UA115888U - METHOD OF IMMUNODIAGNOSTICS OF ANIMAL TOXOPlasmosis ON THE BASIS OF SURFACE PLASMON RESONANCE - Google Patents
METHOD OF IMMUNODIAGNOSTICS OF ANIMAL TOXOPlasmosis ON THE BASIS OF SURFACE PLASMON RESONANCE Download PDFInfo
- Publication number
- UA115888U UA115888U UAU201612664U UAU201612664U UA115888U UA 115888 U UA115888 U UA 115888U UA U201612664 U UAU201612664 U UA U201612664U UA U201612664 U UAU201612664 U UA U201612664U UA 115888 U UA115888 U UA 115888U
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- toxoplasmosis
- transducer
- plasmon resonance
- solution
- surface plasmon
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 8
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 title claims abstract description 8
- 208000003463 Animal Toxoplasmosis Diseases 0.000 title claims abstract description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims abstract description 8
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims abstract description 8
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 7
- 201000005485 Toxoplasmosis Diseases 0.000 claims abstract description 7
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims abstract description 6
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 claims abstract description 6
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 5
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 5
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 5
- 229920002518 Polyallylamine hydrochloride Polymers 0.000 claims abstract description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 4
- 241000223996 Toxoplasma Species 0.000 claims abstract description 3
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 claims abstract description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 2
- 238000011835 investigation Methods 0.000 claims 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 abstract description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 abstract 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 abstract 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 abstract 1
- 238000004381 surface treatment Methods 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 12
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 3
- 229920000867 polyelectrolyte Polymers 0.000 description 3
- 108010015078 Pregnancy-Associated alpha 2-Macroglobulins Proteins 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 2
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 4-[4-(dimethylamino)phenyl]-n,n-dimethylaniline Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1C1=CC=C(N(C)C)C=C1 YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 239000012790 adhesive layer Substances 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 229910052758 niobium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010955 niobium Substances 0.000 description 1
- GUCVJGMIXFAOAE-UHFFFAOYSA-N niobium atom Chemical compound [Nb] GUCVJGMIXFAOAE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Investigating Or Analysing Materials By Optical Means (AREA)
Abstract
Спосіб імунодіагностики токсоплазмозу тварин на основі поверхневого плазмонного резонансу включає визначення у сироватці крові тварин наявності антитіл до збудника токсоплазмозу. Визначення включає послідовне нанесення на поверхню трансдьюсера: поліаліламіну гідрохлориду, розчину білка А, токсоплазменного антигену, бичачого сироваткового альбуміну і позитивної та негативної досліджуваних сироваток крові, після кожного етапу проводиться промивання фізіологічним розчином, оцінку результатів реакції проводять за зміною кута відбиття на сенсорограмі за умови попередньої обробки поверхні трансдьюсера, загальний час аналізу становить 30-40 хвилин.The method of immunodiagnosis of animal toxoplasmosis on the basis of surface plasmon resonance involves determining in the serum of animals the presence of antibodies to the causative agent of toxoplasmosis. Definition includes sequential deposition on the surface of the transducer: polyallylamine hydrochloride, a solution of protein A, toxoplasma antigen, bovine serum albumin and positive and negative test sera, after each step is washed with saline, assessing the results of reaction surface treatment of the transducer, the total analysis time is 30-40 minutes.
Description
Корисна модель належить до галузі ветеринарної медицини та біотехнології і може бути використана для зажиттєвої діагностики токсоплазмозу.The useful model belongs to the field of veterinary medicine and biotechnology and can be used for lifelong diagnosis of toxoplasmosis.
Відомий аналог (Інструкція з застосування набору реагентів для імуноферментного виявлення сумарних антитіл до Тохоріазта допаїй у сироватці (плазмі) крові (ВектоТоксо- антитіла); Кішп 1І., бішгКоміс-ЮБіакоміє О., ТпшПе Р. Сотрагізоп ої а соттегсіа! ЕГ15ЗА м/ййп Ше тодаіїїєй адаІшіпаїйоп їеві Тог Пе деїесіюп ої Тохоріазта допаїї іп'тесійоп іп паштгаПу ехрозей зПпеер /7хоопозе5 Рибіїс Неайй, 2007. - Мо 54 (3-4). - б. 165-168; Галат М.В. Сучасні методи діагностики токсоплазмозу котів /М.В. Галат //Тваринництво України, 2015. - Мо 1-2. - б. 27-30.Known analog (Instructions for the use of a set of reagents for the immunoenzymatic detection of total antibodies to Tochoriazt dopai in blood serum (plasma) (VektoToxo-antibodies); Kishp 1I., BishgKomis-YuBiakomie O., TpshPe R. Sotragizop oii a sottegsia! EG15ZA m/yyp She todaiiiy adaIshipaiyop yeevi Tog Pe deyesiyup oi Tokhoriazta dopayi ip'tesiyop ip pashtgaPu ekhrozei zPpeer /7hoopose5 Rybiis Neayi, 2007. - Mo 54 (3-4). - pp. 165-168; Galat M.V. Modern methods of diagnosis of toxoplasmosis in cats /M.V. Galat //Livestock of Ukraine, 2015. - Mo. 1-2. - pp. 27-30.
Нпер//прим.дом.ца/І-ра/ТтмОКи 2015 1-2 9.раї), на планшет з іммобілізованим антигеном вносять контрольні зразки (позитивний, слабо позитивний і негативний), а також досліджувані сироватки (по 100 мкл). Лунки планшету закривають та інкубують 30 хвилин при 37 "С.Nper//prim.dom.tsa/I-ra/TtmOKy 2015 1-2 9.rai), control samples (positive, weakly positive and negative), as well as test sera (100 μl each) are added to the tablet with immobilized antigen. The wells of the tablet are closed and incubated for 30 minutes at 37 °C.
Після закінчення інкубації за допомогою спеціального пристрою промивають лунки планшету 5 разів буферним розчином (ФОСБ-Т одноразовий розводили з дистильованою водою у співвідношенні 1:25). При цьому чергують аспірацію і негайне заповнення лунок кожного стрипу. В кожну лунку вносять не менше 400 мкл рідини у процесі кожного циклу промивання.After the end of incubation, using a special device, wash the wells of the tablet 5 times with a buffer solution (FOSB-T disposable diluted with distilled water in a ratio of 1:25). At the same time, alternating aspiration and immediate filling of the holes of each strip. Add at least 400 μl of liquid to each well during each washing cycle.
Час між заповненням і випорожненням лунок триває не менше 30 секунд. Повного випорожнення лунок досягають після кожного їх заповнення. По закінченні промивання залишки вологи із лунок ретельно видаляють. З цією метою перевернутим планшетом постукують по фільтрувальному паперу. На наступному етапі вносять в усі лунки по 100 мкл кон'югату та інкубують 30 хвилин при 37 "С. Після закінчення інкубації лунки промивають 5 разів, як описано вище і вносять у кожну лунку по 100 мкл розчину ТМБ (тетраметилбензидин). Витримують у темному місці упродовж 25 хвилин при 18-25 "С, а потім результати реєструють за допомогою спектрофотометра.The time between filling and emptying the wells lasts at least 30 seconds. The holes are completely emptied after each filling. After washing, the remaining moisture is carefully removed from the holes. For this purpose, the inverted tablet is tapped on the filter paper. At the next stage, 100 μl of the conjugate is added to all wells and incubated for 30 minutes at 37 "C. After incubation, the wells are washed 5 times, as described above, and 100 μl of TMB (tetramethylbenzidine) solution is added to each well. Keep in the dark place for 25 minutes at 18-25 "C, and then the results are recorded using a spectrophotometer.
Недоліками аналога є те, що він потребує дорогих реактивів, обладнання (вошер, імуноферментний аналізатор), послуг висококваліфікованого персоналу, а також не менше 2 годин для здійснення аналізу в умовах добре обладнаної лабораторії.The disadvantages of the analogue are that it requires expensive reagents, equipment (washer, enzyme immunoassay), services of highly qualified personnel, and at least 2 hours to carry out the analysis in a well-equipped laboratory.
Задачею корисної моделі є розробка нового способу діагностики токсоплазмозу тварин з використанням імунного біосенсора на основі поверхневого плазмонного резонансу (ППР).The task of the useful model is to develop a new method of diagnosing animal toxoplasmosis using an immune biosensor based on surface plasmon resonance (SPR).
Поставлена задача вирішується тим, що спосіб імунодіагностики токсоплазмозу тварин наThe task is solved by the fact that the method of immunodiagnosis of toxoplasmosis in animals
Зо основі поверхневого плазмонного резонансу, який включає визначення у сироватці крові тварин наявності антитіл до збудника токсоплазмозу згідно з пропонованим рішенням визначення включає послідовне нанесення на поверхню трансдьюсера: поліаліламіну гідрохлориду (ПААГ), розчину білка А, токсоплазменного антигену, бичачого сироваткового альбуміну і позитивної та негативної досліджуваних сироваток крові, після кожного етапу проводиться промивання фізіологічним розчином, оцінку результатів реакції проводять за зміною кута відбиття на сенсорограмі за умови попередньої обробки поверхні трансдьюсера, загальний час аналізу становить 30-40 хвилин.On the basis of surface plasmon resonance, which includes the determination of the presence of antibodies to the causative agent of toxoplasmosis in the blood serum of animals, according to the proposed solution, the determination includes sequential application to the surface of the transducer: polyallylamine hydrochloride (PAAG), a solution of protein A, toxoplasma antigen, bovine serum albumin, and positive and negative of the studied blood sera, after each stage washing with physiological solution is carried out, the evaluation of the reaction results is carried out by the change of the angle of reflection on the sensorogram, provided that the surface of the transducer is pre-treated, the total analysis time is 30-40 minutes.
Приклад здійснення способуAn example of the implementation of the method
Чутливий шар біосенсора формується на скляній пластинці, поверхня якої покрита 1-2 нм адгезійного шару ніобію та 50 нм плівкою золота, на якій відбувається виникнення поверхневого плазмонного резонансу. З призмою пластинка поєднується і фіксується за допомогою імерсійної рідини. Це дає змогу легко змінити використану на нову, що значно скорочує час проведення аналізу.The sensitive layer of the biosensor is formed on a glass plate, the surface of which is covered with a 1-2 nm niobium adhesive layer and a 50 nm gold film, on which surface plasmon resonance occurs. The plate is combined with the prism and fixed with the help of an immersion liquid. This allows you to easily change the used one to a new one, which significantly reduces the time of the analysis.
Спочатку у вимірювальну комірку вносили ФР для отримання базової лінії. Поліелектролітна плівка на золотій поверхні трансдьюсера формувалась з використанням розчину поліаліламіну гідрохлориду (ПААГ). Поліелектроліт використовували у концентрації 20 мкг/мл. Потім на поверхню, вкриту плівкою полієлектроліту, наносили розчин білку А з концентрацією 20 мкг/мл.First, the RF was introduced into the measuring cell to obtain a baseline. The polyelectrolyte film on the gold surface of the transducer was formed using a solution of polyallylamine hydrochloride (PAAG). Polyelectrolyte was used at a concentration of 20 μg/ml. Then, a solution of protein A with a concentration of 20 μg/ml was applied to the surface covered with a polyelectrolyte film.
Після цього здійснювали адсорбцію розчину антигену (Ад) Тохоріазта допаїї протягом 15 хв. за температури 25"С. Наступним етапом було проведено нанесення розчину бичачого сироваткового альбуміну (БСА) у концентрації 20 мкг/мл. Обробка поверхні 1 95 розчином БСА після іммобілізації антитіл не внесла суттєвих змін у значення резонансного кута, що реєструється. Це означає, що на поверхні практично не залишались вільні місця зв'язування, а концентрація антитіл була достатньою для створення максимально щільного шару.After that, adsorption of the antigen (Ad) solution of Tochoriazt dopaia was carried out for 15 minutes. at a temperature of 25"C. The next stage was application of a solution of bovine serum albumin (BSA) at a concentration of 20 μg/ml. Treatment of the surface with 1 95 BSA solution after immobilization of antibodies did not significantly change the value of the recorded resonance angle. This means that practically no free binding sites remained on the surface, and the concentration of antibodies was sufficient to create the most dense layer.
Наступним етапом експерименту було нанесення розчинів антитіл (АБ) негативної та позитивної сироватки до Тохоріабта допадїі она попередньо підготовлену поверхню перетворювача.The next stage of the experiment was application of antibody solutions (AB) of negative and positive serum to Tochoriabta onto the previously prepared surface of the transducer.
На кожному етапі здійснювали промивання комірки ФР. Швидкість осідання реактивів на поверхні трансдьюсера відслідковували по зміні кута відбиття на сенсорограмі приладу. Час експозиції кожного розчину становив до 15 хвилин за температури 25 "С, оскільки надалі зміна бо кута відбиття не спостерігалася. Це свідчить про закріплення біологічного шару на поверхні перетворювача. При введенні у вимірювальну комірку сироватки крові тварини, що позитивно реагувала на наявність збудника токсоплазмозу величина відгуку біосенсора суттєво збільшувалася у порівнянні з негативною сироваткою.At each stage, the FR cell was washed. The rate of sedimentation of reagents on the surface of the transducer was monitored by the change in the angle of reflection on the sensorogram of the device. The exposure time of each solution was up to 15 minutes at a temperature of 25 "C, since no further change in the angle of reflection was observed. This indicates the fixation of a biological layer on the surface of the transducer. When the blood serum of an animal that reacted positively to the presence of the toxoplasmosis pathogen was introduced into the measuring cell, the value response of the biosensor significantly increased compared to the negative serum.
Загальний час проведення аналізу за попередньої модифікації поверхні трансдьюсера становить близько 30-40 хв.The total time of the analysis with preliminary modification of the transducer surface is about 30-40 minutes.
Короткий час проведення аналізу за умови попередньої підготовки поверхні перетворювача, а також використання підготовлених для аналізу колекцій сироваток крові різних видів тварин дозволяє здійснювати діагностику хвороби у польових умовах.The short time of the analysis, provided that the surface of the transducer is pre-prepared, as well as the use of blood serum collections of various animal species prepared for the analysis, allows the diagnosis of the disease in field conditions.
Технічне рішення способу імунодіагностики токсоплазмозу тварин на основі ефекту поверхневого плазмонного резонансу дає можливість використовувати його з метою вчасної діагностики даної хвороби серед різних видів тварин.The technical solution of the method of immunodiagnosis of animal toxoplasmosis based on the effect of surface plasmon resonance makes it possible to use it for the purpose of timely diagnosis of this disease among different species of animals.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| UAU201612664U UA115888U (en) | 2016-12-12 | 2016-12-12 | METHOD OF IMMUNODIAGNOSTICS OF ANIMAL TOXOPlasmosis ON THE BASIS OF SURFACE PLASMON RESONANCE |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| UAU201612664U UA115888U (en) | 2016-12-12 | 2016-12-12 | METHOD OF IMMUNODIAGNOSTICS OF ANIMAL TOXOPlasmosis ON THE BASIS OF SURFACE PLASMON RESONANCE |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA115888U true UA115888U (en) | 2017-04-25 |
Family
ID=58634044
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UAU201612664U UA115888U (en) | 2016-12-12 | 2016-12-12 | METHOD OF IMMUNODIAGNOSTICS OF ANIMAL TOXOPlasmosis ON THE BASIS OF SURFACE PLASMON RESONANCE |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| UA (1) | UA115888U (en) |
-
2016
- 2016-12-12 UA UAU201612664U patent/UA115888U/en unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2503009C2 (en) | Apparatus and method for blood separation and analysis | |
| CN105823880B (en) | A kind of utilization hook effect expands the biochip and its detection method of detection range | |
| CN104330553B (en) | A kind of unmarked chemiluminescence immunoassay sensor and immune analysis method thereof | |
| US10921322B2 (en) | Methods for detecting a marker for active tuberculosis | |
| CN105785041A (en) | Test strip for quantitatively detecting calprotectin, preparation method thereof and determining method for calprotectin concentration | |
| CN104090109A (en) | Colloidal gold immunochromatography test paper and colloidal gold immunochromatography test method for quickly detecting human blood procalcitonin | |
| KR20190058357A (en) | A wide range of in-vitro diagnostic kit capable of quantitating target substance in high concentration specimen | |
| JP5010374B2 (en) | Use of bovine albumin p-aminophenyl N-acetyl β-D glucosaminide as a control system for immunoassay devices | |
| JP2013507618A (en) | Anti-VLA-4 related assays | |
| CN115060888A (en) | Preparation method of novel coronavirus nucleocapsid protein antigen detection test paper | |
| Yuksel et al. | A precise and rapid early pregnancy test: Development of a novel and fully automated electrochemical point-of-care biosensor for human urine samples | |
| Tomassetti et al. | Comparison of three immunosensor methods (surface plasmon resonance, screen-printed and classical amperometric immunosensors) for immunoglobulin G determination in human serum and animal or powdered milks | |
| CN100480703C (en) | The application of helicobacter pylori antibodies and antigen binding fragment in the preparation of sensor | |
| UA115888U (en) | METHOD OF IMMUNODIAGNOSTICS OF ANIMAL TOXOPlasmosis ON THE BASIS OF SURFACE PLASMON RESONANCE | |
| CN105044335B (en) | Immunochromatographic test strip for rapid detection of ancylostomiasis infection and preparation method thereof | |
| US11782052B2 (en) | Biosensor for male infertility | |
| CN103454418B (en) | A kind of Fasciola gigantica immune chromatography rapid detecting test paper strip and preparation method thereof | |
| US20100216162A1 (en) | Immunological Method, Test Kit and Device for the Determination of the Analyte Content of a Sample | |
| CN208537565U (en) | C reactive protein, serum amyloid A protein immunochromatography quantify combined detection test paper | |
| CN105929175A (en) | Semi-quantitative detection colloidal gold test paper for cystatin C in urine | |
| CN201365914Y (en) | Rapid diagnostic detection device | |
| UA125506U (en) | METHOD OF DIAGNOSTICS OF ANIMAL TOXOPLASMOSIS BASED ON THE EFFECTS OF PHOTOLUMINESCENCE AND NANOSTRUCTURES OF METALS | |
| RU2757078C1 (en) | Method for potentiometric diagnosis of bovine leukemia | |
| CN107490679A (en) | A kind of saliva Procalcitonin enzyme-linked immune detection method | |
| CN107271664A (en) | A kind of amniotic fluid Test paper and preparation method thereof |