JP5010374B2 - 免疫測定装置用の対照系としてのウシアルブミンp−アミノフェニルN−アセチルβ−Dグルコサミニドの使用 - Google Patents
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Description
「試料」という用語は一般に、細菌を含有することができる任意のものを指す。試料は、生体液または生物組織などの生物試料であってよい。生体液の例には、尿、血液、血漿、血清、唾液、精液、糞便、喀痰、脳脊髄液、涙液、眼の水晶体液、汗、乳汁、腹水、滑液、腹腔液、経皮滲出液、咽頭滲出液、気管支肺胞洗浄液、気管吸引液、脳脊髄液、頸管粘液、膣分泌液または尿道分泌物、粘液、羊水などが含まれる。例えば、毛髪、皮膚および爪垢、肉エキス、果実および堅果の外皮などの細胞組織の体液ホモジネートも生体液と考えることができる。
本発明は、試料中の細菌の存在について試料を検査する場合に、包括的な対照徴表を表示するための免疫測定装置、キット、および方法を提供することができる。試料中の細菌の存在について検査するために、本発明の実施形態の装置は、細菌に含まれることが知られている細菌性糖質の対象分析物の存在について検査することができる。包括的な対照徴表は、対象分析物の類似体を対照試薬として利用し、この類似体は、対象分析物と同一または類似の標識受容体結合領域を含む固定化試薬であってもよい。対象分析物と同一または類似の標識受容体結合領域を有する類似体を対照試薬として使用する主要な利点は、対象分析物を検出するのに使用される同一の免疫型の反応が、対照徴表を生成するのに使用されることである。したがって、生じた陽性対照徴表により、試料が免疫測定を経たこと、および免疫測定の条件が、標識受容体の免疫活性の整合性など、正確な検査結果を生み出す化学反応および免疫反応を支持していることを操作者が検証できるようにする。
a)標識部分に結合した受容体部分であって、該標識部分に結合することにより標識受容体を形成し、対象分析物の細菌性糖質と結合することができる受容体部分と、
b)検出区域およ対照区域を含むバインダー支持体と
を備え、
この検出区域は対象分析物またはその誘導体もしくは相同体の検出を提供し、この対照区域は検出区域と流体連通しており、この対照区域は対象の分析物の類似体を固定化された形で含み、この類似体は対象分析物と同一または類似の標識受容体結合領域を含む。
a)免疫測定装置に加えるための試料を調製するステップと、
b)この試料を、分析物に特異的な標識受容体を含む免疫測定装置に加えるステップと、
c)試料中の対象分析物である細菌性糖質が存在する場合に、それを分析物に特異的な標識受容体に結合させて、分析物/標識受容体複合体を形成するステップであって、標識受容体の量および/または免疫測定の結合反応速度により、ある量の非結合標識受容体を装置内に残すステップと、
d)固定化バインダーに分析物/標識受容体複合体を結合させるステップであって、該固定化バインダーは試料中の分析物/標識受容体複合体を結合することができるが、非結合標識受容体を結合することができず、該固定化バインダーはバインダー支持体上の検出区域に位置しているものであるステップと、
e)非結合標識受容体を固定化分析物類似体に結合させるステップであって、該分析物類似体はバインダー支持体上の対照区域に位置しており、該類似体は対象分析物の標識受容体結合領域と同一または類似の標識受容体結合領域を含むものであるステップと、
f)免疫測定の条件が試料中の分析物の存在または量の正確な測定をもたらすかどうか、また試料が検出区域および対照区域を通過したかどうかを、徴表について対照区域を分析することにより判定するステップであって、徴表の存在により、標識受容体と、対象分析物が存在する場合のそれとの結合を支持する適切な条件を検証するものであるステップと、
g)試料中の対象分析物の存在または量を、徴表について検出区域を分析することにより測定するステップであって、検出区域の陽性徴表が試料中の対象分析物の存在を示すものであるステップとを含む。
本発明はさらに、本明細書に記載の装置を利用して免疫測定を実行するためのキットを提供する。一実施形態では、本発明によるキットは免疫測定装置を含むことができ、該免疫測定装置には、毛管移動用溶液(wicking solution)および/または検査試料前処理試薬はもちろんのこと、該免疫測定装置にに組み込む試薬を備えることができる。緩衝液、安定剤、界面活性剤、細菌抑制剤など、当分野の技術者に知られている他の免疫測定構成要素をキット中に有することもできる。さらに、このキットは、包装用材料および装置の使用方法に関する説明書を備えることができる。
図10a〜bは、本発明に従って構築された、横方向に流れるGAS免疫測定装置の代表例を示す。図10aに示す通り、乾燥中和溶液を含む15mm試料パッド32は、8mmの長さを有するトレーサーパッド10と並置していた。トレーサーパッド10は、5mm混合パッド54と並置しており、次にこの混合パッド54は、25mmニトロセルロース製バインダー支持体8と並置していた。ニトロセルロース製バインダー支持体8は、17mm液溜めパッド34と並置していた。図10bに示す通り、ニトロセルロース製バインダー支持体8は、検出区域14(ニトロセルロース製バインダー支持体8の左側から14mmのところに配置)および対照区域18(ニトロセルロース製バインダー支持体8の左側から20mmのところに配置)を含んでいた。上記のパッドおよび媒体は全て、図10aに示される構成の60mm積層支持体56上に押し付けた。
GAS抗原を含有する抽出試料を、先の節(a)に記載の通りに構築された装置の最上部の試料用開口部への分注用チューブの先端から試料パッドに3滴加えた。装置の試料パッドにおいて試料を中和させた。中和後、GAS抗原とGAS抗原に対する抗体との結合を可能にするのに好ましい条件となった。次いで、免疫測定を進行させた。次いで、装置の対照区域および検出区域の徴表が、装置の最上部にある開口を通じて可視化された。
Claims (18)
- 試料中の細菌性糖質の存在または量を測定するための免疫測定装置であって、
検出区域および対照区域を含むバインダー支持体を備え、
前記検出区域は細菌性糖質と結合することができる固定化バインダーを含み、前記対照区域は検出区域と流体連通しており、前記対照区域は細菌性糖質の類似体を固定化された形で含み、
前記装置はA群レンサ球菌細菌の存在または量について検査し、
前記細菌性糖質は、ポリラムノース骨格に結合したβ−N−アセチル−D−グルコサミンを含み、
前記細菌性糖質の類似体は、ウシアルブミンp−アミノフェニルN−アセチルβ−Dグルコサミニドを含む、
ことを特徴とする免疫測定装置。 - 受容体部分および標識部分を含む標識受容体をさらに含み、前記受容体部分は細菌性糖質および細菌性糖質の類似体と結合することができ、前記受容体部分は前記標識部分と結合していることを特徴とする請求項1に記載の装置。
- トレーサーパッドをさらに備え、前記トレーサーパッド上に標識受容体が位置していることを特徴とする請求項2に記載の装置。
- 液溜めをさらに備え、前記液溜めはバインダー支持体と並置していることを特徴とする請求項1に記載の装置。
- 細菌性糖質を含有すると思われる試料を受け取ることができる試料パッドをさらに備えることを特徴とする請求項1に記載の装置。
- 上部収納容器および下部収納容器をさらに備えることを特徴とする請求項1に記載の装置。
- 上部収納容器および下部収納容器をさらに備え、前記上部収納容器は、バインダー支持体への流体の接近を可能にする開口を含むことを特徴とする請求項1に記載の装置。
- 中和パッドをさらに備えることを特徴とする請求項1に記載の装置。
- a.細菌性糖鎖を含有すると思われる試料を受け取ることができる試料パッドと、
b.上部収納容器と、
c.下部収納容器と
をさらに備え、
前記上部収納容器は、前記試料パッドへの流体の接近を可能にする開口を含むことを特徴とする請求項1に記載の装置。 - 上部収納容器および下部収納容器をさらに備え、前記上部収納容器は、検出区域への視覚的観察を可能にする開口を含むことを特徴とする請求項1に記載の装置。
- 上部収納容器および下部収納容器をさらに備え、前記上部収納容器は、対照区域への視覚的観察を可能にする開口を含むことを特徴とする請求項1に記載の装置。
- 試料中の細菌性糖質の存在または量を測定するための免疫測定キットであって、
a.検出区域および対照区域を含むバインダー支持体と、
b.包装用材料と
を備え、
前記検出区域は細菌性糖質と結合することができる固定化バインダーを含み、前記対照区域は前記検出区域と流体連通しており、前記対照区域は前記細菌性糖質の類似体を固定化された形で含み、
前記キットはA群レンサ球菌細菌の存在または量について検査し、
前記細菌性糖質は、ポリラムノース骨格に結合したβ−N−アセチル−D−グルコサミンを含み、
前記細菌性糖質の類似体は、ウシアルブミンp−アミノフェニルN−アセチルβ−Dグルコサミニドを含む、
ことを特徴とする免疫測定キット。 - 受容体部分および標識部分を含む標識受容体をさらに含み、前記受容体部分は細菌性糖質および細菌性糖質の類似体と結合することができ、前記受容体部分は前記標識部分と結合していることを特徴とする請求項12に記載のキット。
- 毛管移動用溶液をさらに備えることを特徴とする請求項12に記載のキット。
- 検査試料前処理試薬をさらに備えることを特徴とする請求項12に記載のキット。
- キットの使用方法に関する説明書をさらに備えることを特徴とする請求項12に記載のキット。
- 試料中の対象分析物の存在または量を測定する方法であって、
該対象分析物は細菌性糖質であり、
該方法は、
a.免疫測定装置に加えるための試料を調製するステップと、
b.対象分析物を含有すると思われる前記試料を、標識受容体を含む免疫測定装置に加えるステップと、
c.前記試料中の対象分析物が存在する場合に、それを前記標識受容体に結合させ、もって分析物/標識受容体複合体を形成するステップであって、前記装置はある量の非結合標識受容体を提供するものであるステップと、
d.前記分析物/標識受容体複合体が存在する場合に、それを前記試料中の分析物/標識受容体複合体が結合することができるが、非結合標識受容体を結合することができない固定化バインダーに結合させるステップであって、前記固定化バインダーはバインダー支持体上の検出区域に位置しているものであるステップと、
e.前記非結合標識受容体を細菌性糖質の固定化類似体に結合させるステップであって、該固定化類似体はバインダー支持体上の対照区域に位置しているものであるステップと、
f.前記対照区域を徴表について分析することにより、免疫測定装置の条件が前記試料中の細菌性糖質の存在または量の正確な測定をもたらすかどうかを判定するステップであって、徴表の存在により適切な条件を検証するステップと、
g.適切な条件が検証された場合、前記検出区域を徴表について分析することにより、前記試料中の細菌性糖質の存在または量を測定するステップであって、前記方法はA群レンサ球菌細菌の存在または量について検査するステップと、
を含み、
前記細菌性糖質は、ポリラムノース骨格に結合したβ−N−アセチル−D−グルコサミンを含み、
前記細菌性糖質の類似体は、ウシアルブミンp−アミノフェニルN−アセチルβ−Dグルコサミニドを含む、
ことを特徴とする方法。 - 試料中の細菌性糖質の存在または量を測定する方法であって、
該方法は、
a.液体試料を免疫測定装置に投与するステップであって、
該免疫測定装置は、
i.受容体部分および標識部分を含む標識受容体であって、前記受容体部分が細菌性糖質と結合することができ、前記受容体部分が前記標識部分と結合している標識受容体と、
ii.検出区域および対照区域を含むバインダー支持体と
を備え、
iii.前記検出区域は細菌性糖質と結合することができる固定化バインダーを含み、前記対照区域は前記検出区域と流体連通しており、前記対照区域は受容体部分と結合することができる細菌性糖質の類似体を固定化された形で含むものであるステップと、
b.免疫測定の条件が前記試料中の細菌性糖質の存在または量の正確な測定をもたらすかどうかを判定するステップであって、
該ステップが前記対照区域を徴表について分析することにより行われ、徴表の存在により適切な条件が検証されるものであるステップと、
c.適切な条件が検証された場合、前記検出区域を徴表について分析することにより、前記試料中の細菌性糖質の存在または量を測定するステップであって、前記方法はA群レンサ球菌細菌の存在または量について検査するステップと、
を含み、
前記細菌性糖質が、ポリラムノース骨格に結合したβ−N−アセチル−D−グルコサミンを含み、
前記細菌性糖質の類似体が、ウシアルブミンp−アミノフェニルN−アセチルβ−Dグルコサミニドを含む、
ことを特徴とする方法。
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