TWI844242B

TWI844242B - 橋環取代的雜芳基並吡喃類衍生物及其應用

Info

Publication number: TWI844242B
Application number: TW112102376A
Authority: TW
Inventors: 張楊; 伍文韜; 李志祥; 朱文元; 楊平; 李秋; 健黎; 曙輝陳
Original assignee: 大陸商南京明德新藥研發有限公司
Priority date: 2022-01-21
Filing date: 2023-01-18
Publication date: 2024-06-01

Abstract

本發明公開了一類橋環取代的雜芳基並吡喃類衍生物及其應用，具體公開了式(VI)所示化合物或其藥學上可接受的鹽。

Description

橋環取代的雜芳基並吡喃類衍生物及其應用

本發明公開了一類橋環取代的雜芳基並吡喃類衍生物及其應用，具體涉及式(VI)所示化合物或其藥學上可接受的鹽。

本申請主張如下優先權：CN202210074707.1，申請日：2022年01月21日；CN202210082274.4，申請日：2022年01月24日；CN202210254285.6，申請日：2022年03月15日；CN202210346571.5，申請日：2022年03月31日；CN202210642158.3，申請日：2022年06月07日；CN202210813772.1，申請日：2022年07月11日；CN202210964127.X，申請日：2022年08月11日；CN 202310029317.7，申請日：2023年01月09日。

RAS癌基因突變是人類癌症中最常見的激活突變，發生在30%的人類腫瘤中。RAS基因家族包括三個亞型(KRAS、HRAS和NRAS)，其中85%的RAS驅動的癌症是由KRAS亞型突變引起的。KRAS突變常見於實體腫瘤中，如：肺腺癌、胰腺導管癌和結直腸癌等。在KRAS突變腫瘤中，80%的致癌突變發生在密碼子12上，最常見的突變包括：p.G12D(41%)、p.G12V(28%)和p.G12C(14%)。

KRAS是一種鼠類肉瘤病毒癌基因，是RAS蛋白中的重要一員。KRAS好像分子開關，當正常時能控制調控細胞生長的路徑；KRAS基因突變後，可以不依賴於上游生長因子受體信號，獨立向下游通路傳輸生長和增殖信號，造成不受控制的細胞生長和腫瘤進展。同時KRAS基因是否有突變，也是腫瘤預後的一個重要指標。

目前，直接靶向KRAS突變的小分子主要集中在KRAS^G12C領域。其中，Amgen公司的AMG510和Mirati Therapeutics的MRTX849在臨床研究中，對KRAS^G12C突變的腫瘤患者都展現出了良好的治療效果。但至今還沒有KRAS^G12D小分子進入臨床研究階段，KRAS^G12D突變的腫瘤患者也還沒有從精准醫療中獲益。

本發明公開了一系列靶向KRAS^G12D的小分子抑制劑及其製備方法。

本發明提供了式(VI)所示化合物或其藥學上可接受的鹽，

其中，

選自單鍵或雙鍵；T₁選自CR_a和N； T₂選自CH和N；L₁選自O和S； R₁選自苯基、萘基、

、

和

，所述苯基、萘基、

、

和

分別獨立地任選被1、2、3、4或5個R_b取代；R₂選自H；R₃選自H、F、CN、CH₃和OCH₃，所述CH₃和OCH₃任選被1、2或3個鹵素取代；或者，R₂和R₃與相連的原子形成苯基或5-6元雜芳基，所述苯基或5-6元雜芳基任選被1、2或3個鹵素取代；R₄不存在，或選自H、CH₃和-CH=CH₂，所述CH₃和-CH=CH₂任選被1、2或3個鹵素取代；或者，R₃和R₄與相連的原子形成

，所述

任選被1或2個R_c取代；或者，R₃和R₄與相連的原子形成環丙基，所述環丙基任選被1、2或3個鹵素取代；R_a選自H和CN；各R_b分別獨立地選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH₂、CN、C_1-3烷基、C_1-3烷氧基、C_2-4炔基、C_2-4炔基-環丙基、C_2-3烯基、-C(=O)C_1-3烷基和C_3-5環烷基，所述C_1-3烷基、C_1-3烷氧基、C_2-4炔基、C_2-4炔基-環丙基、C_2-3烯基、-C(=O)C_1-3烷基和C_3-5環烷基任選被1、2、3、4或5個鹵素取代；各R_c分別獨立地選自F、Cl、Br、I、CN、CH₃和OCH₃；m選自0或1。

本發明還提供了式(P-1)所示化合物或其藥學上可接受的鹽，

其中，

選自單鍵或雙鍵；L₁選自O和S； R₁選自苯基、萘基、5-10元雜芳基、

、

和

，所述苯基、萘基、5-10元雜芳基、

、

和

分別獨立地任選被1、2、3、 4或5個R_b取代，R₅選自

、

和

，所述

、

和

分別獨立地任選被1、2、3、4或5個R_d取代；或者，R₁選自5-10元雜芳基，所述5-10元雜芳基任選被1、2、3、4或5 個R_b取代，R₅選自

，所述

任選被1、2、3、4或5個R_d取代；各R_b分別獨立地選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH₂、CN、C_1-3烷基、C_1-3烷氧基、C_2-4炔基、C_2-4炔基-環丙基、C_2-3烯基、-C(=O)C_1-3烷基和C_3-5環烷基，所述C_1-3烷基、C_1-3烷氧基、C_2-4炔基、C_2-4炔基-環丙基、C_2-3烯基、-C(=O)C_1-3烷基和C_3-5環烷基任選被1、2、3、4或5個R取代；各R_d分別獨立地選自F、Cl、Br、I、CN、CH₃和OCH₃；各R分別獨立地選自鹵素和D。

本發明還提供了式(P-2)所示化合物或其藥學上可接受的鹽，

其中，

選自單鍵或雙鍵；L₁選自O和S；各R_b分別獨立地選自F、Cl、Br、I、OH、NH₂、CN、C_1-3烷基、C_1-3烷氧基、C_2-4炔基、C_2-4炔基-環丙基、C_2-3烯基、-C(=O)C_1-3烷基和C_3-5環烷基，所述C_1-3烷基、C_1-3烷氧基、C_2-4炔基、C_2-4炔基-環丙基、C_2-3烯基、-C(=O)C_1-3烷基和C_3-5環烷基任選被1、2、3、4或5個R取代；各R分別獨立地選自鹵素和D；v選自1、2、3、4或5；條件是，至少有一個R_b被1、2、3、4或5個D取代。

在本發明的一些方案中，所述各R_b分別獨立地選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH₂、CN、CH₃、CH₂CH₃、OCH₃、OCH₂CH₃、-CH=CH₂、-C≡CH、-C≡CCH₃、-C≡CCH₂CH₃、

和環丙基，所述CH₃、CH₂CH₃、OCH₃、OCH₂CH₃、-CH=CH₂、-C≡CH、-C≡CCH₃、-C≡CCH₂CH₃、

和環丙基任選被1、2、3、4或5個鹵素取代，其他變量如本發明所定義。

在本發明的一些方案中，所述各R_b分別獨立地選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH₂、CN、CH₃、CH₂F、CF₂H、CF₃、CH₂CH₃、CF₂CF₃、-CH=CH₂、-C≡CH、-C≡CF、-C≡CBr、-C≡CCH₃、-C≡CCF₃、-C≡CCH₂CF₃、

和環丙基，其他變量如本發明所定義。

和環丙基任選被1、2、3、4或5個R取代，其他變量如本發明所定義。

在本發明的一些方案中，所述各R_b分別獨立地選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH₂、CN、CH₃、CD₃、CH₂F、CF₂H、CF₃、CH₂CH₃、CF₂CF₃、-CH=CH₂、-C≡CH、-C≡CF、-C≡CBr、-C≡CCH₃、

、-C≡CCF₃、-C≡CCH₂CF₃、

和環丙基，其他變量如本發明所定義。

在本發明的一些方案中，所述R₁選自

、

、

、

、

、

、

和

，其他變量如本發明所定義。

在本發明的一些方案中，所述R₁選自

、

、

和

，其他變量如本發明所定義。

在本發明的一些方案中，所述R₁選自

、

、

和

，其他變量如本發明所定義。

在本發明的一些方案中，所述結構單元

選自

，其他變量如本發明所定義。

在本發明的一些方案中，所述R₃選自H、F、CN、CH₃和OCH₃，其他變量如本發明所定義。

在本發明的一些方案中，所述R₂和R₃與相連的原子形成苯基、呋喃基和吡啶基，所述苯基、呋喃基和吡啶基任選被1個F取代，其他變量如本發明所定義。

在本發明的一些方案中，所述R₄不存在，或選自H、CH₂F和-CH=CH₂，其他變量如本發明所定義。

在本發明的一些方案中，所述R₃和R₄與相連的原子形成

、

、

和

，其他變量如本發明所定義。

在本發明的一些方案中，所述R₃和R₄與相連的原子形成

，其他變量如本發明所定義。

在本發明的一些方案中，所述R₅選自

、

、

和

，其他變量如本發明所定義。

在本發明的一些方案中，所述結構單元

選自

、

和

，其他變量如本發明所定義。

在本發明的一些方案中，所述結構單元

選自

、

和

，其他變量如本發明所定義。

在本發明的一些方案中，所述結構單元

選自

、

和

，其他變量如本發明所定義。

在本發明的一些方案中，所述結構單元

選自

、

、

和

，其他變量如本發明所定義。

在本發明的一些方案中，所述結構單元

選自

、

、

和

，其他變量如本發明所定義。

在本發明的一些方案中，所述結構單元

選自

、

和

，其他變量如本發明所定義。

在本發明的一些方案中，所述結構單元

選自

，其他變量如本發明所定義。

在本發明的一些方案中，所述化合物或其藥學上可接受的鹽，其化合物選自，

其中，

選自單鍵或雙鍵；T₁、T₂、R₁、R₂、R₃、R₄、L₁和m如本發明所定義。

其中，

選自單鍵或雙鍵；T₁、T₂、R₁、R₂、R₃、R₄、L₁和m如本發明所定義；條件是，當結構單元選自

選自

時，結構片段

不為

，R₂選自H；R₃選自H、F、CN、CH₃和OCH₃，所述CH₃和OCH₃任選被1、2或3個鹵素取代；R₄選自H和CH₃。

其中，

選自單鍵或雙鍵；結構單元

選自

和

；R₂選自H；R₃選自H、F、CN、CH₃和OCH₃，所述CH₃和OCH₃任選被1、2或3個鹵素取代；或者，R₂和R₃與相連的原子形成苯基或5-6元雜芳基，所述苯基或5-6元雜芳基任選被1、2或3個鹵素取代； R₄選自-CH=CH₂，所述-CH=CH₂任選被1、2或3個鹵素取代；或者，R₃和R₄與相連的原子形成

，所述

任選被1或2個R_c取代；或者，R₃和R₄與相連的原子形成環丙基，所述環丙基任選被1、2或3個鹵素取代；T₁、T₂、R₁、各R_c、L₁和m如本發明所定義。

在本發明的一些方案中，所述結構單元

選自

，其他變量如本發明所定義。

在本發明的一些方案中，所述T₁為N，其他變量如本發明所定義。

在本發明的一些方案中，所述結構單元

選自

和

，其他變量如本發明所定義。

在本發明的一些方案中，所述結構單元

選自

，其他變量如本發明所定義。

其中，

選自單鍵或雙鍵；各R_b和L₁如本發明所定義；n選自0、1、2、3、4和5。

在本發明的一些方案中，所述結構片段

選自

和

，其他變量如本發明所定義。

在本發明的一些方案中，所述結構片段

選自

和

，其他變量如本發明所定義。

其中，各R_b和L₁如本發明所定義；n選自0、1、2、3、4和5。

其中，各R_b和L₁如本發明所定義；n選自0、1、2、3、4和5。

其中，

選自單鍵或雙鍵；T₁、T₂、R₂、R₃、R₄和L₁如本發明所定義；R_b1、R_b2、R_b3、R_b4、R_b5、R_b6和R_b7分別獨立地選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH₂、CN、C_1-3烷基、C_1-3烷氧基、C_2-4炔基、C_2-4炔基-環丙基、C_2-3烯基、-C(=O)C_1-3烷基和C_3-5環烷基，所述C_1-3烷基、C_1-3烷氧基、C_2-4炔基、C_2-4炔基-環丙基、C_2-3烯基、-C(=O)C_1-3烷基和C_3-5環烷基任選被1、2、3、4或5個鹵素取代。

在本發明的一些方案中，所述R_b1、R_b2、R_b3、R_b4、R_b5、R_b6、R_b7和R_b8分別獨立地選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH₂、CN、CH₃、CH₂CH₃、 OCH₃、OCH₂CH₃、-CH=CH₂、-C≡CH、-C≡CCH₃、-C≡CCH₂CH₃、

在本發明的一些方案中，所述R_b1、R_b2、R_b3、R_b4、R_b5、R_b6、R_b7和R_b8分別獨立地選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH₂、CN、CH₃、CF₃、CH₂CH₃、CF₂CF₃、-CH=CH₂、-C≡CH、-C≡CF、-C≡CBr、-C≡CCH₃、-C≡CCF₃、-C≡CCH₂CF₃、

和環丙基，其他變量如本發明所定義。

本發明還提供了式(IV)所示化合物或其藥學上可接受的鹽，

其中，

選自單鍵或雙鍵；T₁選自CR_a和N；T₂選自CH和N；L₁選自O和S； R₁選自苯基、萘基、

和

，所述苯基、萘基、

和

分別獨立地任選被1、2、3、4或5個R_b取代；R₂選自H；R₃選自H、F、CN和OCH₃，所述OCH₃任選被1、2或3個鹵素取代；或者，R₂和R₃與相連的原子形成苯基和5-6元雜芳基，所述苯基和5-6元雜芳基任選被1、2或3個鹵素取代；R₄不存在，或選自H、CH₃和-CH=CH₂，所述CH₃和-CH=CH₂任選被1、2或3個鹵素取代；或者，R₃和R₄與相連的原子形成

，所述

任選被1或2個鹵素取代；或者，R₃和R₄與相連的原子形成環丙基，所述環丙基任選被1、2或3個鹵素取代；R_a選自H和CN；各R_b分別獨立地選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH₂、CN、C_1-3烷基、C_1-3烷氧基、C_2-4炔基、C_2-4炔基-環丙基、C_2-3烯基、-C(=O)C_1-3烷基和C_3-5環烷基，所述C_1-3烷基、C_1-3烷氧基、C_2-4炔基、C_2-4炔基-環丙基、C_2-3烯基、-C(=O)C_1-3烷基和C_3-5環烷基任選被1、2、3、4或5個鹵素取代。

和環丙基，其他變量如本發明所定義。

在本發明的一些方案中，所述R₁選自

、

、

和

，其他變量如本發明所定義。

在本發明的一些方案中，所述R₃選自H、F、CN和OCH₃，其他變量如本發明所定義。

在本發明的一些方案中，所述R₃和R₄與相連的原子形成

，其他變量如本發明所定義。

在本發明的一些方案中，所述R₃和R₄與相連的原子形成

，其他變量如本發明所定義。

在本發明的一些方案中，所述結構單元

選自

、

、

、

、

和

，其他變量如本發明所定義。

其中，

在本發明的一些方案中，所述R_b1、R_b2、R_b3、R_b4、R_b5、R_b6、R_b7和R_b8分別獨立地選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH₂、CN、CH₃、CH₂CH₃、OCH₃、OCH₂CH₃、-CH=CH₂、-C≡CH、-C≡CCH₃、-C≡CCH₂CH₃、

和環丙基，其他變量如本發明所定義。

本發明還提供了式(IV)所示化合物或其藥學上可接受的鹽，

其中，

選自單鍵或雙鍵；T₁選自CR_a和N；T₂選自CH和N；L₁選自O和S；R₁選自苯基和萘基，所述苯基和萘基分別獨立地任選被1、2、3、4或5個R_b取代； R₂選自H；R₃選自H、F和CN；或者，R₂和R₃與相連的原子形成苯基；R₄不存在，或選自H和-CH=CH₂；R_a選自H和CN；各R_b分別獨立地選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH₂、CN、C_1-3烷基、C_1-3烷氧基、C_2-3炔基、C_2-3烯基、-C(=O)C_1-3烷基和C_3-5環烷基，所述C_1-3烷基、C_1-3烷氧基、C_2-3炔基、C_2-3烯基、-C(=O)C_1-3烷基和C_3-5環烷基任選被1、2、3、4或5個鹵素取代。

在本發明的一些方案中，所述各R_b分別獨立地選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH₂、CN、CH₃、CH₂CH₃、OCH₃、OCH₂CH₃、-CH=CH₂、-C≡CH和環丙基，所述CH₃、CH₂CH₃、OCH₃、OCH₂CH₃、-CH=CH₂、-C≡CH和環丙基任選被1、2、3、4或5個鹵素取代，其他變量如本發明所定義。

在本發明的一些方案中，所述各R_b分別獨立地選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH₂、CN、CH₃、CH₂F、CF₂H、CF₃、CH₂CH₃、CF₂CF₃、-CH=CH₂、-C≡CH和環丙基，其他變量如本發明所定義。

在本發明的一些方案中，所述R₁選自

、

、

、

和

，其他變量如本發明所定義。

在本發明的一些方案中，所述結構單元

選自

、

、

、

、

和

，其他變量如本發明所定義。

其中，

選自單鍵或雙鍵；T₁、T₂、R₂、R₃、R₄和L₁如本發明所定義；R_b1、R_b2、R_b3、R_b4、R_b5、R_b6和R_b7分別獨立地選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH₂、CN、C_1-3烷基、C_1-3烷氧基、C_2-3炔基、C_2-3烯基、-C(=O)C_1-3 烷基和C_3-5環烷基，所述C_1-3烷基、C_1-3烷氧基、C_2-3炔基、C_2-3烯基、-C(=O)C_1-3烷基和C_3-5環烷基任選被1、2、3、4或5個鹵素取代。

在本發明的一些方案中，所述R_b1、R_b2、R_b3、R_b4、R_b5、R_b6、R_b7和R_b8分別獨立地選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH₂、CN、CH₃、CH₂CH₃、OCH₃、OCH₂CH₃、-CH=CH₂、-C≡CH和環丙基，所述CH₃、CH₂CH₃、OCH₃、OCH₂CH₃、-CH=CH₂、-C≡CH和環丙基任選被1、2、3、4或5個R取代，其他變量如本發明所定義。

在本發明的一些方案中，所述R_b1、R_b2、R_b3、R_b4、R_b5、R_b6、R_b7和R_b8分別獨立地選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH₂、CN、CH₃、CF₃、CH₂CH₃、CF₂CF₃、-CH=CH₂、-C≡CH和環丙基，其他變量如本發明所定義。

本發明還提供了式(III)所示化合物或其藥學上可接受的鹽，

其中，

選自單鍵或雙鍵；T₁選自CR_a和N；T₂選自CH和N；L₁選自O和S；R₁選自苯基和萘基，所述苯基和萘基分別獨立地任選被1、2、3、4或5個R_b取代；R₂選自H；R₃選自H和F；或者，R₂和R₃與相連的原子形成苯基；R_a選自H和CN；各R_b分別獨立地選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH₂、CN、C_1-3烷基、C_1-3烷氧基、C_2-3炔基、C_2-3烯基、-C(=O)C_1-3烷基和C_3-5環烷基，所述C_1-3烷基、C_1-3烷氧基、C_2-3炔基、C_2-3烯基、-C(=O)C_1-3烷基和C_3-5環烷基任選被1、2、3、4或5個鹵素取代。

在本發明的一些方案中，所述R₁選自

、

、

和

，其他變量如本發明所定義。

其中，

選自單鍵或雙鍵；T₁、T₂、R₂、R₃和L₁如本發明所定義；R_b1、R_b2、R_b3、R_b4、R_b5、R_b6和R_b7分別獨立地選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH₂、CN、C_1-3烷基、C_1-3烷氧基、C_2-3炔基、C_2-3烯基、-C(=O)C_1-3烷基和C_3-5環烷基，所述C_1-3烷基、C_1-3烷氧基、C_2-3炔基、C_2-3烯基、-C(=O)C_1-3烷基和C_3-5環烷基任選被1、2、3、4或5個鹵素取代。

本發明還提供了式(I)所示化合物或其藥學上可接受的鹽，

其中，

選自單鍵或雙鍵；T₁選自CR_a和N；L₁選自O和S；R₁選自苯基和萘基，所述苯基和萘基分別獨立地任選被1、2、3、4或5個R_b取代；R_a選自H和CN；各R_b分別獨立地選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH₂、CN、C_1-3烷基、C_1-3烷氧基、C_2-3炔基、C_2-3烯基、-C(=O)C_1-3烷基和C_3-5環烷基，所述C_1-3烷基、C_1-3烷氧基、C_2-3炔基、C_2-3烯基、-C(=O)C_1-3烷基和C_3-5環烷基任選被1、2、3、4或5個鹵素取代。

在本發明的一些方案中，所述各R_b分別獨立地選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH₂、CN、CH₃、CF₃、CH₂CH₃、CF₂CF₃、-CH=CH₂、-C≡CH和環丙基，其他變量如本發明所定義。

其中，

選自單鍵或雙鍵；T₁和L₁如本發明所定義；R_b1、R_b2、R_b3、R_b4、R_b5、R_b6和R_b7分別獨立地選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH₂、CN、C_1-3烷基、C_1-3烷氧基、C_2-3炔基、C_2-3烯基、-C(=O)C_1-3烷基和C_3-5環烷基，所述C_1-3烷基、C_1-3烷氧基、C_2-3炔基、C_2-3烯基、-C(=O)C_1-3烷基和C_3-5環烷基任選被1、2、3、4或5個鹵素取代。

在本發明的實施例8中，化合物8的鹽酸鹽由化合物8-3通過步驟6和步驟7製備得到，其中化合物8-3是由化合物8-2與化合物1-12B經過步驟5製備得到，化合物8-2與化合物1-12B分別由化合物8-1A和化合物1-11B製備得到。

在本發明的實施例8中，化合物8的鹽酸鹽是由化合物8-1A製備得到，其中，化合物8-1A通過SFC分析(色譜柱：Chiralpak IH-3,100×4.6mm I.D.,3μm；流動相：A(超臨界CO₂)和B(乙醇，含0.1%異丙胺)；梯度：B%=10~50%，4min；流速：3.4mL/min；波長：220nm；壓力：2000psi)顯示保留時間為1.489min。

在本發明的實施例8中，化合物8的鹽酸鹽是由化合物1-11B製備得到，其中，化合物1-11B通過SFC分析(色譜柱：(S,S)Whelk-O1 100×4.6mm I.D.,5.0μm；流動相：A：超臨界CO₂，B：[75%異丙醇/25%乙腈/0.05%二乙胺]；B%：50%-50%，流速：2.5mL/min)顯示保留時間為3.317min，其對映異構體的保留時間為2.536min。

在本發明的實施例8中，化合物8是由化合物1-11B製備得到，其中，化合物1-11B通過SFC分析(色譜柱：(S,S)Whelk-O1 100×4.6mm I.D.,5.0μm；流動相：A：超臨界CO₂，B：[75%異丙醇/25%乙腈/0.05%二乙胺]；B%：50%-50%，流速：2.5mL/min)顯示保留時間為3.317min，其對映異構體的保留時間為2.536min。

在本發明的實施例8中，化合物1-11B通過SFC分析(色譜柱：(S,S)Whelk-O1 100×4.6mm I.D.,5.0μm；流動相：A：超臨界CO₂，B：[75%異丙醇/25%乙腈/0.05%二乙胺]；B%：50%-50%，流速：2.5mL/min)顯示保留時間為3.317min，其對映異構體的保留時間為2.536min，1-11B經過實施例8中所述步驟合成得到化合物8的鹽酸鹽。

本發明還有一些方案是由所述變量任意組合而來。

本發明提供了下式所示化合物或其藥學上可接受的鹽，

本發明提供了下式所示化合物或其藥學上可接受的鹽，

在本發明的一些方案中，所述化合物或其藥學上可接受的鹽，其選自，

本發明還提供了上述化合物或其藥學上可接受的鹽在製備治療與KRAS^G12D突變相關疾病的藥物中的應用。

本發明還提供了上述化合物或其藥學上可接受的鹽在製備治療與腫瘤相關疾病的藥物中的應用。

本發明還提供了下列合成方法：

合成方法1：

合成方法2：

本發明還提供了下列測試方法：

測試方法1. KRAS^G12D抑制活性測試

1.目的

通過TR-FRET的方法，篩選出能有效抑制KRAS與GTP結合的化合物。

2.耗材和儀器

3.試劑準備

a.儲存試劑：

1)KRAS核苷酸交換緩衝液

取20mL 1000mM HEPES，20mL 500mM EDTA，10mL 5M氯化鈉，100% 0.1mL吐溫20，949.9mL水，配製成1L溶液，用過濾法消毒，4℃條件下儲存。

2)KRAS實驗緩衝液

取20mL 1000mM HEPES，10mL 1000mM氯化鎂，30mL 5M氯化鈉，100% 0.05mL吐溫20，939.95mL水，配製成1L溶液，用過濾法消毒，4℃條件下儲存。

3)KRAS/Bodipy GDP/Tb-SA混合液

取9.5μL 95μM KRAS^G12D蛋白，440.5μL KRAS核苷酸交換緩衝液混合，室溫下孵育1小時後，與8.4μL 17.9μM Tb-SA，1.8μL 5mM Bodipy GDP，9539.8μL KRAS實驗緩衝液，配製成1L溶液，混合後室溫下靜置6小時，儲存至-80℃條件下。

b.實驗試劑：

1)KRAS酶溶液

取73.3μL KRAS/Bodipy GDP/Tb-SA混合液，2126.7μL KRAS實驗緩衝液，配製成2200μL溶液。

2)SOS/GTP混合液

取1.59μL 166μM SOS蛋白，198μL 100mM GTP，2000.41μL KRAS實驗緩衝液，配製成2200μL溶液。

4.實驗流程

1)對照化合物母液濃度為1mM，待測化合物母液濃度為10mM。轉移9μL對照化合物和待測化合物至384-LDV板內；2)使用Bravo將LDV板上的化合物進行10點3倍稀釋；3)使用ECHO將LDV板上的化合物轉移9nL至實驗板；4)使用Dragonfly自動加樣儀依次向實驗板每孔中加入3μL 3nM Kras/0.5nM TB-SA/30nM BodipyGDP混合液和3μL Ras buffer，以1000rpm/min，將實驗板離心1分鐘；5)實驗板在室溫中孵育1小時；6)使用Dragonfly自動加樣儀在實驗板每孔加入3μL 120nM SOS/9mM GTP混合液，以1000rpm/min，將實驗板離心1分鐘；7)實驗板在室溫中孵育1小時；8)使用Envision讀板並記錄數據；9)使用Excel和Xlfit進行數據分析，計算待測化合物IC₅₀。

測試方法2. AGS細胞p-ERK抑制測試

1.目的

通過HTRF的方法，篩選出能有效抑制AGS細胞p-ERK的化合物。

2.實驗流程

1).AGS細胞種於透明96孔細胞培養板中，80μL細胞懸液每孔，每孔包含10000個細胞，細胞板放入二氧化碳培養箱，37度過夜孵育； 2).結束孵育後，棄掉細胞上清，加入80μL每孔的培養基，培養基含0.02%血清，細胞板放入二氧化碳培養箱，37度過夜孵育；3).取2μL化合物加入78μL細胞培養基，混勻後，取20μL化合物溶液加入到對應細胞板孔中，細胞板放回二氧化碳培養箱繼續孵育3小時；4).結束孵育後，棄掉細胞上清加入50μL 1X細胞裂解液每孔，室溫搖晃孵育30分鐘；5).使用detection buffer將Phospho-ERK1/2 Eu Cryptate antibody和Phospho-ERK1/2 d2 antibody稀釋20倍；6).取16μL細胞裂解物上清每孔到新的384白色微孔板中，再加入2μL Phospho-ERK1/2 Eu Cryptate antibody稀釋液和2μL Phospho-ERK1/2 d2 antibody稀釋液，常溫孵育至少4小時；7).孵育結束後使用多標記分析儀讀取HTRF excitation：320nm,emission：615nm，665nm；8).計算待測化合物IC₅₀。

測試方法3. GP2D細胞p-ERK抑制測試

1.目的

通過HTRF的方法，篩選出能有效抑制GP2D細胞p-ERK的化合物。

2.實驗流程

1).GP2D細胞種於透明96孔細胞培養板中，80μL細胞懸液每孔，每孔包含8000個細胞，細胞板放入二氧化碳培養箱，37度過夜孵育；2).取2μL化合物加入78μL細胞培養基，混勻後，取20μL化合物溶液加入到對應細胞板孔中，細胞板放回二氧化碳培養箱繼續孵育1小時； 3).結束孵育後，棄掉細胞上清加入50μL 1X細胞裂解液每孔，室溫搖晃孵育30分鐘；4).使用detection buffer將Phospho-ERK1/2 Eu Cryptate antibody和Phospho-ERK1/2 d2 antibody稀釋20倍；5).取16μL細胞裂解物上清每孔到新的384白色微孔板中，再加入2μL Phospho-ERK1/2 Eu Cryptate antibody稀釋液和2μL Phospho-ERK1/2 d2 antibody稀釋液，常溫孵育至少4小時；6).孵育結束後使用多標記分析儀讀取HTRF excitation：320nm,emission：615nm，665nm；7).計算待測化合物IC₅₀。

測試方法4. PANC0403細胞p-ERK抑制測試

1.實驗材料：

PANC0403細胞購自南京科佰；RPMI-1640培養基購自Biological Industries；胎牛血清購自Biosera；Advanced Phospho-ERK1/2(THR202/TYR204)KIT購自Cisbio。

2.實驗方法：

1)PANC0403細胞種於透明96孔細胞培養板中，80μL細胞懸液每孔，每孔包含10000個PANC0403細胞，細胞板放入二氧化碳培養箱，37度過夜孵育；2)將待測化合物用100%DMSO稀釋到2mM作為第一個濃度，然後再用移液器進行5倍稀釋至第8個濃度，即從2mM稀釋至25.6nM。取2μL化合物加入78μL細胞饑餓培養基，混勻後，取20μL化合物溶液加入到對應細胞板孔中，細胞板放回二氧化碳培養箱繼續孵育3小時，此時化合物濃度為10μM至0.128nM，DMSO濃度為0.5%；3)結束孵育後，棄掉細胞上清加入50μL細胞裂解液每孔，室溫搖晃孵育30分鐘；4)使用Detection buffer將Phospho-ERK1/2 Eu Cryptate antibody和Phospho-ERK1/2 d2 antibody稀釋20倍；5)取16μL細胞裂解物上清每孔到新的384白色微孔板中，再加入2μL Phospho-ERK1/2 Eu Cryptate antibody稀釋液和2μL Phospho-ERK1/2 d2 antibody稀釋液，常溫孵育過夜；6)孵育結束後使用多標記分析儀讀取HTRF excitation：320nm,emission：615nm，665nm。

3.數據分析：

利用方程式(Sample-Min)/(Max-Min)*100%將原始數據換算成抑制率，IC₅₀的值即可通過四參數進行曲線擬合得出(GraphPad Prism中log(inhibitor)vs.response--Variable slope模式得出)。

Max孔：陽性對照孔讀值為1X裂解液

Min孔：陰性對照孔讀值為0.5%DMSO細胞孔細胞裂解液

測試方法5. 化合物在腫瘤細胞系AsPC-1和GP2D中的抗細胞增殖作用

研究目的

本實驗通過檢測化合物在腫瘤細胞系AsPC-1和GP2D中對體外細胞活性的影響而研究化合物抑制細胞增殖的作用。

實驗材料

Ultra Low Cluster-96孔板(Corning-7007)

Greiner CELLSTAR 96-孔板(# 655090)

Promega CellTiter-Glo 3D發光法細胞活性檢測試劑盒(Promega-G9683)

2104-10 EnVision讀板器，PerkinElmer

RPMI 1640，DMEM，PBS(磷酸鹽緩衝溶液)，FBS(胎牛血清)，Antibiotic-antimycotic(抗生素-抗真菌藥)，L-glutamine(L-麩醯胺酸)，DMSO(二甲基亞碸)

實驗方法及步驟

細胞培養

將腫瘤細胞系按培養方法所示的培養條件在37℃，5% CO₂的培養箱中進行培養。定期傳代，取處於對數生長期的細胞用於鋪板。

細胞鋪板

用台盼藍進行細胞染色並計數活細胞。

將細胞濃度調整至合適濃度。AsPC-1，7000個細胞/孔；GP2D，8000個細胞/孔

在ULA培養板中每孔加入135μL細胞懸液，在空白對照空中加入同樣體積且不含細胞的培養液。

鋪板後，立刻在室溫條件下將ULA培養板離心10分鐘，離心條件1000rpm。

注意：在離心後，務必小心處理後續操作，不要造成不必要的震盪。

將培養板在37℃，5% CO₂，及100%相對濕度的培養箱中培養過夜。

10X化合物工作液的配製及化合物處理細胞(第一天)

配製好10X化合物工作液(DMSO 10X工作液)後，分別向ULA培養板內加入15μL的10X化合物工作液，在溶媒對照和空白對照中加入15μL DMSO-細胞培養液混合液。

將96孔細胞板放回培養箱中培養120小時。

每天觀察細胞成球情況直至實驗終點。

CellTiter-Glo發光法細胞活性檢測(第五天)

以下步驟按照Promega CellTiter-Glo 3D發光法細胞活性檢測試劑盒(Promega # G9683)的說明書來進行。

在每孔中加入150μL(等於每孔中細胞培養液體積)的CellTiter-Glo 3D試劑。用鋁箔紙包裹細胞板以避光。

將培養板在軌道搖床上振搖5分鐘。

小心的用移液管上下吹打10次，混勻空內混合物。在繼續下一步之前需確保細胞球體充分被分離。

然後將ULA培養板內的溶液轉移至黑底培養板(#655090)中，在室溫放置25分鐘以穩定發光信號。

在2104 EnVision讀板器上檢測發光信號。

數據分析

用下列公式來計算檢測化合物的抑制率(Inhibition rate，IR)：IR(%)=(1-(RLU化合物-RLU空白對照)/(RLU溶媒對照-RLU空白對照))*100%。在Excel中計算不同濃度化合物的抑制率，然後用GraphPad Prism軟體作抑制曲線圖和計算相關參數，包括最小抑制率，最大抑制率及IC₅₀。

測試方法6. CD-1小鼠口服及靜脈注射受試化合物的藥代動力學研究

實驗目的

測試CD-1小鼠口服及靜脈注射化合物的體內藥代動力學。

實驗步驟

受試化合物與5%DMSO+95%(10%HP-β-CD)水溶液混合，渦旋並超聲波震盪，製備得到0.5mg/mL澄清溶液(靜脈)或3mg/mL澄清溶液(口服)，微孔濾膜過濾後備用。選取7至10周齡的雄性SD小鼠，靜脈注射給予候選化合物溶液，劑量約為2mg/kg。口服給予候選化合物溶液，劑量約為30mg/kg。收集一定時間的全血，製備得到血漿，以LC-MS/MS方法分析藥物濃度，並用Phoenix WinNonlin軟體(美國Pharsight公司)計算藥代參數。

測試方法7. 血漿蛋白結合實驗(PPB)實驗

實驗目的

採用平衡透析法測定化合物在CD-1小鼠、Sprague-Dawley大鼠、比格犬、食蟹猴和人血漿中的蛋白結合率。

實驗方法

採用上述五個物種的血漿分別配製化合物濃度為2μM的血漿樣品，置於96孔快速平衡透析裝置中，在37±1℃下用磷酸鹽緩衝溶液透析4h。本實驗採用華法林作為對照化合物。血漿和透析緩衝液中待測物的濃度用LC-MS/MS法進行測定。

測試方法8. AsPC-1細胞p-ERK抑制測試

1.目的

通過HTRF的方法，評估化合物對AsPC-1細胞p-ERK水平的抑制活性。

2.實驗材料：

ASPC-1細胞購ATCC；RPMI-1640培養基購自GIbco；胎牛血清購自Hyclone；Advanced Phospho-ERK1/2(THR202/TYR204)KIT購自Bioauxilium-

3.實驗方法：

1)ASPC-1細胞種於白底384孔細胞培養板中，8μL細胞懸液每孔，每孔包含7500個細胞，細胞板放入二氧化碳培養箱，37度過夜孵育；

2)將待測化合物用100% DMSO稀釋到3mM作為第一個濃度，然後再用移液器進行稀釋成3000、1000、300、100、30、10、3、1、0.3、0.1μM十個濃度。取2μL化合物加入198μL細胞饑餓培養基，混勻後，取15μL化合物溶液加入35μL細胞饑餓培養基並混勻，隨後將最後一步的化合物溶液以每孔4μL加入到對應細胞板孔中，細胞板放回二氧化碳培養箱繼續孵育3小時，此時化合物濃度為3000、1000、300、100、30、10、3、1、0.3、0.1nM，

3)結束孵育後，每孔加入3μL 5X細胞裂解液每孔，室溫搖晃孵育30分鐘；

4)使用Detection buffer將Phospho-ERK1/2 Eu Cryptate antibody和Phospho-ERK1/2 d2 antibody稀釋20倍，並按1：1比例混勻，按每孔5μL加入到細胞培養板，常溫孵育2h。

5)孵育結束後使用多標記分析儀讀取HTRF excitation：320nm,emission：615nm,665nm。

4.數據分析：

Max孔：陽性對照孔讀值為1X裂解液

Min孔：陰性對照孔讀值為0.5%DMSO細胞孔細胞裂解液

相關定義

除非另有說明，本文所用的下列術語和短語旨在具有下列含義。一個特定的術語或短語在沒有特別定義的情況下不應該被認為是不確定的或不清楚的，而應該按照普通的含義去理解。當本文中出現商品名時，意在指代其對應的商品或其活性成分。

這裡所採用的術語「藥學上可接受的」，是針對那些化合物、材料、組合物和/或劑型而言，它們在可靠的醫學判斷的範圍之內，適用於與人類和動物的組織接觸使用，而沒有過多的毒性、刺激性、過敏性反應或其它問題或併發症，與合理的利益/風險比相稱。

術語「藥學上可接受的鹽」是指本發明化合物的鹽，由本發明發現的具有特定取代基的化合物與相對無毒的酸或鹼製備。當本發明的化合物中含有相對酸性的功能團時，可以通過在純的溶液或合適的惰性溶劑中用足夠量的鹼與這類化合物接觸的方式獲得鹼加成鹽。藥學上可接受的鹼加成鹽包括鈉、鉀、鈣、銨、有機胺或鎂鹽或類似的鹽。當本發明的化合物中含有相對鹼性的官能團時，可以通過在純的溶液或合適的惰性溶劑中用足夠量的酸與這類化合物接觸的方式獲得酸加成鹽。本發明的某些特定的化合物含有鹼性和酸性的官能團，從而可以被轉換成任一鹼或酸加成鹽。

本發明的藥學上可接受的鹽可由含有酸根或鹼基的母體化合物通過常規化學方法合成。一般情況下，這樣的鹽的製備方法是：在水或有機溶劑或兩者的混合物中，經由游離酸或鹼形式的這些化合物與化學計量的適當的鹼或酸反應來製備。

本發明的化合物可以存在特定的幾何或立體異構體形式。本發明設想所有的這類化合物，包括順式和反式異構體、(-)-和(+)-對映體、(R)-和 (S)-對映體、非對映異構體、(D)-異構體、(L)-異構體，及其外消旋混合物和其他混合物，例如對映異構體或非對映體富集的混合物，所有這些混合物都屬本發明的範圍之內。烷基等取代基中可存在另外的不對稱碳原子。所有這些異構體以及它們的混合物，均包括在本發明的範圍之內。

本發明的化合物可以在一個或多個構成該化合物的原子上包含非天然比例的原子同位素。例如，可用放射性同位素標記化合物，比如氚(³H)，碘-125(¹²⁵I)或C-14(¹⁴C)。又例如，可用重氫取代氫形成氘代藥物，氘與碳構成的鍵比普通氫與碳構成的鍵更堅固，相比於未氘化藥物，氘代藥物有降低毒副作用、增加藥物穩定性、增強療效、延長藥物生物半衰期等優勢。本發明的化合物的所有同位素組成的變換，無論放射性與否，都包括在本發明的範圍之內。

術語「任選」或「任選地」指的是隨後描述的事件或狀況可能但不是必需出現的，並且該描述包括其中所述事件或狀況發生的情況以及所述事件或狀況不發生的情況。

術語「被取代的」是指特定原子上的任意一個或多個氫原子被取代基取代，取代基可以包括重氫和氫的變體，只要特定原子的價態是正常的並且取代後的化合物是穩定的。當取代基為氧(即=O)時，意味著兩個氫原子被取代。氧取代不會發生在芳香基上。術語「任選被取代的」是指可以被取代，也可以不被取代，除非另有規定，取代基的種類和數目在化學上可以實現的基礎上可以是任意的。

當任何變量(例如R)在化合物的組成或結構中出現一次以上時，其在每一種情況下的定義都是獨立的。因此，例如，如果一個基團被0-2個R所取代，則所述基團可以任選地至多被兩個R所取代，並且每種情況下的R都有獨立的選項。此外，取代基和/或其變體的組合只有在這樣的組合會產生穩定的化合物的情況下才是被允許的。

當一個連接基團的數量為0時，比如-(CRR)₀-，表示該連接基團為單鍵。

當其中一個變量選自單鍵時，表示其連接的兩個基團直接相連，比如A-L-Z中L代表單鍵時表示該結構實際上是A-Z。

當所列舉的連接基團沒有指明其連接方向，其連接方向是任意的，例如，

中連接基團L為-M-W-，此時-M-W-既可以按與從左往右的讀取順序相同的方向連接環A和環B構成

，也可以按照與從左往右的讀取順序相反的方向連接環A和環B構成

。所述連接基團、取代基和/或其變體的組合只有在這樣的組合會產生穩定的化合物的情況下才是被允許的。

除非另有規定，當某一基團具有一個或多個可連接位點時，該基團的任意一個或多個位點可以通過化學鍵與其他基團相連。當該化學鍵的連接方式是不定位的，且可連接位點存在H原子時，則連接化學鍵時，該位點的H原子的個數會隨所連接化學鍵的個數而對應減少變成相應價數的基團。所述位點與其他基團連接的化學鍵可以用直形實線鍵

、直形虛線鍵

、或波浪線

表示。例如-OCH₃中的直形實線鍵表示通過該基團中的氧原子與其他基團相連；

中的直形虛線鍵表示通過該基團中的氮原子的兩端與其他基團相連；

中的波浪線表示通過該苯基基團中的1和2位碳原子與其他基團相連；

表示該哌啶基上的任意可連接位點可以通過1個化學鍵與其他基團相連，至少包括

、

、

、

這4種連接方式，即使-N-上畫出了H原子，但是

仍包括

這種連接方式的基團，只是在連接1個化學鍵時，該位點的H會對應減少1個變成相應的一價哌啶基。

除非另有說明，用楔形實線鍵

和楔形虛線鍵

表示一個立體中心的絕對構型，用直形實線鍵

和直形虛線鍵

表示立體中心的相對構型，用波浪線

表示楔形實線鍵

或楔形虛線鍵

，或用波浪線

表示直形實線鍵

或直形虛線鍵

。

除非另有說明，當化合物中存在雙鍵結構，如碳碳雙鍵、碳氮雙鍵和氮氮雙鍵，且雙鍵上的各個原子均連接有兩個不同的取代基時(包含氮原子的雙鍵中，氮原子上的一對孤對電子視為其連接的一個取代基)，如果該化合物中雙鍵上的原子與其取代基之間用

表示，則表示該化合物的(Z)型異構體、(E)型異構體或兩種異構體的混合物。除非另有說明，術語「互變異構體」或「互變異構體形式」是指在室溫下，不同官能團異構體處於動態平衡，並能很快的相互轉化。若互變異構體是可能的(如在溶液中)，則可以達到互變異構體的化學平衡。例如，質子互變異構體(proton tautomer)(也稱質子轉移互變異構體(prototropic tautomer))包括通過質子遷移來進行的互相轉化，如酮-烯醇異構化和亞胺-烯胺異構化。價鍵異構體(valence tautomer)包括一些成鍵電子的重組來進行的相互轉化。其中酮-烯醇互變異構化的具體實例是戊烷-2,4-二酮與4-羥基戊-3-烯-2-酮兩個互變異構體之間的互變。

除非另有規定，術語「鹵代素」或「鹵素」本身或作為另一取代基的一部分表示氟、氯、溴或碘原子。

除非另有規定，術語「C_1-3烷基」用於表示直鏈或支鏈的由1至3個碳原子組成的飽和碳氫基團。所述C_1-3烷基包括C_1-2和C_2-3烷基等；其可以是一價(如甲基)、二價(如亞甲基)或者多價(如次甲基)。C_1-3烷基的實例包括但不限於甲基(Me)、乙基(Et)、丙基(包括n-丙基和異丙基)等。

除非另有規定，術語「C_1-3烷氧基」表示通過一個氧原子連接到分子的其餘部分的那些包含1至3個碳原子的烷基基團。所述C_1-3烷氧基包括C_1-2、C_2-3、C₃和C₂烷氧基等。C_1-3烷氧基的實例包括但不限於甲氧基、乙氧基、丙氧基(包括正丙氧基和異丙氧基)等。

除非另有規定，「C_2-3烯基」用於表示直鏈或支鏈的包含至少一個碳-碳雙鍵的由2至3個碳原子組成的碳氫基團，碳-碳雙鍵可以位於該基團的任何位置上。所述C_2-3烯基包括C₃和C₂烯基；所述C_2-3烯基可以是一價、二價或者多價。C_2-3烯基的實例包括但不限於乙烯基、丙烯基等。

除非另有規定，「C_2-3炔基」用於表示直鏈或支鏈的包含至少一個碳-碳三鍵的由2至3個碳原子組成的碳氫基團，碳-碳三鍵可以位於該基團的任何位置上。其可以是一價、二價或者多價。所述C_2-3炔基包括C₃和C₂炔基。C_2-3炔基的實例包括但不限於乙炔基、丙炔基等。

除非另有規定，「C_2-4炔基」用於表示直鏈或支鏈的包含至少一個碳-碳三鍵的由2至4個碳原子組成的碳氫基團，碳-碳三鍵可以位於該基團的任何位置上。所述C_2-4炔基包括C_2-3、C₄、C₃和C₂炔基等。其可以是一價、二價或者多價。C_2-4炔基的實例包括但不限於乙炔基、丙炔基、丁炔基等。

除非另有規定，「C_3-5環烷基」表示由3至5個碳原子組成的飽和環狀碳氫基團，其為單環體系，所述C_3-5環烷基包括C_3-4和C_4-5環烷基等；其可以是一價、二價或者多價。C_3-5環烷基的實例包括，但不限於，環丙基、環丁基、環戊基等。

除非另有規定，本發明術語「5-6元雜芳環」和「5-6元雜芳基」可以互換使用，術語「5-6元雜芳基」表示由5至6個環原子組成的具有共軛π電子體系的單環基團，其1、2、3或4個環原子為獨立選自O、S和N的雜原子，其餘為碳原子。其中氮原子任選地被四級銨化，氮和硫雜原子可任選被氧化(即NO和S(O)_p，p是1或2)。5-6元雜芳基可通過雜原子或碳原子連接到分子的其餘部分。其可以是一價、二價或者多價。所述5-6元雜芳基包括5元和6元雜芳基。所述5-6元雜芳基的實例包括但不限於吡咯基(包括N-吡咯基、2-吡咯基和3-吡咯基等)、吡唑基(包括2-吡唑基和3-吡唑基等)、咪唑基(包括N-咪唑基、2-咪唑基、4-咪唑基和5-咪唑基等)、

唑基(包括2-

唑基、4-

唑基和5-

唑基等)、三唑基(1H-1,2,3-三唑基、2H-1,2,3-三唑基、1H-1,2,4-三唑基和4H-1,2,4-三唑基等)、四唑基、異

唑基(3-異

唑基、4-異

唑基和5-異

唑基等)、噻唑基(包括2-噻唑基、4-噻唑基和5-噻唑基等)、呋喃基(包括2-呋喃基和3-呋喃基等)、噻吩基(包括2-噻吩基和3-噻吩基等)、吡啶基(包括2-吡啶基、3-吡啶基和4-吡啶基等)、吡

基或嘧啶基(包括2-嘧啶基和4-嘧啶基等)。

除非另有規定，本發明術語「5-10元雜芳環」和「5-10元雜芳基」可以互換使用，術語「5-10元雜芳基」是表示由5至10個環原子組成的具有共軛π電子體系的環狀基團，其1、2、3或4個環原子為獨立選自O、S和N的雜原子，其餘為碳原子。其可以是單環、稠合雙環或稠合三環體系，其中各個環均為芳香性的。其中氮原子任選地被四級銨化，氮和硫雜原子可任選被氧化(即NO和S(O)_p，p是1或2)。5-10元雜芳基可通過雜原子或碳原子連接到分子的其餘部分。其可以是一價、二價或者多價。所述5-10元雜芳基包括5-8元、5-7元、5-6元、5元和6元雜芳基等。所述5-10元雜芳基的實例包括但不限於吡咯基(包括N-吡咯基、2-吡咯基和3-吡咯基等)、吡唑基(包括2-吡唑基和3-吡唑基等)、咪唑基(包括N-咪唑基、2-咪唑基、4-咪唑基和5-咪唑基等)、

唑基(包括2-

唑基、4-

唑基和5-

唑基(3-異

唑基、4-異

唑基和5-異

基、嘧啶基(包括2-嘧啶基和4-嘧啶基等)、苯並噻唑基(包括5-苯並噻唑基等)、嘌呤基、苯並咪唑基(包括2-苯並咪唑基等)、苯並

唑基、吲哚基(包括5-吲哚基等)、異喹啉基(包括1-異喹啉基和5-異喹啉基等)、喹喔啉基(包括2-喹喔啉基和5-喹喔啉基等)或喹啉基(包括3-喹啉基和6-喹啉基等)。

除非另有規定，C_n-n+m或C_n-C_n+m包括n至n+m個碳的任何一種具體情況，例如C_1-12包括C₁、C₂、C₃、C₄、C₅、C₆、C₇、C₈、C₉、C₁₀、C₁₁、和C₁₂，也包括n至n+m中的任何一個範圍，例如C_1-12包括C_1-3、C_1-6、C_1-9、C_3-6、C_3-9、C_3-12、C_6-9、C_6-12、和C_9-12等；同理，n元至n+m元表示環上原子數為n至n+m個，例如3-12元環包括3元環、4元環、5元環、6元環、 7元環、8元環、9元環、10元環、11元環、和12元環，也包括n至n+m中的任何一個範圍，例如3-12元環包括3-6元環、3-9元環、5-6元環、5-7元環、6-7元環、6-8元環、和6-10元環等。

本發明的化合物可以通過本發明所屬技術領域具有通常知識者所熟知的多種合成方法來製備，包括下面列舉的具體實施方式、其與其他化學合成方法的結合所形成的實施方式以及本發明所屬技術領域具有通常知識者所熟知的等同替換方式，優選的實施方式包括但不限於本發明的實施例。

本發明的化合物可以通過本發明所屬技術領域具有通常知識者所熟知的常規方法來確認結構，如果本發明涉及化合物的絕對構型，則該絕對構型可以通過本領域常規技術手段予以確證。例如單晶X射線繞射法(SXRD)，把培養出的單晶用Bruker D8 venture繞射儀收集繞射強度數據，光源為CuKα輻射，掃描方式：φ/ω掃描，收集相關數據後，進一步採用直接法(Shelxs97)解析晶體結構，便可以確證絕對構型。

本發明所使用的溶劑可經市售獲得。本發明採用如下縮略詞：PhNTf₂代表N-苯基雙(三氟甲烷磺醯)亞胺；Pd₂(dba)₃代表三[二亞苄基丙酮]二鈀；DavePhos代表2-二環己膦基-2'-(N,N-二甲胺)-聯苯；LIHMDS代表雙三甲基矽基胺基鋰；NaOH代表氫氧化鈉；NaHCO₃代表碳酸氫鈉；Boc₂O代表二碳酸二第三丁酯；Et₃N代表三乙胺；Tf₂O代表三氟乙酸酐；Xantphos代表4,5-雙二苯基膦-9,9-二甲基氧雜蒽；DMF代表N,N-二甲基甲醯胺；DMAP代表4-二甲胺基吡啶；TBDPSCl代表三級丁基二苯基氯矽烷；DCM代表二氯甲烷；EA代表乙酸乙酯；Grubbs二代催化劑代表1,3-雙(2,4,6-三甲基苯基)-2-(咪唑烷亞基)(二氯苯亞甲基)(三環己基膦)釕；TFA代表三氟乙酸；THF代表四氫呋喃；NBS代表N-溴代琥珀醯亞胺；PMB代表對甲氧基苄基；Tf代表三氟甲磺醯基；Boc代表碳酸三級丁醯基；TIPS代表三異丙基矽基；MOM代表亞甲基甲醚基。

化合物依據本領域常規命名原則或者使用ChemDraw®軟體命名，市售化合物採用供應商目錄名稱。

圖1、化合物A與和KRAS^G12D蛋白的結合模式圖；圖2、化合物B與和KRAS^G12D蛋白的結合模式圖；圖3、化合物C與和KRAS^G12D蛋白的結合模式圖；圖4、化合物D與和KRAS^G12D蛋白的結合模式圖；圖5、化合物E與和KRAS^G12D蛋白的結合模式圖；圖6、化合物F與和KRAS^G12D蛋白的結合模式圖。

技術效果

本發明化合物對KRAS^G12D突變的酶有良好的抑制作用，可有效抑制p-ERK，對KRAS^G12D突變的細胞具有良好的細胞增殖抑制活性，可有效抑制體內腫瘤生長，且耐藥性佳。本發明化合物具有較好的藥代動力學性質。

下面通過實施例對本發明進行詳細描述，但並不意味著對本發明任何不利限制。本文已經詳細地描述了本發明，其中也公開了其具體實施例方式，對本發明所屬技術領域具有通常知識者而言，在不脫離本發明精神和範圍的情況下針對本發明具體實施方式進行各種變化和改進將是顯而易見的。

計算例1

本發明還提供了所述化合物或其藥學上可接受分子對接過程是通過使用Maestro(Schrödinger版本2017-2)中的Glide SP[1]和默認選項進行的。選取PDB數據庫中KRAS_G12C的晶體結構PDB：6UT0，將Cys12模擬突變為Asp12，經過能量優化後，作為對接模板。為了準備蛋白質，使用Maestro[2]的蛋白質準備嚮導模塊添加氫原子，並使用OPLS3力場。對於配體的準備，使用LigPrep生成了分子的三維結構，並進行了能量最小化[3]，使用confgen模塊對小分子構象進行採樣。以6UT0的配體作為質心生成了邊長為25Å *25Å *25Å的正方體對接網格。在分子對接過程中放置參考化合物。分析蛋白質受體與配體的相互作用類型，分析蛋白質受體與配體的相互作用類型，然後根據計算得到的docking scrore以及結合模式選擇並保存了合理對接構象，如圖1至圖6所示。

[1]Glide,Schrödinger,LLC,New York,NY,2017.

[2]Maestro,Schrödinger,LLC,New York,NY,2017.

[3]LigPrep,Schrödinger,LLC,New York,NY,2017.

結論：本發明化合物與KRAS G12D有較好的結合。

實施例1

步驟1：中間體1-2的合成

向預先乾燥的反應瓶中加入化合物1-1(20g,137.40mmoL)，N,N-二甲基甲醯胺(200mL)，碘化鉀(22.81g,137.40mmoL)，無水碳酸鉀(47.47g,343.50mmoL)，攪拌下加入對甲氧基氯苄(44.11g,281.67mmoL,38.36mL)，然後升溫至65℃攪拌4小時，反應液降溫至室溫，然後墊矽藻土過濾，200mL甲基三級丁基醚淋洗濾餅，然後濾液加入200mL水，萃取，水相用乙酸乙酯(100mL*2)萃取，然後合併有機相，飽和食鹽水(200mL*3)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，得到粗品，粗品用50mL石油醚打漿48小時，過濾，收集濾餅，乾燥得到產品，得到化合物1-2，直接用於下一步，¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ=7.18-7.17(m,5H),6.85-6.82(m,6H),4.24(s,4H),3.74-3.71(m,6H)。MS m/z=386.1[M+H]⁺。

步驟2：中間體1-3的合成

將2,2,6,6-四甲基哌啶(43.93g,311.00mmoL,52.80mL)溶於四氫呋喃(300mL)，然後降溫至-5℃，加入正丁基鋰(2.5M,124.40mL)，攪拌0.5小時，然後降溫至-60℃，加入化合物1-2(30g,77.75mmoL)的四氫呋喃(30mL)溶液，攪拌0.5小時，然後加入N,N-二甲基甲醯胺(113.66g,1.55moL,119.64mL)，繼續攪拌0.5小時。向反應液加入200mL飽和氯化銨。乙酸乙酯萃取(200mL)，分液，飽和食鹽水洗100mL，無水硫酸鈉乾燥過濾濃縮。過柱純化(石油醚：乙酸乙酯=10：1)，得化合物1-3。

步驟3：中間體1-4的合成

將鈉氫(6.38g,159.47mmol,60%含量)溶於四氫呋喃(300mL)，N₂置換兩次，然後降溫至0℃，加入乙醯乙酸甲酯(18.52g,159.47mmol,17.15mL)，攪拌10min，然後加入正丁基鋰(2.5M,63.79mL)，繼續攪拌10min，降溫-15℃，加入化合物1-3(30g,72.49mmol)的四氫呋喃(50mL)溶液，繼續攪拌30min。向反應液中加入100mL飽和氯化銨，乙酸乙酯萃取(100mL*2)，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮。過柱純化(石油醚：乙酸乙酯=10：1)，得化合物1-4。MS m/z=530.2[M+H]⁺。

步驟4：中間體1-5的合成

將化合物1-4(20g,37.74mmoL)溶於無水二氯(50mL)中，氮氣保護下加入N,N-二甲基甲醯胺二甲基縮醛(5.40g,45.28mmoL,6.02mL)，25℃反應16小時，加入三氟化硼乙醚(6.43g,45.28mmoL,5.59mL)，20℃反應1小時，將反應液加入50mL飽和碳酸氫鈉溶液中，用二氯甲烷(20mL*2)萃取分液，合併有機相，用30mL飽和食鹽水洗滌後，無水硫酸鈉乾燥過濾後濃縮。粗品過柱純化(石油醚：乙酸乙酯=10：1-1：1)得到化合物1-5。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ=8.45(s,1H),7.14(m,4H),7.00-6.69(m,6H),5.80(m,1H),4.27-4.10(m,5H),3.79(m,1H),3.94-3.66(m,8H),2.98-2.73(m,1H)。MS m/z=540.2[M+H]⁺。

步驟5：中間體1-6的合成

將化合物1-5(12g,22.22mmoL)加入無水四氫呋喃(30mL)中，在氮氣保護下加入三二級丁基硼氫化鋰(11.83g,62.22mmoL,13.60mL)，-60℃反應1小時，將反應液加入40mL水中，用乙酸乙酯(20mL*2)萃取，合併有機相，再用20mL飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥後濃縮，粗品過柱純化(石油醚：乙酸乙酯=100：0=3：1)，得到化合物1-6。MS m/z=542.2[M+H]⁺。

步驟6：中間體1-7的合成

將化合物1-6(5.5g,10.15mmoL)加入到乙醇(15mL)和水(3mL)中，加入碳酸氫鈉(2.15g,20.30mmoL)和甲基異硫脲硫酸鹽(2.74g,30.44mmoL)，45-50℃反應16小時，反應液用水(20mL)和乙酸乙酯(20mL*2)萃取，合併有機相用飽和食鹽水(20mL*2)洗滌，無水硫酸鈉乾燥後濃縮，得到化合物1-7，粗品直接投下一步。MS m/z=582.2[M+H]⁺。

步驟7：中間體1-8的合成

將化合物1-7(6g,8.04mmoL)加入到無水二氯甲烷(20mL)中，0℃加入N,N-二異丙基乙胺(3.12g,24.12mmoL,4.20mL)，降溫到0-10℃，將三氟甲磺酸酐(4.08g,14.47mmoL,2.39mL)緩慢滴加，0℃反應0.5小時，將反應液加入到20mL飽和氯化銨中，用無水二氯甲烷(10mL*2)萃取，合併有機相，用20mL飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥過濾後濃縮，粗品過柱純化(石油醚：乙酸乙酯=1：0-0：1)得到化合物1-8。MS m/z=714.1[M+H]⁺。

步驟8：中間體1-9的鹽酸鹽合成

將化合物1-8(0.8g,1.12mmoL)，化合物1-1A(475.62mg,2.24mmoL)，DIPEA(434.33mg,3.36mmoL,585.35μL)加入到N,N-二甲基甲醯胺(5mL)中，50℃反應1小時。將反應液加入飽和氯化銨(20mL)中，用乙酸乙酯(20mL*2)萃取，合併有機相，再用20mL飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥後濃縮，粗品用過柱純化(石油醚：乙酸乙酯=3：1)，再進行製備HPLC(色譜柱：Phenomenex Luna C18 250*50mm*10μm；流動相：[水(0.05%鹽酸)-乙腈]；(乙腈)%：65%-95%,10min)分離，得到化合物1-9的鹽酸鹽。MS m/z=776.3[M+H]⁺。

步驟9：中間體1-10的合成

將化合物1-9的鹽酸鹽(1.2g)溶於N,N-二甲基甲醯胺(5mL)，降溫至0℃，然後加入N-溴代丁二醯亞胺(330.13mg,1.85mmoL)，20℃攪拌1小時。向反應液中加入30mL水，用乙酸乙酯萃取(30mL*2)，合併有機相，飽和食鹽水洗(20mL*2)，無水硫酸鈉乾燥過濾濃縮。過柱純化(石油醚：乙酸乙酯=3：1-1：1)得化合物1-10。MS m/z=856.1[M+H]⁺。

步驟10：中間體1-11的合成

將化合物1-10(0.3g,350.77μmol)，氧化亞銅(133.61mg,701.55μmol)，氟磺醯二氟乙酸甲酯(336.94mg,1.75mmol,223.14μL)溶於N,N-二甲基甲醯胺(10mL)，氮氣保護，在100℃攪拌1小時。反應液合併倒入30mL水中，用甲基三級丁醚(20mL*2)萃取，合併有機相，再用飽和食鹽水(20mL*2)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。過柱純化(石油醚：乙酸乙酯=10：1-1：1)得化合物1-11。MS m/z=844.2[M+H]⁺。

步驟11：中間體1-12的合成

將化合物1-11(0.35g,414.52μmol)加入反應瓶中，加入無水二氯甲烷(5mL)開始攪拌，然後加入間氯過氧苯甲酸(126.24mg,621.78μmol,85%含量)，25℃反應1小時。反應液加入5mL 5%硫代硫酸鈉溶液，用二氯甲烷(10mL*2)萃取，合併有機相，再用飽和食鹽水(5mL*2)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮。過柱純化(石油醚：乙酸乙酯=10：1-1：1)，得化合物1-12。MS m/z=860.2[M+H]⁺。

步驟12：中間體1-13的合成

將化合物1-2A(256.28mg,1.61mmol)加入無水四氫呋喃(5mL)中，加入三級丁醇鈉(123.76mg,1.29mmol)，-15℃反應15min，加入化合物1-12(0.277g,321.96μmol)，-15℃反應1小時。反應液中加入5mL飽和氯化銨，用乙酸乙酯(10mL*3)萃取，合併有機相，飽和食鹽水(20mL*2)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮。經過柱純化(二氯甲烷：甲醇=20：1-10：1)，得化合物1-13。MS m/z=955.3[M+H]⁺。

步驟13：化合物1A和1B的合成

將化合物1-13(0.450g,470.98μmol)放入三氟乙酸(2.85g,24.96mmol,1.85mL)和二氯甲烷(9mL)中，-10-0℃反應1小時，將反應液倒入10mL水中，將下層二氯甲烷相分出，水相用飽和碳酸氫鈉溶液調節pH值為8~10，再用乙酸乙酯(5mL*2)萃取，合併有機相，用飽和食鹽水(5mL*2)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮，經高效液相色譜分離(色譜柱：Phenomenex C18 75*30mm*3μm；流動相：[水(0.05%鹽酸)-乙腈]；(乙腈)%：1%-35%,8min)，再進行SFC拆分(色譜柱：DAICEL CHIRALCEL OD(250mm*30mm,10μm)；流動相：[超臨界CO₂-甲醇(0.1%氨水)]；甲醇(0.1%氨水)%：36%-36%,7min)得到化合物1A和化合物1B。手性SFC分析(色譜柱：DAICEL CHIRALCEL OD-3(150mm*4.6mm,3μm)；流動相：[超臨界CO₂-甲醇(0.1%二乙胺)]；(甲醇)%：40%-40%)，化合物1A，Rt=3.151分鐘，ee值99%；化合物1B，Rt=4.085分鐘，ee值93%。

化合物1A：¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ=6.93(d,J=8.0Hz,1H),5.68-5.46(m,1H),5.32-5.19(m,1H),4.78-4.69(m,1H),4.63-4.46(m,2H),4.41-4.28(m,1H),4.24-4.08(m,2H),4.04-3.74(m,5H),3.73-3.65(m,1H),3.55-3.41(m,2H),3.02-2.89(m,1H),2.80-2.48(m,2H),2.48-2.24(m,4H),2.24-2.04(m,3H),2.03-1.91(m,1H),2.04-1.90(m,1H)。MS m/z=615.4[M+H]⁺。

化合物1B：¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ=6.98-6.85(m,1H),5.54-5.39(m,1H),5.35-5.19(m,2H),4.76-4.66(m,1H),4.63-4.53(m,1H),4.39-4.14(m,4H),4.06-3.89(m,3H),3.78-3.62(m,2H),3.62-3.50(m,2H),3.27-3.09(m,3H),2.99-2.86(m,1H),2.48-2.25(m,2H),2.13-1.83(m,6H)。MS m/z=615.4[M+H]⁺。

實施例2

步驟1：中間體2-2的合成

將化合物2-1(11.0g,18.66mmol)加入到無水甲醇(150mL)中，然後加入乙酸銨(7.19g,93.29mmol)，所得反應液升溫至60℃攪拌反應48小時。將反應液濃縮，殘留物溶解於300mL乙酸乙酯中，然後加入水50mL攪拌至澄清，分去水層，有機相用水(30mL*2)和飽和食鹽水(30mL)洗滌，有機相濃縮得到粗品，過柱純化(石油醚：乙酸乙酯=30：1)，得到化合物2-2。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ：7.16(d,J=8.4Hz,4H),6.84(d,J=8.4Hz,4H),6.62 (d,J=8.4Hz,1H),4.99(br,J=10.5Hz,1H),4.63(d,J=13.6Hz,1H),4.42-4.21(m,5H),3.80(s,6H),3.71(s,3H),3.07(br,J=11.2,16.2Hz,1H),2.34-2.32(m,3H),2.26-2.19m,1H)；MS m/z=589.1[M+H]⁺。

步驟2：中間體2-3的合成

將化合物2-2(7.56g,12.84mmol)和N,N-二異丙基乙胺(3.32g,25.69mmol,4.47mL)溶解於四氫呋喃(150mL)中，氮氣保護下冷卻到0℃，然後向其中滴加化合物2-2A(2.10g,15.41mmol,1.64mL)，滴畢，15℃攪拌反應15小時。將反應液濃縮得粗品，過柱純化(石油醚：乙酸乙酯=10：1)，得到化合物2-3，MS m/z=689.1[M+H]⁺。

步驟3：中間體2-4的合成

將化合物2-3(2.94g,4.27mmol)溶解於四氫呋喃(30mL)中，然後加入甲醇鈉(461.27mg,8.54mmol)和無水甲醇(0.5mL)，所得反應液在氮氣保護下，50℃攪拌反應4小時。將反應液冷卻到室溫，用0.5M鹽酸調節反應液pH至4-5，然後旋去溶劑，殘留物溶解於150mL乙酸乙酯中然後用水30mL和飽和食鹽水30mL洗滌，有機相濃縮得粗品，過柱純化(石油醚：乙酸乙酯=10：1)，得到化合物2-4。MS m/z=657.2[M+H]⁺。

步驟4：中間體2-5的合成

將化合物2-4(200mg,304.59μmol)溶解於二甲基亞碸(10mL)中，然後加入氯化鋰(51.65mg,1.22mmol,24.95μL)，所得反應液升溫至120℃攪拌反應4小時，加150mL乙酸乙酯稀釋，然後用水(20mL*3)和飽和食鹽水(20mL)洗滌，有機相濃縮得到粗品，過柱純化(甲醇/二氯甲烷=1：10)得到化合物2-5，MS m/z=599.2[M+H]⁺。

步驟5：中間體2-6的合成

將化合物2-5(400mg,668.24μmol)和PhNTf₂(477.46mg,1.34mmol)加入到N-N-二甲基甲醯胺(1.5mL)中，然後加入N,N-二異丙基乙基胺(345.46mg,2.67mmol,465.58μL)，反應液15℃攪拌反應3小時。將反應液濃縮得到粗品，過柱純化(石油醚：乙酸乙酯=10：1)得到化合物2-6，MS m/z=862.8[M+H]⁺。

步驟6：中間體2-7的合成

將化合物2-6(580mg,672.30μmol)和化合物1-1A(142.72mg,672.30μmol)加入到N,N-二甲基甲醯胺(4mL)中，然後加入N,N-二異丙基乙基胺(173.78mg,1.34mmol,234.21μL)，所得反應液升溫至60℃攪拌反應3小時。將反應液濃縮得到粗品。過柱純化(石油醚：乙酸乙酯=10：1)得到化合物2-7，MS m/z=925.4[M+H]⁺。

步驟7：中間體2-8A和2-8B的合成

將化合物2-7(106mg,114.60μmol)和化合物1-2A(54.74mg,343.81μmol)加入到二

烷(2mL)中，然後加入Pd₂(dba)₃(20.99mg,22.92μmol)，DavePhos(18.04mg,45.84μmol)和LIHMDS(1M,343.81μL)，所得反應液氮氣置換後，升溫至95℃反應15小時。將反應液濃縮，殘留物中加入水(1mL)和乙酸乙酯(30mL)，然後用0.5M鹽酸調節pH至7-8，分出有機相，水相用10mL乙酸乙酯萃取兩次，合併有機相，濃縮得粗品。粗品製備板分離(乙酸乙酯：甲醇=20：1)。將上述製備板分離得到的樣品繼續用經高效液相色譜分離(色譜柱：Welch Xtimate C18 100*40mm*3μm；流動相：[水(0.075%三氟乙酸)-乙腈]；(乙腈)%：43%-73%,8min)，濃縮得化合物2-8A。MS m/z=934.9[M+H]⁺和化合物2-8B,MS m/z=934.9[M+H]⁺。

步驟8：化合物2A的鹽酸鹽和2B的鹽酸鹽合成

將三氟乙酸(0.3mL)加入到化合物2-8A(43mg,46.04μmol)中，氮氣保護下20℃攪拌反應2小時。將反應液濃縮得粗品。溶解於乙腈中，用經高效液相色譜分離(色譜柱：Xtimate C18 150*40mm*5μm；流動相：[水(0.05%鹽酸)-乙腈]；(乙腈)%：5%-35%,10min)，得到化合物2A的鹽酸鹽，MS m/z=594.3[M+H]⁺。

將三氟乙酸(0.3mL)加入到化合物2-8B(52mg,55.67μmol)中，所得反應液在氮氣保護下，20℃攪拌反應2小時.將反應液濃縮得粗品。粗品用經高效液相色譜分離(色譜柱：Xtimate C18 150*40mm*5μm；流動相：[水(0.05%鹽酸)-乙腈]；(乙腈)%：5%-35%,10min)，得到化合物2B的鹽酸鹽，LCMS m/z=594.4[M+H]⁺。

實施例3

步驟1：中間體3-2的合成

將化合物3-1(50g,139.46mmol)加入到無水二氯甲烷(500mL)中，加入N,N-二異丙基乙二胺(54.07g,418.39mmol,72.87mL)，降溫至0℃，緩慢滴加入氯甲基甲醚(15.59g,193.64mmol,14.71mL)，緩慢升溫至18℃反應1小時。將反應液加入到500mL的冰水中，用DCM(100mL*2)萃取，合併有機相，再用500mL的飽和碳酸鈉，500mL的飽和氯化銨和500mL的半飽和食鹽水分別洗滌，無水硫酸鈉乾燥過濾後濃縮，粗品經柱層析(石油醚：乙酸乙酯=3：1)純化得到化合物3-2。MS m/z=403.2[M+H]⁺。

步驟2：中間體3-3的合成

將化合物3-2(36g,89.42mmol)和N,N-二異丙基乙二胺(34.67g,268.27mmol,46.73mL)加入到無水二氯甲烷(360mL)中，降溫至-40℃，滴加入三氟甲磺酸酐(37.85g,134.14mmol,22.13mL)，反應1小時。將反應液加入到300mL的冰水中，分液萃取，有機相用200mL的飽和碳酸氫鈉溶液洗滌，再用200mL的飽和氯化銨洗滌，200mL的食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥過濾後濃縮。粗品用柱層析(石油醚：乙酸乙酯=10：1)純化得到化合物3-3。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ=7.71(dd,J=5.2,9.2Hz,1H),7.43(d,J=2.4Hz,1H),7.36(d,J=2.0Hz,1H),7.33(t,J=8.8Hz,1H),5.28(s,2H),3.53(s,3H),1.28-1.18(m,21H)。

步驟3：中間體3-4的合成

將化合物3-3(34g,63.59mmol)加入到N,N-二甲基甲醯胺(340mL)中，加入乙烯基三丁基錫(42.03g,132.55mmol,38.56mL)和氯化鋰(10.78g,254.38mmol,5.21mL)，氮氣置換三次，氮氣保護下加入三苯基膦二氯化鈀(4.46g,6.36mmol)，30℃反應20小時。向反應液中加入300mL的20%的KF水溶液和300mL甲基三級丁基醚攪拌20分鐘，墊矽藻土過濾，濾餅用甲基三級丁基醚(50mL*4)淋洗，除去水相，有機相用500mL的飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥過濾後減壓濃縮。粗品經過柱(石油醚：乙酸乙酯=5：1)純化得到化合物3-4。MS m/z=413.3[M+H]⁺。

步驟4：中間體3-5的合成

將化合物3-4(20g,48.47mmol)加入到無水四氫呋喃(200mL)和水(50mL)中，降溫至0℃，加入高碘酸鈉(31.10g,145.42mmol,8.06mL)和四氧化鋨(1.5g,5.90mmol,306.12μL)，緩慢升溫至18℃，反應1小時。將反應液加入到300mL 10%硫代硫酸鈉溶液中，用乙酸乙酯(100mL*2)萃取，500mL的飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥過濾後濃縮。粗品經過柱(石油醚：乙酸乙酯=5：1)純化得到化合物3-5。MS m/z=415.3[M+H]⁺。

步驟5：中間體3-7的合成

向化合物3-6(1g,4.05mmol)和1-1A(1.03g,4.86mmol)的二氯甲烷溶液中加入N,N-二異丙基乙胺(1.05g,8.11mmol)，得到的混合物室溫25℃攪拌小時。向反應液中加入水(20mL)和二氯甲烷(50mL)，攪拌5分鐘，除去水相，有機相減壓濃縮，殘餘物經過柱機純化(石油醚：乙酸乙酯=5：1)得到的化合物3-7。MS m/z=423.1[M+H]⁺。

步驟6：中間體3-8的合成

冰水浴0℃氮氣保護下，向化合物3-7(0.6g,1.42mmol)的四氫呋喃(5mL)溶液中分批加入四氫鋁鋰(0.1g,2.84mmol)，得到的混合物自然升至25℃攪拌2小時，向反應液中依次滴加水(0.1g)、15%氫氧化鈉水溶液(0.1g)和水(0.3g)攪拌30分鐘，過濾，四氫呋喃(10mL)，濾液減壓濃縮，得到化合物3-8。MS m/z=381.1[M+H]⁺。

步驟7：中間體3-9的合成

乾冰-乙酸乙酯浴零下65℃氮氣保護下，向化合物3-8(0.5g,1.33mmol)的四氫呋喃(10mL)溶液中滴加二異丙基胺基鋰(1.51mL,3.02mmol,2M)，攪拌30分鐘後滴加化合物3-5(0.5g,1.51mmol)的四氫呋喃(5mL)溶液，得到的混合物自然升至25℃，向反應液中加入0.1M稀鹽酸水溶液(15mL)和乙酸乙酯(20mL)，攪拌10分鐘，除去水相，有機相減壓濃縮，殘餘物經過柱機純化(石油醚：乙酸乙酯=5：1)，得到化合物3-9。MS m/z=795.4[M+H]⁺。

步驟8：中間體3-10的合成

乾冰-乙酸乙酯浴零下65℃氮氣保護下，向化合物3-9(0.51g,641.44μmol)的四氫呋喃(10mL)溶液中滴加正丁基鋰(2.5M,564.47μL)，攪拌30分鐘後，滴加對甲苯磺醯氯(183.43mg,962.16μmol)的四氫呋喃(3mL)，得到的混合物自然升至25℃攪拌2小時，向反應液中加入50毫升飽和氯化銨水溶液淬滅反應，再加入50毫升乙酸乙酯萃取，除去水相，有機相減壓濃縮。殘餘物經過柱機純化(石油醚：乙酸乙酯=5：1)，得到化合物3-10。MS m/z=777.4[M+H]⁺。

步驟9：中間體3-11的合成

向化合物3-10(45mg,57.91μmol)的二氯甲烷(2mL)溶液中加入間氯過氧苯甲酸(14.11mg,69.49μmol,85%含量)，得到的混合物室溫25℃攪拌2小時。向反應液中加入2毫升飽和碳酸氫鈉水溶液和2毫升飽和亞硫酸鈉水溶液和5毫升二氯甲烷攪拌5分鐘，除去水相，有機相減壓濃縮。殘餘物經過製備TLC純化(石油醚：乙酸乙酯=5：1)，得化合物3-11。MS m/z=793.4[M+H]⁺。

步驟10：中間體3-12的合成

冰水浴0℃氮氣保護下，向化合物1-2A(32.12mg,201.76μmol)的四氫呋喃(2mL)溶液中加入三級丁醇鈉(19.39mg,201.76μmol)，攪拌30分鐘後加入化合物3-11(40mg,50.44μmol)，得到的反應液自然升至25℃攪拌2小時。向反應液中加入0.5M稀鹽酸調節pH值約為6，加入5毫升乙酸乙酯和2毫升飽和食鹽水攪拌5分鐘，除去水相，有機相減壓濃縮，得到化合物3-12。MS m/z=888.5[M+H]⁺。

步驟11：中間體3-13的鹽酸鹽合成

向化合物3-12(45mg,50.67μmol)的二氯甲烷(1mL)溶液中加入鹽酸-乙酸乙酯(4M,126.67μL)，得到的反應液室溫攪拌2小時，反應液直接減壓濃縮得化合物3-13的鹽酸鹽。MS m/z=744.4[M+H]⁺。

步驟12：中間體3-14的合成

向化合物3-13的鹽酸鹽(0.5g,612.06μmol)的MeOH(10mL)溶液中加入NaHCO₃(2M,1.53mL)和Boc₂O(267.16mg,1.22mmol,281.22μL)，反應液室溫攪拌2小時。反應液減壓濃縮除去甲醇，向殘餘物中加入10mL乙酸乙酯和5mL飽和食鹽水攪拌5分鐘，除去水相，有機相減壓濃縮，得化合物3-14，MS m/z=844.4[M+H]⁺。

步驟13：中間體3-15的合成

向化合物3-14(1.2g,1.42mmol)的DCM(5mL)溶液中加入Et₃N(287.70mg,2.84mmol,395.74μL)和Tf₂O(601.64mg,2.13mmol,351.83μL)，反應液室溫攪拌2小時。向反應液中加入10mL水和10mL二氯甲烷攪拌10分鐘，除去水相，有機相減壓濃縮。殘餘物經過柱機純化(石油醚：乙酸乙酯=1：1)得化合物3-15，MS m/z=976.2[M+H]⁺。

步驟14：中間體3-16的合成

將化合物3-15(200mg,204.88μmol)，化合物3-15A(74.26mg,409.76μmol,68.76μL)，碳酸銫(200.26mg,614.64μmol)，Xantphos(23.71mg,40.98μmol)加入無水甲苯(5mL)中，氮氣置換3次，加入三(二亞苄基丙酮)二鈀(18.76mg,20.49μmol)，氮氣保護下100℃反應3小時。反應液降至室溫，矽藻土過濾，30mL乙酸乙酯淋洗，母液通過減壓濃縮得到化合物3-16。

步驟15：中間體3-17的鹽酸鹽合成

將化合物3-16(180mg,178.69μmol)加入到4M鹽酸甲醇溶液(5mL)中，室溫反應1小時。直接將反應液濃縮，得到粗品化合物3-17鹽酸鹽。MS m/z=743.3[M+H]⁺。

步驟16：化合物3的鹽酸鹽合成

將化合物3-17的鹽酸鹽(180.00mg)，氟化銫(73.60mg,484.51μmol)，無水碳酸鉀(267.86mg,1.94mmol)加入N,N-二甲基甲醯胺(10mL)中，60℃反應16小時。向反應液中加入10mL的水，利用10mL*2的乙酸乙酯萃取，合併有機相，用飽和食鹽水(10mL*3)洗滌，無水硫酸鈉乾燥過濾後濃縮。用經高效液相色譜分離(色譜柱：Phenomenex luna C18 80*40mm*3μm；流動相：[水(0.05%鹽酸)-乙腈]；(乙腈)%：1%-20%,7min)，得到化合物3的鹽酸鹽，¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ=7.75-7.63(m,1H),7.42-7.24(m,2H),6.91-6.81(m,1H),6.57-6.41(m,1H),5.58-5.45(m,2H),5.36-5.14(m,1H),5.06-4.90(m,1H),4.84-4.58(m,2H),3.97-3.78(m,3H),3.66-3.38(m,2H),3.10-2.89(m,4H),2.85-2.64(m,1H),2.15-1.89(m,6H),1.87-1.56(m,9H)。MS m/z=587.3[M+H]⁺。

實施例4

步驟1：中間體1-13B的合成

將化合物1-12(4.16g,26.15mmol)溶於無水四氫呋喃(150mL)中，氮氣保護，降溫至20℃，加入三級丁醇鈉(2.85g,29.64mmol)攪拌0.5小時，將化合物1-2A(15g,17.43mmol)的THF(15mL)溶液滴加到反應液中，在此溫度下攪拌0.5小時，反應液倒入飽和氯化銨水溶液(200mL)中，加入乙酸乙酯(100mL x 3)萃取，合併有機相濃縮得到粗品。通過高效液相色譜分離，(色譜柱：Phenomenex luna C18(250*70mm,15μm)；流動相：[水(0.05%鹽酸)-乙腈]；乙腈%：40%-70%,20min)，得到粗品，再次分離，(色譜柱：Phenomenex luna c18 250mm*100mm*10μm；流動相：[水(0.025%三氟乙酸)-乙腈]；乙腈%：40%-70%,20min)，得到產品，經過超臨界液相色譜(SFC)分離純化(色譜柱：DAICEL CHIRALPAK IE(250mm*30mm,10μm)；流動相：A：超臨界CO₂，B：[乙腈/異丙醇=1：1(0.1%氨水)]；B%：65%-65%,45min)，得到化合物1-13A和1-13B。SFC分析：(色譜柱：DAICEL CHIRALPAK IE(50mm*4.6mm,3μm)；流動相：A：超臨界CO₂，B：[乙腈/異丙醇=1：1(0.1%二異丙胺)]；B%：50%-50%)化合物1-13A，保留時間time=2.143；化合物1-13B保留時間time=4.935。MS m/z=955.5[M+H]⁺。

步驟2：中間體4-1的合成

將化合物1-13B(120mg,125.60μmol)，無水磷酸鉀(53.32mg,251.19μmol)，乙烯三氟硼酸鉀(25.24mg,188.39μmol)溶於1,4-二

烷(1mL)，水(0.2mL)中，氮氣置換三次，加入氯[(正丁基二(1-金剛烷基)膦)-2-(2-胺基聯苯)]鈀(II)(8.40mg,12.56μmol)在80℃下反應3小時。倒入水溶液(5mL)中，乙酸乙酯(10mL x 2)萃取，分液，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，得到化合物4-1。MS m/z=947.4[M+H]⁺。

步驟3：化合物4的鹽酸鹽合成

將化合物4-1(100mg,105.59μmol)溶於無水二氯甲烷(2mL)中，加入三氟乙酸(770.00mg,6.75mmol)，在20℃下反應3小時。反應液濃縮得到粗品。通過高效液相色譜分離(色譜柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3μm；流動相：[水(0.05%鹽酸)-乙腈]；乙腈%：1%-30%,8min)。得到化合物4的鹽酸鹽。MS m/z=607.4[M+H]⁺。

實施例5

步驟1：中間體5-1的合成

將化合物1-13B(100mg,104.66μmol)，磷酸鉀(55.54mg,261.66μmol)，環丙基硼酸(89.90mg,1.05mmol)加入1,4-二

烷(2.5mL)、水(0.5mL)中，氮氣置換3次，加入氯化(2-二環己基膦-2',6'-二甲氧基-1,1'-聯苯基)[2-(2'-胺基-1,1'-聯苯基)]鈀II)(7.54mg,10.47μmol)，氮氣保護下100℃反應3小時。反應液降至室溫減壓濃縮得到粗品化合物5-1，MS m/z=961.5[M+H]⁺。

步驟2：化合物5的鹽酸鹽合成

向化合物5-1(150mg,156.08μmol)中加入三氟乙酸(1.60g,14.05mmol)，無水二氯甲烷(5mL)中，0℃反應16小時。將反應液倒入10mL水中，將有機相分出，水相利用乙酸乙酯(5mL*2)萃取，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮。通過高效液相色譜分離純化(色譜柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3μm；流動相：[水(0.05%鹽酸)-乙腈]；乙腈%：1%-30%,8min)得到化合物5的鹽酸鹽。MS m/z=621.3[M+H]⁺。

實施例6

步驟1：中間體6-1的合成

將化合物1-13B(120mg,125.60μmol)，雙(乙腈)氯化鈀(II)(3.26mg,12.56μmol)，碳酸銫(122.76mg,376.79μmol)，2-二環己基膦-2',4',6'-三異丙基聯苯(11.97mg,25.12μmol)溶於乙腈(1.5mL)中，氮氣置換三次，室溫攪拌0.5小時，再將三甲基矽基乙炔(49.34mg,502.38μmol)加入到反應液中，80℃反應10小時。反應液直接濃縮得到化合物6-1。MS m/z=1017.5[M+H]⁺。

步驟2：化合物6的合成

將化合物6-1(100mg,98.31μmol)溶於無水二氯甲烷(4mL)中，加入三氟乙酸(1.54g,13.51mmol)，在20℃下反應3小時。倒入飽和碳酸氫鈉水溶液(5mL)中，分液，水相用二氯甲烷(5mL x 3)萃取，飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮得到粗品。經高效液相製備色譜分離、純化(色譜柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10μm；流動相：[水(10mM NH₄HCO₃)-乙腈]；乙腈%：30%-50%,8min)，得到化合物6。MS m/z=605.4[M+H]⁺。

實施例7

步驟1：中間體7-1的合成

將化合物1-13B(200mg,209.33μmol)溶於無水甲苯(2.5mL)中，氮氣鼓泡10min，氮氣保護下加入二氯雙[二第三丁基-(4-二甲基胺基苯基)膦]鈀(II)(44.47mg,62.80μmol)和1-丙炔基三-正-丁基錫(275.56mg,837.30μmol)，110℃反應3小時。將反應液倒入5mL水中，用乙酸乙酯(3mL x 2)萃取，合併有機相，用飽和食鹽水(3mL x 2)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮，得到化合物7-1，MS m/z=959.3[M+H]⁺。

步驟2：化合物7的鹽酸鹽合成

將化合物7-1(450mg,469.21μmol)溶入二氯甲烷(2.5mL)，加入三氟乙酸(802.50mg,7.04mmol)，25℃反應4小時，反應液直接濃縮。經高效液相色譜純化(色譜柱：Phenomenex luna C18 250*50mm*10μm；流動相：[水(0.05%鹽酸)-乙腈]；乙腈%：5%-35%,10min)得到化合物7的鹽酸鹽，MS m/z=619.2[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ 7.00-6.92(m,1H),5.74-5.50(m,1H),5.31-5.17(m,1H),5.03-4.92(m,2H),4.79-4.72(m,2H),4.31-4.16(m,2H),4.09-3.92(m,4H),3.90-3.83(m,1H),3.64-3.54(m,1H),3.54-3.36 (m,3H),3.11-3.01(m,1H),2.84-2.61(m,2H),2.57-2.47(m,1H),2.44-2.33(m,1H),2.36(br d,J=8.5Hz,6H),2.06-2.02(m,3H)。

實施例8

步驟1：中間體8-1A的合成

將化合物8-1進行製備超臨界液相色譜(SFC)(色譜柱：ChiralPak IH,250*50mm,10μm；流動相：A：超臨界CO₂，B：[0.1%氨水-乙醇]；B%：20%-20%，運行時間3.7min，出峰時間：1.266min和1.521min)，收集出峰時間為1.521min的樣品得到化合物8-1A，SFC分析方法(色譜柱：Chiralpak IH-3,100×4.6mm I.D.,3μm；流動相：A(超臨界CO₂)和B(乙醇，含0.1%異丙胺)；梯度：B%=10~50%，4min；流速：3.4mL/min；波長：220nm；壓力：2000psi)，化合物8-1A，Rt=1.489min，ee值98.82%。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ=4.99-4.86(m,2H),4.26-3.95(m,3H),3.59(m,1H),3.00-2.88(m,1H),2.87-2.12(m,4H),1.91(s,1H),1.20-1.08(m,3H)。

步驟2：中間體8-2的合成

將四氫鋁鋰(1.55g,40.15mmol)溶於無水四氫呋喃(30mL)中，降溫至0℃，氮氣保護下加入化合物8-1A(2.8g,13.38mmol)的無水四氫呋喃(20mL)溶液，70℃反應1小時。0℃條件下向反應液中加入1.5mL水，加入1.5mL 15%NaOH溶液，再加入4.5mL水，攪拌20分鐘，反應液過濾，濾餅用10mL四氫呋喃洗滌，濾液濃縮，得到化合物8-2。¹H NMR(400MHz,CDCl₃) δ=4.99-4.86(m,2H),4.26-3.95(m,3H),3.59(m,1H),3.00-2.88(m,1H),2.74-2.27(m,4H),1.91(s,1H),1.20-1.08(m,3H)。

步驟3：中間體1-11B的合成

將化合物1-11進行超臨界液相色譜分析(色譜柱：(S,S)Whelk-01 100×4.6mm I.D.,5.0μm；流動相：A：超臨界CO₂，B：[0.1%乙醇胺-異丙醇]；B%：50%，流速：2.5mL/min，保留時間為2.705min和3.357min)，收集保留時間為3.357min的樣品得到化合物1-11B，製備SFC(手性柱：REGIS(s,s)WHELK-O1(250mm*50mm,10um)；流動相：A：超臨界CO₂，B：[75%異丙醇-25%乙腈]；B%：50%-50%)。手性SFC分析(色譜柱：(S,S)Whelk-O1 100×4.6mm I.D.,5.0μm；流動相：A：超臨界CO₂，B：[75%異丙醇/25%乙腈/0.05%二乙胺]；B%：50%-50%，流速：2.5mL/min)，化合物1-11A，保留時間為2.536min,ee值99%；化合物1-11B，保留時間為3.317min，ee值99%，MS m/z=844.5[M+H]⁺。

步驟4：中間體1-12B的合成

將化合物1-11B(1g,1.18mmol)加入到20mL二氯甲烷中，加入間氯過氧苯甲酸(240.44mg,1.18mmol,85%純度)，室溫反應1小時。向反應液加入5mL 5%硫代硫酸鈉溶液，用二氯甲烷(10mL x 2)萃取，合併有機相，再用飽和食鹽水(5mL x 2)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮，粗品經柱層析純化(石油醚：乙酸乙酯=10：1-1：1)，得化合物1-12B，MS m/z=860.4[M+H]⁺。

步驟5：中間體8-3的合成

將化合物8-2(103.29mg,674.14μmol)溶於無水四氫呋喃(3mL)，加入三級丁醇鈉(64.78mg,674.14μmol)，降溫至-15℃反應15分鐘，加入化合物 1-12B(0.29g,337.07μmol)，在-15℃-25℃條件下反應1小時。向反應液加入5mL飽和氯化銨，使用乙酸乙酯(5mL x 2)萃取，飽和食鹽水(5mL x 2)洗滌，無水硫酸鈉乾燥後濃縮，粗品經過柱層析純化(石油醚：乙酸乙酯=0：1)，得到化合物8-3，MS m/z=949.2[M+H]⁺。

步驟6：中間體8-4的合成

將化合物8-3(0.24g,252.77μmol)溶於無水甲苯(2.5mL)中，氮氣鼓泡10分鐘，氮氣保護下加入二氯雙[二第三丁基-(4-二甲基胺基苯基)膦]鈀(53.69mg,75.83μmol,53.69μL)和三丁基(1-丙炔基)錫(332.76mg,1.01mmol)，110℃反應2小時。反應液倒入5mL水中，使用乙酸乙酯(3mL x 2)萃取，合併有機相，利用飽和食鹽水(3mL x 2)洗滌，無水硫酸鈉乾燥後濃縮，得粗品化合物8-4。MS m/z=953.4[M+H]⁺。

步驟7：化合物8的鹽酸鹽合成

將化合物8-4(100mg,104.92μmol)溶解在三氟乙酸(3mL)中，25℃反應0.5小時，反應完成後，直接濃縮，經高效液相色譜分離(色譜柱：Xtimate C18 150*40mm*5μm；流動相：[water(0.05%HCl)-乙腈]；乙腈%：5%-35%,10min)，得到化合物8的鹽酸鹽，MS m/z=613.3[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ ppm 6.99-6.93(m,1 H),5.36(br d,J=6.75Hz,2 H),5.24(br dd,J=10.94,4.31Hz,1 H),5.01-4.92(m,2 H),4.78-4.73(m,2 H),4.36(br d,J=14.13Hz,1 H),4.29-4.18(m,2 H),4.08-4.0(m,1 H),3.95(br d,J=14.38Hz,2 H),3.85-3.77(m,1 H),3.56(br d,J=14.63Hz,1 H),3.45-3.37(m,1 H),3.30-3.23(m,1 H),3.15-3.01(m,2 H),2.85(br d,J=15.63Hz,1 H),2.45(br dd,J=12.01,6.50Hz,1 H),2.31-2.03(m,11 H)。

實施例9

步驟1：中間體9-2的合成

秤取化合物9-1(1.2g,6.62mmol)，加入THF(50mL)，降溫至-20℃加入LiAlH₄(1M,6.62mL)，加畢-20℃反應0.5小時，加水淬滅，直接濃縮，柱層析純化(二氯甲烷：甲醇=10：1)，得化合物9-2，MS m/z=154.1[M+H]⁺。

步驟2：中間體9-3的合成

化合物9-2(73.43mg,479.26μmol)溶於無水四氫呋喃(2mL)，加入三級丁醇鈉(46.06mg,479.26μmol)，降溫至-15℃反應15分鐘，加入化合物1-12B(200mg,228.22μmol)，在-15℃-25℃條件下反應1小時，向反應液加入5mL飽和氯化銨，使用乙酸乙酯(5mL x 2)萃取，飽和食鹽水(5mL x 2)洗滌，無水硫酸鈉乾燥後濃縮，經過柱層析純化(石油醚：乙酸乙酯=0：1)得到化合物9-3。MS m/z=949.4[M+H]⁺。

步驟3：化合物9的鹽酸鹽合成

將化合物9-3(0.12g,126.39μmol)溶於無水二氯甲烷(1mL)，降溫至0℃，加入三氟乙酸(302.62mg,2.65mmol,196.51μL),25℃反應2小時。將反應液直接濃縮。進行高效液相色譜製備(色譜柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3μm；流動相：[水(0.05%鹽酸)-乙腈]；乙腈%：5%-40%，運行時間8min)純化後得到化合物9的鹽酸鹽。MS m/z=609.1[M+H]⁺，¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ=6.90(s,1H),6.13-5.78(m,2H),5.31-5.21(m,1H),4.98-4.89(m,3H),4.28-4.14(m,2H),4.07-3.68(m,6H),3.54-3.33(m,4H),3.11-2.99(m,1H),2.61-2.49(m,2H),2.37-1.94(m,8H)。

實施例10

步驟1：中間體10-2的合成

將化合物10-1(1.0g,5.22mmol)溶解於DMF(15mL)中，然後加入K₂CO₃(3.61g,26.09mmol)，攪拌30分鐘後，再加入烯丙基溴(757.46mg,6.26mmol)，室溫反應5小時。將反應液用80mL乙酸乙酯稀釋，然後墊矽藻土過濾，濾液減壓濃縮除去溶劑得到粗品。粗品經柱層析純化(石油醚：乙酸乙酯=10：1)，得化合物10-2。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)：δ=6.07-5.92(m,1H),5.88-5.73(m,1H),5.27-5.18(m,1H),5.16-5.08(m,2H),5.04-4.96(m,1H),3.72-3.61(m,3H),3.30-3.18(m,1H),3.10-2.93(m,2H),2.75-2.63(m,1H),2.34-2.17(m,1H),1.91-1.72(m,3H)。

步驟2：中間體10-3的合成

將化合物10-2(325mg,1.66mmol)溶解於甲苯(36mL)中，然後加入Grubbs二代催化劑(70.65mg,83.22μmol)，在氮氣保護下升溫至120℃攪拌反應20小時。將反應液濃縮得到粗品，經柱層析分離(二氯甲烷：甲醇=20：1)，得化合物10-3。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)：δ=5.94-5.77(m,2H),4.12-4.00(m,1H),3.83-3.72(m,3H),3.49-3.41(m,1H),3.39-3.30(m,1H),2.74-2.59(m,1H),2.43-2.27(m,1H),1.93-1.82(m,3H)。

步驟3：中間體10-4的合成

將化合物10-3(130mg,777.49μmol)溶解於THF(3mL)中，氮氣保護下冷卻到0℃，然後向其中滴加四氫鋁鋰(1M,777.49μL)，0℃攪拌反應0.5小時。將反應液用200μL水淬滅，然後加入20mL乙酸乙酯攪拌2分鐘，加入2g無水硫酸鈉乾燥，墊矽藻土過濾，濾液減壓濃縮除去溶劑，得到化合物10-4。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)：δ=5.74-5.63(m,1H),5.59-5.47(m, 1H),3.92-3.70(m,1H),3.44-3.23(m,3H),3.14-2.99(m,1H),2.62-2.47(m,1H),1.76-1.51(m,5H)。

步驟4：中間體10-5的合成

將化合物10-4(43.68mg,313.82μmol)溶於無水四氫呋喃(2mL)，加入三級丁醇鈉(26.14mg,271.98μmol)，降溫至-15℃反應15分鐘，加入化合物1-12B(180mg,209.22μmol)，在-15℃-25℃條件下反應1小時，反應液加入5mL飽和氯化銨，利用乙酸乙酯(5mL x 2)萃取，飽和食鹽水(5mL x 2)洗滌，無水硫酸鈉乾燥後濃縮，粗品經柱層析純化(石油醚：乙酸乙酯=1：0-0：1)，得化合物10-5。MS m/z=935.2[M+H]⁺。

步驟5：中間體10-6的合成

將化合物10-5(130.00mg,138.97μmol)溶於無水甲苯(1.5mL)中，氮氣鼓泡10分鐘，氮氣保護下加入二氯雙[二第三丁基-(4-二甲基胺基苯基)膦]鈀(29.52mg,41.69μmol,29.52μL)和三丁基(1-丙炔基)錫(182.95mg,555.89μmol)，110℃反應2小時，反應液倒入5mL水中，用乙酸乙酯(3mL x 2)萃取，合併有機相，利用飽和食鹽水(3mL x 2)洗滌，無水硫酸鈉乾燥後濃縮，粗品經過柱層析純化(石油醚：乙酸乙酯=0：1)，然後經高效液相色譜製備法(色譜柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3μm；流動相A：水(0.05%鹽酸)；流動相B：乙腈；運行梯度：乙腈%：35%-70%；運行時間：8min)進一步純化，得到化合物10-6。MS m/z=939.3[M+H]⁺。

步驟6：化合物10的鹽酸鹽合成

將化合物10-6(30mg,31.95μmol)溶於無水二氯甲烷(0.5mL)，0℃加入三氟乙酸(1.16g,10.16mmol,752.18μL)，0-25℃反應3h。將反應液直接濃縮。進行高效液相色譜製備法純化(色譜柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3μm；流動相A：水(0.05%鹽酸)；流動相B：乙腈；運行梯度：乙腈%：5%-35%；運行時間：8min)。凍乾後得到化合物10的鹽酸鹽。MS m/z=599.1[M+H]⁺。

實施例11

步驟1：中間體11-2的合成

將化合物11-1(20g,56.53mmol)溶入鹽酸/乙酸乙酯(4M,120mL)。25℃下反應2小時。反應液直接濃縮得到11-2的鹽酸鹽粗品。粗品直接用於下一步。

步驟2：中間體11-3的合成

將11-2的鹽酸鹽粗品(20g)溶入DMF(65mL)，加入碳酸鉀(14.2g,102mmol)。25℃下反應12小時。反應液用500mL乙酸乙酯稀釋，水(300mL x 2)洗，300mL飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮得到粗品。粗品經柱層析(石油醚：乙酸乙酯=2：1)純化得到化合物11-3。

步驟3：中間體11-4的合成

將化合物11-3(7g,32.23mmol)溶入2-甲基四氫呋喃(75mL)，氮氣置換3次後，氮氣保護下在10℃緩慢加入紅鋁甲苯溶液(37.2g,129mmol,35.8mL,70%純度)。25℃下反應12小時。將反應液逐滴加入到26.0%的酒石酸鈉水溶液中淬滅，使用2-甲基四氫呋喃(200mL)萃取，水相用2-甲基四氫呋喃(50mL x 3)萃取。合併的有機相使用50mL飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮得到化合物11-4。

步驟4：中間體11-5的甲酸鹽的合成

將化合物11-4(2.3g,13.4mmol)溶入DCM(30mL)，加入咪唑(3.66g,53.7mmol),DMAP(164mg,1.34mmol)和TBDPSCl(7.38g,26.9mmol,6.90mL)。45℃下反應12小時。向反應液加入水(50mL)，分離有機相，水相用二氯甲烷(50mL)萃取。合併有機相，用50mL飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮。向其中加入甲基三級丁基醚(10mL)，正庚烷(21mL)和HCl(2M,21mL)，分離出水相，用甲基三級丁基醚：正庚烷=1：2的混合溶劑(20mL*3)洗，再用碳酸鈉水溶液調至pH=7，先使用270mL乙酸乙酯萃取，後使用40mL乙酸乙酯萃取。合併有機相，用20mL飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮得到粗品。粗品經柱層析(石油醚：乙酸乙酯=10：1)分離，分出第一個點(R_f=0.6)得到粗品中間體11-5，再高效液相色譜分離：(色譜柱：Phenomenex luna C18 250*80mm*10μm；流動相：[水(0.225%甲酸)-乙腈]；乙腈%：32%-62%,12min)，得到化合物11-5的甲酸鹽。MS m/z=410.3[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ ppm 7.62-7.53(m,4 H),7.37-7.27(m,6 H),6.47-6.17(m,1 H),3.66(br d,J=14.92Hz,1 H),3.38-3.30(m,2 H),3.25(br d,J=14.79Hz,1 H),3.03-2.94(m,1 H),2.56-2.43(m,2 H),2.12(br d,J=15.41Hz,1 H),1.92(ddd,J=12.20,7.92,3.97Hz,1 H),0.99(s,9 H)1.82-1.51(m,3 H)。¹⁹F NMR(377MHz,CDCl₃)δ ppm -131.66。

步驟5：中間體11-5A的合成

將化合物11-5(3.3g,7.57mmol)用製備手性SFC拆分分離(色譜柱：DAICEL CHIRALPAK IC(250mm*30mm,10μm)；流動相：A：超臨界CO₂，B：[0.1%NH₃H₂O甲醇]；B%：25%-25%,4.5min，出峰時間：2.117min和2.980min)，收集出峰時間為2.117min的樣品得到化合物11-5A。化合物11-5A SFC分析方法(色譜柱：Chiralpak IC-3 50×4.6mm I.D.,3μm；流動相：A(超臨界CO₂)和B(MeOH，含0.05%二乙胺)；梯度：B%=5~10%，流速：3mL/min)，Rt=2.014min，ee值98.5%。MS m/z=410.3[M+H]⁺。

步驟6：中間體11-6的鹽酸鹽合成

將化合物11-5A(1.2g,2.93mmol)溶於24mL 1,4-二

烷，加入濃鹽酸(12M,7.20mL)。95℃下反應12小時。反應液冷卻後，用10mL水稀釋，10mL乙酸乙酯洗滌，水相凍乾即得化合物11-6的鹽酸鹽。¹H NMR(400MHz,D₂O)δ ppm 6.90-6.53(m,1 H),4.22(br d,J=15.04Hz,1 H),3.97(br d,J=15.04Hz,1 H),3.79-3.69(m,1 H),3.67-3.55(m,2 H),3.24-3.14(m,1 H),2.76-2.67(m,1 H),2.64-2.54(m,1 H),2.19-1.94(m,4 H)。¹⁹F NMR(376MHz,CDCl₃)δ ppm -126.73。

步驟7：中間體11-7的合成

將化合物1-12B(300mg,349μmol)溶於無水甲苯(10.0mL)，加入三級丁醇鈉(134mg,1.39mmol,4eq),4A分子篩(500mg)和化合物11-6的鹽酸鹽(109mg,523μmol)。在110℃反應12小時。向反應液倒入30mL的飽和氯化銨水溶液淬滅反應，用乙酸乙酯(30mL)萃取。有機相用飽和食鹽水(20mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥後，過濾濃縮，即得粗品。粗品經柱層析(石油醚：乙酸乙酯=1：1)純化得到化合物11-7。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ ppm 7.14(d,J=8.56Hz,4 H),6.87(d,J=8.68Hz,5 H),6.64-6.36(m,1 H),5.28-5.18(m,1 H),4.79-4.68(m,2 H),4.44-4.24(m,6 H),4.10-3.97(m,2 H),3.94-3.74(m,8 H),3.51-2.94(m,7 H),2.77-2.55(m,2 H),2.32(br d,J=15.16Hz,1 H),2.22-2.11(m,1 H),1.95-1.58(m,7 H),1.51(s,9 H)。¹⁹F NMR(376MHz,CDCl₃)δ ppm -119.86,-50.65。

步驟8：中間體11-8的合成

將化合物11-7(222mg,229μmol)溶於無水甲苯(10.0mL)，加入1-丙炔基三正丁基錫(755mg,2.29mmol)和二氯雙[二第三丁基-(4-二甲基胺基苯基)膦]鈀(II)(162mg,229μmol,162μL)。氮氣置換3次後，在氮氣保護下110℃反應12小時。反應液冷卻濃縮即得粗品，粗品經柱層析(石油醚：乙酸乙酯=1：1)純化得到化合物11-8。MS m/z=971.3[M+H]⁺。

步驟9：化合物11的甲酸鹽合成

將化合物11-8(149mg,129μmol,84%純度)溶入二氯甲烷(10mL)，加入三氟乙酸(770mg,6.75mmol,0.5mL)，25℃下反應12小時。反應液用10mL水和20mL乙酸乙酯稀釋，分離，將有機相用1N稀鹽酸洗(5mL x 2)。所有水相合併後用飽和NaHCO₃水溶液調至pH=8，然後濃縮。得到的固體加入20mL乙腈攪拌，過濾，濾液濃縮得到粗品。粗品進行高效液相色譜分離(色譜柱：Phenomenex luna C18 150*25mm* 10μm；流動相：[水(0.225%甲酸)-乙腈]；乙腈%：9%-39%,10min)。凍乾後得到化合物11的甲酸鹽。MS m/z=631.3[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ ppm 6.93(d,J=8.44Hz,1 H),6.90-6.65(m,1 H),5.19(br dd,J=11.13,3.79Hz,1 H),4.77-4.69(m,2 H),4.41-4.31(m,2 H),4.26(br d,J=13.57Hz,1 H),4.19-4.04(m,3 H),3.86-3.73(m,2 H),3.68-3.61(m,1 H),3.52-3.44(m,1 H),3.37(s,3 H),3.32-3.24(m,2 H),3.06-2.81(m,3 H),2.62(br d,J=16.14Hz,1 H),2.31-2.05(m,6 H),2.02-1.91(m,2 H)。

實施例12

步驟1：中間體12-2的合成

將化合物12-1(20.0g,73.7mmol)和雙-(4-甲氧基苄基)-胺(37.9g,147mmol)加入到N-甲基吡咯烷酮(600mL)中，油浴加熱140℃反應12小時。將反應液用250mL水稀釋，然後用乙酸乙酯(200mL×3)和飽和食鹽水200mL洗滌，有機相乾燥，過濾，濾液減壓濃縮得到粗品。粗品過柱純化(石油醚：乙酸乙酯=20：1)得到化合物12-2。

步驟2：中間體12-3的合成

將化合物12-2(22.0g,49.1mmol)溶解於無水四氫呋喃(220mL)中，氮氣保護下冷卻到-78℃，然後向其中滴加正丁基鋰(2.5M,21.6mL)，滴畢，攪拌反應1小時，然後向其中滴加N,N-二甲基甲醯胺(71.8g,982mmol,75.6mL)，滴畢攪拌反應1小時。向其中加入100mL水淬滅反應，然後用乙酸乙酯(100mL×3)萃取，合併有機相，減壓濃縮得到粗品。粗品過柱純化(石油醚：乙酸乙酯=20：1)得到化合物12-3。MS m/z=397.1[M+H]⁺。

步驟3：中間體12-4的合成

將化合物12-3(15.0g,37.8mmol)溶解於N,N-二甲基甲醯胺(170mL)中，然後加入N-溴代丁二醯亞胺(7.06g,39.6mmol)，所得反應液在氮氣保護下，室溫25℃攪拌反應1小時。向其中加入300mL水淬滅反應，然後用乙酸乙酯(200mL×3)萃取，合併有機相，減壓濃縮得到粗品。粗品過柱純化(石油醚：乙酸乙酯=10：1)得到化合物12-4。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ ppm 10.10(s,1 H),7.16(d,J=8.63Hz,4 H),6.89-6.85(m,4 H),6.76(s,1 H),4.73(s,4 H),3.81(s,6 H)。

步驟4：中間體12-5的合成

將化合物12-4(14.2g,29.8mmol)和氟磺醯基二氟乙酸甲酯(28.6g,149mmol,18.9mL)加入到N,N-二甲基甲醯胺(160mL)中，然後加入碘化亞銅(5.68g,29.8mmol)，所得反應液在氮氣置換後於100℃攪拌反應2.5小時。向其中加入100mL水淬滅反應，然後用乙酸乙酯(300mL×3)萃取，合併有機相，減壓濃縮得到粗品。粗品過柱純化(石油醚：乙酸乙酯=20：1)得到化合物12-5。MS m/z=465.0[M+H]⁺。

步驟5：中間體12-6的合成

將化合物四甲基哌啶(1.45g,10.2mmol)溶解於無水四氫呋喃(100mL)中，氮氣保護下冷卻到-40℃，然後向其中滴加正丁基鋰(2.5M,32.8mL)，滴畢，攪拌反應0.5小時，然後將化合物3-8(7.80g,20.5mmol)溶解於無水四氫呋喃(50mL)中，在-60℃下逐滴加入到反應瓶中，滴畢攪拌反應0.3小時，將化合物12-5(10.4g,22.5mmol)在-60℃下加入到反應中，滴畢攪拌反應0.5小時。向其中加入300mL水淬滅反應，然後用乙酸乙酯(400mL×3)萃取，合併有機相，減壓濃縮得到粗品。粗品過柱純化(石油醚：乙酸乙酯=5：1)得到化合物12-6。MS m/z=845.2[M+H]⁺。

步驟6：中間體12-7的合成

將化合物12-6(6.1g,7.22mmol)溶解於無水甲苯(60mL)中，氮氣保護下向其中加入氰基亞甲基三正丁基膦(5.22g,21.6mmol)，加畢，在100℃下攪拌反應12小時。減壓濃縮得到粗品。粗品過柱純化(石油醚：乙酸乙酯=5：1)得到化合物12-7。MS m/z=827.2[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 7.09(br d,J=8.50Hz,4 H),6.84(br d,J=8.50Hz,4 H),6.53(s,1 H),5.20(br dd,J=10.01,3.00Hz,1 H),4.81-4.54(m,7 H),4.37-4.25(m,2 H),3.80(s,7 H),3.67-3.55(m,1 H),3.50-3.37(m,2 H),3.14-2.92(m,2 H),2.49(s,3 H),1.94(br s,3 H),1.50(s,9 H)。

步驟7：中間體12-8的合成

將化合物12-7(600mg,725μmol)溶解於無水二氯甲烷(6mL)中，氮氣保護下向其中加入間氯過氧苯甲酸(176mg,870μmol,85%純度)，加畢，在25℃下攪拌反應1小時。向反應液中加水(10mL)淬滅，然後用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，合併有機相，減壓濃縮得到粗品。粗品過柱純化(石油醚：乙酸乙酯=2：1)得到化合物12-8。

步驟8：中間體12-9A和12-9B的合成

將化合物12-8(600mg,698μmol)溶解於無水甲苯(5mL)中，氮氣保護下向其中加入三級丁醇鈉(201mg,2.09mmol)和化合物8-2(128mg,837μmol)，加畢，在80℃下攪拌反應12小時。向反應液中加水(10mL)淬滅，然後用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，合併有機相，減壓濃縮得到粗品。粗品過柱純化(石油醚：乙酸乙酯=2：1)得到化合物12-9。將化合物12-9進行製備SFC手性拆分(手性柱：DAICEL CHIRALCEL OD(250mm*30mm,10μm)；流動相：[超臨界CO₂-甲醇(0.1%氨水)]；甲醇(0.1%氨水)%：40%-40%)，得到化合物12-9A和12-9B。SFC分析：(手性柱：DAICEL CHIRALCEL OD-3(50mm*4.6mm,3μm)；流動相：[超臨界CO₂-甲醇(0.05%二乙胺)]；甲醇%：5%-40%)，化合物12-9A，Rt=2.091分鐘，ee值99%；MS m/z=932.4[M+H]⁺；化合物12-9B,Rt=2.331分鐘，MS m/z=932.3[M+H]⁺。

步驟9：化合物12A的三氟乙酸鹽和12B的三氟乙酸鹽的合成

將化合物12-9A(40.0mg,42.9μmol)溶入三氟乙酸(1.54g,13.4mmol,1mL)，50℃下反應9小時。將反應液減壓濃縮後，粗品進行高效液相色譜分離(柱子：Phenomenex luna C18 150*25mm* 10μm；流動相：[水(0.075%三氟乙酸)-乙腈]；乙腈%：8%-38%,8min)。得化合物12A的三氟乙酸鹽。MS m/z=592.2[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ ppm 6.73(s,1 H),5.34(br d,J=8.00Hz,2 H),5.27(dd,J=10.13,3.25Hz,1 H),4.98(br s,1 H),4.74(d,J=13.76Hz,1 H),4.69-4.59(m,2 H),4.46(br d,J=14.26Hz,1 H),4.37(br d,J=14.26Hz,1 H),4.19(br d,J=13.13Hz,2 H),3.99-3.92(m,2 H),3.84-3.76(m,1 H),3.73(br d,J=13.38Hz,1 H),3.57(dd,J=18.26,10.01Hz,1 H),3.42(br d,J=14.01Hz,1 H),3.26(dt,J=11.48,7.08Hz,1 H),3.07(br d,J=16.01 Hz,1 H),2.93(dd,J=18.32,3.19Hz,1 H),2.82(br d,J=16.13Hz,1 H),2.39(dd,J=11.88,6.50Hz,1 H),2.31-2.10(m,6 H),2.04-1.95(m,1 H)。

將化合物12-9B(40.0mg,42.9μmol)溶入三氟乙酸(1.54g,13.4mmol,1mL)，50℃下反應9小時。將反應液減壓濃縮後，粗品進行高效液相色譜分離(柱子：Phenomenex luna C18 150*25mm* 10μm；流動相：[水(0.075%三氟乙酸)-乙腈]；乙腈%：8%-38%,8min)。得化合物12B的三氟乙酸鹽。MS m/z=592.3[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ ppm 6.71(s,1 H),5.32(br d,J=8.50Hz,2 H),5.25(dd,J=10.19,3.19Hz,1 H),4.96(s,1 H),4.73(d,J=13.76Hz,1 H),4.63(s,2 H),4.46(br d,J=14.13Hz,1 H),4.36(br d,J=14.38Hz,1 H),4.17(br d,J=13.01Hz,2 H),4.00-3.89(m,2 H),3.83-3.69(m,2 H),3.55(dd,J=18.20,10.07Hz,1 H),3.41(br d,J=14.13Hz,1 H),3.24(dt,J=11.54,7.11Hz,1 H),3.05(br d,J=16.01Hz,1 H),2.91(dd,J=18.20,3.31Hz,1 H),2.80(br d,J=16.26Hz,1 H),2.43-2.33(m,1 H),2.28-2.08(m,6 H),2.03-1.93(m,1 H)。

實施例13

12-9A→13-1A→13A

12-9B→13-1B→13B

步驟1：中間體13-1A和13-1B的合成

將化合物12-9A(250mg,268μmol)溶於無水甲苯(1mL)，加入1-丙炔基三正丁基錫(264mg,804μmol)和二氯雙[二第三丁基-(4-二甲基胺基苯基)膦]鈀(II)(37.9mg,53.6μmol)。氮氣置換3次後，氮氣保護下100℃反應12小時後，反應液冷卻濃縮即得粗品。粗品經薄層製備板(二氯甲烷：甲醇=15：1)分離得化合物13-1A。

參考步驟1，使用12-9B為原料，得到化合物13-1B。

步驟2：化合物13A的三氟乙酸鹽和13B的三氟乙酸鹽的合成

將化合物13-1A(120mg,128μmol)溶入三氟乙酸(1.54g,13.4mmol,1mL)，50℃下反應9小時。將反應液減壓濃縮後，粗品進行高效液相色譜分離(柱子：Phenomenex luna C18 150*25mm* 10μm；流動相：[水(0.075%三氟乙酸)-乙腈]；乙腈%：10%-40%,9min)。得化合物13A的三氟乙酸鹽。MS m/z=596.3[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ ppm 6.80(s,1 H),5.43-5.26(m,3 H),5.00(br d,J=13.88Hz,2 H),4.81(d,J=13.63Hz,1 H),4.60(d,J=2.50Hz,2 H),4.45-4.30(m,2 H),4.24-4.13(m,2 H),3.99-3.84(m,2 H),3.83-3.64(m,2 H),3.40-3.34(m,2 H),3.28-3.21(m,1 H),3.06(br d,J=16.26Hz,1 H),2.95(dd,J=18.07,3.56Hz,1 H),2.81(br d,J=16.01Hz,1 H),2.38(br dd,J=11.63,6.38Hz,1 H),2.29-2.12(m,8 H),1.99(br t,J=9.44Hz,1 H)。

將化合物13-1B(120mg,128μmol)溶入三氟乙酸(1.54g,13.4mmol,1mL)，50℃下反應9小時。將反應液減壓濃縮後，粗品進行高效液相色譜分離(柱子：Phenomenex luna C18 150*25mm* 10μm；流動相：[水(0.075%三氟乙酸)-乙腈]；乙腈%：8%-38%,8min)。得化合物13B的三氟乙酸鹽。MS m/z=596.2[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ ppm 6.80(s,1 H),5.31 (br d,J=8.88Hz,3 H),4.99(br d,J=13.76Hz,2 H),4.80(d,J=13.88Hz,1 H),4.58(d,J=2.38Hz,2 H),4.43-4.31(m,2 H),4.16(br d,J=16.01Hz,2 H),3.95-3.84(m,2 H),3.79-3.67(m,2 H),3.37(br d,J=13.63Hz,2 H),3.28-3.22(m,1 H),3.07-2.91(m,2 H),2.80(br d,J=15.88Hz,1 H),2.40-2.33(m,1 H),2.23-2.10(m,8 H),2.02-1.93(m,1 H)。

實施例14

步驟1：中間體14-2的合成

將化合物14-1溶解於DMF(2.00mL)中，向反應液中加入三級丁醇鉀(299mg,2.67mmol)，反應液升溫至80℃反應12小時。水(10mL)加入反應液中，用二氯甲烷：甲醇=5：1(10mL*3)萃取，有機相合併，用飽和食鹽水(20mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮。粗品經過柱純化(二氯甲烷：甲醇=5：1)得到化合物14-2。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ ppm 5.03(s,1 H)3.89(ddd,J=15.04,5.07,2.14Hz,1 H)3.38-3.44(m,1 H)3.26-3.36(m,2 H)3.13-3.22(m,1 H)2.59-2.66(m,1 H)1.61-1.90(m,5 H)；¹⁹F NMR(376MHz,CDCl₃)δ ppm -128.29(br s,1 F)。

步驟2：中間體14-3的合成

將化合物1-12B(120mg,139μmol)，化合物14-2(43.9mg,279μmol)和三級丁醇鈉(40.2mg,418μmol)加入甲苯(2.00mL)中，反應液升溫至100℃反應5小時。將反應液減壓濃縮。粗品經過柱純化(石油醚：乙酸乙酯=1：1)到化合物14-3，MS m/z=953.1[M+H]⁺。

步驟3：中間體14-4的合成

將化合物14-3(75.0mg,78.7μmol)，1-丙炔基三正丁基錫(104mg,315μmol)加入甲苯(2.00mL)，氮氣置換三次後，向反應液中加入二氯雙[二第三級丁基-(4-二甲基胺基苯基)膦]鈀(II)(16.7mg,23.6μmol)，再次置換氮氣三次，升溫至110℃反應3小時。反應液使用矽藻土進行過濾，濾液減壓濃縮得到粗品。粗品經過柱純化(石油醚：乙酸乙酯=1：1)得到化合物14-4，MS m/z=957.4[M+H]⁺。

步驟4：化合物14的合成

將化合物14-4(73.0mg,76.3μmol)溶解於二氯甲烷(1.00mL)，向反應液中加入TFA(0.10mL)，在25℃反應3小時。用飽和碳酸氫鈉溶液將反應液pH調節至7，然後減壓濃縮得到粗品。粗品進行高效液相色譜分離(柱子：Waters Xbridge 150*25mm* 5μm；流動相：[水(0.05%氨水)-乙腈]；乙腈%：53%-83%,9min)純化得到化合物14,MS m/z=617.4[M+H]⁺。1H NMR(400MHz,CDCl₃)δ ppm 6.91-6.82(m,1 H),5.49-5.38(m,1 H),5.21-5.10(m,1 H),4.75-4.69(m,2 H),4.18-3.92(m,6 H),3.65(br d,J=1.96Hz,2 H),3.44(br s,1 H),3.37-3.25(m,3 H),3.10-3.04(m,1 H),3.00-2.91(m,1 H),2.67-2.58(m,1 H),2.19-2.08(m,1 H),2.04(s,2 H),2.03-1.97(m,1 H),1.90-1.83(m,3 H),1.78-1.72(m,3 H),1.26(br s,1 H),0.88-0.80(m,2 H)。

實施例15

步驟1：中間體15-1的合成

將化合物10-1(3.00g,15.6mmol)溶於DMF(21mL)，加入碳酸鉀(8.65g,62.6mmol)和化合物3-溴-2-甲基丙烯(2.54g,18.7mmol)，室溫下反應12小時。向反應液中倒入100mL水，用乙酸乙酯(10mL)萃取3次。有機相用飽和食鹽水(100mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥後，過濾，減壓濃縮得粗品。粗品經柱層析(石油醚：乙酸乙酯=20：1)純化得到化合物15-1。

步驟2：中間體15-2的合成

將化合物15-1(2.5g,11.9mmol)溶於無水THF(20.0mL)，在0℃下加入氫化鋁鋰(680mg,17.9mmol)，然後在室溫下反應1小時。向反應液中加入1毫升水，1毫升15%NaOH水溶液，最後加入3毫升水，無水硫酸鈉乾燥後，過濾，減壓濃縮，得到化合物15-2，MS m/z=182.1[M+H]⁺。

步驟3：中間體15-3的合成

將化合物15-2(1.7g,9.38mmol)溶於無水DCM(20.0mL)，加入咪唑(2.55g,37.5mmol)，4-二甲胺基吡啶(114mg,937μmol)，然後在0℃下加入三級丁基二苯基氯矽烷(5.16g,18.7mmol)。在室溫下反應12小時。向反應液中加入50mL水，用DCM(100mL)萃取3次。有機相用飽和食鹽水(100mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥後，過濾，減壓濃縮得粗品。粗品經柱層析(石油醚：乙酸乙酯=15：1)純化得到化合物15-3，MS m/z=420.4[M+H]⁺。

步驟4：中間體15-4的合成

將化合物15-3(2g,4.77mmol)溶於無水甲苯(200mL)，加入Grubbs催化劑(597mg,953μmol)。在110℃下反應12小時。將反應液減壓濃縮得到粗產品。粗品經薄板層析(二氯甲烷：甲醇=20：1)純化得到化合物15-4，MS m/z=392.2[M+H]⁺。

步驟5：中間體15-5的鹽酸鹽合成

將化合物15-4(200mg,510μmol)溶於無水二

烷(1.0mL)，加入HCl(12M,212μL)。在95℃下反應12小時。向反應液中加入10毫升水，萃取後將水相凍乾，得到粗品可直接用於下一步反應。得到化合物15-5的鹽酸鹽，MS m/z=154.1[M+H]⁺。

步驟6：中間體15-6的合成

將化合物1-12B(300mg,348μmol)溶於無水甲苯(2mL)，加入三級丁醇鈉(100mg,1.05mmol)和化合物15-5的鹽酸鹽(64.1mg)。在室溫下反應12小時，向反應液倒入30mL的飽和氯化銨水溶液，用乙酸乙酯(30mL)萃取。有機相用飽和食鹽水(20mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥後，過濾，減壓濃縮得粗品。粗品經柱層析(二氯甲烷：甲醇=10：1)純化得到化合物15-6，MS m/z=949.5[M+H]⁺。

步驟7：中間體15-7的合成

將化合物15-6(80mg,84.2μmol)溶於無水甲苯(2mL)，加入1-丙炔基三正丁基錫(83.1mg,252μmol)和二氯雙[二第三丁基-(4-二甲基胺基苯基)膦]鈀(II)(11.mg,16.8μmol)。氮氣置換3次後，在氮氣保護下110℃反應2小時。反應液冷卻減壓濃縮得粗品。粗品經薄板層析(二氯甲烷：甲醇=10：1)純化得到化合物15-7，MS m/z=953.6[M+H]⁺。

步驟8：化合物15的三氟乙酸鹽合成

將化合物15-7(40mg,41.9μmol)溶入二氯甲烷(1.0mL)，加入三氟乙酸(4.79mg,41.9μmol)，25℃下反應1小時。反應液減壓濃縮得到粗品。粗品進行高效液相色譜分離(柱子：Phenomenex luna C18 150*25mm* 10μm；流動相：[水(0.075%三氟乙酸)-乙腈]；乙腈%：15%-45%,9min)。凍乾後得到化合物15的三氟乙酸鹽。MS m/z=613.5[M+H]⁺。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ 6.92(d,J=8.5Hz,1H),5.48(br s,1H),5.20-5.10(m,1H),4.95-4.90(m,3H),4.80-4.70(m,1H),4.64(d,J=12.3Hz,1H),4.55-4.51(m,2H),4.33(br d,J=14.5Hz,1H),4.15(br dd,J=2.1,16.1Hz,2H),3.92(br d,J=15.4Hz,1H),3.82(br d,J=13.1Hz,1H),3.81-3.70(m,1H),3.71-3.61(m,1H),2.92(br dd,J=4.1,18.4Hz,1H),2.30-2.11(m,8H),2.01-1.91(m,4H),1.85(s,3H)。

實施例16

步驟1：中間體16-2的合成

將化合物16-1(500mg,2.56mmol)溶於無水甲苯(1mL)，加入Grubbs催化劑(217mg,256μmol)和化合物丙烯二氯甲烷溶液(0.5M,5.12mL)。在50℃下反應2小時。將反應液減壓濃縮得到粗產品。粗品經柱層析(石油醚：乙酸乙酯=10：1)純化得到化合物16-2，MS m/z=210.0[M+H]⁺。

步驟2：中間體16-3的合成

將化合物16-2(210mg,1.00mmol)溶於無水THF(1.0mL)，在0℃下加入氫化鋁鋰(76.1mg,2.01mmol)，然後在70℃下反應12小時。向反應液中加入0.7毫升水，0.7毫升15%NaOH水溶液，最後加入2毫升水，無水硫酸鈉乾燥後，過濾，減壓濃縮，得粗品直接用於下一步。得到化合物16-3。

步驟3：中間體16-4的合成

將化合物1-12B(300mg,348μmol)溶於無水THF(1mL)，加入三級丁醇鈉(100mg,1.05mmol)和化合物16-3(58.3mg,348μmol)。在室溫下反應12小時。向反應液倒入30mL的飽和氯化銨水溶液淬滅反應，用乙酸乙酯(30mL)萃取。有機相用飽和食鹽水(20mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥後，過濾，濃縮，得粗品。粗品經柱層析(二氯甲烷：甲醇=10：1)純化得到化合物16-4，MS m/z=963.5[M+H]⁺。

步驟4：中間體16-5的合成

將化合物16-4(90.0mg,93.4μmol)溶於無水甲苯(1mL)，加入1-丙炔基三正丁基錫(122mg,373μmol)和二氯雙[二第三丁基-(4-二甲基胺基苯基)膦]鈀(II)(19.8mg,28.0μmol)。氮氣置換3次後，在氮氣保護下110℃反應12小時。反應液冷卻，減壓濃縮得粗品。粗品經薄板層析(二氯甲烷：甲醇=12：1)純化得到化合物16-5，MS m/z=967.5[M+H]⁺。

步驟5：化合物16的三氟乙酸鹽合成

將化合物16-5(70.00mg,72.3μmol)溶入二氯甲烷(1.0mL)，加入三氟乙酸(539mg,4.73mmol)，25℃下反應12小時。反應液減壓濃縮得到粗品。粗品進行高效液相色譜分離(柱子：Phenomenex luna C18 150*25mm* 10μm；流動相：[水(0.075%三氟乙酸)-乙腈]；乙腈%：18%-48%,9min)。凍乾後得到化合物16的三氟乙酸鹽，MS m/z=627.3[M+H]⁺。

實施例17

步驟1：中間體17-2的合成

將化合物1-12B(870mg,1.01mmol)溶於無水甲苯(10.0mL)，加入三級丁醇鈉(777mg,8.09mmol)，和化合物17-1(404mg,3.03mmol)。在100℃反應12小時。向反應液倒入30.0mL的飽和氯化銨水溶液，用乙酸乙酯(50.0mL)萃取。有機相用飽和食鹽水(30.0mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥後，過濾減壓濃縮，即得粗品。粗品經柱層析(石油醚：乙酸乙酯=2：1)純化得到化合物17-2，MS m/z=929.4[M+H]⁺。

步驟2：中間體17-3的甲酸鹽合成

將化合物17-2(445mg,479μmol)溶於無水甲苯(4.00mL)，加入1-丙炔基三正丁基錫(630mg,1.92mmol)和二氯雙[二第三丁基-(4-二甲基胺基苯基)膦]鈀(II)(102mg,144μmol)。氮氣置換3次後，在氮氣保護下110℃反應3小時，反應液冷卻減壓濃縮即得粗品。粗品進行高效液相色譜分離(柱子：Phenomenex luna C18 150*25mm* 10μm；流動相：[water(0.225%甲酸)-乙腈]；乙腈%：40%-70%,10min)，凍乾得到化合物17-3的甲酸鹽，MS m/z=933.5[M+H]⁺。

步驟3：化合物17的合成

將化合物17-3的甲酸鹽(210mg)溶入二氯甲烷(2.00mL)，加入三氟乙酸(3.00mL)，25℃下反應4小時。反應液用6.00mL氨水淬滅，然後濃縮得到粗品。粗品進行高效液相色譜分離(柱子：Waters Xbridge 150*25mm*5μm；流動相：[水(0.05%氨水)-乙腈]；乙腈%：28%-58%)。凍乾後得到化合物17，MS m/z=593.3[M+H]⁺。

實施例18

步驟1：中間體18-2的合成

向化合物18-1(192.05mg,1.16mmol)中加入THF(10mL)溶解，投入三級丁醇鈉(111.70mg,1.16mmol)，保持反應液溫度0℃攪拌1小時，加入化合物1-12B(0.5g,581.16μmol)，反應液保持0℃反應1小時。向反應液加水(10mL)，乙酸乙酯(20mL*3)萃取，合併有機相，利用飽和食鹽水(20mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，過柱純化(二氯甲烷：甲醇=20：1)，得到化合物18-2，MS m/z=961.7[M+H]⁺。

步驟2：中間體18-3的合成

將化合物18-2(0.526g,547.07μmol)加入甲苯(20mL)溶解，投入化合物1-丙炔基三正丁基錫(900.24mg,2.74mmol)與二氯雙[二第三丁基-(4-二甲基胺基苯基)膦]鈀(II)(116.21mg,164.12μmol)，抽換氮氣5次，保持反應液溫度120℃反應5小時。向反應液加水(10mL)，墊矽藻土過濾，乙酸乙酯(20mL)洗濾餅，向濾液中加入乙酸乙酯萃取(20mL*3)，合併有機相，利用飽和食鹽水(20mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，過柱純化(二氯甲烷：甲醇=10：1)，得到化合物18-3,MS m/z=965.7[M+H]⁺。

步驟3：化合物18的鹽酸鹽合成

向化合物18-3(0.5g,518.09μmol)加入DCM(10mL)溶解，投入三氟乙酸(4.13g,36.25mmol)，保持反應液溫度25℃反應1小時，將反應液減壓濃縮，粗品進行高效液相色譜分離(柱子：Xtimate C18 150*40mm*5μm；流動相：[水(0.05%鹽酸)-乙腈]；(乙腈)%：5%-35%,10min)，得到化合物18的鹽酸鹽，MS m/z=625.3[M+H]⁺。

實施例19

步驟1：中間體19-2的合成

向化合物19-1(199.00mg,1.16mmol)中加入THF(10mL)溶解，投入三級丁醇鈉(111.70mg,1.16mmol)，保持反應液溫度0℃攪拌1小時，加入化合物1-12B(0.5g,581.16μmol)，反應液保持0℃反應1小時。向反應液加水(10mL)，乙酸乙酯(20mL*3)萃取，合併有機相，利用飽和食鹽水(20mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，過柱純化(二氯甲烷：甲醇=20：1)，得到化合物19-2，MS m/z=967.6[M+H]⁺。

步驟2：中間體19-3的合成

將化合物19-2(0.442g,456.87μmol)加入甲苯(10mL)溶解，投入化合物1-丙炔基三正丁基錫(601.44mg,1.83mmol)與二氯雙[二第三丁基-(4-二甲基胺基苯基)膦]鈀(II)(97.05mg,137.06μmol)，抽換氮氣5次，保持反應液溫度120℃反應5小時。向反應液加水(10mL)，墊矽藻土過濾，乙酸乙酯(20mL)洗濾餅，乙酸乙酯(20mL*3)萃取，合併有機相，利用飽和食鹽水(20mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，過柱純化(二氯甲烷：甲醇=10：1)，得到化合物19-3,MS m/z=971.8[M+H]⁺。

步驟3：化合物19的鹽酸鹽合成

向化合物19-3(0.442g,455.17μmol)加入DCM(5mL)溶解，投入三氟乙酸(15.58g,136.67mmol)，保持反應液溫度25℃反應1小時，將反應液減壓濃縮，粗品進行高效液相色譜分離(柱子：Xtimate C18 150*40mm*5μm；流動相：[水(0.05%鹽酸)-乙腈]；(乙腈)%：5%-35%,10min)，得到化合物19的鹽酸鹽，MS m/z=631.3[M+H]⁺。

實施例20

步驟1：化合物20-2的合成

秤取化合物20-1(480g,2.53mol)，加入DMF(2500mL)，加入4-甲氧基氯苄(5.18mol,702.79mL)，碳酸鉀(872.82g,6.32mol)，碘化鉀(419.35g,2.53mol)，65℃反應2小時。加水(1000mL)，乙酸乙酯(1000mL * 3)萃取，有機相減壓濃縮，得化合物20-2，MS m/z=430.0[M+H]⁺。

步驟2：化合物20-3的合成

秤取化合物2,2,6,6-四甲基哌啶(220.59g,1.56mol,265.13mL)，加入THF(3000mL)，-5℃加入正丁基鋰(2.5M,499.73mL)，攪拌0.5小時，降溫至-60℃加入20-2(280g,624.67mmol)，攪拌0.5小時，最後加入DMF(228.28g,3.12mol,240.30mL)。繼續反應0.5小時。將反應液倒入水中(1000mL)，加入1N鹽酸調pH到7，用乙酸乙酯(1000mL * 3)萃取，減壓濃縮，柱層析分離(石油醚：乙酸乙酯=10：1)，得化合物20-3。

步驟3：化合物20-4的合成

秤20-3(370g,807.30mmol)，加入甲苯(1500mL)，二氯雙[二第三丁基-(4-二甲基胺基苯基)膦]鈀(2.86g,4.04mmol,2.86mL)和三丁基(1-丙炔基)錫(265.69g,807.30mmol)，氮氣保護下120℃反應2小時。減壓濃縮，柱層析分離(石油醚：乙酸乙酯=5：1)，得化合物20-4。MS m/z=418.1[M+H]⁺。

步驟4：化合物20-5的合成

秤20-4(450g,970.13mmol)，加入DMF(100mL)，加入N-溴代丁二醯亞胺(189.93g,1.07mol)，25℃反應2小時。補加N-溴代丁二醯亞胺(17.27g,97.01mmol)，繼續反應3小時。減壓濃縮，柱層析分離(石油醚：乙酸乙酯=5：1)，得化合物20-5。MS m/z=496.0[M+H]⁺。

步驟5：化合物20-6的合成

秤20-5(55g,110.81mmol)，加入DMF(300mL)，加入氟磺醯二氟乙酸甲酯(42.57g,221.61mmol,28.19mL)，碘化亞銅(42.21g,221.61mmol)，110℃氮氣保護下反應2小時。加入500mL水淬滅，用乙酸乙酯(600mL*3)萃取，合併萃取後的有機相，依次用水(800mL*2)和飽和食鹽水(800mL)洗滌，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。柱層析分離(石油醚：乙酸乙酯=10：1)，得化合物20-6。MS m/z=485.9[M+H]⁺。

步驟6：化合物20-7的合成

在0℃下，向鈉氫(6.34g,158.61mmol,60%純度)的四氫呋喃(350mL)溶液中滴加乙醯乙酸甲酯(18.42g,158.61mmol,17.10mL)，反應15分鐘。再加入20-6(35g,72.10mmol)的四氫呋喃溶液(350mL)。反應0.5小時。加入200mL飽和氯化銨溶液淬滅反應，用乙酸乙酯(300mL*2)萃取，合併萃取後的有機相，用飽和食鹽水(400mL)洗滌，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。柱層析分離(石油醚：乙酸乙酯=10：1-1：1)，得化合物20-7。MS m/z=624.2[M+Na]⁺。

步驟7：化合物20-8的合成

秤20-7(38g,63.17mmol)，加入二氯甲烷(300mL)，再加入N,N-二甲基甲醯胺二甲基縮醛(9.03g,75.80mmol)。25℃反應16小時。冷到0℃，加入三氟化硼乙醚(10.76g,75.80mmol,9.32mL)，反應液在0℃下繼續攪拌1小時，向反應液中加入200mL飽和碳酸氫鈉溶液，分離出有機相，水相用200mL二氯甲烷萃取，合併萃取後的有機相，用250mL飽和食鹽水洗滌，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。柱層析分離(石油醚：乙酸乙酯=10：1-1：1)，得化合物20-8。MS m/z=612.1[M+H]⁺。

步驟8：化合物20-9的合成

秤20-8(30g,49.05mmol)，加入四氫呋喃(300mL)，-60℃條件下加入三二級丁基硼氫化鋰(1M,53.96mL)。-60℃反應1小時，向反應液中加入200mL水淬滅反應，用乙酸乙酯(300mL*2)萃取，合併萃取後的有機相，用300mL飽和食鹽水洗滌，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。柱層析分離(石油醚：乙酸乙酯=10：1-5：1)，得化合物20-9。MS m/z=614.1[M+H]⁺。

步驟9：化合物20-10的合成

秤20-9(20g,32.59mmol)，加入乙醇(200mL)，再加入2-甲基-2-硫代異脲硫酸鹽(27.22g,97.78mmol)，碳酸鈉(6.91g,65.19mmol)，50℃反應13小時。將反應液濃縮乾，加入40mL水，用乙酸乙酯(50mL*2)萃取，合併萃取後的有機相，用60mL飽和食鹽水洗滌，用無水硫酸鈉乾燥。過濾，減壓濃縮得化合物20-10。MS m/z=654.3[M+H]⁺。

步驟10：化合物20-11B的合成

秤20-10(21g,32.13mmol)，加入DMF(200mL)，再加入N,N-二異丙基乙基胺(12.46g,96.38mmol,16.79mL)，N-苯基雙(三氟甲烷磺醯)亞胺(13.77g,38.55mmol)，25℃反應1小時。向反應液中加入300mL水，用乙酸乙酯(300mL*3)萃取，依次用水(400mL*2)和飽和食鹽水(400mL)洗滌，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。柱層析分離(石油醚：乙酸乙酯=10：1)，得化合物20-11。進行SFC拆分，(色譜柱：DAICEL CHIRALPAK IG(250mm*50mm,10μm)；流動相：[超臨界CO₂-乙醇(0.1%氨水)]；乙醇%：25%-25%)得到化合物20-11A和化合物20-11B。手性SFC分析(色譜柱：ChiralPak IG-3(100mm*4.6mm,3μm)；流動相：[超臨界CO₂-乙醇(0.05%二乙胺)]；(乙醇(0.05%二乙胺))%：5%-40%)，化合物20-11A，Rt=2.574分鐘，ee值99%；化合物20-11B，Rt=3.055分鐘，ee值99%。

步驟11：化合物20-12的合成

秤取化合物20-11B(2g,2.55mmol)和20-12A(871.78mg,3.82mmol)溶解在DMF(10mL)，加入N,N-二異丙基乙胺(986.88mg,7.64mmol)，然後100℃反應1小時。反應液減壓濃縮，柱層析分離(石油醚：乙酸乙酯=5：1)得到化合物20-12，MS m/z=864.0[M+H]⁺。

步驟12：化合物20-13的合成

秤取化合物20-12(1.8g,2.08mmol)，溶解在THF(20mL)中，加入間氯過氧苯甲酸(422.96mg,2.08mmol,85%純度)，25℃攪拌0.5小時。將反應液減壓濃縮，得到化合物20-13。MS m/z=880.0[M+H]⁺。

步驟13：化合物20-14的合成

秤取化合物8-2(626.81mg,4.09mmol)溶解在THF(5mL)中，然後0℃下加入三級丁醇鈉(393.15mg,4.09mmol)，一個小時後加入20-13(1.8g,2.05mmol)，繼續攪拌1小時。加入10mL水淬滅，使用1N的稀鹽酸調節pH=6左右，使用乙酸乙酯(100mL*2)萃取，合併萃取後的有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，柱層析分離(二氯甲烷：甲醇=10：1)得到化合物20-14，MS m/z=969.1[M+H]⁺。

步驟14：化合物20的鹽酸鹽合成

秤取化合物20-14(1.4g,1.44mmol)溶解在三氟乙酸(10mL)中，25℃反應1小時。將反應液減壓濃縮，粗品進行高效液相色譜分離(柱子：Xtimate C18 150*40mm*5μm；流動相：[水(0.05%鹽酸)-乙腈]；(乙腈)%：5%-35%,10min)，得到化合物20的鹽酸鹽，MS m/z=610.6[M+H]⁺。

實施例21

步驟1：中間體21-1的合成

將化合物20-3(19g,41.46mmol)和戊炔酸(4.88g,49.75mmol)加入到二甲基亞碸(200mL)中，然後加入二氯二三苯基膦鈀(290.98mg,414.56μmol)，1,4-雙(二苯基膦)丁烷(353.59mg,829.12μmol)和1.8-二氮雜二環[5.4.0]十一十一烷-7-烯(18.93g,124.37mmol,18.75mL)，所得反應液氮氣置換後，升溫至110-115℃攪拌反應18小時。將反應液用500mL乙酸乙酯稀釋，然後用水(50mL×3)和飽和食鹽水(100mL)洗滌，有機相減壓濃縮得到粗品，粗品過柱純化(石油醚：乙酸乙酯=5：1)得到化合物21-1。¹H NMR(400MHz,CDCL₃)δ：10.34(s,1H),7.42(dd,J=2.0,5.6Hz,1H),7.16(d,J=8.4Hz,4H),7.11-7.06(m,1H),6.87-6.82(m,4H),4.24(s,4H),3.82-3.78(m,6H),2.37(q,J=7.6Hz,2H),1.21(t,J=7.6Hz,3H)。

步驟2：中間體21-2的合成

將化合物21-1(4.0g,9.27mmol)溶解於DMF(30mL)中，然後加入N-溴代丁二醯亞胺(2.14g,12.05mmol)，所得反應液在氮氣保護下50℃攪拌反應3小時。將反應液用150mL乙酸乙酯稀釋，然後用水(20mL×3)和飽和食鹽水(20mL)洗滌，有機相減壓濃縮得到粗品。粗品過柱純化(石油醚：乙酸乙酯=5：1)得到化合物21-2，MS m/z=510.1[M+H]⁺。

步驟3：中間體21-3的合成

將化合物21-2(4.6g,9.01mmol)和化合物氟磺醯二氟乙酸甲酯(6.93g,36.05mmol,4.59mL)加入到N,N-二甲基甲醯胺(30mL)中，然後加入碘化亞銅(3.43g,18.03mmol)，所得反應液在氮氣保護下升溫至105℃攪拌反應3小時。將反應液減壓濃縮得到粗品。粗品過柱純化(石油醚：乙酸乙酯=5：1)得到化合物21-3，MS m/z=500.0[M+H]⁺。

步驟4：中間體21-4的合成

將鈉氫(856.78mg,21.42mmol,60%純度)懸浮與無水四氫呋喃(30mL)中，所得混合物冷卻到0℃，然後向其中滴加乙醯乙酸甲酯(2.09g,17.99mmol,1.94mL)，滴畢攪拌30分鐘，接著向其中滴加正丁基鋰(2.5M,7.88mL)，滴畢，繼續攪拌30分鐘，撤去冰浴，將反應混合液冷卻到-78℃，最後向其中滴加化合物21-3(4.28g,8.57mmol)的15mL四氫呋喃溶液，滴畢，攪拌反應0.5小時。用1M鹽酸淬滅反應，並調節pH=5分出有機相，水相用30mL乙酸乙酯萃取三次，合併有機相，減壓濃縮得到粗品，粗品過柱純化(石油醚：乙酸乙酯=2：1)得化合物21-4。MS m/z=638.2[M+Na]⁺。

步驟5：中間體21-5的合成

將化合物21-4(5.0g,6.01mmol)溶解於二氯甲烷(40mL)中，然後加入N,N-二甲基甲醯胺縮二甲醇(2.15g,18.03mmol,2.40mL)，所得反應液在氮氣保護下攪拌反應18小時。將反應液冷卻到0℃，然後向其中滴加三氟化硼乙醚錯合物(853.03mg,6.01mmol)，滴畢，攪拌反應1小時將反應液用20mL飽和碳酸氫鈉淬滅，然後用二氯甲烷30mL×3萃取，合併有機相，減壓濃縮得到粗品。粗品過柱純化(石油醚：乙酸乙酯=2：1)得到化合物21-5。MS m/z=626.0[M+H]⁺。

步驟6：中間體21-6的合成

將化合物21-5(2.6g,4.16mmol)溶解於無水四氫呋喃(20mL)中，氮氣保護下冷卻到-78℃，然後向其中滴加三二級丁基硼氫化鋰(1M,4.57mL)，滴畢，-78℃下攪拌反應0.5小時。加入水15mL水淬滅反應，然後用1M鹽酸調節pH~5-6，分出有機相，水層用30mL×3萃取，合併有機相，減壓濃縮得到粗品。粗品過柱純化(石油醚：乙酸乙酯=5：1)得到化合物21-6，MS m/z=650.0[M+Na]⁺。

步驟7：中間體21-7的合成

將化合物21-6(0.6g,955.99μmol)和2-甲基硫脲硫酸鹽(539.83mg,2.87mmol)加入到乙醇(15mL)中，然後加入碳酸鈉(202.65mg,1.91mmol)，所得反應液在氮氣保護下加熱到65℃攪拌反應18小時。將反應液減壓濃縮，殘留物中加入10mL水和80mL乙酸乙酯，攪拌下用2M鹽酸調節PH=6，分出有水層，有機相用10mL飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得到化合物21-7，MS m/z=668.3[M+H]⁺。

步驟8：中間體21-8的合成

將化合物21-7(640mg,958.50μmol)和化合物N-苯基雙(三氟甲烷磺醯)亞胺(513.63mg,1.44mmol)加入到N,N-二甲基甲醯胺(5mL)中，然後加入N,N-二異丙基乙基胺(247.76mg,1.92mmol)。所得反應液氮氣置換後，升溫至35℃攪拌反應1.5小時。將反應液用50mL乙酸乙酯稀釋，然後用水10mL×3洗滌，有機相減壓濃縮得到粗品，粗品過柱純化(石油醚：乙酸乙酯=5：1)得到化合物21-8。MS m/z=800.4[M+H]⁺。

步驟9：中間體21-9的合成

將化合物21-8(340mg,425.12μmol)和化合物1-1A(180.50mg,850.24μmol)加入到N,N-二甲基甲醯胺(3mL)中，然後加入N,N-二異丙基乙基胺(164.83mg,1.28mmol)，所得反應液在氮氣保護下升溫至105℃攪拌反應1小時。將反應液減壓濃縮得到粗品。粗品過柱純化(石油醚：乙酸乙酯=2：1)得到化合物21-9。MS m/z=862.4[M+H]⁺。

步驟10：中間體21-10的合成

將化合物21-9(223mg,258.71μmol,)溶解於二氯甲烷(3mL)中，然後加入間氯過氧苯甲酸(52.52mg,258.71μmol,85%純度)，所得最終反應液在氮氣保護下，25℃攪拌反應1小時。將反應液減壓濃縮得到粗品，粗品過柱純化(石油醚：乙酸乙酯=1：1)得到化合物21-10。MS m/z=894.4[M+H]⁺。

步驟11：中間體21-11的合成

將化合物8-2(76.44mg,498.89μmol)和三級丁醇鈉(47.95mg,498.89μmol)加入到四氫呋喃(2mL)中，25℃攪拌反應0.5小時，然後向其中滴加化合物21-10(223mg,249.45μmol)的2mL四氫呋喃溶液，25℃攪拌反應0.5小時。將反應液用30mL乙酸乙酯稀釋，然後用5mL飽和食鹽水洗滌，有機相用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得到化合物21-11。MS m/z=967.8[M+H]⁺。

步驟12：化合物21的合成

將化合物21-11(238mg,246.10μmol)加入到三氟乙酸(2mL)中，25℃攪拌反應1小時將反應液減壓濃縮得到粗品，粗品進行高效液相色譜分離(柱子：Xtimate C18 150*40mm*5μm；流動相：[水(0.05%鹽酸)-乙腈]；(乙腈)%：5%-35%,10min)，得到化合物21的鹽酸鹽，MS m/z=627.4[M+H]⁺。

步驟13：化合物21A和21B的合成

化合物21的鹽酸鹽經過SFC分離，(色譜柱：DAICEL CHIRALPAK IC(250mm*30mm,10μm)；流動相：[超臨界CO₂-甲醇(0.1%氨水)]；甲醇%：60%-60%)得到化合物21A和化合物21B。手性SFC分析(色譜柱：ChiralPak IC(100mm*4.6mm,3μm)；流動相：[超臨界CO₂-乙醇(0.05%二乙胺)]；(甲醇(0.05%二乙胺))%：60%-60%)，化合物21A，Rt=1.696分鐘，ee值99%，MS m/z=627.4[M+H]⁺；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ：6.89(d,J=8.4Hz,1H),5.21(d,J=12.0Hz,2H),5.11(d,J=7.6Hz,1H),4.80-4.50(m,4H),4.44-4.27(m,2H),4.23-3.82(m,5H),3.77-3.48(m,3H),3.35-3.20(m,1H),3.11-2.86(m,3H),2.63-2.51(m,1H),2.38(q,J=7.2Hz,3H),2.30-2.06(m,5H),2.04-1.75(m,2H),1.20(t,J=7.6Hz,3H)。化合物21B，Rt=5.728分鐘，ee值99%，MS m/z=627.3[M+H]⁺，¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ：6.86(d,J=8.4Hz,1H),5.19-5.08(m,1H),4.95(br s,2H),4.80-4.64(m,3H),4.15-4.03(m,4H),4.01-3.93(m,1H),3.82-3.67(m,3H),3.59-3.43(m,2H),3.36-3.14(m,4H),3.00-2.90(m,1H),2.80(d,J=15.0Hz,1H),2.72-2.62(m,1H),2.45-2.32(m,3H),2.22-2.11(m,1H),2.09-1.84(m,5H),1.82-1.67(m,2H),1.21(t,J=7.2Hz,3H)。

實施例22

步驟1：中間體22-1的甲酸鹽合成

將化合物16-1(1.28g,6.56mmol)溶解於甲苯(10.0mL)中，分別加入化合物異丁烯四氫呋喃溶液(2.40M,2.73mL)和Hoveyda-Grubbs催化劑(411mg,656μmol)。在120℃下反應12小時。反應液使用矽藻土過濾，濾液減壓濃縮得到粗品。粗品進行高效液相色譜分離(柱子：Phenomenex Luna C18 150*25mm*10μm；流動相：[水(0.225%甲酸)-乙腈]；乙腈：25%-55%)純化得到化合物22-1。MS m/z=224.1[M+1]⁺。

步驟2：中間體22-2的合成

將化合物22-1(200mg)溶解THF(2.00mL)中，降溫至0℃，在0℃下緩慢滴加紅鋁甲苯溶液(1.03g,3.58mmol,70.0%純度)，滴加完畢後，反應液在25℃反應12小時。向反應液中加入甲醇(3.00ml)，減壓濃縮得到粗品。粗品經柱純化(二氯甲烷：甲醇=10：1)得到化合物22-2。MS m/z=182.1[M+1]⁺。

步驟3：中間體22-3的甲酸鹽合成

將化合物1-12B(100mg,116μmol)溶解於甲苯(1.00mL)中，向溶液中加入化合物22-2(105mg,581μmol)，4A分子篩(100mg)和三級丁醇鈉(33.5mg, 349μmol)。反應液在110℃下反應12小時。反應液冷卻後使用矽藻土進行過濾，濾液減壓濃縮得到粗品。粗品進行高效液相色譜分離(柱子：Phenomenex luna C18 150*25mm* 10μm；流動相：[水(0.225%甲酸)-乙腈]；乙腈：50%-80%)純化得到化合物22-3的甲酸鹽。MS m/z=977.3[M+1]⁺。

步驟4：中間體22-4的合成

將化合物22-3(45.0mg,46.0μmol)的甲酸鹽溶解於甲苯(1.00mL)中，向反應液中加入1-丙炔基三正丁基錫(60.6mg,184μmol)和二氯雙[二第三丁基-(4-二甲基胺基苯基)膦]鈀(II)(9.78mg,13.8μmol)。反應液在110℃下反應3小時。反應液冷卻後用矽藻土進行過濾，濾液減壓濃縮得到粗品。粗品進行高效液相色譜分離(柱子：Phenomenex Luna C18 150*25mm*10μm；流動相：[水(0.075%三氟乙酸)-乙腈]；乙腈：52%-82%)純化得到化合物22-4的三氟乙酸鹽。MS m/z=981.4[M+1]⁺。

步驟5：化合物22的甲酸鹽合成

將化合物22-4(35.0mg,35.7μmol)的三氟乙酸鹽溶解於二氯甲烷(1.00mL)中，向反應液中加入三氟乙酸(0.20mL)，反應液在25℃下反應1小時，反應液直接減壓濃縮得到粗品。粗品依次進行如下高效液相色譜分離(柱子：Phenomenex luna C18 150*25mm* 10μm；流動相：[水(0.075%三氟乙酸)-乙腈]；乙腈：20%-50% over 9min)；(柱子：Waters Xbridge 150*25mm* 5μm；流動相：[水(0.1%氨水)-乙腈]；乙腈：55%-85% over 10min)；(柱子：Phenomenex luna C18 150*25mm* 10μm；流動相：[水(0.225%甲酸)-乙腈]；乙腈：15%-45% over 9min)純化後得到化合物22的甲酸鹽。MS m/z=641.3[M+1]⁺。

實施例23

步驟1：中間體23-2的合成

將化合物23-1(5.5g)溶於DMF(50mL)，加入碳酸鉀(15.8g,114mmol)和化合物烯丙基溴(4.17g,34.4mmol)。室溫下反應12小時後。向反應液中倒入100mL水，用乙酸乙酯(200mL)萃取3次。有機相用飽和食鹽水(100mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥後，過濾，減壓濃縮得粗品。粗品經柱層析(石油醚：乙酸乙酯=20：1)純化得到化合物23-2。

步驟2：中間體23-3的合成

將化合物23-2(5.5g,28.1mmol)溶於無水THF(37.0mL)，在0℃下加入氫化鋁鋰(2.5M,13.5mL)，然後在室溫下反應1小時。向反應液中加入1.2毫升水，1.2毫升15% NaOH水溶液，最後加入3.6毫升水，無水硫酸鈉乾燥後，過濾減壓濃縮，即得粗品直接用於下一步。得到化合物23-3。

步驟3：中間體23-4的合成

將化合物23-3(2.5g)溶於無水DCM(20.0mL)，加入咪唑(4.07g,59.7mmol)，4-二甲胺基吡啶(182mg,1.49mmol)，然後在0℃下加入三級丁基二苯基氯矽烷(8.22g,29.9mmol)。在室溫下反應12小時。向反應液加入100mL水淬滅反應，用DCM(100mL)萃取3次。有機相用飽和食鹽水(100mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥後，過濾減壓濃縮，即得粗品。粗品經柱層析(石油醚：乙酸乙酯=10：1)純化得到化合物23-4。MS m/z=406.2[M+H]⁺。

步驟4：中間體23-5的合成

將化合物23-4(1.5g,3.70mmol)溶於無水甲苯(30mL)，加入Grubbs催化劑(313.93mg,369.78μmol)。在120℃下反應12小時。將反應液減壓濃縮得到粗產品。粗品經薄板層析(二氯甲烷：甲醇=10：1)純化得到化合物23-5。MS m/z=378.2[M+H]⁺。

步驟5：中間體23-6的鹽酸鹽合成

將化合物23-5(200mg,529μmol)溶於無水二

烷(6.0mL)，加入鹽酸(12M,44.1μL)。在95℃下反應12小時。向反應液中加入10毫升水，萃取後將水相凍乾，得到粗品可直接用於下一步反應。得到化合物23-6的鹽酸鹽。

步驟6：中間體23-7的合成

將化合物23-6的鹽酸鹽(207mg)溶於無水甲苯(3mL)，加入三級丁醇鈉(250mg,2.60mmol)和化合物1-12B(320mg,371μmol)。在室溫下反應12小時。向反應液中倒入30mL的飽和氯化銨水溶液，用乙酸乙酯(30mL)萃取。有機相用飽和食鹽水(20mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥後，過濾減壓濃縮，即得粗品。粗品經柱層析(二氯甲烷：甲醇=10：1)純化得到化合物23-7。MS m/z=935.3[M+H]⁺。

步驟7：中間體23-8的合成

將化合物23-7(130mg,138μmol)溶於無水甲苯(1mL)，加入1-丙炔基三正丁基錫(182mg,555μmol)和二氯雙[二第三丁基-(4-二甲基胺基苯基)膦]鈀(II)(9.84mg,13.9μmol)。氮氣置換3次後，在氮氣保護下130℃反應4小時。反應液冷卻減壓濃縮得粗品。粗品經薄板層析(二氯甲烷：甲醇=10：1)純化得到化合物23-8。MS m/z=939.4[M+H]⁺。

步驟8：化合物23的三氟乙酸鹽合成

將化合物23-8(100mg,106μmol)溶入二氯甲烷(1.0mL)，加入三氟乙酸(182mg,1.60mmol)，25℃下反應0.5小時。反應液減壓濃縮得到粗品。粗品進行高效液相色譜分離(柱子：Phenomenex luna C18 150*25mm* 10μm；流動相：[水(0.075%三氟乙酸)-乙腈]；乙腈：10%-40% over 9min)。凍乾後得到化合物23的三氟乙酸鹽。MS m/z=599.3[M+H]⁺。1H NMR(400MHz,CD₃OD)6.92(d,J=8.4Hz,1H),6.00(d,J=6.4Hz,1H),5.87(td,J=2.4,6.4Hz,1H),5.18(dd,J=4.4,11.2Hz,1H),4.88-4.85(m,1H),4.76-4.70(m,2H),4.61-4.52(m,2H),4.36-4.28(m,1H),4.20-4.11(m,2H),4.04(br d,J=16.0Hz,1H),3.85-3.74(m,2H),3.66(br d,J=13.6Hz,1H),3.35(br d,J=6.4Hz,2H),3.29-3.24(m,1H),2.92(br dd,J=3.6,18.0Hz,1H),2.31-2.09(m,7H),2.04-1.95(m,4H)。

實施例24

步驟1：中間體24-2的合成

將化合物24-1(54g,198mmol)溶於無水THF(450mL)，降溫到-78℃，滴加甲基溴化鎂(3M,79.2mL)然後在-78℃下反應0.5小時，然後在室溫下反應12小時。向反應液倒入200mL鹽酸(1M)淬滅反應，用乙酸乙酯(200mL)萃取3次。有機相用飽和食鹽水(100mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥後，過濾，減壓濃縮得粗品。粗品經柱層析(石油醚：乙酸乙酯=5：1)純化得到化合物24-2。MS m/z=288.0[M+1]⁺。

步驟2：中間體24-3的合成

將化合物24-2(38g,131mmol)溶於無水DCM(380mL)加入戴斯-馬丁氧化劑(111g,263mmol,81.6mL)在室溫下反應4小時。向反應液倒入200mL水，用乙酸乙酯(200mL)萃取3次。有機相用飽和食鹽水(100mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥後，過濾，減壓濃縮得粗品。粗品經柱層析(石油醚：乙酸乙酯=5：1)純化得到化合物24-3。MS m/z=285.9[M+1]⁺。

步驟3：中間體24-4的合成

將化合物溴化甲基三苯基磷(8.42g,23.5mmol)溶於無水四氫呋喃(45mL)降溫到-78℃，滴加正丁基鋰(2.5M,9.42mL)然後在0℃下反應2小時。然後降溫-78℃滴加入24-3(4.5g,15.7mmol)溶於THF(20mL)。在室溫下反應10小時後。向反應液倒入100mL HCl(1M)水溶液，用EA(100mL)萃取3次。有機相用飽和食鹽水(100mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥後，過濾，減壓濃縮得粗品。粗品經柱層析(石油醚：乙酸乙酯=10：1)純化得到化合物24-4。

步驟4：中間體24-5的鹽酸鹽合成

將化合物24-4(5.5g,19.3mmol)溶於鹽酸甲醇溶液(4M,61.1mL)，在室溫下反應12小時。將反應液減壓濃縮得到化合物24-5的鹽酸鹽，MS m/z=170.1[M+1]⁺。

步驟5：中間體24-6的合成

將化合物24-5的鹽酸鹽(4.5g)溶於DMF(40mL)，加入碳酸鉀(14.7g,106mmol)和烯丙基溴(3.86g,31.9mmol)。室溫下反應1.5小時。向反應液中倒入100mL水，用乙酸乙酯(200mL)萃取3次。有機相用飽和食鹽水(100mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥後，過濾，減壓濃縮得粗品。粗品經柱層析(石油醚：乙酸乙酯=10：1)純化得到化合物24-6。

步驟6：中間體24-7的合成

將化合物24-6(2.5g,11.9mmol)溶於無水四氫呋喃(20.0mL)，在0℃下加入氫化鋁鋰(2.5M,6.32mL)，然後在室溫下反應1小時。向反應液中加入0.6毫升水，0.6毫升15%氫氧化鈉水溶液，最後加入1.8毫升水，無水硫酸鈉乾燥後，過濾，減壓濃縮得粗品化合物24-7。MS m/z=182.1[M+H]⁺。

步驟7：中間體24-8的合成

將化合物24-7(2.3g)溶於無水二氯甲烷(23.0mL)，加入咪唑(3.46g,50.7mmol)，4-二甲胺基吡啶(155mg,1.27mmol)，然後在0℃下加入三級丁基二苯基氯矽烷(6.97g,25.3mmol)。在室溫下反應12小時。向反應液中倒入50mL水，用乙酸乙酯(100mL)萃取3次。有機相用飽和食鹽水(10mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥後，過濾，減壓濃縮得粗品。粗品經柱層析(石油醚：乙酸乙酯=10：1)純化得到化合物24-8。MS m/z=420.3[M+H]⁺。

步驟8：中間體24-9的合成

將化合物24-8(2.5g,5.96mmol)溶於無水甲苯(50mL)，加入Grubbs催化劑(1.01g,1.19mmol)。在120℃下反應12小時。將反應液減壓濃縮得到粗品。粗品經柱層析(二氯甲烷：甲醇=20：1)純化得到化合物24-9。MS m/z=392.2[M+H]⁺。

步驟9：中間體24-10的合成

將化合物24-9(1.00g,2.55mmol)溶於無水二

烷(6.0mL)，加入鹽酸(12M,212μL)。在95℃下反應12小時。向反應液中加入10毫升水，乙酸乙酯(20mL *3)萃取後，將水相凍乾，得到粗品化合物24-10。

步驟10：中間體24-11的合成

將化合物24-10(92.6mg)溶於無水甲苯(3mL)，加入三級丁醇鈉(101mg,1.06mmol)和化合物1-12B(130mg,151μmol)。在95℃下反應12小時。將反應液減壓濃縮得到粗品。粗品經柱層析(二氯甲烷：甲醇=10：1)純化得到化合物24-11。

步驟11：中間體24-12的合成

將化合物24-11(89mg,93.7μmol)溶於無水甲苯(1mL)，加入1-丙炔基三正丁基錫(123mg,374μmol)和二氯雙[二第三丁基-(4-二甲基胺基苯基)膦]鈀(II)(6.64mg,9.37μmol)。氮氣置換3次後，在氮氣保護下130℃反應0.5小時。反應液冷卻，減壓濃縮得粗品。粗品經薄板層析(二氯甲烷：甲醇=10：1)純化得到化合物24-12。

步驟12：化合物24的三氟乙酸鹽合成

將化合物24-12(90mg,94.4μmol)溶入二氯甲烷(1.0mL)，加入三氟乙酸(161mg,1.42mmol)，25℃下反應1.5小時。反應液減壓濃縮得到粗品。粗品進行高效液相色譜分離(柱子：Phenomenex luna C18 150*25mm* 10μm；流動相：[水(0.075%三氟乙酸)-乙腈]；乙腈：20%-50% over 7min)。凍乾後得到化合物24的三氟乙酸鹽。MS m/z=613.2[M+H]⁺。1H NMR(400MHz,METHANOL-d4)6.92(d,J=8.2Hz,1H),5.61(d,J=1.4Hz,1H),5.18(br dd,J=4.4,11.6Hz,1H),4.91-4.89(m,2H),4.86-4.82(m,1H),4.80-4.70(m,2H),4.51-4.41(m,2H),4.29(br d,J=14.0Hz,1H),4.19-4.10(m,2H),3.91(br d,J=15.2Hz,1H),3.85-3.74(m,2H),3.63(br d,J=14.4Hz,1H),3.27(br d,J=5.2Hz,2H),2.95(br d,J=1.2Hz,1H),2.28-2.08(m,7H),2.02(s,3H),1.83(d,J=1.6Hz,3H)。

實施例25

步驟1：中間體25-2的合成

將化合物25-1(9.80g,43.5mmol)溶於無水DMF(98mL)，然後加入對甲氧基氯苄(8.17g,52.2mmol)，碘化鉀(7.22g,43.5mmol)和碳酸鉀(15.0g,109mmol)。在50℃下反應12小時。向反應液倒入50.0mL的水，用乙酸乙酯(150mL)萃取。有機相用飽和食鹽水(100mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥後，過濾，減壓濃縮得粗品。粗品經柱層析(石油醚：乙酸乙酯=10：1)純化得到化合物25-2。MS m/z=345.6[M+H]⁺。

步驟2：中間體25-3的合成

將2,2,6,6-四甲基哌啶(21.3g,150mmol)溶於四氫呋喃(130mL)氮氣置換三次後，降溫至-5℃，逐滴滴加正丁基鋰(2.50M,60.2mL)，攪拌0.5小時。然後降溫至-60℃，加入化合物25-2(13.0g,37.6mmol)，攪拌0.5小時。然後在-60℃加入DMF(55.0g,752mmol)，繼續攪拌0.5小時。在0℃下用200mL的飽和氯化銨溶液淬滅反應，乙酸乙酯萃取(300mL)。有機相用飽和食鹽水(300mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥後，過濾減壓濃縮得粗品。粗品經柱層析(石油醚：乙酸乙酯=50：1)純化得到化合物25-3。MS m/z=373.28[M+H]⁺。

步驟3：中間體25-4的合成

將化合物25-3(4.9g,13.12mmol)，碘化亞銅(5.00g,26.23mmol)，2,2-二氟-2-氟磺醯乙酸甲酯(9.57g,49.84mmol)溶於DMF(50mL)中，置換氮氣3次，在110℃下反應2.5小時。將反應液冷卻，鋪矽藻土過濾後，向有機相中加入水(100mL)，用乙酸乙酯(100mL)萃1次。有機相用飽和食鹽水(100mL)洗滌6次，無水硫酸鈉乾燥後，過濾，減壓濃縮得粗品。粗品經柱層析(石油醚：乙酸乙酯=20：1)純化得到化合物25-4。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)10.29(q,J=4.25Hz,1 H),7.35(d,J=8.63Hz,2 H),7.21(d,J=7.25Hz,1 H),7.00-6.90(m,2 H),5.14(s,2 H),3.84(s,3 H)。

步驟4：中間體25-5的合成

將2,2,6,6-四甲基哌啶(3.68g,26.02mmol,4.42mL)溶到THF(30mL)中，置換氮氣3次，將溫度降至-40℃後，緩慢滴加正丁基鋰(2.5M,10.06mL)，滴完之後，-40℃下反應0.5小時，將反應液降溫至-60℃，將3-8(3.3g,8.67mmol)的THF(10mL)溶液緩慢滴加至上述反應液中，升溫-40℃下反應15分鐘後，將化合物25-4(3.77g,10.41mmol)分批加入到上述反應液中，室溫反應2小時。反應液用飽和氯化銨水溶液(50mL)進行淬滅，用乙酸乙酯(50mL)萃取2次。有機相用飽和食鹽水(100mL)洗滌2次，無水硫酸鈉乾燥後，過濾，減壓濃縮得粗品。粗品經加入石油醚和乙酸乙酯混合溶液(20mL)(石油醚：乙酸乙酯=5：1)攪拌12小時，過濾收集固體得到化合物25-5。

步驟5：中間體25-6的合成

將化合物25-5(2.7g,3.63mmol)，氰亞甲基磷酸三丁酯(1.75g,7.27mmol)溶於甲苯(27mL)，置換氮氣後，110℃反應12小時。向反應液中倒入50mL氯化銨水溶液，用乙酸乙酯(50mL)萃取2次。有機相用飽和食鹽水(100mL)洗滌2次，無水硫酸鈉乾燥後，過濾，減壓濃縮得粗品。粗品經柱層析(石油醚：乙酸乙酯=10：1)純化得到化合物25-6。MS m/z=725.3[M+H]⁺。

步驟6：中間體25-7的合成

將化合物25-6(1.5g,2.07mmol)溶於無水DCM(15.0mL)，在0℃下分批加入間氯過氧苯甲酸(461.92mg,2.28mmol,85%純度)，然後在室溫下反應過夜。將反應液直接拌樣，經柱層析(石油醚：乙酸乙酯=1：1)純化得到化合物25-7。MS m/z=741.3[M+H]⁺。

步驟7：中間體25-8的合成

將化合物25-7(1.9g,2.56mmol)溶於無水甲苯(19mL)，加入化合物1-2A(816.20mg,5.13mmol)，三級丁醇鈉(985.42mg,10.25mmol)和4A分子篩(1g)，置換氮氣後在100℃下反應12小時。反應液減壓濃縮得粗品。粗品經柱層析(石油醚：乙酸乙酯=1：1)純化得到化合物25-8。MS m/z=836.5[M+H]⁺。

步驟8：中間體25-9的合成

將化合物25-8(1.50g,1.79mmol)溶於無水甲苯(15mL)，加入1-丙炔基三正丁基錫(2.36g,7.17mmol)和二氯雙[二第三丁基-(4-二甲基胺基苯基)膦]鈀(II)(381.01mg,538.09μmol)。氮氣置換3次後，在氮氣保護下110℃反應12小時。反應液冷卻，減壓濃縮得粗品。粗品經柱層析(石油醚：乙酸乙酯=1：1)純化得到化合物25-9。MS m/z=840.3[M+H]⁺。

步驟9：化合物25的合成

將化合物25-9(1.27g,1.51mmol)溶入二氯甲烷(13mL)，加入三氟乙酸(3.99g,35.00mmol)，20℃下反應3小時。反應液用飽和碳酸氫鈉水溶液調節pH=7，減壓濃縮得到粗品。粗品進行高效液相色譜分離(柱子：Kromasil Eternity XT 250*80mm*10μm；流動相：[水(0.1%氨水)-乙腈]；乙腈：10%-40% over 20min)。凍乾後得到化合物25。MS m/z=620.4[M+H]⁺。

步驟10：化合物25A和25B的合成

化合物25經過SFC分離，(柱子：DAICEL CHIRALPAK IC(250mm*30mm,10μm)；流動相：[超臨界CO₂-乙醇(0.1%氨水)]；乙醇(0.1%氨水)%：50%-50%)，得到化合物25A和化合物25B。

化合物25A，手性SFC分析(色譜柱：ChiralPak IC-3(100mm*4.6mm,3μm)；流動相：[超臨界CO₂-乙醇(0.05%二乙胺)]；(乙醇(0.05%二乙胺))%：40%-40%)，Rt=0.695分鐘，ee值99%，MS m/z=620.2[M+H]⁺；¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ 7.07(d,J=8.13Hz,1 H),5.30-5.04(m,2 H),4.78-4.59 (m,2 H),4.13-3.89(m,3 H),3.56(br s,2 H),3.45-2.77(m,12 H),2.29-2.05(m,3 H),2.01-1.57(m,8 H)。

化合物25B，手性SFC分析(色譜柱：ChiralPak IC-3(100mm*4.6mm,3μm)；流動相：[超臨界CO₂-乙醇(0.05%二乙胺)]；(乙醇(0.05%二乙胺))%：40%-40%)，Rt=1.229分鐘，ee值99%，MS m/z=620.2[M+H]⁺。¹H NMR(DMSO-d6,400MHz)9.44-8.91(m,2 H),7.12(br d,J=8.25Hz,1 H),5.68-5.45(m,1 H),5.12(br dd,J=10.88,3.75Hz,1 H),4.95-4.63(m,2 H),4.45(s,2 H),4.31-4.01(m,3 H),3.95-3.51(m,6 H),3.39-3.09(m,3 H),2.99-2.81(m,1 H),2.54(br d,J=4.38Hz,1 H),2.44(br s,1 H),2.35-2.24(m,1 H),2.23-2.06(m,4 H),1.99-1.87(m,2 H),1.87-1.72(m,1 H)。

實施例26

步驟1：中間體26-2的合成

將化合物26-1(5.00g,30.6mmol)溶於無水二氯甲烷(50.0mL)，加入NBS(6.53g,36.7mmol)。室溫下反應1小時。向反應液加入50.0mL的水，用二氯甲烷(150mL)萃取。有機相用飽和食鹽水(150mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥後，過濾，減壓濃縮得粗品。粗品經柱層析(石油醚：乙酸乙酯=20：1)純化得到化合物26-2。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ ppm 7.14(dd,J=9.88,2.25Hz,1 H)3.60-4.02(m,2 H)。

步驟2：中間體26-3的合成

將化合物26-2(5.60g,23.1mmol)和對甲氧基氯苄(8.68g,55.4mmol)溶於無水DMF(56.0mL)，加入碘化鉀(3.83g,23.1mmol)和碳酸鉀(7.98g,57.7mmol)。在80℃反應2小時。向反應液倒入100mL的水，用乙酸乙酯(150mL)萃取。有機相用飽和食鹽水(100mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥後，過濾，減壓濃縮得粗品。粗品經柱層析(石油醚：乙酸乙酯=20：1)純化得到化合物26-3。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ ppm 7.20(d,J=8.50Hz,4 H)7.09(dd,J=10.38,2.13Hz,1 H)6.83(d,J=8.63Hz,4 H)4.16(s,4 H)3.80(s,6 H)。

步驟3：中間體26-4的合成

將2,2,6,6-四甲基哌啶(10.3g,73.2mmol,12.4mL)溶於四氫呋喃(90.0mL)氮氣置換三次後，降溫至-5℃，逐滴滴加正丁基鋰(2.50M,29.3mL)，攪拌0.5小時。然後降溫至-60℃，加入化合物26-4(9.20g,18.3mmol)，攪拌1小時。然後在-60℃加入DMF(26.8g,366mmol)，繼續攪拌0.5小時。在0℃下加入100mL的飽和氯化銨溶液，使用乙酸乙酯萃取(300mL)。有機相用飽和食鹽水(300mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥後，過濾，減壓濃縮得粗品。粗品經柱層析(石油醚：乙酸乙酯=30：1)純化得到化合物26-4。MS m/z=510.8[M+H]⁺。

步驟4：中間體26-5的合成

將2,2,6,6-四甲基哌啶(3.56g,25.2mmol,4.28mL)溶於四氫呋喃(50.0mL)氮氣置換三次後，降溫至-40℃，逐滴滴加正丁基鋰(2.5M,9.76mL)，攪拌0.5小時。然後降溫至-60℃，加入化合物3-8(3.20g,8.41mmol)，攪拌15分鐘。然後在-60℃加入化合物26-4(5.37g,10.1mmol)。在室溫下繼續攪拌0.5小時。在25℃下加入100mL的飽和氯化銨溶液，使用乙酸乙酯萃取(300mL)。有機相用飽和食鹽水(300mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥後，過濾，減壓濃縮得粗品。粗品進行高效液相色譜分離(柱子：Phenomenex luna C18(250*70mm,10μm)；流動相：[水(0.075%三氟乙酸)-乙腈]；乙腈：80%-100% over 20min)。凍乾後得到化合物26-5。

步驟5：中間體26-6的合成

將化合物26-5(2.20g,2.47mmol)和氰亞甲基磷酸三丁酯(1.19g,4.94mmol)溶入無水甲苯(20.0mL)，在氮氣保護下，110℃下反應12小時。反應液減壓濃縮得到粗品。粗品經柱層析(石油醚：乙酸乙酯=5：1)純化得到化合物26-6。

步驟6：中間體26-7A和26-7B的合成

將化合物26-6(1.10g,1.26mmol)和氟磺醯二氟乙酸甲酯(919.60mg,4.79mmol)溶入無水DMF(10.0mL)，然後加入碘化亞銅(480mg,2.52mmol)。在110℃下反應2.5小時。在25℃下加入50.0mL的水，使用乙酸乙酯萃取(150mL)。有機相用飽和食鹽水(150mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥後，過濾，減壓濃縮得粗品。粗品經柱層析(石油醚：乙酸乙酯=5：1)純化得到化合物26-7。後經製備SFC分離(手性柱：DAICEL CHIRALCEL OD(250mm*30mm,10μm)；流動相：超臨界CO₂-乙醇(0.1%氨水)]；乙醇%：40%-40%))純化得到化合物26-7A和化合物26-7B。手性SFC分析(色譜柱：(S,S)Whelk-O1 50*4.6mm I.D.,3.5μm；流動相：[超臨界CO₂-乙醇(0.05%二乙胺)]；(乙醇(0.05%二乙胺))%：50%-50%)，化合物26-7A，Rt=1.791分鐘，ee值99%，MS m/z=862.3[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ ppm 7.15(d,J=8.50Hz,4 H),6.85(d,J=8.63Hz,4 H),5.21-5.09(m,1 H),4.70(s,2 H),4.21(s,6 H),3.81(s,6 H),3.57-2.97(m,5 H),2.54(s,3 H),1.96(br s,3 H),1.66(br d,J=5.88Hz,1 H),1.50(s,10 H)。化合物26-7B，Rt=2.166分鐘，ee值99%，MS m/z=862.3[M+H]⁺。

步驟7：中間體26-8A和26-8B的合成

將化合物26-7A(170mg,197μmol)溶於無水二氯甲烷(2.00mL)，加入間氯過氧苯甲酸(44.0mg,217μmol,85%純度)。室溫下反應2小時，用二氯甲烷(60.0mL)萃取。有機相用飽和食鹽水(60.0mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥後，過濾，減壓濃縮得粗品。粗品經柱層析(石油醚：乙酸乙酯=2：1)純化得到化合物26-8A。MS m/z=878.2[M+H]⁺。

參考步驟7，使用26-7B為原料，得到化合物26-8B。MS m/z=878.2[M+H]⁺

步驟8：中間體26-9A和26-9B的甲酸鹽合成

將化合物26-8A(150mg,171μmol)溶於無水甲苯(2.00mL)，加入三級丁醇鈉(131mg,1.37mmol)，化合物8-2(52.3mg,342μmol)和分子篩(70.0mg)。在100℃反應12小時。向反應液倒入60.0mL的飽和氯化銨水溶液，用乙酸乙酯(50.0mL)萃取。有機相用飽和食鹽水(60.0mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥後，過濾，減壓濃縮得粗品。粗品進行高效液相色譜分離(柱子：Phenomenex luna C18 150*25mm* 10μm；流動相：[水(0.225%甲酸)-乙腈]；乙腈：40%-70%)。凍乾後得到化合物26-9A的甲酸鹽。MS m/z=967.3[M+H]⁺。

參考步驟8，使用26-8B為原料，得到化合物26-9B的甲酸鹽。MS m/z=967.3[M+H]⁺。

步驟9：中間體26-10A和26-10B的合成

將化合物26-9A的甲酸鹽(20.0mg)溶於無水甲苯(1.00mL)，加入1-丙炔基三正丁基錫(27.2mg,82.7μmol)和二氯雙[二第三丁基-(4-二甲基胺基苯基)膦]鈀(II)(4.39mg,6.20μmol)。氮氣置換3次後，在氮氣保護下110℃反應12小時。減壓濃縮甲苯，加入2.00mL乙酸乙酯，經製備薄層色譜法純化得到化合物26-10A。MS m/z=971.3[M+H]⁺。

參考步驟9，使用26-9B的甲酸鹽為原料，得到化合物26-10B。MS m/z=971.3[M+H]⁺。

步驟10：化合物26A和26B的三氟乙酸鹽合成

將化合物26-10A(40.0mg,41.2μmol)溶入二氯甲烷(1.00mL)，加入三氟乙酸(307mg,2.69mmol)，25℃下反應12小時。向反應液中加入3.00mL飽和碳酸鈉溶液，減壓濃縮得到粗品。粗品進行高效液相色譜分離(柱子：Phenomenex Luna C18 150*25mm*10μm；流動相：[水(0.075%三氟乙酸)-乙腈]；乙腈：15%-45%)。凍乾後得到26A的三氟乙酸鹽。MS m/z=631.3[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ ppm 5.31(br d,J=7.88Hz,3 H),4.84-4.83(m,2 H),4.77-4.71(m,1 H),4.58(br s,2 H),4.43-4.31(m,2 H),4.23-4.13(m,2 H),3.98-3.64(m,4 H),3.36(br s,1 H),3.25(br d,J=2.88Hz,1 H),3.09-2.91(m,2 H),2.79(br d,J=16.01Hz,1 H),2.44-2.34(m,1 H),2.32-2.20(m,4 H),2.18-2.05(m,5 H),2.02-1.90(m,1 H)。

將化合物26-10B(46.0mg,47.4μmol)溶入二氯甲烷(1.00mL)，加入三氟乙酸(307mg,2.69mmol)，25℃下反應12小時。反應液減壓濃縮得到粗品。粗品進行高效液相色譜分離(柱子：Phenomenex Luna C18 150*25mm*10μm；流動相：[水(0.075%三氟乙酸)-乙腈]；乙腈：15%-45%)。凍乾後得到26B的三氟乙酸鹽。MS m/z=631.3[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ ppm 5.34-5.16(m,3 H),4.88(br s,2 H),4.77-4.71(m,1 H),4.56(s,2 H),4.34(br d,J=14.26Hz,2 H),4.20-4.10(m,2 H),3.92(br d,J=14.63Hz,1 H),3.86-3.63(m,3 H),3.27-3.21(m,1 H),3.08-2.89(m,3 H),2.79(br d,J=15.76Hz,1 H),2.36(br dd,J=11.88,6.38Hz,1 H),2.30-2.10(m,7 H),2.09(s,3 H)。

生物測試數據

實驗例1.GP2D細胞p-ERK抑制測試

1.目的

通過HTRF的方法，篩選出能有效抑制KRAS^G12D突變的GP2D細胞p-ERK的化合物。

2.實驗流程

1).GP2D細胞種於透明96孔細胞培養板中，80μL細胞懸液每孔，每孔包含8000個細胞，細胞板放入二氧化碳培養箱，37度過夜孵育；2).取2μL化合物加入78μL細胞培養基，混勻後，取20μL化合物溶液加入到對應細胞板孔中，細胞板放回二氧化碳培養箱繼續孵育1小時；3).結束孵育後，棄掉細胞上清加入50μL 1X細胞裂解液每孔，室溫搖晃孵育30分鐘；4).使用detection buffer將Phospho-ERK1/2 Eu Cryptate antibody和Phospho-ERK1/2 d2 antibody稀釋20倍；5).取16μL細胞裂解物上清每孔到新的384白色微孔板中，再加入2μL Phospho-ERK1/2 Eu Cryptate antibody稀釋液和2μL Phospho-ERK1/2 d2 antibody稀釋液，常溫孵育至少4小時；6).孵育結束後使用多標記分析儀讀取HTRF excitation：320nm,emission：615nm，665nm；7).計算待測化合物IC₅₀。

3.實驗結果

結果見表5。

表5化合物對GP2D細胞p-ERK抑制的IC₅₀值

實驗結論：本發明化合物具有顯著的KRAS^G12D突變GP2D細胞p-ERK抑制作用。

實驗例2.AGS細胞p-ERK抑制測試

1.目的

通過HTRF的方法，篩選出能有效抑制KRAS^G12D突變AGS細胞p-ERK的化合物。

2.實驗流程

1).AGS細胞種於透明96孔細胞培養板中，80μL細胞懸液每孔，每孔包含10000個細胞，細胞板放入二氧化碳培養箱，37度過夜孵育；2).結束孵育後，棄掉細胞上清，加入80μL每孔的培養基，培養基含0.02%血清，細胞板放入二氧化碳培養箱，37度過夜孵育；3).取2μL化合物加入78μL細胞培養基，混勻後，取20μL化合物溶液加入到對應細胞板孔中，細胞板放回二氧化碳培養箱繼續孵育3小時；4).結束孵育後，棄掉細胞上清加入50μL 1X細胞裂解液每孔，室溫搖晃孵育30分鐘；5).使用detection buffer將Phospho-ERK1/2 Eu Cryptate antibody和Phospho-ERK1/2 d2 antibody稀釋20倍；6).取16μL細胞裂解物上清每孔到新的384白色微孔板中，再加入2μL Phospho-ERK1/2 Eu Cryptate antibody稀釋液和2μL Phospho-ERK1/2 d2 antibody稀釋液，常溫孵育至少4小時； 7).孵育結束後使用多標記分析儀讀取HTRF excitation：320nm,emission：615nm，665nm；8).計算待測化合物IC₅₀。

3.實驗結果

結果見表6。

實驗結論：本發明化合物具有顯著的KRAS^G12D突變AGS細胞p-ERK抑制作用。

實驗例3.AsPC-1細胞p-ERK抑制測試

1.目的

通過HTRF的方法，篩選出能有效抑制KRAS^G12D突變AsRC-1細胞p-ERK的化合物。

2.實驗材料：

ASPC-1細胞購自普諾賽；RPMI-1640培養基購自VivaCell；胎牛血清購自Biosera；Advanced Phospho-ERK1/2(THR202/TYR204)KIT購自Cisbio。

3.實驗方法：

6)ASPC-1細胞種於透明96孔細胞培養板中，80μL細胞懸液每孔，每孔包含8000個細胞，細胞板放入二氧化碳培養箱，37度過夜孵育；7)結束孵育後棄掉上清，加入80μL每孔1640空白培養基饑餓過夜；8)將待測化合物用100%DMSO稀釋到2mM作為第一個濃度，然後再用移液器進行5倍稀釋至第8個濃度，即從2mM稀釋至25.6nM。取2μL化合物加入78μL細胞饑餓培養基，混勻後，取20μL化合物溶液加入到對應細胞板孔中，細胞板放回二氧化碳培養箱繼續孵育1小時，此時化合物濃度為10μM至0.128nM，DMSO濃度為0.5%；9)結束孵育後，棄掉細胞上清加入50μL細胞裂解液每孔，室溫搖晃孵育30分鐘；10)使用Detection buffer將Phospho-ERK1/2 Eu Cryptate antibody和Phospho-ERK1/2 d2 antibody稀釋20倍；11)取16μL細胞裂解物上清每孔到新的384白色微孔板中，再加入2μL Phospho-ERK1/2 Eu Cryptate antibody稀釋液和2μL Phospho-ERK1/2 d2 antibody稀釋液，常溫孵育4小時；12)孵育結束後使用多標記分析儀讀取HTRF excitation：320nm,emission：615nm，665nm。

4.數據分析：

利用方程式(Sample-Min)/(Max-Min)*100%將原始數據換算成抑制率，IC₅₀的值即可通過四參數進行曲線擬合得出(GraphPad Prism中log(inhibitor)vs. response--Variable slope模式得出)。表1提供了本發明的化合物對p-ERK的抑制作用。

Max孔：陽性對照孔讀值為1X裂解液

Min孔：陰性對照孔讀值為0.5%DMSO細胞孔細胞裂解液

5.實驗結果

結果見表8。

實驗結論：本發明化合物在KRAS^G12D突變AsPC-1細胞對具有顯著的抑制作用。

實驗例4.AsPC-1細胞p-ERK抑制測試

1.目的

通過In cell western的方法，篩選出能有效抑制KRAS^G12D突變AsPC-1細胞p-ERK的化合物。

2.實驗材料：

ASPC-1細胞購ATCC；RPMI-1640培養基購自ATCC；胎牛血清購自Ausgenex；Phospho-p44/42 MAPK(Erk1/2)(Thr202/Tyr204)(D13.14.4E)XP^® Rabbit mAb購自CST，GAPDH(D4C6R)Mouse mAb購自CST，IRDye 680RD Goat anti Mouse IgG(H+L)購自LI-COR，IRDye 800CW Goat anti-Rabbit IgG(H+L)購自LI-COR。

3.實驗方法：

1)ASPC-1細胞種於黑色底部透明384孔細胞培養板中，40μL細胞懸液每孔，每孔包含6000個細胞，細胞板放入二氧化碳培養箱，37攝氏度過夜孵育；2)將待測化合物用100%DMSO稀釋到10mM作為第一個濃度，然後再用移液器進行3倍稀釋至第9個濃度，即從10mM稀釋至1.52μM。使用ECHO儀器，轉移40nL化合物加入細胞板中，低速離心，細胞板放回二氧化碳培養箱繼續孵育1小時，此時化合物濃度為10μM至1.52nM，DMSO濃度為0.1%；3)結束孵育後，每孔加入40μL 8%的多聚甲醛固定液，室溫靜止20分鐘；4)使用PBS緩衝液洗滌兩遍；每孔加入40μL預冷的甲醇溶液；使用PBS緩衝液洗滌兩遍；每孔加入20μL的封閉液，室溫靜置60分鐘；5)移除封閉液，每孔加入20μL的一抗抗體混合液(Phospho-p44/42 MAPK(Erk1/2)(Thr202/Tyr204)(D13.14.4E)XP^® Rabbit mAb稀釋1000倍，GAPDH(D4C6R)Mouse mAb稀釋2000倍)，4攝氏度過夜孵育；6)移除一抗混合液，使用PBS緩衝液洗滌三遍；每孔加入20μL的二抗抗體混合液(IRDye 800CW Goat anti-Rabbit IgG(H+L)稀釋2000倍，IRDye 680RD Goat anti Mouse IgG(H+L)稀釋2000倍)，室溫避光孵育60分鐘； 7)移除一抗混合液，使用PBS緩衝液洗滌三遍，1000轉每分鐘，倒置離心1分鐘，使用Odyssey CLx儀器掃描板子。

4.數據分析：

利用方程式(800通道螢光總值/700通道螢光總值)計算出相對表達量，再利用方程式(Max-Sample)/(Max-Min)*100%將原始數據換算成抑制率，IC₅₀的值即可通過四參數進行曲線擬合得出(Excel中插件XLfit中log(inhibitor)vs.response--Variable slope模式得出)。

Max孔：陽性對照孔為陽性藥最高濃度

Min孔：陰性對照孔讀值為0.1%DMSO細胞孔

5.實驗結果

結果見表9。

實驗結論：本發明化合物具有顯著的KRAS^G12D突變AsPC-1細胞p-ERK抑制作用。

實驗例5.化合物在腫瘤細胞系AsPC-1中的抗細胞增殖作用

研究目的

本實驗通過檢測化合物在KRAS^G12D突變的腫瘤細胞系AsPC-1中對體外細胞活性的影響而研究化合物抑制細胞增殖的作用。

實驗材料

細胞系：AsPC-1；腫瘤類型：胰腺癌；生長特點：貼壁生長；培養方法：RPMI 1640+10% FBS

Ultra Low Cluster-96孔板(Corning-7007)

Greiner CELLSTAR 96-孔板(# 655090)

Promega CellTiter-Glo 3D發光法細胞活性檢測試劑盒(Promega-G9683)2104-10 EnVision讀板器，PerkinElmer

實驗方法及步驟

細胞培養

細胞鋪板

用台盼藍進行細胞染色並計數活細胞。

將細胞濃度調整至合適濃度。

細胞系：AsPC-1；密度(每孔)：7000個細胞。

將培養板在37℃,5% CO₂，及100%相對濕度的培養箱中培養過夜。

10X化合物工作液的配製及化合物處理細胞(第一天)

將96孔細胞板放回培養箱中培養120小時。

每天觀察細胞成球情況直至實驗終點。

CellTiter-Glo發光法細胞活性檢測(第五天)

將培養板在軌道搖床上振搖5分鐘。

在2104 EnVision讀板器上檢測發光信號。

數據分析

實驗結果

結果見表10。

實驗結論：本發明化合物對KRAS^G12D突變細胞AsPC-1顯示了優異的抗增殖作用。

實驗例6.化合物在腫瘤細胞系AsPC-1中的抗細胞增殖作用

1.目的

通過3D-CTG的方法，驗證化合物在KRAS^G12D突變的腫瘤細胞系AsPC-1中的抗細胞增殖的作用。

2.實驗材料：

ASPC-1細胞購自ATCC；RPMI-1640培養基購自ATCC；胎牛血清購自Ausgenex；CellTiter-Glo® 3D assay kit(3D-CTG)購自Promega；CellCarrier-96 Spheroid ULA/CS購自PE。

3.實驗方法：

8)ASPC-1細胞種於透明96孔細胞培養板中，195μL細胞懸液每孔，每孔包含2000個細胞；

9)將待測化合物用100%DMSO稀釋到10mM作為第一個濃度，然後再用移液器進行5倍稀釋至第8個濃度，即從10mM稀釋至0.13μM。取2μL梯度稀釋後的化合物加入48μL細胞培養基中進行二次稀釋，混勻後，取5μL二次稀釋後化合物加入到對應195μL的細胞板孔中，細胞板放回二氧化碳培養箱孵育7天，此時化合物濃度為10μM至0.128nM，DMSO濃度為0.1%；

10)結束孵育後，棄掉100μL細胞上清，並加入60μL 3D-CTG每孔，室溫200rpm震盪孵育20分鐘；並放入孵箱，室溫孵育1h。

11)吸取100μL孔板中的上清轉移至96孔黑色底透板中，在BMG中讀取luminescence。

4.數據分析：

利用方程式Inhibition%=(Ave_H-Sample)/(Ave_H-Ave_L)將原始數據換算成抑制率，IC₅₀的值即可通過四參數進行曲線擬合得出(GraphPad Prism中log(inhibitor)vs.response--Variable slope模式得出)。

H孔：DMSO孔的讀值

L孔：Medium的讀值

5.實驗結果

結果見表11。

實驗例7.CD-1小鼠口服及靜脈注射受試化合物的藥代動力學研究

實驗目的

測試CD-1小鼠口服及靜脈注射化合物的體內藥代動力學。

實驗步驟

受試化合物與5%DMSO+95%(10%HP-β-CD)水溶液混合，渦旋並超聲波震盪，製備得到0.5mg/mL澄清溶液(靜脈)或3mg/mL澄清溶液(口服)，微孔濾膜過濾後備用。選取7至10周齡的雄性CD-1小鼠，靜脈注射給予候選化合物溶液。口服給予候選化合物溶液。收集一定時間的全血，製備得到血漿，以LC-MS/MS方法分析藥物濃度，並用Phoenix WinNonlin軟體(美國Pharsight公司)計算藥代參數。

實驗結果

實驗結論

本發明化合物在小鼠體內的半衰期長，暴露量高，且具有良好的口服生物利用度，藥代動力學性質良好。

實驗例8.體內藥效學研究

實驗方法：

建立人結腸癌GP2D細胞皮下異種移植腫瘤Balb/c nude小鼠模型，將0.2mL(2×10⁶個)GP2D細胞(加基質膠，體積比為1：1)皮下接種於每只小鼠的右後背，當腫瘤平均體積達到140mm³時開始分組給藥，每組6只。實驗當天動物按組別給予相對應的藥物。第一組G1設陰性對照組，單獨灌胃給予5%DMSO+95%(10%HP-β-CD)，第二組G2-第四組G4給予給化合物8的鹽酸鹽，給藥劑量和方案如表14所示。

注：PO表示口服，QD表示每日一次，BID表示每日一次。

實驗期間每週測定2次動物的體重和腫瘤的大小，同時每天觀察並記錄動物的臨床症狀，每次給藥均參考最近一次秤量的動物體重。

腫瘤的測量用數顯遊標卡尺來測定長(a)和寬(b)，腫瘤體積(Tumor volume，TV)的計算公式為：TV=a×b²/2。

實驗結果：

化合物8的鹽酸鹽對人結腸癌GP2D小鼠異種移植瘤有顯著的抑制作用，給藥28天后，第二組G2(50mg/kg,PO,QD)在第28天時，腫瘤體積抑制率TGI(%)為47.0%；第三組G3(100mg/kg,PO,QD)和第四組G4(200mg/kg,PO,QD)在第28天時，腫瘤體積抑制率TGI(%)分別為75.9%和94.7%；詳細結果如表15所示。

注：N/A表示未檢測。

實驗結論：在體內藥效方面，本發明化合物在GP2D細胞系中表現出良好的抑制腫瘤作用，存在明顯的劑量相關性。

Claims

一種式(VI)所示化合物或其藥學上可接受的鹽，
其中，
選自單鍵或雙鍵；T₁選自CR_a和N；T₂選自CH和N；L₁選自O和S；R₁選自苯基、萘基、
、
和
，所述苯基、萘基、
、
和
分別獨立地任選被1、2、3、4或5個R_b取代；R₂選自H；R₃選自H、F、CN、CH₃和OCH₃，所述CH₃和OCH₃任選被1、2或3個鹵素取代；或者，R₂和R₃與相連的原子形成苯基或5-6元雜芳基，所述苯基或5-6元雜芳基任選被1、2或3個鹵素取代；R₄不存在，或選自H、CH₃和-CH=CH₂，所述CH₃和-CH=CH₂任選被1、2或3個鹵素取代；或者，R₃和R₄與相連的原子形成
，所述
任選被1或2個R_c取代；或者，R₃和R₄與相連的原子形成環丙基，所述環丙基任選被1、2或3個鹵素取代；R_a選自H和CN；各R_b分別獨立地選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH₂、CN、C_1-3烷基、C_1-3烷氧基、C_2-4炔基、C_2-4炔基-環丙基、C_2-3烯基、-C(=O)C_1-3烷基和C_3-5環烷基，所述C_1-3烷基、C_1-3烷氧基、C_2-4炔基、C_2-4炔基-環丙基、C_2-3烯基、-C(=O)C_1-3烷基和C_3-5環烷基任選被1、2、3、4或5個鹵素取代；各R_c分別獨立地選自F、Cl、Br、I、CN、CH₃和OCH₃；m選自0或1。
一種式(P-1)所示化合物或其藥學上可接受的鹽，
其中，
選自單鍵或雙鍵；L₁選自O和S； R₁選自苯基、萘基、5-10元雜芳基、
、
和
，所述苯基、萘基、5-10元雜芳基、
、
和
分別獨立地任選被1、2、3、4或5個R_b取代，R₅選自
、
和
，所述
、
和
分別獨立地任選被1、2、3、4或5個R_d取代；或者，R₁選自5-10元雜芳基，所述5-10元雜芳基任選被1、2、3、4或5個R_b取代，R₅選自
，所述
任選被1、2、3、4或5個R_d取代；各R_b分別獨立地選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH₂、CN、C_1-3烷基、C_1-3烷氧基、C_2-4炔基、C_2-4炔基-環丙基、C_2-3烯基、-C(=O)C_1-3烷基和C_3-5環烷基，所述C_1-3烷基、C_1-3烷氧基、C_2-4炔基、C_2-4炔基-環丙基、C_2-3烯基、-C(=O)C_1-3烷基和C_3-5環烷基任選被1、2、3、4或5個R取代；各R_d分別獨立地選自F、Cl、Br、I、CN、CH₃和OCH₃；各R分別獨立地選自鹵素和D。
一種式(P-2)所示化合物或其藥學上可接受的鹽：
其中，
選自單鍵或雙鍵；L₁選自O和S；各R_b分別獨立地選自F、Cl、Br、I、OH、NH₂、CN、C_1-3烷基、C_1-3烷氧基、C_2-4炔基、C_2-4炔基-環丙基、C_2-3烯基、-C(=O)C_1-3烷基和C_3-5環烷基，所述C_1-3烷基、C_1-3烷氧基、C_2-4炔基、C_2-4炔基-環丙基、C_2-3烯基、-C(=O)C_1-3烷基和C_3-5環烷基任選被1、2、3、4或5個R取代；各R分別獨立地選自鹵素和D；v選自1、2、3、4或5；條件是，至少有一個R_b被1、2、3、4或5個D取代。
如請求項1所述化合物或其藥學上可接受的鹽，其中，各R_b分別獨立地選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH₂、CN、CH₃、CH₂CH₃、OCH₃、OCH₂CH₃、-CH=CH₂、-C≡CH、-C≡CCH₃、-C≡CCH₂CH₃、
和環丙基，所述CH₃、CH₂CH₃、OCH₃、OCH₂CH₃、-CH=CH₂、-C≡CH、-C≡CCH₃、-C≡CCH₂CH₃、
和環丙基任選被1、2、3、4或5個鹵素取代。
如請求項2或3所述化合物或其藥學上可接受的鹽，其中，各R_b分別獨立地選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH₂、CN、CH₃、CH₂CH₃、OCH₃、 OCH₂CH₃、-CH=CH₂、-C≡CH、-C≡CCH₃、-C≡CCH₂CH₃、
和環丙基，所述CH₃、CH₂CH₃、OCH₃、OCH₂CH₃、-CH=CH₂、-C≡CH、-C≡CCH₃、-C≡CCH₂CH₃、
和環丙基任選被1、2、3、4或5個R取代。
如請求項1所述化合物或其藥學上可接受的鹽，其中，R₁選自
如請求項2所述化合物或其藥學上可接受的鹽，其中，R₁選自
如請求項1所述化合物或其藥學上可接受的鹽，其中，R₃選自H、F、CN、CH₃和OCH₃。
如請求項1所述化合物或其藥學上可接受的鹽，其中，R₂和R₃與相連的原子形成苯基、呋喃基和吡啶基，所述苯基、呋喃基和吡啶基任選被1個F取代。
如請求項1所述化合物或其藥學上可接受的鹽，其中，R₄不存在，或選自H、CH₂F和-CH=CH₂。
如請求項1所述化合物或其藥學上可接受的鹽，其中，R₃和R₄與相連的原子形成
、
、
和
。
如請求項1所述化合物或其藥學上可接受的鹽，其中，R₃和R₄與相連的原子形成
。
如請求項1所述化合物或其藥學上可接受的鹽，其中，結構單元
選自
、
、
、
、
、
、
、
如請求項1所述化合物或其藥學上可接受的鹽，其中，結構單元
選自
、
、
、
、
、
、
如請求項2或3所述化合物或其藥學上可接受的鹽，其中，結構單元
選自
。
如請求項1所述化合物或其藥學上可接受的鹽，
其中，各R_b和L₁如請求項1所定義； n選自0、1、2、3、4和5。
一種下列所示化合物或其藥學上可接受的鹽，
如請求項17所述的化合物或其藥學上可接受的鹽，其選自：
一種如請求項1~18任意一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽在製備治療與KRAS^G12D突變相關疾病的藥物中的應用。
一種如請求項1~18任意一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽在製備治療與腫瘤相關疾病的藥物中的應用。