WO2023138601A1 - 桥环取代的杂芳基并吡喃类衍生物及其应用 - Google Patents

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WO2023138601A1
WO2023138601A1 PCT/CN2023/072798 CN2023072798W WO2023138601A1 WO 2023138601 A1 WO2023138601 A1 WO 2023138601A1 CN 2023072798 W CN2023072798 W CN 2023072798W WO 2023138601 A1 WO2023138601 A1 WO 2023138601A1
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ethyl acetate
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PCT/CN2023/072798
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张杨
伍文韬
李志祥
朱文元
杨平
李秋
黎健
陈曙辉
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南京明德新药研发有限公司
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    • C07D491/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D491/04—Ortho-condensed systems
    • C07D491/044—Ortho-condensed systems with only one oxygen atom as ring hetero atom in the oxygen-containing ring
    • C07D491/052—Ortho-condensed systems with only one oxygen atom as ring hetero atom in the oxygen-containing ring the oxygen-containing ring being six-membered
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    • C07D519/00—Heterocyclic compounds containing more than one system of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system not provided for in groups C07D453/00 or C07D455/00

Definitions

  • a class of bridging-ring-substituted heteroarylpyran derivatives and applications thereof in the present invention specifically relate to a compound represented by formula (VI) or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • RAS oncogene mutations are the most common activating mutations in human cancers, occurring in 30% of human tumors.
  • the RAS gene family includes three subtypes (KRAS, HRAS, and NRAS), and 85% of RAS-driven cancers are caused by mutations in KRAS subtypes.
  • KRAS mutations are commonly found in solid tumors, such as lung adenocarcinoma, pancreatic ductal carcinoma, and colorectal cancer. In KRAS-mutated tumors, 80% of oncogenic mutations occurred at codon 12, and the most common mutations included: p.G12D (41%), p.G12V (28%), and p.G12C (14%).
  • KRAS is a murine sarcoma virus oncogene and an important member of the RAS protein.
  • KRAS is like a molecular switch, which can control the pathway of cell growth when it is normal; after KRAS gene mutation, it can independently transmit growth and proliferation signals to downstream pathways independently of upstream growth factor receptor signals, resulting in uncontrolled cell growth and tumor progression.
  • whether there is a mutation in the KRAS gene is also an important indicator of tumor prognosis.
  • KRAS G12C small molecules that directly target KRAS mutations are mainly concentrated in the KRAS G12C field.
  • Amgen's AMG510 and Mirati Therapeutics' MRTX849 have shown good therapeutic effects on tumor patients with KRAS G12C mutations in clinical studies. But so far no KRAS G12D small molecule has entered the clinical research stage, and tumor patients with KRAS G12D mutations have not yet benefited from precision medicine.
  • the invention discloses a series of small molecule inhibitors targeting KRAS G12D and a preparation method thereof.
  • the present invention provides a compound represented by formula (VI) or a pharmaceutically acceptable salt thereof, in,
  • T1 is selected from CR a and N;
  • T2 is selected from CH and N;
  • L is selected from O and S;
  • R 1 is selected from phenyl, naphthyl, The phenyl, naphthyl, each independently optionally substituted by 1, 2, 3, 4 or 5 R b ;
  • R2 is selected from H
  • R 3 is selected from H, F, CN, CH 3 and OCH 3 , said CH 3 and OCH 3 are optionally substituted by 1, 2 or 3 halogens;
  • R 2 and R 3 form a phenyl group or a 5-6 membered heteroaryl group with the connected atoms, and the phenyl group or 5-6 membered heteroaryl group is optionally substituted by 1, 2 or 3 halogens;
  • R3 and R4 form with connected atoms said optionally substituted by 1 or 2 R c ;
  • R3 and R4 form a cyclopropyl group with the connected atoms, which cyclopropyl group is optionally substituted by 1, 2 or 3 halogens;
  • R a is selected from H and CN
  • Each R c is independently selected from F, Cl, Br, I, CN, CH 3 and OCH 3 ;
  • n is selected from 0 or 1.
  • the present invention also provides a compound represented by formula (P-1) or a pharmaceutically acceptable salt thereof, in,
  • L is selected from O and S;
  • R 1 is selected from phenyl, naphthyl, 5-10 membered heteroaryl, The phenyl, naphthyl, 5-10 membered heteroaryl, each independently optionally substituted by 1, 2, 3, 4 or 5 R b , R selected from said each independently optionally substituted by 1, 2, 3, 4 or 5 R ;
  • R is selected from 5-10 membered heteroaryl optionally substituted by 1, 2, 3, 4 or 5 R b , R is selected from said optionally substituted by 1, 2, 3, 4 or 5 R ;
  • Each R d is independently selected from F, Cl, Br, I, CN, CH 3 and OCH 3 ;
  • Each R is independently selected from halogen and D.
  • the present invention also provides a compound represented by formula (P-2) or a pharmaceutically acceptable salt thereof, in,
  • L is selected from O and S;
  • Each R is independently selected from halogen and D;
  • v is selected from 1, 2, 3, 4 or 5;
  • At least one Rb is substituted by 1, 2, 3, 4 or 5 Ds.
  • said R 1 is selected from Other variables are as defined herein.
  • said R 1 is selected from Other variables are as defined herein.
  • said R 1 is selected from Other variables are as defined herein.
  • the R 3 is selected from H, F, CN, CH 3 and OCH 3 , and other variables are as defined in the present invention.
  • the R2 and R3 form phenyl, furyl and pyridyl with the connected atoms, and the phenyl, furyl and pyridyl are optionally substituted by 1 F, and other variables are as defined in the present invention.
  • the R 3 and R 4 form with the connected atoms
  • Other variables are as defined herein.
  • said R3 and R4 form Other variables are as defined herein.
  • the R 5 is selected from Other variables are as defined herein.
  • the compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof is selected from the group consisting of in,
  • T 1 , T 2 , R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , L 1 and m are as defined in the present invention.
  • the compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof is selected from the group consisting of in,
  • T 1 , T 2 , R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , L 1 and m are as defined in the present invention.
  • the condition is that when the structural unit is selected from selected from selected from When, the structure fragment not for R 2 is selected from H; R 3 is selected from H, F , CN, CH 3 and OCH 3 optionally substituted by 1, 2 or 3 halogens; R 4 is selected from H and CH 3 .
  • the compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof is selected from the group consisting of in,
  • R2 is selected from H
  • R 3 is selected from H, F, CN, CH 3 and OCH 3 , said CH 3 and OCH 3 are optionally substituted by 1, 2 or 3 halogens;
  • R 2 and R 3 form a phenyl group or a 5-6 membered heteroaryl group with the connected atoms, and the phenyl group or 5-6 membered heteroaryl group is optionally substituted by 1, 2 or 3 halogens;
  • R3 and R4 form with connected atoms said optionally substituted by 1 or 2 R c ;
  • R3 and R4 form a cyclopropyl group with the connected atoms, which cyclopropyl group is optionally substituted by 1, 2 or 3 halogens;
  • T 1 , T 2 , R 1 , each of R c , L 1 and m are as defined herein.
  • the T 1 is N, and other variables are as defined in the present invention.
  • the compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof is selected from the group consisting of in,
  • n is selected from 0, 1, 2, 3, 4 and 5.
  • the compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof is selected from the group consisting of in,
  • n is selected from 0, 1, 2, 3, 4 and 5.
  • the compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof is selected from the group consisting of in,
  • n is selected from 0, 1, 2, 3, 4 and 5.
  • the compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof is selected from the group consisting of in,
  • T 1 , T 2 , R 2 , R 3 , R 4 and L 1 are as defined in the present invention.
  • the present invention also provides a compound represented by formula (IV) or a pharmaceutically acceptable salt thereof, in,
  • T1 is selected from CR a and N;
  • T2 is selected from CH and N;
  • L is selected from O and S;
  • R 1 is selected from phenyl, naphthyl, The phenyl, naphthyl, each independently optionally substituted by 1, 2, 3, 4 or 5 R b ;
  • R is selected from H
  • R 3 is selected from H, F, CN and OCH 3 optionally substituted by 1, 2 or 3 halogens;
  • R2 and R3 form a phenyl group and a 5-6 membered heteroaryl group with the connected atoms, and the phenyl group and the 5-6 membered heteroaryl group are optionally substituted by 1, 2 or 3 halogens;
  • R3 and R4 form with connected atoms said optionally substituted by 1 or 2 halogens;
  • R3 and R4 form a cyclopropyl group with the connected atoms, which cyclopropyl group is optionally substituted by 1, 2 or 3 halogens;
  • R a is selected from H and CN
  • said R 1 is selected from Other variables are as defined herein.
  • the R 3 is selected from H, F, CN and OCH 3 , and other variables are as defined in the present invention.
  • the R2 and R3 form phenyl, furyl and pyridyl with the connected atoms, and the phenyl, furyl and pyridyl are optionally substituted by 1 F, and other variables are as defined in the present invention.
  • said R3 and R4 form Other variables are as defined herein.
  • said R3 and R4 form Other variables are as defined herein.
  • the compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof is selected from the group consisting of in,
  • T 1 , T 2 , R 2 , R 3 , R 4 and L 1 are as defined in the present invention.
  • the present invention also provides a compound represented by formula (IV) or a pharmaceutically acceptable salt thereof, in,
  • T1 is selected from CR a and N;
  • T2 is selected from CH and N;
  • L is selected from O and S;
  • R is selected from phenyl and naphthyl, said phenyl and naphthyl are independently optionally substituted by 1, 2, 3, 4 or 5 R b ;
  • R2 is selected from H
  • R is selected from H, F and CN
  • R 2 and R 3 form a phenyl group with the attached atoms
  • R a is selected from H and CN
  • said R 1 is selected from Other variables are as defined herein.
  • the compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof is selected from the group consisting of in,
  • T 1 , T 2 , R 2 , R 3 , R 4 and L 1 are as defined in the present invention.
  • said R b1 , R b2 , R b3 , R b4 , R b5 , R b6 , R b7 and R b8 are independently selected from H, F, Cl, Br, I, OH, NH 2 , CN, CH 3 , CH 2 CH 3 , OCH 3 , OCH 2 CH 3 , -CH ⁇ CH 2 , -C ⁇ CH and cyclopropyl, and said CH 3 , CH 2 CH 3 , OCH 3 , OCH 2 CH 3 , -CH ⁇ CH 2 , -C ⁇ CH and cyclopropyl are optionally substituted by 1, 2, 3, 4 or 5 R, and other variables are as defined herein.
  • the present invention also provides a compound represented by formula (III) or a pharmaceutically acceptable salt thereof, in,
  • T1 is selected from CR a and N;
  • T2 is selected from CH and N;
  • L is selected from O and S;
  • R is selected from phenyl and naphthyl, said phenyl and naphthyl are independently optionally substituted by 1, 2, 3, 4 or 5 R b ;
  • R2 is selected from H
  • R is selected from H and F
  • R 2 and R 3 form a phenyl group with the attached atoms
  • R a is selected from H and CN
  • said R 1 is selected from Other variables are as defined herein.
  • the compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof is selected from the group consisting of in,
  • T 1 , T 2 , R 2 , R 3 and L 1 are as defined in the present invention.
  • said R b1 , R b2 , R b3 , R b4 , R b5 , R b6 , R b7 and R b8 are independently selected from H, F, Cl, Br, I, OH, NH 2 , CN, CH 3 , CH 2 CH 3 , OCH 3 , OCH 2 CH 3 , -CH ⁇ CH 2 , -C ⁇ CH and cyclopropyl, and said CH 3 , CH 2 CH 3 , OCH 3 , OCH 2 CH 3 , -CH ⁇ CH 2 , -C ⁇ CH and cyclopropyl are optionally substituted by 1, 2, 3, 4 or 5 R, and other variables are as defined herein.
  • the present invention also provides a compound represented by formula (I) or a pharmaceutically acceptable salt thereof, in,
  • T1 is selected from CR a and N;
  • L is selected from O and S;
  • R is selected from phenyl and naphthyl, said phenyl and naphthyl are independently optionally substituted by 1, 2, 3, 4 or 5 R b ;
  • R a is selected from H and CN
  • the compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof is selected from the group consisting of in,
  • T and L are as defined in the present invention.
  • said R b1 , R b2 , R b3 , R b4 , R b5 , R b6 , R b7 and R b8 are independently selected from H, F, Cl, Br, I, OH, NH 2 , CN, CH 3 , CH 2 CH 3 , OCH 3 , OCH 2 CH 3 , -CH ⁇ CH 2 , -C ⁇ CH and cyclopropyl, and said CH 3 , CH 2 CH 3 , OCH 3 , OCH 2 CH 3 , -CH ⁇ CH 2 , -C ⁇ CH and cyclopropyl are optionally substituted by 1, 2, 3, 4 or 5 R, and other variables are as defined herein.
  • Example 8 of the present invention the hydrochloride of compound 8 was prepared from compound 8-3 through step 6 and step 7, wherein compound 8-3 was prepared from compound 8-2 and compound 1-12B through step 5, and compound 8-2 and compound 1-12B were prepared from compound 8-1A and compound 1-11B, respectively.
  • Example 8 of the present invention the hydrochloride of compound 8 was prepared from compound 1-11B, wherein, compound 1-11B was analyzed by SFC (chromatographic column: (S,S)Whelk-O1 100 ⁇ 4.6mm ID, 5.0 ⁇ m; mobile phase: A: supercritical CO 2 , B: [75% isopropanol/25% acetonitrile/0.05% diethylamine]; B%: 50%-50%, flow rate: 2. 5mL/min) shows that the retention time is 3.317min, and the retention time of its enantiomer is 2.536min.
  • SFC chromatographic column: (S,S)Whelk-O1 100 ⁇ 4.6mm ID, 5.0 ⁇ m; mobile phase: A: supercritical CO 2 , B: [75% isopropanol/25% acetonitrile/0.05% diethylamine]; B%: 50%-50%, flow rate: 2. 5mL/min
  • Example 8 of the present invention compound 8 was prepared from compound 1-11B, wherein compound 1-11B was analyzed by SFC (chromatographic column: (S,S)Whelk-O1 100 ⁇ 4.6mm ID, 5.0 ⁇ m; mobile phase: A: supercritical CO 2 , B: [75% isopropanol/25% acetonitrile/0.05% diethylamine]; B%: 50%-50%, flow rate: 2.5mL/ min) shows that the retention time is 3.317min, and the retention time of its enantiomer is 2.536min.
  • SFC chromatographic column: (S,S)Whelk-O1 100 ⁇ 4.6mm ID, 5.0 ⁇ m; mobile phase: A: supercritical CO 2 , B: [75% isopropanol/25% acetonitrile/0.05% diethylamine]; B%: 50%-50%, flow rate: 2.5mL/ min
  • Example 8 of the present invention compound 1-11B was analyzed by SFC (chromatographic column: (S,S)Whelk-O1 100 ⁇ 4.6mm ID, 5.0 ⁇ m; mobile phase: A: supercritical CO 2 , B: [75% isopropanol/25% acetonitrile/0.05% diethylamine]; B%: 50%-50%, flow rate: 2.5mL/min) showed that the retention time was 3.317min, which The retention time of the enantiomer was 2.536 min, and 1-11B was synthesized through the steps described in Example 8 to obtain the hydrochloride of compound 8.
  • SFC chromatographic column: (S,S)Whelk-O1 100 ⁇ 4.6mm ID, 5.0 ⁇ m; mobile phase: A: supercritical CO 2 , B: [75% isopropanol/25% acetonitrile/0.05% diethylamine]; B%: 50%-50%, flow rate: 2.5mL/min
  • the present invention provides a compound represented by the following formula or a pharmaceutically acceptable salt thereof,
  • the present invention provides a compound represented by the following formula or a pharmaceutically acceptable salt thereof,
  • the compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof is selected from the group consisting of,
  • the present invention also provides the use of the above compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof in the preparation of a medicament for treating diseases related to KRAS G12D mutation.
  • the present invention also provides the use of the above compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof in the preparation of a drug for treating tumor-related diseases.
  • the present invention also provides following synthetic method:
  • the present invention also provides following test method:
  • control compound mother solution 1 mM
  • concentration of the test compound mother solution 10 mM.
  • Test method 2 AGS cell p-ERK inhibition test
  • AGS cells are planted in a transparent 96-well cell culture plate, 80 ⁇ L of cell suspension per well, each well contains 10,000 cells, the cell plate is placed in a carbon dioxide incubator, and incubated overnight at 37;
  • GP2D cells are planted in a transparent 96-well cell culture plate, 80 ⁇ L of cell suspension per well, each well contains 8000 cells, the cell plate is placed in a carbon dioxide incubator, and incubated overnight at 37;
  • Test method 4 PANC0403 cell p-ERK inhibition test
  • PANC0403 cells were purchased from Nanjing Kebai; RPMI-1640 medium was purchased from Biological Industries; fetal bovine serum was purchased from Biosera; Advanced Phospho-ERK1/2 (THR202/TYR204) KIT was purchased from Cisbio.
  • PANC0403 cells are planted in a transparent 96-well cell culture plate, 80 ⁇ L of cell suspension per well, each well contains 10,000 PANC0403 cells, the cell plate is placed in a carbon dioxide incubator, and incubated overnight at 37;
  • Negative control well reading is 0.5% DMSO cell well cell lysate
  • Test Method 5 Anti-cell Proliferation Effects of Compounds in Tumor Cell Lines AsPC-1 and GP2D
  • RPMI 1640 fetal bovine serum
  • FBS fetal bovine serum
  • Antibiotic-antimycotic antibiotic-antifungal
  • L-glutamine L-glutamine
  • DMSO dimethyl sulfoxide
  • the tumor cell lines were cultured in an incubator at 37°C and 5% CO 2 according to the culture conditions indicated in the culture method. Passage regularly, and take cells in logarithmic growth phase for plating.
  • the ULA plate was centrifuged at room temperature for 10 minutes at 1000 rpm. Note: After centrifugation, be careful not to cause unnecessary shocks in subsequent operations.
  • DMSO 10X working solution After preparing the 10X compound working solution (DMSO 10X working solution), add 15 ⁇ L of 10X compound working solution to the ULA culture plate, and add 15 ⁇ L of DMSO-cell culture solution mixture to the vehicle control and blank control.
  • the 96-well cell plate was returned to the incubator for 120 hours.
  • the sphere formation of cells was observed every day until the end of the experiment.
  • the solution in the ULA plate was then transferred to a black bottom plate (#655090) and left at room temperature for 25 minutes to stabilize the luminescent signal.
  • Luminescent signals were detected on a 2104EnVision plate reader.
  • IR Inhibition rate
  • Test method 6 Pharmacokinetic study of oral and intravenous injection of test compound in CD-1 mice
  • test compound was mixed with 5% DMSO+95% (10% HP- ⁇ -CD) aqueous solution, vortexed and sonicated to prepare a 0.5 mg/mL clear solution (intravenous) or a 3 mg/mL clear solution (oral), which was filtered through a microporous membrane for use.
  • Male SD mice aged 7 to 10 weeks were selected, and the candidate compound solution was administered intravenously at a dose of about 2 mg/kg.
  • the candidate compound solution was orally administered at a dose of about 30 mg/kg.
  • Whole blood was collected for a certain period of time to prepare plasma, and the drug concentration was analyzed by LC-MS/MS method, and the pharmacokinetic parameters were calculated by Phoenix WinNonlin software (Pharsight, USA).
  • the protein binding rate of the compound in CD-1 mouse, Sprague-Dawley rat, Beagle dog, cynomolgus monkey and human plasma was determined by equilibrium dialysis.
  • Plasma samples with a compound concentration of 2 ⁇ M were prepared from the plasma of the above five species, placed in a 96-well rapid equilibrium dialysis device, and dialyzed against phosphate buffered saline at 37 ⁇ 1°C for 4 hours. In this experiment, warfarin was used as the control compound. The concentrations of analytes in plasma and dialysis buffer were determined by LC-MS/MS.
  • Test method 8 AsPC-1 cell p-ERK inhibition test
  • ASPC-1 cells were purchased from ATCC; RPMI-1640 medium was purchased from GIbco; fetal bovine serum was purchased from Hyclone; Advanced Phospho-ERK1/2(THR202/TYR204) KIT was purchased from Bioauxilium-
  • ASPC-1 cells were planted in a 384-well cell culture plate with a white bottom, 8 ⁇ L of cell suspension per well, each well contained 7500 cells, the cell plate was placed in a carbon dioxide incubator, and incubated overnight at 37;
  • Negative control well reading is 0.5% DMSO cell well cell lysate
  • pharmaceutically acceptable refers to those compounds, materials, compositions and/or dosage forms, which are suitable for use in contact with human and animal tissues within the scope of sound medical judgment, without excessive toxicity, irritation, allergic reaction or other problems or complications, commensurate with a reasonable benefit/risk ratio.
  • pharmaceutically acceptable salt refers to a salt of a compound of the present invention, which is prepared from a compound having a specific substituent found in the present invention and a relatively non-toxic acid or base.
  • base addition salts can be obtained by contacting such compounds with a sufficient amount of base, either neat solution or in a suitable inert solvent.
  • Pharmaceutically acceptable base addition salts include sodium, potassium, calcium, ammonium, organic amine or magnesium salts or similar salts.
  • acid addition salts can be obtained by contacting such compounds with a sufficient amount of the acid, either neat solution or in a suitable inert solvent.
  • Certain specific compounds of the present invention contain basic and acidic functional groups and can thus be converted into either base or acid addition salts.
  • the pharmaceutically acceptable salts of the present invention can be synthesized from the parent compound containing acid groups or bases by conventional chemical methods.
  • such salts are prepared by reacting the free acid or base form of these compounds with a stoichiometric amount of the appropriate base or acid in water or an organic solvent or a mixture of both.
  • the compounds of the invention may exist in particular geometric or stereoisomeric forms.
  • the present invention contemplates all such compounds, including cis and trans isomers, (-)- and (+)-enantiomers, (R)- and (S)-enantiomers, diastereomers, (D)-isomers, (L)-isomers, and racemic and other mixtures thereof, such as enantiomerically or diastereomerically enriched mixtures, all of which are within the scope of the present invention within.
  • Additional asymmetric carbon atoms may be present in substituents such as alkyl groups. All such isomers, as well as mixtures thereof, are included within the scope of the present invention.
  • the compounds of the present invention may contain unnatural proportions of atomic isotopes at one or more of the atoms that constitute the compounds.
  • compounds can be labeled with radioactive isotopes, such as tritium ( 3 H), iodine-125 ( 125 I) or C-14 ( 14 C).
  • radioactive isotopes such as tritium ( 3 H), iodine-125 ( 125 I) or C-14 ( 14 C).
  • heavy hydrogen can be used to replace hydrogen to form deuterated drugs.
  • the bond formed by deuterium and carbon is stronger than the bond formed by ordinary hydrogen and carbon.
  • deuterated drugs Compared with non-deuterated drugs, deuterated drugs have the advantages of reducing toxic and side effects, increasing drug stability, enhancing efficacy, and prolonging the biological half-life of drugs. All isotopic composition shifts of the compounds of the invention, whether radioactive or not, are included within the scope of the invention.
  • substituted means that any one or more hydrogen atoms on a specified atom are replaced by a substituent, which may include deuterium and hydrogen variants, as long as the valence of the specified atom is normal and the substituted compound is stable.
  • Oxygen substitution does not occur on aromatic groups.
  • optionally substituted means that it may or may not be substituted, and unless otherwise specified, the type and number of substituents may be arbitrary on a chemically realizable basis.
  • any variable eg, R
  • its definition is independent at each occurrence.
  • said group may optionally be substituted with up to two R, with independent options for each occurrence of R.
  • substituents and/or variations thereof are permissible only if such combinations result in stable compounds.
  • linking group When the number of a linking group is 0, such as -(CRR) 0 -, it means that the linking group is a single bond.
  • linking group listed does not indicate its linking direction
  • its linking direction is arbitrary, for example,
  • the connecting group L in the middle is -MW-, at this time -MW- can connect ring A and ring B in the same direction as the reading order from left to right to form It can also be formed by connecting loop A and loop B in the opposite direction to the reading order from left to right
  • any one or more sites of the group can be linked to other groups through chemical bonds.
  • the connection method of the chemical bond is not positioned, and there is an H atom at the connectable site, when the chemical bond is connected, the number of H atoms at the site will decrease correspondingly with the number of chemical bonds connected to become a group with the corresponding valence.
  • the chemical bonds that the site is connected with other groups can use straight solid line bonds straight dotted key or tilde express.
  • the straight solid-line bond in -OCH 3 indicates that it is connected to other groups through the oxygen atom in the group;
  • the straight dotted line bond in indicates that the two ends of the nitrogen atom in the group are connected to other groups;
  • the wavy lines in indicate that the 1 and 2 carbon atoms in the phenyl group are connected to other groups;
  • keys with wedge-shaped solid lines and dotted wedge keys Indicates the absolute configuration of a stereocenter, with a straight solid-line bond and straight dashed keys Indicates the relative configuration of the stereocenter, with a wavy line Indicates wedge-shaped solid-line bond or dotted wedge key or with tilde Indicates a straight solid line key or straight dotted key
  • proton tautomers also called prototropic tautomers
  • keto-enol isomerization and imine-enamine isomerization include interconversions via migration of a proton, such as keto-enol isomerization and imine-enamine isomerization.
  • Valence isomers include interconversions by recombination of some bonding electrons.
  • keto-enol tautomerization is the interconversion between two tautomers of pentane-2,4-dione and 4-hydroxypent-3-en-2-one.
  • halogen or halogen by itself or as part of another substituent means a fluorine, chlorine, bromine or iodine atom.
  • C 1-3 alkyl is used to denote a straight or branched chain saturated hydrocarbon group consisting of 1 to 3 carbon atoms.
  • the C 1-3 alkyl group includes C 1-2 and C 2-3 alkyl groups and the like; it may be monovalent (such as methyl), divalent (such as methylene) or multivalent (such as methine).
  • Examples of C 1-3 alkyl include, but are not limited to, methyl (Me), ethyl (Et), propyl (including n - propyl and isopropyl), and the like.
  • C 1-3 alkoxy denotes those alkyl groups containing 1 to 3 carbon atoms attached to the rest of the molecule through an oxygen atom.
  • the C 1-3 alkoxy group includes C 1-2 , C 2-3 , C 3 and C 2 alkoxy groups and the like.
  • Examples of C 1-3 alkoxy include, but are not limited to, methoxy, ethoxy, propoxy (including n-propoxy and isopropoxy), and the like.
  • C2-3 alkenyl is used to denote a straight or branched chain hydrocarbon group consisting of 2 to 3 carbon atoms containing at least one carbon-carbon double bond, which may be located anywhere in the group.
  • the C 2-3 alkenyl includes C 3 and C 2 alkenyl; the C 2-3 alkenyl can be monovalent, divalent or multivalent. Examples of C 2-3 alkenyl include, but are not limited to, ethenyl, propenyl, and the like.
  • C alkynyl is used to denote a straight or branched chain hydrocarbon group consisting of 2 to 3 carbon atoms containing at least one carbon-carbon triple bond, which may be located anywhere in the group. It may be monovalent, divalent or polyvalent.
  • the C 2-3 alkynyl includes C 3 and C 2 alkynyl. Examples of C alkynyl include, but are not limited to, ethynyl, propynyl, and the like.
  • C alkynyl is used to denote a straight or branched chain hydrocarbon group consisting of 2 to 4 carbon atoms containing at least one carbon-carbon triple bond, which may be located anywhere in the group.
  • the C 2-4 alkynyl includes C 2-3 , C 4 , C 3 and C 2 alkynyl and the like. It may be monovalent, divalent or polyvalent. Examples of C alkynyl include, but are not limited to, ethynyl, propynyl, butynyl, and the like.
  • C 3-5 cycloalkyl means a saturated cyclic hydrocarbon group composed of 3 to 5 carbon atoms, which is a monocyclic ring system.
  • the C 3-5 cycloalkyl includes C 3-4 and C 4-5 cycloalkyl, etc.; it can be monovalent, divalent or multivalent.
  • Examples of C 3-5 cycloalkyl include, but are not limited to, Cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, etc.
  • 5-6 membered heteroaryl ring and “5-6 membered heteroaryl” in the present invention can be used interchangeably.
  • the term “5-6 membered heteroaryl” means a monocyclic group with a conjugated ⁇ electron system consisting of 5 to 6 ring atoms, 1, 2, 3 or 4 of which are heteroatoms independently selected from O, S and N, and the rest are carbon atoms. Where the nitrogen atom is optionally quaternized, the nitrogen and sulfur heteroatoms may be optionally oxidized (ie NO and S(O) p , where p is 1 or 2).
  • a 5-6 membered heteroaryl can be attached to the rest of the molecule through a heteroatom or a carbon atom.
  • the 5-6 membered heteroaryl includes 5 and 6 membered heteroaryl.
  • Examples of the 5-6 membered heteroaryl group include, but are not limited to, pyrrolyl (including N-pyrrolyl, 2-pyrrolyl and 3-pyrrolyl, etc.), pyrazolyl (including 2-pyrazolyl and 3-pyrazolyl, etc.), imidazolyl (including N-imidazolyl, 2-imidazolyl, 4-imidazolyl and 5-imidazolyl, etc.), oxazolyl (including 2-oxazolyl, 4-oxazolyl and 5-oxazolyl, etc.), triazolyl (1H- 1,2,3-triazolyl, 2H-1,2,3-triazolyl, 1H-1,2,4-triazolyl and 4H-1,2,4-triazolyl, etc.), tetrazolyl, isoxazolyl (3-isoxazolyl, 4-iso
  • 5-10 membered heteroaryl ring and “5-10 membered heteroaryl” in the present invention can be used interchangeably.
  • the term “5-10 membered heteroaryl” means a cyclic group with a conjugated ⁇ -electron system consisting of 5 to 10 ring atoms, 1, 2, 3 or 4 of which are heteroatoms independently selected from O, S and N, and the rest are carbon atoms. It can be a monocyclic, fused bicyclic or fused tricyclic ring system in which each ring is aromatic. Where the nitrogen atom is optionally quaternized, the nitrogen and sulfur heteroatoms may be optionally oxidized (ie NO and S(O) p , where p is 1 or 2).
  • the 5-10 membered heteroaryl can be attached to the rest of the molecule through a heteroatom or a carbon atom. It may be monovalent, divalent or polyvalent.
  • the 5-10 membered heteroaryl group includes 5-8 membered, 5-7 membered, 5-6 membered, 5-membered and 6-membered heteroaryl groups and the like.
  • Examples of the 5-10 membered heteroaryl group include, but are not limited to, pyrrolyl (including N-pyrrolyl, 2-pyrrolyl and 3-pyrrolyl, etc.), pyrazolyl (including 2-pyrazolyl and 3-pyrazolyl, etc.), imidazolyl (including N-imidazolyl, 2-imidazolyl, 4-imidazolyl and 5-imidazolyl, etc.), oxazolyl (including 2-oxazolyl, 4-oxazolyl and 5-oxazolyl, etc.), triazolyl (1H -1,2,3-triazolyl, 2H-1,2,3-triazolyl, 1H-1,2,4-triazolyl and 4H-1,2,4-triazolyl, etc.), tetrazolyl, isoxazolyl (3-isoxazolyl, 4-isoxazolyl, and 5-isoxazolyl, etc.), thiazolyl (including 2-thiazolyl,
  • C n-n+m or C no -C n+m Any specific instance including n to n+m carbons, e.g. C 1-12 including C 1 ⁇ C 2 ⁇ C 3 ⁇ C 4 ⁇ C 5 ⁇ C 6 ⁇ C 7 ⁇ C 8 ⁇ C 9 ⁇ C 10 ⁇ C 11 , and C 12 , including any range from n to n+m, such as C 1-12 including C 1- 3 ⁇ C 1-6 ⁇ C 1-9 ⁇ C 3-6 ⁇ C 3-9 ⁇ C 3-12 ⁇ C 6-9 ⁇ C 6-12 , and C 9-12 Etc.; similarly, n-membered to n+m-membered means that the number of atoms on the ring is from n to n+m.
  • a 3-12-membered ring includes a 3-membered ring, a 4-membered ring, a 5-membered ring, a 6-membered ring, a 7-membered ring, an 8-membered ring, a 9-membered ring, a 10-membered ring, an 11-membered ring, and a 12-membered ring, and any range from n to n+m.
  • a 3-12-membered ring includes a 3-6-membered ring, a 3-9-membered ring, a 5-6-membered ring, and a 5-7-membered ring. , 6-7-membered ring, 6-8-membered ring, and 6-10-membered ring, etc.
  • the compounds of the present invention can be prepared by various synthetic methods well known to those skilled in the art, including the specific embodiments listed below, the embodiments formed by combining them with other chemical synthesis methods, and equivalent replacement methods well known to those skilled in the art. Preferred embodiments include but are not limited to the examples of the present invention.
  • the structure of the compounds of the present invention can be confirmed by conventional methods known to those skilled in the art. If the present invention involves the absolute configuration of the compound, the absolute configuration can be confirmed by conventional technical means in the art. For example, single crystal X-ray diffraction (SXRD), the cultured single crystal is collected with a Bruker D8 venture diffractometer to collect diffraction intensity data, the light source is CuK ⁇ radiation, and the scanning method is: After scanning and collecting relevant data, the absolute configuration can be confirmed by further analyzing the crystal structure by direct method (Shelxs97).
  • SXRD single crystal X-ray diffraction
  • the cultured single crystal is collected with a Bruker D8 venture diffractometer to collect diffraction intensity data
  • the light source is CuK ⁇ radiation
  • the scanning method is: After scanning and collecting relevant data, the absolute configuration can be confirmed by further analyzing the crystal structure by direct method (Shelxs97).
  • PhNTf 2 stands for N-phenylbis(trifluoromethanesulfonyl) ⁇ ;Pd 2 (dba) 3 ⁇ [ ⁇ ] ⁇ ;DavePhos ⁇ 2- ⁇ -2'-(N,N- ⁇ )- ⁇ ;LIHMDS ⁇ ;NaOH ⁇ ;NaHCO 3 ⁇ ;Boc 2 O ⁇ ;Et 3 N ⁇ ;Tf 2 O ⁇ ;Xantphos ⁇ 4,5- ⁇ -9,9- ⁇ ;DMF ⁇ N,N- ⁇ ;DMAP ⁇ 4- ⁇ ;TBDPSCl ⁇ ;DCM ⁇ ;EA ⁇ ;Grubbs ⁇ 1,3- ⁇ (2,4,6- ⁇ )-2-( ⁇ )( ⁇ )( ⁇ ) ⁇ ;TFA ⁇ ;THF ⁇ ;NBS ⁇ N- ⁇ ;PMB ⁇ ;Tf ⁇ ;Boc ⁇ ;TIPS ⁇ ;MOM ⁇
  • Figure 1 The binding mode diagram of compound A and KRAS G12D protein
  • Figure 6 The binding mode diagram of compound F and KRAS G12D protein.
  • the compound of the invention has good inhibitory effect on KRAS G12D mutated enzymes, can effectively inhibit p-ERK, has good cell proliferation inhibitory activity on KRAS G12D mutated cells, can effectively inhibit tumor growth in vivo, and has good drug resistance.
  • the compound of the present invention has better pharmacokinetic properties.
  • the present invention also provides that the docking process of the compound or its pharmaceutically acceptable molecule is obtained by using Maestro ( Glide SP[1] and default options in version 2017-2).
  • the crystal structure PDB:6UT0 of KRAS_G12C in the PDB database was selected, Cys12 was simulated and mutated into Asp12, and after energy optimization, it was used as a docking template.
  • hydrogen atoms were added using the Protein Preparation Wizard module of Maestro [2] and the OPLS3 force field was used.
  • ligand preparation the 3D structure of the molecule was generated using LigPrep and energy minimized [3], and the small molecule conformation was sampled using the confgen module.
  • the compound of the present invention has a good combination with KRAS G12D.
  • Step 8 Synthesis of the hydrochloride salt of compound 2A and the hydrochloride salt of 2B
  • reaction solution was added to 300mL of ice water, separated and extracted, the organic phase was washed with 200mL of saturated sodium bicarbonate solution, then washed with 200mL of saturated ammonium chloride, washed with 200mL of brine, dried and filtered over anhydrous sodium sulfate, and then concentrated.
  • N,N-diisopropylethylamine (1.05 g, 8.11 mmol) was added to a dichloromethane solution of compound 3-6 (1 g, 4.05 mmol) and 1-1A (1.03 g, 4.86 mmol), and the resulting mixture was stirred at room temperature at 25°C for hours.
  • MS m/z 423.1 [M+H] + .
  • lithium aluminum tetrahydride (0.1g, 2.84mmol) was added in batches to a solution of compound 3-7 (0.6g, 1.42mmol) in tetrahydrofuran (5mL), and the resulting mixture was naturally raised to 25°C and stirred for 2 hours.
  • Water (0.1g), 15% aqueous sodium hydroxide solution (0.1g) and water (0.3g) were added dropwise to the reaction solution and stirred for 30 minutes, filtered, and tetrahydrofuran ( 10 mL), the filtrate was concentrated under reduced pressure to obtain compound 3-8.
  • MS m/z 381.1 [M+H] + .
  • lithium diisopropylamide (1.51mL, 3.02mmol, 2M) was added dropwise to a solution of compound 3-8 (0.5g, 1.33mmol) in tetrahydrofuran (10mL). After stirring for 30 minutes, a solution of compound 3-5 (0.5g, 1.51mmol) in tetrahydrofuran (5mL) was added dropwise, and the resulting mixture was naturally raised to 25°C.
  • n-butyl lithium (2.5M, 564.47 ⁇ L) was added dropwise to a solution of compound 3-9 (0.51 g, 641.44 ⁇ mol) in tetrahydrofuran (10 mL).
  • Dissolve compound 1-13B (120mg, 125.60 ⁇ mol), anhydrous potassium phosphate (53.32mg, 251.19 ⁇ mol), potassium ethylene trifluoroborate (25.24mg, 188.39 ⁇ mol) in 1,4-dioxane (1mL), water (0.2mL), replace nitrogen three times, add chlorine [(n-butylbis(1-adamantyl)phosphine)-2-(2-amino Biphenyl)] palladium (II) (8.40mg, 12.56 ⁇ mol) was reacted at 80°C for 3 hours.
  • Trifluoroacetic acid (1.60 g, 14.05 mmol) was added to compound 5-1 (150 mg, 156.08 ⁇ mol), and anhydrous dichloromethane (5 mL) was reacted at 0° C. for 16 hours.
  • the reaction solution was poured into 10 mL of water, the organic phase was separated, the aqueous phase was extracted with ethyl acetate (5 mL*2), the organic phases were combined, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated.
  • Lithium aluminum tetrahydride (1.55g, 40.15mmol) was dissolved in anhydrous tetrahydrofuran (30mL), cooled to 0°C, compound 8-1A (2.8g, 13.38mmol) in anhydrous tetrahydrofuran (20mL) was added under nitrogen protection, and reacted at 70°C for 1 hour.
  • 1.5 mL of water was added to the reaction solution at 0°C, 1.5 mL of 15% NaOH solution was added, and 4.5 mL of water was added, stirred for 20 minutes, the reaction solution was filtered, the filter cake was washed with 10 mL of tetrahydrofuran, and the filtrate was concentrated to obtain compound 8-2.
  • Step 8 Synthesis of intermediates 12-9A and 12-9B
  • Compound 12-9 was subjected to preparative SFC chiral resolution (chiral column: DAICEL CHIRALCEL OD (250mm*30mm, 10 ⁇ m); mobile phase: [supercritical CO 2 -methanol (0.1% ammonia water)]; methanol (0.1% ammonia water) %: 40%-40%), to obtain compounds 12-9A and 12-9B.
  • Step 1 Synthesis of intermediates 13-1A and 13-1B
  • step 1 using 12-9B as starting material, compound 13-1B was obtained.
  • Compound 18-2 (0.526g, 547.07 ⁇ mol) was dissolved in toluene (20mL), and compound 1-propynyltri-n-butyltin (900.24mg, 2.74mmol) and dichlorobis[di-tert-butyl-(4-dimethylaminophenyl)phosphine]palladium(II) (116.21mg, 164.12 ⁇ mol) were put into the compound, nitrogen gas was replaced 5 times, and the system temperature was maintained at 120°C for 5 hours. .
  • methyl acetoacetate (18.42 g, 158.61 mmol, 17.10 mL) was added dropwise to a solution of sodium hydrogen (6.34 g, 158.61 mmol, 60% purity) in tetrahydrofuran (350 mL), and reacted for 15 minutes.
  • MS m/z 800.4 [M+H] + .
  • the formate salt of compound 22-3 (45.0 mg, 46.0 ⁇ mol) was dissolved in toluene (1.00 mL), and 1-propynyltri-n-butyltin (60.6 mg, 184 ⁇ mol) and dichlorobis[di-tert-butyl-(4-dimethylaminophenyl)phosphine]palladium(II) (9.78 mg, 13.8 ⁇ mol) were added to the reaction solution.
  • the reaction solution was reacted at 110° C. for 3 hours. After the reaction solution was cooled, it was filtered with diatomaceous earth, and the filtrate was concentrated under reduced pressure to obtain a crude product.
  • the trifluoroacetic acid salt of compound 22-4 (35.0 mg, 35.7 ⁇ mol) was dissolved in dichloromethane (1.00 mL), trifluoroacetic acid (0.20 mL) was added to the reaction solution, and the reaction solution was reacted at 25° C. for 1 hour, and the reaction solution was directly concentrated under reduced pressure to obtain a crude product.
  • the compound methyltriphenylphosphine bromide (8.42g, 23.5mmol) was dissolved in anhydrous tetrahydrofuran (45mL) and cooled to -78°C, n-butyllithium (2.5M, 9.42mL) was added dropwise and reacted at 0°C for 2 hours. Then, 24-3 (4.5 g, 15.7 mmol) dissolved in THF (20 mL) was added dropwise at -78°C. After reacting at room temperature for 10 hours. Pour 100 mL of HCl (1M) aqueous solution into the reaction solution, and extract 3 times with EA (100 mL).
  • the hydrochloride salt of compound 24-5 (4.5 g) was dissolved in DMF (40 mL), and potassium carbonate (14.7 g, 106 mmol) and allyl bromide (3.86 g, 31.9 mmol) were added.
  • the reaction was carried out at room temperature for 1.5 hours. 100 mL of water was poured into the reaction liquid, and extracted three times with ethyl acetate (200 mL). The organic phase was washed with saturated brine (100 mL), dried over anhydrous sodium sulfate, filtered, and concentrated under reduced pressure to obtain a crude product.
  • 2,2,6,6-Tetramethylpiperidine (21.3g, 150mmol) was dissolved in tetrahydrofuran (130mL) and replaced with nitrogen three times, the temperature was lowered to -5°C, n-butyl lithium (2.50M, 60.2mL) was added dropwise, and stirred for 0.5 hours. Then the temperature was lowered to -60°C, compound 25-2 (13.0 g, 37.6 mmol) was added, and stirred for 0.5 hours. Then DMF (55.0 g, 752 mmol) was added at -60 °C and stirring was continued for 0.5 h.
  • reaction solution was quenched with saturated aqueous ammonium chloride (50 mL), and extracted twice with ethyl acetate (50 mL).
  • the organic phase was washed twice with saturated brine (100 mL), dried over anhydrous sodium sulfate, filtered, and concentrated under reduced pressure to obtain a crude product.
  • Compound 25 was separated by SFC (column: DAICEL CHIRALPAK IC (250mm*30mm, 10 ⁇ m); mobile phase: [supercritical CO 2 -ethanol (0.1% ammonia water)]; ethanol (0.1% ammonia water)%: 50%-50%), to obtain compound 25A and compound 25B.
  • 2,2,6,6-Tetramethylpiperidine (10.3g, 73.2mmol, 12.4mL) was dissolved in tetrahydrofuran (90.0mL) and replaced with nitrogen three times, the temperature was lowered to -5°C, n-butyl lithium (2.50M, 29.3mL) was added dropwise, and stirred for 0.5 hours. Then the temperature was lowered to -60°C, compound 26-4 (9.20 g, 18.3 mmol) was added, and stirred for 1 hour. Then DMF (26.8 g, 366 mmol) was added at -60 °C and stirring was continued for 0.5 h.
  • 2,2,6,6-Tetramethylpiperidine (3.56g, 25.2mmol, 4.28mL) was dissolved in tetrahydrofuran (50.0mL) and replaced with nitrogen three times, then cooled to -40°C, n-butyllithium (2.5M, 9.76mL) was added dropwise, and stirred for 0.5 hours. Then the temperature was lowered to -60°C, compound 3-8 (3.20 g, 8.41 mmol) was added, and stirred for 15 minutes. Then compound 26-4 (5.37 g, 10.1 mmol) was added at -60 °C. Stirring was continued for 0.5 hours at room temperature.
  • Step 8 Synthesis of formate salts of intermediates 26-9A and 26-9B
  • GP2D cells are planted in a transparent 96-well cell culture plate, 80 ⁇ L of cell suspension per well, each well contains 8000 cells, the cell plate is placed in a carbon dioxide incubator, and incubated overnight at 37;
  • the compound of the present invention has significant inhibitory effect on p-ERK in KRAS G12D mutant GP2D cells.
  • AGS cells are planted in a transparent 96-well cell culture plate, 80 ⁇ L of cell suspension per well, each well contains 10,000 cells, the cell plate is placed in a carbon dioxide incubator, and incubated overnight at 37;
  • the compound of the present invention has significant inhibitory effect on p-ERK in KRAS G12D mutant AGS cells.
  • ASPC-1 cells were purchased from Procell; RPMI-1640 medium was purchased from VivaCell; fetal bovine serum was purchased from Biosera; Advanced Phospho-ERK1/2 (THR202/TYR204) KIT was purchased from Cisbio.
  • ASPC-1 cells are planted in a transparent 96-well cell culture plate, 80 ⁇ L of cell suspension per well, each well contains 8000 cells, the cell plate is placed in a carbon dioxide incubator, and incubated overnight at 37;
  • Example-Min Use the equation (Sample-Min)/(Max-Min)*100% to convert the original data into an inhibition rate, and the value of IC 50 can be obtained by curve fitting with four parameters (log(inhibitor) vs. response--Variable slope mode in GraphPad Prism).
  • Table 1 provides the inhibitory effect of compounds of the present invention on p-ERK.
  • Negative control well reading is 0.5% DMSO cell well cell lysate
  • ASPC-1 cells were purchased from ATCC; RPMI-1640 medium was purchased from ATCC; fetal bovine serum was purchased from Ausgenex; Phospho-p44/42 MAPK(Erk1/2)(Thr202/Tyr204)(D13.14.4E) Rabbit mAb was purchased from CST, GAPDH (D4C6R) Mouse mAb was purchased from CST, IRDye 680RD Goat anti Mouse IgG (H+L) was purchased from LI-COR, and IRDye 800CW Goat anti-Rabbit IgG (H+L) was purchased from LI-COR.
  • ASPC-1 cells are planted in a transparent 384-well cell culture plate with a black bottom, 40 ⁇ L of cell suspension per well, each well contains 6000 cells, the cell plate is placed in a carbon dioxide incubator, and incubated overnight at 37 degrees Celsius;
  • Negative control well reading is 0.1% DMSO cell well
  • Cell line AsPC-1; tumor type: pancreatic cancer; growth characteristics: adherent growth; culture method: RPMI 1640+10%FBS
  • RPMI 1640 fetal bovine serum
  • FBS fetal bovine serum
  • Antibiotic-antimycotic antibiotic-antifungal
  • L-glutamine L-glutamine
  • DMSO dimethyl sulfoxide
  • the tumor cell lines were cultured in an incubator at 37°C and 5% CO 2 according to the culture conditions indicated in the culture method. Passage regularly, and take cells in logarithmic growth phase for plating.
  • Cell line AsPC-1; Density (per well): 7000 cells.
  • the ULA plate was centrifuged at room temperature for 10 minutes at 1000 rpm. NOTE: After centrifugation, be sure to Handle follow-up operations carefully so as not to cause unnecessary shocks.
  • DMSO 10X working solution After preparing the 10X compound working solution (DMSO 10X working solution), add 15 ⁇ L of 10X compound working solution to the ULA culture plate, and add 15 ⁇ L of DMSO-cell culture solution mixture to the vehicle control and blank control.
  • the 96-well cell plate was returned to the incubator for 120 hours.
  • the sphere formation of cells was observed every day until the end of the experiment.
  • the solution in the ULA plate was then transferred to a black bottom plate (#655090) and left at room temperature for 25 minutes to stabilize the luminescent signal.
  • Luminescent signals were detected on a 2104EnVision plate reader.
  • IR Inhibition rate
  • the compound of the present invention shows excellent anti-proliferation effect on KRAS G12D mutant cell AsPC-1.
  • ASPC-1 cells were purchased from ATCC; RPMI-1640 medium was purchased from ATCC; fetal bovine serum was purchased from Ausgenex; 3D assay kit (3D-CTG) was purchased from Promega; CellCarrier-96Spheroid ULA/CS was purchased from PE.
  • ASPC-1 cells are planted in a transparent 96-well cell culture plate, 195 ⁇ L of cell suspension per well, each well contains 2000 cells;
  • Inhibition% (Ave_H-Sample)/(Ave_H-Ave_L) to convert the raw data into inhibition rate, and the value of IC 50 can be obtained by curve fitting with four parameters (obtained by log(inhibitor)vs.response--Variable slope mode in GraphPad Prism).
  • the compound of the present invention shows excellent anti-proliferation effect on KRAS G12D mutant cell AsPC-1.
  • test compound was mixed with 5% DMSO+95% (10% HP- ⁇ -CD) aqueous solution, vortexed and sonicated to prepare a 0.5 mg/mL clear solution (intravenous) or a 3 mg/mL clear solution (oral), which was filtered through a microporous membrane for use.
  • Male CD-1 mice aged 7 to 10 weeks were selected and given the candidate compound solution intravenously.
  • Candidate compound solutions are administered orally.
  • Whole blood was collected for a certain period of time to prepare plasma, and the drug concentration was analyzed by LC-MS/MS method, and the pharmacokinetic parameters were calculated by Phoenix WinNonlin software (Pharsight, USA).
  • the compound of the present invention has long half-life in mice, high exposure, good oral bioavailability and good pharmacokinetic properties.
  • GP2D cell subcutaneous xenograft tumor Balb/c nude mouse model Human colon cancer GP2D cell subcutaneous xenograft tumor Balb/c nude mouse model was established. 0.2 mL (2 ⁇ 10 6 ) GP2D cells (plus Matrigel, volume ratio 1:1) were subcutaneously inoculated on the right back of each mouse. When the average volume of the tumor reached 140 mm 3 , group administration began, with 6 mice in each group. On the day of the experiment, the animals were given corresponding drugs according to the groups. The first group G1 was set as a negative control group, and 5% DMSO+95% (10% HP- ⁇ -CD) was given by intragastric administration alone, and the second group G2-fourth group G4 were given the hydrochloride of compound 8, and the dosage and schedule were shown in Table 14.
  • the body weight and tumor size of the animals were measured twice a week, and the clinical symptoms of the animals were observed and recorded every day, and each administration was referred to the last weighed animal body weight.
  • the hydrochloride salt of compound 8 has a significant inhibitory effect on human colon cancer GP2D mouse xenograft tumors.
  • TGI tumor volume inhibition rate

Abstract

本发明公开了一类桥环取代的杂芳基并吡喃类衍生物及其应用，具体公开了式(VI)所示化合物或其药学上可接受的盐。

Description

桥环取代的杂芳基并吡喃类衍生物及其应用
本申请主张如下优先权:
CN202210074707.1，申请日：2022年01月21日；
CN202210082274.4，申请日：2022年01月24日；
CN202210254285.6，申请日：2022年03月15日；
CN202210346571.5，申请日：2022年03月31日；
CN202210642158.3，申请日：2022年06月07日；
CN202210813772.1，申请日：2022年07月11日；
CN202210964127.X，申请日：2022年08月11日；
CN 202310029317.7，申请日：2023年01月09日。
技术领域
本发明一类桥环取代的杂芳基并吡喃类衍生物及其应用，具体涉及式(VI)所示化合物或其药学上可接受的盐。
背景技术
RAS癌基因突变是人类癌症中最常见的激活突变，发生在30％的人类肿瘤中。RAS基因家族包括三个亚型(KRAS、HRAS和NRAS)，其中85％的RAS驱动的癌症是由KRAS亚型突变引起的。KRAS突变常见于实体肿瘤中，如：肺腺癌、胰腺导管癌和结直肠癌等。在KRAS突变肿瘤中，80％的致癌突变发生在密码子12上，最常见的突变包括：p.G12D(41％)、p.G12V(28％)和p.G12C(14％)。
KRAS是一种鼠类肉瘤病毒癌基因，是RAS蛋白中的重要一员。KRAS好像分子开关，当正常时能控制调控细胞生长的路径；KRAS基因突变后，可以不依赖于上游生长因子受体信号，独立向下游通路传输生长和增殖信号，造成不受控制的细胞生长和肿瘤进展。同时KRAS基因是否有突变，也是肿瘤预后的一个重要指标。
目前，直接靶向KRAS突变的小分子主要集中在KRASG12C领域。其中，Amgen公司的AMG510和和Mirati Therapeutics的MRTX849在临床研究中，对KRASG12C突变的肿瘤患者都展现出了良好的治疗效果。但至今还没有KRASG12D小分子进入临床研究阶段，KRASG12D突变的肿瘤患者也还没有从精准医疗中获益。
本发明公开了一系列靶向KRASG12D的小分子抑制剂及其制备方法。
发明内容
本发明提供了式(VI)所示化合物或其药学上可接受的盐，

其中，
选自单键或双键；
T1选自CRa和N；
T2选自CH和N；
L1选自O和S；
R1选自苯基、萘基、所述苯基、萘基、分别独立地任选被1、2、3、4或5个Rb取代；
R2选自H；
R3选自H、F、CN、CH3和OCH3，所述CH3和OCH3任选被1、2或3个卤素取代；
或者，R2和R3与相连的原子形成苯基或5-6元杂芳基，所述苯基或5-6元杂芳基任选被1、2或3个卤素取代；
R4不存在，或选自H、CH3和-CH＝CH2，所述CH3和-CH＝CH2任选被1、2或3个卤素取代；
或者，R3和R4与相连的原子形成所述任选被1或2个Rc取代；
或者，R3和R4与相连的原子形成环丙基，所述环丙基任选被1、2或3个卤素取代；
Ra选自H和CN；
各Rb分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、C1-3烷基、C1-3烷氧基、C2-4炔基、C2-4炔基-环丙基、C2-3烯基、-C(＝O)C1-3烷基和C3-5环烷基，所述C1-3烷基、C1-3烷氧基、C2-4炔基、C2-4炔基-环丙基、C2-3烯基、-C(＝O)C1-3烷基和C3-5环烷基任选被1、2、3、4或5个卤素取代；
各Rc分别独立地选自F、Cl、Br、I、CN、CH3和OCH3；
m选自0或1。
本发明还提供了式(P-1)所示化合物或其药学上可接受的盐，

其中，
选自单键或双键；
L1选自O和S；
R1选自苯基、萘基、5-10元杂芳基、所述苯基、萘基、5-10元杂芳基、 分别独立地任选被1、2、3、4或5个Rb取代，R5选自 所述分别独立地任选被1、2、3、4或5个Rd取代；
或者，R1选自5-10元杂芳基，所述5-10元杂芳基任选被1、2、3、4或5个Rb取代，R5选自所述任选被1、2、3、4或5个Rd取代；
各Rb分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、C1-3烷基、C1-3烷氧基、C2-4炔基、C2-4炔基-环丙基、C2-3烯基、-C(＝O)C1-3烷基和C3-5环烷基，所述C1-3烷基、C1-3烷氧基、C2-4炔基、C2-4炔基-环丙基、C2-3烯基、-C(＝O)C1-3烷基和C3-5环烷基任选被1、2、3、4或5个R取代；
各Rd分别独立地选自F、Cl、Br、I、CN、CH3和OCH3；
各R分别独立地选自卤素和D。
本发明还提供了式(P-2)所示化合物或其药学上可接受的盐，

其中，
选自单键或双键；
L1选自O和S；
各Rb分别独立地选自F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、C1-3烷基、C1-3烷氧基、C2-4炔基、C2-4炔基-环丙基、C2-3烯基、-C(＝O)C1-3烷基和C3-5环烷基，所述C1-3烷基、C1-3烷氧基、C2-4炔基、C2-4炔基-环丙基、C2-3烯基、-C(＝O)C1-3烷基和C3-5环烷基任选被1、2、3、4或5个R取代；
各R分别独立地选自卤素和D；
v选自1、2、3、4或5；
条件是，至少有一个Rb被1、2、3、4或5个D取代。
在本发明的一些方案中，所述各Rb分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、CH3、CH2CH3、OCH3、OCH2CH3、-CH＝CH2、-C≡CH、-C≡CCH3、-C≡CCH2CH3、和环丙基，所述CH3、CH2CH3、OCH3、OCH2CH3、-CH＝CH2、-C≡CH、-C≡CCH3、-C≡CCH2CH3、和环丙基任选被1、2、3、4或5个卤素取代，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述各Rb分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、CH3、CH2F、CF2H、CF3、CH2CH3、CF2CF3、-CH＝CH2、-C≡CH、-C≡CF、-C≡CBr、-C≡CCH3、-C≡CCF3、-C≡CCH2CF3、和环丙基，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述各Rb分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、CH3、CH2CH3、OCH3、OCH2CH3、-CH＝CH2、-C≡CH、-C≡CCH3、-C≡CCH2CH3、和环丙基，所述CH3、CH2CH3、OCH3、OCH2CH3、-CH＝CH2、-C≡CH、-C≡CCH3、-C≡CCH2CH3、和环丙基任选被1、2、3、4或5个R取代，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述各Rb分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、CH3、CD3、CH2F、CF2H、CF3、CH2CH3、CF2CF3、-CH＝CH2、-C≡CH、-C≡CH、-C≡CBr、-C≡CCH3、-C≡CCF3、-C≡CCH2CH3、和环丙基，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述R1选自 其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述R1选自 其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述R1选自 其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述结构单元选自其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述R3选自H、F、CN、CH3和OCH3，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述R2和R3与相连的原子形成苯基、呋喃基和吡啶基，所述苯基、呋喃基和吡啶基任选被1个F取代，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述R4不存在，或选自H、CH2F和-CH＝CH2，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述R3和R4与相连的原子形成其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述R3和R4与相连的原子形成其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述R5选自其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述结构单元选自 其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述结构单元选自 其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述结构单元选自 其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述结构单元选自 其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述结构单元选自 其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述结构单元选自 其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述结构单元选自其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述化合物或其药学上可接受的盐，其化合物选自，

其中，
选自单键或双键；
T1、T2、R1、R2、R3、R4、L1和m如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述化合物或其药学上可接受的盐，其化合物选自，

其中，
选自单键或双键；
T1、T2、R1、R2、R3、R4、L1和m如本发明所定义；
条件是，当结构单元选自选自时，结构片段不为R2选自H；R3选自H、F、CN、CH3和OCH3，所述CH3和OCH3任选被1、2或3个卤素取代；R4选自H和CH3。
在本发明的一些方案中，所述化合物或其药学上可接受的盐，其化合物选自，

其中，
选自单键或双键；
结构单元选自
R2选自H；
R3选自H、F、CN、CH3和OCH3，所述CH3和OCH3任选被1、2或3个卤素取代；
或者，R2和R3与相连的原子形成苯基或5-6元杂芳基，所述苯基或5-6元杂芳基任选被1、2或3个卤素取代；
R4选自-CH＝CH2，所述-CH＝CH2任选被1、2或3个卤素取代；
或者，R3和R4与相连的原子形成所述任选被1或2个Rc取代；
或者，R3和R4与相连的原子形成环丙基，所述环丙基任选被1、2或3个卤素取代；
T1、T2、R1、各Rc、L1和m如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述结构单元选自其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述T1为N，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述结构单元选自其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述结构单元选自其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述化合物或其药学上可接受的盐，其化合物选自，

其中，
选自单键或双键；
各Rb和L1如本发明所定义；
n选自0、1、2、3、4和5。
在本发明的一些方案中，所述结构片段选自其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述结构片段选自其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述化合物或其药学上可接受的盐，其化合物选自，

其中，
各Rb和L1如本发明所定义；
n选自0、1、2、3、4和5。
在本发明的一些方案中，所述化合物或其药学上可接受的盐，其化合物选自，

其中，
各Rb和L1如本发明所定义；
n选自0、1、2、3、4和5。
在本发明的一些方案中，所述化合物或其药学上可接受的盐，其化合物选自，

其中，
选自单键或双键；
T1、T2、R2、R3、R4和L1如本发明所定义；
Rb1、Rb2、Rb3、Rb4、Rb5、Rb6和Rb7分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、C1-3烷基、C1-3烷氧基、C2-4炔基、C2-4炔基-环丙基、C2-3烯基、-C(＝O)C1-3烷基和C3-5环烷基，所述C1-3烷基、C1-3烷氧基、C2-4炔基、C2-4炔基-环丙基、C2-3烯基、-C(＝O)C1-3烷基和C3-5环烷基任选被1、2、3、4或5个卤素取代。
在本发明的一些方案中，所述Rb1、Rb2、Rb3、Rb4、Rb5、Rb6、Rb7和Rb8分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、CH3、CH2CH3、OCH3、OCH2CH3、-CH＝CH2、-C≡CH、-C≡CCH3、-C≡CCH2CH3、和环丙基，所述CH3、CH2CH3、OCH3、OCH2CH3、-CH＝CH2、-C≡CH、-C≡CCH3、-C≡CCH2CH3、 和环丙基任选被1、2、3、4或5个R取代，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述Rb1、Rb2、Rb3、Rb4、Rb5、Rb6、Rb7和Rb8分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、CH3、CF3、CH2CH3、CF2CF3、-CH＝CH2、-C≡CH、-C≡CF、-C≡CBr、-C≡CCH3、-C≡CCF3、-C≡CCH2CH3、和环丙基，其他变量如本发明所定义。
本发明还提供了式(IV)所示化合物或其药学上可接受的盐，

其中，
选自单键或双键；
T1选自CRa和N；
T2选自CH和N；
L1选自O和S；
R1选自苯基、萘基、所述苯基、萘基、分别独立地任选被1、2、3、4或5个Rb取代；
R2选自H；
R3选自H、F、CN和OCH3，所述OCH3任选被1、2或3个卤素取代；
或者，R2和R3与相连的原子形成苯基和5-6元杂芳基，所述苯基和5-6元杂芳基任选被1、2或3个卤素取代；
R4不存在，或选自H、CH3和-CH＝CH2，所述CH3和-CH＝CH2任选被1、2或3个卤素取代；
或者，R3和R4与相连的原子形成所述任选被1或2个卤素取代；
或者，R3和R4与相连的原子形成环丙基，所述环丙基任选被1、2或3个卤素取代；
Ra选自H和CN；
各Rb分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、C1-3烷基、C1-3烷氧基、C2-4炔基、C2-4炔基-环丙基、C2-3烯基、-C(＝O)C1-3烷基和C3-5环烷基，所述C1-3烷基、C1-3烷氧基、C2-4炔基、C2-4炔基-环丙基、C2-3烯基、-C(＝O)C1-3烷基和C3-5环烷基任选被1、2、3、4或5个卤素取代。
在本发明的一些方案中，所述各Rb分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、CH3、CH2CH3、OCH3、OCH2CH3、-CH＝CH2、-C≡CH、-C≡CCH3、-C≡CCH2CH3、和环丙基，所述CH3、CH2CH3、OCH3、OCH2CH3、-CH＝CH2、-C≡CH、-C≡CCH3、-C≡CCH2CH3、和环丙基任选被1、2、3、4或5个卤素取代，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述各Rb分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、CH3、CH2F、CF2H、CF3、CH2CH3、CF2CF3、-CH＝CH2、-C≡CH、-C≡CF、-C≡CBr、-C≡CCH3、-C≡CCF3、-C≡CCH2CH3、 和环丙基，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述R1选自 其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述R3选自H、F、CN和OCH3，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述R2和R3与相连的原子形成苯基、呋喃基和吡啶基，所述苯基、呋喃基和吡啶基任选被1个F取代，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述R4不存在，或选自H、CH2F和-CH＝CH2，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述R3和R4与相连的原子形成其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述R3和R4与相连的原子形成其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述结构单元选自 其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述化合物或其药学上可接受的盐，其化合物选自，

其中，
选自单键或双键；
T1、T2、R2、R3、R4和L1如本发明所定义；
Rb1、Rb2、Rb3、Rb4、Rb5、Rb6和Rb7分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、C1-3烷基、C1-3烷氧基、C2-4炔基、C2-4炔基-环丙基、C2-3烯基、-C(＝O)C1-3烷基和C3-5环烷基，所述C1-3烷基、C1-3烷氧基、C2-4炔基、C2-4炔基-环丙基、C2-3烯基、-C(＝O)C1-3烷基和C3-5环烷基任选被1、2、3、4或5个卤素取代。
在本发明的一些方案中，所述Rb1、Rb2、Rb3、Rb4、Rb5、Rb6、Rb7和Rb8分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、CH3、CH2CH3、OCH3、OCH2CH3、-CH＝CH2、-C≡CH、-C≡CCH3、-C≡CCH2CH3、和环丙基，所述CH3、CH2CH3、OCH3、OCH2CH3、-CH＝CH2、-C≡CH、-C≡CCH3、-C≡CCH2CH3、和环丙基任选被1、2、3、4或5个R取代，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述Rb1、Rb2、Rb3、Rb4、Rb5、Rb6、Rb7和Rb8分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、CH3、CF3、CH2CH3、CF2CF3、-CH＝CH2、-C≡CH、-C≡CF、-C≡CBr、-C≡CCH3、-C≡CCF3、-C≡CCH2CH3、和环丙基，其他变量如本发明所定义。
本发明还提供了式(IV)所示化合物或其药学上可接受的盐，

其中，
选自单键或双键；
T1选自CRa和N；
T2选自CH和N；
L1选自O和S；
R1选自苯基和萘基，所述苯基和萘基分别独立地任选被1、2、3、4或5个Rb取代；
R2选自H；
R3选自H、F和CN；
或者，R2和R3与相连的原子形成苯基；
R4不存在，或选自H和-CH＝CH2；
Ra选自H和CN；
各Rb分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、C1-3烷基、C1-3烷氧基、C2-3炔基、C2-3烯基、-C(＝O)C1- 3烷基和C3-5环烷基，所述C1-3烷基、C1-3烷氧基、C2-3炔基、C2-3烯基、-C(＝O)C1-3烷基和C3-5环烷基任选被1、2、3、4或5个卤素取代。
在本发明的一些方案中，所述各Rb分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、CH3、CH2CH3、OCH3、OCH2CH3、-CH＝CH2、-C≡CH和环丙基，所述CH3、CH2CH3、OCH3、OCH2CH3、-CH＝CH2、-C≡CH和环丙基任选被1、2、3、4或5个卤素取代，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述各Rb分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、CH3、CH2F、CF2H、CF3、CH2CH3、CF2CF3、-CH＝CH2、-C≡CH和环丙基，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述R1选自 其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述结构单元选自 其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述化合物或其药学上可接受的盐，其化合物选自，

其中，
选自单键或双键；
T1、T2、R2、R3、R4和L1如本发明所定义；
Rb1、Rb2、Rb3、Rb4、Rb5、Rb6和Rb7分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、C1-3烷基、C1-3烷氧基、C2-3炔基、C2-3烯基、-C(＝O)C1-3烷基和C3-5环烷基，所述C1-3烷基、C1-3烷氧基、C2-3炔基、C2-3烯基、-C(＝O)C1-3烷基和C3-5环烷基任选被1、2、3、4或5个卤素取代。
在本发明的一些方案中，所述Rb1、Rb2、Rb3、Rb4、Rb5、Rb6、Rb7和Rb8分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、CH3、CH2CH3、OCH3、OCH2CH3、-CH＝CH2、-C≡CH和环丙基，所述CH3、CH2CH3、OCH3、OCH2CH3、-CH＝CH2、-C≡CH和环丙基任选被1、2、3、4或5个R取代，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述Rb1、Rb2、Rb3、Rb4、Rb5、Rb6、Rb7和Rb8分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、CH3、CF3、CH2CH3、CF2CF3、-CH＝CH2、-C≡CH和环丙基，其他变量如本发明所定义。
本发明还提供了式(III)所示化合物或其药学上可接受的盐，

其中，
选自单键或双键；
T1选自CRa和N；
T2选自CH和N；
L1选自O和S；
R1选自苯基和萘基，所述苯基和萘基分别独立地任选被1、2、3、4或5个Rb取代；
R2选自H；
R3选自H和F；
或者，R2和R3与相连的原子形成苯基；
Ra选自H和CN；
各Rb分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、C1-3烷基、C1-3烷氧基、C2-3炔基、C2-3烯基、-C(＝O)C1- 3烷基和C3-5环烷基，所述C1-3烷基、C1-3烷氧基、C2-3炔基、C2-3烯基、-C(＝O)C1-3烷基和C3-5环烷基任选被1、2、3、4或5个卤素取代。
在本发明的一些方案中，所述各Rb分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、CH3、CH2CH3、OCH3、OCH2CH3、-CH＝CH2、-C≡CH和环丙基，所述CH3、CH2CH3、OCH3、OCH2CH3、-CH＝CH2、-C≡CH和环丙基任选被1、2、3、4或5个卤素取代，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述各Rb分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、CH3、CH2F、CF2H、CF3、CH2CH3、CF2CF3、-CH＝CH2、-C≡CH和环丙基，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述R1选自 其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述化合物或其药学上可接受的盐，其化合物选自，

其中，
选自单键或双键；
T1、T2、R2、R3和L1如本发明所定义；
Rb1、Rb2、Rb3、Rb4、Rb5、Rb6和Rb7分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、C1-3烷基、C1-3烷氧基、C2-3炔基、C2-3烯基、-C(＝O)C1-3烷基和C3-5环烷基，所述C1-3烷基、C1-3烷氧基、C2-3炔基、C2-3烯 基、-C(＝O)C1-3烷基和C3-5环烷基任选被1、2、3、4或5个卤素取代。
在本发明的一些方案中，所述Rb1、Rb2、Rb3、Rb4、Rb5、Rb6、Rb7和Rb8分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、CH3、CH2CH3、OCH3、OCH2CH3、-CH＝CH2、-C≡CH和环丙基，所述CH3、CH2CH3、OCH3、OCH2CH3、-CH＝CH2、-C≡CH和环丙基任选被1、2、3、4或5个R取代，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述Rb1、Rb2、Rb3、Rb4、Rb5、Rb6、Rb7和Rb8分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、CH3、CF3、CH2CH3、CF2CF3、-CH＝CH2、-C≡CH和环丙基，其他变量如本发明所定义。
本发明还提供了式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐，

其中，
选自单键或双键；
T1选自CRa和N；
L1选自O和S；
R1选自苯基和萘基，所述苯基和萘基分别独立地任选被1、2、3、4或5个Rb取代；
Ra选自H和CN；
各Rb分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、C1-3烷基、C1-3烷氧基、C2-3炔基、C2-3烯基、-C(＝O)C1- 3烷基和C3-5环烷基，所述C1-3烷基、C1-3烷氧基、C2-3炔基、C2-3烯基、-C(＝O)C1-3烷基和C3-5环烷基任选被1、2、3、4或5个卤素取代。
在本发明的一些方案中，所述各Rb分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、CH3、CH2CH3、OCH3、OCH2CH3、-CH＝CH2、-C≡CH和环丙基，所述CH3、CH2CH3、OCH3、OCH2CH3、-CH＝CH2、-C≡CH和环丙基任选被1、2、3、4或5个卤素取代，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述各Rb分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、CH3、CF3、CH2CH3、CF2CF3、-CH＝CH2、-C≡CH和环丙基，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述化合物或其药学上可接受的盐，其化合物选自，

其中，
选自单键或双键；
T1和L1如本发明所定义；
Rb1、Rb2、Rb3、Rb4、Rb5、Rb6和Rb7分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、C1-3烷基、C1-3烷氧基、C2-3炔基、C2-3烯基、-C(＝O)C1-3烷基和C3-5环烷基，所述C1-3烷基、C1-3烷氧基、C2-3炔基、C2-3烯基、-C(＝O)C1-3烷基和C3-5环烷基任选被1、2、3、4或5个卤素取代。
在本发明的一些方案中，所述Rb1、Rb2、Rb3、Rb4、Rb5、Rb6、Rb7和Rb8分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、CH3、CH2CH3、OCH3、OCH2CH3、-CH＝CH2、-C≡CH和环丙基，所述CH3、CH2CH3、OCH3、OCH2CH3、-CH＝CH2、-C≡CH和环丙基任选被1、2、3、4或5个R取代，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述Rb1、Rb2、Rb3、Rb4、Rb5、Rb6、Rb7和Rb8分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、CH3、CF3、CH2CH3、CF2CF3、-CH＝CH2、-C≡CH和环丙基，其他变量如本发明所定义。
在本发明的实施例8中，化合物8的盐酸盐由化合物8-3通过步骤6和步骤7制备得到，其中化合物8-3是由化合物8-2与化合物1-12B经过步骤5制备得到，化合物8-2与化合物1-12B分别由化合物8-1A和化合物1-11B制备得到。
在本发明的实施例8中，化合物8的盐酸盐是由化合物8-1A制备得到，其中，化合物8-1A通过SFC分析(色谱柱：Chiralpak IH-3,100×4.6mm I.D.,3μm；流动相：A(超临界CO2)和B(乙醇，含0.1％异丙胺)；梯度：B％＝10～50％，4min；流速:3.4mL/min；波长:220nm；压力:2000psi)显示保留时间为1.489min。
在本发明的实施例8中，化合物8的盐酸盐是由化合物1-11B制备得到，其中，化合物1-11B通过SFC分析(色谱柱:(S,S)Whelk-O1 100×4.6mm I.D.,5.0μm；流动相:A:超临界CO2，B:[75％异丙醇/25％乙腈/0.05％二乙胺]；B％:50％-50％,流速：2.5mL/min)显示保留时间为3.317min，其对映异构体的保留时间为2.536min。
在本发明的实施例8中，化合物8是由化合物1-11B制备得到，其中，化合物1-11B通过SFC分析(色谱柱:(S,S)Whelk-O1 100×4.6mm I.D.,5.0μm；流动相:A:超临界CO2，B:[75％异丙醇/25％乙腈/0.05％二乙胺]；B％:50％-50％,流速：2.5mL/min)显示保留时间为3.317min，其对映异构体的保留时间为2.536min。
在本发明的实施例8中，化合物1-11B通过SFC分析(色谱柱:(S,S)Whelk-O1 100×4.6mm I.D.,5.0μm；流动相:A:超临界CO2，B:[75％异丙醇/25％乙腈/0.05％二乙胺]；B％:50％-50％,流速：2.5mL/min)显示保留时间为3.317min，其对映异构体的保留时间为2.536min，1-11B经过实施例8中所述步骤合成得到化合物8的盐酸盐。
本发明还有一些方案是由所述变量任意组合而来。
本发明提供了下式所示化合物或其药学上可接受的盐，






本发明提供了下式所示化合物或其药学上可接受的盐，





在本发明的一些方案中，所述化合物或其药学上可接受的盐，其选自，











本发明还提供了上述化合物或其药学上可接受的盐在制备治疗与KRASG12D突变相关疾病的药物中的应用。
本发明还提供了上述化合物或其药学上可接受的盐在制备治疗与肿瘤相关疾病的药物中的应用。
本发明还提供了下列合成方法：
合成方法1：
合成方法2：
本发明还提供了下列测试方法：
测试方法1.KRASG12D抑制活性测试
1.目的
通过TR-FRET的方法，筛选出能有效抑制KRAS与GTP结合的化合物。
2.耗材和仪器
表1.耗材和仪器
3.试剂准备
a.储存试剂：
1)KRAS核苷酸交换缓冲液
取20mL 1000mM HEPES，20mL 500mM EDTA，10mL 5M氯化钠，100％0.1mL吐温20，949.9mL水，配制成1L溶液，用过滤法消毒，4℃条件下储存。
2)KRAS实验缓冲液
取20mL 1000mM HEPES，10mL 1000mM氯化镁，30mL 5M氯化钠，100％0.05mL吐温20，939.95mL水，配制成1L溶液，用过滤法消毒，4℃条件下储存。
3)KRAS/Bodipy GDP/Tb-SA混合液
取9.5μL 95μM KRASG12D蛋白，440.5μL KRAS核苷酸交换缓冲液混合，室温下孵育1小时后，与8.4μL  17.9μM Tb-SA，1.8μL 5mM Bodipy GDP，9539.8μL KRAS实验缓冲液，配制成1L溶液，混合后室温下静置6小时，储存至-80℃条件下。
b.实验试剂：
1)KRAS酶溶液
取73.3μL KRAS/Bodipy GDP/Tb-SA混合液，2126.7μL KRAS实验缓冲液，配制成2200μL溶液。
2)SOS/GTP混合液
取1.59μL 166μM SOS蛋白，198μL 100mM GTP，2000.41μL KRAS实验缓冲液，配制成2200μL溶液。
4.实验流程
1)对照化合物母液浓度为1mM，待测化合物母液浓度为10mM。转移9μL对照化合物和待测化合物至384-LDV板内；
2)使用Bravo将LDV板上的化合物进行10点3倍稀释；
3)使用ECHO将LDV板上的化合物转移9nL至实验板；
4)使用Dragonfly自动加样仪依次向实验板每孔中加入3μL 3nM Kras/0.5nM TB-SA/30nM BodipyGDP混合液和3μL Ras buffer，以1000rpm/min，将实验板离心1分钟；
5)实验板在室温中孵育1小时；
6)使用Dragonfly自动加样仪在实验板每孔加入3μL 120nM SOS/9mM GTP混合液，以1000rpm/min，将实验板离心1分钟；
7)实验板在室温中孵育1小时；
8)使用Envision读板并记录数据；
9)使用Excel和Xlfit进行数据分析，计算待测化合物IC50。
测试方法2.AGS细胞p-ERK抑制测试
1.目的
通过HTRF的方法，筛选出能有效抑制AGS细胞p-ERK的化合物。
2.实验流程
1).AGS细胞种于透明96孔细胞培养板中，80μL细胞悬液每孔，每孔包含10000个细胞，细胞板放入二氧化碳培养箱，37度过夜孵育；
2).结束孵育后，弃掉细胞上清，加入80μL每孔的培养基，培养基含0.02％血清，细胞板放入二氧化碳培养箱，37度过夜孵育；
3).取2μL化合物加入78μL细胞培养基，混匀后，取20μL化合物溶液加入到对应细胞板孔中，细胞板放回二氧化碳培养箱继续孵育3小时；
4).结束孵育后，弃掉细胞上清加入50μL 1X细胞裂解液每孔，室温摇晃孵育30分钟；
5).使用detection buffer将Phospho-ERK1/2 Eu Cryptate antibody和Phospho-ERK1/2 d2 antibody稀释20倍；
6).取16μL细胞裂解物上清每孔到新的384白色微孔板中，再加入2μL Phospho-ERK1/2 Eu Cryptate antibody稀释液和2μL Phospho-ERK1/2 d2 antibody稀释液，常温孵育至少4小时；
7).孵育结束后使用多标记分析仪读取HTRF excitation:320nm,emission:615nm，665nm；
8).计算待测化合物IC50。
测试方法3.GP2D细胞p-ERK抑制测试
1.目的
通过HTRF的方法，筛选出能有效抑制GP2D细胞p-ERK的化合物。
2.实验流程
1).GP2D细胞种于透明96孔细胞培养板中，80μL细胞悬液每孔，每孔包含8000个细胞，细胞板放入二氧化碳培养箱，37度过夜孵育；
2).取2μL化合物加入78μL细胞培养基，混匀后，取20μL化合物溶液加入到对应细胞板孔中，细胞板放回二氧化碳培养箱继续孵育1小时；
3).结束孵育后，弃掉细胞上清加入50μL 1X细胞裂解液每孔，室温摇晃孵育30分钟；
4).使用detection buffer将Phospho-ERK1/2 Eu Cryptate antibody和Phospho-ERK1/2 d2 antibody稀释20倍；
5).取16μL细胞裂解物上清每孔到新的384白色微孔板中，再加入2μL Phospho-ERK1/2 Eu Cryptate antibody稀释液和2μL Phospho-ERK1/2 d2 antibody稀释液，常温孵育至少4小时；
6).孵育结束后使用多标记分析仪读取HTRF excitation:320nm,emission:615nm，665nm；
7).计算待测化合物IC50。
测试方法4.PANC0403细胞p-ERK抑制测试
1.实验材料：
PANC0403细胞购自南京科佰；RPMI-1640培养基购自Biological Industries；胎牛血清购自Biosera；Advanced Phospho-ERK1/2(THR202/TYR204)KIT购自Cisbio。
表2.Advanced Phospho-ERK1/2(THR202/TYR204)KIT成分表
成分名称 储存温度
Advanced PhosphoERK1/2 Eu Cryptate antibody ≤-16℃
Advanced PhosphoERK1/2 d2 antibody ≤-16℃
Blocking reagent(stock solution 100X) ≤-16℃
Lysis buffer#1(stock solution 4X) ≤-16℃
Detection buffer(ready-to-use) ≤-16℃
2.实验方法：
1)PANC0403细胞种于透明96孔细胞培养板中，80μL细胞悬液每孔，每孔包含10000个PANC0403细胞，细胞板放入二氧化碳培养箱，37度过夜孵育；
2)将待测化合物用100％DMSO稀释到2mM作为第一个浓度，然后再用移液器进行5倍稀释至第8个浓度，即从2mM稀释至25.6nM。取2μL化合物加入78μL细胞饥饿培养基，混匀后，取20μL化合物溶液加入到对应细胞板孔中，细胞板放回二氧化碳培养箱继续孵育3小时，此时化合物浓度为10μM至0.128nM，DMSO浓度为0.5％；
3)结束孵育后，弃掉细胞上清加入50μL细胞裂解液每孔，室温摇晃孵育30分钟；
4)使用Detection buffer将Phospho-ERK1/2 Eu Cryptate antibody和Phospho-ERK1/2 d2 antibody稀释20倍；
5)取16μL细胞裂解物上清每孔到新的384白色微孔板中，再加入2μL Phospho-ERK1/2 Eu Cryptate antibody稀释液和2μL Phospho-ERK1/2 d2 antibody稀释液，常温孵育过夜；
6)孵育结束后使用多标记分析仪读取HTRF excitation:320nm,emission:615nm，665nm。
3.数据分析：
利用方程式(Sample-Min)/(Max-Min)*100％将原始数据换算成抑制率，IC50的值即可通过四参数进行曲线拟合得出(GraphPad Prism中log(inhibitor)vs.response--Variable slope模式得出)。
Max孔:阳性对照孔读值为1X裂解液
Min孔：阴性对照孔读值为0.5％DMSO细胞孔细胞裂解液
测试方法5.化合物在肿瘤细胞系AsPC-1和GP2D中的抗细胞增殖作用
研究目的
本实验通过检测化合物在肿瘤细胞系AsPC-1和GP2D中对体外细胞活性的影响而研究化合物抑制细胞增殖的作用。
实验材料
表3.细胞系详情
细胞系 肿瘤类型 生长特点 培养方法
AsPC-1 胰腺癌 贴壁生长 RPMI 1640+10％FBS
GP2D 结肠癌 贴壁生长 DMEM+10％FBS+2mM L-glutamine
Ultra Low Cluster-96孔板(Corning-7007)
Greiner CELLSTAR 96-孔板(#655090)
Promega CellTiter-Glo 3D发光法细胞活性检测试剂盒(Promega-G9683)
2104-10 En Vision读板器，PerkinElmer
RPMI 1640，DMEM，PBS(磷酸盐缓冲溶液)，FBS(胎牛血清)，Antibiotic-antimycotic(抗生素-抗真菌药)，L-glutamine(L-谷氨酰胺)，DMSO(二甲基亚砜)
实验方法及步骤
细胞培养
将肿瘤细胞系按培养方法所示的培养条件在37℃，5％CO2的培养箱中进行培养。定期传代，取处于对数生长期的细胞用于铺板。
细胞铺板
用台盼兰进行细胞染色并计数活细胞。
将细胞浓度调整至合适浓度。AsPC-1，7000个细胞/孔；GP2D，8000个细胞/孔
在ULA培养板中每孔加入135μL细胞悬液，在空白对照空中加入同样体积且不含细胞的培养液。
铺板后，立刻在室温条件下将ULA培养板离心10分钟，离心条件1000rpm。注意：在离心后，务必小心处理后续操作，不要造成不必要的震荡。
将培养板在37℃，5％CO2，及100％相对湿度的培养箱中培养过夜。
10X化合物工作液的配制及化合物处理细胞(第一天)
配制好10X化合物工作液(DMSO 10X工作液)后，分别向ULA培养板内加入15μL的10X化合物工作液，在溶媒对照和空白对照中加入15μL DMSO-细胞培养液混合液。
将96孔细胞板放回培养箱中培养120小时。
每天观察细胞成球情况直至实验终点。
CellTiter-Glo发光法细胞活性检测(第五天)
以下步骤按照Promega CellTiter-Glo 3D发光法细胞活性检测试剂盒(Promega#G9683)的说明书来 进行。
在每孔中加入150μL(等于每孔中细胞培养液体积)的CellTiter-Glo 3D试剂。用铝箔纸包裹细胞板以避光。
将培养板在轨道摇床上振摇5分钟。
小心的用移液管上下吹打10次，混匀空内混合物。在继续下一步之前需确保细胞球体充分被分离。
然后将ULA培养板内的溶液转移至黑底培养板(#655090)中，在室温放置25分钟以稳定发光信号。
在2104EnVision读板器上检测发光信号。
数据分析
用下列公式来计算检测化合物的抑制率(Inhibition rate，IR)：IR(％)＝(1–(RLU化合物–RLU空白对照)/(RLU溶媒对照–RLU空白对照))*100％。在Excel中计算不同浓度化合物的抑制率，然后用GraphPad Prism软件作抑制曲线图和计算相关参数，包括最小抑制率，最大抑制率及IC50。
测试方法6.CD-1小鼠口服及静脉注射受试化合物的药代动力学研究
实验目的
测试CD-1小鼠口服及静脉注射化合物的体内药代动力学。
实验步骤
受试化合物与5％DMSO+95％(10％HP-β-CD)水溶液混合，涡旋并超声，制备得到0.5mg/mL澄清溶液(静脉)或3mg/mL澄清溶液(口服)，微孔滤膜过滤后备用。选取7至10周龄的雄性SD小鼠，静脉注射给予候选化合物溶液，剂量约为2mg/kg。口服给予候选化合物溶液，剂量约为30mg/kg。收集一定时间的全血，制备得到血浆，以LC-MS/MS方法分析药物浓度，并用Phoenix WinNonlin软件(美国Pharsight公司)计算药代参数。
测试方法7.血浆蛋白结合实验(PPB)实验
实验目的
采用平衡透析法测定化合物在CD-1小鼠、Sprague-Dawley大鼠、比格犬、食蟹猴和人血浆中的蛋白结合率。
实验方法
采用上述五个物种的血浆分别配制化合物浓度为2μM的血浆样品，置于96孔快速平衡透析装置中，在37±1℃下用磷酸盐缓冲溶液透析4h。本实验采用华法林作为对照化合物。血浆和透析缓冲液中待测物的浓度用LC-MS/MS法进行测定。
测试方法8.AsPC-1细胞p-ERK抑制测试
1.目的
通过HTRF的方法，评估化合物对AsPC-1细胞p-ERK水平的抑制活性。
2.实验材料：
ASPC-1细胞购ATCC；RPMI-1640培养基购自GIbco；胎牛血清购自Hyclone；Advanced Phospho-ERK1/2(THR202/TYR204)KIT购自Bioauxilium-
表4.Advanced Phospho-ERK1/2(THR202/TYR204)KIT成分表
成分名称 储存温度
Advanced PhosphoERK1/2 Eu Cryptate antibody ≤-16℃
Advanced PhosphoERK1/2 d2 antibody ≤-16℃
Blocking reagent(stock solution 100X) ≤-16℃
Lysis buffer#1(stock solution 4X) ≤-16℃
Detection buffer(ready-to-use) ≤-16℃
3.实验方法：
1)ASPC-1细胞种于白底384孔细胞培养板中，8μL细胞悬液每孔，每孔包含7500个细胞，细胞板放入二氧化碳培养箱，37度过夜孵育；
2)将待测化合物用100％DMSO稀释到3mM作为第一个浓度，然后再用移液器进行稀释成3000、1000、300、100、30、10、3、1、0.3、0.1μM十个浓度。取2μL化合物加入198μL细胞饥饿培养基，混匀后，取15μL化合物溶液加入35μL细胞饥饿培养基并混匀，随后将最后一步的化合物溶液以每孔4μL加入到对应细胞板孔中，细胞板放回二氧化碳培养箱继续孵育3小时，此时化合物浓度为3000、1000、300、100、30、10、3、1、0.3、0.1nM，
3)结束孵育后，每孔加入3μL 5X细胞裂解液每孔，室温摇晃孵育30分钟；
4)使用Detection buffer将Phospho-ERK1/2 Eu Cryptate antibody和Phospho-ERK1/2 d2 antibody稀释20倍，并按1:1比例混匀，按每孔5μL加入到细胞培养板，常温孵育2h。
5)孵育结束后使用多标记分析仪读取HTRF excitation:320nm,emission:615nm，665nm。
4.数据分析：
利用方程式(Sample-Min)/(Max-Min)*100％将原始数据换算成抑制率，IC50的值即可通过四参数进行曲线拟合得出(GraphPad Prism中log(inhibitor)vs.response--Variable slope模式得出)。
Max孔:阳性对照孔读值为1X裂解液
Min孔：阴性对照孔读值为0.5％DMSO细胞孔细胞裂解液
相关定义
除非另有说明，本文所用的下列术语和短语旨在具有下列含义。一个特定的术语或短语在没有特别定义的情况下不应该被认为是不确定的或不清楚的，而应该按照普通的含义去理解。当本文中出现商品名时，意在指代其对应的商品或其活性成分。
这里所采用的术语“药学上可接受的”，是针对那些化合物、材料、组合物和/或剂型而言，它们在可靠的医学判断的范围之内，适用于与人类和动物的组织接触使用，而没有过多的毒性、刺激性、过敏性反应或其它问题或并发症，与合理的利益/风险比相称。
术语“药学上可接受的盐”是指本发明化合物的盐，由本发明发现的具有特定取代基的化合物与相对无毒的酸或碱制备。当本发明的化合物中含有相对酸性的功能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的碱与这类化合物接触的方式获得碱加成盐。药学上可接受的碱加成盐包括钠、钾、钙、铵、有机胺或镁盐或类似的盐。当本发明的化合物中含有相对碱性的官能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的酸与这类化合物接触的方式获得酸加成盐。本发明的某些特定的化合物含有碱性和酸性的官能团，从而可以被转换成任一碱或酸加成盐。
本发明的药学上可接受的盐可由含有酸根或碱基的母体化合物通过常规化学方法合成。一般情况下，这样的盐的制备方法是：在水或有机溶剂或两者的混合物中，经由游离酸或碱形式的这些化合物与化学计量的适当的碱或酸反应来制备。
本发明的化合物可以存在特定的几何或立体异构体形式。本发明设想所有的这类化合物，包括顺式和反式异构体、(-)-和(+)-对映体、(R)-和(S)-对映体、非对映异构体、(D)-异构体、(L)-异构体，及其外消旋混合物和其他混合物，例如对映异构体或非对映体富集的混合物，所有这些混合物都属于本发明的范围 之内。烷基等取代基中可存在另外的不对称碳原子。所有这些异构体以及它们的混合物，均包括在本发明的范围之内。
本发明的化合物可以在一个或多个构成该化合物的原子上包含非天然比例的原子同位素。例如，可用放射性同位素标记化合物，比如氚(3H)，碘-125(125I)或C-14(14C)。又例如，可用重氢取代氢形成氘代药物，氘与碳构成的键比普通氢与碳构成的键更坚固，相比于未氘化药物，氘代药物有降低毒副作用、增加药物稳定性、增强疗效、延长药物生物半衰期等优势。本发明的化合物的所有同位素组成的变换，无论放射性与否，都包括在本发明的范围之内。
术语“任选”或“任选地”指的是随后描述的事件或状况可能但不是必需出现的，并且该描述包括其中所述事件或状况发生的情况以及所述事件或状况不发生的情况。
术语“被取代的”是指特定原子上的任意一个或多个氢原子被取代基取代，取代基可以包括重氢和氢的变体，只要特定原子的价态是正常的并且取代后的化合物是稳定的。当取代基为氧(即＝O)时，意味着两个氢原子被取代。氧取代不会发生在芳香基上。术语“任选被取代的”是指可以被取代，也可以不被取代，除非另有规定，取代基的种类和数目在化学上可以实现的基础上可以是任意的。
当任何变量(例如R)在化合物的组成或结构中出现一次以上时，其在每一种情况下的定义都是独立的。因此，例如，如果一个基团被0-2个R所取代，则所述基团可以任选地至多被两个R所取代，并且每种情况下的R都有独立的选项。此外，取代基和/或其变体的组合只有在这样的组合会产生稳定的化合物的情况下才是被允许的。
当一个连接基团的数量为0时，比如-(CRR)0-，表示该连接基团为单键。
当其中一个变量选自单键时，表示其连接的两个基团直接相连，比如A-L-Z中L代表单键时表示该结构实际上是A-Z。
当所列举的连接基团没有指明其连接方向，其连接方向是任意的，例如，中连接基团L为-M-W-，此时-M-W-既可以按与从左往右的读取顺序相同的方向连接环A和环B构成也可以按照与从左往右的读取顺序相反的方向连接环A和环B构成所述连接基团、取代基和/或其变体的组合只有在这样的组合会产生稳定的化合物的情况下才是被允许的。
除非另有规定，当某一基团具有一个或多个可连接位点时，该基团的任意一个或多个位点可以通过化学键与其他基团相连。当该化学键的连接方式是不定位的，且可连接位点存在H原子时，则连接化学键时，该位点的H原子的个数会随所连接化学键的个数而对应减少变成相应价数的基团。所述位点与其他基团连接的化学键可以用直形实线键直形虚线键或波浪线表示。例如-OCH3中的直形实线键表示通过该基团中的氧原子与其他基团相连；中的直形虚线键表示通过该基团中的氮原子的两端与其他基团相连；中的波浪线表示通过该苯基基团中的1和2位碳原子与其他基团相连； 表示该哌啶基上的任意可连接位点可以通过1个化学键与其他基团相连，至少包括 这4种连接方式，即使-N-上画出了H原子，但是仍包括这种连接方式的基团，只是在连接1个化学键时，该位点的H会对应减少1个变成相应的一价哌啶基。
除非另有说明，用楔形实线键和楔形虚线键表示一个立体中心的绝对构型，用直形实线键和直形虚线键表示立体中心的相对构型，用波浪线表示楔形实线键或楔形虚线键或用波浪线表示直形实线键或直形虚线键
除非另有说明，当化合物中存在双键结构，如碳碳双键、碳氮双键和氮氮双键，且双键上的各个原子均连接有两个不同的取代基时(包含氮原子的双键中，氮原子上的一对孤对电子视为其连接的一个取代基)，如果该化合物中双键上的原子与其取代基之间用表示，则表示该化合物的(Z)型异构体、(E)型异构体或两种异构体的混合物。除非另有说明，术语“互变异构体”或“互变异构体形式”是指在室温下，不同官能团异构体处于动态平衡，并能很快的相互转化。若互变异构体是可能的(如在溶液中)，则可以达到互变异构体的化学平衡。例如，质子互变异构体(proton tautomer)(也称质子转移互变异构体(prototropic tautomer))包括通过质子迁移来进行的互相转化，如酮-烯醇异构化和亚胺-烯胺异构化。价键异构体(valence tautomer)包括一些成键电子的重组来进行的相互转化。其中酮-烯醇互变异构化的具体实例是戊烷-2,4-二酮与4-羟基戊-3-烯-2-酮两个互变异构体之间的互变。
除非另有规定，术语“卤代素”或“卤素”本身或作为另一取代基的一部分表示氟、氯、溴或碘原子。
除非另有规定，术语“C1-3烷基”用于表示直链或支链的由1至3个碳原子组成的饱和碳氢基团。所述C1-3烷基包括C1-2和C2-3烷基等；其可以是一价(如甲基)、二价(如亚甲基)或者多价(如次甲基)。C1- 3烷基的实例包括但不限于甲基(Me)、乙基(Et)、丙基(包括n-丙基和异丙基)等。
除非另有规定，术语“C1-3烷氧基”表示通过一个氧原子连接到分子的其余部分的那些包含1至3个碳原子的烷基基团。所述C1-3烷氧基包括C1-2、C2-3、C3和C2烷氧基等。C1-3烷氧基的实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基(包括正丙氧基和异丙氧基)等。
除非另有规定，“C2-3烯基”用于表示直链或支链的包含至少一个碳-碳双键的由2至3个碳原子组成的碳氢基团，碳-碳双键可以位于该基团的任何位置上。所述C2-3烯基包括C3和C2烯基；所述C2-3烯基可以是一价、二价或者多价。C2-3烯基的实例包括但不限于乙烯基、丙烯基等。
除非另有规定，“C2-3炔基”用于表示直链或支链的包含至少一个碳-碳三键的由2至3个碳原子组成的碳氢基团，碳-碳三键可以位于该基团的任何位置上。其可以是一价、二价或者多价。所述C2-3炔基包括C3和C2炔基。C2-3炔基的实例包括但不限于乙炔基、丙炔基等。
除非另有规定，“C2-4炔基”用于表示直链或支链的包含至少一个碳-碳三键的由2至4个碳原子组成的碳氢基团，碳-碳三键可以位于该基团的任何位置上。所述C2-4炔基包括C2-3、C4、C3和C2炔基等。其可以是一价、二价或者多价。C2-4炔基的实例包括但不限于乙炔基、丙炔基、丁炔基等。
除非另有规定，“C3-5环烷基”表示由3至5个碳原子组成的饱和环状碳氢基团，其为单环体系，所述C3-5环烷基包括C3-4和C4-5环烷基等；其可以是一价、二价或者多价。C3-5环烷基的实例包括，但不限于， 环丙基、环丁基、环戊基等。
除非另有规定，本发明术语“5-6元杂芳环”和“5-6元杂芳基”可以互换使用，术语“5-6元杂芳基”表示由5至6个环原子组成的具有共轭π电子体系的单环基团，其1、2、3或4个环原子为独立选自O、S和N的杂原子，其余为碳原子。其中氮原子任选地被季铵化，氮和硫杂原子可任选被氧化(即NO和S(O)p，p是1或2)。5-6元杂芳基可通过杂原子或碳原子连接到分子的其余部分。其可以是一价、二价或者多价。所述5-6元杂芳基包括5元和6元杂芳基。所述5-6元杂芳基的实例包括但不限于吡咯基(包括N-吡咯基、2-吡咯基和3-吡咯基等)、吡唑基(包括2-吡唑基和3-吡唑基等)、咪唑基(包括N-咪唑基、2-咪唑基、4-咪唑基和5-咪唑基等)、噁唑基(包括2-噁唑基、4-噁唑基和5-噁唑基等)、三唑基(1H-1,2,3-三唑基、2H-1,2,3-三唑基、1H-1,2,4-三唑基和4H-1,2,4-三唑基等)、四唑基、异噁唑基(3-异噁唑基、4-异噁唑基和5-异噁唑基等)、噻唑基(包括2-噻唑基、4-噻唑基和5-噻唑基等)、呋喃基(包括2-呋喃基和3-呋喃基等)、噻吩基(包括2-噻吩基和3-噻吩基等)、吡啶基(包括2-吡啶基、3-吡啶基和4-吡啶基等)、吡嗪基或嘧啶基(包括2-嘧啶基和4-嘧啶基等)。
除非另有规定，本发明术语“5-10元杂芳环”和“5-10元杂芳基”可以互换使用，术语“5-10元杂芳基”是表示由5至10个环原子组成的具有共轭π电子体系的环状基团，其1、2、3或4个环原子为独立选自O、S和N的杂原子，其余为碳原子。其可以是单环、稠合双环或稠合三环体系，其中各个环均为芳香性的。其中氮原子任选地被季铵化，氮和硫杂原子可任选被氧化(即NO和S(O)p，p是1或2)。5-10元杂芳基可通过杂原子或碳原子连接到分子的其余部分。其可以是一价、二价或者多价。所述5-10元杂芳基包括5-8元、5-7元、5-6元、5元和6元杂芳基等。所述5-10元杂芳基的实例包括但不限于吡咯基(包括N-吡咯基、2-吡咯基和3-吡咯基等)、吡唑基(包括2-吡唑基和3-吡唑基等)、咪唑基(包括N-咪唑基、2-咪唑基、4-咪唑基和5-咪唑基等)、噁唑基(包括2-噁唑基、4-噁唑基和5-噁唑基等)、三唑基(1H-1,2,3-三唑基、2H-1,2,3-三唑基、1H-1,2,4-三唑基和4H-1,2,4-三唑基等)、四唑基、异噁唑基(3-异噁唑基、4-异噁唑基和5-异噁唑基等)、噻唑基(包括2-噻唑基、4-噻唑基和5-噻唑基等)、呋喃基(包括2-呋喃基和3-呋喃基等)、噻吩基(包括2-噻吩基和3-噻吩基等)、吡啶基(包括2-吡啶基、3-吡啶基和4-吡啶基等)、吡嗪基、嘧啶基(包括2-嘧啶基和4-嘧啶基等)、苯并噻唑基(包括5-苯并噻唑基等)、嘌呤基、苯并咪唑基(包括2-苯并咪唑基等)、苯并噁唑基、吲哚基(包括5-吲哚基等)、异喹啉基(包括1-异喹啉基和5-异喹啉基等)、喹喔啉基(包括2-喹喔啉基和5-喹喔啉基等)或喹啉基(包括3-喹啉基和6-喹啉基等)。
除非另有规定，Cn-n+m或Cn-Cn+m包括n至n+m个碳的任何一种具体情况，例如C1-12包括C1、C2、C3、C4、C5、C6、C7、C8、C9、C10、C11、和C12，也包括n至n+m中的任何一个范围，例如C1-12包括C1- 3、C1-6、C1-9、C3-6、C3-9、C3-12、C6-9、C6-12、和C9-12等；同理，n元至n+m元表示环上原子数为n至n+m个，例如3-12元环包括3元环、4元环、5元环、6元环、7元环、8元环、9元环、10元环、11元环、和12元环，也包括n至n+m中的任何一个范围，例如3-12元环包括3-6元环、3-9元环、5-6元环、5-7元环、6-7元环、6-8元环、和6-10元环等。
本发明的化合物可以通过本领域技术人员所熟知的多种合成方法来制备，包括下面列举的具体实施方式、其与其他化学合成方法的结合所形成的实施方式以及本领域技术上人员所熟知的等同替换方式，优选的实施方式包括但不限于本发明的实施例。
本发明的化合物可以通过本领域技术人员所熟知的常规方法来确认结构，如果本发明涉及化合物的绝对构型，则该绝对构型可以通过本领域常规技术手段予以确证。例如单晶X射线衍射法(SXRD)，把培养出的单晶用Bruker D8 venture衍射仪收集衍射强度数据，光源为CuKα辐射，扫描方式：扫描，收集相关数据后，进一步采用直接法(Shelxs97)解析晶体结构，便可以确证绝对构型。
本发明所使用的溶剂可经市售获得。本发明采用如下缩略词：PhNTf2代表N-苯基双(三氟甲烷磺酰)亚 胺；Pd2(dba)3代表三[二亚苄基丙酮]二钯；DavePhos代表2-二环己膦基-2'-(N,N-二甲胺)-联苯；LIHMDS代表双三甲基硅基胺基锂；NaOH代表氢氧化钠；NaHCO3代表碳酸氢钠；Boc2O代表二碳酸二叔丁酯；Et3N代表三乙胺；Tf2O代表三氟乙酸酐；Xantphos代表4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽；DMF代表N,N-二甲基甲酰胺；DMAP代表4-二甲氨基吡啶；TBDPSCl代表叔丁基二苯基氯硅烷；DCM代表二氯甲烷；EA代表乙酸乙酯；Grubbs二代催化剂代表1,3-双(2,4,6-三甲基苯基)-2-(咪唑烷亚基)(二氯苯亚甲基)(三环己基膦)钌；TFA代表三氟乙酸；THF代表四氢呋喃；NBS代表N-溴代琥珀酰亚胺；PMB代表对甲氧基苄基；Tf代表三氟甲磺酰基；Boc代表碳酸叔丁酰基；TIPS代表三异丙基硅基；MOM代表亚甲基甲醚基。
化合物依据本领域常规命名原则或者使用软件命名，市售化合物采用供应商目录名称。
附图说明
图1.化合物A与和KRASG12D蛋白的结合模式图；
图2.化合物B与和KRASG12D蛋白的结合模式图；
图3.化合物C与和KRASG12D蛋白的结合模式图；
图4.化合物D与和KRASG12D蛋白的结合模式图；
图5.化合物E与和KRASG12D蛋白的结合模式图；
图6.化合物F与和KRASG12D蛋白的结合模式图。
技术效果
本发明化合物对KRASG12D突变的酶有良好的抑制作用，可有效抑制p-ERK，对KRASG12D突变的细胞具有良好的细胞增殖抑制活性，可有效抑制体内肿瘤生长，且耐药性佳。本发明化合物具有较好的药代动力学性质。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明进行详细描述，但并不意味着对本发明任何不利限制。本文已经详细地描述了本发明，其中也公开了其具体实施例方式，对本领域的技术人员而言，在不脱离本发明精神和范围的情况下针对本发明具体实施方式进行各种变化和改进将是显而易见的。
计算例1
本发明还提供了所述化合物或其药学上可接受分子对接过程是通过使用Maestro(版本2017-2)中的Glide SP[1]和默认选项进行的。选取PDB数据库中KRAS_G12C的晶体结构PDB:6UT0，将Cys12模拟突变为Asp12，经过能量优化后，作为对接模板。为了准备蛋白质，使用Maestro[2]的蛋白质准备向导模块添加氢原子，并使用OPLS3力场。对于配体的准备，使用LigPrep生成了分子的三维结构，并进行了能量最小化[3]，使用confgen模块对小分子构象进行采样。以6UT0的配体作为质心生成了边长为的正方体对接网格。在分子对接过程中放置参考化合物。分析蛋白质受体与配体的相互作用类型，分析蛋白质受体与配体的相互作用类型，然后根据计算得到的docking scrore以及结合模式选择并保存了合理对接构象，如图1至图6所示。
[1]Glide,LLC,New York,NY,2017.
[2]Maestro,LLC,New York,NY,2017.
[3]LigPrep,LLC,New York,NY,2017.
结论：本发明化合物与KRAS G12D有较好的结合。
实施例1

步骤1：中间体1-2的合成
向预先干燥的反应瓶中加入化合物1-1(20g,137.40mmoL)，N,N-二甲基甲酰胺(200mL)，碘化钾(22.81g,137.40mmoL)，无水碳酸钾(47.47g,343.50mmoL)，搅拌下加入对甲氧基氯苄(44.11g,281.67mmoL,38.36mL)，然后升温至65℃搅拌4小时，反应液降温至室温，然后垫硅藻土过滤，200mL甲基叔丁基醚淋洗滤饼，然后滤液加入200mL水，萃取，水相用乙酸乙酯(100mL*2)萃取，然后合并有机相，饱和食盐水(200mL*3)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到粗品，粗品用50mL石油醚打浆48小时，过滤，收集滤饼，干燥得到产品，得到化合物1-2，直接用于下一步，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝7.18-7.17(m,5H),6.85-6.82(m,6H),4.24(s,4H),3.74-3.71(m,6H)。MS m/z＝386.1[M+H]+。
步骤2：中间体1-3的合成
将2,2,6,6-四甲基哌啶(43.93g,311.00mmoL,52.80mL)溶于四氢呋喃(300mL)，然后降温至-5℃，加入正丁基锂(2.5M,124.40mL)，搅拌0.5小时，然后降温至-60℃，加入化合物1-2(30g,77.75mmoL)的四氢呋喃(30mL)溶液，搅拌0.5小时，然后加入N,N-二甲基甲酰胺(113.66g,1.55moL,119.64mL)，继续搅拌0.5小时。向反应液加入200mL饱和氯化铵。乙酸乙酯萃取(200mL)，分液，饱和食盐水洗100mL，无水硫酸钠干燥过滤浓缩。过柱纯化(石油醚：乙酸乙酯＝10：1)，得化合物1-3。
步骤3：中间体1-4的合成
将钠氢(6.38g,159.47mmol,60％含量)溶于四氢呋喃(300mL)，N2置换两次，然后降温至0℃，加入乙酰乙酸甲酯(18.52g,159.47mmol,17.15mL)，搅拌10min，然后加入正丁基锂(2.5M,63.79mL)，继续搅拌10min，降温-15℃，加入化合物1-3(30g,72.49mmol)的四氢呋喃(50mL)溶液，继续搅拌30min。向反应液中加入100mL饱和氯化铵，乙酸乙酯萃取(100mL*2)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩。过柱纯化(石油醚：乙酸乙酯＝10：1)，得化合物1-4。MS m/z＝530.2[M+H]+。
步骤4：中间体1-5的合成
将化合物1-4(20g,37.74mmoL)溶于无水二氯(50mL)中，氮气保护下加入N,N-二甲基甲酰胺二甲基缩醛(5.40g,45.28mmoL,6.02mL)，25℃反应16小时，加入三氟化硼乙醚(6.43g,45.28mmoL,5.59mL)，20℃反应1小时，将反应液加入50mL饱和碳酸氢钠溶液中，用二氯甲烷(20mL*2)萃取分液，合并有机相，用30mL饱和食盐水洗涤后，无水硫酸钠干燥过滤后浓缩。粗品过柱纯化(石油醚:乙酸乙酯＝10:1-1:1) 得到化合物1-5。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.45(s,1H),7.14(m,4H),7.00-6.69(m,6H),5.80(m,1H),4.27-4.10(m,5H),3.79(m,1H),3.94-3.66(m,8H),2.98-2.73(m,1H)。MS m/z＝540.2[M+H]+。
步骤5：中间体1-6的合成
将化合物1-5(12g,22.22mmoL)加入无水四氢呋喃(30mL)中，在氮气保护下加入三仲丁基硼氢化锂(11.83g,62.22mmoL,13.60mL)，-60℃反应1小时，将反应液加入40mL水中，用乙酸乙酯(20mL*2)萃取，合并有机相，再用20mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥后浓缩，粗品过柱纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100:0＝3:1)，得到化合物1-6。MS m/z＝542.2[M+H]+。
步骤6：中间体1-7的合成
将化合物1-6(5.5g,10.15mmoL)加入到乙醇(15mL)和水(3mL)中，加入碳酸氢钠(2.15g,20.30mmoL)和甲基异硫脲硫酸盐(2.74g,30.44mmoL)，45-50℃反应16小时，反应液用水(20mL)和乙酸乙酯(20mL*2)萃取，合并有机相用饱和食盐水(20mL*2)洗涤，无水硫酸钠干燥后浓缩，得到化合物1-7，粗品直接投下一步。MS m/z＝582.2[M+H]+。
步骤7：中间体1-8的合成
将化合物1-7(6g,8.04mmoL)加入到无水二氯甲烷(20mL)中，0℃加入N,N-二异丙基乙胺(3.12g,24.12mmoL,4.20mL)，降温到0-10℃，将三氟甲磺酸酐(4.08g,14.47mmoL,2.39mL)缓慢滴加，0℃反应0.5小时，将反应液加入到20mL饱和氯化铵中，用无水二氯甲烷(10mL*2)萃取，合并有机相，用20mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥过滤后浓缩，粗品过柱纯化(石油醚：乙酸乙酯＝1:0-0:1)得到化合物1-8。MS m/z＝714.1[M+H]+。
步骤8：中间体1-9的盐酸盐合成
将化合物1-8(0.8g,1.12mmoL)，化合物1-1A(475.62mg,2.24mmoL)，DIPEA(434.33mg,3.36mmoL,585.35μL)加入到N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，50℃反应1小时。将反应液加入饱和氯化铵(20mL)中，用乙酸乙酯(20mL*2)萃取，合并有机相，再用20mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥后浓缩，粗品用过柱纯化(石油醚:乙酸乙酯＝3：1)，再进行制备HPLC(色谱柱:Phenomenex Luna C18 250*50mm*10μm；流动相:[水(0.05％盐酸)-乙腈]；(乙腈)％:65％-95％,10min)分离，得到化合物1-9的盐酸盐。MS m/z＝776.3[M+H]+。
步骤9：中间体1-10的合成
将化合物1-9的盐酸盐(1.2g)溶于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)，降温至0℃，然后加入N-溴代丁二酰亚胺(330.13mg,1.85mmoL)，20℃搅拌1小时。向反应液中加入30mL水，用乙酸乙酯萃取(30mL*2)，合并有机相，饱和食盐水洗(20mL*2)，无水硫酸钠干燥过滤浓缩。过柱纯化(石油醚：乙酸乙酯＝3:1-1:1)得化合物1-10。MS m/z＝856.1[M+H]+。
步骤10：中间体1-11的合成
将化合物1-10(0.3g,350.77μmol)，氧化亚铜(133.61mg,701.55μmol)，氟磺酰二氟乙酸甲酯(336.94mg,1.75mmol,223.14μL)溶于N,N-二甲基甲酰胺(10mL)，氮气保护，在100℃搅拌1小时。反应液合并倒入30mL水中，用甲基叔丁醚(20mL*2)萃取，合并有机相，再用饱和食盐水(20mL*2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。过柱纯化(石油醚：乙酸乙酯＝10:1-1:1)得化合物1-11。MS m/z＝844.2[M+H]+。
步骤11：中间体1-12的合成
将化合物1-11(0.35g,414.52μmol)加入反应瓶中，加入无水二氯甲烷(5mL)开始搅拌，然后加入间氯过氧苯甲酸(126.24mg,621.78μmol,85％含量)，25℃反应1小时。反应液加入5mL 5％硫代硫酸钠溶液，用二氯甲烷(10mL*2)萃取，合并有机相，再用饱和食盐水(5mL*2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩。过柱纯化(石油醚：乙酸乙酯＝10:1-1:1)，得化合物1-12。MS m/z＝860.2[M+H]+。
步骤12：中间体1-13的合成
将化合物1-2A(256.28mg,1.61mmol)加入无水四氢呋喃(5mL)中，加入叔丁醇钠(123.76mg,1.29mmol)，-15℃反应15min，加入化合物1-12(0.277g,321.96μmol)，-15℃反应1小时。反应液中加入5mL饱和氯化铵，用乙酸乙酯(10mL*3)萃取，合并有机相，饱和食盐水(20mL*2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩。经过柱纯化(二氯甲烷：甲醇＝20:1-10:1)，得化合物1-13。MS m/z＝955.3[M+H]+。
步骤13：化合物1A和1B的合成
将化合物1-13(0.450g,470.98μmol)放入三氟乙酸(2.85g,24.96mmol,1.85mL)和二氯甲烷(9mL)中，-10-0℃反应1小时，将反应液倒入10mL水中，将下层二氯甲烷相分出，水相用饱和碳酸氢钠溶液调节pH值为8～10，再用乙酸乙酯(5mL*2)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(5mL*2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，经高效液相色谱分离(色谱柱:Phenomenex C18 75*30mm*3μm；流动相:[水(0.05％盐酸)-乙腈]；(乙腈)％:1％-35％,8min)，再进行SFC拆分(色谱柱:DAICEL CHIRALCEL OD(250mm*30mm,10μm)；流动相:[超临界CO2-甲醇(0.1％氨水)]；甲醇(0.1％氨水)％:36％-36％,7min)得到化合物1A和化合物1B。手性SFC分析(色谱柱:DAICEL CHIRALCEL OD-3(150mm*4.6mm,3μm)；流动相:[超临界CO2-甲醇(0.1％二乙胺)]；(甲醇)％:40％-40％)，化合物1A，Rt＝3.151分钟，ee值99％；化合物1B，Rt＝4.085分钟，ee值93％。
化合物1A：1H NMR(400MHz,CD3OD)δ＝6.93(d,J＝8.0Hz,1H),5.68-5.46(m,1H),5.32-5.19(m,1H),4.78-4.69(m,1H),4.63-4.46(m,2H),4.41-4.28(m,1H),4.24-4.08(m,2H),4.04-3.74(m,5H),3.73-3.65(m,1H),3.55-3.41(m,2H),3.02-2.89(m,1H),2.80-2.48(m,2H),2.48-2.24(m,4H),2.24-2.04(m,3H),2.03-1.91(m,1H),2.04-1.90(m,1H)。MS m/z＝615.4[M+H]+。
化合物1B：1H NMR(400MHz,CD3OD)δ＝6.98-6.85(m,1H),5.54-5.39(m,1H),5.35-5.19(m,2H),4.76-4.66(m,1H),4.63-4.53(m,1H),4.39-4.14(m,4H),4.06-3.89(m,3H),3.78-3.62(m,2H),3.62-3.50(m,2H),3.27-3.09(m,3H),2.99-2.86(m,1H),2.48-2.25(m,2H),2.13-1.83(m,6H)。MS m/z＝615.4[M+H]+。
实施例2
步骤1：中间体2-2的合成
将化合物2-1(11.0g,18.66mmol)加入到无水甲醇(150mL)中，然后加入乙酸铵(7.19g,93.29mmol)，所得反应液升温至60℃搅拌反应48小时。将反应液浓缩，残留物溶解于300mL乙酸乙酯中，然后加入水50mL搅拌至澄清，分去水层，有机相用水(30mL*2)和饱和食盐水(30mL)洗涤，有机相浓缩得到粗品，过柱纯化(石油醚：乙酸乙酯＝30：1)，得到化合物2-2。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：7.16(d,J＝8.4Hz,4H),6.84(d,J＝8.4Hz,4H),6.62(d,J＝8.4Hz,1H),4.99(br,J＝10.5Hz,1H),4.63(d,J＝13.6Hz,1H),4.42-4.21(m,5H),3.80(s,6H),3.71(s,3H),3.07(br,J＝11.2,16.2Hz,1H),2.34-2.32(m,3H),2.26-2.19m,1H)；MS m/z＝589.1[M+H]+。
步骤2：中间体2-3的合成
将化合物2-2(7.56g,12.84mmol)和N,N-二异丙基乙胺(3.32g,25.69mmol,4.47mL)溶解于四氢呋喃(150mL)中，氮气保护下冷却到0℃，然后向其中滴加化合物2-2A(2.10g,15.41mmol,1.64mL)，滴毕，15℃搅拌反应15小时。将反应液浓缩得粗品，过柱纯化(石油醚：乙酸乙酯＝10：1)，得到化合物2-3，MS m/z＝689.1[M+H]+。
步骤3：中间体2-4的合成
将化合物2-3(2.94g,4.27mmol)溶解于四氢呋喃(30mL)中，然后加入甲醇钠(461.27mg,8.54mmol)和无水甲醇(0.5mL)，所得反应液氮气保护下，50℃搅拌反应4小时。将反应液冷却到室温，用0.5M盐酸调节反应液pH至4-5,然后旋去溶剂，残留物溶解于150mL乙酸乙酯中然后用水30mL和饱和食盐水30mL洗涤，有机相浓缩得粗品，过柱纯化(石油醚：乙酸乙酯＝10：1)，得到化合物2-4。MS m/z＝657.2[M+H]+。
步骤4：中间体2-5的合成
将化合物2-4(200mg,304.59μmol)溶解于二甲基亚砜(10mL)中，然后加入氯化锂(51.65mg,1.22mmol,24.95μL)，所得反应液升温至120℃搅拌反应4小时，加150mL乙酸乙酯稀释，然后用水(20mL*3)和饱和食盐水(20mL)洗涤，有机相浓缩得到粗品，过柱纯化(甲醇/二氯甲烷＝1:10)得到化合物2-5，MS m/z＝599.2[M+H]+。
步骤5：中间体2-6的合成
将化合物2-5(400mg,668.24μmol)和PhNTf2(477.46mg,1.34mmol)加入到N-N-二甲基甲酰胺(1.5mL)中，然后加入N,N-二异丙基乙基胺(345.46mg,2.67mmol,465.58μL)，反应液15℃搅拌反应3小时。将反应液浓缩得到粗品，过柱纯化(石油醚：乙酸乙酯＝10：1)得到化合物2-6，MS m/z＝862.8[M+H]+。
步骤6：中间体2-7的合成
将化合物2-6(580mg,672.30μmol)和化合物1-1A(142.72mg,672.30μmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中，然后加入N,N-二异丙基乙基胺(173.78mg,1.34mmol,234.21μL)，所得反应液升温至60℃搅拌反应3小时。将反应液浓缩得到粗品。过柱纯化(石油醚：乙酸乙酯＝10：1)得到化合物2-7，MS m/z＝925.4[M+H]+。
步骤7：中间体2-8A和2-8B的合成
将化合物2-7(106mg,114.60μmol)和化合物1-2A(54.74mg,343.81μmol)加入到二氧六环(2mL)中，然后加入Pd2(dba)3(20.99mg,22.92μmol)，DavePhos(18.04mg,45.84μmol)和LIHMDS(1M,343.81μL)，所得反应液氮气置换后，升温至95℃反应15小时。将反应液浓缩，残留物中加入水(1mL)和乙酸乙酯(30mL)，然后用0.5M盐酸调节pH至7-8，分出有机相，水相用10mL乙酸乙酯萃取两次，合并有机相，浓缩得粗品。粗品制备板分离(乙酸乙酯:甲醇＝20:1)。将上述制备板分离得到的样品继续用经高效液相色谱分离(色谱柱:Welch Xtimate C18 100*40mm*3μm；流动相:[水(0.075％三氟乙酸)-乙腈]；(乙腈)％:43％-73％,8min)，浓 缩得化合物2-8A。MS m/z＝934.9[M+H]+和化合物2-8B,MS m/z＝934.9[M+H]+。
步骤8：化合物2A的盐酸盐和2B的盐酸盐合成
将三氟乙酸(0.3mL)加入到化合物2-8A(43mg,46.04μmol)中，氮气保护下20℃搅拌反应2小时。将反应液浓缩得粗品。溶解于乙腈中，用经高效液相色谱分离(色谱柱:Xtimate C18 150*40mm*5μm；流动相:[水(0.05％盐酸)-乙腈]；(乙腈)％:5％-35％,10min)，得到化合物2A的盐酸盐，MS m/z＝594.3[M+H]+。
将三氟乙酸(0.3mL)加入到化合物2-8B(52mg,55.67μmol)中，所得反应液氮气保护下，20℃搅拌反应2小时.将反应液浓缩得粗品。粗品用经高效液相色谱分离(色谱柱:Xtimate C18 150*40mm*5μm；流动相:[水(0.05％盐酸)-乙腈]；(乙腈)％:5％-35％,10min)，得到化合物2B的盐酸盐，LCMS m/z＝594.4[M+H]+。
实施例3

步骤1：中间体3-2的合成
将化合物3-1(50g,139.46mmol)加入到无水二氯甲烷(500mL)中，加入N,N-二异丙基乙二胺(54.07g,418.39mmol,72.87mL)，降温至0℃，缓慢滴加入氯甲基甲醚(15.59g,193.64mmol,14.71mL)，缓慢升温至18℃反应1小时。将反应液加入到500mL的冰水中，用DCM(100mL*2)萃取，合并有机相，再用500mL的饱和碳酸钠，500mL的饱和氯化铵和500mL的半饱和食盐水分别洗涤，无水硫酸钠干燥过滤后浓缩，粗品经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝3：1)纯化得到化合物3-2。MS m/z＝403.2[M+H]+。
步骤2：中间体3-3的合成
将化合物3-2(36g,89.42mmol)和N,N-二异丙基乙二胺(34.67g,268.27mmol,46.73mL)加入到无水二氯甲烷(360mL)中，降温至-40℃，滴加入三氟甲磺酸酐(37.85g,134.14mmol,22.13mL)，反应1小时。将反应液加入到300mL的冰水中，分液萃取，有机相用200mL的饱和碳酸氢钠溶液洗涤，再用200mL的饱和氯化铵洗涤，200mL的食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥过滤后浓缩。粗品用柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝10：1)纯化得到化合物3-3。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝7.71(dd,J＝5.2,9.2Hz,1H),7.43(d,J＝2.4Hz,1H),7.36(d,J＝2.0Hz,1H),7.33(t,J＝8.8Hz,1H),5.28(s,2H),3.53(s,3H),1.28-1.18(m,21H)。
步骤3：中间体3-4的合成
将化合物3-3(34g,63.59mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(340mL)中，加入乙烯基三丁基锡(42.03g,132.55mmol,38.56mL)和氯化锂(10.78g,254.38mmol,5.21mL)，氮气置换三次，氮气保护下加入三苯基膦二氯化钯(4.46g,6.36mmol)，30℃反应20小时。向反应液中加入300mL的20％的KF水溶液和300mL甲基叔丁基醚搅拌20分钟，垫硅藻土过滤，滤饼用甲基叔丁基醚(50mL*4)淋洗，除去水相，有机相用500mL的饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥过滤后减压浓缩。粗品经过柱(石油醚：乙酸乙酯＝5： 1)纯化得到化合物3-4。MS m/z＝413.3[M+H]+。
步骤4：中间体3-5的合成
将化合物3-4(20g,48.47mmol)加入到无水四氢呋喃(200mL)和水(50mL)中，降温至0℃，加入高碘酸钠(31.10g,145.42mmol,8.06mL)和四氧化锇(1.5g,5.90mmol,306.12μL)，缓慢升温至18℃，反应1小时。将反应液加入到300mL10％硫代硫酸钠溶液中，用乙酸乙酯(100mL*2)萃取，500mL的饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥过滤后浓缩。粗品经过柱(石油醚：乙酸乙酯＝5：1)纯化得到化合物3-5。MS m/z＝415.3[M+H]+。
步骤5：中间体3-7的合成
向化合物3-6(1g,4.05mmol)和1-1A(1.03g,4.86mmol)的二氯甲烷溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(1.05g,8.11mmol)，得到的混合物室温25℃搅拌小时。向反应液中加入水(20mL)和二氯甲烷(50mL)，搅拌5分钟，除去水相，有机相减压浓缩，残余物经过柱机纯化(石油醚：乙酸乙酯＝5：1)得到的化合物3-7。MS m/z＝423.1[M+H]+。
步骤6：中间体3-8的合成
冰水浴0℃氮气保护下，向化合物3-7(0.6g,1.42mmol)的四氢呋喃(5mL)溶液中分批加入四氢铝锂(0.1g,2.84mmol)，得到的混合物自然升至25℃搅拌2小时，向反应液中依次滴加水(0.1g)、15％氢氧化钠水溶液(0.1g)和水(0.3g)搅拌30分钟，过滤，四氢呋喃(10mL)，滤液减压浓缩，得到化合物3-8。MS m/z＝381.1[M+H]+。
步骤7：中间体3-9的合成
干冰-乙酸乙酯浴零下65℃氮气保护下，向化合物3-8(0.5g,1.33mmol)的四氢呋喃(10mL)溶液中滴加二异丙基氨基锂(1.51mL,3.02mmol,2M)，搅拌30分钟后滴加化合物3-5(0.5g,1.51mmol)的四氢呋喃(5mL)溶液，得到的混合物自然升至25℃，向反应液中加入0.1M稀盐酸水溶液(15mL)和乙酸乙酯(20mL)，搅拌10分钟，除去水相，有机相减压浓缩，残余物经过柱机纯化(石油醚：乙酸乙酯＝5：1)，得到化合物3-9。MS m/z＝795.4[M+H]+。
步骤8：中间体3-10的合成
干冰-乙酸乙酯浴零下65℃氮气保护下，向化合物3-9(0.51g,641.44μmol)的四氢呋喃(10mL)溶液中滴加正丁基锂(2.5M,564.47μL)，搅拌30分钟后，滴加对甲苯磺酰氯(183.43mg,962.16μmol)的四氢呋喃(3mL)，得到的混合物自然升至25℃搅拌2小时，向反应液中加入50毫升饱和氯化铵水溶液淬灭反应，再加入50毫升乙酸乙酯萃取，除去水相，有机相减压浓缩。残余物经过柱机纯化(石油醚：乙酸乙酯＝5：1)，得到化合物3-10。MS m/z＝777.4[M+H]+。
步骤9：中间体3-11的合成
向化合物3-10(45mg,57.91μmol)的二氯甲烷(2mL)溶液中加入间氯过氧苯甲酸(14.11mg,69.49μmol,85％含量)，得到的混合物室温25℃搅拌2小时。向反应液中加入2毫升饱和碳酸氢钠水溶液和2毫升饱和亚硫酸钠水溶液和5毫升二氯甲烷搅拌5分钟，除去水相，有机相减压浓缩。残余物经过制备TLC纯化(石油醚：乙酸乙酯＝5：1)，得化合物3-11。MS m/z＝793.4[M+H]+。
步骤10：中间体3-12的合成
冰水浴0℃氮气保护下，向化合物1-2A(32.12mg,201.76μmol)的四氢呋喃(2mL)溶液中加入叔丁醇钠(19.39mg,201.76μmol)，搅拌30分钟后加入化合物3-11(40mg,50.44μmol)，得到的混合物自然升至25℃搅拌2小时。向反应液中加入0.5M稀盐酸调节pH值约为6，加入5毫升乙酸乙酯和2毫升饱和食盐水搅拌5分钟，除去水相，有机相减压浓缩，得到化合物3-12。MS m/z＝888.5[M+H]+。
步骤11：中间体3-13的盐酸盐合成
向化合物3-12(45mg,50.67μmol)的二氯甲烷(1mL)溶液中加入盐酸-乙酸乙酯(4M,126.67μL)，得到的混合物室温搅拌2小时，反应液直接减压浓缩得化合物3-13的盐酸盐。MS m/z＝744.4[M+H]+。
步骤12：中间体3-14的合成
向化合物3-13的盐酸盐(0.5g,612.06μmol)的MeOH(10mL)溶液中加入NaHCO3(2M,1.53mL)和Boc2O(267.16mg,1.22mmol,281.22μL)，体系室温搅拌2小时。反应液减压浓缩除去甲醇，向残余物中加入10mL乙酸乙酯和5mL饱和食盐水搅拌5分钟，除去水相，有机相减压浓缩，得化合物3-14，MS m/z＝844.4[M+H]+。
步骤13：中间体3-15的合成
向化合物3-14(1.2g,1.42mmol)的DCM(5mL)溶液中加入Et3N(287.70mg,2.84mmol,395.74μL)和Tf2O(601.64mg,2.13mmol,351.83μL)，体系室温搅拌2小时。向反应液中加入10mL水和10mL二氯甲烷搅拌10分钟，除去水相，有机相减压浓缩。残余物经过柱机纯化(石油醚：乙酸乙酯＝1：1)得化合物3-15，MS m/z＝976.2[M+H]+。
步骤14：中间体3-16的合成
将化合物3-15(200mg,204.88μmol)，化合物3-15A(74.26mg,409.76μmol,68.76μL)，碳酸铯(200.26mg,614.64μmol)，Xantphos(23.71mg,40.98μmol)加入无水甲苯(5mL)中，氮气置换3次，加入三(二亚苄基丙酮)二钯(18.76mg,20.49μmol)，氮气保护下100℃反应3小时。反应液降至室温，硅藻土过滤，30mL乙酸乙酯淋洗，母液通过减压浓缩得到化合物3-16。
步骤15：中间体3-17的盐酸盐合成
将化合物3-16(180mg,178.69μmol)加入到4M盐酸甲醇溶液(5mL)中，室温反应1小时。直接将反应液浓缩，得到粗品化合物3-17盐酸盐。MS m/z＝743.3[M+H]+。
步骤16：化合物3的盐酸盐合成
将化合物3-17的盐酸盐(180.00mg)，氟化铯(73.60mg,484.51μmol)，无水碳酸钾(267.86mg,1.94mmol)加入N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中，60℃反应16小时。向反应液中加入10mL的水，利用10mL*2的乙酸乙酯萃取，合并有机相，用饱和食盐水(10mL*3)洗涤，无水硫酸钠干燥过滤后浓缩。用经高效液相色谱分离(色谱柱:Phenomenex luna C18 80*40mm*3μm；流动相:[水(0.05％盐酸)-乙腈]；(乙腈)％:1％-20％,7min)，得到化合物3的盐酸盐，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝7.75-7.63(m,1H),7.42-7.24(m,2H),6.91-6.81(m,1H),6.57-6.41(m,1H),5.58-5.45(m,2H),5.36-5.14(m,1H),5.06-4.90(m,1H),4.84-4.58(m,2H),3.97-3.78(m,3H),3.66-3.38(m,2H),3.10-2.89(m,4H),2.85-2.64(m,1H),2.15-1.89(m,6H),1.87-1.56(m,9H)。MS m/z＝587.3[M+H]+。
实施例4

步骤1：中间体1-13B的合成
将化合物1-12(4.16g,26.15mmol)溶于无水四氢呋喃(150mL)中，氮气保护，降温至20℃，加入叔丁醇钠(2.85g,29.64mmol)搅拌0.5小时，将化合物1-2A(15g,17.43mmol)的THF(15mL)溶液滴加到反应液中，在此温度下搅拌0.5小时，反应液倒入饱和氯化铵水溶液(200mL)中，加入乙酸乙酯(100mL x 3)萃取，合并有机相浓缩得到粗品。通过高效液相色谱分离，(色谱柱:Phenomenex luna C18(250*70mm,15μm)；流动相:[水(0.05％盐酸)-乙腈]；乙腈％:40％-70％,20min)，得到粗品，再次分离，(色谱柱:Phenomenex luna c18 250mm*100mm*10μm；流动相:[水(0.025％三氟乙酸)-乙腈]；乙腈％:40％-70％,20min)，得到产品，经过超临界液相色谱(SFC)分离纯化(色谱柱:DAICEL CHIRALPAK IE(250mm*30mm,10μm)；流动相:A:超临界CO2，B:[乙腈/异丙醇＝1:1(0.1％氨水)]；B％:65％-65％,45min)，得到化合物1-13A和1-13B。SFC分析：(色谱柱:DAICEL CHIRALPAK IE(50mm*4.6mm,3μm)；流动相:A:超临界CO2，B:[乙腈/异丙醇＝1：1(0.1％二异丙胺)]；B％:50％-50％)化合物1-13A，保留时间time＝2.143；化合物1-13B保留时间time＝4.935。MS m/z＝955.5[M+H]+。
步骤2：中间体4-1的合成
将化合物1-13B(120mg,125.60μmol)，无水磷酸钾(53.32mg,251.19μmol)，乙烯三氟硼酸钾(25.24mg,188.39μmol)溶于1,4-二氧六环(1mL)，水(0.2mL)中，氮气置换三次，加入氯[(正丁基二(1-金刚烷基)膦)-2-(2-氨基联苯)]钯(II)(8.40mg,12.56μmol)在80℃下反应3小时。倒入水溶液(5mL)中，乙酸乙酯(10mL x 2)萃取，分液，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到化合物4-1。MS m/z＝947.4[M+H]+。
步骤3：化合物4的盐酸盐合成
将化合物4-1(100mg,105.59μmol)溶于无水二氯甲烷(2mL)中，加入三氟乙酸(770.00mg,6.75mmol)，在20℃下反应3小时。反应液浓缩得到粗品。通过高效液相色谱分离(色谱柱:Phenomenex Luna80*30mm*3μm；流动相:[水(0.05％盐酸)-乙腈]；乙腈％:1％-30％,8min)。得到化合物4的盐酸盐。MS m/z＝607.4[M+H]+。
实施例5
步骤1：中间体5-1的合成
将化合物1-13B(100mg,104.66μmol)，磷酸钾(55.54mg,261.66μmol)，环丙基硼酸(89.90mg,1.05mmol)加入1,4-二氧六环(2.5mL)、水(0.5mL)中，氮气置换3次，加入氯化(2-二环己基膦-2′,6′-二甲氧基-1,1′-联苯基)[2-(2′-氨基-1,1′-联苯基)]钯II)(7.54mg,10.47μmol)，氮气保护下100℃反应3小时。反应液降至室温减压浓缩得到粗品化合物5-1，MS m/z＝961.5[M+H]+。
步骤2：化合物5的盐酸盐合成
向化合物5-1(150mg,156.08μmol)中加入三氟乙酸(1.60g,14.05mmol)，无水二氯甲烷(5mL)中，0℃反应16小时。将反应液倒入10mL水中，将有机相分出，水相利用乙酸乙酯(5mL*2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩。通过高效液相色谱分离纯化(色谱柱:Phenomenex Luna 80*30mm*3μm；流动相:[水(0.05％盐酸)-乙腈]；乙腈％:1％-30％,8min)得到化合物5的盐酸盐。MS m/z＝621.3[M+H]+。
实施例6
步骤1：中间体6-1的合成
将化合物1-13B(120mg,125.60μmol)，双(乙腈)氯化钯(II)(3.26mg,12.56μmol)，碳酸铯(122.76mg,376.79μmol)，2-二环己基膦-2',4',6'-三异丙基联苯(11.97mg,25.12μmol)溶于乙腈(1.5mL)中，氮气置换三次，室温搅拌0.5小时，再将三甲基硅基乙炔(49.34mg,502.38μmol)加入到反应液中，80℃反应10小时。反应液直接浓缩得到化合物6-1。MS m/z＝1017.5[M+H]+。
步骤2：化合物6的合成
将化合物6-1(100mg,98.31μmol)溶于无水二氯甲烷(4mL)中，加入三氟乙酸(1.54g,13.51mmol)，在20℃下反应3小时。倒入饱和碳酸氢钠水溶液(5mL)中，分液，水相用二氯甲烷(5mL x 3)萃取，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩得到粗品。经高效液相制备色谱分离、纯化(色谱柱:Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10μm；流动相:[水(10mM NH4HCO3)-乙腈]；乙腈％:30％-50％,8min)，得到化合物6。MS m/z＝605.4[M+H]+。
实施例7
步骤1：中间体7-1的合成
将化合物1-13B(200mg,209.33μmol)溶于无水甲苯(2.5mL)中，氮气鼓泡10min，氮气保护下加入二氯双[二叔丁基-(4-二甲基氨基苯基)膦]钯(II)(44.47mg,62.80μmol)和1-丙炔基三-正-丁基锡(275.56mg,837.30μmol)，110℃反应3小时。将反应液倒入5mL水中，用乙酸乙酯(3mL x 2)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(3mL x 2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，得到化合物7-1，MS m/z＝959.3[M+H]+。
步骤2：化合物7的盐酸盐合成
将化合物7-1(450mg,469.21μmol)溶入二氯甲烷(2.5mL)，加入三氟乙酸(802.50mg,7.04mmol)，25℃反应4小时，反应液直接浓缩。经高效液相色谱纯化(色谱柱:Phenomenex luna C18 250*50mm*10μm；流动相:[水(0.05％盐酸)-乙腈]；乙腈％:5％-35％,10min)得到化合物7的盐酸盐，MS m/z＝619.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.00-6.92(m,1H),5.74-5.50(m,1H),5.31-5.17(m,1H),5.03-4.92(m,2H),4.79-4.72(m,2H),4.31-4.16(m,2H),4.09-3.92(m,4H),3.90-3.83(m,1H),3.64-3.54(m,1H),3.54-3.36(m,3H),3.11-3.01(m,1H),2.84-2.61(m,2H),2.57-2.47(m,1H),2.44-2.33(m,1H),2.36(br d,J＝8.5Hz,6H),2.06-2.02(m,3H)。
实施例8
步骤1：中间体8-1A的合成
将化合物8-1进行制备超临界液相色谱(SFC)(色谱柱:ChiralPak IH,250*50mm,10μm；流动相:A:超临界CO2，B：[0.1％氨水-乙醇]；B％:20％-20％,运行时间3.7min，出峰时间：1.266min和1.521min)，收集出峰时间为1.521min的样品得到化合物8-1A，SFC分析方法(色谱柱：Chiralpak IH-3,100×4.6mm I.D.,3μm；流动相：A(超临界CO2)和B(乙醇，含0.1％异丙胺)；梯度：B％＝10～50％，4min；流速:3.4mL/min；波长:220nm；压力:2000psi)，化合物8-1A，Rt＝1.489min，ee值98.82％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝4.99-4.86(m,2H),4.26-3.95(m,3H),3.59(m,1H),3.00-2.88(m,1H),2.87-2.12(m,4H),1.91(s,1H),1.20-1.08(m,3H)。
步骤2：中间体8-2的合成
将四氢铝锂(1.55g,40.15mmol)溶于无水四氢呋喃(30mL)中，降温至0℃，氮气保护下加入化合物8-1A(2.8g,13.38mmol)的无水四氢呋喃(20mL)溶液，70℃反应1小时。0℃条件下向反应液中加入1.5mL水，加入1.5mL 15％NaOH溶液，再加入4.5mL水，搅拌20分钟，反应液过滤，滤饼用10mL四氢呋喃洗涤，滤液浓缩，得到化合物8-2。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝4.99-4.86(m,2H),4.26-3.95(m,3H),3.59(m,1H),3.00-2.88(m,1H),2.74-2.27(m,4H),1.91(s,1H),1.20-1.08(m,3H)。
步骤3：中间体1-11B的合成
将化合物1-11进行超临界液相色谱分析(色谱柱:(S,S)Whelk-01 100×4.6mm I.D.,5.0μm；流动相:A:超临界CO2，B:[0.1％乙醇胺-异丙醇]；B％:50％,流速：2.5mL/min，保留时间为2.705min和3.357min)，收集保留时间为3.357min的样品得到化合物1-11B，制备SFC(手性柱：REGIS(s,s)WHELK-O1(250mm*50mm,10um)；流动相:A:超临界CO2，B:[75％异丙醇-25％乙腈]；B％:50％-50％)。手性SFC分析(色谱柱:(S,S)Whelk-O1 100×4.6mm I.D.,5.0μm；流动相:A:超临界CO2，B:[75％异丙醇/25％乙腈/0.05％二乙胺]；B％:50％-50％,流速：2.5mL/min)，化合物1-11A,保留时间为2.536min,ee值99％；化合物1-11B,保留时间为3.317min，ee值99％，MS m/z＝844.5[M+H]+。
步骤4：中间体1-12B的合成
将化合物1-11B(1g,1.18mmol)加入到20mL二氯甲烷中，加入间氯过氧苯甲酸(240.44mg,1.18mmol,85％纯度)，室温反应1小时。向反应液加入5mL 5％硫代硫酸钠溶液，用二氯甲烷(10mL x 2)萃取，合并有机相，再用饱和食盐水(5mL x 2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，粗品经柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝10:1-1:1)，得化合物1-12B，MS m/z＝860.4[M+H]+。
步骤5：中间体8-3的合成
将化合物8-2(103.29mg,674.14μmol)溶于无水四氢呋喃(3mL)，加入叔丁醇钠(64.78mg,674.14μmol)，降温至-15℃反应15分钟，加入化合物1-12B(0.29g,337.07μmol)，在-15℃-25℃条件下反应1小时。向反应液加入5mL饱和氯化铵，使用乙酸乙酯(5mL x 2)萃取，饱和食盐水(5mL x 2)洗涤，无水硫酸钠干燥后浓缩，粗品经过柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝0：1)，得到化合物8-3，MS m/z＝949.2[M+H]+。
步骤6：中间体8-4的合成
将化合物8-3(0.24g,252.77μmol)溶于无水甲苯(2.5mL)中，氮气鼓泡10分钟，氮气保护下加入二氯双[二叔丁基-(4-二甲基氨基苯基)膦]钯(53.69mg,75.83μmol,53.69μL)和三丁基(1-丙炔基)锡(332.76mg,1.01mmol)，110℃反应2小时。反应液倒入5mL水中，使用乙酸乙酯(3mL x 2)萃取，合并有机相，利用饱和食盐水(3mL x 2)洗涤，无水硫酸钠干燥后浓缩，得粗品化合物8-4。MS m/z＝953.4[M+H]+。
步骤7：化合物8的盐酸盐合成
将化合物8-4(100mg,104.92μmol)溶解在三氟乙酸(3mL)中，25℃反应0.5小时，反应完成后，直接浓缩，经高效液相色谱分离(色谱柱:Xtimate C18 150*40mm*5μm；流动相:[water(0.05％HCl)-乙腈]；乙腈％:5％-35％,10min)，得到化合物8的盐酸盐，MS m/z＝613.3[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 6.99 -6.93(m,1H),5.36(br d,J＝6.75Hz,2H),5.24(br dd,J＝10.94,4.31Hz,1H),5.01-4.92(m,2H),4.78-4.73(m,2H),4.36(br d,J＝14.13Hz,1H),4.29-4.18(m,2H),4.08-4.0(m,1H),3.95(br d,J＝14.38Hz,2H),3.85-3.77(m,1H),3.56(br d,J＝14.63Hz,1H),3.45-3.37(m,1H),3.30-3.23(m,1H),3.15-3.01(m,2H),2.85(br d,J＝15.63Hz,1H),2.45(br dd,J＝12.01,6.50Hz,1H),2.31-2.03(m,11H)。
实施例9
步骤1：中间体9-2的合成
称取化合物9-1(1.2g,6.62mmol)，加入THF(50mL)，降温至-20℃加入LiAlH4(1M,6.62mL)，加毕-20℃反应0.5小时，加水淬灭，直接浓缩，柱层析纯化(二氯甲烷：甲醇＝10：1)，得化合物9-2，MS m/z＝154.1[M+H]+。
步骤2：中间体9-3的合成
化合物9-2(73.43mg,479.26μmol)溶于无水四氢呋喃(2mL)，加入叔丁醇钠(46.06mg,479.26μmol)，降温至-15℃反应15分钟，加入化合物1-12B(200mg,228.22μmol)，在-15℃-25℃条件下反应1小时，向反应液加入5mL饱和氯化铵，使用乙酸乙酯(5mL x 2)萃取，饱和食盐水(5mL x 2)洗涤，无水硫酸钠干燥后浓缩，经过柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝0:1)得到化合物9-3。MS m/z＝949.4[M+H]+。
步骤3：化合物9的盐酸盐合成
将化合物9-3(0.12g,126.39μmol)溶于无水二氯甲烷(1mL)，降温至0℃，加入三氟乙酸(302.62mg,2.65mmol,196.51μL)，25℃反应2小时。将反应液直接浓缩。进行高效液相色谱制备(色谱柱:Phenomenex Luna 80*30mm*3μm；流动相:[水(0.05％盐酸)-乙腈]；乙腈％:5％-40％,运行时间8min)纯化后得到化合物9的盐酸盐。MS m/z＝609.1[M+H]+，1H NMR(400MHz,CD3OD)δ＝6.90(s,1H),6.13-5.78(m,2H),5.31-5.21(m,1H),4.98-4.89(m,3H),4.28-4.14(m,2H),4.07-3.68(m,6H),3.54-3.33(m,4H),3.11-2.99(m,1H),2.61-2.49(m,2H),2.37-1.94(m,8H)。
实施例10
步骤1：中间体10-2的合成
将化合物10-1(1.0g,5.22mmol)溶解于DMF(15mL)中，然后加入K2CO3(3.61g,26.09mmol)，搅拌30分钟后，再加入烯丙基溴(757.46mg,6.26mmol)，室温反应5小时。将反应液用80mL乙酸乙酯稀释，然后垫硅藻土过滤，滤液减压浓缩除去溶剂得到粗品。粗品经柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝10:1)，得化合物10-2。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ＝6.07-5.92(m,1H),5.88-5.73(m,1H),5.27-5.18(m,1H),5.16-5.08(m,2H),5.04-4.96(m,1H),3.72-3.61(m,3H),3.30-3.18(m,1H),3.10-2.93(m,2H),2.75-2.63(m,1H),2.34-2.17(m,1H),1.91-1.72(m,3H)。
步骤2：中间体10-3的合成
将化合物10-2(325mg,1.66mmol)溶解于甲苯(36mL)中，然后加入Grubbs二代催化剂(70.65mg,83.22μmol)，在氮气保护下升温至120℃搅拌反应20小时。将反应液浓缩得到粗品，经柱层析分离(二氯甲烷：甲醇＝20：1)，得化合物10-3。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ＝5.94-5.77(m,2H),4.12-4.00(m,1H),3.83-3.72(m,3H),3.49-3.41(m,1H),3.39-3.30(m,1H),2.74-2.59(m,1H),2.43-2.27(m,1H),1.93-1.82(m,3H)。
步骤3：中间体10-4的合成
将化合物10-3(130mg,777.49μmol)溶解于THF(3mL)中，氮气保护下冷却到0℃，然后向其中滴加四氢铝锂(1M,777.49μL)，0℃搅拌反应0.5小时。将反应液用200μL水淬灭，然后加入20mL乙酸乙酯搅拌2分钟，加入2g无水硫酸钠干燥，垫硅藻土过滤，滤液减压浓缩除去溶剂，得到化合物10-4。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ＝5.74-5.63(m,1H),5.59-5.47(m,1H),3.92-3.70(m,1H),3.44-3.23(m,3H),3.14-2.99(m,1H),2.62-2.47(m,1H),1.76-1.51(m,5H)。
步骤4：中间体10-5的合成
将化合物10-4(43.68mg,313.82μmol)溶于无水四氢呋喃(2mL)，加入叔丁醇钠(26.14mg,271.98μmol)，降温至-15℃反应15分钟，加入化合物1-12B(180mg,209.22μmol)，在-15℃-25℃条件下反应1小时，反应液加入5mL饱和氯化铵，利用乙酸乙酯(5mL x 2)萃取，饱和食盐水(5mL x 2)洗涤，无水硫酸钠干燥后浓缩,粗品经柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝1:0-0:1)，得化合物10-5。MS m/z＝935.2[M+H]+。
步骤5：中间体10-6的合成
将化合物10-5(130.00mg,138.97μmol)溶于无水甲苯(1.5mL)中，氮气鼓泡10分钟，氮气保护下加入二氯双[二叔丁基-(4-二甲基氨基苯基)膦]钯(29.52mg,41.69μmol,29.52μL)和三丁基(1-丙炔基)锡(182.95mg,555.89μmol)，110℃反应2小时，反应液倒入5mL水中，用乙酸乙酯(3mL x 2)萃取，合并有机相，利用饱和食盐水(3mL x 2)洗涤，无水硫酸钠干燥后浓缩，粗品经过柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝0:1)，然后经高效液相色谱制备法(色谱柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3μm；流动相A：水(0.05％盐酸)；流动相B：乙腈；运行梯度：乙腈％：35％-70％；运行时间：8min)进一步纯化，得到化合物10-6。MS m/z＝939.3[M+H]+。
步骤6：化合物10的盐酸盐合成
将化合物10-6(30mg,31.95μmol)溶于无水二氯甲烷(0.5mL)，0℃加入三氟乙酸(1.16g,10.16mmol,752.18μL)，0-25℃反应3h。将反应液直接浓缩。进行高效液相色谱制备法纯化(色谱柱：Phenomenex Luna80*30mm*3μm；流动相A：水(0.05％盐酸)；流动相B：乙腈；运行梯度：乙腈％：5％-35％；运行时间：8min)。冻干后得到化合物10的盐酸盐。MS m/z＝599.1[M+H]+。
实施例11

步骤1：中间体11-2的合成
将化合物11-1(20g,56.53mmol)溶入盐酸/乙酸乙酯(4M,120mL)。25℃下反应2小时。反应液直接浓缩得到11-2的盐酸盐粗品。粗品直接用于下一步。
步骤2：中间体11-3的合成
将11-2的盐酸盐粗品(20g)溶入DMF(65mL)，加入碳酸钾(14.2g,102mmol)。25℃下反应12小时。反应液用500mL乙酸乙酯稀释，水(300mL x 2)洗，300mL饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩得到粗品。粗品经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝2:1)纯化得到化合物11-3。
步骤3：中间体11-4的合成
将化合物11-3(7g,32.23mmol)溶入2-甲基四氢呋喃(75mL)，氮气置换3次后，氮气保护下在10℃缓慢加入红铝甲苯溶液(37.2g,129mmol,35.8mL,70％纯度)。25℃下反应12小时。将反应液逐滴加入到26.0％的酒石酸钠水溶液中淬灭，使用2-甲基四氢呋喃(200mL)萃取，水相用2-甲基四氢呋喃(50mL x 3)萃取。合并的有机相使用50mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩得到化合物11-4。
步骤4：中间体11-5的甲酸盐的合成
将化合物11-4(2.3g,13.4mmol)溶入DCM(30mL)，加入咪唑(3.66g,53.7mmol),DMAP(164mg,1.34mmol)和TBDPSCl(7.38g,26.9mmol,6.90mL)。45℃下反应12小时。向反应液加入水(50mL)，分离有机相，水相用二氯甲烷(50mL)萃取。合并有机相，用50mL饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩。向其中加入甲基叔丁基醚(10mL),正庚烷(21mL)和HCl(2M,21mL)，分离出水相，用甲基叔丁基醚:正庚烷＝1:2的混合溶剂(20mL*3)洗，再用碳酸钠水溶液调至pH＝7，先使用270mL乙酸乙酯萃取，后使用40mL乙酸乙酯萃取。合并有机相，用20mL饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩得到粗品。粗品经柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝10:1)分离，分出第一个点(Rf＝0.6)得到粗品中间体11-5，再高效液相色谱分离：(色谱柱:Phenomenex luna C18 250*80mm*10μm；流动相:[水(0.225％甲酸)-乙腈]；乙腈％:32％-62％,12min)，得到化合物11-5的甲酸盐。MS m/z＝410.3[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 7.62-7.53(m,4H),7.37-7.27(m,6H),6.47-6.17(m,1H),3.66(br d,J＝14.92Hz,1H),3.38-3.30(m,2H),3.25(br d,J＝14.79Hz,1H),3.03-2.94(m,1H),2.56-2.43(m,2H),2.12(br d,J＝15.41Hz,1H),1.92(ddd,J＝12.20,7.92,3.97Hz,1H),0.99(s,9H)1.82-1.51(m,3H)。19F NMR(377MHz,CDCl3)δppm-131.66。
步骤5：中间体11-5A的合成
将化合物11-5(3.3g,7.57mmol)用制备手性SFC拆分分离(色谱柱:DAICEL CHIRALPAK IC(250mm*30mm,10μm)；流动相:A:超临界CO2，B:[0.1％NH3H2O甲醇]；B％:25％-25％,4.5min，出峰时间： 2.117min和2.980min)，收集出峰时间为2.117min的样品得到化合物11-5A。化合物11-5A SFC分析方法(色谱柱：Chiralpak IC-3 50×4.6mm I.D.,3μm；流动相：A(超临界CO2)和B(MeOH，含0.05％二乙胺)；梯度：B％＝5～10％，流速:3mL/min)，Rt＝2.014min，ee值98.5％。MS m/z＝410.3[M+H]+。
步骤6：中间体11-6的盐酸盐合成
将化合物11-5A(1.2g,2.93mmol)溶于24mL 1,4-二氧六环，加入浓盐酸(12M,7.20mL)。95℃下反应12小时。反应液冷却后，用10mL水稀释，10mL乙酸乙酯洗涤，水相冻干即得化合物11-6的盐酸盐。1H NMR(400MHz,D2O)δppm 6.90-6.53(m,1H),4.22(br d,J＝15.04Hz,1H),3.97(br d,J＝15.04Hz,1H),3.79-3.69(m,1H),3.67-3.55(m,2H),3.24-3.14(m,1H),2.76-2.67(m,1H),2.64-2.54(m,1H),2.19-1.94(m,4H)。19F NMR(376MHz,CDCl3)δppm-126.73。
步骤7：中间体11-7的合成
将化合物1-12B(300mg,349μmol)溶于无水甲苯(10.0mL)，加入叔丁醇钠(134mg,1.39mmol,4eq),4A分子筛(500mg)和化合物11-6的盐酸盐(109mg,523μmol)。在110℃反应12小时。向反应液倒入30mL的饱和氯化铵水溶液淬灭反应，用乙酸乙酯(30mL)萃取。有机相用饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥后，过滤浓缩，即得粗品。粗品经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝1:1)纯化得到化合物11-7。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 7.14(d,J＝8.56Hz,4H),6.87(d,J＝8.68Hz,5H),6.64-6.36(m,1H),5.28-5.18(m,1H),4.79-4.68(m,2H),4.44-4.24(m,6H),4.10-3.97(m,2H),3.94-3.74(m,8H),3.51-2.94(m,7H),2.77-2.55(m,2H),2.32(br d,J＝15.16Hz,1H),2.22-2.11(m,1H),1.95-1.58(m,7H),1.51(s,9H)。19F NMR(376MHz,CDCl3)δppm-119.86,-50.65。
步骤8：中间体11-8的合成
将化合物11-7(222mg,229μmol)溶于无水甲苯(10.0mL)，加入1-丙炔基三正丁基锡(755mg,2.29mmol)和二氯双[二叔丁基-(4-二甲基氨基苯基)膦]钯(II)(162mg,229μmol,162μL)。氮气置换3次后，在氮气保护下110℃反应12小时。反应液冷却浓缩即得粗品，粗品经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝1:1)纯化得到化合物11-8。MS m/z＝971.3[M+H]+。
步骤9：化合物11的甲酸盐合成
将化合物11-8(149mg,129μmol,84％纯度)溶入二氯甲烷(10mL)，加入三氟乙酸(770mg,6.75mmol,0.5mL)，25℃下反应12小时。反应液用10mL水和20mL乙酸乙酯稀释，分离，将有机相用1N稀盐酸洗(5mL x 2)。所有水相合并后用饱和NaHCO3水溶液调至pH＝8，然后浓缩。得到的固体加入20mL乙腈搅拌，过滤，滤液浓缩得到粗品。粗品进行高效液相色谱分离(色谱柱:Phenomenex luna C18 150*25mm*10μm；流动相:[水(0.225％甲酸)-乙腈]；乙腈％:9％-39％,10min)。冻干后得到化合物11的甲酸盐。MS m/z＝631.3[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 6.93(d,J＝8.44Hz,1H),6.90-6.65(m,1H),5.19(br dd,J＝11.13,3.79Hz,1H),4.77-4.69(m,2H),4.41-4.31(m,2H),4.26(br d,J＝13.57Hz,1H),4.19-4.04(m,3H),3.86-3.73(m,2H),3.68-3.61(m,1H),3.52-3.44(m,1H),3.37(s,3H),3.32-3.24(m,2H),3.06-2.81(m,3H),2.62(br d,J＝16.14Hz,1H),2.31-2.05(m,6H),2.02-1.91(m,2H)。
实施例12
步骤1：中间体12-2的合成
将化合物12-1(20.0g,73.7mmol)和双-(4-甲氧基苄基)-胺(37.9g,147mmol)加入到N-甲基吡咯烷酮(600mL)中，油浴加热140℃反应12小时。将反应液用250mL水稀释，然后用乙酸乙酯(200mL×3)和饱和食盐水200mL洗涤，有机相干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品。粗品过柱纯化(石油醚:乙酸乙酯＝20:1)得到化合物12-2。
步骤2：中间体12-3的合成
将化合物12-2(22.0g,49.1mmol)溶解于无水四氢呋喃(220mL)中，氮气保护下冷却到-78℃，然后向其中滴加正丁基锂(2.5M,21.6mL)，滴毕，搅拌反应1小时，然后向其中滴加N,N-二甲基甲酰胺(71.8g,982mmol,75.6mL)，滴毕搅拌反应1小时。向其中加入100mL水淬灭反应，然后用乙酸乙酯(100mL×3)萃取，合并有机相，减压浓缩得到粗品。粗品过柱纯化(石油醚:乙酸乙酯＝20:1)得到化合物12-3。MS m/z＝397.1[M+H]+。
步骤3：中间体12-4的合成
将化合物12-3(15.0g,37.8mmol)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(170mL)中，然后加入N-溴代丁二酰亚胺(7.06g,39.6mmol)，所得反应液氮气保护下，室温25℃搅拌反应1小时。向其中加入300mL水淬灭 反应，然后用乙酸乙酯(200mL×3)萃取，合并有机相，减压浓缩得到粗品。粗品过柱纯化(石油醚:乙酸乙酯＝10:1)得到化合物12-4。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 10.10(s,1H),7.16(d,J＝8.63Hz,4H),6.89-6.85(m,4H),6.76(s,1H),4.73(s,4H),3.81(s,6H)。
步骤4：中间体12-5的合成
将化合物12-4(14.2g,29.8mmol)和氟磺酰基二氟乙酸甲酯(28.6g,149mmol,18.9mL)加入到N,N-二甲基甲酰胺(160mL)中，然后加入碘化亚铜(5.68g,29.8mmol)，所得反应液氮气置换后于100℃搅拌反应2.5小时。向其中加入100mL水淬灭反应，然后用乙酸乙酯(300mL×3)萃取，合并有机相，减压浓缩得到粗品。粗品过柱纯化(石油醚:乙酸乙酯＝20:1)得到化合物12-5。MS m/z＝465.0[M+H]+。
步骤5：中间体12-6的合成
将化合物四甲基哌啶(1.45g,10.2mmol)溶解于无水四氢呋喃(100mL)中，氮气保护下冷却到-40℃，然后向其中滴加正丁基锂(2.5M,32.8mL)，滴毕，搅拌反应0.5小时，然后将化合物3-8(7.80g,20.5mmol)溶解于无水四氢呋喃(50mL)中，在-60℃下逐滴加入到反应瓶中，滴毕搅拌反应0.3小时，将化合物12-5(10.4g,22.5mmol)在-60℃下加入到反应中，滴毕搅拌反应0.5小时。向其中加入300mL水淬灭反应，然后用乙酸乙酯(400mL×3)萃取，合并有机相，减压浓缩得到粗品。粗品过柱纯化(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)得到化合物12-6。MS m/z＝845.2[M+H]+。
步骤6：中间体12-7的合成
将化合物12-6(6.1g,7.22mmol)溶解于无水甲苯(60mL)中，氮气保护下向其中加入氰基亚甲基三正丁基膦(5.22g,21.6mmol)，加毕，在100℃下搅拌反应12小时。减压浓缩得到粗品。粗品过柱纯化(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)得到化合物12-7。MS m/z＝827.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 7.09(br d,J＝8.50Hz,4H),6.84(br d,J＝8.50Hz,4H),6.53(s,1H),5.20(br dd,J＝10.01,3.00Hz,1H),4.81-4.54(m,7H),4.37-4.25(m,2H),3.80(s,7H),3.67-3.55(m,1H),3.50-3.37(m,2H),3.14-2.92(m,2H),2.49(s,3H),1.94(br s,3H),1.50(s,9H)。
步骤7：中间体12-8的合成
将化合物12-7(600mg,725μmol)溶解于无水二氯甲烷(6mL)中，氮气保护下向其中加入间氯过氧苯甲酸(176mg,870μmol,85％纯度)，加毕，在25℃下搅拌反应1小时。向反应液中加水(10mL)淬灭，然后用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，合并有机相，减压浓缩得到粗品。粗品过柱纯化(石油醚:乙酸乙酯＝2:1)得到化合物12-8。
步骤8：中间体12-9A和12-9B的合成
将化合物12-8(600mg,698μmol)溶解于无水甲苯(5mL)中，氮气保护下向其中加入叔丁醇钠(201mg,2.09mmol)和化合物8-2(128mg,837μmol)，加毕，在80℃下搅拌反应12小时。向反应液中加水(10mL)淬灭，然后用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，合并有机相，减压浓缩得到粗品。粗品过柱纯化(石油醚:乙酸乙酯＝2:1)得到化合物12-9。将化合物12-9进行制备SFC手性拆分(手性柱:DAICEL CHIRALCEL OD(250mm*30mm,10μm)；流动相:[超临界CO2-甲醇(0.1％氨水)]；甲醇(0.1％氨水)％:40％-40％)，得到化合物12-9A和12-9B。SFC分析：(手性柱:DAICEL CHIRALCEL OD-3(50mm*4.6mm,3μm)；流动相:[超临界CO2-甲醇(0.05％二乙胺)]；甲醇％:5％-40％)，化合物12-9A，Rt＝2.091分钟，ee值99％；MS m/z＝932.4[M+H]+；化合物12-9B,Rt＝2.331分钟，MS m/z＝932.3[M+H]+。
步骤9：化合物12A的三氟乙酸盐和12B的三氟乙酸盐的合成
将化合物12-9A(40.0mg,42.9μmol)溶入三氟乙酸(1.54g,13.4mmol,1mL)，50℃下反应9小时。将反应液减压浓缩后，粗品进行高效液相色谱分离(柱子:Phenomenex luna C18 150*25mm*10μm；流动相:[水(0.075％三氟乙酸)-乙腈]；乙腈％:8％-38％,8min)。得化合物12A的三氟乙酸盐。MS m/z＝592.2[M+H]+。1H  NMR(400MHz,CD3OD)δppm 6.73(s,1H),5.34(br d,J＝8.00Hz,2H),5.27(dd,J＝10.13,3.25Hz,1H),4.98(br s,1H),4.74(d,J＝13.76Hz,1H),4.69-4.59(m,2H),4.46(br d,J＝14.26Hz,1H),4.37(br d,J＝14.26Hz,1H),4.19(br d,J＝13.13Hz,2H),3.99-3.92(m,2H),3.84-3.76(m,1H),3.73(br d,J＝13.38Hz,1H),3.57(dd,J＝18.26,10.01Hz,1H),3.42(br d,J＝14.01Hz,1H),3.26(dt,J＝11.48,7.08Hz,1H),3.07(br d,J＝16.01Hz,1H),2.93(dd,J＝18.32,3.19Hz,1H),2.82(br d,J＝16.13Hz,1H),2.39(dd,J＝11.88,6.50Hz,1H),2.31-2.10(m,6H),2.04-1.95(m,1H)。
将化合物12-9B(40.0mg,42.9μmol)溶入三氟乙酸(1.54g,13.4mmol,1mL)，50℃下反应9小时。将反应液减压浓缩后，粗品进行高效液相色谱分离(柱子:Phenomenex luna C18 150*25mm*10μm；流动相:[水(0.075％三氟乙酸)-乙腈]；乙腈％:8％-38％,8min)。得化合物12B的三氟乙酸盐。MS m/z＝592.3[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 6.71(s,1H),5.32(br d,J＝8.50Hz,2H),5.25(dd,J＝10.19,3.19Hz,1H),4.96(s,1H),4.73(d,J＝13.76Hz,1H),4.63(s,2H),4.46(br d,J＝14.13Hz,1H),4.36(br d,J＝14.38Hz,1H),4.17(br d,J＝13.01Hz,2H),4.00-3.89(m,2H),3.83-3.69(m,2H),3.55(dd,J＝18.20,10.07Hz,1H),3.41(br d,J＝14.13Hz,1H),3.24(dt,J＝11.54,7.11Hz,1H),3.05(br d,J＝16.01Hz,1H),2.91(dd,J＝18.20,3.31Hz,1H),2.80(br d,J＝16.26Hz,1H),2.43-2.33(m,1H),2.28-2.08(m,6H),2.03-1.93(m,1H)。
实施例13
步骤1：中间体13-1A和13-1B的合成
将化合物12-9A(250mg,268μmol)溶于无水甲苯(1mL)，加入1-丙炔基三正丁基锡(264mg,804μmol)和二氯双[二叔丁基-(4-二甲基氨基苯基)膦]钯(II)(37.9mg,53.6μmol)。氮气置换3次后，氮气保护下100℃反应12小时后，反应液冷却浓缩即得粗品。粗品经薄层制备板(二氯甲烷:甲醇＝15:1)分离得化合物13-1A。
参考步骤1，使用12-9B为原料，得到化合物13-1B。
步骤2：化合物13A的三氟乙酸盐和13B的三氟乙酸盐的合成
将化合物13-1A(120mg,128μmol)溶入三氟乙酸(1.54g,13.4mmol,1mL)，50℃下反应9小时。将反应液减压浓缩后，粗品进行高效液相色谱分离(柱子:Phenomenex luna C18 150*25mm*10μm；流动相:[水 (0.075％三氟乙酸)-乙腈]；乙腈％:10％-40％,9min)。得化合物13A的三氟乙酸盐。MS m/z＝596.3[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 6.80(s,1H),5.43-5.26(m,3H),5.00(br d,J＝13.88Hz,2H),4.81(d,J＝13.63Hz,1H),4.60(d,J＝2.50Hz,2H),4.45-4.30(m,2H),4.24-4.13(m,2H),3.99-3.84(m,2H),3.83-3.64(m,2H),3.40-3.34(m,2H),3.28-3.21(m,1H),3.06(br d,J＝16.26Hz,1H),2.95(dd,J＝18.07,3.56Hz,1H),2.81(br d,J＝16.01Hz,1H),2.38(br dd,J＝11.63,6.38Hz,1H),2.29-2.12(m,8H),1.99(br t,J＝9.44Hz,1H)。
将化合物13-1B(120mg,128μmol)溶入三氟乙酸(1.54g,13.4mmol,1mL)，50℃下反应9小时。将反应液减压浓缩后，粗品进行高效液相色谱分离(柱子:Phenomenex luna C18 150*25mm*10μm；流动相:[水(0.075％三氟乙酸)-乙腈]；乙腈％:8％-38％,8min)。得化合物13B的三氟乙酸盐。MS m/z＝596.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 6.80(s,1H),5.31(br d,J＝8.88Hz,3H),4.99(br d,J＝13.76Hz,2H),4.80(d,J＝13.88Hz,1H),4.58(d,J＝2.38Hz,2H),4.43-4.31(m,2H),4.16(br d,J＝16.01Hz,2H),3.95-3.84(m,2H),3.79-3.67(m,2H),3.37(br d,J＝13.63Hz,2H),3.28-3.22(m,1H),3.07-2.91(m,2H),2.80(br d,J＝15.88Hz,1H),2.40-2.33(m,1H),2.23-2.10(m,8H),2.02-1.93(m,1H)。
实施例14
步骤1：中间体14-2的合成
将化合物14-1溶解于DMF(2.00mL)中，向反应液中加入叔丁醇钾(299mg,2.67mmol)，反应液升温至80℃反应12小时。水(10mL)加入反应液中，用二氯甲烷:甲醇＝5:1(10mL*3)萃取，有机相合并，用饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗品经过柱纯化(二氯甲烷:甲醇＝5:1)得到化合物14-2。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 5.03(s,1H)3.89(ddd,J＝15.04,5.07,2.14Hz,1H)3.38-3.44(m,1H)3.26-3.36(m,2H)3.13-3.22(m,1H)2.59-2.66(m,1H)1.61-1.90(m,5H)；19F NMR(376MHz,CDCl3)δppm-128.29(br s,1F)。
步骤2：中间体14-3的合成
将化合物1-12B(120mg,139μmol)，化合物14-2(43.9mg,279μmol)和叔丁醇钠(40.2mg,418μmol)加入甲苯(2.00mL)中，反应液升温至100℃反应5小时。将反应液减压浓缩。粗品经过柱纯化(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)到化合物14-3，MS m/z＝953.1[M+H]+。
步骤3：中间体14-4的合成
将化合物14-3(75.0mg,78.7μmol)，1-丙炔基三正丁基锡(104mg,315μmol)加入甲苯(2.00mL)，氮气置换三次后，向反应液中加入二氯双[二叔丁基-(4-二甲基氨基苯基)膦]钯(II)(16.7mg,23.6μmol)，再次置 换氮气三次，升温至110℃反应3小时。反应液使用硅藻土进行过滤，滤液减压浓缩得到粗品。粗品经过柱纯化(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)得到化合物14-4，MS m/z＝957.4[M+H]+。
步骤4：化合物14的合成
将化合物14-4(73.0mg,76.3μmol)溶解于二氯甲烷(1.00mL)，向反应液中加入TFA(0.10mL)，在25℃反应3小时。用饱和碳酸氢钠溶液将反应液pH调节至7，然后减压浓缩得到粗品。粗品进行高效液相色谱分离(柱子:Waters Xbridge 150*25mm*5μm；流动相:[水(0.05％氨水)-乙腈]；乙腈％:53％-83％,9min)纯化得到化合物14,MS m/z＝617.4[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 6.91-6.82(m,1H),5.49-5.38(m,1H),5.21-5.10(m,1H),4.75-4.69(m,2H),4.18-3.92(m,6H),3.65(br d,J＝1.96Hz,2H),3.44(br s,1H),3.37-3.25(m,3H),3.10-3.04(m,1H),3.00-2.91(m,1H),2.67-2.58(m,1H),2.19-2.08(m,1H),2.04(s,2H),2.03-1.97(m,1H),1.90-1.83(m,3H),1.78-1.72(m,3H),1.26(br s,1H),0.88-0.80(m,2H)。
实施例15
步骤1：中间体15-1的合成
将化合物10-1(3.00g,15.6mmol)溶于DMF(21mL)，加入碳酸钾(8.65g,62.6mmol)和化合物3-溴-2-甲基丙烯(2.54g,18.7mmol)，室温下反应12小时。向反应液中倒入100mL水，用乙酸乙酯(10mL)萃取3次。有机相用饱和食盐水(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥后，过滤，减压浓缩得粗品。粗品经柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝20:1)纯化得到化合物15-1。
步骤2：中间体15-2的合成
将化合物15-1(2.5g,11.9mmol)溶于无水THF(20.0mL)，在0℃下加入氢化铝锂(680mg,17.9mmol)，然后在室温下反应1小时。向反应液中加入1毫升水，1毫升15％NaOH水溶液，最后加入3毫升水，无水硫酸钠干燥后，过滤，减压浓缩，得到化合物15-2，MS m/z＝182.1[M+H]+。
步骤3：中间体15-3的合成
将化合物15-2(1.7g,9.38mmol)溶于无水DCM(20.0mL)，加入咪唑(2.55g,37.5mmol)，4-二甲氨基吡啶(114mg,937μmol),然后在0℃下加入叔丁基二苯基氯硅烷(5.16g,18.7mmol)。在室温下反应12小时。向反应液中加入50mL水，用DCM(100mL)萃取3次。有机相用饱和食盐水(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥后，过滤，减压浓缩得粗品。粗品经柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝15:1)纯化得到化合物15-3，MS m/z＝420.4[M+H]+。
步骤4：中间体15-4的合成
将化合物15-3(2g,4.77mmol)溶于无水甲苯(200mL)，加入Grubbs催化剂(597mg,953μmol)。在110℃下反应12小时。将反应液减压浓缩得到粗产品。粗品经薄板层析(二氯甲烷:甲醇＝20:1)纯化得到化合物15-4，MS m/z＝392.2[M+H]+。
步骤5：中间体15-5的盐酸盐合成
将化合物15-4(200mg,510μmol)溶于无水二氧六环(1.0mL)，加入HCl(12M,212μL)。在95℃下反应12小时。向反应液中加入10毫升水，萃取后将水相冻干，得到粗品可直接用于下一步反应。得到化合物15-5的盐酸盐，MS m/z＝154.1[M+H]+。
步骤6：中间体15-6的合成
将化合物1-12B(300mg,348μmol)溶于无水甲苯(2mL)，加入叔丁醇钠(100mg,1.05mmol)和化合物15-5的盐酸盐(64.1mg)。在室温下反应12小时，向反应液倒入30mL的饱和氯化铵水溶液，用乙酸乙酯(30mL)萃取。有机相用饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥后，过滤，减压浓缩得粗品。粗品经柱层析(二氯甲烷:甲醇＝10:1)纯化得到化合物15-6，MS m/z＝949.5[M+H]+。
步骤7：中间体15-7的合成
将化合物15-6(80mg,84.2μmol)溶于无水甲苯(2mL)，加入1-丙炔基三正丁基锡(83.1mg,252μmol)和二氯双[二叔丁基-(4-二甲基氨基苯基)膦]钯(II)(11.mg,16.8μmol)。氮气置换3次后，在氮气保护下110℃反应2小时。反应液冷却减压浓缩得粗品。粗品经薄板层析(二氯甲烷:甲醇＝10:1)纯化得到化合物15-7，MS m/z＝953.6[M+H]+。
步骤8：化合物15的三氟乙酸盐合成
将化合物15-7(40mg,41.9μmol)溶入二氯甲烷(1.0mL)，加入三氟乙酸(4.79mg,41.9μmol)，25℃下反应1小时。反应液减压浓缩得到粗品。粗品进行高效液相色谱分离(柱子:Phenomenex luna C18 150*25mm*10μm；流动相:[水(0.075％三氟乙酸)-乙腈]；乙腈％:15％-45％,9min)。冻干后得到化合物15的三氟乙酸盐。MS m/z＝613.5[M+H]+。1H NMR(CD3OD,400MHz)δ6.92(d,J＝8.5Hz,1H),5.48(br s,1H),5.20-5.10(m,1H),4.95-4.90(m,3H),4.80-4.70(m,1H),4.64(d,J＝12.3Hz,1H),4.55-4.51(m,2H),4.33(br d,J＝14.5Hz,1H),4.15(br dd,J＝2.1,16.1Hz,2H),3.92(br d,J＝15.4Hz,1H),3.82(br d,J＝13.1Hz,1H),3.81-3.70(m,1H),3.71-3.61(m,1H),2.92(br dd,J＝4.1,18.4Hz,1H),2.30-2.11(m,8H),2.01-1.91(m,4H),1.85(s,3H)。
实施例16

步骤1：中间体16-2的合成
将化合物16-1(500mg,2.56mmol)溶于无水甲苯(1mL)，加入Grubbs催化剂(217mg,256μmol)和化合物丙烯二氯甲烷溶液(0.5M,5.12mL)。在50℃下反应2小时。将反应液减压浓缩得到粗产品。粗品经柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝10:1)纯化得到化合物16-2，MS m/z＝210.0[M+H]+。
步骤2：中间体16-3的合成
将化合物16-2(210mg,1.00mmol)溶于无水THF(1.0mL)，在0℃下加入氢化铝锂(76.1mg,2.01mmol)，然后在70℃下反应12小时。向反应液中加入0.7毫升水，0.7毫升15％NaOH水溶液，最后加入2毫升水，无水硫酸钠干燥后，过滤，减压浓缩，得粗品直接用于下一步。得到化合物16-3。
步骤3：中间体16-4的合成
将化合物1-12B(300mg,348μmol)溶于无水THF(1mL)，加入叔丁醇钠(100mg,1.05mmol)和化合物16-3(58.3mg,348μmol)。在室温下反应12小时。向反应液倒入30mL的饱和氯化铵水溶液淬灭反应，用乙酸乙酯(30mL)萃取。有机相用饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥后，过滤，浓缩,得粗品。粗品经柱层析(二氯甲烷:甲醇＝10:1)纯化得到化合物16-4，MS m/z＝963.5[M+H]+。
步骤4：中间体16-5的合成
将化合物16-4(90.0mg,93.4μmol)溶于无水甲苯(1mL)，加入1-丙炔基三正丁基锡(122mg,373μmol)和二氯双[二叔丁基-(4-二甲基氨基苯基)膦]钯(II)(19.8mg,28.0μmol)。氮气置换3次后，在氮气保护下110℃反应12小时。反应液冷却，减压浓缩得粗品。粗品经薄板层析(二氯甲烷:甲醇＝12:1)纯化得到化合物16-5，MS m/z＝967.5[M+H]+。
步骤5：化合物16的三氟乙酸盐合成
将化合物16-5(70.00mg,72.3μmol)溶入二氯甲烷(1.0mL)，加入三氟乙酸(539mg,4.73mmol)，25℃下反应12小时。反应液减压浓缩得到粗品。粗品进行高效液相色谱分离(柱子:Phenomenex luna C18150*25mm*10μm；流动相:[水(0.075％三氟乙酸)-乙腈]；乙腈％:18％-48％,9min)。冻干后得到化合物16的三氟乙酸盐，MS m/z＝627.3[M+H]+。
实施例17

步骤1：中间体17-2的合成
将化合物1-12B(870mg,1.01mmol)溶于无水甲苯(10.0mL)，加入叔丁醇钠(777mg,8.09mmol),和化合物17-1(404mg,3.03mmol)。在100℃反应12小时。向反应液倒入30.0mL的饱和氯化铵水溶液，用乙酸乙酯(50.0mL)萃取。有机相用饱和食盐水(30.0mL)洗涤，无水硫酸钠干燥后，过滤减压浓缩，即得粗品。粗品经柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝2:1)纯化得到化合物17-2，MS m/z＝929.4[M+H]+。
步骤2：中间体17-3的甲酸盐合成
将化合物17-2(445mg,479μmol)溶于无水甲苯(4.00mL)，加入1-丙炔基三正丁基锡(630mg,1.92mmol)和二氯双[二叔丁基-(4-二甲基氨基苯基)膦]钯(II)(102mg,144μmol)。氮气置换3次后，在氮气保护下110℃反应3小时，反应液冷却减压浓缩即得粗品。粗品进行高效液相色谱分离(柱子:Phenomenex luna C18 150*25mm*10μm；流动相:[water(0.225％甲酸)-乙腈]；乙腈％:40％-70％,10min)，冻干得到化合物17-3的甲酸盐，MS m/z＝933.5[M+H]+。
步骤3：化合物17的合成
将化合物17-3的甲酸盐(210mg)溶入二氯甲烷(2.00mL)，加入三氟乙酸(3.00mL)，25℃下反应4小时。反应液用6.00mL氨水淬灭，然后浓缩得到粗品。粗品进行高效液相色谱分离(柱子:Waters Xbridge150*25mm*5μm；流动相:[水(0.05％氨水)-乙腈]；乙腈％:28％-58％)。冻干后得到化合物17，MS m/z＝593.3[M+H]+。
实施例18
步骤1：中间体18-2的合成
向化合物18-1(192.05mg,1.16mmol)中加入THF(10mL)溶解，投入叔丁醇钠(111.70mg,1.16mmol)，保持反应体系温度0℃搅拌1小时，加入化合物1-12B(0.5g,581.16μmol)，反应体系保持0℃反应1小时。向反应液加水(10mL)，乙酸乙酯(20mL*3)萃取，合并有机相，利用饱和食盐水(20mL)洗涤，无水 硫酸钠干燥后，减压浓缩，过柱纯化(二氯甲烷：甲醇＝20：1)，得到化合物18-2，MS m/z＝961.7[M+H]+。
步骤2：中间体18-3的合成
将化合物18-2(0.526g,547.07μmol)加入甲苯(20mL)溶解，投入化合物1-丙炔基三正丁基锡(900.24mg,2.74mmol)与二氯双[二叔丁基-(4-二甲基氨基苯基)膦]钯(II)(116.21mg,164.12μmol)，抽换氮气5次，保持体系温度120℃反应5小时。向反应体系加水(10mL)，垫硅藻土过滤，乙酸乙酯(20mL)洗滤饼，向滤液中加入乙酸乙酯萃取(20mL*3)，合并有机相，利用饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，过柱纯化(二氯甲烷：甲醇＝10:1)，得到化合物18-3,MS m/z＝965.7[M+H]+。
步骤3：化合物18的盐酸盐合成
向化合物18-3(0.5g,518.09μmol)加入DCM(10mL)溶解，投入三氟乙酸(4.13g,36.25mmol)，保持反应体系温度25℃反应1小时，将反应液减压浓缩，粗品进行高效液相色谱分离(柱子:Xtimate C18150*40mm*5μm；流动相:[水(0.05％盐酸)-乙腈]；(乙腈)％:5％-35％,10min)，得到化合物18的盐酸盐，MS m/z＝625.3[M+H]+。
实施例19
步骤1：中间体19-2的合成
向化合物19-1(199.00mg,1.16mmol)中加入THF(10mL)溶解，投入叔丁醇钠(111.70mg,1.16mmol)，保持反应体系温度0℃搅拌1小时，加入化合物1-12B(0.5g,581.16μmol)，反应体系保持0℃反应1小时。向反应液加水(10mL)，乙酸乙酯(20mL*3)萃取，合并有机相，利用饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，过柱纯化(二氯甲烷：甲醇＝20：1)，得到化合物19-2，MS m/z＝967.6[M+H]+。
步骤2：中间体19-3的合成
将化合物19-2(0.442g,456.87μmol)加入甲苯(10mL)溶解，投入化合物1-丙炔基三正丁基锡(601.44mg,1.83mmol)与二氯双[二叔丁基-(4-二甲基氨基苯基)膦]钯(II)(97.05mg,137.06μmol)，抽换氮气5次，保持体系温度120℃反应5小时。向反应体系加水(10mL)，垫硅藻土过滤，乙酸乙酯(20mL)洗滤饼，乙酸乙酯(20mL*3)萃取，合并有机相，利用饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，过柱纯化(二氯甲烷：甲醇＝10:1)，得到化合物19-3,MS m/z＝971.8[M+H]+。
步骤3：化合物19的盐酸盐合成
向化合物19-3(0.442g,455.17μmol)加入DCM(5mL)溶解，投入三氟乙酸(15.58g,136.67mmol)，保 持反应体系温度25℃反应1小时，将反应液减压浓缩，粗品进行高效液相色谱分离(柱子:Xtimate C18150*40mm*5μm；流动相:[水(0.05％盐酸)-乙腈]；(乙腈)％:5％-35％,10min)，得到化合物19的盐酸盐，MS m/z＝631.3[M+H]+。
实施例20
步骤1：化合物20-2的合成
称取化合物20-1(480g,2.53mol)，加入DMF(2500mL)，加入4-甲氧基氯苄(5.18mol,702.79mL)，碳酸钾(872.82g,6.32mol),碘化钾(419.35g,2.53mol)，65℃反应2小时。加水(1000mL)，乙酸乙酯(1000mL*3)萃取，有机相减压浓缩，得化合物20-2，MS m/z＝430.0[M+H]+。
步骤2：化合物20-3的合成
称取化合物2,2,6,6-四甲基哌啶(220.59g,1.56mol,265.13mL)，加入THF(3000mL)，-5℃加入正丁基锂(2.5M,499.73mL)，搅拌0.5小时，降温至-60℃加入20-2(280g,624.67mmol),搅拌0.5小时，最后加入DMF(228.28g,3.12mol,240.30mL)。继续反应0.5小时。将反应液倒入水中(1000mL)，加入1N盐酸调pH到7，用乙酸乙酯(1000mL*3)萃取，减压浓缩，柱层析分离(石油醚：乙酸乙酯＝10:1)，得化合物20-3。
步骤3：化合物20-4的合成
称20-3(370g,807.30mmol)，加入甲苯(1500mL)，二氯双[二叔丁基-(4-二甲基氨基苯基)膦]钯(2.86g,4.04mmol,2.86mL)和三丁基(1-丙炔基)锡(265.69g,807.30mmol)，氮气保护下120℃反应2小时。减压浓缩，柱层析分离(石油醚：乙酸乙酯＝5:1)，得化合物20-4。MS m/z＝418.1[M+H]+。
步骤4：化合物20-5的合成
称20-4(450g,970.13mmol)，加入DMF(100mL)，加入N-溴代丁二酰亚胺(189.93g,1.07mol)，25℃反应2小时。补加N-溴代丁二酰亚胺(17.27g,97.01mmol)，继续反应3小时。减压浓缩，柱层析分离(石油醚：乙酸乙酯＝5:1)，得化合物20-5。MS m/z＝496.0[M+H]+。
步骤5：化合物20-6的合成
称20-5(55g,110.81mmol)，加入DMF(300mL)，加入氟磺酰二氟乙酸甲酯(42.57g,221.61mmol,28.19mL)，碘化亚铜(42.21g,221.61mmol)，110℃氮气保护下反应2小时。加入500mL水淬灭，用乙酸乙酯(600mL*3)萃取，合并萃取后的有机相，依次用水(800mL*2)和饱和食盐水(800mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。柱层析分离(石油醚：乙酸乙酯＝10:1)，得化合物20-6。MS m/z＝485.9[M+H]+。
步骤6：化合物20-7的合成
在0℃下，向钠氢(6.34g,158.61mmol,60％纯度)的四氢呋喃(350mL)溶液中滴加乙酰乙酸甲酯(18.42g,158.61mmol,17.10mL)，反应15分钟。再加入20-6(35g,72.10mmol)的四氢呋喃溶液(350mL)。反应0.5小时。加入200mL饱和氯化铵溶液淬灭反应，用乙酸乙酯(300mL*2)萃取，合并萃取后的有机相，用饱和食盐水(400mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。柱层析分离(石油醚：乙酸乙酯＝10:1-1:1)，得化合物20-7。MS m/z＝624.2[M+Na]+。
步骤7：化合物20-8的合成
称20-7(38g,63.17mmol)，加入二氯甲烷(300mL)，再加入N,N-二甲基甲酰胺二甲基缩醛(9.03g,75.80mmol)。25℃反应16小时。冷到0℃，加入三氟化硼乙醚(10.76g,75.80mmol,9.32mL)，体系在0℃下继续搅拌1小时，向体系中加入200mL饱和碳酸氢钠溶液，分离出有机相，水相用200mL二氯甲烷萃取，合并萃取后的有机相，用250mL饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。柱层析分离(石油醚：乙酸乙酯＝10:1-1:1)，得化合物20-8。MS m/z＝612.1[M+H]+。
步骤8：化合物20-9的合成
称20-8(30g,49.05mmol)，加入四氢呋喃(300mL)，-60℃条件下加入三仲丁基硼氢化锂(1M,53.96mL)。-60℃反应1小时，向体系中加入200mL水淬灭反应，用乙酸乙酯(300mL*2)萃取，合并萃取后的有机相，用300mL饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。柱层析分离(石油醚：乙酸乙酯＝10:1-5:1)，得化合物20-9。MS m/z＝614.1[M+H]+。
步骤9：化合物20-10的合成
称20-9(20g,32.59mmol)，加入乙醇(200mL)，再加入2-甲基-2-硫代异脲硫酸盐(27.22g,97.78mmol)，碳酸钠(6.91g,65.19mmol)，50℃反应13小时。将反应液浓缩干，加入40mL水，用乙酸乙酯(50mL*2)萃取，合并萃取后的有机相，用60mL饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥。过滤，减压浓缩得化合物20-10。MS m/z＝654.3[M+H]+。
步骤10：化合物20-11B的合成
称20-10(21g,32.13mmol)，加入DMF(200mL)，再加入N,N-二异丙基乙基胺(12.46g,96.38mmol,16.79mL)，N-苯基双(三氟甲烷磺酰)亚胺(13.77g,38.55mmol)，25℃反应1小时。向体系中加入300mL水，用乙酸乙酯(300mL*3)萃取，依次用水(400mL*2)和饱和食盐水(400mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。柱层析分离(石油醚：乙酸乙酯＝10:1)，得化合物20-11。进行SFC拆分，(色谱柱:DAICEL CHIRALPAK IG(250mm*50mm,10μm)；流动相:[超临界CO2-乙醇(0.1％氨水)]；乙醇％:25％-25％)得到化合物20-11A和化合物20-11B。手性SFC分析(色谱柱:ChiralPak IG-3(100mm*4.6mm,3μm)；流动相:[超临界CO2-乙醇(0.05％二乙胺)]；(乙醇(0.05％二乙胺))％:5％-40％)，化合物20-11A，Rt＝2.574分钟，ee值99％；化合物20-11B，Rt＝3.055分钟，ee值99％。
步骤11：化合物20-12的合成
称取化合物20-11B(2g,2.55mmol)和20-12A(871.78mg,3.82mmol)溶解在DMF(10mL)，加入N,N-二异丙基乙胺(986.88mg,7.64mmol)，然后100℃反应1小时。反应液减压浓缩，柱层析分离(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)得到化合物20-12，MS m/z＝864.0[M+H]+。
步骤12：化合物20-13的合成
称取化合物20-12(1.8g,2.08mmol)，溶解在THF(20mL)中，加入间氯过氧苯甲酸(422.96mg,2.08mmol,85％纯度)，25℃搅拌0.5小时。将反应液减压浓缩，得到化合物20-13。MS m/z＝880.0[M+H]+。
步骤13：化合物20-14的合成
称取化合物8-2(626.81mg,4.09mmol)溶解在THF(5mL)中，然后0℃下加入叔丁醇钠(393.15mg,4.09mmol)，一个小时后加入20-13(1.8g,2.05mmol)，继续搅拌1小时。加入10mL水淬灭，使用1N的稀盐酸调节pH＝6左右，使用乙酸乙酯(100mL*2)萃取，合并萃取后的有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，柱层析分离(二氯甲烷:甲醇＝10:1)得到化合物20-14，MS m/z＝969.1[M+H]+。
步骤14：化合物20的盐酸盐合成
称取化合物20-14(1.4g,1.44mmol)溶解在三氟乙酸(10mL)中，25℃反应1小时。将反应液减压浓缩，粗品进行高效液相色谱分离(柱子:Xtimate C18 150*40mm*5μm；流动相:[水(0.05％盐酸)-乙腈]；(乙腈)％:5％-35％,10min)，得到化合物20的盐酸盐，MS m/z＝610.6[M+H]+。
实施例21
步骤1：中间体21-1的合成
将化合物20-3(19g,41.46mmol)和戊炔酸(4.88g,49.75mmol)加入到二甲基亚砜(200mL)中，然后加入二氯二三苯基膦钯(290.98mg,414.56μmol)，1,4-双(二苯基膦)丁烷(353.59mg,829.12μmol)和1.8-二氮杂二环[5.4.0]十一十一烷-7-烯(18.93g,124.37mmol,18.75mL)，所得反应液氮气置换后，升温至110-115℃搅拌反应18小时。将反应液用500mL乙酸乙酯稀释，然后用水(50mL×3)和饱和食盐水(100mL)洗涤，有机相减压浓缩得到粗品，粗品过柱纯化(石油醚：乙酸乙酯＝5:1)得到化合物21-1。1H NMR(400MHz,CDCL3)δ:10.34(s,1H),7.42(dd,J＝2.0,5.6Hz,1H),7.16(d,J＝8.4Hz,4H),7.11-7.06(m,1H),6.87-6.82(m,4H),4.24(s,4H),3.82-3.78(m,6H),2.37(q,J＝7.6Hz,2H),1.21(t,J＝7.6Hz,3H)。
步骤2：中间体21-2的合成
将化合物21-1(4.0g,9.27mmol)溶解于DMF(30mL)中，然后加入N-溴代丁二酰亚胺(2.14g,12.05mmol)，所得反应液氮气保护下50℃搅拌反应3小时。将反应液用150mL乙酸乙酯稀释，然后用水(20mL×3)和饱和食盐水(20mL)洗涤，有机相减压浓缩得到粗品。粗品过柱纯化(石油醚：乙酸乙酯＝5:1) 得到化合物21-2，MS m/z＝510.1[M+H]+。
步骤3：中间体21-3的合成
将化合物21-2(4.6g,9.01mmol)和化合物氟磺酰二氟乙酸甲酯(6.93g,36.05mmol,4.59mL)加入到N,N-二甲基甲酰胺(30mL)中，然后加入碘化亚铜(3.43g,18.03mmol)，所得反应液氮气保护下升温至105℃搅拌反应3小时。将反应液减压浓缩得到粗品。粗品过柱纯化(石油醚：乙酸乙酯＝5:1)得到化合物21-3，MS m/z＝500.0[M+H]+。
步骤4：中间体21-4的合成
将钠氢(856.78mg,21.42mmol,60％纯度)悬浮与无水四氢呋喃(30mL)中，所得混合物冷却到0℃，然后向其中滴加乙酰乙酸甲酯(2.09g,17.99mmol,1.94mL)，滴毕搅拌30分钟，接着向其中滴加正丁基锂(2.5M,7.88mL)，滴毕，继续搅拌30分钟，撤去冰浴，将反应混合液冷却到-78℃，最后向其中滴加化合物21-3(4.28g,8.57mmol)的15mL四氢呋喃溶液，滴毕，搅拌反应0.5小时。用1M盐酸淬灭反应，并调节pH＝5分出有机相，水相用30mL乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，减压浓缩得到粗品，粗品过柱纯化(石油醚：乙酸乙酯＝2:1)得化合物21-4。MS m/z＝638.2[M+Na]+。
步骤5：中间体21-5的合成
将化合物21-4(5.0g,6.01mmol)溶解于二氯甲烷(40mL)中，然后加入N,N-二甲基甲酰胺缩二甲醇(2.15g,18.03mmol,2.40mL)，所得反应液氮气保护下搅拌反应18小时。将反应液冷却到0℃，然后向其中滴加三氟化硼乙醚络合物(853.03mg,6.01mmol)，滴毕，搅拌反应1小时将反应液用20mL饱和碳酸氢钠淬灭，然后用二氯甲烷30mL×3萃取，合并有机相，减压浓缩得到粗品。粗品过柱纯化(石油醚：乙酸乙酯＝2:1)得到化合物21-5。MS m/z＝626.0[M+H]+。
步骤6：中间体21-6的合成
将化合物21-5(2.6g,4.16mmol)溶解于无水四氢呋喃(20mL)中，氮气保护下冷却到-78℃，然后向其中滴加三仲丁基硼氢化锂(1M,4.57mL)，滴毕，-78℃下搅拌反应0.5小时。加入水15mL水淬灭反应，然后用1M盐酸调节pH～5-6，分出有机相，水层用30mL×3萃取，合并有机相，减压浓缩得到粗品。粗品过柱纯化(石油醚：乙酸乙酯＝5:1)得到化合物21-6，MS m/z＝650.0[M+Na]+。
步骤7：中间体21-7的合成
将化合物21-6(0.6g,955.99μmol)和2-甲基硫脲硫酸盐(539.83mg,2.87mmol)加入到乙醇(15mL)中，然后加入碳酸钠(202.65mg,1.91mmol)，所得反应液氮气保护下加热到65℃搅拌反应18小时。将反应液减压浓缩，残留物中加入10mL水和80mL乙酸乙酯，搅拌下用2M盐酸调节PH＝6，分出有水层，有机相用10mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到化合物21-7，MS m/z＝668.3[M+H]+。
步骤8：中间体21-8的合成
将化合物21-7(640mg,958.50μmol)和化合物N-苯基双(三氟甲烷磺酰)亚胺(513.63mg,1.44mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，然后加入N,N-二异丙基乙基胺(247.76mg,1.92mmol)。所得反应液氮气置换后，升温至35℃搅拌反应1.5小时。将反应液用50mL乙酸乙酯稀释，然后用水10mL×3洗涤，有机相减压浓缩得到粗品，粗品过柱纯化(石油醚：乙酸乙酯＝5:1)得到化合物21-8。MS m/z＝800.4[M+H]+。
步骤9：中间体21-9的合成
将化合物21-8(340mg,425.12μmol)和化合物1-1A(180.50mg,850.24μmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中，然后加入N,N-二异丙基乙基胺(164.83mg,1.28mmol)，所得反应液氮气保护下升温至105℃搅拌反应1小时。将反应液减压浓缩得到粗品。粗品过柱纯化(石油醚：乙酸乙酯＝2:1)得到化合物21-9。MS m/z＝862.4[M+H]+。
步骤10：中间体21-10的合成
将化合物21-9(223mg,258.71μmol,)溶解于二氯甲烷(3mL)中，然后加入间氯过氧苯甲酸(52.52mg,258.71μmol,85％纯度)，所得最终反应液氮气保护下25℃搅拌反应1小时。将反应液减压浓缩得到粗品，粗品过柱纯化(石油醚：乙酸乙酯＝1:1)得到化合物21-10。MS m/z＝894.4[M+H]+。
步骤11：中间体21-11的合成
将化合物8-2(76.44mg,498.89μmol)和叔丁醇钠(47.95mg,498.89μmol)加入到四氢呋喃(2mL)中，25℃搅拌反应0.5小时，然后向其中滴加化合物21-10(223mg,249.45μmol)的2mL四氢呋喃溶液，25℃搅拌反应0.5小时。将反应液用30mL乙酸乙酯稀释，然后用5mL饱和食盐水洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到化合物21-11。MS m/z＝967.8[M+H]+。
步骤12：化合物21的合成
将化合物21-11(238mg,246.10μmol)加入到三氟乙酸(2mL)中，25℃搅拌反应1小时将反应液减压浓缩得到粗品，粗品进行高效液相色谱分离(柱子:Xtimate C18 150*40mm*5μm；流动相:[水(0.05％盐酸)-乙腈]；(乙腈)％:5％-35％,10min)，得到化合物21的盐酸盐，MS m/z＝627.4[M+H]+。
步骤13：化合物21A和21B的合成
化合物21的盐酸盐经过SFC分离，(色谱柱:DAICEL CHIRALPAK IC(250mm*30mm,10μm)；流动相:[超临界CO2-甲醇(0.1％氨水)]；甲醇％:60％-60％)得到化合物21A和化合物21B。手性SFC分析(色谱柱:ChiralPak IC(100mm*4.6mm,3μm)；流动相:[超临界CO2-乙醇(0.05％二乙胺)]；(甲醇(0.05％二乙胺))％:60％-60％)，化合物21A，Rt＝1.696分钟，ee值99％，MS m/z＝627.4[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：6.89(d,J＝8.4Hz,1H),5.21(d,J＝12.0Hz,2H),5.11(d,J＝7.6Hz,1H),4.80-4.50(m,4H),4.44-4.27(m,2H),4.23-3.82(m,5H),3.77-3.48(m,3H),3.35-3.20(m,1H),3.11-2.86(m,3H),2.63-2.51(m,1H),2.38(q,J＝7.2Hz,3H),2.30-2.06(m,5H),2.04-1.75(m,2H),1.20(t,J＝7.6Hz,3H)。化合物21B，Rt＝5.728分钟，ee值99％，MS m/z＝627.3[M+H]+，1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:6.86(d,J＝8.4Hz,1H),5.19-5.08(m,1H),4.95(br s,2H),4.80-4.64(m,3H),4.15-4.03(m,4H),4.01-3.93(m,1H),3.82-3.67(m,3H),3.59-3.43(m,2H),3.36-3.14(m,4H),3.00-2.90(m,1H),2.80(d,J＝15.0Hz,1H),2.72-2.62(m,1H),2.45-2.32(m,3H),2.22-2.11(m,1H),2.09-1.84(m,5H),1.82-1.67(m,2H),1.21(t,J＝7.2Hz,3H)。
实施例22
步骤1：中间体22-1的甲酸盐合成
将化合物16-1(1.28g,6.56mmol)溶解于甲苯(10.0mL)中,分别加入化合物异丁烯四氢呋喃溶液(2.40M, 2.73mL)和Hoveyda-Grubbs催化剂(411mg,656μmol)。在120℃下反应12小时。反应液使用硅藻土过滤，滤液减压浓缩得到粗品。粗品进行高效液相色谱分离(柱子:Phenomenex Luna C18 150*25mm*10μm；流动相:[水(0.225％甲酸)-乙腈]；乙腈:25％-55％)纯化得到化合物22-1。MS m/z＝224.1[M+1]+。
步骤2：中间体22-2的合成
将化合物22-1(200mg)溶解THF(2.00mL)中，降温至0℃，在0℃下缓慢滴加红铝甲苯溶液(1.03g,3.58mmol,70.0％纯度),滴加完毕后，反应液在25℃反应12小时。向反应液中加入甲醇(3.00ml)，减压浓缩得到粗品。粗品经柱纯化(二氯甲烷：甲醇＝10：1)得到化合物22-2。MS m/z＝182.1[M+1]+。
步骤3：中间体22-3的甲酸盐合成
将化合物1-12B(100mg,116μmol)溶解于甲苯(1.00mL)中，向溶液中加入化合物22-2(105mg,581μmol)，4A分子筛(100mg)和叔丁醇钠(33.5mg,349μmol)。反应液在110℃下反应12小时。反应液冷却后使用硅藻土进行过滤，滤液减压浓缩得到粗品。粗品进行高效液相色谱分离(柱子:Phenomenex luna C18150*25mm*10μm；流动相:[水(0.225％甲酸)-乙腈]；乙腈:50％-80％)纯化得到化合物22-3的甲酸盐。MS m/z＝977.3[M+1]+。
步骤4：中间体22-4的合成
将化合物22-3(45.0mg,46.0μmol)的甲酸盐溶解于甲苯(1.00mL)中，向反应液中加入1-丙炔基三正丁基锡(60.6mg,184μmol)和二氯双[二叔丁基-(4-二甲基氨基苯基)膦]钯(II)(9.78mg,13.8μmol)。反应液在110℃下反应3小时。反应液冷却后用硅藻土进行过滤，滤液减压浓缩得到粗品。粗品进行高效液相色谱分离(柱子:Phenomenex Luna C18 150*25mm*10μm；流动相:[水(0.075％三氟乙酸)-乙腈]；乙腈:52％-82％)纯化得到化合物22-4的三氟乙酸盐。MS m/z＝981.4[M+1]+。
步骤5：化合物22的甲酸盐合成
将化合物22-4(35.0mg,35.7μmol)的三氟乙酸盐溶解于二氯甲烷(1.00mL)中，向反应液中加入三氟乙酸(0.20mL)，反应液在25℃下反应1小时，反应液直接减压浓缩得到粗品。粗品依次进行如下高效液相色谱分离(柱子:Phenomenex luna C18 150*25mm*10μm；流动相:[水(0.075％三氟乙酸)-乙腈]；乙腈:20％-50％over 9min)；(柱子:Waters Xbridge 150*25mm*5μm；流动相:[水(0.1％氨水)-乙腈]；乙腈:55％-85％over 10min)；(柱子:Phenomenex luna C18 150*25mm*10μm；流动相:[水(0.225％甲酸)-乙腈]；乙腈:15％-45％over 9min)纯化后得到化合物22的甲酸盐。MS m/z＝641.3[M+1]+。
实施例23

步骤1：中间体23-2的合成
将化合物23-1(5.5g)溶于DMF(50mL)，加入碳酸钾(15.8g,114mmol)和化合物烯丙基溴(4.17g,34.4mmol)。室温下反应12小时后。向反应液中倒入100mL水，用乙酸乙酯(200mL)萃取3次。有机相用饱和食盐水(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥后，过滤，减压浓缩得粗品。粗品经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝20:1)纯化得到化合物23-2。
步骤2：中间体23-3的合成
将化合物23-2(5.5g,28.1mmol)溶于无水THF(37.0mL)，在0℃下加入氢化铝锂(2.5M,13.5mL)，然后在室温下反应1小时。向反应液中加入1.2毫升水，1.2毫升15％NaOH水溶液，最后加入3.6毫升水，无水硫酸钠干燥后，过滤减压浓缩，即得粗品直接用于下一步。得到化合物23-3。
步骤3：中间体23-4的合成
将化合物23-3(2.5g)溶于无水DCM(20.0mL)，加入咪唑(4.07g,59.7mmol)，4-二甲氨基吡啶(182mg,1.49mmol),然后在0℃下加入叔丁基二苯基氯硅烷(8.22g,29.9mmol)。在室温下反应12小时。向反应液加入100mL水淬灭反应，用DCM(100mL)萃取3次。有机相用饱和食盐水(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥后，过滤减压浓缩，即得粗品。粗品经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝10:1)纯化得到化合物23-4。MS m/z＝406.2[M+H]+。
步骤4：中间体23-5的合成
将化合物23-4(1.5g,3.70mmol)溶于无水甲苯(30mL)，加入Grubbs催化剂(313.93mg,369.78μmol)。在120℃下反应12小时。将反应液减压浓缩得到粗产品。粗品经薄板层析(二氯甲烷：甲醇＝10：1)纯化得到化合物23-5。MS m/z＝378.2[M+H]+。
步骤5：中间体23-6的盐酸盐合成
将化合物23-5(200mg,529μmol)溶于无水二氧六环(6.0mL)，加入盐酸(12M,44.1μL)。在95℃下反应12小时。向反应液中加入10毫升水，萃取后将水相冻干，得到粗品可直接用于下一步反应。得到化合物23-6的盐酸盐。
步骤6：中间体23-7的合成
将化合物23-6的盐酸盐(207mg)溶于无水甲苯(3mL)，加入叔丁醇钠(250mg,2.60mmol)和化合物1-12B(320mg,371μmol)。在室温下反应12小时。向反应液中倒入30mL的饱和氯化铵水溶液，用乙酸乙酯(30mL)萃取。有机相用饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥后，过滤减压浓缩，即得粗品。粗品经柱层析(二氯甲烷：甲醇＝10:1)纯化得到化合物23-7。MS m/z＝935.3[M+H]+。
步骤7：中间体23-8的合成
将化合物23-7(130mg,138μmol)溶于无水甲苯(1mL)，加入1-丙炔基三正丁基锡(182mg,555μmol)和二氯双[二叔丁基-(4-二甲基氨基苯基)膦]钯(II)(9.84mg,13.9μmol)。氮气置换3次后，在氮气保护下130℃反应4小时。反应液冷却减压浓缩得粗品。粗品经薄板层析(二氯甲烷：甲醇＝10:1)纯化得到化合物23-8。MS m/z＝939.4[M+H]+。
步骤8：化合物23的三氟乙酸盐合成
将化合物23-8(100mg,106μmol)溶入二氯甲烷(1.0mL)，加入三氟乙酸(182mg,1.60mmol)，25℃下反应0.5小时。反应液减压浓缩得到粗品。粗品进行高效液相色谱分离(柱子:Phenomenex luna C18150*25mm*10μm；流动相:[水(0.075％三氟乙酸)-乙腈]；乙腈:10％-40％over 9min)。冻干后得到化合物23的三氟乙酸盐。MS m/z＝599.3[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD)6.92(d,J＝8.4Hz,1H),6.00(d,J＝6.4Hz,1H),5.87(td,J＝2.4,6.4Hz,1H),5.18(dd,J＝4.4,11.2Hz,1H),4.88-4.85(m,1H),4.76-4.70(m,2H),4.61-4.52(m,2H),4.36-4.28(m,1H),4.20-4.11(m,2H),4.04(br d,J＝16.0Hz,1H),3.85-3.74(m,2H),3.66(br d,J＝13.6Hz,1H),3.35(br d,J＝6.4Hz,2H),3.29-3.24(m,1H),2.92(br dd,J＝3.6,18.0Hz,1H),2.31-2.09(m,7H),2.04-1.95(m,4H)。
实施例24
步骤1：中间体24-2的合成
将化合物24-1(54g,198mmol)溶于无水THF(450mL)，降温到-78℃，滴加甲基溴化镁(3M,79.2mL)然后在-78℃下反应0.5小时，然后在室温下反应12小时。向反应液倒入200mL盐酸(1M)淬灭反应，用乙酸乙酯(200mL)萃取3次。有机相用饱和食盐水(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥后，过滤，减压浓缩得粗品。粗品经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝5:1)纯化得到化合物24-2。MS m/z＝288.0[M+1]+。
步骤2：中间体24-3的合成
将化合物24-2(38g,131mmol)溶于无水DCM(380mL)加入戴斯-马丁氧化剂(111g,263mmol,81.6mL)在室温下反应4小时。向反应液倒入200mL水，用乙酸乙酯(200mL)萃取3次。有机相用饱和食盐水(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥后，过滤，减压浓缩得粗品。粗品经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝5:1)纯化得到化合物24-3。MS m/z＝285.9[M+1]+。
步骤3：中间体24-4的合成
将化合物溴化甲基三苯基磷(8.42g,23.5mmol)溶于无水四氢呋喃(45mL)降温到-78℃，滴加正丁基锂(2.5M,9.42mL)然后在0℃下反应2小时。然后降温-78℃滴加入24-3(4.5g,15.7mmol)溶于THF(20mL)。在室温下反应10小时后。向反应液倒入100mL HCl(1M)水溶液，用EA(100mL)萃取3次。有机相用饱和食盐水(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥后，过滤，减压浓缩得粗品。粗品经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝10:1)纯化得到化合物24-4。
步骤4：中间体24-5的盐酸盐合成
将化合物24-4(5.5g,19.3mmol)溶于盐酸甲醇溶液(4M,61.1mL)，在室温下反应12小时。将反应液减压浓缩得到化合物24-5的盐酸盐，MS m/z＝170.1[M+1]+。
步骤5：中间体24-6的合成
将化合物24-5的盐酸盐(4.5g)溶于DMF(40mL)，加入碳酸钾(14.7g,106mmol)和烯丙基溴(3.86g,31.9mmol)。室温下反应1.5小时。向反应液中倒入100mL水，用乙酸乙酯(200mL)萃取3次。有机相用饱和食盐水(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥后，过滤，减压浓缩得粗品。粗品经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝10:1)纯化得到化合物24-6。
步骤6：中间体24-7的合成
将化合物24-6(2.5g,11.9mmol)溶于无水四氢呋喃(20.0mL)，在0℃下加入氢化铝锂(2.5M,6.32mL)，然后在室温下反应1小时。向反应液中加入0.6毫升水，0.6毫升15％氢氧化钠水溶液，最后加入1.8毫升水，无水硫酸钠干燥后，过滤，减压浓缩得粗品化合物24-7。MS m/z＝182.1[M+H]+。
步骤7：中间体24-8的合成
将化合物24-7(2.3g)溶于无水二氯甲烷(23.0mL)，加入咪唑(3.46g,50.7mmol)，4-二甲氨基吡啶(155mg,1.27mmol),然后在0℃下加入叔丁基二苯基氯硅烷(6.97g,25.3mmol)。在室温下反应12小时。向反应液中倒入50mL水，用乙酸乙酯(100mL)萃取3次。有机相用饱和食盐水(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥后，过滤，减压浓缩得粗品。粗品经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝10:1)纯化得到化合物24-8。MS m/z＝420.3[M+H]+。
步骤8：中间体24-9的合成
将化合物24-8(2.5g,5.96mmol)溶于无水甲苯(50mL)，加入Grubbs催化剂(1.01g,1.19mmol)。在120℃下反应12小时。将反应液减压浓缩得到粗品。粗品经柱层析(二氯甲烷：甲醇＝20:1)纯化得到化合物24-9。MS m/z＝392.2[M+H]+。
步骤9：中间体24-10的合成
将化合物24-9(1.00g,2.55mmol)溶于无水二氧六环(6.0mL)，加入盐酸(12M,212μL)。在95℃下反应12小时。向反应液中加入10毫升水，乙酸乙酯(20mL*3)萃取后，将水相冻干，得到粗品化合物24-10。
步骤10：中间体24-11的合成
将化合物24-10(92.6mg)溶于无水甲苯(3mL)，加入叔丁醇钠(101mg,1.06mmol)和化合物1-12B(130mg,151μmol)。在95℃下反应12小时。将反应液减压浓缩得到粗品。粗品经柱层析(二氯甲烷：甲醇＝10:1)纯化得到化合物24-11。
步骤11：中间体24-12的合成
将化合物24-11(89mg,93.7μmol)溶于无水甲苯(1mL)，加入1-丙炔基三正丁基锡(123mg,374μmol)和二氯双[二叔丁基-(4-二甲基氨基苯基)膦]钯(II)(6.64mg,9.37μmol)。氮气置换3次后，在氮气保护下130℃反应0.5小时。反应液冷却，减压浓缩得粗品。粗品经薄板层析(二氯甲烷：甲醇＝10:1)纯化得到化合物24-12。
步骤12：化合物24的三氟乙酸盐合成
将化合物24-12(90mg,94.4μmol)溶入二氯甲烷(1.0mL)，加入三氟乙酸(161mg,1.42mmol)，25℃下反应1.5小时。反应液减压浓缩得到粗品。粗品进行高效液相色谱分离(柱子:Phenomenex luna C18150*25mm*10μm；流动相:[水(0.075％三氟乙酸)-乙腈]；乙腈:20％-50％over 7min)。冻干后得到化合物24的三氟乙酸盐。MS m/z＝613.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,METHANOL-d4)6.92(d,J＝8.2Hz,1H),5.61(d,J＝1.4Hz,1H),5.18(br dd,J＝4.4,11.6Hz,1H),4.91-4.89(m,2H),4.86-4.82(m,1H),4.80-4.70(m,2H),4.51-4.41(m,2H),4.29(br d,J＝14.0Hz,1H),4.19-4.10(m,2H),3.91(br d,J＝15.2Hz,1H),3.85-3.74(m,2H),3.63(br d,J＝14.4Hz,1H),3.27(br d,J＝5.2Hz,2H),2.95(br d,J＝1.2Hz,1H),2.28-2.08(m,7H),2.02(s,3H),1.83(d,J＝1.6Hz,3H)。
实施例25

步骤1：中间体25-2的合成
将化合物25-1(9.80g,43.5mmol)溶于无水DMF(98mL)，然后加入对甲氧基氯苄(8.17g,52.2mmol)，碘化钾(7.22g,43.5mmol)和碳酸钾(15.0g,109mmol)。在50℃下反应12小时。向反应液倒入50.0mL的水，用乙酸乙酯(150mL)萃取。有机相用饱和食盐水(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥后，过滤,减压浓缩得粗品。粗品经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝10:1)纯化得到化合物25-2。MS m/z＝345.6[M+H]+。
步骤2：中间体25-3的合成
将2,2,6,6-四甲基哌啶(21.3g,150mmol)溶于四氢呋喃(130mL)氮气置换三次后，降温至-5℃，逐滴滴加正丁基锂(2.50M,60.2mL)，搅拌0.5小时。然后降温至-60℃，加入化合物25-2(13.0g,37.6mmol)，搅拌0.5小时。然后在-60℃加入DMF(55.0g,752mmol)，继续搅拌0.5小时。在0℃下用200mL的饱和氯化铵溶液淬灭反应，乙酸乙酯萃取(300mL)。有机相用饱和食盐水(300mL)洗涤，无水硫酸钠干燥后，过滤减压浓缩得粗品。粗品经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝50:1)纯化得到化合物25-3。MS m/z＝373.28[M+H]+。
步骤3：中间体25-4的合成
将化合物25-3(4.9g,13.12mmol)，碘化亚铜(5.00g,26.23mmol)，2,2-二氟-2-氟磺酰乙酸甲酯(9.57g,49.84mmol)溶于DMF(50mL)中，置换氮气3次，在110℃下反应2.5小时。将反应液冷却，铺硅藻土过滤后，向有机相中加入水(100mL)，用乙酸乙酯(100mL)萃1次。有机相用饱和食盐水(100mL)洗涤6次，无水硫酸钠干燥后，过滤，减压浓缩得粗品。粗品经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝20:1)纯化得到化合物25-4。1H NMR(CDCl3,400MHz)10.29(q,J＝4.25Hz,1H),7.35(d,J＝8.63Hz,2H),7.21(d,J＝7.25Hz,1H),7.00-6.90(m,2H),5.14(s,2H),3.84(s,3H)。
步骤4：中间体25-5的合成
将2,2,6,6-四甲基哌啶(3.68g,26.02mmol,4.42mL)溶到THF(30mL)中，置换氮气3次，将温度降至-40℃后，缓慢滴加正丁基锂(2.5M,10.06mL)，滴完之后，-40℃下反应0.5小时，将反应体系降温至-60℃，将3-8(3.3g,8.67mmol)的THF(10mL)溶液缓慢滴加至上述反应液中，升温-40℃下反应15分钟后，将化 合物25-4(3.77g,10.41mmol)分批加入到上述反应液中，室温反应2小时。反应液用饱和氯化铵水溶液(50mL)进行淬灭，用乙酸乙酯(50mL)萃取2次。有机相用饱和食盐水(100mL)洗涤2次，无水硫酸钠干燥后，过滤，减压浓缩得粗品。粗品经加入石油醚和乙酸乙酯混合溶液(20mL)(石油醚：乙酸乙酯＝5:1)搅拌12小时，过滤收集固体得到化合物25-5。
步骤5：中间体25-6的合成
将化合物25-5(2.7g,3.63mmol),氰亚甲基磷酸三丁酯(1.75g,7.27mmol)溶于甲苯(27mL)，置换氮气后，110℃反应12小时。向反应液中倒入50mL氯化铵水溶液，用乙酸乙酯(50mL)萃取2次。有机相用饱和食盐水(100mL)洗涤2次，无水硫酸钠干燥后，过滤，减压浓缩得粗品。粗品经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝10:1)纯化得到化合物25-6。MS m/z＝725.3[M+H]+。
步骤6：中间体25-7的合成
将化合物25-6(1.5g,2.07mmol)溶于无水DCM(15.0mL)，在0℃下分批加入间氯过氧苯甲酸(461.92mg,2.28mmol,85％纯度)，然后在室温下反应过夜。将反应液直接拌样，经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝1:1)纯化得到化合物25-7。MS m/z＝741.3[M+H]+。
步骤7：中间体25-8的合成
将化合物25-7(1.9g,2.56mmol)溶于无水甲苯(19mL)，加入化合物1-2A(816.20mg,5.13mmol)，叔丁醇钠(985.42mg,10.25mmol)和4A分子筛(1g),置换氮气后在100℃下反应12小时。反应液减压浓缩得粗品。粗品经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝1:1)纯化得到化合物25-8。MS m/z＝836.5[M+H]+。
步骤8：中间体25-9的合成
将化合物25-8(1.50g,1.79mmol)溶于无水甲苯(15mL)，加入1-丙炔基三正丁基锡(2.36g,7.17mmol)和二氯双[二叔丁基-(4-二甲基氨基苯基)膦]钯(II)(381.01mg,538.09μmol)。氮气置换3次后，在氮气保护下110℃反应12小时。反应液冷却，减压浓缩得粗品。粗品经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝1:1)纯化得到化合物25-9。MS m/z＝840.3[M+H]+。
步骤9：化合物25的合成
将化合物25-9(1.27g,1.51mmol)溶入二氯甲烷(13mL)，加入三氟乙酸(3.99g,35.00mmol)，20℃下反应3小时。反应液用饱和碳酸氢钠水溶液调节pH＝7，减压浓缩得到粗品。粗品进行高效液相色谱分离(柱子:Kromasil Eternity XT 250*80mm*10μm；流动相:[水(0.1％氨水)-乙腈]；乙腈:10％-40％over 20min)。冻干后得到化合物25。MS m/z＝620.4[M+H]+。
步骤10：化合物25A和25B的合成
化合物25经过SFC分离，(柱子：DAICEL CHIRALPAK IC(250mm*30mm,10μm)；流动相:[超临界CO2-乙醇(0.1％氨水)]；乙醇(0.1％氨水)％:50％-50％)，得到化合物25A和化合物25B。
化合物25A，手性SFC分析(色谱柱:ChiralPak IC-3(100mm*4.6mm,3μm)；流动相:[超临界CO2-乙醇(0.05％二乙胺)]；(乙醇(0.05％二乙胺))％:40％-40％)，Rt＝0.695分钟，ee值99％，MS m/z＝620.2[M+H]+；1H NMR(CDCl3,400MHz)δ7.07(d,J＝8.13Hz,1H),5.30-5.04(m,2H),4.78-4.59(m,2H),4.13-3.89(m,3H),3.56(br s,2H),3.45-2.77(m,12H),2.29-2.05(m,3H),2.01-1.57(m,8H)。
化合物25B，手性SFC分析(色谱柱:ChiralPak IC-3(100mm*4.6mm,3μm)；流动相:[超临界CO2-乙醇(0.05％二乙胺)]；(乙醇(0.05％二乙胺))％:40％-40％)，Rt＝1.229分钟，ee值99％，MS m/z＝620.2[M+H]+。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)9.44-8.91(m,2H),7.12(br d,J＝8.25Hz,1H),5.68-5.45(m,1H),5.12(br dd,J＝10.88,3.75Hz,1H),4.95-4.63(m,2H),4.45(s,2H),4.31-4.01(m,3H),3.95-3.51(m,6H),3.39-3.09(m,3H),2.99-2.81(m,1H),2.54(br d,J＝4.38Hz,1H),2.44(br s,1H),2.35-2.24(m,1H),2.23-2.06(m,4H),1.99-1.87(m,2H),1.87-1.72(m,1H)。
实施例26
步骤1：中间体26-2的合成
将化合物26-1(5.00g,30.6mmol)溶于无水二氯甲烷(50.0mL)，加入NBS(6.53g,36.7mmol)。室温下反应1小时。向反应液加入50.0mL的水，用二氯甲烷(150mL)萃取。有机相用饱和食盐水(150mL)洗涤，无水硫酸钠干燥后，过滤，减压浓缩得粗品。粗品经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝20:1)纯化得到化合物26-2。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 7.14(dd,J＝9.88,2.25Hz,1H)3.60-4.02(m,2H)。
步骤2：中间体26-3的合成
将化合物26-2(5.60g,23.1mmol)和对甲氧基氯苄(8.68g,55.4mmol)溶于无水DMF(56.0mL)，加入碘化钾(3.83g,23.1mmol)和碳酸钾(7.98g,57.7mmol)。在80℃反应2小时。向反应液倒入100mL的水，用乙酸乙酯(150mL)萃取。有机相用饱和食盐水(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥后，过滤，减压浓缩得粗品。粗品经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝20:1)纯化得到化合物26-3。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm7.20(d,J＝8.50Hz,4H)7.09(dd,J＝10.38,2.13Hz,1H)6.83(d,J＝8.63Hz,4H)4.16(s,4H)3.80(s,6H)。
步骤3：中间体26-4的合成
将2,2,6,6-四甲基哌啶(10.3g,73.2mmol,12.4mL)溶于四氢呋喃(90.0mL)氮气置换三次后，降温至-5℃，逐滴滴加正丁基锂(2.50M,29.3mL)，搅拌0.5小时。然后降温至-60℃，加入化合物26-4(9.20g,18.3mmol)，搅拌1小时。然后在-60℃加入DMF(26.8g,366mmol)，继续搅拌0.5小时。在0℃下加入100mL的饱和氯化铵溶液，使用乙酸乙酯萃取(300mL)。有机相用饱和食盐水(300mL)洗涤，无水硫酸钠干燥后，过滤，减压浓缩得粗品。粗品经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝30:1)纯化得到化合物26-4。MS m/z＝510.8[M+H]+。
步骤4：中间体26-5的合成
将2,2,6,6-四甲基哌啶(3.56g,25.2mmol,4.28mL)溶于四氢呋喃(50.0mL)氮气置换三次后，降温至-40℃，逐滴滴加正丁基锂(2.5M,9.76mL)，搅拌0.5小时。然后降温至-60℃，加入化合物3-8(3.20g,8.41mmol)，搅拌15分钟。然后在-60℃加入化合物26-4(5.37g,10.1mmol)。在室温下继续搅拌0.5小时。在25℃下加入100mL的饱和氯化铵溶液，使用乙酸乙酯萃取(300mL)。有机相用饱和食盐水(300mL)洗涤，无水硫酸钠干燥后，过滤，减压浓缩得粗品。粗品进行高效液相色谱分离(柱子:Phenomenex luna C18(250*70mm,10μm)；流动相:[水(0.075％三氟乙酸)-乙腈]；乙腈:80％-100％over 20min)。冻干后得到化合物26-5。
步骤5：中间体26-6的合成
将化合物26-5(2.20g,2.47mmol)和氰亚甲基磷酸三丁酯(1.19g,4.94mmol)溶入无水甲苯(20.0mL)，在氮气保护下，110℃下反应12小时。反应液减压浓缩得到粗品。粗品经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝5:1)纯化得到化合物26-6。
步骤6：中间体26-7A和26-7B的合成
将化合物26-6(1.10g,1.26mmol)和氟磺酰二氟乙酸甲酯(919.60mg,4.79mmol)溶入无水DMF(10.0mL)，然后加入碘化亚铜(480mg,2.52mmol)。在110℃下反应2.5小时。在25℃下加入50.0mL的水，使用乙酸乙酯萃取(150mL)。有机相用饱和食盐水(150mL)洗涤，无水硫酸钠干燥后，过滤，减压浓缩得粗品。粗品经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝5:1)纯化得到化合物26-7。后经制备SFC分离(手性柱:DAICEL CHIRALCEL OD(250mm*30mm,10μm)；流动相:超临界CO2-乙醇(0.1％氨水)]；乙醇％:40％-40％))纯化得到化合物26-7A和化合物26-7B。手性SFC分析(色谱柱:(S,S)Whelk-O1 50*4.6mm I.D.,3.5μm；流动相:[超临界CO2-乙醇(0.05％二乙胺)]；(乙醇(0.05％二乙胺))％:50％-50％)，化合物26-7A，Rt＝1.791分钟，ee值99％，MS m/z＝862.3[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 7.15(d,J＝8.50Hz,4H),6.85(d,J＝8.63Hz,4H),5.21-5.09(m,1H),4.70(s,2H),4.21(s,6H),3.81(s,6H),3.57-2.97(m,5H),2.54(s,3H),1.96(br  s,3H),1.66(br d,J＝5.88Hz,1H),1.50(s,10H)。化合物26-7B，Rt＝2.166分钟，ee值99％，MS m/z＝862.3[M+H]+。
步骤7：中间体26-8A和26-8B的合成
将化合物26-7A(170mg,197μmol)溶于无水二氯甲烷(2.00mL)，加入间氯过氧苯甲酸(44.0mg,217μmol,85％纯度)。室温下反应2小时，用二氯甲烷(60.0mL)萃取。有机相用饱和食盐水(60.0mL)洗涤，无水硫酸钠干燥后，过滤，减压浓缩得粗品。粗品经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝2:1)纯化得到化合物26-8A。MS m/z＝878.2[M+H]+。
参考步骤7，使用26-7B为原料，得到化合物26-8B。MS m/z＝878.2[M+H]+
步骤8：中间体26-9A和26-9B的甲酸盐合成
将化合物26-8A(150mg,171μmol)溶于无水甲苯(2.00mL)，加入叔丁醇钠(131mg,1.37mmol),化合物8-2(52.3mg,342μmol)和分子筛(70.0mg)。在100℃反应12小时。向反应液倒入60.0mL的饱和氯化铵水溶液，用乙酸乙酯(50.0mL)萃取。有机相用饱和食盐水(60.0mL)洗涤，无水硫酸钠干燥后，过滤，减压浓缩得粗品。粗品进行高效液相色谱分离(柱子:Phenomenex luna C18 150*25mm*10μm；流动相:[水(0.225％甲酸)-乙腈]；乙腈:40％-70％)。冻干后得到化合物26-9A的甲酸盐。MS m/z＝967.3[M+H]+。
参考步骤8，使用26-8B为原料，得到化合物26-9B的甲酸盐。MS m/z＝967.3[M+H]+。
步骤9：中间体26-10A和26-10B的合成
将化合物26-9A的甲酸盐(20.0mg)溶于无水甲苯(1.00mL)，加入1-丙炔基三正丁基锡(27.2mg,82.7μmol)和二氯双[二叔丁基-(4-二甲基氨基苯基)膦]钯(II)(4.39mg,6.20μmol)。氮气置换3次后，在氮气保护下110℃反应12小时。减压浓缩甲苯，加入2.00mL乙酸乙酯，经制备薄层色谱法纯化得到化合物26-10A。MS m/z＝971.3[M+H]+。
参考步骤9，使用26-9B的甲酸盐为原料，得到化合物26-10B。MS m/z＝971.3[M+H]+。
步骤10：化合物26A和26B的三氟乙酸盐合成
将化合物26-10A(40.0mg,41.2μmol)溶入二氯甲烷(1.00mL)，加入三氟乙酸(307mg,2.69mmol)，25℃下反应12小时。向反应液中加入3.00mL饱和碳酸钠溶液，减压浓缩得到粗品。粗品进行高效液相色谱分离(柱子:Phenomenex Luna C18 150*25mm*10μm；流动相:[水(0.075％三氟乙酸)-乙腈]；乙腈:15％-45％)。冻干后得到26A的三氟乙酸盐。MS m/z＝631.3[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 5.31(br d,J＝7.88Hz,3H),4.84-4.83(m,2H),4.77-4.71(m,1H),4.58(br s,2H),4.43-4.31(m,2H),4.23-4.13(m,2H),3.98-3.64(m,4H),3.36(br s,1H),3.25(br d,J＝2.88Hz,1H),3.09-2.91(m,2H),2.79(br d,J＝16.01Hz,1H),2.44-2.34(m,1H),2.32-2.20(m,4H),2.18-2.05(m,5H),2.02-1.90(m,1H)。
将化合物26-10B(46.0mg,47.4μmol)溶入二氯甲烷(1.00mL)，加入三氟乙酸(307mg,2.69mmol)，25℃下反应12小时。反应液减压浓缩得到粗品。粗品进行高效液相色谱分离(柱子:Phenomenex Luna C18150*25mm*10μm；流动相:[水(0.075％三氟乙酸)-乙腈]；乙腈:15％-45％)。冻干后得到26B的三氟乙酸盐。MS m/z＝631.3[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 5.34-5.16(m,3H),4.88(br s,2H),4.77-4.71(m,1H),4.56(s,2H),4.34(br d,J＝14.26Hz,2H),4.20-4.10(m,2H),3.92(br d,J＝14.63Hz,1H),3.86-3.63(m,3H),3.27-3.21(m,1H),3.08-2.89(m,3H),2.79(br d,J＝15.76Hz,1H),2.36(br dd,J＝11.88,6.38Hz,1H),2.30-2.10(m,7H),2.09(s,3H)。
生物测试数据
实验例1.GP2D细胞p-ERK抑制测试
1.目的
通过HTRF的方法，筛选出能有效抑制KRASG12D突变的GP2D细胞p-ERK的化合物。
2.实验流程
1).GP2D细胞种于透明96孔细胞培养板中，80μL细胞悬液每孔，每孔包含8000个细胞，细胞板放入二氧化碳培养箱，37度过夜孵育；
2).取2μL化合物加入78μL细胞培养基，混匀后，取20μL化合物溶液加入到对应细胞板孔中，细胞板放回二氧化碳培养箱继续孵育1小时；
3).结束孵育后，弃掉细胞上清加入50μL 1X细胞裂解液每孔，室温摇晃孵育30分钟；
4).使用detection buffer将Phospho-ERK1/2 Eu Cryptate antibody和Phospho-ERK1/2 d2 antibody稀释20倍；
5).取16μL细胞裂解物上清每孔到新的384白色微孔板中，再加入2μL Phospho-ERK1/2 Eu Cryptate antibody稀释液和2μL Phospho-ERK1/2 d2 antibody稀释液，常温孵育至少4小时；
6).孵育结束后使用多标记分析仪读取HTRF excitation:320nm,emission:615nm，665nm；
7).计算待测化合物IC50。
3实验结果
结果见表5。
表5化合物对GP2D细胞p-ERK抑制的IC50值
化合物编号 GP2D p-ERK IC50(nM)
化合物1B 0.76
实验结论：本发明化合物具有显著的KRASG12D突变GP2D细胞p-ERK抑制作用。
实验例2.AGS细胞p-ERK抑制测试
1.目的
通过HTRF的方法，筛选出能有效抑制KRASG12D突变AGS细胞p-ERK的化合物。
2.实验流程
1).AGS细胞种于透明96孔细胞培养板中，80μL细胞悬液每孔，每孔包含10000个细胞，细胞板放入二氧化碳培养箱，37度过夜孵育；
2).结束孵育后，弃掉细胞上清，加入80μL每孔的培养基，培养基含0.02％血清，细胞板放入二氧化碳培养箱，37度过夜孵育；
3).取2μL化合物加入78μL细胞培养基，混匀后，取20μL化合物溶液加入到对应细胞板孔中，细胞板放回二氧化碳培养箱继续孵育3小时；
4).结束孵育后，弃掉细胞上清加入50μL 1X细胞裂解液每孔，室温摇晃孵育30分钟；
5).使用detection buffer将Phospho-ERK1/2 Eu Cryptate antibody和Phospho-ERK1/2 d2 antibody稀释20倍；
6).取16μL细胞裂解物上清每孔到新的384白色微孔板中，再加入2μL Phospho-ERK1/2 Eu Cryptate antibody稀释液和2μL Phospho-ERK1/2 d2 antibody稀释液，常温孵育至少4小时；
7).孵育结束后使用多标记分析仪读取HTRF excitation:320nm,emission:615nm，665nm；
8).计算待测化合物IC50。
3实验结果
结果见表6。
表6化合物对AGS细胞p-ERK抑制的IC50值
化合物编号 AGS p-ERK IC50(nM)
化合物3的盐酸盐 64.6
实验结论：本发明化合物具有显著的KRASG12D突变AGS细胞p-ERK抑制作用。
实验例3.AsPC-1细胞p-ERK抑制测试
1.目的
通过HTRF的方法，筛选出能有效抑制KRASG12D突变AsPC-1细胞p-ERK的化合物。
2.实验材料：
ASPC-1细胞购自普诺赛；RPMI-1640培养基购自VivaCell；胎牛血清购自Biosera；Advanced Phospho-ERK1/2(THR202/TYR204)KIT购自Cisbio。
表7.Advanced Phospho-ERK1/2(THR202/TYR204)KIT成分表
成分名称 储存温度
Advanced PhosphoERK1/2 Eu Cryptate antibody ≤-16℃
Advanced PhosphoERK1/2 d2 antibody ≤-16℃
Blocking reagent(stock solution 100X) ≤-16℃
Lysis buffer#1(stock solution 4X) ≤-16℃
Detection buffer(ready-to-use) ≤-16℃
3.实验方法：
6)ASPC-1细胞种于透明96孔细胞培养板中，80μL细胞悬液每孔，每孔包含8000个细胞，细胞板放入二氧化碳培养箱，37度过夜孵育；
7)结束孵育后弃掉上清，加入80μL每孔1640空白培养基饥饿过夜；
8)将待测化合物用100％DMSO稀释到2mM作为第一个浓度，然后再用移液器进行5倍稀释至第8个浓度，即从2mM稀释至25.6nM。取2μL化合物加入78μL细胞饥饿培养基，混匀后，取20μL化合物溶液加入到对应细胞板孔中，细胞板放回二氧化碳培养箱继续孵育1小时，此时化合物浓度为10μM至0.128nM，DMSO浓度为0.5％；
9)结束孵育后，弃掉细胞上清加入50μL细胞裂解液每孔，室温摇晃孵育30分钟；
10)使用Detection buffer将Phospho-ERK1/2 Eu Cryptate antibody和Phospho-ERK1/2 d2 antibody稀释20倍；
11)取16μL细胞裂解物上清每孔到新的384白色微孔板中，再加入2μL Phospho-ERK1/2 Eu Cryptate antibody稀释液和2μL Phospho-ERK1/2 d2 antibody稀释液，常温孵育4小时；
12)孵育结束后使用多标记分析仪读取HTRF excitation:320nm,emission:615nm，665nm。
4.数据分析：
利用方程式(Sample-Min)/(Max-Min)*100％将原始数据换算成抑制率，IC50的值即可通过四参数进行曲线拟合得出(GraphPad Prism中log(inhibitor)vs.response--Variable slope模式得出)。表1提供了本发明的化合物对p-ERK的抑制作用。
Max孔:阳性对照孔读值为1X裂解液
Min孔：阴性对照孔读值为0.5％DMSO细胞孔细胞裂解液
5实验结果
结果见表8。
表8化合物对AsPC-1细胞p-ERK抑制的IC50值
化合物编号 AsPC-1 p-ERK IC50(nM)
化合物1B 12.3
化合物6 21.9
化合物7的盐酸盐 3.2
化合物8的盐酸盐 0.6
化合物9的盐酸盐 35.9
化合物10的盐酸盐 1.1
化合物11的甲酸盐 0.9
实验结论：本发明化合物在KRASG12D突变AsPC-1细胞对具有显著的抑制作用。
实验例4.AsPC-1细胞p-ERK抑制测试
1.目的
通过In cell western的方法，筛选出能有效抑制KRASG12D突变AsPC-1细胞p-ERK的化合物。
2.实验材料：
ASPC-1细胞购ATCC；RPMI-1640培养基购自ATCC；胎牛血清购自Ausgenex；Phospho-p44/42 MAPK(Erk1/2)(Thr202/Tyr204)(D13.14.4E)Rabbit mAb购自CST，GAPDH(D4C6R)Mouse mAb购自CST，IRDye 680RD Goat anti Mouse IgG(H+L)购自LI-COR，IRDye 800CW Goat anti-Rabbit IgG(H+L)购自LI-COR。
3.实验方法：
13)ASPC-1细胞种于黑色底部透明384孔细胞培养板中，40μL细胞悬液每孔，每孔包含6000个细胞，细胞板放入二氧化碳培养箱，37摄氏度过夜孵育；
14)将待测化合物用100％DMSO稀释到10mM作为第一个浓度，然后再用移液器进行3倍稀释至第9个浓度，即从10mM稀释至1.52μM。使用ECHO仪器，转移40nL化合物加入细胞板中，低速离心，细胞板放回二氧化碳培养箱继续孵育1小时，此时化合物浓度为10μM至1.52nM，DMSO浓度为0.1％；
15)结束孵育后，每孔加入40μL 8％的多聚甲醛固定液，室温静止20分钟；
16)使用PBS缓冲液洗涤两遍；每孔加入40μL预冷的甲醇溶液；使用PBS缓冲液洗涤两遍；每孔加入20μL的封闭液，室温静置60分钟；
17)移除封闭液，每孔加入20μL的一抗抗体混合液(Phospho-p44/42 MAPK(Erk1/2)(Thr202/Tyr204)(D13.14.4E)Rabbit mAb稀释1000倍，GAPDH(D4C6R)Mouse mAb稀释2000倍)，4摄氏度过夜孵育；
18)移除一抗混合液，使用PBS缓冲液洗涤三遍；每孔加入20μL的二抗抗体混合液(IRDye 800CW Goat anti-Rabbit IgG(H+L)稀释2000倍，IRDye 680RD Goat anti Mouse IgG(H+L)稀释2000倍)，室温避光孵育60分钟；
19)移除一抗混合液，使用PBS缓冲液洗涤三遍，1000转每分钟，倒置离心1分钟，使用Odyssey CLx仪器扫描板子。
4.数据分析：
利用方程式(800通道荧光总值/700通道荧光总值)计算出相对表达量，再利用方程式(Max- Sample)/(Max-Min)*100％将原始数据换算成抑制率，IC50的值即可通过四参数进行曲线拟合得出(Excel中插件XLfit中log(inhibitor)vs.response--Variable slope模式得出)。
Max孔:阳性对照孔为阳性药最高浓度
Min孔：阴性对照孔读值为0.1％DMSO细胞孔
5实验结果
结果见表9。
表9化合物对AsPC-1细胞p-ERK抑制的IC50值
化合物编号 AsPC-1 p-ERK IC50(nM)
化合物12A的三氟乙酸盐 15.0
化合物13A的三氟乙酸盐 4.2
化合物15的三氟乙酸盐 5.6
化合物18的盐酸盐 10.1
化合物19的盐酸盐 2.5
化合物20的盐酸盐 1.3
实验结论：本发明化合物具有显著的KRASG12D突变AsPC-1细胞p-ERK抑制作用。
实验例5.化合物在肿瘤细胞系AsPC-1中的抗细胞增殖作用
研究目的
本实验通过检测化合物在KRASG12D突变的肿瘤细胞系AsPC-1中对体外细胞活性的影响而研究化合物抑制细胞增殖的作用。
实验材料
细胞系：AsPC-1；肿瘤类型：胰腺癌；生长特点：贴壁生长；培养方法：RPMI 1640+10％FBS
Ultra Low Cluster-96孔板(Corning-7007)
Greiner CELLSTAR 96-孔板(#655090)
Promega CellTiter-Glo 3D发光法细胞活性检测试剂盒(Promega-G9683)
2104-10 EnVision读板器，PerkinElmer
RPMI 1640，DMEM，PBS(磷酸盐缓冲溶液)，FBS(胎牛血清)，Antibiotic-antimycotic(抗生素-抗真菌药)，L-glutamine(L-谷氨酰胺)，DMSO(二甲基亚砜)
实验方法及步骤
细胞培养
将肿瘤细胞系按培养方法所示的培养条件在37℃，5％CO2的培养箱中进行培养。定期传代，取处于对数生长期的细胞用于铺板。
细胞铺板
用台盼兰进行细胞染色并计数活细胞。
将细胞浓度调整至合适浓度。
细胞系：AsPC-1；密度(每孔)：7000个细胞。
在ULA培养板中每孔加入135μL细胞悬液，在空白对照空中加入同样体积且不含细胞的培养液。
铺板后，立刻在室温条件下将ULA培养板离心10分钟，离心条件1000rpm。注意：在离心后，务必 小心处理后续操作，不要造成不必要的震荡。
将培养板在37℃,5％CO2,及100％相对湿度的培养箱中培养过夜。
10X化合物工作液的配制及化合物处理细胞(第一天)
配制好10X化合物工作液(DMSO 10X工作液)后，分别向ULA培养板内加入15μL的10X化合物工作液，在溶媒对照和空白对照中加入15μL DMSO-细胞培养液混合液。
将96孔细胞板放回培养箱中培养120小时。
每天观察细胞成球情况直至实验终点。
CellTiter-Glo发光法细胞活性检测(第五天)
以下步骤按照Promega CellTiter-Glo 3D发光法细胞活性检测试剂盒(Promega#G9683)的说明书来进行。
在每孔中加入150μL(等于每孔中细胞培养液体积)的CellTiter-Glo 3D试剂。用铝箔纸包裹细胞板以避光。
将培养板在轨道摇床上振摇5分钟。
小心的用移液管上下吹打10次，混匀空内混合物。在继续下一步之前需确保细胞球体充分被分离。
然后将ULA培养板内的溶液转移至黑底培养板(#655090)中，在室温放置25分钟以稳定发光信号。
在2104EnVision读板器上检测发光信号。
数据分析
用下列公式来计算检测化合物的抑制率(Inhibition rate，IR)：IR(％)＝(1–(RLU化合物–RLU空白对照)/(RLU溶媒对照–RLU空白对照))*100％。在Excel中计算不同浓度化合物的抑制率，然后用GraphPad Prism软件作抑制曲线图和计算相关参数，包括最小抑制率，最大抑制率及IC50。
实验结果
结果见表10。
表10化合物对KRASG12D突变细胞AsPC-1抑制的IC50值
化合物编号 KRASG12D AsPC-1 IC50(nM)
化合物1B 74.6
化合物6 94.6
化合物7的盐酸盐 37.7
实验结论：本发明化合物对KRASG12D突变细胞AsPC-1显示了优异的抗增殖作用。
实验例6.化合物在肿瘤细胞系AsPC-1中的抗细胞增殖作用
1.目的
通过3D-CTG的方法，验证化合物在KRASG12D突变的肿瘤细胞系AsPC-1中的抗细胞增殖的作用。2.实验材料：
ASPC-1细胞购自ATCC；RPMI-1640培养基购自ATCC；胎牛血清购自Ausgenex；3D assay kit(3D-CTG)购自Promega；CellCarrier-96Spheroid ULA/CS购自PE。
3.实验方法：
20)ASPC-1细胞种于透明96孔细胞培养板中，195μL细胞悬液每孔，每孔包含2000个细胞；
21)将待测化合物用100％DMSO稀释到10mM作为第一个浓度，然后再用移液器进行5倍稀释至第8个浓度，即从10mM稀释至0.13μM。取2μL梯度稀释后的化合物加入48μL细胞培养基中进行二次稀释，混匀后，取5μL二次稀释后化合物加入到对应195μL的细胞板孔中，细胞板放回二氧化碳培养 箱孵育7天，此时化合物浓度为10μM至0.128nM，DMSO浓度为0.1％；
22)结束孵育后，弃掉100μL细胞上清，并加入60μL 3D-CTG每孔，室温200rpm震荡孵育20分钟；并放入孵箱，室温孵育1h。
23)吸取100μL孔板中的上清转移至96孔黑色底透板中，在BMG中读取luminescence。
4.数据分析：
利用方程式Inhibition％＝(Ave_H-Sample)/(Ave_H-Ave_L)将原始数据换算成抑制率，IC50的值即可通过四参数进行曲线拟合得出(GraphPad Prism中log(inhibitor)vs.response--Variable slope模式得出)。
H孔:DMSO孔的读值
L孔：Medium的读值
5实验结果
结果见表11。
表11化合物对KRASG12D突变细胞AsPC-1抑制的IC50值
化合物编号 KRASG12D AsPC-1 IC50(nM)
化合物8的盐酸盐 9.0
化合物16的三氟乙酸盐 18.6
化合物20的盐酸盐 9.6
实验结论：本发明化合物对KRASG12D突变细胞AsPC-1显示了优异的抗增殖作用。
实验例7.CD-1小鼠口服及静脉注射受试化合物的药代动力学研究
实验目的
测试CD-1小鼠口服及静脉注射化合物的体内药代动力学。
实验步骤
受试化合物与5％DMSO+95％(10％HP-β-CD)水溶液混合，涡旋并超声，制备得到0.5mg/mL澄清溶液(静脉)或3mg/mL澄清溶液(口服)，微孔滤膜过滤后备用。选取7至10周龄的雄性CD-1小鼠，静脉注射给予候选化合物溶液。口服给予候选化合物溶液。收集一定时间的全血，制备得到血浆，以LC-MS/MS方法分析药物浓度，并用Phoenix WinNonlin软件(美国Pharsight公司)计算药代参数。
实验结果
表12.静脉(IV)PK数据
供试品 化合物8的盐酸盐
给药剂量(mg/kg) 2.22
C0(nM) 1704
T1/2(h) 12.6
Vd(L/kg) 52.9
Cl(mL/Kg/min) 76
AUC0-last(nM.h) 598
表13.口服(PO)PK数据
供试品 化合物8的盐酸盐
给药剂量(mg/kg) 101
Cmax(nM) 4410
Tmax 1
T1/2(h) 7.26
AUC0-last(nM.h) 9977
F 36.7％
实验结论
本发明化合物在小鼠体内的半衰期长，暴露量高，且具有良好的口服生物利用度，药代动力学性质良好。
实验例8.体内药效学研究
实验方法：
建立人结肠癌GP2D细胞皮下异种移植肿瘤Balb/c nude小鼠模型，将0.2mL(2×106个)GP2D细胞(加基质胶，体积比为1:1)皮下接种于每只小鼠的右后背，当肿瘤平均体积达到140mm3时开始分组给药，每组6只。实验当天动物按组别给予相对应的药物。第一组G1设阴性对照组，单独灌胃给予5％DMSO+95％(10％HP-β-CD)，第二组G2-第四组G4给予给化合物8的盐酸盐，给药剂量和方案如表14所示。
表14受试物对人弥漫大B淋巴瘤TMD8小鼠移植瘤的药效研究

注：PO表示口服，QD表示每日一次，BID表示每日一次。
实验期间每周测定2次动物的体重和肿瘤的大小，同时每天观察并记录动物的临床症状，每次给药均参考最近一次称量的动物体重。
肿瘤的测量用数显游标卡尺来测定长(a)和宽(b)，肿瘤体积(Tumor volume，TV)的计算公式为：TV＝a×b2/2。
实验结果：
化合物8的盐酸盐对人结肠癌GP2D小鼠异种移植瘤有显著的抑制作用，给药28天后，第二组G2(50mg/kg,PO,QD)在第28天时，肿瘤体积抑制率TGI(％)为47.0％；第三组G3(100mg/kg,PO,QD)和第四组G4(200mg/kg,PO,QD)在第28天时，肿瘤体积抑制率TGI(％)分别为75.9％和94.7％；详细结果如表15所示。
表15受试物在人结肠癌GP2D小鼠异种移植瘤模型中对动物肿瘤大小的影响


注：N/A表示未检测。
实验结论：在体内药效方面，本发明化合物在GP2D细胞系中表现出良好的抑制肿瘤作用，存在明显的剂量相关性。

Claims (20)

  1. 式(VI)所示化合物或其药学上可接受的盐，
    其中，
    选自单键或双键；
    T1选自CRa和N；
    T2选自CH和N；
    L1选自O和S；
    R1选自苯基、萘基、所述苯基、萘基、分别独立地任选被1、2、3、4或5个Rb取代；
    R2选自H；
    R3选自H、F、CN、CH3和OCH3，所述CH3和OCH3任选被1、2或3个卤素取代；
    或者，R2和R3与相连的原子形成苯基或5-6元杂芳基，所述苯基或5-6元杂芳基任选被1、2或3个卤素取代；
    R4不存在，或选自H、CH3和-CH＝CH2，所述CH3和-CH＝CH2任选被1、2或3个卤素取代；
    或者，R3和R4与相连的原子形成所述任选被1或2个Rc取代；
    或者，R3和R4与相连的原子形成环丙基，所述环丙基任选被1、2或3个卤素取代；
    Ra选自H和CN；
    各Rb分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、C1-3烷基、C1-3烷氧基、C2-4炔基、C2-4炔基-环丙基、C2-3烯基、-C(＝O)C1-3烷基和C3-5环烷基，所述C1-3烷基、C1-3烷氧基、C2-4炔基、C2-4炔基-环丙基、C2-3烯基、-C(＝O)C1-3烷基和C3-5环烷基任选被1、2、3、4或5个卤素取代；
    各Rc分别独立地选自F、Cl、Br、I、CN、CH3和OCH3；
    m选自0或1。
  2. 式(P-1)所示化合物或其药学上可接受的盐，
    其中，
    选自单键或双键；
    L1选自O和S；
    R1选自苯基、萘基、5-10元杂芳基、所述苯基、萘基、5-10元杂芳基、 分别独立地任选被1、2、3、4或5个Rb取代，R5选自所述分别独立地任选被1、2、3、4或5个Rd取代；
    或者，R1选自5-10元杂芳基，所述5-10元杂芳基任选被1、2、3、4或5个Rb取代，R5选自所述任选被1、2、3、4或5个Rd取代；
    各Rb分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、C1-3烷基、C1-3烷氧基、C2-4炔基、C2-4炔基-环丙基、C2-3烯基、-C(＝O)C1-3烷基和C3-5环烷基，所述C1-3烷基、C1-3烷氧基、C2-4炔基、C2-4炔基-环丙基、C2-3烯基、-C(＝O)C1-3烷基和C3-5环烷基任选被1、2、3、4或5个R取代；
    各Rd分别独立地选自F、Cl、Br、I、CN、CH3和OCH3；
    各R分别独立地选自卤素和D。
  3. 式(P-2)所示化合物或其药学上可接受的盐：
    其中，
    选自单键或双键；
    L1选自O和S；
    各Rb分别独立地选自F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、C1-3烷基、C1-3烷氧基、C2-4炔基、C2-4炔基-环丙基、C2-3烯基、-C(＝O)C1-3烷基和C3-5环烷基，所述C1-3烷基、C1-3烷氧基、C2-4炔基、C2-4炔基-环丙基、C2-3烯基、-C(＝O)C1-3烷基和C3-5环烷基任选被1、2、3、4或5个R取代；
    各R分别独立地选自卤素和D；
    v选自1、2、3、4或5；
    条件是，至少有一个Rb被1、2、3、4或5个D取代。
  4. 根据权利要求1所述化合物或其药学上可接受的盐，其中，各Rb分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、CH3、CH2CH3、OCH3、OCH2CH3、-CH＝CH2、-C≡CH、-C≡CCH3、-C≡CCH2CH3、和环丙基，所述CH3、CH2CH3、OCH3、OCH2CH3、-CH＝CH2、-C≡CH、-C≡CCH3、-C≡CCH2CH3、和环丙基任选被1、2、3、4或5个卤素取代；或者，各Rb分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、CH3、CH2F、CF2H、CF3、CH2CH3、CF2CF3、-CH＝CH2、-C≡CH、-C≡CF、-C≡CBr、-C≡CCH3、-C≡CCF3、-C≡CCH2CH3、和环丙基。
  5. 根据权利要求2或3所述化合物或其药学上可接受的盐，其中，各Rb分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、CH3、CH2CH3、OCH3、OCH2CH3、-CH＝CH2、-C≡CH、-C≡CCH3、-C≡CCH2CH3、和环丙基，所述CH3、CH2CH3、OCH3、OCH2CH3、-CH＝CH2、-C≡CH、-C≡CCH3、-C≡CCH2CH3、和环丙基任选被1、2、3、4或5个R取代；或者，各Rb分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、CH3、CD3、CH2F、CF2H、CF3、CH2CH3、CF2CF3、-CH＝CH2、-C≡CH、-C≡CF、-C≡CBr、-C≡CCH3、-C≡CCF3、-C≡CCH2CH3、和环丙基。
  6. 根据权利要求1所述化合物或其药学上可接受的盐，其中，R1选自
  7. 根据权利要求2所述化合物或其药学上可接受的盐，其中，R1选自
  8. 根据权利要求1所述化合物或其药学上可接受的盐，其中，R3选自H、F、CN、CH3和OCH3。
  9. 根据权利要求1所述化合物或其药学上可接受的盐，其中，R2和R3与相连的原子形成苯基、呋喃基和吡啶基，所述苯基、呋喃基和吡啶基任选被1个F取代。
  10. 根据权利要求1所述化合物或其药学上可接受的盐，其中，R4不存在，或选自H、CH2F和-CH＝CH2。
  11. 根据权利要求1所述化合物或其药学上可接受的盐，其中，R3和R4与相连的原子形成
  12. 根据权利要求1所述化合物或其药学上可接受的盐，其中，R3和R4与相连的原子形成
  13. 根据权利要求1所述化合物或其药学上可接受的盐，其中，结构单元选自
  14. 根据权利要求1所述化合物或其药学上可接受的盐，其中，结构单元选自
  15. 根据权利要求1、2或3所述化合物或其药学上可接受的盐，其中，结构单元选自
  16. 根据权利要求1所述化合物或其药学上可接受的盐，
    其中，
    各Rb和L1如权利要求1所定义；
    n选自0、1、2、3、4和5。
  17. 下列所示化合物或其药学上可接受的盐，





  18. 根据权利要求17所述的化合物或其药学上可接受的盐，其选自：

















  19. 根据权利要求1～18任意一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备治疗与KRASG12D突变相关疾病的药物中的应用。
  20. 根据权利要求1～19任意一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备治疗与肿瘤相关疾病的药物中的应用。
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