TWI794269B - 抑制植物病原體之組成物及方法 - Google Patents

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Abstract

本說明書在一項態樣中，提供一種處理或抑制植物之植物病原體感染之方法。該方法包括使植物與抑制植物病原體有效量之蔓越莓組成物接觸。另一態樣中，本說明書提供一種處理植物病害之組成物。該組成物包括蔓越莓組成物與傳遞蔓越莓組成物至柑橘類植物之至少一部份韌皮部之載劑。

Description

抑制植物病原體之組成物及方法
本揭露一般係有關一種用於植物病害之組成物及處理法。
黃龍病(Huanglongbing)(HLB)亦稱為柑橘綠化病、黃芽病、或黃龍病(yellow dragon)，為一種影響柑橘類植物之細菌病害。在佛羅里達州，HLB為在2003至2016之間嚴重降低影響柑橘產量的元凶，因為傳統的病蟲害生物與植物病害管理系統均無法適當處理HLB。
本揭露部份基於發現一種特別在植物病害中處理HLB之新方法。該處理法涉及對植物(例如：柑橘類植物)投與富含多酚類(如：原花青素(PAC))、苯甲酸、奎寧酸、與/或木葡聚醣之組成物，如：蔓越莓組成物。該組成物可依任何方式投與植物(例如：柑橘類植物)，例如：注射至患病之植物、噴灑在患病之植物上、植入患病之植物內、注射至患病之植物週圍土壤中、及/或噴灑在患病之植物週圍土壤上。該組成物可與載劑組合用於改良傳遞組成物進入有HLB細菌駐留之植物韌皮部中。該組成物可提供之優點為容易納入已用於柑橘農業之綜合病蟲害管理系統中。該組成物可提供之優點為其等衍生自天然物，因為可以用於生產有機植物產物。
因此，一項態樣中，本說明書提出一種處理植物病害之組成物，其包括1mg/g至100mg/g之酚類物質及可以讓組成物傳遞至柑橘類植物之至少一部份韌皮部之佐劑。
有些實施例中，該組成物包括0.01%至14%之奎寧酸。有些例子中，該組成物包括約0.1%至約4%之奎寧酸。
有些實施例中，該組成物包括0.01%至20%之蘋果酸與檸檬酸中至少一種。有些例子中，該組成物包括約0.1%至約4%之檸檬酸。有些例子中，該組成物包括約0.1%至約3%之蘋果酸。
有些實施例中，該組成物包括1,000mg/kg至100,000mg/kg之原花青素。有些例子中，該組成物包括約2,000mg/kg至約5,000mg/kg之原花青素。有些例子中，該組成物包括約30,000mg/kg至約60,000mg/kg之原花青素。
有些實施例中，該組成物包括至少一種葉部、壓餅或果實之逆向流萃取濃縮物、同向流萃取濃縮物、搗泥濃縮物、超濾滯留液、樹脂萃取物、及次臨界水萃取物。
有些實施例中，該組成物係衍生自蔓越莓。
有些實施例中，該組成物係衍生自以下一或多種：蔓越莓、藍莓、接骨木果、野櫻莓、越橘、樹莓、葡萄、醋栗、越橘莓、草莓、黑莓、雲莓、黑醋栗、紅醋栗、白醋栗、及桂皮、或其任何組合。
有些實施例中，該佐劑包括界面活性劑。
有些實施例中，該組成物包括澱粉降解酵素，其中該佐劑之組態在於傳遞澱粉降解酵素至植物之至少一部份韌皮部。有些例子中，該澱粉降解酵素為澱粉酶。
有些實施例中，該佐劑包括至少一種礦物油、園藝用油、植物油、及種子油。
有些實施例中，該佐劑包括單寧酶酵素。
有些實施例中，該組成物包括至少一種抗生素。
有些實施例中，該組成物包括至少一種β-胺基丁酸、2-去氧-D-葡萄糖、水楊酸、草酸、海藻糖、海藻糖-6-磷酸酯、或其任何組合。
有些實施例中，該組成物包括至少一種殺昆蟲劑。
有些實施例中，該組成物包括約1 Brix(白利糖度)之蔓越莓固形物含量。
有些實施例中，該組成物包括約10 Brix之蔓越莓固形物含量。
有些實施例中，該組成物包括約20 Brix之蔓越莓固形物含量。
有些實施例中，該組成物包括約1mg/kg至約100mg/kg之花青素。
有些實施例中，該組成物包括約2,000mg/kg至約5,000mg/kg之花青素。
有些實施例中，該組成物包括約3mg/g至約12mg/g之總酚物。
有些實施例中，該組成物包括約35至約65mg/g之總酚物。
有些實施例中，該組成物包括緩衝劑。
另一態樣中，本說明書提供一種處理或抑制植物之植物病原體感染之方法，其包括由植物與抑制植物病原體有效量之組成物接觸，其中該組成物包括1mg/g至100mg/g之酚類物質。
有些實施例中，接觸植物包括由組成物刷拭或噴灑在植物上，或注入植物中。
有些實施例中，接觸植物包括噴灑、澆灌、混合、或注射組成物至植 物週圍土壤。
有些實施例中，該組成物係衍生自蔓越莓。
有些實施例中，該組成物係衍生自以下一或多種：蔓越莓、藍莓、接骨木果、野櫻莓、越橘、樹莓、葡萄、醋栗、越橘莓、草莓、黑莓、雲莓、黑醋栗、紅醋栗、白醋栗、及桂皮、或其任何組合。
有些實施例中，該組成物包括可以傳遞組成物至植物韌皮部之載劑。
有些實施例中，該載劑包括至少一種礦物油、園藝用油、植物油、及種子油。
有些實施例中，該組成物包括澱粉降解酵素。有些例子中，該澱粉降解酵素為澱粉酶。
有些實施例中，該組成物包括單寧酶酵素。
有些實施例中，該組成物包括至少一種抗生素。
有些實施例中，該植物為柑橘植物，且該植物病原體為韌皮部桿菌(Candidatus Liberibacter)。
有些實施例中，該組成物包括約1 Brix之蔓越莓固形物含量。
有些實施例中，該組成物包括約10 Brix之蔓越莓固形物含量。
有些實施例中，該組成物包括約20 Brix之蔓越莓固形物含量。
有些實施例中，該組成物包括0.01%至20%之檸檬酸與蘋果酸中至少一種。有些例子中，該組成物包括約0.1%至約4%之檸檬酸。有些例子中，該組成物包括約0.1%至約3%之蘋果酸。
有些實施例中，該組成物包括約0.01%至約14%之奎寧酸。有些例子中，該組成物包括約0.1%至約4%之奎寧酸。
有些實施例中，該組成物包括約1mg/kg至約100mg/kg之花青素。
有些實施例中，該組成物包括約2,000mg/kg至約5,000mg/kg之花青素。
有些實施例中，該組成物包括約1,000mg/kg至約100,000mg/kg之原花青素。有些例子中，該組成物包括約2,000mg/kg至約5,000mg/kg之原花青素。有些例子中，該組成物包括約30,000mg/kg至約60,000mg/kg之原花青素。
有些例子中，該組成物包括約3mg/g至約12mg/g之總酚物。有些例子中，該組成物包含約35至約65mg/g之總酚物。
另一態樣中，本說明書提供一種處理植物病害之組成物，其包括1mg/g至100mg/g之酚類物質，其中該組成物係呈肥料棒、固態肥料混合物、液態肥料混合物、土壤澆灌、包含該組成物之土壤、噴灑液、凝膠、注射組成物、或植入式組成物等形式。
有些實施例中，該組成物包括0.01%至20%之蘋果酸與檸檬酸中至少一種。
有些實施例中，該組成物包括0.01%至14%之奎寧酸。
有些實施例中，該組成物包括1,000mg/kg至100,000mg/kg之原花青素。
有些實施例中，該組成物係衍生自蔓越莓。
另一態樣中，本說明書提供一種處理植物病害之蔓越莓組成物，其包括1mg/g至100mg/g之酚類物質、0.5%至2%之奎寧酸、及超過20,000 mg/kg之原花青素。
另一態樣中，本說明書提供一種處理植物病害之蔓越莓組成物，其包括1mg/g至100mg/g之酚類物質及超過20,000mg/kg之原花青素。
另一態樣中，本說明書提供一種處理植物病害之蔓越莓組成物，其包括1mg/g至100mg/g之酚類物質，可視需要包括0.5%至2%之奎寧酸，及可視需要包括超過20,000mg/kg之原花青素。
另一態樣中，本說明書提供一種處理植物病害之蔓越莓組成物，其包括1mg/g至100mg/g之酚類物質、0.5%至6%之總有機酸(檸檬酸、蘋果酸、及奎寧酸)、及超過20,000mg/kg之原花青素。
除非另有其他定義，否則本文所採用所有技術與科學術語均具有熟悉本發明所屬相關技藝者咸了解之相同定義。本文說明本發明所採用之方法及材料；亦可採用相關技藝已知之其他合適方法及材料。僅說明該等材料、方法、與實例，並無意加以限制。本文提及之所有出版品、專利申請案、專利案、資料庫、及其他參考文獻已以引用之方式完整併入本文中。若有牴觸，將以本說明書(包括定義)為準。
本發明其他特色與優點將可由下列詳細說明及圖示、及申請專利範圍中了解。
圖1為使用蔓越莓組成物處理患有HLB之植物之系統圖。
圖2為使用蔓越莓組成物處理患有HLB之植物之方法流程圖。
圖3為出示各種不同蔓越莓組成物在1、2、與4%固形物濃度下於活體外抑制半月形韌皮部桿菌(L.crescens)之百分比之長條圖。
圖4為出示三種蔓越莓組成物於活體外對抗半月形韌皮部桿菌之最小抑制濃度之長條圖。
圖5為出示經過蔓越莓組成物處理之葉部中，由qPCR所測定CLas複本數量隨時間變化之長條圖。
圖6為出示經過蔓越莓組成物處理之葉部中，PMA效價隨時間變化之長條圖。
圖7A及7B分別為葉部在接受噴灑蔓越莓組成物之後立即及之後48小時之照片。
圖8A及8B分別為柑橘葉部在浸入對照緩衝液中之處理開始時及7天後之照片。
圖9A及9B分別為柑橘葉部在浸入蔓越莓萃取物壓餅之SWE中之處理開始時及7天後之照片。
本揭露內容說明例如：處理及預防植物病原體(如：導致HLB之細菌病原體)散播之方法。處理植物病害或蟲害之傳統方法(包括殺昆蟲劑與抗生素)經常無法好好處理HLB，因為HLB細菌α-變形菌韌皮部桿菌屬(Candidatus Liberibacter spp.)(亦稱為CLas或Las)駐留在感染之植物韌皮部內。由本文所說明組成物(如：蔓越莓組成物)與合適載劑配對組合傳遞至韌皮部內，可以改善HLB之處理。該組成物與載劑可以藉由各種不同方法傳遞至植物，如：投與噴灑液、液體、氣霧劑、固體組成物、與/或注射劑，等等。有些例子中，本文所說明組成物可能不需要載劑來處理HLB。
通常，該方法包括對需要此等處理之植物或經過判定需要此等處理之植物投與有效量之本文所說明組成物。本文所採用「處理」意指減緩植物病害(如：HLB)之至少一種徵狀，及/或減少植物中植物病原體(例如：CLas)之數量、活力、與/或生長速率。例如：有些處理HLB之例子中，處理結果可以使植物之一或多個部份(例如：葉部)之黃化比感染CLas但未處理之植物減輕。其他例子中，處理結果可以使果實生產(例如：測量果實之數量與/或大小)比感染CLas但未處理之植物提高。其他例子中，經過本文所說明組成物處理之結果可以使病害徵狀發病之速率比未處理植物減慢。其他處理HLB之例子中，處理結果可以使通常與柑橘綠化病相關之低Brix及高酸度情況減輕。又其他例子中，當採用qPCR分析得自已感染植物之樣本時，該處理結果可以提高Ct值(CLas效價之測量值)。「有效量」係指足以達到有利或所需結果時之用量。例如：醫療量係指達到所需醫療效力時之用量。此用量可與預防有效量相同或不同，其係防止 病害或病害徵狀發作時所需之用量。有效量可以投與、施加或下藥一次或多次。組成物可以每天投與一次或多次至每週投與一次或多次；包括每隔一天一次、每月一次、或每年一次。習此相關技藝者咸了解，某些因素可能影響有效處理植物所需之用量及時間，包括(但不限於)：病害嚴重性、過去之處理、植物之一般健康、年齡、及/或種類，及其他植物病害之存在。
一項實例中，蔓越莓組成物中，組成物中蔓越莓固形物濃度可為約1至65 Brix之間，例如：約1 Brix至約2 Brix、約2 Brix至約4 Brix、約4 Brix至約10 Brix、約10 Brix至約20 Brix、約20至約30 Brix、約30至約40 Brix、約40至約50 Brix、約50至約60 Brix、約60至約65 Brix、或約1 Brix、2 Brix、4 Brix、10 Brix、20 Brix、30 Brix、40 Brix、50 Brix、60 Brix、或65 Brix。
依所採用處理方法而定，可在植物上施加不同量之蔓越莓組成物。例如：在葉部施加(施加液體至植物葉部)之蔓越莓組成物可為每英畝約20至約500加侖，其中一英畝可包括老叢約80至130棵樹及新叢約140至220棵樹。當每英畝低於80棵樹時，可降低其用量。另一項實例中，當注射樹幹時，每100吋樹幹直徑可注射約10ml至約3L。另一項實例中，當使用土壤澆灌施加法時，若一英畝包括約80至130棵樹時，每英畝可施加約1至約500加侖。當每英畝低於80棵樹時，可降低其用量。習此相關技藝者可依需要經常處理，例如：每年1至約16次，例如：每年1、2、3、4次，等等。
可使用本文所說明組成物(例如：蔓越莓組成物)處理之植物包括(但不限於)：柑橘類植物，例如：柳橙樹、橘子樹、葡萄柚樹、檸檬樹、及其等雜交種。可使用本文所說明組成物(例如：蔓越莓組成物)處理之植物病原體包括細菌、病毒、真菌、及線蟲，等等。此等植物病原體可侵襲植物之任何組織，包括葉部及根部。
病害說明
HLB通常導致感染之植物之葉脈與組織黃化，葉部感染色斑、落葉、根腐，及最後植物死亡。患病之植物亦可能生長不良，可能產生小且形狀不規則，具有部份綠皮之果實。HLB為由木虱昆蟲(亦稱為跳蟬(jumping plantlice))散播之細菌病害。HLB細菌係侷限在韌皮部之難培養原核生物α- 變形菌韌皮部桿菌屬(Candidatus Liberibacter spp.)(CLas或經常稱為Las)，尤其指柑橘韌皮部桿菌亞洲種(Ca.L.asiaticus)、柑橘韌皮部桿菌非洲種(Ca.L.africanus)、及柑橘韌皮部桿菌美洲種(Ca.L.americanus)、柑橘韌皮部桿菌亞洲種(Ca.L.asiaticus)、及其病媒柑橘木虱(Diaphorina citri)，亦稱為亞洲柑橘木虱(ACP)，為北美HLB病害之主因。木虱攝入HLB細菌，同時食用感染HLB之植物之植物組織，並且在攝食未感染植物之組織過程中傳播HLB細菌給未感染植物。已感染植物中，HLB細菌駐留在植物韌皮部內。韌皮部為植物維管束組織，從葉部向下傳送糖類與其他代謝產物。HLB細菌將原本透過韌皮部轉運至植物其他部位之糖類代謝掉，造成生長不良及植物植株黃化。此外，CLas在韌皮部內產生澱粉材料，進一步降低抗細菌劑到達CLas本身之能力。
習此相關技藝操作者咸了解，其他來自侷限於韌皮部之細菌(如：CLas以外之韌皮部桿菌(Liberibacter)，亦即已知會引起馬鈴薯與紅蘿蔔病害之茄科韌皮部桿菌(Candidatus Liberibacter solanaceous)，及已判別會引起草莓葉邊褪綠病(Marginal Chlorosis)之韌皮桿菌(Phlomobacter)，如：草莓韌皮桿菌(Candidatus Phlomobacter fragariae))之植物病害亦可採用本文說明之組成物及方法處理。除了上述變形菌以外，本文所說明組成物及方法亦可處理無壁細菌，亦稱為柔膜菌，如：植原體及螺原體。由植原體引起之植物病害實例包括例如：棕櫚之致死性黃化病，及桃子病害，如：桃叢簇花葉病、小桃病、黃桃病、及桃子紅縫病。由螺原體引起之植物病害實例包括例如：柑橘頑固病(由柑橘螺原體(Spiroplasma citri)引起)及玉米矮化病(由玉米矮縮螺原體(Spiroplasma kunkelii)引起)。
習此相關技藝操作者咸了解，其他植物病害，如：彼等駐留在木質部中者，經常會前進到韌皮部，亦可使用本文所說明組成物及方法處理。例如：皮爾斯病害(Pierce’s disease)(由木質部難養菌(Xyllella fastidiosa)引起)及番茄潰瘍病(由密西根棍狀桿菌(Cornebacterium michiganense)引起)可使用蔓越莓組成物處理。由於通常比較容易傳遞至植物之木質部，而非植物之韌皮部，因此施加植物之組成物中之蔓越莓固形物濃度可以低於處理以韌皮部為主之病害時之濃度。
此外，真菌病害，如：大豆銹病(由豆薯層銹菌(Phakopsora pachyrhizi)引起)、木本植物之月桂萎凋病(Laurel Wilt)(月桂萎凋病菌(Raffaelea lauricola))、及櫟樹猝死病(由枝幹疫黴(Phytophthora ramorum)引起)及病毒(如：玉米條紋病(Maize Stripe)(由細病毒引起))亦可使用蔓越莓組成物處理。
抑制病害之蔓越莓組成物
富含多酚類(如：原花青素)、或苯甲酸或奎寧酸或木葡聚醣或其組合之之組成物可以有效對抗植物病原體，如：CLas。蔓越莓組成物特別適用於本文所說明方法。蔓越莓組成物為包含蔓越莓植物之組份(如：蔓越莓)或其衍生之組份之組成物，其展現至少一種抗細菌性質(例如：殺細菌或制細菌性質)。蔓越莓組成物對抗CLas之活性可包括例如：作為抗微生物劑、生物膜瓦解劑、及/或數量感應機轉之作用，或作為抗黏附劑，以破壞微生物群。
各種不同蔓越莓組成物可能具有不同含量之酸類(例如：檸檬酸、蘋果酸、與奎寧酸)及酚類物質，包括花青素與PAC。酚類物質包括多酚類與酚酸。多酚類中，有類黃酮與其他多酚類，如：白藜蘆醇。類黃酮可為黃烷或聚黃烷醇類，如：原花青素(PAC)。黃烷可為花青素、或黃酮醇或黃烷醇類。適合處理如：HLB之植物病害之蔓越莓組成物可採用已知蔓越莓加工方法製造。例如：蔓越莓組成物可包括彼等衍生自蔓越莓壓餅、葉部、與/或果實之次臨界水萃取物(SWE)。另一項實例中，蔓越莓組成物可包括來自逆向流萃取(CCE)過程之濃縮物。適用於本說明方法之許多蔓越莓組成物列於下表1。
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CCE濃縮物為採用逆向流萃取過程產生之濃縮物。CCE濃縮物可由來自先經過切片或劃破皮之解凍果實之蔓越莓果汁，在逆向流萃取器中使用流水萃取產生。逆向流萃取期間產生之萃取物隨後利用超濾及蒸發法濃縮。逆向流萃取過程實例之詳細內容可參見美國專利案案號5,419,251。CCE濃縮物實例可為約20-25 Brix固形物含量、約2-4%檸檬酸、約2-3%蘋果酸、約3-4%奎寧酸，且可能包含約70-80mg/kg花青素、約2,000-2,500mg/kg PAC、與約4-5mg/g總酚物。衍生自蔓越莓之CCE濃縮物實例示於上表1。
搗泥濃縮物可使用錘磨機打破蔓越莓果實，使用果膠酶消解果膠，及傾析或壓製已消解之材料來產生。搗泥萃取物隨後可利用超濾及蒸發法濃縮。搗泥濃縮物實例可為約20-25 Brix固形物含量、約2-3%檸檬酸、約2-3% 蘋果酸、約2-4%奎寧酸，且可能包含約40-60mg/kg花青素、約4,000-5,000mg/kg PAC、與約7-8mg/g總酚物。衍生自蔓越莓之搗泥濃縮物實例示於上表1。
樹脂萃取物可以透過陰離子交換層析過程，排除蔓越莓果汁物流中之酸後產生。製造樹脂萃取物之方法可包括在單一陰離子交換樹脂或一系列樹脂上吸附有機酸(例如：檸檬酸、蘋果酸、及奎寧酸)，並從水性混合物中分開溶離出每一種酸。一項實例中，由第一種樹脂結合檸檬酸與蘋果酸，及由第二種樹脂結合奎寧酸。有些實施例中，可在管柱外(例如：以批式吸附過程)進行陰離子交換。樹脂萃取物實例可為約18-20 Brix固形物含量、約0-1%檸檬酸、約0-1%蘋果酸、約0-1%奎寧酸，且可能包含約4,000-5,000mg/kg花青素、約50,000-70,000mg/kg PAC、與約50-70mg/g總酚物。衍生自蔓越莓之樹脂萃取物實例示於上表1。
樹脂萃取物可與單寧酶酵素混合。單寧酶酵素有助於水解含在樹脂萃取物中之PAC形成較小分子量。由約0.5%單寧酶酵素(Sumizyme TAN)與樹脂萃取物混合形成溶液。樹脂萃取物與單寧酶之混合物實例可為約16-20 Brix固形物含量、約0-1%檸檬酸、約0-1%蘋果酸、約0-1%奎寧酸，且可能包含約4,000-5,000mg/kg花青素、約40,000-60,000mg/kg PAC、與約70-80mg/g總酚物。衍生自蔓越莓之樹脂萃取物實例示於上表1。
超濾(UF)滯留液為包括懸浮固體與高分子量溶質(包括原花青素)之溶液，且可由CCE濃縮物經過超濾產生。有些實例中，UF滯留液可由CCE濃縮通過分子量截斷值為2,000至10,000道耳吞之間之超濾膜系過濾產生。UF滯留液實例可為約20-25 Brix固形物含量、約2-3%檸檬酸、約1-2%蘋果酸、約1-3%奎寧酸，且可能包含約2,000-3,000mg/kg花青素、約30,000-50,000mg/kg PAC、與約12-16mg/g總酚物。衍生自蔓越莓之UF滯留液實例示於上表1。
亦可使用壓餅、葉、及果實之次臨界水萃取物(SWE)。SWE萃取物可由壓餅、葉、或果實在約160℃及約2000psi壓力下處理後產生。由壓餅製成之SWE濃縮物實例可為約18-22 Brix固形物含量、約0-1%檸檬酸、約0-1%蘋果酸、約0-1%奎寧酸，且可能包含約5-15mg/kg花青素、約40,000-50,000mg/kg PAC、與約35-45mg/g總酚物。由葉部製成之SWE濃縮物實例可為約16-20 Brix 固形物含量、約0-1%檸檬酸、約0-1%蘋果酸、約0-1%奎寧酸，且可能包含約1-3mg/kg花青素、約25,000-35,000mg/kg PAC、與約4-6mg/g總酚物。由高酸果實製成之SWE濃縮物實例可為約18-22 Brix固形物含量、約2-4%檸檬酸、約1-3%蘋果酸、約2-4%奎寧酸，且可能包含約3-5mg/kg花青素、約1,000-3,000mg/kg PAC、與約7-9mg/g總酚物。由低酸果實製成之SWE濃縮物實例可為約16-20 Brix固形物含量、約2-3%檸檬酸、約1-3%蘋果酸、約2-4%奎寧酸，且可能包含約5-15mg/kg花青素、約4,000-5,000mg/kg PAC、與約8-12mg/g總酚物。衍生自蔓越莓之SWE萃取物實例示於上表1。有關製造SWE萃取物之過程實例可參見美國專利申請公開案案號2018/0220680。
同向流濃縮物為由同向流萃取過程產生之濃縮物。同向流濃縮物可為在同向流萃取器中，例如：DTS系統(由Dutch TecSource設計)，從果實萃取果汁所產生。習此相關技藝者咸了解，同向流濃縮物所包括之酚類物質、有機酸類、與PAC之比例可能類似上述所討論之CCE濃縮物實例。
習此相關技藝者咸了解，上述方法及其他方法可依需要經過修飾與/或組合，產生本文說明之組成物，且所得組成物可以依特定處理法適當調整，例如：稀釋、濃縮、選擇性富集，等等。
有些例子中，本文所說明處理植物病害之組成物包括Brix含量為約1至65 Brix，例如：約1 Brix至約2 Brix、約1 Brix至約5 Brix、約1 Brix至約10 Brix、約1 Brix至約20 Brix、約1 Brix至約30 Brix、約1 Brix至約40 Brix、約1 Brix至約50 Brix、約1 Brix至約60 Brix、約1 Brix至約65 Brix、約2 Brix至約5 Brix、約2 Brix至約10 Brix、約2 Brix至約20 Brix、約2 Brix至約30 Brix、約2 Brix至約40 Brix、約2 Brix至約50 Brix、約2 Brix至約60 Brix、約2 Brix至約65 Brix、約5 Brix至約10 Brix、約5 Brix至約20 Brix、約5 Brix至約30 Brix、約5 Brix至約40 Brix、約5 Brix至約50 Brix、約5 Brix至約60 Brix、約5 Brix至約65 Brix、約10 Brix至約20 Brix、約10 Brix至約30 Brix、約10 Brix至約40 Brix、約10 Brix至約50 Brix、約10 Brix至約60 Brix、約10 Brix至約65 Brix、約20至約30 Brix、約20 Brix至約40 Brix、約20 Brix至約50 Brix、約20 Brix至約60 Brix、約20 Brix至約65 Brix、約30至約40 Brix、約30 Brix至約50 Brix、約30 Brix至約60 Brix、約30 Brix至約65 Brix、約40至約50 Brix、約40 Brix至約60 Brix、約40 Brix至 約65 Brix、約50至約60 Brix、約50至約65 Brix、約60至約65 Brix、或約1 Brix、2 Brix、4 Brix、10 Brix、20 Brix、30 Brix、40 Brix、50 Brix、60 Brix、或65 Brix。有些實例中，本文所說明處理植物病害之組成物可為乾物組成物。
有些例子中，本文所說明處理植物病害之組成物包括0至35,000mg/kg之花青素，例如：約0mg/kg至約5mg/kg、約0mg/kg至約25mg/kg、約0mg/kg至約50mg/kg、約0mg/kg至約100mg/kg、約0mg/kg至約500mg/kg、約0mg/kg至約1,000mg/kg、約0mg/kg至約2,500mg/kg、約0mg/kg至約5,000mg/kg、約0至約10,000mg/kg、約0mg/kg至約35,000mg/kg、約5mg/kg至約25mg/kg、約5mg/kg至約50mg/kg、約5mg/kg至約100mg/kg、約5mg/kg至約500mg/kg、約5mg/kg至約1,000mg/kg、約5mg/kg至約2,500mg/kg、約5mg/kg至約5,000mg/kg、約5至約10,000mg/kg、約5mg/kg至約35,000mg/kg、約25mg/kg至約50mg/kg、約25mg/kg至約100mg/kg、約25mg/kg至約500mg/kg、約25mg/kg至約1,000mg/kg、約25mg/kg至約2,500mg/kg、約25mg/kg至約5,000mg/kg、約25至約10,000mg/kg、約25mg/kg至約35,000mg/kg、約50mg/kg至約100mg/kg、約50mg/kg至約500mg/kg、約50mg/kg至約1,000mg/kg、約50mg/kg至約2,500mg/kg、約50mg/kg至約5,000mg/kg、約50至約10,000mg/kg、約50mg/kg至約35,000mg/kg、約100mg/kg至約500mg/kg、約100mg/kg至約1,000mg/kg、約100mg/kg至約2,500mg/kg、約100mg/kg至約5,000mg/kg、約100至約10,000mg/kg、約100mg/kg至約35,000mg/kg、約500mg/kg至約1,000mg/kg、約500mg/kg至約2,500mg/kg、約500mg/kg至約5,000mg/kg、約500至約10,000mg/kg、約500mg/kg至約35,000mg/kg、約1,000mg/kg至約2,500mg/kg、約1,000mg/kg至約5,000mg/kg、約1,000至約10,000mg/kg、約1,000mg/kg至約35,000mg/kg、約2,500mg/kg至約5,000mg/kg、約2,500至約10,000mg/kg、約2,500mg/kg至約35,000mg/kg、約5,000至約10,000mg/kg、約5,000mg/kg至約35,000mg/kg、約10,000mg/kg至約35,000mg/kg、或約0mg/kg、約5mg/kg、約25mg/kg、約50mg/kg、約100mg/kg、約500mg/kg、約1,000mg/kg、約2,500mg/kg、約5,000mg/kg、約10,000mg/kg、或約35,000mg/kg。
有些例子中，本文所說明處理植物病害之組成物包括0至500,000mg/kg之原花青素(PAC)，例如：約0mg/kg至約2,500mg/kg、約0mg/kg至約5,000 mg/kg、約0mg/kg至約10,000mg/kg、約0mg/kg至約25,000mg/kg、約0mg/kg至約50,000mg/kg、約0mg/kg至約75,000mg/kg、約0mg/kg至約100,000mg/kg、約0mg/kg至約200,000mg/kg、約0mg/kg至約300,000mg/kg、約0mg/kg至約400,000mg/kg、約0mg/kg至約500,000mg/kg、約2,500mg/kg至約5,000mg/kg、約2,500mg/kg至約10,000mg/kg、約2,500mg/kg至約25,000mg/kg、約2,500mg/kg至約50,000mg/kg、約2,500mg/kg至約75,000mg/kg、約2,500mg/kg至約100,000mg/kg、約2,500mg/kg至約200,000mg/kg、約2,500mg/kg至約300,000mg/kg、約2,500mg/kg至約400,000mg/kg、約2,500mg/kg至約500,000mg/kg、約5,000mg/kg至約10,000mg/kg、約5,000mg/kg至約25,000mg/kg、約5,000mg/kg至約50,000mg/kg、約5,000mg/kg至約75,000mg/kg、約5,000mg/kg至約100,000mg/kg、約5,000mg/kg至約200,000mg/kg、約5,000mg/kg至約300,000mg/kg、約5,000mg/kg至約400,000mg/kg、約5,000mg/kg至約500,000mg/kg、約10,000mg/kg至約25,000mg/kg、約10,000mg/kg至約50,000mg/kg、約10,000mg/kg至約75,000mg/kg、約10,000mg/kg至約100,000mg/kg、約10,000mg/kg至約200,000mg/kg、約10,000mg/kg至約300,000mg/kg、約10,000mg/kg至約400,000mg/kg、約10,000mg/kg至約500,000mg/kg、約25,000mg/kg至約50,000mg/kg、約25,000mg/kg至約75,000mg/kg、約25,000mg/kg至約100,000mg/kg、約25,000mg/kg至約200,000mg/kg、約25,000mg/kg至約300,000mg/kg、約25,000mg/kg至約400,000mg/kg、約25,000mg/kg至約500,000mg/kg、約50,000mg/kg至約75,000mg/kg、約50,000mg/kg至約100,000mg/kg、約50,000mg/kg至約200,000mg/kg、約50,000mg/kg至約300,000mg/kg、約50,000mg/kg至約400,000mg/kg、約50,000mg/kg至約500,000mg/kg、約75,000mg/kg至約100,000mg/kg、約75,000mg/kg至約200,000mg/kg、約75,000mg/kg至約300,000mg/kg、約75,000mg/kg至約400,000mg/kg、約75,000mg/kg至約500,000mg/kg、約100,000mg/kg至約200,000mg/kg、約100,000mg/kg至約300,000mg/kg、約100,000mg/kg至約400,000mg/kg、約100,000mg/kg至約500,000mg/kg、約200,000mg/kg至約300,000mg/kg、約200,000mg/kg至約400,000mg/kg、約200,000mg/kg至約500,000mg/kg、約300,000mg/kg至約400,000mg/kg、約300,000mg/kg至約500,000mg/kg、約400,000mg/kg至約500,000mg/kg、或約0 mg/kg、約2,500mg/kg、約5,000mg/kg、約10,000mg/kg、約25,000mg/kg、約50,000mg/kg、約75,000mg/kg、約100,000mg/kg、約200,000mg/kg、約300,000mg/kg、約400,000mg/kg、或約500,000mg/kg。表1中原花青素濃度係採用美國專利申請公開案2017/0181458A1中所說明Ocean Spray之二甲基胺基桂皮醛(DMAC)方法測定。
有些例子中，適用於本文所說明處理植物病害之組成物包括0至700mg/g之總酚物，例如：約0mg/g至約5mg/g、約0mg/g至約10mg/g、約0mg/g至約25mg/g、約0mg/g至約50mg/g、約0mg/g至約75mg/g、約0mg/g至約100mg/g、約0mg/g至約150mg/g、約0mg/g至約200mg/g、約0mg/g至約400mg/g、約0mg/g至約600mg/g、約0mg/g至約700mg/g、約5mg/g至約10mg/g、約5mg/g至約25mg/g、約5mg/g至約50mg/g、約5mg/g至約75mg/g、約5mg/g至約100mg/g、約5mg/g至約150mg/g、約5mg/g至約200mg/g、約5mg/g至約400mg/g、約5mg/g至約600mg/g、約5mg/g至約700mg/g、約10mg/g至約25mg/g、約10mg/g至約50mg/g、約10mg/g至約75mg/g、約10mg/g至約100mg/g、約10mg/g至約150mg/g、約10mg/g至約200mg/g、約10mg/g至約400mg/g、約10mg/g至約600mg/g、約10mg/g至約700mg/g，約25mg/g至約50mg/g、約25mg/g至約75mg/g、約25mg/g至約100mg/g、約25mg/g至約150mg/g、約25mg/g至約200mg/g、約25mg/g至約400mg/g、約25mg/g至約600mg/g、約25mg/g至約700mg/g、約50mg/g至約75mg/g、約50mg/g至約100mg/g、約50mg/g至約150mg/g、約50mg/g至約200mg/g、約50mg/g至約400mg/g、約50mg/g至約600mg/g、約50mg/g至約700mg/g、約75mg/g至約100mg/g、約75mg/g至約150mg/g、約75mg/g至約200mg/g、約75mg/g至約400mg/g、約75mg/g至約600mg/g、約75mg/g至約700mg/g、約100mg/g至約150mg/g、約100mg/g至約200mg/g、約100mg/g至約400mg/g、約100mg/g至約600mg/g、約100mg/g至約700mg/g、約150mg/g至約200mg/g、約150mg/g至約400mg/g、約150mg/g至約600mg/g、約150mg/g至約700mg/g、約200mg/g至約400mg/g、約200mg/g至約600mg/g、約200mg/g至約700mg/g、約400mg/g至約600mg/g、約400mg/g至約700mg/g、約600mg/g至約700mg/g、或約0mg/g、約5mg/g、約10mg/g、約25mg/g、約50mg/g、約75mg/g、約100mg/g、約150mg/g、約200mg/g、 約400mg/g、約600mg/g、或約700mg/g。本文所說明組成物之總酚物係採用福林(Folin-Ciocalteu)方法測定。
有些例子中，本文所說明處理植物病害之組成物包括0%至20%之檸檬酸，例如：約0%至約0.5%、約0%至約1%、約0%至約1.5%、約0%至約2%、約0%至約2.5%、約0%至約3%、約0%至約4%、約0%至約5%、約0%至約5%、約0%至約10%、約0%至約15%、約0%至約20%、約0.1%至約0.5%、約0.1%至約1%、約0.1%至約1.5%、約0.1%至約2%、約0.1%至約2.5%、約0.1%至約3%、約0.1%至約4%、約0.1%至約5%、約0.1%至約5%、約0.1%至約10%、約0.1%至約15%、約0.1%至約20%、約0.5%至約1%、約0.5%至約1.5%、約0.5%至約2%、約0.5%至約2.5%、約0.5%至約3%、約0.5%至約4%、約0.5%至約5%、約0.5%至約5%、約0.5%至約10%、約0.5%至約15%、約0.5%至約20%、約1%至約1.5%、約1%至約2%、約1%至約2.5%、約1%至約3%、約1%至約4%、約1%至約5%、約1%至約5%、約1%至約10%、約1%至約15%、約1%至約20%、約1.5%至約2%、約1.5%至約2.5%、約1.5%至約3%、約1.5%至約4%、約1.5%至約5%、約1.5%至約5%、約1.5%至約10%、約1.5%至約15%、約1.5%至約20%、約2%至約2.5%、約2%至約3%、約2%至約4%、約2%至約5%、約2%至約5%、約2%至約10%、約2%至約15%、約2%至約20%、約2.5%至約3%、約2.5%至約4%、約2.5%至約5%、約2.5%至約5%、約2.5%至約10%、約2.5%至約15%、約2.5%至約20%、約3%至約4%、約3%至約5%、約3%至約5%、約3%至約10%、約3%至約15%、約3%至約20%、約4%至約5%、約4%至約10%、約4%至約15%、約4%至約20%、約5%至約10%、約5%至約15%、約5%至約20%、約10%至約15%、約10%至約20%、約15%至約20%、或約0.1%、約0.5%、約1%、約1.5%、約2%、約2.5%、約3%、約4%、約5%、約10%、約15%、或約20%。
有些例子中，本文所說明處理植物病害之組成物包括0%至20%之蘋果酸，例如：約0%至約0.5%、約0%至約1%、約0%至約1.5%、約0%至約2%、約0%至約2.5%、約0%至約3%、約0%至約4%、約0%至約5%、約0%至約5%、約0%至約10%、約0%至約15%、約0%至約20%、約0.1%至約0.5%、約0.1%至約1%、約0.1%至約1.5%、約0.1%至約2%、約0.1%至約2.5%、約0.1%至約3%、約0.1%至約4%、約0.1%至約5%、約0.1%至約5%、約0.1%至約10%、約 0.1%至約15%、約0.1%至約20%、約0.5%至約1%、約0.5%至約1.5%、約0.5%至約2%、約0.5%至約2.5%、約0.5%至約3%、約0.5%至約4%、約0.5%至約5%、約0.5%至約5%、約0.5%至約10%、約0.5%至約15%、約0.5%至約20%、約1%至約1.5%、約1%至約2%、約1%至約2.5%、約1%至約3%、約1%至約4%、約1%至約5%、約1%至約5%、約1%至約10%、約1%至約15%、約1%至約20%、約1.5%至約2%、約1.5%至約2.5%、約1.5%至約3%、約1.5%至約4%、約1.5%至約5%、約1.5%至約5%、約1.5%至約10%、約1.5%至約15%、約1.5%至約20%、約2%至約2.5%、約2%至約3%、約2%至約4%、約2%至約5%、約2%至約5%、約2%至約10%、約2%至約15%、約2%至約20%、約2.5%至約3%、約2.5%至約4%、約2.5%至約5%、約2.5%至約5%、約2.5%至約10%、約2.5%至約15%、約2.5%至約20%、約3%至約4%、約3%至約5%、約3%至約5%、約3%至約10%、約3%至約15%、約3%至約20%、約4%至約5%、約4%至約10%、約4%至約15%、約4%至約20%、約5%至約10%、約5%至約15%、約5%至約20%、約10%至約15%、約10%至約20%、約15%至約20%、或約0.1%、約0.5%、約1%、約1.5%、約2%、約2.5%、約3%、約4%、約5%、約10%、約15%、或約20%。
有些例子中，本文所說明處理植物病害之組成物包括0%至14%之奎寧酸，例如：約0%至約0.5%、約0%至約1%、約0%至約1.5%、約0%至約2%、約0%至約2.5%、約0%至約3%、約0%至約4%、約0%至約5%、約0%至約5%、約0%至約10%、約0%至約14%、約0.1%至約0.5%、約0.1%至約1%、約0.1%至約1.5%、約0.1%至約2%、約0.1%至約2.5%、約0.1%至約3%、約0.1%至約4%、約0.1%至約5%、約0.1%至約5%、約0.1%至約10%、約0.1%至約14%、約0.5%至約1%、約0.5%至約1.5%、約0.5%至約2%、約0.5%至約2.5%、約0.5%至約3%、約0.5%至約4%、約0.5%至約5%、約0.5%至約5%、約0.5%至約10%、約0.5%至約14%、約1%至約1.5%、約1%至約2%、約1%至約2.5%、約1%至約3%、約1%至約4%、約1%至約5%、約1%至約5%、約1%至約10%、約1%至約14%、約1.5%至約2%、約1.5%至約2.5%、約1.5%至約3%、約1.5%至約4%、約1.5%至約5%、約1.5%至約5%、約1.5%至約10%、約1.5%至約14%、約約2%至約2.5%、約2%至約3%、約2%至約4%、約2%至約5%、約2%至約5%、約2%至約10%、約2%至約14%、約2.5%至約3%、約2.5%至約4%、約2.5%至約 5%、約2.5%至約5%、約2.5%至約10%、約2.5%至約14%、約3%至約4%、約3%至約5%、約3%至約5%、約3%至約10%、約3%至約14%、約4%至約5%、約4%至約10%、約4%至約15%、約4%至約20%、約5%至約10%、約5%至約14%、約10%至約14%、或約0.1%、約0.5%、約1%、約1.5%、約2%、約2.5%、約3%、約4%、約5%、約10%、或約14%。
有些例子中，本文所說明處理植物病害之組成物包括0至30,000ppm苯甲酸，例如：約0ppm至約1,000ppm、約0ppm至約2,000ppm、約0ppm至約5,000ppm、約0ppm至約10,000ppm、約0ppm至約15,000ppm、約0ppm至約20,000ppm、約0ppm至約25,000ppm、約0至約30,000ppm、約1,000ppm至約5,000ppm、約1,000ppm至約10,000ppm、約1,000ppm至約15,000ppm、約1,000ppm至約20,000ppm、約1,000ppm至約25,000ppm、約1,000至約30,000ppm、約2,000ppm至約5,000ppm、約2,000ppm至約10,000ppm、約2,000ppm至約15,000ppm、約2,000ppm至約20,000ppm、約2,000ppm至約25,000ppm、約2,000至約30,000ppm、約5,000ppm至約10,000ppm、約5,000ppm至約15,000ppm、約5,000ppm至約20,000ppm、約5,000ppm至約25,000ppm、約5,000至約30,000ppm、約10,000ppm至約15,000ppm、約10,000ppm至約20,000ppm、約10,000ppm至約25,000ppm、約10,000至約30,000ppm、約15,000ppm至約20,000ppm、約15,000ppm至約25,000ppm、約15,000至約30,000ppm、約20,000ppm至約25,000ppm、約20,000至約30,000ppm、約25,000ppm至約30,000ppm、或約0ppm、約1,000ppm、約2,000ppm、約5,000ppm、約10,000ppm、約15,000ppm、約20,000ppm、約25,000ppm、或約30,000ppm。
上述組成物可以依據用於傳遞組成物至植物時所需施用方法(如下文說明)進行稀釋或濃縮。習此相關技藝操作者咸了解，組成物亦可包括一多種添加劑，例如：抗生素，如：安莫西林(amoxicillin)、兩性黴素(amphotericin)、安比西林(ampicillin)、頭孢曲松(ceftriaxone)、氯黴素(chloramphenicol)、環丙沙(ciprofloxacin)、克黴唑(clotrimazole)、慶大黴素(gentamycin)、酮康唑(ketoconazole)、莫匹羅星(mupirocin)、土黴素(oxytetracycline)、磺胺二甲氧嘧啶(sulphadimethoxin)、鏈黴素(streptomycin)、萬古黴素(vancomycin)、或其任何組合，界面活性劑，如：非離子性界面活性劑，例如：醇烷氧化物類、 烷基胺乙氧化物、烷基苯酚乙氧化物、油類或脂肪酸或山梨糖醇酐乙氧化物、聚烯氧化物共聚物、或其任何組合。或者或此外，可使用陰離子性界面活性劑，如：烷基苯磺酸酯、烷基萘磺酸酯、烷基磺酸酯、脂肪酸磺酸酯、木質素磺酸酯、與二辛基磺基磺酸酯、或其任何組合。添加劑可包括澱粉降解酵素、佐劑、油類，等等。習此相關技藝操作者咸了解，包括可能影響上述組成物性質範圍之添加劑。
習此相關技藝操作者咸了解，組成物可為濃縮、稀釋、或乾燥型。例如：上述組成物可濃縮成仍保留上述相同組份比例(例如：PAC、總酚物、酸，等等)之粉末。依組成物型式而定，可能需要較多或較少組成物施用在患病之植物上。
測定組成物中酚類物質之方法
本文所說明組成物之總酚物係採用福林(Folin-Ciocalteu)方法測定。例舉之方法中，取福林酚試劑(Folin-Ciocalteu Phenol Reagent)2N(MP Biomedical LLC)，於去離子水中稀釋成10x溶液，並存放在琥珀色瓶中。取無水碳酸鈉(Sigma-Aldrich)溶於去離子水中，形成7.5%溶液後，置於攪拌加熱板上直到完全混合為止。混合物靜置冷卻至室溫後，存放在琥珀色瓶中。取樣本於去離子水中稀釋。取100uL製成之樣本加至玻璃培養試管中。添加100ul去離子水至玻璃培養試管中，作為空白組。然後添加3.9ml去離子水至各試管中，並渦轉。然後添加250uL 10x 2N福林試劑至各玻璃培養試管中後，渦轉。添加750uL 7.5%碳酸鈉溶液至各玻璃培養試管中後，渦轉。樣本隨後存放在暗箱中30分鐘。取出樣本後，在Hach DR3900(1.13cm光徑)上，使用去離子水樣本作為空白組，在765nm下測定(Singleton,V. and Rossi,J.1965.Colorimetry of Total Phenolics with Phosphomolybdic-Phosphotungstic Acid Reagents.Am J Eno and Vitic.16：144-158)。
製備0.5%沒食子酸(Sigma-Aldrich)溶液。製備包含0-200mg/L之標準曲線，並如上述測定。任何超出標準曲線吸光度範圍之樣本結果均在較適當稀釋度下再操作一次，以達到標準曲線範圍內之吸光度。亦在每次操作時測定已經過測試並證實之對照組樣本。結果係以mg/g沒食子酸當量(GAE)表示。
測定組成物中有機酸之方法
本文所說明組成物中有機酸含量分析法係於裝備EG40溶離劑發生器(Eluent Generator)、ASRS 300、4mm陰離子抑制器、及CR-ATC之Dionex ICS-2100離子層析系統(Ion Chromatography System)(Thermo Scientific Sunnyvale,CA,USA)上進行。有機酸之分離法係在RFIC IonPac AS11-HC，分析級，連接RFIC IonPac AG11-HC，4 x 50mm前導管柱4 x 250mm之離子交換管柱上進行，及採用抑制型導電度檢測器測定。於去離子水中製備包含檸檬酸、富馬酸、半乳糖醛酸、異檸檬酸、蘋果酸、與奎寧酸之儲備標準液，濃度5%。儲備標準液再稀釋製成操作標準液5、25、及50mg/L，用於校正儀器。
測定組成物中原花青素之方法
採用Ocean Spray之二甲基胺基肉桂醛(DMAC)方法分析或定量本文所說明組成物中之PAC含量，其採用來自特定蔓越莓來源之PAC分離物作為標準物。參見例如：Martin等人之Food Res Int 71：68-82,2015；及de Pascual-Teresa等人之J Agric Food Chem 46：4209-4213,1998，其等已以引用之方式併入本文中。習此相關技藝操作者咸了解，可以採用其他方法。例如：布倫威克實驗室(Brunswick Labs)使用來自商品之純原花青素A-2/B-2標準物(二聚體)作為標準物。參見例如：Prior等人之J Sci Food Agric 90：1473-1478,2010。測試樣本之PAC時，當採用Ocean Spray之方法與布倫威克實驗室之方法比較時，採用布倫威克實驗室方法檢測到之PAC值通常較低，因為原花青素A-2/B-2標準物之分子量低於分離之PAC標準物(其包含A-2/B-2及所有高分子量PAC寡聚物及含在蔓越莓中之聚合物)。例如：當採用Ocean Spray之DMAC方法測定樣本含有約110mg PAC時，採用布倫威克實驗室之DMAC方法可能僅測得約36mg PAC。
習此相關技藝操作者咸了解，這兩種方法均測定樣本中總PAC，但其等差異僅在於如何依所選用標準物當量來表示結果。因此，雖然在同一樣本上採用兩種方法可能有不同結果，但並不表示其等含量不同。因此建議 在相同材料上一律採用相同方法進行比較試驗，以避免混淆。儘管如此，仍以Ocean Spray之方法較適合代表蔓越莓中所含之PAC，因而由此方法得到之結果更能代表蔓越莓樣本中的PAC「真」含量。所以本文所說明所有PAC值均採用Ocean Spray之DMAC方法測定。
執行Ocean Spray之DMAC方法之實例中，依序採用Sephadex LH-20管柱分離法及DMAC比色反應之吸光度測定法來測定蔓越莓樣本中之PAC含量(Cunningham,D.,Vannozzi,S.,O’Shea,E.,& Turk,R.2002.Quality Management of Nutraceuticals ACS Symposium series 803,Washington DC.)。取1.0g含水樣本加載至預先水合之Sephadex LH-20 polyprep管柱。依序使用蒸餾水(10mL)與25%EtOH(10mL)溶液溶離出糖類、有機酸類、花青素、及黃酮醇。此等溶出液棄置不要。隨後使用70%丙酮之水溶液(2.5mL後，再2.5mL)連續洗滌管柱，收集，及合併在15mL試管中。樣本渦轉後，取1mL樣本加至玻璃培養試管中。在各培養試管(包括試劑空白組)中添加3mL已製備好之1%DMAC(含於70/30 MeOH/HCl)。試管渦轉後，5分鐘後，於Hach DR3900上測定640nm之吸光度。光度計採用試劑空白組歸零。樣本必需保持在0.2-0.8最佳範圍內，超出此範圍之樣本應送回再稀釋。計算樣本之PAC濃度，並以mg/kg表示。
病害抑制性組成物之來源
除了衍生自蔓越莓之組成物以外，習此相關技藝操作者咸了解，適用於本說明方法之組成物可由具有類似性質之另一種果實或植物產物製造。例如：除了來自蔓越莓植株之組份外，可以改用或外加使用之組成物可包括衍生自藍莓、接骨木果、野櫻莓、越橘、樹莓、葡萄、醋栗、越橘莓、草莓、黑莓、雲莓、黑醋栗、紅醋栗、白醋栗、及/或其任何混合物之組成物。有些實例中，該組成物可包括衍生自桂皮之組成物。此等組成物在本文中分別指藍莓、接骨木莓、野櫻莓、越橘、樹莓、葡萄、醋栗、越橘莓、草莓、黑莓、雲莓、黑醋栗、紅醋栗、白醋栗、及桂皮組成物。
表1例舉之組成物係衍生自蔓越莓，然而習此相關技藝操作者咸了解，具有類似Brix含量、檸檬酸、蘋果酸、及奎寧酸含量、及/或酚類含量(花青 素及PAC)之組成物亦可由其他果實或植物產物(如：彼等上列者)產生。此外，習此相關技藝操作者咸了解，有些例子中，類似彼等用於製造表1所說明組成物之過程可用於下文所列舉之果實或植物產物。例如：可在藍莓或其他果實上進行逆向流萃取法，以產生類似來自表1所示由蔓越莓所製成CCE濃縮物之CCE濃縮物。
傳遞至植物韌皮部及用於此等傳遞之組成物
有些植物病害(如：HLB)因為植物病原體(如：CLas)駐留在韌皮部而特別難處理。韌皮部為植物之維管束組織，其從葉部向下傳導糖類及其他代謝產物。為了傳遞蔓越莓組成物以便進行接觸並藉以抑制駐留在韌皮部內之病原體，該組成物可與其他成份(亦即載劑)混合，以改良轉運至韌皮部。載劑可包括佐劑。佐劑可為活化劑佐劑(改良蔓越莓組份活性)或修飾劑佐劑(改良蔓越莓組份半衰期、操作法、及施用法)。
一項使用活化劑佐劑之實例中，組成物(如：蔓越莓組成物)可與界面活性劑混合，以改善分佈能力及流動性。界面活性劑通常會降低兩種液體(或液體與固體)之間之表面張力，並更能傳遞組成物至葉部表皮及/或韌皮部。適用之界面活性劑包括例如：非離子性界面活性劑，如：醇烷氧化物、烷基胺乙氧化物、烷基苯酚乙氧化物、油性或脂肪酸或山梨糖醇酐乙氧化物、聚烯烴氧化物共聚物、或其任何組合。可改用或增加使用陰離子性界面活性劑，如：烷基苯酸酯、烷基萘磺酸酯、烷基磺酸酯、脂肪酸磺酸酯、木質素磺酸酯、與二辛基磺基琥珀酸酯、或其任何組合。
一項使用修飾劑佐劑之實例中，組成物(如：蔓越莓組成物)可再含有苯甲酸、丙酸、山梨酸、與/或其鹽類、對羥基苯甲酸酯類(如：對羥基苯甲酸甲酯、乙酯、丁酯、與丙酯)、丁基化羥基苯甲醚(BHA)、丁基化羥基甲苯(BHT)或其組合，以改良組成物之半衰期。
另一項使用修飾劑佐劑之實例中，組成物(如：蔓越莓組成物)可包括已經過處理的水，例如：經過聚葡糖苷、聚糖苷、聚氧乙二醇或其衍生物、銨鹽、檸檬磷酸鹽、甘油酸類、羥基羧酸類、磷酸酯、磷酸、聚羧酸、聚丙烯酸、硫酸酯、尿素或其任何組合處理。
另一項實例中，可使用油類如：礦物油(基於石油)、園藝用油、或植物油(種子油)及其酯化衍生物、或油類混合物作為佐劑。可使用乳化劑來混合親水性成份與油類。所形成之乳液可為乳液、微乳液、或奈米乳液。由於油類可以遮蔽組成物(如：蔓越莓組成物)之極性，因此較容易運送至韌皮部。
另一項實例中，可使用如：硫酸銨之銨鹽類作為佐劑。咸信銨鹽類可以改良農藥之吸收性。
另一項實例中，可添加如：α-澱粉酶之澱粉降解酵素至蔓越莓組成物中。由於HLB細菌(CLas)會在韌皮部內部產生澱粉材料，因此引進澱粉降解酵素可以改善蔓越莓組成物透過韌皮部之傳遞。此外，引進澱粉降解酵素可以提供蔓越莓組成物接觸CLas之額外空間，改善細菌之抑制作用。
另一項實例中，可以添加單寧酶酵素至蔓越莓組成物中。單寧酶酵素可為例如：Sumizyme TAN。單寧酶酵素有助於水解蔓越莓組成物中所含之PAC成為較小分子量。較多量之小分子量PAC分子不僅改良抑制效力，而且更容易到達有導致病害之病原體(如：細菌及病媒)駐留之韌皮部。
另一項實例中，該組成物可包括一或多種緩衝劑，如：檸檬酸鹽，與/或馬來酸鹽，以稍微提高組成物之pH。可使用鈉與鉀之氫氧化物製成檸檬酸鹽及蘋果酸鹽緩衝劑，因為檸檬酸及蘋果酸已經存在於組成物中。其他例子中，可在組成物中添加自商品取得之緩衝劑，如：磷酸酯，及咪唑-HCl。
另一項實例中，組成物可包括β-胺基丁酸(BABA)、2-去氧-D-葡萄糖(DDG)、水楊酸(SA)、草酸(OA)、海藻糖、或海藻糖-6-磷酸酯、或其任何混合物及/或鹽類。此等化合物可能具有激素作用，可挽救HLB對樹組織之傷害。
有些例子中，包括在組成物中之佐劑可來自天然物。天然衍生之佐劑包括(但不限於)：油類(包括園藝用油及植物油)，及界面活性劑(包括絲蘭(yucca)萃取物、卡斯提亞液態皂(castile soap)、肥皂草(soapwort)、與石鹼木皮(quillaja bark)萃取物。僅包括天然成份之組成物(例如：蔓越莓組成物)可用於有機農業來生產有機植物產物。
對植物投與組成物之方法
組成物可依各種不同方式施用至植物，如：圖2所示。例如：蔓越莓組成物可藉由噴灑法施加至柑橘類植物。可採用機械式或水力噴灑器，其組成為水箱、幫浦、噴槍(單一噴嘴)或噴桿、及噴嘴(或多重噴嘴)。例如：呈液態型式之蔓越莓成份可呈加壓液滴分佈在葉部，其可為大雨滴型或幾乎看不到之細粒。使用蔓越莓組成物處理患病植物之噴灑系統圖示說明於圖1。此外或或者，蔓越莓組成物可採用氣霧、液體、噴液、或注射施加至患病之植物上，或施加至週圍土壤。蔓越莓組成物可利用刷拭法施加組成物至葉部上或其他植物部份，或手動施加至植物上。
可利用樹幹植入法或樹幹注射法引進本文說明之組成物。直接在樹幹中注射或植入組成物有助於傳遞組成物至植物之韌皮部。由於當注射或植入組成物至樹幹中時，組成物會接近韌皮部，因此會比其他施用法更快產生抑制病害結果。此外，含有較高濃度大分子(例如：PAC)之組成物可能有利於注射或植入樹幹中，因為此等大分子不需長程擴散即可到達韌皮部中之細菌。
組成物可經由土壤注射、土壤澆灌、土壤摻雜、及/或土壤底部噴灑引至植物中。組成物可藉由根部吸收至植物中，並傳遞至韌皮部。
組成物可包括在固態組成物中，如：肥料棒、丸粒、粉劑、灑粉劑，等等。組成物可與肥料或土壤混合。與肥料或土壤混合物混合之組成物可呈固態(例如：丸粒、粉劑)或液態(例如：溶液、漿液、凝膠)。有些實施例中，固態組成物之組態可以在接觸到水時溶解，例如：呈緩釋調配物。當固態組成物與水接觸時，可以釋出組成物進入植物周圍土壤並被植物吸收。固態組成物(例如：肥料、丸粒、肥料棒)之組態可以在一段時間內釋出預定劑量之組成物。習此相關技藝操作者咸了解，來自此等固態組成物之劑量可依據感染程度、植物型態、土壤環境，等等設定。
依據所採用之處理方法，可以施加各種不同量之組成物至植物上。此外，植物年齡或所處理病害之嚴重性均會影響組成物之施加量或頻率。
木虱處理
本文說明之組成物可用於抑制生長在木虱(尤指亞洲柑橘木虱(ACP))腸中之CLas細菌。由於木虱在植物之間移動及在植物上覓食，因此木虱會在植物之間傳播CLas細菌。當木虱攝入已被蔓越莓組成物處理之植物組織時，蔓越莓組成物之抗細菌性質可以抑制生長在木虱腸中之CLas細菌。腸中沒有CLas細菌之木虱即無法在植物與植物之間傳播細菌。因此，當木虱食用經過處理之植物之植物組織，且木虱所帶之細菌受到抑制時，即可限制病害散播。
雖然傳統殺昆蟲劑之目標在於驅逐植物上之木虱來防止病害散播，但有時候有利於吸引木虱至已處理之植物上，因此即可以抑制木虱所帶之細菌。可在蔓越莓組成物中包括可吸引木虱之組成物(例如：檸檬酸)。亦可使用吸引木虱之揮發性組成物。例如：印象咖哩葉(Indian Curry Leaf，Bergera koenigii)亦吸引木虱。亦可添加此等植物之揮發性組成物至蔓越莓成份中，以加強吸引木虱。
習此相關技藝操作者咸了解，本文所說明組成物可用於其他與韌皮部結合之病媒(如：葉蟬(leafhopper))及與木質部結合之病媒(如：大葉蟬(sharpshooter))。亦可抑制病媒(如：蚜蟲、植物飛虱、粉介殼蟲、粉虱、與角蟬(membracids))中之植物病原體。
亦可採用包括本文所說明組成物之陷阱來吸引病媒並抑制病媒腸病原體。
綜合病蟲害管理系統
本說明方法可利用為綜合病蟲害管理(integrated pest management)(IPM)計畫的一部份。綜合病蟲害管理計畫包括蔓越莓組成物處理，例如：包括採用蔓越莓成份連同生物防治、機械、栽培、物理/環境修改、與宿主抗性或遺傳操作一起處理植物與病媒。例如：蔓越莓組成物可連同抗生素一起投藥。可與本文所說明組成物併用之抗生素包括土黴素(oxytetracycline)、鏈黴素(streptomycin)、安莫西林(amoxicillin)、兩性黴素(amphotericin)、安比西林(ampicillin)、頭孢曲松(ceftriaxone)、氯黴素(chloramphenicol)、環丙沙 (ciprofloxacin)、克黴樂(clotrimazole)、慶大黴素(gentamycin)、酮康唑(ketoconazole)、莫匹羅星(mupirocin)、磺胺二甲氧嘧啶(sulphadimethoxin)、萬古黴素(vancomycin)或其任何組合。此組合可以減少處理柑橘類植物時之抗生素總用量。例如：引用蔓越莓組成物可以減少農業用鏈黴素(Firewall®)與農業用土黴素(Fireline®)對植物之施加量，因為抗生素與蔓越莓組成物之間已產生協同效應。
實例 實例1：蔓越莓組成物之活體外抑制活性
半月形韌皮部桿菌(Liberibacter crescens)為最接近韌皮部桿菌亞洲種(Candidatus Liberibacter asiaticus)(CLas)之培養菌種，後者被認為係柑橘綠化病或黃龍病(HLB)的肇因。進行一項分析實例，由半月形韌皮部桿菌與本文所說明各種不同蔓越莓萃取物，在不同濃度下接觸。本分析之目的在於判別可以抑制病原體生長及阻止HLB散播之製劑。由於CLas無法在其宿主外生長，因此使用半月形韌皮部桿菌(L.crescens)為替代品來測試可能之處理。
在例舉之分析過程中，取半月形韌皮部桿菌於含在小試管中之2mLBM7培養基中培養至指數期(3-4天)。BM7培養基包括α-酮基戊二酸酯(2g)、ACES緩衝劑(10g)、KOH(3.75g)、與蒸餾水(550mL)(此培養基經過殺菌及冷卻後，添加150mL胎牛血清與300mL TMN-FH培養基(Sigma T1032)，形成BM7培養基)。取500ul生長至指數期之細胞加至20mL新鮮BM7中，並分成等份加至96孔板中。隨後使用試驗組成物(此時指蔓越莓萃取物)，以三重覆，依不同濃度處理半月形韌皮部桿菌培養物，並培養該等培養物。
培養後，取適當培養物樣本，並添加Presto BlueTM細胞活力試劑(Cell Viability Reagent)至各樣本中。Presto BlueTM細胞活力試劑利用一種基於刃天青藍之無螢光化合物，其在活細胞之胞液中會還原成鹵靈(resorfuin)，一種紅色螢光化合物。測定螢光度即反映化合物的轉化，並與代謝活性細胞量成比例。在各樣本中添加Presto BlueTM細胞活力試劑，培養樣本後，採用HT Synergy Biotek微量盤偵測儀讀取各樣本之螢光。
收集螢光數據時，取重覆孔(彼等使用相同濃度之相同化合物處理之孔) 之讀數平均值，並扣除僅含介質之孔之平均螢光度進行校正。隨後由螢光數據與無處理孔比較，從每個分析板得到相對抑制百分比。因此每次操作之間無法比較確實讀數，但可以比較相對百分比。各種不同蔓越莓萃取物在20%、10%、與5%稀釋度下之抑制結果示於下表2。
Figure 107128480-A0202-12-0027-3
如表2所示，各種不同蔓越莓萃取物當接觸半月形韌皮部桿菌時，產生80%或更高抑制性。產生80%至90%之間抑制性之蔓越莓萃取物稀釋液係以淺灰底色表示，及產生超過90%抑制性之蔓越莓萃取物稀釋液係以深灰底色表示。在不希望受到理論限制下，咸信PAC與酚類物質對半月形韌皮部桿菌之抑制性之影響高於蔓越莓萃取物中之酸類，例如：蘋果酸、檸檬酸、與奎寧酸。然而，亦咸信含在蔓越莓萃取物中之弱酸有利於傳遞蔓越莓萃取物進入韌皮部，因為弱酸之解離常數較低。表2所示之稀釋液對應於類似表1所示組成物實例之組成物稀釋液，其係約20 Brix。因此，20%稀釋液相當於約4 Brix，10%稀釋液相當於約2 Brix，及5%稀釋液相當於約1 Brix。
實例2：蔓越莓組成物之活體外抑制活性
測試固形物含量為0.2%、0.5%、1%、2%、與4%之蔓越莓組成物，以測定各蔓越莓組成物之抑制性質，示於圖3與4。此等蔓越莓組成物係利用實例1說明之過程產生。各蔓越莓組成物之最小抑制濃度為1 Brix(1%固形物含量)。使用土黴素作為對照組，並在各試驗濃度下產生100%抑制性。
實例3：蔓越莓組成物之活體內抑制活性
以土壤澆灌方式，分別添加三種蔓越莓組成物、樹脂萃取物、樹脂萃取物與單寧酶，及壓餅萃取物之SWE至10棵平均樹幹直徑0.7cm之柑橘類植物幼苗上。各蔓越莓組成物之固形物含量為10 Brix。分別使用水與鏈黴素作為陰性與陽性對照組。在即將施加蔓越莓組成物之前收集葉部樣本(每棵植物三片)。在前處理葉片樣本及處理後2天、14天、與28天收集之葉片樣本上進行qPCR。
qPCR過程係在Applied Biosystems 7500快速實時PCT系統(Fast Real-Time PCT System)上完成。每次反應均使用1μL樣本DNA，在總體積26μL中進行。測定cox2基因作為內部植物對照。開始施加蔓越莓組成物後，即採用qRT-PCR測試CLas及目測毒性。
圖5出示葉片樣本經過qPCR分析法測定葉片樣本中所含CLas基因複本數隨時間之變化。複本數與CT效價之所有變化均以相對於初始值之變化表示。開始時，與接受水處理之植物比較，接受蔓越莓組成物與鏈黴素處理之植物具有高複本數。然而，28天後，接受鏈黴素處理之植物與接受蔓越莓組成物處理之植物均在CLas基因之複本數上顯示顯著下降(p<0.05)，此表示蔓越莓組成物在處理感染HLB之葉部上之效力。圖5中，代表CLas之複本數與初始量有統計上顯著下降差異的長條係以星號表示。
植物經過壓餅萃取物之SWE處理14天後，CLas基因複本數增加，但在28天後複本數減少。經過壓餅萃取物之SWE處理之植物初始之CLas細菌數(示於圖5中之0小時)高於其他植物。CLas先上升再下降之一種可能解釋為壓餅萃取物之SWE比其他蔓越莓組成物型態更難快速抑制高量細菌。此外，壓餅萃取物之SWE中之原花青素(PAC)分子大於樹脂萃取物及樹脂萃取物 與單寧酶中所含PAC。壓餅萃取物之SWE可能因PAC之分子較大而需要比其他萃取物型態更長時間才能進入植物韌皮部。
圖6出示各蔓越莓組成物處理從0小時(前處理)至2天、14天、與28天之叠氮碘化丙啶(Propidium Monoazide)(PMA)效價變化。PMA效價代表活細菌(此時指CLas)之存在。定量活細菌時，使用過量PMA處理樣本。PMA選擇性進入死細胞，且當受光活化時，其會與DNA相互螯合及共價結合，強力抑制其PCR擴增。因此，主要由活DNA得以擴增。PMA效價變化正值表示活細菌減少。經過水處理之植物(對照組)之PMA效價變化大多為負值，表示所處理植物之活CLas細菌增加。經過鏈黴素、樹脂萃取物、及樹脂萃取物與單寧酶處理之植物在48小時內之PMA效價呈正值變化，表示對處理有反應。經過壓餅萃取物之SWE處理之植物之細菌族群先在48小時後上升，如：PMA效價呈負值變化所示，隨後在2週後開始死亡，如：PMA效價呈正值變化所示。PMA效價結果與圖5所討論qPCR結果一致。
實例4：植物毒性噴灑液試驗
在一小部份葡萄柚樹上大量噴灑10%蔓越莓萃取物。經過噴灑之葉部在噴灑後立即示於圖7A，及在噴灑後48小時示於圖7B。經過噴灑之葉部在48小時後沒有顯示植物毒性徵兆。隨後再追蹤處理過之葉部上任何植物毒性徵兆7天以上(未示於圖中)，且未發現任何徵兆。
實例5：植物毒性浸泡試驗
取柑橘葉部浸入含1%固形物含量(1 Brix)之本文之壓餅萃取物之SWE溶液中連續7天。圖9A出示浸泡葉部第0天，及圖9B出示浸泡葉部第7天。經過蔓越莓萃取物浸泡之柑橘葉部在7天後未顯示植物毒性徵兆。再由柑橘葉部浸入對照緩衝液一樣7天。圖8A與8B分別出示經過對照緩衝液浸泡之柑橘葉部之第0天與第7天。浸入對照緩衝液中之柑橘葉部在7天後未顯示植物毒性徵兆。
其他具體實施例
咸了解，雖然本發明已結合其詳細敘述來說明，但上述說明係供例示，並未限制本發明範圍，本發明範圍將由附錄申請專利範圍界定。其他態樣、優點與修飾均在下列申請專利範圍內。

Claims (58)

  1. 一種處理植物病害之組成物，其包含：1mg/g至100mg/g之酚類物質；0.01%至14%之奎寧酸；及可以讓組成物傳遞至柑橘類植物之至少一部份韌皮部之佐劑。
  2. 如請求項1之組成物，其包含0.1%至4%之奎寧酸。
  3. 如請求項1之組成物，其進一步包含0.01%至20%之蘋果酸與檸檬酸中至少一種。
  4. 如請求項3之組成物，其進一步包含0.1%至4%之檸檬酸。
  5. 如請求項3之組成物，其包含0.1%至3%之蘋果酸。
  6. 如請求項1之組成物，其中該酚類物質包含1,000mg/kg至100,000mg/kg之原花青素。
  7. 如請求項6之組成物，其中該酚類物質包含2,000mg/kg至5,000mg/kg之原花青素。
  8. 如請求項6之組成物，其中該酚類物質包含30,000mg/kg至60,000mg/kg之原花青素。
  9. 如請求項1之組成物，其中該組成物包含以下至少一種：葉部、壓餅或果實之逆向流萃取濃縮物、同向流萃取濃縮物、搗泥濃縮物、超濾滯留液、樹脂萃取物、與次臨界水萃取物。
  10. 如請求項1之組成物，其中該組成物係衍生自蔓越莓。
  11. 如請求項1之組成物，其中該組成物係衍生自以下一或多種：蔓越莓、藍莓、接骨木果、野櫻莓、越橘、樹莓、葡萄、醋栗、越橘莓、草莓、黑莓、雲莓、黑醋栗、紅醋栗、白醋栗、及桂皮、或其任何組合。
  12. 如請求項1之組成物，其中該佐劑包含界面活性劑。
  13. 如請求項1之組成物，其進一步包含澱粉降解酵素，其中該佐劑之組態在於傳遞澱粉降解酵素至植物之至少一部份韌皮部。
  14. 如請求項13之組成物，其中該澱粉降解酵素為澱粉酶。
  15. 如請求項1之組成物，其中該佐劑包含以下至少一種：礦物油、園藝用油、植物油、與種子油。
  16. 如請求項1之組成物，其中該佐劑包含單寧酶酵素。
  17. 如請求項1之組成物，其進一步包含至少一種抗生素。
  18. 如請求項1之組成物，其進一步包含以下至少一種：β-胺基丁酸、2-去氧-D-葡萄糖、水楊酸、草酸、海藻糖、海藻糖-6-磷酸酯、或其任何組合。
  19. 如請求項1之組成物，其進一步包含至少一種殺昆蟲劑。
  20. 如請求項10之組成物，其包含1Brix之蔓越莓固形物含量。
  21. 如請求項10之組成物，其包含10Brix之蔓越莓固形物含量。
  22. 如請求項10之組成物，其包含20Brix之蔓越莓固形物含量。
  23. 如請求項1之組成物，其中該酚類物質包含1mg/kg至100mg/kg之花青素。
  24. 如請求項1之組成物，其中該酚類物質包含2,000mg/kg至5,000mg/kg之花青素。
  25. 如請求項1之組成物，其包含3mg/g至12mg/g之該酚類物質。
  26. 如請求項1之組成物，其包含35至65mg/g之酚類物質。
  27. 如請求項1之組成物，其進一步包含緩衝劑。
  28. 一種處理或抑制植物之植物病原體感染之方法，其包括：由植物與抑制植物病原體有效量之組成物接觸，其中該組成物包含1mg/g至100mg/g之酚類物質及0.01%至14%之奎寧酸。
  29. 如請求項28之方法，其中與植物之接觸包括由該組成物刷拭或噴灑在植物上，或注射至植物內。
  30. 如請求項28之方法，其中與植物之接觸包括由該組成物噴灑、澆灌、混合、或注射至植物週圍土壤。
  31. 如請求項28之方法，其中該組成物係衍生自蔓越莓。
  32. 如請求項28之方法，其中該組成物係衍生自以下一或多種：蔓越莓、藍莓、接骨木果、野櫻莓、越橘、樹莓、葡萄、醋栗、越橘莓、草莓、黑莓、雲莓、黑醋栗、紅醋栗、白醋栗、及桂皮、或其任何組合。
  33. 如請求項28之方法，其中該組成物進一步包含可以傳遞該組成物至植物韌皮部之載劑。
  34. 如請求項33之方法，其中該載劑包含至少一種礦物油、園藝用油、植物油、與種子油。
  35. 如請求項28之方法，其中該組成物進一步包含澱粉降解酵素。
  36. 如請求項35之方法，其中該澱粉降解酵素為澱粉酶。
  37. 如請求項28之方法，其中該組成物進一步包含單寧酶酵素。
  38. 如請求項28之方法，其中該組成物進一步包含至少一種抗生素。
  39. 如請求項28之方法，其中該植物為柑橘類植物，及該植物病原體為韌皮部桿菌(Candidatus Liberibacter)。
  40. 如請求項31之方法，其中該組成物包含1Brix之蔓越莓固形物含量。
  41. 如請求項31之方法，其中該組成物包含10Brix之蔓越莓固形物含量。
  42. 如請求項31之方法，其中該組成物包含20Brix之蔓越莓固形物含量。
  43. 如請求項28之方法，其中該組成物進一步包含0.01%至20%之檸檬酸及蘋果酸中至少一種。
  44. 如請求項43之方法，其中該組成物進一步包含0.1%至4%之檸檬酸。
  45. 如請求項43之方法，其中該組成物進一步包含0.1%至3%之蘋果酸。
  46. 如請求項28之方法，其中該組成物包含0.1%至4%之奎寧酸。
  47. 如請求項28之方法，其中該酚類物質包含1mg/kg至100mg/kg之花青素。
  48. 如請求項28之方法，其中該酚類物質包含2,000mg/kg至5,000mg/kg之花青素。
  49. 如請求項28之方法，其中該酚類物質包含1,000mg/kg至100,000mg/kg之原花青素。
  50. 如請求項49之方法，其中該酚類物質包含2,000mg/kg至5,000mg/kg之原花青素。
  51. 如請求項49之方法，其中該酚類物質包含30,000mg/kg至60,000mg/kg之原花青素。
  52. 如請求項28之方法，其中該組成物包含3mg/g至12mg/g之酚類物質。
  53. 如請求項28之方法，其中該組成物包含35至65mg/g之酚類物質。
  54. 一種處理植物病害之組成物，其包含：1mg/g至100mg/g之酚類物質，及0.01%至14%之奎寧酸，其中該組成物係呈肥料棒、固態肥料混合物、液態肥料混合物、土壤澆灌、包含該組成物之土壤、噴灑液、凝膠、注射組成物、或植入式組成物之形式。
  55. 如請求項54之組成物，其進一步包含0.01%至20%之蘋果酸與檸檬酸中至少一種。
  56. 如請求項54之組成物，其中該酚類物質包含1,000mg/kg至100,000mg/kg之原花青素。
  57. 如請求項54之組成物，其中該組成物係衍生自蔓越莓。
  58. 一種處理植物病害之蔓越莓組成物，其包含： 1mg/g至100mg/g之酚類物質，其中該酚類物質包含超過20,000mg/kg之原花青素；及0.5%至2%之奎寧酸。
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