TWI726645B - 沉香樹子萃取物用以製備皮膚修護組成物之用途 - Google Patents

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Abstract

一種沉香樹子萃取物用以製備皮膚抗修護組成物之用途，其係由複數的沉香樹(Aquilaria malaccensis)子經粉碎後，以90%乙醇進行超音波萃取，每批粉碎後之沉香樹子萃取三次，每天萃取1次，萃取完畢後，藉由減壓濃縮機及真空幫浦移除所有醇水溶劑，使獲得可應用於皮膚修護用途之沉香樹子萃取物。

Description

沉香樹子萃取物用以製備皮膚修護組成物之用途
本發明係為一種將沉香樹子萃取物用於製備皮膚修護組成物之用途。
由於人類皮膚會隨著年紀、生理因素或環境影響，多會有老化、膚質粗糙或產生皺紋等現象，而因正常年輕人的皮膚都具一定的彈性和張力，當表情肌鬆弛後，皮膚會很快復原，使皺紋消失；但進入中、老年後，皮膚會開始變薄、乾燥、張力降低等老化現象，使得表情肌鬆弛後，皮膚無法快速復原，使得皺紋開始成形；而肌膚因乾燥、紫外線、清潔劑或化學物質，或激素平衡紊亂等因素下，同時因皮膚角質層屏障功能及水分量之下降，其會造成角質粗糙、失去彈性及保濕功能，進而使皮膚褶皺及失去光澤。
而目前市面雖有許多改善膚質、延緩老化之保養、修護產品，惟該些產品多以化學物質為主要成分，其很容易會因成分不天然而造成過敏，甚至因個人體質因素而會有效果不明顯、或造成膚質更加受損之情事發生。因此，開發天然成分之產品以針對受損皮膚進行修護及提高皮膚保養，實乃目前之重要課題。
本發明之目的，即在於改善上述之缺失，俾提供一種可用於 製備皮膚修護用途組成物之沉香樹子萃取物。
為達到上述目的，本發明之可製備皮膚修護組成物之沉香樹子萃取物，其係將複數的沉香樹(Aquilaria malaccensis)子分批以逆滲透流動水清洗，每次清洗10分鐘，每一批沉香樹子重複洗滌三次後於室溫下瀝乾，並平鋪於吸水性材質上陰乾兩天；然後，使用粉碎機粉碎該些沉香樹子，並使粉碎後之沉香樹子之粒徑不大於2mm，同時控制粉碎機之粉碎時間，使連續粉碎時間不超過20分鐘，接著將該些粉碎後之沉香樹子分批以90%乙醇進行超音波萃取，每批粉碎後之沉香樹子萃取三次，每天萃取1次，萃取完畢後，藉由減壓濃縮機及真空幫浦移除所有醇水溶劑，使獲得沉香樹子萃取物；藉此，該沉香樹子萃取物確具有可製備皮膚修護組成物之用途。
圖1係本發明萃取沉香樹子萃取物之步驟流程圖。
圖2係本發明沉香樹子萃取物冷藏與避光儲存一個月後之檢測圖。
圖3係本發明沉香樹子萃取物經紫外線作用之細胞存活度之試驗圖。
圖4係本發明沉香樹子萃取物偵測UVB光產物CPD之表現圖(一)。
圖5係本發明沉香樹子萃取物偵測UVB光產物CPD之表現圖(二)。
圖6係本發明沉香樹子萃取物促進皮膚膠原蛋白生成之試驗圖。
圖7係本發明沉香樹子萃取物促進傷口癒合之試驗圖(一)。
圖8係本發明沉香樹子萃取物促進傷口癒合之試驗圖(二)
有關本發明為達到目的所運用之技術手段及其構造，茲謹再配合圖1至圖8所示之實施例，詳細說明如下：如1圖所示，將複數的沉香樹(Aquilaria malaccensis)子分批以逆滲透流動水清洗，每次清洗10分鐘，每一批沉香樹子重複洗滌三次後於室溫下瀝乾，並平鋪於吸水性材質上陰乾兩天；然後，使用粉碎機粉碎該些沉香樹子，並使粉碎後之沉香樹子之粒徑不大於2mm，同時控制粉碎機之粉碎時間，使連續粉碎時間不超過20分鐘，藉以避免因機器過熱改變沉香樹內含之化學成分。接著，將該些粉碎後之沉香樹子分批以90%乙醇進行超音波萃取，每批粉碎後之沉香樹子萃取三次，每天僅萃取1次，萃取完畢後，藉由減壓濃縮機及真空幫浦移除所有醇水溶劑，使得到沉香樹子萃取物(Crude-EtOH)，且該沉香樹子萃取物(Crude-EtOH)之型態為油狀，使形成沉香子油。
承上述，較佳之實施例是，取2.9公斤之沉香樹(Aquilaria malaccensis)子經上述步驟粉碎、瀝乾、陰乾後，以15公升之90%的乙醇進行萃取後，可得102克的沉香樹子萃取物(Crude-EtOH)，亦即得到102克之沉香子油。
接著，將上述之沉香子油以4℃冷藏及避光儲存一個月，該沉香子油之氣味、顏色及酸鹼值測等物理性質並未有變化；同時，透過核磁共振儀的評估，如圖2所示，第一天的1H NMR(CDCl3,400MHz)與一個月後同一檢品均存在佛波酯及脂肪酸之特徵訊號，且於成分之比例上沒有明顯變化，1H NMR呈現穩定吻合的結果。藉此可知，4℃冷藏與避光的環 境顯然為適合該沉香子油之儲存方式。
此外，藉由下列實驗之具體實施例，可進一步證明本發明用途之應用範圍，但並不以此限制本發明之範圍。
實驗一：本實驗係因不論何種本養產品塗抹於皮膚上時，皮膚的角質層為最些接觸該些產品，因此本實驗選用人類皮膚角質株化細胞進行安全性評估。本實驗採用MTT assay檢測。將皮膚角質細胞(1×104/well)培養在96-well盤，並在37℃及5% CO2培養箱中培養至少24小時；因此，本實驗為沉香子油保護及修護皮膚細胞經紫外線作用之細胞存活度試驗。
(1)移除細胞上清液，更換無血清之新鮮培養液，培養4小時後，以PBS清洗置入無血清之新鮮培養液，繼續培養4小時，進行存活度分析，此作為Control組。
(2)移除細胞上清液，更換無血清之新鮮培養液，放置細胞培養箱中培養4小時後，移除上清液以PBS清洗並抽乾，進行UV照射後，立即加入無血清之新鮮培養液，繼續培養4小時，進行存活度分析，此作為UV照射組。
(3)移除細胞之上清液，將沉香子油各別混合於無血清之新鮮培養液，培養4小時後，移除上清液以PBS清洗並抽乾，各別進行UV照射後，立即加入含萃取物之無血清新鮮培養液，繼續培養4小時，進行存活度分析，此作為UV照射+沉香子油組。
(4)當上述三組達反應時間，移除舊的培養液，以PBS清洗一次，並換上新的培養液，加入10μL的MTT(3-(4,5-cimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenyl tetrazolium bromide)溶液反應，於37℃、5% CO2反應4小時後移除培養液，加入100μL的DMSO溶解formazan沉澱物，最後於波長570nm下測定吸光值(BioTek,SynergyTM2,USA)。
(5)試驗結果如圖3所示，細胞經過50mJ/cm2 UVB照射後，細胞存活度約47%，經過1~100μg/mL沉香子油作用後，可有效降低UVB對細胞的損傷，且以10~100μg/mL沉香子油的保護效能最為明顯。
實驗二：
本實驗係因化學、輻射和很多其他因素的都會對DNA鹼基對造成破壞，DNA時常需要修復，核苷酸切除修復是其中一種很重要的方法，通過移除絕大部分紫外線導致的DNA損傷，使得細胞免於受到有害變異的影響(主要形式為環丁烷嘧啶二聚體(cyclobutane pyrimidine dimer,CPD))；因此，本實驗係為沉香子油之保護及修護皮膚細胞試驗--偵測UVB光產物CPD之表現。
(1)將1×105/mL細胞培養於24孔盤至少24小時，進行各別處理-Control組、UV照射組、UV照射+沉香子油組。沉香子油作用4小時後進行UV照射，更換不含血清培養液培養4小時。移除培養液以PBS清洗，以冰甲醇固定細胞，再以Triton X-100作用，加入2M HCl作用1小時，再以1% BSA填補細胞間隙，再以CPD一級抗體於37℃搖晃反應1小時，去除一級抗體後，再加入二級抗體避光反應30分鐘，以PBS清洗於Ex：504nm；Em：524nm偵測螢光表現。再加入Hoechst 33342(10mg/ml)進行細胞核染色，以PBS清洗後再以Ex：355nm；Em：460nm偵測螢光表現，並於螢光顯微鏡下觀察拍照。
(2)試驗結果如圖4、圖5所示，細胞經過UVB照射後，誘發光化產物CPD產生，經過50和100μg/mL沉香子油作用後，細胞內CPD有明顯的減少，顯示沉香子油具有保護細胞免於UVB傷害的效能。
實驗三：
本實驗係因皮膚的膠原蛋白會受到體內自由基、紫外線或是年齡漸增而流失，導致皮膚失去彈性及張力，使肌膚提早老化，因此本實驗係用以測定沉香子油是否可促進皮膚膠原蛋白生成。
(1)將1×104/well皮膚纖維母細胞培養在3-cm dish盤中24小時後，移除上清液再加入含有樣品之無血清培養液培養48小時，PBS清洗後，刮除細胞，在1200rpm下離心5分鐘，再去除上清液。本試驗是利用Sircol soluble collagenassay kit進行膠原蛋白測定。首先將100μL細胞液混合1mL sircol dye reagent，接著在室溫下均勻搖晃30分鐘，再離心12000rpm 10分鐘，直接倒掉上清液，再加入750μL ice-cold acid-salt wash reagent，再離心12000rpm 10分鐘，將dye reagent完全去除乾淨。之後加入250μLalkali reagent混合均勻，取100μL至96-well盤，在555nm測吸光值。試驗結果顯示，纖維母細胞經過50和100μg/mL沉香子油作用48小時後，有效促進纖維母細胞分泌22~61%膠原蛋白。
(2)試驗結果如圖6所示，纖維母細胞經過50和100μg/mL沉香子油作用48小時後，有效促進纖維母細胞分泌22~61%膠原蛋白。
實驗四：
本實驗為測定沉香子油是否可促進傷口癒合試驗(wound healing)。
(1)將inster置於24-well plate中，將3×105cell/mL細胞數之細胞培養在insert中，並在37℃及5% CO2培養箱中培養至少24小時，拔除insert進行50mJ/cm2UVB照射後再加入不同濃度沉香子油樣品反應4小時後，以顯微鏡觀察0、12、24和48小時的變化並拍照，最後進行定量分析。
(2)試驗結果如圖7、圖8所示，經過沉香子作用後，觀察0、12、24和48小時細胞移動距離(Gap Distance)比例，對照組為100.0%、82.7%、76.9%和46.1%，沉香子油為100.0%、93.8%、65.6%和62.5%。
藉由上述實驗可知，本發明之沉香樹子萃取物(即上述之沉香子油)確具有可修護皮膚細胞、促進皮膚膠原蛋白生成、促進傷口癒合之功效，本發明之沉香樹子萃取物(即上述之沉香子油)應用於皮膚修護與抗老化之用途，確實具有明顯之效果。
又，為提升本發明沉香樹子萃取物(即上述之沉香子油)之應用範圍，可將本發明上述實驗中沉香樹子萃取物(即上述之沉香子油)最高作用濃度50~100μg/mL(0.005~0.01%)放大100倍，將有效作用濃度(0.5~1%)之沉香樹子萃取物(即上述之沉香子油)添加油相中可抗氧化之維他命E、可滋潤膚感之橄欖油、玫瑰果油，亦可添加水相添加濟中可保濕嫩膚之玻尿酸、可保濕增稠之三仙膠、可光滑膚感及增稠之海藻膠，以及可提高保存之氯苯甘醚(Chlorphenesin)、…等成分，進而獲得沉香子複合油、沉香子油精華霜、…等產品；因此，本發明之沉香樹子萃取物可使皮膚有效抗老化、修護受損細胞、促進傷口癒合，本發明確可用於製備皮膚修護用途之組成物。
由是，從以上所述可知，本發明之沉香樹子萃取物確具有顯著之新穎性與進步性，誠已符合發明專利之要件，爰依法提出專利申請，並祈賜專利為禱，至感德便。
惟以上所述，僅為本發明之可行實施例，該實施例主要僅在於用以舉例說明本發明為達到目的所運用之技術手段及其構造，因此並不能以之限定本發明之保護範圍，舉凡依本發明說明書及申請專利範圍所為之等效變化或修飾，皆應仍屬本發明所涵蓋之保護範圍者。

Claims (2)

  1. 一種沉香樹子萃取物用以製備皮膚修護組成物之用途，其係由複數的沉香樹(Aquilaria malaccensis)子分批以逆滲透流動水清洗，每次清洗10分鐘，每一批沉香樹子重複洗滌三次後於室溫下瀝乾，並平鋪於吸水性材質上陰乾兩天；然後，使用粉碎機粉碎該些沉香樹子，並使粉碎後之沉香樹子之粒徑不大於2mm，同時控制粉碎機之粉碎時間，使連續粉碎時間不超過20分鐘，接著將該些粉碎後之沉香樹子分批以90%乙醇進行超音波萃取，每批粉碎後之沉香樹子萃取三次，每天萃取1次，萃取完畢後，藉由減壓濃縮機及真空幫浦移除所有醇水溶劑，使獲得沉香樹子萃取物，而該沉香樹子萃取物之型態為油狀，使形成沉香子油。
  2. 如請求項1所述之一種沉香樹子萃取物應用於皮膚修護之用途，其中該沉香樹子萃取物之有效作用濃度為50~100μg/mL。
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