TWI726429B

TWI726429B - 用於皮膚傷口癒合之用途的大豆醱酵組合物

Info

Publication number: TWI726429B
Application number: TW108135368A
Authority: TW
Inventors: 蕭敬皇
Original assignee: 寶耕生技股份有限公司
Priority date: 2019-09-27
Filing date: 2019-09-27
Publication date: 2021-05-01
Also published as: TW201946642A

Abstract

本發明提供一種用於皮膚傷口癒合之用途的醫藥組合物，具體而言該組合物為一大豆醱酵組合物，是以大豆液與多種的微生物益生菌群共同培養而製成的大豆醱酵液，其中該微生物益生菌群係由雙歧桿菌屬、乳桿菌屬、芽孢桿菌屬、乳酸球菌屬及鏈球菌屬之微生物所組成的群組。

Description

用於皮膚傷口癒合之用途的大豆醱酵組合物

本發明係提供一種用於皮膚傷口癒合之用途的醫藥組合物，具體而言該組合物的主成分為一大豆醱酵組合物，是以大豆液與多種的微生物益生菌群共同培養而製成的大豆醱酵液，其中該微生物益生菌群係由雙歧桿菌屬、乳桿菌屬、芽孢桿菌屬、乳酸球菌屬及鏈球菌屬之微生物所組成的群組。

皮膚的主要功能包括保護、排泄、分泌、吸收、熱調節、蓄積、感覺認知及免疫過程之調節，因此當皮膚上有傷口時，例如一般性創傷或褥瘡所造成的傷口，會使得皮膚受到不利的影響，而無法發揮其正常該有的功能。

此外，眾所皆知糖尿病的傷口不易癒合，患者容易因為自主神經病變，進而造成皮膚乾燥，容易龜裂；患者亦也容易因為血管病變，導致末端血管容易阻塞，循環變差，使得皮膚容易萎縮。

使用微生物醱酵大豆之產物亦可用作抗活性氧作用組合物、試劑、食品、化妝品及藥品(例如日本專利第4139132號)。某些特定的大豆萃取物可用於治療某些皮膚病之化妝品或藥物，例如含有規定比率之鞘磷脂及磷脂之大豆萃取物經揭示可用於治療乾性皮膚之化妝品中(美國專利公開案第US2002/0009509 A1號)。但該等萃取物是以水粹取成熟之完整大豆或無油大豆粉產生粗粹物，再經由使用脂族烴及脂族酮處理而得之。

本發明係以同發明人(中華民國發明專利第I538680號)內文之實施例為基礎之製備方法，發現其有用於皮膚傷口癒合之用途。

本發明係提供一種用於皮膚傷口癒合之醫藥組合物，具體而言該組合物為一大豆醱酵組合物，是以大豆液與一種以上的微生物益生菌群共同培養而製成的大豆醱酵液，其中該微生物益生菌群係由雙歧桿菌屬、乳桿菌屬、芽孢桿菌屬、乳酸球菌屬及鏈球菌屬之微生物所組成的群組。

在本發明一實施例中，其中該雙歧桿菌屬之微生物係為雙岐桿菌(bifidobacterium bifidum)及長雙岐桿菌(Bifidobacterium longum)；該芽孢桿菌屬之微生物係為凝結芽孢桿菌(Bacillus coagulans)；該乳桿菌屬之微生物係選自於由嗜酸乳桿菌(Lactobacillus Acidophilus)、乾酪乳桿菌(Lactobacillus casei)、戴白氏乳桿菌 (Lactobacillus delbrueckii)、副乾酪乳桿菌(Lactobacillus paracasei)、植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)及鼠李醣乳桿菌(Lactobacillus rhamnosus)所組成的群組；該乳酸球菌屬之微生物係為乳酸球菌(Lactococcus lactis)；該鏈球菌屬之微生物係為唾液鏈球菌(Streptococcus salivarius)。

在本發明一實施例中，其中該大豆液(即大豆培養基)與該微生物益生菌群共同培養的比例係為100：1，且該大豆液係為使用未脫脂的大豆液。

雖然本發明已以實施例揭露如上，然其並非用以限定本發明，任何所屬技術領域中具有通常知識者，在不脫離本發明之精神和範圍內，當可作些許之更動與潤飾，故本發明之保護範圍當事後付之申請專利範圍所界定者為準。

第一圖，係說明大豆醱酵液凝膠(FSG)對於傷口面積變化。

第二圖，係說明大豆醱酵液凝膠(FSG)對於傷口癒合變化。

第三圖，係說明傷口癒合病理染色分析。

第四圖至第八圖，係說明本發明於人體傷口癒合的實施例。

實施例1. 本發明之組合物中含有之大豆醱酵液的製備方法

本發明係將未脫脂的非基因改造大豆使用磨漿機磨漿，以大豆與水之比例為1比16之大豆液加入黑糖、礦鹽加熱後，無需過濾即得大豆液體培養基，供微生物益生菌群培養使用。

該大豆液體培養基分別與雙歧桿菌屬(Bifidobacterium)、芽孢桿菌屬(Bacillus)、乳桿菌屬(Lactobacillus)、乳酸球菌屬(Lactococcus)及鏈球菌屬(Streptococcus)之微生物依乳酸菌發酵方式(如同營醱酵或異營醱酵)個別進行液態培養，再添加該大豆液體培養基進行放大培養，最後將各個菌種混合在一起，添加該大豆液體培養基進行最終培養，發酵溫度控制在38℃，發酵時間為168小時以上。

上述雙歧桿菌屬(Bifidobacterium)之微生物係為雙岐桿菌(bifidobacterium bifidum)及長雙岐桿菌(Bifidobacterium longum)；該芽孢桿菌屬之微生物係為凝結芽孢桿菌(Bacillus coagulans)；該乳桿菌屬之微生物係選自於由嗜酸乳桿菌(Lactobacillus Acidophilus)、乾酪乳桿菌(Lactobacillus casei)、戴白氏乳桿菌(Lactobacillus delbrueckii)、副乾酪乳桿菌(Lactobacillus paracasei)、植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)及鼠李醣乳桿菌(Lactobacillus rhamnosus)所組成的群組；該乳酸球菌屬之微生物係為乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)；以及該鏈球菌屬之微生物係為唾液鏈球菌(Streptococcus salivarius)。

上述實施例中，其中該大豆液與該微生物益生菌群共同培養的比例為100：1，其中雙岐桿菌佔總體積的0.10~0.30%、長雙岐桿菌佔總體積的0.05~0.15%；凝結芽孢桿菌佔總體積的0.10~0.30%；嗜酸乳桿菌佔總體積的0.10~0.30%、乾酪乳桿菌佔總體積的0.10~0.30%、戴白氏乳桿菌佔總體積的0.10~0.30%、副乾酪乳桿菌佔總體積的0.100~0.30%、植物乳桿菌佔總體積的0.100~0.30%、鼠李醣乳桿菌佔總體積的0.100~0.30%；乳酸球菌佔總體積的0.05~0.15%以及唾液鏈球菌佔總體積的0.05~0.15%。

上述實施例中，最終培養所得的大豆醱酵液經加熱滅菌及過濾後，可溶性固形物濃度可達5.0 Brix左右，即製得本發明所述的用於皮膚傷口癒合之用途的大豆醱酵組合物中所含之大豆醱酵液。

將上述大豆醱酵液添加適當佐劑，可製成噴液、凝膠、乳化液、乳膏、軟膏等劑型。較佳者，本發明用於皮膚傷口癒合之大豆醱酵組合物係以凝膠及噴劑形式，即Fermented Soybean Filtrate Gel(FSG)和Fermented Soybean Filtrate Liquid(FSL)。

實施例2. 本發明之組合物用於皮膚傷口癒合之動物試驗

為了評估本發明組合物所含之大豆發酵液，是否具有促進皮膚傷口癒合之之功效，而進行試驗評估。

本實施例採用約6週大雄性ICR品系小鼠(購自樂斯科生物科技股份有限公司)，每組8隻，體重約30至35公克，並給予7天環境適應期，以小鼠飼料(Chow 5001)與水提供予小鼠自由攝食。

本實施例試驗分組如下：

(1)FSG組：即本發明實驗組，以大豆醱酵液添加賦形劑所調配的凝膠，Fermented Soybean Filtrate Gel (FSG)。

(2)Vehicle組：以水取代大豆醱酵液，並添加實驗組相同含量之賦形劑所調配的凝膠。

(3)Positive組：購買市售的藥品(類固醇-貝他每松軟膏BETAMETHASONE OINTMENT)作為Positive Control。

動物進行開創前一天予以禁食8小時以上，飲水則不限制。首先以氣體麻醉儀器將isoflurane氣化後，將實驗動物穩定進入深層麻醉階段後，先將手術區域背側剃毛，再以優碘塗抹欲開創部位，並以75%酒精拭去殘留優碘。將Lidocaine(3mg/kg)注射在開創部位局部麻醉，5分鐘後開始執行手術，進行全皮層之方形創傷(1公分×1公分)，每隻老鼠背側僅進行單一傷口開創，並進行實驗凝膠給予與照片拍攝記錄，最後用紗布覆蓋傷口並戴上防護罩。

在首日傷口開創後，即刻於傷口給予不同的實驗樣品(FSG組；Vehicle組；Positive組)，並依時間指定連續給予相同實驗樣品更換與傷口紀錄(如第一圖)。傷口開創當日定義為Day 0，之後每2~3天給予傷口藥物更換與紀錄；實驗凝膠更換、傷口清潔與紀錄等流程，實驗動物均穩定進入深層麻醉階段後實施(如第二圖)。

傷口面積量測：以軟體(Image J)分析計算傷口癒合面積，再計算傷口癒合百分比(wound healing rate,%)。傷口癒合百分比%=[(第0天傷口面積-第N天傷口面積)/第0天傷口面積]×100%。

傷口面積變化：(如第一圖)，在Day2發現傷口均會因為發炎的關係而稍有面積增加之趨勢；在Day4開始呈現組間差異，FSG組顯著低於Vehicle組別(P=0.006)，但Positive組分別與FSG組和Vehicle組並無顯著差異(P>0.05)；在Day7組別間呈現顯著組間差異，FSG組分別顯著低於Positive組與Vehicle組(P=0.015；P<0.0001)，Positive組亦顯著低於Vehicle組(P=0.025)；在Day9傷口面積組間呈現更大的組間差，FSG組分別顯著低於Positive組與Vehicle組(P=0.045；P=0.001)，Positive組亦顯著低於Vehicle組別(P=0.048)；在Day11呈現組間差異，FSG組分別顯著低於Vehicle組別(P=0.006)，但Positive組分別與FSG組和Vehicle組無顯著差異(P>0.05)；在Day14、17與21的時間點上，組別間具組間差異，Vehicle組均顯著高於Positive組與FSG組別(P<0.05)，但Positive組與FSG組無顯著差異(P>0.05)。

以上結果顯示，本發明之大豆醱酵組合物(FSG組：大豆醱酵物凝膠)對於皮膚傷口癒合能力，具有優於其他實驗樣品(Vghicle組：空白凝膠對照組、Positive組：類固醇-貝他每松軟膏BETAMETHASONE OINTMENT)之功效。

實施例3. 本發明之組合物對於皮膚傷口組織病理之影響

在上述實施例2的實驗中，在Day9，各組分別犧牲2隻動物，並取其傷口區域範圍之組織進行組織病理切片與分析。(如第三圖)

再上皮化(re-epithelialization)(H&E staining)評估(如第三圖第一排)，是皮膚表皮層在傷口癒合重要的一個指標，結果顯示FSG組及Positive組結果較Vehicle組呈現較佳的趨勢。

肉芽組織評估方面，傷口癒合增生期可見到大量增生的微血管、纖維結締組織與炎症細胞進潤，因此肉芽組織的面積大小對傷口癒合上應有其意義。本試驗採用Masson Trichrome染色(如第三圖第二排)來區分傷口的肉芽組織，在觀察後發現FSG組及Positive組的肉芽組織面積皆小於Vehicle組，顯示具有減緩發炎反應之效果而加速傷口的復原速度。

纖維結締組織評估方面，成熟結締組織較多對於傷口愈合表示已經開始進入肉芽組職修復後期，故使用Van Gieson染色(如第三圖第三排)區分不同種類的纖維結締組織來進一步驗證上述Masson Tricheome染色的結果，在觀察後發現發現FSG組及Positive組成熟的肉芽組織於皆多於Vehicle組。

血管新生成的部分(H&E staining)，在光學顯微鏡以400倍的視野下觀察wound bed周圍區域(如第三圖第四排)，發現在FSG組及Positive組的新生血管均顯著性多於Vehicle組。

由上述病理切片分析，本發明之大豆醱酵組合物(FSG組：大豆醱酵物凝膠)對於皮膚傷口癒合的機制，是控制傷口發炎(類似類固醇)，並提高成熟結締組織與血管新生效果，而達到促進傷口癒合之成效。

實施例4. 本發明之組合物實際對於人皮膚傷口癒合之案例

案例1：(如第四圖)頭頸癌接受放射線治療，因皮膚燒焦破皮不適而暫停放療，使用本發明之大豆醱酵組合物於皮膚表面，每日2次，經過5天，皮膚傷口癒合。

案例2：(如第五圖)亦頭頸癌接受放射線治療，因皮膚燒焦破皮不適而暫停放療，使用本發明之大豆醱酵組合物於皮膚表面，每日2次，經過13天，皮膚傷口癒合完好。

案例3：(如第六圖)腳部擦傷經過二個星期還無法癒合，使用本發明之大豆醱酵組合物於皮膚表面後，每日1次，經過5天皮膚傷口癒合呈現癒合趨勢，經過13天皮膚傷口癒合呈現癒合。

案例4：(如第七圖)糖尿病足部傷口，長達二年無法癒合，使用本發明之大豆醱酵組合物於皮膚表面後，每日1次，經過27天皮膚傷口癒合呈現癒合趨勢，只剩一小洞，經過52天皮膚傷口癒合完全癒合。

案例5：(如第八圖)長期臥床患者的褥瘡傷口，眾所皆知褥瘡不易治療，甚至絕大多數患者會越來越嚴重，就算接受治療，多數只能延緩不繼續惡化，想要癒合談何容易，圖中患者使用本發明之大豆醱酵組合物於皮膚表面後，每日1次，經過181天皮膚傷口癒合至0.5平方公分表層傷口。

Claims

一種用於皮膚傷口癒合用途之醫藥組合物，具備藉由控制傷口發炎，並提高成熟結締組織與血管新生效果，而達到促進傷口癒合之成效。該組合物的主成分是一大豆醱酵液，該大豆醱酵液係以大豆液與多種的微生物益生菌群共同培養而製成。將未脫脂的非基因改造大豆使用磨漿機磨漿，以大豆與水之比例為1比16之大豆液加入黑糖、礦鹽加熱後，無需過濾即得大豆液體培養基，供微生物益生菌群培養使用。其中該微生物益生菌群係由雙歧桿菌(Bifidobacterium bifidum)、長雙岐桿菌(Bifidobacterium longum)、凝結芽孢桿菌(Bacillus coagulans)、嗜酸乳桿菌(Lactobacillus Acidophilus)、乾酪乳桿菌(Lactobacillus casei)、戴白氏乳桿菌(Lactobacillus delbrueckii)、副乾酪乳桿菌(Lactobacillus paracasei)、植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)、鼠李醣乳桿菌(Lactobacillus rhamnosus)、乳酸球菌(Lactococcus lactis)及鏈球菌(Streptococcus salivarius)之微生物所組成之群組。群組各益生菌先個別進行液態培養，再添加該大豆液體培養基進行放大培養，最後將各個菌種混合在一起，添加該大豆液體培養基進行最終培養，發酵溫度控制在38℃，發酵時間為168小時以上，最終培養所得的大豆醱酵液經加熱滅菌。
如申請專利範圍第1項所述用途之醫藥組合物，該促進傷口癒合用途之傷口係指接受放射線治療之傷口、擦傷傷口、糖尿病足部傷口、褥瘡傷口。