TWI726228B - Ｃｄ１４拮抗分子用於治療癌症 - Google Patents

Abstract

一種使用CD14拮抗分子治療個體之癌症及/或減少癌幹細胞幹性的方法，該CD14拮抗分子可為一抗CD14抗體。

Description

CD14拮抗分子用於治療癌症

本發明係關於一種癌症治療方法，特別係關於使用CD14拮抗分子治療癌症的方法。

肺癌是全球最常見的致命惡性腫瘤，而非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)是最常見的癌症類型。非小細胞肺癌通常使用化療治療；然而，此方法的效果相對不彰，使病患的中位數存活期不足一年。

固態腫瘤包含異質性的細胞群體，包括癌幹細胞(cancer stem cells，CSCs)的小群體。這些細胞被認為會導致大多數惡性腫瘤，並且在癌症復發、轉移、及抗藥性中起主要作用。因此，以癌幹細胞為標靶的特定藥劑可能有益於癌症治療。

本揭露是係基於CD14參與癌幹細胞的幹性(stemness)維持，以及諸如抗CD14抗體之CD14拮抗分子成功抑制肺癌幹細胞的球體形成能力，並且抑制小鼠的異種移植腫瘤形成與腫瘤生長等意外發現。

因此，本發明之一目的在提供一種治療個體癌症的方法，包含對一有此需要的個體施用一有效量的CD14拮抗分子。在一些實施例中，該CD14拮抗分子的量有效減少該個體的腫瘤形成或腫瘤生長。替代地或另外，該CD14拮抗分子的量有效減少癌幹細胞的幹性。替代地或另外，該CD14拮抗分子的量有效抑制癌幹細胞誘導的免疫抑制(immunosuppression)，例如，免疫抑制性配體(ligand)PDL1在免疫細胞、癌細胞、或該二種細胞中的表現增加。任一該CD14拮抗分子可以全身性施用，例如，經由一腸道途徑或經由一腸道外途徑。

在一些實施例中，該CD14拮抗分子是一抗體。本文所述方法中使用的任一抗體可以是一全長抗體或其抗原結合片段。或者，該抗體可以是一人類抗體、一人源化抗體(humanized antibody)、一嵌合抗體(chimeric antibody)、或一單鏈抗體(single-chain antibody)。

或者，該CD14拮抗分子是一抑制CD14介導的訊息傳遞路徑的藥劑。在一些實施例中，該藥劑是一小分子抑制劑或一胜肽抑制劑。該CD14拮抗分子也可以是一抑制CD14表現的藥劑，例如一靶向CD14的干擾核糖核酸(interfering RNA)。

以本文所述方法治療的個體可以是一患有或疑似患有癌症的病患(例如一人類病患)，所述癌症諸如肺癌、乳癌、結腸直腸癌、胰臟癌、肝癌、前列腺癌、皮膚癌、淋巴瘤、或白血病。在一些實施例中，該個體是一患有或疑似患有非小細胞肺癌(NSCLC)的人類病患。這樣的人類病患相比一未罹患癌症(例如NSCLC)的對照個體可表現出含量提高的CD14、細胞程式死亡配體1(PDL1)、CD44、或其組合。

任何以本文所述方法治療的個體可能已經接受另一癌症療法(例如，化學療法、免疫療法、或手術)。在一些實施例中，本文所述方法可進一步包含對該個體施用另一抗癌治療劑。

本揭露之範圍亦涵蓋(a)一種用於治療個體癌症的醫藥組合物，該醫藥組合物包含一或多種本文所述的CD14拮抗分子(例如一抗CD14抗體)；以及(b)前述CD14拮抗分子用於製備治療癌症之藥物之用途。

以下說明闡述了本發明之一或多個實施方式的細節。由下列附圖與若干實施例之詳細說明，以及所附申請專利範圍，本發明的其他特徵或優點將清晰可見。

下列附圖構成本說明書的一部分，其被納入以進一步說明本揭露的某些面向。透過參考一或多個該些附圖並結合本文提出的具體實施例的詳細描述，可以更好地理解該些面向。

圖1A-1C顯示抗CD14抗體對CD14⁺肺癌幹細胞的球體形成能力的抑制作用。CLS1(圖1A)、CL141(圖1B)及CL152(圖1C)細胞係在有或無抗CD14抗體(0.1 及1μg/ml)的條件下，培養於含有表皮生長因子(EGF，20ng/ml)與鹼性纖維母細胞生長因子(bFGF，20ng/ml)的MCDB201培養基。21天後測定細胞形態(上圖)及球體形成能力(下圖)。比例尺，100μm。

圖2A-2B顯示抗CD14抗體對小鼠腫瘤起始(圖2A)及腫瘤生長的抑制作用(圖2B)。圖2A，每週一次以2或10mg/kg之抗CD14抗體處理兩週後，測定由CD14⁺ CLS1細胞形成的異種移植腫瘤的發生率及腫瘤重量。腫瘤之產生係透過注射500個CD14⁺ CLS1細胞(N

3隻小鼠)。圖2B，每週兩次以1、2或5mg/kg之抗CD14抗體處理兩週後，測定由CD14⁺ CLS1細胞形成的異種移植腫瘤的腫瘤生長。腫瘤之產生係透過注射500個CD14⁺ CLS1細胞(N

3隻小鼠)。

圖3A-3H顯示CD14過度表現對細胞訊息傳遞的影響。圖3A，以流式細胞術分析(flow cytometric analysis)過度表現CD14之CLS1細胞中的CD14。圖3B，以西方墨點法分析(Western blot analysis)過度表現CD14之CLS1細胞中的Janus激酶(JAK)、訊息傳遞與轉錄活化因子1(STAT1)、訊息傳遞與轉錄活化因子3(STAT3)及Nanog之表現。圖3C，相比空白對照細胞，過度表現CD14之CLS1細胞中被上調基因的MetaCore路徑分析。圖3D，以即時反轉錄定量聚合酶鏈鎖反應(real time RT Q-PCR)分析CD14過度表現細胞及空白對照細胞中的幹性路徑分子(CD14、CD44和乙醛去氫酶(ALDH1A1))、ABC轉運蛋白(ABCG1及ABCG2)以及免疫檢查點分子(PDL1)。數據表示平均值±S.D.並藉由學生t檢定檢驗顯著性，* P<0.05。數據代表三個獨立生物實驗。圖3E，以流式細胞術分析過度表現CD14之CLS1細胞中的PDL1。圖3F，以流式細胞術分析過度表現CD14之CLS1細胞中的CD44。圖3G，以流式細胞術分析過度表現CD14之雙重染色(CD14和CD44)CLS1細胞。圖3H，以即時反轉錄Q-PCR分析經抗CD14抗體(0.1及1μg/ml)處理24小時的CD14過度表現細胞中的PDL1及CD44表現量。數據表示為平均值±S.E.M。數據之顯著性係藉由學生t檢定檢驗，* P<0.05。數據代表三個獨立生物實驗。

圖4A-4H顯示sCD14對癌細胞幹性的調節作用。圖4A，利用酵素結合免疫吸附分析法(ELISA)測量癌相關纖維母細胞(CAFs)以及與CAFs或不與CAFs共培養的CLS1細胞的sCD14分泌濃度(N=3)。圖4B，以即時反轉錄Q-PCR分析經sCD14(200ng/ml)處理72小時或未經處理的CLS1細胞中的幹性路徑分子(Nanog、Oct3/4及Sox2)。數據表示為平均值±S.E.M並藉由學生t檢定檢驗其顯著性，* P<0.05。各數據代表三個獨立生物實驗。圖4C，在添加EGF(20ng/ml)與 bFGF(20ng/ml)的MCDB201培養基中以sCD14處理21天的初代肺癌細胞(CL141及CL152細胞)的球體形成能力(下圖)及形態(上圖)。圖4D，利用受體酪胺酸激酶磷酸化抗體陣列(receptor tyrosine kinase phosphorylation antibody arrays)辨識經sCD14(200ng/ml)處理30分鐘及1小時或未經處理的CLS1細胞的可能訊息傳遞。掃描及定量該陣列，並以陽性對照的數量對各數量標準化。圖4E，以西方墨點法分析經sCD14(200ng/ml)與類胰島素生長因子-II(IGF-II)(100ng/ml)處理的CLS1細胞在指定時間點(0、10及30分鐘及1、2、6、及24小時)的JAK1及Nanog表現。圖4F，藉由免疫墨點法(immunoblotting)檢測靶向LIFR及Nanog之LIFR短髮夾RNA(shRNA)(shLIFR # 659及shLIFR # 362)或亂序小干擾RNA(siRNA)(shLuc)細胞的蛋白質量。β-肌動蛋白(β-actin)用作內部對照。圖4G，透過免疫墨點法檢測經sCD14(200ng/ml)處理的靶向JAK及Nanog之LIFR短髮夾RNA(shLIFR # 659及shLIFR # 362)或亂序小干擾RNA(shLuc)細胞在指定時間點(0、10及30分鐘及1、2、6、及24小時)的蛋白質量。β-肌動蛋白用作內部對照。圖4H，以sCD14(200ng/ml)處理的CLS1細胞的球體形成能力及形態，及其在含有EGF(20ng/ml)與bFGF(20ng/ml)的MCDB201培養基中培養21天後之LIFR專一性減幅(knockdown)分析。比例尺，100μm。

圖5A-5C顯示sCD14對腫瘤微環境中免疫抑制分子的調節作用。圖5A，以即時反轉錄Q-PCR分析經sCD14(200ng/ml)處理24小時的癌細胞、癌相關纖維母細胞(CAFs)、及THP1衍生之巨噬細胞中的PDL1。圖5B，以即時反轉錄Q-PCR分析經連續濃度之sCD14(0、20、200及1000ng/ml)及CD14抗體(1μg/ml)處理24小時的THP1衍生之巨噬細胞中的PDL1。圖5C，以流式細胞術分析經連續濃度之sCD14(0、20、200及1000ng/ml)處理或經sCD14與CD14抗體(0.2及1μg/ml)組合處理的THP1衍生之巨噬細胞中的PDL1。

癌幹細胞(CSCs)是治療癌症的有希望靶標。癌幹細胞能自我更新、分化為特化細胞類型、及發展成癌症。「癌症幹性(cancer stemness)」的表型可能是致癌的驅動力，並且癌幹細胞被認為有助於化學或放射性抗性與轉移。越來越多證據顯示癌幹細胞存在於白血病及各種固態腫瘤，包括肺癌、乳癌、 結腸直腸癌、胰臟癌、肝癌、前列腺癌、皮膚癌、淋巴瘤、或白血病。癌幹細胞可以透過如CD14之生物標記辨識。

本發明報導意外的發現，(i)CD14拮抗分子，如抗CD14抗體，減少培養中癌幹細胞的幹性；(ii)抗CD14抗體保護小鼠免於腫瘤形成及腫瘤生長；(iii)CD14介導的訊息傳遞路徑在維持癌幹細胞的幹性中起重要作用。因此，本揭露提供使用有效量的CD14拮抗分子治療個體癌症(例如，減輕癌症、延遲癌症起始、及/或抑制癌症轉移)的方法，該CD14拮抗分子可以是一抗CD14抗體，或一抑制CD14介導的訊息傳遞路徑的藥劑。

CD14拮抗分子及包含該物之藥物組合物

CD14糖蛋白是一細菌脂多醣(lipopolysaccharide，LPS)的共同受體(co-receptor)，並且在脂多醣結合蛋白(LBP)存在時結合LPS。CD14有兩種亞型，膜結合形式(mCD14)和可溶形式(sCD14)。本文所用之術語「CD14」包括一表現CD14的個體的mCD14和sCD14，例如人CD14。在實施例中，人mCD14及sCD14的胺基酸序列如GenBank登錄號NP_001167576及PDB：4GLP_A所提供。

本文所述方法使用的CD14拮抗分子可以是一直接或間接阻斷、抑制、或減少CD14介導的訊息傳遞路徑的分子。術語「拮抗分子(antagonist)」未指示任何特定的生物作用機制，並且被認為明確地包括及涵蓋所有可能與CD14有直接或間接的藥理學、生理學、及生物化學上的交互作用。基於本揭露之目的，將可明確理解術語「拮抗分子」包括所有先前確認的用語、稱謂、功能狀態及特徵，其致使CD14本身(例如人CD14)、CD14生物活性(包括但不限於其調節癌症之任何方面的能力)、或該生物活性的後果，實質上有任何有意義程度之無效、減少、或中和，該有意義程度例如至少達20%、50%、70%、85%、90%、100%、150%、200%、300%、或500%，或10倍、20倍、50倍、100倍、1000倍、或10⁴倍。

在一些情況下，本文描述的CD14拮抗分子可以是結合CD14並且直接抑制CD14的生物活性的藥劑。在其他情況下，一CD14拮抗分子可以是結合CD14並干擾CD14與其配體(例如LPS)之間交互作用的藥劑，從而阻斷該配體活化CD14。或者，一CD14拮抗分子可以是包含一CD14結合部分及一毒素部分的接合物(conjugate)。此類CD14拮抗分子可能造成如癌幹細胞之表現CD14的細胞 的毒性。在其他實施例中，一CD14拮抗分子可以是一降低或抑制CD14表現的藥劑。另外，一CD14拮抗分子可以是作用於CD14引發的訊息傳遞路徑之下游組成分的藥劑。

例示性CD14拮抗分子包括但不限於抗CD14抗體、靶向CD14的反義(anti-sense)核酸分子、針對CD14的小干擾RNA(siRNA)、CD14抑制性小分子化合物、或CD14抑制性胜肽。

抗CD14抗體

一抗體(可與複數形式交互使用)是能夠透過位於免疫球蛋白分子之可變區(variable region)的至少一個抗原識別位點而專一性結合靶標的一免疫球蛋白分子，該標靶例如碳水化合物、多核苷酸、脂質、多肽等。本文所用之術語「抗體」不僅包括完整的(即全長的)多株(polyclonal)或單株(monoclonal)抗體，還包括其抗原結合片段(例如Fab、Fab'、F(ab')₂、Fv)、單鏈(scFv)、其突變體、包含一抗體部分的融合蛋白、人源化抗體、嵌合抗體、雙抗體、線性抗體、單鏈抗體、多專一性抗體(例如雙專一性抗體)及包含具有所需專一性之抗原識別位點的免疫球蛋白分子的任何其他修飾構型(configuration)，包括抗體的糖基化變體、抗體的胺基酸序列變體、及經共價修飾的抗體。一抗體包括任何類別的抗體，例如IgD、IgE、IgG、IgA或IgM(或其亞型)，並且抗體不需要是任何特定類別。依據抗體重鏈(heavy chain)恆定結構域(constant domain)的胺基酸序列，免疫球蛋白可以分配至不同類別。免疫球蛋白有五大類別：IgA、IgD、IgE、IgG、及IgM，其中一些類別可進一步區分為亞型(同型)，例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2。對應不同類別免疫球蛋白的重鏈恆定結構域分別稱為α(alpha)、δ(delta)、ε(epsilon)、γ(gamma)及μ(mu)。不同類別免疫球蛋白的次單元(subunit)結構及三維構型是眾所周知的。

一抗CD14抗體是能夠結合CD14的抗體，其可抑制CD14生物活性及/或CD14介導的訊息傳遞下游路徑。在一些實施例中，本文所述方法使用的抗CD14抗體抑制CD14訊息傳遞路徑達至少20%、至少40%、至少50%、至少75%、至少90%、至少100%，或至少2倍、至少5倍、至少10倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、或至少1000倍。抗CD14抗體的實例包括但不限於揭露於美國專利6,245,897號及7,326,569號；及PCT公開案WO 2002/042333號及WO 2015/140591號。在一些情況下，抗CD14抗體結合CD14的細胞外結構域或其內的一抗原決定位(epitope)。

一抗CD14抗體與CD14(例如人CD14)的結合親和力(binding affinity)可小於約100nM、約50nM、約10nM、約1nM、約500pM、約100pM、或約50pM至約2pM間任一者。結合親和力可以表示為K_D或解離常數，並且一增加的結合親和力對應於一降低的K_D。決定抗體與CD14的結合親和力的方法之一是測量抗體的單功能Fab片段的結合親和力。為了獲得單功能Fab片段，可以用木瓜酵素切割抗體(例如IgG)或以重組方式表現。一抗體的抗CD14 Fab片段的親和力可以藉由表面電漿共振(BIAcore3000^TM surface plasmon resonance(SPR)system，BIAcore公司，Piscaway，紐澤西州)來決定。取得動力學結合速率(k_on)及解離速率(k_off)(通常在25℃下測量)；平衡解離常數(K_D)值以k_off/k_on計算。

在一些實施例中，該抗體結合人CD14，並且未顯著結合來自另一哺乳動物物種的CD14。在一些實施例中，該抗體結合人CD14以及來自另一哺乳動物物種的一或多種CD14。在其他實施例中，抗體結合CD14且不與其他蛋白質有顯著交叉反應。與抗體結合的抗原決定位可以是連續的或不連續的。

本文所述方法使用的抗CD14抗體可以是屬於鼠類、大鼠、人類、或任何其他來源(包括嵌合或人源化抗體)。在一些實施例中，該抗體包含一經修飾的恆定區，例如一免疫上惰性的恆定區，所述免疫上惰性例如，不引發補體介導的裂解、或不刺激抗體依賴性細胞介導的細胞毒殺(ADCC)。ADCC活性可使用美國專利5,500,362號中揭露的方法評估。在其他實施例中，該恆定區之修飾如文獻所述：Eur.J.Immunol.(1999)29：2613-2624；PCT申請案PCT/GB99/01441號；及/或英國專利申請案9809951.8號。

本文所述任何抗體可以是單株抗體或多株抗體。「單株抗體」是指一同質性抗體群，而「多株抗體」是指一異質性抗體群。該二術語不限制抗體的來源或其製備方式。

在一些實施例中，本文所述方法使用的抗體是一人源化抗體。人源化抗體是指非人類(例如鼠類)抗體的類型為專一性嵌合免疫球蛋白、免疫球蛋白鏈、或其抗原結合片段，其含有源自非人類免疫球蛋白的最小序列。在大多數情況下，人源化抗體是指人類免疫球蛋白(接受者抗體)中屬於該接受者的互補性決定區(complementary determining region，CDR)的殘基(residue)被屬於非人物 種(供給者抗體)的CDR的殘基取代。所述非人物種例如具有所需專一性、親和力、及能力之小鼠、大鼠或兔子。在一些情況下，人類免疫球蛋白的Fv框架區(FR)殘基被相應的非人類殘基取代。此外，該人源化抗體可包含既不存在於接受者抗體也不存在於導入之CDR或框架序列的殘基，但該殘基被包含在內以進一步改進和優化抗體性能。一般而言，幾乎所有人源化抗體將包含至少一個且通常兩個可變結構域，其中所有或幾乎所有CDR區對應至非人類免疫球蛋白的該些區域，並且所有或幾乎所有FR區是人類免疫球蛋白共有序列(consensus sequence)的該些區域。人源化抗體最佳為將亦包含至少一免疫球蛋白恆定區或結構域(Fc)的一部分，通常是人類免疫球蛋白的該區域。抗體的Fc區可具有如WO 99/58572所述的修飾。其他類型的人源化抗體具有一或多個CDR(一個、二個、三個、四個、五個、六個)是相對於原始抗體而被改變，其也被稱為由原始抗體之一或多個CDR「衍生而來」的一或多個CDR。人源化抗體亦可涉及親和力成熟(affinity maturation)。

在一些實施例中，本文所述的抗體是一嵌合抗體，其可包括來自人類抗體的一重鏈恆定區及一輕鏈恆定區。嵌合抗體是指具有來自第一物種的一可變區或部分可變區及來自第二物種的一恆定區的抗體。在這些嵌合抗體中，通常輕鏈及重鏈的可變區皆類似一哺乳動物物種(例如，一非人類哺乳動物，例如小鼠、兔子及大鼠)的抗體可變區，而恆定部分則與來自另一種哺乳動物(例如人)的抗體是序列同源。在一些實施例中，可以在可變區及/或恆定區中進行氨基酸修飾。

在一些實施例中，本文揭露的抗體專一地結合一標靶抗原，例如人CD14(例如人mCD14或人sCD14)。「專一地結合(specifically binds)」(在本文中可互換使用)一靶標或一抗原決定位的抗體是本技術領域熟知的術語，並且此專一性結合的測定方法也是本技術領域熟知的。如果一分子更頻繁、更快速地以更長時間及/或以更強親和力與一特定標靶抗原反應或結合，勝過該分子與其他靶標之作用，則稱其表現出「專一性結合(specific binding)」。如果一抗體以比與其他物質結合更大的親和力、親留力(avidity)、更容易及/或以更長時間結合一標靶抗原，則該抗體「專一地結合」該標靶抗原。例如，與CD14抗原決定位專一地(或優先地)結合的抗體是相比與其他CD14抗原決定位或非CD14抗原決定位結合時，以更大的親和力、親留力、更容易及/或以更長時間與該CD14抗原 決定位結合的抗體。藉由閱讀此定義還可理解，例如，專一地結合一第一標靶抗原的抗體可以或可以不專一地或優先地結合一第二標靶抗原。因此，「專一性結合」或「優先結合(preferential binding)」不一定需要(儘管可以包括)排他性結合。通常但不是必須地，所謂結合意指優先結合。

能夠干擾CD14訊息傳遞路徑的抗體可以是與CD14(例如人CD14)結合並且抑制CD14生物活性及/或CD14介導的下游路徑的抗體。或者，此類抗體可以是結合一CD14配體(例如LBP)、結合一或多種類鐸受體(Toll-Like Receptors，TLRs)、及抑制CD14介導的下游訊息傳遞路徑的抗體。

本文所述的任何抗CD14抗體可與一毒素接合以形成一抗體-藥物接合物。在一些實施例中，抗CD14抗體可以對CD14訊息傳遞路徑影響最小的方式結合CD14(例如人CD14)。毒素的實例包括但不限於雞母珠毒素(abrin)、蓖麻毒蛋白A(ricin A)、假單胞菌外毒素(pseudomonas exotoxin)、或白喉毒素(diphtheria toxin)。在一些實施例中，該毒素是一細胞毒殺劑，例如紫杉醇(taxol)、細胞遲緩素B(cytochalasin B)、短桿菌素D(gramicidin D)、溴化乙錠(ethidium bromide)、土根鹼(emetine)、絲裂黴素(mitomycin)、依託泊苷(etoposide)、替尼泊苷(teniposide)、長春新鹼(vincristine)、長春花鹼(vinblastine)、秋水仙素(colchicin)、阿黴素(doxorubicin)、道諾黴素(daunorubicin)、二羥基蒽二酮(dihydroxy anthracin dione)、米托蒽醌(mitoxantrone)、光輝黴素(mithramycin)、放線菌素D(actinomycin D)、1-脫氫睪固酮(1-dehydrotestosterone)、糖皮質激素(glucocorticoids)、普魯卡因(procaine)、四卡因(tetracaine)、木卡因(lidocaine)、普萘洛爾(propranolol)、和嘌呤黴素(puromycin)及其類似物(analog)或同系物(homolog)。

本文所述能夠干擾CD14訊息傳遞路徑的抗體(例如抗CD14抗體)可藉由本技術領域已知的任何方法製備。參見例如Harlow and Lane,(1988)Antibodies：A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory,New York。

在一些實施例中，可以通過常規的融合瘤(hybridoma)技術製備對一標靶抗原(例如人CD14)具專一性的抗體。選擇性與如鑰孔血藍蛋白(KLH)之載體(carrier)蛋白偶聯的全長標靶抗原或其片段可用於免疫一宿主動物以產生與該抗原結合的抗體。如本文之進一步描述，宿主動物免疫的途徑與時程通常與已建立及常規的抗體刺激及生產技術一致。用於產生小鼠、人源化、及人類抗體 的一般技術是本技術領域已知的並且於本文中描述。預期包括人之任何哺乳動物個體或其抗體生成細胞可被操縱以作為哺乳動物(包括人)融合瘤細胞株的生產基礎。通常，宿主動物經由腹腔內、肌肉內、口服、皮下、足底及/或皮內接種一定量之免疫原，包括本文所描述者。

融合瘤可以由淋巴細胞(lymphocytes)及永生骨髓瘤細胞(immortalized myeloma cells)製備，係利用Kohler,B.and Milstein,C.(1975)Nature 256：495-497之一般體細胞融合技術或依Buck,D.W.et al.,In Vitro,18：377-381(1982)之修飾。可取得的骨髓瘤系可被用於融合，其包括但不限於X63-Ag8.653及來自美國加州聖地牙哥Salk Institute之Cell Distribution Center的該些細胞。一般而言，該技術涉及使用一融合劑如聚乙二醇(polyethylene glycol)或藉由本領域熟習技藝人士熟知的電學方法融合骨髓瘤細胞及淋巴樣細胞。融合後，將細胞與融合培養基分離，並培養於選擇性生長培養基，例如次黃嘌呤-胺基蝶呤-胸腺核苷(hypoxanthine-aminopterin-thymidine，HAT)培養基，以去除未融合的親代細胞。本文所述的任何補充或不含血清的培養基可用於培養分泌單株抗體的融合瘤。作為細胞融合技術的另一替代方案，第四型人類皰疹病毒(EBV)永生化B細胞可用於產生本發明的抗CD14單株抗體。若有需要，將擴增及次選殖融合瘤，並透過常規的免疫試驗方法(例如，放射免疫試驗、酵素免疫試驗、或螢光免疫試驗)測定上清液的抗免疫原活性。

可用作抗體來源的融合瘤包括親代融合瘤的所有衍生物及子代細胞，其產生能夠干擾CD14訊息傳遞路徑的單株抗體。產生此種抗體的融合瘤可使用已知方法在體外(in vitro)或體內(in vivo)生長。若有需要，可以藉由常規的免疫球蛋白純化方法，例如硫酸銨沉澱、膠體電泳(gel electrophoresis)、透析、色層分析、及超過濾，從培養基或體液中分離單株抗體。若存在不想要的活性，可將其除去，例如，藉由使製劑通過附著於固相的免疫原所製成的吸附劑，並從免疫原上沖提或釋放所需抗體。使用一標靶抗原或一含有該標靶胺基酸序列接合至一待免疫物種之免疫原性蛋白質的片段對宿主動物進行免疫，可以產生一抗體群(例如單株抗體)。所述免疫原性蛋白質例如鑰孔血藍蛋白、血清白蛋白、牛甲狀腺球蛋白、或大豆胰蛋白酶抑制劑。該接合係使用一雙官能基或衍生劑，例如馬來醯亞胺基苯甲酸磺基琥珀醯亞胺酯(maleimidobenzoyl sulfosuccinimide ester)(透過半胱胺酸(cysteine)殘基接合)、N-羥基琥珀醯亞胺 (N-hydroxysuccinimide)(透過離胺酸(lysine)殘基)、戊二醛(glutaraldehyde)、丁二酸酐(succinic anhydride)、SOCl、或R1N=C=NR，其中R及R1是不同烷基。

若有需要，一目的抗體(單株或多株)(例如由融合瘤產生)可被定序，而後該多核苷酸序列可轉殖至一載體中以用於表現或增殖。編碼該目的抗體的序列可以保存在一宿主細胞的載體中，然後可擴增及冷凍該宿主細胞以供未來使用。或者，該多核苷酸序列可用於遺傳操作以「人源化」抗體或改善抗體的親和力(親和力成熟)或其他特徵。例如，如果將該抗體用於臨床試驗及治療人類，則恆定區可被改造為更類似於人類恆定區以避免免疫反應。該抗體序列可能需要經過遺傳操作以獲得對標靶抗原的更大親和力及更強的抑制CD14介導的訊息傳遞路徑的功效。對於本領域熟習技藝人士明顯可知的是，可以對抗體進行一或多個多核苷酸改變，並仍保持其對標靶抗原的結合專一性。

在其他實施例中，可以藉由使用已被改造為表現特定人類免疫球蛋白的市售小鼠來獲得完全人類抗體。設計用於產生更理想的(例如，完全人類抗體)或更強的免疫反應的基因轉殖動物也可用於產生人源化或人類抗體。此類技術的實例是來自Amgen公司(Fremont，加州)的Xenomouse^RTM及來自Medarex公司(Princeton，紐澤西州)的HuMAb-Mouse^RTM與TC Mouse^TM。在其他替代方案中，可以藉由噬菌體呈現(phage display)技術重組製備抗體。參見例如美國專利5,565,332號；5,580,717號；5,733,743號；及6,265,150號；以及Winter et al.,(1994)Annu.Rev.Immunol.12：433-455。或者，噬菌體呈現技術(McCafferty et al.,(1990)Nature 348：552-553)可用於從未經免疫供給者的免疫球蛋白可變(V)結構域基因庫中以體外方式產生人類抗體及抗體片段。

一完整抗體(全長抗體)的抗原結合片段可透過常規方法製備。例如，F(ab')₂片段可藉由胃蛋白酶消化一抗體分子而產生，Fab片段可藉由還原F(ab')₂片段的雙硫鍵產生。

遺傳工程抗體，例如人源化抗體、嵌合抗體、單鏈抗體、及雙專一性抗體，可以透過例如常規重組技術產生。在一實施例中，可以使用常規方法順利地分離及定序編碼一對標靶抗原具專一性的單株抗體的去氧核醣核酸(DNA)(例如，藉由使用能夠與編碼單株抗體重鏈及輕鏈的基因專一性結合的寡核苷酸探針)。此種DNA的較佳來源是融合瘤細胞。一旦分離，該DNA可置入一或多個表現載體，然後轉染至宿主細胞中，例如大腸桿菌細胞、猿猴COS細胞、 中國倉鼠卵巢(CHO)細胞、或不產生免疫球蛋白的骨髓瘤細胞，以便在重組宿主細胞中合成單株抗體。參見例如PCT公開案WO 87/04462號。其後，該DNA可被修飾，例如，以人類重鏈及輕鏈恆定結構域的編碼序列取代鼠類同源序列，見Morrison et al.,(1984)Proc.Nat.Acad.Sci.81：6851，或將該免疫球蛋白的編碼序列共價連接至一非免疫球蛋白多肽的全部或部分編碼序列。依此種方式，遺傳工程抗體，例如「嵌合(chimeric)」或「雜合(hybrid)」抗體，可被製備為具有對標靶抗原的結合專一性。

為產生「嵌合抗體」而開發的技術是本技術領域熟知的。參見例如Morrison et al.(1984)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 81：6851；Neuberger et al.(1984)Nature 312,604；及Takeda et al.(1984)Nature 314：452。

構建人源化抗體的方法也是本技術領域熟知的。參見例如Queen et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86：10029-10033(1989)。在一實施例中，依據本技術領域已知的方法對一親代非人類抗體的V_H和V_L可變區進行三維分子模擬分析。其次，使用相同的分子模擬分析辨識被預測為對於形成正確CDR結構重要的框架胺基酸殘基。同時，使用親代V_H及V_L序列作為檢索指令，從任何抗體基因資料庫中辨識具有與親代非人類抗體胺基酸序列同源的胺基酸序列的人類V_H及V_L鏈。然後，選取人類V_H及V_L受體基因。

所選人類受體基因內的CDR區可用來自親代非人類抗體或其功能變體的CDR區替代。必要時，被預測為在與CDR區交互作用中重要的親代鏈框架區內殘基(參見上文描述)可用於替代人類受體基因中的相應殘基。

一單鏈抗體可透過重組技術製備，藉由連接一編碼重鏈可變區的核苷酸序列及一編碼輕鏈可變區的核苷酸序列。較佳地，一彈性連接子(linker)被納入該二可變區間。或者，可採用產生單鏈抗體的技術(美國專利4,946,778號及4,704,692號)以產生噬菌體scFv庫，並且可以依據常規方法從該噬菌體庫中辨識具CD14專一性的scFv選殖株。陽性選殖株可經進一步篩選以辨識出抑制CD14受體活性者。

依據本技術領域已知並且在本文中記載的方法而獲得的抗體可以本領域熟知的方法描述其特徵。例如，一種方法是用於辨識抗原所結合的抗原決定位或「抗原決定位定位(epitope mapping)」。本技術領域已知許多用於定位及表徵蛋白質上抗原決定位之位置的方法，包括解析抗體-抗原複合物的晶體 結構、競爭試驗(competition assays)、基因片段表現試驗(gene fragment expression assays)、及基於合成胜肽的試驗，例如記載於Harlow and Lane,Using Antibodies,a Laboratory Manual,Chapter 11,Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,N.Y.,1999。在另一實施例中，抗原決定位定位可用於確定抗體結合的序列。抗原決定位可以是一線性抗原決定位，即包含在單一胺基酸區段中，或是由胺基酸的三維交互作用而形成一個立體構形抗原決定位，其不必包含在單一區段(一級結構之線性序列)。不同長度的胜肽(例如，至少4-6個胺基酸的長度)可以被分離或合成(例如以重組方式)，並用於與抗體結合的試驗。在另一實施例中，抗體所結合的抗原決定位可藉由使用源自標靶抗原序列的重疊胜肽及測定其與抗體之結合在系統性篩選中確定。根據基因片段表現試驗，將編碼標靶抗原的可讀框架(open reading frame)隨機或依特定遺傳架構分段，並且測定該抗原的表現片段與待測抗體的反應性。舉例而言，該基因片段可以透過PCR產生，然後在有放射性胺基酸的情況下體外轉錄並轉譯成蛋白質。其後，藉由免疫沉澱(immunoprecipitation)及膠體電泳測定抗體與放射性標記抗原片段的結合。某些抗原決定位還可以透過使用呈現在噬菌體顆粒(噬菌體庫)表面上的龐大隨機胜肽序列庫來確定。或者，可以在簡單結合試驗中測試一限定的重疊胜肽片段庫與待測抗體的結合。在另一實施例中，可以進行抗原結合結構域的突變(mutagenesis)、結構域交換(domain swapping)實驗、及丙氨酸(alanine)掃描突變，以確定抗原決定位結合所需的、足夠的及/或必需的殘基。例如，可使用一標靶抗原的突變體進行結構域交換實驗，其中CD14多肽的多種片段被密切相關但抗原性不同的蛋白質的序列替換(交換)。藉由評估抗體與CD14突變體的結合，可以評估特定抗原片段對抗體結合的重要性。

或者，可以使用已知與相同抗原結合的其他抗體進行競爭試驗，以確定一抗體是否與其他抗體結合至相同的抗原決定位。競爭試驗為本領域熟習技藝人士所熟知。

其他CD14拮抗分子

除上述抗體以外的CD14拮抗分子可用於本文所述方法。在一些實施例中，該CD14拮抗分子是一抑制CD14介導的訊息傳遞路徑的藥劑，例如，直接抑制CD14活性的一小分子抑制劑或一胜肽抑制劑，或是一抑制CD14表現的藥劑(例如一靶向CD14的干擾RNA)。

在其他實施例中，該CD14拮抗分子包含至少一CD14抑制性化合物。如本文所述，「CD14抑制性化合物」是指一除抗CD14抗體以外的化合物，其直接或間接地降低、抑制、中和、或消除CD14生物活性。一CD14抑制性化合物應具有以下任何一或多種特徵：(a)與CD14結合及抑制其生物活性及/或CD14訊息傳遞功能介導的下游路徑；(b)預防、改善、或治療癌症的任一方面；(c)減少癌幹細胞的幹性；(d)減少腫瘤形成或腫瘤生長；(e)阻斷或減少CD14受體活化；(f)增加CD14的清除率；(g)抑制(減少)CD14合成、產生或釋放。本領域熟習技藝人士能製備其他小分子抑制性化合物。

在一些實施例中，一CD14抑制性化合物可以是一CD14突變體、一類鐸受體TLR4突變體、一骨髓分化蛋白-2(MD-2)突變體、一脂多醣結合蛋白(LBP)突變體、或一脂多醣(LPS)突變體，其可結合CD14但不能引發訊息傳遞。此種突變體可以阻斷野生型LPS與CD14的結合，因而阻止CD14訊息傳遞。

在其他實施例中，本文所述的CD14抑制性化合物是小分子，其分子量可以約為100至20,000Da、500至15,000Da、或1000至10,000Da之間任一者。小分子分子庫為商業上可取得。小分子之施予可使用本技術領域已知的任何方法，包括吸入、腹腔內、靜脈內、肌肉內、皮下、脊髓腔內、心室內、口服、腸道內、腸道外、鼻內或經皮膚。一般而言，當本發明的CD14拮抗分子是小分子時，其將以0.1至300mg/kg病患體重的比率及分成一至三劑或更多劑施用。對於正常體重的成年病患，可施予每劑1mg至5g的劑量。

上述小分子可從化合物庫中獲得。該化合物庫可以是空間可定位平行固相或溶液相庫。參見例如Zuckermann et al.,J.Med.Chem.37,2678-2685,1994；及Lam,Anticancer Drug Des.12：145,1997。化合物庫的合成方法是本技術領域熟知的，例如DeWitt et al.,PNAS USA 90：6909,1993；Erb et al.,PNAS USA 91：11422,1994；Zuckermann et al.,J.Med.Chem.37：2678,1994；Cho et al.,Science 261：1303,1993；Carrell et al.,Angew Chem.Int.Ed.Engl.33：2059,1994；Carell et al.,Angew Chem.Int.Ed.Engl.33：2061,1994；及Gallop et al.,J.Med.Chem.37：1233,1994。化合物庫可以呈現於溶液中(例如Houghten Biotechniques 13：412-421,1992)，或呈現於珠子(Lam,Nature 354：82-84,1991)、晶片(Fodor,Nature 364：555-556,1993)、細菌(美國專利5,223,409號)、孢子(美國專利5,223,409號)、質體(Cull et al.,PNAS USA 89：1865-1869,1992)、或嗜菌體(Scott and Smith, Science 249：386-390,1990；Devlin,Science 249：404-406,1990；Cwirla et al.,PNAS USA 87：6378-6382,1990；Felici,J.Mol.Biol.222：301-310,1991；及美國專利5,223,409號)之上。

在一些實施例中，小分子抑制劑可以是一醣脂(glycolipid)或一芐基銨脂質(benzylammonium lipid)。市售小分子抑制劑的實例包括但不限於IAXO-101、IAXO-102、及IAXO-3。

在其他實施例中，該CD14拮抗分子可以是一包含CD14結合蛋白的一部分的多肽，其中該多肽專一地結合CD14並阻斷其與一或多種CD14結合蛋白的交互作用。該CD14結合蛋白的實例是LPS、LBP、及TRL4。或者，該CD14拮抗分子可以一是減少CD14表現的藥劑，例如嗎啉基寡核苷酸(morpholino oligonucleotides)、小干擾RNA(siRNA或RNAi)、反義核酸、或核醣核酸酵素(ribozymes)。RNA干擾(RNAi)是雙股RNA(dsRNA)引導訊息RNA的同源序列專一性降解的過程。在哺乳動物細胞中，RNAi可由小干擾RNA(siRNA)的21個核苷酸之雙鏈觸發，卻不活化宿主的干擾素反應。本文揭露方法使用的dsRNA可以是一小干擾RNA(含有兩個獨立且互補的RNA鏈)或一短髮夾RNA(即一形成緊密髮夾結構的RNA鏈)，兩者皆可基於目標基因的序列而設計。

可選擇地，如上述之本文所述方法使用的核酸分子(例如，一反義核酸、一小干擾RNA、或一微小RNA)包含非天然存在的核酸鹼基、糖、或共價核苷間鍵結(骨架)。此種經修飾的寡核苷酸賦予所需的性質，例如增強細胞攝取、改善對標靶核酸的親和力、及增加體內穩定性。

在一實施例中，核酸具有一經修飾的骨架，包括保留磷原子的骨架(參見例如美國專利3,687,808號；4,469,863號；5,321,131號；5,399,676號；及5,625,050)以及不含磷原子的骨架(參見例如美國專利5,034,506號；5,166,315號；及5,792,608號)。包含磷的修飾骨架的實例包括但不限於硫代磷酸酯(phosphorothioates)、手性硫代磷酸酯(chiral phosphorothioates)、二硫代磷酸酯(phosphorodithioates)、磷酸三酯(phosphotriesters)、氨基烷基磷酸酯(aminoalkyl-phosphotriesters)、甲基及其他烷基磷酸酯，包括3'-亞烷基磷酸酯(3'-alkylene phosphonates)、5'-亞烷基磷酸酯(5'-alkylene phosphonates)及手性磷酸酯(chiral phosphonates)，次磷酸酯(phosphinates)、氨基磷酸酯(phosphoramidates)，包括3'-氨基氨基磷酸酯(3'-amino phosphoramidate)及氨基烷基氨基磷酸酯 (aminoalkylphosphoramidates)，硫羰基磷醯胺酯(thionophosphoramidates)、硫羰基烷基磷酸酯(thionoalkylphosphotriesters)、硫羰基烷基磷酸三酯(thionoalkylphosphotriesters)、硒磷酸酯(selenophosphates)及具有3'-5'鍵或2'-5'鍵之硼烷磷酸酯(boranophosphates)。此種骨架尚包括具有反轉極性的骨架，即3'至3'，5'至5'或2'至2'鍵結。不含磷原子的改性骨架由短鏈烷基或環烷基核苷間鍵結、混合雜原子及烷基或環烷基核苷間鍵結、或一或多個短鏈雜原子或雜環核苷間鍵結形成。此種骨架包括具有嗎啉基鍵結的骨架(部分由一核苷的糖部分形成)；矽氧烷(siloxane)骨架；硫化物(sulfide)、亞碸(sulfoxide)、及碸(sulfone)骨架；甲醯基(formacetyl)及硫代甲醯基(thioformacetyl)骨架；亞甲基甲醯基(methylene formacetyl)及硫代甲醯基(thioformacetyl)骨架；核糖乙醯(riboacetyl)骨架；含烯烴(alkene)的骨架；氨基磺酸(sulfamate)骨架；亞甲基亞氨基(methyleneimino)和亞甲基肼基(methylenehydrazino)骨架；磺酸酯(sulfonate)及磺醯胺(sulfonamide)骨架；醯胺(amide)骨架；及其他具有混合的N、O、S及CH₂組分的其他骨架。

在另一實施例中，已揭露方法使用的核酸包括一或多個取代的糖部分。此種經取代的糖部分可以在其2'位置包括下列基團之一：OH；F；O-烷基、S-烷基、N-烷基、O-烯基、S-烯基、N-烯基；O-炔基、S-炔基、N-炔基、及O-烷基-O-烷基。在這些基團中，烷基、烯基及炔基可以是經取代的或未取代的C₁至C₁₀烷基或C₂至C₁₀烯基及炔基。它們亦可在2'位置包括雜環烷基、雜環烷芳基、氨基烷基氨基(aminoalkylamino)、聚烷基氨基(polyalkylamino)、經取代的甲矽烷基(silyl)、一RNA切除基團、一報導基團、一嵌入劑、一用於改善寡核苷酸的藥代動力學性質的基團、或一用於改善寡核苷酸的藥效動力學性質的基團。較佳的經取代糖部分包括具有2'-甲氧基乙氧基、2'-二甲基氨基氧基乙氧基、及2'-二甲基氨基乙氧基乙氧基者。參見Martin et al.,Helv.Chim.Acta,1995,78,486-504。

在又一實施例中，核酸包括一或多個經修飾的天然核酸鹼基(即腺嘌呤、鳥嘌呤、胸腺嘧啶、胞嘧啶及尿嘧啶)。經修飾的核酸鹼基包括該些記載於美國專利3,687,808號、The Concise Encyclopedia Of Polymer Science And Engineering,pages 858-859,Kroschwitz,J.I.ed.John Wiley & Sons,1990、Englisch et al.,Angewandte Chemie,International Edition,1991,30,613、及Sanghvi,Y.S.,Chapter 15,Antisense Research and Applications,pages 289-302,CRC Press,1993。該些核酸鹼基中的某些對於增加反義寡核苷酸與其標靶核酸的結合親和力特別 有用。其包括5-取代的嘧啶、6-氮雜嘧啶、及N-2、N-6與O-6取代的嘌呤(例如，2-氨基丙基-腺嘌呤、5-丙炔基尿嘧啶及5-丙炔基胞嘧啶)。參見Sanghvi et al.,eds.,Antisense Research and Applications,CRC Press,Boca Raton,1993,pp.276-278。

任何核酸可藉由本技術領域已知的方法合成。參見例如Caruthers et al.,1992,Methods in Enzymology 211,3-19、Wincott et al.,1995,Nucleic Acids Res.23,2677-2684、Wincott et al.,1997,Methods Mol.Bio.74,59、Brennan et al.,1998,Biotechnol Bioeng.,61,33-45、及Brennan，美國專利6,001,311號。該核酸亦可轉錄自一表現載體並使用標準技術分離。

CD14拮抗分子可使用本技術領域已知的方法辨識或表徵，藉由該些方法可偵測及/或測量CD14生物活性的減少、改善、或中和。例如，一種ELISA型試驗可能適用於CD14與脂多醣結合蛋白(LBP)及脂多醣(LPS)結合的定性或定量測量。

CD14拮抗分子之辨識尚可藉由將一候選試劑與CD14置於一處並監測以下任一或多種特徵：(a)與CD14結合及抑制其生物活性及/或CD14訊息傳遞介導的下游路徑；(b)預防、改善、或治療癌症的任一方面；(c)阻斷或減少CD14受體活化；(d)增加CD14的清除率；(e)抑制(減少)CD14的合成、產生或釋放。在一些實施例中，CD14拮抗分子之辨識是藉由將一候選試劑與CD14置於一處，並監測其結合以及伴隨的CD14生物活性減少或中和。結合試驗之進行可使用純化的CD14多肽，或者使用天然表現或經轉染以表現CD14多肽的細胞。在一實施例中，結合試驗是一競爭性結合試驗，其評估一候選抗體與一已知CD14拮抗分子競爭與CD14結合的能力。試驗之進行可透過各種形式，包括ELISA形式。在其他實施例中，CD14拮抗分子之辨識是藉由將一候選試劑與CD14置於一處，並監測伴隨的CD14/LPS複合物形成之抑制或CD14/LPS/LBP複合物形成之抑制。初步辨識之後，候選CD14拮抗分子的活性可以藉由已知用於測試目標生物活性之生物試驗進一步確認及修正。或者，生物試驗可用於直接篩選候選拮抗分子。

以下實施例提供了許多可用於篩選候選CD14拮抗分子的試驗。生物試驗包括但不限於在CD14拮抗分子存在時，測定受體結合酪胺酸激酶(TK)活性或測定核因子-κB(nuclear factor kappa B，NF-κB)的易位。此外，即時PCR (RT-PCR)可用於直接測量CD14表現或測量CD14上調的基因表現，例如CD44及PDL1。

此外，適合的CD14拮抗分子可以使用本技術領域已知及/或本文所述的任何試驗方法從組合化合物庫中篩選出。

醫藥組合物

上述一或多種CD14拮抗分子可以與一藥學上可接受的載體(賦形劑)，包括緩衝液，加以混合以形成一用於減輕癌症的藥物組合物。「可接受的」是指該載體必須與組合物的活性成分相容(並且較佳地能夠穩定該活性成分)，並且對有待治療的個體無害。藥學上可接受的賦形劑(載體)，包括緩衝液，是本技術領域熟知的。參見例如Remington：The Science and Practice of Pharmacy 20^th Ed.(2000)Lippincott Williams and Wilkins,Ed.K.E.Hoover。在一實施例中，本文所述的藥物組合物含有一種以上的抗CD14抗體，其識別標靶抗原的不同抗原決定位。在另一實施例中，該藥物組合物包含至少兩種不同類型的CD14拮抗分子(例如，一抗體及一小分子)。

用於本發明方法的藥物組合物可包含凍乾製劑或水溶液形式的藥學上可接受的載體、賦形劑、或穩定劑。(Remington：The Science and Practice of Pharmacy 20^th Ed.(2000)Lippincott Williams and Wilkins，Ed.K.E.Hoover)。可接受的載體、賦形劑、或穩定劑在所用劑量及濃度下對接受者無毒，並且可包含緩衝液，例如磷酸鹽、檸檬酸鹽及其他有機酸；抗氧化劑，包括抗壞血酸及甲硫胺酸(methionine)；防腐劑(例如十八烷基二甲基芐基氯化銨(octadecyldimethylbenzyl ammonium chloride)；六甲基氯化銨(hexamethonium chloride)；苯扎氯銨(benzalkonium chloride)；芐索氯銨(benzethonium chloride)；苯酚、丁基或芐基(benzyl)醇；對羥基苯甲酸烷基酯(alkyl parabens)，如對羥基苯甲酸甲酯或對羥基苯甲酸丙酯；兒茶酚(catechol)；間苯二酚；環己醇；3-戊醇；及間甲酚)；低分子量(少於約10個殘基)的多肽；蛋白質，如血清白蛋白、明膠、或免疫球蛋白；親水性聚合物，如聚乙烯吡咯烷酮(polyvinylpyrrolidone)；胺基酸，如甘胺酸(glycine)、麩醯胺酸(glutamine)、天冬醯胺(asparagine)、組胺酸(histidine)、精胺酸(arginine)或離胺酸；單糖、雙糖、及其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖(mannose)或葡聚醣(dextran)；螯合劑，如乙二胺四乙酸(EDTA)；醣類，如蔗糖、甘露醇(mannitol)、海藻糖(trehalose)、或山梨糖醇(sorbitol)；成 鹽相對離子，如鈉；金屬複合物(例如鋅-蛋白質複合物)；及/或非離子性界面活性劑，例如TWEEN^TM(聚山梨醇酯)、PLURONICS^TM(泊洛沙姆(poloxamer))、或聚乙二醇(PEG)。本文進一步描述藥學上可接受的賦形劑。

在一些實施例中，本文所述的藥物組合物包含含有CD14拮抗分子(例如抗體)的脂質體(liposome)，其可藉由本技術領域已知的方法製備，例如描述於Epstein,et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 82：3688(1985)；Hwang,et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77：4030(1980)；及美國專利4,485,045號與4,544,545號。具有增長循環時間的脂質體是揭露於美國專利5,013,556號。特別有用的脂質體可以藉由逆相揮發法(reverse evaporation)用包含磷脂醯膽鹼(phosphatidylcholine)、膽固醇、及PEG衍生的磷脂醯乙醇胺(PEG-derivatized phosphatidylethanolamine，PEG-PE)的脂質組合物產生。將脂質體擠過具有確定孔徑的過濾器以產生具有所需直徑的脂質體。

活性成分(例如CD14拮抗分子)也可以包埋在藉由例如凝聚(coacervation)技術或藉由界面聚合製備的微膠囊中，例如羥甲基纖維素或明膠-微膠囊及聚(甲基丙烯酸甲酯)(poly(methylmethacylate))微膠囊，在膠體藥物遞送系統(例如脂質體、白蛋白微球、微乳液、納米粒子及納米膠囊)中或在巨乳液中。該些技術是本技術領域已知的，參見例如Remington，The Science and Practice of Pharmacy 20^th Ed.Mack Publishing(2000)。

在其他實施例中，本文所述的藥物組合物可以配製為持續釋放(sustained-release)形式。適合的持續釋放製劑的實例包括含有抗體的固體疏水聚合物的半透性基質，該基質是成型製品的形式，例如薄膜或微膠囊。持續釋放基質的實例包括聚酯、水膠(例如聚(2-羥乙基-甲基丙烯酸酯)或聚(乙烯醇))、聚乳酸(美國專利3,773,919號)、L-麩胺酸與7-乙基-L-麩胺酸的共聚物、不可降解的乙烯-乙酸乙烯酯、例如LUPRON DEPOT^TM(由乳酸-乙醇酸共聚物及醋酸亮丙瑞林(leuprolide acetate)組成的可注射微球)之可降解的乳酸-乙醇酸共聚物、乙酸異丁酸蔗糖酯、及聚D-(-)-3-羥基丁酸。

用於體內施用的藥物組合物必須是無菌的。此係藉由例如通過無菌過濾膜而過濾可輕易實現。治療性抗體組合物通常置於具有一無菌進入口的容器中，例如，一靜脈注射溶液袋或一具有皮下注射針頭可刺穿的塞子的小瓶。

本文所述的藥物組合物可以是單位劑型，例如片劑、丸劑、膠囊、粉劑、顆粒、溶液、或懸浮液、或栓劑，用於口服、腸道外或直腸施用，或藉由吸入或吹入施用。

為製備固體組合物，如片劑，可將主要活性成分與藥物載體混合以形成含有本發明化合物或其無毒的藥學上可接受的鹽的均質混合物的固體預製劑(preformulation)組合物。藥物載體例如常規的壓片成分，如玉米澱粉、乳糖、蔗糖、山梨糖醇、滑石粉、硬脂酸、硬脂酸鎂、磷酸二鈣或樹膠，以及其他藥物稀釋劑，例如水。當這些預製劑組合物被稱為均質時，意指活性成分均勻地分散於該組合物中，使得組合物可以順利地被分成等效的單位劑型，例如片劑、丸劑及膠囊。該固體預製劑組合物再被分成上述類型的單位劑型，其含有0.1至約500mg之本發明活性成分。新穎組合物的片劑或丸劑可被塗覆或以其他方式複合，以提供具有延長作用優點的劑型。例如，該片劑或丸劑可包含一內部劑量及一外部劑量組分，後者在前者上形成包膜。該二組分可以一腸溶層間隔，該腸溶層用於抵抗在胃中被分解並允許該內部組分完整進入十二指腸或延遲釋放。多種材料可用於此類腸溶層或塗層，這些材料包括許多聚合酸及聚合酸與諸如蟲膠(shellac)、鯨蠟醇(cetyl alcohol)和醋酸纖維素等材料的混合物。

適合的界面活性劑特別包括非離子試劑，例如聚氧乙烯山梨糖醇(例如Tween^TM 20、40、60、80或85)及其他脫水山梨糖醇(例如Span^TM 20、40、60、80或85)。具有界面活性劑的組合物將便利地包含0.05至5%的界面活性劑，且可以介於0.1至2.5%。應當理解，若有需要可以加入其他成分，例如甘露醇或其他藥學上可接受的載體。

適合的乳液可使用市售的脂肪乳液製備，例如Intralipid^TM、Liposyn^TM、Infonutrol^TM、Lipofundin^TM及Lipiphysan^TM。活性成分可以溶解於預混合的乳液組合物，或者可以溶解於油脂(例如大豆油、紅花油、棉籽油、芝麻油、玉米油或杏仁油)並且在與磷脂(例如卵磷脂、大豆磷脂、或大豆卵磷脂)及水混合時形成乳液。應當理解，可以加入其他成分，例如甘油或葡萄糖，以調節乳液的張力。適合的乳液通常含有高達20%的油脂，例如介於5-20%。脂肪乳液可包含0.1至1.0.im，特別是0.1至0.5.im的脂肪滴，並具有5.5至8.0的pH範圍。

該乳液組合物可藉由將CD14拮抗分子與Intralipid^TM(一種脂質乳液)或其組分(大豆油、卵磷脂、甘油及水)混合而製備。

用於吸入或吹入的藥物組合物包括在藥學上可接受的水性或有機溶劑或其混合物中的溶液及懸浮液，以及粉末。液體或固體組合物可含有如上所述的適合的藥學上可接受的賦形劑。在一些實施例中，該組合物是經由口服或鼻呼吸途徑施用以產生局部或全身效用。

在較佳地無菌的藥學上可接受的溶劑中的組合物可藉由使用氣體進行霧化。霧化溶液可以直接從霧化裝置呼吸，或者霧化裝置可連接至一面罩、布幕或間歇正壓呼吸儀。溶液、懸浮液或粉末組合物可從以適當方式遞送製劑的裝置而施用，較佳為藉由口服或經鼻腔。

CD14拮抗分子用於治療癌症

為了實施本文揭露的方法，可以經由適合途徑(例如靜脈內施用)將有效量的上述藥物組合物施用於需要治療的個體(例如人)。

以本文所述方法接受治療的個體可以是一患有癌症、疑似患有癌症、或有罹癌風險的人類病患。癌症的實例包括但不限於肺癌、非小細胞肺癌(NSCLC)、乳癌、結腸直腸癌、胰臟癌、肝癌、前列腺癌、皮膚癌、淋巴瘤、或白血病。以本文所述方法接受治療的個體可以是哺乳動物，較佳為人類。哺乳動物包括但不限於農場動物、運動競賽動物、寵物、靈長類、馬、狗、貓、小鼠及大鼠。一需要治療的人類個體可以是患有癌症(例如肺癌)、有罹癌風險、或疑似患有癌症的人類病患。一患有癌症的個體可以透過常規醫學檢查加以辨識，例如實驗室測試、活體組織切片、PET掃描、CT掃描、或超音波。一疑似患有癌症的個體可能表現出一或多種疾病症狀，例如，不明原因的體重減輕、發燒、疲倦、咳嗽、疼痛、皮膚變化、異常出血或排便、及/或身體部位的增厚或腫塊。一有罹癌風險的個體可以是具有該疾病的一或多種風險因子的個體。例如，與癌症相關風險因子包括(a)病毒感染(例如皰疹病毒感染)，(b)年齡，(c)家族史，(d)重度飲酒，(e)肥胖，以及(f)使用煙草。

本文所述的「一有效量」是指各活性藥劑在單獨或與一或多種其他活性藥劑組合時賦予個體治療效果所需的量。如本領域熟習技藝人士所理解，根據所治療的具體病症、該病症的嚴重程度、病患個人的參數(包括年齡、身體狀況、大小、性別及體重)、治療持續時間、同時期療法的性質(若有的話)、特定的施用途徑、以及健康從業者的知識和專業範圍內的相似因素，有效量是可變動的。這些因素是本技術領域中具有通常知識者所熟知的，並且可以僅藉 由常規實驗決定。通常較佳為使用各組分或其組合的最大劑量，即依據合理醫學判斷的最高安全劑量。然而，本技術領域中具有通常知識者將理解，出於醫學因素、心理因素或實際上任何其他原因，病患可能堅持一較低劑量或可耐受劑量。

經驗考量，例如半衰期，通常將有助於決定劑量。例如，與人免疫系統相容的抗體，例如人源化抗體或完全人類抗體，可用於延長抗體的半衰期並防止宿主的免疫系統攻擊該抗體。施用頻率可以在治療過程中決定及調整，並且通常但不是必須基於治療及/或抑制及/或改善及/或延遲癌症。或者，CD14拮抗分子的持續連續釋放製劑可能是適合的。用於實現持續釋放的各種製劑及裝置是本技術領域已知的。

在一實施例中，本文所述的CD14拮抗分子的劑量可以在已被施予一或多次CD14拮抗分子的個體中憑經驗決定。個體被施予遞增劑量的拮抗分子。為評估該拮抗分子的功效，可以追蹤一癌症指標(例如腫瘤形成或腫瘤生長)。

通常，在施用本文所述的任何抗體時，初始候選劑量可為約2mg/kg。出於本發明之目的，典型的每日劑量範圍可為約0.1μg/kg至3μg/kg至30μg/kg至300μg/kg至3mg/kg至30mg/kg至100mg/kg或更高之任一種，此係取決於上述因素。在經歷數天或更長時間而重複施用時，取決於病症，治療會持續至出現所需的症狀抑制或直至達到減輕癌症或其症狀的足夠治療程度。例示性給藥方案包括施用約2mg/kg之初始劑量，然後每週施用約1mg/kg抗體之固定劑量，或者每隔一週施用約1mg/kg的固定劑量。然而，取決於從業者所欲實現的藥物動力學衰變模式，其他給藥方案可能是有用的。例如，考慮每週施用一至四次。在一些實施例中，可以使用之劑量範圍為約3μg/mg至約2mg/kg(例如約3μg/mg、約10μg/mg、約30μg/mg、約100μg/mg、約300μg/mg、約1mg/kg及約2mg/kg。在一些實施例中，給藥頻率是每週一次、每2週一次、每4週一次、每5週一次、每6週一次、每7週一次、每8週一次、每9週一次、或每10週一次；或每月一次、每2個月一次、或每3個月或更長時間一次。該療法的進展可藉由常規技術及試驗輕易監測。給藥方案(包括使用的抗體)可隨時間變化。

當CD14拮抗分子不是抗體時，以0.1至300mg/kg病患體重的比率分成一至三劑或依本文所揭露施用。在一些實施例中，對於一正常體重的成年病患，可施用之劑量範圍為約0.3至5.00mg/kg。特定給藥方案，即劑量、時間及 重複次數，將取決於特定個體與該個體的病史，以及各種藥劑的性質(例如藥劑的半衰期，以及本技術領域中眾所周知的其他因素)。

出於本發明之目的，CD14拮抗分子的適當劑量將取決於所用的特定CD14拮抗分子(或其組合物)、癌症的類型與嚴重程度、為預防或治療目的施用該拮抗分子、過往治療、病患的臨床病史與對拮抗分子的反應、以及主治醫師的決斷。通常，臨床醫生將施用CD14拮抗分子，例如抗CD14抗體，直至達到所欲結果的劑量。CD14拮抗分子的施用可以是連續的或間歇的，取決於例如接受者的生理狀況、施用目的是治療性的或預防性的、以及熟習技藝之從業者已知的其他因素。CD14拮抗分子(例如若CD14拮抗分子是抗CD14抗體)可在一段預選時間內實質上連續施用，或者可以一系列間隔的劑量施用，例如，在癌症發展前、期間、或之後施用。

本文所用之術語「治療」是指將包含一或多種活性藥劑的組合物使用於或施用於患有癌症、有癌症症狀、或有癌症傾向的個體，其目的是治愈、治療、減輕、緩解、改變、補救、改善、改進或影響疾病、疾病的症狀、或癌症的傾向。

減輕癌症包括延遲疾病的發展或進展，或降低疾病嚴重程度。減輕疾病不一定需要治癒效果。其中，所謂「延遲」疾病(例如肺癌)的發展意指推遲、阻礙、減慢、延緩、穩定及/或延後疾病的進展。取決於疾病史及/或被治療的個體，此種延遲可以有不同的時間長度。一種「延遲」或減輕疾病發展或延遲疾病起始的方法是相比不使用該方法相時，在固定時間區段內降低該疾病之一或多種症狀發生可能性及/或在固定時間區段減少該症狀程度的方法。此種比較通常是基於臨床研究，其使用足以給出統計學顯著結果的許多個體。

疾病的「發展(development)」或「進展(progression)」意指疾病的初次表現及/或隨後的進展。疾病的發展可以使用本技術領域熟知的標準臨床技術予以檢測及評估。然而，發展亦指可能無法檢測的進展。出於本揭露之目的，發展或進展是指症狀的生物學上過程。「發展」包括發生、復發及、起始。本文所述癌症的「起始」或「發生」包括初次開始及/或複發。

在一些實施例中，本文所述的CD14拮抗分子(例如抗CD14抗體)施用於一需要治療個體的用量足以降低CD14介導的訊息傳遞程度達至少20%(例如30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或更高)。在其他實施例中， 該拮抗分子以有效減少癌幹細胞幹性的量施用。或者，該拮抗分子以有效減少腫瘤形成或腫瘤生長的量施用。

在一些實施例中，該CD14拮抗分子施用於一需要治療個體的用量足以降低癌幹細胞的幹性達至少20%(例如30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或更高)。癌細胞的幹性是指癌幹細胞自我更新及分化為不同腫瘤細胞類型的能力。癌細胞幹性的等級可藉由常規試驗或本文描述的試驗來確定(參見以下實施例)。

可使用醫學領域中具有通常知識者已知的常規方法將藥物組合物給予個體，其取決於待治療疾病的類型或疾病的部位。該組合物亦可經由其他常規途徑施用，例如經由口服、腸道外、吸入噴霧、局部、直腸、鼻腔、口腔、陰道或透過植入的儲存庫施用。本文所用之術語「腸道外」包括皮下、皮內、靜脈內、肌肉內、關節內、動脈內、滑膜內、胸骨內、脊髓腔內、病灶內、及顱內註射或灌注技術。另外，組合物可以經由可注射儲存庫的施用途徑給予個體，例如使用可儲存1、3或6個月的可注射或生物可降解的材料和方法。

可注射組合物可含有多種載體，例如植物油、二甲基乙醯胺、二甲基甲醯胺、乳酸乙酯、碳酸乙酯、肉荳蔻酸異丙酯、乙醇和多元醇(甘油、丙二醇、液態聚乙二醇等)。就靜脈內註射而言，水溶性抗體可藉由滴注法施用，此法是灌注含有抗體及生理上可接受的賦形劑的藥物製劑。生理上可接受的賦形劑可包括例如5%葡萄糖、0.9%生理食鹽水、林格氏溶液或其他適合的賦形劑。肌肉內製劑，例如抗體的適當可溶性鹽形式的無菌製劑，可溶解於藥物賦形劑並由此施用，藥物賦形劑例如注射用水、0.9%生理食鹽水、或5%葡萄糖溶液。

在一實施例中，一CD14拮抗分子經由特定位置或標靶性局部遞送技術施用。特定位置或標靶性局部遞送技術的實例包括CD14拮抗分子的多種可植入儲庫來源或局部遞送導管，例如輸注導管、留置導管、或針導管、合成移植物、外膜包裹物、通道與支架或其他可植入設備、特定位置載體、直接注入、或直接應用。參見例如PCT公開案WO 00/53211號及美國專利5,981,568號。

尚可使用含有反義多核苷酸、表現載體或次基因體多核苷酸的治療組合物的標靶遞送。受體介導的DNA遞送技術描述於Findeis et al.,Trends Biotechnol.(1993)11：202；Chiou et al.,Gene Therapeutics：Methods And Applications Of Direct Gene Transfer(J.A.Wolff,ed.)(1994)；Wu et al.,J.Biol. Chem.(1988)263：621；Wu et al.,J.Biol.Chem.(1994)269：542；Zenke et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1990)87：3655；Wu et al.,J.Biol.Chem.(1991)266：338。在一基因治療方案中的局部施用，是將含有多核苷酸的治療組合物以約100ng至約200mg範圍的DNA施用。在一些實施例中，基因治療方案也可以使用濃度範圍為約500ng至約50mg、約1μg至約2mg、約5μg至約500μg、及約20μg至約100μg或更多的DNA。

本文所述的治療性多核苷酸及多肽可使用基因遞送載體遞送。基因遞送載體可以是病毒或非病毒來源(通常參見Jolly,Cancer Gene Therapy(1994)1：51；Kimura,Human Gene Therapy(1994)5：845；Connelly,Human Gene Therapy(1995)1：185；及Kaplitt,Nature Genetics(1994)6：148)。此類編碼序列之表現可以使用內源性哺乳動物或異源性啟動子及/或增強子加以誘導。該編碼序列之表現可以是持續的或受調節的。

用於遞送所需多核苷酸並在所需細胞中表現的病毒型載體是本技術領域熟知的。例示性的病毒型載體包括但不限於重組反轉錄病毒(參見例如PCT公開案WO 90/07936號；WO 94/03622號；WO 93/25698號；WO 93/25234號；WO 93/11230號；WO 93/10218號；WO 91/02805號；美國專利5,219,740號及4,777,127號；英國專利2,200,651號；及歐洲專利0 345 242號)、α病毒型載體(例如辛德畢斯病毒(Sindbis virus)載體、塞姆利基森林病毒(Semliki forest virus)(ATCC VR-67；ATCC VR-1247)、羅斯河病毒(Ross River virus)(ATCC VR-373；ATCC VR-1246)及委內瑞拉馬腦炎病毒(Venezuelan equine encephalitis virus)(ATCC VR-923；ATCC VR-1250；ATCC VR 1249；ATCC VR-532))、及腺相關病毒(adeno-associated virus，AAV)vectors載體(參見例如PCT公開案WO 94/12649號；WO 93/03769號；WO 93/19191號；WO 94/28938號；WO 95/11984號及WO 95/00655號)。亦可使用連接滅活腺病毒的DNA，其描述於Curiel,Hum.Gene Ther.(1992)3：147。

尚可使用非病毒遞送載體及方法，包括但不限於與單獨的滅活腺病毒連接或不連接的聚陽離子濃縮DNA(參見例如Curiel,Hum.Gene Ther.(1992)3：147)；連接配體的DNA(參見例如Wu,J.Biol.Chem.(1989)264：16985)；真核細胞遞送載體細胞(參見例如美國專利5,814,482號；PCT公開案WO 95/07994號；WO 96/17072號；WO 95/30763號；及WO 97/42338號)及核酸電荷中和或與細胞 融合膜。亦可使用裸DNA。例示性裸DNA導入方法描述於PCT公開案WO 90/11092號及美國專利5,580,859號。可用作基因遞送載體的脂質體描述於美國專利5,422,120號；PCT公開案WO 95/13796號；WO 94/23697號；WO 91/14445號；及歐洲專利0524968號。其他方法描述於Philip,Mol.Cell.Biol.(1994)14：2411,and in Woffendin,Proc.Natl.Acad.Sci.(1994)91：1581。

表現載體可用於直接表現本文所述的任何基於蛋白質的CD14拮抗分子(例如抗CD14抗體)亦是顯而易見的。例如，能夠阻斷(部分至完全阻斷)CD14及/或CD14生物活性的其他CD14胜肽抑制劑是本技術領域已知的。

本文所述方法使用的特定給藥方案，即劑量、時間、及重複次數，將取決於特定個體與該個體的病史。

在一些實施例中，可將一種以上CD14拮抗分子(例如一抗體與一小分子CD14抑制性化合物)給予一需要治療的個體。該拮抗分子可以是相同類型或彼此不同。至少一種、至少二種、至少三種、至少四種、至少五種不同的CD14拮抗分子可以共同施用。通常，彼此不會產生不利影響的該些CD14拮抗分子具有互補活性。CD14拮抗分子亦可與用於增強及/或補充藥劑有效性的其他藥劑聯合使用。

治療功效可以藉由本技術領域熟知的方法評估，例如監測接受治療病患的腫瘤生長或形成。參見例如以下實施例1。

組合療法

本文亦提供使用本文所述的任何CD14拮抗分子及另一抗癌治療劑(例如本文所述者)的組合療法。本文所用之術語「組合療法」包括以順序方式施用這些藥劑(例如一CD14拮抗分子及一抗癌治療劑)，即其中各種治療劑在不同時間施用，以及以實質上同時的方式施用這些治療劑或至少二種該些藥劑。

各種藥劑的順序施用或實質上同時施用可受任何適當途徑的影響，包括但不限於口服途徑、靜脈內途徑、肌肉內、皮下途徑、及透過黏膜組織的直接吸收。該些藥劑之施用可以藉由相同途徑或不同途徑。例如，第一藥劑(例如CD14拮抗分子)可以口服施用，並且第二藥劑(例如抗癌劑)可以靜脈內施用。

除非另外指明，本文所用之術語「順序」是指依規則的順序或次序，例如，若劑量方案包括施用一CD14拮抗分子及一抗癌劑，則順序的給藥方 案可包括在施用抗癌劑之前、同時、實質上同時、或之後施用CD14拮抗分子，但該二藥劑將以規則的順序或次序施用。除非另外指明，術語「分開」是指使一物與另一物分離。除非另外指明，術語「同時」是指同時發生或完成，即同時施用本發明的藥劑。術語「實質上同時」是指藥劑在彼此施用的幾分鐘內施用(例如彼此在10分鐘內)，並且意圖包括聯合施用以及連續施用，但如果施用是連續的，則其在時間上僅分開一短時期(例如，醫療從業者分開施用二種藥劑所花費的時間)。本文中，同時施用及實質上同時施用可互換使用。順序施用是指在時間上分開施用本文所述的藥劑。

組合療法亦可包括將本文所述藥劑(例如，一CD14拮抗分子及一抗癌劑)之施用進一步與其他生物活性成分(例如一不同的抗癌劑)及非藥物療法(例如手術)結合。

應當理解，一CD14拮抗分子與另一抗癌劑(例如一化學治療劑)的任意組合可依任何順序用於治療癌症。本文所述之組合可基於許多因素進行選擇，所述因素包括但不限於抑制CD14、減少腫瘤形成或腫瘤生長、降低癌幹細胞幹性、及/或減輕至少一種癌症相關症狀的效力，或者減輕該組合中另一種藥劑的副作用的效力。例如，本文描述的組合療法可減少該組合中各成員的任何相關副作用，例如，與抗癌劑相關的副作用。

在一些實施例中，另一抗癌治療劑是一化學療法、一放射療法、一手術療法及/或一免疫療法。化學治療劑的實例包括但不限於卡鉑(Carboplatin)或順鉑(Cisplatin)、歐洲紫杉醇(Docetaxel)、吉西他濱(Gemcitabine)、白蛋白結合紫杉醇(Nab-Paclitaxel)、紫杉醇(Paclitaxel)、培美曲塞(Pemetrexed)及長春瑞濱(Vinorelbine)。放射療法的實例包括但不限於電離輻射、γ射線、中子束放射療法、電子束放射療法、質子療法、近接治療(brachytherapy)、全身放射性同位素及放射增敏劑。手術療法的實例包括但不限於治愈性手術(例如腫瘤切除手術)、預防性手術、腹腔鏡手術及雷射手術。免疫療法的實例包括但不限於一PD-1抑制劑或一PD-L1抑制劑、過繼性免疫細胞輸入、及治療性癌症疫苗。化學療法的其他實例包括但不限於鉑化劑，例如卡鉑、奧沙利鉑(Oxaliplatin)、順鉑、奈達鉑(Nedaplatin)、賽特鉑(Satraplatin)、樂鉑(Lobaplatin)、三鉑四硝酸酯(Triplatin tetranitrate)、吡鉑(Picoplatin)、Prolindac、阿柔鉑(Aroplatin)及其他衍生物；拓撲異構酶I抑制劑，如喜樹鹼(Camptothecin)、拓撲替康(Topotecan)、伊立替康 (irinotecan)/SN38、魯比替康(rubitecan)、貝洛替康(Belotecan)及其他衍生物；拓撲異構酶II抑制劑，例如依托泊苷(VP-16)、道諾黴素、阿黴素藥物(例如阿黴素、阿黴素HCl、阿黴素類似物、或脂質體中的阿黴素及其鹽或類似物)、米托蒽醌、阿克拉黴素(Aclarubicin)、表阿黴素(Epirubicin)、伊達比星(Idarubicin)、氨柔比星(Amrubicin)、胺苯吖啶(Amsacrine)、吡柔比星(Pirarubicin)、戊柔比星(Valrubicin)、佐柔比星(Zorubicin)、替尼泊苷(Teniposide)及其他衍生物；抗代謝劑，例如葉酸類(甲氨蝶呤(Methotrexate)、培美曲塞、雷替曲塞(Raltitrexed)、胺基蝶呤、及相近物)；嘌呤拮抗分子(硫鳥嘌呤(Thioguanine)、氟達拉濱(Fludarabine)、克拉曲濱(Cladribine)、6-巰基嘌呤、噴司他汀(Pentostatin)、氯法拉濱(clofarabine)及相近物)及嘧啶拮抗分子(阿糖胞苷(Cytarabine)、氟尿苷(Floxuridine)、阿扎胞苷(Azacitidine)、替加氟(Tegafur)、卡莫氟(Carmofur)、卡培他濱(Capacitabine)、吉西他濱、羥基尿素、5-氟尿嘧啶(5FU)、及相近物)；烷基化劑，例如氮芥劑(例如環磷醯胺(Cyclophosphamide)、美法崙(Melphalan)、苯丁酸氮芥(Chlorambucil)、鹽酸氮芥(mechlorethamine)、異環磷醯胺(Ifosfamide)、鹽酸氮芥、曲磷胺(Trofosfamide)、潑尼莫司汀(Prednimustine)、苯達莫司汀(Bendamustine)、尿嘧啶氮芥(Uramustine)、雌莫司汀(Estramustine)、及相近物)；亞硝基尿素類(nitrosoureas)(例如卡莫司汀(Carmustine)、洛莫司汀(Lomustine)、司莫司汀(Semustine)、福莫司汀(Fotemustine)、尼莫司汀(Nimustine)、雷莫司汀(Ranimustine)、鏈尿佐菌素(Streptozocin)、及相近物)；三氮烯(Triazenes)(例如達卡巴仁(Dacarbazine)、六甲蜜胺(Altretamine)、替莫錯唑胺(Temozolomide)、及相近物)；烷基磺酸鹽(例如白消安(Busulfan)、甘露舒凡(Mannosulfan)、曲奧舒凡(Treosulfan)、及相近物)；甲基苄肼(Procarbazine)；二溴甘露醇(Mitobronitol)及氮丙啶(Aziridines)(例如卡波醌(Carboquone)、三亞胺醌(Triaziquone)、三胺硫磷(ThioTEPA)、三亞乙基蜜胺(triethylenemalamine)、及相近物)；抗生素，如羥基尿素；蒽環黴素(Anthracyclines)(例如阿黴素藥物、道諾黴素、表阿黴素及其他衍生物)；蒽醌類(Anthracenediones)(例如米托蒽醌及相近物)；鏈黴菌類(例如博來黴素(Bleomycin)、絲裂黴素C(Mitomycin C)、放線菌素(Actinomycin)、普卡黴素(Plicamycin))；及紫外線。

用於治療癌症之試劑組(kits)

本揭露亦提供用於減輕癌症的試劑組。此類試劑盒可包括一或多個包含CD14拮抗分子(例如抗CD14抗體)的容器。在一些實施例中，該CD14拮抗分子是能夠干擾本文所述的CD14訊息傳遞路徑的任何藥劑。在其他實施例中，該試劑盒包含的CD14拮抗分子是一小分子抑制劑、一胜肽抑制劑、或一抑制CD14表現的藥劑。

在一些實施例中，該試劑盒可包含依據本文所述任何方法的使用說明書。該內附說明書可包含依據本文所述任何方法施用CD14拮抗分子以治療癌症、延遲癌症起始、或減輕癌症的描述。該試劑盒可以進一步包含基於識別個體是否患有癌症而選擇適合接受治療個體的描述。在其他實施例中，該說明書包含對患有癌症、疑似患有癌症、或有罹癌風險的個人施用CD14拮抗分子的描述。

關於使用CD14拮抗分子的說明書通常包括有關目的療法的劑量、給藥方案、及施用途徑的資訊。該容器可以是單位劑量、大量包裝(例如多劑量包裝)或次單位劑量。本發明的試劑盒中提供的說明書通常是在標籤上的書面說明或包裝插入件(例如，包括在試劑盒中的紙張)，但機器可讀的說明書(例如磁性或光學存儲碟片上附載的說明書)也是可接受的。

該標籤或包裝插入件指示該組合物是用於治療癌症、延遲癌症起始、及/或減輕癌症。可以提供用於實施本文所述的任何方法的說明。

本發明的試劑盒處於適合的包裝中。適合的包裝包括但不限於小瓶、瓶子、廣口瓶、軟包裝(例如密封的聚酯薄膜或塑膠袋)及類似物。亦考慮與一特定裝置組合使用的包裝，所述特定裝置例如一吸入器、一鼻腔給藥裝置(例如一噴霧器)或一注入裝置(例如一微型泵)。試劑盒可具有一無菌進入口(例如該容器可以是一靜脈注射溶液袋或一具有皮下注射針頭可刺穿的塞子的小瓶)。該容器亦可具有一無菌進入口(例如該容器可以是一靜脈注射溶液袋或一具有皮下注射針頭可刺穿的塞子的小瓶)。該組合物中有至少一種活性藥劑是CD14拮抗分子，例如一抗CD14抗體。

試劑組可以選擇性地提供額外的組件，例如緩衝液及解釋性資訊。通常，該試劑組包含一容器及在該容器上或與該容器相連的標籤或包裝插入件。在一些實施例中，本發明提供包含上述試劑盒的內容物的製品。

無需進一步詳細說明，相信本領域熟習技藝人士基於以上說明可以最大程度地利用本發明。因此，以下具體實施例應被解釋為僅是說明性的，並且不以任何方式限制本揭露的其餘部分。本文引用的所有公開文獻是出於本文引用的目的或標的以引用方式併入。

一般技術

除非另外指明，本發明之實施將採用分子生物學(包括重組技術)、微生物學、細胞生物學、生物化學及免疫學的常規技術，其係在本領域的技術範圍內。這些技術在文獻中有充分解釋，例如Molecular Cloning：A Laboratory Manual,second edition(Sambrook,et al.,1989)Cold Spring Harbor Press；Oligonucleotide Synthesis(M.J.Gait,ed.,1984)；Methods in Molecular Biology,Humana Press；Cell Biology：A Laboratory Notebook(J.E.Cellis,ed.,1998)Academic Press；Animal Cell Culture(R.I.Freshney,ed.,1987)；Introduction to Cell and Tissue Culture(J.P.Mather and P.E.Roberts,1998)Plenum Press；Cell and Tissue Culture：Laboratory Procedures(A.Doyle,J.B.Griffiths,and D.G.Newell,eds.,1993-8)J.Wiley and Sons；Methods in Enzymology(Academic Press,Inc.)；Handbook of Experimental Immunology(D.M.Weir and C.C.Blackwell,eds.)；Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells(J.M.Miller and M.P.Calos,eds.,1987)；Current Protocols in Molecular Biology(F.M.Ausubel,et al.,eds.,1987)；PCR：The Polymerase Chain Reaction(Mullis,et al.,eds.,1994)；Current Protocols in Immunology(J.E.Coligan et al.,eds.,1991)；Short Protocols in Molecular Biology(Wiley and Sons,1999)；Immunobiology(C.A.Janeway and P.Travers,1997)；Antibodies(P.Finch,1997)；Antibodies：a practical approach(D.Catty.,ed.,IRL Press,1988-1989)；Monoclonal antibodies：a practical approach(P.Shepherd and C.Dean,eds.,Oxford University Press,2000)；Using antibodies：alaboratory manual(E.Harlow and D.Lane(Cold Spring Harbor Laboratory Press,1999)；The Antibodies(M.Zanetti and J.D.Capra,eds.,Harwood Academic Publishers,1995)。

實施例 實施例1：抗CD14抗體對抗人肺癌幹細胞的保護作用 材料及方法 肺癌細胞株

人肺癌細胞株(CLS1、CL141及CL152)之建立係使用來自肺癌病患的初代培養物。細胞係培養於37℃、由20% O₂及5% CO₂組成的濕潤空氣下以及添加10%胎牛血清(FBS)的RPMI 1640培養基中。

超低球體形成試驗(Ultra-low sphere-forming assay)

超低球體形成試驗是依據標準程序進行並如本文所述予以修飾。在添加20ng/ml EGF(Sigma)與20ng/ml bFGF(Invitrogen)的MCDB201無血清培養基(Invitrogen)中的肺癌幹細胞單細胞懸浮液係接種於超低黏附性24孔盤(Corning公司，Corning，紐約州，美國；200個活細胞/孔)。每週兩次添加新鮮生長因子至培養基。三週後，在Axiovert 200顯微鏡下檢視球體。

在SCID小鼠中形成異種移植腫瘤

涉及小鼠的所有程序均經國立臺灣大學動物照護和使用委員會核准。六週齡雄性SCID小鼠或NOD/SCID/IL2Rγ_(NSG)小鼠用於肺癌細胞或肺癌幹細胞(將100μl磷酸緩衝鹽溶液(PBS)中的10⁴、10³或10²個活細胞與基質膠(Matrigel)混合)之低劑量皮下注射。監測小鼠8週，並檢視腫瘤形成及轉移的發生率。腫瘤切片以蘇木素與伊紅(hematoxylin and eosin，H&E)染色。

關於體內實驗，自CLS1細胞分選出的共500個CD14⁺癌細胞以100mL體積經由皮下注射到小鼠體內。關於腫瘤起始評估，將小鼠隨機分成5組(2及10mg/kg之抗CD14抗體、2及10mg/kg之IgA抗體、及載體對照組)並且每週一次施予抗CD14抗體、IgA抗體、或載體控制，持續二週。在第30天測量腫瘤發生率及腫瘤重量，並以平均值±SEM表示。關於腫瘤生長評估，將平均腫瘤生長體積為50μm³的小鼠隨機分成6組(1、2及10mg/kg之抗CD14抗體，及1、2及10mg/kg的IgA抗體)並且每週二次施予抗CD14抗體或IgA抗體，持續二週。藉由電子游標卡尺每週監測腫瘤體積兩次，並使用公式：體積=0.4×ab²計算腫瘤體積，其中a和b分別是腫瘤的最長及最短直徑。

統計分析

除非另外指明，定量的體外與體內數據表示為平均值±標準誤差(S.E.M)。二組之比較係使用學生t檢定。所有檢定均為雙尾且P值<0.05被認為是顯著的。

結果 抗CD14抗體抑制CD14 ⁺ 肺癌細胞形成球體

為了確定抗CD14抗體是否可以抑制CD14⁺肺癌幹細胞的形成，在有或無濃度遞增的抗CD14抗體的情況下測定CLS1、CL141、及CL152肺癌細胞的球體形成能力。CLS1(圖1A)、CL141(圖1B)、及CL152(圖1C)肺癌細胞的球體形成能力被抗CD14抗體以劑量依賴性方式抑制。這些結果說明CD14是降低初代肺癌幹細胞幹性的靶標，因此是癌症治療的有希望的靶標。

抗CD14抗體保護小鼠免於腫瘤形成及腫瘤生長

為了確定抗CD14抗體是否可以抑制腫瘤形成，對小鼠皮下接種CD14⁺ CLS1細胞(500個細胞)並施予抗CD14抗體、IgA抗體或載體對照。相比以IgA抗體對照或以載體對照處理的小鼠，以抗CD14抗體處理的小鼠具有顯著下降的腫瘤形成及腫瘤重量(圖2A)。該些下降被觀察到有劑量依賴性(圖2A)。這些結果說明抗CD14抗體之處理可預防CD14⁺肺癌細胞的腫瘤形成。

為了確定抗CD14抗體是否可以抑制腫瘤生長，以抗CD14抗體或IgA抗體處理接種CD14⁺ CLS1細胞後產生腫瘤的小鼠。相比以IgA抗體對照處理的小鼠，以抗CD14抗體處理的小鼠腫瘤體積減少40%(圖2B)。這些結果說明抗CD14抗體之處理可預防CD14⁺肺癌細胞的腫瘤生長。

實施例2：辨識肺癌幹細胞中CD14特異性訊息傳遞路徑 材料及方法 即時反轉錄(RT)Q-PCR

使用ABI Prism 7900定序儀(Applied Biosystems)透過即時反轉錄Q-PCR測定幹性相關基因的表現量及驗證過度表現CD14之CLS1細胞與空白CLS1細胞的Affymetrix微陣列數據。引子之設計係使用Primer Express 3.0(Applied Biosystems)(表1)。β-肌動蛋白用作內部對照。表現量係以β-肌動蛋白進行標準化並定義為-△CT=-[CT_目標-CT_{β-肌動蛋白}]。相對表現量之比值是計算相對於對照組的倍數變化(2^-△△CT)。實驗以三重複進行。

基因表現譜分析

依據製造商操作規範使用AffymetrixGeneChip系統(Affymetrix公司，Santa Clara，加州，美國)取得CLS1細胞及空白CLS1細胞中過度表現的CD14的基因表現圖譜。陣列數據是由國立臺灣大學基因體醫學微陣列核心設施處理。簡言之，利用T7-(dT)₂₄引子將從癌相關纖維母細胞(CAFs)、肺癌幹細胞及肺癌細胞分離出的總RNA用於產生的cDNA(SuperscriptChoice System，Gibco BRL Life Technologies)。使用BioArray高產率RNA轉錄物標記試劑組(EnzoDiagnostic公司)以合成生物素(biotin)標記的核糖核苷酸，並與人類基因體U133 Plus 2.0晶片(Affymetrix)雜合。

流式細胞術

藉由流式細胞術分析及分選癌幹細胞標記的群體。人類抗原之抗體如PE-接合的CD14抗體(HCD14；Biolegend；1：20)、FITC-接合的CD44抗體(G44-26；BD Pharmingen；1：10)、及PDL1抗體是由商業上購買。肺癌細胞株及初代肺癌細胞在室溫下於PBS中進行CD14染色30分鐘。30分鐘後，清洗染色細胞以移除過量的未結合抗體，並使染色細胞再懸浮於分選緩衝液(含1mM EDTA及2% FBS之PBS)。使用BD FACSAriaIII細胞分選儀(Becton Dickinson)進行流式分選，並以FACSCalibur流式細胞儀(BectonDickinson)進行分析。為了確保單細胞分選，憑藉前向散射高度對比前向散射寬度(forward-scatter height(FSC-H)versus forward-scatter width(FSC-W))及側向散射面積對比側向散射寬度(side-scatter area(SSC-A)versus side-scatter width(SSC-W))去除細胞聚集體。藉由排除碘化丙啶(propidium iodide(PI)，死細胞染劑；Molecular Probes)染色細胞以去除死細胞，此步驟增加了單細胞實驗中分選出穩健活細胞的效率。

西方墨點法分析

依據標準程序進行西方墨點法分析。p-JAK1(Tyr1022/1023,3331S)、JAK1(3344S)、pSTAT1(Tyr701,9167S)、STAT1(9172S)，pSTAT3(Tyr705,9131S)、STAT3(9139S)、Nanog(D73G4；1：1000)的一級抗體購自Cell Signaling Technology公司，且CD14的一級抗體(EPR3653；1：1000)購自Cell marque。小鼠抗β-肌動蛋白單株抗體(Chemicon，Millipore；1：5000)用作樣品載入對照。轉印膜以TBST清洗三次，然後與2%脫脂奶/TBST中的山葵過氧化酶(HRP)-接合二級抗體(1：5,000)置於一處。結合的抗體係使用增強化學發光系統(Santa Cruz，加州)檢測。化學發光訊號以Fujifilm LAS 3000系統(Fujifilm，東京，日本)擷取。所有實驗以二重複進行至少三次。

結果 CD14 ⁺ 肺癌幹細胞中癌症幹性之維持涉及數種途徑

為了解CD14如何促進肺癌幹性，在CLS1細胞中過度表現CD14(圖3A)。西方墨點法顯示CD14的過度表現誘導JAK1、STAT1、及STAT3的磷酸化以及Nanog的表現(圖3B)。為了揭示肺癌幹細胞中CD14特異性訊息傳遞路徑，於此探究過度表現CD14之CLS1細胞中的轉錄調節網絡。依據轉錄體(transcriptome)與MetaCore軟體分析，在CD14過度表現之肺癌幹細胞中被上調的訊息傳遞路徑是有關於直腸結腸癌之一般模式(IL6與IL8訊息傳遞)、上皮-間質轉化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)、CD44、肝細胞生長因子(HGF)及轉化生長因子-β(TGF-β)路徑，其調節如Nanog之數種幹性轉錄因子以及如IL1、C5a與IL10之免疫反應訊號(圖3C)。利用Q-PCR驗證得數種關鍵調節因子，包括CD44、ALDH1A1、ABC轉運蛋白及PDL1(圖3D)。藉由流式細胞術證實在過度表現CD14之肺癌細胞中，PDL1(圖3E)與CD44(圖3F)的表現增加。在過度表現CD14之CLS1細胞中，CD44與CD14雙重染色的流式細胞術分析也檢測到CD44的表現增加(圖3G)。由即時反轉錄Q-PCR測量之表現量顯示在以抗CD14抗體處理的CD14過度表現細胞中，PDL1與CD44的表現增加會被抑制(圖3H)。

本實施例所得結果說明CD14介導的訊息傳遞路徑在維持癌幹細胞的幹性中起重要作用。因此，可以預期阻斷此訊息傳遞路徑的藥劑有益於癌症治療。

實施例3：sCD14透過JAK訊息傳遞路徑調節癌細胞的幹性 材料及方法 酵素結合免疫吸附分析法(Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)

為了定量分泌到培養基中的人類可溶性CD14(sCD14)蛋白質量，依據製造商說明書使用sCD14 ELISA試劑組(Quantikine ELISA Human sCD14 Immunoassay，R&D Systems，Minneapolis，明尼蘇達州，美國)。在無血清培養 基中24小時後，收集癌相關纖維母細胞(CAF)培養物、CLS1/CAF共培養物、及CLS1培養物的條件培養基，並將100μL條件培養基用於sCD14之定量。

人類受體酪胺酸激酶磷酸化抗體陣列(Human receptor tyrosine kinase phosphorylation antibody array)

依據製造商說明書使用人類磷酸化抗體陣列(G series 1，Ray Biotech公司)。簡言之，CLS1細胞以sCD14(200ng/ml)處理，在不同時間點(0、30、60分鐘)收集其細胞裂解物並與經阻斷處理之玻璃陣列在4℃下溫和振盪反應24小時。顯影後，使用螢光掃描器GenePix 4000B(Molecular Devices)掃描及定量螢光訊號。螢光訊號之定量係以內部陽性對照的螢光訊號進行標準化。

結果 sCD14透過JAK訊息傳遞路徑調節癌細胞的幹性

為了進一步了解CD14如何促進肺癌幹性，於此評估sCD14對於維持癌細胞幹性的作用。ELISA試驗顯示CLS1/CAF共培養物的培養基中有高度分泌的sCD14，但培養中的CAF與CLS1細胞的培養基則無此分泌(圖4A)。相比未經sCD14處理的CLS1細胞，以sCD14(200ng/ml)處理的CLS1細胞顯示出癌症幹性路徑分子(Nanog、Oct3/4、及Sox2)的表現增加(圖4B)。以sCD14處理的初代肺癌細胞(CL141和CL152)有被誘導的球體形成能力與幹細胞形態(圖4C)。

為了解sCD14如何調節癌症幹性，使用人RTK磷酸化抗體陣列(Ray Biotech公司，Norcross，喬治亞州)辨識其中被sCD14誘導磷酸化的蛋白質。這些實驗證明sCD14以時間依賴性方式誘導JAK1磷酸化(圖4D)。西方墨點法進一步證實sCD14在初代肺癌細胞(CLS1)中以時間依賴性方式誘導JAK1磷酸化及Nanog表現(圖4E)。

細胞分化受到白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor，LIF)與白血病抑制因子受體(leukemia inhibitory factor receptor，LIFR)的交互作用影響。當細胞中的LIF量低時，細胞會分化。LIFR減幅(knockdown)會抑制sCD14調節的癌症幹性。LIFR減幅可使用兩種針對LIFR的不同shRNA加以驗證(圖4F)。LIFR減幅抑制了sCD14誘導的JAK1磷酸化與Nanog表現(圖4G)，以及球體形成(圖4H)。

本實施例所得結果說明sCD14在維持癌幹細胞的幹性中起重要作用，而且sCD14是透過LIFR/JAK1訊息傳遞誘導幹性。因此，可以預期阻斷此訊息傳遞路徑的藥劑有益於癌症治療。

實施例4：sCD14增加免疫抑制配體PD-L1的表現

為了研究sCD14是否增加腫瘤微環境中的免疫抑制能力，於此分析在以sCD14處理的癌細胞、癌相關纖維母細胞(CAFs)、及巨噬細胞中，免疫抑制配體PD-L1的表現量。相比以sCD14處理的癌細胞與CAFs，以CD14處理的巨噬細胞展現出PD-L1的表現增加(圖5A)。sCD14以劑量依賴性方式誘導巨噬細胞中PD-L1的表現(圖5B-5C)。在以抗CD14抗體處理的巨噬細胞中，sCD14誘導的PD-L1表現被抑制(圖5B-5C)。

本實施例所得結果說明sCD14增加巨噬細胞中免疫抑制配體PD-L1的表現，因而促進腫瘤微環境中巨噬細胞的免疫抑制能力。

其他實施例

本說明書揭露的所有特徵可以任何組合進行組合。本說明書揭露的每個特徵可被用於相同、等同或類似目的之一替代性特徵所代替。因此，除非另外明確指明，所揭露的每個特徵僅是一上位系列的等效或類似特徵的例示。依據以上說明，本技術領域熟習技藝人士能夠輕易確認本揭露的重要特徵，並且在不脫離其精神與範圍的情況下，可以對本揭露進行各種變更及修飾以使其適合各種用途及條件。因此，其他實施例亦在申請專利範圍之內。

均等物與範圍

本技術領域熟習技藝人士將了解或能夠使用不超出常規的實驗而確定本文所述本揭露之具體實施例的許多均等物。本揭露的範圍非旨在受限於以上說明，而是如所附申請專利範圍所闡述。

除非指出相反意思或者從上下文中明顯可見，否則申請專利範圍中諸如「一(a)」、「一(an)」、及「該」等冠詞可以表示一個或多於一個。除非指出相反意思或者從上下文中明顯可見，如果一群組中的一個、多於一個或所有成員存在於、使用於、或有關於一給定的物品或過程中，則認為包括該群組中一個或多個成員間的「或」的請求項或說明是可滿足的。本揭露包括好一個群組成員存在於、使用於、或有關於一給定物品或過程的實施例。本揭露包 括一個以上或所有群組成員存在於、使用於、或有關於一給定物品或過程的實施例。

此外，本揭露涵蓋將所列申請專利範圍中一項或多項的一個或多個限制條件、元件、子句、及描述性術語引入另一項申請專利範圍的所有變型、組合、及排列。例如，可以將任何依附於另一請求項的請求項修飾為包括依附於相同基礎請求項的任何其他請求項所具有的一個或多個限制條件。在元件以列表呈現的情況下，例如以馬庫西形式，元件的各個次群組亦被揭露，並且可自群組中移除任何元件。應可理解的是，一般而言，在本揭露或本揭露的某部分被描述為包括特定元件及/或特徵的情況下，本揭露的某些實施例或本揭露的某部分由這些元件及/或特徵組成或基本上由這些元件及/或特徵組成。出於簡化的目的，該些實施例未在本文中具體闡述。亦須注意，術語「包含(comprising)」與「含有(containing)」意圖為開放的並且允許包括額外的元件或步驟。在給出範圍的情況下，範圍包括端點。此外，除非另外指明或者基於上下文及本技術領域中具有通常知識者的理解為明顯可見，否則表示為範圍的數值可以假設為本揭露不同實施例中的所述範圍內的任何特定值或次範圍，至該範圍下限的單位量的十分之一，除非上下文另有明確規定。

本申請案提及多件公告的專利、公開的專利申請案、期刊文章、及其他出版物，該些所有皆藉由引用併入本文。如果任何併入的參考文獻與本說明書之間存在衝突，則應以說明書為準。另外，落入先前技術範圍內的本揭露任何特定實施例可以自申請專利範圍的任一項或多項中被明確排除。因為這些實施例被認為是本技術領域中具有通常知識者已知的，即使未在本文中敘明排除，亦可以將其排除。無論是否與先前技術的存在相關，本揭露的任何特定實施例出於任何理由可以自任何請求項中被排除。

本技術領域熟習技藝人士將了解或能夠使用不超過常規的實驗而確定本文所述具體實施例的許多均等物。本文所述具體實施例的範圍非旨在受限於以上說明，而是如所附申請專利範圍所闡述。本技術領域中具有通常知識者將理解，在不脫離如下列申請專利範圍所界定的本揭露之精神或範圍的情況下，可以對此說明進行各種變更及修飾。

<110> 國立臺灣大學

<120> CD14拮抗分子用於治療癌症

<130> US 62/543,067

<160> 14

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 1

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Claims (16)

1. 一種抗CD14抗體用於製備治療個體癌症之藥物的用途，其中該抗CD14抗體係抑制CD14介導的訊息傳遞下游路徑，以減少該個體中癌幹細胞的幹性，且該癌症係肺癌。
2. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該抗CD14抗體是一全長抗體或其抗原結合片段。
3. 如申請專利範圍第1項或第2項所述之用途，其中該抗CD14抗體是一人類抗體或一人源化抗體。
4. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該抗CD14抗體與一毒素接合。
5. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該個體是一患有癌症、疑似患有癌症、或有罹癌風險的人類病患。
6. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該肺癌是非小細胞肺癌。
7. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該抗CD14抗體的量有效減少腫瘤形成或腫瘤生長。
8. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該抗CD14抗體配製於一醫藥組合物中，且該醫藥組合物進一步包含一藥學上可接受的載體。
9. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該個體被施用另一抗癌治療劑。
10. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該個體接受或已經接受另一抗癌療法。
11. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該個體是一人類病患。
12. 如申請專利範圍第11項所述之用途，其中該個體相比一未罹患癌症的對照個體具有一提高的CD14量、一提高的PDL1量、一提高的CD44量、或其組合。
13. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該抗CD14抗體是全身性施用。
14. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該抗CD14抗體是經由一腸道途徑或一腸道外途徑施用。
15. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該抗CD14抗體的量有效抑制癌幹細胞誘導的免疫抑制。
16. 如申請專利範圍第15項所述之用途，其中該癌幹細胞誘導的免疫抑制是在免疫細胞、癌細胞、或其組合中的一PDL1表現增加。

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