TWI702959B - 開發黃花蟛蜞菊的標準化與功效最佳化的草藥抽出物以及其用於治療疾病的用途 - Google Patents

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Abstract

本發明係一種用於製備標準化黃花蟛蜞菊抽出物的方法以及藉由該方法所製得的抽出物。本發明亦提供一種在體外藉由鑑定出其最豐富化合物及其生物活性而用於使該標準化抽出物合格化的方法。此外，本發明提供一種使用合格的黃花蟛蜞菊抽出物於治療雄性激素激發疾病的方法。

Description

開發黃花蟛蜞菊的標準化與功效最佳化的草藥抽出物以及其用於治療疾病的用途
本申請案係關於自黃花蟛蜞菊萃取出的草藥作為一種疾病的補充或替代療法。
植物的二級代謝物顯示出無數伴隨著具有藥物潛力的活性的化學結構。在傳統醫藥系統中使用的植物為具有新穎結構、組合性及作用機制的先導物質之目標鑑定提供了合理且明顯的來源。植物抽出物亦具有附加的優點，作為藥物，其安全性及有效性皆經由歷史用途或長期的人類經驗而完好地建立。舉例而言，蟛蜞菊，屬於菊科(菊科植物)族，為一種具有極佳的藥物潛力的藥性植物，其已被常規用於治療一般性炎性疾病。
基於草藥抽出物的化學成分的既有複雜性，常規的品質管控技術不足以評估草藥批次與批次間的一致性。舉例而言，遺傳變異性、生理及環境變數，例如光週期、氣候及土壤中的營養條件，影響植物中二級代謝物的生成及原料的生化組成。包括活性化合物的二級代謝物的含量亦取決於收穫時間、溫度、收穫後儲存狀態、乾燥情況、萃取及最終產品的製作。
有需要發展用於製備草藥抽出物的標準化方法及用於評估批次與批次間抽出物變異性的技術，以製備出具有最大化及標準化功效的安全藥物。
為了達到上述需求，本發明揭示一種用於製備標準化黃花蟛蜞菊抽出物的方法。該方法包括提供一種黃花蟛蜞菊的乙醇抽出物、酸水解該乙醇抽出物、中和該經酸處理的乙醇抽出物、將該中和過的經酸處理乙醇抽出物置於逆相管柱中、進行洗提並由該逆相管柱收集分離組分(fraction)、在體外測定該收集的分離組分對於抗雄性激素受體的活性、並合併具有高度抗雄性激素受體活性的分離組分的步驟。
本發明亦提供一種含有由上述方法製得的標準化黃花蟛蜞菊抽出物的組合物。
本發明進一步提供一種使黃花蟛蜞菊抽出物標準化製品合格化的方法，以供治療雄性激素激發疾病。
該方法包括獲得多個黃花蟛蜞菊抽出物標準化製品、分析各個標準化製品以使其中最豐富的化合物合格化、在體外測定各個標準化製品對於抗雄性激素受體的活性、以及將各個標準化製品中最豐富的化合物的含量與其相對應的體外抗雄性激素受體活性進行關聯性分析後決定活性閾值的步驟。如其抗雄性激素活性高於已決定的活性閾值，則該黃花蟛蜞菊的標準化抽出物製品合格於治療雄性激素激發疾病。
此外，本發明所揭示的為一種用於治療雄性激素激發疾病的方法。該方法包括鑑定出需要治療患有雄性激素激發疾病的個體、將由上述方法所製得的含有標準化黃花蟛蜞菊抽出物製品的組合物投予至該個體的步驟。
本發明亦揭示一種合格的標準化黃花蟛蜞菊抽出物於治療雄性激素激發疾病之用途。
本發明的一個或多個實施例的細節係於以下的說明書及實例中說明。本發明的其他特徵、目的及優點將由詳細說明、附圖、以及從申請專利範圍中成為顯而易見的。本文引用的所有參考文獻係通過引用而全部併入本文中。
如上所述，本發明揭示一種製備標準化黃花蟛蜞菊抽出物的方法，其中將酸水解的黃花蟛蜞菊乙醇抽出物中和後，在逆向管柱中進行分級分離。
該逆向管柱可以是C18管柱。該管柱可由，例如80% H2 O ：20%乙醇的移動相進行平衡，藉以洗除未鍵結的物質。以H2 O：乙醇梯度洗提分離組分。該梯度可以從以體積計80% H2 O：20%乙醇至以體積計50% H2 O：50%乙醇。在特定方面，該梯度為線性梯度。可由紫外光吸收光譜鑑定分離組分。紫外光可以是320 nm及210 nm。在一實施例中，洗提並收集六個分離組分。另可選擇地，該方法可用於從鱧腸（Eclipta prostrata ）及從旱蓮草（fromEclipta alba ）製作標準化抽出物。
該方法亦包括在體外檢測分離組分中的抗雄性激素受體的活性的步驟。一方面，可藉由前列腺特異性抗原啟動子/報導基因檢測法測定抗雄性激素受體的活性。可將具有高度抗雄性激素受體活性的分離組分合併而形成標準化黃花蟛蜞菊抽出物。較佳地，將兩個具有最高度抗雄性激素受體活性的分離組分合併而形成標準化黃花蟛蜞菊抽出物。可使用相同方法從鱧腸及從旱蓮草製得標準化抽出物。
上述亦說明一種用於使標準化黃花蟛蜞菊抽出物合格化的方法。該方法根據使在標準化黃花蟛蜞菊抽出物中最豐富的化合物的含量與其體外的抗雄性激素受體活性進行關聯性分析。可藉由，例如前列腺特異性抗原啟動子/報導基因檢測法測定體外抗雄性激素受體活性。再者，可藉由，舉例而言，LC-MS-MS定量地測量最豐富化合物的含量。
較佳地，藉由主成分分析，接著進行正交訊號校正偏最小平方判别分析法決定關聯性。關聯性可用於對個別的抽出物進行分組，以決定活性閾值。具有高於活性閾值的抗雄性激素受體活性的標準化黃花蟛蜞菊抽出物被認為是合格的。
合格的標準化黃花蟛蜞菊抽出物對於體內治療雄性激素激發疾病是有效的。雄性激素激發疾病為任何因雄性激素受體活性而造成或者惡化的異常健康狀態，例如前列腺癌、良性前列腺肥大、乳癌、男性脫髮、痤瘡丙酸桿菌（Propionibacterium acnes ）感染、多囊性卵巢症候群、自體顯性多囊腎疾病及高雄性激素血症。在特定方面，前列腺癌為抗去勢型前列腺癌。
在此方面，本發明提供一種藉由投予標準化黃花蟛蜞菊抽出物而治療雄性激素激發疾病的方法。較佳地，已由上述方法使該標準化黃花蟛蜞菊抽出物合格化。一方面，合格的黃花蟛蜞菊抽出物係與藥學上可接受賦形劑結合。
如上所述，本發明提供合格的黃花蟛蜞菊抽出物在治療雄性激素激發疾病的用途。該雄性激素激發疾病可以是前列腺癌、良性前列腺肥大、乳癌、男性脫髮、痤瘡丙酸桿菌（Propionibacterium acnes ）感染、多囊性卵巢症候群、自體顯性多囊腎疾病及高雄性激素血症。在特定方面，合格的黃花蟛蜞菊抽出物可用於治療抗去勢型前列腺癌。
以下特定實例將被解釋為僅是說明性，而不是限制本發明於任何方式的其餘部分。無需進一步詳細說明，據信本領域的技術人員能夠基於本文的描述，利用本發明至其最大限度。本文引用的所有出版物在此通過引用而將其整體納入本文中。
實例1：標準化黃花蟛蜞菊抽出物的製備
於不同月份，從單一農場(台灣，新北市，二重疏洪道)中收穫黃花蟛蜞菊植物。亦可在台灣其他區域種植並收穫黃花蟛蜞菊而獲得相似的結果，例如台南市。使該植物的地上部分進行空氣乾燥、研磨、並以95%乙醇抽取。冷凝後，在80 °C下，使用pH 2.0的HCl進行該抽出物的酸水解反應1小時，以提高類黃酮苷元的含量，然後以NaOH中和，並使用C18管柱(SNAP400KP-C18-HS Column, Biotage)將其置於快速LC系統(IsoleraOne, Biotage, Uppsala, Sweden)，。將經酸水解/中和過的抽出物置於管柱後，使用以體積計的80% H2 O：20%乙醇做為流動相進行管柱的平衡，以洗除起始無活性分離組分，稱為“分離組分W0”。使用線性乙醇/H2 O梯度(以體積計80% H2 O：20%乙醇至以體積計50% H2 O：50%乙醇)，將抽出物分離成6個洗提分離組分，即分離組分W1-W6。以320 nm及210 nm的紫外光吸收值鑑定洗提的分離組分。最後，使用100%乙醇做為移動相，藉以從管柱中洗除任何殘留的物質。此物質經收集後即為分離組分W7。
藉著使用先前文獻中所述由22Rv1細胞來源的103E殖株，進行前列腺特異性抗原啟動子-螢光素酶報導基因(PSA-LUC)檢測法，以在體外測定各個分離組分的抗雄性激素受體活性。參見Lin et al., 2007, Carcinogenesis 28:2521–2529 (“Lin”)。示例性結果如以下表1所述。
表1. 由PSA-LUC 檢測法所測定的黃花蟛蜞菊分離組分的抗雄性激素受體活性。
Figure 105106816-A0304-0001
 a 數值係以對照組PSA-LUC活性的抑制百分比表示。
結果說明分離組分W4及W5具有最高的抗雄性激素受體活性。參見以上表1中的粗體數值。將分離組分W4及W5合併形成標準化抽出物，稱為黃花蟛蜞菊抽出物(“WCE”)。平均而言，W4及W5從乾燥植物算得的產率分別為0.25%及0.11% (重量%)，而從粗抽出物算得者分別為2.25%及0.97%(重量%)。分離組分W4及W5，合起來，分別為乾燥植物的0.35% (重量%)，粗抽出物的3.22% (重量%)。使WCE乾燥、冷凍並保存於-80 °C備用。
實例2：標準化黃花蟛蜞菊抽出物的鑑定
分析從不同月份的植物中收穫的幾批標準化黃花蟛蜞菊抽出物 (WCE)，以測定抗雄性激素受體活性以及抽出物中主要的化合物含量。以LC/MS/MS測定WCE中個別化合物的質量分率。結果如以下表2所示。
表2. 15批WCE的分析結果
Figure 105106816-A0304-0002
 a 數值以分析的WCE批次的總質量百分比表示。b 由上述實例1所述的PSA-LUC檢測法所測定的數值。
以搭配電噴霧偵測器的HPLC分析每個WCE批次的化學組成。結果顯示每個批次具有極為相似的化學組成，包括有先前已知為黃花蟛蜞菊的主要活性化合物，蟛蜞菊內酯（wedelolactone）、木犀草素（luteolin）、及芹菜素（apigenin）。參見Lin的文獻。
藉由三重四極桿LC-MS-MS分析法鑑定並定量WCE中的其他化合物。結果如上述表2所示。進一步鑑定蟛蜞菊內酯、木犀草素、及芹菜素之後的四個最豐富的化合物，包括3-O-二甲氧基肉桂醯基-5-O-咖啡醯奎尼酸（3-O-dimethoxycinnamoyl-5-O-caffeoylquinic acid）及其他3個未知的化合物，指定為峰5, 6及7。
一開始以PSA-LUC檢測法研究總共15個批次的WCE，以測定其生物活性的效力，以IC50 值表示。結果如上述表2所示，最後一欄，顯示從不同月份收獲得的不同批次黃花蟛蜞菊之間，其抗雄性激素受體活性有所改變。
實例3：標準化化黃花蟛蜞菊抽出物的合格化
為了得到各個豐富化合物可變比例與整體WCE效力的關聯性，進行15個WCE批次的主成分分析(PCA)。
在二維圖譜中WCE批次的位置分佈於兩個關聯性圓圈中。然後使用正交訊號校正偏最小平方判别分析法(OPLS-DA)以使由PCA所觀察到的兩組間的變異值能有最大的區隔。在15個WCE批次間，OPLS-DA分析清楚地將IC50 ≤ 300 ng/ml的組別(有效批次)與IC50 ＞ 400 ng/ml的組別 (無效批次)分開。參見上述表2中粗斜體的數值。若WCE批次在體外PSA-螢光素酶檢測法中測得IC50 ≤ 300 ng/ml，則為合格。
上述OPLS-DA的對應評分值(S-圖)說明在WCE中七個最豐富化合物間，蟛蜞菊內酯在有效及無效組別的叢集中有最大的貢獻度。實際上，兩組間的IC50 值在統計上為顯著的。此結果說明蟛蜞菊內酯的含量可主導WCE的抗雄性激素受體活性。
實例4：存在WCE中的化合物的生物利用度及代謝性
比較活性化合物，即，蟛蜞菊內酯、木犀草素、及芹菜素，以WCE的形式投予，以及以高度純化的化合物(“製劑”)的混合物投予該活性化合物，兩者間的生物利用度及代謝率數值。從WCE中純化出蟛蜞菊內酯、木犀草素、及芹菜素，並將其合併而製得該製劑。此外，在上述W4及W5分離組分中，與蟛蜞菊內酯、木犀草素、及芹菜素一起共洗提出的次要化合物從這些活性化合物中分離，並稱為“基質分離組分”。如PSA-LUC檢測法所測定的，相較於基質(IC50 = 7435 ng/ml)，製劑具有較高的AR-抑制活性(IC50 = 228.1 ng/ml)。令人驚訝地，相較於由蟛蜞菊內酯、木犀草素、及芹菜素組成的製劑而言，WCE的抗AR活性(IC50 = 264.9 ng/ml)並無顯著不同。
為了研究在基質分離組分中化合物在體內活性化合物的吸收及代謝功效，經由口服投予單一劑量100 mg/kg的WCE或等同量的製劑(純化的活性化合物)而進行藥物動力學研究。在不同劑量區間，藉由LC/MS/MS分析游離活性化合物及其分別與葡萄醣醛酸及硫酸鹽的結合物在血漿中的濃度。在經WCE處理的小鼠的血漿濃度與時間的曲線中，投予後8小時前，仍可測得游離、未結合的木犀草素。相反地，在8小時內，經製劑處理的小鼠中，木犀草素降低至偵測極限。因此，經WCE處理的小鼠較經製劑處理的老鼠，具有較高量的暴露度(AUC0-inf )及最高濃度(Cmax )的木犀草素。再者，經WCE處理的小鼠，其木犀草素的清除速率(Cl/F_obs)較經製劑處理的老鼠低43.6%。
對於芹菜素而言，在經WCE處理及經製劑處理的小鼠中，其暴露度、最高濃度及清除速率無顯著差異。
而對於蟛蜞菊內酯而言，在 經WCE處理及經製劑處理的兩種小鼠中，游離未結合的蟛蜞菊內酯含量低於10 nM的偵測極限。
然後，以β-葡萄糖醛酸酶及硫酸酯酶混合物使血清樣本水解以確保未結合及結合的三種活性化合物的總含量動力學情況。結果如以下表3所示。
表3. 血漿中結合及未結合的活性化合物的藥物動力學參數
Figure 105106816-A0304-0003
分析總活性化合物後顯示，在經WCE的小鼠中，蟛蜞菊內酯的AUC0-inf 較在經製劑處理者高40.7%。參見表3。另一方面，儘管因作為抽出物的一部分進行投予後蟛蜞菊內酯的Cmax 稍為降低，相較於經製劑處理的動物而言，蟛蜞菊內酯從經WCE處理的小鼠循環系統中的清除速率較慢。參見上述表3。
再者，在經WCE處理的小鼠中，芹菜素的AUC0-inf 及Cmax 分別提高108.1%及98.1%，而相較於經製劑處理的小鼠，其清除速率降低54.2%。參見上述表3。
當相較於以製劑的一部分，而以WCE的一部分進行投予時，木犀草素的代謝僅表現出稍微的改變，說明AUC0-inf 增加，清除速率降低，Cmax 則無改變。參見上述表3。
結合所有數據顯示，相較於純化的主要化合物混合物而言，在WCE中存有基質化合物的情況下會藉著增加其體內半衰期而使主要活性化合物，亦即蟛蜞菊內酯、木犀草素、及芹菜素，有較高的生物利用度。
實例 5：標準化黃花蟛蜞菊抽取物的體內抗腫瘤活性
藉由慢病毒感染方式，以帶有螢火蟲螢光酶luc2並由雜交的EF1α/eIF4g啟動子所啟動的pGL4(Promega, Madison, WI)穩定地轉染能表現雄性激素受體且可反應雄性激素的刺激，但在不存有雄性激素的情況下可獨立地生長的人類前列腺癌22Rv1細胞株，而獲得22Rv1Luc2細胞。參見Hsu et al., 2012, Cell Rep. 2:568–579。
如先前文獻所述，植入22Rv1Luc2細胞後，可於無胸腺裸鼠(6週大)的皮下及原位處發現腫瘤。參見Tsai et al., 2009, Clin. Cancer Res. 15:5435–5444。
將溶於含有10%(v/v) DMSO及5%(v/v) Tween-80(載體)的磷酸鹽緩衝液中的WCE經由灌食方式投予。WCE的5週投予劑量為2 mg/kg及10 mg/kg。在投予兩種劑量的合格WCE (IC50 ≤ 300 ng/ml)後，可發現腫瘤尺寸顯著地變小。而具有體外IC50 ＞ 400 ng/ml的不合格WCE，僅在高劑量下，即10 mg/kg，顯示出對於腫瘤的抑制。
實例 6：體內WCE及純化的活性化合物的抗腫瘤活性
在上述實例5中所描述的22Rv1原位前列腺癌模型中進一步分析實例 4中所述的WCE及製劑。結果說明，當投予至帶有腫瘤的小鼠時，WCE較該製劑更有效於抑制腫瘤生長。參見圖1A。相似的差別功效亦可在腫瘤質量上顯現，相較於製劑，WCE可使種瘤重量顯著地降低。參見圖1B。經WCE處理及製劑處理的動物間的體重相似。
實例 7：在抗去勢型前列腺癌體外模型中的WCE功效
將2 x 105 個表現螢光酶基因的雄性激素依賴型前列腺癌細胞株，即LNCaP細胞，原位注射入小鼠前列腺中，而形成抗去勢型前列腺癌細胞。四週後，經由手術移除睪丸而使小鼠去勢。在之後的10週中，在去勢小鼠中，由注射的細胞形成腫瘤，經過緩解，並復發。在解剖時將腫瘤切除，並培養腫瘤中的前列腺癌細胞。這些細胞稱為“LNCaP-CR細胞”。不同於須依賴雄性激素的存在方能生長的親代LNCaP細胞，如同生長於無雄性激素的培養基所示，LNCaP-CR細胞為雄性激素非依賴型。參見以下。
測定WCE對於LNCaP及LNCaP-CR細胞的功效。使LNCaP與LNCaP-CR細胞在補充有經活性碳-葡聚糖吸附的胎牛血清(CD-FBS)以從該血清中移除任何雄性激素的RPMI-1640培養基中生長。在某些培養中添加1 x 10-8 M的二氫睪固酮(DHT)。在某些培養中添加10 µg/ml或25 µg/ml的WCE。在為期4天中，測量經處理及對照組的培養細胞的生長速率。結果如圖2A及2B所示。
培養於CD-FBS的雄性激素依賴型LNCaP細胞的生長較培養於DHT下降低38.6%。參見圖2A。添加WCE至10 µg/ml亦抑制DHT依賴型生長，且亦有效於減少雄性激素缺乏下的生長(參見圖2A中的CD-FBS/WCE 10 µg/ml)。添加WCE至25 µg/ml幾乎完全抑制細胞生長。參見圖2A。
如上所述，測定WCE對於LNCaP-CR細胞的功效。結果如圖2B所示。相較於對照組或經DHT處理的LNCaP-CR細胞而言，以10 µg/ml的WCE處理使細胞生長減少至少40%。將WCE的量提高至25 µg/ml使LNCaP-CR細胞的生長稍微增加或無增加。參見圖2B。
實例 8：WCE的組合物及抗雄性激素情況
在體外評估WCE與恩雜鲁胺，其為一種抗雄性激素劑，的合併功效。使上述兩種細胞，LNCaP及LNCaP-CR細胞 (i)未經處理，(ii)以20 µg/ml 的恩雜鲁胺處理，(iii) 以10 µg/ml的WCE處理，(iv)以25 µg/ml的WCE，以及(v)以20 µg/ml的恩雜鲁胺外加10 µg/ml的WCE處理。結果如圖2C及2D所示。
恩雜鲁胺顯著地抑制雄性激素依賴型LNCaP細胞的生長。參見圖2C (恩雜鲁胺以MDV3100表示)。預期中，以恩雜鲁胺處理雄性激素非依賴型LNCaP-CR細胞使得其生長抑制現象顯著減少。參見圖2D。相較於恩雜鲁胺，以10 µg/ml的WCE處理更有效於抑制細胞生長。25 μg/ml的WCE有效地阻斷LNCaP及LNCaP-CR細胞的生長。重要地，相較於單獨處理及以恩雜鲁胺與低劑量的WCE合併處理以增強恩雜鲁胺的療效而言，以20 μg/ml的恩雜鲁胺與10 μg/ml的 WCE合併處理可更有效阻斷LNCaP及LNCaP-CR細胞生長。參見圖2C及2D。
實例 9：WCE與多西紫杉醇合併而在體外抑制雄性激素受體呈陰性的前列腺癌細胞的生長
本發明評估 WCE及多西紫杉醇對於雄性激素受體呈陰性(AR-陰性)的前列腺癌細胞株PC-3及DU145的功效。培養的細胞，未經處理、以25 µg/ml的WCE處理、以10 nM多西紫杉醇處理、或以兩者一起處理。48小時後，使用CyQUANT直接細胞增生檢測法測定活細胞數目。結果如圖3A及3B所示。
WCE及多西紫杉醇兩者皆抑制PC-3細胞(圖3A)及DU145細胞(圖3B)的生長。結合這兩種處理，可進一步抑制細胞生長達80%。亦參見圖3A及3B。
實例 10：WCE的體外抗腫瘤活性
在小鼠模型中，針對與雄性激素無關的前列腺癌，研究WCE對於體外腫瘤生長的功效。將帶有螢光酶報導基因的PC-3 AR-陰性前列腺癌細胞注射至小鼠前列腺，每隻動物注射1×105 個細胞。注射後一週，將小鼠分成四組，並以以下方式處理6週：第一組：對照組，僅有載體；第二組：每天經由灌食一定劑量的WCE；第三組：每週由尾部靜脈注射多西紫杉醇；以及第四組：進行每天WCE及每週多西紫杉醇處理。經由每週進行生物發光影像測量腫瘤生長。每週亦秤量動物的重量。
結果如圖4A及4B所示。
WCE較多西紫杉醇更顯著有效於抑制體內腫瘤生長。參見圖4A。合併這兩種處理可最有效抑制腫瘤生長。註：針對體重，在8週的試驗期間，相較於對照組動物而言，經WCE處理的動物不會減輕體重。參見圖4B。相較之下，因多西紫杉醇的毒性而造成體重大幅下降。註：重要地，相較於僅以多西紫杉醇處理的動物而言，以WCE及多西紫杉醇一併處理的動物顯示出顯著較少的體重下降。註：結合所有數據顯示，WCE可改善多西紫杉醇對於AR-陰性腫瘤的功效，並同時降低多西紫杉醇的毒性。
其他實施例
本說明書所揭示的所有特徵可以任何組合方式進行組合。本說明書所揭示的各特徵可由具有相同、等效或相似目的的另可選擇的特徵所取代。因此，除非另有其他明確的申明，所揭示的各特徵僅是一般系列的等效或類似特徵的一個實例。
由上述說明，本領域技術人員可簡單地確定本發明的必要特徵，且在不背離其精神及範疇下，可針對本發明進行各種改變及修飾以使其符合各種用途及情況。因此，其他實施例亦在請求項範圍內。
無
以下本發明的說明係參照附圖：
圖1A為在指定的處理後生物發光性與時間的作圖：載體 = 對照組，WCE = 標準化黃花蟛蜞菊抽出物，製劑(formula) = 純化活性化合物，蟛蜞菊內酯(wedelolactone)、木犀草素(luteolin)、及芹菜素(apigenin)的混合物；
圖1B為各組治療中腫瘤質量的點圖；
圖1C為體重對時間作圖；
圖2A為經二氫睪固酮 (DHT)、WCE、活性碳-葡聚糖處理的胎牛血清 (CD-FBS)、及DHT/WCE與CD-FBS/WCE組合物處理的LNCaP細胞的標準化生長速率對時間的作圖；
圖2B為經DHT、WCE、CD-FBS、及DHT/WCE與CD-FBS/WCE組合物處理的LNCaP-CR細胞的標準化生長速率對時間的作圖；
圖 2C為經恩雜鲁胺(恩雜鲁胺(Enzalutamide)；MDV3100)、WCE、及MDV3100與WCE組合物處理的LNCaP細胞的標準化生長速率對時間的作圖；
圖2D為經恩雜鲁胺(MDV3100)、WCE、及MDV3100與WCE組合物處理的LNCaP-CR細胞的標準化生長速率對時間的作圖；
圖3A為顯示WCE、多西紫杉醇及兩者對於PC-3雄性激素受體呈現陰性(AR-)的前列腺癌細胞的功效長條圖；
圖3B為顯示WCE、多西紫杉醇及兩者對於DU145 AR-前列腺癌細胞的功效長條圖；
圖4A為在指定的處理後生物發光性與時間的作圖：ctrl = 對照組、WCE = 標準化黃花蟛蜞菊抽出物、紫杉醇 (taxel) = 多西紫杉醇(docetaxel)；以及
圖4B為在指定的處理後體重對於時間的作圖。
無

Claims (8)

  1. 一種用於製備標準化黃花蟛蜞菊(Wedelia chinensis)抽出物的方法，該方法包含：提供一種黃花蟛蜞菊乙醇抽出物；酸水解該乙醇抽出物；中和該經酸處理的乙醇抽出物；將該經中和的經酸處理的乙醇抽出物置於逆向管柱中；以水：乙醇梯度進行洗提並從該逆向管柱中收集分離組分，其中該水：乙醇梯度係為以體積計的80%水：20%乙醇至50%水：50%乙醇；在體外檢測該分離組份的抗雄性激素受體活性；以及將該收集的分離組分中具有最高抗雄性激素受體活性的分離組分予以合併。
  2. 根據請求項1的方法，其中收集6個分離組分。
  3. 根據請求項2的方法，其中在合併的步驟中，將相較於各個分離組分的抗雄性激素活性而言，兩個具有最高度抗雄性激素受體活性的分離組分進行合併。
  4. 根據請求項1至3中任一項的方法，其中該抗雄性激素受體活性係經由前列腺特異性抗原啟動子/報導基因檢測法而測定。
  5. 根據請求項4的方法，其中該分離組分具有最高度的抗雄性激素受體活性，其在報導檢測法中具有IC50
    Figure 105106816-A0305-02-0018-1
    300ng/ml。
  6. 一種黃花蟛蜞菊乙醇抽出物用於製備供治療抗去勢型前列腺癌的藥物的用途，其中該黃花蟛蜞菊乙醇抽出物係進一步以請求項1至5中任一項之方法標準化。
  7. 根據請求項6的用途，其中該黃花蟛蜞菊乙醇抽出物係與恩雜鲁胺(enzalutamide)及/或多西紫杉醇(docetaxel)併用。
  8. 一種治療抗去勢型前列腺癌的組合，其包括黃花蟛蜞菊乙醇抽出物與恩雜鲁胺(enzalutamide)及/或多西紫杉醇(docetaxel)，其中該黃花蟛蜞菊乙醇抽出物係進一步以請求項1至5中任一項之方法標準化。
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