TWI491398B

TWI491398B - 預防或治療腸道發炎疾病之蟛蜞菊屬萃取物及其用途

Info

Publication number: TWI491398B
Application number: TW101127288A
Authority: TW
Inventors: Chih Chun Wen; Pei Wen Hsiao; Wen Ching Huang; Shu Hui Lin; Yuh Ting Huang; Wen Ching Lin; Ning Sun Yang
Original assignee: Academia Sinica; One Power Bio Technology Co Ltd
Priority date: 2012-07-27
Filing date: 2012-07-27
Publication date: 2015-07-11
Also published as: TW201404398A; CN103565872A; CN103565872B

Description

預防或治療腸道發炎疾病之蟛蜞菊屬萃取物及其用途

本發明係關於一種蟛蜞菊屬的植物萃取物在預防和治療腸道發炎上的運用和產品化。

發炎性腸道疾病(Inflammatory bowel disease,IBD)是種腸胃道慢性發炎病症，影響範圍遍及全球數百萬人口。流行病學和病理學上的研究證據顯示發炎性腸道疾病發病的起因是經由一種複雜的環境誘因、家族性和遺傳性的因子、免疫調節的缺陷以及微生物接觸的交互作用，造成不當地持續活化黏膜免疫系統。

近年來，從草藥衍生出的天然健康產品已經發展成常見疾病之另類或輔助療法。新近的調查報告指出，在發炎性腸道疾病患者之中，最常使用的另類或輔助療法是草藥療法。蟛蜞菊(Wedelia chinensis )是在亞洲國家廣泛地被使用的一種重要草藥，為草藥茶中的一個重要組成成分。在台灣和東南亞，蟛蜞菊是被認為有療效例如去咳、解熱、排毒、消炎以及保護肝臟的效果。蟛蜞菊中的成分近來被報導有緩和雄性素受體的活性以及攝護腺癌的生長。

由於目前用以治療發炎性腸道疾病的藥物無法根除此疾病的復發且具有副作用，因此對於能有效治療發炎性腸道疾病的療法之研發仍有其需求。利用傳統藥草當作輔助療法以緩解此種的疾病，已被認為是一種重要的方式。然而，缺乏科學證據以證明傳統藥草之療效及安全性，和缺乏萃取方法和品種(species)對藥草的影響的調查等問題，仍是在傳統藥草之研發和應用時需面對的。

目前已有從傳統藥用植物衍生出單一化合物/植物化學物質，例如，Curcuma longa的薑黃素[1]、Polygonum tinctorium[2]的tryptanthrin、Scutelleria baicalensis的黃岑素[3]，Catalpa Ovata的Catalposide[4]、Copaifera Officinalis的β-caryophyllene[5]以及其他已測試其可能為抗結腸炎的治療藥物。

然而，在傳統藥用植物特定組織中，萃取、製備和分離的方法會容易影響藥用或膳食的植物材料的最終萃取物樣品之藥物或營養的特性[6]。Capecka[7]等人研究已發現，在製備脣形科種植物中，新鮮與乾燥方式備製之抗氧化活性有顯著的差異。

在一方面，本發明是關於一種應用蟛蜞菊萃取物方法於預防和治療腸道發炎疾病上的運用及產品化。對於具有急性腸道炎的小鼠展現出良好的抗腸炎作用，其顯示蟛蜞菊具有舒緩或治療IBD病患因腸道發炎所引起的臨床症狀和組織病理變化的潛力。

在另一方面，本發明係揭露一種萃取蟛蜞菊萃取物的方法。本發明利用不同萃取方法所製得的蟛蜞菊萃取物，包括新鮮或陰乾的蟛蜞菊所製得的熱水萃取物及50%和100%酒精的萃取物，皆能紓緩葡聚醣硫酸鈉(dextran sodium sulfate,DSS)所誘發的腸道發炎。

前述或其他的實施例將可由以下對較佳實施例之描述及圖式更為清楚，然而其改變或修飾並未脫離本發明揭露內容之精神、範圍及概念。

相關圖式係可說明一或多個本發明實施例，同時配合文字說明，可用於解釋本發明之概念。圖式中相同的元件符號係用於標示一實施例中的相同或相似元件。

定義

說明書中所使用的用語係在該領域中具有其一般定義，包括在本發明之說明內容，以及特定文字內容部份所使用的用語。以下將討論本發明所使用的特定用語，亦或說明書的其他部分，以作為實施者在實施本發明之導引。為了便利起見，某些詞彙將特別標記，例如使用斜體及/或引號標示。這些標記的使用，將不影響該用語的範圍或定義；該用語的範圍或定義在文中仍然是相同的，無論其是否有標記。相同的事物可用一種以上的方式描述。因此，在此將使用超過一種的其他用語及同義字，該些用語並無其他特殊含義，無論該些用語是否有特別解釋或闡述。在本文中使用了一些同義字，列舉一或多種同義字並不代表排除了其他未提及或列舉的同義字。在實施例或說明書中所使用的用語僅為用以說明，並非限定其本發明或實施例之範圍或定義。同樣地，本發明並非受限於說明書中的實施例。

除非另外定義，本文中所使用的技術上或科學上的用語，皆為該領域具有通常知識者所理解在本發明所涉及的一般定義。

在一方面，本發明是關於蟛蜞菊抗腸炎功效的可能性。本發明對於具有急性腸道炎的小鼠展現出良好的抗腸炎作用，其顯示蟛蜞菊具有舒緩或治療IBD病患因腸道發炎所引起的臨床症狀和組織病理變化的潛力。

在另一方面，本發明係揭露一種萃取蟛蜞菊萃取物的方法。本發明利用不同萃取方法所製得的蟛蜞菊萃取物，包括新鮮或陰乾的蟛蜞菊所製得的熱水萃取物及50%和100%酒精的萃取物，皆能紓緩葡聚糖硫酸鈉(dextran sodium sulfate,DSS)所誘發的腸道發炎，其中以新鮮的製備的熱水萃取物效果最佳。另外，本發明進一步利用高效液相層析儀分析各種蟛蜞菊屬(Wedelia genus)植物的其他種(species)之鮮品水萃物的代謝物圖譜。其結果發現，琉球蟛蜞菊(W.biflora var.ryukyuensis )、蟛蜞菊(Wedelia chinensis )及南美蟛蜞菊(W.trilobata )之高效液相層析儀分析的圖譜與其他三者(雙花蟛蜞菊(W.biflora )、天蓬草舅(W.prostrate )及大天蓬草舅(W.prostrata var.robusta. ))有顯著的不同；各種的蟛蜞菊亦有獨特的波峰可供辨識。本研究也發現數種單一植化物(phytochemicals)，如綠原酸(chlorogenic acid)及阿魏酸(ferulic acid)可能存在於蟛蜞菊屬植物中，可做為蟛蜞菊屬植物之鮮品水萃物的指標成分(index compounds)，當作商業應用上的品質控管依據。

在本發明之一實施例中，一種預防或治療腸道發炎疾病之蟛蜞菊屬(Wedelia )萃取物，其係由一蟛蜞菊屬植物以水或醇類萃取而得。

在本發明之另一實施例中，所述之蟛蜞菊屬萃取物，其中該蟛蜞菊屬植物係選自於琉球蟛蜞菊(W.biflora var.ryukyuensis )蟛蜞菊(Wedelia chinensis )南美蟛蜞菊(W.trilobata )雙花蟛蜞菊(W.biflora )、天蓬草舅(W.prostrate )、大天蓬草舅(W.prostrata var.robusta. )及其任一組合所組成之群組

在本發明之另一實施例中，其中該蟛蜞菊屬植物係為一新鮮或一乾燥之植物。

在本發明之另一實施例中，所述之蟛蜞菊屬萃取物，其中該水係為滾燙熱水。

在本發明之另一實施例中，所述之蟛蜞菊屬萃取物，其中該醇類係為乙醇。

在本發明之另一實施例中，所述之蟛蜞菊屬萃取物，其進一步包含綠原酸(chlorogenic acid)、阿魏酸(ferulic acid)或其混合物。

在本發明之另一實施例中，一種用於預防或治療腸道發炎疾病之醫藥組成物，包括一有效劑量之如申請專利範圍第1項所述之蟛蜞菊屬萃取物，以及一藥學上可接受之載體。

在本發明之另一實施例中，所述之醫藥組成物，其中該腸道發炎疾病係為一結腸炎。

在本發明之另一實施例中，所述之蟛蜞菊屬萃取物用於製備預防或治療腸道發炎疾病之藥物的用途。

在本發明之另一實施例中，所述之用途，其中該蟛蜞菊屬萃取物具有抗發炎功效以達到預防或治療腸道發炎疾病之效果。

實施例

以下將提供本發明的實施例，包括儀器、裝置及方法，以及依據該些實施例所得的結果。在實施例中使用的名稱及副名稱是為了方便閱讀，並非用以限制本發明的保護範圍。進一步地，在此所揭露的原理，只要發明能夠依據說明書所載據以實施，都不應限制本發明的保護範圍。

材料及方法 蟛蜞菊萃取物的準備

依先前文獻所記載及自行的研究，實驗用的植物材料需用肉眼於外觀、構造、植物化學和基因圖表的特徵上作確認。蟛蜞菊購自台北市有聲譽的中醫藥草店或由種植者取得。乾燥的蟛蜞菊是將新鮮乾淨的蟛蜞菊置放於陰涼處兩個星期乾燥而成。關於經由熱水提煉的新鮮(亦稱鮮品)或乾燥蟛蜞菊萃取物，實驗植物材料需秤重然後加入適當的滾水(每一百公克的新鮮或乾燥蟛蜞菊須一公升的水)煎煮，須煎煮至滾水剩餘原來的四分之一。然後使用吸取泵將滾水之萃取物經由濾紙過濾以及使用旋轉蒸發器將萃取物濃縮。乙醇提煉的萃取物是將整個新鮮蟛蜞菊浸泡於100%或50% EtOH(WC100或WC50)兩星期，之後其萃取物經由上述的方法過濾以及濃縮。全部的萃取物在使用前須經冷凍乾燥以及儲藏在4℃中。

小鼠

七到八個月大的C57BL/6以及ICR雌小鼠是從National Laboratory Animal Center(台灣台北)購買的。小鼠安置固定的溫度和濕度下，維持以12h/12h/日/夜的循環。小鼠給予食物和水持續至小鼠達到實驗所需的理想體重。其步驟是依照中研院的Institutional Animal Care and Use Committee(IACUC)的標準流程進行。

導入急性結腸炎

待小鼠適應環境之後，體重達到標準的雌小鼠(20-25公克)隨機分置對照、結腸炎-對照和治療等組。全部的小鼠給予正常的飲水從第-7天到第0天。為了導入急性結腸炎，除了對照組之外，其餘的小鼠給予含有2%(w/v) 葡聚醣硫酸鹽(DSS，分子量：36000-50000 Da,MP Biochenicals,Solon,Ohio,USA)的飲水從第0天到第8-9天。DSS溶液每兩天更換一次，DSS的飲用量以均值(mean)紀錄。在整個實驗的期間，對照組和DSS組的小鼠經由口服給予其對照試驗萃取物的載體(vehicle)(1% Tween 80,Sigma-Aldrich,St.Louis,MO,USA)。治療組給予以不同方式提煉的蟛蜞菊萃取物，將萃取物溶解於載體，經由管餵(oral gavage)、口服的方式，其劑量為50 mg/kg。為了評估結腸炎的程度，每天對小鼠的體重、排便狀況以及糞便中的血液含量進行觀察；結腸炎的disease activity index是根據Cooper[8]等人的改良準則所計算的。在每個實驗結束之後，將全部的試驗小鼠測量體重並犧牲。小鼠的大腸被切除後，測量結腸長度，移除盲腸之後，洗浸於0.9%的生理食鹽水，最後浸泡置10%中性福馬林中。

結腸炎的組織病理學之評估

結腸組織檢驗的中段結腸的組織評分是根據Cooper等人所描述的評分系統。將已浸泡於福馬林中的結腸分成三等段(equal segments)分別是前、中和後段，使用石蠟包埋，切片(2um)然後染色於蘇木色素和伊紅。DSS導入的結腸炎的損傷以腸道腺窩的喪失、腸道腺窩的再生、黏膜下層的水腫、發炎以及出血(纖維組織母細胞的滲透)來評分。根續Shackleford[9]等人所描述的方法(參見表一)，其損害程度是以依照前述每項嚴重度1到5分來進行評分，最高總分為25分。

distribution width(血小板分布之寬度)、NEU=neutrophil count(嗜中性白血球數)、LYM=lymphocyte count(淋巴細胞數)、MONO=monocyte count(單核細胞數)、EOS=eosinophil count(嗜酸性粒細胞數)、BASO=basophil count(嗜鹼性粒細胞數)AST=aspartate aminotransferase(天冬氨酸轉胺脢)、ALT=alanine aminotransferase(丙氨酸轉胺脢)、ALP=alkaline phosphatase(鹼性磷酸酶)、TB=total bilirubin(全膽紅素)、BUN=blood urea nitrogen(血尿素氮)。試驗組與對照組沒有顯著的不同。

骨髓過氧化酵素(Myeloperoxidase)的活性

骨髓過氧化酵素活性的測量方式是依照Krawisz[10]等人所發表的規章經稍微改良，以一種生化指標來標示嗜中性白血球的累積。經由液態氮冷凍的結腸中段，磨碎後均質化於50 mM磷酸鹽鉀的緩衝液(KH₂ PO₄ /K₂ HPO₄ ,pH 6.0)，其緩衝液包含0.5%(w/v)hexadecyltrimethyl ammonium bromide(HETAB)。此均質物經由離心機分離(4℃,13000 rpm,20分鐘)後採集其浮在表層的東西。浮在表層之物的骨髓過氧化酵素活性的測量方式是將100 μl的浮在表層之物與50 μl已備好的tetramethylbenzidine(TMB)substrate(Clinical Science Product,MA,USA)混合於一個96孔盤，讓其混合物反應兩分鐘，然後加入50 μl 2M的硫酸，使其反應停止。隨後立即使用PowerWave XS Microplate分光光度計(Bio-Te,Winooski,VT,USA)在450 nm下進行(測量其光密度(optical density(O.D))。浮在表層之物的蛋白質濃度經由Coomassie蛋白質化驗試劑(Thermo,Rockford,IL,USA)。骨髓過氧化酵素活性以O.D/ug protein表示。

統計分析

所有資料皆以平均值標準差(mean±S.E.M)的方式呈現。獨立實驗係以Student’s t-test進行比較。以星號標示的差異表示其具有統計上顯著意義(p <0.05)。

新鮮蟛蜞菊萃取物緩和DSS導入急性結腸炎的徵狀

經由熱水萃取的新鮮蟛蜞菊之萃取物，經由DSS導入急性結腸炎的小鼠模式進行評估其效果。試驗鼠經由口服給予載體溶液或新鮮蟛蜞菊萃取物(50 mg/kg鼠體重)為期一星期之後，給予含2% DSS飲用水為期九天。DSS組的小鼠快速地顯現出典型的結腸炎徵狀包括腹瀉、直腸出血及體重減輕。依第1A圖所示，與對照組相比較下，DSS組小鼠的相對體重在第7、8和9天顯著的減少(P <0.05,P <0.005,P <0.001)。新鮮蟛蜞菊萃取物組的小鼠表現出的體重與對照組沒有不同。與DSS組的小鼠相比較之下，新鮮蟛蜞菊萃取物+DSS組的小鼠之疾病活性指標是顯著的降低(第1B圖，P <0.001)。

除了體重減輕之外，結腸長度的縮短也是DSS導入急性結腸炎一個重要的症狀特徵。依第1C圖所示，新鮮蟛蜞菊萃取物有效減少試驗鼠之結腸長度的縮短(P <0.001)，也緩和病理組織學上的癥兆(第1D圖)。當與從DSS鼠取出之典型的H&E染色的中段結腸切片相比較下，經新鮮蟛蜞菊萃取物治療的鼠之組織切片顯著地表現出降低腸道腺窩的破壞和單核細胞的滲透或是其他的淋巴球進入黏膜組織(第1D圖)。經新鮮蟛蜞菊萃取物治療的鼠結腸切片之組織學評分也明顯地下降(P <0.005，第1E圖)。我們隨後收集結腸組織以及對試驗樣本進行骨髓過氧化酵素活性的分析。與組織學上的評分一致，DSS組的骨髓過氧化酵素活性大幅度的增加，但是新鮮蟛蜞菊萃取物治療組的活性確被有效的降低至與對照組相同(P <0.05，第1F圖)。因此，本發明實驗結果(第1A-F圖)顯示新鮮蟛蜞菊萃取物治療以50mg/kg的劑量可以顯著地緩和試驗鼠的結腸組織因DSS導入發炎和創傷之臨床徵狀和組織所造成的損害。

經熱水新鮮蟛蜞菊萃取物療法

為了在未來的應用上，使蟛蜞菊萃取物有最大的效果，便對於不同的萃取方法進行評估。本發明分析四種不同的萃取方法來製備天然植物的萃取物以及對其抗鼠結腸炎活性的效果評估。與DSS鼠相比較下，經不同蟛蜞菊萃取物治療的鼠有效的減輕DSS所造成的體重的減少(第2A圖)、結腸長度的縮短(第2B圖)和疾病活性指數(第2C圖)。在此四種萃取方法的萃取物中(熱水新鮮蟛蜞菊萃取物(WCHF)、熱水乾燥蟛蜞菊萃取物(WCHD)以及100%(WC100)和50%(WC50)的乙醇新鮮蟛蜞菊萃取物)，以熱水新鮮蟛蜞菊萃取物展現出最高的抗結腸炎之效果。

高效液相色譜法

高效液相色譜法等級的溶劑和化學劑皆從J.T Baker(Phillipsburg,NJ,USA)購買的。熱水提煉的新鮮和乾燥蟛蜞菊萃取物經冷凍乾燥後，分別將其磨碎至粉狀後溶於二甲亞碸(DMSO,TEDIA company Inc.,Fairfield,OH,USA)儲存備用(20 mg/ml)。將等份的新鮮和乾燥蟛蜞菊萃取物稀釋於1mg/ml的甲醇中，之後放至離心機中以13000 rpm進行分離，10分鐘之後收集浮在表層之物。將20 μl浮在表層之物的萃取物經由高效液相色譜法(Agilent 1100 Series System with G131A Quat Pump,Palo Alto,CA)及使用Cosmosil C18-AR-II column(5um particle size,250^＊ 4.6mm,Nacalai Tesque,Kyoto,Japan)以1 ml/min穩定的流速來進行分析。梯度流析(gradient elution)是以甲醇(溶劑B)和溶解於去離子水的0.05%的三氟乙酸(trifluoroacetic acid,TFA)(溶劑A)所組成之流動相(mobile phase)：0-30分鐘，15%-100%溶劑B以及30-40分鐘，100%溶劑B。檢測的波長是設定在254nm、280nm、300nm和350nm。

使用高效液相色譜法分析蟛蜞菊萃取物中的植物化學劑

使用高效液相色譜法來分析熱水新鮮蟛蜞菊萃取物與熱水乾燥蟛蜞菊萃取物之代謝物的特性。依第3A~D圖所示，在WCHF的樣本中有兩次主要高點，偵測到的時間點是在第11.58分鐘和第17.75分鐘，但在WCHD的樣本中，其代謝物的特性顯著地減少，依照WCHF的樣本所觀察，其暗示著存在於此兩種特有的植物中的代謝物之成分可能有助於改善抗結腸炎的活性。另外，之後將WCHF的高效液相色譜法之特性與一些已知的生物化學劑相比對，綠原酸(chlorogenic acid)和阿魏酸(ferulic acid)有相似的偵測時間點，其表示WCHF的製備方式可能含有綠原酸和阿魏酸。

亞急性口服毒性研究

體重達到標準的ICR小鼠，隨機分配至四個群組，經口服施予水(對照組)或100、500、1000mg/kg(依鼠體重)的新鮮蟛蜞菊萃取物(分別是低、中、高劑量群組)，為期28天。測量其體重以及食物的消耗量。臨床徵兆和生命力一天觀察兩次。在28天之後，將小鼠犧牲。其器官在肉眼下觀察，選取重要的器官(心臟、肝臟、脾臟、肺臟和腎臟)測量其重量以及置放於10%中性甲醛溶液中。血液和尿液之血液學及生化分析是由Taiwan Mouse Clinic來進行的。

每日經口服給予WCHF對於試驗鼠是沒有毒性的

雖然蟛蜞菊作為藥草或是飲食用的草本植物已經有很長的歷史，就我們專業知識的了解，尚未有報導關於此種植物以科學證據為基礎的毒性研究。為了評估蟛蜞菊一般毒性的可能性，我們進行一個28天亞急性口服毒性試驗來測試不同劑量對於ICR鼠的影響(100,500以及1000 mg/kg鼠體重)。全部接受治療的鼠在整個實驗期間表現正常形態和行為的表型和成長速度以及存活良好。在四個試驗組之間觀察，食物的攝取行為或最初和最後的體重並沒有重大的變化(參見表二)。經肉眼觀察從犧牲的小鼠切除下的器官也發現是正常的。另外，在任何的試驗組中，重要器官的相對體重也沒有重大的改變(參見表二)。在組織上，重要器官的組織檢驗沒有表現出WCHF治療所造成的組織損害(第4圖)。

肝臟組織切片表現出輕微肝醣浸潤與擴散以及空泡的形成，我們推測其造成的原因是由於在試驗鼠犧牲前施行非空腹的措施。當與對照組相比較，WCHF的治療方式沒有造成試驗鼠血液或血液生化之活性數據上重要改變，甚至在最高的WCHF劑量(1000 mg/kg)下(參見前述表一)。這些實驗結果讓我們推斷每日固定給予口服WCHF萃取物在一個高達1000 mg/kg鼠體重隻劑量下對於試驗鼠是安全的。

本發明之優點是提供使用蟛蜞菊之萃取物，治療和緩和結腸炎症狀，其效果以經熱水提煉出之蟛蜞菊的萃取物為最佳。顯示蟛蜞菊具有舒緩或治療IBD病患因腸道發炎所引起的臨床症狀及組織病理變化的潛力。我們亦發現，不同萃取方法所製得的蟛蜞菊萃取物，包括用新鮮或陰乾的蟛蜞菊所製得的熱水萃取物及50%和100%酒精之萃取物皆能紓緩DSS所誘發之腸道發炎。此外，也發現其他台灣常見的蟛蜞菊屬的植物對于DSS所誘發之小鼠急性腸道炎有不同程度上的舒緩效果，表三為不同種蟛蜞菊的縮寫，其中WC為蟛蜞菊、WT為南美蟛蜞菊、WB為雙花蟛蜞菊、WP為天蓬草舅、WBR為琉球蟛蜞菊以及WPR為大天蓬草舅。

本發明亦利用高效液相層析儀(high performance liquid chromatography、HPLC)分析前述各種蟛蜞菊之鮮品萃取物之代謝圖譜。結果發現，琉球蟛蜞菊(W.biflora var.ryukyuensis )、蟛蜞菊(Wedelia chinensis ) 與南美蟛蜞菊(W.trilobata )的HPLC圖譜與其他三者(雙花蟛蜞菊(W.biflora )、天蓬草舅(W.prostrate )及大天蓬草(W.prostrata var.robusta .))有顯著的不同；各種蟛蜞菊亦各有其獨特的波峰可供辨識。另外，第5圖至第7圖則分別顯示不同種的蟛蜞菊之熱水萃取物對於在DSS導入結腸炎的小鼠之效果，例如體重分析、疾病活性指標及病理組織和組織學評分。在進一步的比對下，發現單一植化物(phytochemical)，如綠原酸(chlorogenic acid)及阿魏酸(furulic acid)可能存在於蟛蜞菊屬植物中，可作為蟛蜞菊屬植物之鮮品水萃物的指標成份，當作商業應用的品質管控依據。這些指標成分及其他未知之植化物相混合、結合，已達成蟛蜞菊抗腸炎之功效。根據研究結果，本發明之萃取物是無毒性且安全。

在本發明之實施說明所引用及探討的部分參考文獻，可包括專利、專利申請書及不同的公開文獻。該些參考文獻的引用及/或討論僅係用於釐清本發明的敘述，而非允許該些參考文獻可當作本發明的先前技術。所有在說明書中引用及討論的參考資料皆以其完整內容作為本文之一部分。

第1圖係顯示給予具有DSS導入急性結腸炎的鼠WCHF療法之影響。結腸炎的導入是經由含有2%DSS的飲水為期九天。小鼠同時間地經口服給予載體(1% Tween 80)或WCHF(50mg/kg鼠體重)為期7天；之後為期九天的DSS的治療。第1A圖係顯示相對體重的改變。第1B圖係顯示疾病活性的指標。第1C圖係顯示結腸之長度。第1D圖係顯示組織切片。第1E圖係顯示組織學評分。第1F圖係顯示骨髓過氧化酵素活性。數據以mean±SD(n=5-6)表示。經H&E染色的結腸中段組織切片以40倍和100倍放大。*P <0.05,**P <0.005,***P <0.001，有顯著的不同與對照組相比較。*P <0.05,**P <0.005,***P <0.001，有顯著的不同與DSS組相比較。

第2圖係顯示鼠具有DSS導入急性結腸炎對於以不同方法萃取出的蟛蜞菊之萃取物的效果。萃取的方法是依照本發明的材料和方法所述。小鼠同時間地經口服給予載體(1% Tween 80)或不同的蟛蜞菊萃取物(50mg/kg鼠體重)為期7天；之後為期九天的DSS的治療。第2A圖係顯示相對體重的改變。第2B圖係顯示結腸之長度。第2C圖係顯示疾病活性的指標。數據以mean±SD(n=5-6)表示。WCHF：經熱水新鮮蟛蜞菊萃取物；WCHD：經熱水乾燥蟛蜞菊萃取物；WC50和WC100：100%(WC100)和50%(WC50)的乙醇新鮮蟛蜞菊萃取物。*P <0.05,**P <0.005,***P <0.001，有顯著的不同與DSS組相比較。

第3A~D圖係顯示經熱水新鮮蟛蜞菊萃取物和經熱水乾燥蟛蜞菊萃取物之高效液相色譜法的特性以及候選的指標化學劑。WCHF,WCDF和單一純化學劑被偵測到在不同的波長下(藍色=254nm，紅色=280nm，綠色=300nm，粉紅色=350nm)。箭頭指示在WCHF的特性中所顯示之特定的高峰，其高峰減低或是並未發現在WCHD的特性中。

第4圖係顯示試驗鼠的重要器官在WCHF的影響下其組織之亞毒性研究。

第5圖係顯示不同種的蟛蜞菊之熱水萃取物對於具有DSS導入急性結腸炎的鼠，喪失其體重的效果。(A)鼠之體重在DSS治療前。給予鼠口服熱水萃取物之A：WC、B：WT、C：WB、D：WP和E：WPR(50mg/kg)、磺胺塞拉金(sulfasalazine,50mg/kg，正對照組)或載體(無菌水、對照組和DSS組)。(B)鼠之體重在DSS治療後。將含有2% DSS的飲水餵於鼠，為期七天。同時給予磺胺塞拉金和不同種的蟛蜞菊之熱水萃取物。WC=蟛蜞菊、WT=南美蟛蜞菊、WB=雙花蟛蜞菊、WP=天蓬草舅、WPR=大天蓬草舅。數據以mean±S.E.M(n=14)。*P <0.05，**P <0.01，***P <0.001表示。

第6圖係顯示不同種的蟛蜞菊之熱水萃取物對於在DSS導入結腸炎的小鼠之疾病活性指標的影響。將含有2% DSS的飲水餵於小鼠和接受口服的載體(無菌水、對照組和DSS組)，磺胺塞拉金(50mg/kg，正對照組)或熱水萃取物A：WC、B：WT、C：WB、D：WP和E：WPR(50mg/kg)。數據以mean±S.E.M(n=14)。*P <0.05，**P <0.01表示。

第7圖係顯示不同種的蟛蜞菊之熱水萃取物對於具有DSS導入急性結腸炎的鼠之病理組織和組織學評分。將含有2% DSS的飲水餵於小鼠和接受口服的載體(無菌水、對照組和DSS組)，磺胺塞拉金(50mg/kg，正對照組)或熱水萃取物A：WC、B：WT、C：WB、D：WP和E：WPR(50mg/kg)。H&E染色之中段結腸切片放大於40倍(A)和100倍(B)。(C)組織學評分。數據以mean±S.E.M(n=14)。^＊ P <0.05，^＊＊ P <0.01，^＊＊＊ P <0.001表示。

參考文獻

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Claims

一種預防或治療腸道發炎疾病之蟛蜞菊(Wedelia chinensis )萃取物，其具有如第3A圖所示之高效液相層析圖譜，係由一新鮮的蟛蜞菊以水煎煮而得；其中，該高效液相層析圖譜係經C18-AR-II管柱高效液相色譜法以1ml/min流速進行，梯度流析之流動相為甲醇與溶解於去離子水的0.05%三氟乙酸，其中在0-30分鐘為15%-100%甲醇，以及30-40分鐘為100%甲醇；檢測波長為254nm、280nm、300nm和350nm。
如申請專利範圍第1項所述之蟛蜞菊萃取物，其中該蟛蜞菊萃取物係由新鮮的蟛蜞菊以水煎煮1小時而得。
如申請專利範圍第1項所述之蟛蜞菊萃取物，其中該蟛蜞菊萃取物係由新鮮的蟛蜞菊以水煎煮至水量剩餘原來的四分之一而得。
一種用於預防或治療腸道發炎疾病之醫藥組成物，包括一有效劑量之如申請專利範圍第1項所述之蟛蜞菊萃取物，以及一藥學上可接受之載體。
如申請專利範圍第4項所述之醫藥組成物，其中該腸道發炎疾病係為一結腸炎。
一種將如申請專利範圍第1項所述之蟛蜞菊萃取物用於製備預防或治療腸道發炎疾病之藥物的用途。
如申請專利範圍第6項所述之用途，其中該蟛蜞菊萃取物具有抗發炎功效以達到預防或治療腸道發炎疾病之效果。