TWI665197B - 具有β２受體激動及Ｍ３受體拮抗活性的苯並環衍生物及其在醫藥上的用途 - Google Patents

具有β２受體激動及Ｍ３受體拮抗活性的苯並環衍生物及其在醫藥上的用途 Download PDF

Info

Publication number
TWI665197B
TWI665197B TW105123024A TW105123024A TWI665197B TW I665197 B TWI665197 B TW I665197B TW 105123024 A TW105123024 A TW 105123024A TW 105123024 A TW105123024 A TW 105123024A TW I665197 B TWI665197 B TW I665197B
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
alkyl
hydroxy
methyl
ethyl
cyano
Prior art date
Application number
TW105123024A
Other languages
English (en)
Other versions
TW201708211A (zh
Inventor
魏用剛
邱關鵬
黃清平
雷柏林
鄭蘇欣
Original Assignee
大陸商四川海思科製藥有限公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 大陸商四川海思科製藥有限公司 filed Critical 大陸商四川海思科製藥有限公司
Publication of TW201708211A publication Critical patent/TW201708211A/zh
Application granted granted Critical
Publication of TWI665197B publication Critical patent/TWI665197B/zh

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D409/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D409/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing three or more hetero rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/438—The ring being spiro-condensed with carbocyclic or heterocyclic ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4427—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/4439—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems containing a five-membered ring with nitrogen as a ring hetero atom, e.g. omeprazole
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A61K31/472—Non-condensed isoquinolines, e.g. papaverine
    • A61K31/4725—Non-condensed isoquinolines, e.g. papaverine containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A61K31/5375—1,4-Oxazines, e.g. morpholine
    • A61K31/538—1,4-Oxazines, e.g. morpholine ortho- or peri-condensed with carbocyclic ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/08—Bronchodilators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D221/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one nitrogen atom as the only ring hetero atom, not provided for by groups C07D211/00 - C07D219/00
    • C07D221/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one nitrogen atom as the only ring hetero atom, not provided for by groups C07D211/00 - C07D219/00 condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D221/20—Spiro-condensed ring systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D409/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D409/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D409/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D413/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D413/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing three or more hetero rings

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Abstract

一種通式(I)所示的化合物或其立體異構物、水合物、代謝產物、溶劑化物、藥學上可接受的鹽、共晶或前藥，以及製備方法和在製備用於治療氣道阻塞性疾病藥物中的應用，其中通式(I)化合物為
其中，各取代基的定義與說明書中一致。

Description

具有 β 2受體激動及M3受體拮抗活性的苯並環衍生物及其在醫藥上的用途
本發明關於一種苯並環衍生物及其製備方法和在醫藥上的應用，具體關於一種具有蕈毒鹼受體M3拮抗和β2-腎上腺素能受體激動雙重活性的新穎苯並環衍生物或其立體異構物、水合物、溶劑化物、代謝產物、藥學上可接受的鹽、共晶或前藥、其醫藥組合物以及其在醫藥上的應用。
支氣管擴張劑對於呼吸疾病例如慢性阻塞性肺疾病(COPD)及哮喘等的治療起重要作用。臨床中廣泛使用的支氣管擴張劑包括蕈毒鹼受體拮抗劑和β2-腎上腺素能激動劑。蕈毒鹼受體拮抗劑通過降低氣道平滑肌的迷走神經膽鹼能水平來發揮支氣管擴張的效力。目前所使用的吸入蕈毒鹼受體拮抗劑包括異丙托溴銨、氧托溴銨、格隆溴銨、噻托溴銨、阿地溴胺和蕪地溴胺。β2-腎上腺素能激動劑通過刺激氣道平滑肌的腎上腺素能受體而使支氣管擴張，逆轉支氣管收縮劑對各種介質如乙醯膽鹼的反應。目前所使用的β2-腎上腺素能激動劑包括沙丁胺醇、沙美特羅、阿福特羅、福美特羅、維蘭特羅和茚達特羅。這些藥物除了改善肺的功能，也可改善患者生活質量並減少病情惡化。
隨著更多的臨床研究發現，證明聯合使用蕈毒鹼受體拮抗劑和β2-腎上 腺素能激動劑比單獨使用其中一種治療劑更有效，目前臨床上將蕈毒鹼受體拮抗劑和β2-腎上腺素能激動劑製備成複方製劑，用於哮喘和中重度COPD的治療，這類複方製劑主要包括Anoro Ellipta(蕪地溴胺/維蘭特羅)、Ultibro Breezhaler(格隆溴銨/茚達特羅)和異丙托溴胺/沙丁胺醇等。雖然複方製劑比其中單一製劑具有更好的治療效果，但是在製劑製備上有更高的要求。
因此，人們希望開發同時具有蕈毒鹼受體拮抗和β2-腎上腺素能激動雙重作用的藥物，這種雙功能藥物具有兩種成分組合的藥學優點，同時具備單一的分子藥代動力學。這些化合物以單一治療劑的形式給藥，可以由兩種不同且可能共同起效的作用模式提供支氣管擴張作用。另外，具有蕈毒鹼受體拮抗和β2-腎上腺素能激動雙重作用(MABA)的化合物還可以與皮質類固醇(ICS)消炎劑藥物組合，形成兩種治療劑(MABA/ICS)而提供三重作用的治療效果(Expert Opin.Investig.Drugs(2014)23(4)：453-456)。
因此，有必要開發新穎的同時具有蕈毒鹼受體拮抗和β2-腎上腺素能激動的雙重活性藥物，以提供更有效的單一治療劑量或者複方製劑，為患者提供更多的臨床用藥選擇。
本發明提供一種通式(I)所示的化合物或其立體異構物、水合物、代謝產物、溶劑化物、藥學上可接受的鹽、共晶或前藥，
其中：R1選自、或；R1a或R1b各自獨立選自H、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-10碳環基、3至8員雜環基、C3-10碳環基-C1-4亞烷基或3至8員雜環基-C1-4亞烷基，所述烯基、炔基、亞烷基、碳環基或雜環基任選進一步被0至4個選自F、Cl、Br、I、CH2F、CHF2、CF3、OH、OCH2F、OCHF2、OCF3、NH2、羧基、氰基、硝基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、-O(=O)C1-4烷基、-(=O)C1-4烷基、-OC3-6環烷基或C1-4烷硫基的取代基所取代，所述雜環基含有1至3個選自N、O或S的雜原子，條件是R1a、R1b不同時為H；R1c選自H、羥基、氰基、NH2、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基或-C(=O)NH2，所述NH2、-C(=O)NH2或烷基任選進一步被0至2個選自F、Cl、Br、I、羥基、氰基或C1-4烷基的取代基所取代；環A和環C各自獨立選自C6-10碳環或5至10員雜環，所述碳環或雜環任選進一步被0至4個選自F、Cl、Br、I、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代，且所述雜環含有1至3個選自N、O或S的雜原子；M選自鍵、-CH2-、-CH2CH2-、-O-、-S-、-OCH2-、-SCH2-或-CH=CH-； R1d選自H、羥基、-CH2OH或C1-4烷基；R1e和R1f各自獨立選自F、Cl、Br、I、CF3、NH2、OH、羧基、氰基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4烷硫基、-NHC1-4烷基、-N(C1-4烷基)2、-S(=O)-C1-4烷基、-S(=O)2-C1-4烷基或-C(=O)O-C1-4烷基；R2選自C1-6亞烷基、C2-6亞烯基或C2-6亞炔基，所述亞烷基、亞烯基或亞炔基任選進一步被0至5個選自F、Cl、Br、I、OH、氰基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、苯基或苯基-C1-4亞烷基的取代基所取代；W1選自鍵、-O-、-C(=O)O-、-OC(=O)-、-S-、-S(=O)-、-S(=O)2-、-C(=O)NRw-、-NRwC(=O)-、-OC(=O)NRw-、-NRwC(=O)O-、-NRwC(=O)NRw-、-NRwS(=O)2-、-S(=O)2NRw-、-NRwS(=O)2NRw-或-NRw-；W2選自鍵或；D選自C6-10亞碳環基或5至10員亞雜環基，且所述亞雜環基含有1至3個選自N、O或S的雜原子，所述的亞碳環基或亞雜環基任選進一步被0至4個選自F、Cl、Br、I、OH、NH2、羧基、氰基、硝基、C1-4烷基、C2-4炔基、C1-4烷氧基、-OC3-6環烷基、C1-4烷硫基、-S(=O)-C1-4烷基、-S(=O)2-C1-4烷基、-C(=O)-C1-4烷基、-C(=O)O-C1-4烷基、-OC(=O)-C1-4烷基或-C(=O)NH2的取代基所取代，所述烷基、烷氧基、環烷基、炔基、NH2和-C(=O)NH2任選進一步被0至4個選自F、Cl、Br、I、CF3、C1-4烷基、C1-4烷氧基或-C(=O)-C1-4烷基的取代基所取代；W3選自鍵、-O-、-C(=O)O-、-OC(=O)-、-S-、-S(=O)-、-S(=O)2-、-C(=O)NRw-、-NRwC(=O)-、-OC(=O)NRw-、-NRwC(=O)O-、-NRwC(=O)NRw-、-NRwS(=O)2-、-S(=O)2NRw-、-NRwS(=O)2NRw-或-NRw-； Rw選自H或C1-4烷基；X、Y、Z各自獨立地選自-N-、-NRx1-、-CRx1Rx2-、-CRx1Rx2CRx3Rx4-、-CRx1=CRx2-、-S-、-O-和-C(O)-；Rx1、Rx2、Rx3或Rx4各自獨立地選自H或C1-4烷基；R3各自獨立選自F、Cl、Br、I、OH、NH2、羧基、氰基、硝基、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C1-4烷氧基、-OC3-6環烷基、C1-4烷硫基、-S(=O)-C1-4烷基、-S(=O)2-C1-4烷基、-C(=O)-C1-4烷基、-C(=O)O-C1-4烷基、-OC(=O)-C1-4烷基或-C(=O)NH2，所述烷基、烷氧基、環烷基、烯基、炔基、NH2和-C(=O)NH2任選進一步被0至4個選自F、Cl、Br、I、CF3、C1-4烷基、C1-4烷氧基或-C(=O)-C1-4烷基的取代基所取代；R4選自C1-6亞烷基，所述亞烷基任選進一步被0至5個選自R4a的取代基所取代；R4a選自F、Cl、Br、I、氰基、OH、C1-4烷基、C1-4烷氧基、苯基或苯基-C1-4亞烷基；選擇性的，兩個R4a可以與它們相連的原子一起形成一個3至6員碳環，所述碳環任選進一步被0至5個選自F、Cl、Br、I、氰基、OH、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代；R5、R6各自獨立的選自H或C1-4烷基；表示β-腎上腺素受體結合基團；通式(I)中「------」選自單鍵或雙鍵，a為0、1、2、3、4或5； b為0、1、2、3或4；c選自0、1、2、3或4；n為0或1；m為0、1、2、3、4、5或6；限制條件是當n為0時，m為1、2、3、4、5或6；p為0、1、2、3、4、5或6。較佳地，本發明提供一種通式(I)所示的化合物或其立體異構物、水合物、代謝產物、溶劑化物、藥學上可接受的鹽、共晶或前藥，其中：表示β-腎上腺素受體結合基團；B較佳為、或，R10、R11、R12、R13、R14、R15、R16、R17或R18各自獨立的選自H、F、Cl、Br、I、CF3、OH、-CH2OH、氰基、羧基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、-C(=O)C1-4烷基、-C(=O)OC1-4烷基、-NHC(=O)H、-NHS(=O)2-C1-4烷基、-NHS(=O)2-NH2或-NHS(=O)2-NHC1-4烷基，Q選自-CRq1=CRq2-、-CRq1Rq2CRq3Rq4-、-O-、-S-、-OCRq1Rq2-、-CRq1Rq2O-、-SCRq1Rq2-、-CRq1Rq2S-，所述Rq1、Rq2、Rq3或Rq4各自獨立的選自選自H、F、Cl、Br、I或C1-4烷基；B更佳為、、、、 、或，其中Q選自-CH=CH-、-CH2CH2-、-O-、-S-、-CH2O-、-OCH2-、-C(CH3)2O-或-OC(CH3)2-；B進一步較佳為、、、、
較佳地，本發明的提供一種通式(I)所示的化合物或其立體異構物、水合物、代謝產物、溶劑化物、藥學上可接受的鹽、共晶或前藥，其中：R1選自、或；R1a或R1b各自獨立選自H、C2-4烯基、C2-4炔基、C3-7碳環基、3至6員雜環基、C3-7碳環基-C1-4亞烷基或3至6員雜環基-C1-4亞烷基，較佳為乙烯基、乙炔基、丙炔基、苯基、環丙烷基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基、苯甲基、噻吩基、呋喃基或吡啶基，所述烯基、炔基、亞烷基、碳環基、雜環基、乙烯基、乙炔基、丙炔基、苯基、環丙烷基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基、苯甲基、噻吩基、呋喃基或吡啶基任選進一步被0 至4個選自F、Cl、Br、I、CF3、OH、NH2、羧基、氰基、硝基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、-O(=O)C1-4烷基、-(=O)C1-4烷基、-OC3-6環烷基或C1-4烷硫基的取代基所取代，所述雜環基含有1至3個選自N、O或S的雜原子，條件是R1a、R1b不同時為H；R1c選自H、羥基、氰基、NH2、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4烷硫基或-C(=O)NH2，所述NH2、-C(=O)NH2或烷基任選進一步被0至2個選自F、Cl、Br、I、羥基、氰基或C1-4烷基的取代基所取代；環A和環C各自獨立選自選自噻吩環、呋喃環、吡啶環或苯環，較佳為苯環，所述噻吩環、呋喃環、吡啶環或苯環任選進一步被0至4個選自F、Cl、Br、I、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代，進一步較佳為被0至4個選自F、Cl、Br、I、甲基、乙基、甲氧基或乙氧基的取代基所取代；M選自鍵、-CH2-、-CH2CH2-、-O-、-S-、-OCH2-、-SCH2-或-CH=CH-，較佳為鍵、-O-或-S-；R1d選自H、羥基、-CH2OH或C1-4烷基，較佳為H、羥基、-CH2OH、甲基、乙基或丙基；R1e和R1f各自獨立選自F、Cl、Br、I、CF3、NH2、OH、氰基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4烷硫基、-NHC1-4烷基或-N(C1-4烷基)2；R2選自C1-6亞烷基、C2-6亞烯基或C2-6亞炔基，較佳為C1-6亞烷基，所述亞烷基、亞烯基或亞炔基任選進一步被0至5個選自F、Cl、Br、I、OH、氰基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、苯基或苯基-C1-4亞烷基的取代基所取代；W1選自鍵、-O-、-C(=O)O-、-OC(=O)-、-S-、-S(=O)-、-S(=O)2-、-C(=O)NRw-、-NRwC(=O)-、-OC(=O)NRw-、-NRwC(=O)O-、 -NRwC(=O)NRw-、-NRwS(=O)2-、-S(=O)2NRw-、-NRwS(=O)2NRw-或-NRw-，較佳為鍵、-O-、-C(=O)NRw-、-NRwC(=O)-、-OC(=O)NRw-或-NRwC(=O)O-；W2選自鍵或；D選自亞苯基，所述的亞苯基任選進一步被0至4個選自F、Cl、Br、I、OH、NH2、羧基、氰基、硝基、C1-4烷基、C2-4炔基、C1-4烷氧基、-OC3-6環烷基、C1-4烷硫基、-S(=O)-C1-4烷基、-S(=O)2-C1-4烷基、-C(=O)-C1-4烷基或-C(=O)O-C1-4烷基的取代基所取代，所述烷基、炔基、烷氧基、環烷基和NH2任選進一步被0至4個選自F、Cl、Br、I、CF3、C1-4烷基、C1-4烷氧基或-C(=O)-C1-4烷基的取代基所取代；W3選自鍵、-O-、-C(=O)O-、-OC(=O)-、-S-、-S(=O)-、-S(=O)2-、-C(=O)NRw-、-NRwC(=O)-、-OC(=O)NRw-、-NRwC(=O)O-、-NRwC(=O)NRw-、-NRwS(=O)2-、-S(=O)2NRw-、-NRwS(=O)2NRw-或-NRw-，較佳為鍵、-O-、-C(=O)NRw-、-NRwC(=O)-、-OC(=O)NRw-或-NRwC(=O)O-；Rw選自H或C1-4烷基；X、Y、Z各自獨立地選自-N-、-NRx1-、-CRx1Rx2-、-CRx1Rx2CRx3Rx4-、-CRx1=CRx2-、-S-、-O-和-C(O)-；Rx1、Rx2、Rx3或Rx4各自獨立地選自H或C1-4烷基；R3各自獨立選自F、Cl、Br、I、OH、NH2、羧基、氰基、硝基、C1-4烷基、C2-4炔基、C1-4烷氧基、-OC3-6環烷基、C1-4烷硫基、-S(=O)-C1-4烷基、-S(=O)2-C1-4烷基、-C(=O)-C1-4烷基或-C(=O)O-C1-4烷基，所述烷基、炔基、烷氧基、環烷基和NH2任選進一步被0至4個選自F、Cl、Br、I、CF3、C1-4烷基、C1-4烷氧基或-C(=O)-C1-4烷基的取代基所取代； R4選自C1-6亞烷基，所述亞烷基任選進一步被0至5個選自R4a的取代基所取代；R4a選自F、Cl、Br、I、氰基、OH、C1-4烷基、C1-4烷氧基、苯基或苯基-C1-4亞烷基；選擇性的，兩個R4a可以與它們相連的原子一起形成一個3至6員碳環，所述碳環任選進一步被0至5個選自F、Cl、Br、I、氰基、OH、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代；R5、R6各自獨立的選自H或C1-4烷基；B選自、、、、、 Q選自-CH=CH-、-CH2CH2-、-O-、-S-、-CH2O-、-OCH2-、-C(CH3)2O-或-OC(CH3)2-；通式(I)中「------」選自單鍵或雙鍵；a為0、1、2、3、4或5；b為0、1、2、3或4；c為0、1、2、3或4；n為0或1；m為0、1、2、3、4、5或6；限制條件是當n為0時，m為1、2、3、4、5或6； p為0、1、2、3、4、5或6。
較佳地，本發明的提供一種通式(I)所示的化合物或其立體異構物、水合物、代謝產物、溶劑化物、藥學上可接受的鹽、共晶或前藥，其中：R1選自、或；R1a或R1b各自獨立選自H、乙烯基、乙炔基、丙炔基、苯基、環丙烷基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基、苯甲基、噻吩基、呋喃基或吡啶基，較佳為乙烯基、乙炔基、苯基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基、苯甲基或噻吩基，所述的乙烯基、乙炔基、丙炔基、苯基、環丙烷基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基、苯甲基、噻吩基、呋喃基或吡啶基任選進一步被0至4個選自F、Cl、Br、I、CF3、OH、NH2、羧基、氰基、硝基、C1-4烷基、C1-4烷氧基或-O(=O)C1-4烷基的取代基所取代，條件是R1a、R1b不同時為H；R1c選自H、羥基、NH2、甲基、乙基、氰基、甲胺基、二甲基胺基、甲氧基、乙氧基、-CH2OH或-C(=O)NH2，較佳為H、羥基、NH2、甲基、乙基、甲氧基或-CH2OH；M選自鍵、-CH2-、-CH2CH2-、-O-、-S-、-OCH2-、-SCH2-或-CH=CH-，較佳為鍵、-O-或-S-；R1d選自H、羥基、-CH2OH、甲基或乙基；R1e和R1f各自獨立選自F、Cl、Br、I、CF3、NH2、OH、氰基、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基、-NHCH3或-N(CH3)2； R2選自亞甲基、亞乙基、亞丙基、亞丁基或亞戊基，所述的亞甲基、亞乙基、亞丙基、亞丁基或亞戊基任選進一步被0至5個選自F、Cl、Br、I、氰基、OH、甲基、乙基、甲氧基或乙氧基的取代基所取代；W1選自鍵、-O-、-C(=O)NRw-、-NRwC(=O)-、-OC(=O)NRw-或-NRwC(=O)O-；W2選自鍵或；D選自或，所述的或任選進一步被0至4個選自F、Cl、Br、氰基、甲基、乙基、丙基、異丙基、乙炔基、CHF2、CF3、甲氧基、乙氧基、-OCHF2或-OCF3的取代基所取代；W3選自鍵、-O-、-C(=O)NRw-、-NRwC(=O)-、-OC(=O)NRw-或-NRwC(=O)O-；Rw選自H、甲基、乙基或丙基；X、Y、Z各自獨立地選自-NH-、-N-、-CH2-、-CH2CH2-、-CH-、-CH=CH-、-S-、-O-和-C(O)-；R3各自獨立選自F、Cl、Br、氰基、甲基、乙基、丙基、異丙基、乙炔基、CHF2、CF3、甲氧基、乙氧基、-OCHF2或-OCF3的取代基所取代；R4選自亞甲基、亞乙基、亞丙基、亞丁基、亞戊基或，所述的亞 甲基、亞乙基、亞丙基、亞丁基、亞戊基或任選進一步被0至5個選自F、Cl、Br、I、氰基、OH、甲基、乙基、甲氧基或乙氧基的取代基所取代；R5、R6各自獨立的選自H、甲基或乙基； B選自、、、、、 通式(I)中「------」選自單鍵或雙鍵；a為0或1；b為0、1或2；c為0、1或2；n為0或1；m為0、1、2、3、4或5；限制條件是當n為0時，m為1、2、3、4或5；p為0、1、2、3或4。
較佳地，本發明的提供一種通式(I)所示的化合物或其立體異構物、水合物、代謝產物、溶劑化物、藥學上可接受的鹽、共晶或前藥，其中：R1選自、、、、、、 R2選自亞甲基、亞乙基、亞丙基、-CH2CH(CH3)-、-CH(CH3)CH2-、亞丁基、-CH(CH3)CH2CH2-、-CH2CH(CH3)CH2-、-CH2CH(CH3)CH2-或亞戊基；W1選自鍵、-O-、-C(=O)NRw-、-NRwC(=O)-、-OC(=O)NRw-或-NRwC(=O)O-；W2選自鍵或；D選自、、、、或 W3選自鍵、-O-、-C(=O)NRw-、-NRwC(=O)-、-OC(=O)NRw-或-NRwC(=O)O-；Rw選自H、甲基、乙基或丙基；X、Y、Z各自獨立地選自-NH-、-N-、-CH2-、-CH2CH2-、-CH-、-CH=CH、-S-、-O-和-C(O)-；R3各自獨立選自F、Cl、Br、CHF2、CF3、氰基、甲基、乙基、乙炔基、甲氧基、乙氧基、-OCHF2或-OCF3； R4選自亞甲基、亞乙基、亞丙基、-CH2CH(CH3)-、-CH(CH3)CH2-、亞丁基、-CH(CH3)CH2CH2-、-CH2CH(CH3)CH2-、-CH2CH(CH3)CH2-、亞戊基或；R5、R6各自獨立的選自H、甲基或乙基，較佳為H；B選自、、、、、 通式(I)中「------」選自單鍵或雙鍵；c為0、1或2；n為0或1；m為0、1、2、3、4或5；限制條件是當n為0時，m為1、2、3、4或5；p為0、1、2、3或4。
較佳地，本發明通式(I)化合物選自，但不限於：
本發明還提供一種醫藥組合物，所述的醫藥組合物含有治療有效劑量的通式(I)任一項所述的化合物或其立體異構物、水合物、代謝產物、溶劑化物、藥學上可接受的鹽、共晶或前藥，以及藥學上可接受的載體、稀釋劑、佐劑、媒介物或賦形劑；所述的組合物還可進一步包括一種或多種其他治療劑；較佳地，其中所述其他治療劑選自PDE4抑制劑、蕈毒鹼受體拮抗劑、皮質類固醇和β-腎上腺素能受體激動劑中的一種或多種。
本發明還提供通式(I)所述的化合物或其立體異構物、水合物、代謝產 物、溶劑化物、藥學上可接受的鹽、共晶、前藥或前面所述的醫藥組合物，在製備用於治療氣道阻塞性疾病的藥物中的應用。較佳地係在製備用於治療哮喘、慢性阻塞性肺疾病或支氣管炎的藥物中的應用。
本發明還提供一種治療氣道阻塞性疾病的方法，其中，所述方法包括給藥治療有效量的前面所述的通式(I)的化合物或其立體異構物、水合物、代謝產物、溶劑化物、藥學上可接受的鹽、共晶或前藥，或前面所述的醫藥組合物。
本發明還提供一種治療哮喘、慢性阻塞性肺疾病或支氣管炎的方法，其中，所述方法包括給藥治療有效量的通式(I)的所述的化合物或其立體異構物、水合物、代謝產物、溶劑化物、藥學上可接受的鹽、共晶或前藥，或前面所述的醫藥組合物。
本發明提供一種製備通式(I)所示的化合物或其立體異構物的中間體，該中間體選自如下通式(II)所示的化合物或其立體異構物：
其中：R1選自、或；R1a或R1b各自獨立選自H、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-10碳環基、3至8員雜環基、C3-10碳環基-C1-4亞烷基或3至8員雜環基-C1-4亞烷基，所述烯基、炔基、亞烷基、碳環基或雜環基任選進一步被0至4個選自F、Cl、 Br、I、CH2F、CHF2、CF3、OH、OCH2F、OCHF2、OCF3、NH2、羧基、氰基、硝基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、-O(=O)C1-4烷基、-(=O)C1-4烷基、-OC3-6環烷基或C1-4烷硫基的取代基所取代，所述雜環基含有1至3個選自N、O或S的雜原子，條件是R1a、R1b不同時為H；R1c選自H、羥基、氰基、NH2、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基或-C(=O)NH2，所述NH2、-C(=O)NH2或烷基任選進一步被0至2個選自F、Cl、Br、I、羥基、氰基或C1-4烷基的取代基所取代；M選自鍵、-CH2-、-CH2CH2-、-O-、-S-、-OCH2-、-SCH2-或-CH=CH-；R1d選自H、羥基、-CH2OH或C1-4烷基；環A和環C各自獨立選自C6-10碳環或5至10員雜環，所述碳環或雜環任選進一步被0至4個選自F、Cl、Br、I、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代，且所述雜環含有1至3個選自N、O或S的雜原子；R1e和R1f各自獨立選自F、Cl、Br、I、CF3、NH2、OH、羧基、氰基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4烷硫基、-NHC1-4烷基、-N(C1-4烷基)2、-S(=O)-C1-4烷基、-S(=O)2-C1-4烷基或-C(=O)O-C1-4烷基；R2選自C1-6亞烷基、C2-6亞烯基或C2-6亞炔基，所述亞烷基、亞烯基或亞炔基任選進一步被0至5個選自F、Cl、Br、I、OH、氰基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、苯基或苯基-C1-4亞烷基的取代基所取代；W1選自鍵、-O-、-C(=O)O-、-OC(=O)-、-S-、-S(=O)-、-S(=O)2-、-C(=O)NRw-、-NRwC(=O)-、-OC(=O)NRw-、-NRwC(=O)O-、-NRwC(=O)NRw、-NRwS(=O)2-、-S(=O)2NRw-、-NRwS(=O)2NRw或-NRw-；W2選自鍵或； D選自C6-10亞碳環基或5至10員亞雜環基，且所述亞雜環基含有1至3個選自N、O或S的雜原子，所述的亞碳環基或亞雜環基任選進一步被0至4個選自F、Cl、Br、I、OH、NH2、羧基、氰基、硝基、C1-4烷基、C2-4炔基、C1-4烷氧基、-OC3-6環烷基、C1-4烷硫基、-S(=O)-C1-4烷基、-S(=O)2-C1-4烷基、-C(=O)-C1-4烷基、-C(=O)O-C1-4烷基、-OC(=O)-C1-4烷基或-C(=O)NH2的取代基所取代，所述烷基、烷氧基、環烷基、炔基、NH2和-C(=O)NH2任選進一步被0至4個選自F、Cl、Br、I、CF3、C1-4烷基、C1-4烷氧基或-C(=O)-C1-4烷基的取代基所取代；W3選自鍵、-O-、-C(=O)O-、-OC(=O)-、-S-、-S(=O)-、-S(=O)2-、-C(=O)NRw-、-NRwC(=O)-、-OC(=O)NRw-、-NRwC(=O)O-、-NRwC(=O)NRw、-NRwS(=O)2-、-S(=O)2NRw-、-NRwS(=O)2NRw或-NRw-；Rw選自H或C1-4烷基；X、Y、Z各自獨立地選自-N-、-NRx1-、-CRx1Rx2-、-CRx1Rx2CRx3Rx4-、-CRx1=CRx2、-S-、-O-和-C(O)-；Rx1、Rx2、Rx3或Rx4各自獨立地選自H或C1-4烷基；R3各自獨立選自F、Cl、Br、I、OH、NH2、羧基、氰基、硝基、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C1-4烷氧基、-OC3-6環烷基、C1-4烷硫基、-S(=O)-C1-4烷基、-S(=O)2-C1-4烷基、-C(=O)-C1-4烷基、-C(=O)O-C1-4烷基、-OC(=O)-C1-4烷基或-C(=O)NH2，所述烷基、烷氧基、環烷基、烯基、炔基、NH2和-C(=O)NH2任選進一步被0至4個選自F、Cl、Br、I、CF3、C1-4烷基、C1-4烷氧基或-C(=O)-C1-4烷基的取代基所取代； E選自甲醯基、或；R4選自C1-6亞烷基，所述亞烷基任選進一步被0至5個選自R4a的取代基所取代；R4a選自F、Cl、Br、I、氰基、OH、C1-4烷基、C1-4烷氧基、苯基或苯基-C1-4亞烷基；選擇性的，兩個R4a可以與它們相連的原子一起形成一個3至6員碳環，所述碳環任選進一步被0至5個選自F、Cl、Br、I、氰基、OH、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代；R5、R6各自獨立的選自H或C1-4烷基；PG選自羥基保護基；表示羥基被TBS基團保護的β-腎上腺素受體結合基團；通式(II)中「------」選自單鍵或雙鍵；a為0、1、2、3、4或5；b為0、1、2、3或4；c選自0、1、2、3或4；n為0或1；m為0、1、2、3、4、5或6；限制條件是當n為0時，m為1、2、3、4、5或6；p為0、1、2、3、4、5或6。
較佳地，本發明提供一種製備通式(I)所示化合物或其立體異構物的中 間體，該中間體選自如下通式(II)所示的化合物或其立體異構物，其中：R1選自、、、、、、、 R2選自亞甲基、亞乙基、亞丙基、-CH2CH(CH3)-、-CH(CH3)CH2-、亞丁基、-CH(CH3)CH2CH2-、-CH2CH(CH3)CH2-、-CH2CH(CH3)CH2-或亞戊基；W1選自鍵、-O-、-C(=O)NRw-、-NRwC(=O)-、-OC(=O)NRw-或-NRwC(=O)O-；W2選自鍵或； D選自、、、、或 W3選自鍵、-O-、-C(=O)NRw-、-NRwC(=O)-、-OC(=O)NRw-或-NRwC(=O)O-；Rw選自H、甲基、乙基或丙基；X、Y、Z各自獨立地選自-NH-、-N-、-CH2-、-CH2CH2-、-CH-、-CH=CH-、-S-、-O-和-C(O)-；R3選自F、Cl、Br、CHF2、CF3、氰基、甲基、乙基、乙炔基、甲氧基、 乙氧基、-OCHF2或-OCF3；E選自甲醯基、或；R4選自亞甲基、亞乙基、亞丙基、-CH2CH(CH3)-、-CH(CH3)CH2-、亞丁基、-CH(CH3)CH2CH2-、-CH2CH(CH3)CH2-、-CH2CH(CH3)CH2-、或亞戊基；R5、R6各自獨立的選自H、甲基或乙基；B選自、、、、、 PG選自TBS；通式(II)中「------」選自單鍵或雙鍵；a為0、1、2、3、4或5；b為0、1、2、3或4；c選自0、1、2、3或4；n為0或1；m為0、1、2、3、4、5或6；限制條件是當n為0時，m為1、2、3、4、5或6； p為0、1、2、3、4、5或6。
較佳地，本發明通式(II)所示的化合物選自，但不限於：
本發明提供的具體實施例化合物的二三氟乙酸鹽，可將其溶解在極性有機溶劑(如甲醇與二氯甲烷的混合溶劑(v/v=1/90)中，通過加入鹼性試劑(如飽和碳酸氫鈉溶液或飽和碳酸鈉溶液等)調節pH至鹼性，攪拌後用有機溶劑(如二氯甲烷、乙酸乙酯等)萃取，將有機相減壓濃縮後可得到對應化合物的游離鹼形式。
除非有相反的陳述，在說明書和申請專利範圍中使用的術語具有下述含義。
本發明所述基團和化合物中所提及的碳、氫、氧、硫、氮或鹵素均包括它們的同位素，意即本發明所述基團和化合物中所提及的碳、氫、氧、硫、氮或鹵素任選進一步被一個或多個它們對應的同位素所替代，其中碳的同位素包括12C、13C和14C，氫的同位素包括氕(H)、氘(D，又稱為重氫)、氚(T，又稱為超重氫)，氧的同位素包括16O、17O和18O，硫的同位素包括32S、33S、34S和36S，氮的同位素包括14N和15N，氟的同位素19F，氯的同位素包括35Cl和37Cl，溴的同位素包括79Br和81Br。
「烷基」是指直鏈和支鏈的一價飽和烴基，主鏈包括1至10個碳原子，較佳為1至8個碳原子，進一步較佳為1至6個碳原子，更佳為1至4個碳原子的直鏈與支鏈基團，最佳為1至2個碳原子，烷基的實例包括但不限於甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、第二丁基、第三丁基、正戊基、2-戊基、3-戊基、2-甲基-2-丁基、3-甲基-2-丁基、正己基、正庚基、正辛基、正壬基和正癸基等；所述的烷基可以任選進一步被0至5個選自F、Cl、Br、I、=O、-CH2F、-CHF2、-CF3、-OCH2F、-OCHF2、-OCF3、羥基、-SR19、硝基、氰基、異氰基、烷基、羥基烷基、烷氧基、碳環基、雜環基、C2-8烯基、C2-8炔基、-(CH2)k-C(=O)-R19、-(CH2)k-C(=O)-O-R19、-(CH2)k-C(=O)-NR19R19a、-(CH2)k-S(=O)j-R19、-O-C(=O)-O-R19或-NR19R19a 的取代基所取代，其中R19和R19a各自獨立選自H、羥基、氨基、羧基、C1-8烷基、C1-8烷氧基、C2-8烯基、C2-8炔基、3至10員碳環基、4至10員雜環基、3至10員碳環基氧基或4至10員雜環基氧基，k選自0、1、2、3、4或5，j選自0、1或2。本文中出現的烷基、k、j或R19和R19a，其定義如上所述。
「亞烷基」是指直鏈和支鏈的二價飽和烴基，包括-(CH2)v-(v為1至10的整數)，亞烷基實施例包括但不限於亞甲基、亞乙基、亞丙基和亞丁基等；所述的亞烷基可以任選進一步被0至5個選自F、Cl、Br、I、=O、-CH2F、-CHF2、-CF3、-OCH2F、-OCHF2、-OCF3、羥基、-SR19、硝基、氰基、異氰基、烷基、羥基烷基、烷氧基、碳環基、雜環基、C2-8烯基、C2-8炔基、-(CH2)k-C(=O)-R19、-(CH2)k-C(=O)-O-R19、-(CH2)k-C(=O)-NR19R19a、-(CH2)k-S(=O)j-R19、-O-C(=O)-O-R19或-NR19R19a的取代基所取代，當亞烷基中的取代基數量大於等於2個時，取代基可以稠合在一起形成環狀結構。本文中出現的亞烷基，其定義如上所述。
「烷氧基」是指O-烷基的一價基團，其中，烷基如本文所定義，烷氧基實施例包括但不限於甲氧基、乙氧基、1-丙氧基、2-丙氧基、1-丁氧基、2-甲基-1-丙氧基、2-丁氧基、2-甲基-2-丙氧基、1-戊氧基、2-戊氧基、3-戊氧基、2-甲基-2-丁氧基、3-甲基-2-丁氧基、3-甲基-1-丁氧基和2-甲基-1-丁氧基等。
「烯基」是指直鏈和支鏈的一價不飽和烴基，其具有至少1個，通常有1、2或3個碳碳雙鍵，主鏈包括2至10個碳原子，進一步較佳為2至6個碳原子，更佳為在主鏈上有2至4個碳原子，烯基實施例包括但不限於乙烯基、烯丙基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、3-丁烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、3-戊烯基、4-戊烯基、1-甲基-1-丁烯基、2-甲基-1-丁烯基、2-甲基-3-丁烯基、1-己烯基、2-己烯基、3-己烯基、4-己烯基、5-己烯基、1-甲基-1-戊烯基、2-甲基-1-戊烯基、1-庚烯基、2-庚烯基、3-庚烯基、4-庚烯基、1-辛烯基、3-辛烯基、1-壬烯基、3-壬烯基、1-癸烯基、4-癸烯基、 1,3-丁二烯、1,3-戊二烯、1,4-戊二烯和1,4-己二烯等；所述的烯基可以任選進一步被0至5個選自F、Cl、Br、I、=O、-CH2F、-CHF2、-CF3、-OCH2F、-OCHF2、-OCF3、羥基、-SR19、硝基、氰基、異氰基、烷基、羥基烷基、烷氧基、碳環基、雜環基、C2-8烯基、C2-8炔基、-(CH2)k-C(=O)-R19、-(CH2)k-C(=O)-O-R19、-(CH2)k-C(=O)-NR19R19a、-(CH2)k-S(=O)j-R19、-O-C(=O)-O-R19或-NR19R19a的取代基所取代。本文中出現的烯基，其定義如上所述。
「亞烯基」是指二價烯基基團，其中烯基的定義如上所述。
「炔基」是指直鏈和支鏈的一價不飽和烴基，其具有至少1個，通常有1、2或3個碳碳三鍵，主鏈包括2至10個碳原子，進一步較佳為2至6個碳原子，更佳為在主鏈上有2至4個碳原子，炔基實施例包括但不限於乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、丁炔基、2-丁炔基、3-丁炔基、1-甲基-2-丙炔基、4-戊炔基、3-戊炔基、1-甲基-2-丁炔基、2-己炔基、3-己炔基、2-庚炔基、3-庚炔基、4-庚炔基、3-辛炔基、3-壬炔基和4-癸炔基等；所述的炔基可以任選進一步被0至5個選自F、Cl、Br、I、=O、-CH2F、-CHF2、-CF3、-OCH2F、-OCHF2、-OCF3、羥基、-SR19、硝基、氰基、異氰基、烷基、羥基烷基、烷氧基、碳環基、雜環基、C2-8烯基、C2-8炔基、-(CH2)k-C(=O)-R19、-(CH2)k-C(=O)-O-R19、-(CH2)k-C(=O)-NR19R19a、-(CH2)k-S(=O)j-R19、-O-C(=O)-O-R19或-NR19R19a的取代基所取代。本文中出現的炔基，其定義如上所述。
「亞炔基」是指二價炔基基團，其中炔基的定義如上所述。
「環烷基」是指一價飽和的碳環烴基，通常有3至10個碳原子，非限制性實施例包括環丙基、環丁基、環戊基、環己基或環庚基等。所述的環烷基可以任選進一步被0至5個選自F、Cl、Br、I、=O、-CH2F、-CHF2、-CF3、-OCH2F、-OCHF2、-OCF3、羥基、-SR19、硝基、氰基、異氰基、烷基、羥基烷基、烷氧基、碳環基、雜環基、C2-8烯基、C2-8炔基、-(CH2)k-C(=O)-R19、-(CH2)k-C(=O)-O-R19、-(CH2)k-C(=O)-NR19R19a、 -(CH2)k-S(=O)j-R19、-O-C(=O)-O-R19或-NR19R19a的取代基所取代。本文中出現的環烷基，其定義如上所述。
「亞環烷基」是指二價環烷基，其中環烷基的定義如上所述。
「碳環基」是指飽和或不飽和的芳香環或非芳香環，芳香環或非芳香環可以是3至10員的單環、4至12員雙環或10至15員三環體系，碳環基可以連接有橋環或螺環，非限制性實施例包括環丙基、環丁基、環戊基、1-環戊基-1-烯基、1-環戊基-2-烯基、1-環戊基-3-烯基、環己基、1-環己基-2-烯基、1-環己基-3-烯基、環己烯基、環己二烯基、環庚基、環辛基、環壬基、環癸基、環十一烷基、環十二烷基、苯基、萘基、、、、。所述的碳環基可以任選進一步被0至5個選自F、Cl、Br、I、=O、-CH2F、-CHF2、-CF3、-OCH2F、-OCHF2、-OCF3、羥基、-SR19、硝基、氰基、異氰基、烷基、羥基烷基、烷氧基、碳環基、雜環基、C2-8烯基、C2-8炔基、-(CH2)k-C(=O)-R19、-(CH2)k-C(=O)-O-R19、-(CH2)k-C(=O)-NR19R19a、-(CH2)k-S(=O)j-R19、-O-C(=O)-O-R19或-NR19R19a的取代基所取代。本文中出現的碳環基，其定義如上所述。
「雜環基」是指飽和或不飽和的芳香環或非芳香環，芳香環或非芳香環可以是3至10員的單環、4至12員雙環或10至15員三環體系，且包含1至4個選自N、O或S的雜原子，較佳為3至8員雜環基，雜環基的環中選擇性取代的N、S可被氧化成各種氧化態。雜環基可以連接在雜原子或碳原子上，雜環基可以連接有橋環或螺環，非限制性實施例包括環氧乙基、環氧丙基、氮雜環丙基、氧雜環丁基、氮雜環丁基、硫雜環丁基、1,3-二氧戊環基、1,4-二氧戊環基、1,3-二氧六環基、氮雜環庚基、氧雜環庚基、硫雜環庚基、氧氮雜基、二氮雜基、硫氮雜基、吡啶基、呱啶基、高呱啶基、呋喃基、噻吩基、吡喃基、N-烷基吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、噠嗪基、呱嗪基、高呱嗪基、咪唑基、呱啶基、呱叮基、嗎啉基、硫代嗎啉基、噻噁烷基、1,3-二噻基、二氫呋喃基、二氫吡喃基、二噻戊環基、四氫 呋喃基、四氫噻吩基、四氫吡喃基、四氫噻喃基、四氫吡咯基、四氫咪唑基、四氫噻唑基、四氫吡喃基、苯並咪唑基、苯並吡啶基、吡咯並吡啶基、苯並二氫呋喃基、2-吡咯啉基、3-吡咯啉基、二氫吲哚基、2H-吡喃基、4H-吡喃基、二氧雜環己基、1,3-二氧戊基、吡唑啉基、二噻烷基、二噻茂烷基、二氫噻吩基、吡唑烷基、咪唑啉基、咪唑烷基、1,2,3,4-四氫異喹啉基、3-氮雜雙環[3.1.0]己基、3-氮雜雙環[4.1.0]庚基、氮雜雙環[2.2.2]己基、3H-吲哚基喹嗪基、N-吡啶基尿素、1,1-二氧硫代嗎啉基、氮雜二環[3.2.1]辛烷基、氮雜二環[5.2.0]壬烷基、氧雜三環[5.3.1.1]十二烷基、氮雜金剛烷基和氧雜螺[3.3]庚烷基。所述的雜環基可以任選進一步被0至5個選自F、Cl、Br、I、=O、-CH2F、-CHF2、-CF3、-OCH2F、-OCHF2、-OCF3、羥基、-SR19、硝基、氰基、異氰基、烷基、羥基烷基、烷氧基、碳環基、雜環基、C2-8烯基、C2-8炔基、-(CH2)k-C(=O)-R19、-(CH2)k-C(=O)-O-R19、-(CH2)k-C(=O)-NR19R19a、-(CH2)k-S(=O)j-R19、-O-C(=O)-O-R19或-NR19R19a的取代基所取代。本文中出現的雜環基，其定義如上所述。
「β-腎上腺素受體結合基團」是指能夠與β-腎上腺素能受體結合的基團；諸如參見綜述文章“β-adrenergic receptors in Comprehensive Medicinal Chemistry，1990，B.E.Main，p187(Pergamon Press)”。上述基團也參見例如WO/2005092841、US/20050215542、WO/2005070872、WO/2006023460、WO/2006051373、WO/2006087315和WO/2006032627。非限制性實施例包括，R5、R6各自獨立的選自H或C1-4烷基，B選自、 ；其中Q選自-CH=CH-、-CH2CH2-、-O-、-S-、-CH2O-、-OCH2-、-C(CH3)2O-或-OC(CH3)2-。
「羥基保護基」是指用於羥基保護的基團，該基團適用於保護羥基，使羥基不進行化學反應，但是在分子的其它部分完成所需化學反應之後該基團容易除去。非限制性實施例包括但不限於三烷基矽基(如三甲基矽基、三乙基矽基、三異丙基矽基、第三丁基二甲基矽基或者第三丁基二苯基矽基等)、苄基、C1-6烷基醯基(如甲醯基、乙醯基、丙醯基等)或C6-10芳基醯基等。
「任選」或「任選地」是指隨後所描述的事件或環境可以但不必須發生，該說明包括該事件或環境發生或不發生的場合。如：「任選被F取代的烷基」指烷基可以但不必須被F取代，說明包括烷基被F取代的情形和烷基不被F取代的情形。
「醫藥組合物」表示一種或多種文本所述化合物或其生理學/藥學上可接受的鹽與其他組成成分的混合物，其中其它組成成分包含生理學/藥學上可接受的載體和賦形劑。
「載體」指的是不會對生物體產生明顯刺激且不會消除所給予化合物的生物活性和特性的載體或稀釋劑。
「賦形劑」指的是加入到醫藥組合物中以進一步依賴於化合物給藥的惰性物質。賦形劑的實例包括但不限於碳酸鈣、磷酸鈣、各種糖和不同類型的澱粉、纖維素衍生物(包括微晶纖維素)、明膠、植物油、聚乙二醇類、稀釋劑、成粒劑、潤滑劑、粘合劑、崩解劑等。
「前藥」是指可以在生理條件下或通過溶劑解轉化為具有生物活性的本發明化合物的化合物。本發明的前藥通過修飾本發明化合物中的功能基團來製備，該修飾可以通過例行的操作或在體內被除去，而得到母體化合 物。
「立體異構物」是指由分子中原子在空間上排列方式不同所產生的異構物，包括順反異構物、對映異構物和構象異構物。
「有效劑量」指引起組織、系統或受試者生理或醫學反應的化合物的量，此量是所尋求的，包括在受治療者身上施用時足以預防受治療的疾患或病症的一種或幾種症狀發生或使其減輕至某種程度的化合物的量。
「溶劑化物」指本發明化合物或其鹽，它們還包括以分子間非共價力結合的化學計量或非化學計量的溶劑。當溶劑為水時，則為水合物。
「IC50」指半數抑制濃度，指達到最大抑制效果一半時的濃度。
以下結合附圖及實施例詳細說明本發明的技術方案，但本發明的保護範圍包括但是不限於此。
化合物的結構是通過核磁共振(NMR)或(和)質譜(MS)來確定的。NMR位移(δ)以10-6(ppm)的單位給出。NMR的測定是用(Bruker Avance III 400和Bruker Avance 300)核磁共振光譜儀，測定溶劑為氘代二甲基亞碸(DMSO-d6)，氘代氯仿(CDCl3)，氘代甲醇(CD3OD)，內標為四甲基矽烷(TMS)。
MS的測定用(Agilent 6120B(ESI)和Agilent 6120B(APCI))。
HPLC的測定使用安捷倫1260DAD高壓液相層析儀(Zorbax SB-C18 100×4.6mm)。
薄層層析矽膠板使用煙臺黃海HSGF254或青島GF254矽膠板，薄層層析法(TLC)使用的矽膠板採用的規格是0.15mm~0.20mm，薄層層析分離純化產品採用的規格是0.4mm~0.5mm。
管柱層析一般使用煙臺黃海矽膠200~300目矽膠為載體。
本發明的己知的起始原料可以採用或按照本領域已知的方法來合成，或可購買於泰坦科技、安耐吉化學、上海德默、成都科龍化工、韶遠化學科技、百靈威科技等公司。
氮氣氛圍是指反應瓶連接一個約1L容積的氮氣氣球。
氫氣氛圍是指反應瓶連接一個約1L容積的氫氣氣球。
氫化反應通常抽真空，充入氫氣，反復操作3次。
若實施例中無特殊說明，反應在氮氣氛下進行。
若實施例中無特殊說明，溶液是指水溶液。
若實施例中無特殊說明，反應的溫度為室溫。
若實施例中無特殊說明，M為摩爾每升。
室溫為最適宜的反應溫度，為20℃~30℃。
TBS為第三丁基二甲基矽基。
Boc為第三丁基氧基羰基。
TFA為三氟乙酸。
中間體1：7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯(中間體1)
7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl 2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate
第一步：2-羥基-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-甲酸第三丁酯(1b)
tert-butyl 2-hydroxy-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate
將第三丁基-2-羰基-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-甲酸乙酯(7g，29.3mmol)的甲醇(100mL)冷卻到0℃，然後加入硼氫化鈉(1.1g，29.3mmol)，加完後在室溫反應2小時。加水(100mL)，用二氯甲烷(100mL×3)萃取，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後得到題述化合物2-羥基-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-甲酸第三丁酯(1b)，白色固體(7g，產率99.2%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 4.39-4.23(m,1H),3.38-3.22(m,4H),2.32-2.22(m,2H),2.04(d,1H),1.74-1.62(m,2H),1.50(m,4H),1.45-1.41(m,9H)。
LCMS m/z=264.1[M+23]+。
第二步：2-[2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙醯基]氧基-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸第三丁酯(1c)
tert-butyl 2-[2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetyl]oxy-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate
將2-羥基-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-甲酸第三丁酯(1c)(0.482g，2mmol)溶於甲苯(10mL)中，加入氫化鈉(0.024g，1mmol)，攪拌5分鐘，加入2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯(0.508g，2mmol)，升溫至155℃反應1小時。加水淬滅反應，用乙酸乙酯(20mL×2)萃取，飽和氯化鈉水溶液(20mL×1)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，殘留物用矽膠管柱層析(洗脫劑為乙酸乙酯/石油醚(v：v)=1/100~1/20)純化，得到題述化合物2-[2-羥基 -2,2-雙(2-噻吩基)乙醯基]氧基-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸第三丁酯(1c)，淡黃色固體(0.23g，產率25%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.29(dd,2H),7.17(dd,2H),6.98(dd,2H),5.25-5.05(m,1H),4.66(s,1H),3.32(dd,2H),3.29-3.23(m,2H),2.41-2.30(m,2H),1.88(dd,2H),1.54-1.50(m,2H),1.47(d,2H),1.44(s,9H)。
LCMS m/z=486.3[M+23]+。
第三步：7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯(中間體1)
7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl 2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate
將2-[2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙醯基]氧基-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸第三丁酯(1c)(0.5g，1.08mmol)溶於1,4-二氧六環(10mL)中，通入過量的鹽酸氣體，室溫反應2小時。加入水(20mL)，在0℃用固體碳酸鉀調節pH值為8-9，用乙酸乙酯(20mL×2)萃取，飽和氯化鈉水溶液(20mL×1)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到題述化合物7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯(中間體1)，白色固體(0.24g，產率61%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.30(dd,2H),7.16(dd,2H),6.98(dd,2H),5.15(t,1H),4.61(s,1H),3.08(s,2H),3.01(s,2H),2.45-2.33(m,2H),1.99-1.87(m,4H),1.87-1.79(m,2H)。
LCMS m/z=364.0[M+1]+。
中間體2：7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙酸酯(中 間體2)
7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl 2-cyclopentyl-2-hydroxy-2-phenyl-acetate
第一步：2-氧代-2-苯基-乙酸(2b)
2-oxo-2-phenyl-acetic acid
將2-氧代-2-苯基-乙酸甲酯(2a)(10g,60.92mmol)溶于水(50mL)中，加入氫氧化鈉(4.9g,121.8mmol)，室溫反應2小時。反應液用二氯甲烷(50mL×2)萃取，水相用4M鹽酸水溶液調節pH至3，用二氯甲烷(100mL×3)萃取，合併有機相，有機相減壓濃縮，得到題述化合物2-氧代-2-苯基-乙酸(2b)，白色固體(9g，產率98.41%)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 7.95-7.88(m,2H),7.78-7.71(m,1H),7.64-7.55(m,2H)。
LCMS m/z=149.1[M-1]。
第二步：2-(2-氧代-2-苯基-乙醯基)氧基-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸第三丁酯(2c)
tert-butyl 2-(2-oxo-2-phenyl-acetyl)oxy-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate
將2-氧代-2-苯基-乙酸(2b)(4.0g,27mmol)溶於二氯甲烷(100mL) 中，加入草醯氯(6.8g,53mmol)，滴加一滴N,N-二甲基甲醯胺，室溫反應1小時。反應液減壓濃縮為反應液1。將2-羥基-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸第三丁酯(1b)(4.8g,20mmol)溶於二氯甲烷(100mL)中，加入三乙胺(11g,110mmol)，冰浴下加入反應液1，室溫反應1小時。反應液加入二氯甲烷(50mL)和水(50mL)，萃取。水相用二氯甲烷(50mL×1)萃取，合併有機相。有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。殘留物用矽膠柱層析分離純化(乙酸乙酯：石油醚(v/v)=0：1~1：9)，得到題述化合物2-(2-氧代-2-苯基-乙醯基)氧基-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸第三丁酯(2c)，黃色油狀(6.0g，產率60%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 8.00(d,2H),7.70-7.62(m,1H),7.52(t,2H),5.35-5.28(m,1H),3.42-3.34(m,2H),3.34-3.26(m,2H),2.54-2.41(m,2H),2.07-1.98(m,2H),1.64-1.53(m,4H),1.50-1.37(m,9H)。
LCMS m/z=396.2[M+23]。
第三步：2-(2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙醯基)氧基7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸第三丁酯(2d)
tert-butyl 2-(2-cyclopentyl-2-hydroxy-2-phenyl-acetyl)oxy-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate
將2-(2-氧代-2-苯基-乙醯基)氧基-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸第三丁酯(2c)(1.0g,11mmol)溶於四氫呋喃(100mL)中，-40℃加入2.0M的環戊基溴化鎂的四氫呋喃溶液(8mL，16mmol)，逐漸升至室溫反應2小時。反應液加入飽和氯化銨溶液(60mL)，加入乙酸乙酯(50mL)，萃取。水相用乙酸乙酯(50mL×1)萃取，合併有機相。有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。殘留物用矽膠柱層析分離純化(乙酸乙酯：石油醚 (v/v)=0：1~1：19)，得到題述化合物2-(2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙醯基)氧基-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸第三丁酯(2d)，無色油狀(2.4g，產率51%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.68-7.42(m,2H),7.38-7.29(m,2H),7.29-7.23(m,1H),5.08-4.95(m,1H),3.39-3.17(m,4H),2.97-2.82(m,1H),2.44-2.20(m,2H),1.90-1.80(m,1H),1.79-1.54(m,7H),1.53-1.47(m,4H),1.45-1.43(m,9H),1.38-1.30(m,2H)。
LCMS m/z=466.3[M+23]。
第四步：7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙酸酯(中間體2)
7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl 2-cyclopentyl-2-hydroxy-2-phenyl-acetate
將2-(2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙醯基)氧基-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸第三丁酯(2d)(2.4g,5.4mmol)溶於二氯甲烷(20mL)中，加入三氟乙酸(6.2g,54mmol)，室溫反應3小時。反應液加入氨水調節pH至10，加入二氯甲烷(50mL)和水(50mL)，萃取。水相用二氯甲烷(20mL×1)萃取，合併有機相。有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到題述化合物7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙酸酯(中間體2)，黃色油狀(1.7g，產率91%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.66-7.40(m,2H),7.38-7.29(m,2H),7.29-7.24(m,1H),5.07-4.95(m,1H),3.03-2.84(m,4H),2.51-2.18(m,2H),2.00-1.27(m,15H)。
LCMS m/z=344.2[M+1]。
中間體2的異構物1和中間體2的異構物2：將2-(2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙醯基)氧基-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸第三丁酯(2d)(13g,29.31mmol)溶於二氯甲烷(50mL)中，加入三氟乙酸(33.41g,293.1mmol)，室 溫反應3小時。反應液加入氨水調節pH至10，加入二氯甲烷(50mL)和水(50mL)，萃取。水相用二氯甲烷(50mL×1)萃取，合併有機相。有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，殘留物採用層析管柱分離純化，層析條件為：設備：Shimadzu LC-20AP Prep HPLC(PrepL-GB)；層析管柱：ChiralPak AY,300×50mm,10u；流動相：A庚烷(0.1%NH3H2O)和B乙醇；梯度：B25%；流速：80mL/min；柱溫：R.T.得到題述化合物7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙酸酯(中間體2)的異構物1，黃色油狀(2.7g，產率27%)，7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙酸酯(中間體2)的異構物2，黃色油狀(2.5g，產率25%)。中間體2異構物1的出峰時間小於中間體2異構物2的出峰時間。
中間體2的異構物1 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.65-7.40(m,2H),7.37-7.29(m,2H),7.29-7.23(m,1H),5.05-4.95(m,1H),2.96-2.88(m,1H),2.88-2.72(m,4H),2.46-2.20(m,2H),1.91-1.79(m,1H),1.79-1.40(m,12H),1.37-1.30(m,1H)。
LCMS m/z=344.3[M+1]。
中間體2的異構物2：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 9.21(s,1H),7.62(dd,2H),7.36-7.30(m,2H),7.29-7.24(m,1H),5.08-4.96(m,1H),3.12-2.94(m,4H),2.94-2.85(m 1H),2.48-2.37(m,1H),2.37-2.27(m,1H),1.93(dd,1H),1.86-1.74(m,5H),1.73-1.40(m,6H),1.40-1.30(m,2H)。
LCMS m/z=344.3[M+1]。
中間體3：7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基2-環戊基-2-羥基-2-(2-噻吩基)乙酸酯(中間體3)
7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl 2-cyclopentyl-2-hydroxy-2-(2-thienyl)acetate
第一步：2-氧代-2-(2-噻吩基)乙酸(3b)
2-oxo-2-(2-thienyl)acetic acid
將2-氧代-2-(2-噻吩基)乙酸甲酯(3a)(20g,108.6mmol)溶于水(100mL)中，加入氫氧化鈉(8.69g,217.1mmol)，室溫反應2小時。反應液用二氯甲烷(100mL×2)萃取，水相用4M鹽酸水溶液調節pH至3，用二氯甲烷(100mL×2)萃取，有機相濃縮，得到題述化合物2-氧代-2-(2-噻吩基)乙酸(3b)，白色固體(16.5g，產率7.3%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 8.53(dd,1H),7.96(dd,1H),7.26(dd,1H)。
LCMS m/z=155.1[M-1]。
第二步：2-(2-氧代-2-(2-噻吩基)乙醯基)氧基-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸第三丁酯(3c)
tert-butyl 2-[2-oxo-2-(2-thienyl)acetyl]oxy-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate
將2-氧代-2-(2-噻吩基)乙酸(3b)(16.5g,106mmol)溶於二氯甲烷(200mL)中，加入草醯氯(26.8g,211mmol)，滴加一滴N,N-二甲基甲醯胺，室溫反應1小時。減壓濃縮為反應液1。將2-羥基-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-甲酸第三丁酯(1b)(21.7g,89.8mmol)溶於二氯甲烷(200mL)中，加入三乙胺(42.8 g,423mmol)，冰浴下加入反應液1，室溫反應1小時。反應液加入二氯甲烷(50mL)和水(200mL)，萃取。水相用二氯甲烷(100mL×1)萃取，合併有機相。有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。殘留物用矽膠柱層析分離純化(乙酸乙酯：石油醚(v/v)=0：1~1：9)，得到題述化合物2-(2-氧代-2-(2-噻吩基)乙醯基)氧基-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸第三丁酯(3c)，黃色油狀(26.0g，產率64.8%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 8.18-8.06(m,1H),7.89-7.76(m,1H),7.22-7.18(m,1H),5.29-5.21(m,1H),3.42-3.26(m,4H),2.52-2.37(m,2H),2.11-1.96(m,2H),1.63-1.53(m,4H),1.45(s,9H)。
LCMS m/z=402.1[M+23]。
第三步：2-(2-環戊基-2-羥基-2-(2-噻吩基)乙醯基)氧基-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸第三丁酯(3d)
tert-butyl 2-[2-cyclopentyl-2-hydroxy-2-(2-thienyl)acetyl]oxy-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate
將2-(2-氧代-2-(2-噻吩基)乙醯基)氧基-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸第三丁酯(3c)(26g,68.51mmol)溶於四氫呋喃(200mL)中，-40℃加入2.0M環戊基溴化鎂的四氫呋喃溶液(56mL,102mmol)，逐漸升至室溫反應2小時。反應液加入飽和氯化銨溶液(200mL)和乙酸乙酯(200mL)，萃取。水相用乙酸乙酯(100mL×1)萃取，合併有機相。有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。殘留物用矽膠柱層析分離純化(乙酸乙酯：石油醚(v/v)=0：1~1：19)，得到題述化合物2-(2-環戊基-2-羥基-2-(2-噻吩基)乙醯基)氧基-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸第三丁酯(3d)，黃色油狀(15g，產率48.70%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.23-7.19(m,1H),7.12-7.06(m,1H),6.99-6.93(m,1H),5.13-5.02(m,1H),3.39-3.16(m,4H),2.86-2.71(m,1H),2.46-2.21(m,2H),1.93-1.86(m,1H),1.85-1.78(m,1H),1.70-1.47(m,12H),1.44(s,9H)。
LCMS m/z=472.3[M+23]。
第四步：7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基2-環戊基-2-羥基-2-(2-噻吩基)乙酸酯(中間體3)
7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl 2-cyclopentyl-2-hydroxy-2-(2-thienyl)acetate
將2-(2-環戊基-2-羥基-2-(2-噻吩基)乙醯基)氧基-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸第三丁酯(3d)(15g,33.36mmol)溶於二氧六環(100mL)中，通入鹽酸氣，室溫反應4小時。反應液減壓濃縮，加入氨水調節pH至10，加入二氯甲烷(100mL)和水(30mL)，萃取。水相用二氯甲烷(50mL×1)萃取，合併有機相。有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基2-環戊基-2-羥基-2-(2-噻吩基)乙酸酯(中間體3)。
中間體3的異構物1和中間體3的異構物2的製備：將7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基2-環戊基-2-羥基-2-(2-噻吩基)乙酸酯(中間體3)用製備層析管柱分離，製備條件為：層析柱：ChiralPak IC,250×30mm I.D.,5μm；流動相：A CO2和B甲醇(0.1%NH3H2O)；梯度：B 40%；流速：80mL/min；背壓：100bar；柱溫：38℃；波長：220nm，週期：~3min。得到標題中間體3的異構物1，黃色油狀(1.93g，產率16.6%)，和中間體3的異構物2，黃色油狀(2.57g，產率22%)。
中間體3的異構物1：
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 7.38(dd,1H),7.08(dd,1H),6.96(dd,1H),5.93(s,1H),4.96-4.92(m,1H),2.75-2.71(m,1H),2.58-2.53(m,4H),2.29-2.18(m,2H),1.75-1.65(m,1H),1.56-1.38(m,12H)。
LCMS m/z=350.3[M+1]。
中間體3的異構物2：
中間體3的異構物2：YH1Z00001960-P2
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 7.38(dd,1H),7.08(dd,1H),6.96(dd,1H),5.93(s,1H),4.96-4.92(m,1H),2.75-2.71(m,1H),2.58-2.53(m,4H),2.29-2.18(m,2H),1.75-1.65(m,1H),1.56-1.38(m,12H)。
LCMS m/z=350.2[M+1]。
中間體4：3-[2-[2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙醯基]氧基-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-基]丙酸(中間體4)
3-[2-[2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetyl]oxy-7-azaspiro[3.5]nonan-7-yl]propanoic acid
將7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯(中間體1)(0.8g,2mmol)和丙烯酸(2.0g,20mmol)溶於2-甲基四氫呋喃(10mL)中，置於微波反應器中，升溫至100℃反應1小時，冷卻至室溫，減壓濃縮，殘留物用矽膠管柱層析分離純化(甲醇：二氯甲烷(v/v)=0：1~1：9)得到題述化合物3-[2-[2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙醯基]氧基-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-基]丙酸(中間體4)，淺黃固體(0.8g，產率80%)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.50(dd,2H),7.10(dd,1H),7.00(dd,2H),5.07-5.03(m,1H),2.77-2.73(m,2H),2.51-2.44(m,6H),2.32-2.27(m,2H),1.80-1.75(m,2H),1.64-1.55(m,4H)。
LCMS m/z=436.0[M+1]。
中間體5：7-[(1R)-2-氨基-1-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基乙基]-4-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-3H-1,3-苯並噻唑-2-酮(中間體5)
7-[(1R)-2-amino-1-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-ethyl]-4-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-3H-1,3-benzothiazol-2-one
第一步：7-[(1R)-2-疊氮基-1-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基乙基]-4-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-3H-1,3-苯並噻唑-2-酮(5b)
7-[(1R)-2-azido-1-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-ethyl]-4-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-3H-1,3-benzothiazol-2-one
7-[(1R)-2-疊氮基-1-羥基-乙基]-4-羥基-3H-1,3-苯並噻唑-2-酮(5a)(參考WO2009098448A1製備得到)(0.56g.2.2mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(20mL)中，然後加入咪唑(0.6g，8.9mmol)，分批加入第三丁基二甲基氯矽烷(1.3g，8.9mmol)，再加入催化量的4-二甲氨基吡啶，溫度升至40℃攪拌7小時。把反應液倒入水(100mL)中，用乙酸乙酯(100mL×1)萃取，有機相用飽和氯化鈉水溶液(100mL×2)洗滌，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，殘留物用矽膠管柱層析純化(洗脫劑為乙酸乙酯/石油醚 (v/v)=0/1~5/95)，得題述化合物7-[(1R)-2-疊氮基-1-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基乙基]-4-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-3H-1,3-苯並噻唑-2-酮(5b)，白色固體(0.85g，產率80%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 8.25(s,1H),6.92(d,1H),6.71(d,1H),4.78(dd,1H),3.41(dd,1H),3.25(dd,1H),1.05-0.98(m,9H),0.92-0.88(m,9H),0.28(m,6H),0.12(d,3H),-0.04(d,3H)。
第二步：7-[(1R)-2-氨基-1-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基乙基]-4-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-3H-1,3-苯並噻唑-2-酮(中間體5)
7-[(1R)-2-amino-1-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-ethyl]-4-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-3H-1,3-benzothiazol-2-one
將7-[(1R)-2-疊氮基-1-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基乙基]-4-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-3H-1,3-苯並噻唑-2-酮(5b)(0.85g，1.8mmol)溶於乙酸乙酯(20mL)中，加入10%(w/w)的鈀碳(0.085g)，常壓氫氣球下攪拌過夜。墊矽藻土過濾，濃縮得題述化合物7-[(1R)-2-氨基-1-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基乙基]-4-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-3H-1,3-苯並噻唑-2-酮(中間體5)，淺黑色固體(0.7g，產率90%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 6.89(d,1H),6.68(d,1H),4.64(dd,1H),2.94-2.82(m,2H),1.04-0.96(s,9H),0.95-0.87(s,9H),0.33-0.23(m,6H),0.12-0.06(m,3H),-0.04--0.11(m,3H)。
實施例1：[7-[3-[5-[[[(2R)-2-羥基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯並三氮唑-1-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2- 噻吩)乙酸酯
[7-[3-[5-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate
第一步：4-(3-羥基丙基氨基)-3-硝基苯甲腈(1B)
4-(3-hydroxypropylamino)-3-nitro-benzonitrile
將4-氟-3-硝基苯甲腈(1A)(5.0g,30mmol)溶于溶於四氫呋喃(50mL)中，加入3-氨基-1-丙醇(2.5g，33mmol)，N,N-二異丙基乙胺(4.3g，33mmol)，在室溫反應4小時。向反應液中加入乙酸乙酯(60mL)，用飽和碳酸 氫鈉溶液(60mL×2)洗滌，飽和氯化鈉水溶液(60mL×1)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得題述產物4-(3-羥基丙基氨基)-3-硝基苯甲腈(1B)，黃色固體(6g，產率90%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 8.67(s,1H),8.50(d,1H),7.59(d,1H),6.97(d,1H),3.86(t,2H),3.56-3.51(m,2H),2.02-1.97(m,2H),1.72(s,1H)。
LCMS m/z=244[M+23]+。
第二步：3-氨基-4-(3-羥基丙基氨基)苯甲腈(1C)
3-amino-4-(3-hydroxypropylamino)benzonitrile
將4-(3-羥基丙基氨基)-3-硝基苯甲腈(1B)(6g，27.12mmol)溶於乙醇(100mL)中，加入10%鈀碳(0.9g)，氫氣氛圍下室溫反應8小時。反應結束後，反應液過濾，濾液濃縮得題述產物3-氨基-4-(3-羥基丙基氨基)苯甲腈(1C)(4.5g，產率87%)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 6.92(dd,1H),6.77(d,1H),6.46(d,1H),5.38(br,1H),4.97(br,2H),4.51(br,1H),3.52(m,2H),3.19-3.14(m,2H),1.81-1.68(m,2H)。
LCMS m/z=192.1[M+1]+。
第三步：1-(3-羥基丙基)苯並三氮唑-5-甲腈(1D)
1-(3-hydroxypropyl)benzotriazole-5-carbonitrile
將3-氨基-4-(3-羥基丙基氨基)苯甲腈(1C)(0.5g，2.61mmol)溶於6M的 鹽酸水溶液(10mL)中，在-5℃下，滴加亞硝酸鈉(0.271g，3.92mmol)的水溶液(2mL)，滴加完畢後室溫反應3小時。反應液用二氯甲烷(30mL×2)萃取，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮得題述產物1-(3-羥基丙基)苯並三氮唑-5-甲腈(1D)(0.25g，產率66%)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 8.81-8.75(m,1H),8.11(dd,1H),7.97-7.89(m,1H),4.83(t,2H),4.77-4.54(m,1H),3.41(t,2H),2.13-2.03(m,2H)。
LCMS m/z=203.1[M+1]+。
第四步：1-(3-羥基丙基)苯並三氮唑-5-甲醛(1E)
1-(3-hydroxypropyl)benzotriazole-5-carbaldehyde
將1-(3-羥基丙基)苯並三氮唑-5-甲腈(1D)(3.0g,14.8mmol)溶於75%的甲酸水溶液(33.3mL)中，加入鋁鎳合金(3.3g)，90℃反應4小時，反應液矽藻土過濾，濾液濃縮，加入乙醇(30mL)溶解殘留物，然後加入2M氫氧化鈉溶液調節至pH值約為10，室溫攪拌1小時。用2M的稀鹽酸調節pH值約為7，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，飽和氯化鈉水溶液(30mL×1)洗滌，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，殘餘物用矽膠管柱層析(洗脫劑為乙酸乙酯：石油醚(v：v)=1：100~1：10)純化得題述產物1-(3-羥基丙基)苯並三氮唑-5-甲醛(1E)，類白色固體(1.8g，產率59%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 10.11(s,1H),8.52(s,1H),8.04(dd,1H),7.72(d，1H),4.85(t,2H),3.67(t,2H),2.34-2.23(m,2H)。
LCMS m/z=206.1[M+1]+。
第五步：1-(3-溴丙基)苯並三氮唑-5-甲醛(1F)
1-(3-bromopropyl)benzotriazole-5-carbaldehyde
在氮氣保護下，將1-(3-羥基丙基)苯並三氮唑-5-甲醛(1E)(0.2g，1mmol)溶於二氯甲烷(10.5mL)中，冰浴下加入四溴化碳(0.4g，1.2mmol)，緩慢加入三苯基膦(0.3g，1.2mmol)，室溫攪拌2小時後，然後繼續加入四溴化碳(0.4g，1.2mmol)，再加入三苯基膦(0.3g，1.2mmol)，室溫反應1小時。反應結束後直接減壓濃縮，殘餘物用矽膠管柱層析(洗脫劑為乙酸乙酯：石油醚(v：v)=1：100~1：10)純化得題述產物1-(3-溴丙基)苯並三氮唑-5-甲醛(1F)，白色固體(0.1g，產率40%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 10.15(s,1H),8.58(s,1H),8.11(dd,1H),7.74(d,1H),4.87(t,2H),3.41(t,2H),2.68-2.55(m,2H)。
LCMS m/z=268[M+1]+。
第六步：[7-[3-(5-甲醯基苯並三氮唑-1-基)丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯(1G)
[7-[3-(5-formylbenzotriazol-l-yl)propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate
將7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯(中間體1)(1.1g，3.026mmol)溶於乙腈(20mL)中，在氮氣保護下，加入1-(3-溴丙基)苯並三氮唑-5-甲醛(1F)(0.811g，3.026mmol)，N,N-二異丙基乙胺(0.54g，4.237mmol)，85℃反應4小時。反應液直接減壓濃縮，殘餘物用矽膠管柱層析(洗脫劑為二氯甲烷：甲醇(v：v)=100：1~100：3)純化得題述產物[7-[3-(5-甲醯基苯並三氮唑-1-基)丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯(1G)，褐色固體(1.2g，產率79%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 10.13(s,1H),8.54(s,1H),8.05(dd,1H),7.69(d,1H),7.31-7.27(m,2H),7.17(dd,2H),6.97(dd,2H),5.14-5.11(m,1H),4.77-4.72(m,2H),2.26-2.17(m,10H),1.89-1.77(m,2H),1.60-1.48(m,4H)。
LCMS m/z=551.0[M+1]+。
第七步：[7-[3-[5-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯並三氮唑-1-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯(1I)
[7-[3-[5-[[[(2R)-2-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate
將[7-[3-(5-甲醯基苯並三氮唑-1-基)丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥 基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯(1G)(0.8g，1.45mmol)和5-[(1R)-2-氨基-1-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基甲基]-8-羥基-1H-喹啉-2-酮(1H)(0.535g，1.6mmol)溶於異丙醇(10mL)和四氫呋喃(5mL)混合溶劑中，加入N,N-二異丙基乙胺(0.222g，1.71mmol)和三乙醯氧基硼氫化鈉(0.453g，2.14mmol)，室溫反應過夜，繼續加入三乙醯氧基硼氫化鈉(1.35g，6.39mmol)，反應3小時後在加入三乙醯氧基硼氫化鈉(0.453g，2.14mmol)，繼續反應2小時。用飽和碳酸氫鈉水溶液調節pH值約為9，用二氯甲烷(30mL×2)萃取，飽和氯化鈉水溶液(30mL×1)洗滌，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，殘餘物用矽膠管柱層析(洗脫劑為二氯甲烷：甲醇(v：v)=100：1~20：1)純化得題述產物[7-[3-[5-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯並三氮唑-1-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯(1I)，褐色固體(0.4g，產率32%)。
LCMS m/z=869.2[M+1]+。
第八步：[7-[3-[5-[[[(2R)-2-羥基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯並三氮唑-1-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩)乙酸酯
[7-[3-[5-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate
將[7-[3-[5-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯並三氮唑-1-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯(1I)(0.4g，0.46mmol)溶於四氫呋喃(2mL)中，加入三乙胺三氫氟酸鹽(0.3g，1.8mmol)，室溫攪拌8小時，用飽和碳酸氫鈉水溶液調節pH值約為9，用二氯甲烷(50mL×2)萃取，飽和氯化鈉水溶液洗滌，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮後，殘餘物用矽膠管柱層析(洗脫劑為二氯甲烷：甲醇(v：v)=100：1~10：1)純化得題述產物[7-[3-[5-[[[(2R)-2-羥基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯並三氮唑-1-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩)乙酸酯(化合物1)，黃色固體(0.24g，產率69%)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 8.12(d,1H),7.92(s,1H),7.77(d,1H),7.51(dd,1H),7.47(dd,2H),7.11-7.04(m,3H),6.99(dd,2H),6.91(d,1H),6.42(d,1H),5.12-5.06(m,1H),5.06-4.98(m,1H),4.68(t,2H),3.91(s,2H),2.76-2.65(m,2H),2.28-2.08(m,8H),2.0742.02(m,2H),1.71(dd,2H),1.50-1.39(m,4H)。
LCMS m/z=755.2[M+1]+。
實施例2：[7-[3-[5-[[[(2R)-2-羥基-2-(5-羥基-3-氧代-4H-1,4-苯並噁嗪-8-基)乙基]氨基]甲基]苯並三氮唑-1-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬-2-基]2-羥基-2,2-二(2-噻吩基)乙酸酯；二三氟乙酸鹽(化合物2)
[7-[3-[5-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(5-hydroxy-3-oxo-4H-1,4-benzoxazin-8-yl)et hyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate；ditrifluoroacetic acid
第一步：[7-[3-[5-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-2-(5-羥基-3-氧代-4H-1,4-苯並噁嗪-8-基)乙基]氨基]甲基]苯並三氮唑-1-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬-2-基]2-羥基-2,2-二(2-噻吩基)乙酸酯(2B)
[7-[3-[5-[[[(2R)-2-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-2-(5-hydroxy-3-oxo-4H-1,4-benzoxazin-8-yl)ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate
將[7-[3-(5-甲醯基苯並三氮唑-1-基)丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯(1G)(1.0g，1.82mmol)和8-[(1R)-2-氨基-1-[第三 丁基(二甲基)甲矽烷基]氧基乙基]-5-羥基-4H-1,4-苯並噁嗪-3-酮(2A)(參考WO2008149110A1中間體65的合成方法製備)(0.738g，2.18mmol)溶於異丙醇(10mL)和四氫呋喃(5mL)混合溶劑中，加入N,N-二異丙基乙胺(0.296g，2.29mmol)和三乙醯氧基硼氫化鈉(0.566g，2.67mmol)，室溫反應過夜，繼續加入三乙醯氧基硼氫化鈉(1.69g，7.99mmol)，反應3小時後，再加入三乙醯氧基硼氫化鈉(0.566g，2.67mmol)，繼續反應2小時。用飽和碳酸氫鈉水溶液調節pH值約為9，用二氯甲烷(30mL×2)萃取，飽和氯化鈉水溶液(30mL×1)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，殘餘物用矽膠管柱層析(洗脫劑為二氯甲烷：甲醇(v：v)=100：1~20：1)純化得到題述化合物[7-[3-[5-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-2-(5-羥基-3-氧代-4H-1,4-苯並噁嗪-8-基)乙基]氨基]甲基]苯並三氮唑-1-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬-2-基]2-羥基-2,2-二(2-噻吩基)乙酸酯(2B)，灰色固體(0.43g，產率27%)。
LCMS m/z=873.3[M+1]+。
第二步：[7-[3-[5-[[[(2R)-2-羥基-2-(5-羥基-3-氧代-4H-1,4-苯並噁嗪-8-基)乙基]氨基]甲基]苯並三氮唑-1-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬-2-基]2-羥基-2,2-二(2-噻吩基)乙酸酯；二三氟乙酸鹽(化合物2)
[7-[3-[5-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(5-hydroxy-3-oxo-4H-1,4-benzoxazin-8-yl)ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate；ditrifluoroacetic acid
將[7-[3-[5-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-2-(5-羥基-3-氧代-4H-1,4-苯並噁嗪-8-基)乙基]氨基]甲基]苯並三氮唑-1-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬-2-基]2-羥基-2,2-二(2-噻吩基)乙酸酯(2B)(0.42g，0.48mmol)溶於四氫呋喃(2mL)中，加入三乙胺三氫氟酸鹽(0.31g，1.9mmol)，室溫攪拌8小時，用飽和碳酸氫鈉水溶液調節pH值約為9，用二氯甲烷(50mL×2)萃取，飽和氯化鈉水溶液洗滌一次，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘餘物採用液相製備柱分離純化(液相製備條件：C18製備柱，洗脫劑為乙腈(A)，含0.05%TFA去離子水(B)，梯度洗脫A：B=20%~25%，洗脫時間32分鐘)得到題述化合物[7-[3-[5-[[[(2R)-2-羥基-2-(5-羥基-3-氧代-4H-1,4-苯並噁嗪-8-基)乙基]氨基]甲基]苯並三氮唑-1-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯；二三氟乙酸鹽(化合物2)，白色固體(0.17g，產率36%)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ 8.23(s,1H),7.94(d,1H),7.73(dd,1H),7.39(dd,2H),7.15(br,2H),7.03(d,1H),7.00(dd,2H),6.57(d,1H),5.21(dd,1H),5.17-5.14(m,1H),4.88-4.86(m,2H),4.50(s,2H),4.39(dd,2H),3.54-3.39(m,2H),3.29-3.24(m,2H),3.21(d,1H),3.09(dd,1H),2.99-2.94(m,2H),2.57-2.46(m,3H),2.40-2.35(m,1H),2.02-1.96(m,3H),1.87-1.80(m,3H)。
LCMS m/z=759.2[M+1]+。
實施例3：[7-[3-[5-[[[(2R)-2-(3-甲醯胺-4-羥基-苯基)-2-羥基-乙基]氨基]甲基]苯並三氮唑-1-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯；二三氟乙酸鹽(化合物3)
[7-[3-[5-[[[(2R)-2-(3-formamido-4-hydroxy-phenyl)-2-hydroxy-ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate；ditrifluoroacetic acid
第一步：N-[5-[(1R)-2-疊氮基-1-羥基-乙基]-2-苄氧基-苯基]甲醯胺(3B)
N-[5-[(1R)-2-azido-1-hydroxy-ethyl]-2-benzyloxy-phenyl]formamide
將N-[2-苄氧基-5-[(1R)-2-溴-1-羥基-乙基]苯基]甲醯胺(3A)(可參照Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters,22(4),1523-1526；2012製備得到)(7g,19.99mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(100mL)中，加入疊氮化鈉(1.95g,29.98mmol)，75℃反應6小時。反應液加入乙酸乙酯(200mL)和水(200mL)，萃取。有機相依次用水(200mL×2)和飽和食鹽水(200mL×1)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到題述化合物N-[5-[(1R)-2- 疊氮基-1-羥基-乙基]-2-苄氧基-苯基]甲醯胺(3B)，黃白色固體(5.3g，產率85%)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 9.61-9.46(m,1H),8.36(d,1H),8.21(d,1H),7.53-7.51(m,2H),7.45-7.27(m,3H),7.19-6.97(m,2H),5.77-5.69(m,1H),5.21(s,2H),4.75-4.65(m,1H),3.38-3.18(m,2H)。
LCMS m/z=335.2[M+23]。
第二步：N-[5-[(1R)-2-氨基-1-羥基-乙基]-2-羥基-苯基]甲醯胺(3C)
N-[5-[(1R)-2-amino-1-hydroxy-ethyl]-2-hydroxy-phenyl]formamide
將N-[5-[(1R)-2-疊氮基-1-羥基-乙基]-2-苄氧基-苯基]甲醯胺(3B)(3.0g,9.6mmol)溶於甲醇(80mL)和二氯甲烷(20mL)中，加入10%(w/w)Pd/C(3g)，45℃加氫反應48小時。反應液矽藻土抽氣過濾，用甲醇(100mL)淋洗四次，濾液濃縮，得到題述化合物N-[5-[(1R)-2-氨基-1-羥基-乙基]-2-羥基-苯基]甲醯胺(3C)，黃色固體(1.8g，產率96%)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ 8.32(s,1H),8.05(d,1H),7.07-6.98(m,1H),6.92-6.82(m,1H),4.63(dd,1H),2.94-2.80(m,2H)。
LCMS m/z=197.2[M+1]。
第三步：[7-[3-[5-[[[(2R)-2-(3-甲醯胺-4-羥基-苯基)-2-羥基-乙基]氨基]甲基]苯並三氮唑-1-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯；二三氟乙酸鹽(化合物3)
[7-[3-[5-[[[(2R)-2-(3-formamido-4-hydroxy-phenyl)-2-hydroxy-ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate；ditrifluoroacetic acid
將[7-[3-[5-甲醯基苯並三氮唑-1-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯(1G)(0.400g,0.726mmol)溶於甲醇(10mL)中，加入N-[5-[(1R)-2-氨基-1-羥基-乙基]-2-羥基-苯基]甲醯胺(3C)(0.171g,0.872mmol)和無水氯化鋅(0.396g,2.91mmol)，55℃反應1小時。加入氰基硼氫化鈉(0.137g,2.18mmol)，55℃反應2小時。反應液加入二氯甲烷(50mL)和飽和碳酸氫鈉溶液(20mL)，萃取。水相用二氯甲烷(30mL×2)萃取，合併有機相，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，殘留物用液相製備柱分離純化(製備條件：C18反相製備柱，流動相為含0.05%TFA的去離子水(A)，含0.05%TFA的乙腈(B)，梯度洗脫A：B=5%~100%，洗脫10分鐘，然後用100% B洗脫5分鐘，流速1.0mL/min，柱溫：40℃)，得到題述化合物[7-[3-[5-[[[(2R)-2-(3-甲醯胺-4-羥基-苯基)-2-羥基-乙基]氨基]甲基]苯並三氮唑-1-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯；二三氟乙酸鹽(化合物3)，黃色固體(0.100g，產率14.4%)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ 8.31(s,1H),8.23(s,1H),8.11(d,1H),7.94(d,1H),7.75(dd,1H),7.39(dd,2H),7.15(s,2H),7.05(dd,1H),6.99(dd,2H),6.88(d,1H),5.19-5.09(m,1H),4.94-4.89(m,1H),4.89-4.86(m,2H),4.50(s,2H),3.45(dd,2H),3.28-3.11(m,4H),3.01-2.84(m,2H),2.57-2.44(m,3H),2.37(s,1H),2.02-1.90(dd,3H),1.89-1.73(m,3H).
19F NMR(376MHz,CD3OD)δ -75.39。
LCMS m/z=366.2[(M+2)/2]。
實施例4：[7-[3-[5-[[[(2R)-2-羥基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯並三氮唑-1-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基 -2-苯基-乙酸酯；二三氟乙酸鹽(化合物4)
[7-[3-[5-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-cyclopentyl-2-hydroxy-2-phenyl-acetate；ditrifluoroacetic acid
第一步：[7-[3-(5-甲醯基苯並三氮唑-1-基)丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙酸酯(4A)
[7-[3-(5-formylbenzotriazol-1-yl)propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-cyclopentyl-2-hydroxy-2-phenyl-acetate
將7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙酸酯(中間體2)(0.500g,1.46mmol)溶於乙腈(20mL)中，加入1-(3-溴丙基)苯並三氮唑-5-甲醛(1F)(0.429g,1.60mmol)，加入三乙胺(0.263g,2.04mmol)，85℃反應4 小時。反應液減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析分離純化(乙酸乙酯：石油醚(v/v)=1：1~1：0)，得到題述化合物[7-[3-(5-甲醯基苯並三氮唑-1-基)丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙酸酯(4A)，黃色固體(0.650g，產率84.1%)。
LCMS m/z=531.3[M+1]。
第二步：[7-[3-[5-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯並三氮唑-1-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙酸酯(4B)
[7-[3-[5-[[[(2R)-2-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-cyclopentyl-2-hydroxy-2-phenyl-acetate
將[7-[3-(5-甲醯基苯並三氮唑-1-基)丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙酸酯(4A)(0.600g,1.13mmol)溶於甲醇(10mL)中，加入5-[(1R)-2-氨基-1-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基甲基]-8-羥基-1H-喹啉-2-酮(1H)(0.378g,1.13mmol)和無水氯化鋅(0.616g,4.52mmol)，55℃反應1小時。加入氰基硼氫化鈉(0.213g,3.39mmol)，55℃反應2小時。反應液加入二氯甲烷(50mL)和飽和碳酸氫鈉溶液(20mL)，萃取。水相用二氯甲烷(30mL×2)萃取，合併有機相，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到題述化合物[7-[3-[5-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯並三氮唑-1-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙酸酯(4B)，黃色固體(0.45g，產率46.9%)。
LCMS m/z=425.4[(M+2)/2]。
第三步：[7-[3-[5-[[[(2R)-2-羥基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯並三氮唑-1-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙酸酯；二三氟乙酸鹽(化合物4)
[7-[3-[5-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-cyclopentyl-2-hydroxy-2-phenyl-acetate；ditrifluoroacetic acid
將[7-[3-[5-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯並三氮唑-1-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙酸酯(4B)(0.450g,0.530mmol)溶於四氫呋喃(5mL)中，加入三乙胺三氫氟酸鹽(0.854g,5.30mmol)，室溫反應24小時。反應液加入10%(v/v)甲醇/二氯甲烷溶液(50mL)，加入飽和碳酸氫鈉溶液調節pH至8左右，萃取。水相用10%(v/v)甲醇/二氯甲烷溶液(50mL×2)萃取，合併有機相。有機相用飽和食鹽水(20mL×1)洗滌，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。殘留物用液相製備柱分離純化(製備條件：C18反相製備柱，流動相為含0.05%TFA的去離子水(A)，含0.05%TFA的乙腈(B)，梯度洗脫A：B=5%~100%，洗脫10分鐘，然後用100% B洗脫5分鐘，流速1.0mL/min，柱溫：40℃)，得到題述化合物[7-[3-[5-[[[(2R)-2-羥基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯並三氮唑-1-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙酸酯；二三氟乙酸鹽(化合物4)，白色固體(0.100g，產率19.6%)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ 8.28-8.19(m,2H),7.91(d,1H),7.73(d,1H),7.67-7.59(m,2H),7.40-7.23(m,4H),7.04(d,1H),6.58(d,1H),5.49-5.40(m,1H),5.08-4.97(m,1H),4.89-4.85(m,2H),4.57-4.47(m,2H), 3.55-3.35(m,2H),3.31-3.21(m,4H),3.06-2.79(m,3H),2.58-2.20(m,4H),2.00-1.75(m,6H),1.70-1.31(m,8H)。
19F NMR(376MHz,CD3OD)δ -75.33。
LCMS m/z=368.3[(M+2)/2]。
實施例5：[7-[3-[5-[[[(2R)-2-羥基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯並三氮唑-1-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙酸酯；二三氟乙酸鹽(化合物4)的異構物1
Isomer 1 of[7-[3-[5-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-cyclopentyl-2-hydroxy-2-phenyl-acetate；ditrifluoroacetic acid
第一步：[7-[3-(5-甲醯基苯並三氮唑-1-基)丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙酸酯(4A)的異構物1
[7-[3-(5-formylbenzotriazol-1-yl)propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-cyclopentyl-2-hydroxy-2-phenyl-acetate
將7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙酸酯(中間體2)的異構物1(0.600g,1.75mmol)溶於乙腈(20mL)中，加入1-(3-溴丙基)苯並三氮唑-5-甲醛(1F)(0.515g,1.92mmol)，加入二異丙基乙胺(0.316g,2.45mmol)，85℃反應4小時。反應液濃縮，殘留物用矽膠柱層析分離純化(乙酸乙酯：石油醚(v/v)=1：1~1：0)，得到題述化合物[7-[3-(5-甲醯基苯並三氮唑-1-基)丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙酸酯(4A)的異構物1，黃色固體(0.550g，產率59.3%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 10.14(s,1H),8.56(d,1H),8.11-8.00(m,1H),7.74-7.67(m,1H),7.66-7.41(m,2H),7.37-7.30(m,2H),7.28-7.23(m,1H),5.07-4.91(m,1H),4.75(t,2H),2.96-2.84(m,1H),2.40-2.30(m,4H),2.28-2.18(m,4H),1.88-1.28(m,16H)。
LCMS m/z=531.3[M+1]。
第二步：[7-[3-[5-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯並三氮唑-1-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙酸酯(4B)的異構物1
Isomer 1 of[7-[3-[5-[[[(2R)-2-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-cyclopentyl-2-hydroxy-2-phenyl-acetate
將[7-[3-(5-甲醯基苯並三氮唑-1-基)丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙酸酯(4A)的異構物1(0.550g,1.04mmol)溶於甲醇(10mL)中，加入5-[(1R)-2-氨基-1-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基甲基]-8-羥基-1H-喹啉-2-酮(1H)(0.347g,1.04mmol)和無水氯化鋅(0.565g,4.15mmol)，55℃反應1小時。加入氰基硼氫化鈉(0.195g,3.11mmol)，55℃反應2小時。反應液加入二氯甲烷(50mL)和飽和碳酸氫鈉溶液(20mL)，萃取。水相用二氯甲烷(30mL×2)萃取，合併有機相，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到題述化合物[7-[3-[5-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯並三氮唑-1-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙酸酯(4B)的異構物1，黃色固體(0.80g，產率90%)。
LCMS m/z=425.4[(M+2)/2]。
第三步：[7-[3-[5-[[[(2R)-2-羥基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯並三氮唑-1-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙酸酯；二三氟乙酸鹽(化合物4)的異構物1
Isomer 1 of[7-[3-[5-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-cyclopentyl-2-hydroxy-2-phenyl-acetate；ditrifluoroacetic acid
將[7-[3-[5-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯並三氮唑-1-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙酸酯(4B)的異構物1(0.800g,0.942mmol)溶於 四氫呋喃(5mL)中，加入三乙胺三氫氟酸鹽(1.52g,9.42mmol)，室溫反應24小時。反應液加入10%(v/v)甲醇/二氯甲烷溶液(50mL)，加入飽和碳酸氫鈉溶液調節pH至8左右，萃取。水相用10%(v/v)甲醇/二氯甲烷溶液(50mL×2)萃取，合併有機相。有機相用飽和食鹽水(20mL×1)洗滌，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。殘留物用液相製備柱分離純化(製備條件：C18反相製備柱，流動相為含0.05%TFA的去離子水(A)，含0.05%TFA的乙腈(B)，梯度洗脫A：B=5%~100%，洗脫10分鐘，然後用100% B洗脫5分鐘，流速1.0mL/min，柱溫：40℃)，得到題述化合物[7-[3-[5-[[[(2R)-2-羥基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯並三氮唑-1-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙酸酯；二三氟乙酸鹽(化合物4)的異構物1，白色固體(0.150g，產率19.6%)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ 8.26-8.16(m,2H),7.89(d,1H),7.70(d,1H),7.65-7.57(m,2H),7.36-7.19(m,4H),7.01(d,1H),6.55(d,1H),5.48-5.37(m,1H),5.05-4.93(m,1H),4.87-4.83(m,2H),4.50(s,2H),3.53-3.35(m,2H),3.28-3.16(m,4H),3.04-2.78(m,3H),2.56-2.20(m,4H),1.98-1.74(m,6H),1.70-1.42(m,6H),1.39-1.27(m,2H)。
19F NMR(376MHz,CD3OD)δ -75.32。
LCMS m/z=368.4[(M+2)/2]。
實施例6：[7-[3-[5-[[[(2R)-2-羥基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯並三氮唑-1-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙酸酯；二三氟乙酸鹽(化合物4)的異構物2
Isomer 2 of [7-[3-[5-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-cyclopentyl-2-hydroxy-2-phenyl-acetate；ditrifluoroacetic acid
第一步：[7-[3-(5-甲醯基苯並三氮唑-1-基)丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙酸酯(4A)的異構物2
Isomer 2 of[7-[3-(5-formylbenzotriazol-1-yl)propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-cyclopentyl-2-hydroxy-2-phenyl-acetate
將7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙酸酯(中間體2)的異構物2(0.600g,1.75mmol)溶於乙腈(20mL)中，加入1-(3-溴丙基)苯並三氮唑-5-甲醛(0.515g,1.92mmol)，加入二異丙基乙胺(0.316g,2.45mmol)，85℃反應4小時。反應液減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析分離純化(乙酸乙酯：石油醚(v/v)=1：1~1：0)，得到題述化合物[7-[3-(5-甲醯基苯並三 氮唑-1-基)丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙酸酯(4A)的異構物2，黃色固體(0.640g，產率68.9%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 10.14(s,1H),8.55(s,1H),8.07(d,1H),7.74-7.67(m,1H),7.65-7.57(m,2H),7.33(t,2H),7.29-7.23(m,1H),5.05-4.93(m,1H),4.76(t,2H),2.96-2.82(m,1H),2.54(s,4H),2.40-2.22(m,4H),1.93-1.22(m,16H)。
LCMS m/z=531.3[M+1]。
第二步：[7-[3-[5-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯並三氮唑-1-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙酸酯(4B)的異構物2
Isomer 2 of[7-[3-[5-[[[(2R)-2-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-cyclopentyl-2-hydroxy-2-phenyl-acetate
將[7-[3-(5-甲醯基苯並三氮唑-1-基)丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙酸酯(4A)的異構物2(0.640g,1.21mmol)溶於甲醇(10mL)中，加入5-[(1R)-2-氨基-1-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基甲基]-8-羥基-1H-喹啉-2-酮(1H)(0.403g,1.21mmol)和無水氯化鋅(0.658g,4.82mmol)，55℃反應1小時。加入氰基硼氫化鈉(0.227g,3.62mmol)，55℃反應2小時。反應液加入二氯甲烷(50mL)和飽和碳酸氫鈉溶液(20mL)，萃取。水相用二氯甲烷(30mL×2)萃取，合併有機相，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到題述化合物[7-[3-[5-[[[(2R)-2-[第三丁基(二 甲基)矽基]氧基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯並三氮唑-1-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙酸酯(4B)的異構物2，黃色固體(0.80g，產率77.9%)。
LCMS m/z=425.4[(M+2)/2]。
第三步：[7-[3-[5-[[[(2R)-2-羥基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯並三氮唑-1-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙酸酯；二三氟乙酸鹽(化合物4)的異構物2
Isomer 2 of[7-[3-[5-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-cyclopentyl-2-hydroxy-2-phenyl-acetate；ditrifluoroacetic acid
將[7-[3-[5-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯並三氮唑-1-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙酸酯(4B)的異構物2(0.800g,0.942mmol)溶於四氫呋喃(5mL)中，加入三乙胺三氫氟酸鹽(1.52g,9.42mmol)，室溫反應24小時。反應液加入10%(v/v)甲醇/二氯甲烷溶液(50mL)，加入飽和碳酸氫鈉溶液調節pH至8左右，萃取。水相用10%(v/v)甲醇/二氯甲烷溶液(50mL×2)萃取，合併有機相。有機相用飽和食鹽水(20mL×1)洗滌，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。殘留物用液相製備柱分離純化(製備條件：C18反相製備柱，流動相為含0.05%TFA的去離子水(A)，含0.05%TFA的乙腈(B)，梯度洗脫A：B=5%~100%，洗脫10分鐘，然後用100% B洗脫5分鐘，流速1.0mL/min，柱溫：40℃)，得到題述化合物[7-[3-[5-[[[(2R)-2-羥基-2-(8- 羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯並三氮唑-1-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-苯基-乙酸酯；二三氟乙酸鹽(化合物4)的異構物2，白色固體(0.250g，產率27.6%)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ 8.27-8.17(m,2H),7.89(d,1H),7.71(d,1H),7.61(d,2H),7.35-7.19(m,4H),7.01(d,1H),6.56(d,1H),5.48-5.30(m,1H),5.04-4.96(m,1H),4.85(s,2H),4.51(s,2H),3.52-3.34(m,2H),3.29-3.18(m,4H),3.03-2.77(m,3H),2.55-2.21(m,4H),1.98-1.73(m,6H),1.72-1.52(m,5H),1.51-1.26(m,3H)。
19F NMR(376MHz,CD3OD)δ -75.33。
LCMS m/z=368.4[(M+2)/2]。
實施例7：[7-[3-[6-[[[(2R)-2-羥基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-2-氧代-1,3-苯並噻唑-3-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯；二三氟乙酸鹽(化合物7)
[7-[3-[6-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]-2-oxo-1,3-benzothiazol-3-yl]propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate；ditrifluoroacetic acid
第一步：2-氧代-3H-1,3-苯並噻唑-6-甲醛(7B)
2-oxo-3H-1,3-benzothiazole-6-carbaldehyde
將6-溴-3H-1,3-苯並噻唑-2-酮(7A)(3.00g,13.0mmol)溶於四氫呋喃(15mL)中，氮氣保護，-10℃加入2M異丙基氯化鎂的四氫呋喃溶液(7mL,14mmol)，升溫至0℃反應1小時。-25℃加入2.5M正丁基鋰的四氫呋喃溶液(21mL,52mmol)，-10℃反應30分鐘。-10℃加入N,N-二甲基甲醯胺(9.5g,130mmol)，逐漸升至室溫反應0.5小時。取5g檸檬酸加入水(50mL)，反應液倒入其中，加入乙酸乙酯(50mL)，萃取。水相用乙酸乙酯(50mL×1)萃取，合併有機相。有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，用50%(v/v)乙酸乙酯/石油醚打漿，殘留物用矽膠柱層析分離純化(乙酸乙酯：石油醚(v/v)=0：1~1：4)，得到題述化合物2-氧代-3H-1,3-苯並噻唑-6-甲醛(7B)，白色固體(1.60g，產率68.7%)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 12.37(s,1H),9.90(s,1H),8.16(d,1H),7.84(dd,1H),7.29(d,1H)。
LCMS m/z=180.1[M+1]。
第二步：3-(3-羥基丙基)-2-氧代-1,3-苯並噻唑-6-甲醛(7C)
3-(3-hydroxypropyl)-2-oxo-1,3-benzothiazole-6-carbaldehyde
將2-氧代3H-1,3-苯並噻唑-6-甲醛(7B)(1.10g,6.14mmol)溶於四氫呋喃(20mL)中，加入溴丙醇(1.02g,7.37mmol)、三苯基磷(1.93g,7.37mmol)和DIAD(偶氮二甲酸二異丙酯，CAS：2446-83-5)(1.49g,7.37mmol)，室溫反應3小時。反應液濃縮，殘留物用矽膠柱層析分離純化(乙酸乙酯：石油醚(v/v)=0：1~3：7)，得到題述化合物3-(3-羥基丙基)-2-氧代-1,3-苯並噻唑-6-甲醛(7C)，白色固體(1.46g，產率100%)。
第三步：3-(3-溴丙基)-2-氧代-1,3-苯並噻唑-6-甲醛(7D)
3-(3-bromopropyl)-2-oxo-1,3-benzothiazole-6-carbaldehyde
將3-(3-羥基丙基)-2-氧代-1,3-苯並噻唑-6-甲醛(7C)(1.46g,6.15mmol)溶於二氯甲烷(30mL)中，加四溴化碳(4.90g,14.8mmol)和三苯基磷(3.87g,14.8mmol)，室溫反應2小時。反應液減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析分離純化(乙酸乙酯：石油醚(v/v)=0：1~1：4)，得到題述化合物3-(3-溴丙基)-2-氧代-1,3-苯並噻唑-6-甲醛(7D)，白色固體(0.550g，產率29.8%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.70(dd,1H),7.53(dd,1H),7.17-7.11(m,1H),6.67(s,1H),4.15-4.06(m,2H),3.51-3.39(m,2H),2.40-2.23(m,2H)。
第四步：[7-[3-[6-甲醯基-2-氧代-1,3-苯並噻唑-3-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯(7E)
[7-[3-(6-formyl-2-oxo-1,3-benzothiazol-3-yl)propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate
將7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯(中間體1)(0.666g,1.83mmol)溶於乙腈(20mL)中，加入3-(3-溴丙基)-2-氧代-1,3-苯並噻唑-6-甲醛(7D)(0.550g,1.83mmol)和二異丙基乙胺(0.331g,2.56mmol)，85℃反應4小時。反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析分離純化(乙酸乙酯：石油醚(v/v)=1：1~1：0)，得到題述化合物[7-[3-[6-甲醯基-2-氧代-1,3-苯並噻唑-3-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯(7E)，黃色固體(0.480g，產率45.0%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 9.95(s,1H),7.97(d,1H),7.84(dd,1H),7.34(d,1H),7.29(m,2H),7.17(m,2H),6.98(m,2H),5.18-5.09(m,1H),4.07(t,2H),2.41(s,2H),2.37-2.22(m,4H),1.99(s,2H),1.91-1.78(m,2H),1.62(s,6H)。
LCMS m/z=583.2[M+1]。
第五步：[7-[3-[6-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-2-氧代-1,3-苯並噻唑-3-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯(7F)
[7-[3-[6-[[[(2R)-2-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]-2-oxo-1,3-benzothiazol-3-yl]propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate
將[7-[3-[6-甲醯基-2-氧代-1,3-苯並噻唑-3-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯(7E)(0.480g,0.824mmol)溶於甲醇 (10mL)中，加入5-[(1R)-2-氨基-1-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基甲基]-8-羥基-1H-喹啉-2-酮(1H)(0.331g,0.988mmol)和無水氯化鋅(0.449g,3.29mmol)，55℃反應1小時。加入氰基硼氫化鈉(0.155g,2.47mmol)，55℃反應2小時。反應液加入二氯甲烷(50mL)和飽和碳酸氫鈉溶液(20mL)，萃取。水相用二氯甲烷(30mL×2)萃取，合併有機相，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到題述化合物[7-[3-[6-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-2-氧代-1,3-苯並噻唑-3-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯(7F)，黃色固體(0.742g，產率100%)。
LCMS m/z=451.3[(M+2)/2]。
第六步：[7-[3-[6-[[[(2R)-2-羥基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基1-2-氧代-1,3-苯並噻唑-3-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯；二三氟乙酸鹽(化合物7)
[7-[3-[6-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]-2-oxo-1,3-benzothiazol-3-yl]propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate；ditrifluoroacetic acid
將[7-[3-[6-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-2-氧代-1,3-苯並噻唑-3-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯(7F)(0.742g,0.823mmol)溶於四氫呋喃(5mL)中，加入三乙胺三氫氟酸鹽(1.33g,8.23mmol)，室溫反應24小時。反應液加入10%(v/v)甲醇/二氯甲烷溶液(50mL)，加入飽和碳酸氫鈉溶液調節pH至8左右，萃取。水相用10%(v/v)甲醇/二氯甲烷溶液(50mL×2)萃取，合併有機相。有機相用飽和食鹽水(20mL×1)洗滌，用無水硫酸鈉乾 燥，過濾，濾液減壓濃縮。殘留物用液相製備柱分離純化(製備條件：C18反相製備柱，流動相為含0.05%TFA的去離子水(A)，含0.05%TFA的乙腈(B)，梯度洗脫A：B=5%~100%，洗脫10分鐘，然後用100% B洗脫5分鐘，流速1.0mL/min，柱溫：40℃)，得到題述化合物[7-[3-[6-[[[(2R)-2-羥基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-2-氧代-1,3-苯並噻唑-3-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯；二三氟乙酸鹽(化合物7)，白色固體(0.200g，產率23.9%)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ 8.23(d,1H),7.69(d,1H),7.51(m,1H),7.40-7.32(m,3H),7.27(d,1H),7.13(s,2H),7.04-6.92(m,3H),6.60(d,1H),5.42(m,1H),5.22-5.04(m,1H),4.33(s,2H),4.11(t,2H),3.43(m,2H),3.26-3.11(m,4H),3.01-2.81(m,2H),2.57-2.41(m,1H),2.41-2.27(m,1H),2.25-2.09(m,2H),2.03-1.88(m,3H),1.88-1.71(m,3H)。
19F NMR(376MHz,CD3OD)δ -75.43。
LCMS m/z=394.1[(M+2)/2]。
實施例8：[7-[3-[6-[[[(2R)-2-羥基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-2-羰基-1,3-苯並噁唑-3-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯；二三氟乙酸鹽(化合物8)
[7-[3-[6-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]-2-oxo-1,3-benzoxazol-3-yl]propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate；ditrifluoroacetic acid
第一步：2-氧代-3H-1,3-苯並噁唑-6-甲醛(8B)
2-oxo-3H-1,3-benzoxazol-6-carbaldehyde
將6-溴-3H-1,3-苯並噁唑-2-酮(8A)(1.78g,13mmol)溶於四氫呋喃(15mL)中，氮氣保護，-10℃加入2M異丙基氯化鎂的四氫呋喃溶液(7mL,14mmol)，升溫至0℃反應1小時。-25℃加入2.5M正丁基鋰的四氫呋喃溶液(21mL,52mmol)，-10℃反應30min。-10℃加入N,N-二甲基甲醯胺(9.5g,130mmol)，逐漸升至室溫反應0.5小時。取檸檬酸(5g)加入水(50mL)，反應液倒入其中，加入乙酸乙酯(50mL)，萃取。水相用乙酸乙酯(50mL×1)萃取，合併有機相。有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，用50%(v/v)乙酸乙酯/石油醚打漿，殘留物用矽膠柱層析分離純化(乙酸乙酯：石油醚(v/v)=0：1~1：4)，得到題述化合物2-氧代-3H-1,3-苯並噁唑-6-甲醛(8B)，白色固體(1.60g，產率75.4%)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 12.16(s,1H),9.92(s,1H),7.78(dd,1H),7.74(d,1H),7.29(d,1H)。
LCMS m/z=164.1[M+1]。
第二步：3-(3-羥基丙基)-2-氧代-1,3-苯並噁唑-6-甲醛(8C)
3-(3-hydroxypropyl)-2-oxo-1,3-benzoxazol-6-carbaldehyde
將2-氧代-3H-1,3-苯並噁唑-6-甲醛(8B)(1.00g,6.14mmol)溶於四氫呋喃(20mL)中，加入溴丙醇(1.33g,9.56mmol)、三苯基磷(2.51g,9.56mmol)和DIAD(偶氮二甲酸二異丙酯)(1.93g,9.56mmol)，室溫反應3小時。反應液濃縮，殘留物用矽膠柱層析分離純化(乙酸乙酯：石油醚(v/v)=0：1~3：7)，得到題述化合物3-(3-羥基丙基)-2-氧代-1,3-苯並噁唑-6-甲醛(8C)，白色固體(1.30g，產率96.0%)。
第三步：3-(3-溴丙基)-2-氧代-1,3-苯並噁唑-6-甲醛(8D)
3-(3-bromopropyl)-2-oxo-1,3-benzoxazol-6-carbaldehyde
將3-(3-羥基丙基)-2-氧代-1,3-苯並噁唑-6-甲醛(8C)(1.7g,7.7mmol)溶於二氯甲烷(30mL)中，加四溴化碳(6.10g,18mmol)和加入三苯基磷(4.8g,18mmol)，室溫反應2小時。反應液減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析分離純化(乙酸乙酯：石油醚(v/v)=0：1~1：4)，得到題述化合物3-(3-溴丙基)-2-氧代-1,3-苯並噁唑-6-甲醛(8D)，白色固體(0.850g，產率38.9%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.54(d,1H),7.37(m,1H),7.05(d,1H),6.68(s,1H),4.01(t,2H),3.45(t,2H),2.41-2.30(m,2H)。
第四步：[7-[3-[6-甲醯基-2-氧代-1，3-苯並噁唑-3-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯(8E)
[7-[3-(6-formyl-2-oxo-1,3-benzoxazol-3-yl)propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate
將7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯(中間體1)(1.09g,2.99mmol)溶於乙腈(20mL)中，加入3-(3-溴丙基)-2-氧代-1,3-苯並噁唑-6-甲醛(8D)(0.850g,2.99mmol)，加入二異丙基乙胺(0.541g,4.49mmol),85℃反應4小時。反應液濃縮，殘留物用矽膠柱層析分離純化(乙酸乙酯：石油醚(v/v)=1：1~1：0)，得到題述化合物[7-[3-[6-甲醯基-2-氧代-1,3-苯並噁唑-3-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯(8E)，黃色固體(0.630g，產率37.2%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 9.94(s,1H),7.70(m,1H),7.58-7.51(m,1H),7.50-7.42(m,1H),7.31-7.27(m,2H),7.18-7.13(m,2H),7.02-6.92(m,2H),5.17-5.08(m,1H),4.00-3.83(m,2H),2.44-2.18(m,6H),1.99(s,2H),1.90-1.77(m,2H),1.70-1.45(m,6H)。
LCMS m/z=567.2[M+1]。
第五步：[7-[3-[6-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-2-氧代-1,3-苯並噁唑-3-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯(8F)
[7-[3-[6-[[[(2R)-2-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]-2-oxo-1,3-benzoxazol-3-yl]propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate
將[7-[3-[6-甲醯基-2-氧代-1,3-苯並噁唑-3-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷 -2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯(8E)(0.630g,1.11mmol)溶於甲醇(10mL)中，加入5-[(1R)-2-氨基-1-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基甲基]-8-羥基-1H-喹啉-2-酮(1H)(0.446g,1.33mmol)，加入無水氯化鋅(0.606g,4.45mmol)，55℃反應1小時。加入氰基硼氫化鈉(0.210g,3.34mmol)，55℃反應2小時。反應液加入二氯甲烷(50mL)，加入飽和碳酸氫鈉溶液(20mL)，萃取。水相用二氯甲烷(30mL×2)萃取，合併有機相，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到題述化合物[7-[3-[6-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-2-氧代-1,3-苯並噁唑-3-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯(8F)，黃色固體(0.984g，產率100%)。
LCMS m/z=443.2[(M+2)/2]。
第六步：[7-[3-[6-[[[(2R)-2-羥基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-2-氧代-1,3-苯並噁唑-3-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯；二三氟乙酸鹽(化合物8)
[7-[3-[6-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]-2-oxo-1,3-benzoxazol-3-yl]propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate；ditrifluoroacetic acid
將[7-[3-[6-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-2-氧代-1,3-苯並噁唑-3-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯(8F)(0.984g,1.11 mmol)溶於四氫呋喃(5mL)中，加入三乙胺三氫氟酸鹽(1.79g,11.1mmol)，室溫反應24小時。反應液加入10%(v/v)甲醇/二氯甲烷溶液(50mL)，加入飽和碳酸氫鈉溶 液調節pH至8左右，萃取。水相用10%(v/v)甲醇/二氯甲烷溶液(50mL×2)萃取，合併有機相。有機相用飽和食鹽水(20mL×1)洗滌，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。殘留物用液相製備柱分離純化(製備條件：C18反相製備柱，流動相為含0.05%TFA的去離子水(A)，含0.05%TFA的乙腈(B)，梯度洗脫A：B=5%~100%，洗脫10分鐘，然後用100% B洗脫5分鐘，流速1.0mL/min，柱溫：40℃)，得到題述化合物[7-[3-[6-[[[(2R)-2-羥基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-2-羰基-1,3-苯並噁唑-3-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯；二三氟乙酸鹽(化合物8)，白色固體(0.120g，產率10.8%)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ 8.24(d,1H),7.43(s,1H),7.40-7.33(m,3H),7.27(m,2H),7.13(s,2H),7.02(d,1H),6.97(m,2H),6.61(d,1H),5.41(m,1H),5.20-5.06(m,1H),4.33(s,2H),3.98(t,2H),3.44(m,2H),3.27-3.14(m,4H),3.02-2.80(m,2H),2.57-2.42(m,1H),2.42-2.28(m,1H),2.27-2.14(m,2H),2.02-1.87(m,3H),1.88-1.71(m,3H)。
19F NMR(376MHz,CD3OD)δ -75.40。
LCMS m/z=386.1[(M+2)/2]。
實施例9：[7-[3-[5-[[[(2R)-2-羥基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯並三氮唑-1-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-(2-噻吩基)乙酸酯；二三氟乙酸鹽(化合物9)的異構物1
[7-[3-[5-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-cyclopentyl-2-hydroxy-2-(2-thienyl)acetate；ditrifluoroacetic acid
第一步：[7-[3-(5-甲醯基苯並三氮唑-1-基)丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-(2-噻吩基)乙酸酯(9A)的異構物1
[7-[3-(5-formylbenzotriazol-1-yl)propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-cyclopentyl-2-hydroxy-2-(2-thienyl)acetate
將7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基2-環戊基-2-羥基-2-(2-噻吩基)乙酸酯(中間體3)的異構物1(0.600g,1.72mmol)溶於乙腈(20mL)中，加入1-(3-溴丙基)苯並三氮唑-5-甲醛(1F)(0.506g,1.89mmol)，加入二異丙基乙胺(0.311g,2.40mmol),85℃反應4小時。反應液減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析分離純化(乙酸乙酯：石油醚(v/v)=1：1~1：0)，得到題述化合物[7-[3-(5-甲醯基苯並三氮唑-1-基)丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-(2-噻吩基)乙酸酯(9A)的異構物1，黃色固體(0.800g，產率86.8%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 10.14(s,1H),8.55(s,1H),8.08(m,1H),7.77(d,1H),7.21(m,1H),7.10(m,1H),6.96(m,1H),5.11-4.94(m,1H),4.81(t,2H),3.77-3.63(m,1H),2.77(m,1H),2.64(s,4H),2.47(s,2H),2.43-2.35(m,1H),2.35-2.26(m,1H),1.91(m,1H),1.87-1.74(m,4H),1.57-1.41(m,10H)。
LCMS m/z=537.3[M+1]。
第二步：[7-[3-[5-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯並三氮唑-1-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-(2-噻吩基)乙酸酯(9B)的異構物1
[7-[3-[5-[[[(2R)-2-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-cyclopentyl-2-hydroxy-2-(2-thienyl)acetate
將[7-[3-(5-甲醯基苯並三氮唑-1-基)丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-(2-噻吩基)乙酸酯(9A)的異構物1(0.800g,1.49mmol)溶於甲醇(10mL)中，加入5-[(1R)-2-氨基-1-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基甲基]-8-羥基-1H-喹啉-2-酮(1H)(0.499g,1.49mmol)，加入無水氯化鋅(0.813g,5.96mmol)，55℃反應1小時。加入氰基硼氫化鈉(0.281g,4.47mmol)，55℃反應2小時。反應液加入二氯甲烷(50mL)和飽和碳酸氫鈉溶液(20mL)，萃取。水相用二氯甲烷(30mL×2)萃取，合併有機相，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到題述化合物[7-[3-[5-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯並三氮唑-1-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-(2-噻吩基)乙酸酯(9B)的異構物1，黃色固體(1.00g，產率78.5%)。
LCMS m/z=428.3[(M+2)/2]。
第三步：[7-[3-[5-[[[(2R)-2-羥基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯並三氮唑-1-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-(2-噻吩基)乙酸酯；二三氟乙酸(化合物9)的異構物1
[7-[3-[5-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-cyclopentyl-2-hydroxy-2-(2-thienyl)acetate；ditrifluoroacetic acid
將[7-[3-[5-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯並三氮唑-1-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-(2-噻吩基)乙酸酯(9B)的異構物1(1.00g,1.17mmol)溶於四氫呋喃(5mL)中，加入三乙胺三氫氟酸鹽(1.9g,12mmol)，室溫反應24小時。反應液加入10%(v/v)甲醇/二氯甲烷溶液(50mL)，加入飽和碳酸氫鈉溶液調節pH至8左右，萃取分液。水相用10%(v/v)甲醇/二氯甲烷溶液(50mL×2)萃取，合併有機相。有機相用飽和食鹽水(20mL×1)洗滌，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。殘留物用液相製備柱分離純化(製備條件：C18反相製備柱，流動相為含0.05%TFA的去離子水(A)，含0.05%TFA的乙腈(B)，梯度洗脫A：B=5%~100%，洗脫10分鐘，然後用100% B洗脫5分鐘，流速1.0mL/min，柱溫：40℃)，得到題述化合物[7-[3-[5-[[[(2R)-2-羥基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯並三氮唑-1-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-(2-噻吩基)乙酸酯；二三氟乙酸鹽(化合物9)的異構物1，白色固體(0.450g，產率39.7%)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ 8.21(d,2H),7.89(d,1H),7.70(m,1H),7.33-7.22(m,2H),7.12(d,1H),7.01(d,1H),6.95(dd,1H),6.55(d,1H),5.43(m,1H),5.10-4.98(m,1H),4.87-4.83(m,2H),4.57-4.42(m,2H),3.53-3.39(m,2H),3.29-3.21(m,4H),3.02-2.77(m,3H),2.57-2.27(m,4H),2.05-1.74(m,6H),1.68-1.43(m,8H)。
19F NMR(376MHz,CD3OD)δ -74.98。
LCMS m/z=371.3[(M+2)/2]。
實施例10：[7-[3-[5-[[[(2R)-2-羥基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯並三氮唑-1-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-(2-噻吩基)乙酸酯；二三氟乙酸鹽(化合物9)的異構物2
[7-[3-[5-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-cyclopentyl-2-hydroxy-2-(2-thienyl)acetate；ditrifluoroacetic acid
第一步：[7-[3-(5-甲醯基苯並三氮唑-1-基)丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-(2-噻吩基)乙酸酯(9A)的異構物2
[7-[3-(5-formylbenzotriazol-l-yl)propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-cyclopentyl-2-hydroxy-2-(2-thienyl)acetate
將7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基2-環戊基-2-羥基-2-(2-噻吩基)乙酸酯(中間體3)的異構物2(0.600g,1.72mmol)溶於乙腈(20mL)中，加入1-(3-溴丙基)苯並三氮唑-5-甲醛(0.506g,1.89mmol)，加入二異丙基乙胺(0.311g,2.40mmol)，85℃反應4小時。反應液濃縮，殘留物用矽膠柱層析分離純化(乙酸乙酯：石油醚(v/v)=1：1~1：0)，得到題述化合物[7-[3-(5-甲醯基苯並三氮唑-1-基)丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-(2-噻吩基)乙酸酯(9A)的異構物2，黃色固體(0.800g，產率86.7%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 10.14(s,1H),8.55(s,1H),8.08(m,1H),7.79(d,1H),7.21(m,1H),7.10(m,1H),6.96(m,1H),5.11-4.98(m,1H),4.81(t,2H),3.78-3.66(m,1H),2.83-2.72(m,1H),2.66(s,4H),2.53-2.43(m,2H),2.43-2.34(m,1H),2.34-2.24(m,1H),1.91(m,1H),1.84-1.73(m,4H),1.56-1.44(m,10H)。
LCMS m/z=537.3[M+1]。
第二步：[7-[3-[5-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯並三氮唑-1-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-(2-噻吩基)乙酸酯(9B)的異構物2
[7-[3-[5-[[[(2R)-2-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-cyclopentyl-2-hydroxy-2-(2-thienyl)acetate
將[7-[3-(5-甲醯基苯並三氮唑-1-基)丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-(2-噻吩基)乙酸酯(9A)的異構物2(0.800g,1.49mmol)溶於甲醇(10mL)中，加入5-[(1R)-2-氨基-1-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基甲基]-8-羥基-1H-喹啉-2-酮(1H)(0.499g,1.49mmol)，加入無水氯化鋅(0.813g,5.96mmol)，55℃反應1小時。加入氰基硼氫化鈉(0.281g,4.47mmol)，55℃反應2小時。反應液加入二氯甲烷(50mL)，加入飽和碳酸氫鈉溶液(20mL)，萃取。水相用二氯甲烷(30mL×2)萃取，合併有機相，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到題述化合物[7-[3-[5-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯並三氮唑-1-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-(2-噻吩基)乙酸酯(9B)的異構物2，黃色固體(1.00g，產率78.5%)。
LCMS m/z=428.4[(M+2)/2]。
第三步：[7-[3-[5-[[[(2R)-2-羥基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯並三氮唑-1-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-(2-噻吩基)乙酸酯；二三氟乙酸鹽(化合物9)的異構物2
[7-[3-[5-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-cyclopentyl-2-hydroxy-2-(2-thienyl)acetate；ditrifluoroacetic acid
將[7-[3-[5-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯並三氮唑-1-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-(2-噻吩基)乙酸酯(9B)的異構物2(1.0g,1.l7mmol)溶於四氫呋喃(5mL)中，加入三乙胺三氫氟酸鹽(1.89g,11.7mmol)，室溫反應24 小時。反應液加入10%(v/v)甲醇/二氯甲烷溶液(50mL)，加入飽和碳酸氫鈉溶液調節pH至8左右，萃取。水相用10%(v/v)甲醇/二氯甲烷溶液(50mL×2)萃取，合併有機相。有機相用飽和食鹽水(20mL×1)洗滌，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。殘留物用液相製備柱分離純化(製備條件：C18反相製備柱，流動相為含0.05%TFA的去離子水(A)，含0.05%TFA的乙腈(B)，梯度洗脫A：B=5%~100%，洗脫10分鐘，然後用100% B洗脫5分鐘，流速1.0mL/min，柱溫：40℃)，得到題述化合物[7-[3-[5-[[[(2R)-2-羥基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯並三氮唑-1-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-環戊基-2-羥基-2-(2-噻吩基)乙酸酯；二三氟乙酸鹽(化合物9)的異構物2，白色固體(0.500g，產率44.1%)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ 8.27-8.16(m,2H),7.89(d,1H),7.71(m,1H),7.32-7.22(m,2H),7.12(d,1H),7.01(d,1H),6.95(dd,1H),6.55(d,1H),5.44(m,1H),5.09-5.00(m,1H),4.88-4.83(m,2H),4.55-4.45(m,2H),3.53-3.38(d,2H),3.29-3.18(m,4H),3.02-2.78(m,3H),2.58-2.24(m,4H),2.04-1.76(m,6H),1.70-1.38(m,8H)。
19F NMR(376MHz,CD3OD)δ -74.88。
LCMS m/z=371.3[(M+2)/2]。
實施例11：[7-[3-[3-[5-[[[(2R)-2-羥基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯並三氮唑-1-基]丙基-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯；二三氟乙酸鹽(化合物11)
[7-[3-[3-[5-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]propyl-methyl-amino]-3-oxo-propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate；ditrifluoroacetic acid
第一步：1-(3-溴丙基)-5-(1,3-二氧戊環-2-基)苯並三氮唑(11A)
1-(3-bromopropyl)-5-(1,3-dioxolan-2-yl)benzotriazole
將1-(3-溴丙基)苯並三氮唑-5-甲醛(1F)(1.5g,5.6mmol)溶於甲苯(40mL)中，加入乙二醇(0.38g,6.2mmol)，加入對甲苯磺酸(0.011g,0.056mmol)，120℃反應3小時。反應液加入乙酸乙酯(30mL)和水(30mL)，萃取。水相用乙酸乙酯(30mL×1)萃取，合併有機相，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析分離純化(乙酸乙酯：石油醚(v/v)=0：1~1：4)，得到題述化合物1-(3-溴丙基)-5-(1,3-二氧戊環-2-基)苯並三氮唑(11A)，無色油狀(1.2g，產率69%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 8.17(s,1H),7.69-7.60(m,2H),5.97(s,1H),4.82(t,2H),4.21-4.04(m,4H),3.37(t,2H),2.62-2.53(m,2H)。
LCMS m/z=312.1[M+1]。
第二步：3-[5-(1,3-二氧戊環-2-基)苯並三氮唑-1-基]-N-甲基-丙基-1-胺(11B)
3-[5-(1,3-dioxolan-2-yl)benzotriazol-1-yl]-N-methyl-propan-1-amine
將1-(3-溴丙基)-5-(1,3-二氧戊環-2-基)苯並三氮唑(11A)(1.2g,3.8mmol)加入50mL單口瓶，加入2N甲胺的乙醇溶液(15mL)，密閉室溫反應12小時。反應液加入二氯甲烷(30mL)和飽和食鹽水(20mL)，萃取。有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到題述化合物3-[5-(1,3-二氧戊環-2-基)苯並三氮唑-1-基]-N-甲基-丙基-1-胺(11B)，黃色油狀(1.0g，產率99%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 8.16(s,1H),7.65-7.56(m,2H),5.97(s,1H),4.75(t,2H),4.23-4.02(m,4H),2.58(t,2H),2.41(s,3H),2.24-2.10(m,2H)。
LCMS m/z=263.2[M+1]。
第三步：[7-[3-[3-[5-(1,3-二氧戊環-2-基)苯並三氮唑-1-基]丙基-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯(11C)
[7-[3-[3-[5-(1,3-dioxolan-2-yl)benzotriazol-1-yl]propyl-methyl-amino]-3-oxo-propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate
將3-[5-(1,3-二氧戊環-2-基)苯並三氮唑-1-基]-N-甲基-丙基-1-胺(11B)(0.397g,1.52mmol)溶於二氯甲烷(40mL)中，加3-[2-[2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙醯基]氧基-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-基]丙酸(中間體4)(0.660g,1.52mmol)，加入HATU(2-(7-偶氮苯並三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯)(0.864g,2.27mmol)和二異丙基乙胺(1.57g,12.1mmol)，室溫反應3小時。反應液加入水(50mL)和二氯甲烷(50mL)萃取。有機相用無水硫酸鈉乾 燥，過濾，濾液減壓濃縮。殘留物用矽膠柱層析分離純化(甲醇：二氯甲烷(v/v)=1：99~1：19)，得到題述化合物[7-[3-[3-[5-(1,3-二氧戊環-2-基)苯並三氮唑-1-基]丙基-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯(11C)，黃色油狀(0.900g，產率87.4%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 8.15(t,1H),7.70-7.60(m,1H),7.59-7.51(m,1H),7.31-7.27(m,2H),7.21-7.13(m,2H),7.02-6.93(m,2H),5.96(s,1H),5.18-5.07(m,1H),4.70-4.58(m,2H),4.20-4.13(m,2H),4.13-4.04(m,2H),3.54-3.42(m,2H),3.04-2.88(m,3H),2.77-2.66(m,2H),2.55-2.22(m,10H),1.92-1.80(m,2H),1.70-1.53(m,4H)。
LCMS m/z=680.3[M+1]。
第四步：[7-[3-[3-[5-甲醯基苯並三氮唑-1-基]丙基-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯(11D)
[7-[3-[3-(5-formylbenzotriazol-1-yl)propyl-methyl-amino]-3-oxo-propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate
將[7-[3-[3-[5-(1,3-二氧戊環-2-基)苯並三氮唑-1-基]丙基-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯(11C)(0.100g,0.147mmol)溶於丙酮(4mL)和水(1mL)中，加入對甲苯磺酸(0.280g,0.147mmol)，70℃反應3小時。反應液加入加入二氯甲烷(20mL)和飽和碳酸氫鈉溶液(10mL)，萃取。有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到題述化合物[7-[3-[3-[5-甲醯基苯並三氮唑-1-基]丙基-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯(11D)，黃色油狀(0.065g，產率69%)。
LCMS m/z=636.3[M+1]。
第五步：[7-[3-[3-[5-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-2-(8-羥基-2- 氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯並三氮唑-1-基]丙基-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯(11E)
[7-[3-[3-[5-[[[(2R)-2-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]propyl-methyl-amino]-3-oxo-propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate
將[7-[3-[3-[5-甲醯基苯並三氮唑-1-基]丙基-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯(11D)(0.665g,1.05mmol)溶於甲醇(10mL)中，加入5-[(1R)-2-氨基-1-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基甲基]-8-羥基-1H-喹啉-2-酮(1H)(0.445g,1.36mmol)，加入無水氯化鋅(0.570g,4.18mmol)，55℃反應1小時。加入氰基硼氫化鈉(0.197g,3.14mmol)，55℃反應2小時。反應液加入二氯甲烷(50mL)和飽和碳酸氫鈉溶液(20mL)，萃取。水相用二氯甲烷(30mL×2)萃取，合併有機相，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到題述化合物[7-[3-[3-[5-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯並三氮唑-1-基]丙基-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯(11E)，黃色固體(0.60g，產率60.1%)。
LCMS m/z=477.8[(M+2)/2]。
第六步：[7-[3-[3-[5-[[[(2R)-2-羥基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯並三氮唑-1-基]丙基-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯；二三氟乙酸鹽(化合物11)
[7-[3-[3-[5-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]propyl-methyl-amino]-3-oxo-propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate；ditrifluoroacetic acid
將[7-[3-[3-[5-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯並三氮唑-1-基]丙基-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯(11E)(0.600g,0.629mmol)溶於四氫呋喃(5mL)中，加入三乙胺三氫氟酸鹽(1.01g,6.29mmol)，室溫反應24小時。反應液加入10%(v/v)甲醇/二氯甲烷溶液(50mL)，加入飽和碳酸氫鈉溶液調節pH至8左右，萃取。水相用10%(v/v)甲醇/二氯甲烷溶液(50mL×2)萃取，合併有機相。有機相用飽和食鹽水(20mL×1)洗滌，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。殘留物用液相製備柱分離純化(製備條件：C18反相製備柱，流動相為含0.05%TFA的去離子水(A)，含0.05%TFA的乙腈(B)，梯度洗脫A：B=5%~100%，洗脫10分鐘，然後用100% B洗脫5分鐘，流速1.0mL/min，柱溫：40℃)，得到題述化合物[7-[3-[3-[5-[[[(2R)-2-羥基-2-(8-羥基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯並三氮唑-1-基]丙基-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯；二三氟乙酸鹽(化合物11)，白色固體(0.200g，產率29.8%)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ 8.28-8.19(m,2H),7.96-7.88(m,1H),7.78-7.68(m,1H),7.39(dd,2H),7.29(d,1H),7.15(s,2H),7.07-6.95(m,3H),6.63-6.53(m,1H),5.49-5.41(m,1H),5.20-5.11(m,1H),4.83-4.75(m,2H),4.53(s,2H),3.58-3.35(m,6H),3.31-3.27(m,2H),3.07-3.00(m,3H),3.00-2.92(m,2H),2.91-2.86(m,2H),2.60-2.27(m,4H),2.04-1.94(m,3H),1.91-1.75(m,3H)。
19F NMR(376MHz,CD3OD)δ -75.47。
LCMS m/z=420.8[(M+2)/2]。
實施例12：[7-[3-[5-[[[(2R)-2-羥基-2-(4-羥基-2-氧代-3H-1,3-苯並噻唑-7-基)乙基]氨基]甲基]苯並三氮唑-1-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-二(2-噻吩基)乙酸酯；二三氟乙酸鹽(化合物12)
[7-[3-[5-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(4-hydroxy-2-oxo-3H-1,3-benzothiazol-7-yl)ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate；ditrifluoroacetic acid
第一步：[7-[3-[5-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)甲矽烷基]氧基-2-[4-[第三丁基(二甲基)甲矽烷基]氧基-2-氧代-3H-1,3-苯並噻唑-7-基]乙基]氨基]甲基]苯並三氮唑-1-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-二(2-噻吩基)乙酸酯(12A)
[7-[3-[5-[[[(2R)-2-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-2-[4-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-2-oxo-3H-1,3-benzothiazol-7-yl]ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate
將[7-[3-(5-甲醯基苯並三氮唑-1-基)丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯(1G)(0.55g，1.0mmol)和7-[(1R)-2-氨基-1-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基乙基]-4-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基-3H-1,3-苯並噻唑-2-酮(中間體5)(0.55g，1.2mmol)溶於甲醇(10mL)中，加入氯化鋅(0.54g，4.0mmol)，升溫至55℃反應1小時，加入氰基硼氫化鈉(0.188g，3.0mmol)，繼續反應2小時。反應結束後，反應液加入水(20mL)，用二氯甲烷(50mL×2)萃取，飽和食鹽水(30mL×1)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘留物用矽膠管柱層析分離純化(用二氯甲烷/甲醇(v/v)=100/1)，得到題述化合物[7-[3-[5-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)甲矽烷基]氧基-2-[4-[第三丁基(二甲基)甲矽烷基]氧基-2-氧代-3H-1,3-苯並噻唑-7-基]乙基]氨基]甲基]苯並三氮唑-1-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-二(2-噻吩基)乙酸酯(12A)，黃色固體(0.43g，產率44%)。
LCMS m/z=989.4[M+1]。
第二步：[7-[3-[5-[[[(2R)-2-羥基-2-(4-羥基-2-氧代-3H-1,3-苯並噻唑-7-基)乙基]氨基]甲基]苯並三氮唑-1-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]-2-羥基-2,2-二(2-噻吩基)乙酸酯；二三氟乙酸鹽(化合物12)
[7-[3-[5-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(4-hydroxy-2-oxo-3H-1,3-benzothiazol-7-yl)ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl] 2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate；ditrifluoroacetic acid
將[7-[3-[5-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)甲矽烷基]氧基-2-[4-[第三丁基(二甲基)甲矽烷基]氧基-2-氧代-3H-1,3-苯並噻唑-7-基]乙基]氨基]甲基]苯並三氮唑-1-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-二(2-噻吩基)乙酸酯(12A)(0.27g，0.27mmol)溶於四氫呋喃(5mL)中，加入三乙胺三氫氟酸鹽(0.18g，1.1mmol)，室溫反應過夜。用飽和碳酸氫鈉水溶液調pH約為9，用二氯甲烷(30mL×1)萃取，有機相用飽和食鹽水(30mL×1)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，殘留物用液相製備柱分離純化(製備條件：C18反相製備柱，流動相為含0.05%TFA的去離子水(A)，乙腈(B)，25%乙腈等度洗脫20分鐘)，得到題述化合物[7-[3-[5-[[[(2R)-2-羥基-2-(4-羥基-2-氧代-3H-1,3-苯並噻唑-7-基)乙基]氨基]甲基]苯並三氮唑-1-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]-2-羥基-2,2-二(2-噻吩基)乙酸酯；二三氟乙酸鹽(化合物12)，類白色固體(0.09g，產率40%)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ 8.23(s,1H),7.95(d,1H),7.75(dd,1H),7.39(dd,2H),7.19-7.12(m,2H),7.06-6.93(m,3H),6.77(d,1H),5.20-5.09(m,1H),5.01(t,1H),4.88(d,2H),4.57-4.44(m,2H),3.56-3.37(m,2H),3.29-3.21(m,2H),3.19(d,2H),2.94(s,2H),2.57-2.46(m,3H),2.37(s,1H),1.95(s,3H),1.80(d,3H)。
LCMS m/z=761.3[M+1]。
化合物12的游離鹼：[7-[3-[5-[[[(2R)-2-羥基-2-(4-羥基-2-氧代-3H-1,3-苯並噻唑-7-基)乙基]氨基]甲基]苯並三氮唑-1-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-二(2-噻吩基)乙酸酯
[7-[3-[5-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(4-hydroxy-2-oxo-3H-1,3-benzothiazol-7-yl)ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate
將[7-[3-[5-[[[(2R)-2-[第三丁基(二甲基)甲矽烷基]氧基-2-[4-[第三丁基(二甲基)甲矽烷基]氧基-2-氧代-3H-1,3-苯並噻唑-7-基]乙基]氨基]甲基]苯並三氮唑-1-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-二(2-噻吩基)乙酸酯(12A)(30.0g，30.3mmol)溶於四氫呋喃(120mL)中，加入三乙胺三氫氟酸鹽(19.56g，0.12mol)，室溫反應過夜。用飽和碳酸氫鈉水溶液調pH至9左右，用二氯甲烷：甲醇=2：1(300mL×1)萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，殘留物用矽膠管柱層析分離純化(用二氯甲烷/甲醇(v/v)=100/1到7/1)，得到題述化合物[7-[3-[5-[[[(2R)-2-羥基-2-(4-羥基-2-氧代-3H-1,3-苯並噻唑-7-基)乙基]氨基]甲基]苯並三氮唑-1-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-二(2-噻吩基)乙酸酯(化合物12的游離鹼)，白色固體(11.0g，產率47.7%)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 7.88(s,1H),7.75(d,1H),7.50-7.48(dd,1H),7.47-7.46(dd,2H),7.09-7.07(dd,2H),6.99-6.97(dd,2H),6.86(d,1H),6.68(d,1H),5.09-4.89(m,1H),4.75-4.50(m,3H),3.86(s,2H),2.71-2.58 (m,2H),2.27-1.93(m,10H),1.73-1.68m(m,2H),1.48-1.42(m,4H)
LCMS m/z=761.3[M+1]。
實施例13：[7-[3-[5-[[[(2R)-2-羥基-2-[4-羥基-3-(羥甲基)苯基]乙基]氨基]甲基]苯並三氮唑-1-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-二(2-噻吩基)乙酸酯；二三氟乙酸鹽(化合物13)
[7-[3-[5-[[[(2R)-2-hydroxy-2-[4-hydroxy-3-(hydroxymethyl)phenyl]ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate；ditrifluoroacetic acid
第一步：7-[3-[5-[[[(2R)-2-(2,2-二甲基-4H-1,3-苯並二氧六環-6-基)-2-羥基乙基]氨基]甲基]苯並三氮唑-1-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-二(2-噻吩基)乙酸酯(13B)
7-[3-[5-[[[(2R)-2-(2,2-dimethyl-4H-1,3-benzodioxin-6-yl)-2-hydroxy-ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate
將[7-[3-(5-甲醯基苯並三氮唑-1-基)丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-雙(2-噻吩基)乙酸酯(1G)(0.4g，0.726mmol)和(1R)-2-氨基-1-(2,2-二甲基-4H-1,3-苯並二氧六環-6-基)乙醇(13A)(0.195g，0.872mmol)加入反應瓶中，加入甲醇(10mL)和氯化鋅(0.396g，2.91mmol)，55℃反應1小時。加入氰基硼氫化鈉(0.137g，2.18mmol)，55℃反應2小時。反應結束後，反應液加入水(20mL)和二氯甲烷(30mL)萃取，水相用二氯甲烷(20mL×1)萃取，合併有機相。有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。殘留物用矽膠管柱層析分析純化(甲醇/二氯甲烷(v/v)=1：49~1：19)，得到題述化合物7-[3-[5-[[[(2R)-2-(2,2-二甲基-4H-1,3-苯並二氧六環-6-基)-2-羥基乙基]氨基]甲基]苯並三氮唑-1-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-二(2-噻吩基)乙酸酯(13B)，黃色固體(0.3g，產率54%)
LC-MS m/z=758.3[M+1]。
第二步：[7-[3-[5-[[[(2R)-2-羥基-2-[4-羥基-3-(羥甲基)苯基]乙基]氨基]甲基]苯並三氮唑-1-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-二(2-噻吩基)乙酸酯；二三氟乙酸鹽(化合物13)
[7-[3-[5-[[[(2R)-2-hydroxy-2-[4-hydroxy-3-(hydroxymethyl)phenyl]ethyl]a mino]methyl]benzotriazol-1-yl]propyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate；ditrifluoroacetic acid
將7-[3-[5-[[[(2R)-2-(2,2-二甲基-4H-1,3-苯並二氧六環-6-基)-2-羥基乙基]氨基]甲基]苯並三氮唑-1-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-二(2-噻吩基)乙酸酯(13B)(0.3g,0.396mmol)溶於二氯甲烷(15mL)中，滴加三氟乙酸(0.0903g,0.792mmol)，室溫反應2小時。反應液加入飽和碳酸氫鈉溶液(15mL)，用二氯甲烷(15mL×2)萃取，合併有機相，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，殘留物用液相製備柱分離純化(製備條件：C18反相製備柱，流動相為含0.05%TFA的去離子水(A)，乙腈(B)，20%~25%B梯度洗脫32分鐘)，得到題述化合物[7-[3-[5-[[[(2R)-2-羥基-2-[4-羥基-3-(羥甲基)苯基]乙基]氨基]甲基]苯並三氮唑-1-基]丙基]-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基]2-羥基-2,2-二(2-噻吩基)乙酸酯；二三氟乙酸鹽(化合物13)，白色固體(0.2g，產率50%)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ 8.23(s,1H),7.94(d,1H),7.75(d,1H),7.39(d,2H),7.33(s,1H),7.16(dd,3H),6.99(dd,2H),6.80(d,1H),5.20-5.09(m,1H),4.98-4.91(m,1H),4.88(s,2H),4.66(s,2H),4.50(s,2H),3.45(dd,2H),3.28-3.20(m,2H),3.16(d,2H),3.00-2.82(m,2H),2.58-2.44(m,3H),2.37(s,1H),1.95(d,3H),1.90-1.76(m,3H)。
LCMS m/z=718.3[M+1]。
生物測試例
測試例1：對人毒蕈鹼M3受體的抑制活性
穩定表達人毒蕈鹼受體3(hM3)和apo-Aequorin的CHO細胞(PerkinElmer，ES-212-AF)培養於含10%胎牛血清(FBS)(Gibico 10099-141)，400μg/mL G418(sigma G5013)和250μg/mL Zeocin(invivogen ant-zn-5p)的Ham’S F12培養基(Invitrogen 12500-062)中，在37℃，5%CO2條件下培養，達到90-100%融合。以PBS/5mM EDTA沖洗分離細胞，離心收集，以含0.1% BSA(BOVOGEN BSAS 100)無酚紅Ham’s F12培養基(Invitrogen 11039-021)重新懸浮細胞並計數，調整細胞濃度至1x106cells/mL。將15ml細胞懸浮液加入50mL離心管，加入Coelenterazine-h(promega S2011)至終濃度為5μM。用錫紙包裹避光，於旋轉搖床20℃下孵育4小時。再以0.1% BSA/無酚紅Ham’s F12培養基稀釋細胞至終濃度為5.0×105cells/mL，將細胞置於旋轉搖床上低速轉動，室溫下孵育至少1小時。實施例化合物用DMSO配製為10mM母液，0.1% BSA/無酚紅Ham’s F12培養基梯度稀釋(log(M)：-7,-8,-9,-10,-11)，加入96孔板，每孔50L。每孔再加入50L細胞懸液(25000細胞/孔)，室溫孵育15分鐘。將96孔板放入酶標儀(Perkin Elmer，Envision)，以酶標儀加樣器每孔加入50L氯化乙醯膽鹼(Sigma A6625)溶液，其濃度為112.92nM(hM3)，記錄發光20秒，使用origin7.5計算和分析IC50。本發明化合物人毒蕈鹼受體的抑制活性通過以上的實驗進行測定，測得的IC50值見下表1。
結論：本發明化合物對人毒蕈鹼M3受體有顯著抑制活性。
測試例2：對人腎上腺素能β2受體的激動活性
實施例化合物對人腎上腺素能受體的激動活性通過LANCE Ultra cAMP Assay測定。
穩定表達人腎上腺素能受體(hβ2)的CHO細胞(PerkinElmer，ES-034-CF)培養於含10%胎牛血清(FBS)(Gibico 10099-141)和250μg/mL Zeocin(InvivoGen ant-zn-5p)的MEM-alpha培養基(Invitrogen 12561-056)，在37℃，5% CO2條件下培養，達到90-100%融合後用LANCE Ultra cAMP Assay試劑盒(PerkinElmer TRF0263)檢測實施例對cAMP的激動作用。以PBS/5mM EDTA分離細胞，離心收集，用Stimulation Buffer(1 x HBSS,5mM HEPES,0.5mM IBMX,0.1% BSA,PH7.4)重新懸浮細胞，調整細胞濃度至6×105cells/ml。實施例化合物用DMSO配製為10mM母液，以Stimulation Buffer梯度稀釋後以每孔5μl加入384孔板。每孔再加入5μL細胞懸浮液(3000細胞/孔)，室溫孵育30分鐘後，每孔加入5μl 4 x Eu-cAMP tracer工作溶液，然後每孔加入5μl 4 x Ulight-anti-cAMP工作溶液，並在室溫下孵育1小時。384孔板用酶標儀(Perkin Elmer，Envision)檢測TR-FRET，使用origin7.5計算和分析EC50。本發明化合物對人腎上腺素能 受體的激動活性通過以上的實驗進行測定，測得的EC50值見表2：
結論：本發明化合物對β2腎上腺素能受體有顯著激動活性。
雖然本發明以實施例說明如上，惟此些實施例並非用以限制本發明。本領域之通常知識者在不脫離本發明技藝精神的範疇內，當可對此些實施例進行等效實施或變更，故本發明的保護範圍應以其後所附之申請專利範圍為準。

Claims (12)

  1. 一種通式(I)所示的化合物或其立體異構物、水合物溶劑化物、藥學上可接受的鹽或共晶，其中：R1選自；R1a或R1b各自獨立選自H、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-10碳環基、3至8員雜環基、C3-10碳環基-C1-4亞烷基或3至8員雜環基-C1-4亞烷基，所述烯基、炔基、亞烷基、碳環基或雜環基任選進一步被0至4個選自F、Cl、Br、I、CH2F、CHF2、CF3、OH、OCH2F、OCHF2、OCF3、NH2、羧基、氰基、硝基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、-O(=O)C1-4烷基、-(=O)C1-4烷基、-OC3-6環烷基或C1-4烷硫基的取代基所取代，所述雜環含有1至3個選自N、O或S的雜原子，條件是R1a、R1b不同時為H；R1c選自H、羥基、氰基、NH2、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基或-C(=O)NH2，所述NH2、-C(=O)NH2或者烷基任選進一步被0至2個選自F、Cl、Br、I、羥基、氰基或者C1-4烷基的取代基所取代；R2選自C1-6亞烷基、C2-6亞烯基或C2-6亞炔基，所述亞烷基、亞烯基或亞炔基任選進一步被0至5個選自F、Cl、Br、I、OH、氰基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、苯基或苯基-C1-4亞烷基的取代基所取代；W1選自鍵、-C(=O)NRw-或-NRwC(=O)-、；W2選自鍵或；W3選自鍵；Rw選自H或C1-4烷基；X、Y、Z各自獨立地選自-N-、-NRx1-、-CRx1Rx2-、-S-、-O-和-C(O)-；Rx1選自H或C1-4烷基；R3各自獨立選自F、Cl、Br、I、OH、NH2、羧基、氰基、硝基、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C1-4烷氧基、-OC3-6環烷基、C1-4烷硫基、-S(=O)-C1-4烷基、-S(=O)2-C1-4烷基、-C(=O)-C1-4烷基、-C(=O)O-C1-4烷基、-OC(=O)-C1-4烷基或-C(=O)NH2，所述烷基、烷氧基、環烷基、烯基、炔基、NH2或-C(=O)NH2任選進一步被0至4個選自F、Cl、Br、I、CF3、C1-4烷基、C1-4烷氧基或-C(=O)-C1-4烷基的取代基所取代；R4選自C1-6亞烷基，所述亞烷基任選進一步被0至5個選自R4a的取代基所取代；R4a選自F、Cl、Br、I、氰基、OH、C1-4烷基、C1-4烷氧基、苯基或苯基-C1-4亞烷基；選擇性的，兩個R4a可以與它們相連的原子一起形成一個3至6員碳環，所述碳環任選進一步被0至5個選自F、Cl、Br、I、氰基、OH、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代；R5、R6各自獨立的選自H或C1-4烷基；通式(I)中「------」選自單鍵或雙鍵；B選自、、、、其中Q選自-CH=CH-、-CH2CH2-、-O-、-S-、-CH2O-、-OCH2-、-C(CH3)2O-或-OC(CH3)2-；c選自0、1、2、3或4；n為0；m為0、1、2、3、4、5或6；限制條件是當n為0時，m為1、2、3、4、5或6；p為0、1、2、3、4、5或6。
  2. 如申請專利範圍第1項所述的化合物或其立體異構物、水合物、溶劑化物、藥學上可接受的鹽或共晶，其中：R1a或R1b各自獨立選自H、C2-4烯基、C2-4炔基、C3-7碳環基、3至6員雜環基、C3-7碳環基C1-4亞烷基或3至6員雜環基-C1-4亞烷基，所述烯基、炔基、亞烷基、碳環基或雜環基任選進一步被0至4個選自F、Cl、Br、I、CF3、OH、NH2、羧基、氰基、硝基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、-O(=O)C1-4烷基、-(=O)C1-4烷基、-OC3-6環烷基或C1-4烷硫基的取代基所取代，所述雜環基含有1至3個選自N、O或S的雜原子，條件是R1a、R1b不同時為H；R1c選自H、羥基、氰基、NH2、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4烷硫基或-C(=O)NH2，所述NH2、-C(=O)NH2或烷基任選進一步被0至2個選自F、Cl、Br、I、羥基、氰基或C1-4烷基的取代基所取代；R3各自獨立選自F、Cl、Br、I、OH、NH2、羧基、氰基、硝基、C1-4烷基、C2-4炔基、C1-4烷氧基、-OC3-6環烷基、C1-4烷硫基、-S(=O)-C1-4烷基、-S(=O)2-C1-4烷基、-C(=O)-C1-4烷基或-C(=O)O-C1-4烷基，所述烷基、炔基、烷氧基、環烷基和NH2任選進一步被0至4個選自F、Cl、Br、I、CF3、C1-4烷基、C1-4烷氧基或-C(=O)-C1-4烷基的取代基所取代。
  3. 如申請專利範圍第2項所述的化合物或其立體異構物、水合物、溶劑化物、藥學上可接受的鹽或共晶，其中：R1選自；R1a或R1b各自獨立選自選自H、乙烯基、乙炔基、丙炔基、苯基、環丙烷基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基、苯甲基、噻吩基、呋喃基或吡啶基，所述的乙烯基、乙炔基、丙炔基、苯基、環丙烷基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基、苯甲基、噻吩基、呋喃基或吡啶基任選進一步被0至4個選自F、Cl、Br、I、CF3、OH、NH2、羧基、氰基、硝基、C1-4烷基、C1-4烷氧基或-O(=O)C1-4烷基的取代基所取代，條件是R1a、R1b不同時為H；R1c選自H、羥基、NH2、甲基、乙基、氰基、甲胺基、二甲基胺基、甲氧基、乙氧基、-CH2OH、或-C(=O)NH2；W1選自鍵、-C(=O)NRw-或-NRwC(=O)-；W3選自鍵；Rw選自H、甲基、乙基或丙基；X、Y、Z各自獨立地選自-NH-、-N-、-CH2-、-CH-、-S-、-O-和-C(O)-；R3各自獨立地選自F、Cl、Br、氰基、甲基、乙基、丙基、異丙基、乙炔基、CHF2、CF3、甲氧基、乙氧基、-OCHF2或-OCF3；R4選自亞甲基、亞乙基、亞丙基、亞丁基、亞戊基或，所述亞甲基、亞乙基、亞丙基、亞丁基、亞戊基或任選進一步被0至5個選自F、Cl、Br、I、氰基、OH、甲基、乙基、甲氧基或乙氧基的取代基所取代；R5、R6各自獨立的選自H、甲基或乙基；B選自、、、、c為0、1或2；n為0；m為0、1、2、3、4或5；限制條件是當n為0時，m為1、2、3、4或5；p為0、1、2、3或4。
  4. 如申請專利範圍第3項所述的化合物或其立體異構物、水合物、溶劑化物、藥學上可接受的鹽或共晶，其中：R1選自、、、、、R2選自亞甲基、亞乙基、亞丙基、-CH2CH(CH3)-、-CH(CH3)CH2-、亞丁基、-CH(CH3)CH2CH2-、-CH2CH(CH3)CH2-、-CH2CH(CH3)CH2-或亞戊基；R3各自獨立地選自F、Cl、Br、CHF2、CF3、氰基、甲基、乙基、乙炔基、甲氧基、乙氧基、-OCHF2或-OCF3；R4選自亞甲基、亞乙基、亞丙基、-CH2CH(CH3)-、-CH(CH3)CH2-、亞丁基、-CH(CH3)CH2CH2-、-CH2CH(CH3)CH2-、-CH2CH(CH3)CH2-、或亞戊基。
  5. 如申請專利範圍第4項所述的化合物或其立體異構物、水合物、溶劑化物、藥學上可接受的鹽或共晶，其中所述的化合物選自：
  6. 一種醫藥組合物，所述的醫藥組合物含有治療有效劑量的如申請專利範圍第1至5項中任一項所述的化合物或其立體異構物、水合物、溶劑化物、藥學上可接受的鹽或共晶，以及藥學上可接受的載體、稀釋劑、佐劑、媒介物或賦形劑；所述的醫藥組合物任選可進一步包括一種或多種其他治療劑。
  7. 如申請專利範圍第6項所述的醫藥組合物，其中所述其他治療劑選自PDE4抑制劑、M受體拮抗劑、皮質類個醇和β-腎上腺素受體激動劑中的一種或多種。
  8. 如申請專利範圍第1至5項中任一項所述的化合物或其立體異構物、水合物、溶劑化物、藥學上可接受的鹽或共晶，或申請專利範圍第6或第7項所述的醫藥組合物，其在製備用於治療氣道阻塞性疾病的藥物中的用途。
  9. 如申請專利範圍1至5項中任一項所述的化合物或其立體異構物、水合物、溶劑化物、藥學上可接受的鹽或共晶，或申請專利範圍第6或第7項所述的醫藥組合物，在製備用於治療哮喘、慢性阻塞性肺疾病或支氣管炎的藥物中的用途。
  10. 一種製備通式(I)所示之化合物或其立體異構物的中間體，該中間體選自如下通式(II)所示之化合物或其立體異構物：其中：R1選自；R1a或R1b各自獨立選自H、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-10碳環基、3至8員雜環基、C3-10碳環基-C1-4亞烷基或3至8員雜環基-C1-4亞烷基，所述烯基、炔基、亞烷基、碳環基或雜環基任選進一步被0至4個選自F、Cl、Br、I、CH2F、CHF2、CF3、OH、OCH2F、OCHF2、OCF3、NH2、羧基、氰基、硝基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、-O(=O)C1-4烷基、-(=O)C1-4烷基、-OC3-6環烷基或C1-4烷硫基的取代基所取代，所述雜環基含有1至3個選自N、O或S的雜原子，條件是R1a、R1b不同時為H；R1c選自H、羥基、氰基、NH2、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基或-C(=O)NH2，所述NH2、-C(=O)NH2或烷基任選進一步被0至2個選自F、Cl、Br、I、羥基、氰基或C1-4烷基的取代基所取代；R2選自C1-6亞烷基、C2-6亞烯基或C2-6亞炔基，所述亞烷基、亞烯基或亞炔基任選進一步被0至5個選自F、Cl、Br、I、OH、氰基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、苯基或苯基-C1-4亞烷基的取代基所取代；W1選自鍵-C(=O)NRw-、-NRwC(=O)-；W2選自鍵或；W3選自鍵；Rw選自H或C1-4烷基；X、Y、Z各自獨立地選自-N-、-NRx1-、-CRx1Rx2-、-S-、-O-和-C(O)-；Rx1、Rx2、Rx3或Rx4各自獨立地選自H或C1-4烷基；R3各自獨立選自F、Cl、Br、I、OH、NH2、羧基、氰基、硝基、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C1-4烷氧基、-OC3-6環烷基、C1-4烷硫基、-S(=O)-C1-4烷基、-S(=O)2-C1-4烷基、-C(=O)-C1-4烷基、-C(=O)O-C1-4烷基、-OC(=O)-C1-4烷基或-C(=O)NH2，所述烷基、烷氧基、環烷基、烯基、炔基、NH2和-C(=O)NH2任選進一步被0至4個選自F、Cl、Br、I、CF3、C1-4烷基、C1-4烷氧基或-C(=O)-C1-4烷基的取代基所取代；E選自甲醯基、或；R4選自C1-6亞烷基，所述亞烷基任選進一步被0至5個選自R4a的取代基所取代；R4a選自F、Cl、Br、I、氰基、OH、C1-4烷基、C1-4烷氧基、苯基或苯基-C1-4亞烷基；選擇性的，兩個R4a可以與它們相連的原子一起形成一個3至6員碳環，所述碳環任選進一步被0至5個選自F、Cl、Br、I、氰基、OH、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代；R5、R6各自獨立的選自H或C1-4烷基；PG選自羥基保護基；表示羥基被保護的β-腎上腺素受體結合基團；B選自、、、、其中Q選自-CH=CH-、-CH2CH2-、-O-、-S-、-CH2O-、-OCH2-、-C(CH3)2O-或-OC(CH3)2-；通式(II)中「------」選自單鍵或雙鍵；c選自0、1、2、3或4；n為0；m為0、1、2、3、4、5或6；限制條件是當n為0時，m為1、2、3、4、5或6；p為0、1、2、3、4、5或6。
  11. 如申請專利範圍第10項所述的中間體，其中：R1選自、、、、或R2選自亞甲基、亞乙基、亞丙基、-CH2CH(CH3)-、-CH(CH3)CH2-、亞丁基、-CH(CH3)CH2CH2-、-CH2CH(CH3)CH2-、-CH2CH(CH3)CH2-或亞戊基；W1選自鍵、-C(=O)NRw-或-NRwC(=O)-；W3選自鍵；Rw選自H、甲基、乙基或丙基；X、Y、Z各自獨立地選自-NH-、-N-、-CH2-、-CH-、-S-、-O-和-C(O)-；R3選自F、Cl、Br、CHF2、CF3、氰基、甲基、乙基、乙炔基、甲氧基、乙氧基、-OCHF2或-OCF3；R4選自亞甲基、亞乙基、亞丙基、-CH2CH(CH3)-、-CH(CH3)CH2-、亞丁基、-CH(CH3)CH2CH2-、-CH2CH(CH3)CH2-、-CH2CH(CH3)CH2-、或亞戊基；R5、R6各自獨立的選自H、甲基或乙基；B選自、、、、PG選自TBS。
  12. 如申請專利範圍第11項所述的中間體，所述中間體選自如下化合物之一：
TW105123024A 2015-07-21 2016-07-21 具有β２受體激動及Ｍ３受體拮抗活性的苯並環衍生物及其在醫藥上的用途 TWI665197B (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
??201510427700.3 2015-07-21
CN201510427700 2015-07-21

Publications (2)

Publication Number Publication Date
TW201708211A TW201708211A (zh) 2017-03-01
TWI665197B true TWI665197B (zh) 2019-07-11

Family

ID=57833723

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW105123024A TWI665197B (zh) 2015-07-21 2016-07-21 具有β２受體激動及Ｍ３受體拮抗活性的苯並環衍生物及其在醫藥上的用途

Country Status (5)

Country Link
US (1) US20190185461A1 (zh)
EP (1) EP3375781A4 (zh)
CN (1) CN107074833B (zh)
TW (1) TWI665197B (zh)
WO (1) WO2017012489A1 (zh)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2020537667A (ja) 2017-10-17 2020-12-24 ヴァンダービルト ユニバーシティー ムスカリン性アセチルコリン受容体ｍ４のアンタゴニスト
WO2019086008A1 (zh) * 2017-11-02 2019-05-09 四川海思科制药有限公司 一种苯并三氮唑衍生物的晶型及其制备方法和用途
CN113544121A (zh) * 2019-06-06 2021-10-22 中国医药研究开发中心有限公司 具有β2受体激动及M受体拮抗活性的杂环衍生物及其医药用途
CN117534663A (zh) * 2020-09-28 2024-02-09 正大天晴药业集团股份有限公司 稠合的三并环衍生物及其在药学上的应用
WO2023179758A1 (zh) * 2022-03-25 2023-09-28 正大天晴药业集团股份有限公司 稠合三并环衍生物或其可药用盐的结晶

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2015048301A1 (en) * 2013-09-26 2015-04-02 Pharmakea, Inc. Autotaxin inhibitor compounds

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002085890A1 (fr) * 2001-04-20 2002-10-31 Banyu Pharmaceutical Co., Ltd. Derives de benzimidazolone
ES2351392T3 (es) * 2003-02-14 2011-02-03 Theravance Inc Derivados bifenilo que tienen actividad agonista de receptores beta2-adrenérgicos y actividad antagonista de receptores muscarínicos.
TWI324150B (en) * 2003-02-28 2010-05-01 Novartis Ag Process for preparing 5-[(r)-2-(5,6-diethyl-indan-2-ylamino)-1-hydroxy-ethyl]-8-hydroxy-(1h)-quinolin-2-one salt
BR112013030302B1 (pt) * 2011-06-10 2021-08-24 Chiesi Farmaceutici S.P.A. Composto, composição farmacêutica, uso de um composto, combinação de um composto e dispositivo
EP2592078A1 (en) * 2011-11-11 2013-05-15 Almirall, S.A. New cyclohexylamine derivatives having beta2 adrenergic agonist and M3 muscarinic antagonist activities
TWI641373B (zh) * 2013-07-25 2018-11-21 阿爾米雷爾有限公司 具有蕈毒鹼受體拮抗劑和β２腎上腺素受體促效劑二者之活性的２－胺基－１－羥乙基－８－羥基喹啉－２（１Ｈ）－酮衍生物之鹽

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2015048301A1 (en) * 2013-09-26 2015-04-02 Pharmakea, Inc. Autotaxin inhibitor compounds

Also Published As

Publication number Publication date
US20190185461A1 (en) 2019-06-20
CN107074833B (zh) 2021-05-25
TW201708211A (zh) 2017-03-01
WO2017012489A1 (zh) 2017-01-26
EP3375781A1 (en) 2018-09-19
EP3375781A4 (en) 2019-01-09
CN107074833A (zh) 2017-08-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
TWI665197B (zh) 具有β２受體激動及Ｍ３受體拮抗活性的苯並環衍生物及其在醫藥上的用途
TW201336833A (zh) 激酶抑制劑
NZ523566A (en) Imidazopyridine and imidazopyrimidine antiviral agents
WO2019205983A1 (zh) 氧杂螺环类化合物及其制备方法和用途
MXPA06003749A (es) Derivados de tropano.
KR20150130426A (ko) Ship1 조절제 및 그와 관련된 방법
JP2022544248A (ja) ２－ヒドロキシシクロアルカン－１－カルバモイル誘導体
CA3010660A1 (en) Nitrogenous heterocyclic amide derivative, preparation method thereof, and pharmaceutical application
KR20220141331A (ko) P2x3 조정제
TW202245753A (zh) 用於治療疾病之類似物
CN107849009B (zh) 一种八氢环戊二烯并[c]吡咯衍生物及其制备方法和在医药上的用途
KR20080012976A (ko) Ｏｒｌ1-수용기 길항제로서의 알파-(아릴- 또는헤테로아릴-메틸)-베타-피페리디노 프로판아마이드 화합물
WO2016180349A1 (zh) 具有β2受体激动及M受体拮抗活性的联苯衍生物及其在医药上的用途
CN116761796A (zh) 用于治疗trpm3介导的病症的芳基衍生物
JP2007507464A (ja) 新規のアミノピリジン誘導体
CN107074816A (zh) 一种杂环衍生物及其制备方法和在医药上的用途
CN107108562B (zh) 具有β2受体激动及M受体拮抗活性的含氮杂螺环衍生物及其在医药上的用途
CN109928953A (zh) 一种羧酸酯衍生物及其在医药上的用途
KR20080012977A (ko) Ｏｒｌ1-수용기 길항제로서의 알파-(아릴- 또는헤테로아릴-메틸)-베타-피페리디노프로파노산 화합물
TW202134248A (zh) Sstr5拮抗劑
WO2020244452A1 (zh) 具有β 2受体激动及M受体拮抗活性的杂环衍生物及其医药用途
CN106336406B (zh) 具有β2受体激动及M受体拮抗活性的八氢并环戊二烯衍生物及其在医药上的用途
EP3210974B1 (en) Prodrug of roflumilast
CN107849035B (zh) 一种苯基杂环衍生物及其在医药上的用途
CN109195975B (zh) 一种二氮杂螺[5.5]十一碳烷衍生物及其用途

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Annulment or lapse of patent due to non-payment of fees