CN107849035B - 一种苯基杂环衍生物及其在医药上的用途 - Google Patents

一种苯基杂环衍生物及其在医药上的用途 Download PDF

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Abstract

一种通式(I)所示的化合物或其立体异构体、水合物、代谢产物、溶剂化物、药学上可接受的盐、共晶或前药，以及制备方法和在制备用于治疗气道阻塞性疾病药物中的应用,其中通式(I)化合物为

Description

一种苯基杂环衍生物及其在医药上的用途
技术领域
本发明涉及一种苯基杂环衍生物及其制备方法和在医药上的应用，具体是一种具有蕈毒碱受体拮抗和β2-肾上腺素能受体激动的双重活性的新颖苯基杂环衍生物或其立体异构体、水合物、溶剂化物、代谢产物、药学上可接受的盐、共晶或前药、其药物组合物以及其在医药上的应用。
背景技术
支气管扩张剂对于呼吸疾病例如慢性阻塞性肺疾病(COPD)及哮喘等的治疗起重要作用。临床中广泛使用的支气管扩张剂包括蕈毒碱受体拮抗剂和β2-肾上腺素能激动剂。蕈毒碱受体拮抗剂通过降低气道平滑肌的迷走神经胆碱能水平来发挥支气管扩张的效力。目前所使用的吸入蕈毒碱受体拮抗剂包括异丙托溴铵、氧托溴铵、格隆溴铵、噻托溴铵、阿地溴胺和芜地溴胺。β2-肾上腺素能激动剂通过刺激气道平滑肌的肾上腺素能受体而使支气管扩张，逆转支气管收缩剂对各种介质如乙酰胆碱的反应。目前所使用的β2-肾上腺素能激动剂包括沙丁胺醇、沙美特罗、阿福特罗、福美特罗、维兰特罗和茚达特罗。这些药物除了改善肺的功能，也可改善患者生活质量并减少病情恶化。
随着更多的临床研究发现，证明联合使用蕈毒碱受体拮抗剂和β2-肾上腺素能激动剂比单独使用其中一种治疗剂更有效，目前临床上将蕈毒碱受体拮抗剂和β2-肾上腺素能激动剂制备成复方制剂，用于哮喘和中重度COPD的治疗，这类复方制剂主要包括AnoroEllipta(芜地溴胺/维兰特罗)、Ultibro Breezhaler(格隆溴铵/茚达特罗)和异丙托溴胺/沙丁胺醇等。虽然复方制剂比其中单一制剂具有更好的治疗效果，但是在制剂制备上有更高的要求。
因此，人们希望开发同时具有蕈毒碱受体拮抗和β2-肾上腺素能激动双重作用的药物，这种双功能药物具有两种成分组合的药学优点，同时具备单一的分子药代动力学。这些化合物以单一治疗剂的形式给药，可以由两种不同且可能协同起效的作用模式提供支气管扩张作用。另外，具有蕈毒碱受体拮抗和β2-肾上腺素能激动双重作用(MABA)的化合物还可以与皮质类固醇(ICS)消炎剂药物组合，形成两种治疗剂(MABA/ICS)而提供三重作用的治疗效果(Expert Opin.Investig.Drugs(2014)23(4):453-456)。
因此，有必要开发新颖的同时具有蕈毒碱受体拮抗和β2-肾上腺素能激动的双重活性药物，以提供更有效的单一治疗剂量或者复方制剂，为患者提供更多的临床用药选择。
发明内容
本发明提供一种通式(I)所示的化合物或其立体异构体、水合物、代谢产物、溶剂化物、药学上可接受的盐、共晶或前药，
Figure GDA0003244926510000021
其中：
R1各自独立的选自F、Cl、Br、I、CF3、C1-4烷基、氰基、-OR1a、-C(＝O)OR1b、-SR1c、-S(＝O)R1d、-S(＝O)2R1e或-NR1fR1g；
R1a、R1b、R1c、R1d、R1e、R1f和R1g各自独立的选自H或C1-4烷基；
作为选择，R1f、R1g与其连接的氮原子形成一个5至6元的杂环，所述的杂环含有1至3个选自N、O或S的杂原子；
环A选自5至10元杂环，所述杂环任选进一步被0至4个选自F、Cl、Br、I、OH、CF3、氰基、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C1-4烷氧基或C3-6环烷基的取代基所取代，且所述的杂环含有1至4个选自N、O或S的杂原子；
W为-O-、-NH-或-NC1-4烷基-；
R2各自独立的选自F、Cl、Br、I、CF3、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C3-6环烷基、氰基、-OR2a、-C(O)OR2b、-SR2c、-S(O)R2d、-S(O)2R2e或-NR2fR2g；或两个R2基团结合形成C1-3亚烷基、C2-3亚烯基或环氧乙烷-2,3-二基；
作为选择两个R2基团与其相连的原子一起形成＝、3至8元环，优选形成＝、3至6元环，进一步优选形成＝、环丙烷、环丁烷、环己烷、环丁烯、环戊烯、环己烯或环氧乙烷；所述环含有0至3个选自N、O、S的杂院子；
R2a、R2b、R2c、R2d、R2e、R2f和R2g各自独立的选自H或C1-4烷基；
R3选自C1-6亚烷基、C2-6亚烯基或C2-6亚炔基，所述亚烷基、亚烯基或亚炔基任选进一步被0至5个选自F、Cl、Br、I、OH、氰基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、苯基或苯基-C1-4亚烷基的取代基所取代；
L选自
Figure GDA0003244926510000031
X1与R3直接相连；
A1和A4各自独立的选自C3-7亚环烷基、C6-10亚芳基、5至10元亚杂芳基、-O-C6-10亚芳基、-O-5至10元亚杂芳基、5至10元亚杂芳基-O-或C6-10亚芳基-O-，其中所述的亚环烷基、亚芳基或亚杂芳基任选进一步被0至5个R7取代；
R7选自F、Cl、Br、I、OH、NH2、羧基、氰基、硝基、＝O、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C1-4烷氧基、-OC3-6环烷基、C1-4烷硫基、-S(＝O)-C1-4烷基、-S(＝O)2-C1-4烷基、-C(＝O)-C1-4烷基、-C(＝O)O-C1-4烷基、-OC(＝O)-C1-4烷基、5至6元杂芳基或-C(＝O)NH2，所述烷基、烷氧基、环烷基、烯基、炔基、杂芳基、NH2和-C(＝O)NH2任选进一步被0至4个选自F、Cl、Br、I、CF3、C1-4烷基、C1-4烷氧基或-C(＝O)-C1-4烷基的取代基所取代，且所述的杂芳基含有1至4个选自N、O或S的杂原子；
A2和A3各自独立选自C1-6亚烷基、C2-6亚烯基或C2-6亚炔基，所述亚烷基、亚烯基或亚炔基任选进一步被0至5个选自F、Cl、Br、I、OH、氰基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、苯基或苯基-C1-4亚烷基的取代基所取代；
X1和X2各自独立的选自键、-O-、-C(＝O)O-、-OC(＝O)-、-S-、-S(＝O)-、-S(＝O)2-、-C(＝O)NRx-、-NRxC(＝O)-、-OC(＝O)NRx-、-NRxC(＝O)O-、-NRxC(＝O)NRx-、-NRxS(＝O)2-、-S(＝O)2NRx-、-NRxS(＝O)2NRx-或-NRx-；
Rx各自独立选自H或者C1-4烷基；
作为选择，Rx与R7直接相连接形成一个4至7元含氮杂环，优选Rx与相邻的R7直接相连接形成一个4至7元含氮杂环，所述的含氮杂环任选进一步被0至5个选自F、Cl、Br、I、CF3、OH、NH2、＝O、氰基、C1-4烷基或C2-4炔基的取代基所取代，且所述含氮杂环含有1至3个任选自N、O或S的杂原子；
R4选自C1-6亚烷基，所述亚烷基任选进一步被0至5个R4a取代；
R4a选自F、Cl、Br、I、氰基、OH、C1-4烷基、C1-4烷氧基、苯基或苯基-C1-4亚烷基；
作为选择，两个R4a可以与它们相连的原子一起形成一个3至6元碳环，所述碳环任选进一步被0至5个选自F、Cl、Br、I、氰基、OH、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代；
R5、R6各自独立的选自H或C1-4烷基；
Figure GDA0003244926510000041
表示β-肾上腺素受体结合基团；
a选自0、1、2、3、4或5；
b选自0、1、2、3或4；
n、m、p或q各自独立的选自0或1；
条件是L不为键。
本发明优选方案，一种通式(I)所示的化合物或其立体异构体、水合物、代谢产物、溶剂化物、药学上可接受的盐、共晶或前药，其中：
R2各自独立的选自F、Cl、Br、I、CF3、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C3-6环烷基、氰基、-OR2a、-C(O)OR2b、-SR2c、-S(O)R2d、-S(O)2R2e或-NR2fR2g；或两个R2基团结合形成C1-3亚烷基、C2-3亚烯基或环氧乙烷-2,3-二基；所述的“两个R2基团结合形成C1-3亚烷基、C2-3亚烯基或环氧乙烷-2,3-二基”是指，两个R2基团与其连接的原子一起形成3至6元饱和碳环、4至5元不饱和碳环或环氧乙烷。
本发明的一种优选方案，一种通式(I)所示的化合物或其立体异构体、水合物、代谢产物、溶剂化物、药学上可接受的盐、共晶或前药，其中：
B选自
Figure GDA0003244926510000042
R10、R11、R12、R13、R14、R15、R16、R17或R18各自独立的选自H、F、Cl、Br、I、CF3、OH、-CH2OH、氰基、羧基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、-C(＝O)C1-4烷基、-C(＝O)OC1-4烷基、-NHC(＝O)H、-NHS(＝O)2-C1-4烷基、-NHS(＝O)2-NH2或-NHS(＝O)2-NHC1-4烷基，Q选自-CRq1Rq2CRq3Rq4-、-O-、-S-、-OCRq1Rq2-、-CRq1Rq2O-、-SCRq1Rq2-、-CRq1Rq2S-，所述Rq1、Rq2、Rq3或Rq4各自独立的选自选自H、F、Cl、Br、I或C1-4烷基；
B优选
Figure GDA0003244926510000051
Figure GDA0003244926510000052
Q选自-CH2CH2-、-CH＝CH-、-O-、-S-、-CH2O-、-OCH2-、-C(CH3)2O-或-OC(CH3)2-；
B更优选
Figure GDA0003244926510000053
Figure GDA0003244926510000054
本发明的一种优选方案，一种通式(I)所示的化合物或其立体异构体、水合物、代谢产物、溶剂化物、药学上可接受的盐、共晶或前药，所述的化合物选自通式(II)或通式(III)所示的化合物：
Figure GDA0003244926510000055
R1各自独立的选自F、Cl、Br、I、CF3、C1-4烷基、氰基、-OR1a、-C(＝O)OR1b、-SR1c、-S(＝O)R1d、-S(＝O)2R1e或-NR1fR1g；
R1a、R1b、R1c、R1d、R1e、R1f和R1g各自独立的选自H或C1-4烷基；
作为选择，R1f、R1g与其连接的氮原子形成一个5至6元的杂环，所述的杂环含有1至3个选自N、O或S的杂原子；
环A选自5至10元杂环，所述杂环任选进一步被0至4个选自F、Cl、Br、I、OH、CF3、氰基、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C1-4烷氧基或C3-6环烷基的取代基所取代，且所述的杂环含有1至4个选自N、O或S的杂原子；
W为-O-、-NH-或-NC1-4烷基-；
R2各自独立的选自F、Cl、Br、I、CF3、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C3-6环烷基、氰基、-OR2a、-C(O)OR2b、-SR2c、-S(O)R2d、-S(O)2R2e或-NR2fR2g；或两个R2基团结合形成C1-3亚烷基、C2-3亚烯基或环氧乙烷-2,3-二基；
作为选择两个R2基团与其相连的原子一起形成＝、3至8元环，优选形成＝、3至6元环，进一步优选形成＝、环丙烷、环丁烷、环己烷、环丁烯、环戊烯、环己烯或环氧乙烷；所述环含有0至3个选自N、O、S的杂院子；
R2a、R2b、R2c、R2d、R2e、R2f和R2g各自独立的选自H或C1-4烷基；
R3选自C1-6亚烷基、C2-6亚烯基或C2-6亚炔基，所述亚烷基、亚烯基或亚炔基任选进一步被0至5个选自F、Cl、Br、I、OH、氰基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、苯基或苯基-C1-4亚烷基的取代基所取代；
L选自
Figure GDA0003244926510000061
X1与R3直接相连；
A1和A4各自独立的选自C3-7亚环烷基、C6-10亚芳基、5至10元亚杂芳基、-O-C6-10亚芳基、-O-5至10元亚杂芳基、5至10元亚杂芳基-O-或C6-10亚芳基-O-，其中所述的亚环烷基、亚芳基或亚杂芳基任选进一步被0至5个R7取代；
R7选自F、Cl、Br、I、OH、NH2、羧基、氰基、硝基、＝O、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C1-4烷氧基、-OC3-6环烷基、C1-4烷硫基、-S(＝O)-C1-4烷基、-S(＝O)2-C1-4烷基、-C(＝O)-C1-4烷基、-C(＝O)O-C1-4烷基、-OC(＝O)-C1-4烷基、5至6元杂芳基或-C(＝O)NH2，所述烷基、烷氧基、环烷基、烯基、炔基、杂芳基、NH2和-C(＝O)NH2任选进一步被0至4个选自F、Cl、Br、I、CF3、C1-4烷基、C1-4烷氧基或-C(＝O)-C1-4烷基的取代基所取代，且所述的杂芳基含有1至4个选自N、O或S的杂原子；
A2和A3各自独立选自C1-6亚烷基、C2-6亚烯基或C2-6亚炔基，所述亚烷基、亚烯基或亚炔基任选进一步被0至5个选自F、Cl、Br、I、OH、氰基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、苯基或苯基-C1-4亚烷基的取代基所取代；
A5选自C1-6亚烷基、C3-7亚环烷基、C6-10亚芳基或5至10元亚杂芳基，其中所述的亚环烷基、亚芳基或亚杂芳基任选进一步被0至5个选自F、Cl、Br、I、OH、NH2、CF3、＝O、C1-4烷基、C2-4炔基或C1-4烷氧基的取代基所取代；
X1和X2各自独立的选自键、-O-、-C(＝O)O-、-OC(＝O)-、-S-、-S(＝O)-、-S(＝O)2-、-C(＝O)NRx-、-NRxC(＝O)-、-OC(＝O)NRx-、-NRxC(＝O)O-、-NRxC(＝O)NRx-、-NRxS(＝O)2-、-S(＝O)2NRx-、-NRxS(＝O)2NRx-或-NRx-；
Rx各自独立选自H或者C1-4烷基；
作为选择，Rx与R7直接相连接形成一个4至7元含氮杂环，优选Rx与相邻的R7直接相连接形成一个4至7元含氮杂环，所述的含氮杂环任选进一步被0至5个选自F、Cl、Br、I、CF3、OH、NH2、＝O、氰基、C1-4烷基或C2-4炔基的取代基所取代，且所述含氮杂环含有1至3个任选自N、O或S的杂原子；
R4选自C1-6亚烷基，所述亚烷基任选进一步被0至5个R4a取代；
R4a选自F、Cl、Br、I、氰基、OH、C1-4烷基、C1-4烷氧基、苯基或苯基-C1-4亚烷基；
作为选择，两个R4a可以与它们相连的原子一起形成一个3至6元碳环，所述碳环任选进一步被0至5个选自F、Cl、Br、I、氰基、OH、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代；
R5、R6各自独立的选自H或C1-4烷基；
B选自
Figure GDA0003244926510000071
Figure GDA0003244926510000072
Q选自-CH2CH2-、-CH＝CH-、-O-、-S-、-CH2O-、-OCH2-、-C(CH3)2O-或-OC(CH3)2-；
B优选
Figure GDA0003244926510000073
Figure GDA0003244926510000081
a选自0、1、2、3、4或5；
b选自0、1、2、3或4。
本发明的一种优选方案，一种通式(I)、(II)、或(III)所示的化合物或其立体异构体、水合物、代谢产物、溶剂化物、药学上可接受的盐、共晶或前药，其中：
B选自
Figure GDA0003244926510000082
Figure GDA0003244926510000083
Q选自-CH2CH2-、-CH＝CH-、-O-、-S-、-CH2O-、-OCH2-、-C(CH3)2O-或-OC(CH3)2-；
B优选
Figure GDA0003244926510000084
Figure GDA0003244926510000085
R1各自独立的选自F、Cl、Br、I、CF3、C1-4烷基、氰基、羟基或C1-4烷氧基，优选F、Cl、Br、I、CF3、氰基、OH、甲基、乙基、甲氧基或乙氧基；
环A选自5至10元杂环，优选噻吩基、苯并噻吩基、噻唑基、苯并噻唑基、呋喃基、苯并呋喃基、恶唑基、苯并恶唑基或吡啶基，所述杂环、噻吩基、苯并噻吩基、噻唑基、苯并噻唑基、呋喃基、苯并呋喃基、恶唑基、苯并恶唑基或吡啶基任选进一步被0至4个选自F、Cl、Br、I、OH、CF3、氰基、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C1-4烷氧基或C3-6环烷基的取代基所取代，且所述的杂环含有1至4个选自N、O或S的杂原子；
W为-O-、-NH-或-NC1-4烷基-，优选-O-、-NH-、-NCH3-或-NCH2CH3-；
R2各自独立的选自F、Cl、Br、I、CF3、C1-4烷基、氰基、羟基或C1-4烷氧基，或两个R2基团结合形成C1-3亚烷基、C2-3亚烯基或环氧乙烷-2,3-二基，R2各自独立的优选F、Cl、Br、I、CF3、氰基、OH、甲基、乙基、甲氧基或乙氧基；
作为选择两个R2基团与其相连的原子一起形成＝、3至8元环，优选形成＝、3至6元环，进一步优选形成＝、环丙烷、环丁烷、环己烷、环丁烯、环戊烯、环己烯或环氧乙烷；所述环含有0至3个选自N、O、S的杂院子；
R3选自C1-4亚烷基，优选亚甲基、亚乙基、亚丙基或亚丁基，所述亚烷基、亚甲基、亚乙基、亚丙基或亚丁基任选进一步被0至5个选自F、Cl、Br、I、OH、氰基、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代；
L选自
Figure GDA0003244926510000091
X1与R3直接相连；
A1和A4各自独立选自C3-7亚环烷基、C6-10亚芳基或5至10元亚杂芳基，优选亚苯基、亚噻吩基、亚呋喃基、亚吡啶基或亚苯并三氮唑基，其中所述的亚环烷基、亚芳基、亚杂芳基、亚苯基、亚噻吩基、亚呋喃基、亚吡啶基或亚苯并三氮唑基任选进一步被0至5个R7取代；
A5选自C1-6亚烷基、C3-7亚环烷基、C6-10亚芳基或5至10元亚杂芳基，优选亚苯基、亚噻吩基、亚呋喃基或亚吡啶基，其中所述的亚环烷基、亚芳基、亚杂芳基、亚苯基、亚噻吩基、亚呋喃基或亚吡啶基任选进一步被0至5个选自F、Cl、Br、I、OH、NH2、CF3、＝O、C1-4烷基、C2-4炔基或C1-4烷氧基的取代基所取代；
A5更优选亚甲基、亚乙基、亚丙基、亚丁基、亚戊基、
Figure GDA0003244926510000092
所述的
Figure GDA0003244926510000093
任选进一步被0至4个选自F、Cl、Br、I、OH、NH2、CF3、＝O、C1-4烷基、C2-4炔基或C1-4烷氧基的取代基所取代；
R7选自F、Cl、Br、I、OH、NH2、羧基、氰基、硝基、C1-4烷基、C2-4炔基、C1-4烷氧基、-OC3-6环烷基、C1-4烷硫基、-S(＝O)-C1-4烷基、-S(＝O)2-C1-4烷基、-C(＝O)-C1-4烷基、5至6元杂芳基或-C(＝O)O-C1-4烷基，优选F、Cl、Br、I、OH、NH2、羧基、氰基、C1-4烷基、C2-4炔基、C1-4烷氧基、-OC3-6环烷基或5至6元杂芳基，更优选F、Cl、Br、氰基、甲基、乙基、丙基、异丙基、CHF2、CF3、甲氧基、乙氧基、-OCHF2、-OCF3、乙炔基、丙炔基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、噻吩基、呋喃基、噻唑基或噁唑基，所述烷基、炔基、烷氧基、环烷基、杂芳基、NH2、甲基、乙基、丙基、异丙基、甲氧基、乙氧基、乙炔基、丙炔基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、噻吩基、呋喃基、噻唑基或噁唑基任选进一步被0至4个选自F、Cl、Br、I、CF3、C1-4烷基、C1-4烷氧基或-C(＝O)-C1-4烷基的取代基所取代，且所述的杂芳基含有1至4个选自N、O或S的杂原子；
A2和A3各自独立选自C1-6亚烷基、C2-6亚烯基或C2-6亚炔基，优选C1-6亚烷基，更优选C1-5亚烷基，更进一步优选亚甲基、亚乙基、亚丙基或亚丁基，所述亚烷基、亚烯基、亚炔基、亚甲基、亚乙基、亚丙基或亚丁基任选进一步被0至5个选自F、Cl、Br、I、OH、氰基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、苯基或苯基-C1-4亚烷基的取代基所取代；
X1和X2各自独立的选自键、-O-、-C(＝O)O-、-OC(＝O)-、-S-、-S(＝O)-、-S(＝O)2-、-C(＝O)NRx-、-NRxC(＝O)-、-OC(＝O)NRx-、-NRxC(＝O)O-、-NRxC(＝O)NRx-、-NRxS(＝O)2-、-S(＝O)2NRx-、-NRxS(＝O)2NRx-或-NRx-，优选键、-O-、-C(＝O)NRx-、-NRxC(＝O)-、-OC(＝O)NRx-、-NRxC(＝O)O-或-NRx-；
Rx各自独立选自H或者C1-4烷基，优选H、甲基、乙基或者丙基；
作为选择，Rx与R7直接相连接形成一个4至7元含氮杂环，优选Rx与相邻的R7直接相连接形成一个4至7元含氮杂环，所述的含氮杂环任选进一步被0至5个选自F、Cl、Br、I、CF3、OH、NH2、＝O、氰基、C1-4烷基或C2-4炔基的取代基所取代，且所述含氮杂环含有1至3个任选自N、O或S的杂原子；
R4选自C1-4亚烷基，优选亚甲基、亚乙基、亚丙基、亚丁基或
Figure GDA0003244926510000101
所述亚烷基、亚甲基、亚乙基、亚丙基、亚丁基或
Figure GDA0003244926510000102
任选进一步被0至5个R4a取代；
R4a选自F、Cl、Br、I、氰基、OH、C1-4烷基、C1-4烷氧基或苯基，优选F、Cl、Br、I、氰基、OH、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基或苯基；
作为选择，两个R4a可以与它们相连的原子一起形成一个3至6元碳环，所述碳环任选进一步被0至5个选自F、Cl、Br、I、氰基、OH、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代；
R5、R6各自独立的选自H或C1-4烷基，优选H、甲基或乙基；
a选自0、1、2、3、4或5；
b选自0、1、2、3或4；
n、m、p或q各自独立的选自0或1；
条件是L不为键。
本发明的一种优选方案，一种通式(I)、(II)、或(III)所示的化合物或其立体异构体、水合物、代谢产物、溶剂化物、药学上可接受的盐、共晶或前药，其中：
B选自
Figure GDA0003244926510000111
Figure GDA0003244926510000112
Q选自-CH2CH2-、-CH＝CH-、-O-、-S-、-CH2O-、-OCH2-、-C(CH3)2O-或-OC(CH3)2-；
B优选
Figure GDA0003244926510000113
Figure GDA0003244926510000114
R1各自独立的选自F、Cl、Br、I、CF3、氰基、OH、甲基、乙基、甲氧基或乙氧基；
环A选自5至10元杂环，优选噻吩基、苯并噻吩基、噻唑基、苯并噻唑基、呋喃基、苯并呋喃基、恶唑基、苯并恶唑基或吡啶基，更优选
Figure GDA0003244926510000121
Figure GDA0003244926510000122
Figure GDA0003244926510000123
所述杂环、噻吩基、苯并噻吩基、噻唑基、苯并噻唑基、呋喃基、苯并呋喃基、恶唑基、苯并恶唑基、吡啶基、
Figure GDA0003244926510000124
Figure GDA0003244926510000125
Figure GDA0003244926510000126
任选进一步被0至4个选自F、Cl、Br、I、OH、CF3、氰基、甲基、乙基、乙炔基、甲氧基或乙氧基的取代基所取代，且所述的杂环含有1至4个选自N、O或S的杂原子；W为-O-、-NH-或-NC1-4烷基-，优选-O-、-NH-、-NCH3-或-NCH2CH3-；
R2各自独立的选自F、Cl、Br、I、CF3、氰基、OH、甲基、乙基、甲氧基或乙氧基；
R3选自C1-4亚烷基，优选亚甲基、亚乙基、亚丙基或亚丁基，所述亚烷基、亚甲基、亚乙基、亚丙基或亚丁基任选进一步被0至5个选自F、Cl、Br、I、氰基、OH、甲基、乙基、甲氧基或乙氧基的取代基所取代；
L选自
Figure GDA0003244926510000127
X1与R3直接相连；
A1和A4各自独立选自C3-7亚环烷基、C6-10亚芳基或5至10元亚杂芳基，优选亚苯基、亚噻吩基、亚呋喃基、亚吡啶基或亚苯并三氮唑基，更优选亚苯基、亚噻吩基、亚呋喃基、亚吡啶基、
Figure GDA0003244926510000128
其中所述的亚环烷基、亚芳基、亚杂芳基、亚苯基、亚噻吩基、亚呋喃基、亚吡啶基、亚苯并三氮唑基或
Figure GDA0003244926510000131
任选进一步被0至5个R7取代；
R7选自F、Cl、Br、I、OH、NH2、羧基、氰基、C1-4烷基、C2-4炔基、C1-4烷氧基、-OC3-6环烷基或5至6元杂芳基，更优选F、Cl、Br、氰基、甲基、乙基、丙基、异丙基、CHF2、CF3、甲氧基、乙氧基、-OCHF2、-OCF3、乙炔基、丙炔基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、噻吩基、呋喃基、噻唑基或噁唑基，优选F、Cl、Br、氰基、甲基、乙基、丙基、异丙基、CHF2、CF3、甲氧基、乙氧基、-OCHF2、-OCF3、乙炔基、丙炔基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、噻吩基、呋喃基、噻唑基或噁唑基；
A2和A3各自独立选自C1-6亚烷基，更优选C1-5亚烷基，更进一步优选亚甲基、亚乙基、亚丙基或亚丁基，所述亚烷基、亚甲基、亚乙基、亚丙基或亚丁基任选进一步被0至5个选自F、Cl、Br、I、OH、氰基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、苯基或苯基-C1-4亚烷基的取代基所取代；
A5选自亚甲基、亚乙基、亚丙基、亚丁基、亚戊基、
Figure GDA0003244926510000132
所述的
Figure GDA0003244926510000133
任选进一步被0至4个选自F、Cl、Br、I、OH、NH2、CF3、＝O、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基或乙炔基取代基所取代；
X1和X2各自独立的选自键、-O-、-C(＝O)O-、-OC(＝O)-、-S-、-S(＝O)-、-S(＝O)2-、-C(＝O)NRx-、-NRxC(＝O)-、-OC(＝O)NRx-、-NRxC(＝O)O-、-NRxC(＝O)NRx-、-NRxS(＝O)2-、-S(＝O)2NRx-、-NRxS(＝O)2NRx-或-NRx-，优选键、-O-、-C(＝O)NRx-、-NRxC(＝O)-、-OC(＝O)NRx-、-NRxC(＝O)O-或-NRx-；
Rx各自独立选自H或者C1-4烷基，优选H、甲基、乙基或者丙基；
作为选择，Rx与R7直接相连接形成一个4至7元含氮杂环，优选Rx与相邻的R7直接相连接形成一个4至7元含氮杂环，所述的含氮杂环任选进一步被0至5个选自F、Cl、Br、I、CF3、OH、NH2、＝O、氰基、C1-4烷基或C2-4炔基的取代基所取代，且所述含氮杂环含有1至3个任选自N、O或S的杂原子；
R4选自C1-4亚烷基，优选亚甲基、亚乙基、亚丙基、亚丁基或
Figure GDA0003244926510000134
所述亚烷基、亚甲基、亚乙基、亚丙基、亚丁基或
Figure GDA0003244926510000135
任选进一步被0至5个R4a取代；
R4a选自F、Cl、Br、I、氰基、OH、C1-4烷基、C1-4烷氧基或苯基，优选F、Cl、Br、I、氰基、OH、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基或苯基；
作为选择，两个R4a可以与它们相连的原子一起形成一个3至6元碳环，所述碳环任选进一步被0至5个选自F、Cl、Br、I、氰基、OH、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代；
R5、R6各自独立的选自H或C1-4烷基，优选H、甲基或乙基；
a选自0、1、2、3、4或5，优选0、1或2；
b选自0、1、2、3或4，优选0；
n、m、p或q各自独立的选自0或1；
条件是L不为键。
本发明的一种优选方案，一种通式(I)、(II)、或(III)所示的化合物或其立体异构体、水合物、代谢产物、溶剂化物、药学上可接受的盐、共晶或前药，其中：
B选自
Figure GDA0003244926510000141
Figure GDA0003244926510000142
Q选自-CH2CH2-、-CH＝CH-、-O-、-S-、-CH2O-、-OCH2-、-C(CH3)2O-或-OC(CH3)2-；
B优选
Figure GDA0003244926510000143
Figure GDA0003244926510000144
R1各自独立的选自F、Cl、Br、I、CF3、氰基、OH、甲基、乙基、甲氧基或乙氧基；
环A选自噻吩基、苯并噻吩基、噻唑基、苯并噻唑基、呋喃基、苯并呋喃基、恶唑基、苯并恶唑基或吡啶基，优选
Figure GDA0003244926510000151
Figure GDA0003244926510000152
Figure GDA0003244926510000153
所述噻吩基、苯并噻吩基、噻唑基、苯并噻唑基、呋喃基、苯并呋喃基、恶唑基、苯并恶唑基、吡啶基、
Figure GDA0003244926510000154
Figure GDA0003244926510000155
任选进一步被0至4个选自F、Cl、Br、I、OH、CF3、氰基、甲基、乙基、乙炔基、甲氧基或乙氧基的取代基所取代；
W选自-O-、-NH-、-NCH3-或-NCH2CH3-；
R2各自独立的选自F、Cl、Br、I、CF3、氰基、OH、甲基、乙基、甲氧基或乙氧基；
R3选自亚甲基、亚乙基、亚丙基、-CH(CH3)CH2-或-CH2CH(CH3)-；
L选自
Figure GDA0003244926510000156
X1与R3直接相连；
A1和A4各自独立选自亚苯基、亚噻吩基、亚呋喃基、亚吡啶基或亚苯并三氮唑基，优选亚苯基、亚噻吩基、亚呋喃基、亚吡啶基或
Figure GDA0003244926510000157
Figure GDA0003244926510000158
其中所述的亚苯基、亚噻吩基、亚呋喃基、亚吡啶基、亚苯并三氮唑基、
Figure GDA0003244926510000159
任选进一步被0至5个R7取代；
R7选自F、Cl、Br、CHF2、CF3、氰基、甲基、乙基、乙炔基、甲氧基、乙氧基、-OCHF2、-OCF3、乙炔基、丙炔基、吡咯基、咪唑基或吡唑基，
A2和A3各自独立选自亚甲基、亚乙基、亚丙基或亚丁基；
A5选自亚甲基、亚乙基、亚丙基、亚丁基、亚戊基、
Figure GDA0003244926510000161
所述的
Figure GDA0003244926510000162
任选进一步被0至4个选自F、Cl、Br、I、OH、NH2、CF3、＝O、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基或乙炔基取代基所取代；
X1和X2各自独立的选自键、-O-、-C(＝O)O-、-OC(＝O)-、-S-、-S(＝O)-、-S(＝O)2-、-C(＝O)NRx-、-NRxC(＝O)-、-OC(＝O)NRx-、-NRxC(＝O)O-、-NRxC(＝O)NRx-、-NRxS(＝O)2-、-S(＝O)2NRx-、-NRxS(＝O)2NRx-或-NRx-，优选键、-O-、-C(＝O)NRx-、-NRxC(＝O)-、-OC(＝O)NRx-、-NRxC(＝O)O-或-NRx-；
Rx各自独立选自H或者C1-4烷基，优选H、甲基、乙基或者丙基；
作为选择，Rx与R7直接相连接形成一个4至7元含氮杂环，优选Rx与相邻的R7直接相连接形成一个4至7元含氮杂环，所述的含氮杂环任选进一步被0至5个选自F、Cl、Br、I、CF3、OH、NH2、＝O、氰基、C1-4烷基或C2-4炔基的取代基所取代，且所述含氮杂环含有1至3个任选自N、O或S的杂原子；
R4选自亚甲基、亚乙基、亚丙基、-CH2CH(CH3)-、-CH2C(CH3)2-、-C(CH3)2CH2-、-CH(CH3)CH2-、亚丁基、-CH(CH3)CH2CH2-、-CH2CH(CH3)CH2-、-CH2CH(CH3)CH2-或
Figure GDA0003244926510000163
R5、R6各自独立的选自H或C1-4烷基，优选H、甲基或乙基；
a选自0、1、2、3、4或5，优选0、1或2；
b选自0、1、2、3或4，优选0；
n、m、p或q各自独立的选自0或1；
条件是L不为键。
本发明优选方案，本发明涉及化合物选自，但不限于：
Figure GDA0003244926510000171
Figure GDA0003244926510000181
本发明还涉及提供一种药物组合物，所述的药物组合物含有治疗有效剂量的通式(I)、(II)或(III)任一项所述的化合物或其立体异构体、水合物、代谢产物、溶剂化物、药学上可接受的盐、共晶或前药，以及药学上可接受的载体、稀释剂、佐剂、媒介物或赋形剂；所述的组合物还可进一步包括一种或多种其他治疗剂；优选的，其中所述其他治疗剂选自PDE4抑制剂、蕈毒碱受体拮抗剂、皮质类固醇和β-肾上腺素能受体激动剂中的一种或多种。
本发明还涉及提供通式(I)、(II)或(III)所述的化合物或其立体异构体、水合物、代谢产物、溶剂化物、药学上可接受的盐、共晶或前药或上述药物组合物，在制备用于治疗气道阻塞性疾病的药物中的应用，优选的，在制备用于治疗哮喘、慢性阻塞性肺疾病或支气管炎的药物中的应用。
本发明还提供了一种治疗气道阻塞性疾病的方法，所述方法包括给药上述通式(I)、(II)或(III)任一项所述的化合物或其立体异构体、水合物、代谢产物、溶剂化物、药学上可接受的盐、共晶或前药，或上述的药物组合物。
本发明还提供了一种治疗哮喘、慢性阻塞性肺疾病或支气管炎的方法，所述方法包括给药上述通式(I)、(II)或(III)任一项所述的化合物或其立体异构体、水合物、代谢产物、溶剂化物、药学上可接受的盐、共晶或前药，或上述的药物组合物。
本发明提供一种制备通式(I)所示化合物或其立体异构体的中间体，该中间体选自通式(I-M)所示的化合物或者其立体异构体：
Figure GDA0003244926510000191
Rm选自H、氨基保护基、-R3-COOH、-R3-COOC1-4烷基、
Figure GDA0003244926510000192
Rn选自-CHO、
Figure GDA0003244926510000193
C(OC1-4烷基)2或
Figure GDA0003244926510000194
所述的氨基保护基优选叔丁基氧基羰基；
P选自羟基保护基，优选苄基或叔丁基二甲基硅基；
R1、R2、R3、R4、R5、R6、B、X1、X2、A1、A2、A3、A4、B、a、b、n、m、p和q的定义与上文中通式(I)所示的化合物一致。本发明优选方案,通式(I-M)所示的化合物包括但不限于如下结构之一：
Figure GDA0003244926510000195
Figure GDA0003244926510000201
Figure GDA0003244926510000211
Figure GDA0003244926510000221
除非有相反的陈述，在说明书和权利要求书中使用的术语具有下述含义。
本发明所述基团和化合物中所涉及的碳、氢、氧、硫、氮或卤素均包括它们的同位素，及本发明所述基团和化合物中所涉及的碳、氢、氧、硫、氮或卤素任选进一步被一个或多个它们对应的同位素所替代，其中碳的同位素包括12C、13C和14C，氢的同位素包括氕(H)、氘(D，又称为重氢)、氚(T，又称为超重氢)，氧的同位素包括16O、17O和18O，硫的同位素包括32S、33S、34S和36S，氮的同位素包括14N和15N，氟的同位素19F，氯的同位素包括35Cl和37Cl，溴的同位素包括79Br和81Br。
“烷基”是指直链和支链的一价饱和烃基，主链包括1至10个碳原子，优选为1至8个碳原子，进一步优选为1至6个碳原子，更优选为1至4个碳原子的直链与支链基团，最优选1至2个碳原子，烷基的实例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、2-戊基、3-戊基、2-甲基-2-丁基、3-甲基-2-丁基、正己基、正庚基、正辛基、正壬基和正癸基等；所述的烷基可以任选进一步被0、1、2、3、4或5个选自F、Cl、Br、I、＝O、-CH2F、-CHF2、-CF3、-OCH2F、-OCHF2、-OCF3、羟基、-SR18、硝基、氰基、异氰基、烷基、羟基烷基、烷氧基、碳环基、杂环基、C2-8烯基、C2-8炔基、-(CH2)s-C(＝O)-R18、-(CH2)s-C(＝O)-O-R18、-(CH2)s-C(＝O)-NR18R18a、-(CH2)s-S(＝O)k-R18、-O-C(＝O)-O-R18或者-NR18R18a的取代基所取代，其中R18和R18a各自独立选自H、羟基、氨基、羧基、C1-8烷基、C1-8烷氧基、C2-8烯基、C2-8炔基、3至10元碳环基、4至10元杂环基、3至10元碳环基氧基或者4至10元杂环基氧基，s选自0、1、2、3、4或者5，k选自0、1或者2。本文中出现的烷基、k、s、R18和R18a，其定义如上所述。
“亚烷基”是指直链和支链的二价饱和烃基，包括-(CH2)v-(v为1至10的整数)，亚烷基实施例包括但不限于亚甲基、亚乙基、亚丙基和亚丁基等；所述的亚烷基可以任选进一步被0、1、2、3、4或5个选自F、Cl、Br、I、＝O、-CH2F、-CHF2、-CF3、-OCH2F、-OCHF2、-OCF3、羟基、-SR18、硝基、氰基、异氰基、烷基、羟基烷基、烷氧基、碳环基、杂环基、C2-8烯基、C2-8炔基、-(CH2)s-C(＝O)-R18、-(CH2)s-C(＝O)-O-R18、-(CH2)s-C(＝O)-NR18R18a、-(CH2)s-S(＝O)k-R18、-O-C(＝O)-O-R18或者-NR18R18a的取代基所取代。本文中出现的亚烷基，其定义如上所述。
“烷氧基”是指O-烷基的一价基团，其中，烷基如本文所定义，烷氧基实施例包括但不限于甲氧基、乙氧基、1-丙氧基、2-丙氧基、1-丁氧基、2-甲基-1-丙氧基、2-丁氧基、2-甲基-2-丙氧基、1-戊氧基、2-戊氧基、3-戊氧基、2-甲基-2-丁氧基、3-甲基-2-丁氧基、3-甲基-1-丁氧基和2-甲基-1-丁氧基等。
“烯基”是指直链和支链的一价不饱和烃基，其具有至少1个，通常有1、2或3个碳碳双键，主链包括2至10个碳原子，进一步优选2至6个碳原子，更优选在主链上有2至4个碳原子，烯基实施例包括但不限于乙烯基、烯丙基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、3-丁烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、3-戊烯基、4-戊烯基、1-甲基-1-丁烯基、2-甲基-1-丁烯基、2-甲基-3-丁烯基、1-己烯基、2-己烯基、3-己烯基、4-己烯基、5-己烯基、1-甲基-1-戊烯基、2-甲基-1-戊烯基、1-庚烯基、2-庚烯基、3-庚烯基、4-庚烯基、1-辛烯基、3-辛烯基、1-壬烯基、3-壬烯基、1-癸烯基、4-癸烯基、1,3-丁二烯、1,3-戊二烯、1,4-戊二烯和1,4-己二烯等；所述的亚烷基可以任选进一步被0、1、2、3、4或5个选自F、Cl、Br、I、＝O、-CH2F、-CHF2、-CF3、-OCH2F、-OCHF2、-OCF3、羟基、-SR18、硝基、氰基、异氰基、烷基、羟基烷基、烷氧基、碳环基、杂环基、C2-8烯基、C2-8炔基、-(CH2)s-C(＝O)-R18、-(CH2)s-C(＝O)-O-R18、-(CH2)s-C(＝O)-NR18R18a、-(CH2)s-S(＝O)k-R18、-O-C(＝O)-O-R18或者-NR18R18a的取代基所取代。本文中出现的烯基，其定义如上所述。
“亚烯基”是指直链和支链的二价烯基，烯基定义如上所述。
“炔基”是指直链和支链的一价不饱和烃基，其具有至少1个，通常有1、2或3个碳碳三键，主链包括2至10个碳原子，进一步优选2至6个碳原子，更优选在主链上有2至4个碳原子，炔基实施例包括但不限于乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、丁炔基、2-丁炔基、3-丁炔基、1-甲基-2-丙炔基、4-戊炔基、3-戊炔基、1-甲基-2-丁炔基、2-己炔基、3-己炔基、2-庚炔基、3-庚炔基、4-庚炔基、3-辛炔基、3-壬炔基和4-癸炔基等；所述的炔基可以任选进一步被0、1、2、3、4或5个选自F、Cl、Br、I、＝O、-CH2F、-CHF2、-CF3、-OCH2F、-OCHF2、-OCF3、羟基、-SR18、硝基、氰基、异氰基、烷基、羟基烷基、烷氧基、碳环基、杂环基、C2-8烯基、C2-8炔基、-(CH2)s-C(＝O)-R18、-(CH2)s-C(＝O)-O-R18、-(CH2)s-C(＝O)-NR18R18a、-(CH2)s-S(＝O)k-R18、-O-C(＝O)-O-R18或者-NR18R18a的取代基所取代。本文中出现的炔基，其定义如上所述。
“亚炔基”是是指直链和支链的二价炔基，炔基定义如上所述。
“环烷基”是指一价饱和的碳环烃基，通常有3至10个碳原子，非限制性实施例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基或环庚基等。所述的环烷基可以任选进一步被0、1、2、3、4或5个选自F、Cl、Br、I、＝O、-CH2F、-CHF2、-CF3、-OCH2F、-OCHF2、-OCF3、羟基、-SR18、硝基、氰基、异氰基、烷基、羟基烷基、烷氧基、碳环基、杂环基、C2-8烯基、C2-8炔基、-(CH2)s-C(＝O)-R18、-(CH2)s-C(＝O)-O-R18、-(CH2)s-C(＝O)-NR18R18a、-(CH2)s-S(＝O)k-R18、-O-C(＝O)-O-R18或者-NR18R18a的取代基所取代。本文中出现的环烷基，其定义如上所述。
“亚环烷基”是指二价环烷基，其中环烷基的定义如上所述。
“芳基”是指具有单环或稠合环的一价芳香族烃基，通常有6至10个碳原子，非限制性实施例包括苯基、萘-1-基或萘-2-基。所述的芳基可以任选进一步被0、1、2、3、4或5个选自F、Cl、Br、I、＝O、-CH2F、-CHF2、-CF3、-OCH2F、-OCHF2、-OCF3、羟基、-SR18、硝基、氰基、异氰基、烷基、羟基烷基、烷氧基、碳环基、杂环基、C2-8烯基、C2-8炔基、-(CH2)s-C(＝O)-R18、-(CH2)s-C(＝O)-O-R18、-(CH2)s-C(＝O)-NR18R18a、-(CH2)s-S(＝O)k-R18、-O-C(＝O)-O-R18或者-NR18R18a的取代基所取代。本文中出现的芳基，其定义如上所述。
“亚芳基”是指二价芳基，其中芳基的定义如上所述。
“碳环”或“碳环基”是指饱和或者不饱和3至10元的单环或者4至12元双环体系，碳环可以连接有桥环或者螺环，非限制性实施例包括环丙基、环丁基、环戊基、1-环戊基-1-烯基、1-环戊基-2-烯基、1-环戊基-3-烯基、环己基、1-环己基-2-烯基、1-环己基-3-烯基、环己烯基、环庚基、环辛基、环壬基、环癸基和
Figure GDA0003244926510000251
所述的碳环基可以任选进一步被0、1、2、3、4或5个选自F、Cl、Br、I、＝O、-CH2F、-CHF2、-CF3、-OCH2F、-OCHF2、-OCF3、羟基、-SR18、硝基、氰基、异氰基、烷基、羟基烷基、烷氧基、碳环基、杂环基、C2-8烯基、C2-8炔基、-(CH2)s-C(＝O)-R18、-(CH2)s-C(＝O)-O-R18、-(CH2)s-C(＝O)-NR18R18a、-(CH2)s-S(＝O)k-R18、-O-C(＝O)-O-R18或者-NR18R18a的取代基所取代。本文中出现的碳环，其定义如上所述。
“杂环”或“杂环基”是指饱和或不饱和的非芳香环，非芳香环可以是3至10元的单环或者4至12元双环，且包含1至4个选自N、O或S的杂原子，优选4至8元杂环基，杂环基的环中选择性取代的N、S可被氧化成各种氧化态。杂环基可以连接在杂原子或者碳原子上，杂环基可以连接有桥环或者螺环，非限制性实施例包括环氧乙基、环氧丙基、氮杂环丙基、氧杂环丁基、氮杂环丁基、硫杂环丁基、1,3-二氧戊环基、1,4-二氧戊环基、1,3-二氧六环基、氮杂环庚基、氧杂环庚基、硫杂环庚基、氧氮杂卓基、硫氮杂卓基、哌啶基、高哌啶基、呋喃基、吡喃基、N-烷基吡咯基、嘧啶基、哌嗪基、高哌嗪基、哌啶基、哌叮基、吗啉基、硫代吗啉基、噻噁烷基、1,3-二噻基、二氢呋喃基、二氢吡喃基、二噻戊环基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、四氢吡喃基、四氢噻喃基、四氢吡咯基、四氢咪唑基、四氢噻唑基、苯并咪唑基、苯并吡啶基、吡咯并吡啶基、2-吡咯啉基、3-吡咯啉基、二氢吲哚基、2H-吡喃基、4H-吡喃基、二氧杂环己基、1,3-二氧戊基、吡唑啉基、二噻烷基、二噻茂烷基、二氢噻吩基、吡唑烷基咪唑啉基和咪唑烷基。所述的杂环基可以任选进一步被0、1、2、3、4或5个选自F、Cl、Br、I、＝O、-CH2F、-CHF2、-CF3、-OCH2F、-OCHF2、-OCF3、羟基、-SR18、硝基、氰基、异氰基、烷基、羟基烷基、烷氧基、碳环基、杂环基、C2-8烯基、-(CH2)q-C(＝O)-R18、-(CH2)s-C(＝O)-O-R18、-(CH2)s-C(＝O)-NR18R18a、-(CH2)s-S(＝O)k-R18、-O-C(＝O)-O-R18或者-NR18R18a的取代基所取代。本文中出现的杂环基，其定义如上所述。
“杂芳基”是指具有单环或两个稠合环并且在环中包含至少1个选自N、O或S的杂原子的一价芳基，通常有5至10元的原子组成，非限制性实施例包括吡咯基、咪唑基、噻唑基、噻吩基、呋喃基、吡唑基、异恶唑基、恶唑基、吡啶基或吡嗪基。所述的杂芳基可以任选进一步被0、1、2、3、4或5个选自F、Cl、Br、I、＝O、-CH2F、-CHF2、-CF3、-OCH2F、-OCHF2、-OCF3、羟基、-SR18、硝基、氰基、异氰基、烷基、羟基烷基、烷氧基、碳环基、杂环基、C2-8烯基、C2-8炔基、-(CH2)s-C(＝O)-R18、-(CH2)s-C(＝O)-O-R18、-(CH2)s-C(＝O)-NR18R18a、-(CH2)s-S(＝O)k-R18、-O-C(＝O)-O-R18或者-NR18R18a的取代基所取代。本文中出现的杂芳基，其定义如上所述。
“亚杂芳基”是指二价杂芳基，其中杂芳基的定义如上所述。
“β-肾上腺素受体结合基团”是指能够与β-肾上腺素能受体结合的基团；诸如参见综述文章“β-adrenergic receptors in Comprehensive Medicinal Chemistry，1990，B.E.Main，p187(Pergamon Press)”。上述基团也参见例如WO/2005092841、US/20050215542、WO/2005070872、WO/2006023460、WO/2006051373、WO/2006087315和WO/2006032627。非限制性实施例包括
Figure GDA0003244926510000261
R5、R6各自独立的选自H或C1-4烷基，B选自
Figure GDA0003244926510000262
Figure GDA0003244926510000263
其中Q选自-CH＝CH-、-CH2CH2-、-O-、-S-、-CH2O-、-OCH2-、-C(CH3)2O-或-OC(CH3)2-。
“氨基保护基”是指用于氨基保护的基团，该基团适用于保护氨基，使氨基不进行化学反应，但是在分子的其它部分完成所需化学反应之后该基团容易除去。在《有机合成中的保护基》(华东理工大学有机化学教研室译，荣国斌校，华东理工大学出版社，2004；原书为Protective Groups In Organic Synthesis(third edition),Theodora W.Green andPeter G.M.Wuts著)中氨基的保护一章对氨基保护基做了详细介绍。本申请将《有机合成中的保护基》中第494-653页引用于此作为本申请的一部分。
“氨基保护基”包括但不限于以下基团：苄基、对甲氧基苄基、三苯甲基、叔丁氧基羰基、苄氧基羰基、9-芴基甲氧羰基、2,2,2-三氯乙氧羰基、乙氧羰基、苄氧基羰基、三氟乙酰基、乙酰基或苯甲酰基。
“羟基保护基”包括但不限于以下基团：苄基、三甲基硅基、叔丁基二甲基硅基、叔丁基二苯基硅基、三异丙基硅基、三叔丁基硅基、甲基、叔丁基、烯丙基、三苯基甲基、甲氧基甲基、乙氧基甲基、甲氧基乙氧基甲基、苄氧基甲基、、一氯乙酰基、二氯乙酰基、三氯乙酰基、苯甲酰基或叔丁基酰基，所述的苄基、苄氧基甲基和苯甲酰基任选地被0至5个选自C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、F、Cl、Br或I的取代基所取代。
“任选”或“任选地”是指随后所描述的事件或环境可以但不必须发生，该说明包括该事件或环境发生或不发生的场合。如：“任选被F取代的烷基”指烷基可以但不必须被F取代，说明包括烷基被F取代的情形和烷基不被F取代的情形。
“药物组合物”表示一种或多种文本所述化合物或其生理学/药学上可接受的盐与其他组成成分的混合物，其中其它组分包含生理学/药学上可接受的载体和赋形剂。
“载体”指的是不会对生物体产生明显刺激且不会消除所给予化合物的生物活性和特性的载体或稀释剂。
“赋形剂”指的是加入到药物组合物中以进一步依赖于化合物给药的惰性物质。赋形剂的实例包括但不限于碳酸钙、磷酸钙、各种糖和不同类型的淀粉、纤维素衍生物(包括微晶纤维素)、明胶、植物油、聚乙二醇类、稀释剂、成粒剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂等。
“前药”是指可以在生理条件下或通过溶剂解转化为具有生物活性的本发明化合物的化合物。本发明的前药通过修饰本发明化合物中的功能基团来制备，该修饰可以通过常规的操作或者在体内被除去，而得到母体化合物。
“立体异构体”是指由分子中原子在空间上排列方式不同所产生的异构体，包括顺反异构体、对映异构体和构象异构体。
“有效剂量”指引起组织、系统或受试者生理或医学反应的化合物的量，此量是所寻求的，包括在受治疗者身上施用时足以预防受治疗的疾患或病症的一种或几种症状发生或使其减轻至某种程度的化合物的量。
“溶剂化物”指本发明化合物或其盐，它们还包括以分子间非共价力结合的化学计量或非化学计量的溶剂。当溶剂为水时，则为水合物。
具体实施方式
以下结合实施例详细说明本发明的技术方案，但本发明的保护范围包括但是不限于此。
化合物的结构是通过核磁共振(NMR)或(和)质谱(MS)来确定的。NMR位移(δ)以10-6(ppm)的单位给出。NMR的测定是用(Bruker Avance III 400和Bruker Avance 300)核磁仪，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(DMSO-d6)，氘代氯仿(CDCl3)，氘代甲醇(CD3OD)，内标为四甲基硅烷(TMS)。
MS的测定用(Agilent 6120B(ESI)和Agilent 6120B(APCI))。
HPLC的测定使用安捷伦1260DAD高压液相色谱仪(Zorbax SB-C18 100×4.6mm)。
薄层层析硅胶板使用烟台黄海HSGF254或青岛GF254硅胶板，薄层色谱法(TLC)使用的硅胶板采用的规格是0.15mm～0.20mm，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm～0.5mm。
柱层析一般使用烟台黄海硅胶200～300目硅胶为载体。
本发明的己知的起始原料可以采用或按照本领域已知的方法来合成，或可购买于泰坦科技、安耐吉化学、上海德默、成都科龙化工、韶远化学科技、百灵威科技等公司。
氢气氛围是指反应瓶连接一个约1L容积的氢气气球。
氢化反应通常抽真空，充入氢气，反复操作3次。
实施例中无特殊说明，反应在氮气氛下进行。
实施例中无特殊说明，溶液是指水溶液。
实施例中无特殊说明，反应的温度为室温。
实施例中无特殊说明，M是摩尔每升。
室温为最适宜的反应温度，为20℃～30℃。
Bn：是指苄基。
Boc：是指叔丁基氧基羰基。
TBS：是指叔丁基二甲基。
TFA：三氟乙酸。
中间体1：7-[(1R)-2-氨基-1-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基乙基]-4-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基-3H-1,3-苯并噻唑-2-酮
7-[(1R)-2-amino-1-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-ethyl]-4-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-3H-1,3-benzothiazol-2-one
Figure GDA0003244926510000291
第一步：7-[(1R)-2-叠氮基-1-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基乙基]-4-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基-3H-1,3-苯并噻唑-2-酮(1b)
7-[(1R)-2-azido-1-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-ethyl]-4-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-3H-1,3-benzothiazol-2-one
Figure GDA0003244926510000292
7-[(1R)-2-叠氮基-1-羟基-乙基]-4-羟基-3H-1,3-苯并噻唑-2-酮(1a)(参考WO2009098448A1制备得到)(0.56g.2.2mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中，然后加入咪唑(0.6g，8.9mmol)，分批加入叔丁基二甲基氯硅烷(1.3g，8.9mmol)，再加入催化量的4-二甲氨基吡啶，温度升至40℃搅拌7小时。把反应液倒入水(100mL)中，用乙酸乙酯(100mL×1)萃取，有机相用饱和氯化钠水溶液(100mL×2)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物用硅胶柱层析(洗脱剂为乙酸乙酯/石油醚(v/v)＝0/1～5/95)，得标题化合物7-[(1R)-2-叠氮基-1-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基乙基]-4-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基-3H-1,3-苯并噻唑-2-酮(1b)，白色固体(0.85g，产率80％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.25(s,1H),6.92(d,1H),6.71(d,1H),4.78(dd,1H),3.41(dd,1H),3.25(dd,1H),1.05-0.98(m,9H),0.92-0.88(m,9H),0.28(t,6H),0.12(d,3H),-0.04(d,3H)。
第二步：7-[(1R)-2-氨基-1-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基乙基]-4-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基-3H-1,3-苯并噻唑-2-酮(中间体1)
7-[(1R)-2-amino-1-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-ethyl]-4-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-3H-1,3-benzothiazol-2-one
Figure GDA0003244926510000301
将7-[(1R)-2-叠氮基-1-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基乙基]-4-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基-3H-1,3-苯并噻唑-2-酮(1b)(0.85g，1.8mmol)溶于乙酸乙酯(20mL)中，加入10％(w/w)的钯碳(0.085g)，常压氢气球下搅拌过夜。垫硅藻土过滤，浓缩得标题化合物7-[(1R)-2-氨基-1-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基乙基]-4-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基-3H-1,3-苯并噻唑-2-酮(中间体1)，浅黑色固体(0.7g，产率90％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.89(d,1H),6.68(t,1H),4.64(dd,1H),2.88(ddd,2H),1.04-0.96(m,9H),0.95-0.87(m,9H),0.33-0.23(m,6H),0.12-0.06(m,3H),-0.04--0.11(m,3H)。
实施例1：[1-[3-[2-氯-4-[[[(2R)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-5-甲氧基苯胺基]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]-N-(5-苯基噻唑-4-基)氨基甲酸酯；二三氟乙酸盐(化合物1)
[1-[3-[2-chloro-4-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]-5-methoxy-anilino]-3-oxo-propyl]-4-piperidyl]
N-(5-phenylthiazol-4-yl)carbamate；ditrifluoroacetic acid
Figure GDA0003244926510000302
Figure GDA0003244926510000311
第一步：5-苯基噻唑-4-羧酸乙酯(1B)
ethyl 5-phenylthiazole-4-carboxylate
Figure GDA0003244926510000312
将5-溴噻唑-4-羧酸乙酯(1A)(10.00g，42.36mmol)溶解在叔丁醇(100mL)中，氮气保护下依次加入四三苯基膦钯(2.447g，2.118mmol)、无水碳酸钠(17.96g，169.4mmol)、苯硼酸(10.33g，84.71mmol)，加完后加热至90℃反应5小时。冷却至室温，加入水(100mL)，乙酸乙酯(500mL)，分液，有机层用饱和氯化钠水溶液(100mLx2)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后残留物用硅胶柱色谱分离提纯(洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝1:0～9:1)得到5-苯基噻唑-4-羧酸乙酯(1B)，黄色固体(7.00g，产率70.8％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.77(s,1H),7.53–7.48(m,2H),7.45–7.40(m,3H),4.34-4.29(m,2H),1.27(t,3H)。
LCMS m/z＝234.1[M+1]。
第二步：5-苯基噻唑-4-羧酸(1C)
5-phenylthiazole-4-carboxylic acid
Figure GDA0003244926510000321
将5-苯基噻唑-4-羧酸乙酯(1B)(0.150g，0.643mmol)溶解在乙醇(2mL)中，加入氢氧化钠(0.129g，3.21mmol)的水溶液(1mL)，加热至90℃反应30分钟。冰浴下，慢慢滴加2M盐酸调节pH至2，用二氯甲烷(50mL×2)萃取，合并有机层，饱和氯化钠水溶液(20mL×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后得到5-苯基噻唑-4-羧酸(1C)粗品，浅黄色固体(0.120g，产率90.9％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.94(s,1H),9.11(s,1H),7.54-7.52(m,2H),7.46-7.43(m,3H)。
LCMS m/z＝206.1[M+1]。
第三步：[(5-苯基噻唑-4-基)氨基甲酰氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(1D)
tert-butyl 4-[(5-phenylthiazol-4-yl)carbamoyloxy]piperidine-1-carboxylate
Figure GDA0003244926510000322
将5-苯基噻唑-4-羧酸(1C)(4.00g，19.5mmol)悬浮在干燥甲苯(30mL)中，氮气保护下加入三乙胺(3.94g，39.0mmol)、叠氮磷酸二苯酯(5.36g，19.5mmol)和4-羟基哌啶-1-羧酸叔丁酯(5.88g，29.2mmol)，室温搅拌1小时后加热至120℃反应1小时。反应液减压浓缩后残留物用硅胶柱色谱分离提纯(洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝1:0～1:1)得到[(5-苯基噻唑-4-基)氨基甲酰氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(1D)，黄色油状物(1.40g，产率17.8.8％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.66(s,1H),7.53–7.48(m,2H),7.43-7.39(m,2H),7.38–7.33(m,1H),6.92(s,1H),4.85–4.78(m,1H),3.62-3.52(m,2H),3.21–3.12(m,2H),1.80-.72(m,2H),1.53-1.47(m,2H),1.45(s,9H)。
LCMS m/z＝404.1[M+1]。
第四步：4-哌啶基-N-(5-苯基噻唑-4-基)氨基甲酸酯(1E)
4-piperidyl N-(5-phenylthiazol-4-yl)carbamate
Figure GDA0003244926510000331
将[(5-苯基噻唑-4-基)氨基甲酰氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(1D)(1.50g，3.72mmol)溶解在二氯甲烷(5mL)中，加入三氟乙酸(5mL)，加完后室温搅拌30分钟。慢慢滴加饱和碳酸氢钠水溶液调节pH至碱性，用二氯甲烷(20mL×2)萃取，合并有机层，饱和氯化钠水溶液(10mL×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得4-哌啶基-N-(5-苯基噻唑-4-基)氨基甲酸酯(1E)粗品，白色固体(0.90g，79.8％)，不纯化直接用于下一步。
LCMS m/z＝304.1[M+1]。
第五步：[1-[3-(2-氯-4-甲酰基-5-甲氧基苯胺基)-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-(5-苯基噻唑-4-基)氨基甲酸酯(1G)
[1-[3-(2-chloro-4-formyl-5-methoxy-anilino)-3-oxo-propyl]-4-piperidyl]
N-(5-phenylthiazol-4-yl)carbamate
Figure GDA0003244926510000332
将4-哌啶基-N-(5-苯基噻唑-4-基)氨基甲酸酯(1E)(0.500g，1.65mmol)溶解在2-甲基四氢呋喃(10mL)中，加入N-(2-氯-4-甲酰基-5-甲氧基-苯基)丙-2-烯酰胺(1F)(0.474g，1.98mmol)和三乙胺(0.334g，3.30mmol)，加完后微波100℃反应40分钟。反应液减压浓缩后残留物用硅胶柱色谱分离提纯(洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝3:2～3:7)得到[1-[3-(2-氯-4-甲酰基-5-甲氧基苯胺基)-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-(5-苯基噻唑-4-基)氨基甲酸酯(1G)，浅黄色固体(0.310g，产率34.6％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.29(s,1H),8.67(s,1H),8.34(s,1H),7.82(s,1H),7.54-7.50(m,2H),7.44–7.39(m,2H),7.37-7.33(m,1H),6.85(s,1H),4.83–4.74(m,1H),3.93(s,3H),2.78-2.72(m,2H),2.72-2.66(m,2H),2.64-2.60(m,2H),2.42-2.32(m,2H),1.96-1.90(m,2H),1.78-1.70(m,2H)。
LCMS m/z＝543.1[M+1]。
第六步：[1-[3-[4-[[[(2R)-2-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-2-氯-5-甲氧基-苯氨基]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]-N-(5-苯基噻唑-4-基)氨基甲酸酯(1I)
[1-[3-[4-[[[(2R)-2-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]-2-chloro-5-methoxy-anilino]-3-oxo-propyl]-4-piperidyl]N-(5-phenylthiazol-4-yl)carbamate
Figure GDA0003244926510000341
将[1-[3-(2-氯-4-甲酰基-5-甲氧基苯胺基)-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-(5-苯基噻唑-4-基)氨基甲酸酯(1G)(0.270g，0.497mmol)溶解在无水甲醇(3mL)中，加入二氯甲烷(3mL)，加入5-[(1R)-2-氨基-1-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基乙基]-8-羟基-1H-喹啉-2-酮(制备参考WO2007102771A1)(1H)(0.200g，0.597mmol)，室温搅拌1小时，加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.316g，1.49mmol)，加完后室温反应2小时。滴加饱和碳酸氢钠水溶液调节pH至碱性，加入二氯甲烷(30mL)，分液，水层再用二氯甲烷(20mL×1)萃取，合并有机层，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后残留物用硅胶柱色谱分离提纯(洗脱剂为二氯甲烷：甲醇(v/v)＝1:0～19:1)得到[1-[3-[4-[[[(2R)-2-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-2-氯-5-甲氧基-苯氨基]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]-N-(5-苯基噻唑-4-基)氨基甲酸酯(1I)，浅黄色固体(0.220g，产率51.4％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.67(s,1H),8.66(s,1H),8.21(d,1H),8.03(s,1H),7.54–7.49(m,2H),7.40-7.37(m,2H),7.35–7.31(m,1H),7.11(s,1H),7.01(d,1H),6.91(d,1H),6.59(d,1H),5.24-5.16(m,1H),4.78-4.70(m,1H),3.88-3.80(m,1H),3.80-3.72(m,4H),3.99–2.94(m,1H),2.88(m,1H),2.77(m,2H),2.69-2.67(m,2H),2.60(m,2H),2.35–2.27(m,2H),1.93-1.90(m,2H),1.75(m,2H),0.85(s,9H),0.02(s,3H),-0.23(s,3H)。
LCMS m/z＝861.3[M+1]。
第七步：[1-[3-[2-氯-4-[[[(2R)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-5-甲氧基苯胺基]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]-N-(5-苯基噻唑-4-基)氨基甲酸酯；二三氟乙酸盐(化合物1)
[1-[3-[2-chloro-4-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]-5-methoxy-anilino]-3-oxo-propyl]-4-piperidyl]N-(5-phenylthiazol-4-yl)carbamate；ditrifluoroacetic acid
Figure GDA0003244926510000351
将[1-[3-[4-[[[(2R)-2-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-2-氯-5-甲氧基-苯氨基]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]-N-(5-苯基噻唑-4-基)氨基甲酸酯(1I)(0.280g，0.325mmol)溶解在四氢呋喃(3mL)中，加入三乙胺三氢氟酸盐(0.210g，1.30mmol)，室温反应过夜。倒掉反应清液，剩下的粘稠物加入四氢呋喃(10mL)，搅拌1分钟，去掉清液，粘稠物再加入四氢呋喃(10mL)，搅拌1分钟，去掉清液，粘稠物加入二氯甲烷/甲醇(v/v)＝9/1的混合溶液(100mL)，滴加饱和碳酸氢钠水溶液调节pH至碱性，分液，水层再用二氯甲烷/甲醇(v/v)＝9/1的混合溶液(100mL×1)萃取，合并有机层，饱和氯化钠水溶液(30mL×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后残留物液相制备(液相制备条件：C18反相制备柱，流动相为含0.05％TFA的去离子水(A)，乙腈(B)，等度洗脱25％乙腈，洗脱时间20分钟)得到[1-[3-[2-氯-4-[[[(2R)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-5-甲氧基苯胺基]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]-N-(5-苯基噻唑-4-基)氨基甲酸酯；二三氟乙酸盐(化合物1)，浅黄色固体(0.066g，产率27.2％)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.81(s,1H),8.01(d,1H),7.69(s,1H),7.47(d,2H),7.38–7.32(m,3H),7.28(t,1H),7.19(d,1H),6.94(d,1H),6.50(d,1H),5.32-5.28(m,1H),4.86(s,1H),4.20-4.11(m,2H),3.74(s,3H),3.62-3.52(m,1H),3.46-3.36(m,3H),3.18(d,1H),3.15(d,1H),3.10-3.02(m,2H),3.00-2.94(m,2H),2.00-1.82(m,4H)。
LCMS m/z＝747.3[M+1]。
实施例2：[1-[3-[2-氯-4-[[[(2R)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-5-甲氧基苯胺基]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]-N-(3-苯基-2-噻吩基)氨基甲酸酯(化合物2)
[1-[3-[2-chloro-4-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]-5-methoxy-anilino]-3-oxo-propyl]-4-piperidyl]N-(3-phenyl-2-thienyl)carbamate
Figure GDA0003244926510000361
第一步：3-苯基噻吩-2-羧酸甲酯(2B)
methyl 3-phenylthiophene-2-carboxylate
Figure GDA0003244926510000362
将3-溴噻吩-2-羧酸甲酯(2A)(10.00g，45.23mmol)溶解在叔丁醇(100mL)中，氮气保护下依次加入四三苯基膦钯(2.614g，2.262mmol)、无水碳酸钠(19.18g，180.9mmol)和苯硼酸(11.03g，90.47mmol)，加完后加热至90℃反应5小时。冷却至室温，加入水(100mL)，乙酸乙酯(500mL)，分液，有机层用饱和氯化钠水溶液(100mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后残留物用硅胶柱色谱分离提纯(洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝1:0～9:1)得到3-苯基噻吩-2-羧酸甲酯(2B)，白色固体(8.30g，产率84.1％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.50(d,1H),7.47-7.43(m,2H),7.43–7.36(m,3H),7.09(d,1H),3.77(s,3H)。
LCMS m/z＝219.1[M+1]。
第二步：3-苯基噻吩-2-羧酸(2C)
3-phenylthiophene-2-carboxylic acid
Figure GDA0003244926510000371
将3-苯基噻吩-2-羧酸甲酯(1B)(8.30g，38.0mmol)溶解在乙醇(20mL)中，加入氢氧化钠(7.60g，190mmol)的水溶液(20mL)，加热至90℃反应30分钟。冰浴下，慢慢滴加2M盐酸调节pH至2，用二氯甲烷(50mL×2)萃取，合并有机层，饱和氯化钠水溶液(20mL×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后残留物用硅胶柱色谱分离提纯(洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝1:0～1:1)得到3-苯基噻吩-2-羧酸(2C)，白色固体(4.60g，产率59.2％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.84(s,1H),7.86(d,1H),7.48–7.44(m,2H),7.42–7.35(m,3H),7.18(d,1H)。
第三步：叔丁基4-[(3-苯基-2-噻吩基)氨基甲酰氧基]哌啶-1-甲酸酯(2D)
tert-butyl 4-[(3-phenyl-2-thienyl)carbamoyloxy]piperidine-1-carboxylate
Figure GDA0003244926510000372
将3-苯基噻吩-2-羧酸(2C)(2.0g，9.79mmol)悬浮在干燥甲苯(20mL)中，氮气保护下加入三乙胺(1.98g，19.6mmol)、叠氮磷酸二苯酯(2.70g，9.79mmol)和4-羟基哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.96g，14.7mmol)，室温搅拌1小时后加热至120℃反应1小时。反应液减压浓缩后残留物用硅胶柱色谱分离提纯(洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝1:0～9:1)，得到叔丁基4-[(3-苯基-2-噻吩基)氨基甲酰氧基]哌啶-1-甲酸酯(2D)，黄色油状物(2.95g，产率74.8％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.47(t,2H),7.43–7.38(m,2H),7.35(t,1H),7.16(s,1H),6.94-6.91(m,2H),4.97-4.89(m,1H),3.80-3.66(m,2H),3.22-3.12(m,2H),1.96-1.84(m,2H),1.68-1.56(m,2H),1.44(s,9H)。
LCMS m/z＝425.2[M+23]。
第四步：4-哌啶基-N-(3-苯基-2-噻吩基)氨基甲酸酯(2E)
4-piperidyl N-(3-phenyl-2-thienyl)carbamate
Figure GDA0003244926510000381
将叔丁基4-[(3-苯基-2-噻吩基)氨基甲酰氧基]哌啶-1-甲酸酯(2D)(1.90g，4.72mmol)溶解在二氯甲烷(4mL)中，加入三氟乙酸(3mL)，加完后室温搅拌30分钟。慢慢滴加饱和碳酸氢钠水溶液调节pH至碱性，用二氯甲烷(30mL×2)萃取，合并有机层，饱和氯化钠水溶液(20mL×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得4-哌啶基-N-(3-苯基-2-噻吩基)氨基甲酸酯(2E)粗品，白色固体(1.30g，91.08％)，不纯化直接用于下一步。
第五步：[1-[3-(2-氯-4-甲酰基-5-甲氧基苯胺基)-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]-N-(3-苯基-2-噻吩基)氨基甲酸酯(2F)
[1-[3-(2-chloro-4-formyl-5-methoxy-anilino)-3-oxo-propyl]-4-piperidyl]N-(3-phenyl-2-thienyl)carbamate
Figure GDA0003244926510000382
将4-哌啶基-N-(3-苯基-2-噻吩基)氨基甲酸酯(2E)(1.29g，4.266mmol)溶解在2-甲基四氢呋喃(8mL)中，加入N-(2-氯-4-甲酰基-5-甲氧基-苯基)丙-2-烯酰胺(1F)(1.23g，5.12mmol)、三乙胺(0.86g，8.53mmol)，加完后微波100℃反应1小时。反应液减压浓缩后残留物用硅胶柱色谱分离提纯(洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝3:2～3:7)得到[1-[3-(2-氯-4-甲酰基-5-甲氧基苯胺基)-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]-N-(3-苯基-2-噻吩基)氨基甲酸酯(2F)，浅黄色固体(1.60g，产率69.2％)。
LCMS m/z＝542.3[M+1]。
第六步：[1-[3-[4-[[[(2R)-2-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-2-氯-5-甲氧基-苯氨基]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-(3-苯基-2-噻吩基)氨基甲酸酯(2G)
[1-[3-[4-[[[(2R)-2-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]-2-chloro-5-methoxy-anilino]-3-oxo-propyl]-4-piperidyl]N-(3-phenyl-2-thienyl)carbamate
Figure GDA0003244926510000391
将[1-[3-(2-氯-4-甲酰基-5-甲氧基苯胺基)-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]-N-(3-苯基-2-噻吩基)氨基甲酸酯(2F)(0.900g，1.66mmol)溶解在无水甲醇(5mL)中，加入二氯甲烷(5mL)，加入5-[(1R)-2-氨基-1-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基乙基]-8-羟基-1H-喹啉-2-酮(1H)(0.611g，1.83mmol)，室温搅拌1小时，加入氰基硼氢化钠(0.313g，4.98mmol)，加完后室温反应2小时。滴加饱和碳酸氢钠水溶液调节pH至碱性，加入二氯甲烷(30mL)，分液，水层再用二氯甲烷(20mL×1)萃取，合并有机层，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩后残留物用硅胶柱色谱分离提纯(洗脱剂为二氯甲烷：甲醇(v/v)＝1:0～19:1)得到[1-[3-[4-[[[(2R)-2-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-2-氯-5-甲氧基-苯氨基]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-(3-苯基-2-噻吩基)氨基甲酸酯(2G)，浅黄色固体(0.967g，产率67.7％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.55(s,1H),8.14(d,1H),7.96(s,1H),7.38-7.32(m,5H),7.24(t,1H),7.05(s,1H),6.93(t,1H),6.86-6.83(m,3H),6.53(d,1H),5.13-5.05(m,1H),4.82-4.72(m,1H),3.67(s,5H),2.95-2.85(m,1H),2.85-2.70(m,3H),2.67-2.57(m,2H),2.55-2.47(m,2H),2.32-2.22(m,2H),2.00-1.90(m,2H),1.82-1.70(m,2H),0.77(s,9H),-0.06(s,3H),-0.30(s,3H)。
LCMS m/z＝430.8[M/2+1]。
第七步：[1-[3-[2-氯-4-[[[(2R)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-5-甲氧基苯胺基]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]-N-(3-苯基-2-噻吩基)氨基甲酸酯(化合物2)
Figure GDA0003244926510000401
将[1-[3-[4-[[[(2R)-2-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-2-氯-5-甲氧基-苯氨基]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-(3-苯基-2-噻吩基)氨基甲酸酯(2G)(0.967g，1.12mmol)溶解在四氢呋喃(10mL)中，加入三乙胺三氢氟酸盐(0.725g，4.50mmol)，室温反应过夜。倒掉反应清液，剩下的粘稠物加入四氢呋喃(10mL)，搅拌1分钟，去掉清液，粘稠物再加入四氢呋喃(10mL)，搅拌1分钟，去掉清液，粘稠物加入二氯甲烷/甲醇(v/v)＝9/1的混合溶液(100mL)，滴加饱和碳酸氢钠水溶液调节pH至碱性，分液，水层再用二氯甲烷/甲醇(v/v)＝9/1的混合溶液(100mL×1)萃取，合并有机层，饱和氯化钠水溶液(30mL×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后残留物用硅胶柱色谱分离提纯(洗脱剂为二氯甲烷：甲醇(v/v)＝1:0～92:8)得到[1-[3-[2-氯-4-[[[(2R)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-5-甲氧基苯胺基]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]-N-(3-苯基-2-噻吩基)氨基甲酸酯(化合物2)，浅黄色固体(0.56g，产率66.8％)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.12(d,1H),7.70(s,1H),7.36(d,2H),7.28(t,2H),7.18(t,2H),7.05(d,2H),6.91(d,1H),6.86(d,1H),6.47(d,1H),5.08-5.04(m,1H),4.63(s,1H),3.67(s,2H),3.65(s,3H),2.82-2.70(m,4H),2.66-2.60(m,2H),2.56-2.50(m,2H),2.35-2.25(m,2H),1.96-1.82(m,2H),1.75-1.65(m,2H)。
LCMS m/z＝746.3[M+1]。
实施例3：[1-[3-[2-氯-4-[[[(2R)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-5-甲氧基-苯氨基]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]-N-(4-苯基-3-噻吩基)氨基甲酸；二三氟乙酸盐
[1-[3-[2-chloro-4-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]-5-methoxy-anilino]-3-oxo-propyl]-4-piperidyl]
N-(4-phenyl-3-thienyl)carbamate；ditrifluoroacetic acid
Figure GDA0003244926510000411
第一步：甲基-4-苯基噻吩-3-羧酸乙酯(3B)
methyl 4-phenylthiophene-3-carboxylate
Figure GDA0003244926510000412
将甲基4-溴噻吩-3-羧酸甲酯(3A)(1.0g，4.523mmol)溶解在叔丁醇(10mL)中，氮气保护下依次加入四三苯基膦钯(0.1568g，0.1357mmol)、碳酸钠(1.918g，18.09mmol)和苯硼酸(1.1g，9.04mmol)，加完后加热至90℃反应5小时。冷却至室温，加入水(10mL)，乙酸乙酯(50mL)，分液，有机层用饱和氯化钠水溶液(10mL×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩后残留物用硅胶柱色谱分离提纯(洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝95:5～900:10)，得到甲基-4-苯基噻吩-3-羧酸甲酯(3B)，无色油状物(0.3g，产率30％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.14(d,1H),7.40–7.30(m,5H),7.17(d,1H),3.73(s,3H)。
LCMS m/z＝219.1[M+1]。
第二步：4-苯基噻吩-3-羧酸(3C)
4-phenylthiophene-3-carboxylic acid
Figure GDA0003244926510000421
将甲基-4-苯基噻吩-3-羧酸甲酯(3B)(1.4g，6.4mmol)溶解在乙醇(15mL)中，加入氢氧化钠(1.3g，32mmol)的水溶液(5mL)，加热至90℃反应30分钟。冰浴下，慢慢滴加2M盐酸调节pH至2，用二氯甲烷(50mL×2)萃取，合并有机层，饱和氯化钠水溶液(20mL×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩后残留物用硅胶柱色谱分离提纯(洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝4:1～1:1)，得到4-苯基噻吩-3-羧酸(3C)，白色固体(1.1g，产率84％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.53(s,1H),8.30(d,1H),7.52(d,1H),7.39–7.31(m,5H)。
LCMS m/z＝227.1[M+23]。
第三步：4-[(4-苯基-3-噻吩基)氨基甲酰氧基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(3D)
tert-butyl 4-[(4-phenyl-3-thienyl)carbamoyloxy]piperidine-1-carboxylate
Figure GDA0003244926510000422
将4-苯基噻吩-3-羧酸(3C)(1.1g，5.39mmol)悬浮在干燥甲苯(20mL)中，氮气保护下加入原料4-羟基哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.63g，8.08mmol)、叠氮磷酸二苯酯(1.48g，5.39mmol)和三乙胺(1.09g,10.8mmol)，加完后，室温搅拌1小时再加热至120℃反应1小时。反应液减压浓缩后残留物用硅胶柱色谱分离提纯(洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝1:0～9:1)，得到4-[(4-苯基-3-噻吩基)氨基甲酰氧基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(3D)，白色固体(1.6g，产率74％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.64(s,1H),7.48(t,2H),7.44–7.35(m,3H),7.15(d,1H),6.74(s,1H),4.97–4.82(m,1H),3.74(dt,2H),3.16(t,2H),1.97–1.84(m,2H),1.69–1.55(m,2H),1.51–1.40(m,9H)。
LCMS m/z＝425.4[M+23]。
第四步：4哌啶基-N-(4-苯基-3-噻吩基)氨基甲酸酯(3E)
4-piperidyl N-(4-phenyl-3-thienyl)carbamate
Figure GDA0003244926510000431
将4-[(4-苯基-3-噻吩基)氨基甲酰氧基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(3D)(1.6g，4.0mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，加入三氟乙酸(5mL)，室温反应30分钟。0℃下用饱和碳酸氢钠溶液调pH约为9，用二氯甲烷(50mL×2)萃取，饱和氯化钠水溶液(30mL×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得4哌啶基-N-(4-苯基-3-噻吩基)氨基甲酸酯(3E)，白色固体(1.0g，产率83％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.47(s,1H),7.63(s,1H),7.50(t,2H),7.44(d,1H),7.38(dd,2H),7.17(d,1H),6.81(s,1H),509–4.94(m,1H),3.24(s,2H),3.13(s,2H),2.22–2.12(m,2H)2.03(s,2H)。
LCMS m/z＝303.2[M+1]。
第五步：[1-[3-(2-氯-4-甲酰基-5-甲氧基苯胺基)-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]-N-(4-苯基-3-噻吩基)氨基甲酸酯(3F)
[1-[3-(2-chloro-4-formyl-5-methoxy-anilino)-3-oxo-propyl]-4-piperidyl]
N-(4-phenyl-3-thienyl)carbamate
Figure GDA0003244926510000432
将4哌啶基-N-(4-苯基-3-噻吩基)氨基甲酸酯(3E)(1.0g，3.3mmol)和N-(2-氯-4-甲酰基-5-甲氧基-苯基)丙-2-烯酰胺(1F)(0.95g，4.0mmol)溶于10mL 2-甲基四氢呋喃中，加入三乙胺(0.67g，6.6mmol)，微波100℃反应1小时。反应液减压浓缩后残留物用硅胶柱色谱分离提纯(洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝10:1～1:2)，得到[1-[3-(2-氯-4-甲酰基-5-甲氧基苯胺基)-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]-N-(4-苯基-3-噻吩基)氨基甲酸酯(3F)，黄色固体(1.0g产率56％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.85(s,1H),10.30(s,1H),8.34(s,1H),7.82(s,1H),7.64(s,1H),7.50(t,2H),7.44(d,1H),7.41–7.36(m,2H),7.16(d,1H),6.76(s,1H),4.85(s,1H),3.94(s,3H),2.90(s,2H),2.70(d,4H),2.39(s,2H),2.06(d,2H),1.87(d,2H)。
LCMS m/z＝542.2[M+1]。
第六步：[1-[3-[4-[[[(2R)-2-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-2-氯-5-甲氧基-苯氨基]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]-N-(4-苯基-3-噻吩基)氨基甲酸酯(3G)
[1-[3-[4-[[[(2R)-2-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]-2-chloro-5-methoxy-anilino]-3-oxo-propyl]-4-piperidyl]
N-(4-phenyl-3-thienyl)carbamate
Figure GDA0003244926510000441
将[1-[3-(2-氯-4-甲酰基-5-甲氧基苯胺基)-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]-N-(4-苯基-3-噻吩基)氨基甲酸酯(3F)(0.6g，1.1mmol)和5-[(1R)-2-氨基-1-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基乙基]-8-羟基-1H-喹啉-2-酮(1H)(0.44g，1.33mmol)溶于甲醇(10mL)，加入氯化锌(0.604g，4.43mmol)，55℃反应1小时。加入氰基硼氢化钠(0.209g，3.32mmol)，55℃反应2小时。反应液加入水(30mL)，然后用二氯甲烷(30mL×2)萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩后残留物用硅胶柱色谱分离提纯(洗脱剂为二氯甲烷：甲醇(v/v)＝100:1～20:1)，得到[1-[3-[4-[[[(2R)-2-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-2-氯-5-甲氧基-苯氨基]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]-N-(4-苯基-3-噻吩基)氨基甲酸酯(3G)，黄色固体(0.6g产率63％)。
LCMS m/z＝860.2[M+1]。
第七步：[1-[3-[2-氯-4-[[[(2R)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-5-甲氧基-苯氨基]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]-N-(4-苯基-3-噻吩基)氨基甲酸酯；二三氟乙酸盐(化合物3)
[1-[3-[2-chloro-4-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]-5-methoxy-anilino]-3-oxo-propyl]-4-piperidyl]N-(4-phenyl-3-thienyl)carbamate；ditrifluoroacetic acid
Figure GDA0003244926510000451
将[1-[3-[4-[[[(2R)-2-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-2-氯-5-甲氧基-苯氨基]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]-N-(4-苯基-3-噻吩基)氨基甲酸酯(3G)(0.6g，0.7mmol)溶于四氢呋喃(5mL)，加入三乙胺三氢氟酸盐(0.45g，2.8mmol)，室温反应过夜。用饱和碳酸氢钠水溶液调pH约为9，用二氯甲烷(50mL×2)萃取，饱和氯化钠水溶液(20mL×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物采用两种方法提纯：
第一种：液相制备柱分离提纯(液相制备条件：C18反相制备柱，流动相为含0.05％TFA的去离子水(A)，乙腈(B)，等度洗脱25％乙腈，洗脱时间20分钟)，得[1-[3-[2-氯-4-[[[(2R)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-5-甲氧基-苯氨基]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]-N-(4-苯基-3-噻吩基)氨基甲酸；二三氟乙酸盐(化合物3)，白色固体(0.15g，产率22％)。
化合物3：1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.15(d,1H),7.78(s,1H),7.48(d,2H),7.42(s,4H),7.37–7.30(m,2H),7.28(d,1H),7.03(d,1H),6.60(d,1H),5.41(dd,1H),5.01(dd,1H),4.26(d,2H),3.85(s,3H),3.53(s,3H),3.31(dt,2H),3.25(d,1H),3.19(d,2H),3.08(s,2H),2.11(s,4H)。
化合物3：LCMS m/z＝746.3[M+1]。
第二种：硅胶柱色谱硅胶柱色谱分离提纯(洗脱剂为二氯甲烷：甲醇(v/v)＝100:1～20:1)，得到[1-[3-[2-氯-4-[[[(2R)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-5-甲氧基-苯氨基]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]-N-(4-苯基-3-噻吩基)氨基甲酸(化合物3的游离碱)，黄色固体(0.6g产率63％)。
化合物3的游离碱：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.23(s,2H),8.73(s,1H),8.12(d,1H),7.76(s,1H),7.51(d,1H),7.48–7.29(m,6H),7.06(d,1H),6.97–6.85(m,1H),6.47(d,1H),5.06(d,1H),4.54(s,1H),3.77–3.67(m,4H),2.84(s,4H),2.76–2.67(m,2H),2.61(s,2H),2.53(d,2H),2.24(s,2H),1.81(s,2H),1.55(s,2H)。
化合物3的游离碱：LCMS m/z＝746.3[M+1]。
实施例4：[1-[3-[2-氯-4-[[[(2R)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-5-甲氧基苯胺基]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]-N-(2-苯基-3-噻吩基)氨基甲酸酯，二三氟乙酸盐(化合物4)
[1-[3-[2-chloro-4-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]-5-methoxy-anilino]-3-oxo-propyl]-4-piperidyl]N-(2-phenyl-3-thienyl)carbamate；ditrifluoroacetic acid
Figure GDA0003244926510000461
第一步：2-苯基噻吩-3-羧酸甲酯(4B)
methyl 2-phenylthiophene-3-carboxylate
Figure GDA0003244926510000462
将2-溴噻吩-3-羧酸甲酯(4A)(1.0g，4.523mmol)溶解在叔丁醇(10mL)中，氮气保护下依次加入原料四三苯基膦钯(0.1568g，0.1357mmol)、碳酸钠(1.918g，18.09mmol)和苯硼酸(1.1g，9.04mmol)，加完后加热至90℃反应5小时。冷却至室温，加入水(10mL)，乙酸乙酯(50mL)，分液，有机层用饱和氯化钠水溶液(10mL×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩后残留物用硅胶柱色谱分离提纯(洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝5:1～9:1)，得到2-苯基噻吩-3-羧酸甲酯(4B)，白色固体(0.3g，产率30％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.54–7.47(m,3H),7.40(dd,3H),7.25(d,1H),3.74(s,3H)。
LCMS m/z＝219.1[M+1]。
第二步：2-苯基噻吩-3-羧酸(4C)
2-phenylthiophene-3-carboxylic acid
Figure GDA0003244926510000471
原料甲基-2-苯基噻吩-3-羧酸甲酯(4B)(1.4g，6.4mmol)溶解在乙醇(15mL)中，加入氢氧化钠(1.3g，32mmol)的水溶液(5mL)，加热至90℃反应30分钟。冰浴下，慢慢滴加2M盐酸调节pH至2，用二氯甲烷(50mL×2)萃取，合并有机层，饱和氯化钠水溶液(20mL×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩后残留物用硅胶柱色谱分离提纯(洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝4:1～1:1)，得到2-苯基噻吩-3-羧酸(4C)，白色固体(1.1g，产率84％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.60(s,1H),7.60(d,1H),7.51–7.46(m,2H),7.45–7.38(m,4H)。
LCMS m/z＝227.1[M+23]。
第三步：4-[(2-苯基-3-噻吩基)氨基甲酰氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(4D)
tert-butyl 4-[(2-phenyl-3-thienyl)carbamoyloxy]piperidine-1-carboxylate
Figure GDA0003244926510000472
将2-苯基噻吩-3-羧酸(4C)(1.1g，5.4mmol)悬浮在干燥甲苯(20mL)中，氮气保护下加入4-羟基哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.6g，8.1mmol)、叠氮磷酸二苯酯(1.5g，5.4mmol)和三乙胺(1.1g，11mmol)，加完后，室温搅拌1小时再加热至120℃反应1小时。反应液减压浓缩后残留物用硅胶柱色谱分离提纯(洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝1:0～10:1)，得到4-[(2-苯基-3-噻吩基)氨基甲酰氧基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(4D)，白色固体(1.6g，产率74％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.64(s,1H),7.56–7.42(m,4H),7.42–7.32(m,1H),7.24(s,1H),6.73(s,1H),4.97–4.86(m,1H),3.72(s,2H),3.18(t,2H),1.97–1.85(m,2H),1.61(m,2H),1.46(d,9H)。
LCMS m/z＝425.3[M+23]。
第四步：4-哌啶基-N-(2-苯基-3-噻吩基)氨基甲酸酯(4E)
4-piperidyl N-(2-phenyl-3-thienyl)carbamate
Figure GDA0003244926510000481
将4-[(2-苯基-3-噻吩基)氨基甲酰氧基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(4D)(1.8g，4.5mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，加入三氟乙酸(5mL)，室温反应30分钟。0℃下用饱和碳酸氢钠溶液调pH约为9，用二氯甲烷(50mL×2)萃取，饱和氯化钠水溶液(30mL×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得4-哌啶基-N-(2-苯基-3-噻吩基)氨基甲酸酯(4E)，白色固体(1.2g，产率89％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.47(s,1H),7.62(s,1H),7.53–7.42(m,4H),7.37(dd,1H),7.27(d,1H),6.81(s,1H),5.01(dd,1H),3.26(s,2H),3.14(s,2H),2.17(s,2H),2.03(s,2H)。
LCMS m/z＝303.2[M+1]。
第五步：[1-[3-(2-氯-4-甲酰基-5-甲氧基苯胺基)-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]-N-(2-苯基-3-噻吩基)氨基甲酸酯(4F)
[1-[3-(2-chloro-4-formyl-5-methoxy-anilino)-3-oxo-propyl]-4-piperidyl]N-(2-phenyl-3-thienyl)carbamate
Figure GDA0003244926510000491
将4-哌啶基-N-(2-苯基-3-噻吩基)氨基甲酸酯(4E)(1.1g，3.64mmol)和N-(2-氯-4-甲酰基-5-甲氧基-苯基)丙-2-烯酰胺(1F)(1.05g，4.37mmol)溶于2-甲基四氢呋喃(10mL)中，加入三乙胺(0.736g，7.28mmol)，微波100℃反应1小时。冷却至室温，反应液减压浓缩后残留物用硅胶柱色谱分离提纯(洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝10:1～1:2)反应结束后直接减压浓缩，得到[1-[3-(2-氯-4-甲酰基-5-甲氧基苯胺基)-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]-N-(4-苯基-3-噻吩基)氨基甲酸(4F)，黄色固体(1.3g，产率66％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.85(s,1H),10.31(d,1H),8.35(s,1H),7.82(s,1H),7.64(s,1H),7.53–7.41(m,4H),7.38(dt,1H),7.27(s,1H),6.74(s,1H),4.85(s,1H),3.99–3.86(m,3H),2.88(s,2H),2.70(d,4H),2.41(s,2H),2.04(s,2H),1.88(s,2H)。
LCMS m/z＝542.2[M+1]。
第六步：[1-[3-[4-[[[(2R)-2-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-2-氯-5-甲氧基-苯氨基]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]-N-(2-苯基-3-噻吩基)氨基甲酸酯(4G)
[1-[3-[4-[[[(2R)-2-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]-2-chloro-5-methoxy-anilino]-3-oxo-propyl]-4-piperidyl]N-(2-phenyl-3-thienyl)carbamate
Figure GDA0003244926510000492
50mL单口瓶中加入[1-[3-(2-氯-4-甲酰基-5-甲氧基苯胺基)-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-(4-苯基-3-噻吩基)氨基甲酸酯(4F)(0.6g，1.11mmol)，5-[(1R)-2-氨基-1-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基乙基]-8-羟基-1H-喹啉-2-酮(1H)(0.44g，1.33mmol)，加入10mL甲醇，加入氯化锌(0.604g，4.43mmol)，55℃反应1h。加入氰基硼氢化钠(0.209g，3.32mmol)，55℃反应2小时。反应液加入水(30mL)，加入二氯甲烷(30mL)，分液，水层再用二氯甲烷(30mL×1)萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩后残留物用硅胶柱色谱分离提纯(洗脱剂为二氯甲烷：甲醇(v/v)＝1:0～20:1)，得到[1-[3-[4-[[[(2R)-2-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-2-氯-5-甲氧基-苯氨基]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]-N-(2-苯基-3-噻吩基)氨基甲酸酯(4G)，黄色固体(0.7g，产率70％)。
LCMS m/z＝860.4[M+1]。
第七步：[1-[3-[2-氯-4-[[[(2R)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-5-甲氧基苯胺基]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-(2-苯基-3-噻吩基)氨基甲酸酯；二三氟乙酸盐(化合物4)
[1-[3-[2-chloro-4-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]-5-methoxy-anilino]-3-oxo-propyl]-4-piperidyl]N-(2-phenyl-3-thienyl)carbamate；ditrifluoroacetic acid
Figure GDA0003244926510000501
将[1-[3-[4-[[[(2R)-2-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-2-氯-5-甲氧基-苯氨基]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]-N-(2-苯基-3-噻吩基)氨基甲酸酯(4G)(0.7g，0.8mmol)溶于四氢呋喃(5mL)，加入三乙胺三氢氟酸盐(0.5g，3mmol)，室温反应过夜。用饱和碳酸氢钠水溶液调pH约为9，用二氯甲烷(50mL×1)萃取，饱和食盐水(20mL×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物用液相制备柱分离提纯(液相制备条件：C18反相制备柱，流动相为含0.05％TFA的去离子水(A)，乙腈(B)，等度洗脱25％乙腈，洗脱时间20分钟)，得[1-[3-[2-氯-4-[[[(2R)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-5-甲氧基-苯氨基]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-(2-苯基-3-噻吩基)氨基甲酸；二三氟乙酸盐(化合物4)，白色固体(0.3g，产率40％)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.17(d,1H),7.80(s,1H),7.52(s,2H),7.49(s,1H),7.43(t,2H),7.40–7.33(m,2H),7.31(d,2H),7.06(d,1H),6.62(d,1H),5.43(dd,1H),5.02(s,1H),4.28(q,2H),3.88(d,3H),3.70(d,1H),3.56(s,3H),3.29(dd,2H),3.19(dd,2H),3.11(s,2H),2.11(d,4H)。
LCMS m/z＝746.2[M+1]。
实施例5：[1-[3-[[5-[4-[[[(2R)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯胺基]5-氧代-戊烷基]-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-(5-苯基噻唑-4-基)氨基甲酸酯；二三氟乙酸盐(化合物5)
[1-[3-[[5-[4-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]anilino]-5-oxo-pentyl]-methyl-amino]-3-oxo-propyl]-4-piperidyl]N-(5-phenylthiazol-4-yl)carbamate；ditrifluoroacetic acid
Figure GDA0003244926510000511
第一步：3-[4-[(5-苯基噻唑-4-基)氨基甲酰基氧基]-1-哌啶基]丙酸(5A)
3-[4-[(5-phenylthiazol-4-yl)carbamoyloxy]-1-piperidyl]propanoic acid
Figure GDA0003244926510000521
将4-哌啶基N-(5-苯基噻唑-4-基)氨基甲酸酯(1E)(1.5g,4.9mmol)溶于2-甲基四氢呋喃(20mL)中，加入丙烯酸(1.8g,25mmol)，100℃微波反应1小时。反应液浓缩，残留物用硅胶柱色谱分离提纯(甲醇：二氯甲烷(v/v)＝0:1～1:9)，得到3-[4-[(5-苯基噻唑-4-基)氨基甲酰基氧基]-1-哌啶基]丙酸(5A)，白色固体(1.1g，产率59％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.42(s,1H),9.00(d,1H),7.62–7.49(m,2H),7.49–7.41(m,2H),7.41–7.32(m,1H),4.69–4.53(m,1H),2.91(t,4H),2.73(m,2H),2.55(t,2H),1.87(br,2H),1.62(br,2H)。
LCMS m/z＝376.2[M+1]。
第二步：5-[甲基-[3-[4-[(5-苯基噻唑-4-基)氨基甲酰基氧基]-1-哌啶基]丙酰基]氨基]戊酸甲酯(5B)
methyl 5-[methyl-[3-[4-[(5-phenylthiazol-4-yl)carbamoyloxy]-1-piperidyl]propanoyl]amino]pentanoate
Figure GDA0003244926510000522
将3-[4-[(5-苯基噻唑-4-基)氨基甲酰基氧基]-1-哌啶基]丙酸(5A)(1.1g,2.93mmol)溶于二氯甲烷(25mL)中，依次加入甲基5-(甲基胺基)戊酸酯(0.425g,2.93mmol)，2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU,CAS:148893-10-1)(1.67g,4.40mmol)，2-异丙基乙基胺(3.03g,23.4mmol)，室温反应3小时。反应液加入二氯甲烷(50mL)和水(50mL)，分液。水相用(20mL×1)萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物用硅胶柱色谱分离提纯(乙酸乙酯：石油醚(v/v)＝1:1～1:0，甲醇：二氯甲烷(v/v)＝3:97～1:10)，得到5-[甲基-[3-[4-[(5-苯基噻唑-4-基)氨基甲酰基氧基]-1-哌啶基]丙酰基]氨基]戊酸甲酯(5B)，黄色油状(1.2g，产率81％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.66(s,1H),7.55–7.46(m,2H),7.45–7.38(m,2H),7.38–7.31(m,1H),7.10(br,1H),4.80(s,1H),3.67–3.64(m,3H),3.36(t,1H),3.29(t,1H),3.01–2.94(m,3H),2.93–2.81(m,4H),2.69–2.54(m,4H),2.37–2.31(m,2H),2.01–1.87(m,2H),1.78(m,2H),1.64–1.53(m,4H)。
LCMS m/z＝503.3[M+1]。
第三步：5-[甲基-[3-[4-[(5-苯基噻唑-4-基)氨基甲酰基氧基]-1-哌啶基]丙酰基]氨基]戊酸(5C)
5-[methyl-[3-[4-[(5-phenylthiazol-4-yl)carbamoyloxy]-1-piperidyl]propanoyl]amino]pentanoic acid
Figure GDA0003244926510000531
将5-[甲基-[3-[4-[(5-苯基噻唑-4-基)氨基甲酰基氧基]-1-哌啶基]丙酰基]氨基]戊酸甲酯(5B)(1.2g,2.4mmol)溶于四氢呋喃(10mL)中，加入氢氧化钠(0.48g,12mmol)的水溶液(10mL)，室温反应2小时。反应液用3M盐酸水溶液调节pH为2～3，用二氯甲烷(50mL×6)萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到5-[甲基-[3-[4-[(5-苯基噻唑-4-基)氨基甲酰基氧基]-1-哌啶基]丙酰基]氨基]戊酸(5C)，黄色固体(0.85g，产率73％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.43(s,1H),9.00(s,1H),7.58–7.51(m,2H),7.48–7.41(m,2H),7.41–7.33(m,1H),4.64(s,1H),3.28(t,2H),3.10–2.59(m,11H),2.29–2.14(m,2H),1.90(br,2H),1.75–1.60(m,2H),1.57-1.38(m,4H)。
LCMS m/z＝489.3[M+1]。
第四步：[1-[3-[[5-[4-(1,3-二氧戊环-2-基)苯胺基]-5-氧代-戊烷基]-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-(5-苯基噻唑-4-基)氨基甲酸酯(5D)
[1-[3-[[5-[4-(1,3-dioxolan-2-yl)anilino]-5-oxo-pentyl]-methyl-amino]-3-oxo-propyl]-4-piperidyl]N-(5-phenylthiazol-4-yl)carbamate
Figure GDA0003244926510000541
将5-[甲基-[3-[4-[(5-苯基噻唑-4-基)氨基甲酰基氧基]-1-哌啶基]丙酰基]氨基]戊酸(5C)(0.800g,1.64mmol)溶于二氯甲烷(25mL)中，依次加入4-(1,3-二氧戊环-2-基)苯胺(0.541g,3.27mmol)，2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)(0.934g,2.46mmol)，2-异丙基乙基胺(0.423g,3.27mmol)，室温反应3小时。反应液加入二氯甲烷(50mL)和水(50mL)，分液。水相用二氯甲烷(20mL×1)萃取，合并有机相。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。残留物用硅胶柱色谱分离提纯(乙酸乙酯：石油醚(v/v)＝1:1～1:0，甲醇：二氯甲烷(v/v)＝3:97～1:10)，得到[1-[3-[[5-[4-(1,3-二氧戊环-2-基)苯胺基]-5-氧代-戊烷基]-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-(5-苯基噻唑-4-基)氨基甲酸酯(5D)，黄色固体(0.600g，产率57.6％)。
LCMS m/z＝636.3[M+1]。
第五步：[1-[3-[[5-(4-甲酰基苯胺基]-5-氧代-戊烷基]-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-(5-苯基噻唑-4-基)氨基甲酸酯(5E)
[1-[3-[[5-(4-formylanilino)-5-oxo-pentyl]-methyl-amino]-3-oxo-propyl]-4-piperidyl]N-(5-phenylthiazol-4-yl)carbamate
Figure GDA0003244926510000542
将[1-[3-[[5-[4-(1,3-二氧戊环-2-基)苯胺基]-5-氧代-戊烷基]-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-(5-苯基噻唑-4-基)氨基甲酸酯(5D)(0.600g,0.944mmol)溶于乙腈(20mL)中，加入3M盐酸水溶液(6mL)，室温反应1小时。反应液加入二氯甲烷(50mL)和水(20mL)，萃取分层。水相用二氯甲烷(20mL×1)萃取，合并有机相。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到[1-[3-[[5-(4-甲酰基苯胺基]-5-氧代-戊烷基]-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-(5-苯基噻唑-4-基)氨基甲酸酯(5E)，黄色固体(0.500g，产率89.5％)。
LCMS m/z＝592.3[M+1]。
第六步：[1-[3-[[5-[4-[[[(2R)-2-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯胺基]5-氧代-戊烷基]-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-(5-苯基噻唑-4-基)氨基甲酸酯(5F)
[1-[3-[[5-[4-[[[(2R)-2-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]anilino]-5-oxo-pentyl]-methyl-amino]-3-oxo-propyl]-4-piperidyl]N-(5-phenylthiazol-4-yl)carbamate
Figure GDA0003244926510000551
将[1-[3-[[5-(4-甲酰基苯胺基]-5-氧代-戊烷基]-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-(5-苯基噻唑-4-基)氨基甲酸酯(5E)(0.500g,0.845mmol)溶于甲醇(10mL)中，加入5-[(1R)-2-氨基-1-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基乙基]-8-羟基-1H-喹啉-2-酮(1H)(0.283g,0.845mmol)，加入无水氯化锌(0.461g,3.38mmol)，55℃反应1小时。加入氰基硼氢化钠(0.59g,2.54mmol)，55℃反应2小时。反应液加入(50mL)二氯甲烷，然后加入饱和碳酸氢钠溶液(20mL)，萃取分层。水相用10％(v/v)甲醇/二氯甲烷(30mL×2)萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到[1-[3-[[5-[4-[[[(2R)-2-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯胺基]5-氧代-戊烷基]-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-(5-苯基噻唑-4-基)氨基甲酸酯(5F)，黄色固体(0.50g，产率65％)。
LCMS m/z＝455.9[M+2/2]。
第七步：[1-[3-[[5-[4-[[[(2R)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯胺基]5-氧代-戊烷基]-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-(5-苯基噻唑-4-基)氨基甲酸酯；二三氟乙酸盐(化合物5)
[1-[3-[[5-[4-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]anilino]-5-oxo-pentyl]-methyl-amino]-3-oxo-propyl]-4-piperidyl]N-(5-phenylthiazol-4-yl)carbamate；ditrifluoroacetic acid
Figure GDA0003244926510000561
将[1-[3-[[5-[4-[[[(2R)-2-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯胺基]5-氧代-戊烷基]-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-(5-苯基噻唑-4-基)氨基甲酸酯(5F)(0.500g,0.549mmol)溶于四氢呋喃(5mL)中，加入三乙胺三氢氟酸盐(0.886g,5.49mmol)，室温反应24小时。反应液加入10％(v/v)甲醇/二氯甲烷(50mL)溶液,加入饱和碳酸氢钠溶液调节pH至8左右，萃取分层。水相用10％(v/v)甲醇/二氯甲烷(50mL×2)萃取，合并有机相。有机相用饱和食盐水(20mL×1)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物用液相制备柱分离提纯(液相制备条件：C18反相制备柱，流动相为含0.05％TFA的去离子水(A)，乙腈(B)，等度洗脱25％乙腈，洗脱时间20分钟)，得到[1-[3-[[5-[4-[[[(2R)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯胺基]5-氧代-戊烷基]-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-(5-苯基噻唑-4-基)氨基甲酸酯；二三氟乙酸盐(化合物5)，白色固体(0.105g，产率18.7％)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.90(s,1H),8.18(t,1H),7.66(d,2H),7.57(m,2H),7.49-7.33(m,5H),7.25(d,1H),7.01(d,1H),6.61(dd,1H),5.37(t,1H),4.93(s,1H),4.26(s,2H),3.67-3.34(m,6H),3.24-2.84(m,9H),2.52-2.36(m,2H),2.18(s,1H),2.03(s,2H),1.80(s,1H),1.74-1.57(m,4H)。
19F NMR(376MHz,CD3OD)δ-74.89.
LCMS m/z＝398.9[M+2/2]。
实施例6：[1-[3-[2-氯-4-[[[(2R)-2-羟基-2-(5-羟基-3-氧代-4H-1,4-苯并恶嗪-8-基)乙基]氨基]甲基]-5-甲氧基苯胺基]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-(2-苯基-3-噻吩基)氨基甲酸,二(2,2,2-三氟乙酸)(化合物6)
[1-[3-[2-chloro-4-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(5-hydroxy-3-oxo-4H-1,4-benzoxazin-8-yl)ethyl]amino]methyl]-5-methoxy-anilino]-3-oxo-propyl]-4-piperidyl]N-(2-phenyl-3-thienyl)carbamate；ditrifluoroacetic acid
Figure GDA0003244926510000571
在50mL单口瓶中加入[1-[3-(2-氯-4-甲酰基-5-甲氧基苯胺基)-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-(2-苯基-3-噻吩基)氨基甲酸酯(4F)(0.650g，1.2mmol)和(R)-8-(2-氨基-1-羟基乙基)-5-羟基-2H-苯并[b][1,4]恶嗪-3(4H)-酮(6A)(0.269g，1.2mmol)，加入二氯甲烷(2mL)和甲醇(10mL)，加入氯化锌(0.327g，2.4mmol)，室温反应1小时。加入氰基硼氢化钠(0.226g，3.6mmol)，40℃反应1小时。反应液加入水(30mL)和饱和碳酸氢钠溶液(10mL)，加入二氯甲烷(30mL)，分液，水相用二氯甲烷(100mL×1)萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物用液相制备柱分离提纯(液相制备条件：C18反相制备柱，流动相为含0.05％TFA的去离子水(A)，乙腈(B)，等度洗脱25％乙腈，洗脱时间20分钟)，得[1-[3-[2-氯-4-[[[(2R)-2-羟基-2-(5-羟基-3-氧代-4H-1,4-苯并恶嗪-8-基)乙基]氨基]甲基]-5-甲氧基苯胺基]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-(2-苯基-3-噻吩基)氨基甲酸；二三氟乙酸盐(化合物6)，白色固体(0.500g，产率55.6％)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.80(s,1H),7.52(m,3H),7.44(t,2H),7.40–7.31(m,2H),7.26(s,1H),7.04(d,1H),6.59(d,1H),5.17(m,1H),4.92(m,1H),4.47(q,2H),4.26(m,2H),3.89(s,3H),3.55(br,4H),3.25–2.95(m,5H),2.17(m,4H)。
LCMS m/z＝751.3[M+1]。
实施例7：[1-[3-[2-氯-4-[[[(2R)-2-羟基-2-(4-羟基-2-氧代-3H-1,3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基]甲基]-5-甲氧基苯胺基]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-(2-苯基-3-噻吩基)氨基甲酸；二三氟乙酸盐(化合物7)
[1-[3-[2-chloro-4-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(4-hydroxy-2-oxo-3H-1,3-benzothiazol-7-yl)ethyl]amino]methyl]-5-methoxy-anilino]-3-oxo-propyl]-4-piperidyl]N-(2-phenyl-3-thienyl)carbamate；ditrifluoroacetic acid
Figure GDA0003244926510000581
第一步：[1-[3-[4-[[[(2R)-2-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基-2-(4-羟基-2-氧代-3H-1,3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基]甲基]-2-氯-5-甲氧基-苯氨基]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-(2-苯基-3-噻吩基)氨基甲酸(7B)
[1-[3-[4-[[[(2R)-2-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-2-(4-hydroxy-2-oxo-3H-1,3-benzothiazol-7-yl)ethyl]amino]methyl]-2-chloro-5-methoxy-anilino]-3-oxo-propyl]-4-piperidyl]
N-(2-phenyl-3-thienyl)carbamate
Figure GDA0003244926510000582
在50mL单口瓶中加入[1-[3-(2-氯-4-甲酰基-5-甲氧基苯胺基)-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-(4-苯基-3-噻吩基)氨基甲酸酯(4F)(0.650g，1.20mmol)，7-[(1R)-2-氨基-1-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基乙基]-4-羟基-3H-1,3-苯并噻唑-2-酮(7A)(0.408g，1.2mmol)，加入二氯甲烷(2mL)和甲醇(10mL)，室温反应1小时。加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.508g，2.40mmol)，40℃反应1小时。反应液加入水(30mL)和二氯甲烷(30mL)，分液，水相用二氯甲烷(30mL×1)萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物用硅胶柱色谱分离提纯(洗脱剂为二氯甲烷/甲醇(v/v)＝100/1～20/1)，得到[1-[3-[4-[[[(2R)-2-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基-2-(4-羟基-2-氧代-3H-1,3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基]甲基]-2-氯-5-甲氧基-苯氨基]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-(2-苯基-3-噻吩基)氨基甲酸(7B)，黄色固体(1.00g，产率96.2％)。
LCMS m/z＝867.3[M+1]。
第二步：[1-[3-[2-氯-4-[[[(2R)-2-羟基-2-(4-羟基-2-氧代-3H-1,3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基]甲基]-5-甲氧基苯胺基]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-(2-苯基-3-噻吩基)氨基甲酸；2,2,2-三氟乙酸(化合物7)
[1-[3-[2-chloro-4-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(4-hydroxy-2-oxo-3H-1,3-benzothiazol-7-yl)ethyl]amino]methyl]-5-methoxy-anilino]-3-oxo-propyl]-4-piperidyl]N-(2-phenyl-3-thienyl)carbamate；ditrifluoroacetic acid
Figure GDA0003244926510000591
将[1-[3-[4-[[[(2R)-2-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基-2-(4-羟基-2-氧代-3H-1,3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基]甲基]-2-氯-5-甲氧基-苯氨基]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-(2-苯基-3-噻吩基)氨基甲酸(7B)(1.00g，1.15mmol)溶于四氢呋喃(5mL)，加入三乙胺三氢氟酸盐(0.744g，4.62mmol)，室温反应过夜。用饱和碳酸氢钠水溶液调pH约为9，用二氯甲烷(50mL×2)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(20mL×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物用液相制备柱分离提纯(液相制备条件：C18反相制备柱，流动相为含0.05％TFA的去离子水(A)，乙腈(B)，等度洗脱25％乙腈，洗脱时间20分钟)，得[1-[3-[2-氯-4-[[[(2R)-2-羟基-2-(4-羟基-2-氧代-3H-1,3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基]甲基]-5-甲氧基苯胺基]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-(2-苯基-3-噻吩基)氨基甲酸；二三氟乙酸盐(化合物7)，白色固体(0.500g，产率57.6％)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.84(s,1H),7.53(m,3H),7.44(t,2H),7.37(m,2H),7.26(s,1H),7.00(d,1H),6.78(d,1H),5.00(t,1H),4.29(m,2H),3.93(s,3H),3.81–3.35(m,4H),3.30–3.19(m,1H),3.18–3.02(m,6H),2.17(m,4H)。
LCMS m/z＝752.3[M+1]。
实施例8：[1-[3-[5-[[[(2S)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯并三氮唑-1-基]丙基]-4-哌啶基]N-(2-苯基-3-噻吩基)氨基甲酸；二三氟乙酸盐(化合物8)
[1-[3-[5-[[[(2S)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]propyl]-4-piperidyl]N-(2-phenyl-3-thienyl)carbamate；ditrifluoroaceticacid
Figure GDA0003244926510000601
第一步：[1-[3-(5-甲酰基苯并三氮唑-1-基)丙基]-4-哌啶基]N-(3-苯基-2-噻吩基)氨基甲酸(8B)
[1-[3-(5-formylbenzotriazol-1-yl)propyl]-4-piperidyl]N-(3-phenyl-2-thienyl)carbamate
Figure GDA0003244926510000602
在50mL单口瓶中加入4-哌啶基N-(2-苯基-2-噻吩基)氨基甲酸(4E)(0.500g，1.65mmol)、乙腈(30mL)，氮气保护下加入1-(3-溴丙基)苯并三氮唑-5-甲醛(8A)(0.443g，1.65mmol)(参考WO2013068552A1制备得到)和二异丙基乙胺(0.299g，2.31mmol)，85℃反应4小时。反应液冷却至室温，减压浓缩，残留物用硅胶柱色谱分离提纯(洗脱剂为二氯甲烷/甲醇(v/v)＝100/1～100/3)，得到[1-[3-(5-甲酰基苯并三氮唑-1-基)丙基]-4-哌啶基]N-(3-苯基-2-噻吩基)氨基甲酸(8B)，黄色油状物(0.700g，产率86.5％)。
LCMS m/z＝490.3[M+1]。
第二步：[1-[3-[5-[[[(2R)-2-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯并三氮唑-1-基]丙基]-4-哌啶基]N-(2-苯基-3-噻吩基)氨基甲酸(8C)
[1-[3-[5-[[[(2R)-2-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]propyl]-4-piperidyl]N-(2-phenyl-3-thienyl)carbamate
Figure GDA0003244926510000611
在50mL单口瓶中加入[1-[3-(5-甲酰基苯并三氮唑-1-基)丙基]-4-哌啶基]N-(3-苯基-2-噻吩基)氨基甲酸(8B)(0.700g，1.43mmol)，5-[(1R)-2-氨基-1-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基乙基]-8-羟基-1H-喹啉-2-酮(1H)(0.478g，1.43mmol)，加入二氯甲烷(2mL)和甲醇(10mL)，加入无水氯化锌(0.585g，4.29mmol)室温反应1小时。加入氰基硼氢化钠(0.180g，2.86mmol)，40℃反应1小时。反应液加入水(30mL)，加入二氯甲烷(30mL)，分液，水相用二氯甲烷(50mL×1)萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物用硅胶柱色谱分离提纯(洗脱剂为二氯甲烷/甲醇(v/v)＝100/1～20/1)，得到[1-[3-[5-[[[(2R)-2-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯并三氮唑-1-基]丙基]-4-哌啶基]N-(2-苯基-3-噻吩基)氨基甲酸酯(8C)，黄色固体(0.700g，产率60.6％)。
第三步：[1-[3-[5-[[[(2S)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯并三氮唑-1-基]丙基]-4-哌啶基]N-(2-苯基-3-噻吩基)氨基甲酸；二三氟乙酸盐(化合物8)
[1-[3-[5-[[[(2S)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]propyl]-4-piperidyl]N-(2-phenyl-3-thienyl)carbamate；ditrifluoroaceticacid
Figure GDA0003244926510000621
将[1-[3-[5-[[[(2R)-2-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯并三氮唑-1-基]丙基]-4-哌啶基]N-(2-苯基-3-噻吩基)氨基甲酸(8C)(0.700g，0.866mmol)溶于四氢呋喃(20mL)，加入三乙胺三氢氟酸盐(0.559g，3.46mmol)，室温反应过夜。用饱和碳酸氢钠水溶液调pH约为9，用二氯甲烷(50mL×2)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(20mL×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物用液相制备柱分离提纯(液相制备条件：C18反相制备柱，流动相为含0.05％TFA的去离子水(A)，乙腈(B)，等度洗脱25％乙腈，洗脱时间20分钟)，得[1-[3-[5-[[[(2S)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯并三氮唑-1-基]丙基]-4-哌啶基]N-(2-苯基-3-噻吩基)氨基甲酸；二三氟乙酸盐(化合物8)，白色固体(0.060g，产率9.98％)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.21–8.05(m,2H),7.82(d,1H),7.63(d,1H),7.42(d,2H),7.36-7.07(m,6H),6.93(d,1H),6.46(d,1H),5.35(m 1H),4.91(s,1H),4.78(d,2H),4.43(s,2H),3.47(m,2H),3.20-2.96(m,5H),2.43(s,2H),2.09(m,5H)。
LCMS m/z＝694.3[M+1]。
实施例9：[1-[3-氯-4-[[[(2R)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-5-甲氧基-苯胺]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-(3-苯基苯并噻吩-2-基)氨基甲酸酯(化合物9)
[1-[3-[2-chloro-4-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]-5-methoxy-anilino]-3-oxo-propyl]-4-piperidyl]N-(3-phenylbenzothiophen-2-yl)carbamate
Figure GDA0003244926510000631
第一步：3-苯基苯并噻吩-2-羧酸甲酯(9B)
methyl 3-phenylbenzothiophene-2-carboxylate
Figure GDA0003244926510000632
将3-氯苯并噻吩-2-羧酸甲酯(9A)(4g，17.65mmol)溶解在甲苯(25mL)中，加入苯硼酸(4.3g，35.29mmol)，磷酸钾(9.36g，44.125mmol)。加完后室温搅拌10分钟，置换氮气3次，氮气保护下加入1,2-双(二苯基膦)乙烷氯化镍(1.4g，2.65mmol)，加完后置换氮气3次，120℃反应4小时。冷却至室温，加入水(50mL)终止反应，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩后残留物用硅胶色谱柱分离提纯(洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯(v:v)＝50:1～10:1)得到3-苯基苯并噻吩-2-羧酸甲酯(9B)，白色固体(4g，产率85.10％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.88(m,1H),7.54(m,1H),7.53–7.43(m,4H),7.43–7.38(m,2H),7.36(m,1H),3.79(s,3H)。
LCMS m/z＝291.1[M+23]。
第二步：3-苯基苯并噻吩-2-羧酸(9C)3-phenylbenzothiophene-2-carboxylicacid
Figure GDA0003244926510000641
将3-苯基苯并噻吩-2-羧酸甲酯(9B)(1.3g，4.83mmol)溶解在乙醇(15mL)中，加入氢氧化钠(580mg，14.5mmol)的水溶液(7.5mL)，90℃下反应2小时。冷却至室温，加入水(25mL)，并用2M的盐酸调节pH约为2，用的二氯甲烷(50mL×2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩后得3-苯基苯并噻吩-2-羧酸(9C)，白色固体(1g，产率81.96％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.90(d,1H),7.57–7.44(m,5H),7.40(m,2H),7.38–7.33(m,1H)。
LCMS m/z＝277.1[M+23]。
第三步：4-[(3-苯基苯并噻吩-2-基)氨基甲酰氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(9D)tert-butyl 4-[(3-phenylbenzothiophen-2-yl)carbamoyloxy]piperidine-1-carboxylate
Figure GDA0003244926510000642
将3-苯基苯并噻吩-2-羧酸(9C)(1g，3.93mmol)溶解在甲苯(20mL)中，加入叠氮磷酸二苯酯(1.08g，3.93mmol)，三乙胺(795mg，7.86mmol)，4-羟基哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.18g，5.895mmol)。氮气保护下室温搅拌1小时后升温至120℃反应3小时。反应液冷却至室温，加入水(100mL)，用乙酸乙酯(100mL×2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩后残留物用硅胶色谱柱分离提纯(洗脱剂：石油醚：乙酸乙酯(v:v)＝10:1～4:1)得到4-[(3-苯基苯并噻吩-2-基)氨基甲酰氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(9D)，浅黄色固体(1.2g，产率70.17％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.79(m,1H),7.57(t,2H),7.49–7.40(m,4H),7.34–7.26(m,2H),7.21(s,1H),4.95(m,1H),3.85–3.64(m,2H),3.17(m,2H),1.93(m,2H),1.62(m,2H),1.47(s,9H)。
LCMS m/z＝475.2[M+23]。
第四步：4-哌啶基N-(3-苯基苯并噻吩-2-基)氨基甲酸酯(9E)
4-piperidyl N-(3-phenylbenzothiophen-2-yl)carbamate
Figure GDA0003244926510000651
将4-[(3-苯基苯并噻吩-2-基)氨基甲酰氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(9D)(1.2g,2.65mmol)溶解在二氯甲烷(10mL)中，加入三氟乙酸(1.5mL)，室温下反应3小时。减压浓缩除去二氯甲烷，并用饱和碳酸氢钠溶液(50mL)调节pH为7～8，用二氯甲烷(50mL×2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩后残留物用硅胶色谱柱分离提纯(洗脱剂为二氯甲烷：甲醇(v:v)＝30:1～15:1)得到4-哌啶基N-(3-苯基苯并噻吩-2-基)氨基甲酸酯(9E)，白色固体(550mg，产率58.88％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.78(m,1H),7.57(t,2H),7.46-7.43(m,4H),7.32-7.26(m,2H),7.18(m,1H),4.92(m,1H),3.12(m,2H),2.81(m,2H),2.52(m,1H),2.03(m,2H),1.69(m,2H)。
LCMS m/z＝353.2[M+1]。
第五步：[1-[3-(2-氯-4-甲酰基-5-甲氧基-苯胺)-3-氧代-丙基-4-哌啶基]N-(3-苯基苯并噻吩-2-基)氨基甲酸酯(9F)
[1-[3-(2-chloro-4-formyl-5-methoxy-anilino)-3-oxo-propyl]-4-piperidyl]N-(3-phenylbenzothiophen-2-yl)carbamate
Figure GDA0003244926510000652
将4-哌啶基N-(3-苯基苯并噻吩-2-基)氨基甲酸酯(9E)(550mg，1.56mmol)溶解无水2-甲基四氢呋喃(10mL)中，加入N-(2-氯-4-甲酰基-5-甲氧基-苯基)丙-2-烯酰胺(1F)(374mg，1.56mmol)，三乙胺(315mg，3.12mmol)，微波100℃下反应1小时。反应液冷却至室温，减压浓缩后残留物用硅胶色谱柱分离提纯(洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯(v:v)＝4:1～1:1)得到[1-[3-(2-氯-4-甲酰基-5-甲氧基-苯胺)-3-氧代-丙基-4-哌啶基]N-(3-苯基苯并噻吩-2-基)氨基甲酸酯(9F)，黄色固体(593mg，产率64.38％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.83(s,1H),10.30(s,1H),8.36(s,1H),7.93-7.69(m,2H),7.58(t,2H),7.52-7.38(m,4H),7.29(m,2H),7.24(s,1H),4.89(m,1H),3.94(s,3H),2.90(m,2H),2.73(m,2H),2.65(m,2H),2.38(m,2H),2.07(m 2H),1.88(m,2H)。
LCMS m/z＝592.3[M+1]。
第六步：[1-[3-[4-[[[(2R)-2-[叔丁基(二甲基)硅基]氧-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-2-氯-5-甲氧基-苯胺]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-(3-苯基苯并噻吩-2-基)氨基甲酸酯(9G)
[1-[3-[4-[[[(2R)-2-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]-2-chloro-5-methoxy-anilino]-3-oxo-propyl]-4-piperidyl]N-(3-phenylbenzothiophen-2-yl)carbamate
Figure GDA0003244926510000661
将[1-[3-(2-氯-4-甲酰基-5-甲氧基-苯胺)-3-氧代-丙基-4-哌啶基]N-(3-苯基苯并噻吩-2-基)氨基甲酸酯(9F)(590mg，1mmol)溶解于甲醇(15mL)中，加入5-[(1R)-2-氨基-1-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基乙基]-8-羟基-1H-喹啉-2-酮(1H)(400mg，1.2mmol)和无水氯化锌(545mg，4mmol)，45℃下反应1小时，然后加入氰基硼氢化钠(189mg，3mmol)，45℃下反应2小时。冷却至室温，加入水(60mL)，并用二氯甲烷(60mL×2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩后得到标题产物[1-[3-[4-[[[(2R)-2-[叔丁基(二甲基)硅基]氧-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-2-氯-5-甲氧基-苯胺]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-(3-苯基苯并噻吩-2-基)氨基甲酸酯(9G)，白色固体，不用纯化，直接用于下一步反应。
LCMS m/z＝455.8[M/2+1]。
第七步：[1-[3-氯-4-[[[(2R)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-5-甲氧基-苯胺]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-(3-苯基苯并噻吩-2-基)氨基甲酸酯(化合物9)
[1-[3-[2-chloro-4-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]-5-methoxy-anilino]-3-oxo-propyl]-4-piperidyl]N-(3-phenylbenzothiophen-2-yl)carbamate
Figure GDA0003244926510000671
将[1-[3-[4-[[[(2R)-2-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-2-氯-5-甲氧基-苯胺]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-(3-苯基苯并噻吩-2-基)氨基甲酸酯(9G)用四氢呋喃(15mL)溶解，加入三乙胺三氢氟酸盐(1.2mL)，加完后室温反应6小时，减压浓缩除去四氢呋喃，残留物用饱和碳酸氢钠水溶液调节pH至9，并用二氯甲烷(50mL×2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩后残留物用硅胶色谱柱分离提纯(洗脱剂为二氯甲烷：甲醇(v:v)＝30:1～15:1)得到[1-[3-氯-4-[[[(2R)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-5-甲氧基-苯胺]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-(3-苯基苯并噻吩-2-基)氨基甲酸酯(化合物9)，白色固体(300mg,产率37.73％)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.16(m,1H),7.83(m,2H),7.58(d,2H),7.50(m,4H),7.39–7.24(m,3H),7.09(d,1H),6.64(d,1H),5.45(d,1H),5.13(m,1H),4.30(m,2H),3.89(s,3H),3.80–3.71(m,2H),3.56(m,2H),3.30(m,4H),3.13(m,2H),2.13(m,4H)。
LCMS m/z＝398.8[M/2+1]。
实施例10：[1-[3-[5-[[[(2R)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯并三氮唑-1-基]丙基]-4-哌啶基]N-(5-苯基噻唑-4-基)氨基甲酸酯(化合物10)
[1-[3-[5-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]propyl]-4-piperidyl]N-(5-phenylthiazol-4-yl)carbamate
Figure GDA0003244926510000672
Figure GDA0003244926510000681
第一步：[1-[3-(5-甲酰基苯并三氮唑-1-基)丙基]-4-哌啶基]N-(5-苯并噻唑-4-基)氨基甲酸酯(10A)
[1-[3-(5-formylbenzotriazol-1-yl)propyl]-4-piperidyl]N-(5-phenylthiazol-4-yl)carbamate
Figure GDA0003244926510000682
将1-(3-溴丙基)苯并三氮唑-5-甲醛(8A)(0.5g，1.88mmol)溶解于乙腈(15mL)中，加入4-哌啶基-N-(5-苯基噻唑-4-基)氨基甲酸酯(1E)(567mg，1.88mmol)，N,N-二异丙基乙胺(486mg，3.76mmol)，85℃下反应4小时。冷却至室温，加入水(50mL)，用乙酸乙酯(50mL×2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩后残留物用硅胶色谱柱分离提纯(洗脱剂为二氯甲烷：甲醇(v:v)＝50:1～20:1)得到[1-[3-(5-甲酰基苯并三氮唑-1-基)丙基]-4-哌啶基]N-(5-苯并噻唑-4-基)氨基甲酸酯(10A)，白色固体(870mg,产率94.46)。
LCMS m/z＝491.3[M+1]。
第二步：[1-[3-[5-[[[(2R)-2-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯并三氮唑-1-基]丙基]-4-哌啶基]N-(5-苯并噻唑-4-基)氨基甲酸酯(10B)
[1-[3-[5-[[[(2R)-2-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]propyl]-4-piperidyl]N-(5-phenylthiazol-4-yl)carbamate
Figure GDA0003244926510000691
将[1-[3-(5-甲酰基苯并三氮唑-1-基)丙基]-4-哌啶基]N-(5-苯并噻唑-4-基)氨基甲酸酯(10A)(450mg，0.918mmol)溶解于甲醇(15mL)中，加入5-[(1R)-2-氨基-1-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基乙基]-8-羟基-1H-喹啉-2-酮(1H)(368mg，1.1mmol)，无水氯化锌(500mg，3.672mmol)，加完后45℃下反应1小时，然后加入氰基硼氢化钠(173mg，2.75mmol)，45℃继续反应2小时。反应液冷却至室温，加入二氯甲烷/甲醇(v/v＝10:1)的混合溶剂(100mL)，并加入水(100mL)，分液后，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩后得到标题产物[1-[3-[5-[[[(2R)-2-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯并三氮唑-1-基]丙基]-4-哌啶基]N-(5-苯并噻唑-4-基)氨基甲酸酯(10B)，不用纯化，直接用于下一步反应。
LCMS m/z＝405.3[M/2+1]。
第三步：[1-[3-[5-[[[(2R)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯并三氮唑-1-基]丙基]-4-哌啶基]N-(5-苯基噻唑-4-基)氨基甲酸酯(化合物10)
[1-[3-[5-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]propyl]-4-piperidyl]N-(5-phenylthiazol-4-yl)carbamate
Figure GDA0003244926510000692
将[1-[3-[5-[[[(2R)-2-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯并三氮唑-1-基]丙基]-4-哌啶基]N-(5-苯并噻唑-4-基)氨基甲酸酯(10B)溶于四氢呋喃(15mL)中，加入三乙胺三氢氟酸盐(1.2mL)，加完后室温反应6小时，减压浓缩除去四氢呋喃，残留物用饱和碳酸氢钠水溶液调节pH至9，并用二氯甲烷(50mL×2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩后残留物用硅胶色谱柱分离提纯(洗脱剂为二氯甲烷：甲醇(v:v)＝30:1～15:1)，得到[1-[3-[5-[[[(2R)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯并三氮唑-1-基]丙基]-4-哌啶基]N-(5-苯基噻唑-4-基)氨基甲酸酯(化合物10)，白色固体(140mg,产率21.97％)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.88(s,1H),8.21(s,2H),7.90(d,1H),7.71(d,1H),7.54(d,2H),7.38(m,3H),7.26(d,1H),7.00(d,1H),6.54(d,1H),5.42(dd,1H),4.90(d,2H),4.50(s,2H),3.60(m,1H),3.46(m,2H),3.28–3.19(m,4H),3.17–2.87(m,2H),2.50(m,2H),2.15(m,4H)。
LCMS m/z＝348.3[M/2+1]。
实施例11:[1-[3-[4-[[[(2R)-2-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-2-氯-5-甲氧基-苯氨基]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]-N-(4-苯基噻唑-5-基)氨基甲酸；二三氟乙酸盐(化合物11)
[1-[3-[4-[[[(2R)-2-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]-2-chloro-5-methoxy-anilino]-3-oxo-propyl]-4-piperidyl]N-(4-phenylthiazol-5-yl)carbamate；ditrifluoroacetic acid
Figure GDA0003244926510000701
第一步：4-(噻唑-5-氨甲酰基氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(11B)
tert-butyl 4-(thiazol-5-ylcarbamoyloxy)piperidine-1-carboxylate
Figure GDA0003244926510000711
将噻唑-5-羧酸(11A)(2.58g,20.0mmol)，叠氮磷酸二苯酯(6.0g,22.0mmol)，4-羟基哌啶-1-羧酸叔丁酯(4.8g,24.0mmol)，溶于甲苯(30mL)中，室温滴加三乙胺(4.0g,40.0mmol)，室温反应1小时后，在110℃加热反应2小时。反应液冷却到室温，加入乙酸乙酯(100mL)和水(50mL)，分液，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得4-(噻唑-5-氨甲酰基氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(11B)，黄色固体(6.5g，产率100％)。
LCMS m/z＝326.2[M-1]。
第二步：4-[(4-溴噻唑-5-基)氨基甲酰氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(11C)
tert-butyl 4-[(4-bromothiazol-5-yl)carbamoyloxy]piperidine-1-carboxylate
Figure GDA0003244926510000712
将4-(噻唑-5-氨甲酰基氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(11B)(1.0g,3mmol)溶于乙腈(10mL)中，滴加将N-溴代丁二酰亚胺(1g,2.9mmol)的乙腈(2mL)溶液，室温反应1小时。将反应液加入水(50mL)，并用乙酸乙酯(100mL×2)萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝5:1)得到4-[(4-溴噻唑-5-基)氨基甲酰氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(11C)，黄色固体(0.7g，产率58.8％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.40(s,1H),7.17(s,1H),4.97(s 1H),3.78(m,2H),3.22(t,2H),2.01–1.89(m,2H),1.74–1.61(m,2H),1.52–1.40(m,9H)。
第三步：4-[(4-苯基噻唑-5-基)氨基甲酰氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(11D)
tert-butyl 4-[(4-phenylthiazol-5-yl)carbamoyloxy]piperidine-1-carboxylate
Figure GDA0003244926510000713
将4-[(4-溴噻唑-5-基)氨基甲酰氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(11C)(3.0g，7.3mmol)、苯硼酸(2.0g，16.3mmol)和碳酸钠(3.0g,28.5mmol)，溶于二氧六环(60mL)和水(20mL)中，氮气保护下再加入[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(1.2g,1.4mmol)，90℃反应2小时。将反应液冷却至室温，加入水(500mL)，并用乙酸乙酯(500mL×2)萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝4:1)得到4-[(4-苯基噻唑-5-基)氨基甲酰氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(11D)，黄色油状物(2.5g，产率86.2％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.52(s,1H),7.63(m,2H),7.50(t,2H),7.41-7.36(m,1H),7.27(s,1H),4.97-4.94(m,1H),3.87-3.65(m,2H),3.19(m,1H),1.92(m,2H),1.69-1.60(m,2H),1.46(s,9H)。
LCMS m/z＝404.2[M+1]。
第四步：4-哌啶基N-(4-苯基噻唑-5-基)氨基甲酸酯(11E)
4-piperidyl N-(4-phenylthiazol-5-yl)carbamate
Figure GDA0003244926510000721
将4-[(4-苯基噻唑-5-基)氨基甲酰氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(11D)(2.5g,6.2mmol)溶于二氧六环(50mL)中，通氯化氢气体，室温反应30分钟。将反应液用饱和的碳酸钠溶液调pH约为8，并用乙酸乙酯(50mL×2)萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到4-哌啶基N-(4-苯基噻唑-5-基)氨基甲酸酯(11E)，黄色固体(1.5g，产率80％)。
LCMS m/z＝304.3[M+1]。
第五步：[1-[3-(2-氯-4-甲酰基-5-甲氧基苯胺基)-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-(4-苯基噻唑-5-基)氨基甲酸酯(11F)
[1-[3-(2-chloro-4-formyl-5-methoxy-anilino)-3-oxo-propyl]-4-piperidyl]N-(4-phenylthiazol-5-yl)carbamate
Figure GDA0003244926510000722
将4-哌啶基N-(4-苯基噻唑-5-基)氨基甲酸酯(11E)(1.4g,4.6mmol)、N-(2-氯-4-甲酰基-5-甲氧基-苯基)丙-2-烯酰胺(1F)(1.1g,4.6mmol)和三乙胺(0.93g,9.2mmol)，溶于2-甲基四氢呋喃(20mL)中，100℃反应30分钟。反应液冷却至室温，减压浓缩后，残留物用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝10:1)得到[1-[3-(2-氯-4-甲酰基-5-甲氧基苯胺基)-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-(4-苯基噻唑-5-基)氨基甲酸酯(11F)，粉红色固体(1.8g，产率72.0％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.81(s,1H),10.30(s,1H),8.51(s,1H),8.36(s,1H),7.82(s,1H),7.65(d,2H),7.52(t,2H),7.41(t,1H),7.30(s,1H),4.90(s,1H),3.94(s,3H),2.90(s,2H),2.69(m,4H),2.40(s,2H),2.06(m,2H),1.89(m,2H)。
LCMS m/z＝543.2[M+1]。
第六步：[1-[3-[4-[[[(2R)-2-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-2-氯-5-甲氧基-苯氨基]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-(4-苯基噻唑-5-基)氨基甲酸酯(11G)
[1-[3-[4-[[[(2R)-2-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]-2-chloro-5-methoxy-anilino]-3-oxo-propyl]-4-piperidyl]N-(4-phenylthiazol-5-yl)carbamate
Figure GDA0003244926510000731
将[1-[3-(2-氯-4-甲酰基-5-甲氧基苯胺基)-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-(4-苯基噻唑-5-基)氨基甲酸酯(11F)(1.0g,1.8mmol)和5-[(1R)-2-氨基-1-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基乙基]-8-羟基-1H-喹啉-2-酮(1H)(0.61g,1.8mmol)溶于甲醇(10mL)中，加入无水氯化锌(0.96g,7.1mmol)，55℃反应1小时，然后加入氰基硼氢化钠(0.34g,5.5mmol)，55℃再反应1小时。将反应液冷却到室温，并加入二氯甲烷(100mL)溶解大部分固体，然后用饱和氯化铵水溶液(100mL)洗涤有机相，分液，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩得到[1-[3-[4-[[[(2R)-2-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-2-氯-5-甲氧基-苯氨基]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-(4-苯基噻唑-5-基)氨基甲酸酯(11G)，灰色固体(1.5g，产率94.9％)。
LCMS m/z＝861.4[M+1]。
第七步：[1-[3-[2-氯-4-[[[(2R)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-5-甲氧基苯胺基]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-(4-苯基噻唑-5-基)氨基甲酸酯；二三氟乙酸盐(化合物11)
[1-[3-[2-chloro-4-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]-5-methoxy-anilino]-3-oxo-propyl]-4-piperidyl]N-(4-phenylthiazol-5-yl)carbamate；ditrifluoroacetic acid
Figure GDA0003244926510000741
将[1-[3-[4-[[[(2R)-2-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-2-氯-5-甲氧基-苯氨基]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-(4-苯基噻唑-5-基)氨基甲酸酯(11G)(1.5g,1.7mmol)溶于四氢呋喃(6mL)中，加入三乙胺三氢氟酸盐(1.1g,6.9mmol)，室温反应过夜。将反应上清液倒掉，残留物中加入二氯甲烷/甲醇(v/v)＝10/1的混合溶液(55mL)，并用饱和碳酸氢钠水溶液(50mL×1)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，残留物液相制备(液相制备条件：C18反相制备柱，流动相为含0.05％TFA的去离子水(A)，乙腈(B)，等度洗脱25％乙腈，洗脱时间20分钟)得[1-[3-[2-氯-4-[[[(2R)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-5-甲氧基苯胺基]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-(4-苯基噻唑-5-基)氨基甲酸酯,二(2,2,2-三氟乙酸)(化合物11)，白色固体(0.8g，产率61.5％)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.76(s,1H),8.10(d,1H),δ7.78(s,1H),δ7.69(s,2H),7.45(m,3H),7.39(d,1H),7.29(d,1H),7.03(d,1H),6.59(d,1H),5.40(dd,1H),5.03(d,1H),4.25(q,2H),3.83-3.75(m,4H),3.56(s,3H),3.28-3.24(m,3H),3.20-3.01(m,3H),2.19(m,4H)。
LCMS m/z＝747.3[M+1]。
实施例12:[1-[3-[2-氯-4-[[[(2R)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-5-甲氧基-苯胺基]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]-N-(2-甲基-4-苯基-噻唑-5-基)甲酸酯；二三氟乙酸盐(化合物12)
[1-[3-[2-chloro-4-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]-5-methoxy-anilino]-3-oxo-propyl]-4-piperidyl]N-(2-methyl-4-phenyl-thiazol-5-yl)carbamate；ditrifluoroacetic acid
Figure GDA0003244926510000751
第一步：4-[(2-甲基噻唑-5-基)氨基甲酰氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(12B)
tert-butyl 4-[(2-methylthiazol-5-yl)carbamoyloxy]piperidine-1-carboxylate
Figure GDA0003244926510000752
将2-甲基噻唑-5-羧酸(12A)(4.3g,30mmol)悬浮于甲苯(50mL)中，加入4-羟基哌啶-1-羧酸叔丁酯(7.3g,36mmol)，叠氮磷酸二苯酯(9.1g,33mmol)、三乙胺(6.1g,60mmol)，室温搅拌1小时，升温120℃反应1小时。冷却至室温，加入水(100mL)，用乙酸乙酯(100mL×1)萃取，有机层用饱和氯化钠(50mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到4-[(2-甲基噻唑-5-基)氨基甲酰氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(12B)，白色固体(9.0g，产率88％)。
LCMS m/z＝364.1[M+23]。
第二步：4-[(4-溴-2-甲基-噻唑-5-基)氨基甲酰氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(12C)
tert-butyl 4-[(4-bromo-2-methyl-thiazol-5-yl)carbamoyloxy]piperidine-1-carboxylate
Figure GDA0003244926510000761
将4-[(2-甲基噻唑-5-基)氨基甲酰氧基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(12B)(8.8g,26mmol)溶于乙腈(100mL)中，加入1-溴吡咯烷-2,5-二酮(4.6g,26mmol)，室温反应1.5小时。加入水(120mL)，用乙酸乙酯(120mL×1)萃取，有机相用饱和氯化钠(150mL×1)洗涤、无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝0:1～1:9)得到4-[(4-溴-2-甲基-噻唑-5-基)氨基甲酰氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(12C)，白色固体(7.0g，产率64％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.95(s,1H),3.76(s,2H),3.22(m,2H),2.65(s,3H),1.94(m,2H),1.76(s,3H),1.68(m,2H),1.45(m,9H)。
第三步：4-[(2-甲基-4-苯基-噻唑-5-基)氨基甲酰氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(12D)
tert-butyl 4-[(2-methyl-4-phenyl-thiazol-5-yl)carbamoyloxy]piperidine-1-carboxylate
Figure GDA0003244926510000762
将4-[(4-溴-2-甲基-噻唑-5-基)氨基甲酰氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(12C)(3g,7.1mmol)溶于叔丁醇(80mL)中，氮气保护下加入苯硼酸(1.3g,10.7mmol)，四三苯基膦钯(0.52g,0.71mmol)、碳酸钠(2.3g,21mmol)，置于微波反应器中100℃反应2小时。反应液冷却至室温，加入水(100mL)，用乙酸乙酯(100mL×1)萃取，有机层用饱和氯化钠(50mL×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，残留物用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝0:1～9:1)得到4-[(2-甲基-4-苯基-噻唑-5-基)氨基甲酰氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(12D)，白色固体(2.8g，产率94％)。
LCMS m/z＝418.3[M+1]。
第四步：4-哌啶N-(2-甲基-4-苯基-噻唑-5-基)氨基甲酸酯(12E)
4-piperidyl N-(2-methyl-4-phenyl-thiazol-5-yl)carbamate
Figure GDA0003244926510000771
将4-[(2-甲基-4-苯基-噻唑-5-基)氨基甲酰氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(12D)(2.6g,6.2mmol)溶于二氯甲烷(25mL)中，加入三氟乙酸(5mL)，室温下反应7小时。反应液加入氨水调节pH 8～9，用二氯甲烷(50mL×1)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥、过滤，滤液减压浓缩，残留物用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷：甲醇(v/v)＝0:1～9:1)得到4-哌啶N-(2-甲基-4-苯基-噻唑-5-基)氨基甲酸酯(12E)，黄色固体(1.2g，产率61％)。
LCMS m/z＝318.2[M+1]。
第五步：[1-[3-(2-氯-4-甲酰基-5-甲氧基苯胺基)-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]-N-(2-甲基-4-苯基-噻唑-5-基)氨基甲酸酯(12F)
[1-[3-(2-chloro-4-formyl-5-methoxy-anilino)-3-oxo-propyl]-4-piperidyl]N-(2-methyl-4-phenyl-thiazol-5-yl)carbamate
Figure GDA0003244926510000772
将4-哌啶N-(2-甲基-4-苯基-噻唑-5-基)氨基甲酸酯(12E)(1.2g,3.8mmol)和N-(2-氯-4-甲酰基-5-甲氧基-苯基)丙-2-烯酰胺(1F)(1.0g,4.2mmol)溶于2-甲基四氢呋喃(20mL)中，加入三乙胺(0.77g,7.6mmol)，置于微波反应器中升温到100℃，反应2小时。反应而已冷却到室温，减压浓缩，残留物用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷：甲醇(v/v)＝1:0～9:1)得到[1-[3-(2-氯-4-甲酰基-5-甲氧基苯胺基)-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]-N-(2-甲基-4-苯基-噻唑-5-基)氨基甲酸酯(12F)，黄色固体(1.0g，产率47％)。
LCMS m/z＝557.2[M+1]。
第六步：[1-[3-[4-[[(2R)-2-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-2-氯-5-甲氧基-苯胺基]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-(2-甲基-4-苯基-噻唑-5-基)氨基甲酸酯(12G)
[1-[3-[4-[[[(2R)-2-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]-2-chloro-5-methoxy-anilino]-3-oxo-propyl]-4-piperidyl]N-(2-methyl-4-phenyl-thiazol-5-yl)carbamate
Figure GDA0003244926510000781
将[1-[3-(2-氯-4-甲酰基-5-甲氧基苯胺基)-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]-N-(2-甲基-4-苯基-噻唑-5-基)氨基甲酸酯(12F)(0.3g,0.54mmol)和5-[(1R)-2-氨基-1-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基-乙基]-8-羟基-1H-喹啉-2-酮(1H)(0.18g,1.54mmol)溶于甲醇(10mL)中，加入无水氯化锌(0.1 5g,1.08mmol)，搅拌1小时，然后加入氰基硼氢化钠(0.10g,1.6mmol)，搅拌2小时。反应液加入二氯甲烷(30mL)和饱和碳酸氢钠溶液(30mL)，萃取。水相用二氯甲烷(20mL×1)萃取，合并有机相。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到[1-[3-[4-[[(2R)-2-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-2-氯-5-甲氧基-苯胺基]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-(2-甲基-4-苯基-噻唑-5-基)氨基甲酸酯(12G)，黄色固体(0.4g，产率80％)。
LCMS m/z＝438.3[M/2+1]。
第七步：[1-[3-[2-氯-4-[[[(2R)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-5-甲氧基-苯胺基]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]-N-(2-甲基-4-苯基-噻唑-5-基)甲酸酯；二三氟乙酸盐(化合物12)
[1-[3-[2-chloro-4-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]-5-methoxy-anilino]-3-oxo-propyl]-4-piperidyl]N-(2-methyl-4-phenyl-thiazol-5-yl)carbamate；ditrifluoroacetic acid
Figure GDA0003244926510000782
将[1-[3-[4-[[(2R)-2-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-2-氯-5-甲氧基-苯胺基]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-(2-甲基-4-苯基-噻唑-5-基)氨基甲酸酯(12G)(0.4g,1.0mmol)溶于四氢呋喃(10mL)中，加入三乙胺三氢氟酸盐(0.4g,2mmol)，室温反应过夜。反应液用饱和碳酸氢钠调pH至碱性，用8％(v/v)甲醇/二氯甲烷(100mL×1)萃取，有机相用饱和氯化钠溶液(50mL×1)洗涤、无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物用液相制备柱分离提纯(液相制备条件：C18反相制备柱，流动相为含0.05％TFA的去离子水(A)，含0.05％TFA的乙腈(B)，梯度洗脱A:B＝10％～55％，洗脱时间39min，流速1.0mL/min，柱温：40℃)，得到[1-[3-[2-氯-4-[[[(2R)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-5-甲氧基-苯胺基]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]-N-(2-甲基-4-苯基-噻唑-5-基)甲酸酯；二三氟乙酸盐(化合物12)，白色固体(0.08g，产率8.1％)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.00(d,1H),7.69(s,1H),7.52(d,2H),7.30(m,4H),7.19(d,1H),6.94(d,1H),6.49(d,1H),5.30(dd,1H),4.98(s,1H),4.15(m,2H),3.76(d,3H),3.47(dd,4H),3.10(m,6H),2.56(s,3H),2.08(t,4H)。
LCMS m/z＝381.33[M/2+1]。
实施例13：[1-[3-[5-[[[(2R)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯并三唑-1-基]丙基]-4-哌啶基]N-(2-苯基-3-噻吩基)氨基甲酸酯；二三氟乙酸盐(化合物13)
[1-[3-[5-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]propyl]-4-piperidyl]N-(2-phenyl-3-thienyl)carbamate；ditrifluoroaceticacid
Figure GDA0003244926510000791
Figure GDA0003244926510000801
第一步：[1-[3-(5-甲酰基苯并三唑-1-基)丙基]-4-哌啶基]N-(2-苯基-3-噻吩基)氨基甲酸酯(13A)
[1-[3-(5-formylbenzotriazol-1-yl)propyl]-4-piperidyl]N-(2-phenyl-3-thienyl)carbamate
Figure GDA0003244926510000802
将4-哌啶N-(2-苯基-3-噻吩基)氨基甲酸酯(4E)(3.8g,13mmol)和3-(5-甲酰基苯并三唑-1-基)丙基甲磺酸酯(3.6g,13mmol)溶于乙腈(50mL)中，加入三乙胺(2.5g,26mmol)，升温到85℃，反应4小时。冷却到室温，减压浓缩，残留物用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷：甲醇(v/v)＝1:0～97:3)得到[1-[3-(5-甲酰基苯并三唑-1-基)丙基]-4-哌啶基]N-(2-苯基-3-噻吩基)氨基甲酸酯(13A)，黄色固体(2.5g，产率41％)。
LCMS m/z＝490.3[M+1]。
第二步：[1-[3-[5-[[(2R)-2-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)氨基]甲基]苯并三唑-1-基]丙基]-4-哌啶基]N-(2-苯基-3-噻吩基)氨基甲酸酯(13B)
[1-[3-[5-[[[(2R)-2-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]propyl]-4-piperidyl]N-(2-phenyl-3-thienyl)carbamate
Figure GDA0003244926510000811
将[[1-[3-(5-甲酰基苯并三唑-1-基)丙基]-4-哌啶基]N-(2-苯基-3-噻吩基)氨基甲酸酯(13A)(0.83g,1.7mmol)和5-[(1R)-2-氨基-1-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基-乙基]-8-羟基-1H-喹啉-2-酮(1H)(0.57g,1.7mmol)溶于甲醇(10mL)中，加入无水氯化锌(0.93g,6.8mmol)，55℃搅拌1小时，然后加入三乙酰氧基硼氢化钠(1.06g,5.0mmol)，55℃搅拌2小时。反应液加入二氯甲烷(30mL)和饱和碳酸氢钠溶液(30mL)，萃取分层。水相用二氯甲烷(20mL×1)萃取，合并有机相。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到[1-[3-[5-[[(2R)-2-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)氨基]甲基]苯并三唑-1-基]丙基]-4-哌啶基]N-(2-苯基-3-噻吩基)氨基甲酸酯(13B)，黄色固体(1.2g，产率88％)。
LCMS m/z＝404.9[M/2+1]。
第三步：[1-[3-[5-[[[(2R)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯并三唑-1-基]丙基]-4-哌啶基]N-(2-苯基-3-噻吩基)氨基甲酸酯；二三氟乙酸盐(化合物13)
[1-[3-[5-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]propyl]-4-piperidyl]N-(2-phenyl-3-thienyl)carbamate；ditrifluoroaceticacid
Figure GDA0003244926510000812
将[1-[3-[5-[[(2R)-2-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)氨基]甲基]苯并三唑-1-基]丙基]-4-哌啶基]N-(2-苯基-3-噻吩基)氨基甲酸酯(13B)(0.8g,1.0mmol)溶于四氢呋喃(40mL)中，加入三乙胺三氢氟酸盐(2.0g,10mmol)，室温反应过夜，反应液用饱和碳酸氢钠调碱，用8％(v/v)甲醇/二氯甲烷(100mL×1)萃取，有机相用饱和氯化钠溶液(50mL×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物用液相制备柱分离提纯(液相制备条件：C18反相制备柱，流动相为含0.05％TFA的去离子水(A)，含0.05％TFA的乙腈(B)，梯度洗脱A:B＝10％～55％，洗脱时间39min，流速1.0mL/min，柱温：40℃)，得到[1-[3-[5-[[[(2R)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯并三唑-1-基]丙基]-4-哌啶基]N-(2-苯基-3-噻吩基)氨基甲酸酯；二三氟乙酸盐(化合物13)，白色固体(0.30g，产率33％)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.21(s,2H),7.90(d,1H),7.71(d,1H),7.50(d,2H),7.32(m,6H),7.01(d,1H),6.54(d,1H),5.43(dd,1H),4.90(m,3H),4.53(d,2H),3.55(d,2H),3.23(m,6H),2.51(s,2H),2.08(t,4H)。
LCMS m/z＝347.8[M/2+1]。
实施例14：[1-[3-[5-[[2R)-2-羟基-2-(5-羟基-3-氧代-4H-1,4-苯并恶嗪-8-基)乙基]氨基]甲基]苯并三唑-1-基]丙基]-4-哌啶基]N-(2-苯基-3-噻吩基)氨基甲酸酯；二三氟乙酸盐(化合物14)
[1-[3-[5-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(5-hydroxy-3-oxo-4H-1,4-benzoxazin-8-yl)ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]propyl]-4-piperidyl]N-(2-phenyl-3-thienyl)carbamate；ditrifluoroacetic acid
Figure GDA0003244926510000821
Figure GDA0003244926510000831
第一步：[1-[3-[5-[[[(2R)-2-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基-2-(5-羟基-3-氧代-4H-1,4-苯并恶嗪-8-基)乙基]氨基]甲基]苯并三唑-1-基]丙基]-4-哌啶基]N-(2-苯基-3-噻吩基)氨基甲酸酯(14G)
[1-[3-[5-[[[(2R)-2-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-2-(5-hydroxy-3-oxo-4H-1,4-benzoxazin-8-yl)ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]propyl]-4-piperidyl]N-(2-phenyl-3-thienyl)carbamate
Figure GDA0003244926510000832
将[1-[3-(5-甲酰基苯并三唑-1-基)丙基]-4-哌啶基]N-(2-苯基-3-噻吩基)氨基甲酸酯(13A)(0.69g,1.4mmol)和8-[(1R)-2-氨基-1-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基-乙基]-5-羟基-4H-1,4-苯并恶嗪-3-酮(制备参考WO2008149110A1)(0.58g,1.7mmol)溶于甲醇(10mL)中，加入无水氯化锌(0.78g,5.7mmol)，55℃搅拌1小时，然后加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.91g,4.3mmol)，55℃搅拌2小时。反应液加入二氯甲烷(30mL)和饱和碳酸氢钠溶液(30mL)，萃取分层。水相用二氯甲烷(20mL×1)萃取，合并有机相。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到[1-[3-[5-[[[(2R)-2-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基-2-(5-羟基-3-氧代-4H-1,4-苯并恶嗪-8-基)乙基]氨基]甲基]苯并三唑-1-基]丙基]-4-哌啶基]N-(2-苯基-3-噻吩基)氨基甲酸酯(14G)，黄色固体(1.1g，产率95％)。
LCMS m/z＝406.9[M/2+1]。
第二步：[1-[3-[5-[[2R)-2-羟基-2-(5-羟基-3-氧代-4H-1,4-苯并恶嗪-8-基)乙基]氨基]甲基]苯并三唑-1-基]丙基]-4-哌啶基]N-(2-苯基-3-噻吩基)氨基甲酸酯；二三氟乙酸盐(化合物14)
[1-[3-[5-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(5-hydroxy-3-oxo-4H-1,4-benzoxazin-8-yl)ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]propyl]-4-piperidyl]N-(2-phenyl-3-thienyl)carbamate；ditrifluoroacetic acid
Figure GDA0003244926510000841
将[1-[3-[5-[[[(2R)-2-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基-2-(5-羟基-3-氧代-4H-1,4-苯并恶嗪-8-基)乙基]氨基]甲基]苯并三唑-1-基]丙基]-4-哌啶基]N-(2-苯基-3-噻吩基)氨基甲酸酯(14G)(1.1g,1.4mmol)溶于四氢呋喃(10mL)中，加入三乙胺三氢氟酸盐(2.2g,14mmol)，室温反应过夜，反应液用饱和碳酸氢钠水溶液调碱性，用8％(v/v)甲醇/二氯甲烷(100mL×1)萃取，有机相用饱和氯化钠溶液(50mL×1)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物用液相制备柱分离提纯(液相制备条件：C18反相制备柱，流动相为含0.05％TFA的去离子水(A)，含0.05％TFA的乙腈(B)，梯度洗脱A:B＝10％～55％，洗脱时间39min，流速1.0mL/min，柱温：40℃)，得到[1-[3-[5-[[2R)-2-羟基-2-(5-羟基-3-氧代-4H-1,4-苯并恶嗪-8-基)乙基]氨基]甲基]苯并三唑-1-基]丙基]-4-哌啶基]N-(2-苯基-3-噻吩基)氨基甲酸酯；二三氟乙酸盐(化合物14)，白色固体(0.30g，产率24％)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.21(s,1H),7.92(d,1H),7.71(d,1H),7.50(d,2H),7.36(m,5H),7.01(d,1H),6.55(d,1H),5.18(dd,1H),4.98(s,1H),4.86(t,4H),4.40(m,4H),3.56(d,2H),3.12(m,4H),2.51(s,2H),2.09(s,4H)。
LCMS m/z＝349.8[M/2+1]。
实施例15：[1-[3-[5-[[[(2R)-2-羟基-2-(4-羟基-2-氧代-3H-1,3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基]甲基]苯并三唑-1-基]丙基]-4-哌啶基]N-(2-苯基-3-噻吩基)氨基甲酸酯；二三氟乙酸盐(化合物15)
[1-[3-[5-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(4-hydroxy-2-oxo-3H-1,3-benzothiazol-7-yl)ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]propyl]-4-piperidyl]N-(2-phenyl-3-thienyl)carbamate；ditrifluoroacetic acid
Figure GDA0003244926510000851
第一步：[1-[3-[5-[[(2R)-2-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基-2-[4-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基-2-氧代-3H-1,3-苯并噻唑-7-基]乙基]氨基]甲基]苯并三唑-1-基]丙基]-4-哌啶基]N-(2-苯基-3-噻吩基)氨基甲酸酯(15G)
[1-[3-[5-[[[(2R)-2-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-2-[4-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-2-oxo-3H-1,3-benzothiazol-7-yl]ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]propyl]-4-piperidyl]N-(2-phenyl-3-thienyl)carbamate
Figure GDA0003244926510000861
将[1-[3-(5-甲酰基苯并三唑-1-基)丙基]-4-哌啶基]N-(2-苯基-3-噻吩基)氨基甲酸酯(13A)(0.70g,1.4mmol)和7-[(1R)-2-氨基-1-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基-乙基]-4-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基-3H-1,3-苯并噻唑-2-酮(中间体1)(0.78g,1.7mmol)溶于甲醇(10mL)中，加入无水氯化锌(0.78g,5.7mmol)，55℃搅拌1小时，然后加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.91g,4.3mmol)，55℃搅拌2小时。反应液加入二氯甲烷(30mL)和饱和碳酸氢钠溶液(30mL)，萃取分层。水相用二氯甲烷(20mL×1)萃取，合并有机相。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到[1-[3-[5-[[(2R)-2-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基-2-[4-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基-2-氧代-3H-1,3-苯并噻唑-7-基]乙基]氨基]甲基]苯并三唑-1-基]丙基]-4-哌啶基]N-(2-苯基-3-噻吩基)氨基甲酸酯(15G)，黄色固体(1.3g，产率98％)。
LCMS m/z＝464.9[1/2M+1]。
第二步：[1-[3-[5-[[[(2R)-2-羟基-2-(4-羟基-2-氧代-3H-1,3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基]甲基]苯并三唑-1-基]丙基]-4-哌啶基]N-(2-苯基-3-噻吩基)氨基甲酸酯；二三氟乙酸盐(化合物15)
[1-[3-[5-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(4-hydroxy-2-oxo-3H-1,3-benzothiazol-7-yl)ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]propyl]-4-piperidyl]N-(2-phenyl-3-thienyl)carbamate；ditrifluoroaceticacid
Figure GDA0003244926510000862
将[1-[3-[5-[[(2R)-2-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基-2-[4-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基-2-氧代-3H-1,3-苯并噻唑-7-基]乙基]氨基]甲基]苯并三唑-1-基]丙基]-4-哌啶基]N-(2-苯基-3-噻吩基)氨基甲酸酯(15G)(1.3g,1.4mmol)溶于四氢呋喃(10mL)中，加入三乙胺三氢氟酸盐(2.2g,14mmol)，室温反应过夜，反应液用饱和碳酸氢钠水溶液调pH至碱性，用8％(v/v)甲醇/二氯甲烷(100mL×1)萃取，有机相用饱和氯化钠溶液(50mL×1)洗涤、无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物用液相制备柱分离提纯(液相制备条件：C18反相制备柱，流动相为含0.05％TFA的去离子水(A)，含0.05％TFA的乙腈(B)，梯度洗脱A:B＝10％～55％，洗脱时间39min，流速1.0mL/min，柱温：40℃)，得到[1-[3-[5-[[[(2R)-2-羟基-2-(4-羟基-2-氧代-3H-1,3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基]甲基]苯并三唑-1-基]丙基]-4-哌啶基]N-(2-苯基-3-噻吩基)氨基甲酸酯；二三氟乙酸盐(化合物15),白色固体(0.60g，产率46％)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.21(s,1H),7.95(m,1H),7.73(d,1H),7.50(d,2H),7.35(m,5H),6.96(d,1H),6.74(d,1H),4.99(m,2H),4.87(t,4H),4.49(m,2H),3.55(d,2H),3.17(m,4H),2.51(s,2H),2.07(t,4H)。
LCMS m/z＝350.8[M/2+1]。
实施例16：[1-[3-[2-氯-4-[[[(2R)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-5-甲氧基-苯胺]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-[2-(3-氯苯基)-3-噻吩基]氨基甲酸酯(化合物16)
[1-[3-[2-chloro-4-[[[(2S)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]-5-methoxy-anilino]-3-oxo-propyl]-4-piperidyl]N-[2-(3-chlorophenyl)-3-thienyl]carbamate
Figure GDA0003244926510000871
Figure GDA0003244926510000881
第一步：4-[(2-溴-3-噻吩基)氨甲酰氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(16B)
tert-butyl 4-[(2-bromo-3-thienyl)carbamoyloxy]piperidine-1-carboxylate
将2-溴-3-噻吩羧酸(16A)(6.00g，29.0mmol)溶于甲苯(150ml)中，并加入叠氮磷酸二苯酯(7.98g，29.0mmol)，4-羟基哌啶-1-羧酸叔丁酯(CAS:109384-19-2)(8.76g，43.5mmol)和三乙胺(5.85g，57.9mmol)，加完后在氮气保护下室温反应1小时，之后升温至120℃下反应3小时。反应冷却至室温，缓慢加入水(200mL)，并用乙酸乙酯(200mL×2)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(200ml×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩后残留物用硅胶色谱柱分离提纯(洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯(v:v)＝15：1～4:1)得到4-[(2-溴-3-噻吩基)氨甲酰氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(16B)，白色固体(6.75g，产率57.4％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.68–7.40(m,1H),7.28–7.25(m,1H),6.69(s,1H),5.04–4.72(m,1H),3.96–3.59(m,2H),3.31–3.06(m,2H),1.99–1.86(m,2H),1.68(m,2H),1.45(s,9H)。
LCMS m/z＝429.1[M+23]。
第二步：4-[[2-(3-氯苯基)-3-噻吩基]氨甲酰氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(16C)
tert-butyl 4-[[2-(3-chlorophenyl)-3-thienyl]carbamoyloxy]piperidine-1-carboxylate
Figure GDA0003244926510000891
将4-[(2-溴-3-噻吩基)氨甲酰氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(16B)(1.56g，3.86mmol)溶于1,4-二氧六环(25ml)和水(5ml)中，加入3-氯苯硼酸频哪醇酯(0.6g，3.86mmol)和碳酸钠(0.82g,7.72mmol)，在氮气保护下加入四三苯基膦钯(0.23g，0.19mmol)升温至85℃下反应4小时。将反应冷却至室温，加入水(100mL)，并用乙酸乙酯(150mL×2)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(200ml×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩后得棕色油状残留物4-[[2-(3-氯苯基)-3-噻吩基]氨甲酰氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(16C)，并直接用于下一步。
LCMS m/z＝459.1[M+23]。
第三步：4-哌啶基N-[2-(3-氯苯基)-3-噻吩基]氨基甲酸酯(16D)
4-piperidyl N-[2-(3-chlorophenyl)-3-thienyl]carbamate
Figure GDA0003244926510000892
将上述4-[[2-(3-氯苯基)-3-噻吩基]氨甲酰氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(16C)溶于二氯甲烷(15mL)，并加入三氟乙酸(2.5mL)，室温反应6小时。反应液用饱和碳酸氢钠溶液调pH为7～9，用二氯甲烷(100mL×2)萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩后残留物用硅胶色谱柱分离提纯(洗脱剂为二氯甲烷：甲醇(v:v)＝50：1～20:1)得到4-哌啶基N-[2-(3-氯苯基)-3-噻吩基]氨基甲酸酯(16D)，白色固体(0.93g，两步产率71.70％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.50(s,1H),7.45(t,1H),7.41–7.30(m,3H),7.27(m,1H),6.78(s,1H),5.03–4.76(m,1H),4.43(s,1H),3.12(m,2H),2.95–2.69(m,2H),2.18–1.88(m,2H),1.75(m,2H)。
LCMS m/z＝337.2[M+1]。
第四步：[1-[3-(2-氯-4-醛基-5-甲氧基-苯胺)-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-[2-(3-氯苯基)-3-噻吩基]氨基甲酸酯(16E)
[1-[3-(2-chloro-4-formyl-5-methoxy-anilino)-3-oxo-propyl]-4-piperidyl]N-[2-(3-chlorophenyl)-3-thienyl]carbamate
Figure GDA0003244926510000901
将4-哌啶基N-[2-(3-氯苯基)-3-噻吩基]氨基甲酸酯(16E)(0.93g，2.77mmol)加入微波管中，并用2-甲基四氢呋喃(10mL)溶解，加入N-(2-氯-4-甲酰基-5-甲氧基-苯基)丙-2-烯酰胺(1F)2(0.73g，3.04mmol)和三乙胺(0.56g，5.53mmol)，微波100℃下反应1小时。反应液冷却至室温，减压浓缩后残留物用硅胶色谱柱分离提纯(洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯(v:v)＝8：1～1:1)得到[1-[3-(2-氯-4-醛基-5-甲氧基-苯胺)-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-[2-(3-氯苯基)-3-噻吩基]氨基甲酸酯(16E)，浅黄色固体(1.1g，产率69.18％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.87(s,1H),10.30(s,1H),8.35(s,1H),7.82(s,1H),7.66–7.49(s,1H),7.46(t,1H),7.39(m,1H),7.37–7.31(m,2H),7.29(d,1H),6.63(s,1H),4.85(m,1H),3.94(s,3H),2.88(m,2H),2.69(m,4H),2.41(m,2H),2.04(m,2H),1.88(m,2H)。
LCMS m/z＝576.2[M+1]。
第五步:[1-[3-[4-[[[(2S)-2-[叔丁基(二甲基)硅基]氧-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基甲基]-2-氯-5-甲氧基-苯胺]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-[2-(3-氯苯基)-3-噻吩基]氨基甲酸酯(16F)
[1-[3-[4-[[[(2S)-2-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]-2-chloro-5-methoxy-anilino]-3-oxo-propyl]-4-piperidyl]
N-[2-(3-chlorophenyl)-3-thienyl]carbamate
Figure GDA0003244926510000902
将[1-[3-(2-氯-4-醛基-5-甲氧基-苯胺)-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-[2-(3-氯苯基)-3-噻吩基]氨基甲酸酯(16E)(0.58g,1mmol)溶于甲醇(15mL)中，并加入5-[(1R)-2-氨基-1-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基乙基]-8-羟基-1H-喹啉-2-酮(1H)(0.4g，1.2mmol)和无水氯化锌(0.55g，4mmol)，加完后45℃下反应1小时，之后加入氰基硼氢化钠(0.19g，3mmol)，45℃下反应2小时。将反应冷却至室温，加入水(100mL)，并用二氯甲烷(100mL×2)萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩后残留物用硅胶色谱柱分离提纯(洗脱剂为二氯甲烷：甲醇(v:v)＝50：1～20:1)得到[1-[3-[4-[[[(2S)-2-[叔丁基(二甲基)硅基]氧-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基甲基]-2-氯-5-甲氧基-苯胺]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-[2-(3-氯苯基)-3-噻吩基]氨基甲酸酯(16F)，浅黄色固体(0.4g，产率44.79％)。
LCMS m/z＝447.8[M/2+1]。
第六步：[1-[3-[2-氯-4-[[[(2R)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-5-甲氧基-苯胺]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-[2-(3-氯苯基)-3-噻吩基]氨基甲酸酯(化合物16)
[1-[3-[2-chloro-4-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]-5-methoxy-anilino]-3-oxo-propyl]-4-piperidyl]N-[2-(3-chlorophenyl)-3-thienyl]carbamate
Figure GDA0003244926510000911
将[1-[3-[4-[[[(2S)-2-[叔丁基(二甲基)硅基]氧-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基甲基]-2-氯-5-甲氧基-苯胺]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-[2-(3-氯苯基)-3-噻吩基]氨基甲酸酯(16F)(0.4g,0.44mmol)溶于四氢呋喃(10mL)，加入三乙胺三氢氟酸溶液(1ml)，室温下反应6小时，减压浓缩除去溶剂，残留物缓慢加入饱和碳酸氢钠水溶液(100mL)，用(二氯甲烷：甲醇(v/v)＝50:1)的混合溶液(100mL×2)萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩后残留物用硅胶色谱柱分离提纯(洗脱剂为二氯甲烷：甲醇(v:v)＝50：1～20:1)得到[1-[3-[2-氯-4-[[[(2R)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-5-甲氧基-苯胺]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-[2-(3-氯苯基)-3-噻吩基]氨基甲酸酯(化合物1)，浅黄色固体(0.17g，产率49.5％)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.22(d,1H),7.81(s,1H),7.53(t,1H),7.42(m,1H),7.37(m,2H),7.32–7.24(m,2H),7.16(d,2H),6.97(d,1H),6.58(d,1H),5.18(m,1H),4.72(m,1H),3.80(s,2H),3.76(s,3H),2.88(m,4H),2.76(m,2H),2.65(m,2H),2.43(m,2H),1.94(m,2H),1.81(m,2H)。
LCMS m/z＝390.8[M/2+1]。
实施例17：[1-[3-[2-氯-4-[[[(2R)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-5-甲氧基-苯胺]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-[2-(2-氟苯基)-3-噻吩基]氨基甲酸酯；二三氟乙酸盐(化合物17)
[1-[3-[2-chloro-4-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]-5-methoxy-anilino]-3-oxo-propyl]-4-piperidyl]N-[2-(2-fluorophenyl)-3-thienyl]carbamate；ditrifluoroacetic acid
Figure GDA0003244926510000921
第一步：4-[[2-(2-氟苯基)-3-噻吩基]氨甲酰氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(17A)
tert-butyl 4-[[2-(2-fluorophenyl)-3-thienyl]carbamoyloxy]piperidine-1-carboxylate
Figure GDA0003244926510000931
将4-[(2-溴-3-噻吩基)氨甲酰氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(16B)(1.56g，3.86mmol)溶于1,4-二氧六环(25mL)和水(5mL)中，加入2-氟苯硼酸(0.54g，3.86mmol)和碳酸钠(0.82g,7.72mmol)，氮气保护下加入四三苯基膦钯(0.23g，0.19mmol)，加完后升温至90℃下反应4小时。将反应冷却至室温，加入水(100mL)，并用乙酸乙酯(150mL×2)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(200ml×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩后得4-[[2-(2-氟苯基)-3-噻吩基]氨甲酰氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(17A)，棕色油状残留物，并直接用于下一步。
LCMS m/z＝443.2[M+23]。
第二步：4-哌啶基N-[2-(2-氟苯基)-3-噻吩基]氨基甲酸酯(17B)
4-piperidyl N-[2-(2-fluorophenyl)-3-thienyl]carbamate
Figure GDA0003244926510000932
将上述4-[[2-(2-氟苯基)-3-噻吩基]氨甲酰氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(17A)溶于二氯甲烷(15mL)，并加入三氟乙酸(2.5mL)，室温反应6小时。反应缓慢加入饱碳酸氢钠水溶液100ml，直至水层pH为7–9，水层用二氯甲烷(100mL×2)萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩后残留物用硅胶色谱柱分离提纯(洗脱剂为二氯甲烷：甲醇(v:v)＝50：1～20:1)得到4-哌啶基N-[2-(2-氟苯基)-3-噻吩基]氨基甲酸酯(17B)，白色固体(0.78g，两步产率63.41％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.77–7.47(m,1H),7.47–7.29(m,3H),7.25–7.14(m,2H),6.66(s,1H),4.97–4.74(m,1H),3.25(s,1H),3.18–2.98(m,2H),2.85(m,2H),2.17–1.80(m,2H),1.80–1.41(m,2H)。
LCMS m/z＝321.2[M+1]。
第三步：[1-[3-(2-氯-4-甲酰基-5-甲氧基-苯胺)-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-[2-(2-氟苯基)-3-噻吩基]氨基甲酸酯(17C)
[1-[3-(2-chloro-4-formyl-5-methoxy-anilino)-3-oxo-propyl]-4-piperidyl]N-[2-(2-fluorophenyl)-3-thienyl]carbamate
Figure GDA0003244926510000941
将4-哌啶基N-[2-(2-氟苯基)-3-噻吩基]氨基甲酸酯(17B)(0.4g，1.25mmol)加入微波管中，并用2-甲基四氢呋喃(10mL)溶解，分别加入N-(2-氯-4-甲酰基-5-甲氧基-苯基)丙-2-烯酰胺(1F)(0.33g，1.37mmol)和三乙胺(0.25g，2.5mmol)，微波100℃下反应1小时。反应冷却至室温，减压浓缩后残留物用硅胶色谱柱分离提纯(洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯(v:v)＝8：1～1:1)得到[1-[3-(2-氯-4-醛基-5-甲氧基-苯胺)-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-[2-(2-氟苯基)-3-噻吩基]氨基甲酸酯(17C)，浅黄色固体(0.55g，产率78.68％)。
LCMS m/z＝560.1[M+1]。
第四步:[1-[3-[4-[[[(2S)-2-[叔丁基(二甲基)硅基]氧-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基甲基]-2-氯-5-甲氧基-苯胺]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-[2-(2-氟苯基)-3-噻吩基]氨基甲酸酯(17D)
[1-[3-[4-[[[(2S)-2-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]-2-chloro-5-methoxy-anilino]-3-oxo-propyl]-4-piperidyl]
N-[2-(2-fluorophenyl)-3-thienyl]carbamate
Figure GDA0003244926510000942
将[1-[3-(2-氯-4-醛基-5-甲氧基-苯胺)-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-[2-(2-氟苯基)-3-噻吩基]氨基甲酸酯(17C)(0.41g,0.73mmol)溶于甲醇(15mL)中，并加入5-[(1R)-2-氨基-1-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基乙基]-8-羟基-1H-喹啉-2-酮(1H)(0.29g，0.87mmol)和无水氯化锌(0.4g，2.92mmol)，加完后45℃下反应1小时，之后加入氰基硼氢化钠(0.14g，2.19mmol)，加完后45℃下反应2小时。将反应冷却至室温，加入水(100mL)，并用二氯甲烷(100mL×2)萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩后得[1-[3-[4-[[[(2S)-2-[叔丁基(二甲基)硅基]氧-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基甲基]-2-氯-5-甲氧基-苯胺]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-[2-(2-氟苯基)-3-噻吩基]氨基甲酸酯(17D)，灰色固体状，并直接用于下一步。
LCMS m/z＝439.8[M/2+1]。
第五步：[1-[3-[2-氯-4-[[[(2R)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-5-甲氧基-苯胺]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-[2-(2-氟苯基)-3-噻吩基]氨基甲酸酯；二三氟乙酸盐(化合物17)
[1-[3-[2-chloro-4-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]-5-methoxy-anilino]-3-oxo-propyl]-4-piperidyl]N-[2-(2-fluorophenyl)-3-thienyl]carbamate
Figure GDA0003244926510000951
将上述[1-[3-[4-[[[(2S)-2-[叔丁基(二甲基)硅基]氧-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基甲基]-2-氯-5-甲氧基-苯胺]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-[2-(2-氟苯基)-3-噻吩基]氨基甲酸酯(17D)溶于四氢呋喃(10mL)，加入三乙胺三氢氟酸溶液(1ml)，室温下反应6小时，减压浓缩出去溶剂，残留物缓慢加入饱和碳酸氢钠水溶液(100ml)，并用(二氯甲烷：甲醇＝50:1)的混合溶液(100mL×2)萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩后残留物用液相制备柱分离提纯(液相制备条件：C18反相制备柱，流动相为含0.05％TFA的去离子水(A)，含0.05％TFA的乙腈(B)，梯度洗脱A:B＝10％～55％，洗脱时间39min，流速1.0mL/min，柱温：40℃)，得到[1-[3-[2-氯-4-[[[(2R)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-5-甲氧基-苯胺]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-[2-(2-氟苯基)-3-噻吩基]氨基甲酸酯；二三氟乙酸盐(化合物17)，浅黄色固体(0.15g，两步产率27.27％)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.13(d,1H),7.78(s,1H),7.49–7.18(m,8H),7.03(d,1H),6.60(d,1H),5.40(dd,1H),5.00(s,1H),4.25(m,2H),3.84(s,3H),3.54(m,4H),3.22(m,4H),3.08(m,2H),2.14(m,4H)。
LCMS m/z＝382.7[M/2+1]。
实施例18：[1-[3-[2-氯-4-[[[(2R)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-5-甲氧基-苯胺]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-[2-(3-氟苯基)-3-噻吩基]氨基甲酸酯；二三氟乙酸盐(化合物18)
[1-[3-[2-chloro-4-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]-5-methoxy-anilino]-3-oxo-propyl]-4-piperidyl]N-[2-(3-fluorophenyl)-3-thienyl]carbamate ditrifluoroacetic acid
Figure GDA0003244926510000961
第一步：4-[[2-(3-氟苯基)-3-噻吩基]氨甲酰氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(18A)
tert-butyl 4-[[2-(3-fluorophenyl)-3-thienyl]carbamoyloxy]piperidine-1-carboxylate
Figure GDA0003244926510000962
将4-[(2-溴-3-噻吩基)氨甲酰氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(16B)(1.5g，3.71mmol)溶于1,4-二氧六环(25mL)和水(5mL)中，加入3-氟苯硼酸(0.52g，3.71mmol)和碳酸钠(0.78g,7.42mmol)，氮气保护下加入四三苯基膦钯(0.22g，0.19mmol)，加完后升温至85℃下反应4小时。将反应冷却至室温，加入水(100mL)，并用乙酸乙酯(150mL×2)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(200ml×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩后得4-[[2-(3-氟苯基)-3-噻吩基]氨甲酰氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(18A)，棕色油状残留物，并直接用于下一步。
LCMS m/z＝443.2[M+23]。
第二步：4-哌啶基N-[2-(3-氟苯基)-3-噻吩基]氨基甲酸酯(18B)
4-piperidyl N-[2-(3-fluorophenyl)-3-thienyl]carbamate
Figure GDA0003244926510000971
将上述4-[[2-(3-氟苯基)-3-噻吩基]氨甲酰氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(18A)溶于二氯甲烷(15mL)，并加入三氟乙酸(2.5mL)，室温反应6小时。反应液用饱和碳酸氢钠溶液调pH为7～9，用二氯甲烷(100mL×2)萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩后残留物用硅胶色谱柱分离提纯(洗脱剂为二氯甲烷：甲醇(v:v)＝50：1～20:1)得到4-哌啶基N-[2-(3-氟苯基)-3-噻吩基]氨基甲酸酯(18B)，浅黄色固体(0.71g，两步产率59.66％)。
LCMS m/z＝321.2[M+1]。
第三步：[1-[3-(2-氯-4-醛基-5-甲氧基-苯胺)-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-[2-(3-氟苯基)-3-噻吩基]氨基甲酸酯(18C)
[1-[3-(2-chloro-4-formyl-5-methoxy-anilino)-3-oxo-propyl]-4-piperidyl]N-[2-(3-fluorophenyl)-3-thienyl]carbamate
Figure GDA0003244926510000972
将4-哌啶基N-[2-(3-氟苯基)-3-噻吩基]氨基甲酸酯(18B)(0.6g，1.87mmol)加入微波管中，并用2-甲基四氢呋喃(10mL)溶解，加入N-(2-氯-4-甲酰基-5-甲氧基-苯基)丙-2-烯酰胺(1F)(0.49g，2.06mmol)和三乙胺(0.38g，3.75mmol)，微波100℃下反应1小时。反应冷却至室温，减压浓缩后残留物用硅胶色谱柱分离提纯(洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯(v:v)＝8：1～1:1)得到[1-[3-(2-氯-4-醛基-5-甲氧基-苯胺)-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-[2-(3-氟苯基)-3-噻吩基]氨基甲酸酯(18C)，浅黄色固体(0.84g，产率80.0％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.89(s,1H),10.30(s,1H),8.35(s,1H),7.82(s,1H),7.57(s,1H),7.39(m,3H),7.24(m,2H),6.64(s,1H),4.83(m,1H),3.94(s,3H),2.66(m,8H),2.04(m,2H),1.87(m,2H)。
LCMS m/z＝560.1[M+1]。
第四步:[1-[3-[4-[[[(2S)-2-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基甲基]-2-氯-5-甲氧基-苯胺]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-[2-(3-氟苯基)-3-噻吩基]氨基甲酸酯(18D)
[1-[3-[4-[[[(2S)-2-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]-2-chloro-5-methoxy-anilino]-3-oxo-propyl]-4-piperidyl]N-[2-(3-fluorophenyl)-3-thienyl]carbamate
Figure GDA0003244926510000981
将[1-[3-(2-氯-4-醛基-5-甲氧基-苯胺)-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-[2-(3-氟苯基)-3-噻吩基]氨基甲酸酯(18C)(0.84g,1.5mmol)溶于甲醇(15mL)中，并加入5-[(1R)-2-氨基-1-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基乙基]-8-羟基-1H-喹啉-2-酮(1H)(0.6g，1.8mmol)和无水氯化锌(0.82g，6mmol)，加完后45℃下反应1小时，之后加入氰基硼氢化钠(0.28g，4.5mmol)，45℃下反应2小时。将反应冷却至室温，加入水(100mL)，并用二氯甲烷(100mL×2)萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩后得到[1-[3-[4-[[[(2S)-2-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基甲基]-2-氯-5-甲氧基-苯胺]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-[2-(3-氟苯基)-3-噻吩基]氨基甲酸酯(18D)，灰色固体，并直接做下一步。
LCMS m/z＝439.8[M/2+1]。
第五步：[1-[3-[2-氯-4-[[[(2R)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-5-甲氧基-苯胺]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-[2-(3-氟苯基)-3-噻吩基]氨基甲酸酯；二三氟乙酸盐(化合物18)
[1-[3-[2-chloro-4-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]-5-methoxy-anilino]-3-oxo-propyl]-4-piperidyl]N-[2-(3-fluorophenyl)-3-thienyl]carbamate ditrifluoroacetic acid
Figure GDA0003244926510000991
将上述[1-[3-[4-[[[(2S)-2-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基甲基]-2-氯-5-甲氧基-苯胺]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-[2-(3-氟苯基)-3-噻吩基]氨基甲酸酯(18D)溶于四氢呋喃(10mL)，加入三乙胺三氢氟酸溶液(1ml)，室温下反应6小时，减压浓缩出去溶剂，残留物缓慢加入饱和碳酸氢钠水溶液(100ml)，并用(二氯甲烷：甲醇＝50:1(v/v))的混合溶液(100mL×2)萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩后残留物用液相制备柱分离提纯(液相制备条件：C18反相制备柱，流动相为含0.05％TFA的去离子水(A)，含0.05％TFA的乙腈(B)，梯度洗脱A:B＝10％～55％，洗脱时间39min，流速1.0mL/min，柱温：40℃)，得到[1-[3-[2-氯-4-[[[(2R)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-5-甲氧基-苯胺]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-[2-(3-氟苯基)-3-噻吩基]氨基甲酸酯；二三氟乙酸盐(化合物18)，白色固体(0.16g，两步产率14.03％)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.13(s,1H),7.79(s,1H),7.57–6.89(m,9H),6.60(d,1H),5.41(m,1H),4.97(d,1H)4.27(m,2H),3.84(s,3H),3.55(m,4H),3.30–3.13(m,4H),3.09(m,2H),2.16(m,4H)。
LCMS m/z＝382.8[M/2+1]。
实施例19：[1-[3-[2-氯-4-[[[(2R)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-5-甲氧基-苯胺]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-[2-(4-氟苯基)-3-噻吩基]氨基甲酸酯；二三氟乙酸盐(化合物19)
[1-[3-[2-chloro-4-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]-5-methoxy-anilino]-3-oxo-propyl]-4-piperidyl]N-[2-(4-fluorophenyl)-3-thienyl]carbamate ditrifluoroacetic acid
Figure GDA0003244926510001001
第一步：4-[[2-(4-氟苯基)-3-噻吩基]氨甲酰氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(19A)
tert-butyl 4-[[2-(4-fluorophenyl)-3-thienyl]carbamoyloxy]piperidine-1-carboxylate
Figure GDA0003244926510001002
将4-[(2-溴-3-噻吩基)氨甲酰氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(16B)(1.5g，3.71mmol)溶于1,4-二氧六环(25mL)和水(5mL)中，加入4-氟苯硼酸(0.52g，3.71mmol)和碳酸钠(0.78g,7.42mmol)，氮气保护下加入四三苯基膦钯(0.22g，0.19mmol)，升温至85℃下反应4小时。将反应冷却至室温，加入水(100mL)，并用乙酸乙酯(150mL×2)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(200ml×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩后得4-[[2-(4-氟苯基)-3-噻吩基]氨甲酰氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(19A)，棕色油状残留物，并直接用于下一步。
LCMS m/z＝443.2[M+23]。
第二步：4-哌啶基N-[2-(4-氟苯基)-3-噻吩基]氨基甲酸酯(19B)
4-piperidyl N-[2-(4-fluorophenyl)-3-thienyl]carbamate
Figure GDA0003244926510001011
将上述4-[[2-(4-氟苯基)-3-噻吩基]氨甲酰氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(19A)溶于二氯甲烷(15mL)，并加入三氟乙酸(2.5mL)，室温反应6小时。反应液用饱和碳酸氢钠溶液调pH为7～9，用二氯甲烷(100mL×2)萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩后残留物用硅胶色谱柱分离提纯(洗脱剂为二氯甲烷：甲醇(v:v)＝50：1～20:1)得到4-哌啶基N-[2-(4-氟苯基)-3-噻吩基]氨基甲酸酯(19B)，浅黄色固体(0.65g，两步产率55.08％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.59(s,1H),7.48–7.33(m,2H),7.24(d,1H),7.19–7.07(m,2H),6.64(s,1H),4.92–4.59(m,1H),3.20–2.90(m,2H),2.75(m,2H),2.51(s,1H),2.03–1.89(m,2H),1.67–1.46(m,2H)。
LCMS m/z＝321.2[M+1]。
第三步：[1-[3-(2-氯-4-醛基-5-甲氧基-苯胺基)-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-[2-(4-氟苯基)-3-噻吩基]氨基甲酸酯(19C)
[1-[3-(2-chloro-4-formyl-5-methoxy-anilino)-3-oxo-propyl]-4-piperidyl]N-[2-(4-fluorophenyl)-3-thienyl]carbamate
Figure GDA0003244926510001021
将4-哌啶基N-[2-(4-氟苯基)-3-噻吩基]氨基甲酸酯(19B)(0.65g，2.03mmol)加入微波管中，并用2-甲基四氢呋喃(10mL)溶解，加入N-(2-氯-4-甲酰基-5-甲氧基-苯基)丙-2-烯酰胺(1F)(0.53g，2.23mmol)和三乙胺(0.41g，4.06mmol)，微波100℃下反应1小时。反应冷却至室温，减压浓缩后残留物用硅胶色谱柱分离提纯(洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯(v:v)＝8：1～1:1)得到[1-[3-(2-氯-4-醛基-5-甲氧基-苯胺基)-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-[2-(4-氟苯基)-3-噻吩基]氨基甲酸酯(19C)，浅黄色固体(0.6g，产率53.09％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.86(s,1H),10.30(s,1H),8.35(s,1H),7.82(s,1H),7.56(s,1H),7.47–7.32(m,2H),7.25(s,1H),7.16(m,2H),6.59(s,1H),4.84(m,1H),3.94(s,3H),2.88(m,2H),2.69(m,4H),2.40(m,2H),2.04(m,2H),1.85(m,2H)。
LCMS m/z＝560.1[M+1]。
第四步:[1-[3-[4-[[[(2S)-2-[叔丁基(二甲基)硅基]氧-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基甲基]-2-氯-5-甲氧基-苯胺]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-[2-(4-氟苯基)-3-噻吩基]氨基甲酸酯(19D)
[1-[3-[4-[[[(2S)-2-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]-2-chloro-5-methoxy-anilino]-3-oxo-propyl]-4-piperidyl]
N-[2-(4-fluorophenyl)-3-thienyl]carbamate
Figure GDA0003244926510001022
将[1-[3-(2-氯-4-醛基-5-甲氧基-苯胺基)-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-[2-(4-氟苯基)-3-噻吩基]氨基甲酸酯(19C)(0.6g,1.07mmol)溶于甲醇(15mL)中，并加入5-[(1R)-2-氨基-1-[叔丁基(二甲基)硅基]氧基乙基]-8-羟基-1H-喹啉-2-酮(1H)(0.43g，1.28mmol)和无水氯化锌(0.58g，4.28mmol)，加完后45℃下反应1小时，之后加入氰基硼氢化钠(0.20g，3.21mmol)，45℃下反应2小时。将反应冷却至室温，加入水(100mL)，并用二氯甲烷(100mL×2)萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩后得到[1-[3-[4-[[[(2S)-2-[叔丁基(二甲基)硅基]氧-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基甲基]-2-氯-5-甲氧基-苯胺]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-[2-(4-氟苯基)-3-噻吩基]氨基甲酸酯(19D)，灰色固体，并直接做下一步。
LCMS m/z＝439.8[M/2+1]。
第五步：[1-[3-[2-氯-4-[[[(2R)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-5-甲氧基-苯胺]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-[2-(4-氟苯基)-3-噻吩基]氨基甲酸酯；二三氟乙酸盐(化合物19)
[1-[3-[2-chloro-4-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]-5-methoxy-anilino]-3-oxo-propyl]-4-piperidyl]N-[2-(4-fluorophenyl)-3-thienyl]carbamate ditrifluoroacetic acid
Figure GDA0003244926510001031
将上述[1-[3-[4-[[[(2S)-2-[叔丁基(二甲基)硅基]氧-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基甲基]-2-氯-5-甲氧基-苯胺]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-[2-(4-氟苯基)-3-噻吩基]氨基甲酸酯(19D)溶于四氢呋喃(10mL)，加入三乙胺三氢氟酸溶液(1ml)，室温反应6小时，减压浓缩除去溶剂，残留物缓慢加入饱和碳酸氢钠水溶液(100ml)，并用(二氯甲烷：甲醇＝50:1(v/v))的混合溶液(100mL×2)萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩后残留物用液相制备柱分离提纯(液相制备条件：C18反相制备柱，流动相为含0.05％TFA的去离子水(A)，含0.05％TFA的乙腈(B)，梯度洗脱A:B＝10％～55％，洗脱时间39min，流速1.0mL/min，柱温：40℃)，得到[1-[3-[2-氯-4-[[[(2R)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]-5-甲氧基-苯胺]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-[2-(4-氟苯基)-3-噻吩基]氨基甲酸酯；二三氟乙酸盐(化合物19)，白色固体(0.22g，两步产率24.47％)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.22(d,1H),7.78(s,1H),7.51(m,2H),7.33(d,1H),7.26(s,1H),7.13(t,4H),6.96(d,1H),6.57(d,H),5.14(m,1H),4.71(s,1H),3.74(s,5H),2.84(m,4H),2.77(m,2H),2.65(m,2H),2.41(m,2H),1.88(m,4H)。
LCMS m/z＝382.8[M/2+1]。
实施例20：[1-[3-[[5-[4-[[[(2R)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯胺基]-5-氧代-戊基]-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-(2-苯基-3-噻吩基)氨基甲酸酯；二三氟乙酸盐(化合物20)
[1-[3-[[5-[4-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]anilino]-5-oxo-pentyl]-methyl-amino]-3-oxo-propyl]-4-piperidyl]N-(2-phenyl-3-thienyl)carbamate；ditrifluoroacetic acid
Figure GDA0003244926510001041
第一步：N-(4-(1,3-二氧戊烷-2-基)苯基)-5-氯戊酰胺(20B)
N-(4-(1,3-dioxolan-2-yl)phenyl)-5-chloropentanamide
Figure GDA0003244926510001051
在4-(1,3-二氧戊烷-2-基)苯胺(20A)(2.20g，13.3mmol)中加入40mL二氯甲烷，冷却到0℃，加入三乙胺(3.37g，33.3mmol)，搅拌下滴加5-氯戊酰氯(2.58g，16.6mmol)，加完后室温搅拌反应1小时。加入水(80mL)，用二氯甲烷萃取(100mL×2)，用无水硫酸钠干燥、过滤，滤液减压浓缩得N-(4-(1,3-二氧戊烷-2-基)苯基)-5-氯戊酰胺(20B)，淡黄色固体(3.70g，产率97.9％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.95(s,1H),7.60(d,2H),7.37–7.30(m,2H),5.65(s,1H),4.02(dd,2H),3.95–3.87(m,2H),3.66(dd,2H),2.35(t,2H),1.80–1.67(m,4H)。
第二步：N-[4-(1,3-氧戊烷-2-基)苯基]-5-(甲基氨基)戊酰胺(20C)
N-[4-(1,3-dioxolan-2-yl)phenyl]-5-(methylamino)pentanamide
Figure GDA0003244926510001052
在封管中加入N-(4-(1,3-二氧戊烷-2-基)苯基)-5-氯戊酰胺(20B)(1.50g，5.29mmol)、20mL乙醇，加入碘化钾(175mg，1.06mmol)和40％甲胺水溶液(20.5g，264mmol)，加完并密封后，升温到100℃反应3小时。冷却后加入80mL水，二氯甲烷萃取(100mL×2)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤(50mL×2)，用无水硫酸钠干燥、过滤，滤液减压浓缩得N-[4-(1,3-氧戊烷-2-基)苯基]-5-(甲基氨基)戊酰胺(20C)，淡黄色固体(1.20g，产率81.6％).
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.92(s,1H),7.60(d,2H),7.37–7.31(m,2H),5.65(s,1H),4.06–3.98(m,2H),3.95–3.88(m,2H),2.46(t,2H),2.30(t,2H),2.25(d,3H),1.59(dd,2H),1.42(m,2H)。
LCMS m/z＝279.3[M+1]。
第三步：[1-[3-[[5-[4-(1,3-氧戊烷-2-基)苯胺基]-5-氧代-戊基]-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-(2-苯基-3-噻吩基)氨基甲酸酯(20D)
[1-[3-[[5-[4-(1,3-dioxolan-2-yl)anilino]-5-oxo-pentyl]-methyl-amino]-3-oxo-propyl]-4-piperidyl]N-(2-phenyl-3-thienyl)carbamate
Figure GDA0003244926510001061
将N-[4-(1,3-氧戊烷-2-基)苯基]-5-(甲基氨基)戊酰胺(20C)(1.86g,6.68mmol)溶于二氯甲烷(20mL)中，3-[4-[(2-苯基-3-噻吩基)氨基甲酰氧基]-1-哌啶基]丙酸(参考5A制备)(2.50g,6.68mmol)、1-乙基-3(3-二甲基丙胺)碳二亚胺盐酸盐(1.78g,10.0mmol)、1-羟基苯并三唑(1.35g,10.0mmol)和三乙胺(1.35g,13.4mmol)，加完后保持室温反应2小时。向反应液加入加入二氯甲烷(100mL)和水(20mL)，萃取分层，有机相用饱和氯化钠水溶液(20mL×1)洗涤，用无水硫酸钠干燥、过滤，滤液减压浓缩，残留物硅胶柱层析提纯(洗脱剂为二氯甲烷：甲醇(v/v)＝99：1～97:3)，得到[1-[3-[[5-[4-(1,3-氧戊烷-2-基)苯胺基]-5-氧代-戊基]-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-(2-苯基-3-噻吩基)氨基甲酸酯(20D)，白色固体(2.80g，产率66.1％)。
LCMS m/z＝635.3[M+1]。
第四步：[1-[3-[[5-(4-甲酰基苯胺基)-5-氧代-戊基]-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-(2-苯基-3-噻吩基)氨基甲酸酯(20E)
[1-[3-[[5-(4-formylanilino)-5-oxo-pentyl]-methyl-amino]-3-oxo-propyl]-4-piperidyl]N-(2-phenyl-3-thienyl)carbamate
Figure GDA0003244926510001062
将[1-[3-[[5-[4-(1,3-氧戊烷-2-基)苯胺基]-5-氧代-戊基]-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-(2-苯基-3-噻吩基)氨基甲酸酯(20D)(2.5g,3.94mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，加入对甲苯磺酸一水合物(3.00g,1.58mmol)，室温下反应2小时。加入水(30mL)，二氯甲烷(50mL×2)萃取，合并有机层，用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤(30mL×3)，无水硫酸钠干燥有机相，过滤，滤液减压浓缩，得到[1-[3-[[5-(4-甲酰基苯胺基)-5-氧代-戊基]-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-(2-苯基-3-噻吩基)氨基甲酸酯(20E)，淡黄色固体(1.90g，产率81.7％)。
LCMS m/z＝591.3[M+1]。
第五步：[1-[3-[[5-[4-[[[(2R)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯胺基]-5-氧代-戊基]-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-(2-苯基-3-噻吩基)氨基甲酸酯；二三氟乙酸盐
[1-[3-[[5-[4-[[[(2R)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1H-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]anilino]-5-oxo-pentyl]-methyl-amino]-3-oxo-propyl]-4-piperidyl]N-(2-phenyl-3-thienyl)carbamate；ditrifluoroacetic acid
Figure GDA0003244926510001071
将[1-[3-[[5-(4-甲酰基苯胺基)-5-氧代-戊基]-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-(2-苯基-3-噻吩基)氨基甲酸酯(20E)(2.00g,3.39mmol)和5-[(1R)-2-氨基-1-羟基-乙基]-8-羟基-1H-喹啉-2-酮(20F)(制备参US20110275623)(0.125g,0.374mmol)溶于10mL无水甲醇中，室温搅拌1小时，然后加入三乙酰氧基硼氢化钠(1.44g,6.77mmol)，再搅拌3小时。反应液用饱和碳酸氢钠调成碱性，用8％甲醇/二氯甲烷(v/v＝8:92,100mL)萃取，有机相用饱和氯化钠水溶液(50mL×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物用液相制备柱分离提纯(液相制备条件：C18反相制备柱，流动相为含0.05％TFA的去离子水(A)，含0.05％TFA的乙腈(B)，梯度洗脱A:B＝10％～55％，洗脱时间39min，流速1.0mL/min，柱温：40℃)，得到[1-[3-[[5-[4-[[[(2R)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1H-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯胺基]-5-氧代-戊基]-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]-4-哌啶基]N-(2-苯基-3-噻吩基)氨基甲酸酯；二三氟乙酸盐(化合物20)，白色固体(1.35g，产率38.9％)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.19(t,1H),7.66(d,2H),7.50(d,2H),7.47–7.37(m,4H),7.35(s,2H),7.25(d,2H),7.01(d,1H),6.61(dd,1H),5.37(t,1H),4.96(s,1H),4.24(s,2H),3.63(s,1H),3.45(dd,5H),3.18(s,4H),3.05(s,2H),2.95(s,3H),2.44(dd,2H),2.23(d,1H),2.06(d,2H),1.90(s,1H),1.69(d,4H)。
LCMS m/z＝398.2[M/2+1]。
生物测试例
测试例1：对人毒蕈碱M3受体的抑制活性
稳定表达人毒蕈碱受体3(hM3)和apo-Aequorin的CHO细胞(PerkinElmer，ES-212-AF)培养于含10％胎牛血清(FBS)(Gibico 10099-141)，400μg/mL G418(sigma G5013)和250μg/mL Zeocin(invivogen ant-zn-5p)的Ham’S F12培养基(Invitrogen12500-062)中，在37℃，5％CO2条件下培养，达到90－100％融合。以PBS/5mM EDTA冲洗分离细胞，离心收集，以含0.1％BSA(BOVOGEN BSAS 100)无酚红Ham’s F12培养基(Invitrogen 11039-021)重悬细胞并计数，调整细胞浓度至1×106cells/mL。将15mL细胞悬液加入50mL离心管，加入Coelenterazine-h(promega S2011)至终浓度为5μM。用锡纸包裹避光，于旋转摇床20℃下孵育4小时。再以0.1％BSA/无酚红Ham’s F12培养基稀释细胞至终浓度为5.0×105cells/mL，将细胞置于旋转摇床上低速转动，室温下孵育至少1小时。实施例化合物用DMSO配制为10mM母液，0.1％BSA/无酚红Ham’s F12培养基梯度稀释(log(M):-7,-8,-9,-10,-11)，加入96孔板，每孔50μL。每孔再加入50μL细胞悬液(25000细胞/孔)，室温孵育15分钟。将96孔板放入酶标仪(Perkin Elmer，Envision)，以酶标仪加样器每孔加入50L氯化乙酰胆碱(SigmaA6625)溶液，其浓度为112.92nM(hM3)，记录发光20秒，使用origin7.5计算和分析IC50。本发明化合物人毒蕈碱受体的抑制活性通过以上的实验进行测定，测得的IC50值见下表1。
表1测试化合物对人毒蕈碱M3受体的抑制活性结果
Figure GDA0003244926510001081
Figure GDA0003244926510001091
结论：本发明化合物对人毒蕈碱M3受体有显著抑制活性。
测试例2：对人肾上腺素能β2受体的激动活性
实施例化合物对人肾上腺素能受体的激动活性通过LANCE Ultra cAMP Assay测定。
稳定表达人肾上腺素能受体(hβ2)的CHO细胞(PerkinElmer，ES-034-CF)培养于含10％胎牛血清(FBS)(Gibico 10099-141)和250μg/mL Zeocin(InvivoGen ant-zn-5p)的MEM-alpha培养基(Invitrogen 12561-056)，在37℃，5％CO2条件下培养，达到90-100％融合后用LANCE Ultra cAMP Assay试剂盒(PerkinElmer TRF0263)检测实施例对cAMP的激动作用。以PBS/5mM EDTA分离细胞，离心收集，用Stimulation Buffer(1x HBSS,5mM HEPES,0.5mM IBMX,0.1％BSA,PH7.4)重悬细胞，调整细胞浓度至6x105 cells/mL。实施例的化合物用DMSO配制为10mM母液，以Stimulation Buffer梯度稀释后以每孔5μl加入384孔板。每孔再加入5μL细胞悬液(3000细胞/孔)，室温孵育30分钟后，每孔加入5μl 4x Eu-cAMPtracer工作溶液，然后每孔加入5μl 4x Ulight-anti-cAMP工作溶液，并在室温下孵育1小时。384孔板用酶标仪(Perkin Elmer，Envision)检测TR-FRET，使用origin7.5计算和分析EC50。本发明化合物对人肾上腺素能受体的激动活性通过以上的实验进行测定，测得的EC50值见表2：
表2测试化合物对人肾上腺素能β2受体的激动活性结果
Figure GDA0003244926510001092
Figure GDA0003244926510001101
结论：本发明化合物对β2肾上腺素能受体有显著激动活性。
测试例3：乙酰甲胆碱诱导的豚鼠支气管收缩抑制作用
8周龄全雄豚鼠购置于维通利华，适应3天后开始实验。待测化合物用83％无水乙醇+17％吐温80配制成0.6mM储备液。于给药前用水稀释500倍使用。给药前，使用小动物麻醉机(Matrx；VME2)给予5％异氟烷麻醉动物，麻醉时间为1.5～2分钟。待豚鼠麻醉后，将豚鼠固定于气管插管操作平台上，使用大鼠液体气溶胶给药套装(penn-century；MSA-250-R)气管内给药，每只豚鼠给药体积250μl。给药后，于4小时，24小时，使用全体积描计仪(DSI；GS220A12-R7B)测量豚鼠增强呼气间歇(enhanced pause；PenH)值。雾化给予3mg/mL乙酰甲胆碱(Mch)，雾化时间36秒，记录时间7分钟。计算PenH平均值。(参考文献J Pharmacol ExpTher 345:260-270.)。实验结果见表3。
PenH计算公式：PenH＝PEP/PIP*Pause；Pause＝(Te-Tr)/Tr
Te：呼气相时间(s)
Tr：松弛相时间(s)
PEP：呼气峰流速(mL/s)
PIP：吸气峰流速(mL/s)
表3化合物对乙酰甲胆碱诱导的豚鼠支气管收缩抑制作用结果
Figure GDA0003244926510001111
结论：本发明化合物对乙酰甲胆碱诱导的豚鼠支气管具有明显的收缩抑制，且部分化合物在给药24小时后，仍具有良好的支气管收缩抑制效果。

Claims (10)

1.一种通式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐：
Figure FDA0003244926500000011
其中：
R1各自独立的选自F、Cl、Br、或I；
环A选自
Figure FDA0003244926500000012
所述的
Figure FDA0003244926500000013
任选进一步被0至4个选自F、Cl、Br、I、甲基或乙基的取代基所取代；
W为-O-；
R2各自独立的选自F、Cl、Br、I、CF3或C1-4烷基；
R3选自C1-4亚烷基，所述亚烷基任选进一步被0至5个选自F、Cl、Br、或I的取代基所取代；
L选自
Figure FDA0003244926500000014
X1与R3直接相连；
A1和A4各自独立的选自亚苯基或
Figure FDA0003244926500000015
其中所述的亚苯基任选进一步被0至5个R7取代；
R7选自F、Cl、Br、I或C1-4烷氧基；
A2和A3各自独立选自C1-6亚烷基，所述亚烷基任选进一步被0至5个选自F、Cl、Br、或I的取代基所取代；
X1和X2各自独立的选自键、-C(＝O)NRx-、或-OC(O)-；
Rx各自独立选自H或者C1-4烷基；
R4选自C1-4亚烷基，所述亚烷基任选进一步被0至5个R4a取代；
R4a选自F、Cl、Br、或I；R5、R6各自独立的选自H；
a选自0、或1；
b选自0；
n、m、p或q各自独立的选自0或1；
条件是L不为键；
B选自
Figure FDA0003244926500000021
2.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，所述的化合物选自通式(II)或通式(III)所示的化合物：
Figure FDA0003244926500000022
A5选自亚丁基；
A1和A4各自独立的选自亚苯基或
Figure FDA0003244926500000023
所述的亚苯基任选进一步被0至4个R7取代；
X1和X2各自独立的选自键或-C(＝O)NRx-；
R3选自亚甲基、亚乙基、亚丙基或亚丁基，所述的亚甲基、亚乙基、亚丙基或亚丁基任选进一步被0至5个选自F、Cl、Br、或I的取代基所取代；
R7选自F、Cl、Br、甲氧基、或乙氧基；
Rx各自独立的选自H、甲基、乙基或者丙基；
R4选自亚甲基、亚乙基、亚丙基或亚丁基，所述亚甲基、亚乙基、亚丙基或亚丁基任选进一步被0至5个选自F、Cl、Br、或I的取代基所取代；
其余基团的定义与权利要求1所述一致。
3.一种化合物或其药学上可接受的盐，其中，所述的化合物选自如下结构之一：
Figure FDA0003244926500000031
Figure FDA0003244926500000041
4.一种药物组合物，所述的药物组合物含有治疗有效剂量的根据权利要求1～3中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的赋形剂；所述的组合物还可进一步包括一种或多种其他治疗剂。
5.根据权利要求4所述的药物组合物，所述的赋形剂选自载体、稀释剂、佐剂或媒介物。
6.根据权利要求4或5所述的药物组合物，其中所述其他治疗剂选自PDE4抑制剂、蕈毒碱受体拮抗剂、皮质类固醇和β-肾上腺素能受体激动剂中的一种或多种。
7.权利要求1～3任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，或者权利要求4～6任一项所述的药物组合物在制备用于治疗气道阻塞性疾病的药物中的应用。
8.根据权利要求7所述的应用，所述的气道阻塞性疾病选自哮喘、慢性阻塞性肺疾病或支气管炎。
9.一种通式(I-M)所示的化合物或者其立体异构体：
Figure FDA0003244926500000042
Rm选自H、氨基保护基、-R3-COOH、-R3-COOC1-4烷基、
Figure FDA0003244926500000043
Figure FDA0003244926500000051
Rn选自-CHO、
Figure FDA0003244926500000052
C(OC1-4烷基)2或
Figure FDA0003244926500000053
P选自羟基保护基；
R1、R2、R3、R4、R5、R6、B、X1、X2、A1、A2、A3、A4、B、a、b、n、m、p和q的定义与权利要求1所述一致。
10.根据权利要求9所述的化合物或者其立体异构体，该化合物选自如下化合物之一：
Figure FDA0003244926500000054
Figure FDA0003244926500000061
Figure FDA0003244926500000071
Figure FDA0003244926500000081
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