TWI653237B

TWI653237B - 磷酸鉑（ｐｈｏｓｐｈａｐｌａｔｉｎ）化合物之合成與純化方法及其用途

Info

Publication number: TWI653237B
Application number: TW106122720A
Authority: TW
Inventors: 韋恩Ｄ路克; 史蒂芬約斯特
Original assignee: 弗斯普萊汀治療有限責任公司
Priority date: 2012-05-24
Filing date: 2013-04-01
Publication date: 2019-03-11
Also published as: EP2855496B1; CY1122316T1; EP3202769B1; PT2855496T; US20140288321A1; CN104540839A; SI2855496T1; HUE032197T2; TW201741326A; US8846964B2; EP2855496A1; HRP20170416T1; US20140024848A1; PL3202769T3; IN2014KN02722A; ES2751668T3; RS55806B1; LT2855496T; LT3202769T; CN106967124A

Abstract

本申請案係揭示磷酸鉑化合物之製備及純化的新穎方法與製程。該等合成方法及純化方法的改善包括，但不限於：以高品質及良好產率有效率且再製性地大規模製造這些有用的藥劑。

Description

磷酸鉑(PHOSPHAPLATIN)化合物之合成與純化方法及其用途

有關申請案介紹

1]本申請案係主張屬於在2012年5月24日申請之美國專利臨時申請案第61/651,200號之35 U.S.C.§ 119(e)的權利，其全文在此併入本案以為參考資料。

發明領域

本申請案係有關於製備可作為藥劑之磷酸鉑(特別是單體性焦磷酸鉑化合物)的合成方法、與用於這些焦磷酸鉑化合物之再結晶及純化的方法。

發明背景

鉑錯合物，特別是以二胺為基礎的鉑錯合物，諸如順鉑(cisplatin)、卡鉑(carboplatin)、及奧沙利鉑(oxaliplatin)，為抗癌劑的重要種類，其等業經廣泛地用於治療癌症，諸如卵巢癌、睪丸癌、小細胞肺癌、及結腸直腸癌。

隨著癌(例如卵巢癌)之順鉑/卡鉑抗藥性增加，在工業內業經努力以更有效之低抗藥性化療劑(例如草酸鉑、磷酸鉑及/或焦磷酸鹽錯合物)取代順鉑/卡鉑。然而，一直到最近，磷酸鉑或焦磷酸鹽錯合物才在其等作為癌治療劑之潛力上受到重視，其部份原因乃這些錯合物容易形成不可溶磷酸鹽橋聯二核錯合物。雖然某些二核磷酸鉑錯合物據稱具有優異抗癌性質，但是其等之應用以及其等的合成之進一步解釋受到限制，因為這些錯合物在水性溶液用具劣可溶性。雖然某些單體性焦-及三磷酸鉑錯合物在本項技藝中係已知，但是其等並不適於藥學組成物，因為在一般的酸性溶液內其等會進行磷酸鹽水解以變成不可溶二核產物(見Bose等人，Inorg.Chem.,1985,24,3989-3996；及美國專利第7,342,122號與頒予Odani等人之WO 2005/000858，其等皆在此併入本案以為參考資料)。

美國專利第7,700,649號及第8,034,964號(皆頒予Bose，其等皆併入本案以為參考資料，亦即該等“Bose專利”)揭示包含新種類之鉑錯合物(亦即單體性胺或二胺焦磷酸鉑錯合物)的合成方法及處理方法，Bose專利中所揭的該等焦磷酸基-鉑複合物為圖1內所示的胺或二胺焦磷酸鉑錯合物。這些錯合物經發現可有效地用以治療各種癌，其包括順鉑及卡鉑抗藥性的癌。然而，直到本發明為止，這些化合物的合成仍然無效率，且適於這些錯合物的大規模製法尚未經報告。各種因素，例如該等單體性錯合物對於合成條件的靈敏性及在某些條件下其等形成二核類似物的傾向，使這些單體性錯合物的大規模製造及純化成為一大挑戰。

發明概要

本發明申請案係揭示一可應付以上之挑戰的發明。

本發明之一方面係提供適於大規模製造之磷酸鉑化合物的新穎製法。該新方法可克服許多技術上的挑戰且可以以多克、多公斤或較大規模合成並離析單體性錯合物。

在一實施例中，該新穎方法係使用一水可混溶之溶劑以作為濕潤劑，其可以使該反應以高於現有方法所使用的濃度45-50倍之濃度進行。在另一實施例中，該反應係於一較高的溫度(較佳為60℃，而該等Bose專利中係使用40℃)下進行。在另一實施例中，使用一脫色暨絮凝劑(較佳為活化碳)處理該反應混合物以移除較少的著色雜質及其它未經溶解的組份可在產物離析前移除不可溶的過量焦磷酸鹽且因此可去除對於該反應之濃度的上端之限制。由於焦磷酸及/或其鹽的沉澱，所以在該文獻內會碰到此種限制。在本發明之另一實施例中，在該晶化步驟內之pH調整前，該反應混合物的冷却會阻滯產物的分解。在本發明之另一實施例中，就產物沉澱而言，更濃之酸的使用(例如2N取代1N硝酸)可更快速地進行酸添加，因此可減少該等化合物暴露於該酸環境下的時間，且因此可減少與酸有關的雜質之形成。本較高的酸濃度亦可減少在該產物沉澱步驟期間之該反應混合物的稀釋，且因此可減少在該反應母液內之產物的損失。

在另一方面中，本發明係提供一再晶化並純化單體性胺或二胺焦磷酸鉑錯合物的新穎方法。該新方法可提供高品質及良好回收率之呈結晶狀固體的該等鉑錯合物，因此可以以精確且定量方式研究該等錯合物的性質，其包括，但不限於其等之療效。

在另一方面中，本發明提供在“一滴式”及/或“一鍋式”製程內製造高品質及良好離析產率之單體性胺或二胺焦磷酸鉑錯合物或類似物且不需進一步純化步驟的方法。該方法業經成功地進行以製造呈98.4%(w/w)純度的該(R,R)-DACH-2產物且不需一另外純化步驟，其製造規模為先前報告的規模之1,000倍或更大。

在另一方面中，本發明亦提供根據文中所述的該等實施例中之任一者而製成或純化的單體性焦磷酸鉑。文中所揭示之新穎合成法及結晶/再結晶方法可克服與先前所述的方法有關之許多問題且可提供許多優於現有方法的特性。值得注意的是，文中所揭示的方法尤其適於再製性且具商業規模地製造高品質及良好產率的鉑錯合物。本發明之這些及其它方面可藉參考以下圖式、實施方式及申請專利範圍而更清楚地瞭解。

圖1表示該等Bose專利內所揭示之可作為抗癌劑之數種重要焦磷酸鉑錯合物的結構。(A)順式-二胺-(焦磷酸二氫)鉑(II)(“am-2”)；(B)順式-二胺-反式-二羥基(焦磷酸二氫)鉑(IV)(“am-4”)；(C)1,2-乙二胺-(焦磷酸二氫)鉑 (II)(“en-2”)；(D)1,2-乙二胺-反式-二羥基(焦磷酸二氫)鉑(IV)(“en-4”)；(E)1,2-環乙二胺-(焦磷酸二氫)鉑(II)(“dach-2”)；及(F)1,2-環己二胺-反式-二羥基(焦磷酸二氫)鉑(IV)(“dach-4”)。

圖2闡明單體性胺或二胺焦磷酸鉑(II)錯合物的一般合成圖解以及在(R,R)-DACH-2之合成法內之反應期間所形成之數種可能雜質的結構。

較佳實施例之詳細說明

單體性二胺(焦磷酸)鉑(II)錯合物的合成及離析具挑戰性，因為其等可輕易地進行反應以形成該等對應的二核鉑錯合物(見美國專利第4,234,500號及WO 2009/021082)。例如，在DACH-Pt-Cl₂或DACH-Pt-(OH₂)₂的存在下，(R,R)-DACH-2可進行反應以形成該對應非所欲二核鉑錯合物、或下述之該“二聚物”[{Pt(C₆H₁₄N₂)}₂P₂O₇]：該(R,R)-DACH-2配合水合作用的速率隨著減少的pH而增加。因此，於低pH下，某一(R,R)-DACH-2水解可形成該經配合水合的化合物DACH-Pt-(OH₂)₂，其接著可以在該溶液內與(R,R)-DACH-2反應以形成該二聚物。本發明可克服本挑戰。

在以下章節中，本發明之發明者將揭示本挑戰業經克服的方法，並討論與現有方法有關的其它問題業經解決的方法。在本揭示文中，環己二胺(焦磷酸)鉑(II)(“dach-2”)係作為一闡明性實例，其具有3種立體異構物，亦即順式異構物“順式dach-2”、及兩反式產物鏡像異構物“(R,R)-dach-2”及“(S,S)-dach-2”，其中“反式-”、“順式-”、“(R,R)-”、及“(S,S)-”係指如熟悉本項技藝者已知的在該1,2-環己二胺(亦即1,2-二胺基己烷、或“DACH”)配位基上之這兩胺基的構形。特別是，在本揭示文中，該申請者所稱之“(R,R)-DACH-2”錯合物係指該“(R,R)-dach-2”鏡像異構物。這些錯合物亦可以由可被熟悉本項技藝者所瞭解的其它類似名稱表示。雖然僅(R,R)-DACH-2作為一闡明性實例，但是本發明應該同樣適用於具類似結構的其它焦磷酸鉑錯合物，其包括，但不限於如熟悉本項技藝者可瞭解之在該Bose專利內所揭示的彼等錯合物。

在一方面中，本發明提供製造一單體性焦磷酸鉑錯合物的方法，該方法包含以下步驟：在一含水及濕潤劑的溶劑系統內混合二鹵化鉑化合物及一焦磷酸鹽，其中該二鹵化鉑化合物與該焦磷酸鹽鹽可進行一反應以形成所欲單體性焦磷酸鉑錯合物；從該反應混合物中沉澱(晶化)該單體性焦磷酸鉑錯合物；並從該反應混合物中離析該單體性鉑錯合物。且較佳在本發明內未必添加一濕潤劑以在該更濃的反應條件下進行該反應。該產物可藉過濾或離心法、或熟悉本項技藝者已知的任何其它方法而離析。該經離析的產物係藉水及/或一有機溶劑(諸如低碳烷基醇，特別是甲醇、乙醇、或異丙醇)而清洗。

在一實施例中，該方法進一步包括將該反應混合物之pH調整至約2以下並在離析該單體性焦磷酸鉑(II)錯合物前，將該反應混合物冷却至室溫以下的溫度。

在另一實施例中，雖然通常未必在本發明中，該方法可進一步包括在該沉澱(晶化)步驟進行前，藉蒸餾出該溶劑(群)之一部份而濃縮該反應混合物。

在另一實施例中，係藉添加一必要量之礦酸至該反應混合物而調整pH。在某些實施例中，可有利地添加該反應混合物至一酸內以更快速地降低該pH。該礦酸較佳為濃度自約1至約2N、較佳約2N的硝酸。不想受限於任何特定理論，該使用一更濃的硝酸之方法的優點包括酸的更快添加，因此可減少該等化合物暴露於該酸環境下時間，且據此，可減少該等酸關連性雜質之形成。本較高的酸濃度亦可減少在該產物沉澱步驟期間的該反應混合物之稀釋，且因此可減少在該反應母液內之產物的損失。根據本揭示文，熟悉本項技藝者可調整酸及/或其濃度的選擇以獲得最佳結果。例如在晶化期間，尤其在早期階段中，可使用一濃硝酸以調整pH，但是就其它原因(諸如安全、黏度或由於混合結果之熱的熱控制、及該最終pH之微調)而言，更稀之濃度，諸如2N及/或1N，可較佳。

在另一實施例中，用於該反應之濕潤劑為水可混溶之有機溶劑。

在另一實施例中，用於該反應之濕潤劑為低碳烷基醇、較佳為C₁-C₄烷基醇、更佳為甲醇。

在另一實施例中，該反應係於一高溫下進行。就闡明目的而言，雖然不想如此受限，可以於一在介於30-70℃間、較佳介於45-65℃間之範圍內的溫度下進行用於製造(R,R)-DACH-2的反應。在純水中，該反應可以於甚至更高的溫度下進行，因此其可以使反應時間更短。經由添加一醇系濕潤劑，在某些實施例中，可較佳於回流下進行該反應，其可以得到最快速的反應動力且可以以大規模(特別是商業規模)操作輕易地進行操作控制。如熟悉本項技藝者可瞭解，該較佳溫度係取決於該基質的安定性及欲製成之產物。在本方面中之任何合理的變異皆屬於本發明之範圍。

在另一實施例中，一旦於約20℃或在約20℃以下的溫度下，將該反應混合物之pH調整至約2或約2以下，有時，該二鹵化鉑化合物的濃度較佳可致使鉑之至少約65%呈該單體性焦磷酸鉑錯合物形式直接從該反應混合物中沉澱出來。

在另一實施例中，一旦於約20℃或在約20℃以下的溫度下，將該反應混合物之pH調整至約2或約2以下，有時，該二鹵化鉑化合物的濃度更佳可致使鉑之約75-85%呈該單體性焦磷酸鉑錯合物形式直接從該反應混合物中沉澱出來。

根據本揭示文，熟悉本項技藝者可根據特定需求，藉均衡該等參數，諸如反應物的濃度、及晶化pH、溫度、及時間等，而使該等反應及晶化條件最佳化以獲得所欲產率及可接受品質之單體性焦磷酸鉑錯合物，特別為文中所明確揭示的錯合物。

在另一實施例中，係於一濃度之該二鹵化鉑化合物下進行該反應，因此不需要或極少需要另外濃度之該溶劑即可離析該產物。一反應之較佳濃度可取決於該等試劑之溶度及該欲製成之產物，其亦可取決於如熟悉本項技藝者可瞭解的水與該有機濕潤劑間的比例。因此，用於製造與(R,R)-DACH-2類似的特定產物之任何位合理的變異及濃度皆可屬於本發明之範圍。

在另一實施例中，該方法進一步包括添加一脫色劑，並在該沉澱或晶化步驟進行前過濾該脫色劑以及其它未經溶解的組份。本項技藝中已知的任何脫色劑可適於本發明，其限制條件為在該等反應條件下，其等具惰性及安定性。此脫色劑之一較佳實例為活化碳。

在另一實施例中，該單體性焦磷酸鉑錯合物含有兩獨立選自以下的胺配位基：NH₃、經取代或未經取代之脂肪族胺、及經取代或未經取代之芳香族胺。

在另一實施例中，該單體性焦磷酸鉑錯合物含有一二胺配位基。

在另一實施例中，該二胺配位基係選自經取代或未經取代之脂肪族1,2-二胺及經取代或未經取代之芳香族1,2-二胺。

在一較佳實施例中，該二胺配位基為一選自1,2-乙二胺及環己-1,2-二胺之脂肪族1,2-二胺。

在另一方面中，本發明提供純化一單體性焦磷酸鉑錯合物的方法，其包含在一緩衝劑內溶解該單體性焦磷酸鉑錯合物並從該緩衝劑內沉澱(晶化)該錯合物。

在一實施例中，該緩衝劑為具有一pH在6-9的範圍內之碳酸氫鹽緩衝劑。

在另一實施例中，該純化方法進一步包括以下步驟：加熱該單體性焦磷酸鉑錯合物，直到其溶解為止，以一脫色劑處理該溶液，過濾該溶液以移除該脫色劑及其它未經溶劑之組份，並冷却該濾液以晶化該錯合物。

在另一實施例中，該脫色劑為活化碳。

在另一實施例中，該緩衝劑溶液進一步包含一焦磷酸鹽。

在根據上述方法中之任一者的另一較佳實施例中，該焦磷酸鉑(II)錯合物具有下式(I)或(II)：或其鹽，其中R¹及R²各獨立選自NH₃、經取代或未經取代之脂肪族胺、及經取代或未經取代之芳香族胺；且其中R³係選自經取代或未經取代之脂肪族或芳香族1,2-二胺。

在另一較佳實施例中，式(I)內之R¹及R²各獨立選自NH₃、甲胺、乙胺、丙胺、異丙胺、丁胺、環己烷胺、苯胺、吡啶、及經取代之吡啶；且式(II)內之R³係選自乙二胺及環己二胺。

在一更佳實施例中，其中該鉑錯合物(II)係選自：及其等之鹽及混合物。

在另一方面中，本發明提供一在一“一滴式”製程中製造高品質及良好離析產率之單體性胺或二胺焦磷酸鉑錯合物的方法。在一實施例中，該方法包含以下步驟：(a)在一水性溶液內使一胺或二胺鹵化鉑錯合物與一無機焦磷酸鹽反應；(b)以活化碳處理該反應混合物；(c)藉過濾而移除該活化碳及在該反應期間所形成的其它固體雜質；及(d)酸化該濾液以沉澱出該等鉑錯合物。根據該等反應條件及所欲產物的控制與用途，該“一滴式”製程可以製造足量之所欲產物且不需進一步純化，諸如再結晶步驟。

在另一實施例中，有時，該活化碳較佳並未直接添加至該反應混合物內，而係以不同方式使用、或完全由一相等的技術取代。例如其可藉一含一過濾介質(諸如一含活化碳之濾墊)之在線(inline)濾筒取代，除了提供其它優點外，其可簡化操作，特別是用於該反應器之清潔方法。

在另一實施例中，有時，使該反應混合物通過一含過濾介質(諸如含活化碳的濾墊)之在線濾筒送達第二清潔容器，藉此在該濾筒內捕獲於該反應期間所形成的非所欲固體及雜質，且該經過濾反應混合物可在該第二清潔槽內經酸化以得到所欲產物。可經由將該反應器加壓或使用一泵、或藉熟悉本項者已知的任何其它技術而進行本過濾方法。

在另一實施例中，有時，較佳經由一泵而迫使該反應混合物通過一含過濾介質(諸如含活化碳濾墊)之在線濾筒，且使該濾液再循環回該反應容器。一旦使一預定體積之液體進行循環，當在該反應期間所形成的非所欲固體及雜質本質上係藉該濾筒而去除時，該經過濾反應混合物係在該反應容器內經酸化以得到所欲產物。本操作模式的優點為可使用相同反應容器以“一鍋式”方法製造所欲產物，因此可簡化操作並節省與第二容器之使用有關的成本。

如一般技術者可瞭解，在任何其它合成法及製程中，自一特定反應或製程批所製成的產物品質可受許多條件(例如反應物的品質、反應條件、及控制)的影響。當文中所述之該等“一滴式”及/或“一鍋式”方法中之任一者所製成的所欲產物並不符合一特定應用的品質規格時，可藉如文中所述之再結晶方法而進一步純化所獲得的此種產物。

因此，在另一實施例中，有時，根據如文中所述之任何實施例的該等方法較佳進一步包含一可純化所獲得該粗產物的再晶化步驟。此再晶化步驟可不僅用以純化所獲得該產物，而且亦可用以獲得呈特殊結晶狀形式(其包括，但不限於所欲多形體(群)及/或一特定所欲粒度範圍或分佈)之最終產物。此及任何其它相關方法可完全為一般技術者所知，且因此其等之任何變體皆涵蓋於本揭示文內。

在另一方面中，本發明提供根據上述實施例中之任一者而製成或純化的單體性焦磷酸鉑錯合物。根據我們所知，本發明係首次提供能以可以在臨床前期及臨床研究中使用該等化合物的規模獲得高品質結晶狀形式及良好產率之本類型的單體性磷酸鉑化合物(其闡明性實例為(R,R)-DACH-2)之可再製方法。這些磷酸鉑化合物為可用於治療多種癌(其包括結腸直腸癌及肺癌，且特別為順鉑抗藥性卵巢癌)的藥物適合物。

在另一方面中，本發明提供製備一單體性焦磷酸鉑(IV)錯合物或其鹽的方法，其包含：(1)製備一根據文中所揭示之實施例中之任一者的單體性焦磷酸鉑(II)錯合物；(2)使用氧化劑(諸如過氧化氫)氧化(1)中所製成之該單體性焦磷酸鉑(II)錯合物；及(3)離析該單體性焦磷酸鉑(IV)錯合物。

在一實施例中，該單體性焦磷酸鉑(IV)錯合物具有下式(III)或(IV)：或其鹽，其中R1及R2各獨立選自NH₃、經取代或未經取代之脂肪族胺、及經取代或未經取代之芳香族胺；且其中R3係選自經取代或未經取代之脂肪族二胺、及經取代或未經取代之芳香族二胺。

在一較佳實施例中，該單體性焦磷酸鉑(IV)錯合物具有式(IV)，其中R³為1,2-乙二胺(“en-4”)或環己-1,2-二胺(“dach-4”)。

在另一方面中，本發明提供藉一根據所述實施例中之任一者的方法而製成或純化之單體性焦磷酸鉑(II)或(IV)錯合物、或其藥學上可接受鹽，且其具有一至少96.0%(w/w)或至少98.0(w/w)的純度。

在另一方面中，本發明提供該可用於治療一對於一或多種選自順鉑、卡鉑、及奧沙利鉑之抗癌藥劑具抗藥性之癌的單體性焦磷酸鉑(II)或(IV)錯合物、或其藥學上可接受鹽，其係藉一根據所述之實施例中之任一者的方法而製成或純化。

在另一方面中，本發明提供一可用於治療一對於一或多種選自順鉑、卡鉑、及奧沙利鉑之抗癌藥劑具抗藥性之癌的單體性焦磷酸鉑(II)或(IV)錯合物、或其藥學上可接受鹽之組成物，其係藉一根據所述之實施例中之任一者的方法而製成或純化。

在一較佳實施例中，該抗藥性癌症係選自卵巢癌、睪丸癌、小細胞肺癌、及頭與頸癌。文中所揭示的該新穎合成法及再結晶方法可克服許多與先前報告的方法有關的問題，且可提供優於現有方法的許多好處。例如，首先，其可以以45-50倍的係數增加該反應濃度且可以使該反應溫度自約40℃增至約60℃，其可改善該反應的效率。其次，添加水可混溶之有機溶劑至該反應混合物可改善該起始物質(亦即二鹵化鉑錯合物)的濕潤性，且可降低該溶劑的凝固點，其可以使用於產物離析的最終溫度較低且可增加產率。第三，在產物再結晶反應前，使用一吸附劑(諸如脫色暨絮凝劑，較佳為活化碳)處理該反應混合物以移除較少的著色雜質及其它未經溶解之組份的步驟可在產物離析前移除不可溶的過量焦磷酸鈉並因此去除由於未經反應之焦磷酸鈉的沉澱所導致的對於該反應之濃度上限；反之，在該文獻方法內，該反應濃度係受限於該未經反應之焦磷酸鈉試劑的潛在沉澱作用。第四，在用於結晶反應之pH調整前，冷却該反應混合物可防止產物分解。而且，使用一更濃的酸(2N而不是1N硝酸)以調整用於產物沉澱的pH可以使酸添加的速度更快且可減少在產物沉澱步驟期間該反應混合物的稀釋，且因此可減少該過濾母液內之產物的損失。最後，本發明已證明可以以“一鍋式”或“一滴式”方法製造高品質及良好產率且不需進一步純化步驟的單體性胺或二胺焦磷酸鉑化合物。

如文中使用，該名詞“水可混溶之有機溶劑”係指於室溫下可以與水完全混溶的有機溶劑。水可混溶之有機溶劑的實例為一般技術者所熟知。其等包括，但不限於：低碳烷基醇、低碳烷基二醇(例如乙二醇、1,3-丙二醇等)、酮(丙酮、2-丁酮等)、乙腈、四氫呋喃、乙酸等。

如文中使用，該名詞“低碳烷基醇”係指具有1至8個、較佳1至6個、且更佳1至4個碳原子的脂肪族醇，其包括，但不限於：甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇(異丙醇)、正-丁醇、異-丁醇、第三丁醇等。

如文中使用，該名詞“沉澱”、“晶化”等係指一旦一條件或條件群(諸如濃度、pH、及/或溫度)改變時，一其中一固體、較佳為一所欲產物係從溶液中沉澱出來的步驟。如熟悉本項技藝者可知，當一產物係呈結晶狀固體沉澱出來時，該名詞“沉澱”的意義本質上如同該名詞“晶化”。因此，兩名詞有時可交互使用。

如文中使用，該名詞“高純度”、“高品質”等意指與具已知純度之參考標準物比較，如藉HPLC而分析，一產物具有一至少96.0、較佳至少98.0、更佳至少99.0、且最佳99.5%(w/w)的純度。此種參考標準物的純度較佳為至少99.0、更佳為至少99.5、且最佳為至少99.0%(w/w)。製造此種參考標準物(例如藉多次再結晶反應)以藉使用各種分析儀器及方法而測定其純度，並藉使用一有效方法(例如HPLC分析法)比較一產物與參考標準物而測定該特定產物的純度之方法為一般技術者已知的技術。

當施用該名詞“約”至一參數(諸如pH及溫度)時，其表示該參數可以有±10%不同，較佳在±5%範圍內。例如一“約2”之pH應該被詮釋為在1.8至2.2、較佳1.9至2.1的範圍內。當施用該名詞“約”至一以百分率表示的純度數據時，其應被詮釋為可遵照捨入及科學的有效數字的可接受慣例。例如以96%表示的純度意指其涵蓋一大於或等於95.5%純度且小於或等於96.49%純度之任何試樣的純度範圍。如熟悉本項技藝者可瞭解，當一參數並不具關鍵性，一數字通常僅用於闡明而非用於限制。

如文中使用，該名詞“一”、或“該”兼代表單數及複數形。一般而言，當使用一名詞之單數或複數形時，其兼表示該名詞的單數及複數形。

比較性文獻方法及條件

在所報告之順式-1,2-環己二胺-(焦磷酸)鉑(II)(“順式-dach-2”)的合成法內，例如係在使用順式-1,2-環己二胺-二氯-鉑(II)(0.100克，0.26毫莫耳)作為可以與焦磷酸鈉十水合水(0.400克)進行反應之該起始物質的該反應中，使用250毫升水以作為溶劑。必需於48℃在真空下蒸發該溶劑之約98%，繼而經硝酸酸化以自該產物沉澱出來。

直到本發明在文中揭示為止，單體性二胺焦磷酸鉑錯合物的最成功合成法為藉，例如Bose在WO 2011/153365A1內所表示的方法，該專利案在此併入本案以為參考資料。一般合成圖解及(R,R)-DACH-2之合成法中的數種可能雜質之結構係描述在圖2中。Bose揭示dach-2的合成法，其係於一自約35至約45℃之範圍內的溫度下及於一自約6至約9之範圍內的pH下，使(1,2-環己二胺)-二氯鉑與過量焦磷酸鈉反應。經由使用所報告的方法，本發明者僅能獲得約96.3%純度(HPLC區域)之目的產物，其產率僅介於約6.3與29.8%之間，且可得到一綠色固體，其賦色表示雜質的存在。就研究或商業目的而言，這些實驗突顯本方法所帶來的難題，以及對於文中所揭示的進一步改善之需求。

將該水性反應混合物濃縮至焦磷酸鹽的沉澱物不會形成的程度。然後可藉添加一酸(諸如1N硝酸)而使該反應混合物之pH快速降至小於2，繼而使其冷却，獲得所欲焦磷酸鉑錯合物的沉澱物。

因此，除了別的以外，該文獻方法突顯以下重要的條件：(1)使用水作為該反應及晶化溶劑、(2)稀釋反應、(3)在沉澱前，於減壓下移除大部份溶劑(水)、及(4)使該濃反應混合物快速酸化以沉澱該產物。甚至在最佳化條件下，現有方法會得到易變的產率及品質之所欲產物。就所報告而言，該等焦磷酸鉑錯合物業經僅以毫莫耳濃度(mM)規模(例如以0.1克DACH-Pt-Cl₂開始之0.263mM規模)製成，且就該等化合物在臨床前期或臨床研究中之一般應用而言，該產率尚未令人滿意。

在一製造多克數量之(R,R)-DACH-2的努力嘗試中，在Inorg.Chem.,47,7972(2008)內之用於合成外消旋DACH-2的實驗方案係使用0.8克DACH-Pt-Cl₂開始，以8倍的係數按比例增加。係以一式兩份的方式重複該方案(實例2)。根據實例1合成該起始物質反式-(1R,2R)DACH-Pt-Cl₂ (亦即在本文件的其餘部份中稱為DACH-Pt-Cl₂)。

簡單的將用於合成該外消旋類似物之原有文獻方法按比例增加至以8之係數合成(R,R)-DACH-2會突顯以下數種問題：該方案不適於使數拾克之產物(其遠低於拾幾至100多公斤之產物)的製造按比例增加。例如，首先該反應非常稀釋。根據理論產率，其可能需要78,349升(20,697加侖)之初反應體積才能製造10公斤產物。其次，產物離析必需藉減壓蒸餾(其係為很耗能且耗時的方法)才能移除大部份(98%)該初溶劑。第三，該反應僅能得到低產率之該產物。而且，該經離析之產物通常會被非所欲之含Pt副產物污染。

除了別的以外，本發明者已發現可以於高很多的濃度下有利地進行焦磷酸鉑錯合物的合成。

於較高濃度下之反應

該文獻建議該合成法必需在一均質溶液內進行才能使非所欲副反應減至最少。特別是，由於咸信該起始物質必需完全溶解，所以該等反應全都在先前所述之很稀的條件下進行。

簡單地使先前所述之反應濃度增加45至50倍的係數會導致大量未經溶解的起始物質(DACH-Pt-Cl₂)的初存在。本物質之濕化性質低劣，所以很難混合且，因此，會產生不一致的反應及產率。本發明者現在已發現可藉添加一水可混溶性溶劑以作為濕潤劑而處理這些問題。水可混溶性醇較佳且根據(R,R)-DACH-2在包括醇類之各種溶劑內的溶度(表1)，甲醇經選定為最佳溶劑。醇類之添加可降低水的凝固點，因此可以使操作者於比僅使用水作為溶劑時的溫度還低之溫度下進行該反應。將該初反應濃度增加45-50倍之係數可完全免除在產物離析前濃縮該反應混合物的必要。本發明因此可去除與先前合成法有關的所有問題並可以以很有效率且合乎經濟的方式進行(R,R)-DACH-2的可再製合成法。該新穎製法適於該化合物的大規模製造且可以得到高產率及品質的產物。最重要的是，該新穎製法可排除藉移除約98%該溶劑(其先前係在產物離析前經蒸餾)而濃縮該反應混合物的必要。

在某些實施例中，本發明之發明者亦已發現更有利的是於該反應開始時以一份的方式添加所有該起始物質DACH-Pt-Cl₂，而不是在一段時間內以數份添加(如在實例3與4間之比較所闡明)。因此，本發明者已意外地發現於高濃度之DACH-Pt-Cl₂下之該反應可產生比習知想法還高的產率及品質之所欲產物。該反應速率與反應濃度、反應溫度及焦磷酸鈉化學計量有關。雖然實例5表示可使用僅2倍過量的焦磷酸四鈉以獲得良好產率，但是較佳使用3.2倍過量以獲得更快的反應時間(實例6及7)。

所提供之該等實例決非具概括性，而係僅用以闡明化學計量及反應溫度對於該反應之總速率的影響。因此，本發明涵蓋使用少量的焦磷酸四鈉(例如僅1莫耳當量)之類似反應。

產物溶度的測定

為了有助於瞭解本發明之效用，以重量測定法測定(R,R)-DACH-2在各種有機溶劑中之溶度。據此，使200毫克(R,R)-DACH-2懸浮在5毫升純水中，於環境溫度下攪拌30分鐘，繼而加熱至40℃並攪拌30分鐘。過濾該懸浮液，於40℃下真空乾燥，並從經回收物質之重量測定於40℃下該(R,R)-DACH-2的溶度。

控制未經沉澱之焦磷酸鹽的沉澱

該文獻明確地建議在產物離析前必需進行該反應混合物的濃縮，其方式可避免形成焦磷酸鹽的沉澱物。在文中所揭示的反應條件下，如藉實例8及9而例示，完全不需要控制未經反應之焦磷酸鹽的沉澱。因此，對於焦磷酸鹽沉澱物之擔憂並不需對於如該文獻中所建議的反應濃度之上端加以限制。

脫色劑的使用

在本方法之兩反應條件下，且特別是在該文獻的反應條件下，著色雜質係在該反應內形成。在產物離析前若不能移除這些雜質會離析出含淡綠色色調至深濃綠色的產物而非所欲米色至淺黃色的該純化合物。已發現使用脫色劑(諸如活化碳)處理該反應混合物可去除色彩(見，例如實例5、6、及9)。此外，已發現該脫色劑亦可作為可加速移除在產物離析前藉過濾而產生的任何微細顆粒或任何未經反應的焦磷酸鹽沉澱物之絮凝劑。

(R,R)-DACH-2溶液安定性研究

如實例10內所摘述，於pH 2下測定(R,R)-DACH-2之飽和水性溶液的安定性。本資料顯示於pH 2下在水性溶液中，(R,R)-DACH-2容易蒙受水解降解。該降解速率隨溫度降低而顯著降低。因此，該資料表示就自該合成反應進行產物沉澱而言，於儘可能低的溫度下進行pH調整的方法係高所欲。在一混合型水性有機溶劑系統(特別是醇)中進行反應可降低該反應溶劑之凝固點並提供比在純水內進行反應還低的反應溫度。

(R,R)-DACH-2錯合物的再結晶及純化

在另一方面，本發明提供一用於(R,R)-DACH-2之再結晶及純化的方法。該方法包括於介於約6至約9之pH 下，在一緩衝劑系統(諸如碳酸氫鈉或硝酸鈉緩衝劑)、或含一硬陰離子之其它緩衝劑系統內進行溶解。焦磷酸四鈉較佳亦存在於該緩衝劑系統中。該反應混合物可經加熱以加速溶解。以脫色劑(諸如活化碳)處理該經攪拌溶液，過濾，冷却至約0℃，且以硝酸將該pH調整至2。收集所得到之沉澱物，經水及甲醇清洗，並乾燥。該等清洗溶劑可選擇性經預冷。本方法特別可有效用以移除該等雜質，其包括DACH-Pt-Cl₂(於低pH下所形成之(R,R)-DACH-2的二聚性分解產物)、及焦磷酸鹽雜質。如藉HPLC而測定，該新穎再結晶及純化法可容易得到以下純度之經離析單體性焦磷酸鉑化合物：大於97%、較佳大於98%、且更佳大於99%純度。因此，在一方面中，本發明涵蓋這些高純度錯合物及製備其等的方法。

可藉以下非限制性實例而更詳細說明本發明。以下實例闡明熟悉本項技藝者知的該方法、及這些實例的修飾。

實例

A.用於測定(R,R)-DACH-2之檢定及相關物質的HPLC分析

方法

儀器：Waters Acquity uPLC H級或同等物

柱：uPLC柱高強度氧化矽(HSS)C₁₈ Waters,2.1×50毫米，1.8pm

偵檢器波長：UV，205奈米(檢定：210奈米)

流動相：A：0.1%三氟乙酸

B：乙腈

梯度輪廓：

射出體積：2.2微升(檢定0.4微升)

偵檢限度(LOD)0.03%；定量限度(LOQ)0.09%

試樣製備：將32毫克試樣溶解在10毫升該稀釋溶液內

主要尖峰之大約滯留時間：

稀釋劑製備：在一1000毫升量瓶內，以去離子水溶解1,583克碳酸氫銨。稀釋至標準且充份地混合。

(R,R)-DACH-2標準物製法：添加32毫克(R,R)-DACH-2標準物至10毫升量瓶內，溶解並以碳酸氫銨稀釋劑稀釋至標準。

Pt-DACH-Cl₂標準物製法：添加5毫克Pt-DACH-Cl₂至50毫升量瓶內，溶解並經0.9%氯化鈉溶液稀釋。在製成後將5毫升本溶液立即轉移至50毫升量瓶內並以0.9%氯化鈉溶液補充體積。充份混合。

B.用於測定(R,R)-DACH-2內之陰離子雜質的分析方法

儀器：Dionex離子層析儀型號ICS 2100或同等物

柱：Doinex AS 11,250×4.0毫米

流量：1.0毫升/分鐘

偵檢：導電率

流動相：使用水性KOH溶液之直線梯度

射出體積：20微升

試樣製備：在20mM水性碳酸氫鈉內2毫克/毫升

實例1

反式-(IR,2R)-DACH-Pt-Cl ₂ 之合成法

使四氯鉑酸鉀(85.0克，0.02莫耳)溶解在633毫升去離子水中並過濾。添加反式-(1R,2R)-環己二胺(28.0克，0.24莫耳)在126毫升去離子水中之溶液至所形成該紅色溶液中。於20℃下攪拌所形成反應混合物，費時66小時，於此時形成黃色沉澱物。過濾該懸浮液且連續以去離子水(500毫升)及甲醇(402克)清洗該等固體，繼而於40℃/25毫巴下進行真空乾燥以得到71.11克(91.3%)產率之黃色固體，反式-(1R,2R)-DACH-Pt-Cl₂。HPLC純度；98.8%面積。

實例2

(R,R)-DACH-2之合成法(以8倍之規模重複Bose方法)

添加反式-(1R,2R)-DACH-Pt-Cl₂(0.8克，1.649毫莫耳)至焦磷酸四鈉十水合物(3.2克，7.10毫莫耳)在1981毫升去離子水中之溶液內。以2N硝酸(約0.08克)將溶液之pH調整至8，加熱至40℃並攪拌15小時，於其間該pH降至約6.6。藉減壓蒸發而將該反應混合物濃縮至40毫升之殘留體積。該濃縮液的pH為5.7。以2N硝酸(約1克)將已浸在冰浴內之該攪拌溶液調整至pH 2。緩慢形成沉澱物，藉過濾而離析該沉澱物並連續經冷却離子水(79毫升)及丙酮(63克)清洗。真空乾燥得到一淡綠色固體。該第一實驗得到0.13克(6.3%)、而第二實驗得到0.30克(29.8%)產物。後者之試樣顯示於+1.51ppm下之單一³¹P NMR共振(碳酸氫鹽D₂O之pH未知)[就外消旋(R,R)-DACH-2，+1.78ppm在D₂O中~100mM，pH 7.93)而言，文獻為(Inorg.Chem.47,7962(2008))]、及於-1755ppm下之單一¹⁹⁵Pt NMR共振[就外消旋(R,R)-DACH-2，-1729ppm(在D₂O中~100mM，pH 7.93)而言，文獻為(Inorg.Chem.47,7972(2008))]。HPLC純度96.3%面積，藉重量鉑測定之純度為97%。

實例3

一份一份地添加DACH-Pt-Cl ₂

使焦磷酸四鈉十水合物(20.5克，46毫莫耳)溶解在250毫升去離子水中。以2N硝酸(3-5毫升)將該混合物之pH調整至8。將該溶液加熱至40℃並在8小時內以5×1克份量添加DACH-Pt-Cl₂(5.0克，13.1毫莫耳)。於40℃下再攪拌所形成懸浮液，費時15小時，於其間所有固體並未溶解。使該反應混合物的溫度增至60℃並再持續攪拌，費時22小時，於其間所有固體已溶解而得到一清澈微綠色溶液。使該溶液冷却至環境溫度並以2N硝酸(30-35毫升)將該pH調整至2。一旦進一步冷却至5℃時，形成沉澱物。藉過濾而收集該綠色固體，並連續經去離子水(3×15毫升)及甲醇(3×15毫升)清洗。真空乾燥得到2.6克(40.9%產率)微綠色固體。從該濾液中收集第二批固體。HPLC分析顯示兩固體皆含有約75%未經反應的起始物質及僅低產率之(R,R)-DACH-2。

實例4

以一份的形式添加該DACH-Pt-Cl ₂

以單一份量的形式添加DACH-Pt-Cl₂(5.0克，13.1毫莫耳)至焦磷酸四鈉十水合物(20.5克，46毫莫耳)在250毫升去離子水及10毫升甲醇中之溶液內。以2N硝酸(3-5毫升)將該混合物之pH調至8，加熱至60℃並攪拌15小時，於其間所有固體溶解而得到清澈微綠色溶液。使該反應混合物冷却至環境溫度，並添加2克活化碳。攪拌數分鐘後，藉過濾而移除該碳而得到清澈無色溶液。以2N硝酸(30-35毫升)將該溶液調整至pH 2並冷却至5℃，於此時形成沉澱物。藉過濾而離析該固體，並經去離子水(3×15毫升)及甲醇(3×15毫升)連續清洗，且在真空下乾燥以得到米色固體(4.8克，75.5%產率)。HPLC分析結果：97.6%(面積)(R,R)-DACH-2， 2.3%(面積)DACH-Pt-Cl₂、及0.1%(面積)未知雜質。

實例5

使用2.0當量焦磷酸鹽合成(R,R)-DACH-2

以單一份量的形式添加DACH-Pt-Cl₂(5.0克，13.1毫莫耳)至焦磷酸四鈉十水合物(11.7克，26.3毫莫耳)在250毫升去離子水及10毫升甲醇中之溶液內。以2N硝酸(3-5毫升)將該混合物之pH調至8，加熱至60℃並攪拌48小時以得到混濁微綠色溶液。添加活化碳(2克)並於60℃下攪拌1小時。過濾該溶液並冷却至環境溫度，於該溫度下以2N硝酸(30-35毫升)將該pH調整至2。使該混合物冷却至5℃並藉過濾而收集所形成的沉澱物。以去離子水(3×15毫升)及甲醇(3×15毫升)連續清洗該等固體，真空乾燥可得到3.6克(56%產率)很微綠色的固體。HPLC分析：97.5%(面積)(R,R)-DACH-2、1.07%(wt/wt)DACH-Pt-Cl₂、及0.1%(面積)未知雜質。

實例6

以3.2當量焦磷酸鹽合成(R,R)-DACH-2(H ₂ O：MeOH=25：1 v/v)

使焦磷酸四鈉十水合物(59.8克，134.14毫莫耳)溶解在去離子水(750毫升)及甲醇(30毫升)之混合物內。以2N硝酸將該混合物之pH調至8。以單一份量之形式添加DACH-Pt-Cl₂(15.0克，39.45毫莫耳)並將所形成混合物加熱至60℃。持續攪拌26小時，於其間，所有固體溶解以得到清澈無色溶液。使該溶液冷却至環境溫度並添加活化碳(1.2克)。於環境溫度下攪拌所形成混合物，費時65小時。過濾該溶液以2N硝酸調整至pH 2以形成沉澱物。使該漿體冷却至5℃，攪拌數分鐘並藉過濾而離析固體，以去離子水(3×40毫升)及甲醇(3×40毫升)連續清洗該濾餅，真空乾燥後，離析17.1克(89.7%產率)固體產物。HPLC分析結果：95.5%(面積)(R,R)-DACH-2、2.0%(wt/wt)DACH-Pt-Cl₂、0.4%(面積)未知雜質。離子層析法分析：1.19%(wt/wt)P₂O₇ ^2-、0.1%(wt/wt)Cl^-、0.01%(wt/wt)PO₄ ^3-。

實例7

使用3.2當量焦磷酸鹽合成(R,R)-DACH-2(H ₂ O：MeOH=7：3v/v)

使焦磷酸四鈉十水合物(59.8克，134.14毫莫耳)溶解在去離子水(525毫升)及甲醇(225毫升)之混合物內。以2N硝酸將該混合物之pH調至8。以單一份量之形式添加DACH-Pt-Cl₂(15.0克，39.45毫莫耳)並將所形成混合物加熱至60℃。持續攪拌16小時後，獲得無色混濁溶液。使該溶液冷却至環境溫度並以2N硝酸調整至pH 2以形成沉澱物。使該漿體冷却至5℃並攪拌數分鐘，於其間該等固體增加。攪拌數分鐘後，藉過濾而離析該等固體並經去離子水(3×40毫升)及甲醇(3×40毫升)連續清洗。真空乾燥以得到米色至黃色固體(16.5克，86.1%產率)。HPLC分析：95.3%(面積)(R,R)-DACH-2、1.9%(wt/wt)DACH-Pt-Cl₂、及0.1%(面積)未知雜質。離子層析法分析：0.87%(wt/wt)P₂O₇ ^2-、0.05%(wt/wt)Cl^-、0.12%(wt/wt)NO₃ ^-、及0.04%(wt/wt)PO₄ ^3-。

實例8

控制未經反應之焦磷酸鹽之沉澱的效應 (未使用實例9之脫色劑)

添加焦磷酸四鈉十水合物(151.6克，339.83毫莫耳)至1330毫升去離子水中，並將所形成混合物加熱至60℃。以2N硝酸將所形成溶液之pH調整至8，繼而添加甲醇(500毫升)。以單一份量之形式添加DACH-Pt-Cl₂(38.0克，99.95毫莫耳)且於60℃下攪拌所形成混合物，費時40小時以得到幾乎是清澈的溶液。冷却至1℃後，以2N硝酸調整該pH並攪拌。當達到pH 2時，在1-2分鐘後形成沉澱物。再攪拌5分鐘後，藉過濾而收集沉澱物並經去離子水(3×40毫升)及甲醇(3×40毫升)連續清洗。真空乾燥以得到44.79克(81.2%產率)之微黃色固體。HPLC分析：87.6%(wt/wt)(R,R)-DACH-2、0.14%(wt/wt)DACH-Pt-Cl₂、0.05%(面積)未知雜質。及0.1%(面積)(R,R)-DACH-2二聚物。離子層析法分析：15%(wt/wt)P₂O₇ ^2-、0.01%(wt/wt)Cl^-、0.02%(wt/wt)NO₃ ^-、及0.04%(wt/wt)PO₄ ^3-。

實例9

控制未經反應之焦磷酸鹽之沉澱(使用脫色劑)的效應

添加焦磷酸四鈉十水合物(75.8克，169.92毫莫耳)至665毫升去離子水中，並將所形成混合物加熱60℃。以2N硝酸將所形成溶液之pH調整至8，繼而添加甲醇(360毫升)。以單一份量之形式添加DACH-Pt-Cl₂(19.0克，49.98毫莫耳)並於60℃下攪拌所形成混合物，費時88小時以得到白色懸浮液。於60℃下添加活化碳(1.5克)，且攪拌並過濾該溶液。使該淺黃色濾液冷却至2℃且以2N硝酸調整該pH。在1-2分鐘內，形成沉澱物。再攪拌該漿體，費時5分鐘。藉過濾而收集該沉澱物並經去離子水(3×40毫升)及甲醇(3×40毫升)連續清洗。真空乾燥以得到19.21克(79.5%產率)微黃色固體，其純度位準可不需再結晶或純化步驟。HPLC分析：102.2%(wt/wt)(R,R)-DACH-2、0.02%(wt/wt)DACH-Pt-Cl₂、0.02%(面積)未知雜質。及0.05%(面積)(R,R)-DACH-2二聚物。離子層析法分析：0.25%(wt/wt)P₂O₇ ^2-、0.01%(wt/wt)Cl^-、<0.01%(wt/wt)NO₃ ^-、及0.01%(wt/wt)PO₄ ^3-。

實例10

(R,R)-DACH-2之飽和水性溶液於pH 2下之安定性

藉添加300毫克(R,R)-DACH-2至15毫升去離子水而製備於pH 2下之(R,R)-DACH-2的飽和水性溶液。攪拌所形成懸浮液並以0.1M硝酸將pH調整至2。使該溶液經由一0.45微米華特門(Whatman)聚丙烯濾器而過濾以得到一清澈溶液。於25及5℃下貯存該溶液之試樣。於表2及3中所示的時間間隔下，藉HPLC而測定該溶液組成。

實例11

(R,R)-DACH-2錯合物的再結晶及純化

使焦磷酸四鈉(7.31克，16.39毫莫耳)溶解在168毫升去離子水中。將該溶液加熱至60℃，並添加(R,R)-DACH-2(3.364克，6.93毫莫耳)及充份的碳酸氫鈉以將該pH調整至8。攪拌約10分鐘後，所有固體溶解。相對於該(R,R)-DACH-2(0.269克)，添加8%(wt/wt)活化碳並攪拌該混合物，費時30分鐘。過濾該溶液並冷却至0℃，於該溫度下，以2N硝酸將該pH調整至2。攪拌約10分鐘後，形成沉澱物。再攪拌15分鐘後，過濾該漿體且以去離子水(3×25毫升)及甲醇(3×25毫升)連續清洗該等固體，繼而真空乾燥。產率1.651克(49.1%)、及分析數據係示於表4內。

實例12

(R,R)-DACH-2錯合物的再結晶及純化

焦磷酸四鈉十水合物(7.25克，16.25毫莫耳)溶解在95毫升去離子水中。將該溶液加熱至60℃，並添加(R,R)-DACH-2(3.335克，6.87毫莫耳)及充份的碳酸氫鈉以將該pH調整至8。攪拌約10分鐘後，溶解所有該等固體。相對於該(R,R)-DACH-2(0.267克)，添加8%(wt/wt)活化碳且攪拌該混合物，費時30分鐘。過濾該溶液並冷却至0℃，於該溫度下，以2N硝酸將該pH調整至2。攪拌約10分鐘後，形成沉澱物。再攪拌15分鐘後，過濾該漿體且以去離子水(3×27毫升)及甲醇(3×27毫升)連續清洗該等固體，繼而真空乾燥。產率1.678克(50.3%)、及分析數據係示於表5內。

實例13

(R,R)-DACH-2錯合物之再結晶及純化以及該再晶化產物的長期安定性

使焦磷酸四鈉十水合物(91.3克，204.68毫莫耳)溶解在500毫升去離子水中並添加充份的碳酸氫鈉以將該pH調整至8。將該緩衝劑溶液加熱至60℃並添加(R,R)-DACH-2(43克，88.62毫莫耳)以完全溶解該等固體。藉添加少量碳酸氫鈉而將該pH調整至8。攪拌約10分鐘後，相對於該(R,R)-DACH-2(3.5克)，添加8%(wt/wt)活化碳。於60℃下攪拌所形成混合物，費時30分鐘。過濾該溶液並冷却至2℃，於該溫度下，以2N硝酸將該pH調整至2。在達到pH 2之1-2分鐘內，形成沉澱物。在初沉澱物形成後，再攪拌該漿體，費時10分鐘。過濾該漿體並以去離子水(3×300毫升)及甲醇(3×300毫升)連續清洗該等固體，繼而真空乾燥。產率15.13克(35.2%)、及分析數據係示於表6內。

進行該經再晶化之試樣的長期安定性研究。於不超過25℃之溫度在60±5%之濕度下貯存在該原有容器(具有一HDPE螺旋帽之100毫升天然HDPE瓶)內之後，該產物之純度僅稍微變化，亦即從99.78%面積及99.4% w/w變化至99.60%面積及98.4% w/w，而該(R,R)-DACH-2二聚物、Pt-DACH-二水合物、及未知的雜質係從“未經偵測”分別改變至0.18%面積、0.01%面積、及0.19%面積(表6)。這些結果顯示該經純化之(R,R)-DACH-2具安定性。

實例14

(R,R)-DACH-2參考標準物之製法及安定性研究

粗(R,R)-DACH-2的合成法

製備焦磷酸鈉四水合物(123.7克，277.23毫莫耳)在DI水(1085毫升)中之溶液並加熱至60℃。以2N硝酸將該溶液之pH調整至8，並添加甲醇(588毫升)。以一份量的形式添加呈固體之Pt-DACH-Cl₂(31.0克，81.54毫莫耳)至該溶液並攪拌。經攪拌時間後，獲得僅具極微混濁性的白色懸浮液。一旦過濾，在冷却至約2℃後，以2N硝酸將該微黃色濾液之pH調整至2並攪拌。當達到pH 2時，在1至2分鐘後形成沉澱物，且在第一次出現混濁狀態後，再攪拌該懸浮液，費時5分鐘。過濾該沉澱物以得到呈微黃色固體之該粗(R,R)-DACH-2產物(48.81克)。以水及甲醇清洗該粗產物並於40℃下在真空內乾燥96小時。根據96.8%(w/w)純度之工作參考標準，HPLC檢定顯示99.62%(面積)及約67.5%(w/w)純度。HPLC檢定顯示其它雜質：Pt-DACH-Cl₂，0.10%(面積)；(R,R)-DACH-2二聚物、0.24%(面積)；及未知雜質，0.04%(面積)。該離子層析法檢定顯示P₂O₇ ^2-的含量為約34%(w/w)，其表示該產物含有大量未經反應的焦磷酸鈉。

(R,R)-DACH-2的再結晶反應

藉使碳酸氫鈉(18.8克)及焦磷酸鈉十水合物(53克)溶解在DI水(914毫升)中並在攪拌下調整至pH 8而製成一緩衝劑溶液。將該緩衝劑溶液加熱至60℃。添加該粗(R,R)-DACH-2產物(45.56克，67.5% w/w純度，經由檢定而知含有30.7克產物)並在攪拌約10分鐘後，完全溶解在該緩衝劑溶液內。添加活化碳(0.64克，以該(R,R)-DACH-2輸入量計為2% w/w)至該溶液且在攪半15分鐘後經過濾出。使所形成濾液冷却至約1℃且經調整至約pH 2。當達到pH 2時，在1至2分鐘內形成沉澱物，並在第一次出現混濁狀態後，再攪拌該懸浮液，費時10分鐘。經由一P5玻璃熔料而藉過濾收集該等沉澱物，以冷DI水及甲醇清洗該固體，並真空乾燥以得到(R,R)-DACH-2(15.26克，49.6%回收率)(如參考 96.8%(w/w)純度之工作參考標準所檢定，其純度為99.8%(面積)及101.6%(w/w))。HPLC檢定顯示其它雜質的含量：Pt-DACH-Cl₂，未經檢測；(R,R)-DACH-2“二聚物”，0.15%(面積)；及Pt-DACH-二水合物，0.03%(面積)；且該離子層析法檢定顯示0.10%(w/w)焦磷酸根陰離子(P₂O₇ ^2-)。於pH 7下，在水性碳酸氫鈉緩衝劑內之(R,R)-DACH-2的¹³C NMR光譜顯示3個共振發生於23.56ppm、31.41ppm、82.44ppm，由於Pt偶合，後者被分裂，且¹¹²Pt NMR光譜顯示單一共振發生於107ppm。差示掃描式量熱法(DSC)分析顯示於310℃下急劇放熱，繼而在熱流掃描中大放熱，其表示熔點為310℃且具放熱分解性。(R,R)-DACH-2之熱重分析顯示質量損失發生於約310℃，其係與在熔點時試樣分解的作用一致。就作為一參考標準而言，根據自100%減掉所有該雜質之重量%總數的標準方法，該試樣之純度被指定為99.35(wt/wt)。

實例15

(R,R)-DACH-Pt-Cl ₂ 之按比例增加的合成法

使四氯鉑酸鉀K₂PtCl₄(約670.1克)溶解在純水(約5005克)並過濾。於環境溫度下添加(R,R)-1,2-二胺基環己烷(R,R-DACH)配位基之溶液至所形成紅色溶液。攪拌所形成混合物，費時48小時以形成黃色懸浮液。然後過濾該黃色懸浮液。先後以水(約4020克)及丙酮(約3176克)清洗所獲得固體，並於環境溫度下真空乾燥。獲得93.2%產率(572.4克)、及96.4%(面積)之HPLC純度的(R,R)-DACH-Pt-Cl₂。

實例16

用於合成(R,R)-DACH-2之“一滴式”方法的按比例增加

使焦磷酸鈉十水合物(1117克，2504毫莫耳)溶解在純水(9800克)內並在攪拌下加熱至60℃。以2N硝酸將所得到溶液之pH調整至8。然後添加甲醇(4200克)至該溶液。以一份量之形式添加呈固體之DACH-Pt-Cl₂(280克，736毫莫耳)至該溶液，並攪拌該混合物，費時88小時。然後於60℃下，添加活化碳(22.40克)至所形成懸浮液。攪拌數分鐘後，藉過濾而移除該活化碳及其它固體，且使該濾液冷却至約2℃，然後以2N硝酸調整至約pH 2並攪拌。於約pH 2下攪拌數分鐘後，獲得沉澱物。藉過濾而收集該等沉澱物，且以水及甲醇清洗所形成黃色固體，然後於0℃在真空下乾燥以得到80.7%產率(288.3克)及如藉HPLC而檢定之98.4%(w/w)純度的(R,R)-DACH-2。其它檢定結果示於表7內。

該等較佳實施例之上述實例及說明應該被認為是用於闡明而非限制如藉申請專利範圍而定義的本發明。熟悉本項技藝者可知只要不違背本發明之精神，可進行許多及各種修飾。

Claims

一種純化一單體性焦磷酸鉑錯合物、或其鹽之方法，其包含：使該單體性焦磷酸鉑錯合物溶解在一緩衝劑內；從該緩衝劑中再晶化(recrystallizing)該錯合物；離析(isolating)該單體性焦磷酸鉑錯合物；並清洗且乾燥該經離析之單體性焦磷酸鉑錯合物。
如請求項1之方法，其中該緩衝劑為碳酸氫鹽緩衝劑。
如請求項1之方法，其中該緩衝劑具有一在約6至約9之範圍內的pH。
如請求項1之方法，其中該溶解步驟包含將該緩衝劑內的該單體性焦磷酸鉑錯合物加熱至一高溫(an elevated temperature)。
如請求項1之方法，其進一步包含添加一脫色劑至該單體性焦磷酸鉑錯合物之緩衝劑溶液，攪拌一段時間，並在該再晶化步驟前，藉過濾而移除該脫色劑及任何未經溶解的固體。
如請求項5之方法，其中該脫色劑為活化碳。
如請求項1之方法，其進一步包含在該再晶化步驟前，使該單體性焦磷酸鉑錯合物之緩衝劑溶液通過含一過濾介質之在線濾器(inline filter)以移除任何未經溶解之固體而獲得清澈濾液。
如請求項7之方法，其中該清澈濾液被轉移至另一乾淨容器以用於再晶化該產物。
如請求項7之方法，其中該清澈濾液被循環回至用於溶解該單體性焦磷酸鉑錯合物之容器，直到所有該單體性焦磷酸鉑錯合物之緩衝劑溶液變清澈。
如請求項7之方法，其中該過濾介質包含活化碳。
如請求項1至10中任一項之方法，其中該緩衝劑溶液進一步包含一焦磷酸鹽。
如請求項1至10中任一項之方法，其中該單體性焦磷酸鉑錯合物包含兩獨立地選自以下之胺配位基：NH₃、經取代或未經取代之脂肪族胺、及經取代或未經取代之芳香族胺。
如請求項1至10中任一項之方法，其中該單體性焦磷酸鉑錯合物包含一有機二胺配位基。
如請求項13之方法，其中該有機二胺係選自經取代或未經取代之脂肪族1,2-二胺及經取代或未經取代之芳香族1,2-二胺。
如請求項13之方法，其中該有機二胺為一選自1,2-乙二胺及環己-1,2-二胺之脂肪族1,2-二胺。
如請求項11之方法，其中該單體性焦磷酸鉑錯合物具有下式(I)或(II)：
或其鹽，其中R¹及R²係各自獨立地選自NH₃、經取代或未經取代之脂肪族胺、及經取代或未經取代之芳香族胺；且其中R³係選自經取代或未經取代之脂肪族二胺、及經取代或未經取代之芳香族二胺。
如請求項16之方法，其中R¹及R²係各自獨立地選自NH₃、甲胺、乙胺、丙胺、異丙胺、丁胺、環己胺、苯胺、吡啶、及經取代之吡啶；且R³係選自1,2-乙二胺及環己-1,2-二胺。
如請求項16之方法，其中該鉑錯合物(II)係選自：
及其等之鹽及混合物。