TWI627973B - 餘甘子組成物、其製造方法及其用途 - Google Patents

Abstract

本發明提供一種餘甘子組成物的製造方法，其包含：壓榨餘甘子果實， 以得到餘甘子果漿；水蒸氣蒸餾並減壓濃縮餘甘子果漿，以得到餘甘子萃取液；凍乾餘甘子萃取液，以得到餘甘子乾燥物；以及配製餘甘子組成物，其係將餘甘子乾燥物相對於溶劑配製為0.15mg/mL~80mg/mL的濃度。

Description

餘甘子組成物、其製造方法及其用途

本發明涉及一種餘甘子組成物、其製造方法及其用途。具體而言，係關於一種以特定條件之水蒸氣蒸餾並減壓濃縮的方法得到的餘甘子組成物、其製造方法及其用途。

自古以來，餘甘子(Phyllanthus emblica)(亦稱魚甘子、由甘子等)被視為有益的中草藥，因初食苦澀，良久更甘而得名，其在廣東、香港、印度等地皆有使用的紀錄，且部分地區亦將其入菜而作為地方傳統食物。中醫上，餘甘子通常被用於舒緩感冒發熱、喉嚨痛、咳嗽、口乾舌燥、維生素C缺乏等症狀，甚至本草綱目亦記載其可解風虛熱氣，補益強氣，久服則可輕身延年長生。可見，餘甘子不僅可作為水果食用，更能作為中藥處方，應用層面可說十分廣泛。

近年來，隨著健康意識抬頭，關於天然中草藥的研究盛行，更發掘出餘甘子的實際營養價值及體內運作機制。油甘子被認為具有豐富的維生素C、E、B等多種維生素並含有人類所需的多種氨基酸，且被認為具有足夠的超氧化物歧化酶活性以作為有效的抗氧化物質，因此，將餘甘 子應用於抗氧化及美白用途的療法及產品應運而生。然而，現有的方法及產品多在萃取餘甘子的處理過程中對其中的成分結構或活性造成破壞，導致效果受到折損或不如預期。因此，實有必要開發一種可保留原始成分及活性的餘甘子組成物，其製造方法以及其產品之應用。

鑒於以上問題，本發明提供一種餘甘子組成物的製造方法，其包含：壓榨餘甘子果實，以得到餘甘子果漿；水蒸氣蒸餾並減壓濃縮餘甘子果漿，以得到餘甘子萃取液；凍乾餘甘子萃取液，以得到餘甘子乾燥物；以及配製餘甘子組成物，其係將餘甘子乾燥物相對於溶劑配製為0.15mg/mL~80mg/mL的濃度。其中，水蒸氣蒸餾並減壓濃縮的步驟係在100℃~110℃的條件下進行，並持續8小時~12小時。

較佳地，餘甘子組成物中包含的總酚量相當於0.08mg/mL~6.00mg/mL的沒食子酸中的總酚量。

較佳地，餘甘子組成物中包含的總黃酮量相當於0.04mg/mL~15mg/mL之槲皮素所含的總黃酮量。

較佳地，溶劑係選自由水、逆滲透水、去離子水、乙醇、甲醇及異丙醇所組成之群組。

較佳地，壓榨步驟包含選自由以下處理程序所組成的群組的步驟：擠壓、輾壓、切碎、剁碎、碾碎、磨碎、離心及其組合。

另外，本發明亦提供上述製造方法所製成的餘甘子組成物，以及此餘甘子組成物製造氧化及/或美白組合物的用途。

較佳地，抗氧化及/或美白組合物包含餘甘子組成物以及佐劑、賦形劑、或醫藥上可接受之載劑。

較佳地，抗氧化及/或美白組合物中餘甘子組成物中的餘甘子乾燥物之重量相對於抗氧化及/或美白組合物整體體積之濃度為0.15mg/mL~80mg/mL。

較佳地，抗氧化及/或美白組合物之劑型係選自由以下劑型所組成的群組：乳液、凝膠、洗劑、霜劑、注射液、口服液、膠囊以及錠劑。

上述本發明所提供的餘甘子組成物，係在發明人所選擇之特定條件區間萃取，在後續的抗氧化分析及美白效果試驗中證明，藉由本發明提供的製造方法得到的餘甘子組成物，保留餘甘子原本的成分及活性，具有較高的總酚含量、總黃酮含量、且在特定濃度下具有較佳的自由基清除能力、超氧化物岐化酶活性、還原力以及酪胺酸酶抑制活性，適合用於抗氧化及/或美白的用途。

S11~S14‧‧‧步驟

第1圖是本發明提供的餘甘子組成物之製造方法流程圖。

第2圖是本發明提供的餘甘子組成物之ABTS清除能力分析結果。

第3圖是本發明提供的餘甘子組成物之DPPH自由基清除能力分析結果。

第4圖是本發明提供的餘甘子組成物之SOD擬似活性分析結果。

第5圖是本發明用於分析總酚含量之沒食子酸檢量線。

第6圖是本發明提供的餘甘子組成物之總酚含量分析結果。

第7圖是本發明用於分析總黃酮含量之槲皮素檢量線。

第8圖是本發明提供的餘甘子組成物之總黃酮含量分析結果。

第9圖是本發明提供的餘甘子組成物之還原力分析結果。

第10圖是本發明提供的餘甘子組成物之酪胺酸酶抑制分析結果。

為利於使所屬領域具有通常知識者瞭解本發明之技術特徵、內容與優點及其所能達成之功效，茲將本發明配合實施例及附圖詳細描述如下。

本發明提供的餘甘子組成物之製造方法的流程如第1圖所示。根據步驟S11，壓榨餘甘子果實以取得餘甘子果漿。由於購入或採集的餘甘子果實可附有枝葉，且表皮上可帶有非本發明所需的藥劑、塵土或其他雜質，可先將非必要的枝葉部分去除，並可利用緩和的手段清洗表面，以將非必要物質清洗乾淨。

步驟S11所述之壓榨，可指擠壓、輾壓、切碎、剁碎、碾碎、磨碎、離心等物理處理程序或其組合。較佳地，可將餘甘子果實的果肉及 果汁經由上述處理程序混合而形成泥狀物或漿狀物，作為餘甘子果漿，以作為後續水蒸氣蒸餾並減壓濃縮步驟的原料。此外，亦可選擇僅取用餘甘子果汁或僅取用果肉的部分進行後續步驟。

步驟S12中，水蒸氣蒸餾並減壓濃縮前述步驟取得的餘甘子果漿。具體而言，可將餘甘子果漿置於容器中並加熱，使所需物質的蒸發，再藉由冷凝方式收集餘甘子萃取液。為了本發明的目的，較佳地，可限定本步驟中所使用的水蒸氣蒸餾並減壓濃縮條件，以確保餘甘子組成物中確實保留所需成分及其活性，具體為溫度100℃~110℃下進行水蒸氣蒸餾並減壓濃縮。較佳地，水蒸氣蒸餾並減壓濃縮時間可為8小時~12小時。

然而，本發明並不限於此。餘甘子果漿亦可使用其他條件或方式進行萃取，例如：藉由水蒸氣萃取的方式，使加熱後的水蒸氣通過餘甘子果漿，進而將餘甘子果漿內部的所需成分萃取出來，以進行後續的應用。

步驟S13中，將前述步驟得到的餘甘子萃取液利用冷凍乾燥技術凍乾，以取得可為粉末型態的餘甘子乾燥物，以利於保存及應用上的配製程序。

步驟S14中，將餘甘子乾燥物相對於溶劑配製為0.15mg/mL~80mg/mL的濃度，較佳地，可配置為0.30mg/mL~75.38mg/mL、0.75mg/mL~75.38mg/mL、1.01mg/mL~75.38mg/mL、1.51mg/mL~75.38mg/mL、1.88mg/mL~75.38mg/mL、2.51mg/mL~75.38mg/mL、3.77mg/mL~75.38mg/mL、7.54mg/mL~75.38mg/mL或15.08mg/mL~75.38mg/mL的濃度，以得到餘甘子組成物。較佳地，配製時使用 之溶劑可為水、逆滲透水、去離子水、乙醇、甲醇、異丙醇或其他適當且刺激性較低的溶劑。較佳地，餘甘子乾燥物係以水、逆滲透水或去離子水配製為水溶液。

在本發明的實例中，係將購入的餘甘子果實利用擠壓的方式壓榨，並同時在壓榨過程中將籽去除，以取得餘甘子果漿。接著，將餘甘子果漿100℃的條件下加熱8小時~12小時，並收集其冷凝的液體再減壓濃縮作為餘甘子萃取液。而後，將餘甘子萃取液凍乾，以取得粉末型態的餘甘子乾燥物，並密封保存於冰箱中。

接著，在分析前將餘甘子乾燥物以去離子水配製為0.08mg/mL、0.10mg/mL、0.15mg/mL、0.30mg/mL、0.75mg/mL、1.01mg/mL、1.51mg/mL、1.88mg/mL、2.51mg/mL、3.77mg/mL、7.54mg/mL、15.08mg/mL及75.38mg/mL之餘甘子組成物，以進行各種分析。

以下描述分析本發明之餘甘子組成物的總酚含量、總黃酮含量、自由基清除能力、超氧化物岐化酶活性、還原力以及酪胺酸酶抑制活性之詳細步驟及結果，所有分析結果內呈現的數值係為三次重複實驗所取之平均值±標準差。

ABTS清除能力分析

利用一般稱為ABTS陽離子清除活性的2,2’-azinobis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonic acid)來進行測定(Re et al.,1999)。將ABTS溶液(7μM)與過硫酸鉀溶液(7.35μM)反應，並避光保存24小時，得到含有ABTS自由基陽離子的深色溶液。在用於測定之前，先以95%乙醇稀 釋ABTS溶液，使其在波長750nm處的吸光值為1±0.005。將300μL測試樣品與3mL的ABTS實驗標準混合液震盪30秒，待反應6分鐘後於波長750nm處測定吸光值來評估自由基清除活性。同時以維生素C(Vit C)作為正對照組。抑制百分比以下式1計算：式1 ABTS自由基清除能力(%)=[1-(樣品吸光值/空白組吸光值)]×100

如第2圖所示，可見餘甘子組成物濃度達到0.3mg/mL時，即可與1%維生素C的ABTS清除能力效果相同，而此現象一直到濃度75.38mg/mL時才發生較明顯的改變，顯示本發明之餘甘子組成物在濃度0.3mg/mL~75.38mg/mL時具有良好的陽離子清除能力。

DPPH清除能力分析

根據Bursal & Gulcin(2011)的方法並稍作修改，樣品的體外自由基清除活性以2,2’-diphenyl-1-picrylhydrazyl(DPPH)測定法評估。將3mL DPPH甲醇溶液(0.2mg/mL)與100μL不同濃度的樣品混合，同時以dibutyl hydroxytoluene(BHT)作為正對照組。將混合物震盪後於室溫下避光反應15分鐘。最後於波長517nm處測定吸光值。依照DPPH自由基清除的百分比計算樣品的清除活性，如下式2所示：式2 DPPH自由基清除能力(%)=[1-(樣品吸光值/空白組吸光值)]×100

如第3圖所示，可見餘甘子組成物的濃度為0.3mg/mL時，可達到幾乎與1% BHT相同的DPPH自由基清除能力，而此現象一直到濃度 75.38mg/mL時才發生較明顯的改變，顯示本發明之餘甘子組成物在濃度0.3mg/mL~75.38mg/mL時具有良好的自由基清除能力。此外，第3圖上半部分亦呈現各濃度之餘甘子組成物的pH值，在上述較佳的應用濃度範圍中，餘甘子組成物屬弱酸性，可有效運用於抗氧化及/或美白用途，而不會造成刺激性。

超氧化物歧化酶(SOD)擬似活性分析

取100μL不同濃度樣品，加入2850μL Tris-HCl buffer(pH 7.4,0.05M Tris-HCl buffer containing 1mM EDTA)，再加入50μL 60mM磷苯三酚，並劇烈搖盪混均，最後於波長325nm處測量吸光值(A)，每隔30秒測一次，紀錄溶液5分鐘吸光度之變化值△₃₂₅。超氧歧化酶活性計算如下式3所示： 其中，△A₀為對照組吸光值變化速率(無檢品)；△A為樣品吸光值變化速率；T為反應時間；Vt為反應總體積；Vs為加入樣品或標準品之體積；N為稀釋倍數；乘以0.5之意義為達50%之氧化速率。

如第4圖所示，上半部分呈現不同濃度的餘甘子組成物的SOD擬似活性對時間的分析結果，結果顯示SOD擬似活性會隨時間逐漸下降，最終趨近於平緩，其中又屬15.08mg/mL及75.38mg/mL的組別具有最佳的效果。而下半部分係呈現上半部分之數據在270秒後趨於平緩之數值，以柱狀圖呈現。

總酚含量分析

藉由分光光度法來測定總酚含量(Kim et al.,2003)。將1mL樣品與1mL弗林試劑(Folin-Ciocalteu’s phenol reagent)混合。震盪5分鐘後，將10mL的Na₂CO₃溶液加入混合物中。最後於波長750nm處測量吸光值。同時製備不同濃度的沒食子酸(gallic acid)溶液(0~0.2mg/mL)作為標準品，得到的檢量線用來估算樣品中的總酚含量。總酚含量以沒食子酸當量(相對於多少沒食子酸的含量)來表示。

沒食子酸的檢量線結果如第5圖所示，藉由此檢量線進一步對比出不同濃度的餘甘子組成物中的總酚含量，如第6圖所示。根據第6圖下半部分顯示的結果，當餘甘子組成物的濃度為1.88mg/mL時，具有與0.2mg/mL的沒食子酸具有幾近相同的效果。此外，上半部分係呈現出下半部分使用之各濃度的餘甘子組成物之pH值。

總黃酮含量分析

根據Park et al.(2008)的方法並稍作修改來測定總黃酮的含量。將0.3mL樣品與3.4mL去離子水及0.15mL的NaNO₂(5%)混合。待6分鐘後，加入0.15mL的AlCl₃混合反應5分鐘。然後加入1mL的NaOH(1M)和0.5mL去離子水。將溶液充分混合後，於波長510nm處測量吸光值。同時按照上述相同程序，以槲皮素(quercetin)溶液(0~0.4mg/mL)製備總黃酮的標準曲線。總黃酮含量以槲皮素當量(相對於多少槲皮素的含量)來表示。

槲皮素的檢量線結果如第7圖所示，藉由此檢量線進一步對比出不同濃度的餘甘子組成物中的總酚含量，如第8圖所示。根據第8圖下半部分顯示的結果，當餘甘子組成物的濃度為3.77mg/mL時，具有與0.4mg/mL的槲皮素具有幾近相同的效果。此外，上半部分係呈現出下半部分使用之各濃度的餘甘子組成物之pH值。

還原力分析

於溶劑存在之下，還原能力是基於Fe³⁺與Fe²⁺之間的轉換(Fejes et al.,2000)。在波長700nm處透過測量普魯士藍(Perl’s Prussian blue)的形成可以間接測得Fe²⁺。將2mL各種濃度的樣品與2mL磷酸鹽緩衝液(0.2M，pH6.6)及2mL鐵氰化鉀(1%)混合。將混合物在50℃水浴20分鐘，然後加入2mL三氯乙酸(10%)。混合物以9000rpm離心3分鐘後收集上清液。將2mL上清液與2mL蒸餾水及0.4mL氯化鐵(0.1%)混合。混合均勻後於波長700nm處測定吸光值。同時以維他命C(0.1% Vit C)作為正對照組。反應混合物有較高的吸光值代表有較高的還原能力。

如第9圖下半部分顯示的結果，當餘甘子組成物的濃度為3.77mg/mL時，具有與1%維生素C具有幾近相同的還原力，而此現象持續到濃度為75.38仍維持相差不遠的數值，可見本發明之餘甘子組成物在濃度3.77mg/mL~75.38mg/mL時具有較佳還原力。此外，上半部分係呈現出下半部分使用之各濃度的餘甘子組成物之pH值。

體外抑制酪胺酸酶活性之測定

將80μL樣品加入80μL PBS(potassium phosphate buffer)(pH6.8)，再加入20μL的酪胺酸或L-多巴胺基質(L-Dopa)溶液，之後震盪混勻10min，於60s加入20μL酪胺酸酶，接下來於波長475nm處測定初始吸光值(A₀)，置於室溫下反應25min，再於波長475nm處測定品吸光值。依照體外抑制酪胺酸酶活性的百分比計算樣品的抑制活性，如下式4所示：式4酪胺酸酵素抑制率(%)=[Ac-(As-A₀)]/Ac×100%；其中，Ac為控制組反映25min後吸光值；As為樣品反應25min後吸光值；A₀為樣品初始吸光值。

如第10圖所示，上半部分顯示以L-Dopa進行分析之結果，顯示當餘甘子組成物的濃度為3.77mg/mL以上時，具有與1%維生素C具有幾近相同的酪胺酸酶抑制能力，而此現象持續到濃度為75.38仍維持相差不遠的數值。另外，下半部分顯示以酪胺酸進行分析之結果，顯示餘甘子組成物的濃度從0.08mg/mL時即有1%維生素C的80%效果，而在0.75mg/mL以上時更幾乎保持與1%維生素C同等的效果。可見，本發明提供的萃取物在上述濃度時具有較佳的能力。

綜上所述，在發明人所選擇之特定條件區間萃取之本發明所提供的餘甘子組成物，在後續的抗氧化分析及美白效果試驗中證明，可保留餘甘子原本的成分及活性，具有較高的總酚含量、總黃酮含量、且在特定濃度下具有較佳的自由基清除能力、超氧化物岐化酶活性、還原力以及酪胺酸酶抑制活性，適合用於抗氧化及/或美白的用途。

以上所述僅為示例性，而非為限制性者。任何未脫離本發明之精神與範疇，而對其進行之等效修改或變更，均應包含於申請專利範圍中。

Claims (9)

1. 一種餘甘子組成物的製造方法，其包含以下步驟：壓榨一餘甘子果實，以得到一餘甘子果漿；水蒸氣蒸餾並減壓濃縮該餘甘子果漿，以得到一餘甘子萃取液；凍乾該餘甘子萃取液，以得到一餘甘子乾燥物；以及配製該餘甘子組成物，其係將該餘甘子乾燥物相對於水配製為0.75mg/mL~75.38mg/mL的濃度，其中，水蒸氣蒸餾並減壓濃縮步驟係在100℃~110℃的條件下進行，並持續8小時~12小時。
2. 如申請專利範圍第1項所述之製造方法，其中，該餘甘子組成物中包含的總酚量相當於0.08mg/mL~6.00mg/mL的沒食子酸水溶液中的總酚量。
3. 如申請專利範圍第1項所述之製造方法，其中，該餘甘子組成物中包含的總黃酮量相當於0.04mg/mL~15mg/mL之槲皮素水溶液中所含的總黃酮量。
4. 如申請專利範圍第1項所述之製造方法，其中，該壓榨步驟包含選自由以下處理程序所組成的群組的步驟：擠壓、輾壓、切碎、剁碎、碾碎、磨碎、離心及其組合。
5. 一種餘甘子組成物，由如申請專利範圍第1項至第4項中任一項所述之方法所製成。
6. 一種餘甘子組成物用於製備抗氧化及/或美白之組合物的用途，其包含以如申請專利範圍第5項所述之餘甘子組成物製造一抗 氧化及/或美白組合物。
7. 如申請專利範圍第6項所述之用途，其中，該抗氧化及/或美白組合物包含：該餘甘子組成物；以及一佐劑、一賦形劑、或一醫藥上可接受之載劑。
8. 如申請專利範圍第6項所述之用途，其中，該抗氧化及/或美白組合物中該餘甘子組成物中的該餘甘子乾燥物之重量相對於該抗氧化及/或美白組合物整體體積之濃度為0.75mg/mL~75.38mg/mL。
9. 如申請專利範圍第6項所述之用途，其中該抗氧化及/或美白組合物之劑型係選自由以下劑型所組成的群組：乳液、凝膠、洗劑、霜劑、注射液、口服液、膠囊以及錠劑。