TWI626053B - Use of Antrodia camphorata compound for preparing a composition for promoting hair growth - Google Patents
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Abstract
本發明提供一種牛樟芝萃取物或化合物用於製備促進毛髮增生組合物之用途，其中該牛樟芝化合物如下列化學式1所示：
Description
本發明係關於一種牛樟芝萃取物，尤其是關於一種將該牛樟芝萃取物以及由其中純化之化合物用於製備促進毛髮增生組合物之用途。
牛樟芝(Antrodia camphorata)，又稱樟芝、牛樟菇或紅樟芝等，屬於非褶菌目(Aphyllophorales)、多孔菌科(Polyporaceae)之多年生蕈菌類，為台灣特有種真菌，僅生長於台灣保育類樹種-牛樟樹(Cinnamoum kanehirai Hay)之中空腐朽心材內壁上。由於牛樟樹分布數量極為稀少，加上人為的盜伐，使得寄生於其中方能生長之野生牛樟芝數量更形稀少，另一方面，由於其子實體生長相當緩慢，生長期僅在六月至十月之間，因此價格非常昂貴。牛樟芝之子實體為多年生，無柄，呈木栓質至木質，其具強烈之樟樹香氣，且其形態多變化，有板狀、鐘狀、馬蹄狀或塔狀。初生時為扁平型並呈鮮紅色，之後其周邊會呈現放射反捲狀，並向四周擴展生長，顏色亦轉變為淡紅褐色或淡黃褐色，並有許多細孔，此係牛樟芝藥用價值最豐富的部位。
在台灣民俗醫學上，牛樟芝具有解毒、減輕腹瀉症狀、消炎、治療肝臟相關疾病及抗癌等功用。牛樟芝如同一般食藥用之蕈菇類，具有許多複雜的成分，已知的生理活性成分中，包括：三萜類化合物(triterpenoids)、多醣體(polysaccharides，如β-D-葡聚醣)、腺苷(adenosine)、維生素(如維生素B、菸鹼酸)、蛋白質(含免疫球蛋白)、超氧歧化酵素(superoxide dismutase,SOD)、微量元素(如：鈣、磷、鍺)、核酸、固醇類以及血壓穩定物質(如antodia acid)等，此些生理活性成分被認為具有抗腫瘤、
增加免疫能力、抗過敏、抗病菌、抗高血壓、降血糖及降膽固醇等多種功效。
雖然由目前諸多之實驗可得知牛樟芝之萃取物具有前述功效，且其所含成分亦陸續被分析出來，但牛樟芝之萃取物中是否仍有其他醫療或醫美用途的有效成分或化合物未被找出，仍有待進一步的實驗研究來找尋與確認。
為了進一步尋找並確認牛樟芝之萃取物本身或/及是否有其他的有效成分及用途，以能應用於疾病治療或醫美產業，本發明最終確認了牛樟芝萃取物(以下亦稱為SY-C)以及該萃取物中之一化合物確實具有促進毛髮增長的功效，因此本發明提供了一種將牛樟芝萃取物SY-C或化合物利用於製備促進毛髮增生組合物之用途，其中該牛樟芝萃取物SY-C係由以下方法製得：以水或有機溶劑萃取牛樟芝菌絲體、子實體或二者之混合物，獲得一粗抽物；將該粗抽物以二氯甲烷/水溶液進行分配萃取法，使其分為二氯甲烷層及水層；以及將二氯甲烷層取出，以矽膠柱層析法分別以正己烷/二氯甲烷與二氯甲烷沖提液沖提後，合併其沖提後所獲得之區分並加以回收，即可獲得該牛樟芝萃取物SY-C。此外，該牛樟芝化合物係如下列化學式1所示(以下亦稱為SY-1)：
，或該化學式1藥理上可接受的鹽類。
在本發明的一實施例中，所述的促進毛髮增生組合物可為液
狀、泡沫狀、噴霧狀、凝膠狀或膏狀，而能以各種型式施用於需要促進毛髮生長之個體，其中，該個體可為具有毛囊之溫血動物體。
在本發明的另一實施例中，所述的促進毛髮增生組合物可進一步將其製備為洗髮精、潤髮乳、髮膠、慕斯、軟膏、生髮水或敷片(例如貼布)，因而能夠在日常生活清潔、保養或造型過程中，達到促進毛髮增生的目的。
在本發明的一實施例中，所述的促進毛髮增生組合物可進一步包括藥學上可接受之載劑，而將該牛樟芝萃取物或化合物製備成促進毛髮增生的醫藥組合物，而進一步利用於治療毛髮無法生長或生長緩慢的個體，其中，該個體可為具有毛囊之溫血動物體。
以下將配合圖式進一步說明本發明的實施方式，下述所列舉的實施例係用以闡明本發明，並非用以限定本發明之範圍，任何熟習此技藝者，在不脫離本發明之精神和範圍內，當可做些許更動與潤飾，因此本發明之保護範圍當視後附之申請專利範圍所界定者為準。
第1圖係顯示牛樟芝萃取物等對小鼠毛髮生長外觀變化影響的照片比較圖，其係分別以SY-1、牛樟芝萃取物SY-C、對照組以及比對組進行實驗之結果比較圖。
第2圖係顯示牛樟芝萃取物等對小鼠毛髮生長影響量化後之曲線圖，其係分別以SY-1、牛樟芝萃取物SY-C、對照組以及比對組進行實驗之結果比較圖。
牛樟芝萃取物SY-C與化合物SY-1之製備
取牛樟芝(Antrodia camphorata)菌絲體、子實體或二者之
混合物，以水或有機溶劑進行萃取，藉以取得牛樟芝水萃取物或有機溶劑萃取物。首先，取1.0kg牛樟芝其菌絲體、子實體或二者之混合物以10倍量的酒精抽取2次後，再將其合併濃縮，可得粗抽物約230g。將前述粗抽物進一步以二氯甲烷/水(1：1)溶液進行3次分配萃取法，使其分為二氯甲烷層約102.6g及水層約127.4g，取二氯甲烷層6.0g以矽膠柱層析法經過正己烷/二氯甲烷(1：4)、二氯甲烷、甲醇/二氯甲烷(5：95)的溶媒分離後，可分離為LT-E-D-1、LT-E-D-2、LT-E-D-3、LT-E-D-4等四區分(fraction)。上述四區分之取得分別為：以正己烷/二氯甲烷(1：4)及二氯甲烷沖提液分別進行沖提後，將獲得的區分合併後即為LT-E-D-1，再以甲醇/二氯甲烷(5：95)沖提液沖提，其前半部獲得之區分為LT-E-D-2，後半部獲得之區分則為LT-E-D-3，最後以甲醇沖提獲得LT-E-D-4。其中，LT-E-D-1區分經回收即為牛樟芝萃取物SY-C。
為進一步純化出牛樟芝萃取物SY-C其中之有效成分，係將LT-E-D-1層取出，之後可利用矽膠柱層析法或經製備型高效液相層析儀加以分離純化，即可純化出以下化學式1(即SY-1)所示之化合物4,7-二甲氧基-5-甲基-1,3-苯並二氧環(4,7-dimethoxy-5-methyl-1,3-benzodioxole)。
其中，有機溶劑可包括醇類(例如甲醇、乙醇或丙醇)、酯類(例如乙酸乙酯)、烷類(例如己烷)或鹵烷(例如氯甲烷、氯乙烷)，但並不以此為限。其中較佳者為醇類，更佳者為乙醇。該有機溶劑與菌絲體、子實體或二者之混合物之重量比可為15：1~5：1，較佳為12：1~8：1，但並未僅限於此。此外，二氯甲烷/水溶液之比例可為2：1~1：2之間，亦並未僅限於此。
關於4,7-二甲氧基-5甲基-1,3-苯並二氧環(4,7-dimethoxy-5-methyl-1,3-benzodioxole)的萃取，可參考Tu SH.,J Agric FoodChem.2012 Apr 11；60(14)：3612-8中所述。在先前相關研究中，無論是牛樟芝萃取物或SY-1，主要著重於其抗腫瘤效果，並無任何關於毛髮增生的研究。而本發明係利用牛樟芝萃取物SY-C以及如化學式1的化合物(SY-1)及其鹽類進行實驗，發現並證實二者皆具有毛髮增生的功效，屬於前所未見之新穎用途。
動物實驗條件
首先，準備實驗用小鼠。本實驗小鼠係購自國家實驗動物中心，屬C57BL/6JNarl品系，年齡為5週。將其飼養於國防醫學烷動物中心，飼育溫度維持在18~26度，相對溼度為30%~70%，光照週期為12小時光照，12小時黑夜，並且提供充足飼料和飲水。
實施例一
試驗前將小鼠以腹腔注射方式給予0.6g/kg Avertin進行麻醉。Avertin的製備係以0.6g之2,2,2-三溴乙醇(2,2,2-Tribromoethanol)加上1.5ml之2-甲基-2-丁醇(2-Methyl-2-butanol)，再加入生理食鹽水定量至50ml後，以0.2μm過濾膜過濾，置於4℃下保存。
待小鼠麻醉後，將其背部毛髮剃除1 x 2cm2的面積。使用棉花棒沾取SY-1溶液(10μM,1.96μg/mL之10%乙醇溶液)後，將其均勻塗抹在毛髮增生試驗區域上。試驗期間，每天塗抹SY-1並每四天照相記錄其毛髮生長情形，試驗時間共4週。相關促進毛髮生長活性之測試方法可參Biol Pharm Bull 37：44-53,2014。
實施例二
試驗前以同實施例一之方式對小鼠以腹腔注射方式給予0.6g/kg Avertin進行麻醉。
待小鼠麻醉後，將其背部毛髮剃除1 x 2cm2的面積。使用棉花棒沾取牛樟芝萃取物SY-C溶液(相當於10μM的SY-1之10%乙醇溶液)
後，將其均勻塗抹在毛髮增生試驗區域上。試驗期間，每天塗抹牛樟芝萃取物並每四天照相記錄其毛髮生長情形，試驗時間共4週。
實施例三
試驗前以同實施例一之方式對小鼠以腹腔注射方式給予0.6g/kg Avertin進行麻醉。
待小鼠麻醉後，將其背部毛髮剃除1 x 2cm2的面積。使用棉花棒沾取10%乙醇溶液，將其均勻塗抹在毛髮增生試驗區域上，作為對照組。試驗期間，每天塗抹10%乙醇溶液並每四天照相記錄其毛髮生長情形，試驗時間共4週。
實施例四
試驗前以同實施例一之方式對小鼠以腹腔注射方式給予0.6g/kg Avertin進行麻醉。
待小鼠麻醉後，將其背部毛髮剃除1 x 2cm2的面積。使用棉花棒沾取3%敏諾西迪(minoxidil,6-Piperidin-1-ylpyrimidine-2,4-diamine 3-oxide之10%乙醇溶液)，將其均勻塗抹在毛髮增生試驗區域上，作為比對組。試驗期間，每天塗抹敏諾西迪並每四天照相記錄其毛髮生長情形，試驗時間共4週。
毛髮生長結果判讀
毛髮生長活性的判讀方式為觀察小鼠背側的皮膚是否產生變黑現象，若有，即表示其毛囊是在生長期階段。毛髮生長的判讀係由三位不參與此研究之實驗室人評定，所得每個分數的平均值作為毛髮生長指數。給分標準：0=沒有生長，1=20%，2=20-40%，3=40-60%，4=60-80%，5=80%以上毛髮的生長指數評定：每四天一次，連續4週。
請同時參閱第1與第2圖，第1圖係SY-1、牛樟芝萃取物SY-C等對小鼠毛髮生長外觀變化影響的照片比較圖，而第2圖係將小鼠毛髮生長影響量化後之曲線圖。當將小鼠背部毛髮剃除以1cm x 2cm之面積，並每日以試驗化合物塗抹後，在加入具有促進毛髮生長藥物敏諾西迪的比對
組，隨著天數增加，在第12日起小鼠背部皮膚即已長出毛髮，而處理以SY-1及牛樟芝萃取物SY-C者，則在第16日長出毛髮，而從第16日起至28日實驗結束，其毛髮生成面積與毛髮量，均顯著高於對照組(見第1圖)。另一方面，從第2圖之量化結果亦顯示與對照組相較，皆具有顯著差異，尤其牛樟芝萃取物SY-C，其功效與敏諾西迪相當或更優。由以上結果顯示，牛樟芝萃取物SY-C及SY-1均具有顯著促進毛髮生長之作用。
前述將牛樟芝萃取物SY-C或是化合物SY-1用於製備促進毛髮增生的組合物時，該促進毛髮增生組合物可為液狀、泡沫狀、噴霧狀、凝膠狀或膏狀，但並不以此為限。且該促進毛髮增生組合物，尚可依據醫藥目的或是美容、清潔保養等目的，進一步例如加入藥學上可接受之載劑，例如適當的賦形劑、稀釋劑、穩定劑等而製備成醫藥組成物，或是加入著色劑、香料等而製備成洗髮精、潤髮乳、髮膠、慕斯、軟膏、生髮水或敷片(例如貼布)。因此，藉由本發明將牛樟芝萃取物SY-C或牛樟芝化合物SY-1應用於製備可促進毛髮增生組合物，利用該促進毛髮增生組合物，可改善或治療具有毛囊之溫血動物體，例如哺乳類動物、禽類或人類，其毛髮無法生長或生長緩慢的問題。
Claims (5)
- 一種牛樟芝化合物用於製備促進毛髮增生組合物之用途，該牛樟芝化合物係如下列化學式1所示：
- 如申請專利範圍第1項所述牛樟芝化合物用於製備促進毛髮增生組合物之用途，其中該促進毛髮增生組合物係液狀、泡沫狀、噴霧狀、凝膠狀或膏狀。
- 如申請專利範圍第1或2項所述牛樟芝化合物用於製備促進毛髮增生組合物之用途，其中該促進毛髮增生組合物係進一步製備成洗髮精、潤髮乳、髮膠、慕斯、軟膏、生髮水或敷片。
- 如申請專利範圍第1或2項所述牛樟芝化合物用於製備促進毛髮增生組合物之用途，其中該促進毛髮增生組合物係使用於具有毛囊之溫血動物體。
- 如申請專利範圍第1或2項所述牛樟芝化合物用於製備促進毛髮增生組合物之用途，其中該促進毛髮增生組合物進一步包括藥學上可接受之載劑。
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