CN107260710B - 雪松醇在制备促进毛发生长和缓解脱发的药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及天然产物技术领域，涉及雪松醇及其衍生物或盐在制备促进毛发生长和缓解脱发药物中的应用。试验结果表明，雪松醇可促进正常脱毛小鼠的毛发生长，同时可以有效缓解小鼠化疗后的脱毛症状，并证明了其用药安全性。其中，雪松醇以100 mg/kg~400 mg/kg的日剂量透皮给药时，其生发效果明显优于美国FDA批准并已在中国上市的生发药品米诺地尔。雪松醇以50 mg/kg~200 mg/kg的日剂量给药时，可减缓脱毛症状，与空白组对比作用显著。本发明的雪松醇不仅具有生发和防化疗后脱发作用，还具有原料易得、天然无刺激等优点，可作为价格昂贵或有副作用的生发药物及防脱发、生发产品的替代产品。本发明可以满足人们对防脱发产品的需求，解决脱发问题带给人们的困扰。

Description

雪松醇在制备促进毛发生长和缓解脱发的药物中的应用

技术领域

本发明涉及天然产物技术领域，涉及雪松醇及其衍生物的新功能，具体涉及雪松醇及其衍生物在制备促进毛发生长和缓解脱发的药物中的应用。

背景技术

1.雪松醇的化学结构：

2.生姜中雪松醇的分离及结构鉴定

超临界(SFE)生姜提取物40mL溶解于200mL石油醚及无水乙醚的混合液中(V_石油醚：V_无水乙醚1:9)，分别配制不同浓度的5％NaHCO₃、1％NaOH碱溶液各400mL，按体积比4:4:3进行分步萃取，萃取后的水层用稀盐酸酸化至pH值为4～5时用石油醚萃取，水洗1～2次，回收石油醚，得到非酚酸性成分的油层30.8mL待用。

SFE生姜提取物30.8g，经硅胶柱层析，石油醚：乙酸乙酯梯度洗脱得到组分A-G，洗脱部分B经丙酮重结晶后得无色针状结晶。将其¹H-NMR谱和¹³C-NMR谱数据与雪松醇drol等波谱数据比较，推测其为α-雪松醇。

【化学名】：1H-3α,7Methanoazulen-6-ol,octahydro-3,6,8,-8-tetramethyl-,(3R,3aS,6R,7R,8aS)-

【异名】：雪松醇drol；雪松醇dar；Camphor；Cypress

【分子式】C₁₅H₂₆O

【理化常数及光谱数据】mp 80～81℃；

¹H NMR(CDCl₃,90MHz)δ:0.83(3H,d,10-CH₃,J＝6.5Hz),1.02(3H,s,13-CH₃),1.28(3H,s,12-CH₃),1.32(3H,s,11-CH₃)；

¹³C NMR(CDCl₃,90.8MHz)δ:25.4(C-1),37.0(C-2),41.5(C-3),54.1(C-3a),31.6(C-4),35.3(C-5),75.0(C-6),61.0(C-7),43.4(C-8),56.5(C-8a),42.0(C-9),15.6(C-10),30.2(C-11),27.7(C-12),28.9(C-13).

3雪松醇的药理作用：

3.1血小板活化因子受体拮抗作用

雪松醇为天然血小板活化因子(platelet ctivating factor,PAF)受体拮抗剂，现已作为PAF拮抗剂的标准化合物。JANTAN I等对马来西亚药用植物抑制家兔血小板活化因子与受体结合的能力进行了测试，并以雪松醇作为阳性药，其IC₅₀值为2.4g·L^-1。体外实验结果显示，雪松醇能够阻断花生四烯酸(arachidonic acid,AA)、胶原和二磷酸腺苷(adenosine diphosphate,ADP)与PAF受体结合，从而在炎症反应，呼吸系统，免疫系统和心血管疾病中发挥作用。3.2抗菌作用

OH I等采用2倍微量肉汤稀释法对雪松醇等物质进行了抗菌活性试验评价。结果发现雪松醇对金黄色葡萄球菌、桑树内生菌和沙门氏菌的最低抑菌浓度为50mg·L^-1，对枯草芽孢杆菌、变形杆菌的最低抑菌浓度为25mg·L^-1。

叶舟等从杉木心材中提取雪松醇，并测得其对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄杆菌、伤寒沙门氏菌均有抑制作用。其中，对大肠杆菌的最低抑菌浓度为0.5g·L^-1，对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、伤寒沙门氏菌的最低抑菌浓度为0.25g·L^-1。

P REHANA等通过抑菌圈研究证明了雪松醇在150μg·disc^-1的浓度下对烟曲霉菌具有抑制作用。Cheng SS等人发现了雪松醇在100mg·L^-1的质量浓度下对木腐菌的抑制活性为68.3％～100.0％。此外，CHOWDHRY L等报道了雪松醇对曲霉菌的最低抑制浓度为46.43mg·L^-1。

3.3解痉挛活性

Kar K等以罂粟碱为对照，对雪松醇的解痉作用进行了体内及体外活性评价。体外实验发现，雪松醇(4.5×10-7～2.25×10-5g·mL-1)能够缓解乙酰胆碱、组胺、5-羟色胺、烟碱、钡剂引起的豚鼠回肠(作用于4～5cm处)和兔空肠(作用于5～6cm处)平滑肌收缩。相同浓度的雪松醇对钡剂及乙酰胆碱引起豚鼠回肠痉挛的缓解作用分别为罂粟碱的4.1和1.47倍。此外，雪松醇可以解除组胺和乙酰胆碱同时作用而引起的30％～50％的豚鼠回肠平滑肌收缩，而罂粟碱无此作用。

体内实验发现，口服雪松醇和罂粟碱(100mg·kg-1)后对大鼠肠道蠕动均无显著影响。静脉注射雪松醇，可以松弛猫的胃肠平滑肌。此外，雪松醇的非特异性解痉挛活性不仅对肠道平滑肌有作用，对豚鼠精囊和大鼠子宫也有明显的解痉挛作用。

3.4镇静作用

Yada Y等比较了在挪威，泰国和日本20～40岁的妇女吸入雪松醇(0.36×0.13μg·L-1，15min)前后的瞳孔直径大小。通过瞳孔缩小率的变化(光刺激后瞳孔直径比初使瞳孔直径)衡量瞳孔对光的反射。研究结果表明，吸入雪松醇之后比吸入之前瞳孔缩小率显著上升。

Kagawa D等研究评价了吸入雪松醇对大鼠和小鼠的镇静作用。结果显示，吸入雪松醇的Wistar大鼠(1.0L·min-1，30min)，累积自主活动次数明显减少；用咖啡因处理的Wistar大鼠、自发性高血压大鼠(SHR)和ddY小鼠吸入雪松醇后也可观察到相似的情况。吸入雪松醇，还可延长戊巴比妥诱导的睡眠时间。此外，实验者向大鼠鼻腔灌注5％ZnSO4/0.5％NaCl，降低其嗅觉功能后，测定戊巴比妥诱导的睡眠时间。结果显示，嗅觉降低大鼠吸入雪松醇仍可延长戊巴比妥诱导的睡眠时间。

以上实验结果表明，雪松醇吸入剂具有镇静效应，且其作用机制是通过嗅觉系统之外的途径产生的。

3.5对心血管系统的调节作用

雪松醇对血管具有舒张作用。Kar K等研究发现，雪松醇对肾上腺素的升压作用和对组胺、乙酰胆碱的降压反应均具有拮抗作用。静脉注射1～10mg·kg-1雪松醇的麻醉猫，出现了剂量依赖性血压降低和周边血管舒张，并在5～15min内，缓慢的恢复到原有水平，其作用效果低于等剂量的罂粟碱。静脉注射雪松醇5mg·kg-1，股动脉血流量增加了7.7％，血压降低12％。注射相同剂量的罂粟碱，麻醉猫的动脉血流量增加8.7％，血压降低28.5％。

Umeno K等研究发现，11位进行过喉头切除术的男性受试者，通过下呼吸道吸入雪松醇((64.0±7.7)×10-9mol·L-1)后，收缩压(SBP)，舒张压(DBP)较吸入空气后显著降低，其中，SBP降低10～20mmHg。

Dayawansa S等通过非创伤性检测方法与光谱数据来评估受试者周边自主神经活动。将气化的雪松醇和空气通过呼吸给药于健康人受试者，统计分析表明吸入雪松醇(14.2×1.7μg·L-1；5.0L·min-1；8min)后心率(HR)，收缩压(SBP)，舒张压(DBP)较吸入空气后显著降低，其中SBP降低最明显，由119.5±3.2mm Hg降为112.8±2.6mm Hg。压力感受器的灵敏度加强，呼吸频率降低。光谱分析表明，在吸入雪松醇时，高频率组分增加，低频率组分减少。此外，吸入雪松醇还可使低频率组分的收缩压和舒张压分别降低了0.61±0.15(mmHg)2/Hz和0.74±0.23(mm Hg)2/Hz。实验表明，吸入雪松醇可以诱导副交感神经活性增强，交感神经活性降低。

3.6抗癌活性

Loizzo MR等发现α-雪松醇对经组织培养的无色素的黑色素瘤C32细胞和肾细胞腺癌细胞具有一定的抑制作用。Su YC等通过体外实验发现α-雪松醇对人肺癌细胞A549、肝癌细胞J5和口腔肿瘤细胞OEC-M1均具有细胞毒性活性。其IC₅₀值均小于25.20μg·mL-1。蒋继宏等从侧柏叶、种皮及种子挥发油中分离纯化出雪松醇，进行了抗人肺癌细胞NCI-H460实验，实验结果得出其IC₅₀ 44.98μg·mL-1。表明雪松醇对人肺癌细胞A549、NCI-H460，肝癌细胞J5，口腔肿瘤细胞OEC-M1均有抑制活性。

3.7其他作用

雪松醇可以干扰很多昆虫细胞的生长和发育周期。Chang ST等从台湾杉心材中提取出雪松醇，并证明其具有较强的抗蚁活性。

Jin MH等研究发现，雪松醇以剂量依赖性方式加速真皮成纤维细胞中Ⅰ型胶原蛋白和弹性蛋白的产生。雪松醇还可增加磷酸化的p42/44细胞外信号调节激酶、p38丝裂原活化蛋白激酶和Akt的含量。因此雪松醇能够增强细胞外基质的产生和胞内信号通路的激活。

脱发(alopecia)是临床常见的毛发病，虽不属于严重疾病，严重影响容貌美观，但却对人们的精神、心理产生较大的影响。我国脱发患者以每年17.5％速度递增，并出现了年轻化的迹象。脱发可分为斑秃、脂溢性脱发、化疗性脱发、老年性脱发、慢性休止期脱发、病后脱发等多种类型。其中斑秃和脂溢性脱发发病率最高，且顽固难治，是临床上常见的两类脱发病。近年来，在各种因素导致的脱发的治疗中，多使用化学合成药物治疗，如常用于治疗脂溢性脱发的5α-还原酶抑制剂非那雄胺，雄激素受体竞争抑制剂西咪替丁和生物学反应调节剂米诺地尔等(Virginia C 1986)。根据文献报道，目前对天然药物的毛发生长研究主要针对于多种中药成分的联合用药，对单一天然药物或者单一成分的生发活性研究和应用制剂较少。

头发的生长是与毛囊的生长状态紧密相关，毛囊内营养和供氧充足有利于毛发的生长和再生(Mooney DJ，1996)。微循环障碍可导致头皮毛囊的正常营养及供氧减少，从而导致脱发的产生。治疗药物可通过能扩张皮肤血管、改善皮肤微循环而促进毛发生长。血小板活化因子(platelet ctivating factor，PAF)为血小板聚集诱导剂，主要通过与膜表面的PAF受体结合，激活蛋白酶C，引起蛋白磷酸化，使血小板活化，导致血管收缩，通透性增高，微循环障碍。雪松醇作为天然的血小板活化因子受体拮抗剂，对PAF诱导的血小板聚集有抑制作用，可改善局部血液的微循环，这可能是其治疗脱发的原因。

目前应用较多的是2％和5％的药物为美国FDA认证的药品米诺地尔(minoxidil，美国专利证号4139619)，作为局部用药用于治疗男性和女性脂溢性脱发。2％米诺地尔已作为普强公司的上市药品，用来治疗秃头症和落发症。米诺地尔为一种钾通道开放剂，能延长毛发的生长期，其生血管效应能逆转毛囊的缩小。但米诺地尔报道有头皮轻度皮炎、眩晕、刺激性过敏、面部和四肢多毛症等不良反应，且米诺地尔在上世纪70年代是作为降压药上市，如使用不慎可能会造成比较严重的副作用(Pharmacotherapy.2009Apr；29(4):460-7；SouthMed J.2010May；103(5):458-60；)。国产特殊育发类化妆品章光101系列生发产品具有防止脱发，改善发根的生长环境等效果。但部分患者使用后出现不同程度的头皮发热，且伴有轻度刺痛感。

除了这两种药以外，植发作为治疗脱发的方法已经在世界范围内得到了认可。但药物治疗与植发虽已经取得极大的进展，仍然有着极大的局限性。

基于目前应用于临床治疗脱发的化学药物存在着不同程度的副作用、停药易复发和价格昂贵的缺点，人们已开始渐渐将目光转向中药治疗脱发的研究上。目前市面上销售量较高的中成药为：养血生发胶囊，用于治疗肾精不足所致的脱发。可改善毛发松动或稀疏状脱落、毛发干燥或油腻、头皮瘙痒；斑秃、全秃、脂溢性脱发与病后、产后脱发等症状。但该产品为复方制剂，组成复杂，有效成分不清楚。除此之外，还有以下临床应用的产品具有同样的问题。

中国专利CN 102885974A公开了一种具有生发功能的中药制剂，其成分包括冬虫夏草、当归、首乌、人参、枸杞、山茱萸等10种中药。

中国专利CN 101433708A公开了防脱生发药物，其成分包括人参、柏子仁、生姜等6种中药材，可促进毛发再生。

中国专利CN 103405620A公开了一种治疗脂溢性脱发及斑秃的中药制剂，原料包括制何首乌、墨旱莲、侧柏叶、熟地黄、山茱萸、党参、茯苓等14种中药，制成中药外用搽剂。其生发作用效果显著，但其作用效果弱于外用米诺地尔。

以上所述的治疗脱发的中成药和中国专利公开的生发药物多为中药复方制剂，它们质量控制方法和制备工艺等方面尚未达到现代天然药物的标准和要求。药品的功效成分、不良反应和禁忌等不够明确。部分生发中成药中含有冬虫夏草等名贵中草药，治疗成本较高(公开号为CN 102885974A、CN 101433708A的发明专利)。

本发明涉及的生发药物雪松醇(包括α-雪松醇、β-雪松醇)及其衍生物具有显著的生发效果，且未出现过敏等不良反应。不仅解决了长期大剂量使用化药产生的副作用，同时解决了中药有效成分不明确、无质量控制方法等问题。因此，生发药物雪松醇具有较好的开发前景和商业价值。本发明为开发安全、高效、价格低廉的生发药品和产品提供了依据。

发明内容

本发明所解决的技术问题是提供雪松醇及其衍生物在制备促进毛发生长和缓解脱发的药物中的应用。

所述的雪松醇可以商购或从如下原料中制备得到：侧柏、卷柏、龙柏、雪松、辽东冷杉、白杆、青杆、油松、华山松、乔松、杉木、水杉、洒金柏、桧柏、龙柏、金心球桧、鹿角桧、沙地柏、罗汉松、粗榧、矮紫杉、白皮松、伸筋草、蔓荆子、定心藤、黑骨藤、生姜、毛喉鞘蕊花、扬子毛莫、木棉花、红心大白菊或土茯苓中的一种或几种。

所述雪松醇及其衍生物的结构式为：

其中R代表H、C1-C20烷基、C2-C20烯烃基、C1-C20烷氧基、C1-C20脂肪酰基、C6-C10芳香酰基、C6-C10杂芳香酰基、C6-C10的取代芳香酰基或无机酸基，所述的取代基为羟基、C1-C4烷氧基、氨基或卤素，所述无机酸基是磷酸基或磺酸基；

进一步地，R代表H、C1-C10烷基、C2-C10烯烃基、C1-C10烷氧基、C1-C10脂肪酰基、C6-C10芳香酰基、C6-C10杂芳香酰基、C6-C10的取代芳香酰基或无机酸基，所述的取代基为羟基、C1-C4烷氧基、氨基或卤素，所述无机酸基是磷酸基或磺酸基；

更进一步地，R代表H、C1-C6烷基、C2-C6烯烃基、C1-C6烷氧基、C1-C6脂肪酰基、C6-C10芳香酰基、C6-C10杂芳香酰基、C6-C10的取代芳香酰基或无机酸基，所述的取代基为羟基、甲氧基、氨基或卤素，所述无机酸基是磷酸基或磺酸基；

再进一步地，R代表H、C1-C4烷基、C2-C6烯烃基、C1-C4烷氧基、C1-C4脂肪酰基、C6-C10芳香酰基、C6-C10杂芳香酰基、C6-C10的取代芳香酰基或无机酸基，所述的取代基为羟基、甲氧基、氨基或卤素，所述无机酸基是磷酸基或磺酸基；

最优选地，R代表H。

所述雪松醇及其衍生物可以为：柏木烯、乙酸柏木酯、乙酰柏木烯、环氧柏木烷、甲基柏木醚、α-雪松醇、β-雪松醇及其盐。

所述的盐为钾盐、钠盐、铵盐、镁盐或钙盐。

所述的雪松醇及其衍生物可以单独使用或与具有生发作用的中药材配伍使用。

所述药材中包括：生姜、人参、灵芝、大黄、何首乌、花椒、半夏、补骨脂、黑芝麻、天麻、侧柏叶、薄荷、北艾、防风、蔓荆子、枸杞、红花、当归、丹参、佛手、黄芪、女贞子、黄蜀葵、野山楂、猪苓、紫檀、银杏、川芎、地榆、黑豆或甘草中的一种或几种。

所述的雪松醇及其衍生物可以与具有生发作用的化药配伍使用。

所述的化药包括：米诺地尔、非那雄胺、α-雌二醇、二苯乙烯苷、环孢素、地蒽酚、毛果芸香碱、氯化卡波洛宁或西咪替丁中的一种或几种。

所述的脱发为斑秃、脂溢性脱发、化疗性脱发、老年性脱发、慢性休止期脱发、病后脱发类脱发。

所述的雪松醇及其衍生物可以与药学上可接受的载体制备各种剂型，可以用于外用给药或口服给药。

所述的外用给药的剂型选自洗发膏、洗发水、染发剂、护发素、洗液、精华、软膏、凝胶、贴剂、酊剂或喷雾剂。

所述的口服给药的剂型选自片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂或口服液体剂。

所述的雪松醇可以通过如下常规提取分离方法制备得到：分馏法、结晶法、冷冻法以及各种色谱分离方法。

试验结果表明，雪松醇具有促进毛发生长的作用，雪松醇的剂量为1mg/kg～500mg/kg。雪松醇以100mg/kg～400mg/kg的日剂量透皮给药时，其生发效果明显优于美国FDA批准并已在中国上市的生发药品米诺地尔。雪松醇以50mg/kg～200mg/kg的日剂量给药时，可减缓脱毛症状，与空白组对比作用显著。

本发明通过实验研究，证明雪松醇及其衍生物具有促进毛发生长的作用，同时具有缓解脱发的作用，使雪松醇及其衍生物增加了一种新的用途，具有产业利用价值，而且该结果可应用于促进毛发生长的医学临床实践，用于开发生发的药品和化妆品，具有潜在的经济和社会效益，并满足了人们对防脱发产品的需求。

附图说明

图1为：不同药物对小鼠毛发生长的影响；

图2为：不同药物对雌鼠皮肤组织学的影响；

图3为：不同药物对雄鼠皮肤组织学的影响；

图4为：不同药物对环磷酰胺引起的脱毛症状的影响；

图5为：不同药物对小鼠皮肤组织学的影响。

具体实施方式

实施例1：α-雪松醇对正常小鼠毛发生长的作用效果实验

本实施例是采用正常小鼠经松香、石蜡脱毛后，检验本发明所述的雪松醇对正常脱毛小鼠毛发生长的作用效果，对脱毛区域连续涂抹试药21天的药效学作用进行了观察。

本实施例中的实验步骤如下：

A.实验动物饲养及处理

实验动物为C57BL/6小鼠，体重18-22g，购自沈阳药科大学实验动物中心，实验前观察三天，选活泼、健康的小鼠用于实验。实验期间各组小鼠至于安静环境，分笼饲养，饲喂普通饲料，自由摄食饮水。每日更换饮水和饲料，保持动物生活环境通风及清洁卫生。白天(12±2)小时光照，室内温度(20±2)℃，相对湿度40％～60％。小鼠基础饲养一周后，随机分组。

具体操作如下：取C57BL/6种小鼠，雌性。在轻度麻醉下，将质量比1:1混合的松香和石蜡混合物加热融化后涂于小鼠背部，待其凝固变硬后轻轻揭去，每只小鼠的脱毛区域面积约为2×2cm²，脱毛后按体重随机分组，每组10只，共6组，给药方案具体如下:

(1)空白对照组：脱毛后涂抹95％乙醇；

(2)α-雪松醇高剂量组：涂抹雪松醇95％乙醇溶液40mg/kg；

(3)α-雪松醇中剂量组：涂抹雪松醇95％乙醇溶液20mg/kg；

(4)α-雪松醇低剂量组：涂抹雪松醇95％乙醇溶液10mg/kg；

于脱毛后，每天涂抹试药2次，连续21天，第22天处死，测新生毛区域鼠毛长度及鼠毛重，每天观察各组动物毛发生长情况，结果如下。

表中：与空白对照组比较，*表示P<0.05，具有统计学意义，**表示P<0.01，具有显著差异。

小鼠毛发生长状态如图1，给药后第五天，米诺地尔组和雪松醇组小鼠的背部皮肤变黑，其中雪松醇高剂量组更明显。涂药后第10天，雪松醇组小鼠的背部出现少量绒毛，其他两组未出现明显变化。光镜下观察小鼠毛囊的皮肤组织学变化，结果如图2(雌鼠)，图3(雄鼠)所示：给药组毛囊数均有不同程度增多、毛囊增长，高剂量组雪松醇组毛囊数目与空白对照组有显著性差异。

由上表可知，雪松醇给药组具有促进脱毛小鼠毛发生长的作用，40mg/kg雪松醇给药组与空白组毛长、毛重均有显著性差异。雪松醇高剂量组的活性略强于米诺地尔的活性。

实施例2：β-雪松醇对化疗损伤性脱发小鼠毛发生长的作用效果实验

本实施例是采用正常小鼠经松香、石蜡脱毛后，与给药后第8天，单剂量注射环磷酰胺(150mg/kg，用前溶于新鲜配置的0.9％生理盐水中)，检验本发明所述的雪松醇对损伤性脱发小鼠毛发生长的作用效果，对脱毛区域连续涂抹试药21天的药效学作用进行了观察。

给药方案如下：

(1)空白对照组：脱毛后涂抹95％乙醇；

(2)β-雪松醇高剂量组：涂抹雪松醇95％乙醇溶液200mg/kg；

(3)β-雪松醇中剂量组：涂抹雪松醇95％乙醇溶液100mg/kg；

(4)β-雪松醇低剂量组：涂抹雪松醇95％乙醇溶液50mg/kg；

于脱毛后，每天涂抹试药1次(0.1mL)，脱毛后第8天，单剂量连续注射环磷酰胺(150mg/kg)，给药21天，第22天处死，测新生毛区域鼠毛长度及鼠毛重，每天观察各组动物毛发生长情况，第21天毛长结果如下。于用药后第21d，取动物背部皮肤，10％甲醛固定，进行常规组织脱水、石蜡包埋、HE染色(苏木精-伊红染色)，光镜下观察小鼠毛囊的皮肤组织学变化。生长状态如图4。

于用药后第21d，取动物背部皮肤，10％甲醛固定，进行常规组织脱水、石蜡包埋、HE染色(苏木精-伊红染色)，光镜下观察小鼠毛囊的皮肤组织学变化，结果如图5所示。

生长第21天，C57BL/6小鼠的毛长、毛重数据如下：

表中：与空白对照组比较，*表示P<0.05，具有统计学意义，**表示P<0.01，具有显著差异。

结果分析：从小鼠注射环磷酰胺第3天开始出现稀疏脱毛，到第5天脱毛程度加重，β-雪松醇组脱毛情况较轻，空白组背部大面积脱毛。到第6天，除β-雪松醇高剂量组外，其他3组背部大面积脱毛。直至第12天，空白对照及给药组小鼠背部的毛发生长与正常小鼠无异。生长第21天，β-雪松醇高、中剂量组较空白对照组的毛长、毛重有明显的增加，与米诺地尔组比无显著差异。组织切片结果显示，给药组毛囊数均有不同程度增多，中剂量组雪松醇组毛囊数目与空白对照组有显著性差异。

实施例3～6：雪松醇组合物对正常小鼠毛发生长的作用效果实验

本实施例是采用正常小鼠经松香、石蜡脱毛后，检验本发明所述的雪松醇对正常脱毛小鼠毛发生长的作用效果，对脱毛区域连续涂抹试药21天的药效学作用进行了观察。

给药方案如下(空白对照为75％乙醇溶液)：

于脱毛后，每天涂抹试药1次，连续21天，第22天处死，测新生毛区域鼠毛长度及鼠毛重，每天观察各组动物毛发生长情况，结果见表3。

表中：与空白对照组比较，*表示P<0.05，具有统计学意义，**表示P<0.01，具有显著差异。

结果分析：雪松醇与具有生发作用的中草药配伍给药后，其生发作用显著提高。

实施例7：口服雪松醇生发片对正常小鼠毛发生长的作用效果实验

本实施例是采用正常小鼠经松香、石蜡脱毛后，灌胃给予雪松醇生发片(使用蒸馏水制为悬浮液)。连续给药21天后，对小鼠脱毛区域的毛发长度和重量进行测定。本实施例选用两种阳性药，分别为外用2％米诺地尔，0.1mL/d；口服药物养血生发胶囊。

给药方案如下(空白对照为蒸馏水)

于脱毛后，每天给药1次，连续21天，第22天处死，测新生毛区域鼠毛长度及鼠毛重，每天观察各组动物毛发生长情况，结果见表4。

表中：与空白对照组比较，*表示P<0.05，具有统计学意义，**表示P<0.01，具有显著差异。结果分析：口服雪松醇较空白组相比，具有明显的生发活性。其活性优于养血生发胶囊，与外用生发药物米诺地尔作用相似。

实施例8：α-雪松醇对人毛乳头细胞生长的影响

本实施例是通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定α-雪松醇及阳性药米诺地尔作用后人毛乳头细胞增值率。

本实施例观察了α-雪松醇对培养的人毛乳头细胞增殖的影响，发现在浓度达到80μg/mL时，α-雪松醇对毛乳头细胞增殖具有明显的促进作用，其作用优于米诺地尔。

实施例9：雪松醇的皮肤刺激性试验

采用多次给药皮肤刺激性试验。取豚鼠6只，背部脱毛面积约为3×3cm²，24h后于豚鼠左侧脱毛区涂抹72mg/kg雪松醇，右测脱毛区涂空白基质约1g，每日1次，连续给药7天，于末次涂药24h后用温水洗去药物，观察除去残留药物后1h、24h、48h、72h豚鼠皮肤的刺激性反应，并进行评分。

由实验结果可知，雪松醇无刺激性，应用后皮肤无水肿。

实施例10：雪松醇的过敏性试验

取健康白色豚鼠10只，体重250～300g，随机分为2组，每组5只，设雪松醇实验组及2，4一二硝基氯苯(DNCB)阳性对照组。给药前24h将豚鼠背部左侧去毛，去毛区约3×3cm²。致敏接触：将0.l mL雪松醇溶液滴加在两层滤纸片上，敷贴在去毛皮肤上，用两层纱布覆盖，最后用无刺激性胶布封闭固定，与皮肤接触6h，隔日致敏1次，共3次，阳性对照组同法致敏。激发接触：于末次接触后14天，在右侧去毛区同法涂抹雪松醇0.lml，6h后去除药液，即刻观察，并于24h、48h、72h再观察有无皮肤过敏反应，进行积分评价，并计算各组动物的反应平均值及致敏率。阳性对照组同法激发接触和观察。

试验结果如下：

实验结果表明，2，4一二硝基氯苯阳性对照组动物激发接触后6h局部皮肤全部出现红斑、水肿，48h开始逐渐减退，至72h退尽，致敏率为100％。雪松醇组豚鼠所有动物均未出现红斑、水肿，表明雪松醇无致敏作用。

以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定为本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下做出若干等同替代或明显变型，而且性能或用途相同，都应当视为属于本发明由所提交的权利要求书确定的专利保护范围。

Claims (6)

1.雪松醇作为唯一活性成分在制备促进毛发生长和缓解脱发药物中的应用，所述的雪松醇为如下结构中的一种：

其中R为H。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于：所述的脱发为斑秃、脂溢性脱发、化疗性脱发、老年性脱发、慢性休止期脱发。

3.如权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述的雪松醇从如下原料中制备得到：侧柏、卷柏、龙柏、雪松、辽东冷杉、白杆、青杆、油松、华山松、乔松、杉木、水杉、洒金柏、桧柏、鹿角桧、沙地柏、罗汉松、粗榧、矮紫杉、白皮松、伸筋草、蔓荆子、定心藤、黑骨藤、生姜、毛喉鞘蕊花、木棉花、红心大白菊或土茯苓中的一种或几种。

4.如权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述的雪松醇单独使用或与具有生发作用的中药材或化药配伍使用。

5.如权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述的雪松醇与药学上可接受的载体制备口服或外用制剂。

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述的外用制剂为洗发膏、洗发水、染发剂、护发素、洗液、精华、软膏、凝胶、贴剂、酊剂或喷雾剂，所述的口服制剂为片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、口服液体剂。