TWI614043B - 紫蘇種子萃取物及其治療精神障礙之藥理作用 - Google Patents

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Abstract

本發明係關於一種包含迷迭香酸、木犀草素、芹菜素之紫蘇種子(PERILLAE FRUCTUS)萃取物，其中迷迭香酸、木犀草素、芹菜素的重量比為0.1~200：0.1~200：1，亦關於使用前述萃取物或者使用一至少含有迷迭香酸、木犀草素、芹菜素其中一活化劑之紫蘇種子萃取物來治療精神障礙。

Description

紫蘇種子萃取物及其治療精神障礙之藥理作用
本發明係關於一種可用於治療精神障礙症之紫蘇種子萃取物及其製作方法。
在美國及其他先進國家，精神障礙為身心障礙之主要成因。詳Kessler et al.,Archives of General Psychiatry 2005,62(6),617-27，以及世界衛生組織the global burden of disease：2004 update,Table A2,Geneva,Switzerland,2008二文件。
舉例而言，注意力不足過動症(ADHD)之精神障礙影響6~7%的幼童，導致課業表現不良(請參閱Willcutt,Neurotherapeutics 2012,9,490-99文件)。常見與ADHD相關的精神障礙包括：對抗反叛症、行為障礙、發育協調障礙、原發警覺性障礙、躁鬱症，抑鬱症，焦慮症，強迫症，物質使用障礙，和不寧腿症候群(restless legs syndrome)。
ADHD以及相關的精神障礙可以哌醋甲酯和苯丙胺等興奮劑治療，惟為安全起見，學齡前幼童不建議以藥物治療，因副作用包括食慾減少、睡眠問題、焦慮、煩躁、腹痛、頭痛、生長緩慢及心血管問題等。詳 國立心理健康研究院(National Institute of Mental Health)注意力不足過動症(ADHD),NIH Publication No.12-3572(2012)文件。
有鑑於此，實需開發一用於治療ADHD及其相關精神障礙症的安全藥物。
本發明係源於意外發現紫蘇種子(PERILLAE FRUCTUS)-一種傳統亞洲食品-之某些萃取物對於治療包括ADHD在內之精神障礙有其成效。
因此，本發明一方面係關於一可用於治療精神障礙症(如：ADHD、對抗反叛症、行為障礙、發育協調障礙、原發警覺性障礙、躁鬱症、抑鬱症、焦慮症、強迫症、物質使用障礙，和不寧腿症候群)之紫蘇種子萃取物，該萃取物中含有迷迭香酸、木犀草素、芹菜素，且其中迷迭香酸、木犀草素、芹菜素的重量比為0.1~200：0.1~200：1(如：0.1~20：0.1~20：1,0.2~10：0.2~10：1或0.5~5：0.5~5：1)。
本發明另一方面係關於一紫蘇種子萃取物之萃取方法，該方法包括下列步驟：(1)備妥紫蘇種子；(2)將紫蘇種子與第一溶劑於15~80℃(如50~80℃或15~50℃)溫度下混合1~10小時以獲得脫脂的紫蘇種子；(3)將脫脂後的紫蘇種子與第二溶劑於50~100℃(如70~100℃)溫度下混合1~4小時以獲得含有足以治療精神障礙之含有迷迭香酸、木犀草素、芹菜素的紫蘇種子萃取物。值得注意的是，紫蘇種子與第一溶劑重量比應為1：3~30，而紫蘇種子與第二溶劑重量比應為1：5~30。
第一溶劑可為(但不限於)：二氧化碳、C6-C8烷烴、C2-C20醚、苯、 C2-C20烷烴或其混合物。第二溶劑一般為C1-C4醇、C3-C10酮、乙腈、乙酸乙酯、水或其混合物。當使用乙醇-水混合物時，該溶劑之乙醇含量應少於60%之體積(如：10~60%或45~55%)或大於90%之體積(如：90~99%或93~98%)。
另本發明範圍包括使用前揭紫蘇種子萃取物來治療精神障礙，或用以製作治療精神障礙之藥物。
另本發明範圍亦包括將有效濃度的紫蘇種子萃取物注入精神障礙患者的治療精神障礙之方法，該萃取物中至少含有迷迭香酸、木犀草素、芹菜素三者之一。
「萃取物」係指一固體、懸浮液或溶劑內含有一種或多種自植物或植物之一部分取得之活性物質，一般而言，其可被直接施用於需要之患者身上或可以直接當作藥物成分使用。
「烷烴」係指一飽和烴、直鏈烴、支鏈烴、環烴或無環烴。實例包括戊烷、異戊烷、正戊烷、環戊烷、正己烷、2-甲基戊烷、3-甲基戊烷、2,3-二甲基丁烷、2,2-二甲基丁烷、環己烷、庚烷、環庚烷、辛烷、環辛烷，及其混合物。
「醚」係指一含有ROR’化學式之有機物質，其中每一R與R’係分別為一烷基或芳基。實例包括乙醚、苯基醚、甲基苯基醚，及甲基叔丁基醚。「烷基」係指烷烴部分缺少一氫原子；「芳基」係指烴部分有一個或多個含有雜原子(如氮、氧或硫)之原子環。芳基部分的實例包括苯基、萘基、萘基、芘基、蒽基、菲基、呋喃基、亞呋喃基、芴基、吡咯基、噻吩基、噁唑基、咪唑基、噻唑基、吡啶基、嘧啶基、喹唑啉基、喹啉基、異喹啉基和吲哚基。
「酯」係指一含有RCO2R’化學式之有機物質，其中每一R與R’係分別為一烷基或芳基。實例包括乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、甲酸甲酯、甲酸乙酯、乙酸異丙酯、乙酸異丁酯、丙酸乙酯及其組合。
「醇」係指一含有ROH化學式之有機物質、其中R為一烷基或芳基。實例包括甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、丁醇、異丁醇、叔丁醇、乙二醇及其組合。
「酮」係指一含有RCOR’化學式之有機物質，其中每一R與R’係分別為一烷基或芳基。實例包括丙酮、環己酮、甲基乙基酮、乙基芐基酮、及其組合。
「治療」係指將一有效濃度之萃取物使用或施用於一精神障礙患者，以期可治癒、治療、緩解、減輕或改善其疾病或症狀。「一有效濃度」係指在受試者身上可達到期望效果的萃取物量，熟習該技術之人均知，有效濃度因施用方式、使用之賦形劑，以及其他併行之治療(如：活性物質之使用)而異。上述本發明的萃取物治療精神障礙的功效可預先藉由在哺乳動物身上進行體內測定得知。舉例而言，該萃取物可先施用在一有精神障礙之動物(如：小老鼠)身上以評估其療效，基於測試結果，本發明可決定一合適濃度範圍及施用方式。
以下，謹以本發明之較佳之實施例及圖例詳細說明如後，本發明之其他特徵、目的、優點將可見於實施方式、圖例及申請專利中。
圖1包含10個圖(1a-1j)，為本發明之迷迭香酸/木犀草素/芹菜素萃取物的相對含量之HPLC色譜圖。
圖2包含2個圖(2a及2b)，為去甲腎上腺素攝取的抑制作用研究數據。
圖3包含3個圖(3a,3b及3c)，為施用本發明萃取物之自發性高血壓大鼠的全部活動情形。
圖4包含3個圖(4a,4b及4c)，為施用本發明萃取物的大鼠身上採集到的透析液之去甲腎上腺素、多巴胺、血清素之濃度。
圖5包含3個圖(5a,5b及5c)，為施用本發明萃取物的大鼠身上採集到的透析液之去甲腎上腺素、多巴胺、血清素之濃度。
紫蘇此一植物已在中國、日本、韓國被種植超過200年，它的葉子用於做魚湯或配生魚片，而它的種子則用於湯之調味。
如先前所述，本發明之紫蘇種子萃取物係先將紫蘇種子與一非極性溶劑(如：正己烷)於15~80℃溫度下混合1~10小時以獲得脫脂的紫蘇種子，再將脫脂後的紫蘇種子與一極性溶劑(如：水及乙醇)於25~100℃溫度下混合1~4小時以獲得含有迷迭香酸、木犀草素、芹菜素的液態萃取物。本發明亦可將該液態萃取物進一步濃縮或乾燥成固態之紫蘇種子萃取物下述為萃取過程例示：乾燥的紫蘇種子與正已烷混合並攪拌以脫脂，移除正己烷後，將脫脂後的紫蘇種子乾燥後，以體積占比95%的乙醇或水沖泡後，去除雜質即可得一綠色液態紫蘇種子萃取物。
該萃取物因此含有至少三項活性物質，亦即：迷迭香酸、木犀草素、芹菜素，其化學式如下：
Figure TWI614043BD00001
該液態萃取物可直接用於治療ADHD及相關精神障礙，或視情形進一步濃縮或稀釋使用。
另，本發明亦可將該液態萃取物乾燥以取得紫蘇種子固態萃取物，該紫蘇種子固態萃取物每克可包含0.1~300毫克(如：0.1~120毫克及0.1~60毫克)之迷迭香酸0.1~250毫克(如：0.1~100毫克及0.1~50毫克)之木犀草素，以及0.1~300毫克(如：0.1~120毫克及0.1~60毫克)之芹菜素。迷迭香酸、木犀草素及芹菜素之總重量佔該紫蘇種子固態萃取物重量0.03~67%(如：0.03~34%或0.03~17%)。一般而言，脂肪含量少於重量之40%(如：少於重量之30%、25%或20%)、碳水化合物含量少於重量之40%(如：少於重量之35%、30%或25%)，而蛋白質含量少於重量之15%(如：少於重量之10%或5%)。
該液態萃取物及固態萃取物均可以作為藥物成份供口服使用，做成膠囊、藥片、乳劑、水狀懸浮液、膠體分散液或溶液。若是製成藥片，一般係以乳糖或玉米澱粉做為載體，一般亦加入如硬脂酸鎂之潤滑 劑；若是製成口服膠囊，有效的稀釋劑包括乳糖和乾燥的玉米澱粉；若是製成口服之水狀懸浮液或膠體分散液，活性成份則呈油狀溶解或懸浮於乳化或懸浮介質中。亦可依喜好增加甜味劑、增味劑或色素。固體之口服劑則可以通過非晶態噴霧乾燥技術、熱熔融擠出法，微粉法，和奈米碾磨技術來製備。
該藥物成份之載體必須為「可接受的」，亦即該載體與各活性成份必須相容(甚者，可穩定該活性成份)，且不致對患者造成傷害。一種或多種增溶劑可作本發明之萃取物之藥物賦形劑。其它載體的實例包括膠體氧化矽、硬脂酸鎂、纖維素、十二烷基硫酸鈉和D&C 10號黃色素。
本發明亦可以使用色層分析技術，以增加能有效地治療ADHD和相關的精神障礙的活性化合物。色層分析技術包括濾紙層析、薄層層析、管柱層析(例如：用Diaion HP-20矽膠柱上的Sephadex交聯葡聚醣凝膠柱)、氣相層析和液相層析(例如：HPLC)。適合作為洗脫劑的溶劑包括水、甲醇、乙腈，及其混合物，亦可使用梯度流析系統(gradient eluent system)。又或者，可使用重結晶法來增強一種或多種活性成份，重結晶溶劑可為有機或無機溶劑，如一在低溫度有低溶解度、在高溫度有高溶解度之溶劑。亦可使用兩種溶劑(solvent pair)或混合溶劑，以期獲得一更有效之產物。
活性物質含量可以層析法或其他方式測量，如UV、MS或NMR。
下列各例僅為演示之用，非用於限制本發明之範圍。熟習本發明之相關技藝者，可容易地在本發明之精神內，基於本發明之相關說明，使用本發明，因此於申請專利範圍內亦包含其他具體態樣，下列各例僅為 參考之用。
實施例1-9
9種紫蘇種子萃取物之製備
實施例1中，一紫蘇種子萃取物2396-PF10之製備方式詳述如後：將乾燥的紫蘇種子(100g)在25℃與正己烷(600g)混合並攪拌2小時以進行脫脂後，將正己烷移除。以正己烷脫脂之程序再重複進行3次後，將所獲得之紫蘇種子於烤箱中以60℃乾燥24小時後，將乾燥物與乙醇(95%；1000g)混合且持續加熱並保持來回流動1小時。待該混合物降至室溫後，將其過濾以獲得一乙醇溶液；固態之紫蘇種子則倒回燒瓶中，再另加入1000g的乙醇，重複前揭萃取過程，以取得第二次的乙醇溶液。將該二乙醇溶液混合並乾燥，可獲得2.89g的紫蘇種子固態萃取物，亦即2396-PF-10。該固態萃取物另將以實施例10所述方式進行HPLC分析。
實施例2中，另一紫蘇種子萃取物2396-PF10-Hot之製備方式與實施例1類似，僅正己烷脫脂過程係在70℃下混合並攪拌1小時進行2次，而非在25℃下混合並攪拌2小時進行4次。可萃取出2.48g的2396-PF10-Hot。該固態萃取物亦將以實施例10所述方式進行HPLC分析。
實施例3~6中，另4種紫蘇種子萃取物，亦即2396-PF3,2396-PF5,2396-PF7，以及2396-PF12之製備方式與2396-PF10製備方式相同，得到的萃取量分別為3.03%,2.75%,2.41%，及2.9%，亦將以實施例10所述方式進行HPLC分析，參閱實施例10。2396-PF3及2396-PF7對ADHD的抑制效果評估詳述於實施例12中。
在實施例7中，萃取物PF7-hex-H2O之製備方式與前述2396-PF10之製備方式相同，更精確的說，乾燥的紫蘇種子(800g)在25℃與正己烷(4800g)混合並攪拌2小時以進行脫脂後，將正己烷移除。以正己烷脫脂之程序再重複進行3次後，將所獲得之紫蘇種子於烤箱中以60℃乾燥24小時後，將乾燥物與水(8000g)混合且持續加熱並保持來回流動1小時。以過濾方式取得水溶液後，將固態之紫蘇種子則倒回燒瓶中，再另加入8000g的水後重複前揭萃取過程，並取得第二次的水溶液。將該二水溶液混合並乾燥，可獲得49.57g(6.2%的萃取率)的紫蘇種子固態萃取物，亦即PF7-hex-H2O。該固態萃取物將另以實施例10所述方式進行HPLC分析。
在實施例8中，萃取物PF7-hex-50EtOH之製備方式與前述2396-PF10製備方式類似，更精確的說，乾燥的紫蘇種子(600g)在25℃與正己烷(3600g)混合並攪拌2小時以進行脫脂後，將正己烷移除。以正己烷脫脂之程序再重複進行3次後，將所獲得之紫蘇種子於烤箱中以60℃乾燥24小時後，將乾燥物與乙醇-水混合液(乙醇濃度50%v/v；6000g)混合且持續加熱並保持來回流動1小時。以過濾方式取得溶液後，將固態之種子倒回燒瓶中，再另加入6000g的相同乙醇-水混合液，並重複前揭萃取過程，並取得第二次的水溶液。將該二水溶液混合並乾燥，可獲得27.05g(4.5%的萃取率)的紫蘇種子固態萃取物，亦即PF7-hex-50EtOH。該固態萃取物另以實施例10所述方式進行HPLC分析。
在實施例9中，萃取物PF7-hex-EA之製備方式與前述2396-PF10製備方式類似，更精確的說，乾燥的紫蘇種子(2400g)在25℃與正己烷 (14400g)混合並攪拌2小時以進行脫脂後，將正己烷移除。以正己烷脫脂之程序再重複進行3次後，將所獲得之紫蘇種子於烤箱中以60℃乾燥24小時後，將乾燥物與乙酸乙脂(24000g)混合且持續加熱並保持來回流動1小時。以過濾方式取得乙酸乙脂溶液後，將固態之種子倒回燒瓶中，另加入24000g的乙酸乙脂，並重複前揭萃取過程，取得第二次的乙酸乙脂溶液。將該二水溶液混合並乾燥，可獲得14.32g(0.6%的萃取率)的紫蘇種子固態萃取物，亦即PF7-hex-EA。該固態萃取物另以實施例10所述方式進行HPLC分析。
實施例10
以HPLC分析實施例1~9製備的萃取物如下圖1。進行HPLC的方式如下：2396-PF10、2396-PF10-Hot、2396-PF3、2396-PF5、2396-PF7、2396-PF12、PF7-hex-H2O、PF7-hex-50EtOH，以及PF7-hex-EA均在254nm紫外線波長下，進行梯度逆相層析，在Waters Atlantis T3層析管柱(5μm,4.6 x 250mm)以移動相溶劑A(0.1%甲酸水溶液)及移動相溶劑B(乙腈)在35℃下進行梯度流析，流速為1.0mL/min。下表1為該二移動相溶劑隨時間之組合變化。
Figure TWI614043BD00002
下表2為2396-PF7、PF7-hex-H2O,、PF7-hex-50EtOH，以及PF7-hex-EA四種萃取物中迷迭香酸、木犀草素，以及芹菜素之含量。該三成份總合所占含量亦顯示於表中。
Figure TWI614043BD00003
下表3顯示2396-PF3、2396-PF5、2396-PF7、2396-PF10、2396-RE10-Hot，以及2396-PF12六種萃取物中迷迭香酸、木犀草素，以及芹菜素之含量，該三成份總合所占含量亦顯示於表中最末欄，迷迭香酸、木犀草素，以及芹菜素間之比例顯示於表4。
在2396-PF7及2396-PF10中，脂肪含量、碳水化合物含量及蛋白質含量係依中華民國國家標準(CNS 5035及CNS 5036)測量而得，2396-PF7含26.32wt%(重量百分比)之脂肪，而2396-PF10則含25.55wt%脂肪、31.15wt%碳水化合物及7.97wt%蛋白質。
Figure TWI614043BD00004
Figure TWI614043BD00005
實施例11 2396-PF10萃取物於抑制正腎上腺素攝入之測試
將含有大量正腎上腺素轉運子之PC-12細胞，以每孔含60,000或120,000細胞之密度，植入到24孔或96孔細胞培養盤之培養基中。在37℃及5% CO2的大氣環境下經過24小時後，將培養基移除，於各孔中置入含有0.1%牛血清白蛋白(BSA)的漢克平衡鹽溶液(Hank’s Balanced Salt Solution，HBSS)且加入或不加入2396-PF10萃取物，在37℃下培養60分鐘。接下來，將螢光染色液加入每一孔中靜置至少60分鐘後，移除螢光染色液，以HBSS沖洗後，再添加1 X Trypsin-EDTA溶解該等細胞。嗣以 流式細胞儀分析該細胞液，並以M5酶標儀進行量化分析，相對螢光單位(RFUs)記錄如圖2所示。
2396-PF10萃取物意外地可有效抑制PC-12細胞對正腎上腺素的再回收。圖2及圖3顯示該萃取物與托莫西汀(Atomoxetine，市面上治療ADHD的藥物)、迷迭香酸、木犀草素及芹菜素之比較結果，其中圖2a係在每細胞培養盤孔含60,000細胞之密度下進行，而圖2b係在每細胞培養盤孔含120,000細胞之密度下進行。
實施例12
以下述程序對2396-PF3及2396-PF7二萃取物治療ADHD之效果進行評估。參考文獻：Sagvolden et al.,Biological Psychiatry 2005,57,1239-47；Sagvolden,Neuroscience Biobehavioral Review 2000,24,31-39；Wiersema et al.,Journal of Neural Transmission 2005,1417-30；and Okamoto,Japanese Circulation Journal 1963,27,282-93.。
以患有自發性高血壓的大鼠(Spontaneously hypertensive rats，以下簡稱患鼠)為ADHD實驗對象，本發明係使用全自動活動分析系統(4通道，San Diego儀器)評估患鼠的自發活動。更具體地說，患鼠被置於關閉的籠子中(40cm×40cm)，每隔2.5公分水平設置紅外線束柵，紀錄一小時內每隔5分鐘自發活動之總運動量，所有的分析均於上午9-10時在一安靜環境下進行。關於該分析的進一步說明，可詳下列文獻：Furuie et al.,Behavioural Pharmacology 2013,24,678-83；Hiraide et al.,Pharmacology Biochemistry and Behavior 2013,105,89-97；van den Bergh et al.,Pharmacology Biochemistry and Behavior 2006,83,380-90；and Yang,et al.,Brain Research Bulletin 2006,71,301-10。
本發明使一組患鼠(n=7或8)口服200mg/kg或2000mg/kg濃度之2396-PF3或2396-PF7，另使控制組患鼠(n=6)口服生理鹽水而非2396-PF3或2396-PF7。在第4天時測量每一隻口服200mg/kg或2000mg/kg濃度之2396-PF3或2396-PF7患鼠之活動量。圖3a顯示所有患鼠在一小時內之平均運動量。令人意外地，口服2000mg/kg濃度之2396-PF3及2396-PF7的兩組患鼠，在第4天的過動情形明顯地被抑制。如圖3a所示，PDC為2396-PF3及2396-PF7的總和。
以上之程序並被用來評估不同濃度(200mg/kg、500mg/kg、1000mg/kg，以及2000mg/kg)之2396-PF10萃取物對治療ADHD之效果。控制組則使用生理鹽水。結果如圖3b所示。
令人意外地，500mg/kg濃度之2396-PF10已可有效地抑制患鼠之過動情形。
2000mg/kg濃度的PF7-hex-H2O及PF7-hex-50EtOH亦以上述程序評估其對於ADHD之療效。控制組使用生理鹽水，結果如圖3c所示。
出乎意料地，PF7-hex-H2O在患鼠服用4天後即可有效地抑制其過動情形，但PF7-hex-50EtOH並無法抑制患鼠過動情形。
實施例13
萃取物2396-PF7以下列程序被使用於腦微透析中，該程序細節請參考文獻：Ago et al.,Neuropsychopharmacology 2005,30,43-51；and Amargos-Bosch et al.,Journal of Neurochemistry 2007,102,550-61。
具體而言，試驗用的雄性SD大鼠(Sprague-Dawley rats)，在水和飲食無限供應的情形下，關在一個溫度為22±1℃而光照為上午7時至 下午7時的籠子裡。一微透析探針插入到SD大鼠大腦的前額皮質區，以1毫升/分鐘流速靜脈注射一人工細胞外液(149mM的NaCl、1.2mM的CaCl2、1.2mM的MgCl2及2.8mM的KCl)2小時。隨後，每隔20分鐘收集透析液，並用HPLC分析，其中前3次取得透析液做為控制樣本後，對大鼠腹腔注射一劑濃度為100mg/kg或300mg/kg之2396 PF7萃取物，再收集更多的透析液並進行分析。
以HPLC分析測定透析液中正腎上腺素(NE)、多巴胺(DA)和5-羥色胺(5-HT)的濃度，低濃度的NE、DA、5-HT與ADHD有關。參考文獻：Prince,Journal of Clinical Psychopharmacology 2008,3,Suppl 2,S39-45。
圖4及5顯示分析結果，在該二圖中PDC2396或PDC2396 PFRM-7為2396-PF7，圖中Tween80(占水溶液的2%)係為載體。
出乎意料之外地，濃度100mg/kg或300mg/kg的2396-PF7均可增加受試大鼠腦中之NE濃度。
其他實施例
本說明書中所揭示之全部特徵可以任何組合方式組合。於是，本發明說明書中所揭示之各別特徵可由依相同、相等或類似目的之替代特徵取代。因此，除非另行清楚地指示，所揭示之各特徵僅為一系列同等物或類似特徵之實例。
從前述之說明，習於該項技藝人士可容易地確定本發明之基本特徵，且在未偏離其範圍下，可進行本發明之各種改變與修飾，以使其適於各種不同用途與狀況。因此，於申請專利範圍內亦包含其他具體態樣。

Claims (8)

  1. 一種包含迷迭香酸、木犀草素及芹菜素之紫蘇種子(PERILLAE FRUCTUS)之萃取物的用途，用於製備治療注意力不足過動症(ADHD)相關之精神障礙症之醫藥品，其中該紫蘇種子之萃取物係由包含下列步驟的方法製備得：(1)提供紫蘇種子；(2)將紫蘇種子與已烷於15~80℃溫度下混合1~10小時以獲得脫脂的紫蘇種子；(3)將該脫脂後的紫蘇種子與第二溶劑於50~100℃溫度下混合1~4小時以獲得含有迷迭香酸、木犀草素、芹菜素之紫蘇種子萃取物，且迷迭香酸、木犀草素、芹菜素之重量比為0.1~200：0.1~200：1；其中，該第二溶劑為選自水、乙醇、乙腈、丙酮、乙酸乙酯或其混合物，當使用乙醇-水混合物時，該溶劑之乙醇含量最多60%之體積或最少90%之體積，紫蘇種子與該己烷重量比為1：3~30，且紫蘇種子與該第二溶劑重量比為1：5~30。
  2. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該紫蘇種子之萃取物中迷迭香酸、木犀草素及芹菜素之重量比為0.1~20：0.1~20：1。
  3. 如申請專利範圍第2項所述之用途，其中該紫蘇種子之萃取物中迷迭香酸、木犀草素及芹菜素之重量比為0.2~10：0.2~10：1。
  4. 如申請專利範圍第3項所述之用途，其中該紫蘇種子之萃取物中迷迭香酸、木犀草素及芹菜素之重量比為0.5~5：0.5~5：1。
  5. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該ADHD-相關之精神障礙症 包括注意力不足過動症(ADHD)、對抗反叛症、行為障礙、發育協調障礙、焦慮症和強迫症。
  6. 如申請專利範圍第5項所述之用途，其中該精神障礙症為注意力不足過動症(ADHD)。
  7. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該該紫蘇種子之萃取物之製備方法包含將紫蘇種子與己烷於50~80℃溫度下混合，獲得該脫脂的紫蘇種子，再與該第二溶劑於70~100℃溫度下混合。
  8. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該紫蘇種子之萃取物之製備方法包含將紫蘇種子與己烷於15~50℃溫度下混合，獲得該脫脂的紫蘇種子，再與該第二溶劑於70~100℃溫度下混合。
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"紫蘇子及其脫脂粕萃取物之抗氧化與抗發炎作用"，東海大學碩士論文，上架日期：2009/07/21
Int. J. of Drug Discovery & Herbal Research, 2012, 2(1)：282-295
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