TWI604852B

TWI604852B - 藉由拮抗ｉｌ－６受體抑制腫瘤生長之方法

Info

Publication number: TWI604852B
Application number: TW101141702A
Authority: TW
Inventors: 張力
Original assignee: 再生元醫藥公司
Priority date: 2011-11-10
Filing date: 2012-11-09
Publication date: 2017-11-11
Also published as: US9409990B2; CN103930443B; US20130122003A1; TW201332569A; TW201716776A; SG11201401286QA; BR112014011211A2; EP2776468B1; WO2013071016A2; CA2853836C; US20170022279A1; US20140322215A1; ZA201402414B; CN103930443A; MY163953A; WO2013071016A3; AU2012335596A1; JP2017095489A; KR101718748B1; IL231854A0

Description

藉由拮抗IL-6受體抑制腫瘤生長之方法

本發明是有關於在個體體內抑制或減弱腫瘤生長或增生的組成物與方法。更具體言之，本發明是有關於包含向帶有腫瘤之個體投與介白素-6(IL-6)拮抗劑的方法。

已顯示血管內皮生長因子(VEGF)的拮抗劑在許多實驗及臨床狀態下有效抑制腫瘤生長。VEGF拮抗劑藉由靶定腫瘤血管分布發揮其治療效用。但是，已觀察到腫瘤在某些狀況下可能對抗VEGF劑發展出抗性。因此，在本技藝中需要新穎的治療方法用以治療腫瘤，包括抑制對抗VEGF療法已發展出抗性之腫瘤生長的方法。

介白素-6(”IL-6”)是一種在多種癌症類型中表現的前發炎性細胞激素。臨床研究已顯示，血清IL-6濃度增加與患者治療結果差有關。IL-6表現升高可能是因為致癌信號傳遞路徑活化及/或因為與癌症發展有關之慢性發炎。IL-6經由其異型二聚體受體IL-6R/gp130傳遞信號以活化JAK/STAT與Ras信號傳遞路徑。具體而言，IL-6強力地活化STAT3，其已顯示會增進腫瘤細胞增生、侵襲與存活。已顯示使用針對IL-6 或IL-6R的單株抗體抑制IL-6信號傳遞在幾個臨床前模型中會抑制腫瘤生長，暗示IL-6路徑對於腫瘤來說是充滿吸引力的治療標的。然而，IL-6濃度與抗VEGF-抗性之間的關聯性，或使用IL-6拮抗劑來治療抗VEGF-抗性腫瘤尚未被描述過。

發明摘要

本發明至少部分是基於意外發現到，抗VEGF-抗性腫瘤表現升高的IL-6濃度，且IL-6的拮抗作用(例如透過使用抗-IL-6R抗體)當與抗VEGF療法組合時，能夠克服腫瘤中的抗VEGF抗性，且因而提供強大的抗腫瘤活性對抗迄今被視為對VEGF拮抗作用不反應之腫瘤。

因此，依據本發明的一個方面，提供用以在個體體內抑制或減弱抗VEGF-抗性腫瘤生長的方法及組成物。依據本發明此方面的某些具體例，提供癌症療法的方法包含：(i)測定來自個體之腫瘤生檢的IL-6/STAT3信號傳遞的程度；以及(ii)若該腫瘤生檢表現IL-6/STAT3信號傳遞增加時，則向該個體投與IL-6拮抗劑。依據本發明此方面的方法，亦包含向該個體投與IL-6拮抗劑及VEGF拮抗劑。依據本發明的此方面，提供包含至少一種IL-6拮抗劑及至少一種VEGF拮抗劑的組成物。

依據本發明的另一個方面，提供用以提高IL-6拮抗劑之抗腫瘤活性的方法。依據本發明此方面的方法包含向帶有腫瘤的個體投與至少一種額外的抗腫瘤劑組合IL-6拮抗劑。該額外的抗腫瘤劑可以是，例如VEGF拮抗劑、EGFR拮抗劑或其組合。

本發明之拮抗劑分子可以是，例如抗原特異性結合蛋白，包括特異地結合例如IL-6、IL-6R、VEGF、VEGFR1、VEGFR2、EGFR、EGFRvIII、ErbB2、ErbB3及/或ErbB4之抗原特異性結合蛋白。本發明之抗原特異性結合蛋白包括抗體及其抗原結合片段。抗原特異性結合蛋白亦包括融合多肽，其包含一或多個受體分子的配體結合蛋白。在某些例示性具體例中，IL-6拮抗劑是特異結合IL-6R的抗體，VEGF拮抗劑是包含VEGFR1、VEGFR2與多聚體化結構域(”VEGF-Trap”)的VEGF結合結構域的VEGF結合融合分子，且EGFR拮抗劑是特異結合EGFR(ErbB1/HER1)的抗體。但是，其他拮抗劑可如本文他處所述般用於本發明的上下文中。

本發明的其他具體例將參照隨後的詳細說明而變得清楚。

詳細說明

在說明本發明之前，應理解本發明不限於所述特定方法以及實驗條件，因為這些方法以及條件可能會改變。亦應理解本文中所用術語僅供說明特定具體例之用，而不是限制性的，因為本發明的範疇將僅會受到隨附申請專利範圍所囿限。

除非另有定義，否則所有本文使用的技術以及科學術語具有與本發明所屬技藝中具有通常技藝者普遍理解的相同意思。如本文所用，術語”約”，當使用在有關特定引用的數值時，表示該值可自所引用的值起改變達不超過1%。舉例而言，如本文所用，用語”約100”包括99與101以及其間的所有值(例如，99.1、99.2、99.3、99.4等)。

儘管任何類似或等同於本文所述的方法以及材料可應用於實施本發明，現將說明較佳的方法以及材料。所有本文提及的公開文獻以其整體併入本文中做為參考文獻說明。

抑制或減弱腫瘤生長的方法

本發明提供在個體體內抑制或減弱腫瘤生長的方法。本發明包括對帶有腫瘤的個體投與IL-6拮抗劑。IL-6拮抗劑可與一或多種額外的治療劑組合投與。依據本發明的方法，可與IL-6拮抗劑組合投與的例示性治療劑包括，例如血管內皮生長因子(VEGF)的拮抗劑及/或表皮生長因子受體(EGFR)的拮抗劑。依據本發明方法，可與IL-6拮抗劑組合投與的治療劑的更多實例描述於本文他處。

本發明方法可用於治療源自於腦部與腦膜、口咽、肺部與支氣管樹、胃腸道、男性與女性生殖道、肌肉、骨、皮膚與附肢、結締組織、胰臟、免疫系統、造血細胞與骨髓、肝臟與尿道，及特化感覺器官(如眼部)的原發性及/或轉移性腫瘤。依據本發明方法可治療的特定癌症包括，例如腎細胞癌、胰臟癌、乳癌、前列腺癌、肝細胞癌、結腸直腸癌、惡性間皮瘤、多發性骨髓瘤、卵巢癌及黑色素瘤。

在某些具體例中，本發明方法可用於在個體體內治療抗VEGF-抗性腫瘤。”抗VEGF-抗性腫瘤”，如本文所用，表示對使用抗VEGF劑(諸如抗VEGF抗體、抗VEGF受體抗體或任何其他VEGF特異性結合蛋白(包括，例如VEGF-trap，如本文所定義))的治療不起反應的腫瘤。舉例而言，抗VEGF- 抗性腫瘤可以是，例如當與一量的VEGF拮抗劑(通常能夠抑制或減弱至少一種類型的腫瘤生長)接觸時繼續於活體外或活體內(例如若移植至動物體內)生長及/或增生的腫瘤。抗VEGF-抗性腫瘤可以是衍生自原始對抗VEGF療法有所反應，但透過篩選、突變或適應而獲得對一或多種抗VEGF劑之抗性的腫瘤細胞的腫瘤。

可使用本發明方法治療的個體包括任何診斷為患有癌症或鑑定為具有腫瘤的個體。在某些具體例中，該個體是已被診斷為或鑑定為帶有對抗VEGF治療具有至少部分抗性之腫瘤的患者。診斷患者為帶有抗VEGF-抗性腫瘤的方法為習於技藝者所熟知的且可使用慣用診斷方法來實施。

如本文實施例中所示，對抗VEGF療法具有抗性的腫瘤細胞顯示會表現比母代非抗性腫瘤細胞還高的IL-6以及磷酸-STAT3之含量。因此，本發明亦包括癌症療法的方法，其包含：(i)測定個體(例如在血清樣品、組織樣品、腫瘤生檢等中，得自於個體)之IL-6/STAT3信號傳遞的程度；以及(ii)若該個體(或樣品/生檢取得者)表現IL-6/STAT3信號傳遞增加時，則向該個體投與IL-6拮抗劑。

依據本發明的某些具體例，用語”IL-6/STAT3信號傳遞增加”表示在腫瘤生檢中所測得的IL-6量及/或磷酸-STAT3量比對抗VEGF療法敏感(亦即沒有抗性)的腫瘤中還高至少3倍(例如4倍、5倍、6倍、7倍或更多倍)。依據本發明的某些具體例，”IL-6/STAT3信號傳遞增加”表示在取自於某個體之樣品中，磷酸-STAT3對無變異對照蛋白的比例(例如 P-STAT3/肌動蛋白比例)大於約2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5或更高。依據本發明的某些具體例中，”IL-6/STAT3信號傳遞增加”表示在取自於某個體之腫瘤樣品中IL-6濃度大於50 pg/ml、55 pg/ml、60 pg/ml、65 pg/ml、70 pg/ml、75 pg/ml、80 pg/ml、85 pg/ml、90 pg/ml、95 pg/ml、100 pg/ml、110 pg/ml、120 pg/ml、130 pg/ml、140 pg/ml、150 pg/ml、160 pg/ml、170 pg/ml、180 pg/ml、190 pg/ml、200 pg/ml或更高。IL-6與磷酸-STAT3的程度可以例如使用西方墨點、ELISA或技藝中熟知的任何其他免疫組織化學方法來測定。

類似地，本發明亦包括決定帶有腫瘤的患者是否具有抗VEGF-抗性腫瘤的方法。依據本發明此方面的方法包含測定來自患者之樣品(例如腫瘤生檢)之IL-6/STAT3信號傳遞程度，其中樣品中的”IL-6/STAT3信號傳遞增加”(如本文上面所定義的用語)鑑定個體為帶有抗VEGF-抗性腫瘤。因為發明人已證實抗VEGF-抗性腫瘤對IL-6拮抗作用具有敏感性，依據本發明此方面的方法在某些具體例中可進一步包含對該患者投與IL-6拮抗劑及/或VEGF拮抗劑。

拮抗劑

本發明包括具有對有需要的個體投與IL-6拮抗劑、VEGF拮抗劑、EGFR拮抗劑及/或其組合的方法。如本文所用，”IL-6拮抗劑”為任一種在活體外或活體內結合IL-6或與IL-6交互作用且抑制IL-6之正常生物信號傳遞功能的藥劑。術語”IL-6拮抗劑”亦包括IL-6受體的拮抗劑(”IL-6R”，亦即”IL-6R拮抗劑”)。IL-6R拮抗劑可以是任何結合IL-6R或與IL-6R交互作用並在活體外或活體內抑制IL-6R之正常生物信號傳遞功能的藥劑。

VEGF拮抗劑可以是任一種結合VEGF或VEGF受體(VEGFR1，亦稱為Flt1；或VEGFR2，亦稱為Flk1或KDR)或與VEGF或VEGF受體交互作用的藥劑。

EGFR拮抗劑可以是任一種結合表皮生長因子受體或與表皮生長因子受體交互作用且在活體外或活體內抑制該受體之正常生物信號傳遞功能的藥劑。用語”EGFR拮抗劑”，如本文所用，包括表皮生長因子受體家族的任一個或更多個成員的拮抗劑。舉例而言，EGFR拮抗劑可以是EGFR(亦稱為ErbB1或HER1)的拮抗劑、EGFR變異體(諸如，例如EGFRvIII)的拮抗劑、ErbB2(亦稱為HER2或Neu)的拮抗劑、ErbB3(亦稱為HER3)的拮抗劑，及/或ErbB4(亦稱為HER4)的拮抗劑。

IL-6、IL-6R、VEGF、VEGF受體及EGFR的拮抗劑包括小分子拮抗劑，以及抗原特異性結合蛋白，如本文他處所述。

抗原特異性結合蛋白

可用於本發明方法中的拮抗劑包括抗原特異性結合蛋白。舉例而言，本發明包括包含對個體投與特異結合介白素-6(IL-6)或IL-6受體(IL-6R)之抗原特異性結合蛋白的方法。本發明亦包括包含對個體投與特異結合血管內皮生長因子(VEGF)或VEGF受體(VEGFR)的抗原特異性結合蛋白，或特異結合表皮生長因子受體(EGFR、EGFRvIII、ErbB2、ErbB3及/或ErbB4)的抗原特異性結合蛋白的方法。

如本文所用，用語”抗原特異性結合蛋白”表示一種包含至少一個特異結合一個特定抗原之結構域的蛋白質。抗原特異性結合蛋白的例示性分類包括抗體、抗體之抗原結合部分、特異與特定抗原交互作用的肽(如肽體)、與特定抗原特異交互作用的受體分子，以及包含特異結合特定抗原之受體的配體結合部分的蛋白質。

術語”特異結合”或類似者，如本文所用，表示抗原特異性結合蛋白，或抗原特異性結合結構域，與特定抗原形成複合物，其特徵在於解離常數(K_D)為500 pM或更低，及/或在一般測試條件下不會結合其他不相干的抗原。”不相干的抗原”為彼此具有少於75%胺基酸同一性的蛋白質、肽或多肽。決定兩個分子是否特異地彼此結合的方法為技藝中所熟知且包括，例如平衡透析、表面電漿共振及類似者。舉例而言，抗原特異性結合蛋白或抗原特異性結合結構域，如本發明上下文中所用，包括以低於約500 pM、低於約400 pM、低於約300 pM、低於約200 pM、低於約100 pM、低於約90 pM、低於約80 pM、低於約70 pM、低於約60 pM、低於約50 pM、低於約40 pM、低於約30 pM、低於約20 pM、低於約10 pM、低於約5 pM、低於約4 pM、低於約2 pM、低於約1 pM、低於約0.5 pM、低於約0.2 pM、低於約0.1 pM或低於約0.05 pM的K_D結合特定抗原(例如IL-6、IL-6R、VEGF、VEGFR及/或EGFR)或其部分的分子，如同在表面電漿共振分析中所測得。

如本文所用，若抗原特異性結合蛋白，或抗原特異性結合結構域當在25℃下於表面電漿共振分析中測試結合至不相干抗原時，表現大於1000 pM的K_D，或無法在此分析或相同分析中展現任何結合，則其”不結合”至不相干抗原。

術語”表面電漿共振”，如本文所用，意指容許藉由偵測生物感測器基質中的蛋白質濃度變化來分析即時交互作用的光學現象，例如使用BIAcore^TM系統(Biacore Life Science division of GE Healthcare,Piscataway,N.J.)。

術語”K_D”，如本文所用，表示特定蛋白質-蛋白質交互作用(例如抗體-抗原交互作用)的平衡解離常數。除非另有指明，否則本文揭示的K_D值意指在25℃下於表面電漿共振分析中所測定的K_D值。

抗體及抗體之抗原結合片段

如上面所指，抗原特異性結合蛋白可包含特異結合特定抗原的抗體或抗體之抗原結合片段(例如抗IL-6抗體、抗IL-6R抗體、抗VEGF抗體、抗VEGFR抗體及/或抗EGFR抗體或其抗原結合片段)，或由特異結合特定抗原的抗體或抗體之抗原結合片段所組成。

術語”抗體”，如本文所用，包括免疫球蛋白分子，其含有4個多肽鏈，藉由雙硫鍵交互連結的2個重(H)鏈以及2個輕(L)鏈，以及其集合體(例如IgM)。各個重鏈含有1個重鏈可變區(此處縮寫為HCVR或V_H)以及1個重鏈恆定區。重鏈恆定區含有3個結構域，C_H1、C_H2以及C_H3。各個輕鏈含有1個輕鏈可變區(此處縮寫為LCVR或V_L)以及1個輕鏈恆定區。輕鏈恆定區含有1個結構域(C_L1)。V_H與V_L區可進一步分成具有超變異性的區域(命名為互補決定區(complementarity determining regions,CDRs))，散佈有較為守恆的區域(命名為骨架區(FR))。各個V_H與V_L由3個CDR以及4個FR所構成，按下列順序從胺基端往羧基端排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。在本發明的不同具體例中，抗體(或其抗原結合部分)的FR可能與人類生殖系序列相同，或可以經天然或人工修飾。胺基酸一致序列可以依據並行分析兩個或多個CDR來定義。

術語”抗體”，如本文所用，亦包括完整抗體分子的抗原-結合片段。如本文所用，術語抗體的”抗原結合部分”、抗體的”抗原結合片段”及類似者包括任何天然存在的、可經酵素得到的、合成的或經遺傳工程的多肽或糖蛋白，其特異地結合抗原而形成複合物。抗體的抗原-結合片段可以使用任何適當的標準技術(諸如蛋白水解消化或涉及操作並表現編碼抗體可變與視情況恆定結構域之DNA的重組遺傳工程技術)而衍生自例如完整抗體分子。這樣的DNA是已知的及/或易於從例如商業來源、DNA圖書館(包括，例如噬菌體-抗體圖書館)獲得或可合成。DNA可以被定序且以化學的方式或使用分子生物技術來操作，例如將一或多個可變及/或恆定結構域排成適當構型，或引入會產生半胱胺酸殘基的密碼子、修飾、添加或刪除胺基酸等。

抗原-結合片段的非限制性實施例包括：(i)Fab片段；(ii)F(ab’)2片段；(iii)Fd片段；(iv)Fv片段；(v)單鏈Fv(scFv)分子；(vi)dAb片段；與(vii)由模擬抗體的超變異區之胺基酸殘基所構成的最小辨識單元(例如單離的互補決定區(CDR)，諸如CDR3肽)，或限制型FR3-CDR3-FR4肽。其他經工程化的分子(諸如結構域特異性抗體、單結構域抗體、結構域刪除抗體、嵌合抗體、CDR-移植抗體、雙抗體、三抗體、四抗體、微抗體、奈米抗體(例如單價奈米抗體、雙價奈米抗體等)、小調節分子免疫藥物(SMIP)及鯊魚可變IgNAR結構域)亦涵括在如本文所用用語”抗原-結合片段”中。

抗體的抗原-結合片段典型含有至少1個可變域。可變域可以是任何大小與胺基酸組成，且通常含有至少1個鄰近一或多個骨架序列或在一或多個骨架序列中的CDR。在帶有與V_L域締合之V_H域的抗原-結合片段中，V_H以及V_L域可相對另一者適當排列。舉例而言，可變區是二聚體且含有V_H-V_H、V_H-V_L或V_L-V_L二聚體。或者，抗體的抗原-結合片段可含有單體V_H或V_L域。

在某些具體例中，抗體的抗原-結合片段可含有至少一個共價連結至少一個恆定域的可變域。可以在本發明之抗體的抗原-結合片段中發現到的可變與恆定域的非限制例示性構型包括：(i)V_H-C_H1；(ii)V_H-C_H2；(iii)V_H-C_H3；(iv)V_H-C_H1-C_H2；(v)V_H-C_H1-C_H2-C_H3；(vi)V_H-C_H2-C_H3；(vii)V_H-C_L；(viii)V_L-C_H1；(ix)V_L-C_H2；(x)V_L-C_H3；(xi)V_L-C_H1-C_H2；(xii)V_L-C_H1-C_H2-C_H3；(xiii)V_L-C_H2-C_H3；以及(xiv)V_L-C_L。在可變與恆定域的任一種構型中(包括上面列示的任一種例示性構型)，可變與恆定域可以是彼此直接連結或藉由完整或部分樞紐或連接子區域而連結。樞紐區是由至少 2個(例如5、10、15、20、40、60或更多個)胺基酸所構成，它在單一多肽分子中的相鄰可變及/或恆定域間產生彈性或半彈性鍵聯。此外，本發明之抗體的抗原-結合片段可包含上列可變與恆定域構型的任一者彼此及/或與一或多個單體V_H或V_L域以非共價締合(例如藉由雙硫鍵(等))所形成的同型二聚體或異型二聚體(或其他集合體)。

本發明分子可包含人類抗體及/或重組人類抗體或其片段，或由人類抗體及/或重組人類抗體或其片段所組成。術語”人類抗體”，如本文所用，欲包括具有衍生自人類生殖系免疫球蛋白序列之可變區及恆定區的抗體。人類抗體可包括非由人類生殖系免疫球蛋白序列所編碼的胺基酸殘基(例如藉由活體外隨機或定位突變或藉由活體內體突變所引入的突變)，例如在CDR以及尤其在CDR3中。但是，術語”人類抗體”，如本文所用，不意欲要包括已被移植至人類骨架序列上之衍生自另一哺乳動物物種(諸如小鼠)之生殖系的CDR序列的抗體。

本發明分子可包含重組人類抗體或其抗原結合片段，或由重組人類抗體或其抗原結合片段所組成。術語”重組人類抗體”，如本文所用，欲包括所有藉由重組方式所製備、表現、產生或分離的人類抗體，諸如使用被轉染至宿主細胞中之重組表現載體而被表現的抗體(進一步說明如下)、分離自重組、組合人類抗體庫(進一步說明如下)的抗體、分離自經人類免疫球蛋白基因轉殖之動物(例如小鼠)的抗體(參見，例如Taylor et al.(1992)Nucl.Acids Res.20：6287-6295)，或藉由任何其他涉及將人類免疫球蛋白基因序列剪接至其他DNA序列之方法所製備、表現、產生或分離的抗體。此等重組人類抗體具有衍生自人類生殖系免疫球蛋白序列的可變區及恆定區。但是，在某些具體例中，此等重組人類抗體經活體外致突變(或，當使用經人類Ig序列基因轉殖的動物時為活體內體細胞致突變)，而因此該等重組抗體之V_H區與V_L區的胺基酸序列為可能在活體內人類抗體生殖系本中非天然存在的序列，儘管它們是衍生自人類生殖系V_H與V_L序列且與其相關。

抗IL-6R抗體及其抗原結合片段

依據某些具體例，本發明方法包含向個體投與抗IL-6R抗體或其抗原結合片段。術語”介白素-6受體”、”IL-6R”及類似者，如本文所述，欲意指特異結合介白素-6(IL-6)之人類細胞激素受體。人類IL-6R的細胞外結構域具有SEQ ID NO：1中所示胺基酸序列。在例如美國專利第5,795,695號；第5,817,790號；第6,410,691號；第6,670,373號；及第7,582,298號中提到抗IL-6R抗體。先前公開文獻任一者中所提及/或所述任一種抗IL-6R抗體或其抗原結合片段可用於本發明上下文中。可用於本發明上下文中的非限制性、例示性抗IL-6R抗體為抗IL-6R抗體或其抗原結合片段，其包含具有SEQ ID NO：2/3之HCVR/LCVR胺基酸對的重鏈與輕鏈CDR。例如，抗IL-6R抗體可以是一種抗體或其抗原結合片段，其包含分別具有SEQ ID NO：4、5及6之胺基酸序列的重鏈CDR(HCDR1、HCDR2及HCDR)；以及分別具有SEQ ID NO：7、8及9之胺基酸序列的輕鏈CDR(LCDR1、LCDR2及 LCDR)。

VEGF拮抗劑

本發明方法依據某些具體例包含對個體投與VEGF拮抗劑。如本文所用，用語”VEGF拮抗劑”表示任一種阻斷、降低或干擾VEGF正常生物活性的分子。VEGF拮抗劑包括干擾VEGF與天然VEGF受體交互作用的分子，例如結合至VEGF或VEGF受體並防止或以其他方式妨礙VEGF與VEGF受體交互作用的分子。特定例示性VEGF拮抗劑包括抗VEGF抗體、抗VEGF受體抗體及以VEGF受體為主的嵌合分子(在本文中亦稱為”VEGF-Trap”)。

以VEGF受體為主的嵌合分子包括嵌合多肽，其包含兩個或更多個VEGF受體(諸如VEGFR1(亦稱為Flt1)及/或VEGFR2(亦稱為Flk1或KDR))的免疫球蛋白(Ig)樣結構域，且亦可含有多聚體化結構域(例如有助於兩個或更多個嵌合多肽多聚體化[例如二聚體化]的Fc結構域)。以VEGF受體為主的例示性嵌合分子是被稱為VEGFR1R2-Fc△C1(a)的分子，其由SEQ ID NO：10的核酸序列所編碼。VEGFR1R2-Fc△C1(a)包含三個組份：(1)VEGFR1組份，其包含SEQ ID NO：11之胺基酸27至129；(2)VEGFR2組份，其包含SEQ ID NO：11的胺基酸130至231；以及(3)多聚體化組份(”Fc△C1(a)”)，其包含SEQ ID NO：11的胺基酸232至457(SEQ ID NO：11的C端胺基酸[亦即K458])，可或可不包括在本發明方法中所用VEGF拮抗劑內；參見，例如美國專利第7,396,664號)。SEQ ID NO：11的胺基酸1-26為訊號序列。

組合療法

本發明方法依據某些具體例包含對個體投與IL-6拮抗劑組合一或多種額外治療劑，諸如VEGF拮抗劑及/或EGFR拮抗劑及/或ErbB3拮抗劑。如本文所用，用語”組合”表示在IL-6拮抗劑之前、之後或同時投與該額外的治療劑。舉例而言，當在IL-6拮抗劑”之前”投與時，該額外的治療劑可以在投與IL-6拮抗劑前約72小時、約60小時、約48小時、約36小時、約24小時、約12小時、約10小時、約8小時、約6小時、約4小時、約2小時、約1小時、約30分鐘、約15分鐘或約10分鐘投與。當在IL-6拮抗劑”之後”投與時，該額外的治療劑可以在投與IL-6拮抗劑後約10分鐘、約15分鐘、約30分鐘、約1小時、約2小時、約4小時、約6小時、約8小時、約10小時、約12小時、約24小時、約36小時、約48小時、約60小時或約72小時投與。與IL-6拮抗劑”同時”投與表示在投與IL-6拮抗劑(之前、之後或同時)5分鐘內以個別劑型對個體投與該額外的治療劑，或對個體投與單一合併劑量調配物，該調配物包含額外的治療劑與IL-6拮抗劑(例如含有抗IL-6R抗體+VEGF Trap的單一調配物；或含有抗IL-6R抗體+抗EGFR抗體的單一調配物；或含有抗IL-6R抗體+抗ErbB3抗體的單一調配物等)。

醫藥組成物及投與方法

本發明包括含有IL-6拮抗劑的醫藥組成物。本發明亦包括含有IL-6拮抗劑與第二活性組份(諸如VEGF拮抗劑及/或 EGFR拮抗劑)的醫藥組成物。舉例而言，本發明包括包含抗IL-6R抗體及VEGF-Trap分子的醫藥組成物；本發明亦包括包含抗IL-6R抗體及抗EGFR抗體的醫藥組成物。包含對患者投與此等醫藥組成物的治療方法亦涵括在本發明範疇內。

本發明的醫藥組成物可與適當載體、賦形劑以及其他提供適當輸送、遞送、耐受性以及類似者的藥劑一起調配。可以在例如Remington’s Pharmaceutical Sciences,Mack Publishing Company,Easton,PA中找到大量適當的調配物。適當調配物包括，例如粉末、糊劑、軟膏、凝膠、蠟、油、脂質、含有囊泡的脂質(陽離子或陰離子)(諸如LIPOFECTIN^TM)、DNA接合物、無水吸收糊劑、水中油與油中水乳劑、乳化卡波蠟(具有各種分子量的聚乙二醇)、半固體凝膠以及含有卡波蠟的半固體混合物。其他適當調配物亦參見Powell et al.”Compendium of excipients for parenteral formulations”PDA(1998)J Pharm Sci Technol 52：238-311。

已知有各種不同的遞送系統並且可用於投與本發明的醫藥組成物，例如封裝在脂質體、微粒、微膠囊內、能夠表現突變病毒的重組細胞、受體媒介的胞吞作用(參見，例如Wu et al.,1987,J.Biol.Chem.262：4429-4432)。投與的方法包括，但不限於皮內、肌肉內、腹膜內、靜脈內、皮下、鼻內、硬膜上以及口服途徑。組成物可以藉由任何習知途徑來投與，例如藉由輸注或團注、藉由透過上皮或黏膜內襯(例如口腔黏膜、直腸以及小腸黏膜等)吸收，並且可以與其他生物活性劑一起投與。

本發明的醫藥組成物可以使用標準注射針與注射器來皮下或靜脈內遞送。此外，關於皮下遞送，筆型遞送裝置很容易應用於遞送本發明的醫藥組成物。這樣的一種筆型遞送裝置可以是重複使用或拋棄式。可重複使用的筆型遞送裝置通常使用含有醫藥組成物的可換式藥匣。一旦藥匣內的所有醫藥組成物被投藥且藥匣空了，空的藥匣可易於丟棄並且置換成含有醫藥組成物的新藥匣。那麼就可以重複使用筆型遞送裝置。就拋棄式筆型遞送裝置來說，沒有可換式藥匣。更確切地來說，拋棄式筆型遞送裝置在裝置的貯器內預先填充醫藥組成物。一旦貯器沒有醫藥組成物，整個裝置就被丟棄。

許多可重複使用的筆型以及自動注射遞送裝置在皮下遞送本發明之醫藥組成物方面有實用性。實施例包括，但不限定於AUTOPEN^TM(Owen Mumford,Inc.,Woodstock,UK)、DISETRONIC^TM pen(Disetronic Medical Systems,Burghdorf,Switzerland)、HUMALOG MIX 75/25^TM pen、HUMALOG^TM pen、HUMALIN 70/30^TM pen(Eli Lilly and Co.,Indianapois,IN)、NOVOPEN^TM I、II與III(Novo Nordisk,Copenhagen,Denmark)、NOVOPEN JUNIOR^TM(Novo Nordisk,Copenhagen,Denmark)、BD^TM pen(Becton Dickinson,Franklin Lakes,NJ)、OPTIPEN^TM、OPTIPEN PRO^TM、OPTIPEN STARLET^TM以及OPTICLIK^TM(sanofi-aventis,Frankfurt,Germany)，僅舉幾個為例。在皮下投遞本發明之醫藥組成物方面有實用性的拋棄式筆型遞送裝置的實施例包括，但不限於SOLOSTAR^TM pen(sanofi-aventis)、FLEXPEN^TM(Novo Nordisk)以及 KWIKPEN^TM(Eli Lilly)、SURECLICK^TM Autoinjector(Amgen,Thousand Oaks,CA)、PENLET^TM(Haselmeier,Stuttgart,Germany)、EPIPEN(Dey,L.P.)以及HUMIRA^TM Pen(Abbott Labs,Abbott Park IL)，僅舉幾個為例。

在某些情況下，本發明醫藥組成物以控制釋放系統的方式被投遞。在一個具體例中，可使用泵(參見Langer，上文；Sefton 1987,CRC Crit.Ref.Biomed.Eng.14：201)。在另一具體例中，可使用聚合材料；參見Medical Applications of Controlled Release,Langer and Wise(eds.),1974,CRC Pres.,Boca Raton,Florida。在又另一個具體例中，控制釋放系統被置放在組成物標的鄰近處，因此僅需要全身性劑量的一部分(參見，例如Goodson,1984，Medical Applications of Controlled Release，上文，vol.2,pp.115-138中)。其他控制釋放系統在Langer,1990,Science 249：1527-1533的回顧中被討論。

可注射製品可包括用於靜脈內、皮下、皮內及肌肉內注射、點滴輸注等的劑型。此等可注射製品可依照公知方法製備。例如，可注射製品可例如，藉由將上述抗體或其鹽溶解、懸浮或乳化於習知用於注射的無菌水性介質或油性介質中來製備。有關用於注射的水性介質，例如有生理食鹽水、含有葡萄糖與其他助劑的等張溶液等，其可與適當助溶劑(諸如醇(乙醇)、多元醇(例如丙二醇、聚乙二醇)、非離子性介面活性劑[例如聚山梨醇酯80、HCO-50(氫化菎麻油的聚氧乙烯(50 mol)加合物)]等組合使用。有關油性介質，採用例如芝麻油、大豆油等，其可與助溶劑(諸如安息酸苯甲酯、苯甲醇等)組合使用。由此製備的注射劑較佳地被填充於適當安瓿中。

有利地，上述供經口或非經口使用的醫藥組成物被製備為呈適於活性成分投藥之單位劑量的劑型。此等呈單位劑量之劑型包括，例如錠劑、丸劑、囊劑、注射劑(安瓿)、栓劑等。

劑量

可投與給個體之活性成分(例如，IL-6拮抗劑、VEGF拮抗劑、EGFR拮抗劑等)之量通常為治療有效量。如本文所用，慣用語”治療有效量”表示當投與給帶有腫瘤之動物時(參見，例如本文實施例1)，相對於陰性對照造成腫瘤生長或重量減少至少5%的抗原特異性結合蛋白及/或抗原結合分子的劑量。舉例而言，”治療有效量”的IL-6R特異性結合蛋白、VEGF特異性結合蛋白及/或EGFR特異性結合蛋白包括，例如當投與給帶有腫瘤的動物時，相對於經陰性對照處理的動物使腫瘤生長或重量減少至少5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、80%、90%、95%或100%的此抗原特異性結合蛋白(等)之量。

在本發明抗原特異性結合蛋白(例如抗IL-6R抗體、抗EGFR抗體、抗ErbB3抗體及/或VEGF-Trap分子)的情況下，治療有效量可以從約0.05 mg至約600 mg；例如約0.05 mg、約0.1 mg、約1.0 mg、約1.5 mg、約2.0 mg、約10 mg、約20 mg、約30 mg、約40 mg、約50 mg、約60 mg、約70 mg、約80 mg、約90 mg、約100 mg、約110 mg、約120 mg、約130 mg、約140 mg、約150 mg、約160 mg、約170 mg、約 180 mg、約190 mg、約200 mg、約210 mg、約220 mg、約230 mg、約240 mg、約250 mg、約260 mg、約270 mg、約280 mg、約290 mg、約300 mg、約310 mg、約320 mg、約330 mg、約340 mg、約350 mg、約360 mg、約370 mg、約380 mg、約390 mg、約400 mg、約410 mg、約420 mg、約430 mg、約440 mg、約450 mg、約460 mg、約470 mg、約480 mg、約490 mg、約500 mg、約510 mg、約520 mg、約530 mg、約540 mg、約550 mg、約560 mg、約570 mg、約580 mg、約590 mg或約600 mg的個別抗原特異性結合蛋白。舉例而言，依據投與抗IL-6R抗體(例如本文所論及的mAb1)的某些特定具體例，抗體可以100 mg、150 mg或200 mg的劑量投與給個體(例如以一週一次、每兩週一次等的頻率)。

個別劑量中所含的本發明抗原特異性結合蛋白的量以術語每公斤患者體重之毫克抗體(亦即mg/kg)來表示。舉例而言，本發明抗IL-6R抗體、抗EGFR抗體、抗ErbB3抗體及/或VEGF-Trap分子可以約0.001至約50 mg/kg患者體重(例如0.5 mg/kg、1.0 mg/kg、1.5 mg/kg、5.0 mg/kg、10 mg/kg、12.5 mg/kg、15 mg/kg、16 mg/kg、17 mg/kg、18 mg/kg、19 mg/kg、20 mg/kg、21 mg/kg、22 mg/kg、23 mg/kg、24 mg/kg、25 mg/kg、26 mg/kg、27 mg/kg、28 mg/kg、29 mg/kg、30 mg/kg、35 mg/kg、40 mg/kg等)的劑量投與給患者。依據某些例示性具體例，投與給患者的VEGF-Trap分子之量呈特定劑量為4 mg/kg或6 mg/kg。

活性成分(例如抗IL-6R抗體、抗EGFR抗體、抗ErbB3 抗體，及/或VEGF-Trap分子)可以相同量存在於本發明組成物中，或者可以彼此不同的量(按照0.5、1、1.5、2、2.5、3、4、5或更高的因子)存在。技藝中具有通常技術者使用慣用實驗將能夠決定產生所要治療效用需要的本發明組成物的個別組份之適當量。

投與方案

依據本發明的某些具體例，多劑量的本發明組成物(例如，含有IL-6拮抗劑、VEGF拮抗劑及/或EGFR拮抗劑的組成物)可在一段限定時間裡被投與給個體。依據本發明此方面的方法包含依序將多劑量的本發明組成物(等)投與給個體。如本文所用，”依序投與”表示各劑量的本發明組成物在不同時間點被投與給個體，例如在由預定間隔(例如數小時、數天、數週或數月)所分開的不同天。本發明包括含有將起始劑量的本發明組成物，接而為一或多個第二劑量的組成物，以及視情況一或多個第三劑量的組成物依序投與給患者。

術語”起始劑量”、”第二劑量”及”第三劑量”意指投與本發明組成物的時間順序。因此，”起始劑量”是在治療方案開始時被投與的劑量(亦意指為”基線劑量”)；”第二劑量”為在起始劑量之後被投與的劑量；而”第三劑量”為在第二劑量之後被投與的劑量。起始劑量、第二劑量與第三劑量可全都含有相同量的活性成分(等)，但通常會在投與頻率方面有所不同。但是，在某些具體例中，起始劑量、第二劑量及/或第三劑量中所含有的活性成分(等)之量將會在治療期間相互改變(例如調高或調低，若需要的話)。

在本發明的一個例示性具體例中，各第二劑量及/或第三劑量在緊接先前劑量之後1至30天(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30或更久)被投與。慣用語”緊接先前劑量”，如本文所用，表示以多次投與的順序，被投與給個體的本發明組成物劑量在順序上次一個劑量投與之前沒有任何插入的劑量。

依據本發明此方面的方法可含有將任一數目的第二劑量及/或第三劑量本發明組成物投與給患者。例如，在某些具體例中，僅有單一第二劑量被投與給患者。在其他具體例中，兩個或更多個(例如，2、3、4、5、6、7、8或更多)第二劑量被投與給患者。同樣地，在某些具體例中，僅有單一第三劑量被投與給患者。在其他具體例中，兩個或更多個(例如，2、3、4、5、6、7、8或更多)第三劑量被投與給患者。

在涉及多個第二劑量的具體例中，各第二劑量可以與其他第二劑量相同的頻率被投與。例如，各第二劑量可在緊接先前劑量之後1至29天被投與給患者。同樣地，在涉及多個第三劑量的具體例中，各第三劑量可以與其他第三劑量相同的頻率被投與。例如，各第三劑量可在緊接先前劑量之後1至60天被投與給患者。或者，第二劑量及/或第三劑量投與給患者的頻率可能隨著治療方案過程而改變。投與頻率也可在治療過程期間由臨床醫師依據個別患者的需要遵循臨床檢驗來予以調整。

第1圖顯示經培養的A549、Calu3及Du145腫瘤細胞的西方墨點結果，俾以評估在使用10 μg/ml人類Fc對照蛋白(道1)、10 μg/ml抗IL-6R mAb1(道2)、10 ng/ml IL-6+10 μg/ml hFc(道3)或10 ng/ml IL-6+10 μg/ml抗IL-6R mAb1(道4)處理後，磷酸-STAT3與總STAT3在細胞中的含量。

第2圖A格顯示對收集自經培養A431-P或A431-V2細胞之條件培養基進行ELISA的結果，俾以測定IL-6濃度。

第2圖B格顯示對經hFc對照蛋白(10 μg/ml)或抗IL-6R mAb1(10 μg/ml)處理之A431-P或A431-V2細胞進行西方墨點的結果，俾以測定磷酸-STAT3程度(相對於肌動蛋白對照)。

實施例

提出下列實施例俾以將如何製造與使用本發明方法和組成物之完整揭示內容以及發明說明提供給技藝中具有通常技術者，且不欲限制發明人就其發明所視為的範疇。已盡力確保所用數字的正確性(例如數量、溫度等)，但可能產生某些實驗誤差與偏差。除非另有指明，否則份為重量份，分子量為平均分子量，溫度為攝氏度，而壓力為大氣壓或近乎大氣壓。

實施例1.做為單一藥劑的抗IL-6R單株抗體組合其他抗腫瘤劑抑制腫瘤異種移植物生長 治療劑

本實施例說明單獨或與VEGF-Trap、抗EGFR抗體或抗ErbB3抗體組合投與抗IL-6R抗體給帶有腫瘤的小鼠。本實施例中所用的抗IL-6R抗體(本文中亦稱為”抗IL-6R mAb1”)是一種包含分別具有胺基酸序列SEQ ID NO：4、5及6之重鏈CDR(HCDR1、HCDR2及HCDR3)；以及分別具有胺基酸序列SEQ ID NO：7、8及9之輕鏈CDR(LCDR1、LCDR2及LCDR3)的抗體(亦即美國專利第7,582,298號中命名為VQ8F11-21的抗IL-6R抗體)。本實施例中所用的VEGF-Trap為兩個融合多肽的二聚體，各自包含：(1)包含SEQ ID NO：11之胺基酸27至129的VEGFR1組份：(2)包含SEQ ID NO：11之胺基酸130至231的VEGFR2組份；以及(3)包含SEQ ID NO：11的胺基酸232至457的多聚體化組份(”Fc△C1(a)”)(亦即在美國專利第7,396,664號中命名為VEGFR1R2-Fc△C1(a)的VEGF-Trap)。本實施例中所用抗EGFR抗體，亦稱為”抗EGFR mAb2”，係經生產為針對人類EGFR/ErbB1/HER1之細胞外結構域的完全人類抗體。本實施例中所用抗ErbB3抗體，本文中亦稱為”抗ErbB3 mAb3”，係經生產為針對ErbB3的完全人類抗體(亦即在2012年9月21日提申之美國專利申請案第13/623,885號中命名為H4H1821N的抗體)。

實驗程序與結果

作為起始實驗，使用(i)10 μg/ml人類Fc對照蛋白(”hFc”)、(ii)10 μg/ml抗IL-6R mAb1、(iii)10 ng/ml IL-6+10 μg/ml hFc或(iv)10 ng/ml IL-6+10 μg/ml抗IL-6R mAb1處理經培養的A549、Calu3與Du145細胞。人類Fc或抗IL-6R mAb1被添加至培養細胞中16小時，而IL-6被添加至經hFc或抗IL-6R mAb1預先處理的細胞30分鐘。接著，將細胞溶解並進行西方墨點以評估磷酸-STAT3與總STAT3的程度。如第1圖中所示，所有三種腫瘤細胞株皆表現構成性與IL-6可誘導性磷酸-STAT3，其可受到抗IL-6R mAb1所抑制。

接著，測試抗IL-6R mAb1、VEGF-Trap或抗IL-6R mAb1加上VEGF-Trap的組合對於Du145人類前列腺癌細胞生長的效用。簡言之，將5×10⁶個Du145細胞(ATCC)皮下植入6至8週大SCID小鼠(Taconic,Hudson,NY)的側脅。在腫瘤達到~200 mm³的平均體積之後，將小鼠隨機分組以供進行處理(每組n=5隻小鼠)。對小鼠投與人類Fc對照蛋白(25 mg/kg)、抗IL-6R mAb1(25 mg/kg)、VEGF-Trap(25 mg/kg)或抗IL-6R mAb1加上VEGF-Trap的組合(25+25 mg/kg)。經由皮下注射每週投與所有蛋白質兩次。在實驗過程每週測量腫瘤體積兩次。從處理開始起針對各組計算平均腫瘤生長。計算相比於Fc對照組的腫瘤生長降低百分比。結果歸納在表1中。

經hFc(25 mg/kg)或抗IL-6R mAb1(25 mg/kg)處理的小鼠的Du145腫瘤被割下並切片。使用對磷酸-STAT3或作為細胞凋亡標記之經切割硫胱胺酸蛋白酶3具有專一性的抗體進行免疫組織化學。經抗IL-6R mAb1處理的腫瘤表現較少的磷酸-STAT3染色而經切割硫胱胺酸蛋白酶染色增加，表示Du145腫瘤具有活化的IL-6/STAT3信號傳遞，有助於腫瘤細胞存活。這暗示IL-6提供存活信號給腫瘤細胞。

在下一個實驗中，測試抗IL-6R mAb1、抑制性抗EGFR抗體(”抗EGFR mAb2”)或抗IL-6R mAb1加上抗EGFR mAb2的組合對於Calu3人類肺腺癌異種移植物生長的效用。簡言之，將5×10⁶個Calu3細胞(ATCC)皮下植入6至8週大SCID小鼠(Taconic,Hudson,NY)的側脅。在腫瘤達到150-200 mm³的平均體積之後，將小鼠隨機分組以供進行處理(每組n=5隻小鼠)。對小鼠投與人類Fc對照蛋白(25 mg/kg)、抗IL-6R mAb1(12.5 mg/kg)、抗EGFR mAb2(12.5 mg/kg)或抗IL-6R mAb1加上抗EGFR mAb2的組合(12.5+12.5 mg/kg)。經由皮下注射每週投與所有蛋白質兩次。在實驗過程每週測量腫瘤體積兩次並在研究結束割下腫瘤後測定腫瘤重量。從處理開始起針對各組計算腫瘤生長與腫瘤重量的平均值。計算相比於Fc對照組的腫瘤生長及腫瘤重量降低百分比。結果歸納在表2及3中。

表2：SCID小鼠中Calu3腫瘤異種移植物生長的抑制

在下一個實驗中，測試抗IL-6R mAb1、抑制性抗ErbB3抗體(”抗ErbB3 mAb3”)或抗IL-6R mAb1加上抗ErbB3 mAb3的組合對於A549人類肺腺癌異種移植物生長的效用。簡言之，將1×10⁷個A549細胞(ATCC,Cat.No.CCL-185)皮下植入6至8週大SCID小鼠(Taconic,Hudson,NY)的側脅。在腫瘤達到400 mm³的平均體積之後，將小鼠隨機分組以供進行處理(每組n=6隻小鼠)。對小鼠投與人類Fc對照蛋白(25 mg/kg)、抗IL-6R mAb1(12.5 mg/kg)、抗ErbB3 mAb3(12.5 mg/kg)或抗IL-6R mAb1加上抗ErbB3 mAb3的組合(12.5+12.5 mg/kg)。經由皮下注射每週投與所有蛋白質兩次。在實驗過程每週測量腫瘤體積兩次並在研究結束割下腫瘤後測定腫瘤重量。從處理開始起針對各組計算腫瘤生長及腫瘤重量的平均值。計算相比於Fc對照組的腫瘤生長與腫瘤重量降低百分比。結果歸納在表4及5中。

最後，研究抗IL-6R mAb1對於A549人類肺腺癌異種移植物生長的效用。簡言之，將5×10⁶個A549細胞(ATCC,Cat.No.CCL-185)皮下植入6至8週大SCID小鼠(Taconic,Hudson,NY)的側脅。在腫瘤達到~100 mm³的平均體積之後，將小鼠隨機分組以供進行處理(每組n=5隻小鼠)。對小鼠投與人類Fc對照蛋白(25 mg/kg)、抗IL-6R mAb1(2.5 mg/kg)或抗IL-6R mAb1(25 mg/kg)。經由皮下注射每週投與所有蛋白質兩次。在實驗過程每週測量腫瘤體積兩次。從處理開始起針對各組計算平均腫瘤生長。計算相比於Fc對照組的腫瘤生長降低百分比。結果歸納在表6中。

結論

本實施例說明抗IL-6R mAb1作為單一藥劑抑制Du145、Calu3以及A549腫瘤異種移植物的生長。此外，使用抗IL-6R mAb1加上VEGF-Trap的組合治療比單一藥劑更能抑制Du145腫瘤異種移植物的生長。還有，抗IL-6R mAb1加上抑制性抗EGFR抗體(抗EGFR mAb2)的組合治療比單一藥劑更能抑制Calu3腫瘤異種移植物的生長。

這些結果顯示，抗IL-6R mAb1優先抑制表現自泌IL-6/STAT3信號傳遞之腫瘤的生長，暗示腫瘤生檢的IL-6及/或磷酸-STAT3程度的免疫組織化學分析可用於鑑別最有可能受惠於抗IL-6R治療的患者。此外，抗IL-6R mAb1在腫瘤異種移植物中減低磷酸-STAT3且增加經切割硫胱胺酸蛋白酶-3濃度，暗示IL-6/STAT3信號傳遞有助於腫瘤細胞存活。

實施例2.抗IL-6R單株抗體組合VEGF拮抗劑抑制抗VEGF-抗性腫瘤的生長 引言

藉由連續繼代於VEGF-Trap存在下在活體內分離出對VEGF Trap的效用具有抗性的A431人類表皮樣癌細胞株的變異株。變異細胞株在本文中稱為”A431-V2”，而母代A431細胞株在本文中被稱為”A431-P”。

首先進行實驗以評估A431-V2細胞株相較於A431-P細胞株所表現的相對IL-6程度。為此，由經培養的A431-P細胞或A431-V2細胞收集條件培養基並且進行ELISA來測定人類IL-6的濃度。如第2(a)圖中所示，A431-V2表現比母代A431細胞株還要更高含量的IL-6(178 pg/ml對29 pg/ml)。

接著，測量變異株與母代A431細胞中的磷酸-STAT3程度。具體而言，使用人類Fc(10 μg/ml)或抗IL-6R mAb1(10 μg/ml)處理經培養的A431-P細胞與A431-V2細胞。準備細胞溶解產物並進行西方墨點以評估磷酸-STAT3程度。如第2(b)圖中所示，磷酸-STAT3的基礎程度在A431-V2細胞中相較於A431-P細胞增加，且因為抗IL-6R mAb1處理而被明顯降低。

有鑑於先前實驗的觀察結果，在本實施例中接著測試包含完整人類抗IL-6R抗體加上VEGF-Trap的組合治療對於A431-V2腫瘤異種移植物生長的效用。

研究程序與結果

簡言之，將1×10⁶個A431-V2細胞皮下植入6至8週大SCID小鼠(Taconic,Hudson,NY)的側脅。在腫瘤達到~200 mm³的平均體積之後，將小鼠隨機分組以供進行處理(每組n=5隻小鼠)。對小鼠投與人類Fc對照蛋白(25 mg/kg)、抗IL-6R mAb1(25 mg/kg)、VEGF-Trap(25 mg/kg)或抗IL-6R mAb1加上VEGF-Trap(25+25 mg/kg)的組合。經由皮下注射每週投與所有蛋白質兩次。在實驗過程每週測量腫瘤體積兩次(在移植後第15、18、22、25及28天)。從處理開始起針對各組計算平均腫瘤生長。計算相比於Fc對照組的腫瘤生長降低百分比。結果歸納在表7中。

對表7中歸納的結果之原始數據進行統計分析。簡言之，對經對數轉換的數據應用變異分析，接著為對抗IL-6R mAb1+VEGF-trap組的鄧氏檢定，俾以決定組合治療相較於對照組對腫瘤生長是否有顯著效用。依據這個分析，相較於使用VEGF-trap組觀察到腫瘤生長降低36%(p=0.0041)，發現到使用組合治療組觀察腫瘤生長降低75%具有統計顯著性(p<0.0001)。

結論

如本實施例中所示，A431-V2腫瘤對VEGF-Trap單一藥劑治療具有抗性，相對於經對照處理的個體僅產生36%的腫瘤生長減少。但這些腫瘤對抗IL-6R mAb1加上VEGF-Trap組合治療有反應，暗示IL-6有助於A431-V2腫瘤對VEGF-Trap抗性表現型。先前數據指出A431-V2腫瘤中的IL-6信號傳遞增加無法避免VEGF-Trap減少腫瘤血管的能力，暗示IL-6信號傳遞當腫瘤血管分布受阻礙時會增高腫瘤細胞增生及/或存活的能力。這個發現與抗IL-6R mAb1也能夠使VEGF-Trap在Du145腫瘤中發揮效用的能力一致(參見實施例1)。

總括來說，本文在上面所呈現的數據指出，IL-6/STAT3信號傳遞的程度可用來鑑別抗VEGF-抗性腫瘤，且IL-6拮抗作用(例如使用抗IL-6R mAb1治療)是有用的治療策略供治療多種類型的癌症，不論是作為單一藥劑或與VEGF拮抗劑組合，尤其是在抗VEGF-抗性腫瘤中。

本發明的範疇不受限於本文所述的特定具體例範疇。更確切地說，除了本文所述者以外，本發明的各種變化對於習於技藝者從前面的發明說明與附圖來說將變得清楚的。此等變化意欲落在隨附申請專利範圍的範疇內。

<110> Regeneron Pharmaceuticals,Inc.

<120> 藉由拮抗IL-6受體抑制腫瘤生長之方法

<130> 6150A-WO

<140> 待指派

<141> 隨附申請

<150> 61/557,939

<151> 2011-11-10

<150> 61/609,968

<151> 2012-03-13

<150> 61/613,538

<151> 2012-03-21

<160> 11

<170> Windows第4.0版的FastSEQ

<210> 1

<211> 358

<212> PRT

<213> 智人

<400> 1

<210> 2

<211> 116

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 2

<210> 3

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 3

<210> 4

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 4

<210> 5

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 5

<210> 6

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 6

<210> 7

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 7

<210> 8

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 8

<210> 9

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 9

<210> 10

<211> 1377

<212> DNA

<213> 智人

<400> 10

<210> 11

<211> 458

<212> PRT

<213> 智人

<400> 11

Claims

一種醫藥組成物，其包含：(a)IL-6R抗體或其抗原結合片段；及(b)特異結合VEGF的抗原特異性結合蛋白，其用於在個體體內抑制或減弱抗VEGF-抗性腫瘤的生長，其中該IL-6R抗體或其抗原結合片段包含一重鏈可變區(HCVR)以及一輕鏈可變區(LCVR)，其中該HCVR包含具有SEQ ID NO：4、5與6之胺基酸序列的CDR，且其中該LCVR包含具有SEQ ID NO：7、8與9之胺基酸序列的CDR；且其中該特異結合VEGF的抗原特異性結合蛋白為包含VEGFR1的Ig結構域2、VEGFR2的Ig結構域3及多聚體化結構域的融合蛋白，其中該VEGFR1的Ig結構域2包含SEQ ID NO：11的胺基酸27至129，該VEGFR2的Ig結構域3包含SEQ ID NO：11的胺基酸130至231，且該多聚體化結構域包含SEQ ID NO：11的胺基酸232至457，其中該IL-6R抗體及VEGF融合蛋白係以實質上相等的量存在。
如申請專利範圍第1項之醫藥組成物，其中該HCVR包含SEQ ID NO：2；且其中LCVR包含SEQ ID NO：3。
一種調配物用於製備在個體體內抑制或減弱抗VEGF-抗性腫瘤生長的藥物之用途，該調配物包含IL-6R抗體或其抗原結合片段以及VEGF拮抗劑，其中該VEGF拮抗劑為特異結合VEGF受體的抗原特異性結合蛋白；且其中腫瘤顯示比對抗VEGF拮抗劑本身敏感的腫瘤至少3倍較高的磷酸-STAT3量。
如申請專利範圍第3項之調配物之用途，其中該IL-6R抗體或其抗原結合片段包含一重鏈可變區(HCVR)以及一輕鏈可變區(LCVR)，其中該HCVR包含具有SEQ ID NO：4、5與6之胺基酸序列的互補決定區(CDR)，且其中該LCVR包含具有SEQ ID NO：7、8與9之胺基酸序列的CDR。
如申請專利範圍第4項之用途，其中該HCVR包含SEQ ID NO：2；且其中LCVR包含SEQ ID NO：3。
如申請專利範圍第3項之用途，其中該VEGF受體為VEGFR1或VEGFR2。
如申請專利範圍第3項之用途，其中該抗原特異性結合蛋白為VEGFR1抗體或其抗原結合片段。
如申請專利範圍第3項之用途，其中該抗原特異性結合蛋白為VEGFR2抗體或其抗原結合片段。
如申請專利範圍第3項之用途，其中該抗原特異性結合蛋白為VEGF抗體。
如申請專利範圍第3項之用途，其中該抗原特異性結合蛋白為包含VEGFR1的Ig結構域2、VEGFR2的Ig結構域3及多聚體化結構域的融合蛋白。
如申請專利範圍第10項之用途，其中該VEGFR1的Ig結構域2包含SEQ ID NO：11的胺基酸27至129；該VEGFR2的Ig結構域3包含SEQ ID NO：11的胺基酸130至231；且該多聚體化結構域包含SEQ ID NO：11的胺基酸232至457。
一種調配物用於製備在個體體內抑制或減弱抗VEGF-抗性腫瘤生長的藥物之用途，該調配物包含：IL-6拮抗劑；VEGF拮抗劑；其中該IL-6拮抗劑為IL-6R抗體或其抗原特異性結合片段，其包含：(a)包含SEQ ID NO：4、5與6之胺基酸序列的重鏈互補決定區(HCDR)；以及(b)包含SEQ ID NO：7、8與9之胺基酸序列的輕鏈互補決定區(LCDR)；且其中該VEGF拮抗劑為包含SEQ ID NO：11之胺基酸27-457的VEGF特異性結合蛋白，其中腫瘤顯示比對抗VEGF拮抗劑本身敏感的腫瘤至少3倍較高的磷酸-STAT3量。
一種調配物用於製備在個體體內抑制或減弱腫瘤生長的藥物之用途，該調配物包含IL-6R抗體或其抗原結合片段以及一種選自由EGFR拮抗劑與ErbB3拮抗劑組成之群的額外治療劑；且其中腫瘤顯示比對抗VEGF拮抗劑本身敏感的腫瘤至少3倍較高的磷酸-STAT3量。
如申請專利範圍第13項之用途，其中該IL-6R抗體或其抗原結合片段包含一重鏈可變區(HCVR)以及一輕鏈可變區(LCVR)，其中該HCVR包含具有SEQ ID NO：4、5與6之胺基酸序列的互補決定區(CDR)，且其中該LCVR包含具有SEQ ID NO：7、8與9之胺基酸序列的CDR。
如申請專利範圍第14項之用途，其中該HCVR包含SEQ ID NO：2；且其中LCVR包含SEQ ID NO：3。
如申請專利範圍第15項之用途，其中該EGFR拮抗劑為特異結合EGFR的抗原特異性結合蛋白。
如申請專利範圍第16項之用途，其中該抗原特異性結合蛋白為EGFR抗體或其抗原結合分子。