TWI581790B - 一種化合物用於製備治療視神經之醫藥組合物的用途 - Google Patents

Description

一種化合物用於製備治療視神經之醫藥組合物的用途

本發明係關於4-(Phenylsulfanyl)butan-2-one化合物之新穎用途的領域，用於製備保護視神經之醫藥組合物的用途。

大約有0.5-5%的閉合性腦損傷(close head trauma)患者會發生創傷性視神經病變，且該病變經常導致永久性的失明。視神經的損壞會導致立即的剪力，造成患處劇烈的腫脹循環及局部缺血，而使視網膜神經節細胞(retinal ganglion cells，RGC)及軸突受損。在大部分的閉合性腦損傷案例中，第一個發生的緊急狀況是神經膠質細胞功能失調所導致的RGC軸突損傷，並伴隨著細胞凋亡訊息傳遞、逆行性軸突退化及Wallerian退化。在切斷視神經(optic nerve，ON)3-7天，RGC開始產生細胞凋亡，而剩餘的(約50-90%)會在幾個星期至幾個月內自視網膜中消失。軸突損傷也會誘發RGC體之中過氧化物突然大量產生，並促使下游一系列的氧化作用及產生具有細胞毒性的細胞介素，進而導致細胞凋亡。因此，刺激神經元的存活率及軸突生長的治療方法對於視神經損傷而言便是有益處的。

視神經壓碎模型(optic nerve crush model)對於探討軸突中RGCs死亡的病理生理學及評估在急性視神經損傷中各種治療策略對於神 經保護的效果是很有效的。壓碎視神經後會誘發RGCs產生逆行性退化。在逆行性退化產生之前，軸突的髓鞘會先退化、ED-1陽性吞噬細胞(包括巨噬細胞及微膠細胞)會滲入並清除髓鞘碎片。巨噬細胞及微膠細胞會堆積在損傷處，並在視神經內形成膠質瘢痕，進而阻礙視神經的再生長。這些現象暗示著視神經壓碎損傷中發炎過程的重要性。已有透過NO抑制劑及抗發炎細胞介素來抑制神經膠質活化的方式，來挽救在軸突損傷後細胞凋亡的RGC。

近年來，數種自海洋無脊椎動物分離的成分已被證實具有廣泛的抗發炎功效、刺激神經再生、及中樞神經系統的調控電位控制通道。過去研究發現台灣產瘤軟珊瑚(Cladiella australis)具有許多生物活性之海洋天然物，如Austrasulfone，具有神經保護功效；Dihydroaustrasulfone alcohol，合成Austrasulfone的前驅物，不只在in vitro具有抗發炎的功效，同時具有治療發炎相關疾病的潛在能力。

然而該前驅物因化合物極性極高，而降低化合物穿過細胞膜的能力，進而減弱了其抗發炎的活性。為了要使化合物更容易通過細胞膜，便可利用簡單的合成，將前驅物上的羥基(-OH)以苯環取代，產生出4-(Phenylsulfanyl)butane-2-one(4-PSB-2)。

本發明提供一種化合物4-(Phenylsulfanyl)butane-2-one(4-PSB-2)用於製備治療一個體之視神經損傷後的視覺功能之醫藥組合物的用途，其中該化合物具有式I之結構： ，，其中該醫藥組合物包含該化合物及醫藥上可接受之載劑。該視神經係視網膜神經節細胞。

較佳的，該4-PSB-2之有效劑量為1-15毫克/公斤體重(mg/Kg)。

較佳的，該4-PSB-2之有效劑量為5-15毫克/公斤體重。

更佳的，該4-PSB-2之有效劑量為5毫克/公斤體重。

4-PSB-2可以保護一個體之視網膜神經節細胞，並恢復該個體之視神經損傷後的視覺。視神經在受到損傷後，會導致視神經節細胞開始產生細胞凋亡現象，這也是會造成視覺喪失的因素。而4-PSB-2可以透過抗細胞凋亡和減緩ED1(巨噬細胞/微膠細胞的標記)陽性細胞浸潤於視神經之發炎反應，同時也可抑制視網膜中之iNOS/COX-2訊息傳遞，達到挽救在視神經損傷後之視網膜神經節細胞。

此外，透過閃光視覺誘發電位(flash visual evoked potential，FVEP)的實施例可了解到，以4-PSB-2處理的組別，其一般的視覺功能也比以載體處理的組別(對照組)來得好，證實4-PSB-2對於眼部結構的功能具有益處，並可恢復在視神經損傷之後的視力。FVEP的測量發現4-PSB-2可以減少因視神經損傷所造成視神經傳導功能損害，達到保留視神經損傷後的視覺。

由先前研究已知，iNOS及COX-2在壓碎模式導致的RGC損耗的發病機轉中是一重要角色(Palin et al.,2008；Tonari et al.,2012；Wu et al.,2009,2014)。iNOS會產生NO，造成細胞毒性，導致神經元死亡及軸突 損傷。COX-2的訊息傳遞亦被證實與神經元的細胞凋亡有關。來自珊瑚的多種生物活性成分可透過抗發炎或終止神經元細胞凋亡的機制(例如降低iNOS及COX-2表現量)而具有神經保護的特性。而給予4-PSB-2至一個體，可使RGC在擠壓損傷之後具有抗凋亡的能力。本發明同時證實給予4-PSB-2至一個體，可顯著地降低視網膜的視神經損傷後之iNOS及COX-2的表現量。由此可知4-PSB-2透過此機制而達到抗凋亡的效果。

視神經的損傷會導致損傷處的發炎反應。在本發明之實施例中，視神經損傷(crush)後，以ED-1標記的巨噬細胞/微膠細胞會逐漸累積在損傷處。在中樞神經系統損傷的死亡神經細胞可觀察到活化的微膠細胞及被微膠細胞釋放的大量前發炎調節因子。先前研究也證實多種發炎調節因子，如TNFa、IL-6、MCP-1、iNOS、及COX-2會被上調，且涉及到視神經損傷的發病機制。一些研究也發現神經損傷會使得損傷處之巨噬細胞/微膠細胞開始產生iNOS及COX-2。

視神經擠壓損傷會導致急性發炎反應，造成發炎細胞、膠質成分、及受傷的神經元釋放iNOS及COX-2，使iNOS及COX-2的表現量上升。ED1陽性反應的巨噬細胞/微膠細胞大量累積在視神經損傷處；Cd11b標記微膠細胞也會在RGC層顯著累積。在視神經損傷後立即給予4-PSB-2，可降低ED1陽性反應的巨噬細胞/微膠細胞累積，並抑制視網膜中Cd11b、iNOS、及COX-2的表現。

在一實施例中，Cd11b標記的微膠細胞於RGC層(RGC layer)顯著地增大，且前發炎因子iNOS及COX-2在視網膜擠壓損傷之後亦顯著地增多。而立刻給予4-PSB-2可減少ED1陽性巨噬細胞/微膠細胞在視神經損傷 處的累積、抑制視網膜中的Cd11b、iNOS、及COX-2表現量。因此4-PSB-2可透過抑制iNOS及COX-2而具有抗發炎的作用，達到神經保護的功效。

故本發明提供一化合物用於製備治療視神經受損之醫藥組合物，該化合物為4-PSB-2。4-PSB-2可在擠壓損傷之後透過其抗發炎及抗凋亡的活性來促進RGC的存活，並可保留/恢復視覺功能。

在一具體實施例中，本發明之醫藥組合物可以是口服藥、注射用藥、或眼藥水。

在一具體實施例中，本發明的醫藥組合物可以注射、口服、滴至眼睛、噴霧等方式給予。

在一具體實施例中，本發明之醫藥組合物可呈粉狀、錠劑、膠囊或液體之任一樣態。

如本文所用之術語「個體」表示動物、尤其哺乳動物。在一較佳實施例中，術語「個體」表示人類。

本文中所提及「有效劑量」一詞係指單獨或併用其他藥物之本發明醫藥組合物組份在症狀之處理上可提供治療利益之量。另外文中所提之單位「毫克/公斤體重(mg/Kg)」一詞係代表依據個體體重(每公斤)給予對應之劑量(毫克)。

ON‧‧‧視神經頭

S‧‧‧視網膜上方

I‧‧‧視網膜下方

N‧‧‧鼻側

T‧‧‧顳側

圖1A顯示視網膜鋪片的輪廓，ON：視神經頭，S：視網膜上方，I：視網膜下方，N：鼻側，T：顳側；圖1B：螢光金標記的RGCs在視網膜中央區域的分布，ON：視神經頭，白色方形：計算RGC的區域，該區域面積為38,250mm²(225 x 170mm)。

圖2為逆行性螢光金標記後兩週的視網膜鋪片以及RGCs型態；A-F為視網膜中央及中間至周邊區域的視網膜鋪片；A、D：假手術組；B、E：視網膜壓碎+PBS處理組；C、F：視網膜壓碎+4-PSB-2處理組；G、H分別為RGCs在視網膜中央及中間至周邊的型態。假手術組的視網膜中央及中間至周邊的RGC密度分別為2359±423/mm²及1400±242/mm²。視網膜壓碎+PBS處理組以及視網膜壓碎+4-PSB-2處理組的視網膜中央RGC密度分別為500±116/mm²(21.1%存活)及1342±473/mm²(56.8%存活)；視網膜壓碎+PBS處理組以及視網膜壓碎+4-PSB-2處理組的視網膜中間至周邊的RGC密度則分別為420±155/mm²(30.0%存活)及915±244/mm²(65.3%存活)。每個組別n=6，*p<0.05。

圖3為FVEP結果。A：ON壓碎後兩週的FVEP結果描繪代表圖；B：假手術組、PBS處理組別、及4-PSB-2處理組別的第一正波的潛伏期延遲時間分別為83±3ms、154±23ms、及118±14ms，與PBS處理組別比較的p<0.05，與假手術組別比較的p<0.001，每個組別n=6，*p<0.05。

圖4為視網膜切片的TUNEL結果圖。A為三個組別的視網膜TUNEL圖；B為三組組別的高倍視野(HPF)TUNEL陽性細胞數的示意圖，每個組別n=6，*p<0.05，***p<0.001，比例尺：50μM。

圖5為壓碎視神經後兩週之ED1免疫組織化學染色。A為視神經縱向切片的ED1染色圖；B為三組組別的ED1陽性細胞數/HPF示意圖，每個組別n=6，*p<0.05，***p<0.001。

圖6壓碎視神經後兩週之Cd11b免疫組織化學染色。A為視神經縱切片的Cd11b染色圖(箭頭所指)；B為三組組別的Cd11b陽性細胞數 /HPF示意圖，每個組別n=6，**p<0.01，***p<0.001，比例尺：20μM。

圖7為ON壓碎後兩週iNOS與COX-2的西方墨點試驗結果圖及免疫組織化學染色圖。A：ON壓碎後兩週各組別的iNOS與COX-2的西方墨點試驗結果圖。B、C：西方墨點試驗結果(A)量化表，表現比值係以GAPDH在假手術組的比值定為1進行計算，其結果以平均值±標準差來呈現，進行三重複，其中*p<0.05。D為iNOS與COX-2在ON壓碎後兩週各組別免疫組織化學染色圖，比例尺：50μM。

材料及方法

動物模型

四十五隻150-180g成年(7-8週大)公Wistar大鼠，以表1之方式進行分組。在進行各種操作時，是在全身麻醉的狀態下進行，以肌肉注射40mg/kg的Ketamine及4mg/kg的xylazine來執行全身麻醉。此外，以0.5%的Alcaine眼藥水進行局部麻醉。實驗動物可自由飲水及攝取食物，並飼養於23±1℃/濕度55±5%/12小時光暗循環(光：7 AM至7 PM)的環境中。

4-PSB-2製備

先將苯硫酚(2.00克，98%，17.8mmole)及三乙基胺(0.25毫升，1.78mmole)加入裝有10毫升丙酮的圓底瓶，於0℃的冰槽攪拌。將含有甲基乙烯基酮(1.38毫升，90%，17.8mmole)的丙酮(4毫升)緩慢加入瓶內。將上述混合物之溫度上升至室溫並持續反應16小時。接著將該不含溶劑的產物進行矽膠管柱層析步驟(以正己烷：乙酸乙酯=25：1進行沖提)以獲得本發明之4-(phenylsulfanyl)butan-2-one(2.80克，產率87%)，反應過程如下：

視神經壓碎試驗

試驗動物在全身麻醉之後利用Alcaine®眼藥水進行局部麻醉，剪開結膜，並使視神經暴露出來。過程需謹慎以避免視神經周圍的血管受到損傷。利用血管夾(60g微型血管夾)在距離眼球後方2mm處夾住視神經30秒。術後施以Tobradex®眼藥膏，並將大鼠置放於37℃的加熱電板上使之復原。對照組動物施以假手術：將神經暴露出來但並未給予擠壓。神經壓碎動作之後透過皮下注射立刻給予4-PSB-2(5毫克/公斤體重溶於0.2mL的PBS)或PBS(作為控制組)各一次。

閃光視覺誘發電位(Flash Visual Evoked Potentials，FVEPs)

為了測試在視神經壓碎之後視神經的功能，18隻進行了視神經壓碎試驗的大鼠在視神經壓碎試驗後兩週測試其閃光視覺誘發電位。施以直徑2-mm的顱骨切開術，透過立體定位座標儀(前囪門(Bregma)-8mm，側邊3mm)及Ohlsson et al.(2004)所述的方法，將一鍍銀電極放置於視覺皮質硬膜區外。本實施例利用視覺神經電氣診斷系統(UTAS-E3000,LKC Technologies,Gaithersburg,MD,USA)測量FVEPs。根據先前文獻顯示，Wistar大鼠在光視覺誘發電位及暗視覺誘發電位的潛伏期延遲時間並無顯著差異，故在光適應(light adaption)之後十分鐘測試光視覺閃光誘發電位(photopic FVEP)。測試設定：背景照明關閉、閃光強度Ganzfeld 0db、單次閃光，閃光頻率1.9Hz、平均測試數量為80個掃描、雜訊刪除的閾值為50mV、取樣頻率2000Hz。比較各組別的FVEP第一正波(P1)潛伏期延遲時間(latency)。

RGCs的螢光金逆行標記及RGCs密度

本實施例透過注射fluoro-gold(FG，螢光金)於上丘(superior colliculus，SC)來進行RGC螢光金逆行標記，藉以測量4-PSB-2在RGC的神經保護功效。藉由此技術，只有突出至上丘的完整RGC軸突會被標記。本實施例之步驟係根據Chang et al(Exp.Eye Res.,2004,118,109-116)進行。概括敘述如下。實驗動物犧牲前一個禮拜，利用Ketamine(劑量100mg/kg)與Xylazin(10mg/kg)混合物來麻醉大鼠，接著將大鼠置放於立體定位儀，再分別將1.5mL 5%的FG(Fluorochrome,Denver,CO,USA)注入雙上丘以 進行標記。標記後一個禮拜，安樂死該批實驗動物，並採集其眼球。將眼球置放於10%的福馬林之中，將完整的視網膜切下並進行鋪片。利用400倍落射螢光顯微鏡檢測該視網膜；該螢光顯微鏡配有濾光片組(激發濾光片=350-400nm；阻斷濾光片=515nm)、數位相機、及相對應軟體。在距離視神經頭1及3mm的位置檢測視網膜的RGCs，以分別測量視網膜中央(central)及中間至周邊(mid-peripheral)區域的RGC密度(圖1A)。隨機計算每個視網膜中央的八個區域(每個區域大小38,250mm²(225 x 170mm))(這八個區域共佔中央面積約40%)(圖1B)，以及隨機計算在中間至周邊的八個區域(每個區域大小38,250mm²(225 x 170mm))(這八個區域共佔中間至周邊範圍約30%)。將這些區域的數值進行平均，作為每一個視網膜的平均RGC密度。RGC存活率的計算方式係以各組別計算出來的RGC數量除以假手術組別的RGC數量，再乘以100。

視神經及視網膜切片準備

在試驗兩週後犧牲大鼠，並在視交叉(optic chiasm)與眼球中間採收約5-7mm長的視神經切片。將該神經切片立即放置於-70℃冷凍的環境用於之後的免疫組織化學試驗。犧牲之後，將角膜、水晶體、玻璃體移除。剩下的眼杯(eyecup)，包含鞏膜、及視網膜，在室溫中固定於4%的三聚甲醛2小時。接著放置於30%的蔗糖中進行脫水，並保存於20℃。

TUNEL

所有的冷凍切片係來自距視神經頭1-2mm的位置。TUNEL(DeadEnd^TM fluorometric TUNEL System,Promega Corporation,Madison,WI,USA)係用於偵測細胞凋亡。每個視網膜取三切片，在每個切片樣本的 RGC層中做10個高倍視野(400X)，並分別計算每個高倍視野的陽性細胞數，再平均每隻眼的三個切片陽性細胞數。

視神經及視網膜的免疫組織化學染色

利用單株抗體(ED1,1：50；CD11b,1：20；AbD Serotec,Oxford,UK)或多株抗體(iNOS,1：50；Cell signaling Inc.Beverly,MA,USA；COX-2,1：50；Santa Cruz,CA,USA)進行ED1(CD68，巨噬細胞/微膠細胞的生物標記)在視神經的免疫組織化學染色，以及CD11b、iNOS、及COX-2在視網膜的的免疫組織化學染色。冷凍的視神經及視網膜在20℃環境固定於丙酮中30分鐘，並以5%的胎牛血清(含有1%的牛血清蛋白(BSA))阻斷15分鐘。加入初級抗體，並於4℃中培育。接著在室溫中加入二級螢光(fluorescein isothiocyanate，FITC)共軛抗體，並培育1小時。最後利用DAPI進行複染。計算視神經損傷(一組六隻大鼠)區域六個HPF的ED1陽性細胞數。計算六個HPF的Cd11b陽性細胞數，並平均三個切片的陽性細胞數。

西方墨點法

利用修飾RIPA緩衝液(modified radioimmunoprecipitation buffer)與Halt^TM蛋白酶磷酸酶抑制劑混合物(Thermo Scientific)自均質樣品萃取出總視網膜蛋白。利用蛋白質定量試劑組檢測蛋白濃度。每個視網膜視為個別的樣品(每組n=3)。透過12% SDS-PAGE分離蛋白樣品(每個樣品含有50mg的蛋白質)，並轉漬到PVDF膜。再將PVDF膜置於5%脫脂奶粉TBST緩衝液培育30分鐘。加入iNOS抗體並培育於4℃一整夜。洗掉後，加入抗HRP共軛二級抗體，並於室溫培育1小時。最後利用增強化學發光法(enhanced chemiluminescence)偵測膜上的蛋白。以GAPDH作為對照組。 利用ImageJ軟體進行密度分析。每組試驗皆為三重複，並使用來自不同大鼠的獨立視網膜樣品。將假手術組的iNOS/GAPDH或COX-2/GAPDH比值設定為1.0倍。

統計分析

計算細胞數量時，計數者並不知道其為實驗組或對照組(masked fashion)。利用商業化軟體(IBM SPSS Statistics 19,International Business Machine Corp.,Armonk,NY)來進行統計分析。利用KruskaleWallis test及ManneWhitney U test來比較各組別。所有數據以平均值±標準差呈現。P<0.05則代表該數據具有顯著意義。

結果

RGCs型態測定

假手術組別的眼睛中，在中央及中間至周邊RGCs密度分別為2359±423/mm²及1400±242/mm²。在視神經壓碎後兩個禮拜，4-PSB-2及PBS處理的組別，其視網膜中央的RGCs密度分別是1342±473/mm²(56.8%存活率)及500±116/mm²(21.1%存活率)；而4-PSB-2及PBS處理的組別，其視網膜中間至周邊的RGCs密度則分別是915±244/mm²(65.3%存活率)及420±155/mm²(30.0%存活率)(圖2)。由此結果顯示，相較於PBS處理的組別，在4-PSB-2處理的組別中RGC存活率在視網膜中央及中間至周邊分別上升約35.7%及35.3%，故可證實4-PSB-2對於是神經有顯著的保護效果(p<0.05)，且可在視神經損傷後恢復其視覺功能。

FVEP

ON壓碎後兩個禮拜，假手術組、PBS處理組別、及4-PSB-2處理組別的第一正波的潛伏期延遲時間分別為83±3ms、154±23ms、及118±14ms(圖3)。由FVEP試驗結果顯示，比起PBS處理的組別，4-PSB-2處理的組別顯著地保存了視覺功能

TUNEL

在假手術處理的組別，其高倍視野(HPF)的TUNEL陽性細胞數為2.0±1.7cells/HPF；PBS處理的組別為14.8±6.5cells/HPF；4-PSB-2處理的組別之陽性細胞數則為6.7±3.4cells/HPF(與PBS處理組別比較的p<0.05，與假手術組別比較的p<0.05，)(圖4)。該結果顯示，給予4-PSB-2可顯著地使RGCs具有抗細胞凋亡之功效。

視神經之ED1

在ON壓碎後兩個禮拜，ED1陽性細胞數/HPF在假手術組、PBS處理組、及4-PSB-2處理組分別為4.3±2.5、67.3±21、及33.5±14.5(與PBS處理組別比較的p<0.05，與假手術組別比較的p<0.05)(圖5)。透過ED1標記的巨噬細胞/微膠細胞在ON累積的數量減少可得知，給予4-PSB-2可在視神經受損後顯著地抗發炎。

視網膜之Cd11b

微膠細胞在神經退化發炎過程中會活化，使Cd11b調升。ON壓碎後兩個禮拜，PBS處理的組別中，其神經節細胞層的Cd11b陽性細胞數有顯著增加(代表微膠細胞活化)(圖6)。Cd11b陽性細胞數/HPF在假手術組別、PBS處理組別、及4-PSB-2處理組別中分別是2.3±1.7、40.0±9.7、及 17.3±5.9(與PBS處理組別比較的p<0.01，與假手術組別比較的p<0.05)。透過在視網膜中降低的Cd11b標記微膠細胞活化可得知，在神經損傷後，4-PSB-2於視網膜中具有抗發炎的效果。

4-PSB-2對於iNOS及COX-2表現量的抑制作用

在視神經壓碎後兩個禮拜，PBS處理的組別之iNOS及COX-2(圖7A-圖7C)表現量會顯著地上升。而給予4-PSB-2則會預防視神經損傷所導致的iNOS及COX-2表現量上升。比起以4-PSB-2處理及假手術處理的組別，在PBS處理的組別中可觀察到增強的iNOS及COX-2免疫反應性(圖7D)。這些結果指出在視神經損傷後，4-PSB-2可減弱視網膜中因視神經損傷所誘發的前發炎細胞介素、iNOS、及COX-2上升的表現量。

本說明書及申請專利範圍中所用之詞語「包含」、「具有」、「包括」或「含有」為包括在內的或開放式的，且其不排除額外未引用之元件或方法步驟。如本文中所述之術語『抑制』、『減少』或『防止』或該等術語之任何變體當用於申請專利範圍及/或說明書中時包括任何可量測之減少或完全抑制以達成所需之結果。

如說明書及/或申請專利範圍中所使用之術語『有效』意謂足以實現所需、所期望或所預計之結果。

一個熟知此領域技藝者能很快體會到本發明可很容易達成目標，並獲得所提到之結果及優點，以及那些存在於其中的東西。本發明中之細胞、動物及其製造程序與方法乃較佳實施例的代表，其為示範性且不僅侷限於本發明領域。熟知此技藝者將會想到其中可修改之處及其他用途。這些修改都蘊含在本發明的精神中，並在申請專利範圍中界定。

本發明的內容敘述與實施例均揭示詳細，得使任何熟習此技藝者能夠製造及使用本發明，即使其中有各種不同的改變、修飾、及進步之處，仍應視為不脫離本發明之精神及範圍。說明書中提及之所有專利及出版品，都以和發明有關領域之一般技藝為準。所有專利和出版品都在此被納入相同的參考程度，就如同每一個個別出版品都被具體且個別地指出納入參考。

在此所適當地舉例說明之發明，可能得以在缺乏任何要件，或許多要件、限制條件或並非特定為本文中所揭示的限制情況下實施。所使用的名詞及表達是作為說明書之描述而非限制，同時並無意圖使用這類排除任何等同於所示及說明之特點或其部份之名詞及表達，但需認清的是，在本發明的專利申請範圍內有可能出現各種不同的改變。因此，應了解到雖然已根據較佳實施例及任意的特點來具體揭示本發明，但是熟知此技藝者仍會修改和改變其中所揭示的內容，諸如此類的修改和變化仍在本發明之申請專利範圍內。

Claims (8)

1. 一種化合物用於製備治療一個體之視神經損傷後的視覺功能之醫藥組合物的用途，其中該化合物具有式I之結構：，其中該醫藥組合物包含該化合物及醫藥上可接受之載劑。
2. 如申請專利範圍第1項之用途，其中該視神經係視網膜神經節細胞。
3. 如申請專利範圍第1項之用途，其中該化合物之劑量為1-10mg/kg。
4. 如申請專利範圍第3項之用途，其中該化合物之劑量為5mg/kg。
5. 如申請專利範圍第1項之用途，其中該化合物具有抑制該視神經凋亡之能力。
6. 如申請專利範圍第1項之用途，其中該化合物具有抑制該視神經發炎反應之能力。
7. 如申請專利範圍第1項之用途，其中該醫藥組合物呈粉狀、錠劑、膠囊或液體之任一態樣。
8. 如申請專利範圍第1項之用途，其中該個體為哺乳動物。