TWI564291B - 一氧化氮生成調節劑 - Google Patents

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Description

一氧化氮生成調節劑
本發明關於三核型五甲炔系花青色素的用途，詳細而言，關於一種一氧化氮生成調節劑，其係含有三核型五甲炔系花青色素，以及1種或2種以上製劑學可容許的其他成分而成。
已知一氧化氮(NO)在生物體內的各種生理學反應中扮演重要的角色(參照例如國際公開WO95/031987號小冊子)。具體而言，例如與藉由對於血管的平滑肌系的弛緩作用進行的血壓調整相關的機能、藉由血小板凝集阻礙作用而抑制血液凝固的作用等。其他擔任的重要的角色還有作為發炎過程及受到活性化的巨噬細胞毒性活性的因子。生物體內的一氧化氮平衡異常，則會產生嚴重的疾病或障礙。亦即在敗血症性或出血性休克時過剩的一氧化氮生成，會引起病理學上的大幅血壓降低。此外，由一氧化氮之濃度降低直接或間接的所引起的疾病的例子有：動脈性高血壓症、鬱血性疾病、心臟疾病。
除了上述以外，與生物體內的一氧化氮平衡異常有關的疾病或障礙已知有：風濕性關節炎、變形性關節炎、潰瘍性大腸炎、臟器移植後的組織障礙、移植排斥反應、病毒感染等所造成的心肌炎及心肌症、以絲球體腎臟炎為首的腎臟炎、胰臟炎、老化等發炎性疾病、動脈硬化症、缺血後的心臟等血管內皮(包括微小血管內皮)損傷等。
一氧化氮在生物體中的角色已經明朗，已明白在其局部或全身的平衡異常與各種疾病的關係，為了抑制生物體內的一氧化氮的生成，預防、治療一氧化氮平衡異常所引起的如上述般的疾病已有文獻提出各種一氧化氮平衡異常相關的疾病或障礙的預防劑或治療劑，係以喋啶衍生物(國際公開WO95/031987號小冊子，日本特表平10-504023號公報)、縮合哌啶化合物(日本特表平11-171866號公報)、環烯烴衍生物(日本特開2005-232168號公報)、洛索洛芬(Loxoprofen)(日本特開2007-284424號公報)等化合物或欖仁處理物(日本特開2005-53864號公報)般的來自植物的成分等作為有效成分。然而現況中，該等化合物許多都還並未實用化。
本發明課題為提供一種新的一氧化氮生成調節劑，其係可安全地適用於生物體，用於有效地調節來自於包含小神經膠質細胞的巨噬系細胞或血管內皮細胞等的一氧化氮生成。
本發明人為了解決上述課題，著眼於聚次甲基系花青色素而潛心研究、搜尋的結果，發現具有下述一般式1所表示之喹啉骨架之三核型五甲炔系花青色素具有調節來自於小神經膠質細胞的一氧化氮生成的作用，而且確認了這種花青色素即使直接適用於生物體，也並未表現出毒性或嚴重的副作用，而完成本發明。亦即，本發明主要構成為一種一氧化氮生成調節劑，其係以下述一般式1所表示之三核型五甲炔系花青色素作為有效成分。
【化1】
一般式1
(一般式1之中，R表示可具有分支而碳數為2至4之烷基，X-表示適當的相對陰離子)。
以前述一般式1所表示之三核型五甲炔系花青色素作為有效成分的本發明之一氧化氮生成調節劑，可藉由非口服或口服投予而調節來自於包含小神經膠質細胞的巨噬系細胞或血管內皮細胞等的一氧化氮生成，而調整一氧化氮平衡異常。而且，作為有效成分的一般式1所表示之色素的安全性極高。進一步可推測本發明之一氧化氮生成調節劑在由一氧化氮生成的平衡異常所引起病理學上的血壓降低、以心肌炎等發炎為首的各種嚴重的發炎性疾病或心臟等血管組織(包括微小血管內皮)等組織或細胞之障礙、動脈性高血壓症、鬱血性疾病等的預防以至於治療方面為有效的。
如上述般，本發明關於一種一氧化氮生成調節劑，其係以上述一般式1所表示之三核型五甲炔系花青色素作為有效成分。已知三核型五甲炔系花青色素本身為周知的物質(參照例如日本特開平11-322603號公報及日本特開2003-137784號公報)，並且具有治癒創傷或細胞賦活等作用(參照例如速水正明監修、「感光色素」，1997年10月17日，產業圖書股份有限公司發行，24至30頁及138至154頁)。然而，在這些文獻中，並不存在教示或提示三核型五甲炔系花青色素具有調節來自包含小神經膠質細胞的巨噬系細胞或血管內皮細胞等的一氧化氮生成的作用之記載，故含有一般式1所表示之三核型五甲炔系花青色素作為有效成分的一氧化氮生成調節劑是由本發明人首先發現。
本發明之一氧化氮生成調節劑係以上述一般式1所表示之三核型五甲炔系花青色素作為有效成分。一般式1中的R所表示之烷基的碳數為2至4，具體而言，乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、第二丁基、第三丁基。從調節來自於包含小神經膠質細胞的巨噬系細胞或血管內皮細胞等的一氧化氮生成的作用的強度的觀點來考量，以一般式1中的R所表示之烷基之碳數為2，或烷基為直鏈狀且其碳數為3之三核型五甲炔系花青色素為較佳，以烷基(R)之碳數為2之色素為特佳。附帶一提，如後述實驗所揭示般，烷基(R)之碳數為1或6之三核型五甲炔系花青色素，並未對於來自於包含小神經膠質細胞的巨噬系細胞或血管內皮細胞等的一氧化氮生成表現出明顯的調節作用。
一般式1中的X-表示適當的相對陰離子，通常選自例如氟陰離子、氯陰離子、溴陰離子、碘陰離子、過氯酸陰離子、過碘酸陰離子、六氟化磷酸陰離子、六氟化銻酸陰離子、六氟化錫酸陰離子、磷酸陰離子、硼氟化氫陰離子、四氟硼酸陰離子等無機酸陰離子、或硫氰酸陰離子、苯磺酸陰離子、萘磺酸陰離子、萘二磺酸陰離子、p-甲苯磺酸陰離子、烷基磺酸陰離子、苯羧酸陰離子、烷基羧酸陰離子、三鹵烷基羧酸陰離子、烷基硫酸陰離子、三鹵烷基硫酸陰離子、菸鹼酸陰離子、天門冬胺酸陰離子等有機酸陰離子。依據本發明之一氧化氮調節劑所得到的調節來自於包含小神經膠質細胞的巨噬系細胞或血管內皮細胞等的一氧化氮生成之作用，基本上而言，依存於作為有效成分的一般式1所表示之烷基(R)之碳數為2至4的三核型五甲炔系花青色素的陽離子部分，因此只要可直接適用於生物體，則其相對陰離子並無特別限制，而從其作用強度的觀點來考量，較佳為碘陰離子及氯陰離子，以碘陰離子為特佳。在一般式1所表示之烷基(R)之碳數為2至4的三核型五甲炔系花青色素的情況，相對陰離子為氯陰離子之色素若與碘陰離子之色素相比，則對水性溶媒的溶解性較為優異，因此在以口服投予的形態使用的情況，吸收至生物體內的吸收性、吸收速度這方面為優異的。
本發明之一氧化氮生成調節劑之有效成分具體而言，可例示下述化學式1至8所表示之三核型五甲炔系花青色素。另外還可為與化學式4及5所表示之色素的陽離子部分相同，且將相對陰離子由碘陰離子換成氯陰離子的化合物。從調節來自於包含小神經膠質細胞的巨噬系細胞或血管內皮細胞等的一氧化氮生成的作用強度的觀點來考量，以化學式1或2所表示之色素為佳，以化學式1所表示之色素為特佳。
【化2】
化學式1
【化3】
化學式2
【化4】
化學式3
【化5】
化學式4
【化6】
化學式5
【化7】
化學式6
【化8】
化學式7
【化9】
化學式8
本發明所謂的一氧化氮生成調節，意指來自於包含小神經膠質細胞的巨噬系細胞或血管內皮細胞等的一氧化氮的生成亢進，局部或全身的一氧化氮平衡發生異常的情況，抑制一氧化氮的生成，使一氧化氮量降至正常程度，或來自於包含小神經膠質細胞的巨噬系細胞或血管內皮細胞等的一氧化氮的生成降低，局部或全身的一氧化氮平衡發生異常的情況，使一氧化氮的生成亢進，而使一氧化氮量上昇至正常程度。
接下來，針對依據本發明所得到的一氧化氮生成調節劑之用途作說明，如先前所述般，本發明之作為有效成分的三核型五甲炔系花青色素具備調節來自於包含小神經膠質細胞的巨噬系細胞或血管內皮細胞等的一氧化氮的生成的性質，即使直接適用於生物體也並未表現出毒性或嚴重的副作用，因此可直接適用於生物體，可使用於調節來自於包含小神經膠質細胞的巨噬系細胞或血管內皮細胞等的一氧化氮的生成。若將本發明之一氧化氮生成調節劑適用於生物體，則可調節一氧化氮的生成，並且可調整其平衡異常，因此可推測在由一氧化氮平衡異常所引起的各種疾病或障礙的預防以至於治療方面為有效的。
本發明所謂的由生物體內的一氧化氮平衡異常所引起的各種疾病或障礙，具體而言可列舉例如敗血症或出血性休克、藉由細胞介素進行的惡性腫瘤治療、或肝硬化等所造成病理學上的血壓降低症、風濕性關節炎、變形性關節炎、潰瘍性大腸炎、臟器移植後的組織障礙、移植排斥反應、動脈硬化症、病毒感染等所造成的心肌炎及心肌症、以絲球體腎臟炎為首的腎臟炎、胰臟炎、燒傷等發炎性疾病、病毒感染、細胞障礙性因子或發炎反應等所造成的血管內皮(包括微小血管內皮)等組織損傷或細胞障礙(細胞死亡)、動脈性高血壓症、鬱血性疾病、心臟疾病等。
本發明之一氧化氮生成調節劑只要因應生物體內的一氧化氮平衡異常的程度，以每天至一天以上的間隔，一天一次或分成多次投予每天所既定的份量即可。每天份的投予量只要是能夠得到本發明所期望的作用效果的量，則並無特別限制，通常在靜脈內投予(包括點滴)、皮下、皮內至腹腔內投予的情況，希望為以上述一般式1所表示之三核型五甲炔系花青色素合計0.01mg/kg體重/天以上，較希望為0.1至20mg/kg體重/天，特別希望為0.5至5mg/kg體重/天。在少於0.01mg/kg體重/天的投予量時，會有觀察不到所期望的效果的情形。另外即使投予20mg/kg體重/天以上，會有觀察不到與此投予量相符的效果增強的情況。在口服投予的情況，希望為0.1mg/kg體重/天以上，較希望為0.5至100mg/kg體重/天，特別希望為0.5至50mg/kg體重/天。此外，考慮到在以口服用劑的形態使用本發明之一氧化氮生成調節劑的情況，與皮下或腹腔內投予相比，本發明所使用的三核型五甲炔系花青色素吸收至生物體內的吸收性較低，為了得到本發明所期望的效果，比起前述皮下或腹腔內的投予量必須增加更多的投予量。再者，在口服用劑的情況，一般式1所表示之三核型五甲炔系花青色素的相對陰離子為氯陰離子之色素與碘陰離子之色素的情況中，只要考量吸收至生物體內的吸收性，或來自於包含小神經膠質細胞的巨噬系細胞或血管內皮細胞等的一氧化氮的生成之調節作用的強度有差異而調節其投予量即可。另外，本發明之一氧化氮生成調節劑的投予期間只要因應一氧化氮平衡異常程度而調整即可，急性的情況，只要投予至生物體內的一氧化氮的程度降低，或者至推斷原因為一氧化氮平衡異常的症狀改善或消失為止即可，慢性的情況，希望持續投予至觀察到這些症狀改善至消失。此外，生物體內的一氧化氮平衡異常可由推斷原因為一氧化氮平衡異常的疾病以至其症狀來推測，然而希望盡可能直接確認生物體內的一氧化氮的程度。用於確認生物體內的一氧化氮程度的一氧化氮的定量法，可列舉例如將依照常法所採取到的血液或來自於其他組織的生物體液以硝酸還原酵素作處理之後，藉由2,3-二胺基萘使亞硝酸陰離子發色(螢光)而定量之方法。另外還可隨意使用市售的氧化氮分析系統(例如Eicom公司製，商品名「NO system(ENO-20)」)等作定量。
本發明之一氧化氮生成調節劑，通常以非口服投予用的液劑、使用時溶解型粉末劑等的形態提供。進一步而言，本發明之一氧化氮生成調節劑還能夠以口服用劑的形態提供。口服用劑的劑形可列舉粉末、顆粒劑、錠劑、膠囊劑、糖漿、液劑等。
本發明之一氧化氮生成調節劑除了注射劑、口服用劑以外，還可採用敷糊劑或經肺用的吸飲噴霧劑等的形態，或可採用埋入皮下等體內的徐放製劑形態。
進一步而言，本發明之一氧化氮生成調節劑還包含投藥單位形態之藥劑。這種投藥形態的藥劑意指本發明之作為有效成分的上述一般式1所表示之三核型五甲炔系花青色素的例如含有每天的用量或相當於其整數倍(至4倍)或約數(至1/4)的量，適合投予並能夠以物理方式分離的劑形。
本發明之一氧化氮生成調節劑亦可使用於以家畜、家禽、寵物為首這些人類以外的動物，以對其中來自於包含小神經膠質細胞的巨噬系細胞或血管內皮細胞等的一氧化氮生成的進行調節。
接下來針對本發明之一氧化氮生成調節劑之製造方法作說明，本發明之一氧化氮生成調節劑之作為有效成分的上述一般式所表示之三核型五甲炔系花青色素，其由來或製法並無限制，可藉由周知的方法或準照周知的方法，而得到所希望的量。例如可藉由速水正明監修、「感光色素」、1997年10月17日、產業圖書股份有限公司發行、的24至30頁所記載的方法或準照該等方法，而得到所希望的量。在這種色素已有市售品的情況，因應必要只要將其加以適當地精製之後使用即可，上述一般式1所表示之三核型五甲炔系花青色素，且其相對陰離子為碘陰離子之色素市售品有：「NK-4」(一般式1中的烷基(R)之碳數為2之色素：上述化學式1所表示之色素)、「NK-234」(一般式1中的烷基(R)為直鏈狀，且其碳數為3之色素；上述化學式2所表示之色素)及「NK-26」(一般式1中的烷基(R)為直鏈狀，且其碳數為4之色素；上述化學式3所表示之色素)(任一者皆為林原生物化學研究所股份有限公司製造)。另外，一般式1所表示之三核型五甲炔系花青色素，且其相對陰離子為氯陰離子之色素之市售品可列舉：「NK-9」(一般式1中的烷基(R)之碳數為2之色素；上述化學式6所表示之色素)、「NK-235」(一般式1中的烷基(R)為直鏈狀，且其碳數為3之色素；上述化學式7所表示之色素)及「NK-46」(一般式1中的烷基(R)為直鏈狀，且其碳數為4之色素；上述化學式8所表示之色素)(任一者皆為林原生物化學研究所股份有限公司製造)等。
本發明之一氧化氮生成調節劑，亦可將其中作為有效成分的三核型五甲炔系花青色素單獨使用，而通常在不脫離本發明範圍之下，能夠以摻合製劑學可容許的醫藥品領域、準藥物領域或食品領域或化妝品領域所可使用的成分之1種或2種以上的製劑形態來提供。
製劑學可容許的成分可例示如醫藥品、準藥物用等的添加劑、賦形劑、崩壞劑、潤滑劑、安定化劑、界面活性劑、防腐劑(抗菌劑)、香料、增黏劑、抗氧化劑、螯合劑、維生素類、胺基酸類、水性溶媒、糖質、水溶性高分子、pH調整劑、發泡劑、醫藥用或準藥物用的有效成分、化妝品原料等，只要將該等成分之1種或2種以上適當地組合而摻合，並且因應目標之劑型依照常法製造即可。
另外，將本發明之一氧化氮生成調節劑與以本發明所使用的三核型五甲炔系花青色素以外之化合物作為有效成分的一氧化氮生成調節劑、或推測本發明之一氧化氮生成調節劑可適用的各種疾病或障礙的預防劑、治療劑一起併用也是有利的。該等藥劑能夠以與本發明之有效成分的混合劑的形態投予、或可將各個製劑分別進行投予。
本發明所使用的色素只要考量對象製劑的組成或其使用目的，在原料階段至製品完成的步驟摻合至本發明之一氧化氮生成調節劑即可。其方法可適當地選擇例如混和、混捏、溶解、熔融、分散、懸浮、乳化、逆微胞化、滲透、晶出、散佈、塗佈、附著、噴霧、被覆(coating)、注入、浸漬、固化、擔持等之1種或2種以上的方法。
本發明之一氧化氮生成調節劑在製成注射用製劑等的非口服用劑的情況，通常溶於不含熱原的水性溶媒，並投予至皮內、皮下、肌肉內、體腔內(胸腔內、腹腔內等)、血管內等組織或臟器，因此製劑的形態可為乾燥製劑或可為液劑。在乾燥製劑的情況，只要在使用時溶於注射用的純化水、生理食鹽水、磷酸緩衝生理食鹽水、葡萄糖液等水性溶媒而使用即可。亦可將粉末成分與水性溶媒分別收納於能將兩者分開封入，並且只要將其間的密封部分開通即可將其混合的形態之塑膠製容器等，在使用時將2成分混合、溶解而使用。液劑的情況可直接投予，或可添加至輸注液、灌流液、腹膜透析液等而使用。另外，在調製徐放性製劑的情況或摻合親油性的成分的情況，還可隨意使用丙二醇、聚乙二醇、橄欖油等兩親媒性溶劑、油性基材、或Tween80等乳化劑等。另外還可隨意封入核糖體等而進行投予。
本發明所謂的水性溶媒一般而言意指以水為必須要素，因應必要而在其中摻合例如乙醇、丙醇、異丙醇等醇類、丙酮等酮類、二乙醚等醚類、二甲亞碸(以下會有簡稱為「DMSO」的情況)等以含硫化合物為首的親水性有機溶劑之1種或2種以上而成的水性溶媒。依據本發明所得的液劑，其中的水性溶劑只要單獨使用注射用純化水、生理食鹽水、林格氏液等即可，亦可隨意使用注射用純化水與例如乙醇、丙醇、異丙醇、二乙醚、DMSO等生理學所容許的親水性有機溶劑的混合液。另外還可隨意添加乳酸、鹽酸、磺酸、甲基磺酸、氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸氫鈉或磷酸緩衝液等pH調整劑，而將pH調整成製劑化的色素的溶解度或安定性最高的pH6.5至8.0，較佳為6.8至7.4。此外，本發明之一氧化氮生成調節劑之作為有效成分的上述一般式1所表示之三核型五甲炔系花青色素依照相對陰離子的種類等，會有對於水性溶媒的安定性低的情形，因此希望為使用時溶解型的製劑形態，進一步希望是相對陰離子為碘陰離子之色素。
這種液劑的情況中，本發明所使用的三核型五甲炔系花青色素會有因為溶氧等而變得不安定的情況，因此在此情況下，只要例如使這種色素溶液的溶氧濃度降低即可。這種液狀組成物，通常可藉經由下述步驟的方法調製：使這種色素溶於水性溶媒之步驟；以及製成該水性溶媒，使其在常溫常壓之大氣環境下的氧濃度下降之步驟。為了使該等色素溶於水性溶媒，只要例如將既定量的色素添加至適量的水性溶媒，因應必要加熱‧攪拌同時使其溶解之後，因應必要追加水性溶媒至色素的濃度成為既定程度為止即可。另外還可預先使這種色素溶於親水性有機溶劑之後，加入水性溶媒稀釋至色素的濃度成為既定程度為止。
為了使水性溶媒的溶氧濃度低於在常溫常壓之大氣環境下的濃度，例如在減壓下調製以及保存本發明所使用的三核型五甲炔系花青色素之溶液，或使溶存於這種色素溶液的氧氣被其他氣體所取代，或使這種色素溶液與脫氧劑接觸的方法為適合。為了使溶於液狀組成物的氧氣被其他氣體取代，只要使例如氮氣等較為不活性的氣體，或氖、氬、氪、氙等稀有氣體在液狀組成物中起泡即可。為了使用脫氧劑使氧濃度下降，只要在液狀組成物適量添加例如L-抗壞血酸、L-抗壞血酸硬脂酸酯、亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、α硫甘油、乙二胺四乙酸鈉、鹽酸半胱胺酸、檸檬酸、卵磷脂、硫乙醇酸鈉、硫蘋果酸鈉、焦亞硫酸鈉、丁基羥基苯甲醚、葡萄糖或麥芽糖等還原性糖質等即可。該等方法可適用於色素溶液，或可適用於使色素溶解前的水性溶媒。此情況下，水性溶媒中的溶氧濃度通常只要定為0.4ppm以下即可，而希望為0.1ppm以下。
另外，為了使本發明所使用的三核型五甲炔系花青色素的安定化，而適量添加如生育酚、胡蘿蔔素、組胺酸、色胺酸、酪胺酸、甲硫胺酸、半胱胺酸、多巴胺、硫代牛磺酸、亞牛磺酸、膽紅素、膽固醇、喹啉、槲皮素、芸香苷或其糖質衍生物、檸檬黃素或其糖質衍生物、兒茶素、花青素、硫胺素等物質般具有將單重態氧消去的活性之成分、或烷基纖維素、羧乙烯基聚合物、聚三葡萄糖等增黏劑、Triton X、Tween 80、去氧膽酸或其鹽、膽酸或其鹽等界面活性劑以調製出製劑，也會是有利的。
以這種方式所得到的上述一般式1所表示之三核型五甲炔系花青色素之溶液，只要在可隔絕氧氣，因應用途而保存在封入適當的容器的狀態下即可。容器的材質只要是原理上可保持液狀組成物，且可實際將氧氣隔絕的物質，並無特別限制，而希望為褐色瓶或褐色安瓿、塑膠容器這樣的遮光性的容器。通常在將液狀組成物分注至玻璃安瓿、樣品瓶、塑膠容器等容器之前進行過濾滅菌等滅菌，或者在玻璃安瓿、樣品瓶的情況中，分注並將容器密封之後，藉由高壓滅菌等進行滅菌，然而情況依照用途而定。
以這種方式製造出的本發明之一氧化氮生成調節劑，即使長期連續使用也沒有嚴重的副作用，而為安全的製劑。
以下藉由實驗對於本發明作進一步詳細說明。
<實驗1：三核型五甲炔系花青色素對於一氧化氮生成造成的影響>
使用由作為人類一氧化氮生成的in vitro模型所泛用的大鼠胎兒腦細胞的初代培養所調製出的小神經膠質細胞，藉由以下所示的方法，對於三核型五甲炔系花青色素對於生物體內的一氧化氮的生成造成的影響進行評估。一氧化氮的誘發劑，採用作為發炎狀態或敗血症的誘發模型物質所泛用的脂多醣(LPS)。此外，在以下的實驗之中，三核型五甲炔系花青色素任一者皆由林原生物化學研究所股份有限公司所合成，精製成純度99質量%以上而使用。
<被驗試樣>
將上述一般式1所表示之三核型五甲炔系花青色素的相對陰離子(X-)為碘陰離子，且烷基(R)之碳數為1之色素(以下稱為「化合物1」)、碳數為2之色素(上述化學式1所表示之色素；以下稱為「化合物2」)、及烷基(R)任一者皆為直鏈狀，且其碳數為3之色素(上述化學式2所表示之色素；以下稱為「化合物3」)、碳數為4之色素(上述化學式3所表示之色素；以下稱為「化合物4」)及碳數為6之色素(以下稱為「化合物5」)，分別以5mg/ml的濃度溶於DMSO(SIGMA公司販售，商品編號「D8418」)之後，進行膜過濾(使用Millipore公司販售，商品名「Millex-LG SLLG025SS」的DMSO耐溶性膜)。在正要使用此溶液之前，使用10體積%牛胎兒血清(FBS)加Dulbecco's MEM培養基(日水製藥股份有限公司販售，DMEM培養基，含有20mM葡萄糖、10mM的HEPES、50μg/ml鏈黴素及50單位(U)/ml青黴素，以下簡稱為「10%FBS加DMEM培養基」)稀釋成化合物的最終濃度成為表1所示的濃度，製成被驗試樣以供測試。此外預先確認了在以10%FBS加DMEM培養基將溶於DMSO的測試標準品稀釋成測試所使用的濃度的情況下，其中所含濃度的DMSO不會影響以下的測試系統。
<小神經膠質細胞之調製>
將懷孕第16至18天的韋斯系大鼠(日本Charles River股份有限公司販售，10週齡，雌性)在醚麻醉之下進行解剖，並將子宮摘出，浸漬於70體積%乙醇溶液之後，立刻浸漬於冰冷的滅菌Hanks緩衝鹽溶液(HBSS)，並將胎兒摘出。將所摘出的胎兒浸漬於新鮮的冰冷的滅菌HBSS，在實體顯微鏡下將大腦由胎兒摘出，並將其皮質部分切出，去除髓膜，並且切細。回收此大腦皮質的細切片，並在由每隻鼠胎所摘出的大腦皮質，加入含有以0.3mg/ml的L-半胱胺酸鹽酸鹽使其活性化的0.01質量%DNaseI(Worthington公司製)的20單位(U)/ml木瓜酵素溶液(Worthington公司製)1ml，在37℃處理30分鐘以使細胞分散。由鼠胎所摘出的大腦皮質，添加0.5ml的馬血清(Cell Culture Tech公司製)，使酵素反應停止後，將細胞懸浮液回收至離心分離所使用的離心管，在室溫以800rpm離心分離3分鐘。離心分離後，除去上清液，在細胞的顆粒加入神經細胞基礎培養基(Neurobasal medium)(Invitrogen公司製；含有25μM麩胺酸、0.5mM麩醯胺酸、1質量%B27補給品(Invitrogen公司製)、50μg/ml鏈黴素及50單位(U)/ml青黴素)，藉由使用10ml量液吸管，以不使其產生泡沫的方式徐緩地吸注以使細胞懸浮之後，在室溫以800rpm離心分離3分鐘。除去上清液之後，再度加入神經細胞基礎培養基，藉由使用1ml的可調式吸量管，以不使其產生泡沫的方式徐緩地將顆粒吸注以使細胞懸浮，然後使其通過孔徑0.4μm的篩網(細胞過濾蓋管，Becton Dickinson公司製)，製成大腦皮質細胞分離物(fraction)。進一步使此大腦皮質細胞分離物懸浮於10%FBS加DMEM培養基，並以3×107個/40ml/燒瓶之量接種至150cm2培養燒瓶(Becton Dickinson公司製)，以相同的培養基更換培養基，在培養約1個月之後，藉由將燒瓶輕微振動以將出現在神經膠質層上面而浮遊的細胞與培養上清液一起回收，而調製出小神經膠質細胞。
<來自於小神經膠質細胞的LPS誘導性一氧化氮生成量之測定>
使上述小神經膠質細胞以3×105個/ml懸浮於10%FBS加DMEM培養基，並以100μl/孔接種至組織培養用96孔微量盤。在培養1天後除去上清液，以成為50μl/孔的方式添加經10%FBS加DMEM培養基稀釋後的被驗試樣的任一者，進一步在1小時後，將溶於10%FBS加DMEM培養基的來自大腸菌之脂多醣(LPS，Difco公司製)，以50μl/孔(LPS的最終濃度為30ng/ml)的添加量添加至預先添加被驗試樣的孔。在添加LPS24小時之後，以50μl/孔的添加量將Griess試藥加入培養上清液，使其反應、發色之後，使用多功能微量盤分析儀，由540nm的吸光度測定出釋放至培養上清液中的一氧化氮量。將培養基中僅添加LPS以進行培養時的一氧化氮生成量定為100，分別求得在添加LPS之前添加被驗試樣的任一者時的一氧化氮生成量相對值，而定為一氧化氮生成率(%)，並揭示於表1。在表1之中，一氧化氮生成率愈低代表一氧化氮生成抑制作用愈強的意思。此外，在本實驗系統之中，推測為在調製小神經膠質細胞時，由附著於培養燒瓶的神經膠質層剝離而微量混入小神經膠質細胞中的星狀細胞，即使在30ng/ml的LPS共存下經過24小時的培養，也並未誘導一氧化氮產生，因此判斷在本實驗所觀察到的一氧化氮係由小神經膠質細胞所產生。
由表1的結果明顯可知，上述一般式1所表示之三核型五甲炔系花青色素之烷基(R)之碳數為1(化合物1)及6(化合物5)，並且相對陰離子為碘陰離子之色素，在這項測試所使用的濃度時，來自於由LPS所誘導的小神經膠質細胞的一氧化氮生成率為95至100%，並未表現出明顯的一氧化氮的生成調節作用。相對於此，一般式1所表示之三核型五甲炔系花青色素之烷基(R)之碳數為2至4，相對陰離子為碘陰離子之色素(化合物2至4)而言，在化合物2之色素的情況中，在0.08μg/ml以上的濃度時，濃度依存地，明顯表現出來自於由LPS所誘導的小神經膠質細胞的一氧化氮生成調節作用，在25μg/ml的濃度時，生成率降至35%。在化合物3及化合物4之色素的情況中，在2μg/ml以上的濃度時，濃度依存地表現出來自於由LPS所誘導的小神經膠質細胞的一氧化氮的生成調節作用，在25μg/ml的濃度時生成率分別降至47%及61%。一氧化氮生成調節的程度，若以其生成率降至50%時的各化合物濃度作比較，則化合物2(烷基(R)之碳數為2之色素)及化合物3(烷基(R)為直鏈狀，且其碳數為3之色素)即使在低濃度也會表現出顯著的作用，而以化合物2為特別顯著。此結果顯示，一般式1所表示之三核型五甲炔系花青色素之烷基(R)之碳數為2至4，且其相對陰離子為碘陰離子之色素，尤其是烷基(R)為直鏈狀且其碳數為2或3之色素，尤其以烷基(R)之碳數為2之色素，為有效的生物體內的一氧化氮生成調節劑。
<實驗2：三核型五甲炔系花青色素的投予之生物體內一氧化氮程度所造成的影響>
隨著由感染或免疫異常等所引起在生物體內的發炎反應等的亢進，由包含小神經膠質細胞的巨噬系細胞或血管內皮細胞等產生一氧化氮，則會迅速代謝成亞硝酸、硝酸，而使血中的氮氧化物(NOx)濃度上昇。於是，針對實驗1所使用的化合物1至5，調查將該等化合物直接投予至生物體的情況下，對於生物體內一氧化氮的程度所造成的影響。亦即，分別將與實驗1所使用的相同化合物1至5以5mg/ml的濃度溶於DMSO(SIGMA公司販售，商品編號「D8418」)之後，進行膜過濾(Millipore公司販售，商品名「Millex-LG SLLG025SS」)。在將此溶液投予至小鼠之前，以磷酸緩衝生理食鹽水(PBS)稀釋成50μg/ml，而製成被驗試樣。使用DMSO溶液作為對照組，並以PBS稀釋成與被驗試樣相同濃度。
<測試方法>
將BALB/c小鼠(日本Charles River公司販售，6週齡，雌性)36隻，在體重測定(平均體重20g)後，隨機以每群6隻分成6群。對於5群各6隻的小鼠，以化合物的投予量成為500μg/kg體重以及尾靜脈內投予的方式(約200μl/隻)投予含有化合物1至5之任一者的被驗試樣。對於剩下的1群6隻，以200μl/隻將DMSO溶液(對照組)投予至尾靜脈內。在被驗試樣或對照投予15分鐘後，對於6群36隻全部的小鼠，將實驗1所使用的LPS溶於PBS並以成為10mg/kg體重的方式投予至腹腔內(約400μl/隻)。在投予LPS6小時後，由各小鼠的心臟採血，藉由市售的氧化氮分析系統(Eicom公司製，商品名「NO system(ENO-20)」)，測定血液中的硝酸陰離子與亞硝酸陰離子之合計濃度，將投予對照組時的血中濃度定為100，求得投予被驗試樣的血中濃度的相對值，定為一氧化氮生成率(%)，並揭示於表2。在表2之中，一氧化氮生成率(%)愈低代表一氧化氮生成調節作用愈強的意思。附帶一提，若在生物體內產生一氧化氮則會迅速地代謝成亞硝酸、硝酸，因此在本實驗中，係以血液中的硝酸陰離子與亞硝酸陰離子的合計濃度定為一氧化氮生成量。
由表2的結果明顯可知，上述一般式1所表示之三核型五甲炔系花青色素之烷基(R)之碳數為1(化合物1)及6(化合物5)，且其相對陰離子為碘陰離子之色素，在這項測試的投予量中，由LPS所誘導的小鼠的一氧化氮生成率為100%，與對照組比較，並未表現出明顯的一氧化氮的生成調節作用。相對於此，在投予一般式1所表示之三核型五甲炔系花青色素之烷基(R)之碳數為2至4，且其相對陰離子為碘陰離子之色素(化合物2至4)的情況，一氧化氮生成率分別為58%、74%、86%，而確認了任一化合物皆具有一氧化氮生成的調節作用。此調節作用以化合物2表現出最強的強度，化合物3為其次。其結果，與實驗1中該等化合物對於來自於由LPS所誘導的小神經膠質細胞的一氧化氮生成的調節作用的有無以及強弱方面為非常相符。進一步而言，此結果顯示化合物2至4在投予至生物體的情況，為有效的一氧化氮生成調節劑。
<實驗3：三核型五甲炔系花青色素的相對陰離子的不同，對於在口服投予時吸收至生物體內的吸收性造成的影響>
化合物2至4這些三核型五甲炔系花青色素為高疏水性，因此在口服投予的情況下，吸收至生物體內的吸收性低，已假設無法達成本發明所希望的效果所能期待的充足血中濃度、轉移至治療的目標組織的情況，因此如以下的方式進行測試，以確認該等化合物是否與三核型五甲炔系花青色素之中，被認為對水性溶媒的溶解性較高的相對陰離子為氯陰離子之色素，在口服投予時吸收至生物體內的吸收性有所差異。亦即，在實驗1及實驗2之中，分別口服投予經判別為一氧化氮生成調節作用特別強的化合物2(上述一般式1中的烷基(R)之碳數為2，且相對陰離子為碘陰離子之三核型五甲炔系花青色素；上述化學式1所表示之色素)，或上述一般式1中的烷基(R)之碳數為2，且相對陰離子為氯陰離子之三核型五甲炔系花青色素(上述化學式6所表示之色素；以下稱為「化合物6」)，並藉由下述評估方法，評估在生物體內的吸收性、轉移至組織的轉移性。此外，評估對象的臟器是選擇被推斷為與這種色素的吸收、分解、排出最為有關的血液、肝臟、腎臟、以及因為血腦障壁(BBB)的存在而難以轉移的可能性高的腦。
<被驗試樣>
分別使化合物2及化合物6，以成為9.2mg/ml的方式懸浮或溶解於聚三葡萄糖的10質量/體積%(林原生物化學研究所股份有限公司販售，商品名「日本藥典聚三葡萄糖」)溶液，而製成被驗試樣。
<測試方法>
將ddY小鼠(日本SLC公司販售，8週齡，雄性，平均體重37g)24隻隨機以每群12隻分成2群。從投予被驗試樣16小時前開始使其絕食，飲水定為自由攝取，對於1群12隻的小鼠使用胃插管以0.4ml/隻口服投予含有化合物2的被驗試樣。對於剩下的1群12隻使用胃插管以0.4ml/隻口服投予含有化合物6的被驗試樣。在投予被驗試樣後1、2、8及24小時，隨機選擇投予含有化合物2或化合物6的被驗試樣的小鼠各3隻，在醚麻醉之下，由腹部大靜脈採取血液，並添加EDTA作為血液凝固阻止劑。在所採取到的血液中添加乙腈使其成為70體積%並加以混合，將離心分離後的各個上清液減壓濃縮後，使其乾固，以70體積%的乙腈溶液使其再溶解之後，再度離心分離，並回收上清液。將此上清液供給至藉由下述條件進行的高速液相層析(HPLC)分析，在藉由測定波長776nm及254nm的吸光度計所得到的層析圖中，由所出現峰之面積，求得化合物2或化合物6的量。對於採血後的小鼠分別藉由使用磷酸緩衝生理食鹽水(PBS(-))15ml進行心臟灌流，在放血之後，摘出含有嗅球的全腦(腦實質)、肝臟及腎臟。摘出的全腦在測定濕質量後，加入質量的2倍量的蒸餾水，而且使其均質化，然後添加乙腈使其成為70體積%並加以混合，在4℃以12,000rpm離心分離20分鐘，並回收上清液。將所回收上清液的全量減壓濃縮後，使其乾固，並以70體積%乙腈溶液使其再溶解之後，再度離心分離，並回收上清液，與血液同樣的方式，藉由HPLC法求得化合物2或化合物6的量。肝臟及腎臟在測定濕質量後，冷凍保存於-80℃。將冷凍的肝臟及腎臟在冰冷環境解凍，添加質量的2倍量的PBS(-)而且使其均質化，然後添加乙腈使其成為70體積%並加以混合，回收離心分離後的上清液，與血液同樣的方式，藉由HPLC求得化合物2或化合物6之量。在任一臟器的情況中，均質化以後的操作皆在冰冷、遮光之下進行。將結果表示於表3。
<化合物2及6的定量方法>
分別將作為標準品的化合物2及6以70體積%乙腈溶液稀釋成25～1,000ng/ml，並供給至採用下述條件的HPLC。
系統：HITACHI公司製(商品名「La Chrom Elite」)管柱：Cosmosil C8(Nacalai Tesque公司製，Φ4.6mm×250mm，無保護管柱)
移動相：70體積%乙腈、0.2體積%三乙胺、0.2體積%醋酸
流速：0.8ml/分鐘
管柱溫度：40℃
試樣冷卻器：5℃
試樣的注入量：0.1ml
分析時間：25分鐘
測定波長：776nm、254nm
[表3]
由表3的結果明顯可知，在口服投予含有化合物2的被驗試樣的情況，化合物2在血中的濃度在投予後2小時達到高峰，此時的濃度為13.2ng/ml，然後減少，在投予8小時與24小時大致呈現定值。相對於此，在口服投予含有化合物6的被驗試樣的情況，化合物6的血中濃度在投予後1小時已經達到高峰，此時濃度為206ng/ml，而達到投予化合物2的情況的高峰濃度的15倍以上。在投予8小時與24小時的時候大致呈現定值，然而此濃度減少至投予化合物2的情況的約3分之1。進一步觀察到在全腦、腎臟及肝臟之任一臟器之中，在口服投予含有化合物6的被驗試樣的情況，相較於在口服投予含有化合物2的被驗試樣的情況，會在較短的時間發生轉移。口服投予含有化合物2的被驗試樣的情況與投予含有化合物6的被驗試樣的情況相比，轉移至各臟器的量較少，然而在投予24小時的情況中，轉移量表現出增加的傾向。此結果顯示，在口服或經消化管投予這種化合物的情況下，相對陰離子的不同會對於吸收至生物體內的吸收量、吸收速度造成顯著的影響。此結果進一步顯示，在口服投予這種化合物的情況下，若比較血液中高峰時的化合物濃度，以及達到高峰的時間，則上述一般式1所表示之三核型五甲炔系花青色素，其烷基(R)之碳數為相同的情況與相對陰離子為氯陰離子之色素與碘陰離子之色素相比，吸收至生物體的吸收性及吸收速度較優異，亦即生體可用率較為優異。另外，若與腎臟或肝臟比較，則觀察到量的差異，然而由於在腦內也偵測到了所投予的化合物，因此可推測由上述一般式1所表示而其烷基(R)之碳數為2至4且相對陰離子為碘陰離子或氯陰離子之三核型五甲炔系花青色素，任一者皆可通過血腦障壁(BBB)。
<實驗4：一般式1所表示之三核型五甲炔系花青色素中，由相對陰離子的不同所造成對於水性溶劑的溶解度的差異>
在實驗3之中，因為上述一般式1所表示之三核型五甲炔系花青色素的相對陰離子的不同，而觀察到在吸收至生物體的吸收性有顯著的差異。其原因予測是因為相對陰離子的不同造成在消化管內兩化合物溶解性的差異，因此考慮到消化管內的環境而使用水性溶劑，並進行確認該等色素的溶解度有所差異的測試。亦即，準照日本藥典的溶解度測試法，分別將與實驗1所使用的相同化合物2至4、與實驗3所使用的相同化合物6、及烷基(R)為直鏈狀，且其碳數為3，而相對陰離子為氯陰離子之色素(上述化學式7所表示之色素；以下稱為「化合物7」)、烷基(R)為直鏈狀，且其碳數為4，而相對陰離子為氯陰離子之色素(上述化學式8所表示之色素；以下稱為「化合物8」)預先使用研鉢進行微粉化。基於預先檢討的各個化合物對於蒸餾水的溶解性測試，精秤各個化合物約2.5至20mg，置入容積15或50ml的透明離心管(Spitz tube)，依照各個色素的溶解性逐漸少量添加蒸餾水，並以攪拌機攪拌5分鐘，在加入純化水之後，在30分鐘以內藉由目視確認不溶物(沉澱)是否殘存。在觀察到不溶物的情況，進一步加入少量蒸餾水，並以攪拌機攪拌5分鐘，在加入蒸餾水之後，在30分鐘以內藉由目視確認是否可觀察到不溶物(沉澱)，重覆此操作至無法觀察到不溶物為止，藉此決定無法觀察到不溶物的蒸餾水最少添加量。將測試所使用的各化合物質量除以蒸餾水的最少添加質量，定為溶解度。將結果揭示於表4。另外，對於上述一般式1所表示之三核型五甲炔系花青色素之烷基(R)為直鏈狀，且其碳數為6之色素，也採用相對陰離子為碘陰離子之色素(化合物5)及氯陰離子之色素(以下稱為「化合物9」)進行同樣的測試。將結果一併揭示於表4。實驗是針對各色素實施3次，並求得其平均值。
由表4的結果明顯可知，上述一般式1所表示之三核型五甲炔系花青色素之烷基(R)之碳數為2至4之色素(化合物2至4)對於蒸餾水的溶解性，其相對陰離子為氯陰離子之色素在任一情況皆高於碘陰離子之色素。其中，在一般式1所表示之三核型五甲炔系花青色素之烷基(R)為直鏈狀，且其碳數為3之色素(化合物3及7)的情況中，依照其相對陰離子的不同，對水的溶解性的差異顯著。相對於此，在一般式1所表示之三核型五甲炔系花青色素之烷基(R)為直鏈狀，且其碳數為6之色素的情況中，其相對陰離子為氯陰離子之色素(化合物9)與相對陰離子為碘陰離子之色素(化合物5)對水的溶解性同樣都很低，並未觀察到相對陰離子的差別所造成溶解性的差異。此結果可與實驗3的結果：在一般式1所表示之三核型五甲炔系花青色素之烷基(R)之碳數為2之色素的情況中，使用其相對陰離子為氯陰離子之色素的情況下在口服投予時吸收至生物體內的吸收性，比陰離子之色素的情況更優異，作良好地整合。進一步還可推測出，在一般式1所表示之三核型五甲炔系花青色素之烷基(R)之碳數為3或4之色素的情況下，使用其相對陰離子為氯陰離子之色素的情況與使用相對陰離子為碘陰離子的情況相比，口服投予時吸收至生物體內的吸收性較為優異。另外還可推測出在一般式1所表示之色素之烷基(R)之碳數6以上的色素的情況下，在口服投予這種化合物時，與烷基(R)之碳數為2至4之色素的情況不同地，相對陰離子之差所造成生體可用率的差並沒有那麼大。
<實驗5：三核型五甲炔系花青色素的安全性>
針對上述一般式1所表示之三核型五甲炔系花青色素之烷基(R)之碳數為2至4，其相對陰離子為碘陰離子或氯陰離子之6種化合物，確認投予至生物體的情況下的安全性，測試如以下的方式進行。
(1)口服、單次投予測試
<被驗試樣>
分別使與實驗4所使用相同的化合物2、化合物3、化合物4、化合物6、化合物7及化合物8，以成為90mg/ml的方式溶解懸浮於1質量/體積%之羧甲基纖維素溶液，而製成被驗試樣(被驗試樣1至6)。對照組採用1質量/體積%之羧甲基纖維素溶液。
<評估方法>
以醫藥品毒性測試規範為基準，而將被定為使用囓齒類的測試的界限量的2,000mg/kg體重設定為1劑的用量。將CD1(ICR系)小鼠(日本Charles River公司販售，6週齡，雄性)35隻隨機以每群5隻分成7群。將全部的小鼠以固態飼料(Oriental Yeast公司販售，商品名「NMF」)馴化飼養6天。飲水係使用給水瓶，使其自由攝取自來水。測定馴化飼養後絕食1天的小鼠體重，並將被驗試樣1至6之任一者以化合物的投予量成為2,000mg/kg體重的方式分別對於1群5隻使用胃插管強制口服投予(約0.5ml/隻)。對於剩下的1群5隻，使用胃插管強制口服投予(0.5ml/隻)1質量/體積%之羧甲基纖維素溶液(對照組)。進一步使用CD1(ICR系)小鼠(日本Charles River公司販售，6週齡，雌性)35隻，並實施與使用雄性的情況相同的測試。
<觀察項目>
投予被驗試樣之後，每天以肉眼觀察小鼠的狀態1次，共14天。在正要投予之前，以及投予後第1、3、8、6、8、10、13及14天測定體重，一併測定攝餌量、攝水量。投予第14天的觀察、體重測定後，以醚麻醉全個體，放血之後解剖，藉由肉眼觀察確認臟器異常的有無，並以該等觀察結果為基礎求得最小致死用量。將結果揭示於表5。此外，在測試結果中並未觀察到雌雄所產生的差異，因此將雌性與雄性的結果一併揭示於表5。
(2)皮下、28天連續投予測試
<被驗試樣>
分別將化合物2、化合物3、化合物4、化合物6、化合物7及化合物8以5mg/ml的濃度溶於DMSO(SIGMA公司販售)之後，進行膜過濾(使用Millipore公司販售商品名「Millex-LG SLLG025SS」的DMSO耐溶性膜)。在正要對小鼠投予之前，以投予大約0.1ml/隻時成為50mg/kg體重的方式分別以PBS稀釋各化合物溶液，而製成被驗試樣(被驗試樣1至6)。
<評估方法>
將CD1(ICR系)小鼠(日本Charles River公司販售，6週齡，雄性)35隻隨機以每群5隻分成7群。將全部的小鼠以固態飼料(Oriental Yeast公司販售，商品名「NMF」)馴化飼養6天。飲水係使用給水瓶，使其自由攝取自來水。測定馴化飼養後絕食1天的小鼠體重，並將被驗試樣1至6之任一者以化合物的投予量成為50mg/kg體重的方式，分別對於1群5隻使用注射器進行皮下投予。對於剩下的1群5隻以皮下投予PBS(對照組)。
<觀察項目>
從被驗試樣開始投予之日開始，每天以肉眼觀察小鼠的狀態1次，共42天。在正要投予之前以及開始投予之日開始每隔2至3天測定體重，一併測定攝餌量、攝水量。開始投予之日至第42天的觀察、體重測定後，以醚麻醉全個體，放血之後解剖，藉由肉眼觀察確認臟器異常的有無，並以該等觀察結果為基礎求得最小致死用量。將結果表示於表5。
(3)腹腔內、連續投予270天
<被驗試樣>
分別將化合物2、化合物3、化合物4、化合物6、化合物7及化合物8以5mg/ml的濃度溶於DMSO(SIGMA公司販售)之後，進行膜過濾(使用Millipore公司販售，商品名「Millex-LG SLLG025SS」的DMSO耐溶性膜)。在使用時，以對小鼠投予大約0.2ml/隻時被驗試樣的投予量成為0.5mg/kg體重的方式將各化合物溶液以PBS稀釋，而製成被驗試樣(被驗試樣1至6)。
<評估方法>
將CD1(ICR系)小鼠(日本Charles River公司販售，6週齡，雄性)35隻隨機以每群5隻分成7群。將全部的小鼠以固態飼料(Oriental Yeast公司販售，商品名「NMF」)馴化飼養6天。飲水係使用給水瓶，使其自由攝取自來水。測定馴化飼養後絕食1天的小鼠體重，將被驗試樣1至6之任一者以化合物的投予量成為0.5mg/kg體重的方式分別對於1群5隻使用注射器投予至腹腔內。對於剩下的1群5隻使用注射器將PBS(對照組)投予至腹腔內。
<觀察項目>
從被驗試樣開始投予之日開始，每天以肉眼觀察小鼠的狀態1次，共270天。在正要投予之前，以及從開始投予之日開始每隔2至3天測定體重，一併測定攝餌量、攝水量。開始投予之日開始第270天之觀察、體重測定後，以醚麻醉全個體，放血之後解剖，藉由肉眼觀察確認臟器異常的有無，並以該等觀察結果為基礎求得最小致死用量。將結果揭示於表5。
上述一般式1所表示之三核型五甲炔系花青色素之烷基(R)之碳數為2至4，其相對陰離子為碘陰離子或氯陰離子之6種化合物，在測試所使用的投予量、投予途徑、投予期間，任一情況中皆並未觀察到死亡或出現異常的小鼠，在體重、攝餌量、攝水量方面，也並未觀察到與對照投予群有明顯的差異。另外，在口服、單次投予測試中，並未觀察到由小鼠的雌雄所產生的差異。甚至在任一測試之中，藉由目視皆並未觀察到臟器的異常，因此任一測試的情況皆無法求得正確的最小致死容量。由此結果可判斷本發明之作為有效成分的三核型五甲炔系花青色素，任一者皆為即使以非口服至口服的的方式長期連續投予至生物體安全性也很高的化合物。
以下藉由實施例對本發明作進一步詳細說明，而本發明完全不受實施例所限定。
[實施例1]
<注射用的液劑>
將在370g注射用純化水中溶有50g無熱原之含水結晶α,α-海藻糖(林原股份有限公司製造)、0.5g抗壞血酸、1.25g碳酸氫鈉，並將pH調整成7.2的溶液、以及在177g注射用純化水溶有3gTween80(日本油脂股份有限公司販售，商品名「Polysorbate 80」)、120mg作為有效成分的化合物2至4及化合物6至8(任一者皆為林原生物化學研究所股份有限公司製造)之任一種的溶液，分別加以混合並過濾滅菌後，以無菌的氮氣起泡至溶氧濃度成為約0.1ppm為止，以各1ml分注至褐色安瓿，在氮氣流下將安瓿密封。本物品任一者皆為無熱原，而可利用作為一氧化氮生成調節劑。另外，本物品可使用於一氧化氮平衡異常所引起病理學上的血壓降低、臟器移植後的組織障礙、移植排斥反應、動脈硬化症、心肌炎、心肌症、以絲球體腎臟炎為首的腎臟炎、胰臟炎等發炎性疾病；病毒感染、細胞障礙性因子、發炎反應等所造成的血管內皮(包括微小血管內皮)等組織損傷或細胞障礙(細胞死亡)、動脈性高血壓症、鬱血性疾病、心臟疾病等疾病或障礙的預防、治療。進一步而言，本發明之一氧化氮生成調節劑亦可適用於人類以外的動物。
[實施例2]
<使用時溶解型粉末劑>
將在370g注射用純化水中溶有30g注射用精製麥芽糖(林原股份有限公司製造)、0.5g抗壞血酸、1g碳酸氫鈉，並將pH調整成7.0的溶液、以及在100g注射用純化水中溶有200mg作為有效成分的化合物6至8(任一者皆為林原生物化學研究所股份有限公司製造)之任一種的溶液，分別加以混合並過濾滅菌後，以各10ml分注至褐色安瓿，依照常法冷凍乾燥後，在氮氣流下將安瓿密封。本物品任一者皆為無熱原，在使用時在安瓿中加入注射用純化水至生理食鹽水2至10ml使其溶解，可採用點滴靜注、皮下投予、腹腔內投予等方法。本物品還可利用作為注射投予用的一氧化氮生成調節劑。另外，本物品可使用於一氧化氮平衡異常所引起的病理學上的血壓降低、臟器移植後的組織障礙、移植排斥反應、動脈硬化症、心肌炎、心肌症、以絲球體腎臟炎為首的腎臟炎、胰臟炎等發炎性疾病；病毒感染、細胞障礙性因子、發炎反應等所造成的血管內皮(包括微小血管內皮)等組織損傷或細胞障礙(細胞死亡)、動脈性高血壓症、鬱血性疾病、心臟疾病等疾病或障礙的預防、治療。進一步而言，本發明之一氧化氮生成調節劑亦可適用於人類以外的動物。
[實施例3]
<使用時溶解型粉末劑>
與實施例1同樣的方式調製出的封入安瓿前的化合物2至4、及化合物6至8之溶液，分別將其過濾滅菌後，進行冷凍乾燥、粉碎而使其粉末化。將各個粉末加入遮光性塑膠容器的其中一個收容部，以使化合物2至4及化合物6至8的冷凍乾燥粉末之任一者成為以化合物而計為10mg/容器，然後密封，而該遮光性塑膠容器具有兩個收容部若將其一者加壓則兩個收容部之間的密封容易開通的構造。將注射用的純化水以成為25ml/容器的方式分注在相同容器的另一個收容部中，然後密封。本物品在使用時，藉由將封入純化水的部位加壓，使粉末與純化水加以混合而溶解，並且採用靜脈內投予、點滴靜注、腹腔內投予等方法。本物品可利用作為注射投予用的一氧化氮生成調節劑。另外，本物品可使用於一氧化氮平衡異常所引起病理學上的血壓降低、臟器移植後的組織障礙、移植排斥反應、動脈硬化症、心肌炎、心肌症、以絲球體腎臟炎為首的腎臟炎、胰臟炎等發炎性疾病、病毒感染、細胞障礙性因子、發炎反應等所造成的血管內皮(包括微小血管內皮)等組織損傷或細胞障礙(細胞死亡)、動脈性高血壓症、鬱血性疾病、心臟疾病等疾病或障礙的預防、治療。進一步而言，本發明之一氧化氮生成調節劑亦可適用於人類以外的動物。
[實施例4]
<口服用劑>
對於預先使用研鉢進行微粉化的化合物2至4及化合物6至8(任一者皆為林原生物化學研究所股份有限公司製造)之任一種4質量份，均勻地混合碳酸氫鈉4.25質量份、及含水結晶α,α-海藻糖(林原股份有限公司製造)1.5質量份、硬脂酸鎂0.25質量份，並依照常法打錠成每個0.5g，而調製出錠劑。本物品可利用作為口服投予用的一氧化氮生成調節劑。另外，本物品還可使用於一氧化氮平衡異常所引起的病理學上的血壓降低、臟器移植後的組織障礙、移植排斥反應、動脈硬化症、心肌炎、心肌症、以絲球體腎臟炎為首的腎臟炎、胰臟炎等發炎性疾病；病毒感染、細胞障礙性因子、發炎反應等所造成的血管內皮(包括微小血管內皮)等組織損傷或細胞障礙(細胞死亡)、動脈性高血壓症、鬱血性疾病、心臟疾病等疾病或障礙的預防、治療。進一步而言，本發明之一氧化氮生成調節劑亦可適用於人類以外的動物。
[產業上之可利用性]
本發明之一氧化氮生成調節劑具有調節生物體內一氧化氮的平衡的作用，且即使投予至生物體，也沒有毒性或嚴重的副作用，而為安全的物質，因此可利用在製造以調節生物體內的一氧化氮平衡異常為目標之醫藥品、準藥物等製劑的業界。本發明為發揮出這種顯著的作用效果的發明，在該領域有非常大的貢獻，實為具明顯意義的發明。

Claims (4)

  1. 一種一般式1所表示之三核型五甲炔系花青色素之用途，其係用於製備抑制巨噬系細胞以及血管內皮細胞所生成的一氧化氮之製劑， (一般式1之中，R表示碳數為2至4之直鏈之烷基，X-表示適當的相對陰離子)。
  2. 如請求項1之用途，其中一般式1所表示之三核型五甲炔系花青色素之中，相對陰離子係碘陰離子或氯陰離子。
  3. 如請求項2之用途，其中一般式1所表示之三核型五甲炔系花青色素係化學式1至3之任一者所表示之色素，
  4. 如請求項1至3中任一項之用途，其中製劑係口服投予或注射投予形態。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
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Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2000186040A (ja) * 1998-12-21 2000-07-04 Hayashibara Biochem Lab Inc 抗ｈｉｖ感染症剤

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Hsiao G et al,"Platonin, a Photosensitizing Dye, Improves Circulatory Failure and Mortality in Rat Models of Endotoxemia", BIOLOGICAL & PHARMACEUTICAL BULLETIN, 2002, 25(8):995-999. *
Kunikata T et al,"Lumin, a cyanine dye, enhances interleukin 12-dependent interferon gamma production by lipopolysaccharide-stimulated mouse splenocytes", BIOLOGICAL & PHARMACEUTICAL BULLETIN, 2002, 25(8):1018-1021. *

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