TWI501731B - 冷凍乾燥粉末狀菌體及其製造方法 - Google Patents

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TWI501731B
TWI501731B TW099106326A TW99106326A TWI501731B TW I501731 B TWI501731 B TW I501731B TW 099106326 A TW099106326 A TW 099106326A TW 99106326 A TW99106326 A TW 99106326A TW I501731 B TWI501731 B TW I501731B
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Description

冷凍乾燥粉末狀菌體及其製造方法
本發明係有關冷凍乾燥粉末狀菌體及其製造方法者，尤其在所定高溫條件下，可以長期保存之冷凍乾燥粉末狀菌體及其製造方法有關者。
近年來具有益生性(probiotic)功能之菌株受到了注目。並且可看到盛行對於經由攝取此等菌以改善消化管內，使其健常化與對其可帶來之免疫調整作用的預防醫學。其中尤其乳酸菌、雙岐桿菌係被稱為益生性菌，自古以來即自各種食品中被攝取。近年來更盛於開發其功能，亦做為具有新穎之功能性商品進行開發。
上述為改善消化管內，使其更健常化為目的，含此等菌類之加工食品群亦被多方面開發。除此外，亦多方設計考量可以更簡便且有效地攝取此等菌類的方法。例如此等食品群之最普通之例有養樂多之開發，更為使其容易攝取而使此等菌類成為粉末狀者。此種粉末狀菌體還可以更簡單地做為應用於製造加工食品所用之新穎原料，其利用價值亦極高。
惟使此等菌類成為粉末狀時，在攝取此等菌類或製造為食品時必須留存必須量之此等菌類於其中，否則無法得到此等菌類的效果。所以極希望開發出有效地保存菌類之方法，及可以簡單地製造為粉末之方法。例如極希望在冷凍乾燥時可以提高其殘存性。
為達到上述目的，以往曾有多方面之研究、檢討被進行。
例如專利文獻1中係被覆造粒酸性下或高溫下會死滅之乳酸菌、雙岐桿菌等有用菌，不讓其在胃液中溶解達到保存之目的再使其在腸內成為可溶性者。具體言，以三層被覆生理活性物質予以造粒，在其中一種則使用糖類。
又，專利文獻2中則為改善雙岐桿菌屬細胞之殘存性，提案將含有選自甘油、木糖醇、核糖醇、阿拉伯膠醇、甘露醇之糖類的殘存性改善劑添加予培養基之方法。此方法係以在需氧條件或低pH值條件下之保存時的殘存性、維持菌數為其目的。尤其此技術中係以提高培養基中之活存率為其主旨者。
又，專利文獻3中係在乳酸菌菌體中混合入聚甘油脂肪酸酯，以提供長期安定性極優之耐酸性、腸溶性優之腸溶性乳酸菌組成物者。以上之技術係以在特定條件下針對其保存或耐性做為主要著眼者。
另一方面有關菌類之冷凍保存，冷凍乾燥保存亦有各種殘存性之改良曾被提案。
例如，專利文獻4中係以提供在冷凍或冷凍乾燥步驟中可以減少菌體之損傷或死亡，且高生存率之製造方法為目的，揭示在乳酸菌類之菌體分散液中添加來自蒟蒻由來之多糖類部分水解物予以冷凍乾燥之方法。多糖類部分水解物係可以經由酵素分解所得之具有所定分子量者，製造時必須經由繁雜之步驟者。又，此技術係以提高冷凍溶解時殘留率為主旨者，針對由此技術所製造之冷凍乾燥粉末狀菌體經保存後其生存率則完全未揭示，亦未提及。
專利文獻5中則提案一種既使溶解冷凍菌後，亦具極佳之菌生存率及活性佳之保存液者。此菌用冷凍保存液係含有海藻糖及/或聚乙二醇做為有效成份者。藉此可以抑制冷凍時之障礙，溶解後可以立即使用之保存液，以此點為其特徵者。屬於一種含水份之系統，尤其可解決自冷凍至溶解之步驟中問題的技術。
又，專利文獻6中係提及以具澱粉質、糖質之保護膜被覆發酵乳桿菌予以成噴霧乾燥體。此技術係以提高噴霧乾燥時該菌之存活性為重點之技術。
另外，專利文獻7中係使乾燥乳酸菌之乾燥微生物與L-精胺酸性胺基酸鹽共存，以提高其在乾燥狀態下之保存安定性。此技術係以製劑微生物(菌)時可以提高微生物之保存安定性為主旨者。另外，雖示有將此技術製造之雙岐桿菌製劑保存於40℃ 2禮拜之結果，但其活存率亦僅為25%左右而已，並不能經久保存數個月之長期保存。
又，非專利文獻1中係揭示自其冷凍乾燥中之機序解析，發現微生物在冷凍乾燥時所受之損傷係最大起因於構成細胞膜的磷酸脂質的物理狀態之變化、與蛋白質的構造變化，針對此提出對於大腸菌等，於海藻糖或蔗糖存在下冷凍乾燥之研究結果。惟對於混合使用海藻糖與蔗糖使用之事並無任何指示以及提到。另外，對具體之冷凍乾燥物之長期保存，以及在所定高溫條件下之保存亦無任何研討。
另外，非專利文獻2中係與上述之目的一樣，針對唾液乳桿菌之冷凍乾燥及保存進行檢討。此文獻係使用4%海藻糖、4%蔗糖、18%脫脂奶粉、4%海藻糖與18%脫脂奶粉、4%蔗糖與18%脫脂奶粉、4%海藻糖與4%蔗糖、及4%海藻糖與4%蔗糖與18%脫脂奶粉做為冷凍乾燥保護劑，保存冷凍乾燥粉末狀菌體於-85℃，檢討其生存率。另外，冷凍乾燥時之菌體懸濁液中的糖濃度係可成為約3.2%，脫脂奶粉濃度係14.4%者。依據該文獻所揭示之結果，4%蔗糖雖無法充分地提高冷凍乾燥粉末狀菌體在-85℃之保存性，但4%蔗糖與18%脫脂奶粉則可提高冷凍乾燥粉末狀菌體在-85℃之保存性。另外，4%海藻糖單獨亦可提高冷凍乾燥粉末狀菌體在-85℃之保存性。除此外，還表示出將冷凍乾燥4%海藻糖與4%蔗糖與18%脫脂奶粉之混合溶液所得粉末狀菌體保存於室溫(未記載溫度)保存7週之結果。在此曾提及只要保存於特定濕度條件(濕度2.8～5.6%、水份活性下0.028～0.056)之環境下時可以維持高度保存性。但由實用性而言，濕度0%及溫度8.8%環境下係無法高保存性者(其分別之活存率係約40%及10%)，可在室溫保存之條件係在極低之濕度，並且被限於極狹小之濕度範圍，所以並不實用。如上述，非專利文獻2之技術係以一般之生活環境而言不具常用性之環境條件表示其保存試驗結果，對於高溫條件下之保存均未言及，要應用此技術於一般之食品確實係很困難者。
先行技術文獻
專利文獻
專利文獻1：特開平5-186337號公報
專利文獻2：特開平11-137172號公報
專利文獻3：特開2001-64189號公報
專利文獻4：特開平7-313140號公報
專利文獻5：特開2001-327280號公報
專利文獻6：特開2005-52100號公報
專利文獻7：國際公開WO2006/106806號公報
非專利文獻
非專利文獻1：SamuelB. Leslie等，「乾燥時以海藻糖與蔗糖保護非損傷細菌之細胞膜與蛋白質雙方」(Trehalose and Sucrose Protect Both Membranes and Proteins in IntactBacteria during Drying)」,(Applied and Environmental Microbiology)，美國，1995年10月，p.3592-3597
非專利文獻2：Gaber Zayed等，「海藻糖與水份含量對冷凍乾燥及保存時之唾液乳桿菌之存活性的影響(Influence of trehalose and moisture content on survival of Lactobacillus salivarius subjected to freeze-drying and storage)」,(Process Biochemistry),2004年，第39卷，p.1081-1086
如上述，以往對有關有用菌類之保存，或有效形態曾有各種研究與檢討。尤其對粉末狀之冷凍乾燥菌體或乾燥菌體等，由於其製品形態具簡便性曾有各種嚐試與研究，惟至今對菌類功能之維持，長期保存後之存活率則仍有許多必須再予以檢討的餘地。例如特定嚐試與研究僅對某一特定之菌類有效，或既使對多數菌類有效，但其保存條件必須為超低溫且必須低溫等嚴格之限制，所以工業上可謂尚無有效之手法被開發。尤其若想對常溫下可長期保存之食品應用，且可做為粉末狀菌體使用，必須在一般之生活環境溫度被設定之範圍內的高溫(30～40℃)條件下，不必限制在特殊之保存條件下，具高存活性者。具有這種性質之粉末狀菌體係無法保證其品質，更無法做為食品材料使用者。
所以，本發明係以提供適於長期保存，可藉由簡便且有效之冷凍乾燥即可得之冷凍乾燥粉末狀菌體，及其製造方法為目的者。尤其可提供在冷凍乾燥後長期保存，或即使長期保存並不在超低溫，且對保存性可能會有影響之生活溫度時期(尤其夏季期間)進行，亦可以在乳酸菌或雙岐桿菌等有用菌的生存率高之狀態下保存，保存後亦可以簡單地做為粉末直接攝取，或做為食品製造時的原料可有效地活用的冷凍乾燥粉末狀菌體，以及其製造方法者。更可以提供含有冷凍乾燥粉末狀菌體之食品組成物者。
有鑑於上述以往之問題所在，本發明人等乃銳意進行研究，結果獲知若將糖質溶液中懸濁有乳酸菌及/或雙岐桿菌的懸濁液予以冷凍乾燥，可以顯著提高有用菌(乳酸醇及/或雙岐桿菌)之粉末狀菌體的存活性，尤其高溫保存時之存活率，遂而完成了本發明。
經由本發明可以提供適於長期保存，藉由簡便且有效地冷凍乾燥所得之冷凍乾燥粉末狀菌體。
即，本發明之一實施形態係冷凍乾燥糖質溶液中懸濁有乳酸菌及/或雙岐桿菌之懸濁液，以得冷凍乾燥粉末狀菌體的冷凍乾燥粉末狀菌體的製造方法者，係上述糖質為海藻糖及蔗糖，且冷凍乾燥前之上述懸濁液中的海藻糖及蔗糖的濃度各為4.5重量%以上之冷凍乾燥粉末狀菌體的製造方法者。
本發明中海藻糖及蔗糖的各濃度係較佳為4.5～15重量%，更佳係8～12重量%。
本發明中海藻糖與蔗糖之重量比係較佳為5：1～1：5。
本發明中上述乳酸菌及/或雙岐桿菌之較佳例可為屬於雙岐桿菌(Bifidobacterium)屬所屬之菌類等。
雙岐桿菌所屬之菌類中較佳者可為兩岐雙岐桿菌(Bifidobacterium bifidum)株、長雙岐桿菌(Bifidobacterium longum)株等。
兩岐雙岐桿菌(Bifidobacterium bifidum)株之較佳例有兩岐雙岐桿菌(Bifidobacterium bifidum)OLB6378株等。
長雙岐桿菌(Bifidobacterium longum)株之較佳例有長雙岐桿菌(Bifidobacterium longum)OLB6001株等。
又，本發明之另一實施態樣係藉由上述任一記載之冷凍乾燥粉末狀菌體之製造方法所製造之冷凍乾燥粉末狀菌體。
本發明之又一另實施態樣係含有效量之上述冷凍乾燥粉末狀菌體所成食品組成物。
藉由本發明製造可長期保存之冷凍乾燥粉末狀菌體之製造方法係尤其固體狀，粉末狀食品等必須保證長期保存時尤其可得其效果。即，依本發明之製造方法所製造之冷凍乾燥粉末狀菌體可以顯著地提高其高溫保存時之生存率，所以保存後既使予以使用亦可得有用之乳酸菌及/或雙岐桿菌之效果。
又，因本發明之製造方法係極簡便之方法，所以不必特別之裝置或複雜之步驟，亦不會因此而增加其製造成本。
又，依本發明之製造方法所製造之冷凍乾燥粉末狀菌體係可以直接使用，保存後亦可成為簡便之粉末直接攝取，食品製造時還可以有效地利用其做為原料。
以下將詳細說明本發明，惟本發明並不僅被限定於以下所述之各種形態。
本發明中使用之乳酸菌及/或雙岐桿菌可示屬於雙岐桿菌屬之菌類，例如可具體為長雙岐桿菌(Bifidobacterium longum)株、嬰兒雙岐桿菌(Bifidobacterium infantis)株、短雙岐桿菌(Bifidobacterium breve)株、兩岐雙岐桿菌(Bifidobacterium bifidum)株、青春雙岐桿菌(Bifidobacterium adolescentis)株等。另外還可為乳桿菌(Lactobacillus)屬、鏈球菌屬(Streptococcus)屬所屬菌類，例如Lactobacillus gasseri株、保加利亞乳桿菌(Lactobacillus bulgaricus)株、嗜熱鏈球菌(Streptococcus thermophilus)株等。惟本發明並不限定此等，又，此等菌株可單獨或組合二種以上使用。
上述中，較佳之例可為兩岐雙岐桿菌(Bifidobacterium bifidum)株、長雙岐桿菌(Bifidobacterium longum)株等。
此等較佳之例被寄存之菌株例如有兩岐雙岐桿菌(Bifidobacterium bifidum)OLB6378株、長雙岐桿菌(Bifidobacterium longum)OLB6001株等。
(A)兩岐雙岐桿菌OLB6378株之寄存
本發明中所用兩岐雙岐桿菌OLB6378株係依如下條件寄存。
(1)寄存機關名：獨立行政法人製品評價技術基盤機構 特許微生物寄存中心
(2)連絡處：日本郵政〒 292-0818千葉懸木更津市KAZUSA 鎌足2-5-8電話：002-81-438-20-5580
(3)寄存號碼：NITE BP-31
(4)為識別予以表示：Bifidobacterium bifidum OLB6378
(5)原寄存日：公元2004年10月26日
(6)依布達佩斯條約寄存之移管日公元2006年1月18日
(B)長雙岐桿菌OLB6001株之寄存
本發明中使用之長雙岐桿菌OLB6001株係依以下條件寄存。
(1)寄存機關名：獨立行政法人產業技術總合研究所特許生物寄存中心
(2)連絡處：日本郵政〒 305-8566茨城縣市東1-1-1中央第6電話：002-81-29-861-6029
(3)寄存號碼：FERM P-13610
(4)為識別予以表示：Bifidobacterium longum No.7
(5)寄存日：公元1993年4月20日
(6)依布達佩斯條約寄存移管接受日：公元2010年3月2日接受號碼：FERM BP-11242
本發明中所用兩岐雙岐桿菌OLB6378株、及長雙岐桿菌OLB6001株係具有以下菌學上性質者。
兩岐雙岐桿菌OLB6378株係來自人乳幼兒糞便之格蘭氏陽性偏性厭氣性桿菌。接種此菌於Lactobacilli MRS Broth(BD)，藉由使用AnaeroPack‧Kenki(三菱瓦斯化學公司製)使其成為厭氣性狀態，於37℃培養18小時，即可觀察到Y字型之菌形態。又，兩岐雙岐桿菌之特異性原物體(腸內叢討論會8，腸內叢之分子生物學上之檢出。鑑定、光岡知足、松本隆廣)，具體言，以使用16S rDNA之種特異性引物之BiBIF-1：CCA CAT GAT CGC ATG TGA TT及BiBIF-2：CCG AAG GCT TGC TCC CAA A之PCR確認了PCR產物。
長雙岐桿菌OLB6001株係人類成人糞便由來之格蘭氏陽性厭氣性菌、菌形狀係桿菌或分岐狀之多形狀、無芽胞之形成運動性。將此菌塗佈於BL瓊脂培養基(榮研製)平板上，以steel wood法在37℃培養48小時即可形成不透明圓形半球狀之具有光澤的菌落。對阿拉伯糖、木糖、核糖、葡萄糖、果糖、半乳糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖蜜二糖、棉子糖、松三糖有發酵性。
本發明中使用做為保護劑之糖質係與海藻糖及蔗糖的混合物。冷凍乾燥前之懸濁液中的海藻糖與蔗糖的各濃度係就高溫下可得到極適於長期保存之冷凍乾燥粉末狀菌體的觀點而言係4.5重量%以上，較佳係8重量%以上。該濃度之上限係由既使過度地增加其濃度亦可在高溫下得到同等之長期保存性效果的觀點而言，較佳係15重量%，更佳係12重量%。海藻糖與蔗糖之重量比並不特別限定，惟就高溫下長期保存亦可得極佳之冷凍乾燥粉末狀菌體之觀點而言，以較佳為5：1～1：5，更佳為3：1～1：3，最佳係1：1～1：1。
此等糖質係以糖質含有水溶液之形態，與培養菌混合，再懸濁此菌為最佳。將如此所得之懸濁液冷凍乾燥，即可得本發明之冷凍乾燥粉末狀菌體。
又，含糖質水溶液中除水及糖質以外，還可以含有例如乳蛋白質、胺基酸、抗壞血酸等。
本發明之冷凍乾燥粉末狀菌體的製造方法、雖不特別限定，但可為如以下之順序所成。
(1)依常法培養所希望之菌體。
(2)可直接於以下(3)使用含被培養之菌的培養液、或藉由離心分離等濃縮或固液分離含有被培養之菌的培養液，得到被濃縮之培養液(菌體液)或做為固體成分被分離之菌體，再將之使用於以下之(3)。
(3)混合所得菌體液或菌體，與含有所定濃度之糖質(保護劑)的溶液得懸濁液後，冷凍乾燥此懸濁液，即可得到本發明之冷凍乾燥粉末狀菌體。
冷凍乾燥之方法可為使用冷凍乾燥機之方法等，例如急速於低溫(例如-30～-90℃)預備冷凍後，在室溫(例如0～20℃)且減壓下(較佳係1000Pa以下，更佳係100Pa以下之真空度)予以乾燥，維持於真空度之下，使冷凍乾燥機之溫度上昇至例如30～70℃，再予乾燥即可。
本發明之冷凍乾燥粉末狀菌體係使用做為食品添加物亦可使用之海藻糖與蔗糖，所以可以直接攝取，亦可添加予各種食品組成物中使用。又，本發明之冷凍乾燥粉末狀菌體係即使長期保存後亦示有所定之菌殘存率，所以亦可以將其做為發酵乳等種菌等的原料使用。
做為食品組成物有各種飲食品(清涼飲料、發酵乳、養樂多、調節奶粉等)。食品組成物係可以直接使用，或與其他食品或食品成份混合等，可依一般之食品組成物所用一般方法使用。又，食品組成物之性狀可為通常被採用之飲食品狀態，例如可為固體狀(粉末、顆粒狀或其他)、膏狀、液狀或懸濁狀之任一均可。
食品組成物中之其他成份並不特別限定，惟可為水、蛋白質、糖質、脂質、維生素類、礦物質頪、有機酸、有機鹼、果汁、調味料類等。此等成份可單獨用一種、或組合二種以上使用。又，食品組成物中之其他成份亦可使用合成品及/或含多量合成品之食品。
實施例
以下根據使用一種很難保存之厭氣性菌(雙岐桿菌)之實施例說明本發明，惟本發明並不被此所限定。又，本說明書中%係不做特別解釋時係表示重量%者。
實驗例1
依以下所示順序依據本發明之製造方法製造冷凍乾燥粉末狀菌體。
(1)在酪蛋白分解培養基(酵素經分解之酪蛋白做為蛋白之培養基)中中和培養兩岐雙岐桿菌(Bifidobacterium bifidum)OLB6378株。
(2)離心分離320ml培養液(4℃，以10000G經20分鐘)除去307.2ml上澄液，得菌體小片部分(12.8ml)。
(3)在菌體小片部分(4ml)中添加2ml含規定濃度之糖質的保護劑液，懸濁菌體，於-80℃冷凍，進行冷凍乾燥。
(4)於冷凍乾燥完後其立即所得之0.5g冷凍乾燥粉末狀菌體中添加生理食鹽水，以其蓋滿，以BL瓊脂平板培養基測定覆水液中之生菌數。
(5)對於再將0.5g冷凍乾燥粉末狀菌體放入Lami-Zip(商品名：塑膠製之袋)，於20℃或30℃保存53天後冷凍乾燥粉末狀菌體亦同樣使用BL瓊脂平板培養基測定其生菌數。
此實驗例中使用之保護劑液係如以下表1所示者。
茲將以上藉由本發明之試料1、2或比較試料1、2、3之兩岐雙岐桿菌的保存試驗結果示於表2。因比較試料1、2之存活率低，所以只將於20℃保存7天之結果一倂列出供參考。
由表2可知，依本發明方法之實施例1～4係在所定高溫條件下保存53天之冷凍乾燥粉末狀菌體，亦未見生菌數減少。尤其如實施例2、4幾乎接近生活環境溫度之高溫下，亦獲知可以極端地提高其存活率。藉此可知，依本發明之製造方法係一種可以充分地利用於品質保證期間可以較長之固體狀‧粉末狀食品的技術。
與之相比，比較例1、2係一種非專利文獻2所代表之僅對於海藻糖系之試驗，但獲知只用海藻糖無法充分地達到目的。尤其非專利文獻2中雖提及超低溫下、濕度條件下之保存時效果，但確知，在如本實驗之生活環境溫度下則無法獲得所希望之效果。
另外，在此以比較例3、4進行檢討與非專利文獻2一樣溫度之海藻糖‧蔗糖倂用之系系統，亦獲知在設定為生活環境之溫度條件下亦得使生菌數減半之結果。
所以在此確認可依此等比較例之方法所得之冷凍乾燥粉末狀菌體係很難適用於品質保證期間長之固體‧粉末狀食品、獲知係一種不可能適用於此等食品之技術。
實驗例2
針對本發明之製造方法所得冷凍乾燥粉末狀菌體，再於高溫條件下(積層配線板20℃、30℃、40℃)長期保存(～6個月)時的效果進行實驗。
又，使用之冷凍乾燥粉末狀菌體係除進行測試量增至約30倍以外，其他仍為依試料1及2之製造方法所製造者。所以以下仍做為試料1及2加以說明。
將以上之實驗結果示於圖1及圖2。
由圖示可知，試料1(參照圖1，混合含20重量%海藻糖之溶液，與含20重量%蔗糖之溶液所得，海藻糖與蔗糖各含有6.6重量%之保護劑溶液)，及試料2(參照圖2，混合含30重量%海藻糖之溶液，與含30重量%蔗糖之溶液所得，海藻糖與蔗糖為各含10重量%之保護劑溶液)均能在20℃及30℃之保存溫度條件下，仍在6個月後亦能維持充分之生菌數，顯示極高之存活性。
以較嚴厲之生活環境溫度條件，在40℃保存時亦可保存試料1經1個月後，仍示有93.9%存活性。因此獲知在此條件下做為保護劑溶液之濃度係以試料1使用之濃度為最佳。
實驗例3
除使用如以下表3所示試料，且在40℃保存3個月以下，其他則與實驗例1一樣進行實驗。結果示於表4。由表4可知，海藻糖與蔗糖之質量比在3：1～1：3之間其存活性為11～17%，幾乎不見太大差異，具有同等效果。
實驗例4
依以下所示順序，根據本發明之製造方法冷凍乾燥粉末狀菌體。
(1)在酪蛋白分解培養基(以酵素分解過之酪蛋白做為蛋白之培養基)中和培養長雙岐桿菌(Bifidobacterium longum)OLB6001株。
(2)離心分離(以4℃，10000G操作20分鐘)5400ml培養液，除去5200ml上澄液，得200ml菌體小片部分。
(3)在菌體小片部分(200ml)中，添加100ml含規定濃度糖質的保護劑液，使菌體懸濁，於-80℃冷凍，進行冷凍乾燥。
(4)冷凍乾燥完後立即在1g冷凍乾燥粉末狀菌體中添加生理食鹽水，倒水後，在BL瓊脂平板培養基測定倒水液中之生菌數。
(5)再將2g冷凍乾燥粉末狀菌體放入Lami-Zip(商標名稱：塑膠製袋)中，於40℃各保存8天、30天、82天、124天，對各期間保存後之冷凍乾燥粉末狀菌體亦同樣在BL瓊脂平板培養基測定生菌數。
此實驗例中使用之保護劑液係如下者。
(1)實施例8
使用各含有20重量%海藻糖與蔗糖之糖溶液(以下稱為試料6)。混合此糖溶液與菌體小片餾分所成冷凍乾燥前之懸濁液中的海藻糖與蔗糖之含有率係分別各為6.7重量%。
(2)比較例5
使用含有6重量%脫脂奶粉，1.7重量%乳糖，0.4重量%胺基酸(賴胺酸等)，4重量%其他成份(糊精等)之溶液(以下稱之為比較試料4)。
結果示於表5及圖3。由表5可知，比較例5之冷凍乾燥粉末狀菌體(圖3中之)為保存於40℃約4個月時，只存活0.002%，與之相比，實施例8之冷凍乾燥粉末狀菌體(圖3中之)係保存於40℃約4個月時顯示有40.0%之高存活率。
產業上之可利用性
依據本發明之可長期保存的冷凍乾燥粉末狀菌體之製造方法時，尤其必須對固體物、粉末狀食品等，保證可以長期保存時，保存後亦可以得到有用之乳酸菌及/或雙岐桿菌之效果。又，不須特別之裝置或複雜之步驟，亦不會因而增加成本，經濟上極有利。另外，本發明之冷凍乾燥粉末狀菌體因可以直接使用，保存後亦可以做為極方便之粉末狀予以直接攝取，可以在食品製造中做為原料有效地活用，其利用價值極高。
圖1：將冷凍乾燥前之懸濁液中的海藻糖濃度與蔗糖濃度分別為6.6重量%(使用做為其與菌體混合前之糖溶液，分別各含有20重量%海藻糖與蔗糖者)之條件下調製兩岐雙岐桿菌之冷凍乾燥粉末狀菌體，分別保存於20℃、30、40℃之各種溫度下進行試驗，將結果示為線圖。
圖2：將冷凍乾燥前之懸濁液中的海藻糖濃度與蔗糖濃度分別為10重量%(使用做為其與菌體混合前之糖溶液，分別各含有30重量%海藻糖與蔗糖者)之條件下調製兩岐雙岐桿菌之冷凍乾燥粉末狀菌體，分別保存於20℃、30、40℃之各種溫度下進行試驗，將結果示為線圖。
圖3：將冷凍乾燥前之懸濁液中的海藻糖濃度與蔗糖濃度分別為6.7重量%(使用做為其與菌體混合前之糖溶液，分別各含有20重量%海藻糖與蔗糖者)之條件下調製之長雙岐桿菌冷凍乾燥粉末狀菌體(圖中之數字)及比較用之冷凍乾燥粉末狀菌體(圖中數字)之40℃溫度下的保存試驗結果圖。

Claims (9)

  1. 一種冷凍乾燥粉末狀菌體之製造方法，其為使在糖質溶液中懸濁有乳酸菌及/或雙岐桿菌的懸濁液冷凍乾燥，以得冷凍乾燥粉末狀菌體的冷凍乾燥粉末狀菌體之製造方法，其特徵為該糖質為海藻糖及蔗糖，且冷凍乾燥前之該懸濁液中的海藻糖及蔗糖之各濃度為6.6~15重量%者。
  2. 如申請專利範圍第1項之冷凍乾燥粉末狀菌體之製造方法，其中冷凍乾燥前之該懸濁液中的海藻糖及蔗糖的各濃度為8~12重量%。
  3. 如申請專利範圍第1項或第2項之冷凍乾燥粉末狀菌體之製造方法，其中該乳酸菌及/或雙岐桿菌為屬於雙岐桿菌(Bifidobacterium)屬之菌類。
  4. 如申請專利範圍第3項之冷凍乾燥粉末狀菌體之製造方法，其中該乳酸菌及/或雙岐桿菌為兩岐雙岐桿菌(Bifidobacterium bifidum)株。
  5. 如申請專利範圍第4項之冷凍乾燥粉末狀菌體之製造方法，其中該乳酸菌及/或雙岐桿菌為兩岐雙岐桿菌(Bifidobacterium bifidum)OLB6378株，其寄存號碼為NITE BP-31。
  6. 如申請專利範圍第3項之冷凍乾燥粉末狀菌體之製造方法，其中該乳酸菌及/或雙岐桿菌為長雙岐桿菌(Bifidobacterium longum)株。
  7. 如申請專利範圍第6項之冷凍乾燥粉末狀菌體之製 造方法，其中該乳酸菌及/或雙岐桿菌為長雙岐桿菌(Bifidobacterium longum)No.7株，其寄存號碼為FERM BP-11242。
  8. 一種冷凍乾燥粉末狀菌體，其特徵為經由如申請專利範圍第1項至第7項中任一項之冷凍乾燥粉末狀菌體之製造方法所製造者。
  9. 一種食品組成物，其特徵為含有效量之如申請專利範圍第8項之冷凍乾燥粉末狀菌體所成者。
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Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP5257363B2 (ja) * 2008-06-26 2013-08-07 信和薬品株式会社 ナノ型乳酸菌の菌体の製造方法
JP2012055288A (ja) * 2010-09-13 2012-03-22 Kaneka Corp 安定化された生菌製剤およびその製造方法。
JP6032737B2 (ja) * 2012-09-27 2016-11-30 株式会社明治 ビフィズス菌の検出方法
JP6230796B2 (ja) * 2013-03-08 2017-11-15 日清食品ホールディングス株式会社 凍結乾燥菌試料およびその製造方法
TW201636010A (zh) * 2014-12-26 2016-10-16 Meiji Co Ltd 有機酸的產生促進劑、發炎性腸疾病的預防及／或改善劑
WO2018012941A2 (ko) * 2016-07-15 2018-01-18 씨제이제일제당(주) 가스발생량이 낮은 류코노스톡 메센테로이드 cjlm119 균주 및 이를 이용한 김치의 제조방법
JP6807677B2 (ja) * 2016-07-15 2021-01-06 株式会社明治 微生物培養液の濃縮方法及び微生物濃縮物
KR101930166B1 (ko) * 2016-07-15 2018-12-17 씨제이제일제당 (주) 가스발생량이 낮은 류코노스톡 메센테로이드 cjlm181 균주 및 이를 이용한 김치의 제조방법
KR101911640B1 (ko) * 2016-07-15 2018-10-24 씨제이제일제당 (주) 가스발생량이 낮은 류코노스톡 메센테로이드 cjlm627 균주 및 이를 이용한 김치의 제조방법
CN111534434B (zh) * 2020-06-28 2022-07-05 江南大学 一种冻干保护剂及其在冻干青春双歧杆菌中的应用
CN113005040B (zh) * 2021-01-22 2023-07-25 武汉微康益生菌研究院有限公司 一种乳双歧杆菌冻干保护剂及其使用方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2006273852A (ja) * 2005-03-03 2006-10-12 Meiji Milk Prod Co Ltd ビフィズス菌を有効成分とするアレルギー予防および／または治療剤
CN1922305A (zh) * 2004-02-24 2007-02-28 科·汉森有限公司 单个颗粒的冷冻乳酸菌培养物

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH0638704A (ja) * 1991-06-19 1994-02-15 Morinaga Milk Ind Co Ltd 発酵調味料及びその製造法
JPH0551321A (ja) * 1991-08-23 1993-03-02 Yotsuba Nyugyo Kk 免疫賦活剤
JPH08187071A (ja) * 1995-01-11 1996-07-23 Morinaga Milk Ind Co Ltd 食品の保存方法
EP1493806A1 (en) * 2003-07-02 2005-01-05 Chr. Hansen A/S Use of compounds involved in biosynthesis of nucleic acids as cryoprotective agents

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1922305A (zh) * 2004-02-24 2007-02-28 科·汉森有限公司 单个颗粒的冷冻乳酸菌培养物
JP2006273852A (ja) * 2005-03-03 2006-10-12 Meiji Milk Prod Co Ltd ビフィズス菌を有効成分とするアレルギー予防および／または治療剤

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
B. De Giulio, P. Orlando, G. Barba, R. Coppola, M. De Rosa, A. Sada, P. P. De Prisco, F. Nazzaro ，"Use of alginate and cryo-protective sugars to improve the viability of lactic acid bacteria after freezing and freeze-drying"， World Journal of Microbiology and Biotechnology ，2005，Vol.21，page 739~746 *

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