TWI477277B - 一種化合物用於製備預防ｂ型肝炎藥物的用途 - Google Patents

Description

一種化合物用於製備預防B型肝炎藥物的用途

本發明係關於一種化合物的用途，特別是一種(23E)-5β,19-環氧-25-甲氧基葫蘆-6,23-二烯-3β-醇用以製備藥物，以預防B型肝炎的用途。

B型肝炎是一種國人常見疾病，係經由血液或體液的交換而相互傳染，不僅會造成急性的猛爆型肝炎，亦會慢性惡化為肝硬化甚至肝癌；據此，B型肝炎可以說是許多肝臟疾病的前身，預防B型肝炎亦等同於預防更嚴重的肝臟疾病。

目前對於B型肝炎的檢測項目，主要是B肝表面抗原(HBsAg)及e抗原(HBeAg)兩種。其中，B肝表面抗原是一種表現於B型肝炎病毒表面的抗原顆粒，在B型肝炎患者的潛伏期即會表現，由於B型肝炎痊癒後B肝表面抗原就會停止表現而消失，所以是一種是評估罹患B型肝炎與否最方便的早期分子指標。e抗原(HBeAg)一般存在於B型肝炎病毒的核心，當B型肝炎患者體內的B型肝炎病毒大量複製時，患者血液、體液及分泌物中會大量出現e抗原，因此e抗原是B型肝炎病毒具有高度傳染力的指標。

在B型肝炎的預防方面，據調查習用B型肝炎疫苗對15~20%的施打者是無效的，因此仍無法有效預防B型肝炎的發生，是以， 仍然需要開發新一代藥物，以改良習用B型肝炎疫苗之缺失。

本發明之主要目的係提供一種化合物的用途，係用於製備藥物，藉由降低細胞中B型肝炎病毒的數量，以預防B型肝炎者。

為達到前述發明目的，本發明所運用之技術手段及藉由該技術手段所能達到之功效包含有：一種化合物用於製備預防B型肝炎藥物的用途，係包含：將一有效劑量之該化合物投予一所需個體，以降低該所需個體感染B型肝炎之可能性；其中，該化合物係為(23E)-5β,19-環氧-25-甲氧基葫蘆-6,23-二烯-3β-醇。

本發明之化合物用於製備預防B型肝炎藥物的用途，其中，該化合物之該有效劑量較佳係為50mg/kg/天。

本發明之化合物用於製備預防B型肝炎藥物的用途，其中，該化合物係每隔2天投藥一次，持續投藥9週。

本發明之化合物用於製備預防B型肝炎藥物的用途，其中，該所需個體係為小鼠，且該化合物較佳係以腹腔注射的方式投予該所需個體。

本發明之化合物用於製備預防B型肝炎藥物的用途，係藉由降低該所需個體的細胞中B型肝炎病毒的數量，使該所需個體的血清中HbsAg及HBeAg明顯下降，而達成預防B型肝炎之功效。

第1圖：本發明化合物的化學式。

第2圖：本發明化合物及奧替普拉對HepG2 2.2 15細胞株表現B肝表面抗原的抑制程度結果。

第3圖：本發明化合物及奧替普拉對HepG2 2.2 15細胞株表現e抗原的抑制程度結果。

第4圖：本發明化合物及奧替普拉對PLC/PRF/5細胞株表現B肝表面抗原的抑制程度結果。

第5a圖：本發明化合物對HepG2 2.2 15細胞株之B型肝炎病毒分泌量的實驗結果。

第5b圖：奧替普拉對HepG2 2.2 15細胞株之B型肝炎病毒分泌量的實驗結果。

第6a圖：本發明化合物對HepG2 2.2 15細胞株之p53蛋白磷酸化影響的結果。

第6b圖：奧替普拉對HepG2 2.2 15細胞株之p53蛋白磷酸化影響的結果。

第7圖：本發明化合物及奧替普拉於HepG2 2.2 15細胞株中，對p53啟動子結合能力影響的結果。

第8圖：本發明化合物及奧替普拉對小鼠之B肝表面抗原、e抗原及胎兒球蛋白的抑制結果。

第9圖：本發明化合物及奧替普拉對小鼠之腫瘤的抑制結果。

為讓本發明之上述及其他目的、特徵及優點能更明顯易懂，下文特舉本發明之較佳實施例，並配合所附圖式，作詳細說明如下：本發明所指RA2-10，係為名為(23E)-5β,19-環氧-25-甲氧基葫蘆-6,23-二烯-3β-醇(5β,19-epoxy-25-methoxycucurbita-6,23(E )-dien-3β-ol)的化合物，為使全案敘述簡潔，以下皆以該RA2-10取代該(23E)-5β,19-環氧-25-甲氧基葫 蘆-6,23-二烯-3β-醇；其中，該RA2-10的化學式請參照第1圖所示。

本發明之RA2-10用於製備預防B型肝炎藥物的用途，係包含：將一有效劑量之RA2-10投予一所需個體，以降低該所需個體感染B型肝炎之可能性。

是以，本發明之RA2-10可以預防B型肝炎，進而提供製備預防B型肝炎藥物的用途，該RA2-10係可以與醫藥學上可以接受之載劑或賦形劑組合形成一醫藥組合物，而以腹腔注射或靜脈注射等針劑方式送入所需個體，或是以錠劑、膠囊、粉劑、粒劑或液劑等口服方式供該所需個體服用；該RA2-10亦可以與其他食品或飲料組合，以一適於經口服用之樣態送入該所需個體。

本發明所指RA2-10，其萃取方式包含：取得含有該RA2-10的一天然物質；以甲醇先行萃取後，以乙酸乙酯與水進行分配萃取，再以正丁醇進行萃取，得到一萃取液；將該萃取液進行純化，以得到該RA2-10。其中，該天然物質係可為苦瓜等天然食品，其純化可由高效能液向層析法(HPLC)、膠體分離純化法等擇一；惟，化學合成之該RA2-10亦具有相同功效，此為本領域具通常知識者所能理解，容不多加贅述。另外，為了減少萃取液之體積，係可進減壓濃縮、風乾、烘乾、冷凍抽乾等方式以濃縮該萃取液。

較佳地，RA2-10係自苦瓜(Momordica charantia )萃取純化而來。詳而言之，係取苦瓜果實乾重30公斤，處理成粉末後，利用60公升的100%甲醇(MeOH)浸泡萃取共重複三次，每次間隔一週，得到三份浸泡液，並將共180公升的該浸泡液進行減壓濃縮而成一粗萃取物(約6.3公斤)。加入8公升水至該粗萃取物中，使該粗萃取物成懸浮狀後，先以8公升乙酸乙酯(EtOAc)進行分配萃取三次得乙酸乙酯層671克，再以4公升正丁醇(n-BuOH)進行萃取三次得正丁醇層966克， 最後剩餘的為水層部分4566克。

將正丁醇層萃取物溶解在20%甲醇中，並以Diaion HP 20為固定相充填管柱，水與甲醇混合液為移動相，進行玻璃管柱色層分析(150×10cm)；其中，初始沖提溶劑中水與甲醇的體積比為4：1，之後以沖提出樣品減少量做為更換水與甲醇比例依據，逐步增加甲醇比例至100%，共可獲得25個區分的初萃取液。

25個區分的初萃取液中，水與甲醇的體積比分別為：區分1(6000mL，水比甲醇為4：1)、區分2(4000mL，水比甲醇為38：12)、區分3(3000mL，水比甲醇為36：14)、區分4(5000mL，水比甲醇為34：16)、區分5(5000mL，水比甲醇為32：18)、區分6(3000mL，水比甲醇為3：2)、區分7(4000mL，水比甲醇為28：22)、區分8(6000mL，水比甲醇為26：24)、區分9(4000mL，水比甲醇為24：26)、區分10(5000mL，水比甲醇為22：28)、區分11(3000mL，水比甲醇為20：30)、區分12(3000mL，水比甲醇為18：32)、區分13(5000mL，水比甲醇為16：34)、區分14(4000mL，水比甲醇為14：36)、區分15(4000mL，水比甲醇為12：38)、區分16(2000mL，水比甲醇為10：40)、區分17(3000mL，水比甲醇為9：41)、區分18(3000mL，水比甲醇為8：42)、區分19(3000mL，水比甲醇為7：43)、區分20(2000mL，水比甲醇為6：44)、區分21(3000mL，水比甲醇為5：45)、區分22(3000mL，水比甲醇為4：46)、區分23(4000mL，水比甲醇為3：47)、區分24(3000mL，水比甲醇為1：49)與區分25(8000mL，甲醇為100%)。

取得區分16的初萃取液並乾燥後，約可獲得6.1克的一初萃取粉末，將該初萃取粉末溶解於10mL的甲醇後，以150克Sephadex LH-20膠體為固定相進行管柱分離(5×50cm)，並以水與甲醇的體積比 為1：1~0：1混合液沖提，獲得6個區分的次萃取液(次萃取液A~次萃取液F，其水與甲醇的體積比分別為50：50、40：60、30：70、20：80、10：90及0：100)，每個區分的次萃取液為800mL。

取得次萃取液B並乾燥後，可獲得約5.2克的次萃取粉末，以120克矽膠為固定相進行玻璃管柱色層分析(3×45cm)，並以二氯甲烷與乙酸乙酯的體積比為10：1~0：1混合液沖提，獲得5個區分的細萃取液(該細萃取液A~該細萃取液E，其二氯甲烷與乙酸乙酯的體積比分別為10：1、8：2、6：4、4：6及0：1)，每個區分的該細萃取液為100mL。獲得該細萃取液C後，以高效能液相層析儀方法(管柱為Lichrosorb silica gel 60，250×10mm，粒徑尺寸5μm)，移動相為正己烷：乙酸乙酯體積比例為8：2的混和液，流速為每分鐘2mL，在滯留時間23.3分鐘即可純化出RA2-10(約為102mg)。

上述RA2-10係可以作為一預防藥劑，投予所需個體，以減緩該所需個體罹患B型肝炎之可能性；其中，該所需個體，係為具有感染B型肝炎可能性的個體。

為驗證RA2-10確實具有預防B型肝炎的效果，接著將該RA2-10與習用B型肝炎預防藥物奧替普拉進行下列實驗。本發明係選用HepG2 2.2.15及PLC/PRF/5兩種細胞株，其中，該HepG2 2.2 15細胞株可以穩定分泌B肝表面抗原及B型肝炎病毒至該HepG2 2.2 15細胞株之培養液中，該PLC/PRF/5細胞株則僅會分泌B肝表面抗原至該PLC/PRF/5細胞株之培養液中，但不分泌B型肝炎病毒。該HepG2 2.2 15細胞株或該PLC/PRF/5細胞株皆培養於含有10%胎牛血清(FBS)的DMEM培養液中，培養於溫度37℃之細胞培養箱中。

(A)RA2-10及奧替普拉對HepG2 2.2 15及PLC/PRF/5細胞株之抑制濃度

本實驗將HepG2 2.2.15及PLC/PRF/5細胞株分別種植於96孔盤中(各孔均為3000顆細胞)，待貼盤16小時後，分別投予50、25、10、5、2、1μg/mL之RA2-10及5μg/mL奧替普拉(為一種習用B型肝炎預防用藥物)，並以DMSO作為對照組，並分別於不同天數以MTT方法(其MTT方法詳如Jpn J Pharmacol，52：95~100，1990記載)進行細胞抑制濃度的偵測。

請參照第1表所示，實驗結果顯示在HepG2 2.2.15細胞株的組別中，於施藥第3、6及9天時，RA2-10對該HepG2 2.2.15細胞株的半抑制濃度(IC₅₀ )都較奧替普拉者為低，表示僅需較低濃度即可使該RA2-10對該HepG2 2.2 15細胞株產生毒殺作用；並且，該RA2-10對該HepG2 2.2.15細胞株在施藥第9天時的10%抑制濃度(IC₁₀ )為5.1μg/mL，亦較奧替普拉者(6.7μg/mL)為低。而在PLC/PRF/5細胞株的組別中，於施藥第4及6天時，該RA2-10對該PLC/PRF/5細胞株的半抑制濃度(IC₅₀ )都較奧替普拉者為低，表示僅需較低濃度即可使該RA2-10對該PLC/PRF/5細胞株產生毒殺作用。

(B)RA2-10及奧替普拉對HepG2 2.2 15細胞株表現B肝表面抗原的抑制程度

在本實驗中，係將HepG2 2.2.15細胞株種植於96孔盤中(各孔均為3,000顆細胞)，待貼盤16小時後，分別投予5μg/mL之RA2-10及5μg/mL之奧替普拉，並以DMSO作為對照組，並分別於不同天數(第3、6及9天)分別取出各組細胞的培養液，以ELISA套組(普生正肝B-96(TMB)，購自普生股份有限公司)進行B肝表面抗原濃度的偵測。

本實驗的結果，係將對照組中第3、6及9天於培養液中偵測到的B肝表面抗原濃度分別作為100%的標準，而投予RA2-10及奧替普拉的組別則於各自比對對照組後，分別獲得不同天數之B肝表面抗原的相對濃度(%)。

請參照第2圖所示，相較於投予DMSO的對照組，投予RA2-10及奧替普拉的組別，其B肝表面抗原的相對濃度皆有顯著降低的現象，並且在施藥第6及9天時，該RA2-10抑制B肝表面抗原的程度更優於奧替普拉者，顯示該RA2-10對HepG2 2.2.15細胞株具有較奧替普拉更優良且更長期之抑制B肝表面抗原產生的效果。

(C)RA2-10及奧替普拉對HepG2 2.2 15細胞株表現e抗 原的抑制程度

在本實驗中，係將HepG2 2.2.15細胞株種植於96孔盤中(各孔均為3,000顆細胞)，待貼盤16小時後，分別投予5μg/mL之RA2-10及5μg/mL之奧替普拉，並以DMSO作為對照組，並分別於不同天數(第3、6及9天)分別取出各組細胞的培養液，以ELISA進行e抗原濃度的偵測。

本實驗的結果，係將對照組中第3、6及9天於培養液中偵測到的e抗原濃度分別作為100%的標準，而投予RA2-10及奧替普拉的組別則於各自比對對照組後，分別獲得不同天數之e抗原的相對濃度(%)。

請參照第3圖所示，相較於投予DMSO的對照組，投予RA2-10及奧替普拉的組別，其e抗原的相對濃度皆有顯著降低的現象，顯示該RA2-10對HepG2 2.2.15細胞株具有與奧替普拉程度相當之抑制e抗原產生的效果。

(D)RA2-10及奧替普拉對PLC/PRF/5細胞株表現B肝表面抗原的抑制程度

在本實驗中，係將PLC/PRF/5細胞株種植於96孔盤中(各孔均為3,000顆細胞)，待貼盤16小時後，分別投予5μg/mL之RA2-10及5μg/mL之奧替普拉，以DMSO作為對照組，並分別於不同天數(第2、4及6天)分別取出各組細胞的培養液，以ELISA進行B肝表面抗原濃度的偵測。

本實驗的結果，係將對照組中第2、4及6天於培養液中偵測到的B肝表面抗原濃度分別作為100%的標準，而投予RA2-10及奧替普拉的組別則於各自比對對照組後，分別獲得不同天數之B肝表面抗原的相對濃度(單位為%)。

請參照第4圖所示，相較於投予DMSO的對照組，投予RA2-10及奧替普拉的組別，其B肝表面抗原的相對濃度皆有顯著降低的現 象，並且在施藥第2及6天時，該RA2-10抑制B肝表面抗原的程度更優於奧替普拉者，顯示該RA2-10對PLC/PRF/5細胞株具有更優於奧替普拉之抑制B肝表面抗原產生的效果。

綜合上述，相較於奧替普拉，RA2-10具有更優良的抑制B肝表面抗原與e抗原產生的效果。接著，為了驗證該RA2-10對B肝表面抗原的抑制是否與B型肝炎病毒含量相關，因此進行下列研究。

(E)RA2-10及奧替普拉對B型肝炎病毒之含量的實驗

本實驗係將HepG2 2.2.15細胞株種入48孔盤中(各孔均為10,000顆細胞)，使各組細胞貼附16小時後，分別投予不同濃度的奧替普拉(1.25、2.5、5及10μg/mL)及RA2-10(0.625、1.25、2.5及5μg/mL)，並以DMSO作為對照組，以於3天後分別收集1.5mL各組細胞的培養液，純化出病毒去氧核糖核酸，以半定量聚合酶連鎖反應(semi-quantitative PCR)進行細胞株分泌至培養液中的B型肝炎病毒去氧核糖核酸之定量。其中，半定量聚合酶連鎖反應的反應條件為於95℃加熱3分鐘後，以94℃15秒、55℃30秒、72℃45秒為一循環，進行32次循環後，再於72℃中留置5分鐘；進行反應的引子對序列分別如SEQ ID NOS：1及2所示(操作條件如Journal of Clinical Microbiology，37：2899~2903，1999記載)。

在投予不同濃度的奧替普拉及RA2-10後，HepG2 2.2.15細胞株之培養液中B型肝炎病毒的去氧核糖核酸相對分泌量；其中，投予奧替普拉及RA2-10所得之實驗數據係以對照組織實驗數據作為100%的相對標準。請一併參照第5a~5b圖所示，奧替普拉的EC₅₀ (半致效應濃度)為4.58μg/mL，而該RA2-10的EC₅₀ 為1.31μg/mL，表示僅需不到三分之一濃度的該RA2-10，即可達成與奧替普拉相同的效果。

(F)以西方點墨法偵測RA2-10及奧替普拉對p53蛋白之磷酸化影響的實驗

p53蛋白是由細胞中的p53 抑癌基因(tumor suppressor gene)所轉錄及轉譯而來，一般而言，p53蛋白在細胞中之半衰期僅有30分鐘，但當細胞受到損傷(如紫外線照射等)，會促使p53蛋白產生磷酸化而成為穩定的活化態p53蛋白，該活化態p53蛋白進而促使細胞凋亡(apoptosis)，以減少細胞的病變。

本實驗係將HepG2 2.2.15細胞株種植於48孔盤中(各孔均為10000顆細胞)，並在細胞貼盤後，分別投予5μg/mL的奧替普拉及5μg/mL的RA2-10，並分別於第1、2、3、4、5及6天，收取細胞溶解液後，分別選用抗p53抗體(1：1000，購自Cell Signaling Technology)、抗pp53(磷酸化於第6號絲胺酸位置)抗體(1：1000，購自Cell Signaling Technology)、抗pp53(磷酸化於第15號絲胺酸位置)抗體(1：1000，購自Cell Signaling Technology)、抗pp53(磷酸化於第20號絲胺酸位置)抗體(1：1000，購自Cell Signaling Technology)、抗pp53(磷酸化於第37號絲胺酸位置)抗體(1：1000，購自Cell Signaling Technology)及抗pp53(磷酸化於第46號絲胺酸位置)抗體(1：1000，購自Cell Signaling Technology)，另以GAPDH作為內部控制組(1：3000，購自Santa Cruz)等一級抗體，另以可以辨識該等一級抗體之二級抗體(辣根過氧化物酶標記二級抗體，Horseradish peroxidase-conjugated secondary antibodies，1：5000、購自Fermentas)進行西方墨點法，以辨認p53蛋白上磷酸化程度；其中，本實驗所使用之抗磷酸化絲胺酸抗體的辨認位置，皆位於p53蛋白之胺基端(N端)，每個樣品槽係注入50μg的蛋白質。

請一併參照第6a~6b圖所示，相較於投予奧替普拉的HepG2 2.2.15細胞株，投予RA2-10的HepG2 2.2.15細胞株之p53蛋白N端磷酸化現象明顯增加，而且有較多絲胺酸呈現磷酸化反應，表示投予該RA2-10會使細胞中的p53蛋白活化為穩定的磷酸化p53蛋白。

(G)RA2-10及奧替普拉對p53蛋白之DNA結合能力影響之實驗

為進一步驗證RA2-10的投予與p53蛋白之間的關係，續以選用HepG2 2.2.15細胞株，各使2000顆細胞於24孔盤貼附16小時，分別添加如第2表所示之DMSO、該RA2-10及奧替普拉，作用4小時後，將各組細胞分別轉染不同劑量之p53-冷光報導者質體(p53-Luc reporter)，另於第A3組及A5組同時轉染p53DN(PT3348-5，購自BD Biosciences)，與內生性p53競爭，進而抑制內生性p53之正常功能，量測各組該p53-冷光報導者之冷光活性，結果紀錄於第7圖。

請參照第7圖所示，將本發明RA2-10及奧替普拉投予細胞，確實都可以有效促進內生性p53與p53-冷光報導者之結合活性，是以大幅提升所測得之冷光活性數值(如第G2及G4組結果所示)；而若是同時轉染p53DN，以抑制該內生性p53之作用，進而降低p53-冷光報導者之結合活性(如第G3及G5組結果所示)。據此，本發明RA2-10係藉由提升p53與啟動子序列之結合，以達到調控下游基因之表現或活性的功效。

接著，為了驗證RA2-10對於個體器官的影響，以及於個體之有效劑量，續進行下列實驗。

(H)投予RA2-10的小鼠之血液生化檢驗及臟器檢驗

首先，將50mg/kg的RA2-10以腹腔注射投予Nu/Nu小鼠，並以投予50mg/kg之玉米油的小鼠作為對照組，於第2天時抽血並檢驗臟器重量。其中，GOT(麩草酸轉氨基酶)與GPT(麩丙酮酸轉氨基酶)皆為肝功能指標，當肝臟發炎或肝細胞損傷破裂時會大量釋出至血液中；BUN(尿素氮)與CRE(肌酸酐)則為腎功能指標，當大量釋出表示腎功能不全。

請參照第3表所示，投予RA2-10的小鼠不論是GOT、GPT、BUN或CRE的數值與對照組相比皆無差異，表示投予該RA2-10並不造成個體的肝腎障礙或功能失調。

(I)投予RA2-10及奧替普拉對小鼠之B肝表面抗原、e抗原及胎兒球蛋白(AFP)的抑制效果實驗

於本實驗中，以因植入HepG2 2.2 15細胞株而誘發B型肝炎病毒表現之小鼠，作為該所需個體；其中，該HepG2 2.2 15細胞株係將HepG2細胞株轉殖B型肝炎病毒(HBV)，因此可穩定分泌B肝表面抗原及B型肝炎病毒至該HepG2 2.2 15細胞株之培養液中。

首先，以腹腔注射將50mg/kg的奧替普拉及50mg/kg的RA2-10投予Nu/Nu小鼠，並以投予50mg/kg玉米油的小鼠作為對照組， 以施打日作為第1天，每2天再施打一次，另於第7天時同樣以腹腔注射將1×10⁶ 個HepG2 2.2.15細胞(於100μL培養液中)投予小鼠，並繼續每2天施打一次50mg/kg的奧替普拉、該RA2-10或玉米油於小鼠之腹腔，持續8週後，於第56天(注射腫瘤細胞後第56天)進行採血，以測量各組小鼠之B肝表面抗原、e抗原及胎兒球蛋白(一種癌症分子指標)表現量。其中，以注射玉米油的小鼠組別所測得之B肝表面抗原、e抗原及胎兒球蛋白表現量作為100%的對照組。

請參照第8圖所示，相較於施打玉米油的對照組，當小鼠施打RA2-10後，其血液中的B肝表面抗原、e抗原及胎兒球蛋白的相對表現量分別僅為對照組之20%、30%及10%，表示當個體體內含有RA2-10時，確實能抑制B肝表面抗原、e抗原及胎兒球蛋白的表現。

(I)投予RA2-10及奧替普拉對小鼠之腫瘤的抑制效果實驗

接續上組實驗條件，本實驗於注射HepG2 2.2.15細胞株至小鼠體內後，於不同天數偵測各組別小鼠體內的腫瘤尺寸變化。

請參照第9圖所示，在投予玉米油的小鼠組別中，至第55天時體內腫瘤尺寸已增加至約2300mm³ ；雖然投予奧替普拉的小鼠組別體內腫瘤尺寸僅為1600mm³ ，但投予RA2-10的小鼠組別效果更佳，體內沒有腫瘤的發生。

綜合上述，RA2-10不僅能夠降低B肝表面抗原及e抗原，更能夠抑制腫瘤之增生。

綜合上述，本發明之化合物用於製備預防B型肝炎藥物的用途，(23E)-5β,19-環氧-25-甲氧基葫蘆-6,23-二烯-3β-醇不僅能夠降低B肝表面抗原及e抗原的產生而達成預防B型肝炎，並一併達成預防由B型肝炎衍生之其他肝病的效果，更能夠抑制肝臟相關腫瘤之增生，藉以達到肝臟保健，而使該(23E)-5β,19-環氧-25-甲氧基葫蘆-6,23-二烯-3β-醇具有用於預防B 型肝炎之功效。

雖然本發明已利用上述較佳實施例揭示，然其並非用以限定本發明，任何熟習此技藝者在不脫離本發明之精神和範圍之內，相對上述實施例進行各種更動與修改仍屬本發明所保護之技術範疇，因此本發明之保護範圍當視後附之申請專利範圍所界定者為準。

<110> 國立屏東科技大學

<120> 一種化合物用於製備預防B型肝炎藥物的用途

<160> 2

<210> 1

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工合成序列

<220>

<221> HBV primer F

<400> 1

<210> 2

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工合成序列

<220>

<221> HBV primer R

<400> 2

Claims (4)

1. 一種化合物用於製備預防B型肝炎藥物的用途，係包含：將一有效劑量之該化合物投予一所需個體，以降低該所需個體感染B型肝炎之可能性；其中，該化合物係為(23E)-5β,19-環氧-25-甲氧基葫蘆-6,23-二烯-3β-醇。
2. 如申請專利範圍第1項所述之化合物用於製備預防B型肝炎藥物的用途，其中，該化合物之該有效劑量係為50mg/kg/天。
3. 如申請專利範圍第2項所述之化合物用於製備預防B型肝炎藥物的用途，其中，該化合物係每隔2天投藥一次，持續投藥9週。
4. 如申請專利範圍第1項所述之化合物用於製備預防B型肝炎藥物的用途，其中，該所需個體係為小鼠，且該化合物係以腹腔注射的方式投予該所需個體。