TWI460273B - 寡醣酯之酵素合成法 - Google Patents
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Description
本發明係有關於一種在有機溶劑中以酵素催化醇解反應得到親脂性寡醣酯之酵素合成法。
寡醣(oligosaccharides
)是一種利用生物技術，研發而得到之具有生理調節機能特性的甜味劑。其係由3-10個單糖分子鍵結而成，不被胃液及小腸酵素分解，寡醣可順利到達大腸的特性，使棲息於大腸內之有益菌(如：雙歧桿菌‚Bifidobacterium
<span style='mso-bidi-font-style:italic'>spp</span>.）可加以選擇利用而大量增殖，在腸內產生有用之醋酸及乳酸，降低腸道pH值，而使病原菌產生酸中毒。寡醣亦具有抑制有害菌(如：產氣莢膜梭狀芽孢桿菌‚Closterdium
<span class="SpellE">perfringenes</span>）增殖之作用，其可改善腸內菌叢，促進腸道蠕動，加速食物通過腸道，達到抑制腸內腐敗菌及膽鹽再吸收，降低血中總膽固醇及三酸甘油酯含量之功效。另有文獻指出攝取寡醣也可改善人體便秘的情形，減少腸內腐敗物質，促進人體健康。
目前寡醣種類繁多，包括：果寡醣(Fructooligosaccharides─FOS)、半乳寡醣(galactooligosaccharides)、大豆寡醣(soybeanoligosaccharides)、異麥芽寡醣(isomaltooligosaccharides)及木寡醣(xylooligosaccharides)等。
果寡醣是由雙糖中的蔗糖[glucose-(β1→2)-fructose即GF]用β-1,2鍵結1～3分子fructose構成的寡醣。由一個葡萄糖分子連接2個果糖基有蔗果三糖（GF2, 1-kestose)、6-kestose、neo-kestose（GF2）三種，其中以1-kestose較為常見；一個葡萄糖分子連接3個果糖基稱為蔗果四糖（GF3, nystose），一個葡萄糖分子連接4個果糖基稱為蔗果五醣（GF4, fructosyl-nystose）。在自然界中，果寡醣存在於蘆筍、甜菜、洋蔥、牛蒡等，可由這些天然食物中萃取獲得，但含量皆很低，也可利用細菌或真菌─黃麴菌株（Aspergillus sp.
）、節桿菌屬（Arthrobacter sp.
）、短梗霉（Aureobasidium sp.
）、鐮刀霉菌（Fusarium sp.
）等，在工業上直接萃取酵素再轉化蔗糖製造果寡醣。果寡醣的物化性質與蔗糖非常相似，其保有蔗糖甜味、水溶性、保濕性等，在pH值4-7中很穩定，也有熱安定性（熔點134~200 ℃），但每克所含的熱量比起蔗糖來的低。
異麥芽寡醣（isomaltooligosaccharide）又稱分枝低聚醣、異麥芽低聚醣、低聚異麥芽醣，是指葡萄糖之間至少有一個α-D-(1,6)醣苷鍵結合而成的，單糖數為2-5不等的低聚糖。其主成分為異麥芽糖(isomaltose)、潘糖(panose)、異麥芽三糖(isomaltotriose)和四糖，占總醣的50%以上。在自然界裡低聚異麥芽醣極少以游離狀態存在，常做為支鏈澱粉或多醣的組分。在某些發酵食品，例如：醬油、黃酒和酶法葡萄糖聚漿中有少量存在。低聚異麥芽醣微甜、難消化、熱值低，能增殖雙歧桿菌，有抗齲齒作用，安全無毒，被廣泛用於食品工業以及醫藥、飼料等行業。有研究報告指出，連續6星期食用異麥芽寡醣戚風蛋糕的受試者，其血清總膽固醇及低密度脂蛋白膽固醇、糞便之吲哚及對甲酚含量等均顯著下降，且便秘情形獲得改善。
寡醣的有益功能如下：
1、低齲齒性
果寡醣帶有像蔗糖的甜度，口感及物化性質皆與蔗糖相似，而且寡醣不像蔗糖會被口腔內的細菌利用，而促進口腔內細菌滋長，造成齲齒。因此，攝取果寡醣能降低齲齒的發生。異麥芽寡醣屬難發酵性醣，不被突變鏈球菌（Streptococcus <span class="SpellE">mutans</span>）所利用。而且與蔗糖合用時，能強烈抑制蔗糖被突變鏈球菌轉化成非水溶性葡聚醣，阻礙發酵產酸，並能強烈抑制葡聚醣在牙齒附著，減少齒垢形成，從而發揮抗齲齒作用。
2、難消化性
果寡醣具難以被腸胃道消化酵素分解之特性，故其能順利的通過動物體之上消化道，完整的進入大腸，促進腸道中有益菌的生長，產生短鏈脂肪酸及氣體，降低腸道pH；且短鏈脂肪酸會被腸道中之絨毛黏膜吸收，提供黏膜之營養，促進黏膜之增生及完整性，促進腸道之健康。因產生的熱量比蔗糖來的低，故不易致胖。
異麥芽寡醣不被唾液及小腸中的酶所水解，幾乎不被人體消化吸收，產生的熱值很低，正常人攝取後，其血糖和血中的胰島素均未上升。異麥芽寡醣具有膳食纖維的作用，但比普通膳食纖維口感好，味道好，日需量小，不會脹肚，易溶於水，易加工，不影響食品的原有性質。尤其異麥芽寡醣甜度約為蔗糖50％，每克產生2.7-3.3大卡的熱量，不會對血糖及胰島素分泌有太大影響，因此可作為肥胖症和糖尿病患者的保健甜味劑。
3、對腸內菌叢改善
果寡醣可被小腸中有益的乳酸菌當作生長的養分，促進腸內有益菌叢生長，抑制有害菌的生存。腸內有益菌的生長，就能讓小腸吸收養分正常，減少毒素產生，延緩腸的老化，維持正常的免疫機能，而降低腸內生長惡性腫瘤的危險。此外，果寡醣調節畜禽腸道微生態菌群，可減少家禽感染沙門氏菌的比率。而近年來，益生菌中的乳酸菌使用在水產養殖的研究也顯示，乳酸菌可提升比目魚仔魚的存活率、增進比目魚及虹鱒的免疫能力、抑制魚類腸道中的病原菌：嗜水氣單胞菌(親水性產氣單胞菌)(Aeromonas hydrophila
)、殺鮭氣單胞菌(A. salmonicida
)及鳗弧菌(Vibrio anguillarum
)等，大幅提升魚類養殖成效。
曾有研究指出，異麥芽寡醣對人全腸道內雙歧桿菌具有極佳的增殖效果，在大腦中不被有害菌如產氣莢膜桿菌所利用。長期食用異麥芽寡醣後，可使人體腸道內以雙歧桿菌為首的有益菌顯著增殖而成為優勢菌，抑制和減少腸內有害菌和外源性致病菌的生長繁殖，促使微生態向良性調整，有利於人的身體健康。
4、糖尿病患者適用
因為果寡醣不會被人體酵素所分解而吸收，因此並不會像蔗糖般促進身體血糖上升和胰島素分泌，所以果寡醣既含有甜味，又不會帶來糖尿病患的負擔，糖尿病患可放心攝取果寡糖。
5、改善便秘
由於果寡醣不能被人體的酵素所分解，能夠通過小腸進入大腸中，因此就像其他膳食纖維一樣，難消化的纖維能增加腸的蠕動，而幫助排便改善便秘。另因攝取寡醣可在腸道內產生大量揮發性短鏈脂肪酸，而刺激腸壁蠕動，增加糞便含水量，進而改善便秘之症狀。
6、降低膽固醇
果寡醣降低膽固醇的生理機制與膳食纖維類似，果寡醣能與膽酸、膽鹽結合而排出體外，防止再吸收膽固醇，而降低血液中的膽固醇濃度。
由於寡醣具有如上所述之有益功能，因此目前廣泛被應用於食品、化粧品及醫藥等工業。但因寡醣[如蔗果三糖與異麥芽三糖]為親水性化合物，故無法穩定順利應用於油脂含量高的藥物、食品、化妝品及環境中，而影響其功能，目前多採化學方法進行結構修飾改善其親脂性。現階段工業上利用化學法合成寡醣酯及其衍生物時，常因產率、品質與色澤不盡理想，加上化學法缺乏特異性，故生產過程中副產物多，成份複雜，純化困難及需高溫反應（150〜170℃），導致成本大幅提高。
因此，為大幅提升產量，並符合現代人重視環保，崇尚天然的訴求，本發明研發出一種利用酵素[尤其是指金屬蛋白酶(Thermolysin)]當生物催化劑，在有機溶劑中分別將蔗果三糖(或異麥芽三糖)與棕櫚酸乙烯酯（palmitic acid vinyl ester）進行醇解反應（alcoholysis），使蔗果三糖(或異麥芽三糖)和棕櫚酸乙烯酯能在短時間內形成酯鏈(ester linkage)提高疏水性，進而合成蔗果三糖棕櫚酸酯（1-kestose palmitate, 1-KP）[或異麥芽三糖棕櫚酸酯（isomaltotriose palmitate, IP）]。
本發明之主要目的，係提供一種藉由酵素的特異性修飾結構增加寡醣親脂性，改善在疏水性環境下溶解不均和難於細胞進行相關作用之困擾的寡醣酯之酵素合成方法。
為達上述目的與功效，本發明研擬一種寡醣酯之酵素合成方法，係在有機溶劑中利用酵素催化醇解反應（alcoholysis），合成親脂性蔗果三糖棕櫚酸酯（1-kestose palmitate,1-KP）或異麥芽三糖棕櫚酸酯（isomaltotriose palmitate,IP），使其不僅保有原蔗果三糖（1-kestose)或異麥芽三糖（isomaltotriose)和棕櫚酸的機能性外，還可增加乳化與保健功能。
本發明寡醣酯之酵素合成方法，至少包括以下步驟流程：
a)醇解反應，分別將酵素，以及蔗果三糖或異麥芽三糖與棕櫚酸乙烯酯置於有機溶劑中，利用酵素催化醇解反應（alcoholysis）合成親脂性蔗果三糖棕櫚酸酯（1-kestose palmitate,1-KP）或親脂性異麥芽三糖棕櫚酸酯（isomaltotriose palmitate,IP）；
b)萃取寡醣酯，在此步驟中，進一步包括以下流程：
b-1)於上述反應液中加入蒸餾水；
b-2)添加丁醇(butanol)與環己烷(cyclohexane)之混合液，且振盪後靜置；
b-3)取有機層水洗，且反覆振盪、離心；
b-4)將有機層進行濃縮，去除有機溶劑；
b-5)加入疏水性的烷類溶劑，並再次振盪、靜置，分離有機層與寡醣酯；
b-6)去除有機層，即得蔗果三糖棕櫚酸酯或異麥芽三糖棕櫚酸酯。
如上所述本發明之寡醣酯之酵素合成方法，其中，該酵素係選用金屬蛋白酶(Thermolysin)。
如上所述本發明之寡醣酯之酵素合成方法，其中，該棕櫚酸係選用棕櫚酸乙烯酯。
如上所述本發明之寡醣酯之酵素合成方法，其中，該有機溶劑是選用二甲基亞碸。
如上所述本發明之寡醣酯之酵素合成方法，其中，酵素催化醇解反應最適反應時間為24小時。
如上所述本發明之寡醣酯之酵素合成方法，其中，丁醇(butanol)與環己烷(cyclohexane)之混合液添加量為25 ml，且丁醇：環己烷＝3：1(v/v)。
為令本發明所運用之技術內容、發明目的及其達成之功效有更完整且清楚的揭露，茲於下詳細說明之，並請一併參閱所揭之圖式及圖號：
請參第一圖，其係揭示本發明之寡醣酯之酵素合成方法的流程步驟方塊圖。本發明之寡醣酯之酵素合成方法至少包括以下步驟：
a)醇解反應，係分別將酵素，以及蔗果三糖或異麥芽三糖，與棕櫚酸乙烯酯置於有機溶劑中，利用酵素催化醇解反應（alcoholysis），合成親脂性蔗果三糖棕櫚酸酯（1-kestosepalmitate,1-KP）或親脂性異麥芽三糖棕櫚酸酯（isomaltotriose palmitate,IP）；其中，該酵素係指金屬蛋白酶；
b)萃取寡醣酯，在此步驟中，進一步包括以下流程：
b-1)加入蒸餾水，於上述反應液中加入蒸餾水；
b-2)添加丁醇(butanol)與環己烷(cyclohexane)之混合液，且振盪後靜置；
b-3)取有機層水洗，且反覆振盪、離心；
b-4)將有機層進行濃縮，去除有機溶劑；
b-5)加入疏水性的烷類溶劑，並再次振盪、靜置，分離有機層與寡醣酯，其中是以自然沉降的方式，讓含蔗果三糖棕櫚酸酯或異麥芽三糖棕櫚酸酯之底部水層與比重較輕的上有機層分離；其中，所述之疏水性的烷類溶劑為正己烷、環己烷、異辛烷（isooctane）、正庚烷（heptane）其中之一；
b-6)去除有機層，是利用吸量管抽離有機層，如此一來即得蔗果三糖棕櫚酸酯或異麥芽三糖棕櫚酸酯。
<實施例>
1.材料：
Candida <span class="SpellE">antarctica</span>脂肪酶（Novozym 435）和Mucor
<span class="SpellE">miehei</span>脂肪酶（Novozym RMIM）購自丹麥Novo公司，Pseudomonas
<span class="SpellE">cepacia</span>脂肪酶（Amano PS）和Penicillium
<span class="SpellE">camembertii</span>脂肪酶（Amano G）購自日本天野製藥公司。Candida <span class="SpellE">rugosa</span> type VII脂肪酶與Bacillus <span class="SpellE">thermoproteolyticus</span> <span class="SpellE">rokko</span>金屬蛋白酶（Thermolysin）與棕櫚酸酐（palmitic anhydride）等試藥皆購自美國Sigma公司。蔗果三糖和異麥芽三糖購自日本Wako公司；棕櫚酸乙烯酯購自日本TCI公司；二甲基亞碸（dimethyl sulfoxide）購自日本關東化學股份有限公司。氰甲烷、正丁醇、正己烷、正庚烷、砒碇和四氫呋喃等溶劑則由德國默克公司購得。
2.方法：
A.酵素反應
以15 ml具螺旋蓋之玻璃瓶為批式反應器，加入適當量的寡糖與棕櫚酸乙烯酯在有機溶劑中，於45 ℃,240 rpm的條件下進行醇解反應。
B.寡醣酯萃取分離之步驟
1)反應液中加入3 ml的蒸餾水。
2)再添加25 ml之丁醇(1-butanol)：環己烷(cyclohexane)＝3：1(v/v)混合液於上述反應液中，振盪，靜置。
3)取有機層水洗，添加水量為反應液的三分之二，振盪，離心，共五次。
4)分離有機層，濃縮，加入4 ml的正己烷，振盪，靜置。
5)去除有機層，即得蔗果三糖棕櫚酸酯或異麥芽三糖棕櫚酸酯。
C.薄層層析的檢測方法
(一)蔗果三糖棕櫚酸酯
1)A：1-kestose；B：棕櫚酸乙烯酯(palmiticacid vinyl ester)；C and D：1-kestose+棕櫚酸乙烯酯(palmitic acid vinylester) + 嗜熱菌(Thermolysin) +二甲基亞碸(DMSO)1.0 ml。
2)展開液：氯仿：甲醇：水＝6：3：0.15(v/v/v）。
3)呈色劑：二苯胺-苯胺磷酸試劑(Diphenylamine-aniline-phosphoric acid reagent)。
4)分別將兩種反應物與產物[蔗果三糖棕櫚酸單酯（1-kestose monopalmitate, 1-KMP）及蔗果三糖棕櫚酸雙酯（1-kestose dipalmitate, 1-KDP）]點在薄層層析板上，展開分離，利用呈色劑呈色，計算R f
值。
請參第二圖，為在有機介質中以酵素法催化合成蔗果三糖棕櫚酸酯的薄層層析結果。其薄層層析之反應分析：(A)蔗果三糖；(B)棕櫚酸乙烯酯；(C)和(D)0.5mg金屬蛋白酶(Thermolysin)、10 mM蔗果三糖及10 mM棕櫚酸乙烯酯溶於1ml二甲基亞碸(DMSO)溶劑中在溫度45℃條件下反應24小時。1-KMP是指蔗果三糖棕櫚酸單酯；1-KDP是指蔗果三糖棕櫚酸雙酯。其中，1- KMP R f
值=0.85；1-KDP R f
值=0.96。1-KMP的質譜(FAB+)：calcdfor C34
H62
O17
Na (M＋Na) 765.91, found 766；1-KDP的質譜(FAB+)：C50
H93
O18
Na(M＋Na) 1004.38, found 1004（參第四圖）。
(二)異麥芽三糖棕櫚酸酯
1)A：isomaltotriose；B：palmitic acid vinyl ester；C and D：isomaltotrios + palmitic acid vinyl ester + Thermolysin+ DMSO 1.0 ml。
2)展開液：第1次甲醇先展開至1/2的薄層色譜(TLC)，第2次再以氯仿：甲醇：水＝3：2.11：0.42(v/v/v)展開至TLC全長。
3)呈色劑：Diphenylamine-aniline-phosphoricacid reagent。
4)分別將兩種反應物與產物[異麥芽三糖棕櫚酸單酯（isomaltotriose monopalmitate, IMP）及異麥芽三糖棕櫚酸雙酯（isomaltotriose dipalmitate,IDP）]點在薄層層析片上，展開分離，利用呈色劑呈色，計算R f
值。
請參第三圖，為在有機介質中以酵素法催化合成異麥芽三糖棕櫚酸酯的薄層層析結果。其薄層層析之反應結果：(A)異麥芽三糖；(B)棕櫚酸乙烯酯；(C)、(D)0.5mg金屬蛋白酶(Thermolysin)、10 mM異麥芽三糖及10 mM棕櫚酸乙烯酯溶於1ml二甲基亞碸(DMSO)溶劑中在溫度45℃條件下反應24小時。IMP是指異麥芽三糖棕櫚酸單酯；IDP是指異麥芽三糖棕櫚酸雙酯。其中，IMP R f
值=0.86；IDP R f
值=0.96。IMP的質譜(ESI-MS)：calcd forC34H62O17Na (M＋Na) 765.91, found 766；IDP的質譜(ESI-MS)：C50H93O18Na(M＋Na) 1004.38, found 1003.95（參第五圖）。
即本發明利用15 ml具螺旋蓋之玻璃瓶在45 ℃，240 rpm的條件下測試五種來源不同的脂肪酶和一種金屬蛋白酶，進行醇解反應24小時後，發現以0.5 mg源於Bacillus
<span class="SpellE">thermoproteolyticus</span> <span class="SpellE">rokko</span>的金屬蛋白酶(Thermolysin)催化10 mM 蔗果三糖(或異麥芽三糖)與10 mM棕櫚酸乙烯酯合成蔗果三糖棕櫚酸酯或異麥芽三糖棕櫚酸酯的效果最好，產率分別為58.6和89.7 %，而其餘五種脂肪酶則不具催化效果（參表1），推測可能蔗果三糖、異麥芽三糖與脂肪酶的活性中心不吻合，導致酵素無法催化反應，故本發明即以金屬蛋白酶(Thermolysin)為醇解主要的生物催化劑。另，藉由薄層層析檢測法與質譜的確認，本發明確實已成功地應用金屬蛋白酶(Thermolysin)分別催化蔗果三糖(或異麥芽三糖)與棕櫚酸乙烯酯經醇解反應，合成出兼具乳化、改善腸內菌叢、降低膽固醇、保濕及抗菌等多功能的蔗果三糖棕櫚酸酯［包括蔗果三糖棕櫚酸單酯（1-kestose monopalmitate, 1-KMP）及蔗果三糖棕櫚酸雙酯（1-kestose dipalmitate, 1-KDP）］或異麥芽三糖棕櫚酸［包括異麥芽三糖棕櫚酸單酯（isomaltotriose monopalmitate, IMP）及異麥芽三糖棕櫚酸雙酯（isomaltotriose dipalmitate,IDP）］。
表 1 由不同來源的酵素所形成的蔗果三糖棕櫚酸酯及異麥芽三糖棕櫚酸酯A
*A
實驗條件: 0.5 mg的金屬蛋白酶粗粉末、10 mM 的蔗果三糖及10 mM的棕櫚酸乙烯酯；該懸浮液在溫度45℃及每分鐘240轉之轉速條件下予以振盪24小時。*實驗條件: 0.5 mg的金屬蛋酶粗粉末、10 mM 的異麥芽三糖及10 mM的棕櫚酸乙烯酯；該懸浮液在溫度45℃及每分鐘240轉之轉速條件下予以振盪24小時。*B
水解活性係由對-硝基酚丁酸酯為物質進行水解所測得。一單位的酵素定義為每分鐘產生1μmol對-硝基酚的酵素量。*C
水解活性係由酪蛋白作為物質進行水解所測得。一單位的酵素定義為每分鐘產生1μmol酪胺酸的酵素量。*D
1-KP係指蔗果三糖棕櫚酸酯。*E
IP係指異麥芽三糖棕櫚酸酯。*每個實驗重複三次以平均值(mean)±平均標準差(SEM) 表示。相同欄位內所示的各平均值(mean)右上方有不同標註，表示各平均值有顯著差異(p< 0.05)。
另，從表2最適反應時間的篩選過程可得知，24小時為合成蔗果三糖棕櫚酸酯和異麥芽三糖棕櫚酸酯的最佳條件，產率分別為58.6和89.7 %。因實驗過程中發現寡醣酯的產率在24小時前會隨反應時間的增加而升高，但當醇解反應時間長達48小時果寡糖酯和異麥芽三糖酯的之產率則會分別下降至41.4及62.9 %，推測此醇解過程中寡醣酯可能發生水解所致。
表 2 反應時間對蔗果三糖棕櫚酸酯及異麥芽三糖棕櫚酸酯形成之影響A
*A
在45 ℃將金屬蛋白酶Thermolysin（0.5 mg）加入含有10 mM蔗果三糖和10 mM棕櫚酸乙烯酯之反應混合物（1 mL）在DMSO反應不同時間。*在45 ℃將金屬蛋白酶Thermolysin（0.5 mg）加入含有10 mM異麥芽三糖和10 mM棕櫚酸乙烯酯之反應混合物（1 mL）在DMSO反應不同時間。
由於親水性佳的蔗果三糖和異麥芽三糖不易溶於有機溶劑，故篩選四種不同性質的有機溶劑，如：砒碇（hydrophobicity index, logP
為0.71）、四氫呋喃（logP
為0.49）、氰甲烷（logP
為-0.34）和二甲基亞碸（logP
為-1.3）等進行測試，結果顯示以具有高極性和滲透力強的二甲基亞碸作為反應溶劑時，蔗果三糖棕櫚酸酯和異麥芽三糖棕櫚酸酯的合成效果最好，若改用其他溶劑時則因兩種寡醣在logP
比二甲基亞碸高的砒碇、四氫呋喃和氰甲烷中因溶解度不佳，加上金屬蛋白酶(Thermolysin)在該環境下不具催化功能，故無法生產蔗果三糖棕櫚酸酯和異麥芽三糖棕櫚酸酯（參表3）。推測可能是因為二甲基亞碸能使金屬蛋白酶(Thermolysin)維持理想的活性構形，因而有助蔗果三糖(或異麥芽三糖)、棕櫚酸乙烯酯與酵素的活性中心接觸作用，產率自然提高。
表 3 45 ℃下在各種有機溶劑中金屬蛋白酶催化寡醣及棕櫚酸乙烯酯醇解反應之結果A
*A
0.5mg的金屬蛋白酶(Thermolysin)在溫度45℃之條件下被加入含有10 mM 蔗果三糖及10 mM棕櫚酸乙烯酯的反應混合物中。*0.5mg的金屬蛋白酶(Thermolysin)在溫度45℃之條件下被加入含有10 mM異麥芽三糖及10 mM棕櫚酸乙烯酯的反應混合物中。該反應係在24小時期間於溫度45℃、不同有機溶劑中完成。
以上所舉者僅係本發明之部份實施例，並非用以限制本發明，致依本發明之創意精神及特徵，稍加變化修飾而成者，亦應包括在本專利範圍之內。
綜上所述，本發明實施例確能達到所預期之使用功效，又其所揭露之具體技術手段，不僅未曾見諸於同類產品中，亦未曾公開於申請前，誠已完全符合專利法之規定與要求，爰依法提出發明專利之申請，懇請惠予審查，並賜准專利，則實感德便。
無
第一圖：本發明之寡醣酯之酵素合成方法的流程方塊圖第二圖：蔗果三糖棕櫚酸酯薄層層析結果第三圖：異麥芽三糖棕櫚酸酯薄層層析結果第四圖：蔗果三糖棕櫚酸酯質譜分析結果第五圖：異麥芽三糖棕櫚酸酯質譜分析結果
無
Claims (3)
- 一種寡醣酯之酵素合成方法，至少包括以下流程：a)醇解反應，將蔗果三糖或異麥芽三糖其中之一，以及金屬蛋白酶、棕櫚酸乙烯酯置於二甲基亞碸中進行酵素催化醇解反應(alcoholysis)；其中該金屬蛋白酶是選自Thermolysin ；b)萃取寡醣酯；b-1)於上述反應液中加入蒸餾水；b-2)添加丁醇(butanol)與環己烷(cyclohexane)之混合液，且振盪後靜置；b-3)取有機層水洗，且反覆振盪、離心，取有機層進行濃縮；b-4)加入疏水性的烷類溶劑，並再次振盪、靜置，分離有機層與寡醣酯；b-5)去除有機層，即得蔗果三糖棕櫚酸酯或異麥芽三糖棕櫚酸酯。
- 如申請專利範圍第1項所述之方法，其中，酵素催化醇解反應最適反應時間為24小時。
- 如申請專利範圍第2項所述之方法，其中，丁醇(butanol)與環己烷(cyclohexane)之混合液添加量為25ml，且丁醇：環己烷=3：1(v/v)。
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| Title |
|---|
| Ignacio Pe´rez-Victoria, Regioselectivity in acylation of oligosaccharides catalyzed by the metalloprotease thermolysin, Tetrahedron, 2006 ,Vol.62, pp:2361–2369 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| TW201414842A (zh) | 2014-04-16 |
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