TWI388333B - 具有改良性質之重組表面張力素 - Google Patents
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Description
本發明係針對一種重組表面張力素(surfactant),包含脂質載劑、及天然表面張力素蛋白質SP-C之特定多肽類似物與天然表面張力素蛋白質SP-B之特定多肽類似物之組合。
本發明亦係針對其醫藥組成物及其用於治療或預防呼吸窘迫症候群(RDS)及其它呼吸道病症之用途。
人肺臟係由稱作為肺泡之大量小型氣囊所組成,於肺泡中,氣體係於血液與肺部的空氣空間之間進行交換。於健康個體,此種空氣交換係藉由含蛋白質表面張力素複體的存在來媒介,該含蛋白質表面張力素複體可防止於呼氣結束時肺部癟陷。
肺表面張力素複體主要係由脂質所組成,且含有小量多種蛋白質。此種複體之存在量不足,結果導致肺臟功能異常。此種症候群稱作為呼吸窘迫症候群(RDS),常造成早產嬰兒的問題。
該症候群可使用由動物肺臟所萃取之改性天然表面張力素製劑而有效治療。
市售改性表面張力素製劑例如為衍生自豬肺之Curosurf、萃取自小牛肺灌洗液之Infasurf、及化學改性天然牛肺萃取物Survanta。
此等表面張力素製劑的主要成分為磷脂,諸如1,2-二棕櫚醯基sn-甘油基-3-磷醯膽鹼,俗名二棕櫚醯基-磷脂基膽鹼(DPPC)、磷脂基甘油(PG)、及表面張力素疏水蛋白質B及C(SP-B及SP-C)。
由於得自動物組織之表面張力素製劑的缺點,諸如製造與滅菌過程複雜而可能誘導免疫反應,故已經發展出可模擬改性天然表面張力素組成之合成表面張力素。該等合成表面張力素稱作為重組表面張力素。
但臨床上具有活性之重組表面張力素,由於天然疏水蛋白質太大無法合成,結構複雜,且於純質形式時不安定,而導致發展困難。
為了替代該等天然疏水蛋白質,於先前技術曾經提示部分與其序列相對應之若干合成多肽及其類似物,例如揭示於WO 89/06657、WO 92/22315、WO 98/49191、WO 95/32992、US 6,660,833、EP 413,957、及WO 91/18015。
WO 00/47623係揭示屬於天然蛋白質SP-C類似物之合成多肽,其中:i)於位置5及6之半胱胺酸已經由Ser殘基所置換;ii)SP-C「中區」之Val殘基已經以選自於由Leu、Ile、及新白胺酸(nL)所組成之組群中之其它中性殘基及疏水殘基所取代;iii)於SP-C「中區」所存在之若干中性胺基酸已經以選自於由Lys、Try、Phe、Tyr及鳥胺酸所組成之組群中之龐大殘基或極性殘基所置換。
該等人造多肽之特徵在於其可如天然蛋白質SP-C般之摺疊,因而適當地與表面張力素脂質交互作用,而不會造成自我寡聚合。
WO 00/76535大致上係有關肺表面張力素製劑,該製劑包含SP-B的至少一處改性組合SP-C蛋白質之至少一處改性。
於Waring AJ等人(2006年4月29日-5月2日於舊金山舉行之小兒科學會年度會議中提出之摘要報告),進行實驗來檢驗由SP-C-模擬SP-Cff(其為於位置4及位置5具有苯丙胺酸來替代半胱胺酸之合成34-殘基SP-C)及SP-B-模擬Mini-B所組成之合成表面張力素活性。
但根據可得到之文獻,於動物研究中,使用重組表面張力素治療造成肺氣體容積不良及呼氣結束時肺泡開放性程度不良,需要使用正端呼吸壓(PEEP)才能進行換氣來達成可媲美使用改性天然表面張力素所能達成之活體內活性(Johansson J et al J Appl Physiol 2003,95,2055-2063;Davis AJ et al Am J Respir Crit Care Med 1998;157,553-559)。該可得到之重組表面張力素製劑確實於呼氣結束時,不會於肺泡內形成安定的磷脂膜。
前述所有參考文獻皆未曾述及有關呼氣結束時之肺泡開放性問題及其揭示製劑之效應。
因此,就肺順應性(compliance)而言,仍有尚未能滿足之具改良性質之重組表面張力素的需求。
特別,需要有一種重組表面張力素製劑,其可保證肺泡穩定性,因此於呼氣結束時可維持肺泡的開放性而無需使用PEEP來換氣。
現已發現且本發明之目的係天然SP-C蛋白質之特定類似物,且較佳為WO 00/47623之多肽,可有利地與天然蛋白質SP-B之特定類似物組合,來提供就肺順應性而言,具有改良性質;且特別於呼氣結束時,可有效維持肺泡開放性而無需使用PEEP換氣之一種重組表面張力素製劑。
特別於RDS模型中,其中早產嬰兒使用外源性表面張力素製劑治療而未施加PEEP時,發現該等蛋白質SP-C與SP-B之特定類似物的組合作用於肺臟氣體容積,肺臟氣體量為呼氣結束時的肺泡開放性指標。
本發明係針對一種重組表面張力素,包含脂質載劑、及天然表面張力素蛋白質SP-C之特定多肽類似物與天然表面張力素蛋白質SP-B之特定多肽類似物之組合。
特別,本發明係針對一種重組表面張力素,包含:a)一脂質載劑;b)含至少20個胺基酸殘基至不超過40個胺基酸殘基之一多肽,該多肽具有如下通式(I)表示之序列Fe
Ge
If
Pf
Sg
SPVHLKRXa
BXb
(BXc
)n
GALLn
Ωp
Gp
Lp
(I)其中:X為分別選自於由I、L及nL所組成之組群中之一胺基酸殘基;B為分別選自於由K、R、H、W、F、Y及Orn所組成之組群中之一胺基酸殘基;S為視需要可經透過酯鍵而鍵聯至支鏈之含12-22個碳原子且較佳為16個碳原子之醯基所取代;Ω為選自於由M或於硫原子經氧化之M、I、L及nL所組成之組群中之一胺基酸;a為具有1至8之數值之一整數;b為具有1至19之數值之一整數;c為具有分別選自於3至8之數值之一整數;e、f、g及p為具有0或1之數值之整數;n為具有0至3之數值之一整數;且限制條件為Xa
BXb
(BXc
)n
為至多含22個胺基酸之序列;c)通式(II)所表示之一多肽:Cf
△LCRALIKRIQAΩIPKGGRΩLPQLVCRLVLΦCSf(II)其中:△為分別選自於由W及L所組成之組群中之一胺基酸殘基;Ω為分別選自於由M、I、L及nL所組成之組群中之一胺基酸殘基;Φ為分別選自於由R及T所組成之組群中之一胺基酸殘基,較佳為R;以及f為具有0或1之數值之整數。
本發明也包括該多肽及其經封阻之N-端衍生物及/或C-端衍生物(例如透過乙醯化及醯胺化而封阻)之醫藥上可接受之鹽。
本發明亦係針對其醫藥組成物及其用於治療或預防呼吸窘迫症候群(RDS)及其它呼吸道病症之用途。
本發明進一步係針對通式(II)多肽用於重組之表面張力素之製備,俾改良於呼氣結束時之肺泡開放性。
最後,本發明提供一種預防及/或治療呼吸窘迫症候群(RDS)及其它呼吸道病症之方法,該方法對有需要此種治療之病人投予治療有效量之包含脂質載劑、通式(I)多肽及通式(II)多肽之一種重組表面張力素。
於活體內使用外源性表面張力素製劑治療後,呼吸功能係藉測量兩個參數進行測定:i)潮汐容積,其為肺順應性指標及ii)肺氣體容積,其為呼氣結束時肺泡之空氣膨脹或開放性之指標,因此為呼氣結束時肺泡中形成安定磷脂膜之能力之指標。
於本案中,「重組表面張力素」一詞表示已經添加透過重組技術或合成方法所製造之表面張力素蛋白質之多肽類似物之脂質載劑。
「脂質載劑」一詞表示磷脂與任選的額外脂質成分(例如中性脂質諸如三酸甘油酯類、自由態脂肪酸類及/或膽固醇)之混合物。
「天然表面張力素蛋白質SP-C之多肽類似物」一詞包括具有胺基酸序列之多肽,該胺基酸序列中,比較天然蛋白質,缺失一個或多個胺基酸,或一個或多個胺基酸已經由其它胺基酸所置換,只要該多肽與脂質載劑之混合物中,該多肽顯示肺表面張力素活性即可。
「天然表面張力素蛋白質SP-B之多肽類似物」一詞包括具有胺基酸序列之多肽,該胺基酸序列中,比較天然蛋白質,缺失一個或多個胺基酸,只要該多肽與脂質載劑之混合物中,該多肽顯示肺表面張力素活性即可。
「Mini-B」一詞表示基於天然SP-B蛋白質之N-端殘基8-25及C-端殘基63-78之34-殘基多肽,及結構式首次係揭示於加州奈米系統協會(California NanoSystems Institute)網頁之呈現。其完整序列隨後係揭示於RCSB Protein Data Bank。
於Waring AJ et al J Peptide Res 2005,66,364-374,報告更多有關其結構式及活性之相關資訊。
「變異株」一詞表示Mini-B胜肽之多肽類似物,其具有胺基酸序列中之一個或多個胺基酸已經由其它胺基酸所置換,只要於與脂質載劑混合物中之該胜肽含有Mini-B之活性即可。
胺基酸序列係根據三字母碼來表示,攜帶自由態胺基於左端(胺基酸端)之胺基酸及攜帶自由態羧酸於右端(羧基端)之胺基酸。
「合成」一詞表示兩種多肽之效果係超過於一給定之檢定分析中將其個別之功效加總所預期的效果。
全部於此處識別之胺基酸殘基皆呈天然L-組態,此處識別之序列係根據如下對應表中所顯示之胺基酸殘基之標準縮寫來報告。
[對應表]
本發明係針對一種重組表面張力素,包含脂質載劑、及天然表面張力素蛋白質SP-C之特定多肽類似物與天然表面張力素蛋白質SP-B之特定多肽類似物之組合,包括Mini-B胜肽及其變異株。
於RDS研究模型中,早產新生兒使用外源性表面張力素製劑治療而未施用PEEP,確實發現通式(I)多肽與通式(II)多肽之組合於肺順應性正向作用。
特別,發現兩種多肽之組合可以協力方式作用於肺氣體容積,而肺氣體容積為呼氣結束時之肺泡開放度的指標。
該結果驗證,比較只含蛋白質SP-C類似物或蛋白質SP-B類似物之重組表面張力素,本發明之重組表面張力素於呼氣結束時,可以較佳方式穩定化肺泡中之磷脂膜。
此外,本案所請求之重組表面張力素製劑顯然可改良呼吸功能(如以潮汐容積表示)至投予改性天然表面張力素後所能達成之呼吸功能可相媲美的程度或甚至略佳的程度。
較佳,天然蛋白質SP-C類似物為一種含至少20個胺基酸殘基至不超過40個胺基酸殘基之一多肽,該多肽具有如下通式(I)表示之序列Fe
Ge
If
Pf
Sg
SPVHLKRXa
BXb
(BXc
)n
GALLΩp
Gp
Lp
(I)其中:X為分別選自於由I、L及nL所組成之組群中之一胺基酸殘基;B為分別選自於由K、R、H、W、F、Y及Orn所組成之組群中之一胺基酸殘基;S為視需要可經透過酯鍵而鍵聯至支鏈之含12-22個碳原子且較佳為16個碳原子之醯基所取代;Ω為選自於由M或於硫原子經氧化之M、I、L及nL所組成之組群中之一胺基酸;a為具有1至8之數值之一整數;b為具有1至19之數值之一整數;c為具有分別選自於3至8之數值之一整數;e、f、g及p為具有0或1之數值之整數;n為具有0至3之數值之一整數;及限制條件為Xa
BXb
(BXc
)n
為至多含22個胺基酸之序列,較佳包含10個至22個胺基酸。
較佳,通式(I)多肽包含至少30個胺基酸至不多於35個胺基酸,更佳不超過33個胺基酸。
於特定具體例中,通式(I)之多肽包含30或33或35個胺基酸。
較佳,SP-C蛋白質之多肽類似物係以通式(Ia)表示,其中e及n為0,及g為1If
Pf
SSPVHLKRXa
BXb
GALLΩp
Gp
Lp
(Ia)其中X、B及Ω係如前文定義;a為由1至8,較佳由1至3;更佳為1;b為由1至19,較佳由5至15;及更佳為14;f及p為0或1。
更佳SP-C蛋白質之多肽類似物係由通式(Ib)表示,其中f為1 IPSSPVHLKRXa
BXb
GALLΩp
Gp
Lp
(Ib)其中:X、B、Ω、a及b係如前文定義;p為0或1。
又更佳SP-C蛋白質之多肽類似物係由通式(Ic)表示IPSSPVHLKRLKLLLLLLLLILLLILGALLΩp
Gp
Lp
(Ic)其中:Ω係如前文定義;p為0或1。
式(Ic)多肽之實例報告如下:IPSSPVHLKRLKLLLLLLLLILLLILGALLMGL (Id)(SEQ ID:1) IPSSPVHLKRLKLLLLLLLLILLLILGALLIGL (Ie)(SEQ ID:2) IPSSPVHLKRLKLLLLLLLLILLLILGALLLGL (If)(SEQ ID:3) IPSSPVHLKRLKLLLLLLLLILLLILGALLnLGL (Ig)(SEQ ID:4) IPSSPVHLKRLKLLLLLLLLILLLILGALL (Ih)(SEQ ID:5)
多肽(Id)於先前技術中也稱作為SP-C33。
更佳,SP-C類似物為選自於由具有式(Ie)、(If)、(Ig)及(Ih)之多肽所組成之組群中之多肽。
於本發明之較佳具體例中,式(I)之多肽為後文稱作為SP-C33(Leu)31
之多肽(If)。
較佳,天然蛋白質SP-B類似物係由與天然SP-B蛋白質之N-端殘基8-25相對應之部分及與天然SP-B蛋白質之63-78C-端部分(稱作為Mini-B胜肽)之二部分或其變異株所組成。
更佳,天然蛋白質SP-B之類似物為如下通式(II)所表示之多肽:Cf
△LCRALIKRIQAΩIPKGGRΩLPQLVCRLVLΦCSf
(II)其中:△為分別選自於由W及L所組成之組群中之一胺基酸殘基;Ω為分別選自於由M、I、L及nL所組成之組群中之一胺基酸殘基;Φ為分別選自於由R及T所組成之組群中之一胺基酸殘基,較佳為R;以及f為具有0或1之數值之整數。
於本發明之一特定具體例中,SP-B類似物為式(IIa)所表示之多肽CWLCRALIKRIQAMIPKGGRMLPQLVCRLVLRCS (IIa)(SEQ ID:6)
於本發明之另一個具體例中,SP-B類似物係選自於具有下式之該等多肽CLLCRALIKRIQAMIPKGGRMLPQLVCRLVLRCS (IIb)(SEQ ID:7) CWLCRALIKRIQALIPKGGRLLPQLVCRLVLRCS (IIc)(SEQ ID:8) CLLCRALIKRIQALIPKGGRLLPQLVCRLVLRCS (IId)(SEQ ID:9)
於一較佳具體例中,多肽(IIa)、(IIb)、(IIc)及(IId)可呈雙硫鍵聯分子形式,其中該分子內雙硫鍵聯係介於位置1與位置33之兩個Cys殘基間,及/或介於位置4與位置27之兩個Cys殘基間。
雙硫鍵聯多肽(IIa)於技藝界稱作為氧化Mini-B(ox Mini-B)。
多肽(IIc)於後文稱作為Mini-B(Lleu),而其雙硫鍵結形式稱作為ox Mini-B(Leu)。
通式(I)及通式(II)之多肽可根據熟諳技藝人士眾所周知之合成方法或重組技術製備。
多種有用技術之絕佳摘要可參考J.M.Steward and J.D.Young,“Solid Phase Peptide Synthesis”,W.H.Freeman Co.,San Francisco,1969及J.Meienhofer,Hormonal Proteins and Peptides”,Vol.2,p.46,Academic Press(New York),1983有關固相胜肽合成,及參考E.Schroder and K.Kubke,“The Peptides”,Vol.1,Academic Press(New York),1965有關典型溶液合成法。本發明之多肽也可使用初步由Merrifield,in J.Am.Chem.Soc.85:2149-2154(1963)所述之固相合成技術製備。其它多肽合成技術可參考例如M.Bodanszky et al.,Peptide Synthesis,John Wiley & Sons,2d Ed.,(1976)及其它熟諳技藝人士已知之參考工作。
供此等合成所使用之適當保護基可參考前文文獻及參考J.F.W.McOmie,Protective Groups in Organic Chemistry,Plenum Press,New York,NY(1973)。
例如通式(I)多肽可根據WO 00/47623所揭示之方法製備;而通式(II)之多肽可根據Waring AJ et al J Peptide Res 2005,66,364-374所報告之方法製備。
本發明也包括通式(I)及(II)之多肽及其例如透過乙醯化及醯胺化之經封阻之N-端衍生物及/或C-端衍生物之醫藥上可接受之鹽。
醫藥上可接受之鹽例如包括鹽酸鹽、乙酸鹽及三氟乙酸鹽。
本發明之重組表面張力素可經由混合通式(I)及(II)之多肽與脂質之溶液或懸浮液,以及隨後經由乾燥混合物而製備,否則可藉凍乾或噴乾而製備。
較佳通式(I)多肽及通式(II)多肽係以固定量及定量比例呈固定組合物存在於本發明之重組表面張力素。
通式(I)及(II)之多肽相對於該重組表面張力素之比例可改變。較佳基於表面張力素重量(w/w),各多肽之存在量包含0.5%至10%,且較佳包含1%至5%,及最佳包含1%至3%。
於一較佳具體例中,重組表面張力素包含1%至3%重量比之多肽(If),1%至3%重量比之多肽(IIa),且較佳係呈氧化形式。
於另一較佳具體例中,重組表面張力素包含1%至3%重量比之多肽(If),1%至3%重量比之多肽(IIc),且較佳係呈氧化形式。
較佳,脂質載劑包含含於天然肺表面張力素製劑中之磷脂,例如磷脂基膽鹼類(PC)諸如二棕櫚醯基磷脂基膽鹼(DPPC)及棕櫚醯基油醯基磷脂基膽鹼(POPC)、及磷脂基甘油類(PG)諸如棕櫚醯基油醯基磷脂基甘油(POPG)及二棕櫚醯基磷脂基甘油(DPPG)。
其它較佳使用之磷脂為磷脂基肌糖醇(PI)、磷脂基乙醇胺類(PE)、磷脂基絲胺酸類、及神經鞘磷脂(SM)。
於一特定具體例中,脂質載劑包含額外成分,例如中性脂質諸如三酸甘油酯類、自由態脂肪酸類及/或膽固醇。
較佳根據本發明之重組表面張力素包含90%至99%重量比脂質載劑,較佳為92%至98%及更佳為94%至96%,及1%至10%重量比之兩種胜肽之和,較佳為2%至8%及更佳為4%至6%。
於本發明之具體例中之一者中,重組表面張力素包含96%重量比脂質載劑、2%重量比通式(I)多肽及2%重量比通式(II)多肽。
於一特定具體例中,該脂質載劑只包含磷脂類,更佳係由DPPC與棕櫚醯基油醯基磷脂之混合物所組成,該棕櫚醯基油醯基磷脂係選自於POPG或其與POPC於由95:5至50:50且較佳由80:20至60:40之重量比之混合物。
DPPC與POPG間之重量比範圍較佳係由75:25至65:35,更佳為68:31。於DPPC:POPG:POPC混合物之情況下,磷脂較佳係以60:20:20或68:15:16之重量比使用。
於另一個具體例中,脂質載劑係由DPPC、DPPG與膽固醇所組成。
於本發明之較佳具體例中,重組表面張力素包含1%至5%重量比之通式(Ia)多肽中之一者,1%至5%重量比之通式(II)多肽中之一者,及DPPC與POPG呈68:31之重量比之混合物。
本發明之重組表面張力素之投予係以熟諳技藝人士已知之方式進行,較佳係藉氣管內裝置進行(浸劑或球劑)或藉噴霧進行。
本發明亦係關於包含本發明之重組表面張力素之醫藥組成物。該組成物較佳係呈溶液劑、分散液劑、懸浮液劑、或乾粉劑劑型投予。較佳該等組成物包含該重組之表面張力素溶解或懸浮於適當溶劑或再懸浮介質。
較佳該醫藥組成物係呈於單次使用之玻璃小瓶內於經過緩衝之生理食鹽水溶液之懸浮液供應。較佳重組表面張力素濃度(以磷脂含量表示)係於約每毫升約2毫克至約160毫克表面張力素之範圍,較佳為10至100毫克/毫升及更佳為20至80毫克/毫升。
該等組成物進一步包含電解質,諸如鈣鹽、鎂鹽及/或鈉鹽且較佳為氯化鈣。
根據本發明之醫藥組成物適合用於早產兒之呼吸窘迫症候群(RDS)之預防及/或治療,或用於與表面張力素缺陷或功能異常相關的其它病症包括成人RDS(ARDS)、胎糞吸入症候群(MAS)及支氣管肺發育異常(BPD)之預防及/或治療。
根據本發明之組成物也可用於預防及/或治療其它呼吸病症諸如肺炎、支氣管炎、COPD(慢性阻塞性肺疾)、氣喘、及囊性纖維化以及用於治療漿液性中耳炎(黏膠耳)。
下列實施例舉例說明本發明之進一步細節。
[實施例1-多肽SP-C33(Leu)31
及SP-C33之合成與純化]多肽SP-C33(Leu)31
係藉基於Fmoc化學及連續TFA-裂解之標準SPPS(固相胜肽合成)法製備。
共獲得186.0克SP-C33(Leu)31
粗產物。
經由使用H2
O/n-BuOH/AcOEt/AcOH 4:1:4:1作為雙相溶劑系統,將該物料接受逆流分布(CCD)而純化多肽。
此純化獲得78.9克SP-C33(Leu)31
,具有純度>60%。
最終純化係藉製備性HPLC進行,使用PLRP-S作為靜相於50×300毫米鋼管柱內,以75分鐘時間施加25% B至100% B之線性梯度進行。動相包含緩衝液A=0.1% TFA於ACN/H2
O 1:4及緩衝液B=0.1% TFA於IPA。
純化後之多肽溶解於90% AcOH,通過填充以Dowex離子交換樹脂(乙酸鹽形式)之管柱,於凍乾後,獲得5.8克(=5.4%)終產物,呈乙酸鹽。
多肽SP-C33係以類似方式製備。
縮寫
ACN 乙腈AcOEt 乙酸乙酯AcOH 乙酸Boc 第三丁氧羰基n-BuOH 正丁醇Fmoc 9-芴基甲氧羰基IPA 異丙醇TFA 三氟乙酸
[實施例2-多肽ox Mini-B(Leu)及ox-Mini-B之合成及純化]多肽ox Mini-B(Leu)係藉基於Fmoc化學及連續TFA-裂解之標準SPPS(固相胜肽合成)法製備。
多肽粗產物係使用TFA系統藉製備性HPLC純化,及藉凍乾分離。
經純化後胜肽進行空氣氧化,獲得Cys1
與Cys33
間有雙硫鍵之單環序列。單環胜肽係使用TFA系統藉製備性HPLC純化及藉凍乾分離。
使用碘以形成Cys4
與Cys27
間之第二雙硫橋。
於氧化後,產物係使用TFA系統藉製備性HPLC純化及藉凍乾分離。分離1.12克(=1.7%)終化合物,純度>89%。多肽ox Mini-B係以類似方式製備。
[實施例3-基於ox Mini-B及SP-C33以重組表面張力素進行活體實驗]表面張力素製劑係於兔妊娠齡27日藉子宮切除術所得之早產新生兔進行檢定分析。進行實驗時並未施加正端呼氣壓(PEEP)。
至於SP-C類似物,使用稱作為SP-C33之多肽,係根據實施例1製備。
至於蛋白質SP-B類似物,使用根據實施例2所製備之氧化Mini-B(ox Mini-B)。
動物於出生時使用重組表面張力素製劑處理,該製劑含有磷脂混合物DPPC:POPG呈68:31 w/w之比作為脂質載劑。磷脂混合2%或4% w/w SPC-33、2% w/w ox Mini-B或2% w/w SPC-33加上2% w/w ox Mini-B。
動物接受相等劑量之Curosurf用作為陽性對照及未經處理之同窩動物作為陰性對照。
全部表面張力素製劑皆係以80毫克/毫升濃度及2.5毫升/千克標準劑量投予。
早產新生兔並行使用尖峰吸氣壓之標準化序列換氣。為了開啟肺臟,壓力係設定於35厘米水柱1分鐘。於此循環後,壓力降至25厘米水柱15分鐘,進一步繼續降至20厘米水柱及15厘米水柱。最後,壓力再度升高至25厘米水柱5分鐘,隨後肺臟又使用氮氣換氣5分鐘,然後切除肺臟作氣體容積測定。
測定肺氣體容積及潮汐容積二者,以毫升/千克表示,結果以中間值分別報告於圖3及圖4。
由圖3可知使用含有2% w/w ox Mini-B之重組表面張力素製劑處理之動物比較接受2% w/w SP-C33之動物具有較低肺氣體容積(約2毫升/千克相對於約4毫升/千克)。
添加2% w/w ox Mini-B至SP-C33表面張力素,比較單獨使用胜肽造成肺氣體容積之顯著較大增量(8毫升/千克相對於約6毫升/千克)。
如圖4所示,對潮汐容積也觀察得類似的趨勢,投予組合胜肽後,比較投予Curosurf觀察得可相媲美之改良或甚至顯著較佳的改良。
也發現SP-C33含量由2%增加至4% w/w,不會增加肺氣體容積,指示於呼氣末端於肺泡中之磷脂膜穩定效應係由於添加ox Mini-B之故。
該結果驗證本發明之重組表面張力素比較只含有蛋白質SP-C類似物或蛋白質SP-B類似物之重組表面張力素,於呼氣結束時可以較佳方式穩定化肺泡內之磷脂膜。
此外,本案所請重組表面張力素製劑比較投予改性天然表面張力素後所達成的效果,以潮汐容積表示,而改良呼吸功能至可相媲美的程度或甚至略佳的程度。
圖1顯示人類蛋白質SP-C之序列。Cys殘基於天然SP-C中係經棕櫚醯化。
圖2顯示人類蛋白質SP-B之序列。
圖3顯示就肺氣體容積(毫升/千克)之結果。
圖4顯示就潮汐容積(毫升/千克)呈時間/壓力之函數之結果。
<110> 吉斯藥品公司/Chiesi Farmaceutici spa
<120> 具有改良性質之重組表面張力素
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- 一種重組表面張力素,包含:(a)一脂質載劑;(b)以通式(Ib)表示之至少一多肽:IPSSPVHLKRXa BXb GALLΩp Gp Lp (Ib)其中:各X為獨立選自於由I、L及nL所組成之組群中之胺基酸殘基;B為選自於由K、W、F、Y及Orn所組成之組群中之胺基酸殘基;各S為經透過酯鍵而鍵聯至支鏈之含12-22個碳原子之醯基所取代;Ω為選自於由M、於硫原子經氧化之M、I、L及nL所組成之組群中之胺基酸殘基;a為具有1至8之數值之整數;b為具有1至19之數值之整數;各p係獨立地為0或1,或至少一其醫藥上可接受之鹽,或至少一其經封阻之N-端及/或C-端衍生物;及(c)以通式(II)表示之至少一多肽:Cf △LCRALIKRIQAΩIPKGGRΩLPQLVCRLVLΦCSf (II)其中:△為選自於由W及L所組成之組群中之胺基酸殘基;各Ω為獨立選自於由M、I、L及nL所組成之組群中之 胺基酸殘基;Φ為選自於由R及T所組成之組群中之胺基酸殘基;以及f為具有0或1之數值之整數,或至少一其醫藥上可接受之鹽,或至少一其經封阻之N-端及/或C-端衍生物。
- 如申請專利範圍第1項之重組表面張力素,其中,Φ為R。
- 如申請專利範圍第1項之重組表面張力素,其中,該以通式(I)表示之至少一多肽,其醫藥上可接受之鹽,或其經封阻之N-端及/或C-端衍生物,及該以通式(II)表示之至少一多肽,其醫藥上可接受之鹽,或其經封阻之N-端及/或C-端衍生物係各以基於該表面張力素總重量的0.5至10重量%之含量存在。
- 如申請專利範圍第1項之重組表面張力素,其包含以通式(II)表示之至少一多肽係呈雙硫鍵聯分子形式’分子內雙硫鍵聯係於位置1及位置33之兩個Cys殘基間及/或於位置4及位置27之兩個Cys殘基間,或至少一其醫藥上可接受之鹽,或至少一其經封阻之N-端及/或C-端衍生物。
- 如申請專利範圍第1項之重組表面張力素,其包含以通式(IIa)表示之至少一多肽:CWLCRALIKRIQAMIPKGGRMLPQLVCRLVLRCS (IIa)或至少一其醫藥上可接受之鹽,或至少一其經封阻之 N-端及/或C-端衍生物。
- 如申請專利範圍第1項之重組表面張力素,其包含以通式(Ic)表示之至少一多肽:IPSSPVHLKRLKLLLLLLLLILLLILGALLΩp Gp Lp (Ic)其中:Ω為選自於由M、於硫原子經氧化之M、I、L及nL所組成之組群中之胺基酸殘基;及各p係獨立地為0或1,或至少一其醫藥上可接受之鹽,或至少一其經封阻之N-端及/或C-端衍生物。
- 如申請專利範圍第6項之重組表面張力素,其包含選自於由下列所組成之組群之至少一多肽:IPSSPVHLKRLKLLLLLLLLILLLILGALLMGL (Id) IPSSPVHLKRLKLLLLLLLLILLLILGALLIGL (Ie) IPSSPVHLKRLKLLLLLLLLILLLILGALLLGL (If) IPSSPVHLKRLKLLLLLLLLILLLILGALLnLGL (Ig) IPSSPVHLKRLKLLLLLLLLILLLILGALL (Ih)其醫藥上可接受之鹽,及其經封阻之N-端及/或C-端衍生物。
- 如申請專利範圍第1項之重組表面張力素,其包含:以通式(If)表示之多肽:IPSSPVHLKRLKLLLLLLLLILLLILGALLLGL (If)其醫藥上可接受之鹽,或其經封阻之N-端及/或C-端衍生物;及以通式(IIa)表示之多肽: CWLCRALIKRIQAMIPKGGRMLPQLVCRLVLRCS (IIa)其醫藥上可接受之鹽,或其經封阻之N-端及/或C-端衍生物。
- 如申請專利範圍第1項之重組表面張力素,其包含:以通式(If)表示之多肽:IPSSPVHLKRLKLLLLLLLLILLLILGALLLGL (If)其醫藥上可接受之鹽,或其經封阻之N-端及/或C-端衍生物;及以通式(IIc)表示之多肽:CWLCRALIKRIQALIPKGGRLLPQLVCRLVLRCS (IIc)其醫藥上可接受之鹽,或其經封阻之N-端及/或C-端衍生物。
- 如申請專利範圍第1項之重組表面張力素,其中,該脂質載劑包含磷脂混合物。
- 如申請專利範圍第10項之重組表面張力素,其中,該磷脂混合物包含二棕櫚醯基磷脂基膽鹼(DPPC)及選自於棕櫚醯基油醯基磷脂基甘油(POPG)或其與棕櫚醯基油醯基磷脂基膽鹼(POPC)呈95:5至50:50範圍之重量比之混合物之棕櫚醯基油醯基磷脂。
- 如申請專利範圍第11項之重組表面張力素,其中,該磷脂混合物包含呈68:31重量比之DPPC及POPG。
- 一種醫藥組成物,包含申請專利範圍第1項之重組表面張力素。
- 如申請專利範圍第13項之醫藥組成物,其係呈溶 液、分散液、懸浮液或乾粉形式。
- 如申請專利範圍第14項之醫藥組成物,其係呈水性懸浮液形式。
- 如申請專利範圍第15項之醫藥組成物,其包含濃度為2至160毫克/毫升之重組表面張力素。
- 如申請專利範圍第16項之醫藥組成物,其中該重組表面張力素之濃度係介於20至80毫克/毫升。
- 一種申請專利範圍第1項之重組表面張力素之用途,其係用於製備治療早產嬰兒呼吸窘迫症候群(RDS)之藥劑。
- 一種申請專利範圍第1項之重組表面張力素之用途,其係用於製備治療與表面張力素缺陷或表面張力素功能異常相關聯疾病之藥劑,其中該疾病係選自成人RDS(ARDS)、胎糞吸入症候群(MAS)及支氣管與肺的發育異常(BPD)所組成之群。
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