TWI280882B - Composition for the treatment of glycogen storage disease type-II - Google Patents

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1280882 A7 _ B7 __ 五、發明說明（/ ) 關連申請案 本申請案主張美國臨時申請案第60/219,237號之利益 ，申請日爲2000年7月18日，其完整的教示納入此處作 爲參考文獻。 發明背景 糖原儲積病II型（GSD-II)(也已知爲龐陪（Pompe )疾病或酸性麥芽糖酶缺乏症）是一種缺乏酸性α-糖苷酶 (GAA ; —種糖原降解溶小體酵素）所引起的致命遺傳性 肌肉疾病（Hkschhom，R. “糖原儲積病Π型：缺乏酸性α-糖苷酶（酸性麥芽糖酶）”，參見ScrWer，C.R.等人（編輯 )，“遺傳性疾病之代謝及分子基礎”，第7版， McGraw-Hill，紐約，1995，第 2443-2464 頁）。這個缺乏 會導致溶小體糖原在幾乎所有的身體組織中累積，使得心 肌及骨骼肌受到最嚴重的影響。所有形式的GSD-II之結合 的發生率估計是1 : 40,000，並且這個疾病會影響到所有的 族群，而沒有種族的偏好（Martiniuk，F.等人，乂腐/· 乂 尬以 6^以· 79 : 69-72 ( 1998 ) ; Ausems，M.G.E.M·等人， Eur· J· Hum· Genet. Ί ·· ΊΥ}>-Ί\6 {\999、、。 臨床上，GSD-II包括一系列的表現型，其具有不同的 發作年齢、所涉及的器官和臨床嚴重性，一般而言是與 GAA活性的殘留量有關。在其最嚴重的表現中（嬰兒型的 GSD-II或龐陪疾病，其中存在有少於1%的正常GAA活性 )，除了大量的糖原在心肌及骨骼肌中累積之外，嬰兒還 罹患肥大型心肌症、全身性肌肉虛弱以及壓力過低症（回 3 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

-t-r°J. •線· 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐〉 1280882 A7 _____B7 _ 五、發明說明（7 ) 顧請參見Hirschhorn之上述文獻）。這個疾病會快速進展 ，通常在1歲之前因發生心臟衰竭而死亡。青少年（1-10 %的正常GAA活性）及成年人發作（10-40%的正常GAA 活性）之疾病形式，其特徵在於缺少嚴重的心臟牽連、較 晚的發作年齡以及較緩慢的進展，但對於受影響的個體而 言，最終的呼吸肌肉及四肢肌肉的牽連，卻導致明顯的發 病率及死亡率。 藥物治療策略、飮食的操作以及骨髓移植，已經使用 作爲治療GSD-II的方法，但並沒有明顯的成就（Hug, G.等 尺，Birth Defects 〇rg· Ser. 9 ·. i\96O ； Slonim, Α·Ε·等人，1肌?/叹7 33 : 34 ( 1983 ) ; Watson，J.G·等人， A/：/· /·尬以314 : 385 ( 1986))。早期在酵素上取代的 嘗試也沒有成功（Hug，G.及 Schubert, W.K·，/. C7//7. ΖσκαΛ 46 : 1073 ( 1967 ) ; de Barsy，Τ·等人，万//Ά 说/<?⑽ Orig. Art Ser. 9 ： 84-190 ( 1973 ) ; Williams，LC.及 Murray，Α·Κ· “以α-糖苷酶低密度的脂蛋白複合體在龐陪疾病中之酵素 取代”，參見Desnick，RJ.(編輯）“在遺傳性疾病中之酵 素療法：2” ，紐約，Alan R. Liss 1980 ;第 415-423 頁）。 因此，對於GSD-II的有效治療，仍有其需求。 發明槪述 本發明是有關於在個體中，治療糖原儲積病II型（嬰 兒、青少年或成年人發作型）之方法，該方法是在一固定 的期間（例如，每月、每個月兩次、每週、每週兩次、每 日），將一治療有效量的酸性α -糖苷酶（例如，每公斤體 4 ._________ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂： 線· A7 1280882 五、發明說明（今） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 重少於大約15毫克的酵素，較佳是每公斤體重大約M0 毫克的酵素’更佳是每公斤體重大約10毫克的酵素或每公 斤體重大約5毫克的酵素），給藥至該個體。酸性八-糖苷 酶是人類的酸性糖苷酶，較佳是重組的人類酸性α-糖 芽酶，更佳是人類酸性α-糖穿酶的前驅物形式’以及還要 更佳是在中國倉鼠卵巢細胞中所製造的人類酸性α -糖穿酶 之前驅物形式。酸性糖苷酶是週期性地給藥（例如，每 月、每個月兩次、每週、每週兩次、每日）。在較佳具體 實施例中，酸性糖苹酿是以靜脈內、肌肉內、腦脊髓膜 內或室內的途徑而給藥。 本發明之方法提供第一種有效治療患有糖原儲積病II 型的個體之方法。 \/圖示之簡單說明 第1A-1C圖是在三個接受酵素取代治療之患有嬰兒型 龐陪疾病的患者中（患者1，第1Α圖；患者2 ’第1Β圖 ;患者3，第1C圖），對於由亞伯達嬰兒運動等級（ Alberta Infant Motor Scale ; AIMS)所評估之運動發育（封 閉的菱形），以及對抗重組的人類酸性糖苷酶（rhGAA )的抗體效價d空心的菱形），一系列說明縱向數據（對 於年齡的前16個月）的圖示。箭號代表當酵素治療開始之 時。在正常的患者中之AIMS分數是以點線對年齡而作圖 (第 5%、10%、25%、50%、75%及 95%分段値，從下 到上）。 第2A-2F圖是在三個接受酵素取代治療之患有嬰兒型 5 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1280882 A7 _____B7______ 五、發明說明（^) 龐陪疾病的患者中（患者1，第2A及2D圖；患者2，第 2B及2E圖；患者3，第2C及2F圖），一系列說明左心 室體積的一^維超音波心臟動測重（弟2A-2C圖）以及質 量（第2D-2F圖）的圖示。第0週代表在酵素治療開始的 時候之測量。空心的菱形代表末端心臟舒張的體積測量； 封閉的菱形代表末端心臟收縮的體積測量。 發明詳述 本發明是有關於在個體中，治療糖原儲積病II型（ GSD-II)之方法，該方法是藉由將酵素-酸性α-糖苷酶（ GAA)，給藥至該個體而完成；以及本發明也有關於將該 酵素（GAA)用於製造一藥劑，以治療糖原儲積病II型。 如此處所說明的，申請人已成功地藉由在定期的基礎上， 將GAA給藥至嬰兒，而治療患有GSD-II的嬰兒；該嬰兒 顯示具有心臟狀態、肺部功能及神經發育的改善，並且顯 示在組織中的糖原水平之降低。 由於這些發現的結果，因此，現在可以第一次治療 GSD-II，包括嬰兒、青少年或成年人發作之GSD-II。雖然 此處說明的結果是討論具有最嚴重形式的GSD-IIC嬰兒型 的GSD-II)之個體，但可期待的是，這些方法也將同等地 有效於罹患青少年或成年人發作的GSD-II之個體，以及事 實上，可能更有效地，對於具有較高的殘留GAA活性水平 之青少年或成年人發作的GSD-II之個體（分別是1-10%或 10-40%)，因此，很可能對於給藥的GAA是更具有免疫 耐受性的（例如，它們一般對於內源性的GAA是陽性的交 6 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) · 線· • . Cf k Ψ / yf -€>^9^ 五、發明說明（f) 叉反應之免疫反應物質（CRIM)，使得它們的免疫系統無 法察覺GAA以作爲一“外來的”蛋白質，以及它們也沒有 發展出抗GAA的抗體）。在這些個體中之增強的功效，可 在患者3中觀察到，其爲CRIM陽性的患者且沒有發展出 抗GAA的抗體，以及患者3顯示正常的發育里程碑之進展 ，相較於在CRIM陰性的患者1及2中所觀察到的變異進 程（其沒有發展出抗GAA的抗體）。 此處所使用的名詞“治療”是指一種或多種與疾病有 關的症狀之改善；一種或多種疾病的症狀之發作的預防或 延遲；及/或一種或多種疾病的症狀之嚴重性或頻率的減輕 。例如，治療可以是指心臟狀態的改善（例如，末端心臟 舒張體積及/或采端心臟收縮體積之增加；或通常在GSD-II 中發現的進行性心肌症之降低'改善或預防），或肺部功 能的改善（例如，在基礎容量上增加哭叫的肺活量，及/或 在哭叫期間的氧氣去飽和作用之正常化）；神經發育及/或 運動技能的改善（例如，增加AIMS分數）；降低在罹患 此疾病的個體之組織中的糖原水平；或這些效果的任何組 合。在一較佳具體實施例中，治療包括心臟狀態的改善， 特別是與GSD-II有關的心肌症之降低或預防。此處所使用 的名詞“改善” ’、“增加”或“降低”，代表與基礎測量 有關之數値，例如，在此處所說明的治療開始之前，在相 同的個體中之測量；或是在缺少此處所說明的治療的情況 下’在對照組個體（或多個對照組個體）中之測量。對照 組個體是如同要治療的個體般，患有相同形式的GSD-II ( 7 1280882 A7 C請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ·- -—線. 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1280882 . A7 ______B7__ 五、發明說明（έ ) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁} 嬰兒、青少年或成年人發作型）之個體，其大約與要治療 的個體具有相同的年齡（爲了確保，將治療組個體及對照 組個體中之疾病的狀態進行比較）。 要治療的個體是具有GSD-II (也就是，嬰兒型GSD-II 、青少年型GSD-II或成年人發作型的GSD-II)之個體（胎 兒、小孩、青少年或成年人）。個體可具有殘留的GAA活 性或是沒有可測量的活性。例如，患有GSD-II的個體可具 有少於大約1%正常GAA活性之GAA活性（嬰兒型GSD-II);具有大約M〇%正常GAA活性之GAA活性（青少 年GSD-II);或具有大約10-40%正常GAA活性之GAA活 性（成年人GSD-II)。對於內源性GAA，個體可以是 CRIM陽性或CRIM陰性的患者。在一較佳具體實施例中， 個體對於內源性GAA是CRIM陽性的患者。在另一較佳具 體實施例中，假體是最近已診斷出該疾病之個體。早期的 治療（診斷候儘早開始治療）是重要的，以將疾病的作用 降至最低，並使治療的利益增至最大。 在本發明的方法中，人類酸性α-糖苷酶（GAA)是給 藥至個體之中。當給藥時，GAA是以將組織（例如，罹患 該疾病的組織（例如，心臟、肌肉））作爲目標的形式而 存在。在一較佳具體實施例中，人類GAA是以其前驅物的 形式而給藥，而此前驅物包含可使GAA有效地由受體調節 所攝取之主體結構（motif)。可選擇地’也可給藥成熟形 式的人類GAA，其已修飾成包含可使GAA有效攝取之主 體結構。在一特別較佳具體實施例中，GAA是重組的人類 8 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1280882 五、發明說明（"]) GAA之前驅物形式。 GAA可從各種的來源中獲得。在一特別較佳具體實施 例中，使用已在中國倉鼠卵巢（CHO)細胞中製造之重組 的人類酸性α-糖苷酶（rhGAA)(例如，參見，Fuller，M· 等人，价厂 /·及⑽· 234 : 903-909 ( 1995 ) ； Van Hove, J丄·Κ·等人，W/· 介/· /7似 93 : 65-70 ( 1996) ;這些參考資料的完整教示均納入此處作爲參考文獻）。 在中國倉鼠卵巢細胞中的GAA之製造，顯示產生具有糖基 化作用的產物，其提供在所要的組織（心臟及肌肉）中之 明顯且有效的GAA攝取；這個假設是，中國倉鼠卵巢細胞 中的糖基化作甩，是不同於在轉殖老鼠及兔子乳汁中所製 造的GAA之糖基化作用（例如，參見，Bijvoet，A.G.A.等 人，价777·尬/,仏此，· 7 : 1815-1824 ( 1998 ); Bijvoet， A.G.A·等人，价π· 6^忧 8 : 2145-2153 ( 1999 ))。 GAA具有大約是在1.0-3.5微莫耳（//mol) /分鐘/毫 克蛋白質的範圍內之比酵素活性，較佳是在大約2-3.5微莫 耳/分鐘/毫克蛋白質的範圍內。在一較佳具體實施例中， GAA具有至少大約1.0微莫耳/分鐘/毫克蛋白質的比酵素活 性；更佳地是至少大約2.0微莫耳/分鐘/毫克蛋白質的比酵 素活性；還要更佳地是至少大約2.5微莫耳/分鐘/毫克蛋白 質的比酵素活性；以及還要更佳地是至少大約2.75微莫耳/ 分鐘/毫克蛋白質的比酵素活性。 GAA可單獨地給藥，或是如此處所說明的，在包括 GAA之組成物或藥劑中（例如，在用以治療該疾病的藥劑 9 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

訂- •線 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1280882 A7 _—_____B7____ 五、發明說明（5") 之製造中）而給藥，組成物可以一生理上可接受的載體或 賦形劑而賦形，以製備一藥學組成物。載體及組成物可以 是無菌的。此配方應適合於給藥的模式。 適合之藥搴上可接受的載體包括，但並不限於，水、 鹽類溶液（例如，氯化鈉）、鹽溶液、緩衝的鹽溶液、醇 類、甘油、乙醇、阿拉伯膠、植物油、苄基醇、聚乙二醇 、動物明膠、碳水化合物（例如，乳糖、直鏈澱粉或澱粉 )、糖類（例如，甘露糖醇、蔗糖或其他）、葡萄糖、硬 脂酸鎂、滑石、矽酸、黏性石蠟、香味油、脂肪酸酯、羥 基甲基纖維素、聚乙烯基吡咯烷酮等，以及其組合物。如 果需要的話，藥學製劑可與輔助作用劑混合，例如，潤滑 劑、防腐劑、穩定劑、溼潤劑、乳化劑、影響滲透壓之鹽 類、緩衝液、色劑、香味劑及/或芳香物質及其類似物，其 不會有害地與活性化合物反應。在一較佳具體實施例中， 使用水溶性的載體，其適合於靜脈內的給藥。 如果需要的話，組成物或藥劑也可包含少量的溼潤劑 或乳化劑，或是pH緩衝作用劑。組成物可以是液體溶液 、懸浮液、乳化液、錠劑、九劑、膠囊、持續釋放的配方 或粉末。組成物也可以傳統的黏結劑及載體（例如，三酸 甘油酯）而賦形成爲栓塞劑。口服配方可包括標準的載體 ，例如，醫藥級的甘露糖醇、乳糖、澱粉、硬脂酸鎂、聚 乙烯基吡咯烷酮、糖精鈉、纖維素、碳酸鎂等等。 組成物或藥劑可根據一般的方法，而賦形成爲適合於 給藥至人類的藥學組成物。例如，在一較佳具體實施例中 10 ^紙張尺度適用中國ϋ家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐) '---^------------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 一-5J·- -線· 1280882 A7 ____B7________ 五、發明說明（1 ) ，用於靜脈給藥的藥學組成物，通常是在無菌等張水溶性 緩衝液中的溶液。當需要時，此組成物也可包括一溶解作 用劑及局部麻醉劑，以在注射部位緩和疼痛。一般而言， 這些成份是個別地供給，或是以單位劑量形式而混合在一 起，例如，成爲乾燥的凍乾粉末或不含水的濃縮液，裝在 嚴格密封的容器中，例如，安瓿或或小袋，其標示著活性 作用劑的數量。當組成物藉由注入而給藥時，其可以一包 含無菌醫藥級的水、鹽溶液或葡萄糖/水之注入瓶而配藥。 當組成物藉由注射而給藥時，可提供無菌注射用水或鹽溶 液的安瓿，使得這些成份可在給藥之前先行混合。 GAA可賦形成爲中性或鹽的形式。藥學上可接受的鹽 類，包括與游離胺基所形成之鹽類，例如，衍生自氫氯酸 、磷酸、醋酸、草酸、酒石酸等的鹽類；以及與游離羧基 所形成之鹽類，例如，衍生自鈉、鉀、銨、鈣、氫氧化鐵 、異丙基胺、三乙基胺、2-乙基胺、乙醇、組織胺酸、普 魯卡因（procaine)等的鹽類。 GAA (或包含GAA的組成物或藥劑）是藉由適當的途 徑而給藥。在一具體實施例中，GAA是靜脈內給藥。在其 他具體實施例中，GAA是直接給藥至標的組織，例如，心 臟或肌肉（例如，肌肉內給藥）；或給藥至神經系統（例 如，直接注射至腦部；室內給藥；腦脊髓膜內給藥）。如 果需要的話，可同時使用超過一種的途徑。 GAA (或包含GAA的組成物或藥劑）可單獨地給藥， 或結合其他作用劑而給藥，例如，抗組織胺（例如，苯海 11 I紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公爱) ' " (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂： 線· 1280882 A7 _________B7____ 五、發明說明（Γσ) 拉明（diphenhydramine))，或可中和抗GAA抗體之免疫 抑制劑或其他的免疫治療作用劑。名詞“結合”代表作用 劑是在大約相同於GAA (或包含GAA的組成物）給藥的 時間而給藥。例如，作用劑可混合至包含GAA的組成物中 ，藉此同時與GAA而給藥；可選擇地，作用劑也可不經混 合而同時給藥（例如，藉由在靜脈內管上之作用劑的“揹 負式”運送，其中GAA也同時給藥；或反之亦然）。在另 一實施例中，作用劑可單獨地給藥（例如，不混合），但 在一短暫的時間內（例如，24小時內）給藥GAA。在一較 佳具體實施例中，如果個體對於內源性GAA是CRIM陰性 的話，則GAA (或包含GAA的組成物）是與設計用於降 低抗GAA抗體的量或預防抗GAA抗體的產生之免疫抑制 劑或免疫治療療程結合而給藥。例如，一種類似於在血友 病患者中所使用的方法（Nilsson，I.M.等人， 318 : 947-50 ( 1988 ))，可用於降低抗GAA的抗體 。這樣的療程也可用於對內源性GAA是CRIM陽性，但具 有抗GAA抗體或處於抗GAA抗體風險之個體。在一特別 較佳具體實施例中，免疫抑制劑或免疫治療療程是在第一 次給藥GAA之前即開始，以將產生抗GAA抗體的可能性 降至最低。 GAA (或包含GAA的組成物或藥劑）是以一治療有效 的量而給藥（也就是，當固定間隔給藥時，劑量的量足以 治療該疾病，例如，改善與該疾病有關之症狀；預防或延 遲疾病之發作；及/或減輕疾病的症狀之嚴重性或頻率；如 12 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐〉 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

1280882 A7 ------ B7_____ 五、發明說明（丨ί ) 上所述）。在治療疾病中之治療有效的量，將取決於疾病 作用的特性及程度，並且可由標準的臨床技術而決定。此 外，也可視需要地使用活體外或活體內的分析，以協助鑑 定最適當的劑量範圍。要使用的準確劑量也將取決於給藥 的途徑、疾病的嚴重性，並且應由醫師的判斷及每位患者 的狀況而決定。·有效的劑量可從衍生自活體外或動物模式 測試系統所得之劑量-反應曲線而推得。在較佳具體實施例 中，GAA是每月、每個月兩次、每週、每週兩次或每曰地 給藥。對於單一個體的給藥間隔不須是固定的間隔，但可 隨著時間而改變，根據個體的需求而定。例如，當身體不 適或在壓力的時候，如果抗GAA抗體出現或增加的話，或 是疾病的症狀惡化的話，則可減少劑量之間的間隔。 在一較佳具體實施例中，10毫克酵素/公斤體重的治療 有效量是每週地給藥。在另一較佳具體實施例中，5毫克 酵素/公斤體重的治療有效量是每週給藥兩次。 本發明也包括一藥學組成物，其包括此處所說明之人 類酸性α-糖苷酶，裝在一容器中（例如，小瓶、瓶子、靜 脈內給藥的袋子、針筒等等），其具有包含指示組成物給 藥之標籤（例如，本發明所說明之方法），以治療糖原儲 積病II型。 本發明將藉由以下的實施例而進一步詳細說明。 實施例：使用重組的人類酸性α -糖苷酶之第Ι/ΙΙ期試驗 材料及方法 患者：包含的標準是罹患嬰兒型GSD-II，事實上不具 13 本紙張尺度適用中國國家標準（Cns)A4規格（210 X 297公釐) 一 一 " (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ·. -線- 1280882 A7 _____B7___ 五、發明說明（丨1 ). (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 有GAA活性（在表皮纖維母細胞及/或肌肉切片檢體中， 小於1%的正常活性），以及年齡小於1歲之嬰兒。排除 的標準包括在基礎及/或醫療條件下，可能降低存活率之嚴 重的心臟呼吸衰竭。由於在診斷後，該疾病的有限生命期 望値，因此不使用安慰劑對照組。歷史的對照數據顯示， 事實上所有的患者均在1歲之前死亡（表1)。 表1 :嬰兒型糖原儲積病II型之歷史對照數據 -· 發作（月） 死亡（月） 疾病過程之長度（月） 杜克大學醫學中心（n= 30) * 平均値±標準差 5·1±1·8 8.6±2.4 3·5±2·3 範圍 2.4-10.3 3.3-12.4 0.0-9.0 Slonim 等人（n= 10) ** 平均値土標準差 2·5±1·0 7·2±2·8 4·7±2·4 範圔 1.0-4.0 4.0-12.0 2.0-9.0 •線- *數據得自杜克（Duke)大學龐陪疾病登記簿。 **數據得自 Slonim 等人，/·外ώ·价· 137 ·· 283-285 ( 2000) 0 在這個硏究中，記錄三位罹患嬰兒型GSD-II之嬰兒， 在表皮纖維母細胞及/或肌肉切片檢體中，其酸性α-糖苦 酶顯示降低至小於1%的正常活性。在蛋白質的程度上， 藉由免疫墨漬分析之偵測，患者1及2都沒有可偵測到的 GAA蛋白質，而患者3則具有降低的GAA蛋白質之程度 。在治療開始之前的基礎臨床數據是摘要於表2中。 14 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1280882 A7 B7 五、發明說明（|^) 表2 :三位嬰兒型龐陪疾病患者之基礎臨床數據 患者臟 賴 m riiGAA m mmn (AIMS 働 中之GAAffiffi (%65ΣΕ常値） CRIM* 灘 目前 患者1 /男性 4個月 腑止 正常邊緣，左大支氣 管由觀臟大的心 麵壓縮，氧氣去飽 和. 0.84% 雖 29個月 患者2 /男性 非裔 3個月 中鹏己砸 0.57% 25個月 患者3 /男性 2.5個月 正常 <<^5_鑣 0.69% 酶 23個月 * CRIM=交叉反應的免疫反應物質。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 患者1在兩個月大時，在鼠蹊部疝氣的選擇性手術補 救期間產生心臟停止。當他四個月大時，後續的評估證實 嚴重的壓力過低症，其運動發育年齡估計是相等於三週大 的嬰兒。他也具有完全的心肌症以及嚴重的心臟增大，而 壓縮左大支氣管，導致左肺的部份肺陷落、餵食困難以及 無法生長。患者2及3是出生前診斷出患有龐陪疾病；重 要的是，其每一個都有之前的兄弟姊妹死於通常可歸因於 嬰兒型的GSD-II之症狀。兩位患者都具有運動遲緩的證據 :此外，患者2也具有餵食困難、無法生長以及嚴重的心 肌症。 基本設計：這個硏究是設計成在三位患有嬰兒型龐陪 疾病的患者中，每週給藥兩次rhGAA之第I/II期’、開放標 籤、單一劑量、安全及功效硏究。這個硏究是由學會審核 委員會所認可，並且獲得父母親之書面同意。 這個硏究包~含一開始的篩選期、13週的治療期以及後 續的治療期。在篩選期中，評估患者一開始的臨床狀態； 15 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1280882 .. A7 _____B7___ 五、發明說明（丨>) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 此外，也測定在骨骼肌切片檢體的樣品中之GAA及糖原程 度。在治療期中，患者每週兩次接受靜脈內注入；rhGAA (5 毫克/公斤）。密切地監測患者是否對酵素注入有任何不利 的反應，以及監測rhGAA的給藥對嬰兒型GSD-II的臨床 進展之影響。一般的臨床評估包括例行的身體檢查，並補 充全尿、血液學及臨床化學之分析（電解質、葡萄糖、肌 酸酐、BUN、二氧化碳、蛋白質、白蛋白、ALT、AST、膽 紅素、鹼性磷酸酶、CK及同功異構酶、尿酸）。詳盡的神 經學及運動功能評估，包括體力肌肉強度測試、丹佛（ Denver)發育測試以及AIMS (亞伯達嬰兒運動等級；參見 Piper, M.C·及Darrah，L，發育中的嬰兒之運動評估，WB Sanders公司，費城，1994)。使用二維、M-模式以及都卜 勒（Doppler)超音波心臟動態測量，以評估左心室質量、 壁厚度以及心臟收縮及舒張的功能。此外，在整個硏究的 過程中，也監測各種的肺部功能（哭叫肺活量、趨勢脈搏-氧計量及末端潮二氧化碳測量、以及反向吸力操作）。在 13週治療期的結論中，測定由前處理的切片檢體之反側大 腿骨的四頭肌所得到的肌肉切片檢體之GAA活性、糖原程 度以及組織病理學。肌肉切片檢體是在rhGAA注入後的三 天取樣。 酵素來源：純化自分泌rhGAA的中國倉鼠卵巢細胞之 細胞培養液的 rhGAA (Van Hove, J.L.K.等人，/Voc·

Acad. Sci. USA 93 ： 65-70 ( 1996))，是由 Synpac 公司提 供（北卡羅來納；99 Alexander Drive，Suite NW20，硏究三 16 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 χ 297公釐） 1280882 A7 _____Β7__ 五、發明說明（$) 角公園，北卡羅來納27709 )，爲優良作業規範（〇ΜΡ) 級、無菌及無色的溶液。rhGAA主要是純化成爲no仟道 耳吞的前驅物蛋白質，具有2.77-3.02微莫耳/分鐘/毫克蛋 白質的比酵素活性。 抗rhGAA抗體之酵素連結免疫吸附分析（Elisa): 對於抗rhGAA抗體之酵素連結免疫吸附分析，是由鳳凰國 際生命科學公司（Saint-Laurent，魁北克）所進行之標準的 三明治分析。簡言之，將微量盤以2·0微克/毫升之rhGAA 覆蓋隔夜，然後以牛的免疫球蛋白（IgG)阻隔。將患者的 血淸（稀釋到1 : 100，然後以1 : 2的比例連續稀釋）， 與微量盤上的rhGAA反應。連結到抗體的量，是以璋菜過 氧化酶結合山羊抗人類二次抗體以及四甲基聯苯胺（TMB )受質，藉由測量450 nm的吸光値而偵測。將陽性的樣品 定義爲具有較陰性篩選値更高的吸光値。這被定義爲正常 人類血淸陰性對照組之450 nm吸光値的兩倍。效價是定義 爲仍具有高於陰性篩選値的450 nm吸光値之血淸稀釋液。 GAA活性、糖原含量以及西方墨漬分析：GAA活性是 如先前所說明的，藉由在pH 4.3時的4-甲基-繳形基-a -D-糖苷切割之測量値而評估（Reuser, A.J.J.等人，如l /.i瓜 6^?從30 : 132-143 ( 1978 ))。作爲內部的標準品，酸性 /3 -半乳糖苷酶的活性是以4-甲基-繳形基衍生物作爲受質 而相似地分析（Wenger，D.A.及Williams，C. “篩選溶小體 失調”，參見Homines，F.A.編輯之“診斷人類生化遺傳學 之技術：實驗室手冊” Wiley-Liss，紐約，1991，第587- 17 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂· •線· 1280882 A7 _____B7____ 五、發明說明（ίί) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 617頁）。糖原含量是藉由以黑麹菌（/印澱 粉葡萄糖苷酶處理組織萃取物以及測量所釋放的葡萄糖而 測定（Van Hove, J.L.K.等人，iVac·他/7· 乂以忒 乂 iASM 93 :65-70 ( 1996))。西方墨漬分析是以在兔子中對抗純化 的胎盤GAA所引起的抗體而進行（Van Hove，LL.K.等人， 上述文獻）。 組織學：將一肌肉樣本以特拉加康斯樹膠固定在墊塊 上，並且快速冷凍於以液態氮冷卻之異戊烷中。得到5微 米的切片，並以蘇木素及曙紅、改質的Gomoii三色原、 ATT酶（在pH 4.35及9.4)、菸鹼醯胺脫氫酶四唑鎗藍還 原酶以及磷酸酯化酶染色。將第二樣本原位夾住，並置於 2.5%戊二醛中。處理組織但不以醋酸雙氧鈾整體染色，以 避免糖原的損失。將半薄切片（0.5微米）以甲苯胺藍染色 ，並將薄切片以醋酸雙氧鈾及檸檬酸鉛染色，並固定在銅 網上，以用於電子顯微鏡檢查。 結果： 患者對治療之反應：三位患有嬰兒型龐陪疾病的患者 ，接受每週兩次靜脈內注入rhGAA達21-25個月。在酵素 治療期間並無嚴重的過敏反應發生。然而，其中兩位患者 出現三次事件的皮膚出疹，伴隨輕微的發熱及增加的過敏 性（患者1兩次事件，患者2單一次事件）。這些症狀在 靜脈內給藥苯海拉明後迅速獲得解決。在第二次事件的皮 膚出疹後，患者1預先以口服苯海拉明給藥，然後再進行 後續的rhGAA注入，而無另外的事件。患者2也預先以口 18 本紙張尺度適用中關家標準（CNS)A4規格（210 X 297公爱)~ "" 1280882 A7 B7 五、發明說明（〖I) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 服苯海拉明給藥，然後再進行後續的rhGAA注入，而無另 外的事件。整個治療期間內’在所有治療的患者中，多種 血液學參數、肝功能、腎功能以及尿液分析，都是在正常 的範圍內。 早在酵素治療開始後的三週，即偵測患者1及2中之 免疫球蛋白IgG類的抗rhGAA抗體（第1A-1C圖）。在患 者1中，抗rhGAA抗體的效價在第16週之前增加至1 : 1，600 (第1A圖），以及在患者2中，抗rhGAA抗體的效 價在第1M9週之間增加至1 : 6,400-1 : 12,800 (第1B圖 )。隨著抗rhGAA抗體的增加，我們注意到臨床的改善（ 在治療期間早期發現，參見以下說明）不再前進。在患者 3中，並沒有偵測到不適的效果，也沒有偵測到抗rhGAA 抗體（第1C圖）。 心臟狀態：在酵素治療開始之前，患者1及2具有與 增加的左心室（LV)質量有關之嚴重的肥大型心肌症、同 中心的心室壁增厚以及心室腔大小的減少（第2B圖，患 者2的心室腔在末端心臟收縮時幾乎是閉塞的）。所有的 這些特徵都典型地在患有嬰兒型龐陪疾病之未治療的患者 中觀察到。此外，也注意到患者2具有增加的左心室排斥 部份（縮短部份，84%)，反映出肌力過強的縮短。然而 ’沒有一位患者具有任何心室流出管道梗塞的證據。在 rhGAA治療的前三個月期間，在患者中所評估之縱向超音 波心臟動態測量的數據，是顯示在第2A-2C圖。在患者1 及2的治療期間內，左心室末端心臟舒張及末端心臟收縮 19 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1280882 A7 ---------- B7_ 五、發明說明（丨^) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 的體積（二維測量）是漸漸地增加，並且在三個月的治療 結束Μ多達幾乎2-3倍，相較於在前處理期期間所測量的 體積（分別參見第2Α圖及第2Β圖）。相同的增加也在 Μ-模式分析中被注意到（數據未顯示）。二維的左心室質 （胃2D-2F圖）一開始是隨著左心室體積的增加而 增加’但隨後在治療期間就穩定地降至較前處理左心室質 量小的數値（降低至基礎前處理水平的60-70%)。一開始 質量的增加大部分可能是由於左心室體積的增加，但左心 室壁的厚度卻未改變所致。當在病毒性肺炎時，左心室質 量進一步增加以及心臟功能被連累，雖然患者1需要增強 的每B酵素注入達1〇天，但整體在心臟參數的改善是維持 到最近的後續評估。除此之外，在兩位患者中的心室功能 已經正常’並且在最近的後續追蹤仍保持正常。因此，明 顯地避免了正常在未治療的嬰兒型龐陪疾病中注意到的進 行性心臟發病率。 患者3具有64克//3 2的左心室質量（正常上限値65) ’另一方面在治療開始時進行正常基礎心臟評估，並且持 繪到治療後7個月而變得正常（現在具有33克/02的左心 室質量）。 肺部功能：在治療的前兩個月中，肺部功能的改善是 明顯的：在基礎容量上增加哭叫的肺活量（在患者1及2 中，分別改善超過28%及70%)，以及在哭叫期間的氧氣 去飽和作用之正常化（在最大哭叫期間，患者1具有70% 的氧氣飽和，以及患者2具有81%的氧氣飽和）。在患者 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1280882 A7 _ - _B7__ 五、發明說明（[1 y 1中，減少的呼吸肌肉強度也是明顯的··在治療之前具有_ 45公分水柱之反向吸力操作（NIFM)，經唾治療，NIFM 增加至-55公分-水柱。然而，在兩位患者的肺部功能所注 意到之一開始的改善，在後2-3個月間上升至高峰期，然 後下降，伴隨著增加的抗rhGAA抗體。在病毒性肺炎突如 其來的呼吸不足之事件後，兩位患者後來都已變成通氣器 依賴性的患者。 患者3在治療開始時具有正常的肺部功能，並且持續 到最近的後續追蹤仍顯示正常的肺部功能測試。 神經發育及運動評估：亞伯達嬰兒運動等級（AIMS) 是用於評估這些嬰兒的運動發育。對所有的三位患者之 AIMS分數，一開始均低於第5%分段値的年齡（第1A-1C 圖）。患者1仍保持低於第5%分段値，但在第13週治療 時開始下降前的範圍內顯示增加（第1A圖）。患者2在 第5週之前上升到第25%分段値，在第7週後儘管增加運 動技能但仍降回低於第5%分段値，然後在第13週及第17 週之間，顯示快速的下降以及運動技能的損失（第1B圖 )。臨床下降的開始，也在一次伴隨著增加抗rhGAA抗體 (第1A圖及第1B圖）。 在患者1中，同時進行的神經學及丹佛發育評估顯示 ，當高峰期及後續的復原期變得明顯時，正常的人際關係 、語言以及細微的運動發育區域具有前進但改善的總體運 動遲緩，直到第1〇週爲止。重要的是，直到第1〇週爲止 ，總體運動技能已顯示明顯的進步，但從未達到正常的水 21 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21〇 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

訂·· •線- 1280882 B7 五、發明說明（以） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 準。患者2在總體運動領域中顯示輕微的發育遲緩，直到 第14-16週復廪時才在細微運動、人際關係以及語言中達 到正常的發育技能。現在，兩位患者都具有正常的年齡之 人際關係發育，但在所有的其他區域中仍是發育遲緩。 患者3顯示穩定的AIMS分數之增加，在第11週治療 之前增加到高於第10%分段値，在第20週之前增加到高 於第25%分段値（第1C圖），以及在最近的後續追蹤時 增加到高於第90%分段値。在年齡9個月大時，他維持獨 立的坐著、爬行移動並要靠手扶持維持站立。明顯地，在 12個月大時，他已可以獨立走路，並且在14個月大時， 已可以不使用手而在蹲及站之間移動。在所有的區域中， 他目前也具有正常的年齡之神經及丹佛發育評估。 肌肉GAA活性以及糖原含量：在rhGAA治療開始前 的基礎第1週時，取樣肌肉切片檢體；但患者1是在 rhGAA治療開始前的2個月診斷時，就取樣肌肉切片檢體 。在rhGAA治療的4個月之後，在酵素注入後的三天（低 谷期），從反側大腿骨的四頭肌得到肌肉切片檢體。經過 rhGAA治療，在患者1及2中，GAA的活性是較基礎前治 療的水平增加2-3倍，以及在患者3中增加18倍（表3) 22 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1280882 A7 R7 五、發明說明（yl) 表3 :在以rhGAA治療的嬰兒型龐陪疾病患者中之肌肉酸 性α -糖苷酶活性以及糖原含量 GAA活性 糖原含量 (奈莫耳/小時/¾克蛋白質） (%溼雷） 患者1 ‘ 治療前 0.41 5.90% 治療後 0.95 7.50% 患者2 · 治療前 0.67 5.68% 治療後 1.97 4:43¾ 患者3 治療前 0.1 5.13% 治療後 1.84 1,41% 對照組 23·92±8·63 0·94±0·55% (正常上限値 1.5%) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) GAA活性的絕對値是在正常肌肉中所觀察到之GAA 活性的接近8%。在患者1及2中，並沒有可估計的肌肉 糖原含量之變化，但在患者3，糠原含量則降至正常範圍 內。 · 組織學：在冷凍切片中，所有患者的前治療切片檢體 均顯示明顯的肌肉纖維空泡化。半薄切片的評估證明了纖 維因糖原而膨脹，形成糖原湖。在一些纖維中，可分辨出 殘餘膜的微弱輪廓。電子顯微鏡檢查證實糖原存在於膨脹 的溶小體中，並未發現於細胞質中。從患者3所得之切片 檢體中發現，有較其他兩位患者具有更多的糖原殘留在溶 小體內（數據未顯示）。 在糖原累積·方面，患者1及2在治療後的4個月之切 片檢體，是相似於前治療的切片檢體。然而，患者3在治 療後的切片檢體，在大部分的肌肉纖維中，卻具有明顯降 23 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） . ;線· 1280882 A7 ______B7___ 五、發明說明C>>) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 低之可看見的糖原，以及實質上正常的組織學。電子顯微 鏡檢查顯示，許多殘餘膨脹的溶小體缺少糖原。一些糖原 湖及富含糖原的溶小體則繼續存在。 西方墨漬分析：爲了硏究爲何抗rhGAA抗體會在患者 1及2中發展，但卻不會在患者3中發展，我們在衍生自 每位患者的纖維母細胞中，進行專一性偵測表現的（但非 功能性的）GAA蛋白質之西方墨漬分析。沒有GAA蛋白 質在患者1及2的纖維母細胞中被偵測到，但卻在患者3 中發現可易於偵測到的GAA蛋白質之前驅物形式（110仟 道耳呑）。這些類型是先前在其他患有嬰兒型GSD-II的患 者中所觀察到的（Van der Ploeg，A.T.等人，▲?· /·及讀· 仏/7说44 : 787-793 ( 1989 ))。如預期之正常的纖維母細 胞，則具有明顯的95仟道耳呑及76仟道耳呑之GAA蛋白 質。 進一*步的硏究： 另外有三位患者已參與另外的硏究。這三位均爲 CRIM陽性的患者。在治療3-6週之後（10毫克/公斤體重 ，每週靜脈注入rhGAA)，均已觀察到心臟功能、肌肉強 度以及運動發育之改善。 所有此處引的公開文獻之教示，其完整內容均納入此 處作爲參考文獻。 雖然本發明已以其所附之較佳具體實施例而特定地顯 示及說明，但在此技藝中之人士應可了解的是，在不脫離 本發明如所附之申請專利範圍定義的精神及範疇之外’可 24 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21〇 x 297公釐） 25 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1280882 A7 _ B7_ 五、發明說明（71?) 對本發明進行各種形式及內容的更動。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐）

Claims (1)

1. 1280882 六、申請專利範圍 1. 一種治療糖原儲積病II型之醫藥組成物，其包括一 治療有效量的人類酸性α -糖苷酶，其中該人類酸性α -糖 苷酶是在中、國倉鼠卵巢(CHO)細胞培養物中製造。 2. —種治療與糖原儲積病II型有關的心肌症之醫藥組 成物，其包括一治療有效量的人類酸性α-糖苷酶，其中該 人類酸性α -糖苷酶是在中國倉鼠卵巢(CHO)細胞培養物中 製造。 3. 如申請專利範圍第1項或第2項之醫藥組成物，其 中該糖原儲積病II型是嬰兒型糖原儲積病II型、青少年型 糖原儲積病II型或成年人發作型糖原儲積病II型。 4. 如申請專利範圍第1項或第2項之醫藥組成物，其 中該治療有效量的人類酸性α -糖苷酶是每公斤個體體重少 於大約15毫克的酸性α -糖苷酶。 5. 如申請專利範圍第1項或第2項之醫藥組成物，其 中該人類酸性α -糖苷酶是重組的人類酸性α -糖苷酶及/或 重組的人類酸性α -糖苷酶之前驅物。 6. 如申請專利範圍第1項或第2項之醫藥組成物，其 係每月、每個月兩次、每週、每週兩次或每日給藥。 7. 如申請專利範圍第1項或第2項之醫藥組成物，其 係藉由選擇自靜脈內、肌肉內、腦脊髓膜內以及室內所組 成的族群中之途徑而給藥。 8. 如申請專利範圍第1項或第2項之醫藥組成物，其 進一步包括一免疫抑制劑。 9. 一種治療糖原儲積病II型之藥學組成物，其包括在 1 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格(210 X 297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 、II: 1280882 A8 B8 C8 D8 申請專利範圍 一容器中之人類酸性α-糖苷酶，並具有包含指示該組成物 的給藥之標籤，其中該人類酸性α-糖苷酶是在中國倉鼠卵 巢(CHO)細胞培養物中製造。 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格(210 X 297公釐〉