ES2599401T3

ES2599401T3 - Tratamiento de glucogenosis de tipo II

Info

Publication number: ES2599401T3
Application number: ES14167882.1T
Authority: ES
Inventors: Yuan-Tsong Chen
Original assignee: Duke University
Current assignee: Duke University
Priority date: 2000-07-18
Filing date: 2001-07-10
Publication date: 2017-02-01
Anticipated expiration: 2021-07-10
Also published as: US20100254966A1; US8900552B2; EP3108895B1; ATE355075T1; JP6163216B2; EP2767291A3; US20080175833A1; LT3108895T; DK2767291T3; DK3449934T3; EP2767291A2; US7056712B2; PT3449934T; JP2016056206A; TWI280882B; EP3108895A1; SI2767291T1; DE60126947D1; SI3449934T1; BR0113006A

Abstract

α-Glucosidasa ácida (GAA) humana recombinante producida en un cultivo celular de ovario de hámster chino para uso en un método de tratamiento de la glucogenosis de tipo II en un ser humano, o en un método de tratamiento de la cardiomiopatía asociada con la glucogenosis de tipo II en un ser humano, donde el ser humano es CRIM-negativo para la α-glucosidasa ácida endógena y en donde dicha α-glucosidasa ácida humana recombinante se administra conjuntamente con un régimen inmunoterapéutico o inmunosupresor.

Description

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DESCRIPCION

Tratamiento de glucogenosis de tipo II Antecedentes de la invencion

La glucogenosis de tipo II (GSD-II) (tambien conocida como enfermedad de Pompe o deficiencia de maltasa acida) es un trastorno muscular genetico letal causado por una deficiencia de la a-glucosidasa acida (GAA), una enzima lisosomal de degradacion del glucogeno (Hirschhorn, R., Glycogen storage disease type II: acid a-glucosidase (acid maltase) deficiency" en Scriver, C. R. et al., (eds) The Metabolic and Molecular Basis of Inherited disease, 1 Ed., McGraw-Hill, Nueva York, 1995, pag. 2443-2464). La deficiencia tiene como resultado la acumulacion de glucogeno lisosomal en casi todos los tejidos del cuerpo, siendo los mas seriamente afectados el musculo cardfaco y el esqueletico. Se ha estimado que la incidencia combinada de todas las formas de GSD-II es de 1:40.000 y la enfermedad afecta a todos los grupos sin que haya una predileccion etnica (Martiniuk, F. et al., Amer. J. Med. Genet. 79:69-72 (1998); Ausems, M.G.E.M et al., Eur. J. Hum. Genet. 7: 713-716 (1999)).

Clmicamente, GSD-II abarca una serie de fenotipos que difieren segun la edad de inicio, los organos afectados y la gravedad clinica, generalmente en correspondencia con la cantidad residual de actividad de GAA. En su presentacion mas grave (GSD-II infantil, o enfermedad de Pompe, en el que existe menos de un 1% de la actividad de GAA normal), los ninos estan afectados por una miocardiopatfa hipertrofica, debilidad muscular generalizada e hipotoma secundaria a la acumulacion masiva de glucogeno en los musculos cardfaco y esqueletico (para revision, vease Hirschhorn, anterior). La enfermedad progresa rapidamente, produciendose el fallecimiento por insuficiencia cardfaca normalmente al ano de edad. Las formas de la enfermedad en la juventud (1-10% de la actividad normal de la GAA) y en de inicio en la edad adulta (10-40% de la actividad normal de la GAA) se caracterizan por ausencia de afectacion cardfaca grave, edad de inicio mas tardfa y progresion mas lenta, pero la eventual afectacion de los musculos respiratorios o de las extremidades tiene como resultado una morbilidad y mortalidad significativas para los individuos afectados.

Se han empleado estrategias de tratamientos con farmacos, manipulaciones de la dieta y trasplantes de medula osea como medio para el tratamiento de la GSD-II, sin un exito significativo (Hug, G. et al., Birth Defects Org. Ser. 9: 160-183 (1967); Slonim, A. E., et al., Neurology 33:34 (1983); Watson, J. G. et al., N. Engl. J. Med. 314:385 (1986)). Los primeros intentos para sustituir la enzima tampoco tuvieron exito (Hug., G. y Schubert, W. K., J. Clin. Invest. 46:1073 (1967); de Barsy, T. et al., Birth Defects Orig. Art. Ser 9:184-190 (1973); Williams, J. C y Murray A.K., Enzyme replacement in Pompe disease with an alpha glucosidase low-density lipoprotein complex, Desnick, R.J. (ed), Enzyme Therapy in Genetic Diseases: 2, Nueva York, Alan R., Liss 1980; pag. 415-423)). En Pharming Press Release de fecha 15 de Marzo del 2000 se describen los resultados de un estudio clmico en Fase II con GAA humana recombinante producida en la leche de conejos transgenicos para uso en el tratamiento de pacientes infantiles de la enfermedad de Pompo.

Un comunicado de prensa de Genzyme de fecha 19 de abril del ano 2000 menciona tres estudios clmicos en los que pacientes que sufnan de glucogenosis II (GSD-II) recibieron GAA. Los estudios clmicos estaban en curso o habfan finalizado. Los resultados clmicos no fueron revelados. Brady, R.O. et al, Pediatrics 100 (6):e11 (1997) dan a conocer una terapia de sustitucion enzimatica para la enfermedad de Gaucher usando glucocerebrosidasa obtenida a partir de placenta humana en combinacion con un regimen inmunosupresor. Sigue habiendo una necesidad de un tratamiento eficaz para la GSD-II.

Compendio de la invencion

La invencion se refiere a las realizaciones como se definen en las reivindicaciones.

La invencion se refiere a una a-glucosidasa acida (GAA) humana recombinante producida en un cultivo celular de ovario de hamster chino para uso en un metodo de tratamiento de la glucogenosis de tipo II en un ser humano, o un metodo de tratamiento de la cardiomiopatfa asociada con la glucogenosis de tipo II en un ser humano, donde el ser humano es CRIM (material immunoreactivo de reaccion cruzada)-negativo para la a-glucosidasa acida endogena y donde dicha a-glucosidasa acida endogena se administra en combinacion con un regimen inmunosupresor o inmunoterapeutico.

La invencion se refiere al uso de a-glucosidasa acida (GAA) humana recombinante producida en un cultivo celular de ovario de hamster chino para la fabricacion de un medicamento para el tratamiento de la glucogenosis de tipo II en un ser humano, o un metodo de tratamiento de la cardiomiopatfa asociada con la glucogenosis de tipo II en un ser humano, donde el ser humano es CRIM (material immunoreactivo de reaccion cruzada)-negativo para la a- glucosidasa acida endogena y donde dicha a-glucosidasa acida endogena se administra en combinacion con un regimen inmunosupresor o inmunoterapeutico.

La invencion se refiere a una a-glucosidasa acida (GAA) humana recombinante producida en un cultivo celular de ovario de hamster chino para uso en un metodo de tratamiento de la glucogenosis de tipo II en un ser humano, o un metodo de tratamiento de la cardiomiopatfa asociada con la glucogenosis de tipo II en un ser humano, donde dicho metodo de tratamiento comprende determinar si el ser humano que va a ser tratado es CRIM-positivo o CRIM-

negativo para la GAA endogena, donde al ser humano CRIM-negativo se le administra dicha a-glucosidasa acida (GAA) humana recombinante con un regimen inmunosupresor o inmunoterapeutico.

La invencion se refiere al uso de una a-glucosidasa acida (GAA) humana recombinante producida en un cultivo celular de ovario de hamster chino para uso en un metodo de tratamiento de la glucogenosis de tipo II en un ser 5 humano, o al tratamiento de la cardiomiopatfa asociada con la glucogenosis de tipo II en un ser humano, donde dicho metodo de tratamiento comprende determinar si el ser humano que va a ser tratado es CRIM-positivo o CRIM- negativo para la GAA endogena, donde al ser humano CRIM-negativo se le administra la a-glucosidasa acida (GAA) humana recombinante con un regimen inmunosupresor o inmunoterapeutico.

La presente invencion se refiere a metodos para el tratamiento de la glucogenosis de tipo II (infantil, juvenil o de 10 inicio en la edad adulta) en un individuo, mediante la administracion al individuo de una cantidad terapeuticamente eficaz de a-glucosidasa acida (p. ej., menos de aproximadamente 15 mg de enzima por kilogramo de peso corporal, preferentemente aproximadamente 1-10 mg de enzima por kilogramo de peso corporal, mas preferentemente aproximadamente 10 mg de enzima por kilogramo de peso corporal o aproximadamente 5 mg de enzima por kilogramo de peso corporal) a intervalos regulares (p. ej., mensual, bimensual, semanal, dos veces a la semana, 15 diariamente). La a-glucosidasa acida es a-glucosidasa acida humana producida en celulas de ovario de hamster

chino, preferentemente a-glucosidasa acida humana recombinante, mas preferentemente, la forma precursora de a- glucosidasa acida humana, e incluso mas preferentemente la forma precursora de a-glucosidasa acida humana producida en celulas de ovario de hamster chino. La a-glucosidasa acida se administra periodicamente (p. ej., mensualmente, bimensualmente, semanalmente, dos veces a la semana, diariamente). En las formas de realizacion 20 preferidas, la a-glucosidasa acida se administra por via intravenosa; intramuscular; intratecal; o intraventricular.

La invencion proporciona el primer medio eficaz para tratar a un individuo con glucogenosis de tipo II.

Breve descripcion de las figuras

Las Fig. 1A-1C son una serie de representaciones graficas que representan datos longitudinales (para los primeros 16 meses de edad) sobre el desarrollo motor evaluado mediante la escala motora infantil de Alberta (AIMS) (rombos 25 cerrados) y la valoracion de los anticuerpos frente a la a-glucosidasa acida humana recombinante (GAArh) (rombos

abiertos) en tres pacientes (paciente 1, Fig. 1A; paciente 2, Fig. 1B; paciente 3, Fig. 1C) con enfermedad de Pompe infantil que estan recibiendo un tratamiento de sustitucion enzimatica. La flecha indica cuando se inicio el tratamiento enzimatico. Las valoraciones en la escala AIMS en pacientes normales se representan como curvas discontinuas frente a la edad (percentiles 5, 19, 25, 50, 75 y 95, de abajo a arriba).

30 Las Fig. 2A-2F son una serie de representaciones graficas que representan las medidas ecocardiograficas bidimensionales longitudinales del volumen (Fig. 2A-2C) y la masa (Fig. 2D-2F) del ventnculo izquierdo en tres pacientes con enfermedad de Pompe infantil que estan recibiendo tratamiento de sustitucion enzimatica (paciente 1, Fig. 2A y 2D; paciente 2, Fig. 2B y 2E; paciente 3, Fig, 2C y 2F). La semana 0 representa las mediciones en el momento de inicio del tratamiento enzimatico. Los rombos abiertos, medicion del volumen diastolico final; rombos 35 cerrados, medicion del volumen sistolico final.

Descripcion detallada de la invencion

La presente invencion se refiere a metodos para tratar la glucogenosis de tipo II (GSD-II) en un individuo, mediante la administracion de la enzima a-glucosidasa acida (GAA) al individuo, asf como el uso de la enzima, GAA, en la fabricacion de un medicamento para el tratamiento de la glucogenosis de tipo II de acuerdo con las realizaciones 40 que se definen en las reivindicaciones.

Como se describe en la presente memoria, los solicitantes han tratado con exito a ninos que padecen GSD-II mediante la administracion de GAA a los ninos de forma regular; los ninos mostraron una mejona del estado cardfaco, de la funcion pulmonar y del desarrollo neurologico, asf como la reduccion de los niveles de glucogeno en el tejido.

45 Como resultado de estas observaciones, es posible ahora, por primera vez, tratar la GSD-II, incluyendo la GSD-II infantil, juvenil y de inicio en la edad adulta. Aunque los resultados descritos en la presente memoria tratan de individuos con la forma mas grave de GSD-II (GSD-II infantil), cabe esperar que los procedimientos sean igualmente eficaces en individuos afectados por GSD-II juvenil o de inicio en la edad adulta y pueden, de hecho, ser incluso mas eficaces, ya que los individuos con GSD-II juvenil o de inicio en la edad adulta poseen niveles mayores de actividad 50 residual de GAA (1-10% o 10-40% respectivamente), y, por tanto, es probable que sean mas tolerantes inmunologicamente a la GAA administrada (p. ej., en general son material inmunoreactivo de reaccion cruzada (CRIM) positivos para la GAA endogena, de forma que sus sistemas inmunitarios no perciben la GAA como protema "extrana" y no desarrollan anticuerpos anti-GAA). La mayor eficacia en dichos individuos se puede ver en el paciente 3, que era CRIM-positivo y que no desarrollo anticuerpos anti-GAA, y que mostro una progresion normal 55 de los hitos del desarrollo, en contraste con el curso variable que se observo en los pacientes CRIM negativos 1 y 2 (que sf desarrollaron anticuerpos anti-GAA).

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Los terminos "tratar" y "tratamiento", tal como se usan en la presente memoria, se refieren a la mejora de uno o mas smtomas asociados con la enfermedad, la prevencion o retraso del inicio de uno o mas smtomas de la enfermedad, y/o la disminucion de la gravedad o frecuencia de uno o mas smtomas de la enfermedad. Por ejemplo, el tratamiento se puede referir a la mejora del estado cardfaco (p. ej., incremento de los volumenes diastolico final y/o sistolico final, o la reduccion, mejora o prevencion de la miocardiopatfa progresiva que normalmente se encuentra en la GSD- II) o de la funcion pulmonar (p. ej., el incremento en la capacidad vital del llanto sobre la capacidad basal, y/o la normalizacion de la desaturacion de oxfgeno durante el llanto); la mejora en el desarrollo neurologico y/o las capacidades motoras (p. ej., incremento en la puntuacion de la escala AIMS); reduccion de los niveles de glucogeno en el tejido del individuo afectado por la enfermedad; o cualquier combinacion de estos efectos. En una forma de realizacion preferida, el tratamiento incluye la mejora del estado cardfaco, en particular la reduccion o la prevencion de miocardiopatfas asociadas con la GSD-II. Los terminos "mejorar", "incrementar" o "reducir", tal como se usan en la presente memoria, indican valores relativos a una medicion basal, tal como una medicion en el mismo individuo antes del inicio del tratamiento descrito en la presente memoria, o una medida en un individuo control (o varios individuos control) en ausencia del tratamiento descrito en la presente memoria. Un individuo control es un individuo afectado por la misma forma de GSD-II (bien infantil, juvenil o de inicio en la edad adulta) que el individuo que se esta tratando, que es de mas o menos la misma edad que el individuo que se esta tratando (para garantizar que todas las etapas de la enfermedad en el individuo tratado y el(los) individuo(s) control son comparables).

El individuo que se esta tratando es un individuo (feto, nino, adolescente o ser humano adulto) con GSD-II (es decir, GSD-II infantil, GSD-II juvenil o GSD-II de inicio en la edad adulta). El individuo puede tener una actividad residual de GAA, o ninguna actividad mensurable. Por ejemplo, el individuo con GSD-II puede tener una actividad de la GAA que sea inferior a aproximadamente 1% de la actividad normal de la GAA (GSD-II infantil), una actividad de la GAA que sea de aproximadamente 1-10% de la actividad normal de la GAA (GSD-II juvenil) o una actividad de la GAA que sea de aproximadamente 10-40% de la actividad normal de la GAA (GSD-II adulta). El individuo puede ser CRIM positivo o CRIM negativo para la GAA endogena. En una forma de realizacion preferida, el individuo es CRIM positivo para la GAA endogena. En otra forma de realizacion preferida, el individuo es un individuo al que se le ha diagnosticado recientemente la enfermedad. El tratamiento precoz (tratamiento que comienza lo antes posible tras el diagnostico) es importante para minimizar los efectos de la enfermedad y maximizar los beneficios del tratamiento.

En los usos segun la invencion se administra a-glucosidasa acida humana (GAA) al individuo. La GAA esta en una forma que, cuando se administra, se dirige a tejidos tales como los tejidos afectados por la enfermedad (p. ej., corazon, musculo). En forma de realizacion preferida, la GAA humana se administra en su forma precursora, ya que el precursor contiene motivos que permiten la captacion eficaz de GAA mediada por receptores. Como alternativa, se puede administrar una forma madura de GAA humana que haya sido modificada para que contenga motivos que permitan la captacion eficaz de GAA. En una forma de realizacion particularmente preferida, la GAA es la forma precursora de GAA humana recombinante.

La GAA se puede obtener a partir de diversas fuentes. En una forma de realizacion particularmente preferida, se ha producido a-glucosidasa acida humana recombinante (GAArh) en cultivos de celulas de ovario de hamster chino (CHO) (vease, por ejemplo, Fuller, M. et al., Eur. J. Biochem. 234:903-909 (1995); Van Hove, J. L.K. et al., Proc. Natl. Acad. Sci EE.UU 93: 65-70 (1996)). La produccion de GAA en celulas CHO parece dar un producto con glicosilacion, que permite la captacion significativa y eficaz de GAA en los tejidos deseados (corazon y musculo); se supone que esta glicosilacion difiere de la de GAA que se produce en la leche de ratones y conejos transgenicos (vease, p. ej., Bijvoet, A.G.A. et al., Hum. Mol. Genet. 7: 1815-1824 (1998); Bijvoet, A.G.A. et al., Hum. Mol. Genet. 8: 2145-2153 (1999)).

La GAA posee una actividad enzimatica espedfica en el intervalo de aproximadamente 1,0-3,5 pmol/min/mg de protema, preferentemente en el intervalo de aproximadamente 2-3,5 pmol/min/mg de protema. En una forma de realizacion preferida, la GAA posee una actividad enzimatica espedfica de al menos aproximadamente 1,0 pmol/min/mg de protema; mas preferentemente, una actividad enzimatica espedfica de al menos aproximadamente 2,0 pmol/min/mg de protema; incluso mas preferentemente, una actividad enzimatica espedfica de al menos aproximadamente 2,5 pmol/min/mg de protema; y todavfa mas preferentemente, una actividad enzimatica espedfica de al menos aproximadamente 2,75 pmol/min/mg de protema.

La GAA se puede administrar sola o en composiciones o medicamentos que comprenden la GAA (p. ej., en la fabricacion de un medicamento para el tratamiento de la enfermedad) como se ha descrito en la presente memoria descriptiva. Las composiciones se pueden formular con un vehmulo o excipiente fisiologicamente aceptable para preparar una composicion farmaceutica. El vehmulo y la composicion pueden ser esteriles. La formulacion debera ser apropiada al modo de administracion.

Entre los vehmulos farmaceuticamente aceptables adecuados se incluyen, sin limitarse solo a ellos, el agua, soluciones de sales (p. ej., NaCl), solucion salina, solucion salina amortiguada, alcoholes, glicerol, etanol, goma arabiga, aceites vegetales, alcoholes bendlicos, polietilen glicoles, gelatina, hidratos de carbono tales como lactosa, amilosa o almidon, azucares tales como manitol, sacarosa u otros, dextrosa, estearato de magnesio, talco, acido silfcico, parafina viscosa, aceite de perfume, esteres de acidos grasos, hidroximetil celulosa, polivinil pirrolidona, etc., asf como combinaciones de los mismos. Las preparaciones farmaceuticas pueden, si se desea, mezclarse con agentes auxiliares, p. ej., lubricantes, conservantes, estabilizantes, agentes humectantes, emulsionantes, sales para

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influir sobre la presion osmotica, amortiguadores, colorantes, saborizantes y/o sustancias aromaticas y similares, que no reaccionan de forma perjudicial con los compuestos activos. En una forma de realizacion preferida, se usa un vehmulo hidrosoluble adecuado para administracion intravenosa.

Si se desea, la composicion o medicamente tambien puede contener pequenas cantidades de agentes humectantes o emulsionantes o agentes amortiguadores del pH. La composicion puede ser una solucion lfquida, suspension, emulsion, comprimido, pfldora, capsula, formulacion de liberacion controlada o polvo. La composicion tambien se puede formular como un supositorio con aglutinantes y vehmulos tradicionales tales como trigliceridos. La formulacion oral puede incluir vehmulos estandar de calidades farmaceuticas tales como manitol, lactosa, almidon, estearato de magnesio, polivinil pirrolidona, sacarina sodica, celulosa, carbonato de magnesio.

La composicion o medicamento se pueden formular de acuerdo con los procedimientos de rutina en forma de una composicion farmaceutica adaptada para la administracion a seres humanos. Por ejemplo, en una forma de realizacion preferida, una composicion para administracion intravenosa tfpicamente es una solucion en amortiguador acuoso isotonico esteril. Cuando sea necesario, la composicion puede tambien incluir un agente solubilizante y un anestesico local para disminuir el dolor en el punto de la inyeccion. En general, los ingredientes se suministran por separado o mezclados juntos en forma de dosis unitaria, por ejemplo en forma de polvo liofilizado o concentrado sin agua en un recipiente hermeticamente sellado, como una ampolla o bolsita que indique la cantidad de agente activo. Cuando la composicion se vaya a administrar mediante infusion, se puede dispensar con una botella de infusion que contenga agua esteril de grado farmaceutico, solucion salina o dextrosa/agua. Cuando la composicion se administra mediante inyeccion se puede proporcionar una ampolla de agua esteril para inyeccion o una solucion salina de forma que los ingredientes se puedan mezclar antes de su administracion.

La GAA se puede formular en formas neutras o salinas. Entre las sales farmaceuticamente aceptables se incluyen las formadas con los grupos amino libres tales como los derivados de los acidos clortndrico, fosforico, acetico, oxalico, tartarico, etc., y los formados con grupos carboxilo libres, tales como los derivados de sodio, potasio, amonio, calcio, hidroxidos ferricos, isopropilamina, trietilamina, 2-etilamino, etanol, histidina, procama, etc.

La GAA (o composicion o medicamento que contiene GAA) se administra a traves de una via adecuada. En una forma de realizacion, la GAA se administra por via intravenosa. En otras formas de realizacion, la GAA se administra mediante administracion directa a un tejido diana, tal como corazon o musculo (p. ej., intramuscular), o al sistema nervioso (p. ej., inyeccion directa en el cerebro, intraventricular; intratecal). Si se desea, se pueden usar mas de una via de forma simultanea.

La GAA (o composicion o medicamento que contiene GAA) se puede administrar sola o junto con otros agentes, tales como antihistammicos (p. ej., difenidramina) o inmunosupresores u otros agentes inmunoterapeuticos que contrarrestan los anticuerpos anti-GAA. El termino "en combinacion con" indica que el agente se administra a aproximadamente el mismo tiempo que la GAA (o composicion que contiene GAA). Por ejemplo, el agente se puede mezclar en una composicion que contenga GAA y, de este modo se puede administrar de forma simultanea a la GAA; como alternativa, el agente se puede administrar a la vez, sin mezclar (p. ej., mediante administracion combinada del agente en la via intravenosa por la que tambien se administra la GAA o viceversa). En otro ejemplo, el agente se puede administrar por separado (p. ej., no mezclado), pero dentro de un periodo de tiempo corto (p. ej., en un plazo de 24 horas) de la administracion de la GAA. En una forma de realizacion preferida, si el individuo es CRIM-negativo para la GAA endogena, la GAA (o composicion que contiene GAA) se administra junto con un regimen inmunosupresor o inmunoterapeutico disenado para reducir las cantidades, o prevenir la produccion, de anticuerpos anti-GAA. Por ejemplo, se puede usar un protocolo similar a los usados en pacientes de hemofilia (Nilsson, I. M, et al., N. Engl. J. Med. 318:947-50 (1988)) para reducir los anticuerpos anti-GAA. Tal regimen tambien se puede usar en individuos CRIM positivos para la GAA endogena pero que presentan, o tienen riesgo de presentar, anticuerpos anti-GAA. En una forma de realizacion particularmente preferida, el regimen inmunosupresor o inmunoterapeutico comienza antes de la primera administracion de GAA, con el fin de minimizar la posibilidad de produccion de anticuerpos anti-GAA.

La GAA (o composicion o medicamento que contiene GAA) se administra en una cantidad terapeuticamente eficaz (es decir, una cantidad de dosis que, cuando se administra a intervalos regulares, es suficiente para tratar la enfermedad, mejorando los smtomas asociados, previniendo o retrasando el inicio de la enfermedad y/o tambien disminuyendo la gravedad o la frecuencia de los smtomas de la enfermedad, como se ha descrito anteriormente). La cantidad que sera terapeuticamente eficaz en el tratamiento de la enfermedad dependera de la naturaleza y el grado de los efectos de la enfermedad, y se puede determinar mediante tecnicas clmicas convencionales. Ademas, opcionalmente se pueden emplear ensayos in vitro o in vivo para ayudar a identificar los intervalos de dosis optimas. La dosis precisa que se ha de emplear tambien dependera de la via de administracion, y de la gravedad de la enfermedad, y debera decidirse segun el criterio de un facultativo y de las circunstancias de cada paciente. Las dosis eficaces se pueden extrapolar a partir de las curvas de respuesta-dosis derivadas de sistemas de ensayo in vitro o con modelos animales. En una forma de realizacion preferida, la cantidad terapeuticamente eficaz es inferior a aproximadamente 15 mg de enzima/kg de peso corporal del individuo, preferentemente en el intervalo de aproximadamente 1-10 mg de enzima/kg de peso corporal, e incluso mas preferentemente aproximadamente 10 mg de enzima/kg de peso corporal o aproximadamente 5 mg de enzima/kg de peso corporal. La dosis eficaz para un individuo concreto se puede variar (p. ej., incrementar o disminuir) en el tiempo, dependiendo de las necesidades del

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individuo. Por ejemplo, en momentos de enfermedad f^sica o estres, o si aparecen o incrementan los anticuerpos anti-GAA, o si los smtomas de la enfermedad empeoran, la cantidad se puede incrementar.

La cantidad terapeuticamente eficaz de GAA (o composicion o medicamento que contiene GAA) se administra a intervalos regulares, en funcion de la naturaleza y el grado de los efectos de la enfermedad, y de forma continua. La administracion a un "intervalo regular", como se usa en la presente memoria, indica que la cantidad terapeuticamente eficaz se administra periodicamente (a diferencia de una dosis de una vez). El intervalo se puede determinar mediante tecnicas clmicas estandar. En formas de realizacion preferidas, la GAA se administra mensualmente, bimensualmente; semanalmente; dos veces a la semana; o diariamente. El intervalo de administracion para un unico individuo no tiene que ser un intervalo fijo, sino que puede variar con el tiempo, en funcion de las necesidades del individuo. Por ejemplo, en momentos de enfermedad ffsica o estres, si aparecen o incrementan los anticuerpos anti-GAA, o si los smtomas de la enfermedad empeoran, el intervalo entre dosis se puede disminuir.

En una forma de realizacion preferida, se administra semanalmente una cantidad terapeuticamente eficaz de 10 mg de enzima/kg de peso corporal. En otra forma de realizacion preferida, se administra dos veces a la semana una cantidad terapeuticamente eficaz de 5 mg de enzima/kg de peso corporal.

La descripcion ademas se refiere a una composicion farmaceutica que comprende a-glucosidasa acida humana, como se describe en la presente memoria, en un recipiente (p. ej., un vial, frasco, bolsa para administracion intravenosa, jeringa, etc.) con una etiqueta que contiene las instrucciones para la administracion de la composicion para el tratamiento de la glucogenosis de tipo II, mediante los procedimientos descritos en la presente memoria.

La invencion se describira ademas y de modo mas espedfico por los siguientes ejemplos.

Ejemplos

Ensayo de fase I/II de uso de a-glucosidasa acida recombinante humana Materiales y metodos

Pacientes: los criterios de inclusion fueron ninos afectados por GSD-II infantil con una actividad de la GAA practicamente ausente (<1% de la normal en fibroblastos de piel y/o biopsia de musculo) y de menos de un ano de edad. Los criterios de exclusion incluyeron insuficiencia cardiorespiratoria grave al inicio y/u otras afecciones medicas con probabilidad de disminuir la supervivencia. A causa de la limitada esperanza de vida de la enfermedad tras el diagnostico, no se uso ningun placebo como control. Los datos control historicos indicaron que virtualmente todos los pacientes monan antes del ano de edad (Tabla 1).

Tabla 1

Datos control historico de la glucogenosis infantil, de tipo II

: Inicio (meses) Fallecimiento (meses) Duracion del curso de la enfermedad (meses)

Duke University Medical Center (n=30)*

Promedio ± desviacion tfpica: 5,1 ± 1,8 8,6 ± 2,4 3,5 ± 2,3

Intervalo: 2,4 -10,3 3,3 -12,4 o 0 1 CD O

Slonim et al. (n=10)**

Promedio ± desviacion tfpica: 2,5 ± 1,0 7,2 ± 2,8 4,7 ± 2,4

Intervalo: o 1 o 4,0 -12,0 2,0 -9,0

*Datos del Registro de la enfermedad de Pompe de la Duke University ** Datos de Slonim et al., J. Pediatr. 137:283-285 (2000).

Fueron incluidos en el estudio tres ninos afectados de GSD-II infantil manifestada por una reducida actividad de a- glucosidasa acida inferior al 1% de la normal en fibroblastos cutaneos y/o biopsia muscular. A nivel de la protema, ninguno de los pacientes 1 y 2 presentaba protema GAA detectable, mientras que el paciente 3 presentaba niveles reducidos de la protema GAA detectados por analisis de inmunotransferencia. Los datos clmicos de referencia antes del inicio del tratamiento se resumen en la Tabla 2.

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Tabla 2. Datos clmicos de referencia en 3 pacientes con enfermedad de Pompe infantil

Numero de paciente/sexo: Origen etnico Edad inicio GAArh Estado cardiaco Funcion pulmonar Desarrollo Actividad motor GAA en (puntuacion fibroblastos AIMS) de la piel (% de normal) Estado CRIM* Edad actual

Paciente 1/varon: Caucasiano 4 meses Cardiomiopatfa severa; estado post ataque cardiaco Lfmite normal, compresion bronquio principal izquierdo por una marcada cardiomegalia, desaturacion O2 <<5o% 0,84% Negativo 29 meses

Paciente 2/varon: Afroamericano 3 meses Cardiomiopatfa moderada Desaturacion O2 durante el llanto <5o% 0,57% Negativo 25 meses

Paciente 3/varon: Caucasiano 21/2 meses Cardiomiopatfa lfmite Normal <<5oh% 0,69% Positivo 23 meses

*CRIM = material inmunorreactivo de reaccion cruzada

El paciente 1 presento a los 2 meses de edad una parada cardfaca durante una operacion quirurgica programada de una hernia inguinal. La siguiente evaluacion cuando tema 4 meses de edad demostro la existencia de signos de hipotoma grave, con un desarrollo motor estimado por edad equivalente al de un nino de 3 semanas. Tambien presentaba una profunda miocardiopatfa y cardiomegalia grave con compresion del bronquio principal izquierdo dando como resultado atelectasia parcial del pulmon izquierdo, y dificultades para comer y retraso del crecimiento. A los pacientes 2 y 3 se les diagnostico prenatalmente la enfermedad de Pompe; es importante, el hecho de que los dos habfan tenido antes un hermano que habfa fallecido con smtomas que normalmente se atribuyen a la GSD-II infantil. Ambos pacientes presentaban signos de retraso motor; ademas el paciente 2 presentaba dificultades para comer, retraso del crecimiento y miocardiopatfa grave.

Diseno basico: El estudio se diseno como un estudio de fase I/II, abierto, de una dosis, para valorar la seguridad y la eficacia de la GAArh, administrada dos veces a la semana a los 3 pacientes con enfermedad de Pompe infantil. El estudio fue aprobado por el consejo de revision institucional y se obtuvo el consentimiento informado escrito de los padres.

El estudio consistio en una Fase de Seleccion inicial, una Fase de Tratamiento de 13 semanas y una Fase de Seguimiento del Tratamiento. Durante la Fase de Seleccion, se valoro el estado clmico inicial de los pacientes; ademas, se determinaron los niveles de GAA y de glicogeno en muestras de biopsia de musculo esqueletico. Durante la Fase de Tratamiento, los pacientes recibieron infusiones intravenosas de GAArh (5 mg/kg) dos veces a la semana. Los pacientes fueron controlados atentamente para detectar respuestas adversas a las infusiones de la enzima, asf como para detectar el impacto que las administraciones de GAArh teman en la progresion clmica de la GSD-II infantil. Las valoraciones clmicas generales incluyeron exploraciones ffsicas de rutina, complementadas con analisis completos de orina, hematologicos y de bioqmmica clmica (electrolitos, glucosa, creatinina, BUN, CO2, protema, albumina, ALT, AST, bilirrubina, fosfatasa alcalina, CK e isozima, acido urico). Las valoraciones neurologicas y de la funcion motora exhaustivas incluyeron pruebas de fuerza muscular manual, prueba del desarrollo de Denver y escala AIMS (Escala motora infantil de Alberta; vease Piper, M.C. y Darrah, J., Motor Assessment of the Developing Infant, WB Sanders Company, Filadelfia, 1994). Se usaron ecocardiograffas bidimensionales, en modo M y Doppler para valorar la masa ventricular izquierda, el grosor de la pared y asf como las funciones sistolica y diastolica. Ademas, durante todo el estudio se monitorizaron una variedad de funciones pulmonares (capacidad vital de llanto, tendencia de la oximetna de pulso y medicion del dioxido de carbono espiratorio, asf como la maniobra de fuerza inspiratoria negativa). Al final de la fase de tratamiento de 13 semanas, se determinaron la actividad de GAA, los niveles de glucogeno y la histopatologfa de biopsias musculares obtenidas de los musculos cuadriceps del muslo contralateral de las biopsias previas al tratamiento. Las biopsias musculares se tomaron 3 dfas despues de la infusion de GAArh.

Fuente de enzima: GAArh purificada del medio de cultivo de celulas CHO secretoras de GAArh (Van Hove, J. L.K. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. EE.UU. 93: 65-70 (1996)) fue proporcionada en forma de solucion de grado GMP, esteril e incolora, por Synpaci (Carolina del norte), Inc., 99 Alexander Drive, Suite NW20, Research Triangle Park, Carolina

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del Norte 27709. La GAArh se purifico principalmente como la protema precursora de 110 kD con una actividad enzimatica espedfica de 2,77-.3,02 jmol/min/mg de protema.

ELISA para anticuerpos anti-GAArh: El ELISA para la deteccion de anticuerpos anti-GAArh fue un ensayo de tipo sandwich estandar realizado por Phoenix International Life Sciences, Inc. (Saint-Laurel, Qebec). Brevemente, las placas de microtitulacion se recubrieron con GAArh a 2,0 |jg/ml durante la noche y despues se bloquearon con IgG bovina. El suero del paciente, diluido a 1:100 y despues diluido en serie a 1:2, reacciono con la GAArh de la placa. La cantidad de anticuerpo unido se detecto con un anticuerpo secundario anti-humano de cabra conjugado con peroxidasa de rabano y sustrato de tetrametilbencidina midiendo las absorbancias a 450 nm. Se definieron las muestras positivas como las que teman una absorbancia superior al valor de corte negativo. Esto se definio como dos veces el valor de A450 del control negativo de suero humano normal. La valoracion se definio como la dilucion del suero que todavfa tema una lectura A450 por encima del valor del punto de corte negativo.

Actividad de GAA, contenido en glucogeno y analisis Inmunotransferencia: La actividad de GAA se valoro mediante la medicion de la escision de 4-metil-umbeliferil-a-D-glucosido a pH 4,3 como se ha descrito previamente (Reuser, A.J.J. et al., Am. J. Hum. Genet. 30: 132-143 (1978)). Como patron interno, de forma similar se analizo la actividad de p-galactosidasa acida con el derivado de 4-metil-umbeliferil como sustrato (Wenger, D. Ay Williams, C., Screening for lysosomal disorders en Hommes, F.A. (ed.), Techniques in diagnostic humano biochemical genetics: a laboratory manual, Wiley-Liss, Nueva York, 1991, pag. 587-617). El contenido en glucogeno se determino mediante tratamiento de extractos tisulares con amiloglucosidasa de A. niger y la medicion de la glucosa liberada (Van Hove, J. L.K. et al., Proc. Natl. Acad. Sci EE.UU. 93: 65-70 (1996)). Se realizo un analisis de inmunotransferencia con los anticuerpos producidos en conejos contra GAA de placenta purificada (Van Hove, J. L.K. et al., anterior).

Histolog^a: Se monto una muestra de musculo en un portaobjetos con goma de tragacanto y se sometio a congelacion rapida en isopentano enfriado mediante nitrogeno lfquido. Se obtuvieron secciones de cinco micrometros y se tineron con hematoxilina y eosina, se modificaron con tricromo de Gomori, ATPAsa a pH 4,35 y 9,4, nicotinamida deshidrogenasa azul de tetrazolio reductasa, y fosforilasa. Una segunda muestra se sujeto in situ y se introdujo en glutaraldehudo al 2,5%. El tejido se proceso sin tincion en bloque con acetato de uranilo con el fin de evitar la perdida de glucogeno. Se tineron las secciones semifinas (0,5 micrometros) con azul de toluidina y las secciones finas se tineron con acetato de uranilo y citrato de plomo y se montaron en una rejilla de cobre para microscopia electronica.

Resultados

Reaccion del paciente al tratamiento: los tres pacientes con enfermedad de Pompe infantil recibieron infusiones intravenosas de GAArh dos veces a la semana durante 21-25 meses. Durante el tratamiento enzimatico no se produjeron reacciones alergicas graves. No obstante, se observaron tres episodios de irritacion cutanea, acompanados de fiebre leve y un aumento de la irritabilidad ocurrio en dos de los pacientes (paciente 1 dos episodios, paciente 2 un unico episodio). Estos smtomas se resolvieron rapidamente tras la administracion intravenosa de difenhidramina. Tras un segundo episodio de irritacion cutanea, el paciente 1 fue medicado previamente con difenhidramina oral inmediatamente antes de todas las siguientes infusiones de GAArh, sin que se produjeran mas episodios. El paciente 2 fue medicado previamente de manera similar con difenhidramina oral inmediatamente antes de todas las demas infusiones, sin mas episodios. Multiples parametros hematologicos, las funciones hepaticas, las funciones renales y los analisis de orina estuvieron todos dentro de los lfmites normales durante el periodo de tratamiento en todos los pacientes tratados.

En los pacientes 1 y 2 se detectaron anticuerpos anti-GAArh de clase IgG a las 3 semanas del inicio del tratamiento enzimatico (Figs.1A-1C). Las valoraciones de anticuerpos anti-GAArh aumentaron a 1:1600 hacia la semana 16 en el paciente 1 (Fig. 1A) y a 1:64000-1:12800 entre las semanas 11-19 en el paciente 2 (Fig. 1B). A medida que aumentaban las valoraciones de anticuerpos anti-GAArh, se observo que las mejoras clmicas (observadas tempranamente durante el tratamiento- vease mas adelante) ya no avanzaban. En el paciente 3 no se han observado ni efectos indeseados ni anticuerpos anti-GAArh (Fig. 1C).

Estado card^aco: Antes del inicio del tratamiento enzimatico, los pacientes 1 y 2 presentaban una miocardiopatfa hipertrofica grave asociada con un incremento de la masa del ventnculo izquierdo (VI), un engrosamiento concentrico de la pared ventricular y una disminucion del tamano de la cavidad ventricular (Fig. 2B, la cavidad del paciente 2 estaba casi obliterada al final de la sfstole). Todas estas caractensticas se suelen observar en el paciente no tratado afectado con la forma infantil de la enfermedad de Pompe. Ademas, se observo que el paciente 2 presentaba una mayor fraccion de eyeccion del VI (fraccion de contraccion, 84%) reflejo de una contraccion hiperdinamica. Ninguno de los pacientes presentaba, sin embargo, ningun signo de obstruccion del tracto de salida ventricular. Los datos ecocardiograficos longitudinales evaluados en los pacientes durante los primeros 3 meses de tratamiento con GAArh se muestran en las Fig. 2A-2C. Durante el periodo de tratamiento, en ambos pacientes 1 y 2, los volumenes sistolico final y diastolico final del VI (mediciones 2D) aumentaron de forma progresiva, y hasta casi 23 veces al final de los 3 meses de tratamiento en comparacion con los medidos durante la fase de previa al tratamiento (Fig. 2A y 2B, respectivamente). Se observaron similares incrementos mediante el analisis de modo M (datos no mostrados). Las mediciones bidimensionales de la masa del VI (Fig. 2D-2F) aumentaron inicialmente a medida que los volumenes del VI aumentaban, pero despues disminuyeron de forma constante durante el

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tratamiento, hasta un valor que era inferior a la masa del VI antes del tratamiento (reducida hasta el 60-70% de los niveles basales previos al tratamiento). El incremento inicial de la masa muy probablemente se debio a un incremento del volumen del VI, sin que se produjera ningun cambio en el grosor de la pared del VI. Estas mejoras globales en los parametros cardfacos, se mantuvieron hasta la ultima evaluacion de seguimiento, aunque el paciente 1 requirio una infusion diaria intensiva de enzima durante 10 dfas cuando la masa del VI aumento mas y la funcion cardfaca se vio comprometida durante una neumoma viral. Por lo demas, la funcion ventricular en ambos pacientes habfa sido normal y permanecio normal hasta el ultimo seguimiento. Por tanto, la morbilidad cardfaca progresiva observada normalmente en la enfermedad de Pompe infantil sin tratar se habfa evitado claramente.

El paciente 3 presentaba una masa del VI de 64 g/p2 (limite normal superior 65) en la evaluacion cardfaca pero por lo demas una evaluacion cardiaca basal normal al inicio del tratamiento, y que ha continuado siendo normal (con una masa del VI ahora de 33 g/p2) 7 meses despues del tratamiento.

Funcion pulmonar. En los primeros 2 meses de tratamiento, la mejora de la funcion pulmonar se hizo evidente por los incrementos en la capacidad vital del llanto (mejoras superiores al 28% y 70%, en los pacientes 1 y 2, respectivamente) con respecto a las capacidades basales, y la normalizacion de la desaturacion de O2 durante el llanto (saturacion de O2 del 70% en el paciente 1 y del 81% en el paciente 2 durante el llanto maximo). En el paciente 1 tambien se puso de manifiesto una disminucion de la fuerza muscular respiratoria antes del tratamiento a traves de una maniobra de fuerza inspiratoria negativa (NIFM) de -45 cm H2O. Con el tratamiento, la NIFM aumento a -55 cm H2O. Las mejoras iniciales observadas en las funciones pulmonares de ambos pacientes, sin embargo, se mantuvieron constantes durante los siguientes 2-3 meses y despues disminuyeron, de forma concomitante con el aumento de los anticuerpos anti-GAArh. Ambos pacientes han pasado despues a depender del respirador tras sufrir episodios de neumoma viral que desencadenaron insuficiencia respiratoria.

EL paciente 3 presento una funcion pulmonar normal al principio del tratamiento y ha continuado demostrando pruebas de la funcion pulmonar normales en el ultimo seguimiento.

Evaluacion del desarrollo neurologico y motor. Se uso la escala del sistema motor de ninos de Alberta (AIMS) para valorar el desarrollo motor en estos ninos. Las puntuaciones AIMS para los 3 pacientes comenzaron por debajo del percentil 5 para su edad (Fig. 1A-1C). El paciente 1 permanecio por debajo del percentil 5 pero mostro incrementos dentro de ese intervalo antes de comenzar a disminuir a la semana 13 del tratamiento (Fig. 1A). El paciente 2 subio al percentil 25 en la semana 5, volvio a caer hasta por debajo del percentil 5 tras la semana 7 a pesar de aumentar sus habilidades, despues mostro una rapida disminucion y perdida de habilidades entre las semanas 13 y 17 (Fig. 1B). El inicio de las disminuciones clmicas, de nuevo fue concomitante al aumento de los anticuerpos anti-GAArh (Fig. 1A, 1B).

Las valoraciones neurologicas y del desarrollo de Denver administradas de forma concurrente mostraron en el paciente 1, dominios normales de conducta personal-social, de lenguaje, y de desarrollo motor fino con un retraso motor grueso constante pero en progreso hasta la semana 10 cuando se puso de manifiesto un estancamiento y la posterior regresion. Es importante el hecho de que las capacidades motoras habfan mostrado un significativo progreso hasta la semana 10, pero nunca alcanzaron los niveles normales. El paciente 2 mostro un retraso leve del desarrollo en la esfera del desarrollo motor grueso solo con consecucion de habilidades de desarrollo normales en los dominios de desarrollo motor fino, personales-sociales y del lenguaje hasta las semanas 14-16, momento en que se produjo regresion. En la actualidad, ambos pacientes presentan un desarrollo personal-social normal para su edad pero un retraso en todos los demas dominios.

El paciente 3 mostro un incremento constante de la puntuacion AIMS, que subiendo por encima del percentil 10 en la semana 11 del tratamiento y por encima del percentil 25 la semana en 20 (fig. 1C) y en el percentil 90 en el ultimo seguimiento. A los 9 meses de edad, se mantema sentado de forma independiente, gateaba con el vientre redprocamente para moverse y se mantema de pie con las manos en alto. Hay que destacar que lleva caminando independiente desde los 12 meses de edad y se ha podido mover entre cuclillas y de pie sin el uso de las manos desde los 14 meses de edad. Actualmente, las valoraciones del desarrollo neurologicas y de Denver en todos los dominios tambien son normales para su edad.

Actividad muscular de la GAA y contenido de glucogeno: Se realizaron biopsias musculares de referencia 1 semana antes del inicio del tratamiento con GAArh a excepcion del paciente 1 al que se le realizo la biopsia en el momento del diagnostico que fue 2 meses antes del inicio del tratamiento con GAARh. Despues de 4 meses de tratamiento con GAARh, se obtuvieron las biopsias musculares de los cuadriceps contralaterales 3 dfas despues de la infusion de enzima (nivel mmimo). Con el tratamiento con GAArh la activad GAA aumento 2-3 veces por encima de los valores de referencia previos al tratamiento en los pacientes 1 y 2, y 18 veces en el paciente 3 (Tabla 3).

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Tabla 3

Actividad de la a-glucosidasa acida muscular y contenido de glucogeno en pacientes con enfermedad de Pompe infantil.

Pacientes afectados por la enfermedad tratados con GAArh

: Actividad GGA Contenido glucogeno

: nmoles/h/mg protema % peso humedo

Paciente 1

Antes de la terapia: 0,41 5,90%

Despues de la terapia: 0,95 7,50%

Paciente 2

Antes de la terapia: 0,67 5,68%

Despues de la terapia: 1,97 4,43%

Paciente 3

Antes de la terapia: 0,1 5,13%

Despues de la terapia: 1,84 1,43%

Control: 23,92 ± 8,63 0,94 ± 0,55%


: (limite normal superior; 1,5%)

El nivel absoluto de actividad de GAA se aproximo a un 8% de la actividad de la GAA observada en musculos normales. No se observaron cambios apreciables en el contenido de glucogeno muscular en los pacientes 1 y 2, pero los niveles de glucogeno se redujeron a lfmites dentro del intervalo normal en el paciente 3.

Histolog^a: Las biopsias previas al tratamiento de todos los pacientes mostraron una marcada vacuolizacion de las fibras musculares en las secciones congeladas. La evaluacion de las secciones semifinas demostro que las fibras estaban expandidas por el glucogeno con la formacion de depositos de glucogeno. En algunas fibras se pudieron discernir leves trazas de membranas residuales. La microscopia electronica confirmo la presencia de glucogeno tanto en los lisosomas expandidos y como en lo que estaban libres en el citoplasma. La biopsia del paciente 3 presentaba mas glucogeno restante dentro de los lisosomas que los otros dos pacientes (datos no mostrados).

Las biopsias realizadas 4 meses despues del tratamiento en los pacientes 1 y 2 fueron similares a las biopsias realizadas antes del tratamiento en terminos de acumulacion de glucogeno. Sin embargo, la biopsia posterior al tratamiento del paciente 3 presentaba una marcada disminucion en el glucogeno visible y una histologfa esencialmente normal en la mayona de las fibras musculares. La microscopia electronica mostro que muchos lisosomas hinchados restantes caredan de glucogeno. Quedaban algunos depositos de glucogeno y lisosomas ricos en glucogeno.

Analisis de inmunotransferencia

Para investigar por que los anticuerpos anti-GAArh se desarrollaban en los pacientes 1 y 2, pero no en el 3, se realizo un analisis de inmunotransferencia espedfico para la deteccion de la protema GAA expresada (pero no funcional) en fibroblastos derivados de cada uno de los pacientes. No se detecto protema GAA en los fibroblastos de los pacientes 1 y 2, mientras que en el paciente 3 se detecto una forma precursora facilmente detectable de la protema GAA (110 kD). Estos patrones se observaron previamente en otros pacientes con GSD-II infantil (Van der Ploeg, A. T. et al., Am. J. Hum. Genet. 44: 787-793 (1989)). Los fibroblastos normales, como cabe esperar, teman protema GAA principalmente de 95 kD y de 76 kD.

Estudios adicionales

En un estudio adicional se han incluido tres pacientes mas. Los tres son CRIM positivos. Tras el tratamiento (10 mg/kilogramo de peso corporal, infusiones semanales intravenosas de GAArh) durante 3-6 semanas, se ha observado una mejora de la funcion cardfaca, la fuerza muscular y el desarrollo motor.

Claims

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REIVINDICACIONES

1. a-Glucosidasa acida (GAA) humana recombinante producida en un cultivo celular de ovario de hamster chino para uso en un metodo de tratamiento de la glucogenosis de tipo II en un ser humano, o en un metodo de tratamiento de la cardiomiopatfa asociada con la glucogenosis de tipo II en un ser humano, donde el ser humano es CRIM-negativo para la a-glucosidasa acida endogena y en donde dicha a-glucosidasa acida humana recombinante se administra conjuntamente con un regimen inmunoterapeutico o inmunosupresor.
2. Uso de una a-glucosidasa acida (GAA) humana recombinante producida en un cultivo celular de ovario de hamster chino para la fabricacion de un medicamento para el tratamiento de la glucogenosis de tipo II en un ser humano, o para el tratamiento de la cardiomiopatfa asociada con la glucogenosis de tipo II en un ser humano, en donde el ser humano es CRIM-negativo para la a-glucosidasa acida endogena y en donde dicha a-glucosidasa acida humana recombinante se administra conjuntamente con un regimen inmunoterapeutico o inmunosupresor.
3. a-Glucosidasa acida (GAA) humana recombinante producida en un cultivo celular de ovario de hamster chino para uso en un metodo de tratamiento de la glucogenosis de tipo II en un ser humano, o en un metodo de tratamiento de la cardiomiopatfa asociada con la glucogenosis de tipo II en un ser humano,

en donde dicho metodo de tratamiento comprende determinar si el ser humano que va a ser tratado es CRIM- positivo o CRIM-negativo para la GAA endogena,

en donde al ser humano CRIM-negativo se le administra dicha a-glucosidasa acida (GAA) humana recombinante con un regimen inmunoterapeutico o inmunosupresor.
4. Uso de a-glucosidasa acida (GAA) humana recombinante producida en un cultivo celular de ovario de hamster chino para la fabricacion de un medicamento para el tratamiento de la glucogenosis de tipo II en un ser humano, o el tratamiento de la cardiomiopatfa asociada con la glucogenosis de tipo II en un ser humano,

en donde dicho tratamiento comprende determinar si el ser humano que va a ser tratado es CRIM-positivo o CRIM- negativo para la GAA endogena,

en donde al ser humano CRIM-negativo se le administra dicha a-glucosidasa acida (GAA) humana recombinante con un regimen inmunoterapeutico o inmunosupresor.
5. La a-glucosidasa acida humana recombinante producida en un cultivo celular de ovario de hamster chino para uso en el metodo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 y 3 o el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 2 y 4, en donde la glucogenosis de tipo II es glucogenosis de tipo II infantil, glucogenosis de tipo II juvenil, o glucogenosis de tipo II de inicio en la edad adulta.
6. La a-glucosidasa acida humana recombinante producida en un cultivo celular de ovario de hamster chino para uso en el metodo de una cualquiera de las reivindicaciones 1, 3 y 5 o el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 2, 4 y 5, en donde la glucogenosis de tipo II es glucogenosis de tipo II infantil.
7. La a-glucosidasa acida humana recombinante producida en un cultivo celular de ovario de hamster chino para uso en el metodo de una cualquiera de las reivindicaciones 1, 3, 5 y 6 o el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 2 y 4 a 6, en donde el medicamento se proporciona en una forma adecuada para la administracion de menos de 15 mg de a-glucosidasa acida por kilogramo de peso corporal.
8. La a-glucosidasa acida humana recombinante producida en un cultivo celular de ovario de hamster chino para uso en el metodo de una cualquiera de las reivindicaciones 1, 3 y 5 a 7 o el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 2 y 4 a 7, donde el medicamento se proporciona en una forma adecuada para la administracion de 1 a 10 mg de a- glucosidasa acida por kilogramo de peso corporal.
9. La a-glucosidasa acida humana recombinante producida en un cultivo celular de ovario de hamster chino para uso en el metodo de una cualquiera de las reivindicaciones 1, 3 y 5 a 8 o el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 2 y 4 a 8, donde la a-glucosidasa acida humana recombinante es la forma precursora de la a-glucosidasa acida humana.
10. La a-glucosidasa acida humana recombinante producida en un cultivo celular de ovario de hamster chino para uso en el metodo de una cualquiera de las reivindicaciones 1, 3 y 5 a 9 o el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 2 y 4 a 9, en donde el medicamento se administra a intervalos regulares, preferiblemente mensualmente, bimensualmente, semanalmente, dos veces a la semana o diariamente.
11. La a-glucosidasa acida humana recombinante producida en un cultivo celular de ovario de hamster chino para uso en el metodo de una cualquiera de las reivindicaciones 1, 3 y 5 a 10 o el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 2 y 4 a 10, en donde el medicamento se prepara para ser administrado mediante una via seleccionada entre la intravenosa, intramuscular, intratecal e intraventricular.