TWI268777B - Compounds with 5-HT1A activity useful for treating disorders of the outer retina - Google Patents

Description

1268777 A7 B7 五、發明說明（1 ) 本發明係有關用於治療因眼睛急性或慢性變性狀態或 疾病而起的視網膜外部疾病之具5-HT1A激動劑活性的化合 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 物。 發明之背景說明 老年性黃斑部退化（AMD)是造成老年人失明之主要原 因，其發病率自65歲成人之20%左右增加至75歲個體之 37%。非滲出型AMD之特徵在於隱結堆積以及視網膜外部 的桿狀或錐狀感光體、視網膜色素表皮（RPE)、布魯赫氏 (Bruch)膜與脈絡膜金管層之退化；而滲出型AMD則導致 脈絡膜新血管增生作用（Greeil與Enger於第100 期第 1519-35 頁（1993 年）乙文；Green 等人於 第 92 期第 615-27 頁（1985 年）乙文；Green 與 Key 於 7>α 似 dm 心c 第 75 期第 180-254 頁（1977 年）乙文；Bressler 等人於心如α第14期第130-42頁（1994年）乙文；Schneider 等人於及如⑽第18期第242-250頁（1998年）乙文；Green與 Kuchle(1997年）於Yannuzzi，L.A·、Flower，R.W·、Slakter，J. 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 S.編輯及由聖路易之摩斯比（Mosby)公司出版之“靛藍花青 綠血管造影術’’乙書第15 1 -6頁）。色素性視網膜炎（RP)係 代表一群遺傳性痿縮症，其特徵在於桿狀感光體變性以及 錐狀感光體與其下色素表皮之續發性退化（pruett於7>α似 第 81 期第 693-735 頁（1983 年）乙文； Heckenlively^rran^ Am Ophthalmol ^ ^ 438-470 頁（1987年）乙文；Pagon於第 33期第 137-177 頁（1988年）乙文；Berson於/πναί C^/zi/za/mo/ scz•第 34 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 4 1268777

五、發明說明（2 ) 期第 1659-1676 頁（1993 年）乙文；Nickells 與 Zack 於

Gew第 17期第 145-65 頁（1996年）乙文）。視網 膜變性疾病諸如老年性黃斑部退化（AMD)與色素性視網膜 炎（RP)之致病機轉係多面相的，在正常個體或該等具有遺 傳致病素因的個體中，可由環境因子所觸發。迄今，對於 可能與各種視網膜外部變性疾病相關之100個以上的基因 ’已經確認其在染色體上之位置或已選殖出來。 已確認光暴露之環境因子，係造成視網膜外部變性疾 病諸如老年性黃斑部退化（AMD)惡化之一作用因子（Y〇ung 於^/r 第 32 期第 252-269 頁（1988 年）乙文；Taylor 等 人於 drc/z 0/7/^/^/第 11〇 期第 99-104 頁（1992 年）乙文；

Cruickshank等人於 〇户/^/^/第 m期第 514-518 頁（1993 年）乙文）。已顯示導致視網膜細胞的光損傷之光氧化壓迫 ’係為適用於研究視網膜變性疾病之一模式，其原因如下 :損傷主要發生於視網膜外部的感光體與視網膜色素表皮 (RPE)，其等係受到遺傳性變性疾病影響之同一群細胞 (Noell等人於/⑽以/ 〇户/^/^/ •第 5期第 450-472 頁（1966 年）乙文；Bressler等人於第 32期第 375-413 頁 (1988年）乙文；Curcio等人於/«ναί ΟρΑΜα/ 5W第 37期 第1236-1249頁（1996年）乙文）；感光體與視網膜色素表皮 (RPE)細胞於老年性黃斑部退化與色素性視網膜炎中損失 以及在光氧化引發之細胞損傷之後的細胞死亡機制，係為 細胞凋零（apoptosis)(Ge-Zhi等人於7>α似 dm Ορ/ζί/ζα/ 6W 第94期第411-430頁（1996年）乙文；Abler等人於及以 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝------Ρ丨訂\ 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1268777 Α7 Β7 五、發明說明（3 )

Mo/ P/zarmaco/第 92期第 177-189 頁（1996年）乙文 ;Nickells 與 Zack於第 17 期第 145-65 頁 (1996年）乙文）；已顯示光係為老年性黃斑部退化與色素 性視網膜炎惡化之一環境風險因子（Taylor等人於Ac/z <9；7/^/ζα/第 110 期第 99-104 頁（1992年）乙文；Naash 等人於 0/7/zi/m/ Fb 第 37期第 775-782 頁（1996年）乙文）； 及在視網膜遺傳性變性疾病的動物模式中，已顯示抑制光 氧化損傷之治療處理具有效用（LaVail等人於尸roc Acad 第 89 期第 11249-11253 頁（1992 年）乙文； Fakforovich 等人於 第 347 期第 83-86 頁（1990年）乙文 ;Frasson等人於Mei第5期第1183-1187頁（1990年）乙 文）。 在不同的動物模式中，已找出降低視網膜光氧化損傷 之數種不同的化合物類型。其等包括：抗氧化劑諸如抗壞 血酸鹽（Organisciak等人於Sc/第 26期第 1589-1598頁（1985年）乙文）、二甲基硫脲（〇巧31^(^1^等人 於如veW 1¾ Scz·第 33期第 1599-1609 頁（1992年）乙 文；Lam等人於 Jrc/z 第 108期第 1751-1752 頁（1990 年、乙艾、、a -1 节輪專 k 於Nippon Ganka Gakkai Ζαα/π·第98期第948-954頁（1994年）乙文）及/3 -胡蘿蔔素 (Rapp等人於Cw办e及以第15期第219-232頁（1995年）乙文) •，鈣拮抗劑諸如氟苯桂嗉（Li等人於五χρ办e 第56期第 71-78 頁（1993 年）乙文；Edward 等人於 J/x/z <9户/^/^/第 1〇9 期弟 554-622 頁（1992年）乙文；Collier等人於/πναίΟρ/ζί/ζα/ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注音？事項再填寫本頁) 裝------Γ —訂，· 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 6 1268777 A7 _ B7 五、發明說明（4 ) Γ以5c/第36期第S5 16頁乙文）；生長因子諸如鹼式纖維母 細胞生長因子、腦衍生之神經因子、纖毛神經營養因子及 介白素 1 -冷（LaVail等人於/V% iVai JcW 第89期第 11249-11253頁（1992年）乙文）；葡萄糖皮質素諸如曱基脫 良反％ 铸專又於 Graefes Arch Clin Exp Ophthal 第 23\ 期第729-736頁（1993年）乙文）及地塞米松（dexamethasone) (Fu等人於五xp 第54期第583-594頁（1992年）乙文）； 鐵螯合劑諸如去鐵銨（Li等人於Cwr fye i?以第2期第133-144頁（1991年）乙文）；NMDA-拮抗劑諸如eliprodil與MK-801(Collier等人於/πναί 第 40期第 S159 頁 (1999年）乙文）。 類血清素功能的5-HT1A激動劑（亦即巴斯皮隆 (buspirone)、濟普拉席東（ziprasidone)、嘬胺甲尿啶），曾 登錄或投入於焦慮、高血壓、schidzophrenia、精神病、 憂鬱兩極性病變之治療中。此外，在不同的動物模式中， 曾顯示5-11丁以激動劑具有神經保護性，及經評估其在臨床 治療大腦缺血、頭部外傷、阿滋海默氏（Alzheimer)病、多 發性硬化症及肌萎縮性側索硬化症方面之效力。顯示5-HUic動劑一 8-OH-DPAT(8·羥基-2-(二-正·丙胺基）四氫化 萘）與伊普沙皮隆（ipsapirone)，可在大鼠大墨潰細胞核基 層中預防NMDA所引發的激活毒性神經元損傷（〇osterink 等人於五w J Pkrmaco/第358期第147-52頁（1998年）乙文） ;在大鼠急性皮下jk腫模式中，其與Bay-x-3702之共同給 藥可顯著地降低缺也性損傷（Alessandri等人於第 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

裝------r I · 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1268777 A7 ____B7______ 五、發明說明（5 ) 845期第232-5頁（1999年）乙文）；在中腦動脈閉塞之後， 8-0H-DPAT、Bay-x-3702、嚷胺甲尿淀、傑晋皮隆（gepirone) 與CM 57493顯著地降低大鼠（Bielenberg與Burkhardt於 第21期（附刊）第IV161-3頁乙文；Semkova等人於五u j 尸/zarmaco/第 359 期第 251-60 頁（1998 年）乙文；Peruche 等人 於J Neural Transm—Park Dis Dement Sect% 名孰赛 (1994年）乙文）與小鼠（prehn等人於五w / P/^rmaco/第203期 第213-22頁（1991年）乙文）之皮質梗塞體積。此外，在大鼠 之4血管短暫性全面缺血、硫酸長春新鹼所引發的隔海馬 迴損傷、丙烯醯胺所引發的周圍神經變性損傷以及坐骨神 經壓傷之後，SR 57746A(—種強力的5-HT1A激動劑）之治 療作用顯示具有神經保護性（Fournier等人於TVewrwc/第55 期第629-41頁（1993年）乙文）；及於pmn小鼠中顯示可延緩 運動神經元病變之惡化（Fournier等人於价7尸第 124期第811-7頁（1998年）乙文）。 曾揭露該類型的化合物用於治療青光眼（降低與控制 I〇P)，如見 WO 98/18458(授予 DeSantis 等人）及 EP 0771563A2(授予 Mano 等人）。Osborne 等人（於 〇/?/^/^/所0/〇(^<^第21〇期第3〇8-314頁（1996年）乙文）教導8-羥基-2-丙胺基四氫化萘（8-OH-DPAT)(—種5-ΗΤιΑ激動劑） 降低兔子之 IOP。Wang 等人（於 Cwrre;?/ 第 16(8)

期第769-775頁（1997年8月）乙文及於I VOS第39(4)期第 S488頁（1998年3月）乙文）揭露曱基哏胺甲尿啶（一種α 1A拮 抗劑與5-HT1A激動劑）降低猴子之ιορ，但係歸因於其α 1A 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -------------裝--------訂---------線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1268777 A7 B7__ 五、發明説明（6 ) 受體活性。同時，揭露5-HT1A拮抗劑適用於治療青光眼（IOP 增加）（如 McLees之 W0 92/0338)。更進一步，DeSai等人（W0 97/35579)與Macor等人（美國專利第5,578,612號）揭露 5-11丁以與5-11丁1_型激動劑在治療青光眼（IOP增加）方面之 用途。該等抗偏頭痛的化合物係為5-HT1b、d、e、f激動劑， 如舒馬崔普坦（sumatriptan)與納拉崔普坦（naratriptan)及相 關化合物。 圖式之簡要說明 第1A與1B圖顯示在經系統性投予8-OH-DPAT及受到 嚴重的光氧化損傷之大鼠中，對於視網膜電流圖（ERG)的a 與b波功能之保存作用。 第2圖顯示在經系統性投予8-OH-DPAT及受到嚴重的 光氧化損傷之大鼠中，對於視網膜形態（感光體與視網膜色 素表皮）之保護作用。 第3圖顯示在經系統性投予巴斯皮隆（buspirone)及受 到嚴重的光氧化損傷之大鼠中，對於視網膜DNA(視網膜細 胞數目之衡量標準）之保護作用及對於視網膜形態（感光體） 之完整的保護作用。 · 經濟、貝工消費合作社印製 智慧財產局 第4A與4B圖顯示在經系統性投予SR-57746A及受到 嚴重的光氧化損傷之大鼠中，對於視網膜電流圖（ERG)的a 與b波功能之保存作用。 發明之概要說明 本發明係有關已發現適用於治療視網膜外部疾病之 5-HT1A激動劑，其特別適用於治療：老年性黃斑部退化（AMD) 9 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 1268777 A7

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1268777 A7 B7 五、發明說明（9 ) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 包括但不限於：坦多史必龍（tandospirone)、哏胺甲尿°定 、濟普拉席東（ziprasidone)、鹽酸瑞皮語坦（repinotan)、 鹽酸西利普丹（xaliproden)(SR-57746A)、巴斯皮隆 (buspirone)、弗辛諾森（flesinoxan)、EMD-68843、DU-127090 、蓋皮隆（gepirone)、愛尼斯皮隆（alnespirone)、PNU-95666 、AP-521、弗班西林（flibanserin)、MKC-242、賴索皮川 (lesopitron)、鹽酸沙林卓坦（3&1^〇1311)、0巧-13011、0巧-12966、E-5842、SUN-N4057及 8-0H-DPAT。 可使用下列方法測定如本發明之受體結合作用與激動 劑活性。 第1方法 5-HT1A受體結合分析 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 使用（3H)8-OH-DPAT作為配位子，使用在中華倉鼠卵 巢（CHO)細胞中表現之經選殖的人類受體，以進行5-HT1A 結合試驗。自表現選殖的5-HT1a受體（由加拿大蒙特婁之 Biosignal公司替NEN公司所生產）之中華倉鼠卵巢（CHO)細 胞取得之膜，在約40倍體積之pH 7.4的50 mM三羥甲基胺 基曱烷（Tris)中均質化5秒鐘。使用貝克曼（Beckman) Biomek 2000自動操縱裝置（美國加州弗羅頓（Fullerton)之 貝克曼（Beckman)儀器公司）進行藥物之稀釋。將膜製備物 、測試化合物及0.25 nM [3H] 8-OH-DPAT(美國麻州波士 頓之NEN公司）置於2 7 °C的同一緩衝液中培養1小時。藉由 快速地真空過濾通過預先浸泡於0.3%聚乙烯亞胺之懷特 曼（Whiteman) GF/B玻璃纖維過濾器，而終止分析。使用 12 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21〇 x 297公釐） 1268777 A7 B7 五、發明說明（10 ) 液體閃爍光譜測定法，而量測結合的放射性強度。使用非 線性曲線擬合程式（Sharif等人於J 尸Aarmaco/第5 1 期第685-694頁（1999年）乙文）分析數據。 亦可使用來自小牛與大鼠腦部（當地來源）之膜製備物 及人類腦皮層膜，而進行配位子結合研究。切割特定的腦 部區域，於10倍體積的0·32 Μ蔗糖中均質化，及於700x g 離心10分鐘。將所得之上清液於43,500x g離心10分鐘， 以組織均質機處理10秒鐘，以將片狀沈澱物重新懸浮於50 mM Tris-HCl(pH 7.7，25°C )中。將等分試樣儲存於-140 °C。在實驗之前，將製備物於37°C培養10分鐘，以除去内 源性▲清素。使用一種布藍德（Brandel)細胞收集器，藉由 快速過濾通過懷特曼（Whiteman) GF/C過濾、器，而終止分 析培養。使用張氏-普魯索夫氏（Cheng-Prusoff)公式（De Vry 等人於 Exper 77zer 第 284 期第 1082-1094 頁（1998 年) 乙文），計算I值。 第2方法 5-HT1a功能分析 可使用多種方法分析5-HT!A激動劑之功能活性，而測 定本發明的化合物之作用。其中之一種分析，係以來自雄 性斯普拉格-德利（Spraque_Dawley)大鼠之海馬迴切片進行 ，其係測1對於forsk〇lin所激發的腺苷酸環化酶之抑制作 用 〇/ Med C/zem 第 42期第 36 頁（1999年）乙文；J 第56期第1114頁（1991年）乙文；j以〜第284 期第1082頁（1998年）乙文）。在25倍體積之ρΗ 7.4與25°C的 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公爱） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝

n ϋ ϋ ϋ I ^1·1 11 1^— I n ϋ I 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 13 1268777 A7 B7 五、發明說明（11 ) 0.3 1^1嚴糖中，其中含有1111]^1£〇丁八、5 111]^£〇丁八、5 111]^[ 二硫蘇糖醇及20 mM Tris-HCl，將大鼠之海馬迴膜予以均 質化。均質化產物於l,〇〇〇x g離心1〇分鐘。然後將上清液 於39,000x g離心10分鐘。將所得之片狀沈澱物重新懸浮 於均質化緩衝液中，以得約1毫克/毫升之一蛋白質濃度， 將等分試樣儲存於-140°C。在使用之前，在波特-愛維詹 (Potter-Elvehjem)均質機中將該膜再度均質化。在含有100 mM氯化鈉、2 mM醋酸鎂、0.2 mM ATP、1 mM cAMP、0.01 mM GTP、0.01 mM forskolin、80 mM Tris-HCl、5 mM填 酸肌酸、0.8 U/微升的肌酸磷酸激酶、0.1 mM IBMX、1-2 微居里的α-[32Ρ]ΑΤΡ之一培養緩衝液中，添加50微升之 膜懸浮液（50微克蛋白質）。藉由在培養混合物（於30°C預 溫5分鐘）中添加該膜溶液，而開始與測試化合物之培養作 用（於30°C共10分鐘）。依據所羅門（Salomon)之方法（於ddv 第 10期第 35-55 頁（1979年）乙文）， 量測[32P]cAMP。使用布雷德福（Bradford)分析法（於d⑽/ 价〇c/zem第72期第248-254頁（1976年）乙文），量測蛋白質 〇

依據修福特（Schoeffter)等人之方法（於第 36期第429-437頁（1997年）乙文），亦可在重組型人類受體 中測量功能活性。在24孔的培養皿中，讓經重組型人類5-HT1A受體轉移感染之海拉（HeLa)細胞生長至匯合處。以1 毫升之經Hepes(2-[4-(2-羥乙基）-1-嘬嗉基]乙磺酸）緩衝的 食鹽水，其中含有130 mM氯化鈉、5.4 mM氯化鉀、1.8 mM 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

tj、 Γ* i_i a·— i-i § _1 1> —ϋ ^ ^ BB^i ^1· ^1· tmt ·ϋ 11 ϋ— I p 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 14 1268777 A7 _B7_ 五、發明說明（12 ) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 氯化鈣、0·8 mM硫酸鎂、0.9 mM磷酸鈉、25 mM葡萄糖 、20 mM Hepes，其酸驗值為7.4及含有5毫克/升之驗紅， 沖洗該細胞。該等細胞於37°C以0.5毫升食鹽水中之6微居 里/毫升的[3H]腺嘌呤（23居里/亳莫耳，來自瑞士蘇黎世拉 恩（Rahn) AG之安莫森（Amersham)公司）加以標記2小時。 之後，以含有1 mM異丁基甲基黃嘌呤之1毫升的緩衝食鹽 水，沖洗培養皿2次。該細胞在10 //M forskolin與測試化 合物存在或不存在之下，在1毫升的該溶液（37°C)中培養15 分鐘。然後移除緩衝液，及添加含有0.1 mMcAMP與0.1 mM ATP之1毫升的5%三氯乙酸（TCA)，以萃取試樣。在4°C放 置30分鐘之後，在多衛世（Dowex) AG 50W-X4與氧化鋁管 柱（Salomon於Mei/z 第 195期第 22-28 頁（1991 年）乙 文）上，進行TCA萃取物之層析分離作用。環狀cAMP之生 產作用，係以[3H]cAMP/([3H]cAMP + [3H] ATP)之比例計 算得之。 使用第1與2方法中所說明之上述方法，而得下列數據 第1表5-HT1A受體結合與功能分析數據

化合物 受體結合作用 (IC50 nM，SEM) CAMP抑制作用 (EC50) (R，S) 8-OH-DPAT 1.5 nM 4.7 nM (R) 8-OH-DPAT 0.5 nM 2.6 nM SR-57746A 2.5 nM 3.7 nM 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 一般就變性疾病而言，係以介於約0.01至約500毫克 之間之每日化合物劑量，而口服投予本發明之5-HT1A激動 劑。每曰總劑量較佳介於約1至約100毫克之間。非口服的 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 15 1268777

五、發明說明（13 ) 投藥作用，諸如玻璃體内、眼睛局部、透皮貼片、皮下、 非經腸、眼内、結膜下或眼球後或眼球筋注射、橫鞏膜( 包括離子電滲療法）或緩㈣生物可分解性聚合物或脂質 體，則可能需要調整每曰總劑量，以提供一治療有效量之 該化合物。亦能以眼睛刺激性溶液之形式輸送5_HT^激動 劑°濃度應自約0.001/^至約100/^，較佳約為001// Μ至約5 // Μ。 可將5-ΗΤ1Α激動劑納入各種眼科配方中，以輸送至眼 睛（如以局部、眼房内或經由一植入物之方式）。其等可與 眼科上可接受的防腐劑、表面活性劑、黏度增強劑、膠凝 劑、滲透增強劑、緩衝液、氣化鈉及水結合，以形成含水 的無菌眼用懸浮液、溶液、預製成的凝膠或在原處製成的 凝膠。可藉由將該化合物溶於一種生理上可接受之等滲壓 的含水緩衝液中，而製備眼用溶液或配方。更進一步，該 眼用 >谷液可包括一種眼科可接受的表面活性劑，以助於該 化合物之溶解作用。該眼用溶液可包括一種黏度增強劑， 諸如羥曱基纖維素、羥乙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、 甲基纖維素、聚乙烯咄咯酮等，以增進該配方於結合膜囊 之留置作用。為製備無菌的眼用軟膏配方，係於一適宜的 載劑（諸如礦物油、液態羊毛脂或白礦脂）中，混合活性成 份與一防腐劑。可藉由將活性成份懸浮於一親水性基質（ 依據用於類似眼科製劑的公開配方而自例如聚羧乙烯-940 等之組合物製備）中，而製備無菌的眼用凝膠配方；及可 納入防腐劑與張力劑。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝-------1—訂-------- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 16 1268777 A7

五、發明說明（14 ) 若以局部方式給藥，較佳係將5_HTia激動劑配製成局 部眼用懸浮液或溶液，其pH值約為4至8。5·ΗΤια激動劑 於該等配方中之含量，一般為〇·⑼以量％至5重量％，較 佳為0·01重量％至2重量％。因此，就局部用的形式而言， 將依據嫻熟的臨床醫師之判斷，每日在眼睛表面投予該等 配方1至4次’每次各1至2滴。 依據嫻熟的臨床醫師之判斷，每日投予下列如本發明 之局部眼用配方1至4次。 第1例 _ 成份 —---- 量(重量％) 巴斯皮隆(buspirone) 0.01-2% 甲基纖維素 0.5% 磷酸二鈉(無水） 0.2% ^ 氣化鈉 0.5% edta二鈉(依地酸二鈉） 0.01% ~ ~~' 聚縮山梨醇油酸酯80 0.05% 氣化苯甲烴銨 0.01% 鈉/氫氯酸 用於將pH值調整至7^7^ 純水 加至 100% ~ (請先閱讀背面之注咅？事項再填寫本頁} 裝 ϋ ϋ I=-OJI MBH MM I HHR 蜃 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 17 1268777 A7 B7 五、發明說明（15 ) 第2例 成份 量(重量％) 巴斯皮隆(buspirone) 0.01-2% 甲基纖維素 4.0% 磷酸二鈉(無水） 0.2% 氯化鈉 0.5% EDTA二鈉(依地酸二鈉） 0.01% 聚縮山梨醇油酸醋80 0.05% 氯化苯甲烴銨 0.01% 氫氧化鈉/氫氣酸 用於將pH值調整至7.3-7.4 純水 加至100% (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 第3例 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 成份 量(重量％) 化合物 0.01-2% 瓜爾豆膠 0.4-6.0% 填酸二鈉(無水） 0.2% 氯化鈉 0.5% EDTA二鈉(依地酸二鈉） 0.01% 聚縮山梨醇油酸S旨80 0.05% 氯化苯甲烴銨 0.01% 氫氧化納/氫氯酸 用於將Ph值調整至7.3-7.4 純水 加至100% 0 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1268777 A7 B7 五、發明說明（16 ) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 第4例 成份 量(重量％) 鹽酸西利普丹(xaliproden) 0.01-2% 白礦脂及礦物油及羊毛脂 軟膏稠度 磷酸二鈉(無水） 0.2% 氯化鈉 0.5% EDTA二鈉(依地酸二納） 0.01% 聚縮山梨醇油酸酯80 0.05% 氯化苯曱烴銨 0.01% 氫氧化鈉/氫氯酸 用於將pH值調整至7.3-7.4 第5例 10 mM靜脈注射溶液體重/體積％ 巴斯皮隆(buspirone) 0.384% L-酒石酸 2.31% 氫氧化鈉 pH 3.8 氫氯酸 pH 3.8 純水 加至100% 第6例 5毫克膠囊 成份 鹽酸巴斯皮隆(buspirone) 5 乳糖，無水 55.7 澱粉，羧基-甲基鈉 8 纖維素，微晶型 30 膠體氧化矽 0.5 硬脂酸鎂 0.8 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝

emmmm ammmmm ϋ ϋ ϋ I— ^1· I 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 19 1268777 A7 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 五、發明說明（17 ) 第3方法 在大鼠之光氧化引發的視網膜病模式中之神經保護效 應 在吾等之光氧化引發的視網膜病模式中，評估該等5_ HT1A激動劑之視網膜保護效應。 引發光化學指塞 藉由暴露於（220 fc)藍光（半幅通頻帶=435·475 nm)6 小時，而在暗適應大鼠（24小時）中引發光化學損害。在電 診斷評估視網膜功能之前，讓動物在黑暗中恢復5天。在 該光暴露期間，大鼠係個別地安置於透明的聚碳酸酯籠中 ------“—訂---------- 電診斷評估 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 在24小時的暗適應期之後，自麻醉的大鼠記錄視網膜 %抓圖（ERG)。藉由IP注射克他命（Ketamine)-鹽酸（75亳克 /公斤）與甲苯噻嗉（6毫克/公斤），而將大鼠麻醉。藉由觀 看完全視野，而引導出自置於角膜的鉑_銥線環電極所記 錄之閃光視網膜電流圖。將對於強度逐漸增強的一系列閃 光之電流反應予以數位化，以分析波形的時間特性與反應 電壓-強度的對數值（V-logI)之關係。視網膜電流圖的^皮 之麦化係與感光體及視網膜色素表皮之損傷有關，而視網 膜内部之損傷係反應於視網膜電流圖的b波之變化。 H隹視網膜之形熊 自對照組及投予藥物或載劑之大鼠取得眼睛組織，及 藉由浸於2%多聚甲醛與2%戊二醛之一混合物中而予以固 20 1268777

五、發明說明（18 ) 定。經固定的眼球係於遞增的乙醇系列中脫水，埋置於圯_4 塑膠樹脂中，及使用與顯微鏡連接之量化電腦影像分析系 統而分析1至1·5微米厚的部份。測量視網膜層之厚度（rpe •視網膜色素表皮；〇NL :外核層厚度；INL :内核層厚 度；IS + 0S :感光體内段與外段之長度）。 評估DNA之變化

藉由吸入一氧化碳而使白鼠無痛死亡，將個別的視網 膜冷凍於分開的管中。在0.8毫升之2·〇 M氯化鈉、5〇 mM 财04、阳7.4與2福£0丁八中，以聲波處理各視網膜， 以得均一的均質物，及予以冷凍儲存。以含有hl微克/毫 升的雙苯並咪唑（Hoechst 33258)之2.0 Μ氯化鈉、5〇 mM NaP04、pH 7.4與2 mM EDTA，將各試樣的等分試樣（〇」 毫升）稀釋10倍。使用相同緩衝液中之0至25微克/毫升的 小牛胸腺DN A，建構一標準曲線。將各視網膜試樣與標 準試樣之三重複的0.2毫升等分試樣，吸量至一個96孔之 培養皿’以在細胞螢光計（Cyt〇fl〇ur H)中量測螢光。激發 波長為360 nm，而發射波長為460 nm。 將雄性斯普拉格-德利（SpraqUe-Dawley)大鼠隨機分派 為藥物與載劑實驗組。對照組之大鼠係於正常的週期性光 暴露之下，安置於其等之籠中。所有的大鼠皆於為期6小 時的藍光暴露前之48、24與0小時給藥。給藥方式如下： 1) 8-OH-DPAT(8-羥基-2-(二-正-丙胺基）四氫化萘）·· 在光暴露之前，對於接受載劑（N=10^8-〇H_DPAT(〇 5亳 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21〇 x 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ------^—訂---------- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 21 1268777

五、發明說明（19 ) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 克/公斤’5Μ1·0亳克/公斤[N=1〇])之大鼠，進行三次的 皮下注射。使用5隻大鼠作為對照組。藉由分析視網膜電 流圖（ERG)反應及測量視網膜形態之變化，而評估對於視 網膜之保護作用。 2) 巴斯皮隆（bUspirone):在光暴露之 療…隻大鼠以IP方式投予載劑或巴斯皮各: (bUSpir〇ne)(0.5毫克/公斤與丨.〇毫克/公斤），以量化dna。 使用來自7隻正常大鼠之視網膜作為對照組。為評估視網 膜形態之變化，對大鼠投予（IP方式）載劑（N=8)或巴斯皮 隆（bUSpir〇ne)(1.0毫克/公斤[N=9])。使用6隻大鼠作為對 照組。藉由量化視網膜DNA之變化及測量視網膜形態之 變化，而評估對於視網膜之保護作用。 3) SR-57746A :對大鼠以ip方式投予載劑（n=15)* SR-57746A(0.5亳克/公斤[N=5]*丨亳克/公斤[n=15])。使 用11隻大鼠作為對照組。在為期5天的恢復期之後，分析 視網膜電流圖（ERG)，以評估對於視網膜之保護作用。 8-0H-DPAT之評估結果 在5天的恢设期之後所測得的結果顯示，相較於正常 的大鼠而㊂’為期6小時的藍光暴露作用造成視網膜電流 圖反應幅度顯著地縮小（ANOVA，ρ<〇.〇〇ι ;邦弗隆尼 (Bonferroni) t-試驗，ρ<〇·〇5)(第1A與B圖）。相較於對照組 ’藍光暴露作用在投予載劑之大鼠中造成a波與b波之最大 幅度縮小7 5 %。此外，閾值反應較低及於較亮的閃光強度 激發。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注咅？事項再填寫本頁) ! I — I I 訂- — II----- 0 22 A7 1268777 _________ 五、發明說明（2〇 ) 投予8-0H-DPAT之大鼠顯示：在保護視網膜内部與外 部功能免於該光氧化所引發的視網膜疾病侵害方面，具有 劑量依賴性的保護作用（第1A與B圖）。在投予8_〇h_ DPAT(0.5cfe克/公斤）之大鼠中&波與b波之最大反應幅度與 投予載劑之大鼠並無差異，及約為對照組之27%。然而， 在投予8-〇H-DPAT(1.0毫克/公斤）之大鼠中，a波與b波之 最大反應幅度分別約為正常鼠之53%與6丨％，及顯著地高 於在投予載劑的大鼠中所測得之反應（第丨八與B圖）。 與該等視網膜電流圖（ERG)之變化相符地，在為期3 週的恢復期之後，在投予載劑的大鼠中進行之該等視網膜 的形態分析顯示：顯著地（AN〇VA，p<〇 〇1)損失感光體細 胞，縮短感光體内段加上外段之長度，及視網膜色素表皮 之平化作用。未偵測到内核層厚度（INL)之顯著變化。相 較於對照組，外核層厚度（〇NL)減少73%，感光體内段加 上外段之長度減少82%，及視網膜色素表皮之厚度減少 59%(第2圖）。在投予8·〇ΡΚ〇ΡΑΤ(〇·5毫克/公斤）之大鼠中 所觀察到之損害，與在投予載劑之大鼠中所觀察到之損害 ，亚無顯著的差異。當視網膜電流圖（ERG)降低約63%之 際，外核層厚度（ONL)減少53%，感光體内段加上外段之 長度減少60%，及視網膜色素表皮之厚度減少％%。然而 、’在投予8-OH-DPAT(l.〇亳克/公斤）之大鼠令所觀察到之 p員σ係兵技予載劑之大鼠顯著地不同。當視網膜電流 圖反應幅度比正常大鼠高約5〇%之際，外核層厚度（〇nl) 為投予载劑的大鼠之2.4倍，感光體内段加上外段之長度 本紙張尺度翻標準（CNS)A4規格（210 X 297公爱） (請先閱讀背面之注音？事項再填寫本頁) 裝 —^—訂---------- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 23 1268777 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明說明（21 ) 為2·9倍，及視網膜色素表皮之厚度為1.9倍。 皮隆（buspirone)之評爸 如第3圖所不，投予載劑的大鼠之視網膜DN a的量， 比對照組的量顯著地減少約3〇%(AN〇VA，p=〇 〇i7)。在 投予載劑或投予〇· 1毫克/公斤巴斯皮隆（buspir〇ne)之組別 之間，並未測到顯著的差異。在投予巴斯皮隆（buspi⑺以… 毫克/公斤）之大鼠中，測得對於視網膜之保護作用。視網 膜DNA的量，係顯著地高於在投予載劑的大鼠中所測得 者’但與對照組並無顯著的差異。 為期6小牯的監光暴露作用造成感光體數目顯著地減 少（AisJOVA，ρ<〇·〇5)。在為期4週的恢復期之後所進行之 該等視網膜的形態分析顯示：投予載劑的大鼠之外核層比 對照組薄54%(第3Β圖）。“，在正常大鼠與、經巴斯皮隆 (buspirone)治療的大鼠之間，並未在外核層厚度方面測得 顯著的差$ ° _於正常大氣之3〇·4微米的外核層厚度， 才又予巴斯皮隆（buspirone)。毫克/公斤）的大鼠之外核層厚 度為28.3微米。 古結果 在經光暴露及投予SR-57746A(〇 5與1〇毫克/公斤）的 大鼠中，测得對於視網膜功能之保護作用。相較於對照組 ，在投予載劑的大鼠中之a波與13波的最大反應幅度降低 50%(第4A與B圖）。然而，在投予sr_57746a(〇5毫克/公 斤）之大鼠中，最大反應為對照組之82%，而在投予丨亳克/ 么斤之大鼠中，最大反應為正常大鼠之70%。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裳------^—訂--------- 24 1268777 A7 '^^ -— B7_— 五、發明說明（22 ) j舎論 在該視網膜變性疾病之氧化模式中，顯示該等5_HTia 激動劑（8-0H-DPAT、巴斯皮隆（bUSpirone)與 SR-57746A) 具有良好效能與效力。在連續3天投予低至1毫克/公斤之 一劑量的大鼠中，達到功能與結構方面之保護作用。 (請先閱讀背面之注音？事項再填寫本頁)

---I--l· I 訂， - - ---I 用 適 度 尺 張 紙_一本 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 國 中

Claims (1)

1268777 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍 1· 一種用於治療視網膜外部疾病之藥學組成物，其包括 一藥學有效量之一種具有5-HT1A激動劑活性之化合物 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 〇 2.如申請專利範圍第1項之藥學組成物，其中該化合物係 選自下列群中：坦多史必龍（tandospirone)、嚷胺甲尿 啶、濟普拉席東（ziprasidone)、鹽酸瑞皮諾坦（repinotan) 、鹽酸西利普丹（xaliproden)(SR-57746A)、巴斯皮隆 (buspirone)、弗辛諾森（flesinoxan)、EMD-68843、DU-127090、蓋皮隆（gepirone)、愛尼斯皮隆（alnespirone) 、PNU-95666、AP-521、弗班西林（flibanserin)、 MKC-242、賴索皮川（lesopitron)、鹽酸沙林卓坦 (sarizotan)、E-5842、SUN-N4057、Org-1301 卜 Org-12966 及 8-OH-DPAT。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印制农 3·如申請專利範圍第1項之藥學組成物，其中該疾病係選 自下列群中：老年性黃斑部退化（AMD)、色素性視網 膜炎（RP)及其他形式的視網膜遺傳變性疾病；視網膜 剝離與撕裂；黃斑部皺摺；影響視網膜外部之缺血症 ;糖尿病性視網膜病；與包括光動力治療（PDT)的雷 射療法（格栅、焦點及全視網膜）相關之損傷；外傷； 醫師所造成之由手術（視網膜移位、視網膜下之手術、 玻璃體切除術）或光引發的視網膜病；及視網膜移植物 之保存作用。 4·如申請專利範圍第3項之藥學組成物，其中該疾病係為 老年性黃斑部退化（AMD)。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 26 1268777 as C8 D8 六、申請專利範圍 5. 如申請專利範圍第3項之藥學組成物，其中該化合物係 選自下列群中：坦多史必龍（tandospirone)、嚷胺甲尿 淀、濟普拉席東（ziprasidone)、鹽酸瑞皮諾坦（repinotan) 、鹽酸西利普丹（xaliproden)(SR-57746A)、巴斯皮隆 (buspirone)、弗辛諾森（flesinoxan)、EMD-68843、DU-127090、蓋皮隆（gepirone)、愛尼斯皮隆（alnespirone) 、PNU-95666、AP-521、弗班西林（flibanserin)、 MKC-242、賴索皮川（lesopitron)、鹽酸沙林卓坦 (sarizotan)、E-5842、SUN-N4057、Org-13〇n、Org-12966 及 8-OH-DPAT。 6. 如申請專利範圍第3項之藥學組成物，其中該疾病係選 自下列群中：老年性黃斑部退化（AMD)、色素性視網 膜炎（RP)及糖尿病性視網膜病。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 27 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐）