TWI249032B - Self-calibrated flow-through assay devices - Google Patents

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TWI249032B
TWI249032B TW092133143A TW92133143A TWI249032B TW I249032 B TWI249032 B TW I249032B TW 092133143 A TW092133143 A TW 092133143A TW 92133143 A TW92133143 A TW 92133143A TW I249032 B TWI249032 B TW I249032B
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Description

1249032 玖、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 各種不同分析程序及設備一般運用於流通試驗，以測定試驗樣本 中分析物的存在與/或者濃度。例如，免疫分析利用免疫系統的機構，其中 爲響應抗原存在而產生抗體，此抗原爲病原或外在有機體。這些抗體及抗 原（即免疫反應物)能互相連結，藉以引起極具體反應機構，此可使用於測 定生物樣本中特殊抗原的存在或濃度。 【先前技術】 有數個使用免疫分析物的著名免疫分析方法標有可查出的成 分’因此可分析查出分析物。舉例來説，“三明治類型”（sandwich-type) 試驗一般牵涉將試驗樣本與可偵檢的探針(比如膠乳或放射性同位素）， 此’此與分析物的特定連結構件結合。結合探針形成具有分析物的合成 物。然後這些合成物擴及固定化抗體地區，此處於抗體與分析物之間發生 連結，以形成二元“三明治合成物”（sandwichcomplexes)。三明治合成物 位於偵檢分析物地區。此技術可使用於獲得定量或半定量結果。此三明治 類型試驗的一些範例由Qrubb等人描述於奚國鼻利編號第4，168，146號， 以及蔓么的美國專利編號第4,366,241號。 代替技術爲“競爭類型”（competitive-type)試驗。在“競爭類 型”試驗中，標籤一般標有分析物或分析物的相似物，此爲了連結抗體而 與樣本中任何未標有分析物競爭。競爭性試驗一般使用於偵檢分析物(比如 半抗原），每個半抗原爲單價，並僅可連結一抗體分子。競爭性免疫分析設 備的範例由描述於美國專利編號第4,235,601號，Liotta的莫 國專利編號第4,442,2〇4號，以及Buechler等人的美國專利編號第5,208,535 號0 許多試驗r依賴校準提供有效且有意義的結果，尤其對半定量及定
Mavis-C:\WINSOFT\^flJ\Pk001.08~\0879\PK-001-0879.doc2004/4/7 1249032 量條。換句話説，-般可使用外部或内部校準系统。在外部校準系财 :由含有-連把知數量分析_鮮樣树得縣崎，雜由樣本獲 得的結果稍辟麟錄，讀壯難絲种財贼者數量。= 邵校準方法較簡單設計及簡單實施，論如何，ff有環境干擾及一次一 次變動，因此並不可靠。 ^換句話説，傳統内部校準系統—般利用具有校準地區及偵檢地區 的薄膜，此m定捕捉特定分析物的湖。不巧，與偵檢地輯照下，經常 限定校準地區提供確實且準確的能力。再者，大部分内部校準地區=昂 貴，藉以產生不實用的某一用途。 如此，目前需存有精確且不昂貴的流通試驗之精確校準系统。 【發明内容】 Θ依照本發明的-實施例，揭發能條存於試驗樣本中的分析物存 在或數量的流賴驗設備(例如三、競铸等）。試驗設備包含與偵檢 探針及校準探針聯繫的多孔薄膜，此能個别產生偵檢信號及校準信號。舉 例來説，在-些實施例中，探針選㈣色素原、催化劑、螢光化合物、化 合光化合物、魏絲物、讀性齡物、雜缝雜、微_(iip〇s_) 及其組合離成。在-制實施例卜料含有職微粒子。 多孔薄膜足義爲固定聚合電解質捕捉試劑内的偵檢/校準，此構成 直接或間接連結至偵檢探針、校準探針或其組合。可利用分析物特定連結 構件的第二捕捉試劑。偵檢/校準地區可魅偵檢及校準信號，因此分析物 的數量可隨校準信號校準而自偵檢信號測定。 依照本發明的另-實施例，揭發偵檢存於試驗樣本中的分析物存 在或數量之方法。讀包含提佩賴驗設備。含有分析物的試驗樣本與 設備中的偵絲収鮮騎麟。賴檢/鮮地區，·餘信號及校 準域的Μ。試驗樣本内的分析物數量與偵檢信號的強度成比例，此由
Mavis-C:\WINSOFT\ 專利\Pk001 ·08~\0879\ΡΚ-001 -0879.doc2004/4/7 1249032 校準信號的強度校準。 本發明的其他特性及觀點更詳細探討於下。 【實施方式】 定義 如此處所使用“分析物”(analyte)—詞一般引用偵檢的物質。例 如，分析物可包括抗原物質、半抗原、抗體及其組合。分析物包括(但不受 P艮)毒素、有機化合物、蛋白質、縮氨酸、微生物、氨基酸、核酸、贺爾蒙、 類固醇、維他命、藥品(包括塗抹治療目的以及塗抹被禁止目的）、試劑媒 介物或副產品、細菌、病毒顆粒及代謝物或對上面任何物質的抗體。一些 分析物的特定範例包括血清蛋白鐵、肌氨酸酑激酶MIB(CK-MB)、毛地黄 異素、苯妥英納(phenytoin)、巴比妥酸鹽類(phenobarbitol)、酉先胺咪 (carbamazepine)、萬古黴素、硫酸紫菌素(gentamycin)、茶驗(theophylline)、 帝拔癲(valproic acid)、異金雞納驗(quinidine)、黄休化荷爾蒙(leutinizing hormone)(LH)、刺激卵泡素贺爾蒙(FSH)、雌二酮、黄體脂酮、C-反應蛋白 質、lipocalins、IgE抗體、維他命B2微球蛋白(microglobulin)、糖化血色 素(glycated hemoglobinXGly，Hb)、腎上腺皮質素、洋地黄毒素、 N-acetylprocainamide(NAPA)、procainamide、德國麻療的抗體(比如德國麻 疹-IgG及德國麻疹IgM)、住血原病蟲的抗體（比如住血原病蟲 IgG(Toxo-IgG)以及住血原病蟲IgM(Toxo-IgM))、睪丸激素、水楊酸鹽、乙 酿基氨基苯(acetaminophen)、B型肝炎病毒抗原(HbsAg)、B型肝炎核心抗 原的抗體(比如抗B型肝炎核心抗原IgG及IgM(抗-HBC))、人體免疫缺乏 病毒1及2(HIV 1及2)、人體T-細胞血癌病毒1及2 (HTLV)、B型肝炎e 抗原(HBeAg)、B型肝炎e抗原的抗體(抗-Hbe)、甲狀腺刺激贺爾蒙(TSH)、 甲狀腺素(T4)、總 triodothyronine (總 T3)、自由 triodothyronine (自由 T3)、 carcinoembryoic抗原（CEA)以及血中胎兒蛋白血中胎兒蛋白（a -feta
Mavis-C:\WINSOFT\|filJ\Pk001,08~\0879\PK-00 l-0879.d〇c2004/4/7 1249032 protein)(AFP)。濫用及控制物質的藥劑包括(但不受限)安非他命、甲基安非 他命、巴必妥酸鹽(比如戊巴必妥、西可巴比妥、戊基巴比毋妥、苯巴比妥 及巴必妥）、非巴比妥類(比如librium及valium)、大麻(比如印度大麻葉及 大麻煙）、古柯鹼、芬太尼(fentanyl)、LSD、白板、鎮靜劑(比如海洛英、 嗎啡、可待囡、二氫嗎啡酮(hydromorphone)、二氫可待因酮(hydrocodone)、 美沙酮、可待因酮(oxycodone)、羥二氫嗎啡酮(oxymorph〇ne)以及鸦片）、 環烴六胺以及propoxyhene。其他可能的分析物由Everhart等人始沭认追國 專利編號第6,436,651號，以及Ϊ011Ι差△的美國專利編號第4,366,241號。 如此處所使用“試驗樣本” (test sample)—詞一般引用疑爲含有 分析物的材料。可直接使用獲自來源或下面預先處理的試驗樣本，以變更 樣本特性。試驗樣本可衍生於生物來源(比如生理流體，包括血液、唾液、 眼睛水晶體泥體、腦脊拄泥體、汗水、尿液、牛奶、腹水流體、粗。亞、關 節滑液流體、腹膜流體、羊水等等）。可在使用之前預先處理試驗樣本，比 如準備來自血液的血漿、稀釋黏液等等。處理方法可牵涉過遽、蒸餘、濃 縮、不活動性的干涉成分以及試劑的附加物。除了生理流體外，可使用其 他液體樣本(比如水、食物產物及執行環境或食物製造試驗）。另外，可使 用疑爲含有分析物的固體材料作爲試驗樣本。在一些實例中，有利於將固 體試驗樣本變成液體中間物，或分離分析物。 洋細描述 目前將參考詳述本發明的各種不同實施例，下面發表一或更多範 例。每個範例經由發明説明提供，並不限制發明。事實上，顯然本發明所 產生的各種不同變更及變動無須達反發明範圍或精神而可精通此技藝。例 如，説明或描述部分實施例的特性可使用於另一實施例，以產生更進一步 實施例。因此，本發明意圖在附加申請專利範園及其同等物範圍内涵蓋此
Mavis-C:\WINSOFT\$flJ\Pk〇〇i.〇8^\〇g79\PK-001-0879.doc2004/4/7 1249032 類變更及變動。 -般而τ，本發明爲鱗内部自行校準系_流通試驗設備。尤 八本發月使用由多⑽膜試驗絲的單_偵檢/校準地區。藉由除去環境 因素(比如溫度、pH及儀器的錄信號不穩定性)的影響，在相同時間傳導 信號偵檢及内部校準可大大增加偵檢的確實性及再生性。 引用第W ’例如’目前將更詳述根據本發明形成的流通試驗設 備W之-實施例。如圖示，設備(20)含有可任意以硬質材料⑼支撐的多 孔薄膜(23)。-般而吕’多孔薄膜(23)可由試驗樣本可通過的任何各種材料 製造。舉例來説，使用於形成多孔薄膜(23)的材料可包括(但不受限)合成變 更的天然、合姐天絲生的賴，比如乡__如麟素材料(比如紙 張)或纖維素衍生物(比如纖維素醋酸鹽及硝化纖維素）、矽石、無機材料(比 如無害的礬土、矽藻土、MgS〇4或一律分配於多孔聚合物基質的其他無機 纖細分割材料，此具有比如氣化烯、氣化烯_丙烯共聚物及氯化烯_醋酸乙 埽酯共聚物）、天然發生的衣物(例如棉布)及合成衣物(例如尼龍或人造 絲）、多孔凝膠(比如矽凝膠、洋菜膠、葡聚糖及骨膠）、聚合薄膜(比如聚丙 婦酿氨等等）。在一特别實施例中，多孔薄膜(23)由硝化纖維素與/或者聚酯 %胺材料形成。需了解此項“硝化纖維素”（nitrocellulose)引用纖維素的硝 酸酯，此可單獨爲硝化纖維素或硝酸與其他酸(比如具有1至7個碳原子的 脂肪族羧酸)的混合酯。 設備(20)也可含有芯吸襯墊(28)。芯吸襯墊(28)—般接收移經全部 多孔薄膜(23)的流體。如著名技藝，芯吸襯墊(28)可幫助促進毛細管作用及 流體流經薄膜(23)。 欲開始偵檢試驗樣本内的分析物，使用者可直接運用試驗樣本至 多孔薄膜(23)，然後此可移動到達偵檢/校準地區(31)(如下所述）。或者，試 驗樣本可首先運用於與多孔薄膜(23)流體聯繫的樣本襯墊(無圖示)。可使用
Mavis-CAWINSOFT\ 專手 IJ\Pk001 ·08~\〇879\ΡΚ-〇〇 1 -0879.d〇C2004/4/7 9 1249032 於形成樣本襯墊的一些適當材料包括(但不受限)硝化纖維素、纖維素、多 孔聚乙烯襯墊及玻璃纖維過濾紙。假使理想的話，樣本襯墊也可含有一或 更多試驗預先處理試劑，此不是擴散性就是非擴散性附著。 在説明的實施例中，試驗樣本自樣本襯墊(無圖示)移至結合襯墊 (22)，此可與樣本襯塾的一末端聯繫。結合襯墊⑼經由能通過試驗樣本的 材料所形成。舉例來説，在一實施例中，結合襯墊(22)由玻璃纖維形成。 雖然僅顯示一結合襯墊(22)，需了解本發明也可使用其他結合襯墊。 欲促進試驗樣本内存有或不存有分析物的精確偵檢，在設備(2〇) 的各種不同位置運用探針。隨著下面更加詳述，探針使用於偵檢分析物及 校準。一般可產生信號的任何物質可由視覺偵檢，或可使用作爲探針的儀 器設備偵檢。各種不同適當物質可包括色素原、催化作用、螢光化合物、 化合光化合物、磷光化合物、放射性化合物、直視標籤(包括膠狀金屬(例 如金)及非金屬顆粒）、染料顆粒、酵素或基質或有機聚合膠乳顆粒、微脂 體或其他含有信號引起物質的囊胞。例如，一些適合使用作爲探針的酵素 由Litmagi人揭發於美國專利編號第4,275，M9號，其完全合併於此作爲 參考目的。酵素/基質総的-範例爲酵紐性活性猶臨献基質硝酸藍 色四唑-5-溴斗氣各indolyl磷酸鹽或衍生物或其相似物，或基質 4-methylumbelliferyl phosphate (MUP)。其他適當探針可由拉描述於 美國專利編號第5,670,381號，以及描述於美國專利編號第 5,2；>2,459號，其完全合併於此作爲參考目的。 在-些實施财，探針可含有製造^可碰信_縣化合物。 螢光化合物可錢光分子、聚合物、樹狀聚合物、雛料。例如，適當 勞光分子的-些範例包括（但不受限）勞光素、螯化銪、_蛋: (phycobiHprotdn)、玫瑰紅顏料及其衍生物及相似物。視覺铺檢的著^化人 物也可使用作爲探針，藉以提供直接著色讀出樣本中分析物的存在或^
Ma^WINSOWk00l,8^^ ^ Ϊ249032 度，此無須進一步信號產生試劑。 探針(比如上面所述)可單獨使用，或可絲粒子(有時稱爲“珠 狀”或“微珠狀”）-起使用。例如，可使用自然發生的微粒子(比如細胞 核、徽漿菌屬(myCOPlasma)、細胞質體、質體、哺乳動物細胞(例如紅血球 翳）、單細胞微生物(例如細菌）、多醣類(例如洋菜)等等。進一步，也可利 用合成微粒子。舉例輕，在施财，_標有縣或著色染料的膠 乳微粒子。雖然本發明可使用任何膠乳微粒子，膠乳微粒子一般由聚苯乙 歸、丁二烯苯乙歸、苯乙烯-丙参乙烯三聚物、聚甲基丙婦酸甲酉旨、衆乙 基丙歸酸甲S旨、苯乙参順丁稀二肝共聚物、聚醋酸乙触、聚乙婦心定、 聚二乙烯苯、聚丁騎苯二甲酸g旨、丙騎、氣化埽·_酸§旨等等或乙酸、 羧基、氨基、煙基或其療得治衍生⑯。其他適當微粒子可由J〇u等人描述 於美國專利編號第5风381號以及由Tarcha等人描述於美國專利編號第 5,252,459號，其完全合併於此作爲參考目的。一些商業上適當勞光顆粒的 可用範例包括螢光羧酸s旨微粒體，此售自商標名“Flu〇Sphere”（Red 580/605)及 “Tra_u〇Sphere ”（543/620)下的 Mole⑶lar Probes，Inc·，並有 Texas Red 及 5-與 6-carboxytetramethylrhodamine，此也售自 Molecular
Probes，Inc·。商業上可用著色膠乳微粒子的範例包括羧酸自旨膠乳珠狀，此 售自 Bang's Laboratory，Inc.。 當探針爲顆粒時(比如上面所述），顆粒的平均直徑一般理想可依 照一些因素而定，必如顆粒選擇類型、.薄膜細孔大小以及薄膜合成物。舉 例來説，在一些實施例中，微粒狀物質標籤的範圍可約爲〇 〇1微米至丨，〇〇〇 微米，在一些實施例中可約爲0.01微米至10微米。在一特别實施例中， 顆粒的平均直徑約爲仏丨至2微米。一般，顆粒實質上爲球形，雖然包括(但 不受限)盤狀、桿狀、棒狀、不規則形狀等等的其他形狀可適合使用於本發 明中。由那些精通技藝明白，可廣泛變化合成物、形狀、大小與/或者顆粒
Mavis-C:\WINSOFT\ 專利\Pk001 ·08〜\0879\ΡΚ-001 -〇879,doc2〇〇4M/7 || 1249032 密度。 人（4财’理想的是在—些方式巾變更探針，使能更輕易黏 /刀析物。在此類實例中，探針可隨某特定連結構件附著而形成探針接 :而變更。特定連結構件-㈣祕特定連結組的構件，即二個不同分 =匕處其卜個化學分子贼者物_至第二分子。例如，免疫反應 重組眶万法或縮氨酸適合體所形成）。抗體可爲單株或多株抗體、重組 忠白貝或心物或細片’也可爲抗财其他特定連結構件的混合物。準 備此類抗體及適當使时爲特定連結構件的詳細説㈣眾所周知的精通 技i“其他共同特定連結組包括(但不受限)維生素Μ抗生物性蛋白、碳 Κ化口物及親醣蛋白胃（leetm)、補充核甘酸順序(包括探針及捕獲核酸順 序此使用於DNA雜父反應試驗，以偵檢出核酸順序）、補充縮氨酸順序 (包括由重組方法、作㈣及較體分子、贺爾蒙及贺聽連結蛋白質、酵 素輔助因子及轉、酵餘·卿素料）。再者，特定連結組包括最初 特定連結構件__齡。糊雜，可制分析物的衍生物或片斷(即 分析物-相似物），只要至少一抗原決定部位與分析物相同。 特足連結構件一般可使用各種已知技術附著至探針。例如，特定 連結構件至探針(即微粒子)的共價連結可使用羧酸、氨基、乙睡、溴乙酿 基、碘乙醯基、硫醇、環氧基樹脂及其他反應或連接官能基完成，而且剩 餘的自由基以及基本碳可經由蛋白質連結反應完成。表面官能基也可合併 作爲官能化共同單體，因爲微粒子的表面可含有極性部分的較高表面濃 度。另外’雖然微粒子探針常常在合成之後官能化，在某情形中(比如聚硫 酚），微粒子可直接與蛋白質共價連結，此不需進一步變更。舉例來説，引 用第一圖，本發明的一實施例爲説明共價連結一探針。如圖示，第一連結 步驟爲使用碳二亞胺在探針表面上羧基活性化。在第二步驟中，活性化绞
Mavis-C:\WINSOFT\^fl]\Pk00|.08~\0879\PK-00l-0879.doc2004/4/7 12 !249〇32 酸基對抗_氨絲辦反應，鎌。雑鎖/或者鍵連結發 生於緩衝物中，比如磷酸鹽缓衝食鹽水(PBS)(例如pH 72)或 2.mo_ino)乙垸磺酸_sx例如pH 5 3)。如圖示，频 用乙醇胺阻擋，例如，形成探針結合物。除了共舰外，本發日月也可利用 其他連結技術(比如物質吸附）。 再次引用第-圖，設備⑽也含有伯檢/校準地區⑼。偵檢/校準 地區(31)-般提供單一個别的偵檢/鮮區域(例如線、點等等），因此使用 者可。λ備位置精確)則定試驗樣本内的特殊分析物。例如，在圖解的實施 例中，利用單線。 進-步，線可配置於實質上與試驗樣本流經設備⑽垂直的方 向。同樣地，在-些實施例中，線可配置實質上與試驗樣本流經設備⑽ 平行的方向中。 偵檢/校準地區(31)含有一或更多固定捕獲試劑，此可直接或間接 連結至探針(即特定連結構件結合至探針，以探針等等合成至分析物卜在 二實施例中’第一免疫捕獲試劑構成連結至偵檢探針，同時第二捕獲試 劑構成連結至鱗探針。第_及第二免疫捕獲試射相同或相異。 一般而言，偵檢/校準地區(31)内可制動各種不同類型的捕獲試 劑。舉例來説，在-實補中，_定連結構件使賴探針結合，捕 獲試劑可完全-致’或由相_型或種類的材料(例如抗體、抗原、相似物 等等)形成。因此，在此實施例中，當連結至分析物時，捕獲試劑可充當探 針的固連結地點。換㈣説，分析物(比如抗體、抗料等)可具有二個 連結地點。根據反應偵檢/校準地區(31)及通過結合襯塾(22)，其中一連結 地點被結合至探針的特定連結構件佔領。無論如何，分析物的自由連結地 點可連結至免疫捕獲試劑。 在另一實施例中，免疫捕獲試劑可爲聚合電解質，此可直接或間
Mavis-C:\WINS〇FT\^iiJ\pk〇〇 i .〇g-\0879\PK-0〇l -〇879.doc20〇4/4/7 13 1249032 接經由離子X互作用而連結至探針。例如，聚合電解質可具有淨正或負電 荷’且靜電荷一般爲中立。一些具有淨正電荷的聚合電解質之適當範例包 括(但不受p艮)聚離氨酸(商業上獲自密蘇里州路易士街的sigma_Aldrich化 學有限公司）、聚次乙亞胺、環氧-氣_丙烷官能化聚胺與/或者聚醯胺 (polyamidoaminesX比如聚(二甲胺-共同-〇(嘩氧_氣_丙烷)）、聚己二烯二甲 基氣化銨、陽離子纖維素衍生物(比如與四級銨水溶性單體接合的纖維素共 聚物或纖維素衍生物)等等。在一特别實施例中，可利用cdQuat(g) sc_23〇M 或H-100(獲自National Starch & Chemical, Inc·)，此爲含有四級銨水溶性單 體的纖維素衍生物。再者，具有淨負電荷的聚合電解質之一些適當範例包 括(但不受限)聚丙烯酸(比如聚(乙婦-共同-甲基丙烯酸）、鈉鹽)等等。也需 了解本發明也可利用其他聚合電解質，比如兩性聚合電解質(即具有極性及 非極性邵分）。例如，適當兩性聚合電解質的一些實施例包括(但不受限)聚 (styryl-b-N-甲基2·乙烯基吡。定碘化物)以及聚⑼㈣各丙烯酸），二者獲自 加旱大 Dorval 的 Polymer Source，Inc.。 雖然一般可使用任何聚合電解質，爲特殊用途而挑選的聚合電解 質可依照探針的性質、特定連結構件、感興趣的分析物、多孔薄膜類型等 等而足。尤其，聚合電解質的流通電荷允許連結至具有相反電荷的物質。 因此，舉例來説，具有淨正電荷的聚合電解質常常最好裝備與負電荷的探 針連結，同時淨負電荷的聚合電解質常常最好裝備連結至正電荷的探針。 因此，在此實例中，這些分子之間的離子交互作用允許在偵檢/校準(31)内 發生連結。儘管如此，雖然離子交互作用主要利用於完成理想連結，聚合 電解質也可與具有相似電荷的探針連結。 因爲聚合電解質設計成連結至探針，一般理想的是聚合電解質實 負上在多孔薄膜(23)的表面上爲非擴散性制動。因此，聚合電解質可於此 方式中運用於多孔薄膜(23)，此一方式爲聚合電解質實質上不擴散至多孔
Mav1s-C:\WINSOFnSfim〇〇1.〇8^〇8WK.〇〇1_^ 14 1249032 薄膜(23)的基質。尤其，聚合電解質一般形成在多孔薄膜(23)表面上有官能 基的離子與/或者共價鍵，因此剩下制動。雖然並不需要，聚合電解質及多 孔薄膜(23)之間的共價鍵形成理想中可更持久制動此聚合電解質。 舉例來説，在一實施例中，使用於形成聚合電解質的單體首次形 成溶液’然後直接運用於多孔薄膜(23)。可利用各種不同溶劑(例如有機溶 劑、水等等)形成溶液。一旦運用，使用加熱、電子束輻射、自由基聚合等 等而開始使單體聚合。在一些實例中，隨著單體聚合，形成具有多孔薄膜 (23)的某官能基之共價鍵，藉以制動最後聚合電解質。舉例來説，在一實 施例中，次乙亞胺單體可形成在一些多孔薄膜(例如硝化纖維素)表面上具 有竣基的共價鍵。 在另一實施例中，應用於多孔薄膜(23)之前，可形成聚合電解質。 假使理想的話，聚合電解質首先可使用有機容易、水等等形成溶液。之後， 聚合電解質溶液直接運用於多孔薄膜(23)，然後乾燥。如上所述，根據乾 燥，聚合電解質可形成在多孔薄膜(23)表面(此電荷與聚合電解質相反)上具 有某官能基的離子键。舉例來説，在一實施例中，正電荷的聚次乙亞胺可 形成在一些多孔薄膜(例如硝化纖維素)表面上具有負電荷羧基的離子鍵。 另外’聚合電解質也可使用各種不同著名技術交鍵至多孔薄膜 (23)。舉例來説，在一些實施例中，α_環氧-氣_丙垸官能化聚胺與/或者聚 醯胺可使用作爲可交键的正電荷聚合電解質。這些材料的範例由Keim描 述於美國專利編號第3,7〇〇,623號；由|^2匕描述於美國專利編號第 3,772,076號;以及由KdnL描述於美國專利編號第4,537,657號;其完全合併 於此作爲參考目的，並相信售自尺卿⑽/以商業名稱下的德拉威州維明頓 的Hercules，Inc.。例如，Kymene^SO及2064爲α-環氧-氣-丙垸官能化 聚胺與/或者聚酿胺化合物，此含有在某類型多孔薄膜(例如硝化纖維素)上 形成具有敌基之共價键的環氧及四級銨基，且在故正時與多孔薄膜的聚合
Mavis-C:\WmSOFTA»Wk001O8~\0879\PK-001-0879.d〇c2004^^^^ χ $ 1249032 中樞交鍵。在一些實施例中，交键溫度範圍约爲5〇〇c至12〇〇c，且交鍵時 間範圍約爲10至600秒。 雖然上面已描述多孔薄膜(23)上非擴散性制動聚合電解質的各種 不同技術，需了解本發明可使用非擴散性制動聚合電解質化合物的任何其 他技術。事實上，上述方法僅爲意圖使用於本發明的示範技術。舉例來説， 在-些實施财，减何加碌合電解f溶液，此可充分抑制聚合電解 質擴散至多孔薄膜(23)的基質。 一般而言，各種流通試驗設備根據本發明構成。在此方面，本發 明的各種不同實補目前將做更詳細的描述。無論如何，需了解下面討論 的實施例僅爲示範，且本發明也考慮其他實施例。例如，引用第三圖，一 特别實施例爲顯示探針(41)使用於偵檢及校準。在此實施例中，偵檢探針 (41)運用於結合襯娜2)，且因此當與試驗設備聯繫時能流通設備(2〇)(如方 向箭頭L所標示）。偵檢探針(41)與分析物a的特定連結構件(9〇)結合，因 此根據與分析物A接觸，探針(41)連結以形成分析物/探針合成物(49)。然 後分析物/探針合成物(49)流通設備(2〇)，直到到達偵檢/校準地區(31)。 在偵檢/校準地區(31)内，聚合電解質捕獲試劑經由離子交互作用 而制動(無圖示)連結至校準探針(43)。在此實施例中，在運用試驗樣本之 前，將校準探針(43)制動於聚合電解質上。例如，校準探針可包括與特定 連結構件(91)(例如抗體、抗原等等)結合的膠乳微粒子。在偵檢/校準地區(3ι) 中，分析物/探針合成物(49)可連結至校準探針(43)的特定連結構件(91)，以 形成二明治合成物(50)。任何未連結探針(41)將流通偵檢/校準地區(31)。假 使理想醜，可估計聚合電解f捕獲試_數量，因此偵檢/校準地區(31) 内的校準錢達賴滿JL估計潛在的信麵度。即估計存放的探針⑷)數 量，因爲在預估及已知程度中設定聚合電解質使用的數量。 一允4元王發展’探針(43)的強度可使用於校準偵檢/校準地區
Mavis-C:\W1NS0FT\專撕kooi 〇8〜\〇879\PK-001 -0879.doc2004/4/7 16 1249032 (31)中的探針(41)強度，以測定試驗樣本中的分析物數量。此校準步驟可由 判讀設備幫助或使用其他技術才看的到。舉例來説，在一實施例中，探針 (41)及(43)可標有螢光製造的化合物，因此可使用傳統技術測量探針(41)及 (43)的信號強度。舉例來説，在一實施例中，探針(41)及(43)可由相同外部 月b源激發。在此實施例中’能源在激發波長中供給輻射，藉以引起探針(41) 在波長中放射光，此與由探針(43)放射的波長不同。此能夠個别測量存有 的探針(41)及(43)。或者，也可使用分離外部能源個别測量探針(41)及(43)。 一般而螢光爲發生於某螢光化合物中的三階段作用結果。在 第一階段，能量由外部能源供應，比如白熱燈或雷射，並由螢光化合物吸 收，產生一激發電子單態。在第二階段，激發狀態在螢光化合物經歷構形 變化期間有限定時間，並也遭受與本身分子環境交互作用的多數可能性。 在此時期，激發狀態的能量部分散發，自螢光放射開始產生一鬆弛狀態。 第三階段爲螢光放射階段，，其中放射能量，使螢光化合物回到本身基態。 放射能量低於本身激發能量(光或雷射），因此有較長波長。此轉移或能量 或波長的差異允許自激發能量偵檢及分離放射能量。 螢光偵檢一般利用波長將放射光子自激發光子過濾分離，且紀綠 放射光子並產生可紀錄輸出的偵查器通常作爲電子信號或攝影影像。一般 認定的四種偵查器爲：光譜勞光計及全自動微盤分析儀(mier〇plate reader)、勞光顯微鏡、螢光掃描器以及細胞流數儀(flow cytometer)。本發 明使用的適當螢光债查器爲FluoroLog ΙΠ光譜榮光計，此售自新澤西州 Edison的SPEX工業有限公司。 雖然並不需要，尤其理想偵檢及校準探針組的選擇標準包括：（1) 對吸收光譜或螢光光譜而言，爲少許或沒有光譜重疊，因此可個别測量放 射強度;(2)當造成極接近時，在偵檢及校準探針之間沒有顯著的螢光能量轉 移，囡此獨立放射;以及⑶較長放射波長(例如约大於600 nm)，因此生物流
Mavis-C:\WINSOFT\ 專手 IJXPkOOl .08~\0879\PK-001-0879.doc2004/4/7 γη 1249032 體的自動螢光在螢光測量上有最小效果。 進一步，假使理想的話，本發明也可利用如“時間解析式螢光偵 檢”(time-resolved fluorescence detection)的已知技術。時間解析式螢光偵檢 設計成藉由利用某螢光材料(比如稀土屬的銪(Eu(瓜）)及铽(爾瓜》螯化物) 的螢光特徵而減少放射能源或分散作用的背景信號(此由激發輻射分散引 起)。螯合物在實質上較短波長的激發後，此螯化物可顯示強烈紅移、窄帶、 耐久放射。一般，由於色基位於緊靠分子中的稀土屬，螯合物具有強烈紫 外線吸收帶。隨後由色基的光吸收，激發能量可自激發色基轉移至稀土 屬。此伴隨稀土屬的螢光放射特徵。使用與窄帶放射過滤器連結的脈動激 發及時閘(time-gated)偵檢允許僅自稀土屬螯化物特定偵檢螢光，拒絶來自 樣本中其他種類的放射，此一般較短暫或具有較短的波長放射。測量螢光 的其他時間解析式技術由EiiYfeiL描述於美國專利編號第5,585,279號以 及由Hgmmila等人的美國專利編號第5,637,5〇9號，其完全合併於此作爲 參考目的。 不分使用於測量探針(41)及(43)的信號強度之技術，已發現使用 單一偵檢/校準地區(31)能夠在設備(20)的相同位置中測量偵檢及校準探針 ⑷)及(43)。此單一測量位置”（singlemeasurement 1〇cati〇n)近乎提供簡單 且近乎吸引使用者的試驗設備，尤其是家用及醫護點用途。 在偵檢/校準地區(31)中，分析物的數量可隨藉由校準探針(43)的 信號強度而由偵檢探針(41)的信號強度確定。換句話説，估計探針(43)的總 數量，並得知，囡此可使用校準目的。因此，試驗樣本中的分析物數量與 Is(探針(41)的信號強度)成正比，同時不分存在的分析物，探針⑼的信號 強度I。剩餘較固定。根據此鮮紐巾_度職下降，可败分析物的 -般濃度範園。結果，在大约同時相同狀況下，可處理校準及樣本試驗， 因此隨著增加靈敏度，而提供確實定量或半量化結果。
Mavis-CAWms〇FnWWk〇〇,〇8^〇87^ 18 1249032 假使理想的話，對已知讀物觀的而言，比率標 出…刀析物歌度的對比’以產生校準曲線。欲測定未知試驗樣本中的分析 物數量，然後根據校準_信號比率可轉換成分析物濃度。需注意 的替換數f關係可標出與分析物濃度的對比，以產生校準曲線。舉例來 祝’在-實施例甲’ Is/(ls+lc)的數値可標出與分析物漠度的對比，以產生校 準曲線。 引用第四圖；55實施例爲顯示使用於偵檢的探針⑷)以及使用 於校準。碰探_)朝於結合齡(22)，@此#與試驗樣本 聯繫時’能夠流通設備(2〇)(如方向箭頭L所標示）。對分析物a而言，偵 檢探針⑷)與特定連結齡(9_合，因此根據與分析物a接觸，探針⑼ 連結形成分析物/探針合成物(49)。然後分析物/探針合成物(49)流通設備 (20) ’直到到達偵檢/校準地區⑼.。校準探針(43)藉聚合電解質捕獲試劑而 制動於偵檢/校準地區⑼内。舉例來説，校準探針(43)可包括標有微粒子、 聚合物或經由離子交互作用連結至聚合電解質的分子。另外，特定連結構 件(91)(例如抗體、抗原等等)也個别制動於偵檢/校準地區(31)内。根據偵檢 探針(41)的特質，非合成物(49)也不是未連結探針(41)連結至聚合電解質捕 獲4劑。替代的是，分析物/探針合成物(49)連結至特定連結構件(91)，以 形成合成物(50)，且任何未連結探針(41)流通偵檢/校準地區(31)。一旦允許 完全發展，可在偵檢/校準地區(31)測定探針(41)的強度信號Is，以計算試 驗樣本中的分析物數量。在此實施例中，試驗樣本中的分析物數量與4成 正比。再者，校準探針(43)的強度信號Ie也可使用於校準Is。舉例來説， 對已知分析物濃度的範圍而言，Is與Ic的比率可標出與分析物濃度的對 比，以產生校準曲線。 引用第五圖，又另一實施例顯示使用於偵檢的探針(41)以及使用 於校準的探針(43)。偵檢探針(41)及校準探針(43)運用於結合襯塾(22)，因
Mav»s-C:\WINSOFT\^Wk001 〇8-\0879\PK-001-〇879.doc2004/4/7 ^ g 1249032 此當與試驗樣本聯繫時，能夠流通設備(2〇)(如以方向箭頭L所標示）。對分 析物A而言，偵檢探針(41)與特定連結構件(9〇)結合，因此根據與分析物A 接觸’探針(41)連結形成分析物/探針合成物(49)。然後分析物/探針合成物 (49)流通設備(20)，直到到達偵檢/校準地區(31)。聚合電解質制動於偵檢/ 校準地區(31)内，以經由離子交互作用而與校準探針(43)(例如標有微粒 子、聚合物或分子)選擇性連結。換句話説，探針(43)的尺寸比探針(41)小， 因此在探針(41)之前抵達偵檢/校準地區(31),並佔領由聚合電解質提供的 所有連結地點。或者，探針(41)及(43)的電荷僅可使得探針(43)連結至聚合 電解質。操論如何’特定連結構件(91)(例如抗體、抗原等等)也個别制動於 偵檢/校準地區(31)内。在偵檢/校準地區(31)中，分析物/探針合成物(49)可 連結至特定連結構件(91)，以形成合成物(5〇)。任何未連結探針(41)將流通 偵檢/校準地區(31)。一旦允許完全發展，在偵檢/校準地區(31)中可測定探 針(41)的強度^號is，以計算試驗樣本中的分析物數量。在此實施例中， 試驗樣本中的分析物數量與is成正比。再者，也可使用校準探針(43)的強 度信號ic校準is。舉例來説，對已知分析物濃度的範園而言，^與Ic的比 率可標出與分析物濃度的對比，以產生校準曲線。 在一些實施例中，設備(20)可含有促進偵檢感興趣分析物的額外 地區。舉例來説，如第六圖所示，設備(20)可含有在偵檢/校準地區(31)上 方的捕獲地區(33)。捕獲地區(33)含有第一捕獲試劑，特别對偵檢或校準探 針而1。例如，在圖解的實施例中，偵檢探針(41)運用於結合襯塾(22)， 因此當與試驗樣本聯繫時能夠流通設備(20)。對分析物A而言，偵檢探針 (41)與特定連結構件(90)結合，因此根據與分析物a接觸，探針(41)連結形 成分析物/探針合成物(49)。然後分析物/探針合成物(49)流通設備(20)，直 到到達捕獲地區(33)。特定連結構件(91)(比如與分析物a —致的抗體或抗 原)制動於捕獲地區(33)内。因此，在捕獲地區(33)中，分析物/探針合成物
Mavis-C:\WINSOFT\ 專利J\Pk001.08〜\0879\PK-001 -0879.doc2004/4/7 2〇 1249032 (49)可連結至特定連結構件㈤，以軸合成物⑼）。 二後任何未連結探針⑷)將流動至偵檢/校準地區⑶）。在此實施 =中’第二捕獲試劑(例如聚合電解質)也制動於偵檢/校準地區(31)内，此 月J工由離子父互作用而連結至任何未連結探針⑼。進一步，校準探針(句 疒t、檢/校準地區(31)内的第二捕獲試劑上制動。舉例來説，校準探針 (43)可包括膠乳餘子，此也可經赫子交互伽而連結絲合電解質。 一旦允許完全發展，在偵檢/校準地區(31)測定探針(41)的強度信 號Is ’以計算試驗樣本内的分析物數量。在此實施例中，試驗樣本中的分 析物數量與Is成反比。骑，鮮麟⑷商自度信以也可使麟校準 Is舉例來説，對已知分析物濃度的範園而言，^與、的比率可標出與分析 物濃度的對比，以產生校準曲線。欲測定未知試驗樣本中的分析物數量， 然後信號鱗可轉鮮曲轉滅分娜觀。需注意[及!。的替換數 學關係可標出與分析物濃度的對比，以產生校準曲線。 雖然上面已描述試驗形狀的各種不同實施例，需了解本發明的試 驗一般可具有任何理想形狀，且不需含有上面所述的所有構成要素。進一 步，其他已知引用於此的試驗構成要素尤其可利用於本發明中。舉例來 説，各種不同試驗形狀由Lggibotte等人描述於美國專利編號第5,395,754 號;由IgM.等人的美國專利編號第5,67〇,381號;以及由Malick菩人的I國專 利編號第6，194,220號，其完全合併於此作爲參考目的。另外，也需了解 可根據本發明形成競爭性試驗。競爭性的技術及形狀爲著名的精通技藝。 如範例，可輕易變更上面所述及第三圖圖解的流通設備(2〇)，以 形成競爭性試驗。在此實施例中，偵檢探針(41)可爲一分析物或分析相似 物，同時校準探針(43)例如可包括與感興趣分析物之特定連結構件結合的 膠乳微粒子。當運用試驗樣本時，偵檢探針(41)移經多孔薄膜(23)，直到抵 達偵檢/校準地區(31)。在地區(31)中，偵檢探針(41)與試驗樣本内的任何分
Mavis-C:\WlNSOFT\^ilJ\PkOO 1.08~\0879\PK-001 -0879.doc2004/4/7 21 1249032 析物A競爭特定連結構件(⑽例如抗體、抗原等等）。任何未連結探針⑼ 將流通傭/校準地區⑼。在此實施例中’試驗樣本中的分析物數量與 (探針⑼的信號強度)成反比。假使理想的話，W L的比率(探針(43)的 ^號強度)可標出與已知分析物濃度範圍之分析物濃度的對比，以產生校準 曲線。 本發明可參照下面範例而能更加了解。 範例1 説明本發明的内部偵檢/校準地區能校準三明治試驗。最初， HF120多孔薄膜樣本疊層至具有長度大约3〇公分的對應支撐卡 card)。螢光珠(校準探針)獲自Molecular Probes，Inc.，此具有0.2微米的顆 粒大小及505/515 nm的激發/放射波長。清洗珠子，並將〇 28 儲存於 儲存緩衝物中。40微升的螢光珠溶液與10微升的聚離氨酸溶液，並剝除 薄膜’以形成偵檢/校準線。在多孔薄膜樣本上制動具有2 36毫克/公撮(獲 自Biogenesis，Inc·)的單株抗體crp Mab 58〇4，以形成捕獲線。然後在溫 度37°C下乾燥薄膜樣本1小時。纖維素纖維芯吸襯墊(MiUip〇re公司)附著 至一薄膜末端，並切成4毫米長條。 將^一分之一棍棒打入各種不同微孔(micro-wells)，此含有勞光珠 (偵檢探針)的混合物與不同濃度的CRP抗原。每個混合物的螢光珠數量相 同，即4微克。螢光偵檢珠的形成如下。最初，提供具有竣基官能基(獲自 Molecular Probes，Inc·)的聚苯乙烯珠。此珠具有〇.5微米的顆粒大小，以及 580/605 nm的激發/放射波長。將1〇〇微升的聚苯乙烯珠(2%濃度)以MES 緩衝物清洗^一次，並以離心分離機分離。Pellitezed珠再次懸浮於1〇〇微升 的MES缓衝物中，並與含有4毫克碳二亞胺(獲自Polysciences，Inc.)的5〇 微升MES緩衝物。在室溫下混合物在攪拌器上反應20分鐘。然後以硼酸
Mavis-C:\WINSOFT\^Wk001.08~\0879\PK-001-0879.doc2004/4/7 22 1249032 鹽清洗活性珠二次。活性珠再次懸浮於200微升的硼酸鹽缓衝物，並與具 有6.4毫克/公撮濃度的15微升·c_反應蛋白質(獲自Bi〇genisis，Inc的CRp Mab 5811)之單株抗體混合。反應允許在室溫下於擾拌器整晚。然後，結果 反應混合物與100微升的乙醇胺以攪拌器混合15分鐘。丟棄浮在表層的 溶液，並以PBS缓衝物將此珠清洗二次，並於4〇c下儲存於含有〇1克分 子PBS、0·!5克分子Naa、1%BSA、你甘油以及〇 1%恤叫的儲存缓衝 物中，結果結合珠的濃度爲4毫克/公撮。 然後在偵檢/校準線中使用FkiorologlO光譜螢光計(新澤西州 Edison的SPEX Industries, Inc·)以直角放置模式測量螢光強度。下面表1顯 不結果’此處Is表示偵檢探針在偵檢/校準線的信號強度，且L表示校準探 針在偵檢/校準線的信號強度。 表1 ··信號強度結果 分析物(ng/ml) Ι〇 IA 0 400 1258 33 426 1068 66 450 971 189 470 860 378 450 822 756 470 564 如從上面結果證實，當樣本中沒有分析物時，偵檢探針移動經過 捕獲線’並在偵檢/校準線中捕獲。當樣本中有分析物時，偵檢探針與分析 物合成，並在捕獲線上捕獲，且在偵檢/校準線中捕獲任何剩下的偵檢探 針。因此，在偵檢/校準線上的偵檢探針(ls)強度與分析物濃度成反比，同
Mavis-C:\WINSOFT\#i fj\Pk001.08~\0879\PK-001 -0879.doc2004/4/7 23 1249032 時校準探針在偵檢/校準線的強度(Ic)剩下較一定的不同分析物濃度，即 〜444±27。西於不同環境、試驗狀況及儀器不穩定性而使1。產生變化。無 論如何，預期變化對Is具有相似效果。因此Is/U目信在此實例中有更精確 的結果。 範例2 説明本發明的内部偵檢/校準地區能夠偵檢三明治試驗。最初， HF 120多孔薄膜樣本疊層於具有長度大約30公分的一致支撐卡。然後螢 光聚合物(校準探針)的形成如下。最初，0.5克的聚丙烯酸(MW=450,000， D.P.=6250)分解成20公撮的甲醇。將在1公撮甲醇中的3.8毫克雙環己基 碳化二亞胺(dicyclohexylcarbodiimide，DCC)加入溶液中，以促進聚丙烯酸 聚合物反應。結果溶液擾拌30分鐘。螢光染料溶液由分解1〇毫克的5-(及 -6)-((N-(5-氨基戊基)氨基)-级基)4甲基玫瑰紅顏料(544/590 nm的激發/放射 波長，Molecular Probes，Inc.)製成1公撮的甲醇溶液。將染料溶液加入活性 的聚丙烯酸溶液中，並攪拌。在室溫下以鋁箔捲繞溶液四周而連續反應反 應24小時。在停止反應後，將二乙醚加入形成沉澱物。將沉澱物離心分 離，並浸泡於乙醇中，以除去任何未反應的螢光染料。在除去乙醇溶液後， 將剩餘的紅色凝膠在空氣中乾燥。 然後上面所述的螢光聚合物（校準探針）分解於水中，並與 CelQuat®l(X)_H(獲自 National Starch & Chemical，Inc·的纖維素聚合電解質 衍生物）。此混合物剝除薄膜，以形成偵檢/較準線。將具有6.4毫克/公撮 濃度的單株抗體CRP Mab 5811(獲自Biogenesis，Inc·)制動於多孔薄膜樣本 上，以形成一捕獲線。然後薄膜樣本在溫度37〇c下乾燥1小時。纖維素 纖維芯吸襯墊(Millipore公司)附著至一薄膜末端，並切成4毫米的長條。 將二分之一棍棒樣本打入各種不同微孔(micro-wells)，此含有螢
Mavis-C:\WINSOFT\$f IJ\Pk001,08~\0879\PK-0〇1-0879.doc2004/4/7 24 1249032 光珠(偵檢探針)的混合物與不同濃度的CRP抗原。每個混合物的螢光珠(偵 檢探針)數量相同，即4微克。螢光珠(偵檢探針)的形成如下。最初，提供 具有羧基官能基(獲自Molecular Probes，Inc·)的聚苯乙烯珠。此珠具有〇.2 微米的顆粒大小，以及505/515 nm的激發/放射波長。將1〇〇微升的聚苯 乙烯珠(2%濃度)以MES缓衝物清洗二次，並以微離心分離機分離。 Pellitezed珠再次懸浮於200微升的MES緩衝物中，並與含有4·8毫克碳 二亞胺(獲自Polysciences，Inc·)的20微升MES緩衝物。在室溫下混合物在 攪拌器上反應20分鐘。然後以硼酸鹽清洗活性珠二次。活性珠再次懸浮 於200微升的硼酸鹽缓衝物，並與具有2.36毫克/公撮濃度的90微升C-反應蛋白質(獲自Biogenisis，Inc.的CRP Mab 5804)之單株抗體混合。反應 允許在室溫下於擾拌器整晚。然後，結果反應混合物與1〇〇微升的乙醇胺 以攪拌器混合15分鐘。丟棄浮在表層的溶液，並以pBS缓衝物將此珠清 洗二次，並於4。(：下儲存於含有〇.1克分子PBS、015克分子Naa、 1%BSA、5%甘油以及0.1%NaN3的儲存緩衝物中，結果結合珠的濃度爲4 毫克/公撮。 然後在偵檢/校準線中使用Fluorolog ΙΠ光譜螢光計(新澤西州 Edison的SPEX Industries，Inc.)以直角放置模式測量螢光強度。下面表2顯 不結果，此處Is表示偵檢探針在偵檢/校準線的信號強度，且Ic表示校準探 針在偵檢/校準線的信號強度。 表2:信號強度結果 分析物(ng/ml) ir τ/τ 0 37 16622 5 42 13714 25 36 15111
Mavis-C:\WINS0FT\ 專和J\Pk001 ·08〜\0879\ΡΚ-001 -0879.doc2004/4/7 25 1249032 50 34 14971 250 34 9529 500 33 7152 2500 34 1765 如從上面結果證實，當樣本中沒有分析物時，偵檢探針移動經過 捕獲線，並在偵檢/校準線中捕獲。當樣本中有分析物時，偵檢探針與分析 物合成，並在捕獲線上捕獲，且在偵檢/校準線中捕獲任何剩下的偵檢探 針。因此，在偵檢/校準線上的偵檢探針(Is)強度與分析物濃度成反比，同 時校準探針在偵檢/校準線的強度(ic)剩下較一定的不同分析物濃度，即〜36 ±6。由於不同環境、試驗狀況及儀器不穩定性而使Ic產生變化。無論如 何，預期變化對Is具有相似效果。因此以相信在此實例中有更精確的結 果。 儘管發明已詳述關於其特定實施例的敘述，需了解根據達成對前 文的了解，所精通的技藝可輕务想像能交替、變化及相當於這些實施例。 因此，本發明的範圍將評定爲附加申請專利範園及任何同等物。 【圖式簡單說明】 本發明的全部或授權揭發(包括針對一般精通技藝的最佳模式)尤 其更發表於剩下的説明書中，此參照附圖，如下： 第一圖爲本發明流通試驗設備之一實施例的立體圖； 第二圖爲本發明抗體共價連結至羧化金奈米粒子之一實施例的 圖解實例； 第二圖爲本發明流通試驗設備之一實施例的概要實例； 第四圖爲本發明流通試驗設備之另一實施例的概要實例； 第五圖爲本發明流通試驗設備之又另一實施例的概要實例;以及
Mavis-C:\WINSOFTV||[Wk001.08-\0879\PK-001-0879.doc2004/4/7 26 1249032 第六圖爲本發明流通試驗設備之另一實施例的概要實例。 本説明書及圖示中重複使用的參考特性意圖表示發明相同或相 似特性或構成部分。 【圖式元件簡單說明】 20 flow-through assay device 流通試驗設備 21 rigid material 硬質材料 22 conjugate pad 結合襯墊 23 porous membrane 多孔薄膜 28 wicking pad 芯吸襯墊 31 detection/calibration zone 偵檢/校準地區 33 capture zone 捕獲地區 41 probe 探針 43 probe 探針 49 analyte/probe complexes 分析物/探針合成物 50 sandwich complex 三明治合成物 90 binding member 連結構件 91 )inding member 連結構件
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Claims (1)

1249032 己二烯二甲基氣化銨、陽離子纖維素衍生物及其組合。 10·如申請專利範圍第1項的流通的試驗設備，其中該聚合電解質具有淨 負電荷。 11.如申请專利範圍第10項的流通的試驗設備，其中該聚合電解質為兩 性。 12·如申請專利範圍第1項的流通的試驗設備，其中該聚合電解質捕獲試 劑構成直接或間接連結至該校準探針。 13·如申凊專利範圍第1項的流通的試驗設備，其中該聚合電解質捕獲試 劑構成直接或間接連結至該偵檢探針。 14.如申請專利範圍第1項的流通的試驗設備，其中該多孔薄膜進一步定 義為位於該偵檢/校準地區上方的捕獲地區，此一或更多捕獲試劑制動 構成直接或間接連結至該偵檢探針。 15·如申請專利範圍第14項的流通的試驗設備，其中該捕獲地區的捕獲試 劑為分析物的特定連結構件。 16·如申請專利範圍第1項的流通的試驗設備，其中試驗樣本内的分析物 數量與偵檢信號強度除以校準信號強度成比例。 17·如申請專利範圍第丨項的流通的試驗設備，其中設備為三明治類型的 試驗設備。 18·如申請專利範圍第1項的流通的試驗設備，其中設備為競爭類型的試 驗設備。 19· 一種自行校準流通的試驗設備，該流通試驗設備包含多孔薄膜，該多 孔薄膜與能產生偵檢信號的偵檢探針及能產生校準信號的校準探針聯 繫’該偵檢探針與分析物的特定連結構件結合，該多孔薄膜定義為偵 檢/校準地區’此聚合電解質捕獲試劑為非擴散性，此構成直接或間接 連結至該校準探針、偵檢探針或其組合，其中該偵檢探針能產生偵檢 D:Wendy/patent/claim/PKOO 1 -0879-CHIN-g^^： 29 1249032 信號’且該校準探針能產生校準信號，同時在該偵檢/校準地區内，其 中分析物的數量能隨由校準信號校準而自該偵檢信號測定。 2〇·如申請專利範圍第19項的流通的試驗設備，其中該偵檢探針及校準探 針選自由色素原、催化劑、螢光化合物、化合光化合物、磷光化合物、 放射性化合物、直接視覺標籤、微脂體及其組合所組成。 21·如申請專利範圍第19項的流通的試驗設備，其中該偵檢探針及校準探 針為螢光化合物。 22·如申請專利範圍第19項的流通的試驗設備，其中該偵檢探針、校準探 針或其組合含有微粒子。 23·如申請專利範圍第19項的流通的試驗設備，其中校準探針與分析物的 特定連結構件結合。 24·如申請專利範圍第19項的流通的試驗設備，其中額外捕獲試劑制動於 該偵檢/校準地區内的多孔薄膜上，此為分析物的特定連結構件。 25·如申請專利範圍第24項的流通的試驗設備，其中該額外捕獲試劑構成 當同時接觸時可直接或間接連結至該偵檢探針。 26.如申請專利範圍第19項的流通的試驗設備，其中該多孔薄膜進一步定 義為位於該偵檢/校準地區上方的捕獲地區，此一或更多捕獲試劑制動 構成直接或間接連結至該偵檢探針。 27·如申叫專利範圍第26項的流通的試驗設備，其中該捕獲地區的捕獲 試劑為分析物的特定連結構件。 28·如申請專利範圍第19項的流通的試驗設備，其中設備為三明治類型的 試驗設備。 29.如申請專利範圍第19項的流通的試驗設備，其中設備為競爭類型的試 驗設備。 30· —種彳貞檢試驗樣本中分析物存在或數量的方法，該方法包含： D:Wendy/patent/claim/PK001-0879-CHDSl·# 換本 30 1249032 〇 提供包含多孔薄膜的流通試驗設備，該多孔薄膜與能產生>(貞檢 信號的彳貞檢探針及能產生校準信號的校準探針聯繫，該多孔薄 膜定義為偵檢/校準地區，制動聚合電解質捕獲試劑構成直接或 間接連結至該彳貞檢探針、校準探針或其組合，其中該债檢探針 能產生偵檢信號，且該校準嘆真能產生校準信號，同時在該偵 檢/校準地區内； U) 將含有分析物的試驗樣本與該彳貞檢探針及校準探針接觸； ω)測量在偵檢/校準地區内產生的偵檢信號強度以及校準信號強度; 以及 IV)以校準信號校準偵檢信號的強度，其中隨該校準信號而自校準 信號測定試驗樣本内的分析物數量。 31·如申凊專利範圍第30項的方法，其中該债檢探針及校準探針選自由色 素原、催化劑、榮光化合物、化合光化合物、鱗光化合物、放射性化 合物、直接視覺標籤、微脂體及其組合所組成。 32·如申請專利範圍第W項的方法，其中該偵檢探針及校準探針為螢光化 合物。 33. 如申凊專利範圍第32項的方法，進一步包含激發該偵檢/校準探針内 的摘檢探針及校準探針，其中激發引起該碰探針放射傭信號，且 該校準探針放射校準信號。 34. 如申請專利範圍第3〇項的方法，其中該碰探針、校準探針或其組合 與分析物的特定連結構件結合。 35. 如中料她@第34項的方法，其中第二捕獲試劑在該備校準地 區内制動，此為分析物的特定連結構件。 36. 如申請專利範圍第35項的方法，其中該第二試劑構成在同時接觸時能 直接或間接連結至該偵檢探針。 D：Wendy/patent/claim/PK001 -0879-CHIN-#g|^： 31 1249032 37. 38. 39. 40. 如申請專纖_3G_方法，其中該聚合 電解質捕獲試劑構成直接 或間接連結至該校準探針。 如申吻專利關第3Q項的紐，射該聚合電解質驢試麵成直接 或間接連結至該偵檢探針。 如申叫專利$&圍第3G項的方法，其中該多孔薄膜進—步定義為位於該 偵檢/校準探針地區上方的捕獲地區，鶴—献多舰試劑構成直接 或間接連結至該偵檢探針。 如申請專利範圍第3〇項的方法，進一步對多數估計分析物濃度而言， 包含由標出偵檢信號的強度而產生一校準曲線，此偵檢信號由校準信 號的強度校準。 D:Wendy/patent/claim/PK0014879>CHIN·替換本 ^2
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Families Citing this family (30)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20030119203A1 (en) * 2001-12-24 2003-06-26 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Lateral flow assay devices and methods for conducting assays
US6837171B1 (en) 2002-04-29 2005-01-04 Palmer/Snyder Furniture Company Lightweight table with unitized table top
US7285424B2 (en) 2002-08-27 2007-10-23 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Membrane-based assay devices
US7247500B2 (en) 2002-12-19 2007-07-24 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Reduction of the hook effect in membrane-based assay devices
US20060019406A1 (en) * 2004-07-23 2006-01-26 Ning Wei Lateral flow device for the detection of large pathogens
DK1800129T3 (da) * 2004-09-23 2013-07-01 Tripath Imaging Inc Polykationiske polymerbelægninger til immobilisering af biologiske prøver
US20060127886A1 (en) * 2004-12-15 2006-06-15 Kaylor Rosann M Sample-efficient lateral flow immunoassay
AU2006212473B2 (en) * 2005-02-10 2011-04-14 Qiagen Gmbh Sample lysis and coating of reaction surface
US7939342B2 (en) 2005-03-30 2011-05-10 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Diagnostic test kits employing an internal calibration system
US7803319B2 (en) * 2005-04-29 2010-09-28 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Metering technique for lateral flow assay devices
US7858384B2 (en) * 2005-04-29 2010-12-28 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Flow control technique for assay devices
WO2006125124A2 (en) * 2005-05-18 2006-11-23 Nanosphere, Inc. Substrate functionalization method for high sensitivity applications
US7829347B2 (en) 2005-08-31 2010-11-09 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Diagnostic test kits with improved detection accuracy
US7504235B2 (en) 2005-08-31 2009-03-17 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Enzyme detection technique
US7279136B2 (en) 2005-12-13 2007-10-09 Takeuchi James M Metering technique for lateral flow assay devices
US7618810B2 (en) * 2005-12-14 2009-11-17 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Metering strip and method for lateral flow assay devices
US8758989B2 (en) 2006-04-06 2014-06-24 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Enzymatic detection techniques
US8012761B2 (en) * 2006-12-14 2011-09-06 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Detection of formaldehyde in urine samples
US7846383B2 (en) * 2006-12-15 2010-12-07 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Lateral flow assay device and absorbent article containing same
US7935538B2 (en) * 2006-12-15 2011-05-03 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Indicator immobilization on assay devices
US7897360B2 (en) 2006-12-15 2011-03-01 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Enzyme detection techniques
US8535617B2 (en) * 2007-11-30 2013-09-17 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Blood cell barrier for a lateral flow device
WO2009090174A1 (en) * 2008-01-17 2009-07-23 Whatman Inc Composite membrane blends comprising ionic branch polymers and methods of use
JP5487104B2 (ja) * 2008-08-22 2014-05-07 デンカ生研株式会社 対照表示部を備えたメンブレンアッセイによる試験装置
US20100290948A1 (en) * 2009-05-15 2010-11-18 Xuedong Song Absorbent articles capable of indicating the presence of urinary tract infections
US11275084B2 (en) 2010-01-15 2022-03-15 Stanford University Successive sampling device and associated method
WO2012068372A1 (en) * 2010-11-17 2012-05-24 Aushon Biosystems Method of and system for printing in-well calibration features
EP3650117B1 (en) 2011-11-14 2022-07-20 Aushon Biosystems, Inc. Systems and methods to enhance consistency of assay performance
DE102013106432A1 (de) * 2013-06-20 2014-12-24 Endress + Hauser Conducta Gesellschaft für Mess- und Regeltechnik mbH + Co. KG Optische Indikator-Einheit und Vorrichtung und Verfahren zur Bestimmung einer physikalisch-chemischen Eigenschaft eines Prozessmediums in einer prozesstechnischen Anlage
JP6706355B2 (ja) * 2017-02-15 2020-06-03 富士フイルム株式会社 免疫検査装置とその作動方法、情報処理装置とその作動方法および作動プログラム、並びに情報処理システム

Family Cites Families (116)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US598543A (en) * 1898-02-08 Robert taylor
US164659A (en) * 1875-06-22 Improvement in processes of preparing pickles
US691666A (en) * 1901-07-23 1902-01-21 Arthur Rogers Die.
US5622871A (en) * 1987-04-27 1997-04-22 Unilever Patent Holdings B.V. Capillary immunoassay and device therefor comprising mobilizable particulate labelled reagents
US3772076A (en) 1970-01-26 1973-11-13 Hercules Inc Reaction products of epihalohydrin and polymers of diallylamine and their use in paper
US3700623A (en) 1970-04-22 1972-10-24 Hercules Inc Reaction products of epihalohydrin and polymers of diallylamine and their use in paper
SE388694B (sv) 1975-01-27 1976-10-11 Kabi Ab Sett att pavisa ett antigen exv i prov av kroppvetskor, med utnyttjande av till porost berarmaterial bundna eller adsorberande antikroppar
US4094647A (en) * 1976-07-02 1978-06-13 Thyroid Diagnostics, Inc. Test device
US4251631A (en) * 1978-02-23 1981-02-17 Research Products Rehovot Ltd. Cross-linked enzyme membrane
US4275149A (en) 1978-11-24 1981-06-23 Syva Company Macromolecular environment control in specific receptor assays
US4374925A (en) * 1978-11-24 1983-02-22 Syva Company Macromolecular environment control in specific receptor assays
US4235601A (en) 1979-01-12 1980-11-25 Thyroid Diagnostics, Inc. Test device and method for its use
US4441373A (en) * 1979-02-21 1984-04-10 American Hospital Supply Corporation Collection tube for drawing samples of biological fluids
US4843000A (en) * 1979-12-26 1989-06-27 Syntex (U.S.A.) Inc. Simultaneous calibration heterogeneous immunoassay
US4427836A (en) * 1980-06-12 1984-01-24 Rohm And Haas Company Sequential heteropolymer dispersion and a particulate material obtainable therefrom, useful in coating compositions as a thickening and/or opacifying agent
EP0146654A3 (en) * 1980-06-20 1986-08-20 Unilever Plc Processes and apparatus for carrying out specific binding assays
US4366241A (en) 1980-08-07 1982-12-28 Syva Company Concentrating zone method in heterogeneous immunoassays
US4442204A (en) 1981-04-10 1984-04-10 Miles Laboratories, Inc. Homogeneous specific binding assay device and preformed complex method
NL8300057A (nl) * 1983-01-07 1984-08-01 Cordis Europ Elektrochemische halfcel.
US4537657A (en) 1983-08-26 1985-08-27 Hercules Incorporated Wet strength resins
GB8406752D0 (en) * 1984-03-15 1984-04-18 Unilever Plc Chemical and clinical tests
US4743560A (en) * 1984-03-26 1988-05-10 Becton Dickinson And Company Solid phase assay
US4661235A (en) * 1984-08-03 1987-04-28 Krull Ulrich J Chemo-receptive lipid based membrane transducers
US4596697A (en) * 1984-09-04 1986-06-24 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army Chemical sensor matrix
US5084394A (en) * 1984-12-24 1992-01-28 Vogt Robert F Method for corrective calibration of a flow cytometry using a mixture of fluorescent microbeads and cells
US4806312A (en) * 1985-08-28 1989-02-21 Miles Inc. Multizone analytical element having detectable signal concentrating zone
CA1291031C (en) * 1985-12-23 1991-10-22 Nikolaas C.J. De Jaeger Method for the detection of specific binding agents and their correspondingbindable substances
US5585279A (en) 1986-01-23 1996-12-17 Davidson; Robert S. Time-resolved luminescence binding assays using a fluorescent transition metal label other than ruthenium
US4916056A (en) * 1986-02-18 1990-04-10 Abbott Laboratories Solid-phase analytical device and method for using same
US5482830A (en) * 1986-02-25 1996-01-09 Biostar, Inc. Devices and methods for detection of an analyte based upon light interference
GB8618133D0 (en) * 1986-07-24 1986-09-03 Pa Consulting Services Biosensors
JPH0692969B2 (ja) * 1986-07-30 1994-11-16 株式会社シノテスト 免疫的測定方法
US5182135A (en) * 1986-08-12 1993-01-26 Bayer Aktiengesellschaft Process for improving the adherency of metallic coatings deposited without current on plastic surfaces
US4835099A (en) * 1986-11-20 1989-05-30 Becton, Dickinson And Company Signal enhancement in immunoassay by modulation of enzymatic catalysis
USRE38430E1 (en) * 1987-03-27 2004-02-17 Becton, Dickinson And Company Solid phase chromatographic immunoassay
CA1303983C (en) * 1987-03-27 1992-06-23 Robert W. Rosenstein Solid phase assay
JPH0684970B2 (ja) * 1987-03-31 1994-10-26 株式会社京都医科学研究所 糞便中の潜血検出方法
ATE195022T1 (de) * 1987-04-27 2000-08-15 Unilever Nv Spezifische bindungstestverfahren
US4904583A (en) * 1987-05-26 1990-02-27 Becton, Dickinson And Company Cascade immunoassay by multiple binding reactions
US5120643A (en) * 1987-07-13 1992-06-09 Abbott Laboratories Process for immunochromatography with colloidal particles
US4842783A (en) * 1987-09-03 1989-06-27 Cordis Corporation Method of producing fiber optic chemical sensors incorporating photocrosslinked polymer gels
US5275785A (en) * 1987-10-30 1994-01-04 Unilever Patent Holdings B.V. Test device for detecting an analyte in a liquid sample
US5670381A (en) * 1988-01-29 1997-09-23 Abbott Laboratories Devices for performing ion-capture binding assays
GB8811919D0 (en) * 1988-05-20 1988-06-22 Amersham Int Plc Biological sensors
AU2684488A (en) * 1988-06-27 1990-01-04 Carter-Wallace, Inc. Test device and method for colored particle immunoassay
AT390517B (de) * 1988-08-04 1990-05-25 Avl Verbrennungskraft Messtech Optischer sensor und verfahren zu dessen herstellung
US5252459A (en) 1988-09-23 1993-10-12 Abbott Laboratories Indicator reagents, diagnostic assays and test kits employing organic polymer latex particles
SE8804074D0 (sv) * 1988-11-10 1988-11-10 Pharmacia Ab Sensorenhet och dess anvaendning i biosensorsystem
US5208143A (en) * 1988-11-17 1993-05-04 Becton, Dickinson And Company Immunoassay on a preblocked solid surface
US4895017A (en) * 1989-01-23 1990-01-23 The Boeing Company Apparatus and method for early detection and identification of dilute chemical vapors
US6352862B1 (en) * 1989-02-17 2002-03-05 Unilever Patent Holdings B.V. Analytical test device for imuno assays and methods of using same
US5096671A (en) * 1989-03-15 1992-03-17 Cordis Corporation Fiber optic chemical sensors incorporating electrostatic coupling
US5120662A (en) * 1989-05-09 1992-06-09 Abbott Laboratories Multilayer solid phase immunoassay support and method of use
US5770416A (en) * 1989-05-26 1998-06-23 Upfront Chromatography A/S Permeable hollow particles having an outer shell of mechanically rigid porous material
US5744101A (en) * 1989-06-07 1998-04-28 Affymax Technologies N.V. Photolabile nucleoside protecting groups
AU635314B2 (en) * 1989-09-08 1993-03-18 Terumo Kabushiki Kaisha Measuring apparatus
US5185127A (en) * 1989-09-21 1993-02-09 Becton, Dickinson And Company Test device including flow control means
US5252743A (en) * 1989-11-13 1993-10-12 Affymax Technologies N.V. Spatially-addressable immobilization of anti-ligands on surfaces
US5508171A (en) * 1989-12-15 1996-04-16 Boehringer Mannheim Corporation Assay method with enzyme electrode system
EP0455905B1 (en) * 1990-05-11 1998-06-17 Microprobe Corporation Dipsticks for nucleic acid hybridization assays and methods for covalently immobilizing oligonucleotides
DK138090D0 (da) * 1990-06-06 1990-06-06 Novo Nordisk As Diagnostisk analysemetode
US5726064A (en) * 1990-11-22 1998-03-10 Applied Research Systems Ars Holding Nv Method of assay having calibration within the assay
US6027944A (en) * 1990-11-22 2000-02-22 Applied Research Systems Ars Holding Nv Capillary-fill biosensor device comprising a calibration zone
US5510481A (en) * 1990-11-26 1996-04-23 The Regents, University Of California Self-assembled molecular films incorporating a ligand
US5208535A (en) 1990-12-28 1993-05-04 Research Development Corporation Of Japan Mr position detecting device
GB9102646D0 (en) * 1991-02-07 1991-03-27 Fisons Plc Analytical device
US5196350A (en) * 1991-05-29 1993-03-23 Omnigene, Inc. Ligand assay using interference modulation
US5428690A (en) * 1991-09-23 1995-06-27 Becton Dickinson And Company Method and apparatus for automated assay of biological specimens
US5418136A (en) * 1991-10-01 1995-05-23 Biostar, Inc. Devices for detection of an analyte based upon light interference
WO1993008472A1 (en) * 1991-10-15 1993-04-29 Multilyte Limited Binding assay employing labelled reagent
US5221454A (en) * 1992-01-31 1993-06-22 Biometric Imaging Inc. Differential separation assay
WO1994003812A1 (en) * 1992-07-31 1994-02-17 Syntex (U.S.A.) Inc. Photoactivatable chemiluminescent matrices
US5395754A (en) 1992-07-31 1995-03-07 Hybritech Incorporated Membrane-based immunoassay method
US5321492A (en) * 1992-08-07 1994-06-14 Miles Inc. Dual function readhead for a reflectance instrument
GB9217864D0 (en) * 1992-08-21 1992-10-07 Unilever Plc Monitoring method
GB9221329D0 (en) * 1992-10-10 1992-11-25 Delta Biotechnology Ltd Preparation of further diagnostic agents
US6200820B1 (en) * 1992-12-22 2001-03-13 Sienna Biotech, Inc. Light scatter-based immunoassay
DE4310142A1 (de) * 1993-03-29 1994-10-06 Boehringer Mannheim Gmbh Immunologisch aktive Konjugate und ein Verfahren zu ihrer Herstellung
US5484867A (en) * 1993-08-12 1996-01-16 The University Of Dayton Process for preparation of polyhedral oligomeric silsesquioxanes and systhesis of polymers containing polyhedral oligomeric silsesqioxane group segments
KR0177182B1 (ko) * 1993-10-20 1999-05-15 최근선 중공구조를 갖는 유화중합체의 제조방법
DK0653639T3 (da) * 1993-11-12 2000-07-24 Unilever Nv Analyseindretninger og fremgangsmåder til anvendelse deraf
ES2182836T3 (es) * 1993-11-12 2003-03-16 Inverness Medical Switzerland Dispositivos de lectura para tiras de analisis.
US5527711A (en) * 1993-12-13 1996-06-18 Hewlett Packard Company Method and reagents for binding chemical analytes to a substrate surface, and related analytical devices and diagnostic techniques
US5599668A (en) * 1994-09-22 1997-02-04 Abbott Laboratories Light scattering optical waveguide method for detecting specific binding events
US5620850A (en) * 1994-09-26 1997-04-15 President And Fellows Of Harvard College Molecular recognition at surfaces derivatized with self-assembled monolayers
US5489988A (en) * 1995-01-03 1996-02-06 Motorola Environmental sensor and method therefor
GB9505425D0 (en) * 1995-03-17 1995-05-03 Unilever Plc Assay devices
AUPN527995A0 (en) 1995-09-07 1995-09-28 Agen Biomedical Limited Method and apparatus for semiquantification of an analyte
DE69705938D1 (de) * 1996-03-29 2001-09-06 Univ British Columbia Bestimmung der plättchenzahl unter verwendung eines plättchen-körnchenproteins
US6387707B1 (en) * 1996-04-25 2002-05-14 Bioarray Solutions Array Cytometry
DE19622458C2 (de) * 1996-05-24 1998-03-26 Senslab Ges Zur Entwicklung Un Enzymatisch-elektrochemischer Einschritt-Affinitätssensor zur quantitativen Bestimmung von Analyten in wäßrigen Medien und Affinitätsassay
US5876944A (en) * 1996-06-10 1999-03-02 Bayer Corporation Method for amplification of the response signal in a sandwich immunoassay
US6020047A (en) * 1996-09-04 2000-02-01 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Polymer films having a printed self-assembling monolayer
US6194220B1 (en) * 1996-09-25 2001-02-27 Becton, Dickinson And Company Non-instrumented assay with quantitative and qualitative results
US6048623A (en) * 1996-12-18 2000-04-11 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Method of contact printing on gold coated films
US6057165A (en) * 1997-02-07 2000-05-02 Becton, Dickinson And Company Quality control procedure for membrane flow-through diagnostic assay devices
US6391558B1 (en) * 1997-03-18 2002-05-21 Andcare, Inc. Electrochemical detection of nucleic acid sequences
US6180288B1 (en) * 1997-03-21 2001-01-30 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Gel sensors and method of use thereof
US6103536A (en) * 1997-05-02 2000-08-15 Silver Lake Research Corporation Internally referenced competitive assays
US5906921A (en) * 1997-09-29 1999-05-25 Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. Biosensor and method for quantitative measurement of a substrate using the same
US6077669A (en) * 1997-11-04 2000-06-20 Becton Dickinson And Company Kit and method for fluorescence based detection assay
US6060256A (en) 1997-12-16 2000-05-09 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Optical diffraction biosensor
SE9704933D0 (sv) * 1997-12-30 1997-12-30 Pharmacia & Upjohn Diag Ab Metod som utnyttjar en ny kalibrator och test kit som innehåller kalibratorn
GB9807134D0 (en) * 1998-04-02 1998-06-03 Unilever Plc Test methods devices and test kits
US6368873B1 (en) * 1998-04-09 2002-04-09 Applied Biotech, Inc. Identification of human urine for drug testing
US6241863B1 (en) * 1998-04-27 2001-06-05 Harold G. Monbouquette Amperometric biosensors based on redox enzymes
US6221579B1 (en) * 1998-12-11 2001-04-24 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Patterned binding of functionalized microspheres for optical diffraction-based biosensors
US6511814B1 (en) * 1999-03-26 2003-01-28 Idexx Laboratories, Inc. Method and device for detecting analytes in fluids
US6399295B1 (en) * 1999-12-17 2002-06-04 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Use of wicking agent to eliminate wash steps for optical diffraction-based biosensors
US6509196B1 (en) * 2000-01-04 2003-01-21 Response Biomedical Corp. Compensation for non-specific signals in quantitative immunoassays
US20020045237A1 (en) * 2000-03-29 2002-04-18 Gouzel Karimova Bacterial two-hybrid system for protein-protein interaction screening, new strains for use therein, and their applications
JP2001349892A (ja) * 2000-04-03 2001-12-21 Unilever Nv 検査方法及びデバイス
US7052831B2 (en) * 2000-09-29 2006-05-30 Becton Dickinson And Company Detection of multiple analytes from a single sample using a multi-well, multi-analyte flow-through diagnostic test device
WO2002041987A2 (en) * 2000-10-25 2002-05-30 Tufts University Polymeric microspheres
US6524864B2 (en) * 2000-12-28 2003-02-25 Aurora L. Fernandez Decastro Test strip for simultaneous detection of a plurality of analytes
AU2002357754A1 (en) * 2001-12-24 2003-07-24 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Flow-through assay with an internal calibration system using polyelectrolyte

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