TWI243682B - Pharmaceutical composition for treating cardiac hypertrophy and the method for making the same - Google Patents

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1243682 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 Α7 Β7 五、發明說明（1 ) 發明範圍 本發明一般性地有關IFN_ r對心肥大之作用。更特定言 之，本發明係有關使用IFN _ r供預防及治療心肥大及有關 之病理學情況。 發明 土擾素-r (IFN - r ) 干擾素爲由病毒或某些其他物質侵入細胞所釋放之相當 小 < 單鏈糖蛋白。干擾素目前分成三大類，定名爲白細胞 干擾素（干擾素_ α，從_干擾素，IFN_從）、纖維母細胞干 擾素（干擾素·々，卢_干擾素，IFN-0 )及免疫干擾素（干擾 素_ r，r _干擾素，ifn· r )。反應於病毒之感染，淋巴球 合成主要爲干擾素（與較少量之不同之干擾素物種，通 常稱爲Ω干擾素），而纖維母細胞之感染，通常謗發卢-干 擾素。從·與卢-干擾素共有約20-30%胺基酸序列同等 性。供人類IFN /?之基因缺少插入子及編碼具2 9 %與人類 IFN - α I同一性胺基酸序列，提示IFN _以與IFN _々基因係 自共同祖先演化（Taniguchi 等，Nature 285. 547-549 [1980])。對照地，IFN_ r並非由病毒感染所謗發，而是 由淋巴球反應於分裂素而合成，且很少與胺基酸序列中之 其他兩類型之干擾素有關。已知干擾素與-卢謗發MHc 第I類抗原，而IFN - r謗發ΜΗ C第II類抗原表現，且亦增 加效力，標題細胞以其提供病毒肽連同Μ H C第I類分子供 細胞毒性Τ細胞識別。 IFN - r爲干擾素系統群之成員，其顯示干擾素-α與_卢 -4- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -I I I I I I I — — — — — — I— ^ . -------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1243682 A7 B7 五、發明說明（） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) (IFN - α與IFN·/?)之抗病毒與抗增殖性質特性，但對照於 那些干擾素，爲pH 2不穩定的。IFN · r原本在分裂素之謗 發淋巴球後產生。人類IFN - r之重組體製造首由Gray， Goeddel 及共同研究者報告（Gray 等，Nature 295· 503-508 [1982])，且爲美國專利第 4,762,791 ，4,929,544 ， 4,727,138 ， 4,925,793 ， 4,855,238 ， 5,582,824 ， 5,096,705，5,574，137 及 5,595,888 號之主題。Gray 與 Goeddel於大腸桿菌中製造之重組體人類IFN-r，由146個 胺基酸組成，分子之N·末端以序列CysTyrCys開始。後來 發現天賦人類IFN- r(亦即自分裂素謗發人類周圍血液淋 巴球發生及隨後之純化）爲缺少由Gray等（同上）所指定之 CysTyrCys N-末端之多肽。最近，大腸菌衍生之重組體人 類IFN - r (rhIFN - r )之晶體結構已決定（Ealick等，Science 698-702 [1991])，顯示蛋白質以緊緊纏繞之非共價之 均二聚物存在，其中兩相同之多肽鏈係朝向反向平行之方 式。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 已知IFN - r顯示廣範園之生物活性，包括抗腫瘤、抗微 生物及免疫調節活性。重組體人類IFN - r之特別形式 (rhlFN- 7* -lb，Actimmune®，Genentech公司，南舊金山， 加州）爲商業可得之免疫調節劑供治療以皮膚、淋巴節、 肝、肺及骨由於呑噬細胞機能不全而嚴重復發感染爲特徵 之慢性肉芽腫病（Baehner，R.L·，Pediatric Pathol. 1£，143-153 [1990])。IFN - r亦已被提出供治療異位性皮炎，以嚴 重之搔癢爲特徵之一般發炎性皮膚病、且常常惡化期間之 -5- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1243682 A7 B7 五、發明說明（3 ) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 慢性復發過程，不同之臨床形態學及皮膚損傷之分佈（參見 PCT公告第W0 91/07984號，1991年6月13日公告），血管 再發性狹窄，包括在血管造形術及/或血管手術後血管再狹 窄之治療（PCT公告第WO 90/03189號，1990年4月5日公 告），各種肺情況，包括呼吸窘迫症候群（RSD)，如成人呼 吸窘迫症候群（ARDS)及新生兒形式，稱爲自發性RDS或 玻璃膜病（PCT公告第WO 89/01341，1989年2月23日公 告）。此外，已提出IFN -7*用於治療各種過敏病，如氣 喘，及HIV·感染·敗血病。已於多發性硬化（MP)患者觀察 道IFN- r之產生受損，且已報告於得自AIDS患者之分裂素 刺激之單核細胞之懸浮液中大大抑制IFN - r之產生。综論 參見例如於干擾素與其他調節之細胞素（Interferons and other Regulatory Cvtokines、，（Edward de Maeyer( 1988, John Wilet and Sons出版）中之第16章”干擾素於疾病中之 可能之致病任務之存在’’。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 干擾素-r與其他細胞素已暗示作爲可謗發之氧化氮 (iNOS)之謗發劑其依次已描述爲心臟回應於敗血病或異源 移植排斥之心衰竭下之發炎機制及不同病因學之擴張之心 肌病進展之重要媒介。Ungureanu-Longrois et al., Circ. Res. 21，494-502 (1995) ; Pinsky et al·，J. Clin· Invest· 95· 677-685 (1995) ; Singh et al·，J. Biol· Chem· 270. 28471-8 (1995) ; Birks 及 Yacoub，Coronary Artery Disease 8_, 3 89-402 (1997) ; Hattori et al·，J. Mol. Cell. Cardiol. 29. 1585-92 (1997)。事實上，IFN- r已報告爲有關肌細胞iNOS謗 -6- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 χ 297公釐） 1243682 A7 ---^ B7 五、發明說明（4 ) 發之最強效之單一細胞素（Watkins et al·, J. Mol. & Cell. Cardiol. 27· 2015-29 [1995 ]) 〇 心臟肥大 肥大一般定義爲非隨自然生長而增加器官或結構之尺寸 而無包含腫瘤形成。器官或組織之肥大歸因於個別細胞之 質量增加（眞正肥大），或組成組織之細胞之數目增加（增 生），或兩者。 心臟肥大爲藉由機械及激素刺激活化之心臟增大，使心 臟能適應增加心輸出或至損傷處之要求^ Morgan及Baker， Cixculation 81, 13_25 (1991)。此反應常與各種不同之病理 學情況，如高血壓、主動脈再狹窄、心肌梗塞、心肌病、 瓣口反流、心臟分流、充血性心衰竭等。 於細胞層次，心臟作爲肌細胞及稱爲非肌細胞之周圍支 撑細胞之融合細胞層。雖然非肌細胞主要爲纖維母細胞/間 葉細胞，彼等亦包含内皮及平滑細胞。事實上，雖然肌細 胞由大部分已成長之心肌質塊組成，但彼等只代表存在於 心臟中之總細胞數之約3 0 %。 胚心臟之擴大大部分依賴心細胞數之增加，其繼續至剛 出生不久，當心臟細胞失去增殖能力爲止。經由個別細胞 肥大再發生生長。已成長之心室肌細胞之肥大係反應於導 致慢性血流流動過度負荷之各種情況。因此，於反應於激 素、生理學、血流動力學、及病理學之刺激，已成長之心 室肌細胞可經由肥大過程之活化而適應於增加之工作負 荷。此反應之特徵爲增加心肌細胞尺寸及個別心肌細胞之 -7- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） I 裝.---— ！「訂 _ --------^^1 . (請先阶讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1243682 A7 B7 五、發明說明（5 ) (請先閱讀背面之注音？事項再填寫本頁) 收縮性蛋白質含量，而無胚基因包括供動脈鈉尿肽（AN P) 用之基因之同時分裂及活化。Chien et al.，FASEB J. 5, 3037-3046 (1991 ) ; Chien et al·，Annu. Rev. Phvsiol. 55, 77-95 (1993 )。與於細胞外基質内與心臟内冠狀動脈之周圍之 間質膠原蛋白之堆積有關之肌細胞尺寸之增加之結果心肌 質塊之增量已述於人類壓力超過負荷造成之左心室肥大 (Caspari et al·，Cardiovasc· Res. 11· 554-8 [1997] ； Schwarz et al·，Am. J. Cardiol. 42· 895-903 [1978] ; Hess et al.， Circulation 63· 360-371 [ 1981 ]; Pearlman et al·，Lab. Invest. 处，158-164 [1982])。由於慢性血液血流過度負荷之心臟肥 大爲大部分心疾患之共同最後結果及心衰竭之一致特性。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 亦已提示由非肌細胞支撑細胞產生之旁分泌因子另外涉 及心臟肥大之發生，且已鑑定各種來自非肌細胞之肥大因 子如白血球抑制因子（LIF )及内皮素。Metcalf，Growth Factors, 7, 169-173 (1992) ； Kurzrock et al., Endocrine Reviews 12, 208-217 (1991) ； Inoue et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2863-2867 (1989) ; Yanagisawa and Masaki， Trends Pharm. Sci. !£，374-378 (1989);美國專利第 5,573,762號（ 1996年1 1月12日公佈）。已鑑定爲心臟肥大之 可能介體之另外之例示因子包括心肥大素cardiotrophin- 1 (CT-lUPennica et al·· Proc· Nat· Acad. Sci· USA 92 : 1142-1146[ 1995])，兒茶酚胺，腎上腺皮質類固醇，血管緊張素 及前列腺素。 已成長之肌細胞肥大藉由容許降低個別肌纖維上之負荷 -8- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1243682 A7 B7 五、發明說明（6 ) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 爲短期反應於受損之心臟機能最初是有好處的。然而，嚴 重長期之過度負荷，肥大之細胞開始損害及死亡。Katz於 Katz Α·Μ·編輯之 Physiology of the Heart(心臟之生理 學）（New York，Raven Press，1992)ρρ· 638-668 中之”心臟衰 竭”。心臟肥大爲心衰竭之臨床過程中之死亡率與病率之嚴 重之風險因子。Katz，Trends Cardiovasc. Med. 5，37-44 (1995)。 對於心肥大之原因及病理學之進一步細節，參見例如 Braunwald，E.編輯（W.B. Saunders 公司，1988)之敎科書 Heart Disease(心臟病）第14章，心衰竭之病理學。 心臟肥大之治療 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 現在，心肥大之治療依基礎之心臟病而異。兒荼酚胺、 腎上腺皮質類固醇、血管緊張素、前列腺素、白血病抑制 因子（LIF)、内皮素（包括内皮素-1，-2，及-3與大内皮 素）、心肥大素-l(CT-l)及心肥大因子（CHF)屬於被鑑定 爲可能之肥大之介體之因子。例如，/?_腎上腺能受體阻斷 藥（-阻斷劑，如普洛普拉醇（propranolol)，替莫醇 (timolol)、特它洛醇（tertalolol)、卡特歐醇（carteolol)、那 多醇（nadolol)、貝它梭醇（betaxolol)、片布妥醇 (penbutolol)、乙醯布妥醇（acetobutolol)、阿天諾醇 (atenolol)、美托普洛醇（metoprolol)、卡非迪醇（carvedilol) 等）及非拉帕米耳（verapamil)已廣用於治療肥大之心肌病。 卢-阻斷劑對症狀（如胸痛）及運動耐受性之有利之作用大部 分由於心速率之降低因而延長舒張及增加被動心室充填。 -9- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） A7 1243682 ___B7___ 五、發明說明（7 ) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

Thompson et al.，Br. Heart J. 44, 488-98 (1980) ； Harrison et al., Circulation 84_98 (1964)，已描述非拉帕米耳增進 心室充填及可能降低心肌局部缺血。尼非滴拼（NifediPine) 及底替阿健（diltiazem)亦已有時用於治療肥大之心肌病。 Lorell et al.9 Circulation 65, 499-507 (1982) ； Betocchi et al., Am. J. Cardiol. 78- 451-7 (1996)。然而，由於其之強效之 血管擴張性質，尼非滴拼可能有害的，尤其於外流閉塞之 患者。滴梭p比拉麥（Disopyramide)由於其負收縮能性質’ 已用來解除症狀。Pollick，N. Engl. J. MecL 307? 997-9 (1982)。然而許多患者中，最初之好處隨時間降低。Wigle et al.，Circulation 92. 1680-92 (1995 )。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 抗高血壓藥治療已報告對與血壓升高有關之心肥大具有 利之作用。用於抗高血壓治療之藥物或併用之實例，爲鈣 拮抗劑，例如尼翠滴拼（nitrendipine )、-腎上腺能受體拮 抗劑，如上列者；血管緊張素轉化酶（ACE)抑制劑，如奎 那普利耳（quinapril)、卡普托普利耳（captopril)、衛那拉普 利耳（enalapril)、拉米普利耳（ramipril)、爷雜普利耳 (benazepril)、弗斯普利耳（fosinopril)、利西諾普利耳 (lisinopril);利尿劑如氯p塞得（chlorothiazide)、氫氯p塞得 (hydrochlorothiazide)、氫氟美 ρ塞得（hydroflumethazide)、 甲氯 p塞得（methylchlothiazide)、节 p塞得（benzthiazide)、二 氯苯醯胺（dichlorphenamide)、乙酸峻酸胺（acetazolamide) 、因達拍醯胺（indapamide);躬道阻斷劑例如迪替阿健 (diltiazem)、尼非滴拼、非拉帕米耳、尼卡滴拼。例如， -10 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21G X 297公爱) 1243682 A7 B7 五、發明說明（） (請先閱讀背面*之注意事項再填寫本頁) 以迪替阿健及卡普托普利耳治療高血壓顯示左心室肌質塊 減少，但舒張機能之Doppler指數並無正常比。Szlachcic et al·, Am. J. Cardiol· 63· 198-201 (1989) ; Shahi et al·, Lancet 336· 458-61 (1990)。解釋此等發現指示於左心室肥大復原 後，可留下過量之間質膠原蛋白。Rossi et al., Am. Heart J. 124· 700-709 (1992)。Rossi et al.，同上，於實驗大鼠中研 究卡普托普利耳對壓力超過負荷之心臟肥大中之心肌細胞 肥大及間質纖維變性之預防及復原之作用。 因爲對心肥大之治療無一般可應用之療法，可預防或降 低心臟肌細胞肥大之因子之鑑定，於開發新治療策略來抑 制病理生理學之心臟生長方面很重要。 發明概要 吾等出乎意料地發現IFN· r抑制前列腺素F2&(PGF2i〇-及苯腎上腺素謗發自已成長之大鼠分離之心肌細胞之擴 展。吾等另發現IFN_ r於活體内於大鼠模式中抑制由 PGF 2 ^之激動劑類似物，弗路普洛史天諾（fluprostenol)謗 發之心肥大，及由壓力過度負荷謗發之肥大。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 於是，本發明有關藉由投予治療上有效劑量之IFN - r， 治療心肥大，不論是否基礎之原因。若目的爲治療人類患 者，則IFN- r較好爲重組體人類IFN- r (rhlFN- r )，最好 爲rhIFN· r -lb，其定義於下文。於最廣義，所用之治療之 觀念且特別地包括任何階段之心臟肥大之預防、緩和、減 低及治癒。 IFN _ r較好以液體醫藥調配物之形式投藥，其可加以防 -11 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐) 1243682 A7 B7 五、發明說明（9 ) (功先閱讀背面之注意事項再填艿本頁) 腐以達到所要之貯存穩定性。經防腐之液體醫藥調配物可 含多劑量之IFN_ r，且因此適宜重複之使用。 IFN - r可與一種以上之另外用於治療心臟肥大或於心肥 大之發展中如血壓提高、主動脈狹窄或心肌梗塞之生理學 情況儀器合併使用。 本發明另有關製造供治療心肥大之包含IFN - r爲活性成 分之醫藥組合物之方法。 本發明亦有關醫藥產品其包含： (a) 含至少一治療上有效劑量之IFN-r之醫藥組合物； (b) 含該醫藥組合物之容器；及 (C)貼在該容器之標籤，或包含於該醫藥產品中之包裝仿 單有關該IFN-r於治療心肥大之使用。 圖之簡要説明 於圖及整個實例中，”IFN”或”IFN- Γ ”係指重組體小鼠 IFN- γ (Genentech 公司，South San Francisco，CA 或 Genzyme, Cambridge, ΜΑ) ° 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 圖1藉由IFN- r抑制前列腺素F2a(PGF2a)-引發之擴展 反應。於分離當日，將肌細胞與鹽水媒劑或IFN - r ( 500單 位/毫升）預先培養。分離後2 4小時進行第二次添加媒劑或 IFN _ r，及添加媒劑或PGF 2α(10·7Μ)。再72小時之培養 後，將細胞固定於戊二醛，以伊紅Υ染色及螢光顯微鏡 看。4天培養後，A，Β，C心臟肌細胞分別爲：對照組、 PGF 2 ^及PGF 2 ^ + IFN - 7*。長條圖顯示棒型心肌細胞相對 於呼吸發生頻率百分比之最大呼吸。棒型細胞之最大呼吸 -12- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1243682 A7 B7 五、發明說明（1ί)) (請先閱讀背面•之注意事項再填寫本頁) 藉由螢光顯微鏡檢術及影像軟體測定。每組自單一實驗檢 測至少200個棒型細胞。IFN · r單獨對細胞之形態學無可 觀測之影響。對所有組之比較，P<〇 〇〇1。

圖2 PGF 2 α _引發之反應藉由IFN _厂（5〇〇_25單位/毫升） 之劑量反應抑制作用。於分離當天，將肌細胞與鹽水媒劑 或IFN - r預先培養。分離後24小時加第二量之IFN - r，隨 後添加媒劑或PGF 2 “（ 1 〇 ·7 Μ)。另7 2小時之培養後，將細 胞固定於戊二醛中，以伊紅γ染色，並於螢光下肉眼觀 察。肌細胞形態學之定量：Α對照組，B PGF2 a， C PGF”+IFN- r (25 單位 / 毫升），D PGFp+IFN- r (100 單 位/亳升），E PGFp+IFN· r (500單位/毫升）。長條圖顯示 棒型心肌細胞相對於呼吸發生頻率百分比之最大呼吸。每 組自單一實驗檢測至少200個棒型細胞。IFN - r單獨對細 胞之型態學無可觀測之影響。對所有組之比較， P<0.001 〇 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 圖3苯基素（PE)引發之擴展反應藉由IFN -，之抑制作 用。於分離當天，將肌細胞與鹽水媒劑或IFN _ r ( 500單位 /毫升）預先培養。分離後2 4小時做第二次添加媒劑或ifn -Γ並一起加媒劑或P E ( 1 0 ·5 Μ )。再培養7 2小時後，將細胞 固定於戊二酸，以伊紅Υ染色，並藉螢光顯微鏡檢觀察。 培養4天後，A，Β，C心肌細胞：分別表對照组，ρ ε及 P E + IFN - 7*。長條圖顯示棒型心肌細胞相對於呼吸發生頻 率百分比之最大呼吸。棒型細胞之最大呼吸藉螢光顯微鏡 檢法及影像軟體測定。自單一實驗每組檢測至少200個棒 -13 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1243682 A7 B7 五、發明說明（11 ) 型細胞。IFN - r單獨對細胞之形態學不具可看到之影響。 對所有組之比較，p<0.001。 (請先閱讀背面•之注咅？事項再填寫本頁) 圖4 IFN_ r對大鼠中藉由弗普洛史天醇（fluprostenol)引 發之心肥大之影響。數據表示爲平均値土 SEM。括號内之 數目爲各組中動物之數目。*p<〇〇5，*Ρ<0·01，與媒劑組 比較。#P<0.05，MPco.Oi，與弗普（Flup)組比較。弗 晋：弗普洛史天醇；IFN = IFN- r ; HW :心臟重量； BW :體重；VW :心室重量；LVW :左心室重量。 圖5弗普及/或IFN對MAP與HR之影響。數據以平均値 土 SEM表示。括號内之數目爲各、组中之動物數目。 *Ρ<0·〇5，與媒劑組比較。#p<0 〇5，與弗普組比較。 + Ρ<0·05，與弗普+IFN組比較。弗普：弗普洛史天醇； IF N : IFN r ; M A Ρ :平均動脈壓；η R :心速率。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印制衣 圖6顯示弗普洛史天醇（FLUP )與IFN _ r對：Α骨骼肌動 蛋白（SKA) ; B漿肌網鈣ATP酶（SRCA) ; C膠原蛋白j (COLI) ; D動脈鈉尿因子（ANF)表現之影響之長條圖。表 現程度經正常化成戊二醛· 3 _磷酸脱氫酶（GAPDH )信息。 VEH爲媒劑。每組7隻動物，數據表示爲平均値士SEM。 P<0.05 對 VEH 組。 圖7 IFN · r於壓力過度負荷之大鼠中對心臟重量，心室 重量及左心室重量之影響。括號内之數目爲各組之動物 數。**ρ<0·01，與僞裝組比較。##P<0.01，與受束縛+媒 劑組。僞裝：僞裝操作之大鼠；受束縛：受束縛之大鼠； IFN : IFN- r ; HW :心臟重量；VW :心室重量； -14- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1243682 A7 B7 五、發明說明（12 ) LVW :左心室重量。 (請先閱讀背面之注音？事項再填寫本頁} 圖8 IFN - r於具壓力過度負荷之大鼠中對心臟重量、心 室重量及左心室重量與體重之比例之影響。數據表示爲平 均値土 SEM。括號中之數目爲各组中之動物數。 **Ρ<0·01，與僞裝組比較。##Ρ<0·01，與受束縛+媒劑組 比較。僞裝：僞裝操作之大鼠；受束縛：主動脈受束縛之 大鼠IFN : IFN - r ;HW:心臟重量，BW:體重；VW: 心室重量；LVW :左心室重量。 圖9 IFN - r於壓力過度負荷之大鼠中對收縮壓、平均動 脈壓及舒張動脈壓之影響。括號内之數爲各組動物之數。 **Ρ<0·01，與僞裝組比較。僞裝：僞裝操作之大鼠；受束 縛：主動脈受束縛之大鼠·· IFN : IFN_ r ; SAP ··收縮動 脈I ; MAP ··平均動脈壓；DAP :舒張動脈壓：。 發明之詳細説明 A.定義 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 ” r干擾素”，’’干擾素-r ”，或”ifn_ r ”係變化地指於 任何之心肥大測定例如本文揭示之肥大測定中顯示生物學 上具活性之所有r干擾素形成（人類及非人類動物），且意 即包含但不限於成熟、前體、變型及/或脱（1-3)(亦稱爲脱 CysTyrCys IFN - r )形式，不論得自天然源、化學合成或由 重組體DNA技術學之技術製造。重組體人類ifn_厂 (rhuIFN- r )包含其cDNA與胺基酸序列之製備之完全描述 揭示於例如美國專利第4,727,138 ; 4,762,791 ; 4,925,793 ; 4,929,554 ; 5,582,824 ; 5,096,705 ; 4,855,238 ; 5,574，137 -15- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公爱） 1243682 A7 B7 五、發明說明（1 ) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 及5,595,888號。缺CysTyrCys之重組體人類IFN· r，包括 各種加以截短之衍生物，例如揭示於歐洲專利公告第 146,354號。非人之動物干擾素，包括IFN - r，例如揭示於 歐洲公告第88,622號。用詞包括各種糖基化形式及其他變 化體（如胺基酸序列變化體）及此等先天性（野生型）干擾素 之衍生物，不論爲已知於技藝或於未來變得可利用。此等 變化體之實例爲等位基因，及其中刪除插入及/或經取代之 殘基之部位指向之突變生成產物（參見，例如上面提及之歐 洲公告第146,354號）。IFN- r已知具狹窄之宿主範圍，因 此，應使用與待治療之動物同質性之IFN_r。於人類治療 中，較好用示於美國專利第4,717,138號及其相對部分，EP 77,670之序列之脱〇78丁丫1^丫8變化體，及視情況，於轉譯處 理後刪除最後4個胺基酸殘基之C -末端變化體。對於人類 治療用途，本發明之IFN- r較好爲重組體人類IFN- r (rhIFN- r )，於N末端有或無胺基酸CysTyrCys。更佳地， IFN · r爲重組體人類IFN - r物種（重組體人類干擾素厂· lb，rhIFN- r -lb，含140個胺基酸），其爲商業調配物， Actimmune® (Genentech公司，南舊金山，加州）之活性成 分。因已知IFN _ r具高度物種特異性於動物實驗中或供獸 醫使用，較好用待治療之動物物種之IFN - r。因此，於使 用大鼠動物模式之活體内實驗中，已使用老鼠（小鼠）重組 體IFN - r ( Genentech公司）。大鼠與小鼠爲充分密切有關， 容許使用小鼠IFN-r於大鼠模式中。 於藥理學之意義上，於本發明之上下文中，”治療上有效 -16- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1243682 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（14 ) 量”之IFN _，係指有效於治療肥大、特定言之，心肥大之 量° 當本文使用，”肥大”定義爲不依賴自然之生長而增加器 官或構造之質量，其不包括腫瘤形成。器官或組織之肥大 歸因於個別細胞質量之增加（眞正肥大），或組成組織之細 胞數增加（數量性肥大），或兩者。某些器官，如心臟，出 生後不久即失去分裂之能力。於是，”心臟肥大，，定義爲增 加心臟之質量，其於成人之特徵爲增加肌細胞細胞尺寸及 收縮蛋白質含量而無同時之細胞分裂。負責引起肥大之壓 力（例如增加前負荷，增加後負荷，喪失肌細胞，如於心肌 梗塞或原發性收縮力抑制）之性質，於決定反應之性質上， 顯現擔負重要任務。心肥大之早期通常於形態學上之特徵 爲增加微原纖維與粒線體之尺寸，及粒線體與核擴大。於 此階段’雖然肌肉細胞大於正常的，但細胞之組織化大部 分被保留。於心肥大之更進一步之階段，優先增加特殊胞 器如粒線體之尺寸或數目，且以不規則之方式，將新的收 縮要素加於細胞之局在之區。受長時間肥大之細胞，顯示 更明顯之阻斷細胞組織化，包括明顯擴大之核具高度分成 小葉之膜’其取代鄰接之肌纖維且造成正常之Z _環帶註册 區斷裂。用詞”心肥大”用來包括此情況進行之所有階段， 特徵爲心臟之各種程度之結構損害，不管基礎之心臟疾 患。 ”心衰竭”係指心機能之不正常，其中心臟不以代謝組織 所須之速率將血液泵出。心衰竭可由許多因素造成，包括 -17- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 裝-------，丨訂---------. (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1243682 A7 B7 五、發明說明（15 ) 局部缺血、先天病，風濕或自發的形式。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ”充血性心衰竭”爲進行性病理狀態，其中心臟愈加不能 供應充足之心輸出量（由心臟於時間内泵出之血量）以輸送 氧合之血液至周圍組織。當充血性心衰竭進行時，發生結 構及血流流動損害。雖然此等損害具各種現象，一特徵之 症狀爲心室肥大。充血性心衰竭爲許多各種心疾患之共同 最終結果。 ’’心肌梗塞”一般得自冠狀動脈之粥樣硬化，通常併發冠 狀栓塞。其可分成兩主要類型：穿壁梗塞，其中心肌壞死 包括心室壁之全厚度及心内膜下（非穿壁）梗塞，其中心肌 壞死包括心内膜下，壁内心肌或兩者，而無擴展通過心室 壁至心外膜。心肌梗塞已知引起血液流動作用之變化及改 變心臟之受損及健康區之結構。因此，例如心肌梗塞降低 最大心輸出量及衝擊心臟體積。亦與心肌梗塞有關者爲發 生於組織間隙之DN A合成之刺激及增加未受影響之心臟區 域中之膠原蛋白之形成。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 於延長之高血壓中於心臟上增加壓力或重壓之結果，例 如增加總周圍抗性，長久以來與”高血壓”有關。由於慢性 壓力過度負荷之變肥大之心室特徵爲受損之舒張性能。 Fouad等人，J. Am. Coll. Cardiol. 4. 1500-6 (1984) ； Smith 等，J. Am. Coll. Cardiol, i, 869-74 (1985)。於早期原發性 高血壓，不論正常或超正常之舒張機能中已檢測延長之左 心室鬆弛。Hartford 等，Hypertension 6· 329-338 (1984) 〇 然而，於血壓程度與心肥大之間並無密切平行。雖然於人 18- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1243682 A7 B7 ------- — 一 五、發明說明（16 ) 類已報告回應於抗高血壓治療之左心室機能改善，但以利 尿劑（氫氯嘍得，/3 -阻斷劑（普洛普拉醇）或鈣遒阻斷劑（迪 替阿健）之各種治療，已顯示左心室質塊之逆轉，而無改善 收縮機能。Inouye 等，Am. J. Cardiol. 11·，1583·7 (1984)。 與心肥大有關之另外複雜之心臟病爲”肥大性心肌病”。 此情況之特徵爲形態上、機能與臨床特性之大大不同 (Maron 等，N. Engl. J. Med· 316· 780-9 [1987] ; Spirito 等，N^Engl. J. MecL, 320, 749_55 [ 1989 ] ; L〇uie 及 Edwards， Prog. Cardiovasc. Pis. 36· 275賺308 [1994 ] ； wigle 等， Circulation 92? 1680-92 [1995])，其異質性由其使所有年齡 之患者受苦之事實所強調（Spirito等，N· Med 336, 775-785 [1997])。肥大之心肌病之原因因素亦不同且顯少 被了解。最近之數據提示々肌球蛋白重鏈突變可説明3〇 至40%之肥大心肌病之尿族病例（Watkins等，N Engl j Med. 326. 1108_ 14 [ 1992 ] Schwartz 等，Circulation 91, 532-40 [1995 ] ; Marian 及 Roberts，Circulation 92, 1336-47 [1995] ; Thierfelder 等，Cell. 77, 701-12 [1994] ； Watkins 等，Nat. Gen. 11· 434-7 [1995 ]) 〇 上瓣膜之”主動脈狹窄”爲遺傳血管疾患，其特徵爲升主 動脈變窄，但其他動脈包括肺動脈亦可被影響。未治療之 主動脈狹窄可導致增加之心臟内壓致成心肌肥大，且最 後，心衰竭及死亡。此疾患之發病並不完全了解，但内側 平滑肌之肥大及可能地增殖爲此疾病之顯著特徵。已報告 彈性蛋白基因之分子變化體涉及主動脈狹窄之發展及發病 -19 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） ------------·裝----- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) — 訂---------- Ϊ243682

、發明說明（ (美國專利第5,650,282號，1997年7月22日公告）。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ’’瓣膜回流”發生爲造成心瓣膜疾患之心臟病之結果。各 種疾病，如風濕熱可引起瓣膜口之皺縮或拉開，而其他疾 病可造成内心臟炎，内心臟或房室口之襯膜或心臟手術之 發炎。缺損如瓣膜狹窄之變窄或瓣膜之缺損性關閉造成血 液蓄積於心腔或血液通過瓣膜之回流。若未校正，延長之 瓣膜狹窄或不足可造成心肥大及有關之心肌損害，其最後 須換瓣膜。 所有這些及伴隨心肥大之其他心臟疾患之處置爲本發明 之主題。 處置係指治療處置及預防或防止方法，其中目的爲防 止或減慢（減少）肥大。須處置之那些包括那些早已有疾 患’及那些易於具有此疾患或待預防此疾患者。肥大可得 自任何原因，包括自發的、心臟營養、或肌肉營養之原 因’或局邵缺血或局部缺血之攻擊，如心肌梗塞。 ”慢性”投藥係指以相反於急性方式之連續方式投予藥 劑’以維持供延長之一段時間用之最初抗肥大作用。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 仏處置之目的用之”哺乳類”係指分類爲哺乳類之任何動 物包括人類、家畜及農場動物及動物園、運動或寵物動物 如狗、_、牛、馬、羊、豬等。較佳地，哺乳類爲人類。 與一種以上之另外之治療劑”混合”投藥，包括同時及以 任何順序連續投藥。 Β · ϋ行本發明之古者 1 ·心臟肥大之測定 ______ -20- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21〇 χ 297公釐） 1243682 Δ7 Α7 Β7 五、發明說明（18 ) 活體外測定 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) a.成鼠心肌細胞之擴展之謗發 於此測定中，自單一（雄Sprague-Dawley )大鼠。分離心室 肌細胞，基本上依詳述於Piper等’’成鼠心室心肌細胞”（於 Cell Culture Techniques in Heart and Vessel Research, H.M. Piper 編輯；Berlin. Spinger-Verlag, 1990，pp. 36-60)之方法 之修飾法。此方法使能分離成鼠心室肌細胞及此等細胞之 長期培養物（此棒型之表現型）。苯基腎上腺素及前列腺素 F2a(PGF2〇已顯示於此等已成長之細胞中謗發擴展反應。 Piper等，如上，Lai等，Am. J. Phvsiol. 1996 ; 271 (Heart Circ. Phvsiol.姐）：H2197_H2208。再藉由各種可能之心肥 大之抑制劑測試由PGF2 «，，或PGF2 β類似物（例如弗普洛史 天醇）及苯基腎上腺素引發之肌細胞擴展之抑制作用。詳細 之實驗計畫書述於下面之實例。 活體内測定 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 a.活體内由弗普洛史天醇引發之心肥大之抑制作用 此藥理模式測試IFN - τ*於大鼠（例如雄Wistar或Sprague· Dawley )内抑制藉皮下注射弗普洛史天醇（爲PGF 2 “之激動 劑類似物）引發心肥大之能力。已知具有由心肌梗塞引發之 病理心肥大之大鼠，於其心肌中具慢性提高含量之可萃取 之 PGF2a。Lai 等 ’ Am. J. Physiol. (Heart Circ. Physiol.) 271 ·· H2l97_H22〇8( l"6)。於是，可於活體内抑制弗普洛 史天醇對心肌生長之作用之因素可能有用於處置心肥大。 IFN - r對心肥大之作用藉由測量相對於以弗普洛史天醇處 -21 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規袼（210 X 297公釐） 1243682 A7 B7 五、發明說明（） (請先閱讀背面-之注意事項再填寫本頁) 理而無接受IFN - r之大鼠之心臟、心室及左心室之重量 (以體重正常化）而決定。此測定之詳細説明提供於實例 中0 b .壓力過度負荷之心肥大測定 供活體内測試通常藉由限制試驗動物之腹部主動脈引發 壓力過度負荷之心肥大。於典型之實驗計晝書中，將大鼠 (如雄Wistar或Sprague_Dawley)於麻醉下處置，各大鼠之腹 主動脈低於橫隔膜變窄。Beznak M.，Can. J. Biochem. Phvsiol. 33. 985-94 (1955 )。經由手術切開將主動脈暴露， 將截頭之針置於血管旁。以毛線結紮帶繞著針限制主動 脈，將其立刻除去，其降低主動脈内腔至針之直徑。此研 究述於例如 Rossi 等，Am. Heart J. 124. 700-709 (1992)及 O’Rourke 及 Reibel，P.S.E.M.B. 200· 95-100 (1992)。由本發 明者使用之實驗計畫書之詳細説明，揭示於下文之實例。 b .於實驗上引發心肌梗塞（ΜI)後，對心肥大之作用 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 藉左冠狀動脈結紮於大鼠中引發急性ΜΙ並藉心電圖之檢 查確認。亦如對照動物製備一群僞裝操作之動物。較早之 數據已顯示心肥大存在於一組具ΜΙ之動物，由心臟重量與 體重比增加1 8%證明。Lai等，同上述。此等動物以心肥 大之候選阻斷劑如IFN - r處置，提供有關經測試之候選阻 斷劑有治療可能性之有價値之資訊。 2 . IFN _ r之使用，治療組合物及投藥 根據本發明，IFN - r可用於處置心肥大，亦即心臟擴 大，不論病因學及發病。當過度之壓力或體積負荷施加於 -22- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1243682 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明說明（2Q ) 心臟（心室）時，心（心肌）肥大發生，提供基礎之補償機 制，使心室得以持續其負荷。Krayenbuehl等，Eur. Heart J. 4 (Suppl· A)，29 (1983)。負責肥大發生之壓力（增加前負 荷，增加後負荷，喪失肌細胞，如於心肌梗塞或原發性收 縮受抑）之性質，於決定肥大反應之性質中扮演重要之角 色 。 Scheuer 及 Buttrick，Circulation 75_(Suppl. I)，63 (1987)。本發明有關與任何基礎之病理學情況，包括而不 限於心肌梗塞後，高血壓、主動脈狹窄、心肌病、瓣膜回 流、心臟分流及充血性心衰竭有關之心肥大之處置。此等 情況之主要特徵討論於上文。 特別重要者爲使用IFN · r於預防心肌梗塞後之心衰竭。 美國每年約750,000病患罹患急性心肌梗塞（AMI)，及所有 死亡中約四分之一歸因於AMI。近年來，血栓溶解劑如鏈 激酶、脲激酶及特別是組織血纖維蛋白溶酶原活化劑（t -PA)顯著增加罹患心肌梗塞之患者之存活。當於1.5至4小 時内連續靜脈内輸注投藥時，於9 0分，於6 9 %至9 0 %之經 處置患者中，t-PA產生冠狀不閉合。Topol等，Am. J. Cardiol. 61· 723_8 (1988) ; Neuhaus 等，J. Am. Coll. Cardiol. 12· 581-7 (1988) ; Neuhaus 等，J. Am. Col. Cardiol. 11，1566-9 (1989)。已報告以高劑量或加速投藥療法具最 高不閉合比例。Topol，J. Am. Coll. Cardiol. 15, 922-4 (1990)。t_PA亦可以單一快速濃注投藥，雖然由於其相當 短之半衰期，但較好適宜輸注治療。Tebbe等，Am. J. Cardiol. 64· 448·53 (1989) 〇 — t P A 變化體，特另U 地經設計 -23- (請先閱讀背面乏注意事項再填寫本頁) Μ----- — 訂 I:-------

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1243682 A7 _B7_ 五、發明說明（21 ) (請先閱tr背面^/注意事項再填寫本頁) 具較長之半衰期及很高之血纖維蛋白特異性，TNK t-PA(爲 T103N，T117Q，KHRR-(296-299)AAAA t-PA 變化 體，Keyt 等，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 9i, 3670-3674 (1994)特別適宜快速濃注投藥。然而，儘管此等進展，患 者存活之長期預後，大大地依賴梗塞後之監測及患者之治 療，其應包括心肥大之監測及治療。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 另外重要之治療指示爲與高血壓有關之心肥大之治療如 前所提，持續之高血壓已知造成心肥大。雖然某些降壓劑 已顯示降低左心室之質量，但治療並不總是得以改進舒張 機能。於是，IFN - r可與Θ ·腎上腺受體阻斷劑例如普洛 普拉醇、替莫醇、特它洛醇、卡特歐醇、那多醇、貝它梭 醇、片布妥醇、乙醯布妥醇、阿天諾醇、美托普洛醇、卡 非迪醇；血管緊張素轉化酶（ACE)抑制劑如奎那普利耳、 卡普托普利耳、衛那拉普利耳、拉米普利耳、苄雜普利 耳、弗斯普利耳、利西諾普利耳；利尿劑如氯嘍得、氫氯 嘍得、氫弗路美嘍得、甲氯嘍得、苄塞得、二氯苯醯胺、 乙醯唑醯胺、因達拍醯胺；及/或鈣道阻斷劑如迪替阿建， 尼非滴拼、非拉帕米耳、尼卡滴拼混合投藥。含由其屬名 識別之治療劑之醫藥組合物爲商業可得，且依製造商之指 示劑量、投藥、不利作用、禁忌等投藥（參見例如 Physician’s Desk Reference, Medical. Economics Data Production公司，Montvale，N.J·，第 51版 1997)。 IFN _ r亦可預防性地投予心肥大之患者，防止情況之進 行，避免猝死，包括無症狀患者之死亡。此預防治療特別 -24- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） A7 1243682 五、發明說明（22 ) 保證被診斷具巨大之左心室之心肥大於成人（最大壁厚35 毫米以上，或於小孩可比較之値）之患者之情形，或於當心 臟上之血液流動負荷特強之情形。 IFN - r亦可用於處理動脈纖維化，其發生於被診斷具肥 大心肌病之實質部分之患者。 IFN· r以含IFN- r爲活性成分連同醫藥上可接受之載劑 之醫藥組合物形式投藥。製備供治療心肥大之IFN - r之治 療調配物供貯存，藉由混合具所須純度之IFN - r與視情況 使用之生理學上可接受之載劑、賦形劑或穩定劑 (Remington^ Pharmaceutical Sciences，同上），以冷凍乾燥 餅或水溶液形式。可接受之載劑、賦形劑或穩定劑於所用 訂 之劑量及濃度對接受者爲無毒性，且包括緩衝劑如磷酸 鹽、檸檬酸鹽及其他有機酸；抗氧化劑包括抗壞血酸；低 分子量（少於約10個殘基）多肽；蛋白質如血清白蛋白、明 膠或免疫球蛋白；親水性聚合物如聚乙缔峨洛相；胺基

酸如甘胺酸、越胺醯胺、天冬驢胺、精胺酸或離胺酸；單 糖、二糖及其他碳水化合物包括葡糖、甘露糖或糊精；螯 合劑如EDTA ;糖醇如甘露醇或山梨糖醇；形成鹽之 離子^納；及/或非離子界面活性劑如吐恩（Tw叫、普魯 洛尼克（Pluronics)，或聚乙二醇（pEG)。 待用於活體内投藥之IFN.,必須爲滅菌的。此易 通過滅菌滤膜過滤完成，於冷康乾燥 ^由 消 組通常以冷康乾燥形式或以溶液貯存。，重新 ，可與其他成分混合，以冷康乾燥形式使用，供使 -25- x 297^J7 本紙張尺度適用f國國家標準（CNS)A4 1243682 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7__— ―― 五、發明說明（23 ) 用時以適當稀釋劑重新組成。由於已知IFN - r對酸不穩 定，傳統上已於中性或微鹼性p Η下處理。參見例如美國專 利第4,499,014號，其揭示經冷凍乾燥之酸性IFn_厂溶液之 再活化至p Η 6至9。更高濃度之IFN - r之中性或微鹼性溶 液通常不適宜作爲注射用調配物，由於中度形成看得見之 Λ»灰。此沉殿投藥後可引起血栓或減少強度。歐洲專利公 告第〇，196,203號揭示冷凍乾燥之iFN_ r重新組成至pH 4 至 6.0。 含有效量之非冷凍乾燥之IFN_，與能維持pH於4·〇 - 6.0 之緩衝劑、穩定劑及非離子清潔劑之穩定之液體醫藥組合 物’揭示於美國專利第5,151,265號，1992年9月29日公 告。穩定劑典型地爲多元羥基糖醇如甘露糖醇及非離子清 潔劑可爲界面活性劑，如聚山梨糖醇酯8 〇或聚山梨糖醇酯 20。非離子清潔劑較好以約0 07至〇 2毫克/毫升之範圍， 最好以約0.1¾克/毫升之濃度存在。適宜之緩衝劑爲習用 之有機酸及其鹽之緩衝劑，如硝酸鹽緩衝劑（如擰檬酸一鈉 鹽-檸檬酸二鈉鹽之混合物，檸檬酸·檸檬酸三鈉之混合 物，檸檬酸-擰檬酸一鈉鹽混合物等）、琥珀酸鹽緩衝劑（如 琥珀酸-琥珀酸一鈉鹽混合物，琥珀酸·氫氧化鈉混合物， 琥珀酸-琥珀酸二鈉鹽混合物等）、酒石酸鹽緩衝劑（如酒石 酸-酒石酸鈉混合物、酒石酸·酒石酸鉀混合物、酒石酸_氫 氧化鈉混合物等），富馬酸鹽緩衝劑（如富馬酸-富馬酸一鈉 鹽、冨馬酸_富馬酸二鈉鹽混合物，富馬酸一鈉鹽_富馬酸 一鋼鹽混合物等）、葡糖酸鹽緩衝劑（如葡糖酸-葡糖酸鈉混 -26- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -----------—— (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 丨訂·_ 1243682

1243682 A7 25 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明說明（ (poloxamers)(如波羅沙摩188)。非離子界面活性劑之使用 使調配物得以暴露於切力表面應力而無引起蛋白質變性。 另外’此含界面活性劑之調配物可於氣溶膠裝置中使用， 如那些用於肺部投藥，及無針噴射注射槍（參見如Ep 257,956) 〇 等張化劑存在以確保本發明液體組合物之等張性，包括 多疋每基糖醇，較好爲三羥基或更高之糖醇如甘油、赤蘚 醇、阿糖醇、木糖醇、山梨醇及甘露醇。此等糖醇可單用 或併用。替代地，可用NaCl或其他適當之無機鹽來使溶液 等張。 乙酸鹽緩衝劑可例如爲乙酸·乙酸鈉混合物、乙酸-氫氧 化納混合物等。本發明之液體調配物之p Η緩衝於約4.〇至 6.0 ;較好4.5至5.5 ,最好於約ρΗ 5之範圍。 防腐劑苯紛、苄醇及鹵苄乙銨如氯苄乙銨，爲已知之抗 微生物劑。 於較佳實施例中，IFN-厂以含下列組份之液體醫藥組合 物之形式投藥： (請先閱讀背面乏注意事項再填寫本頁)

IFN- r 乙酸鈉（pH 5.0) 吐恩2 0 苯酚 甘露醇 注射用水，u S P 0.1-2.0毫克/毫升 5-100 mM 0.1至0.01%重量比 0.05至0.4%重量比 5 %重量比 至 100%， 其中百分比之量係基於組合物之重量。苯酚可由〇 5 _ i 〇 〇/〇 28 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21〇 x 297公釐） 1243682 A7 IFN- r 乙酸鈉（p Η 5.0 ；) 吐恩2 0 苯酚 甘露醇 B7 五、發明說明（26 ) 重量比之苄醇代替，及甘露醇可由0.9%重量比NaCi代替 最佳地，組合物包含

01至10毫克/毫升 10 mM Q〇l %重量比 0.2% 5% 苯酚可由0.75f量比之苄醇代替及甘露醇由〇9%重量比 之NaCl代替。 經防腐之液體調配物較好含多劑量之治療上有效量之 IFN-r。鑑於此多肽對治療人類患者之狹窄宿主範圍，本 人類跳，，較好天生序列之人類㈣之液體調配物: 佳。作爲生物反應修飾劑，！FN·,對於各種人類及非人類 之哺乳類物種中之廣範圍之細胞類型發揮廣大不同之活 性。當然，治療上有效劑量，依此等因素如待處理（包括預 之病理情況，患者之年齡、體重、醫藥情況、醫藥史等 而變化，且其決定係於執業醫師之技藝範圍内。有效之劑 量一般於約〇.〇〇1至約i.O毫克/公斤，較好約毫克"I 斤，較好約O.Oi-O.i毫克/公斤之範圍内。於此等調酉己^ 中’ hUIFN-r較好於A549細胞對抗腦心肌炎病毒之測試時 顯現約2 X 107單位/毫克之蛋白質之等級之比活性。應了解 的疋，内毒素污染應保持最小於安全之水平，例如少於〇 $ 毫微克/毫克蛋白質。而且，供人類投藥，液體調配物應符 合由FDA Office and Bi〇l〇gies標準品所要求之減菌度:熱 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21〇 x 297公昼 --------I----------訂·--I----- (請先阶讀背面•之注意事項再填寫本頁) 經 濟 部 智 慧 財 產 局 員 工 消 費 合 作 社 印 製 -29-

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1243682 五、發明說明（27 ) 尽性、一般安全性及純度。 IFN - r投藥途徑係依已知方法，例如藉靜脈内、腹膜 内 知内、肌肉内、眼内、動脈内或損傷内注射或輸注， 或藉由下述之持續釋放系統。治療用IFN_ r組合物一般置 於具滅菌進入口之容器例如靜脈内溶液袋或具藉由皮下注 射針可刺透之蓋子之小瓶。調配物較好以重複之靜脈内 (iv·)、皮下（s.c·)或肌肉内（i.m·)注射劑，或以適宜鼻内 戍肺内輸送（供肺内輸送，參見例如EP 257,956 )之氣溶膠 羽配物投藥。 適宜之IFN - r之水性組合物較好含於小瓶中，其中含至 約3 0個治療上有效劑量之IFN -厂。IFN - r之生物活性較好 保持於第一次投藥時顯現之生物活性之約2〇〇/〇内歷至少約 1 4天，更佳地至少約第一次投藥後2〇〇天。 IFN · r亦可以持續釋放之製劑形式投藥。持續釋放製劑 之適宜實例包括含蛋白質之固體疏水性聚合物之半透過性 基質’其基質以成型之物件形式例如薄膜或微膠囊。持續 釋放基資之實例包括如由Langer等，J. Biomed. Mater. Res., ϋ_，167-277 [1981]及 Langer，Chem. Tech.. 12 : 98-105 [1982]所述之聚酯、水凝膠（如聚（2_羥乙基-甲基丙晞酸 醋），或聚（乙烯醇））、聚交酯（美國專利第3,773,919號， EP 58,481)，L-麩胺酸與，l-麩胺酸乙醋（Sidman等， Bi擊lymers，21，547-556 [1983 ])，非可降解之乙晞乙酸 乙烯酯（Langer等，同上），可降解之乳酸-乙醇酸共聚物如 Lupron DepotTM(由乳酸-乙醇酸共聚物及白普洛乙酸酉旨 -30- ^?長尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21Q X 297公釐) -- (請先閱讀背面•之注意事項再填寫本頁) 裝--------訂-------—

1243682 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（28 ) (1 euprolide acetate )組成之注射用微球）及聚- D- (_)_3_羥基 丁酸（EP 133,988)。 雖然聚合物如乙烯-乙酸乙烯酯及乳酸·乙酯酸使能釋出 分子歷超過100天，但某些水凝膠釋放蛋白質歷較短之期 間。當包膠之蛋白質保持於體内歷一長時間，由於暴露於 3 7 °C濕氣下之結果，其可變性或聚集，造成喪失生物活性 及可能之免疫原性變化。可設計合理之策略，依有關之機 制而定，供蛋白質之穩定化。例如，若發現聚集之機制爲 經由硫-化二硫交換形成分子間S _ S鍵，則穩定化可藉由修 飾氫硫基殘基、自酸性溶液中冷凍乾燥、控制水分含量、 使用適當添加物及開發特別之聚合物基質組合物達成。 持續釋放IFN- r組合物亦包括脂質體截留之IFN- r。含 脂質體之IFN· r藉本身已知之方法：DE 3,218，121 ; Epstein 等，Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 82 : 3688-3692 (1985) ； Hwang 等，Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77_ ： 4030-4034 (1980) ； EP 52,322 ； EP 36,676 ; EP 88,046 ； EP 143,949 ; EP 142, 641 ;日本專利申請案 83-118008 ;美國 專利第 4,485,045 及 4,544,545 號；及EP 102,324 製備。通 常，該脂質體爲小的（約200-800埃）單薄層型，其中脂肪含 量高於約3 0莫耳％膽固醇，調節選擇之比例供最佳之治 療。 待治療上使用之IFN - r之有效量依例如依治療目的、投 藥途徑、患者之情況而定。於是，治療者須定劑量及若須 要修改投藥途徑以得最佳之療效。投予IFN- r -31 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱tr背面t注意事項再填寫本頁) ---------"訂 i.-------線一 1243682 Α7 Β7 五、發明說明（29 ) (Actnnmime®，Genentech公司）治療具慢性肉芽腫病之推薦 劑量，對體表面積大於〇·5平方米之患者爲5〇微克/平方米 (1·5百萬單位/平方米），及對體表面積等於或少於〇 5平方 米之患者爲1.5微克/公斤/劑量，以皮下注射投藥，一週3 次。此爲供醫師決定治療心肥大之最佳有效劑量之有價値 <指引。醫師將投予IFN_ r直至達到對治療心機能不全所 須之作用之劑量。例如，若目的爲治療充血性衰竭，該劑 量爲抑制與此情況有關之進行性心肥大者。此治療之進行 容易藉由超音波心臟動態圖監測。類似地，於具肥大心肌 病之患者中，可基經經驗，依賴患者之主觀之有利的感覺 投藥。 IFN _ r可與用於治療（包括預防）心肥大之其他治療劑合 併投藥。例如，IFN _ r治療可與已知心肌細胞肥大因子之 抑制劑例如^ -腎上腺能激動劑之抑制劑如苯基腎上腺素； 内皮素-1 ; CT-1 ; LIF ;血管緊張素轉化酶及血管緊張素 II合併投予。心肥大因子抑制劑（CHf，心唑芬 (cardiotrophin)或心峻芬·1，參見，例如us 5,679,545)供 合併治療特佳。 供治療肥大心肌病之合併治療用之較佳候選藥爲腎上 腺能阻斷劑（如普洛普拉醇、替莫醇、特它洛醇、卡特歐 醇、那多醇、貝它梭醇、片布妥醇、乙醯布妥醇、阿天諾 醇、美托普洛醇、卡非迪醇）、非拉帕米耳、迪非滴拼、迪 替阿健。與高血壓有關之肥大之治療須使用抗高血壓藥治 療’使用鈣道阻斷劑如底替阿健、尼非滴拼、非拉帕米 -32- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面•之注咅？事項再填寫本頁) 一裝 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1243682

五、發明說明（30 耳、尼卡滴拼；卢·腎上腺能阻斷劑；利尿劑如氯遠得、氮 氣嘆得、氫氟美屢得、甲氣㈣、塞得、二氣苯酿胺、 乙醯唑醯胺、因達拍醯胺；及/或ACE_抑制劑如奎那普利 耳、卡普托普利耳、衛那拉普利耳、拉米普利耳、苄雜普 利耳、弗斯普利耳、利西諾普利耳。 曰 與IFN- r合併投予之治療劑之有效量由醫師或獸醫決 定。做劑量投藥與調整以達到最適宜之處置待治療之情 況，及理想地考慮使用利尿劑或毛地黃之情況，及如高或 低血壓，腎損害之情況等。劑量另外依此等因素如待使用 之治療劑之類型及待治療之特定患者而定。典型地，使用 量如同投予所指定之治療劑而無IFN - r時之劑量。 實例 實例1 EQIL2 〃引發之已成長肌細胞之擴展反應藉由IFN r之抽剎 作用 材料及方法 成人肌細胞培養物供自成鼠分離心.室肌細胞所用之方法 爲由Piper等（同上）所述及詳述於Lai等人（同上）之方法之 修飾法。對各肌細胞之製備，將稱重約250克之一雄性 Sprague-Dawley大鼠以戊巴比妥鈉麻醉，移除心臟。自心 臟修剪外在之、组織，將其固定於Langendorff系統上，其溫 度控制於3 7 °C。心臟以約4 0毫升之Krebs缓衝液（11 〇 mM NaCl，2·6 mM KC1 〇 1.2 mM KH2P〇4，1.2 mM MgS04 · 7H20，25 mM NaHC03及11 mM葡糖）灌流。再將含3 0毫 -33- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 x 297公釐) ~ "" (請先閱讀背面'之注意事項再填寫本頁) |裝--------訂---------

經濟部智慧財產局員工消費合作社印制衣 1243682 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明說明（） 克膠原蛋白酶及12.5微升之100 mM CaCl2於5 0毫升Krebs緩 衝液之溶液再循環通過心臟歷3 0分。自Langendorff裝置移 除心臟，並除去心房及結缔組織。將心室以解剖剪切成2 毫米立方體，再於新配之膠原蛋白酶溶液（30毫克膠原蛋 白酶與400毫克BS A，與12.5微升之100 mM CaCl2溶於 Krebs緩衝液）中，於3 7 X：消化5分。消化期間，將組織懸 浮液溫和地以手振搖，每分鐘1次。消化後，除去上清液 並保留之，其餘之組織再於新配之膠原蛋白酶溶液中消化 另5分。 將分離之成鼠肌細胞以3 X 1 03細胞/毫升之密度平舖於塗 佈海帶胺酸之平m上。7 2小時之適當刺激後，細胞以戊二 醛固定並以伊紅Y染色。於螢光顯微鏡檢下捕捉棒型細胞 之影像，用影像軟體（Simple 32，Compix Imaging，Mars， PA)決定最大呼吸。 結果 IFN_ r抑制由肥大因子PGF2 α與苯基腎上腺素引發之已 成長心肌細胞之擴展 PGF2 α與汉腎上腺能激動劑苯基腎上腺素已顯示引發培 養之新出生之大鼠心肌細胞之肥大（Adams等，J. Biol. Chem. 271 ： 1179-1186 [1996] ; Lai 等，Am. J.

Phvsiol. (Heart Circ. PhvsioU 271 : H2197-H2208 [1996]; Meidell 等，Am. J. Phvsiol. 251 : Η 1076-H1084 [1986]; Simpson, J. Clin. Invest. 72· 732-738 [1983] ; Simpson, Circ. Res. 56 ： 884-894 [1985 ])。當暴露於培養物中之此等因子 -34- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先贤讀背®之注音？事項再填寫本頁) --------訂---------

1243682 A7 B7 五、發明說明（32 ) (請先¾讀背面之注音？事項再填寫本頁) 時，成鼠心室肌細胞擴展（Lai等，同上；Piper等，”成鼠心 室心肌細 H包”，於 Cell Culture Techniques in Heart and Vessel Research, Η·Μ· Piper 編輯，1990，Spinger-Verlag : Berlin，p. 36-60)。已成長之肌細胞具棒狀外形學。當此等 細胞暴露於〇. 1 A M PGF 2 “，棒型細胞變平並擴展（圖1)。 擴展反應藉由測量至少200個棒型細胞之最大細胞呼吸而 定量，並將此値對群體中之細胞呼吸頻率百分比作圖。 PGF2 β引發最大細胞呼吸顯著變化藉由與對照組細胞 (Ρ<0.001)比較群體對此參數之分佈之移動而證明。以 IFN- r處理之細胞顯著抑制其對PGF2 ,之反應（Ρ<0.001 PGF2a+IFN- r 與 PGF2e 比較）。IFN - r 對 PGF2a 引發之月几 細胞擴展之抑制劑作用，於一濃度範圍内爲劑量依賴性（圖 2)，其比對IFN· r於心肌細胞與其他細胞系統中之生物學 反應一致（Singh 等，J. Biol. Chem. 271 : 1111-1117 [1996] ; Pinsky 等，J. Clin. Invest. 95. ： 766-685 [1995]； Ungureanu-Longrois 等 Circ. Res. 77 : 494-502 [1995 ]； Soderberg-Naucler 等人，J. Clin. Invest. 100 : 3154-3163 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 [1997] ; Gou 等，J. Clin. Invest. 100 : 829-838 [1997]； Marra 等，Can J. Cardiol 12 : 1259-1267 [ 1996 ])。抑制 PGF 2 α引發肌細胞擴展之能力顯示對IFN · r爲特異性，因 爲數種其他之細胞素包括IL-1沒，IL-yS，IL-2，IL-6， TNF -汉，IFN -汉及IFN -冷並不抑制擴展反應。IFN - r之 抑制作用對PGF2a並非特異性。IFN - r亦可抑制由苯基腎 上腺素引發之擴展（圖3)。 ___-35- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21〇 x 297公釐） A7 1243682 B7_ 34 五、發明說明（） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 脈植入腹主動脈内，供測量平均動脈壓（MAP)及心速 (HR)。將套管拉至外面並固定於頸背。 插套管後1天，將動脈套管連接至Model CP10之壓力轉 換器（Century Technology 公司，Inglewood，CA，USA)，其 與 Grass Model 7 多種描記器（Grass Instruments，Quincy，MA， USA)。於清醒、未受約束之大鼠中同時量得MAP及HR。 器官重量之測量以克它胺/克西拉畊麻醉下，移出心、 腎、脾、解剖及稱重。將左心室貯於8 0 °C供評估基因表 現。 壓力過度負荷之動物模式藉由於大鼠中部分連結腹部 主動脈引發壓力過度負荷，以前已記述。K imura等，Am· J· Physiol· 1989 ： 256 (Heart Circ. Physiol. 25) ： Η 1006-H1-11 ; Batra 等，J. Cardiovasc. Pharmacoll. 17 (Suppl. 2) ’ S151-S153 (1991 )。簡言之，大鼠以克它胺/克西拉畊如上 述麻醉。於腹壁做3公分之中線切割。將於橫隔膜與腎動 脈間之腹主動脈暴露並以5 - 0絲缝線繞圈。縫線緊繞著計 量23針，然後抽出針。接受僞手術之動物接受手術而未緊 繫缝線。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 於具壓力過度負荷大鼠中之實驗計晝書於手術前1天及手 術後1 4天，隨機地使主動脈受束縛之大鼠接受皮下注射 IFN-r，0.08毫克/公斤，每天2次。僞裝動物無受處理。 處理後13天，將套管於麻醉下如上述植入右頸動脈。植入 後1天，於清醒大鼠中測量動脈壓及H R。摘除心臟及其他 器官包括肝、腎及脾，稱重，固定於10 〇/〇緩衝之甲醛供病 -37- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公爱） 1243682 A7 B7 五、發明說明（） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 理學研究。於一些動物中快速切除左心室並以液氮冷柬並 貯於-8 0 C供基因表現之評估。 統計學分析結果表示爲平均値士 S EM。做單向變異分 析（ANOVA)評估兩組間參數之差異。再將顯著之差異用 Newman_Keuls方法做pOSthoc分析；以P<0·05爲有意義。 RN A製備用RNeasy Maxi管柱（Qiagen)依製造商之指示 分離全部RNA。 RT-PCR 用即時（Real-time)RT-PCR(TaqMan)技術比 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 較各處理組間之基因表現。含螢光性報道基因染料，6 •羧 基四甲基·玫瑰紅（TAMRA)之寡核甞酸探針，3’-端被設計 成融合於由兩條PCR引物所定義之擴大區。3，·封阻之磷酸 鹽防止探針之擴大。報道基因染料藉由Taq聚合酶之5,核 酸外切酶活性於PCR反應之擴大期中釋放。於反應管中所 得之螢光藉由序列檢出器監測，並定量而無再放大，因此 用詞爲”即時"。循環數閾（Ct)，定義爲報道基因螢光達高 於基線標準偏差之10倍之値，與自樣品產生之擴大區之量 成正比。因螢光係於擴大之指數期檢測，並無反應組份爲 限制性。於各實驗中，分析對照組，其缺少RN A模板以監 測污染，亦包含另外之對照組，其中省略RT步驟以消除可 能之污染之DNA之擴大爲信號之來源。將反應最適化以提 供最大之螢光信號及最小之C t，藉由滴定鎂與引物濃度， 將產物於瓊脂糖凝膠上跑，證明於預期之分子量單一環帶 之存在。此外，用Genbank篩選擴大區之序列以消除與密 切有關之基因重疊之可能性。 對於各樣品’用下述之標準曲線定量各標的基因，再標 -38- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1243682 A7 B7 五、發明說明（36 ) (請先閱讀背面之注音？事項再填寫本頁) 準化成樣品中甘油醛-3·磷酸·脱氫酶（GAPDH)之量（參見 下面對此計算之特別聲明）。再於處理組間比較各標的基因 對GAPDH之相對豐度。 使用 TaqMan Model 7700 序列檢測器（ABI-Perkin Elmer) 對每個反應1毫微克之總RNA做RT-PCR(Gibson等， Genome Res. 995-1001 [1996 ])。擴大反應條件（對 5 0 微 升）爲 1 X TaqMan 緩衝液 A，200 以 M dATP、dCTP、dGTP 及 400 // M dUTP、10% 甘油，6.5 mM MgCl2，50 單位 MuLV反轉錄酶，20單位RNase抑制劑，1.25單位AmpliTaq Gold，100 nM正向及反向引物，及100 nM螢光生成探針。 RT-PCR試劑及甘油分別購自Perkin Elmer及Sigms。反應 於 MicoAmp Optical Tubes 及 Caps (ABI-Perkin Elmer)中進 行。TaqMan引物及探針根據由Perkin Elmer決定之指南設 計並於Genentech公司合成，除了那些供老鼠GAPDH用者 外，其係得自Perkin Elmer之慷慨惠贈。反轉錄於4 8 Ό下 進行30分，接著Ampli Taq Gold於95°C下加熱活化10分。 熱循環於95°C下30秒及於60°C下1.5分，循環40次。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

TaqMan 結果之定量如 Heid 等，Genome Res. 6_ ： 986-994 (1996)並加修飾爲之。簡言之，各有關之標的基因之標準 曲線（1 : 5系列稀釋）係皆以2份得之。將Ct於Y軸上對全 RNA濃度之對數（X軸）作圖。自適當之標準曲線藉由代入 Ct(Y値）及解出輸入之mRNA(X)，定出各標的基因之 MRNA。再將標的基因之値藉由解下式：l〇xl/i〇X2(其中 XI爲標的基因，及X2爲GAPDH)，而標準化成GAPDH。 -39- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） " " A7 1243682 _B7___ 五、發明說明（37 ) 結果 (請先閲讀背面乏注意事項再填寫本頁) 活體内IFN _ r抑制心肥大 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 慢性投予弗普洛史天醇，爲PGF 2 π之激動劑類似物，已 顯示活體内引發心肥大，及具由心肌梗塞引發病理性心肥 大之大鼠，已慢性地提高於其心肌中之可萃取之PGF 2 “之 水平（Lai等，同上）。因此，活體内可抑制pop”作用於心 肌生長之因子可用於治療心肥大。大氣於IFN - r存在及不 存在下投予弗普洛史天醇2週，測定對心肥大之作用。心 臟、心室及左心室之絕對重量，於弗普洛史天醇處理之大 鼠與媒劑對照組比較時，傾向於增加，且於以弗普洛史天 醇+IFN_r之大鼠相對於弗普洛史天醇處理之大鼠中，此 等參數顯著減少（表1)。以弗普洛史天醇處理造成顯著增加 心臟、心室及左心室重量對體重（BW)之比値，指示弗普 洛史天醇引發心肥大（圖4)。IFN - r抑制弗普洛史天醇引 發之肥大。接受弗普洛史天醇+IFN-，之大鼠，與弗普洛 史天醇組之動物比較’顯著降低心臟、心室及左心室重量 (圖4)。IFN· r與媒劑處理組間之比較顯示單獨投予IFN-r無顯著改變絕對或經BW-標準化之心臟、心室及左心室 重量（表1，圖4)。 性投予弗普洛史天醇與顯著降低平均動脈壓（M A P)， (當與媒劑處理組比較時）有關（圖5 )。與媒劑組比較，IFn · r對MAP典影響，亦不影響以弗普洛史天醇處理之動物之 MAP。於4個處理組中，顯著改變心述（圖5)。此等結果指 示IFN - r並不抑制由弗普洛史天醇引發之肥大，藉由抵消 ____-40- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規袼（210 x 297公爱)---- 1243682

五、發明說明（38 ) 處理組之血流流動作用。 IFN - r不只抑制與投予弗普洛史天醇有關之心臟質量之 增加，而且改變與弗普洛史天醇引發之肥大有關之心臟基 因表現（圖6)。於以弗普洛史天醇處理之大鼠相對於以媒劑 處理者，對於心臟中之骨骼肌動蛋白、膠原蛋白〗及鈉 尿因子（mRNA之豐度有增加。於此等大鼠中，供漿肌網 鈣ATP酶之mRNA顯著降低。IFN_r抑制除了心房鈉尿因 子反應外之所有反應。 IFN _r亦於藉由腹動脈受束縛產生之壓力過度負荷引發 之大鼠心肥大模式中加以測試。主動脈壓縮致成之心肥 大，由實質上增加絕對之心臟、心房、心室及左心室重 里，以及此等重量對B W之比例而證明。以IFN _ r處理顯 著減弱此模式中之心肥大（表2及圖7與8 )。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面*之注音？事項再填寫本頁) IFN - r對其他器官之作用亦加以檢測（表2 )。主動脈束縛 與IFN - r處理皆不改變腎重量及腎重量對b w之比例。比 較於僞裝操作之動物，於動脈受束縛而以媒劑處理之大鼠 中’肝重量及B W之比例傾向於減少但於以ifn 厂處理者 則無。主動脈壓縮引起顯著提高絕對及經B w標準化之脾 重量’其藉由IFN - r處理而加重。因此，ifn - r對心質量 之作用並非歸因於對器官重量之一般化之影響。 於具主動脈壓縮之大鼠比較於僞裝操作之對照組，平均 之動脈壓、收縮壓及舒張壓顯著較高，而於以IFN- r或媒 劑處理之受束縛大鼠之間，動脈壓之增量之增加並無差異 (圖9)。此結果指示於受束縛之接受IFN- r之大鼠中觀察 -41 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1243682 A7 B7 五、發明說明（ 到心肥大之減弱，與負荷後之變化無關。 主動隸縮致成心臟基因表現之數 大鼠中當與僞裝操作之對日Λ相必 又末κ 、 于…、、，且比較時，供卢_肌球蛋白重 鍵、從-平滑肌及“ _骨悠狀私 Β肌動蛋白、心居鈉尿因子、膠原 蛋白I及III及纖維網d 、 』蛋白心mRNA心相對豐度，所有皆增 加。對此等基因中之兩種之作 ^ 呵徑心作用，α _平滑肌肌動蛋白及膠 原蛋白I受IFN -，抑制（表3 )。 實例1與2之結果，一起顯示IFN_ ^可抑制心肥大。ιρΝ_ r(作用並不受限於抑制由肥大刺激引發之心臟質量之增 加，IFN_r亦可抑制於肥大化心臟發生之於基因表現層次 之某些分子變化。尤其値得注意的*IFN_ ,於活體内抑制 膠原蛋白I基因表現之引發，後者係反應於以弗普洛史天醇 之慢性刺激及於藉由壓力過度負荷引發之肥大之模式中。 膠原蛋白I説明約75%之心肌膠原蛋白（Ju等，Can. J Caiidol. II ·· 1259-1267 [1996])。伴隨心臟肥大增加之細胞 外基質沉積及間質纖維化可促成心衰竭之病理生理學。藉 由抑制膠原蛋白I產生，IFN - r可於心衰竭之固化中可降低 間質纖維化。 -----------裝-------：訂 _·-------- (請先閱讀背面乏注音？事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -42 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公爱） A7 1243682 _______B7 五、發明說明（4Q ) 表1·以弗普及/iIFN處理之大藏中之體重及器官重 媒劑 弗普 弗普+IFN IFN BWO(克） 292.4 土 1.7 292.3 ±2.2 292.8 士 2.1 292_5 土 3.2 BW(克） 391·6±6·3 381.1±4.4 377.6±4.5 380·8±6·1 △BW(克） 99.2±5.5 91·9±4·0 84.8 土 3.9 88.3±5.0 HW(克） .966 土.022 1·000±·018 .9279土.016# .956 ±.029 VW(克） .922 + .022 .957 + .017 .889 + .015# .914 + .029 LVW(克） ·706±·018 .740±.013 .678 ±.011## •696 土.023 KW(克） 1.440+ .035 1.397 + .038 1.377 + .031 1.327 + .035* KW/BW(克/公斤） 3.678+ .075 3.632 + .076 3.648+ .070 3.483+ .069 SW(克） .799 ±.050 .880 ±.048 1.009 ±.042* .924 ±.068 SW/BW(克/公斤） 2.065+ .149 2.309 + .130 2.676 +.082** 2.415 + .149 (請先閱讀背面乏注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 數據表不爲平均値土SEM，及於媒劑、弗普、弗普+IFN 及1 FN組中動物數分別爲14，14，14及9。媒劑，鹽水； 弗普’弗普洛史天醇；IFN，干擾素r、BWO、體重之基 礎水平；BW，處理後之體重；ABW，BW-BWO ; HW ’心臟重量；VW，心室重量；LVW，左心室重； KW ’ 腎重；sw ;脾重。*ρ<〇.〇5，**ρ<〇.〇1，與媒劑組 比較’ #P<〇.〇5，##P<0.01與弗普組比。 ____43_ 本紙張尺度適用中國i—^準（CNS)A4規格（21G χ 297公爱） 1243682 A7 _________Β7 五、發明說明（41 ) 表2 .具I力過量負荷之大鼠中之體重，器官重及HR 僞裝 PO+媒劑 PO+IFN BWO(克） 278.8 土 1_9 279·4±1·3 279.0 土 1.3 BW(克） 367.9 土 6.8 347.5 ±5.7* 355.5土5.2 △BW(克） 89.1+5.8 68.1 + 5.6* 76.5+4.7 AW(克） .038 ±0.002 .056 ±.002** .046 ±.003*## AW/BW(克/公斤） .104 + .004 .162+ .006** .129+ .007*## KW(克） 1.438+ .051 1.334 + .033 1.349 + .071 KWBW(克/公斤、 3.894 + .078 3.841 + .070 3.776 + .071 LW(克） 13.84 + .55 12.53+ .36 13.96 + .47# LW/BW(克/公斤） 37.46 + .96 36.01 + .71 38.94+ .92# SW(克） .724 ±.030 •839 ±.026* 1.170 ±.053**## SW/BW(jT^ 1.959 土 .051 2.418土.069** 3·261±.121* 哪 HR(bpm) 371 + 12 415 + 12* 418 + 19* (請先閱讀背®之注意事項再填寫本頁) 數據表示爲平均値土SEM。對所有參數，於僞裝，PO +媒 劑及P〇 + IFN組中，動物數分別爲16，22及21，而HR除 外’其動物數分別爲7，8及7，PO，壓力過度負荷； 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 IFN ’干提素r .、BWO，體重之基礎水平；BW，處理後 I 體重；ΛΒ\ν，BW_BWO ; AW，心房重；KW，腎 重’ LW，肝重；sw ;脾重；HR，心述。*Ρ<0·05， **ρ<0·〇1，與僞裝組比較，#Ρ<0 〇5，##ρ<〇.〇ι，與 ρ〇 + 媒劑組比較。 -44- 本紙張尺度適用中國(cns)A4規格（210 X 297公釐） A7 1243682 B7

AO 五、發明說明（） 表3. IFN對基因表現之作用 處理 SHAM+媒劑 PO+媒劑 PO+IFN ANF 0·98±0.37 5.29±1.2lf 3·61±1·32 β MHC 0.89±0.24 1.91 土 0.15 十 1.71±0.14τ SKA 0.95±0.13 3·35±0·46| 2·47±0·51 + SMA 0.71 土 0.06 0.89 土 0·04| 0·77 土 0.06 COLI 0·55±0·05 0.91 土 0.09 十 0·77±0·10 COLII 0.44±0.05 0.66 ±0.08 + 0.72±0.09士 FIB 0.66土0.17 1.03 士 0.11} 0·97±0·12 P0指壓力過度負荷；IFN，干擾素-r ; ANF，心房鈉尿 因子；MHC，卢-肌球蛋白重鏈；SKA，從·骨骼肌動蛋 白；SMA，α ·平滑肌肌動蛋白；COLI，膠原蛋白I ; COLIII，膠原蛋白III ; FIB，纖維網蛋白。表現水平計算 (請先閱讀背面•之注意事項再填寫本頁) 爲對甘油醛· 3 -磷酸脱氫酶之比値。每組η = 6。數値爲平均 値士 SEM。| Ρ<0·05相對於僞裝+媒劑組。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -45- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐）

Claims (1)

1. 弟前S105269號專利申請案 g 中文申請專利範圍替換本m车2 、 eg B8 C8

   1· 一 者之心肥大之醫藥組合^二其包含治療 12436^ 上有效量之干擾素r (IFN_ r)及醫藥上可接受之載劑。 2·根據申請專利範圍第丨項之醫藥組合物，其中該患者為人 3.根據申請專利範圍第2項之醫藥組合物，其中該 重組體人類 IFN - r (rh-IFN - r.)。 4·根據申請專利範圍第3項之醫藥組合物，其中該1171^-7為 rhIFN- 7 -lb。 5·根據申請專利範圍第3項之醫藥組合物，其中該心肥大之 特徵為提高之PGF2a含量。 6·根據申請專利範圍第2項之醫藥組合物，其中該心肥大藉 由心肌梗塞引發。 7·根據申請專利範圍第6項之醫藥組合物，其中該1171^_7投 藥係於心肌梗塞後4 8小時内開始。 &根據申請專利範圍第7項之醫藥組合物，其中該汗^^^投 藥係於心肌梗塞後24小時内開始。 9·根據申請專利範圍第2項之醫藥組合物，其中該患者係有 發生心肥大之危險。 10.根據申請專利範圍第9項之醫藥組合物，其中該患者罹患 心肌梗塞。 u·根據申請專利範圍第10項之醫藥組合物，其中該IFlsi-r 投藥係於心肌梗塞後4 8小時内開姶。 12·根據申請專利範圍第"項之醫藥組合物，其中該IFn·^ 投藥係於心肌梗塞後2 4小時内開始。 1243682 A8 B8 C8 _________D8 _____ • 六、申請專利範圍 13. 根據申請專利範圍第2項之醫藥組合物，其中該IFN - r係 與一或多種另外之用於治療心肥大或致成心肥大之心臟 病之治療劑合併投藥。 14. 根據申請專利範圍第1 3項之醫藥組合物，其中該另外之 治療劑選自/3 -腎上腺能阻斷劑、非拉帕米耳 (verapamil)、滴非滴拼（difedipine)及迪替阿健 (diltiazem) 〇 15·根據申請專利範圍第1 4項之醫藥組合物，其中該万-腎上 腺能阻斷劑為卡非迪醇（carve(jil〇l)、普洛普拉醇 (propranolol)、美托普洛醇（nietoprolol)、替莫醇 (timolol)、歐西普瑞諾醇（〇Xpren〇i〇i)或特它洛醇 (tertatolol)。 16·根據申請專利範圍第1 3項之醫藥組合物，其中該IFN- r 係與抗高血壓藥合併投藥。 17·根據申請專利範圍第i 3項之醫藥組合物，其中該IFN- 7 係與ACE-抑制劑合併投藥。 18.根據申請專利範圍第13項之醫藥組合物，其中該ifn - γ 係與内皮素受體拮抗劑合併投藥。 19·根據申請專利範圍第1 3項之醫藥組合物，其中該IFN. r 係於投予血栓溶解劑後投藥。 2〇·根據申請專利範圍第丨9項之醫藥組合物，其中該血栓溶 解劑為重組體人類組織血纖維蛋白溶酶原活化劑（rht_ PA)。 21·根據申請專利範圍第13項之醫藥組合物，其中 _ -2- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) 8 8 8 8 A B c D 1243682 - 六、申請專利範圍 係於治療急性心肌梗塞之發性血管造形術後投藥。 22. 根據申請專利範圍第1項之醫藥組合物，其為液體。 23. 根據申請專利範圍第2 2項之醫藥組合物，其包含防腐 劑。 24. 根據申請專利範圍第2 3項之醫藥組合物，其為注射用調 配物。 -3- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐）