TW575574B

TW575574B - Cyclic boroproline compounds

Info

Publication number: TW575574B
Application number: TW88108803A
Authority: TW
Inventors: Barbara P Wallner
Original assignee: Point Therapeutics Inc
Priority date: 1998-06-05
Filing date: 1999-05-28
Publication date: 2004-02-11
Also published as: NZ508642A; CA2334155C; MY122383A; DK1084129T3; NO20006169L; KR100704814B1; IL139885A0; US6355614B1; DE69905038D1; EP1084129B1; CA2334155A1; EP1084129A1; IL139885A; ES2189423T3; ATE231512T1; NO20006169D0; PT1084129E; JP2002517401A; BR9910907A; AR018440A1

Description

A7 575574 __B7__ 五、發明說明（）相關申請案本案係在專利法35 § 119(e)下請求於1998年6月5曰申請以“環硼酸脯胺酸化合物”爲名之美國臨時申請案 60/088,540號之優先權，該案之全文係以參考文獻方式倂於本文。發明領域本發明係關於一種可與CD26結合之實質上純的環形或線形環硼酸脯胺酸化合物。本發明也係關於一種使用這類化合物來刺激具CD26之細胞活化和/或增生，以便使造血代細胞能移動至胰臟及周邊系統的方法。發明背景 CD26是一種許多細胞類表面上都有的第Π型跨膜蛋白質，這類細胞包括淋巴細胞(Marguet，D. et al.， 3:209-215(1993))、造血細胞（Vivier，I. et al., J. Immunol. 147:447-454 (1991); Bristol, et al., J. Immunol. 149:367 (1992))、胸腺細胞（Dang, N.H. et aL, /· /瓜 147:2825-2832 (1991); Tanaka, T. et al., J. Immunol. 149:481-486 (1992); Darmoul, D. et al., J. Biol. Chem. 267:4824-4833 (1992))、小腸刷狀緣膜、內皮細胞、纖維母細胞及基質細胞。連接在細胞表面之CD26乃是一種涎醣蛋白質，且其大半的質量均位於細胞外。目前被硏究的最淸楚的是周邊T細胞上的CD26， CD26在此細胞上係作爲T細胞活化時一種強力的共同刺激訊號(costimulatory signal)。當T細胞被活化時即可增加細 3 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) I --1----訂----I----線— · A7 575574 ___B7__ 五、發明說明（）胞表面上 CD26 的表現（Dong, R.P. et al.，CW/ 9:153-162 (1996); Torimoto, Y. et al.? J. Immunol. 147:2514 (1991); Mittrucker, H-W. et al., Eur. I. Immun. 25:295-297 (1995); Hafler, D. A. et al., /. Immunol. 142:2590-2596 (1989); Dang, Ν·Η· et al·，/· /瓜·wo/· 144:409 (1990))。目前也已知在囑鼠動物之造血及淋巴發育上CD26是一個具調節功能、非常重要的細胞表面受體(Vivier，I. et al.，/. /仙皿卯/· 147:447-454 (1991))。CD26的一級結構在許多物種間的相似度很高 (Ogata, S. et al·，/·历〇/· α⑽· 264:3596-3601 (1998))。人類 CD26被報導與調節胸腺細胞活化、分化及成熟有關(Dang, N.H. et al.? /. ImmunoL 147:2825-2832 (1991); Kameoka, J. et al·，Blood 85:1132-1137 (1995))。 CD26乃是一種外酵素，其活性與一種具高受質專一性的絲胺酸類的外胜肽，即二元胜肽基胜肱酶IV (DPP-IV)相同。如果蛋白質上倒數第二的胺基酸是脯胺酸或是丙胺酸 (某些情況下）的話，其可由蛋白質上將二元胜肽的N-端切下（Fleischer，B. Zot/zzmo/· Γσώ/ 15:180 (1994)) 〇曾有人硏發出一類低分子量、且對CD26具高親和性之合成的單體分子（G.R. Flentke，et al.，Inhibition of dipeptidyl aminopeptidase IV (DP-IV) by Xaa-boroPro dipeptides and use of these inhibitors to examine the role of DP-IV in T-cell function, PNAS (USA) 88, 1556-1559 (1991); W.G. Gutheil and W.W. Bachovchin. Separation of L-Pro-DL-boroPro into its Component Diastereomers and Kinetic Analysis 4 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 x 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

-I n BBB n n ϋ n 一一OJ· I n ϋ ϋ n n I I an I ϋ ·1» ϋ fl^i n ·ϋ ϋ n —.1 ·ϋ ϋ i^i ϋ ϋ ϋ I -ϋ -i_i n I A7 575574 ______B7__ 五、發明說明（） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) of their Inhibition of Dipeptidyl Peptidase IV. A New Method for the Analysis of Slow, Tight-binding Inhibition, Biochemistry 32:8723-8731 (1993))。已知這類分子可明確有效的抑制與CD26連接之DPIV蛋白酶活性。這些以過渡態性類似物爲主的抑制劑，即Xaa-硼酸脯胺酸，爲底所合成出來的單體抑制劑之代表性結構包括脯胺酸-硼酸脯胺酸、丙胺酸-硼酸脯胺酸、纈胺酸-硼酸脯胺酸、及賴胺酸-硼酸脯胺酸。硼酸脯胺酸係指脯胺酸之羧基團爲硼酸基團(b(oh)2)所取代之類似物。脯胺酸-硼酸脯胺酸爲這類抑制劑中被硏究的最淸楚的一種化合物，其Ki値約爲 16 微微莫耳(pM)(W.G. Gutheil and W_W. Bachovchin· Separation of L-Pro-DL-boroPro into Its Component Diastereomers and Kinetic Analysis of Their Inhibition of Dipeptidyl Peptidase IV. A New Method for the Analysis of Slow, Tight-binding Inhibition, Biochemistry 32:8723-8731 (1993))。而纈胺酸-硼酸脯胺酸之親和力甚至更高，其Ki 値約爲 1.6 微微莫耳(pM)(W.G. Gutheil and W.W. Bachovchin. Supra; R.J. Snow et al.，Studies on Proline boronic Acid Dipeptide Inhibitors of Dipeptidyl Peptidase IV: Identification of a Cyclic Species Containing a B-N Bond, J. Am. Chem. Soc. 116, 10860-10869 (1994))。因此，這些Xaa-硼酸脯胺酸抑制劑之效果較已知之下一個抑制劑好上1〇δ倍。美國專利申請案第4,935,493號（Bachovchin’493)及第 5.，462,928號(Bachovchin’928)，兩案在此均以參考文獻方式 5 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） A7 575574 ___B7___ 五、發明說明（）將其內容倂入本文中。此兩案揭露了藉施用一能有效抑制二元胜肽基胜肽酶IV(DP-IV)之可溶性胺基蛋白酶催化活性的蛋白酶抑制劑及過渡性類似物（‘493專利）來治療發生移殖排斥、關節炎、或系統性紅斑狼瘡（SLE)之患者（G.R. Flentke, et al., Inhibition of dipeptidyl aminopeptidase IV (DP-IV) by Xaa-boroPro dipeptides and use of these inhibitors to examine the role of DP-IV in T-cell function, PNAS (USA) 88, 1556-1559 (1991))。在 PCT 申請案 W098/00439 中（Multivalent Compounds for Crosslinking Receptors and Uses Thereof)曾提及一種硼酸脯胺酸類的CD26抑制劑，無論在那一種pH値之水溶液下，均會以可緩慢達到平衡之雨種構型的混合物形式存在，該兩種構型分別是具抑制效果的開放鏈狀結構(活性物) 及不具抑制效果的環形(非活性物)構型。低PH値較利於該開放、具活性、有抑制效果的物種存在，而高PH値則較利於該環形結構。由以上所述可知，W098/00439案曾建議需防止胜肽構型(即分子間環化)改變，係藉由建構一個內含一烯烴基團之二價或多價化合物來產生一種新穎的CD26 抑制劑。依據W098/00439案，”如果可防止環化’本發明者預測此將能提高在此所教導化合物之生物可利用性約 100 至 1000 倍”。發明槪述本發明係植基於許多令人驚訝且意料之外的發現上。 6 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) % 訂---------線！ n I I I ϋ .1 I ϋ ϋ ϋ ϋ ϋ .1 ϋ ϋ ϋ ϋ ϋ ϋ ϋ < A7 575574 五、發明說明（） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 意料之外，已知依據美專利申請案第4,935,493號 (Bachovchin’493)所述，讓患者口服環形-硼酸脯胺酸可治療線形分子能治療之相同症狀。一般相信環硼酸脯胺酸化合物在體內的酸性環境下（即胃內）會經轉化反應而形成能選擇性的與CD26(DP-IV)結合之線形反應產物。因此，依據此觀點，本發明之方法及組成物係關於一種可口服的、新穎的藥學前驅藥，即環硼酸脯胺酸化合物。本發明亦提供該新穎的藥學組成物中含本發明實質上純的環硼酸脯胺酸化合物之新穎組成物，該化合物係以水溶液形式及乾燥形式存在。一般相信本發明之環狀化合物與其線形化合物同樣具有生物活性。因此，本發明也係關於在一受測動物體內，或試管內（亦即，挑出競爭性分子之篩選分析）當該環狀化合物尙未經可誘發其轉變爲線形化合物情況下，於受測動物體內施用該環狀化合物的方法及組成物。因此，該環狀化合物可在有或無將其轉變成線形化合物情況下，以口服 (其可有或無在胃酸下被轉變成線形)及注射型式施用。依據本發明，有用的藥劑爲環狀的式I化合物(示於圖 4)，每一乂^與X2分別是一羥基或是在生理pH値下、於水溶液中可被水解成羥基的基團；且X代表一可模擬能被後-脯胺基裂解酵素(post prolyl cleaving enzyme)所認得之受質位置之胺基酸或胜肽側鏈。在較佳實施例中，該胺基酸爲 L-型胺基酸(對甘胺酸而言，則無左右旋之分）；較好是與B 鍵結的C乃是以L-型構型進行鍵結。”與B鍵結的C乃是 7 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） A7 575574 ______B7__ 五、發明說明（）以L-型構型進行鍵結”一詞係指C的絕對構型與L-型胺基酸類似。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 可模擬後-脯胺基裂解酵素DP-IV(在此亦指”CD26”)受質位置之胜肽詳述於美國專利申請案第4,935,493號 (Bachovchin’493)及第 5,462,928 號(Bachovchin’928)中。線形轉變至環形間的反應涉及脯胺酸的順反異構化反應及一新N-B鍵結的生成。因此，”環形”係指式I化合物的環狀結構，該式I化合物乃是二酮六氫吡畊之類似物。此轉換示於圖3中。 “實質上純的”一詞在此係指組成物中至少含約90%之本發明環狀化物。在某些最佳實施例中，組成物中至少含 98%之環硼酸脯胺酸。在某些實施例中，組成物中所含環硼酸脯胺酸化合物重量比係選自下列：至少5%，至少10%，至少20%，至少 30%，至少40%，至少50%，至少60%，至少70%，至少 80%，至少90%，至少95%，至少96%，至少97%，至少 98%，至少99%，及至少99.5%。在這些及其他實施例中，組成物含一線形環硼酸脯胺酸化合物，該化合物重量比係選自下列：少於95%，少於 90%，少於80%，少於70%，少於60%，少於50%，少於 40%，少於30%，少於20%，少於10%，少於5%，少於 4%，少於3%，少於2%，少於1.0%，及少於0.5%。在本發明一特別佳的實施例中，該環硼酸脯胺酸化合物乃是纈胺酸-硼酸脯胺酸化合物。”纈胺酸-硼酸脯胺酸化 8 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公ϋ " " A7 575574 _____B7______ 五、發明說明（）合物”一詞在此係指式I化合物，即該硼酸脯胺酸化合物之羧基端係依標準胜肽化學以一胜鍵連接至纈胺酸殘基上。一較佳實施例乃是環纈胺酸-硼酸脯胺酸化合物，其可以是以下形式：L-纈胺酸-S-硼酸脯胺酸、L-纈胺酸_R-硼酸脯胺酸、D-纈胺酸-S-硼酸脯胺酸、及D-纈胺酸-R-硼酸脯胺酸。最好是，該化合物爲L-纈胺酸-S-硼酸脯胺酸或L-纈胺酸-R-硼酸脯胺酸。依據本發明之另一觀點，也提供了製造該組成物之方法及藥學組成物。本發明之藥學組成物中含：（1)一種藥學上可接受的載體；及(2)—或多個本發明之環硼酸脯胺酸化合物。較好是，該藥學組成物係被配方成口服形式來施用，但是，也提供了可供口服或注射用之冷凍乾燥的環狀化合物。這類冷凍乾燥或乾燥之本發明化合物可於施用前於適當pH値下之緩衝溶液中重組。一般相信，含本發明環狀化合物之口服配方在施用後，亦即，當化合物遇到胃中酸性環境時，會進行構型改變而由環形轉成線形。因此，較佳之口服配方爲藥錠、膠囊、或其他無腸衣包被之固體形式。該藥學組成物的製造方法涉及將本發明之環硼酸脯胺酸化合物置於一藥學上可接受的載體中，或是將環狀化合物配方成藥錠或其他適於口服的形式。依據本發明之另一觀點，也提供了能調控免疫系統功能的方法。於亟需調控其免疫系統之受測動物體上施用一有效量能調控免疫系統功能之本發明化合物。及藥學組成物。可調控之免疫系統功能包括，但不限於，增加免疫功 9 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

A7 575574 ____B7_____ 五、發明說明（）能，例如藉由刺激具特定免疫功能之免疫細胞（諸如含 CD26之細胞)增生以預防或治療與感染性疾病、癌症等相關之後果。依據本發明可明確治療的狀況爲本發明之明確且獨特之處，將詳述於實施例中。藉施用本發明化合物而能治療之例舉性狀況包括：HIV感染、贅瘤(其中淋巴細胞成爲會溶解細胞的或是助手T細胞會攻撃贅瘤）、化療或放射性治療所引起的副作用（諸如肇因自免疫系統細胞數減少，如來自淋巴、紅細胞和或白細胞之數目減少）、腎衰竭 (肇因自免疫系統細胞數減少）、因免疫不全所引起的骨髓病變、自體免疫、.及免疫不全（肇因自免疫系統細胞數減少）。更特別的是，本發明可刺激淋巴細胞及造血細胞的增生、分化及移動，並刺激由基質細胞所製造的細胞素，例如IL-6、及G-CSF，和能安定或活化CD26/DPP-IV蛋白酶受質之細胞素(亦即，末端胺基酸順序爲Xaa脯胺酸之細胞素’其中Xaa乃是一個胺基酸，且其胺基酸序列可爲 CD26/DPP-IV所裂解）。因此，本發明對欲求刺激該免疫細胞增生、分化及移動，或刺激、安定或活化細胞素之製造上均非常有用。造血細胞移動的特點是骨髓內初期代細胞增生，及這些增生細胞會對可造成其移動的移動劑（諸如 G-CSF、GM-CSF等）反應而被收集至周邊細統。依據本發明有用的試劑可治療淋巴細胞及造血細胞不足或使具該不足之該受測動物體內造血細胞及成熟血球細胞數目回到正常値。這類試劑也可和能在該受測動物體內補充或製造一 10 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) LST·- •線- 575574 A7 _—__^_B7___ 五、發明說明（）免疫系統之諸如骨髓或周邊血液植入物這類的造血細胞植入物一同使用。這類試劑更進而可被當作能刺激放大免疫系統之試劑來使用。這類試劑與培育供治療及硏究目的之用的細胞在試管內一起使用也同樣有用。刺激人類淋巴細胞、造血細胞或基質細胞活化或增生的方法。該方法涉及在體內或試管內，讓淋巴細胞、造血細胞和/或基質細胞與濃度足以活化或誘發增生之一或多個本發明環硼酸脯胺酸化合物接觸。在某些較佳實施例中，接觸係藉由讓亟需該治療之人類患者口服化合物來達成，亦即該患者係被診斷爲具嚴重淋巴細胞或造血細胞濃度不足之醫療狀況的患者。或者也可以注射方式來對受測動物進行治療。如此所述，受測動物意指人類、及包括狗、猫、綿羊、山羊、馬、牛、豬及嚼齒動物在內的非人類靈長類動物。本發明藥劑可單獨施用或與其他可提供治療之藥劑一起施用，如能刺激該淋巴細胞、造血細胞或基質細胞活化或增生的藥劑。讓淋巴細胞與本發明化合物接觸的步驟可於試管內或體內進行。如此所述，本發明化合物意指上述化合物及其鹽類。在本發明中所提及之所有的專利、專利申請書、參考文獻及其他文件，其內容均以參考文獻的方式倂入本文中。定義 11 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐1 一 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) vaj· --線 575574 a7 —_B7___ _ 五、發明說明（） 1安_酸”一詞係包括亞胺基酸在內。 “研月酸脯胺酸”係指脯胺酸之一 α-胺基硼酸類似物與另一胺基酸鍵結形成一個在C-端帶有硼酸脯胺酸之二元胜。“硼酸脯胺酸”係指脯胺酸之羧基團爲硼酸基團 (Β(〇Η)〇所取代之類似物，其中(0Η)2代表兩羧基團且Β代表一硼原子。 “CD26配體”意指任一能與Τ細胞受體CD26結合、且能提供一刺激性或抑制性訊號之蛋白質、醣蛋白質、脂蛋白質或多肽。 CD26、二元胜肽基胜肽酶IV(DP-IV或DPPIV)及二元胜肽基胺基胜肽酶1V ’這些名詞係互通且可交替使用。 CD26爲一種可明確將Xaa-脯胺酸二元胜肽由多肽之N-端移除之後-脯胺酸裂解酶(其中Xaa表示一胺基酸）。一胺基酸之心碳原子乃是胺基酸上接了羧基之碳原子。所有天然胺基酸都屬α-胺基酸或α-亞胺基酸；意指胺基及羧基均接在同一碳原子上。可把每一個胺基酸想像成在一碳原子上接了一個竣基、一個胺基、一個稱爲R之支鏈及一個氫原子，其中”R”是一支鏈；”ΝΗ2”是α-胺基團；而與ΝΗ2相接之第一個碳原子(C)上有一個氫原子(Η)及一個R基團，其同時也是α-碳原子；而與接了一個羥基並與氧形成雙鍵之碳原子則是α-羧基團。 ΝΗ2及COOH基團係用來在胺基酸彼此間形成共價鍵結。當兩胺基酸被鍵結在一起時，會移去由胺基酸羧基端上的羥基與Ν-端上的一個氫原子所形成的一個水分子。蛋 12 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公爱） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) I — — — — — — ^ 0 I-----I I I . A7 575574 ______B7___ 五、發明說明（）白質形成時，藉由水分子的移除而使一胺基酸上的胺基與另一胺基酸上的羧基反應，所得的鍵結即稱一胜肽鍵。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) “胜肽”意指一小分子，通常含50個以下的胺基酸且一般不具任何明確的三度空間結構。藥學製劑及施用模式如此所述。由以下發明詳述及申請專利範圍將可更了解本發明的其他特點及優點。附圖簡單說明圖1顯示環PT-100及PT-100之氫氯酸鹽和甲烷磺酸鹽之口服生物可利用性。圖2顯示環PT-100及PT-100之氫氯酸鹽和甲院擴酸鹽刺激經環磷醯胺處理後之老鼠嗜中性白血球細胞再生的效果。圖3顯示Xaa-硼酸脯胺酸抑制劑(構型平衡之Xaa-硼酸脯胺酸抑制劑)之環形及線型結構。圖4顯示式I化合物之結構。圖5顯示所建議之硼酸脯胺酸合成路徑之反應流程圖。圖6顯示N-BOC-(S)-纈胺酸-(R)-硼酸脯胺酸-(13,28,3匕53)-頻娜烯醇酯，1?068之反應流程圖。圖7顯示H2N-(S)-纈胺酸-(R)-硼酸脯胺酸-(13,28,311，58)-頻娜烯醇酯，111?069之反應流程圖。圖8顯示環-(S)-纈胺酸-(R)-硼酸脯胺酸，IP070之反 13 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 575574 A7 ____B7________ 五、發明說明（）應流程圖。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 圖9顯示H2N-(S)-纈胺酸-(R)-硼酸脯胺酸·〇Η，Ηα FP020之反應流程圖。發明詳述 --線· 本發明係植基於許多令人驚訝且意料之外的發現上。意料之外，已知依據美專利申請案弟4,935,493 5虎 (Bach〇Vchin，493)所述，讓患者口服環形-硼酸脯胺酸可治療線形化合物能治療之相同症狀。一般相信環硼酸脯胺酸在體內的酸性環境下（即胃內）會轉變成能選擇性的與 CD26(DP-IV)結合之線形結構。這些預期外的結果可供治療及硏究上應用。因此，依據此觀點，本發明之方法及組成物係關於一種可口服的、新穎的藥學前驅藥’即環硼酸脯胺酸化合物。本發明也包括可在使用前於酸性緩衝液中重組以形成線形硼酸脯胺酸化合物之本發明環硼酸脯胺酸化合物之冷凍乾燥形式。該新穎的藥學組成物中含本發明實質上純的環硼酸脯胺酸化合物，本發明同時也提供了水溶液形式及乾燥形式的化合物。

依據本發明，有用的藥劑爲環狀的式I化合物(示於圖 4)，每一乂^與X2分別是一羥基或是在生理pH値下、於水溶液中可被水解成羥基的基團；且X代表一可模擬能被後-脯胺基裂解酵素(post prolyl cleaving enzyme)所認得之受質位置之胺基酸或胜肽側鏈。在較佳實施例中，該胺基酸爲 L·型胺基酸(對甘胺酸而言，則無左右旋之分）；較好是與B 14 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 575574 A7 ______ B7 _ r 11 丨 I " ·. - - ------------- - ----- 五、發明說明（） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 鍵結的C乃是以L-型構型進行鍵結。，，與B鍵結的C乃是以L·型構型進行鍵結”一詞係指c的絕對構型與L-型胺基酸類似。因此 <X1 x2 基團與c間的關係就如L·型胺基酸上羧基與α-碳原子間的關係一樣。在某些實施例中，Α及^分別是脯胺酸或丙胺酸殘基；m是0 ;义1與χ2是羥基，·抑制劑是L-丙胺酸-L-硼酸脯胺酸；且抑制劑是L-脯胺酸-L-硼酸脯胺酸。如此所述，本發明化合物係指前述化合物及其鹽類。 --線- 如美國專利申請案第4,935,493號、授予Bachovchin等人之”蛋白酶抑制劑”（Bachovchin，493);及美國專利申請案第5,462,928號、授予Bachovchin等人之”第IV型二元胜肽基-胺基胜肽酶”(Bach〇VChm，928);授予Hank◦等人之”脯胺酸衍生物及組成物及以其作爲HIV蛋白酶抑制劑之用途”(“Hanko’604”）； PCT/US92/09845之”脯胺酸硼酸酯之製備方法”，及其美國優先權申請案（USSN 07/796,148及 07/936,198)、申請人爲 Boehinger Ingelheim Pharmacuticals， Inc.(“Boehinger”);及 PCT/GB94/02615 之，’第 IV 型-絲胺酸蛋白酶抑制劑”、申請人爲Ferring ¥1(“？6出112”)等案之內容所述，能抑制後-脯胺基裂解酵素之胜肽，若是能和一個 15 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） A7 575574 ________B7_____ 五、發明說明（）具反應性的官能基團在該後-脯胺基裂解酵素具反應性位置上以共價鍵結合形成一共價性複合物，則可有效的抑制後_ 脯胺基裂解酶。本發明之環硼酸脯胺酸化合物可變化其構型成爲可模擬後-脯胺基裂解酵素DP IV(在此亦稱”CD26”)之受質結合位置的線形化合物(”線形硼酸脯胺酸化合物”）。DP IV乃是一種後-脯胺基裂解酵素，可專一性的將Xaa-脯胺酸(xaa 代表任何一種胺基酸）之二元胜肽由受質多肽的胺基端移除。以過渡性類似物，即Xaa-硼酸脯胺酸，爲底所合成出來的單體抑制劑之代表性結構包括纈胺酸-硼酸脯胺酸、賴胺酸-硼酸脯胺酸、脯胺酸-硼酸脯胺酸及丙胺酸-硼酸脯胺酸，其中”硼酸脯胺酸”係指脯胺酸之羧基團爲硼酸基團 (B(OH)2)所取代之類似物。在本發明一特別佳實施例中，該環硼酸脯胺酸化合物乃是一纈胺酸-硼酸脯胺酸化合物。一”纈胺酸-硼酸脯胺酸化合物”係指一具有式I之化合物，其中該硼酸脯胺酸化合物之羧基端係依標準胜肽化學以一胜肽鍵連接至纈胺酸殘基上。該纈胺酸可選擇性的以一胜肽鍵與額外的胺基酸連接，前提是這些額外的胺基酸不會抑制纈胺酸-硼酸腩胺酸化合物與CD26結合的能力。在一最佳之實施例中，本發明化合物乃是纈胺酸-硼酸脯胺酸(亦稱爲”PT-100”）。由於胺基酸殘基上的不對稱碳原子及與硼原子相接之碳原子亦屬不對稱碳原子，因此纈胺酸-硼酸脯胺酸可以多種異構物形式存在：（a)L-纈胺酸硼酸脯胺酸，（b)L-纈胺酸I硼 • 16 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) %,------訂！！線-J··---------------------- A7 575574 ____B7__ 五、發明說明（）酸脯胺酸，（c)D-纈胺酸-S-硼酸脯胺酸，及⑷D-纈胺酸-R-硼酸脯胺酸。最好是，該化合物爲L-纈胺酸-S-硼酸脯胺酸或L-纈胺酸硼酸脯胺酸。同樣的，本發明之環硼酸脯胺酸化合物也可以多種異構物形式存在；但是，一般來說，較佳的化合物乃是胺基酸殘基上的不對稱碳原子爲L_構型，且硼酸脯胺酸爲R或S之化合物。在本案中，係以下述及詳述於教科書中、習知技藝人士所知之傳統技術來分辨追些異構物（參見Principles in Biochemistry, eds. A.L. Lehninger, P.99-100, Worth Publishers, Inc. (1982) New York; Orangic Chemistry, Morrison and Boyd, 3rd edition, chap 4, Allyn and Bacon, Inc., Boston, MA (1978); Patent Cooperation Treaty published application WO93/10127, application no. PCT/US92/09845)。所有的胺基酸，除甘胺酸外，均含有一個或一個以上的不對稱碳原子。胺基酸之不對稱α-碳原子即被稱爲一不對稱中心，且可以兩種不同的異構物形式存在。這些不同的異構物形式，除了所造成極性光平面轉動的方向不同外，均具有相同的化學及物理性質。因此這些胺基酸被稱爲具”光學活性”，即這些胺基酸可轉動之極性光平面的轉動方向不同。因此與α-碳原子相接之四個不同取代基在空間上會出現兩種不同的排列。這些排列爲彼此無法重疊的鏡像’因此稱其互爲光學異構物、鏡像物、或立體異構物。若某一胺基酸之立體異構物溶液可將極性光平面朝左轉動’即稱 17 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) i-------訂---------i,---------------------- A7 575574 ________B7 _ 五、發明說明（）其爲左旋異構物[以㈠表示];該胺基酸之另一種立體異構物溶液則可將極性光平面朝右轉動，即稱其爲右旋異構物 [以(+ )表示]。一種用來區別並爲立體異構物命名之較系統化的方法乃是以四個不同取代基在該不對稱碳原子（即〜碳原子）上以四面體形式所形成之絕對構型來爲其命名。爲建立此系統，因此選擇了一種化合物(甘油醛），其係爲具有不對稱碳原子之最小的糖分子。依傳統方法，該甘油醛的兩種異構物分別被命爲L或D。其絕對構型可由X光繞射分析來確定。參考甘油醛之絕對構型，也可將胺基酸命爲L或D 形構型。因此，無論這些不對稱立體化合物其轉動極光平面的方向爲何，凡具有與L-甘油醛在空間排列上相同構型之不對稱化合物被稱爲L-形，而具有與D-甘油醛在空間排列上相同構型之不對稱化合物被稱爲D-形。因此，L或D 的符號係指四個取代基在該不對稱碳原子（即α-碳原子）上所形成之絕對構型。一般來說，含有不對稱中心之天然化合物只會以一種立體異構物的形式存在，不是L就是D。所有天然胺基酸均爲L形胺基酸，但是，本發明也包括以D形胺基酸構型存在之立體異構物。大部分蛋白質上的胺基酸都可明確無誤的以L或D之命名系統來命名。但是，具有2個或多個不對稱中心之化合物其可能的立體異構物數目可多達2η個，其中η爲不對稱中心的數目。這些立體異構物係以_RS系統來命名以其 18 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) · 訂---------線— A7 575574 ____ B7_ 五、發明說明（） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 能更淸楚的標示含多個不對稱中心之胺基酸的構型。舉例來說，諸如蘇胺酸、異亮胺酸這類含2個不對稱碳原子之化合物便具有4個立體異構物。含2個不對稱中心之化合物的異構物稱爲非鏡像立體異構物（diastereomers)。在由 A.L. Lehninger 編輯之 Principles in Biochemistry—書之 99-100頁中，對RS命名系統有非常完整的介紹。簡述如下。爲了避免在爲一內含2或多個不對稱中心之化合物命名時出現混淆，因此發明了 RS命名系統。一般來說，系統係將繞著不對稱碳原子之四個取代基以原子序大小或價鍵密度來加以排序，並令原子序最小者或排序最低者位於觀察者最遠的位置。習知技藝人士應熟知這些排序的方法，該方法詳述於Lehninger —書之99頁。如果排序依順時針方向依序減少，該不對稱中心之構型即爲R;如果排序依反時針方向依序減少，該不對稱中心之構型即爲S。依此系統對每一個不對稱中心之構型命名。將此系統運用在蘇胺酸的命名上，習知技藝人士將可知依RS命名系統而言，L-蘇胺酸係指(2S，3R)-蘇胺酸。目前習知技藝人士已習慣且仍繼續在使用一種更傳統的L-、D-、L-allo、及D-allo型式來命名蘇胺酸。但是，RS命名系統愈來愈被廣泛使用於胺基酸的命名上，特別是內含一個以上不對稱中心之胺基酸。 “實質上純的”係指本發明之環硼酸脯胺酸化合物約佔組成物重量至少90%。在某一實施例中，環硼酸脯胺酸化合物重量約佔組成物重量至少5%，至少10%，至少20%， 19 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 575574 B7 五、發明說明（）至少30%，至少4〇%，至少50%，至少60%，至少70%，至少80%，至少9〇%，至少95%，至少96%，至少97%，至少98%，至少99%，及至少99.5%。在這些及其他實施例中，含線形環硼酸脯胺酸化合物之組成物中，該線形環硼酸脯胺酸化合物重量需少於 95%，少於90%，少於80%，少於70%，少於60%，少於 50%，少於4〇%，少於3〇%，少於20%，少於10%，少於 5%，少於4%，少於3%，少於2%，少於1·〇%，及少於 0.5% 〇依據本發明另一項觀點，也提供了製備這類藥學組成物之方法。本發明藥學組成物中含：（丨)一藥學上可接受的載體；和(2)—或多種本發明之環硼酸脯胺酸化合物。在較佳實施例中，該環硼酸脯胺酸化合物是纈胺酸-硼酸脯胺酸。該藥學組成物較好是無菌狀態。”藥學上可接受的載體”一詞係指適於施用於人類或其他動物體上之一或多種可相容的固態或液態充塡物、稀釋物或包埋物質。”載體”一詞係指一種有機或無機、天然或合成之成分，當與活性成分結合後可促進活性成分的施用。藥學組成物的成分也能與本發明分子及其彼此互相混合，且不會互相反應造而損害到使所欲求之藥學效用。較好是，該藥學組成物被配方成適合口服或注射用，但是，吾人也提供了冷凍乾燥形式之環狀化合物。可於施用前將這類冷凍乾燥或其他乾燥形式之化合物於適當pH 値及鹽濃度之緩衝溶液中重組。若是欲採口服或注射方式 20 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -丨-------訂---------線—. r— — — — —— — — — — — — — — A7 575574 五、發明說明（）施用，則可於施用前將本發明環狀化合物於酸性或中性緩衝溶液中重組。一般來說，重組係涉及將環狀化合物置於一緩衝液中，該緩衝液之pH値需能讓環狀化合物於重組 (即口服或注射配方）時仍能保持其構型或能讓其構型由環形轉變爲線形硼酸脯胺酸化合物(即口服或注射配方）。一般深信含本發明環硼酸脯胺酸化合物之口服配方，在施用後，亦即在消化道的酸性pH値情況下，其構型會由環形轉變爲線形硼酸脯胺酸化合物。因此，本發明某些口服配方實施例中並未包括腸衣在內。在與本發明枏關的一項觀點中，提供了一種藥學組成物的製備方法。該方法涉及將本發明環硼酸脯胺酸化合物置於一藥學上可接受的載體中。該藥學上可接受的載體較好是適合口服用。更好是，該方法係涉及將組成物配方成不含腸衣的藥錠或膠囊。在另一實施例中，該藥學上可接受的載體較好是適合注射用，且該方法更涉及將該組成物冷凍乾燥成一冷凍乾燥式的製備。藉由在這類製備中加入一具酸性pH値之藥學上可接受的載體，形成一適於注射用之重組製備。或者，藉由在這類製備中加入一具中性pH 値(即pH値約在6-8間，較好是界於6.5-7.5間)之藥學上可接受的載體，形成一適於口服用之重組製備。依據本發明的另一項觀點，也提供了刺激人類淋巴細胞、造血細胞或基質細胞活化或增生的方法。該方法涉及讓該淋巴細胞或造血細胞在體內或試管內與濃度足以誘發細胞活化或增生之一或多種本發明環狀化合物接觸。在某 21 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) I -------訂---------線丨· Γ— — — — —— — — — — — — A7 575574 ______ 五、發明說明（）些較佳實施例中，係藉由讓亟需該治療之患者口服該化合物來達成接觸的目的，亟需該治療之患者即指被診斷出具淋巴細胞或造血細胞不足這類嚴重醫療狀況之患者。或者也可能讓該環狀化合物轉變成線形化合物的情況下，以注射方式來實施該治療方法。本發明化合物可單獨使用，或與能治療該疾病狀況的其他藥劑一同施用，即能刺激該淋巴細胞或造血細胞活化或增生之不同藥劑。例如本發明化合物可與爲達某特定目的所特別選用之外加生長因子及細胞激素一同使用。例如，若希望刺激某特定類型之造血細胞，則可使用能促進該特定類型之造血細胞增生及分化的生長因子及細胞激素。因此，已知包括11^1、11^2、11^3、11^4、11^5、11^ 6、IL-7、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IL-13 及 IL-17 在內的白介素均與淋巴細胞的分化有關。白介素-3及白介素-4 均與肥大細胞之分化有關。粒細胞巨噬細胞群落刺激生長因子(GMCSF)、白介素-3及白介素-5均與嗜伊紅血球之分化有關。GMCSF、巨噬細胞群落刺激生長因子(MCSF)及白介素-3均與嗜中性白血球細胞的分化有關。GMCSF、白介素-3、白介素-6、白介素-11及TPO均與血小板細胞的分化有關。Flt3配體則與樹突狀細胞生長有關。GMCSF、白介素_3及紅血球生成素則與紅血球分化有官。最後，能維持造血之原始、多功能代細胞的自我更新需要SCF、FU3配體、G-CSF、IL-3、IL-6及IL-11的存在。習知技藝人士應很淸楚達成所欲求效果之各類組合方式。因依據本發明有 22 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) Φ 訂---------線！ F— — — — —— — — — — — — — — — — — — — — — A7 575574 ___._B7___ 五、發明說明（）用的試劑可刺激原始、未定型之造血代細胞，因此這類試劑可與前述任一類別的試劑合用來刺激某一特定類型造血細胞的增生。習知技藝人士應熟悉前述這些因子，及大部分都是市面上買得到的。依據另一實施例，本發明化合物與淋巴細胞的接觸可於試管內進行。舉例來說，可由患者或捐贈者身上取出下列任一種細胞並讓其在試管內與本發明線形化合物接觸： T-細胞、骨髓細胞、幹細胞或初期代細胞（early lineage progenitor cells)。較好是，在本發明化合物於試管內與這些分離出的細胞接觸前、或同時，將本發明化合物之pH値調整爲中性，以促進線形硼酸脯胺酸化合物的形成。如此，環狀化合物可以環狀形式儲存一段較長的時間，因此可降低降解/促進使用前化合物的安定度。細胞係與足以有效刺激細胞量之本發明化合物接觸，之後再將這些處理過的細胞重新引入患者體內。依據本發明的另一項觀點，也提供了能調控免疫系統功能的方法。於亟需調控其免疫系統之受測動物體上施用一有效量能調控免疫系統功能之本發明化合物。及藥學組成物。可調控之免疫系統功能包括，但不限於，增加免疫功能，例如藉由刺激具特定免疫功能之免疫細胞（諸如含 CD26之細胞)增生以預防或治療與感染性疾病、癌症等相關之後果。依據本發明可明確治療的狀況爲本發明之明確且獨特之處，將詳述於實施例中。藉施用本發明化合物而能治療之例舉性狀況包括：HIV感染、贅瘤(其中淋巴細胞 23 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1 ------丨訂--------- *5^ _ . A7 575574 五、發明說明（）成爲會溶解細胞的或是助手τ細胞會攻擊贅瘤）、化療或放射性治療所引起的副作用（諸如肇因自免疫系統細胞數減少，如來自淋巴、紅細胞和或白細胞之數目減少）、腎衰竭 (肇因自免疫系統細胞數減少）、因免疫不全所引起的骨髓病變、自體免疫、及免疫不全（肇因自免疫系統細胞數減少）。藉由讓淋巴細胞於試管內或體內與濃度足以誘發細胞活化之本發明化合物接觸來刺激淋巴細胞的活化或增生。該方法較好是涉及在體內施用該化合物，該化合物係與一諸如無菌生理食鹽水之藥學上可接受之載體混合。患者可以是任何身受淋巴細胞活化或濃度不足之患者。這類情況包括HIV感染、腎衰竭、癌症(特別是伴隨有化療所造成之淋巴細胞不足的癌症）、因淋巴細胞不足所引起的骨髓病變。本化合物較好是以口服方式施用至患者身上。或者，本發明化合物可於試管內來刺激淋巴細胞的活化或增生，亦即當患者自體之淋巴細胞被移除後，來刺激淋巴細胞活化和/或增生，並將其重新引入患者體內。本方法可用來增加專門攻擊患者腫瘤之T-細胞數目或感染HIV患者體內T-細胞數目。本發明之一重要觀點是，當受測者之造血細胞或成熟血球細胞低於正常値以下，以足以使其造血細胞或成熟血球細胞數目回到一預設正常値或預設値之有效量來施用該藥劑。該藥劑較好是以18小時內至少2劑量的方式施用於受測動物上。本發明對回復嗜中性白血球、紅血球細胞或 24 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -鲁-----訂---------線----------------------- A7 575574 五、發明說明（）血小板細胞數目回到一正常或預設値的應用上非常有用。最佳之藥劑爲環硼酸脯胺酸化合物。依據本發明的另一項觀點，也提供了能縮短或去除受測動物因使用造血抑制劑而使體內造血細胞或成熟血球細胞低於正常値以下之時間的方法。以能增加受測動物體內造血細胞或成熟血球細胞數目之一有效量在亟需該治療之動物身上施用該藥劑，其中該藥劑係在造血抑制劑施用前或與其幾乎同時被施用至受測動物體內。該藥劑及較佳藥劑如前述。在一重要實施例中，造血細胞抑制劑會造成受測動物體內造血細胞或成熟血球細胞低於一預設之正常値以下。較好是，該藥劑較好是以18小時內至少2劑量的方式施用於受測動物上。在一重要實施例中，本發明對回復嗜中性白血球紐胞、紅血球細胞或血小板細胞數目回到一正常或預設値的應用上非常有用。較佳之藥劑有效量如前述。本發明的另一項目的是提供一種方法，爲準備接受造血細胞抑制劑之受測動物體作準備。該方法涉及在受測動物體接受造血細胞抑制劑前，將一有效量能刺激受測動物製造生長因子之試劑施用至動物體身上。該試劑及較佳的試劑如上述。在一重要實施例中，該生長因子是粒細胞群落生成刺激因子。在其他實施例中，該生長因子係選自由 IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-6、IL-11、IL-17、TP〇、EPO、 MCSF、GMCSF、FLT-3配體和幹細胞因子所組成的族群中。施用至受測動物體上的量較好是低於每天每公斤體重 25 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21〇 X 297公釐） ~ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

n ί ϋ n n 一一OJi ϋ β— ϋ n ϋ ϋ I n «ι_ρ ·ϋ ϋ I n ί I* n n ϋ ϋ ϋ ϋ *ϋ ϋ ^1 ϋ ϋ -ϋ βϋ n I A7 575574 _ ___ B7___ 五、發明說明（） 1毫克。同時該劑量較好是於18小時內以至少2次劑量施用至受測動物體上。本發明的另一項目的是提供一種方法，以增加一受測動物體中的造血細胞數目或成熟血球細胞數目。在亟需治療的受測動物體上施用一有效量試劑，以增加該受測動物體身上之造血細胞數目或成熟血球細胞數目，其中該試劑係以18小時內2或3劑量的第一種服法(regimens)被施用至動物體身上。該試劑及較佳的試劑如上述。在一重要實施例中，該試劑係以18小時內2或3劑量的第二種服法被施用至動物體身上，其中該第二種服法與第一種服法之間 % 有時間區隔。在另一實施例中，該試劑係以18小時內2或 3劑量的第三種服法被施用至動物體身上，其中該第三種服法與第一、二種服法之間有時間區隔。在另一實施例中，該試劑係以第四、第五、第六、或第七種服法被選擇性的施用，其中每一種服法都是以18小時內2或3劑量組成，且其中每一種服法均與前種服法之間有時間區隔。在其他實施例中，受測動物體內的紅血球細胞與血小板細胞數目都遠低於正常値。較佳的劑量、試劑及類似物均如上述。在重要實施例中，劑量不可多於六個服法、不可多於五個服法、不可多於四個服法、不可多於三個服法、甚至不可多於二個服法。本發明的另一個目的涉及恢復或預防一受測動物體內造血細胞數目不足。這類不足可肇因於諸如基因異常、疾病、壓力、化療(例如以具細胞毒性之藥物、類固醇、免疫 26 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) I --I I---訂·丨 --------I · r— — — — —— — — — — — — — — — — — — — — — A7 575574 五、發明說明（）抑制藥物等來進行治療)及輻射照射治療。本發明廣泛來說係關於可使因使用造血細胞抑制劑所引起的血球細胞不足現象恢復至正常。造血細胞抑制劑乃是一種外加之藥劑（諸如一種藥物或輻射治療），會導致受測動物之造血細胞數目或成熟血球細胞數目下降。在此所指的造血細胞係指粒細胞(如前骨髓細胞、嗜中性白血球、嗜伊紅白血球細胞及嗜鹼性白血球）、紅血球、網狀細胞、血小板(如巨核細胞、可生成血小板之巨核細胞及血小板）、淋巴細胞、單核白血球、樹突狀細胞及巨噬細胞。成熟血球細胞包括成熟的淋巴細胞、血小板、紅血球、網狀細胞、粒細胞及巨噻細胞。在本發明的某些重要觀點中，依據本發明有用的試劑可增加嗜中性白血球、紅血球及血小板紐胞數目。與嗜中性白血球有關，本發明試劑可用來治療除藥物或輻射照射所引起之嗜中性白血球減少、慢性自發性嗜中性白血球減少及週期性嗜中性白血球減少症。基質細胞包括纖維母細胞、巨噬細胞、內表皮細胞、造骨細胞，及其他習知技藝人士熟知且詳述於免疫學教科書上的細胞。本發明的一個重要目的係使該受測動物體內造血細胞數目回到一”正常値”或”保護値，，。在此所指之一，，正常値，，係指一處於控制狀態下的細胞數量，較好是包括與受測動物有類似特徵的其他受測動物，比如說年齡。”正常値，，也可以ί曰個範圍，比如δ兌，以一群細胞來獲得該受測動物 27 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公爱) 一1— (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) I --------訂---------線丨· A7 575574 ____B7__ 五、發明說明（）所屬特定族群之基礎値。也可將族群分組，比方說分成四組，最低的一組內乃是由具有最少造血細胞之個體所組成，而最高的一組內乃是由具有最多造血細胞之個體所組成。因此，”正常値”可視所選特定族群而有所不同。較好是，正常値係指那些從未罹患造血細胞異常且看起來健康的受測動物體內的細胞數目。這種”正常値”，可當作預設値，作爲考量一受測動物該屬於那一類別之用。習知技藝人士可藉由一般常規的實驗即可定出適當的範圍及類別。可以該範圍內之平均値或其他預選値作爲一正常的預設値。同樣的，也可以受測動物在以造血抑制劑處理前之値作爲一預設値。一般來說，嗜中性白血球的正常値約在每微升1800-7250個細胞間(平均値爲3650);嗜鹼性白血球細胞的正常値約在每微升（M50個細胞間(平均値爲30);嗜伊紅血球細胞的正常値約在每微升0-700個細胞間(平均値爲150); 巨噬細胞的正常値約在每微升200-950個細胞間(平均値爲 430);淋巴細胞的正常値約在每微升1500-4000個細胞間 (平均値爲2500);紅血球細胞的正常値約在每微升4.2 X 10ό - 6.1 X 106個細胞間；血小板細胞的正常値約在每微升 133 X 103 - 333 X 103個細胞間。前述範圍可信度均在95%以內。醫界已針對某些狀況定出其合理的預設値應爲多少。例如，輕微嗜中性白血球減少症的特點是每微升約有1000-2000個細胞，中度嗜中性白血球減少症特點是每微升約有 28 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) --丨丨丨丨丨訂---丨· A7 575574 五、發明說明（） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 500-1000個細胞，嚴重嗜中性白血球減少症特點則是每微升含500個以下的細胞。同樣的，以成人來說，當淋巴細胞數低於1500時即被視爲一種醫療上不欲見到的狀況。對兒童而言，該數値則是3000以下。習知技藝人士應能很輕易的推出其他預設値。依據本發明有用的試劑可用來建立或重建這類包括正常値在內的預設値。造血細胞的保護値乃是指可確保患者臨床利益所需的細胞數目。所需細胞數目可等於或低於”正常値”。習知技藝人士應很淸楚這類所需細胞數目。例如，嗜中性白血球的保護値應高於1000，較好是至少有1500。一般來說，本發明化合物或組成物對調節免疫反應療效上非常有用，可（1)治療特徵爲免疫抑制之疾病，即AIDS 或與AIDS-相關之倂發症、其他由病毒或環境誘發之疾病及某些先天性免疫缺乏症狀；（2)增加因使用免疫抑制藥物所受損之免疫功能；（3)治療系統性紅斑狼瘡、風濕性關節炎、及多重硬化症。本發明環狀或線狀化合物，或其組成物可用來刺激培育中之造血細胞的生長。可將這類細胞移植到諸如人類之哺乳動物身上，以強化或加大造血系統、免疫系統或兩者之功能。也可以這些化合物來治療因疾病或造血細胞不足之患者，例如AIDS患者；因接受化療之患者和/或因癌症接受輻射治療之患者，及接受骨髓移植之患者。當本發明組成物被施用於諸如人類之哺乳動物身上，可提高被壓抑之免疫系統的細胞重生，這些細胞即CD4和 29 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） A7 575574 _______B7___ 五、發明說明（） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) T-細胞。因此，本發明化合物可以一有效量單獨施用，或與一藥學上可接受的載體、佐劑、或稀釋劑一起，以單一劑量的形式施用至諸如人類之哺乳動物身上。可採傳統之藥學方法來提供可施用於受免疫抑制、或免疫不足或AIDS 症狀之苦之患者適當的配方或組成物。可採任何適當的施用途徑，例如注射、血管內、皮下、肌肉內、囊內、脊椎內、池內、腹膜內、鼻腔內、氣態噴霧、或口服方式施用。藥學配方可以是溶液態或懸浮液態；口服用之藥學配方可以是藥錠或膠囊；鼻內用藥學配方可以是粉末、鼻滴劑或氣態噴霧劑。如上述，因消化道中酸性環境之故，口服用化合物無需在施用前將其pH値調至可形成線形化合物之酸性pH値。本發明化合物或組成物可用來控制T細胞的活化過程，因此可用來防止不欲求之免疫反應出現。本發明化合物或組成物可用來促進回憶抗原（recall-antigen)之專一性免疫反應。大部分感染HIV的人的淋巴細胞都有一種缺陷，即其對回憶抗原的反應出現缺陷（A.S. Fauci. The human immunodeficiency virus:ingectivity and mechanisms of pathogenesis. Science 239, 617-722 (1988)) 〇這種缺陷在感染初期及帶有CD4+之T-細胞數目開始下降前即會出現。因此，一般相信這些化合物對AIDS的治療相當有用。因此，其刺激活性藉由改善在感染初期出現之回憶抗原的反應，及增加帶有CD4+之T-細胞數目，來改善感染HIV的人之功能。 30 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） A7 575574 五、發明說明（）因一般深信，本發明環狀或線狀化合物，對CD26有很高的親和力及專一性，因此他們對選擇性的傳送其他藥學治劑至帶有CD26之細胞(即帶有CD4+之T-細胞)上非常有用。因此，本發明化合物可用來將一般無法穿透細胞之藥學藥物傳送至帶有CD26之細胞內。例如，已有許多 HIV蛋白酶強力抑制劑被發展出來，雖說其對HIV蛋白酶具有非常高的親和力，但因其無法進入帶有CD26之細胞內，因此其在體內阻礙HIV的能力變得極有限。這些HIV 蛋白酶抑制劑可連接在本發明化合物上(即，藉由共價鍵連接在一胺基酸側鏈上或一非與CD26結合部分之官能基團上），前提是該連接反應不會影響本發明化合物在中性pH 値下環化及進入帶有CD26之細胞內的能力。就算是一種藥物能進入帶有CD26之細胞內，本發明化合物可用來將帶有CD26之細胞內之該藥物濃縮，使欲求之藥學活性達到最大’並使其對其他細胞之不欲求的細胞毒性降至最低。因此，此種傳遞載體提供了一種藉由將AZT送至帶有 CD26之細胞內，而可防止受HIV感染細胞被溶解的機制。因此，在此所揭露之化合物將CD26包入細胞內之活性’可用來當成一種可運送並濃縮其他藥劑至帶有CD26 之細胞內之載體。本發明化合物或其組成物可單獨使用，或彼此合用，或與其他藥劑一起合用。例如，可以一或多種本發明化合物及多種傳統藥物一起來治療免疫系統異常。本發明藥學製劑係以藥學上可接受之量於藥學上可接 31 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) %-------訂---------線- ^ H ϋ ϋ I n ϋ I — ϋ ϋ ϋ t— ϋ ϋ ϋ ϋ ϋ ϋ I ϋ I < A7 575574 ________B7 _ 五、發明說明（）受之組成物中來施用。這類製劑可常規性的含有鹽、緩衝劑、防腐劑、相容之載體、及其他藥劑。當用於藥物上時，鹽類需爲藥學上可接受的，但可輕易的以非藥學上可接受的鹽來製備此藥學上可接受之鹽類則仍在本發明範疇內。這類藥理上及藥學上可接受的鹽類包括，但不限於，那些由下列酸所製成之鹽類：氯酸、溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、順丁烯二酸、醋酸、水楊酸、檸檬酸、甲酸、丙二酸、琥珀酸等。藥學上可接受的鹽類也可以用鹼金屬或鹼土金屬的鹽類來製備，諸如其鈉鹽、鉀鹽或鈣鹽。或然率，該藥學組成物也可含諸如殺藻胺、氯化丁醇、對苯物 (parabens)、硫柳汞(thimersol)等之適當防腐劑。適於口服、皮下注射、靜脈注射、肌肉注射等方式施用之載體配方可在 Mack Publishing Co.(Easton，PA)公司出版之 Remington，s Pharmaceutical Sciences — 書中找到。有許多施用途徑都可用來治療受測動物。特定之施用模式將視所選用之特定化合物、欲治療狀況之嚴重性及所需欲求療效之劑量而定。一般來說，本發明方法可以任何醫學上可接受的模式來施用，即在可產生效量活性物、且不會產生臨床上不欲求效應之任何模式。這類施用模式包括口服、直腸、表面塗抹、鼻用、皮內、或注射。這類模式也包括由患者身上取得T細胞或骨髓細胞、幹細胞或初期代細胞，並讓這些分離出的細胞在活體外wVo)與本發明化合物接觸，而後再將這些經處理後的細胞重新引入患者體內。可以此領域中眾所周知之任何方式將處理後 32 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 丨 —-----訂—-------線—· A7 575574 五、發明說明（）的細胞重新引入患者體內。最好是採口服。適合口服之組成物可以不連續之分離單元存在，如膠囊、藥錠、藥片。每一種單元內均含有一預定量之本發明化合物。其他組成物包括在水溶液或非水溶液之懸浮液，如糖漿、甘香酒劑或乳化劑。因需要將本發明環狀化合物曝露於消化道中的酸性pH値使其轉變成線型化合物之故，因此口服配方較好是不含腸衣。如此所述，”注射”係包括皮下、靜脈、肌肉γ或灌注。適於注射用之組成物至少包括本發明化合物之無菌溶液’其張力較好是與欲接受該溶液之血液張力相同。可依已知方法以適當分散液或濕潤劑及懸浮劑來爲該溶液製備進行配方。此無菌注射製備物也可是溶於無菌之注射用稀釋物或溶劑，如1,3-丁烷二醇，之無菌注射液或懸浮液。在這些藥學可接受載體及溶劑中可包括水、林格氏液 (Ringer’s solution)、及等張之氯化鈉溶液。此外，也可用無菌之固定油作爲溶劑或懸浮基質。可使用任何品牌之合成的單一或二甘油醛。此外，也可以諸如油酸之脂肪酸來製備注射用配方。對長效治療及預防目的而言，靜脈及肌肉注射並不適合。這些方法較適合緊急狀況時用。口服配方因其方便使用及劑量流程，因此適合預防及其他治療之用。藥學組成物可以單一劑量形式存在，並可以藥界習知之方法來製備。該方法包括讓本發明化合物與構成該組成物之一或多種載體接觸的步驟。一般來說，組成物係藉由 33 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) % 訂----------線！ ^ ·1 ^1 ϋ I ·1 ϋ H ϋ ϋ ϋ ϋ ^1 ϋ ^1 ϋ H ϋ ϋ ^1 ϋ ϋ _ A7 575574 r----2Ζ---- 五、發明說明（）讓本發明化合物均勻的、且緊密的與一液態載體、一切得極細之固態載體、或兩者一起接觸，之後將其成形。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -線- 其他的傳送系統可包栝時間釋、延長釋放或持久性釋放之傳送系統。這類系統可避免重複施用該試劑，增加受測動物及醫師的方便。可用的釋放傳送系統有許多種且均爲習知技藝人士所熟知。他們包括諸如聚（糖交酯）、草酸酯共聚物、聚己內酯、聚酯醯胺、聚鄰酯類、聚羥基丁酸及聚酐等之聚合物爲底的系統。含藥物之前述聚合物微膠囊如美國專利申請案5,075，109中所述。傳送系統也包括非聚合物式的系統：含諸如膽固醇、膽固醇酯類之固醇物及諸如單-、雙-及三酸甘油酯類之脂肪酸的油脂；水性凝膠釋放系統；sylasted system ;及以胜肽爲底之系統；鱲塗覆物；以傳統結合劑及輔劑壓縮成之藥錠；部分融合之殖入物等類似物。特定範例包括，但不限於：⑻腐蝕性系統，其中之藥劑係包含於一種如美國專利申請案第4,452,775、 4,667,014、4,478,034 及 5,239,660 號所述之基質中，和(b)二擴散系統，其中一活性成份係以一控制速率由諸如美國專利申請案第3,832,253及3,854,480號所述之聚合物中擴散出去。此外，也可採用幫浦式的硬體傳送系統，某些適合當做植入物使用。對慢性病的治療而言，長期持久性的釋放系統可能特別適合。如此所述之”長期釋放”，意指該植入物係被建構並安排成可傳送治療有效量的活性成份至少30天，且較好是60天。習知技藝人士應熟悉所謂的長期持久性釋放系 34 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公爱) ' ' 575574 B7 五、發明說明（）統，此包括上述之釋放系統。如上述之化合物係以有效量的方式被施用。有效量視施用模式、治療狀況及欲求效果而定。如上述也將視階段狀況、受測動物身體狀況及年齡、同時施用之治療性質，及一般醫療執業人員熟知的因素而有所不同。例如，一能刺激T細胞活化或造血之有效量係指藉由測量所增加之細胞數或T細胞活性，可知T細胞活化或造血已增加至一具統計顯著性之藥量。也可藉由測定受測動物體免疫功能(即所增加之B細胞反應、所增加之具細胞毒性的T細胞反應、刺激骨髓增生、增加白血球或紅血球細胞數目、或減緩、停止、或預防感染或癌症)的改變來測量刺激一欲求免疫反應之有效量。能治療自體免疫異常或過敏性異常之有效量乃是足以減輕或抑制與該異常相關之免疫或過敏反應之有效劑量，以減緩或停止該異常之惡化。因此，需知本發明化合物可用來預防性的治療一可能會發展出該免疫反應之受測動物體(如接受移植前之個體)上的自體免疫異常現象(如移植排斥）。如申請專利範圍中所用的”抑制”一詞包括所有前述現象。同樣的，一能治療免疫異常之有效量係指能減緩或完全停止與該免疫系統異常相關之症候以預防異常之量。一般較好是使用最大劑量，亦即依據可靠的醫學判斷所能使用之最高安全劑量。一般來說，本發明活性化合物劑量範圍約從每天每公斤體重0.001毫克至每天每公斤體重10⑻毫克間。適合的劑量範圍約從每天每公斤體重0.001毫克至每天每公斤體 35 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21〇 X 297公爱） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) I I H ! 1 n I n I I I I n n n n I n I ϋ ϋ ϋ n n ϋ ϋ n ϋ I i i I I n ϋ ϋ ϋ ϋ n ϋ A7 575574 ___B7__ 五、發明說明（） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 重100毫克間，較好是每天口服一或多次。採用其他諸如靜脈注射之施用模式將會使劑量降低。可採用許多施用途徑。一般來說，當受測動物接受了初期劑量後的反應並不充分時，可使用患者可容忍之較高劑量(或以一種不同、更能局部傳送途徑來造成較高的有效劑量）。可考慮每天施用多重劑量。在本案中所引用的所有專利、專利申請案、參考文獻及其他文件，其內容均以參考文獻的方式倂入文中。實施例 •線· 實施例顯示本發明一代表性環狀化合物之生物可利用性及該化合物再體內刺激淋巴細胞增生之活性。這些實施例係爲了闡述本發明之用，本發明並不因此受到限制。實施例中所用的爲本發明一特別佳之化合物，即環硼酸脯胺酸化合物(“PT-100”）。在此案中，詳述了每一實施例及附圖。需知在此所揭露之任一反應基團可用來取代附圖中及特定實施例中之特定反應基團(如硼酸基）。可藉NMR來評估環狀化合物的生成。實施例1化合物之一般合成方法本發明化合物係以類似的化學法合成。這些化合物被設計成可專一性的與CD26受體結合。線狀硼酸脯胺酸化合物的合成詳見Bachovchm’493案。藉由將線狀硼酸脯胺 36 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） A7 575574 — ____B7_____ 五、發明說明（）酸化合物置於中性pH値中(約pH 6至約pH 8，更好是約 pH 6.5至約pH 7.5間)一段足以使構型改變的時間，使線狀硼酸脯胺酸化合物轉變爲環硼酸脯胺酸化合物。相反的，在酸性情況下，環狀化合物會轉變成線形化合物。一般相信，環狀及線狀化合物均具生物活性(與CD26受體結合），不見得一定需要變成線形才具生物活性或結合活性。因此’可在毋需先誘發構型改變的情況下來施用環狀化合物。一般係採胜肽直接連接來製備線狀硼酸脯胺酸化合物。本發明所用之胜肽直接連接法乃眾所周知的。採用該法的書包括’但不限於’如P.D. Bailey，An Introduction to Peptide Chemistry, Ed.John Wiley & Sons, 1990; Miklos Bodansky, Peptide Chemistry: A Practical Textbook, Ed·: Springer-Verlag, 1988; Miklos Bodansky, Principles of Peptide Synthesis, “Reactivity and Structure Concepts in Organic Chemistry,” Volume 16, Ed·: Springer-Verlag，1984; and Miklos Bodansky, Principles of Peptide Synthesis, “Reactivity and Structure Concepts in Organic Chemistry，” Volume 21，Ed·: Springer-Verlag，1984. 可以W098/00439中所教導之H-硼酸脯胺酸來開始合成。使用Η-硼酸脯胺酸僅是爲闡述之用，本發明之範疇並不因此受到限制。依據W098/00439之教導，Η-硼酸脯胺酸係依前述已知之合成途徑來製備（G.R. Flentke，et aL, “Inhibition of 37 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 x 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ·%!訂---------線！ A7 575574 ___B7__ 五、發明說明（） dipeptidyl aminopeptidase IV (DP-IV) by Xaa-boroPro dipeptides and use of these inhibitors to examine the role of DP-IV in T-cell function”，PNAS (USA) 88, 1556-1559 (1991); 同時也詳述於美國專利案第5,462,928中）。或者，依一新程序來製備 H-硼酸脯胺酸(Kelly，T.A.，et aL, “The efficient synthesis and simple resolution of a proline boronate ester suitable for enzyme inhibition studies’’，Tetrahedron 49，1009-1016 (193))。兩種合成途徑均可產生互爲消旋物之H-硼酸脯胺酸蒎烷二醇。依據W098/00439之教導，Z-賴胺酸-硼酸脯胺酸之純 L、L及L、D型之非鏡像立體異構物之製備係先經結晶將光學活性基團保護起來而將H-硼酸脯胺酸消旋物加以分開，接著再將純L-硼酸脯胺酸及D-硼酸脯胺酸連接在純的賴胺酸異構物上(參見美國專利案第5,462,928)。或者，賴胺酸-硼酸脯胺酸之純L、L及L、D型之非鏡像立體異構物之高光學活性製備係以L-賴胺酸連接H-硼酸腩胺酸消旋物，並將所得Z-賴胺酸-硼酸脯胺酸之非鏡像立體異構物以前述將脯胺酸-硼酸脯胺酸分開之逆相HPLC分開成其L、 D及L、L型非鏡像立體異構物來進行製備(W.G. Gutheil and W.W_ Bachovchin，“Seperation of L-Pro-DL-boroPro into Its Component Diastereomers and Kinetic Analysis of Their Inhibition of Dipeptidyl Peptidase IV. A New Method for the Analysis of Slow，Tight-Binding Inhibition”，Biochemistry 32, 8.723-8731 (1993))。實施例7提供了可獲得本發明化合物之 38 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) Φ-----------訂---------線----------------------- 575574 A7 _______B7______ 五、發明說明（）一明確的流程。 --------------__ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 實施例2 環化反應能抑制水溶件CD26(DP IV)之活性（開鏈）及非活件Γ環狀)_單元化合物之鑑別 -線該抑制劑無論在那一種pH値之水溶液中，均以兩種構型之平衡混合物存在··一爲抑制性（具活性）的開鏈結構 (線形硼酸脯胺酸化合物），及另一非抑制性(不具活性)的環形結構(環硼酸脯胺酸化合物）。參見圖3，該圖顯示xaa-硼酸脯胺酸抑制劑(Xaa-硼酸脯胺酸抑制劑之構型平衡物)之開鏈及環形結構。該開鏈、具活性之抑制劑較喜在低pH値的環境，而該環形結構則較喜在中性pH値之環境。該反應乃完全可逆：在低pH値的環境下，主要物種爲開鏈化合物。由開鏈轉至環狀的反應涉及脯胺酸之順反異構物間的轉變及一新的N-B鍵之形成。該環狀結構爲一二酮六氫毗啡之硼酸類似物，該物乃是胜肽化學中常見的一種產物。環化可釋出一當量的H+，因此可解釋爲什麼環化反應需要鹼，而開鏈反應則需要酸。環狀結構在高pH値的水溶液下相當安定。長期在高pH値的環境下進行培育，從未使DPIV對所檢測之任一 Xaa-硼酸脯胺酸之抑制性活性消失。此乃是該活性抑制劑係與其非抑制性物種間處於一種構型平衡、而非進行了一不可逆的去活化反應之首要證據。由環狀結構重新生成開鏈結構之半生期相當低。因此，可結論在水溶 39 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） A7 575574 __ B7___ 五、發明說明（）液中喪失抑制活性係由於與pH値相關之構型平衡所致、而非降解反應之故。任一 Xaa-硼酸脯胺酸抑制劑之抑制活性都絕對不會低到零的程度，即使經過長期培育也一樣；加上環狀至開鏈結構之可逆反應，這些事實顯示應可藉由測定平衡時之表面KJit(apparent K〇並與實際&値比較而得到構型平衡時之平衡常數。已知[環形]:[線形]之比例在中性pH値下，對脯胺酸-硼酸脯胺酸而言是156 : 1 ;而對纈胺酸-硼酸脯胺酸而言則是 1130: 1(W.G. Gutheil and W.W. Bachovchin， Seperation of L-Pro-DL-boroPro into Its Component Diastereomers and Kinetic Analysis of Their Inhibition of Dipeptidyl Peptidase IV. A New Method for the Analysis of Slow, Tight-Binding Inhibition, Biochemistry 32, 8723-8731 (1993))。此表示有低於1%之脯胺酸-硼酸脯胺酸、及低於 0.1%之纈胺酸-硼酸脯胺酸在中性pH値下、會以抑制性的開鏈結構存在。但是，在這些情況下，這些抑制劑分別表現的有如其Ki値爲2.5 nM及1.8 nM。此”完全去活化”物種之表面&値仍然較目前其他已被報導過的DP IV抑制劑來得好(〜1000倍）。本發明者相信本發明環狀化合物能與CD26進行專一性的結合。因此，本發明者預測在口服本發明環狀化合物後，亦即在體內（在胃酸的影響下）讓構型變成線形，本發明環狀化合物之生物功能將會顯著的增加（約100-1000 倍）。因此，如果線形結構是必需的，其可於體內完成，且 40 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) % — — — — — — — 訂----------線丨· A7 575574 _____B7___ 五、發明說明（）可於循環系統中產生具療效濃度之物種，因此一般相信本發明化合物之生物活性將會增加約100-1000倍。此外，一般相信本發明環硼酸脯胺酸化合物之冷凍乾燥及固體形式可延長保存期限，因此對本發明化合物知應用有貢獻。依上述所製備之每一種化合物可以HPLC純化並以NMR光譜鑑別，胺基酸組成物或質譜儀都是必需的。藉由調整pH値至酸性pH値(pH値範圍：1-3)可將本發明環狀化合物轉變成線形，且其線形硼酸脯胺酸化合物抑制CD26蛋白酶之強度可以傳統酵素分析(範例詳述於下) 來進行測定。此外，本發明化合物調控免疫系統的影響可藉由習知技藝人士熟知之動物模型體內試驗及細胞培育試管內試驗來預測該化合物的體內活性。實施例3 功能活性評估本發明化合物至少具有下列性質：⑴結合位置爲DP IV之活化位置；及(ii)表現出可跨越物種之專一性。用來評估功能性的試驗包括：DP IV(亦指”DPPIV”)活性，口服生物可利用性及嗜中性白血球細胞增生分析，均詳述如下。在進行活性分析前可將環狀化合物轉變爲線形或無需轉變過程直接進行分析。實施例4 標準CD26(DP IV)活性之測定可於本發明化合物上執行測定CD26(DP IV)活性之分析試驗。測量小胜肽抑制劑與CD26或DP IV，及CD26與 41 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂-------------線！ A7 575574 ____B7_ 五、發明說明（）諸如HIV Tat蛋白質類之大配體間反應之定性方法已被開發出來（W.G· Gutheil and W.W. Bachovchin，Seperation of L-Pro-DL-boroPro into Its Component Diastereomers and Kinetic Analysis of Their Inhibition of Dipeptidyl Peptidase IV. A New Method for the Analysis of Slow, Tight-Binding Inhibition, Biochemistry 8723-8731 (1993); Gutheil, W.G, and W. B. W. Kinlsq, A Matlab Program for Fitting Kinetics Data with Numerically Integrated Rate Equations and Its Application to the Analysis of Slow, Tight-Binding Inhibition, Analytical Biochemistry 223, 13-20 (1994); Gutheil, W.G., et al., HIV-1 丁at Binds to DP IV (CD26): A possible Mechanism for Tat’s Immunosuppressive Activity, Proc. NatL Acad. Sci. USA 91, 6594-6598 (1994))。這些方法中都使用了丙胺酸-脯胺酸-硝化苯甲醯苯胺(ΑρρΝΑ)這種有色的受質，及丙胺酸-脯胺酸_ 7-胺基-4-三氟甲基香豆素(AP-AFC)這種螢光受質。ΑρρΝΑ 及AP-AFC在市面上均有販售（即酵素系統公司，Dublin， CA)。實施例5 口服生物可利用件夕測宏此試驗的數據示於圖1中。將各種PT-100樣品以0.2毫升溶於0.9%生理食鹽水之溶液以如第1圖X軸所示劑量經口導管倒入BALB/C老鼠體內。兩小時後由每隻老鼠尾部抽取血液樣品，餅以螢光分析測定每一樣品中DPPIV活性。數據以相對於未接受化 42 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） · -- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ---------線丨· ^ n ϋ n I n ϋ ϋ n n I n n I ϋ ϋ n Ml t n ϋ . A7 575574 五、發明說明（）合物處理之0.2毫升生理食鹽水控制組，所收集血淸樣品能抑制DPPIV活性之百分比顯Tpc於第1圖之Y軸上。所示每一數據點均爲三隻動物之樣品平均値及其標準偏差。實施例6 刺激嗜中性白血球細朐增Φ 此試驗的數據示於圖2中。 6-8週大之BALB/c雌鼠於第0天，由腹膜中注射每公斤體重220毫克之環磷醯胺。正常控制組則只接受了水的注射。由第3天開始，並持續至第7天，每天兩次經口導管餵食每次每隻老鼠2μ2纈胺酸-硼酸脯胺酸(VBP)。所用不同形式之VBP爲：HC1=線形，HC1鹽；環狀=自由鹼，無鹽；及MeS04=線形，甲基磺酸鹽。所用不同形式之 VBP係以0.1N HC1配製分裝成小管並冷凍儲存於-20°C下。於第3天將每一種形式之分裝溶液分別解凍一瓶，並於整個劑量持續時間將解凍後液體保持於4°C下。正常生理食鹽水控制組在同樣劑量處理期間則只接受生理食鹽水處理。實驗中每一形式VBP之每一劑量及控制組均採取四重複。於第7天，由老鼠尾部採集血液樣品並置於內含 EDTA的微量管中。數據爲絕對嗜中性細胞之平均値(+/-標準偏差），其係由不同周邊血液抹片經Wright Giemsa染色後計數而得之數値，白血球總數則是以0.5%醋酸將紅血球溶解後以細胞計數器計算而得之數値。實施例7 明確的合成流程 43 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) I -------訂- ---------線丨· ^ I ϋ ϋ I n ϋ n ϋ ·1 ϋ n n I n a— n n ϋ I _ A7 575574 _____B7__ 五、發明說明（）此實施例之反應流程示於圖5中。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 實施例7A 所建議之砸酸脯胺酸合成路徑此流程之反應程序示於圖5中，其中反應試劑及條件如下：i.二-三級丁基二碳酸鹽，二氯甲烷；ii. S-丁基鋰四甲乙基亞乙二胺；iii.三烷基硼酸鹽（烷基=甲基、乙基、或丁基），醚；iv.稀釋之氯酸水溶液；V.蕕烷二醇，醚； vi.無水氫氯酸，乙酸乙酯；vii.再結晶。參考文獻： S.J. Couttes et al., J. Med. Chem. 1996 39, 2087; Kelly et al., Tetrahedron Letters 1993 49, 1009; Beak et al., Tetrahedron Letters 1989 30, 1197; and F. R. Bean et al., J. Amer. Chem. Soc. 1932 54,4415. 實施例7B N-B〇C-(S)-纈胺酸硼酸脯胺酸二 (1S.2S.3R.5S)-蒎烷二醇酯，IP068 此流程之反應程序示於圖6中。起始物，（13,23,311,53)-蒎烷二醇吡咯啶-21^-硼酸酯氯化氫，之質量等於”A”。此流程之反應程序如下： 1. 充滿 CH2CMA X 20 ml/g) 2. 充滿 B0C-纈胺酸(A X 0.761 g/g)

3. 冷卻至0-5°C 4. 充滿羥基苯基疊氮(A x 0.473 g/g) 5. 充滿 EDCI(A x 0.874 g/g) FW=191.71 (EDCI 是，，1-(3· 44 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 χ 297公釐） A7 575574 ___B7___ 五、發明說明（）二甲胺丙基)-3-乙碳二亞胺氯化氫“） 6. 於0-5°C下攪拌30分鐘 7. 充滿（13,23,3艮53)-蒎烷二醇吡略啶-2&*-硼酸酯氯化氫(量=A) 8. 充滿4-甲基嗎啉(A X 0.722 ml/g) 9. 讓其緩慢回溫至室溫 10. 隔夜攪拌 11. 水洗(A X 9.5 ml/g) 12. 以 1M KH2S〇4淸洗(A X 9·5 ml/g) 13. 以飽和碳酸鈉溶液淸洗(A x 9.5 ml/g) 14. 以硫酸鎂乾燥 15. 以矽膠過濾，並以EtOAc洗出(A X 0.1 L/g) 16. 濃縮乾燥 17·理論値=Axl.57g/g，期望値=理論値X (95-98%) 所得產率：84% 實施例7C H2N-(S)-纈胺酸-(R)-硼酸脯胺酸-(1S,2S,3R,5S)-蒎烷二醇酯,氯化氣IP069 此流程之反應程序示於圖7並如下示： 1·將燒瓶充滿1M溶於Eh◦之HC1 (A X 37.2 ml/g) 2. 於溶液中通入HC1 10分鐘

3. 冷卻至0-5°C 4. 充滿BOC-(S)-纈胺酸-(R)-硼酸脯胺酸-(1S,2S，3R，5S)-蒎烷二醇醚，IP068 (量=A) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -------訂- --------- 丨, A7 575574 ___B7___ 五、發明說明（） 5. 隔夜攪拌，讓混合物緩慢回溫至室溫 6. 濃縮乾燥 7. 理論値=Ax0.858 g/g，期望値〜100% 所得產率：106% 實施例7D 環-(S)-纈胺酸-(R)-硼酸脯胺酸，IP070 此流程之反應程序示於圖8並如下示： 1. 將燒瓶充滿H2N-(S)-纈胺酸-(R)-硼酸脯胺酸-(13,23,3艮53)-蒎烷二醇酯，氯化氫(量4) 2. 充滿水(A X 25 ml/g) 3. 以IN HC1調整pH至2(如果需要的話） 4. 充滿己烷(A X 25 ml/g) 5. 衝滿苯基硼酸(A X 0.333 g/g) 6. 劇烈攪拌 7.30分鐘後將己烷層傾出，並以新鮮己烷取代 8.60分鐘後再次以新鮮己烷取代 9.90分鐘後再次以新鮮己烷取代 10.120分鐘後再次以新鮮己烷取代 11. 隔夜攪拌 12. 分層 13. 將水層載入Dowex 50-X2-100離子交換樹脂管柱(H* 型沖 14. 以水沖洗直到呈中性 15. 以1 : 50之NH4〇H ·· H2〇沖洗本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂---------線！ 575574 A7 ______ B7____ 五、發明說明（） 16. 將適當分餾部分冷凍乾燥 17. 理論値=AxO_556 g/g，期望値〜90-95% 所得產率：83% *TLC ·· 1 : 50之NHUOH : Me〇H，產物可於碘氣室中以肉眼進行觀察。實施例7E H2N-(S)-纈胺酸-(R)-硼酸脯胺酸-OH， FP020 此流程之反應程序示於圖9並如下示： 1. 於環-(S)-纈胺酸-(R)-硼酸脯胺酸，IP070中注入51.4 ml/g 之 0.1NHC1 2. 攪拌10分鐘 3. 將產物冷凍乾燥理論値=IP070克數X 1.17 g/g，期望値〜100% 所得產率：106% 其他實施例見以下申請專利範圍。本發明已藉實施例詳加描述，習知技藝人士應知在不悖離本發明精神範疇下，本發明可作許多修改或變化。此類修改、變化或等效替換均應仍視爲落在本發明專利申請範圍內。 47 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公爱） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂---------線！

Claims

575574 截 C8 D8 六、申請專利範圍型胺基酸之胜肽。 ...........................裝------ (請先閱讀背面之注意事項再塡寫本頁) 5. 如申請專利範圍第1項之組成物，其中該環硼酸脯胺酸化合物係選自L-X-S-硼酸脯胺酸及L-X-R-硼酸脯胺酸所組成之族群中。 6. 如申請專利範圍第1項之組成物，其中該環硼酸脯胺酸化合物代表組成物重量之高於90%。 7. 如申請專利範圍第1項之組成物，其中該線狀硼酸脯胺酸化合物代表該組成物重量之低於10%。 8. 如申請專利範圍第2項之組成物，其中該線狀硼酸脯胺酸化合物代表該組成物重量之低於10%。 9. 如申請專利範圍第3項之組成物，其中該線狀硼酸脯胺酸化合物代表該組成物重量之低於10%。 10. 如申請專利範圍第4項之組成物，其中該線狀硼酸脯胺酸化合物代表該組成物重量之低於10%。 11. 如申請專利範圍第5項之組成物，其中該線狀硼酸脯胺酸化合物代表該組成物重量之低於10%。 12. 如申請專利範圍第6項之組成物，其中該線狀硼酸脯胺酸化合物代表該組成物重量之低於10%。 13. 如申請專利範圍第1項之組成物，其中該線狀硼酸脯胺酸化合物代表該組成物重量之低於5%。 14. 如申請專利範圍第2項之組成物，其中該線狀硼酸脯胺酸化合物代表該組成物重量之低於5%。 15. 如申請專利範圍第3項之組成物，其中該線狀硼酸脯胺酸化合物代表該組成物重量之低於5%。 X 太級谣尺磨谪用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 575574 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍 16. 如申請專利範圍第4項之組成物，其中該線狀硼酸脯胺酸化合物代表該組成物重量之低於5%。 17. 如申請專利範圍第5項之組成物，其中該線狀硼酸脯胺酸化合物代表該組成物重量之低於5%。 18. 如申請專利範圍第6項之組成物，其中該線狀硼酸脯胺酸化合物代表該組成物重量之低於5%。 19. 如申請專利範圍第1項之組成物，其中該線狀硼酸脯胺酸化合物代表該組成物重量之低於1%。 20. 如申請專利範圍第2項之組成物，其中該線狀硼酸脯胺酸化合物代表該組成物重量之低於1%。 21. 如申請專利範圍第3項之組成物，其中該線狀硼酸脯胺酸化合物代表該組成物重量之低於1%。 22. 如申請專利範圍第4項之組成物，其中該線狀硼酸脯胺酸化合物代表該組成物重量之低於1%。 23. 如申請專利範圍第5項之組成物，其中該線狀硼酸脯胺酸化合物代表該組成物重量之低於1%。 24. 如申請專利範圍第6項之組成物，其中該線狀硼酸脯胺酸化合物代表該組成物重量之低於1%。 25. 如申請專利範圍第1項之組成物，其中該線狀硼酸脯胺酸化合物代表該組成物重量之低於0.5%。 26. 如申請專利範圍第2項之組成物，其中該線狀硼酸脯胺酸化合物代表該組成物重量之低於0.5%。 27. 如申請專利範圍第3項之組成物，其中該線狀硼酸脯胺酸化合物代表該組成物重量之低於0.5%。本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再塡寫本頁)

線 2288 99 ABCD 575574 六、申請專利範圍 28. 如申請專利範圍第4項之組成物，其中該線狀硼酸脯胺酸化合物代表該組成物重量之低於0.5%。 29. 如申請專利範圍第5項之組成物，其中該線狀硼酸脯胺酸化合物代表該組成物重量之低於0.5%。 30. 如申請專利範圍第6項之組成物，其中該線狀硼酸脯胺酸化合物代表該組成物重量之低於0.5%。 31. 如申請專利範圍第1項之組成物，其中該線狀硼酸脯胺酸化合物代表該組成物重量之低於0.1%。 32. 如申請專利範圍第2項之組成物，其中該線狀硼酸脯胺酸化合物代表該組成物重量之低於0.1%。 33. 如申請專利範圍第3項之組成物，其中該線狀硼酸脯胺酸化合物代表該組成物重量之低於0.1%。 34. 如申請專利範圍第4項之組成物，其中該線狀硼酸脯胺酸化合物代表該組成物重量之低於0.1%。 35. 如申請專利範圍第5項之組成物，其中該線狀硼酸脯胺酸化合物代表該組成物重量之低於0.1%。 36. 如申請專利範圍第6項之組成物，其中該線狀硼酸脯胺酸化合物代表該組成物重量之低於0.1%。 37. 如申請專利範圍第1項之組成物，其中該線狀硼酸脯胺酸化合物代表該組成物重量之低於0.05%。 38. 如申請專利範圍第2項之組成物，其中該線狀硼酸脯胺酸化合物代表該組成物重量之低於0.05%。 39. 如申請專利範圍第3項之組成物，其中該線狀硼酸脯胺酸化合物代表該組成物重量之低於0.05%。 4 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格(210 X 297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

575574 A8 B8 C8 ! D8 六、申請專利範圍 40. 如申請專利範圍第4項之組成物，其中該線狀硼酸脯胺酸化合物代表該組成物重量之低於0.05%。 41. 如申請專利範圍第5項之組成物，其中該線狀硼酸脯胺酸化合物代表該組成物重量之低於0.05%。 42. 如申請專利範圍第6項之組成物，其中該線狀硼酸脯胺酸化合物代表該組成物重量之低於0.05%。 43. 如申請專利範圍第1項之組成物，其中該線狀硼酸 * 脯胺酸化合物代表該組成物重量之低於0.01%。 44. 如申請專利範圍第2項之組成物，其中該線狀硼酸脯胺酸化合物代表該組成物重量之低於0.01%。 45. 如申請專利範圍第3項之組成物，其中該線狀硼酸脯胺酸化合物代表該組成物重量之低於0.01%。 46. 如申請專利範圍第4項之組成物，其中該線狀硼酸脯胺酸化合物代表該組成物重量之低於0.01%。 47. 如申請專利範圍第5項之組成物，其中該線狀硼酸脯胺酸化合物代表該組成物重量之低於0.01%。 48. 如申請專利範圍第6項之組成物，其中該線狀硼酸脯胺酸化合物代表該組成物重量之低於0.01%。 49. 如申請專利範圍第1-48項中任一項之組成物，其中該環硼酸脯胺酸化合物是纈胺酸-硼酸脯胺酸化合物。 50. 如申請專利範圍第49項之組成物，其中該環硼酸脯胺酸化合物是纈胺酸-硼酸脯胺酸。 51. 如申請專利範圍第1-48項中任一項之組成物，其中該環硼酸脯胺酸化合物含至少90%之L-胺基酸且硼酸脯胺 5 . 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS〉A4規格(210 X 297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

線 575574 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍酸係以R或S構型存在。 52. 如申.請專利範圍第49項之組成物，其中該環硼酸脯胺酸化合物含至少90%之L-胺基酸且硼酸脯胺酸係以R 或S構型存在。 53. 如申請專利範圍第50項之組成物，其中該環硼酸脯胺酸化合物含至少90%之L-胺基酸且硼酸脯胺酸係以R 或S構型存在。 54. 如申請專利範圍第M8項中任一項之組成物，其中該環硼酸脯胺酸化合物含至少94%之L-胺基酸且硼酸脯胺酸係以R或S構型存在。 55. 如申請專利範圍第49項之組成物，其中該環硼酸脯胺酸化合物含至少94%之L-胺基酸且硼酸脯胺酸係以R 或S構型存在。 56. 如申請專利範圍第50項之組成物，其中該環硼酸脯胺酸化合物含至少94%之L-胺基酸且硼酸脯胺酸係以R 或S構型存在。 57. 如申請專利範圍第1-48項中任一項之組成物，其中該環硼酸脯胺酸化合物含至少％%之L-胺基酸且硼酸脯胺酸係以R或S構型存在。 58. 如申請專利範圍第49項之組成物，其中該環硼酸脯胺酸化合物含至少96%之L-胺基酸且硼酸脯胺酸係以R 或S構型存在。 59. 如申請專利範圍第50項之組成物，其中該環硼酸脯胺酸化合物含至少96%之L·胺基酸且硼酸脯胺酸係以R 6 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格(210 X 297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

:338899 ABCD 575574 六、申請專利範圍或S構型存在。 60. 如申.請專利範圍第1-48項中任一項之組成物，其中該環硼酸脯胺酸化合物含至少98%之L-胺基酸且硼酸脯胺酸係以R或S構型存在。 61. 如申請專利範圍第49項之組成物，其中該環硼酸脯胺酸化合物含至少98%之L-胺基酸且硼酸脯胺酸係以R 或S構型存在。 62. 如申請專利範圍第50項之組成物，其中該環硼酸脯胺酸化合物含至少98%之L-胺基酸且硼酸脯胺酸係以R 或S構型存在。 63. 如申請專利範圍第1-48項中任一項之組成物，其中該環硼酸脯胺酸化合物含至少99%之L-胺基酸且硼酸脯胺酸係以R或S構型存在。 64. 如申請專利範圍第49項之組成物，其中該環硼酸脯胺酸化合物含至少99%之L-胺基酸且硼酸脯胺酸係以R 或S構型存在。 65. 如申請專利範圍第50項之組成物，其中該環硼酸脯胺酸化合物含至少99%之L-胺基酸且硼酸脯胺酸係以R 或S構型存在。 66. 如申請專利範圍第M8項中任一項之組成物，其中該環硼酸脯胺酸化合物含至少99.5%之L-胺基酸且硼酸脯胺酸係以R或S構型存在。 67. 如申請專利範圍第49項之組成物，其中該環硼酸脯胺酸化合物含至少99.5%之L-胺基酸且硼酸脯胺酸係以 7 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格(210 X 297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本頁)

575574 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍 R或S構型存在。 68. 如申.請專利範圍第50項之組成物，其中該環硼酸脯胺酸化合物含至少99.5%之L-胺基酸且硼酸脯胺酸係以 R或S構型存在。 69. 如申請專利範圍第M8項中任一項之組成物，其中該碳-硼鍵係以L構型存在。 70. 如申請專利範圍第49項之組成物，其中該碳-硼鍵係以L構型存在。 71. 如申請專利範圍第50項之組成物，其中該碳-硼鍵係以L構型存在。 72. 如申請專利範圍第51項之組成物，其中該碳-硼鍵係以L構型存在。 73. 如申請專利範圍第52項之組成物，其中該碳-硼鍵係以L構型存在。 74. 如申請專利範圍第53項之組成物，其中該碳-硼鍵係以L構型存在。 75. 如申請專利範圍第54項之組成物，其中該碳-硼鍵係以L構型存在。 76. 如申請專利範圍第55項之組成物，其中該碳-硼鍵係以L構型存在。 77. 如申請專利範圍第56項之組成物，其中該碳-硼鍵係以L構型存在。 78. 如申請專利範圍第57項之組成物，其中該碳-硼鍵係以L構型存在。 8 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再塡寫本頁) .¾. -一口線 ·· 575574 A8 B8 g 六、申請專利範圍 79. 如申請專利範圍第58項之組成物，其中該碳-硼鍵係以L構型存在。 80. 如申請專利範圍第59項之組成物，其中該碳-硼鍵係以L構型存在。 81. 如申請專利範圍第60項之組成物，其中該碳-硼鍵係以L構型存在。 82. 如申請專利範圍第61項之組成物，其中該碳-硼鍵係以L構型存在。 83. 如申請專利範圍第62項之組成物，其中該碳-硼鍵係以L構型存在。 84. 如申請專利範圍第63項之組成物，其中該碳-硼鍵係以L構型存在。 85. 如申請專利範圍第64項之組成物，其中該碳-硼鍵係以L構型存在。 86. 如申請專利範圍第65項之組成物，其中該碳-硼鍵係以L構型存在。 87. 如申請專利範圍第66項之組成物，其中該碳-硼鍵係以L構型存在。 88. 如申請專利範圍第67項之組成物，其中該碳-硼鍵係以L構型存在。 89. 如申請專利範圍第68項之組成物，其中該碳-硼鍵係以L構型存在。 90. 如申請專利範圍第1項之組成物，其中該環硼酸脯胺酸化合物是環狀的纈胺酸-硼酸脯胺酸。 9 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格(210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再塡寫本頁)

575574 AH B8 C8 D8 , 六、申請專利範圍 91.如申請專利範圍第90項之組成物，其中該碳-硼鍵係以L構型存在。 92·如申請專利範圍第1項之組成物，其中該組成物係被配製成口服施用。 93. 如申請專利範圍第1或92項之組成物，其中該環硼酸脯胺酸化合物是纈胺酸-硼酸脯胺酸化合物。 94. 如申請專利範圍第1項之組成物，其中該組成物係被配製成非經腸道施用。 95. 如申請專利範圍第94項之組成物，其中該組成物係被冷凍乾燥。 96. 如申請專利範圍第1項之組成物，其中該組成物是用於刺激人類淋巴細胞或造血細胞之活化或增生，其中該淋巴細胞或造血細胞係與誘發活化或增生之濃度的化合物接觸。 97. 如申請專利範圍第96項之組成物，其中該接觸步驟係藉由口服施用該化合物至需要該治療之人類患者中而達成，其中該患者係被診斷出具有特徵爲淋巴細胞或造血細胞活化或濃度不足之病況。 98. 如申請專利範圍第96項之組成物，其中該接觸步驟係藉由將該環硼酸脯胺酸化合物之冷凍乾燥組成物於具酸性之藥學上可接受的載體中重組，形成一重組酸性製劑，並將該重組製劑以非經腸道方式施用於患有淋巴細胞或造血細胞活化或濃度不足爲特徵的病況之人類患者中。 99. 如申請專利範圍第97或98項之組成物，其中該化 10 本紙張尺度適用中國國家標準((ϋ)Α4規格(210 x 297公釐) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 、1T- — ·· 575574 A8 Βδ C8 D8 六、申請專利範圍合物與能刺激該淋巴細胞或造血細胞活化或增生之第二種不同的藥劑一同施用。 100·如申請專利範圍第98項之組成物，其中該淋巴細胞與該化合物之接觸係於試管內wYm)進行。 101·如申請專利範圍第100項之組成物，其中該接觸步驟包括由個體中取得τ細胞、骨髓細胞、幹細胞、基質細胞、或初期代細胞(early lineage progenitor cells)，議該等分離出的細胞於活體外κ/>σ)與一能刺激細胞有效量之化合物接觸後，且將該等細胞重新引入個體內。 102. 如申請專利範圍第97項之組成物，其中該病況爲 (a) HIV 感染； (b) 腫瘤，且該淋巴細胞爲細胞溶解或助手T細胞； (c) 因化療或放射線治療所引起的副作用，該副作用之一爲造血系統細胞不足所致結果，該造血系統細胞係選自衍生自淋巴系統、紅血球系統及骨髓系統之細胞所組成的族群中； (d) 腎衰竭導致造血細胞不足或造成免疫不全之骨髓疾病；. (e) 自體免疫疾病，或 (f) 因免疫系統細胞不足所致之免疫不全症狀。 103. —種製備如申請專利範圍第1項之藥學組成物的方法，該方法包括：將具有下式I結構的環硼酸脯胺酸化合物置於一藥學上可接受的載體中，本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格(210 X 297公變） (請先閱讀背面之注意事項再塡寫本頁)

575574 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍

其中每一 Xl與X2獨立爲一羥基或是在生理pH値下、於水溶液中可被水解成羥基的基團；且X代表一可模擬能被後-脯胺基裂酵素(P〇st prolyl c]eaving enZyme)所認得之 .受質位置之胺基酸或胜肽側鏈。 104,如申請專利範圍第1〇3項之方法，其中該藥學上可接受的載體乃是適於口服施用。 105·如申請專利範圍第104項之方法，其進而包括將組成物配製成不含腸衣之藥錠或膠囊之步驟。 • 106·如申請專利範圍第1〇3項之方法，其中藥學上可接受的載體乃是適於非經腸道施用。 107·如申請專利範圍第1〇6項之方法，其進而包括將組成物冷凍乾燥以製成冷凍乾燥製劑之步驟。 108·如申請專利範圍第1〇7項之方法，其進而包括將組成物於具酸性pH値之藥學上可接受的載體中重組形成一重組製劑的步驟。 109.—種刺激人類淋巴細胞或造血細胞活化或增生的方法，該方法包括於試管內（M v//讓該淋巴細胞或造血細胞與誘發活化或增生之濃度之具下式I結構的環硼酸脯胺酸化合物接觸， 12 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格(210 X 297 ;釐）丨：纒I: (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 575574 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍

其中每一乂!與X2獨立爲一羥基或是在生理pH値下、於水溶液中可被水解成羥基的基團；且X代表一可模擬能被後-脯胺基裂解酵素(P〇st prolyl cleaving enzyme)所認得之受質位置之胺基酸或胜肽側鏈。 110 .如申請專利範圍第109項之方法，其中該接觸步驟之進行係藉由將該環硼酸脯胺酸化合物之冷凍乾燥組成物於酸性之藥學上可接受的載體中重組，形成一重組酸性製劑，並將該重組製劑與該淋巴細胞或造血細胞接觸。 111. 如申請專利範圍第110項之方法，其中該該淋巴細胞或造血細胞係由患有淋巴細胞活化或濃度不足或造血細胞活化或濃度不足爲特徵的病況之人類患者中分離出。 112. 如申請專利範圍第110項之方法，其中該化合物係與能刺激該淋巴細胞或造血細胞活化或增生之第二種不同的藥劑倂用。 113..如申請專利範圍第111項之方法，其中係將分離自個體之T細胞、骨髓細胞、幹細胞、基質細胞或初期代細胞(early lineage progenitor cells)，與一能刺激細胞有效量之化合物於活體外 (ez κ/κσ)接觸。 114·如申請專利範圍第m項之方法，其中該病況爲 13 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格(210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再塡寫本頁)

575574 S8S 六、申請專利範圍 HIV感染。 115. 如申請專利範圍第111項之方法，其中該病況爲腫瘤，且該淋巴細胞爲細胞溶解或助手T細胞。 116. 如申請專利範圍第111項之方法，其中該病況爲因化療或放射線治療所引起的副作用，該副作用之一爲造血系統細胞不足所致結果，該造血系統細胞係選自衍生自淋巴系統、紅血球系統及骨髓系統之細胞所組成的族群中。 117. 如申請專利範圍第111項之方法，其中該病況是腎衰竭導致造血細胞不足或造成免疫不全之骨髓疾病。 118. 如申請專利範圍第111項之方法，其中該病況是自體免疫疾病。 119. 如申請專利範圍第118項之方法，其中該病況是因免疫系統細胞不足所致之免疫不全症狀。 14 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格(210 X 297公釐) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)