TW471967B - Use of 6,7-substituted-2-aminotetralines for preparing pharmaceutical compositions useful for the treatment of septic shock, and antipyretic and antiinflammatory pharmaceutical compositions - Google Patents

Description

R 471967 A7 __ B7___ 五、發明説明（1 ) 本發明係關於6，7 —經取代一2 _胺基菓滿及其藥 學上可接受之鹽類用於製備治療敗血性休克之藥學組成物 ’以及具有抗發炎及退燒活性之藥學組成物的用途。 這類6，7_經取代—2 —胺基某滿具有通式（I )

X (I) 其中X與γ相同或不同，選自甲氧基、乙氧基或氟基；R 與R1相同或不同，選自氫原子、乙基、丙基、環丙基甲 基、2 —苯基—2~羥乙基、2 —羥基一 2 —（4_甲基 苯基）乙基或2 -羥基—3 -（4 —甲氧基苯氧基）丙基 〇 式（I )之6，7 —經取代—2 -胺基棻滿類中’下 列化合物特別佳，其中： (1 ) Χ = Υ^甲氧基；R =氫原子，1^=2 —羥 基（4 —甲基苯基）乙基： 2 -〔 （N — 2 —羥基一2 —（4 —甲基苯基 )乙基）胺基〕一6，7_二甲氧基一某滿。 (下文記爲：ST563)； (2) X = Y =甲氧基；R =乙基；Ri=2 =苯基 IIn — I I —J I^ In 11— aaw. (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 一 4 - 471967

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7 B 明説 明發 基 乙 徑 I 2 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 2 —〔 （N-乙基，N— 2 -苯基一2 —羥乙 基）胺基〕一6，7 —二甲氧基某滿（下文記 爲：S T 5 7 0 ); (3) X = Y =甲氧基；R = Ri =環丙基甲基： 2 —〔N，N —二環丙基甲基）胺基〕一6， 7 -二甲氧基某滿。（下文記爲：ST557 )； (4) X = Y =甲氧基；R =氫原子；Ri=2 —羥 基一 3 —（4 —甲氧基苯氧基）丙基： 2 —〔N-2 —羥基一3 — (4 —甲氧基苯氧 基）丙基）胺基〕一 6，7 —二甲氧基某滿。 (下文記爲：ST564)； (5) X =氟基，Y =甲氧基；氫原子： 2 —胺基一 6 —氟一 7 —甲氧基棻滿（下文記 爲：S T 6 2 6 ) •，及 (6) X = Y =乙氧基；R =氨原子；Ri =两基： 2 — N -丙基胺基一6，7 —二乙氧基棻滿。 (下文記爲：ST608)。 式（I )之6 ’ 7 —經取代一 2 —胺基奈滿類，特別 是化合物（1) — (6)，是已知化合物。 事實上，義大利專利第1 2 4 1 9 8 8號或其對應申 請案E P — A — 0 4 6 6 6 6 2揭示了具有免疫調節活性 之藥學組成物，其含有這類胺基某滿作爲活性組份。 L---：--，訂-----rl^w. (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -5 - 471967 A7 B7 五、發明説明（3 ) 甚至在此之前’ ST563與ST570之抗高血壓 活性早已揭示於EP — B — 〇 2730 1 7中》 再者，諸如ST557，ST564與ST626之 化合物的抗高血壓活性亦早已分別揭示於義大利專利案第 1219428號與第1224243號，以及j. Med. C h e m . 29 · 1615 (1986)。 這些式（I )胺基菓滿早爲人知之免疫調節與抗高血 壓活性，雖然與本發明首先揭示之對抗敗血性休克的治療 活性及其作爲抗發炎與退燒藥物完全無關。 敗血性休克是伴隨高死亡率之臨床症候群，其特徵爲 多種血液動力上、免疫上及生化上之異常。 僅管使用了多種抗生素、手術導流、血管活化物質與 代謝支持物，敗血性休克漸增之發生率使其晉身爲最嚴重 之醫院病理病例之一，特別是在加護單位。已證實美國每 年約有1 0 0，0 0 0人死於內毒素休克。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先Η讀背面之注意事項再填寫本頁) 4 此類病理病例之主要致因乃葛蘭姆氏陰性菌之嚴重感 染，這類菌之生理病理學上的作用可歸究於L P S，即細 菌細胞膜外屬之一種組份，其能夠藉著與宿主免疫系統之 多種組份，特別是巨噬細胞，之交互作用而引起敗血性休 克。 事實上，免疫勝任細胞群釋放不同之內源性調節子， 而該調節子對隨後發生之複雜病理現象應負最後責任。 近來已將人類敗血性休克之致死結果，與全身性釋放 實質量之多種胞激素牽連在一起》 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 經濟部中央橾準局員工消費合作社印製 471967 A7 ___B7 五、發明説明（4 ) 事實上’許多研究顯示胞激素（例如IL — 1 ，IL —6 ’ TNF與I FN — r )之異常調節與嚴重之敗血性 休克有密切關連》 其它炎症調節子（PAP、LTD、BK、P物質） 亦顯示與敗血性生理病理學有關。 TNF (腫瘤壞死因子）是不折不扣的胞激素，其在 宿主對L P S之反應中扮演作爲調節子之關鍵角色（參見 Tracery K J, Tumor Necrosis Factor (Cachect ί n ) in the Biology of Endotox i c Shock Syndrome. Dire. Shock 1991; 35: 123-28)，因爲腫瘤壞死因子在以休克 過程爲特色之多種代謝異常中被證實有關連（Starnes HK ，Warren RS, J eevandam M. et a 1. TumorNecros i s Factor and the acute metabolic response to tissue injury in man. J. Clin. Invest. 1988: 82:1321)， 此種代謝異常之不利預後通常與極高血清濃度之TN F有 關（Dames Ρ· , Reuter A.，Gysen Ρ., Demonty J.，

Lamy M., Franch i mont P. Tumor Necrosis Factor and interleukin-1 serum levels during severe sepsis in humans. C r i t. Care Mad. 1 989; 1 7:975-978. Debets JMH., Kampmeijer R., Van Der Linden MPMH., Buurman WA. , Van Der Linden CJ. , Plasma Tumor Necrosis Factor and mortality in critically ill septic patients. C r i t.. Care Med. 1 9 8 9 ; 1 7 : 4 8 9 - 4 9 4 )。 事實上，藉實驗方式使用L P S而令動物中毒之動物 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐）_ 7 _ „---：---IT-----Γ—^w (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 471967 A7 B7 五、發明説明（5 ) 血清中，發現了高濃度之TNF，直接接受TNF之動物 會產生一種中毒症狀，其可與內毒素血症區別（Natanson C., Eichnols PW., Danner RL., Endotoxin and Tumor Nevrosis Factor challenges in dogs simulate the cardiovascular profile of human septic shock. J. Exp. Med. 1989; 169:823-832. Beutler B. Milsak IW. , Ceram i A. , Passive immunization against cachect i n/Tumor Necrosis Factor protects mice from lethal effect of endotoxin. Science 1985 ： 229： 869-871 )。 因此，阻斷或拮抗TNF之化合物可視爲治療敗血性 休克之適用的治療性候選物。 ST6 2 6對於BALB/c小白鼠藉脂多醣（源自大腸 桿菌02 6 : B6株之LPS)誘生之致死率的功效評估 動物 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 採用BALB/c純種公小白鼠（I f f a Credo)，約7周齡（每實驗組使用8隻動物）。 眚驗渦葙 經口服用溶於無菌生理食鹽水之化合物S T 6 2 6， 劑量爲5 0毫克/每公斤體重，其係根據兩種不同處理安 排’即相對於LPS注射之時間1) —60 /與+5 一 ， 及2) +5>及+120>。所使用之LPS (源自大腸 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Μ規格（210X297公釐）_ q _ 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 471967 A7 B7 五、發明説明（6 ) 桿菌0 2 6 : B 6株）首先係溶於無菌生理食鹽水中，然 後注射至腹腔內，劑量爲1 5毫克/每公斤體重，體積爲 每10克體重（b. w.)用0. 1毫升。LPS攻毒後 ，每天評估存活率、持續10天。 結果 根據兩次經口投服化合物〔相對於L P S攻毒之 —6〇 /與+5 —，或+5—與+120<〕的內毒素休 克模式，使用ST6 2 6所得之全部結果示於表1。 由此可見，ST626能大大地減少經LPS誘生之 致死率，僅管此作用未能顯著地令人滿意。再者，L P S 對照組動物在攻毒後2天內死亡而經S T 6 2 6處理之兩 組動物皆在L P S攻毒後6天內死亡。 表1 :經口服用ST — 626 (50毫克/公斤）對於使 用LPS (源自大腸桿菌026 : B6株）注射誘 生之致死率的影響 —-I— ： ,訂 I (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -9 - 471967 五、發明説明（7 ) A7 B7 實驗組別 處理b 致死率 存活率 D / T c (% ) LPS — 6/8 25 ST 626 -60’ 與 +5’ 2/8 75 ST 626 + 5,與 +1 20’ 2/8 75 a=BALB/c 小白鼠 b =相對於L P S攻毒之ST6 2 6服用時間。 c =死亡數目/每個實驗組之動物總數。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) .訂 4 ST6 2 6對於C 5 7BL/6小白鼠藉脂多醣（源自大 腸桿菌055:B5株之LPS)誘生之致死率的功效評 估 動物 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 採用C57BL/6純種公小白鼠（I f f a Credo)，約7周齡（每實驗組使用7_8隻動物） 實驗渦程 經口服用溶於無菌生理食鹽水之化合物S T 6 2 6， 劑量爲5 0毫克/每公斤體重，其係根據兩種不同處理安 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -10 - 471967

7 B 明説 明發五 間 時 之 射 注 S P -L 於 .對 相 即 5¾ 5 + 與 -* ο 6 及2) +5 β及+1 20 >。所使用之LPS (源自大腸 桿菌Ο 5 5 : B 5株）首先係溶於無菌生理食鹽水中，然 後注射至腹腔內，劑量爲4 5毫克/每公斤體重，體積爲 每10克體重（b.w.)用0· 1毫升。LPS攻毒後 ，每天評估存活率、持續1 0天。 結果 表2所示數據顯示，相對LPS攻毒之_60 >與 + 5 >經口投服兩次ST626時，ST626具有完全 保護功效。攻毒後投服S626 ( + 5<與+12〇/) 之兩次經口處理並不甚有效（5 7%存活率相對於對照相 之12. 5%存活率）。但是ST626處理組之平均存 活時間（MST)的數值（MST2 1 〇天）相對於對照 組（MST = 3天）在統計上有意義（p<〇. 01)。 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) Φ 表2 :經口服用ST626 (50毫克/公斤）對於使用 LPS (源自大腸桿菌〇55 : B5株）注射誘生 之致死率的影響 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（ 210X297公釐）-一 471967 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（9 ) 實驗組別 處理b 致死率 存活率 D / T c (% ) LPS — 7/8 12.5 ST 626 -60’ 與 +5， 0/7* 100 ST 626 + 5,與 +120’ 3/7 57.2 a=C57BL/6 小白鼠 b =相對於L P S攻毒之ST6 2 6服用時間 c =死亡數目/每個實驗組之動物總數 * = F i she r 確實測試法：ρ·<0. 01 ST6 2 6對於C 5 7BL/6小白鼠藉脂多醣（源自大 腸桿菌055 : B5株之LPS)誘生之致死率的功效評 估 動物 採用C57BL/6純種公小白鼠（I f f a Credo)，約7周齡（每實驗組使用8隻動物）。 實驗渦程 經口服用溶於無菌生理食鹽水之化合物S T 6 2 6， 劑量爲5 0毫克/每公斤體重，其係根據兩種不同處理安 ------------ΓI—.訂------#. (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -12 - 471967 A7 B7 五、發明説明（10) 排，即相對於L P S注射之時間1 ) 一 6 0 /與+ 5 / ， 及2) +5>及+120>。所使用之LPS (源自大腸 桿菌055:B5)首先係溶於無菌生理食鹽水中，然後 注射至經D —半乳糖胺預先處理之動物腹腔內，劑量爲 〇. 0 1毫克/公斤。增進感應之化合物在LPS攻毒前 3 0分鐘經靜脈注射，劑量爲1 0 0 0毫克/公斤。 L P S攻毒後，每日評估存活率，持續1 〇天。 結果 於此內毒素休克模式中，ST6 2 6對於使用D —半 乳糖胺增感之小白鼠具有完全之保護作用（1 0 0%存活 率）（見表3)。最有趣的是，即使在LPS攻毒後投服 ST626，其仍顯示有效· 表3 :經口服用ST — 626 (50毫克/公斤）對於經 D—半乳糖胺增感之後，使用LPS(源自大腸桿 菌0 5 5 : Β 5 )於小白鼠誘生之致死率的影響 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) •'vm Γ 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 -13 - 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 471967 五、發明説明（11) A7 B7 實驗組別 處理b 致死率 D / T ° 存活率 (% ) D -半乳糖胺Η H LPS - 7/8 12.5 ST 626 -60’ 與 +5’ 0/8* 100 ST 626 + 5’ 與 +120’ 0/8 100 a = C57BL/6 小白鼠 b=相對於L P S攻毒之ST6 2 6服用時間 c =死亡數目/每個實驗組之動物總數 * = F i she r 確實測試法：p<0. 001 ST6 2 6對於小白鼠經LPS誘生之血清TNF (腫瘤 壞死因子）濃度的功效評估 動物 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 使用BALB/c純種公小白鼠（I f f a Credo)，約8週齡（每個實驗組使用8隻動物）。 實驗渦程 LPS攻毒前9 0分鐘，經口投服化合物ST6 2 6 ，劑量爲1 0 0毫克/公斤。然後以劑量爲1 0毫克/公 斤之LPS (源自大腸桿菌026 : B6株）注射至動物 14 - (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 471967 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 ____ B7__五、發明説明（l2) 腹腔內。將c 〇2麻醉後之小白鼠放血，其係利用眼窩後 針刺法在L P S注射後1小時（即TNF達最高濃度時） 收集血樣。 欲測試S T 6 2 6本身是否能夠誘生可測定量之待檢 測的胞激素，每組4隻動物之兩個實驗組在採集血樣前 60分鐘或120分鐘經口投服ST626。血樣皆在室 溫下令其凝集成血塊，藉此分離出血清，然後離心。將血 清樣品保存在一 8 0°C直到分析。血清中TN F生物活性 之測定係使用L 9 2 9細胞株（一種老鼠纖維肉瘤），此 細胞對於TNF之胞毒活性十分敏感（V. Ruggiero，C. Chiapparino, S. Mangane11o, L. Pace 1 1 ο, P. Foresta & Arrigoni Martelli. Beneficial Effects of a Novel Platelet-Activating Factor Receptor Antagonist, ST 899, on Endotoxin -Induced Shock in Mice, SHOCK, 2, n° 4, pages 275-280 , 1994)。 血清中TN F活性表示爲生物學單位/毫升。 結果 L P S攻毒前9 0分鐘，以1 0 0毫克/公斤之劑量 經口投服的化合物ST626，顯著降低了由LPS誘生 之血清TNF濃度（ρ<0_ 0 0 1) ’但投服在對照鼠 不會誘使TNF生產（表4)。 表4 ST6 2 6 ^對於對照組及經L P S處理之小白鼠° 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐）_ Μ - ---------衣 _Γ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 471967

A B 五、發明説明（l3) 之血清TNF最高濃度（LPS處理後1小時）的 影響 T N F ( U / /ml) 對照 ST626 ST626 LPS LPS + (-60’ ） (-120，） ST 626 平均值 2.50 1.23 0. 60 89.77 3. 33 ± S. E. 1.02 0.63 0.28 19.65 0. 76 P n. s. n. s. <0.001 <0.001 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 對照組之小白鼠在—6〇/或一 12〇/ ，經 L P S —處理之小白鼠則在一 9 0 >，經口服用 劑量爲1 0 0毫克/公斤之該物質。 b=源自大腸桿菌026:B6株之LPS c = BALB/c 小白鼠 學生，t 〃測試法（ST626 vs.對照組； L P S vs.對照組；LPS + ST626 vs. L P S ) ° 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -16 - 471967 A7 B7 五、發明説明（l4) ST626對於小白鼠經LPS誘生之血清TNF — α ( 腫瘤壞死因子）濃度的功效評估 使用BALB/c純種公小白鼠（I f f a Credo)，約8週齡（每個實驗組使用8隻動物）。 青驗過程 L P S攻毒前6 0分鐘且攻毒後5分鐘，或者只在攻 毒後5分鐘，經口投服化合物ST626，劑量爲50毫 克/公斤。然後以溶於生理食鹽水且劑量爲1 〇毫克//公 斤之L P S (源自大腸桿菌02 6 : B 6株）注射至動物 腹腔內。將C 02麻醉後之小白鼠放血，其係利用眼窩後 針刺法在L P S注射後1小時（即TNF達最高濃度時） 收集血樣。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 令血樣靜置室溫3 0分鐘以形成血塊，藉此分離出血 清，然後離心（30分鐘於2000 r pm)。測定 TN F - α之血清濃度係採用測定鼠TN F — α的市售 EL I SA 套組（Genzyme, Boston, ΜΑ)，根據廠商指不 進行。 結果 L P S注射之後所增加的TNF — α血清濃度，在兩 次施用ST626者（分別在LPS攻毒之—60 >與 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -17 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 471967 A7 B7 五、發明説明（15) + 5 /服用50毫克/公斤）幾乎消失（表5)。最值得 注意的是，LPS攻毒後（+ 5>)，單次服用 ST626能夠明顯降低TNF濃度（p<0. 001) :1 2 7 1微微克/毫升相對於7 5 8 6微微克/毫升。 表5 S T 6 2 6 a對於經L P S處理b之小白鼠。之血清 TNF最高濃度（LPS處理後1小時）的影響 數據以平均值（8隻動物）士 S. E.表示。 實驗組 處理方式d TNF- α (微微克/毫升） LPS — 7586. 9 9 ± 943.49 ST 626 -60’ 及 +5’ 7. 66 ± 1 2 7.6 9 * ST 626 + 5’ 1 27 1. 0 6 ± 2 0 9. 74* a =經口服用劑量爲5 0毫克/公斤之該物質，於 _60 >與+5 /或者僅在+5 > (相對於 L P S攻毒時間）。 b=源自大腸桿菌026:B6株之LPS c = BALB/c 小白鼠 d=相對於L P S攻毒之ST6 2 6服用時間 *=學生，測試法（處理組 vs. LPS) - -1-:- . .......- ---—— I、1τ—— -- i n Hr (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 18 - 471967 A7 B7 五、發明説明（l6) p < 0 . 0 0 1。 ST626對於小白鼠經LPS誘生之血清IL· — 1泠（ 間白素一1 /3 )濃度的功效評估 動物 使用BALB/c純種公小白鼠（I f f a Credo)，約8週齡（每個實驗組使用9隻動物）。 實驗過程 根據兩種不同之處理安排，即相對於L P S之注射時 間：1)-60'與+ 5' ’ 及 2)+5^ 與 + 90’ ’ 經口服用劑量爲5 0毫克/公斤之化合物ST6 2 6。將 溶於無菌生理食鹽水之L P S (源自大腸桿菌0 2 6 : 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) B 6株），劑量爲1 0毫克/公斤’注射至動物腹腔內。 利用眼窩後針刺法將C 0 2麻醉後的小白鼠放白’在 L P S注射後4小時收集血樣，即當時I L_ 1石達到小 白鼠體內之血清最高濃度。 令血樣靜置室溫3 0分鐘以形成血塊，藉此分離出血 清，然後離心（30分鐘於2000 r pm)。測定 I L — lyS之血清濃度係採用測定鼠I L — 1/S的市售 E L I SA 套組（Genzyme，Boston, MA)，根據廠商指不 進行。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（ 210X297公釐）_ 1〇 _ 6 9 τ-* 7 A7 ___E_____ 五、發明説明（Π) 結果 · 相對於LPS注射時間，在—60 /與+5 /經口服 用ST6 2 6 ( 5 0毫克/公斤）之處理組，明顯地降低 IL 一 1；S濃度至幾乎無法測得（表6)。同樣地，經 ST626後處理組（相對於LPS施用時間，在+5 — 與+90 一）能夠明顯（p<〇. 〇〇1)降低IL 一 1召血清濃度。 表6 ST6 2 6a對於經LP S處理b之小白鼠°之1 L 一 1 血清最高濃度（L P S處理後4小時）的影 數據以平均值（9隻動物）土 S. E.表示。 實驗組 處理方式d IL-1冷（微微克/毫升） LPS — 61. 1 7± 9. 38 ST 626 -60,與 +5， 0· 06± 3· 77* ST 626 + 5’ 與 +90’ 12. 49± 4· 14* 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) a =經口服用劑量爲5 0毫克/公斤之該物質。 b=源自大腸桿菌026:B6株之LPS c=BALB/c 小白鼠 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -20 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 471967 A7 _ B7_ 五、發明説明（18) d=相對於L P S攻毒之S T6 2 6服用時間。 *=學生〃測試法（處理組 vs. LPS): p < 0 . 0 0 1。 ST626對於小白鼠經LPS誘生之ILN— r (干擾 素- r )濃度的功效評估 動物 使用BALB/c純種公小白鼠（I f f a Credo)，約8週齡（每個實驗組使用8隻動物）。 實驗過程 根據兩種不同之處理安排，即相對於L P S之注射時 間：1)-60 一與+ 5' ’ 及 2) + 5^ + 90'與 + 1 8 0 / ，經口服用劑量爲5 0毫克/公斤之化合物 S 6 2 6。將溶於無菌生理食鹽之L P S (源自大腸桿菌 026:Β6株），劑量爲10毫量/公斤，注射至動物 腹腔內。利用眼窩後針刺法將C 〇2麻醉後的小白鼠放血 ，在LPS注射後6小時收集血樣，即當時I FN — r達 到小白鼠體內之血清最高濃度。 令血樣靜置室溫3 0分鐘以形成血塊，藉此分離出血 清，然後離心（30分鐘於2000rpm)。測定 I FN— γ之血清濃度係採用測定鼠I FN_r的市售 E L I SA 套組（Genzyme，Boston, MA)，根據廠商指不 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X2.97公釐）_ - (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

471967 附件三a :第851 〇2443號專利申請案中文說明書修正頁 民國87年11月呈 五、發明说明（19 進行。 結果

Wit ¥ 重複經口服用ST6 2 6之處理組造成I FN— r之 血清濃度明顯降低（P<0. 001)，特別是該化合物 係於相對LPS之施用時間爲'_60 >及+ 5 >服用者（ 461微微克/毫升 v s . 1 3 7 5 1 微微克/毫升 )(表 7 )。 表7 3丁6 2 6&對於經1^?5處理15之小白鼠°之 I FN_r血清最高濃度（LPS處理後6小時） 的影響 數據以平均值（8隻動物）±S. E.表示。 實驗組 處理方式 d IFN- 7* (微微克/毫升） 、-1T ("先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) LPS ST 626 ST 626 -60,與 +5’ + 5’，+90,與 +180 1 375 1. 3 ± 1 953. 5 461· 2± 58. 8* 1162. 2 ± 238. 0*

a =經口服用劑量爲5 0毫克/公斤之該物質 b=源自大腸桿菌026:B6株之LPS 久張尺度適州中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -22 - 471967 A7 B7 五、發明説明（2〇) c = BALB/c 小白鼠 d=相對於L P S攻毒之S T6 2 6服用時間。 *=學生’t 〃測試法（處理組 vs. LPS): } P < 0 · 0 0 1。 5 T 6 2 6對於小白鼠體溫之功效評估 動物 使用BALB/c純種公小白鼠（I f f a Credo) ’約8週齡（每個實驗組使用8隻動物）。 眚驗渦程 經口服用劑量爲1 0 0毫克/公斤體重之化合物 ST6 2 6。在服用化合物之前與服用之後5 > ，30 一 6 0 /及9 0 / )藉由直腸溫度計記錄動物體溫。 結果 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

Jt 口服ST6 2 6會產生動物肛溫急劇降低之現象，早 在處理後5 /即可證實（約1°C)並在第6 0分鐘達到最 大值（約7 °C )(表8 ) 表8 ST626 a對小白鼠體溫（°C)之影響）。數據 係以平均值（8隻動物）土 S. E.表示。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐）_ 23 經濟部中央標準局員工消費合作社印策 471967 五、發明説明（21) A7 B7 基礎溫度 測量肛溫之時間 5' 30' 60' 90' 平均值 38. 21 37.18 31.90 31.38 31.86 土 S · E . 0. 14 0.16 0.13 0.31 0.37 P <0.001 <0.001 <0.001 <0.001 a =此物質係以1 0 0毫克/公斤之劑量經口服用。 學生"t "測試法（成對數據）。 啤酒酵母菌於大鼠誘生之發炎模式中，S T 6 2 6對於退 燒與抗發炎之功效評估 動物 使用約9週齡之Sprague Daw ley公大鼠（I f f a

Credo)(每個實驗組用6隻動物）。 眚驗渦稈 開始測試之前，令動物禁食（無食物及水）1小時’ 將0. 2 5毫升之啤酒酵母菌懸浮液（於無菌生理食鹽水 中，30%)注射至左後足掌內。 實驗# 1 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X2.97公釐）_ 24 _ ---------—L---^--.訂------ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 471967 A7 _B7___ 五、發明説明（22 ) 注射致炎症物質（ph 1 〇 g 〇 g e η)之後4小時 半，一組動物施用50毫克/公斤 ST626 (於2毫 升水中），而對照組僅接受相同體積之佐劑。第二次施用 此化合物係在致炎症物質注射後6. 5小時。每隻動物之 肛溫係在啤酒酵母菌注射後第0. 45，5，6，7及 2 6小時測定。測量體溫並同時檢測經過處理之後足掌的 水腫情形。足掌體積係以體積描記器在致炎症物質注射後 0，4 . 5，7及2 6小時測量。 實驗# 2 注射致炎症物質之後2小時半，一組動物施用1 0毫 克/公斤 ST626 (於2毫升水中），而對照組僅接 受相同體積之佐劑。每隻動物之肛溫係在注射致炎症物質 之後0，6 0及1 2 0分鐘測定。另一組之溫度測定係由 該化合物施用後1 0分開始並繼續測定至2 4小時爲止。 實驗# 3 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 —--------^裝 l· I (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) .4 實驗# 2結束後7天，對相同動物進行另一項測試， 其係如前所述施用啤酒酵母菌而引起再次發燒。在發炎之 前，測定肛溫與欲予酵母菌處理之後足掌（右腳）體積。 ST626係於酵母菌注射後1及3. 5小時經口投服（ 2 0毫克/公斤）。 S Τ 6 2 6處理之前（致炎症物質注射之前1小時） ，測量肛溫且持續測量至7小時半。另一組測量係於2 4 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐）_ π _ 471967

五、發明说K 23^1P ;.:n v 及3 1小睁έ後進.·行 Μ Β7 發炎反應物的結果係在產生水腫後 3 5，7. 5，24及31小時，藉由，評定經過處理 之足掌體積而予檢測。 結果 經口服用劑量爲1 0，2 0及5 0毫克/公斤之 S Τ 6 2 6能夠顯著減少啤酒酵母菌誘生之發燒，此係藉 由肛溫得知（表8 — 10)。再者，水腫的擴展係爲致炎 症物質處理之結果，在S Τ 6 2 6處理後，水腫明顯保持 在極低數值。 實驗# 1 表8 - 1 ST6 2 6a對於被啤酒酵母菌處理過之大鼠 的體溫（°C)影響。數據係以平均值（6隻動 物）土 S E表示。 時間 對照組 s T 6 2 6 (賴先閱讀背面之注意事項再硝寫本頁) -"-而彡 1,;/1'贽合竹71卬-,:' 0 37. 1 土 0. 11 37. 2 土 0. 13 + 4. 5h 37. 8土 0. 10 38. 0 土 0· 13 + 5h 38. 1土 0. 05 37. 2土 0. 1 6 + 6h 38. 1 土 0. 08 37. 4土 0. 11 + 7h 38. 6士 0. 11 36. 7土 0. 15 + 24h 38. 2土 0. 15 38. 3土 0. 11 _本紙張尺度適31¾¾票準（rNS) Α4規格（210χ297公釐） 471967

、發明説明（一-y-------------- a=該物質係於致炎症物質注射後4. 5與6. 5小 五 時經口服用，劑量爲5 0毫克/公斤。 學生測試：▲=?<0. 001 表8 — 2 ST6 2 6a對於被啤酒酵母菌處理過之大鼠 後足掌的水腫影響。數據係以平均值（6隻動 物）土 S · E ·表示。 處理後之足掌平均增加體積（毫升） 時間 對照組 S Τ 6 2 6 + 4. 5小時 3. 08+ 0. 09 3.06+0.06 + 7小時 3. 00± 0. 08 2. 54± 0. 1 1· + 2 6小時 3. 71 ± 0. 09 3. 60 ± 0. 20 ^:、;!部屮-',;^^^爻1,消=^合：^."卬^^ ("先閱讀背面之注意事項再镇寫本頁) a=該物質係於致炎症物質注射後4. 5與6. 5小 時經口服用，劑量爲5 0毫克/公斤。 學生、t'測試：·=ρ<0· 01 本纸張尺度適用屮國國家標準（CNS ) Λ4規格（210X 297公釐）Όέ- I - 471967 A7

表9 5丁6 2 6^對於被啤酒酵母菌處理過之大鼠的體 溫（°C)影響。數據係以平均值（6隻動物） 土 S E表示》 ("先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 後。 射斤 注公 質 / 物克 症毫 炎 ο 致 5 於爲 係量 質劑 物， 該用 II a 艮 月 □ 經 時 小 時間 對 照組 S ' T 6 2 6 0 36. 7土 0. 10 36. 5土 0. 06 + lh 37. 1 土 0. 07 37. 3土 0. 05 + 2h 37. 6土 0. 08 37. 7土 0. 08 + 2. 7h 37. 6 士 0. 11 37. 8土 0. 13 + 3h 38. 1土 0. 04 37. 7土 0. 06A + 3. 5h 38. 4 土 0. 08 37. 7土 0. 06A + 4. 5h 38. 8土 0. 08 38. 5土 0. 11令 + 5h 39. 0 土 0. 03 38. 7士 0. 11· + 6h 39. 1土 0. 03 38. 7土 0. 13令 + 7h 39. 1 土 0. 05 38. 9 土 0· 08 + 24h 37. 3 土 0. 10 37. 5 土 0. 12 本紙张尺度適州中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐）_ 471967 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝 A7 B7 五、發明説明（25)

學生"t"測試：♦=?<0_ 05 ;_=pS 0. 0 2 ； A = p < 0 . 001 實驗# 3 表1 0 ST6 2 6 a對於被啤酒酵母菌處理過之大鼠的 溫（°C)影響。數據係以平均值（6隻動物） 土 S E表示。 時間 對照組 S T 6 2 6 0 37. 07± 0 .14 37. 3土 0. 20 + lh 37. 4 土 0. 10 37. 6 士 0. 13 +1 · 5h 37. 8 土 0. 15 37. 6 土 0. 07 + 2. 5h 38. 1 土 0. 14 37. 6 土 0. 20 + 3. 5h 38. 4 土 0. 30 38. 0 土 0. 20 + 4. 5h 38. 7土 0. 17 37. 9 土 0. 13· + 5. 5h 38. 8土 0. 08 38. 2土 0. 18· + 6. 5h 38. 8土 0. 06 38. 5 土 0. 08參 + 7. 5h 38. 7土 0. 09 38. 5 土 0. 08 + 24h 37. 8土 0. 15 38. 1土 0. 10 + 314h 37. 3士 0. 09 37. 6土 0. 12 a=該物質係於致炎症物質注射後1與3. 5小時經 口服用，劑量爲2 0毫克/公斤。 學生"t"測試：#=pS〇. 〇1 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）_別_ ---------^^裝-----7--，訂-----ll^w (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 471967 A7 B7五、發明説明（26) 表10 (第二份） ST626 a對於被啤酒酵母菌處理 過之大鼠後足掌的水腫影響。數據係以平均值（6 隻動物）土SE表示。 處理後之足掌平均增加體積（毫升） 時間 對照組 S T 6 2 6 + 3. ! 5小 時 I. 73± 0. II I. 44 土 0 .04 • + 7. ! 5小 時 2. 05 ± 0. 12 I. 46 士 0 .20 • + 24 小 時 I. 90± 0. 08 I. 66 土 0 .I I + 32 小 時 1. 90 ± 0. 08 I. 66 土 0 .II a 該物質係於致炎症物質注射後I 與 3 C 5小 時經 口服用，劑量爲2 0毫克/公斤。 學生，t"測試：#=pS〇. 01 ; 0.02 P < ---------裝 L----Μ--* 訂----- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）_ 29 _

Claims (1)

1. 471967 Α8 Β8 C8 D8 、申請專利範圍 附件一：第8 5 1 02443號專利申請案 中文申請專利範圍修正本 々JV,;〆.丄二； "/rfT ±I 民國9 0年2月修正 1. 一種用於治療敗血性休克及具有抗發炎及退燒活 性之藥學組成物，包含式（I )之6，7 —經取代一 2 — 胺基某滿 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 更原實質内容 之 ; 受 基，接 •，氧I可 氟甲上 爲爲II學 X R 藥 中與其 其 Y R 或 劑 形 賦 之 受 接 可 上 學 藥 其 及 以 類 經濟部智慧財產局員工消費合作杜印製

   R, 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公爱） 471967 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍 6 _根據申請專利範圍第5項之紫杉烷類組成 物’其中該酸係無水檸檬酸。 7 ·根據申請專利範圍第1項之紫杉烷類組成 物’其中該紫杉烷類化合物係紫杉醇。 8 ·—種適於靜脈注射之醫藥用紫杉烷類組成 物，該紫杉烷類組成物係將紫杉烷類化合物儲存 於一具有較佳溶解度和較低毒性之儲存溶液 中’再以一適於靜脈注射之稀釋劑稀釋而成，其 中該儲存溶液包括·· U)聚氧乙烯山梨醇之脂肪酸單酯； (b)聚乙氧基化之篦麻油••以及 (Ο乙醇； 在此溶液中，單酯和聚乙氧基化之箆麻油共 存，其量足以有效降低紫杉院類組成物之毒性， 且該儲存溶液之pH値以在約1〜8之間爲佳。 9 ·根據申請專利範圍第8項之紫杉烷類組成 物，其中該聚氧乙烯山梨醇之脂肪酸單酯係聚氧 乙烯（2 0)山梨醇單油酸酯。 經濟部中央榡隼局員工消費合作社印裝 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 10 ·根據申請專利範圍第9項之紫杉烷類組成 物，其中該儲存溶液更包括低分子量之聚乙烯乙 二醇。 1 1 ·根據申請專利範圍第1 〇項之紫杉烷類組 成物，包含4毫克/毫升至8毫克/毫升之紫杉烷 類化合物、1 2〇至30 % (V/V)聚乙氧基化篦麻油、5 1 2 i紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 471967 A8 B8 C8 D8 _ 六、申請專利範圍 至15%(ν/ν)聚氧乙烯（2〇)山梨醇單油酸酯、15至 3〇%(v/v)乙醇和4〇至6〇%(v/v)之低分子量聚乙烯 乙二醇。 1 2 _根據申請專利範圍第8項之紫杉烷類組成 物，其中該儲存溶液更包括一種醫藥上可接受之 酸，而使其中的pH値保持在大約4到6之間。 13·根據申請專利範圍第12項之紫杉烷類組 成物’其中該醫藥上可接受之酸係無水檸檬酸。 14·根據申請專利範圍第8項之紫杉烷類組成 物，其中該稀釋劑係生理食鹽水。 1 5 ·根據申請專利範圍第8項之紫杉烷類組成 物’其中該紫杉烷類化合物係紫杉醇。 (請先閲讀背面之注意事'項再填寫本頁) 訂 經濟部中央標準局負工消費合作社印裂 3 本紙張尺度適用中國國家標隼（CNS ) Μ規格（210X297公釐）