TW450978B

TW450978B - Cyclopeptolides

Info

Publication number: TW450978B
Application number: TW085114246A
Authority: TW
Inventors: Michael Morris Dreyfuss; Theodor Fehr; Carolyn Ann Foster; Dieter Geyl; Berndt Oberhauser
Original assignee: Novartis Ag
Priority date: 1995-11-21
Filing date: 1996-11-20
Publication date: 2001-08-21
Also published as: MY115877A; SK65698A3; HUP9903810A2; CA2237157C; WO1997019104A1; AU712900B2; IL124310A0; PL186010B1; CN1202904A; JP2000502992A; CA2237157A1; BR9611619B1; PL326755A1; KR19990071533A; MX9804048A; DE69628323D1; AR012286A1; EP0866801A1; ES2200079T3; HUP9903810A3

Description

45 097 8 — A7 B7 — 五、發明説明（1 ) ~~~ 本發明係有關環多肽類和涉及它們用作黏附分子表達抑制劑的治療用途》細胞黏附分子諸如ICAM-l，VCAM-1和E_se〖ectin係在内皮細胞的表面’以及ICAM-1角質化細胞上被表達，以對包含 TNFcc，IFNy，IL1和LPS的發炎症介質源產生反應。對應的配位體諸如LFA-1，VLA-4和SLE在循環血液細胞的表面上被表達。由於這些黏附分子和它們的配位體之間的相互作用的結果，在發炎症過粗中白企球透過内皮的遷移以及脈管外細胞-細胞的相互作用被調節。因此，黏附分子表達的抑制劑提供了治療許多疾病的能力。環多肽類是一種環狀分子，其包含藉由肽鍵連接在一起的胺基酸殘基並且至少有一個經基取代的叛酸基殘基，該羧酸基利用其經基取代基通過一種酷鍵與相鄰的酸殘基相連。我們的待審查專利申請〔已公開的國際專利申請第WO 96/03430號〕揭示了一種新穎的環七肽類，它們是ICAM-1， VCAM-1和E-selectin表達的抑制劑。現在我們進一步發現了相同的總化合物類型的新穎環七肽類，包括具有特別令人滿意性質的化合物= 本發明提供了如式I所示之環七肽類 p-A-B-R^eu-Leu-C-X-Y 一 1 其中： A為一種乙醇酸殘基’任選地被Η，甲基，乙基’丙基或乙烯基α-取代，任選地被鹵素，烷氡基取代，任選地經保護 4 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） ---------、-»--- (諳先聞讀背面1之注意•事項再填寫本頁) 、ST' 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 ^ 4 5 097 8 A7 B7 五、發明説明（2 ) 的羥基或胺基，CSNH2，coor2，乙烯基，-OCH或噻唑取代，其中R2為Η或低級烷基，任選地由烷基，齒素，環烷基，任選地被取代的噻唑， COOR2 或-C = CH 取代，其中R2的定義如上所述； B 為一種α-胺基-γ-甲基-取代的辛酸義基； R:為氫或甲基； c 為一種色胺酸'或式II所示之Ν-曱基-色胺酸殘基 C0— (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝-

訂經濟部智慧財產局員工消費合作社印製其中：R3代表氫，烷氧基，烷基或笮基，r4代表氫或鹵素，1^5代表氫或甲基和-…代表單鍵或雙鐽； X 為一種CX-胺基·取代的（C2至C14)羧酸殘基，和 Y 為一種<x -胺基-或N -甲基-α-胺基取代的〔€2至C10)幾酸殘基β 在式I中，胺基酸殘基的Ν-末端至C-末端方向的定向是順時鐘方向進行的，而多肽類酯鍵係位於殘基Α和Υ之間，當Ri是甲基時，殘基R:-Leu和Leu分別相應為N-甲基-亮胺酸和亮胺酸殘基。較佳地，A為一種乙醇酸殘基，其係被η，甲基，乙基 5 本紙張尺度適用t國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） 90. U U 年月a 補充 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消费合作社印製 45 09 7 8 3 ------ -五、發明說明（）或丙基(X-取代，任選地被胺基，羥基，氯基，烷氧基取代，任選地經取代的鳴吐，任選地經取代.的乙稀基，環丙基， CSNH2 或-CsCH 取代。較佳地，c為一種式II的N-甲基色胺酸殘基，其t R3 代表氫，（q至c4〕烷氧基（特別是甲氧基）或烷基而r4代表氫或鹵素。較佳地，X為一種α_胺基-取代的（c4至c8)羧酸殘基，該殘基任選地是β-或c4)烷基取代的，最佳地，X為一種α·胺基-β-或^-(Ci至c4)烷基-，特別是甲基-，取代的辛酸或丁酸殘基。較佳地，Y為一種N-甲基-α-胺基-取代的（C2iC4)羧酸殘基’該殘基任選地是β-或烷基-取代的。最佳地，γ 為一種Ν-甲基-丙氨酸或Ν-甲基-纈氨酸殘基》本發明包括對應於式I化合物的開鏈肽類或多肽類，例如，由殘基Υ和Α之間的酯鍵裂解或任何其它相鄰的一對酸殘基之間醯胺鍵的裂解獲得的開鏈分子。較佳的開鏈衍生物是式_ IV和V所示之化合物 H-C-X-Y-A-B-R, Leu-Leu.OR7 IV 和其中r7代表氫或烷基，例如q至q低級烷基e 依照本發明的一個具體實施方案的較佳化合物是式ipm 示之化合物 6 本紙張尺度適用辛國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐〉 (請先朗讀背面之注s'事項再填寫本頁) .衣·!—訂!丨丨！ 450978 A7 B7 五、發明説明（經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

_A -Bp-RipLeu-Leu-Cp-Xp-Y 其中：

Ap為一種乙醇酸殘基，任選地被Η，乙基或甲基α_取代； Βρ為一種(X-胺基I·甲基-取代的辛酸殘基；

Rlp為氫或甲基；

Cp為一種色胺酸或1^甲基.色胺酸殘基，其任選地是 H1 至C4)烷氧基取代的；

Xp為一種〇t-胺基-取代的（Cs至Cl·*)欺酸殘基，和 Yp為一種α-胺基-或N-甲基—α·胺基-取代的（<^至C1Q〕羧酸殘基。依照本發明另一個具體實施方案較佳的化合物是式Ip'所示之化合物「Ap，-Bp-RiPLeu-Leu-Cp-Xp-Yp — Ip，其中Bp’ Rip，Cp’ XP和Yp的定義如上所述，並且a〆為一種a-羥基-取代的丁酸殘基，該殘基是被式VI所示之基團γ取代的〇

其中R2代表低級烷基，諸如Ci至c4低級烷基。最佳的R>2是曱基或乙基。本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X2.97公釐） -------1(-裝------訂 f請先閲讀背面之注意事項再填窝本頁} A7 B7 5 450978 五、發明説明（依照本發明的又一個具體實施方案較佳的化合物是式所示之化合物

Apw-Bp-RlpLeu-Leu-Cp-Xp-Yr

V ip，Cp’ Xp和Yp的定義如上所述，並且為一種是α-羥基-取代的丁酸殘基，該殘基是被式VII所示之基團γ取代的

S Ν

VII (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製其中I代表氣，低級烷基或苯基或與位置5的噻唑環一起形成碳環。式I ’ IV ’ V，Ip，Ip’和ϊρ”的化合物在下文被稱之為“本發明的化合物，，，該術語也包括當以鹽或酯的形式以及游離形式存在時的本發明所有的化合物。本發明的化合物包含不對稱的原子，因此可以多種差向立體異構體形式存在。所有可能的差向立體異構體以及其# 對映立體異構混合物都被包括在本發明的範圍内。其有抑制黏附分子表達活性的差向立體異構物是較佳的。通常’依照本發明’諸如對於藥物用途而言，具有抑制黏附分子表遠’奪性以質純的或基本上是質純的形式存在的差向立體異換魏 C即無或基本上不具抑制黏附分子表達活性的差向立雜異構體）’諸如包含至少9 0 %，例如至少9 5 %的活性差向異構#(即本紙張尺度適用中國國家標準（CNS > Α4規格（210X297公釐） 4 5 097 8 A7 B7 五、發明説明（6 ) 包含低於10%，諸如低於5%非活性差向立體異構體）是較佳的。最佳的本發明的化合物具有如下列式VII所示之特佳的化合物相同的環多肽類環立體化學構形。本發明特別較佳的化合物是式VIII，IX和X的化合物 ------.1、參---I--訂广.. (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

本紙張尺度適用中國國家標準（CMS ) A4规格（21〇><29<7公釐） 450978 A7 B7 五、發明説明（7 )

式VIII的化合物已經從真菌菌株F/94-499709的培養物中分離出來’依據布連佩斯（Budapest)條約的規定，該樣品於1995 年9月18日寄存在DSM-Deutsche的微生物和細胞培養的保藏室中，指定的寄存號碼為DSM 10275。係於下文所示之實施例1揭示了該真菌菌株F/94-499709的特徵。式νπι化人物是本發明的特定化合物。菌株F/94-499709的樣品也可以從山德士藥廠（s〇nd〇z Ltd) ’ CH-4002 Basel Switzerland 處獲得。本發明包括以分離形式和其突變體和其衍生物形式存在的菌株F/94-499709CDSM 10275)以及由該菌株所製備的新穎之環多肽類° 式VIII化合物和有關的化合物可藉由在營養介質中於養 F/94-4997〇9(DSM 10275)或其突變體或其衍生物或類似的真菌物種並從中回收該化合物而獲得的，例如如實施例2中所揭示者〇實施例3中賦予了式VIII的化合物的特徵。依照本發明，化合物可以藉由式XI或XII〔如下文所揭示 10 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 45 09 7 8 A7 B7 五、發明説明（8 ) 者）所示或VIII的化合物之衍生作用來製備而成，該方法包括： a) -製備式I的化合物，其中A是被C00R2取代，將對應的式I的化合物，其中A是被C N取代，與親核試劑，較佳為乙醇，與合適的鹼性或酸性催化劑，較佳為鹽酸，在有機溶劑，較佳為乙醚中反應，或 b) -製備式I的化合物，其中A是烷氧基曱基取代的，將對應的式I化合物，其中A是被-CH2-〇H取代，與烷基化化合物，諸如烷基滷化物或重氮基化合物，在有或無催化劑的條件下進行反應，或 C)-製備式I的化合物，其中A是被CO'OR2取代，藉由標準方法，較佳地係藉由用例如亞硫醯氣將對應的式I化合物，其中A是被COOH取代，轉化成氣化醯並在一種酸結合劑的存在或不存在下用一種合適的醇進行處理，從而進行酯化，或 d〕-製備式I的化合物，其令A是被CH2〇H取代，將對應的式I化合物，其中A是被COOR2取代，與金屬氫化物或硼氫化物，較佳為曱硼统二甲基硫化物複合物，在有機溶劑内進行還原反應，或 e) -製備式I的化合物，其中A是被任選地經取代的乙烯基取代，將對應的式I化合物，其中A是被CHO取代，與一種維蒂希（Wittig)試劑進行反應，或 f) -製備式I的化合物，其中A是被CH2NH2取代，還原對應的式I化合物，其中A是被CH2N3取代，或 __ 11 _ _ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） (請先鬩讀背面之注意事項再填寫本買) 袈- 訂經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 450978 五、發明説明（9 ) g) _製備式I的化合物，其中A被C = CH取代，將對應的式I化合物脱氧化，其中A是被CH=^CBr2取代，或 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) h) -製備式I的化合物，其中A是被環丙基取代，將對應的式I化合物，其中A是被乙烯基取代，與重氮甲烷反應，或 i) -製備式I的化合物，其中A是被CSNH2取代，諸如藉由回流硫化合物和其中A被CN取代之式I化合物的溶液，使對應的式I化合物，其中A被CN取代，與硫的衍生物，較佳係與二苯基膦基二硫羧酸反應，或 j) -製備較佳的式1/的化合物厂 Ap"-Bp-RlpLeu-Leu-Cp-Xp-Yp —1 1/ 其中取代基的定義如上所述，將式Ip"的化合物，其中Ap"代表一種Ot-羥基-取代的丁酸殘基，該殘基是被-CS-NH2y-取代，與式XIII的一種CC-鹵代羰基化合物反應

Hal-CH2-CO-R6 ΧΠΙ 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製其中R6的定義如上所述，Hal代表鹵素，或與式XIII的乙縮醒化合物反應 C該反應可按照已知的方法進行，諸如將式π化合物在惰性溶劑中的溶液，在反應條件下，諸如在二甲基曱醯胺或咄啶中，於高溫下，較佳在60至100 °C下進行反應，最終產物可藉由傳統技術分離和純化），或 k〕-製備較佳的式1/化合物 _ 12 _ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4规格（2!0X297公釐）經濟部智慧財產局員工消費合作杜印製 45 097 8 at _ B7 五、發明説明（1D) —Ap’-Bp-RlpLeu-Leu-Cp-Xp-Yp —~ lp' 其中取代基的定義如上所述，將式Ip，的化合物，其中Ap，代表一種α-羥基-取代的丁酸殘基，該殘基被_CH〇 γ_取代，與烷氧基羰基亞甲基三苯基正膦反應並分離出式％,化合物，或 l) -製備式I的化合物，其中R3代表氫，從式！化合物中移除去甲氧基，其中r3代表〇CH3，或 m) -製備式I的化合物，其中符號二二代表單鍵，將式I 的化合物，其中符號二二代表雙鍵’進行還原反應，或 η) ·製備式I的化合物，其中1代表烷基或笮基，將這些基團引入到式I化合物中，其中r3代表氫，或〇)-製備式I化合物，其中r4代表鹵素，鹵化式I的化合物，其中R4代表氫，或 P)-製備式I的化合物，其中r3代表烷氧基，而符敏…· 代表雙鍵’將式I的化合物，其中r3代表氫而符號…代表單鍵’與一種鹼性鎢酸鹽和過氧化氫反應並且烷基化N_羥基_ 吲哚-中間產物，且假使必要時分離出式I的化合物。在較佳的上述a)至υ的具體實施方案中，式I化合物是其中的A為一種α-羥基丁酸殘基的化合物，所述殘基是被 COOR2，CN，烷氧基甲基，Ch2_0h，c〇〇H，任選地經取代的乙烯基，CH0，CH2NH2，CH2N3，CSCH , CH = CBr2，環丙基或乙稀基γ-取代的β 用來製備式I化合物中間產物可依照如下所之方法製 —- _ 13 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） ^il^i ^^^^1 ^^^^1 ^^^^1 mf mu (請先閱讀背面之注項再填寫本頁) 45 09 7 8 a7 B7 ------------— --------- 五、發明説明（11 ) 備： ⑴ 製備其中的A被-CHO取代的中間體’氧化其中A 被-CH2〇H取代的對應的式I化合物，和

Ci〇製備其中的A被-COOH取代的中間體’用無機酸諸如HC1的醇水溶液或用鹼水解其中的a被COO烷基取代的對應的式I化合物。製備式I化合物的中間體，其中Α被-CN取代，包栝天然的化合物《例如式XI和χΠ所示之化合物 (婧先閲讀背面之注意事項再填寫本象· ir 絰濟部智慧財產局員工消費合作社印製

是從真菌菌株F92-4471/08的培養物中分離而獲得的’依據

14 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ2.97公釐） 45 097 8 A7 B7 r 一 .....丨 * 五、發明説明（12) 布達佩斯條約的規定，該菌株培養物於1993年7月2日寄存在美國農業部門NRRL培養物收藏處’指定的寄存號碼為 NRRL 21123。國際專利申請第WO 96/03430號中詳細地揭示該真菌菌株F92-4471/08的特徵和化合物XI和XII的分離。本發明的化合物亦可藉由化學合成方法來製備，例如，採用傳統的肽合成技術。通常在製備化合物的最後步驟是環化步驟，其中直鏈肽或多肽包含的酸殘基A，B，RJeu, Leu，C， X和Y係以合適尚順序連接在一起，並藉由酿胺鍵或酯鍵形成反應而被環化。本發明包括製備式I環多肽類的方法，包括環化直鏈肽或多肽類，其具有的酸殘基A，B，RiLeu，Leu，c，X和Υ係以合適的順序被連接在一起。本發明的化合物顯示具有藥理學活性，因此可被使用為藥物。本發明的化合物特別是細胞黏附分子刺激表達的抑制劑，特別是VCAM-1相對於E_seiectin和表達的抑制劑。本發明的化合物特別也是TNF釋放的抑制劑，例如TNFa 釋放的抑制劑。在實施例之後所揭示的一些試驗，這些試驗被用於檢測藉由使用本發明的化合物對表達的抑制和對TNFa釋放的抑制。因此鑒於作為細胞黏附分子表達抑制劑的活性，該等化合物對於治療或預防涉及細胞黏附分子表達的疾病過程是有作用的。這些疾病過程包括許多後天的和遺傳疾病/棄礼， &張尺Μ财_家辟（CNS ) ) '~----- (請先閲讀背面之注115^項再填寫本頁) 裝_ 訂經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 450978 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 16 五、發明説明（I3 ) 在這些疾病中，白血球激活作用和交換在引發疾病過程中有著重要的作用’最顯著的是急性和慢性發炎症（例如過敏，哮喘’皮膚炎，牛皮癬，灌液操作損傷（reperfmi〇n间虹”和敗血症休克），自體免疫狀態（諸如糖尿病，多發性硬化症和類風濕性關節炎）和間接免疫的神經變性（諸如後天的免疫力缺乏症）。本發明化合物的其它適應症包括腫瘤轉移（例如黑腫瘤，骨癌）和同種異體移植/異種移植的排斥，因為眾所周知，血管黏附分子的抑制能很大程度地改善這些過程的預測。當將本發明·的化合物在基於角質化細胞以及其它增生的試驗中測試72小時，試驗表明由於它們在微莫耳濃度下的抑制活性’本發明化合物具有治療高增生的皮膚病（諸如牛皮癬）以及各種惡性疾病。本發明的化合物在藉由P 24 ELISA測定時，在單環細胞系中抑制TNFa/IL_6_誘導的HIV產生中是具有活性的，因此，它們可用於治療免疫力缺之和病毒引發的疾病，尤其是治療愛滋病（aids)。此外，依據本發明化合物作為TNF釋放抑制劑的活性，本發明化合物可以用來預防或治療由TNF，特別是循a所引發的疾病或病理學症狀，例如發炎症，自體免疫疾病，嚴重的傳本冑，和器官或組織移植排彳，包括同種異體移植和異種移植排斥，諸如治療受體的心臟，肺臟，心肺臟合併，肝臟，腎冑，胰臟，皮膚或眼角膜移植和用來預防以也 versus-host疾病，如隨後的骨髓移植。本發明的化合物特別適用於治療，預防或改善自體免疫㈣張尺度適财關A4^ ( 210X297^7 i^i^i lwv 1 i PI —^n YJ f 势 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 4 5 0 9 7 8 A7 __ B7 五、發明説明（Μ) 疾病或發炎症狀，特別是涉及病原學的發炎症狀，包括自體免疫部分’諸如關節炎〔例如風濕性關節炎，慢性progrediente 關節炎和變形性關節炎）和風濕性疾病。可使用本發明化合物的具體自體免疫疾病包括自體免疫血液病（諸如溶血性貧企’發月不良貧血’純紅細胞貧血，自發血小板減少症），全身性紅斑狼瘡，多軟骨炎，硬皮病，韋格納肉芽腫病，皮肌炎’慢性活性肝炎，重症肌無力，斯約二氏症候群，自發的口炎性腹；寫’自體免疫炎性腸疾病（例如，潰癌性結腸炎和克羅思氏病）’内分泌眼病，格雷夫斯氏病，肉樣瘤病，多發性硬化症’原發性膽汁性肝硬變，青少年糖尿病（青少年I型糖麻病）’眼色素層炎C前眼色素層炎和後眼色素層炎），乾性角媒結膜炎和春發型角膜結膜炎，間質性肺纖維變性，牛皮癬性關節炎和腎小球性腎炎（具有或沒有腎病變综合病，例如，自發的腎病症候群或最小變化的腎病）。本發明的化合物亦可用來治療，預防或改善哮喘，支氣管炎、肺塵埃沉著病，肺氣腫、和其它阻塞性或呼吸道的發炎症》本發明的化合物被用來治療不希望由TNF，特別是TNFa 所引發的急性和超急性發炎症反應，諸如急性傳染病’例如敗血症休克（諸如内毒素休克和成人呼吸不適症候群〕，腦膜炎’肺炎；和嚴重燒傷；並用於治療病態的TNF釋放有關的感染之後的惡病質或虛損症候群，癌症，或器官功能不良，尤其是與愛滋病（AIDS)釋放有關的惡病質，諸如與HIV感染有關或HIV感染之後的惡病質。 ______：_ 17 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS〉Α4規格（210'χ^公釐） --- -----.----'裝-- (請先間讀背面之注意事項再填寫本頁) -訂經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 450978 A7 五、發明説明（15 本發明還包括本發明斗人^ +赞明化合物的治療用途，和化合物的治療組合物。有本發月本發明特別包括有關叙法，$方法白鉍，刀子表達疾病的治療或預防方法及方法包括將一種治療崚褚欣古从总t 1 -’次預防有效量的本發明的化合物給予所需要的對象。乃幻化0物本發明亦包括含右.Ά .兹士 ~療有效量的本發明化合物的治療組合物。此外纟發明包括在治療或預防涉及黏附分子表達的疾病中用於製備成·藥物的本發明化合物的用途。本發明還進一步提供了-系列具體實施方案： Α.-種抑制可溶解的TNF，尤其是丁驗的產生，或減輕需這種治療的對象（即哺乳類動物，特別是人類）的發炎症的方法。該方法包括向所述之對象給予—種有效量的本發明化合物，或者一種治療任何上述症狀的方法，尤其是治療發 f症或自鱧免疫疾病或症狀，諸如多發性硬化症或風濕性關節炎，或減輕上述任何一種或以上症狀的方法。 B. 供使用作為藥物的本發明化合物，諸如使用在預防或治療由TNF所引發的疾病或病理學症狀，諸如一種免疫抑制劑或抗發炎劑的本發明化合物；或用於預防、改善或治療任何如上所揭示之疾病或症狀，諸如自體免疫或發炎症之疾病或症狀。 C. 含有本發明化合物以及連同在藥學所接受的稀釋劑或載體的藥物組合物，諸如用於預防或治療由TNF所引發的疾病或病理學症狀的藥物組合物，諸如作為免疫抑制劑或抗發 18 本紙張尺度適用中國國家祿率（CNS ) a4規格（：2iOX297公釐）請先閲讀背 1¾ 意事項再頁訂經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 450978 五、發明説明（16) 炎劑；或㈣預I改善或治療任何或如上所揭示之疾病或症狀’諸如自體免疫或發炎症疾病或症狀的藥物組合物。 D·本發明的化合物在製造用於預防或治療由所引發的疾病或病理學症狀之藥物用途，諸如作為一種免疫抑制劑或抗發炎射的用途；或在製造料㈣、改善或治療任何如上所揭示之疾病或症狀，諸如自體免疫或發炎症疾病的藥物的用途。該等組合物可以腸胃.外，口服，氣溶膠，吸入或局部形式給藥，其通常’含有一種或以上之藥學可接受的載體稀釋劑或賦形劑’並且可包含添加劑諸如穩定劑等。所使用的化合物的劑量可依據症狀或疾病的種類，是用於治療還是用於預防以及給藥方式和途徑而具有不同的變化。通常，在口服劑量為約〇.〇5至約1〇毫克/公斤/天，較佳為約0.1至約7.5毫克/公斤/天，更佳為約〇1至約2毫克/ 公斤/天給藥一次，或以分開的劑量每天給藥24次，可獲得令人滿意的結果，也可採用例如藉由靜脈滴注或注射形式腸胃外給藥，使用劑量為約〇.〇1至約5毫克/公斤/天，較^為約0·05至約1毫克/公斤/天，而更佳為約〇1至約ι 〇毫克/ 公斤/天。因此，對於人類病患來說，合適的每日劑量為約2,5至約5 00毫克/ 口服，較佳為約5至約25〇毫克/ 口服更佳為約5至約100毫克/口服；或為約〇 5至約25〇毫杳七凡/野脈注射，較佳為約2.5至約125毫克/靜脈注射，更佳為約2 $ 約50毫克/靜脈注射。 19 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（2丨0Χ297公釐） (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁} -訂經濟部智慧財產局員工消費合作社印製至

45 097 B A7 B7 五、發明説明（17) 該等化合物可以藉由任何合適的途徑給藥，包内，腸胃道外和局部或藉由吸人。合適的腸内給藥形式用的溶液，片或膠囊。合適的腸胃外給藥形式是注〜或懸浮液。合適的局部給藥形式包括乳膏、外用藥水等，：製劑的濃度範圍為0·01至10%，較佳為〇 :至〔重量）。: 於口服給藥之合適的單位劑量可包含丄至別毫克的化合物對通常為1至10毫克。 ’ 涉及附圖的下列實施例僅僅是為了進—步描述本發明其中： · ’ 圖1顯示式VIII化合物的UV光譜；圖2顯示式VIII化合物的ir光错；圖3顯示式VIII化合物的FD-Mass光譜；圖4顯示式VIII化合物的FD_Mass光譜〔加入了 LiI)和圖5顯示式VIII化合物在CDCI3中的質子NMR光講。實施例實施例ΐ:菌株F/94-499709 (DSM 102751的絲擻下面的介質被用來表徵菌株F/94-499709，其中所給予的介質組成物是在去離子水中按重量/體積計的，熱殺菌是在 121 °C下進行20分鐘。 MEA: 2%麥芽萃取汁，〇.4〇/〇酵母萃取物，2%¾月旨。當將菌株F/94-499709在培養皿中的MEA中點接種並在黑暗處培育時，該菌株具有下列之特徵：最理想的生長溫度為24和30 ΐ：。培育14天後的菌落達 20 本紙張尺度適用中國國家標率（CNS ) A4規格（2丨0 X 297公釐）

I ---------! (請先閎讀背面之注$項再填寫本頁J 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 45 097 8 a? _B7__ 五、發明説明（18 ) 到直徑在24 °C為25至32mm，在27 °C為30至37mm而在 33 °C為7至15mm。在超過37 °C以上和低於13。〇以下，菌株F/94-499709沒有顯示任何的生長。在黑暗處27 °C，菌落的生長一般從奶油色逐漸變成淡黃色，並從相當平保持到稍微升高，在中心部分發育有少量受限制的稍帶白色至淡灰色之氣生的菌絲體。散射狀溝變得明顯，當從底部觀察時，暗灰色同心區域佔有優勢。在老化培養時，在菌落的中心部分之氣生的菌絲體和基質菌絲體變成暗灰色，而菌落邊緣保持了奶油色至淡黃色。在顯微鏡檢測中，沒有觀察到孢子形成結構，由此可將 F/94-499709 推測為一種 mycelium sterilum。實施例2:菌株F/94-499709的發醢下面的介質和過程適用於藉由菌株F/94-499 709的發酵製備式VIII化合物的方法。如果沒有另外說明，所有的介質組成物是在去離子水中按重量/體積計的，熱殺菌是在121 °C 下進行20分鐘。 PCM〔預培養物和中間培養介質）：2%麥芽萃取汁，0.4% 酵母萃取物，0.1%瓊脂。 PRM(製備介質）：2%可溶性澱粉，〇,5%酵母萃取物， 2%葡萄糖，2%玉米漿，〇.5%鰊，〇_2%碳酸鈣。預培養物是藉由解凍2毫升菌株f/94-499709的液氮菌種懸浮液，將它們接種到一裝有2〇〇毫升PCM的500毫升錐形瓶（Erlenmeyerflask)中，並在24。〇下在200RPM的旋轉搖動 _—_______ 21 本纸張尺度適用中國國家榇準（CNS ) A4規格（2ΐ〇χ^^--- <^ϋ- n^i' --^ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 450978

五、發明説明（l9 器中培育7天而製備的。裟備起始的中間培養物，14個各裝有200毫升PCM 的500毫升錐形瓶各用5毫升預培養物接種。第—中間培養物的製備是藉由分別用1.4升起始的中間 "接種兩個50升含卩⑽的發酵罐製傷。發酵是在下列條行6天_24C，1升空氣/分鐘/升介質，在i5〇RpM旋轉的葉片授拌器授拌和〇_5巴的壓力下1 了製備式獲化合物和相關的化合物’们3升第二中間培養物接種到三個裝有刪的5〇〇升發酵罐的每—個罐t，發酵是在下列條件下進行的.21C，1升空氣/分鐘/升介質，首先在1〇〇RpM旋轉的葉片攪拌器攪拌，並逐漸增加到15〇RpM的旋轉的葉片攪拌器搜拌和0.5巴壓力下。在9〇小時後回收所需的式·化合物和相關的化合物，收集並合併了 1 5〇〇升的發酵產品^ i施例3:從菌株F/94-499709中分齙式.VIII的多肽將1500升發酵的肉湯與ι7〇〇升的乙酸乙酯一起在 Dispax反應器中均質化並劇烈攪拌3小時。用westfalia分離器分離有機相。重複進行萃取步騍，在減壓下蒸發有機相，獲得2745克萃取物。萃取物藉由用4〇升甲醇/水混合物（9:1) 和40升環己烷三步萃取以進行脫脂。甲醇餾分被合併，在減壓下蒸發至乾燥，獲得960克經脫脂的萃取物。將該萃取物在甲醇溶液中的15公斤Sephadex LH20的管柱中進行色層分析，總共獲得135克含式VIII類多肽的餾分。用135克餾分浸潰在300克矽膠，然後將經浸潰的矽膠在1 _5公斤Silicagei 22 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2I0X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂_ 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 45 097 8 五、發明説明（20)

MercMO.04至0.063mm)的管柱由頂部加入，並用！升甲基_ 叔丁醚/環己烷 1:9, 2:8, 3:7, 4:6, 5:5, 6:4, 7:3, 8:2, 9:iA 3升的MTBE和3升的MTBE/甲醇95:5洗脫進行色層分析。收集1升餾分並藉由HPLC和TLC進行分析。合併餾分8 和9並蒸發至乾燥。從乙醚中進行結晶，獲得2 i 9克質純的式νπι的多肽類。進一步純化母液並將餾分1〇_13在矽膠H Merck(750克）上按如上所揭示之類似的方式進行色層分析’進一步獲得一批量結晶的式VIII環多肽。發現多肽當從乙喊中純化時真有的炫點（mp)為143-146 °C，而旋光度 [a]D20 = -233.9o(C = 0_908 ’ 甲醇）。式 VIII 的多肽當在 VCAM-1 細胞EUSA中測定時具有的IC50為約2nM。分子式：C51H83N709(938.3) 279(5.08) > 220 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 在曱醇中的UV光譜：λ最大Cs'〕=290(5.4) (38.1), 197(55.7) » 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製請參見圖1 IR(KBr)光譜示於圖2 MS FAB光譜示於圖3 MS FAB光譜（具有Lil〕示於圖4 在CDC13中的質子NMR光譜示於圖5 MTBE =甲基叔丁醚 VCAM =血管黏附分子實施例4:式VIII化合物的N脫甲氣某衍生物的合成將4.9毫克式VIII化合物溶解在3毫升曱醇中，加入8 23 本紙張尺度適用中國國家標率（CNS ) Α4規格（210X297公楚） A7 B7 450978 五、發明説明（21 ) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 毫克在炭（10 %)上的纪。使混合物在一種氫氣氣氛下授拌2 小時，用氬氣沖洗，過遽並蒸發，獲得一種無色泡珠的標題化合物。將該化合物進行薄層色層分析和NMR光譜分析，獲得的結果如下： TLC:矽膠，甲苯/甲醇9/1，Rf=0.28 ^-NMR ¢3種同分異構物56:37:7，用^標記，給予的特徵信號)：8.72* (d， J=10Hz, NH); 8.08^ (s, br, "51# NH); 6.97*, 6.90° (2d, J=2Hz, H-2); 6.34° (d, J=9.5Hz, NH〕； 6,00* (d，J=6.5Hz, NH); 5.83’（d, NH); 5.32° (ddd， PrLeu ot-H); 5.12。，5.08* (2q，J=7Hz，乳酸 Me); 4.50* (dd, MeLeu a-H); 4·10* (ddd，Leu ot-H); 3.42 (q，J=7Hz，MeAla ot-H); 3.43。，3.19。，3.12*，2.53' 2.35。C6s，NMe); 1.54*，1.50。（2d, J=7Hz, MeAla ot-H); 1.38°，1.24*〔2d， J=7Hz,乳酸 a-H〕； 0.57*，-0.01* (2d，J=6.5Hz, Me); -0_19* (ddd，Leu β-Η〕。實施例5 :式VIII化合物的Nl'-曱基衍生物的合成經濟部智慧財產局員工消費合作社印製將5毫克實施例4的產物在0.5毫升乾燥的DMF中的溶液與100毫升碘化曱烷混合，加入3毫克雙C三曱基甲矽烷基）醯胺鈉的0.3毫升DMF溶液。在將反應混合物在室溫下攪拌 1.5小時以後，將混合物倒入0.1M HC1水溶液中，用乙酸乙酯萃取，並將它們分配在乙酸乙酯和飽和的碳酸氫鹽水溶液之間。用鹽水沖洗有機相，並在硫酸鈉之上乾燥並在真空中蒸發。該粗產物在矽膠上進行色層分析C洗脫液：梯度甲苯/甲醇=100/0.25至100/2.5)純化，獲得一種無色泡沫的標題化合物。將該化合物進行薄層色層分析及NMR光譜分析，獲得的結果如下： TLC:矽膠，曱苯/甲醇9/1，Rf=〇.4〇。 iH-NMR ¢2種同分異構物60:40，用—標記，給予的特徵信號）：8.72* (d, J=10Hz，NH); 6.79*，6·74。（2s，吲哚 H-2); 6.35。（d，J=9.5Hz, NH); 5·98* (d， J=6.5Hz，NH); 5.32° (ddd，PrLeu a-H); 5.12°，5.08* (2q，J=7Hz，乳酸 Me〕; 4.50 (dd，MeLeu a-H); 4.06* (ddd，Leu a-H); 3.73 (s，吲哚 NME); 3.44。， __24_ 本紙張尺度適用中國國家標準（CMS ) A4規格（210 X 297公釐）經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 45097 8 __B7_ 五、發明説明（22 ) 3.19°, 3.15*, 2.53*, 2.35° (6s, NMe); 1.55*, 1.51° (2d, J=7Hz, MeAla α-H); 1.39。，1.24* (2d, J=7Hz,乳酸 ct-H); 0·57*，-0·09* (2d, J=6.5Hz, Me); -0.32* 實施例6: 5-[8tll-二異丁基-14-(1-甲氧基-1H-吲哚-3-基曱基）-7,13,19,20-四甲基-5,17-雙-C2-甲基，己基）-3,6,9,12,15, 18,21-七氧代-1-氣雜-4,7，10，13,16,19-六氮雜-環二十一 -2-基戊-2-烯酸甲酯將185毫克式XV(如下文所示）的化合物和1.26克甲氧基羰基亞甲基三苯基正膦在甲苯中的溶液於室溫下攪拌1小時。然後在真空中蒸發掉溶劑，殘留物在LH-20凝膠過濾管柱内在甲醇中進行色層分析，含餾分的產物在真空中蒸發，並進一步在矽膠上進行色層分析（洗脫液：梯度甲苯/甲醇 = 99.5/0.5至96/4)純化，獲得一種無色泡沫的標題產物。將產物從苯中凍乾。 iH-NMRCCDCh，特徵信號，3種同分異構物53:41:6，用標記)：8.67*(d， J=10Hz, NH); 7.87* Cd, J=10Hz, NH); 7.80° (d, J=10Hz, NH); 7.69° Cd, J=10Hz, NH); 7.45-7.35 C4d, MeMeOTrp Β-Ψ, H-7〇; 7.23*, 7.22° (2m, MeMeOTrp H-6'); 7.4 (2m, MeMeOTrp H-5’〕； 7.06*，7.00。（2s， MeMeOTrp H-2〇; 6.88° (ddd, J=15Hz, J=7Hz, -CH=); 6.76* (ddd, J=15Hz, J=7Hz，-CH=); 6.24。（d, J=10Hz, Leu NH); 6.04* (d，J=6Hz，Leu NH); 5.82。， 5.78* C2d, J=15Hz, =CH-CO); 5,29° (ddd, MeAla α-H); 5.07-4.98 (m, a-H); 4.92 (dd, MeMeOtrp a-H); 4-86* (ddd, CgAA a-H); 4.78* (dd, Leu a-H); 4.71 (m, a-H); 4.48* (dd, MeLeua-H); 4.17* (ddd, Leua-H); 4.06*, 4.03r, 4.02° (3s, N-OMe); 3.75*，3.74。（2s，COOMe); 3.43。（s, N-Me); 3.20*〔s, MeAla NMe); 3.17° (s, N-Me); 2.92* (S, MeMeOtrp N-Me); 2.52* (s, MeLeu N-Me); 2.47° (s, N-Me); 1.51*, 1.48° (2d, J=7Hz, MeAla β-Η); 1.04 (d, J=6.5Hz, MeLeu Me); 0.98-0.84 (m); 0_63* (d，J=6.6Hz, Leu Me); 0_56，，0.39' (2d); 0_06*〔d, J=6.6Hz, Leu Me); -0.11* (ddd, Leu β-CH) ° 按與實施例6所揭示的類似方法獲得乙基醚。 25 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210x297公釐） ^1 - — II I ^^'1^- -I I - I- - - - - I I (諸先聞讀背面之注項再填寫本頁) A7 B7 〇

CHO 〇· 450978 五、發明説明（23 ) 式XV所示之起始原料

B,-R1Leu-Leu-C,-X,-Y, —, XV 是已知的（W〇 96 / 03430) »在該式中，取代基具有下列的定義： A·

Bf = X' .NH — CH— CHr — (CH2)j*CH3 CO CH， (請先閲讀背面之注意事頃再填寫本買)

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 Y，= • Ν*—CH—"CO-I I CK CHq 在下面的實施例7-11中，使用了相同的縮寫，例外情況 26 本紙張尺度逋用中國國家襟準（cns ) A4胁（训乂297公疫） A7 45 097 8 _B7 五、發明説明（24) 是： A，，= 0

R3 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝- 實施例7:式IX的化合物 (即式I的化合物’其中A = A"，R8 =嘆嗤-2-基，> R1 = CH ， C = C"，Rs = OCH3，==雙鍵，X=X,，Y=Y，〕將 400 毫克的式 I 化合物〔A=A"，R8 = -CSCH2，B = B,， R；! = CH3，C = C"，R3 = OCH3，雙鍵，Χ=Χ;，γ = γ。和〇 5 毫升氣乙醛水合物在8毫升乾的二甲基f醯胺中的溶液與〇5 克4A的分子篩一起攪拌並加熱至60 °C歷時5小時。然後將混合物用乙酸乙酯稀釋，過濾並用0.1 N HC1萃取。有機相用鹽水洗滌，乾燥並在真空中蒸發。將粗製產物在矽膠上進行色層分析（洗脫液：梯度甲苯/甲醇=99.5/0.5至98/2〕純化，獲得一種固體泡沫的標題化合物β 按照與實施例7類似的方法，獲得以下的式I化合物 (A=AW - B = Bf > R! = CH3 ' C = CW - R3 = OCH3 > …-=铂練，χ=χ,， γ=γ，） 27 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（2丨ΟΧ 297公釐）言經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 450978 五、發明説明（25) A7 B7 實施例 Rs -i ......^ 8 固體泡沫 9 固體泡沫 10 N ch3 固體泡沫 11 S ^ Ίΐ 固體泡沫 N c(ch3)3 ...· ΙΓ* L—1 ^1· ^1· ^^1 -I f^i ^^1 ^ 炎^- I - - I II - I—- - f S. ,\吞 ./ (請先閲读背面之注意事項存填窝本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製起始原料，即式I化合物，其中A = AW，R8 = -CSNH2 ’ B = f ’ R^CHs ' C = Cf j R4 = 〇CH3 > —==雙 M，X = Xf，Y=Y’是依照下述方法製備的：將1.1克式XI化合物（A是一種(X-羥基取代的丁基酸殘基，該殘基被-CN γ-取代，B = Bf，R1 = CH3，C = C,，R4=〇CH3 , 二二=雙鍵，X=Xf，Y=Y，）和1.8克二笨基膦基二硫羧酸在25毫升異丙醇中的溶液加熱回流7小時。將反應混合物在真空中蒸發，並溶解在乙酸乙酯中，用碳酸氫鈉水溶液和鹽水萃取。在蒸發掉有機層後，將粗產物在矽麒上進行色層分析（洗脫液： 28 本紙張尺度逋用中國國家標隼（CNS > Α4規格（210Χ297公釐) 45 097 8 at B7 五、發明説明（26 ) 梯度甲苯/甲醇=99.5/0.5至98/2)純化，獲得一種無色泡沫的起始化合物。 {請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 當進行VCAM-1細胞ELISA測定時，實施例4-11的化合物與式νπι的化合物具有相類似的活性。 iH-NMR:光譜（CDC13) 實施例： 7. 3種同分異構物 46:51:3，用標記：8.70* (4 J=10Hz，LeuPrNH); 7.89* (d，10Hz, NH); 7.83。Cd, J=9Hz，NH); 7.69, 7.66 (2d，J=3_3Hz，噻唑 H); 7.58 (d, J=10Hz, NH); 7.53*, 7.47° (2dm, MeTrpOMe H-4〇; 7.38*, 7-37° (2dm, J=8Hz MeTrpOMe H-7); 7.22*, 7.20° (2tm, MeTrpOMe, H-6f); 7.17, 7.16 (2d, J=3.3Hz,噻唑-H); 7.09 (s, MeTrpOMe H-2，)； 7.03*, 7.00。 (2dd, MeTrpOMe, H-5〇; 6.98° (s, MeTrpOMe, H-2r); 6.18° (d, J=10Hz, Leu NH); 6.03=^ (d, J=7Hz, Leu NH); 5.80f (d, J=10Hz Leu NH); 5.30° (ddd, PrLeu α-H); Cdd，羥基丁酸 α-H); 5.05-4.98 (m, ct-H); 4.94 (dd, MeTrpOMe a-H); 4.86° (ddd, LeuPr ot-H); 4.73 (m5 a-H); 4.49* (dd, MeLeu a-H); 4.23=^ (ddd, Leu a-H); 4.02, 4.00 (2s, N-OMe); 3.84° (m, a-H); 3.59-3.40 (m); 3.38 (q, J=7Hz, MeAla a-H); 3.33 (s, N-Me); 3.2-2.85 Cm); 3.21 Cs, N-Me); 3.07 (s, N-Me); 2.93* (s, MeTrpOme N-Me); 2.53«= (s3 MeLeu N-Me); 2.49 (s, N-Me); 2.43-2.28 (m); 2.18 (m); 1.98 (m); 1.81 (m); 1.7-1.1 (m); 1.48, 1.46 (2d, J=7Hz, MeAla β-Me); 1.06* (d, J=6.5Hz, MeLeu Me); 1.00-0.84 (m); 0.61* (d, J=6.6Hz, Leu Me); 0.54^ (d3 J=6.6Hz, Leu Me); 0.35f (d, J=6.6Hz, Leu Me); 0.10* (d, J=6.6Hz, Leu Me); -0_12* (ddd, Leu β-CH)。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 8. 3 種同分異構物 47:48:5，用*。'標記：8.64* (d，J=l〇Hz，LeuPrNH); 7.82 (2d，10Hz，NH); 7.63。（d，J=10Hz, NH); 7_23, 7.17, 7.08, 6,97 (4t，芳香族 H); 7.32，7·28 (2s，噻唑-Η〕； 7·〇7〔s，MeTrpOMe HJ); 6.81 (s, MeTrpOMeH-2，）；6.22。Cd，J=10Hz，LeuNH);6.07* (2d，J=7Hz，LeuNH〕; 5.80' (d，J=10Hz Leu NH); 5.29。（ddd，LeuPr ct-H); 5.20* (dd，MeTrpOMe a-H); 5.12° (dd,羥基丁酸 ct-H); 5.03°〔ddd, LeuPr a-H); 4.97* (ddd, LeuPr oc-H); 4.85 (m,經基丁酸 + LeuPr a-H); 4.71。〔ddd, Leu a-H); 4.52* (dd, MeLeu a-H); 4.21*〔ddd，Leu oc-H); 4.02, 3.90〔2s, N-OMe); 3.34 (s, N-Me); 3.22(s,N-Me); 3.02 (s, N-Me); 2.93 (s, N-Me); 2.53 (s, N- 29 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 450973 A7 ____B7_ 五、發明説明（27 )

Me); 2.48 (s, N-Me); 1.43, 1.42 (2d, J=7Hz, MeAla β-Me); 1.06^ (d, J=6.5Hz, MeLeu Me); 0.62* (d, J=6.6Hz, Leu Me); 0.10* (d, J=6.6Hz, Leu Me); -0.04* (ddd，Leu β-CH)。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本1) 9. 3 種同分異構物 42:52:6，用 *。’標記：8.67* (d，J=10Hz,LeuPrNH); 7.83, 7.80 (2d, 10Hz, NH); 7.63° (d, J=10Hz, NH); 7.55, 7.42, 7.39, 7.36 (4d, MeTrpOme 芳香族)；7.22, 7.18, 7.05, 6,97(4dd, MeTrpOMe H-5% H-6f); 7.06° (s, MeTrpOMe H-2〇; 6.88* (s, MeTrpOMe H-2〇; 6.22° (d, J=10Hz, Leu NH); 6.02* (d, J=7Hz, Leu NH); 5.77 (d, J=10Hz Leu NH); 5.30° (ddd, LeuPr a-H); 5.21* (dd, MeTrpOMe a-H); 5.0 (m, a-H); 4.85 (m, a-H); 4.65 (ddd, Leu a-H); 4.49* (dd, MeLeu a-H); 4.13^ (ddd3 Leu a-H); 4.03, 3.98 (2s, N-OMe); 3.70 (m); 3.55 (m); 3.45 (q, J=7Hz, MeAla a-H); 3.37, 3.20, 3.11，2.93, 2.52, 2.43 (6s,N-Me〕； 2.73 (m,四氫-苯駢噻唑); 1.50, 1.48 (2d, .J=7Hz, MeAla β-Me); 1.04* (d, J=6.5Hz, MeLeu Me); 0.58* (d, J=6.6Hz, Leu Me); 0.50; (d, J=6.6Hz, Leu Me); 0.30( (d, J=6.6Hz，Leu Me); 0.03* (d, J=6.6Hz，Leu Me); -0.22* (ddd, Leu β-CH)。 10. 3 種同分異構物 44:51:5，用 W標記：8.66*(d3J=10Hz，LeuPrNH);7.83, 7.81 (2d，10Hz，NH); 7.63。Cd，J=10Hz，NH); 7.57*，7-43。，7.38*，7.36。 (4d, J=8Hz，吲哚-H); 7·21*，7.18。，7_05, 6.97 (4t，吲哚-H); 7.06*〔s， MeTrpOMe H-2'); 6,88° (s，MeTrpOMe H-2f); 6.70。，6.69* (2¾ J=lHz，噻唑-H); 6.23° (d，J=10Hz，Leu NH); 6.05* (d，J=7Hz，Leu NH); 5.80f (d, J=10Hz Leu NH); 5.29° (ddd，LeuPr ct-H); 5.11° (dd，羥基丁酸 a-H); 5.01 (m); 4.97 (dd, a-H); 4.85 (m，2x a-H); 4.69。（ddd，Leu a-H); 4.57r (dd} a-H); 4.48* (dd, MeLeu a-H); 4.16* (ddd, Leu a-H); 4.03, 3.98 (2s, N-OMe); 3.43 (q, J=7Hz, MeAla α-H); 3.37, 3.20, 3.10, 2.92, 2.52, 2.46 C6s，N-Me); 2.40, 2,39 C2d, J=lHz，Me-噻唑）；1.48, 1.47 (2d，J=7Hz， MeAla β-Me); 1.05* (d, J=6.5Hz, MeLeu d-Me); 0.60* (d} J=6.6Hz, Leu d-Me); 0.52,, 0.33, (2d, J=6.5Hz, Leu d-Me); 0.05* (d, J=6.6Hz, Leu d-Me); -0·14* (_，Leu β-CH)。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 11. 3 種同分異構物 47:50:3，用c標記:8.69* (d，J=10Hz, LeuPrNH); 7.79, 7.78 (2d, 10Hz, NH); 7.65° (d, J=10Hz,.NH); 7.51*, 7.41°, 7.39*, 7.38° (4d, J=8Hz,吲哚-H); 7.23*，7·20。，7.07, 7_00 (4t,吲哚-H); 7.04* Cs, MeTrpOMe H-2'); 6.85。（s，MeTrpOMe H-2，)； 6.71。* (s，噻唑-H); 6·25。〔d, J=10Hz3 Leu NH); 6.04^ (d, J=7Hz, Leu NH); 5.80f (d, J=10Hz Leu NH); 5.30。〔ddd, LeuPr ct-H); 5.10。（dd,羥基丁酸 a-H); 5.02 ⑽；4_97 (dd， a-H); 4.85 (in, 2x a-H); 4.72° (ddd, Leu a-H); 4.60f (dd, a-H); 4.50* (dd, MeLeu a-H); 4.17* (ddd3 Leu a-H); 4.04, 4.00 (2s, N-OMe); 3.48 (q, J=7Hz, MeAla α-H); 3.41, 3.21, 3.17, 2.92, 2.53, 2.47 (6s,N-Me); 0.97, _30____ 本紙張尺度適用中國國家標隼（CNS ) M規格（2l〇X297公釐） ' Λ5 09 7 8 A7 ___B7_ 五、發明説明（28 ) 0.96 (2s，叔丁基噻唑)；1_5〇, 1.49 (2d，J=7Hz, MeAla β-Me); 1_06* (d， J=6.5Hz，MeLeu d-Me); 0.62*〔d, J=6.5Hz，Leu d-Me); 0.53，，0.35,（2d， J=6.5Hz, Leu d-Me); 0.07* (d, J=6.6Hz, Leu d-Me); ^0.08* (ddd, Leu β-CH)。 (請先閲讀背面之注ί項再填寫本頁) A) 3 種同分異構物 44:30:26，用標記：8·85 (d，CSNH2); 8·60 Cd，LeuPr NH); 8.17 (d，CSNHJ; 8.03, 8.00〔2d，NH); 7.88 (m，CSNH2); 7.6-7.1 (芳香族)；6.28* (d, 10Hz，Leu NH); 6.070 (d，7Hz，Leu NH); 5.87, Cd，9Hz Leti NH); 5.26* (ddd, LeuPr a-H); 5.22 (dd，羥基酸a-H); 5.15-4.95, 5.08* (dd} 羥基酸tx-H); 4.83° (ddd，LeuPr ct-H); 4.50* (ddd, Leu ct-H); 4.37* (dd， MeTrpOMe 〇t-H); 4.25。（ddd，Leu a-H); 4.09, 4.05, 4.03* (3s，OMe); 3.89 (m, a-H)； 3.65*, 3.63% 3.52° (3q, 7Hz MeAla α-H ); 3.57 (m); 3.17, 3.16, 3Λ5, 3.22, 3.20, 3.05, 2.92, 2.55, 2.53 (9s, N-Me); 1.8-1.1; 1.05 (d, 7Hz); 0.99-0.82, 0.60〇5 0.55,, 0.23% 0.17° (d, J=6.5Hz, MeLeud-Me); 0.62* (d, J=6.5Hz, Leu d-Me); 0.53,, 0.35f (4d, 7Hz, Leu d-Me); -0.15°, -0.17' (ddd，Leu β-CH)。 PKF 285-916(噻唑）生物活十生在細胞毒性和ICAM-1，VCAM-1和E-selectin表達的抑制，細胞增生，以及TNF釋放的抑制和細胞毒性的相關測定中，測試本發明化合物的活性。測定是按照以下的方法進行：經濟部智慧財產局員工消費合作社印製將HaCaT細胞，自發地轉變，非腫瘤的具有正常角質化細胞的高度保存表塑差異特徵的人體角質化細胞系（Baukamp 等人，1988 JT_ Cell Biol. 106, 761-771)，都被用來進行細胞增生測定和ICAM-1細胞Elisa測定。 A. ICAM-1 細胞-ELISA 測定 I.角質化細胞ICAM-1細胞Elisa 用於確定ICAM-1表達的抑制ICAM-1細胞Elisa本質上如 Winiski 和 Foster 所揭示的那樣（1992，J. Invest. Dermatol·， 31 本紙張尺度適用中國國家標隼（CNS ) Α4规格（210Χ297公釐） A7 B7 45〇978 五、發明説明（29 ) 99, 48-52)。將HaCaT細胞接種在96孔微滴平板中（2x104細胞/孔在培養介質中：具有5%FCS的DMEM，100U/毫升青黴素’ 100毫克/毫升鍵徽素，2 mM穀胺醯胺，ImM丙酮酸納〕，生長成菌落（confluency)，然後在具有或不具有ifN-γ/TNF-cc刺激介質（測試介質+100〇u/毫升iFN-Y/3ng/毫升 TNF-α)的新鮮測試介質（作為培養介質，但用〇.5%FCS代替 5%FCS)，在測試化合物的存在或不存在下培育約24小時。然後沖洗掉介質，並用1 %多聚曱醛固定細胞單層。用飽和量的初級（小鼠抗TCAM-1單克隆）和次級（山羊抗鼠過氧化物酶結合的〕抗體培育單層。隨後使用3 -胺基-9-乙基咔峻（AE C )作為受質進行過氧化物酶反應，生成一種難溶的著色產物，這種產物在標準的微滴平板讀出器上易於進行測定。 II. 細胞毒性的測定在AEC反應後完成ICAM-1檢測，用pbs(200毫升〕沖洗 HaCaT單層’從平板上倒掉PBS，然後用紙巾在頂部輕拍吸乾該平板以除去多餘的液體。先用濕潤的棉紙，然後用乾的棉紙緩慢地擦淨微滴平板的底層，在492nm下讀出吸光率。在將早層乾餘之前’向每個孔中加入0.1毫升的结晶紫溶液（首先通過0_2mm過濾器）。然後將該平板在室溫下培育10分鐘’用PBS充分地洗蘇5次，以如上所揭示的除去多餘的液體’並在擦乾單廣之前再次在492nm下讀出吸光率°由於結晶紫染色的緣故，因此給出染色前後光密度的差值*該值與孔中存在的單層細胞的量有關。用該值校正AE c 值。 32 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（公釐） n I^i I - I I I in J I I (請先間讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 45 097 8 A7 _____B7 五、發明説明（30) 互二内忠細胞VCAM-l ’ ICAM-1和E-Selec^r·細胞-Elisa測定 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 該測定是基於96孔細胞Elisa方法，採用人體微血管内皮細胞系HMEC-1和人體肚臍靜脈内皮細胞（HUveC〕進行的。用測試化合物預處理細胞4小時，接著用TNFcc刺激6至 16小時’然後藉由間接免疫過氧化物酶染色技術進行多聚甲备固定’以連續评定VCAM-1，ICAM-1或E-Selectin表達。在將細胞（吉姆薩核染色）暴露在測試物質中後，藉由計數有關的細胞數量確定細胞毒素作用，與對照孔（僅含溶劑和介質）進行比較。如茱化合物顯示乏50% VCAM-1，ICAM-1或E-Selectin抑制，<25%細胞損失，這表明化合物是有效的。方法論胞系：VCAM-1和ICAM-1測定採用了不滅的（SV-40病毒大量T抗原）人體微血管内皮細胞系（hmeC-1; Ades等人，

Invest. Dermatol. 99: 683-690, 1992)。HMEC-1 細胞基本上表達了低濃度的ICAM-1，ICAM-1是藉由發炎症介質正調節的。然而它們僅表達了以下的細胞分裂因子（cytokine)刺激的 VCAM-1 。進行劑量-反應和時間過程試驗，以確定誘導 VC AM -1和IC AM -1表達的最佳條件。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 II.生長條件:將HMEC-1細胞在T-75燒瓶（Nunc)中，在標準條件（37 °C，5%C02)下，在1.5 X 106細胞/毫升培養介質中生長（CM =補給 10% FCS，10ng/毫升人體 EGF(Boehringer)，1 毫克/毫升氫化腎上腺皮質素（Sigma # 0888)，2.2克/升 NaHC03, 15mMHepes，0.11克/升丙酮酸鈉，4mM穀胺酿胺， 100U/毫升青黴素和100毫克/毫升鏈黴素的内皮細胞基介質本紙張尺度適闲中國國家標準（CNS ) A4規格（2丨0 X 297公釐） 33 __ 450973 A7 B7 五、發明説明（31 ) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁} [EBM; Clonetics])。在溫和的騰酶消化（0.25%姨蛋白酶 + 0 1 % EDTA至8分鐘）並重懸浮後，每2-3天，以1:3分裂比例重接種細胞。 III. VCAM-1 和 ICAM-1 細胞-Elisa 96孔平底微滴平板用牛的fibronectin(FN; Sigma #F1141〕預塗層，然後在200毫升EBM生長介質中接種2X104細胞/ 孔並培育過夜。第二天先將培養介質（CM)替換成200毫升/ 孔EBM測定介質（用補入的5%FCS的CM代替補入1〇〇/0 FCS 的CM)，並隨後'換成具有（1)合適濃度的測試化合物，（2)相對應濃度的溶劑/曱醇萃取的介質，或（3)僅含EBM測定介質的180毫升介質並在37 °C下培育4小時。每個96孔測定用雙重孔進行。然後藉由添加20毫升濃縮的細胞分裂因子溶液〔2000U/毫升TNFot)刺激細胞並在37 °C下培育16.小時。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製然後用1 %多聚甲醛的EBM介質沖洗細胞單層，於室溫下〔RT)在2%多聚甲醛中固定15分鐘，並用PBS沖洗幾次。從細胞中移除PBS，並將單層在含10%標準山羊血清（NGS) 的PBS中培育30分鐘。將NGS溶液替換成1〇〇毫升/孔抗_ VCAM-1或ICAM-1單克隆抗體並在4 °C下培育過夜。然後除去mAb溶液，細胞用PBS沖洗幾次，隨後用含1〇〇/〇NGS的PBS 在室溫下培育30至60分鐘。除去NGS溶液，加入1〇〇毫升和摔菜根過氧化物酶結合的山羊FCAbf)2抗鼠igG抗體（Tago; 1:500稀釋在含5%NGS的PBS中）並將平板在室溫下培育1 小時。然後除去次級抗體並在PBS中沖洗細胞，然後將PBS 替換成150毫升/孔新製備的並經過濾的AEC溶液（3-胺基-9- ___；____34_______ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） ' ~ B7 450978 五、發明説明（32 ) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 乙基咔唑；Sigma)，並將平板在室溫下培育45至60分鐘，除去過氧化物酶受質並用PBS漂洗細胞。在微滴平板讀數器上在55〇nm處讀出AEC吸光率值，並對690nm處的“空白”或參考值進行校正。 j；V· E-seletin測定：E-seletin測定是採用新分離的HUVEC進行的，特別是按照VCAM-1或ICAM-1測定所揭示的方法進行’只是進行短的TNFct-刺激（6至8小時〕。 Y_細胞毒性的測定（基於核染色的細胞損失）：將内皮細胞藉由將PBS替換成95〇/〇乙醇脫色20分鐘（兩個10分鐘變化），與對照組藉由顯微鏡進行。然後在蒸餾水 (Aquadest〕中沖洗細胞，並用在Aquadest中的33%吉姆薩溶液於室溫下單層覆蓋5分鐘。然後該孔用Aquadest洗務:並用空氣乾燥至少15分鐘。顯微鏡評估用來檢測只有核染色，而基本上無胞質染色的情況。在微滴平板讀數器上的55 〇nm處讀出吉姆薩吸光率值，並對69〇nm處的“空白，，值（無細胞列）進行校正。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 —敦據s平定:構成VC AM -1或E-Selectin表達（未經刺激的對照孔）的AEC值本質上與同模標本匹配的對照mAb值相同並顯示了本背景染色。在每個96 -孔平板中，對於每個細胞分裂因子刺激組（EBM和溶劑對照物，以及測試物質）來說，從平均AEC值中減去平均構成值’得到表示正綱節的π am-1 和誘導的VCAM-1或E-Selectin細胞黏附分子〔cam〕表達數量 (即AEC-CAM〕。然後用每個AEC-CAM值除以相對應的平均吉姆薩值，得到推測給予細胞密度的CAM表達的相對濃度的數 —___35_ 本紙張尺度適用中國國家標準< CNS ) A4規格（210X297公釐） " A7 B7 450978 五、發明説明（33 量，基於核數（即AEC :吉姆薩比例〕。 AEC(經刺激的）-AEC(未經刺.激的）=Aec-CAM AEC-CAM/吉姆薩=AEC:吉姆薩比例因此’“實際的”CAMIC5◦值是藉由將測試物質的Age:吉姆薩值與經刺激的對照組（EBM，溶劑）的AEC:吉姆薩值進行比較所確定的。然後將這些值相對於單獨的吉姆薩1<：5◦值進行分析。嚴格的標準是用來確定CAM抑制對細胞毒性〔Giemsa〕是否能指明應該被追蹤的“真正”目標。

HaCaT細胞增· 4浪丨定將HaCaT細胞培養在補充2.2克/升NaHC03，0.11克/ 升丙酮酸鈉，15mM Hepes ’ 5%牛犢胎兒血清（FcS),青黴素（100U/毫升），鏈黴素（1〇0毫克/毫升），和穀胺酿胺（為增加4mM的最終濃度）的DMEM(Gibo # 074-02100)中。對於增生測定而言，藉由胰酶黴消化使細胞脫離，懸浮在新鮮介質中’並接種到96孔微滴平板中，使最終密度為4〇〇〇細胞 /0.2毫升/孔。24小時後（第0天），將介質替換成含梯度濃度的測試化合物的新鮮介質。在37 °C /5%C02中培育3天後，藉由採用染料sulforhodamine B測定相對細胞量的比色測定法測疋與办劑對照組tb較的細胞增生的存在（skehan等人，1990, J. Natl. Cancer Inst总1107_1112)。“起始細胞數，，藉由測定第〇天和·的相對細胞量來確定。結果表示為0/〇抑制=丨〇〇·%對照組吸光率（其中溶劑對照=1〇〇0/〇時）並表示三種測定的平均值土標準偏差。劑量-反應曲線是用半對數繪製的，半數最大抑制 (1(：5〇〕所需的濃度是由線性插入確定的。没有細胞淨損失的最 36 私紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公资） ----_H.衣-- (請先闆讀背面之注意事項再填寫本頁3 、可. 經濟部智慧財產笱員乍土

A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 34五、發明說明（）大抑制由“起始細胞數”表示，一般係介於90〜98%之間。 D. TNF釋放的抑制I. 單核細胞是依照Hansell等人（J· Imm. Methods (1991〕 145:105)的方法，採用ficollhypaque密度分離從健康志願者的外周圍血液中所製備，並且在RPMI 1640 + 10% FCS中所使用的濃度為10s細胞/孔。在加入ΙΡΝγ(10〇υ/毫升）和LPS(5 毫克/毫升）之前，用一系列測試化合物的稀釋液在37 °C下培育細胞30分鐘，隨後進一步培育3小時。培育係藉由離心作用在1400 RPM歷時10分鐘而终止。採用商業購得的ELSA (Innotest hTNFoc，從 Innogenetics N. V·，Zwijnaarde，Belgium 處購得）測定上層液中的TNFa»測試0至lOmM濃度下的化合物》例舉的式I化合物，尤其是較佳的式Ip, Ip、Ip' VII，IX和X 的化合物，在該測定中抑制了 TNF釋放，具有的IC50為約5 至高達約500nM。 II. 細胞毒性在THP1細胞（5 X 10V孔）上確定細胞毒性，THP1細胞是在IFNy(100U/毫升）和LPS(5毫克/毫升）的存在下培育，並在測試化合物存在或不存在的情況下，在37 °C下培育24小時》由測定活細胞中的線粒體脫氫酶的比色法讀數（MTT)，以測定活細胞和死細胞的百分比，如Mosman, J· Imm. Methods (1983) 65:55中所揭示者。當在該測定之評估中，本發明的較佳化合物一般具有較低的細胞毒性，諸如IC5。為約100至高達約 1000 nM 〇 37 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格⑵G x 297公楚） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 45 097 8 A7 B7 五、發明説明（％ ) 圖式簡單說明：圖1 :顯示式VIII化合物的UV光譜；圖2 :顯示式VIII化合物的IR光譜；圖3 :顯示式VIII化合物的FD-Mass光譜；圖4 :顯示式VIII化合物的FD-Mass光譜（加入了 Lil)和圖5 :顯示式VIII化合物在CDCl3中的質子NMR光譜。 I. ί - I - I 1^1 —II 1 II \ -'私-I. I I- I - - I I I I. I -- (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本紙張尺度適用中國國家標隼（CNS ) Α4規格（210 X 297公釐）

Claims

修正年月3 i金 90. 6. 2m领見申請專利範圍

【第85114246號專利申請案修正本_90年6月20曰 1. 一種式Ip 4化合物 Ap-Bp-RipLeu-Leu-Cp-Xp-Yp Ip 其中：丨 Ap為一種乙醇酸殘基，任選地被η，乙基或甲基α_取代； Βρ為一種α-胺基-γ-甲基-取代的辛酸殘基； Rip為氫或甲基； Cp為一種色胺酸或N-甲基-色胺酸殘基，其任選地是Ν，Γ (Q至C4)烷氧基取代的； xp為一種α-胺基-取代的（C21C14)羧睃殘基，和 YP為一種α-胺基-或N-甲基-α-胺基-取代的（(^至c10〕觀酸殘基。或式Ij/的化合物 Ap,-Bp-RlpLeu-Leu-Cp-Xp-Yt V (請先閱讀背面之注意Ϋ'項再填寫本頁) 訂---------線. 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製其中BP ’ RiP ’ Cp，Xp和Yp的定義如上所述，且Ap，為一; 種α-羥基-取代的丁酸殘基，該殘基是被式…所示之基團丫取代的 Ο VI

其中代表低級烷基，諸如Cw低級烷基 39 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐〉 450978_六、申請專利範圍或式I/的化合物 Ap^Bp-RapLeu-Leu-Cp-Χ,,-Υ,, —1 V 其中Bp，％，Cp ’ XP和Yp的定義如上所述，且Ap"為一種是α-羥基取代的丁酸殘基，該殘基是被式VII所示之棊困γ取代的 S

VII (請先閱讀背面之注意事項再填寫本買) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製其中Re代表氫，Cw烷基或笨基或與位置5的嘍唑環一起形成碳環。 2· —種製備如申請專利範圍第1項所述之化合物的方法，其包括： a) -製備式Ip的化合物’其令Ap是被COOR2取代，將對應的式Ip的化合物’其中Ap是被CN取代，與親核試劑， —較佳為乙醇，與合適的鹼性或酸性催化劑，較佳為鹽酸/ 在有機溶劑，較佳為乙醚中反應，或 b) -製備式1的化合物，其中Ap是烷氧基甲基取代的，將對應的式Ip化合物，其中Ap是被_CH2-OH取代，與烷基化化令物’諸如烷基由化物或重氮基化合物，在有或無催化劑的條件下進行反應，或 c) -製備式Ip的化合物，其中Ap是被c〇or2取代，藉由標準方法，較佳地係藉由用例如亞硫醯氣將對應的式~ 40 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐）經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 45097 B 滢 _______ D8____ 六、申請專利範圍化合物，其中Ap是被COOH取代，轉化成氯化酿並在一種酸結合劑的存在或不存在下用一種合適的醇進行處理’從而進行酯化，或 d) ‘製備式“的化合物，其中Ap是被CH2〇H取代，將對應的式ΪΡ化合物，其中Ap是被C00R2取代，與金屬氫化物或蝴氩化物，較佳為甲硼烷二甲基硫化物複合物，在有機溶劑内進行還原反應，或 e) -製備式Ip的化合物，其中八1)是被任選地經取代的乙稀基取代，將對應的式Ip化合物，其尹Ap是被CHO取代，與一種維蒂希（wittig)試劑進行反應，或 f) -製備式Ip的化合物，其中Ap是被ch2nh2取代，還原對應的式Ip化合物，其中Ap是被ch2n3取代，或 g) -製備式Ip的化合物，其中Ap被CsCH取代，將對應的式ΪΡ化合物脫氧化，其中Ap是被CH = CBr2取代，或 h) ·製備式1?的化合物，其中ap是被環丙基取代，將對; 應的式Ip化合物，其中Ap是被乙婦基取代，與重氮甲烧反應，或 i) -製備式Ip的化合物’其中Ap是被CSNH2取代，諸如: 藉由回流硫化合物和其中Ap被CN取代之式Ip化合物的溶液’.使對應的式Ip化合物，其中Ap被CN取代，與硫的衍· 生物，較佳係與二苯基膦基二硫羧酸反應，或 j〕-製備較佳的式Ip"的化合物 —Ap,,-Bp-RlpLeu-Leu-Cp-Xp-Yp j « 41 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁} —y ...---------訂 i 1* i J— 1 ^^1 n f 線經濟部智慧財鱼笱員L肖£ 450978 § D8六、申請專利範圍其中取代基的定義如上所述，將式的化合物，其中Ap" 代表一種α-羥基-取代的丁酸殘基，該殘基是被-CS-NH2y「取代，與式ΧΠΙ的一種α-鹵代羰基化合物反應 Hal-CH2-CO-R6 XIII .1 其中116的定義如上所述，而Hal代表鹵素，或與式χιπ 的乙縮醛化合物反應，或 k)-製備較佳的式I，化合物‘ 厂 Ap’-Bp-Ueu-Leu-Cp-Xp-Yp —] 1/ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 其中取代基的定義如上所述，將式1/的化合物，1其中Apf -代表一種α-羥基-取代的丁醆殘基，該殘基被-CHO γ-取) 代，與烷氧基羰基亞曱基三苯基正膦反應，或 1)-製備式一的化合物，其中cp為一種色胺酸或Ν-甲基丄色胺酸，從式Ip化合物中移除甲氧基，其中Cp代表色胺酸或N-甲基-色胺酸，其係被〇cH3 ΡΓ-取代，且假使必要時分離出式丨p的北合物。 3. —種供抑制細胞黏附分子表達之藥用組合物，其包括如申請專利範圍第1項所述之化合物，速同一種或多種藥學上: 可揍受之載體’稀釋劑或賦形劑。訂---------線- ______42 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4在格（210 X 297公愛)