RU2171260C2 - Циклопептолиды - Google Patents
Циклопептолиды Download PDFInfo
- Publication number
- RU2171260C2 RU2171260C2 RU98111936/04A RU98111936A RU2171260C2 RU 2171260 C2 RU2171260 C2 RU 2171260C2 RU 98111936/04 A RU98111936/04 A RU 98111936/04A RU 98111936 A RU98111936 A RU 98111936A RU 2171260 C2 RU2171260 C2 RU 2171260C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- substituted
- compounds
- formula
- methyl
- residue
- Prior art date
Links
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 143
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 claims abstract description 16
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 16
- 108010024212 E-Selectin Proteins 0.000 claims abstract description 14
- FZWLAAWBMGSTSO-UHFFFAOYSA-N Thiazole Chemical group C1=CSC=N1 FZWLAAWBMGSTSO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 10
- AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N Glycolic acid Chemical group OCC(O)=O AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 9
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 claims abstract description 7
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 claims abstract description 7
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims abstract description 7
- CZCIKBSVHDNIDH-NSHDSACASA-N N(alpha)-methyl-L-tryptophan Chemical group C1=CC=C2C(C[C@H]([NH2+]C)C([O-])=O)=CNC2=C1 CZCIKBSVHDNIDH-NSHDSACASA-N 0.000 claims abstract description 5
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 claims abstract description 5
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 claims abstract description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 3
- 102000015689 E-Selectin Human genes 0.000 claims abstract 2
- 108010064593 Intercellular Adhesion Molecule-1 Proteins 0.000 claims description 23
- 102000015271 Intercellular Adhesion Molecule-1 Human genes 0.000 claims description 23
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 15
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 15
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 claims description 8
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 claims description 5
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 4
- WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N octanoic acid Chemical class CCCCCCCC(O)=O WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- OBETXYAYXDNJHR-UHFFFAOYSA-N alpha-ethylcaproic acid Natural products CCCCC(CC)C(O)=O OBETXYAYXDNJHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- CZCIKBSVHDNIDH-UHFFFAOYSA-N Nalpha-methyl-DL-tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(NC)C(O)=O)=CNC2=C1 CZCIKBSVHDNIDH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 108010000134 Vascular Cell Adhesion Molecule-1 Proteins 0.000 claims 1
- 102100023543 Vascular cell adhesion protein 1 Human genes 0.000 claims 1
- 238000011282 treatment Methods 0.000 abstract description 19
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 18
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 abstract description 17
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 17
- -1 α-amino-γ- methyl-substituted octanoic acid residue Chemical group 0.000 abstract description 13
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 abstract description 12
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 abstract description 10
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 abstract description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 6
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 abstract description 4
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 abstract description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 3
- 102000003390 tumor necrosis factor Human genes 0.000 abstract 3
- 101000936738 Coturnix japonica Astacin-like metalloendopeptidase Proteins 0.000 abstract 2
- 101000794562 Naegleria gruberi Calmodulin, flagellar Proteins 0.000 abstract 2
- 230000007721 medicinal effect Effects 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 45
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 44
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 42
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 26
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 20
- 238000000034 method Methods 0.000 description 20
- 125000000250 methylamino group Chemical group [H]N(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 18
- XJODGRWDFZVTKW-LURJTMIESA-N (2s)-4-methyl-2-(methylamino)pentanoic acid Chemical compound CN[C@H](C(O)=O)CC(C)C XJODGRWDFZVTKW-LURJTMIESA-N 0.000 description 15
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 14
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 14
- OXEUETBFKVCRNP-UHFFFAOYSA-N 9-ethyl-3-carbazolamine Chemical compound NC1=CC=C2N(CC)C3=CC=CC=C3C2=C1 OXEUETBFKVCRNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 13
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 13
- 102100023471 E-selectin Human genes 0.000 description 12
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 11
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 11
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N ether Substances CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 10
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 10
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 10
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 10
- 102000016289 Cell Adhesion Molecules Human genes 0.000 description 9
- 108010067225 Cell Adhesion Molecules Proteins 0.000 description 9
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 9
- 239000000047 product Substances 0.000 description 9
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 8
- SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N Indole Chemical compound C1=CC=C2NC=CC2=C1 SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 8
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 8
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 8
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 8
- 125000000391 vinyl group Chemical group [H]C([*])=C([H])[H] 0.000 description 8
- 229920002554 vinyl polymer Chemical group 0.000 description 8
- SJZRECIVHVDYJC-UHFFFAOYSA-N 4-hydroxybutyric acid Chemical compound OCCCC(O)=O SJZRECIVHVDYJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N Methyl tert-butyl ether Chemical compound COC(C)(C)C BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 7
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 7
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 7
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 7
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 6
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 6
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 6
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 description 6
- 150000002367 halogens Chemical group 0.000 description 6
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 6
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 6
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 6
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 5
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 5
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 5
- 150000002431 hydrogen Chemical class 0.000 description 5
- 210000002510 keratinocyte Anatomy 0.000 description 5
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 5
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 5
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 5
- 0 CCCCC(C)CC(*=CC(C(CC(c1ccccc11)=CC1OC)C(C)C(C(CC(C)C)C=*C(C(CC(C)C)*(C)C(C(C[C@](C)CCCC)*C([C@@](C)OC([C@](C)C1C)=O)=O)=O)=O)=O)=O)C1=O Chemical compound CCCCC(C)CC(*=CC(C(CC(c1ccccc11)=CC1OC)C(C)C(C(CC(C)C)C=*C(C(CC(C)C)*(C)C(C(C[C@](C)CCCC)*C([C@@](C)OC([C@](C)C1C)=O)=O)=O)=O)=O)=O)C1=O 0.000 description 4
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 4
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 4
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 125000001559 cyclopropyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C1([H])* 0.000 description 4
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N indole Natural products CC1=CC=CC2=C1C=CN2 PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N indolenine Natural products C1=CC=C2CC=NC2=C1 RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 4
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 4
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 4
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 4
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 4
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 4
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 4
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 description 4
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 3
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 3
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 3
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 3
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 3
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 3
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 3
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 3
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 description 3
- 206010040070 Septic Shock Diseases 0.000 description 3
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 3
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 3
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 3
- 229940121363 anti-inflammatory agent Drugs 0.000 description 3
- 239000002260 anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 3
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 3
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 3
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 3
- 230000006727 cell loss Effects 0.000 description 3
- 239000013553 cell monolayer Substances 0.000 description 3
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 3
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 3
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960003444 immunosuppressant agent Drugs 0.000 description 3
- 230000001861 immunosuppressant effect Effects 0.000 description 3
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 230000004968 inflammatory condition Effects 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 3
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 3
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 3
- 239000013587 production medium Substances 0.000 description 3
- 238000000425 proton nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 3
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 3
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 3
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 3
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 3
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 3
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 3
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 3
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N Butyric acid Chemical compound CCCC(O)=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010006895 Cachexia Diseases 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N Cyclohexane Chemical compound C1CCCCC1 XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000029462 Immunodeficiency disease Diseases 0.000 description 2
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 2
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 2
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 206010029164 Nephrotic syndrome Diseases 0.000 description 2
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 2
- 208000037919 acquired disease Diseases 0.000 description 2
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- 125000004849 alkoxymethyl group Chemical group 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 239000012911 assay medium Substances 0.000 description 2
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 2
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- 239000012267 brine Substances 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 2
- 125000001309 chloro group Chemical group Cl* 0.000 description 2
- 239000000306 component Substances 0.000 description 2
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 2
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 2
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N hydrocortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 2
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 2
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 210000004088 microvessel Anatomy 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 2
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 2
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 230000036303 septic shock Effects 0.000 description 2
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 2
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 2
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000008259 solid foam Substances 0.000 description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 2
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- FYSNRJHAOHDILO-UHFFFAOYSA-N thionyl chloride Chemical compound ClS(Cl)=O FYSNRJHAOHDILO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 2
- 238000002211 ultraviolet spectrum Methods 0.000 description 2
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 1
- PTXVSDKCUJCCLC-UHFFFAOYSA-N 1-hydroxyindole Chemical compound C1=CC=C2N(O)C=CC2=C1 PTXVSDKCUJCCLC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ALUQMCBDQKDRAK-UHFFFAOYSA-N 2,3,3a,4-tetrahydro-1,3-benzothiazole Chemical compound C1C=CC=C2SCNC21 ALUQMCBDQKDRAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VDCLCAXYTCLVQY-CTVGSUQISA-N 2-[(3s,6s,9s,15s,18s,21s,24s,27s)-15,18-di(butan-2-yl)-6-[(4-methoxyphenyl)methyl]-3,10,16,19,22,28-hexamethyl-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-decaoxo-9,24,27-tri(propan-2-yl)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28-decazabicyclo[28.4.0]tetratriacontan-21-yl]acetic acid Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N2CCCCC2C(=O)N(C)[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C(=O)N(C)[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N(C)[C@@H](C(C)CC)C(=O)N(C)[C@H](C(NCC(=O)N(C)[C@@H](C(C)C)C(=O)N1)=O)C(C)CC)C(C)C)C1=CC=C(OC)C=C1 VDCLCAXYTCLVQY-CTVGSUQISA-N 0.000 description 1
- NGNBDVOYPDDBFK-UHFFFAOYSA-N 2-[2,4-di(pentan-2-yl)phenoxy]acetyl chloride Chemical compound CCCC(C)C1=CC=C(OCC(Cl)=O)C(C(C)CCC)=C1 NGNBDVOYPDDBFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QXCPBNVAQSUDRV-UHFFFAOYSA-N 2-chloroethane-1,1-diol Chemical compound OC(O)CCl QXCPBNVAQSUDRV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AFENDNXGAFYKQO-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxybutyric acid Chemical compound CCC(O)C(O)=O AFENDNXGAFYKQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003229 2-methylhexyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- AZKSAVLVSZKNRD-UHFFFAOYSA-M 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide Chemical compound [Br-].S1C(C)=C(C)N=C1[N+]1=NC(C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=CC=C1 AZKSAVLVSZKNRD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- GOZMBJCYMQQACI-UHFFFAOYSA-N 6,7-dimethyl-3-[[methyl-[2-[methyl-[[1-[3-(trifluoromethyl)phenyl]indol-3-yl]methyl]amino]ethyl]amino]methyl]chromen-4-one;dihydrochloride Chemical compound Cl.Cl.C=1OC2=CC(C)=C(C)C=C2C(=O)C=1CN(C)CCN(C)CC(C1=CC=CC=C11)=CN1C1=CC=CC(C(F)(F)F)=C1 GOZMBJCYMQQACI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010001052 Acute respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000032467 Aplastic anaemia Diseases 0.000 description 1
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 208000008439 Biliary Liver Cirrhosis Diseases 0.000 description 1
- 208000033222 Biliary cirrhosis primary Diseases 0.000 description 1
- 208000019838 Blood disease Diseases 0.000 description 1
- 101001027553 Bos taurus Fibronectin Proteins 0.000 description 1
- MFAJHXSORFJNNU-QYRDTDTQSA-N CCCC[C@@H](C)CC(C)C(N(C)C(CC(C)C)C(NC(CC(C)C)C(C(C)C(C(NC(CC(C)CCCC)C(C(C)[C@@H](C)C(C1)C1O[C@H](C)C=O)O)=O)C(c1ccccc11)=CC1OC)=O)=O)=O Chemical compound CCCC[C@@H](C)CC(C)C(N(C)C(CC(C)C)C(NC(CC(C)C)C(C(C)C(C(NC(CC(C)CCCC)C(C(C)[C@@H](C)C(C1)C1O[C@H](C)C=O)O)=O)C(c1ccccc11)=CC1OC)=O)=O)=O MFAJHXSORFJNNU-QYRDTDTQSA-N 0.000 description 1
- 208000015943 Coeliac disease Diseases 0.000 description 1
- 206010009900 Colitis ulcerative Diseases 0.000 description 1
- 208000027205 Congenital disease Diseases 0.000 description 1
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 description 1
- 108020005199 Dehydrogenases Proteins 0.000 description 1
- YXHKONLOYHBTNS-UHFFFAOYSA-N Diazomethane Chemical compound C=[N+]=[N-] YXHKONLOYHBTNS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101100095895 Drosophila melanogaster sle gene Proteins 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 1
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 1
- 206010014561 Emphysema Diseases 0.000 description 1
- 206010060742 Endocrine ophthalmopathy Diseases 0.000 description 1
- 206010014824 Endotoxic shock Diseases 0.000 description 1
- 102400001368 Epidermal growth factor Human genes 0.000 description 1
- 101800003838 Epidermal growth factor Proteins 0.000 description 1
- 238000002738 Giemsa staining Methods 0.000 description 1
- 206010018364 Glomerulonephritis Diseases 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 208000003807 Graves Disease Diseases 0.000 description 1
- 208000015023 Graves' disease Diseases 0.000 description 1
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 description 1
- 208000037357 HIV infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 101500025419 Homo sapiens Epidermal growth factor Proteins 0.000 description 1
- 101001074035 Homo sapiens Zinc finger protein GLI2 Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 206010021245 Idiopathic thrombocytopenic purpura Diseases 0.000 description 1
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 102100022339 Integrin alpha-L Human genes 0.000 description 1
- 108010008212 Integrin alpha4beta1 Proteins 0.000 description 1
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 208000029523 Interstitial Lung disease Diseases 0.000 description 1
- LCPYQJIKPJDLLB-UWVGGRQHSA-N Leu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(C)C LCPYQJIKPJDLLB-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010064548 Lymphocyte Function-Associated Antigen-1 Proteins 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 201000009906 Meningitis Diseases 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- GDFAOVXKHJXLEI-VKHMYHEASA-N N-methyl-L-alanine Chemical compound C[NH2+][C@@H](C)C([O-])=O GDFAOVXKHJXLEI-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- AKCRVYNORCOYQT-YFKPBYRVSA-N N-methyl-L-valine Chemical group CN[C@@H](C(C)C)C(O)=O AKCRVYNORCOYQT-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 206010065159 Polychondritis Diseases 0.000 description 1
- 208000012654 Primary biliary cholangitis Diseases 0.000 description 1
- 201000001263 Psoriatic Arthritis Diseases 0.000 description 1
- 208000036824 Psoriatic arthropathy Diseases 0.000 description 1
- 239000012979 RPMI medium Substances 0.000 description 1
- 208000013616 Respiratory Distress Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000025747 Rheumatic disease Diseases 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 206010042033 Stevens-Johnson syndrome Diseases 0.000 description 1
- 231100000168 Stevens-Johnson syndrome Toxicity 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010052779 Transplant rejections Diseases 0.000 description 1
- OKJPEAGHQZHRQV-UHFFFAOYSA-N Triiodomethane Natural products IC(I)I OKJPEAGHQZHRQV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000006704 Ulcerative Colitis Diseases 0.000 description 1
- 206010046851 Uveitis Diseases 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 208000010399 Wasting Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 102100035558 Zinc finger protein GLI2 Human genes 0.000 description 1
- DHKHKXVYLBGOIT-UHFFFAOYSA-N acetaldehyde Diethyl Acetal Natural products CCOC(C)OCC DHKHKXVYLBGOIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001241 acetals Chemical class 0.000 description 1
- 239000003377 acid catalyst Substances 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 208000038016 acute inflammation Diseases 0.000 description 1
- 230000006022 acute inflammation Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 208000011341 adult acute respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 1
- 201000000028 adult respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 1
- 150000001350 alkyl halides Chemical class 0.000 description 1
- 230000002152 alkylating effect Effects 0.000 description 1
- 230000029936 alkylation Effects 0.000 description 1
- 238000005804 alkylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 description 1
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 1
- 201000003710 autoimmune thrombocytopenic purpura Diseases 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 238000010322 bone marrow transplantation Methods 0.000 description 1
- MCQRPQCQMGVWIQ-UHFFFAOYSA-N boron;methylsulfanylmethane Chemical compound [B].CSC MCQRPQCQMGVWIQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010006451 bronchitis Diseases 0.000 description 1
- 210000005252 bulbus oculi Anatomy 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 125000002837 carbocyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 102000008373 cell-cell adhesion mediator activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040002566 cell-cell adhesion mediator activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 210000003161 choroid Anatomy 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 208000037976 chronic inflammation Diseases 0.000 description 1
- 230000006020 chronic inflammation Effects 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 125000000753 cycloalkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 1
- 238000006356 dehydrogenation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 150000008049 diazo compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 208000010643 digestive system disease Diseases 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 230000035622 drinking Effects 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 229940116977 epidermal growth factor Drugs 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 235000013861 fat-free Nutrition 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 229940044627 gamma-interferon Drugs 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 230000026030 halogenation Effects 0.000 description 1
- 238000005658 halogenation reaction Methods 0.000 description 1
- 208000014951 hematologic disease Diseases 0.000 description 1
- 208000007475 hemolytic anemia Diseases 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 229940116978 human epidermal growth factor Drugs 0.000 description 1
- 208000033519 human immunodeficiency virus infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 229960000890 hydrocortisone Drugs 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- TUJKJAMUKRIRHC-UHFFFAOYSA-N hydroxyl Chemical compound [OH] TUJKJAMUKRIRHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003463 hyperproliferative effect Effects 0.000 description 1
- 208000016036 idiopathic nephrotic syndrome Diseases 0.000 description 1
- 230000007813 immunodeficiency Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- INQOMBQAUSQDDS-UHFFFAOYSA-N iodomethane Chemical compound IC INQOMBQAUSQDDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010023332 keratitis Diseases 0.000 description 1
- 201000010666 keratoconjunctivitis Diseases 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 208000017169 kidney disease Diseases 0.000 description 1
- 108010091798 leucylleucine Proteins 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 239000006210 lotion Substances 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 206010025135 lupus erythematosus Diseases 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000012533 medium component Substances 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 229910052987 metal hydride Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000004681 metal hydrides Chemical class 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- UKVIEHSSVKSQBA-UHFFFAOYSA-N methane;palladium Chemical compound C.[Pd] UKVIEHSSVKSQBA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002032 methanolic fraction Substances 0.000 description 1
- 125000001160 methoxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])OC(*)=O 0.000 description 1
- XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N methyl 1-acetylthieno[3,2-c]pyrazole-5-carboxylate Chemical compound CC(=O)N1N=CC2=C1C=C(C(=O)OC)S2 XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NTNUDYROPUKXNA-UHFFFAOYSA-N methyl 2-(triphenyl-$l^{5}-phosphanylidene)acetate Chemical compound C=1C=CC=CC=1P(C=1C=CC=CC=1)(=CC(=O)OC)C1=CC=CC=C1 NTNUDYROPUKXNA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000004702 methyl esters Chemical class 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000012452 mother liquor Substances 0.000 description 1
- 206010028417 myasthenia gravis Diseases 0.000 description 1
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 1
- GVUGOAYIVIDWIO-UFWWTJHBSA-N nepidermin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(C)C)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 GVUGOAYIVIDWIO-UFWWTJHBSA-N 0.000 description 1
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 231100001222 nononcogenic Toxicity 0.000 description 1
- 238000012758 nuclear staining Methods 0.000 description 1
- 239000012038 nucleophile Substances 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 230000000414 obstructive effect Effects 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000004768 organ dysfunction Effects 0.000 description 1
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 206010035653 pneumoconiosis Diseases 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 1
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 1
- 230000010410 reperfusion Effects 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 238000007363 ring formation reaction Methods 0.000 description 1
- 201000000306 sarcoidosis Diseases 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 238000009738 saturating Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 208000017520 skin disease Diseases 0.000 description 1
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WRIKHQLVHPKCJU-UHFFFAOYSA-N sodium bis(trimethylsilyl)amide Chemical compound C[Si](C)(C)N([Na])[Si](C)(C)C WRIKHQLVHPKCJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 150000003463 sulfur Chemical class 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- LMBFAGIMSUYTBN-MPZNNTNKSA-N teixobactin Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H]1C(N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C[C@@H]2NC(=N)NC2)C(=O)N[C@H](C(=O)O[C@H]1C)[C@@H](C)CC)=O)NC)C1=CC=CC=C1 LMBFAGIMSUYTBN-MPZNNTNKSA-N 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 125000000437 thiazol-2-yl group Chemical group [H]C1=C([H])N=C(*)S1 0.000 description 1
- 125000000335 thiazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 1
- RIOQSEWOXXDEQQ-UHFFFAOYSA-N triphenylphosphine Chemical compound C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 RIOQSEWOXXDEQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PBYZMCDFOULPGH-UHFFFAOYSA-N tungstate Chemical compound [O-][W]([O-])(=O)=O PBYZMCDFOULPGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003606 umbilical vein Anatomy 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K11/00—Depsipeptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K11/02—Depsipeptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof cyclic, e.g. valinomycins ; Derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
- C12N1/145—Fungal isolates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- A61K38/15—Depsipeptides; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
- A61P11/06—Antiasthmatics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/08—Antiallergic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
- C12P21/02—Preparation of peptides or proteins having a known sequence of two or more amino acids, e.g. glutathione
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Virology (AREA)
- Botany (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Obesity (AREA)
- Hematology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Dermatology (AREA)
Abstract
Описаны циклопептолиды формулы I в свободной форме, в форме соли или сложного эфира
где А обозначает остаток гликолевой кислоты, необязательно α-замещенной метилом, этилом, необязательно замещенным тиазолом; В обозначает остаток α-амино-γ-метилзамещенной октановой кислоты; R1 обозначает метил; С обозначает остаток N-метилтриптофана формулы II
где R1 обозначает алкокси; R4 обозначает метил; R5 - метил; символ обозначает двойную связь; Х обозначает α-аминозамещенной (С2-С14)карбоновой кислоты и Y обозначает остаток N-метил-α-аминозамещенной (С2-С10)карбоновой кислоты, которые являются ингибиторами экспрессии молекул адгезии и ингибиторами высвобождения TNF и которые вследствие этого пригодны для лечения воспалительных и других заболеваний, обусловленных повышенными уровнями экспрессии молекул адгезии, и/или опосредованы TNF. Описана также терапевтическая композиция, обладающая цитотоксической активностью, активностью в отношении ингибирования экспрессии I CAM-1, V CAM-1 и Е - селектина, высвобождения TNF и пролиферации клеток, содержащая терапевтически эффективное количество соединения по п.1 или 2. 2 с. и 1 з.п. ф-лы, 5 ил., 1 табл.
где А обозначает остаток гликолевой кислоты, необязательно α-замещенной метилом, этилом, необязательно замещенным тиазолом; В обозначает остаток α-амино-γ-метилзамещенной октановой кислоты; R1 обозначает метил; С обозначает остаток N-метилтриптофана формулы II
где R1 обозначает алкокси; R4 обозначает метил; R5 - метил; символ обозначает двойную связь; Х обозначает α-аминозамещенной (С2-С14)карбоновой кислоты и Y обозначает остаток N-метил-α-аминозамещенной (С2-С10)карбоновой кислоты, которые являются ингибиторами экспрессии молекул адгезии и ингибиторами высвобождения TNF и которые вследствие этого пригодны для лечения воспалительных и других заболеваний, обусловленных повышенными уровнями экспрессии молекул адгезии, и/или опосредованы TNF. Описана также терапевтическая композиция, обладающая цитотоксической активностью, активностью в отношении ингибирования экспрессии I CAM-1, V CAM-1 и Е - селектина, высвобождения TNF и пролиферации клеток, содержащая терапевтически эффективное количество соединения по п.1 или 2. 2 с. и 1 з.п. ф-лы, 5 ил., 1 табл.
Description
Изобретение относится к циклопептолидам и к их терапевтическому применению в качестве ингибиторов экспрессии молекул адгезии.
Молекулы клеточной адгезии, такие как ICAM-1 (молекула межклеточной адгезии), VCAM-1 (молекула сосудистой адгезии) и E-селектин, экспрессируются на поверхности эндотелиальных клеток, а также, в случае ICAM-1, на поверхности кератиноцитов в ответ на появление медиаторов, которые являются предшественниками воспаления, таких как TNF α (фактор-альфа некроза опухоли), IFN γ ( γ -интерферон), IL1 (интерлейкин 1) и LPS (липополисахариды). Соответствующие антилиганды, например, LFA-1, VLA-4 и SLEx, экспрессируются на поверхности клеток, находящихся в кровотоке.
Трансэндотелиальная миграция лейкоцитов во время воспалительных процессов, а также внесосудистые взаимосвязи клетка-клетка регулируется в результате взаимодействий между этими молекулами адгезии и их антилингандами.
Следовательно, ингибиторы экспрессии молекул адгезии потенциально пригодны для лечения многих болезненных состояний.
Циклопептолиды представляют собой циклические молекулы, содержащие аминокислотные остатки, сцепленные вместе пептидными связями, и по крайней мере одну гидроксигруппу, замещенную остатком карбоновой кислоты, который связан через свой гидроксильный радикал с соседним остатком кислоты с помощью эфирной связи.
В заявке WO 96/03430 описаны новые циклогептапептолиды, которые являются ингибиторами экспрессии ICAM-1, VCAM-1 и E-селектина. Согласно настоящему изобретению были созданы дополнительные новые циклогептапептолиды из этого же общего класса соединений, в том числе соединения, обладающие особенно важными целевыми свойствами.
Настоящее изобретение относится к циклогептапептолидам формулы I
где A обозначает остаток гликолевой кислоты, необязательно α -замещенный метилом, этилом или винилом, необязательно замещенным галогеном, алкоксигруппой, необязательно защищенной гидрокси- или аминозащитной группой, CSNH2, COOR2, винилом или -C≡CH или тиазолом,
где R2 обозначает H или (низш.)алкил, необязательно замещенный алкилом, галогеном, циклоалкилом, необязательно замещенным тиазолом, COOR2 или -C≡CH, где R2 имеет указанное выше значение;
B обозначает остаток α -амино- γ -метилзамещенной октановой кислоты;
R1 обозначает водород или метил;
C обозначает триптофан или остаток N-метилтриптофана формулы II
где R3 обозначает водород, алкокси, алкил или бензил, R4 обозначает водород или галоген, R5 обозначает водород или метил и символ обозначает простую или двойную связь;
X обозначает остаток α -аминозамещенной C2-C14 карбоновой кислоты и
Y обозначает остаток α -амино- или N-метил- α -аминозамещенной C2-С10 карбоновой кислоты, при условии, что A не обозначает остаток незамещенной α -гидроксизамещенной масляной кислоты, и при условии, что, когда A обозначает остаток гликолевой кислоты, α -замещенной этилом, этильный остаток необязательно замещен только амино-, гидроксигруппой, хлором, алкоксигруппой, необязательно замещенной тиазолом, необязательно замещенным винилом, циклопропилом, CSNH2 или -C≡CH.
В формуле I ориентация аминокислотных остатков от N-конца к C-концу происходит по часовой стрелке, а пептолидная эфирная связь находится между остатками A и Y. Когда R1 обозначает метил, остатки R1-Leu и Leu обозначают остатки N-метиллейцина и лейцина соответственно.
где A обозначает остаток гликолевой кислоты, необязательно α -замещенный метилом, этилом или винилом, необязательно замещенным галогеном, алкоксигруппой, необязательно защищенной гидрокси- или аминозащитной группой, CSNH2, COOR2, винилом или -C≡CH или тиазолом,
где R2 обозначает H или (низш.)алкил, необязательно замещенный алкилом, галогеном, циклоалкилом, необязательно замещенным тиазолом, COOR2 или -C≡CH, где R2 имеет указанное выше значение;
B обозначает остаток α -амино- γ -метилзамещенной октановой кислоты;
R1 обозначает водород или метил;
C обозначает триптофан или остаток N-метилтриптофана формулы II
где R3 обозначает водород, алкокси, алкил или бензил, R4 обозначает водород или галоген, R5 обозначает водород или метил и символ обозначает простую или двойную связь;
X обозначает остаток α -аминозамещенной C2-C14 карбоновой кислоты и
Y обозначает остаток α -амино- или N-метил- α -аминозамещенной C2-С10 карбоновой кислоты, при условии, что A не обозначает остаток незамещенной α -гидроксизамещенной масляной кислоты, и при условии, что, когда A обозначает остаток гликолевой кислоты, α -замещенной этилом, этильный остаток необязательно замещен только амино-, гидроксигруппой, хлором, алкоксигруппой, необязательно замещенной тиазолом, необязательно замещенным винилом, циклопропилом, CSNH2 или -C≡CH.
В формуле I ориентация аминокислотных остатков от N-конца к C-концу происходит по часовой стрелке, а пептолидная эфирная связь находится между остатками A и Y. Когда R1 обозначает метил, остатки R1-Leu и Leu обозначают остатки N-метиллейцина и лейцина соответственно.
Предпочтительно A обозначает остаток гликолевой кислоты, α -замещенной метилом или этилом, необязательно замещенным амино-, гидроксигруппой, хлором, алкоксигруппой, необязательно замещенной тиазолом, необязательно замещенным винилом, циклопропилом, CSNH2 или -C≡CH.
Предпочтительно C обозначает остаток N-метилтриптофана формулы II, где R3 обозначает водород, C1-C4 алкокси (прежде всего метокси) или алкил и R4 обозначает водород или галоген.
Предпочтительно C обозначает остаток N-метилтриптофана формулы II, где R3 обозначает водород, C1-C4 алкокси (прежде всего метокси) или алкил и R4 обозначает водород или галоген.
Предпочтительно X обозначает остаток α -аминозамещенной C4-C8 карбоновой кислоты, который необязательно является β - или γ -замещенным C1-C4 алкилом. Наиболее предпочтительно X обозначает остаток октановой или масляной кислоты, α -амино- β - или γ -замещенный C1-C4 алкилом, предпочтительно метилом.
Предпочтительно Y обозначает остаток N-метил- α -аминозамещенной C2-C4 карбоновой кислоты, который необязательно является β - или γ -замещенным C1-C4 алкилом. Наиболее предпочтительно Y обозначает остаток N-метилаланина или N-метилвалина.
Изобретение включает пептиды или пептолиды с открытой цепью, соответствующие соединениям формулы I; например, молекулы с открытой цепью, полученные в результате разрыва сложноэфирной химической связи между остатками Y и A или разрыва амидной связи между любой другой соседней парой остатков кислоты. Предпочтительно производные с открытой цепью представляют собой соединения формул IV или V
H-C-X-Y-A-B-R1Leu-Leu.OR7 (IV)
и
HA-B-R1Leu-Leu-C-X-Y.OR7, (V)
где R7 обозначает водород или алкил, например, C1-C4 (низш.)алкил.
H-C-X-Y-A-B-R1Leu-Leu.OR7 (IV)
и
HA-B-R1Leu-Leu-C-X-Y.OR7, (V)
где R7 обозначает водород или алкил, например, C1-C4 (низш.)алкил.
В соответствии с одним из вариантов осуществления изобретения предпочтительными являются соединения формулы Ip
где Ap обозначает остаток гликолевой кислоты, необязательно α -замещенной метилом;
Bp обозначает остаток α -амино- γ -метилзамещенной октановой кислоты;
R1p обозначает водород или метил;
C обозначает триптофан или остаток N-метилтриптофана, который необязательно замещен N'-C1-C4 алкоксигруппой;
Xp обозначает остаток α -аминозамещенной C2-C14 карбоновой кислоты;
Yp обозначает остаток α -амино- или N-метил- α -аминозамещенной C2-C10 карбоновой кислоты.
где Ap обозначает остаток гликолевой кислоты, необязательно α -замещенной метилом;
Bp обозначает остаток α -амино- γ -метилзамещенной октановой кислоты;
R1p обозначает водород или метил;
C обозначает триптофан или остаток N-метилтриптофана, который необязательно замещен N'-C1-C4 алкоксигруппой;
Xp обозначает остаток α -аминозамещенной C2-C14 карбоновой кислоты;
Yp обозначает остаток α -амино- или N-метил- α -аминозамещенной C2-C10 карбоновой кислоты.
В соответствии с еще одним вариантом осуществления изобретения предпочтительными являются соединения формулы I'p
где Bp, R1p, Cp, Xp и Yp имеют значения, указанные выше, а A'p обозначает остаток α -гидроксизамещенной масляной кислоты, γ -замещенный группой формулы VI
где R2 обозначает (низш. )алкильную группу, например, C1-C4 (низш. )алкильную группу.
где Bp, R1p, Cp, Xp и Yp имеют значения, указанные выше, а A'p обозначает остаток α -гидроксизамещенной масляной кислоты, γ -замещенный группой формулы VI
где R2 обозначает (низш. )алкильную группу, например, C1-C4 (низш. )алкильную группу.
Наиболее предпочтительно R2 обозначает метил или этил.
В соответствии с еще одним вариантом осуществления изобретения предпочтительными являются соединения формулы I''p
где Bp, R1p, Cp, Xp и Yp имеют значения, указанные выше, а A''p обозначает остаток α -гидроксизамещенной масляной кислоты, γ -змещенный группой формулы VII
, (VII)
где R6 обозначает водород, (низш.)алкил или фенил или образует карбоциклическое кольцо, соединяясь в положении 5 с тиазолильным кольцом.
где Bp, R1p, Cp, Xp и Yp имеют значения, указанные выше, а A''p обозначает остаток α -гидроксизамещенной масляной кислоты, γ -змещенный группой формулы VII
, (VII)
где R6 обозначает водород, (низш.)алкил или фенил или образует карбоциклическое кольцо, соединяясь в положении 5 с тиазолильным кольцом.
Соединения формул I, IV, V, Ip, I'p и I''p в контексте настоящего описания далее обозначены как "соединения по изобретению", и это понятие также включает все соединения по изобретению, которые находятся в форме соли или сложного эфира или в свободной форме.
Соединения по изобретению содержат асимметричные атомы и, следовательно, могут находиться в различных эпимерных формах. Все возможные эпимеры, а также их диастереоизомерные смеси подпадают под объем изобретения. Предпочтительными являются эпимеры, которые обладают способностью ингибировать экспрессию молекул адгезии. В целом, например, для фармацевтического применения в соответствии с изобретением предпочтительными будут являться эпимеры, которые обладают способностью ингибировать экспрессию молекул адгезии, в чистой или в практически чистой форме (т.е. свободные или практически свободные от эпимеров, которые не обладают способностью ингибировать экспрессию молекул адгезии), например, содержащие по крайней мере 90%, например, по крайней мере 95%, активного эпимера (т.е. содержащие менее 10%, например, менее 5%, неактивного эпимера). Наиболее предпочтительные соединения по изобретению имеют такую же стереохимическую конформацию циклопептолидного кольца, которая характерна для наиболее предпочтительного соединения формулы VII, приведенного ниже.
Особенно предпочтительными соединениями по изобретению являются соединения формул VIII, IX и X
Соединения формулы VIII были выделены из культур штамма грибов F/94-499709, образцы которого в соответствии с Будапештским соглашением депонированы в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур (DSM) 18 сентября 1995 г. и получили регистрационный номер DSM 10275.
Соединения формулы VIII были выделены из культур штамма грибов F/94-499709, образцы которого в соответствии с Будапештским соглашением депонированы в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур (DSM) 18 сентября 1995 г. и получили регистрационный номер DSM 10275.
Характеристики штамма грибов F/94-499709 приведены ниже в примере 1 настоящего описания. Соединение формулы VIII является заслуживающим особого внимания соединением по изобретению.
Образцы штамма F/94-499709 также могут быть получены на фирме Sandox Ltd., CH-4002, Базель, Швейцария.
При этом следует отметить, что доступ к образцам DSM 10275 ограничен в соответствии с условиями правила 28(4) и (5) Европейской патентной конвенции.
Изобретение включает штамм F/94-499709 (DSM 10275) в выделенной форме и его мутанты и производные, а также новые циклопептолиды, которые продуцируются этим штаммом.
Соединения формулы VIII и родственные соединения могут быть получены при культивировании штамма F/94- 499709 (DSM 10275) или его мутанта или производного или близких к нему видов грибов в питательной среде и путем выделения из нее соединений, например, согласно примеру 2.
Характеристики соединения формулы VIII приведены в примере 3.
Соединения по изобретению могут быть получены путем образования производных соединений формул XI или XII (как представлено ниже в настоящем описании) или VIII способом, включающим
а) для получения соединений формулы I, где A замещен группой COOR2, взаимодействие соединений формулы I, где A замещен CN, с нуклеофилами, предпочтительно со спиртом, в присутствии пригодного основного или кислотного катализатора, предпочтительно соляной кислоты, в органических растворителях, предпочтительно в простом эфире, или
б) для получения соединений формулы I, где A замещен алкоксиметилом, взаимодействие соединений формулы I, где A замещен группой CH2-OH, с алкилирующими соединениями, такими, как алкилгалогениды или диазосоединения, в присутствии катализатора или без него, или
в) для получения соединений формулы I, где A замещен группой COOR2, образование сложных эфиров соответствующих соединений формулы I, где A замещен группой COOH, стандартными методами, предпочтительно превращением в хлорангидрид с помощью, например, тионилхлорида, и обработки соответствующим спиртом в присутствии акцептора кислоты или без него, или
г) для получения соединений формулы I, где A замещен CH2OH, восстановление соответствующих соединений формулы I, где A замещен группой COOR2, гидридами металлов или борангидридами, предпочтительно комплексом боран-диметилсульфид, в органических растворителях, или
д) для получения соединений формулы I, где A замещен необязательно замещенным винилом, взаимодействие соединений формулы I, где A замещен группой CHO, с реагентом Виттига, или
е) для получения соединений формулы I, где A замещен CH2NH2, восстановление соответствующих соединений формулы I, где A замещен группой CH2N3, или
ж) для получения соединений формулы I, где A замещен группой дегидрирование соответствующих соединений формулы I, где A замещен группой CH= CBr2, или
з) для получения соединений формулы I, где A замещен циклопропилом, взаимодействие соответствующих соединений формулы I, где A замещен винилом, с диазометаном, или
и) для получения соединений формулы I, где A замещен группой CSNH2, взаимодействие соответствующих соединений формулы I, где A замещен группой CN, с производными серы, предпочтительно с дифенилфосфиндитионовой кислотой, например, путем кипячения с обратным холодильником раствора серусодержащего соединения с соединением формулы I, где A замещен группой CN, или
к) для получения предпочтительных соединений формулы I''p
где заместители имеют значения, указанные выше, взаимодействие соединения формулы I''p, где A''p обозначает остаток α -гидроксизамещенной масляной кислоты, γ -замещенный группой -CS-NH2, с α -галоидкарбонильным соединением формулы XIII
Hal-CH2-CO-R6, (XIII)
где R6 имеет значения, указанные выше, a Hal обозначает галоген, или с ацеталем соединения формулы XIII
(реакция может быть проведена в соответствии с известными методами, например, взаимодействием раствора соединения формулы II в растворителе, инертном в условиях реакции, например, в диметилформамиде или пиридине, при повышенной температуре, предпочтительно при 60-100oC; конечный продукт может быть выделен и очищен общепринятыми способами), или
л) для получения предпочтительных соединений формулы I'p
где заместители имеют значения, указанные выше, взаимодействие соединения формулы I'p, где A'p обозначает остаток α -гидроксизамещенной масляной кислоты, γ -замещенный группой -CHO, с алкоксикарбонилметилентрифенилфосфораном и выделение соединений формулы I'p, или
м) для получения соединений формулы I, где R3 обозначает водород, удаление метоксигруппы из соединений формулы I, где R3 обозначает OCH3, или
н) для получения соединений формулы I, в которых символ обозначает простую связь, восстановление соединений формулы I, в которых символ обозначает двойную связь, или
о) для получения соединений формулы I, где R3 обозначает алкил или бензил, введение этих групп в соединения формулы I, где R3 обозначает водород, или
п) для получения соединений формулы I, где R4 обозначает галоген, галогенирование соединений формулы I, где R4 обозначает водород, или
р) для получения соединений формулы I, где R3 обозначает алкокси и символ обозначает двойную связь, взаимодействие соединения формулы I,
где R3 обозначает водород и символ обозначает простую связь, с щелочным вольфраматом и перекисью водорода и алкилирование N-гидроксииндольного промежуточного продукта и при необходимости выделение соединения формулы I.
а) для получения соединений формулы I, где A замещен группой COOR2, взаимодействие соединений формулы I, где A замещен CN, с нуклеофилами, предпочтительно со спиртом, в присутствии пригодного основного или кислотного катализатора, предпочтительно соляной кислоты, в органических растворителях, предпочтительно в простом эфире, или
б) для получения соединений формулы I, где A замещен алкоксиметилом, взаимодействие соединений формулы I, где A замещен группой CH2-OH, с алкилирующими соединениями, такими, как алкилгалогениды или диазосоединения, в присутствии катализатора или без него, или
в) для получения соединений формулы I, где A замещен группой COOR2, образование сложных эфиров соответствующих соединений формулы I, где A замещен группой COOH, стандартными методами, предпочтительно превращением в хлорангидрид с помощью, например, тионилхлорида, и обработки соответствующим спиртом в присутствии акцептора кислоты или без него, или
г) для получения соединений формулы I, где A замещен CH2OH, восстановление соответствующих соединений формулы I, где A замещен группой COOR2, гидридами металлов или борангидридами, предпочтительно комплексом боран-диметилсульфид, в органических растворителях, или
д) для получения соединений формулы I, где A замещен необязательно замещенным винилом, взаимодействие соединений формулы I, где A замещен группой CHO, с реагентом Виттига, или
е) для получения соединений формулы I, где A замещен CH2NH2, восстановление соответствующих соединений формулы I, где A замещен группой CH2N3, или
ж) для получения соединений формулы I, где A замещен группой дегидрирование соответствующих соединений формулы I, где A замещен группой CH= CBr2, или
з) для получения соединений формулы I, где A замещен циклопропилом, взаимодействие соответствующих соединений формулы I, где A замещен винилом, с диазометаном, или
и) для получения соединений формулы I, где A замещен группой CSNH2, взаимодействие соответствующих соединений формулы I, где A замещен группой CN, с производными серы, предпочтительно с дифенилфосфиндитионовой кислотой, например, путем кипячения с обратным холодильником раствора серусодержащего соединения с соединением формулы I, где A замещен группой CN, или
к) для получения предпочтительных соединений формулы I''p
где заместители имеют значения, указанные выше, взаимодействие соединения формулы I''p, где A''p обозначает остаток α -гидроксизамещенной масляной кислоты, γ -замещенный группой -CS-NH2, с α -галоидкарбонильным соединением формулы XIII
Hal-CH2-CO-R6, (XIII)
где R6 имеет значения, указанные выше, a Hal обозначает галоген, или с ацеталем соединения формулы XIII
(реакция может быть проведена в соответствии с известными методами, например, взаимодействием раствора соединения формулы II в растворителе, инертном в условиях реакции, например, в диметилформамиде или пиридине, при повышенной температуре, предпочтительно при 60-100oC; конечный продукт может быть выделен и очищен общепринятыми способами), или
л) для получения предпочтительных соединений формулы I'p
где заместители имеют значения, указанные выше, взаимодействие соединения формулы I'p, где A'p обозначает остаток α -гидроксизамещенной масляной кислоты, γ -замещенный группой -CHO, с алкоксикарбонилметилентрифенилфосфораном и выделение соединений формулы I'p, или
м) для получения соединений формулы I, где R3 обозначает водород, удаление метоксигруппы из соединений формулы I, где R3 обозначает OCH3, или
н) для получения соединений формулы I, в которых символ обозначает простую связь, восстановление соединений формулы I, в которых символ обозначает двойную связь, или
о) для получения соединений формулы I, где R3 обозначает алкил или бензил, введение этих групп в соединения формулы I, где R3 обозначает водород, или
п) для получения соединений формулы I, где R4 обозначает галоген, галогенирование соединений формулы I, где R4 обозначает водород, или
р) для получения соединений формулы I, где R3 обозначает алкокси и символ обозначает двойную связь, взаимодействие соединения формулы I,
где R3 обозначает водород и символ обозначает простую связь, с щелочным вольфраматом и перекисью водорода и алкилирование N-гидроксииндольного промежуточного продукта и при необходимости выделение соединения формулы I.
В предпочтительных, указанных выше вариантах осуществления а)-и) соединения формулы I представляют собой те соединения формулы I, в которых A обозначает остаток α -гидроксимасляной кислоты, γ -замещенный группой COOR2, CN, алкоксиметилом, CH2-OH, COOH, при необходимости необязательно замещенным винилом, CHO, CH2NH2, CH2N3, C≡CH, CH=CBr2, циклопропилом или винилом.
Промежуточные продукты для получения соединений формулы I могут быть получены следующим образом:
(I) для получения промежуточных продуктов, в которых A замещен -CHO, окислением соответствующих соединений формулы I, в которых A замещен -CH2OH, и
(II) для получения промежуточных продуктов, в которых A замещен -COOH, гидролизом соответствующих соединений формулы I, в которых A замещен COO алкилом, с помощью неорганической кислоты, например, HCl, в водном спиртовом растворе или с помощью основания.
(I) для получения промежуточных продуктов, в которых A замещен -CHO, окислением соответствующих соединений формулы I, в которых A замещен -CH2OH, и
(II) для получения промежуточных продуктов, в которых A замещен -COOH, гидролизом соответствующих соединений формулы I, в которых A замещен COO алкилом, с помощью неорганической кислоты, например, HCl, в водном спиртовом растворе или с помощью основания.
Промежуточные продукты для получения соединений формулы I, в которых A замещен -CN, включают природные соединения. Например, соединения формул XI и XII
могут быть получены в виде изолятов из культур штамма гриба F92-4471/08, депонированного в соответствии с Будапештским соглашением в Коллекции культур департамента сельского хозяйства США (NRRL) 2 июля 1993 г. и получившего регистрационный номер NRRL 21123. Характеристики штамма гриба F92-4471/08 и выделение соединений XI и XII подробно описаны в международной заявке WO 96/03430.
могут быть получены в виде изолятов из культур штамма гриба F92-4471/08, депонированного в соответствии с Будапештским соглашением в Коллекции культур департамента сельского хозяйства США (NRRL) 2 июля 1993 г. и получившего регистрационный номер NRRL 21123. Характеристики штамма гриба F92-4471/08 и выделение соединений XI и XII подробно описаны в международной заявке WO 96/03430.
Соединения по изобретению могут быть получены также путем химического синтеза, например, с использованием общепринятых методов синтеза пептидов. Обычно конечной стадией при получении соединений является стадия циклизации, при которой линейный пептид или пептолид, содержащий остатки кислот A, B, R1Leu, Leu, C, X или Y, связанные друг с другом соответствующим образом, циклизуют с помощью реакции, приводящей к образованию амидной или сложноэфирной связи.
Таким образом, изобретение относится к способу получения циклического пептолида формулы I, включающему циклизацию линейного пептида или пептолида, содержащего остатки кислот A, B, R1Leu, Leu, C, X или Y, связанные друг с другом соответствующим образом.
Соединения по изобретению обладают фармакологической активностью и, следовательно, пригодны для применения в качестве фармацевтических препаратов. В частности, соединения по изобретению являются ингибиторами стимулированной экспрессии молекул клеточной адгезии, прежде всего эффективными ингибиторами экспрессии VCAM-1 по сравнению с E-селектином и ICAM-1. В частности, соединения по изобретению также являются ингибиторами высвобождения TNF, например, ингибиторами высвобождения TNFα.
Исследования, которые могут применяться для выявления ингибирования экспрессии ICAM-1, VCAM-1 и E-селектина и для выявления ингибирования высвобождения TNF α соединениями по изобретению, описаны ниже в примерах.
Исследования, которые могут применяться для выявления ингибирования экспрессии ICAM-1, VCAM-1 и E-селектина и для выявления ингибирования высвобождения TNF α соединениями по изобретению, описаны ниже в примерах.
Таким образом, с точки зрения их активности в качестве ингибиторов экспрессии молекул клеточной адгезии соединения пригодны для лечения или профилактики болезненных состояний, которые вызывают экспрессию молекул клеточной адгезии. Эти болезненные состояния включают целый ряд приобретенных и врожденных заболеваний/расстройств, при которых происходит активация лейкоцитов, а их транспорт играет основную роль в патогенном процессе, в том числе большинство известных острых и хронических воспалений (например, аллергию, астму, дерматит, псориаз, повреждение при реперфузии и септический шок), аутоиммунные состояния (например, диабет, рассеянный склероз и ревматоидный артрит) и опосредованную иммунной системой нейродегенерацию (например, приобретенные нарушения, связанные с иммунодефицитом). Другие показания для соединений по изобретению включают метастаз опухоли (например, меланомы, остеокарциномы), атеросклероз и отторжение аллотрансплантата/ксенотрансплантата, поскольку известно, что ингибирование молекул сосудистой адгезии может в значительной степени улучшить прогноз в отношении этих процессов.
Соединения по изобретению также обладают терапевтическим потенциалом в отношении гиперпролиферативных заболеваний кожи (например, псориаза), а также различных злокачественных заболеваний, принимая во внимание их ингибирующую активность в субмикромолярных концентрациях, которая выявлена при тестировании в течение 72 ч в опытах по изучению пролиферации кератиноцитов, а также других клеток.
Соединения по изобретению обладают активностью в отношении ингибирования ВИЧ, индуцированного TNF α/IL-6, в клеточной линии моноцитов U1, что показано с помощью метода p24 ELISA, и, следовательно, пригодны для лечения заболеваний, связанных с иммунодефицитом, и заболеваний вирусной этиологии, прежде всего для лечения СПИДа.
Таким образом, принимая во внимание их активность в качестве ингибиторов высвобождения TNF, соединения по изобретению пригодны для профилактики и лечения заболеваний или патологических состояний, опосредованных TNF, прежде всего TNF α , например, воспалительных состояний, аутоиммунных заболеваний, тяжелых инфекций и отторжений трансплантата органа или ткани, включая как отторжение аллотрансплантата, так и ксенотрансплантата, например, для лечения реципиентов, имеющих трансплантаты сердца, легкого, комбинации сердце-легкое, печени, почки, панкреатической железы, кожи или роговицы, и для предупреждения реакции "трансплантат против хозяина", такой, как возникающая после трансплантаций костного мозга.
Соединения по изобретению особенно пригодны для лечения, предупреждения или уменьшения интенсивности заболевания и воспалительных состояний, в частности, воспалительных состояний, этиология которых включает аутоиммунный компонент, таких, как артрит (например, ревматоидный артрит, хронический прогрессирующий артрит и деформирующий артрит) и ревматические заболевания. Конкретные аутоиммунные заболевания, для которых могут применяться соединения по изобретению, включают аутоиммунные гематологические расстройства (включая, например, гемолитическую анемию, апластическую анемию, чистую анемию красных клеток и идиопатическую тромбоцитопению), красную волчанку, полихондрит, склеродому, гранулематоз Вегенера, дерматомиозит, хронический активный гепатит, тяжелую псевдопаралитическую миастению, псориаз, синдром Стивенса-Джонсона, идиопатическую спру, аутоиммунное воспалительное заболевание пищеварительного тракта (включая, например, язвенный колит и болезнь Крона), эндокринную офталмопатию, болезнь Грейвса, саркоидоз, рассеянный склероз, первичный билиарный цирроз, юношеский диабет (сахарный диабет типа I), увеит (передней и задней сосудистой оболочки глазного яблока), кератоконъюнктивит сухой и весенний кератоконъюнктивит, интерстициальный фиброз легкого, псориатический артрит и гломерулонефрит (без нефротического синдрома или с нефротическим синдромом, например, включающим идиопатический нефротический синдром или минимальное изменение нефропатии).
Соединения по изобретению также пригодны для лечения, предупреждения или улучшения симптомов астмы, бронхита, пневмокониоза, эмфиземы легкого и других обструктивных или воспалительных заболеваний дыхательных путей.
Соединения по изобретению пригодны для лечения нежелательных острых и гиперактивных воспалительных реакций, которые опосредованы TNF, прежде всего TNF α , например, таких, как острые инфекции, в том числе септический шок (например, эндотоксический шок и респираторный дистресс-синдром взрослых), менингит, пневмония; и тяжелые ожоги; а также для лечения кахексии или синдрома истощения, связанного с патологическим высвобождением TNF, в результате инфекции, рака или дисфункции органа, прежде всего, связанной со СПИДом кахексии, например, связанной с ВИЧ-инфекцией или обусловленной ей.
Таким образом, изобретение также относится к терапевтическим композициям, содержащим соединения по изобретению и их терапевтическое применение.
В частности, изобретение относится к способам лечения или профилактики заболевания, при котором происходит экспрессия молекул адгезии, включающим введение пациенту терапевтически эффективного или эффективного с точки зрения профилактики количества соединения по изобретению.
В изобретении также предлагаются терапевтические композиции, содержащие терапевтически эффективное количество соединения по изобретению.
Кроме того, изобретение относится к применению соединения по изобретению для изготовления лекарственных средств, предназначенных для лечения или профилактики заболеваний, при которых происходит экспрессия молекул адгезии.
В частности, изобретение также относится к нескольким дополнительным объектам, которыми являются следующие.
А. Способ ингибирования производства растворимого TNF, прежде всего ТНФ , или уменьшения воспаления у пациента (т.е. у млекопитающего, прежде всего у человека), нуждающегося в таком лечении, включающий введение этому пациенту эффективного количества соединения по изобретению, или способ лечения любого из вышеуказанных состояний, в частности, способ лечения воспалительного или аутоиммунного заболевания или состояния, например, рассеянного склероза или ревматоидного артрита, или облегчения одного или нескольких симптомов любого из вышеуказанных состояний.
Б. Соединение по изобретению для применения в качестве фармацевтического препарата, например, для применения с целью профилактики или лечения заболеваний или патологических состояний, опосредованных TNF, например, в качестве иммуннодепрессанта или противовоспалительного агента, или для применения с целью предупреждения, уменьшения интенсивности или лечения любого заболевания или состояния, описанного выше, например, аутоиммунного или воспалительного заболевания или состояния.
В. Фармацевтическая композиция, включающая соединение по изобретению вместе с фармацевтически приемлемым разбавителем или носителем, например, предназначенная для применения с целью профилактики или лечения заболеваний или патологических состояний, опосредованных TNF, например, в качестве иммуннодепрессанта или противовоспалительного агента, или для применения с целью предупреждения, уменьшения интенсивности или лечения любого заболевания или состояния, описанного выше, например, аутоиммунного или воспалительного заболевания или состояния.
Г. Применение соединения по изобретению при изготовлении лекарственного средства, предназначенного для применения с целью профилактики или лечения заболеваний или патологических состояний, опосредованных TNF, например, в качестве иммуннодепрессанта или противовоспалительного агента, или для применения с целью предупреждения, уменьшения интенсивности или лечения любого заболевания или состояния, описанного выше, например, аутоиммунного или воспалительного заболевания или состояния.
Композиции могут быть предназначены для парентерального, орального введения, для применения в виде аэрозоля, для ингаляции или для местного нанесения и обычно включают один или несколько фармацевтически приемлемых носителей, разбавителей или эксципиентов и могут содержать добавки, такие, как стабилизаторы и т.п.
Применяемые дозы соединений могут изменяться в зависимости от состояния или заболевания, подлежащего лечению, в зависимости от того, применяются ли они для лечения или профилактики, в том числе в зависимости от механизма и пути введения. В целом, хотя удовлетворительные результаты получают при введении оральным путем доз от приблизительно 0,05 до приблизительно 10 мг/кг/день, предпочтительно применять от приблизительно 0,1 до приблизительно 7,5 мг/кг/день, более предпочтительно от приблизительно 0,1 до приблизительно 2 мг/кг/день, при использовании однократных или разделенных доз (2-4 раза в день). Альтернативно этому для парентерального введения, например, с помощью капельного внутривенного вливания или инфузии, могут применяться дозы от приблизительно 0,01 до приблизительно 5 мг/кг/день, предпочтительно от приблизительно 0,05 до приблизительно 1 мг/кг/день и более предпочтительно от приблизительно 0,1 до приблизительно 1,0 мг/кг/день.
Таким образом, приемлемые суточные дозы для больных людей составляют от приблизительно 2,5 до приблизительно 500 мг перорально, предпочтительно от приблизительно 5 до приблизительно 250 мг перорально, более предпочтительно от приблизительно 5 до приблизительно 100 мг перорально; или от приблизительно 0,5 до приблизительно 250 мг внутривенно, предпочтительно от приблизительно 2,5 до приблизительно 125 мг внутривенно и более предпочтительно от приблизительно 2,5 до приблизительно 50 мг внутривенно.
Соединения можно вводить с помощью любого принятого метода, в том числе энтерально, парентерально или местно либо с помощью ингалятора. Приемлемыми формами для энтерального введения являются растворы для питья, таблетки или капсулы. Приемлемыми формами для парентерального введения являются инъецируемые растворы или суспензии. Приемлемые формы для местного нанесения включают кремы, лосьоны и т.п. в диапазоне концентраций соединения от 0,01 до 10%, предпочтительно от 0,1 до 1 мас.% в пересчете на массу таких композиций. Пригодные стандартные дозируемые формы для орального введения могут содержать от 1 до 50 мг соединения, обычно от 1 до 10 мг.
Ниже изобретение более подробно поясняется на примерах со ссылкой на прилагаемые чертежи, на которых показано:
на фиг. 1 - УФ-спектр соединения формулы VIII,
на фиг. 2 - ИК-спектр соединения формулы VIII,
на фиг. 3 - FD-масс-спектр соединения формулы VIII,
на фиг. 4 - FD-масс-спектр (с добавлением LiI) соединения формулы VIII и
на фиг. 5 - 1H-ЯМР-спектр соединения формулы VIII в CDCl3.
на фиг. 1 - УФ-спектр соединения формулы VIII,
на фиг. 2 - ИК-спектр соединения формулы VIII,
на фиг. 3 - FD-масс-спектр соединения формулы VIII,
на фиг. 4 - FD-масс-спектр (с добавлением LiI) соединения формулы VIII и
на фиг. 5 - 1H-ЯМР-спектр соединения формулы VIII в CDCl3.
Примеры
Пример 1: Характеристики штамма F/94-499709 (DSM 10275)
Для получения характеристик штамма F/94-499709 используют следующую среду, где концентрации компонентов среды указаны в % в отношении массы к объему (мас. /об. ) в деионизированной воде, а тепловую стерилизацию осуществляют выдержкой в течение 20 мин при 121oC:
MEA: 2%-ный экстракт солода, 0,4%-ный экстракт дрожжей, 2%-ный агар.
Пример 1: Характеристики штамма F/94-499709 (DSM 10275)
Для получения характеристик штамма F/94-499709 используют следующую среду, где концентрации компонентов среды указаны в % в отношении массы к объему (мас. /об. ) в деионизированной воде, а тепловую стерилизацию осуществляют выдержкой в течение 20 мин при 121oC:
MEA: 2%-ный экстракт солода, 0,4%-ный экстракт дрожжей, 2%-ный агар.
При точечной инокуляции на среду MEA в чашках Петри и при инкубации в темноте для штамма F/94-499709 получены следующие характеристики:
Оптимальная для роста температура составляет 24-30oC.
Оптимальная для роста температура составляет 24-30oC.
После 14 дней инкубации колонии достигают диаметра 25-32 мм при 24oC, 30-37 мм при 27oC и 7-15 мм при 33oC. При температуре выше 37oC и ниже 13oC не обнаружено никакого роста штамма F/94-499709.
Колонии, растущие в темноте при 27oC, обычно имеют цвет от кремового до цвета светлой буйволовой кожи, сохраняют форму от относительно плоской до слегка вспученной с развившимся в центре небольшим и ограниченным воздушным мицелием с цветом от белесого до светло-серого. Радиальные бороздки могут становиться заметными, а при виде снизу более темные концентрические зоны могут быть преобладающими. В созревших культурах воздушный и субстратный мицелий в центральных частях колоний может стать темно-серым, в то время как края колоний сохраняют цвет от кремового до цвета светлой буйволовой кожи.
При микроскопическом исследовании не обнаружено никаких спорулирующих структур, и, следовательно, штамм F/94-499709 условно можно назвать mycelium sterilum (штаммом со стерильным мицелием).
Пример 2: Ферментация штамма F/94-499709
Для получения соединения формулы VIII путем ферментации штамма F/94-499709 пригодными для применения являются следующая среда и процессы. Если не указано иное, все концентрации компонентов среды указаны в % в отношении массы к объему (мас./об.) в деионизированной воде, а тепловую стерилизацию осуществляют выдержкой в течение 20 мин при 121oC:
PCM: (предкультуральная и промежуточная культуральная среда): 2%-ный экстракт солода, 0,4%-ный экстракт дрожжей, 0,1%-ный агар.
Для получения соединения формулы VIII путем ферментации штамма F/94-499709 пригодными для применения являются следующая среда и процессы. Если не указано иное, все концентрации компонентов среды указаны в % в отношении массы к объему (мас./об.) в деионизированной воде, а тепловую стерилизацию осуществляют выдержкой в течение 20 мин при 121oC:
PCM: (предкультуральная и промежуточная культуральная среда): 2%-ный экстракт солода, 0,4%-ный экстракт дрожжей, 0,1%-ный агар.
PRM (продуцирующая среда): 2%-ный раствор крахмала, 0,5%-ный экстракт дрожжей, 2%-ная глюкоза, 2%-ный экстракт замоченной кукурузы, 0,5%-ный пептон, 0,2%-ный карбонат кальция.
Предкультуры получают путем оттаивания 2 мл выcеянной суспензии штамма F/94-499709, замороженной жидким азотом, внесения посевного материала в колбу Эрленмейера объемом 500 мл, содержащую 200 мл среды PCM, и инкубации при 24oC в течение 7 дней на роторном шейкере при 200 об/мин.
Для получения первичной промежуточной культуры в каждую из четырнадцати колб Эрленмейера объемом 500 мл, содержащих по 200 мл PCM, в качестве посевного материала вносят 5 мл предкультуры.
Вторичные промежуточные культуры получают путем внесения в качестве посевного материала 1,4 л первичных промежуточных культур в каждый из двух 50-литровых ферментеров, содержащих PCM. Ферментацию проводят в течение 6 дней в следующих условиях: 24oC, 1 л воздуха/мин/1 л среды, лопастные мешалки, вращающиеся со скоростью 150 об/мин, и давление 0,5 бар. Для получения соединения формулы VIII и родственных соединений 13 л вторичной промежуточной культуры вносят в качестве посевного материала в каждый из трех 500-литровых ферментеров, содержащих PRM. Ферментацию проводят в следующих условиях: 21oC, 1 л воздуха/мин/1 л среды, лопастные мешалки, вращающиеся сначала со скоростью 100 об/мин с постепенным повышением скорости до 150 об/мин, и давление 0,5 бар. Через 96 ч собирают 1500 л продукта ферментации и объединяют для выделения целевого соединения формулы VIII и родственных соединений.
Пример 3: Выделение пептолида формулы VIII из штамма F/94-499709
Жидкую среду из 1500 л продукта ферментации вместе с 1700 л этилацетата гомогенизируют в реакторе типа Dispax и интенсивно перемешивают в течение 3 ч. Органическую фазу отделяют с помощью сепаратора типа Westfalia. Эту стадию экстракции повторяют и органические фазы совместно упаривают при пониженном давлении, получая 2745 г экстракта. Экстракт обезжиривают путем трехступенчатой экстракции с использованием 40 л смеси метанол/вода (9:1) и 40 л циклогексана. Метанольные фракции объединяют и упаривают досуха при пониженном давлении, получая 960 г обезжиренного экстракта. Этот экстракт хроматографируют на колонке, содержащей 15 кг сефадекса LH20 в растворе метанола, получая фракции общей массой 135 г, содержащие пептолид формулы VIII. 300 г силикагеля импрегнируют всей фракцией массой 135 г и импрегнированный силикагель затем добавляют в верхнюю часть колонки, содержащей 1,5 кг силикагеля фирмы Merk с зернистостью 0,04-0,063 мм и хроматографируют с использованием 1 л смеси метил-трет-бутиловый эфир/циклогексан в соотношении 1:9, 2:8, 3:7, 4:6, 5:5, 6:4, 7:3, 8:2, 9:1, 3 л МТБЭ и 3 л смеси МТБЭ/метанол (95: 5). Фракцию объемом 1 л собирают и анализируют с помощью ЖХВР (жидкостная хроматография высокого разрешения) и ТСХ (тонкослойная хроматография). Фракции 8 и 9 объединяют и упаривают досуха. После кристаллизации из простого эфира получают 21,9 г чистого пептолида формулы VIII. Дальнейшая очистка маточного раствора и фракций 10-13 с помощью хроматографии на силикагеле H Merck (750 г), которую проводят аналогично описанному выше способу, позволяет получить дополнительную порцию кристаллического циклопептолида формулы VIII.
Жидкую среду из 1500 л продукта ферментации вместе с 1700 л этилацетата гомогенизируют в реакторе типа Dispax и интенсивно перемешивают в течение 3 ч. Органическую фазу отделяют с помощью сепаратора типа Westfalia. Эту стадию экстракции повторяют и органические фазы совместно упаривают при пониженном давлении, получая 2745 г экстракта. Экстракт обезжиривают путем трехступенчатой экстракции с использованием 40 л смеси метанол/вода (9:1) и 40 л циклогексана. Метанольные фракции объединяют и упаривают досуха при пониженном давлении, получая 960 г обезжиренного экстракта. Этот экстракт хроматографируют на колонке, содержащей 15 кг сефадекса LH20 в растворе метанола, получая фракции общей массой 135 г, содержащие пептолид формулы VIII. 300 г силикагеля импрегнируют всей фракцией массой 135 г и импрегнированный силикагель затем добавляют в верхнюю часть колонки, содержащей 1,5 кг силикагеля фирмы Merk с зернистостью 0,04-0,063 мм и хроматографируют с использованием 1 л смеси метил-трет-бутиловый эфир/циклогексан в соотношении 1:9, 2:8, 3:7, 4:6, 5:5, 6:4, 7:3, 8:2, 9:1, 3 л МТБЭ и 3 л смеси МТБЭ/метанол (95: 5). Фракцию объемом 1 л собирают и анализируют с помощью ЖХВР (жидкостная хроматография высокого разрешения) и ТСХ (тонкослойная хроматография). Фракции 8 и 9 объединяют и упаривают досуха. После кристаллизации из простого эфира получают 21,9 г чистого пептолида формулы VIII. Дальнейшая очистка маточного раствора и фракций 10-13 с помощью хроматографии на силикагеле H Merck (750 г), которую проводят аналогично описанному выше способу, позволяет получить дополнительную порцию кристаллического циклопептолида формулы VIII.
Установлено, что при очистке из простого эфира пептолид имеет температуру плавления (tпл) 143-146oC и оптическое вращение [α] =-233,9o (с = 0,908, метанол). Значение IC50-показателя пептолид формулы VIII составляет приблизительно 2 нМ при определении VCAM-1 методом клеточного твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA).
Молекулярная формула: C51H83N7O9 (938,3)
УФ-спектр в метаноле: = 290 (5,4), 279 (5,08), 220 (38,1), 197 (55,7) (см. фиг. 1).
УФ-спектр в метаноле: = 290 (5,4), 279 (5,08), 220 (38,1), 197 (55,7) (см. фиг. 1).
ИК (KBr)-спектр приведен на фиг. 2.
МС-БТЯ- спектр приведен на фиг. 3.
МС-БТЯ-спектр (с LiI) приведен на фиг. 4.
1Н-ЯМР-спектр в CDCl3 приведен на фиг. 5.
МТБЭ обозначает метил-трет-бутиловый эфир.
VCAM обозначает молекулу сосудистой адгезии.
Пример 4: Синтез N1'-дезметоксильного производного соединения формулы VIII
Раствор, содержащий 4,9 г соединения формулы VIII, растворяют в 3 мл метанола и добавляют 8 г палладия на угле (10%-ного). Смесь перемешивают в атмосфере водорода в течение 2 ч, промывают струей аргона, фильтруют и упаривают, получая указанное в заголовке соединение в виде бесцветной пены. Соединение анализируют с помощью тонкослойной хроматографии и ЯМР-спектроскопии, получая следующие результаты:
ТСХ: силикагель, толуол/метанол 9/1, Rf=0,28;
1H-ЯМР (3 конформера 56:37:7, обозначенные символами *, o, ', приведены характеристические сигналы): 8,72* (d, J=10 Гц, NH); 8,08 (s, br, индол, NH); 6,97*, 6,90o (2d, J=2 Гц, индол Н-2); 6,34o (d, J=9,5 Гц, NH); 6,00* (d, J=6,5 Гц, NH); 5,83' (d, NH); 5,32 (ddd, PrLeu α -H); 5,12o, 5,08* (2q, J=7 Гц, молочная кислота Me); 4,50* (dd, MeLeu α -H); 4,10* (ddd, Leu α -H); 3,42 (q, J=7 Гц, MeAla α -H); 3,43o, 3,19o, 3,12*, 2,93*, 2,53*, 2,35o (6s, NMe); 1,54*, 1,50o (2d, J=7 Гц, MeAla α -H); 1,38o, 1,24* (2d, J=7 Гц, молочная кислота α -Н); 0,57*, -0,01* (2d, J=6,5 Гц, Me); -0,19* (ddd, Leu β -H).
Раствор, содержащий 4,9 г соединения формулы VIII, растворяют в 3 мл метанола и добавляют 8 г палладия на угле (10%-ного). Смесь перемешивают в атмосфере водорода в течение 2 ч, промывают струей аргона, фильтруют и упаривают, получая указанное в заголовке соединение в виде бесцветной пены. Соединение анализируют с помощью тонкослойной хроматографии и ЯМР-спектроскопии, получая следующие результаты:
ТСХ: силикагель, толуол/метанол 9/1, Rf=0,28;
1H-ЯМР (3 конформера 56:37:7, обозначенные символами *, o, ', приведены характеристические сигналы): 8,72* (d, J=10 Гц, NH); 8,08 (s, br, индол, NH); 6,97*, 6,90o (2d, J=2 Гц, индол Н-2); 6,34o (d, J=9,5 Гц, NH); 6,00* (d, J=6,5 Гц, NH); 5,83' (d, NH); 5,32 (ddd, PrLeu α -H); 5,12o, 5,08* (2q, J=7 Гц, молочная кислота Me); 4,50* (dd, MeLeu α -H); 4,10* (ddd, Leu α -H); 3,42 (q, J=7 Гц, MeAla α -H); 3,43o, 3,19o, 3,12*, 2,93*, 2,53*, 2,35o (6s, NMe); 1,54*, 1,50o (2d, J=7 Гц, MeAla α -H); 1,38o, 1,24* (2d, J=7 Гц, молочная кислота α -Н); 0,57*, -0,01* (2d, J=6,5 Гц, Me); -0,19* (ddd, Leu β -H).
Пример 5: Синтез N1'-метильного производного соединения формулы VIII
Раствор, содержащий 5 мг продукта, полученного в примере 4, в 0,5 мл безводного ДМФ смешивают со 100 мл йодметана и добавляют раствор, содержащий 3 мг бис(триметилсилил)амида натрия в 0,3 мл ДМФ. После перемешивания реакционной смеси в течение 1,5 ч при комнатной температуре смесь сливают на 0,1М водный раствор HCl, экстрагируют этилацетатом и распределяют между этилацетатом и насыщенным водным раствором бикарбоната натрия. Органическую фазу промывают соляным раствором, сушат над сульфатом натрия и упаривают в вакууме. Неочищенный продукт очищают с помощью хроматографии на силикагеле (градиент: толуол/метанол в соотношении от 100/0,25 до 100/2,5), получая указанное в заголовке соединение в виде бесцветной пены. Соединение анализируют с помощью тонкослойной хроматографии и ЯМР- спектроскопии с получением следующих результатов:
ТСХ: силикагель, толуол/метанол 9/1, Rf=0,40;
1H-ЯМР (2 конформера 60:40, обозначенные символами *, o, приведены характеристические сигналы): 8,72* (d, J=10 Гц, NH); 6,79*, 6,74o (2s, индол, H-2); 6,35o (d, J=9,5 Гц, NH); 5,98* (d, J=6,5 Гц, NH); 5,32o (ddd, PrLeu α -H); 5,12o, 5,08* (2q, J=7 Гц, молочная кислота Me); 4,50* (dd, MeLeu α -H); 4,06* (ddd, Leu α -H); 3,73 (s, индол, NMe); 3,44o, 3,19o, 3,15* 2,93*, 2,53*, 2,35o (6s, NMe); 1,55*, 1,51o (2d, J=7 Гц, MeAla α -H); 1,39o, 1,24* (2d, J= 7 Гц, молочная кислота α -H); 0,57*, -0,09* (2d, J=6,5 Гц, Me); -0,32* (ddd, Leu β -H).
Раствор, содержащий 5 мг продукта, полученного в примере 4, в 0,5 мл безводного ДМФ смешивают со 100 мл йодметана и добавляют раствор, содержащий 3 мг бис(триметилсилил)амида натрия в 0,3 мл ДМФ. После перемешивания реакционной смеси в течение 1,5 ч при комнатной температуре смесь сливают на 0,1М водный раствор HCl, экстрагируют этилацетатом и распределяют между этилацетатом и насыщенным водным раствором бикарбоната натрия. Органическую фазу промывают соляным раствором, сушат над сульфатом натрия и упаривают в вакууме. Неочищенный продукт очищают с помощью хроматографии на силикагеле (градиент: толуол/метанол в соотношении от 100/0,25 до 100/2,5), получая указанное в заголовке соединение в виде бесцветной пены. Соединение анализируют с помощью тонкослойной хроматографии и ЯМР- спектроскопии с получением следующих результатов:
ТСХ: силикагель, толуол/метанол 9/1, Rf=0,40;
1H-ЯМР (2 конформера 60:40, обозначенные символами *, o, приведены характеристические сигналы): 8,72* (d, J=10 Гц, NH); 6,79*, 6,74o (2s, индол, H-2); 6,35o (d, J=9,5 Гц, NH); 5,98* (d, J=6,5 Гц, NH); 5,32o (ddd, PrLeu α -H); 5,12o, 5,08* (2q, J=7 Гц, молочная кислота Me); 4,50* (dd, MeLeu α -H); 4,06* (ddd, Leu α -H); 3,73 (s, индол, NMe); 3,44o, 3,19o, 3,15* 2,93*, 2,53*, 2,35o (6s, NMe); 1,55*, 1,51o (2d, J=7 Гц, MeAla α -H); 1,39o, 1,24* (2d, J= 7 Гц, молочная кислота α -H); 0,57*, -0,09* (2d, J=6,5 Гц, Me); -0,32* (ddd, Leu β -H).
Пример 6: Метиловый эфир 5-[8,11-диизобутил-14-(1-метокси- 1H-индол-3-илметил)-7,13,9,20-тетраметил-5,17-бис(2-метилгексил)- 3,6,9,12,15,18,21-гептаоксо-1-окса-4,7,10,13,16,19- гексаазациклогенеикос-2-ил]-пент-2-еновой кислоты
Раствор, содержащий 185 мг соединения формулы XV (см. ниже) и 1,26 г метоксикарбонилметилентрифенилфосфорана в толуоле, перемешивают при комнатной температуре в течение 1 ч. Затем растворитель выпаривают в вакууме, остаток хроматографируют на колонке для гель-фильтрации типа LH-20 в метаноле, фракции, содержащие продукт, упаривают в вакууме и дополнительно очищают с помощью хроматографии на силикагеле (элюент: градиент смеси толуол/метанол от 99,5/0,5 до 96/4), получая указанный в заголовке продукт в виде бесцветной твердой пены. Этот продукт подвергают лиофилизации из бензола.
Раствор, содержащий 185 мг соединения формулы XV (см. ниже) и 1,26 г метоксикарбонилметилентрифенилфосфорана в толуоле, перемешивают при комнатной температуре в течение 1 ч. Затем растворитель выпаривают в вакууме, остаток хроматографируют на колонке для гель-фильтрации типа LH-20 в метаноле, фракции, содержащие продукт, упаривают в вакууме и дополнительно очищают с помощью хроматографии на силикагеле (элюент: градиент смеси толуол/метанол от 99,5/0,5 до 96/4), получая указанный в заголовке продукт в виде бесцветной твердой пены. Этот продукт подвергают лиофилизации из бензола.
1H-ЯМР (CDCl3 характеристические сигналы, 3 конформера 53:41: 6, обозначенные символами *, o, '): 8,67* (d, J=10 Гц, C9AA NH); 7,87* (d, J=10 Гц, C9AA NH); 7,80o (d, J=10 Гц, NH); 7,69o (d, J=10 Гц, NH); 7,45-7,35 (4d, MeMe ОТrр H-4', H-7'); 7,23*, 7,22o (2m, MeMe ОТrр Н-6'); 7,4 (2m, MeMe ОТrр H-5'); 7,06*, 7,00o (2s, MeMeОТrр H-2'); 6,88o (ddd, J=15 Гц, J=7 Гц, -CH=); 6,76* (ddd, J=15 Гц, J=7 Гц, -CH=); 6,24o (d, J=10 Гц, Leu NH); 6,04* (d, J= 6 Гц, Leu NH); 5,82o, 5,78* (2d, J=15 Гц, =CH-CO); 5,29o (ddd, MeAla α -H); 5,07-4,98 (m, α -H); 4,92 (dd, MeМеОТrр α -Н); 4,86* (ddd, C9AA α -Н); 4,78* (dd, Leu α -H); 4,71 (m, α -H); 4,48* (dd, MeLeu α -H); 4,17* (ddd, Leu α -H); 4,06*, 4,03', 4,02o (3s, N-OMe); 3,75*, 3,74o (2s, COOMe); 3,43o (s, N-Me); 3,20* (s, MeAla NMe); 3,17o (s, N-Me); 2,92* (s, MeMeОТrр-N-Me); 2,52* (s, MeLeu N-Me); 2,47o (s, N-Me); 1,51*, 1,48o (2d, J=7 Гц, MeAla β -Me); 1,04 (d, J=6...5 Гц, MeLeu Me); 0,98-0,84 (m); 0,63* (d, J=6,6 Гц, Leu Me); 0,56', 0,39' (2d); 0,06* (d, J=6,6 Гц, Leu Me); -0,11 (ddd, Leu β -CH).
Работая аналогично примеру 6, получают этиловый эфир.
Исходный продукт формулы XV
является известным (WO 96/03430). В этой формуле заместители имеют следующие значения:
B' означает
X означает
C' означает
Y' означает
В следующих примерах 7-11 применяют такие же сокращения, за исключением того, что
A'' означает
C'' означает
Пример 7: Соединение формулы IX
(т. е. соединение формулы I, в котором A означает A'', R8 означает тиазол-2-ил, B означает В', R1 означает CH3, C означает C'', R3 означает OCH3, символ означает двойную связь, X означает X', Y означает Y').
является известным (WO 96/03430). В этой формуле заместители имеют следующие значения:
B' означает
X означает
C' означает
Y' означает
В следующих примерах 7-11 применяют такие же сокращения, за исключением того, что
A'' означает
C'' означает
Пример 7: Соединение формулы IX
(т. е. соединение формулы I, в котором A означает A'', R8 означает тиазол-2-ил, B означает В', R1 означает CH3, C означает C'', R3 означает OCH3, символ означает двойную связь, X означает X', Y означает Y').
Раствор, содержащий 400 мг соединения формулы I, в котором A означает A'', R8 означает -CSNH2, B означает В', R1 означает CH3, C означает C'', R3 означает OCH3, символ означает двойную связь, X означает X', Y означает Y', и 0,5 мл гидрата хлорацетальдегида в 8 мл безводного диметилформамида перемешивают с 0,5 г молекулярных сит с размером пор 4 и нагревают до 60oC в течение 5 ч. Затем смесь разбавляют этилацетатом, фильтруют и экстрагируют 0,1 н. HCl. Органическую фазу промывают соляным раствором, сушат и упаривают в вакууме. Сырой продукт очищают с помощью хроматографии на силикагеле (элюент: градиент смеси толуол/метанол от 99,5/0,5 до 98/2), получая указанное в заголовке соединение в виде твердой пены.
Работая аналогично примеру 7, получают следующие соединения формулы I (A означает A'', В означает В', R1 означает CH3, C означает C'', R3 означает OCH3, символ означает двойную связь, X означает X', Y означает Y') (табл. 1).
Исходный продукт, т.е. соединение формулы I, в котором A означает A'', R8 означает -CSNH2, В означает В', R1 означает CH3, C означает C', R4 означает OCH3, символ означает двойную связь, X означает X', Y означает Y', получают следующим образом.
Раствор, содержащий 1,1 г соединения формулы XI (A обозначает остаток α -гидроксизамещенной масляной кислоты, γ -замещенный -CN, В означает В', R1 означает CH3, C означает C', R4 означает OCH3, символ означает двойную связь, X означает X', Y означает Y') и 1,8 г дифенилфосфиндитионовой кислоты в 25 мл изопропанола, нагревают с обратным холодильником в течение 7 ч. Реакционную смесь упаривают в вакууме, растворяют в этилацетате и экстрагируют раствором бикарбоната натрия и соляным раствором. После выпаривания органического слоя сырой продукт очищают с помощью хроматографии на силикагеле (элюент: градиент смеси толуол/метанол от 99,5/0,5 до 98/2), получая исходное соединение в виде бесцветной пены.
Соединения из примеров 4-11 обладают активностью, аналогичной таковой соединения формулы VIII при определении VCAM-1 методом клеточного ELISA.
1H-ЯМР-спектр (CDCL3)
Примеры
7. 3 конформера 46:51:3, обозначенные символами *, o, ': 8,70* (d, J=10 Гц, LeuPr NH); 7,89* (d, J=10 Гц, NH); 7,83o (d, J=9 Гц, NH); 7,69, 7,66 (2d, J=3,3 Гц, тиазол Н); 7,58 (d, J=10 Гц, NH); 7,53*, 7,47o (2dm, J=7 Гц, MeТrрOMe Н-4'); 7,38*, 7,37o (2dm, J=8 Гц, MeТrрOMe Н-7'); 7,22*, 7,20o (2tm, MeТrрOMe, Н-6'); 7,17, 7,16 (2d, J=3,3 Гц, тиазол Н); 7,09 (s, MeТrрOMe Н-2'); 7,03*, 7,00o (2dd, MeТrрOMe Н-5'); 6,98o (s, MeТrрOMe Н-2'); 6,18o (d, J=10 Гц, Leu NH); 6,03* (d, J=7 Гц, Leu NH); 5,80' (d, J=10 Гц, Leu NH); 5,30o (ddd, LeuPr α -H); 5,11* (dd, гидроксимасляная кислота α -H); 5,05-4,98 (m, α -Н); 4,94 (dd, MeТrрOMe α -H); 4,86o (ddd, LeuPr α -H); 4,73 (m, α -H); 4,49* (dd, MeLeu α -H); 4,23* (ddd, Leu α -H); 4,02, 4,00 (2s, N-OMe); 3,84o (m, α -H); 3,59-3,40 (m); 3,38 (q, J=7 Гц, MeAla α -H); 3,33 (s, N-Me); 3,2-2,85 (m); 3,21 (s, N-Me); 3,07 (s, N-Me); 2,93* (s, MeТrрOMe N-Me); 2,53* (s, MeLeu N-Me); 2,49 (s, N-Me); 2,43- 2,28 (m); 2,18 (m); 1,98 (m); 1,81 (m); 1,7-1,1 (m); 1,48, 1,46 (2d, J=7 Гц, MeAla β -Me); 1,06* (d, J= 6,5 Гц, MeLeu Me); 1,00- 0,84 (m); 0,61* (d, J=6,6 Гц, Leu Me); 0,54' (d, J=6,6 Гц, Leu Me); 0,35' (d, J=6,6 Гц, Leu Me); 0,10* (d, J=6,6 Гц, Leu Me); -0,12* (ddd, Leu β -CH).
Примеры
7. 3 конформера 46:51:3, обозначенные символами *, o, ': 8,70* (d, J=10 Гц, LeuPr NH); 7,89* (d, J=10 Гц, NH); 7,83o (d, J=9 Гц, NH); 7,69, 7,66 (2d, J=3,3 Гц, тиазол Н); 7,58 (d, J=10 Гц, NH); 7,53*, 7,47o (2dm, J=7 Гц, MeТrрOMe Н-4'); 7,38*, 7,37o (2dm, J=8 Гц, MeТrрOMe Н-7'); 7,22*, 7,20o (2tm, MeТrрOMe, Н-6'); 7,17, 7,16 (2d, J=3,3 Гц, тиазол Н); 7,09 (s, MeТrрOMe Н-2'); 7,03*, 7,00o (2dd, MeТrрOMe Н-5'); 6,98o (s, MeТrрOMe Н-2'); 6,18o (d, J=10 Гц, Leu NH); 6,03* (d, J=7 Гц, Leu NH); 5,80' (d, J=10 Гц, Leu NH); 5,30o (ddd, LeuPr α -H); 5,11* (dd, гидроксимасляная кислота α -H); 5,05-4,98 (m, α -Н); 4,94 (dd, MeТrрOMe α -H); 4,86o (ddd, LeuPr α -H); 4,73 (m, α -H); 4,49* (dd, MeLeu α -H); 4,23* (ddd, Leu α -H); 4,02, 4,00 (2s, N-OMe); 3,84o (m, α -H); 3,59-3,40 (m); 3,38 (q, J=7 Гц, MeAla α -H); 3,33 (s, N-Me); 3,2-2,85 (m); 3,21 (s, N-Me); 3,07 (s, N-Me); 2,93* (s, MeТrрOMe N-Me); 2,53* (s, MeLeu N-Me); 2,49 (s, N-Me); 2,43- 2,28 (m); 2,18 (m); 1,98 (m); 1,81 (m); 1,7-1,1 (m); 1,48, 1,46 (2d, J=7 Гц, MeAla β -Me); 1,06* (d, J= 6,5 Гц, MeLeu Me); 1,00- 0,84 (m); 0,61* (d, J=6,6 Гц, Leu Me); 0,54' (d, J=6,6 Гц, Leu Me); 0,35' (d, J=6,6 Гц, Leu Me); 0,10* (d, J=6,6 Гц, Leu Me); -0,12* (ddd, Leu β -CH).
8. 3 конформера 47:48:5, обозначенные символами *, o, ': 8,64* (d, J=10 Гц, LeuPr NH); 7,82 (2d, J=10 Гц, NH); 7,63o (d, J=10 Гц, NH); 7,23, 7,17, 7,08, 6,97 (4t, аром. H); 7,32, 7,28 (2s, тиазол H); 7,07 (s, MeТrрOMe Н-2'); 6,81 (s, MeТrрOMe H-2'); 6,22o (d, J=10 Гц, Leu NH); 6,07* (d, J=7 Гц, Leu NH); 5,80' (d, J=10 Гц, Leu NH); 5,29o (ddd, LeuPr α -H); 5,20* (dd, MeТrрOMe α -H); 5,12o (dd, гидроксимасляная кислота α -H); 5,03o (ddd, LeuPr α -H); 4,97* (ddd, LeuPr α -H); 4,85 (m, гидроксимасляная кислота + LeuPr α -H); 4,71o (ddd, Leu α -H); 4,52* (dd, MeLeu α -H); 4,21* (ddd, Leu α -H); 4,02, 3,90 (2s, N-OMe); 3,34 (s, N-Me); 3,22 (s, N-Me); 3,02 (s, N-Me); 2,93 (s, N-Me); 2,53 (s, N-Me); 2,48 (s, N-Me); 1,43, 1,42 (2d, J=7 Гц, MeAla β -Ме); 1,06* (d, J=6,5 Гц, MeLeu Me); 0,62* (d, J=6,6 Гц, Leu Me); 0,10* (d, J=6,6 Гц, Leu Me); -0,04* (ddd, Leu β -CH).
9. 3 конформера 42:52:6, обозначенные символами *, oC, ': 8,67 (d, J=10 Гц, LeuPr NH); 7,83, 7,80 (2d, J=10 Гц, NH); 7,63o (d, J=10 Гц, NH); 7,55, 7,42, 7,39, 7,36 (4d, MeТrрOMe аром.); 7,22, 7,18, 7,05, 6,97 (4dd, MeТrрOMe H-5', Н-6'); 7,06o (s, MeТrрOMe Н-2'); 6,88* (s, MeТrрOMe Н-2'); 6,22o (d, J= 10 Гц, Leu NH); 6,02* (d, J=7 Гц, Leu NH); 5,77' (d, J=10 Гц, Leu NH); 5,30o (ddd, LeuPr α -H); 5,21* (dd, MeТrрOMe α -H); 5,0 (m, α -H); 4,85 (m, α -H); 4,65 (ddd, Leu α -H); 4,49* (dd, MeLeu α -H); 4,13* (ddd, Leu α -H); 4,03, 3,98 (2s, N-OMe); 3,70 (m); 3,55 (m); 3,45
(q, J=7 Гц, MeAla α -H); 3,37, 3,20, 3,11, 2,93, 2,52, 2,43 (6s, N-Me); 2,73 (m, тетрагидробензотиазол); 1,50, 1,48 (2d, J=7 Гц, MeAla β -Me); 1,04* (d, J= 6,5 Гц, MeLeu Me); 0,58* (d, J=6,6 Гц, Leu Me); 0,50' (d, J=6,6 Гц, Leu Me); 0,30' (d, J=6,6 Гц, Leu Me); 0,03* (d, J=6,6 Гц, Leu Me); -0,22* (ddd, Leu β -CH).
(q, J=7 Гц, MeAla α -H); 3,37, 3,20, 3,11, 2,93, 2,52, 2,43 (6s, N-Me); 2,73 (m, тетрагидробензотиазол); 1,50, 1,48 (2d, J=7 Гц, MeAla β -Me); 1,04* (d, J= 6,5 Гц, MeLeu Me); 0,58* (d, J=6,6 Гц, Leu Me); 0,50' (d, J=6,6 Гц, Leu Me); 0,30' (d, J=6,6 Гц, Leu Me); 0,03* (d, J=6,6 Гц, Leu Me); -0,22* (ddd, Leu β -CH).
10. 3 конформера 44:51:5, обозначенные символами *, o, ': 8,66* (d, J=10 Гц, LeuPr NH); 7,83, 7,81 (2d, J=10 Гц, NH); 7,63o (d, J=10 Гц, NH); 7,57*, 7,43o, 7,38*, 7,36o (4d, J=8 Гц, индол-H); 7,21*, 7,18o, 7,05, 6,97 (4t, индол-H); 7,06* (s, MeТrрOMe Н- 2'); 6,88o (s, MeТrрOMe Н-2'); 6,70o, 6,69* (2q, J= 1 Гц, тиазол-H); 6,23o (d, J=10 Гц, Leu NH); 6,05o (d, J=7 Гц, Leu NH); 5,80' (d, J=10 Гц, Leu NH); 5,29o (ddd, LeuPr α -H); 5,11o (dd, гидроксимасляная кислота α -Н); 5,01 (m); 4,97 (dd, α -H); 4,85 (m, 2х α -Н); 4,69o (ddd, Leu NH); 4,57' (dd, α -H); 4,48* (dd, MeLeu α -H); 4,16* (ddd, Leu α -H); 4,03, 3,98 (2s, N-OMe); 3,43 (q, J=7 Гц, MeAla α -H); 3,37, 3,20, 3,10, 2,92, 2,52, 2,46 (6s, N-Me); 2,40, 2,39 (2d, J=1 Гц, Me-тиазол); 1,48, 1,47 (2d, J=7 Гц, MeAla β -Me); 1,05* (d, J=6,5 Гц, MeLeu d-Me); 0,60* (d, J= 6,6 Гц, Leu d-Me); 0,52', 0,33' (2d, J=6,5 Гц, Leu d-Me); 0,05* (d, J=6,6 Гц, Leu d-Me); -0,14* (ddd, Leu β -CH).
11. 3 конформера 47:50:3, обозначенные символами *, o, ': 8,69 (d, J=10 Гц, LeuPr NH); 7,79, 7,78 (2d, J=10 Гц, NH); 7,65o (d, J=10 Гц, NH); 7,51*, 7,41o, 7,39*, 7,38o (4d, J=8 Гц, индол-H); 7,23*, 7,20o, 7,07, 7,00 (4t, индол-H); 7,04* (s, MeТrрOMe Н-2'); 6,85o (s, MeТrрOMe Н-2'); 6,71* (s, тиазол-H); 6,25o (d, J=10 Гц, Leu NH); 6,04* (d, J=7 Гц, Leu NH); 5,80' (d, J= 10 Гц, Leu NH); 5,30o (ddd, LeuPr α -H); 5,10o (dd, гидроксимасляная кислота α -Н); 5,02 (m); 4,97 (dd, α -H); 4,85 (m, 2x α -H); 4,72o (ddd, Leu α -H); 4,60' (dd, α -H); 4,50* (dd, MeLeu α -H); 4,17* (ddd, Leu α -Н); 4,04, 4,00 (2s, N-OMe); 3,48 (q, J=7 Гц, MeAla α -H); 3,41, 3,21, 3,17, 2,92, 2,53, 2,47 (6s, N-Me); 0,97, 0,96 (2s, трет-Bu-тиазол); 1,50, 1,49 (2d, J=7 Гц, MeAla β -Me); 1,06* (d, J=6,5 Гц, MeLeu d-Me); 0,62* (d, J=6,6 Гц, Leu d-Me); 0,53', 0,35' (2d, J=6,5 Гц, Leu d-Me); 0,07* (d, J=6,6 Гц, Leu d-Me); -0,08* (ddd, Leu β -CH).
А. 3 конформера 44: 30: 26, обозначенные символами *, o, ': 8,85 (d, CSNH2); 8,60* (d, LeuPr NH); 8,17 (d, CSNH2); 8,03, 8,00 (2d, NH); 7,88 (m, CSNH2); 7,6-7,1 (аром.); 6,28* (d, 10 Гц, Leu NH); 6,07o (d, 7 Гц, Leu NH); 5,87 (d, 9 Гц, Leu NH); 5,26* (ddd, LeuPr α -H); 5,22 (dd, гидроксимасляная кислота α -Н); 5,15-4,95, 5,08* (dd, гидроксимасляная кислота α -H); 4,83o (ddd, LeuPr α -Н); 4,50* (ddd, Leu α -H); 4,37* (dd, MeТrрOMe α -H); 4,25o (ddd, Leu α -H); 4,09, 4,05, 4,03* (3s, OMe); 3,89 (m, α -Н); 3,65, 3,63', 3,52o (3q, 7 Гц, MeAla α -Н); 3,57 (m); 3,17, 3,16, 3,15, 3,22, 3,20, 3,05, 2,92, 2,55, 2,53 (9s, N-Me); 1,8-1,1, 1,05 (d, 7 Гц); 0,99-0,82, 0,60o, 0,55', 0,23', 0,17o (4d, 7 Гц, Leu d-Me); -0,15o, -0,17' (ddd, Leu β -CH). PKF 285-916 (тиазол)
Биологическая активность
Активность соединений по изобретению тестируют в отношении цитотоксичности и ингибирования экспрессии ICAM-1, VCAM-1 и E-селектина, пролиферации клеток, а также в отношении ингибирования высвобождения TNF и связанной с этим цитотоксичности.
Биологическая активность
Активность соединений по изобретению тестируют в отношении цитотоксичности и ингибирования экспрессии ICAM-1, VCAM-1 и E-селектина, пролиферации клеток, а также в отношении ингибирования высвобождения TNF и связанной с этим цитотоксичности.
Анализы проводят следующим образом.
Клетки линии НаСаТ, случайным образом трансформированной, неонкогенной линии клеток кератиноцитов человека, у которой в значительной степени сохранились характеристики фенотипической дифференциации нормальных кератиноцитов (Boukamp и др., 1988 J. Cell Biol. 106, 761-771), применяют как для анализа пролиферации клеток, так и для анализа ICAM-1 методом клеточного ELISA.
А. Анализ ICAM-1 методом клеточного ELISA
I. Анализ ICAM-1 кератиноцитов методом клеточного ELISA
Анализ ICAM-1 методом клеточного ELISA применяют для определения ингибирования экспрессии ICAM-1 в основном аналогично методу, описанному у Winiski и Foster (1992, J. Invest. Dermatol., 99, 48-52). Клетки линии НаСаТ высевают на 96-луночные микротитрационные планшеты (2х104 клеток/лунку в следующую культуральную среду: модифицированная по способу Дульбекко среда Игла (DMEM) с 5%-ной ФТС (фетальная телячья сыворотка), 100 ед./мл пенициллина, 100 мг/мл стрептомицина, 2 мМ глютамином, 1 мМ пируватом натрия), выращивают до слияния и затем инкубируют в течение примерно 24 ч в свежей среде для анализа (такая же среда, как и культуральная, но содержащая 0,5% ФТС вместо 5%) с добавлением среды, стимулированной IFN- γ/TNF- α (среда для анализа + 1000 ед. /мл IFN- γ/3 нг/мл TNF- α), или без нее в присутствии тестируемого соединения или без него. Затем среду отмывают и клеточные монослои фиксируют 1%-ным параформальдегидом. Монослои инкубируют с насыщающими количествами первичного антитела (мышиное анти-ICAM-1 моноклональное) и вторичного антитела (козлиное антимышиное, связанное с пероксидазой). Далее проводят пероксидазную реакцию с использованием в качестве субстрата 3- амино-9-этилкарбазоля (AEC) и получают нерастворимый, окрашенный продукт, который легко поддается измерению в стандартном аппарате для прочтения микротитрационных планшетов.
I. Анализ ICAM-1 кератиноцитов методом клеточного ELISA
Анализ ICAM-1 методом клеточного ELISA применяют для определения ингибирования экспрессии ICAM-1 в основном аналогично методу, описанному у Winiski и Foster (1992, J. Invest. Dermatol., 99, 48-52). Клетки линии НаСаТ высевают на 96-луночные микротитрационные планшеты (2х104 клеток/лунку в следующую культуральную среду: модифицированная по способу Дульбекко среда Игла (DMEM) с 5%-ной ФТС (фетальная телячья сыворотка), 100 ед./мл пенициллина, 100 мг/мл стрептомицина, 2 мМ глютамином, 1 мМ пируватом натрия), выращивают до слияния и затем инкубируют в течение примерно 24 ч в свежей среде для анализа (такая же среда, как и культуральная, но содержащая 0,5% ФТС вместо 5%) с добавлением среды, стимулированной IFN- γ/TNF- α (среда для анализа + 1000 ед. /мл IFN- γ/3 нг/мл TNF- α), или без нее в присутствии тестируемого соединения или без него. Затем среду отмывают и клеточные монослои фиксируют 1%-ным параформальдегидом. Монослои инкубируют с насыщающими количествами первичного антитела (мышиное анти-ICAM-1 моноклональное) и вторичного антитела (козлиное антимышиное, связанное с пероксидазой). Далее проводят пероксидазную реакцию с использованием в качестве субстрата 3- амино-9-этилкарбазоля (AEC) и получают нерастворимый, окрашенный продукт, который легко поддается измерению в стандартном аппарате для прочтения микротитрационных планшетов.
II. Оценка цитоксичности
По завершении реакции с использованием AEC для выявления ICAM-1 монослои НаСаТ промывают ЗФР (забуференный фосфатом физиологический раствор) (200 мл), ЗФР сбрасывают с планшетов, которые затем сушат концом бумажного полотенца для удаления избытка жидкости. Поверхность дна микротитрационных планшетов осторожно протирают полоской влажной ткани и затем вновь сушат полоской ткани и определяют абсорбцию при 492 нм. До того, как слои могут высохнуть, в каждую лунку добавляют 0,1 мл 0,1%-ного раствора кристаллического фиолетового в ЗФА (предварительно пропущенного через фильтр с диаметром пор 0,2 мм). Затем планшеты инкубируют при комнатной температуре в течение 10 мин, тщательно пятикратно промывают ЗФР, избыток жидкости удаляют, как описано выше, и вновь определяют абсорбцию при 492 нм до того, как слои могут высохнуть. Разница между оптическими плотностями до и после окрашивания дает значения, полученные в результате окрашивания кристаллическим фиолетовым, и, следовательно, они связаны с величиной клеточного монослоя, присутствующего в лунках. Эти значения применяют для корректировки значений, полученных для AEC.
По завершении реакции с использованием AEC для выявления ICAM-1 монослои НаСаТ промывают ЗФР (забуференный фосфатом физиологический раствор) (200 мл), ЗФР сбрасывают с планшетов, которые затем сушат концом бумажного полотенца для удаления избытка жидкости. Поверхность дна микротитрационных планшетов осторожно протирают полоской влажной ткани и затем вновь сушат полоской ткани и определяют абсорбцию при 492 нм. До того, как слои могут высохнуть, в каждую лунку добавляют 0,1 мл 0,1%-ного раствора кристаллического фиолетового в ЗФА (предварительно пропущенного через фильтр с диаметром пор 0,2 мм). Затем планшеты инкубируют при комнатной температуре в течение 10 мин, тщательно пятикратно промывают ЗФР, избыток жидкости удаляют, как описано выше, и вновь определяют абсорбцию при 492 нм до того, как слои могут высохнуть. Разница между оптическими плотностями до и после окрашивания дает значения, полученные в результате окрашивания кристаллическим фиолетовым, и, следовательно, они связаны с величиной клеточного монослоя, присутствующего в лунках. Эти значения применяют для корректировки значений, полученных для AEC.
Б. Анализ VCAM-1, ICAM-1 и E-селектина в эндотелиальной клетке методом клеточного ELISA
Анализ основан на применении метода клеточного ELISA на 96-луночном планшете с использованием линии клеток эндотелия микрососудов человека (HMEC-1) и клеток эндотелия пупочной вены человека (HUVEC). Клетки предварительно обрабатывают в течение 4 ч тестируемым соединением, стимулируют в течение последующих 6-16 ч TNF α , а затем фиксируют параформальдегидом для последующей оценки экспрессии VCAM-1, ICAM-1 и E-селектина методом непрямого иммунопероксидазного окрашивания. Цитотоксические воздействия определяют, подсчитывая относительное количество клеток (окрашивание ядра по Гимзе) после экспонирования тестируемыми соединениями, по сравнению с контрольными лунками (содержащими только растворитель и среду). Соединения рассматриваются как дающие положительную реакцию, если они ингибируют VCAM-1, ICAM-1 или E-селектин на ≥50%, при этом потеря клеток составляет <25%.
Анализ основан на применении метода клеточного ELISA на 96-луночном планшете с использованием линии клеток эндотелия микрососудов человека (HMEC-1) и клеток эндотелия пупочной вены человека (HUVEC). Клетки предварительно обрабатывают в течение 4 ч тестируемым соединением, стимулируют в течение последующих 6-16 ч TNF α , а затем фиксируют параформальдегидом для последующей оценки экспрессии VCAM-1, ICAM-1 и E-селектина методом непрямого иммунопероксидазного окрашивания. Цитотоксические воздействия определяют, подсчитывая относительное количество клеток (окрашивание ядра по Гимзе) после экспонирования тестируемыми соединениями, по сравнению с контрольными лунками (содержащими только растворитель и среду). Соединения рассматриваются как дающие положительную реакцию, если они ингибируют VCAM-1, ICAM-1 или E-селектин на ≥50%, при этом потеря клеток составляет <25%.
Методики
I. Линия клеток: Для анализа VCAM-1 и ICAM-1 используют иммортализованную (большим T-ангигеном вируса SV-40) линию клеток эндотелия микрососудов человека (HMEC-1; Ades и др., J. Invest. Dermatol. 99: 683-690, 1992). Клетки линии HMEC-1 постоянно экспрессируют низкие уровни ICAM-1, активируемые медиаторами воспаления. Однако они экспрессируют только VCAM-1 после стимуляции цитокином. Для определения оптимальных условий для индукции экспрессии VCAM-1 и ICAM-1 проводили эксперименты по определению зависимости реакции от дозы и от времени.
I. Линия клеток: Для анализа VCAM-1 и ICAM-1 используют иммортализованную (большим T-ангигеном вируса SV-40) линию клеток эндотелия микрососудов человека (HMEC-1; Ades и др., J. Invest. Dermatol. 99: 683-690, 1992). Клетки линии HMEC-1 постоянно экспрессируют низкие уровни ICAM-1, активируемые медиаторами воспаления. Однако они экспрессируют только VCAM-1 после стимуляции цитокином. Для определения оптимальных условий для индукции экспрессии VCAM-1 и ICAM-1 проводили эксперименты по определению зависимости реакции от дозы и от времени.
II. Условия выращивания: Клетки линии HMEC-1 выращивают в колбах типа T-75 (Nunc) в стандартных условиях (37oC, 5% CO2) из расчета 1,5х106 клеток на мл культуральной среды (КС означает основную среду для эндотелиальных клеток [ЕВМ; фирма Clonetics], дополненная 10%-ной ФТС, 10 нг/мл человеческого эпидермального фактора роста (EGF) (фирма Boehringer), 1 мг/мл гидрокортизона (фирма Sigma N 0888), 2,2 г/л NaHCO3, 15 мМ Hepes, 0,11 г/л пирувата натрия, 4 мМ глютамином, 100 ед./мл пенициллина и 100 мг/мл стрептомицина). После мягкой обработки трипсином (0,25%-ный трипсин + 0,1%-ная ЭДТК в течение 8 мин) и ресуспендирования клетки пересевают каждые 2-3 дня с коэффициентом разведения 1:3.
III. Метод клеточного ELISA для VCAM-1 и ICAM-1
96-луночные плоскодонные микротитрационные планшеты предварительно покрывают бычьим фибронектином (FN, фирма Sigma, N F1141), а затем засевают из расчета 2х104 клеток/лунку в 200 мл среды для выращивания ЕВМ и инкубируют в течение ночи. На следующий день культуральную среду (КС) сначала заменяют из расчета 200 мл/лунку средой для анализа ЕВМ (КС, дополненная 5%-ной ФТС вместо 10%-ной) и затем заменяют 180 мл среды, содержащей либо (1) определенные концентрации тестируемого соединения, либо (2) соответствующие концентрации растворителя/среды, экстрагированной метанолом, либо (3) одну среду для анализа ЕВМ, и инкубируют в течение 4 ч при 37oC. Каждый анализ 96-луночного планшета осуществляют с дублированием лунок. Затем клетки стимулируют, добавляя 20 мл концентрированного раствора цитокина (2000 ед./мл TNF α ), и инкубируют в течение 16 ч при 37oC.
96-луночные плоскодонные микротитрационные планшеты предварительно покрывают бычьим фибронектином (FN, фирма Sigma, N F1141), а затем засевают из расчета 2х104 клеток/лунку в 200 мл среды для выращивания ЕВМ и инкубируют в течение ночи. На следующий день культуральную среду (КС) сначала заменяют из расчета 200 мл/лунку средой для анализа ЕВМ (КС, дополненная 5%-ной ФТС вместо 10%-ной) и затем заменяют 180 мл среды, содержащей либо (1) определенные концентрации тестируемого соединения, либо (2) соответствующие концентрации растворителя/среды, экстрагированной метанолом, либо (3) одну среду для анализа ЕВМ, и инкубируют в течение 4 ч при 37oC. Каждый анализ 96-луночного планшета осуществляют с дублированием лунок. Затем клетки стимулируют, добавляя 20 мл концентрированного раствора цитокина (2000 ед./мл TNF α ), и инкубируют в течение 16 ч при 37oC.
После этого клеточный монослой промывают 1%-ным параформальдегидом в среде ЕВМ, фиксируют в 2%-ном параформальдегиде в течение 15 мин при комнатной температуре (КТ) и несколько раз промывают ЗФР. ЗФР удаляют с клеток и монослой инкубируют в течение 30 мин в ЗФР, содержащем 10%-ную нормальную козью сыворотку (NGS). Раствор NGS заменяют из расчета 100 мл/лунку моноклональным антителом к VCAM-1 или ICAM-1 и инкубируют при 4oC в течение ночи. Раствор мАт (моноклональное антититело) затем удаляют и клетки несколько раз промывают ЗФР, а затем инкубируют с ЗФР, содержащим 10% NGS в течение 30-60 мин при КТ. Раствор NGS удаляют и добавляют 100 мл связанного с пероксидазой хрена козьего F(Ab')2 антимышиного IgG антитела (фирма Tago; разбавление 1: 500 в ЗФР, содержащем 5% NGS) и планшеты инкубируют в течение 1 ч при КТ. Затем вторичное антитело удаляют и клетки промывают в ЗФР, который затем заменяют из расчета 150 мл/лунку свежеприготовленным и профильтрованным раствором AEC (3-амино-9-этилкарбазоль; фирма Sigma) и планшеты инкубируют в течение 45-60 мин при КТ. Субстрат для пероксидазы удаляют и клетки промывают в ЗФР. Значение абсорбции AEC определяют с помощью аппарата для прочтения микротитрационных планшетов при 550 нм и корректируют с учетом "чистых" или контрольных значений, полученных при 690 нм.
IV. Анализ Е-селектина
Анализ Е-селектина проводят с использованием свежевыделенных клеток линии HUVEC в основном аналогично тому, как это описано для анализа VCAM-1 и ICAM-1, за исключением более короткого времени стимуляции TNFα (6-8 ч).
Анализ Е-селектина проводят с использованием свежевыделенных клеток линии HUVEC в основном аналогично тому, как это описано для анализа VCAM-1 и ICAM-1, за исключением более короткого времени стимуляции TNFα (6-8 ч).
V. Оценка цитотоксичности (оценка потери клеток на основе окрашивания ядер)
Эндотелиальные клетки обесцвечивают путем замены ЗФР на 95%-ный этанол в течение 20 мин (две замены по 10 мин каждая), осуществляя контроль с помощью микроскопии. Затем клетки промывают дистиллированной водой (Aquadest) и монослой при КТ покрывают на 5 мин 33%-ным раствором Гимзе в Aquadest. Затем лунки промывают Aquadest и сушат на воздухе в течение по крайней мере 15 мин. Для контроля того, что окрашены только ядра и практически отсутствует окрашивание цитоплазмы, используют микроскопическое исследование. Значение абсорбции раствора Гимзе определяют с помощью аппарата для прочтения микротитрационных планшетов при 550 нм и корректируют с учетом "чистых" значений (ряды без клеток), полученных при 690 нм.
Эндотелиальные клетки обесцвечивают путем замены ЗФР на 95%-ный этанол в течение 20 мин (две замены по 10 мин каждая), осуществляя контроль с помощью микроскопии. Затем клетки промывают дистиллированной водой (Aquadest) и монослой при КТ покрывают на 5 мин 33%-ным раствором Гимзе в Aquadest. Затем лунки промывают Aquadest и сушат на воздухе в течение по крайней мере 15 мин. Для контроля того, что окрашены только ядра и практически отсутствует окрашивание цитоплазмы, используют микроскопическое исследование. Значение абсорбции раствора Гимзе определяют с помощью аппарата для прочтения микротитрационных планшетов при 550 нм и корректируют с учетом "чистых" значений (ряды без клеток), полученных при 690 нм.
VI. Анализ данных
Значения AEC для конститутивной экспрессии VCAM-1 или Е-селектина (контрольные лунки без стимуляции) практически совпадают с таковыми для изотипически сходного контрольного мАт и представляют собой фоновую окраску. В каждом 96-луночном планшете среднее конститутивное значение вычитают из среднего значения AEC для каждой группы, стимулированной цитокином (контрольные группы с ЕВМ и растворителем, а также группа с тестируемым соединением), получая число, которое представляет собой экспрессию молекул клеточной адгезии (САМ), активированную в случае ICAM-1 и индуцированную в случае VCAM-1 или E-селектина (обозначенное как AEC-САМ). Каждое значение AEC-CAM затем делят на соответствующее среднее значение для раствора Гимзе, получая число, которое позволяет оценить относительные уровни экспрессии САМ при данной плотности клеток, основываясь на количестве ядер (обозначенное как отношение AEC:Гимзе)
AEC (стимуляция) - AEC (без стимуляции) = AEC-CAM,
AEC-САМ/Гимзе = отношение AEC:Гимзе.
Значения AEC для конститутивной экспрессии VCAM-1 или Е-селектина (контрольные лунки без стимуляции) практически совпадают с таковыми для изотипически сходного контрольного мАт и представляют собой фоновую окраску. В каждом 96-луночном планшете среднее конститутивное значение вычитают из среднего значения AEC для каждой группы, стимулированной цитокином (контрольные группы с ЕВМ и растворителем, а также группа с тестируемым соединением), получая число, которое представляет собой экспрессию молекул клеточной адгезии (САМ), активированную в случае ICAM-1 и индуцированную в случае VCAM-1 или E-селектина (обозначенное как AEC-САМ). Каждое значение AEC-CAM затем делят на соответствующее среднее значение для раствора Гимзе, получая число, которое позволяет оценить относительные уровни экспрессии САМ при данной плотности клеток, основываясь на количестве ядер (обозначенное как отношение AEC:Гимзе)
AEC (стимуляция) - AEC (без стимуляции) = AEC-CAM,
AEC-САМ/Гимзе = отношение AEC:Гимзе.
Таким образом, "действительные значения" IC50-показателя для САМ определяют путем сравнения значений AEC:Гимзе для тестируемого соединения со значением для стимулированного контроля (ЕВМ, растворитель). Эти значения затем анализируют относительно значений IC50 для варианта только с раствором Гимзе. Точный критерий позволяет выявить удачный вариант взаимосвязи между ингибированием САМ и профилем цитотоксичности (с использованием раствора Гимзе), исследование которого может быть продолжено.
В. Анализ пролиферации клеток линии НаСаТ
Клетки линии НаСаТ культивируют в среде DMEM (фирма Gibco N 074-02100), дополненной 2,2 г/л NaHCO3, 0,11 г/л пирувата натрия, 15 мМ Hepes, 5%-ной фетальной телячьей сывороткой (ФТС), пенициллином (100 ед./мл), стрептомицином (100 мг/мл) и глютамином (для повышения конечной концентрации до 4 мМ). Для анализа пролиферации клетки отделяют с помощью обработки трипсином, суспендируют в свежей среде и высевают на 96-луночные микротитрационные планшеты с конечной плотностью 4000 клеток/0,2 мл/лунку. Через 24 ч (день 0) среду заменяют свежей средой, содержащей ступенчато изменяющиеся концентрации тестируемого соединения. После трехдневной инкубации при 37oC/5% CO2 степень клеточной пролиферации в сравнении с таковой в контрольных группах, в которых использован только растворитель, оценивают колориметрическим методом, который позволяет измерить относительную клеточную массу с помощью красителя сульфородамина В (Skehan и др., 1990, J. Natl. Cancer Inst. 82, 1107-1112). "Исходное количество клеток" определяют измерением относительной клеточной массы в день 0. Результаты выражают в следующем виде: % ингибирования = 100% абсорбции в контроле (где контроль с растворителем = 100%) и выражают в виде среднего значения ± стандартное отклонение по трем измерениям. Кривую зависимости реакции от дозы строят в полулогарифмическом масштабе и с помощью линейной интерполяции определяют концентрацию, необходимую для ингибирования, составляющего половину от максимального (IC50).
Клетки линии НаСаТ культивируют в среде DMEM (фирма Gibco N 074-02100), дополненной 2,2 г/л NaHCO3, 0,11 г/л пирувата натрия, 15 мМ Hepes, 5%-ной фетальной телячьей сывороткой (ФТС), пенициллином (100 ед./мл), стрептомицином (100 мг/мл) и глютамином (для повышения конечной концентрации до 4 мМ). Для анализа пролиферации клетки отделяют с помощью обработки трипсином, суспендируют в свежей среде и высевают на 96-луночные микротитрационные планшеты с конечной плотностью 4000 клеток/0,2 мл/лунку. Через 24 ч (день 0) среду заменяют свежей средой, содержащей ступенчато изменяющиеся концентрации тестируемого соединения. После трехдневной инкубации при 37oC/5% CO2 степень клеточной пролиферации в сравнении с таковой в контрольных группах, в которых использован только растворитель, оценивают колориметрическим методом, который позволяет измерить относительную клеточную массу с помощью красителя сульфородамина В (Skehan и др., 1990, J. Natl. Cancer Inst. 82, 1107-1112). "Исходное количество клеток" определяют измерением относительной клеточной массы в день 0. Результаты выражают в следующем виде: % ингибирования = 100% абсорбции в контроле (где контроль с растворителем = 100%) и выражают в виде среднего значения ± стандартное отклонение по трем измерениям. Кривую зависимости реакции от дозы строят в полулогарифмическом масштабе и с помощью линейной интерполяции определяют концентрацию, необходимую для ингибирования, составляющего половину от максимального (IC50).
Максимальное ингибирование при отсутствии чистой потери клеток, которое представлено в виде "исходного количества клеток", обычно составляет 90-98%.
Г. Ингибирование высвобождения TNF
I. Одноядердные клетки получают из периферической крови здоровых добровольцев на основе разделения плотности в фиколе-гипаке в соответствии с методом Hansell и др. (J. Imm. Methods 1991, 145: 105) и применяют в концентрации 105 клеток/лунку в среде RPMI 1640, дополненной 10%-ной ФТС. Клетки инкубируют с серийными разбавлениями тестируемых соединений в течение 30 мин при 37oC перед добавлением INF γ (100 ед./мл) и LPS (5 мг/мл) и затем дополнительно инкубируют в течение 3 ч. Инкубацию прекращают путем центрифугирования при 1400 об/мин в течение 10 мин. Содержание TNF α в супернатанте измеряют, используя коммерческий набор для ELISA (Innotest hTNF α, поставляемый фирмой Innogenetics N.V., Zwijnaarde, Бельгия). Соединения тестируют в концентрациях от 0 до 10 мМ. Приведенные в примерах соединения формулы I, особенно предпочтительные соединения формул I, I'p, I''p, VII, IX и X, в этом опыте подавляют высвобождение TNF, причем значения IC50 составляют от примерно 5 до примерно 1 нМ.
I. Одноядердные клетки получают из периферической крови здоровых добровольцев на основе разделения плотности в фиколе-гипаке в соответствии с методом Hansell и др. (J. Imm. Methods 1991, 145: 105) и применяют в концентрации 105 клеток/лунку в среде RPMI 1640, дополненной 10%-ной ФТС. Клетки инкубируют с серийными разбавлениями тестируемых соединений в течение 30 мин при 37oC перед добавлением INF γ (100 ед./мл) и LPS (5 мг/мл) и затем дополнительно инкубируют в течение 3 ч. Инкубацию прекращают путем центрифугирования при 1400 об/мин в течение 10 мин. Содержание TNF α в супернатанте измеряют, используя коммерческий набор для ELISA (Innotest hTNF α, поставляемый фирмой Innogenetics N.V., Zwijnaarde, Бельгия). Соединения тестируют в концентрациях от 0 до 10 мМ. Приведенные в примерах соединения формулы I, особенно предпочтительные соединения формул I, I'p, I''p, VII, IX и X, в этом опыте подавляют высвобождение TNF, причем значения IC50 составляют от примерно 5 до примерно 1 нМ.
II. Цитотоксичность
Цитотоксичность определяют на клетках линии THP1 (5•104 клеток/лунку), которые инкубируют в присутствии INF γ (100 ед./мл) и LPS (5 мг/мл) и в присутствии тестируемого соединения или без него в течение 24 ч при 37oC. Проценты живых и мертвых клеток определяют с помощью колориметрического маркера (МТТ) [бромид 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолия] , который позволяет измерить митохондрильные дегидрогеназы в живых клетках, как описано у Mosman, J. Imm. Methods (1983) 65:55. Предпочтительные соединения по изобретению обычно обладают сравнительно низкой цитотоксичностью при оценке этим методом, например, значение IC50 составляет от примерно 100 до 1000 нМ.
Цитотоксичность определяют на клетках линии THP1 (5•104 клеток/лунку), которые инкубируют в присутствии INF γ (100 ед./мл) и LPS (5 мг/мл) и в присутствии тестируемого соединения или без него в течение 24 ч при 37oC. Проценты живых и мертвых клеток определяют с помощью колориметрического маркера (МТТ) [бромид 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолия] , который позволяет измерить митохондрильные дегидрогеназы в живых клетках, как описано у Mosman, J. Imm. Methods (1983) 65:55. Предпочтительные соединения по изобретению обычно обладают сравнительно низкой цитотоксичностью при оценке этим методом, например, значение IC50 составляет от примерно 100 до 1000 нМ.
Claims (2)
1. Циклогептапептолид формулы I в свободной форме, в форме соли или сложного эфира
где А обозначает остаток гликолевой кислоты, необязательно α-замещенной метилом, этилом, необязательно замещенным тиазолом;
В обозначает остаток α-аимно-γ-метилзамещенной октановой кислоты;
R1 обозначает метил;
С обозначает остаток N-метилтриптофана формулы II
где R3 обозначает алкокси;
R4 обозначает водород;
R5 - метил;
символ обозначает двойную связь;
X обозначает остаток α-аминозамещенной (C2 - C14)карбоновой кислоты;
Y обозначает остаток N-метил-α-аминозамещенной (C2 - C10)карбоновой кислоты.
где А обозначает остаток гликолевой кислоты, необязательно α-замещенной метилом, этилом, необязательно замещенным тиазолом;
В обозначает остаток α-аимно-γ-метилзамещенной октановой кислоты;
R1 обозначает метил;
С обозначает остаток N-метилтриптофана формулы II
где R3 обозначает алкокси;
R4 обозначает водород;
R5 - метил;
символ обозначает двойную связь;
X обозначает остаток α-аминозамещенной (C2 - C14)карбоновой кислоты;
Y обозначает остаток N-метил-α-аминозамещенной (C2 - C10)карбоновой кислоты.
2. Циклопептолид по п.1 формул VIII, IX или X
3. Терапевтическая композиция, обладающая цитотоксической активностью в отношении ингибирования экспрессии ICAM-1, VCAM-1 и Е-селектина, высвобождения TMF и пролиферации клеток, содержащая терапевтически эффективное количество соединения по п.1 или 2.
3. Терапевтическая композиция, обладающая цитотоксической активностью в отношении ингибирования экспрессии ICAM-1, VCAM-1 и Е-селектина, высвобождения TMF и пролиферации клеток, содержащая терапевтически эффективное количество соединения по п.1 или 2.
Приоритет по пунктам:
21.11.1995 - п.2 (формула VIII);
01.03.1996 - п.2 (формула IX);
04.07.1996 - п.2 (формула X).
21.11.1995 - п.2 (формула VIII);
01.03.1996 - п.2 (формула IX);
04.07.1996 - п.2 (формула X).
Applications Claiming Priority (6)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
GB9523744.2 | 1995-11-21 | ||
GBGB9523744.2A GB9523744D0 (en) | 1995-11-21 | 1995-11-21 | Organic compounds |
GB9604406.0 | 1996-03-01 | ||
GBGB9604406.0A GB9604406D0 (en) | 1996-03-01 | 1996-03-01 | Organic compounds |
GB9613990.2 | 1996-07-04 | ||
GBGB9613990.2A GB9613990D0 (en) | 1996-07-04 | 1996-07-04 | Organic compounds |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU98111936A RU98111936A (ru) | 2000-03-27 |
RU2171260C2 true RU2171260C2 (ru) | 2001-07-27 |
Family
ID=27267982
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU98111936/04A RU2171260C2 (ru) | 1995-11-21 | 1996-11-20 | Циклопептолиды |
Country Status (27)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US6011136A (ru) |
EP (1) | EP0866801B1 (ru) |
JP (1) | JP3463691B2 (ru) |
KR (1) | KR19990071533A (ru) |
CN (1) | CN1125079C (ru) |
AR (1) | AR012286A1 (ru) |
AT (1) | ATE240972T1 (ru) |
AU (1) | AU712900B2 (ru) |
BR (1) | BR9611619B1 (ru) |
CA (1) | CA2237157C (ru) |
CO (1) | CO4770985A1 (ru) |
CZ (1) | CZ154998A3 (ru) |
DE (1) | DE69628323T2 (ru) |
ES (1) | ES2200079T3 (ru) |
HU (1) | HUP9903810A3 (ru) |
IL (1) | IL124310A0 (ru) |
MX (1) | MX9804048A (ru) |
MY (1) | MY115877A (ru) |
NO (1) | NO982280L (ru) |
NZ (1) | NZ322909A (ru) |
PE (1) | PE22998A1 (ru) |
PL (1) | PL186010B1 (ru) |
RU (1) | RU2171260C2 (ru) |
SK (1) | SK65698A3 (ru) |
TR (1) | TR199800897T2 (ru) |
TW (1) | TW450978B (ru) |
WO (1) | WO1997019104A1 (ru) |
Families Citing this family (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2002034283A2 (en) * | 2000-10-27 | 2002-05-02 | Novartis Ag | Vegh inhibitors and their use |
AU2005244249A1 (en) * | 2004-03-17 | 2005-11-24 | Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. | Treatment of severe community-acquired pneumonia by admistration of tissue factor pathway inhibitor (TFPI) |
EP3774850A1 (en) | 2018-03-29 | 2021-02-17 | Kezar Life Sciences | Cdp protein secretion inhibitors |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE3832059A1 (de) * | 1988-09-21 | 1990-03-29 | Howaldtswerke Deutsche Werft | Tauchtiefengesteuerte ausblasventil-einrichtung |
DE3832362A1 (de) * | 1988-09-23 | 1990-03-29 | Sandoz Ag | Neue cyclopeptolide, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung |
AT396108B (de) * | 1991-08-21 | 1993-06-25 | Biochemie Gmbh | Neues verfahren und neue zwischenprodukte zur herstellung von 7-aminocephalosporansaeurederivaten |
JPH07109299A (ja) * | 1993-10-13 | 1995-04-25 | Shionogi & Co Ltd | 抗hiv物質ペスタヒビン及びその誘導体 |
CN1116304C (zh) * | 1994-07-27 | 2003-07-30 | 诺瓦蒂斯有限公司 | 有机化合物 |
US20040219569A1 (en) * | 1999-07-06 | 2004-11-04 | Fruma Yehiely | Gene identification method |
-
1996
- 1996-11-11 US US09/068,915 patent/US6011136A/en not_active Expired - Fee Related
- 1996-11-18 AR ARP960105235A patent/AR012286A1/es not_active Application Discontinuation
- 1996-11-19 PE PE1996000830A patent/PE22998A1/es not_active Application Discontinuation
- 1996-11-19 MY MYPI96004794A patent/MY115877A/en unknown
- 1996-11-20 CN CN96198477A patent/CN1125079C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1996-11-20 AU AU76946/96A patent/AU712900B2/en not_active Ceased
- 1996-11-20 TW TW085114246A patent/TW450978B/zh not_active IP Right Cessation
- 1996-11-20 SK SK656-98A patent/SK65698A3/sk unknown
- 1996-11-20 IL IL12431096A patent/IL124310A0/xx unknown
- 1996-11-20 CO CO96061149A patent/CO4770985A1/es unknown
- 1996-11-20 EP EP96939867A patent/EP0866801B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-11-20 CA CA002237157A patent/CA2237157C/en not_active Expired - Fee Related
- 1996-11-20 BR BRPI9611619-6A patent/BR9611619B1/pt not_active IP Right Cessation
- 1996-11-20 NZ NZ322909A patent/NZ322909A/xx unknown
- 1996-11-20 JP JP51765297A patent/JP3463691B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1996-11-20 PL PL96326755A patent/PL186010B1/pl unknown
- 1996-11-20 CZ CZ981549A patent/CZ154998A3/cs unknown
- 1996-11-20 ES ES96939867T patent/ES2200079T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1996-11-20 TR TR1998/00897T patent/TR199800897T2/xx unknown
- 1996-11-20 DE DE69628323T patent/DE69628323T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1996-11-20 WO PCT/EP1996/005123 patent/WO1997019104A1/en not_active Application Discontinuation
- 1996-11-20 HU HU9903810A patent/HUP9903810A3/hu unknown
- 1996-11-20 AT AT96939867T patent/ATE240972T1/de not_active IP Right Cessation
- 1996-11-20 KR KR1019980703806A patent/KR19990071533A/ko not_active Application Discontinuation
- 1996-11-20 RU RU98111936/04A patent/RU2171260C2/ru not_active IP Right Cessation
-
1998
- 1998-05-19 NO NO982280A patent/NO982280L/no not_active Application Discontinuation
- 1998-05-21 MX MX9804048A patent/MX9804048A/es unknown
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
FOSTER C.A. Pharmacological modulation of endothelial cell-associated adhesion molecule expression implications for future treatment of dermatological diseases. DERMATOL J. 1994, v.21, № 11, р.847 - 854. * |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
SK135493A3 (en) | Pharmacological effective compounds, the method of their preparation and pharmaceutical compositions, which these compounds contain | |
KR100378974B1 (ko) | 유기화합물 | |
RU2171260C2 (ru) | Циклопептолиды | |
US20020128307A1 (en) | Chemokine receptor antagonists | |
WO1995006649A1 (en) | Macrolides as antagonists of macrophilin binding immunosuppressants | |
US20120190651A1 (en) | Anti-inflammatory compounds | |
US6630147B1 (en) | Pseudomycin natural products | |
JPH08301862A (ja) | Penicillium種の抗生物質シリアノンおよびその化学誘導体並びにその製造法および使用 | |
JPH09110689A (ja) | 静脈細胞接着分子−1の産生阻害剤及びナピラジオマイシンsc | |
KR20070005345A (ko) | 2,5-디히드로-4-알킬-2,5-디옥소퓨란 유도체 및이것의 용도 | |
JP2006213704A (ja) | 新規発酵生産物 | |
JPH07258153A (ja) | 五環性化合物、その製造法および用途 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20031121 |