TW438807B - Novel peptides containing T-cell epitope(s) of cedar pollen allergens, the processes therefor and the pharmaceutical uses thereof - Google Patents

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A 7 Β7 143 88 〇 7 五、發明説明（1 ) 發明背蒉 發明範嘛 *" 1- - - j— I -- 111 u > I ——「____ \—r f靖先聞讀背而之注意事項再填ϊϊ-r本頁j 本發明係關於一種新穎肽及其用途’詳言之，係關於能 活化對香杉花粉過敏原特異之T細胞的一種肽，及含有此 肽作爲有效組份之免疫治療劑。 先前技藝之說明 就最近數十年觀之，抱怨香杉花粉病所致鼻炎及結膜 炎的病患人數在日本逐年增加，特別是在春季。由大眾媒 體已引入强_烈注意到這類病症，且此病症已成爲公共健康 上不容忽視的關心課題，因爲病人數目相對大且事件及作 用的多變性仍持續發生。 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝 香杉花粉症是一種過敏原，其主要致病因子已知爲香 杉花粉中存在的過敏性物質，即香杉花粉過敏原。這些散 佈於空氣中的花粉侵入體內，誘使對這類花粉特異之免疫 球蛋白E抗體的生成。當個體呈此種狀態，又，被香杉花 粉侵入時，花粉中的香杉花粉過敏原與免疫球蛋白E抗體 免疫反應而造成過敏病症。 現今已知香杉花粉至少含有兩種不同抗原性的香杉花 粉過敏原。一種是命名爲^(：1"¥ j I#之過敏原， 由 Y a s u e d a 氏等發表於 J 〇 u r n a 1 〇 f A 1 I e r g y a n d C 1 n i c a I [mmuno!ogy,Voi.71,No_l ，I) p . 7 7 — 8 6 ( 1 9 8 3 )，另一種目前命名爲’Cry j I I * ， 係由Tamai氏等發表於FEBS LETTERS， 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS>A4現格（210X297公釐）_ 4 · A7 B7 經濟邹中夬標隼局員工消費合作社印裝 五、發明説明（2 ) Vo】. 239，. No. 2，pp. 3 2 9 - 3 3 2 ( 1 9 8 8 )及由 Sakaguchi 氏等發表於 Allergy , Vol. 45，pp. 309—312 (1990)。報告指出香 杉花粉通常含有比例約50:1之Cry j I及 Cry j I I ，且由香杉花粉病病人所回數的血清樣 品幾乎皆與這些過敏原反應。Sawatan i氏等在％ Ai ! ergy ，，Vol. 42，No. 6，pp, 7 3 8 - 7 4 7 ( 1 9 9 3 )中報告，皮內測試或放射過敏吸附測試（ RAST)中 Cry j II 呈現與 Cry i I 相 同程度之抗.·原性。 分離到的數種香杉花粉過敏原顯示有相同程度之性質 與特徵，因此藉施用純化之香杉花粉過敏原給人類以降低 敏感，導致治療及/或預防香杉花粉病的可能。近來，達 此目的之一些低敏感化試劑被推薦出來，例如，日本先公 開專利申請案第156，926/89及93，730/ 91，其中揭示一種施用人體作爲低敏感化試劑之共軛物 的方法，該共軛物之製備係將一醣與含有N終端所示胺基 酸序列 Asp —Asn — Pro— I 1 e — Asp — Ser 或 a- I 1 e— Asn — I 1 e— Phe — A s n的香杉花粉過敏原共價鍵結在一起。然而，過敏病 之診斷及低敏感化治療通常需要相當大S之高度純化的過 敏原，而香杉花粉只含有相當少量之香杉花粉過敏原且具 有相當差的穗定性，當花粉應單獨使用以作爲診斷劑或低 敏感化劑時，這類活性將伴隨多種阻難。 本紙张尺度適用中國阎家標李（CNS)/\4規格（210X29?公釐）.5 _ T11--- - H - lip I I - I ‘ ^^1 I:— - ί (請先閱讀背面之注意事項戽填寫本頁) 經濟部中夹標準局員工消費合作社印裝 A7 B7五、發明説明（3) 由上文觀之，不似習知方法（即施用完整過敏原給病 人），最近之治療及預防過敏症著眼於下述免疫療法，即 對病人施用一物質，其具有可被τ一細胞專一地辨識之過 敏原的相當窄範圍，即基本上由τ—細胞抗原決定位組成 之相當低分子量的肽。 通常當過敏原被抗原表現細胞（例如巨噬細胞）捕獲 時，過敏原首先被消化，然後經消化之片段鍵結至抗原表 現細胞表面之H L A蛋白質之上並誘生抗原性。抗原表現 片段受限於過敏原之特定位置的特定區域，此係由於其對 H L A蛋白...質的親和力。這些區域之中，專一地辨試T細 胞的區域通常稱之爲'T_細胞抗原決定位'。對病人施 用基本上由Τ細胞抗原決定位組成之肽的免疫療法，具下 列優點： (i)缺乏Β細胞抗原決定之這種肽，表示其不與對過敏 原特異的免疫球蛋白E抗體反應，且不會發生習知粗製及 純化過敏原時常引起之副作用諸如（過敏性反應）；及（ 2 )與習知低敏感化劑比較，這類免疫療法可大量縮短治 療期之間時，其係由相當低劑量之開始達到有效劑量所需 的時間。 雖然已積極地分析多種過敏原之T細胞抗原決定基， 這些分析一般需要過敏原之完整胺基酸序列。至今香杉花 粉過敏原受到關注，但其T細胞抗原決定基尙未被確责分 析。 -. 1- - -I _ - 1 ! ----- n ' i^v -- i! 1—^i nil HI -I— > 0¾ 、- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙浪尺度適用中國國家標準（(：?^),'\4規格（210;< 297.公釐）-6- 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝 ^43 88 0 7 A7 ______ B7__ 五、發明説明（4 ) 發明簡沭 綜上所言，本發明之第一相檩是提供一種基本上由香 杉花粉過敏原之T細胞抗原決定位組成的肽，及其同源肽 0 本發明之第二目檩是提供一種免疫治療劑，其含有作 爲有效組份之肽。 本發明之第一目標係藉由一肽而達成，該肽寅質上不 與對香杉花粉過敏原特異之免疫球蛋白E抗體反應，且當 藉3H —胸腺核苷攝入法分析時，該肽比陰性對照組更明 顯地活化對..香杉花粉過敏原特異之T細胞。 本發明之第二相標是藉由一免疫治療劑達成，該免疫 治療劑含有作爲有效組份之肽。 發明之詳細說明 當施用至一般晡乳動物（包括人）時，本發明之肽不 與對香杉花粉過敏原特異之免疫球蛋白E抗體反應，但會 活化對過敏原特異之T細胞，卻實質上不引起過敏反應。 當施用至一般晡乳動物（包括人）時，含有本發明肽 之免疫治療劑呈現對香杉花粉病之萵度治療及/或預防功 效，但實質上不誘生過敏性反應。 謹利用下列實驗及實例爲參考資料以解釋本發明，本 發明之完成係根據一肽之發現，該肽實質上由香杉花粉過 敏原之T細胞抗原決定位組成。 長期硏究之結果，本發明近幾年發現香杉花粉過敏原 本紙張尺度適用中國国家橾隼（CNS ) A4规格（2l〇X2*)7公釐）-7 - (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局貝工消资合作社印災 Λ7 __B7五、發明説明（5) 具有作爲主要組份之如SEQ ID NO:14所示之 胺基酸序列，並將此發現揭示於日本專利申案第 3 4 4 ，5 9 6 / 9 3。國際專利先公開案第 9 3/0 1 ，2 1 3號中揭示，香杉花粉過敏原之另一組 份具有如SEQ ID NO:15所示之胺基酸序列， 本案發明人亦將此相同胺基酸序列發表於J a p a n e s e S 〇 c i _ ety of Allergology之第六次硏討會，1 9 9 4年4月 1 4 至 1 6 日在日本KuniainotQ-city,Kuinanioto舉行。 欲得知香杉花粉過敏原之T細胞抗原決定位，本案發 明人合成約...8 0種肽，其由SEQ ID NO: 14及 15所示胺基酸序列中広11 ， 14或17個連續胺基酸 殘基組成，且根據SEQ ID NO:14及15所示 胺基酸序列，其具有不同的胺基酸序列，本案發明人測試 該肽與對該過敏原特異之免疫球蛋白E抗體的反應性，以 及活化對該過敏原特異之T細胞的功用。結果發現，具有 如SEQ ID NO:8至13所示胺基酸序列之肽實 質上不與對香杉花粉過敏原特異之免疫球蛋白E抗體反應 ，且當利用3 Η _胸腺核苔攝入法分析時，與陰性對照組 比較，該肽顯著活化對該過敏原特異之Τ細胞。這些事實 顯示，這些肽基本上由香杉花粉過敏原之Τ細胞抗原決定 位組成。SEQ ID NO:8至13所示胺基酸序列 之分析顯示，SEQ ID NO:1至7所示序列是T 細胞辨識具有如SEQ I D N〇s:8至13所示胺 基酸序列之肽類所必須的。 ilu —^^—i I - - - I ^ --- ^—>1 / - 1 1J 、-» (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（2丨():<別公釐）-8 - 經濟部中央橾準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（6) 下列實驗1及2說明如何証實上述事實。 實驗1 肽及香杉花粉渦敏原之製備 實驗1 一 1 fl太之製備 如前所述，香杉花粉已知含有至少2種具有不同性質 及特徵之過敏原。這些香杉花粉過敏原之成熟蛋白質顯示 具有如SEQ ID NO:14或15所示之胺基酸序 列，事實上一，已自香杉花粉分離出具有對應SEQ ID NO : 1 4中第4 6至4 3 3個胺基酸位置或第5 1至4 3 3個胺基酸位置之胺基酸序列的香杉花粉過敏原（下文 命名爲、過敏原），以及具有對應SEQ ID NO : 1 5中第1至3 5個胺基酸位之胺基酸序列的香杉 花粉過敏原（下文命名爲 '"過敏原) 。SEQ ID NO : 1 4中，由cDNA之鹼基序列所編碼之N —終端 胺基酸序列的第一個胺基酸殘基，規定標記爲’因 爲早已得知編碼過敏原A之基因沒有訊號肽。 藉由複製SEQ ID NO:14中第46至 4 3 3個胺基酸位置之區域中1 〇個接1 〇個胺基酸殘基 ，而化學合成95種肽（實例A— 1至Α — 95) ’這些

肽具有11或14個胺基酸殘基組成之不同胺基酸序列’ 然而具有1 4個胺基酸殘基組成之不同胺基酸序列的8 6 種肽（實例B— 1至B— 86)，係複製SEQ I D 本紙張尺度適用中1¾國家標嗥（CNS ) A4現格（2丨0X 297公釐）-9 _ ·.. - _ < - - —^1» I— In I^R< ^^^1 I-^ Jy - ,-a (請先閱讀背面之注意事項再填寫本1) 脬43 88 Ο 7 Α7 Β7 五、發明説明（7 ) N〇：1 5中第1至3 5 3個胺基酸位置之证域中1 0個 接1 0個胺基酸殘基而化學合成的。這些肽係於下列實驗 2中用於篩選本發明之多肽。 合成1 8 1種肽，其由1 1或1 4個胺基酸殘基組成 且含有SEQ ID NO:1至6中所示胺基酸序列， 係使用 C a b r i d g e P- e s e a r c h B i q c h e in i c a 1 e 廠，C h e s h i r e， United Kingdom販售之 'CLEAVABLE PEPTIDE KIT'，樣 品於 P e r k i π - E 1 in e r C o r p , Instrument Div. ,Norrwalkt U S A販售之肽定序儀’MODEL 470A#上分析，顯示這些 肽具有上述-胺基酸序列。 實驗1 — 2 香杉花粉渦敏原之製備 將生長在日本Akita之由Ura-sugi (—種日本香杉， Crptomeria japorica)雄花回收所得之一份重香杉花粉 ，浸泡在約1 6份重之Q . 1 2 5M重碳酸塩水溶液（ P Η 8 . 2 )中，並在溫和攪拌條件下，於4 °C萃取1小 經濟部中央棵準局員工消費合作社印裝 (请先閒讀背面之注意事項再填寫本頁) 時。離心所生成之萃取物，如上所述再次萃取沈澱物，然 後匯合第一次及第二次上清液。將所匯合之溶液與西塔隆 (cetavlon)混合而得濃度爲0 . 1 w/v %，溫和攪拌 條件下令其於4 °C靜置1小時，以沈澱多醣。離心所生成 的混合液，令所生成的上清液與硫酸銨混合而得飽和度爲 8 0 w / v %，靜置於4 °C 一夜以晶析。 回收沈澱物並於5 0 mM Tris-HCl緩衝液（p Η 紙乐尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4规格_( 2!〇Χ29·7公釐）_ _ ' 143 〇 7 A7 B7 經濟部中央標準局賀Η消費合作社印製 五、發明説明（8) 7. 8)中透析10小時，過濾所生成之透析後溶液，將 其饋至經過5 OmM Tris-HCl緩衝液（PH7 . 8 )平 衡之DEAE — S EPHADEX管柱，並注入新鮮配製 之相同緩衝液以溶離出含有蛋白質性質之組成份的流份。 匯合流份，添加醋酸以校正pH至5. G，將其饋至經過 1 Ο τη Μ乙酸塩緩衝液（p Η 5 . 0 )平衡之C Μ - SEPHADX管柱。以1 OmM乙酸塩緩衝液（pH 5. 0)清洗管柱，饋入含有G. 3M氯化鈉之0.1M 磷酸塩緩衝液（PH7. 0)，然後回收及匯合含有蛋白 質性質之組-成份的流份。 將如此製得之溶液饋至·"MONO S"管柱，其事 先經過1 0 m Μ乙酸塩緩衝液（P Η 5 . 0 )平衡，並以 乙酸塩緩衝液（ΡΗ5. 0)洗滌管柱，饋入由0Μ至 0. 5Μ氯化鈉（於l〇rnM磷酸塩緩衝液，ρΗ7. 0 之線性梯度之緩衝液，然後在約〇· 1 - 〇 · 3 Μ氯化鈉 及約0. 4Μ氯化鈉時，分別自管柱溶離出過敏原Β及過 敏原Α。分開回收含有過敏原Α及Β之流份，濃縮至所欲 濃度，冷凍乾燥以用於實驗2。過敏八及8之產量分別約 佔乾固重計之〇 0 1%及〇. (相對於原料香杉 花粉）° 實例2 篩潠含有靑杉花粉渦敏原之T細胞原抉定位的咔 實例 2 -,.1,, (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁} 木紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4说格（2 ΙΟ X 297公釐）_ } ! _ A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明说明（9) 對香杉花粉過敏原特異之τ細胞的活化作用 令患有香杉花粉病之病人所製備的經肝素處理之周邊 血液進行f 1 CQ 1 1 - hypaqne梯度離心，以分離單核細胞群， 其含有對香杉花粉過敏原特異之T細胞。 將細胞此群懸浮於添加5 v/v%AB血清之RPMI 1 6 4 0培養基（pH7. 0)，令此懸浮液分送至96 孔微量之培養盤，生成5X1 Q 5細胞/孔。將實驗1_ 1製得之肽或香杉花粉過敏原，1微克/孔，添加至此微 量培養盤，以新鮮配製之相同培養基將微量培養盤中每一 孔之體積加、.至2 0 0微升/孔，再令此微量培養盤於3 7 °C培養箱中培養2天，於5 v/v%C〇2條件下。然後 將3H —胸腺核苷加入此微量培養盤，濃度爲1. 〇" C ί /孔，再於相同條件下培養1 6小時，根據使用閃爍 計數器之習知方法分析單核細胞群中3H -胸腺核替攝入 量。作爲對照的是，提供無肽及香杉花粉過敏原之系統， 但如上所述方法處理者。 判斷對香杉花粉過敏原特異之T細胞的活化活性，係 根據含有上述T細胞之單核細胞群中3H -胸腺核苷攝入 量（c pm )。當系統超過或不超過對照系統之攝入量約 2倍或2倍以上時，其分別標記爲、陽極#及t陰極* 。 結果示於表1至6。 ----------裝------訂------^ (請先閱讀背面之注*事項再填寫本頁) 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公Μ ) - 12 -

把43 88 Ο Α7 Β7 五、發明說明（1〇 ) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 > I K) Ln > ro > NJ GJ > K> to A-21 > NJ 〇 > 1 > } h-* 00 > 1- <1 > \ h~* > LH > l·-· ω > 1-' > 1 I-1 > 〇 > A-8 > <1 > 1 CTi > 1 cn > A-3 . > ro 143-156 139-152 135-148 131-144 127-140 123-136 119-132 125-128 111-124 107-120 103-116 99-112 95-108 91-104 87-100 CO ω \〇 Cn 79-92 un CD CXI 0 1 CD ON 'xj CO o CP\ ω 〇\ υ\ N) Ln Ln CD 〇1 1 cr- Λ1 a - Ly s - Leu -Thr-Gly - Phe - Thr - Leu-Met - Gly - Lys -Giy-Va 1 - lie Trp-Leu-Gln-Phe-Ala-Lys-Leu-Thr-Gly-Phe-Thr-Leu-Met-Gly Asn-Asn-Arg - Ile-Trp-IjeiJ — Gln-Phe-Ala-Lys- Leu — Thr一Gly ― Phe Ala-Ser-Trp-Lys-Asn-Asn-Arg-Ile-Trp-Leu-Gln-Phe-Ala - Lys Tyr-Gln-Asn-Pro-Ala-Ser-Trp-Lys-Asn^Asn-Arg-Ile-Trp-Leu lie - lie-Ala-Ala-Tyr-Gln-Asn** Pro-Ala-Ser^Trp - Ly s - Asn-Asn Lys-Val-Asp-Gly-Ile-Ile-Ala^Ala-Tyr-Gln-Asn-Pro^Ala-Ser His-Phe-Thr-Phe-Lys-Val ^5口一.01乂一11已一11已-為1己一 Ala_Tyr-Gin Pro-Cys-Gln-Pro-His-Phe^Thr-Phe - Lys-Val -Asp-Gly- lie-* lie Phe-Phe^Asn-Gly-Pro-Cys-Gln-Pro-His-Phe-Thr-Phe-Lys-Val Val-Asn^ Asn-Leu-Phe-Phe-Asn-Gly-Pro-Cys-Gln-Pro-His-Phe Lys-Lys-Phe-Val-Val-Asn-Asn^Leu-Phe-Phe™Asn-Gly-Pro-Cys Val-Pro-Gly—Asn-Lys-Lys-Phe-Val-Val—Asn-Asn-Leu—Phe-Phe Ala-Met-Leu-Leu-Val-Pro-Gly^Asn-Lys-Lys^Phe-Val-Val-Asn Lys-Lys-Pro^Ser-Ala-Met-Leu^Leu-Val-Pro-Gly-Asn^Lys-Lys Gln-Ala-Ala-Cys-Lys-Lys-Pro-Ser-Ala-Met-Leu-Leu'-Val-Pro Ser-Thr-Ala -Trp-Gln-Ala-Ala*-Cys- Lys - Lys-Pro-Ser-Ala-Mel: Thr-Glu-Ala-Phe-Ser-Thr-Ala-Trp^Gln-Ala-Ala-Cys-Lys-Lys Lys-Ηίs-Asp-Cys-Thr-Glu-Ala-Phe-Ser-Thr~Ala-Trp-Gln-Ala Val-Gly-Asp-Gly-Lys-His-Asp-Cys-Thr-GlU'Ala-Phe-Ser-Thr Lys-Tyr-Gly-Aia-Val-Gly-Asp-Gly-Lys-His~Asp-Cys ^Thr-Glu Phe-Asn-Val ^Glu- Lys-Tyr-Gly^Ala-Val-Gly™'Asp-Gly^Lys-His Ala-Ile-Asn-Ile-Phe-Asn-Val-Glu-Lys-Tyr-Gly-*Ala-Val-GIy Ser-Arg-His-Asp-Ala-Xle*-Asn-Ile^Phe^Asn-Val~Glu-Lys-Tyr 陰性 陰性 陽性 陰性 "m it 陽性 陰性 陰性 陰性 陰性 陰性 陰性 陰性 陰性 蔭性 ―陰性— 陰性 陰性 陰性 陰性 陰性 _陰性 陰性 1 1 1 r 1 1 1 j 1 1 1 \ I I 1 I 1 1 1 * All 办6—5山 Ar(a-Lys-val-GlulHis — ser!Ar(o—HislAS'oIAla — Il(DIASn—Ile-phe 服 1W· 娘一 -0 W__μ辦閎iyl^J .. — aalBal (請先閲讀背面之;i意事項再填寫本頁) 裝 -------訂-------1--' 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 13- 3 88 0 7 A7 B7 五、發明說明（11 ) ΛΓ ? k& i t rl. ( , - ϋ tr > r. --71. ϋ : ' 、Tsgs 部 ib 河ϋ" - 一 ' β 鉬、»钊"聲>-猫冲箱锘蝴[0-£筠鎇^渖攝涪"(葫皆3餑.(1»却膝薛蹿涵|1啩 办 9 2 π 3 薄^¾^¾^^¾) A 丨 31 16^1180 GlnlcysILys-Trp—val—Asn丨Gly — Ar^IGlulIlelcys — Asn-AsplAr^0 ^ > ω 〇 > NJ vX) > 1 NJ CD > 1 to > l M σ* 樣品+ 163-176 159-172 155-168 151-164 147-160 位置 Trp-Trp-Ala-Gly-Gln-Cys-Lys-Trp-Val-Asn-Gly-Arg-Glu-Ile Gln-Gly-Lys-Gln-Trp-Trp-Ala-Gly-Gln-Cys-Lys-Trp-Val-Asn Val-Ile-Asp-Gly-Gln-Gly-Lys-Gln-Trp-T$:p-Ala-Gly-Gln-Cys Met-Gly-Lys-Gly-Val-Ile-Asp-Gly-Gln-Gly-Lys-Gln-Trp-Trp Gly-Phe-Thr-Leu-Met-Gly-Lys-Gly-Val-lie-Asp-Gly-Gln-Gly 胺基酸序列 ！ 陰性 陰性 陰性 陰性 陰性 >. 1 1 1 1 txl 1 (¾¾) ^-----„----訂-----I---i^,. (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公楚） - Η日修正 8a】2. i6補充 A7 五、發明說明（12 ) 經濟部智慧財產局員工消f合作社印製 > I αι CT> > LT\ > tn A-53 > Ln NJ > cn y-· > <_n 〇 > 1 \〇 Λ-48 > -0 > 1 cn > 1 ' ϋΐ A-44 A-^3 > NJ > a A-40 > 1 LO \D > 1 OJ 03 > ! 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p P Η '7 -補λ! Α7 Β7 五、發明說明（15 ) 經濟部智慧財產局員工消費合作杜印製 ϋ : ' Α 姻、»$!1、Τ 證諸葫{CV渖癍"-扭 ' B 鉬、谢$1|' 2CA纈浊滞婼晌m-E筇矓^沛為谇、.(葫骂3嬋fw*%膝谇鹫遄闺掛 4t92nm筠珈雄^顏决砘).，

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A7 B7 五、發明說明（16 經濟部智慧財屋局員工消费合作社印製 [ΠΙ27 1〇5|118 Gly I pMolcys tvoil 丨 phet I ie—rys 丨 ArlQ—vOJl I Seri Asn—vOJl 丨 lie-1 le 1¾ ϋ ω I Μ CO 1 M m CO 1 M ω i Μ ω CD 1 NJ NJ 1 N) }-- 1 (Ό 〇 B-19 tn 1 CD tv I l·-· 1 μ-« .OJ )-» LT\ CD 1 1-« 办 CD 1 l·-4 W ω 1 KJ 〇 J M h-» B-10 ro 1 kO 1 CO ro 1 w 1 CD 1 Ln CD 1 ro 1 U> 101-114 97-110 93-106 89-102 CO U\ UD CO CO μ- Ι \Ω 厶 \〇 〇 '-j CJ 1 ca cn O'· CO M ON LTi -«〇 QD ON >-* Ln 、J 〇 CJ1 UJ σ> cr> 公 y£i 45-58 h-1 cn ω Ln 〇 ω ω σ> NJ Ό t CO oi 1 CO CO tvJ 1—· ω J—1 '-O ω 〇 13-26 1 fO to I le-Gly-Asn-Gly-Gly-Pro^Cys -Val -Phe-1 le^Lys-Arg^-Val - Ser Ala-G1n-Val-Tyr^Ile-Gly^Asn-Gly-Gly-Pro-Cys-Val-Phe-Ile Asp-Gly-Arg-Gly-Ala-Gin-Val ^Tyr - Ile-Gly-Asn-Gly-Gly *-Pro Tyr-Lys-Thr-Phe-Asp-Gly-Arg-Gly-Ala-Gln-Val-Tyr-工le-Gly Tyr-Ile-Ala-Gly-Tyr-Lys-Thr^Phe-Asp*Gly-Arg-Gly-Ala^Gln Lys-Met-Pr〇'Met-Tyr'Ile-Ala-Gly-Tyr-Lys-Thr-Phe-Asp-Gly Asn^Ile-Lys-Leu-Lys-Met-Pro-Met-Tyr-Ile-Ala-Gly-Tyr-Lys Ser^Gly-Asn-Met-As/i'-Ile-Lys ^Leu-Lys*Met-Pro-Met-Tyr - lie Trp-Ile-Ile-Phe^Ser-GIy-Asn-Met-Asn-Ile-Lys-Leu-Lys-Met Asp-Arg-Pr〇-Leu-Trp-Ile-Ile'Phe-Ser-Gly-Asn"Met-Asn-Ile Gly-Ala-Thr-Arg^Asp-Arg-Pro-Leu-Trp-Ile-Ile-Phe-SGr-Gly Thr-Leu-Arg-Tyr-Gly-Ala^Thr-Arg-Asp-Arg-Pro-Leu-Trp-lie Pro-Ala-Pro-Gly-Thr-Leu-Arg-Tyr-Gly-Ala^Thr-Arg-Asp-Arg Asp-Pro-Val^Asn-Pro-Ala-Pro-Gly-Thr-Leu-Arg-Tyr-Gly*Ala Asn-Ser-Asp-Asp-Asp-Pro-Val-Asn-Pro-Ala-Pro-Gly-Thr-Leu Tyr-Thr-Val-Thr-Asn-Ser-Asp--Asp~Asp-Pro-Val^Asn-Pro-Ala Gly-Gly-Asp-Leu-Tyr-Thr-Val-Thr-Asn-Ser-Asp-Asp-Asp-Pro Met-Gly-Gly-Lys-Gly-Gly^Asp-Leu-Tyr-THr-Val-Thr^Asn-Ser Gly-Ser-Ser-Thr^Met-Gly^Gly-Lys-Gly-Gly-Asp^Leu-Tyr-Thr AX3--V3.1-GLy-Phs_Gly - Ssr - Ssx^Ttvr—Gly- Ly s —Gly — Gly Leu-Ala-Asp-Cys-Ala-Val-Gly'•Phe-Gly-Ser-ier-Thr-Met-Gly Asn^Arg-MG.t-Lys-Leu-Ala-Asp-Cys-Ala-Val-Gly'-Phe-Gly^Ser Asn-Trp-Ala-Gln-Asn-Arg-Met-Lys-Leu-Ala-Asp^Cys-Ala-Val Arg-Gly-Asp^Ser-Asn-Trp-Ala-Gln-Asn»Arg-Met-Lys-Leu-Ala 陰性 陰性 陰性 陰性 陰性 陰性 w 陰性 陰性 陰性 陰性 陰性 陰性 陰性 陰性 陰性 -陰性 陰性 陰性 陰性 陰性 陰性 陰性 陰性 1 f 1 1 1 1 r r j 1 1 j 1 1 I 1 i 1 1 1 0ISG□向13薄啭驟¾当-1ΒΛ 规..—4 ! - - I I I 1 I t— I n t I I n n ^^eJI n n n .^1 t (請先M讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4現格（210 X 297公釐） -19 - 股12.〗6補充 Δ7 B7 五、發明說明（17 ) 經濟部智慧財產局負工消费合作社印製 w .. , A偭"姗邻> T證窗葫{CV渖攝、-' B滿"姍邻* ilaA騷冲碌鹆蝴ΓΠ-Ε萍繭N-渖鋇1i、(葫皆3燁{1»$||^涪盥遄菡^ - 492nm 薄：S^N-裔法¾) CD 1 ω ί^Ι CD 1 ω D3 1 ω ω CD I CO NJ D3 ? CO W 1 CO σ D3 1 f〇 y〇 tn 1 M c〇 137-150 133-146 129-142 125-138 121-134 117-130 113-126 109-122 Asn-GlU'-Ser-Phe - Gly-Vsl-Glu，Pro-Val-His-Piro-Gln-Asp-Gly Asn-Val-Leu-Ile'Asn-Glu-Ser-Phe~Gly-Val-Glu-Pro-Val-His Seir-Val-Leu—Gly^Asn-Val-Leu-Ile-Asn-Glu-Ser-Phe-Gly-Val Gly-Cys-Ser^Thr-Ser-Val-Leu-Gly-Asn-Val-Leu-Ile-Asn-Glu Leu-Tyr-Leu-Tyr-Gly-Cys-Ser-Thr-Ser-Val-Leu-Gly-Asn-Val lie-Ile-His-Gly-Leu-Tyr-Leu-Tyr-Gly-Cys-Ser^Thr-Ser-Val Val-Ser-Asn-Val-IXe^Ile-His-Gly-Leu-Tyr-Leu-Tyr-Gly-Cys Phe-lie— Lys-Arg — Val-Ser-Asn-Vai-Ile — Ile-His-Gly-Leu-Tyr 陰性 陰性 陰性 陰性 陰性 陰性 m _陰性 i 1 1 j 1 ί 1 1 (魂|£) 0 απα ^ 薄獬猫 ~_ > 鉬 ro*l (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

- ti i ί —^· ϋ n I^DJ_ n n _— n .1 I 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公f ) _ 20 - 89.12. 1S 年月日 修正補充 腊43 88〇 A7 B7 五、發明說明（18 ) 經濟部智慧財產局員工消费合作社印製 CU ( CT» 〇 Μ m Cn v£) M CD Ln 00 r〇 ω in o Ki αα 〇Ί Ch Μ CD ί_π Ln to ω (_n 仁 K> m uj M ra Ol w K) CD cn K1 f〇 cn Cn 〇 >- C〇 ω* Μ CD CD tu 1 、] η ro 1 σ> 一 W 1 cn M m 1 Μ CD ω ro fO M a I-* CO 1 o DO I CO \Ω w CD 1 ω CD M ro 1 ω ί—· D3 1 ω σ« Μ U! -J 〇J CO NJ NJ Ol ΙΌ h-» '-J h* U) 〇 \d O c/i o M Ό u> CD <X> CO cn CO η 'vj <1 ω σ» vjD σι LH 〇\ U1 cn ω <a 办 Ln 私 η I Ν) 1 M 1 1 to ί Μ f ΝΪ ί M l ro h〇 NJ N) Μ to M Μ 1 I—1 1 — w i— l·-· ί I—* 1 1—1 \ H· ί η U1 〇 心 cr. 办 fO CJ CD GJ “ u> o M cr» K) ro ① h-* 〇 Ο σ\ 〇 NJ uD CD \O 〇 0□ cr. 00 NJ --j CO •vj -«0 o CTN σ> to Ln 03 (J1 r 0) c > h-^ Qi > > U) D Ο 1—· D < QJ 3： (D rt > w Ό > U) Ό r1 (D c 'ζ (Λ D* > W D < 0) -ϊ y Η > U) > ϋ) *"C U) ω M x H* (Λ M CD H r 2 > (/) Ό < 〇i ο — I < 0) 1 > 1 Z： m 1 Π 吣 I 汩 rr 1 > i r 1 > t/l > M o 1 < 〇i I > ω > U) H Γ W (D 1 < Cu 1 Ο ί-· > 1/) > t/ϊ e M 1 > M 1 -3 rr 1 〇 1 X H* ί < 卬 I—' I UD 1 rt i CO i Φ 1 〇J 1 ω 1 TD 1 0) 1 1 r Μ r M ί I Ό r Di ! h J 1 W 1 Η 1 X H. H o ο $-· ti < 0) X H· 2： Φ X Κ r> ro M H Η ^Γ C- (D cn (D ⑺ 〇> M H r (D > CO Ό 卜1 Ω Μ U) I M I 〇 | I 1 | | [Λ t I in j rt I ω I c fD h C M H ro H c 0 C C QJ 〇 > o >_| Μ > /Λ H >*T U) m cn m > /n 1 tr I X ω ό l· tr ί < cn > > > 1 :> 1 〇 1 TD !-· I | Π t〇 1 D | Π 0 1 UJ 3 | |J •M j (U >i I (U M C/] Ό fD C Η· ω 1 nr (0 iD H Μ fD C CD Η fD ：T fD Ό w h CQ 1—J 0> h 0 > l·- QJ r m c > H QJ > h IQ > in o 3 < 0) 2： 0) c^· > tfl > U) m I r1 01 rr 巾 > in π 1 < 0) j -3 rr H 1 > ΙΛ m > w Pi-ϊ (/) (T> X H， ) M l y 1 r m 1 > ω 1 < α» i > GO 3 r t < 1 \ > 〇 1 1 2 ① d· 1 t Ο ω ί Ϊ π rr Φ ( t > M QJ I 1 ^T1 C/l 1 '> V] 1 > H 〇) G 1 < 〇ί κ ι > U) 3 1 > W i Η h t Π 1 cn (D h i Lt I < 0) 1 u a *> > Ui D w 1 > 0) D lU H Π > Cu 1 c 1 了 Ό J Q r 1~1 1 工 Η· W I > If) X μ*. in t I h 0 I Q j Q Ci rr ① < 0) M | r M H I H* ω X (D rf X H· C/l f* (Dr C Μ Μ ro t ^r M Η h I r ro c rD H cn (D h M i〇 -3 r (t) c > w Ό 勺 Μ 0 > < 〇 > > cn iA > r1 X 心 w o I r < CQ > > [ > 1 > I Ο ω * DJ h tQ l·- D 1 0 1 ω I rr h Q >1 cn (D d m ro CO η t H (0 1 c I cu l·-* 0) 1-i [D tn Xi (Λ D IQ Cu Μ > r > > > (D < > r r 匁 F > r < 1 Η > 1 > \ (J) 1 X 1 M 1 1 tr 1 > ¥ H H- QJ ① c H Q] ID 1 ' [/) rj 二 〇i (Ό r+ ω X> w TJ ro c ΰ) (D (Λ D OJ H h w T3 (fl T3 Φ H- (/1 Φ a> c ω π > ω > (J) | < 〇) l·-· j 1 > 幻， | 1 3： f0 ,<+ • I Γ) in 1 "d D* (Ό I > CD I ίΛ 1 1 > cn > j-· QJ Ω H 1 < 0i η· 1 > w 3 I 1 > w 1 ：r H • W fD 1 < Qi l··^ 1 o 1 > (Λ D 1 > (Λ D 1 H Ό r > H Di H rr M I Ο Η 0 1 > CO P I X ρ ω I -3 1 Τί Μ 0 t o Q "T3 D- (D i < Q> h^> r ω M 1 2： H* ω 2 Φ r+ 1 X H· tfl r (D c 1 M CD 1 =r D* 1 · tr1 (D c cln (t) M c〇 (T> h M 卜 .m tr* ω c { > C0 > < Ci r > C) 1 > ω 01 > r f X 1 cn 1 a tr f < i C/) Ό > > > 1 > h Ό 1 tn D H I | Μ Ώ I 口 I 0 I (n P I rr 疖 fi 1 a> ω Tf a> c K (Λ I fD < Φ h ro c 0) h- ft? rr 0) (Λ W J h IQ DJ 闩 zx > r (0 1 > Μ > > w Q < PJ 2 (D > M 1 > in r φ 1 f1 1 rr 1 > CO Γ < 0； H D* > (Λ > m CO (D X 卜 r M H 1 rr I r φ 1 0J I c 1 0) 1 td ] a j D ί H j rt t3 c <J] CD l·-* H T3 (Λ (D h C M H* > (Λ Ό > ω =1 < cu j-j > 卜1 3 ① rt Π w rr (0 > QJ irt > ω > H* Oi CD < oj > fn > (/1 D D* h cn fO < cu I-* 〇 > 0 > If) D 1 卜5 Ό 1 > Di ί Η 願 膝 踩 w W 膝 脑 m 脲 w 脲 爾 彌 w w w w 脲 郦 祥 1 F# K? 1 i# —·»- 薛 j 谇 f# 1 碎 I h? r 谇 1 1 r F# 1 h¥ 1 谇 1 Fff l 辖 o O 〇 o Ln hi? 1 谇 1 R? 1 薄啉错¾当 -----------’一 Μ-----r---訂--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS) A4規格（210 X 297公« ) -21 «a 12. 年月 丨修正丨-4m M3B8 07 A7B71 五、發明說明（19 ) B—68 269丨282 Thr丨Alalpro—AsnlGlulser-TyrlLys—Lys—Glnlval-ThrlJlefArg 0 ^ ^ .. ' A 鉬"*$11、T 證窗部 <b 河嶷、-J. ' B 鉬、m9(l' .!2£Λ鄕冲箱祺晌m-E誶譴N-渖裔阵、(葫莒3餑膠s¾涵IM m 仏92nm落珈0#^洚决砘) _______ B-67 00 1 σ> σ> ⑴ 1 σ> cn CD ! σ» ω 1 O' ω CD 1 〇\ NJ DD 1 265-278 261-274 257-270 253-266 249-262 245-258 241-254 Gly-Asn-Ser-Phe-Thr-Ala-Pro-Asn-Glu-Ser-Tyr-Lys-Lys-Gln Ile-Leu-Ser-Glu-Gly-Asn-Ser-Phe-Thr-Ala-Pro-Asn-Glu-Ser Ser-Asn-Pro-Thr-Ile-Leu-Ser-Glu-Gly-Aan-Ser-Phe-Thr-Ala Ile-Gly-Gly-Ser-Ser-Asn-Pro-Thr-Ile-Leu-Ser-Glu-Gly-Asn Thr-Ile-Tyr-Ala-Ile-Gly-Gly-Ser-Ser-Asn-Pro-Thr-Ile-Leu Tyr-Asp-Pro-Trp-Thr-Ile-Tyr-Ala-Ile-Gly-Gly-Ser-Ser-Asn Ala-Asn-Asn-Asn-Tyr-Asp-Pro-Trp-Thr-Ile-Tyr-Ala-Ile-Gly 陰性 陰性 陰性 陰性 陰性 陰性 陰性 1 1 \ \ 1 薄脒娣镝当 CDJS -22-

Uf1¾} ._>α, &_

AA .4--------訂---------線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用t國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公;8 ) 2· H σί8 一 6 年 月 Π A7B7 經濟部智慧財產局員工消费合作社印製 五、 發明說 明（ 20 ) 〇 1 〇 1 ω η 1 Ν» n 1 p m 1 00 tD 1 03 U1 w 1 00 itx 1 €0 ω m 0□ to CD \ CD GO i 00 〇 m 1 -sj B-78 CO l •v] m 1 CD 1 nJ Ln tu 1 >0 ro 1 OJ ID to B-71 1 -j o DJ 1 cn y〇 樣品 丨 352-363 192-208 91-107 公 f o 340-353 337-350 333-346 329-342 325-338 321-334 317-330 313-326 309-322 305-318 301-314 297-310 293-306 289-302 285-298 281-294 277-290 273-286 I I I J J Asp~Ile^Ser-Leu-Lys-Leu-Thr-Ser-Gly-Lys-lie-Ala-Ser-Cys-Leu-Asn-Asp Asp-Ile™Phe-Ala^Ser-Lys-Asn-Phe-His-Leu-Gln-Lvs^Asn-Thr-Ilg〜Gly-Thr ; Asn-Arg -Ile-Trp-Leu-Gln-Phe-Ala^-Lys-Leu-Thr ^Gly-Phe-Thr-Leu-Met-Gly Lys^Val-Asp-Gly-1le-Ile*Ala-Ala-'Tyr-Gln-^sn^ Pro-Ala-Ser-Trp--Lys*Asn Lys-Asn-Ala-Gly^Val-Leu-Thr-Cys-Ser-Leu-Ser-Lys-Arg-Cys Gin'Leu-Thr-Lys^Asn-Ala-Gly-Vsl™ Leu-Thx-Cys-Ser-Leu-Ser Asn-Ala-Thr^Pro-Gln-Leu-Thr-Lys-Asn-Ala-Gly-Val-Leu^Thr Val -Glu-Asn-Gly-Asn-Ala-Thr^ Pro-Gin-Leu-Thr- Lys-Asn-Ala Glu-Ala^Phe-Asn-Val-Glu-Asn'Gly-Asn^Ala^Thr-Pro-Gln-Leu Tyr~Thr-Lys-Lys^Glu-Ala-Phe-Asn-Val-Glu-Asn-Gly^Asn-Ala GXy"Gly-Asn-IXe™Tyr-Thr-Lys-Lys-Glu-Ala-Phe-Asn"Val-Glu Gly-Lys-Tyr^Glu-Gly-Gly-Asn-Ile-Tyr-Thr-LyS'Lys-Glu-Ala Phe-Val-Ser^Ser-Gly-Lys-Tyr-Glu-Gly-Gly^Asn-Ile-Tyr-Thr Asn-Gly-Ala-Tyr-Phe^Vel-Ser-Ser^Gly-Lys-Tyr^Glu-Gly-Gly Asp-Val-Phe-Tyr-Asn-Gly-Ala-Tyr-Phe-Val-Ser-Ser-Gly-Lys Gln^Ser-Thr-GXn-Asp-Val-Phe-Tyr-Asn-Gly^Ala-Tyr-Phe~Val Asn-Trp^Val-Trp'Gln-Ser-Thr-Gln-Asp^Val-Phe-Tyr-Asn-Gly Ser-Ser-Cys^Ser-Asn-Trp-Val-Trp-Gln-Ser-Thr-Gln-Asp-Vel Cys - Lys-Thr-Ser-Ser-Ser-Cys-Ser-Asn-Trp-*Val；-Trp-Gln-Ser 工le-Arg-Ile-Gly-Cys-Lys—Thr-Ser-Ser-Ser—Cys—Ser-Asn-Tzrp Lys-Gln-Val"Thr-Ile-Arg-Ile-Gly-Cys-Lys"Thr-Ser-Ser-Ser Glu-Ser-Tyr^Lys-Lys^Gln-Val-Thr-Ile-Arg-1le-Gly-Cys^ Lys 铕 m m % cn j ! 陽性 陽性 陽性 陽性 1陰性 :陰性 陰性 陰性 陰性 .陰性 陽性 陰性 膝 陰性 w Κΐ ΗΪ :w 'R+ 陰性 陰性 陰性 陰性 陰性 A項 0,081(0.083 ) 0,071(0,055}- 0.089(0.076) t ·. 0.084(0.053) 1 1 r 1 ( 1 0.077(0.144). 1 J i 1 1 1 ( 1 1 1 1 DO I ,.--il — — — — — — — ---1 l· ! I 訂---------声 {請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用肀國國家標準（CNS)A4規格（210 x 297公爱） -23- 經濟部中央標牟局員工消費合作社印製 A7 ____B7____ 五、發明説明（22) 表1至6之結果顯示，上述實驗使用之香杉花粉過敏 原明確地在對此過敏原特異之T細胞上作用不同。與陰性 對照組比較，使用樣品A— 1 9 ，Α—2 Ο，A — 23， A-48 ，A-49，A~89 ，B-39 或 B-80， 或過敏原A或B的系統明顯增加3H —胸腺之攝入，但使 用其它樣品的系統不顯著增加攝入量。這些結果顯示，樣 S，A-19，A-20，A-23，A.-48，A-49，A— 89，B — 39 或 B-80，與過敏原 A 及 B 顯著地活化單核細胞群中對香杉花粉過敏原特異之T細胞 至於具有一般及複製得胺基酸序列之樣品A - 1 9， A-2 0 ，A - 4 8及，A—4 9，顯示比其它具T細胞 活化活性陽性樣品的T細胞活化活性稍低的樣品，A -23及A— 89，及具有如SEQ I D NO: 8至 11所示胺基酸序列且由17個胺基酸殘基組成的肽類， 是化學合成的。 根據習知方法合成具有如SEQ ID NO: 8至 1 1所示胺基酸序列之肽，即樣品C_1至C-4 ，其係 使用^1丨11丨8611/8;036珏1"(：11,!^11丨卩0「6分公司，^53技(：1111-seus，USA商品化之肽合成儀'EXCELL®，， 純化而得9 5w/w% (按照固重計，d. s · b )之純 度，純化係藉助逆相高效液相層析儀，其使用B i 〇 -Rad Laboratiorios [nc.,Brussels, Belgium 廠商品 化之管柱 'MODEL Hi— Pore RP— 318 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（2丨0乂297公釐）-25 - ^--*裝------訂------.水 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 」- -; A 7 B7五、發明説明（2¾ •。然後自樣品c— 1至C— 4取樣進行分析，其係藉助 Perkin-Elmer C o r p . , Instrument Div. ,Norrwalk, USA 商品化之肽定序儀’MODEL 470A# ，結果顯示樣品皆具有 上述之胺基酸序列。 如前所述’測試樣品C_ 1至C- 4之Τ'細胞活化活 性，結果顯示爲陽性，表示這些樣品顯著活化對香杉花粉 過敏原特異之Τ細胞。 官賒2 - 2 對於莬疫球-蛋白Ε抗體之反應性，該抗體對香杉花粉渦输 原特異 使用 Taniai 氏等在 ''Molecular lininunology# 第 3 0 冊，第2號，第1 8 3-1 89頁（1 99 3)中記載的 E IA (酵素免疫分析法），硏究樣品B_3 9 ，B_ 80 ，C-1及C—4與免疫球蛋白E抗體的反應性，該 樣品是實驗2 — 1中顯示可明顯活化對香杉花粉過敏原特 異之T細胞，而該抗體對患有香杉花粉病病人之血液製得 的香杉花粉過敏原特異。 將 Pierce廠，Rockford 丨 Minois ，USA購得之 1 克雙 (硫代琥珀醯亞胺基）辛二酸酯（BS3)溶於1 0毫升 蒸餾水中，並將該溶液（5 (]微升/孔）分裝至Nune廠， Jioskilde，Denmark購得之 9 6 孔微置盤 'C0UL1NK MODϋLE^ ，然後在3 7 °C培養該盤3小時。以蒸餾水清洗 該微置盤，注入下列溶液（5 0微升/孔）：該溶液係將 本紙張尺度通用中國國家橾準（CNS ) A4規格（210X297公嫠）_ μ - -----------袭------ΐτ------f---Γ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 匿4388 0 Α7 Β7 五、發明説明（24) 樣品B — 3 9 ，B— 8 0 ，C— 1及C—4中任一者及過 敏原A及B溶於磷酸塩緩衝之食塩水中（P B S )而製備 的，濃度爲2 0微克/毫升或5微克/毫升，然後於3 7 °C培養該微量盤3小時以令樣品與微量盤表面上之過敏原 共價鍵結。將含有lw/v%胎牛血清白蛋白之5 0微升 /孔P B S加入該微量盤，然後令其於4 °C靜置一夜以阻 斷樣品與過敏原之未反應活性基團，以含有0. 1 w/v%胎牛血清白蛋白之PB S清洗，然後添加患有香 柏花粉病之病人血清（5 0微升/孔）至該微量盤，該血 清事先用新-鮮調配之相同PBS (含有相同濃度之胎牛血 清白蛋白）稀釋5倍，於3 7 °C培養該微量盤1小時。 經濟部中失標準局員工消費合作社印製 n. - - I - ·! I. · - - . - - I— m _ - -- --- I I— .......- -~V - U3. *v5 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 然後以含有0. lw/v%胎牛血清白蛋白之PBS 清洗此微量盤，注入5 Q微升/孔之1微克/毫升經生物 素檫記之抗人類ε鏈抗體溶液，該溶液之製備係將抗體溶 於具有相同濃度胎牛血清白蛋白之新鮮配製之相同PB S ，培養於3 7 °C歷1小時，以含有0. lw/v%胎牛血 清白蛋白之PBS清洗，注入5 0微升/孔之經過氧化酶 標記之生物素結合蛋白質（購自Zy me d廠，加州，美國） 的溶液，其之製備係以具有相同濃度胎牛血清白蛋白之新 鮮配製的相同PBS予以稀釋5，0 0 0倍，再於3 7°C 培養1小時。再以含有0 . 1 w/v %胎牛血清白蛋白之 PBS清洗該微量盤，注入含有0. 03w/v%過氧化 物及0· 5毫克/毫升對苯二胺之0. 1 Μ檸檬酸/磷酸 塩緩衝液（ΡΗ5. 0 ) ，：L 00微升/孔’令其於室溫 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格UlOx 297公釐27 - 蹈4 3 38 〇 A7 B7 五、發明説明（25) 靜置5分鐘以進行酵素反應，將1 0 Q微升/孔之2N硫 酸加入微量盤以終止酵素反應，以一般方法使用光譜儀測 量及光度，波長在492nm。 同持提供一系統作爲陰性對照組，其使用健康志願者 之血清代替香杉花粉病病人血清，並如上所述予以處理。 結果示於表1至6。 如表1至6之結果所示，過敏原A與B與香杉花粉病 病人製得之香杉花粉過敏原有特異性之免疫球蛋白E抗體 强烈反應，但樣品B— 3 9，B—8 0及C—1至C-4 實質上不與這些過敏原反應。這表示這些樣品缺乏過敏原 A與B所含之香杉花粉過敏原的B細胞抗原決定位。全面 考慮實驗2 - 1之結果及數據，可鑑知上述樣品（即這些 肽），具有SEQ ID NO: 8至13所示之胺基酸 序列，基本上由香杉花粉過敏原之T細胞抗原決定位組成 --------'--d------'玎------·Α {请先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中夬標隼局員工消費合作社印製

實驗3 篩撰某本上被T細朐辨識之T細胞杭原決定位的胺基酸序2L 此實驗中，進一步分析實驗2中揭示之6個T細胞抗 原決定基，並篩選基本上被T細胞辨認的胺基酸序列。 根據實驗1-1之方法，化學合成14或17個胺基 酸組成之肽，其係以丙胺酸替換SEQ ID NO: 8 至1 3及業已確認其T細胞活化活性之樣品B _ 3 8，B 本紙浪尺度適用中阖國家橾準（CNS)A4规格（2Ι0Χ2<Π公釐）-28 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝 Λ7 _ B7五、發明説明（26) _ 8 1及B - 8 2中胺基酸序列一端或兩端的一個或一個 以上的胺基酸。硏究這些肽之T細胞活化反應，該T細胞 對香杉花粉過敏原特異，及硏究這些肽對該過敏原特異免 疫球蛋白E抗體的反應性。 結果如表7所示，其發現含有SEQ ID NO: 1至7所示胺基酸序列之樣品D - 1至D — 7 ，作用在對 香杉花粉過敏原特異之T細胞與對該過敏原特異之免疫球 蛋白E抗體，此幾乎類似具有SEQ ID NO: 8至 1 3所示胺基酸序列的肽。這些事實明顯指出，SEQ ID NO—： 1至7所示之胺基酸序列基本上負表T細胞 辨認具有SEQ ID NO:8至13所示胺基酸序列 的肽。 - - n^i I - I In I . 士^· - - - ^^^1 ...... ^^1· (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙ί長尺度適用中國國家標準（CMS )八4規格（2〖〇ΧΜ7公；f ) 29 - 補充 五、發明說明（27 ) B7 經濟部智慧財產局員工消费合作社印製

li: ^、谢邻、^語菡'Di\{t 河裔、-坤"Β«"«ΓΘ， isA溢冲铴祺晌cd-ε铒雖Ν·河inHr、(葫窖3续fl撕邻膝漭鹫通譚m 松9 2 nrn薄淛S.N萍涞砘) α I >〇 D-6 υ ί LH D-4 D-3 D-2 σ 1 Μ g% ΛΤί > r φ > 〇ί Ala > Ala r ω π〇 a-Alc C I μ_3 I > I > I__. I > I > 1 < •—3 Μ I r*- fli 1 ω Γ~* CD ] 卜ί U3 1 Μ Η1 Q) 1 > I > 1 Ala- Leu-Ari fD μ 1 D* (D 1 > ① [ Η Μ 〇ί 1 > (Λ Ό 1 Ο > . μ m c Ι ΟΙ 卜； — 03 Μ 〇> I > Μ Οί ια I Η ί U1 ! cn • -Leu- r Μ Μ Φ 1 Μ Η Φ > ί > iD Ο Η Η Η* Μ Κ- Η QJ Η QJ c tn > 3 卬 1 ,Φ * I 1 1 e > 1 > I > > (/1 ：Τ Η Η Η 〇) Η \ D (D I QJ Οί 菏 1 > Ι-* U) 1 1 > > 1 > Η α> > W CD Φ Η α» Η 〇ί m 0) 1 > Η ftl D J > Η Λΐ 1 a H -His- 1 Γ1 V) 1 Η j Η h 頰 1-Alc ；I • > Η 〇> έ a t 1 tr1 CD c I tr1 (D C 1 Q Η 3 1 Q Η I 1 t ,M cfi H > > > > M Η W W Η a> D 0) D I Φ 0) r 1 I 1 > f > > > h- Ί3· Η > Η to Η 0) 〇ί 0 QJ QJ 1 I 1 < οι > Η ω > > > > id •i GV κ 0) κ 0J Η 0> Η 1 Q 0> > > H > > Μ 1 > Μ Η Η 〇J QJ 0J CU 又 C 〇ί > H > H > Λΐ > Η Αι If > l·-1 > 1— 〇J > H ΛΙ Μ/ 1 > Η Οι U* > Μ Λι β) > Η· ϊ-Ala tu > PJ i-Ala 1-Ala ί-Ala |3 .W W A項 η¥ H? 谇 漭 ο . Ο Ο Ο 〇 ο Ο ο Ο ο 03 ο 03 ο ο 03 ο NsJ Cd 00 \〇 Ο vj S ο 〇〇 >-s. ο Ln ν. Ο Η1 «1 Ο to —Ν Ο t〇 Ο Ά Ο ο 〇\ ο 0Q ο -0 i— Ο cn \〇 ο σ> 0J ο NJ --^ -----：----訂--------I 線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中囷國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） A7 B7 五、發明説明（28) 實驗4 急件審件試驗 將實例B - 1 B - 7中方法製得之免疫治療劑經口及 經腹腔施用至2 0日齡之小白鼠。結果發現這些藥劑之 LD5〇値爲2 0 0毫克/公斤鼠或更高（無關其施藥途徑 )。這表示本發明之肽可納入免疫治療劑中，以施用包括 人類之晡乳動物，且無懼於引起副作用。 如前所述，本發明係關於實質上不與免疫球蛋白E抗 體反應的多肽，該抗體對香杉花粉過敏原特異，且藉3H —胸腺核苷-攝入法分析時，該多肽比陰性對照組顯然更能 活性對香杉花粉過敏原特異的T細胞。本發明包括任何肽 ，只要該肽具有這些獨立於其結構，來源及製法之外的特 性0 經濟部中央標隼局員工消費合作社印製 I-------^--^ ,裝-- (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 本發明之肽通常由5 — 5 0個胺基酸組成，較好1 0 _ 2 Q個胺基酸，該胺基酸藉肽鍵彼此鍵結。這種肽之範 例包括具SEQ ID NO:8至13所示胺基酸序列 之肽及其同源肽。這些同源胺基酸序列可藉由實質上不會 改變上述免疫活性之其它胺基酸來替換SEQ I D N 0 :8至13中一個或一個以上之胺基酸而製得，或將一個 或一個以上之胺基酸添加至SEQ ID NO: 8至 1 3所示胺基酸序列的一端或兩端。 詳言之，只有SEQ ID NO: 8至13中基本 上負賫被T細胞辨識之胺基酸序列不予處理，但S E Q ID NO: 8至13中的其它胺基酸序列置換了實質上 本紙浪尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（2丨0X2W公釐）_ 31 - ^4388 Ο 7 Α7 Β7 經 濟 部 央 橾 準 五、發明説明（四） 不改變其作爲Τ細胞抗原決定位之免疫活性的其它胺基酸 。或者，一個或一個以上適合之胺基酸（例如丙胺酸）可 偶合至上述基本上負責Τ細胞辨識之胺基酸序列的一端或 兩端，以形成具有足以令Τ細胞辨識之長度者，即10至 2 0個胺基酸殘基。這些备基酸序列的範例是SEQ ID N 0 s : 1至7所示序列，且其同源胺基酸序列之 範例是SEQ ID NO: 16及24所示胺基酸序列 的肽。 本發明之肽可用此藝習知之已知肽成法輕易製得，例 如 ' 固相法J及、液相法"。本案說明書不說明這些肽之 合成法，因爲本發明本身非關於肽合成。這種技術詳述於 ，舉例而言，Tokyo Kagaku Dojin, Tokoy, Japan 出版， T h e J a p a n e s e B i o c h e m i c a 1 S o c i e t y，Τ o k y ο , J a p a π 編輯 之、S h i - S e i k a g a k u ' J i k k e η - K 〇 z a '第 1 冊，第 3 — 4 4 頁（1 9 9 2 )的 ’Protein VP 乙章 限於化學合成者，其包括由香杉花粉及 它肽，及適當分解重組DNA技術製得 並由生成物中分離而製得的肽。再者， NO:8至13所示胺基酸序列及其同 可被製備且嵌入可自行複製的載體以形 後導入適合宿主，例如大腸桿菌，桿菌 轉形體。本發明之肽亦可製備如下：培 培養基，且自培養物回收該肽。編碼具 NO:8至13所示胺基酸序列之肽的 本紙悵尺度過用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X29?公釐），39 {請先鬩讀背面之注意事項再填寫本頁) 中。本發明之肽不 香杉雄花製得的其 之香杉花粉過敏原 編碼S E Q ID 源序列的D N A， 成重組D N A，然 屬及酵母菌以製得 養該轉形體於營養 有 S E Q ID D N A，可根據日 消 費 合 作 杜 印 經濟部中央標隼局員工消費合作社印裝 A7 __B7五、發明説明（30) 本專利申請案3 4 4 ，5 9 6/9 3號及國際專利公告號 W09 3/0 1 ，2 1 3中揭示之CDNA鹼基序列製備 。本發明之肽可修飾爲共軛物形式（其可藉由添加醣類及 聚乙二醇至本發明之肽而製得），及衍生物及聚合物形式 (藉乙醢化，醯胺化及/或多功能試劑將該肽架橋及鍵結 起來而製得）。 雖然本發明之肽即使呈相當粗製形式施用至病人仍然 具有所欲之治療及/或預防功效，其通常在使用前予以純 化。本發明中可使用的純化技術包括此技藝中用來純化肽 與蛋白質的·'技術，例如，過濾法，濃縮法，離心法，凝膠 過濾層析法，離子交換層析法，高效相層析法，親和層析 法，凝膠電泳及等電泳及等電點電泳。若有需要，可合併 使用兩種以上的上述技術。所得之純化肽可進一步濃縮及 /或冷凍乾燥爲液體或固體型式的產物以符合最終用途。 如上所述，本發明之多肽實質上不與對香杉花粉過敏 原特異之免疫球蛋白E抗體反應，且顯著活化對該過敏原 特異之T細胞。因此，本發明之肽具有作爲免疫治療劑以 治療及/或預防香杉花粉病的廣泛應用性。含有本發明之 肽作爲有效組成份之免疫治療劑，可治療香杉花粉病，但 實質上不產生副作用，例如施用至患有香杉花粉病之哺乳 動物（包括人類）時產生的過敏反應。倘若對可能患有香 杉花粉病之健康人與動物施用本發明之免疫治療劑，呈現 對香杉花粉病有顯著預防功效，且有需要時，可强烈緩和 過敏症狀。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS )八4規格（2丨0X2*>7公釐）_ _ I-----：— d------、玎-------4. (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7五、發明説明（31) 現在詳述本發明之免疫治療劑，本發明中其通常含有 一種以上的肽，佔乾固重計之0 . 0 1 — 1 0 Ow/w% ，較好0. 05—50攻/界％，更好是0, 5—5, 0 w/w%。本發明之免疫治療劑包括單獨使用之本發明肽 ，或含有該肽及一種以上下列物質的組成物：載劑，稀釋 劑，佐劑及安定劑，例如血清白蛋白，明膠，甘露糖醇， 麥芽糖及海藻糖；以及抗發炎劑與抗組織胺劑，例如類固 醇激素及克模甘油酸墙（sodium cromciglycate)。本發 t. 明之免疫治療劑包括呈單位劑置形式者，其包括呈日劑量 至可被整除〜倍劑量（即4至1 / 4 0倍）的本發明肽，以 及適於投藥之生理上區隔之全身性藥劑形式者。這類呈單 位劑形藥劑的範例有散劑，細顆粒劑，顆粒劑，薬丸，錠 劑，膠囊，片劑，糖漿，乳劑，油育，硬耷劑，粥劑，栓 劑，眼藥水，鼻滴劑，嘖霧劑及注射液。 現在說明本發明之免疫治療劑的施用方法，其一般可 經皮，經口，經鼻，經眼及以注射方式施用至哺乳動（包 括人），以治療及/或預防香杉花粉病。雖然人類所需劑 量可隨其目的及病人症狀而予改變，但通常對病人施用之 劑量介於0. 01—1. 0克/天/成人之間，較好 〇 01-0. 1克/天/成人，每週或每月一次，歷經 約1 _ 6個月之期間，其間同時觀察病人症狀及病況。一 般而言，劑量乃逐漸增加且重複投薬。 下列實例說明本發明肽之製法及其用途： (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標苹（〇：邮）八4規格（2丨0/ 297公嫠）-34 稱4388 07 A7 經濟部中央標隼局員工消費合作社印裝 B7五、發明説明（叫 官例A _ 1 肽之製備藉一般方法，化學合成具SEQ ID NO: 8至 1 1所示胺基酸序列的肽，其係使用、EXCELL®， 純化於Bio-Rad Laboratories Inc.廠，Brusse 丨 s,Belgi-u m商品化之送相高效液相層析儀、Μ 0 D E L Hi — Pore RP— 318'，直到生成95w/w%以上 之純度（按乾固重計），並冷凍乾燥爲固體製劑。對每份 製劑採樣，並於 Perk in-Elmer 廠，Ustrument Div., Norrwa丨k，-iJSA商品化的肽定序儀、MOD E L 470 A"上分析，結果顯示所合成的四種肽具有上述胺基酸序 列0 窗例A — 2 肽之製備 使用’CLEAVABLE PEPTIDE K【T，，以一般方法化學 合成具有SEQ ID NOs :12及13所示胺基酸 序列的肽，且如同實例A — 1 ，純化而得9 5 w/w %純 度（佔乾固重計），並冷凍乾燥成固體製劑。如同實例A _ 1對每份製劑採樣與分析，証實所合成的四種肽具有上 述胺基酸序列。 窗例A _ 3 肽之製備 本紙張尺度家標_ ( CN’S ) A4規格（21ϋχ 297公I ) _奶_ ~ 一 --------_--.裝------訂------f---- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局t貝工消費合作杜印裝 388 〇7 A7 ____ B7 五 '發明説明（33) 如同實例A— 1，化學合成具有SEQ ID N 〇 :1 6所示胺基酸序列之肽，且純化而得9 5w/w%之 純度（佔乾固重計）。然後，如同實例A — 1對經純化之 肽採樣與分析，結果顯示該肽具有上述胺基酸序列。 實例A ~ 4 肽之製備 如同實例A—2，化學合成具有SEQ ID NO :1 7所示胺基酸序列之肽，並純化而得9 5w/w%純 度（佔乾固•重計）。如同實例A — 1對純化後之肽採樣與 分析，結果顯示該肽具有上述胺基酸序列。 實例A — 5 壯之製備 如同實例A— 1與A — 2，化學合成具有SEQ ID NOs : 1 8至2 4所示胺基酸序列之肽，其對應 實驗3之樣品D_1至D — 7，純化而得9 5w/w%之 純度，且冷凍乾燥成固體產物。對此產物採樣，且於 P e r k i π - E 1 m e r C 〇 r ρ . , ί n s t r u m e π t D i v . , N 〇 r w a ! k , I) S A 商 品化之肽定序儀'MODEL 470A#上分析，結果顯示所合成 的7種肽具有上述胺基酸序列。 窗例B — 1 溶液 本紙張尺度適用中國阐家楹準（CNS)A4規格（2I0X297公釐）-36 - I.------^--裝------訂------八.1 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作杜印製 A7 ____B7 _____五、發明説明（34) 令實例A_ I及A — 2方法製得之6種肽分別溶於含 有1 w/v%純化明膠（其係作爲安定劑）之蒸餾水中， 生成終濃度爲0. 1克/毫升，且以一般方法令此溶液經 膜過濂而得6份溶液。 —般而言，每位個體與本發明之肽分別反應。然後， 這6份溶液調成適當比例而得最適個體之組成物。此組成 物有令人滿意的安定性，可隨意用於治療及/或預防香杉 花粉病，其係作爲眼藥水，漕鼻藥及口腔嘖霧劑。 實例B — 2 ... 注射液 令實例A—1及A-2方法製得的6種肽溶於含有1 w/v %人類血清白蛋白之生理食塩水中，生成預期終濃 度爲0. 01，0.1或1毫克/毫升，令此溶液經膜過 濾，分裝至滅菌小瓶中（2毫升/瓶）且冷凍乾燥，然後 封蓋。 使用前，令產物與1毫升注射用蒸餾水混合且溶解均 勻。此產物具令人滿意的安定性且含有作爲有效組成份之 6種肽，可隨意用來作爲乾燥注射劑以治療及/或預防香 杉花粉病。 官例B _ 3 錠劑 將2克純化之花粉（平均分子量約2 0 ，0 0 〇道耳 -------I - - - - I II I------ 士n «-I— u— 1^1 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家榇準（CNS > Λ4規格（210x297公羡> -- MA388 0 7 A 7 B7 經濟部中央標準局員工消费合作社印策 五、發明説明（35) 呑）溶於1 Ο 0毫升蒸餾水中至均質狀，令此溶液與2毫 升之1. 7W/V%氰尿醯氯（於丙酮中）混合，再進行 酵素於5 °C反應2小時，同時搅拌並使用5w/v%碳酸 鈉水溶液保持pH爲7。然後，令反應混合物於4 °C冷水 中透析一夜，如上所述保持p Η在7，製得含有經活化花 粉之2 0毫升水溶液。 將實例Α—1方法製得之具有SEQ ID NO: 8 ，1 0及1 1所示胺基酸序列的肽，實例A — 2方法製 得之具有SEQ ID NO:13所示胺基酸序列之肽 ，實例A —一 3方法製得之肽及實例A — 4方法製得之肽分 別取0. 2毫克添加至上述溶液中，令此混合溶液於37 °C進行酵素反應1 2小時，同時溫和攪拌且保持pH約爲 7。酵素反應完全後，令此反應混合物與4克甘氨酸混合 ，在溫合攪拌條件下，於3 7 °C培養5小時以阻斷該肽之 未反應的活性基團。 將所製得之反應混合物饋至充塡'SEPHADEX G-5(T 之管柱，其事先被0. 1M磷酸塩緩衝液（pH7. 0) 平衡過，注入新鮮配製之相同緩衝液以分級分離，回收本 發明肽與花粉組成之共軛物。產量相對於初肽約爲3 0 % (佔乾固重計）。 匯合含該共軛物之流份，經膜過濾，濃縮，冷凍乾燥 ，碾製，與甘露糖醇混合至均質狀，錠化而得錠劑，每錠 2 0 0毫克重，含2，1 〇或5 0毫克之該共軛物。 產物具令人滿意的吸收力與安定性，可隨意用來作爲 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁} 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（2I0X 297公釐）_ B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（36) 舌下劑以治療及/或預防香杉花粉病。 眚例B — 4 糖漿 將衍自大腸桿菌之1克純化的脂多醣溶於1 〇 〇毫升 之1 OmM磷酸鈣水溶液中，令此溶液與6毫升之1 〇 〇 mM高碘酸鈉混合，室溫培養2 0分鐘以活化該脂多醣。 令所生成之混合液於1M之甘氨酸一 HC 1緩衝液（pH 4 . 4 )中透析，4 °C歷一夜以除去殘留之未反應過碘酸 ，校正p H...至約9. 5，其係添加0. 1M碳酸氫鈉緩衝 變。將實例A — 1及A - 2方法製得之6種肽分別以1 0 毫克溶於10 0毫升之G. 1M磷酸塩緩衝液（pH 7. 0)，將此溶液加入含有經活化之脂多醣的混合液中 。令所生成之混合液進行酵素反應，其係於室溫靜置1 2 小時。 藉實例B - 3之方法純化該反應混合液，將含有肽共 軛物之流份與該脂多醣混合，濃縮且碾製而得固體產物。 產量相對於初肽約爲3 0% (按乾固重計）。 將此產物與蔗糖溶於含1 w/v %純化明膠之蒸餾水 中，分別生成終濃度爲0. 1或1毫克/毫升與5 0 w/w%，以一般方法令此溶液通過膜過濾，製得糖漿產 物。將此產物分裝於滅菌之小瓶（每瓶2毫升），封蓋而 得所欲產物。 此產物具有令人滿意的安定性且含有共軛物，可隨意 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（2IOX297公釐）-39 - I. 一 •裝 訂------S *---Γ (請先閒讀背而之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印聚 A7 _______ B7 _五、發明説明（37) 用來作爲治療及/或預防香杉花粉病之糖漿。 官例B _ 5 溶液 將實例A_ 5方法製得之7種肽，——溶於含有1 w / v %純化明膠〈其係作爲安定劑）之蒸餾水中，生成 終濃度爲0.1克/毫升，以一般方法過濾滅菌而得7份 溶液。 本發明多肽之敏感性通常是可根據所欲施藥之個體而 改變，因此*所欲產物之製備係將上述7種溶液混合而得最 適合比例。所製得之產物具有令人滿意的安定性，可隨意 用來作爲治療及/或預防香杉花粉病之眼藥水，灌鼻劑及 口腔噴耪劑。 音例B — 6 注射劑 將實例A — 5製得之7種肽溶於含有1 w/v%人類 血清白蛋白（其係作爲安定劑）之生理食塩水，分別生成 終濃度爲0. 〇1，〇·1或1毫克/毫升，過濾滅菌， 分裝至經滅菌小瓶（每瓶2毫升），冷凍乾燥且封蓋。 使用前，將產物與1毫升/瓶注射用蒸餾水混合，並 溶解內容物至均質狀。此產物具有7種肽作爲活性組成份 且具有令人滿意之安定性，可隨意用來作爲治療及/或預 防香杉花粉病的脫水注射劑。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 装 訂 本紙張尺度通用中國國家標準（CNS ) A4規格（2丨0乂297公f ) _ 40 經濟部中央標隼局員工消費合作社印裝 A7 ___B7五、發明説明（3S) 實例B — 7 糖漿 將實例A — 5方法製得之7種肽溶於含有1 w/v % 經純化明膠之蒸餾水中，分別生成0.1毫克/毫升之濃 度，進一步溶入蔗糖而得濃度爲5 0 w/v%。令所生成 之溶液過濾滅菌而得一糖漿，然後將其分裝至經滅菌之小 瓶（每瓶2毫升），封蓋而得所欲產物。 此產物具令人滿意的安定性且含有本發明之肽，可隨 意用來作爲-治療及/或預防香杉花粉病之糖漿。 如前所述，本發明之達成係根據發現了實質上香杉花 粉過敏原之T細胞抗原決定位組成物的肽。此肽實質上不 與對免疫球蛋白E抗體過敏原特異之免疫球蛋白E抗體反 應，但活化對香杉花粉過敏原特異之T細胞，且施用至晡 乳動物（包括人）實質上不引起過敏性反應。因此，含有 此肽作爲有效組成物之本發明免疫治療劑施用至晡乳動物 (包括人類）時，在相當短之時間內具有令人滿意之治療 及/或預防香杉花粉病的效力，而無懼於引起副作用。本 發明之肽具有高度安全性，可用於治療及/或預防香杉花 粉，因爲其可輕易製得所欲劑量且可輕易達成品管。 具有這些令人滿意功效及功用之本發明對此技術範圍 頁獻厥偉。 上述揭示者乃本發明現今可視爲較佳之具體實例，可 了解的是，其中可作多種改良，附錄之申請專利範圍並欲 本紙張尺度適用中國國家標隼（CNS ) A4現格（210X 297公釐）_ 41 _ (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 略 -'5 -IίΛ 〇 附件2-1:第84109410»専利案 中文説明窨够正頁 民团87年12月修正 ^^6?畀^帝，衣-';-{'.三沒是否^^茂-:?、才今.^ 經沪部中呔撐"-^0-7-消费合竹社印焚 五、發明説明（39 ) 涵括本發明之實際精神與範圃內的所有這類改 序列表 (1 ) 一般資料 (i) 申請人：林原生物化學研究所股份有限公司 (ii) 發明名稱：肽及其用途 (iii) 序列數目：24 (iv) 通訊住址： (A) 收信人：林原生物化學研究所股份有限公司 (B) 街：一丁目，二番三號 (C) 市：岡山市 (E )國：日本國 (F )郵遞區號（ZIP):700 (v) 電腦可讀型式： (A) 介質型式：套裝軟體 (B) 電腦：IBM PC可相容者 (C) 操作系統：PC-DOS/MS-DOS (D) 軟體：WORD PERFECT第 5版 (vii)先前申請資料 ()申請案號：JP 242 1 37/94 (B1 )申請日：1 9 94年9月10日 (A2)申請案參考編號：JP 10047602/94 (B2)申請日：1994年7月14日 (A3)申請案參考編號：JP 10047603/94 (B3 )申請日：1 994年7月U日 本紙张尺度適用中國國{ CNS ) ί 2]0χ 2ϋ; Ί 本年Λ ^"^^"'"^/""•Y.d^^^^'i、) 裝- 訂 8β U i A7 Η ' 經^·部中史"^·局；κ-χ消资合竹杜印製 五、 發明説明（40 ) i I ( 2 ) S E Q ID N 0 : 1 之資 料： 1 1 (i) 序列特性： 1 ( A)序列長度： 11胺基酸 1 ( B)序列類型： 胺基酸 1 閱 t ( D)拓撲學：線 形 巧. JI 1] ! 而 Cii) 分子型式：呔 ；:ί. 1 ΐν 1 (xi) 序列說明：SEQ ID NO. 1 '!， 項 1 I 再 1 J/1 - Lys Val Asp Gly lie 工le Ala Ala Tyr Gin Asn 本 Tj 裝 1 1 5 10 1 1 1 ( 3 ) S E Q ID NO :2 之資 料： f 1 1 1 (i) 序列特性： I 訂 I ( A)序列長度： 10胺基酸 1 t ( B)序列類型： 胺基酸 1 1 ( D)拓撲學：線 形 1 1 (ii) 分子型式：肽 ，.， (xi) 序列說明：SEQ ID NO. 2 1 lie lie Ala Ala Tyr Gin Asn Pro Ala Ser 1 1 5 10 1 1 ( 4 ) S E Q ID NO :3 之資 料： 1 1 1 (i) 序列特性： 1 I ( A )序列長度： 10胺基酸 1 I ( B)序列類型： 胺基酸 1 1 1 本紙乐尺度適用中國國家標牟（CNS ) Λ料2]0,〇97:M; ) ,ft _ 43 一 A7 ______B7 五、發明説明（41 ) (D)拓撲學：線形 (i i)分子型式：肽 (xi )序列說明：SEQ ID NO. 3

Asn Arg lie Trp Leu Gin Phe Ala Lys Leu 15 10 (5 ) SEQ ID NO :4 之資料： (i )序列特性： (A)序列長度：10胺基酸 (B )序列類型··胺基酸 (D)拓撲學：線形 (i i )分子型式：肽 (xi )序列說明：SEQ ID N0. 4

Phe Ala Ser Lys Asn Phe His Leu Gin Lys 15 10 (6 ) SEQ ID NO :5 之資料： (i)序列特性： (A)序列長度：11胺基酸 (B )序列類型：胺基酸 (D)拓撲學：線形 (i i )分子型式：呔 (xi )序列說明：SEQ ID N0. 5 本紙張尺度適用中國準（CNS ) Λ4iUi; ( 2I0X7A# ) I I J·1-/ i&4i'項4項$本頁) 訂 -44 - A7 B7 經妒部中次忭"局消贽合竹社印袈 五、發明説明（42 )

Ser Leu Lys Leu Thr Ser Gly Lys lie Ala Ser 1 5 10 (7 ) S E Q ID K 0 ：6 之資 料： (i) 序列特性： ( A)序列長度 : 8胺基 酸 ( B )序列類型 • 胺基酸 ( D)拓撲學： 線 形 (ii) 分子型式： 肽 (xi) 序列說明：SEQ ID NO .6 Leu Thr Leu Arg Thr Ala Thr Asn 1 5 (8 ) SEQ ID N 0 :7 之資 料： (i) 序列特性： ( A)序列長度 ： 5胺基 酸 ( B)序列類型 • 胺基酸 ( D)拓撲學： 線 形 (ii) 分子型式： 肽 (x i) 序列說明：SEQ ID NO .7 Ala Phe Asn Val Glu 1 5 (9 ) S E Q ID N 0 :8 之資 料： (i )序列特性： ("也K';i·'#^之.r:"事項乃功.：？：'本7Io

木紙張尺度適用中國國家楛導（CNS )八4叱枋（210X2VD/; > 一 45 _ 腔4388 0 7

A I __ Η 7 _______ 五、發明説明（43) (A) 序列長度：17胺基酸 (B) 序列類型：胺基酸 (D)拓撲學：線形 (i i )分子型式：肽 (xi)序列說明：SEQ ID N0. 8

Lys Val Asp Gly lle He Ala Ala Tyr Gin Asn Pro Ala Ser Trp Lys Asn 10 15 (10) SEQ ID NO :9 之資料： (i)序列特性： (A) 序列長度：17胺基酸 (B) 序列類型：胺基酸 (D)拓撲學：線形 (i i)分子型式：肽 (xi)序列說明：SEQ ID N0. 9

Asn Arg He Trp Leu Gin Phe Ala Lys Leu Thr Gly Phe Thr Leu Met 部中央忭枣局只H_消仵合竹社印*'1衣 - I. —rr. I 4·-·、 n^i n^i 一!J ("汔閲逑^";之"--'!'0事項呼硪巧本石) 1 5 10 ] c

Gly (11) S E Q ID NO :10 之資料 (i)序列特性： (A) 序列長度：17胺基酸 (B) 序列類型：胺基酸 本紙張尺度適用中國國家標準（cns ) 佑（2丨〇x?w -46 - ^43 88 Ο 7 Α7 1Π 五、發明説明（4〇 (D)拓撲學 (ii)分子型式 (xi)序列說明 線形 .肽 SEQ ID NO, jsp Ile Phe Aia Ser Lys Asn phe His Gin ^

ID

NO 1 2 ) SEQ (i)序列特性： (A) 序列長度：17胺基酸 (B) 序列類型：胺基酸 (D)拓撲學：線形 (i i )分子型式：肽 (xi)序列說明：SEQ ID NO. 11 :11 之資料 ϋι^ν flu·— ^^^^1 ^^^^1 \ ， θν --° {"""wflvg 之注态肀項"硪，r,:i本 Ώ )

Asp lie Ser Leu Lys Leu Thr Ser Gly Lys lie Ala Ser Cys Leu Asn 15 10 15

Asp (13) SEQ ID NO : (i )序列特性： (A) 序列長度：14胺基酸 (B) 序列類型：胺基酸 (D )拓撲學：線形 (i i)分子型式：肽 (xi)序列說明：SEQ ID NO. 12 本紙张尺度適用中國國家枉準（CNS ) Λ4圯枯（ 2 之資料 麫浐部中央桴£i,^h工消於合竹社印於 -47 - A? 五、發明説明（45 )

Leu Thr Leu Arg Thr Ala Thr Asn lie Trp lie Asp His Asn 15 10

ID

NO (14) S E Q (i)序列特性： (A) 序列長度：14胺基酸 (B) 序列類型：胺基酸 13 之資料 (D)拓撲學 (ii)分子型式 (xi)序列說明 線彤 肽 SEQ ID NO. 13

Glv Gly Asn lie Tyr Thr Lys Lys Glu Ala Phe Asn Val Glu ! 5 l〇

NO 部 中 央 標 消 合 社 印 (15) SEQ ID (i) 序列特性： (A) 序列長度：514胺基酸 (B) 序列類型：胺基酸 (D)拓撲學：線形 (ii) 分子型式：蛋白質 (vi)原始來源： (A)生物體：Cryptomeria japonica (F)組織類形：花粉 (xi)序列說明：SEQ ID NO. 14 之資料 I _ .^ϋ i^i ^^1 . _ 3rl~I ------ ----- ^(< ^^1· 1^1 HI n r ^^::而之：;,--'°事項再頊朽本-¾ ) 本紙張尺度適用中國SI家d· ( CNS ) Λ4ίί格 -48 - 館43 88 0 7 A7 li? 五、發明説明（46 )

Met Ala Met Lys Phe lie Ala Pro Met Ala Phe Val Ala Met Gin Leu 15 10 15

He He Met Ala Ala Ala Glu Asp Gin Ser Ala Gin He Met Leu Asp 20 25 30

Ser Asp lie Glu Gin Tyr Leu Arg Ser Asn Arg Ser Leu Arg Lys Val 35 40 45

Glu His Ser Arg His Asp Ala He Asn lie Phe Asn Val Glu Lys Tyr 50 55 60

Gly Ala Val Gly Asp Gly Lys His Asp Cys Thr Glu Ala Phe Ser Thr 65 70 75 80

Ala Trp Gin Ala Ala Cys Lys Lys Pro Ser Ala Met Leu Leu Val Pro 85 90 95

Gly Asn Lys Lys Phe Val Val Asn Asn Leu Phe Phe Asn Gly Pro Cys 100 105 HO

Gin Pro His Phe Thr Phe Lys Val Asp Gly lie lie Ala Ala Tyr Gin 115 120 125

Asn Pro Ala Ser Trp Lys Asn Asn Arg lie Trp Leu Gin Phe Ala Lys 130 135 140

Leu Thr Gly Phe Thr Leu Met Gly Lys Gly Val He Asp Gly Gin Gly 145 150 155 160

Lys Gin Trp Trp Ala Gly Gin Cys Lys Trp Val Asn Gly Arg Glu lie 165 170 175

Cys Asn Asp Arg Asp Arg Pro Thr Ala lie Lys Phe Asp Phe Ser Thr 180 185 190

Gly Leu lie lie Gin Gly Leu Lys Leu Met Asn Ser Pro Glu Phe His 195 200 205

Leu Val Phe Gly Asn Cys Glu Gly Val Lys lie lie Gly He Ser lie 210 215 220

Thr Ala Pro Arg Asp Ser Pro Asn Thr Asp Gly lie Asp lie Phe Ala 225 230 235 240

Ser Lys Asn Phe His Leu Gin Lys Asn Thr lie Gly Thr Gly Asp Asp 245 250 255

Cys Val Ala lie Gly Thr Gly Ser Ser Asn lie Val lie Glu Asp Leu 260 265 270 lie Cys Gly Pro Gly His Gly lie Ser lie Gly Ser Leu Gly Arg Glu 275 280 285

Asn Ser Arg Ala Glu Val Ser Tyr Val His Val Asn Gly Ala Lys Phe 290 295 300 lie Asp Thr Gin Asn Gly Leu Arg lie Lys Thr Trp Gin Gly Gly Ser 305 310 315 320

Gly Met Ala Ser His lie lie Tyr Glu Asn Val Glu Met lie Asn Ser 325 330 335

Glu Asn Pro lie Leu lie Asn Gin Phe Tyr Cys Thr Ser Ala Ser Ala 340 345 350

Cys Gin Asn Gin Arg Ser Ala Val Gin lie Gin Asp Val Thr Tyr Lys 355 360 365

Asn lie Arg Gly Thr Ser Ala Thr Ala Ala Ala lie Gin Leu Lys Cys 370 375 380

Ser Asp Ser Met Pro Cys Lys Asp lie Lys Leu Ser Asp lie Ser Leu 385 390 395 400

Lys Leu Thr Ser Gly Lys lie Ala Ser Cys Leu Asn Asp Asn Ala Asn 405 410 415

Gly Tyr Phe Ser Gly His Val lie Pro Ala Cys Lys Asn Leu Ser Pro 420 425 430 本紙張尺度適用中國國家枕隼（CNS ) Λ仙L格（210x2y7:,>i;) 3 38 0 7 A7

IP 五、發明説明（47 )

Ser Ala Lys Arg Lys Glu Ser Lvs Ser His Lys His Pro Lys Thr Val 435 440 445

Met Val Lys Asn Met Gly Ala Tyr Asp Lys Gly Asn Arg Thr Arg lie 450 455 460

Leu Leu Gly Ser Arg Pro Pro Asn Cys Thr Asn Lys Cys His Gly Cys 465 470 475 480

Ser Pro Cys Lys Ala Lys Leu Val lie Val His Arg lie Met Pro Gin 485 490 495

Glu Tyr Tyr Pro Gin Arg Trp Met Cys Ser Arg His Ala Lys lie Tyr 500 505 510

His Pro (16) S E Q ID NO :15 之資料： (i) 序列特性： (A) 序列長度：353胺基酸 (B) 序列類型：胺基酸 (D)拓撲學：線形 i:r':i'T,部中央桴汶而消费合0社印,4 -----------裝------iT (对尤圮述力而之注^¾本刃) (ii) 分子型式：蛋白質 (v i )原始來源： (A)生物體：Cryptoraeria japonica (F)組織類形：花粉 (xi)序列說明：SEQ ID NO. 15 本紙Ηί尺度適用中國國家枝4M CNS) ) 起#部中史^^局只工消费，合竹^印製

«§43 88 Ο 7 Μ ---—_____\\Ί 五、發明説明（48 )

Asp Asn Pro lie Asp Ser Cys Trp Arg Gly Asp Ser Asn Trp Ala Gin 15 10 15

Asn Arg Met Lys Leu Ala Asp Cys Ala Val Gly Phe Gly Ser Ser Thr 20 25 30

Met Gly Gly Lys Gly Gly Asp Leu Tyr Thr Val Thr Asn Ser Asp Asp 35 40 45

Asp Pro Val Asn Pro Ala Pro Gly Thr Leu Arg Tyr Gly Ala Thr Arg 50 55 60

Asp Arg Pro Leu Trp lie lie Phe Ser Gly Asn Met Asn II© Lys Leu 65 70 75 80

Lys Met Pro Met Tyr lie Ala Gly Tyr Lys Thr Phe Asp Gly Arg Gly 85 90 95

Ala Gin Val Tyr lie Gly Asn Gly Gly Pro Cys Val Phe lie Lys Arg 100 105 no

Val Ser Asn Val lie lie His Gly Leu Tyr Leu Tyr Gly Cys Ser Thr 115 120 125

Ser Val Leu Gly Asn Val Leu He Asn Glu Ser Phe Gly Val Glu Pro 130 135 140

Val His Pro Gin Asp Gly Asp Ala Leu Thr Leu Arg Thr Ala Thr Asn 145 150 155 160 lie Trp lie Asp His Asn Ser Phe Ser Asn Ser Ser Asp Gly Leu Val 165 170 175

Asp Val Thr Leu Thr Ser Thr Gly Val Thr lie Ser Asn Asn Leu Phe 180 185 190

Phe Asn His His Lys Val Met Leu Leu Gly His Asp Asp Ala Tyr Ser 195 200 205

Asp Asp Lys Ser Met Lys Val Thr Val Ala Phe Asn Glil Phe Gly Pro 210 215 220

Asn Cys Gly Gin Arg Met Pro Arg Ala Arg Tyr Gly Leu Val His Val 225 230 235 240

Ala Asn Asn Asn Tyr Asp Pro Trp Thr lie Tyr Ala lie Gly Gly Ser 245 250 255

Ser Asn Pro Thr lie Leu Ser Glu Gly Asn Ser Phe Thr Ala Pro Asn 260 265 270

Glu Ser Tyr Lys Lys Gin Val Thr lie Arg lie Gly Cys Lys Thr Ser 275 280 285

Ser Ser Cys Ser Asn Trp Val Trp Gin Ser Thr Gin Asp Val Phe Tyr 290 295 300

Asn Gly Ala Tyr Phe Val Ser Ser Gly Lys Tyr Glu Gly Gly Asn He 305 310 315 320

Tyr Thr Lys Lys Glu Ala Phe Asn Val Glu Asn Gly Asn Ala Thr Pro 325 330 335

Gin Leu Thr Lys Asn Ala Gly Val Leu Thr Cys Ser Leu Ser Lys Arg 340 345 350 木紙張尺度適用中ϋ則:㈣—（CNS )鐵易（210x2^^ 1 ~ 外而之：;ί·芯氺項4祕、y·4·万)

143 88 Ο 7 A， 157 五、發明説明（49 ) (17) S E Q ID NO ： 16 之資料： (i )序列特性： (A) 序列長度：17胺基酸 (B) 序列類型：胺基酸 (D)拓撲學：線形 (i i)分子型式：肽 (xi)序列說明：SEQ ID NO. 16

Asn Arg lie Trp Leu Gin Phe Ala Lys Leu Gin Gly Phe Thr Leu Met 1 5 l〇 15

Gly (18) SEQ ID NO :17 之資料： (i )序列特性： 經浸部中央桴ii«局β工消f合^::社印奴 (A) 序列長度：14胺基酸 (B) 序列類型：胺基酸 (D)拓撲學：線形 (i i)分子型式：呔 (xi)序列說明：SEQ ID NO. 17 -52 - A7 ____Jl:_____________________________ 五、發明説明（50 )

Leu Ala Leu Arg Thr Ala Thr Asn lie Trp lie Asp His Asn 1 5 10 (19) S E Q ID NO :18 之資料 (i )序列特性： (A)序列長度：17胺基酸 (B )序列類型：胺基酸 (D)拓撲學：線形 (ii)分子型式：肽 (xi)序列說明：SEQ ID N0· 18

Lys Val Asp Gly lie lie Ala Ala Tyr Gin Asn Ala Ala Ala Ala Ala 15 10 15

Ala 「尤閱 之.·5·'·^^項-ίΓ}43 本Ώ )

•1T 部中央桴纹局只-1消资合竹社印狀 (20) SEQ ID NO :19 之資料： (i) 序列特性： (A)序列長度：17胺基酸 (B )序列類型：胺基酸 (D)拓撲學：線形 (ii) 分子型式：呔 (xi)序列說明：SEQ ID N0_ 19

Ala Ala Ala Ala lie He Ala Ala Tyr Gin Asn Pro Ala Ser Ala Ala 1 5 10 15

Ala (21) SEQ ID N 0 本纸认尺度速用中國國家樣準（CNS ) Λ4圮#, ( 20 之資料 -53 尅浐部中央疗1¥局：^工消於合竹社印％ A7 五、發明説明（51 ) (i )序列特性： (A) 序列長度：17胺基酸 (B) 序列類型：胺基酸 (D)拓撲學：線形 (ii)分子型式：肽 (xi)序列說明：SEQ ID NO. 20

Asn Arg lie Trp Leu Gin Phe Ala Lys Leu Ala Ala Ala Ala Ala Ala 15 10 15

Ala (22) SEQ ID NO :21 之資料： (i )序列特性： (A)序列長度：17胺基酸 (B )序列類型：胺基酸 (D)拓撲學：線形 (ii)分子型式：肽 (xi)序列說明：SEQ ID N0. 21

Ala Ala Phe Ala Ser Lvs Ph。u* τ I 5 Υ ASn Phe HlS Gln ^ Ala Ala Ala Ala

Ala 10 15 (23) SEQ ID NO :22 之資料 (i )序列特性： (A) 序列長度：17胺基酸 (B) 序列類型：胺基酸 本紙張尺度適用中國國家枕隼{ CNS ) Λ4ίΜ, ( 2IO_OW公; in ---*^1 utir ^^1— Ϊ- s - - - -- _ - .« - -丨 —^ϋ In HI rt 另v i'J (先聞"-15而之注*小項ir}峭3本頁) -54 - “3 88 0 7 五、發明説明（52 ) (D)拓撲學：線形 (ii)分子型式：肽 (xi)序列說明：SEQ ID N0· 22

Ala Ala Ser Leu Lys Leu Thr Ser Gly Lys lie Ala Ser Ala Ala Ala Ala 5 10 15 (24) S E Q ID (i)序列特性： (A) 序列長度：14胺基酸 (B) 序列類型：胺基酸 (D)拓撲學：線形 (i i)分子型式：肽 (xi)序列說明：SEQ ID NO. 23 N 0 :23之資料：

Leu Thr Leu Arg Thr Ala Thr Asn Ala Ala Ala Ala Ala Ala 5 10 (25) S E Q ID NO (i) 序列特性： (A) 序列長度：14胺基酸 (B) 序列類型：胺基酸 (D)拓撲學：線形 (ii) 分子型式：肽 (xi)序列說明：SEQ ID N0_ 24 24之資料 ，^ 本紙张尺度適用中國國家«:準（CN_S )八4圯彳6 ( 55 * i43 88 0 7 A： 1Γ 五、發明説明（53

Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Phe Asn Val Glu 1 5 10 I 414 _充-·— - 1 ^il* ^i·^— - Λ -3^ ，v6 (1:而之""事項再功1本打) 木紙张尺度適用中國國家枝準（CNS ) AWt松（2丨) ce -5b

Claims (1)

1. 申請專利範圍 附件1 - 1 : 第8 4 1 Q 9 4 1 G號專利申請案 中文申請專利範圍修正本 民國8 9年1 2月修正 一種具T細胞抗原決定位之肽，其具有一胺基酸 序列，該胺基酸序列係選自如下S E Q D NO: - 2 4所示任一者之胺基酸序列，該肽在3H —胸腺核替 嘧啶攝入法分析時，其實質上不與香杉花粉過敏原之特異 免疫球蛋白E抗體反應，且比陰性對照物更能活化該香杉 花粉過敏原之特異T細胞： SEQ ID N0：1： Lvs Val Asd Gly lie lie Ala Ala Tyr Gin Asn .1 ' 5 10 乂 SEQ ID NO:2 ' lie lie Ala Ala Tyr Gin Asn Pro Ala Ser 1 5 10 SEQ ID NO：3: (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) * - --- -: I I ! - -- I n I I 1 I i I 經濟部智慧財產局員Η消費合作社印製 Asn Arg 工le Trp Leu Gin Phe Ala Lys Leu ; 1 5 10 SEQ ID NO:4: Phe Ala Ser Lys Asn Phe His Leu Gin Lys 1 5 10 SEQ ID NO:5: Ser Leu Lys Leu Thr Ser Gly Lys He Ala Ser ;1 . 5 10 c 0 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 * 297公釐）

   A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍 SEQ ID NO:6： Leu Thr Leu Arg Thx· Ala Thr Asn ; 1 5 SEQ ID NO:7: Ala Phe Asn Val Glu ； 1 5 SEQ ID NO:8: z Lys Val Asp Gly He lie Ala Ala Tyr Gin Asn Pro Ala Ser Trp Lys 1 5 -10 IS Asn ； SEQ ID NO:9: Asn Arg lie Trp Leu Gin Phe Ala Lys Leu Thr Gly Phe Thr Leu Met 1 5 . 10 1 15 Gly ； SEQ ID NO;10: Γ Asp He Phe Ala Ser Lys Asn Phe -His Leu Gin Lys Asn Thr He Gl.v 1 5 10 15 Thr ； -13 SEQ ID N0:11: ____III----- --- ----訂·—------咸 (请先閲讀背面之主意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局貝工消f合作社印製 p p s s A 1 A lie Ser Leu Lys Leu Thr Ser Gly Lys lie Ala Ser Cys Leu Asn 5 l〇 15 SEQ ID NO:12: L>eu Thr Leu Arg Thr Ala Thr.Asn lie Trp lie Asp His Asn 1 5 l〇 SEQ 工D NO :13: Gly Gly Asn lie Tyr Thr Lys Lys Glu Ala Phe Asn Val Glu ; 1 5 10 〇〇V 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 2- ^43 88 0 7 88800 ABCD 六、申請專利範圍 經濟部智慧財產局員工消t合作社印製 SEQ ID NO：14; Met Ala Met Lys 1 ' lie lie Met Ala 20 Ser Asp lie Glu 35 Glu His Ser Arg 50 Gly Ala Val Gly 65 Ala Trp Gin Ala Gly Asn Lys Lys 100 Gin Pro His Phe 115 Asn Pro Ala Ser 130 - Leu Thr Gly Phe 145 Lys Gin Trp Trp Cys Asn Aso Arg 180 Gly Leu lie lie 195 Leu Vai Phe Gly 210 Thr Ala Pro Arg 225 Ser Lys Asri Phe Cys Val Ala lie 260 lie Cys Gly Pro 275 Asn Ser Arg Ala 290 lie Asp Thr Gin 305 Gly Met Ala Ser Glu Asn Pro lie 340 Cys Gin Asn Gin 355 Asn lie Arg Gly 370 Ser Asp Ser Met 385 Lys Leu Thr Ser Gly Tyr Phe Ser 420 Phe lie 5 Ala Ala Gin Tyr His Asp Asp Gly 70 Ala Cys 85 Phe Val Thr Phe Trp Lys Thr Leu 150 Ala Gly 165 Asp Arg Gin Gly Asn Cys Asp Ser 230 His Leu 245 Gly Thr Gly His Glu Val Asn Gly 310 His lie 325 Leu lie Arg Ser Thr Ser Pro Cys 390 Gly Lys 405 Gly His Ala Pro Glu Asp Leu Arg 40 Ala lie 55 Lys His Lys Lys Val Asn Lys Val 120 Asn Asn 135 Met Gly Gin Cys Pro Thr Leu Lys 200 Glu Gly 215 Pro Asn Gin Lys Gly Ser Gly lie 280 Ser Tyr 295 Leu Arg lie Tyr Asn Gin Ala Val 360 Ala Thr 375 Lys Asp lie Ala Val lie Met Ala .10 Gin Ser 25 Ser Asn Asn lie ASp Pro Asn 105 Asp Arg Lys Lys AX a 185 Leu Val Thr Asn Ser 265 Ser Val He Glu Phe 345 Gin Ala lie Ser Pro 425 Cys Ser 90 Leu Gly lie Gly Trp 170 lie Met Lys ASp Thr 250 Asn lie His Lys Asn 330 Tyr lie Ala Lys Cys 410 Ala Phe Val Ala Gin Arg Ser Phe Asn 60 Thr Glu 75 Ala Met Phe Phe lie lie Trp Leu 140 Val lie 155 Val Asn Lys Phe Asn Ser He lie f 220 Gly lie 235 He Gly He Val Gly Ser Val Asn 300 Thr Trp 315 Val Glu Cys Thr Gin Asp Ala lie 380 Leu Ser 395 Leu Asn Cys Lys Ala Met Gin Leu 15 lie Met Leu Asp 30 Leu Arg Lys Val 45 Val Glu Lys Tyr Ala Phe Leu Leu Asn Gly 110 Ala Ala 125 Gin Phe Asp Gly Gly Arg Asp Phe 190 Pro Glu 205 Gly He Asp lie Thr Gly He Glu 270 Leu Gly 285 Gly Ala Gin Gly Met lie Ser Ala 350. Val Thr 365 Gin Leu Asp lie Asp Asn Asn Leu 430 Ser Thr 80 Val Pro 95 Pro Cys Tyr Gin Ala Lys Gin Gly 160 Glu lie 175 Ser Thr Phe His Ser lie Phe Ala 240 Asp Asp 255 Asp Leu Arg Glu Lys Phe Gly Ser 320 Asn Ser 335 Ser Ala Tyr Lys Lys Cys Ser Leu 400 Ala Asn 41S Ser Pro (請先M讀背面之注意事項再填寫本黃) k I I I I I I I I I I 1 I — — I 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐）‘ .3 - ^-3 88 0 7 A8B8C8D8 六、申請專利勤*圍 Ser Ala Lys Axg Lys Glu Ser Lys Ser His Lys His Pro Lys Thr Val 435 44D 445 Met Val Lys Asn Met Gly Ala Tyr Asp Lys Gly Asn Arg Thr Arg lie 450- 455 460 Leu Leu Gly Ser Arg Pro Pro Asn Cys Thr Asn Lys Cys His Gly Cys 465 470 475 480 Ser Pro Cys Lys Ala Lys Leu Val He Val His Arg lie Met Pro Gin 485 490 495 Glu Tyr Tyr Pro Gin Arg Trp Met Cys Ser Arg His Ala Lys lie Tyr 500 505 510 His Pro 經濟部智慧財產局MR工消费合作社印製 SEQ ID NO :15: Asp Asn Pro He X Asn Arg Met Lys 20 Met Gly Gly hys 35 i Asp Pro Val X^n 5Q Asp Arg Pro Leu 65 Lys Met Pro Met Ala Gin Val Tyr 100 Val Ser Asn Val 115 Ser Val Leu Gly 130 Val His Pro' Gin 145 lie Trp lie Asp Asp Val Thr Leu 160 Phe Asn His His 195 Asp Asp Lys Ser 210 Asn Cys Gly Gin 225 Ala Asn Asn Asn Ser Asn Pro Thr 260 Glu Ser Tyr Lys 275 Ser Ser Cys Ser 290 Asn Gly Ala Tyr 305 Tyr Thr Lys Lys Gin Leu Thr Lys ； 340 Asp Ser 5 Leu Ala Gly Gly Pro Ala Trp lie 70 Tyr lie 85.. 工le Gly lie lie Asn Val Asp Gly 150 His Asn 165 Thr Ser Lys Val Met Lys Arg Met 230 Tyr Asp 245 lie Leu Lys Gin Asn Trp Phe val 310 Glu Aidi 325 Asn Ala Cys Trp Asp Cys Asp Leu 40 Pro Gly 55 lie Phe Ala Gly Asn Gly His Gly 120 Leu lie 135 Asp Ala Ser Phe Thr Gly Met Leu 200 Val Thr 215 Pro Arg Pro Trp Ser Glu Val Thr 280 Val Trp 295 Ser Ser Phe Asn Gly Val Arg Ala 25 Tyr Thr Ser Tyr Gly 105 Leu Asn Leu Ser Val 185 Leu Val Ala Thr Gly 265 lie Gin Gly Val Leu 345 Gly Asp Ser Asn 10 Val Gly Phe Gly Thr Val Thr Asn 45 Leu Arg Tyr Gly 60 Gly Asn Met Asn 75 Lys Thr Phe Asp 90 · Pro Cys Val Phe Tyr Leu Tyr Gly 125 Glu Ser<Phe Gly 140 Thr Leu Arg Thr 155 Asn Ser Ser Asp 170 Thr lie Ser Asn Gly His Asp Asp 205 Ala Phe Asn Gin 220 Arg Tyr Gly Leu 235 lie Tyr Ala He 250 Asn Ser Phe Thr Arg lie Gly Cys 285 Ser Thr Gin Asp 300 Lys Tyr Glu Gly 315 Glu Asn Gly Asn 330 Thr Cys Ser Leu ^4- Trp Ala Gin 15 Ser Ser Thr 30 Ser Asp Asp Ala Thr Arg lie Lys Leu 80 Gly Arg Gly 95 lie Lys Arg 110 Cys Ser Thr Val Glu Pro Ala Thr Ash 160 Gly Leu Val 175 Asn Leu Phe 190 Ala Tyr Ser Phe Gly Pro Val His Val 240 Gly Gly Ser 255 Ala Pro Asn 270 Lys Thr Ser Val Phe Tyr Gly Asn He 320 Ala Thr Pro 335 Ser Lys Arg 350 f _____ I------I --------訂 ί I — —-- (請先《讀背面之注意事項#填寫本頁) r A8 B8 C8 D8 申請專利範圍 SEQ ID N0:16: _ . Λ Asn Arg lie Trp Leu Gin Phe Ala Lys Leu Gin Gly Phe Thx Leu Met 1 5 10 . 15 Gly ; SEQ ID NO:17: Leu Ala Leu Arg Thr Ala Thr Asn lie Trp 工le Asp His Asn 15 10 SBQ ID NO:18: Lys Val Asp Gly lie He Ala Ala Tyr Gin Asn Ala Ala Ala Ala Ala Ala 10 15 {請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) SEQ 工D NO:19: Ala Ala Ala Ala He lie Ala Ala Tyr Gin Asn Pro Ala Ser Ala Ala 1 5 l〇 Ala · 15 裝--------訂----- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 SEQ ID NO:20: Asn Arg lie Trp Leu Gin Phe Ala Lys Leu Ala Ala Ala Ala Ala Ala 味 1 s 10 15 Ala . SEQ ID NO :21: Ala Ala Phe Ala Ser Lys Asn Phe His Leu Gin Lys Ala Ala Ala Ala 1 5 10 15 Ala *, SEQ ID NO :22: Ala Ala Ser Leu Lys Leu Thr Ser Gly Lys lie Ala Ser Ala Ala Ala x 5 10 15 Ala ： 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 5- 經濟部智慧財產局員工消t合作社印製 A8 ， ' ， B8 ' C8 D8 六、申請專利範圍 SEQ ID NO:23: Leu Thr Leu Arg Thr Ale Thr Asn Ala Ala Ala Ala Ale Ala ； /3 1 5 i〇 .Γ\ SE〇 ID NO:24: Λίβ Ala Ala Ala Ala Ala Ala Λ1& Ala Ala Phe Asn Val Glu 〇 1 5 10 ^ 2. 如申請專利範圍第1項之肽，其係源自由下列 步驟製得之香杉花粉過敏原： (a )由日本香杉（Cryntomeria iaponica)雄花回 收香杉花粉； (b )將香杉花粉浸入p Η 8 . 2之水溶液以進行萃 取； (c )自所生成之萃取液製備含有香杉花粉過敏原之 水溶液； (d )將此溶液依所定順 及C Μ - S e p h a d e X管柱層析； (e )回收自CM-Sephadex管柱生成之流份，其含有 香杉花粉過敏原|並將所生成之流份進行Mono-S管柱層析 ，其使用氯化鈉之線性梯度緩衝液，由0M至〇. 5M氯 化鈉；及 (f )回收約0· 4M氯化鈉時溶離出之流份。 3. 如申請專利範圍第1項之肽，其係源自由下列步 驟製得之香杉花粉過敏原： (a )由日本香杉（Cryptomer i a iaponica)雄花回 本紙張尺度適用中固國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐〉-6 - -------------裝--------訂—i—線 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) A8 B8 1 , 一 」·-** - C8 D8 六、申請專利範圍 收香杉花粉； (b) 將香杉花粉浸入PH8. 2之水溶液以進行萃 取； (c) 自所生成之萃取液製備含有香杉花粉過敏原之 水溶液； (d) 將此溶液依所定順序進行DEAE — Sephadex 及CM-Sephadex管柱層析； (e )回收自CM-Sephadex管柱生成之流份·其含有 香杉花粉過敏原，並將所生成之流份進行Mono-S管柱層析 ，其使用氯化鈉之線性梯度緩衝液，由0M至0. 5M氯 化鈉；及 (f)回收約0. 1至0.3M氯化鈉時溶離出之流 份。 4. 如申請專利範圍第1項之肽，其具有如SEQ ID N 0 : 1所示之胺基酸序列。 5. 如申請專利範圍第1項之肽，其具有如SEQ ID NO:2所示之胺基酸序列。 6. 如申請專利範圍第1項之肽，其具有如SEQ ID NO:3所示之胺基酸序列。 7. 如申請專利範圍第1項之肽，其具有如SEQ ID NO: 4所示之胺基酸序列。 8. 如申請專利範圍第1項之肽，其具有如SEQ ID NO:5所示之胺基酸序列β 9. 如申請專利範圍第1項之肽，其具有如SEQ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（2】0 x 297公釐）-7 - (靖先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 0 i n UK l n n ff^i 1 IK 1^1 ^1· n n I— I I 經濟部智慧財產局員工消费合作杜印製 A8B8C8D8 IP.43B8 07 六、申請專利範圍 ID NO:6所示之胺基酸序列。 10.如申請專利範圔第1項之肽，其具有如SEQ ID NO:7所示之胺基酸序列》 1 1 .—種用於活化對香杉花粉過敏原有特異性之T 細胞的藥學組成物*其含有如申請專利範圍第1項之具T 細胞抗原決定位之肽，及/或該肽與醣類形成之共軛物， 其係作爲有效組成分。 1 2 .如申請專利範圍第1 1項之組成物，其中該肽 具有如SEQ ID NO:14或15所示胺基酸序列 9 1 3 .如申請專利範圍第1 1項之組成物，其中該肽 係源自由下列步驟製得之香杉花粉過敏原： (a )由日本香杉（Cryptomeria japonica)雄花回 收香杉花粉； (b) 將香杉花粉浸入pH8. 2之水溶液以進行萃 取： (c) 自所生成之萃取液製備含有香杉花粉過敏原之 水溶液； (d )將此溶液依所定順序進行D E A E — Sephadex 及CM-Sephadex管柱層析： (e )回收自CM-Sephadex管柱生成之流份，其含有 香杉花粉過敏原’並將所生成之流份進行Mono-S管柱層析 ，其使用氯化鈉之線性梯度緩衝液，由〇从至〇 . 5M氯 化鈉；及 ------I ------裝---- - (請先閲讀背面之注意Ϋ項再填寫本頁) 訂---------線 經濟部智慧財產局貝Η消费合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公8 ) -8- 05 A8 B8 C8 六、申請專利範圍 (£)回收約0. 4M氯化鈉時溶離出之流份》 1 4 .如申請專利範圍第1 1項之組成物，其中該肽 係源自由下列步驟製得之香杉花粉過敏原： (請先Μ讀背面之注意事項再填寫本頁) (a )由日本香杉（Cryptomeria japonica)雄花回 收香杉花粉： (b) 將香杉花粉浸入pH8. 2之水溶液以進行萃 取； (c) 自所生成之萃取液製備含有香杉花粉過敏原之 水溶液； (d )將此溶液依所定順序進行D E A E — Sephadex 及C Μ - S e p h a d e x管柱餍析； (e )回收自CM-Sephadex管柱生成之流份，其含有 香杉花粉過敏原’並將所生成之流份進行Mono-S管柱層析 |其使用氯化鈉之線性梯度緩衝液，由0M至0. 5M氯 化鈉；及 (f)爲回收約0. 1至0.3M氯化鈉時溶離出之 流份。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印«衣 1 5_如申請專利範圍第1 1項之組成物，其中該肽 之含量爲0. 0 1 -1 0 〇w/w% *按乾固重計》 1 6 ·如申請專利範圍第1 1項之組成物，其含有選 自下列之物質’包括血清白蛋白，明膠，甘露糖醇，麥芽 糖，海藻糖及其混合物’其係作爲安定劑或賦形劑。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 * 297公) _ g - P付件：第84丨0^410號專利申請案 中文說明書修正頁 民國89年12月呈 申請曰期 84年 9月 8日 案 號 84109410 類 別 (以上各攔由本局填註）

   姓 6丨修正 …A-( 梱充H 雲墨專利説明書433807 含有香杉花粉過敏原之T-細胞抗原決定位之新穎肽類，其製法本 其醫療用途 Novel peptides containing T-cel1 epitope(s) of cedar polle allergens, the processes therefor and the phar#aceutical uses thereof 名 國 籍 郎彦文 三克美 藤野口 吝日谷 ⑴(2)(3 (1)日本 0 日本 ⑶ 曰本 裝 發明 創作 人 住、居所 姓 名 (名稱） ⑴日本國東京都品川區西五反田二丁目三〇番一 0--- -0 —號 <21曰本國岡山縣岡山市奥田一丁目七番一〇-二 〇四號 (3)日本國岡山縣岡山市平并五丁目三番三〇_五 號 !1)林原生物化學研究所股份有限公司 株式会社林原生物化半研究所 訂 .^濟部智^^凌^劈工^-贽合作社印繁 線 國 籍 申請人 住、居所 (事務所} 代表人 姓 名 ⑴日本 ⑴日本國岡山縣岡山市下石井一丁目二番三號 (1)林原健 本紙張 尺度適用中國國家檩华（CNS〉A4规格（210X297公釐}

   把43 88 Ο Α7 Β7 五、發明說明（1〇 ) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 > I K) Ln > ro > NJ GJ > K> to A-21 > NJ 〇 > 1 > } h-* 00 > 1- <1 > \ h~* > LH > l·-· ω > 1-' > 1 I-1 > 〇 > A-8 > <1 > 1 CTi > 1 cn > A-3 . > ro 143-156 139-152 135-148 131-144 127-140 123-136 119-132 125-128 111-124 107-120 103-116 99-112 95-108 91-104 87-100 CO ω \〇 Cn 79-92 un CD CXI 0 1 CD ON 'xj CO o CP\ ω 〇\ υ\ N) Ln Ln CD 〇1 1 cr- Λ1 a - Ly s - Leu -Thr-Gly - Phe - Thr - Leu-Met - Gly - Lys -Giy-Va 1 - lie Trp-Leu-Gln-Phe-Ala-Lys-Leu-Thr-Gly-Phe-Thr-Leu-Met-Gly Asn-Asn-Arg - Ile-Trp-IjeiJ — Gln-Phe-Ala-Lys- Leu — Thr一Gly ― Phe Ala-Ser-Trp-Lys-Asn-Asn-Arg-Ile-Trp-Leu-Gln-Phe-Ala - Lys Tyr-Gln-Asn-Pro-Ala-Ser-Trp-Lys-Asn^Asn-Arg-Ile-Trp-Leu lie - lie-Ala-Ala-Tyr-Gln-Asn** Pro-Ala-Ser^Trp - Ly s - Asn-Asn Lys-Val-Asp-Gly-Ile-Ile-Ala^Ala-Tyr-Gln-Asn-Pro^Ala-Ser His-Phe-Thr-Phe-Lys-Val ^5口一.01乂一11已一11已-為1己一 Ala_Tyr-Gin Pro-Cys-Gln-Pro-His-Phe^Thr-Phe - Lys-Val -Asp-Gly- lie-* lie Phe-Phe^Asn-Gly-Pro-Cys-Gln-Pro-His-Phe-Thr-Phe-Lys-Val Val-Asn^ Asn-Leu-Phe-Phe-Asn-Gly-Pro-Cys-Gln-Pro-His-Phe Lys-Lys-Phe-Val-Val-Asn-Asn^Leu-Phe-Phe™Asn-Gly-Pro-Cys Val-Pro-Gly—Asn-Lys-Lys-Phe-Val-Val—Asn-Asn-Leu—Phe-Phe Ala-Met-Leu-Leu-Val-Pro-Gly^Asn-Lys-Lys^Phe-Val-Val-Asn Lys-Lys-Pro^Ser-Ala-Met-Leu^Leu-Val-Pro-Gly-Asn^Lys-Lys Gln-Ala-Ala-Cys-Lys-Lys-Pro-Ser-Ala-Met-Leu-Leu'-Val-Pro Ser-Thr-Ala -Trp-Gln-Ala-Ala*-Cys- Lys - Lys-Pro-Ser-Ala-Mel: Thr-Glu-Ala-Phe-Ser-Thr-Ala-Trp^Gln-Ala-Ala-Cys-Lys-Lys Lys-Ηίs-Asp-Cys-Thr-Glu-Ala-Phe-Ser-Thr~Ala-Trp-Gln-Ala Val-Gly-Asp-Gly-Lys-His-Asp-Cys-Thr-GlU'Ala-Phe-Ser-Thr Lys-Tyr-Gly-Aia-Val-Gly-Asp-Gly-Lys-His~Asp-Cys ^Thr-Glu Phe-Asn-Val ^Glu- Lys-Tyr-Gly^Ala-Val-Gly™'Asp-Gly^Lys-His Ala-Ile-Asn-Ile-Phe-Asn-Val-Glu-Lys-Tyr-Gly-*Ala-Val-GIy Ser-Arg-His-Asp-Ala-Xle*-Asn-Ile^Phe^Asn-Val~Glu-Lys-Tyr 陰性 陰性 陽性 陰性 "m it 陽性 陰性 陰性 陰性 陰性 陰性 陰性 陰性 陰性 蔭性 ―陰性— 陰性 陰性 陰性 陰性 陰性 _陰性 陰性 1 1 1 r 1 1 1 j 1 1 1 \ I I 1 I 1 1 1 * All 办6—5山 Ar(a-Lys-val-GlulHis — ser!Ar(o—HislAS'oIAla — Il(DIASn—Ile-phe 服 1W· 娘一 -0 W__μ辦閎iyl^J .. — aalBal (請先閲讀背面之;i意事項再填寫本頁) 裝 -------訂-------1--' 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 13- Η日修正 8a】2. i6補充 A7 五、發明說明（12 ) 經濟部智慧財產局員工消f合作社印製 > I αι CT> > LT\ > tn A-53 > Ln NJ > cn y-· > <_n 〇 > 1 \〇 Λ-48 > -0 > 1 cn > 1 ' ϋΐ A-44 A-^3 > NJ > a A-40 > 1 LO \D > 1 OJ 03 > ! (jJ > ω CPv > ω ,υι > 1 CO li^ > 1 ω ω 267-280 263-276 259-272 255-268 251-264 247-260 243-256 239-252 235-248 231-244 227r240 223-236 219-232 215-228 211-224 207-220 203-216 199-212 195-208 191-204 187-200 183-196 179-192 175-188 Ile-Val-Ile-Glu-Asp- Leu-1ie-Cys Gly-Pro-Gly-His-Gly-Ile Gly-Ser-Ser-Asn-Ile-Val-Ile-Glu-Asp-Leu-Ile-Cys-Gly-Pro Ala-Ile-Gly-Thr-Gly-Ser-Ser-Asn-Ile-Val-Ile-Glu-Asp-Leu Asp-Aep-Cys-Val-Ala- Ile-Gly-Thr-Gly-S'er-Ser-Asn*- lie-Val Ile-Gly-Thr-Gly-Asp-Asp-Cys-Va1-Ala-Ile-Gly-Thr-Gly-Ser Gin™· Lys-Asn-Thr - Ile-Gly-Thr-Gly-Asp-Asp-Cys-Val-Ala-Ile Asn-Phe-His-Leu-Gln-Lys-Asn"Thr-Ile-Gly-Thr-Gly-Asp-Asp Phe-Ala-Ser-Lys-Asn-Phe-His-Leu-Gln-Lys-Asn-Thr»Ile-Gly Gly-He-Asp-lie-Phe-Ala-Ser-Lys^Asn^Phe-His-Leu-Gin-Lys Pro-Asn-Thr—Asp-Gly-Ile-Asp-Ile—Phe-Ala-Ser-Lys-Asn-Phe Pro-Arg-Asp-Ser-Pro-Asn-Thr-Asp-Gly-Ile-Asp-Ile-Phe-Ala Ser-Ile-Thr-Ala-Pro-Arg-Asp-Ser-Pro-Asn-Thr-Asp-Gly-lie ]:le- Ile-Gly-Ile-Ser-Ile-Thr-Ala-Pro-Arg-Asp-Ser-Pro-Asn Glu-Gly-Val-Lys-lie-Ile-Giy-Ile-Ser-Ile-Thr-Ala-Pr〇-Arg P h e - d y - A s r\- Cy s *"Glu-Gly-Vsl- Ly s - lie -工 le-Gly -工 1 e - S gjt m 工 1 e PhG — His — Leu ~VsX — Ph&~G Ly* Asn—Cys-GLu — Gly—Val — Lys — ΙΧθ-Χ1θ Asn-Ser-Pro-Glu-Phe-His^ Leu-Val-Phe-Gly-Asn-Cys-Glu-Gly Leu-Lys-Leu-Met-Asn-Ser-Pro-Glu-Phe-His^Leu-Val-Phe-Gly Ile-Ile-Gln-Gly-Leu-Lys-Leu-Met-Α5Γϊ-5θΐ·-ΡΓ〇-01υ-ΡΐΊθ-Ηί3 Ser-Thr-Gly-Leu-lie-11e-Gln-Gly-Leu^Lys-Leu-Met-Asn-Ser Lys-Phe-Asp^Phe-Ser-Thr-Gly-Leu-Ile-Ile-Gln-Gly-Leu-Lys Pro-Thr-Ala - lie-Lys - Phe-Asp-Phe-Ser-Thr-Gly-Leu - 1]1_巳-116 Asp-Arg-Asp-Arg-Pro-Thr-Ala-Ile-Lys-Phe-Asp-Phe-Ser^Thr Glu-Ile-Cys-Asn-Asp-Arg-Asp-Arg-Pro-Thr-Ala-Ile-Lys-Phe w 'h? w Κΐ· j 陰性 陰性 陰性 陰性 陰性 陽性 陽性 :陰性 :陰性 陰性 陰性 陰性 陰性 陰性 :陰性 陰性 .陰性 + 陰性 陰性' 陰性 陰性 陰性 I 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 ί 1 r r ------------------ ----- L----訂 i n n 1 n I n n n --- 1 ^1- n i (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 汫2 - 0^ β a —0 ff ^ ^ I: ' a 淘 b 鉬 Ai32 171118-4 vallAsn — GlylArgllGlutlleicyslAsn — ASOlAJrlQIAS'OIArolplio — Thr 0 s 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 * 297公釐） 15- 修正aa^V^P43 88 07 A7 B7 五、發明說明（13 ) 經濟部智慧財產局員工消費合作杜印製 ϋ : 、τ 莒窗甜{CV河裔"-ta· J ^ , ^>-11浊漭错晌OJE筇龉N河為瑢、(葫骂3燁{1»邻膝>±聲涸商炉 ^92n3薄：^潘^裔^河) 、 > ! ON > t CTs U> > cr^ K； > CT\ H* > 〇 > σι \〇 > Ol CD > t U1 > I LTI 299-312 295-308 291-304 287-300 283-296 279-292 275-288 271-284 267-280 Val-Asn-Gly-Ala-Lys-Phe-Ile-Asp-Thr-Gln-Asn-Gly-Leu-Arg Ser-Tyr-Val-His-Val-Asn-Gly-Ala-Lys-Phe-Ile-Asp-Thr-Gln Arg-Ala-Glu-Val-Ser-Tyr-Val-His-Val^Asn-Gly-Ala-Lys-Phe Arg-GIu-Asn-Ser-Arg-Ala-Glu-Vai-Ser*Tyr-Val-His-Val-Asn Gly-Ser-Leu-Gly-Arg-Glu-Asn^Ser-Arg^Ala-Glu-Val-Ser-Tyr Gly-lie-Ser-Ile-Gly-Ser-Leu-Gly-Arg-Glu-Asn-Ser-Arg-Ala Gly-Pro-Gly-His-Gly-Ile-Ser-Ile-Gly-Ser-Leu-Gly-Arg-Glu Asp-Leu-Ile-Cys-Gly-Pro-Gly-His-Gly~Ile-Ser-Ile-Gly-Ser lie-Val-Ile-Glu-Asp-Leu-Ile-Cys Gly~Pro-giy-His-Gly-1le 陰性 陰性 陰性 陰性 陰性 陰性 陰性 陰性 陰性 1 1 1 [ ί j 1 1 i (魂3 : 0snlD i 叫^'^:^!— — A—57 271-284 Am-p!Leu-Ile 丨 Cys 丨 Gly-tlro-Gly — xis 丨 Gly 丨 lie 丨 Ser-Ile — Gly 丨 sfBr 0 ---- —----— I - 裝-- ------- 訂·!----!.^(請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -16- 年 Η 修正 補充 聪4388 07 Α7 Β7 五、發明說明（14 ) 經濟部智慧財產局員工消费合作社印製 > I CD v〇 > 1 αϊ ca > 1 CD > 1 00 > 1 CD c_n > f CO > ω > 1 CO to > CO > 03 〇 > 1 -0 \Ώ A-78 ‘> <1 > CT\ > \j U) > f > 1 vj ω > 1 vj to > ί )-« > 1 〇 > cr. MD > ί CO > ί Q> > 1 CP^ 399-412 395-408 391-404 387-400 383-396 379-392 375-388 371-384 367-380 363-376 359-372 355-368 351-364 347-360 243-356 239-352 235-348 231-344 227-340 223-336 219-332 315-328 311-324 307-320 Ser-Leu-Lys-Leu-Thr-Ser-Gly-Lys-Ile-Ala-Ser-Cys-Leu-Asn Leu-Ser-Asp-Ile-Ser-Leu-Lys-Leu-Thr-Ser-Gly-Lys-Ile-Ala Lys-Asp-lie™ Lys-Leu-Ser-Asp-Ile-Ser-Leu-Lys-Leu-Thr-Ser Ser-Met-Pro-Cys-Lys-Asp-Ile-Lys-Leu-Ser-Asp-Ile-Ser-Leu Lys-Cys-Ser-Asp-Ser-Met-Pro-Cys^Lys-Akp-Ile-Lys-Leu-Ser A la-lie-Gin-Leu-Lys-Cys-Ser-Asp-Ser-Met-Pro-Cys-Lys-Asp Ala-Thr-Ala-Ala-Ala-Ile-Gln-Leu-Lys-Cys^Ser-Asp-Ser-Met Arg-Gly- Thr- Ser-Ala-Thr - Ala-Ala-Ala -1 le-Gln - Leu^- Lys-Cys Tyr-Lys^ Asn - Ile-Arg-GIy'-Thr-Ser-Ala-Thr-Ala-Ala~Ala-Ile Gin-Asp-Val-Thr-Tyr-Lys-Asn-Ile-Arg-Gly-Thr-Ser-Ala-Thr Ala-Val-Gln-Ile-Gln-Asp-Val-Thr-Tyr^-Lys-Asn - Ile-Arg-Gly Asn-Gln^Arg-Ser-Ala-Val-Gin-Ile-Gln-Asp-Val-Thr^Tyr-Lys Ser-Ala-Cys-Gln-Asn-Gln-Arg-Ser-Ala-Val-Gln-Ile-Gln-Asp Cys-Thr-Ser-Ala-Ser-Ala-Cys-Gln-Asn-Gln-Arg-Ser-Ala-Val Asn-Gln-Phe^Tyr-Cys-Thr-Ser-Ala^Ser-Ala-Cys-Gln-Asn-Gln Pro -工 le - Leu —工 le-Asn-Gln-Phie — Tyr-Cys —Thr — Ser-Ala-Sei:— Ala Asn-Ser-Glu-Asn-Pro-Ile-Leu-ίle-Asn-Gln-Phe^Tyr-Cys-Thr Val-Glu-Met-Ile-Asn-Ser-Glu^Asn^Pro-Ile-Leu-Ile-Asn-Gln Ile-Tyr-Glu-Asn-Val-Glu-Met-Ile-Asn-SeV^Glu-Asn-Pro-Ile Ala-Ser-His-IJLe-Ile-Tyr-Glu-Asn-Val-Glu-Mel: - Ile-Asn-Ser Gly - Ser-Gly-Met--Ala-Ser-His - Ile-I le-Tyr-Glu-Asn-Val-Glu Thr - Trp-Gln-Gly-Gly-Ser^Gly-Met-Ala '-Ser-His - lie -1 le-Tyr Leu-Arg-Ile-Lys-Thr-Trp-Gin-Gly-Gly-Ser-Gly-Met-Ala^Ser Thr-Gln-Asn-Gly- Leu-Arg*- IlG-Lys-Thr-Trp-Gln-Gly-Gly-Ser 嘬性 陰性 ~陰性 _陰性 ,u^ r j j 蔭性 陰性 陰性 陰性 陰性. 陰性' 陰性 陰性 陰性 陰性 陰性 w 谇 w W f# 陰性 w 1? 陰性 陰性 i性 ! 1 1' 1' 1 t 1 1 ί r r 1 1 1 ( 1 s 1 1 1 1 A 丨 65 303-31.^Lys — phei 1 ie —Asp-Thr—Gln; Asn—Gly 丨 L.eu 丨 Ar^IIlmlLysiThrlTrp 0 ® *3 I -*ru-' i ^ g :丨 菏懈攝1¾a I: Alalj B - j 11 _ _ H II _ _ J— H _ . (K _ I —l· - -· *κ 一SJI n - -- I - 1 ! I (請先閱讀背面之泫意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -17- 8W气修正丨把4 3 p P Η '7 -補λ! Α7 Β7 五、發明說明（15 ) 經濟部智慧財產局員工消費合作杜印製 ϋ : ' Α 姻、»$!1、Τ 證諸葫{CV渖癍"-扭 ' B 鉬、谢$1|' 2CA纈浊滞婼晌m-E筇矓^沛為谇、.(葫骂3嬋fw*%膝谇鹫遄闺掛 4t92nm筠珈雄^顏决砘).，

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   A7 B7 五、發明說明（16 經濟部智慧財屋局員工消费合作社印製 [ΠΙ27 1〇5|118 Gly I pMolcys tvoil 丨 phet I ie—rys 丨 ArlQ—vOJl I Seri Asn—vOJl 丨 lie-1 le 1¾ ϋ ω I Μ CO 1 M m CO 1 M ω i Μ ω CD 1 NJ NJ 1 N) }-- 1 (Ό 〇 B-19 tn 1 CD tv I l·-· 1 μ-« .OJ )-» LT\ CD 1 1-« 办 CD 1 l·-4 W ω 1 KJ 〇 J M h-» B-10 ro 1 kO 1 CO ro 1 w 1 CD 1 Ln CD 1 ro 1 U> 101-114 97-110 93-106 89-102 CO U\ UD CO CO μ- Ι \Ω 厶 \〇 〇 '-j CJ 1 ca cn O'· CO M ON LTi -«〇 QD ON >-* Ln 、J 〇 CJ1 UJ σ> cr> 公 y£i 45-58 h-1 cn ω Ln 〇 ω ω σ> NJ Ό t CO oi 1 CO CO tvJ 1—· ω J—1 '-O ω 〇 13-26 1 fO to I le-Gly-Asn-Gly-Gly-Pro^Cys -Val -Phe-1 le^Lys-Arg^-Val - Ser Ala-G1n-Val-Tyr^Ile-Gly^Asn-Gly-Gly-Pro-Cys-Val-Phe-Ile Asp-Gly-Arg-Gly-Ala-Gin-Val ^Tyr - Ile-Gly-Asn-Gly-Gly *-Pro Tyr-Lys-Thr-Phe-Asp-Gly-Arg-Gly-Ala-Gln-Val-Tyr-工le-Gly Tyr-Ile-Ala-Gly-Tyr-Lys-Thr^Phe-Asp*Gly-Arg-Gly-Ala^Gln Lys-Met-Pr〇'Met-Tyr'Ile-Ala-Gly-Tyr-Lys-Thr-Phe-Asp-Gly Asn^Ile-Lys-Leu-Lys-Met-Pro-Met-Tyr-Ile-Ala-Gly-Tyr-Lys Ser^Gly-Asn-Met-As/i'-Ile-Lys ^Leu-Lys*Met-Pro-Met-Tyr - lie Trp-Ile-Ile-Phe^Ser-GIy-Asn-Met-Asn-Ile-Lys-Leu-Lys-Met Asp-Arg-Pr〇-Leu-Trp-Ile-Ile'Phe-Ser-Gly-Asn"Met-Asn-Ile Gly-Ala-Thr-Arg^Asp-Arg-Pro-Leu-Trp-Ile-Ile-Phe-SGr-Gly Thr-Leu-Arg-Tyr-Gly-Ala^Thr-Arg-Asp-Arg-Pro-Leu-Trp-lie Pro-Ala-Pro-Gly-Thr-Leu-Arg-Tyr-Gly-Ala^Thr-Arg-Asp-Arg Asp-Pro-Val^Asn-Pro-Ala-Pro-Gly-Thr-Leu-Arg-Tyr-Gly*Ala Asn-Ser-Asp-Asp-Asp-Pro-Val-Asn-Pro-Ala-Pro-Gly-Thr-Leu Tyr-Thr-Val-Thr-Asn-Ser-Asp--Asp~Asp-Pro-Val^Asn-Pro-Ala Gly-Gly-Asp-Leu-Tyr-Thr-Val-Thr-Asn-Ser-Asp-Asp-Asp-Pro Met-Gly-Gly-Lys-Gly-Gly^Asp-Leu-Tyr-THr-Val-Thr^Asn-Ser Gly-Ser-Ser-Thr^Met-Gly^Gly-Lys-Gly-Gly-Asp^Leu-Tyr-Thr AX3--V3.1-GLy-Phs_Gly - Ssr - Ssx^Ttvr—Gly- Ly s —Gly — Gly Leu-Ala-Asp-Cys-Ala-Val-Gly'•Phe-Gly-Ser-ier-Thr-Met-Gly Asn^Arg-MG.t-Lys-Leu-Ala-Asp-Cys-Ala-Val-Gly'-Phe-Gly^Ser Asn-Trp-Ala-Gln-Asn-Arg-Met-Lys-Leu-Ala-Asp^Cys-Ala-Val Arg-Gly-Asp^Ser-Asn-Trp-Ala-Gln-Asn»Arg-Met-Lys-Leu-Ala 陰性 陰性 陰性 陰性 陰性 陰性 w 陰性 陰性 陰性 陰性 陰性 陰性 陰性 陰性 陰性 -陰性 陰性 陰性 陰性 陰性 陰性 陰性 陰性 1 f 1 1 1 1 r r j 1 1 j 1 1 I 1 i 1 1 1 0ISG□向13薄啭驟¾当-1ΒΛ 规..—4 ! - - I I I 1 I t— I n t I I n n ^^eJI n n n .^1 t (請先M讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4現格（210 X 297公釐） -19 - 股12.〗6補充 Δ7 B7 五、發明說明（17 ) 經濟部智慧財產局負工消费合作社印製 w .. , A偭"姗邻> T證窗葫{CV渖攝、-' B滿"姍邻* ilaA騷冲碌鹆蝴ΓΠ-Ε萍繭N-渖鋇1i、(葫皆3燁{1»$||^涪盥遄菡^ - 492nm 薄：S^N-裔法¾) CD 1 ω ί^Ι CD 1 ω D3 1 ω ω CD I CO NJ D3 ? 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I 訂---------声 {請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用肀國國家標準（CNS)A4規格（210 x 297公爱） -23- 補充 五、發明說明（27 ) B7 經濟部智慧財產局員工消费合作社印製 li: ^、谢邻、^語菡'Di\{t 河裔、-坤"Β«"«ΓΘ， isA溢冲铴祺晌cd-ε铒雖Ν·河inHr、(葫窖3续fl撕邻膝漭鹫通譚m 松9 2 nrn薄淛S.N萍涞砘) α I >〇 D-6 υ ί LH D-4 D-3 D-2 σ 1 Μ g% ΛΤί > r φ > 〇ί Ala > Ala r ω π〇 a-Alc C I μ_3 I > I > I__. 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   申請專利範圍 附件1 - 1 : 第8 4 1 Q 9 4 1 G號專利申請案 中文申請專利範圍修正本 民國8 9年1 2月修正 一種具T細胞抗原決定位之肽，其具有一胺基酸 序列，該胺基酸序列係選自如下S E Q D NO: - 2 4所示任一者之胺基酸序列，該肽在3H —胸腺核替 嘧啶攝入法分析時，其實質上不與香杉花粉過敏原之特異 免疫球蛋白E抗體反應，且比陰性對照物更能活化該香杉 花粉過敏原之特異T細胞： SEQ ID N0：1： Lvs Val Asd Gly lie lie Ala Ala Tyr Gin Asn .1 ' 5 10 乂 SEQ ID NO:2 ' lie lie Ala Ala Tyr Gin Asn Pro Ala Ser 1 5 10 SEQ ID NO：3: (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) * - --- -: I I ! - -- I n I I 1 I i I 經濟部智慧財產局員Η消費合作社印製 Asn Arg 工le Trp Leu Gin Phe Ala Lys Leu ; 1 5 10 SEQ ID NO:4: Phe Ala Ser Lys Asn Phe His Leu Gin Lys 1 5 10 SEQ ID NO:5: Ser Leu Lys Leu Thr Ser Gly Lys He Ala Ser ;1 . 5 10 c 0 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 * 297公釐）