TW202413435A - 融合蛋白的藥物組成物及其使用方法 - Google Patents

融合蛋白的藥物組成物及其使用方法 Download PDF

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登傑 楊
康歡
維奈 拉哈克里斯漢
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美商艾力克森製藥公司
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Abstract

本揭露提供了配製用於皮下投與的高濃度的融合蛋白的藥物組成物及其使用方法。此外，本揭露提供了開發高濃度蛋白質配製物之方法。

Description

融合蛋白的藥物組成物及其使用方法
蛋白質治療劑的皮下投與提供了與其他投與方法相比的幾個優勢。例如，已證明皮下投與改善患者依從性、改善便利性、以及改善藥物動力學和藥效學特徵。然而，開發用於皮下投與的配製物的挑戰之一係注射體積通常小於2 mL。因此，藥物組成物中的蛋白質必須以高濃度存在。因此，仍然需要高濃度配製物以達到適當的劑量。開發高濃度配製物仍存在一些挑戰（例如在黏度、穩定性和遞送方面）。
在第一方面，本揭露提供了藥物組成物，其包含融合蛋白、界面活性劑（detergent）、和緩沖劑，其中該融合蛋白的濃度係至少120 mg/mL。在一些實施方式中，融合蛋白包含具有SEQ ID NO: 2-7的胺基酸序列的互補決定區（CDR）。在一些實施方式中，融合蛋白包含第一部分和第二部分，該第一部分包含與SEQ ID NO: 55具有至少95%（例如，至少96%、97%、98%、99%、或100%）序列同一性的胺基酸序列，該第二部分包含與SEQ ID NO: 56具有至少95%（例如，至少96%、97%、98%、99%、或100%）序列同一性的胺基酸序列。在一些實施方式中，融合蛋白由SEQ ID NO: 1的胺基酸序列或其修飾組成。在一些實施方式中，修飾包括SEQ ID NO: 1的序列的N-末端麩醯胺酸向焦麩胺酸的轉化。
在一些實施方式中，融合蛋白的濃度在120 mg/mL與250 mg/mL之間（例如，在120 mg/mL與250 mg/mL、150 mg/mL與250 mg/mL、175 mg/mL與250 mg/mL、200 mg/mL與250 mg/mL、225 mg/mL與250 mg/mL、120 mg/mL與225 mg/mL、120 mg/mL與200 mg/mL、120 mg/mL與175 mg/mL、120 mg/mL與150 mg/mL、或150 mg/mL與180 mg/mL之間）。在一些實施方式中，融合蛋白的濃度係至少150 mg/mL。在一些實施方式中，融合蛋白的濃度在150 mg/mL與200 mg/mL之間（例如，在150 mg/mL與200 mg/mL、150 mg/mL與190 mg/mL、150 mg/mL與180 mg/mL、150 mg/mL與170 mg/mL、150 mg/mL與160 mg/mL、160 mg/mL與200 mg/mL、170 mg/mL與200 mg/mL、180 mg/mL與200 mg/mL、或190 mg/mL與200 mg/mL之間）或更高，例如，250 mg/mL。在一些實施方式中，融合蛋白的濃度在170 mg/mL與200 mg/mL之間（例如，在170 mg/mL與195 mg/mL、170 mg/mL與190 mg/mL、170 mg/mL與185 mg/mL、170 mg/mL與180 mg/mL、170 mg/mL與175 mg/mL、175 mg/mL與200 mg/mL、180 mg/mL與200 mg/mL、185 mg/mL與200 mg/mL、190 mg/mL與200 mg/mL、或195 mg/mL與200 mg/mL之間）。在一些實施方式中，融合蛋白的濃度係約190 mg/mL。在一些實施方式中，融合蛋白的濃度係約150 mg/mL。
在一些實施方式中，界面活性劑係聚山梨醇酯。在一些實施方式中，聚山梨醇酯係聚山梨醇酯80（PS80）。在一些實施方式中，聚山梨醇酯的濃度在0.001%與1%（w/v）之間（例如，在0.001%（w/v）與0.8%（w/v）、0.001%（w/v）與0.6%（w/v）、0.001%（w/v）與0.4%（w/v）、0.001%（w/v）與0.2%（w/v）、0.001%（w/v）與0.05%（w/v）、0.005%（w/v）與0.1%（w/v）、0.1%（w/v）與1.5%（w/v）、0.3%（w/v）與1.5%（w/v）、0.4%（w/v）與1.5%（w/v）、0.005%（w/v）與1%（w/v）、0.05%（w/v）與1%（w/v）、或0.1%（w/v）與1%（w/v）之間）。在一些實施方式中，聚山梨醇酯的濃度係約0.05%（w/v）。在一些實施方式中，聚山梨醇酯的濃度在0.05%（w/v）與0.5%（w/v）之間（例如，在0.05%（w/v）與0.3%（w/v）、0.05%（w/v）與0.1%（w/v）、0.1%（w/v）與0.5%（w/v）、0.2%（w/v）與0.5%（w/v）、或0.3%（w/v）與0.5%（w/v）之間）。在一些實施方式中，聚山梨醇酯的濃度在0.1%（w/v）與0.2%（w/v）之間（例如，在0.1%（w/v）、0.11%（w/v）、0.12%（w/v）、0.13%（w/v）、0.14%（w/v）、0.15%（w/v）、0.16%（w/v）、0.17%（w/v）、0.18%（w/v）、0.19%（w/v）、或0.2%（w/v）之間）。在一些實施方式中，聚山梨醇酯的濃度係約0.15%（w/v）。
在一些實施方式中，界面活性劑的濃度在0.01%（w/v）與1.5%（w/v）之間（例如，在0.01%（w/v）與0.4%（w/v）、0.01%（w/v）與0.3%（w/v）、0.01%（w/v）與0.2%（w/v）、0.01%（w/v）與0.1%（w/v）、0.01%（w/v）與1%（w/v）、0.1%（w/v）與1.5%（w/v）、0.2%（w/v）與1.5%（w/v）、0.3%（w/v）與1.5%（w/v）、0.4%（w/v）與1.5%（w/v）、0.5%（w/v）與1.5%（w/v）、0.8%（w/v）與1.5%（w/v）、或1%（w/v）與1.5%（w/v）之間）。在一些實施方式中，界面活性劑的濃度在0.01%（w/v）與1%（w/v）之間（例如，0.01%（w/v）、0.02%（w/v）、0.03%（w/v）、0.04%（w/v）、0.05%（w/v）、0.06%（w/v）、0.07%（w/v）、0.08%（w/v）、0.09%（w/v）、0.1%（w/v）、0.2%（w/v）、0.3%（w/v）、0.4%（w/v）、0.5%（w/v）、0.6%（w/v）、0.7%（w/v）、0.8%（w/v）、0.9%（w/v）、或1%（w/v））。在一些實施方式中，界面活性劑的濃度在約0.05%（w/v）與0.1%（w/v）之間（例如，0.05%（w/v）、0.06%（w/v）、0.07%（w/v）、0.08%（w/v）、0.09%（w/v）、或0.1%（w/v））。在一些實施方式中，界面活性劑的濃度係約0.05%（w/v）。在一些實施方式中，界面活性劑的濃度係約0.1%（w/v）。
在一些實施方式中，緩衝劑係乙酸鹽、組胺酸、磷酸鹽、或琥珀酸鹽、或其組合。在一些實施方式中，緩衝劑係乙酸鹽。在一些實施方式中，乙酸鹽係乙酸鈉。在一些實施方式中，乙酸鈉的濃度在約10 mM與150 mM之間（例如，在10 mM與140 mM、10 mM與130 mM、10 mM與120 mM、10 mM與100 mM、10 mM與75 mM、10 mM與50 mM、20 mM與150 mM、30 mM與150 mM、75 mM與150 mM、100 mM與150 mM或40 mM與150 mM之間）。在一些實施方式中，乙酸鈉的濃度在約15 mM與100 mM之間（例如，在約15 mM與80 mM、15 mM與60 mM、15 mM與40 mM、15 mM與20 mM、20 mM與100 mM、40 mM與100 mM、60 mM與100 mM、或80 mM與100 mM之間）。在一些實施方式中，乙酸鈉的濃度係約50 mM。在一些實施方式中，乙酸鈉的濃度係約20 mM。
在一些實施方式中，藥物組成物進一步包含胺基酸。在一些實施方式中，胺基酸係脯胺酸。在一些實施方式中，胺基酸係精胺酸。在一些實施方式中，胺基酸係甘胺酸。在一些實施方式中，胺基酸以在100 mM與200 mM之間（例如，在100 mM與190 mM、100 mM與180 mM、100 mM與170 mM、140 mM與200 mM、150 mM與200 mM、或160 mM與200 mM、110 mM與190 mM、120 mM與180 mM、130 mM與170 mM、140 mM與180 mM、150 mM與170 mM或160 mM與170 mM之間）的濃度存在於藥物組成物中。在特別的實施方式中，胺基酸的濃度係約165 mM。
在一些實施方式中，胺基酸具有在約10 mM與200 mM之間（例如，在10 mM與150 mM、10 mM與100 mM、10 mM與50 mm、10 mM與20 mM、20 mM與200 mM、50 mM與200 mM、100 mM與200 mM、或150 mM與200 mM之間）的濃度。在一些實施方式中，胺基酸具有在約100 mM與200 mM之間（例如，在100 mM與180 mM、100 mM與160 mM、100 mM與140 mM、100 mM與120 mM、120 mM與200 mM、140 mM與200 mM、160 mM與200 mM、或180 mM與200 mM之間）的濃度。
在一些實施方式中，藥物組成物進一步包含張度劑。在一些實施方式中，張度劑係糖、胺基酸、或鹽。在一些實施方式中，鹽係NaCl。在一些實施方式中，糖係蔗糖、葡萄糖、甘油、或海藻糖。在一些實施方式中，糖係蔗糖。在一些實施方式中，蔗糖的濃度在約1%（w/v）與約15%（w/v）之間（例如，1%（w/v）、2%（w/v）、3%（w/v）、4%（w/v）、5%（w/v）、6%（w/v）、7%（w/v）、8%（w/v）、9%（w/v）、10%（w/v）、11%（w/v）、12%（w/v）、13%（w/v）、14%（w/v）、或15%（w/v））。在一些實施方式中，蔗糖以在2%（w/v）與10%（w/v）之間（例如，2%（w/v）、3%（w/v）、4%（w/v）、5%（w/v）、6%（w/v）、7%（w/v）、8%（w/v）、9%（w/v）、或10%（w/v））的濃度存在。在一些實施方式中，蔗糖的濃度在約4%（w/v）與約9%（w/v）之間（例如，4%（w/v）、5%（w/v）、6%（w/v）、7%（w/v）、8%（w/v）、9%（w/v）、或10%（w/v））。在一些實施方式中，蔗糖的濃度係約4%（w/v）。在一些實施方式中，蔗糖以在8%（w/v）與9%（w/v）之間（例如，8.1%（w/v）、8.2%（w/v）、8.3%（w/v）、8.4%（w/v）、8.5%（w/v）、8.6%（w/v）、8.7%（w/v）、8.8%（w/v）、8.9%（w/v）、或9%（w/v））的濃度存在。在一些實施方式中，蔗糖以約8.6%（w/v）的濃度存在。
在一些實施方式中，藥物組成物具有約pH 3與pH 8之間（例如，在pH 3與pH 6、pH 3與pH 4、pH 4與pH 8、或pH 6與pH 8之間）的pH。在一些實施方式中，藥物組成物具有pH 4與pH 7之間（例如，在pH 4與pH 6、pH 4與pH 5、pH 5與pH 7、或pH 6與pH 7之間）的pH。在一些實施方式中，藥物組成物具有約pH 5.4的pH。
在一些實施方式中，藥物組成物在20°C下具有＜ 17 cP的黏度。在一些實施方式中，藥物組成物在20°C下具有＜ 12 cP的黏度。在一些實施方式中，藥物組成物在20°C下具有10 cP或11 cP的黏度。在一些實施方式中，藥物組成物在20°C下具有在6 cP至35 cP之間（例如，6 cP、7 cP、8 cP、9 cP、10 cP、11 cP、12 cP、13 cP、14 cP、15 cP、16 cP、17 cP、18 cP、19 cP、20 cP、21 cP、22 cP、23 cP、24 cP、25 cP、26 cP、27 cP、28 cP、29 cP、30 cP、31 cP、32 cP、33 cP、34 cP、或35 cP）的黏度。
在一些實施方式中，藥物組成物經過一個月在25°C下按月計具有百分比在0.05%（w/v）與0.5%（w/v）（例如，0.05%（w/v）與0.4%（w/v）、0.05%（w/v）與0.3%（w/v）、0.05%（w/v）與0.2%（w/v）、0.05%（w/v）與0.1%（w/v）、0.1%（w/v）與0.5%（w/v）、0.2%（w/v）與0.5%（w/v）、0.3%（w/v）與0.5%（w/v）、或0.4%（w/v）與0.5%（w/v））之間的高分子量化合物。在一些實施方式中，藥物組成物經過一個月在25°C下按月計具有百分比約0.3%（w/v）的高分子量化合物。在一些實施方式中，藥物組成物經過一個月在37°C下按月計具有百分比在約1%（w/v）與10%（w/v）之間（例如，1%（w/v）、2%（w/v）、3%（w/v）、4%（w/v）、5%（w/v）、6%（w/v）、7%（w/v）、8%（w/v）、9%（w/v）、或10%（w/v））的高分子量化合物。在一些實施方式中，藥物組成物經過一個月在37°C下按月計具有百分比約4.6%（w/v）或約5%（w/v）的高分子量化合物。在一些實施方式中，藥物組成物經過一個月在37°C下按月計具有百分比在4.2%（w/v）與5.8%（w/v）之間或在3.7%（w/v）與5.5%（w/v）之間的高分子量化合物。
在一些實施方式中，藥物組成物在37°C下按月計具有在約1與10之間（例如，約1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10）的濁度，其中濁度測量為在400 nm處的光密度。在一些實施方式中，藥物組成物在37°C下按月計具有約3或約4的濁度。在一些實施方式中，藥物組成物在37°C下按月計具有在1.4與4.5之間的或者在37°C下按月計具有在2.3與5.8之間的濁度。
在一些實施方式中，藥物組成物具有在100 Osm/kg H 2O與500 Osm/kg H 2O之間（例如，在100 Osm/kg H 2O與400 Osm/kg H 2O、100 Osm/kg H 2O與300 Osm/kg H 2O、100 Osm/kg H 2O與200 Osm/kg H 2O、200 Osm/kg H 2O與500 Osm/kg H 2O、300 Osm/kg H 2O與500 Osm/kg H 2O、或400 Osm/kg H 2O與500 Osm/kg H 2O之間）的滲透壓。在一些實施方式中，藥物組成物具有約245 Osm/kg H 2O的滲透壓。
在另一方面，本揭露提供了藥物組成物，其包含融合蛋白、界面活性劑、蔗糖、和乙酸鈉，其中該融合蛋白包含具有SEQ ID NO: 2-7的胺基酸序列的CDR，其中該融合蛋白的濃度在120 mg/mL與200 mg/mL之間，其中該乙酸鈉的濃度在25 mM與75 mM之間，其中該蔗糖具有在2%（w/v）與15%（w/v）之間的濃度，其中該界面活性劑的濃度在0.01%（w/v）與0.2%（w/v）之間，並且其中該藥物組成物具有在pH 4與pH 7之間的pH。
在一些實施方式中，該融合蛋白的濃度係約150 mg/mL，其中該乙酸鈉的濃度係約50 mM，其中該蔗糖的濃度係約8.6%（w/v），其中該界面活性劑係具有濃度約0.05%（w/v）的PS-80，並且其中該藥物組成物具有約5.4的pH。
在一些實施方式中，該融合蛋白的濃度係約150 mg/mL，其中該乙酸鈉的濃度係約50 mM，其中該蔗糖的濃度係約8.6%（w/v），其中該界面活性劑係具有濃度約0.15%（w/v）的PS-80，並且其中該藥物組成物具有約5.4的pH。
在一方面，本揭露提供了藥物組成物，其包含融合蛋白、界面活性劑、和乙酸鈉，其中該融合蛋白包括具有SEQ ID NO: 2-7的胺基酸序列的CDR，其中該融合蛋白的濃度在150 mg/mL與200 mg/mL之間（例如，在150 mg/mL與190 mg/mL、150 mg/mL與180 mg/mL、150 mg/mL與170 mg/mL、150 mg/mL與160 mg/mL、160 mg/mL與200 mg/mL、170 mg/mL與200 mg/mL、180 mg/mL與200 mg/mL、或190 mg/mL與200 mg/mL之間），其中該界面活性劑的濃度在0.01%（w/v）與0.1%（w/v）之間（例如，0.01%（w/v）、0.02%（w/v）、0.03%（w/v）、0.04%（w/v）、0.05%（w/v）、0.06%（w/v）、0.07%（w/v）、0.08%（w/v）、0.09%（w/v）、或0.1%（w/v）），其中該蔗糖的濃度在1%（w/v）與10%（w/v）之間（例如，1%（w/v）、2%（w/v）、3%（w/v）、4%（w/v）、5%（w/v）、6%（w/v）、7%（w/v）、8%（w/v）、9%（w/v）、或10%（w/v）），其中該乙酸鈉的濃度在10 mM與50 mM之間（例如，在10 mM與40 mM、10 mM與30 mM、10 mM與20 mM、20 mM與50 mM、30 mM與50 mM、或40 mM與50 mM之間），並且其中該藥物組成物具有在pH 4與pH 7之間（例如，在pH 4與pH 6、pH 4與pH 5、pH 5與pH 7、或pH 6與pH 7之間）的pH。在一些實施方式中，該融合蛋白的濃度係約190 mg/mL，其中該界面活性劑的濃度係約0.05%（w/v），其中該蔗糖的濃度係4%（w/v），其中該乙酸鈉的濃度係約20 mM，並且其中該藥物組成物具有約pH 5.4的pH。在一些實施方式中，界面活性劑係PS80。在一些實施方式中，PS80的濃度係約1.0%（w/v）。
在一些實施方式中，融合蛋白包括具有SEQ ID NO: 2-7的胺基酸序列的CDR，界面活性劑，乙酸鈉，和脯胺酸，其中該融合蛋白的濃度在150 mg/mL與200 mg/mL之間（例如，在150 mg/mL與190 mg/mL、150 mg/mL與180 mg/mL、150 mg/mL與170 mg/mL、150 mg/mL與160 mg/mL、160 mg/mL與200 mg/mL、170 mg/mL與200 mg/mL、180 mg/mL與200 mg/mL、或190 mg/mL與200 mg/mL之間），其中該界面活性劑的濃度在0.01%（w/v）與0.1%（w/v）之間（例如，0.01%（w/v）、0.02%（w/v）、0.03%（w/v）、0.04%（w/v）、0.05%（w/v）、0.06%（w/v）、0.07%（w/v）、0.08%（w/v）、0.09%（w/v）、或0.1%（w/v）），其中該乙酸鈉的濃度在10 mM與50 mM之間（例如，在10 mM與40 mM、10 mM與30 mM、10 mM與20 mM、20 mM與50 mM、30 mM與50 mM、或40 mM與50 mM之間），其中該脯胺酸的濃度在100 mM與200 mM之間（例如，在100 mM與180 mM、100 mM與160 mM、100 mM與140 mM、100 mM與120 mM、120 mM與200 mM、140 mM與200 mM、160 mM與200 mM、或180 mM與200 mM之間），並且其中該藥物組成物具有在pH 4與pH 7之間（例如，在pH 4與pH 6、pH 4與pH 5、pH 5與pH 7、或pH 6與pH 7之間）的pH。在一些實施方式中，該融合蛋白的濃度係約190 mg/mL，其中該界面活性劑的濃度係約0.05%（w/v），其中該乙酸鈉的濃度係約20 mM，其中該脯胺酸的濃度係約165 mM，並且其中該藥物組成物具有約pH 5.4的pH。在一些實施方式中，界面活性劑係PS80。在一些實施方式中，PS80的濃度係約1.0%（w/v）。
在一些實施方式中，融合蛋白包含第一部分和第二部分，該第一部分包含與SEQ ID NO: 55具有至少95%（例如，至少95%、96%、97%、98%、99%、或100%）序列同一性的胺基酸序列，該第二部分包含與SEQ ID NO: 56具有至少95%（例如，至少95%、96%、97%、98%、99%、或100%）序列同一性的胺基酸序列。在一些實施方式中，融合蛋白具有SEQ ID NO: 1的胺基酸序列。
在一些實施方式中，將藥物組成物配製為藥物產品。
在另一方面，本揭露提供了治療或預防本文所述之疾病或病症之方法，該方法包括向有需要的受試者投與本文所述之藥物組成物中的任一種。在一些實施方式中，疾病係鐮狀細胞疾病。在一些實施方式中，藥物組成物係皮下投與。在一些實施方式中，藥物組成物經由預填充注射器、自動注射器、或隨身裝置投與。在一些實施方式中，受試者係人。
在另一方面，本揭露提供了開發用於皮下投與的融合蛋白的高濃度配製物之方法，該方法包括：i) 進行賦形劑篩選，其中該賦形劑篩選包括測量包括該融合蛋白和一或多種賦形劑的溶液在一段時間內的穩定性和黏度；ii) 在步驟 (i) 之後，測量由於改變pH、乙酸鹽濃度、和蔗糖濃度而導致的在步驟 (i) 的溶液中的高分子量化合物的黏度、濁度、和形成速率；iii) 在步驟 (ii) 之後，測量由於改變該融合蛋白的pH、蔗糖濃度、賦形劑、和濃度而導致的在步驟 (ii) 的溶液中的高分子量化合物的黏度、濁度、和形成速率；以及iv) 在步驟 (iii) 之後，進行黏度評估，其中該配製物的黏度在一定的溫度範圍和一定的融合蛋白濃度範圍下進行測量。
在一些實施方式中，融合蛋白包括具有SEQ ID NO: 2-7的胺基酸序列的6個CDR。在一些實施方式中，融合蛋白包括第一部分和第二部分，該第一部分包括與SEQ ID NO: 55具有至少95%（例如，至少95%、96%、97%、98%、99%、或100%）序列同一性的胺基酸序列，該第二部分包括與SEQ ID NO: 56具有至少95%（例如，至少95%、96%、97%、98%、99%、或100%）序列同一性的胺基酸序列。在一些實施方式中，融合蛋白具有SEQ ID NO: 1的胺基酸序列、或其修飾。在一些實施方式中，修飾包括SEQ ID NO: 1的序列的N-末端麩醯胺酸向焦麩胺酸的轉化。
在一些實施方式中，高濃度配製物具有至少120 mg/mL的融合蛋白濃度。在一些實施方式中，高濃度配製物具有至少150 mg/mL的融合蛋白濃度。在一些實施方式中，高濃度配製物具有在120 mg/mL與250 mg/mL之間（例如，在120 mg/mL與250 mg/mL、150 mg/mL與250 mg/mL、175 mg/mL與250 mg/mL、200 mg/mL與250 mg/mL、225 mg/mL與250 mg/mL、120 mg/mL與225 mg/mL、120 mg/mL與200 mg/mL、120 mg/mL與175 mg/mL、120 mg/mL與150 mg/mL、或150 mg/mL與180 mg/mL之間）的融合蛋白濃度。在一些實施方式中，步驟 (i) 的溶液具有約200 mg/mL的融合蛋白濃度。
在一些實施方式中，步驟ii和步驟iii的測量每週進行一次。在一些實施方式中，測量進行至少4週。
在一些實施方式中，一或多種賦形劑選自琥珀酸鹽、精胺酸、乙酸鹽、組胺酸、磷酸鹽、或其組合。在一些實施方式中，一或多種賦形劑係精胺酸。在一些實施方式中，精胺酸係精胺酸鹽酸鹽。在一些實施方式中，精胺酸係精胺酸乙酸鹽。在一些實施方式中，精胺酸係精胺酸琥珀酸鹽。在一些實施方式中，一或多種賦形劑係琥珀酸鹽。在一些實施方式中，一或多種賦形劑係琥珀酸鹽和精胺酸鹽酸鹽。在一些實施方式中，一或多種賦形劑係乙酸鹽。在一些實施方式中，一或多種賦形劑係乙酸鹽和精胺酸鹽酸鹽。在一些實施方式中，一或多種賦形劑係乙酸鹽和精胺酸乙酸鹽。
在一些實施方式中，步驟 (i) 的溶液進一步包括蔗糖。在一些實施方式中，蔗糖具有在1%（w/v）與15%（w/v）之間（例如，1%（w/v）、2%（w/v）、3%（w/v）、4%（w/v）、5%（w/v）、6%（w/v）、7%（w/v）、8%（w/v）、9%（w/v）、10%（w/v）、11%（w/v）、12%（w/v）、13%（w/v）、14%（w/v）、或15%（w/v））的濃度。在一些實施方式中，蔗糖以在2%（w/v）與10%（w/v）之間（例如，2%（w/v）、3%（w/v）、4%（w/v）、5%（w/v）、6%（w/v）、7%（w/v）、8%（w/v）、9%（w/v）、或10%（w/v））的濃度存在。在一些實施方式中，蔗糖的濃度在約4%（w/v）與約9%（w/v）之間（例如，4%（w/v）、5%（w/v）、6%（w/v）、7%（w/v）、8%（w/v）、9%（w/v）、或10%（w/v））。在一些實施方式中，蔗糖的濃度係約4%（w/v）。在一些實施方式中，蔗糖以在8%（w/v）與9%（w/v）之間（例如，8.1%（w/v）、8.2%（w/v）、8.3%（w/v）、8.4%（w/v）、8.5%（w/v）、8.6%（w/v）、8.7%（w/v）、8.8%（w/v）、8.9%（w/v）、或9%（w/v））的濃度存在。在一些實施方式中，蔗糖以約8.6%（w/v）的濃度存在。
在一些實施方式中，步驟 (ii) 的溶液具有在4與7之間的pH（例如，在4與6、4與5、5與7、或6與7之間的pH）。在一些實施方式中，步驟 (ii) 的溶液具有在4.5與6.0之間的pH（例如，在4.5與5.5、4.5與5、5與6、或5.5與6之間的pH）。在一些實施方式中，步驟 (ii) 的溶液具有在10 mM與200 mM之間（例如，在10 mM與150 mM、10 mM與100 mM、10 mM與50 mM、50 mM與200 mM、100 mM與200 mM、或150 mM與200 mM之間）的乙酸鹽的濃度。在一些實施方式中，步驟 (ii) 的溶液具有在15 mM與150 mM之間（例如，在15 mM與80 mM、15 mM與60 mM、15 mM與40 mM、15 mM與20 mM、20 mM與100 mM、40 mM與100 mM、60 mM與100 mM、80 mM與100 mM、80 mM與150 mM、100 mM與150 mM、或60 mM與150 mM之間）的乙酸鹽的濃度。
在一些實施方式中，步驟 (ii) 的溶液具有在1%（w/v）與20%（w/v）之間（例如，在1%（w/v）與15%（w/v）、1%（w/v）與10%（w/v）、1%（w/v）與5%（w/v）、5%（w/v）與20%（w/v）、10%（w/v）與20%（w/v）、或15%（w/v）與20%（w/v）之間）的蔗糖的濃度。在一些實施方式中，步驟 (ii) 的溶液具有在2%（w/v）與10%（w/v）之間（例如，2%（w/v）、3%（w/v）、4%（w/v）、5%（w/v）、6%（w/v）、7%（w/v）、8%（w/v）、9%（w/v）、或10%（w/v））的蔗糖的濃度。在一些實施方式中，步驟 (ii) 的溶液具有約150 mg/mL的融合蛋白濃度。在一些實施方式中，步驟 (iii) 的溶液具有在5與6之間的pH。在一些實施方式中，步驟 (iii) 的溶液具有在0%（w/v）與10%（w/v）之間（例如，1%（w/v）、2%（w/v）、3%（w/v）、4%（w/v）、5%（w/v）、6%（w/v）、7%（w/v）、8%（w/v）、9%（w/v）、或10%（w/v））的蔗糖的濃度。在一些實施方式中，步驟 (iii) 的溶液具有在0%（w/v）與5%（w/v）之間（例如，1%（w/v）、2%（w/v）、3%（w/v）、4%（w/v）、或5%（w/v））的蔗糖的濃度。在一些實施方式中，步驟 (iii) 的溶液具有在約100 mg/mL與300 mg/mL之間（例如，在100 mg/mL與250 mg/mL、100 mg/mL與200 mg/mL、100 mg/mL與150 mg/mL、150 mg/mL與300 mg/mL、200 mg/mL與300 mg/mL、或250 mg/mL與300 mg/mL之間）的融合蛋白濃度。在一些實施方式中，步驟 (ii) 的溶液具有在約150 mg/mL與230 mg/mL（例如，150 mg/mL與200 mg/mL、150 mg/mL與175 mg/mL、175 mg/mL與230 mg/mL、200 mg/mL與230 mg/mL、或220 mg/mL與230 mg/mL）之間的融合蛋白濃度。
在一些實施方式中，配製物在20°C下具有在5 cP與15 cP之間（例如，5 cP、6 cP、7 cP、8 cP、9 cP、10 cP、11 cP、12 cP、13 cP、14 cP、或15 cP）的黏度。在一些實施方式中，配製物在20°C下具有約10 cP或11 cP的黏度。在一些實施方式中，配製物經過一個月在25°C下按月計具有百分比在0.05%（w/v）與0.5%（w/v）之間（例如，在0.05%（w/v）與0.4%（w/v）、0.05%與0.3%（w/v）、0.05%與0.2%（w/v）、0.05%（w/v）與0.1%（w/v）、0.1%（w/v）與0.5%（w/v）、0.2%（w/v）與0.5%（w/v）、0.3%（w/v）與0.5%（w/v）、或0.4%（w/v）與0.5%（w/v）之間）的高分子量化合物。在一些實施方式中，配製物經過一個月在25°C下按月計具有百分比約0.2%（w/v）的高分子量化合物。在一些實施方式中，配製物經過一個月在37°C下按月計具有百分比在約1%（w/v）與10%（w/v）之間（例如，1%（w/v）、2%（w/v）、3%（w/v）、4%（w/v）、5%（w/v）、6%（w/v）、7%（w/v）、8%（w/v）、9%（w/v）、或10%（w/v））的高分子量化合物。在一些實施方式中，配製物經過一個月在37°C下按月計具有百分比約5%（w/v）的高分子量化合物。在一些實施方式中，配製物在37°C下按月計具有在約1與10之間（例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10）的濁度，其中濁度測量為在400 nm處的光密度。在一些實施方式中，配製物在37°C下按月計具有約3的濁度。
在另一方面，本揭露提供了雙特異性構建體，其結合備解素和人血清白蛋白，該雙特異性構建體包含SEQ ID NO:1的胺基酸序列、或其修飾。如請求項117所述之雙特異性構建體，其中該修飾包括SEQ ID NO: 1的胺基酸序列的N-末端麩醯胺酸向焦麩胺酸的轉化。在另一實施方式中，雙特異性構建體由SEQ ID NO: 1的胺基酸序列組成，其中N-末端麩醯胺酸已被轉化為焦麩胺酸。
定義
為了促進對本揭露的理解，下面定義了多個術語。本文定義的術語具有如與本揭露相關的領域中的普通技術者通常理解的含義。術語例如「一個/種（a、an）」和「該」並不旨在僅指單個實體，而是包括可以使用特定實例來說明的一般類別。本文的術語用於描述特定實施方式，但它們的使用不限制本揭露，除非在請求項中列出。
如本文所用，術語「約」係指高於或低於所描述的值10%以內的值。
如本文所用，在值的範圍內提供的任何值都包括上限和下限、以及該上限和下限內含有的任何值。
如本文所用，術語「抗體」包括完整抗體和任何抗原結合片段（即，「抗原結合部分」）或其單鏈版本。「抗體」係指糖蛋白（例如含有由二硫鍵互相連接的至少兩條重（H）鏈和兩條輕（L）鏈）、或其抗原結合部分。如本文所用，術語「重鏈」和「輕鏈」係指任何免疫球蛋白（「Ig」）多肽，該多肽具有足以賦予靶抗原特異性的可變結構域序列。每條重鏈由重鏈可變區（本文縮寫為V H）和重鏈恒定區構成。重鏈恒定區由三個結構域（CH1、CH2和CH3）構成。每條輕鏈由輕鏈可變區（本文縮寫為V L）和輕鏈恒定區構成。輕鏈恒定區由一個結構域CL構成。在全長輕鏈和重鏈內，可變區和恒定結構域典型地藉由約12個或更多個胺基酸的「J」區連接，其中重鏈還包括約10個以上的胺基酸的「D」區。每個輕鏈/重鏈對的可變區典型地形成抗原結合位點。V H及V L區可以進一步細分為稱為互補決定區（CDR）的高變區，其間穿插有稱為框架區（FR）的更保守的區域。每個V H和V L由從胺基末端到羧基末端按以下順序排列的三個CDR和四個FR構成：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重鏈和輕鏈的可變區含有與抗原相互作用的結合結構域。抗體的恒定區可以介導免疫球蛋白與宿主組織或因子（包括免疫系統的多種細胞（例如，效應細胞）和經典補體系統的第一成分（C1q））的結合。
如本文所用，術語抗體的「抗原結合片段」（或簡稱「抗體片段」）係指保持特異性結合抗原的能力的抗體的一或多個片段或部分。這樣的「片段」係，例如長度在約8與約1500個胺基酸之間，適當地長度在約8與約745個胺基酸之間，適當地在約8與約300個胺基酸之間，例如長度在約8與約200個胺基酸之間，或在約10與約50個或100個胺基酸之間。已經顯示抗體的抗原結合功能可以由全長抗體的片段執行。涵蓋在術語抗體的「抗原結合片段」內的結合片段之實例包括 (i) Fab片段，其係由V L、V H、CL和CH1結構域組成的單價片段；(ii) F(ab') 2片段，其係包含在絞鏈區由二硫橋連接的兩個Fab片段的二價片段；(iii) 由V H和CH1結構域組成的Fd片段；(iv) 由抗體的單臂的V L和V H結構域組成的Fv片段，(v) 由V H結構域組成的dAb片段（Ward等人, (1989) Nature[自然] 341:544-546）；和 (vi) 分離的互補決定區（CDR）或 (vii) 可視需要由合成連接子連接的兩個或更多個分離的CDR的組合。此外，雖然Fv片段的兩個結構域V L和V H係由單獨的基因編碼的，但是可以使用重組方法將這兩個結構域藉由使它們能夠形成單一蛋白鏈的合成連接子連接，在該單一蛋白鏈中，V L區和V H區配對形成單價分子（被稱為單鏈Fv（「sFv」）；Bird, R.等人 , Science[科學] 242:423-6, 1988；Huston, J.等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA[美國國家科學院院刊], 85:5879-83, 1988）。術語抗體的「抗原結合片段」也旨在涵蓋這樣的單鏈抗體。該等抗體片段係使用本領域的技術者已知的常規技術獲得的，並且以與完整抗體相同的方式針對效用來篩選該等片段。抗原結合部分可以藉由重組DNA技術或藉由完整免疫球蛋白的酶促或化學切割來產生。
當分子在蛋白質和/或大分子的複雜混合物中優先識別其抗原靶標時，本文揭露的抗體、免疫球蛋白或免疫功能性免疫球蛋白片段、或工程化多肽或融合蛋白被稱為「特異性」結合抗原。如本文所用，術語「特異性結合」係指本揭露的抗體、免疫球蛋白或免疫功能性免疫球蛋白片段、或工程化多肽或融合蛋白與含有K D為至少約10 -6M、10 -7M、10 -8M、10 -9M、10 -10M、10 -11M、10 -12M、或更低的表位的抗原結合，和/或以比其對非特異性抗原的親和力大至少兩倍的親和力與表位結合的能力。
如本文所用，「補體介導的障礙」係指由補體途徑的錯誤調節（例如補體途徑的激活或抑制）直接或間接引起的障礙，或者由補體途徑的一或多個組分、或由補體途徑生成的產物直接或間接介導的障礙。該術語還指由於補體途徑的一或多個組分或補體途徑生成的產物而加劇的障礙。
如本文所用，「藥物產品」或「DP」係指呈其最終組態的藥物組成物，使其準備投與於受試者（例如，呈最終小瓶組態）。DP中多肽的濃度可為將其投與於受試者的濃度。
如本文所用，術語「有效量」係指當投與於受試者（例如人受試者）時，足以產生有益或期望的結果（例如臨床結果）的藥物組成物的量。本文所述之將對應於這樣的有益或期望的結果的給定組成物的量取決於各種因素，例如，給定的藥劑、藥物配製物、投與途徑、治療的受試者的特性（例如，年齡、性別、體重）等。
如本文所用，術語「融合至」係指藉由將一個以上序列組合，典型地藉由將一個序列（例如編碼序列）選殖到具有一或多個第二編碼序列的框中的表現載體中，使得兩個（或更多個）編碼序列被轉錄並翻譯成單個連續的多肽來工程化的多肽。除了藉由重組技術製成外，多肽的部分還可以藉由化學反應或本領域已知的用於製造定制多肽的其他手段相互「融合」。
如本文所用，術語「重鏈抗體」係指缺乏在常規抗體中發現的一或多條輕鏈的抗體。
如本文所用，術語「人抗體」係指例如，藉由免疫系統用於結合和中和病原體的Ig。術語包括具有基本上對應於人種系Ig序列的可變區和恒定區的抗體。在一些實施方式中，人抗體在非人哺乳動物（包括但不限於齧齒動物，例如小鼠和大鼠，以及兔類動物，如兔）中產生。在其他實施方式中，人抗體在融合瘤細胞中產生。在仍其他實施方式中，人抗體係重組產生的。如本文所用，人抗體包括全部或部分抗體，包括例如重鏈和輕鏈、可變區、恒定區、蛋白水解片段、互補決定區（CDR）和其他功能片段。
術語「VHH結構域」係指在天然存在的重鏈抗體中存在的可變結構域（例如，「VHH抗體」或「VHH單鏈抗體」），以將它們與在常規四鏈抗體中存在的重鏈可變結構域（本文稱為「VH結構域」）和在常規四鏈抗體中存在的輕鏈可變結構域（本文稱為「VL結構域」）區分開來。VHH抗體由某些駱駝科物種（例如，駱駝和美洲駝）產生。針對特定抗原免疫的駱駝科將產生與抗原結合的單鏈抗體（單個重鏈）。來自重鏈抗體的單結構域、重鏈可變結構域序列可以稱為VHH或V HH抗體、VHH或V HH抗體片段、或VHH或V HH結構域。
如本文所用，術語「肽連接子」係指在融合蛋白的多肽之間插入或包括的一或多個胺基酸殘基。肽連接子可以例如在序列水平上在融合蛋白的多肽之間的過渡處插入或包括。連接子中胺基酸殘基的同一性和序列可以根據期望的二級結構而變化。例如，甘胺酸、絲胺酸和丙胺酸可用於具有最大的柔性的連接子。任何胺基酸殘基都可以被認為是與一或多個其他胺基酸殘基組合的連接子，其可以與第一胺基酸殘基相同或不同，以必要時根據期望的特性構建更大的肽連接子。
術語「雙特異性」係指能夠結合兩個抗原的融合蛋白。術語「多價融合蛋白」意指包含兩個或更多個抗原結合位點的融合蛋白。「多特異性融合蛋白」係能夠結合兩個或更多個相關或不相關的靶標的融合蛋白。常規四鏈抗體係多價的，但每個臂都與同一抗原結合，並且，因此不是雙特異性的。VHH抗體係單價的。例如，在具有或不具有連接子的情況下，可以藉由融合兩個或更多個單價VHH抗體（或VHH可變結構域片段或其他功能片段）來工程化雙特異性抗體，使得融合蛋白係多價的。如果融合的可變結構域特異性結合不同的抗原，那麼融合蛋白將是雙特異性的。
如本文所用，術語「載體」係指用於將編碼資訊轉移到表現系統（例如，宿主細胞或體外表現系統）的任何分子（例如，核酸、質體或病毒）。一種類型的載體係「質體」，其係指環狀雙鏈DNA（dsDNA）分子，其中可以插入另外的DNA區段。另一種類型的載體係病毒載體，其中可以將另外的DNA區段插入到病毒基因組中。某些載體能夠在引入它們的宿主細胞中自主複製（例如，具有細菌複製起點的細菌載體和游離型哺乳動物載體）。可以將其他載體（例如非游離型哺乳動物載體）在引入宿主細胞後整合到宿主細胞的基因組中，從而與宿主基因組一起複製。另外，某些載體能夠指導它們可操作地連接的編碼序列的表現。這樣的載體在本文中稱為「表現載體」。
如本文所用，術語「可操作地連接」係指側翼序列的排列，其中側翼序列被配置或裝配以進行期望的功能。因此，可操作地連接到編碼序列的側翼序列可以能夠影響編碼序列的複製、轉錄和/或翻譯。編碼序列可操作地連接到啟動子，例如，其中啟動子能夠指導該編碼序列的轉錄。側翼序列不需要與被認為是可操作地連接的編碼序列鄰接，只要它正常工作即可。
如本文所用，術語「宿主細胞」係指已引入表現載體的細胞。「宿主細胞」旨在不僅指特定的受試細胞，而且指這樣的細胞的後代。因為由於突變或環境影響，在隨後的世代中可能發生某些修飾，所以這樣的後代實際上可能與親本細胞不同，但這樣的細胞仍包括在如本文所用的術語「宿主細胞」的範圍內。多種宿主細胞表現系統可用於表現本揭露的融合蛋白，包括細菌、酵母、桿狀病毒和哺乳動物表現系統（以及噬菌體展示表現系統）。
如本文所用，術語「患者」和「受試者」包括人和動物受試者。
如本文所用，術語「藥物組成物」或「治療組成物」係指當投與於患者時能夠誘導期望的治療效果的化合物或組成物。
如本文所用，術語「藥學上可接受的載劑」或「生理學上可接受的載劑」係指適合完成或增強本揭露的融合蛋白的遞送的一或多種配製物材料。
如本文所用，術語「藥學上可接受的鹽」代表那些適合用於治療人類而沒有不當毒性的鹽。藥學上可接受的鹽係本領域已知的（Berge, S.等人, J. Pharm. Sci.[藥物科學雜誌], 66:1-19, 1977； Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use[藥用鹽：特性、選擇和使用], (編輯P.H. Stahl和C.G. Wermuth), Wiley-VCH出版社, 2008）。該等鹽可以例如在本文所述之化合物的最終分離和純化過程中原位製備，或者藉由使游離鹼基團與合適的有機酸反應而單獨地製備。代表性的酸加成鹽包括但不限於乙酸鹽、己二酸鹽、藻酸鹽、抗壞血酸鹽、天冬胺酸鹽、苯磺酸鹽、苯甲酸鹽、硫酸氫鹽、硼酸鹽、丁酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、檸檬酸鹽、環戊烷丙酸鹽、二葡糖酸鹽、十二烷基硫酸鹽、乙烷磺酸鹽、延胡索酸鹽、葡庚糖酸鹽、甘油磷酸鹽、半硫酸鹽、庚酸酯、己酸鹽、氫溴酸鹽、鹽酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基-乙烷磺酸鹽、乳糖酸鹽、乳酸鹽、月桂酸鹽、月桂基硫酸鹽、蘋果酸鹽、順丁烯二酸鹽、丙二酸鹽、甲磺酸鹽、2-萘磺酸鹽、菸鹼酸鹽、硝酸鹽、油酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽、雙羥萘酸鹽、果膠酸鹽、過硫酸鹽、3-苯基丙酸鹽、磷酸鹽、苦味酸鹽、特戊酸鹽、丙酸鹽、硬脂酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、甲苯磺酸鹽、十一酸鹽、戊酸鹽等。代表性的鹼金屬或鹼土金屬鹽包括但不限於鈉、鋰、鉀、鈣、鎂等，以及無毒的銨、四級銨和胺陽離子，包括但不限於銨、四甲基銨、四乙基銨、甲胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺、乙胺、L-α-磷脂醯乙醇胺、雙(2-乙基己基)胺、大豆卵磷脂等。代表性的胺基酸鹽包括離胺酸、精胺酸、甘胺酸、組胺酸等。熟悉該項技術者將認識到，任何提及的藥物化合物包括在其範圍內所指示的藥物化合物的藥學上可接受的鹽。
如本文所用，術語「重組人抗體」包括藉由例如以下重組手段製備、表現、產生或分離的所有人抗體：(a) 從針對人免疫球蛋白基因轉基因或轉染色體的動物（例如，小鼠）或由其製備的融合瘤中分離的抗體；(b) 從轉化以表現抗體的宿主細胞中（例如，從轉染瘤中）分離的抗體；(c) 從重組的組合人抗體文庫中分離的抗體；以及 (d) 藉由任何其他手段（涉及將人免疫球蛋白基因序列剪接到其他DNA序列）製備、表現、產生或分離的抗體。這樣的重組人抗體包括利用由種系基因編碼的特定人種系免疫球蛋白序列的可變區和恒定區，但也可以包括隨後發生（例如在抗體成熟期間）的重排和突變。可變區含有抗原結合結構域，該結構域由各種基因編碼，該等基因重排以形成針對外來抗原的特異性抗體（Lonberg, N., Nat. Biotechnol.[自然生物技術], 23:1117-25, 2005）。除了重排之外，可變區可以藉由多個單個胺基酸變化進一步修飾（稱為體細胞突變或超突變）以增加抗體對外來抗原的親和力。恒定區將隨著對抗原的進一步反應而改變（即同種型轉換）。因此，響應於抗原的編碼輕鏈和重鏈免疫球蛋白多肽的重排和體細胞突變的核酸分子可能與原始核酸分子不具有序列同一性，而是將基本相同或相似（即，具有至少80%的同一性）。
如本文所用，術語「治療（treatment或treat）」係指治療性治療和預防性（prophylactic或preventative）措施兩者。需要治療的那些包括患有疾病或病症的那些，以及處於患有疾病或病症風險的那些，或者其中需要預防疾病或病症的那些。
如本文所用，例如，本文所述之融合蛋白的「治療有效」量係指足以產生期望的治療結果的量或劑量。治療有效量係投與時導致疾病症狀的嚴重程度（例如，疾病無症狀期的頻率和持續時間的增加或預防由於疾病折磨而導致的損傷或殘疾）降低的量或足以在一段時間內抑制與所治療的病症相關的一或多個臨床定義的病理過程的量。治療有效量可以根據與所治療患者和障礙的嚴重程度相關的各種因素和條件而變化。
本揭露部分基於藥物組成物的優化，該等藥物組成物允許融合蛋白以高濃度存在，這在用於皮下投與的組成物的開發中係期望的。特別需要包含生物分子（例如，酶、抗體、VHH抗體、雙特異性VHH抗體和雙特異性VHH抗體片段）的藥物組成物的高濃度配製物。本文所述之藥物組成物包括融合蛋白（例如，VHH雙特異性抗體，其包含藉由柔性連接子連接的來自兩種不同駱駝科抗體的可變結構域）、聚山梨醇酯、和緩沖劑。該等配製物已經針對黏度和穩定性進行了優化，使得融合蛋白以至少150 mg/mL的濃度存在。
藥物組成物
本文所述之融合蛋白可以摻入到適合於向受試者投與的藥物組成物中。典型地，藥物組成物包括融合蛋白以及一或多種藥學上可接受的載劑或賦形劑。
本文所述之藥物組成物包括以至少150 mg/mL的濃度存在的融合蛋白。例如，藥物組成物中的融合蛋白的濃度可以在150 mg/mL與200 mg/mL之間（例如，在150 mg/mL與190 mg/mL、150 mg/mL與180 mg/mL、150 mg/mL與170 mg/mL、150 mg/mL與160 mg/mL、160 mg/mL與200 mg/mL、170 mg/mL與200 mg/mL、180 mg/mL與200 mg/mL、或190 mg/mL與200 mg/mL之間）。在一些實施方式中，融合蛋白的濃度在170 mg/mL與200 mg/mL之間（例如，170 mg/mL、171 mg/mL、172 mg/mL、173 mg/mL、174 mg/mL、175 mg/mL、176 mg/mL、177 mg/mL、178 mg/mL、179 mg/mL、180 mg/mL、181 mg/mL、182 mg/mL、183 mg/mL、184 mg/mL、185 mg/mL、186 mg/mL、187 mg/mL、188 mg/mL、189 mg/mL、190 mg/mL、191 mg/mL、192 mg/mL、193 mg/mL、194 mg/mL、195 mg/mL、196 mg/mL、197 mg/mL、198 mg/mL、199 mg/mL、或200 mg/mL）。在一些實施方式中，融合蛋白的濃度係約190 mg/mL。在其他實施方式中，融合蛋白的濃度係約150 mg/mL。本文所述之方法和組成物可以允許更高的濃度，例如，高達250 mg/mL和更高。
本文所述之藥物組成物可以包括界面活性劑。藥物組成物可以具有濃度在0.01%（w/v）與1.5%（w/v）之間（例如，在0.01%（w/v）與0.4%（w/v）、0.01%（w/v）與0.3%（w/v）、0.01%（w/v）與0.2%（w/v）、0.01%（w/v）與0.1（w/v）、0.01%（w/v）與0.05%（w/v）、0.05%（w/v）與0.5%（w/v）、0.1%（w/v）與0.5%（w/v）、0.2%（w/v）與0.5%（w/v）、0.3%（w/v）與0.5%（w/v）、或0.4%（w/v）與0.5%（w/v）之間）的界面活性劑。在一些實施方式中，界面活性劑的濃度在0.01%（w/v）與1%（w/v）之間（例如，在0.01%（w/v）與0.9%（w/v）、0.01%（w/v）與0.5%（w/v）、0.01%（w/v）與0.1%（w/v）、0.01%（w/v）與0.05%（w/v）、0.05%（w/v）與1%（w/v）、0.1（w/v）與0.1%（w/v）、或0.5%與1%（w/v）之間）。在一些實施方式中，界面活性劑的濃度在0.01%（w/v）與0.1%（w/v）之間（例如，0.01%（w/v）、0.02%（w/v）、0.03%（w/v）、0.04%（w/v）、0.05%（w/v）、0.06%（w/v）、0.07%（w/v）、0.08%（w/v）、0.09%（w/v）、或0.1%（w/v））。在某些實施方式中，界面活性劑的濃度係約0.05%（w/v）。在其他實施方式中，界面活性劑的濃度係約0.1%（w/v）。界面活性劑可為熟悉該項技術者已知的任何界面活性劑。例如，本文所述之藥物組成物可以包括聚山梨醇酯、TRITON® X-100、毛地黃皂苷、皂苷、n-十二烷基-β-D-麥芽糖苷、或其任何組合。在一些實施方式中，聚山梨醇酯可為聚山梨醇酯80（PS80）或聚山梨醇酯20。
本文所述之藥物組成物包括一或多種緩衝劑。緩衝劑可以係本領域已知的任何緩衝劑。例如，緩衝劑可為乙酸鹽、琥珀酸鹽、組胺酸、磷酸鹽、或其組合。緩衝劑可以以允許緩衝藥物組成物的任何濃度存在。在一些實施方式中，緩衝劑具有在約10 mM與200 mM之間（例如，在10 mM與150 mM、10 mM與100 mM、10 mM與50 mM、50 mM與200 mM、100 mM與200 mM、或150 mM與200 mM之間）的濃度。例如，緩衝劑具有在約100 mM與200 mM之間（例如，100 mM與180 mM、100 mM與160 mM、100 mM與140 mM、100 mM與120 mM、120 mM與200 mM、140 mM與200 mM、160 mM與200 mM、或180 mM與200 mM）的濃度。
在一些實施方式中，藥物組成物包括乙酸鹽緩衝劑。例如，乙酸鹽係乙酸鈉。在一些實施方式中，乙酸鈉以在10 mM與150 mM之間（例如，在10 mM與140 mM、10 mM與130 mM、10 mM與120 mM、10 mM與100 mM、10 mM與75 mM、10 mM與50 mM、20 mM與150 mM、30 mM與150 mM、75 mM與150 mM、100 mM與150 mM或40 mM與150 mM之間）的濃度存在於藥物組成物中。在一些實施方式中，乙酸鈉的濃度在約15 mM與100 mM之間（例如，在約15 mM與80 mM、15 mM與60 mM、15 mM與40 mM、15 mM與20 mM、20 mM與100 mM、40 mM與100 mM、60 mM與100 mM、或80 mM與100 mM之間）。在一些實施方式中，乙酸鈉的濃度係約50 mM。
在一些實施方式中，藥物組成物包括胺基酸穩定劑，例如，脯胺酸或精胺酸。在一些實施方式中，胺基酸穩定劑（例如，脯胺酸）以在100 mM與200 mM之間（例如，在100 mM與190 mM、100 mM與180 mM、100 mM與170 mM、140 mM與200 mM、150 mM與200 mM、或160 mM與200 mM、110 mM與190 mM、120 mM與180 mM、130 mM與170 mM、140 mM與180 mM、150 mM與170 mM或160 mM與170 mM之間）的濃度存在於藥物組成物中。在特別的實施方式中，脯胺酸的濃度係約165 mM。在一些實施方式中，精胺酸係精胺酸乙酸鹽、精胺酸-琥珀酸鹽、或精胺酸鹽酸鹽。
本文所述之藥物組成物可以包括張度劑。張度劑可以係本領域已知的任何張度劑。例如，張度劑可為糖、胺基酸、或鹽。糖可為蔗糖、葡萄糖、甘油、或海藻糖。在一些實施方式中，糖係蔗糖。蔗糖可以具有在1%（w/v）與約15%（w/v）之間（例如，1%（w/v）、2%（w/v）、3%（w/v）、4%（w/v）、5%（w/v）、6%（w/v）、7%（w/v）、8%（w/v）、9%（w/v）、10%（w/v）、11%（w/v）、12%（w/v）、13%（w/v）、14%（w/v）、或15%（w/v））的濃度。例如，蔗糖可以具有在約4%（w/v）與約9%（w/v）之間（例如，4%（w/v）、5%（w/v）、6%（w/v）、7%（w/v）、8%（w/v）、9%（w/v）、或10%（w/v））的濃度。在一些實施方式中，蔗糖的濃度係約4%（w/v）。在一些實施方式中，蔗糖以在8%（w/v）與9%（w/v）之間（例如，8.1%（w/v）、8.2%（w/v）、8.3%（w/v）、8.4%（w/v）、8.5%（w/v）、8.6%（w/v）、8.7%（w/v）、8.8%（w/v）、8.9%（w/v）、或9%（w/v））的濃度存在。
藥物組成物的pH可以在pH 3與pH 8之間（例如，pH 3、pH 4、pH 5、pH 6、pH 7、或pH 8）。在一些實施方式中，藥物組成物具有在pH 4與pH 7之間（例如，pH 4、pH 4.5、pH 5、pH 5.5、pH 6、pH 6.5、或pH 7）的pH。例如，藥物組成物的pH可為pH 5.4。
藥物組成物可以配製成使得藥物組成物在20°C下具有＜ 17 cP的黏度。在一些實施方式中，藥物組成物可以配製成使得藥物組成物在20°C下具有＜ 12 cP的黏度。例如，黏度在20°C下可為10或11 cP。在一些實施方式中，藥物組成物在20°C下具有在6 cP至35 cP之間（例如，6 cP、7 cP、8 cP、9 cP、10 cP、11 cP、12 cP、13 cP、14 cP、15 cP、16 cP、17 cP、18 cP、19 cP、20 cP、21 cP、22 cP、23 cP、24 cP、25 cP、26 cP、27 cP、28 cP、29 cP、30 cP、31 cP、32 cP、33 cP、34 cP、或35 cP）的黏度。
在一些實施方式中，藥物組成物可以配製成使得藥物組成物經過一個月在25°C下按月計具有百分比在0.05%（w/v）與0.5%（w/v）（例如，0.05%（w/v）與0.4%（w/v）、0.05%（w/v）與0.3%（w/v）、0.05%（w/v）與0.2%（w/v）、0.05%（w/v）與0.1%（w/v）、0.1%（w/v）與0.5%（w/v）、0.2%（w/v）與0.5%（w/v）、0.3%（w/v）與0.5%（w/v）、或0.4%（w/v）與0.5%（w/v））之間的高分子量化合物。在一些實施方式中，藥物組成物經過一個月在25°C下按月計具有百分比約0.2%（w/v）或範圍在0.1與0.2之間或在0.1與0.3之間的高分子量化合物。藥物組成物經過一個月在37°C下按月計可以具有百分比在約1%（w/v）與10%（w/v）之間（例如，1%（w/v）、2%（w/v）、3%（w/v）、4%（w/v）、5%（w/v）、6%（w/v）、7%（w/v）、8%（w/v）、9%（w/v）、或10%（w/v）、或在4.2%（w/v）與5.8%（w/v）之間、或在約3.7%（w/v）與約5.5%（w/v）之間）的高分子量化合物。例如，藥物組成物經過一個月在37°C下按月計可以具有百分比約5%（w/v）或約4.6%（w/v）的高分子量化合物。
藥物組成物在37°C下儲存時在一個月後可以具有相對於在400 nm處的光密度（OD）的在約1與10之間（例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9和10）的濁度。例如，藥物組成物在37°C下按月計可以具有約3.0或4.0的濁度，如藉由OD 400測量的，或者藥物組成物在37°C下按月計可以具有在1.4與4.5之間或在2.3與5.8之間的濁度，如藉由OD 400測量的。
在一些實施方式中，藥物組成物具有在100 Osm/kg H 2O與500 Osm/kg H 2O之間（例如，在100 Osm/kg H 2O與400 Osm/kg H 2O、100 Osm/kg H 2O與300 Osm/kg H 2O、100 Osm/kg H 2O與200 Osm/kg H 2O、200 Osm/kg H 2O與500 Osm/kg H 2O、300 Osm/kg H 2O與500 Osm/kg H 2O、或400 Osm/kg H 2O與500 Osm/kg H 2O之間）的滲透壓。在一些實施方式中，藥物組成物具有約245 Osm/kg H 2O的滲透壓。
工程化融合蛋白
本文描述了融合蛋白及其配製物。在一些實施方式中，融合蛋白係雙特異性抗體，其中將兩個抗原結合多肽（例如，藉由連接子如連接子）連接。這樣的雙特異性構建體可以包括藉由連接子連接到第二多肽（例如，第二單價抗體或VHH可變結構域）的抗備解素結合多肽（例如，單價VHH抗體、或VHH可變結構域）。第二多肽可以例如增強雙特異性構建體的體內穩定性，靶向不同的治療靶標，或將兩種抗原放置在非常接近的位置（例如，從而將第一結合抗原靶向第二結合抗原）。在一些實施方式中，第二多肽係白蛋白結合分子、白蛋白結合肽、或抗白蛋白抗體（例如，單價抗體）、或其修飾的形式（例如，與人血清白蛋白特異性結合的美洲駝抗體的可變結構域）。除了本揭露之外，白蛋白結合肽係本領域已知的（WO 2007/106120（參見表1至9）；Dennis, M.等人, J. Biol. Chem.[生物化學雜誌], 277:35035-43, 2002；將其揭露內容藉由引用特此併入）。
本文所述之抗體可以抑制例如備解素與C3b、C3Bb、和C3bBb的結合。備解素的抑制導致可替代的途徑補體激活減少，表明對於患有可替代的途徑失調疾病的患者的治療益處，其中可替代的途徑係過度激活的。
本文所述之抗備解素抗體可以藉由使用全長備解素、備解素多肽，和/或使用攜帶抗原備解素表位的肽，例如，備解素多肽的片段來產生。備解素肽和多肽可以分離並用於生成抗體，如天然多肽，重組或合成重組多肽。所有可用於產生抗備解素抗體的抗原都可用於生成單價抗體。合適的單價抗體形式和產生它們的方法係本領域已知的（WO 2007/048037和WO 2007/059782，將其全部內容藉由引用併入本文）。
抗備解素抗體可為單株抗體或衍生自單株抗體。針對所選抗原的合適的單株抗體可以藉由已知的技術（「Monoclonal Antibodies: A manual of techniques [單株抗體：技術手冊],」 Zola (CRC出版社, 1988)；「Monoclonal Hybridoma Antibodies: Techniques and Applications [單株融合瘤抗體：技術和應用],」 Hurrell (CRC出版社, 1982)，將其全部內容藉由引用併入本文）來製備。
在其他實施方式中，抗體可為單結構域抗體，例如VHH。這樣的抗體天然存在於駱駝科和鯊魚中（Saerens, D.等人, Curr. Opin. Pharmacol.[藥理學研究現狀], 8:600-8, 2008）。駱駝科抗體描述於例如，美國專利案號5,759,808；5,800,988；5,840,526；5,874,541；6,005,079；和6,015,695中，將其每一個的全部內容藉由引用併入本文。選殖和分離的VHH結構域係穩定的多肽，其特徵在於原始重鏈抗體的全部抗原結合能力。具有獨特的結構和功能特性的VHH結構域將常規抗體的優點（高靶向特異性、高靶向親和力和低固有毒性）與小分子藥物的重要特徵（抑制酶並且進入受體裂隙的能力）相結合。此外，它們係穩定的，有可能藉由注射以外的手段投與，更容易製造，並且可以人源化（美國專利案號5,840,526；美國專利案號5,874,541；美國專利案號6,005,079、美國專利案號6,765,087；EP 1589107；WO 97/34103；WO 97/49805；美國專利案號5,800,988；美國專利案號5,874,541和美國專利案號6,015,695，將其每一個的全部內容藉由引用併入本文）。
本文所述之雙特異性抗體的抗備解素組分可以包含CDR序列，該等序列包括具有與GRISSIIHMA（SEQ ID NO: 2）具有至少90%同一性的胺基酸序列的CDR-H1；具有與RVGTTVYADSVKG（SEQ ID NO: 3）具有至少90%（例如，至少95%、96%、97%、98%、99%、或100%）同一性的胺基酸序列的CDR-H2；以及具有與LQYEKHGGADY（SEQ ID NO: 4）具有至少90%（例如，至少95%、96%、97%、98%、99%、或100%）同一性的胺基酸序列的CDR-H3。本文所述之雙特異性抗體可以包括具有GRISSIIHMA（SEQ ID NO: 2）的胺基酸序列的CDR-H1；具有RVGTTVYADSVKG（SEQ ID NO: 3）的胺基酸序列的CDR-H2；以及具有LQYEKHGGADY（SEQ ID NO: 4）的胺基酸序列的CDR-H3。
此外，本文所述之工程化融合蛋白可以特異性結合血清白蛋白，使得當工程化蛋白與血清白蛋白分子結合或以其他方式與血清白蛋白分子相關時，與血清白蛋白分子與FcRn的結合相比，當多肽與血清白蛋白分子不結合時，不顯著降低或抑制血清白蛋白分子與FcRn的結合。在此實施方式中，「不顯著降低或抑制」意指血清白蛋白與FcRn的結合親和力（如使用合適的測定（例如像SPR）所測量的）降低不超過50%、或超過30%、或超過10%、或超過5%、或根本沒有降低。在此實施方式中，「不顯著降低或抑制」還意指血清白蛋白分子的半衰期沒有顯著降低。特別地，工程化多肽可以與血清白蛋白上的胺基酸殘基結合，該等胺基酸殘基不參與血清白蛋白與FcRn的結合。更特別地，工程化多肽可以與不構成血清白蛋白的結構域III的部分的胺基酸殘基或血清白蛋白序列結合，例如，能夠與構成結構域I和/或結構域II的部分的胺基酸殘基或血清白蛋白序列結合的工程化多肽。
本文所述之雙特異性抗體的抗白蛋白組分可以包含CDR序列，該等序列包括具有與GRPVSNYA（SEQ ID NO: 5）具有至少87%同一性的胺基酸序列的CDR-H1；具有與INWQKTAT（SEQ ID NO: 6）具有至少87%同一性的胺基酸序列的CDR-H2；以及具有與AAVFRVVAPKTQYDYDY（SEQ ID NO: 7）具有至少90%（例如，至少95%、96%、97%、98%、99%、或100%）同一性的胺基酸序列的CDR-H3。本文所述之雙特異性抗體可以包括具有GRPVSNYA（SEQ ID NO: 5）的胺基酸序列的CDR-H1；具有INWQKTAT（SEQ ID NO: 6）的胺基酸序列的CDR-H2；以及具有AAVFRVVAPKTQYDYDY（SEQ ID NO: 7）的胺基酸序列的CDR-H3。
在一些實施方式中，融合蛋白包括抗備解素結合部分以及抗白蛋白結合部分。在一些實施方式中，其中抗備解素結合結構域具有暴露的N-末端，N-末端麩醯胺酸可以轉化為環化焦麩胺酸。這樣的修飾係本領域已知的（參見，例如，Liu等人, The Journal of Biological Chemistry [生物化學雜誌] 286(13:11211-11217, 2011）。編碼抗備解素結合部分的部分可以與以下的胺基酸序列具有至少90%（例如，95%、96%、97%、98%、99%、或100%）同一性： QVQLVESGGG LVKPGGSLRL SCAASGRPVS NYAAAWFRQA PGKEREFVSA INWQKTATYA DSVKGRFTIS RDNAKNSLYL QMNSLRAEDT AVYYCAAVFR VVAPKTQYDY DYWGQGTLVT VSS（SEQ ID NO: 55）。
在一些實施方式中，融合蛋白的抗備解素結合部分包括SEQ ID NO: 55。編碼抗白蛋白結合部分的部分可以與以下的胺基酸序列具有至少90%（例如，95%、96%、97%、98%、99%、或100%）同一性： VQ LLESGGGLVQ PGGSLRLSCA ASGRISSIIH MAWFRQAPGK ERELVSEISR VGTTVYADSV KGRFTISRDN SKNTLYLQMN SLKPEDTAVY YCNALQYEKH GGADYWGQGT LVTVSS（SEQ ID NO: 56）。
在一些實施方式中，融合蛋白的抗備解素結合部分包括SEQ ID NO: 56。
在一些實施方式中，融合蛋白由與以下的核酸序列具有至少80%（例如，至少81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%）同一性的核酸序列來編碼： CAGGTGCAGCTGGTGGAAAGCGGCGGAGGCCTGGTCAAGCCTGGCGGCAGCCTGAGACTGAGCTGTGCCGCCAGCGGCAGACCCGTGTCCAATTACGCCGCTGCCTGGTTCCGGCAGGCCCCTGGCAAAGAGAGAGAGTTCGTCAGCGCCATCAACTGGCAGAAAACCGCCACCTACGCCGACAGCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCAGCCGGGACAACGCCAAGAACAGCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGCGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCGCTGTGTTCCGGGTGGTGGCCCCCAAGACCCAGTACGACTACGATTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTCACCGTGTCATCTGGCGGAGGGGGAGAAGGCGGGGGAGGGGAAGGGGGAGGCGGCGAAGTCCAGCTGCTGGAATCTGGGGGCGGACTGGTGCAGCCAGGCGGCTCCCTCAGACTGTCTTGCGCCGCCTCCGGCCGGATCAGCAGCATCATCCACATGGCCTGGTTTAGACAGGCTCCCGGAAAAGAACGCGAGCTGGTGTCCGAGATCTCCAGAGTGGGCACCACCGTGTATGCCGACTCCGTGAAAGGCAGATTCACAATCTCCCGCGACAACAGCAAGAATACTCTGTATCTCCAGATGAATAGCCTGAAGCCCGAAGATACAGCCGTCTACTATTGCAACGCCCTGCAGTACGAGAAGCACGGCGGAGCCGACTATTGGGGACAGGGAACACTCGTGACAGTGTCTAGCTGATGA（SEQ ID NO: 57）。
在一些實施方式中，融合蛋白由與SEQ ID NO: 57的核酸序列具有至少90%（例如，至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%）同一性的核酸序列編碼。在一些實施方式中，融合蛋白由SEQ ID NO: 57的核酸序列編碼。
在一些實施方式中，融合蛋白具有與以下胺基酸序列具有至少90%（例如，91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%）同一性的胺基酸序列： QVQLVESGGG LVKPGGSLRL SCAASGRPVS NYAAAWFRQA PGKEREFVSA INWQKTATYA DSVKGRFTIS RDNAKNSLYL QMNSLRAEDT AVYYCAAVFR VVAPKTQYDY DYWGQGTLVT VSSGGGGEGGGGEGGGGEVQ LLESGGGLVQ PGGSLRLSCA ASGRISSIIH MAWFRQAPGK ERELVSEISR VGTTVYADSV KGRFTISRDN SKNTLYLQMN SLKPEDTAVY YCNALQYEKH GGADYWGQGT LVTVSS（SEQ ID NO: 1）。
在一些實施方式中，融合蛋白具有與SEQ ID NO: 1具有至少95%（例如，95%、96%、97%、98%、99%、或100%）同一性的胺基酸序列。在一些實施方式中，融合蛋白具有SEQ ID NO: 1的胺基酸序列。在一些實施方式中，融合蛋白具有SEQ ID NO: 1的胺基酸序列，該序列具有SEQ ID NO: 1的序列的N-末端麩醯胺酸向焦麩胺酸的轉化。
在一些實施方式中，融合蛋白的備解素結合結構域的C-末端殘基可以直接或經由連接子融合到人血清白蛋白結合結構域的N-末端殘基。在其他實施方式中，融合蛋白的補體組分人血清白蛋白結合結構域的C-末端殘基可以直接或經由肽融合到備解素結合結構域的N-末端殘基。本文所述之融合蛋白可以包括一或多個經修飾的胺基酸殘基。例如，SEQ ID NO: 1的胺基酸序列可以包括一或多個胺基酸修飾。本文所述之胺基酸修飾包括本領域已知的所有胺基酸修飾（參見，例如，Liu等人, The Journal of Biological Chemistry [生物化學雜誌] 286(13:11211-11217, 2011以及Manning等人, Pharmaceutical Research [藥物研究] 27(4):544-575, 2010）。在所有情況下，將包括例如在融合多肽的加工或純化過程中特定胺基酸的已知轉化，例如，暴露的N-末端麩醯胺酸向焦麩胺酸的轉化。
連接子
如本文所述，連接子用於描述多肽或蛋白質結構域和/或相關的非蛋白質部分之間的鍵或連接。在一些實施方式中，連接子係至少兩個多肽構建體之間的鍵或連接，例如，使得兩個多肽構建體以串聯系列（例如，與第二多肽或單價抗體連接的單價抗體）相互連接。連接子可以將一個抗體構建體的N-末端或C-末端附接到第二多肽構建體的N-末端或C-末端。
本文描述了包含特異性結合白蛋白和備解素的工程化蛋白的融合蛋白，其中該等工程化蛋白直接融合或經由一或多個合適的連接子或間隔子連接。肽連接子可以例如在序列水平上在融合蛋白的工程化蛋白之間的過渡處插入或包括。連接子中胺基酸殘基的同一性和序列可以根據期望的二級結構而變化。
連接子可為簡單的共價鍵，例如肽鍵、合成聚合物（例如聚乙二醇（PEG）聚合物）或由化學反應（例如化學軛合）產生的任何種類的鍵。在連接子係肽鍵的情況下，一個蛋白質結構域C-末端處的羧酸基團可以與在縮合反應中的另一個蛋白質結構域的N-末端的胺基基團反應以形成肽鍵。特別地，肽鍵可以通過本領域熟知的常規有機化學反應由合成手段形成，或者藉由從宿主細胞自然產生而形成，其中編碼以串聯系列的兩種蛋白質的DNA序列的多核苷酸序列（例如，兩種抗體構建體）可以在宿主細胞中直接轉錄並藉由必要的分子機制（例如，DNA聚合酶和核糖體）翻譯成編碼兩種蛋白質的連續多肽。
在連接子係合成聚合物（例如PEG聚合物）的情況下，聚合物可以在兩端用反應性化學官能基來官能化，以與在兩種蛋白質的連接端處的末端胺基酸反應。
在連接子（上述肽鍵除外）由化學反應製成的情況下，化學官能基（例如胺、羧酸、酯、疊氮化物或本領域常用的其他官能基）可以分別合成地附接到一種蛋白質的C-末端和另一種蛋白質的N-末端。然後，兩個官能基可以通過合成化學手段進行反應以形成化學鍵，從而將兩種蛋白質連接在一起。這樣的化學軛合程序對於熟悉該項技術者來說是常規的。
如本文所述，兩個肽構建體之間的連接子可為包括1-200（例如，1-4、1-10、1-20、1-30、1-40、2-10、2-12、2-16、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、40、50、60、70、80、90、100、150、200）個胺基酸的胺基酸連接子。合適的肽連接子係本領域已知的，並且包括例如含有柔性胺基酸殘基（例如甘胺酸和絲胺酸）的肽連接子。
甘胺酸、絲胺酸和丙胺酸可用於具有最大的柔性的連接子。任何胺基酸殘基都可以被認為是與一或多個其他胺基酸殘基組合的連接子，其可以與第一胺基酸殘基相同或不同，以必要時根據期望的特性構建更大的肽連接子。在其他實施方式中，連接子係GGGGEGGGGEGGGGE（SEQ ID NO:10）。在其他實施方式中，連接子係GGGGSGGGGSGGGGS（SEQ ID NO:11）。適合用於產生本文所述之融合蛋白的另外的肽連接子包括，例如，G 4S（SEQ ID NO:12）、(G 4S) 2（SEQ ID NO:13）、(G 4S) 3（SEQ ID NO:14）、(G 4S) 4（SEQ ID NO:15）、(G 4S) 5（SEQ ID NO:16）、(G 4S) 6（SEQ ID NO:17）、(EAAAK) 3（SEQ ID NO:18）、PAPAP（SEQ ID NO:19）、G 4SPAPAP（SEQ ID NO:20）、PAPAPG 4S（SEQ ID NO:21）、(GGGDS) 2（SEQ ID NO:22）、(GGGES) 2（SEQ ID NO:23）、GGGDSGGGGS（SEQ ID NO:24）、GGGASGGGGS（SEQ ID NO:25）、GGGESGGGGS（SEQ ID NO:26）、ASTKGP（SEQ ID NO:27）、ASTKGPSVFPLAP（SEQ ID NO:28）、G 3P（SEQ ID NO:29）、G 7P（SEQ ID NO:30）、PAPNLLGGP（SEQ ID NO:31）、G 6（SEQ ID NO:32）、G 12（SEQ ID NO:33）、APELPGGP（SEQ ID NO:34）、SEPQPQPG（SEQ ID NO:35）、(G 3S 2) 3（SEQ ID NO:36）、GGGGGGGGGSGGGS（SEQ ID NO:37）、GGGGSGGGGGGGGGS（SEQ ID NO:38）、(GGSSS) 3（SEQ ID NO:39）、(GS 4) 3（SEQ ID NO:40）、G 4A(G 4S) 2（SEQ ID NO:41）、G 4SG 4AG 4S（SEQ ID NO:42）、G 3AS(G 4S) 2（SEQ ID NO:43）、G 4SG 3ASG 4S（SEQ ID NO:44）、G 4SAG 3SG 4S（SEQ ID NO:45）、(G 4S) 2AG 3S（SEQ ID NO:46）、G 4SAG 3SAG 3S（SEQ ID NO:47）、G 4D(G 4S) 2（SEQ ID NO:48）、G 4SG 4DG 4S（SEQ ID NO:49）、(G 4D) 2G 4S（SEQ ID NO:50）、G 4E(G 4S) 2（SEQ ID NO:51）、G 4SG 4EG 4S（SEQ ID NO:52）、(G 4E) 2G 4S（SEQ ID NO:53）、和GGGGAGGGGAGGGGS（SEQ ID NO: 54）。熟悉該項技術者可以選擇連接子，例如，以減少或消除翻譯後修飾，例如糖基化，例如木糖基化。在某些實施方式中，融合蛋白包含至少兩個sdAb、Dab、VHH抗體、VHH抗體片段或其組合，其中至少一個sdAb、Dab、VHH抗體或VHH抗體片段係針對白蛋白的，並且sdAb、Dab、VHH抗體或VHH抗體片段中的一個係針對備解素的，因此所得融合蛋白係多價或多特異性的。結合結構域或部分可為針對例如，HSA、石蟹獼猴血清白蛋白、人備解素和/或石蟹獼猴備解素的。
配製高濃度組成物孩子方法
本文描述了開發用於皮下投與的融合蛋白的高濃度配製物之方法。開發用於皮下投與的高濃度配製物具有幾個挑戰，包括需要優化黏度、穩定性和遞送。實驗設計（DOE）方法可用於開發用於向受試者皮下投與的融合蛋白的高濃度配製物。本文所述之方法旨在選擇潛在的黏度降低賦形劑，同時對藥物組成物的穩定性具有最小的負面影響。
配製融合蛋白的高濃度配製物可以包括進行賦形劑篩選的第一步驟。賦形劑篩選可以包括測量包括融合蛋白和一或多種賦形劑的溶液在一段時間內的穩定性和黏度。在第二步驟中，該方法在賦形劑篩選之後可以包括測量由於改變pH、乙酸鹽濃度和蔗糖濃度而導致的在溶液中的高分子量化合物的黏度、濁度和形成速率。作為第三步驟，該方法可以包括由於改變融合蛋白的pH、蔗糖濃度、賦形劑、和濃度而導致的在溶液中的高分子量化合物的黏度、濁度、和形成速率。溶液的黏度評估可以作為第四步驟進行。配製物的黏度在一定的溫度範圍和一定的融合蛋白濃度範圍下進行測量。
在第二和第三步驟中，高分子量化合物的黏度、濁度和形成速率的測量可以每週進行一次，並且可以測量至少4週。
對於賦形劑篩選，一或多種賦形劑可以選自琥珀酸鹽、精胺酸、乙酸鹽、或其組合。一或多種賦形劑可為精胺酸。例如，精胺酸係精胺酸鹽酸鹽、精胺酸乙酸鹽、或精胺酸琥珀酸鹽。一或多種賦形劑可為琥珀酸鹽。在一些實施方式中，一或多種賦形劑係琥珀酸鹽和精胺酸鹽酸鹽。一或多種賦形劑可為乙酸鹽。在一些實施方式中，一或多種賦形劑係乙酸鹽和精胺酸鹽酸鹽。在一些實施方式中，一或多種賦形劑係乙酸鹽和精胺酸乙酸鹽。
在一些實施方式中，步驟二中所述之溶液具有在10 mM與200 mM之間（例如，在10 mM與150 mM、10 mM與100 mM、10 mM與50 mM、50 mM與200 mM、100 mM與200 mM、或150 mM與200 mM之間）的乙酸鹽的濃度。例如，溶液具有在15 mM與100 mM之間（例如，在15 mM與80 mM、15 mM與60 mM、15 mM與40 mM、15 mM與20 mM、20 mM與100 mM、40 mM與100 mM、60 mM與100 mM、或80 mM與100 mM之間）的乙酸鹽的濃度。
包括賦形劑篩選的第一步驟中的溶液還可為蔗糖。蔗糖在溶液中可以具有在1%（w/v）與10%（w/v）之間（例如，1%（w/v）、2%（w/v）、3%（w/v）、4%（w/v）、5%（w/v）、6%（w/v）、7%（w/v）、8%（w/v）、9%（w/v）、或10%（w/v））的濃度。在一些實施方式中，蔗糖具有約4%（w/v）的濃度。第二步驟中的溶液可以具有在1%（w/v）與20%（w/v）之間（例如，在1%（w/v）與15%（w/v）、1%（w/v）與10%（w/v）、1%（w/v）與5%（w/v）、5%（w/v）與20%（w/v）、10%（w/v）與20%（w/v）、或15%（w/v）與20%（w/v）之間）的蔗糖的濃度。例如，步驟二中所述之溶液可以具有在2%（w/v）與10%（w/v）之間（例如，2%（w/v）、3%（w/v）、4%（w/v）、5%（w/v）、6%（w/v）、7%（w/v）、8%（w/v）、9%（w/v）、或10%（w/v））的蔗糖的濃度。第三步驟可以具有蔗糖的濃度在0%（w/v）與10%（w/v）之間（例如，1%（w/v）、2%（w/v）、3%（w/v）、4%（w/v）、5%（w/v）、6%（w/v）、7%（w/v）、8%（w/v）、9%（w/v）、或10%（w/v））的溶液。例如，步驟三中的溶液可以具有在0%（w/v）與5%（w/v）之間（例如，1%（w/v）、2%（w/v）、3%（w/v）、4%（w/v）、或5%（w/v））的蔗糖的濃度。
第二步驟中的溶液的pH可以在4與7之間（例如，在4與6、4與5、5與7、或6與7之間的pH）。例如，溶液具有在4.5與6.0之間的pH（例如，在4.5與5.5、4.5與5、5與6、或5.5與6之間的pH）。第三步驟中的溶液的pH可以在5與6之間。
存在於高濃度配製物中的融合蛋白可以包括具有SEQ ID NO: 2-7的胺基酸序列的6個CDR。融合蛋白可以包括第一部分，該第一部分包含與SEQ ID NO: 55具有至少95%（例如，至少96%、97%、98%、99%、或100%）序列同一性的胺基酸序列。此外，融合蛋白可以包括第二部分，該第二部分包括與SEQ ID NO: 56具有至少95%（例如，至少96%、97%、98%、99%、或100%）序列同一性的胺基酸序列。在一些實施方式中，融合蛋白具有SEQ ID NO: 1的胺基酸序列、或其修飾。在一些實施方式中，修飾包括SEQ ID NO: 1的序列的N-末端麩醯胺酸向焦麩胺酸的轉化。
融合蛋白在第二步驟中所述之溶液中可以具有約150 mg/mL的濃度。融合蛋白在第二步驟中所述之溶液中可以具有約190 mg/mL的濃度。溶液在第二步驟中可以具有在約150 mg/mL與230 mg/mL（例如，150 mg/mL與200 mg/mL、150 mg/mL與175 mg/mL、175 mg/mL與230 mg/mL、200 mg/mL與230 mg/mL、或220 mg/mL與230 mg/mL）之間的融合蛋白濃度。在一些實施方式中，第三步驟中的溶液具有在約100 mg/mL與300 mg/mL之間（例如，在100 mg/mL與250 mg/mL、100 mg/mL與200 mg/mL、100 mg/mL與150 mg/mL、150 mg/mL與300 mg/mL、200 mg/mL與300 mg/mL、或250 mg/mL與300 mg/mL之間）的融合蛋白濃度。高濃度配製物中的融合蛋白可以以至少150 mg/mL的濃度存在。例如，賦形劑篩選中的融合蛋白可以以約200 mg/mL的濃度存在。
高濃度配製物在20°C下可以具有在5 cP與15 cP之間（例如，5 cP、6 cP、7 cP、8 cP、9 cP、10 cP、11 cP、12 cP、13 cP、14 cP、或15 cP）的黏度。例如，配製物在20°C下具有約10 cP或11 cP的黏度。配製物經過一個月在25°C下按月計可以具有百分比在0.05%（w/v）與0.5%（w/v）之間（例如，在0.05%（w/v）與0.4%（w/v）、0.05%與0.3%（w/v）、0.05%與0.2%（w/v）、0.05%（w/v）與0.1%（w/v）、0.1%（w/v）與0.5%（w/v）、0.2%（w/v）與0.5%（w/v）、0.3%（w/v）與0.5%（w/v）、或0.4%（w/v）與0.5%（w/v）之間）的高分子量化合物。例如，配製物經過一個月在25°C下按月計具有百分比約0.2%（w/v）的高分子量化合物。在一些實施方式中，配製物經過一個月在37°C下按月計具有百分比在約1%（w/v）與10%（w/v）之間（例如，1%（w/v）、2%（w/v）、3%（w/v）、4%（w/v）、5%（w/v）、6%（w/v）、7%（w/v）、8%（w/v）、9%（w/v）、或10%（w/v））的高分子量化合物。在一些實施方式中，配製物經過一個月在37°C下按月計具有百分比約5%（w/v）的高分子量化合物。在一些實施方式中，配製物在37°C下按月計具有在約1與10之間（例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10）的濁度，其中濁度測量為在400 nm處的光密度。在一些實施方式中，配製物在37°C下按月計具有約3或4的濁度。
治療之方法
本文所述之組成物可以用於治療需要這樣的治療的個體中的由可替代的補體途徑功能障礙介導的疾病或障礙之方法，該方法包括向該個體投與治療有效量的包括本文所述之融合蛋白的高濃度配製物以藉由抑制哺乳動物（例如，人）中的可替代的補體途徑激活來治療由可替代的補體途徑失調介導的疾病。在一些實施方式中，本文所述之藥物組成物可以用於治療或預防受試者中的疾病或病症之方法，其中該疾病係鐮狀細胞疾病。
本文所述之藥物組成物可以藉由本領域已知的多種方法投與，但是對於許多治療性應用，較佳的投與途徑/方式係靜脈內注射或輸注。多肽還可以藉由肌內或皮下注射投與。在一些實施方式中，本文所述之藥物組成物可以皮下投與於受試者。如熟悉該項技術者將理解的，投與途經和/或方式將根據期望的結果而變化。用於製備這樣的配製物的許多方法係熟悉該項技術者已知的（例如，Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems [持續和控制釋放藥物遞送系統], J.R.Robinson編輯，Marcel Dekker, Inc.[馬塞爾·德克爾公司], 紐約, 1978）。適用於控制釋放或延長釋放抗體（例如本文揭露的單價單結構域抗體）之方法係已知的（美國專利案號：6,306,406和6,346,274；美國專利申請案號：US 20020182254和US 20020051808，將其每一個的全部教導內容藉由引用併入本文）。
在一些實施方式中，使用預填充注射器投與本文所述之融合蛋白。在其他實施方式中，使用自動注射器裝置投與融合蛋白。例如，自動注射器裝置可以包括單個小瓶系統，例如用於溶液遞送的筆式注射器裝置。這樣的裝置可從例如以下製造商處商購：BD Pens、BD Autojector®、Humaject®、NovoPen®、B-D®Pen、AutoPen®、and OptiPen®、GenotropinPen®、Genotronorm Pen®、Humatro Pen®、Reco-Pen®、Roferon Pen®、Biojector®、Iject®、J-tip Needle-Free Injector®、DosePro®、Medi-Ject®，例如，如由以下製造或開發：貝迪公司（Becton Dickinson）（佛蘭克林湖，新澤西州）、Ypsomed公司（布格多夫，瑞士，www.ypsomed.com；Bioject，波特蘭，俄勒岡州；國家醫療產品（National Medical Products），韋斯頓醫藥公司（Weston Medical）（彼得伯勒，英國）、Medi-Ject公司（明尼阿波利斯，明尼蘇達州）、和Zogenix公司，埃默里維爾，加利福尼亞州。公認的包括雙小瓶系統的裝置包括筆式注射器系統，用於將凍乾藥物重組到用於遞送重組溶液（例如HumatroPen®）的筒中。在一個實施方式中，自動注射器係YpsoMate 2.25或YpsoMate 2.25 Pro （Ypsomed公司）一次性注射裝置。
套組
含有本文所述之融合蛋白的組成物可以在套組（kit）中提供，用於在疾病或病症中使用。套組可以進一步包括標籤或包裝插頁，其指導套組的用戶（例如具有疾病或病症的受試者或醫師）進行本文所述之方法。在一些實施方式中，套組包括具有標籤的容器和包括本文所述之融合蛋白的組成物，並且該標籤指示將該組成物投與於有需要的患者。套組可以視需要包括用於投與該組成物的注射器或其他裝置（例如，自動注射器、預填充注射器、或可穿戴裝置）。在其他實施方式中，套組包括單室或多室預填充注射器（例如，液體注射器和凍乾注射器）。在一些實施方式中，套組包括含有本文所述之組成物的筒，用於與醫療裝置（例如，自動注射器或可穿戴裝置）一起使用。 實例
提出以下實例係以向熟悉該項技術者提供如何使用、製備和評估本文所述之組成物和方法的描述，並且旨在純粹作為示例而不是旨在限制本揭露的範圍。
實例1.開發用於皮下投與的雙特異性抗體高濃度配製物的設計實驗策略的應用
皮下（SC）投與蛋白質治療劑具有幾個優勢，包括改善的患者依從性/便利性、偏好和PK/PD曲線。SC投與的注射體積典型地很小（＜ 2 mL），這進而導致需要高濃度配製物以達到適當的劑量。開發高濃度配製物（例如黏度、穩定性和遞送）仍存在一些挑戰。
實驗設計（DOE）方法用於開發用於向受試者皮下投與的27 kDa雙特異性抗體的高濃度配製物。考慮到黏度可能是開發超高濃度（例如，＞ 150 mg/mL）配製物的限制因素，實驗的目標係選擇潛在的黏度降低賦形劑，同時對藥物組成物的穩定性具有最小的負面影響。
用精胺酸、精胺酸和相對離子以及脯胺酸進行初步賦形劑篩選，以評估濃度為200 mg/mL的具有SEQ ID NO: 1的胺基酸序列的融合蛋白的溶液的穩定性。在初步賦形劑篩選之後，進行第1次DOE以評估pH、乙酸鹽濃度和蔗糖濃度對具有150 mg/mL的融合蛋白濃度的藥物組成物的穩定性的影響。在此評估之後，研究了pH、蛋白質濃度、脯胺酸的存在以及蔗糖濃度對藥物組成物的穩定性的影響。最後，對藥物組成物進行黏度評估。
對於初步賦形劑篩選，研究了以下配製物： •  F1：20 mM乙酸鹽，8.6% w/v蔗糖，0.05%（w/v）PS-80，pH 5.4 •  F2：20 mM乙酸鹽，4%（w/v）蔗糖，0.05%（w/v）PS-80，pH 5.4 •  F3：20 mM乙酸鹽，4%（w/v）蔗糖，150 mM Arg-HCl，0.05%（w/v）PS-80，pH 5.4 •  F4：20 mM琥珀酸鹽，4%（w/v）蔗糖，150 mM Arg-HCl，0.05%（w/v）PS-80，pH 5.4 •  F5：20 mM乙酸鹽，4%（w/v）蔗糖，150 mM Arg-乙酸鹽，0.05%（w/v）PS-80，pH 5.4 •  F6：4%（w/v）蔗糖，150 mM Arg-琥珀酸鹽，0.05%（w/v）PS-80，pH 5.4 •  F7：20 mM乙酸鹽，4%（w/v）蔗糖，150 mM脯胺酸，0.05%（w/v）PS-80，pH 5.4（1週後1個時間點）。
在37°C下在儲存後1、2和4週評估黏度（圖1A、圖1B、和圖1C）、在溶液中存在的高分子量（HMW）物質的百分比（圖2A和圖2B）、以及溶液的濁度（如藉由在400 nm處的光密度確定的）（圖4），並且拍攝溶液隨時間推移的照片（圖3A和圖3B）。該賦形劑篩選顯示精胺酸和脯胺酸不會降低黏度，並且顯示蔗糖水平的增加略微增加黏度。另外，Arg-HCl被證明會隨著濁度和HMW物質的增加而使分子去穩定化。Arg-乙酸鹽隨著濁度的增加使分子去穩定化。Arg-琥珀酸鹽隨著濁度增加但HMW物質減少使分子去穩定化。脯胺酸的存在減少HMW物質的形成。在37°C下，增加的蔗糖濃度使濁度的增加最小化，並減少了HMW的形成。具有Arg的配製物在37°C下在1週後顯示濁度顯著增加。
在初步賦形劑篩選之後，進行第1次DOE以評估pH、乙酸鹽濃度和蔗糖濃度對具有150 mg/mL的融合蛋白濃度的藥物組成物的穩定性的影響。對於包括100 mM乙酸鹽，2%（w/v）蔗糖，和0.05% PS80（pH 5.4）的組成物（F4）以及包括60.9 mM乙酸鹽，2%（w/v）蔗糖，和0.05% PS80（pH 6.0）的組成物（F5），在37°C（圖5A）和25°C（圖5B）下在一個月內評估HMW形成速率。在37°C（分別如圖6A、7A和8A所示）和25°C（分別如所示圖6B、7B和8B）下在一個月內也都測量了酸形成速率、鹼形成速率、和濁度增加速率。
另外，為具有150 mg/mL融合蛋白的組成物生成預測曲線，以研究乙酸鹽的濃度、蔗糖的濃度和組成物的pH對滲透壓、在25°C和20°C下的黏度的影響（圖9）。該等曲線顯示乙酸鹽濃度的增加使得滲透壓升高，但對黏度的影響很小，並且蔗糖濃度的增加增加了滲透壓並增加了黏度，並且pH的增加對滲透壓和黏度的影響很小。還生成了組成物的預測曲線，以評估在37°C（圖10A）和25°C（圖10B）下乙酸鹽的濃度、蔗糖的濃度和組成物的pH對HMW形成速率、濁度增加、酸形成速率和鹼形成速率的影響。該等預測顯示乙酸鹽濃度的增加對HMW形成速率的影響很小，導致濁度速率增加，並且對酸形成速率的影響很小。蔗糖濃度的增加對鹼形成速率和酸形成速率的影響很小。pH的增加對鹼形成速率和酸形成速率的影響很小，並導致HMW形成速率和濁度速率的增加。該等研究的結果總結在下表1中。 [ 表 1 ] . 第一次 DOE 的結果的總結
   預測 實驗
Osmo 499（377 - 620） 402
在25°C下的黏度 5.8（5.2 - 6.4） 5.6
在20°C下的黏度 6.9（6.2 - 7.6） 6.5
在37°C下的HMW%/月 4.0（3.1 - 4.9） 4.8
在25°C下的HMW%/月 0.6（0.3 - 0.8） 0.3
在37°C下的酸性/月 1.1（-2.5 - 4.6） 0.4
在25°C下的酸性/月 0.2（-0.3 - 0.8） -0.0
在37°C下的鹼性/月 2.3（1.4 - 3.2） 1.7
在25°C下的鹼性/月 0.3（-0.1 - 0.7） -0.2
在37°C下的濁度/月 0.4（-1.2 - 2.0） 1.3
本研究的結果產生150 mg/mL的具有SEQ ID NO:1的序列的雙特異性抗體在20 mM乙酸鈉、8.6% w/v蔗糖、0.05% w/v PS80（pH 5.4）中的第1階段配製物。另外，值得注意的是，預測值與實驗數據一致，表明該模型係穩健的。
隨後，進行第1次DOE，第2次DOE，以評估pH、蛋白質濃度、脯胺酸的存在以及蔗糖濃度對藥物組成物的穩定性的影響。對於包括230 mg/mL融合蛋白、40 mM乙酸鹽、和0.05% PS80 （pH 5.2）（F2）的組成物以及包括221 mg/mL、40 mM乙酸鹽、5%（w/v）蔗糖、165 mM脯胺酸、和0.05% PS80（pH 5.2）（F7）的組成物，在37°C（圖11A）和25°C（圖11B）下在一個月內評估HMW形成速率。在37°C（分別如圖12A、13A和14A所示）和25°C（分別如所示圖12B、13B和14B）下在一個月內也都測量了酸形成速率、鹼形成速率、和濁度增加速率。
另外，為組成物生成預測曲線以研究蛋白質濃度、脯胺酸濃度、蔗糖的濃度、以及組成物的pH對滲透壓、在25°C和20°C下的黏度的影響（圖15）。該等曲線顯示蛋白質濃度的增加增加了滲透壓和黏度，脯胺酸濃度的增加增加了滲透壓並對黏度的影響很小，蔗糖濃度的增加使得滲透壓升高並對黏度的影響很小，並且pH的增加對滲透壓和黏度的影響很小。還生成了組成物的預測曲線，以評估在37°C（圖16A）和25°C（圖16B）下蛋白質的濃度、脯胺酸濃度、蔗糖濃度和組成物的pH對HMW形成速率、濁度增加、酸形成速率和鹼形成速率的影響。該等預測顯示蛋白質濃度的增加使得HMW形成速率、濁度增加、鹼形成速率升高，並且對酸形成速率的影響很小。脯胺酸濃度的增加導致HMW物質形成的減少以及鹼形成速率的降低，並且對濁度速率和酸形成速率的影響很小。蔗糖濃度的增加在37°C下對HMW形成速率的影響很小，並且導致在25°C下鹼形成速率、酸形成速率和HMW形成的降低。pH的增加導致在37°C下HMW形成速率、鹼形成速率和酸形成速率的降低，並且在25°C下的濁度速率和HMW形成速率和濁度速率的增加。
在20°C下針對在不同濃度的融合蛋白中的黏度來評估表2中總結的組成物的黏度，如圖17所示。 [表2 ].組成物的黏度
   組成物 具有 17 cP 的蛋白質濃度（ mg/mL ） 在 15% 規格下的相應蛋白質濃度（ mg/mL ）
F1 20 mM乙酸鹽，pH 5.4 218 189
F2 20 mM乙酸鹽，pH 5.4，4%（w/v）蔗糖，0.05%（w/v）PS-80 214 186
F3 20 mM乙酸鹽，pH 5.4，8.6%（w/v）蔗糖，0.05%（w/v）PS-80 205 178
根據穩定性數據，主要的降解途徑係在加速（25°C）條件下HMW物質的形成，並且在應力（37°C）條件下HMW物質的形成以及增加的濁度。在該等研究中沒有觀察到電荷變化的顯著變化。根據黏度選擇190 mg/mL的配製物濃度。基於該等研究，較佳的配製物被確定為190 mg/mL在20 mM乙酸鈉、4%（w/v）蔗糖、0.05%（w/v）PS80（pH 5.4）中以及190 mg/mL在20 mM乙酸鈉、165 mM脯胺酸、0.05%（w/v）PS80（pH 5.4）中。該等配製物中的每一種的特性總結在表3中。 [表3 ].較佳的配製物的預測特徵：
組分 第 I 階段配製物 較佳的 第二
在25°C下的HMW%/月 0.3 0.2（0.1 - 0.2） 0.2（0.1 - 0.3）
在37°C下的HMW%/月 4.8 5.0（4.2 - 5.8） 4.6（3.7 - 5.5）
在37°C下的濁度/月 1.3 3.0（1.4 - 4.5） 4.0（2.3 - 5.8）
在20°C下的黏度 6.5 10.0 11.0
另外的實施方式
本說明書中所引用的所有參考文獻（包括數據庫加入的資訊（例如，在GENBANK、UNIPROT、PUBMED中））都藉由引用併入本文，如同每個參考文獻特別地和單獨地指出藉由引用併入。任何參考文獻的引用均為為了在提交日期之前揭露，並且不應解釋為承認本揭露由於先前發明而沒有資格先於這樣的文獻。
將理解，上述要素中的每個、或兩個或更多個一起還可以在不同於上述類型的其他類型的方法中找到有用的應用。無需進一步分析，前述將如此全面地揭示本揭露的要點，以至於其他人可以藉由應用現有知識，容易地將其修改用於多種應用，而沒有省略從先前技術的觀點來看清楚地構成在所附申請專利範圍中闡述的本揭露的一般方面或特定方面的必要特徵的特徵。前述實施方式僅以實例的方式給出。
[圖1A至圖1C]係顯示各種緩衝賦形劑（圖1A）、脯胺酸（圖1B）的存在、以及蔗糖濃度（圖1C）對溶液的黏度的影響之圖。
在一定的溫度範圍內具有200 mg/mL的融合蛋白的溶液的黏度。
[圖2A和圖2B]係顯示在37°C下在4週的時間段內在具有各種緩衝賦形劑（圖2A）或蔗糖濃度或脯胺酸的存在（圖2B）的溶液中的高分子量化合物的百分比之圖。
[圖3A和圖3B]係顯示在37°C下在4週的時間段內在具有各種緩衝賦形劑（圖2A）或蔗糖濃度或脯胺酸的存在（圖2B）的溶液中的濁度之照片。
[圖4]係顯示針對不同蔗糖濃度在4週時間段內測量溶液的濁度之圖。
[圖5A和圖5B]係顯示在具有不同乙酸鹽濃度的溶液中在3個月時間段內在37°C（圖5A）或25°C（圖5B）下測量高分子量化合物的百分比之圖。
[圖6A和圖6B]係顯示在具有不同乙酸鹽濃度的溶液中在3個月時間段內在37°C（圖6A）或25°C（圖6B）下測量在溶液中存在的酸的百分比之圖。
[圖7A和圖7B]係顯示在具有不同乙酸鹽濃度的溶液中在3個月時間段內在37°C（圖7A）或25°C（圖7B）下測量在溶液中存在的鹼的百分比之圖。
[圖8A和圖8B]係顯示在具有不同乙酸鹽濃度的溶液中在3個月時間段內在37°C（圖5A）或25°C（圖5B）下測量溶液的濁度之圖。
[圖9]示出了顯示乙酸鹽濃度、蔗糖濃度、和pH對具有濃度為150 mg/mL的具有SEQ ID NO. 1的胺基酸序列的多肽的溶液的滲透壓、在25°C下的黏度以及在20°C下的黏度的預測影響的一系列圖。
[圖10A和圖10B]示出了顯示乙酸鹽濃度、蔗糖濃度、和pH在37°C（圖10A）和25°C（圖10B）下對具有濃度為150 mg/mL的具有SEQ ID NO. 1的胺基酸序列的多肽的溶液的高分子量化合物形成速率、濁度、酸形成速率、以及鹼形成速率的預測影響的一系列圖。
[圖11A和圖11B]係顯示在具有不同乙酸鹽濃度的溶液中在1個月時間段內在37°C（圖11A）或25°C（圖11B）下測量高分子量化合物的百分比之圖。
[圖12A和圖12B]係顯示在具有不同乙酸鹽濃度的溶液中在1個月時間段內在37°C（圖12A）或25°C（圖12B）下測量在溶液中存在的酸的百分比之圖。
[圖13A和圖13B]係顯示在具有不同乙酸鹽濃度的溶液中在1個月時間段內在37°C（圖13A）或25°C（圖13B）下測量在溶液中存在的鹼的百分比之圖。
[圖14A和圖14B]係顯示在具有不同乙酸鹽濃度的溶液中在1個月時間段內在37°C（圖14A）或25°C（圖14B）下測量溶液的濁度之圖。
[圖15]示出了顯示多肽濃度、脯胺酸濃度、蔗糖濃度、和pH對溶液的高分子量化合物形成速率、濁度、酸形成速率、和鹼形成速率的預測影響的一系列圖。
[圖16A和圖16B]示出了顯示多肽濃度、脯胺酸濃度、蔗糖濃度、和pH在37°C（圖16A）和25°C（圖16B）下對溶液的高分子量化合物形成速率、濁度、酸形成速率、以及鹼形成速率的預測影響的一系列圖。
[圖17]係顯示蔗糖濃度對具有至少200 mg/mL多肽（融合蛋白）濃度的溶液的黏度的影響之圖。
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Claims (118)

  1. 一種藥物組成物，其包含融合蛋白、界面活性劑、和緩沖劑，其中該融合蛋白的濃度係至少120 mg/mL。
  2. 如請求項2之藥物組成物，其中該融合蛋白包含具有SEQ ID NO: 2-7的胺基酸序列的互補決定區（CDR）。
  3. 如請求項2之藥物組成物，其中該融合蛋白包含第一部分和第二部分，該第一部分包含與SEQ ID NO: 55具有至少95%序列同一性的胺基酸序列，該第二部分包含與SEQ ID NO: 56具有至少95%序列同一性的胺基酸序列。
  4. 如請求項2或3之藥物組成物，其中該融合蛋白由SEQ ID NO: 1的胺基酸序列、或其修飾組成。
  5. 如請求項4之藥物組成物，其中該修飾包括SEQ ID NO: 1的序列的N-末端麩醯胺酸向焦麩胺酸的轉化。
  6. 如請求項1至5中任一項之藥物組成物，其中該融合蛋白的濃度在120 mg/mL與250 mg/mL之間。
  7. 如請求項1至5中任一項之藥物組成物，其中該融合蛋白的濃度係至少150 mg/mL。
  8. 如請求項1至5中任一項之藥物組成物，其中該融合蛋白的濃度在150 mg/mL與200 mg/mL之間。
  9. 如請求項8之藥物組成物，其中該融合蛋白的濃度在170 mg/mL與200 mg/mL之間。
  10. 如請求項9之藥物組成物，其中該融合蛋白的濃度係約190 mg/mL。
  11. 如請求項8之藥物組成物，其中該融合蛋白的濃度係約150 mg/mL。
  12. 如請求項1至11中任一項之藥物組成物，其中該界面活性劑係聚山梨醇酯。
  13. 如請求項12之藥物組成物，其中該聚山梨醇酯係聚山梨醇酯80（PS80）。
  14. 如請求項12或13之藥物組成物，其中該聚山梨醇酯的濃度在0.001%與1%（w/v）之間。
  15. 如請求項14之藥物組成物，其中該聚山梨醇酯的濃度在0.05%（w/v）與0.5%（w/v）之間。
  16. 如請求項15之藥物組成物，其中該聚山梨醇酯的濃度在0.1%（w/v）與0.2%（w/v）之間。
  17. 如請求項16之藥物組成物，其中該聚山梨醇酯的濃度係約0.15%（w/v）。
  18. 如請求項1至17中任一項之藥物組成物，其中該緩衝劑係乙酸鹽、琥珀酸鹽、組胺酸、磷酸鹽、或其組合。
  19. 如請求項18之藥物組成物，其中該緩衝劑係乙酸鹽。
  20. 如請求項19之藥物組成物，其中該乙酸鹽係乙酸鈉。
  21. 如請求項20之藥物組成物，其中該乙酸鈉的濃度在約10 mM與150 mM之間。
  22. 如請求項21之藥物組成物，其中該乙酸鈉的濃度在約15 mM與100 mM之間。
  23. 如請求項22之藥物組成物，其中該乙酸鈉的濃度係約50 mM。
  24. 如請求項21之藥物組成物，其中該乙酸鈉的濃度係約20 mM。
  25. 如請求項1至24中任一項之藥物組成物，其進一步包含胺基酸。
  26. 如請求項25之藥物組成物，其中該胺基酸係精胺酸、脯胺酸、或甘胺酸。
  27. 如請求項26之藥物組成物，其中該胺基酸的濃度在約100 mM與200 mM之間。
  28. 如請求項27之藥物組成物，其中該胺基酸的濃度係約165 mM。
  29. 如請求項1至28中任一項之藥物組成物，其進一步包含張度劑。
  30. 如請求項29之藥物組成物，其中該張度劑係糖、胺基酸、或鹽。
  31. 如請求項30之藥物組成物，其中該鹽係NaCl。
  32. 如請求項30之藥物組成物，其中該糖係蔗糖、葡萄糖、甘油、或海藻糖。
  33. 如請求項32之藥物組成物，其中該糖係蔗糖。
  34. 如請求項32之藥物組成物，其中該蔗糖以在約1%（w/v）與約15%（w/v）之間的濃度存在。
  35. 如請求項34之藥物組成物，其中該蔗糖以在2%（w/v）與10%（w/v）之間的濃度存在。
  36. 如請求項34之藥物組成物，其中該蔗糖以在4%（w/v）與9%（w/v）之間的濃度存在。
  37. 如請求項36之藥物組成物，其中該蔗糖以在8%（w/v）與9%（w/v）之間的濃度存在。
  38. 如請求項37之藥物組成物，其中該蔗糖以約8.6%（w/v）的濃度存在。
  39. 如請求項34之藥物組成物，其中該蔗糖以約4%（w/v）的濃度存在。
  40. 如請求項1至39中任一項之藥物組成物，其中該藥物組成物具有在約pH 3與pH 8之間的pH。
  41. 如請求項40之藥物組成物，其中該藥物組成物具有在pH 4與pH 7之間的pH。
  42. 如請求項41之藥物組成物，其中該藥物組成物具有約pH 5.4的pH。
  43. 如請求項1至42中任一項之藥物組成物，其中該藥物組成物在20°C下具有6 cP至35 cP之間的黏度。
  44. 如請求項1至43中任一項之藥物組成物，其中該藥物組成物在20°C下具有＜ 17 cP的黏度。
  45. 如請求項44之藥物組成物，其中該藥物組成物在20°C下具有＜ 12 cP的黏度。
  46. 如請求項1至45中任一項之藥物組成物，其中該藥物組成物經過一個月在25°C下按月計具有百分比在0.05%（w/v）與0.5%（w/v）之間的高分子量化合物。
  47. 如請求項46之藥物組成物，其中該藥物組成物經過一個月在25°C下按月計具有百分比約0.2%（w/v）的高分子量化合物。
  48. 如請求項1至47中任一項之藥物組成物，其中該藥物組成物經過一個月在37°C下按月計具有百分比在約1%（w/v）與10%（w/v）之間的高分子量化合物。
  49. 如請求項48之藥物組成物，其中該藥物組成物經過一個月在37°C下按月計具有百分比約4.6%或約5%（w/v）的高分子量化合物。
  50. 如請求項1至49中任一項之藥物組成物，其中該藥物組成物在37°C下按月計具有在約1與10之間的濁度，其中濁度測量為在400 nm處的光密度。
  51. 如請求項50之藥物組成物，其中該藥物組成物在37°C下按月計具有約3或約4的濁度。
  52. 如請求項1至51中任一項之藥物組成物，其中該藥物組成物具有在100 Osm/kg H 2O與500 Osm/kg H 2O之間的滲透壓。
  53. 如請求項52之藥物組成物，其中該藥物組成物具有約245 Osm/kg H 2O的滲透壓。
  54. 一種藥物組成物，其包含融合蛋白、界面活性劑、蔗糖、和乙酸鈉，其中該融合蛋白包含具有SEQ ID NO: 2-7的胺基酸序列的CDR，其中該融合蛋白的濃度在120 mg/mL與200 mg/mL之間，其中該乙酸鈉的濃度在25 mM與75 mM之間，其中該蔗糖具有在2%（w/v）與15%（w/v）之間的濃度，其中該界面活性劑的濃度在0.01%（w/v）與0.2%（w/v）之間，並且其中該藥物組成物具有在pH 4與pH 7之間的pH。
  55. 如請求項54之藥物組成物，其中該融合蛋白的濃度係約150 mg/mL，其中該乙酸鈉的濃度係約50 mM，其中該蔗糖的濃度係約8.6%（w/v），其中該界面活性劑係具有濃度約0.05%（w/v）的PS-80，並且其中該藥物組成物具有約5.4的pH。
  56. 如請求項54之藥物組成物，其中該融合蛋白的濃度係約150 mg/mL，其中該乙酸鈉的濃度係約50 mM，其中該蔗糖的濃度係約8.6%（w/v），其中該界面活性劑係具有濃度約0.15%（w/v）的PS-80，並且其中該藥物組成物具有約5.4的pH。
  57. 一種藥物組成物，其包含融合蛋白、界面活性劑、和乙酸鈉，其中該融合蛋白包含具有SEQ ID NO: 2-7的胺基酸序列的CDR，其中該PS80的濃度在0.01%（w/v）與0.1%（w/v）之間，其中該蔗糖的濃度在1%（w/v）與10%（w/v）之間，其中該乙酸鈉的濃度在10 mM與50 mM之間，並且其中該藥物組成物具有在pH 4與pH 7之間的pH，並且其中該融合蛋白的濃度在150 mg/mL與200 mg/mL之間。
  58. 如請求項57之藥物組成物，其中該融合蛋白的濃度係約190 mg/mL，其中該PS80的濃度係約0.05%（w/v）或約0.1%（w/v），其中該蔗糖的濃度係4%（w/v），其中該乙酸鈉的濃度係約20 mM，並且其中該藥物組成物具有約pH 5.4的pH。
  59. 一種藥物組成物，其包含融合蛋白、界面活性劑、乙酸鈉、和脯胺酸，其中該融合蛋白包含具有SEQ ID NO: 2-7的胺基酸序列的CDR，其中該界面活性劑的濃度在0.01%（w/v）與0.1%（w/v）之間，其中該乙酸鈉的濃度在10 mM與50 mM之間，其中該脯胺酸的濃度在100 mM與200 mM之間，並且其中該藥物組成物具有在pH 4與pH 7之間的pH，並且其中該融合蛋白的濃度在150 mg/mL與200 mg/mL之間。
  60. 如請求項59之藥物組成物，其中該融合蛋白的濃度係約190 mg/mL，其中該界面活性劑的濃度係約0.05%（w/v）或約0.1%（w/v），其中該乙酸鈉的濃度係約20 mM，其中該脯胺酸的濃度係約165 mM，並且其中該藥物組成物具有約pH 5.4的pH。
  61. 如請求項54至60中任一項之藥物組成物，其中該融合蛋白包含第一部分和第二部分，該第一部分包含與SEQ ID NO: 55具有至少95%序列同一性的胺基酸序列，該第二部分包含與SEQ ID NO: 56具有至少95%序列同一性的胺基酸序列。
  62. 如請求項54至61中任一項之藥物組成物，其中該融合蛋白由SEQ ID NO: 1的胺基酸序列、或其修飾組成。
  63. 如請求項62之方法，其中該修飾包括SEQ ID NO: 1的序列的N-末端麩醯胺酸向焦麩胺酸的轉化。
  64. 如請求項1至63中任一項之藥物組成物，其中將該藥物組成物配製為藥物產品。
  65. 一種治療或預防受試者中的疾病或病症之方法，該方法包括向有需要的受試者投與如請求項64之藥物組成物。
  66. 如請求項65之方法，其中該疾病係鐮狀細胞疾病。
  67. 如請求項65或66之方法，其中該藥物組成物係皮下投與。
  68. 如請求項67之方法，其中該藥物組成物經由預填充注射器、自動注射器、或隨身裝置投與。
  69. 如請求項65至68中任一項之方法，其中該受試者係人。
  70. 一種開發用於皮下投與的融合蛋白的高濃度配製物之方法，該方法包括： i)      進行賦形劑篩選，其中該賦形劑篩選包括測量包含該融合蛋白和一或多種賦形劑的溶液在一段時間內的穩定性和黏度； ii)     在步驟 (i) 之後，測量由於改變pH、乙酸鹽濃度、和蔗糖濃度而導致的在步驟 (i) 的溶液中的高分子量化合物的黏度、濁度、和形成速率； iii)    在步驟 (ii) 之後，測量由於改變該融合蛋白的pH、蔗糖濃度、賦形劑、和濃度而導致的在步驟 (ii) 的溶液中的高分子量化合物的黏度、濁度、和形成速率；以及 iv)    在步驟 (iii) 之後，進行黏度評估，其中該配製物的黏度在一定的溫度範圍和一定的融合蛋白濃度範圍下進行測量。
  71. 如請求項70之方法，其中該融合蛋白包含具有SEQ ID NO: 2-7的胺基酸序列的6個CDR。
  72. 如請求項70或71之方法，其中該融合蛋白包含第一部分和第二部分，該第一部分包含與SEQ ID NO: 55具有至少95%序列同一性的胺基酸序列，該第二部分包含與SEQ ID NO: 56具有至少95%序列同一性的胺基酸序列。
  73. 如請求項70至72中任一項之方法，其中該融合蛋白由SEQ ID NO: 1的胺基酸序列、或其修飾組成。
  74. 如請求項73之方法，其中該修飾包括SEQ ID NO: 1的序列的N-末端麩醯胺酸向焦麩胺酸的轉化。
  75. 如請求項70至74中任一項之方法，其中該高濃度配製物具有至少120 mg/mL的融合蛋白濃度。
  76. 如請求項70至75中任一項之方法，其中該高濃度配製物具有在120 mg/mL與250 mg/mL之間的融合蛋白濃度。
  77. 如請求項70至75中任一項之方法，其中該高濃度配製物具有至少150 mg/mL的融合蛋白濃度。
  78. 如請求項70至77中任一項之方法，其中步驟 (i) 的溶液具有約200 mg/mL的融合蛋白濃度。
  79. 如請求項70至78中任一項之方法，其中步驟ii和步驟iii的測量每週進行一次。
  80. 如請求項79之方法，其中該測量進行至少4週。
  81. 如請求項70至80中任一項之方法，其中該一或多種賦形劑選自琥珀酸鹽、精胺酸、乙酸鹽、組胺酸、磷酸鹽、或其組合。
  82. 如請求項81之方法，其中該一或多種賦形劑係精胺酸。
  83. 如請求項82之方法，其中該精胺酸係精胺酸鹽酸鹽。
  84. 如請求項82之方法，其中該精胺酸係精胺酸乙酸鹽。
  85. 如請求項82之方法，其中該精胺酸係精胺酸琥珀酸鹽。
  86. 如請求項81之方法，其中該一或多種賦形劑係琥珀酸鹽。
  87. 如請求項81之方法，其中該一或多種賦形劑係琥珀酸鹽和精胺酸鹽酸鹽。
  88. 如請求項81之方法，其中該一或多種賦形劑係乙酸鹽。
  89. 如請求項81之方法，其中該一或多種賦形劑係乙酸鹽和精胺酸鹽酸鹽。
  90. 如請求項81之方法，其中該一或多種賦形劑係乙酸鹽和精胺酸乙酸鹽。
  91. 如請求項70至90中任一項之方法，其中步驟 (i) 的溶液進一步包含蔗糖。
  92. 如請求項91之方法，其中該蔗糖以在8%（w/v）與9%（w/v）之間的濃度存在。
  93. 如請求項92之方法，其中該蔗糖以約8.6%（w/v）的濃度存在。
  94. 如請求項91之方法，其中該蔗糖具有在1%（w/v）與10%（w/v）之間的濃度。
  95. 如請求項94之方法，其中該蔗糖具有約4%（w/v）的濃度。
  96. 如請求項70至95中任一項之方法，其中步驟 (ii) 的溶液具有在4與7之間的pH。
  97. 如請求項96之方法，其中步驟 (ii) 的溶液具有在4.5與6.0之間的pH。
  98. 如請求項70至97中任一項之方法，其中步驟 (ii) 的溶液具有在10 mM與200 mM之間的乙酸鹽的濃度。
  99. 如請求項81之方法，其中步驟 (ii) 的溶液具有在15 mM與150 mM之間的乙酸鹽的濃度。
  100. 如請求項70至99中任一項之方法，其中步驟 (ii) 的溶液具有在1%（w/v）與20%（w/v）之間的蔗糖的濃度。
  101. 如請求項100之方法，其中步驟 (ii) 的溶液具有在2%（w/v）與10%（w/v）之間的蔗糖的濃度。
  102. 如請求項70至101中任一項之方法，其中步驟 (ii) 的溶液具有約150 mg/mL的融合蛋白濃度。
  103. 如請求項70至102中任一項之方法，其中步驟 (iii) 的溶液具有在5與6之間的pH。
  104. 如請求項70至103中任一項之方法，其中步驟 (iii) 的溶液具有在0%（w/v）與10%（w/v）之間的蔗糖的濃度。
  105. 如請求項104之方法，其中步驟 (iii) 的溶液具有在8%（w/v）與9%（w/v）之間的蔗糖的濃度。
  106. 如請求項70至105中任一項之方法，其中步驟 (iii) 的溶液具有在約100 mg/mL與300 mg/mL之間的融合蛋白濃度。
  107. 如請求項106之方法，其中步驟 (ii) 的溶液具有在約150 mg/mL與230 mg/mL之間的融合蛋白濃度。
  108. 如請求項70至107中任一項之方法，其中該配製物在20°C下具有在6 cP與35 cP之間的黏度。
  109. 如請求項70至108中任一項之方法，其中該配製物在20°C下具有在5 cP與15 cP之間的黏度。
  110. 如請求項109之方法，其中該配製物在20°C下具有約10 cP或11 cP的黏度。
  111. 如請求項70至110中任一項之方法，其中該配製物經過一個月在25°C下按月計具有百分比在0.05%（w/v）與0.5%（w/v）之間的高分子量化合物。
  112. 如請求項111之方法，其中該配製物經過一個月在25°C下按月計具有百分比約0.2%（w/v）的高分子量化合物。
  113. 如請求項70至112中任一項之方法，其中該配製物經過一個月在37°C下按月計具有百分比在約1%（w/v）與10%（w/v）之間的高分子量化合物。
  114. 如請求項113之方法，其中該配製物經過一個月在37°C下按月計具有百分比約4%（w/v）或約5%（w/v）的高分子量化合物。
  115. 如請求項70至114中任一項之方法，其中該配製物在37°C下按月計具有在約1與10之間的濁度，其中濁度測量為在400 nm處的光密度。
  116. 如請求項115之方法，其中該配製物在37°C下按月計具有約3或4的濁度。
  117. 一種雙特異性構建體，該雙特異性構建體結合備解素和人血清白蛋白，該雙特異性構建體包含SEQ ID NO:1的胺基酸序列、或其修飾。
  118. 如請求項117之雙特異性構建體，其中該修飾包括SEQ ID NO: 1的胺基酸序列的N-末端麩醯胺酸向焦麩胺酸的轉化。
TW112129378A 2022-08-05 2023-08-04 融合蛋白的藥物組成物及其使用方法 TW202413435A (zh)

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