TW202412766A

TW202412766A - Ｆａｋ抑制劑及拓撲異構酶抑制劑的藥物組合及用途

Info

Publication number: TW202412766A
Application number: TW112135243A
Authority: TW
Inventors: 張寶袁; 劉學彬; 高家明; 張平; 龐然; 在琪王
Original assignee: 大陸商應世生物科技（南京）有限公司
Priority date: 2022-09-16
Filing date: 2023-09-15
Publication date: 2024-04-01

Abstract

本公開涉及FAK抑制劑、拓撲異構酶抑制劑和免疫檢查點抑制劑聯合治療腫瘤。本公開還涉及FAK抑制劑和拓撲異構酶抑制劑聯合治療腫瘤。

Description

FAK抑制劑及拓撲異構酶抑制劑的藥物組合及用途

[相關申請案的交叉參考] 本申請要求於2022年9月16日遞交的中國專利申請202211129639.0和於2023年9月7日遞交的中國專利申請202311155482.3的優先權，在此全文引用上述中國專利申請公開的內容以作為本申請的一部分。

本發明屬於藥物化學領域。具體地，本發明涉及粘著斑激酶（Focal Adhesion Kinase, FAK）抑制劑與其它藥物聯用治療腫瘤。

腫瘤是威脅人們健康的第二大殺手。免疫原性細胞死亡（Immunogenic cell death, ICD）是基於細胞程序性死亡的疊加效應。癌細胞接觸化療或者靶向治療類藥物的同時可能活化細胞內部的壓力信號，這一類壓力信號包含內質網壓力（ER stress）和氧化壓力（oxidative stress）。在壓力信號的作用下細胞會先嘗試修復壓力，如果壓力造成的損傷超出了修復的能力，細胞會啟動程序性死亡過程。在這個過程中往往伴隨著一類叫做損傷相關分子（Damage associated molecular patterns, DAMPs）的釋放。這類DAMPs會特異性的被機體內抗原呈遞細胞（Antigen-presenting cells, APC）上的模式識別受體識別，誘導APC成熟、分化和活化，並逐級呈遞給效應T細胞等免疫細胞，從而使免疫細胞產生抗原記憶，再次發現相同來源的腫瘤細胞時免疫細胞就會特異性識別並殺傷腫瘤細胞。ICD啟動的新的針對腫瘤的特異性免疫反應可增加對免疫檢查點抑制劑（Immuno-check point inhibitor, ICI）的敏感，以此增效免疫檢查點類抑制劑的作用，並可產生具有免疫記憶持久的抗腫瘤的反應。

FAK，又稱為第二型蛋白酪氨酸激酶（Protein Tyrosine Kinase 2, PTK2），是一種非受體酪氨酸激酶，並且是粘著斑複合體的關鍵組分。FAK在介導整合素和生長因子信號以調節腫瘤細胞的侵襲、增殖和存活方面發揮著重要作用。

拓樸異構酶的體內功能是透過切割DNA鏈釋放DNA複製及轉錄過程中產生的張力，去除複製又前端產生的正超螺旋和轉錄時RNA聚合於游所產生的負超螺旋，再將切割形成的斷端連接成完整DNA鏈，確保反應順利進行。拓樸異構酶抑制劑與相應異構酶易解離複合物結合並使之形成穩定複合物，阻止複製叉順利通過而至DNA鏈斷裂，干擾DNA複製及轉錄。這類藥物被廣泛用於腫瘤的治療。但是此類藥物會在服用一段時間後產生一定的抗藥性。

化療包括拓樸異構酶抑制劑和免疫療法聯合，已在臨床上有的廣泛的應用。但是，療效仍有改善提升的空間，尤其是如何強化療效，產生持久的抗腫瘤效果。

本公開一方面提供了FAK抑制劑、拓撲異構酶抑制劑和免疫檢查點抑制劑在製備用於在對象中治療腫瘤的藥物中的用途，其中所述拓撲異構酶抑制劑不為蒽環類。

本公開又一方面提供了FAK抑制劑、拓撲異構酶抑制劑和免疫檢查點抑制劑的藥物組合產品，其用於在對象中治療腫瘤，其中所述拓撲異構酶抑制劑不為蒽環類。

本公開又一方面提供了一種治療腫瘤的方法，該方法包括向有需要的對象施用治療有效量的FAK抑制劑、拓撲異構酶抑制劑和免疫檢查點抑制劑，其中所述拓撲異構酶抑制劑不為蒽環類。

本公開又一方面提供了一種試劑盒或藥學上可接受的組合物，其包括：（a）FAK抑制劑；（b）拓撲異構酶抑制劑，所述拓撲異構酶抑制劑不為蒽環類；和（c）免疫檢查點抑制劑。

本公開又一方面提供了FAK抑制劑和拓撲異構酶抑制劑在製備用於在治療腫瘤的藥物中的用途，其中所述FAK抑制劑用於增強所述拓撲異構酶抑制劑誘導的免疫原性細胞死亡，其中所述拓撲異構酶抑制劑不為蒽環類。

本公開又一方面提供了FAK抑制劑，其在治療腫瘤中用於增強拓撲異構酶抑制劑誘導的免疫原性細胞死亡，其中所述拓撲異構酶抑制劑不為蒽環類。

本公開又一方面提供了一種治療腫瘤的方法，該方法包括向有需要的對象施用治療有效量的FAK抑制劑和拓撲異構酶抑制劑，其中所述FAK抑制劑用於增強所述拓撲異構酶抑制劑誘導的免疫原性細胞死亡，其中所述拓撲異構酶抑制劑不為蒽環類。

本公開又一方面提供了FAK抑制劑、拓撲異構酶抑制劑和免疫檢查點抑制劑在製備用於聯合治療腫瘤的藥物中的用途，其中所述拓撲異構酶抑制劑不為蒽環類。

本公開又一方面提供了FAK抑制劑在製備用於與拓撲異構酶抑制劑和免疫檢查點抑制劑治療腫瘤的聯用藥物中的用途，其中所述拓撲異構酶抑制劑不為蒽環類。

本公開又一方面提供了拓撲異構酶抑制劑在製備用於與FAK抑制劑和免疫檢查點抑制劑治療腫瘤的聯用藥物中的用途，其中所述拓撲異構酶抑制劑不為蒽環類。

本公開又一方面提供了免疫檢查點抑制劑在製備用於與FAK抑制劑和拓撲異構酶抑制劑治療腫瘤的聯用藥物中的用途，其中所述拓撲異構酶抑制劑不為蒽環類。

本公開又一方面提供了FAK抑制劑在製備用於與拓撲異構酶抑制劑和免疫檢查點抑制劑聯合治療腫瘤的藥物中的用途，其中所述拓撲異構酶抑制劑不為蒽環類。

本公開又一方面提供了拓撲異構酶抑制劑在製備用於與FAK抑制劑和免疫檢查點抑制劑聯合治療腫瘤的藥物中的用途，其中所述拓撲異構酶抑制劑不為蒽環類。

本公開又一方面提供了免疫檢查點抑制劑在製備用於與FAK抑制劑和拓撲異構酶抑制劑聯合治療腫瘤的藥物中的用途，其中所述拓撲異構酶抑制劑不為蒽環類。

本公開又一方面提供了一種試劑盒，其包括：FAK抑制劑；和說明書，該說明書指出該FAK抑制劑可用於與拓撲異構酶抑制劑和免疫檢查點抑制劑聯合治療腫瘤，其中所述拓撲異構酶抑制劑不為蒽環類。

本公開又一方面提供了一種試劑盒，其包括：拓撲異構酶抑制劑；和說明書，該說明書指出該拓撲異構酶抑制劑可用於與FAK抑制劑和免疫檢查點抑制劑聯合治療腫瘤，其中所述拓撲異構酶抑制劑不為蒽環類。

本公開又一方面提供了一種試劑盒，其包括：免疫檢查點抑制劑；和說明書，該說明書指出該免疫檢查點抑制劑可用於與FAK抑制劑和拓撲異構酶抑制劑聯合治療腫瘤，其中所述拓撲異構酶抑制劑不為蒽環類。

本公開另一方面提供了一種治療腫瘤的方法，該方法包括向有需要的對象施用治療有效量的FAK抑制劑和拓撲異構酶抑制劑，其中所述拓撲異構酶抑制劑不為蒽環類。

本公開又一方面提供了FAK抑制劑和拓撲異構酶抑制劑的藥物組合產品，其用於在有需要的對象中治療腫瘤，其中所述拓撲異構酶抑制劑不為蒽環類。

本公開又一方面提供了FAK抑制劑和拓撲異構酶抑制劑在製備用於治療腫瘤的聯用藥物中的用途，其中所述拓撲異構酶抑制劑不為蒽環類。

本公開又一方面提供了FAK抑制劑在製備用於與拓撲異構酶抑制劑治療腫瘤的聯用藥物中的用途，其中所述拓撲異構酶抑制劑不為蒽環類。

本公開又一方面提供了拓撲異構酶抑制劑在製備用於與FAK抑制劑治療腫瘤的聯用藥物中的用途，其中所述拓撲異構酶抑制劑不為蒽環類。

本公開又一方面提供了FAK抑制劑和拓撲異構酶抑制劑在製備用於聯合治療腫瘤的藥物中的用途，其中所述拓撲異構酶抑制劑不為蒽環類。

本公開又一方面提供了FAK抑制劑在製備用於與拓撲異構酶抑制劑聯合治療腫瘤的藥物中的用途，其中所述拓撲異構酶抑制劑不為蒽環類。

本公開又一方面提供了拓撲異構酶抑制劑在製備用於與FAK抑制劑聯合治療腫瘤的藥物中的用途，其中所述拓撲異構酶抑制劑不為蒽環類。

本公開又一方面提供了一種試劑盒，其包括：FAK抑制劑；和說明書，該說明書指出該FAK抑制劑可用於與拓撲異構酶抑制劑聯合治療腫瘤，其中所述拓撲異構酶抑制劑不為蒽環類。

本公開又一方面提供了一種試劑盒，其包括：拓撲異構酶抑制劑；和說明書，該說明書指出該拓撲異構酶抑制劑可用於與FAK抑制劑聯合治療腫瘤，其中所述拓撲異構酶抑制劑不為蒽環類。

可選的，所述FAK抑制劑為IN10018、Defactinib、GSK2256098、PF-00562271、VS-4718、APG-2449、AMP945、AMP886或其藥學上可接受的鹽，優選為IN10018、Defactinib、AMP945或其藥學上可接受的鹽，進一步優選為IN10018或其藥學上可接受的鹽，尤其是IN10018酒石酸鹽，所述IN10018結構如下：。

所述Defactinib也稱為地法替尼，CAS號為1345713-71-4；所述GSK2256098的CAS號為1224887-10-8。所述PF-00562271的CAS號為717907-75-0；所述VS-4718的CAS號為1061353-68-1；所述APG-2449為亞盛醫藥研發；所述AMP945的CAS號為1393653-34-3。

可選的，所述拓撲異構酶抑制劑為拓撲異構酶I抑制劑。

例如，所述拓撲異構酶I抑制劑為拓撲替康（Topotecan）、伊立替康（Irinotecan）、貝洛替康（Belotecan）、科西特康（Cositecan）、依喜替康（Exatecan, DX-8951）、茚並異喹啉（Indenoisoquinoline）、Indotecan （LMP-400）、Indimitecan（LMP-776）、希明替康（Simmitecan）、Gimatecan（ST1481）、EC-112002、PLX-038（NK012）、AR-67，或其藥學上可接受的鹽。

所述拓撲替康（Topotecan）的CAS號為123948-87-8；所述伊立替康（Irinotecan）的CAS號為97682-44-5；所述貝洛替康（Belotecan）的CAS號為256411-32-2；所述科西特康（Cositecan）的CAS號為401905-67-7；所述依喜替康（Exatecan，DX-8951）的CAS號為171335-80-1；所述茚並異喹啉(Indenoisoquinoline）的CAS號為97501-75-2；所述Indotecan （LMP-400）的CAS號為915303-09-2；所述Indimitecan （LMP-776）的CAS號為915360-05-3；所述希明替康（Simmitecan）的CAS號為951290-31-6；所述Gimatecan （ST1481）的CAS號為292618-32-7；所述EC-112002為Elucida Oncology Inc研發、所述PLX-038（NK012）的CAS號為86639-52-3；所述AR-67的CAS號為220913-32-6。

可選的，所述拓撲異構酶I抑制劑為伊立替康（Irinotecan）或其藥學上可接受的鹽。

可選的，所述拓撲異構酶抑制劑為拓撲異構酶II抑制劑。

例如，所述拓撲異構酶II抑制劑為依託泊苷（Etoposide）、替尼泊苷（Teniposide）、莎巴比星（Sabarubicin），或其藥學上可接受的鹽。

所述依託泊苷（Etoposide）的CAS號為33419-42-0；所述替尼泊苷（Teniposide）的CAS號為29767-20-2；所述莎巴比星（Sabarubicin）的CAS號為211100-13-9。

可選的，所述拓撲異構酶II抑制劑為依託泊苷（Etoposide）、替尼泊苷（Teniposide），或其藥學上可接受的鹽。

可選的，所述免疫檢查點抑制劑為抗PD-1/PD-L1抗體、PD-1/PD-L1小分子抑制劑或者TIGIT抗體。

可選的，所述免疫檢查點抑制劑為抗PD-1/PD-L1抗體，進一步的，所述抗PD-1/PD-L1抗體為帕博利珠單抗（pembrolizumab）、替雷利珠單抗（Tislelizumab）、尼伏單抗（Nivolumab）、特瑞普利單抗（Toripalimab）、阿替珠單抗（Atezolizumab）、度伐單抗（durvalumab）、阿維單抗（Avelumab）、阿特珠單抗（Atezolizumab）、卡瑞利珠單抗（Camrelizumab）、信迪利單抗（Sintilimab）、西米普利單抗（Cemiplimab）、恩沃利單抗（envafolimab）、BMS-936559、JS003、SHR-1316、GS-4224、AN-4005或者MX-10181。

可選的，所述免疫檢查點抑制劑為PD-1/PD-L1小分子抑制劑，進一步的，所述PD-1/PD-L1小分子抑制劑為INCB-086550、拉澤替尼（Lazertinib）、IMMH-010、CA-170、ABSK043或者RRx-001。

可選的，所述免疫檢查點抑制劑為TIGIT抗體，進一步的，所述TIGIT抗體為歐司珀利單抗（Ociperlimab/BGB-A1217）、維博利單抗（Vibostolimab）、domvanalimab（AB154）、替瑞利尤單抗（Tiragolumab）、Belrestotug、艾替利單抗（Etigilimab）、ONO-4686、JS-006、AZD-2936、HLX-301、SEA-TGT、M-6223、IBI-939、COM-902、AB-308、AGEN-1777、AK-127、BAT-6021、BAT-6005、ASP-8374、PM-1022、BMS-986207、HB0036或IBI-321。

可選的，所述FAK抑制劑為IN10018或其藥學上可接受的鹽，所述拓撲異構酶抑制劑為伊立替康（Irinotecan）或其藥學上可接受的鹽；所述免疫檢查點抑制劑為抗PD-1/PD-L1抗體或PD-1/PD-L1小分子抑制劑。

可選的，所述FAK抑制劑為IN10018或其藥學上可接受的鹽，所述拓撲異構酶抑制劑為伊立替康（Irinotecan）或其藥學上可接受的鹽；所述免疫檢查點抑制劑為抗PD-1/PD-L1抗體。

可選的，所述FAK抑制劑為IN10018或其藥學上可接受的鹽，所述拓撲異構酶抑制劑為依託泊苷（Etoposide）、替尼泊苷（Teniposide），或其藥學上可接受的鹽；所述免疫檢查點抑制劑為抗PD-1/PD-L1抗體或PD-1/PD-L1小分子抑制劑。

可選的，所述FAK抑制劑為IN10018或其藥學上可接受的鹽，所述拓撲異構酶抑制劑為依託泊苷（Etoposide）、替尼泊苷（Teniposide），或其藥學上可接受的鹽；所述免疫檢查點抑制劑為抗PD-1/PD-L1抗體。

可選的，所述FAK抑制劑、所述拓撲異構酶抑制劑和所述免疫檢查點抑制劑被同時或依次施用於所述對象。

可選的，所述腫瘤為膀胱癌、乳腺癌、子宮頸癌、結腸癌（包括結直腸癌）、食管癌、食管鱗狀細胞癌、頭頸癌、肝癌、肺癌（包括小細胞肺癌和非小細胞肺癌）、黑色素瘤、骨髓瘤、橫紋肌肉瘤、炎性肌纖維母細胞瘤、成神經細胞瘤、胰腺癌、前列腺癌、腎癌、腎細胞癌、肉瘤（包括骨肉瘤）、皮膚癌（包括鱗狀細胞癌）、胃癌、睾丸癌、甲狀腺癌、子宮癌、間皮瘤、膽管癌、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤、鼻咽癌、神經內分泌癌、卵巢癌、唾液腺癌、梭形細胞癌引起的轉移瘤、間變性大細胞淋巴瘤、甲狀腺未分化癌、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、神經膠質瘤或者惡性血液病，例如急性髓細胞性白血病（AML）、急性淋巴細胞白血病（ALL）、彌漫性大B細胞淋巴瘤（DLBCL）、濾泡性淋巴瘤（FL）、慢性淋巴細胞性白血病（CLL）、慢性粒細胞白血病（CML）。

可選的，其中所述腫瘤為乳腺癌或結腸癌（包括結直腸癌）。

為使本公開實施例的目的、技術方案和優點更加清楚，下面將結合本公開實施例的附圖，對本公開實施例的技術方案進行清楚、完整地描述。顯然，所描述的實施例是本公開的一部分實施例，而不是全部的實施例。基於所描述的本公開的實施例，本領域普通技術人員在無需創造性勞動的前提下所獲得的所有其他實施例，都屬於本發明保護的範圍。

本發明可在不偏離本發明基本屬性的情況下以其它具體形式來實施。應該理解的是，在不衝突的前提下，本發明的任一和所有實施方案都可與任一其它實施方案或多個其它實施方案中的技術特徵進行組合以得到另外的實施方案。本發明包括這樣的組合得到的另外的實施方案。

本公開中提及的所有出版物和專利在此通過引用以它們的全部內容納入本公開。如果通過引用納入的任何出版物和專利中使用的用途或術語與本公開中使用的用途或術語衝突，那麼以本公開的用途和術語為准。

本文所用的章節標題僅用於組織文章的目的，而不應被解釋為對所述主題的限制。

除非另有規定，本文使用的所有技術術語和科學術語具有要求保護主題所屬領域的通常含義。倘若對於某術語存在多個定義，則以本文定義為准。

除了在工作實施例中或另外指出之外，在說明書和權利要求中陳述的定量性質例如劑量的所有數字應理解為在所有情況中被術語「約」修飾。還應理解的是，本申請列舉的任何數字範圍意在包括該範圍內的所有的子範圍和該範圍或子範圍的各個端點的任何組合。

本公開中使用的「包括」、「含有」或者「包含」等類似的詞語意指出現該詞前面的要素涵蓋出現在該詞後面列舉的要素及其等同，而不排除未記載的要素。本文所用的術語「含有」或「包括（包含）」可以是開放式、半封閉式和封閉式的。換言之，所述術語也包括「基本上由…組成」、或「由…組成」。 [定義]

本申請中所用的下列術語和符號具有如下所述的含義，其所處的上下文中另有說明的除外。本文所用的術語「FAK抑制劑」是指FAK的有效抑制劑，可適於哺乳動物，特別是人。在一些實施方案中，所述FAK抑制劑為IN10018、Defactinib、GSK2256098、PF-00562271、VS-4718、AMP945、AMP886或其藥學上可接受的鹽，所述IN10018結構如下：。

所述Defactinib也稱為地法替尼，CAS號為1345713-71-4；所述GSK2256098的CAS號為1224887-10-8。所述PF-00562271的CAS號為717907-75-0；所述VS-4718的CAS號為1061353-68-1；所述APG-2449為亞盛醫藥研發；所述AMP945的CAS號為1393653-34-3。在一些實施方案中，所述FAK抑制劑優選為IN10018、Defactinib、AMP945或其藥學上可接受的鹽，在一些優選實施方案中，所述FAK抑制劑為IN10018或其藥學上可接受的鹽，尤其是IN10018酒石酸鹽。

本文所用術語「拓撲異構酶抑制劑」是指一類能夠抑制DNA拓撲異構酶活性的化合物。常見的有拓撲異構酶I抑制劑和拓撲異構酶II抑制劑。

本文所用術語「蒽環類」是指一類拓撲異構酶II抑制劑，包括阿黴素、表阿黴素、柔紅黴素和阿克拉黴素等。

本文所用的術語「免疫檢查點抑制劑」是指能夠通過調控免疫檢查點通路（例如PD-1、TIGIT、CTLA-4、LAG-3、TIM-3等）來提高免疫系統活性的藥物。在一些實施方案中，免疫檢查點抑制劑為PD-1/PD-L1（程序性細胞死亡蛋白1）通路的拮抗劑（也稱為「PD-1抑制劑」）或TIGIT抑制劑。PD-1抑制劑在本公開中也稱為PD-1/PD-L1抑制劑。例如，在本公開的治療方法、藥物和用途中所述PD-1/PD-L1抑制劑為PD-1/PD-L1抗體，包括但不限於帕博利珠單抗（可瑞達/Keytruda/K藥）、替雷利珠單抗（Tislelizumab/百澤安）、尼伏單抗（Nivolumab）、特瑞普利單抗（Toripalimab/拓益）、阿替珠單抗（Atezolizumab/泰聖奇）、度伐單抗（英飛凡/度伐魯單抗/durvalumab）、阿維單抗（Avelumab/Bavencio）、阿特珠單抗（MPDL3280A/Atezolizumab/Tecentriq/T藥）、BMS-936559（全人源抗PD-L1的IgG4單克隆抗體）、GS-4224、AN-4005或者MX-10181。在一些優選的實施方案中，PD-1抑制劑為特瑞普利單抗。在一些實施方案中，PD-1抑制劑用於治療人對象。在一些實施方案中，PD-1為人PD-1。PD-1/PD-L1抑制劑也包括PD-1/PD-L1小分子抑制劑，例如INCB-086550、拉澤替尼（Lazertinib）、IMMH-010、CA-170、ABSK043或者RRx-001。TIGIT（也稱為WUCAM、Vstm3、VSIG9）是Ig超家族的一種受體，是繼PD-1/PD-L1之後的新型免疫檢查點。例如，在本公開的治療方法、藥物和用途中，所述免疫檢查點抑制劑為TIGIT抑制劑，包括但不限於歐司珀利單抗（Ociperlimab/BGB-A1217）、維博利單抗（Vibostolimab）、domvanalimab（AB154）、替瑞利尤單抗（Tiragolumab）、Belrestotug、艾替利單抗（Etigilimab）、ONO-4686、JS-006、AZD-2936、HLX-301、SEA-TGT、M-6223、IBI-939、COM-902、AB-308、AGEN-1777、AK-127、BAT-6021、BAT-6005、ASP-8374、PM-1022、BMS-986207、HB0036或IBI-321。在一些實施方案中，TIGIT抑制劑用於治療人對象。為了避免歧義，本文中抗體均包括雙抗。

本文所用的「藥物組合」或者「藥物組合產品」既可以指採用一個劑量單位形式的固定組合（例如所有藥物活性成分以一種劑型存在）或者成套藥盒以組合施用的產品的情形，也可以指一種藥物與指示該藥物可與另外的一種或多種藥物聯合使用的說明書的組合情形。

本文所用的「聯合治療」或者「聯用藥物」是指一種藥物與另外的一種或多種藥物聯合使用來治療疾病，既包括一種藥物與另外的一種或多種藥物的組合的情形，也包括一種藥物與指示該藥物可與另外的一種或多種藥物聯合使用的說明書的組合情形。

「同時或依次施用」在本申請中是指一個給藥週期內（例如4周內、3周內、2周內、1周內或24小時以內）兩種以上的藥物同時或以一定時間間隔先後施用，藥物施用的方式（例如口服、靜脈、肌肉或皮下施用等）可以相同或不同，兩種以上的藥物的給藥頻率/週期可以相同或不同。當本公開的治療方法、產品或用途涉及兩種藥物時，兩種藥物可同時或以一定時間間隔分別單獨施用。當本公開的治療方法、產品或用途涉及三種藥物時，三種藥物可以在同一時間點施用，或者兩種藥物在一個時間點施用而剩下一種藥物在另一個時間點施用，或者所有三種藥物各自在不同時間點施用。

在一些實施方案中，PD-1/PD-L1抑制劑被靜脈（例如，作為靜脈輸注）或皮下施用或口服。優選地，PD-1/PD-L1抑制劑以靜脈輸注施用。

在一些實施方案中，TIGIT抑制劑被靜脈（例如，作為靜脈輸注）或皮下施用或口服。優選地，TIGIT抑制劑以靜脈輸注施用。

免疫檢查點抑制劑治療癌症的能力取決於腫瘤組織內腫瘤抗原特異性T細胞的存在。這要求腫瘤組織表達將自身與其非轉化的對應物區分開來的抗原，例如，通過被稱為新抗原（neoantigen）的新型蛋白產物。腫瘤新抗原負荷與免疫原性和敏感性（例如，對檢查點抑制劑療法的敏感性）密切相關，這意味著免疫原性較差的腫瘤應該在很大程度上對這些藥物耐藥。用於釋放可被APC攝取的腫瘤抗原的療法，如誘導免疫原性細胞死亡（ICD）的那些，可能會促進有效的抗腫瘤免疫，特別是當進一步與檢查點抑制劑聯合時。

本文所用的術語「治療」是指給患有疾病或者具有所述疾病的症狀的對象施用一種或多種藥物物質，用以治癒、緩解、減輕、改變、醫治、改善、改進或影響所述疾病或者所述疾病的症狀。在一些實施方案中，所述疾病是腫瘤或者癌症。

本文所用的術語「腫瘤」是指機體在各種致瘤因素的作用下，局部組織的細胞在基因水平上失去對其生長的正常調控，從而導致其克隆型異常增生而形成的異常病變。所述腫瘤包括，但不限於：膀胱癌、乳腺癌、子宮頸癌、結腸癌（包括結直腸癌）、食管癌、食管鱗狀細胞癌、頭頸癌、肝癌、肺癌（包括小細胞肺癌和非小細胞肺癌）、黑色素瘤、骨髓瘤、橫紋肌肉瘤、炎性肌纖維母細胞瘤、成神經細胞瘤、胰腺癌、前列腺癌、腎癌、腎細胞癌、肉瘤（包括骨肉瘤）、皮膚癌（包括鱗狀細胞癌）、胃癌、睾丸癌、甲狀腺癌、子宮癌、間皮瘤、膽管癌、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤、鼻咽癌、神經內分泌癌、卵巢癌、唾液腺癌、梭形細胞癌引起的轉移瘤、間變性大細胞淋巴瘤、甲狀腺未分化癌、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、神經膠質瘤或者惡性血液病，例如急性髓細胞性白血病（AML）、急性淋巴細胞白血病（ALL）、彌漫性大B細胞淋巴瘤（DLBCL）、濾泡性淋巴瘤（FL）、慢性淋巴細胞性白血病（CLL）、慢性粒細胞白血病（CML）。在一些實施方案中，所述腫瘤為乳腺癌或結腸癌（包括結直腸癌）。

本文所用的術語「對象」或「受試者」是指哺乳動物和非哺乳動物。哺乳動物是指哺乳類的任何成員，其包括但不限於：人；非人靈長類動物，如黑猩猩及其它猿類和猴類物種；農場動物，如牛、馬、綿羊、山羊和豬；家畜，如兔、狗和貓；實驗室動物，包括齧齒類動物，如大鼠、小鼠和豚鼠；等等。非哺乳動物的例子包括但不限於鳥等。術語「對象」並不限定特定的年齡或性別。在一些實施方案中，對象是人。

本文所用的術語「藥學上可接受的」指的是無毒的、生物學上可耐受的，適合給對象施用的。

本文所用的術語「藥學上可接受的鹽」指的是無毒的、生物學上可耐受的適合給對象施用的酸加成鹽，包括但不限於：與無機酸形成的酸加成鹽，例如鹽酸鹽、氫溴酸鹽、碳酸鹽、碳酸氫鹽、磷酸鹽、硫酸鹽、亞硫酸鹽、硝酸鹽等；以及與有機酸形成的酸加成鹽，例如甲酸鹽、乙酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、富馬酸鹽、酒石酸鹽、琥珀酸鹽、檸檬酸鹽、乳酸鹽、甲磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽、2-羥基乙磺酸鹽、苯甲酸鹽、水楊酸鹽、硬脂酸鹽和與式HOOC-（CH ₂） _n-COOH（其中n是0至4）的鏈烷二羧酸形成的鹽等。

此外，藥學上可接受的酸加成鹽可以按照由鹼性化合物製備酸加成鹽的常規操作通過將游離堿溶於合適的溶劑並且用酸處理該溶液來得到。本領域技術人員無需過多實驗即可確定各種可用來製備無毒的藥學上可接受的酸加成鹽的合成方法。

本文所用的術語「藥學上可接受的組合物」是指必須在化學和/或毒理學上與包括製劑的其他成分相容，和/或與接受其治療的對象相容。本文所用的術語「治療有效量」是指通常足以對對象產生有益治療效果的量。可以通過常規方法（例如建模、劑量遞增研究或臨床試驗）結合常規影響因素（例如給藥方式、化合物的藥代動力學、疾病的嚴重程度和病程、對象的病史、對象的健康狀況、對象對藥物的響應程度等）來確定本發明的治療有效量。

本文所用的術語「抑制」是指生物活動或過程的基線活性的降低。

本文所用的術語「試劑盒」是指用於盛放檢測化學成分、藥物殘留、病毒種類等化學試劑的盒子。本發明所述試劑盒可以是包括（i）FAK抑制劑、拓撲異構酶抑制劑和免疫檢查點抑制劑中的一種、二種或三種；以及（ii）說明書，所述說明書指出可使用FAK抑制劑、拓撲異構酶抑制劑和免疫檢查點抑制劑來在對象中治療腫瘤。在一種實施方案中，試劑盒包括（i）FAK抑制劑；以及（ii）說明書，所述說明書指出可使用FAK抑制劑、拓撲異構酶抑制劑和免疫檢查點抑制劑來在對象中治療腫瘤。在一種實施方案中，試劑盒包括（i）拓撲異構酶抑制劑；以及（ii）說明書，所述說明書指出可使用FAK抑制劑、拓撲異構酶抑制劑和免疫檢查點抑制劑來在對象中治療腫瘤。在一種實施方案中，試劑盒包括（i）免疫檢查點抑制劑；以及（ii）說明書，所述說明書指出可使用FAK抑制劑、拓撲異構酶抑制劑和免疫檢查點抑制劑來在對象中治療腫瘤。在一種實施方案中，試劑盒包括（i）FAK抑制劑、拓撲異構酶抑制劑和免疫檢查點抑制劑；以及（ii）說明書，所述說明書指出可使用FAK抑制劑、拓撲異構酶抑制劑和免疫檢查點抑制劑來在對象中治療腫瘤。在一種實施方案中，試劑盒包括（i）FAK抑制劑；以及（ii）說明書，所述說明書指出可使用FAK抑制劑和拓撲異構酶抑制劑來在對象中治療腫瘤。在一種實施方案中，試劑盒包括（i）拓撲異構酶抑制劑；以及（ii）說明書，所述說明書指出可使用拓撲異構酶抑制劑和FAK抑制劑在對象中治療腫瘤。

試劑盒的化合物可以包含在分開的容器中。可選地，兩種或更多種化合物包含在同一容器中。例如，試劑盒可以包括第一容器、第二容器、第三容器和包裝插頁，其中第一容器包括至少一個劑量的包括FAK抑制劑的藥物，第二容器包括至少一個劑量的拓撲異構酶抑制劑，第三容器包括至少一個劑量的免疫檢查點抑制劑的藥物，且所述包裝插頁包括使用藥物治療對象的腫瘤的說明。第一容器、第二容器和第三容器可以包含相同或不同形狀（例如，小瓶、注射器和瓶）和/或材料（例如，塑料或玻璃）。試劑盒還可以包括可以有助於施用藥物的其他材料，如稀釋劑、過濾器、IV袋和管線、針和注射器。

給予受試者的FAK抑制劑、拓撲異構酶抑制劑、或免疫檢查點抑制劑的精確量將取決於各種因素，例如給定的藥物或化合物，藥物製劑，給藥途徑，疾病類型，病症，所治療的受試者或宿主的身份等，但是仍然可以由本領域技術人員常規確定。例如，確定有效量還取決於細胞增殖的程度，嚴重性和類型。技術人員將能夠根據這些和其他因素確定合適的劑量。

FAK抑制劑、拓撲異構酶抑制劑、或免疫檢查點抑制劑可選擇合適的方式例如口服、靜脈、肌肉或皮下施用給藥。

例如，口服給藥時，可以將藥物與藥學上可接受的載體例如惰性稀釋劑或可吸收的食用載體一起口服給藥。它們可以封裝在硬殼或軟殼明膠膠囊中，可以壓制成片劑，或者可以直接與患者的食物混合。例如，藥物可以與一種或多種賦形劑組合，並以可攝取的片劑，口腔片劑，錠劑，膠囊，酏劑，懸浮液，糖漿或糯米紙囊劑等形式使用。片劑，錠劑，丸劑，膠囊劑等可進一步包括：粘合劑，例如黃芪膠，阿拉伯膠，玉米澱粉或明膠；賦形劑，如磷酸二鈣；崩解劑，例如玉米澱粉，馬鈴薯澱粉，海藻酸等；潤滑劑，例如硬脂酸鎂；或甜味劑，例如蔗糖，果糖，乳糖或阿斯巴甜；或調味劑。

例如，輸注或注射靜脈內或腹膜內給藥時，藥物的溶液可以在水中製備，任選地與無毒的表面活性劑混合。

用於注射或輸注的示例性藥物劑型包括：無菌水溶液，分散液，或包含活性成分的無菌粉末，該無菌粉末適合於臨時製備無菌注射或輸注溶液或分散液。無論如何，最終劑型在生產和儲存條件下均應無菌，流動且穩定。

無菌注射溶液可以通過將所需量的藥物與所需的上述各種其他成分摻入適當的溶劑中，然後過濾滅菌來製備。對於用於製備無菌注射溶液的無菌粉末，優選的製備方法可以是真空乾燥和冷凍乾燥技術，其可以產生活性成分加上先前無菌過濾後存在的任何其他所需成分的粉末。

用於治療所需的FAK抑制劑、拓撲異構酶抑制劑、或免疫檢查點抑制劑的量不僅可以隨所選擇的特定試劑而變化，還可以隨給藥途徑，所治療疾病的性質以及患者的年齡和狀況而變化，並且最終可以由主治醫師或臨床醫生自行決定。然而，一般而言，劑量可以在每天約0.1至約50mg/kg體重的範圍內。

所述FAK抑制劑以成年人中5mg/天-300mg/天的劑量範圍施用。在一種具體的實施方案中，IN10018或其藥學上可接受鹽以成年人中5mg/天-100 mg/天的劑量施用，例如，IN10018或其藥學上可接受鹽以成年人中25mg/天-100 mg/天的劑量施用，所述劑量以IN10018計。

所述拓撲異構酶抑制劑以成年人中每週1-300 mg/m2的劑量範圍施用。在一種具體的實施方式中，伊立替康或其藥學上可接受的鹽以成年人中每週1-300 mg/m2的劑量施用，用量以伊立替康計；依託泊苷或其藥學上可接受的鹽以成年人中每週1-300 mg/m2的劑量施用，用量以依託泊苷計；替尼泊苷以成年人中每週1-300 mg/m2的劑量施用，用量以替尼泊苷計。

所述免疫檢查點抑制劑每次給藥以成年人中2-10mg/kg或者50-1200mg的劑量施用，每2周到3周給藥一次。在一種具體的實施方式中，所述免疫檢查點抑制劑每次給藥以成年人中3-10mg/kg或者100-1200mg的劑量施用，每2周到3周給藥一次。

本文所用的未具體定義的技術和科學術語具有本發明所屬領域的技術人員通常理解的含義。

在一些實施方案中，本公開還公開了以下： [實施方案1]

FAK抑制劑、拓撲異構酶抑制劑和免疫檢查點抑制劑，其用於在對象中治療腫瘤的方法，其中所述拓撲異構酶抑制劑不為蒽環類。 [實施方案2]

如實施方案1所述的FAK抑制劑、拓撲異構酶抑制劑和免疫檢查點抑制劑，其中所述FAK抑制劑為IN10018、Defactinib、GSK2256098、PF-00562271、VS-4718、APG-2449、AMP945、AMP886或其藥學上可接受的鹽，優選為IN10018、Defactinib、AMP945或其藥學上可接受的鹽，進一步優選為IN10018或其藥學上可接受的鹽，尤其是IN10018酒石酸鹽，所述IN10018結構如下：。 [實施方案3]

如實施方案1-2所述的FAK抑制劑、拓撲異構酶抑制劑和免疫檢查點抑制劑，其中所述拓撲異構酶抑制劑為拓撲異構酶I抑制劑。 [實施方案4]

如實施方案3所述的FAK抑制劑、拓撲異構酶抑制劑和免疫檢查點抑制劑，其中所述拓撲異構酶I抑制劑為拓撲替康（Topotecan）、伊立替康（Irinotecan）、貝洛替康（Belotecan）、科西特康（Cositecan）、依喜替康（Exatecan，DX-8951）、茚並異喹啉（Indenoisoquinoline）、Indotecan （LMP-400）、Indimitecan （LMP-776）、希明替康（Simmitecan）、Gimatecan （ST1481）、EC-112002 、PLX-038 （NK012）、AR-67，或其藥學上可接受的鹽。 [實施方案5]

如實施方案3-4任一項所述的FAK抑制劑、拓撲異構酶抑制劑和免疫檢查點抑制劑，其中所述拓撲異構酶I抑制劑為伊立替康（Irinotecan），或其藥學上可接受的鹽。

如實施方案3-4任一項所述的FAK抑制劑、拓撲異構酶抑制劑和免疫檢查點抑制劑，其中所述拓撲異構酶I抑制劑為伊立替康（Irinotecan），或其藥學上可接受的鹽。 [實施方案6]

如實施方案1-2任一項所述的FAK抑制劑、拓撲異構酶抑制劑和免疫檢查點抑制劑，其中所述拓撲異構酶抑制劑為拓撲異構酶II抑制劑。 [實施方案7]

如實施方案6所述的FAK抑制劑、拓撲異構酶抑制劑和免疫檢查點抑制劑，其中所述拓撲異構酶II抑制劑為依託泊苷（Etoposide）、替尼泊苷（Teniposide）、莎巴比星（Sabarubicin），或其藥學上可接受的鹽。 [實施方案8]

如實施方案7任一項所述的FAK抑制劑、拓撲異構酶抑制劑和免疫檢查點抑制劑，其中所述拓撲異構酶II抑制劑為依託泊苷（Etoposide）、替尼泊苷（Teniposide），或其藥學上可接受的鹽。 [實施方案9]

如實施方案1-8任一項所述的FAK抑制劑、拓撲異構酶抑制劑和免疫檢查點抑制劑，其中所述免疫檢查點抑制劑為抗PD-1/PD-L1抗體、PD-1/PD-L1小分子抑制劑或者TIGIT抗體。 [實施方案10]

如實施方案1-9任一項所述的FAK抑制劑、拓撲異構酶抑制劑和免疫檢查點抑制劑，其中所述免疫檢查點抑制劑為抗PD-1/PD-L1抗體，進一步的，所述抗PD-1/PD-L1抗體為帕博利珠單抗（pembrolizumab）、替雷利珠單抗（Tislelizumab）、尼伏單抗（Nivolumab）、特瑞普利單抗（Toripalimab）、阿替珠單抗（Atezolizumab）、度伐單抗（durvalumab）、阿維單抗（Avelumab）、阿特珠單抗（Atezolizumab）、卡瑞利珠單抗（Camrelizumab）、信迪利單抗（Sintilimab）、西米普利單抗（Cemiplimab）、恩沃利單抗（envafolimab）、BMS-936559、JS003、SHR-1316、GS-4224、AN-4005或者MX-10181。 [實施方案11]

如實施方案1-9任一項所述的用途、藥物組合產品或者方法，其中所述免疫檢查點抑制劑為PD-1/PD-L1小分子抑制劑，進一步的，所述PD-1/PD-L1小分子抑制劑為INCB-086550、拉澤替尼（Lazertinib）、IMMH-010、CA-170、ABSK043或者RRx-001。 [實施方案12]

如實施方案1-9任一項所述的FAK抑制劑、拓撲異構酶抑制劑和免疫檢查點抑制劑，其中所述免疫檢查點抑制劑為TIGIT抗體，進一步的，所述TIGIT抗體為歐司珀利單抗（Ociperlimab/BGB-A1217）、維博利單抗（Vibostolimab）、domvanalimab（AB154）、替瑞利尤單抗（Tiragolumab）、Belrestotug、艾替利單抗（Etigilimab）、ONO-4686、JS-006、AZD-2936、HLX-301、SEA-TGT、M-6223、IBI-939、COM-902、AB-308、AGEN-1777、AK-127、BAT-6021、BAT-6005、ASP-8374、PM-1022、BMS-986207、HB0036或IBI-321。 [實施方案13]

如實施方案1所述的FAK抑制劑、拓撲異構酶抑制劑和免疫檢查點抑制劑，其中所述FAK抑制劑為IN10018或其藥學上可接受的鹽；所述拓撲異構酶抑制劑為伊立替康（Irinotecan）或其藥學上可接受的鹽；所述免疫檢查點抑制劑為抗PD-1/PD-L1抗體或PD-1/PD-L1小分子抑制劑，尤其是抗PD-1/PD-L1抗體。 [實施方案14]

如實施方案1所述的FAK抑制劑、拓撲異構酶抑制劑和免疫檢查點抑制劑，其中所述FAK抑制劑為IN10018或其藥學上可接受的鹽；所述拓撲異構酶抑制劑為依託泊苷（Etoposide）、替尼泊苷（Teniposide），或其藥學上可接受的鹽；所述免疫檢查點抑制劑為抗PD-1/PD-L1抗體或PD-1/PD-L1小分子抑制劑，尤其是抗PD-1/PD-L1抗體。 [實施方案15]

如實施方案1-14任一項所述的FAK抑制劑、拓撲異構酶抑制劑和免疫檢查點抑制劑，所述FAK抑制劑、所述拓撲異構酶抑制劑和所述免疫檢查點抑制劑被同時或依次施用於所述對象。 [實施方案16]

如實施方案1-15任一項所述的FAK抑制劑、拓撲異構酶抑制劑和免疫檢查點抑制劑，其中所述腫瘤為膀胱癌、乳腺癌、子宮頸癌、結腸癌（包括結直腸癌）、食管癌、食管鱗狀細胞癌、頭頸癌、肝癌、肺癌（包括小細胞肺癌和非小細胞肺癌）、黑色素瘤、骨髓瘤、橫紋肌肉瘤、炎性肌纖維母細胞瘤、成神經細胞瘤、胰腺癌、前列腺癌、腎癌、腎細胞癌、肉瘤（包括骨肉瘤）、皮膚癌（包括鱗狀細胞癌）、胃癌、睾丸癌、甲狀腺癌、子宮癌、間皮瘤、膽管癌、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤、鼻咽癌、神經內分泌癌、卵巢癌、唾液腺癌、梭形細胞癌引起的轉移瘤、間變性大細胞淋巴瘤、甲狀腺未分化癌、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、神經膠質瘤或者惡性血液病，例如急性髓細胞性白血病（AML）、急性淋巴細胞白血病（ALL）、彌漫性大B細胞淋巴瘤（DLBCL）、濾泡性淋巴瘤（FL）、慢性淋巴細胞性白血病（CLL）、慢性粒細胞白血病（CML）；優選地，所述腫瘤為乳腺癌、卵巢癌、結腸癌（包括結直腸癌）、肺癌（包括小細胞肺癌和非小細胞肺癌）、黑色素瘤或胰腺癌。 [實施方案17]

如實施方案1-16任一項所述的FAK抑制劑、拓撲異構酶抑制劑和免疫檢查點抑制劑，其中所述腫瘤為乳腺癌或結腸癌（包括結直腸癌）。 [實施方案18]

一種試劑盒或藥學上可接受的組合物，其包括：（a）FAK抑制劑；（b）拓撲異構酶抑制劑，所述拓撲異構酶抑制劑不為蒽環類；和（c）免疫檢查點抑制劑。 [實施方案19]

如實施方案18所述的試劑盒或組合物，其中所述FAK抑制劑為IN10018、Defactinib、GSK2256098、PF-00562271、VS-4718、APG-2449、AMP945、AMP886或其藥學上可接受的鹽，優選為IN10018、Defactinib、AMP945或其藥學上可接受的鹽，進一步優選為IN10018或其藥學上可接受的鹽，尤其是IN10018酒石酸鹽，所述IN10018結構如下：。 [實施方案20]

如實施方案18-19所述的試劑盒或組合物，其中所述拓撲異構酶抑制劑為拓撲異構酶I抑制劑。 [實施方案21]

如實施方案20所述的試劑盒或組合物，其中所述拓撲異構酶I抑制劑為拓撲替康（Topotecan）、伊立替康（Irinotecan）、貝洛替康（Belotecan）、科西特康（Cositecan）、依喜替康（Exatecan，DX-8951）、茚並異喹啉（Indenoisoquinoline）、Indotecan （LMP-400）、Indimitecan （LMP-776）、希明替康（Simmitecan）、Gimatecan （ST1481）、EC-112002 、PLX-038 （NK012）、AR-67，或其藥學上可接受的鹽。 [實施方案22]

如實施方案20-21任一項所述的試劑盒或組合物，其中所述拓撲異構酶I抑制劑為伊立替康（Irinotecan），或其藥學上可接受的鹽。 [實施方案23]

如實施方案18-19任一項所述的試劑盒或組合物，其中所述拓撲異構酶抑制劑為拓撲異構酶II抑制劑。 [實施方案24]

如實施方案23所述的試劑盒或組合物，其中所述拓撲異構酶II抑制劑為依託泊苷（Etoposide）、替尼泊苷（Teniposide）、莎巴比星（Sabarubicin），或其藥學上可接受的鹽。 [實施方案25]

如實施方案24所述的試劑盒或組合物，其中所述拓撲異構酶II抑制劑為依託泊苷（Etoposide）、替尼泊苷（Teniposide），或其藥學上可接受的鹽。 [實施方案26]

如實施方案18-25任一項所述的試劑盒或組合物，其中所述免疫檢查點抑制劑為抗PD-1/PD-L1抗體、PD-1/PD-L1小分子抑制劑或者TIGIT抗體。 [實施方案27]

如實施方案18-26任一項所述的試劑盒或組合物，其中所述免疫檢查點抑制劑為抗PD-1/PD-L1抗體，進一步的，所述抗PD-1/PD-L1抗體為帕博利珠單抗（pembrolizumab）、替雷利珠單抗（Tislelizumab）、尼伏單抗（Nivolumab）、特瑞普利單抗（Toripalimab）、阿替珠單抗（Atezolizumab）、度伐單抗（durvalumab）、阿維單抗（Avelumab）、阿特珠單抗（Atezolizumab）、卡瑞利珠單抗（Camrelizumab）、信迪利單抗（Sintilimab）、西米普利單抗（Cemiplimab）、恩沃利單抗（envafolimab）、BMS-936559、JS003、SHR-1316、GS-4224、AN-4005或者MX-10181。 [實施方案28]

如實施方案18-26任一項所述的用途、藥物組合產品或者方法，其中所述免疫檢查點抑制劑為PD-1/PD-L1小分子抑制劑，進一步的，所述PD-1/PD-L1小分子抑制劑為INCB-086550、拉澤替尼（Lazertinib）、IMMH-010、CA-170、ABSK043或者RRx-001。 [實施方案29]

如實施方案18-26任一項所述的試劑盒或組合物，其中所述免疫檢查點抑制劑為TIGIT抗體，進一步的，所述TIGIT抗體為歐司珀利單抗（Ociperlimab/BGB-A1217）、維博利單抗（Vibostolimab）、domvanalimab（AB154）、替瑞利尤單抗（Tiragolumab）、Belrestotug、艾替利單抗（Etigilimab）、ONO-4686、JS-006、AZD-2936、HLX-301、SEA-TGT、M-6223、IBI-939、COM-902、AB-308、AGEN-1777、AK-127、BAT-6021、BAT-6005、ASP-8374、PM-1022、BMS-986207、HB0036或IBI-321。 [實施方案30]

如實施方案18所述的試劑盒或組合物，其中所述FAK抑制劑為IN10018或其藥學上可接受的鹽；所述拓撲異構酶抑制劑為伊立替康（Irinotecan）或其藥學上可接受的鹽；所述免疫檢查點抑制劑為抗PD-1/PD-L1抗體或PD-1/PD-L1小分子抑制劑，尤其是抗PD-1/PD-L1抗體。 [實施方案31]

如實施方案18所述的試劑盒或組合物，其中所述FAK抑制劑為IN10018或其藥學上可接受的鹽；所述拓撲異構酶抑制劑為依託泊苷（Etoposide）、替尼泊苷（Teniposide），或其藥學上可接受的鹽；所述免疫檢查點抑制劑為抗PD-1/PD-L1抗體或PD-1/PD-L1小分子抑制劑，尤其是抗PD-1/PD-L1抗體。 [實施方案32]

如實施方案18-31任一項所述的試劑盒或組合物，其中所述組合物用於藥物。 [實施方案33]

如實施方案32所述的試劑盒或組合物，其中所述藥物用於治療腫瘤，所述腫瘤為膀胱癌、乳腺癌、子宮頸癌、結腸癌（包括結直腸癌）、食管癌、食管鱗狀細胞癌、頭頸癌、肝癌、肺癌（包括小細胞肺癌和非小細胞肺癌）、黑色素瘤、骨髓瘤、橫紋肌肉瘤、炎性肌纖維母細胞瘤、成神經細胞瘤、胰腺癌、前列腺癌、腎癌、腎細胞癌、肉瘤（包括骨肉瘤）、皮膚癌（包括鱗狀細胞癌）、胃癌、睾丸癌、甲狀腺癌、子宮癌、間皮瘤、膽管癌、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤、鼻咽癌、神經內分泌癌、卵巢癌、唾液腺癌、梭形細胞癌引起的轉移瘤、間變性大細胞淋巴瘤、甲狀腺未分化癌、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、神經膠質瘤或者惡性血液病，例如急性髓細胞性白血病（AML）、急性淋巴細胞白血病（ALL）、彌漫性大B細胞淋巴瘤（DLBCL）、濾泡性淋巴瘤（FL）、慢性淋巴細胞性白血病（CLL）、慢性粒細胞白血病（CML）；優選地，所述腫瘤為乳腺癌、卵巢癌、結腸癌（包括結直腸癌）、肺癌（包括小細胞肺癌和非小細胞肺癌）、黑色素瘤或胰腺癌。 [實施方案34]

如實施方案33所述的試劑盒或組合物，其中所述腫瘤為乳腺癌或結腸癌（包括結直腸癌）。 [實施方案35]

一種在對象中治療腫瘤的方法，其中所述方法包括向所述對象施用治療有效量的FAK抑制劑、拓撲異構酶抑制劑和免疫檢查點抑制劑，其中所述拓撲異構酶抑制劑不為蒽環類。 [實施方案36]

如實施方案35所述的方法，其中所述FAK抑制劑為IN10018、Defactinib、GSK2256098、PF-00562271、VS-4718、APG-2449、AMP945、AMP886或其藥學上可接受的鹽，優選為IN10018、Defactinib、AMP945或其藥學上可接受的鹽，進一步優選為IN10018或其藥學上可接受的鹽，尤其是IN10018酒石酸鹽，所述IN10018結構如下：。 [實施方案37]

如實施方案35-36所述的方法，其中所述拓撲異構酶抑制劑為拓撲異構酶I抑制劑。 [實施方案38]

如實施方案37所述的方法，其中所述拓撲異構酶I抑制劑為拓撲替康（Topotecan）、伊立替康（Irinotecan）、貝洛替康（Belotecan）、科西特康（Cositecan）、依喜替康（Exatecan，DX-8951）、茚並異喹啉（Indenoisoquinoline）、Indotecan （LMP-400）、Indimitecan （LMP-776）、希明替康（Simmitecan）、Gimatecan （ST1481）、EC-112002 、PLX-038 （NK012）、AR-67，或其藥學上可接受的鹽。 [實施方案39]

如實施方案38所述的方法，其中所述拓撲異構酶I抑制劑為伊立替康（Irinotecan），或其藥學上可接受的鹽。 [實施方案40]

如實施方案35-36任一項所述的方法，其中所述拓撲異構酶抑制劑為拓撲異構酶II抑制劑。 [實施方案41]

如實施方案40所述的方法，其中所述拓撲異構酶II抑制劑為依託泊苷（Etoposide）、替尼泊苷（Teniposide）、莎巴比星（Sabarubicin），或其藥學上可接受的鹽。 [實施方案42]

如實施方案41所述的方法，其中所述拓撲異構酶II抑制劑為依託泊苷（Etoposide）、替尼泊苷（Teniposide），或其藥學上可接受的鹽。 [實施方案43]

如實施方案35-42任一項所述的方法，其中所述免疫檢查點抑制劑為抗PD-1/PD-L1抗體、PD-1/PD-L1小分子抑制劑或者TIGIT抗體。 [實施方案44]

如實施方案35-43任一項所述的方法，其中所述免疫檢查點抑制劑為抗PD-1/PD-L1抗體，進一步的，所述抗PD-1/PD-L1抗體為帕博利珠單抗（pembrolizumab）、替雷利珠單抗（Tislelizumab）、尼伏單抗（Nivolumab）、特瑞普利單抗（Toripalimab）、阿替珠單抗（Atezolizumab）、度伐單抗（durvalumab）、阿維單抗（Avelumab）、阿特珠單抗（Atezolizumab）、卡瑞利珠單抗（Camrelizumab）、信迪利單抗（Sintilimab）、西米普利單抗（Cemiplimab）、恩沃利單抗（envafolimab）、BMS-936559、JS003、SHR-1316、GS-4224、AN-4005或者MX-10181。 [實施方案45]

如實施方案35-43任一項所述的用途、藥物組合產品或者方法，其中所述免疫檢查點抑制劑為PD-1/PD-L1小分子抑制劑，進一步的，所述PD-1/PD-L1小分子抑制劑為INCB-086550、拉澤替尼（Lazertinib）、IMMH-010、CA-170、ABSK043或者RRx-001。 [實施方案46]

如實施方案35-43任一項所述的方法，其中所述免疫檢查點抑制劑為TIGIT抗體，進一步的，所述TIGIT抗體為歐司珀利單抗（Ociperlimab/BGB-A1217）、維博利單抗（Vibostolimab）、domvanalimab（AB154）、替瑞利尤單抗（Tiragolumab）、Belrestotug、艾替利單抗（Etigilimab）、ONO-4686、JS-006、AZD-2936、HLX-301、SEA-TGT、M-6223、IBI-939、COM-902、AB-308、AGEN-1777、AK-127、BAT-6021、BAT-6005、ASP-8374、PM-1022、BMS-986207、HB0036或IBI-321。 [實施方案47]

如實施方案35所述的方法，其中所述FAK抑制劑為IN10018或其藥學上可接受的鹽；所述拓撲異構酶抑制劑為伊立替康（Irinotecan）或其藥學上可接受的鹽；所述免疫檢查點抑制劑為抗PD-1/PD-L1抗體或PD-1/PD-L1小分子抑制劑，尤其是抗PD-1/PD-L1抗體。 [實施方案48]

如實施方案35所述的方法，其中所述FAK抑制劑為IN10018或其藥學上可接受的鹽；所述拓撲異構酶抑制劑為依託泊苷（Etoposide）、替尼泊苷（Teniposide），或其藥學上可接受的鹽；所述免疫檢查點抑制劑為抗PD-1/PD-L1抗體或PD-1/PD-L1小分子抑制劑，尤其是抗PD-1/PD-L1抗體。 [實施方案49]

如實施方案35-48任一項所述的方法，所述FAK抑制劑、所述拓撲異構酶抑制劑和所述免疫檢查點抑制劑被同時或依次施用於所述對象。 [實施方案50]

如實施方案35-49任一項所述的方法，其中所述腫瘤為膀胱癌、乳腺癌、子宮頸癌、結腸癌（包括結直腸癌）、食管癌、食管鱗狀細胞癌、頭頸癌、肝癌、肺癌（包括小細胞肺癌和非小細胞肺癌）、黑色素瘤、骨髓瘤、橫紋肌肉瘤、炎性肌纖維母細胞瘤、成神經細胞瘤、胰腺癌、前列腺癌、腎癌、腎細胞癌、肉瘤（包括骨肉瘤）、皮膚癌（包括鱗狀細胞癌）、胃癌、睾丸癌、甲狀腺癌、子宮癌、間皮瘤、膽管癌、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤、鼻咽癌、神經內分泌癌、卵巢癌、唾液腺癌、梭形細胞癌引起的轉移瘤、間變性大細胞淋巴瘤、甲狀腺未分化癌、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、神經膠質瘤或者惡性血液病，例如急性髓細胞性白血病（AML）、急性淋巴細胞白血病（ALL）、彌漫性大B細胞淋巴瘤（DLBCL）、濾泡性淋巴瘤（FL）、慢性淋巴細胞性白血病（CLL）、慢性粒細胞白血病（CML）；優選地，所述腫瘤為乳腺癌、卵巢癌、結腸癌（包括結直腸癌）、肺癌（包括小細胞肺癌和非小細胞肺癌）、黑色素瘤或胰腺癌。 [實施方案51]

如實施方案35-50任一項所述的方法，其中所述腫瘤為乳腺癌或結腸癌（包括結直腸癌）。 [實施方案52]

FAK抑制劑、拓撲異構酶抑制劑和免疫檢查點抑制劑，其用於通過在對象中增加免疫原性細胞死亡來治療腫瘤的方法，其中所述拓撲異構酶抑制劑不為蒽環類。 [實施方案53]

如實施方案52所述的FAK抑制劑、拓撲異構酶抑制劑和免疫檢查點抑制劑，其中所述FAK抑制劑為IN10018、Defactinib、GSK2256098、PF-00562271、VS-4718、APG-2449、AMP945、AMP886或其藥學上可接受的鹽，優選為IN10018、Defactinib、AMP945或其藥學上可接受的鹽，進一步優選為IN10018或其藥學上可接受的鹽，尤其是IN10018酒石酸鹽，所述IN10018結構如下：。 [實施方案54]

如實施方案52-53所述的FAK抑制劑、拓撲異構酶抑制劑和免疫檢查點抑制劑，其中所述拓撲異構酶抑制劑為拓撲異構酶I抑制劑。 [實施方案55]

如實施方案54所述的FAK抑制劑、拓撲異構酶抑制劑和免疫檢查點抑制劑，其中所述拓撲異構酶I抑制劑為拓撲替康（Topotecan）、伊立替康（Irinotecan）、貝洛替康（Belotecan）、科西特康（Cositecan）、依喜替康（Exatecan，DX-8951）、茚並異喹啉（Indenoisoquinoline）、Indotecan （LMP-400）、Indimitecan （LMP-776）、希明替康（Simmitecan）、Gimatecan （ST1481）、EC-112002 、PLX-038 （NK012）、AR-67，或其藥學上可接受的鹽。 [實施方案56]

如實施方案55所述的FAK抑制劑、拓撲異構酶抑制劑和免疫檢查點抑制劑，其中所述拓撲異構酶I抑制劑為伊立替康（Irinotecan）或其藥學上可接受的鹽。 [實施方案57]

如實施方案52-53任一項所述的FAK抑制劑、拓撲異構酶抑制劑和免疫檢查點抑制劑，其中所述拓撲異構酶抑制劑為拓撲異構酶II抑制劑。 [實施方案58]

如實施方案57所述的FAK抑制劑、拓撲異構酶抑制劑和免疫檢查點抑制劑，其中所述拓撲異構酶II抑制劑為依託泊苷（Etoposide）、替尼泊苷（Teniposide）、莎巴比星（Sabarubicin），或其藥學上可接受的鹽。 [實施方案59]

如實施方案58任一項所述的FAK抑制劑、拓撲異構酶抑制劑和免疫檢查點抑制劑，其中所述拓撲異構酶II抑制劑為依託泊苷（Etoposide）、替尼泊苷（Teniposide），或其藥學上可接受的鹽。 [實施方案60]

如實施方案52-59任一項所述的FAK抑制劑、拓撲異構酶抑制劑和免疫檢查點抑制劑，其中所述免疫檢查點抑制劑為抗PD-1/PD-L1抗體、PD-1/PD-L1小分子抑制劑或者TIGIT抗體。 [實施方案61]

如實施方案52-60任一項所述的FAK抑制劑、拓撲異構酶抑制劑和免疫檢查點抑制劑，其中所述免疫檢查點抑制劑為抗PD-1/PD-L1抗體，進一步的，所述抗PD-1/PD-L1抗體為帕博利珠單抗（pembrolizumab）、替雷利珠單抗（Tislelizumab）、尼伏單抗（Nivolumab）、特瑞普利單抗（Toripalimab）、阿替珠單抗（Atezolizumab）、度伐單抗（durvalumab）、阿維單抗（Avelumab）、阿特珠單抗（Atezolizumab）、卡瑞利珠單抗（Camrelizumab）、信迪利單抗（Sintilimab）、西米普利單抗（Cemiplimab）、恩沃利單抗（envafolimab）、BMS-936559、JS003、SHR-1316、GS-4224、AN-4005或者MX-10181。 [實施方案62]

如實施方案52-60任一項所述的用途、藥物組合產品或者方法，其中所述免疫檢查點抑制劑為PD-1/PD-L1小分子抑制劑，進一步的，所述PD-1/PD-L1小分子抑制劑為INCB-086550、拉澤替尼（Lazertinib）、IMMH-010、CA-170、ABSK043或者RRx-001。 [實施方案63]

如實施方案52-60任一項所述的FAK抑制劑、拓撲異構酶抑制劑和免疫檢查點抑制劑，其中所述免疫檢查點抑制劑為TIGIT抗體，進一步的，所述TIGIT抗體為歐司珀利單抗（Ociperlimab/BGB-A1217）、維博利單抗（Vibostolimab）、domvanalimab（AB154）、替瑞利尤單抗（Tiragolumab）、Belrestotug、艾替利單抗（Etigilimab）、ONO-4686、JS-006、AZD-2936、HLX-301、SEA-TGT、M-6223、IBI-939、COM-902、AB-308、AGEN-1777、AK-127、BAT-6021、BAT-6005、ASP-8374、PM-1022、BMS-986207、HB0036或IBI-321。 [實施方案64]

如實施方案52所述的FAK抑制劑、拓撲異構酶抑制劑和免疫檢查點抑制劑，其中所述FAK抑制劑為IN10018或其藥學上可接受的鹽；所述拓撲異構酶抑制劑為伊立替康（Irinotecan）或其藥學上可接受的鹽；所述免疫檢查點抑制劑為抗PD-1/PD-L1抗體或PD-1/PD-L1小分子抑制劑，尤其是抗PD-1/PD-L1抗體。 [實施方案65]

如實施方案52所述的FAK抑制劑、拓撲異構酶抑制劑和免疫檢查點抑制劑，其中所述FAK抑制劑為IN10018或其藥學上可接受的鹽；所述拓撲異構酶抑制劑為依託泊苷（Etoposide）、替尼泊苷（Teniposide），或其藥學上可接受的鹽；所述免疫檢查點抑制劑為抗PD-1/PD-L1抗體或PD-1/PD-L1小分子抑制劑，尤其是抗PD-1/PD-L1抗體。 [實施方案66]

如實施方案52-65任一項所述的FAK抑制劑、拓撲異構酶抑制劑和免疫檢查點抑制劑，所述FAK抑制劑、所述拓撲異構酶抑制劑和所述免疫檢查點抑制劑被同時或依次施用於所述對象。 [實施方案67]

如實施方案52-66任一項所述的FAK抑制劑、拓撲異構酶抑制劑和免疫檢查點抑制劑，其中所述腫瘤為膀胱癌、乳腺癌、子宮頸癌、結腸癌（包括結直腸癌）、食管癌、食管鱗狀細胞癌、頭頸癌、肝癌、肺癌（包括小細胞肺癌和非小細胞肺癌）、黑色素瘤、骨髓瘤、橫紋肌肉瘤、炎性肌纖維母細胞瘤、成神經細胞瘤、胰腺癌、前列腺癌、腎癌、腎細胞癌、肉瘤（包括骨肉瘤）、皮膚癌（包括鱗狀細胞癌）、胃癌、睾丸癌、甲狀腺癌、子宮癌、間皮瘤、膽管癌、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤、鼻咽癌、神經內分泌癌、卵巢癌、唾液腺癌、梭形細胞癌引起的轉移瘤、間變性大細胞淋巴瘤、甲狀腺未分化癌、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、神經膠質瘤或者惡性血液病，例如急性髓細胞性白血病（AML）、急性淋巴細胞白血病（ALL）、彌漫性大B細胞淋巴瘤（DLBCL）、濾泡性淋巴瘤（FL）、慢性淋巴細胞性白血病（CLL）、慢性粒細胞白血病（CML）；優選地，所述腫瘤為乳腺癌、卵巢癌、結腸癌（包括結直腸癌）、肺癌（包括小細胞肺癌和非小細胞肺癌）、黑色素瘤或胰腺癌。 [實施方案68]

如實施方案52-67任一項所述的FAK抑制劑、拓撲異構酶抑制劑和免疫檢查點抑制劑，其中所述腫瘤為乳腺癌或結腸癌（包括結直腸癌）。 [實施方案69]

一種通過在對象中增加免疫原性細胞死亡來治療腫瘤的方法，其中所述方法包括向所述對象施用治療有效量的FAK抑制劑、拓撲異構酶抑制劑和免疫檢查點抑制劑，其中所述拓撲異構酶抑制劑不為蒽環類。 [實施方案70]

如實施方案69所述的方法，其中所述FAK抑制劑為IN10018、Defactinib、GSK2256098、PF-00562271、VS-4718、APG-2449、AMP945、AMP886或其藥學上可接受的鹽，優選為IN10018、Defactinib、AMP945或其藥學上可接受的鹽，進一步優選為IN10018或其藥學上可接受的鹽，尤其是IN10018酒石酸鹽，所述IN10018結構如下：。 [實施方案71]

如實施方案69-70所述的方法，其中所述拓撲異構酶抑制劑為拓撲異構酶I抑制劑。 [實施方案72]

如實施方案69-71任一項所述的方法，其中所述拓撲異構酶I抑制劑為拓撲替康（Topotecan）、伊立替康（Irinotecan）、貝洛替康（Belotecan）、科西特康（Cositecan）、依喜替康（Exatecan，DX-8951）、茚並異喹啉（Indenoisoquinoline）、Indotecan （LMP-400）、Indimitecan （LMP-776）、希明替康（Simmitecan）、Gimatecan （ST1481）、EC-112002 、PLX-038 （NK012）、AR-67，或其藥學上可接受的鹽。 [實施方案73]

如實施方案72所述的方法，其中所述拓撲異構酶I抑制劑為伊立替康（Irinotecan），或其藥學上可接受的鹽。 [實施方案74]

如實施方案69-70任一項所述的方法，其中所述拓撲異構酶抑制劑為拓撲異構酶II抑制劑。 [實施方案75]

如實施方案74所述的方法，其中所述拓撲異構酶II抑制劑為依託泊苷（Etoposide）、替尼泊苷（Teniposide）、莎巴比星（Sabarubicin），或其藥學上可接受的鹽。 [實施方案76]

如實施方案75所述的方法，其中所述拓撲異構酶II抑制劑為依託泊苷（Etoposide）、替尼泊苷（Teniposide），或其藥學上可接受的鹽。 [實施方案77]

如實施方案69-76任一項所述的方法，其中所述免疫檢查點抑制劑為抗PD-1/PD-L1抗體、PD-1/PD-L1小分子抑制劑或者TIGIT抗體。 [實施方案78]

如實施方案69-77任一項所述的方法，其中所述免疫檢查點抑制劑為抗PD-1/PD-L1抗體，進一步的，所述抗PD-1/PD-L1抗體為帕博利珠單抗（pembrolizumab）、替雷利珠單抗（Tislelizumab）、尼伏單抗（Nivolumab）、特瑞普利單抗（Toripalimab）、阿替珠單抗（Atezolizumab）、度伐單抗（durvalumab）、阿維單抗（Avelumab）、阿特珠單抗（Atezolizumab）、卡瑞利珠單抗（Camrelizumab）、信迪利單抗（Sintilimab）、西米普利單抗（Cemiplimab）、恩沃利單抗（envafolimab）、BMS-936559、JS003、SHR-1316、GS-4224、AN-4005或者MX-10181。 [實施方案79]

如實施方案69-77任一項所述的用途、藥物組合產品或者方法，其中所述免疫檢查點抑制劑為PD-1/PD-L1小分子抑制劑，進一步的，所述PD-1/PD-L1小分子抑制劑為INCB-086550、拉澤替尼（Lazertinib）、IMMH-010、CA-170、ABSK043或者RRx-001。 [實施方案80]

如實施方案69-77任一項所述的方法，其中所述免疫檢查點抑制劑為TIGIT抗體，進一步的，所述TIGIT抗體為歐司珀利單抗（Ociperlimab/BGB-A1217）、維博利單抗（Vibostolimab）、domvanalimab（AB154）、替瑞利尤單抗（Tiragolumab）、Belrestotug、艾替利單抗（Etigilimab）、ONO-4686、JS-006、AZD-2936、HLX-301、SEA-TGT、M-6223、IBI-939、COM-902、AB-308、AGEN-1777、AK-127、BAT-6021、BAT-6005、ASP-8374、PM-1022、BMS-986207、HB0036或IBI-321。 [實施方案81]

如實施方案69所述的方法，其中所述FAK抑制劑為IN10018或其藥學上可接受的鹽；所述拓撲異構酶抑制劑為伊立替康（Irinotecan）或其藥學上可接受的鹽；所述免疫檢查點抑制劑為抗PD-1/PD-L1抗體或PD-1/PD-L1小分子抑制劑，尤其是抗PD-1/PD-L1抗體。 [實施方案82]

如實施方案69所述的方法，其中所述FAK抑制劑為IN10018或其藥學上可接受的鹽；所述拓撲異構酶抑制劑為依託泊苷（Etoposide）、替尼泊苷（Teniposide），或其藥學上可接受的鹽；所述免疫檢查點抑制劑為抗PD-1/PD-L1抗體或PD-1/PD-L1小分子抑制劑，尤其是抗PD-1/PD-L1抗體。 [實施方案83]

如實施方案69-82任一項所述的方法，所述FAK抑制劑、所述拓撲異構酶抑制劑和所述免疫檢查點抑制劑被同時或依次施用於所述對象。 [實施方案84]

如實施方案69-83任一項所述的方法，其中所述腫瘤為膀胱癌、乳腺癌、子宮頸癌、結腸癌（包括結直腸癌）、食管癌、食管鱗狀細胞癌、頭頸癌、肝癌、肺癌（包括小細胞肺癌和非小細胞肺癌）、黑色素瘤、骨髓瘤、橫紋肌肉瘤、炎性肌纖維母細胞瘤、成神經細胞瘤、胰腺癌、前列腺癌、腎癌、腎細胞癌、肉瘤（包括骨肉瘤）、皮膚癌（包括鱗狀細胞癌）、胃癌、睾丸癌、甲狀腺癌、子宮癌、間皮瘤、膽管癌、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤、鼻咽癌、神經內分泌癌、卵巢癌、唾液腺癌、梭形細胞癌引起的轉移瘤、間變性大細胞淋巴瘤、甲狀腺未分化癌、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、神經膠質瘤或者惡性血液病，例如急性髓細胞性白血病（AML）、急性淋巴細胞白血病（ALL）、彌漫性大B細胞淋巴瘤（DLBCL）、濾泡性淋巴瘤（FL）、慢性淋巴細胞性白血病（CLL）、慢性粒細胞白血病（CML）；優選地，所述腫瘤為乳腺癌、卵巢癌、結腸癌（包括結直腸癌）、肺癌（包括小細胞肺癌和非小細胞肺癌）、黑色素瘤或胰腺癌。 [實施方案85]

如實施方案69-84任一項所述的方法，其中所述腫瘤為乳腺癌或結腸癌（包括結直腸癌）。 [實施方案86]

FAK抑制劑在製備用於在對象中治療腫瘤的藥物中的用途，其中將所述FAK抑制劑、拓撲異構酶抑制劑和免疫檢查點抑制劑施用於所述對象，其中所述拓撲異構酶抑制劑不為蒽環類。 [實施方案87]

拓撲異構酶抑制劑在製備用於在對象中治療腫瘤的藥物中的用途，其中將FAK抑制劑，所述拓撲異構酶抑制劑和免疫檢查點抑制劑施用於所述對象，其中所述拓撲異構酶抑制劑不為蒽環類。 [實施方案88]

免疫檢查點抑制劑在製備用於在對象中治療腫瘤的藥物中的用途，其中將FAK抑制劑、拓撲異構酶抑制劑和所述免疫檢查點抑制劑施用於所述對象，其中所述拓撲異構酶抑制劑不為蒽環類。 [實施方案89]

FAK抑制劑、拓撲異構酶抑制劑和免疫檢查點抑制劑在製備用於治療腫瘤的聯用藥物中的用途，其中所述拓撲異構酶抑制劑不為蒽環類。 [實施方案90]

FAK抑制劑在製備用於與拓撲異構酶抑制劑和免疫檢查點抑制劑治療腫瘤的聯用藥物中的用途，其中所述拓撲異構酶抑制劑不為蒽環類。 [實施方案91]

拓撲異構酶抑制劑在製備用於與FAK抑制劑和免疫檢查點抑制劑治療腫瘤的聯用藥物中的用途，其中所述拓撲異構酶抑制劑不為蒽環類。 [實施方案92]

免疫檢查點抑制劑在製備用於與FAK抑制劑和拓撲異構酶抑制劑治療腫瘤的聯用藥物中的用途，其中所述拓撲異構酶抑制劑不為蒽環類。 [實施方案93]

FAK抑制劑、拓撲異構酶抑制劑和免疫檢查點抑制劑在製備用於聯合治療腫瘤的藥物中的用途，其中所述拓撲異構酶抑制劑不為蒽環類。 [實施方案94]

FAK抑制劑在製備用於與拓撲異構酶抑制劑和免疫檢查點抑制劑聯合治療腫瘤的藥物中的用途，其中所述拓撲異構酶抑制劑不為蒽環類。 [實施方案95]

拓撲異構酶抑制劑在製備用於與FAK抑制劑和免疫檢查點抑制劑聯合治療腫瘤的藥物中的用途，其中所述拓撲異構酶抑制劑不為蒽環類。 [實施方案96]

免疫檢查點抑制劑在製備用於與FAK抑制劑和拓撲異構酶抑制劑聯合治療腫瘤的藥物中的用途，其中所述拓撲異構酶抑制劑不為蒽環類。 [實施方案97]

如實施方案86-96任一項所述的用途，其中所述FAK抑制劑為IN10018、Defactinib、GSK2256098、PF-00562271、APG-2449、VS-4718、AMP945、AMP886或其藥學上可接受的鹽，優選為IN10018、Defactinib、AMP945或其藥學上可接受的鹽，進一步優選為IN10018或其藥學上可接受的鹽，尤其是IN10018酒石酸鹽，所述IN10018結構如下：。 [實施方案98]

如實施方案86-97任一項所述的用途，其中所述拓撲異構酶抑制劑為拓撲異構酶I抑制劑。 [實施方案99]

如實施方案98所述的用途，其中所述拓撲異構酶I抑制劑為拓撲替康（Topotecan）、伊立替康（Irinotecan）、貝洛替康（Belotecan）、科西特康（Cositecan）、依喜替康（Exatecan，DX-8951）、茚並異喹啉（Indenoisoquinoline）、Indotecan （LMP-400）、Indimitecan （LMP-776）、希明替康（Simmitecan）、Gimatecan （ST1481）、EC-112002 、PLX-038 （NK012）、AR-67，或其藥學上可接受的鹽。 [實施方案100]

如實施方案99所述的用途，其中所述拓撲異構酶I抑制劑為伊立替康（Irinotecan）或其藥學上可接受的鹽。 [實施方案101]

如實施方案86-97任一項所述的用途，其中所述拓撲異構酶抑制劑為拓撲異構酶II抑制劑。 [實施方案102]

如實施方案101所述的用途，其中所述拓撲異構酶II抑制劑為依託泊苷（Etoposide）、替尼泊苷（Teniposide）、莎巴比星（Sabarubicin），或其藥學上可接受的鹽。 [實施方案103]

如實施方案102所述的用途，其中所述拓撲異構酶II抑制劑為依託泊苷（Etoposide）、替尼泊苷（Teniposide），或其藥學上可接受的鹽。 [實施方案104]

如實施方案86-103任一項所述的用途，其中所述免疫檢查點抑制劑為抗PD-1/PD-L1抗體、PD-1/PD-L1小分子抑制劑或者TIGIT抗體。 [實施方案105]

如實施方案86-104任一項所述的用途，其中所述免疫檢查點抑制劑為抗PD-1/PD-L1抗體，進一步的，所述抗PD-1/PD-L1抗體為帕博利珠單抗（pembrolizumab）、替雷利珠單抗（Tislelizumab）、尼伏單抗（Nivolumab）、特瑞普利單抗（Toripalimab）、阿替珠單抗（Atezolizumab）、度伐單抗（durvalumab）、阿維單抗（Avelumab）、阿特珠單抗（Atezolizumab）、卡瑞利珠單抗（Camrelizumab）、信迪利單抗（Sintilimab）、西米普利單抗（Cemiplimab）、恩沃利單抗（envafolimab）、BMS-936559、JS003、SHR-1316、GS-4224、AN-4005或者MX-10181。 [實施方案106]

如實施方案86-104任一項所述的用途、藥物組合產品或者方法，其中所述免疫檢查點抑制劑為PD-1/PD-L1小分子抑制劑，進一步的，所述PD-1/PD-L1小分子抑制劑為INCB-086550、拉澤替尼（Lazertinib）、IMMH-010、CA-170、ABSK043或者RRx-001。 [實施方案107]

如實施方案86-104任一項所述的用途，其中所述免疫檢查點抑制劑為TIGIT抗體，進一步的，所述TIGIT抗體為歐司珀利單抗（Ociperlimab/BGB-A1217）、維博利單抗（Vibostolimab）、domvanalimab（AB154）、替瑞利尤單抗（Tiragolumab）、Belrestotug、艾替利單抗（Etigilimab）、ONO-4686、JS-006、AZD-2936、HLX-301、SEA-TGT、M-6223、IBI-939、COM-902、AB-308、AGEN-1777、AK-127、BAT-6021、BAT-6005、ASP-8374、PM-1022、BMS-986207、HB0036或IBI-321。 [實施方案108]

如實施方案86-96任一項所述的用途，其中所述FAK抑制劑為IN10018或其藥學上可接受的鹽；所述拓撲異構酶抑制劑為伊立替康（Irinotecan）或其藥學上可接受的鹽；所述免疫檢查點抑制劑為抗PD-1/PD-L1抗體或PD-1/PD-L1小分子抑制劑，尤其是抗PD-1/PD-L1抗體。 [實施方案109]

如實施方案86-96任一項所述的用途，其中所述FAK抑制劑為IN10018或其藥學上可接受的鹽；所述拓撲異構酶抑制劑為依託泊苷（Etoposide）、替尼泊苷（Teniposide），或其藥學上可接受的鹽；所述免疫檢查點抑制劑為抗PD-1/PD-L1抗體或PD-1/PD-L1小分子抑制劑，尤其是抗PD-1/PD-L1抗體。 [實施方案110]

如實施方案86-109任一項所述的用途，所述FAK抑制劑、所述拓撲異構酶抑制劑和所述免疫檢查點抑制劑被同時或依次施用於所述對象。 [實施方案111]

如實施方案86-110任一項所述的用途，其中所述腫瘤為膀胱癌、乳腺癌、子宮頸癌、結腸癌（包括結直腸癌）、食管癌、食管鱗狀細胞癌、頭頸癌、肝癌、肺癌（包括小細胞肺癌和非小細胞肺癌）、黑色素瘤、骨髓瘤、橫紋肌肉瘤、炎性肌纖維母細胞瘤、成神經細胞瘤、胰腺癌、前列腺癌、腎癌、腎細胞癌、肉瘤（包括骨肉瘤）、皮膚癌（包括鱗狀細胞癌）、胃癌、睾丸癌、甲狀腺癌、子宮癌、間皮瘤、膽管癌、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤、鼻咽癌、神經內分泌癌、卵巢癌、唾液腺癌、梭形細胞癌引起的轉移瘤、間變性大細胞淋巴瘤、甲狀腺未分化癌、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、神經膠質瘤或者惡性血液病，例如急性髓細胞性白血病（AML）、急性淋巴細胞白血病（ALL）、彌漫性大B細胞淋巴瘤（DLBCL）、濾泡性淋巴瘤（FL）、慢性淋巴細胞性白血病（CLL）、慢性粒細胞白血病（CML）；優選地，所述腫瘤為乳腺癌、卵巢癌、結腸癌（包括結直腸癌）、肺癌（包括小細胞肺癌和非小細胞肺癌）、黑色素瘤或胰腺癌。 [實施方案112]

如實施方案86-111任一項所述的用途，其中所述腫瘤為乳腺癌或結腸癌（包括結直腸癌）。 [ 實施例 ]

提供下面的實施例以進一步闡述本發明。應理解，這些實施例僅用於舉例說明本發明，而不用於限制本發明的範圍。

下列實施例中未注明具體條件的實驗方法均可以按照這類反應的常規條件進行或者按照製造廠商所建議的條件進行。

以下實施例中所用的實驗材料和試劑如無特別說明均可從市售渠道獲得。

實施例中所用的縮寫含義如下：

英文縮寫	中文名稱
siRNA	小段干擾RNA
DMSO	二甲基亞碸
COMBO	聯用或合用
HMGB1	高遷移率族蛋白1
AAALAC	國際實驗動物評估和認可委員會
IACUC	實驗動物管理與使用委員會
SPF	無特殊病原體
BIW	每週兩次
QD	每天一次
BID	每天兩次
BW	體重
EDTA	乙二胺四乙酸
GLP	藥物非臨床研究質量管理規範
p.o.	灌胃給藥
i.v.	靜脈注射給藥
i.p.	腹腔注射給藥
DPBS	杜氏磷酸鹽緩衝液
DDH ₂O	雙蒸水
RT	室溫
SEM	平均值標準誤差
TGI	腫瘤生長抑制率
TV	腫瘤體積
TW	腫瘤重量
FBS	胎牛血清
PBS	磷酸鹽緩衝液
MC	甲基纖維素
CO ₂	二氧化碳
CRT	鈣網蛋白
Annexin-V-FITC	異硫氰酸熒光素標記膜聯蛋白
PI	碘化丙啶

實施例 1 ： FAK 靶點抑制 增強乳腺癌細胞針對依託泊苷（ Etoposide ）免疫原性細胞死亡的研究[實驗方案1]

FAK沉默聯合依託泊苷促進乳腺癌細胞MDA-MB-231凋亡。

體外實驗利用siRNA技術降低FAK的表達水平，與依託泊苷聯合使用48小時；利用流式細胞儀，檢測對照和FAK沉默的細胞凋亡。 [實驗方案2]

FAK沉默聯合依託泊苷能夠有效促進乳腺癌細胞MDA-MB-231產生ICD作用。

體外實驗利用siRNA技術降低FAK的表達水平，與依託泊苷聯合使用48小時；利用流式細胞儀，檢測ICD的主要靶標Calreticulin的表達情況。

實驗抗體：重組Alexa Fluor® 647熒光Anti-Calreticulin（抗-鈣網蛋白）抗體（Abcam，ab196159），Annexin V細胞凋亡檢測試劑盒（Invitrogen, A35110）。

FAK siRNA由吉瑪基因提供，序列如下表所示： F：CCUGUAUGCCUAUCAGCUUTT； R：AAGCUGAUAGGCAUACAGGTT

實驗儀器：

熒光顯微鏡（Olympus U-HGLGPS）。化學發光成像儀（BIORAD chemidoc touch）。 [實驗結果1]

FAK沉默後聯合依託泊苷顯著增加MDA-MB-231細胞凋亡。

分別使用終濃度為50nM的對照siRNA或FAK siRNA轉染MDA-MB-231細胞。轉染24小時後，給予2 μM 依託泊苷處理48小時，使用Annexin V試劑盒進行細胞染色並使用流式細胞儀進行檢測。統計細胞早期和晚期凋亡數值與DMSO對照組進行比較並使用Graphpad 8.0進行繪圖，結果顯示FAK沉默組與對照組比較，經過依託泊苷處理後，凋亡被顯著的增強了，如圖1所示。 [實驗結果2]

FAK沉默後聯合依託泊苷顯著上調了ICD靶點Calreticulin釋放及暴露。

分別使用終濃度為50nM的對照siRNA或FAK siRNA轉染MDA-MB-231細胞。轉染24小時後，給予2 μM 依託泊苷處理48小時，用Calreticulin抗體進行熒光染色，流式細胞儀對染色結果經行分析。FlowJo軟件結果統計顯示：FAK沉默後聯合依託泊苷，Calreticulin的釋放及暴露均被顯著的增強了，如圖2所示。

實施例 2 ： FAK 靶點抑制 增強乳腺癌細胞針對替尼泊苷（ Teniposide ）免疫原性細胞死亡的研究[實驗方案1]

FAK沉默，聯合替尼泊苷促進乳腺癌細胞MDA-MB-231凋亡。

體外實驗利用siRNA技術降低FAK的表達水平，與teniposide聯合使用48小時；利用流式細胞儀，檢測對照和FAK沉默的細胞凋亡。 [實驗方案2]

FAK沉默，聯合替尼泊苷能夠有效促進乳腺癌細胞MDA-MB-231產生ICD作用。

體外實驗利用siRNA技術降低FAK的表達水平，與替尼泊苷聯合使用48小時；利用流式細胞儀，檢測ICD的主要靶標Calreticulin的表達情況。

實驗儀器：

FAK沉默後聯合替尼泊苷顯著增加MDA-MB-231細胞凋亡。

分別使用終濃度為50nM的對照siRNA或FAK siRNA轉染MDA-MB-231細胞。轉染24小時後，給予2μM替尼泊苷處理48小時，使用Annexin V試劑盒進行細胞染色並使用流式細胞儀進行檢測。統計細胞早期和晚期凋亡數值與DMSO對照組進行比較並使用Graphpad 8.0進行繪圖。結果顯示FAK沉默組與對照組比較，經過替尼泊苷處理後，凋亡被顯著的增強了，如圖3所示。 [實驗結果2]

FAK沉默後聯合替尼泊苷顯著上調了ICD靶點Calreticulin釋放及暴露。

分別使用終濃度為50nM的對照siRNA或FAK siRNA轉染MDA-MB-231細胞。轉染24小時後，給予2 μM替尼泊苷處理48小時，用Calreticulin抗體進行熒光染色，流式細胞儀對染色結果經行分析。FlowJo軟件結果統計顯示：FAK沉默後聯合替尼泊苷，Calreticulin的釋放及暴露均被顯著的增強了，如圖4所示。

實施例 3 ： IN10018 和依託泊苷在結腸癌 CT26 細胞中的協同作用

CT26細胞用RPMI 1640（上海元培，分類號: L210KJ, 批號: F210916）+10%FBS（Gibco，分類號: 10099-141c, 批號: 2158737cp）培養，傳代兩次，當細胞狀況良好時，將其放置在96孔板中，3000個細胞/孔。細胞鋪展24小時後，加入含有依託泊苷的培養基，設置10個藥物作用濃度，第一個濃度為30 μM，5倍稀釋，最後一個為對照，藥物濃度為0，每個藥物濃度設置為3個複合孔。同時，用與上述方法相同的藥物濃度建立另一組細胞。不同之處在於，每孔加入5μM IN10018，將藥物混合，並在37°C下在5%CO ₂培養箱中培養72小時。

藥物作用72小時後，顯微鏡下觀察細胞，向每個孔中加入10μl CCK8檢測試劑（Cellorlab，分類號：CX001M，批號：2571100），在37°C的5%CO ₂培養箱中培養2-4小時，然後用微孔板讀取器OD450（化學發光法）讀取孔板。

分析結果發現，依託泊苷（來源MCE，分類號：33419-42-0，批號：113741）組的IC50為24.43μM；依託泊苷 +5μM IN10018組的IC50為4.86μM。含有IN10018的組的IC50顯著小於不含IN10018的組，表明兩種藥物聯合治療組的療效優於單藥治療組，如圖5所示。

實施例 4 ： IN10018 和依託泊苷在結腸癌 CT26 細胞中的研究

CT26細胞（中科院細胞所）用RPMI 1640（上海元培，分類號: L210KJ, 批號: F210916）+10%FBS（Gibco，分類號: 10099-141c, 批號: 2158737cp）培養，傳代兩次，當細胞狀況良好時，將培養液放置在24孔板中。細胞鋪展24小時後，設四組，第一組為對照組，加入培養基，第二組為IN10018，濃度為5μM，第三組為依託泊苷（來源MCE，分類號：33419-42-0，批號：113741），濃度為20μM，第四組為IN10018 （5μM）和依託泊苷（20μM）聯用組。將藥物混合，並在37°C的5%CO ₂培養箱中培養48小時。

藥物作用48小時後，對細胞進行顯微鏡觀察和拍照，並保存照片。然後收集細胞進行流動分析，並用流式緩衝液（PBS+2%FBS）洗滌細胞兩次，將0.5μl AF647抗鈣網蛋白抗體（abcam，分類號：ab196159，批號：CR33676773）添加到每個孔中，充分混合，在4°C且避光的條件下培養20分鐘。20分鐘後，用流式緩衝液（PBS+2%FBS）清洗細胞兩次。使用細胞凋亡檢測試劑盒（Beyotime，目錄號：CL062L，批號：021921210811），加入195μl膜聯蛋白-V-FITC結合物，輕輕混合細胞，然後加入5μl膜聯蛋白-V-FITC抗體，輕輕混合。加入10μl PI染料，輕輕混合，室溫避光培養15min，然後在流式細胞儀上進行分析。

顯微鏡下觀察細胞，依託泊苷單藥組和兩藥聯用組的細胞狀態較差，兩藥聯用組最差，細胞死亡較多，而對照組和IN10018組的細胞狀態良好。結果顯示，雙藥聯用組的CRT陽性率和Annexin V陽性率高於單藥組，詳見圖6和圖7。

實施例 5 ：伊立替康（ Irinotecan ）和 IN10018 在小鼠結腸癌 CT26 細胞體外對免疫原性細胞死亡靶點誘導的研究

分組信息見表1。 [表1：體外藥效實驗分組方案]

編號	藥物	細胞	染色方法
1	對照組	CT26	CRT/Annexin-V/PI
2	IN10018（5 μM）
3	伊立替康（126.76 μM）
4	伊立替康（126.76 μM）+IN10018（5 μM）

待測化合物信息見表2。 [表2：待測化合物信息]

名稱	伊立替康	IN10018
供應商	上海超嵐化工科技中心	按照專利WO2010058032中的方法合成
批號	202110
MW	623.14	588.56
FW		738.65
性狀	白色粉末	白色粉末
溶媒	DMSO	DMSO
儲存條件	4°C	室溫

實驗主要試劑見表3。 [表3：實驗主要試劑]

試劑名稱	生產廠家	貨號	批號
DPBS	上海源培	B210KJ	B210902
RPMI-1640	上海源培	L210KJ	E211006
FBS	GIBCO	10099-141c	2158737cp
胰蛋白酶	上海源培	S310KJ	C210903
Annexin V-凋亡檢測試劑盒	Beyotime	C1062L	021921210811
AF647 Anti-Calreticulin Antibody	Abcam	ab196159	CR33676773

實驗方法與步驟[細胞培養]

CT26細胞由應世生物科技（南京）有限公司維持傳代。細胞體外單層培養，細胞培養條件為RPMI1640培養基中加10％胎牛血清，置於37 ºC、5% CO ₂培養箱中培養。一周兩到三次用胰蛋白酶進行常規消化傳代處理。當細胞處於指數生長期，貼壁匯合至80%-90%時，收取細胞並進行鋪板。 [細胞鋪板]

CT26細胞用胰蛋白酶進行消化後收取細胞並進行計數，根據計數結果，用對應完全培養基對細胞進行稀釋，稀釋濃度為5萬個細胞每毫升，然後進行24孔細胞培養板鋪板，每孔鋪1 ml細胞懸液即5萬個細胞。鋪板完成後，將細胞放於37 ºC、5% CO ₂培養箱中培養。 [加入待測化合物]

鋪板24小時後，在不同孔內分別加入待測化合物伊立替康和IN10018，待測化合物為之前進行統一配製分裝，用DMSO進行溶解，分裝體積為50 μL/支，置於-20 ºC避光保存，本次實驗取出其中一支進行加藥及檢測。分組及藥物濃度如表4所示。 [表4：藥物分組及加藥濃度]

編號	藥物
1	Medium
2	IN10018（5 μM）
3	伊立替康（126.76 μM）
4	伊立替康（126.76 μM）+IN10018（5 μM）

[收集細胞進行流式檢測]

細胞用流式緩衝液（DPBS + 2% FBS）清洗兩遍後，每孔加入0.5 μL AF647 Anti-Calreticulin Antibody抗體，混勻後4 ^oC避光培養20 min。此後加入流式緩衝液清洗一遍後加入195 μL Annexin-V-FITC結合液，輕輕混勻細胞後加入5 μL Annexin-V-FITC抗體，進一步混勻後加入10 μL PI染料並進行混勻，室溫避光培養15 min後進行流式檢測。 [數據分析]

實驗結束後，用Flowjo（V10）軟體進行細胞陽性率的分析。 [實驗結果]

各組在藥物作用後48小時後。流式細胞分析結果顯示，聯合用藥組CRT和Annexin V陽性率均明顯高於單藥組，詳見圖8。

實施例 6 ：替尼泊苷（ Teniposide ）和 IN10018 對小鼠結腸癌 CT26 細胞體外增殖抑制活性的研究[實驗設計]

分組信息見表5。 [表5：細胞增殖抑制試驗分組方案]

編號	受試藥物
1	替尼泊苷
2	替尼泊苷 + IN10018 （5 μM）

待測化合物信息見表6。 [表6]

名稱	替尼泊苷	IN10018
供應商	MCE	應世生物科技（上海）有限公司
批號	24543	按照專利WO2010058032中的方法合成
MW	656.65	588.56
FW		738.65
性狀	白色粉末	白色粉末
溶媒	DMSO	DPBS
儲存條件	4°C	常溫

主要試劑信息見表7。 [表7]

試劑名稱	生產廠家	貨號	批號
DPBS	上海源培	B210KJ	B210902
RPMI-1640	上海源培	L210KJ	F210916
FBS	GIBCO	10099-141c	2158737cp
胰蛋白酶	上海源培	S310KJ	C210903
CCK-8試劑盒	Servicebio	G4103-5ml	CR2112050

實驗方法與步驟[細胞培養]

CT26細胞由應世生物科技（南京）有限公司復蘇並維持傳代。細胞體外單層貼壁培養，培養條件為RPMI1640培養基中加10％胎牛血清，37 ºC、5% CO ₂。一周兩到三次使用胰蛋白酶對細胞消化傳代。當細胞生長處於指數生長期，貼壁匯合至80%-90%時，收取細胞並進行鋪板。 [細胞鋪板]

CT26細胞用胰蛋白酶進行消化後收取細胞並進行計數，根據計數結果，使用RPMI1640 + 10%FBS將細胞稀釋至每毫升3萬個細胞，然後對96孔細胞平底培養板進行細胞鋪板，每孔加入0.1 ml細胞懸液即3千個細胞。細胞鋪板完成後，將培養板置於37 ºC、5% CO ₂培養箱中繼續培養。 [加入待測化合物]

細胞鋪板24小時後，在細胞板不同的孔內分別加入待測化合物替尼泊苷，待測化合物在實驗前進行統一配製及分裝。簡言之，使用DMSO將藥物溶解至10 mM，分裝體積為50 μL/支，置於-20 ºC避光保存，本次實驗取出其中一支對細胞進行加藥及處理。分組及藥物濃度信息見表8所示。 [表8：藥物分組及加藥濃度]

編號	受試藥物
1	替尼泊苷（最高濃度30 μM，5倍梯度稀釋，10個作用濃度）
2	替尼泊苷（最高濃度30μM，5倍梯度稀釋，10個作用濃度） + IN10018 （5 μM）

替尼泊苷設計10個藥物作用濃度，其中最後一個藥物作用濃度為0，設為陰性對照組。

加藥完成後，將藥物輕輕混勻，然後細胞置於37 ºC、5% CO ₂培養箱中培養。 [加入CCK-8檢測試劑並讀板]

藥物作用72小時後，使用多孔道移液器對細胞板每孔均加入10 μL CCK-8檢測試劑，而後將細胞板置於37 ºC、5% CO ₂培養箱中繼續培養4小時。最後使用酶標儀測定每孔於450 nm處的吸光度。 [數據分析]

實驗結束後，使用GraphPad Prism 8軟體對測試藥物對細胞的抑制百分比進行分析。 [抑制百分比計算]

抑制百分比={ [A（0加藥）－A（空白）] -- [A（加藥）－A（空白）] }／[ A（0加藥）－A（空白）] × 100% A（加藥）：加有細胞、CCK-8溶液和藥物溶液孔的吸光度值 A（空白）：加有培養基和CCK-8溶液而無細胞孔的吸光度值 A（0加藥）：加有細胞、CCK-8溶液而無藥物溶液孔的吸光度值 [實驗結論]

本實驗評價了替尼泊苷單藥和與IN10018合用後在體外條件下對CT26細胞增殖抑制的作用。各組在藥物作用後72小時相關檢測結果如圖9所示。替尼泊苷與IN10018聯合用藥組的IC50值為0.09799 μM，低於單藥組的IC50值（0.8179 μM），因此聯合用藥組具有更強的體外抑制癌細胞生長作用。

實施例 7 ： 替尼泊 苷和 IN10018 在小鼠結腸癌 CT26 細胞體外對免疫原性細胞死亡靶點誘導的研究

實驗分組見表9。 [表9]

編號	藥物	細胞	染色方法
1	陰性對照	CT26	1.CRT/Annexin-V/PI 2.GRP94
2	IN10018（5 μM）
3	替尼泊苷（4.8 μM）
4	替尼泊苷（4.8μM）+IN10018（5 μM）

化合物信息見表10。 [表10]

名稱	替尼泊苷	IN10018
供應商	MCE	按照專利WO2010058032中的方法合成
批號	24543
MW	656.65	588.56
FW	N/A	738.65
性狀	白色粉末	白色粉末
溶媒	DMSO	DPBS
儲存條件	4°C	常溫

化合物信息見表11。 [表11]

試劑名稱	生產廠家	貨號	批號
DPBS	上海源培	B210KJ	B210902
RPMI-1640	上海源培	L210KJ	F210916
FBS	GIBCO	10099-141c	2158737cp
胰蛋白酶	上海源培	S310KJ	C210903
Annexin V-凋亡檢測試劑盒	Beyotime	C1062L	021921210811
AF647 Anti-Calreticulin Antibody	Abcam	ab196159	CR33676773

[細胞培養]

CT26細胞由應世生物科技（南京）有限公司維持傳代。細胞體外單層培養，培養條件為RPMI1640培養基中加10％胎牛血清，37ºC、5% CO ₂培養箱中培養。一周兩到三次用胰蛋白酶進行常規消化傳代處理。當細胞處於指數生長期，貼壁匯合至80%-90%時，收取細胞並進行鋪板。

[細胞鋪板]

CT26細胞用胰蛋白酶進行消化後收取細胞並進行計數，根據計數結果，用RPMI1640 + 10%FBS對細胞進行稀釋，稀釋濃度為5萬個細胞每毫升，然後進行12孔細胞培養板鋪板，每孔鋪2 ml細胞懸液即10萬個細胞。

鋪板完成後，將細胞放於37 ºC、5% CO ₂培養箱中培養。

[加入待測化合物]

鋪板24小時後，在不同孔內分別加入待測化合物替尼泊苷，待測化合物為之前進行統一配製分裝，用DMSO進行溶解，濃度均為10 mM，分裝體積為50 μL/支，置於-20 ºC避光保存，本次實驗取出其中一支進行加藥及檢測。分組及藥物濃度如表9所示。

藥物作用48小時後，使用顯微鏡對細胞進行拍照，然後胰蛋白酶消化細胞並收集細胞進行流式染色。

細胞用流式緩衝液（DPBS + 2% FBS）清洗兩遍後，每組細胞平均分為兩份，其中一份每孔加入0.5 μL AF647 Anti-Calreticulin Antibody抗體，混勻後4ºC避光孵育20分鐘。此後加入流式緩衝液清洗一遍後加入195 μL Annexin-V-FITC結合液，輕輕混勻細胞後加入5 μL Annexin-V-FITC抗體，進一步混勻後加入10 μL PI染料並進行混勻，室溫避光培育15分鐘後進行流式檢測。

[數據分析]

實驗結束後，用Flowjo（V10）軟體進行細胞陽性率的分析。

[實驗結果]

本實驗評價了替尼泊苷單藥和與IN10018合用後在體外條件下對CT26細胞誘導表達免疫細胞死亡靶點的作用。

各組在藥物作用後48小時相關檢測結果如圖10所示。在顯微鏡下觀察細胞狀態，替尼泊苷單藥組細胞死亡明顯，聯合用藥組細胞死亡最為顯著，陰性對照組和IN10018組細胞活力較好。流式細胞分析結果顯示，聯合用藥組CRT和Annexin V陽性率均明顯高於單藥組。

實施例 8 ：依託泊苷、 IN10018 與抗鼠 PD-L1 抗體之間的配伍治療在結腸癌 MC38 細胞 C57BL/6 小鼠皮下同種移植瘤模型中的體內抗腫瘤藥效研究

分組與給藥信息見表12。 [表12：體內藥效實驗動物分組及給藥方案]

組別	N ¹	受試藥物	劑量 (mg/kg)	給藥體積參數(mL/kg) ²	給藥途徑	給藥頻次
1	6	對照組	N/A	10	PO	QD x 17
2	6	抗鼠PD-L1抗體	5	10	i.p.	BIW x 17
3	6	依託泊苷 ³	3	10	PO	QD x 17
4	6	依託泊苷 ³+抗鼠PD-L1抗體	3 + 5	10	PO + i.p.	QD x 17 + BIW x 17
5	6	依託泊苷 ³+IN10018	3 + 25	10	PO + PO	QD x 17 + QD x 17
6	6	依託泊苷 ³+IN10018+抗鼠PD-L1抗體	3 + 25 + 5	10	PO + PO + i.p.	QD x 17 + QD x 17 + BIW x 17

注： 1. N：每組小鼠數目； 2. 給藥體積：根據小鼠體重10 mL/kg，如果體重下降超過15%，動物停止給藥；待體重恢復至降低10%，再恢復給藥； 3. 依託泊苷劑量在分組給藥之後的第6天增至6mg/kg給藥；

[細胞培養]

結直腸癌細胞MC38（來源南京科佰生物科技有限公司，貨號：CBP60825）由應世生物科技（南京）有限公司維持傳代。細胞體外單層培養，培養條件為DMEM培養基中加10％胎牛血清，37ºC，5% CO ₂培養箱中培養。一周兩到三次用胰酶-EDTA進行常規消化處理傳代。當細胞處於指數生長期，飽和度為80%-90%時，收取細胞，計數後接種。

[細胞接種及分組]

將0.1 mL含有2×10 ⁵個細胞的細胞懸液皮下接種於每只小鼠的右後背。當腫瘤體積達到~50 mm ³左右時（細胞接種後的第9天），根據腫瘤體積進行隨機分組並給藥，受試物及對照溶媒配製見表13。 [表13：受試物及對照溶媒配製]

名稱	劑量（mg/kg）	濃度（mg/ml）	配製方法	儲存條件及配製頻率
對照組	N/A	N/A	分別依次吸取1.5 ml DMSO，12 ml PEG300，1.5 ml Tween-80以及15 ml PBS，渦旋混勻，即可。	4 ºC保存。
依託泊苷	3	0.3	稱取依託泊苷粉末12.0 mg，加入2.0 ml DMSO，超聲混勻，再依次加入16 ml PEG-300，2.0 ml Tween-80以及20ml DPBS，吹打混勻，以製成澄清溶液。	4 ºC保存，每7天配製一次。
依託泊苷	6	0.6	稱取依託泊苷粉末24.0 mg，加入2.0 ml DMSO，超聲混勻，再依次加入16 ml PEG-300，2.0 ml Tween-80以及20ml DPBS，吹打混勻，以製成澄清溶液。	4 ºC保存，每7天配製一次。
IN10018	25	2.5	稱取 30 mg IN10018 ，加入12 mL DPBS 稀釋，充分混合渦旋以製成澄清溶液。	4 ºC保存，每4天配製一次。
mPD-L1	5	0.5	吸取0.31 mL PDL1抗體（7.29 mg/mL），加入4.19 mL DPBS 稀釋，充分混合以製成澄清溶液	4 ºC保存，現配現用。

[實驗動物日常觀察]

本實驗方案的擬定及任何修改均通過了雲橋生物IACUC的評估核准。實驗動物的使用及福利遵照AAALAC的規定執行。每天監測動物的健康狀況及死亡情況，例行檢查包括觀察腫瘤生長和藥物治療對動物日常行為表現的影響如行為活動，攝食攝水量（僅目測），體重變化，外觀體徵或其它不正常情況。基於各組動物數量記錄了組內動物死亡數和副作用。

[實驗終止]

若動物健康狀況持續惡化，或瘤體積超過3,000 mm ³，或有嚴重疾病，或疼痛，須處以安樂死。有以下情況者，通知獸醫並處以安樂死：明顯消瘦，體重降低大於20％；不能自由取食和飲水；對照組瘤體積平均值達到3,000 mm ³，實驗終止。動物出現以下臨床表現且持續惡化：立毛，弓背，耳、鼻、眼或足色發白，呼吸倉促，抽搐，連續腹瀉，脫水，行動遲緩，發聲。

[腫瘤測量和實驗指標]

實驗指標是考察腫瘤生長是否被抑制、延緩或治癒。用遊標卡尺測量腫瘤直徑，每週測量3次。腫瘤體積的計算公式為：V = 0.5 × a × b ²，a和b分別表示腫瘤的長徑和短徑。

化合物的抑瘤療效用TGI（%）評價，反映腫瘤生長抑制率。參照分組後第一天的腫瘤體積，根據以下公式計算腫瘤生長抑制率TGI（%）。TGI（%）=[1-（某給藥組的平均瘤體積-該給藥組開始治療時平均瘤體積）/（溶劑對照組的平均瘤體積-溶劑對照組開始治療時平均瘤體積）]×100%。

[統計分析]

統計分析基於試驗結束時腫瘤體積運用Prism Graphpad軟體進行分析。多組間比較，採用Two-way ANOVA，Fisher’s LSD test法檢驗進行分析。P ＜ 0.05認為有顯著性差異。

[實驗結果]

1. 受試物依託泊苷、IN10018與抗鼠PD-L1抗體之間的配伍治療在MC38小鼠結直腸癌細胞C57BL/6小鼠皮下同種移植瘤模型中的體內藥效研究

細胞接種後，每天觀察腫瘤生長情況，接種後第9天根據腫瘤體積進行分組，入組平均腫瘤體積約為50mm ³。由於腫瘤負荷，對照組在接種後的第26天，即分組給藥之後的第17天安樂死，整個實驗結束。

分組給藥後第17天，對照組的腫瘤體積為2670.9±1438.9 mm ³。PD-L1抗體（5mg/kg）和依託泊苷（3 mg/kg）單藥治療組的腫瘤體積分別為2677.7±2029.0 mm ³和2420.2±1377.3 mm3；依託泊苷+PD-L1抗體（3+5mg/kg）和依託泊苷+IN10018（3+25mg/kg）兩藥聯用治療組的腫瘤體積分別為1947.6±539.7 mm3和1865.0±839.9 mm ³；依託泊苷+IN10018+PD-L1抗體（3+25+5 mg/kg）三藥聯用治療組的腫瘤體積分別為1245.6±1064.7 mm ³。綜合腫瘤體積與對照組進行比較，PD-L1抗體（5mg/kg）和依託泊苷（3 mg/kg）單藥治療組的抑瘤率TGI分別為-0.2%（p = 0.9827）和9.5%（p = 0.4487）；依託泊苷+PD-L1抗體（3+5mg/kg）和依託泊苷+IN10018（3+25mg/kg）兩藥聯用治療組的抑瘤率TGI分別為27.6%（p = 0.0295）和30.7%（p = 0.0111）；依託泊苷+IN10018+PD-L1抗體（3+25+5 mg/kg）三藥聯用治療組的抑瘤率TGI為54.4%（p ＜ 0.0001）。

綜合瘤體積與依託泊苷+IN10018+PD-L1抗體（3+25+5 mg/kg）三藥聯用組相比較，進行統計學分析，對照組、PD-L1抗體（5mg/kg）和依託泊苷（3 mg/kg）單藥治療組的P值分別為p ＜ 0.0001、p ＜ 0.0001和p = 0.0005；依託泊苷+PD-L1抗體（3+5mg/kg）和依託泊苷+IN10018（3+25mg/kg）兩藥聯用治療組的P值分別為p = 0.0346和p = 0.0504，詳見表14。各劑量組在不同時間段的腫瘤體積如圖11所示。與空白對照組相比，PD-L1抗體（5mg/kg）和依託泊苷（3 mg/kg）單藥治療組的平均瘤體積和對照組的平均瘤體積很接近，並沒有顯現出對腫瘤生長有抑制作用；而依託泊苷+PD-L1抗體（3+5mg/kg）和依託泊苷+IN10018（3+25mg/kg）兩藥聯用治療組和依託泊苷+IN10018+PD-L1抗體（3+25+5 mg/kg）三藥聯用組則均有明顯腫瘤生長抑制作用，和對照組相比都有統計學差異。綜合整個給藥週期，依託泊苷+IN10018+PD-L1抗體（3+25+5 mg/kg）三藥聯用組相對于其餘各治療組的腫瘤體積一直都更小，且和PD-L1抗體（5mg/kg）和依託泊苷（3 mg/kg）單藥治療組以及依託泊苷+PD-L1抗體（3+5mg/kg）兩藥聯用治療組相比均具有統計學差異，雖然依託泊苷+IN10018+PD-L1抗體（3+25+5 mg/kg）三藥聯用組和依託泊苷+IN10018（3+25mg/kg）兩藥聯用治療組相比沒有統計學差異，但是其平均瘤體積相對而言一直都較小，也顯示出依託泊苷+IN10018+PD-L1抗體（3+25+5 mg/kg）三藥聯用組具有更好的抑制腫瘤生長的效果。

[表14：受試物對小鼠結腸癌MC38細胞的C57BL/6小鼠移植瘤模型的抑瘤效果評價（基於分組給藥後第17天數據）]

組別	第0天腫瘤體積（mm ³） ¹	第17天腫瘤體積（mm ³） ¹	TGI（%） ²	P值 ³	P值 ⁴
對照組	49.3±13.9	2670.9±1438.9	/	/	p ＜ 0.0001 ****
PD-L1抗體	50.7±18.6	2677.7±2029.0	-0.2	0.9827	p ＜ 0.0001 ****
依託泊苷	48.2±10.2	2420.2±1377.3	9.5	0.4487	0.0005 ***
依託泊苷+PD-L1抗體	49.2±12.5	1947.6±539.7	27.6	0.0295 *	0.0346 *
依託泊苷+IN10018	49.2±12.3	1865.0±839.9	30.7	0.0111 *	0.0504
依託泊苷+IN10018+PD-L1抗體	49.0±11.6	1245.6±1064.7	54.4	p ＜ 0.0001 ****	/

注： 1. 按照分組給藥後的天數來計算，數據為平均值±標準差（mean±SD）； 2. TGI （%） = [1-（T ₁₇-T ₀）/ （V ₁₇-V ₀）] ×100%； 3. *：p＜0.05，vs. 對照組，Two-way ANOVA； 4. *：p＜0.05，vs. 依託泊苷+IN10018+PD-L1抗體（3+25+5 mg/kg）組，Two-way ANOVA；

受試物依託泊苷、IN10018和抗鼠PD-L1抗體之間的配伍治療在MC38小鼠結直腸癌細胞C57BL/6小鼠皮下同種移植瘤模型中的體重變化及臨床狀況研究

實驗按照給藥方案進行，實驗過程中，每天觀察動物攝食飲水等活動，每週記錄3次動物體重。分組給藥17天之後，對照組的平均體重從分組給藥當天（Day0）的18.7g，變化至23.9g，體重增長率為28.8%；PD-L1抗體（5mg/kg）和依託泊苷（3 mg/kg）單藥治療組的平均體重分別從Day0的18.8g和19.1g變化至Day17的23.6g和22.8g，其體重變化率分別為25.8%和19.3%；依託泊苷+PD-L1抗體（3+5mg/kg）和依託泊苷+IN10018（3+25mg/kg）兩藥聯用治療組的平均體重分別從Day0的19.1g和18.9g變化至Day17的22.3g和22.5g，體重變化率分別為17.2%和19.0%；依託泊苷+IN10018+PD-L1抗體（3+25+5 mg/kg）三藥聯用組的平均體重從Day 0的19.1g變化至Day17的21.6g，體重變化率為13.3%。在整個給藥週期中，依託泊苷（3 mg/kg）單藥治療組和依託泊苷+PD-L1抗體（3+5mg/kg）兩藥聯用治療組分別各有1只小鼠，由於腫瘤破潰，分別在分組給藥後的第12天和第17天發現死亡，其餘各組的動物在整個給藥週期中，體重均無明顯下降且狀態良好，顯示出對不同給藥方式的耐受。詳見表15。各劑量組在不同時間段的體重變化如圖12所示。說明動物對依託泊苷+IN10018+PD-L1抗體（3+25+5 mg/kg）三藥聯用耐受。

[表15：受試物對小鼠結腸癌MC38細胞的C57BL/6小鼠移植瘤模型的體重變化評價（基於分組給藥後第17天數據）]

組別	動物存活 ¹	第0天體重（g） ²	第17天體重（g） ²	體重變化率（%） ³
對照組	6/6	18.7±1.7	23.9±2.3	28.8
PD-L1抗體	6/6	18.8±0.5	23.6±3.5	25.8
依託泊苷	5/6	19.1±1.1	22.8±1.3	19.3
依託泊苷+PD-L1抗體	5/6	19.1±0.4	22.3±0.9	17.2
依託泊苷+IN10018	6/6	18.9±0.7	22.5±1.7	19.0
依託泊苷+IN10018+PD-L1抗體	6/6	19.1±0.7	21.6±1.6	13.3

注： 1. 按照分組給藥後的天數來計算，第0天的動物存活數目/第17天的動物存活數目； 2. 數據為平均值±標準差（mean±SD）； 3. 體重變化率=[1- （W17-W0） / W0]*100%；

實施例 9 ：依託泊苷（ Etoposide ）和 AMP945 對小鼠乳腺癌 4T1 細胞體外免疫原性細胞死亡靶點誘導的研究[實驗材料]

本實驗所用藥物：Etoposide由MCE提供, Lot No.: 113741。AMP945由MCE提供, Lot No.: 143253

本實驗所用抗體：重組Alexa Fluor® 647熒光Anti-Calreticulin抗體（Abcam，Cat No.: ab196159, Lot No.: CR33676773）。Annexin V-凋亡檢測試劑盒（Beyotime, Cat No.: C1062L, Lot No.: 122221220706）。 [實驗方法]

4T1細胞（來源南京科佰生物科技有限公司，貨號：CBP60352）用RPMI 1640（上海元培, Cat No.: L210KJ, Lot No.: F210916）+10%FBS（Gibco, Cat No.: 10099-141c, Lot No.: 2158737cp）培養，培養條件為37 ºC、5% CO ₂。一周兩到三次用胰蛋白酶進行常規消化傳代處理。當細胞處於指數生長期，貼壁匯合至80%-90%時，收取細胞並進行鋪板。4T1細胞用胰蛋白酶進行消化後收取細胞並進行計數，根據計數結果，用RPMI1640 + 10%FBS對細胞進行稀釋，稀釋濃度為5萬個細胞每毫升，然後進行12孔細胞培養板鋪板，每孔鋪2 ml細胞懸液即10萬個細胞。鋪板完成後，將細胞放於37 ºC、5% CO ₂培養箱中培養。細胞鋪展24小時後，設立六組，第一組為對照組，添加培養基，第二組為AMP945，濃度為3 μM，第三組為AMP945，濃度為6 μM，第四組為Etoposide，濃度為5μM，第五組為AMP945（3 μM）與Etoposide（5μM）聯用，第六組為AMP945（6 μM）與Etoposide（5μM）聯用。將藥物混合，並在37°C下在5% CO ₂培養箱中培養48小時。 [實驗結果]

藥物作用48h後，收集細胞進行流動分析，並使用流式緩衝液（PBS + 2%FBS）清洗細胞兩次，每個孔中加入0.5 μl AF647抗鈣網蛋白抗體（abcam），混合。在4℃且避光的條件下孵育，培育20 min後加入流式緩衝液，使用Annexin V-凋亡檢測試劑盒（Beyotime），加入195 μl Annexin-V-FITC結合物，與細胞進行吹打混合後，加入5 μl Annexin-V-FITC抗體，輕輕混合，最後加入10 μl PI染料混合，室溫避光培育15 min，將樣品送至流式細胞儀上進行信號測定。

流式細胞儀分析結果顯示兩藥合用組的CRT陽性率和Annexin-V陽性率顯著優於單藥組及對照組，見圖13。

實施例 10 ：伊立替康（ Irinotecan ）和 AMP945 對小鼠乳腺癌 4T1 細胞體外免疫原性細胞死亡靶點誘導的研究[實驗材料]

本實驗所用藥物：Irinotecan由上海超嵐化工科技中心提供, Lot No.: 202110。AMP945由MCE提供, Lot No.: 143253

4T1細胞（來源南京科佰生物科技有限公司，貨號：CBP60352）用RPMI 1640（上海元培, Cat No.: L210KJ, Lot No.: F210916）+10%FBS（Gibco, Cat No.: 10099-141c, Lot No.: 2158737cp）培養，培養條件為37 ºC、5% CO ₂。一周兩到三次用胰蛋白酶進行常規消化傳代處理。當細胞處於指數生長期，貼壁匯合至80%-90%時，收取細胞並進行鋪板。4T1細胞用胰蛋白酶進行消化後收取細胞並進行計數，根據計數結果，用RPMI1640 + 10%FBS對細胞進行稀釋，稀釋濃度為5萬個細胞每毫升，然後進行12孔細胞培養板鋪板，每孔鋪2 ml細胞懸液即10萬個細胞。鋪板完成後，將細胞放於37 ºC、5% CO ₂培養箱中培養。細胞鋪展24小時後，設立六組，第一組為對照組，添加培養基，第二組為AMP945，濃度為3 μM，第三組為AMP945，濃度為6 μM，第四組為Irinotecan濃度為120μM，第五組為AMP945（3 μM）與Irinotecan（120μM）聯用，第六組為AMP945（6 μM）與Irinotecan（120μM）聯用。將藥物混合，並在37°C下在5% CO ₂培養箱中培養48小時。 [實驗結果]

藥物作用48h後，收集細胞進行流動分析，並使用流式緩衝液（PBS + 2%FBS）清洗細胞兩次，每個孔中加入0.5 μl AF647抗鈣網蛋白抗體（abcam），混合。在4℃且避光的條件下培育，培育20 min後加入流式緩衝液，使用Annexin V-凋亡檢測試劑盒（Beyotime），加入195 μl Annexin-V-FITC結合物，與細胞進行吹打混合後，加入5 μl Annexin-V-FITC抗體，輕輕混合，最後加入10 μl PI染料混合，室溫避光孵育15 min，將樣品送至流式細胞儀上進行信號測定。

流式細胞儀分析結果顯示兩藥合用組的CRT陽性率和Annexin-V陽性率顯著優於單藥組及對照組，見圖14。

通過引用將本發明中所提及的所有參考文獻均完整合併入本文，就如同每一篇文獻均單獨列出一樣。應理解，在閱讀了本發明的公開內容之後，本領域技術人員可以對本發明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落入本申請所附權利要求書所限定的範圍內。

無

為了更清楚地說明本公開實施例的技術方案，下面將對實施例的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅涉及本公開的一些實施例，而非對本發明的限制。

圖1顯示了FAK沉默後聯合2 μM依託泊苷處理48小時，增加了MDA-MB-231細胞凋亡。圖2顯示了FAK沉默後聯合2 μM依託泊苷處理48小時，增強了Calreticulin釋放及暴露。圖3顯示了FAK沉默後聯合2 μM替尼泊苷處理48小時增加了MDA-MB-231細胞凋亡。圖4顯示了FAK沉默後聯合2 μM替尼泊苷處理48小時，增強了Calreticulin釋放及暴露。圖5顯示了依託泊苷聯合IN10018在結腸癌細胞CT26中的IC50值。圖6顯示了結腸癌CT26細胞與藥物培養48小時後拍攝細胞的白光顯微鏡照片。圖7顯示結腸癌CT26細胞與IN10018和依託泊苷培養48小時後的情況，其中：7a顯示了結腸癌CT26細胞與藥物培養48小時後CRT陽性細胞的百分比；7b顯示了結腸癌CT26細胞與藥物培養48小時後Annexin V陽性細胞的百分比。圖8顯示結腸癌CT26細胞與IN10018和伊立替康培養48小時後的情況，其中：8a顯示了結腸癌CT26細胞與藥物培養48小時後CRT陽性細胞的百分比；8b顯示了結腸癌CT26細胞與藥物培養48小時後Annexin V陽性細胞的百分比。圖9顯示了替尼泊苷及其聯合IN10018對結腸癌CT26細胞的增殖的抑制作用相對於藥物濃度的曲線。圖10顯示結腸癌CT26細胞與IN10018和替尼泊苷培養48小時後的情況，其中：10a顯示了小鼠結腸癌細胞CT26細胞與藥物培養48小時後Calreticulin（CRT）陽性細胞百分比；10b顯示了小鼠結腸癌細胞CT26細胞與藥物培養48小時後Annexin-V陽性細胞百分比。圖11顯示了MC38小鼠結直腸癌細胞C57BL/6小鼠皮下同種移植瘤模型給藥後的腫瘤生長曲線，其中數據點代表組內平均腫瘤體積，誤差線代表平均值標準誤差（SEM）。圖12顯示了MC38小鼠結直腸癌細胞C57BL/6小鼠皮下同種移植瘤模型給藥後的體重變化曲線，其中數據點代表組內平均體重，誤差線代表平均值標準誤差（SEM）。圖13顯示小鼠乳腺癌T41細胞與AMP945和Etoposide孵育48小時後的情況，其中：13a顯示了小鼠乳腺癌T41細胞與藥物培養48小時後Calreticulin（CRT）陽性細胞百分比；13b顯示了小鼠乳腺癌T41細胞與藥物培養48小時後Annexin-V陽性細胞百分比。圖14顯示小鼠乳腺癌T41細胞與AMP945和Irinotecan培養48小時後的情況，其中：14a顯示了小鼠乳腺癌T41細胞與藥物培養48小時後Calreticulin（CRT）陽性細胞百分比；14b顯示了小鼠乳腺癌T41細胞與藥物培養48小時後Annexin-V陽性細胞百分比。

Claims

FAK抑制劑、拓撲異構酶抑制劑和免疫檢查點抑制劑在製備用於在對象中治療腫瘤的藥物中的用途，其中所述拓撲異構酶抑制劑不為蒽環類。
FAK抑制劑、拓撲異構酶抑制劑和免疫檢查點抑制劑的藥物組合產品，其用於在對象中治療腫瘤，其中所述拓撲異構酶抑制劑不為蒽環類。
一種治療腫瘤的方法，該方法包括向對象施用治療有效量的FAK抑制劑、拓撲異構酶抑制劑和免疫檢查點抑制劑，其中所述拓撲異構酶抑制劑不為蒽環類。
如請求項1-3中任一項所述的用途、藥物組合產品或者方法，其中所述FAK抑制劑和所述拓撲異構酶抑制劑誘導免疫原性細胞死亡（ICD），其中所述拓撲異構酶抑制劑不為蒽環類。
如請求項1-4中任一項所述的用途、藥物組合產品或者方法，其中所述FAK抑制劑為IN10018、Defactinib、GSK2256098、PF-00562271、VS-4718、APG-2449、AMP945、AMP886或其藥學上可接受的鹽，優選為IN10018、Defactinib、AMP945或其藥學上可接受的鹽，進一步優選為IN10018或其藥學上可接受的鹽，尤其是IN10018酒石酸鹽，所述IN10018結構如下：。
如請求項1-5中任一項所述的用途、藥物組合產品或者方法，其中所述拓撲異構酶抑制劑為拓撲異構酶I抑制劑。
如請求項6所述的用途、藥物組合產品或者方法，其中所述拓撲異構酶I抑制劑為拓撲替康（Topotecan）、伊立替康（Irinotecan）、貝洛替康（Belotecan）、科西特康（Cositecan）、依喜替康（Exatecan，DX-8951）、茚並異喹啉（Indenoisoquinoline）、Indotecan （LMP-400）、Indimitecan （LMP-776）、希明替康（Simmitecan）、Gimatecan （ST1481）、EC-112002、PLX-038 （NK012）、AR-67，或其藥學上可接受的鹽。
如請求項7所述的用途、藥物組合產品或者方法，其中所述拓撲異構酶I抑制劑為伊立替康（Irinotecan），或其藥學上可接受的鹽。
如請求項1-5中任一項所述的用途、藥物組合產品或者方法，其中所述拓撲異構酶抑制劑為拓撲異構酶II抑制劑。
如請求項9所述的用途、藥物組合產品或者方法，其中所述拓撲異構酶II抑制劑為依託泊苷（Etoposide）、替尼泊苷（Teniposide）、莎巴比星（Sabarubicin），或其藥學上可接受的鹽。
如請求項10所述的用途、藥物組合產品或者方法，其中所述拓撲異構酶II抑制劑為依託泊苷（Etoposide）、替尼泊苷（Teniposide），或其藥學上可接受的鹽。
如請求項1-11中任一項所述的用途、藥物組合產品或者方法，其中所述免疫檢查點抑制劑為抗PD-1/PD-L1抗體、PD-1/PD-L1小分子抑制劑或者TIGIT抗體。
如請求項1-12中任一項所述的用途、藥物組合產品或者方法，其中所述免疫檢查點抑制劑為抗PD-1/PD-L1抗體，進一步的，所述抗PD-1/PD-L1抗體為帕博利珠單抗（pembrolizumab）、替雷利珠單抗（Tislelizumab）、尼伏單抗（Nivolumab）、特瑞普利單抗（Toripalimab）、阿替珠單抗（Atezolizumab）、度伐單抗（durvalumab）、阿維單抗（Avelumab）、阿特珠單抗（Atezolizumab）、卡瑞利珠單抗（Camrelizumab）、信迪利單抗（Sintilimab）、西米普利單抗（Cemiplimab）、恩沃利單抗（envafolimab）、BMS-936559、JS003、SHR-1316、GS-4224、AN-4005或者MX-10181。
如請求項1-12中任一項所述的用途、藥物組合產品或者方法，其中所述免疫檢查點抑制劑為PD-1/PD-L1小分子抑制劑，進一步的，所述PD-1/PD-L1小分子抑制劑為INCB-086550、拉澤替尼（Lazertinib）、IMMH-010、CA-170、ABSK043或者RRx-001。
如請求項1-12中任一項所述的用途、藥物組合產品或者方法，其中所述免疫檢查點抑制劑為TIGIT抗體，進一步的，所述TIGIT抗體為歐司珀利單抗（Ociperlimab/BGB-A1217）、維博利單抗（Vibostolimab）、domvanalimab（AB154）、替瑞利尤單抗（Tiragolumab）、Belrestotug、艾替利單抗（Etigilimab）、ONO-4686、JS-006、AZD-2936、HLX-301、SEA-TGT、M-6223、IBI-939、COM-902、AB-308、AGEN-1777、AK-127、BAT-6021、BAT-6005、ASP-8374、PM-1022、BMS-986207、HB0036或IBI-321。
如請求項1-5中任一項所述的用途、藥物組合產品或者方法，其中所述FAK抑制劑為IN10018或其藥學上可接受的鹽；所述拓撲異構酶抑制劑為伊立替康（Irinotecan）或其藥學上可接受的鹽；所述免疫檢查點抑制劑為抗PD-1/PD-L1抗體或PD-1/PD-L1小分子抑制劑，尤其是抗PD-1/PD-L1抗體。
如請求項1-5中任一項所述的用途、藥物組合產品或者方法，其中所述FAK抑制劑為IN10018或其藥學上可接受的鹽；所述拓撲異構酶抑制劑為依託泊苷（Etoposide）、替尼泊苷（Teniposide），或其藥學上可接受的鹽；所述免疫檢查點抑制劑為抗PD-1/PD-L1抗體或PD-1/PD-L1小分子抑制劑，尤其是抗PD-1/PD-L1抗體。
如請求項1-17中任一項所述的用途、藥物組合產品或者方法，所述FAK抑制劑、所述拓撲異構酶抑制劑和所述免疫檢查點抑制劑被同時或依次施用於所述對象。
如請求項1-18中任一項所述的用途、藥物組合產品或者方法，其中所述腫瘤為膀胱癌、乳腺癌、子宮頸癌、結腸癌（包括結直腸癌）、食管癌、食管鱗狀細胞癌、頭頸癌、肝癌、肺癌（包括小細胞肺癌和非小細胞肺癌）、黑色素瘤、骨髓瘤、橫紋肌肉瘤、炎性肌纖維母細胞瘤、成神經細胞瘤、胰腺癌、前列腺癌、腎癌、腎細胞癌、肉瘤（包括骨肉瘤）、皮膚癌（包括鱗狀細胞癌）、胃癌、睾丸癌、甲狀腺癌、子宮癌、間皮瘤、膽管癌、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤、鼻咽癌、神經內分泌癌、卵巢癌、唾液腺癌、梭形細胞癌引起的轉移瘤、間變性大細胞淋巴瘤、甲狀腺未分化癌、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、神經膠質瘤或者惡性血液病，例如急性髓細胞性白血病（AML）、急性淋巴細胞白血病（ALL）、彌漫性大B細胞淋巴瘤（DLBCL）、濾泡性淋巴瘤（FL）、慢性淋巴細胞性白血病（CLL）、慢性粒細胞白血病（CML）；優選地，所述腫瘤為乳腺癌、卵巢癌、結腸癌（包括結直腸癌）、肺癌（包括小細胞肺癌和非小細胞肺癌）、黑色素瘤或胰腺癌。
如請求項1-19中任一項所述的用途、藥物組合產品或者方法，其中所述腫瘤為乳腺癌或結腸癌（包括結直腸癌）。
一種試劑盒或藥學上可接受的組合物，其包括： FAK抑制劑；拓撲異構酶抑制劑，所述拓撲異構酶抑制劑不為蒽環類；和免疫檢查點抑制劑。
如請求項21所述的試劑盒或組合物，其中所述FAK抑制劑和所述拓撲異構酶抑制劑誘導免疫原性細胞死亡（ICD）。
如請求項21-22中任一項所述的試劑盒或組合物，其中所述FAK抑制劑為IN10018、Defactinib、GSK2256098、PF-00562271、VS-4718、APG-2449、AMP945、AMP886或其藥學上可接受的鹽，優選為IN10018、Defactinib、AMP945或其藥學上可接受的鹽，進一步優選為IN10018或其藥學上可接受的鹽，尤其是IN10018酒石酸鹽，所述IN10018結構如下：。
如請求項21-23中任一項所述的試劑盒或組合物，其中所述拓撲異構酶抑制劑為拓撲異構酶I抑制劑。
如請求項24所述的試劑盒或組合物，其中所述拓撲異構酶I抑制劑為拓撲替康（Topotecan）、伊立替康（Irinotecan）、貝洛替康（Belotecan）、科西特康（Cositecan）、依喜替康（Exatecan，DX-8951）、茚並異喹啉（Indenoisoquinoline）、Indotecan （LMP-400）、Indimitecan （LMP-776）、希明替康（Simmitecan）、Gimatecan （ST1481）、EC-112002、PLX-038 （NK012）、AR-67，或其藥學上可接受的鹽。
如請求項25所述的試劑盒或組合物，其中所述拓撲異構酶I抑制劑為伊立替康（Irinotecan），或其藥學上可接受的鹽。
如請求項21-23中任一項所述的試劑盒或組合物，其中所述拓撲異構酶抑制劑為拓撲異構酶II抑制劑。
如請求項27所述的試劑盒或組合物，其中所述拓撲異構酶II抑制劑為依託泊苷（Etoposide）、替尼泊苷（Teniposide）、莎巴比星（Sabarubicin），或其藥學上可接受的鹽。
如請求項28所述的試劑盒或組合物，其中所述拓撲異構酶II抑制劑為依託泊苷（Etoposide）、替尼泊苷（Teniposide），或其藥學上可接受的鹽。
如請求項21-29中任一項所述的試劑盒或組合物，其中所述免疫檢查點抑制劑為抗PD-1/PD-L1抗體、PD-1/PD-L1小分子抑制劑或者TIGIT抗體。
如請求項21-30中任一項所述的試劑盒或組合物，其中所述免疫檢查點抑制劑為抗PD-1/PD-L1抗體，進一步的，所述抗PD-1/PD-L1抗體為帕博利珠單抗（pembrolizumab）、替雷利珠單抗（Tislelizumab）、尼伏單抗（Nivolumab）、特瑞普利單抗（Toripalimab）、阿替珠單抗（Atezolizumab）、度伐單抗（durvalumab）、阿維單抗（Avelumab）、阿特珠單抗（Atezolizumab）、卡瑞利珠單抗（Camrelizumab）、信迪利單抗（Sintilimab）、西米普利單抗（Cemiplimab）、恩沃利單抗（envafolimab）、BMS-936559、JS003、SHR-1316、GS-4224、AN-4005或者MX-10181。
如請求項21-30中任一項所述的試劑盒或組合物，其中所述免疫檢查點抑制劑為PD-1/PD-L1小分子抑制劑，進一步的，所述PD-1/PD-L1小分子抑制劑為INCB-086550、拉澤替尼（Lazertinib）、IMMH-010、CA-170、ABSK043或者RRx-001。
如請求項21-30中任一項所述的試劑盒或組合物，其中所述免疫檢查點抑制劑為TIGIT抗體，進一步的，所述TIGIT抗體為歐司珀利單抗（Ociperlimab/BGB-A1217）、維博利單抗（Vibostolimab）、domvanalimab（AB154）、替瑞利尤單抗（Tiragolumab）、Belrestotug、艾替利單抗（Etigilimab）、ONO-4686、JS-006、AZD-2936、HLX-301、SEA-TGT、M-6223、IBI-939、COM-902、AB-308、AGEN-1777、AK-127、BAT-6021、BAT-6005、ASP-8374、PM-1022、BMS-986207、HB0036或IBI-321。
如請求項21-22中任一項所述的試劑盒或組合物，其中所述FAK抑制劑為IN10018或其藥學上可接受的鹽；所述拓撲異構酶抑制劑為伊立替康（Irinotecan）或其藥學上可接受的鹽；所述免疫檢查點抑制劑為抗PD-1/PD-L1抗體或PD-1/PD-L1小分子抑制劑，尤其是抗PD-1/PD-L1抗體。
如請求項21-22中任一項所述的試劑盒或組合物，其中所述FAK抑制劑為IN10018或其藥學上可接受的鹽；所述拓撲異構酶抑制劑為依託泊苷（Etoposide）、替尼泊苷（Teniposide），或其藥學上可接受的鹽；所述免疫檢查點抑制劑為抗PD-1/PD-L1抗體或PD-1/PD-L1小分子抑制劑，尤其是抗PD-1/PD-L1抗體。
如請求項21-35中任一項所述的試劑盒或組合物，其用作藥物。
如請求項21-36中任一項所述的試劑盒或組合物，其中所述藥物用於治療腫瘤，所述腫瘤為膀胱癌、乳腺癌、子宮頸癌、結腸癌（包括結直腸癌）、食管癌、食管鱗狀細胞癌、頭頸癌、肝癌、肺癌（包括小細胞肺癌和非小細胞肺癌）、黑色素瘤、骨髓瘤、橫紋肌肉瘤、炎性肌纖維母細胞瘤、成神經細胞瘤、胰腺癌、前列腺癌、腎癌、腎細胞癌、肉瘤（包括骨肉瘤）、皮膚癌（包括鱗狀細胞癌）、胃癌、睾丸癌、甲狀腺癌、子宮癌、間皮瘤、膽管癌、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤、鼻咽癌、神經內分泌癌、卵巢癌、唾液腺癌、梭形細胞癌引起的轉移瘤、間變性大細胞淋巴瘤、甲狀腺未分化癌、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、神經膠質瘤或者惡性血液病，例如急性髓細胞性白血病（AML）、急性淋巴細胞白血病（ALL）、彌漫性大B細胞淋巴瘤（DLBCL）、濾泡性淋巴瘤（FL）、慢性淋巴細胞性白血病（CLL）、慢性粒細胞白血病（CML）；優選地，所述腫瘤為乳腺癌、卵巢癌、結腸癌（包括結直腸癌）、肺癌（包括小細胞肺癌和非小細胞肺癌）、黑色素瘤或胰腺癌。
如請求項37所述的試劑盒或組合物，其中所述腫瘤為乳腺癌或結腸癌（包括結直腸癌）。
FAK抑制劑，其在治療腫瘤中用於增強拓撲異構酶抑制劑誘導的免疫原性細胞死亡，其中所述拓撲異構酶抑制劑不為蒽環類。
如請求項39所述的FAK抑制劑，其中所述FAK抑制劑為IN10018、Defactinib、GSK2256098、PF-00562271、VS-4718、APG-2449、AMP945、AMP886或其藥學上可接受的鹽，優選為IN10018、Defactinib、AMP945或其藥學上可接受的鹽，進一步優選為IN10018或其藥學上可接受的鹽，尤其是IN10018酒石酸鹽，所述IN10018結構如下：。
如請求項39或40中所述的FAK抑制劑，其中所述拓撲異構酶抑制劑為拓撲異構酶I抑制劑。
如請求項41所述的FAK抑制劑，其中所述拓撲異構酶I抑制劑為拓撲替康（Topotecan）、伊立替康（Irinotecan）、貝洛替康（Belotecan）、科西特康（Cositecan）、依喜替康（Exatecan，DX-8951）、茚並異喹啉（Indenoisoquinoline）、Indotecan （LMP-400）、Indimitecan （LMP-776）、希明替康（Simmitecan）、Gimatecan （ST1481）、EC-112002 、PLX-038 （NK012）、AR-67，或其藥學上可接受的鹽。
如請求項42所述的FAK抑制劑，其中所述拓撲異構酶I抑制劑為伊立替康（Irinotecan），或其藥學上可接受的鹽。
如請求項39或40中所述的FAK抑制劑，其中所述拓撲異構酶抑制劑為拓撲異構酶II抑制劑。
如請求項44所述的FAK抑制劑，其中所述拓撲異構酶II抑制劑為依託泊苷（Etoposide）、替尼泊苷（Teniposide）、莎巴比星（Sabarubicin），或其藥學上可接受的鹽。
如請求項45所述的FAK抑制劑，其中所述拓撲異構酶II抑制劑為依託泊苷（Etoposide）、替尼泊苷（Teniposide），或其藥學上可接受的鹽。
如請求項39-46中任意一項所述的FAK抑制劑，其中所述腫瘤為膀胱癌、乳腺癌、子宮頸癌、結腸癌（包括結直腸癌）、食管癌、食管鱗狀細胞癌、頭頸癌、肝癌、肺癌（包括小細胞肺癌和非小細胞肺癌）、黑色素瘤、骨髓瘤、橫紋肌肉瘤、炎性肌纖維母細胞瘤、成神經細胞瘤、胰腺癌、前列腺癌、腎癌、腎細胞癌、肉瘤（包括骨肉瘤）、皮膚癌（包括鱗狀細胞癌）、胃癌、睾丸癌、甲狀腺癌、子宮癌、間皮瘤、膽管癌、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤、鼻咽癌、神經內分泌癌、卵巢癌、唾液腺癌、梭形細胞癌引起的轉移瘤、間變性大細胞淋巴瘤、甲狀腺未分化癌、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、神經膠質瘤或者惡性血液病，例如急性髓細胞性白血病（AML）、急性淋巴細胞白血病（ALL）、彌漫性大B細胞淋巴瘤（DLBCL）、濾泡性淋巴瘤（FL）、慢性淋巴細胞性白血病（CLL）、慢性粒細胞白血病（CML）；優選地，所述腫瘤為乳腺癌、卵巢癌、結腸癌（包括結直腸癌）、肺癌（包括小細胞肺癌和非小細胞肺癌）、黑色素瘤或胰腺癌。
如請求項39-47中任意一項所述的FAK抑制劑，其中所述腫瘤為乳腺癌或結腸癌（包括結直腸癌）。