TW202400557A

TW202400557A - 維生素ｄ衍生物之結晶或其溶劑合物之結晶

Info

Publication number: TW202400557A
Application number: TW112108854A
Authority: TW
Inventors: 齋藤博; 髙橋紗織
Original assignee: 日商帝人製藥股份有限公司
Priority date: 2022-03-11
Filing date: 2023-03-10
Publication date: 2024-01-01
Also published as: WO2023171801A1

Abstract

本發明提供一種式(1)表示之維生素D衍生物之結晶或式(1)表示之維生素D衍生物之溶劑合物之結晶。所述結晶係有用於作為用於促進寡從樹突細胞前驅細胞分化誘導至寡樹突細胞之醫藥。

Description

維生素Ｄ衍生物之結晶或其溶劑合物之結晶

本發明係有關於一種具有寡樹突細胞分化誘導促進作用，且有用於例如多發性硬化症、多系統退化症、阿茲海默型失智症、腦梗塞等的預防或治療的維生素D衍生物之結晶或其溶劑合物之結晶。

寡樹突細胞係於神經細胞的軸突形成髓鞘(髓磷脂)，其主要作用在於提高跳躍傳導的誘導所產生之傳導速度。而且其亦與神經細胞的代謝有關。

關於數種發炎性脫髓鞘疾病、神經退化疾病及精神疾病，經報導有脫髓鞘或髓鞘的形成不全之情形。脫髓鞘係指髓鞘遭破壞而消失之狀態，由於髓鞘消失而引發各種的神經症狀。作為引發脫髓鞘之神經免疫疾病，多發性硬化症極為有名，此外視神經脊髓炎、進行性多灶性白質腦病、多系統退化症、急性瀰漫性腦脊髓炎、異位性脊髓炎、HTLV-1相關脊髓症、HIV相關白質腦病、克拉伯病等亦已知為會引發脫髓鞘的中樞神經系統發炎性脫髓鞘疾病。而且作為末梢神經系統脫髓鞘疾病，已知有格林-巴利症候群、米勒費雪症候群、慢性脫髓鞘性神經炎、Charcot-Marie-Tooth氏症等。再者，缺血性中風亦常會伴隨脫髓鞘，而脫髓鞘會引起後續的功能變差。又，有人報導屬神經退化疾病之阿茲海默型失智症，亦會因脫髓鞘而抑制髓鞘的可塑性變化，而導致認知機能變差。

再者，已在思覺失調症、躁鬱症、嚴重抑鬱症、泛自閉症障礙(ASD)、注意缺陷多動障礙、強迫性障害、創傷後壓力症候群(PTSD)、藥物成癮所致之抑鬱症等各種的精神疾病患者的腦中確認有髓鞘的形成不全，而被指出與疾病有關。

由以上所述，使脫髓鞘或髓鞘的形成不全之狀態回復正常，對於中樞神經系或末梢神經系的治療甚為重要。

近年來有人報導1α,25-二羥基維生素D ₃具有促進從寡樹突細胞前驅細胞或神經幹細胞分化誘導至寡樹突細胞之作用(非專利文獻1及2)。1α,25-二羥基維生素D ₃及其衍生物的作用已知有2種路徑(非專利文獻3)。其一為與屬核受體之一的維生素D受體(VDR)結合，而控制基因表現之作用(genomic作用)。另一作用則為結合於Protein disulfide isomerase A3(PDIA3)，而引起訊息傳遞之作用(non-genomic作用)。於現階段，非專利文獻1及2中所報導之1α,25-二羥基維生素D ₃之寡樹突細胞分化誘導作用係根據genomic作用與non-genomic作用中的何者，完全一無所悉。另一方面，1α,25-二羥基維生素D ₃及其衍生物的主要作用可舉出鈣-磷代謝作用。一般以轉錄亢進活性值表示之genomic作用愈強的衍生物其鈣代謝作用愈強，而有使血鈣濃度上升而引起高鈣血症之虞。因此，投予量有其極限，有時無法引起期望的藥理作用。

甚而，有人報導1α,25-二羥基維生素D ₃的中樞轉移性極低(非專利文獻4及5)。根據此等文獻，其意指為了使1α,25-二羥基維生素D ₃在腦中達到充足的濃度，需要極高的投予量。然而，1α,25-二羥基維生素D ₃的高用量投予會引起血鈣濃度上升而較為棘手。

因此，吾人便企盼有一種可於腦中發揮效果之中樞轉移性優良的維生素D衍生物，甚而不會引起髓磷脂再生促進作用與血鈣上升作用的維生素D衍生物，惟此種衍生物迄今尚未有人報導之。 [先前技術文獻] [非專利文獻]

[非專利文獻1]A.G.de la Fuente et al., Journal of Cell Biology, 2015, 211(5), 975-985 [非專利文獻2]H.A.Shirazi et al., Experimental and Molecular Pathology, 2015, 98(2), 240-245 [非專利文獻3]M.A.Zmijewski et al., Experimental Dermatology, 2020, 29, 876-884 [非專利文獻4]M.R.Durk et al., The Journal of Neuroscience, 2014, 34(21), 7091-7101 [非專利文獻5]E.C.Y.Chow et al., The American Journal of Physiology：Endocrinology and Metabolism, 2013, 304(9), E977-989

[發明所欲解決之課題]

本發明目的在於提供一種具有優良之寡樹突細胞分化誘導促進作用的新型維生素D衍生物之結晶或其溶劑合物之結晶。 [解決課題之手段]

本案發明人等為達上述目的而致力研究的結果發現，特定結構之維生素D衍生物具有特別優異的寡樹突細胞分化誘導促進作用。再者，本案發明人等發現，部分此等化合物有呈化學穩定且適合作為醫藥原料藥之構造之結晶。

亦即，本發明為式(1)表示之維生素D衍生物之結晶或其溶劑合物之結晶：式(1)： [式中，R表示下述式中之Ra、Rb、Rc、Rd、Re或Rf的任一種結構： ] [發明之效果]

根據本發明，係提供一種具有優良之寡樹突細胞分化誘導促進作用，且有用於例如多發性硬化症、多系統退化症、阿茲海默型失智症、腦梗塞等的預防或治療的維生素D衍生物之結晶或其溶劑合物之結晶。本發明之結晶可作為醫藥品製造用前驅體使用。

[實施發明之形態]

茲就本發明之上述式(1)表示之維生素D衍生物之結晶的製造加以說明。

上述式(1)表示之維生素D衍生物的合成能以任意方法進行。例如上述式(1)中R=Ra、Rb、Rc、Rd或Rf之維生素D衍生物能以路徑圖1之程序來合成。亦即，就步驟1(圖中step1)，使化合物(2)與環狀胺化合物(3)(圖中Amine(3))於鹼存在下耦合而取得化合物(4)後，就步驟2(圖中step2)，將羥基之保護基去保護並進行純化，可得到粗產物之化合物(1)[R=Ra、Rb、Rc、Rd或Rf](圖中crude(1))。就步驟3(圖中step3)，藉由將粗產物之化合物(1)(圖中crude(1))再結晶化，可得到目標化合物(1)。

與化合物(2)進行耦合反應(步驟1，圖中Step1)之環狀胺化合物(3)可為自由體或使用鹽。本反應中使用之環狀胺化合物(3)的量，宜添加化合物(2)的1～5莫耳當量，較佳為3～5莫耳當量。且本步驟中的鹼不特別限定，合宜之鹼可舉出碳酸鉀、碳酸氫鉀及碳酸銫等。鹼宜添加化合物(2)的1～5莫耳當量，較佳為3～5莫耳當量。且為了加速本反應，亦可對反應混合物添加碘化鉀或碘化鈉。就碘化鉀或碘化鈉的添加量，較佳為化合物(2)的1～2莫耳當量。且對於溶劑亦不特別限定，合宜溶劑可舉出N,N-二甲基甲醯胺、N-甲基-2-吡咯啶酮等。又本耦合反應的反應溫度較佳為40℃～90℃、反應時間較佳使其反應6小時至48小時。

此外，步驟1結束後經純化後，可進行至去保護反應(步驟2，圖中Step2)，或能以步驟1之粗產物進行至去保護反應(步驟2)。於步驟1後進行純化時，較佳以矽膠管柱層析法進行純化。作為矽膠管柱層析法純化的溶劑，宜以庚烷/乙酸乙酯或己烷/乙酸乙酯的混合溶劑進行純化。

上述路徑圖1中之去保護反應(步驟2)的條件，只要是矽烷基系保護基的去保護條件則不特別限定，可舉出藉由四丁基氟化銨(TBAF)之去保護或藉由鹽酸之去保護。合宜條件可舉出在四氫呋喃(THF)中，將四丁基氟化銨(TBAF)，按化合物(2)(於步驟1後純化時為化合物(3))的每1個羥基添加1～3莫耳當量，自室溫於回流溫度下攪拌。且其他合宜條件可舉出在丙酮或2-丁酮等溶劑中，將鹽酸按化合物(2)(於步驟1後純化時為化合物(3))的每1個羥基添加1～3莫耳當量，並於室溫下攪拌。鹽酸的濃度較佳為1M～6M。

而且，上述式(1)中R=Re之維生素D衍生物可如下述路徑圖2所示來合成。

亦即，將週知化合物(5)以氫化二異丁基鋁還原(DIBAL還原)而取得醛體(6)(步驟4，圖中step4)後，藉由還原胺化導入嗎啉而取得化合物(7)(步驟5，圖中step5)，再進行去保護可得到粗產物之化合物(1)[R=Re](圖中crude(1)[R=Re])(步驟6，圖中step6)。

步驟4之DIBAL還原係藉由在-78℃～0℃下，於甲苯中添加化合物(5)之1～2莫耳當量的二異丁基鋁水合物(DIBAL-H)，以0.5～2小時左右進行反應。

步驟5之還原胺基化試劑較佳為三乙醯氧基硼氫化鈉及氰基硼氫化鈉等。溶劑不特別限定，合宜溶劑可舉出四氫呋喃(THF)。且，亦能以嗎啉作為溶劑使其反應。還原胺基化反應係例如藉由在THF中，使1～5莫耳當量的嗎啉與1～3莫耳當量的還原劑與化合物(6)反應來進行反應。其後，藉由進行去保護反應(步驟6)，可獲得粗產物之化合物(1)[R=Re](圖中、crude(1)[R=Re])。就步驟6之去保護反應，係以與路徑圖1同樣的條件進行。

用於獲得粗產物之化合物(1)[R=Re](圖中、crude(1)[R=Re])之中途中間體的化合物(4)、化合物(6)、化合物(7)可經矽膠管柱層析法純化，亦可未經純化而前進至次一步驟。以中間體純化時，矽膠管柱層析法的移動溶劑較佳使用庚烷、乙酸乙酯。具體而言，例如藉由將乙酸乙酯的比率自庚烷/乙酸乙酯=98/2階梯式提升至庚烷/乙酸乙酯=70/30，可將中間體純化。

本發明之結晶可藉由將透過上述製法而得之式(1)之粗產物之化合物(1)再結晶而得(上述路徑圖1中的步驟3或上述路徑圖2中的步驟7)。再結晶溶劑可舉出例如乙腈、甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇、丙酮、水。合宜溶劑可舉出乙腈、甲醇、乙醇、水。再結晶的溶劑量可舉出粗產物重量的10倍～100倍(v/w)。作為製法，可對粗產物添加再結晶溶劑，加熱至40℃～70℃，較佳為45℃～65℃使其溶解後，冷卻至室溫或0℃而生成結晶。

且，透過將藉由上述製法而得之式(1)之粗產物之化合物(1)進行中和晶析，亦可取得本發明之結晶。具體而言，係對式(1)之粗產物之化合物(1)添加鹽酸而調成鹽酸鹽溶液，且邊將式(1)之粗產物之化合物(1)的鹽酸鹽溶液於冰冷卻下攪拌，邊對其添加鹼而使pH成為7.5～11左右，較佳為8～10左右，可獲得上述式(1)表示之維生素D衍生物之結晶。調製鹽酸鹽溶液之際係使用1～6M的鹽酸，惟較佳可舉出1～2M的鹽酸。且中和時的鹼係使用氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鋰、碳酸鉀、碳酸鈉或碳酸氫鈉等的水溶液，合宜的鹼可舉出1～5M的氫氧化鈉水溶液。中和可於0℃至室溫，較佳為0～20℃、或0～10℃的溫度下滴加鹼來進行。中和後，藉由在0℃至室溫，較佳為10～35℃、或以20～30℃的溫度攪拌30分鐘至3小時後，進行過濾、乾燥，可獲得目標之上述式(1)表示之維生素D衍生物之結晶。

藉由上述再結晶或中和晶析所取得之結晶非為適合作為醫藥品使用的純度時，可藉由將該低純度之結晶在漿液狀態下加熱攪拌，來提升LC純度。用於漿液狀態下的攪拌之溶劑不特別限定，可舉出乙腈、甲醇、乙醇、水。且攪拌溫度較佳為室溫至60℃。一般而言，可藉由在該低純度之結晶未完全溶解的溶劑量、溫度下加熱攪拌，再冷卻至室溫或0℃後，將結晶過濾來提升純度。此外，藉由上述再結晶或中和晶析所得之結晶的一部分亦能以化合物(1)與再結晶溶劑等溶劑的溶劑合物之形式存在。

本發明之結晶可藉由粉末X光繞射(XRD)光譜、差示掃描熱分析(DSC)及/或固態NMR光譜等來表徵。此等結晶的粉末X光繞射(XRD)光譜顯示特徵圖樣，各結晶具有特有的繞射角2θ值。此等結晶在差示掃描熱分析(DSC)中，亦顯示各者特有的熱行為。此等結晶的固態NMR光譜顯示其特性圖樣，各結晶具有特有的化學位移(ppm)。

本發明為前述式(1)表示之化合物之結晶；以下就其較佳實施形態，以下記載各化合物之結晶。

＜化合物名＞ (1R、3R)-5-(2-((1R,3aS,7aR,E)-1-((S)-1-((S)-3-(二氟甲基)吡咯啶-1-基)丙烷-2-基)-7a-甲基八氫-4H-茚-4-亞基)亞乙基)環己烷-1,3-二醇(化合物(A)) (1R、3R)-5-(2-((1R,3aS,7aR,E)-1-((S)-1-((R)-3-(二氟甲基)吡咯啶-1-基)丙烷-2-基)-7a-甲基八氫-4H-茚-4-亞基)亞乙基)環己烷-1,3-二醇(化合物(B)) (1R、3R)-5-(2-((1R,3aS,7aR,E)-1-((S)-1-((R)-3-(1,1-二氟乙基)吡咯啶-1-基)丙烷-2-基)-7a-甲基八氫-4H-茚-4-亞基)亞乙基)環己烷-1,3-二醇(化合物(C)) (1R、3R)-5-(2-((1R,3aS,7aR,E)-1-((S)-1-((S)-3-(2,2-二氟乙基)吡咯啶-1-基)丙烷-2-基)-7a-甲基八氫-4H-茚-4-亞基)亞乙基)環己烷-1,3-二醇(化合物(D)) (1R、3R)-5-(2-((1R,3aS,7aR,E)-7a-甲基-1-((R)-4-嗎啉基丁烷-2-基)八氫-4H-茚-4-亞基)亞乙基)環己烷-1,3-二醇(化合物(E)) (1R、3R)-5-(2-((1R,3aS,7aR,E)-1-((S)-1-(3,3-二甲基嗎啉基)丙烷-2-基)-7a-甲基八氫-4H-茚-4-亞基)亞乙基)環己烷-1,3-二醇(化合物(F))

化合物(A)之結晶，於粉末X光繞射光譜中，在2θ=14.2°、16.3°、17.9°及18.5°具有特徵峰，更詳而言之，在8.9°、14.2°、16.3°、17.9°及18.5°具有特徵峰。化合物(A)之結晶，於差示掃描熱分析(DSC)中具有外插起始點溫度為171℃的吸熱峰。且化合物(A)之結晶，於 ¹³C固態NMR光譜中具有13.6ppm、19.2ppm、117.2ppm、121.8ppm、133.6ppm及138.5ppm之特有的化學位移。

化合物(B)之結晶，於粉末X光繞射光譜中，在2θ=14.2°、16.2°、17.9°、18.5°及24.3°具有特徵峰，更詳而言之，在8.9°、14.2°、16.2°、17.9°、18.5°、24.3°及30.4°具有特徵峰。化合物(B)之結晶，於差示掃描熱分析(DSC)中具有外插起始點溫度為187℃的吸熱峰。且化合物(B)之結晶，於 ¹³C固態NMR光譜中具有13.1ppm、19.7ppm、117.1ppm、123.2ppm、132.6ppm及139.2ppm之特有的化學位移。

化合物(C)之結晶，於粉末X光繞射光譜中，在2θ=14.1°、15.2°、15.8°、16.6°及18.8°具有特徵峰，更詳而言之，在14.1°、15.2°、15.8°、16.6°、17.2°、18.8°、21.3°及22.6°具有特徵峰。化合物(C)之結晶，於差示掃描熱分析(DSC)中具有外插起始點溫度為159℃的吸熱峰。且化合物(C)之結晶，於 ¹³C固態NMR光譜中具有16.6ppm、18.0ppm、118.1ppm、120.4ppm、137.2ppm及138.8ppm之特有的化學位移。

化合物(D)之結晶，於粉末X光繞射光譜中，在2θ=14.6°、16.2°、16.5°及18.3°具有特徵峰，更詳而言之，在12.4°、14.6°、16.2°、16.5°及18.3°具有特徵峰。化合物(D)之結晶，於差示掃描熱分析(DSC)中具有外插起始點溫度為171℃的吸熱峰。且化合物(D)之結晶，於 ¹³C固態NMR光譜中具有13.0ppm、18.6ppm、116.6ppm、123.6ppm、132.5ppm及141.1ppm之特有的化學位移。

化合物(E)之結晶，於粉末X光繞射光譜中，在2θ=13.5°、16.4°、18.1°及20.3°具有特徵峰，更詳而言之，在13.5°、16.4°、16.7°、18.1°及20.3°具有特徵峰。化合物(E)之結晶，於差示掃描熱分析(DSC)中具有外插起始點溫度為194℃的吸熱峰。且化合物(E)之結晶，於 ¹³C固態NMR光譜中具有14.3ppm、19.4ppm、117.4ppm、122.2ppm、133.2ppm及139.6ppm之特有的化學位移。

化合物(F)之結晶，於粉末X光繞射光譜中，在2θ=16.1°、16.4°及17.3°具有特徵峰，更詳而言之，在13.7°、15.3°、16.1°、16.4°、17.3°、19.1°及19.6°具有特徵峰。化合物(F)之結晶，於差示掃描熱分析(DSC)中具有外插起始點溫度為218℃的吸熱峰。且化合物(F)之結晶，於 ¹³C固態NMR光譜中具有13.4ppm、14.2ppm、18.3ppm、117.4ppm、123.0ppm、132.6ppm及140.0ppm之特有的化學位移。

此處所稱「特徵峰」，係指在各結晶形的粉末X光繞射光譜及固態NMR光譜中，表徵各光譜全體之圖樣的固有波峰。由本發明之繞射角或化學位移所鑑定的結晶亦包含看出上述特徵峰以外之波峰者。

粉末X光繞射光譜中之繞射角2θ的位置及相對強度可能隨測定條件不同而略有差異，因此，2θ僅些微不同時，亦應適宜參照整個光譜的圖樣來認定結晶形的同一性，而所述誤差範圍之結晶亦包含於本發明。就2θ之誤差，研判為例如±0.2°。亦即，由上述繞射角所鑑定之結晶亦包含在±0.2°的範圍內一致者。在使用粉末X光繞射法來判斷結晶形態的同一性之際，即使波峰數較少，只要可確認多個在±0.2°以內之誤差內一致的波峰，亦有時判斷為同一種結晶。使用含有錠劑等混合物的物質進行分析時，相對於以原藥粉體作為分析試料時，錠劑等所含之賦形劑等多成分之波峰混合存在的結果，亦有時會生成因多種成分之波峰重疊而無法判別的波峰，因此，較適當的是，只要可進一步確認多個在±0.2°以內之誤差內一致的波峰，則判斷為同一種結晶。

而且，源於粉末X光繞射光譜的測定條件(例如裝置)的誤差範圍之結晶亦包含於本發明。於差示掃描熱分析(DSC)中，波峰的外插起始點溫度係指放熱或吸熱峰的開始點溫度，即藉由外差所求得之放熱或吸熱起始溫度。差示掃描熱分析(DSC)中之放熱及吸熱峰亦可能隨測定條件不同而略有差異。誤差研判為例如±5℃、±2℃的範圍。亦即，由上述波峰所鑑定之結晶亦包含在±2℃以內至±5℃以內的範圍內一致者。

一般而言， ¹³C固態NMR光譜的化學位移亦會產生誤差。就所述誤差，例如為±0.25ppm，典型上為±0.5ppm的範圍。亦即，由上述化學位移所鑑定之結晶形亦包含在±0.25ppm以內至±0.5ppm以內的範圍內一致者。而且，波峰強度會隨測定時的旋轉頻率或測定儀器的差異而異、波峰出現或消失。在使用固態NMR光譜來判斷結晶形態的同一性之際，即使波峰數較少，只要可確認多個在±0.25ppm以內(某些情況下為±0.5ppm以內)之誤差內一致的波峰，亦有時判斷為同一種結晶。使用含有錠劑等混合物的物質進行分析時，相對於以原藥粉體作為分析試料時，錠劑等所含之賦形劑等多成分之波峰混合存在的結果，亦有時會生成因多種成分之波峰重疊而無法判別的波峰，因此，較適當的是，只要可進一步確認多個在±0.25ppm以內(某些情況下為±0.5ppm以內)之誤差內一致的波峰，則判斷為同一種結晶。

再者，就粉末X光繞射光譜、差示掃描熱分析(DSC)及 ¹³C固態NMR光譜之任一種分析結果的值，結晶的標準品，例如藉由本案實施例記載之方法所得之各結晶的實測值與本案所記載之各分析結果之數值的差異容許作為測定誤差。亦即，在藉由所述方法所算出之誤差範圍內，繞射角、吸熱及放熱波峰一致之結晶亦包含於本發明之結晶。

使用含有錠劑等混合物的物質進行分析時，相對於以原藥粉體作為分析試料時，有波峰強度較小的傾向。因此，以固態NMR或XRD進行混合物之結晶形的同一性的分析時，可延長測定時間，增加累計次數亦屬有用。

本發明中，式(1)表示之維生素D衍生物之結晶或其溶劑合物之結晶，比起非結晶物，製造時或保存時的取用處理或穩定性等更為有利。

本發明之式(1)表示之維生素D衍生物之結晶或其溶劑合物之結晶可作為再髓鞘化促進劑而於臨床上應用，即作為多發性硬化症、視神經脊髓炎、進行性多灶性白質腦病、多系統退化症、急性瀰漫性腦脊髓炎、異位性脊髓炎、HTLV-1相關脊髓症、HIV相關白質腦病、克拉伯病、格林-巴利症候群、米勒費雪症候群、慢性脫髓鞘性神經炎、Charcot-Marie-Tooth氏症、帕金森氏症、思覺失調症、躁鬱症、嚴重抑鬱症、泛自閉症障礙、注意缺陷多動障礙、強迫性障害、創傷後壓力症候群、藥物依賴性抑鬱症、自閉症、阿茲海默型失智症及缺血性中風等與脫髓鞘或髓鞘形成不全有關之疾病的治療劑使用。

含有本發明之維生素D衍生物之結晶或其溶劑合物之結晶作為有效成分的治療劑係使用一般用於製劑化之載體或基劑及賦形劑、其他添加劑而調製成醫藥組成物。用於醫藥組成物之載體、基劑及賦形劑可為固體或液體任一種，可舉出例如乳糖、硬脂酸鎂澱粉、滑石、明膠、瓊脂、果膠、阿拉伯膠、橄欖油、芝麻油、可可脂、乙二醇及中鏈脂肪酸甘油三酯等或其他常用物質。投予可為使用錠劑、丸劑、膠囊劑、軟膠囊劑、顆粒劑、散劑及液劑等的口服投予，或者採用靜脈注射及肌肉注射等的注射劑、坐劑、經皮及經鼻等的非口服投予之任一種形態。

本發明之治療劑中之有效成分之用於治療或預防的有效量係隨投予路徑、患者年齡、性別、疾病程度而異，通常為0.1～10000μg/日左右，投予次數通常為1～3次/日至1～3次/週，較佳以滿足此種條件的方式來調製製劑。惟，由於投予量會隨各種條件而變更，有時以少於上述投予量的量即足夠，且有時需要超過上述範圍的投予量。 [實施例]

以下舉出本案之實施例具體加以說明。惟，以下實施例非限定本發明。例如，以下實施例所例示之化合物的合成方法、純化方法及結晶化方法為用於獲得本發明之結晶的方法例示，本發明之結晶非限定於僅藉由以下所揭示之合成方法、純化方法及結晶化方法所得之結晶。

實施例之結晶之化合物及合成時所分離之新化合物的結構係藉由 ¹H-NMR光譜或使用LC/MS(液相層析質譜儀)的質譜法來確認。

就 ¹H-NMR光譜，係使用JEOL JNM-ECZ400S(400MHz)。溶劑為CDCl ₃時係使用四甲基矽烷之波峰(0.0ppm)或氯仿之波峰(7.26ppm)、若為CD ₃OD時則使用甲醇之波峰(3.30ppm)作為標準波峰。就 ¹H-NMR光譜(400MHz、CD ₃OD或CDCl ₃)，係示出其化學位移(δ：ppm)及耦合常數(J：Hz)。此外，以下縮寫係分別表示以下者：s=singlet、d=doublet、t=triplet、q=quartet、brs=broad singlet、m=multiplet。

就LC/MS之結果，係示出各化合物之[M+H] ⁺值(分子量實測值(Obs. MS)：亦即對化合物的分子質量[M]加成質子[H] ⁺之實測值)。

實施例之結晶的粉末X光繞射光譜係依以下條件測定。裝置：Rigaku製MiniFlex600-C、射線源：Cu･Kα、波長：1.541862(10 ^-10m)、管電壓-管電流：40kV-15mA、檢測器：高速一維檢測器D/tex Ultra2、掃描範圍：3～40°、步進條件：0.01°、測定速度：每分鐘10°、DS：1/4°、IHS：10mm、入射･受光平行狹縫：2.5°、Kβ濾光片(Ni)

實施例之差示掃描熱量係依以下條件測定。裝置：TA Instruments製Q-200、升溫速度：每分鐘5℃、環境：氦氣、試樣秤盤：鋁、測定溫度範圍：40～250℃ 實施例之結晶的固態NMR光譜( ¹³C)係依以下條件測定。裝置：Bruker Biospin公司製AvanceIII 500(MAS轉子：3.2mmΦ) 測定核： ¹³C 觀測頻率：125.8MHz 測定模式：VCAP/MAS MAS旋轉數：12kHz 接觸小時：2毫秒脈衝重複時間：5秒外部標準物質：甘胺酸(α型結晶)(將α型結晶之甘胺酸的羰基波峰設定為176.03ppm來測定，且將三甲基矽烷(TMS)之波峰設為0ppm)

[實施例1] (1R,3R)-5-(2-((1R,3aS,7aR,E)-1-((S)-1-((S)-3-(二氟甲基)吡咯啶-1-基)丙烷-2-基)-7a-甲基八氫-4H-茚-4-亞基)亞乙基)環己烷-1,3-二醇(化合物(A))之結晶的製造

＜步驟1(吡咯啶環的導入)＞將週知化合物之(S)-2-((1R,3aS,7aR,E)-4-(2-((3R,5R)-3,5-雙((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)亞環己基)亞乙基)-7a-甲基八氫-1H-茚-1-基)丙基 4-甲基苯磺酸酯(CAS No. 1621978-74-2、化合物(A-1)，圖中A-1)[8.45g、11.8 mmol]、週知化合物之(3S)-3-(二氟甲基)吡咯啶鹽酸鹽(CAS No. 1638744-40-7)[3.00g、19.0mmol]與碳酸鉀[6.51g、47.1mmol]之混合物的DMF溶液[100mL]於60℃加熱攪拌24小時。將混合物移至水[250mL]中，以乙酸乙酯[200mL]進行萃取。將有機相以飽和食鹽水[100mL]洗淨，以無水硫酸鎂乾燥並進行減壓濃縮。將殘渣以矽膠管柱層析法[庚烷/乙酸乙酯系]純化，而得到(S)-1-((S)-2-((1R,3aS,7aR,E)-4-(2-((3R,5R)-3,5-雙((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)亞環己基)亞乙基)-7a-甲基八氫-1H-茚-1-基)丙基)-3-(二氟甲基)吡咯啶(化合物(A-2)，圖中A-2)[4.75g、7.13mmol]。

＜步驟2(去保護)＞對化合物(A-2)[4.75g、7.13mmol]的THF溶液[60mL]於室溫添加TBAF[1M THF溶液、22mL、22mmol]，將混合物進行回流5小時。將混合物移至飽和碳酸氫鈉水溶液[100mL]中，以乙酸乙酯[100mL]進行萃取。將有機相以無水硫酸鎂乾燥並進行減壓濃縮，而得到粗產物之(1R,3R)-5-(2-((1R,3aS,7aR,E)-1-((S)-1-((S)-3-(1,1-二氟乙基)吡咯啶-1-基)丙烷-2-基)-7a-甲基八氫-4H-茚-4-亞基)亞乙基)環己烷-1,3-二醇(化合物(A)(crude)，圖中compound A(crude))。 Exact Mass=437.31(C ₂₆H ₄₁F ₂NO ₂)Obs. mass=438.35 (M+H)

＜步驟3(結晶化)＞對步驟2中所得之粗產物(化合物(A)(crude))添加乙腈[90mL]與甲醇[10mL]的混合溶劑，在油浴中於50℃下攪拌。確認粗產物溶解後停止加熱，於油浴中使其冷卻至室溫而使結晶析出。回收結晶，而得到(1R,3R)-5-(2-((1R,3aS,7aR,E)-1-((S)-1-((S)-3-(1,1-二氟乙基吡咯啶-1-基)丙烷-2-基)-7a-甲基八氫-4H-茚-4-亞基)亞乙基)環己烷-1,3-二醇(化合物(A)，圖中compound A)[1.86g、4.25mmol]之結晶。

¹H-NMR (CD ₃OD) δ：6.21 (1H, d, J = 10.7 Hz), 5.89 (1H, d, J = 10.7 Hz), 5.78 (1H, td, J = 57.0, 6.0 Hz), 4.06-3.95 (2H, m), 2.82 (2H, dd, J = 18.8, 10.0 Hz), 2.66-2.50 (4H, m), 2.44-1.92 (11H, m), 1.86-1.23 (13H, m), 1.05 (3H, d, J = 6.3 Hz), 0.60 (3H, s). Exact Mass=437.31(C ₂₆H ₄₁F ₂NO ₂)Obs. mass=438.35 (M+H)

＜化合物(A)之結晶的評定＞將所得化合物(A)之結晶的XRD示於圖1。於繞射角2θ=8.9°、14.2°、16.3°、16.6°、17.9°、18.5°、20.1°、22.6°、22.9°及30.3°確認有波峰。

化合物(A)之結晶的差示掃描熱分析(DSC)中之吸熱峰的外插起始點溫度為171℃。

將所得化合物(A)之結晶的 ¹³C固態NMR光譜示於圖7。於化學位移13.6ppm、19.2ppm、22.9ppm、29.4ppm、46.0ppm、57.2ppm、65.8ppm、67.5ppm、117.2ppm、121.8ppm、133.6ppm及138.5ppm確認有波峰。

[實施例2] (1R,3R)-5-(2-((1R,3aS,7aR,E)-1-((S)-1-((R)-3-(二氟甲基)吡咯啶-1-基)丙烷-2-基)-7a-甲基八氫-4H-茚-4-亞基)亞乙基)環己烷-1,3-二醇(化合物(B))之結晶的製造

＜步驟1(吡咯啶環的導入)＞將週知化合物之(S)-2-((1R,3aS,7aR,E)-4-(2-((3R,5R)-3,5-雙((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)亞環己基)亞乙基)-7a-甲基八氫-1H-茚-1-基)丙基 4-甲基苯磺酸酯(CAS No. 1621978-74-2、化合物(A-1)，圖中A-1)[4.95g、6.90mmol]、週知化合物之(3R)-3-(二氟甲基)吡咯啶鹽酸鹽(CAS No. 1443983-89-8)[2.26g、14.3mmol]與碳酸鉀[4.97g、36.0mmol]之混合物的DMF溶液[49.5mL]於60℃加熱攪拌22小時。將混合物移至飽和食鹽水[100mL]，以乙酸乙酯[100mL]進行萃取。將有機相以飽和食鹽水[100mL]洗淨，以無水硫酸鎂乾燥並進行減壓濃縮。將殘渣以矽膠管柱層析法[庚烷/乙酸乙酯系]粗純化，而得到(R)-1-((S)-2-((1R,3aS,7aR,E)-4-(2-((3R,5R)-3,5-雙((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)亞環己基)亞乙基)-7a-甲基八氫-1H-茚-1-基)丙基)-3-(二氟甲基)吡咯啶(化合物(B-2)，圖中B-2)[1.93g、2.90mmol]。

＜步驟2(去保護)＞對化合物(B-2)[1.93g、2.90mmol]的THF溶液[26mL]於室溫添加TBAF[1M THF溶液、8.7mL、8.7mmol]，將混合物於60℃攪拌4.5小時。將混合物移至飽和碳酸氫鈉水溶液[100mL]中，以乙酸乙酯[100mL、2次]進行萃取。自有機相中以1M鹽酸[100mL]進行逆萃取。將水相以5M氫氧化鈉水溶液[20mL]中和，進一步添加飽和碳酸氫鈉水溶液[20mL]，即形成白色懸浮液。將此混合物以乙酸乙酯[100mL]進行萃取，將有機相以無水硫酸鎂乾燥並進行減壓濃縮，而得到粗產物之(1R,3R)-5-(2-((1R,3aS,7aR,E)-1-((S)-1-((R)-3-(1,1-二氟乙基)吡咯啶-1-基)丙烷-2-基)-7a-甲基八氫-4H-茚-4-亞基)亞乙基)環己烷-1,3-二醇(化合物(B)(crude)，圖中compound B(crude))[1.67g]。 Exact Mass=437.31(C ₂₆H ₄₁F ₂NO ₂)Obs. mass=438.35 (M+H)

＜步驟3(結晶化)＞對步驟2中所得之粗產物(化合物(B)(crude))[1.67g]添加乙腈[36mL]與甲醇[4mL]的混合溶劑，在油浴中於60℃下攪拌。確認粗產物溶解後停止加熱，於油浴中使其冷卻至室溫而使結晶析出。回收結晶，而得到(1R,3R)-5-(2-((1R,3aS,7aR,E)-1-((S)-1-((R)-3-(1,1-二氟乙基吡咯啶-1-基)丙烷-2-基)-7a-甲基八氫-4H-茚-4-亞基)亞乙基)環己烷-1,3-二醇(化合物(B)，圖中compound B)[905.0mg、2.07mmol]之結晶。

¹H-NMR (CD ₃OD) δ： 6.22 (1H, d, J = 10.7 Hz), 5.89 (1H, d, J = 10.7 Hz), 5.76 (1H, td, J = 57.0, 5.0 Hz), 4.06-3.96 (2H, m), 2.84 (1H, dd, J = 12.0, 3.8 Hz), 2.65-2.52 (5H, m), 2.47-1.49 (21H, m), 1.40-1.22 (4H, m), 1.05 (3H, d, J = 6.3 Hz), 0.60 (3H, s).Exact Mass = 437.31(C ₂₆H ₄₁F ₂NO ₂)Obs. mass = 438.35 (M+H)

＜化合物(B)之結晶的評定＞將所得化合物(B)之結晶的XRD示於圖2。於繞射角2θ=8.9°、14.2°、16.2°、17.9°、18.5°、19.1°、20.1°、22.6°、23.0°、24.3°及30.4°確認有波峰。

化合物(B)之結晶的差示掃描熱分析(DSC)中之吸熱峰的外插起始點溫度為187℃。

將所得化合物(B)之結晶的 ¹³C固態NMR光譜示於圖7。於化學位移13.1ppm、19.7ppm、23.2ppm、29.3ppm、46.3ppm、65.8ppm、67.7ppm、117.1ppm、123.2ppm、132.6ppm及139.2ppm確認有波峰。

[實施例3] (1R,3R)-5-(2-((1R,3aS,7aR,E)-1-((S)-1-((R)-3-(1,1-二氟乙基)吡咯啶-1-基)丙烷-2-基)-7a-甲基八氫-4H-茚-4-亞基)亞乙基)環己烷-1,3-二醇(化合物(C))之結晶的製造

＜步驟1(吡咯啶環的導入)＞將週知化合物之(S)-2-((1R,3aS,7aR,E)-4-(2-((3R,5R)-3,5-雙((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)亞環己基)亞乙基)-7a-甲基八氫-1H-茚-1-基)丙基 4-甲基苯磺酸酯(CAS No. 1621978-74-2、化合物(A-1)，圖中A-1)[7.33g、10.2 mmol]、週知化合物之(3R)-3-(1,1-二氟乙基)吡咯啶鹽酸鹽(CAS No. 2708341-81-3)[1.88g、11.0mmol]與碳酸鉀[5.65g、40.9mmol]之混合物的DMF[80mL]與甲醇[40mL]的混合溶液於60℃加熱攪拌17小時。將混合物移至飽和食鹽水[100mL]中，以乙酸乙酯[200mL]進行萃取。將有機相以無水硫酸鎂乾燥並進行減壓濃縮。將殘渣以矽膠管柱層析法[庚烷/乙酸乙酯系]粗純化，而得(R)-1-((S)-2-((1R,3aS,7aR,E)-4-(2-((3R,5R)-3,5-雙((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)亞環己基)亞乙基)-7a-甲基八氫-1H-茚-1-基)丙基)-3-(1,1-二氟乙基)吡咯啶(化合物(C-2)，圖中C-2)[3.23g、4.75mmol]。 Exact Mass=679.50(C ₃₉H ₇₁F ₂NO ₂Si ₂)Obs. mass=680.60 (M+H)

＜步驟2(去保護)＞對化合物(C-2)[3.23g、4.75mmol]的THF溶液[60mL]於室溫添加TBAF[1M THF溶液、15mL、15mmol]，將混合物進行回流4小時。將混合物移至飽和碳酸氫鈉水溶液中，以庚烷/乙酸乙酯(1/1)的混合溶液[100mL]進行萃取。自有機相中以1M鹽酸[100mL]進行逆萃取。將水相以5M氫氧化鈉水溶液[20mL]中和，進一步添加飽和碳酸氫鈉水溶液[20mL]，即形成白色懸浮液。將此混合物以乙酸乙酯[100mL]進行萃取，將有機相以無水硫酸鎂乾燥並進行減壓濃縮，而得到粗產物之(1R,3R)-5-(2-((1R,3aS,7aR,E)-1-((S)-1-((R)-3-(1,1-二氟乙基)吡咯啶-1-基)丙烷-2-基)-7a-甲基八氫-4H-茚-4-亞基)亞乙基)環己烷-1,3-二醇(化合物(C)(crude)，圖中compound C(crude))[1.088g、2.41mmol]。 Exact Mass=451.33(C ₂₇H ₄₃F ₂NO ₂)Obs. mass=452.40 (M+H)

＜步驟3(結晶化)＞對步驟2中所得之粗產物(化合物(C)(crude))[1.088g、2.41mmol]添加乙腈[20mL]，在油浴中於50℃下攪拌。確認粗產物溶解後停止加熱，於油浴中使其冷卻至室溫而使結晶析出。回收結晶，而得到(1R,3R)-5-(2-((1R,3aS,7aR,E)-1-((S)-1-((R)-3-(1,1-二氟乙基吡咯啶-1-基)丙烷-2-基)-7a-甲基八氫-4H-茚-4-亞基)亞乙基)環己烷-1,3-二醇(化合物(C)，圖中compound C)[835mg、1.85mmol]之結晶。

1H-NMR (CD ₃OD) δ： 6.21 (1H, d, J = 11.0 Hz), 5.89 (1H, d, J = 11.0 Hz), 4.06-3.95 (2H, m), 2.83 (1H, dd, J = 11.9, 3.7 Hz), 2.72-1.51 (27H, m), 1.45-1.20 (3H, m), 1.05 (3H, d, J = 6.4 Hz), 0.60 (3H, s). Exact Mass=451.33(C ₂₇H ₄₃F ₂NO ₂)Obs. mass=452.40 (M+H)

＜化合物(C)之結晶的評定＞將所得化合物(C)之結晶的XRD示於圖3。於繞射角2θ=14.1°、15.2°、15.8°、16.6°、17.2°、18.8°、20.5°、21.0°、21.3°及22.6°確認有波峰。

化合物(C)之結晶的差示掃描熱分析(DSC)中之吸熱峰的外插起始點溫度為159℃。

將所得化合物(C)之結晶的 ¹³C固態NMR光譜示於圖7。於化學位移16.6ppm、18.0ppm、26.2ppm、27.3ppm、28.6ppm、46.3ppm、64.7ppm、65.5ppm、67.9ppm、118.1ppm、120.4ppm、137.2ppm及138.8ppm確認有波峰。

[實施例4] (1R,3R)-5-(2-((1R,3aS,7aR,E)-1-((S)-1-((S)-3-(2,2-二氟乙基)吡咯啶-1-基)丙烷-2-基)-7a-甲基八氫-4H-茚-4-亞基)亞乙基)環己烷-1,3-二醇(化合物(D))之結晶的製造

＜步驟1(吡咯啶環的導入)＞將週知化合物之(S)-2-((1R,3aS,7aR,E)-4-(2-((3R,5R)-3,5-雙((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)亞環己基)亞乙基)-7a-甲基八氫-1H-茚-1-基)丙基 4-甲基苯磺酸酯(CAS No. 1621978-74-2、化合物(A-1)，圖中A-1)[4.86g、6.78 mmol]、週知化合物之(3S)-3-(2,2-二氟乙基)吡咯啶鹽酸鹽(CAS No. 2708342-85-0)[2.01g、11.7mmol]與碳酸鉀[4.50g、32.6mmol]之混合物的DMF[30mL]溶液於60℃加熱攪拌20小時。將混合物移至飽和食鹽水[100mL]中，以乙酸乙酯[100mL]進行萃取。將有機相以無水硫酸鎂乾燥並進行減壓濃縮。將殘渣以矽膠管柱層析法[庚烷/乙酸乙酯系]粗純化，而得到(S)-1-((S)-2-((1R,3aS,7aR,E)-4-(2-((3R,5R)-3,5-雙((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)亞環己基)亞乙基)-7a-甲基八氫-1H-茚-1-基)丙基)-3-(2,2-二氟乙基)吡咯啶(化合物(D-2)，圖中D-2)[3.08g、4.53mmol]。 Exact Mass=679.50(C ₃₉H ₇₁F ₂NO ₂Si ₂)Obs. mass=680.60 (M+H)

＜步驟2(去保護)＞對化合物(D-2)[3.08g、4.53mmol]的THF溶液[55mL]於室溫添加TBAF[1M THF溶液、14mL、14mmol]，將混合物進行回流4.5小時。將混合物移至飽和碳酸氫鈉水溶液中，以庚烷/乙酸乙酯(1/1)的混合溶液[100mL]進行萃取。將有機相以飽和食鹽水洗淨，以無水硫酸鎂乾燥並進行減壓濃縮。將殘渣以乙酸乙酯[75mL]稀釋，自有機相中以1M鹽酸[100mL]進行逆萃取。將水相以5M氫氧化鈉水溶液[20mL]中和，進一步以飽和碳酸氫鈉水溶液[30mL]調整成pH=10。將此混合物以乙酸乙酯[100mL]進行萃取，將有機相以無水硫酸鎂乾燥並進行減壓濃縮，而得到粗產物之(1R,3R)-5-(2-((1R,3aS,7aR,E)-1-((S)-1-((S)-3-(2,2-二氟乙基)吡咯啶-1-基)丙烷-2-基)-7a-甲基八氫-4H-茚-4-亞基)亞乙基)環己烷-1,3-二醇(化合物(D)(crude)，圖中compound D(crude))[1.14g、2.52mmol]。 Exact Mass=451.33(C ₂₇H ₄₃F ₂NO ₂)Obs. mass=452.35 (M+H)

＜步驟3(結晶化)＞對步驟2中所得之粗產物(化合物(D)(crude))[1.14g、2.52mmol]添加乙腈[19mL]與甲醇[1mL]的混合溶劑，在油浴中於50℃下攪拌。確認粗產物溶解後停止加熱，於油浴中使其冷卻至室溫而使結晶析出。回收結晶，而得到(1R,3R)-5-(2-((1R,3aS,7aR,E)-1-((S)-1-((S)-3-(2,2-二氟乙基吡咯啶-1-基)丙烷-2-基)-7a-甲基八氫-4H-茚-4-亞基)亞乙基)環己烷-1,3-二醇(化合物(D)，圖中compound D)[786.6mg、1.74mmol]之結晶。

¹H-NMR (CD ₃OD) δ： 6.21 (1H, d, J = 11.0 Hz), 6.03-5.72 (2H, m), 4.06-3.95 (2H, m), 2.83 (1H, dd, J = 12.3, 3.7 Hz), 2.76 (1H, t, J = 8.2 Hz), 2.70 (1H, t, J = 7.8 Hz), 2.59 (1H, dd, J = 13.3, 3.7 Hz), 2.43-2.10 (8H, m), 2.09-1.46 (16H, m), 1.43-1.16 (3H, m), 1.05 (3H, d, J = 6.4 Hz), 0.60 (3H, s). Exact Mass=451.33(C ₂₇H ₄₃F ₂NO ₂)Obs. mass=452.35 (M+H)

＜化合物(D)之結晶的評定＞將所得化合物(D)之結晶的XRD示於圖4。於繞射角2θ=12.4°、14.6°、16.2°、16.5°、18.3°、18.5°、19.2°、19.6°、19.8°及22.7°確認有波峰。

化合物(D)之結晶的差示掃描熱分析(DSC)中之吸熱峰的外插起始點溫度為171℃。

將所得化合物(D)之結晶的 ¹³C固態NMR光譜示於圖7。於化學位移13.0ppm、18.6ppm、23.7ppm、30.3ppm、45.8ppm、66.2ppm、67.2ppm、116.6ppm、123.6ppm、132.5ppm及141.1ppm確認有波峰。

[實施例5] (1R、3R)-5-(2-((1R,3aS,7aR,E)-7a-甲基-1-((R)-4-嗎啉基丁烷-2-基)八氫-4H-茚-4-亞基)亞乙基)環己烷-1,3-二醇(化合物(E))之結晶的製造

＜步驟1(DIBAL-H還原)＞對週知化合物之(R)-3-((1R,3aS,7aR,E)-4-(2-((3R,5R)-3,5-雙((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)亞環己基)亞乙基)-7a-甲基八氫-1H-茚-1-基)丁腈[CAS No.2489320-15-0、6.73g、11.8mmol、化合物(E-1)，圖中E-1]的甲苯溶液[75mL]於-20℃下以內溫不超過0℃的方式添加氫化二異丁基鋁[DIBAL-H、1.5M己烷溶液、12.5mL、18.75mmol]。將混合物於-15℃攪拌30分鐘。將混合物以飽和羅謝爾鹽(酒石酸鈉鉀)水溶液[10mL]急速冷卻，升溫至室溫。對混合物進一步添加飽和羅謝爾鹽(酒石酸鈉鉀)水溶液[30mL]，將混合物於室溫下攪拌1小時。分離水相，將有機相以飽和羅謝爾鹽(酒石酸鈉鉀)水溶液洗淨2次。將有機相以無水硫酸鎂乾燥並進行減壓濃縮，而得到粗產物之(R)-3-((1R,3aS,7aR,E)-4-(2-((3R,5R)-3,5-雙((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)亞環己基)亞乙基)-7a-甲基八氫-1H-茚-1-基)丁醛(化合物(E-2)，圖中E-2)[7.87g]。此粗產物未經進一步純化即使用於次一反應中。

＜步驟2(還原胺基化)＞對步驟1中所得之粗產物之化合物(E-2)[7.87g]與嗎啉[13mL]的THF溶液[65mL]於室溫下添加三乙醯氧基硼氫化鈉[3.74g、17.6mmol]，並於同一溫度下攪拌3小時。將混合物用水[5mL]急速冷卻，添加飽和食鹽水[30mL]。將混合物以乙酸乙酯[50mL]進行萃取，將有機相以飽和食鹽水[50mL]洗淨。將有機相以無水硫酸鎂乾燥並進行減壓濃縮，而得到粗產物之4-((R)-3-((1R,3aS,7aR,E)-4-(2-((3R,5R)-3,5-雙((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)亞環己基)亞乙基)-7a-甲基八氫-1H-茚-1-基)丁基)嗎啉(化合物(E-3)，圖中E-3)[8.29g]。此粗產物未經進一步純化即使用於次一反應中。

＜步驟3(去保護)＞將步驟2中所得之粗產物之化合物(E-3)[8.29g]用丙酮[100mL]與水[8mL]的混合溶液溶解，對其於室溫下添加2M鹽酸[23.6mL、57.2mmol]，並於同一溫度下攪拌3小時。對混合物加水[90mL]並以乙酸乙酯[100mL]進行萃取。將水相以冰浴冷卻，以2M氫氧化鈉水溶液[12mL]調整成pH=10，於室溫下攪拌1小時。將混合物過濾回收固體並加以乾燥，而取得粗產物之(1R,3R)-5-(2-((1R,3aS,7aR,E)-7a-甲基-1-((R)-4-嗎啉基丁烷-2-基)八氫-4H-茚-4-亞基)亞乙基)環己烷-1,3-二醇(化合物(E)(crude)，圖中compound E(crude))[3.54g]。

＜步驟4(中和晶析)＞對步驟3中所得之粗產物之化合物(E)[3.54g]的丙酮溶液[35mL]添加1M鹽酸[10.2mL]。對此溶液加水[52mL]，並進一步添加1M鹽酸[6.8mL]。將此溶液以乙酸乙酯進行萃取，將水相以2M氫氧化鈉水溶液調整成pH=10。將混合物於室溫下攪拌1小時，進行過濾回收固體。藉由將固體乾燥，而得到目標化合物(E)(圖中compound E)[3.16g、7.57mmol]之結晶。

¹H-NMR (CD ₃OD) δ： 6.21 (1H, d, J = 11.0 Hz), 5.88 (1H, d, J = 11.4 Hz), 4.06-3.95 (2H, m), 3.69 (4H, t, J = 4.6 Hz), 2.83 (1H, dd, J = 11.9, 4.1 Hz), 2.59 (1H, dd, J = 13.7, 3.7 Hz), 2.50-2.37 (6H, m), 2.33 (1H, td, J = 11.4, 5.3 Hz), 2.23-2.13 (2H, m), 2.06-1.93 (4H, m), 1.88-1.47 (9H, m), 1.39-1.27 (4H, m), 0.98 (3H, d, J = 6.4 Hz), 0.58 (3H, s). Exact Mass=417.32(C ₂₆H ₄₃NO ₃)Obs. mass=418.35 (M+H)

＜化合物(E)之結晶的評定＞將所得化合物(E)之結晶的XRD示於圖5。於繞射角2θ=13.5°、15.1°、16.4°、16.7°、17.2°、17.7°、18.1°、18.6°、20.3°及21.6°確認有波峰。

化合物(E)之結晶的差示掃描熱分析(DSC)中之吸熱峰的外插起始點溫度為194℃。

將所得化合物(E)之結晶的 ¹³C固態NMR光譜示於圖7。於化學位移14.3ppm、19.4ppm、23.2ppm、24.9ppm、29.0ppm、29.8ppm、45.9ppm、57.7ppm、67.0ppm、117.4ppm、122.2ppm、133.2ppm及139.6ppm確認有波峰。

[實施例6] (1R、3R)-5-(2-((1R,3aS,7aR,E)-1-((S)-1-(3,3-二甲基嗎啉基)丙烷-2-基)-7a-甲基八氫-4H-茚-4-亞基)亞乙基)環己烷-1,3-二醇(化合物(F))之結晶的製造

＜步驟1(嗎啉環的導入)＞對週知化合物之(S)-2-((1R,3aS,7aR,E)-4-(2-((3R,5R)-3,5-雙((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)亞環己基)亞乙基)-7a-甲基八氫-1H-茚-1-基)丙基 4-甲基苯磺酸酯(CAS No. 1621978-74-2、化合物(A-1)，圖中A-1)[20.3g、28.3mmol]的N-甲基-吡咯啶酮溶液[160mL]添加3,3-二甲基嗎啉(CAS No. 59229-63-9)[7.0mL、11.7mmol]、碘化鉀[5.56g、33.5mmol]與碳酸鉀[10.89g、78.79mmol]，於70℃加熱攪拌16小時。將混合物添加庚烷[120mL]與水[120mL]，去除水相。將水相以乙酸乙酯[100mL]進行萃取。將併存之有機相以10%硫代硫酸鈉水溶液[100mL]洗淨2次。將有機相以無水硫酸鎂乾燥並進行減壓濃縮，而得到粗產物之4-((S)-2-((1R,3aS,7aR,E)-4-(2-((3R,5R)-3,5-雙((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)亞環己基)亞乙基)-7a-甲基八氫-1H-茚-1-基)丙基)-3,3-二甲基嗎啉(化合物(F-2)，圖中F-2)[19.22g]。此粗產物未經進一步純化即使用於次一反應中。 Exact Mass=659.51(C ₃₉H ₇₃NO ₃Si ₂)Obs. mass=660.35 (M+H)

＜步驟2(去保護)＞對步驟1中所得之粗產物之化合物(F-2)[19.22g]的2-丁酮溶液[100mL]於室溫下添加2M鹽酸[100mL、200mmol]，將混合物攪拌75分鐘。將混合物以庚烷[100mL]進行萃取。進而將水相以庚烷[50mL]與2-丁酮[50mL]的混合溶劑洗淨。邊將水相於0℃下攪拌邊以5M氫氧化鈉水溶液[100mL]予以中和。進而添加飽和碳酸氫鈉水溶液[50mL]調整成pH=10，即形成白色懸浮液。將此混合物於室溫下攪拌1小時，將混合物過濾回收固體並加以乾燥，而得到粗產物之(1R、3R)-5-(2-((1R,3aS,7aR,E)-1-((S)-1-(3,3-二甲基嗎啉基)丙烷-2-基)-7a-甲基八氫-4H-茚-4-亞基)亞乙基)環己烷-1,3-二醇(化合物(F)(crude)，圖中compound F(crude))[11.71g、27.13mmol]。 Exact Mass=431.34(C ₂₇H ₄₅NO ₃)Obs. mass=432.20 (M+H)

＜步驟3(作為結晶的純化之漿液洗淨)＞對步驟1、2之製法所製造之粗產物之化合物(F)(crude)[23.20g、53.75mmol]添加乙醇[460mL]，於油浴中、60℃下攪拌16小時。冷卻至室溫後回收結晶，而得到(1R、3R)-5-(2-((1R,3aS,7aR,E)-1-((S)-1-(3,3-二甲基嗎啉基)丙烷-2-基)-7a-甲基八氫-4H-茚-4-亞基)亞乙基)環己烷-1,3-二醇(化合物(F)，圖中compound F)[18.61g、43.12 mmol]之結晶。

¹H-NMR (CD ₃OD) δ： 6.21 (1H, d, J = 11.0 Hz), 5.89 (1H, d, J = 11.4 Hz), 4.06-3.94 (2H, m), 3.82-3.78 (1H, m), 3.65-3.59 (1H, m), 3.39 (1H, d, J = 11.0 Hz), 3.32 (1H, s), 2.85-2.81 (1H, m), 2.73-2.69 (1H, m), 2.62-2.56 (2H, m), 2.40 (1H, dd, J = 13.5, 3.4 Hz), 2.33-2.13 (4H, m), 2.07-1.97 (3H, m), 1.87-1.81 (1H, m), 1.78-1.72 (1H, m), 1.67-1.50 (6H, m), 1.37-1.25 (3H, m), 1.06-1.04 (6H, m), 1.01 (3H, s), 0.60 (3H, s). Exact Mass=431.34(C ₂₇H ₄₅NO ₃)Obs. mass=432.20 (M+H)

＜化合物(F)之結晶的評定＞將所得化合物(F)之結晶的XRD示於圖6。於繞射角2θ=13.7°、15.3°、16.1°、16.4°、17.3°、19.1°、19.6°、21.2°、22.8°及24.1°確認有波峰。

化合物(F)之結晶的差示掃描熱分析(DSC)中之吸熱峰的外插起始點溫度為218℃。

將所得化合物(F)之結晶的 ¹³C固態NMR光譜示於圖7。於化學位移13.4ppm、14.2ppm、18.3ppm、23.7ppm、25.2ppm、28.3ppm、29.5ppm、46.4ppm、117.4ppm、123.0ppm、132.6ppm及140.0ppm確認有波峰。

[實施例7] 大鼠寡樹突細胞前驅細胞分化誘導促進作用評定針對本發明之維生素D衍生物，以髓鞘鹼性蛋白(髓磷脂鹼性蛋白，MBP)免疫染色評定寡樹突細胞前驅細胞(OPC)分化誘導促進作用。

(1)大鼠寡樹突細胞前驅細胞的採取將採取自SD大鼠(Charles River Japan/1日大)的前腦用70μm細胞濾網(Falcon # 352350)弄碎，以寡樹突細胞前驅細胞分離培養基(20% FBS/2mM Glutamax(Gibco #35050-061)/1mM 丙酮酸鈉(Gibco #11360-070)/1% 青黴素-鏈黴素(Invitrogen #15140-122)/DMEM(Gibco #11960-044))回收而調製成細胞浮游液。於被覆聚-D-離胺酸之T75燒瓶(Thermo Fisher Scientific #132704)中播種細胞浮游液，實施10日培養(37℃、5%CO ₂)。培養後，將燒瓶使用旋轉搖動器(和研藥 #WB-101SRC)搖晃約1小時(37℃、100rpm)，棄去上清液而去除小神經膠質。其後，於燒瓶中添加寡樹突細胞前驅細胞分離培養基，同樣地搖晃約22小時(37℃、200rpm)後，回收上清液而調製成寡樹突細胞前驅細胞。

(2)寡樹突細胞前驅細胞分化誘導促進作用評定將調製之寡樹突細胞前驅細胞以分化培養基(2% B27(Thermo Fisher Scientific公司 #17504-044)/1%青黴素-鏈黴素(Invitrogen公司 #15140-122)/1%丙酮酸鈉(FUJIFILM Wako Chemicals公司 #191-03061)/10ng/mL CNTF(PeproTech公司 #AF-450-13)/DMEM(Gibco公司 #11960-044))懸浮，以0.65×10 ⁴cells/well之條件播種於由聚-L-鳥胺酸(FUJIFILM Wako Chemicals公司 #163-27421)被覆之96well plate中。播種細胞後，將由受試化合物之DMSO溶液(20mM)以分化培養基調製之溶液(三碘甲狀腺胺酸(T ₃･陽性對照))=30nM或本發明之維生素D衍生物=2μM)或DMSO以分化培養基調製之溶液以井孔中之DMSO濃度成為0.1%的狀態的方式添加，培養4日(37℃、5%CO ₂)。受試化合物係以N=3或N=6來評定。培養後，將細胞以固定(4%多聚甲醛溶液、30分鐘、室溫)、PBS洗淨、膜穿透處理(0.1%Trion X-100(SIGMA公司 #X100-100ML)/PBS、3分、室溫)、阻斷液(3%BSA(SIGMA公司 #A9647-10G)/PBS、1小時、室溫)、一次抗體反應(MBP抗體(abcam公司 #ab40390)、2.5μg/mL、4℃、24小時)、PBS洗淨、二次抗體反應(Alexa488 anti-rabbit IgG(Thermo Fisher Scientific公司 #Ⓐ-11034)、5μg/mL、室溫、1小時)、PBS洗淨、核染色(Hoechst33342(DOJINDO ＃NU043)、10μg/mL、室溫、5分)之方法，對MBP實施免疫染色。其後，使用螢光顯微鏡(KEYENCE公司 #BZ-X800)取得各well之影像，使用影像解析應用軟體(KEYENCE公司 #BZ-X800 Analyzer)量測MBP陽性細胞數及Hoechst33342陽性細胞數，算出其比例(MBP陽性細胞數/Hoechst33342陽性細胞數)。

(3)結果將結果示於下表。此外，下表中之顯著差異係如下表示對DMSO群進行t檢定時的顯著差異。＊：＜0.05 ＊＊：＜0.01 ＊＊＊：＜0.001 ＊＊＊＊：＜0.0001 ns：無顯著差異

如表1-1、1-2、1-3所示，本發明之維生素D衍生物在採用免疫染色的評定中顯示較強的寡樹突細胞前驅細胞分化誘導促進作用。

[實施例8] 小鼠腦轉移性評定

試驗1(1mg/kg投予之試驗) 將受試化合物(10mg/mL 乙醇溶液)以0.1%Trion X-100(SIGMA #X100-100ML)/生理食鹽水稀釋100倍，調製成投予液。將此投予液對C57BL/6J小鼠(8週大、公、N=3)進行單次口服投予(1mg/kg)。投予後，於0.25、0.5、1、2、4及8小時後此6個時點對小鼠施予安樂死處置，並實施血漿及腦的採樣。採取之腦使用Tissue Lyser II(QIAGEN #85300)製成均漿後，添加乙腈進行離心分離(TOMY SEIKO MX-307、12000rpm、5分鐘)，以此實施腦內所含之受試化合物的萃取。以同樣方式對血漿亦添加乙腈進行離心分離，而實施血漿內所含之受試化合物的萃取。萃取出之各試樣係使用LC/MS/MS(SHIMADZU UFLC/MS/ MS(8050))實施受試化合物的濃度測定。

將顯示評定之各受試化合物之腦中濃度的最大值(腦Cmax)時(腦Cmax時)的血漿中濃度與腦中濃度的結果以平均值±SD(標準差)示於下表。且將腦中濃度/血漿中濃度比(各腦中濃度(平均值)除以血漿中濃度(平均值)所得之數值)示於下表。

試驗2(0.2mg/kg投予之試驗) 將受試化合物(2mg/mL 乙醇溶液)以0.1%Trion X-100(SIGMA #X100-100ML)/生理食鹽水稀釋100倍，調製成投予液。將此投予液對C57BL/6J小鼠(8週大、公、N=3)進行單次口服投予(0.2mg/kg)。投予後，於0.25、0.5、1、2、4及8小時後此6個時點對小鼠施予安樂死處置，並實施血漿及腦的採樣。採取之腦使用Tissue Lyser II(QIAGEN #85300)製成均漿後，添加乙腈進行離心分離(TOMY SEIKO MX-307、12000rpm、5分鐘)，以此實施腦內所含之受試化合物的萃取。以同樣方式對血漿亦添加乙腈進行離心分離，而實施血漿內所含之受試化合物的萃取。萃取出之各試樣係使用LC/MS/MS(SHIMADZU UFLC/ MS/MS(8050))實施受試化合物的濃度測定。

本發明之化合物在任何口服投予條件下，腦中濃度/血漿中濃度比均顯示1.03～2.38。根據非專利文獻5，其中報導1α,25-二羥基維生素D ₃的腦中濃度/血中濃度比為0.007±0.003。從而，本發明之化合物與1α,25-二羥基維生素D ₃相比，可稱中樞轉移性大幅獲改善的化合物。

[圖1]為(1R、3R)-5-(2-((1R,3aS,7aR,E)-1-((S)-1-((S)-3-(二氟甲基)吡咯啶-1-基)丙烷-2-基)-7a-甲基八氫-4H-茚-亞基)亞乙基)環己烷-1,3-二醇(化合物A)之結晶的粉末X光繞射光譜。 [圖2]為(1R、3R)-5-(2-((1R,3aS,7aR,E)-1-((S)-1-((R)-3-(二氟甲基)吡咯啶-1-基)丙烷-2-基)-7a-甲基八氫-4H-茚-亞基)亞乙基)環己烷-1,3-二醇(化合物B)之結晶的粉末X光繞射光譜。 [圖3]為(1R、3R)-5-(2-((1R,3aS,7aR,E)-1-((S)-1-((R)-3-(1,1-二氟乙基)吡咯啶-1-基)丙烷-2-基)-7a-甲基八氫-4H-茚-亞基)亞乙基)環己烷-1,3-二醇(化合物C)之結晶的粉末X光繞射光譜。 [圖4]為(1R、3R)-5-(2-((1R,3aS,7aR,E)-1-((S)-1-((S)-3-(2,2-二氟乙基)吡咯啶-1-基)丙烷-2-基)-7a-甲基八氫-4H-茚-4-亞基)亞乙基)環己烷-1,3-二醇(化合物D)之結晶的粉末X光繞射光譜。 [圖5]為(1R、3R)-5-(2-((1R,3aS,7aR,E)-7a-甲基-1-((R)-4-嗎啉基丁烷-2-基)八氫-4H-茚-4-亞基)亞乙基)環己烷-1,3-二醇(化合物E)之結晶的粉末X光繞射光譜。 [圖6]為(1R、3R)-5-(2-((1R,3aS,7aR,E)-1-((S)-1-(3,3-二甲基嗎啉基)丙烷-2-基)-7a-甲基八氫-4H-茚-4-亞基)亞乙基)環己烷-1,3-二醇(化合物F)之結晶的粉末X光繞射光譜。 [圖7]為(1R、3R)-5-(2-((1R,3aS,7aR,E)-1-((S)-1-((S)-3-(二氟甲基)吡咯啶-1-基)丙烷-2-基)-7a-甲基八氫-4H-茚-4-亞基)亞乙基)環己烷-1,3-二醇(化合物A)之結晶的固態NMR( ¹³C)光譜。 [圖8]為(1R、3R)-5-(2-((1R,3aS,7aR,E)-1-((S)-1-((R)-3-(二氟甲基)吡咯啶-1-基)丙烷-2-基)-7a-甲基八氫-4H-茚-4-亞基)亞乙基)環己烷-1,3-二醇(化合物B)之結晶的固態NMR( ¹³C)光譜。 [圖9]為(1R、3R)-5-(2-((1R,3aS,7aR,E)-1-((S)-1-((R)-3-(1,1-二氟乙基)吡咯啶-1-基)丙烷-2-基)-7a-甲基八氫-4H-茚-4-亞基)亞乙基)環己烷-1,3-二醇(化合物C)之結晶的固態NMR( ¹³C)光譜。 [圖10]為(1R、3R)-5-(2-((1R,3aS,7aR,E)-1-((S)-1-((S)-3-(2,2-二氟乙基)吡咯啶-1-基)丙烷-2-基)-7a-甲基八氫-4H-茚-4-亞基)亞乙基)環己烷-1,3-二醇(化合物D)之結晶的固態NMR( ¹³C)光譜。 [圖11]為(1R、3R)-5-(2-((1R,3aS,7aR,E)-7a-甲基-1-((R)-4-嗎啉基丁烷-2-基)八氫-4H-茚-4-亞基)亞乙基)環己烷-1,3-二醇(化合物E)之結晶的固態NMR( ¹³C)光譜。 [圖12]為(1R、3R)-5-(2-((1R,3aS,7aR,E)-1-((S)-1-(3,3-二甲基嗎啉基)丙烷-2-基)-7a-甲基八氫-4H-茚-4-亞基)亞乙基)環己烷-1,3-二醇(化合物F)之結晶的固態NMR( ¹³C)光譜。

Claims

一種下述式(1)表示之維生素D衍生物之結晶或式(1)表示之維生素D衍生物之溶劑合物之結晶； [式中，R表示下述式中之Ra、Rb、Rc、Rd、Re或Rf的任一種結構： ]。
如請求項1之結晶，其為(1R、3R)-5-(2-((1R,3aS,7aR,E)-1-((S)-1-((S)-3-(二氟甲基)吡咯啶-1-基)丙烷-2-基)-7a-甲基八氫-4H-茚-亞基)亞乙基)環己烷-1,3-二醇之結晶。
如請求項2之結晶，其中於粉末X光繞射光譜中，具有繞射角(2θ±0.2°)=14.2°、16.3°、17.9°及18.5°之波峰。
如請求項2之結晶，其中於粉末X光繞射光譜中，具有繞射角(2θ±0.2°)=8.9°、14.2°、16.3°、17.9°及18.5°之波峰。
如請求項2之結晶，其中粉末X光繞射光譜具有圖1所示之圖樣。
如請求項2之結晶，其中於固態NMR光譜( ¹³C)中，具有化學位移(±0.5ppm)=13.6ppm、19.2ppm、117.2ppm、121.8ppm、133.6ppm及138.5ppm之波峰。
如請求項2之結晶，其中固態NMR光譜( ¹³C)具有圖7所示之圖樣。
如請求項2之結晶，其中差示熱分析中之吸熱峰的外插起始點溫度為171±5℃。
如請求項1之結晶，其為(1R、3R)-5-(2-((1R,3aS,7aR,E)-1-((S)-1-((R)-3-(二氟甲基)吡咯啶-1-基)丙烷-2-基)-7a-甲基八氫-4H-茚-亞基)亞乙基)環己烷-1,3-二醇之結晶。
如請求項9之結晶，其中於粉末X光繞射光譜中，具有繞射角(2θ±0.2°)=14.2°、16.2°、17.9°、18.5°及24.3°之波峰。
如請求項9之結晶，其中於粉末X光繞射光譜中，具有繞射角(2θ±0.2°)=8.9°、14.2°、16.2°、17.9°、18.5°、24.3°及30.4°之波峰。
如請求項9之結晶，其中粉末X光繞射光譜具有圖2所示之圖樣。
如請求項9之結晶，其中於固態NMR光譜( ¹³C)中，具有化學位移(±0.5ppm)=13.1ppm、19.7ppm、117.1ppm、123.2ppm、132.6ppm及139.2ppm之波峰。
如請求項9之結晶，其中固態NMR光譜( ¹³C)具有圖8所示之圖樣。
如請求項9之結晶，其中差示熱分析中之吸熱峰的外插起始點溫度為187±5℃。
如請求項1之結晶，其為(1R、3R)-5-(2-((1R,3aS,7aR,E)-1-((S)-1-((R)-3-(1,1-二氟乙基)吡咯啶-1-基)丙烷-2-基)-7a-甲基八氫-4H-茚-亞基)亞乙基)環己烷-1,3-二醇之結晶。
如請求項16之結晶，其中於粉末X光繞射光譜中，具有繞射角(2θ±0.2°)=14.1°、15.2°、15.8°、16.6°及18.8°之波峰。
如請求項16之結晶，其中於粉末X光繞射光譜中，具有繞射角(2θ±0.2°)=14.1°、15.2°、15.8°、16.6°、17.2°、18.8°、21.3°及22.6°之波峰。
如請求項16之結晶，其中粉末X光繞射光譜具有圖3所示之圖樣。
如請求項16之結晶，其中於固態NMR光譜( ¹³C)中，具有化學位移(±0.5ppm)=16.6ppm、18.0ppm、118.1ppm、120.4ppm、137.2ppm及138.8ppm之波峰。
如請求項16之結晶，其中固態NMR光譜( ¹³C)具有圖9所示之圖樣。
如請求項16之結晶，其中差示熱分析中之吸熱峰的外插起始點溫度為159±5℃。
如請求項1之結晶，其為(1R、3R)-5-(2-((1R,3aS,7aR,E)-1-((S)-1-((S)-3-(2,2-二氟乙基)吡咯啶-1-基)丙烷-2-基)-7a-甲基八氫-4H-茚-4-亞基)亞乙基)環己烷-1,3-二醇之結晶。
如請求項23之結晶，其中於粉末X光繞射光譜中，具有繞射角(2θ±0.2°)=14.6°、16.2°、16.5°及18.3°之波峰。
如請求項23之結晶，其中於粉末X光繞射光譜中，具有繞射角(2θ±0.2°)=12.4°、14.6°、16.2°、16.5°及18.3°之波峰。
如請求項23之結晶，其中粉末X光繞射光譜具有圖4所示之圖樣。
如請求項23之結晶，其中於固態NMR光譜( ¹³C)中，具有化學位移(±0.5ppm)=13.0ppm、18.6ppm、116.6ppm、123.6ppm、132.5ppm及141.1ppm之波峰。
如請求項23之結晶，其中固態NMR光譜( ¹³C)具有圖10所示之圖樣。
如請求項23之結晶，其中差示熱分析中之吸熱峰的外插起始點溫度為171±5℃。
如請求項1之結晶，其為(1R、3R)-5-(2-((1R,3aS,7aR,E)-7a-甲基-1-((R)-4-嗎啉基丁烷-2-基)八氫-4H-茚-4-亞基)亞乙基)環己烷-1,3-二醇之結晶。
如請求項30之結晶，其中於粉末X光繞射光譜中，具有繞射角(2θ±0.2°)=13.5°、16.4°、18.1°及20.3°之波峰。
如請求項30之結晶，其中於粉末X光繞射光譜中，具有繞射角(2θ±0.2°)=13.5°、16.4°、16.7°、18.1°及20.3°之波峰。
如請求項30之結晶，其中粉末X光繞射光譜具有圖5所示之圖樣。
如請求項30之結晶，其中於固態NMR光譜( ¹³C)中，具有化學位移(±0.5ppm)=14.3ppm、19.4ppm、117.4ppm、122.2ppm、133.2ppm及139.6ppm之波峰。
如請求項30之結晶，其中固態NMR光譜( ¹³C)具有圖11所示之圖樣。
如請求項30之結晶，其中差示熱分析中之吸熱峰的外插起始點溫度為194±5℃。
如請求項1之結晶，其為(1R、3R)-5-(2-((1R,3aS,7aR,E)-1-((S)-1-(3,3-二甲基嗎啉基)丙烷-2-基)-7a-甲基八氫-4H-茚-4-亞基)亞乙基)環己烷-1,3-二醇之結晶。
如請求項37之結晶，其中於粉末X光繞射光譜中，具有繞射角(2θ±0.2°)=16.1°、16.4°及17.3°之波峰。
如請求項37之結晶，其中於粉末X光繞射光譜中，具有繞射角(2θ±0.2°)=13.7°、15.3°、16.1°、16.4°、17.3°、19.1°及19.6°之波峰。
如請求項37之結晶，其中粉末X光繞射光譜具有圖6所示之圖樣。
如請求項37之結晶，其中於固態NMR光譜( ¹³C)中，具有化學位移(±0.5ppm)=13.4ppm、14.2ppm、18.3ppm、117.4ppm、123.0ppm、132.6ppm及140.0ppm之波峰。
如請求項37之結晶，其中固態NMR光譜( ¹³C)具有圖12所示之圖樣。
如請求項37之結晶，其中差示熱分析中之吸熱峰的外插起始點溫度為218±5℃。
一種醫藥組成物，其係包含如請求項1～43中任一項之結晶及藥劑學上可容許之載體。
一種用於促進從寡樹突細胞前驅細胞分化誘導至寡樹突細胞之醫藥組成物，其係含有如請求項1～43中任一項之結晶作為有效成分。
一種再髓鞘化促進劑，其係含有如請求項1～43中任一項之結晶作為有效成分。
一種選自由多發性硬化症、視神經脊髓炎、進行性多灶性白質腦病、多系統退化症、急性瀰漫性腦脊髓炎、異位性脊髓炎、HTLV-1相關脊髓症、HIV相關白質腦病、克拉伯病、格林-巴利症候群、米勒費雪症候群、慢性脫髓鞘性神經炎、Charcot-Marie-Tooth氏症、帕金森氏症、思覺失調症、躁鬱症、嚴重抑鬱症、泛自閉症障礙、注意缺陷多動障礙、強迫症、創傷後壓力症候群、藥物依賴性所致之抑鬱症、自閉症、阿茲海默型失智症及缺血性中風所成群組的一種以上疾病之治療劑，其係含有如請求項1～43中任一項之結晶作為有效成分。