TW202321285A

TW202321285A - 用於在過繼細胞療法中提供標靶共刺激之嵌合分子

Info

Publication number: TW202321285A
Application number: TW111126739A
Authority: TW
Inventors: 約翰布里喬曼; 羅伯特霍金斯; 魯班羅卓古茲
Original assignee: 英商英斯特生物科技有限公司
Priority date: 2021-07-16
Filing date: 2022-07-15
Publication date: 2023-06-01
Also published as: EP4370213A1; US20230331808A1; US20230059511A1; AR126463A1; US11697677B2; WO2023288278A1

Abstract

本發明係關於一種適用於過繼細胞療法(adoptive cell therapy；ACT)之嵌合分子及包含該嵌合分子之細胞。該嵌合分子可充當細胞活性調節劑，其增強在內源性T細胞受體(T-cell receptor；TCR)與其同源抗原接合時的反應。本發明亦提供蛋白質、編碼該嵌合分子之核酸及其治療性用途。

Description

用於在過繼細胞療法中提供標靶共刺激之嵌合分子

本發明係關於一種適用於過繼細胞療法(ACT)之嵌合分子及包含該嵌合分子之細胞。該嵌合分子可充當細胞活性調節劑，其增強在內源性T細胞受體(TCR)與其同源抗原接合時的反應。本發明亦提供蛋白質、編碼該嵌合分子之核酸及其治療性用途。

使用自體性T細胞介導癌症消退之過繼細胞療法(ACT)已在早期臨床試驗中展現出許多前景。已採用若干通用方法，諸如使用離體擴增的天然產生之腫瘤反應性或腫瘤浸潤性淋巴球(TIL)。另外，T細胞可經基因修飾以使其再靶向明確腫瘤抗原。此可經由肽(p)-主要組織相容複合物(MHC)特異性T細胞受體(TCR)之基因轉移或在腫瘤特異性單鏈抗體片段(scFv)及T細胞傳訊域(例如，CD3ζ)之間的合成性融合進行，該T細胞傳訊域稱為嵌合抗原受體(CAR)。

當靶向黑色素瘤時，TIL及TCR轉移已證實尤其良好(Rosenberg等人. 2011；Morgan 2006)，而CAR療法已在某些B細胞惡性病之治療中顯示出有很大的前景(Grupp等人2013)。

共刺激訊號適用於實現穩固的CAR T細胞擴增、功能、持久性及抗腫瘤活性。CAR療法在白血病中之成功已部分地歸因於共刺激域(例如，CD28或CD137)併入至CAR構築體中，來自該CAR構築體之訊號與由CD3ζ提供之訊號協同以增強抗腫瘤活性。此觀測結果之基礎係關於T細胞活化之經典訊號1/訊號2模範。此處，由TCR複合物提供之訊號1與由諸如CD28、CD137或CD134之共刺激受體提供之訊號2協同以使得該等細胞經歷純系擴增、IL2產生及長期存活，而無與單獨訊號1相關之活化誘導的細胞死亡(AICD)。此外，訊號2之參與增強經由訊號1產生之訊號，使得該等細胞對低親合力相互作用(諸如，在抗腫瘤反應期間遇到的彼等相互作用)反應更佳。

靶向共刺激將對非基於CAR之T細胞療法具有有益作用。舉例而言，已顯示出將共刺激域併入至嵌合TCR中會增強T細胞對pMHC之反應(Govers 2014)。雖然腫瘤浸潤性淋巴球(TIL)利用其內源性TCR介導腫瘤識別，但不可能對內源性TCR進行工程化。因此，隨著腫瘤細胞表現極少共刺激配位體，TIL受到實質性限制。誘導TIL或實際上任何其他過繼T細胞療法產物之靶向共刺激的能力將為有益的。

本申請案中任何文獻之引用或鑑別並非承認此類文獻可用作本發明之先前技術。

本文提供嵌合分子，特定言之嵌合蛋白質，其經設計以在內源性TCR與其同源抗原接合時提供共刺激。在機制上，所提出之構築體可併入內源性TCR複合物中。當內源TCR複合物機制與其同源抗原接合時，TCR受體複合物聚集，迫使此等嵌合構築體簇聚。此簇聚引起其傳訊域活化，從而導致共刺激增加。此共刺激本身表現出接受體T細胞之效應功能的可量測改進：活化標記增加，細胞介素分泌(特定言之，IL-2)增加且增殖增加。

本文之一些實施例係關於一種嵌合分子，有利地為嵌合蛋白質，其在內源性T細胞受體得以接合時提供共刺激至T細胞。此分子可包含TCR簇集域及傳訊域，該傳訊域可含有CD40細胞內域或其傳訊片段。

TCR簇聚域可為TCR複合物中通常所發現之蛋白質中之一或多者，諸如(但不限於) CD3D、CD3E、CD3G、CD3Z、CD3-η及前-TCRα (PTCRA) TCRα、TCRβ、TCRγ或TCRδ之恆定鏈。

傳訊域亦可包含額外全長共刺激域，包括(但不限於) CD2、CD9、CD26、CD27、CD28、CD29、CD38、CD40、CD43、CD46、CD49d、CD55、CD73、CD81、CD82、CD99、CD100、CD134 (OX40)、CD137 (41BB)、CD150 (SLAM)、CD270 (HVEM)、CD278 (ICOS)、CD357 (GITR)或EphB6。

儘管CD3D、CD3E、CD3G、CD3Z單獨作用；含有TCR恆定鏈(α/β或γ/δ)之構築體較佳經呈雙順反子組態之對應搭配物共表現：TCRα經TCRβ且TCRγ經TCRδ。因此，含有TCRα之構築體有利地與TCRβ共表現且反之亦然；且含有TCRγ之構築體應與TCRδ共表現且反之亦然。在TIL及任何其他α-β T細胞之情形下；較佳組態包括TCR γ-δ；且在γ-δ T細胞中，較佳組態包括TCR α-β以使與內源性TCR機制及TCR配對之干擾/破壞降至最低。

對於CD3D、CD3E、CD3G及CD3Z，宜利用跨膜及胞外部分。然而，本發明亦涵蓋部分或其全部細胞內組分，其可潛在地使內源性TCR複合物傳訊之破壞降至最低或有助於進一步擴增內源性TCR傳訊。

在另一態樣中，本發明提供一種嵌合蛋白質，其包含簇集域及傳訊域，該傳訊域可含有CD40細胞內域或其傳訊片段。在一些實施例中，簇集域能夠寡聚及/或自組裝。在一些實施例中，簇集包含形成均二聚體或均三聚體。在一些實施例中，簇集包含使用不同蛋白質進行寡聚以形成異二聚體或異三聚體。在一些實施例中，嵌合蛋白質在傳訊時為組成性的，例如獨立於藉由胞外配位體進行之受體接合或獨立於藉由連接至不同細胞之胞外配位體進行之受體接合。在一些實施例中，簇集域包含跨膜域。在一些實施例中，簇集域包含跨膜域且進一步包含促進二聚或寡聚之活化突變。在一些實施例中，簇集域包含胞外域，諸如(但不限於)受體之胞外域。在一些實施例中，簇集域包含受體之胞外域且進一步包含胞外域中促進二聚或寡聚之活化突變。在一些實施例中，簇集域包含白胺酸拉鏈。在一些實施例中，白胺酸拉鏈包含或構成跨膜域。在一些實施例中，白胺酸拉鏈包含或構成可溶性域。簇聚域之非限制性實例包括血小板生成素受體(TpoR)、紅血球生成素受體(EpoR)、生長激素受體(GHR)、醣蛋白A (GPA)跨膜域及其活化突變體之簇聚域。在一些實施例中，簇集可藉由小分子調節。在一些實施例中，簇集可藉由轉譯後修飾來調節。

在另一態樣中，本發明提供一種嵌合蛋白質，其包含藉由跨膜域連接至細胞內傳訊域之胞外配位體結合域。在一些實施例中，胞外配位體結合域經選擇或經工程化以結合至胞外配位體，該胞外配位體保持嵌合蛋白質之兩個或更多個複本彼此接近以使得該傳訊域經活化。該胞外配體結合域被視為特異性結合對(sbp)之單組分且該胞外配位體為特異性結合對之第二部分。在一些實施例中，sbp之一個成員包含蛋白質或其受體或胞外部分，且第二sbp包含對sbp之第一成員具有特異性的結合蛋白質。在一些實施例中，胞外sbp為二價。在一些實施例中，胞外sbp為三價。胞外配位體之非限制性實例包括抗體及其二價抗原結合片段。本發明之嵌合蛋白質的胞外配體結合域之非限制性實例(亦即，sbp成員)包括(但不限於) NKG2A、CD27、CD137、GITR、PD-1、PD-L1、FasL、OX40、CTLA4、ICOS、CD40、EGFR、HER2及其胞外部分。互補sbp成員包括(但不限於)：PD1之帕博利珠單抗(pembrolizumab)、HER2之曲妥珠單抗(trastuzumab)、EGFR之西妥昔單抗(cetuximab)、CTLA4之曲美單抗(tremelimumab)、CD27之瓦里木單抗(varlilumab)及CD137之烏瑞魯單抗(urelumab)。在一些實施例中，胞內傳訊域包含CD40胞內域或其傳訊片段。

在一些實施例中，該CD40傳訊域包含SEQ ID NO:154、SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:156。在一些實施例中，CD40傳訊片段包含以下、由以下組成或基本上由以下組成：SH3模體(KPTNKAPH、PTNKAPHP或PTNKAPH)、TRAF2模體(PKQE、PKQET、PVQE、PVQET、SVQE、SVQET)、TRAF6模體(QEPQEINFP或QEPQEINFP)、PKA模體(KKPTNKA、SRISVQE、或其組合，或為全長CD40細胞內域。在一些實施例中，CD40傳訊域之SH3、TRAF2、TRAF6或PKA模體中之一或多者發生突變。在一些實施例中，CD40傳訊域之SH3、TRAF2、TRAF6或PKA模體中之一或多者存在於多個複本中。

本申請案中揭示經工程化蛋白質。在一些實施例中，該經工程化蛋白質與SEQ ID NO: 166具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、100%或在80與100%之間的任何整數之一致性，且其中該序列不為SEQ ID NO: 123。

在一些實施例中，該經工程化蛋白質與SEQ ID NO: 167具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、100%或在80與100%之間的任何整數之一致性，且其中該序列不為SEQ ID NO: 123。

在一些實施例中，該經工程化蛋白質進一步包含結合域、CD28域及CD40域。在一些實施例中，該經工程化蛋白質進一步包含訊號肽序列。在一些實施例中，該訊號肽序列與SEQ ID NO: 157之胺基酸序列具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、100%或在80與100%之間的任何整數之一致性。在一些實施例中，該結合域包含VL序列、VH序列及至少一個連接子。在一些實施例中，該至少一個連接子與SEQ ID NO: 159或161之胺基酸序列具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、100%或在80與100%之間的任何整數之一致性。在一些實施例中，該結合域包含兩個連接子序列。在一些實施例中，該等兩個連接子序列分別與胺基酸序列SEQ ID NO: 159及SEQ ID NO: 161具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、100%或在80與100%之間的任何整數之一致性。在一些實施例中，該VL序列與SEQ ID NO: 158之胺基酸序列具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、100%或在80與100%之間的任何整數之一致性。在一些實施例中，該VH序列與SEQ ID NO: 160之胺基酸序列具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、100%或在80與100%之間的任何整數之一致性。在一些實施例中，該CD40域與SEQ ID NO: 165之胺基酸序列具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、100%或在80與100%之間的任何整數之一致性。在一些實施例中，該CD28域包含CD28跨膜域。在一些實施例中，該CD28跨膜域與SEQ ID NO: 163具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、100%或在80與100%之間的任何整數之一致性。在一些實施例中，該CD28域包含CD28胞外域。在一些實施例中，該CD28胞外域與SEQ ID NO: 162具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、100%或在80與100%之間的任何整數之一致性。在一些實施例中，該CD28域包含CD28胞內域。在一些實施例中，該CD28胞內域與SEQ ID NO: 164具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、100%或在80與100%之間的任何整數之一致性。在一些實施例中，該蛋白質進一步包含1、2、3、4、5或所有6個選自由以下組成之群的CDR序列：QASQSLSNLLA (SEQ ID NO: 168)、GASNLES (SEQ ID NO: 169)、QGGHYSGL (SEQ ID NO: 170)、TNDMN (SEQ ID NO: 171)、VIYSDDTPDYATWAKG (SEQ ID NO: 172)及/或GHYDASVYAYALNI (SEQ ID NO: 173)。在一些實施例中，該結合域及該CD28域係藉由至少一個連接子連接。

在一些實施例中，提供一種經工程化蛋白質。其可包含與SEQ ID NO: 166或167之胺基酸序列至少80%一致的胺基酸序列，其中該胺基酸序列不包括以下中之至少一者：QKLISEEDLE (SEQ ID NO: 174)或LVKQSPMLVAYDNAVNLSCKYSYNLFSREFRASLHKGLDSAVEVCVVYGNYSQQLQVYSKTGFNCDGKLGNESVTFYLQNLYVNQTDIYFCKI (SEQ ID NO: 175)。

在一些實施例中，本發明提供一種CoStAR。其可包含：a)視情況存在之訊號肽；b)結合域，其中該結合域結合至抗帕博利珠單抗抗體或其結合片段；c) CD28域；及d) CD40域。其中a)視情況連接至b)，其中b)連接至c)，其中c)連接至d)，且其中該CoStAR包含如下胺基酸序列：i)缺乏以下中之至少一者：QKLISEEDLE (SEQ ID NO: 174)或LVKQSPMLVAYDNAVNLSCKYSYNLFSREFRASLHKGLDSAVEVCVVYGNYSQQLQVYSKTGFNCDGKLGNESVTFYLQNLYVNQTDIYFCKI (SEQ ID NO: 175)；ii)具有與SEQ ID NO: 166或167具有超過95%一致性之胺基酸序列；iii)具有與SEQ ID NO: 166或167具有超過80%一致性之胺基酸序列且不為SEQ ID NO: 123；或iv) i-iii之任何組合。

在一些實施例中，本發明提供一種融合蛋白質。該融合蛋白質包含a)用於結合至抗體之構件，該抗體結合至帕博利珠單抗；b) CD28域；及c) CD40域。其中a)連接至b)，其中b)連接至c)，且其中該融合蛋白質包含如下胺基酸序列：i)缺乏以下中之至少一者：QKLISEEDLE (SEQ ID NO: 174)或LVKQSPMLVAYDNAVNLSCKYSYNLFSREFRASLHKGLDSAVEVCVVYGNYSQQLQVYSKTGFNCDGKLGNESVTFYLQNLYVNQTDIYFCKI (SEQ ID NO: 175)；ii)具有與SEQ ID NO: 166或167具有超過95%一致性之胺基酸序列；iii)具有與SEQ ID NO: 166或167具有超過80%一致性之胺基酸序列且不為SEQ ID NO: 123；或iv) i-iii之任何組合。

在一些實施例中，提供一種融合蛋白質，其包含SEQ ID NO: 166之胺基酸序列。

在一些實施例中，提供一種融合蛋白質，其包含SEQ ID NO: 167之胺基酸序列。

在一些實施例中，核酸編碼如前述技術方案中任一項之蛋白質。

本文亦揭示一種核酸，其編碼本申請案之實施例中之任一者的蛋白質。

本文亦揭示一種載體，其包含本申請案之實施例中之任一者的核酸。

本文亦揭示一種細胞，其表現本申請案之實施例中之任一者的蛋白質。

本文亦揭示一種細胞，其表現至少兩個本申請案之實施例中之任一者的蛋白質。

本文亦揭示一種製備本申請案之實施例中之任一者之細胞的方法，其包含用本申請案之實施例中之任一者之載體轉導或轉染細胞之步驟。

本文亦揭示一種用於製備表現本申請案之實施例中之任一者之蛋白質的細胞群體之方法，其包含偵測該蛋白質在用根據本申請案之實施例中之任一者載體轉導或轉染的細胞之表面上之表現，且選擇經鑑別為表現該蛋白質之細胞。

本文亦揭示一種藉由本申請案中所揭示之方法中之任一者之方法產生的細胞群體。

本文亦揭示一種細胞群體，其富集細胞以表現本申請案之實施例中之任一者的蛋白質。

本文亦揭示一種用於治療有需要之個體之疾病的方法，其包含向該個體投與本申請案之實施例中之任一者的細胞或本申請案之實施例中之任一者的細胞群體的步驟。

因此，本發明之一個目標為本發明內不涵蓋任何先前已知的產物、製造該產物的製程，或使用該產物的方法，使得申請人保留權利且特此揭示任何先前已知產物、製程或方法的免責聲明。另外應注意，本發明不希望在本發明之範疇內涵蓋不符合USPTO (35 U.S.C. §112，第一段)或EPO (EPC之第83章)之書面說明及實現要求的任何產品、製備該產品之製程或使用該產品之方法，使得申請人有權且特此揭示任何先前所述產品、製備該產品之製程或使用該產品之方法的免責聲明。本發明之實踐遵循EPC第53(c)條以及EPC規則28(b)及(c)可為有利的。明確地保留明確地放棄作為本申請案之譜系中或任何其他譜系中或任何第三方之任何先前所申請申請案中申請人之任何一或多個所授予專利之主題的任何實施例的所有權利。本文中之任何內容不應被視作承諾。

應注意，在本發明中且尤其在申請專利範圍及/或段落中，諸如「包含(comprises/comprised/comprising)」及其類似者之術語可具有美國專利法中賦予其之含義；例如其可意謂「包括(includes/included/including)」及其類似者；且諸如「基本上由…組成(consisting essentially of/consists essentially of)」之術語具有美國專利法中賦予其之含義，例如其使得要素無需明確列舉，但排除先前技術中所發現或影響本發明之基本或新穎特徵的要素。

此等及其他實施例揭示於以下實施方式中或自以下實施方式為顯而易見的且涵蓋於以下實施方式中。

相關申請之交叉引用

本申請案主張2021年7月16日申請之美國臨時申請案第63/222,916號之權益，其在此以全文引用之方式明確地併入本文中。相關申請案及以引用的方式併入

參考2020年7月17日申請之美國臨時專利申請案第63/053,498號、2021年7月16日申請之美國臨時專利申請案第63/222,916號、2021年7月16日申請之PCT專利申請案第PCT/US2021/042079號、2022年5月25日申請之美國臨時專利申請案第63/345,821號，其內容以全文引用之方式併入本文中。

參考2019年1月22日申請之GB專利申請案第1900858.0號、2019年12月20日申請之美國專利申請案第62/951,770號、2020年1月20日國際申請案PCT/GB2020/050120及2020年7月17日申請之美國臨時專利申請案63/053,494。

前述申請案，及其中或在其審查期間所引用之所有文獻(「申請案引用文獻」)，及申請案引用文獻中所引用或參考之所有文獻，及本文中所引用或參考之所有文獻(「本文引用文獻」)，及本文引用文獻中所引用或參考之所有文獻，以及本文中或以引用方式併入本文中之任何文獻中所提及之任何產品的任何製造商說明書、描述、產品規格及產品介紹，皆以引用之方式特此併入本文中，且可用於本發明之實施。更特定言之，所有參考文獻均以引用的方式併入，其引用的程度如同特定且個別地指示各個別文獻以引用的方式併入一般。序列表之引用

本申請案與電子格式之序列表一起申請。序列表以2022年7月12日創建的名稱為「SeqListing_INSTB006WO2」之文件提供，其大小為266,809個位元組。電子格式之序列表中之資訊以全文引用之方式併入本文中。

本文揭示多種經工程化蛋白質。在一些實施例中，經工程化蛋白質與SEQ ID NO: 166具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、100%或在80與100%之間的任何整數之一致性，且其中該序列不為SEQ ID NO: 123。在一些實施例中，經工程化蛋白質與SEQ ID NO: 166具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、100%或在70與100%之間的任何整數之一致性。在一些實施例中，經工程化蛋白質與SEQ ID NO:166具有至少80%之一致性。在一些實施例中，經工程化蛋白質與SEQ ID NO:166具有至少90%之一致性。在一些實施例中，該經工程化蛋白質為SEQ ID NO:166 (圖9)。在一些實施例中，序列為至少80%一致且不為SEQ ID NO: 123之序列。

在一些實施例中，經工程化蛋白質與SEQ ID NO: 167具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、100%或在80與100%之間的任何整數之一致性，且其中該序列不為SEQ ID NO: 123。在一些實施例中，經工程化蛋白質與SEQ ID NO: 167具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、100%或在70與100%之間的任何整數之一致性。在一些實施例中，經工程化蛋白質與SEQ ID NO:167具有至少80%之一致性。在一些實施例中，經工程化蛋白質與SEQ ID NO:167具有至少90%之一致性。在一些實施例中，該經工程化蛋白質為SEQ ID NO:167 (圖10)。在一些實施例中，序列為至少80%一致且不為SEQ ID NO: 123之序列。

在一些實施例中，提供經工程化蛋白質，其與SEQ ID NO: 166具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、100%或在80與100%之間的任何整數之一致性，且其中該序列不為SEQ ID NO: 123。

在一些實施例中，提供經工程化蛋白質，其與SEQ ID NO: 167具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、100%或在80與100%之間的任何整數之一致性，且其中該序列不為SEQ ID NO: 123。

在一些實施例中，經工程化蛋白質、CoStAR或融合蛋白質具有如圖8A中所描繪之通用結構。

在一些實施例中，經工程化蛋白質CoStAR或融合蛋白質具有如圖8B中所描繪之通用結構。

在一些實施例中，經工程化蛋白質CoStAR或融合蛋白質包含至少一個圖8C中所描繪之序列。

在一些實施例中，圖8A中之佈置為與圖8B及/或8C中之實施例分離的實施例。在一些實施例中，圖8B中之佈置為與圖8C及/或8A中之實施例分離的實施例。在一些實施例中，圖8C中之佈置為與圖8A及/或8B中之實施例分離的實施例(因此，設想序列本身在一些實施例中為整個經工程化蛋白質)。在一些實施例中，圖8B描繪作為圖8C之子集的一些實施例。在一些實施例中，圖8C描繪作為圖8A及圖8B之子集的一些實施例。例示性CDR在圖8C中帶下劃線(SEQ ID NO: 158及160)。

在一些實施例中，工程化蛋白質CoStAR或融合蛋白質如圖9或10中所描繪。例示性CDR在圖9及圖10中帶下劃線。在一些實施例中，經工程化蛋白質CoStAR或融合蛋白質不同於其他融合蛋白質，如圖11中所繪示。在一些實施例中，經工程化蛋白質CoStAR或融合蛋白質可缺乏標籤組分及/或CD28區段。

在一些實施例中，經工程化蛋白質包含結合域。在一些實施例中，經工程化蛋白質包含CD28域。在一些實施例中，工程化蛋白質包含CD40域。在一些實施例中，經工程化蛋白質包含1、2或全部3個結合域、CD28域及/或CD40域。

在一些實施例中，該經工程化蛋白質包含訊號肽序列。術語「訊號肽」給出其常見科學含義，且因此係指在易位所連接蛋白質之其餘部分中起作用的短肽。因此，「訊號肽」亦可稱為訊號序列、靶向訊號、定位訊號、定位序列、轉運肽、前導序列或前導肽。應理解，訊號肽可為具有連接肽易位至細胞之質膜之傳訊功能的任何肽。在一些實施例中，該訊號肽序列與SEQ ID NO: 157之胺基酸序列具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、100%或在80與100%之間的任何整數之一致性。

在一些實施例中，結合域包含VL序列、VH序列及/或至少一個連接子之1、2或全部3個。在一些實施例中，該至少一個連接子與SEQ ID NO: 159或161之胺基酸序列具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、100%或在80與100%之間的任何整數之一致性。在一些實施例中，該結合域包含兩個連接子序列。在一些實施例中，該等兩個連接子序列分別與胺基酸序列SEQ ID NO: 159及SEQ ID NO: 161具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、100%或在80與100%之間的任何整數之一致性。

在一些實施例中，該VL序列與SEQ ID NO: 158之胺基酸序列具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、100%或在80與100%之間的任何整數之一致性。在一些實施例中，該VH序列與SEQ ID NO: 160之胺基酸序列具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、100%或在80與100%之間的任何整數之一致性。在一些實施例中，VH及VL內之重鏈CDR的全部3個及/或輕鏈CDR之全部三個與包含於SEQ ID NO: 158及160內之重鏈及/或輕鏈CDR具有一致性。在一些實施例中，1、2、3、4、5或6個CDR具有1、2、3、4個或更多個點突變。在一些實施例中，1、2、3、4、5或6個CDR與SEQ ID NO: 158及/或160內之相應CDR具有70、80、85、90、95、96、97、98、99或100%一致性。

在一些實施例中，該蛋白質包含1、2、3、4、5或全部6個選自由以下組成之群的CDR序列：QASQSLSNLLA (SEQ ID NO: 168)、GASNLES (SEQ ID NO: 169)、QGGHYSGL (SEQ ID NO: 170)、TNDMN (SEQ ID NO: 171)、VIYSDDTPDYATWAKG (SEQ ID NO: 172)及/或GHYDASVYAYALNI (SEQ ID NO: 173)。在一些實施例中，該結合域及該CD28域係藉由至少一個連接子連接。在一些實施例中，1、2、3、4、5或6個CDR具有1、2、3、4個或更多個點突變。在一些實施例中，1、2、3、4、5或6個CDR與CDR具有70、80、85、90、95、96、97、98、99或100%一致性。

本文亦揭示一種包含胺基酸序列之經工程化蛋白質，該胺基酸序列與SEQ ID NO: 166或167之胺基酸序列具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、100%或在80與100%之間的任何整數之一致性。

在一些實施例中，提供一種經工程化蛋白質，其包含與SEQ ID NO: 166或167之胺基酸序列至少80%一致之胺基酸序列，其中該胺基酸序列不包括以下中之至少一者：QKLISEEDLE (SEQ ID NO: 174)或LVKQSPMLVAYDNAVNLSCKYSYNLFSREFRASLHKGLDSAVEVCVVYGNYSQQLQVYSKTGFNCDGKLGNESVTFYLQNLYVNQTDIYFCKI (SEQ ID NO: 175)。

在一些實施例中，該CD40域與SEQ ID NO: 165之胺基酸序列具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、100%或在80與100%之間的任何整數之一致性。在一些實施例中，該CD28域包含CD28跨膜域。在一些實施例中，該CD28跨膜域與SEQ ID NO: 163具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、100%或在80與100%之間的任何整數之一致性。在一些實施例中，該CD28域包含CD28胞外域。在一些實施例中，該CD28胞外域與SEQ ID NO: 162具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、100%或在80與100%之間的任何整數之一致性。在一些實施例中，該CD28域包含CD28胞內域。在一些實施例中，該CD28胞內域與SEQ ID NO: 164具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、100%或在80與100%之間的任何整數之一致性。

在一些實施例中，胺基酸序列及/或融合蛋白質及/或經工程化蛋白質不包括以下中之至少一者：QKLISEEDLE (SEQ ID NO: 174)或LVKQSPMLVAYDNAVNLSCKYSYNLFSREFRASLHKGLDSAVEVCVVYGNYSQQLQVYSKTGFNCDGKLGNESVTFYLQNLYVNQTDIYFCKI (SEQ ID NO: 175)。在一些實施例中，經工程化蛋白質缺乏以下兩者：QKLISEEDLE (SEQ ID NO: 174)及LVKQSPMLVAYDNAVNLSCKYSYNLFSREFRASLHKGLDSAVEVCVVYGNYSQQLQVYSKTGFNCDGKLGNESVTFYLQNLYVNQTDIYFCKI (SEQ ID NO: 175)。

在一些實施例中，經工程化蛋白質包含與SEQ ID NO: 157具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、100%或在80與100%之間的任何整數之一致性的序列。

在一些實施例中，經工程化蛋白質包含與SEQ ID NO: 158具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、100%或在80與100%之間的任何整數之一致性的序列。

在一些實施例中，經工程化蛋白質包含與SEQ ID NO: 159具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、100%或在80與100%之間的任何整數之一致性的序列。

在一些實施例中，經工程化蛋白質包含與SEQ ID NO: 160具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、100%或在80與100%之間的任何整數之一致性的序列。

在一些實施例中，經工程化蛋白質包含與SEQ ID NO: 161具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、100%或在80與100%之間的任何整數之一致性的序列。

在一些實施例中，經工程化蛋白質包含與SEQ ID NO: 162具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、100%或在80與100%之間的任何整數之一致性的序列。

在一些實施例中，經工程化蛋白質包含與SEQ ID NO: 163具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、100%或在80與100%之間的任何整數之一致性的序列。

在一些實施例中，經工程化蛋白質包含與SEQ ID NO: 164具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、100%或在80與100%之間的任何整數之一致性的序列。

在一些實施例中，經工程化蛋白質包含與SEQ ID NO: 165具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、100%或在80與100%之間的任何整數之一致性的序列。

在一些實施例中，經工程化蛋白質包含1、2、3、4、5、6、7、8及/或9個分別與SEQ ID NO: 157-165具有至少80%之一致性的序列。在一些實施例中，經工程化蛋白質包含1、2、3、4、5、6、7、8及/或9個分別與SEQ ID NO: 157-165具有至少90%之一致性的序列。在一些實施例中，經工程化蛋白質包含1、2、3、4、5、6、7、8及/或9個分別與SEQ ID NO: 157-165具有至少95%之一致性的序列。在一些實施例中，經工程化蛋白質包含1、2、3、4、5、6、7、8及/或9個分別與SEQ ID NO: 157-165具有至少98%之一致性的序列。在一些實施例中，經工程化蛋白質包含1、2、3、4、5、6、7、8及/或9個選自由SEQ ID NO: 157-165組成之群的序列。

本文亦揭示一種CoStAR。在一些實施例中，該CoStAR包含視情況存在之訊號肽、結合域，其中該結合域結合至抗帕博利珠單抗抗體或其結合片段、CD28域及CD40域，其中該訊號肽視情況連接至結合域，其中該結合域連接至CD28域，其中該CD28域連接至CD40域，且其中該CoStAR包含如下胺基酸序列：i)缺乏以下中之至少一者：QKLISEEDLE (SEQ ID NO: 174)或 LVKQSPMLVAYDNAVNLSCKYSYNLFSREFRASLHKGLDSAVEVCVVYGNYSQQLQVYSKTGFNCDGKLGNESVTFYLQNLYVNQTDIYFCKI (SEQ ID NO: 175)；ii)具有與SEQ ID NO: 166或167具有超過95%一致性之胺基酸序列；iii)具有與SEQ ID NO: 166或167具有超過80%一致性之胺基酸序列且不為SEQ ID NO: 123；或iv) i-iii之任何組合。

本文亦揭示一種融合蛋白質。在一些實施例中，融合蛋白質包含結合至與帕博利珠單抗結合之抗體的構件、CD28域及CD40域，其中結合至抗體之構件連接至CD28域，其中該CD28域連接至CD40域，且其中該融合蛋白質包含如下胺基酸序列：i)缺乏以下中之至少一者：QKLISEEDLE (SEQ ID NO: 174)或LVKQSPMLVAYDNAVNLSCKYSYNLFSREFRASLHKGLDSAVEVCVVYGNYSQQLQVYSKTGFNCDGKLGNESVTFYLQNLYVNQTDIYFCKI (SEQ ID NO: 175)；ii)具有與SEQ ID NO: 166或167具有超過95%一致性之胺基酸序列；iii)具有與SEQ ID NO: 166或167具有超過80%一致性之胺基酸序列且不為SEQ ID NO: 123；或iv) i-iii之任何組合。在一些實施例中，結合至帕博利珠單抗之構件為抗帕博利珠單抗抗體。在一些實施例中，抗帕博利珠單抗抗體為

在一些實施例中，結合域或結合至與帕博利珠單抗結合之抗體的構件包含：1、2、3、4、5或全部6個選自由以下組成之群的CDR序列：QASQSLSNLLA (SEQ ID NO: 168)、GASNLES (SEQ ID NO: 169)、QGGHYSGL (SEQ ID NO: 170)、TNDMN (SEQ ID NO: 171)、VIYSDDTPDYATWAKG (SEQ ID NO: 172)及/或GHYDASVYAYALNI (SEQ ID NO: 173)。在一些實施例中，1、2、3、4、5或6個CDR具有1、2、3、4個或更多個點突變。在一些實施例中，1、2、3、4、5或6個CDR與CDR具有70、80、85、90、95、96、97、98、99或100%一致性。

在一些實施例中，該CD28域包含：SEQ ID NO: 162、163及164，或與其具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、100%或在80與100%之間之任何整數的一致性的序列。在一些實施例中，該CD40域包含：SEQ ID No: 165，或與其具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、100%或在80與100%之間之任何整數的一致性的序列。

本文亦揭示一種融合蛋白質，其包含SEQ ID NO: 166之胺基酸序列。在一些實施例中，融合蛋白質包含與SEQ ID NO: 166具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、100%或在80與100%之間之任何整數的一致性的序列。本文亦揭示一種融合蛋白質，其包含SEQ ID NO: 167之胺基酸序列。在一些實施例中，融合蛋白質包含與SEQ ID NO: 167具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、100%或在80與100%之間之任何整數的一致性的序列。

如本文所用，「全長蛋白質」或「全長受體」係指受體蛋白質，諸如CD40受體蛋白質。術語「全長」涵蓋一旦其訊號肽已裂解，在成熟受體蛋白質之N端處缺乏至多約5個或至多10個胺基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個胺基酸之受體蛋白質。舉例而言，雖然受體N端訊號肽之特異性裂解位點可經限定，但已觀測到準確裂解點之可變性。術語「全長」並不暗示受體N端訊號肽之胺基酸的存在或不存在。在一個實施例中，術語「全長」(例如，根據本發明之某些態樣，全長CD28或全長CD40胞內域)涵蓋一旦其訊號肽已裂解，在成熟受體蛋白質之N端處缺乏至多約5個，例如1、2、3、4、5或至多10個胺基酸之缺乏N端訊號肽的成熟受體蛋白質(例如，根據本發明之某些態樣的CD28)。如上文所提及，根據本發明之各種態樣的「全長」CD28受體或其他受體或TCR簇聚域不包括訊號肽且在成熟受體蛋白質之N端(例如，N端殘基N、K、I、L及/或V)處可缺乏至多約5個，例如1、2、3、4、5或至多10個胺基酸。此展示於例示性融合物中，例如SEQ ID Nos. 4-12 (應注意，此等融合物在成熟受體蛋白質之N端處可缺乏至多約5個，例如1、2、3、4、5個或至多10個胺基酸，如加框區域中所示)。

本發明之嵌合蛋白質可包含TCR簇集域以及傳訊域，該傳訊域有利地可以包含CD40細胞內域。

術語「T細胞受體」或「TCR」係指由T細胞表面上配對的αβ或γδ鏈構成之雜二聚體受體。各α、β、γ及δ鏈由兩個Ig樣域形成：經由互補決定區(CDR)賦予抗原識別之可變域(V)，接著藉由連接肽及跨膜區錨定至細胞膜之跨膜(TM)區。TM區與CD3傳訊設備之恆定次單位結合。V域中之每一者具有三個CDR。此等CDR與結合至由主要組織相容複合物(pMHC)編碼之蛋白質之抗原肽之間的複合物相互作用(Davis and Bjorkman (1988) Nature, 334, 395-402；Davis等人. (1998) Annu Rev Immunol, 16, 523-544；Murphy (2012), xix, 868 p.)。

適用於本發明之嵌合蛋白質的共刺激受體蛋白質包括(但不限於) CD2、CD9、CD26、CD27、CD28、CD29、CD38、CD40、CD43、CD46、CD49d、CD55、CD73、CD81、CD82、CD99、CD100、CD134 (OX40)、CD137 (41BB)、CD150 (SLAM)、CD270 (HVEM)、CD278 (ICOS)、CD357 (GITR)或EphB6，其天然形式包含胞外配體結合域及胞內訊號轉導域。舉例而言，CD2表徵為在T細胞表面上發現之細胞黏附分子，且能夠起始T細胞活化所需之胞內訊號。CD27表徵為屬於TNFR超家族(TNFRSF)之II型跨膜醣蛋白，其在B細胞上之表現由B細胞中之抗原受體活化誘導。CD28為T細胞上之一種蛋白質且為抗原呈現細胞上CD80 (B7.1)及CD86 (B7.2)配位體之受體。CD137 (4-1BB)配位體見於大部分白細胞及一些非免疫細胞上。OX40配位體表現於許多抗原呈現細胞(諸如DC2 (樹突狀細胞)、巨噬細胞及B淋巴球)上。在一個實施例中，共刺激受體蛋白質為如本文所定義之全長CD28。

CD40為腫瘤壞死因子受體(TNFR)超家族之成員且數種同功型係由替代性剪接產生。其配位體CD154 (亦稱為CD40L)為主要表現於經活化T細胞上之蛋白質。為供參考，人類CD40同功型1蛋白質序列係載於GenBank寄存編號NP_001241.1中，包括訊號肽(胺基酸1-20)、跨膜域(胺基酸194-215)及細胞質域(胺基酸216-277) (SEQ ID NO: 22)。CD40受體傳訊涉及轉接蛋白，其包括(但不限於) TNF受體相關因子(TRAF)，且該細胞質域包含傳訊組分，包括(但不限於) SH3模體(KPTNKAPH)、TRAF2模體(PKQE、PVQE、SVQE)、TRAF6模體(QEPQEINFP)及PKA模體(KKPTNKA，SRISVQE)。結合至TRAF1、TRAF2、TRAF3及TRAF5之其他模體包含主要共有序列(P/S/A/T)X(Q/E)E或次要共有序列PXQXXD，且可鑑別於TNFR家族成員(諸如但不限於CD30、Ox40、4-1BB及EBV致癌蛋白LMP1)中或自其獲得。(參見例如，Ye, H等人, The Structural Basis for the Recognition of Diverse Receptor Sequences by TRAF2. Molecular Cell, 1999; 4(3):321-30. doi: 10.1016/S1097-2765(00)80334-2; Park HH, Structure of TRAF Family: Current Understanding of Receptor Recognition. Front. Immunol. 2018; 9:1999. doi: 10.3389/fimmu.2018.01999)。

本文中所揭示之實例展現CD40作為傳訊域之操作且進一步展現細胞介素及趨化介素表現概況藉由傳訊域選擇改變。就此而言，本發明之CD40傳訊域提供不同的及重疊的由不同的因子結合位點誘導之反應。(參見例如，Ahonen, CL等人, The CD40-TRAF6 axis controls affinity maturation and the generation of long-lived plasma cells. Nat Immunol. 2002; 3: 451-456; Mackey MF等人, Distinct contributions of different CD40 TRAF binding sites to CD154-induced dendritic cell maturation and IL-12 secretion. Eur J Immunol. 2003; 33: 779-789; Mukundan L等人., TNF receptor-associated factor 6 is an essential mediator of CD40-activated proinflammatory pathways in monocytes and macrophages. J Immunol. 2005; 174: 1081-1090.

在一些實施例中，本發明之嵌合蛋白質包含實質上全部CD40共刺激域。在一些實施例中，本發明之嵌合蛋白質包含兩個或更多個CD40共刺激域。在一些實施例中，本發明之嵌合蛋白質包含CD40共刺激域傳訊組分或模體，包括(但不限於) SH3模體(KPTNKAPH)、TRAF2模體(PKQE、PVQE、SVQE)、TRAF3模體、TRAF6模體(QEPQEINFP)或PKA模體(KKPTNKA，SRISVQE)以及兩個或更多個、或三個或更多個、或四個或多個此類模體組分，其可在多個複本中且按任何次序排列。在一些實施例中，本發明之嵌合蛋白質包含CD40共刺激域及CD40共刺激域傳訊組分或模體。

在一些實施例中，一或多種共刺激域傳訊組分或模體之選擇係由其中表現嵌合蛋白質之細胞及/或與傳訊組分或模體更緊密相關之所需共刺激活性，或避免與傳訊組分或模體更緊密相關之共刺激活性來引導。

在一些實施例中，除CD40共刺激域或其傳訊組分或模體，或兩個或更多個此類域或其組分或模體或組合之外，嵌合蛋白質傳訊域包含額外全長共刺激域或其傳訊組分，其來自(但不限於) CD2、CD9、CD26、CD27、CD28、CD29、CD38、CD40、CD43、CD46、CD49d、CD55、CD73、CD81、CD82、CD99、CD100、CD134 (OX40)、CD137 (41BB)、CD150 (SLAM)、CD270 (HVEM)、CD278 (ICOS)、CD357 (GITR)或EphB6。

為供參考，人類CD28蛋白質序列係載於GenBank寄存編號NP_006130.1中，包括訊號肽(胺基酸1-18)、胞外域(胺基酸19-152)、跨膜域(胺基酸153-179)及細胞質域(胺基酸180-200)。胞外域包括免疫球蛋白類型域(胺基酸21-136)，其含有構成抗原結合位點之胺基酸及形成均二聚體界面之胺基酸。胞外域包括可經糖基化之若干天冬醯胺殘基，且細胞內域包含經磷酸化之絲胺酸及酪胺酸殘基。

作為參考，人類CD8 α鏈蛋白質序列係GenBank寄存編號NP_001139345.1所載，包括訊號肽(胺基酸1-21)、胞外域(胺基酸22-182)、跨膜域(胺基酸183-203)及細胞質域(胺基酸204-235)。胞外域包括免疫球蛋白類型域(胺基酸28-128)，其含有構成抗原結合位點之胺基酸及形成均二聚體界面之胺基酸。胞外域包括可經糖基化之若干天冬醯胺殘基，且細胞內域包含經磷酸化之絲胺酸及酪胺酸殘基。

為供參考，人類IgG4恆定區序列係載於UniProtKB/Swiss-Prot:寄存編號P01861.1中，包括CH1 (胺基酸1-98)、鉸鏈(胺基酸99-110)、CH2 (胺基酸111-220)、CH3 (胺基酸221-327)。CH2區包括在胺基酸177處之天冬醯胺，其經醣基化且與Fc受體及抗體依賴性細胞介導的細胞毒性(ADCC)相關。

為供參考，人類CD137 (41BB)，另一TNFR超家族成員之蛋白質序列係GenBank寄存編號NP_001552.2所闡述，包括訊號肽(胺基酸1-23)、胞外域(胺基酸24-186)、跨膜域(胺基酸187-213)及細胞質域(胺基酸214-255)。

為供參考，人類CD134 (OX40)蛋白質序列係載於GenBank寄存編號NP_003318.1中，包括訊號肽(胺基酸1-28)、胞外域(胺基酸29-214)、跨膜域(胺基酸215-235)及細胞質域(胺基酸236-277)。此受體已展示經由其與轉接蛋白TRAF2及TRAF5相互作用來活化NF-κB且研究表明此受體促進細胞凋亡抑制劑BCL2及BCL2lL1/BCL2-XL之表現。

人類T細胞表面抗原CD2具有至少兩種同功型。為供參考，人類CD2同功型1蛋白質序列係由NP_001315538.1所載，包括訊號肽(胺基酸1-24)、胞外域(胺基酸25-235)、跨膜域(胺基酸236-261)及細胞質域(胺基酸262-377)。人類CD2同功型2蛋白質序列係由NP_001758.2所載。

為供參考，人類CD357 (GITR)同功型-1蛋白質序列係由GenBank寄存編號NP_004186.1所闡述，包括訊號肽(胺基酸1-25)、胞外域(胺基酸26-162)、跨膜域(胺基酸163-183)及細胞質域(胺基酸184-241)。

為供參考，人類CD29 (β1整合素)蛋白質序列係由GenBank寄存編號NP_596867所闡述，包括訊號肽(胺基酸1-20)、胞外域(胺基酸21-728)、跨膜域(胺基酸729-751)及細胞質域(胺基酸752-798)。

人類CD150 (SLAM)蛋白質序列具有數種同功型。除CD150 (mCD150)的跨膜形式之外，造血譜系之細胞表現編碼CD150之經分泌形式(sCD150)的mRNA，該形式缺乏30個胺基酸之整個跨膜區。為供參考，人類SLAM同功型b係GenBank寄存編號NP_003028.1所闡述，包括訊號肽(胺基酸1-20)、胞外域(胺基酸21-237)、跨膜域(胺基酸238-258)及細胞質域(胺基酸259-335)。人類SLAM同功型a係GenBank寄存編號NP_001317683.1所載。

在本發明之實施例中，嵌合蛋白質可在細胞之治療性群體中具有治療活性之啟動子，例如腫瘤浸潤性淋巴球(TIL)的控制下單獨表現。或者，嵌合蛋白質可與治療性轉殖基因，諸如嵌合抗原受體(CAR)及/或T細胞受體(TCR)一起表現。適合之TCR及CAR在文獻中已係熟知的，例如HLA-A*02-NYESO-1特異性TCR (Rapoport等人Nat Med 2015)或抗CD19scFv.CD3ζ融合CAR (Kochenderfer等人J Clin Oncol 2015)，其分別已成功地用於治療骨髓瘤或B細胞惡性病。本文所描述之嵌合蛋白質可用任何已知CAR或TCR表現，由此提供具有可調節的生長開關的細胞，以允許細胞在活體外或活體內擴增，且針對抗癌活性提供呈TCR或CAR形式之習知活化機制。因此，本發明提供一種用於過繼細胞療法之細胞，其包含如本文所描述之嵌合蛋白質及特異性結合至腫瘤相關抗原之TCR及/或CAR。包含CD28之例示性嵌合蛋白質包括胞外抗原結合域及胞外、跨膜及胞內傳訊域。

本發明之嵌合蛋白質視情況包含TCR簇聚域與共刺激受體之間的間隔區。如本文所使用，術語「間隔子」係指嵌合蛋白質之胞外結構區域，其將TCR簇聚域與嵌合蛋白質之傳訊域分離。在一些實施例中，採用長間隔子例如靶向近膜抗原決定基或經糖基化之抗原(參見Guest R.D.等人. The role of extracellular spacer regions in the optimal design of chimeric immune receptors: evaluation of four different scFvs and antigens. J. Immunother. 2005;28:203-211; Wilkie S.等人, Retargeting of human T cells to tumor-associated MUC1: the evolution of a chimeric antigen receptor. J. Immunol. 2008;180:4901-4909)。在其他實施例中，嵌合蛋白質具有短間隔子，例如以靶向遠膜抗原決定基(參見Hudecek M.等人, Receptor affinity and extracellular domain modifications affect tumor recognition by ROR1-specific chimeric antigen receptor T cells. Clin. Cancer Res. 2013;19:3153-3164; Hudecek M.等人acarbazine nalling extracellular spacer domain of chimeric antigen receptors is decisive for in vivo antitumor activity. Cancer Immunol. Res. 2015;3:125-135)。在一些實施例中，間隔子包含IgG絞鏈之全部或一部分或由IgG絞鏈衍生，包括(但不限於) IgG1、IgG2或IgG4。「衍生自Ig鉸鏈」意指在IgG鉸鏈中包含插入、缺失或突變之間隔子。在一些實施例中，間隔子可包含一或多個抗體恆定域之全部或一部分，諸如(但不限於) CH2及/或CH3域。在一些實施例中，在包含CH2域之全部或一部分之間隔基中，CH2域經修飾以免結合至Fc受體。舉例而言，已發現骨髓細胞中之Fc受體結合會削弱CAR T細胞功能性。在一些實施例中，間隔子包含來自CD28、CD8或包含鉸鏈區之其他蛋白質之Ig樣鉸鏈的全部或一部分。在包含間隔子之本發明之一些實施例中，間隔子之長度為1至50個胺基酸。

在一些實施例中，嵌合蛋白質胞外域包含連接子。連接子包含用於連接域(例如結合域)與間隔子或跨膜域之短運轉胺基酸。為了結合配位體存在可撓性，配體結合域通常將藉由包含約5至25個胺基酸，諸如AAAGSGGSG或GGGGSGGGGSGGGGS之可撓性連接子連接至間隔子或跨膜域。在一些實施例中，嵌合蛋白質包含藉由連接子且在無間隔子之情況下直接接合至傳訊域之TCR簇聚域。在一些實施例中，嵌合蛋白質包含藉由間隔子且在無連接子之情況下直接接合至跨膜之結合域。

如上文所論述，在一些實施例中，嵌合蛋白質包含全長一級共刺激受體，其可包含(但不限於) CD2、CD9、CD26、CD27、CD28、CD29、CD38、CD40、CD43、CD46、CD49d、CD55、CD73、CD81、CD82、CD99、CD100、CD134 (OX40)、CD137 (41BB)、CD150 (SLAM)、CD270 (HVEM)、CD278 (ICOS)、CD357 (GITR)或EphB6之胞外配體結合及胞內傳訊部分。在其他實施例中，嵌合蛋白質例如可包含前述蛋白質中之一者的胞外配位體結合域及前述蛋白質中之另一者的胞內傳訊域。在一些實施例中，嵌合蛋白質之傳訊部分包含單一傳訊域。在其他實施例中，嵌合蛋白質之傳訊部分包含第二胞內傳訊域，諸如(但不限於) CD2、CD27、CD28、CD40、CD134 (OX40)、CD137 (4-1BB)、CD150 (SLAM)。在一些實施例中，第一及第二胞內傳訊域相同。在其他實施例中，第一及第二細胞內傳訊域不同。在一些實施例中，共刺激受體能夠二聚。在不受理論束縛之情況下，認為嵌合蛋白質與其他輔助分子二聚或締合以引發訊號。在一些實施例中，嵌合蛋白質經由跨膜域相互作用與輔助分子二聚或締合。在一些實施例中，藉由共刺激受體之胞內部分及/或胞外部分中之共刺激受體相互作用輔助與輔助分子二聚或締合。

儘管跨膜之主要功能為將嵌合蛋白質錨定於T細胞膜中，但在一些實施例中，跨膜域影響嵌合蛋白質功能。在一些實施例中，跨膜域由全長初級共刺激受體域構成。在其中本發明之嵌合蛋白質構築體包含一個受體之胞外域及第二受體之胞內傳訊域的實施例中，跨膜域可為胞外域或胞內域之跨膜域。在一些實施例中，跨膜域來自CD4、CD8α、CD28或ICOS。Gueden等人的具有增加之CAR T細胞存留及總體抗腫瘤功效之ICOS跨膜域的相關使用(Guedan S.等人, Enhancing CAR T cell persistence through ICOS and 4-1BB costimulation. JCI Insight. 2018;3:96976)。在一實施例中，跨膜域包含跨越細胞膜之疏水性α螺旋。

在一些實施例中，涵蓋本文提供之TCR簇聚域或其他部分之胺基酸序列變異體。舉例而言，可能需要改良抗體部分之結合親和力及/或其他生物特性。抗體部分之胺基酸序列變異體可藉由將適當修飾引入至編碼簇聚部分之核苷酸序列中或藉由肽合成製備。此類修飾包括例如在抗體部分之胺基酸序列內的殘基之缺失及/或插入及/或取代。可進行缺失、插入及取代之任何組合以獲得最終構築體，其限制條件為最終構築體具有所需特徵。

在一些實施例中，提供包含一或多個胺基酸取代、缺失或插入之TCR簇聚域部分。胺基酸取代可經引入至所關注之結合域中，且針對所需活性進行篩選之產物例如保持/改進簇聚或減少免疫原性。在一些實施例中，胺基酸取代可引入至初級共刺激受體域(胞外或胞內)、次級共刺激受體域或胞外共受體域中之一或多者中。因此，本發明涵蓋嵌合蛋白質及尤其本文所揭示之組分部分以及其變異體，亦即與尤其本文所揭示之胺基酸序列具有至少75%、至少80%、至少85%、至少87%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%序列一致性之嵌合蛋白質及組分部分。當參考特定序列時，使用術語「相似度一致性」、「百分比一致性」及「同源性百分比」，如University of Wisconsin GCG software program BestFit中所闡述，可使用其他演算法，例如BLAST、psiBLAST或TBLASTN (其使用Altschul等人的方法，(1990) J. Mol. Biol. 215: 405-410)、FASTA (其使用Pearson及Lipman的方法(1988) PNAS USA 85: 2444-2448)。

特定胺基酸序列變異體可因1個胺基酸、2、3、4、5 -10、10-20或20-30個胺基酸之插入、添加、取代或缺失而不同於參考序列。在一些實施例中，變異序列可包含具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10個或更多個插入、缺失或取代之殘基的參考序列。舉例而言，5、10、15、至多20、至多30或至多40個殘基可插入、缺失或取代。

在一些較佳實施例中，變異體可與參考序列相差1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多個保守取代。保守取代涉及用具有類似特性之不同胺基酸置換胺基酸。舉例而言，脂族殘基可經另一脂族殘基置換，非極性殘基可經另一非極性殘基置換，酸性殘基可經另一酸性殘基置換，鹼性殘基可經另一鹼性殘基置換，極性殘基可經另一極性殘基置換或芳族殘基可經另一芳族殘基置換。保守取代可例如在以下群組內之胺基酸之間進行：

保守性取代顯示於下表1中。表 1：

初始殘基	例示性取代	較佳取代基
IArg (R)	Lys；Gln；Asn	Lys
Asn (N)	Gln；His；Asp；Lys；Arg	Gln
Asp (D)	Glu；AsnIu
Cys (C)	Ser；Ala	Ser
Gln (Q)	Asn；I	Asn
Glu (E)	Asp；Gln	Asp
Gly (G)	Ala	Ala
His (H)	Asn；Gln；Lys；Arg	Arg
Ile (I)	Leu；Val；Met；Ala；Phe；正白胺酸	Leu
Leu (L)	正白胺酸；Ile；Val；Met；Ala；Phe	Ile
Lys (K)	Arg；Gln；Asn	Arg
Met (M)	Leu；Phe；Ile	Leu
Phe (F)	Trp；Leu；Val；Ile；Ala；Tyr	Tyr
Pro (P)	Ala	Ala
Ser (S)	Thr	Thr
Thr (T)	Val；Ser	Ser
Trp (W)	Tyr；Phe	Tyr
Tyr (Y)	Trp；Phe；Thr；Ser	Phe
Val ( V)	Il e；Le u；Met；Phe；Ala；正白胺酸	Leu

胺基酸可根據常見側鏈特性分為不同類別：a.疏水性：正白胺酸、Met、Ala、Val、Leu、Ile；b.中性親水性：Cys、Ser、Thr、Asn、Gln；c.酸性：Asp、Glu；d.鹼性：His、Lys、Arg；e.影響鏈定向之殘基：Gly、Pro；芳族：Trp、Tyr、Phe。非保守取代將引起此等類別中之一者的成員換成另一個類別。本發明中使用之細胞可為適用於過繼細胞療法之任何淋巴細胞，諸如T細胞或自然殺手(NK)細胞、NKT細胞、γ/δ T細胞或T調節細胞。細胞對於患者可為同種異體或自體的。

T細胞或T淋巴細胞為在細胞介導之免疫性中起中心作用的淋巴細胞類型。其與其他淋巴細胞(諸如B細胞及自然殺手細胞(NK細胞))之區別可在於細胞表面上存在T細胞受體(TCR)。存在各種類型之T細胞，如下文所概述。細胞毒性T細胞(TC細胞或CTL)破壞經病毒感染之細胞及腫瘤細胞，且亦涉及移植排斥反應。CTL在其表面處表現CD8分子。

此等細胞藉由結合至與存在於所有成核細胞之表面上的I類MHC締合之抗原來識別其目標。經由IL-10、腺苷及由調節性T細胞分泌之其他分子，CD8+細胞可不活化為無反應狀態，其預防自體免疫性疾病，諸如實驗性自體免疫腦脊髓炎。

記憶T細胞為在感染消退之後長期存留之抗原特異性T細胞之子集。其在再次暴露於其同源抗原後快速擴增成大量效應T細胞，因此為「免疫系統」提供針對過去感染之「記憶」。記憶T細胞包含三種亞型：中樞記憶T細胞(TCM細胞)及兩種類型之效應記憶T細胞(TEM細胞及TEMRA細胞)。記憶細胞可為CD4 ⁺或CD8 ⁺。記憶T細胞典型地表現細胞表面蛋白CD45RO。調節T細胞(Treg細胞)先前稱為抑制T細胞，其對於維持免疫耐受性而言為關鍵的。其主要作用為關閉T細胞介導免疫性至免疫反應結束且抑制逃避胸腺中之陰性選擇過程之主動反應T細胞。

已描述兩種主要類別之CD4 ⁺Treg細胞-天然存在之Treg細胞及適應性Treg細胞。天然產生之Treg細胞(亦稱為CD4+CD25+FoxP3+ Treg細胞)在胸腺中產生且與在產生T細胞與已用TSLP活化之骨髓(CD11c ⁺)及漿細胞樣(CD123 ⁺)樹突狀細胞之間的相互作用有關。天然產生之Treg細胞與其他T細胞之區別可在於存在細胞內分子(稱為FoxP3)。適應性Treg細胞(亦稱為Tr1細胞或Th3細胞)可在正常免疫反應期間產生。

自然殺手細胞(或NK細胞)為形成先天免疫系統之一部分的一種類型的細胞溶解細胞。NK細胞以MHC非依賴性方式提供對來自病毒感染細胞之先天性訊號的快速反應。NK細胞(屬於先天性淋巴樣細胞之群)定義為大型顆粒狀淋巴球(LGL)且構成區別於產生B及T淋巴球之常見淋巴樣前驅細胞之第三種類細胞。

在一些實施例中，本發明之治療性細胞包含經工程化以表現嵌合蛋白質之自體性細胞。在一些實施例中，本發明之治療性細胞包含經工程化以表現嵌合蛋白質之同種異體細胞。歸因於受體同種抗原之TCR介導之識別，表現嵌合蛋白質之自體細胞可有利於避免移植物抗宿主病(GVHD)。

本發明之一態樣提供本發明之核酸序列，其編碼本文所描述之嵌合蛋白質、多肽或蛋白質中之任一者(包括其功能性部分及功能性變異體)。如本文所用，術語「聚核苷酸」、「核苷酸」及「核酸」既定為彼此同義。技術人員應理解，由於遺傳密碼之簡併，大量不同聚核苷酸及核酸可編碼相同的多肽。另外，應理解，熟習此項技術者可使用常規技術進行不影響由本文所描述之聚核苷酸編碼之多肽序列的核苷酸取代以反映任何特定宿主生物體之密碼子使用，其中將表現多肽，例如密碼子最佳化。根據本發明之核酸可包含DNA或RNA。其可為單股或雙股的。其亦可為在其內包括合成性或經修飾之核苷酸的聚核苷酸。對寡核苷酸之多種不同類型之修飾為此項技術中已知的。此等包括甲基膦酸酯及硫代磷酸酯主鏈，在分子之3'端及/或5'端處添加吖啶或聚離胺酸鏈。出於本發明之目的，應瞭解，聚核苷酸可藉由此項技術中可獲得之任何方法修飾。可進行此類修飾以便增強所關注之聚核苷酸之活體內活性或壽命。

關於核苷酸序列之術語「變異體」、「同系物」或「衍生物」包括來自或關於序列之一個(或多個)核酸之任何取代、變化、修飾、置換、缺失或添加。

核酸序列可編碼展示為SEQ ID NO:2之蛋白質序列或其變異體。核苷酸序列可包含經密碼子最佳化之核酸序列，其顯示為經工程化以表現於人類細胞中。

本發明亦提供核酸序列，其包含編碼嵌合蛋白質之核酸序列及編碼T細胞受體(TCR)及/或嵌合抗原受體(CAR)之另一核酸序列。

核酸序列可藉由允許兩個或更多個核酸序列之共表現的序列接合。舉例而言，構築體可包含內部啟動子、內部核糖體進入序列(IRES)序列或編碼裂解位點之序列。裂解位點可自裂解，使得當產生多肽時，其立即裂解為離散蛋白質而無需任何外部裂解活性。已知各種自裂解位點，包括口蹄疫病毒(FMDV)及2A自裂解肽。共表現序列可為內部核糖體進入序列(IRES)。共表現序列可為內部啟動子。

在一態樣中，本發明提供一種載體，其包含本發明之核酸序列或核酸構築體。

此類載體可用於將核酸序列或核酸構築體引入至宿主細胞中，使得其表現一或多個根據本發明之第一態樣之嵌合蛋白質及視情況一或多個其他所關注之蛋白質(POI)，例如TCR或CAR。載體可例如為質體或病毒載體，諸如反轉錄病毒載體或慢病毒載體，或基於轉座酶之載體或合成性mRNA。

本發明之核酸亦可用於使用標準基因傳遞方案的核酸免疫接種及基因療法。基因傳遞方法為此項技術中已知的。參見例如美國專利第5,399,346號、第5,580,859號、第5,589,466號，該等專利以全文引用的方式併入本文中。

來源於反轉錄病毒(諸如慢病毒)之載體為達成長期基因轉移之適合工具，因為其允許長期穩定整合轉殖基因及其在子細胞中之傳播。載體可能夠轉染或轉導包括T細胞或NK細胞之淋巴球。本發明亦提供其中插入有本發明之核酸的載體。編碼嵌合蛋白質及視情況TCR或CAR之天然或合成性核酸的表現通常藉由以下方式來實現：將編碼嵌合蛋白質及TCR/CAR多肽或其部分之核酸可操作地連接至一或多個啟動子，且將構築體併入表現載體中。

其他啟動子元件(例如強化子)調控轉錄起始頻率。通常，此等元件位於起始位點上游30-110 bp區中，但多個啟動子最近已展示含有亦位於起始位點下游之功能元件。啟動子元件之間的間距通常為靈活的，使得當元件相對於彼此倒置或移動時保留啟動子功能。在胸苷激酶(tk)啟動子中，啟動子元件之間的間距在活性開始下降之前可以增加至相隔50 bp。

適合啟動子之一個實例為即刻早期巨細胞病毒(CMV)啟動子序列。此啟動子序列為能夠驅使任何與其可操作地連接之聚核苷酸序列之高表現量的強組成性啟動子序列。適合啟動子之另一實例為延伸生長因子-1α (EF-1α)。然而，亦可使用其他構成性啟動子序列，包括(但不限於)猴病毒40 (SV40)早期啟動子、小鼠乳房腫瘤病毒(MMTV)、人類免疫缺乏病毒(HIV)長末端重複序列(LTR)啟動子、MoMuLV啟動子、MSCV啟動子、MND啟動子、禽類白血病病毒啟動子、埃-巴二氏病毒即刻早期啟動子、勞斯肉瘤病毒啟動子(Rous sarcoma virus promoter)，以及人類基因啟動子，諸如(但不限於)肌動蛋白啟動子、肌球蛋白啟動子、血紅素啟動子及肌酸激酶啟動子。

載體可適合於真核宿主細胞中之複製及整合。典型選殖載體含有轉錄及轉譯終止子、起始序列及適用於調節所需核酸序列表現之啟動子。病毒載體技術為此項技術中熟知且描述於例如以下中：Sambrook等人. (2001, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, New York)，及於其他病毒學及分子生物學手冊中，亦參見WO 01/96584；WO 01/29058；及美國專利第6,326,193號)。在一些實施例中，所表現之構築體如SEQ ID NO:32-65及67-79中所示。在一些實施例中，核酸為允許在單一啟動子控制下多個轉殖基因(例如，嵌合蛋白質及TCR及/或CAR等)之表現的多順反子構築體。在一些實施例中，轉殖基因(例如，嵌合蛋白質及TCR及/或CAR等)藉由自裂解2A肽分離。適用於本發明之核酸構築體中之2A肽之實例包括F2A、P2A、T2A及E2A。在本發明之其他實施例中，本發明之核酸構築體為多順反子構築體，其包含兩個啟動子；一個啟動子驅動嵌合蛋白質表現，且另一啟動子驅動TCR或CAR表現。在一些實施例中，本發明之雙啟動子構築體為單向的。在其他實施例中，本發明之雙啟動子構築體為雙向的。為了評估嵌合蛋白質多肽或其部分之表現，意欲引入至細胞中之表現載體亦可含有可選標記基因或報導基因或兩者以促進自設法經由病毒載體轉染或轉導之細胞群體鑑別及選擇表現細胞。

在擴增及基因修飾之前，自個體獲得細胞源，例如免疫效應細胞(例如T細胞或NK細胞)。術語「個體」欲包括可引起免疫反應之活生物體(例如，哺乳動物)。個體之實例包括人類、狗、貓、小鼠、大鼠及其轉殖基因物種。T細胞可獲自許多來源，包括周邊血液單核球、骨髓、淋巴結組織、臍帶血、胸腺組織、來自感染位點之組織、腹水、肋膜積液、脾組織及腫瘤。

在一個態樣中，藉由溶解紅血球及例如藉由經由PERCOLL ^TM梯度離心或藉由逆流離心淘析耗盡單核球來自周邊血液淋巴細胞分離T細胞。

在另一態樣中，腫瘤浸潤性細胞(TIL)例如藉由經碎斷、分割或酶消化之腫瘤活檢體或團塊自腫瘤分離及/或擴增。

T細胞之特異性亞群，諸如CD3+、CD28+、CD4+、CD8+、CD45RA+及CD45RO+T細胞可藉由正選擇或負選擇技術進一步分離。舉例而言，在一個態樣中，T細胞係藉由與抗CD3/抗CD28結合之珠粒(諸如DYNABEADS® M-450 CD3/CD28 T)一起培育足以正向選擇所需T細胞的時間段來分離。在一個態樣中，該時間段為約30分鐘。在另一態樣中，該時間段在30分鐘至36小時或更長及其間所有整數值範圍內。在另一態樣中，該時間段為至少1、2、3、4、5或6小時。在又一較佳態樣中，該時間段為10至24小時。在一個態樣中，培育時間段為24小時。在相比於其他細胞類型存在極少T細胞之任何情況下可使用較長培育時間分離T細胞，諸如自腫瘤組織或免疫功能不全個體分離腫瘤浸潤淋巴細胞(TIL)。另外，使用較長培育時間可提高捕捉CD8+ T細胞之效率。因此，藉由簡單縮短或延長時間使T細胞結合於CD3/CD28珠粒及/或藉由增加或降低珠粒與T細胞之比率(如本文進一步描述)，對於或針對在培養起始時或在該方法期間之其他時間點可優先選擇T細胞之亞群。另外，藉由增加或降低珠粒或其他表面上抗CD3及/或抗CD28抗體之比率，對於或針對在培養起始時或在其他所要時間點可優先選擇T細胞之亞群。熟習此項技術者將認識到在本發明之背景下亦可使用多輪選擇。在某些態樣中，可能需要進行選擇程序且在活化及擴展過程中使用「未經選擇之」細胞。「未經選擇之」細胞亦可經受其他多輪選擇。

藉由負選擇增濃T細胞群體可使用針對負選擇之細胞所獨特之表面標記的抗體之組合來實現。一種方法為經由負磁性免疫黏附或流動式細胞測量術分選及/或選擇細胞，該負磁性免疫黏附或流動式細胞測量術使用針對負選擇細胞上存在之細胞表面標記之單株抗體混合物。舉例而言，為了藉由負選擇使CD4+細胞富集，單株抗體混合物通常包括針對CD14、CD20、CD16、HLA-DR及CD8之抗體。在某些態樣中，可能需要富集或正選擇通常表現CD4+、CD25+、CD62Lhi、GITR+、CD137、PD1、TIM3、LAG-3、CD150及FoxP3+之調節性T細胞。或者，在某些態樣中，藉由抗C25結合之珠粒或其他類似選擇方法耗盡T調節細胞。

本文所述之方法可以包括例如使用例如負向選擇技術(例如本文所述)選擇特定的免疫效應細胞亞群，例如，作為T調控細胞耗乏群體之T細胞、CD25+耗乏細胞。較佳地，調節性耗乏T細胞群體含有少於30%、25%、20%、15%、10%、5%、4%、3%、2%、1%之CD25+細胞。

可藉由正選擇技術富集特異性結合至目標抗原之嵌合蛋白質效應細胞的特定亞群。舉例而言，在一些實施例中，效應細胞係藉由與目標抗原結合之珠粒一起培育足以正選擇所需abTCR效應細胞之時間段來進行富集。在一些實施例中，該時間段為約30分鐘。在一些實施例中，時段在30分鐘至36小時或更長(包括此等值之間的所有範圍)的範圍內。在一些實施例中，該時間段為至少一、2、3、4、5或6小時。在一些實施例中，該時間段為10至24小時。在一些實施例中，培育時間段為24小時。關於異質性細胞群體中以低含量存在之效應細胞之分離，使用較長培育時間(諸如24小時)可提高細胞產量。在任何相較於其他細胞類型存在較少效應細胞的情形中可使用較長培育時間分離效應細胞。熟習此項技術者將認識到在本發明之背景下亦可使用多輪選擇。

用於刺激的T細胞亦可在洗滌步驟後加以冷凍。在移除血漿及血小板之洗滌步驟後，細胞可懸浮於冷凍溶液中。儘管許多冷凍溶液及參數為此項技術中已知且將適用於此情形，但一種方法涉及使用含有20% DMSO及8%人類血清白蛋白之PBS，或含有10%聚葡萄糖40及5%右旋糖、20%人類血清白蛋白及7.5% DMSO，或31.25% Plasmalyte-A、31.25%右旋糖5%、0.45% NaCl、10%聚葡萄糖40及5%右旋糖、20%人類血清白蛋白及7.5% DMSO之培養基或含有例如Hespan及PlasmaLyte A之其他適合細胞冷凍培養基，細胞接著在每分鐘1°之速率下冷凍至-80℃且以氣相儲存於液氮儲存槽中。可使用受控冷凍以及在-20℃下或在液氮中不受控立即冷凍之其他方法。

在本文所描述之實施例中，免疫效應細胞可為同種異體免疫效應細胞，例如T細胞或NK細胞。

本文所描述之T細胞可例如經工程改造以使其不在其表面上表現功能性HLA。舉例而言，本文所述之T細胞可經工程改造以使得HLA (例如HLA 1類及/或HLAII類)之細胞表面表現下調。在一些態樣中，HLA下調可藉由減少或消除β-2微球蛋白(B2M)之表現來實現。

在一些實施例中，T細胞可缺乏功能性TCR及功能性HLA，例如I類HLA及/或II類HLA。缺乏功能性TCR及/或HLA表現之經修飾T細胞可藉由任何適合方式獲得，包括一或多個TCR或HLA次單元之基因剔除或阻斷基因表現。舉例而言，T細胞可包括使用siRNA、shRNA、叢集規律性間隔之短回文重複序列(CRISPR)、轉錄活化因子樣效應核酸酶(TALEN)或鋅指核酸內切酶(ZFN)阻斷TCR及/或HLA之基因表現。

在一些實施例中，同種異體細胞可為不表現或以低含量表現抑制分子之細胞，例如藉由本文所描述之任何方法工程化之細胞。舉例而言，細胞可為不表現或以低含量表現抑制性分子之細胞，該抑制性分子例如可降低表現嵌合蛋白質之細胞建立免疫效應反應之能力。抑制性分子之實例包括PD1、PD-L1、PD-L2、CTLA4、TIM3、CEACAM (例如，CEACAM-1、CEACAM-3及/或CEACAM-5)、LAG3、VISTA、BTLA、TIGIT、LAIR1、CD160、2B4、CD80、CD86、B7-H3 (CD276)、B7-H4 (VTCN1)、HVEM (TNFRSF14或CD270)、KIR、A2aR、MHC I類、MHC II類、Gal9、腺苷及TGFR β。抑制性分子之抑制，例如在DNA、RNA或蛋白質含量上之抑制，可使表現CAR之細胞的效能最佳。在實施例中，可使用例如如本文所描述之抑制性核酸(例如抑制性核酸，例如dsRNA，例如siRNA或shRNA)、叢集規律性間隔之短回文重複序列(CRISPR)、轉錄活化因子樣效應核酸酶(TALEN)或鋅指核酸內切酶(ZFN)。

T細胞通常可使用如以下文獻中所述之方法活化及擴增：例如美國專利6,352,694；6,534,055；6,905,680；6,692,964；5,858,358；6,887,466；6,905,681；7,144,575；7,067,318；7,172,869；7,232,566；7,175,843；5,883,223；6,905,874；6,797,514；6,867,041；及美國專利申請公開案第20060121005號。

一般而言，本發明之T細胞可以藉由與表面接觸來擴增，該表面連接有刺激CD3/TCR複合物相關訊號的藥劑及刺激T細胞表面上之共刺激分子的配位體。特定言之，T細胞群可如本文所描述刺激，諸如藉由與抗CD3抗體或其抗原結合片段、或固定於表面上之抗CD2抗體接觸，或藉由與蛋白激酶C活化因子(例如，苔蘚蟲素)以及鈣離子載體接觸。為了共刺激T細胞表面上之輔助分子，使用結合輔助分子之配位體。舉例而言，可使T細胞群體與抗CD3抗體及抗CD28抗體在適於刺激T細胞增殖之條件下接觸。為了刺激CD4+ T細胞或CD8+ T細胞之增殖，可使用抗CD3抗體及抗CD28抗體。抗CD28抗體之實例包括9.3、B-T3、XR-CD28 (Diaclone, Besançon, France)，可按此項技術中通常已知之其他方法使用(Berg等人, Transplant Proc. 30(8):3975-3977, 1998；Haanen等人, J. Exp. Med. 190(9):13191328, 1999；Garland等人, J. Immunol Meth. 227(1-2):53-63, 1999)。

在一些實施例中，擴增可使用燒瓶或容器或熟習此項技術者已知之透氣容器進行且可進行持續7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天或14天、約7天至約14天、約8天至約14天、約9天至約14天、約10天至約14天、約11天至約14天、約12天至約14天或約13天至約14天。在一些實施例中，第二次TIL擴增可進行約14天。

在一些實施例中，擴增可在介白素-2 (IL-2)或介白素-15 (IL-15)存在下使用非特異性T細胞受體刺激進行。非特異性T細胞受體刺激物可包括例如抗CD3抗體，諸如約30 ng/ml OKT3、小鼠單株抗CD3抗體(可購自Ortho-McNeil, Raritan, N.J.或Miltenyi Biotech, Auburn, Calif.)或UHCT-1 (可購自BioLegend, San Diego, Calif., USA)。嵌合蛋白質細胞可藉由包括一或多個抗原，包括其抗原部分，諸如癌症之抗原決定基而活體外擴增，其可視情況由載體表現，諸如人類白血球抗原A2 (HLA-A2)結合肽，例如0.3 .mu.M MART-1:26-35 (27L)或gpl00:209-217 (210M)，視情況在T細胞生長因子，諸如300 IU/mL IL-2或IL-15存在下。其他適合之抗原可包括例如NY-ESO-1、TRP-1、TRP-2、酪胺酸酶癌症抗原、MAGE-A3、SSX-2及VEGFR2或其抗原部分。嵌合蛋白質細胞亦可藉由用脈衝至表現HLA-A2之抗原呈現細胞上的相同癌症抗原再刺激而快速擴增。或者，嵌合蛋白質細胞可進一步用例如實例經輻射之自體淋巴球或用經輻射之HLA-A2+同種異體淋巴球及IL-2刺激。在一些實施例中，刺激作為擴增之部分發生。在一些實施例中，擴增在經輻射之自體淋巴球或經輻射之HLA-A2+同種異體淋巴球及IL-2存在下發生。

在一些實施例中，細胞培養基包含IL-2。在一些實施例中，細胞培養基包含IL-2之約1000 IU/mL、約1500 IU/mL、約2000 IU/mL、約2500 IU/mL、約3000 IU/mL、約3500 IU/mL、約4000 IU/mL、約4500 IU/mL、約5000 IU/mL、約5500 IU/mL、約6000 IU/mL、約6500 IU/mL、約7000 IU/mL、約7500 IU/mL或約8000 IU/mL或在1000與2000 IU/mL之間、在2000與3000 IU/mL之間、在3000與4000 IU/mL之間、在4000與5000 IU/mL之間、在5000與6000 IU/mL之間、在6000與7000 IU/mL之間、在7000與8000 IU/mL之間或在8000 IU/mL之間。

在一些實施例中，細胞培養基包含OKT3抗體。在一些實施例中，細胞培養基包含約0.1 ng/mL、約0.5 ng/mL、約1 ng/mL、約2.5 ng/mL、約5 ng/mL、約7.5 ng/mL、約10 ng/mL、約15 ng/mL、約20 ng/mL、約25 ng/mL、約30 ng/mL、約35 ng/mL、約40 ng/mL、約50 ng/mL、約60 ng/mL、約70 ng/mL、約80 ng/mL、約90 ng/mL、約100 ng/mL、約200 ng/mL、約500 ng/mL、約1 μg/mL、或介於0.1 ng/mL與1 ng/mL之間、介於1 ng/mL與5 ng/mL之間、介於5 ng/mL與10 ng/mL之間、介於10 ng/mL與20 ng/mL之間、介於20 ng/mL與30 ng/mL之間、介於30 ng/mL與40 ng/mL之間、介於40 ng/mL與50 ng/mL之間、或介於50 ng/mL與100 ng/mL之間的OKT3抗體。

在一些實施例中，使用IL-2、IL-7、IL-15及/或IL-21之組合作為第一擴增期間之組合。在一些實施例中，在擴增期間可包括IL-2、IL-7、IL-15及/或IL-21以及其任何組合。在一些實施例中，採用IL-2、IL-15及IL-21之組合作為在擴增期間之組合。在一些實施例中，可包括IL-2、IL-15及IL-21以及其任何組合。

在一些實施例中，第二擴增可在包含IL-2、OKT-3及抗原呈現飼養細胞之補充細胞培養基中進行。

在一些實施例中，擴增培養基包含約500 IU/mL之IL-15、約400 IU/mL之IL-15、約300 IU/mL之IL-15、約200 IU/mL之IL-15、約180 IU/mL之IL-15、約160 IU/mL之IL-15、約140 IU/mL之IL-15、約120 IU/mL之IL-15、或約100 IU/mL之IL-15、或約500 IU/mL之IL-15至約100 IU/mL之IL-15、或約400 IU/mL之IL-15至約100 IU/mL之IL-15、或約300 IU/mL之IL-15至約100 IU/mL之IL-15或約200 IU/mL之IL-15、或約180 IU/mL之IL-15。

在一些實施例中，擴增培養基包含約20 IU/mL之IL-21、約15 IU/mL之IL-21、約12 IU/mL之IL-21、約10 IU/mL之IL-21、約5 IU/mL之IL-21、約4 IU/mL之IL-21、約3 IU/mL之IL-21、約2 IU/mL之IL-21、約1 IU/mL之IL-21、或約0.5 IU/mL之IL-21、或約20 IU/mL之IL-21至約0.5 IU/mL之IL-21、或約15 IU/mL之IL-21至約0.5 IU/mL之IL-21、或約12 IU/mL之IL-21至約0.5 IU/mL之IL-21、或約10 IU/mL之IL-21至約0.5 IU/mL之IL-21、或約5 IU/mL之IL-21至約1 IU/mL之IL-21、或約2 IU/mL之IL-21。在一些實施例中，細胞培養基包含約1 IU/mL之IL-21或約0.5 IU/mL之IL-21。

在一些實施例中，抗原呈現飼養細胞(APC)為PBMC。在一個實施例中，擴增中嵌合蛋白質細胞與PBMC及/或抗原呈遞細胞之比率為約1至25、約1至50、約1至100、約1至125、約1至150、約1至175、約1至200、約1至225、約1至250、約1至275、約1至300、約1至325、約1至350、約1至375、約1至400、或約1至500、或1至50與1至300之間、或1至100與1至200之間。

在某些態樣中，T細胞之主要刺激訊號及協同刺激訊號可藉由不同方案提供。舉例而言，提供各訊號之試劑可在溶液中或偶合至表面。當偶合至表面時，試劑可偶合至同一表面(亦即，以「順式」形式)或偶合至獨立表面(亦即，以「反式」形式)。或者，一種試劑可偶合至表面且另一試劑在溶液中。在一個態樣中，提供協同刺激訊號之試劑結合至細胞表面且提供主要活化訊號之試劑在溶液中或偶合至表面。在某些態樣中，兩種試劑均可在溶液中。在一個態樣中，該等試劑可為可溶性形式，且隨後交聯至表面(諸如表現Fc受體之細胞或抗體或將與該等試劑結合之其他結合劑)。就此而言，關於預期在本發明中用於活化及擴增T細胞之人工抗原呈現細胞(aAPC)，參見例如美國專利申請公開案第20040101519號及第20060034810號。

在一態樣中，兩種試劑固定於珠粒上，在同一珠粒上，亦即「順」；或在獨立珠粒上，亦即「反」。舉例而言，提供一級活化訊號之試劑為抗CD3抗體或其抗原結合片段且提供協同刺激訊號之試劑為抗CD28抗體或其抗原結合片段；且兩種試劑以等效分子量共同固定於同一珠粒。在一個態樣中，使用結合於用於CD4+ T細胞擴展及T細胞生長之珠粒的1:1比率之各抗體。在本發明之某些態樣中，使用一定比率之結合於珠粒之抗CD3:CD28抗體，使得觀測到T細胞擴增相較於使用1:1比率所觀測到的擴增增加。在一個特定態樣中，相較於使用1:1比率觀測到之擴增而言觀測到約1倍至約3倍之增加。在一個態樣中，結合至珠粒之CD3:CD28抗體的比率在100:1到1:100及其間的所有整數值範圍內。在本發明之一個態樣中，結合至粒子的抗CD28抗體比抗CD3抗體多，亦即，CD3:CD28比率小於一。在本發明之某些態樣中，結合於珠粒的抗CD28抗體比抗CD3抗體之比率大於2:1。在一個特定態樣中，使用1:100 CD3:CD28比率的結合於珠粒之抗體。在一個態樣中，使用1:75之結合於珠粒的CD3:CD28抗體比率。在另一態樣中，使用1:50之結合於珠粒的抗體CD3:CD28比率。在一個態樣中，使用1:30之結合至珠粒的CD3:CD28抗體比率。在一個較佳態樣中，使用1:10之結合於珠粒的抗體CD3:CD28比率。在一態樣中，使用1:3之結合於珠粒的抗體CD3:CD28比率。在又一個態樣中，使用3:1之結合於珠粒的抗體CD3:CD28比率。

可使用1:500至500:1及其間之任何整數值的粒子與細胞之比率刺激T細胞或其他靶細胞。如一般技術者可容易瞭解，粒子與細胞之比率可視相對於靶細胞之粒徑而定。舉例而言，小型珠粒可僅結合少數細胞，而較大珠粒可結合許多細胞。在某些態樣中，細胞比粒子之比率在1:100至100:1及其間之任何整數值範圍內且在其他態樣中，包含1:9至9:1及其間之任何整數值的比率亦可用於刺激T細胞。引起T細胞刺激之抗CD3及抗CD28-耦合粒子與T細胞之比率可如上所指出變化，然而，某些較佳值包括1:100、1:50、1:40、1:30、1:20、1:10、1:9、1:8、1:7、1:6、1:5、1:4、1:3、1:2、1:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1及15:1，其中一種較佳比率為至少1:1個粒子/T細胞。在一個態樣中，使用1:1或更低的粒子比細胞之比率。在一個特定態樣中，較佳之粒子:細胞比率為1:5。在其他態樣中，粒子與細胞之比率可視刺激日子而變化。舉例而言，在一個態樣中，粒子與細胞之比率在第一天為1:1至10:1，且其後每天或每隔一天向細胞添加額外粒子長達10天，最終比率為1:1至1:10 (以添加當天之細胞計數計)。在一個特定態樣中，粒子與細胞之比率在刺激第一天為1:1且在刺激第三天及第五天調整至1:5。在一個態樣中，在每天或每隔一天基礎上添加粒子直至第一天的最終比率為1:1，且刺激第三天及第五天為1:5。在一個態樣中，粒子與細胞之比率在刺激第一天為2:1且在刺激第三天及第五天調整至1:10。在一個態樣中，在每天或每隔一天基礎上添加粒子直至最終比率在第一天為1:1，且在刺激第三天及第五天為1:10。熟習此項技術者將瞭解多種其他比率可適於本發明。特定言之，比率將視粒度及細胞尺寸及類型而變化。在一態樣中，第一天使用之最典型比率為約1:1、2:1及3:1。

在本發明之其他態樣中，細胞(諸如T細胞)與試劑塗佈之珠粒組合，隨後分離珠粒與細胞，且隨後培養細胞。在替代態樣中，在培養之前，經試劑塗佈之珠粒及細胞不分離，而是一起培養。在另一態樣中，珠粒及細胞首先藉由施加力(諸如磁力)集中，導致細胞表面標記之接合增加，進而誘導細胞刺激。

基於病毒及非病毒之遺傳工程化工具可用於產生嵌合蛋白質細胞，其包括(但不限於)引起治療性基因之永久或短暫表現的T細胞、NK細胞。基於反轉錄病毒之基因遞送為成熟的充分表徵技術，其已用於將CAR永久地整合至宿主細胞基因體中(Scholler J., 例如Decade-long safety and function of retroviral-modified chimeric antigen receptor T cells. Sci. Transl. Med. 2012;4:132ra53; Rosenberg S.A.等人, Gene transfer into humans—immunotherapy of patients with advanced melanoma, using tumor-infiltrating lymphocytes modified by retroviral gene transduction. N. Engl. J. Med. 1990;323:570-578)

亦可使用非病毒DNA轉染方法。舉例而言，Singh等人描述使用經開發用於對CAR T細胞進行工程化之睡美人(SB)轉座子系統(Singh H.等人，Redirecting specificity of T-cell populations for CD19 using the Sleeping Beauty system. Cancer Res. 2008;68:2961-2971)且用於臨床試驗中(參見例如，Clinical Trials.gov: NCT00968760及NCT01653717)。相同技術適用於對嵌合蛋白質細胞進行工程化。

已使用多種SB酶遞送轉基因。Mátés描述高度活化轉座酶(SB100X)，其中當與第一代轉座酶相比時效率增強約100倍。SB100X支援造血幹細胞或前驅細胞中富集之人類CD34(+)細胞中之35-50%穩定的基因轉移。(Mátés L.等人, Molecular evolution of a novel hyperactive Sleeping Beauty transposase enables robust stable gene transfer in vertebrates. Nat. Genet. 2009;41:753-761)且多個轉殖基因可自多順反子單個質體(例如，Thokala R.等人., Redirecting specificity of T cells using the Sleeping Beauty system to express chimeric antigen receptors by mix-and-matching of VL and VH domains targeting cD123+ tumors. PLoS ONE. 2016;11:e0159477)或多個質體(例如，Hurton L.V.等人, Tethered IL-15 augments antitumor activity and promotes a stem-cell memory subset in tumor-specific T cells. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2016;113:E7788-E7797)遞送。此類系統與本發明之嵌合蛋白質一起使用。

Morita等人描述piggyBac轉座子系統以整合較大轉殖基因(Morita D.等人, Enhanced expression of anti-CD19 chimeric antigen receptor in piggyBactransposon-engineered T cells. Mol. Ther. Methods Clin. Dev. 2017;8:131-140) Nakazawa等人描述使用該系統產生表現HER2特異性嵌合抗原受體之EBV-特異性細胞毒性T細胞(Nakazawa Y等人, PiggyBac-mediated cancer immunotherapy using EBV-specific cytotoxic T-cells expressing HER2-specific chimeric antigen receptor. Mol. Ther. 2011;19:2133-2143)。Manuri等人使用該系統產生CD-19特異性T細胞(Manuri P.V.R.等人, piggyBac transposon/transposase system to generate CD19-specific T cells for the treatment of B-lineage malignancies. Hum. Gene Ther. 2010;21:427-437)。

轉座子技術為容易且經濟的。一個潛在缺點為當前採用之較長擴增方案可能引起T細胞分化、減弱之活性及輸注細胞之不良持久性。Monjezi等人描述研發微型環載體，其經由較高效率整合使此等困難降至最低(Monjezi R.等人, Enhanced CAR T-cell engineering using non-viral Sleeping Beauty transposition from minicircle vectors. Leukemia. 2017;31:186-194)。此等轉座子技術可用於本發明之嵌合蛋白質。

本發明亦關於一種醫藥組合物，其含有表現本發明之細胞的載體或嵌合蛋白質以及醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑，及視情況一或多個其他醫藥學上活性之多肽及/或化合物。

在一些實施例中，提供包含上文所描述之嵌合蛋白質及醫藥學上可接受之載劑的醫藥組合物。在一些實施例中，提供一種醫藥組合物，其包含編碼根據上文所描述之實施例中之任一者之嵌合蛋白質的核酸及醫藥學上可接受之載劑。在一些實施例中，提供一種醫藥組合物，其包含表現上文所描述之嵌合蛋白質之效應細胞及醫藥學上可接受之載劑。此類調配物可例如呈適合於靜脈內輸注之形式。

如本文所用，「醫藥學上可接受」或「藥理學相容性」意謂在生物學上或在其他方面無不良影響之材料，亦即，該材料可併入投與患者之醫藥組合物中而不會引起任何顯著不良生物學效應或以有害方式與含有其之組合物中的任何其他組分相互作用。醫藥學上可接受之載劑或賦形劑較佳滿足毒理學及製造測試之必需標準及/或包括於美國食品藥物管理局(U.S. Food and Drug administration)制定之非活性成分指南(Inactive Ingredient Guide)中。

本發明之一態樣提供表現重組嵌合蛋白質之經修飾T細胞群體。適合群體可藉由上文所描述之方法產生。

經修飾之T細胞群體可用作藥劑。舉例而言，如本文所描述之經修飾T細胞群體可用於癌症免疫療法，例如過繼性T細胞療法中。

本發明之其他態樣提供如本文所描述之經修飾T細胞群體用於製造供治療癌症用之藥劑的用途，如本文所描述之經修飾T細胞群體用於治療癌症，且治療癌症之方法可包含向有需要之個體投與如本文所描述之經修飾T細胞群體。

經修飾T細胞群體可為自體性的，亦即，經修飾T細胞最初自其隨後投與其之相同個體獲得(亦即，供體及受體個體相同)。適用於向個體投與之經修飾T細胞群體可藉由以下方法產生：其包含提供獲自個體之初始T細胞群體；修飾T細胞以表現個體中之cAMP PDE或其片段及特異性結合至癌細胞之抗原受體；及培養經修飾T細胞。

經修飾T細胞群體可為同種異體的，亦即經修飾T細胞最初自其隨後投與其之不同個體獲得(亦即，供體及受體個體不同)。供體及受體個體可為HLA匹配的，以避免GVHD及其他不合需要之免疫效應。適合投與受體個體之經修飾T細胞群體可藉由包含以下之方法產生：提供獲自供體個體之初始T細胞群體，修飾T細胞以表現特異性結合至受體個體中之癌細胞之嵌合蛋白質，且培養經修飾T細胞。

在投與經修飾T細胞之後，受體個體可展現出針對受體個體中之癌細胞的T細胞介導之免疫反應。此可對個體中之癌症病狀具有有益作用。

癌症病狀的特徵可在於惡性癌細胞之異常增殖且可包括白血病，諸如AML、CML、ALL及CLL；淋巴瘤，諸如霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤及多發性骨髓瘤；及實體癌，諸如肉瘤、皮膚癌、黑色素瘤、膀胱癌、腦癌、乳癌、子宮癌、卵巢癌、前列腺癌、肺癌、大腸直腸癌、子宮頸癌、肝癌、頭頸癌、食道癌、胰臟癌、腎癌、腎上腺癌、胃癌、睪丸癌、膽囊及膽道癌、甲狀腺癌、胸腺癌、骨癌、腦癌以及未知原發性癌症(CUP)。

個體內之癌細胞可與個體中之正常體細胞在免疫學上不同(亦即，癌性腫瘤可為免疫原性的)。舉例而言，癌細胞可能能夠在個體中誘發針對癌細胞所表現之一或多個抗原的全身性免疫反應。引發免疫反應之腫瘤抗原可對癌細胞具有特異性或可由個體中之一或多個正常細胞共有。

適用於如上文所描述之治療的個體可為哺乳動物，諸如嚙齒動物(例如，天竺鼠、倉鼠、大鼠、小鼠)、鼠類(例如，小鼠)、犬類(例如，犬)、貓類(例如，貓)、馬類(例如，馬)、靈長類動物、猿猴(例如，猴或猿)、猴(例如，狨猴、狒狒)、猿(例如，大猩猩、黑猩猩、紅毛猩猩、長臂猿)或人類。

在較佳實施例中，個體為人類。在其他較佳實施例中，可採用非人類哺乳動物，尤其習知地用作在人類(例如鼠類、靈長類動物、豬、犬或兔動物)中展現出治療功效之模型的哺乳動物。

術語「治療有效量」係指如本文所揭示之嵌合蛋白質或包含嵌合蛋白質之組合物有效治療個體之疾病或病症的量。在癌症之情況下，如本文所揭示之嵌合蛋白質或包含嵌合蛋白質之組合物的治療有效量可降低癌細胞之數目；減小腫瘤尺寸或重量；抑制(亦即，在一定程度上減緩且較佳阻止)癌細胞浸潤至周邊器官中；抑制(亦即，在一定程度上減緩且較佳阻止)腫瘤轉移；在一定程度上抑制腫瘤生長；及/或在一定程度上緩解一或多種與癌症相關之症狀。在如本文所揭示之嵌合蛋白質或包含嵌合蛋白質之組合物可阻止生長及/或殺死現有癌細胞之程度上，其可為細胞生長抑制及/或細胞毒性的。在一些實施例中，治療有效量為生長抑制量。在一些實施例中，治療有效量為改良患者之無進展存活期的量。在諸如病毒感染之感染性疾病之情況下，如本文所揭示之嵌合蛋白質或包含嵌合蛋白質之組合物的治療有效量可降低受病原體感染之細胞的數目；降低病原體衍生之抗原產生或釋放；抑制(亦即，在一定程度上減緩且較佳阻止)病原體擴散至未感染細胞；及/或在一定程度上緩解與感染相關之一或多種症狀。在一些實施例中，治療有效量為延長患者存活期之量。

用於本發明之方法中的表現嵌合蛋白質之細胞，包括T細胞及NK細胞，可自患者之自身周邊血液(自體性)活體外產生，或在自供體外周血液(同種異體)之造血幹細胞移植設備或自未連接供體(同種異體)之外周血液設備建立。或者，T細胞或NK細胞可衍生自誘導性前驅細胞或胚胎前驅細胞向T細胞或NK細胞之活體內分化。在此等情況下，表現嵌合蛋白質及視情況CAR及/或TCR之T細胞藉由引入編碼嵌合蛋白質及視情況CAR及/或TCR之DNA或RNA，藉由包括用病毒載體轉導、用DNA或RNA轉染之許多方式中之一者產生。

表現本發明之嵌合蛋白質及視情況表現TCR及/或CAR之T細胞或NK細胞可用於治療血液癌或實體腫瘤。

用於治療疾病之方法係關於本發明之載體或細胞(包括T或NK細胞)之治療用途。就此而言，載體或T細胞或NK細胞可投與患有現有疾病或病狀之個體以便減輕、降低或改善至少一種與疾病相關之症狀及/或減緩、降低或阻斷疾病進展。本發明之方法可引起或促進T細胞介導之癌細胞殺傷。根據本發明之載體或T細胞或NK細胞可與一或多種額外治療劑一起投與患者。一或多種另外的治療劑可共投與患者。「共投與」意謂在時間上足夠接近地投與一或多種另外治療劑及本發明之載體或T或NK細胞以使得載體或T或NK細胞可增強一或多種另外治療劑之作用，或反之亦然。就此而言，首先可投與載體或細胞，且其次可投與一或多種額外治療劑，或反之亦然。或者，載體或細胞及一或多種另外治療劑可同時投與。可能適用的一種共投與治療劑為IL-2，因為其當前用於現有細胞療法中以加強所投與細胞之活性。然而，IL-2治療與毒性及耐受性問題相關。

在一些實施例中，向個體添加經工程化蛋白質誘導細胞介素分泌。在一些實施例中，向個體添加CoStAR誘導細胞介素分泌。在一些實施例中，細胞介素分泌降低個體中之細胞介素含量，包括(但不限於) IL-2。在一些實施例中，CoStAR暴露後之細胞介素分泌引起個體中之不可偵測的IL-2。在一些實施例中，向個體添加經工程化蛋白質降低或消除對投與外源性IL-2之需求。在一些實施例中，向個體添加CoStAR降低或消除對投與外源性IL-2之需求。

在一些實施例中，除CoStAR之直接作用以外，其他作用機制涉及腫瘤細胞之殺傷。在一些實施例中，評估細胞介素之分泌及/或增殖。在一些實施例中，腫瘤細胞殺傷效能藉由流式細胞量測術表徵，以計數T細胞及目標細胞以及基於盤之螢光或發光，以量測殺傷百分比。在一些實施例中，細胞介素分泌效能在單一細胞含量下藉由流式細胞量測術及ELISA/MSD表徵以表徵群體。在一些實施例中，增殖效能藉由流式細胞量測術確定以表徵群體。在一些實施例中，TIL效能可藉由額外分析物、記憶表型、使用細胞株之細胞毒性、使用患者特異性腫瘤之細胞毒性、細胞介素小組、細胞增殖及/或細胞組成來確定。

如所提及，為向患者投與，嵌合蛋白質效應細胞可為患者同種異體或自體性的。在一些實施例中，同種異體細胞進一步經遺傳修飾，例如藉由基因編輯，以便最小化或預防GVHD及/或患者針對嵌合蛋白質細胞之免疫反應。

嵌合蛋白質效應細胞用於治療與目標抗原相關之癌症及贅生性疾病。可使用本文所描述之方法中的任一者治療之癌症及贅生性疾病包括未血管化或尚未實質上血管化之腫瘤，以及血管化腫瘤。癌症可包含非實體腫瘤(諸如血液腫瘤，例如白血病及淋巴瘤)或可包含實體腫瘤。意御用本發明之嵌合蛋白質效應細胞治療之癌症的類型包括(但不限於)癌瘤、母細胞瘤及肉瘤，以及某些白血病或淋巴惡性病、良性與惡性腫瘤及例如肉瘤、癌瘤與黑色素瘤之惡性病。成人腫瘤/癌症及兒科腫瘤/癌症亦包括在內。

血液癌為血液或骨髓之癌症。血液(或血性)癌之實例包括白血病，包括急性白血病(如急性淋巴球性白血病、急性骨髓細胞性白血病、急性骨髓性白血病及骨髓母細胞性、前髓細胞性、骨髓單核球性、單核球性及紅白血病)、慢性白血病(如慢性骨髓細胞性(粒細胞性)白血病、慢性骨髓性白血病及慢性淋巴球性白血病)、真性紅血球增多症、淋巴瘤、霍奇金氏病(Hodgkin's disease)、非霍奇金氏淋巴瘤(頑固性及高級形式)、多發性骨髓瘤、瓦爾登斯特倫氏巨球蛋白血症(Waldenstrom's macroglobulinemia)、重鏈病、骨髓發育不良症候群、毛細胞白血病及骨髓發育不良。

實體腫瘤為通常不含有囊腫或液體區域之異常組織塊體。實體腫瘤可為良性或惡性的。不同類型的實體腫瘤關於形成其之細胞類型命名(諸如肉瘤、癌瘤及淋巴瘤)。實體腫瘤，諸如肉瘤及癌瘤之實例包括腎上腺皮質癌、膽管癌、纖維肉瘤、黏液肉瘤、脂肪肉瘤、軟骨肉瘤、骨肉瘤及其他肉瘤、滑膜瘤、間皮瘤、尤文氏腫瘤、平滑肌肉瘤、橫紋肌肉瘤、大腸癌瘤、胃癌、淋巴惡性疾病、胰臟癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、前列腺癌、肝細胞癌、鱗狀細胞癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、甲狀腺癌(例如，甲狀腺髓樣癌及乳頭狀甲狀腺癌)、嗜鉻細胞瘤皮脂腺癌、乳頭狀癌、乳頭狀腺癌、髓性癌、支氣管癌、腎細胞癌、肝癌、膽管癌、絨毛膜癌、威耳姆士腫瘤、子宮頸癌(例如，子宮頸癌及創傷前子宮頸發育不良)、大腸直腸癌、肛門、肛管或肛腸癌症、陰道癌、外陰癌症(例如，鱗狀細胞癌、上皮內癌、腺癌及纖維肉瘤)、陰莖癌、口咽癌、食道癌、頭癌(例如，鱗狀細胞癌)、頸癌(例如，鱗狀細胞癌)、睪丸癌(例如，精原細胞瘤、畸胎瘤、胚胎性癌、畸胎癌、絨毛膜癌、肉瘤、萊迪希氏細胞腫瘤、纖維瘤、纖維腺瘤、腺瘤樣腫瘤及脂肪瘤)、膀胱癌、腎癌、黑色素瘤、子宮癌症(例如，子宮內膜癌)、尿道上皮癌(例如，鱗狀細胞癌、移行細胞癌、腺癌、尿管癌症及膀胱癌症)及CNS腫瘤(諸如神經膠質瘤(諸如腦幹神經膠質瘤及混合神經膠質瘤)、神經膠母細胞瘤(亦稱為多形性膠質母細胞瘤)星形細胞瘤、CNS淋巴瘤、胚細胞瘤、神經管胚細胞瘤、神經鞘瘤顱咽管瘤、室管膜瘤、松果體瘤、血管母細胞瘤、聽神經瘤、少突神經膠質瘤、腦膜瘤、神經母細胞瘤、視網膜母細胞瘤及腦轉移瘤)。

當指示「免疫有效量」、「抗腫瘤有效量」、「腫瘤抑制有效量」或「治療量」時，意欲投與之本發明組合物之精確量可由醫師考慮個體之年齡、體重、腫瘤大小、感染或轉移程度及患者(個體)條件的差異來決定。一般可規定包含本文所描述之T細胞之醫藥組合物可以10 ⁴至10 ⁹個細胞/公斤體重，在一些情況下10 ⁵至10 ⁶個細胞/公斤體重(包括彼等範圍內之全部整數值)之劑量投與。T細胞組合物亦可以此等劑量多次投與。細胞可藉由使用免疫療法中通常已知之輸注技術投與(參見例如Rosenberg等人, New Eng. J. of Med. 319:1676, 1988)。

本文所描述之表現嵌合蛋白質之細胞可與其他已知藥劑及療法組合使用。如本文中所使用，「組合」投與意謂在個體受病症折磨之病程期間向個體遞送兩種(或更多種)不同治療，例如，在個體已被確診患有病症之後及在病症治癒或消除或出於其他原因治療停止之前，遞送兩種或更多種治療。在一些實施例中，當開始遞送第二治療時，第一治療之遞送仍存在以使得在投與方面存在重疊。此在本文中有時稱為「同時」或「並行遞送」。在其他實施例中，一種治療之遞送在另一種治療遞送開始之前結束。在任一情況之一些實施例中，療法由於組合投藥而更有效。舉例而言，相較於在第一治療不存在下投與第二治療將可見，第二治療更有效，例如使用較少第二治療即可見同等效果，或第二治療減輕症狀達更大程度，或對於第一治療可見類似情況。在一些實施例中，遞送使得症狀減少，或與病症相關之其他參數大於一種治療在另一種治療不存在下遞送所觀測到的參數。兩種治療之作用可部分相加，完全相加或大於相加。遞送可使得所遞送之第一治療之作用在遞送第二治療時仍可偵測。

本文所描述之表現嵌合蛋白質之細胞及至少一個額外治療劑可同時、以相同或以單獨組合物形式或依序投與。對於依次投與，本文所描述之表現CAR之細胞可首先投與，且其次可投與額外試劑，或投與順序可顛倒。

嵌合蛋白質療法及/或其他治療劑、程序或儀器治療在病症活躍期期間或在疾病緩解或不太活躍期期間投與。嵌合蛋白質療法可在其他治療之前、與治療並行、治療後或在病症緩解期間投與。

當組合投與時，療法及額外藥劑(例如第二或第三藥劑)或全部可以與各藥劑例如以單一療法形式獨立使用之量或劑量相比更高、更低或相同的量或劑量投與。在一些實施例中，嵌合蛋白質療法、額外藥劑(例如，第二或第三藥劑)或全部之投與量或劑量比單獨使用，例如呈單一療法形式之各藥劑之量或劑量更低(例如，至少20%、至少30%、至少40%或至少50%)。在其他實施例中，引起所需作用(例如，治療癌症)之嵌合蛋白質療法、額外藥劑(例如，第二或第三藥劑)或全部之量或劑量比實現相同治療作用所需之各藥劑，例如以單一療法形式單獨使用之量或劑量低(例如低至少20%、至少30%、至少40%或至少50%)。

在其他態樣中，本文所描述之表現嵌合蛋白質之細胞可用於治療方案以及手術、化學療法、輻射、免疫抑制劑(諸如環孢素、硫唑嘌呤、甲胺喋呤、黴酚酸酯及FK506)、抗體或其他免疫燒蝕劑(諸如CAMPATH、抗CD3抗體或其他抗體療法、細胞毒素、氟達拉濱、環孢素、FK506、雷帕黴素、黴酚酸、類固醇、FR901228、細胞激素)及照射肽疫苗，諸如Izumoto等人2008 J Neurosurg 108:963-971中所描述之照射肽疫苗。

在某些情況下，本發明之化合物與其他治療劑組合，諸如其他抗癌劑、抗過敏劑、抗噁心劑(或抗嘔吐劑)、疼痛舒解劑、細胞保護劑及其組合。

在一個實施例中，本文所描述之表現嵌合蛋白質之細胞可與化學治療劑組合使用。例示性化學治療劑包括蒽環黴素(例如，小紅莓(doxorubicin) (例如，脂質小紅莓))、長春花生物鹼(vinca alkaloid) (例如，長春鹼(vinblastine)、長春新鹼、長春地辛(vindesine)、長春瑞濱(vinorelbine))、烷基化劑(例如，環磷醯胺、達卡巴嗪(decarbazine)、美法侖(melphalan)、異環磷醯胺、替莫唑胺(temozolomide))、免疫細胞抗體(例如，阿侖單抗(alemtuzamab)、吉妥單抗(gemtuzumab)、利妥昔單抗(rituximab)、奧法木單抗(ofatumumab)、托西莫單抗(tositumomab)、貝倫妥單抗(brentuximab))、抗代謝物(包括例如葉酸拮抗劑、嘧啶類似物、嘌呤類似物及腺苷脫胺酶抑制劑(例如，氟達拉濱))、mTOR抑制劑、TNFR糖皮質激素誘導之TNFR相關蛋白質(GITR)促效劑、蛋白酶體抑制劑(例如，阿克拉黴素A (aclacinomycin A)、膠毒素或硼替佐米(bortezomib))、免疫調節劑(諸如沙立度胺(thalidomide)或沙立度胺衍生物(例如，來那度胺(lenalidomide)))。

考慮適用於組合療法之一般化學治療劑包括白消安(Myleran®)、白消安注射液(Busulfex®)、克拉屈濱(Leustatin®)、環磷醯胺(Cytoxan®或Neosar®)、阿糖胞苷、胞嘧啶阿拉伯糖苷(Cytosar-U®)、阿糖胞苷脂質體注射液(DepoCyt®)、鹽酸道諾黴素(Cerubidine®)、道諾黴素檸檬酸鹽脂質體注射液(DaunoXome®)、地塞米松、鹽酸阿黴素(Adriamycin®、Rubex®)、依託泊苷(Vepesid®)、氟達拉賓磷酸鹽(Fludara®)、羥基尿素(Hydrea®)、艾達黴素(Idamycin®)、米托蒽醌(Novantrone®)、吉妥珠單抗奧唑米星(mylotarg®)。

在實施例中，視為適用於組合療法之通用化學治療劑包括阿那曲唑(Arimidex®)、比卡魯胺(Casodex®)、博萊黴素硫酸鹽(Blenoxane®)、白消安(Myleran®)、白消安注射液(Busulfex®)、卡培他濱(Xeloda®)、N4-戊氧基羰基-5-去氧-5-氟胞苷、卡鉑(Paraplatin®)、卡莫司汀(BiCNU®)、苯丁酸氮芥(Leukeran®)、順鉑(Platinol®)、克拉屈濱(Leustatin®)、環磷醯胺(Cytoxan®或Neosar®)、阿糖胞苷、胞嘧啶阿拉伯糖苷(Cytosar-U®)、阿糖胞苷脂質體注射液(DepoCyt®)、達卡巴嗪(DTIC- Dome®)、放線菌素(放線菌素D，Cosmegan)、鹽酸道諾黴素(Cerubidine®)、道諾黴素檸檬酸鹽脂質體注射液(DaunoXome®)、地塞米松、多西他賽(Taxotere®)、鹽酸阿黴素(Adriamycin®、Rubex®)、依託泊苷(Vepesid®)、氟達拉賓磷酸鹽(Fludara®)、5-氟尿嘧啶(Adrucil®、Efudex®)、氟他胺(Eulexin®)、替紮他濱、吉西他濱(二氟去氧胞苷)、羥基尿素(Hydrea®)、艾達黴素(Idamycin®)、異環磷醯胺(IFEX®)、伊立替康(Camptosar®)、L-天冬醯胺酶(ELSPAR®)、甲醯四氫葉酸鈣、美法侖(Alkeran®)、6-巰嘌呤(Purinethol®)、甲胺喋呤(Folex®)、米托蒽醌(Novantrone®)、麥羅塔、太平洋紫杉醇(Taxol®)、菲尼克斯(Yttrium90/MX-DTPA)、噴司他丁、具有卡莫司汀植入之聚苯丙生20 (Gliadel®)、他莫昔芬檸檬酸鹽(Nolvadex®)、替尼泊甙(Vumon®)、6-硫代鳥嘌呤、噻替派、替拉紮明(Tirazone®)、用於注射之拓樸替康鹽酸鹽(Hycamptin®)、長春鹼(Velban®)、長春新鹼(Oncovin®)及長春瑞賓(Navelbine®)。

治療可例如藉由腫瘤消退、腫瘤重量或尺寸收縮、進展時間、存活持續時間、無進展存活期、總反應率、反應持續時間、生活品質、蛋白質表現及/或活性來評估。可使用確定療法功效之方法，包括例如經由放射成像量測反應。

TCR併入式抗原不確定受體(TIAAR)

表2提供本發明之TCR併入式抗原不確定受體(TIAAR)之組分的例示性非限制性實例。表3展示組分之例示性配置。

表2 - TCR併入式抗原不確定受體(TIAAR)組分
碼	訊號肽	標籤	ECD_TMD	ICD	Costim
pIB1026	CD3D	Myc	CD3D	N/A	CD28-CD40
pIB1027	CD3E	FLAG	CD3E	N/A	CD28-CD40
pIB1028	CD3G	Myc	CD3G	N/A	CD28-CD40
pIB1029	CD3Z	Myc IC	CD3Z	N/A	CD28-CD40
pIB1030	CD8A	Myc	hTRDC	N/A	CD28-CD40
pIB1031	CD8A	FLAG	hTRGC1	N/A	CD28-CD40
pIB1032	CD8A	Myc	mTRAC	N/A	CD28-CD40
pIB1033	CD8A	FLAG	mTRBC1	N/A	CD28-CD40
pIB1046	CD8A x2	Myc及FLAG	hTRDC_hTRGC1	N/A	CD28-CD40
pIB1047	CD8A x2	Myc及FLAG	mTRAC_mTRBC1	N/A	CD28-CD40
pIB1048	CD3D及CD3E	Myc及FLAG	CD3D_CD3E	N/A	CD28-CD40
pIB1049	CD3G及CD3E	Myc及FLAG	CD3G_CD3E	N/A	CD28-CD40
pIB1050	CD3D及CD3E	Myc及FLAG	CD3D_CD3E	CD3D_CD3E	CD28-CD40
pIB1051	CD3D及CD3E	Myc及FLAG	CD3D_CD3E	CD3D_CD3E	N/A
pIB1052	CD3D及CD3E	Myc及FLAG	CD3D_CD3E	N/A	N/A
pIB1053	CD3G及CD3E	Myc及FLAG	CD3G_CD3E	CD3G_CD3E	CD28-CD40
pIB1054	CD3G及CD3E	Myc及FLAG	CD3G_CD3E	CD3G_CD3E	N/A
pIB1055	CD3G及CD3E	Myc及FLAG	CD3G_CD3E	N/A	N/A
pIB1056	CD3Z	Myc IC	CD3Z	CD3Z	CD28-CD40
pIB1057	CD3Z	Myc IC	CD3Z	CD3Z	N/A
pIB1058	CD3Z	Myc IC	CD3Z	N/A	N/A
pIB1059	CD3Z	Myc IC	CD3Z	CD3Z (x2)	CD28-CD40
pIB1060	CD3Z	Myc IC	CD3Z	CD3Z (x2)	N/A
pIB1061	CD3Z	Myc IC	CD3Z	CD3Z (x2)	CD28-CD40 (交換)
pIB1062	CD3Z	Myc IC	CD3Z	CD3Z	CD28-CD40 (交換)
pIB1063	CD80	Myc	CD80	CD80	N/A
pIB1064	無訊號肽	Myc IC	N/A	Lck	N/A
pIB1065	無訊號肽	Myc IC	N/A	Lck (Y505F)	N/A
pIB1066	CD80	Myc	CD80	Lck	N/A
pIB1067	CD80	Myc	CD80	Lck	CD28-CD40
pIB1068	CD80	Myc	CD80	CD80_Lck (Y505F)	N/A
pIB1069	CD80	Myc	CD80	CD80_Lck (Y505F)	CD28-CD40
pIB1070	CD8A	Myc	LAT	LAT	N/A
pIB1071	CD8A	Myc	LAT	LAT	CD28-CD40
pIB1072	CD4	Myc	CD4	CD4	CD28-CD40
pIB1073	CD4	Myc	CD4	CD4	CD28-CD40
pIB1074	CD8A及CD8B	Myc及FLAG	CD8A及CD8B	CD8A及CD8B	N/A
pIB1075	CD8A及CD8B	Myc及FLAG	CD8A及CD8B	CD8A及CD8B	CD28--D40

表3 - TCR併入式抗原不確定受體(TIAAR)
碼	描述
pIB1026	CD3D_CD3D_CD28CD40
pIB1027	CD3E_CD3E_CD28CD40
pIB1028	CD3G_CD3G_CD28CD40
pIB1029	CD3Z_CD3Z_CD28CD40_Myc
pIB1030	CD8A_hTRDC_CD28CD40
pIB1031	CD8A_hTRGC1_CD28CD40
pIB1032	CD8A_mTRAC_CD28CD40
pIB1033	CD8A_mTRBC1_CD28CD40
pIB1046	CD8A_hTRDC_CD28CD40-T2A-CD8a_hTRGC1_CD28CD40
pIB1047	CD8A_mTRAC_CD28CD40-T2A-CD8A_mTRBC1_CD28CD40
pIB1048	CD3D_CD3D_CD28CD40-T2A-CD3E_CD3E_CD28CD40
pIB1049	CD3G_CD3G_CD28CD40-T2A-CD3E_CD3E_CD28CD40
pIB1050	CD3D_CD3D_CD3D (ICD)_CD28CD40-T2A-CD3E_CD3E_CD3E (ICD)_CD28CD40
pIB1051	CD3D_CD3D_CD3D ICD -T2A-CD3E_CD3E_CD3E ICD
pIB1052	CD3D_CD3D (對照)-T2A-CD3E_CD3E (對照)
pIB1053	CD3G_CD3G_CD3G (ICD)_CD28CD40-T2A-CD3E_CD3E_CD3E (ICD)_CD28CD40
pIB1054	CD3G_CD3G_CD3G ICD -T2A-CD3E_CD3E_CD3E ICD
pIB1055	CD3G_CD3G (對照)-T2A-CD3E_CD3E (對照)
pIB1056	CD3z _CD3z_CD3z ICD _CD28CD40_Myc
pIB1057	CD3z _CD3z_CD3z ICD_Myc
pIB1058	CD3z _CD3z (對照)
pIB1059	CD3Z_CD3Z_CD3Z ICD (複製CD3z胞內域-6 ITAM ) _CD28CD40_Myc
pIB1060	CD3Z_CD3Z_CD3Z ICD (複製CD3z胞內域-6 ITAMs)_Myc
pIB1061	CD3Z_CD3Z_CD28CD40_CD3Z (6 ITAMs)_Myc
pIB1062	CD3Z_CD3Z_CD28CD40_CD3Z ICD_Myc
pIB1063	CD80 (對照)
pIB1064	Lck (對照)
pIB1065	Lck (Y505F) (對照)
pIB1066	CD80_Lck
pIB1067	CD80_Lck_CD28CD40
pIB1068	CD80_Lck (Y505F)
pIB1069	CD80_Lck (Y505F)_CD28CD40
pIB1070	LAT (對照)
pIB1071	LAT_C28CD40
pIB1072	CD4對照
pIB1073	CD4_CD28_CD40
pIB1074	CD8對照
pIB1075	CD8_CD28_CD40

組成性共刺激蛋白

表4提供本發明之組成性共刺激蛋白之組分的例示性非限制性實例。表5展示組分之例示性配置。

表4-組成性刺激抗原不確定受體(C-SAAR)組分
碼	訊號肽	標籤	ECD_TMD	Costim
pIB1076	CD8A	Myc	LZ (cFos)_EGFR	CD28-CD40
pIB1077	CD8A	Myc	LZ (cFos)_CD28	CD28-CD40
pIB1078	CD8A	Myc	LZ (cJun)_EGFR	CD28-CD40
pIB1079	CD8A	Myc	LZ (cJun)_CD28	CD28-CD40
pIB1080	CD8A	Myc	LZ (c/EBP)_EGFR	CD28-CD40
pIB1081	CD8A	Myc	LZ (c/EBP)_CD28	CD28-CD40
pIB1103	GpA	Myc	GpA ECD_TMD	CD28-CD40
pIB1104	GpA	Myc	GpA TMD	CD28-CD40
pIB1105	EPOR	Myc	EPOR ECD_TMD	CD28-CD40
pIB1106	EPOR	Myc	EPOR TMD	CD28-CD40
pIB1107	TPOR	Myc	TPOR ECD_TMD	CD28-CD40
pIB1108	TPOR	Myc	TPOR TMD	CD28-CD40
pIB1109	TPOR	Myc	TPOR ECD_TMD (S505N)	CD28-CD40
pIB1110	TPOR	Myc	TPOR TMD (S505N)	CD28-CD40
pIB1111	TPOR	Myc	TPOR ECD_TMD (W515K)	CD28-CD40
pIB1112	TPOR	Myc	TPOR TMD (W515K)	CD28-CD40
pIB1113	TPOR	Myc	TPOR ECD_TMD (H499L)	CD28-CD40
pIB1114	TPOR	Myc	TPOR TMD (H499L)	CD28-CD40
pIB1115	TPOR	Myc	TPOR ECD_TMD (S505N-W515K)	CD28-CD40
pIB1116	TPOR	Myc	TPOR TMD (S505N-W515K)	CD28-CD40
pIB1117	TPOR	Myc	TPOR ECD_TMD (H499Y-S505N)	CD28-CD40
pIB1118	TPOR	Myc	TPOR TMD (H499Y-S505N)	CD28-CD40
pIB1119	TPOR	Myc	TPOR ECD_TMD (L498W-H499C)	CD28-CD40
pIB1120	TPOR	Myc	TPOR TMD (L498W-H499C)	CD28-CD40
pIB1025	CD8a	Myc	CD28	CD28-CD40
pIB1179	CD8a	N/A	IgG1+CD28TM	CD28-CD40
pIB1180	CD8a	N/A	IgG1mut+CD28TM	CD28-CD40
pIB1181	CD8a	N/A	IgG2+CD28TM	CD28-CD40
pIB1182	CD8a	N/A	IgG3+CD28TM	CD28-CD40
pIB1183	CD8a	N/A	IgG4+CD28TM	CD28-CD40
pIB1184	CD8a	N/A	IgG4mut+CD28TM	CD28-CD40
pIB1185	CD8a	N/A	IgG1 + CD28柄/TM	CD28-CD40
pIB1186	CD8a	N/A	IgG1mut + CD28柄/TM	CD28-CD40
pIB1187	CD8a	N/A	IgG2 + CD28柄/TM	CD28-CD40
pIB1188	CD8a	N/A	IgG3 + CD28柄/TM	CD28-CD40
pIB1189	CD8a	N/A	IgG4 + CD28柄/TM	CD28-CD40
pIB1190	CD8a	N/A	IgG4mut + CD28柄/TM	CD28-CD40

表5 - C-SAAR蛋白質
碼	描述
pIB1076	LZ (cFos)- EGFRTM/JMD- CD28-CD40
pIB1077	LZ (cFos)- CD28TM- CD28-CD40
pIB1078	LZ (cJun)- EGFRTM/JMD- CD28-CD40
pIB1079	LZ (cJun)- CD28TM- CD28-CD40
pIB1080	LZ (c/EBP)- EGFRTM/JMD- CD28-CD40
pIB1081	LZ (c/EBP)- CD28TM- CD28-CD40
pIB1103	GpA ECD-TMD-CD28-CD40
pIB1104	GpA TMD-CD28-CD40
pIB1105	EpoR ECD-TMD-CD28-CD40
pIB1106	EpoR TMD-CD28-CD40
pIB1107	TPO ECD- TPO (WT) TMD -CD28-CD40
pIB1108	TPO (WT) TMD -CD28-CD40
pIB1109	TPO ECD- TPO (S505N) TMD -CD28-CD40
pIB1110	TPO (S505N) TMD -CD28-CD40
pIB1111	TPO ECD- TPO (W515K) TMD -CD28-CD40
pIB1112	TPO (W515K) TMD -CD28-CD40
pIB1113	TPO ECD- TPO (H499L) TMD -CD28-CD40
pIB1114	TPO (H499L) TMD -CD28-CD40
pIB1115	TPO ECD- TPO (S505N-W515K) TMD -CD28-CD40
pIB1116	TPO (S505N-W515K) TMD -CD28-CD40
pIB1117	TPO ECD- TPO (H499Y-S505N) TMD -CD28-CD40
pIB1118	TPO (H499Y-S505N) TMD -CD28-CD40
pIB1119	TPO ECD- TPO (L498W-H499C) TMD -CD28-CD40
pIB1120	TPO (L498W-H499C) TMD -CD28-CD40
pIB1025	CD28 TM_CD28_CD40
pIB1179	IICH2CH3)-CD28(TM)-CD28(CoStim)-CD40(CoStim)
pIB1180	IgG1ICH3，突變體)-CD28(TM)-CD28(CoStim)-CD40(CoStim)
IIB1182	IgG3(CH2CH3)-CD28(TM)-CD28(CoStim)-CD40(CoI)
IpIB1184	IgG4(CH2CH3，突變體)-CD28(TM)-CD28(CoStim)-CD40(CoStim)
pIB1185	IgG1(CH2CH3)-CD28(柄+TM)-CD28(CoStim)-CD40(CoStim)
pIB1186	IgG1(CH2CH3，突變體)-CD28(柄+TM)-CD28(CoStim)-CD40(CoStim)
pIB1187	IgG2(CH2CH3)-CD28(柄+TM)-CD28(CoStim)-CD40(CoStim)
pIB1188	IgG3(CH2CH3)-CD28(柄+TM)-CD28(CoStim)-CD40(CoStim)
pIB1189	IgG4(CH2CH3)-CD28(柄+TM)-CD28(CoStim)-CD40(CoStim)
pIB1190	IgG4(CH2CH3，突變體)-CD28(柄+TM)-CD28(CoStim)-CD40(CoStim)

誘導性共刺激受體

表6提供本發明之誘導性共刺激受體之例示性非限制性實例。表7展示組分之例示性配置。

表6 -誘導性共刺激蛋白組分
碼	訊號肽	標籤	ECD_TMD	ICD	Costim
pIB1082	EGFR	Myc	EGFR	N/A	CD28-CD40
pIB1083	EGFR	Myc	EGFR (域IV)	N/A	CD28-CD40
pIB1084	EGFR	Myc	EGFR (623-668)	N/A	CD28-CD40
pIB1085	Her2	Myc	Her2	N/A	CD28-CD40
pIB1086	Her2	Myc	Her2 (V659E)	N/A	CD28-CD40
pIB1087	Her2	Myc	Her2 (V660D)	N/A	CD28-CD40
pIB1088	Her2	Myc	Her2 (V660R)	N/A	CD28-CD40
pIB1089	Her2	Myc	Her2域IV_TMD	N/A	CD28-CD40
pIB1090	Her2	Myc	Her2域IV_TMD (V659E)	N/A	CD28-CD40
pIB1091	Her2	Myc	Her2域IV_TMD (G660D)	N/A	CD28-CD40
pIB1092	Her2	Myc	Her2域IV_TMD (G660R)	N/A	CD28-CD40
pIB1093	Her2	Myc	Her2 TMD	N/A	CD28-CD40
pIB1094	Her2	Myc	Her2 TMD (V659E)	N/A	CD28-CD40
pIB1095	Her2	Myc	Her2 TMD (G660D)	N/A	CD28-CD40
pIB1096	Her2	Myc	Her2 TMD (G660R)	N/A	CD28-CD40
pIB1097	CD8A	Myc	A30514 VH_VL	N/A	CD28-CD40
pIB1098	CD8A	Myc	A30514 VL_VH	N/A	CD28-CD40
pIB1099	CD8A	Myc	A30523 VH_VL	N/A	CD28-CD40
pIB1100	CD8A	Myc	A30523 VL_VH	N/A	CD28-CD40
pIB1101	CD8A	Myc	A30633 VH_VL	N/A	CD28-CD40
pIB1102	CD8A	My-	A30633 VL_VH	N/A	CD28-CD40

表7 -誘導性共刺激蛋白
碼	GOI描述
pIB1082	WT EGFR ECD- EGFRTM/JMD- CD28-CD40
pIB1083	域IV - EGFRTM/JMD- CD28-CD40
pIB1084	EGFRTM/JMD- CD28-CD40 (對照)
pIB1085	Her 2 (域1至IV)-TMD/JMD-CD28-CD40
pIB1086	Her 2 (域1至IV)-TMD (V659E)/JMD-CD28-CD40
pIB1087	Her 2 (域1至IV)-TMD (G660D)/JMD-CD28-CD40
pIB1088	Her 2 (域1至IV)-TMD (G660R)/JMD-CD28-CD40
pIB1089	Her 2 (域IV)-TMD/JMD-CD28-CD40
pIB1090	Her 2 (域IV)-TMD (V659E)/JMD-CD28-CD40
pIB1091	Her 2 (域IV)-TMD (G660D)/JMD-CD28-CD40
pIB1092	Her 2 (域IV)-TMD (G660R)/JMD-CD28-CD40
pIB1093	Her 2 TMD/JMD-CD28-CD40
pIB1094	Her 2 TMD (V659E)/JMD-CD28-CD40
pIB1095	Her 2 TMD (G660D)/JMD-CD28-CD40
pIB1096	Her 2 TMD (G660R)/JMD-CD28-CD40
pIB1097	抗ID1 VH-VL (A30514-帕博利珠單抗)- CD28TMD CD28-CD40
pIB1098	抗ID1 VL-VH (A30514-帕博利珠單抗)- CD28TMD CD28-CD40
pIB1099	抗ID2 Vh-VL (A30523-帕博利珠單抗)- CD28TMD CD28-CD40
pIB1100	抗ID2 VL-Vh (A30523-帕博利珠單抗)- CD28TMD CD28-CD40
pIB1101	抗ID3 Vh-VL (A30633-帕博利珠單抗)- CD28TMD CD28-CD40
pIB1102	抗ID3 VL-VH (A30633-帕博利珠單抗)- CD28TMD CD28-CD40

下表中之以下序列包括完整組分且為非限制性的。組分可包括訊號肽(SP)、TCR簇集域(CD)及/或傳訊域(SD)。應理解，儘管某些蛋白質在表現時可包含N端訊息肽，彼等訊息肽在表現蛋白質時裂解且可不精確地裂解，且移除訊息肽所來自之所得蛋白質包含在N端胺基酸位置具有至多約五個胺基酸之變化的結合域。表 8 ： TCR 共刺激構築體實例

SEQ ID NO:1
組分：	SP CD3D_
序列：	MEHSTFLSGL VLATLLSQVS P
SEQ ID NO:2
組分：	CD CD3D_
序列：	FKIPIEELED RVFVNCNTSI TWVEGTVGTL LSDITRLDLG KRILDPRGIY RCNGTDIYKD KESTVQVHYR MCQSCVELDP ATVAGIIVTD VIATLLLALG VFCFA
SEQ ID NO:3
組分：	SD CD28CD40
序列：	RSKRSRLLHS DYMNMTPRRP GPTRKHYQPY APPRDFAAYR SKKVAKKPTN KAPHPKQEPQ EINFPDDLPG SNTAAPVQET LHGCQPVTQE DGKESRISVQ ERQ
SEQ ID NO:4
全長：	CD3D_CD3D_CD28CD40
序列：	MEHSTFLSGL VLATLLSQVS PFKIPIEELE DRVFVNCNTS ITWVEGTVGT LLSDITRLDL GKRILDPRGI YRCNGTDIYK DKESTVQVHY RMCQSCVELD PATVAGIIVT DVIATLLLAL GVFCFARSKR SRLLHSDYMN MTPRRPGPTR KHYQPYAPPR DFAAYRSKKV AKKPTNKAPH PKQEPQEINF PDDLPGSNTA APVQETLHGC QPVTQEDGKE SRISVQERQ
SEQ ID NO:5
組分：	SP CD3E_
序列：	MQSGTHWRVL GLCLLSVGVW GQ
SEQ ID NO:6
組分：	CD CD3E_
序列：	DGNEEMGGIT QTPYKVSISG TTVILTCPQY PGSEILWQHN DKNIGGDEDD KNIGSDEDHL SLKEFSELEQ SGYYVCYPRG SKPEDANFYL YLRARVCENC MEMDVMSVAT IVIVDICITG GLLLLVYYWS
SEQ ID NO:7
組分：	SD CD28CD40
序列：	RSKRSRLLHS DYMNMTPRRP GPTRKHYQPY APPRDFAAYR SKKVAKKPTN KAPHPKQEPQ EINFPDDLPG SNTAAPVQET LHGCQPVTQE DGKESRISVQ ERQ
SEQ ID NO:8
全長：	CD3E_CD3E_CD28CD40
序列：	MQSGTHWRVL GLCLLSVGVW GQDGNEEMGG ITQTPYKVSI SGTTVILTCPQ YPGSEILWQH NDKNIGGDED DKNIGSDEDH LSLKEFSELE QSGYYVCYPRG SKPEDANFYL YLRARVCENC MEMDVMSVAT IVIVDICITG GLLLLVYYWSR SKRSRLLHSD YMNMTPRRPG PTRKHYQPYA PPRDFAAYRS KKVAKKPTNKA PHPKQEPQEI NFPDDLPGSN TAAPVQETLH GCQPVTQEDG KESRISVQERQ
SEQ ID NO:9
組分：	SP CD3G_
序列：	MEQGKGLAVL ILAIILLQGT LA
SEQ ID NO:10
組分：	CD CD3G_
序列：	QSIKGNHLVK VYDYQEDGSV LLTCDAEAKN ITWFKDGKMI GFLTEDKKKW NLGSNAKDPR GMYQCKGSQN KSKPLQVYYR MCQNCIELNA ATISGFLFAE IVSIFVLAVG VYFIA
SEQ ID NO:11
組分：	SD CD28CD40
序列：	RSKRSRLLHS DYMNMTPRRP GPTRKHYQPY APPRDFAAYR SKKVAKKPTN KAPHPKQEPQ EINFPDDLPG SNTAAPVQET LHGCQPVTQE DGKESRISVQ ERQ
SEQ ID NO:12
全長：	CD3G_CD3G_CD28CD40
序列：	MEQGKGLAVL ILAIILLQGT LAQSIKGNHL VKVYDYQEDG SVLLTCDAEA KNITWFKDGK MIGFLTEDKK KWNLGSNAKD PRGMYQCKGS QNKSKPLQVY YRMCQNCIEL NAATISGFLF AEIVSIFVLA VGVYFIARSK RSRLLHSDYM NMTPRRPGPT RKHYQPYAPP RDFAAYRSKK VAKKPTNKAP HPKQEPQEIN FPDDLPGSNT AAPVQETLHG CQPVTQEDGK ESRISVQERQ
SEQ ID NO:13
組分：	SP CD3Z_
序列：	MKWKALFTAA ILQAQLPITE A
SEQ ID NO:14
組分：	CD CD3Z_
序列：	QSFGLLDPKL CYLLDGILFI YGVILTALFL
SEQ ID NO:15
組分：	SD CD28CD40
序列：	RSKRSRLLHS DYMNMTPRRP GPTRKHYQPY APPRDFAAYR SKKVAKKPTN KAPHPKQEPQ EINFPDDLPG SNTAAPVQET LHGCQPVTQE DGKESRISVQ ERQ
SEQ ID NO:16
全長：	CD3Z_CD3Z_CD28CD40
序列：	MKWKALFTAA ILQAQLPITE AQSFGLLDPK LCYLLDGILF IYGVILTALF LRSKRSRLLH SDYMNMTPRR PGPTRKHYQP YAPPRDFAAY RSKKVAKKPT NKAPHPKQEP QEINFPDDLP GSNTAAPVQE TLHGCQPVTQ EDGKESRISV QERQ
SEQ ID NO:17
組分：	SP CD8A_
序列：	MALPVTALLL PLALLLHAAR P
SEQ ID NO:18
組分：	CD TRDC_
序列：	SQPHTKPSVF VMKNGTNVAC LVKEFYPKDI RINLVSSKKI TEFDPAIVIS PSGKYNAVKL GKYEDSNSVT CSVQHDNKTV HSTDFEVKTD STDHVKPKET ENTKQPSKSC HKPKAIVHTE KVNMMSLTVL GLRMLFAKTV AVNFLLTAKL FFL
SEQ ID NO:19
組分：	SD CD28CD40
序列：	RSKRSRLLHS DYMNMTPRRP GPTRKHYQPY APPRDFAAYR SKKVAKKPTN KAPHPKQEPQ EINFPDDLPG SNTAAPVQET LHGCQPVTQE DGKESRISVQ ERQ
SEQ ID NO:20
全長：	CD8A_TRDC_CD28CD40
序列：	MALPVTALLL PLALLLHAAR PSQPHTKPSV FVMKNGTNVA CLVKEFYPKD IRINLVSSKK ITEFDPAIVI SPSGKYNAVK LGKYEDSNSV TCSVQHDNKT VHSTDFEVKT DSTDHVKPKE TENTKQPSKS CHKPKAIVHT EKVNMMSLTV LGLRMLFAKT VAVNFLLTAK LFFLRSKRSR LLHSDYMNMT PRRPGPTRKH YQPYAPPRDF AAYRSKKVAK KPTNKAPHPK QEPQEINFPD DLPGSNTAAP VQETLHGCQP VTQEDGKESR ISVQERQ
SEQ ID NO:21
組分：	SP CD8A_
序列：	MALPVTALLL PLALLLHAAR P
SEQ ID NO:22
組分：	CD TRGC1_
序列：	DKQLDADVSP KPTIFLPSIA ETKLQKAGTY LCLLEKFFPD VIKIHWQEKK SNTILGSQEG NTMKTNDTYM KFSWLTVPEK SLDKEHRCIV RHENNKNGVD QEIIFPPIKT DVITMDPKDN CSKDANDTLL LQLTNTSAYY MYLLLLLKSV VYFAIITCCL L
SEQ ID NO:23
組分：	SD CD28CD40
序列：	RSKRSRLLHS DYMNMTPRRP GPTRKHYQPY APPRDFAAYR SKKVAKKPTN KAPHPKQEPQ EINFPDDLPG SNTAAPVQET LHGCQPVTQE DGKESRISVQ ERQ
SEQ ID NO:24
全長：	CD8A_TRGC1_CD28CD40
序列：	MALPVTALLL PLALLLHAAR PDKQLDADVS PKPTIFLPSI AETKLQKAGT YLCLLEKFFP DVIKIHWQEK KSNTILGSQE GNTMKTNDTY MKFSWLTVPE KSLDKEHRCI VRHENNKNGV DQEIIFPPIK TDVITMDPKD NCSKDANDTL LLQLTNTSAY YMYLLLLLKS VVYFAIITCC LLRSKRSRLL HSDYMNMTPR RPGPTRKHYQ PYAPPRDFAA YRSKKVAKKP TNKAPHPKQE PQEINFPDDL PGSNTAAPVQ ETLHGCQPVT QEDGKESRIS VQERQ
SEQ ID NO:25
組分：	SP CD8A_
序列：	MALPVTALLL PLALLLHAAR P
SEQ ID NO:26
組分：	CD TRAC_
序列：	IQNPEPAVYQ LKDPRSQDST LCLFTDFDSQ INVPKTMESG TFITDKCVLD MKAMDSKSNG AIAWSNQTSF TCQDIFKETN ATYPSSDVPC DATLTEKSFE TDMNLNFQNL LVIVLRILLL KVAGFNLLMT LRLWSS
SEQ ID NO:27
組分：	SD CD28CD40
序列：	RSKRSRLLHS DYMNMTPRRP GPTRKHYQPY APPRDFAAYR SKKVAKKPTN KAPH PKQEP QEINFPDDLP GSNTAAPVQE TLHGCQPVTQ EDGKESRISV QERQ
SEQ ID NO:28
全長：	CD8A_TRAC_CD28CD40
序列：	MALPVTALLL PLALLLHAAR PIQNPEPAVY QLKDPRSQDS TLCLFTDFDS QINVPKTMES GTFITDKCVL DMKAMDSKSN GAIAWSNQTS FTCQDIFKET NATYPSSDVP CDATLTEKSF ETDMNLNFQN LLVIVLRILL LKVAGFNLLM TLRLWSSRSK RSRLLHSDYM NMTPRRPGPT RKHYQPYAPP RDFAAYRSKK VAKKPTNKAP HPKQEPQEIN FPDDLPGSNT AAPVQETLHG CQPVTQEDGK ESRISVQERQ
SEQ ID NO:29
組分：	SP CD8A_
序列：	MALPVTALLL PLALLLHAAR P
SEQ ID NO:30
組分：	CD TRBC1_
序列：	VLTPPKVSLF EPSKAEIANK QKATLVCLAR GFFPDHVELS WWVNGKEVHS GVCTDPQAYK ESNYSYCLSS RLRVSATFWH NPRNHFRCQV QFHGLSEEDK WPEGSPKPVT QNISAEAWGR ADCGITSASY QQGVLSATIL YEILLGKATL YAVLVSTLVV MAMVKRKNS
SEQ ID NO:31
組分：	SD CD28CD40
序列：	RSKRSRLLHS DYMNMTPRRP GPTRKHYQPY APPRDFAAYR SKKVAKKPTN KAPHPKQEPQ EINFPDDLPG SNTAAPVQET LHGCQPVTQE DGKESRISVQ ERQ
SEQ ID NO:32
全長：	CD8A_TRBC1_CD28CD40
序列：	MALPVTALLL PLALLLHAAR PVLTPPKVSL FEPSKAEIAN KQKATLVCLA RGFFPDHVEL SWWVNGKEVH SGVCTDPQAY KESNYSYCLS SRLRVSATFW HNPRNHFRCQ VQFHGLSEED KWPEGSPKPV TQNISAEAWG RADCGITSAS YQQGVLSATI LYEILLGKAT LYAVLVSTLV VMAMVKRKNS RSKRSRLLHS DYMNMTPRRP GPTRKHYQPY APPRDFAAYR SKKVAKKPTN KAPHPKQEPQ EINFPDDLPG SNTAAPVQET LHGCQPVTQE DGKESRISVQ ERQ
SEQ ID NO:33
載體純系：	pIB1001
序列	MALPVTALLL PLALLLHAAR PEQKLISEED LQVQLVQSGA EVKKPGASVK VSCKASGYTF TSYWMNWVRQ APGQGLEWMG RIDPYDSETH YAQKLQGRVT MTTDTSTSTA YMELRSLRSD DTAVYYCARG GYDFDVGTLY WFFDVWGQGT TVTVSSGGGG SGGGGSGGGG SDIQMTQSPS SLSASVGDRV TITCRASENI YSYLAWYQQK PGKAPKLLIY NAKTLAEGVP SRFSGSGSGT DFTLTISSLQ PEDFATYYCQ HHYGTPRTFG GGTKVEIKAA AGSGGSGILV KQSPMLVAYD NAVNLSCKYS YNLFSREFRA SLHKGLDSAV EVCVVYGNYS QQLQVYSKTG FNCDGKLGNE SVTFYLQNLY VNQTDIYFCK IEVMYPPPYL DNEKSNGTII HVKGKHLCPS PLFPGPSKPF WVLVVVGGVL ACYSLLVTVA FIIFWVRSKR SRLLHSDYMN MTPRRPGPTR KHYQPYAPPR DFAAYRSKKV AKKPTNKAPH PKQEPQEINF PDDLPGSNTA APVQETLHGC QPVTQEDGKE SRISVQERQ
SEQ ID NO:34
載體純系：	pIB1002
序列：	MALPVTALLL PLALLLHAAR PEQKLISEED LDIQMTQSPS SLSASVGDRV TITCRASENI YSYLAWYQQK PGKAPKLLIY NAKTLAEGVP SRFSGSGSGT DFTLTISSLQ PEDFATYYCQ HHYGTPRTFG GGTKVEIKGG GGSGGGGSGG GGSQVQLVQS GAEVKKPGAS VKVSCKASGY TFTSYWMNWV RQAPGQGLEW MGRIDPYDSE THYAQKLQGR VTMTTDTSTS TAYMELRSLR SDDTAVYYCA RGGYDFDVGT LYWFFDVWGQ GTTVTVSSAA AGSGGSGILV KQSPMLVAYD NAVNLSCKYS YNLFSREFRA SLHKGLDSAV EVCVVYGNYS QQLQVYSKTG FNCDGKLGNE SVTFYLQNLY VNQTDIYFCK IEVMYPPPYL DNEKSNGTII HVKGKHLCPS PLFPGPSKPF WVLVVVGGVL ACYSLLVTVA FIIFWVRSKR SRLLHSDYMN MTPRRPGPTR KHYQPYAPPR DFAAYRSKKV AKKPTNKAPH PKQEPQEINF PDDLPGSNTA APVQETLHGC QPVTQEDGKE SRISVQERQ
SEQ ID NO:35
載體純系：	pIB1003
序列：	MALPVTALLL PLALLLHAAR PEQKLISEED LQVQLVESGG GVVQPGRSLR LSCAASGFTF SSYDMHWVRQ APGKGLEWVA VIWYDGSNKY YADSVKGRFT ISRDNSKNTL YLQMNSLRAE DTAVYYCARG SGNWGFFDYW GQGTLVTVSS GGGGSGGGGS GGGGSDIQMT QSPSSLSASV GDRVTITCRA SQGISRWLAW YQQKPEKAPK SLIYAASSLQ SGVPSRFSGS GSGTDFTLTI SSLQPEDFAT YYCQQYNTYP RTFGQGTKVE IKAAAGSGGS GILVKQSPML VAYDNAVNLS CKYSYNLFSR EFRASLHKGL DSAVEVCVVY GNYSQQLQVY SKTGFNCDGK LGNESVTFYL QNLYVNQTDI YFCKIEVMYP PPYLDNEKSN GTIIHVKGKH LCPSPLFPGP SKPFWVLVVV GGVLACYSLL VTVAFIIFWV RSKRSRLLHS DYMNMTPRRP GPTRKHYQPY APPRDFAAYR SKKVAKKPTN KAPHPKQEPQ EINFPDDLPG SNTAAPVQET LHGCQPVTQE DGKESRISVQ ERQ
SEQ ID NO:36
載體純系：	pIB1004
序列：	MALPVTALLL PLALLLHAAR PEQKLISEED LDIQMTQSPS SLSASVGDRV TITCRASQGI SRWLAWYQQK PEKAPKSLIY AASSLQSGVP SRFSGSGSGT DFTLTISSLQ PEDFATYYCQ QYNTYPRTFG QGTKVEIKGG GGSGGGGSGG GGSQVQLVES GGGVVQPGRS LRLSCAASGF TFSSYDMHWV RQAPGKGLEW VAVIWYDGSN KYYADSVKGR FTISRDNSKN TLYLQMNSLR AEDTAVYYCA RGSGNWGFFD YWGQGTLVTV SSAAAGSGGS GILVKQSPML VAYDNAVNLS CKYSYNLFSR EFRASLHKGL DSAVEVCVVY GNYSQQLQVY SKTGFNCDGK LGNESVTFYL QNLYVNQTDI YFCKIEVMYP PPYLDNEKSN GTIIHVKGKH LCPSPLFPGP SKPFWVLVVV GGVLACYSLL VTVAFIIFWV RSKRSRLLHS DYMNMTPRRP GPTRKHYQPY APPRDFAAYR SKKVAKKPTN KAPHPKQEPQ EINFPDDLPG SNTAAPVQET LHGCQPVTQE DGKESRISVQ ERQ
SEQ ID NO:37
載體純系：	pIB1005
序列：	MALPVTALLL PLALLLHAAR PEQKLISEED LQVQLQQWGA GLLKPSETLS LTCAVYGGSF SGYYWSWIRQ SPEGLEWIGE INHGGYVTYN PSLESRVTIS VDTSKNQFSL KLSSVTAADT AVYYCARDYG PGNYDWYFDL WGRGTLVTVS SGGGGSGGGG SGGGGSEIVL TQSPATLSLS PGERATLSCR ASQSVSSYLA WYQQKPGQAP RLLIYDASNR ATGIPARFSG SGSGTDFTLT ISSLEPEDFA VYYCQQRSNW PPALTFGGGT KVEIKRAAAG SGGSGILVKQ SPMLVAYDNA VNLSCKYSYN LFSREFRASL HKGLDSAVEV CVVYGNYSQQ LQVYSKTGFN CDGKLGNESV TFYLQNLYVN QTDIYFCKIE VMYPPPYLDN EKSNGTIIHV KGKHLCPSPL FPGPSKPFWV LVVVGGVLAC YSLLVTVAFI IFWVRSKRSR LLHSDYMNMT PRRPGPTRKH YQPYAPPRDF AAYRSKKVAK KPTNKAPHPK QEPQEINFPD DLPGSNTAAP VQETLHGCQP VTQEDGKESR ISVQERQ
SEQ ID NO:38
載體純系：	pIB1006
序列：	MALPVTALLL PLALLLHAAR PEQKLISEED LEIVLTQSPA TLSLSPGERA TLSCRASQSV SSYLAWYQQK PGQAPRLLIY DASNRATGIP ARFSGSGSGT DFTLTISSLE PEDFAVYYCQ QRSNWPPALT FGGGTKVEIK RGGGGSGGGG SGGGGSQVQL QQWGAGLLKP SETLSLTCAV YGGSFSGYYW SWIRQSPEGL EWIGEINHGG YVTYNPSLES RVTISVDTSK NQFSLKLSSV TAADTAVYYC ARDYGPGNYD WYFDLWGRGT LVTVSSAAAG SGGSGILVKQ SPMLVAYDNA VNLSCKYSYN LFSREFRASL HKGLDSAVEV CVVYGNYSQQ LQVYSKTGFN CDGKLGNESV TFYLQNLYVN QTDIYFCKIE VMYPPPYLDN EKSNGTIIHV KGKHLCPSPL FPGPSKPFWV LVVVGGVLAC YSLLVTVAFI IFWVRSKRSR LLHSDYMNMT PRRPGPTRKH YQPYAPPRDF AAYRSKKVAK KPTNKAPHPK QEPQEINFPD DLPGSNTAAP VQETLHGCQP VTQEDGKESR ISVQERQ
SEQ ID NO:39
載體純系：	pIB1007
序列：	MALPVTALLL PLALLLHAAR PEQKLISEED LQVTLRESGP ALVKPTQTLT LTCTFSGFSL STSGMGVGWI RQPPGKALEW LAHIWWDDDK YYNPSLKSRL TISKDTSKNQ VVLTMTNMDP VDTATYYCAR TRRYFPFAYW GQGTLVTVSS GGGGSGGGGS GGGGSEIVMT QSPATLSVSP GERATLSCKA SQNVGTNVAW YQQKPGQAPR LLIYSASYRY SGIPARFSGS GSGTEFTLTI SSLQSEDFAV YYCQQYNTDP LTFGGGTKVE IKAAAGSGGS GILVKQSPML VAYDNAVNLS CKYSYNLFSR EFRASLHKGL DSAVEVCVVY GNYSQQLQVY SKTGFNCDGK LGNESVTFYL QNLYVNQTDI YFCKIEVMYP PPYLDNEKSN GTIIHVKGKH LCPSPLFPGP SKPFWVLVVV GGVLACYSLL VTVAFIIFWV RSKRSRLLHS DYMNMTPRRP GPTRKHYQPY APPRDFAAYR SKKVAKKPTN KAPHPKQEPQ EINFPDDLPG SNTAAPVQET LHGCQPVTQE DGKESRISVQ ERQ
SEQ ID NO:40
載體純系：	pIB1008
序列：	MALPVTALLL PLALLLHAAR PEQKLISEED LEIVMTQSPA TLSVSPGERA TLSCKASQNV GTNVAWYQQK PGQAPRLLIY SASYRYSGIP ARFSGSGSGT EFTLTISSLQ SEDFAVYYCQ QYNTDPLTFG GGTKVEIKGG GGSGGGGSGG GGSQVTLRES GPALVKPTQT LTLTCTFSGF SLSTSGMGVG WIRQPPGKAL EWLAHIWWDD DKYYNPSLKS RLTISKDTSK NQVVLTMTNM DPVDTATYYC ARTRRYFPFA YWGQGTLVTV SSAAAGSGGS GILVKQSPML VAYDNAVNLS CKYSYNLFSR EFRASLHKGL DSAVEVCVVY GNYSQQLQVY SKTGFNCDGK LGNESVTFYL QNLYVNQTDI YFCKIEVMYP PPYLDNEKSN GTIIHVKGKH LCPSPLFPGP SKPFWVLVVV GGVLACYSLL VTVAFIIFWV RSKRSRLLHS DYMNMTPRRP GPTRKHYQPY APPRDFAAYR SKKVAKKPTN KAPHPKQEPQ EINFPDDLPG SNTAAPVQET LHGCQPVTQE DGKESRISVQ ERQ
SEQ ID NO:41
載體純系：	pIB1009
序列：	MALPVTALLL PLALLLHAAR PEQKLISEED LQVQLVQSGV EVKKPGASVK VSCKASGYTF TNYYMYWVRQ APGQGLEWMG GINPSNGGTN FNEKFKNRVT LTTDSSTTTA YMELKSLQFD DTAVYYCARR DYRFDMGFDY WGQGTTVTVS SGGGGSGGGG SGGGGSEIVL TQSPATLSLS PGERATLSCR ASKGVSTSGY SYLHWYQQKP GQAPRLLIYL ASYLESGVPA RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQH SRDLPLTFGG GTKVEIKRAA AGSGGSGILV KQSPMLVAYD NAVNLSCKYS YNLFSREFRA SLHKGLDSAV EVCVVYGNYS QQLQVYSKTG FNCDGKLGNE SVTFYLQNLY VNQTDIYFCK IEVMYPPPYL DNEKSNGTII HVKGKHLCPS PLFPGPSKPF WVLVVVGGVL ACYSLLVTVA FIIFWVRSKR SRLLHSDYMN MTPRRPGPTR KHYQPYAPPR DFAAYRSKKV AKKPTNKAPH PKQEPQEINF PDDLPGSNTA APVQETLHGC QPVTQEDGKE SRISVQERQ
SEQ ID NO:42
載體純系：	pIB1010
序列：	MALPVTALLL PLALLLHAAR PEQKLISEED LEIVLTQSPA TLSLSPGERA TLSCRASKGV STSGYSYLHW YQQKPGQAPR LLIYLASYLE SGVPARFSGS GSGTDFTLTI SSLEPEDFAV YYCQHSRDLP LTFGGGTKVE IKRGGGGSGG GGSGGGGSQV QLVQSGVEVK KPGASVKVSC KASGYTFTNY YMYWVRQAPG QGLEWMGGIN PSNGGTNFNE KFKNRVTLTT DSSTTTAYME LKSLQFDDTA VYYCARRDYR FDMGFDYWGQ GTTVTVSSAA AGSGGSGILV KQSPMLVAYD NAVNLSCKYS YNLFSREFRA SLHKGLDSAV EVCVVYGNYS QQLQVYSKTG FNCDGKLGNE SVTFYLQNLY VNQTDIYFCK IEVMYPPPYL DNEKSNGTII HVKGKHLCPS PLFPGPSKPF WVLVVVGGVL ACYSLLVTVA FIIFWVRSKR SRLLHSDYMN MTPRRPGPTR KHYQPYAPPR DFAAYRSKKV AKKPTNKAPH PKQEPQEINF PDDLPGSNTA APVQETLHGC QPVTQEDGKE SRISVQERQ
SEQ ID NO:43
載體純系：	pIB1011
序列：	MALPVTALLL PLALLLHAAR PEQKLISEED LEVQLVESGG GLVQPGGSLR LSCAASGFTF SDSWIHWVRQ APGKGLEWVA WISPYGGSTY YADSVKGRFT ISADTSKNTA YLQMNSLRAE DTAVYYCARR HWPGGFDYWG QGTLVTVSSG GGGSGGGGSG GGGSDIQMTQ SPSSLSASVG DRVTITCRAS QDVSTAVAWY QQKPGKAPKL LIYSASFLYS GVPSRFSGSG SGTDFTLTIS SLQPEDFATY YCQQYLYHPA TFGQGTKVEI KRAAAGSGGS GILVKQSPML VAYDNAVNLS CKYSYNLFSR EFRASLHKGL DSAVEVCVVY GNYSQQLQVY SKTGFNCDGK LGNESVTFYL QNLYVNQTDI YFCKIEVMYP PPYLDNEKSN GTIIHVKGKH LCPSPLFPGP SKPFWVLVVV GGVLACYSLL VTVAFIIFWV RSKRSRLLHS DYMNMTPRRP GPTRKHYQPY APPRDFAAYR SKKVAKKPTN KAPHPKQEPQ EINFPDDLPG SNTAAPVQET LHGCQPVTQE DGKESRISVQ ERQ
SEQ ID NO:44
載體純系：	pIB1012
序列：	MALPVTALLL PLALLLHAAR PEQKLISEED LDIQMTQSPS SLSASVGDRV TITCRASQDV STAVAWYQQK PGKAPKLLIY SASFLYSGVP SRFSGSGSGT DFTLTISSLQ PEDFATYYCQ QYLYHPATFG QGTKVEIKRG GGGSGGGGSG GGGSEVQLVE SGGGLVQPGG SLRLSCAASG FTFSDSWIHW VRQAPGKGLE WVAWISPYGG STYYADSVKG RFTISADTSK NTAYLQMNSL RAEDTAVYYC ARRHWPGGFD YWGQGTLVTV SSAAAGSGGS GILVKQSPML VAYDNAVNLS CKYSYNLFSR EFRASLHKGL DSAVEVCVVY GNYSQQLQVY SKTGFNCDGK LGNESVTFYL QNLYVNQTDI YFCKIEVMYP PPYLDNEKSN GTIIHVKGKH LCPSPLFPGP SKPFWVLVVV GGVLACYSLL VTVAFIIFWV RSKRSRLLHS DYMNMTPRRP GPTRKHYQPY APPRDFAAYR SKKVAKKPTN KAPHPKQEPQ EINFPDDLPG SNTAAPVQET LHGCQPVTQE DGKESRISVQ ERQ
SEQ ID NO:45
載體純系：	pIB1013
序列：	MALPVTALLL PLALLLHAAR PEQKLISEED LQVQLVQSGA EVKKPGASVK VSCKASGYTF TNYWIGWVKQ APGQGLEWIG YLYPGGLYTN YNEKFKGKAT MTADTSTNTA YMELSSLRSE DTAVYYCARY RDYDYAMDYW GQGTLVTVSS GGGGSGGGGS GGGGSDVVMT QTPLSLPVTL GQPASISCKS TKSLLNSDGF TYLGWCLQKP GQSPQLLIYL VSNRFSGVPD RFSGSGSGTD FTLKISRVEA EDVGVYYCFQ SNYLPLTFGQ GTKLEIKRAA AGSGGSGILV KQSPMLVAYD NAVNLSCKYS YNLFSREFRA SLHKGLDSAV EVCVVYGNYS QQLQVYSKTG FNCDGKLGNE SVTFYLQNLY VNQTDIYFCK IEVMYPPPYL DNEKSNGTII HVKGKHLCPS PLFPGPSKPF WVLVVVGGVL ACYSLLVTVA FIIFWVRSKR SRLLHSDYMN MTPRRPGPTR KHYQPYAPPR DFAAYRSKKV AKKPTNKAPH PKQEPQEINF PDDLPGSNTA APVQETLHGC QPVTQEDGKE SRISVQERQ
SEQ ID NO:46
載體純系：	pIB1014
序列：	MALPVTALLL PLALLLHAAR PEQKLISEED LDVVMTQTPL SLPVTLGQPA SISCKSTKSL LNSDGFTYLG WCLQKPGQSP QLLIYLVSNR FSGVPDRFSG SGSGTDFTLK ISRVEAEDVG VYYCFQSNYL PLTFGQGTKL EIKRGGGGSG GGGSGGGGSQ VQLVQSGAEV KKPGASVKVS CKASGYTFTN YWIGWVKQAP GQGLEWIGYL YPGGLYTNYN EKFKGKATMT ADTSTNTAYM ELSSLRSEDT AVYYCARYRD YDYAMDYWGQ GTLVTVSSAA AGSGGSGILV KQSPMLVAYD NAVNLSCKYS YNLFSREFRA SLHKGLDSAV EVCVVYGNYS QQLQVYSKTG FNCDGKLGNE SVTFYLQNLY VNQTDIYFCK IEVMYPPPYL DNEKSNGTII HVKGKHLCPS PLFPGPSKPF WVLVVVGGVL ACYSLLVTVA FIIFWVRSKR SRLLHSDYMN MTPRRPGPTR KHYQPYAPPR DFAAYRSKKV AKKPTNKAPH PKQEPQEINF PDDLPGSNTA APVQETLHGC QPVTQEDGKE SRISVQERQ
SEQ ID NO:47
載體純系：	pIB1015
序列：	MALPVTALLL PLALLLHAAR PEQKLISEED LQVQLQESGP GLVKPSQTLS LTCAVYGGSF SSGYWNWIRK HPGKGLEYIG YISYNGITYH NPSLKSRITI NRDTSKNQYS LQLNSVTPED TAVYYCARYK YDYDGGHAMD YWGQGTLVTV SSGGGGSGGG GSGGGGSDIQ MTQSPSSLSA SVGDRVTITC RASQDISNYL NWYQQKPGKA PKLLIYYTSK LHSGVPSRFS GSGSGTDYTL TISSLQPEDF ATYYCQQGSA LPWTFGQGTK VEIKAAAGSG GSGILVKQSP MLVAYDNAVN LSCKYSYNLF SREFRASLHK GLDSAVEVCV VYGNYSQQLQ VYSKTGFNCD GKLGNESVTF YLQNLYVNQT DIYFCKIEVM YPPPYLDNEK SNGTIIHVKG KHLCPSPLFP GPSKPFWVLV VVGGVLACYS LLVTVAFIIF WVRSKRSRLL HSDYMNMTPR RPGPTRKHYQ PYAPPRDFAA YRSKKVAKKP TNKAPHPKQE PQEINFPDDL PGSNTAAPVQ ETLHGCQPVT QEDGKESRIS VQERQ
SEQ ID NO:48
載體純系：	pIB1016
序列：	MALPVTALLL PLALLLHAAR PEQKLISEED LDIQMTQSPS SLSASVGDRV TITCRASQDI SNYLNWYQQK PGKAPKLLIY YTSKLHSGVP SRFSGSGSGT DYTLTISSLQ PEDFATYYCQ QGSALPWTFG QGTKVEIKGG GGSGGGGSGG GGSQVQLQES GPGLVKPSQT LSLTCAVYGG SFSSGYWNWI RKHPGKGLEY IGYISYNGIT YHNPSLKSRI TINRDTSKNQ YSLQLNSVTP EDTAVYYCAR YKYDYDGGHA MDYWGQGTLV TVSSAAAGSG GSGILVKQSP MLVAYDNAVN LSCKYSYNLF SREFRASLHK GLDSAVEVCV VYGNYSQQLQ VYSKTGFNCD GKLGNESVTF YLQNLYVNQT DIYFCKIEVM YPPPYLDNEK SNGTIIHVKG KHLCPSPLFP GPSKPFWVLV VVGGVLACYS LLVTVAFIIF WVRSKRSRLL HSDYMNMTPR RPGPTRKHYQ PYAPPRDFAA YRSKKVAKKP TNKAPHPKQE PQEINFPDDL PGSNTAAPVQ ETLHGCQPVT QEDGKESRIS VQERQ
SEQ ID NO:49
載體純系：	pIB1017
序列：	MALPVTALLL PLALLLHAAR PEQKLISEED LQVQLVESGG GVVQPGRSLR LSCAASGFTF SSYTMHWVRQ APGKGLEWVT FISYDGNNKY YADSVKGRFT ISRDNSKNTL YLQMNSLRAE DTAIYYCART GWLGPFDYWG QGTLVTVSSG GGGSGGGGSG GGGSEIVLTQ SPGTLSLSPG ERATLSCRAS QSVGSSYLAW YQQKPGQAPR LLIYGAFSRA TGIPDRFSGS GSGTDFTLTI SRLEPEDFAV YYCQQYGSSP WTFGQGTKVE IKAAAGSGGS GILVKQSPML VAYDNAVNLS CKYSYNLFSR EFRASLHKGL DSAVEVCVVY GNYSQQLQVY SKTGFNCDGK LGNESVTFYL QNLYVNQTDI YFCKIEVMYP PPYLDNEKSN GTIIHVKGKH LCPSPLFPGP SKPFWVLVVV GGVLACYSLL VTVAFIIFWV RSKRSRLLHS DYMNMTPRRP GPTRKHYQPY APPRDFAAYR SKKVAKKPTN KAPHPKQEPQ EINFPDDLPG SNTAAPVQET LHGCQPVTQE DGKESRISVQ ERQ
SEQ ID NO:50
載體純系：	pIB1018
序列：	MALPVTALLL PLALLLHAAR PEQKLISEED LEIVLTQSPG TLSLSPGERA TLSCRASQSV GSSYLAWYQQ KPGQAPRLLI YGAFSRATGI PDRFSGSGSG TDFTLTISRL EPEDFAVYYC QQYGSSPWTF GQGTKVEIKG GGGSGGGGSG GGGSQVQLVE SGGGVVQPGR SLRLSCAASG FTFSSYTMHW VRQAPGKGLE WVTFISYDGN NKYYADSVKG RFTISRDNSK NTLYLQMNSL RAEDTAIYYC ARTGWLGPFD YWGQGTLVTV SSAAAGSGGS GILVKQSPML VAYDNAVNLS CKYSYNLFSR EFRASLHKGL DSAVEVCVVY GNYSQQLQVY SKTGFNCDGK LGNESVTFYL QNLYVNQTDI YFCKIEVMYP PPYLDNEKSN GTIIHVKGKH LCPSPLFPGP SKPFWVLVVV GGVLACYSLL VTVAFIIFWV RSKRSRLLHS DYMNMTPRRP GPTRKHYQPY APPRDFAAYR SKKVAKKPTN KAPHPKQEPQ EINFPDDLPG SNTAAPVQET LHGCQPVTQE DGKESRISVQ ERQ
SEQ ID NO:51
載體純系：	pIB1019
序列：	MALPVTALLL PLALLLHAAR PEQKLISEED LEVQLVESGG GVVRPGGSLR LSCVASGVTF DDYGMSWVRQ APGKGLEWVS GINWNGGDTD YSDSVKGRFT ISRDNAKNSL YLQMNSLRAE DTALYYCARD FYGSGSYYHV PFDYWGQGIL VTVSSGGGGS GGGGSGGGGS EIVLTQSPGT LSLSPGERAT LSCRASQSVS RSYLAWYQQK RGQAPRLLIY GASSRATGIP DRFSGDGSGT DFTLSISRLE PEDFAVYYCH QYDMSPFTFG PGTKVDIKAA AGSGGSGILV KQSPMLVAYD NAVNLSCKYS YNLFSREFRA SLHKGLDSAV EVCVVYGNYS QQLQVYSKTG FNCDGKLGNE SVTFYLQNLY VNQTDIYFCK IEVMYPPPYL DNEKSNGTII HVKGKHLCPS PLFPGPSKPF WVLVVVGGVL ACYSLLVTVA FIIFWVRSKR SRLLHSDYMN MTPRRPGPTR KHYQPYAPPR DFAAYRSKKV AKKPTNKAPH PKQEPQEINF PDDLPGSNTA APVQETLHGC QPVTQEDGKE SRISVQERQ
SEQ ID NO:52
載體純系：	pIB1020
序列：	MALPVTALLL PLALLLHAAR PEQKLISEED LEIVLTQSPG TLSLSPGERA TLSCRASQSV SRSYLAWYQQ KRGQAPRLLI YGASSRATGI PDRFSGDGSG TDFTLSISRL EPEDFAVYYC HQYDMSPFTF GPGTKVDIKG GGGSGGGGSG GGGSEVQLVE SGGGVVRPGG SLRLSCVASG VTFDDYGMSW VRQAPGKGLE WVSGINWNGG DTDYSDSVKG RFTISRDNAK NSLYLQMNSL RAEDTALYYC ARDFYGSGSY YHVPFDYWGQ GILVTVSSAA AGSGGSGILV KQSPMLVAYD NAVNLSCKYS YNLFSREFRA SLHKGLDSAV EVCVVYGNYS QQLQVYSKTG FNCDGKLGNE SVTFYLQNLY VNQTDIYFCK IEVMYPPPYL DNEKSNGTII HVKGKHLCPS PLFPGPSKPF WVLVVVGGVL ACYSLLVTVA FIIFWVRSKR SRLLHSDYMN MTPRRPGPTR KHYQPYAPPR DFAAYRSKKV AKKPTNKAPH PKQEPQEINF PDDLPGSNTA APVQETLHGC QPVTQEDGKE SRISVQERQ
SEQ ID NO:53
載體純系：	pIB1021
序列：	MALPVTALLL PLALLLHAAR PEQKLISEED LQVQLVESGG GVVQPGRSLR LSCAASGFSF SSTYVCWVRQ APGKGLEWIA CIYTGDGTNY SASWAKGRFT ISKDSSKNTV YLQMNSLRAE DTAVYFCARP DITYGFAINF WGPGTLVTVS SGGGGSGGGG SGGGGSDIQM TQSPSSLSAS VGDRVTIKCQ ASQSISSRLA WYQQKPGKPP KLLIYRASTL ASGVPSRFSG SGSGTDFTLT ISSLQPEDVA TYYCQCTGYG ISWPIGGGTK VEIKAAAGSG GSGILVKQSP MLVAYDNAVN LSCKYSYNLF SREFRASLHK GLDSAVEVCV VYGNYSQQLQ VYSKTGFNCD GKLGNESVTF YLQNLYVNQT DIYFCKIEVM YPPPYLDNEK SNGTIIHVKG KHLCPSPLFP GPSKPFWVLV VVGGVLACYS LLVTVAFIIF WVRSKRSRLL HSDYMNMTPR RPGPTRKHYQ PYAPPRDFAA YRSKKVAKKP TNKAPHPKQE PQEINFPDDL PGSNTAAPVQ ETLHGCQPVT QEDGKESRIS VQERQ
SEQ ID NO:54
載體純系：	pIB1022
序列：	MALPVTALLL PLALLLHAAR PEQKLISEED LDIQMTQSPS SLSASVGDRV TIKCQASQSI SSRLAWYQQK PGKPPKLLIY RASTLASGVP SRFSGSGSGT DFTLTISSLQ PEDVATYYCQ CTGYGISWPI GGGTKVEIKG GGGSGGGGSG GGGSQVQLVE SGGGVVQPGR SLRLSCAASG FSFSSTYVCW VRQAPGKGLE WIACIYTGDG TNYSASWAKG RFTISKDSSK NTVYLQMNSL RAEDTAVYFC ARPDITYGFA INFWGPGTLV TVSSAAAGSG GSGILVKQSP MLVAYDNAVN LSCKYSYNLF SREFRASLHK GLDSAVEVCV VYGNYSQQLQ VYSKTGFNCD GKLGNESVTF YLQNLYVNQT DIYFCKIEVM YPPPYLDNEK SNGTIIHVKG KHLCPSPLFP GPSKPFWVLV VVGGVLACYS LLVTVAFIIF WVRSKRSRLL HSDYMNMTPR RPGPTRKHYQ PYAPPRDFAA YRSKKVAKKP TNKAPHPKQE PQEINFPDDL PGSNTAAPVQ ETLHGCQPVT QEDGKESRIS VQERQ
SEQ ID NO:55
載體純系：	pIB1023
序列：	MALPVTALLL PLALLLHAAR PEQKLISEED LQVQLVQSGA EVKKPGASVK VSCKASGYTF TGYYMHWVRQ APGQGLEWMG WINPDSGGTN YAQKFQGRVT MTRDTSISTA YMELNRLRSD DTAVYYCARD QPLGYCTNGV CSYFDYWGQG TLVTVSSGGG GSGGGGSGGG GSDIQMTQSP SSVSASVGDR VTITCRASQG IYSWLAWYQQ KPGKAPNLLI YTASTLQSGV PSRFSGSGSG TDFTLTISSL QPEDFATYYC QQANIFPLTF GGGTKVEIKA AAGSGGSGIL VKQSPMLVAY DNAVNLSCKY SYNLFSREFR ASLHKGLDSA VEVCVVYGNY SQQLQVYSKT GFNCDGKLGN ESVTFYLQNL YVNQTDIYFC KIEVMYPPPY LDNEKSNGTI IHVKGKHLCP SPLFPGPSKP FWVLVVVGGV LACYSLLVTV AFIIFWVRSK RSRLLHSDYM NMTPRRPGPT RKHYQPYAPP RDFAAYRSKK VAKKPTNKAP HPKQEPQEIN FPDDLPGSNT AAPVQETLHG CQPVTQEDGK ESRISVQERQ
SEQ ID NO:56
載體純系：	pIB1024
序列：	MALPVTALLL PLALLLHAAR PEQKLISEED LDIQMTQSPS SVSASVGDRV TITCRASQGI YSWLAWYQQK PGKAPNLLIY TASTLQSGVP SRFSGSGSGT DFTLTISSLQ PEDFATYYCQ QANIFPLTFG GGTKVEIKGG GGSGGGGSGG GGSQVQLVQS GAEVKKPGAS VKVSCKASGY TFTGYYMHWV RQAPGQGLEW MGWINPDSGG TNYAQKFQGR VTMTRDTSIS TAYMELNRLR SDDTAVYYCA RDQPLGYCTN GVCSYFDYWG QGTLVTVSSA AAGSGGSGIL VKQSPMLVAY DNAVNLSCKY SYNLFSREFR ASLHKGLDSA VEVCVVYGNY SQQLQVYSKT GFNCDGKLGN ESVTFYLQNL YVNQTDIYFC KIEVMYPPPY LDNEKSNGTI IHVKGKHLCP SPLFPGPSKP FWVLVVVGGV LACYSLLVTV AFIIFWVRSK RSRLLHSDYM NMTPRRPGPT RKHYQPYAPP RDFAAYRSKK VAKKPTNKAP HPKQEPQEIN FPDDLPGSNT AAPVQETLHG CQPVTQEDGK ESRISVQERQ
SEQ ID NO:57
載體純系：	pIB1025
序列：	MALPVTALLL PLALLLHAAR PEQKLISEED LILVKQSPML VAYDNAVNLS CKYSYNLFSR EFRASLHKGL DSAVEVCVVY GNYSQQLQVY SKTGFNCDGK LGNESVTFYL QNLYVNQTDI YFCKIEVMYP PPYLDNEKSN GTIIHVKGKH LCPSPLFPGP SKPFWVLVVV GGVLACYSLL VTVAFIIFWV RSKRSRLLHS DYMNMTPRRP GPTRKHYQPY APPRDFAAYR SKKVAKKPTN KAPHPKQEPQ EINFPDDLPG SNTAAPVQET LHGCQPVTQE DGKESRISVQ ERQ
SEQ ID NO:58
載體純系：	pIB1026
序列：	MEHSTFLSGL VLATLLSQVS PEQKLISEED LFKIPIEELE DRVFVNCNTS ITWVEGTVGT LLSDITRLDL GKRILDPRGI YRCNGTDIYK DKESTVQVHY RMCQSCVELD PATVAGIIVT DVIATLLLAL GVFCFARSKR SRLLHSDYMN MTPRRPGPTR KHYQPYAPPR DFAAYRSKKV AKKPTNKAPH PKQEPQEINF PDDLPGSNTA APVQETLHGC QPVTQEDGKE SRISVQERQ
SEQ ID NO:59
載體純系：	pIB1027
序列：	MQSGTHWRVL GLCLLSVGVW GQDYKDDDDK DGNEEMGGIT QTPYKVSISG TTVILTCPQY PGSEILWQHN DKNIGGDEDD KNIGSDEDHL SLKEFSELEQ SGYYVCYPRG SKPEDANFYL YLRARVCENC MEMDVMSVAT IVIVDICITG GLLLLVYYWS RSKRSRLLHS DYMNMTPRRP GPTRKHYQPY APPRDFAAYR SKKVAKKPTN KAPHPKQEPQ EINFPDDLPG SNTAAPVQET LHGCQPVTQE DGKESRISVQ ERQ
SEQ ID NO:60
載體純系：	pIB1028
序列：	MEQGKGLAVL ILAIILLQGT LAEQKLISEE DLQSIKGNHL VKVYDYQEDG SVLLTCDAEA KNITWFKDGK MIGFLTEDKK KWNLGSNAKD PRGMYQCKGS QNKSKPLQVY YRMCQNCIEL NAATISGFLF AEIVSIFVLA VGVYFIARSK RSRLLHSDYM NMTPRRPGPT RKHYQPYAPP RDFAAYRSKK VAKKPTNKAP HPKQEPQEIN FPDDLPGSNT AAPVQETLHG CQPVTQEDGK ESRISVQERQ
SEQ ID NO:61
載體純系：	pIB1029
序列：	MKWKALFTAA ILQAQLPITE AQSFGLLDPK LCYLLDGILF IYGVILTALF LRSKRSRLLH SDYMNMTPRR PGPTRKHYQP YAPPRDFAAY RSKKVAKKPT NKAPHPKQEP QEINFPDDLP GSNTAAPVQE TLHGCQPVTQ EDGKESRISV QERQEQKLIS EEDL
SEQ ID NO:62
載體純系：	pIB1030
序列：	MALPVTALLL PLALLLHAAR PEQKLISEED LSQPHTKPSV FVMKNGTNVA CLVKEFYPKD IRINLVSSKK ITEFDPAIVI SPSGKYNAVK LGKYEDSNSV TCSVQHDNKT VHSTDFEVKT DSTDHVKPKE TENTKQPSKS CHKPKAIVHT EKVNMMSLTV LGLRMLFAKT VAVNFLLTAK LFFLRSKRSR LLHSDYMNMT PRRPGPTRKH YQPYAPPRDF AAYRSKKVAK KPTNKAPHPK QEPQEINFPD DLPGSNTAAP VQETLHGCQP VTQEDGKESR ISVQERQ
SEQ ID NO:63
載體純系：	pIB1031
序列：	MALPVTALLL PLALLLHAAR PDYKDDDDKD KQLDADVSPK PTIFLPSIAE TKLQKAGTYL CLLEKFFPDV IKIHWQEKKS NTILGSQEGN TMKTNDTYMK FSWLTVPEKS LDKEHRCIVR HENNKNGVDQ EIIFPPIKTD VITMDPKDNC SKDANDTLLL QLTNTSAYYM YLLLLLKSVV YFAIITCCLL RSKRSRLLHS DYMNMTPRRP GPTRKHYQPY APPRDFAAYR SKKVAKKPTN KAPHPKQEPQ EINFPDDLPG SNTAAPVQET LHGCQPVTQE DGKESRISVQ ERQ
SEQ ID NO:64
載體純系：	pIB1032
序列：	MALPVTALLL PLALLLHAAR PEQKLISEED LIQNPEPAVY QLKDPRSQDS TLCLFTDFDS QINVPKTMES GTFITDKCVL DMKAMDSKSN GAIAWSNQTS FTCQDIFKET NATYPSSDVP CDATLTEKSF ETDMNLNFQN LLVIVLRILL LKVAGFNLLM TLRLWSSRSK RSRLLHSDYM NMTPRRPGPT RKHYQPYAPP RDFAAYRSKK VAKKPTNKAP HPKQEPQEIN FPDDLPGSNT AAPVQETLHG CQPVTQEDGK ESRISVQERQ
SEQ ID NO:65
載體純系：	pIB1033
序列：	MALPVTALLL PLALLLHAAR PDYKDDDDKV LTPPKVSLFE PSKAEIANKQ KATLVCLARG FFPDHVELSW WVNGKEVHSG VCTDPQAYKE SNYSYCLSSR LRVSATFWHN PRNHFRCQVQ FHGLSEEDKW PEGSPKPVTQ NISAEAWGRA DCGITSASYQ QGVLSATILY EILLGKATLY AVLVSTLVVM AMVKRKNSRS KRSRLLHSDY MNMTPRRPGP TRKHYQPYAP PRDFAAYRSK KVAKKPTNKA PHPKQEPQEI NFPDDLPGSN TAAPVQETLH GCQPVTQEDG KESRISVQER Q
SEQ ID NO:66
載體純系：	pIB1046
序列：	MALPVTALLL PLALLLHAAR PEQKLISEED LSQPHTKPSV FVMKNGTNVA CLVKEFYPKD IRINLVSSKK ITEFDPAIVI SPSGKYNAVK LGKYEDSNSV TCSVQHDNKT VHSTDFEVKT DSTDHVKPKE TENTKQPSKS CHKPKAIVHT EKVNMMSLTV LGLRMLFAKT VAVNFLLTAK LFFLRSKRSR LLHSDYMNMT PRRPGPTRKH YQPYAPPRDF AAYRSKKVAK KPTNKAPHPK QEPQEINFPD DLPGSNTAAP VQETLHGCQP VTQEDGKESR ISVQERQRAK RGSGEGRGSL LTCGDVEENP GPMALPVTAL LLPLALLLHA ARPDYKDDDD KDKQLDADVS PKPTIFLPSI AETKLQKAGT YLCLLEKFFP DVIKIHWQEK KSNTILGSQE GNTMKTNDTY MKFSWLTVPE KSLDKEHRCI VRHENNKNGV DQEIIFPPIK TDVITMDPKD NCSKDANDTL LLQLTNTSAY YMYLLLLLKS VVYFAIITCC LLRSKRSRLL HSDYMNMTPR RPGPTRKHYQ PYAPPRDFAA YRSKKVAKKP TNKAPHPKQE PQEINFPDDL PGSNTAAPVQ ETLHGCQPVT QEDGKESRIS VQERQ
SEQ ID NO:67
載體純系：	pIB1047
序列：	MALPVTALLL PLALLLHAAR PEQKLISEED LIQNPEPAVY QLKDPRSQDS TLCLFTDFDS QINVPKTMES GTFITDKCVL DMKAMDSKSN GAIAWSNQTS FTCQDIFKET NATYPSSDVP CDATLTEKSF ETDMNLNFQN LLVIVLRILL LKVAGFNLLM TLRLWSSRSK RSRLLHSDYM NMTPRRPGPT RKHYQPYAPP RDFAAYRSKK VAKKPTNKAP HPKQEPQEIN FPDDLPGSNT AAPVQETLHG CQPVTQEDGK ESRISVQERQ RAKRGSGEGR GSLLTCGDVE ENPGPMALPV TALLLPLALL LHAARPDYKD DDDKVLTPPK VSLFEPSKAE IANKQKATLV CLARGFFPDH VELSWWVNGK EVHSGVCTDP QAYKESNYSY CLSSRLRVSA TFWHNPRNHF RCQVQFHGLS EEDKWPEGSP KPVTQNISAE AWGRADCGIT SASYQQGVLS ATILYEILLG KATLYAVLVS TLVVMAMVKR KNSRSKRSRL LHSDYMNMTP RRPGPTRKHY QPYAPPRDFA AYRSKKVAKK PTNKAPHPKQ EPQEINFPDD LPGSNTAAPV QETLHGCQPV TQEDGKESRI SVQERQ
SEQ ID NO:68
載體純系：	pIB1048
序列：	MEHSTFLSGL VLATLLSQVS PEQKLISEED LFKIPIEELE DRVFVNCNTS ITWVEGTVGT LLSDITRLDL GKRILDPRGI YRCNGTDIYK DKESTVQVHY RMCQSCVELD PATVAGIIVT DVIATLLLAL GVFCFARSKR SRLLHSDYMN MTPRRPGPTR KHYQPYAPPR DFAAYRSKKV AKKPTNKAPH PKQEPQEINF PDDLPGSNTA APVQETLHGC QPVTQEDGKE SRISVQERQR AKRGSGEGRG SLLTCGDVEE NPGPMQSGTH WRVLGLCLLS VGVWGQDYKD DDDKDGNEEM GGITQTPYKV SISGTTVILT CPQYPGSEIL WQHNDKNIGG DEDDKNIGSD EDHLSLKEFS ELEQSGYYVC YPRGSKPEDA NFYLYLRARV CENCMEMDVM SVATIVIVDI CITGGLLLLV YYWSRSKRSR LLHSDYMNMT PRRPGPTRKH YQPYAPPRDF AAYRSKKVAK KPTNKAPHPK QEPQEINFPD DLPGSNTAAP VQETLHGCQP VTQEDGKESR ISVQERQ
SEQ ID NO:69
載體純系：	pIB1049
序列：	MEQGKGLAVL ILAIILLQGT LAEQKLISEE DLQSIKGNHL VKVYDYQEDG SVLLTCDAEA KNITWFKDGK MIGFLTEDKK KWNLGSNAKD PRGMYQCKGS QNKSKPLQVY YRMCQNCIEL NAATISGFLF AEIVSIFVLA VGVYFIARSK RSRLLHSDYM NMTPRRPGPT RKHYQPYAPP RDFAAYRSKK VAKKPTNKAP HPKQEPQEIN FPDDLPGSNT AAPVQETLHG CQPVTQEDGK ESRISVQERQ RAKRGSGMQS GTHWRVLGLC LLSVGVWGQD YKDDDDKDGN EEMGGITQTP YKVSISGTTV ILTCPQYPGS EILWQHNDKN IGGDEDDKNI GSDEDHLSLK EFSELEQSGY YVCYPRGSKP EDANFYLYLR ARVCENCMEM DVMSVATIVI VDICITGGLL LLVYYWSRSK RSRLLHSDYM NMTPRRPGPT RKHYQPYAPP RDFAAYRSKK VAKKPTNKAP HPKQEPQEIN FPDDLPGSNT AAPVQETLHG CQPVTQEDGK ESRISVQERQ
SEQ ID NO:70
載體純系：	pIB1050
序列：	MEHSTFLSGL VLATLLSQVS PEQKLISEED LFKIPIEELE DRVFVNCNTS ITWVEGTVGT LLSDITRLDL GKRILDPRGI YRCNGTDIYK DKESTVQVHY RMCQSCVELD PATVAGIIVT DVIATLLLAL GVFCFAGHET GRLSGAADTQ ALLRNDQVYQ PLRDRDDAQY SHLGGNWARN KRSKRSRLLH SDYMNMTPRR PGPTRKHYQP YAPPRDFAAY RSKKVAKKPT NKAPHPKQEP QEINFPDDLP GSNTAAPVQE TLHGCQPVTQ EDGKESRISV QERQRAKRGS GEGRGSLLTC GDVEENPGPM QSGTHWRVLG LCLLSVGVWG QDYKDDDDKD GNEEMGGITQ TPYKVSISGT TVILTCPQYP GSEILWQHND KNIGGDEDDK NIGSDEDHLS LKEFSELEQS GYYVCYPRGS KPEDANFYLY LRARVCENCM EMDVMSVATI VIVDICITGG LLLLVYYWSK NRKAKAKPVT RGAGAGGRQR GQNKERPPPV PNPDYEPIRK GQRDLYSGLN QRRIRSKRSR LLHSDYMNMT PRRPGPTRKH YQPYAPPRDF AAYRSKKVAK KPTNKAPHPK QEPQEINFPD DLPGSNTAAP VQETLHGCQP VTQEDGKESR ISVQERQ
SEQ ID NO:71
載體純系：	pIB1051
序列：	MEHSTFLSGL VLATLLSQVS PEQKLISEED LFKIPIEELE DRVFVNCNTS ITWVEGTVGT LLSDITRLDL GKRILDPRGI YRCNGTDIYK DKESTVQVHY RMCQSCVELD PATVAGIIVT DVIATLLLAL GVFCFAGHET GRLSGAADTQ ALLRNDQVYQ PLRDRDDAQY SHLGGNWARN KRAKRGSGEG RGSLLTCGDV EENPGPMQSG THWRVLGLCL LSVGVWGQDY KDDDDKDGNE EMGGITQTPY KVSISGTTVI LTCPQYPGSE ILWQHNDKNI GGDEDDKNIG SDEDHLSLKE FSELEQSGYY VCYPRGSKPE DANFYLYLRA RVCENCMEMD VMSVATIVIV DICITGGLLL LVYYWSKNRK AKAKPVTRGA GAGGRQRGQN KERPPPVPNP DYEPIRKGQR DLYSGLNQRR I
SEQ ID NO:72
載體純系：	pIB1052
序列：	MEHSTFLSGL VLATLLSQVS PEQKLISEED LFKIPIEELE DRVFVNCNTS ITWVEGTVGT LLSDITRLDL GKRILDPRGI YRCNGTDIYK DKESTVQVHY RMCQSCVELD PATVAGIIVT DVIATLLLAL GVFCFARAKR GSGEGRGSLL TCGDVEENPG PMQSGTHWRV LGLCLLSVGV WGQDYKDDDD KDGNEEMGGI TQTPYKVSIS GTTVILTCPQ YPGSEILWQH NDKNIGGDED DKNIGSDEDH LSLKEFSELE QSGYYVCYPR GSKPEDANFY LYLRARVCEN CMEMDVMSVA TIVIVDICIT GGLLLLVYYW S
SEQ ID NO:73
載體純系：	pIB1053
序列：	MEQGKGLAVL ILAIILLQGT LAEQKLISEE DLQSIKGNHL VKVYDYQEDG SVLLTCDAEA KNITWFKDGK MIGFLTEDKK KWNLGSNAKD PRGMYQCKGS QNKSKPLQVY YRMCQNCIEL NAATISGFLF AEIVSIFVLA VGVYFIAGQD GVRQSRASDK QTLLPNDQLY QPLKDREDDQ YSHLQGNQLR RNRSKRSRLL HSDYMNMTPR RPGPTRKHYQ PYAPPRDFAA YRSKKVAKKP TNKAPHPKQE PQEINFPDDL PGSNTAAPVQ ETLHGCQPVT QEDGKESRIS VQERQRAKRG SGEGRGSLLT CGDVEENPGP MQSGTHWRVL GLCLLSVGVW GQDYKDDDDK DGNEEMGGIT QTPYKVSISG TTVILTCPQY PGSEILWQHN DKNIGGDEDD KNIGSDEDHL SLKEFSELEQ SGYYVCYPRG SKPEDANFYL YLRARVCENC MEMDVMSVAT IVIVDICITG GLLLLVYYWS KNRKAKAKPV TRGAGAGGRQ RGQNKERPPP VPNPDYEPIR KGQRDLYSGL NQRRIRSKRS RLLHSDYMNM TPRRPGPTRK HYQPYAPPRD FAAYRSKKVA KKPTNKAPHP KQEPQEINFP DDLPGSNTAA PVQETLHGCQ PVTQEDGKES RISVQERQ
SEQ ID NO:74
載體純系：	pIB1054
序列：	MEQGKGLAVL ILAIILLQGT LAEQKLISEE DLQSIKGNHL VKVYDYQEDG SVLLTCDAEA KNITWFKDGK MIGFLTEDKK KWNLGSNAKD PRGMYQCKGS QNKSKPLQVY YRMCQNCIEL NAATISGFLF AEIVSIFVLA VGVYFIAGQD GVRQSRASDK QTLLPNDQLY QPLKDREDDQ YSHLQGNQLR RNRAKRGSGE GRGSLLTCGD VEENPGPMQS GTHWRVLGLC LLSVGVWGQD YKDDDDKDGN EEMGGITQTP YKVSISGTTV ILTCPQYPGS EILWQHNDKN IGGDEDDKNI GSDEDHLSLK EFSELEQSGY YVCYPRGSKP EDANFYLYLR ARVCENCMEM DVMSVATIVI VDICITGGLL LLVYYWSKNR KAKAKPVTRG AGAGGRQRGQ NKERPPPVPN PDYEPIRKGQ RDLYSGLNQR RI
SEQ ID NO:75
載體純系：	pIB1055
序列：	MEQGKGLAVL ILAIILLQGT LAEQKLISEE DLQSIKGNHL VKVYDYQEDG SVLLTCDAEA KNITWFKDGK MIGFLTEDKK KWNLGSNAKD PRGMYQCKGS QNKSKPLQVY YRMCQNCIEL NAATISGFLF AEIVSIFVLA VGVYFIARAK RGSGEGRGSL LTCGDVEENP GPMQSGTHWR VLGLCLLSVG VWGQDYKDDD DKDGNEEMGG ITQTPYKVSI SGTTVILTCP QYPGSEILWQ HNDKNIGGDE DDKNIGSDED HLSLKEFSEL EQSGYYVCYP RGSKPEDANF YLYLRARVCE NCMEMDVMSV ATIVIVDICI TGGLLLLVYY WS
SEQ ID NO:76
載體純系：	pIB1056
序列：	MKWKALFTAA ILQAQLPITE AQSFGLLDPK LCYLLDGILF IYGVILTALF LRVKFSRSAD APAYQQGQNQ LYNELNLGRR EEYDVLDKRR GRDPEMGGKP QRRKNPQEGL YNELQKDKMA EAYSEIGMKG ERRRGKGHDG LYQGLSTATK DTYDALHMQA LPPRRSKRSR LLHSDYMNMT PRRPGPTRKH YQPYAPPRDF AAYRSKKVAK KPTNKAPHPK QEPQEINFPD DLPGSNTAAP VQETLHGCQP VTQEDGKESR ISVQERQEQK LISEEDL
SEQ ID NO:78
載體純系：	pIB1057
序列：	MKWKALFTAA ILQAQLPITE AQSFGLLDPK LCYLLDGILF IYGVILTALF LRVKFSRSAD APAYQQGQNQ LYNELNLGRR EEYDVLDKRR GRDPEMGGKP QRRKNPQEGL YNELQKDKMA EAYSEIGMKG ERRRGKGHDG LYQGLSTATK DTYDALHMQA LPPREQKLIS EEDL
SEQ ID NO:79
載體純系：	pIB1058
序列：	MKWKALFTAA ILQAQLPITE AQSFGLLDPK LCYLLDGILF IYGVILTALF LEQKLISEED L
SEQ ID NO:80
載體純系：	pIB1059
序列：	MKWKALFTAA ILQAQLPITE AQSFGLLDPK LCYLLDGILF IYGVILTALF LRVKFSRSAD APAYQQGQNQ LYNELNLGRR EEYDVLDKRR GRDPEMGGKP QRRKNPQEGL YNELQKDKMA EAYSEIGMKG ERRRGKGHDG LYQGLSTATK DTYDALHMQA LPPRRVKFSR SADAPAYQQG QNQLYNELNL GRREEYDVLD KRRGRDPEMG GKPQRRKNPQ EGLYNELQKD KMAEAYSEIG MKGERRRGKG HDGLYQGLST ATKDTYDALH MQALPPRRSK RSRLLHSDYM NMTPRRPGPT RKHYQPYAPP RDFAAYRSKK VAKKPTNKAP HPKQEPQEIN FPDDLPGSNT AAPVQETLHG CQPVTQEDGK ESRISVQERQ EQKLISEEDL
SEQ ID NO:81
載體純系：	pIB1060
序列：	MKWKALFTAA ILQAQLPITE AQSFGLLDPK LCYLLDGILF IYGVILTALF LRVKFSRSAD APAYQQGQNQ LYNELNLGRR EEYDVLDKRR GRDPEMGGKP QRRKNPQEGL YNELQKDKMA EAYSEIGMKG ERRRGKGHDG LYQGLSTATK DTYDALHMQA LPPRRVKFSR SADAPAYQQG QNQLYNELNL GRREEYDVLD KRRGRDPEMG GKPQRRKNPQ EGLYNELQKD KMAEAYSEIG MKGERRRGKG HDGLYQGLST ATKDTYDALH MQALPPREQK LISEEDL
SEQ ID NO:82
載體純系：	pIB1061
序列：	MKWKALFTAA ILQAQLPITE AQSFGLLDPK LCYLLDGILF IYGVILTALF LRSKRSRLLH SDYMNMTPRR PGPTRKHYQP YAPPRDFAAY RSKKVAKKPT NKAPHPKQEP QEINFPDDLP GSNTAAPVQE TLHGCQPVTQ EDGKESRISV QERQRVKFSR SADAPAYQQG QNQLYNELNL GRREEYDVLD KRRGRDPEMG GKPQRRKNPQ EGLYNELQKD KMAEAYSEIG MKGERRRGKG HDGLYQGLST ATKDTYDALH MQALPPRRVK FSRSADAPAY QQGQNQLYNE LNLGRREEYD VLDKRRGRDP EMGGKPQRRK NPQEGLYNEL QKDKMAEAYS EIGMKGERRR GKGHDGLYQG LSTATKDTYD ALHMQALPPR EQKLISEEDL
SEQ ID NO:83
載體純系：	pIB1062
序列：	MKWKALFTAA ILQAQLPITE AQSFGLLDPK LCYLLDGILF IYGVILTALF LRSKRSRLLH SDYMNMTPRR PGPTRKHYQP YAPPRDFAAY RSKKVAKKPT NKAPHPKQEP QEINFPDDLP GSNTAAPVQE TLHGCQPVTQ EDGKESRISV QERQRVKFSR SADAPAYQQG QNQLYNELNL GRREEYDVLD KRRGRDPEMG GKPQRRKNPQ EGLYNELQKD KMAEAYSEIG MKGERRRGKG HDGLYQGLST ATKDTYDALH MQALPPREQK LISEEDL
SEQ ID NO:84
載體純系：	pIB1063
序列：	MGHTRRQGTS PSKCPYLNFF QLLVLAGLSH FCSGEQKLIS EEDLVIHVTK EVKEVATLSC GHNVSVEELA QTRIYWQKEK KMVLTMMSGD MNIWPEYKNR TIFDITNNLS IVILALRPSD EGTYECVVLK YEKDAFKREH LAEVTLSVKA DFPTPSISDF EIPTSNIRRI ICSTSGGFPE PHLSWLENGE ELNAINTTVS QDPETELYAV SSKLDFNMTT NHSFMCLIKY GHLRVNQTFN WNTTKQEHFP DNLLPSWAIT LISVNGIFVI CCL
SEQ ID NO:85
載體純系：	pIB1064
序列：	MGCGCSSHPE DDWMENIDVC ENCHYPIVPL DGKGTLLIRN GSEVRDPLVT YEGSNPPASP LQDNLVIALH SYEPSHDGDL GFEKGEQLRI LEQSGEWWKA QSLTTGQEGF IPFNFVAKAN SLEPEPWFFK NLSRKDAERQ LLAPGNTHGS FLIRESESTA GSFSLSVRDF DQNQGEVVKH YKIRNLDNGG FYISPRITFP GLHELVRHYT NASDGLCTRL SRPCQTQKPQ KPWWEDEWEV PRETLKLVER LGAGQFGEVW MGYYNGHTKV AVKSLKQGSM SPDAFLAEAN LMKQLQHQRL VRLYAVVTQE PIYIITEYME NGSLVDFLKT PSGIKLTINK LLDMAAQIAE GMAFIEERNY IHRDLRAANI LVSDTLSCKI ADFGLARLIE DNEYTAREGA KFPIKWTAPE AINYGTFTIK SDVWSFGILL TEIVTHGRIP YPGMTNPEVI QNLERGYRMV RPDNCPEELY QLMRLCWKER PEDRPTFDYL RSVLEDFFTA TEGQYQPQPE QKLISEEDL
SEQ ID NO:86
載體純系：	pIB1065
序列：	MGCGCSSHPE DDWMENIDVC ENCHYPIVPL DGKGTLLIRN GSEVRDPLVT YEGSNPPASP LQDNLVIALH SYEPSHDGDL GFEKGEQLRI LEQSGEWWKA QSLTTGQEGF IPFNFVAKAN SLEPEPWFFK NLSRKDAERQ LLAPGNTHGS FLIRESESTA GSFSLSVRDF DQNQGEVVKH YKIRNLDNGG FYISPRITFP GLHELVRHYT NASDGLCTRL SRPCQTQKPQ KPWWEDEWEV PRETLKLVER LGAGQFGEVW MGYYNGHTKV AVKSLKQGSM SPDAFLAEAN LMKQLQHQRL VRLYAVVTQE PIYIITEYME NGSLVDFLKT PSGIKLTINK LLDMAAQIAE GMAFIEERNY IHRDLRAANI LVSDTLSCKI ADFGLARLIE DNEYTAREGA KFPIKWTAPE AINYGTFTIK SDVWSFGILL TEIVTHGRIP YPGMTNPEVI QNLERGYRMV RPDNCPEELY QLMRLCWKER PEDRPTFDYL RSVLEDFFTA TEGQFQPQPE QKLISEEDL
SEQ ID NO:87
載體純系：	pIB1066
序列：	MGHTRRQGTS PSKCPYLNFF QLLVLAGLSH FCSGEQKLIS EEDLVIHVTK EVKEVATLSC GHNVSVEELA QTRIYWQKEK KMVLTMMSGD MNIWPEYKNR TIFDITNNLS IVILALRPSD EGTYECVVLK YEKDAFKREH LAEVTLSVKA DFPTPSISDF EIPTSNIRRI ICSTSGGFPE PHLSWLENGE ELNAINTTVS QDPETELYAV SSKLDFNMTT NHSFMCLIKY GHLRVNQTFN WNTTKQEHFP DNLLPSWAIT LISVNGIFVI CCLGCGCSSH PEDDWMENID VCENCHYPIV PLDGKGTLLI RNGSEVRDPL VTYEGSNPPA SPLQDNLVIA LHSYEPSHDG DLGFEKGEQL RILEQSGEWW KAQSLTTGQE GFIPFNFVAK ANSLEPEPWF FKNLSRKDAE RQLLAPGNTH GSFLIRESES TAGSFSLSVR DFDQNQGEVV KHYKIRNLDN GGFYISPRIT FPGLHELVRH YTNASDGLCT RLSRPCQTQK PQKPWWEDEW EVPRETLKLV ERLGAGQFGE VWMGYYNGHT KVAVKSLKQG SMSPDAFLAE ANLMKQLQHQ RLVRLYAVVT QEPIYIITEY MENGSLVDFL KTPSGIKLTI NKLLDMAAQI AEGMAFIEER NYIHRDLRAA NILVSDTLSC KIADFGLARL IEDNEYTARE GAKFPIKWTA PEAINYGTFT IKSDVWSFGI LLTEIVTHGR IPYPGMTNPE VIQNLERGYR MVRPDNCPEE LYQLMRLCWK ERPEDRPTFD YLRSVLEDFF TATEGQYQPQ P
SEQ ID NO:88
載體純系：	pIB1067
序列：	MGHTRRQGTS PSKCPYLNFF QLLVLAGLSH FCSGEQKLIS EEDLVIHVTK EVKEVATLSC GHNVSVEELA QTRIYWQKEK KMVLTMMSGD MNIWPEYKNR TIFDITNNLS IVILALRPSD EGTYECVVLK YEKDAFKREH LAEVTLSVKA DFPTPSISDF EIPTSNIRRI ICSTSGGFPE PHLSWLENGE ELNAINTTVS QDPETELYAV SSKLDFNMTT NHSFMCLIKY GHLRVNQTFN WNTTKQEHFP DNLLPSWAIT LISVNGIFVI CCLGCGCSSH PEDDWMENID VCENCHYPIV PLDGKGTLLI RNGSEVRDPL VTYEGSNPPA SPLQDNLVIA LHSYEPSHDG DLGFEKGEQL RILEQSGEWW KAQSLTTGQE GFIPFNFVAK ANSLEPEPWF FKNLSRKDAE RQLLAPGNTH GSFLIRESES TAGSFSLSVR DFDQNQGEVV KHYKIRNLDN GGFYISPRIT FPGLHELVRH YTNASDGLCT RLSRPCQTQK PQKPWWEDEW EVPRETLKLV ERLGAGQFGE VWMGYYNGHT KVAVKSLKQG SMSPDAFLAE ANLMKQLQHQ RLVRLYAVVT QEPIYIITEY MENGSLVDFL KTPSGIKLTI NKLLDMAAQI AEGMAFIEER NYIHRDLRAA NILVSDTLSC KIADFGLARL IEDNEYTARE GAKFPIKWTA PEAINYGTFT IKSDVWSFGI LLTEIVTHGR IPYPGMTNPE VIQNLERGYR MVRPDNCPEE LYQLMRLCWK ERPEDRPTFD YLRSVLEDFF TATEGQYQPQ PRSKRSRLLH SDYMNMTPRR PGPTRKHYQP YAPPRDFAAY RSKKVAKKPT NKAPHPKQEP QEINFPDDLP GSNTAAPVQE TLHGCQPVTQ EDGKESRISV QERQ
SEQ ID NO:89
載體純系：	pIB1068
序列：	MGHTRRQGTS PSKCPYLNFF QLLVLAGLSH FCSGEQKLIS EEDLVIHVTK EVKEVATLSC GHNVSVEELA QTRIYWQKEK KMVLTMMSGD MNIWPEYKNR TIFDITNNLS IVILALRPSD EGTYECVVLK YEKDAFKREH LAEVTLSVKA DFPTPSISDF EIPTSNIRRI ICSTSGGFPE PHLSWLENGE ELNAINTTVS QDPETELYAV SSKLDFNMTT NHSFMCLIKY GHLRVNQTFN WNTTKQEHFP DNLLPSWAIT LISVNGIFVI CCLGCGCSSH PEDDWMENID VCENCHYPIV PLDGKGTLLI RNGSEVRDPL VTYEGSNPPA SPLQDNLVIA LHSYEPSHDG DLGFEKGEQL RILEQSGEWW KAQSLTTGQE GFIPFNFVAK ANSLEPEPWF FKNLSRKDAE RQLLAPGNTH GSFLIRESES TAGSFSLSVR DFDQNQGEVV KHYKIRNLDN GGFYISPRIT FPGLHELVRH YTNASDGLCT RLSRPCQTQK PQKPWWEDEW EVPRETLKLV ERLGAGQFGE VWMGYYNGHT KVAVKSLKQG SMSPDAFLAE ANLMKQLQHQ RLVRLYAVVT QEPIYIITEY MENGSLVDFL KTPSGIKLTI NKLLDMAAQI AEGMAFIEER NYIHRDLRAA NILVSDTLSC KIADFGLARL IEDNEYTARE GAKFPIKWTA PEAINYGTFT IKSDVWSFGI LLTEIVTHGR IPYPGMTNPE VIQNLERGYR MVRPDNCPEE LYQLMRLCWK ERPEDRPTFD YLRSVLEDFF TATEGQFQPQ P
SEQ ID NO:90
載體純系：	pIB1069
序列：	MGHTRRQGTS PSKCPYLNFF QLLVLAGLSH FCSGEQKLIS EEDLVIHVTK EVKEVATLSC GHNVSVEELA QTRIYWQKEK KMVLTMMSGD MNIWPEYKNR TIFDITNNLS IVILALRPSD EGTYECVVLK YEKDAFKREH LAEVTLSVKA DFPTPSISDF EIPTSNIRRI ICSTSGGFPE PHLSWLENGE ELNAINTTVS QDPETELYAV SSKLDFNMTT NHSFMCLIKY GHLRVNQTFN WNTTKQEHFP DNLLPSWAIT LISVNGIFVI CCLGCGCSSH PEDDWMENID VCENCHYPIV PLDGKGTLLI RNGSEVRDPL VTYEGSNPPA SPLQDNLVIA LHSYEPSHDG DLGFEKGEQL RILEQSGEWW KAQSLTTGQE GFIPFNFVAK ANSLEPEPWF FKNLSRKDAE RQLLAPGNTH GSFLIRESES TAGSFSLSVR DFDQNQGEVV KHYKIRNLDN GGFYISPRIT FPGLHELVRH YTNASDGLCT RLSRPCQTQK PQKPWWEDEW EVPRETLKLV ERLGAGQFGE VWMGYYNGHT KVAVKSLKQG SMSPDAFLAE ANLMKQLQHQ RLVRLYAVVT QEPIYIITEY MENGSLVDFL KTPSGIKLTI NKLLDMAAQI AEGMAFIEER NYIHRDLRAA NILVSDTLSC KIADFGLARL IEDNEYTARE GAKFPIKWTA PEAINYGTFT IKSDVWSFGI LLTEIVTHGR IPYPGMTNPE VIQNLERGYR MVRPDNCPEE LYQLMRLCWK ERPEDRPTFD YLRSVLEDFF TATEGQFQPQ PRSKRSRLLH SDYMNMTPRR PGPTRKHYQP YAPPRDFAAY RSKKVAKKPT NKAPHPKQEP QEINFPDDLP GSNTAAPVQE TLHGCQPVTQ EDGKESRISV QERQ
SEQ ID NO:91
載體純系：	pIB1070
序列：	MALPVTALLL PLALLLHAAR PEQKLISEED LMEEAILVPC VLGLLLLPIL AMLMALCVHC HRLPGSYDST SSDSLYPRGI QFKRPHTVAP WPPAYPPVTS YPPLSQPDLL PIPRSPQPLG GSHRTPSSRR DSDGANSVAS YENEGASGIR GAQAGWGVWG PSWTRLTPVS LPPEPACEDA DEDEDDYHNP GYLVVLPDST PATSTAAPSA PALSTPGIRD SAFSMESIDD YVNVPESGES AEASLDGSRE YVNVSQELHP GAAKTEPAAL SSQEAEEVEE EGAPDYENLQ ELN
SEQ ID NO:92
載體純系：	pIB1071
序列：	MALPVTALLL PLALLLHAAR PEQKLISEED LMEEAILVPC VLGLLLLPIL AMLMALCVHC HRLPGSYDST SSDSLYPRGI QFKRPHTVAP WPPAYPPVTS YPPLSQPDLL PIPRSPQPLG GSHRTPSSRR DSDGANSVAS YENEGASGIR GAQAGWGVWG PSWTRLTPVS LPPEPACEDA DEDEDDYHNP GYLVVLPDST PATSTAAPSA PALSTPGIRD SAFSMESIDD YVNVPESGES AEASLDGSRE YVNVSQELHP GAAKTEPAAL SSQEAEEVEE EGAPDYENLQ ELNRSKRSRL LHSDYMNMTP RRPGPTRKHY QPYAPPRDFA AYRSKKVAKK PTNKAPHPKQ EPQEINFPDD LPGSNTAAPV QETLHGCQPV TQEDGKESRI SVQERQ
SEQ ID NO:93
載體純系：	pIB1072
序列：	MNRGVPFRHL LLVLQLALLP AATQGEQKLI SEEDLKKVVL GKKGDTVELT CTASQKKSIQ FHWKNSNQIK ILGNQGSFLT KGPSKLNDRA DSRRSLWDQG NFPLIIKNLK IEDSDTYICE VEDQKEEVQL LVFGLTANSD THLLQGQSLT LTLESPPGSS PSVQCRSPRG KNIQGGKTLS VSQLELQDSG TWTCTVLQNQ KKVEFKIDIV VLAFQKASSI VYKKEGEQVE FSFPLAFTVE KLTGSGELWW QAERASSSKS WITFDLKNKE VSVKRVTQDP KLQMGKKLPL HLTLPQALPQ YAGSGNLTLA LEAKTGKLHQ EVNLVVMRAT QLQKNLTCEV WGPTSPKLML SLKLENKEAK VSKREKAVWV LNPEAGMWQC LLSDSGQVLL ESNIKVLPTW STPVQPMALI VLGGVAGLLL FIGLGIFFCV RCRHRRRQAE RMSQIKRLLS EKKTCQCPHR FQKTCSPI
SEQ ID NO:94
載體純系：	pIB1073
序列：	MNRGVPFRHL LLVLQLALLP AATQGEQKLI SEEDLKKVVL GKKGDTVELT CTASQKKSIQ FHWKNSNQIK ILGNQGSFLT KGPSKLNDRA DSRRSLWDQG NFPLIIKNLK IEDSDTYICE VEDQKEEVQL LVFGLTANSD THLLQGQSLT LTLESPPGSS PSVQCRSPRG KNIQGGKTLS VSQLELQDSG TWTCTVLQNQ KKVEFKIDIV VLAFQKASSI VYKKEGEQVE FSFPLAFTVE KLTGSGELWW QAERASSSKS WITFDLKNKE VSVKRVTQDP KLQMGKKLPL HLTLPQALPQ YAGSGNLTLA LEAKTGKLHQ EVNLVVMRAT QLQKNLTCEV WGPTSPKLML SLKLENKEAK VSKREKAVWV LNPEAGMWQC LLSDSGQVLL ESNIKVLPTW STPVQPMALI VLGGVAGLLL FIGLGIFFCV RCRHRRRQAE RMSQIKRLLS EKKTCQCPHR FQKTCSPIRS KRSRLLHSDY MNMTPRRPGP TRKHYQPYAP PRDFAAYRSK KVAKKPTNKA PHPKQEPQEI NFPDDLPGSN TAAPVQETLH GCQPVTQEDG KESRISVQER Q
SEQ ID NO:95
載體純系：	pIB1074
序列：	MALPVTALLL PLALLLHAAR PEQKLISEED LSQFRVSPLD RTWNLGETVE LKCQVLLSNP TSGCSWLFQP RGAAASPTFL LYLSQNKPKA AEGLDTQRFS GKRLGDTFVL TLSDFRRENE GYYFCSALSN SIMYFSHFVP VFLPAKPTTT PAPRPPTPAP TIASQPLSLR PEACRPAAGG AVHTRGLDFA CDIYIWAPLA GTCGVLLLSL VITLYCNHRN RRRVCKCPRP VVKSGDKPSL SARYVRAKRG SGEGRGSLLT CGDVEENPGP MRPRLWLLLA AQLTVLHGNS VDYKDDDDKL QQTPAYIKVQ TNKMVMLSCE AKISLSNMRI YWLRQRQAPS SDSHHEFLAL WDSAKGTIHG EEVEQEKIAV FRDASRFILN LTSVKPEDSG IYFCMIVGSP ELTFGKGTQL SVVDFLPTTA QPTKKSTLKK RVCRLPRPET QKGPLCSPIT LGLLVAGVLV LLVSLGVAIH LCCRRRRARL RFMKQFYK
SEQ ID NO:96
載體純系：	pIB1075
序列：	MALPVTALLL PLALLLHAAR PEQKLISEED LSQFRVSPLD RTWNLGETVE LKCQVLLSNP TSGCSWLFQP RGAAASPTFL LYLSQNKPKA AEGLDTQRFS GKRLGDTFVL TLSDFRRENE GYYFCSALSN SIMYFSHFVP VFLPAKPTTT PAPRPPTPAP TIASQPLSLR PEACRPAAGG AVHTRGLDFA CDIYIWAPLA GTCGVLLLSL VITLYCNHRN RRRVCKCPRP VVKSGDKPSL SARYVRSKRS RLLHSDYMNM TPRRPGPTRK HYQPYAPPRD FAAYRSKKVA KKPTNKAPHP KQEPQEINFP DDLPGSNTAA PVQETLHGCQ PVTQEDGKES RISVQERQRA KRGSGEGRGS LLTCGDVEEN PGPMRPRLWL LLAAQLTVLH GNSVDYKDDD DKLQQTPAYI KVQTNKMVML SCEAKISLSN MRIYWLRQRQ APSSDSHHEF LALWDSAKGT IHGEEVEQEK IAVFRDASRF ILNLTSVKPE DSGIYFCMIV GSPELTFGKG TQLSVVDFLP TTAQPTKKST LKKRVCRLPR PETQKGPLCS PITLGLLVAG VLVLLVSLGV AIHLCCRRRR ARLRFMKQFY KRSKRSRLLH SDYMNMTPRR PGPTRKHYQP YAPPRDFAAY RSKKVAKKPT NKAPHPKQEP QEINFPDDLP GSNTAAPVQE TLHGCQPVTQ EDGKESRISV QERQ
SEQ ID NO:97
載體純系：	pIB1076
序列：	MALPVTALLL PLALLLHAAR PEQKLISEED LELTDTLQAE TDQLEDEKSA LQTEIANLLK EKEKLEFILA AHNCTYGCTG PGLEGCPTNG PKIPSIATGM VGALLLLLVV ALGIGLFMRS KRSRLLHSDY MNMTPRRPGP TRKHYQPYAP PRDFAAYRSK KVAKKPTNKA PHPKQEPQEI NFPDDLPGSN TAAPVQETLH GCQPVTQEDG KESRISVQER Q
SEQ ID NO:98
載體純系：	pIB1077
序列：	MALPVTALLL PLALLLHAAR PEQKLISEED LELTDTLQAE TDQLEDEKSA LQTEIANLLK EKEKLEFILA AHFWVLVVVG GVLACYSLLV TVAFIIFWVR SKRSRLLHSD YMNMTPRRPG PTRKHYQPYA PPRDFAAYRS KKVAKKPTNK APHPKQEPQE INFPDDLPGS NTAAPVQETL HGCQPVTQED GKESRISVQE RQ
SEQ ID NO:99
載體純系：	pIB1078
序列：	MALPVTALLL PLALLLHAAR PEQKLISEED LLEEKVKTLK AQNSELASTA NMLREQVAQL NCTYGCTGPG LEGCPTNGPK IPSIATGMVG ALLLLLVVAL GIGLFMRSKR SRLLHSDYMN MTPRRPGPTR KHYQPYAPPR DFAAYRSKKV AKKPTNKAPH PKQEPQEINF PDDLPGSNTA APVQETLHGC QPVTQEDGKE SRISVQERQ
SEQ ID NO:100
載體純系：	pIB1079
序列：	MALPVTALLL PLALLLHAAR PEQKLISEED LLEEKVKTLK AQNSELASTA NMLREQVAQL FWVLVVVGGV LACYSLLVTV AFIIFWVRSK RSRLLHSDYM NMTPRRPGPT RKHYQPYAPP RDFAAYRSKK VAKKPTNKAP HPKQEPQEIN FPDDLPGSNT AAPVQETLHG CQPVTQEDGK ESRISVQERQ
SEQ ID NO:101
載體純系：	pIB1080
序列：	MALPVTALLL PLALLLHAAR PEQKLISEED LETQHKVLEL TAENERLQKK VEQLSRELST NCTYGCTGPG LEGCPTNGPK IPSIATGMVG ALLLLLVVAL GIGLFMRSKR SRLLHSDYMN MTPRRPGPTR KHYQPYAPPR DFAAYRSKKV AKKPTNKAPH PKQEPQEINF PDDLPGSNTA APVQETLHGC QPVTQEDGKE SRISVQERQ
SEQ ID NO:102
載體純系：	pIB1081
序列：	MALPVTALLL PLALLLHAAR PEQKLISEED LETQHKVLEL TAENERLQKK VEQLSRELST FWVLVVVGGV LACYSLLVTV AFIIFWVRSK RSRLLHSDYM NMTPRRPGPT RKHYQPYAPP RDFAAYRSKK VAKKPTNKAP HPKQEPQEIN FPDDLPGSNT AAPVQETLHG CQPVTQEDGK ESRISVQERQ
SEQ ID NO:103
載體純系：	pIB1082
序列：	MRPSGTAGAA LLALLAALCP ASRAEQKLIS EEDLLEEKKV CQGTSNKLTQ LGTFEDHFLS LQRMFNNCEV VLGNLEITYV QRNYDLSFLK TIQEVAGYVL IALNTVERIP LENLQIIRGN MYYENSYALA VLSNYDANKT GLKELPMRNL QEILHGAVRF SNNPALCNVE SIQWRDIVSS DFLSNMSMDF QNHLGSCQKC DPSCPNGSCW GAGEENCQKL TKIICAQQCS GRCRGKSPSD CCHNQCAAGC TGPRESDCLV CRKFRDEATC KDTCPPLMLY NPTTYQMDVN PEGKYSFGAT CVKKCPRNYV VTDHGSCVRA CGADSYEMEE DGVRKCKKCE GPCRKVCNGI GIGEFKDSLS INATNIKHFK NCTSISGDLH ILPVAFRGDS FTHTPPLDPQ ELDILKTVKE ITGFLLIQAW PENRTDLHAF ENLEIIRGRT KQHGQFSLAV VSLNITSLGL RSLKEISDGD VIISGNKNLC YANTINWKKL FGTSGQKTKI ISNRGENSCK ATGQVCHALC SPEGCWGPEP RDCVSCRNVS RGRECVDKCN LLEGEPREFV ENSECIQCHP ECLPQAMNIT CTGRGPDNCI QCAHYIDGPH CVKTCPAGVM GENNTLVWKY ADAGHVCHLC HPNCTYGCTG PGLEGCPTNG PKIPSIATGM VGALLLLLVV ALGIGLFMRS KRSRLLHSDY MNMTPRRPGP TRKHYQPYAP PRDFAAYRSK KVAKKPTNKA PHPKQEPQEI NFPDDLPGSN TAAPVQETLH GCQPVTQEDG KESRISVQER Q
SEQ ID NO:104
載體純系：	pIB1083
序列：	MRPSGTAGAA LLALLAALCP ASRAEQKLIS EEDLGTSGQK TKIISNRGEN SCKATGQVCH ALCSPEGCWG PEPRDCVSCR NVSRGRECVD KCNLLEGEPR EFVENSECIQ CHPECLPQAM NITCTGRGPD NCIQCAHYID GPHCVKTCPA GVMGENNTLV WKYADAGHVC HLCHPNCTYG CTGPGLEGCP TNGPKIPSIA TGMVGALLLL LVVALGIGLF MRSKRSRLLH SDYMNMTPRR PGPTRKHYQP YAPPRDFAAY RSKKVAKKPT NKAPHPKQEP QEINFPDDLP GSNTAAPVQE TLHGCQPVTQ EDGKESRISV QERQ
SEQ ID NO:105
載體純系：	pIB1084
序列：	MRPSGTAGAA LLALLAALCP ASRAEQKLIS EEDLNCTYGC TGPGLEGCPT NGPKIPSIAT GMVGALLLLL VVALGIGLFM RSKRSRLLHS DYMNMTPRRP GPTRKHYQPY APPRDFAAYR SKKVAKKPTN KAPHPKQEPQ EINFPDDLPG SNTAAPVQET LHGCQPVTQE DGKESRISVQ ERQ
SEQ ID NO:106
載體純系：	pIB1085
序列：	MELAALCRWG LLLALLPPGA ASEQKLISEE DLTQVCTGTD MKLRLPASPE THLDMLRHLY QGCQVVQGNL ELTYLPTNAS LSFLQDIQEV QGYVLIAHNQ VRQVPLQRLR IVRGTQLFED NYALAVLDNG DPLNNTTPVT GASPGGLREL QLRSLTEILK GGVLIQRNPQ LCYQDTILWK DIFHKNNQLA LTLIDTNRSR ACHPCSPMCK GSRCWGESSE DCQSLTRTVC AGGCARCKGP LPTDCCHEQC AAGCTGPKHS DCLACLHFNH SGICELHCPA LVTYNTDTFE SMPNPEGRYT FGASCVTACP YNYLSTDVGS CTLVCPLHNQ EVTAEDGTQR CEKCSKPCAR VCYGLGMEHL REVRAVTSAN IQEFAGCKKI FGSLAFLPES FDGDPASNTA PLQPEQLQVF ETLEEITGYL YISAWPDSLP DLSVFQNLQV IRGRILHNGA YSLTLQGLGI SWLGLRSLRE LGSGLALIHH NTHLCFVHTV PWDQLFRNPH QALLHTANRP EDECVGEGLA CHQLCARGHC WGPGPTQCVN CSQFLRGQEC VEECRVLQGL PREYVNARHC LPCHPECQPQ NGSVTCFGPE ADQCVACAHY KDPPFCVARC PSGVKPDLSY MPIWKFPDEE GACQPCPINC THSCVDLDDK GCPAEQRASP LTSIISAVVG ILLVVVLGVV FGILIRSKRS RLLHSDYMNM TPRRPGPTRK HYQPYAPPRD FAAYRSKKVA KKPTNKAPHP KQEPQEINFP DDLPGSNTAA PVQETLHGCQ PVTQEDGKES RISVQERQ
SEQ ID NO:107
載體純系：	pIB1086
序列：	MELAALCRWG LLLALLPPGA ASEQKLISEE DLTQVCTGTD MKLRLPASPE THLDMLRHLY QGCQVVQGNL ELTYLPTNAS LSFLQDIQEV QGYVLIAHNQ VRQVPLQRLR IVRGTQLFED NYALAVLDNG DPLNNTTPVT GASPGGLREL QLRSLTEILK GGVLIQRNPQ LCYQDTILWK DIFHKNNQLA LTLIDTNRSR ACHPCSPMCK GSRCWGESSE DCQSLTRTVC AGGCARCKGP LPTDCCHEQC AAGCTGPKHS DCLACLHFNH SGICELHCPA LVTYNTDTFE SMPNPEGRYT FGASCVTACP YNYLSTDVGS CTLVCPLHNQ EVTAEDGTQR CEKCSKPCAR VCYGLGMEHL REVRAVTSAN IQEFAGCKKI FGSLAFLPES FDGDPASNTA PLQPEQLQVF ETLEEITGYL YISAWPDSLP DLSVFQNLQV IRGRILHNGA YSLTLQGLGI SWLGLRSLRE LGSGLALIHH NTHLCFVHTV PWDQLFRNPH QALLHTANRP EDECVGEGLA CHQLCARGHC WGPGPTQCVN CSQFLRGQEC VEECRVLQGL PREYVNARHC LPCHPECQPQ NGSVTCFGPE ADQCVACAHY KDPPFCVARC PSGVKPDLSY MPIWKFPDEE GACQPCPINC THSCVDLDDK GCPAEQRASP LTSIISAVEG ILLVVVLGVV FGILIRSKRS RLLHSDYMNM TPRRPGPTRK HYQPYAPPRD FAAYRSKKVA KKPTNKAPHP KQEPQEINFP DDLPGSNTAA PVQETLHGCQ PVTQEDGKES RISVQERQ
SEQ ID NO:108
載體純系：	pIB1087
序列：	MELAALCRWG LLLALLPPGA ASEQKLISEE DLTQVCTGTD MKLRLPASPE THLDMLRHLY QGCQVVQGNL ELTYLPTNAS LSFLQDIQEV QGYVLIAHNQ VRQVPLQRLR IVRGTQLFED NYALAVLDNG DPLNNTTPVT GASPGGLREL QLRSLTEILK GGVLIQRNPQ LCYQDTILWK DIFHKNNQLA LTLIDTNRSR ACHPCSPMCK GSRCWGESSE DCQSLTRTVC AGGCARCKGP LPTDCCHEQC AAGCTGPKHS DCLACLHFNH SGICELHCPA LVTYNTDTFE SMPNPEGRYT FGASCVTACP YNYLSTDVGS CTLVCPLHNQ EVTAEDGTQR CEKCSKPCAR VCYGLGMEHL REVRAVTSAN IQEFAGCKKI FGSLAFLPES FDGDPASNTA PLQPEQLQVF ETLEEITGYL YISAWPDSLP DLSVFQNLQV IRGRILHNGA YSLTLQGLGI SWLGLRSLRE LGSGLALIHH NTHLCFVHTV PWDQLFRNPH QALLHTANRP EDECVGEGLA CHQLCARGHC WGPGPTQCVN CSQFLRGQEC VEECRVLQGL PREYVNARHC LPCHPECQPQ NGSVTCFGPE ADQCVACAHY KDPPFCVARC PSGVKPDLSY MPIWKFPDEE GACQPCPINC THSCVDLDDK GCPAEQRASP LTSIISAVVD ILLVVVLGVV FGILIRSKRS RLLHSDYMNM TPRRPGPTRK HYQPYAPPRD FAAYRSKKVA KKPTNKAPHP KQEPQEINFP DDLPGSNTAA PVQETLHGCQ PVTQEDGKES RISVQERQ
SEQ ID NO:109
載體純系：	pIB1088
序列：	MELAALCRWG LLLALLPPGA ASEQKLISEE DLTQVCTGTD MKLRLPASPE THLDMLRHLY QGCQVVQGNL ELTYLPTNAS LSFLQDIQEV QGYVLIAHNQ VRQVPLQRLR IVRGTQLFED NYALAVLDNG DPLNNTTPVT GASPGGLREL QLRSLTEILK GGVLIQRNPQ LCYQDTILWK DIFHKNNQLA LTLIDTNRSR ACHPCSPMCK GSRCWGESSE DCQSLTRTVC AGGCARCKGP LPTDCCHEQC AAGCTGPKHS DCLACLHFNH SGICELHCPA LVTYNTDTFE SMPNPEGRYT FGASCVTACP YNYLSTDVGS CTLVCPLHNQ EVTAEDGTQR CEKCSKPCAR VCYGLGMEHL REVRAVTSAN IQEFAGCKKI FGSLAFLPES FDGDPASNTA PLQPEQLQVF ETLEEITGYL YISAWPDSLP DLSVFQNLQV IRGRILHNGA YSLTLQGLGI SWLGLRSLRE LGSGLALIHH NTHLCFVHTV PWDQLFRNPH QALLHTANRP EDECVGEGLA CHQLCARGHC WGPGPTQCVN CSQFLRGQEC VEECRVLQGL PREYVNARHC LPCHPECQPQ NGSVTCFGPE ADQCVACAHY KDPPFCVARC PSGVKPDLSY MPIWKFPDEE GACQPCPINC THSCVDLDDK GCPAEQRASP LTSIISAVVR ILLVVVLGVV FGILIRSKRS RLLHSDYMNM TPRRPGPTRK HYQPYAPPRD FAAYRSKKVA KKPTNKAPHP KQEPQEINFP DDLPGSNTAA PVQETLHGCQ PVTQEDGKES RISVQERQ
SEQ ID NO:110
載體純系：	pIB1089
序列：	MELAALCRWG LLLALLPPGA ASEQKLISEE DLQLCARGHC WGPGPTQCVN CSQFLRGQEC VEECRVLQGL PREYVNARHC LPCHPECQPQ NGSVTCFGPE ADQCVACAHY KDPPFCVARC PSGVKPDLSY MPIWKFPDEE GACQPCPINC THSCVDLDDK GCPAEQRASP LTSIISAVVG ILLVVVLGVV FGILIRSKRS RLLHSDYMNM TPRRPGPTRK HYQPYAPPRD FAAYRSKKVA KKPTNKAPHP KQEPQEINFP DDLPGSNTAA PVQETLHGCQ PVTQEDGKES RISVQERQ
SEQ ID NO:111
載體純系：	pIB1090
序列：	MELAALCRWG LLLALLPPGA ASEQKLISEE DLQLCARGHC WGPGPTQCVN CSQFLRGQEC VEECRVLQGL PREYVNARHC LPCHPECQPQ NGSVTCFGPE ADQCVACAHY KDPPFCVARC PSGVKPDLSY MPIWKFPDEE GACQPCPINC THSCVDLDDK GCPAEQRASP LTSIISAVEG ILLVVVLGVV FGILIRSKRS RLLHSDYMNM TPRRPGPTRK HYQPYAPPRD FAAYRSKKVA KKPTNKAPHP KQEPQEINFP DDLPGSNTAA PVQETLHGCQ PVTQEDGKES RISVQERQ
SEQ ID NO:112
載體純系：	pIB1091
序列：	MELAALCRWG LLLALLPPGA ASEQKLISEE DLQLCARGHC WGPGPTQCVN CSQFLRGQEC VEECRVLQGL PREYVNARHC LPCHPECQPQ NGSVTCFGPE ADQCVACAHY KDPPFCVARC PSGVKPDLSY MPIWKFPDEE GACQPCPINC THSCVDLDDK GCPAEQRASP LTSIISAVVD ILLVVVLGVV FGILIRSKRS RLLHSDYMNM TPRRPGPTRK HYQPYAPPRD FAAYRSKKVA KKPTNKAPHP KQEPQEINFP DDLPGSNTAA PVQETLHGCQ PVTQEDGKES RISVQERQ
SEQ ID NO:113
載體純系：	pIB1092
序列：	MELAALCRWG LLLALLPPGA ASEQKLISEE DLQLCARGHC WGPGPTQCVN CSQFLRGQEC VEECRVLQGL PREYVNARHC LPCHPECQPQ NGSVTCFGPE ADQCVACAHY KDPPFCVARC PSGVKPDLSY MPIWKFPDEE GACQPCPINC THSCVDLDDK GCPAEQRASP LTSIISAVVR ILLVVVLGVV FGILIRSKRS RLLHSDYMNM TPRRPGPTRK HYQPYAPPRD FAAYRSKKVA KKPTNKAPHP KQEPQEINFP DDLPGSNTAA PVQETLHGCQ PVTQEDGKES RISVQERQ
SEQ ID NO:114
載體純系：	pIB1093
序列：	MELAALCRWG LLLALLPPGA ASEQKLISEE DLSIISAVVG ILLVVVLGVV FGILIRSKRS RLLHSDYMNM TPRRPGPTRK HYQPYAPPRD FAAYRSKKVA KKPTNKAPHP KQEPQEINFP DDLPGSNTAA PVQETLHGCQ PVTQEDGKES RISVQERQ
SEQ ID NO:115
載體純系：	pIB1094
序列：	MELAALCRWG LLLALLPPGA ASEQKLISEE DLSIISAVEG ILLVVVLGVV FGILIRSKRS RLLHSDYMNM TPRRPGPTRK HYQPYAPPRD FAAYRSKKVA KKPTNKAPHP KQEPQEINFP DDLPGSNTAA PVQETLHGCQ PVTQEDGKES RISVQERQ
SEQ ID NO:116
載體純系：	pIB1095
序列：	MELAALCRWG LLLALLPPGA ASEQKLISEE DLSIISAVVD ILLVVVLGVV FGILIRSKRS RLLHSDYMNM TPRRPGPTRK HYQPYAPPRD FAAYRSKKVA KKPTNKAPHP KQEPQEINFP DDLPGSNTAA PVQETLHGCQ PVTQEDGKES RISVQERQ
SEQ ID NO:117
載體純系：	pIB1096
序列：	MELAALCRWG LLLALLPPGA ASEQKLISEE DLSIISAVVR ILLVVVLGVV FGILIRSKRS RLLHSDYMNM TPRRPGPTRK HYQPYAPPRD FAAYRSKKVA KKPTNKAPHP KQEPQEINFP DDLPGSNTAA PVQETLHGCQ PVTQEDGKES RISVQERQ
SEQ ID NO:118
載體純系：	pIB1097
序列：	MALPVTALLL PLALLLHAAR PEQKLISEED LQEQLVESGG RLVTPGTPLT LTCTASGFSL GSDFMSWVRQ APGKGLEWIG YIDPRSDIPY YASWAKGRFT ISKTSTTVDL KITSPTTEDT ATYFCARDLN AGYFNGIFYI WGPGTLVTVS SGGGGSGGGG SGGGGSELVM TQTPSSVSAA VGDTVTINCQ ASETVATLLA WYQQKPGQPP KLLIYGASNL ESGVPSRFRG SGSGTEFTLT ISGMKAEDAA TYYCQYGYIS TGSNTFGAGT NVEIKAAAGS GGSGILVKQS PMLVAYDNAV NLSCKYSYNL FSREFRASLH KGLDSAVEVC VVYGNYSQQL QVYSKTGFNC DGKLGNESVT FYLQNLYVNQ TDIYFCKIEV MYPPPYLDNE KSNGTIIHVK GKHLCPSPLF PGPSKPFWVL VVVGGVLACY SLLVTVAFII FWVRSKRSRL LHSDYMNMTP RRPGPTRKHY QPYAPPRDFA AYRSKKVAKK PTNKAPHPKQ EPQEINFPDD LPGSNTAAPV QETLHGCQPV TQEDGKESRI SVQERQ
SEQ ID NO:119
載體純系：	pIB1098
序列：	MALPVTALLL PLALLLHAAR PEQKLISEED LELVMTQTPS SVSAAVGDTV TINCQASETV ATLLAWYQQK PGQPPKLLIY GASNLESGVP SRFRGSGSGT EFTLTISGMK AEDAATYYCQ YGYISTGSNT FGAGTNVEIK GGGGSGGGGS GGGGSQEQLV ESGGRLVTPG TPLTLTCTAS GFSLGSDFMS WVRQAPGKGL EWIGYIDPRS DIPYYASWAK GRFTISKTST TVDLKITSPT TEDTATYFCA RDLNAGYFNG IFYIWGPGTL VTVSSAAAGS GGSGILVKQS PMLVAYDNAV NLSCKYSYNL FSREFRASLH KGLDSAVEVC VVYGNYSQQL QVYSKTGFNC DGKLGNESVT FYLQNLYVNQ TDIYFCKIEV MYPPPYLDNE KSNGTIIHVK GKHLCPSPLF PGPSKPFWVL VVVGGVLACY SLLVTVAFII FWVRSKRSRL LHSDYMNMTP RRPGPTRKHY QPYAPPRDFA AYRSKKVAKK PTNKAPHPKQ EPQEINFPDD LPGSNTAAPV QETLHGCQPV TQEDGKESRI SVQERQ
SEQ ID NO:120
載體純系：	pIB1099
序列：	MALPVTALLL PLALLLHAAR PEQKLISEED LQEQLVESGG RLVTPGTPLT LTCTASGFSL GSDFMSWVRQ APGKGLEWIG YIDPRSDIPY YASWAKGRFT ISKTSTTVDL KITSPTTEDT ATYFCARDLN AGYFNGIFYI WGPGTLVTVS SGGGGSGGGG SGGGGSELDM TQTPSSTSEP VGGTVTINCQ ASQTISSYLS WYQQKPGHPP KLLIYDASDL ASGVPSRFSG SRSGTQFTLT ISGVQCDDAA TYYCLGVYDY RSDDGAAFGG GTELEILAAA GSGGSGILVK QSPMLVAYDN AVNLSCKYSY NLFSREFRAS LHKGLDSAVE VCVVYGNYSQ QLQVYSKTGF NCDGKLGNES VTFYLQNLYV NQTDIYFCKI EVMYPPPYLD NEKSNGTIIH VKGKHLCPSP LFPGPSKPFW VLVVVGGVLA CYSLLVTVAF IIFWVRSKRS RLLHSDYMNM TPRRPGPTRK HYQPYAPPRD FAAYRSKKVA KKPTNKAPHP KQEPQEINFP DDLPGSNTAA PVQETLHGCQ PVTQEDGKES RISVQERQ
SEQ ID NO:121
載體純系：	pIB1100
序列：	MALPVTALLL PLALLLHAAR PEQKLISEED LELDMTQTPS STSEPVGGTV TINCQASQTI SSYLSWYQQK PGHPPKLLIY DASDLASGVP SRFSGSRSGT QFTLTISGVQ CDDAATYYCL GVYDYRSDDG AAFGGGTELE ILGGGGSGGG GSGGGGSQEQ LVESGGRLVT PGTPLTLTCT ASGFSLGSDF MSWVRQAPGK GLEWIGYIDP RSDIPYYASW AKGRFTISKT STTVDLKITS PTTEDTATYF CARDLNAGYF NGIFYIWGPG TLVTVSSAAA GSGGSGILVK QSPMLVAYDN AVNLSCKYSY NLFSREFRAS LHKGLDSAVE VCVVYGNYSQ QLQVYSKTGF NCDGKLGNES VTFYLQNLYV NQTDIYFCKI EVMYPPPYLD NEKSNGTIIH VKGKHLCPSP LFPGPSKPFW VLVVVGGVLA CYSLLVTVAF IIFWVRSKRS RLLHSDYMNM TPRRPGPTRK HYQPYAPPRD FAAYRSKKVA KKPTNKAPHP KQEPQEINFP DDLPGSNTAA PVQETLHGCQ PVTQEDGKES RISVQERQ
SEQ ID NO:122
載體純系：	pIB1101
序列：	MALPVTALLL PLALLLHAAR PEQKLISEED LQSLEESGGR LVTPGTPLTL TCTVSGFSLS TNDMNWVRQA PGKGLEWIGV IYSDDTPDYA TWAKGRFTIS RTSTTVDLKI TSPTTEDTAT YFCARGHYDS AVYAYALNIW GPGTLVTVSS GGGGSGGGGS GGGGSELVMT QTPSSVSAAV GGTVTITCQA SQSLSNLLAW YQQKPGQPPK LLIYGASNLE SGVPSRFRGS GSGTDFTLTI SGMKAEDAAT YYCQGGHYSG LTFGNGTNVE IKAAAGSGGS GILVKQSPML VAYDNAVNLS CKYSYNLFSR EFRASLHKGL DSAVEVCVVY GNYSQQLQVY SKTGFNCDGK LGNESVTFYL QNLYVNQTDI YFCKIEVMYP PPYLDNEKSN GTIIHVKGKH LCPSPLFPGP SKPFWVLVVV GGVLACYSLL VTVAFIIFWV RSKRSRLLHS DYMNMTPRRP GPTRKHYQPY APPRDFAAYR SKKVAKKPTN KAPHPKQEPQ EINFPDDLPG SNTAAPVQET LHGCQPVTQE DGKESRISVQ ERQ
SEQ ID NO:123
載體純系：	pIB1102
序列：	MALPVTALLL PLALLLHAAR PEQKLISEED LELVMTQTPS SVSAAVGGTV TITCQASQSL SNLLAWYQQK PGQPPKLLIY GASNLESGVP SRFRGSGSGT DFTLTISGMK AEDAATYYCQ GGHYSGLTFG NGTNVEIKGG GGSGGGGSGG GGSQSLEESG GRLVTPGTPL TLTCTVSGFS LSTNDMNWVR QAPGKGLEWI GVIYSDDTPD YATWAKGRFT ISRTSTTVDL KITSPTTEDT ATYFCARGHY DSAVYAYALN IWGPGTLVTV SSAAAGSGGS GILVKQSPML VAYDNAVNLS CKYSYNLFSR EFRASLHKGL DSAVEVCVVY GNYSQQLQVY SKTGFNCDGK LGNESVTFYL QNLYVNQTDI YFCKIEVMYP PPYLDNEKSN GTIIHVKGKH LCPSPLFPGP SKPFWVLVVV GGVLACYSLL VTVAFIIFWV RSKRSRLLHS DYMNMTPRRP GPTRKHYQPY APPRDFAAYR SKKVAKKPTN KAPHPKQEPQ EINFPDDLPG SNTAAPVQET LHGCQPVTQE DGKESRISVQ ERQ
SEQ ID NO:124
載體純系：	pIB1103
序列：	MYGKIIFVLL LSEIVSISAE QKLISEEDLS STTGVAMHTS TSSSVTKSYI SSQTNDTHKR DTYAATPRAH EVSEISVRTV YPPEEETGER VQLAHHFSEP EITLIIFGVM AGVIGTILLI SYGRSKRSRL LHSDYMNMTP RRPGPTRKHY QPYAPPRDFA AYRSKKVAKK PTNKAPHPKQ EPQEINFPDD LPGSNTAAPV QETLHGCQPV TQEDGKESRI SVQERQ
SEQ ID NO:125
載體純系：	pIB1104
序列：	MYGKIIFVLL LSEIVSISAE QKLISEEDLI TLIIFGVMAG VIGTILLISY GRSKRSRLLH SDYMNMTPRR PGPTRKHYQP YAPPRDFAAY RSKKVAKKPT NKAPHPKQEP QEINFPDDLP GSNTAAPVQE TLHGCQPVTQ EDGKESRISV QERQ
SEQ ID NO:126
載體純系：	pIB1105
序列：	MDHLGASLWP QVGSLCLLLA GAAWEQKLIS EEDLAPPPNL PDPKFESKAA LLAARGPEEL LCFTERLEDL VCFWEEAASA GVGPGNYSFS YQLEDEPWKL CRLHQAPTAR GAVRFWCSLP TADTSSFVPL ELRVTAASGA PRYHRVIHIN EVVLLDAPVG LVARLADESG HVVLRWLPPP ETPMTSHIRY EVDVSAGNGA GSVQRVEILE GRTECVLSNL RGRTRYTFAV RARMAEPSFG GFWSAWSEPV SLLTPSDLDP LILTLSLILV VILVLLTVLA LLSRSKRSRL LHSDYMNMTP RRPGPTRKHY QPYAPPRDFA AYRSKKVAKK PTNKAPHPKQ EPQEINFPDD LPGSNTAAPV QETLHGCQPV TQEDGKESRI SVQERQ
SEQ ID NO:127
載體純系：	pIB1106
序列：	MDHLGASLWP QVGSLCLLLA GAAWEQKLIS EEDLLILTLS LILVVILVLL TVLALLSRSK RSRLLHSDYM NMTPRRPGPT RKHYQPYAPP RDFAAYRSKK VAKKPTNKAP HPKQEPQEIN FPDDLPGSNT AAPVQETLHG CQPVTQEDGK ESRISVQERQ
SEQ ID NO:128
載體純系：	pIB1107
序列：	MPSWALFMVT SCLLLAPQNL AQVSSEQKLI SEEDLQDVSL LASDSEPLKC FSRTFEDLTC FWDEEEAAPS GTYQLLYAYP REKPRACPLS SQSMPHFGTR YVCQFPDQEE VRLFFPLHLW VKNVFLNQTR TQRVLFVDSV GLPAPPSIIK AMGGSQPGEL QISWEEPAPE ISDFLRYELR YGPRDPKNST GPTVIQLIAT ETCCPALQRP HSASALDQSP CAQPTMPWQD GPKQTSPSRE ASALTAEGGS CLISGLQPGN SYWLQLRSEP DGISLGGSWG SWSLPVTVDL PGDAVALGLQ CFTLDLKNVT CQWQQQDHAS SQGFFYHSRA RCCPRDRYPI WENCEEEEKT NPGLQTPQFS RCHFKSRNDS IIHILVEVTT APGTVHSYLG SPFWIHQAVR LPTPNLHWRE ISSGHLELEW QHPSSWAAQE TCYQLRYTGE GHQDWKVLEP PLGARGGTLE LRPRSRYRLQ LRARLNGPTY QGPWSSWSDP TRVETATETA WISLVTALHL VLGLSAVLGL LLLRWRSKRS RLLHSDYMNM TPRRPGPTRK HYQPYAPPRD FAAYRSKKVA KKPTNKAPHP KQEPQEINFP DDLPGSNTAA PVQETLHGCQ PVTQEDGKES RISVQERQ
SEQ ID NO:129
載體純系：	pIB1108
序列：	MPSWALFMVT SCLLLAPQNL AQVSSEQKLI SEEDLISLVT ALHLVLGLSA VLGLLLLRWR SKRSRLLHSD YMNMTPRRPG PTRKHYQPYA PPRDFAAYRS KKVAKKPTNK APHPKQEPQE INFPDDLPGS NTAAPVQETL HGCQPVTQED GKESRISVQE RQ
SEQ ID NO:130
載體純系：	pIB1109
序列：	MPSWALFMVT SCLLLAPQNL AQVSSEQKLI SEEDLQDVSL LASDSEPLKC FSRTFEDLTC FWDEEEAAPS GTYQLLYAYP REKPRACPLS SQSMPHFGTR YVCQFPDQEE VRLFFPLHLW VKNVFLNQTR TQRVLFVDSV GLPAPPSIIK AMGGSQPGEL QISWEEPAPE ISDFLRYELR YGPRDPKNST GPTVIQLIAT ETCCPALQRP HSASALDQSP CAQPTMPWQD GPKQTSPSRE ASALTAEGGS CLISGLQPGN SYWLQLRSEP DGISLGGSWG SWSLPVTVDL PGDAVALGLQ CFTLDLKNVT CQWQQQDHAS SQGFFYHSRA RCCPRDRYPI WENCEEEEKT NPGLQTPQFS RCHFKSRNDS IIHILVEVTT APGTVHSYLG SPFWIHQAVR LPTPNLHWRE ISSGHLELEW QHPSSWAAQE TCYQLRYTGE GHQDWKVLEP PLGARGGTLE LRPRSRYRLQ LRARLNGPTY QGPWSSWSDP TRVETATETA WISLVTALHL VLGLNAVLGL LLLRWRSKRS RLLHSDYMNM TPRRPGPTRK HYQPYAPPRD FAAYRSKKVA KKPTNKAPHP KQEPQEINFP DDLPGSNTAA PVQETLHGCQ PVTQEDGKES RISVQERQ
SEQ ID NO:131
載體純系：	pIB1110
序列：	MPSWALFMVT SCLLLAPQNL AQVSSEQKLI SEEDLISLVT ALHLVLGLNA VLGLLLLRWR SKRSRLLHSD YMNMTPRRPG PTRKHYQPYA PPRDFAAYRS KKVAKKPTNK APHPKQEPQE INFPDDLPGS NTAAPVQETL HGCQPVTQED GKESRISVQE RQ
SEQ ID NO:132
載體純系：	pIB1111
序列：	MPSWALFMVT SCLLLAPQNL AQVSSEQKLI SEEDLQDVSL LASDSEPLKC FSRTFEDLTC FWDEEEAAPS GTYQLLYAYP REKPRACPLS SQSMPHFGTR YVCQFPDQEE VRLFFPLHLW VKNVFLNQTR TQRVLFVDSV GLPAPPSIIK AMGGSQPGEL QISWEEPAPE ISDFLRYELR YGPRDPKNST GPTVIQLIAT ETCCPALQRP HSASALDQSP CAQPTMPWQD GPKQTSPSRE ASALTAEGGS CLISGLQPGN SYWLQLRSEP DGISLGGSWG SWSLPVTVDL PGDAVALGLQ CFTLDLKNVT CQWQQQDHAS SQGFFYHSRA RCCPRDRYPI WENCEEEEKT NPGLQTPQFS RCHFKSRNDS IIHILVEVTT APGTVHSYLG SPFWIHQAVR LPTPNLHWRE ISSGHLELEW QHPSSWAAQE TCYQLRYTGE GHQDWKVLEP PLGARGGTLE LRPRSRYRLQ LRARLNGPTY QGPWSSWSDP TRVETATETA WISLVTALHL VLGLSAVLGL LLLRKRSKRS RLLHSDYMNM TPRRPGPTRK HYQPYAPPRD FAAYRSKKVA KKPTNKAPHP KQEPQEINFP DDLPGSNTAA PVQETLHGCQ PVTQEDGKES RISVQERQ
SEQ ID NO:133
載體純系：	pIB1112
序列：	MPSWALFMVT SCLLLAPQNL AQVSSEQKLI SEEDLISLVT ALHLVLGLSA VLGLLLLRKR SKRSRLLHSD YMNMTPRRPG PTRKHYQPYA PPRDFAAYRS KKVAKKPTNK APHPKQEPQE INFPDDLPGS NTAAPVQETL HGCQPVTQED GKESRISVQE RQ
SEQ ID NO:134
載體純系：	pIB1113
序列：	MPSWALFMVT SCLLLAPQNL AQVSSEQKLI SEEDLQDVSL LASDSEPLKC FSRTFEDLTC FWDEEEAAPS GTYQLLYAYP REKPRACPLS SQSMPHFGTR YVCQFPDQEE VRLFFPLHLW VKNVFLNQTR TQRVLFVDSV GLPAPPSIIK AMGGSQPGEL QISWEEPAPE ISDFLRYELR YGPRDPKNST GPTVIQLIAT ETCCPALQRP HSASALDQSP CAQPTMPWQD GPKQTSPSRE ASALTAEGGS CLISGLQPGN SYWLQLRSEP DGISLGGSWG SWSLPVTVDL PGDAVALGLQ CFTLDLKNVT CQWQQQDHAS SQGFFYHSRA RCCPRDRYPI WENCEEEEKT NPGLQTPQFS RCHFKSRNDS IIHILVEVTT APGTVHSYLG SPFWIHQAVR LPTPNLHWRE ISSGHLELEW QHPSSWAAQE TCYQLRYTGE GHQDWKVLEP PLGARGGTLE LRPRSRYRLQ LRARLNGPTY QGPWSSWSDP TRVETATETA WISLVTALLL VLGLSAVLGL LLLRWRSKRS RLLHSDYMNM TPRRPGPTRK HYQPYAPPRD FAAYRSKKVA KKPTNKAPHP KQEPQEINFP DDLPGSNTAA PVQETLHGCQ PVTQEDGKES RISVQERQ
SEQ ID NO:135
載體純系：	pIB1114
序列：	MPSWALFMVT SCLLLAPQNL AQVSSEQKLI SEEDLISLVT ALLLVLGLSA VLGLLLLRWR SKRSRLLHSD YMNMTPRRPG PTRKHYQPYA PPRDFAAYRS KKVAKKPTNK APHPKQEPQE INFPDDLPGS NTAAPVQETL HGCQPVTQED GKESRISVQE RQ
SEQ ID NO:136
載體純系：	pIB1115
序列：	MPSWALFMVT SCLLLAPQNL AQVSSEQKLI SEEDLQDVSL LASDSEPLKC FSRTFEDLTC FWDEEEAAPS GTYQLLYAYP REKPRACPLS SQSMPHFGTR YVCQFPDQEE VRLFFPLHLW VKNVFLNQTR TQRVLFVDSV GLPAPPSIIK AMGGSQPGEL QISWEEPAPE ISDFLRYELR YGPRDPKNST GPTVIQLIAT ETCCPALQRP HSASALDQSP CAQPTMPWQD GPKQTSPSRE ASALTAEGGS CLISGLQPGN SYWLQLRSEP DGISLGGSWG SWSLPVTVDL PGDAVALGLQ CFTLDLKNVT CQWQQQDHAS SQGFFYHSRA RCCPRDRYPI WENCEEEEKT NPGLQTPQFS RCHFKSRNDS IIHILVEVTT APGTVHSYLG SPFWIHQAVR LPTPNLHWRE ISSGHLELEW QHPSSWAAQE TCYQLRYTGE GHQDWKVLEP PLGARGGTLE LRPRSRYRLQ LRARLNGPTY QGPWSSWSDP TRVETATETA WISLVTALHL VLGLNAVLGL LLLRKRSKRS RLLHSDYMNM TPRRPGPTRK HYQPYAPPRD FAAYRSKKVA KKPTNKAPHP KQEPQEINFP DDLPGSNTAA PVQETLHGCQ PVTQEDGKES RISVQERQ
SEQ ID NO:137
載體純系：	pIB1116
序列：	MPSWALFMVT SCLLLAPQNL AQVSSEQKLI SEEDLISLVT ALHLVLGLNA VLGLLLLRKR SKRSRLLHSD YMNMTPRRPG PTRKHYQPYA PPRDFAAYRS KKVAKKPTNK APHPKQEPQE INFPDDLPGS NTAAPVQETL HGCQPVTQED GKESRISVQE RQ
SEQ ID NO:138
載體純系：	pIB1117
序列：	MPSWALFMVT SCLLLAPQNL AQVSSEQKLI SEEDLQDVSL LASDSEPLKC FSRTFEDLTC FWDEEEAAPS GTYQLLYAYP REKPRACPLS SQSMPHFGTR YVCQFPDQEE VRLFFPLHLW VKNVFLNQTR TQRVLFVDSV GLPAPPSIIK AMGGSQPGEL QISWEEPAPE ISDFLRYELR YGPRDPKNST GPTVIQLIAT ETCCPALQRP HSASALDQSP CAQPTMPWQD GPKQTSPSRE ASALTAEGGS CLISGLQPGN SYWLQLRSEP DGISLGGSWG SWSLPVTVDL PGDAVALGLQ CFTLDLKNVT CQWQQQDHAS SQGFFYHSRA RCCPRDRYPI WENCEEEEKT NPGLQTPQFS RCHFKSRNDS IIHILVEVTT APGTVHSYLG SPFWIHQAVR LPTPNLHWRE ISSGHLELEW QHPSSWAAQE TCYQLRYTGE GHQDWKVLEP PLGARGGTLE LRPRSRYRLQ LRARLNGPTY QGPWSSWSDP TRVETATETA WISLVTALYL VLGLNAVLGL LLLRWRSKRS RLLHSDYMNM TPRRPGPTRK HYQPYAPPRD FAAYRSKKVA KKPTNKAPHP KQEPQEINFP DDLPGSNTAA PVQETLHGCQ PVTQEDGKES RISVQERQ
SEQ ID NO:139
載體純系：	pIB1118
序列：	MPSWALFMVT SCLLLAPQNL AQVSSEQKLI SEEDLISLVT ALYLVLGLNA VLGLLLLRWR SKRSRLLHSD YMNMTPRRPG PTRKHYQPYA PPRDFAAYRS KKVAKKPTNK APHPKQEPQE INFPDDLPGS NTAAPVQETL HGCQPVTQED GKESRISVQE RQ
SEQ ID NO:140
載體純系：	pIB1119
序列：	MPSWALFMVT SCLLLAPQNL AQVSSEQKLI SEEDLQDVSL LASDSEPLKC FSRTFEDLTC FWDEEEAAPS GTYQLLYAYP REKPRACPLS SQSMPHFGTR YVCQFPDQEE VRLFFPLHLW VKNVFLNQTR TQRVLFVDSV GLPAPPSIIK AMGGSQPGEL QISWEEPAPE ISDFLRYELR YGPRDPKNST GPTVIQLIAT ETCCPALQRP HSASALDQSP CAQPTMPWQD GPKQTSPSRE ASALTAEGGS CLISGLQPGN SYWLQLRSEP DGISLGGSWG SWSLPVTVDL PGDAVALGLQ CFTLDLKNVT CQWQQQDHAS SQGFFYHSRA RCCPRDRYPI WENCEEEEKT NPGLQTPQFS RCHFKSRNDS IIHILVEVTT APGTVHSYLG SPFWIHQAVR LPTPNLHWRE ISSGHLELEW QHPSSWAAQE TCYQLRYTGE GHQDWKVLEP PLGARGGTLE LRPRSRYRLQ LRARLNGPTY QGPWSSWSDP TRVETATETA WISLVTAWCL VLGLSAVLGL LLLRWRSKRS RLLHSDYMNM TPRRPGPTRK HYQPYAPPRD FAAYRSKKVA KKPTNKAPHP KQEPQEINFP DDLPGSNTAA PVQETLHGCQ PVTQEDGKES RISVQERQ
SEQ ID NO:141
載體純系：	pIB1120
序列：	MPSWALFMVT SCLLLAPQNL AQVSSEQKLI SEEDLISLVT AWCLVLGLSA VLGLLLLRWR SKRSRLLHSD YMNMTPRRPG PTRKHYQPYA PPRDFAAYRS KKVAKKPTNK APHPKQEPQE INFPDDLPGS NTAAPVQETL HGCQPVTQED GKESRISVQE RQ
SEQ ID NO:142
載體純系：	pIB1179
序列：	MALPVTALLL PLALLLHAAR PEPKSCDKTH TCPPCPAPEL LGGPSVFLFP PKPKDTLMIS RTPEVTCVVV DVSHEDPEVK FNWYVDGVEV HNAKTKPREE QYNSTYRVVS VLTVLHQDWL NGKEYKCKVS NKALPAPIEK TISKAKGQPR EPQVYTLPPS RDELTKNQVS LTCLVKGFYP SDIAVEWESN GQPENNYKTT PPVLDSDGSF FLYSKLTVDK SRWQQGNVFS CSVMHEALHN HYTQKSLSLS PGKAAAFWVL VVVGGVLACY SLLVTVAFII FWVRSKRSRL LHSDYMNMTP RRPGPTRKHY QPYAPPRDFA AYRSKKVAKK PTNKAPHPKQ EPQEINFPDD LPGSNTAAPV QETLHGCQPV TQEDGKESRI SVQERQ
SEQ ID NO:143
載體純系：	pIB1180
序列：	MALPVTALLL PLALLLHAAR PAEPKSPDKT HTCPPCPAPP VAGPSVFLFP PKPKDTLMIA RTPEVTCVVV DVSHEDPEVK FNWYVDGVEV HNAKTKPREE QYNSTYRVVS VLTVLHQDWL NGKEYKCKVS NKALPAPIEK TISKAKGQPR EPQVYTLPPS RDELTKNQVS LTCLVKGFYP SDIAVEWESN GQPENNYKTT PPVLDSDGSF FLYSKLTVDK SRWQQGNVFS CSVMHEALHN HYTQKSLSLS PGKKDPKFWV LVVVGGVLAC YSLLVTVAFI IFWVRSKRSR LLHSDYMNMT PRRPGPTRKH YQPYAPPRDF AAYRSKKVAK KPTNKAPHPK QEPQEINFPD DLPGSNTAAP VQETLHGCQP VTQEDGKESR ISVQERQ
SEQ ID NO:144
載體純系：	pIB1181
序列：	MALPVTALLL PLALLLHAAR PERKCCVECP PCPAPPVAGP SVFLFPPKPK DTLMISRTPE VTCVVVDVSH EDPEVQFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQFNS TFRVVSVLTV VHQDWLNGKE YKCKVSNKGL PAPIEKTISK TKGQPREPQV YTLPPSREEM TKNQVSLTCL VKGFYPSDIS VEWESNGQPE NNYKTTPPML DSDGSFFLYS KLTVDKSRWQ QGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSPGKF WVLVVVGGVL ACYSLLVTVA FIIFWVRSKR SRLLHSDYMN MTPRRPGPTR KHYQPYAPPR DFAAYRSKKV AKKPTNKAPH PKQEPQEINF PDDLPGSNTA APVQETLHGC QPVTQEDGKE SRISVQERQ
SEQ ID NO:145
載體純系：	pIB1182
序列：	MALPVTALLL PLALLLHAAR PELKTPLGDT THTCPRCPEP KSCDTPPPCP RCPEPKSCDT PPPCPRCPEP KSCDTPPPCP RCPAPELLGG PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVQFKW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STFRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KTKGQPREPQ VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESSGQP ENNYNTTPPM LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNIFSCSV MHEALHNRFT QKSLSLSPGK FWVLVVVGGV LACYSLLVTV AFIIFWVRSK RSRLLHSDYM NMTPRRPGPT RKHYQPYAPP RDFAAYRSKK VAKKPTNKAP HPKQEPQEIN FPDDLPGSNT AAPVQETLHG CQPVTQEDGK ESRISVQERQ
SEQ ID NO:146
載體純系：	pIB1183
序列：	MALPVTALLL PLALLLHAAR PESKYGPPCP SCPAPEFLGG PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS QEDPEVQFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQFN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKG LPSSIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSQEE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY SRLTVDKSRW QEGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSLGK FWVLVVVGGV LACYSLLVTV AFIIFWVRSK RSRLLHSDYM NMTPRRPGPT RKHYQPYAPP RDFAAYRSKK VAKKPTNKAP HPKQEPQEIN FPDDLPGSNT AAPVQETLHG CQPVTQEDGK ESRISVQERQ
SEQ ID NO:147
載體純系：	pIB1184
序列：	MALPVTALLL PLALLLHAAR PESKYGPPCP PCPAPEFEGG PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS QEDPEVQFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQFQ STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKG LPSSIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSQEE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY SRLTVDKSRW QEGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSLGK FWVLVVVGGV LACYSLLVTV AFIIFWVRSK RSRLLHSDYM NMTPRRPGPT RKHYQPYAPP RDFAAYRSKK VAKKPTNKAP HPKQEPQEIN FPDDLPGSNT AAPVQETLHG CQPVTQEDGK ESRISVQERQ
SEQ ID NO:148
載體純系：	pIB1185
序列：	MALPVTALLL PLALLLHAAR PEPKSCDKTH TCPPCPAPEL LGGPSVFLFP PKPKDTLMIS RTPEVTCVVV DVSHEDPEVK FNWYVDGVEV HNAKTKPREE QYNSTYRVVS VLTVLHQDWL NGKEYKCKVS NKALPAPIEK TISKAKGQPR EPQVYTLPPS RDELTKNQVS LTCLVKGFYP SDIAVEWESN GQPENNYKTT PPVLDSDGSF FLYSKLTVDK SRWQQGNVFS CSVMHEALHN HYTQKSLSLS PGKAAAIEVM YPPPYLDNEK SNGTIIHVKG KHLCPSPLFP GPSKPFWVLV VVGGVLACYS LLVTVAFIIF WVRSKRSRLL HSDYMNMTPR RPGPTRKHYQ PYAPPRDFAA YRSKKVAKKP TNKAPHPKQE PQEINFPDDL PGSNTAAPVQ ETLHGCQPVT QEDGKESRIS VQERQ
SEQ ID NO:149
載體純系：	pIB1186
序列：	MALPVTALLL PLALLLHAAR PAEPKSPDKT HTCPPCPAPP VAGPSVFLFP PKPKDTLMIA RTPEVTCVVV DVSHEDPEVK FNWYVDGVEV HNAKTKPREE QYNSTYRVVS VLTVLHQDWL NGKEYKCKVS NKALPAPIEK TISKAKGQPR EPQVYTLPPS RDELTKNQVS LTCLVKGFYP SDIAVEWESN GQPENNYKTT PPVLDSDGSF FLYSKLTVDK SRWQQGNVFS CSVMHEALHN HYTQKSLSLS PGKKDPKIEV MYPPPYLDNE KSNGTIIHVK GKHLCPSPLF PGPSKPFWVL VVVGGVLACY SLLVTVAFII FWVRSKRSRL LHSDYMNMTP RRPGPTRKHY QPYAPPRDFA AYRSKKVAKK PTNKAPHPKQ EPQEINFPDD LPGSNTAAPV QETLHGCQPV TQEDGKESRI SVQERQ
SEQ ID NO:150
載體純系：	pIB1187
序列：	MALPVTALLL PLALLLHAAR PERKCCVECP PCPAPPVAGP SVFLFPPKPK DTLMISRTPE VTCVVVDVSH EDPEVQFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQFNS TFRVVSVLTV VHQDWLNGKE YKCKVSNKGL PAPIEKTISK TKGQPREPQV YTLPPSREEM TKNQVSLTCL VKGFYPSDIS VEWESNGQPE NNYKTTPPML DSDGSFFLYS KLTVDKSRWQ QGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSPGKI EVMYPPPYLD NEKSNGTIIH VKGKHLCPSP LFPGPSKPFW VLVVVGGVLA CYSLLVTVAF IIFWVRSKRS RLLHSDYMNM TPRRPGPTRK HYQPYAPPRD FAAYRSKKVA KKPTNKAPHP KQEPQEINFP DDLPGSNTAA PVQETLHGCQ PVTQEDGKES RISVQERQ
SEQ ID NO:151
載體純系：	pIB1188
序列：	MALPVTALLL PLALLLHAAR PELKTPLGDT THTCPRCPEP KSCDTPPPCP RCPEPKSCDT PPPCPRCPEP KSCDTPPPCP RCPAPELLGG PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVQFKW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STFRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KTKGQPREPQ VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESSGQP ENNYNTTPPM LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNIFSCSV MHEALHNRFT QKSLSLSPGK IEVMYPPPYL DNEKSNGTII HVKGKHLCPS PLFPGPSKPF WVLVVVGGVL ACYSLLVTVA FIIFWVRSKR SRLLHSDYMN MTPRRPGPTR KHYQPYAPPR DFAAYRSKKV AKKPTNKAPH PKQEPQEINF PDDLPGSNTA APVQETLHGC QPVTQEDGKE SRISVQERQ
SEQ ID NO:152
載體純系：	pIB1189
序列：	MALPVTALLL PLALLLHAAR PESKYGPPCP SCPAPEFLGG PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS QEDPEVQFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQFN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKG LPSSIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSQEE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY SRLTVDKSRW QEGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSLGK IEVMYPPPYL DNEKSNGTII HVKGKHLCPS PLFPGPSKPF WVLVVVGGVL ACYSLLVTVA FIIFWVRSKR SRLLHSDYMN MTPRRPGPTR KHYQPYAPPR DFAAYRSKKV AKKPTNKAPH PKQEPQEINF PDDLPGSNTA APVQETLHGC QPVTQEDGKE SRISVQERQ
SEQ ID NO:153
載體純系：	pIB1190
序列：	MALPVTALLL PLALLLHAAR PESKYGPPCP PCPAPEFEGG PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS QEDPEVQFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQFQ STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKG LPSSIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSQEE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY SRLTVDKSRW QEGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSLGK IEVMYPPPYL DNEKSNGTII HVKGKHLCPS PLFPGPSKPF WVLVVVGGVL ACYSLLVTVA FIIFWVRSKR SRLLHSDYMN MTPRRPGPTR KHYQPYAPPR DFAAYRSKKV AKKPTNKAPH PKQEPQEINF PDDLPGSNTA APVQETLHGC QPVTQEDGKE SRISVQERQ
SEQ ID NO:154
指名	CD40
序列	KKVAKKPTNK APHPKQEPQE INFPDDLPGS NTAAPVQETL HGCQPVTQED GKESRISVQE RQ
SEQ ID NO:155
指名	CD40_串聯
序列	KKVAKKPTNK APHPKQEPQE INFPDDLPGS NTAAPVQETL HGCQPVTQED GKESRISVQE RQKKVAKKPT NKAPHPKQEP QEINFPDDLP GSNTAAPVQE TLHGCQPVTQ EDGKESRISV QERQ
SEQ ID NO:156
指名	CD40_P227A
序列	KKVAKKPTNK AAHPKQEPQE INFPDDLPGS NTAAPVQETL HGCQPVTQED GKESRISVQE RQ

在一些實施例中，涵蓋以下配置中之任何一或多者： 1.一種經工程化蛋白質，其與SEQ ID NO: 166具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、100%或在80與100%之間的任何整數之一致性，且其中該序列不為SEQ ID NO: 123。 2.一種經工程化蛋白質，其與SEQ ID NO: 167具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、100%或在80與100%之間的任何整數之一致性，且其中該序列不為SEQ ID NO: 123。 3.如配置1或2中任一項之經工程化蛋白質，其進一步包含結合域、CD28域及CD40域。 4.如配置2-3中任一項之經工程化蛋白質，其進一步包含訊號肽序列。 5.如配置4之經工程化蛋白質，其中該訊號肽序列與SEQ ID NO: 157之胺基酸序列具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、100%或在80與100%之間的任何整數之一致性。 6.如配置3-5中任一項之經工程化蛋白質，其中該結合域包含VL序列、VH序列及至少一個連接子。 7.如配置6之經工程化蛋白質，其中該至少一個連接子與SEQ ID NO: 159或161之胺基酸序列具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、100%或在80與100%之間的任何整數之一致性。 8.如配置6-7中任一項之經工程化蛋白質，其中該結合域包含兩個連接子序列。 9.如配置8之經工程化蛋白質，其中該等兩個連接子序列分別與胺基酸序列SEQ ID NO: 159及SEQ ID NO: 161具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、100%或在80與100%之間的任何整數之一致性。 10.如配置6-9中任一項之經工程化蛋白質，其中該VL序列與SEQ ID NO: 158之胺基酸序列具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、100%或在80與100%之間的任何整數之一致性。 11.如配置6-10中任一項之經工程化蛋白質，其中該VH序列與SEQ ID NO: 160之胺基酸序列具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、100%或在80與100%之間的任何整數之一致性。 12.如配置3-11中任一項之經工程化蛋白質，其中該CD40域與SEQ ID NO: 165之胺基酸序列具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、100%或在80與100%之間的任何整數之一致性。 13.如配置3-12中任一項之經工程化蛋白質，其中該CD28域包含CD28跨膜域。 14.如配置13之經工程化蛋白質，其中該CD28跨膜域與SEQ ID NO: 163具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、100%或在80與100%之間的任何整數之一致性。 15.如配置3-14中任一項之經工程化蛋白質，其中該CD28域包含CD28胞外域。 16.如配置15之經工程化蛋白質，其中該CD28胞外域與SEQ ID NO: 162具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、100%或在80與100%之間的任何整數之一致性。 17.如配置3-16中任一項之經工程化蛋白質，其中該CD28域包含CD28胞內域。 18.如配置17之經工程化蛋白質，其中該CD28胞內域與SEQ ID NO: 164具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、100%或在80與100%之間的任何整數之一致性。 19.如配置1-18中任一項之經工程化蛋白質，其中該蛋白質進一步包含1、2、3、4、5或所有6個選自由以下組成之群的CDR序列：QASQSLSNLLA (SEQ ID NO: 168)、GASNLES (SEQ ID NO: 169)、QGGHYSGL (SEQ ID NO: 170)、TNDMN (SEQ ID NO: 171)、VIYSDDTPDYATWAKG (SEQ ID NO: 172)及/或GHYDASVYAYALNI (SEQ ID NO: 173)。 20.一種經工程化蛋白質，其包含與SEQ ID NO: 166或167之胺基酸序列至少80%一致的胺基酸序列，其中該胺基酸序列不包括以下中之至少一者：QKLISEEDLE (SEQ ID NO: 174)或 LVKQSPMLVAYDNAVNLSCKYSYNLFSREFRASLHKGLDSAVEVCVVYGNYSQQLQVYSKTGFNCDGKLGNESVTFYLQNLYVNQTDIYFCKI (SEQ ID NO: 175)。 21.如配置20之經工程化蛋白質，其中該經工程化蛋白質缺乏以下兩者：QKLISEEDLE (SEQ ID NO: 174)及 LVKQSPMLVAYDNAVNLSCKYSYNLFSREFRASLHKGLDSAVEVCVVYGNYSQQLQVYSKTGFNCDGKLGNESVTFYLQNLYVNQTDIYFCKI (SEQ ID NO: 175)。 22.如配置20或21中之任一項之經工程化蛋白質，其中SEQ ID NO: 166或167包含與SEQ ID NO: 158具有至少80%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之序列。 23.如配置20或21中之任一項之經工程化蛋白質，其中SEQ ID NO: 166或167包含與SEQ ID NO: 160具有至少80%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之序列。 24.如配置23中之任一項之經工程化蛋白質，其中SEQ ID NO: 166或167包含與SEQ ID NO: 158具有至少80%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之序列。 25.如配置20-24中任一項之經工程化蛋白質，其中SEQ ID NO: 166或167包含與SEQ ID NO: 162具有至少80%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之序列。 26.如配置20-25中任一項之經工程化蛋白質，其中SEQ ID NO: 166或167包含與SEQ ID NO: 164具有至少80%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之序列。 27.如配置20-26中任一項之經工程化蛋白質，其中SEQ ID NO: 166或167包含與SEQ ID NO: 165具有至少80%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之序列。 28.如配置20-27中任一項之經工程化蛋白質，其中SEQ ID NO: 166或167包含與SEQ ID NO: 163具有至少80%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之序列。 29.如配置20-28中任一項之經工程化蛋白質，其中SEQ ID NO: 166或167包含與SEQ ID NO: 161具有至少80%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之序列。 30.如配置20-29中任一項之經工程化蛋白質，其中SEQ ID NO: 166或167包含與SEQ ID NO: 159具有至少80%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之序列。 31.如配置20-30中任一項之經工程化蛋白質，其中SEQ ID NO: 166或167包含與SEQ ID NO: 157具有至少80%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之序列。 32.如配置20-31中任一項之經工程化蛋白質，其中SEQ ID NO: 166或167包含與SEQ ID NO: 162具有至少80%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之序列。 33.如配置20-32中任一項之經工程化蛋白質，其中SEQ ID NO: 166或167包含1、2、3、4、5、6、7及/或所有8個與選自由SEQ ID NO: 158、160、162、163、164及165組成之群的序列具有至少95%一致性之序列。 34.如配置20-33中任一項之經工程化蛋白質，其中SEQ ID NO: 166或167包含與SEQ ID NO: 158、160、162、163、164及165中之各者具有超過98%一致性之序列。 35.一種CoStAR，其包含： (a)視情況存在之訊號肽； (b)結合域，其中該結合域結合至抗帕博利珠單抗(anti-pembrolizumab)抗體或其結合片段； (c) CD28域； (d) CD40域；其中a)視情況連接至b)，其中b)連接至c)，其中c)連接至d)，且其中該CoStAR包含如下胺基酸序列： i)缺乏以下中之至少一者：QKLISEEDLE (SEQ ID NO: 174)或 LVKQSPMLVAYDNAVNLSCKYSYNLFSREFRASLHKGLDSAVEVCVVYGNYSQQLQVYSKTGFNCDGKLGNESVTFYLQNLYVNQTDIYFCKI (SEQ ID NO: 175)； ii)具有與SEQ ID NO: 166或167具有超過95%一致性之胺基酸序列； iii)具有與SEQ ID NO: 166或167具有超過80%一致性之胺基酸序列且不為SEQ ID NO: 123；或 iv) i-iii之任何組合。 36.一種融合蛋白質，其包含： (a)用於結合至抗體之構件，該抗體結合至帕博利珠單抗； (b) CD28域； (c) CD40域；其中a)連接至b)，其中b)連接至c)，且其中該融合蛋白質包含如下胺基酸序列： i)缺乏以下中之至少一者：QKLISEEDLE (SEQ ID NO: 174)或 LVKQSPMLVAYDNAVNLSCKYSYNLFSREFRASLHKGLDSAVEVCVVYGNYSQQLQVYSKTGFNCDGKLGNESVTFYLQNLYVNQTDIYFCKI (SEQ ID NO: 175)； ii)具有與SEQ ID NO: 166或167具有超過95%一致性之胺基酸序列； iii)具有與SEQ ID NO: 166或167具有超過80%一致性之胺基酸序列且不為SEQ ID NO: 123；或 iv) i-iii之任何組合。 37.如配置35或36之CoStAR或融合蛋白質，其中該結合域或結合至與帕博利珠單抗結合之抗體的該構件包含：1、2、3、4、5或所有6個選自由以下組成之群的CDR序列：QASQSLSNLLA (SEQ ID NO: 168)、GASNLES (SEQ ID NO: 169)、QGGHYSGL (SEQ ID NO: 170)、TNDMN (SEQ ID NO: 171)、VIYSDDTPDYATWAKG (SEQ ID NO: 172)及/或GHYDASVYAYALNI (SEQ ID NO: 173)。 38.如配置35至37中任一項之CoStAR或融合蛋白質，其中該CD28域包含：SEQ ID NO: 162、163及164，或與其具有至少80%或95%或98%一致性之序列。 39.如配置35至38中任一項之CoStAR或融合蛋白質，其中該CD40域包含：SEQ ID No: 165，或與其具有至少80%或95%或98%一致性之序列。 40.一種融合蛋白質，其包含SEQ ID NO: 166之胺基酸序列。 41.一種融合蛋白質，其包含SEQ ID NO: 167之胺基酸序列。 42.一種核酸，其編碼如前述配置中任一項之蛋白質。 43.一種載體，其包含如前述配置中任一項之核酸。 44.一種細胞，其表現如前述配置中任一項之蛋白質。 45.一種細胞，其表現至少兩種如前述配置中任一項之蛋白質。 46.一種製備如配置44或45中任一項之細胞的方法，其包含用如配置43之載體轉導或轉染細胞之步驟。 47.一種用於製備表現如配置1至41中任一項之蛋白質的細胞群體之方法，其包含偵測該蛋白質在用如配置43之載體轉導或轉染的細胞之表面上之表現，且選擇經鑑別為表現該蛋白質之細胞。 48.一種細胞群體，其藉由如配置47之方法產生。 49.一種細胞群體，其富集細胞以表現如配置1至41中任一項之蛋白質。 50.一種用於治療有需要之個體之疾病的方法，其包含向該個體投與如配置44至45中任一項之細胞或如配置48或49之細胞群體的步驟。 51.如配置1-41中任一項之經工程化蛋白質，其中該結合域及該CD28域藉由至少一個連接子連接。

儘管已詳細描述本發明及其優點，但應理解，在不背離由所附申請專利範圍所限定之本發明之精神及範疇之情況下，本文可進行各種改變、取代及更改。實例

本發明將進一步說明於以下實例中，該等實例僅出於說明之目的而給出且不意欲以任何方式限制本發明。實例 1

共培養分析設定 .來自2個健康供體之T細胞經修飾以表現所測試之構築體或在MOI 10下保持未經轉導(NTD)。在共培養設定之前一天，使效應T細胞解凍且在1 x 10 ⁶個細胞/mL下再懸浮於不具有IL2之T細胞培養基(TCM)中且在37℃下用5% CO2培育隔夜。在共培養當天，收集T細胞(效應子)及Ba/F3-OKT3目標且按照製造商說明書使用ViCELL BLU對其進行計數。接著將T細胞與Ba/F3 OKT3目標以10:1、1:1及1:10 E:T (效應子:目標)比率共培養隔夜。對於所測試之誘導性共刺激蛋白構築體(亦即pIB1097至pIB1102)，設定另外一組孔，其中除了Ba/F3 OKT3目標之外，亦添加10 µg/mL帕博利珠單抗。各條件一式兩份地進行。未刺激之T細胞充當陰性對照。設定每一E:T比率之兩個集合以及僅T細胞之對照培養盤。將布雷非德菌素A以1:1000稀釋度添加至一組盤以藉由胞內細胞介素染色(ICS)在共培養隔夜之後使用流式細胞儀評定細胞介素產生。將第二組培育5天，其後藉由流動式細胞測量術評定T細胞計數及活化標記表現(亦即41BB及CD69)。

本發明包括修飾TCR複合物及相關訊號傳遞轉接子(諸如在TCR併入式抗原不確定受體「TIAAR」中)之組分，鑑別跨膜域(TMD)及實現受體(「組成性」)之組成性活化的修飾，且利用抗體誘導受體活化(「誘導性」)。

靶向共刺激或抑制劑受體及配位體之scFv。scFV衍生自靶向免疫細胞上表現之共刺激或抑制性分子的抗體。表 9 ：

訊號肽	標籤	ECD_TMD	ICD	Costim	GOI 描述
CD8a	Myc	hZ270_HL	NA	CD28-CD40	抗NKG2A阻斷
CD8a	Myc	hZ270_LH	NA	CD28-CD40	抗NKG2A阻斷
CD8a	Myc	瓦里木單抗_HL	NA	CD28-CD40	抗CD27促效劑
CD8a	Myc	瓦里木單抗_LH	NA	CD28-CD40	抗CD27促效劑
CD8a	Myc	烏瑞魯單抗_HL	NA	CD28-CD40	抗CD137促效劑
CD8a	Myc	烏瑞魯單抗_LH	NA	CD28-CD40	抗CD137促效劑
CD8a	Myc	TRX518_HL	NA	CD28-CD40	抗GITR促效劑
CD8a	Myc	TRX518_LH	NA	CD28-CD40	抗GITR促效劑
CD8a	Myc	帕博利珠單抗_HL	NA	CD28-CD40	抗PD1阻斷
CD8a	Myc	帕博利珠單抗_LH	NA	CD28-CD40	抗PD1阻斷
CD8a	Myc	阿替利珠單抗_HL	NA	CD28-CD40	抗PDL1阻斷
CD8a	Myc	阿替利珠單抗_LH	NA	CD28-CD40	抗PDL1阻斷
CD8a	Myc	RONK203_HL	NA	CD28-CD40	抗FasL阻斷
CD8a	Myc	RONK203_LH	NA	CD28-CD40	抗FasL阻斷
CD8a	Myc	他利昔珠單抗_HL	NA	CD28-CD40	抗OX40促效劑
CD8a	Myc	他利昔珠單抗_LH	NA	CD28-CD40	抗OX40促效劑
CD8a	Myc	伊派利單抗_HL	NA	CD28-CD40	抗CTLA4阻斷
CD8a	Myc	伊派利單抗_LH	NA	CD28-CD40	抗CTLA4阻斷
CD8a	Myc	KY1044_HL	NA	CD28-CD40	抗ICOS促效劑
CD8a	Myc	KY1044_LH	NA	CD28-CD40	抗ICOS促效劑
CD8a	Myc	APX005_HL	NA	CD28-CD40	抗CD40促效劑
CD8a	Myc	APX005_LH	NA	CD28-CD40	抗CD40促效劑
CD8a	Myc	塞立路單抗_HL	NA	CD28-CD40	抗CD40促效劑
CD8a	Myc	塞立路單抗_LH	NA	CD28-CD40	抗CD40促效劑

表 10 ：構築體之 TIAAR ( 併入 TCR) 清單

碼	概念	訊號肽	標籤	ECD_TMD	ICD	Costim	GOI 描述
pIB1026	TIAAR	CD3D	Myc	CD3D	N/A	CD28-CD40	CD3D_CD3D_CD28CD40
pIB1027	TIAAR	CD3E	FLAG	CD3E	N/A	CD28-CD40	CD3E_CD3E_CD28CD40
pIB1028	TIAAR	CD3G	Myc	CD3G	N/A	CD28-CD40	CD3G_CD3G_CD28CD40
pIB1029	TIAAR	CD3Z	Myc IC	CD3Z	N/A	CD28-CD40	CD3Z_CD3Z_CD28CD40_Myc
pIB1030	TIAAR	CD8A	Myc	hTRDC	N/A	CD28-CD40	CD8A_hTRDC_CD28CD40
pIB1031	TIAAR	CD8A	FLAG	hTRGC1	N/A	CD28-CD40	CD8A_hTRGC1_CD28CD40
pIB1032	TIAAR	CD8A	Myc	mTRAC	N/A	CD28-CD40	CD8A_mTRAC_CD28CD40
pIB1033	TIAAR	CD8A	FLAG	mTRBC1	N/A	CD28-CD40	CD8A_mTRBC1_CD28CD40
pIB1046	TIAAR	CD8A x2	Myc及FLAG	hTRDC_hTRGC1	N/A	CD28-CD40	CD8A_hTRDC_CD28CD40-T2A-CD8a_hTRGC1_CD28CD40
pIB1047	TIAAR	CD8A x2	Myc及FLAG	mTRAC_mTRBC1	N/A	CD28-CD40	CD8A_mTRAC_CD28CD40-T2A-CD8A_mTRBC1_CD28CD40
pIB1048	TIAAR	CD3D及CD3E	Myc及FLAG	CD3D_CD3E	N/A	CD28-CD40	CD3D_CD3D_CD28CD40-T2A-CD3E_CD3E_CD28CD40
pIB1049	TIAAR	CD3G及CD3E	Myc及FLAG	CD3G_CD3E	N/A	CD28-CD40	CD3G_CD3G_CD28CD40-T2A-CD3E_CD3E_CD28CD40
pIB1050	TIAAR	CD3D及CD3E	Myc及FLAG	CD3D_CD3E	CD3D_CD3E	CD28-CD40	CD3D_CD3D_CD3D (ICD)_CD28CD40-T2A-CD3E_CD3E_CD3E (ICD)_CD28CD40
pIB1051	TIAAR	CD3D及CD3E	Myc及FLAG	CD3D_CD3E	CD3D_CD3E	N/A	CD3D_CD3D_CD3D ICD -T2A-CD3E_CD3E_CD3E ICD
pIB1052	TIAAR	CD3D及CD3E	Myc及FLAG	CD3D_CD3E	N/A	N/A	CD3D_CD3D (對照)-T2A-CD3E_CD3E (對照)
pIB1053	TIAAR	CD3G及CD3E	Myc及FLAG	CD3G_CD3E	CD3G_CD3E	CD28-CD40	CD3G_CD3G_CD3G (ICD)_CD28CD40-T2A-CD3E_CD3E_CD3E (ICD)_CD28CD40
pIB1054	TIAAR	CD3G及CD3E	Myc及FLAG	CD3G_CD3E	CD3G_CD3E	N/A	CD3G_CD3G_CD3G ICD -T2A-CD3E_CD3E_CD3E ICD
pIB1055	TIAAR	CD3G及CD3E	Myc及FLAG	CD3G_CD3E	N/A	N/A	CD3G_CD3G (對照)-T2A-CD3E_CD3E (對照)
pIB1056	TIAAR	CD3Z	Myc IC	CD3Z	CD3Z	CD28-CD40	CD3z _CD3z_CD3z ICD _CD28CD40_Myc
pIB1057	TIAAR	CD3Z	Myc IC	CD3Z	CD3Z	N/A	CD3z _CD3z_CD3z ICD_Myc
pIB1058	TIAAR	CD3Z	Myc IC	CD3Z	N/A	N/A	CD3z _CD3z (對照)
pIB1059	TIAAR	CD3Z	Myc IC	CD3Z	CD3Z (x2)	CD28-CD40	CD3Z_CD3Z_CD3Z ICD (複製CD3z胞內域-6 ITAMs) _CD28CD40_Myc
pIB1060	TIAAR	CD3Z	Myc IC	CD3Z	CD3Z (x2)	N/A	CD3Z_CD3Z_CD3Z ICD (複製CD3z胞內域-6 ITAMs)_Myc
pIB1061	TIAAR	CD3Z	Myc IC	CD3Z	CD3Z (x2)	CD28-CD40 (交換)	CD3Z_CD3Z_CD28CD40_CD3Z (6 ITAMs)_Myc
pIB1062	TIAAR	CD3Z	Myc IC	CD3Z	CD3Z	CD28-CD40 (交換)	CD3Z_CD3Z_CD28CD40_CD3Z ICD_Myc
pIB1063	TIAAR	CD80	Myc	CD80	CD80	N/A	CD80 (對照)
pIB1064	TIAAR	無訊號肽	Myc IC	N/A	Lck	N/A	Lck (對照)
pIB1065	TIAAR	無訊號肽	Myc IC	N/A	Lck (Y505F)	N/A	Lck (Y505F) (對照)
pIB1066	TIAAR	CD80	Myc	CD80	Lck	N/A	CD80_Lck
pIB1067	TIAAR	CD80	Myc	CD80	Lck	CD28-CD40	CD80_Lck_CD28CD40
pIB1068	TIAAR	CD80	Myc	CD80	CD80_Lck (Y505F)	N/A	CD80_Lck (Y505F)
pIB1069	TIAAR	CD80	Myc	CD80	CD80_Lck (Y505F)	CD28-CD40	CD80_Lck (Y505F)_CD28CD40
pIB1070	TIAAR	CD8A	Myc	LAT	LAT	N/A	LAT (對照)
pIB1071	TIAAR	CD8A	Myc	LAT	LAT	CD28-CD40	LAT_C28CD40
pIB1072	TIAAR	CD4	Myc	CD4	CD4	CD28-CD40	CD4對照
pIB1073	TIAAR	CD4	Myc	CD4	CD4	CD28-CD40	CD4_CD28_CD40
pIB1074	TIAAR	CD8A及CD8B	Myc及FLAG	CD8A及CD8B	CD8A及CD8B	N/A	CD8對照
pIB1075	TIAAR	CD8A及CD8B	Myc及FLAG	CD8A及CD8B	CD8A及CD8B	CD28-CD40	CD8_CD28_CD40

在用Ba/F3 OKT3目標刺激或保持未刺激(亦即僅T細胞)隔夜之後，來自經遺傳修飾及未轉導之T細胞(NTD)的細胞介素產生(Bcl-xL、IL2、IFNγ及TNFα) (圖2)。相較於供體1中之NTD細胞，自遺傳修飾T細胞產生的Bcl-xL、IL2、IFNγ及TNFα增加。相較於供體2中之NTD細胞，遺傳修飾中存在IFNγ產量增加及相當或更低的Bcl-xL、IL2、IFNγ及TNFα產生量。

在與Ba/F3 OKT3目標共培養或保持未刺激(亦即僅T細胞) 5天之後，經遺傳修飾及未轉導之T細胞(NTD)之增殖(來自CD45+ (TIARR)之T細胞計數)及活化標記表現(來自CD45+之41BB及來自CD45+之CD69) (圖3A-3B)。相較於供體1中之NTD細胞，遺傳修飾T細胞計數減少。相較於供體1中之NTD細胞，在遺傳修飾中存在增加或類似的41BB及CD69表現。相較於供體1中之NTD細胞，遺傳修飾T細胞中存在增加或類似的41BB及CD69表現。相較於供體2中之NTD細胞，針對2個所測試之修飾存在增加之T細胞計數，且針對其餘遺傳修飾之T細胞存在類似或降低之T細胞計數。相較於供體2中之NTD細胞，遺傳修飾中存在增加或相當的41BB及CD169表現。表 11 ：組成性構築體之清單

碼

概念

訊號肽

標籤

ECD_TMD

ICD

Costim

GOI 描述

pIB1076

C-SAAR

CD8A

Myc

LZ (cFos)_EGFR

N/A

CD28-CD40

LZ (cFos)- EGFRTM/JMD- CD28-CD40

pIB1077

C-SAAR

CD8A

Myc

LZ (cFos)_CD28

N/A

CD28-CD40

LZ (cFos)- CD28TM- CD28-CD40

pIB1078

C-SAAR

CD8A

Myc

LZ (cJun)_EGFR

N/A

CD28-CD40

LZ (cJun)- EGFRTM/JMD- CD28-CD40

pIB1079

C-SAAR

CD8A

Myc

LZ (cJun)_CD28

N/A

CD28-CD40

LZ (cJun)- CD28TM- CD28-CD40

pIB1080

C-SAAR

CD8A

Myc

LZ (c/EBP)_EGFR

N/A

CD28-CD40

LZ (c/EBP)- EGFRTM/JMD- CD28-CD40

pIB1081

C-SAAR

CD8A

Myc

LZ (c/EBP)_CD28

N/A

CD28-CD40

LZ (c/EBP)- CD28TM- CD28-CD40

pIB1103

C-SAAR

GpA

Myc

GpA ECD_TMD

N/A

CD28-CD40

GpA ECD-TMD-CD28-CD40

pIB1104

C-SAAR

GpA

Myc

GpA TMD

N/A

CD28-CD40

GpA TMD-CD28-CD40

pIB1105

C-SAAR

EPOR

Myc

EPOR ECD_TMD

N/A

CD28-CD40

EpoR ECD-TMD-CD28-CD40

pIB1106

C-SAAR

EPOR

Myc

EPOR TMD

N/A

CD28-CD40

EpoR TMD-CD28-CD40

pIB1107

C-SAAR

TPOR

Myc

TPOR ECD_TMD

N/A

CD28-CD40

TPO ECD- TPO (WT) TMD -CD28-CD40

pIB1108

C-SAAR

TPOR

Myc

TPOR TMD

N/A

CD28-CD40

TPO (WT) TMD -CD28-CD40

pIB1109

C-SAAR

TPOR

Myc

TPOR ECD_TMD (S505N)

N/A

CD28-CD40

TPO ECD- TPO (S505N) TMD -CD28-CD40

pIB1110

C-SAAR

TPOR

Myc

TPOR TMD (S505N)

N/A

CD28-CD40

TPO (S505N) TMD -CD28-CD40

pIB1111

C-SAAR

TPOR

Myc

TPOR ECD_TMD (W515K)

N/A

CD28-CD40

TPO ECD- TPO (W515K) TMD -CD28-CD40

pIB1112

C-SAAR

TPOR

Myc

TPOR TMD (W515K)

N/A

CD28-CD40

TPO (W515K) TMD -CD28-CD40

pIB1113

C-SAAR

TPOR

Myc

TPOR ECD_TMD (H499L)

N/A

CD28-CD40

TPO ECD- TPO (H499L) TMD -CD28-CD40

pIB1114

C-SAAR

TPOR

Myc

TPOR TMD (H499L)

N/A

CD28-CD40

TPO (H499L) TMD -CD28-CD40

pIB1115

C-SAAR

TPOR

Myc

TPOR ECD_TMD (S505N-W515K)

N/A

CD28-CD40

TPO ECD- TPO (S505N-W515K) TMD -CD28-CD40

pIB1116

C-SAAR

TPOR

Myc

TPOR TMD (S505N-W515K)

N/A

CD28-CD40

TPO (S505N-W515K) TMD -CD28-CD40

pIB1117

C-SAAR

TPOR

Myc

TPOR ECD_TMD (H499Y-S505N)

N/A

CD28-CD40

TPO ECD- TPO (H499Y-S505N) TMD -CD28-CD40

pIB1118

C-SAAR

TPOR

Myc

TPOR TMD (H499Y-S505N)

N/A

CD28-CD40

TPO (H499Y-S505N) TMD -CD28-CD40

pIB1119

C-SAAR

TPOR

Myc

TPOR ECD_TMD (L498W-H499C)

N/A

CD28-CD40

TPO ECD- TPO (L498W-H499C) TMD -CD28-CD40

pIB1120

C-SAAR

TPOR

Myc

TPOR TMD (L498W-H499C)

N/A

CD28-CD40

TPO (L498W-H499C) TMD -CD28-CD40

pIB1025

C-SAAR

CD8a

Myc

CD28

N/A

CD28-CD40

CD28 TM_CD28_CD40

pIB1179

C-SAAR

CD8a

N/A

IgGI28TM

N/A

CD28-CD40

IgG1(CH2CH3)-CD28(TM)-CD28(CoStim)-CD40(CoStim)

pIB1180

C-SAAR

CD8a

N/A

IgG1mut+CIM

N/A

CD28-CD40

IgG1(CH2CH3，突變體)-CD28(TM)-CD28(CoStim)-CD40(CoStim)

pIB1181

C-SAAR

CD8aI

N/A

IgG2+CD28TM

N/A

CD28-CD40

IgG2(CH2CH3)-CD28(TM)-CD28(CoStim)-CD40(CoStim)

pIB1182

C-SAAR

I

N/A

IgG3+CD28TM

N/A

CD28-CD40

IgG3(CH2CH3)-CD28(TM)-CD28(CoStim)-CD40(CoStim)

pIB1183

C-SICD8a

CD8a

N/A

IgG4+CD28TM

N/A

CD28-CD40

IgG4(CH2CH3)-CD28(TM)-CD28(CoStim)-CD40(CoStim)

pIB1184

C-SAAR

CDI/A

N/A

IgG4mut+CD28TM

N/A

CD28-CD40

IgG4(CH2CH3，突變體)-CD28I-CD28(CoStim)-CD40(CoStim)

pIB1185

C-SAAR

CD8a

N/A

IgG1 + CD28柄/TM

N/A

CD28-CD40

IgG1(CH2CH3)-CD28(柄+TM)-CD28(CoStim)-CD40(CoStim)

pIB1186

C-SAAR

CD8a

N/A

IgG1mut + CD28柄/TM

N/A

CD28-CD40

IgG1(CH2CH3，突變體)-CD28(柄+TM)-CD28(CoStim)-CD40(CoStim)

pIB1187

C-SAAR

CD8a

N/A

IgG2 + CD28柄/TM

N/A

CD28-CD40

IgG2(CH2CH3)-CD28(柄+TM)-CD28(CoStim)-CD40(CoStim)

pIB1188

C-SAAR

CD8a

N/A

IgG3 + CD28柄/TM

N/A

CD28-CD40

IgG3(CH2CH3)-CD28(柄+TM)-CD28(CoStim)-CD40(CoStim)

pIB1189

C-SAAR

CD8a

N/A

IgG4 + CD28柄/TM

N/A

CD28-CD40

IgG4(CH2CH3)-CD28(柄+TM)-CD28(CoStim)-CD40(CoStim)

pIB1190

C-SAAR

CD8a

N/A

IgG4mut + CD28柄/TM

N/A

CD28-CD40

IgG4(CH2CH3，突變體)-CD28(柄+TM)-CD28(CoStim)-CD40(CoStim)

在用Ba/F3 OKT3目標刺激或保持未刺激(亦即僅T細胞)隔夜之後，來自經遺傳修飾及未轉導之T細胞(NTD)的細胞介素產生(Bcl-xL、IL2、IFNγ及TNFα) (圖4)。相較於供體1中之NTD細胞，遺傳修飾之T細胞中存在增加或相當的Bcl-xL、IL2及TNFα產量及相當或更低的IFNγ含量。相較於供體2中之NTD細胞，遺傳修飾中存在IFNγ及IL2產量增加及相當或更低的Bcl-xL及TNFα產生量。

在與Ba/F3 OKT3目標共培養或保持未刺激(亦即僅T細胞) 5天之後，經遺傳修飾及未轉導之T細胞(NTD)之增殖(來自CD45+ (LZ)之T細胞計數)及活化標記表現(來自CD45+之41BB及來自CD45+之CD69) (圖5A-5B)。相較於供體1中之NTD細胞，遺傳修飾T細胞計數減少。相較於供體1中之NTD細胞，遺傳修飾T細胞中存在增加之41BB及CD69表現。相較於供體2中之NTD細胞，T細胞計數增加，相較於NTD細胞，遺傳修飾T細胞中41BB表現增加，且相較於供體2中之NTD細胞，遺傳修飾之T細胞中的CD169表現類似或減少。表 12 ：誘導性構築體之清單

碼	概念	訊號肽	標籤	ECD_TMD	ICD	Costim	GOI 描述
pIB1082	誘導性	EGFR	Myc	EGFR	N/A	CD28-CD40	WT EGFR ECD- EGFRTM/JMD- CD28-CD40
pIB1083	誘導性	EGFR	Myc	EGFR (域IV)	N/A	CD28-CD40	域IV - EGFRTM/JMD- CD28-CD40
pIB1084	誘導性	EGFR	Myc	EGFR (623-668)	N/A	CD28-CD40	EGFRTM/JMD- CD28-CD40 (對照)
pIB1085	誘導性	Her2	Myc	Her2	N/A	CD28-CD40	Her 2 (域1至IV)-TMD/JMD-CD28-CD40
pIB1086	誘導性	Her2	Myc	Her2 (V659E)	N/A	CD28-CD40	Her 2 (域1至IV)-TMD (V659E)/JMD-CD28-CD40
pIB1087	誘導性	Her2	Myc	Her2 (V660D)	N/A	CD28-CD40	Her 2 (域1至IV)-TMD (G660D)/JMD-CD28-CD40
pIB1088	誘導性	Her2	Myc	Her2 (V660R)	N/A	CD28-CD40	Her 2 (域1至IV)-TMD (G660R)/JMD-CD28-CD40
pIB1089	誘導性	Her2	Myc	Her2域IV_TMD	N/A	CD28-CD40	Her 2 (域IV)-TMD/JMD-CD28-CD40
pIB1090	誘導性	Her2	Myc	Her2域IV_TMD (V659E)	N/A	CD28-CD40	Her 2 (域IV)-TMD (V659E)/JMD-CD28-CD40
pIB1091	誘導性	Her2	Myc	Her2域IV_TMD (G660D)	N/A	CD28-CD40	Her 2 (域IV)-TMD (G660D)/JMD-CD28-CD40
pIB1092	誘導性	Her2	Myc	Her2域IV _TMD (G660R)	N/A	CD28-CD40	Her 2 (域IV)-TMD (G660R)/JMD-CD28-CD40
pIB1093	誘導性	Her2	Myc	Her2 TMD	N/A	CD28-CD40	Her 2 TMD/JMD-CD28-CD40
pIB1094	誘導性	Her2	Myc	Her2 TMD (V659E)	N/A	CD28-CD40	Her 2 TMD (V659E)/JMD-CD28-CD40
pIB1095	誘導性	Her2	Myc	Her2 TMD (G660D)	N/A	CD28-CD40	Her 2 TMD (G660D)/JMD-CD28-CD40
pIB1096	誘導性	Her2	Myc	Her2 TMD (G660R)	N/A	CD28-CD40	Her 2 TMD (G660R)/JMD-CD28-CD40
pIB1097	誘導性	CD8A	Myc	A30514 VH_VL	N/A	CD28-CD40	抗ID1 VH-VL (A30514-帕博利珠單抗)- CD28TMD CD28-CD40
pIB1098	誘導性	CD8A	Myc	A30514 VL_VH	N/A	CD28-CD40	抗ID1 VL-VH (A30514-帕博利珠單抗)- CD28TMD CD28-CD40
pIB1099	誘導性	CD8A	Myc	A30523 VH_VL	N/A	CD28-CD40	抗ID2 Vh-VL (A30523-帕博利珠單抗)- CD28TMD CD28-CD40
pIB1100	誘導性	CD8A	Myc	A30523 VL_VH	N/A	CD28-CD40	抗ID2 VL-Vh (A30523-帕博利珠單抗)- CD28TMD CD28-CD40
pIB1101	誘導性	CD8A	Myc	A30633 VH_VL	N/A	CD28-CD40	抗ID3 Vh-VL (A30633-帕博利珠單抗)- CD28TMD CD28-CD40
pIB1102	誘導性	CD8A	Myc	A30633 VL_VH	N/A	CD28-CD40	抗ID3 VL-VH (A30633-帕博利珠單抗)- CD28TMD CD28-CD40

在用Ba/F3 OKT3目標或具有10 μg/mL帕博利珠單抗之Ba/F3 OKT3目標刺激或保持未刺激(亦即僅T細胞)隔夜之後的經遺傳修飾及未轉導之T細胞(NTD)的細胞介素產生(Bcl-xL、IL2、IFNg及TNFa) (圖6)。與具有單獨Ba/F3 OKT3刺激及供體1及供體2兩者中之NTD細胞的條件相比，在Ba/F3 OKT3及帕博利珠單抗存在下，來自遺傳修飾之T細胞的Bcl-xL、IL2、IFNγ及TNFα產生增加或相當。

在與Ba/F3 OKT3目標或具有10ug/mL帕博利珠單抗之Ba/F3 OKT3目標共培養或保持未刺激(亦即僅T細胞) 5天之後，經遺傳修飾及未轉導之T細胞(NTD)之增殖(來自CD45+ (誘導性)之T細胞計數)及活化標記表現(來自CD45+之41BB及來自CD45+之CD69) (圖7A-7B)。相較於供體1中之NTD細胞，遺傳修飾T細胞中存在增加、相當及降低之T細胞計數。相較於供體1中之NTD細胞，遺傳修飾T細胞中存在增加或類似的41BB及CD169表現。相較於供體2中之NTD細胞，遺傳修飾T細胞中之T細胞計數增加或相當。相較於供體2中之NTD細胞，遺傳修飾細胞中存在增加、類似及降低的41BB及CD169表現。與具有單獨Ba/F3 OKT3刺激以及NTD細胞之條件相比，當遺傳修飾T細胞經Ba/F3 OKT3在帕博利珠單抗存在下刺激時觀測到在兩種供體中之T細胞計數及活化標記表現增加。實例 2 使用細胞系統中之序列 治療患者

具有SEQ ID NO: 166之序列的經工程化蛋白質將使用標準程序藉由併入載體轉染至腫瘤浸潤淋巴球(TIL)細胞中。此細胞隨後將用於產生表現彼等蛋白質之TIL細胞群體。群體將經由偵測蛋白質在經轉染以表現兩種蛋白質之細胞之表面上的表現及選擇鑑別為表現彼等蛋白質之細胞來衍生。經由此過程，細胞群體將富集表現蛋白質之細胞群體。在富集之後，將以治療量向患者投與作為癌症之治療性治療的TIL細胞。實例 3 CoStAR 構築體轉導至 TIL 細胞中

將CoStAR構築體轉導至來自腫瘤消化物之TIL細胞中。第1天在腫瘤消化物上的CEA或FOLR表現效率如圖20至圖22及表13中所示。表 13 ：

腫瘤類型	構築體名稱	來自CD45 - 之CEA % ( FSC -H 相對於CEA )	FOLR1 表現 % (FSC-H 相對於FOLR1)	%CEA+ %FOLR+ (CEA 相對於FOLR1)
CRC (轉移性)	CRC 11959	71.7	4.53	2.65
CRC (轉移性)	CRC 11974	54.6	9.9	5.31
NSCLC	NSCLC-9332	3.88	15.3	1.56
NSCLC	NSCLC-9596	15.1	34.8	14.7
卵巢	OV-9662	2.03	41.3	0.93
黑色素瘤	MEL-CC50	1.37	0.77	0.061
黑色素瘤	MEL-11909	1.26	4.53	0.25
黑色素瘤	MEL-17614	4.4	1.41	0.18

截至第21天CEA或FOLR表現之效率如圖12至圖14中所示。如圖12-14及20-22中可以展示，相較於1天治療，CEA及FOLR表現之量在21天治療內顯著較高。使用以下物質及方法進行轉導： 方法： 實驗概述

在第1天，使腫瘤消化物在培養基1中解凍(無刺激)。存在總共15個腫瘤消化物，且包含胰臟、CRC、NSCLC、卵巢、黑色素瘤及子宮頸腫瘤(圖18)。在每個條件(6種條件)下接種0.5-1e6個細胞。記錄表型為可適用的。在第3天及第4天，細胞在培養基1中以MOI 10轉導。在第8天，經由添加1 mL具有健大黴素/兩性黴素及新鮮IL2 (6000 U/mL)之培養基2，給與細胞生長饋料。在第10天，進行靜態REP (G-REX 6)；細胞經OKT3 (30ng/mL) + IL2 (3000 U/mL) +照射給料器(1:200)刺激。在第15天，進行動態REP；細胞用100mL培養基3轉移至G-REX 6M。在第18天，視需要對細胞進行計數、分裂及/或移除65 mL培養基且補充新鮮培養基3。在第21天，REP結束。此時刻表亦示意性地描繪於圖19中。 方法： 培養基製備

TCM基礎培養基：GMP/TCM培養基+ 25mM HEPES + 25µM 2-巰基乙醇

培養基1：TCM基礎培養基+ 10% FBS，1X健大黴素/兩性黴素(500X儲備液) + 50 ug/mL萬古黴素+ 3000 IU/mL IL2

培養基2：TCM基礎培養基+ 10% FBS，2X健大黴素/兩性黴素B (500X stock) + 100 ug/mL萬古黴素+ 6000 IU/mL IL2

培養基3：TCM基礎培養基+ 8%人類AB血清，3000 IU/mL IL2 方法： 日期詳細方案

第1天：解凍冷凍腫瘤消化物 1.按照excel表形式之表製備培養基1。將200uL IL2添加至200mL培養基1 2.為各腫瘤消化物小瓶標記15 ML錐形管 3.自LN移除腫瘤消化物小瓶，且立即在37度水浴中解凍直至保留小塊。 4.對外部進行滅菌且將小瓶放入BSC。 5.在1 ml預溫熱培養基1中平緩地逐滴添加至各小瓶中。 6.使用5 ml血清學移液管將總共2 ml細胞懸浮液自小瓶轉移，且逐滴極平緩地添加至含有2 ml培養基1之匹配標記的15 ml錐形管中。 7.在9 mL預溫熱培養基1中極平緩地添加至15 ml錐形管中之細胞懸浮液中。 8.以400 g下離心10 min。 9.小心地排出上清液而不觸碰細胞集結粒。 10.基於冷凍細胞數目，平緩地將細胞再懸浮於5 ml培養基1中。 11.使用Vicell計數且記錄於excel表中(1:10稀釋；30uL細胞懸浮液於270uL培養基1中) 12.添加1 mL培養基且分成6種條件 13.使細胞再懸浮於0.5M/mL中 14.將0.5M/mL接種於24孔盤中或將1M/2mL接種於6孔盤中 15.針對各腫瘤碎解物(pIB1322、pIB1324、CTP386.1、CTP387.1、CTP025及NTD T細胞)接種6孔 16.僅針對CRC樣品添加10uL/mL兩性黴素B 17.將盤置放於培育箱中 18.若可用於檢查腫瘤上之CEA及FOLR表現，則收集細胞

第3天：在生長期間的TIL轉導 1.製備所需培養基1且添加1uL/mL IL2 (25uL IL2至25mL培養基1) 2.在各樣品之獨立小瓶中用培養基1稀釋所需體積之LVV (對於24孔盤0.1 mL或對於6孔盤0.5 ml)，平緩地吸液管混合孔且添加至細胞培養物中。 3.將相等體積之培養基1單獨添加至未轉導孔中。 4.輕緩地混合且將培養盤置放於培育箱中。

第4天：TIL第二轉導 1.製備所需培養基1且添加1uL/mL IL2 (35uL IL2至35mL培養基1) 2.使用第3天之TVC及LVV體積計算值，在各樣品之獨立小瓶中用培養基1稀釋所需體積之LVV於0.1ml中 3.輕緩地混合且將培養盤置放於培育箱中。

第8天：生長饋料 1.按照excel表形式之表製備培養基2。將200uL IL2添加至100mL培養基2中。 2.混合各孔 3.對於6孔盤，將1ml新鮮培養基2添加至各孔中，且對於24孔盤添加500uL 4.繼續培養直至第10天。

第10天：靜態REP 1.按照excel表形式之表製備培養基3。 2.收集所有條件 3.使用Vicell計數且記錄於excel表中 4.計算所需之irPBMC饋送器之所需數量 a.基於以下細胞計數，假定每個條件為0.1e6個細胞 b.在1:200下將需要總共12e9個照射饋送器 c.在培養基3中解凍饋送器且在300g×5分鐘下離心 d.使用Vicell計數饋送器 5.視需要製備培養基3 + OKT3 +IL2之主混合物，使用下表14中概述之比率。表 14 ：

試劑	儲備液濃度	每 mL 培養基4	所需體積
培養基3	NA	1mL	30mL
OKT3 (30ng/mL或0.3uL/mL)	100ug/mL	NA	30uL (100ng/mL)
IL2	3000U/uL	1uL	30uL

6.按以下順序將所需體積添加至6孔G-Rex之各孔中 a.首先添加30mL培養基4 + OKT3 +IL2至各孔中 b.將經照射之饋送器添加至孔底部 c.將TIL平緩地添加至孔底部 7.單獨培養經照射之饋送器之額外孔以監測及表型(亦接種於Grex中)

第15天：動態REP 1.收集所有細胞培養物，再懸浮孔 2.使用Vicell計數且記錄於excel表中 3.使30mL細胞懸浮液轉移至6M G-REX且頂部轉移至100ml (亦即，添加60 mL培養基3 + 10mL以沖洗孔) 4.添加新鮮IL2 (3000U/mL IL2為1uL/mL)。針對各條件添加100μL IL2

第18天：動態REP維持 1.自培育箱中獲取6M G-REX 2.將細胞再懸浮於孔中 3.使用Vicell計數且記錄於excel表中 4.對細胞計數＜1e6個細胞/mL進行培養基更換，或對細胞計數＞1e6個細胞/mL分離條件注意： a.使G-Rex在生物安全櫃中停留30分鐘(若細胞在懸浮中或在移除培養基之前受干擾)。 b.對於培養基更換，移除60 mL培養基且補充60 mL培養基4 + IL2 c.對於分離條件，轉移50 mL細胞懸浮液至第二G-REX 6M且對於所有條件補充體積至100mL。 5.頂部孔具有培養基4至100 ml且置放於培育箱中。

第21天：收穫 1.收穫所有細胞。 2.在400 g×10 min下離心 3.再懸浮於50 mL培養基3中且通過100um細胞過濾器進入新鮮50mL錐形管中 4.使用Vicell計數且記錄於excel表中 5.以400 g使細胞短暫離心10分鐘且抽吸掉上清液。 6.用CryoStor CS10低溫保存細胞且在冷凍小瓶中冷凍。實例 4 TIL 功能性 篩選

表現CoStAR構築體之TIL細胞隨後經歷篩選以評估功能。此篩選之結果如圖17A-17B中所示。根據篩選，產生關於CEA及/或FOLR表現富集的細胞群體。具有正表現之抗CEA、抗FOLR及通用CoStAR細胞之分率如圖23-27中所示。在此等TILS中，CD4/8比率如圖28A-28D中所示。用於分析之方法如下： 方法：實驗概述

在第1天，解凍TIL細胞。在第2天，經CoStAR修飾之TIL經分選，隨後在fortessa上運行。在第4天，完成培養基變化，且將細胞染色且在fortessa上運行。在第6天，改變TCM培養基以排除IL2。在第7天，設定共培養及連續刺激分析。如圖30A-30H、31A-31H及32A-32H中可見，具有自體消化物之共培養物可能歸因於由於CoStAR分選而在不同條件之間該等TIL之腫瘤反應性中引入之變化而不確定。另外，在24小時共培養分析中，自抗CEA及通用CoStAR修飾之TIL在訊號1+2存在下觀測到高含量之IL2產生。觀測到IFNg及TNFa之類似趨勢。在第8天，收集上清液，且進行MSD。隨後染色細胞以評估活化標記之表現。此時間之輪廓如圖29中所展示。方法：具有 IL2 之 TCM 培養基

向500 mL RPMI 1640之瓶中添加：50 mL FBS、5 mL青黴素/鏈黴素、5 mL HEPES、500 uL 2-巰基乙醇及1 uL/mL IL-2儲備液(3e6 U/mL)。培養基之最終濃度應為3000 U/mL。方法： 日期詳細方案

第1天：解凍TILS 1)將瓶置放於水浴中 2)轉移至通風櫥中且添加細胞懸浮液至9mL TCM培養基中 3)在400 g×5 min下離心 4)抽吸 5)添加5mL培養基 6)使用Vicell計數 7)細胞在1e6個細胞/毫升下置放隔夜

第2天：分選經CoStAR修飾之TILS 1.收集細胞 2.在400g×5 min下離心 3.抽吸且再懸浮於5 mL培養基中 4.使用Vicell計數 5.製備緩衝液(10% FBS + 2mM EDTA)，添加以下至500mL RPMI 1640 o 50mL胎牛血清 o 2mL 0.5M EDTA 6.確定細胞數目，收集LS管柱之細胞(參見「分選前及分選後計數」)。 7.在400xg下離心5分鐘，抽吸上清液。斷裂丸粒。 8.轉移至15mL錐形管 9.將細胞與如表之抗體一起培育 o對於CTP205，添加1uL sol FOLR Fc APC抗體/1e6個細胞 o對於pIB1322及pIB1324，添加10uL驢抗兔PE抗體/1e6個細胞 o對於CTP386.1及387.1，添加2.5uL CEACAM5-Fc FITC抗體/1e6個細胞 10.充分混合，在黑暗中在4℃下培育30分鐘。 11.藉由每10e6個細胞添加1至2 mL緩衝液來洗滌細胞 12.在400xg下離心5分鐘。抽吸上清液。 13.添加5mL緩衝液以洗滌。 14.在400xg下離心5分鐘。抽吸上清液。 15.使10e6個細胞再懸浮於80uL緩衝液中(參見表) 16.添加20uL微珠10e6個細胞(參見表) 17.充分混合，在4℃下培育15分鐘 18.藉由每10e6個細胞添加1至2 mL緩衝液來洗滌細胞 19.在400xg下離心5分鐘。抽吸上清液。 20.在500uL緩衝液中再懸浮至多100e6個細胞。 21.使用LS管柱之磁性分離 a)將LS管柱置放於MACS分離器上。 b)用2mL緩衝液沖洗。立即使用管柱。在添加細胞懸浮液之前即刻沖洗管柱。 c)將細胞懸浮液施用於管柱 d)用2 mL緩衝液洗滌管柱3次。收集穿過管柱之未經標記之細胞 e)移出管柱形式分離器且置於適當管上。 f)使5mL緩衝液移液至管柱上。 g)藉由牢固地將柱塞推動至管柱中來立即沖洗。 h)在400 g×5 min下離心 i)再懸浮於1mL (或5mL，視丸粒而定) TCM培養基+ 3000 U/mL IL2中 j)在Vicell上計數。(參見分選前及分選後計數) k)添加培養基以將細胞維持在1e6/mL且培育燒瓶

第4天：完全培養基變化 1.將細胞收集在試管中 2.在400 g×5 min下離心 3.抽吸 4.添加具有IL2之TCM培養基 5.使用Vicell計數 6.添加培養基使細胞維持在1e6個細胞/mL 7.收集0.05至0.1e6個細胞以使用L/D Near Far IR進行fortessa染色

第6天：更換為無IL2之介質 8.將細胞收集在試管中 9.在400 g×5 min下離心 10.抽吸 11.添加無IL2之TCM培養基 12.使用Vicell計數 13.添加無IL2培養基之TCM培養基以使細胞維持在1e6個細胞/mL

第7天：設定共培養 1.收集經分選之TIL 2.在400g×5 min下離心 3.抽吸且添加無IL2之5mL TCM培養基 4.使用Vicell計數 5.收集目標- K562 WT、OKT3、CEACAM5及OKT3 CEACAM5及OKT3 FOLR 6.在無IL2之TCM培養基中解凍自體消化物 7.在400g×5 min下離心 8.抽吸且再懸浮於無IL2之5mL TCM培養基中 9.使用Vicell對效應子、目標細胞株及自體消化物計數 10.收集2e6個細胞且再懸浮於具有不含IL2之TCM培養基的2mL最終體積中 11.收集1e6個目標且再懸浮於具有不含IL2之TCM培養基的10mL最終體積中 12.收集自體消化物之2e6或10e6個細胞且再懸浮於不含IL2之2mL TCM培養基中(此將為1:1或1:5比率) 13.根據盤圖在培養盤中培養50uL TIL 14.根據盤圖在培養盤中培養50uL目標 15.根據TIL將目標再懸浮以將E:T比率調節至10:1 (此僅針對細胞株) 16.根據表，自儲備液製備帕博利珠單抗(5mg/mL) 17.根據盤圖添加100μL帕博利珠單抗 18.向培養盤1中添加100uL培養基 19.在所有孔中補足至200uL最終體積。應注意，僅效應子及僅目標孔將具有150uL；視盤而定添加50uL培養基或適當的帕博利珠單抗濃度。 20.添加TIL用於FMO 21.添加PBS至空孔 22.在培育箱中培養盤實例 5 CoStAR - TIL 細胞之 連續刺激分析

表現CoStAR構築體之TIL細胞隨後進行連續刺激分析。刺激分析結果如圖15A-15E及16A-16E中所示。如在彼等圖中可見，經抗CEA CoStAR而非通用CoStAR修飾之TIL在與抗FOLR CoStAR修飾之TIL相當的連續刺激分析中擴增。用於刺激分析之方法如下：

第1天： 1.收集效應細胞且使用Vicell進行計數 2.解凍目標(經照射之K562 OKT3 CEACAM5及K562 OKT3 FOLR1)且使用Vicell計數 3.在excel表中記錄計數且對於各樣品補充體積至0.2M/ml 4.根據盤圖用培養盤培養50uL效應子(亦即，50K細胞)及目標(亦即，10K細胞)。注意：添加K562 OKT3 FOLR以控制盤 5.根據盤圖添加100ul培養基至適當孔中 6.將10uL儲備液帕博利珠單抗稀釋於4.99ml新鮮培養基中，以製備2x濃度用於盤2 (10ug/ml)且根據盤圖將100ul添加至適當孔中 7.將0.5mL儲備液帕博利珠單抗稀釋於4.5ml新鮮培養基中，以製備2x濃度用於盤3 (500ug/ml)且根據盤圖將100μL添加至適當孔中 8.在盤之邊緣處添加200uL PBS至孔 9.將培養盤放入培育箱中

第6、13、20、27及34天：收集細胞用於細胞計數 1.藉由將180ul培養基添加至Vi-細胞96孔計算盤中準備細胞計算 2.將細胞再懸浮於共培養盤中 3.獲取20ul再懸浮細胞且添加至Vi-細胞96孔盤中。參考excel表中之「用於計數之盤圖」標籤。 4.將共培養盤放回培育箱中 5.對Vi-細胞96孔盤計數(1:10稀釋) 6.將培養盤放回培育箱中

第7、14、21、28及35天：用目標再刺激細胞 1.自vi-cell獲取細胞計數檔案且插入至excel表中以用於計算 2.收集50uL樣品用於染色 3.用封口膜密封盤且以500g x 5 min短暫離心共培養盤 4.傾析生物安全箱內部之盤 5.將細胞再懸浮於50ul/孔之新鮮培養基中 6.製備帕博利珠單抗且基於濃度計算值添加100ul帕博利珠單抗 7.將12uL儲備液帕博利珠單抗稀釋於6ml新鮮培養基中，以製備2x濃度(10ug/ml)且根據盤圖將100μL添加至適當孔中 8.將0.6mL儲備液帕博利珠單抗稀釋於5.4ml新鮮培養基中，以製備2x濃度(500ug/ml)且根據盤圖將100μL添加至適當孔中 9.根據盤圖添加100ul培養基至適當孔中 10.基於表中之計算添加額外培養基 11.解凍經照射之K562 OKT3 CEACAM5及K562 OKT3 FOLR目標 12.使目標細胞再懸浮於1M/ml且基於表中之計算添加目標細胞 13.混合孔且置放於培育箱中 14.沿邊緣將PBS添加至空孔中 * * *

在由此詳細描述本發明之較佳實施例的情況下，應理解，由上文段落定義之本發明不限於上文描述中所闡述之特定細節，因為其許多明顯變化可在不偏離本發明之精神或範疇的情況下進行。

以舉例方式給出，但並不意欲將本發明僅限制於描述之特定實施例之以下實施方式可與隨附圖式結合而最佳地理解。

圖 1A-1C-通用共刺激蛋白質之示意性模型。(圖1A)TCR併入式抗原不可知受體(TIAAR)包含修飾TCR複合物及相關傳訊銜接子之組分。(圖1B)組成性共刺激受體，其包含跨膜域(TMD)及允許誘導性或組成性活化的特徵。(圖1C)能夠藉由胞外配位體結合進行誘導及活化之誘導性共刺激受體。

圖 2-藉由TCR併入式抗原不確定受體(TIAAR)轉導之細胞的細胞介素產生。在用Ba/F3 OKT3標靶刺激或保持未刺激(亦即，僅T細胞)隔夜之後確定來自兩個供體之經遺傳修飾及未經轉導之T細胞(NTD)的細胞介素產生(Bcl-xL、IL2、IFNg及TNFa)。

圖 3A-3B-藉由TIAAR轉導細胞之增殖及活化標記表現。在用Ba/F3 OKT3標靶或保持未刺激(亦即，僅T細胞)共培養5天之後確定來自供體1 (圖3A)及供體2 (圖3B)之經遺傳修飾及未經轉導之T細胞(NTD)的增殖(T細胞計數)及活化標記表現(41BB及CD69)。

圖 4-基於白胺酸拉鏈之通用CoStAR (LZ)轉導細胞中之細胞介素產生。在用Ba/F3 OKT3標靶刺激或保持未刺激(亦即，僅T細胞)隔夜之後確定來自兩個供體之經遺傳修飾及未經轉導之T細胞(NTD)的細胞介素產生(Bcl-xL、IL2、IFNg及TNFa)。

圖 5A-5B-藉由LZ-CoStAR轉導細胞之增殖及活化標記表現。在用Ba/F3 OKT3標靶或保持未刺激(亦即，僅T細胞)共培養5天之後確定來自供體1 (圖5A)及供體2 (圖5B)之經遺傳修飾及未經轉導之T細胞(NTD)的增殖(T細胞計數)及活化標記表現(41BB及CD69)。

圖 6-誘導性通用CoStAR轉導細胞中之細胞介素產生。在用Ba/F3 OKT3標靶刺激或保持未刺激(亦即，僅T細胞)隔夜之後確定來自兩個供體之經遺傳修飾及未經轉導之T細胞(NTD)的細胞介素產生(Bcl-xL、IL2、IFNg及TNFa)。通用CoStAR可由帕博利珠單抗誘導。

圖 7A-7B-藉由誘導性通用CoStAR轉導細胞之增殖及活化標記表現。在用Ba/F3 OKT3標靶或保持未刺激(亦即，僅T細胞)共培養5天之後確定來自供體1 (圖7A)及供體2 (圖7B)之經遺傳修飾及未經轉導之T細胞(NTD)的增殖(T細胞計數)及活化標記表現(41BB及CD69)。通用CoStAR可由帕博利珠單抗誘導。

圖 8A-為本文所提供之一些實施例之蛋白質的示意圖。其為包含通用CoStAR序列之蛋白質，該序列包含視情況部分、結合域、CD28域及CD40域。

圖 8B-為本文所提供之一些實施例的示意圖。

圖 8C-概述本文所提供之一些實施例的一組序列。

圖 9-描繪含有視情況訊號域之抗帕博利珠單抗CoStAR序列(「通用CoStAR」) (SEQ ID NO: 166)的序列。

圖 10-描繪不具有視情況訊號域之抗帕博利珠單抗CoStAR序列(「通用CoStAR」) (SEQ ID NO: 166)的序列。

圖 11-描繪在抗帕博利珠單抗CoStAR序列(「通用CoStAR」) (SEQ ID NO: 166)與載體純系pIB1102 (SEQ ID NO: 123)之間的序列比對。

圖 12-描繪在21天之後構築體至TIL中之轉導效率。第1輪(左圖)及第2輪(右圖)係用構築體CTP386.1及CTP387.1在多種TIL器官類型(x軸)中進行。

圖 13-描繪在21天之後構築體至TIL中之轉導效率。第1輪(左圖)及第2輪(右圖)係用構築體322及1324在多種TIL器官類型(x軸)中進行。

圖 14-描繪在21天之後構築體至TIL中之轉導效率。第1輪(左圖)及第2輪(右圖)係用構築體CTP205在多種TIL器官類型(x軸)中進行。

圖 15A-15E-描述根據連續刺激分析之TIL的擴增倍數。來自CRC 9823之抗CEA或抗FOLR修飾之TIL每7天分別用目標K562 OKT3 CEACAM5或OKT3 FOLR處理。使用隨時間推移之細胞計數來量測讀數。圖中展示使用K562 OKT3 CEACAM5暴露之抗CEA TIL(圖15A)、使用OKT3 FOLR暴露之抗FOLR TIL (圖15B)、使用K562 OKT3 CEACAM5暴露之通用CoStAR (圖15C)、使用K562 OKT3 CEACAM5暴露及5 ug/mL帕博利珠單抗之通用CoStAR (圖15D)及使用K562 OKT3 CEACAM5暴露及250 ug/mL帕博利珠單抗之通用CoStAR (圖15E)的擴增倍數。

圖 16A-16E-描述根據連續刺激分析之TIL的擴增倍數。來自Mel 11909之抗CEA或抗FOLR修飾之TIL每7天分別用目標K562 OKT3 CEACAM5或OKT3 FOLR處理。使用隨時間推移之細胞計數來量測讀數。圖中展示使用K562 OKT3 CEACAM5暴露之抗CEA TIL(圖16A)、使用OKT3 FOLR暴露之抗FOLR TIL (圖16B)、使用K562 OKT3 CEACAM5暴露之通用CoStAR (圖16C)、使用K562 OKT3 CEACAM5暴露及5 ug/mL帕博利珠單抗之通用CoStAR (圖16D)及使用K562 OKT3 CEACAM5暴露及250 ug/mL帕博利珠單抗之通用CoStAR (圖16E)的擴增倍數。

圖 17A-17B-描繪來自CRC983 (圖17A)或Mel 11909 (圖17B)之抗CEA、抗FOLR及通用CoStAR修飾之TLS中IL2產生增加(pg/mL)。

圖 18-描繪實例3中用作消化物以產生TIL細胞之腫瘤類型(n=15)的餅圖。

圖 19 -描繪使用實例3中所概述之方案將CoStAR構築體轉導至細胞中之實例時刻表。

圖 20-描繪在1天之後構築體至TIL中之轉導效率。第1輪(左圖)及第2輪(右圖)轉導係在多種TIL器官類型(x軸)中進行。繪製於y軸上，為轉導後具有FOLR1之陽性表現的細胞百分比。

圖 21-描繪在1天之後構築體至TIL中之轉導效率。第1輪(左圖)及第2輪(右圖)轉導係在多種TIL器官類型(x軸)中進行。繪製於y軸上，為轉導後具有CEA之陽性表現的細胞百分比。

圖 22-描繪在1天之後構築體至TIL中之轉導效率。第1輪(左圖)及第2輪(右圖)轉導係在多種TIL器官類型(x軸)中進行。繪製於y軸上，為轉導後具有FOLR1及CEA兩者之陽性表現的細胞百分比。

圖 23 -描繪如實例4中所概述之在分選前、分選後、第2天及第4天之後對於CEA表現呈陽性的百分比之抗CEA (386.1)細胞之第1輪(左圖)及第2輪(右圖)。

圖 24 -描繪如實例4中所概述之在分選前、分選後、第2天及第4天之後對於CEA表現呈陽性的百分比之抗CEA (387.1)細胞之第1輪(左圖)及第2輪(右圖)。

圖 25 -描繪如實例4中所概述之在分選前、分選後、第2天及第4天之後對於FOLR表現呈陽性的百分比之抗FOLR細胞之第1輪(左圖)及第2輪(右圖)。

圖 26 -描繪如實例4中所概述之在分選前、分選後、第2天及第4天之後對於FOLR及CEA兩者呈陽性的百分比之通用CoStAR (pIB1322)細胞之第1輪(左圖)及第2輪(右圖)。

圖 27 -描繪如實例4中所概述之在分選前、分選後、第2天及第4天之後對於FOLR及CEA兩者呈陽性的百分比之通用CoStAR (pIB1324)細胞之第1輪(左圖)及第2輪(右圖)。

圖 28A-28D -描繪在21天之後針對FOLR及/或CEA表現富集之細胞的CD4與CD8陽性TIL細胞之比率。圖28A描繪CRC細胞中之比率，圖28B描繪NSCLC細胞中之比率，圖28C描繪卵巢細胞中之比率，且圖28D描繪黑色素瘤細胞中之比率。

圖 29 -描繪使用實例4中所概述之方案的用於分選TIL細胞及測試功能之實例時刻表。

圖 30A-30H-描繪在細胞類型CRC-11974 (圖30A)、CRC-11959 (圖30B)、NSCLC-9332 (圖30C)、NSCLC-9596 (圖30D)、卵巢細胞(圖30E)、黑色素瘤-CC60 (圖30F)、黑色素瘤-11909 (圖30G)及黑色素瘤-17614 (圖30H)中共培養之後TIL及K562細胞株中之IFNg產生增加(pg/mL)。

圖 31A-31H-描繪在細胞類型CRC-11974 (圖31A)、CRC-11959 (圖31B)、NSCLC-9332 (圖31C)、NSCLC-9596 (圖31D)、卵巢細胞(圖31E)、黑色素瘤-CC60 (圖31F)、黑色素瘤-11909 (圖31G)及黑色素瘤-17614 (圖31H)中共培養之後TIL及K562細胞株中之IL2產生增加(pg/mL)。

圖 32A-32H-描繪在細胞類型CRC-11974 (圖32A)、CRC-11959 (圖32B)、NSCLC-9332 (圖32C)、NSCLC-9596 (圖32D)、卵巢細胞(圖32E)、黑色素瘤-CC60 (圖32F)、黑色素瘤-11909 (圖32G)及黑色素瘤-17614 (圖32H)中共培養之後TIL及K562細胞株中之TNFa產生增加(pg/mL)。

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Claims

一種經工程化蛋白質，其與SEQ ID NO: 166具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、100%或介於80與100%之間的任何整數之一致性，且其中該序列不為SEQ ID NO: 123。
一種經工程化蛋白質，其與SEQ ID NO: 167具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、100%或介於80與100%之間的任何整數之一致性，且其中該序列不為SEQ ID NO: 123。
如請求項1或2中任一項之經工程化蛋白質，其進一步包含結合域、CD28域及CD40域。
如請求項2至3中任一項之經工程化蛋白質，其進一步包含訊號肽序列。
如請求項4之經工程化蛋白質，其中該訊號肽序列與SEQ ID NO: 157之胺基酸序列具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、100%或介於80與100%之間的任何整數之一致性。
如請求項3至5中任一項之經工程化蛋白質，其中該結合域包含VL序列、VH序列及至少一個連接子。
如請求項6之經工程化蛋白質，其中該至少一個連接子與SEQ ID NO: 159或161之胺基酸序列具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、100%或介於80與100%之間的任何整數之一致性。
如請求項6至7中任一項之經工程化蛋白質，其中該結合域包含兩個連接子序列。
如請求項8之經工程化蛋白質，其中該等兩個連接子序列分別與胺基酸序列SEQ ID NO: 159及SEQ ID NO: 161具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、100%或介於80與100%之間的任何整數之一致性。
如請求項6至9中任一項之經工程化蛋白質，其中該VL序列與SEQ ID NO: 158之胺基酸序列具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、100%或介於80與100%之間的任何整數之一致性。
如請求項6至10中任一項之經工程化蛋白質，其中該VH序列與SEQ ID NO: 160之胺基酸序列具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、100%或在80與100%之間的任何整數之一致性。
如請求項3至11中任一項之經工程化蛋白質，其中該CD40域與SEQ ID NO: 165之胺基酸序列具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、100%或在80與100%之間的任何整數之一致性。
如請求項3至12中任一項之經工程化蛋白質，其中該CD28域包含CD28跨膜域。
如請求項13之經工程化蛋白質，其中該CD28跨膜域與SEQ ID NO: 163具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、100%或在80與100%之間的任何整數之一致性。
如請求項3至14中任一項之經工程化蛋白質，其中該CD28域包含CD28胞外域。
如請求項15之經工程化蛋白質，其中該CD28胞外域與SEQ ID NO: 162具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、100%或在80與100%之間的任何整數之一致性。
如請求項3至16中任一項之經工程化蛋白質，其中該CD28域包含CD28胞內域。
如請求項17之經工程化蛋白質，其中該CD28胞內域與SEQ ID NO: 164具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、100%或在80與100%之間的任何整數之一致性。
如請求項1至18中任一項之經工程化蛋白質，其中該蛋白質進一步包含1、2、3、4、5或所有6個選自由以下組成之群的CDR序列：QASQSLSNLLA (SEQ ID NO: 168)、GASNLES (SEQ ID NO: 169)、QGGHYSGL (SEQ ID NO: 170)、TNDMN (SEQ ID NO: 171)、VIYSDDTPDYATWAKG (SEQ ID NO: 172)及/或GHYDASVYAYALNI (SEQ ID NO: 173)。
一種經工程化蛋白質，其包含與SEQ ID NO: 166或167之胺基酸序列至少80%一致的胺基酸序列，其中該胺基酸序列不包括以下中之至少一者：QKLISEEDLE (SEQ ID NO: 174)或 LVKQSPMLVAYDNAVNLSCKYSYNLFSREFRASLHKGLDSAVEVCVVYGNYSQQLQVYSKTGFNCDGKLGNESVTFYLQNLYVNQTDIYFCKI (SEQ ID NO: 175)。
如請求項20之經工程化蛋白質，其中該經工程化蛋白質缺乏以下兩者：QKLISEEDLE (SEQ ID NO: 174)及 LVKQSPMLVAYDNAVNLSCKYSYNLFSREFRASLHKGLDSAVEVCVVYGNYSQQLQVYSKTGFNCDGKLGNESVTFYLQNLYVNQTDIYFCKI (SEQ ID NO: 175)。
如請求項20或21中之任一項之經工程化蛋白質，其中SEQ ID NO: 166或167包含與SEQ ID NO: 158具有至少80%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之序列。
如請求項20或21中之任一項之經工程化蛋白質，其中SEQ ID NO: 166或167包含與SEQ ID NO: 160具有至少80%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之序列。
如請求項23中之任一項之經工程化蛋白質，其中SEQ ID NO: 166或167包含與SEQ ID NO: 158具有至少80%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之序列。
如請求項20至24中任一項之經工程化蛋白質，其中SEQ ID NO: 166或167包含與SEQ ID NO: 162具有至少80%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之序列。
如請求項20至25中任一項之經工程化蛋白質，其中SEQ ID NO: 166或167包含與SEQ ID NO: 164具有至少80%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之序列。
如請求項20至26中任一項之經工程化蛋白質，其中SEQ ID NO: 166或167包含與SEQ ID NO: 165具有至少80%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之序列。
如請求項20至27中任一項之經工程化蛋白質，其中SEQ ID NO: 166或167包含與SEQ ID NO: 163具有至少80%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之序列。
如請求項20至28中任一項之經工程化蛋白質，其中SEQ ID NO: 166或167包含與SEQ ID NO: 161具有至少80%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之序列。
如請求項20至29中任一項之經工程化蛋白質，其中SEQ ID NO: 166或167包含與SEQ ID NO: 159具有至少80%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之序列。
如請求項20至30中任一項之經工程化蛋白質，其中SEQ ID NO: 166或167包含與SEQ ID NO: 157具有至少80%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之序列。
如請求項20至31中任一項之經工程化蛋白質，其中SEQ ID NO: 166或167包含與SEQ ID NO: 162具有至少80%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之序列。
如請求項20至32中任一項之經工程化蛋白質，其中SEQ ID NO: 166或167包含1、2、3、4、5、6、7及/或所有8個與選自由SEQ ID NO: 158、160、162、163、164及165組成之群的序列具有至少95%一致性之序列。
如請求項20至33中任一項之經工程化蛋白質，其中SEQ ID NO: 166或167包含與SEQ ID NO: 158、160、162、163、164及165中之各者具有超過98%一致性之序列。
一種CoStAR，其包含： (a)視情況存在之訊號肽； (b)結合域，其中該結合域結合至抗帕博利珠單抗(anti-pembrolizumab)抗體或其結合片段； (c) CD28域； (d) CD40域；其中a)視情況連接至b)，其中b)連接至c)，其中c)連接至d)，且其中該CoStAR包含如下胺基酸序列，其： i)缺乏以下中之至少一者：QKLISEEDLE (SEQ ID NO: 174)或 LVKQSPMLVAYDNAVNLSCKYSYNLFSREFRASLHKGLDSAVEVCVVYGNYSQQLQVYSKTGFNCDGKLGNESVTFYLQNLYVNQTDIYFCKI (SEQ ID NO: 175)； ii)具有與SEQ ID NO: 166或167具有超過95%一致性之胺基酸序列； iii)具有與SEQ ID NO: 166或167具有超過80%一致性之胺基酸序列且不為SEQ ID NO: 123；或 iv) i-iii之任何組合。
一種融合蛋白質，其包含： (a)用於結合至抗體之構件，該抗體結合至帕博利珠單抗； (b) CD28域； (c) CD40域；其中a)連接至b)，其中b)連接至c)，且其中該融合蛋白質包含如下胺基酸序列： i)缺乏以下中之至少一者：QKLISEEDLE (SEQ ID NO: 174)或 LVKQSPMLVAYDNAVNLSCKYSYNLFSREFRASLHKGLDSAVEVCVVYGNYSQQLQVYSKTGFNCDGKLGNESVTFYLQNLYVNQTDIYFCKI (SEQ ID NO: 175)； ii)具有與SEQ ID NO: 166或167具有超過95%一致性之胺基酸序列； iii)具有與SEQ ID NO: 166或167具有超過80%一致性之胺基酸序列且不為SEQ ID NO: 123；或 iv) i-iii之任何組合。
如請求項35或36之CoStAR或融合蛋白質，其中該結合域或結合至與帕博利珠單抗結合之抗體的該構件包含：1、2、3、4、5或所有6個選自由以下組成之群的CDR序列：QASQSLSNLLA (SEQ ID NO: 168)、GASNLES (SEQ ID NO: 169)、QGGHYSGL (SEQ ID NO: 170)、TNDMN (SEQ ID NO: 171)、VIYSDDTPDYATWAKG (SEQ ID NO: 172)及/或GHYDASVYAYALNI (SEQ ID NO: 173)。
如請求項35至37中任一項之CoStAR或融合蛋白質，其中該CD28域包含：SEQ ID NO: 162、163及164，或與其具有至少80%或95%或98%一致性之序列。
如請求項35至38中任一項之CoStAR或融合蛋白質，其中該CD40域包含：SEQ ID No: 165，或與其具有至少80%或95%或98%一致性之序列。
一種融合蛋白質，其包含SEQ ID NO: 166之胺基酸序列。
一種融合蛋白質，其包含SEQ ID NO: 167之胺基酸序列。
一種核酸，其編碼如前述請求項中任一項之蛋白質。
一種載體，其包含如前述請求項中任一項之核酸。
一種細胞，其表現如前述請求項中任一項之蛋白質。
一種細胞，其表現至少兩種如前述請求項中任一項之蛋白質。
一種製備如請求項44或45中任一項之細胞的方法，其包含用如請求項43之載體轉導或轉染細胞之步驟。
一種用於製備表現如請求項1至41中任一項之蛋白質的細胞群體之方法，其包含偵測該蛋白質在用如請求項43之載體轉染或轉導的細胞之表面上之表現，且選擇經鑑別為表現該蛋白質之細胞。
一種細胞群體，其藉由如請求項46之方法產生。
一種細胞群體，其經富集以對如請求項1至41中任一項之蛋白質進行細胞表現。
一種用於治療有需要之個體之疾病的方法，其包含向該個體投與如請求項44至45中任一項之細胞或如請求項48或49之細胞群體的步驟。
如請求項1至41中任一項之經工程化蛋白質，其中該結合域及CD28域係藉由至少一個連接子連接。