TW202317571A - 吡咯并吡唑螺環化合物 - Google Patents

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付翔宇
照中 丁
胡利紅
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大陸商正大天晴藥業集團股份有限公司
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Abstract

一類吡咯并吡唑螺環化合物，及其在製備治療相關疾病的藥物中的應用，具體涉及式（I’）化合物、其立體異構體及其藥學上可接受的鹽。

Description

吡咯并吡唑螺環化合物
本申請涉及一類吡咯并吡唑螺環化合物，及其在製備治療相關疾病的藥物中的應用，具體涉及式（I）化合物、其立體異構體及其藥學上可接受的鹽。
本申請要求1）於2021年10月27日向中國國家知識產權局提交的第202111257617.8號中國專利申請的優先權和權益，2）於2021年11月19日向中國國家知識產權局提交的第202111402382.7號中國專利申請的優先權和權益，3）於2022年01月14日向中國國家知識產權局提交的第202210045128.4號中國專利申請的優先權和權益，和4）於2022年10月18日向中國國家知識產權局提交的第202211275680.9號中國專利申請的優先權和權益，所述申請公開的內容通過引用整體併入本文中。
SHP2屬於蛋白酪胺酸磷酸酶（protein tyrosine phosphatase，PTP）家族成員，是一種非受體型磷酸酶，催化蛋白質酪胺酸去磷酸化反應。SHP2由PTP非受體型11（PTP nonreceptor 11，PTPN11）編碼，在人體中廣泛表達，在生長因子受體下游信號通路中扮演重要角色。作為包括RAS-ERK、PI3K-AKT、JAK-STAT等在內的多種重要通路的上游蛋白，SHP2起到調節細胞增殖、分化、遷移、凋亡等多種生理學功能。同時，SHP2也被發現處於PD-1/PD-L1通路中，起到免疫調節的作用。
有研究證明，SHP2對RAS驅動的腫瘤是不可或缺的。SHP2處於RAS上游，介導激活RAS-ERK通路，這一功能主要通過去磷酸化RAS-GAP實現。當受到各種生長因子的刺激時，SHP2去磷酸化RTKs的酪胺酸磷酸化位點，並通過去磷酸化p120RasGAP與RTKs結合的位點，防止p120RasGAP抑制Ras活化，起到激活RAS通路的目的。
從N端開始，SHP2蛋白包含兩個Src同源結構域N-SH2和C-SH2，之後是具有催化活性的PTP區域。正常的SHP2處在自抑制狀態，活性催化微點被N-SH2遮擋。當Tyr542和Tyr580被磷酸化後，構象發生變化，SHP2被激活。當SHP2發生突變（如：E76K等）時，N-SH2構象發生巨大的變化，無法遮擋活性催化位點，SHP2無需磷酸化便被激活。在多種腫瘤中均發現SHP2突變。
由於PTP區域起催化磷酸酯的作用，其催化位點極性非常高，這使得直接作用於催化位點的小分子藥物開發難度大。別構抑制劑是另一個抑制SHP2的思路。SHP2別構抑制劑起到「膠水」的作用，使得SHP2保持在自抑制的狀態。目前已有多個SHP2別構抑制劑進入臨床研究階段，在NSCLC等疾病中展現出了優異的藥效。 綜上，靶向SHP2的別構抑制劑能夠成為一種進步的癌症治療方案。
本申請提供式（I’）化合物、其立體異構體或其藥學上可接受的鹽
Figure 02_image001
， 其中， 環A選自芳基和雜芳基； R 1選自H、氘、NH 2、任選地被一個或多個鹵素、CN或OH取代的C 1-6烷基； R 2選自氘、H、鹵素、OH、CN、COOH、-C(=O)-C 1-6烷基、-COO-C 1-6烷基、C 1-6烷基和-C(=O)NH 2，所述-C(=O)-C 1-6烷基、-COO-C 1-6烷基、C 1-6烷基和-C(=O)NH 2分別獨立地任選被1、2或3個R a取代； R 3選自H、鹵素、OH、NO 2、CN、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基和C 1-6烷氨基，所述C 1-6烷基、C 1-6烷氧基和C 1-6烷氨基分別獨立地任選被1、2或3個R b取代； R 4、R 5和R 6分別獨立地選自H、氘、鹵素、NH 2、NO 2、CN、OH、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基和-NH-O-C 1-6烷基，所述NH 2、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基和-NH-O-C 1-6烷基分別獨立地任選被1、2或3個R c取代； R a、R b、R c分別獨立地選自氘、鹵素、OH、NH 2、CN和C 1-3烷基。
本申請提供式（I）化合物、其立體異構體或其藥學上可接受的鹽
Figure 02_image004
， 其中， 環A選自芳基和雜芳基； R 1選自H、氘、NH 2、任選地被一個或多個鹵素、CN或OH取代的C 1-6烷基； R 2選自氘、H、鹵素、OH、CN、COOH、-C(=O)-C 1-6烷基、-COO-C 1-6烷基、C 1-6烷基和-C(=O)NH 2，所述-C(=O)-C 1-6烷基、-COO-C 1-6烷基、C 1-6烷基和-C(=O)NH 2分別獨立地任選被1、2或3個R a取代； R 3選自H、鹵素、OH、NO 2、CN、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基和C 1-6烷氨基，所述C 1-6烷基、C 1-6烷氧基和C 1-6烷氨基分別獨立地任選被1、2或3個R b取代； R 4、R 5和R 6分別獨立地選自H、氘、鹵素、NH 2、NO 2、CN、OH、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基和-NH-O-C 1-6烷基，所述NH 2、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基和-NH-O-C 1-6烷基分別獨立地任選被1、2或3個R c取代； R a、R b、R c分別獨立地選自氘、鹵素、OH、NH 2、CN和C 1-3烷基。
在一些實施方案中，所述環A選自芳基和5-6元雜芳基，所述5-6元雜芳基包含1、2或3個分別獨立地選自N、O、S和NH的雜原子或雜原子團。
在一些實施方案中，所述R 1選自H、氘、NH 2、任選地被一個或多個鹵素、CN或OH取代的C 1-3烷基。在一些實施方案中，所述R 1選自H、氘、NH 2、任選地被一個或多個鹵素取代的C 1-3烷基。在一些實施方案中，所述R 1選自H、氘、NH 2、任選地被一個或多個氟取代的C 1-3烷基。在一些實施方案中，所述R 1選自H、氘、NH 2、CH 3、CHF 2、CH 2F和CF 3。
在一些實施方案中，R 2選自氘、F、Cl、Br、I、CN、COOH、-C(=O)-C 1-3烷基、-COO-C 1-3烷基、C 1-3烷基和-C(=O)NH 2，所述-C(=O)-C 1-3烷基、-COO-C 1-3烷基、C 1-3烷基和-C(=O)NH 2分別獨立地任選被1、2或3個R a取代。
在一些實施方案中，R 3選自H、F、Cl、Br、I、NO 2、CN、C 1-3烷基、C 1-3烷氧基和C 1-3烷氨基，所述C 1-3烷基、C 1-3烷氧基和C 1-3烷氨基分別獨立地任選被1、2或3個R b取代。
在一些實施方案中，R 4、R 5和R 6分別獨立地選自H、氘、F、Cl、Br、I、NH 2、NO 2、CN、OH、C 1-3烷基、C 1-3烷氧基和-NH-O-C 1-3烷基，所述NH 2、C 1-3烷基、C 1-3烷氧基和-NH-O-C 1-3烷基分別獨立地任選被1、2或3個R c取代。
本申請提供式（I）化合物、其立體異構體或其藥學上可接受的鹽
Figure 02_image004
， 其中， 環A選自芳基和5-6元雜芳基，所述5-6元雜芳基包含1、2或3個分別獨立地選自N、O、S和NH的雜原子或雜原子團； R 1選自H、氘、NH 2、CH 3、CHF 2、CH 2F和CF 3； R 2選自氘、F、Cl、Br、I、CN、COOH、-C(=O)-C 1-3烷基、-COO-C 1-3烷基、C 1-3烷基和-C(=O)NH 2，所述-C(=O)-C 1-3烷基、-COO-C 1-3烷基、C 1-3烷基和-C(=O)NH 2分別獨立地任選被1、2或3個R a取代； R 3選自H、F、Cl、Br、I、NO 2、CN、C 1-3烷基、C 1-3烷氧基和C 1-3烷氨基，所述C 1-3烷基、C 1-3烷氧基和C 1-3烷氨基分別獨立地任選被1、2或3個R b取代； R 4、R 5和R 6分別獨立地選自H、氘、F、Cl、Br、I、NH 2、NO 2、CN、OH、C 1-3烷基、C 1-3烷氧基和-NH-O-C 1-3烷基，所述NH 2、C 1-3烷基、C 1-3烷氧基和-NH-O-C 1-3烷基分別獨立地任選被1、2或3個R c取代； R a分別獨立地選自氘、F、Cl、Br、I、OH和NH 2； R b分別獨立地選自氘、F、Cl、Br、I和OH； R c分別獨立地選自氘、F、Cl、Br、I、NH 2和C 1-3烷基。
在一些方案中，R a、R b、R c分別獨立地選自鹵素、OH、NH 2和C 1-3烷基。在一些方案中，R a、R b、R c分別獨立地選自鹵素、OH和C 1-3烷基。在一些方案中，R a、R b、R c分別獨立地選自氟、OH和C 1-3烷基。在一些方案中，R a、R b、R c分別獨立地選自氟、OH和CH 3。
在一些方案中，所述R a分別獨立地選自氘、F、Cl、Br、I、OH和NH 2； 所述R b分別獨立地選自氘、F、Cl、Br、I和OH； 所述R c分別獨立地選自氘、F、Cl、Br、I、NH 2和C 1-3烷基。
在一些方案中，所述R a分別獨立地選自F、Cl、OH和NH 2。在一些方案中，所述R a分別獨立地選自OH。
在一些方案中，所述R b分別獨立地選自F、Cl和OH。
在一些方案中，所述R c分別獨立地選自F、Cl、Br、I和C 1-3烷基。在一些方案中，所述R c分別獨立地選自F、Cl、Br、I、NH 2和CH 3。在一些方案中，所述R c分別獨立地選自F、Cl、NH 2和CH 3。
在一些方案中，所述R c分別獨立地選自F和C 1-3烷基。 在本申請的一些方案中，上述R c分別獨立地選自F和CH 3，其他變量如本申請所定義。
在本申請的一些方案中，上述R 1選自H、CH 3和CHF 2，其他變量如本申請所定義。 在本申請的一些方案中，上述R 1選自CH 3和CHF 2，其他變量如本申請所定義。
在本申請的一些方案中，上述R 2選自氘、F、Cl、Br、I、CH 3和-C(=O)NH 2，所述CH 3和-C(=O)NH 2分別獨立地任選被1、2或3個R a取代，其他變量如本申請所定義。 在本申請的一些方案中，上述R 2選自Cl、-CH 2OH、-CH 3和-C(=O)NH 2，其他變量如本申請所定義。 在本申請的一些方案中，上述R 2選自Cl、-CH 2OH和-C(=O)NH 2，其他變量如本申請所定義。
在本申請的一些方案中，上述R 3選自H、F、Cl和CH 3，其他變量如本申請所定義。 在本申請的一些方案中，上述R 3選自H，其他變量如本申請所定義。
在本申請的一些方案中，上述R 4、R 5和R 6分別獨立地選自H、氘、F、Cl、Br、I、NH 2、NO 2、CN、OH、=O、CH 3、-OCH 3和-NH-O-CH 3，所述NH 2、CH 3、-OCH 3和-NH-O-CH 3分別獨立地任選被1、2或3個R c取代，其他變量如本申請所定義。
在本申請的一些方案中，上述R 4、R 5和R 6分別獨立地選自F、Cl、NH 2、-NH-O-CH 3、-NH-CH 3、CH 3、CF 3和CHF 2，其他變量如本申請所定義。
在本申請的一些方案中，上述結構單元
Figure 02_image007
選自
Figure 02_image009
、
Figure 02_image011
、
Figure 02_image013
、
Figure 02_image015
和
Figure 02_image017
，其他變量如本申請所定義。
在本申請的一些方案中，上述結構單元
Figure 02_image007
選自
Figure 02_image009
、
Figure 02_image013
、
Figure 02_image015
和
Figure 02_image017
，其他變量如本申請所定義。
在本申請的一些方案中，上述結構單元
Figure 02_image023
選自
Figure 02_image025
、
Figure 02_image027
、
Figure 02_image029
、
Figure 02_image031
、
Figure 02_image033
、
Figure 02_image035
、
Figure 02_image037
和
Figure 02_image039
，其他變量如本申請所定義。
在本申請的一些方案中，上述環A選自C 6-10芳基和5-10元雜芳基。在本申請的一些方案中，上述環A選自C 6-10芳基和5-6元雜芳基。在本申請的一些方案中，上述環A選自苯基和5-6元雜芳基。
在本申請的一些方案中，上述環A選自苯基、吡唑基和吡啶基，其他變量如本申請所定義。
在本申請的一些方案中： 上述環A選自苯基、吡唑基和吡啶基；或者上述環A選自吡啶基； 上述R 2選自氘、F、Cl、Br、I、CH 3和-C(=O)NH 2，所述CH 3和-C(=O)NH 2分別獨立地任選被1、2或3個R a取代；或者上述R 2選自Cl、-CH 2OH、CH 3和-C(=O)NH 2；或者上述R 2選自Cl、-CH 2OH和-C(=O)NH 2；或者上述R 2選自-CH 2OH； 上述R 3選自H、F、Cl和CH 3；或者上述R 3選自H； 上述R 4、R 5和R 6分別獨立地選自F、Cl、NH 2、-NH-O-CH 3、-NH-CH 3、CH 3、CF 3和CHF 2， 其他變量如本申請所定義。
本申請還有一些技術方案是由上述各變量任意組合而來。
本申請提供式（I）化合物、其立體異構體或其藥學上可接受的鹽，其中式（I）化合物選自式（I）-A或式（I）-B化合物
Figure 02_image041
Figure 02_image043
。
在本申請的一些方案中，上述化合物選自
Figure 02_image045
、
Figure 02_image047
、
Figure 02_image049
、
Figure 02_image051
、
Figure 02_image053
和
Figure 02_image055
， 其中，R 1、R 4和R 5如本申請所定義。
在本申請的一些方案中，上述化合物選自
Figure 02_image057
、
Figure 02_image059
、
Figure 02_image061
、
Figure 02_image063
、
Figure 02_image065
Figure 02_image067
和
Figure 02_image069
，其中，R 1、R 4和R 5如本申請所定義。
本申請還提供化合物、其立體異構體或其藥學上可接受的鹽，其中，化合物選自
Figure 02_image071
、
Figure 02_image073
、
Figure 02_image075
、
Figure 02_image077
、
Figure 02_image079
、
Figure 02_image081
、
Figure 02_image083
、
Figure 02_image085
、
Figure 02_image087
、
Figure 02_image089
、
Figure 02_image091
和
Figure 02_image093
。
在本申請的一些方案中，上述化合物選自
Figure 02_image095
、
Figure 02_image097
、
Figure 02_image099
、
Figure 02_image101
、
Figure 02_image103
、
Figure 02_image105
、
Figure 02_image107
、
Figure 02_image109
、
Figure 02_image111
、
Figure 02_image113
、
Figure 02_image115
、
Figure 02_image117
、
Figure 02_image119
、
Figure 02_image121
、
Figure 02_image123
、
Figure 02_image125
、
Figure 02_image127
、
Figure 02_image129
、
Figure 02_image131
、
Figure 02_image133
、
Figure 02_image135
、
Figure 02_image137
、
Figure 02_image139
和
Figure 02_image141
。
另一方面，本申請涉及一種藥物組合物，其包含本申請的化合物、其立體異構體或其藥學上可接受的鹽。在一些實施方案中，本申請的藥物組合物還包括藥學上可接受的輔料。
另一方面，本申請涉及預防或者治療哺乳動物與SHP2蛋白相關疾病的方法，包括對需要該治療的哺乳動物，優選人類，給予治療有效量的本申請的化合物、其立體異構體或其藥學上可接受的鹽、或其藥物組合物。
另一方面，本申請涉及本申請的化合物、其立體異構體或其藥學上可接受的鹽、或其藥物組合物在製備預防或者治療與SHP2蛋白相關疾病的藥物中的用途。
另一方面，本申請涉及本申請的化合物、其立體異構體或其藥學上可接受的鹽、或其藥物組合物在預防或者治療與SHP2蛋白相關疾病的用途。
另一方面，本申請涉及預防或者治療與SHP2蛋白相關疾病的本申請的化合物、其立體異構體或其藥學上可接受的鹽、或其藥物組合物。
在一些方案中，所述與SHP2蛋白相關疾病選自癌症；或者，所述與SHP2蛋白相關疾病選自肺癌或胰腺癌。
技術效果 本申請提供了一種新型的SHP2別構抑制劑，對SHP2具有較高體內外抑制活性，可以作為一種新的、更有效的治療癌症的方案。具體的體外可以抑制激酶或腫瘤細胞（MIAPACA2_PANCREAS、NCIH358_LUNG）活性；體內藥代動力學性質及藥效學性質優異。
定義和說明 除非另有說明，本文所用的下列術語和短語旨在具有下列含義。一個特定的術語或短語在沒有特別定義的情況下不應該被認為是不確定的或不清楚的，而應該按照普通的含義去理解。當本文中出現商品名時，意在指代其對應的商品或其活性成分。
這裡所採用的術語「藥學上可接受的」，是針對那些化合物、材料、組合物和/或劑型而言，它們在可靠的醫學判斷的範圍之內，適用於與人類和動物的組織接觸使用，而沒有過多的毒性、刺激性、過敏性反應或其它問題或併發症，與合理的利益/風險比相稱。
術語「藥學上可接受的鹽」是指本申請化合物的鹽，由本申請發現的具有特定取代基的化合物與相對無毒的酸或鹼製備。當本申請的化合物中含有相對酸性的功能團時，可以通過在純的溶液或合適的惰性溶劑中用足夠量的鹼與這類化合物接觸的方式獲得鹼加成鹽。藥學上可接受的鹼加成鹽包括鈉、鉀、鈣、銨、有機胺或鎂鹽或類似的鹽。當本申請的化合物中含有相對鹼性的官能團時，可以通過在純的溶液或合適的惰性溶劑中用足夠量的酸與這類化合物接觸的方式獲得酸加成鹽。本申請的某些特定的化合物含有鹼性和酸性的官能團，從而可以被轉換成任一鹼或酸加成鹽。
本申請的藥學上可接受的鹽可由含有酸根或鹼基的母體化合物通過常規化學方法合成。一般情況下，這樣的鹽的製備方法是：在水或有機溶劑或兩者的混合物中，經由游離酸或鹼形式的這些化合物與化學計量的適當的鹼或酸反應來製備。
本申請的化合物可以存在特定的幾何或立體異構體形式。本申請設想所有的這類化合物，包括順式和反式異構體、(-)- 和 (+)-對映體、( R)- 和 ( S)-對映體、非對映異構體、( D)-異構體、( L)-異構體，及其外消旋混合物和其他混合物，例如對映異構體或非對映體富集的混合物，所有這些混合物都屬於本申請的範圍之內。烷基等取代基中可存在另外的不對稱碳原子。所有這些異構體以及它們的混合物，均包括在本申請的範圍之內。
除非另有說明，術語「對映異構體」或者「旋光異構體」是指互為鏡像關係的立體異構體。
除非另有說明，術語「順反異構體」或者「幾何異構體」系由因雙鍵或者成環碳原子單鍵不能自由旋轉而引起。
除非另有說明，術語「非對映異構體」是指分子具有兩個或多個手性中心，並且分子間為非鏡像的關係的立體異構體。
除非另有說明，「(+)」表示右旋，「(-) 」表示左旋，「(±)」表示外消旋。
除非另有說明，用楔形實線鍵（
Figure 02_image143
）和楔形虛線鍵（
Figure 02_image145
）表示一個立體中心的絕對構型，用直形實線鍵（
Figure 02_image147
）和直形虛線鍵（
Figure 02_image149
）表示立體中心的相對構型，用波浪線（
Figure 02_image151
）表示楔形實線鍵（
Figure 02_image143
）或楔形虛線鍵（
Figure 02_image145
），或用波浪線（
Figure 02_image151
）表示直形實線鍵（
Figure 02_image147
）和直形虛線鍵（
Figure 02_image149
）。
除非另有說明，術語「互變異構體」或「互變異構體形式」是指在室溫下，不同官能團異構體處於動態平衡，並能很快的相互轉化。若互變異構體是可能的 (如在溶液中)，則可以達到互變異構體的化學平衡。例如，質子互變異構體 (proton tautomer) (也稱質子轉移互變異構體 (prototropic tautomer)) 包括通過質子遷移來進行的互相轉化，如酮-烯醇異構化和亞胺-烯胺異構化。價鍵異構體 (valence tautomer) 包括一些成鍵電子的重組來進行的相互轉化。其中酮-烯醇互變異構化的具體實例是戊烷-2,4-二酮與4-羥基戊-3-烯-2-酮兩個互變異構體之間的互變。
除非另有說明，術語「富含一種異構體」、「異構體富集」、「富含一種對映體」或者「對映體富集」指其中一種異構體或對映體的含量小於100%，並且，該異構體或對映體的含量大於等於60%，或者大於等於70%，或者大於等於80%，或者大於等於90%，或者大於等於95%，或者大於等於96%，或者大於等於97%，或者大於等於98%，或者大於等於99%，或者大於等於99.5%，或者大於等於99.6%，或者大於等於99.7%，或者大於等於99.8%，或者大於等於99.9%。
除非另有說明，術語「異構體過量」或「對映體過量」指兩種異構體或兩種對映體相對百分數之間的差值。例如，其中一種異構體或對映體的含量為90%，另一種異構體或對映體的含量為10%，則異構體或對映體過量（ee值）為80%。
可以通過的手性合成或手性試劑或者其他常規技術製備光學活性的( R)-和( S)-異構體以及 D和 L異構體。如果想得到本申請某化合物的一種對映體，可以通過不對稱合成或者具有手性助劑的衍生作用來製備，其中將所得非對映體混合物分離，並且輔助基團裂開以提供純的所需對映異構體。 或者，當分子中含有鹼性官能團（如氨基）或酸性官能團（如羧基）時，與適當的光學活性的酸或鹼形成非對映異構體的鹽，然後通過本領域所公知的常規方法進行非對映異構體拆分，然後回收得到純的對映體。此外，對映異構體和非對映異構體的分離通常是通過使用色譜法完成的，所述色譜法採用手性固定相，並任選地與化學衍生法相結合（例如由胺生成氨基甲酸鹽）。
本申請的化合物可以在一個或多個構成該化合物的原子上包含非天然比例的原子同位素。例如，可用放射性同位素標記化合物，比如氚（ 3H），碘-125（ 125I）或C-14（ 14C）。又例如，可用重氫取代氫形成氘代藥物，氘與碳構成的鍵比普通氫與碳構成的鍵更堅固，相比於未氘化藥物，氘代藥物有降低毒副作用、增加藥物穩定性、增強療效、延長藥物生物半衰期等優勢。本申請的化合物的所有同位素組成的變換，無論放射性與否，都包括在本申請的範圍之內。
術語「任選」或「任選地」指的是隨後描述的事件或狀況可能但不是必需出現的，並且該描述包括其中所述事件或狀況發生的情況以及所述事件或狀況不發生的情況。
術語「被取代的」是指特定原子上的任意一個或多個氫原子被取代基取代，取代基可以包括重氫和氫的變體，只要特定原子的價態是正常的並且取代後的化合物是穩定的。當取代基為氧（即=O）時，意味著兩個氫原子被取代。氧取代不會發生在芳香基上。術語「任選被取代的」是指可以被取代，也可以不被取代，除非另有規定，取代基的種類和數目在化學上可以實現的基礎上可以是任意的。
當任何變量（例如R）在化合物的組成或結構中出現一次以上時，其在每一種情況下的定義都是獨立的。因此，例如，如果一個基團被0-2個R所取代，則所述基團可以任選地至多被兩個R所取代，並且每種情況下的R都有獨立的選項。此外，取代基和/或其變體的組合只有在這樣的組合會產生穩定的化合物的情況下才是被允許的。
當一個連接基團的數量為0時，比如-(CRR) 0-，表示該連接基團為單鍵。
當其中一個變量選自單鍵時，表示其連接的兩個基團直接相連，比如A-L-Z中L代表單鍵時表示該結構實際上是A-Z。
當一個取代基為空缺時，表示該取代基是不存在的，比如A-X中X為空缺時表示該結構實際上是A。當所列舉的取代基中沒有指明其通過哪一個原子連接到被取代的基團上時，這種取代基可以通過其任何原子相鍵合，例如，吡啶基作為取代基可以通過吡啶環上任意一個碳原子連接到被取代的基團上。
當所列舉的連接基團沒有指明其連接方向，其連接方向是任意的，例如，
Figure 02_image153
中連接基團L為-M-W-，此時-M-W-既可以按與從左往右的讀取順序相同的方向連接環A和環B構成
Figure 02_image155
，也可以按照與從左往右的讀取順序相反的方向連接環A和環B構成
Figure 02_image157
。所述連接基團、取代基和/或其變體的組合只有在這樣的組合會產生穩定的化合物的情況下才是被允許的。
除非另有規定，當某一基團具有一個或多個可連接位點時，該基團的任意一個或多個位點可以通過化學鍵與其他基團相連。當該化學鍵的連接方式是不定位的，且可連接位點存在H原子時，則連接化學鍵時，該位點的H原子的個數會隨所連接化學鍵的個數而對應減少變成相應價數的基團。所述位點與其他基團連接的化學鍵可以用直形實線鍵（
Figure 02_image159
）、直形虛線鍵（
Figure 02_image161
）、或波浪線（
Figure 02_image163
）表示。例如-OCH 3中的直形實線鍵表示通過該基團中的氧原子與其他基團相連；
Figure 02_image165
中的直形虛線鍵表示通過該基團中的氮原子的兩端與其他基團相連；
Figure 02_image167
中的波浪線表示通過該苯基基團中的1和2位碳原子與其他基團相連；
Figure 02_image169
表示該哌啶基上的任意可連接位點可以通過1個化學鍵與其他基團相連，至少包括
Figure 02_image171
、
Figure 02_image173
、
Figure 02_image175
、
Figure 02_image177
這4種連接方式，即使-N-上畫出了H原子，但是
Figure 02_image169
仍包括
Figure 02_image171
這種連接方式的基團，只是在連接1個化學鍵時，該位點的H會對應減少1個變成相應的一價哌啶基。
除非另有規定，環上原子的數目通常被定義為環的元數，例如，「5-7元環」是指環繞排列5-7個原子的「環」。
術語「烷基」用於表示直鏈或支鏈的由碳原子組成的飽和碳氫基團。除非另有規定，術語「C 1-6烷基」用於表示直鏈或支鏈的由1至6個碳原子組成的飽和碳氫基團；術語「C 1-3烷基」用於表示直鏈或支鏈的由1至3個碳原子組成的飽和碳氫基團。所述C 1-3烷基包括C 1-2和C 2-3烷基等；其可以是一價（如甲基）、二價（如亞甲基）或者多價（如次甲基）。C 1-3烷基的實例包括但不限於甲基 (Me)、乙基 (Et)、丙基 (包括 n-丙基和異丙基) 等。
術語「烷氧基」表示-O-烷基。除非另有規定，術語「C 1-6烷氧基」表示通過一個氧原子連接到分子的其餘部分的那些包含1至6個碳原子的烷基基團；術語「C 1-3烷氧基」表示通過一個氧原子連接到分子的其餘部分的那些包含1至3個碳原子的烷基基團。所述C 1-3烷氧基包括C 1-2、C 2-3、C 3和C 2烷氧基等。C 1-3烷氧基的實例包括但不限於甲氧基、乙氧基、丙氧基 (包括正丙氧基和異丙氧基)等。
術語「C 1-6烷氨基」 表示-NH-烷基。除非另有規定，術語「C 1-6烷氨基」表示通過氨基連接到分子的其餘部分的那些包含1至6個碳原子的烷基基團；術語「C 1-3烷氨基」表示通過氨基連接到分子的其餘部分的那些包含1至3個碳原子的烷基基團。所述C 1-3烷氨基包括C 1-2、C 3和C 2烷氨基等。C 1-3烷氨基的實例包括但不限於-NHCH 3、-N(CH 3) 2、-NHCH 2CH 3、-N(CH 3)CH 2CH 3、-NHCH 2CH 2CH 3、-NHCH 2(CH 3) 2等。
除非另有規定，術語「鹵代素」或「鹵素」本身或作為另一取代基的一部分表示氟、氯、溴或碘原子。
術語「芳基」是指具有共軛的π電子體系的全碳單環或稠合多環的芳香環基團。例如，芳基可以具有6-20個碳原子，6-14個碳原子或6-12個碳原子。芳基的非限制性實例包括但不限於苯基、萘基、蒽基和1,2,3,4-四氫化萘等。
術語「雜芳基」是指單環或稠合多環體系，其中含有至少一個選自N、O、S的環原子，例如1個、2個、3個或4個選自N、O、S的環原子，其餘環原子為C，並且具有至少一個芳香環。優選的雜芳基具有單個5至8元環或5至6元環，或包含6至14個，尤其是6至10個環原子的多個稠合環。
除非另有規定，本申請術語「5-6元雜芳環」和「5-6元雜芳基」可以互換使用，術語「5-6元雜芳基」表示由5至6個環原子組成的具有共軛π電子體系的單環基團，其1、2、3或4個環原子為獨立選自O、S和N的雜原子，其餘為碳原子。其中氮原子任選地被季銨化，氮和硫雜原子可任選被氧化（即NO和S(O) p，p是1或2）。5-6元雜芳基可通過雜原子或碳原子連接到分子的其餘部分。所述5-6元雜芳基包括5元和6元雜芳基。所述5-6元雜芳基的實例包括但不限於吡咯基 (包括 N-吡咯基、2-吡咯基和3-吡咯基等)、吡唑基 (包括2-吡唑基和3-吡唑基等)、咪唑基 (包括 N-咪唑基、2-咪唑基、4-咪唑基和5-咪唑基等)、㗁唑基 (包括2-㗁唑基、4-㗁唑基和5-㗁唑基等)、三唑基 (1 H-1,2,3-三唑基、2 H-1,2,3-三唑基、1 H-1,2,4-三唑基和4 H-1,2,4-三唑基等)、四唑基、異㗁唑基 (3-異㗁唑基、4-異㗁唑基和5-異㗁唑基等)、噻唑基 (包括2-噻唑基、4-噻唑基和5-噻唑基等)、呋喃基 (包括2-呋喃基和3-呋喃基等)、噻吩基 (包括2-噻吩基和3-噻吩基等)、吡啶基 (包括2-吡啶基、3-吡啶基和4-吡啶基等)、吡𠯤基或嘧啶基 (包括2-嘧啶基和4-嘧啶基等)。
除非另有規定，C n-n+m或C n-C n+m包括n至n+m個碳的任何一種具體情況，例如C 1-12包括C 1、C 2、C 3、C 4、C 5、C 6、C 7、C 8、C 9、C 10、C 11、和C 12，也包括n至n+m中的任何一個範圍，例如C 1-12包括C 1-3、C 1-6、C 1-9、C 3-6、C 3-9、C 3-12、C 6-9、C 6-12、和C 9-12等；同理，n元至n+m元表示環上原子數為n至n+m個，例如3-12元環包括3元環、4元環、5元環、6元環、7元環、8元環、9元環、10元環、11元環、和12元環，也包括n至n+m中的任何一個範圍，例如3-12元環包括3-6元環、3-9元環、5-6元環、5-7元環、6-7元環、6-8元環、和6-10元環等。
術語「治療」意為將本申請所述化合物或製劑進行給藥以改善或消除疾病或與所述疾病相關的一個或多個症狀，且包括： (i) 抑制疾病或疾病狀態，即遏制其發展； (ii) 緩解疾病或疾病狀態，即使該疾病或疾病狀態消退。
術語「預防」意為將本申請所述化合物或製劑進行給藥以預防疾病或與所述疾病相關的一個或多個症狀，且包括：預防疾病或疾病狀態在哺乳動物中出現，特別是當這類哺乳動物易患有該疾病狀態，但尚未被診斷為已患有該疾病狀態時。
術語「治療有效量」意指(i)治療或預防特定疾病、病況或障礙，(ii)減輕、改善或消除特定疾病、病況或障礙的一種或多種症狀，或(iii)預防或延遲本文中所述的特定疾病、病況或障礙的一種或多種症狀發作的本申請化合物的用量。構成「治療有效量」的本申請化合物的量取決於該化合物、疾病狀態及其嚴重性、給藥方式以及待被治療的哺乳動物的年齡而改變，但可例行性地由本發明所屬領域具通常知識者根據其自身的知識及本公開內容而確定。
術語「藥物組合物」是指一種或多種本申請的化合物或其鹽與藥學上可接受的輔料組成的混合物。藥物組合物的目的是有利於對有機體給予本申請的化合物。
術語「藥學上可接受的輔料」是指對有機體無明顯刺激作用，而且不會損害該活性化合物的生物活性及性能的那些輔料。合適的輔料是本發明所屬領域具通常知識者熟知的，例如碳水化合物、蠟、水溶性和/或水可膨脹的聚合物、親水性或疏水性材料、明膠、油、溶劑、水等。
詞語「包括（comprise）」或「包含（comprise）」及其英文變體例如comprises或comprising應理解為開放的、非排他性的意義，即「包括但不限於」。
本申請化合物的治療劑量可根據例如以下而定：治療的具體用途、給予化合物的方式、患者的健康和狀態，以及簽處方醫師的判斷。本申請化合物在藥用組合物中的比例或濃度可不固定，取決於多種因素，它們包括劑量、化學特性（例如疏水性）和給藥途徑。例如可通過含約0.1~10％w/v 該化合物的生理緩衝水溶液提供本申請化合物，用於腸胃外給藥。某些典型劑量範圍為約1μg/kg~約1g/kg 體重/日。在某些實施方案中，劑量範圍為約0.01mg/kg~約100mg/kg 體重/日。劑量很可能取決於此類變量，如疾病或病症的種類和發展程度、具體患者的一般健康狀態、所選擇的化合物的相對生物學效力、賦形劑製劑及其給藥途徑。可通過由體外或動物模型試驗系統導出的劑量-反應曲線外推，得到有效劑量。
本申請具體實施方式的化學反應是在合適的溶劑中完成的，所述的溶劑須適合於本申請的化學變化及其所需的試劑和物料。為了獲得本申請的化合物，有時需要本發明所屬領域具通常知識者在已有實施方式的基礎上對合成步驟或者反應流程進行修改或選擇。
本申請的化合物可以通過本發明所屬領域具通常知識者所熟知的多種合成方法來製備，包括下面列舉的具體實施方式、其與其他化學合成方法的結合所形成的實施方式以及本發明所屬領域具通常知識者所熟知的等同替換方式，優選的實施方式包括但不限於本申請的實施例。
在一些方案中，本申請的化合物可以由本發明所屬領域具通常知識者通過以下通用路線並採用本領域已知的方法來製備：
Figure 02_image179
LG1和LG2為離去基團，如：鹵素、-O-O 2SR（R=任選被取代的C 1-6烷基）。
本申請的化合物可以通過本發明所屬領域具通常知識者所熟知的常規方法來確認結構，如果本申請涉及化合物的絕對構型，則該絕對構型可以通過本領域常規技術手段予以確證。例如X光單晶繞射（SXRD），把培養出的單晶用Bruker D8 venture繞射儀收集繞射強度數據，光源為CuKα輻射，掃描方式：φ/ω掃描，收集相關數據後，進一步採用直接法(Shelxs97)解析晶體結構，便可以確證絕對構型。
本申請所使用的溶劑可經市售獲得。
本申請採用下述縮略詞：aq代表水；HATU代表O-(7-氮雜苯并三唑-1-基）-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸鹽；EDC代表N-（3-二甲基氨基丙基）-N'-乙基碳二亞胺鹽酸鹽；m-CPBA代表3-氯過氧苯甲酸；eq代表當量、等量；CDI代表羰基二咪唑；DCM代表二氯甲烷；PE代表石油醚；DIAD代表偶氮二羧酸二異丙酯；DMF 代表N,N-二甲基甲醯胺；DMSO代表二甲亞碸；EtOAc代表乙酸乙酯；EtOH代表乙醇；MeOH代表甲醇；CBz代表苄氧羰基，是一種胺保護基團；BOC代表三級丁氧羰基是一種胺保護基團；HOAc代表乙酸； NaCNBH 3代表氰基硼氫化鈉；r.t.代表室溫；O/ N代表過夜；THF代表四氫呋喃；Boc 2O代表二-三級丁基二碳酸酯；TFA代表三氟乙酸；DIPEA代表二異丙基乙基胺；SOCl 2代表氯化亞碸；CS 2代表二硫化碳；TsOH代表對甲苯磺酸；NFSI代表N-氟-N-（苯磺醯基）苯磺醯胺；NCS代表1-氯吡咯烷-2,5-二酮； n-Bu 4NF代表氟化四丁基銨；iPrOH代表2-丙醇；mp代表熔點；LDA代表二異丙基胺基鋰。
下面通過實施例對本申請進行詳細描述，但並不意味著對本申請任何不利限制。本申請的化合物可以通過本發明所屬領域具通常知識者所熟知的多種合成方法來製備，包括下面列舉的具體實施方式、其與其他化學合成方法的結合所形成的實施方式以及本發明所屬領域具通常知識者所熟知的等同替換方式，優選的實施方式包括但不限於本申請的實施例。對本發明所屬領域具通常知識者而言，在不脫離本申請精神和範圍的情況下針對本申請具體實施方式進行各種變化和改進將是顯而易見的。
實施例1：化合物1
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Figure 02_image183
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步驟A：在氮氣保護下，將化合物1-1（8.9克，34.59毫莫耳，1當量）的四氫呋喃（100毫升）溶液冷卻到-70，然後加入二異丙基氨基鋰（2莫耳每升，20.75毫升，1.2當量），在-70攝氏度攪拌1小時後加入化合物1-2（3.66克，38.05毫莫耳，1.1當量），在25攝氏度下攪拌12小時後加入乙酸乙酯（200毫升），然後用食鹽水洗（300毫升×3），無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮得到的粗產品經製備級高效液相層析法（柱子：Phenomenex luna C18 （250×70毫米,10微米）；流動相：[水(0.225%甲酸)-乙腈]；乙腈%：25%-55%，22分鐘）純化得到化合物1-3。MS (ESI) m/z：254.2, 298.2 [M+H +-100, M+H +-56]。
步驟B：在0攝氏度下，向化合物1-3（2.7克，7.64毫莫耳，1當量）的四氫呋喃（30 毫升）溶液中加入四氫鋁鋰（376.95毫克，9.93毫莫耳，1.3當量），在25攝氏度攪拌12小時後，加入飽和的硫酸鈉溶液淬滅反應，直至無氣泡產生，加入乙酸乙酯（100毫升），過濾，濾液用食鹽水洗（100毫升×2），無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮得到化合物1-4。MS (ESI) m/z：256.1 [M+H +-56]。
步驟C：向化合物1-4（1.5克，4.82毫莫耳，1當量）的N,N-二甲基甲醯胺（20毫升）溶液中加入咪唑（491.93毫克，7.23 毫莫耳，1.5當量）和三級丁基二甲基氯矽烷（871.29毫克，5.78毫莫耳，708.36微升，1.2當量），在25攝氏度下攪拌1小時後，加入乙酸乙酯（80毫升），用食鹽水洗（80毫升×5），無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮得到化合物1-5。MS (ESI) m/z：426.3 [M+H +]。
步驟D：向化合物1-5（2.2克，5.17毫莫耳，1當量）的二氯甲烷（20毫升）溶液中加入戴斯-馬丁試劑（2.63克，6.20毫莫耳，1.2當量），在25攝氏度下攪拌12小時，反應完後加入亞硫酸鈉溶液（40毫升）和飽和的碳酸氫鈉溶液（40毫升），在25攝氏度下攪拌30分鐘，二氯甲烷萃取（50毫升×2），合併的有機相用食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮得到的粗產品經矽膠柱層析法（洗脫液：乙酸乙酯在石油醚中百分比=0%-50%)純化得到化合物1-6。MS (ESI) m/z：324.5 [M+H +-100]。
步驟E：向化合物1-6（750毫克，1.77毫莫耳，1當量）的四氫呋喃（20毫升）溶液中加入四丁基氟化銨（1莫耳每升，2.66毫升，1.5當量），在25攝氏度下攪拌12小時，反應完後加入乙酸乙酯（50毫升），食鹽水洗（50毫升×5），無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮得到化合物1-7。MS (ESI) m/z：210.0 [M+H +-100]。
步驟F：向化合物1-7（620毫克，2.00毫莫耳，1當量）的四氫呋喃（10毫升）溶液中加入三苯基磷（578.22毫克，2.20毫莫耳，1.1當量）和偶氮二甲酸二異丙酯（445.78毫克，2.20毫莫耳，428.63微升，1.1當量），在25攝氏度下攪拌12小時，減壓濃縮得到的粗產品經矽膠柱層析法（洗脫液：乙酸乙酯在石油醚中百分比=0%-20%）純化得到化合物1-8。MS (ESI) m/z：236.2 [M+H +-56]。
步驟G：向化合物1-8（100毫克，343.24微莫耳，1當量）和1-9（124.80毫克，1.03毫莫耳，3當量）的甲苯（5毫升）溶液中加入四乙氧基鈦（156.59 毫克，686.47微莫耳，142.35微升，2當量），在氮氣保護和110攝氏度下攪拌12小時，反應完後化合物1-10直接在溶液中在下一步中使用。MS (ESI) m/z：395.5 [M+H +]。
步驟H：在氮氣保護和-70攝氏度下，向化合物1-10（135.42毫克，343.24微莫耳，1當量）的甲苯（3 毫升）溶液中加入硼氫化鈉（130毫克，3.44毫莫耳，10.01當量），在-70攝氏度下攪拌1小時，加入甲醇（5毫升）淬滅反應，再加入20毫升乙酸乙酯，過濾，濾液用食鹽水洗（20毫升×3），無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮得到的粗品經製備型高效液相層析柱（柱型號：Phenomenex luna C18（150毫米×25毫米×10微米）；流動相：[0.225%甲酸水溶液-乙腈]；梯度：30%-60%）純化得到化合物1-11。MS (ESI) m/z：397.5 [M+H +]。將化合物1-11用製備SFC（柱型號：DAICEL CHIRALPAK IC（250毫米×30毫米×10微米）；流動相：A相為超臨界二氧化碳，B相為甲醇（0.1%氨水）；梯度（B%）：35%-35%）分離得到化合物1-11A。MS (ESI) m/z：397.5 [M+H +]。化合物1-11A經SFC檢測（柱型號：Chiralpak IG-3（50毫米×4.6毫米×3微米）；流動相：A相為超臨界二氧化碳，B相為甲醇（0.05%二乙胺）；梯度（B%）：5%-40%）得到：化合物1-11A的保留時間為1.294分鐘，e.e.值為100.00%。
步驟I：向化合物1-11A（170毫克，428.70微莫耳，1當量）的乙酸乙酯（1毫升）溶液中加入鹽酸乙酸乙酯（4莫耳每升，1毫升，9.33當量），在20攝氏度下攪拌30分鐘，反應完後加入乙酸乙酯（5毫升），過濾，濾餅減壓乾燥得到化合物1-12A。
步驟J：將化合物1-13（10克，39.30毫莫耳，1當量）和化合物1-14（10.30克，47.16毫莫耳，1.2當量）溶解在二㗁烷（100毫升）中加入N,N-二異丙基乙胺（10.16克，78.60毫莫耳，13.69毫升，2當量），4,5-雙(二苯基磷)-9,9-二甲基氧雜蒽（2.27克，3.93毫莫耳，0.1當量）和三(二亞苄基丙酮)二鈀（1.80克，1.96毫莫耳，0.05當量）。反應混合物在氮氣保護下置換氣體三次，然後反應體系在氮氣保護下加熱到105攝氏度攪拌12小時。反應完全後，將反應液冷卻至25攝氏度，過濾，濾液濃縮得到粗品加入正庚烷（50毫升）和乙酸乙酯（5毫升），在25攝氏度下攪拌1小時，過濾，濾餅真空乾燥得到化合物1-15。MS (ESI) m/z：345.2 [M+H +]。
步驟K：將化合物1-15（13.2克，38.27毫莫耳，1當量）溶解在四氫呋喃（130毫升）中，加入甲醇鈉甲醇溶液（5.4莫耳每升，9.21毫升，1.3當量），反應混合物在25攝氏度下攪拌1小時。反應完全後，將反應液直接濃縮得到粗品溶解在水（50毫升）中，用乙酸乙酯（50毫升×2）洗滌。水相用鹽酸水溶液（1莫耳每升）調節pH到6，過濾，濾餅真空乾燥得到化合物1-16。MS (ESI) m/z：161.1 [M+H +]。
步驟L：將化合物1-18（29.79克，401.95毫莫耳，34.33毫升，1當量）溶解在乙醇（350毫升）中，在0攝氏度下，加入1-17（70克，401.95毫莫耳，61.95毫升，1當量），反應混合物在25攝氏度下攪拌2小時。將反應液加熱到80攝氏度攪拌20小時。反應完全後，反應液直接濃縮得到粗品經過柱層析（矽膠，乙酸乙酯：甲醇=1：0 到1：1）得到化合物1-19. MS (ESI) m/z：183.1 [M+H +]。
步驟M：將化合物1-19（51.46克，282.47毫莫耳，1當量）溶解在N,N-二甲基甲醯胺（500毫升）中，在0攝氏度下，加入N-溴代丁二醯亞胺(52.79克，296.60毫莫耳，1.05當量)。反應混合物在25攝氏度下攪拌1小時。反應完全後，反應液加入水（500毫升）和乙酸乙酯（700毫升），反應混合物攪拌2分鐘，反應體系分層後水相用乙酸乙酯（700毫升）萃取。合併後的有機相用10%食鹽水（500毫升×5）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液濃縮得到粗品經過柱層析（矽膠，石油醚：乙酸乙酯=1：0到7：1）得到化合物1-20。MS (ESI) m/z：261.0, 263.0 [M+H +]。
步驟N：將三苯基膦（18.08克，68.95毫莫耳，3當量）溶解在二㗁烷（200毫升）中，加入N-氯代丁二醯亞胺（9.36克，70.10毫莫耳，3.05當量），反應混合物在25攝氏度下攪拌0.5小時，加入化合物1-20（6克，22.98毫莫耳，1當量）。反應液加熱到100攝氏度下攪拌1小時。反應完全後，反應混合物冷卻至25攝氏度，反應液倒入水（600毫升）中，甲基三級丁基醚（400毫升×2）萃取。合併後的有機相用飽和食鹽水（400毫升）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液濃縮得到粗品經柱層析（矽膠，石油醚：乙酸乙酯=10：1 到5：1）得到化合物1-21。MS (ESI) m/z：279.0 [M+H +]。
步驟O：將化合物1-21（5.6克，20.03毫莫耳，1當量）和化合物1-16（3.22克，20.03毫莫耳，1當量）溶解在二㗁烷（80毫升）中，加入N,N-二異丙基乙胺（7.7克，60.10毫莫耳，10.47毫升，3當量），4,5-雙(二苯基磷)-9,9-二甲基氧雜蒽（1.16克，2.00毫莫耳，0.1當量）和三(二亞苄基丙酮)二鈀（917.30毫克，1.00毫莫耳，0.05當量）。反應混合物在氮氣保護下置換氣體三次，然後反應體系在氮氣保護下加熱到100攝氏度攪拌5小時。反應完全後，將反應液冷卻至25攝氏度，過濾，濾液濃縮得到粗品加入乙酸乙酯（50毫升），在25攝氏度下攪拌1小時，過濾，濾餅減壓乾燥得到化合物1-22。MS (ESI) m/z：359.1 [M+H +]。
步驟P：將化合物1-22（1.90克，5.29毫莫耳，1當量）和化合物1-12A（1.82克，6.88毫莫耳，1.3當量，2分子鹽酸鹽）溶解在N-甲基吡咯烷酮（20毫升）中，加入碳酸鉀（3.65克，26.45毫莫耳，5當量）。反應混合物加熱到80攝氏度攪拌1小時。反應完全後，反應液冷卻至25攝氏度，加入水（100毫升），過濾，濾餅減壓乾燥得到化合物1-23。MS (ESI) m/z：515.3 [M+H +]。
步驟E：將化合物1-23（1.1克，2.14毫莫耳，1當量）溶解在四氫呋喃（15毫升）中，在0攝氏度和氮氣保護下加入二異丁基氫化鋁（1莫耳每升，8.54毫升，4當量）。反應混合物在25攝氏度下攪拌1小時，用飽和硫酸鈉溶液淬滅直至無氣泡冒出後在25攝氏度下攪拌30分鐘，過濾，濾液減壓濃縮得到的粗品經製備級高效液相層析（柱型號：Waters Xbridge BEH C18（250×50毫米×10微米）；流動相：[0.05%氨水-乙腈]；梯度：15%-45%）分離純化得到化合物1。MS (ESI) m/z：473.3 [M+H +]。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 7.65 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 7.40 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 6.34 (s, 2H), 6.05 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 5.75 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 5.45 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 4.49 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 4.15 (d, J = 10.8 Hz, 1H), 4.00 - 3.80 (m, 4H), 3.25 - 3.19 (m, 2H), 2.41 (s, 3H), 1.97 - 1.92 (m, 3H), 1.80 - 1.74 (m, 1H), 1.68 - 1.64 (m, 1H), 1.54-1.51 (m, 1H)。
實施例2：化合物2
Figure 02_image191
步驟A：在氮氣保護下，往化合物2-1（1克，3.88毫莫耳，1當量）的二甲基亞碸（10毫升）溶液中加入2-2的四氫呋喃溶液（2莫耳每升，10毫升，5.15當量），在70攝氏度攪拌0.5小時後停止反應加入水（100毫升），過濾得到化合物2-3。MS (ESI) m/z：268.9 [M+H +]。
步驟B：將化合物2-3（0.89克，3.31毫莫耳，1當量）和化合物1-14（868.60毫克，3.98毫莫耳，1.2當量）溶解在二㗁烷（10毫升）中加入N,N-二異丙基乙胺（856.86毫克，6.63毫莫耳，1.15毫升，2當量），4,5-雙(二苯基磷)-9,9-二甲基氧雜蒽（95.90毫克，165.5微莫耳，0.05當量）和醋酸鈀（37.21毫克，165.75微莫耳，0.05當量）。反應混合物在氮氣保護下置換氣體三次，然後反應體系在氮氣保護下加熱到100攝氏度攪拌1小時。反應完全後，將反應液冷卻至15攝氏度，加入乙酸乙酯（30毫升）過濾，濾液濃縮得到粗品加入石油醚（20毫升），過濾，濾液濃縮經過柱層析（矽膠，石油醚：乙酸乙酯=1：0 到20：1）得到化合物2-4。MS (ESI) m/z：359.1 [M+H +]。
步驟C：將化合物2-4（1.19克，3.30毫莫耳，1當量）溶解在四氫呋喃（10毫升）中，加入甲醇鈉甲醇溶液（5.4莫耳每升，1.22毫升，2當量），反應混合物在15攝氏度下攪拌0.5小時。反應完全後，將反應液直接濃縮得到粗品溶解在水（20毫升）中，使用1莫耳每升的鹽酸調溶液至pH值為6，然後用乙酸乙酯（20毫升×2）洗滌。水相濃縮後加入乙醇（20毫升）溶解過濾減壓濃縮得到化合物2-5。MS (ESI) m/z：175.1 [M+H +]。
步驟D：將化合物2-5（0.386克，2.21毫莫耳，1.1當量）和化合物1-21（561.61毫克，2.01毫莫耳，1當量）溶解在二㗁烷（5毫升）中，加入N,N-二異丙基乙胺（779.03毫克，6.03毫莫耳，1.05毫升，3當量），4,5-雙(二苯基磷)-9,9-二甲基氧雜蒽（116.26毫克，200.92微莫耳，0.1當量）和三(二亞苄基丙酮)二鈀（91.99毫克，100.46微莫耳，0.05當量）。反應混合物在氮氣保護下置換氣體三次，然後反應體系在氮氣保護下加熱到100攝氏度攪拌12小時。反應完全後，將反應液冷卻至15攝氏度，加入二㗁烷（5毫升）過濾，濾液濃縮得到粗品加入乙酸乙酯（5毫升）和正庚烷（5毫升），過濾，減壓濃縮得到化合物2-6。MS (ESI) m/z：373.1 [M+H +]。
步驟E：將化合物2-6（0.436克，1.17毫莫耳，1當量）和化合物1-12A（0.602克，2.27毫莫耳，1.94當量，2分子鹽酸鹽）溶解在N-甲基吡咯烷酮（7毫升）中，加入碳酸鉀（1.2克，8.68毫莫耳，7.43當量）。反應混合物加熱到80攝氏度攪拌2小時。反應完全後，反應液冷卻至15攝氏度，加入水（20毫升），用乙酸乙酯（20毫升*2）萃取得到有機相，無水硫酸鈉乾燥後過濾減壓濃縮得到化合物2-7。MS (ESI) m/z：529.3 [M+H +]。
步驟F：將化合物2-7（0.46克，869.47微莫耳，1當量）溶解在四氫呋喃（5毫升）中，在0攝氏度和氮氣保護下加入二異丁基氫化鋁（1莫耳每升，3.48毫升，4當量）。反應混合物在15攝氏度下攪拌1小時，用飽和硫酸鈉溶液（10毫升）淬滅後加入四氫呋喃（30毫升），過濾，濾液減壓濃縮得到的粗品經製備級高效液相層析（柱型號：Waters Xbridge BEH C18（150×50毫米×10微米）；流動相：[碳酸氫銨水溶液（10毫莫耳每升）-乙腈]；梯度：22%-52%）分離純化得到化合物2。MS (ESI) m/z：487.2 [M+H +]。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 7.74 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.40 (s, 1H), 6.59 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 6.05 (s, 1H), 5.74 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 5.45 (br s, 1H), 4.49 (s, 2H), 4.15 (d, J = 10.8 Hz, 1H), 3.99 - 3.82 (m, 4H), 3.25 - 3.19 (m, 2H), 2.84 (d, J = 4.0 Hz, 3H), 2.40 (s, 3H), 1.98-1.92 (m, 1H), 1.80 - 1.75 (m, 1H), 1.68 - 1.65 (m, 1H), 1.55-1.52 (m, 1H)。
實施例3：化合物3
Figure 02_image193
步驟A：將化合物3-1（500毫克，2.79毫莫耳，1.1當量）和化合物1-21（709.53毫克，2.54毫莫耳，1當量）溶解在二㗁烷（10毫升）中，加入N,N-二異丙基乙胺（984.22毫克，7.62毫莫耳，1.33毫升，3當量），4,5-雙(二苯基磷)-9,9-二甲基氧雜蒽（146.88毫克，253.84微莫耳，0.1當量）和三(二亞苄基丙酮)二鈀（116.22毫克，126.92微莫耳，0.05當量）。反應混合物在氮氣保護下置換氣體三次，然後反應體系在氮氣保護下加熱到100攝氏度攪拌12小時。反應完全後，向反應液中加入乙酸乙酯（10毫升），過濾，濾液濃縮得到粗品，粗產品經矽膠薄層色譜法（石油醚/乙酸乙酯=10:1）純化得到化合物3-2。 MS (ESI) m/z：379.0 [M+H +]。
步驟B：將化合物3-2（460毫克，1.22毫莫耳，1當量）和化合物1-12A（419.88毫克，1.58毫莫耳，1.3當量，2分子鹽酸鹽）溶解在N-甲基吡咯烷酮（6毫升）中，加入碳酸鉀（841.69毫克，6.09毫莫耳，5當量）。反應混合物加熱到80攝氏度攪拌12小時。反應完全後，加入水（10毫升）用乙酸乙酯（10毫升*3）萃取合併有機相用飽和食鹽水洗（10毫升*2），無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮得到粗品化合物3-3。MS (ESI) m/z：533.3 [M+H +]。
步驟C：將化合物3-3（572毫克，1.07毫莫耳，1當量）溶解在四氫呋喃（5毫升）中，在0攝氏度和氮氣保護下加入二異丁基氫化鋁（1莫耳每升，4.29毫升，4當量）。反應混合物在25攝氏度下攪拌0.5小時，用飽和硫酸鈉溶液（10毫升）淬滅直至無氣泡冒出後在25攝氏度下攪拌30分鐘，過濾，濾液減壓濃縮得到的粗品經製備級高效液相層析（柱型號：Waters Xbridge  C18（150×50毫米×10微米）；流動相：[碳酸氫銨水溶液（10毫莫耳每升）-乙腈]；梯度：36%-66%）分離純化得到化合物3。MS (ESI) m/z：491.1 [M+H+]。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 7.49 (dd, J = 1.2, 8.0 Hz, 1H), 7.40 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.26 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 6.80 (dd, J = 1.6, 8.4 Hz, 1H), 6.05 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 5.36 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 4.47 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 4.15 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 4.02 - 3.92 (m, 2H), 3.90 - 3.77 (m, 2H), 3.25 - 3.16 (m, 2H), 2.43 (s, 3H), 2.02 - 1.86 (m, 3H), 1.82 - 1.72 (m, 1H), 1.71 - 1.63 (m, 1H), 1.53 (br d, J = 13.6 Hz, 1H)。
實施例4：化合物4
Figure 02_image195
步驟A：向化合物4-1（2克，8.85毫莫耳，1當量）和1-14（2.32克，10.62毫莫耳，1.2當量）的1,4-二㗁烷（20毫升）溶液中加入N,N-二異丙基乙胺（3.43克，26.55毫莫耳，4.62毫升，3當量），4,5-雙（二苯基磷）-9,9-二甲基氧雜蒽（512.07毫克，884.98微莫耳，0.1當量）和三（二亞苄基丙酮）二鈀（405.20毫克，442.49微莫耳，0.05當量）。氮氣置換3次後在100℃下攪拌12小時。反應完後冷卻到室溫，過濾，濾液濃縮得到的粗品經矽膠柱層層析法（洗脫液:石油醚/乙酸乙酯=1：0-5：1）分離純化得到化合物4-2。MS (ESI) m/z：364.2 [M+H +]。
步驟B：向化合物4-2（700毫克，1.93毫莫耳，1當量）的四氫呋喃（5毫升）溶液中加入甲醇鈉的甲醇溶液（5.4莫耳每升，713.35微升，30%純度，2當量）。在25℃下攪拌30分鐘後，用鹽酸乙酸乙酯（4莫耳每升）調節pH到7-8，濃縮得到化合物4-3直接用於下一步。
步驟C：向化合物4-3（345.08毫克，1.93毫莫耳，1當量）和化合物1-21（538.37毫克，1.93 毫莫耳，1當量）的1,4-二㗁烷（7毫升）溶液中加入N,N-二異丙基乙胺（746.79毫克，5.78毫莫耳，1.01毫升，3當量），4,5-雙（二苯基磷）-9,9-二甲基氧雜蒽（111.45毫克，192.61微莫耳，0.1當量）和三（二亞苄基丙酮）二鈀（88.19毫克，96.30微莫耳，0.05當量）。氮氣置換3次後在100℃下攪拌12小時。反應完後冷卻到室溫，過濾，濾液濃縮得到的粗品經矽膠柱層層析法（洗脫液:石油醚/乙酸乙酯=1：0-5：1）分離純化得到化合物4-4。MS (ESI) m/z：378.1 [M+H +]。
步驟D：向化合物4-4（210毫克，555.90微莫耳，1當量）和化合物1-12A（191.64毫克，722.66 微莫耳，1.3當量，2分子鹽酸鹽）的N,N-二甲基甲醯胺（5毫升）溶液中加入碳酸鉀（384.14毫克，2.78毫莫耳，5當量）。混合物在80℃下攪拌12小時，反應完後冷卻到25℃，過濾，濾液濃縮得到化合物4-5的粗品。MS (ESI) m/z：534.2 [M+H +]。
步驟E：在0℃和氮氣保護下，向化合物4-5（300毫克，562.25微莫耳，1當量）的四氫呋喃（3毫升）溶液中滴加二異丁基氫化鋁（1莫耳每升，2.81毫升，5當量）。滴加完後，在25℃下攪拌1小時，用飽和硫酸鈉溶液淬滅到反應液無氣泡冒出，在25℃下攪拌30分鐘，過濾，濾液濃縮得到的粗品經製備及高效液相層析（柱型號：Waters Xbridge 150×25毫米×5微米；流動相：[氨的水溶液（0.05%）-乙腈]；梯度：25%-55%）分離純化得到化合物4。MS (ESI) m/z：492.1 [M+H +]。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 8.56 (dd, J = 1.6, 4.4 Hz, 1H), 7.63 - 7.57 (m, 2H), 7.40 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.05 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 5.34 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 4.44 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 4.14 (d, J = 10.8 Hz, 1H), 3.98 - 3.94 (m, 2H), 3.85 - 3.76 (m, 2H), 3.22 - 3.15 (m, 2H), 2.42 (s, 3H), 2.03 (br s, 2H), 1.97 - 1.90 (m, 1H), 1.79 - 1.73 (m, 1H), 1.67 - 1.64 (m, 1H), 1.53-1.50 (m, 1H)。
實施例5：化合物5
Figure 02_image197
步驟A：將化合物1-23（100毫克，194.16微莫耳，1當量）和氨水（1.13克，9.71毫莫耳，1.25毫升，30%純度，50當量）的1,4-二㗁烷（2毫升）溶液在悶罐中加熱到80℃並在80℃下攪拌12小時。反應完後冷卻到25℃，減壓濃縮得到的粗品經製備級高效液相層析法（柱型號: Waters Xbridge 150×25毫米×5微米；流動相：[氨的水溶液（0.05%）-乙腈]；梯度：15%-45%）分離純化得到化合物5。MS (ESI) m/z：486.1 [M+H +]。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 7.94 (s, 1H), 7.67 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.41 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.36 (s, 2H), 6.06 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 5.77 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 4.16 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 4.05 - 3.87 (m, 4H), 3.30 - 3.27 (m, 2H), 2.41 (s, 3H), 1.92 - 1.86 (m, 1H), 1.73 - 1.61 (m, 2H), 1.54-1.50 (m, 1H)。
實施例6：化合物6
Figure 02_image199
步驟A：將化合物6-1（3克，12.45毫莫耳，1當量）溶解在二㗁烷（15毫升）中加入氨水（13.65克，7.37毫莫耳，15毫升，純度25%，7.92當量），反應液在100毫升的四氟悶罐中加熱到80攝氏度攪拌12小時。反應完全後，將反應液冷卻至25攝氏度，向反應液中加入水（60毫升），在25攝氏度下攪拌0.5小時，過濾，濾餅真空乾燥得到化合物6-2。MS (ESI) m/z：239.0 [M+H +]。
步驟B：將化合物6-2（2.3克，9.66毫莫耳，1當量）和化合物1-14（2.53克，11.60毫莫耳，1.2當量）溶解在二㗁烷（25毫升）中加入N,N-二異丙基乙胺（3.75克，28.99毫莫耳，5.05毫升，3當量），4,5-雙（二苯基磷）-9,9-二甲基氧雜蒽（1.12克，1.93毫莫耳，0.2當量）和三（二亞苄基丙酮）二鈀（884.94毫克，966.38微莫耳，0.1當量）。反應混合物在氮氣保護下置換氣體三次，然後反應體系在氮氣保護下加熱到100攝氏度攪拌12小時。反應完全後，向反應液中加入乙酸乙酯（10毫升），過濾，濾液濃縮得到粗品加入正庚烷（40毫升）和乙酸乙酯（2毫升），在25攝氏度下攪拌0.5小時，過濾，濾餅真空乾燥得到化合物6-3。MS (ESI) m/z：329.3 [M+H +]。
步驟C：將化合物6-3（500毫克，1.52毫莫耳，1當量）溶解在四氫呋喃（5毫升）中，加入甲醇鈉甲醇溶液（5莫耳每升，395.81微升，1.3當量），反應混合物在25攝氏度下攪拌0.5小時。反應完全後，用鹽酸乙酸乙酯（4莫耳每升）將反應液pH值調到7，直接濃縮反應液得到得到化合物6-4。MS (ESI) m/z：145.1 [M+H +]。
步驟D：將化合物1-21（386.83毫克，1.38毫莫耳，1當量）和化合物6-4（219.47毫克，1.52毫莫耳，1.1當量）溶解在二㗁烷（5毫升）中，加入N,N-二異丙基乙胺（536.57毫克，4.15毫莫耳，723.14微升，3當量），4,5-雙(二苯基磷)-9,9-二甲基氧雜蒽（160.15毫克，276.78微莫耳，0.2當量）和三(二亞苄基丙酮)二鈀（126.73毫克，138.39微莫耳，0.1當量）。反應混合物在氮氣保護下置換氣體三次，然後反應體系在氮氣保護下加熱到100攝氏度攪拌12小時。反應完全後，向反應液中加入乙酸乙酯（10毫升），過濾，濾液濃縮得到粗品，粗產品經矽膠薄層色譜法（石油醚/乙酸乙酯=2:1）純化得到化合物6-5。 MS (ESI) m/z：343.1 [M+H +]。
步驟E：將化合物6-5（269毫克，784.77微莫耳，1當量）和化合物1-12A（270.54毫克，1.02毫莫耳，1.3當量，2分子鹽酸鹽）溶解在N-甲基吡咯烷酮（5毫升）中，加入碳酸鉀（542.31毫克，3.92毫莫耳，5當量）。反應混合物加熱到80攝氏度攪拌12小時。反應完全後，加入水（10毫升）用乙酸乙酯（10毫升*3）萃取合併有機相用飽和食鹽水洗（10毫升*2），無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮得到粗品經製備級高效液相層析（柱型號：Waters Xbridge C18 150×50毫米×10微米；流動相：[碳酸氫銨水溶液（10毫莫耳每升）-乙腈]；梯度B%：22%-52%）分離純化得到化合物6-6。MS (ESI) m/z：499.1 [M+H +]。
步驟F：將化合物6-6（215毫克，431.23微莫耳，1當量）溶解在四氫呋喃（5毫升）中，在0攝氏度和氮氣保護下加入二異丁基氫化鋁（1莫耳每升，1.72毫升，4當量）。反應混合物在25攝氏度下攪拌12小時，用飽和硫酸鈉溶液（10毫升）淬滅直至無氣泡冒出後在25攝氏度下攪拌30分鐘，過濾，濾液減壓濃縮得到的粗品經製備級高效液相層析（柱型號：Waters Xbridge C18 150×50毫米×10微米；流動相：[碳酸氫銨水溶液（10毫莫耳每升）-乙腈]；梯度：15%-45%）分離純化得到化合物6。MS (ESI) m/z：457.1 [M+H+]。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 7.56 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 7.40 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 6.28 (s, 2H), 6.05 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 5.93 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 5.43 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 4.47 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 4.15 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 4.02 - 3.91 (m, 2H), 3.89 - 3.76 (m, 2H), 3.25 - 3.14 (m, 2H), 2.47 - 2.39 (m, 3H), 2.01 - 1.87 (m, 1H), 1.82 - 1.71 (m, 1H), 1.71 - 1.62 (m, 1H), 1.52 (br d, J = 13.6 Hz, 1H)。
實施例7：化合物7
Figure 02_image201
步驟A：將化合物7-1（3克，18.63毫莫耳，1當量）和化合物1-14（4.88克，22.36毫莫耳，1.2當量）溶解在二㗁烷（30毫升）中加入N,N-二異丙基乙胺（4.82克，37.27毫莫耳，6.49毫升，2當量），4,5-雙（二苯基磷）-9,9-二甲基氧雜蒽（539.09毫克，931.68微莫耳，0.05當量）和醋酸鈀（209.17毫克，931.68微莫耳，0.05當量）。反應混合物在氮氣保護下置換氣體三次，然後反應體系在氮氣保護下加熱到100攝氏度攪拌12小時，在120攝氏度再繼續攪拌12小時。反應完後，將反應液冷卻至15攝氏度，加入甲醇（30毫升），過濾，濾液濃縮得到粗品，經過柱層析（矽膠，石油醚：乙酸乙酯=1：0 到30：1）得到化合物7-2。MS (ESI) m/z：299.3 [M+H +]。
步驟B：將化合物7-2（0.6克，2.01毫莫耳，1當量）溶解在四氫呋喃（6毫升）中，加入甲醇鈉甲醇溶液（5.4莫耳每升，744.60微升，2當量），反應混合物在15攝氏度下攪拌0.5小時。反應完全後，使用4莫耳每升的氯化氫乙酸乙酯溶液將反應液的pH調至7，然後減壓濃縮得到粗品化合物7-3，直接投下一步。MS (ESI) m/z：115.2 [M+H +]。
步驟C：將化合物7-3（229.53毫克，2.01毫莫耳，1.1當量）和化合物1-21（510.87毫克，1.83毫莫耳，1當量）溶解在二㗁烷（5毫升）中，加入N,N-二異丙基乙胺（708.63毫克，5.48毫莫耳，955.02毫升，3當量），4,5-雙（二苯基磷）-9,9-二甲基氧雜蒽（105.75毫克，182.77微莫耳，0.1當量）和三（二亞苄基丙酮）二鈀（83.68毫克，91.38微莫耳，0.05當量）。反應混合物在氮氣保護下置換氣體三次，然後反應體系在氮氣保護下加熱到100攝氏度攪拌12小時。反應完全後，將反應液冷卻至15攝氏度，加入二㗁烷（5毫升）過濾，濾液濃縮得到粗品，經過柱層析（矽膠，石油醚：乙酸乙酯=1：0 到10：1）得到化合物7-4。MS (ESI) m/z：313.1 [M+H +]。
步驟D：將化合物7-4（233毫克，744.95微莫耳，1當量）和化合物1-12A（256.81毫克，968.43微莫耳，1.3當量，2分子鹽酸鹽）溶解在N,N-二甲基甲醯胺（5毫升）中，加入碳酸鉀（514.79毫克，3.72毫莫耳，5當量）。反應混合物加熱到80攝氏度攪拌12小時。反應完全後，反應液冷卻至15攝氏度，將反應液過濾減壓濃縮得到化合物7-5。MS (ESI) m/z：469.3 [M+H +]。
步驟E：將化合物7-5（307毫克，655.18微莫耳，1當量）溶解在四氫呋喃（3毫升）中，在0攝氏度和氮氣保護下加入二異丁基氫化鋁（1莫耳每升，3.28毫升，5當量）。反應混合物在15攝氏度下攪拌1小時，用飽和硫酸鈉溶液（10毫升）淬滅後加入四氫呋喃（20毫升），過濾，濾液減壓濃縮得到的粗品經製備級高效液相層析（柱型號：Waters Xbridge BEH C18 150×25毫米×5微米；流動相：[氨的水溶液（0.05%）-乙腈]；梯度：20%-50%）分離純化得到化合物7。MS (ESI) m/z：427.3 [M+H +]。 1H NMR (400 MHz,CDCl 3) δ = 7.60 (d, J = 2 Hz, 1H), 7.52 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 6.52 (d, J = 2Hz, 1H), 6.12 (d, J = 1.6Hz, 1H),4.53 (s, 2H), 4.19 (d, J = 11.2Hz, 1H), 4.08 (s, 1H), 4.01 (d, J = 10.8Hz, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.41-3.33 (m, 2H), 3.06 – 2.982 (m, 2H), 2.55 (s, 3H), 2.04 – 1.97 (m, 1H), 1.92 – 1.85 (m, 1H), 1.76 – 1.60 (m, 2H)。
實施例8：化合物8
Figure 02_image203
Figure 02_image205
Figure 02_image207
Figure 02_image209
步驟A：將化合物2-1（1克，3.88毫莫耳，1當量），甲氧基胺 (1.62克，19.42毫莫耳，5當量，鹽酸鹽) 和N,N-二異丙基乙胺（3.01克，23.31毫莫耳，4.06毫升，6當量）溶於二甲基亞碸（15毫升）中，在100攝氏度進行微波反應12小時。反應完後加入水（100毫升）和乙酸乙酯（100毫升），分離出有機相，然後再用乙酸乙酯（100毫升）對水相進行萃取，得到聯合的有機相用飽和食鹽水（100毫升×5）洗，無水硫酸鈉進行乾燥，過濾，減壓濃縮得到化合物8-1。MS (ESI) m/z：285.0 [M+H +]。
步驟B：在氮氣保護下，將化合物8-1（2克，7.03毫莫耳，1當量）、化合物1-14（1.84克，8.44 毫莫耳，1.2當量）、N,N-二異丙基乙胺（1.82克，14.06毫莫耳，2.45毫升，2當量）、醋酸鈀（78.92毫克，351.52微莫耳，0.05當量）和4,5-雙（二苯基磷）-9,9-二甲基氧雜蒽（203.39毫克，351.52微莫耳，0.05當量）溶於二㗁烷（20毫升）中，在100攝氏度和氮氣保護下反應3小時。反應完成後，往反應液中加入乙酸乙酯（30毫升），過濾，濾液減壓濃縮得到的粗品經矽膠柱層層析法（石油醚：乙酸乙酯=1：0到30：1）分離純化得到化合物8-2。MS (ESI) m/z：375.2 [M+H +]。
步驟C：在氮氣保護下，將化合物8-2（0.61克，1.63毫莫耳，1當量）溶於四氫呋喃（6毫升）中，加入三級丁醇鉀四氫呋喃溶液（1莫耳每升，3.25毫升，2當量），在15攝氏度下攪拌0.5小時。用1莫耳每升的氯化氫乙酸乙酯溶液調節反應液的pH至7，然後減壓濃縮得到化合物8-3。MS (ESI) m/z：191.1 [M+H +]。
步驟D：在氮氣保護下，將化合物8-3（310.19毫克，1.63毫莫耳，1當量）、化合物1-21（454.78毫克，1.63毫莫耳，1當量）、三(二亞苄基丙酮)二鈀（74.49毫克，81.35微莫耳，0.05當量）、4,5-雙(二苯基磷)-9,9-二甲基氧雜蒽（94.14毫克，162.70微莫耳，0.1當量）和N,N-二異丙基乙胺（630.84毫克，4.88毫莫耳，850.19微升，3當量）溶於1,4-二㗁烷（3毫升）中，在100攝氏度和氮氣保護下反應12小時。反應完後，減壓濃縮得到的粗品經矽膠柱層層析法（石油醚：乙酸乙酯=1：0 到10：1）分離純化得到化合物8-4。MS (ESI) m/z：389.0 [M+H +]。
步驟E：將化合物8-4（80毫克，205.52微莫耳，1當量），化合物1-12A（70.85毫克，267.18微莫耳，1.3當量，2分子鹽酸鹽）和N,N-二異丙基乙胺（159.37毫克，1.23毫莫耳，214.79微升，6當量）溶於N,N-二甲基甲醯胺（1毫升）中，在80攝氏度下反應1.5小時。冷卻至室溫，過濾，濾液減壓濃縮得到的粗品經薄層層析色譜法（二氯甲烷：乙醇=8:1）分離純化得到化合物8-5。MS (ESI) m/z：545.3 [M+H +]。
步驟F：在氮氣保護下，將化合物8-5（27毫克，49.54微莫耳，1當量）溶於四氫呋喃（1毫升）中，冷卻至0攝氏度，滴加二異丁基氫化鋁（1莫耳每升，247.68微升，5當量），保持溫度不超過3℃，滴加完後在15攝氏度下攪拌1小時。反應完後，滴加飽和的硫酸鈉溶液至反應液中無氣泡產生，然後加入四氫呋喃（10毫升），減壓抽濾，濾液減壓濃縮得到的粗品經製備級高效液相層析法（柱型號：Phenomenex Synergi Polar-RP 100×25毫米×4微米；流動相： [三氟乙酸的水溶液（0.1%）-乙腈]；梯度：14%-34%）分離純化得到化合物8的三氟乙酸鹽。MS (ESI) m/z：503.3 [M+H +]。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 8.53 (brs , 3H), 7.65 (brs, 1H), 7.58 (s, 1H), 6.31 (s, 1H), 5.84 (brs, 1H), 4.49 (brs, 3H), 4.36 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 4.22 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 4.04 (d, J = 13.6 Hz, 1H), 3.94 (d, J = 13.6 Hz, 1H), 3.71 (s, 3H), 3.31-3.25 (m, 1H), 3.16 - 3.11 (m, 1H) , 2.43 (s, 3H), 2.07 - 1.97 (m, 1H) , 1.91 – 1.84 (m, 2H), 1.69 (d, J = 12.4 Hz, 1H)。
實施例9：化合物9
Figure 02_image211
步驟A：將化合物9-1（10克，68.04毫莫耳，1當量）溶解在乙腈（100毫升）中加入無水氟化鉀（7.91克，136.08毫莫耳，3.19毫升，2當量）和溴氟甲基膦酸二乙酯（18.17克，68.04毫莫耳， 1當量），反應液在25攝氏度攪拌12小時。反應完全後，乙腈（20毫升）加入到反應液中，過濾，濾液減壓濃縮得到化合物9-2。MS (ESI) m/z：197.0,199.0 [M+H +]。
步驟B：將化合物9-2（13.30克，60.92毫莫耳，1.2當量）和化合物1-14（10克，50.77毫莫耳，1當量）溶解在二㗁烷（100毫升）中加入N,N-二異丙基乙胺（19.68克，152.30毫莫耳，26.53毫升，3當量），4,5-雙(二苯基磷)-9,9-二甲基氧雜蒽（2.94克，5.08毫莫耳，0.1當量）和三(二亞苄基丙酮)二鈀（2.32克，2.54毫莫耳，0.05當量）。反應混合物在氮氣保護下置換氣體三次，然後反應體系在氮氣保護下加熱到100攝氏度攪拌12小時。反應完全後，向反應液中加入乙酸乙酯（10毫升），過濾，濾液濃縮得到粗品，粗產品經矽膠薄層色譜法（石油醚/乙酸乙酯=5:1）純化得到化合物9-3。MS (ESI) m/z：335.2 [M+H+]。
步驟C：將化合物9-3（1克，2.99毫莫耳，1當量）溶解在四氫呋喃（10毫升）中，加入甲醇鈉甲醇溶液（5莫耳每升，777.46微升，1.3當量），反應混合物在25攝氏度下攪拌0.5小時。反應完全後，用鹽酸/乙酸乙酯（4莫耳每升）將反應液pH值調到7，直接濃縮反應液得到得到化合物9-4。MS (ESI) m/z：151.1 [M+H +]。
步驟D：將化合物1-21（759.84毫克，2.72毫莫耳，1當量）和化合物9-4（448.98毫克，2.99毫莫耳，1.1當量）溶解在二㗁烷（10毫升）中，加入N,N-二異丙基乙胺（1.05克，8.16毫莫耳，1.42毫升，3當量），4,5-雙(二苯基磷)-9,9-二甲基氧雜蒽（157.29毫克，271.84微莫耳，0.1當量）和三(二亞苄基丙酮)二鈀（124.46毫克，135.92微莫耳，0.05當量）。反應混合物在氮氣保護下置換氣體三次，然後反應體系在氮氣保護下加熱到100攝氏度攪拌12小時。反應完全後，向反應液中加入乙酸乙酯（10毫升），過濾，濾液濃縮得到粗品，粗產品經矽膠薄層色譜法（石油醚/乙酸乙酯=3:1）純化得到化合物9-5。 MS (ESI) m/z：349.0 [M+H +]。
步驟E：將化合物9-5（400毫克，1.15毫莫耳，1當量）和化合物1-12A（395.39毫克，1.49毫莫耳，1.3當量，2分子鹽酸鹽）溶解在N-N二甲基甲醯胺（5毫升）中，加入碳酸鉀（792.57毫克，5.73毫莫耳，5當量）。反應混合物加熱到80攝氏度攪拌12小時。反應完全後，過濾，濾液減壓濃縮得到化合物9-6。MS (ESI) m/z：505.2 [M+H +]。
步驟F：將化合物9-6（0.7克，1.39毫莫耳，1當量）溶解在四氫呋喃（7毫升）中，在0攝氏度和氮氣保護下加入二異丁基氫化鋁（1莫耳每升，6.94毫升，5當量）。反應混合物在25攝氏度下攪拌0.5小時，用飽和硫酸鈉溶液（10毫升）淬滅直至無氣泡冒出後在25攝氏度下攪拌30分鐘，過濾，濾液減壓濃縮得到的粗品經製備級高效液相層析（柱子：Waters Xbridge C18 150×50毫米×10微米；流動相：[碳酸氫銨的水溶液（10毫莫耳每升）-乙腈]；B%：22%-52%，10分鐘）分離純化得到化合物9。MS (ESI) m/z：463.1 [M+H +]。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 8.17 - 7.74 (m, 2H), 7.38 (s, 1H), 6.73 (s, 1H), 6.03 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 5.08 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 4.40 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 4.11 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 3.98 - 3.87 (m, 2H), 3.78 - 3.59 (m, 2H), 3.16 - 3.02 (m, 2H), 2.48 (br s, 3H), 2.03 - 1.83 (m, 3H), 1.78 - 1.68 (m, 1H), 1.66 - 1.58 (m, 1H), 1.48 (br d, J = 13.2 Hz, 1H)。
實施例10：化合物10
Figure 02_image213
步驟A：向化合物10-1（1克，5.29毫莫耳，1當量）的1,4-二㗁烷（15毫升）溶液中加入三氯氧磷（4.06克，26.45毫莫耳，2.46毫升，5當量）。在氮氣保護和90℃下攪拌12小時後，冷卻到25℃，滴加水（50毫升）淬滅反應，乙酸乙酯（50毫升×2）萃取，聯合的有機相用食鹽水（50毫升×2）洗，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後得到化合物10-2的粗品，直接用於下一步。
步驟B：向化合物10-2（800毫克，3.86毫莫耳，1當量）和化合物1-16（619.41毫克，3.86毫莫耳，1當量）的1,4-二㗁烷（10毫升）中加入N,N-二異丙基乙胺（1.50克，11.57毫莫耳，2.02毫升，3當量），4,5-雙（二苯基磷）-9,9-二甲基氧雜蒽（446.26毫克，771.25微莫耳，0.2當量）和三（二亞苄基丙酮）二鈀（353.12毫克，385.62微莫耳，0.1當量）。氮氣置換3次後在90℃下攪拌12小時。反應完後冷卻到室溫，過濾，濾液濃縮得到的粗品經製備級高效液相層析（柱型號：Phenomenex luna C18 250×50毫米×10微米；流動相：[鹽酸水溶液（0.05%）-乙腈]；梯度：30%-60%）分離純化得到化合物10-3。MS (ESI) m/z：287.0 [M+H +]
步驟C：向化合物10-3（10毫克，34.82微莫耳，1當量）和化合物1-12A（9.23毫克，34.82微莫耳，1當量，2分子鹽酸鹽）是N,N-二甲基甲醯胺（1毫升）溶液中加入碳酸鉀（24.06毫克，174.11微莫耳，5當量）。在100℃下攪拌12小時後，冷卻到室溫，過濾，濾液減壓濃縮得到的粗品製備級高效液相層析（柱型號：Waters Xbridge 150×25毫米×5微米；流動相：[氨水（0.05%）-乙腈]；梯度：19%-49%）分離純化得到化合物10。MS (ESI) m/z：443.3 [M+H +]。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 8.30 (s, 1H), 7.67 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 7.44 (s, 1H), 6.37 (s, 2H), 6.10 (s, 1H), 5.89 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 4.18 - 4.01 (m, 3H), 3.67 - 3.59 (m, 2H), 3.19 - 3.07 (m, 2H), 2.50 (s, 3H), 2.01 - 1.93 (m, 1H), 1.84 - 1.75 (m, 1H), 1.71 - 1.57 (m, 2H)。
實驗例1：SHP2體外酶學實驗 實驗材料：Homogeneous Full Length SHP-2 Assay Kit購自BPS Bioscience，多標記分析儀NIVO。 實驗方法： 1倍緩衝液配製（現配現用）：將5倍緩衝液用去離子水稀釋成1倍緩衝液，冰上放置備用。 將待測化合物用100% DMSO稀釋到100 μM作為第一個濃度，然後再用排槍進行4倍稀釋至第8個濃度，即從100 μM稀釋至6.1 nM。用1倍緩衝液將待測化合物各梯度稀釋成DMSO為10%的工作液，5 μL/孔加到對應孔中，設置雙複孔實驗。1000轉每分鐘，離心1分鐘。 每孔加入18μL配製的反應混合液，其中含12.25 μL去離子水；5 μL 5倍緩衝液；0.25 μL SHP-2底物多肽（100 μM）；0.5 μL DTT（250 mM）。1000轉每分鐘，離心1分鐘。 用1倍緩衝液將SHP-2酶稀釋到0.1 ng/μL，取2 μL/孔加入到對應孔中，陰性對照孔中加入2 μL 1倍緩衝液，SHP-2（0.2 ng），該步在冰上操作，反應體系置於25度孵育60分鐘做化合物預孵育。 化合物預孵育結束後每孔加入25 μL底物工作液，其中含19.45 μL去離子水；5 μL 5倍緩衝液；0.5 μL DTT（250 mM）和0.05 μL SHP-2 Substrate (DiFMUP) (10 mM)，反應體系置於25度反應30分鐘。此時化合物終濃度梯度為1 μM至0.061 nM。反應結束後採用多標記分析儀NIVO讀取螢光值，激發波長：360 nm，測試波長：460 nm。 化合物本底讀值檢測：取100% DMSO稀釋好的待測化合物各梯度5 μL到新的化合物板中，加入45 μL 1倍緩衝液進行10倍稀釋，配成10% DMSO的工作液，再取該化合物工作液5 μL/孔到檢測板中，然後加入45 μL 1倍緩衝液進行10倍稀釋，此時DMSO終濃度為1%，1000 rpm/min，離心1分鐘後採用多標記分析儀讀取螢光值，激發波長：360 nm，測試波長：460 nm。
數據分析： 原始數據換算成抑制率，IC 50的值可通過四參數進行曲線擬合得出。表1提供了本申請的化合物對SHP2酶活性的影響。 實驗結果：見表1。 表1
樣品 SHP2 IC 50(奈莫耳每升)
化合物1 1.73
化合物2 2.87
化合物3 2.28
化合物4 2.14
化合物5 3.24
化合物6 3.15
化合物8 3.99
化合物10 1.09
結論：本申請化合物對SHP2具有優異的體外抑制活性。
實驗例2：KRAS突變腫瘤細胞抗增殖實驗研究 實驗材料： 細胞培養基，盤尼西林/鏈黴素抗生素購自維森特，胎牛血清購自Biosera。3D CellTiter-Glo（細胞活率化學發光檢測試劑）試劑購自Promega。細胞系購自南京科佰生物科技有限公司和武漢普諾賽生命科技有限公司。Envision多標記分析儀(PerkinElmer)。 實驗方法： 將不同腫瘤細胞種於超低吸附96孔U型板中，80 μL細胞懸液每孔，細胞密度條件如下表。細胞板置於二氧化碳培養箱中過夜培養。
細胞名稱 鋪板密度 化合物給藥天數
MIAPACA2_PANCREAS 1000 3
NCIH358_LUNG 2000 5
將待測化合物用排槍進5倍稀釋至第9個濃度，即從2 mM稀釋至5.12nM或200μM至0.512nM，設置雙複孔實驗。向中間板中加入78 μL培養基，再按照對應位置，轉移2 μL每孔的梯度稀釋化合物至中間板，混勻後轉移20μL每孔到細胞板中。轉移到細胞板中的化合物濃度範圍是10μM至0.0256nM，或1μM至0.00256nM細胞板置於二氧化碳培養箱中培養3-6天。具體時間見表1. 向細胞板中加入每100 μL的細胞活率化學發光檢測試劑，室溫孵育10分鐘使發光信號穩定。採用多標記分析儀讀數。
數據分析： 將原始數據換算成抑制率，IC 50的值即可通過四參數進行曲線擬合得出（GraphPad Prism中"log(inhibitor) vs. response -- Variable slope" 模式得出）。表2提供了本申請的化合物對不同腫瘤細胞增殖的抑制活性。 實驗結果：見表2、表3。 表2本申請的化合物對H358細胞增殖的抑制活性
樣品 H358抗增殖IC 50(奈莫耳每升)
化合物1 22.10
化合物2 61.43
化合物3 62.09
化合物4 144.80
化合物5 43.10
化合物6 120.20
化合物10 38.86
表3本申請的化合物對MiaPaCa-2細胞增殖的抑制活性
樣品 MiaPaCa-2抗增殖IC 50(奈莫耳每升)
化合物1 22.56
化合物2 24.40
化合物3 35.00
化合物4 56.90
化合物5 48.47
化合物6 62.15
化合物10 19.31
實驗結論： 本申請化合物對KRAS突變的癌細胞H358和MiaPaCa-2均有很好的抗增殖抑制效果。
實驗例3：對H358細胞ERK磷酸化的抑制活性研究 實驗材料： H358細胞購自南京科佰生物科技有限公司；1640培養基購自Biological industries；胎牛血清購自Biosera；Advanced Phospho-ERK1/2(THR202/TYR204) KIT購自Cisbio Advanced Phospho-ERK1/2(THR202/TYR204) KIT 成分表
成分名稱 儲存溫度
定制磷酸化ERK1/2 Eu Cryptate抗體（Advanced PhosphoERK1/2 Eu Cryptate antibody） ≤-16°C
定制磷酸化ERK1/2 d2抗體（Advanced PhosphoERK1/2 d2 antibody） ≤-16°C
封閉液（100X母液儲存）（Blocking reagent (stock solution 100X) ） ≤-16°C
裂解液1號（4X母液儲存）（Lysis buffer # 1 (stock solution 4X) ） ≤-16°C
檢測液（現配現用）（Detection buffer (ready-to-use) ） ≤-16°C
實驗方法： 1. H358細胞種於透明96孔細胞培養板中，80 μL細胞懸液每孔，每孔包含10000個H358細胞，細胞板放入二氧化碳培養箱，37度過夜孵育； 2. 棄掉細胞上清，加入80 μL每孔饑餓培養基（1640+ 0.02%胎牛血清+1%雙抗），細胞板放入二氧化碳培養箱，細胞饑餓處理過夜； 3. 將待測化合物用100%DMSO稀釋到4 mM作為第一個濃度，然後再用移液器進行5倍稀釋至第8個濃度，即從4 mM稀釋至10.24 μM。取1 μL化合物加入79 μL細胞饑餓培養基，混勻後，取20 μL化合物溶液加入到對應細胞板孔中，細胞板放回二氧化碳培養箱繼續孵育1小時，此時化合物濃度為10 μM至0.0256 nM，DMSO濃度為0.25%； 4. 結束孵育後，棄掉細胞上清加入50 μL細胞裂解液每孔，室溫搖晃孵育30分鐘； 5. 使用Detection buffer 將Phospho-ERK1/2 Eu Cryptate antibody和Phospho-ERK1/2 d2 antibody稀釋20倍； 6. 取16 μL細胞裂解物上清每孔到新的384白色微孔板中，再加入2 μL Phospho-ERK1/2 Eu Cryptate antibody稀釋液和2 μL Phospho-ERK1/2 d2 antibody稀釋液，常溫孵育4小時； 7. 孵育結束後使用多標記分析儀讀取HTRF excitation:320nm, emission:615nm，665nm。
數據分析： 將原始數據換算成抑制率，IC 50的值即可通過四參數進行曲線擬合得出。 實驗結果：見表4。 表4本申請的化合物對H358細胞ERK磷酸化的抑制活性
樣品 H358細胞ERK磷酸化IC 50(奈莫耳每升)
化合物1 21.24
化合物2 84.14
化合物3 55.62
化合物4 75.78
化合物5 45.26
化合物6 57.11
實驗結論： 本申請化合物對KRAS突變的癌細胞H358的ERK磷酸化有很強的抑制效果。
實驗例4：小鼠體內藥代動力學研究 實驗目的： 本實驗目的是評價化合物單次靜脈注射和灌胃給藥後的藥代動力學行為，考察灌胃給藥後的生物利用度。 實驗操作： 選取7至10周齡的CD-1雄性小鼠。小鼠在給藥前禁食至少12小時，給藥4小時後恢復供食，整個試驗期間自由飲水。 實驗當天靜脈組動物通過尾靜脈單次注射給予相應化合物，給藥體積為5毫升每公斤；口服組動物通過單次灌胃給予相應化合物，給藥體積為10毫升每公斤。在給藥前秤量動物體重，根據體重計算給藥體積。樣品採集時間：注射組為0.083小時、0.25小時、0.5小時、1小時、2小時、4小時、8小時、24小時，灌胃組為0.25小時、0.5小時、1小時、2小時、4小時、6小時、8小時、24小時。每個時間點通過隱靜脈採集大約30 µL全血用於製備血漿供高效液相層析-串聯質譜（LC-MS/MS）進行濃度測定。所有動物在採集完最後一個時間點的PK樣品後進行CO 2麻醉安樂死。採用WinNonlin™ Version 6.3 (Pharsight, Mountain View, CA) 藥動學軟件的非房室模型處理血漿濃度，使用線性對數梯形法方法計算藥動學參數。
實驗結果：PK性質評價結果見表5。 實驗結論： 本申請化合物具有優異的藥代動力學性質。 表5 小鼠體內PK性質評價結果
化合物 注射 口服
劑量 (毫克每公斤) Cl (mL/min/kg) AUC 0-last(nM.h) 劑量 (毫克每公斤) Cmax (nM) AUC 0-last(nM.h) F%
化合物1 2 27.7 2532 10 3537 8602 69.5
化合物2 1 27 1316 2 927 2035 83.6
化合物4 1 35.5 974 2 372 990 58.6
化合物6 1 68.3 638 2 463 817 89.8
實驗結論： 本申請化合物在小鼠體內口服AUC、生物利用度優異，具有良好的藥代動力學性質。
實驗例5：大鼠體內藥代動力學研究 實驗目的： 本實驗目的是評價化合物單次靜脈注射和灌胃給藥後的藥代動力學行為，考察灌胃給藥後的生物利用度。 實驗操作： 選取7至10周齡的SD雄性大鼠。大鼠在給藥前禁食至少12小時，給藥4小時後恢復供食，整個試驗期間自由飲水。 實驗當天靜脈組動物通過尾靜脈單次注射給予相應化合物，給藥體積為5 mL/kg；口服組和通過單次灌胃給予相應化合物，給藥體積為10 mL/kg。在給藥前秤量動物體重，根據體重計算給藥體積。樣品採集時間為：0.083（注射組），0.25,0.5,1,2,4,6,8,24 h。每個時間點通過頸靜脈採集大約200μL全血用於製備血漿供高效液相層析-串聯質譜（LC-MS/MS）進行濃度測定。所有動物在採集完最後一個時間點的PK樣品後進行CO 2麻醉安樂死。採用WinNonlin™ Version 6.3 (Pharsight, Mountain View, CA)藥動學軟件的非房室模型處理血漿濃度，使用線性對數梯形法方法計算藥動學參數。
實驗結果：大鼠體內PK性質評價結果見表6。 表6 大鼠體內PK性質評價結果
化合物 注射 口服
劑量 (毫克每公斤) Cl (mL/min/kg) AUC 0-last(nM.h) 劑量 (毫克每公斤) Cmax (nM) AUC 0-last(nM.h) F%
化合物1 2 17.3 4050 20 9727 39709 98.0
實驗結論： 本申請化合物在大鼠體內口服AUC、生物利用度優異，具有良好的藥代動力學性質。
實驗例6：MiaPaCa-2皮下異種移植腫瘤抑制體內實驗 實驗目的： 評價測試藥物在人源胰腺癌MIA PaCa-2細胞株皮下異種移植雌性BALB/c裸小鼠動物模型中的抗腫瘤作用。 實驗操作： MIA PaCa-2細胞培養在含2.5%HS 和10% 胎牛血清的DMEM培養液中。收集指數生長期的MIA PaCa-2細胞，PBS重懸至適合濃度用於裸鼠皮下腫瘤接種。 實驗小鼠於右側背部皮下接種5×10 6MIA PaCa-2細胞，細胞重懸在1：1的PBS與基質膠中（0.1ml/只）定期觀察腫瘤生長情況，待腫瘤生長至平均體積~125(100-150)mm 3時根據腫瘤大小和小鼠體重隨機分組給藥。 開始給藥後，每週測量兩次小鼠的體重和腫瘤的大小。腫瘤體積計算公式：腫瘤體積（mm 3）= 1/2 ×（a × b 2）（其中a表示長徑，b表示短徑）。
實驗結果：化合物腫瘤抑制效果見表7。 表7  MiaPaCa-2異種異位移植實驗結果
化合物 空白 化合物1 化合物2
給藥劑量（毫克每公斤） 0 30 30
給藥頻率 每天一次 每天一次 每天一次
給藥方式 口服 口服 口服
平均腫瘤體積（立方毫米） 第12天 129.22 129.20 129.17
第39天 512.12 278.34 248.09
第39天 %抑制率 63.1 66.6
實驗結論： 本申請化合物對MiaPaCa-2皮下異種移植腫瘤生長有顯著抑制作用。
無
無

Claims (15)

  1. 一種如式（I’）化合物、其立體異構體或其藥學上可接受的鹽
    Figure 03_image001
    ， 其中， 環A選自芳基和雜芳基； R 1選自H、氘、NH 2、任選地被一個或多個鹵素、CN或OH取代的C 1-6烷基； R 2選自氘、H、鹵素、OH、CN、COOH、-C(=O)-C 1-6烷基、-COO-C 1-6烷基、C 1-6烷基和-C(=O)NH 2，所述-C(=O)-C 1-6烷基、-COO-C 1-6烷基、C 1-6烷基和-C(=O)NH 2分別獨立地任選被1、2或3個R a取代； R 3選自H、鹵素、OH、NO 2、CN、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基和C 1-6烷氨基，所述C 1-6烷基、C 1-6烷氧基和C 1-6烷氨基分別獨立地任選被1、2或3個R b取代； R 4、R 5和R 6分別獨立地選自H、氘、鹵素、NH 2、NO 2、CN、OH、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基和-NH-O-C 1-6烷基，所述NH 2、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基和-NH-O-C 1-6烷基分別獨立地任選被1、2或3個R c取代； R a、R b、R c分別獨立地選自氘、鹵素、OH、NH 2和C 1-3烷基。
  2. 如請求項1所述的化合物、其立體異構體或其藥學上可接受的鹽，其選自式（I）化合物或其藥學上可接受的鹽
    Figure 03_image004
    ， 其中， 環A選自芳基和雜芳基； R 1選自H、氘、NH 2、任選地被一個或多個鹵素、CN或OH取代的C 1-6烷基； R 2選自氘、H、鹵素、OH、CN、COOH、-C(=O)-C 1-6烷基、-COO-C 1-6烷基、C 1-6烷基和-C(=O)NH 2，所述-C(=O)-C 1-6烷基、-COO-C 1-6烷基、C 1-6烷基和-C(=O)NH 2分別獨立地任選被1、2或3個R a取代； R 3選自H、鹵素、OH、NO 2、CN、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基和C 1-6烷氨基，所述C 1-6烷基、C 1-6烷氧基和C 1-6烷氨基分別獨立地任選被1、2或3個R b取代； R 4、R 5和R 6分別獨立地選自H、氘、鹵素、NH 2、NO 2、CN、OH、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基和-NH-O-C 1-6烷基，所述NH 2、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基和-NH-O-C 1-6烷基分別獨立地任選被1、2或3個R c取代； R a、R b、R c分別獨立地選自氘、鹵素、OH、NH 2和C 1-3烷基。
  3. 如請求項1或2所述的化合物、其立體異構體或其藥學上可接受的鹽，其中 環A選自芳基和5-6元雜芳基，所述5-6元雜芳基包含1、2或3個分別獨立地選自N、O、S和NH的雜原子或雜原子團； R 1選自H、氘、NH 2、CH 3、CHF 2、CH 2F和CF 3； R 2選自氘、F、Cl、Br、I、CN、COOH、-C(=O)-C 1-3烷基、-COO-C 1-3烷基、C 1-3烷基和-C(=O)NH 2，所述-C(=O)-C 1-3烷基、-COO-C 1-3烷基、C 1-3烷基和-C(=O)NH 2分別獨立地任選被1、2或3個R a取代； R 3選自H、F、Cl、Br、I、NO 2、CN、C 1-3烷基、C 1-3烷氧基和C 1-3烷氨基，所述C 1-3烷基、C 1-3烷氧基和C 1-3烷氨基分別獨立地任選被1、2或3個R b取代； R 4、R 5和R 6分別獨立地選自H、氘、F、Cl、Br、I、NH 2、NO 2、CN、OH、C 1-3烷基、C 1-3烷氧基和-NH-O-C 1-3烷基，所述NH 2、C 1-3烷基、C 1-3烷氧基和-NH-O-C 1-3烷基分別獨立地任選被1、2或3個R c取代； R a分別獨立地選自氘、F、Cl、Br、I、OH和NH 2； R b分別獨立地選自氘、F、Cl、Br、I和OH； Rc分別獨立地選自氘、F、Cl、Br、I、NH 2和C 1-3烷基。
  4. 如請求項1-3任一項所述的化合物、其立體異構體或其藥學上可接受的鹽，其中，環A選自C 6-10芳基和5-10元雜芳基； 或者，環A選自C 6-10芳基和5-6元雜芳； 或者，環A選自苯基和5-6元雜芳基； 或者，環A選自芳基和5-6元雜芳基，所述5-6元雜芳基包含1、2或3個分別獨立地選自N、O、S和NH的雜原子或雜原子團； 或者，環A選自苯基、吡唑基和吡啶基； 或者，環A選自吡啶基。
  5. 如請求項1-4任一項所述的化合物、其立體異構體或其藥學上可接受的鹽，其中，R a、R b、R c分別獨立地選自鹵素、OH、NH 2和C 1-3烷基； 或者，R a、R b、R c分別獨立地選自鹵素、OH和C 1-3烷基； 或者，R a、R b、R c分別獨立地選自氟、OH和C 1-3烷基； 或者，R a分別獨立地選自OH； 或者，R c分別獨立地選自F和CH 3。
  6. 如請求項1-5任一項所述的化合物、其立體異構體或其藥學上可接受的鹽，其中，所述R 1選自H、氘、NH 2、任選地被一個或多個鹵素、CN或OH取代的C 1-3烷基； 或者，R 1選自H、氘、NH 2、任選地被一個或多個鹵素取代的C 1-3烷基； 或者，R 1選自H、氘、NH 2、任選地被一個或多個氟取代的C 1-3烷基； 或者，R 1選自H、氘、NH 2、CH 3、CHF 2、CH 2F和CF 3； 或者，R 1選自H、CH 3和CHF 2；或者，R 1選自CH 3和CHF 2。
  7. 如請求項1-6任一項所述的化合物、其立體異構體或其藥學上可接受的鹽，其中，R 2選自氘、F、Cl、Br、I、CN、COOH、-C(=O)-C 1-3烷基、-COO-C 1-3烷基、C 1-3烷基和-C(=O)NH 2，所述-C(=O)-C 1-3烷基、-COO-C 1-3烷基、C 1-3烷基和-C(=O)NH 2分別獨立地任選被1、2或3個R a取代； 或者，R 2選自氘、F、Cl、Br、I、CH 3和-C(=O)NH 2，所述CH 3和-C(=O)NH 2分別獨立地任選被1、2或3個R a取代；或者，R 2選自Cl、-CH 2OH、-CH 3和-C(=O)NH 2； 或者，其中，R 2選自Cl、-CH 2OH和-C(=O)NH 2。
  8. 如請求項1-7任一項所述的化合物、其立體異構體或其藥學上可接受的鹽，其中，R 3選自H、F、Cl、Br、I、NO 2、CN、C 1-3烷基、C 1-3烷氧基和C 1-3烷氨基，所述C 1-3烷基、C 1-3烷氧基和C 1-3烷氨基分別獨立地任選被1、2或3個R b取代； 或者，R 3選自H、F、Cl和CH 3；或者，R 3選自H。
  9. 如請求項1-8任一項所述的化合物、其立體異構體或其藥學上可接受的鹽，其中，R 4、R 5和R 6分別獨立地選自H、氘、F、Cl、Br、I、NH 2、NO 2、CN、OH、C 1-3烷基、C 1-3烷氧基和-NH-O-C 1-3烷基，所述NH 2、C 1-3烷基、C 1-3烷氧基和-NH-O-C 1-3烷基分別獨立地任選被1、2或3個R c取代； 或者，R 4、R 5和R 6分別獨立地選自H、氘、F、Cl、Br、I、NH2、NO2、CN、OH、=O、CH 3、-OCH 3和-NH-O-CH 3，所述NH2、CH 3、-OCH 3和-NH-O-CH 3分別獨立地任選被1、2或3個Rc取代； 或者，R 4、R 5和R 6分別獨立地選自F、Cl、NH 2、-NH-O-CH 3、-NH-CH 3、CH 3、CF 3和CHF 2。
  10. 如請求項1-9任一項所述的化合物、其立體異構體或其藥學上可接受的鹽，其中，結構單元
    Figure 03_image007
    選自
    Figure 03_image009
    、
    Figure 03_image011
    、
    Figure 03_image013
    、
    Figure 03_image015
    和
    Figure 03_image017
    ；和/或 ，結構單元
    Figure 03_image023
    選自
    Figure 03_image025
    、
    Figure 03_image027
    、
    Figure 03_image029
    、
    Figure 03_image031
    、
    Figure 03_image033
    、
    Figure 03_image035
    、
    Figure 03_image037
    和
    Figure 03_image039
    。
  11. 如請求項1-10任意一項所述的化合物、其立體異構體或其藥學上可接受的鹽，其中，化合物選自
    Figure 03_image041
    Figure 03_image043
    Figure 03_image045
    、
    Figure 03_image047
    、
    Figure 03_image049
    、
    Figure 03_image051
    、
    Figure 03_image053
    Figure 03_image055
    Figure 03_image057
    、
    Figure 03_image059
    、
    Figure 03_image061
    、
    Figure 03_image063
    、
    Figure 03_image065
    Figure 03_image067
    和
    Figure 03_image069
    。
  12. 一種化合物、其立體異構體或其藥學上可接受的鹽，其中，化合物選自
    Figure 03_image071
    、
    Figure 03_image073
    、
    Figure 03_image075
    、
    Figure 03_image077
    、
    Figure 03_image079
    、
    Figure 03_image081
    、
    Figure 03_image083
    、
    Figure 03_image085
    、
    Figure 03_image087
    、
    Figure 03_image089
    、
    Figure 03_image091
    和
    Figure 03_image093
    。
  13. 一種化合物、其立體異構體或其藥學上可接受的鹽，其中，化合物選自
    Figure 03_image095
    、
    Figure 03_image097
    、
    Figure 03_image099
    、
    Figure 03_image101
    、
    Figure 03_image103
    、
    Figure 03_image105
    、
    Figure 03_image107
    、
    Figure 03_image109
    、
    Figure 03_image111
    、
    Figure 03_image113
    、
    Figure 03_image115
    、
    Figure 03_image117
    、
    Figure 03_image119
    、
    Figure 03_image121
    、
    Figure 03_image123
    、
    Figure 03_image125
    、
    Figure 03_image127
    、
    Figure 03_image129
    、
    Figure 03_image131
    、
    Figure 03_image133
    、
    Figure 03_image135
    、
    Figure 03_image137
    、
    Figure 03_image139
    和
    Figure 03_image141
    。
  14. 一種藥物組合物，其包含請求項1-13任一項所述的化合物、其立體異構體或其藥學上可接受的鹽。
  15. 請求項1-13任一項所述的化合物、其立體異構體或其藥學上可接受的鹽、或請求項14所述的藥物組合物在製備預防或者治療與SHP2蛋白相關疾病的藥物中的用途；任選地，所述與SHP2蛋白相關疾病選自癌症；任選地，所述與SHP2蛋白相關疾病選自肺癌或胰腺癌。
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