TW202308674A

TW202308674A - 口服攝取用IL-1β血中濃度上升抑制劑、口服攝取用類澱粉蛋白-β腦內濃度上升抑制劑、口服攝取用毛髮改善劑及口服攝取用抗老化劑

Info

Publication number: TW202308674A
Application number: TW111123876A
Authority: TW
Inventors: 高橋知也; 溫淑芳; 林士弘; 吳佳佳; 張志萱; 謝岱儒; 李明翰; 呂亦晃
Original assignee: 日商安露莎慧央集團股份有限公司
Priority date: 2021-08-20
Filing date: 2022-06-27
Publication date: 2023-03-01
Also published as: JP2023028872A; JP7239208B2

Abstract

本發明的課題為判明白鶴靈芝的乙醇萃取物所具有的新穎的性質，根據該新穎的性質提供新的用途。本發明的解決手段為一種口服攝取用IL-1β血中濃度上升抑制劑、口服攝取用類澱粉蛋白-β腦內濃度上升抑制劑、口服攝取用毛髮改善劑及口服攝取用抗老化劑，含有以白鶴靈芝的乙醇萃取物作為有效成分。

Description

口服攝取用IL-1β血中濃度上升抑制劑、口服攝取用類澱粉蛋白-β腦內濃度上升抑制劑、口服攝取用毛髮改善劑及口服攝取用抗老化劑

本發明是關於含有白鶴靈芝的乙醇萃取物之口服攝取用IL-1β血中濃度上升抑制劑、口服攝取用類澱粉蛋白-β腦內濃度上升抑制劑、口服攝取用毛髮改善劑及口服攝取用抗老化劑。

白鶴靈芝(Rhinacanthus nasutus(L.)Kurz，也稱為白鶴靈芝草)是屬於被認為原產於印度南部德干高原(Deccan Plateau)的白鶴靈芝屬爵床科的常綠矮灌木。已知白鶴靈芝的全草具有驅蟲、消炎、對皮膚真菌的抗菌作用(例如參照非專利文獻1)，主要在中國、台灣等作為中藥或食品使用，而且最近在日本國也作為中藥或食品使用。其他在本申請人所提出的以前的申請中揭示有：白鶴靈芝具有去除活性氧的能力(例如參照專利文獻1)；具有促進排泄作用(例如參照專利文獻2)；具有抗過敏作用(例如參照專利文獻3)以及具有抗腫瘤作用(例如參照專利文獻4)等。

[專利文獻1] 日本國特開平9-143091號公報 [專利文獻2] 日本國特開平9-169662號公報 [專利文獻3] 日本國特開2001-10964號公報 [專利文獻4] 日本國特開2002-53481號公報

[非專利文獻1] 原色牧野和漢藥草大圖鑑、492頁、北隆館、1988年

但是，白鶴靈芝的萃取物成為口服攝取用IL-1β血中濃度上升抑制劑、口服攝取用類澱粉蛋白-β腦內濃度上升抑制劑、口服攝取用毛髮改善劑及口服攝取用抗老化劑的有效成分還不知道。

本發明其課題為判明白鶴靈芝的萃取物所具有的新穎的性質，根據該新穎的性質提供新的用途。

為了解決上述課題，本發明人們就白鶴靈芝的萃取物的新的有用性專心致志檢討的結果發現，在使用動物模式(animal model)的實驗系統中，包含白鶴靈芝的乙醇萃取物的組成物具有藉由口服攝取抑制血中的IL-1β濃度的上升作用、抑制腦內的類澱粉蛋白-β濃度的上升作用、毛髮的改善作用及抗老化作用而完成了本發明。也就是說，本發明包含以下的實施形態。

(1)、一種口服攝取用IL-1β血中濃度上升抑制劑，含有以白鶴靈芝的乙醇萃取物作為有效成分，藉由口服攝取抑制IL-1β的血中濃度的上升。 (2)、如(1)之口服攝取用IL-1β血中濃度上升抑制劑，其中前述乙醇萃取物為藉由自前述白鶴靈芝使用含水乙醇進行萃取而得到的萃取物。 (3)、如(1)或(2)之口服攝取用IL-1β血中濃度上升抑制劑，其中為醫藥品、飲食品、飼料或配合於醫藥品、飲食品、飼料之有效成分組成物的形態。 (4)、如(3)之口服攝取用IL-1β血中濃度上升抑制劑，其中前述飲食品為健康增進用飲食品。 (5)、如(1)至(4)中任一項之口服攝取用IL-1β血中濃度上升抑制劑，其中透過藉由口服攝取抑制IL-1β的血中濃度的上升，緩和、改善、抑制、預防或治療慢性阻塞性肺病(chronic obstructive pulmonary disease)、自體發炎性疾病(inflammatory disease)、類風溼性關節炎(Rheumatoid arthritis)、變形性關節炎(arthritis deformans)、痛風性關節炎(gouty arthritis)及動脈硬化之中的至少一個。 (6)、一種口服攝取用類澱粉蛋白-β腦內濃度上升抑制劑，含有以白鶴靈芝的乙醇萃取物作為有效成分，藉由口服攝取抑制類澱粉蛋白-β的腦內濃度的上升。 (7)、如(6)之口服攝取用類澱粉蛋白-β腦內濃度上升抑制劑，其中前述乙醇萃取物為藉由自前述白鶴靈芝使用含水乙醇進行萃取而得到的萃取物。 (8)、如(6)或(7)之口服攝取用類澱粉蛋白-β腦內濃度上升抑制劑，其中為醫藥品、飲食品、飼料或配合於醫藥品、飲食品、飼料之有效成分組成物的形態。 (9)、如(8)之口服攝取用類澱粉蛋白-β腦內濃度上升抑制劑，其中前述飲食品為健康增進用飲食品。 (10)、如(6)至(9)中任一項之口服攝取用類澱粉蛋白-β腦內濃度上升抑制劑，其中透過藉由口服攝取抑制類澱粉蛋白-β的腦內濃度的上升，緩和、改善、抑制、預防或治療類澱粉腦血管病變(cerebral amyloid angiopathy)。 (11)、一種口服攝取用毛髮改善劑，含有以白鶴靈芝的乙醇萃取物作為有效成分，藉由口服攝取抑制毛髮的光澤的降低。 (12)、如(11)之口服攝取用毛髮改善劑，其中前述乙醇萃取物為藉由自前述白鶴靈芝使用含水乙醇進行萃取而得到的萃取物。 (13)、如(11)或(12)之口服攝取用毛髮改善劑，其中為醫藥品、飲食品、飼料或配合於醫藥品、飲食品、飼料之有效成分組成物的形態。 (14)、如(13)之口服攝取用毛髮改善劑，其中前述飲食品為美容用飲食品或健康增進用飲食品。 (15)、一種口服攝取用抗老化劑，含有以白鶴靈芝的乙醇萃取物作為有效成分。 (16)、如(15)之口服攝取用抗老化劑，其中前述乙醇萃取物為藉由自前述白鶴靈芝使用含水乙醇進行萃取而得到的萃取物。 (17)、如(15)或(16)之口服攝取用抗老化劑，其中為醫藥品、飲食品、飼料或配合於醫藥品、飲食品、飼料之有效成分組成物的形態。 (18)、如(17)之口服攝取用抗老化劑，其中前述飲食品為美容用飲食品或健康增進用飲食品。 (19)、一種白鶴靈芝的乙醇萃取物的使用，係用以製造用於抑制人類或非人類哺乳動物中的IL-1β的血中濃度上升，抑制人類或非人類哺乳動物中的類澱粉蛋白-β的腦內濃度的上升，改善人類或非人類哺乳動物中的毛髮及人類或非人類哺乳動物中的抗老化之口服攝取用的醫藥品、飲食品或配合於醫藥品、飲食品之有效成分組成物。

依照本發明，作為白鶴靈芝的乙醇萃取物所具有的新穎的用途，可提供包含白鶴靈芝的乙醇萃取物之口服攝取用IL-1β血中濃度上升抑制劑、口服攝取用類澱粉蛋白-β腦內濃度上升抑制劑、口服攝取用毛髮改善劑、口服攝取用抗老化劑及美容用飲食品、健康增進用飲食品。

接著，就本發明的各實施形態參照圖式進行說明。此外，在以下說明的各實施形態不是限定與申請專利範圍有關的發明，而且，在各實施形態中說明的諸要素及其組合的全部不一定對本發明的解決手段是必須。

(I)、白鶴靈芝的乙醇萃取物本發明的一實施形態中的有效成分是由白鶴靈芝(Rhinacanthus nasutus(L.)Kurz)藉由乙醇萃取出之乙醇萃取物。此外，在本說明書中在僅為[乙醇]的情形下是指[總質量之中乙醇的質量為30％以上的溶媒]。也就是說，[乙醇]不僅包含所謂的無水乙醇，也包含乙醇與其他溶媒的混合溶媒。

(II)、口服攝取用IL-1β血中濃度上升抑制劑本說明書中的[口服攝取用IL-1β血中濃度上升抑制劑]是指抑制IL-1β的血中濃度的上升。IL-1β為發炎性細胞介素(inflammatory cytokine)的一種，IL-1β的持續產生會使骨骼、關節、血管、肌肉等中的種種慢性炎症性疾病發生(小野嵜，間白素(interleukin)1：從細胞增殖控制到慢性炎症性疾病，YAKUGAKU ZASSHI，133 (6)，645-660，2013)。具體而言，已知IL-1β與慢性阻塞性肺病(肺氣腫emphysema)、自體發炎性疾病、類風溼性關節炎、變形性關節炎、痛風性關節炎、動脈硬化之疾病有關。此外，本發明中的[口服攝取用]是指用以藉由飲食(包含服用)攝取。

(III)、口服攝取用類澱粉蛋白-β腦內濃度上升抑制劑本說明書中的[口服攝取用類澱粉蛋白-β腦內濃度上升抑制劑]是指抑制類澱粉蛋白-β的腦內濃度的上升。如後述，類澱粉蛋白-β除了與阿茲海默型失智症(Alzheimer dementia)密切相關之外，還藉由沉著在腦膜(meninges)及腦內的血管壁而成為類澱粉腦血管病變及伴隨於此的腦出血的原因(古和等，寄予老年人中風的現狀 2、老年人的腦出血的現狀，日本老年醫學會雜誌，54卷4號，514-518，2017)。

(IV)、口服攝取用毛髮改善劑本說明書中的[口服攝取用毛髮改善劑]是指有助於改善毛髮者，特別是預防或改善毛髮的光澤的降低者。由後述的實施例2也判明，本發明的口服攝取用毛髮改善劑對毛髮的光澤的降低具有顯著的效果。

(IV)、口服攝取用抗老化劑用語[抗老化]是指廣泛被定義者，緩和、改善、抑制、預防或治療心肌梗塞(myocardial infarction)、腦梗塞(cerebral infarction)、骨質疏鬆症(osteoporosis)、類風溼性關節炎(Rheumatoid arthritis)、白內障(cataract)等的老化(加齡)相關疾病，或斑、皺紋和暗沉等的皮膚疾病。較佳為指對起因於伴隨著加齡的慢性炎症或伴隨著加齡的有害物質的蓄積及沉著的疾病具有緩和、改善、抑制、預防或治療的作用。而且，也指起因於外部因素(紫外線、空氣的乾燥等)或加齡的皮膚或毛髮的老化預防或改善作用。用語[抗老化劑]是指包含用於這種抗老化的藥劑。

(VI)、劑的形態本實施形態的口服攝取用IL-1β血中濃度上升抑制劑、口服攝取用類澱粉蛋白-β腦內濃度上升抑制劑、口服攝取用毛髮改善劑及口服攝取用抗老化劑能以醫藥品、飲食品或配合於醫藥品、飲食品之有效成分組成物的形態使用。作為該有效成分組成物使用的情形，不僅原封不動地使用白鶴靈芝的乙醇萃取物，也能使用該白鶴靈芝的乙醇萃取物的粗精製品或精製品。

本實施形態的有效成分組成物適宜配合適當的可食性載體(食品原料)、製藥上容許的載體，調製成如後述的飲食品、醫藥品等的形態較佳。以下就包含該有效成分組成物的醫藥品及飲食品的形態具體地進行說明。

(醫藥品) 本實施形態的口服攝取用IL-1β血中濃度上升抑制劑、口服攝取用類澱粉蛋白-β腦內濃度上升抑制劑、口服攝取用毛髮改善劑及口服攝取用抗老化劑以醫藥品的情形係使用與白鶴靈芝的乙醇萃取物一起在製劑學上被容許的適當的製劑載體，被調製成一般的醫藥組成物的形態而被實用。作為該製劑載體通常可舉例說明在該領域被使用之已知的填充劑、增量劑、結合劑、保濕劑(moisturizer)、崩散劑(disintegrating agent)、表面活性劑、潤滑劑等的稀釋劑或賦形劑(excipient)。該等係依照所得到的製劑的給藥單位形態被適宜選擇使用。

作為醫藥組成物的給藥單位形態可選擇各種形態，惟較佳可舉出口服給藥用製劑。作為口服給藥製劑的代表的製劑可舉出：錠劑、丸劑、散劑、液劑、懸濁劑、乳劑、細粒劑、膠囊劑等。

在成形成錠劑的形態時，作為上述製劑載體例如可使用：乳糖、白糖、氯化鈉、葡萄糖、尿素、澱粉、碳酸鈣、高嶺土(kaolin)、結晶纖維素、矽酸、磷酸鉀等的賦形劑；水、乙醇、丙醇、單糖漿(simple syrup)、葡萄糖液、澱粉液、明膠(gelatin)溶液、羧甲基纖維素(carboxymethyl cellulose)、羥丙基纖維素(hydroxypropyl cellulose)、甲基纖維素(methylcellulose)、聚乙烯吡咯烷酮(polyvinylpyrrolidone)等的結合劑；羧甲基纖維素鈉(carboxymethylcellulose sodium)、羧甲基纖維素鈣(carboxymethylcellulose calcium)、低取代度羥丙基纖維素(hydroxypropyl cellulose with low degree of substitution)、乾燥澱粉、海藻酸鈉(sodium alginate)、洋菜粉末(agar powder)、昆布糖粉末(laminaran powder)、碳酸氫鈉(sodium bicarbonate)、碳酸鈣等的崩散劑；聚氧乙烯去水山梨醇脂肪酸酯類(polyoxyethylene sorbitan fatty acid esters)、月桂硫酸鈉(sodium lauryl sulfate)、硬脂酸單甘油酯(monoglyceride stearate)等的界面活性劑；白糖、硬酯(stearin)、可可脂(cocoa butter)、氫化油(hydrogenated oil)等的崩散抑制劑、四級銨鹼(ammonium base)、月桂硫酸鈉等的吸收促進劑；甘油(glycerin)、澱粉等的保濕劑；澱粉、乳糖、高嶺土、膨土(bentonite)、膠體狀矽酸等的吸附劑(adsorbent)；精製滑石、硬脂酸鹽(stearate)、硼酸粉末、聚乙二醇(polyethylene glycol)等的潤滑劑等。進而錠劑依照需要能以施以通常的劑皮之錠劑，例如糖衣錠、明膠外包錠、腸溶被錠、膜衣錠或雙重錠、多層錠。

在成形成丸劑的形態時，作為製劑載體例如可使用：葡萄糖、乳糖、澱粉、可可脂(cacao butter)、硬化植物油、高嶺土、滑石等的賦形劑；阿拉伯膠(gum arabic)粉末、黃蓍膠(tragacanth)粉末、明膠、乙醇等的結合劑；昆布糖、洋菜等的崩散劑等。

再者，在醫藥組成物中依照需要也能含有：著色劑、保存劑(preservative)、香料、風味劑、甜味劑(edulcorant)等或其他的醫藥品。

上述醫藥組成物的給藥方法特別無限制，係依照各種製劑形態、患者的年齡、性別和其他的條件，疾病的程度等而決定。而且，雖然其給藥量依照用法、患者的年齡、性別和其他的條件、疾病的程度等而適宜選擇，但通常成人以每一日0.1~1000mg，較佳為1~300mg，更佳為10~150mg左右較佳，該製劑可一日分成1~4次給藥給人。

(飲食品) 本實施形態的口服攝取用IL-1β血中濃度上升抑制劑、口服攝取用類澱粉蛋白-β腦內濃度上升抑制劑、口服攝取用毛髮改善劑及口服攝取用抗老化以飲食品的情形可舉例說明加入有效成分組合物之以茶的形態的食品或配合有效成分組合物之以加工食品的形態的食品。作為茶，與白鶴靈芝本身的葉、莖或根的乾燥物混合，或與其他的茶原料混合使用較佳。作為茶原料若為綠茶、烏龍茶、普洱茶、紅茶、煎茶、糙米茶、杜仲茶、柿葉茶、桑葉茶等通常可作為茶使用者，則任何茶原料都能使用。此外，白鶴靈芝的葉、莖或根的乾燥物與其他的茶原料一樣也能烘焙而使用。

作為其他的飲食品形態的例子可舉出：醃菜、味噌、發酵茶、麵包等的發酵食品；斷乳食品、奶粉、嬰幼兒食品等的嬰幼兒用食品；發泡製劑、口香糖、軟糖、布丁等的糕點類；麵類；膠囊(capsule)、顆粒、粉末、錠劑等的營養輔助食品等；發酵乳、乳酸菌飲料、發酵蔬菜飲料、發酵水果飲料、發酵豆漿飲料等。[發酵乳]是指以乳酸菌、雙叉乳酸桿菌或酵母使乳或乳製品發酵之作成糊狀或液狀者。因此，在該發酵乳包含有飲料形態同時包含有酸酪乳(yogurt)形態。而且，[乳酸菌飲料]是指以如下當作主原料並使其稀釋於水之飲料：以乳酸菌、雙叉乳酸桿菌或酵母使乳或乳製品發酵之作成糊狀或液狀者。

本說明書中的[飲食品]是指包含專門口服地使用於飲食用的形態的全部(例如也包含飲料)，即使是錠劑等的形態，只要專門使用於飲食用，就包含於本說明書中的飲食品。例如以IL-1β的血中濃度上升抑制、類澱粉蛋白-β的腦內濃度上升抑制、毛髮改善或抗老化為概念，依照需要顯示其意旨之健康食品、健康輔助食品、病人用食品、營養輔助食品或者日本國厚生勞働省所規定的保健功能食品(特定保健用食品、營養功能食品)也包含在本說明書中的飲食品。

作為較佳的實施形態，可舉出健康增進用飲食品。健康增進用飲食品是指藉由緩和等伴隨著加齡的慢性炎症等調整對象者的身體狀況，改善體質。在本說明書中，[健康增進]是指不僅意味著不生病、不虛弱，還意味著增強身體的、精神的而且社會的完全良好的狀態之[健康]狀態。

作為較佳的實施形態，也可舉出美容用飲食品。用語[美容用]是指為了抑制對象者的老化的進行等並維持或改善美的外觀的用途，此也包含改善肌膚和頭髮的美的外觀等。特別是在後述的實施例中，因口服攝取了本實施形態的有效成分之老化小鼠的毛長出來的樣子、毛的光澤艷麗及眼周圍的皮膚狀態等的老化指標被改善，故可期待透過抑制對象者的老化所得到的改善美的外觀，亦即作為美容用的飲食品的用途。而且，本實施形態的美容用飲食品更進一步也能當作口服攝取用的皮膚(肌膚)老化防止(預防)劑、皮膚(肌膚)的彈性改善劑、抗皺劑、膚質改善劑，美髮改善劑、通便改善劑、身體狀況改善劑、體質改善劑使用。

而且，該健康增進用飲食品及美容用飲食品除了上述的有效成分之外，也可以適宜依照需要含有生理活性物質、(食品)原料、(食品)添加物等。作為添加物/原料，例如可舉出：在食品等的製造、加工、保存時藉由添加、混合、浸潤和其他的方法使用者，例如賦形劑、增量劑、增稠劑(thickener)、結合劑、潤滑劑、穩定劑、著色劑、乳化劑、助溶劑、食用色素、香味料、調味料、香辛料、甜味料、保存劑、通常當作香料使用者。

作為依照本實施形態的飲食品中的有效成分組合物的含量未被特別限定，可適宜決定。從達成IL-1β血中濃度上升抑制、類澱粉蛋白-β腦內濃度上升抑制、毛髮改善或抗老化的效果的觀點，對各個飲食品的總質量，例如0.01質量%以上較佳，0.1質量%以上更佳，1質量%以上再更佳。另一方面，飲食品中的有效成分組合物的含量的上限未被特別限制，例如原封不動地攝取作為有效成分組合物的白鶴靈芝的乙醇萃取物也可以，但通常可配合飲食品的形態適宜調整。

(VII)、有效成分組合物的製造方法在本發明的其他的側面中，提供具有IL-1β的血中濃度上升抑制作用、類澱粉蛋白-β的腦內濃度上升抑制作用、毛髮改善作用及抗老化作用之有效成分組合物的製造方法。圖1是顯示該有效成分組成物的製程之流程圖。該方法包含：將白鶴靈芝粉碎之粉碎程序(S01)；由白鶴靈芝使用乙醇進行萃取之萃取程序(S02)；除去萃取所使用的溶媒(乙醇)之除去溶媒程序(S03)。

粉碎程序(S01)例如可使用通常使用的粉碎機等來實施。關於白鶴靈芝，可使用在適當的時期採集原料之白鶴靈芝的葉、莖、根、花等之後，原封不動或附加於通常通風乾燥等的乾燥程序，當作原料者。關於使用成為萃取原料的白鶴靈芝的哪一部位，或者精細地粉碎哪種程度等可依照白鶴靈芝的狀況或應製造的製品的形態等而適宜決定。此外，由於白鶴靈芝的粉碎是為了促進萃取而進行，因此替代將白鶴靈芝粉碎，將白鶴靈芝切碎也可以獲得相同的效果。而且，在不將白鶴靈芝粉碎也能獲得充分的乙醇萃取物的情形下，不實施粉碎程序也可以。

萃取程序(S02)只要使用白鶴靈芝及乙醇，就能藉由通常工業上、實驗上所使用的眾所周知的萃取方法(例如參照[FIGHT MEDICINE、第16卷、929~934頁、2009年])進行。在由白鶴靈芝進行萃取時，作為溶媒使用含水乙醇(乙醇與水的混合溶媒)較佳，使用90%(w/w)乙醇更佳。

萃取溫度通常為0~100℃，較佳為5~80℃。在以溶媒沸騰的條件進行萃取的情形下，一邊使溶媒回流，一邊進行萃取較佳。萃取時間為1小時~10天左右，溶媒量為每一乾燥原料每一次通常1~30倍重量，較佳為5~10倍重量。萃取操作既可以為攪拌，也可以僅為浸漬。萃取操作依照需要重複複數次也可以。而且，組合條件不同的萃取操作也可以。再者，由以上述的操作得到的粗萃取液藉由過濾或離心分離進行除去不溶性殘渣(insoluble residue)的操作較佳。

在除去溶媒程序(S03)中，藉由真空乾燥、冷凍乾燥、噴霧乾燥、轉筒乾燥(drum drying)等除去溶媒(乙醇)，能以固形乾燥物(乾固物)回收白鶴靈芝的乙醇萃取物。如此得到的白鶴靈芝的乙醇萃取物可當作本發明的有效成分組合物利用。最終在作為醫藥品或飲食品時，在無需於該階段進行除去溶媒的情形下(例如作為醫藥品或飲食品的材料包含乙醇較佳的情形)，省略除去溶媒程序也可以。

接著，舉出實施例，更詳細地說明本發明，但是本發明絲毫不被該等實施例限制。此外，在以下的實施例中表示各種成分的添加量的數值的單位%是意味著質量%。

[實施例] (實施例1) 白鶴靈芝的乙醇萃取物的製造首先，作為原料係準備白鶴靈芝(Rhinacanthus nasutus(L.)Kurz)的根的乾燥物2kg，以通用的粉碎機粉碎。接著，將白鶴靈芝浸漬於10L的90%(w/w)乙醇，藉由使溶媒在80℃下回流1小時之回流萃取得到萃取液。萃取液與萃取殘渣藉由過濾器(filter)過濾分離，得到濾液。過濾係使用ADVANTEC TOYO股份有限公司製的定性濾紙(qualitative filter paper)No.2。對相同原料合計進行了3次該萃取。藉由減壓自3次份的濾液除去溶媒，得到白鶴靈芝的乙醇萃取物的固形乾燥物77.8g。為了使在實驗的處理容易，將9倍量(700.2 g)的糊精(dextrin)連同適量的90%(w/w)乙醇添加到白鶴靈芝的乙醇萃取物並充分混合後，藉由再度的減壓除去溶媒，得到實驗用有效成分組合物(白鶴靈芝的乙醇萃取物10%與糊精90%的混合物）。糊精係使用松谷化學工業股份有限公司製的Paindex#2。

(實施例2) 透過老化動物模式進行的IL-1β的血中濃度上升抑制作用、類澱粉蛋白-β的腦內濃度上升抑制作用、毛髮改善作用及抗老化作用的評價藉由AKR/J系統的選擇性近親交配，製作老化促進小鼠(SAM)。該小鼠顯示老年性類澱粉變性(senile amyloidosis)、老年性骨質疏鬆症、白內障、免疫反應(immune response)的降低、學習/記憶障礙等的過早老化(premature aging)現象。老化促進小鼠prone-8 (SAMP8：Senescence-accelerated mouse prone-8)因腦的萎縮早期就開始，伴隨嗜睡/記憶障礙和情緒障礙，故為特別廣泛用於失智症(dementia)研究的模式(T.Takeda , et al., A new murine model of accelerated senescence. Mech Ageing Dev. 17(1981) 183-194)。SAMP8 的壽命為對照菌株(reference strain)之SAM/resistant 1(SAMR1)的大約一半。已知老化促進小鼠SAMP8藉由給予高脂肪飲食(high fat diet)而更進一步加速老化，一邊發病成第 II 型糖尿病，一邊成為阿茲海默型失智症(Alzheimer dementia)的病理模式(Mehta et al.,Experimental Induction of Type 2 Diabetes in Aging-Accelerated Mice Triggered Alzheimer-Like Pathology and Memory Deficits.Journal of Alzheimer’s Disease 39:145-162, 2014)。

3-1、小鼠雄性SAMP8 / TaHsd(老化促進小鼠)是從Envigo RMS B. V.(荷蘭)獲得。根據供應商的住房政策，使SAMP8小鼠在6週齡時獨居。到達時，小鼠為4~7週齡。6~7週齡的 SAMP8小鼠在出貨前成獨居，被分配為批次1。4~5週齡的 SAMP8小鼠在5~6週齡(檢疫後)成獨居，被分配為批次2 。所有的小鼠都在365×207×140mm的籠子(無蓋)單獨收容，在溫度23±20°C，從上午 7點30分開始12小時的明暗循環下飼養。批次2 的小鼠比批次1的小鼠晚兩週開始實驗，並配合年齡。為了馴化，從測試開始前17天給予所有的小鼠control diet(LFD，D12450Ji，Research Diets)。SAMP8 的一部分的小鼠在測試開始時的10~11週齡時變更為高脂肪飲食(HFD，D12492i，Research Diets)。HFD與LFD係每週餵食3次。動物的健康狀態係每天監控。水與飼料係自由攝取。飼料的每日的消耗量係每週測定。水的消耗量係每2~3週測定24小時的飲水量。體重係在測試期間中每週測定兩次。算出小鼠的體重的變化率。所有的動物實驗及程序均得到台灣工業技術研究院的設施內實驗動物照護及使用委員會Institutional Animal Care and Use Committee(ITRI-IACUC-2019-069V1)的批准。

3-2、投予方法將10~11週齡的雄性SAMP8小鼠分成3 組(各組n = 9，由批次1與批次2的兩方構成，在批次2中以4~5匹/組)。為如下的3組：(1)、LFD(低脂飲食(low fat diet))組，(2)、載體(高脂肪飲食)組(vehicle group)，(3)、RN30(高脂肪飲食)組。在載體(高脂肪飲食)組與RN30(高脂肪飲食)組(以300mg/kg/天投予在實施例1調製的實驗用有效成分組合物，亦即以300mg/kg/天投予白鶴靈芝的乙醇萃取物的組)從試驗開始第0天起，使其攝取高脂肪飲食，在LFD組使其攝取低脂飲食。而且，在LFD(低脂飲食)組與載體(高脂肪飲食)組投予糊精1500mg/kg/天，在RN30(高脂肪飲食)組投予實驗用有效成分組合物300mg/kg/天(白鶴靈芝的乙醇萃取物300mg/kg/天)，同時投予糊精1200 mg/kg/天。投予(給藥)方法係每天使用探頭(sonde)進行了122天(從測試開始第0~121天)口服投予5mL/kg/天。第122天到第132天之間，在不進行檢體的投予下繼續測試，在第133天處死小鼠。

統計分析係藉由分析軟體EZR(R version 4.0.3，R commander 2.7-1)進行，圖2為重複測定的變異數分析(analysis of variance)(Repeated measures ANOVA)，圖3~6係使用一元配置的ANOVA進行分析，進行了Dunnett 的事後分析(post hoc analysis)。**p＜0.01，***p＜0.001。

3-3、組織的回收處死小鼠時，保存了小鼠的血清與腦組織。使用誘導箱與遮罩(mask)並藉由吸入2.5%異氟醚(isoflurane)對小鼠進行深度麻醉，藉由腳趾捏反射確認了麻醉狀態。開胸，以注射器(25G針頭)從右心室採集0.35mL的全血作為血清。心腔內灌流係使用蠕動泵(peristaltic pump)，從剛切開右心房之後的左心室注入15~20mL(10mL/min)的冰冷的人工腦脊隨液(ACSF)。ACSF 由124mM NaCl、2.5mM KCl、1.2mM NaH ₂PO ₄、24mM NaHCO ₃、5mM HEPES、12.5mM葡萄糖、2mM MgSO ₄.7H ₂O、2mM CaCl ₂.2H ₂O構成。ACSF的pH在室溫下使用碳合氧(carbogen)(95%O ₂/5% CO ₂)供給氧後，調整為7.4。ACSF在4°C或冰上保存，在使用前以碳合氧進行再充氧(reoxygenation)20分鐘。心腔內灌流後，迅速回收腦，分離成兩個半球。左半球在液態氮(liquid nitrogen)中急速冷凍，以-80°C保存。在室溫下花費2 小時使全血樣品凝固後，以1000×g離心分離 10 分鐘。回收血清，以-80°C保存。

3-4、血清中的發炎因子(inflammatory factor)間白素1β(interleukin 1β)(IL-1β)的測定已知在老年人中IL-1等的發炎性細胞介素(inflammatory cytokine)的產生升高(磯部等，老年醫學的展望-老化與免疫-日本老年醫學會雜誌，48: 205-210，2011及Licastro, et al., Innate immunity and inflammation in ageing: a key for understanding age-related diseases. Immunity & Ageing2：8、2005)。為了調查SAMP8小鼠的IL-1β的水平是否因白鶴靈芝的乙醇萃取物的投予而變化，進行了ELISA。匯集各組的血清樣品，將使用Abcam公司的High Sensitivity IL-1βELISA Kit(abl97742)檢測IL-1β的結果顯示於圖2。如圖2所示，IL-1β水平係與LFD(低脂飲食)組比較，在載體(高脂肪飲食)組顯著地上升(Dunnett，p＜0.001)，但在RN30(高脂肪飲食)組中，與載體(高脂肪飲食)組比較，IL-1β的上升顯著地被抑制(Dunnett，p＜0.001)。

3-5、腦內類澱粉蛋白-β的測定以添加了蛋白酶抑制劑(protease inhibitor)雞尾酒(K266-100，BioVision)之800μL的T-PER ^TMTissue Protein Extraction Reagent(78510, Thermo Fisher Scientific)將冷凍(-80°C)的左半球的腦勻漿化(homogenize)。然後，以10000×g將勻漿(homogenate)離心分離5分鐘。回收上清，以-80°C保存。半球中的類澱粉蛋白-β _1-42的總濃度係使用ELISA套件(Mouse amyloid beta peptide 1-42 ELISA Kit，CSB-E10787m，CUSABIO)，依照製造商的指示進行測定。

已知老化促進模式小鼠SAMP8成為以類澱粉蛋白-β的高表現導致的氧化壓力(oxidative stress)增加為病因的阿茲海默型失智症的模型(Morley et al., The senescence accelerated mouse (SAMP8) as a model for oxidative stress. and Alzheimer's disease. Biochimica et Biophysica Acta 1822：650-656, 2012)。將以SAMP8小鼠的腦評價對RN30(高脂肪飲食)組的類澱粉蛋白-β的效果的結果顯示於圖3。如圖3所示，腦勻漿上清中的類澱粉蛋白-β的水平係與LFD組比較，在載體(高脂肪飲食)組顯著地(Dunnett，p＜0.01)上升，但在RN30(高脂肪飲食)組中，與載體(高脂肪飲食)組比較，類澱粉蛋白-β的上升顯著地被抑制(Dunnett，p＜0.01)。

3-6、毛的光澤感在小鼠22週齡時，進行了關於毛的光澤感的觀察。以目視進行該觀察，以0~4的4階段的分數(分數越低越佳)進行了評價。將各投予組中的22週齡的毛的光澤感(Glossiness of fur)的分數顯示於圖4。如圖4所示，與LFD(低脂飲食)組比較，載體(高脂肪飲食)組顯示顯著高的分數(Dunnett，P＜0.001)。另一方面，RN30(高脂肪飲食)組與載體(低脂飲食)組比較，顯著地抑制了該上升(Dunnett，P ＜0.001)。

3-7、老化指標的測定為了評價SAMP8小鼠的老化的程度，使用老化度評價分數，該老化度評價分數係以0~4合計表示包含上述的毛的光澤感之行為和外表的變化的11項目的分數(參照表1)。圖5是顯示投予本發明的有效成分組成物等之老化促進小鼠的11項目的老化度評價分數的平均值(總老化指標)的經時變化。

[表1]

各投予組的平均評分從9週齡到25週齡逐漸上升。到15週齡為止沒有顯著差異，但在22週齡以後明顯有差異(圖5)(Repeated measures ANOVA；RN30 vs. 載體：P＜0.01，LFD vs. 載體：P＜0.001)。將22週齡的各組的老化度評價分數平均值的合計顯示於圖6。如圖6所示，與LFD(低脂飲食)組比較，載體(高脂肪飲食)組顯示出顯著高的分數(Dunnett，P＜0.001)。另一方面，RN30(高脂肪飲食)組與載體(低脂飲食)組比較，顯著地抑制了該上升(Dunnett，P ＜0.001)。分數的變化主要是毛的外觀的指標之光澤感與密集度的類別(category)為中心(參照表2)。

[表2]

(處方例1 錠劑) 根據習用方法混合以下的成分以製造錠劑。此外，有效成分組合物係使用在實施例1得到的白鶴靈芝的乙醇萃取物的固形乾燥物。組成有效成分組合物(實施例1) 150mg 纖維素 80mg 澱粉 20mg 蔗醣脂肪酸酯 2mg 將上述成分混合，打錠，得到錠劑。

(處方例2 膠囊劑) 根據習用方法混合以下的成分以得到軟膠囊(soft capsule)。此外，有效成分組合物係使用在實施例1得到的白鶴靈芝的乙醇萃取物的固形乾燥物。組成有效成分組合物(實施例1) 100 mg 蜂蠟 10mg 葡萄籽油(grape seed oil) 110mg 將上述成分混合，填充到混合明膠(gelatin)及甘油的膠囊基劑中，得到軟膠囊。

(處方例3 美容用飲用水）根據習用方法混合以下的成分，全量以100g調製了美容用飲用水。此外，有效成分組合物係使用在實施例1得到的白鶴靈芝的乙醇萃取物的固形乾燥物。組成有效成分組合物(實施例1) 500mg 輔酶(coenzyme)Q10 500mg 維生素B2 5mg 維生素B6 5mg 菸鹼醯胺(nicotinamide) 10mg 維生素E 100mg L-抗壞血酸(L-ascorbic acid) 100mg 黑糖葡萄糖液糖 10g 檸檬酸 1g 香料 100mg 色素 100mg 水 97.5g

包含白鶴靈芝的乙醇萃取物的組合物的適用在使用高脂肪飲食投予老化促進模式小鼠的評價中，可確認顯示IL-1β的血中濃度上升抑制作用、類澱粉蛋白-β的腦內濃度上升抑制作用、毛髮改善作用及抗老化作用。因此，本發明的口服攝取用IL-1β血中濃度上升抑制劑、口服攝取用類澱粉蛋白-β腦內濃度上升抑制劑、口服攝取用毛髮改善劑及口服攝取用抗老化劑具有可當作醫藥品、飲食品，特別是健康增進用飲食品利用的可能性。

圖1是顯示本發明的有效成分組成物的製程之流程圖。圖2是顯示投予本發明的有效成分組成物等之老化促進小鼠的試驗開始第133天中的血清的IL-1β的濃度之圖表。圖3是顯示投予本發明的有效成分組成物等之老化促進小鼠的試驗開始第133天中的腦勻漿(brain homogenate)上清的類澱粉蛋白β的濃度之圖表。圖4是顯示投予本發明的有效成分組成物等之老化促進小鼠的22週齡中的毛的光澤分數之圖表。圖5是顯示投予本發明的有效成分組成物等之老化促進小鼠的11項目的老化度評價分數的平均值的經時變化之圖表。圖6是顯示投予本發明的有效成分組成物等之老化促進小鼠的22週齡中的11項目的老化度評價分數的平均值之圖表。

Claims

一種口服攝取用IL-1β血中濃度上升抑制劑，含有以白鶴靈芝的乙醇萃取物作為有效成分，藉由口服攝取抑制IL-1β的血中濃度的上升。
如請求項1之口服攝取用IL-1β血中濃度上升抑制劑，其中該乙醇萃取物為藉由自該白鶴靈芝使用含水乙醇進行萃取而得到的萃取物。
如請求項1或請求項2之口服攝取用IL-1β血中濃度上升抑制劑，其中為醫藥品、飲食品、飼料或配合於醫藥品、飲食品、飼料之有效成分組成物的形態。
如請求項3之口服攝取用IL-1β血中濃度上升抑制劑，其中該飲食品為健康增進用飲食品。
如請求項1或請求項2之口服攝取用IL-1β血中濃度上升抑制劑，其中透過藉由口服攝取抑制IL-1β的血中濃度的上升，緩和、改善、抑制、預防或治療慢性阻塞性肺病、自體發炎性疾病、類風溼性關節炎、變形性關節炎、痛風性關節炎及動脈硬化之中的至少一個。
一種口服攝取用類澱粉蛋白-β腦內濃度上升抑制劑，含有以白鶴靈芝的乙醇萃取物作為有效成分，藉由口服攝取抑制類澱粉蛋白-β的腦內濃度的上升。
如請求項6之口服攝取用類澱粉蛋白-β腦內濃度上升抑制劑，其中該乙醇萃取物為藉由自該白鶴靈芝使用含水乙醇進行萃取而得到的萃取物。
如請求項6或請求項7之口服攝取用類澱粉蛋白-β腦內濃度上升抑制劑，其中為醫藥品、飲食品、飼料或配合於醫藥品、飲食品、飼料之有效成分組成物的形態。
如請求項8之口服攝取用類澱粉蛋白-β腦內濃度上升抑制劑，其中該飲食品為健康增進用飲食品。
如請求項6或請求項7之口服攝取用類澱粉蛋白-β腦內濃度上升抑制劑，其中透過藉由口服攝取抑制類澱粉蛋白-β的腦內濃度的上升，緩和、改善、抑制、預防或治療類澱粉腦血管病變。
一種口服攝取用毛髮改善劑，含有以白鶴靈芝的乙醇萃取物作為有效成分，藉由口服攝取抑制毛髮的光澤的降低。
如請求項11之口服攝取用毛髮改善劑，其中該乙醇萃取物為藉由自該白鶴靈芝使用含水乙醇進行萃取而得到的萃取物。
如請求項11或請求項12之口服攝取用毛髮改善劑，其中為醫藥品、飲食品、飼料或配合於醫藥品、飲食品、飼料之有效成分組成物的形態。
如請求項13之口服攝取用毛髮改善劑，其中該飲食品為美容用飲食品或健康增進用飲食品。
一種口服攝取用抗老化劑，含有以白鶴靈芝的乙醇萃取物作為有效成分。
如請求項15之口服攝取用抗老化劑，其中該乙醇萃取物為藉由自該白鶴靈芝使用含水乙醇進行萃取而得到的萃取物。
如請求項15或請求項16之口服攝取用抗老化劑，其中為醫藥品、飲食品、飼料或配合於醫藥品、飲食品、飼料之有效成分組成物的形態。
如請求項17之口服攝取用抗老化劑，其中該飲食品為美容用飲食品或健康增進用飲食品。