TW202306988A - Ｉｌ—２１多肽及靶向構築體 - Google Patents

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Abstract

本發明提供包含IL-21多肽、相對於其他免疫細胞類型選擇性活化目標免疫細胞(例如CD8+ T細胞)之靶向細胞介素構築體的方法及組合物。本發明之細胞介素可進一步包含改變其電荷分佈以改善其在血液內半衰期的突變。

Description

IL-21多肽及靶向構築體
介白素-21 (IL-21)為調控先天性免疫細胞及適應性免疫細胞兩者之活性的T細胞衍生之多效性細胞介素。IL-21可加強T細胞存活率及效應功能。介白素-21為作為用於癌症治療之有前景的免疫治療劑出現之I型細胞介素及共同細胞介素受體γ鏈(γc)家族成員。在一些情況下，由經活化CD4+ T細胞及自然殺手T (NKT)細胞產生之IL-21經由包含離散IL-21受體(IL-21R)次單元以及γc之異二聚受體複合物傳導信號。在一些情況下，IL-21R複合物之活化引起JAK/STAT信號傳導路徑之活化。IL-21R於包括T淋巴球及B淋巴球、自然殺手(NK)細胞及骨髓細胞之造血細胞中廣泛表現。IL-21為用於NK細胞及經活化T細胞兩者之強效促分裂原及存活因子。IL-21可支援CD4+ T輔助17 (Th17)細胞以及濾泡性輔助T細胞(Tfh)分化且可拮抗調控T細胞(Treg)分化。另外，IL-21可加強CD8+ T細胞存活率，從而產生經較弱活化但更加持久的T細胞表現型以引起增強之腫瘤及病毒控制。細胞介素免疫療法之挑戰在於在一些情況下，儘管活化免疫細胞以增強免疫反應，但相同細胞介素亦可活化如藉由IL-2及IFNγ所例示之相對調控路徑。此等相對調控路徑可活化調控T細胞反應及抑制路徑。因為其在抗腫瘤反應及抗病毒反應中起關鍵作用，故除了對導致自體免疫疾病及發炎性疾病發展之發炎反應發揮重要作用之外，IL-21亦已為若干療法之吸引性目標。
仍需要利用IL-21之治療模態，包括合併將IL-21導引至特異性細胞類型之IL-21部分的模態。
在本發明之一個實施例中，本文提供IL-21多肽或其功能片段或變異體，其包含與SEQ ID NO: 1具有至少80%序列一致性之多肽序列，其中IL-21多肽之等電點相較於具有SEQ ID NO: 1之序列之野生型IL-21蛋白之等電點低至少約0.6個單位至約5個單位。在一些實施例中，SEQ ID NO: 1之等電點為約9.42。在一些實施例中，IL-21多肽之等電點為約7.12至約8.72。在一些實施例中，當投與個體時，該多肽提供相較於野生型IL-21蛋白改善之暴露，如相對於野生型IL-21之曲線下面積(AUC)在等效濃度下該多肽之曲線下面積(AUC)大至少約1.5倍所量測。在一些實施例中，IL-21多肽包含至少一個胺基酸取代，使IL-21多肽之等電點相對於不具有該胺基酸取代之人類IL-21多肽降低約0.6個單位至約5個單位。在一些實施例中，IL-21多肽包含至少四個胺基酸取代，使IL-21多肽之等電點相對於不具有該等胺基酸取代之人類IL-21多肽降低約0.6個單位至約5個單位。在一些實施例中，IL-21多肽包含多至10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個降低等電點之胺基酸取代。
在一些實施例中，本發明提供IL-21多肽或其功能片段或變異體，其中相對於人類IL-21多肽之包含約2至20個帶正電胺基酸殘基之區域，IL-21多肽包含該約2至20個帶正電胺基酸殘基之至少一個胺基酸取代。在一些實施例中，人類IL-21多肽之該區域不包括結合人類IL-21受體之胺基酸殘基。在一些實施例中，人類IL-21多肽之該區域含有包含SEQ ID NO: 1之人類IL-21多肽之胺基酸殘基S80至T92。在一些實施例中，本發明提供IL-21多肽或其功能片段或變異體，其中人類IL-21多肽在人類IL-21多肽之三維結構中在人類IL-21多肽之表面上包含至少一個帶正電胺基酸殘基，該至少一個帶正電胺基酸殘基不直接與人類IL-21受體相互作用或結合人類IL-21受體，且其中IL-21多肽包含該至少一個帶正電胺基酸殘基之至少一個胺基酸取代。在一些實施例中，本發明提供不包含胺基酸取代在包含SEQ ID NO: 1之人類IL-21多肽之G84的IL-21多肽。
在一些實施例中，IL-21多肽包含在選自由SEQ ID NO: 1之K56、T81、N82、A83、G84、R85、R86、Q87、K88、H89、R90、L91及T92組成之群之一或多個位置之突變。在一些實施例中，IL-21多肽包含在選自由SEQ ID NO: 1之S80、T81、N82、A83、G84、R85、R86、Q87、K88、H89、R90、L91及T92組成之群之一或多個位置之突變(例如胺基酸取代)。在一些實施例中，IL-21多肽包含4、5、6、7、8、9、10、11或12個胺基酸取代在選自SEQ ID NO: 1之S80、T81、N82、A83、R85、R86、Q87、K88、H89、R90、L91或T92之位置。在一些實施例中，IL-21多肽包含4、5、6、7、8、9、10、11或12個胺基酸取代選自S80G、T81G、N82G、N82E、A82G、A83E、A83S、R85G、R85E、R85S、R86G、R86E、Q87G、Q87E、Q87S、K88G、H89G、H89S、R90G、R90S、R90E、R90A、L91G、L91S、T92G、T92S。在一些實施例中，IL-21多肽包含(a) R85G、R86G、K88G及R90E或(b) S80G、T81G、N82E、A83G、R85G、R86G、Q87G、K88G、H89G、R90E、L91G及T92G。在一些實施例中，本發明提供不包含胺基酸取代在包含SEQ ID NO: 1之人類IL-21多肽之G84的IL-21多肽。
在一些實施例中，本發明提供IL-21多肽或其功能片段或變異體，其包含以下胺基酸序列：QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPX 1X 2X 3X 4GX 5X 6X 7X 8X 9X 10X 11X 12CPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS (SEQ ID NO: 380)，其中X 1= G、S；X 2= G、T；X 3= G、E、N；X 4= G、S、E、A；X 5= G、E、S、R；X 6= G、E、R；X 7= S、G、E、Q；X 8= G、K；X 9= G、S、H；X 10= A、E、S、G、R；X 11= S、G、L；及X 12= G、S、T，限制條件為X 5、X 6、X 8、X 9及X 10中之至少一者不為在SEQ ID NO: 1中所述之一致位置之胺基酸殘基，視情況，其中： (i) X 5= G，X 6= G，X 8= G，X 10= A； (ii) X 5= G，X 6= G，X 8= G，X 10= E； (iii) X 1= G，X 2= G，X 3= G，X 4= S，X 5= E，X 6= G，X 7= S，X 8= G，X 9= G，X 10= S； (iv) X 1= G，X 2= G，X 3= G，X 4= S，X 5= G，X 6= G，X 7= S，X 8= G，X 9= G，X 10= E； (v) X 5= G，X 6= G，X 7= S，X 8= G，X 9= G，X 10= E； (vi) X 5= G，X 6= G，X 7= S，X 8= G，X 9= G，X 10= S； (vii) X 5= G，X 6= G，X 7= G，X 8= G，X 9= G，X 10= E； (viii) X 5= G，X 6= G，X 7= G，X 8= G，X 9= G，X 10= G； (ix) X 5= G，X 6= G，X 7= E，X 8= G，X 9= G，X 10= G； (x) X 1= G，X 2= G，X 3= G，X 4= S，X 5= G，X 6= G，X 7= S，X 8= G，X 9= G，X 10= G，X 11= S，X 12= G； (xi) X 1= G，X 2= G，X 3= G，X 4= G，X 5= G，X 6= G，X 7= G，X 8= G，X 9= G，X 10= G，X 11= G，X 12= G； (xii) X 1= G，X 2= G，X 3= G，X 4= S，X 5= G，X 6= G，X 7= E，X 8= G，X 9= G，X 10= G，X 11= S，X 12= G； (xiii) X 1= G，X 2= G，X 3= G，X 4= E，X 5= G，X 6= G，X 7= E，X 8= G，X 9= G，X 10= G，X 11= S，X 12= G； (xiv) X 3= G，X 4= G，X 5= S，X 6= G，X 7= G，X 8= G，X 9= S，X 10= G，X 11= G，X 12= S； (xv) X 3= G，X 4= G，X 5= E，X 6= G，X 7= G，X 8= G，X 9= S，X 10= G，X 11= G，X 12= S； (xvi) X 1= G，X 2= G，X 3= G，X 4= G，X 5= E，X 6= G，X 7= G，X 8= G，X 9= G，X 10= G，X 11= G，X 12= G； (xvii) X 1= G，X 2= G，X 3= G，X 4= S，X 5= G，X 6= G，X 7= S，X 8= G，X 9= G，X 10= E，X 11= G，X 12= G； (xviii) X 1= G，X 2= G，X 3= G，X 4= G，X 5= G，X 6= G，X 7= G，X 8= G，X 9= G，X 10= E，X 11= G，X 12= G； (xix) X 3= G，X 4= G，X 5= S，X 6= G，X 7= G，X 8= G，X 9= S，X 10= E，X 11= G，X 12= S； (xx) X 3= G，X 4= G，X 5= G，X 6= G，X 7= G，X 8= G，X 9= G，X 10= E，X 11= G，X 12= G； (xxi) X 5= G，X 6= G，X 7= G，X 8= G，X 9= G，X 10= E，X 11= G； (xxii) X 3= G，X 4= G，X 5= G，X 6= G，X 7= G，X 8= G，X 9= G，X 10= E，X 11= G； (xxiii) X 3= G，X 4= G，X 5= G，X 6= E，X 7= G，X 8= G，X 9= G，X 10= E，X 11= G； (xxiv) X 3= G，X 4= G，X 5= E，X 6= G，X 7= G，X 8= G，X 9= G，X 10= E，X 11= G； (xxv) X 1= G，X 2= G，X 3= G，X 4= E，X 5= G，X 6= G，X 7= G，X 8= G，X 9= G，X 10= E，X 11= G，X 12= G；或 (xxvi) X 1= G，X 2= G，X 3= E，X 4= G，X 5= G，X 6= G，X 7= G，X 8= G，X 9= G，X 10= E，X 11= G，X 12= G。在一些實施例中，本發明提供不包含胺基酸取代在包含SEQ ID NO: 1之人類IL-21多肽之G84的IL-21多肽。
在一些實施例中，本發明提供IL-21多肽或其功能片段或變異體，其包含與選自SEQ ID NO: 2、4-15及23-40之胺基酸序列至少90%、約95%、約96%、約97%、約98%或約99%一致之胺基酸序列。在一些實施例中，IL-21多肽包含選自SEQ ID NO: 2、4-15及23-40之胺基酸序列。在一些實施例中，IL-21多肽包含SEQ ID NO: 40之胺基酸序列。
在一些實施例中，本發明提供IL-21多肽或其功能片段或變異體，其包含至少一個胺基酸取代，使與人類IL-21受體之結合相較於人類IL-21多肽之結合減少。在一些實施例中，該至少一個胺基酸取代係在SEQ ID NO: 1之位置R5、I8、R9、R11、L13、I14、I16、V17、D18、K72、K73、L74、K75、R76、K77或K117之一或多個胺基酸殘基。在一些實施例中，該至少一個胺基酸取代係選自：R5F、R5A、R5E、R5S、R5T、R5N、R5Q、R5V、R5I、R5L、R5Y、I8E、R9A、R9D、R9E、R9H、R9S、R9T、R9N、R9G、R9V、R9I、R9L、R9Y、R11D、R11E、L13F、L13R、I14D、I16A、I16S、I16R、V17I、V17A、D18A、K72A、K72E、K73A、K73E、K75A、K75E、L74I、L74F、L74M、L74V、R76E、R76F、R76A、R76N、R76D、R76S、R76T、R76Q、R76V、R76I、R76L、R76Y、R76M、K77A、K77E及K117A。在一些實施例中，該至少一個胺基酸取代為R76E或R76Q。在一些實施例中，IL-21多肽包含在選自由SEQ ID NO: 1之R5、I8、R9、R11、Q12、I14、D15、D18、Q19、Y23、R65、S70、K72、K73、K75、R76、K77、S80、Q116及K117組成之群之位置之突變。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 9、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 11、SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO: 13、SEQ ID NO: 14或SEQ ID NO: 15之序列至少約85%、約90%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%或約100%一致之胺基酸序列。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 20或SEQ ID NO: 21之序列至少約85%、約90%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%或約100%一致之胺基酸序列。在一些實施例中，IL-21多肽包含與選自SEQ ID NO: 2、4-15及23-40之序列至少約85%、約90%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%或約100%一致之胺基酸序列。在一些實施例中，IL-21多肽包含與選自SEQ ID NO: 16-21、41-98及374-379之序列至少約85%、約90%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%或約100%一致之胺基酸序列。在一些實施例中，IL-21多肽包含與選自SEQ ID NO: 16-21、41-93及374-379之序列至少約85%、約90%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%或約100%一致之胺基酸序列。在一些實施例中，IL-21多肽包含與選自SEQ ID NO: 94-98之序列至少約85%、約90%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%或約100%一致之胺基酸序列。
在本發明之一個實施例中，本文提供包含本發明之IL-21多肽或其功能片段或變異體及抗體或其抗原結合片段之靶向細胞介素構築體。在一些實施例中，該抗體或其抗原結合片段特異性結合至CD8+ T細胞。在一些實施例中，該抗體或其抗原結合片段特異性結合至CD8α、CD8αα或CD8αβ中之至少一者。在一些實施例中，該抗體或其抗原結合片段特異性結合至CD8β。
在本發明之一個實施例中，本文提供靶向細胞介素構築體，其包含：a)包含胺基酸序列與SEQ ID NO: 1至少80%一致之IL-21多肽或其功能片段或變異體；及b)特異性結合至CD8α、CD8αα或CD8αβ中之至少一者之抗體或其抗原結合片段。
在本發明之一個實施例中，本文提供靶向細胞介素構築體，其包含：a)包含胺基酸序列與SEQ ID NO: 1至少80%一致之IL-21多肽或其功能片段或變異體；及b)特異性結合至CD8β之抗體或其抗原結合片段。
在一些實施例中，IL-21多肽包含在SEQ ID NO: 1之一或多個胺基酸位置之突變。在一些實施例中，IL-21多肽包含在選自由SEQ ID NO: 1之K56、T81、N82、A83、G84、R85、R86、Q87、K88、H89、R90、L91及T92組成之群之一或多個位置之突變。在一些實施例中，IL-21多肽包含在選自由SEQ ID NO: 1之R5、I8、R9、R11、Q12、I14、D15、D18、Q19、Y23、R65、S70、K72、K73、K75、R76、K77、S80、Q116及K117組成之群之位置之突變。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 9、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 11、SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO: 13、SEQ ID NO: 14或SEQ ID NO: 15之序列至少約85%、約90%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%或約100%一致之胺基酸序列。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 20或SEQ ID NO: 21之序列至少約85%、約90%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%或約100%一致之胺基酸序列。在一些實施例中，構築體以相較於NK細胞或CD4+ T細胞之活化至少約10倍或更大之效力活化CD8+ T細胞。在一些實施例中，構築體以相較於NK細胞或CD4+ T細胞之活化大至少約10倍至約100,000倍之效力活化CD8+ T細胞。在一些實施例中，該抗體或其抗原結合片段包含：i)第一多肽，其自N端至C端排列包含：可變輕鏈(VL)胺基酸序列及輕鏈恆定區胺基酸序列(CL1)；ii)第二多肽，其自N端至C端排列包含：可變重鏈(VH)胺基酸序列、重鏈CH1恆定區胺基酸序列、鉸鏈區胺基酸序列、重鏈CH2恆定區胺基酸序列及重鏈CH3恆定區胺基酸序列；iii)第三多肽，其自N端至C端排列包含：鉸鏈區胺基酸序列、重鏈CH2恆定區胺基酸序列及重鏈CH3恆定區胺基酸序列，其中第二多肽及第三多肽之各CH2域及CH3域形成Fc域。在一些實施例中，第三多肽自N端至C端排列包含：可變重鏈(VH)胺基酸序列、重鏈CH1恆定區胺基酸序列、鉸鏈區胺基酸序列、重鏈CH2恆定區胺基酸序列、重鏈CH3恆定區胺基酸序列，其中該抗體或其抗原結合片段進一步包含：iv)第四多肽，其自N端至C端排列包含：可變輕鏈(VL)胺基酸序列及輕鏈恆定胺基酸序列(CL1)。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體及該抗體或其抗原結合片段彼此可操作地連接。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體與該抗體或其抗原結合片段之N端或C端連接。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體與第二多肽或第三多肽之C端結合。在一些實施例中，靶向細胞介素構築體包含IL-21多肽之至少一個分子。在一些實施例中，Fc域為人類IgG Fc域。在一些實施例中，Fc域為IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc域。在一些實施例中，Fc域包含促進異二聚化之一或多個修飾。在一些實施例中，第二多肽在CH2域或CH3域中包含杵修飾，且第三多肽在CH2域或CH3域中包含臼修飾；或其中第三多肽在CH2域或CH3域中包含杵修飾，且第二多肽在CH2或CH3中包含臼修飾。在一些實施例中，第二多肽及第三多肽中之至少一者包含以下突變：根據EU索引編號之L234A、L235A及G237A。
在本發明之一個實施例中，本文提供靶向細胞介素構築體，其包含：a)包含胺基酸序列與SEQ ID NO: 1至少80%一致之IL-21多肽或其功能片段或變異體；及b)包含第一抗原結合臂及第二抗原結合臂之抗體或其抗原結合片段，其中第一抗原結合臂及第二抗原結合臂結合至兩種不同抗原，其中第一抗原結合臂及第二抗原結合臂中之至少一者特異性結合至CD8α、CD8αα、CD8αβ。
在本發明之一個實施例中，本文提供靶向細胞介素構築體，其包含：a)包含胺基酸序列與SEQ ID NO: 1至少80%一致之IL-21多肽或其功能片段或變異體；及b)包含第一抗原結合臂及第二抗原結合臂之抗體或其抗原結合片段，其中第一抗原結合臂及第二抗原結合臂結合至兩種不同抗原，其中第一抗原結合臂及第二抗原結合臂中之至少一者特異性結合至CD8β。在一些實施例中，靶向細胞介素構築體以相較於NK細胞或CD4+ T細胞之活化至少約10倍或更大之效力活化CD8+ T細胞。在一些實施例中，靶向細胞介素構築體以相較於NK細胞或CD4+ T細胞之活化大至少約10倍至約100,000倍之效力活化CD8+ T細胞。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或其變異體包含在選自由SEQ ID NO: 1之K56、T81、N82、A83、R85、G84、R86、Q87、K88、H89、R90、L91及T92組成之群之位置之突變。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或其變異體包含在選自由SEQ ID NO: 1之R5、I8、R9、R11、Q12、I14、D15、D18、Q19、Y23、R65、S70、K72、K73、K75、R76、K77、S80、Q116及K117組成之群之位置之突變。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 9、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 11、SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO: 13、SEQ ID NO: 14或SEQ ID NO: 15之序列至少約85%、約90%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%或約100%一致之胺基酸序列。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 20或SEQ ID NO: 21之序列至少約85%、約90%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%或約100%一致之胺基酸序列。
在一些實施例中，本發明提供融合蛋白，其包含： a)包含以下之IL-21多肽：(i)一或多個胺基酸取代提供相對於包含SEQ ID NO: 1之人類IL-21多肽降低之等電點，其中該一或多個胺基酸取代係在SEQ ID NO: 1之S80至T92內，其中至少一個胺基酸取代係在殘基R85、R86、K88、H89、R90或其組合；及(ii)至少一個胺基酸取代提供相對於該人類IL-21多肽之結合減少之與人類IL-21受體之結合；及 b)特異性結合至CD8αβ或CD8 β之抗體或其抗原結合片段。在一些實施例中，IL-21多肽不包含G84取代。在一些實施例中，提供減少結合的至少一個胺基酸取代為R76E或R76Q。
在一些實施例中，本發明提供融合蛋白，其包含： a)包含以下之IL-21多肽：(i)四個或更多個胺基酸取代提供相對於包含SEQ ID NO: 1之人類IL-21多肽降低之等電點，其中該四個或更多個胺基酸取代係在SEQ ID NO: 1之S80至T92內，其中至少四個胺基酸取代係在殘基R85、R86、K88、H89、R90或其組合；及(ii)至少一個胺基酸取代提供相對於該人類IL-21多肽之結合減少之與人類IL-21受體之結合；及 b)特異性結合至CD8αβ或CD8 β之抗體或其抗原結合片段。
在一些實施例中，本發明提供融合蛋白，其包含： a)包含以下之IL-21多肽：(i)四個或更多個胺基酸取代提供相對於包含SEQ ID NO: 1之人類IL-21多肽降低之等電點，其中該四個或更多個胺基酸取代係在SEQ ID NO: 1之S80至T92內，其中至少四個胺基酸取代係在殘基R85、R86、K88、H89、R90或其組合；及(ii)至少一個胺基酸取代提供相對於該人類IL-21多肽之結合減少之與人類IL-21受體之結合，其中該至少一個胺基酸取代係在選自R5、I8、R9、R11、L13、I14、I16、V17、D18、K72、K73、L74、K75、R76、K77、K117及其組合之殘基處；及 b)特異性結合至CD8αβ或CD8 β之抗體或其抗原結合片段。
在一些實施例中，本發明提供融合蛋白，其包含： a)包含以下之IL-21多肽：(i)提供相對於包含SEQ ID NO: 1之人類IL-21多肽降低之等電點的四個或更多個胺基酸取代，其中該四個或更多個胺基酸取代係在SEQ ID NO: 1之S80至T92內，其中至少四個胺基酸取代係在殘基R85、R86、K88、H89、R90或其組合；及(ii)至少一個胺基酸取代係選自：(a) R11D；(b) R11E；(c) I14D、D18A及K117A；(d) R76E；(e) R5F；(f) R76F；(g) I8E；(h) R5A；(i) R5E；(j) R5S；(k) R5T；(l) R5N；(m) R5Q；(n) R5V；(o) R5I；(p) R5L；(q) R5Y；(r) R76A；(s) R76N；(t) R76D；(u) R76S；(v) R76T；(w) R76Q；(x) R76V；(y) R76I；(z) R76L；(aa) R76Y；(bb) K77A；(cc) K77E；(dd) K72A；(ee) K72E；(ff) K75A；(gg) K75E；(hh) K73A；(ii) K73E；(jj) R5F及K77A；(kk) R5F及K77E；(ll) R5F及K72A；(mm) R5F及K72E；(nn) R5F及K76A；(oo) R5F及K76E；(pp) K73A及K76F；(qq) K73E及K76F；(rr) R9A；(ss) R9D；(tt) R9E；(uu) R9H；(vv) R9S；(ww) R9T；(xx) R9N；(zz) R9G；(aaa) R9V；(bbb) R9I；(ccc) R9L；(ddd) R9Y；(eee) K72A及R76F；(fff) K75A及R76F；(ggg) R76F及K77A；(hhh) K75E及R76F；(iii) V17I及L74I；(jjj) I16A及L74F；(kkk) I16S、V17I及L74V；(lll) I16R、V17I及L74I；(mmm) L13F、I16A、V17A及L74M；及(nnn) L13R、I16A、V17I及L74I；及 b)特異性結合至CD8αβ或CD8 β之抗體或其抗原結合片段。
在一些實施例中，本發明提供融合蛋白，其包含： a)包含以下之IL-21多肽：(i)四個或更多個胺基酸取代提供相對於包含SEQ ID NO: 1之人類IL-21多肽降低之等電點，其中該四個或更多個胺基酸取代係在殘基S80、T81、N82、A83、R85、R86、Q87、K88、H89、R90、L91、T92或其組合；及(ii)至少一個胺基酸取代提供相對於該人類IL-21多肽之結合減少之與人類IL-21受體之結合，其中該至少一個胺基酸取代係在選自R5、I8、R9、R11、L13、I14、I16、V17、D18、K72、K73、L74、K75、R76、K77、K117及其組合之殘基處；及 b)特異性結合至CD8αβ或CD8 β之抗體或其抗原結合片段。
在一些實施例中，本發明提供融合蛋白，其包含： a)包含以下之IL-21多肽：(i)四個或更多個胺基酸取代提供相對於包含SEQ ID NO: 1之人類IL-21多肽降低之等電點，其中該四個或更多個胺基酸取代係在殘基S80、T81、N82、A83、R85、R86、Q87、K88、H89、R90、L91、T92或其組合；及(ii)至少一個胺基酸取代提供相對於該人類IL-21多肽之結合減少之與人類IL-21受體之結合，其中該至少一個胺基酸取代係在殘基R76處；及 b)特異性結合至CD8αβ或CD8 β之抗體或其抗原結合片段。
在一些實施例中，本發明提供融合蛋白，其包含： a)包含以下之IL-21多肽：(i)胺基酸序列選自SEQ ID NO: 2、4-15及23-40及(ii)至少一個胺基酸取代提供相對於人類IL-21多肽之結合減少之與人類IL-21受體之結合；及 b)特異性結合至CD8αβ或CD8 β之抗體或其抗原結合片段。
在一些實施例中，本發明提供融合蛋白，其包含： a)包含以下之IL-21多肽：(i)胺基酸序列選自SEQ ID NO: 2、4-15及23-40及(ii)至少一個胺基酸取代提供相對於人類IL-21多肽之結合減少之與人類IL-21受體之結合，其中該至少一個胺基酸取代係在選自R5、I8、R9、R11、L13、I14、I16、V17、D18、K72、K73、L74、K75、R76、K77、K117及其組合之殘基處；及 b)特異性結合至CD8αβ或CD8 β之抗體或其抗原結合片段。
在一些實施例中，本發明提供融合蛋白，其包含： a)包含以下之IL-21多肽：(i)胺基酸序列選自SEQ ID NO: 2、4-15及23-40及(ii)至少一個胺基酸取代提供相對於人類IL-21多肽之結合減少之與人類IL-21受體之結合，其中該至少一個胺基酸取代係在殘基R76處；及 b)特異性結合至CD8αβ或CD8 β之抗體或其抗原結合片段。
在一些實施例中，IL-21多肽及該抗體或其抗原結合片段經由連接子彼此連接。在一些實施例中，IL-21多肽與該抗體或其抗原結合片段之N端或C端連接。在一些實施例中，IL-21多肽與該抗體或其抗原結合片段之C端連接。
在一些實施例中，本發明提供融合蛋白，其包含： a)包含VL鏈及CL1鏈之第一多肽； b)包含VH鏈及HC恆定域之第二多肽，其中IL-21多肽可操作地連接至該HC恆定域之C端，且其中該HC恆定域包含杵修飾； c)包含VH鏈及HC恆定域之第三多肽，其中該HC恆定域包含臼修飾，且其中該第二多肽及該第三多肽之該VH鏈係相同的；及 d)包含VL鏈及CL1鏈之第四多肽，其中該第一多肽及該第四多肽之該VL鏈係相同的，且 其中該VH鏈及該VL鏈包含特異性結合至CD8αβ或CD8 β之CDRs， 其中該IL-21多肽包含(i)一或多個胺基酸取代提供相對於包含SEQ ID NO: 1之人類IL-21多肽降低之等電點，其中該一或多個胺基酸取代係在SEQ ID NO: 1之S80至T92內，其中至少一個胺基酸取代係在殘基R85、R86、K88、H89、R90或其組合；及(ii)至少一個胺基酸取代提供相對於該人類IL-21多肽之結合減少之與人類IL-21受體之結合。
在一些實施例中，本發明提供融合蛋白，其包含： a)包含VL鏈及CL1鏈之第一多肽； b)包含VH鏈及HC恆定域之第二多肽，其中該HC恆定域包含杵修飾； c)包含VH鏈及HC恆定域之第三多肽，其中IL-21多肽可操作地連接至該HC恆定域之C端，其中該HC恆定域包含臼修飾，且其中該第二多肽及該第三多肽之該VH鏈係相同的；及 d)包含VL鏈及CL1鏈之第四多肽，其中該第一多肽及該第四多肽之該VL鏈係相同的，且 其中該VH鏈及該VL鏈包含特異性結合至CD8αβ或CD8 β之CDRs， 其中該IL-21多肽包含(i)一或多個胺基酸取代提供相對於包含SEQ ID NO: 1之人類IL-21多肽降低之等電點，其中該一或多個胺基酸取代係在SEQ ID NO: 1之S80至T92內，其中至少一個胺基酸取代係在殘基R85、R86、K88、H89、R90或其組合；及(ii)至少一個胺基酸取代提供相對於該人類IL-21多肽之結合減少之與人類IL-21受體之結合。
在本發明之一個實施例中，本文提供編碼如技術方案1至8中任一項之IL-21多肽或其功能片段或變異體的聚核苷酸。
在本發明之一個實施例中，本文提供編碼靶向細胞介素構築體之聚核苷酸，該靶向細胞介素構築體包含本發明之IL-21多肽或其功能片段或變異體及抗體或其抗原結合片段，該聚核苷酸包含IL-21多肽之編碼序列及該抗體或其抗原結合片段之編碼序列。
在本發明之一個實施例中，本文提供包含本發明之聚核苷酸的載體。
在本發明之一個實施例中，本文提供包含本發明之聚核苷酸或載體的宿主細胞。
在本發明之一個實施例中，本文提供包含本發明之IL-21多肽或其功能片段或變異體及醫藥學上可接受之載劑的醫藥組合物。
在本發明之一個實施例中，本文提供包含本發明之靶向細胞介素構築體及醫藥學上可接受之載劑的醫藥組合物。
在本發明之一個實施例中，本文提供用於選擇性活化CD8+ T細胞之方法，其中該方法包含使包含CD8+ T細胞、CD4+ T細胞及NK細胞之細胞群體與本發明之靶向細胞介素構築體接觸。在一些實施例中，選擇性活化包含在細胞群體中以相較於NK細胞或CD4+ T細胞之活化至少約10倍或更大之效力活化CD8+ T細胞。在一些實施例中，選擇性活化包含在細胞群體中以相較於NK細胞或CD4+ T細胞之活化大至少約10倍至約100,000倍之效力活化CD8+ T細胞。在一些實施例中，CD8+ T細胞之選擇性活化導致細胞群體中之CD8+ T細胞之STAT3磷酸化相較於NK細胞或CD4+ T細胞之STAT3磷酸化增加。
在本發明之一個實施例中，本文提供治療個體之疾病之方法，該方法包含投與本發明之IL-21多肽或其功能片段或變異體、本文所描述之靶向細胞介素構築體或本發明之醫藥組合物。在一些實施例中，該方法進一步包含另外治療劑。在一些實施例中，該疾病包含癌症或慢性感染。在一些實施例中，該疾病包含癌症且其中該癌症為急性淋巴母細胞性白血病(ALL) (包括非T細胞ALL)、急性骨髓白血病、B細胞前淋巴球白血病、B細胞急性淋巴性白血病(「BALL」)、母細胞性漿細胞樣樹突狀細胞贅瘤、伯基特氏淋巴瘤(Burkitt's lymphoma)、慢性淋巴球白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、慢性骨髓白血病、慢性或急性白血病、瀰漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、濾泡性淋巴瘤(FL)、毛細胞白血病、霍奇金氏病(Hodgkin's Disease)、惡性淋巴增生性病況、MALT淋巴瘤、套細胞淋巴瘤、邊緣區淋巴瘤、意義不明單株伽瑪球蛋白症(MGUS)、多發性骨髓瘤、骨髓化生不良及骨髓化生不良症候群、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、漿細胞增生性病症(包括無症狀骨髓瘤(鬱積型多發性骨髓瘤或惰性骨髓瘤))、漿母細胞性淋巴瘤、漿細胞樣樹突狀細胞贅瘤、漿細胞瘤(包括漿細胞惡液質；孤立骨髓瘤；孤立漿細胞瘤；髓外漿細胞瘤；及多發性漿細胞瘤)、POEMS症候群(亦稱為克羅-富克斯症候群(Crow-Fukase syndrome)；高槻病(Takatsuki disease)；及PEP症候群)、原發性縱隔大B細胞淋巴瘤(PMBC)、小細胞或大細胞濾泡性淋巴瘤、脾邊緣區淋巴瘤(SMZL)、全身澱粉樣蛋白輕鏈澱粉樣變性病、T細胞急性淋巴性白血病(「TALL」)、T細胞淋巴瘤、轉化型濾泡性淋巴瘤或瓦爾登斯特倫巨球蛋白血症(Waldenstrom macroglobulinemia)、套細胞淋巴瘤(MCL)、轉化型濾泡性淋巴瘤(TFL)、原發性縱隔B細胞淋巴瘤(PMBCL)、多發性骨髓瘤、毛細胞淋巴瘤/白血病、肺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺(NSCL)癌、細支氣管肺泡細胞肺癌、鱗狀細胞癌、肺腺癌、鱗狀肺癌、腹膜癌、頭頸癌、骨癌、胰臟癌、皮膚癌、頭頸癌、皮膚或眼內黑色素瘤、甲狀腺癌、子宮癌、胃腸癌、卵巢癌、直腸癌、肛門區癌、胃癌(stomach cancer/gastric cancer)、結腸癌、乳癌、子宮內膜癌、子宮癌、輸卵管癌、子宮頸癌、陰道癌、外陰癌、霍奇金氏病、食道癌、小腸癌、內分泌系統癌、甲狀腺癌、副甲狀腺癌、腎上腺癌、軟組織肉瘤、尿道癌、陰莖癌、前列腺癌、膀胱癌、腎或輸尿管癌、腎細胞癌、腎盂癌、間皮瘤、膀胱癌、肝癌、肝腫瘤、肝細胞癌、子宮頸癌、唾液腺癌、膽道癌、中樞神經系統(CNS)贅瘤、脊髓軸腫瘤、腦幹神經膠質瘤、多形性神經膠質母細胞瘤、星形細胞瘤、神經鞘瘤、室管膜瘤、神經管胚細胞瘤、腦脊髓膜瘤、鱗狀細胞癌、垂體腺瘤及尤文氏肉瘤(Ewing's sarcoma)，包括以上癌症中任一者之難治性型式，或以上癌症中一或多者之組合。
在一些實施例中，該抗體或抗原結合片段包含重鏈可變(VH)域及輕鏈可變(VL)域；且其中(a)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 137之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 138之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 139之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 140之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 141之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 142之胺基酸序列之CDR-L3；(b)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 149之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 150之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 151之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 152之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 153之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 154之胺基酸序列之CDR-L3；(c)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 155之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 156之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 157之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 158之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 159之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 160之胺基酸序列之CDR-L3；(d)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 161之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 162之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 163之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 164之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 165之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 166之胺基酸序列之CDR-L3；(e)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 167之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 168之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 169之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 170之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 171之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 172之胺基酸序列之CDR-L3；(f)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 173之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 174之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 175之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 176之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 177之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 178之胺基酸序列之CDR-L3；(g)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 179之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 180之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 181之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之CDR-L3；(h)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 143之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 144之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 145之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 146之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 147之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 148之胺基酸序列之CDR-L3；(i)該VH域包含：包含X 1X 2AIS (SEQ ID NO: 185)之胺基酸序列之CDR-H1，其中X 1為S、K、G、N、R、D、T或G，且其中X 2為Y、L、H或F；包含X 1X 2X 3PX 4X 5X 6X 7X 8X 9YX 10QKFX 11G (SEQ ID NO: 186)之胺基酸序列之CDR-H2，其中X 1為G或H，X 2為I或F，X 3為I、N或M，X 4為G、N、H、S、R、I或A，X 5為A、N、H、S、T、F或Y，X 6為A、D或G，X 7為T、E、K、V、Q或A，X 8為A或T，X 9為N或K，X 10為A或N，且X 11為Q或T；及包含X 1X 2X 3GX 4X 5LFX 6X 7(SEQ ID NO: 187)之胺基酸序列之CDR-H3，其中X 1為D或A，X 2為A、G、E、R、Y、K、N、Q、L或F，X 3為A、L、P或Y，X 4為I或L，X 5為R、A、Q或S，X 6為A或D，且X 7為D、E、A或S；且其中該VL域包含：包含X 1X 2SX 3X 4IX 5GX 6LN (SEQ ID NO: 188)之胺基酸序列之CDR-L1，其中X 1為R或G，X 2為A或T，X 3為Q或E，X 4為E、N、T、S、A、K、D、G、R或Q，X 5為Y或S，且X 6為A或V；包含GX 1X 2X 3LX 4X 5(SEQ ID NO: 189)之胺基酸序列之CDR-L2，其中X 1為A或S，X 2為T、S、E、Q或D，X 3為N、R、A、E或H，X 4為Q或A，且X 5為S或D；及包含QX 1X 2X 3X 4X 5PWT (SEQ ID NO: 190)之胺基酸序列之CDR-L3，其中X 1為S、N、D、Q、A或E，X 2為T、I或S，X 3為Y、L或F，X 4為D、G、T、E、Q、A或Y，且X 5為A、T、R、S、K或Y；(j)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 199之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 200之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 201之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 152之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 153之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 202之胺基酸序列之CDR-L3；(k)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 199之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 203之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 204之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 205之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 206之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 207之胺基酸序列之CDR-L3；(l)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 199之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 203之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 204之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 152之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 153之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 202之胺基酸序列之CDR-L3；(m)該VH域包含：包含X 1YX 2MS (SEQ ID NO: 208)之胺基酸序列之CDR-H1，其中X 1為S、D、E、A或Q且X 2為A、G或T；包含DIX 1X 2X 3GX 4X 5TX 6YADSVKG (SEQ ID NO: 209)之胺基酸序列之CDR-H2，其中X 1為T、N、S、Q、E、H、R或A，X 2為Y、W、F或H，X 3為A、S、Q、E或T，X 4為G或E，X 5為S或I，且X 6為A或G；及包含X 1X 2X 3YX 4WX 5X 6AX 7DX 8(SEQ ID NO: 210)之胺基酸序列之CDR-H3，其中X 1為S或A，X 2為N、H、A、D、L、Q、Y或R，X 3為A、N、S或G，X 4為A、V、R、E或S，X 5為D或S，X 6為D、N、Q、E、S、T或L，X 7為L、F或M，且X 8為I、Y或V；且其中該VL域包含：包含RASQSVSSNLA (SEQ ID NO: 176)之胺基酸序列之CDR-L1；包含GASSRAT (SEQ ID NO: 177)之胺基酸序列之CDR-L2；及包含QQYGSSPPVT (SEQ ID NO: 178)之胺基酸序列之CDR-L3；(n)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 220之胺基酸序列之CDR-H1；包含SEQ ID NO: 221之胺基酸序列之CDR-H2；及包含SEQ ID NO: 222之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含RASQSVSSNLA (SEQ ID NO: 176)之胺基酸序列之CDR-L1；包含GASSRAT (SEQ ID NO: 177)之胺基酸序列之CDR-L2；及包含QQYGSSPPVT (SEQ ID NO: 178)之胺基酸序列之CDR-L3；(o)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 220之胺基酸序列之CDR-H1；包含SEQ ID NO: 260之胺基酸序列之CDR-H2；及包含SEQ ID NO: 222之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含RASQSVSSNLA (SEQ ID NO: 176)之胺基酸序列之CDR-L1；包含GASSRAT (SEQ ID NO: 177)之胺基酸序列之CDR-L2；及包含QQYGSSPPVT (SEQ ID NO: 178)之胺基酸序列之CDR-L3；或(p)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 252之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 253之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 254之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 255之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 256之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 257之胺基酸序列之CDR-L3。
在一些實施例中，該抗體或抗原結合片段包含重鏈可變(VH)域及輕鏈可變(VL)域；且其中(a)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 226之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 227之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 151之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 152之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 153之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 154之胺基酸序列之CDR-L3；(b)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 228之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 227之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 157之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 158之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 159之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 160之胺基酸序列之CDR-L3；(c)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 223之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 227之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 163之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 164之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 165之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 166之胺基酸序列之CDR-L3；(d)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 229之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 227之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 169之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 170之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 171之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 172之胺基酸序列之CDR-L3；(e)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 230之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 231之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 175之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 176之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 177之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 178之胺基酸序列之CDR-L3；(f)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 230之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 232之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 181之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之CDR-L3；(g)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 223之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 224之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 225之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 140之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 141之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 142之胺基酸序列之CDR-L3；(h)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 233之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 234之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 145之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 146之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 147之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 148之胺基酸序列之CDR-L3；(i)該VH域包含：包含GX1X2FX3X4X5 (SEQ ID NO: 235)之胺基酸序列之CDR-H1，其中X1為G、Y、S或A，X2為T、S、G、R、N或H，X3為S、T、R、H、Y、G或P，X4為S、K、G、N、R、D、T或G，且X5為Y、L、H或F；包含X1PX2X3X4X5 (SEQ ID NO: 236)之胺基酸序列之CDR-H2，其中X1為I、N或M，X2為G、N、H、S、R、I或A，X3為A、N、H、S、T、F或Y，X4為A、D或G，且X5為T、E、K、V、Q或A；及包含X1X2X3GX4X5LFX6X7 (SEQ ID NO: 237)之胺基酸序列之CDR-H3，其中X1為D或A，X2為A、G、E、R、Y、K、N、Q、L或F，X3為A、L、P或Y，X4為I或L，X5為R、A、Q或S，X6為A或D，且X7為D、E、A或S；且其中該VL域包含：包含X1X2SX3X4IX5GX6LN (SEQ ID NO: 188)之胺基酸序列之CDR-L1，其中X1為R或G，X2為A或T，X3為Q或E，X4為E、N、T、S、A、K、D、G、R或Q，X5為Y或S，且X6為A或V；包含GX1X2X3LX4X5 (SEQ ID NO: 189)之胺基酸序列之CDR-L2，其中X1為A或S，X2為T、S、E、Q或D，X3為N、R、A、E或H，X4為Q或A，且X5為S或D；及包含QX1X2X3X4X5PWT (SEQ ID NO: 190)之胺基酸序列之CDR-L3，其中X1為S、N、D、Q、A或E，X2為T、I或S，X3為Y、L或F，X4為D、G、T、E、Q、A或Y，且X5為A、T、R、S、K或Y；(j)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 241之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 242之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 204之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 152之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 153之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 202之胺基酸序列之CDR-L3；(k)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 241之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 243之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 204之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 205之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 206之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 207之胺基酸序列之CDR-L3；(l)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 241之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 243之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 204之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 152之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 153之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 202之胺基酸序列之CDR-L3；(m)該VH域包含：包含GFTFX1X2Y (SEQ ID NO: 244)之胺基酸序列之CDR-H1，其中X1為S、D、E、Q、S或A且X2為S、D、E、A或Q；包含X1X2X3GX4X5 (SEQ ID NO: 245)之胺基酸序列之CDR-H2，其中X1為T、N、S、Q、E、H、R或A，X2為Y、W、F或H，X3為A、S、Q、E或T，X4為G或E，且X5為S或I；及包含X1X2X3YX4WX5X6AX7DX8 (SEQ ID NO: 246)之胺基酸序列之CDR-H3，其中X1為S或A，X2為N、H、A、D、L、Q、Y或R，X3為A、N、S或G，X4為A、V、R、E或S，X5為D或S，X6為D、N、Q、E、S、T或L，X7為L、F或M，且X8為I、Y或V；且其中該VL域包含：包含RASQSVSSNLA (SEQ ID NO: 176)之胺基酸序列之CDR-L1、包含GASSRAT (SEQ ID NO: 177)之胺基酸序列之CDR-L2及包含QQYGSSPPVT (SEQ ID NO: 178)之胺基酸序列之CDR-L3；(n)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 250之胺基酸序列之CDR-H1；包含SEQ ID NO: 251之胺基酸序列之CDR-H2；及包含SEQ ID NO: 288之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含RASQSVSSNLA (SEQ ID NO: 176)之胺基酸序列之CDR-L1；包含GASSRAT (SEQ ID NO: 177)之胺基酸序列之CDR-L2；及包含QQYGSSPPVT (SEQ ID NO: 178)之胺基酸序列之CDR-L3；(o)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 250之胺基酸序列之CDR-H1；包含SEQ ID NO: 261之胺基酸序列之CDR-H2；及包含SEQ ID NO: 288之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含RASQSVSSNLA (SEQ ID NO: 176)之胺基酸序列之CDR-L1；包含GASSRAT (SEQ ID NO: 177)之胺基酸序列之CDR-L2；及包含QQYGSSPPVT (SEQ ID NO: 178)之胺基酸序列之CDR-L3；或(p)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 223之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 224之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 284之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 285之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 286之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 287之胺基酸序列之CDR-L3。
在一些實施例中，(a)該VH域包含與SEQ ID NO: 109之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列，且其中該VL域包含與SEQ ID NO: 110之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列；(b)該VH域包含與SEQ ID NO: 111之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列，且其中該VL域包含與SEQ ID NO: 112之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列；(c)該VH域包含與SEQ ID NO: 113之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列，且其中該VL域包含與SEQ ID NO: 114之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列；(d)該VH域包含與SEQ ID NO: 115之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列，且其中該VL域包含與SEQ ID NO: 116之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列；(e)該VH域包含與SEQ ID NO: 117之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列，且其中該VL域包含與SEQ ID NO: 118之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列；(f)該VH域包含與SEQ ID NO: 119之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列，且其中該VL域包含與SEQ ID NO: 120之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列；(g)該VH域包含與SEQ ID NO: 123之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列；且其中該VL域包含與SEQ ID NO: 124之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列；(h)該VH域包含與SEQ ID NO: 129之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列，且其中該VL域包含與SEQ ID NO: 130之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列；(i)該VH域包含與SEQ ID NO: 131之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列；且其中該VL域包含與SEQ ID NO: 132之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列；(j)該VH域包含與SEQ ID NO: 125之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列；且其中該VL域包含與SEQ ID NO: 126之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列；(k)該VH域包含與SEQ ID NO: 127之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列，且其中該VL域包含與SEQ ID NO: 128之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列；(l)該VH域包含與SEQ ID NO: 133之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列；且其中該VL域包含與SEQ ID NO: 134之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列；(m)該VH域包含與SEQ ID NO: 135之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列；且其中該VL域包含與SEQ ID NO: 136之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列；(n)該VH域包含與SEQ ID NO: 107之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列；且其中該VL域包含與SEQ ID NO: 108之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列；(o)該VH域包含與SEQ ID NO: 121之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列；且其中該VL域包含與SEQ ID NO: 122之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列；或(p)該VH域包含與SEQ ID NO: 258之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列，且其中該VL域包含與SEQ ID NO: 259之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列。
在一些實施例中，(a)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 199之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 203之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 204之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 205之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 206之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 207之胺基酸序列之CDR-L3； (b)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 241之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 243之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 204之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 205之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 206之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 207之胺基酸序列之CDR-L3； (c)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 220之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 221之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 222之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 176之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 177之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 178之胺基酸序列之CDR-L3；或 (d)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 250之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 251之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 288之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 176之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 177之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 178之胺基酸序列之CDR-L3。
在一些實施例中，(a)該VH域包含與SEQ ID NO: 129之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列，且其中該VL域包含與SEQ ID NO: 130之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列；或(b)該VH域包含與SEQ ID NO: 127之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列，且其中該VL域包含與SEQ ID NO: 128之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列。
在一些實施例中，本發明提供融合蛋白，其包含： a)包含以下之IL-21多肽：(i)四個或更多個胺基酸取代提供相對於包含SEQ ID NO: 1之人類IL-21多肽降低之等電點，其中該四個或更多個胺基酸取代係在SEQ ID NO: 1之S80至T92內，其中至少四個胺基酸取代係在殘基R85、R86、K88、H89、R90或其組合；及(ii)至少一個胺基酸取代提供相對於該人類IL-21多肽之結合減少之與人類IL-21受體之結合；及 b)特異性結合至CD8αβ或CD8 β之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含： (i) VH域，其包含：包含SEQ ID NO: 199之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 203之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 204之胺基酸序列之CDR-H3；及VL域，其包含：包含SEQ ID NO: 205之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 206之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 207之胺基酸序列之CDR-L3；  (ii) VH域，其包含：包含SEQ ID NO: 241之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 243之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 204之胺基酸序列之CDR-H3；及VL域，其包含：包含SEQ ID NO: 205之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 206之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 207之胺基酸序列之CDR-L3； (iii) VH域，其包含：包含SEQ ID NO: 220之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 221之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 222之胺基酸序列之CDR-H3；及VL域，其包含：包含SEQ ID NO: 176之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 177之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 178之胺基酸序列之CDR-L3；或 (iv) VH域，其包含：包含SEQ ID NO: 250之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 251之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 288之胺基酸序列之CDR-H3；及VL域，其包含：包含SEQ ID NO: 176之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 177之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 178之胺基酸序列之CDR-L3。
在一些實施例中，本發明提供融合蛋白，其包含： a)包含以下之IL-21多肽：(i)四個或更多個胺基酸取代提供相對於包含SEQ ID NO: 1之人類IL-21多肽降低之等電點，其中該四個或更多個胺基酸取代係在SEQ ID NO: 1之S80至T92內，其中至少四個胺基酸取代係在殘基R85、R86、K88、H89、R90或其組合；及(ii)至少一個胺基酸取代提供相對於該人類IL-21多肽之結合減少之與人類IL-21受體之結合，其中該至少一個胺基酸取代係在選自R5、I8、R9、R11、L13、I14、I16、V17、D18、K72、K73、L74、K75、R76、K77、K117及其組合之殘基處；及 b)特異性結合至CD8αβ或CD8 β之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含： (i) VH域，其包含：包含SEQ ID NO: 199之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 203之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 204之胺基酸序列之CDR-H3；及VL域，其包含：包含SEQ ID NO: 205之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 206之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 207之胺基酸序列之CDR-L3；  (ii) VH域，其包含：包含SEQ ID NO: 241之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 243之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 204之胺基酸序列之CDR-H3；及VL域，其包含：包含SEQ ID NO: 205之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 206之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 207之胺基酸序列之CDR-L3； (iii) VH域，其包含：包含SEQ ID NO: 220之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 221之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 222之胺基酸序列之CDR-H3；及VL域，其包含：包含SEQ ID NO: 176之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 177之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 178之胺基酸序列之CDR-L3；或 (iv) VH域，其包含：包含SEQ ID NO: 250之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 251之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 288之胺基酸序列之CDR-H3；及VL域，其包含：包含SEQ ID NO: 176之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 177之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 178之胺基酸序列之CDR-L3。
在一些實施例中，本發明提供融合蛋白，其包含： a)包含以下之IL-21多肽：(i)提供相對於包含SEQ ID NO: 1之人類IL-21多肽降低之等電點的四個或更多個胺基酸取代，其中該四個或更多個胺基酸取代係在SEQ ID NO: 1之S80至T92內，其中至少四個胺基酸取代係在殘基R85、R86、K88、H89、R90或其組合；及(ii)至少一個胺基酸取代係選自：(a) R11D；(b) R11E；(c) I14D、D18A及K117A；(d) R76E；(e) R5F；(f) R76F；(g) I8E；(h) R5A；(i) R5E；(j) R5S；(k) R5T；(l) R5N；(m) R5Q；(n) R5V；(o) R5I；(p) R5L；(q) R5Y；(r) R76A；(s) R76N；(t) R76D；(u) R76S；(v) R76T；(w) R76Q；(x) R76V；(y) R76I；(z) R76L；(aa) R76Y；(bb) K77A；(cc) K77E；(dd) K72A；(ee) K72E；(ff) K75A；(gg) K75E；(hh) K73A；(ii) K73E；(jj) R5F及K77A；(kk) R5F及K77E；(ll) R5F及K72A；(mm) R5F及K72E；(nn) R5F及K76A；(oo) R5F及K76E；(pp) K73A及K76F；(qq) K73E及K76F；(rr) R9A；(ss) R9D；(tt) R9E；(uu) R9H；(vv) R9S；(ww) R9T；(xx) R9N；(zz) R9G；(aaa) R9V；(bbb) R9I；(ccc) R9L；(ddd) R9Y；(eee) K72A及R76F；(fff) K75A及R76F；(ggg) R76F及K77A；(hhh) K75E及R76F；(iii) V17I及L74I；(jjj) I16A及L74F；(kkk) I16S、V17I及L74V；(lll) I16R、V17I及L74I；(mmm) L13F、I16A、V17A及L74M；及(nnn) L13R、I16A、V17I及L74I；及 b)特異性結合至CD8αβ或CD8 β之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含： (i) VH域，其包含：包含SEQ ID NO: 199之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 203之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 204之胺基酸序列之CDR-H3；及VL域，其包含：包含SEQ ID NO: 205之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 206之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 207之胺基酸序列之CDR-L3；  (ii) VH域，其包含：包含SEQ ID NO: 241之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 243之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 204之胺基酸序列之CDR-H3；及VL域，其包含：包含SEQ ID NO: 205之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 206之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 207之胺基酸序列之CDR-L3； (iii) VH域，其包含：包含SEQ ID NO: 220之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 221之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 222之胺基酸序列之CDR-H3；及VL域，其包含：包含SEQ ID NO: 176之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 177之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 178之胺基酸序列之CDR-L3；或 (iv) VH域，其包含：包含SEQ ID NO: 250之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 251之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 288之胺基酸序列之CDR-H3；及VL域，其包含：包含SEQ ID NO: 176之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 177之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 178之胺基酸序列之CDR-L3。
在一些實施例中，本發明提供融合蛋白，其包含： a)包含以下之IL-21多肽：(i)四個或更多個胺基酸取代提供相對於包含SEQ ID NO: 1之人類IL-21多肽降低之等電點，其中該四個或更多個胺基酸取代係在殘基S80、T81、N82、A83、R85、R86、Q87、K88、H89、R90、L91、T92或其組合；及(ii)至少一個胺基酸取代提供相對於該人類IL-21多肽之結合減少之與人類IL-21受體之結合，其中該至少一個胺基酸取代係在選自R5、I8、R9、R11、L13、I14、I16、V17、D18、K72、K73、L74、K75、R76、K77、K117及其組合之殘基處；及 b)特異性結合至CD8αβ或CD8 β之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含： (i) VH域，其包含：包含SEQ ID NO: 199之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 203之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 204之胺基酸序列之CDR-H3；及VL域，其包含：包含SEQ ID NO: 205之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 206之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 207之胺基酸序列之CDR-L3；  (ii) VH域，其包含：包含SEQ ID NO: 241之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 243之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 204之胺基酸序列之CDR-H3；及VL域，其包含：包含SEQ ID NO: 205之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 206之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 207之胺基酸序列之CDR-L3； (iii) VH域，其包含：包含SEQ ID NO: 220之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 221之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 222之胺基酸序列之CDR-H3；及VL域，其包含：包含SEQ ID NO: 176之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 177之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 178之胺基酸序列之CDR-L3；或 (iv) VH域，其包含：包含SEQ ID NO: 250之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 251之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 288之胺基酸序列之CDR-H3；及VL域，其包含：包含SEQ ID NO: 176之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 177之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 178之胺基酸序列之CDR-L3。
在一些實施例中，本發明提供融合蛋白，其包含： a)包含以下之IL-21多肽：(i)四個或更多個胺基酸取代提供相對於包含SEQ ID NO: 1之人類IL-21多肽降低之等電點，其中該四個或更多個胺基酸取代係在殘基S80、T81、N82、A83、R85、R86、Q87、K88、H89、R90、L91、T92或其組合；及(ii)至少一個胺基酸取代提供相對於該人類IL-21多肽之結合減少之與人類IL-21受體之結合，其中該至少一個胺基酸取代係在殘基R76處；及 b)特異性結合至CD8αβ或CD8 β之抗體或其抗原結合片段。
在一些實施例中，本發明提供融合蛋白，其包含： a)包含以下之IL-21多肽：(i)胺基酸序列選自SEQ ID NO: 2、4-15及23-40及(ii)至少一個胺基酸取代提供相對於人類IL-21多肽之結合減少之與人類IL-21受體之結合；及 b)特異性結合至CD8αβ或CD8 β之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含： (i) VH域，其包含：包含SEQ ID NO: 199之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 203之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 204之胺基酸序列之CDR-H3；及VL域，其包含：包含SEQ ID NO: 205之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 206之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 207之胺基酸序列之CDR-L3；  (ii) VH域，其包含：包含SEQ ID NO: 241之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 243之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 204之胺基酸序列之CDR-H3；及VL域，其包含：包含SEQ ID NO: 205之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 206之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 207之胺基酸序列之CDR-L3； (iii) VH域，其包含：包含SEQ ID NO: 220之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 221之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 222之胺基酸序列之CDR-H3；及VL域，其包含：包含SEQ ID NO: 176之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 177之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 178之胺基酸序列之CDR-L3；或 (iv) VH域，其包含：包含SEQ ID NO: 250之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 251之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 288之胺基酸序列之CDR-H3；及VL域，其包含：包含SEQ ID NO: 176之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 177之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 178之胺基酸序列之CDR-L3。
在一些實施例中，本發明提供融合蛋白，其包含： a)包含以下之IL-21多肽：(i)胺基酸序列選自SEQ ID NO: 2、4-15及23-40及(ii)至少一個胺基酸取代提供相對於人類IL-21多肽之結合減少之與人類IL-21受體之結合，其中該至少一個胺基酸取代係在選自R5、I8、R9、R11、L13、I14、I16、V17、D18、K72、K73、L74、K75、R76、K77、K117及其組合之殘基處；及 b)特異性結合至CD8αβ或CD8 β之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含： (i) VH域，其包含：包含SEQ ID NO: 199之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 203之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 204之胺基酸序列之CDR-H3；及VL域，其包含：包含SEQ ID NO: 205之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 206之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 207之胺基酸序列之CDR-L3；  (ii) VH域，其包含：包含SEQ ID NO: 241之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 243之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 204之胺基酸序列之CDR-H3；及VL域，其包含：包含SEQ ID NO: 205之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 206之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 207之胺基酸序列之CDR-L3； (iii) VH域，其包含：包含SEQ ID NO: 220之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 221之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 222之胺基酸序列之CDR-H3；及VL域，其包含：包含SEQ ID NO: 176之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 177之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 178之胺基酸序列之CDR-L3；或 (iv) VH域，其包含：包含SEQ ID NO: 250之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 251之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 288之胺基酸序列之CDR-H3；及VL域，其包含：包含SEQ ID NO: 176之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 177之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 178之胺基酸序列之CDR-L3。
在一些實施例中，本發明提供融合蛋白，其包含： a)包含以下之IL-21多肽：(i)胺基酸序列選自SEQ ID NO: 2、4-15及23-40及(ii)至少一個胺基酸取代提供相對於人類IL-21多肽之結合減少之與人類IL-21受體之結合，其中該至少一個胺基酸取代係在殘基R76處；及 b)特異性結合至CD8αβ或CD8 β之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含： (i) VH域，其包含：包含SEQ ID NO: 199之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 203之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 204之胺基酸序列之CDR-H3；及VL域，其包含：包含SEQ ID NO: 205之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 206之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 207之胺基酸序列之CDR-L3；  (ii) VH域，其包含：包含SEQ ID NO: 241之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 243之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 204之胺基酸序列之CDR-H3；及VL域，其包含：包含SEQ ID NO: 205之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 206之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 207之胺基酸序列之CDR-L3； (iii) VH域，其包含：包含SEQ ID NO: 220之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 221之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 222之胺基酸序列之CDR-H3；及VL域，其包含：包含SEQ ID NO: 176之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 177之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 178之胺基酸序列之CDR-L3；或 (iv) VH域，其包含：包含SEQ ID NO: 250之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 251之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 288之胺基酸序列之CDR-H3；及VL域，其包含：包含SEQ ID NO: 176之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 177之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 178之胺基酸序列之CDR-L3。
在一些實施例中，本發明提供融合蛋白，其包含： a)包含VL鏈及CL1鏈之第一多肽，其中該VL鏈包含：包含SEQ ID NO: 205之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 206之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 207之胺基酸序列之CDR-L3； b)包含VH鏈及HC恆定域之第二多肽，其中IL-21多肽可操作地連接至該HC恆定域之C端，其中該HC恆定域包含杵修飾，且其中該VH鏈包含：包含SEQ ID NO: 199之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 203之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 204之胺基酸序列之CDR-H3； c)包含VH鏈及HC恆定域之第三多肽，其中該HC恆定域包含臼修飾，且其中該第二多肽及該第三多肽之該VH鏈係相同的；及 d)包含VL鏈及CL1鏈之第四多肽，其中該第一多肽及該第四多肽之該VL鏈係相同的，且 其中該IL-21多肽包含(i)一或多個胺基酸取代提供相對於包含SEQ ID NO: 1之人類IL-21多肽降低之等電點，其中該一或多個胺基酸取代係在SEQ ID NO: 1之S80至T92內，其中至少一個胺基酸取代係在殘基R85、R86、K88、H89、R90或其組合；及(ii)至少一個胺基酸取代提供相對於該人類IL-21多肽之結合減少之與人類IL-21受體之結合。
在一些實施例中，本發明提供融合蛋白，其包含： a)包含VL鏈及CL1鏈之第一多肽，其中該VL鏈包含：包含SEQ ID NO: 205之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 206之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 207之胺基酸序列之CDR-L3； b)包含VH鏈及HC恆定域之第二多肽，其中該HC恆定域包含杵修飾，且其中該VH鏈包含：包含SEQ ID NO: 199之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 203之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 204之胺基酸序列之CDR-H3； c)包含VH鏈及HC恆定域之第三多肽，其中IL-21多肽可操作地連接至該HC恆定域之C端，其中該HC恆定域包含臼修飾，且其中該第二多肽及該第三多肽之該VH鏈係相同的；及 d)包含VL鏈及CL1鏈之第四多肽，其中該第一多肽及該第四多肽之該VL鏈係相同的，且 其中該IL-21多肽包含(i)一或多個胺基酸取代提供相對於包含SEQ ID NO: 1之人類IL-21多肽降低之等電點，其中該一或多個胺基酸取代係在SEQ ID NO: 1之S80至T92內，其中至少一個胺基酸取代係在殘基R85、R86、K88、H89、R90或其組合；及(ii)至少一個胺基酸取代提供相對於該人類IL-21多肽之結合減少之與人類IL-21受體之結合。
在一些實施例中，本發明提供融合蛋白，其包含： a)包含VL鏈及CL1鏈之第一多肽，其中該VL鏈包含：包含SEQ ID NO: 176之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 177之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 178之胺基酸序列之CDR-L3； b)包含VH鏈及HC恆定域之第二多肽，其中IL-21多肽可操作地連接至該HC恆定域之C端，其中該HC恆定域包含杵修飾，且其中該VH鏈包含：包含SEQ ID NO: 220之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 221之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 222之胺基酸序列之CDR-H3； c)包含VH鏈及HC恆定域之第三多肽，其中該HC恆定域包含臼修飾，且其中該第二多肽及該第三多肽之該VH鏈係相同的；及 d)包含VL鏈及CL1鏈之第四多肽，其中該第一多肽及該第四多肽之該VL鏈係相同的，且 其中該IL-21多肽包含(i)一或多個胺基酸取代提供相對於包含SEQ ID NO: 1之人類IL-21多肽降低之等電點，其中該一或多個胺基酸取代係在SEQ ID NO: 1之S80至T92內，其中至少一個胺基酸取代係在殘基R85、R86、K88、H89、R90或其組合；及(ii)至少一個胺基酸取代提供相對於該人類IL-21多肽之結合減少之與人類IL-21受體之結合。
在一些實施例中，本發明提供融合蛋白，其包含： a)包含VL鏈及CL1鏈之第一多肽，其中該VL鏈包含：包含SEQ ID NO: 176之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 177之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 178之胺基酸序列之CDR-L3； b)包含VH鏈及HC恆定域之第二多肽，其中該HC恆定域包含杵修飾，且其中該VH鏈包含：包含SEQ ID NO: 220之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 221之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 222之胺基酸序列之CDR-H3； c)包含VH鏈及HC恆定域之第三多肽，其中IL-21多肽可操作地連接至該HC恆定域之C端，其中該HC恆定域包含臼修飾，且其中該第二多肽及該第三多肽之該VH鏈係相同的；及 d)包含VL鏈及CL1鏈之第四多肽，其中該第一多肽及該第四多肽之該VL鏈係相同的，且 其中該IL-21多肽包含(i)一或多個胺基酸取代提供相對於包含SEQ ID NO: 1之人類IL-21多肽降低之等電點，其中該一或多個胺基酸取代係在SEQ ID NO: 1之S80至T92內，其中至少一個胺基酸取代係在殘基R85、R86、K88、H89、R90或其組合；及(ii)至少一個胺基酸取代提供相對於該人類IL-21多肽之結合減少之與人類IL-21受體之結合。
在一些實施例中，本發明提供融合蛋白，其包含： a)包含VL鏈及CL1鏈之第一多肽，其中該VL鏈包含：包含SEQ ID NO: 205之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 206之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 207之胺基酸序列之CDR-L3； b)包含VH鏈及HC恆定域之第二多肽，其中IL-21多肽可操作地連接至該HC恆定域之C端，其中該HC恆定域包含杵修飾，且其中該VH鏈包含：包含SEQ ID NO: 199之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 203之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 204之胺基酸序列之CDR-H3； c)包含VH鏈及HC恆定域之第三多肽，其中該HC恆定域包含臼修飾，且其中該第二多肽及該第三多肽之該VH鏈係相同的；及 d)包含VL鏈及CL1鏈之第四多肽，其中該第一多肽及該第四多肽之該VL鏈係相同的，且 其中該IL-21多肽包含：胺基酸序列選自SEQ ID NO: 2、4-15及23-40及至少一個胺基酸取代提供相對於人類IL-21多肽之結合減少之與人類IL-21受體之結合。
在一些實施例中，本發明提供融合蛋白，其包含： a)包含VL鏈及CL1鏈之第一多肽，其中該VL鏈包含：包含SEQ ID NO: 205之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 206之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 207之胺基酸序列之CDR-L3； b)包含VH鏈及HC恆定域之第二多肽，其中該HC恆定域包含杵修飾，且其中該VH鏈包含：包含SEQ ID NO: 199之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 203之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 204之胺基酸序列之CDR-H3； c)包含VH鏈及HC恆定域之第三多肽，其中IL-21多肽可操作地連接至該HC恆定域之C端，其中該HC恆定域包含臼修飾，且其中該第二多肽及該第三多肽之該VH鏈係相同的；及 d)包含VL鏈及CL1鏈之第四多肽，其中該第一多肽及該第四多肽之該VL鏈係相同的，且 其中該IL-21多肽包含：胺基酸序列選自SEQ ID NO: 2、4-15及23-40及至少一個胺基酸取代提供相對於人類IL-21多肽之結合減少之與人類IL-21受體之結合。
在一些實施例中，本發明提供融合蛋白，其包含： a)包含VL鏈及CL1鏈之第一多肽，其中該VL鏈包含：包含SEQ ID NO: 176之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 177之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 178之胺基酸序列之CDR-L3； b)包含VH鏈及HC恆定域之第二多肽，其中IL-21多肽可操作地連接至該HC恆定域之C端，其中該HC恆定域包含杵修飾，且其中該VH鏈包含：包含SEQ ID NO: 220之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 221之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 222之胺基酸序列之CDR-H3； c)包含VH鏈及HC恆定域之第三多肽，其中該HC恆定域包含臼修飾，且其中該第二多肽及該第三多肽之該VH鏈係相同的；及 d)包含VL鏈及CL1鏈之第四多肽，其中該第一多肽及該第四多肽之該VL鏈係相同的，且 其中該IL-21多肽包含：胺基酸序列選自SEQ ID NO: 2、4-15及23-40及至少一個胺基酸取代提供相對於人類IL-21多肽之結合減少之與人類IL-21受體之結合。
在一些實施例中，本發明提供融合蛋白，其包含： a)包含VL鏈及CL1鏈之第一多肽，其中該VL鏈包含：包含SEQ ID NO: 176之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 177之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 178之胺基酸序列之CDR-L3； b)包含VH鏈及HC恆定域之第二多肽，其中該HC恆定域包含杵修飾，且其中該VH鏈包含：包含SEQ ID NO: 220之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 221之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 222之胺基酸序列之CDR-H3； c)包含VH鏈及HC恆定域之第三多肽，其中IL-21多肽可操作地連接至該HC恆定域之C端，其中該HC恆定域包含臼修飾，且其中該第二多肽及該第三多肽之該VH鏈係相同的；及 d)包含VL鏈及CL1鏈之第四多肽，其中該第一多肽及該第四多肽之該VL鏈係相同的，且 其中該IL-21多肽包含：胺基酸序列選自SEQ ID NO: 2、4-15及23-40及至少一個胺基酸取代提供相對於人類IL-21多肽之結合減少之與人類IL-21受體之結合。
在一些實施例中，本發明提供融合蛋白，其包含： a)包含VL鏈及CL1鏈之第一多肽，其中該VL鏈包含：包含SEQ ID NO: 205之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 206之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 207之胺基酸序列之CDR-L3； b)包含VH鏈及HC恆定域之第二多肽，其中IL-21多肽可操作地連接至該HC恆定域之C端，其中該HC恆定域包含杵修飾，且其中該VH鏈包含：包含SEQ ID NO: 199之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 203之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 204之胺基酸序列之CDR-H3； c)包含VH鏈及HC恆定域之第三多肽，其中該HC恆定域包含臼修飾，且其中該第二多肽及該第三多肽之該VH鏈係相同的；及 d)包含VL鏈及CL1鏈之第四多肽，其中該第一多肽及該第四多肽之該VL鏈係相同的，且 其中該IL-21多肽包含選自SEQ ID NO: 16-21、41-98及374-379之胺基酸序列。
在一些實施例中，本發明提供融合蛋白，其包含： a)包含VL鏈及CL1鏈之第一多肽，其中該VL鏈包含：包含SEQ ID NO: 205之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 206之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 207之胺基酸序列之CDR-L3； b)包含VH鏈及HC恆定域之第二多肽，其中該HC恆定域包含杵修飾，且其中該VH鏈包含：包含SEQ ID NO: 199之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 203之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 204之胺基酸序列之CDR-H3； c)包含VH鏈及HC恆定域之第三多肽，其中IL-21多肽可操作地連接至該HC恆定域之C端，其中該HC恆定域包含臼修飾，且其中該第二多肽及該第三多肽之該VH鏈係相同的；及 d)包含VL鏈及CL1鏈之第四多肽，其中該第一多肽及該第四多肽之該VL鏈係相同的，且 其中該IL-21多肽包含選自SEQ ID NO: 16-21、41-98及374-379之胺基酸序列。
在一些實施例中，本發明提供融合蛋白，其包含： a)包含VL鏈及CL1鏈之第一多肽，其中該VL鏈包含：包含SEQ ID NO: 176之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 177之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 178之胺基酸序列之CDR-L3； b)包含VH鏈及HC恆定域之第二多肽，其中IL-21多肽可操作地連接至該HC恆定域之C端，其中該HC恆定域包含杵修飾，且其中該VH鏈包含：包含SEQ ID NO: 220之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 221之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 222之胺基酸序列之CDR-H3； c)包含VH鏈及HC恆定域之第三多肽，其中該HC恆定域包含臼修飾，且其中該第二多肽及該第三多肽之該VH鏈係相同的；及 d)包含VL鏈及CL1鏈之第四多肽，其中該第一多肽及該第四多肽之該VL鏈係相同的，且 其中該IL-21多肽包含選自SEQ ID NO: 16-21、41-98及374-379之胺基酸序列。
在一些實施例中，本發明提供融合蛋白，其包含： a)包含VL鏈及CL1鏈之第一多肽，其中該VL鏈包含：包含SEQ ID NO: 176之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 177之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 178之胺基酸序列之CDR-L3； b)包含VH鏈及HC恆定域之第二多肽，其中該HC恆定域包含杵修飾，且其中該VH鏈包含：包含SEQ ID NO: 220之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 221之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 222之胺基酸序列之CDR-H3； c)包含VH鏈及HC恆定域之第三多肽，其中IL-21多肽可操作地連接至該HC恆定域之C端，其中該HC恆定域包含臼修飾，且其中該第二多肽及該第三多肽之該VH鏈係相同的；及 d)包含VL鏈及CL1鏈之第四多肽，其中該第一多肽及該第四多肽之該VL鏈係相同的，且 其中該IL-21多肽包含選自SEQ ID NO: 16-21、41-98及374-379之胺基酸序列。
在一些實施例中，本發明提供融合蛋白，其包含： a)包含VL鏈及CL1鏈之第一多肽，其中該VL鏈包含：包含SEQ ID NO: 205之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 206之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 207之胺基酸序列之CDR-L3； b)包含VH鏈及HC恆定域之第二多肽，其中IL-21多肽可操作地連接至該HC恆定域之C端，其中該HC恆定域包含杵修飾，且其中該VH鏈包含：包含SEQ ID NO: 241之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 243之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 204之胺基酸序列之CDR-H3； c)包含VH鏈及HC恆定域之第三多肽，其中該HC恆定域包含臼修飾，且其中該第二多肽及該第三多肽之該VH鏈係相同的；及 d)包含VL鏈及CL1鏈之第四多肽，其中該第一多肽及該第四多肽之該VL鏈係相同的，且 其中該IL-21多肽包含(i)一或多個胺基酸取代提供相對於包含SEQ ID NO: 1之人類IL-21多肽降低之等電點，其中該一或多個胺基酸取代係在SEQ ID NO: 1之S80至T92內，其中至少一個胺基酸取代係在殘基R85、R86、K88、H89、R90或其組合；及(ii)至少一個胺基酸取代提供相對於該人類IL-21多肽之結合減少之與人類IL-21受體之結合。
在一些實施例中，本發明提供融合蛋白，其包含： a)包含VL鏈及CL1鏈之第一多肽，其中該VL鏈包含：包含SEQ ID NO: 205之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 206之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 207之胺基酸序列之CDR-L3； b)包含VH鏈及HC恆定域之第二多肽，其中該HC恆定域包含杵修飾，且其中該VH鏈包含：包含SEQ ID NO: 241之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 243之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 204之胺基酸序列之CDR-H3； c)包含VH鏈及HC恆定域之第三多肽，其中IL-21多肽可操作地連接至該HC恆定域之C端，其中該HC恆定域包含臼修飾，且其中該第二多肽及該第三多肽之該VH鏈係相同的；及 d)包含VL鏈及CL1鏈之第四多肽，其中該第一多肽及該第四多肽之該VL鏈係相同的，且 其中該IL-21多肽包含(i)一或多個胺基酸取代提供相對於包含SEQ ID NO: 1之人類IL-21多肽降低之等電點，其中該一或多個胺基酸取代係在SEQ ID NO: 1之S80至T92內，其中至少一個胺基酸取代係在殘基R85、R86、K88、H89、R90或其組合；及(ii)至少一個胺基酸取代提供相對於該人類IL-21多肽之結合減少之與人類IL-21受體之結合。
在一些實施例中，本發明提供融合蛋白，其包含： a)包含VL鏈及CL1鏈之第一多肽，其中該VL鏈包含：包含SEQ ID NO: 176之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 177之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 178之胺基酸序列之CDR-L3； b)包含VH鏈及HC恆定域之第二多肽，其中IL-21多肽可操作地連接至該HC恆定域之C端，其中該HC恆定域包含杵修飾，且其中該VH鏈包含：包含SEQ ID NO: 250之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 251之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 288之胺基酸序列之CDR-H3； c)包含VH鏈及HC恆定域之第三多肽，其中該HC恆定域包含臼修飾，且其中該第二多肽及該第三多肽之該VH鏈係相同的；及 d)包含VL鏈及CL1鏈之第四多肽，其中該第一多肽及該第四多肽之該VL鏈係相同的，且 其中該IL-21多肽包含(i)一或多個胺基酸取代提供相對於包含SEQ ID NO: 1之人類IL-21多肽降低之等電點，其中該一或多個胺基酸取代係在SEQ ID NO: 1之S80至T92內，其中至少一個胺基酸取代係在殘基R85、R86、K88、H89、R90或其組合；及(ii)至少一個胺基酸取代提供相對於該人類IL-21多肽之結合減少之與人類IL-21受體之結合。
在一些實施例中，本發明提供融合蛋白，其包含： a)包含VL鏈及CL1鏈之第一多肽，其中該VL鏈包含：包含SEQ ID NO: 176之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 177之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 178之胺基酸序列之CDR-L3； b)包含VH鏈及HC恆定域之第二多肽，其中該HC恆定域包含杵修飾，且其中該VH鏈包含：包含SEQ ID NO: 250之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 251之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 288之胺基酸序列之CDR-H3； c)包含VH鏈及HC恆定域之第三多肽，其中IL-21多肽可操作地連接至該HC恆定域之C端，其中該HC恆定域包含臼修飾，且其中該第二多肽及該第三多肽之該VH鏈係相同的；及 d)包含VL鏈及CL1鏈之第四多肽，其中該第一多肽及該第四多肽之該VL鏈係相同的，且 其中該IL-21多肽包含(i)一或多個胺基酸取代提供相對於包含SEQ ID NO: 1之人類IL-21多肽降低之等電點，其中該一或多個胺基酸取代係在SEQ ID NO: 1之S80至T92內，其中至少一個胺基酸取代係在殘基R85、R86、K88、H89、R90或其組合；及(ii)至少一個胺基酸取代提供相對於該人類IL-21多肽之結合減少之與人類IL-21受體之結合。
在一些實施例中，本發明提供融合蛋白，其包含： a)包含VL鏈及CL1鏈之第一多肽，其中該VL鏈包含：包含SEQ ID NO: 205之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 206之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 207之胺基酸序列之CDR-L3； b)包含VH鏈及HC恆定域之第二多肽，其中IL-21多肽可操作地連接至該HC恆定域之C端，其中該HC恆定域包含杵修飾，且其中該VH鏈包含：包含SEQ ID NO: 241之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 243之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 204之胺基酸序列之CDR-H3； c)包含VH鏈及HC恆定域之第三多肽，其中該HC恆定域包含臼修飾，且其中該第二多肽及該第三多肽之該VH鏈係相同的；及 d)包含VL鏈及CL1鏈之第四多肽，其中該第一多肽及該第四多肽之該VL鏈係相同的，且 其中該IL-21多肽包含：胺基酸序列選自SEQ ID NO: 2、4-15及23-40及至少一個胺基酸取代提供相對於人類IL-21多肽之結合減少之與人類IL-21受體之結合。
在一些實施例中，本發明提供融合蛋白，其包含： a)包含VL鏈及CL1鏈之第一多肽，其中該VL鏈包含：包含SEQ ID NO: 205之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 206之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 207之胺基酸序列之CDR-L3； b)包含VH鏈及HC恆定域之第二多肽，其中該HC恆定域包含杵修飾，且其中該VH鏈包含：包含SEQ ID NO: 241之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 243之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 204之胺基酸序列之CDR-H3； c)包含VH鏈及HC恆定域之第三多肽，其中IL-21多肽可操作地連接至該HC恆定域之C端，其中該HC恆定域包含臼修飾，且其中該第二多肽及該第三多肽之該VH鏈係相同的；及 d)包含VL鏈及CL1鏈之第四多肽，其中該第一多肽及該第四多肽之該VL鏈係相同的，且 其中該IL-21多肽包含：胺基酸序列選自SEQ ID NO: 2、4-15及23-40及至少一個胺基酸取代提供相對於人類IL-21多肽之結合減少之與人類IL-21受體之結合。
在一些實施例中，本發明提供融合蛋白，其包含： a)包含VL鏈及CL1鏈之第一多肽，其中該VL鏈包含：包含SEQ ID NO: 176之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 177之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 178之胺基酸序列之CDR-L3； b)包含VH鏈及HC恆定域之第二多肽，其中IL-21多肽可操作地連接至該HC恆定域之C端，其中該HC恆定域包含杵修飾，且其中該VH鏈包含：包含SEQ ID NO: 250之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 251之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 288之胺基酸序列之CDR-H3； c)包含VH鏈及HC恆定域之第三多肽，其中該HC恆定域包含臼修飾，且其中該第二多肽及該第三多肽之該VH鏈係相同的；及 d)包含VL鏈及CL1鏈之第四多肽，其中該第一多肽及該第四多肽之該VL鏈係相同的，且 其中該IL-21多肽包含：胺基酸序列選自SEQ ID NO: 2、4-15及23-40及至少一個胺基酸取代提供相對於人類IL-21多肽之結合減少之與人類IL-21受體之結合。
在一些實施例中，本發明提供融合蛋白，其包含： a)包含VL鏈及CL1鏈之第一多肽，其中該VL鏈包含：包含SEQ ID NO: 176之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 177之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 178之胺基酸序列之CDR-L3； b)包含VH鏈及HC恆定域之第二多肽，其中該HC恆定域包含杵修飾，且其中該VH鏈包含：包含SEQ ID NO: 250之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 251之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 288之胺基酸序列之CDR-H3； c)包含VH鏈及HC恆定域之第三多肽，其中IL-21多肽可操作地連接至該HC恆定域之C端，其中該HC恆定域包含臼修飾，且其中該第二多肽及該第三多肽之該VH鏈係相同的；及 d)包含VL鏈及CL1鏈之第四多肽，其中該第一多肽及該第四多肽之該VL鏈係相同的，且 其中該IL-21多肽包含：胺基酸序列選自SEQ ID NO: 2、4-15及23-40及至少一個胺基酸取代提供相對於人類IL-21多肽之結合減少之與人類IL-21受體之結合。
在一些實施例中，本發明提供融合蛋白，其包含： a)包含VL鏈及CL1鏈之第一多肽，其中該VL鏈包含：包含SEQ ID NO: 205之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 206之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 207之胺基酸序列之CDR-L3； b)包含VH鏈及HC恆定域之第二多肽，其中IL-21多肽可操作地連接至該HC恆定域之C端，其中該HC恆定域包含杵修飾，且其中該VH鏈包含：包含SEQ ID NO: 241之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 243之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 204之胺基酸序列之CDR-H3； c)包含VH鏈及HC恆定域之第三多肽，其中該HC恆定域包含臼修飾，且其中該第二多肽及該第三多肽之該VH鏈係相同的；及 d)包含VL鏈及CL1鏈之第四多肽，其中該第一多肽及該第四多肽之該VL鏈係相同的，且 其中該IL-21多肽包含選自SEQ ID NO: 16-21、41-98及374-379之胺基酸序列。
在一些實施例中，本發明提供融合蛋白，其包含： a)包含VL鏈及CL1鏈之第一多肽，其中該VL鏈包含：包含SEQ ID NO: 205之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 206之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 207之胺基酸序列之CDR-L3； b)包含VH鏈及HC恆定域之第二多肽，其中該HC恆定域包含杵修飾，且其中該VH鏈包含：包含SEQ ID NO: 241之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 243之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 204之胺基酸序列之CDR-H3； c)包含VH鏈及HC恆定域之第三多肽，其中IL-21多肽可操作地連接至該HC恆定域之C端，其中該HC恆定域包含臼修飾，且其中該第二多肽及該第三多肽之該VH鏈係相同的；及 d)包含VL鏈及CL1鏈之第四多肽，其中該第一多肽及該第四多肽之該VL鏈係相同的，且 其中該VH鏈及該VL鏈包含特異性結合至CD8αβ或CD8 β之CDRs， 其中該IL-21多肽包含選自SEQ ID NO: 16-21、41-98及374-379之胺基酸序列。
在一些實施例中，本發明提供融合蛋白，其包含： a)包含VL鏈及CL1鏈之第一多肽，其中該VL鏈包含：包含SEQ ID NO: 176之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 177之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 178之胺基酸序列之CDR-L3； b)包含VH鏈及HC恆定域之第二多肽，其中IL-21多肽可操作地連接至該HC恆定域之C端，其中該HC恆定域包含杵修飾，且其中該VH鏈包含：包含SEQ ID NO: 250之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 251之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 288之胺基酸序列之CDR-H3； c)包含VH鏈及HC恆定域之第三多肽，其中該HC恆定域包含臼修飾，且其中該第二多肽及該第三多肽之該VH鏈係相同的；及 d)包含VL鏈及CL1鏈之第四多肽，其中該第一多肽及該第四多肽之該VL鏈係相同的，且 其中該IL-21多肽包含選自SEQ ID NO: 16-21、41-98及374-379之胺基酸序列。
在一些實施例中，本發明提供融合蛋白，其包含： a)包含VL鏈及CL1鏈之第一多肽，其中該VL鏈包含：包含SEQ ID NO: 176之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 177之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 178之胺基酸序列之CDR-L3； b)包含VH鏈及HC恆定域之第二多肽，其中該HC恆定域包含杵修飾，且其中該VH鏈包含：包含SEQ ID NO: 250之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 251之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 288之胺基酸序列之CDR-H3； c)包含VH鏈及HC恆定域之第三多肽，其中IL-21多肽可操作地連接至該HC恆定域之C端，其中該HC恆定域包含臼修飾，且其中該第二多肽及該第三多肽之該VH鏈係相同的；及 d)包含VL鏈及CL1鏈之第四多肽，其中該第一多肽及該第四多肽之該VL鏈係相同的，且 其中該IL-21多肽包含選自SEQ ID NO: 16-21、41-98及374-379之胺基酸序列。
在一些實施例中，融合蛋白包含四個多肽鏈，其中： 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 262之胺基酸序列，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 263之胺基酸序列，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 264之胺基酸序列，且該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 262之胺基酸序列；  該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 266之胺基酸序列，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 267之胺基酸序列，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 268之胺基酸序列，且該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 266之胺基酸序列；  該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 270之胺基酸序列，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 271之胺基酸序列，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 272之胺基酸序列，且該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 270之胺基酸序列；  該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 274之胺基酸序列，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 275之胺基酸序列，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 276之胺基酸序列，且該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 274之胺基酸序列；或  該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 278之胺基酸序列，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 279之胺基酸序列，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 280之胺基酸序列，且該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 278之胺基酸序列。
在一些實施例中，融合蛋白包含四個多肽鏈，其中： 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 262之胺基酸序列，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 263之胺基酸序列，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 265之胺基酸序列，且該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 262之胺基酸序列；  該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 266之胺基酸序列，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 267之胺基酸序列，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 269之胺基酸序列，且該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 266之胺基酸序列；  該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 270之胺基酸序列，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 271之胺基酸序列，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 273之胺基酸序列，且該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 270之胺基酸序列；  該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 274之胺基酸序列，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 275之胺基酸序列，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 277之胺基酸序列，且該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 274之胺基酸序列；或  該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 278之胺基酸序列，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 279之胺基酸序列，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 281之胺基酸序列，且該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 278之胺基酸序列。
在一些實施例中，融合蛋白包含四個多肽鏈，其中： (a)該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 297之胺基酸序列，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 298之胺基酸序列，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 299之胺基酸序列，且該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 297之胺基酸序列； (b)該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 301之胺基酸序列，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 302之胺基酸序列，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 303之胺基酸序列，且該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 303之胺基酸序列； (c)該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 305之胺基酸序列，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 306之胺基酸序列，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 307之胺基酸序列，且該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 305之胺基酸序列；或 (d)該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 309之胺基酸序列，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 310之胺基酸序列，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 311之胺基酸序列，且該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 309之胺基酸序列。
在一些實施例中，融合蛋白包含四個多肽鏈，其中： (a)該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 297之胺基酸序列，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 298之胺基酸序列，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 300之胺基酸序列，且該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 297之胺基酸序列； (b)該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 301之胺基酸序列，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 302之胺基酸序列，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 304之胺基酸序列，且該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 301之胺基酸序列； (c)該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 305之胺基酸序列，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 306之胺基酸序列，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 308之胺基酸序列，且該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 305之胺基酸序列；或 (d)該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 309之胺基酸序列，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 310之胺基酸序列，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 312之胺基酸序列，且該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 309之胺基酸序列。 以引用之方式併入
本說明書中所提及之所有公開案、專利及專利申請案皆以引用之方式併入本文中，其引用程度如同特定地且個別地指示各個別公開案、專利或專利申請案以引用之方式併入一般。
在一些實施例中，本發明提供IL-21多肽或其功能片段或變異體，其包含相對於野生型IL-21 (SEQ ID NO: 1)改善之特性。改善之特性之實例包括但不限於：(i)改善之全身暴露(例如如藉由相對於在投與野生型IL-21蛋白後之曲線下面積(AUC)增大之在向個體投與IL-21多肽或其功能片段或變異體後之曲線下面積(AUC)所量測)；(ii)減弱之與IL-21受體之結合；(iii)降低之細胞毒性；或其任何組合。
如本文所描述，本發明提供IL-21多肽或其功能片段或變異體，其具有相對於人類IL-21多肽(SEQ ID NO: 1)降低之電荷(亦即等電點)及降低之對人類IL-21受體之結合親和力。特定言之，本發明提供在位於人類IL-21之殘基S80-T92內之帶正電區域中具有一或多個胺基酸取代之IL-21多肽。如 圖 21B中所示，人類IL-21之S80-T92內之殘基形成不直接與人類IL-21受體相互作用之可撓性環。在不希望受理論束縛之情況下，咸信人類IL-21之殘基P78、P79、C93及P94提供環周圍之結構剛性。本發明提供在可撓性環內具有一或多個胺基酸取代之IL-21多肽，其具有降低之等電點及改善之生物可用性及生物活性。如本文所描述，具有相對於人類IL-21多肽降低之等電點之本發明之IL-21多肽展現延長之循環半衰期及降低之多反應性(例如在循環中具有充足的帶正電蛋白)。如 圖 4A - 4D中所示，具有相對於人類IL-21降低之等電點的具有IL-21多肽之融合蛋白具有改善之半衰期。本發明進一步提供相對於CD4+ T細胞、NK細胞及B細胞選擇性活化CD8+ T細胞的具有IL-21多肽與抗CD8抗體之融合蛋白，該選擇性活化包括在非人類靈長類動物中活體內選擇性活化(參見 圖 24)。在不受理論束縛之情況下，具有IL-21多肽與特異性結合CD8ab或CD8b之抗原結合域之融合蛋白相對於表現CD8aa之NK細胞選擇性活化CD8+ T細胞。另外，具有降低之等電點之IL-21多肽對在循環中充足的諸如肝素及血紅素之蛋白質具有較低結合親和力(參見 表 5)。此外，在不受理論束縛之情況下，在可撓性環中具有甘胺酸及/或絲胺酸取代之本發明之IL-21多肽在投與個體後可具有相對於未經修飾之人類IL-21降低之免疫原性。
本發明亦提供與人類IL-21受體具有減少結合的IL-21多肽。如本文所示，減弱之本發明之IL-21多肽與其受體之結合使IL-21介導之對同種異體反應性T細胞及樹突狀細胞之抑制作用減弱(參見 圖 22)。在不希望受理論束縛之情況下，預期減弱之本發明之IL-21多肽與其受體之結合避免了與B細胞及NK細胞之結合的下沉效應。本文亦展現包含本發明之IL-21多肽及抗CD8靶向抗體之融合蛋白的治療功效。在不受理論束縛之情況下，與抗CD8靶向抗體具有減弱之結合的IL-21多肽之連接提供經減弱IL-21多肽的選擇性復原。具體言之， 圖 12表明該等融合蛋白提供活體內抗腫瘤功效。此功效至少部分由在阻斷淋巴球運輸減少治癒性反應時CD8+ T細胞之周邊活化產生(參見 圖 13A - 13D)。在不受理論束縛之情況下，腫瘤微環境中之T細胞可為功能異常的且表現抑制分子，且因此融合蛋白對CD8+ T細胞之周邊活化提供抗腫瘤免疫反應。因此，本發明提供具有改善之生物特性之新穎IL-21多肽及包含該等IL-21多肽之融合蛋白以及使用該等多肽治療個體之疾病的方法。
本發明之各個實施例提供涉及使用細胞介素(例如相對於野生型IL-21多肽序列包含一或多個經突變胺基酸殘基之介白素21 (IL-21)或IL-21多肽或其功能片段或變異體)之方法及組合物，該等細胞介素經導引或靶向以活化特異性細胞子集(例如CD8+ T細胞)，特此稱為靶向細胞介素構築體。在不希望受特定理論束縛之情況下，經考慮能夠選擇性活化某些細胞類型可使得能夠發生更穩健的反應以及能夠限制將對成功免疫反應具有相對效益之其他細胞類型的活化。在一些情況下，本文所揭示之方法及組合物允許向所需細胞類型靶向遞送IL-21多肽且允許投與相對低濃度之IL-21以引發CD8+ T細胞之選擇性活化。在一些情況下，使用本文所揭示之靶向細胞介素構築體提供了相較於諸如自然殺手(NK)細胞、CD4+ T細胞或B細胞之其他細胞類型之活化更具選擇性的細胞(諸如CD8+ T細胞)活化。 定義
除非本文另外定義，否則結合本發明使用之科學及技術術語應具有一般熟習此項技術者通常理解之含義。術語之含義及範疇應為清楚的，然而，在任何潛在不明確性之情況下，本文所提供之定義優先於任何字典或外部定義採用。此外，除非上下文另外需要，否則單數術語應包括複數且複數術語應包括單數。在本申請案中，除非另外說明，否則「或」之使用意謂「及/或」。此外，術語「包括(including)」以及諸如「包括(includes/included)」之其他形式之使用不具限制性。
一般而言，結合本文所描述之細胞及組織培養物、分子生物學、免疫學、微生物學、遺傳學及蛋白質與核酸化學及雜交使用之命名法及其技術為此項技術中熟知且常用之命名法及技術。除非另外指示，否則本發明之方法及技術一般根據此項技術中熟知之習知方法且如本說明書通篇所引用及論述之各種通用及更特定參考文獻中所描述來執行。酶促反應及純化技術係根據製造商說明書，如此項技術中通常所實現或如本文所描述來執行。結合本文所描述之分析化學、合成有機化學及藥物與醫藥化學使用之命名法以及其實驗室程序及技術為此項技術中熟知且常用之命名法以及實驗室程序及技術。標準技術係用於化學合成、化學分析、醫藥製備、調配及遞送以及患者治療。
除非上下文另外清楚地指示，否則如本說明書及申請專利範圍中所使用之單數形式「一(a/an)」及「該」包括複數個提及物。舉例而言，術語「嵌合跨膜受體多肽」包括複數個嵌合跨膜受體多肽。
術語「約」或「大致」意謂在如藉由一般熟習此項技術者所測定之特定值之可接受誤差範圍內，其將部分地視該值如何經量測或測定，亦即量測系統之限制而定。舉例而言，「約」可意謂根據此項技術中之實踐在1個或超過1個標準差內。可替代地，「約」可意謂既定值之至多20%、至多10%、至多5%或至多1%之範圍。可替代地，尤其就生物系統或方法而言，該術語可意謂在一值之一個數量級內，較佳在5倍內且更佳地在2倍內。在本申請案及申請專利範圍中描述特定值之情況下，除非另外說明，否則應假設術語「約」意謂在特定值之可接受誤差範圍內。
如本文所使用之「曲線下面積」或「AUC」為藥物動力學參數，其係指在給藥後藥物(例如本文所描述之IL-21多肽或融合蛋白)血漿濃度相對於時間之圖下面積。在一些實施例中，AUC量測患者藥物暴露且視劑量、生物可用性及清除率而定。用於測定AUC之方法為熟習此項技術者已知的且包括但不限於矩形方法、梯形法則及辛普森法則(Simpson's Rule)。
「細胞介素」為可介導起始/原代細胞與目標/效應細胞之間的串擾之免疫調節多肽形式。其可充當締合以結合目標免疫細胞上之「細胞介素受體」來活化信號傳導之可溶性形式或細胞表面。如此處所使用之「細胞介素受體」為細胞表面上在結合胞外細胞表面上之細胞介素後活化胞內信號傳導之多肽。細胞介素可包括但不限於趨化介素、干擾素、介白素、淋巴介質及腫瘤壞死因子。細胞介素係由包括免疫細胞、內皮細胞、纖維母細胞及基質細胞之廣泛範圍的細胞產生。既定細胞介素可由超過一種細胞類型產生。細胞介素為多效性的；由於受體係在多個免疫細胞子集上表現，故一種細胞介素可活化多個細胞中之信號傳導路徑。然而，視細胞類型而定，細胞介素之信號傳導事件可引起諸如活化、增殖、存活、細胞凋亡、效應功能及其他免疫調節蛋白分泌之不同的下游細胞事件。在一些實施例中，既定細胞介素為野生型細胞介素多肽、其片段或其諸如經突變細胞介素多肽(在本文中亦稱為突變蛋白細胞介素，例如突變蛋白IL-21或IL-21突變蛋白)之變異體。
如本文所使用之術語「抗原」係指能夠與選擇性結合劑結合之分子或其片段。作為一實例，抗原可為可與諸如受體之選擇性結合劑結合之配位體。作為另一實例，抗原可為可與諸如免疫蛋白(例如抗體)之選擇性結合劑結合之抗原分子。抗原亦可指能夠用於動物中以產生能夠結合至該抗原之抗體的分子或其片段。
如本文所使用之術語「抗體」意謂包含與特定抗原特異性結合或相互作用之至少一個互補決定區(CDR)的任何抗原結合分子。術語「抗體」包括包含藉由二硫鍵互連之四個多肽鏈，亦即兩個重(H)鏈及兩個輕(L)鏈之免疫球蛋白分子以及其多聚體(例如IgM)。各重鏈包含重鏈可變區(本文中縮寫為HCVR或VH)及重鏈恆定區。重鏈恆定區包含三個域，亦即CH1、CH2及CH3。各輕鏈包含輕鏈可變區(在本文中縮寫為LCVR或VL)及輕鏈恆定區。輕鏈恆定區包含一個域(CL1)。VH區及VL區可進一步再分成高變區，該等高變區稱為互補決定區(CDR)，其穿插有稱為構架區(FR)之更保守區。各VH及VL由自胺基端至羧基端按以下次序排列之三個CDR及四個FR構成：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。在本發明之不同實施例中，抗體(或其抗原結合部分)之FR可與人類生殖系序列一致，或可經天然或人工修飾。胺基酸共同序列可基於兩個或更多個CDR之並列分析來加以界定。
術語「完整抗體」係指包含藉由二硫鍵互連之四個多肽鏈，亦即兩個重(H)鏈及兩個輕(L)鏈之抗體。在一個實施例中，該抗體為完整抗體。在一個實施例中，完整抗體為完整人類IgG1、IgG2或IgG4同型。在某些實施例中，該抗體或其抗原結合片段為人類IgG1、IgG2或IgG4同型。
如本文所使用之術語抗體之「抗原結合部分」、抗體之「抗原結合片段」或「抗體片段」及其類似術語包括特異性結合抗原以形成複合物之任何天然存在、酶促可獲得、合成或經基因工程改造之多肽或醣蛋白。抗體之抗原結合片段可使用任何適合的標準技術例如自完整抗體分子衍生，該等標準技術諸如為蛋白水解消化或重組基因工程改造技術，其涉及操縱及表現編碼抗體可變域及視情況恆定域的DNA。該DNA為已知的及/或可易於自例如商業來源、DNA庫(包括例如噬菌體-抗體庫)獲得，或可經合成。DNA可以化學方式或藉由使用分子生物學技術加以定序及操縱，例如以將一或多個可變域及/或恆定域排列成適合的組態，或以引入密碼子，產生半胱胺酸殘基，修飾、添加或缺失胺基酸等。
抗原結合片段之非限制性實例包括：(i) Fab片段；(ii) F(ab')2片段；(iii) Fd片段；(iv) Fv片段；(v)單鏈Fv (scFv)分子；(vi) dAb片段；及(vii)由模擬抗體之高變區(例如經分離之互補決定區(CDR)，諸如CDR3肽)或限制性FR3-CDR3-FR4肽之胺基酸殘基組成的最小辨識單元。
如本文所使用之術語抗體或其片段之「可變區」或「可變域」係指包括互補決定區(CDR；亦即CDR-1、CDR-2及CDR-3)及構架區(FR)之胺基酸序列的抗體分子的輕鏈及重鏈的部分。VH係指重鏈之可變域。VL係指輕鏈之可變域。根據本發明中所使用之方法，經指定至CDR及FR之胺基酸位置可根據Kabat (Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, Md., 1987及1991))來加以界定。抗體或抗原結合片段之胺基酸編號亦根據Kabat之胺基酸編號。
如本文所使用之術語「互補決定區」或「CDR」係指在抗體可變序列內之互補決定區。重鏈及輕鏈之可變區中之各者中存在三個CDRs，對於該等可變區中之各者，該三個CDR命名為CDR1、CDR2及CDR3。如本文所使用之術語「CDR集」係指存在於能夠結合抗原之單一可變區中之一組三個CDR。此等CDR之準確邊界已根據不同系統以不同方式加以界定。由Kabat (Kabat等人, Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1987)及(1991))所描述之系統不僅提供適用於抗體之任何可變區之明確的殘基編號系統，且亦提供界定三個CDR之精確殘基邊界。此等CDR可稱為Kabat CDR。Chothia及同事(Chothia等人, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)及Chothia等人, Nature 342:877-883 (1989))發現，在Kabat CDR內之某些子部分採取幾乎相同的肽骨幹構形，即使在胺基酸序列層面具有極大多樣性。此等子部分命名為L1、L2及L3或H1、H2及H3，其中「L」及「H」分別表示輕鏈區及重鏈區。此等區可稱為Chothia CDR，其具有與Kabat CDR重疊之邊界。界定與Kabat CDR重疊之CDR的其他邊界已由Padlan (FASEB J. 9:133-139 (1995))及MacCallum (J Mol Biol 262(5):732-45 (1996))描述。另外其他CDR邊界定義可不嚴格遵循以上系統中之一者，但仍將與Kabat CDR重疊，但其可根據特定殘基或殘基群組或甚至全部CDR不顯著影響抗原結合之預測或實驗發現經縮短或延長。本文所使用之方法可利用根據此等系統中任一者界定之CDR，但較佳實施例使用Kabat或Chothia界定之CDR。
如本文所使用之術語「構架區」(在下文為FR)係指除CDR殘基以外之彼等可變域殘基。各可變域通常具有四個FR，該四個FR經鑑別為FR1、FR2、FR3及FR4。抗體或其功能片段之可變區中之共同結構特點為此項技術中熟知的。編碼特定抗體之DNA序列一般可遵循諸如描述於以下中之方法的熟知方法發現：Kabat等人1987 Sequence of Proteins of Immunological Interest, 美國衛生與人群服務部(U.S. Department of Health and Human Services), Bethesda MD，該文獻作為參考文獻併入本文中。另外，用於自抗體選殖功能可變區之通用方法可見於Chaudhary, V.K.等人, 1990 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:1066中，該文獻作為參考文獻併入本文中。
「變異Fc區」包含因如本文所定義之至少一個「胺基酸修飾」而不同於天然序列Fc區之胺基酸序列的胺基酸序列。變異Fc區相較於天然序列Fc區或親本多肽Fc區具有至少一個胺基酸取代，例如在天然序列Fc區或親本多肽Fc區中具有約一個至約十個胺基酸取代、約一個至約五個胺基酸取代。在一個實施例中，本文中之變異Fc區可具有與天然序列Fc區具有至少約80%一致性、至少約85%一致性、至少約90%一致性、至少約95%一致性或至少約99%一致性之序列。根據另一實施例，本文中之變異Fc區可具有與親本多肽Fc區具有至少約80%一致性、至少約85%一致性、至少約90%一致性、至少約95%一致性或至少約99%一致性之序列。
如本文所使用之術語「Fc受體」或「FcR」一般指可結合至抗體之Fc區的受體或其任何衍生物、變異體或片段。在某些實施例中，FcR為結合IgG抗體之FcR (γ受體Fcγ R)且包括Fcγ RI (CD64)、Fcγ RII (CD32)及Fcγ RIII (CD16)子類之受體，包括此等受體之對偶基因變異體及交替剪接形式。Fcγ RII受體包括具有不同之處主要在於其胞質域之類似胺基酸序列的Fcγ RIIA (「活化受體」)及Fcγ RIIB (「抑制受體」)。術語「FcR」亦包括負責將母本IgG轉移至胎兒之新生兒受體FcRn。
如本文所使用之「效應功能」意謂由抗體Fc區與Fc受體或配位體之相互作用引起之生物化學事件，其隨抗體同型變化。效應功能包括但不限於抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)、抗體依賴性細胞介導之吞噬作用(ADCP)、補體依賴性細胞毒性(CDC)、細胞介素分泌、免疫複合物介導之抗原呈現細胞對抗原之吸收、細胞表面受體(例如B細胞受體)下調及B細胞活化。「抗體依賴性細胞介導之細胞毒性」或「ADCC」係指其中表現FcR之非特異性細胞毒性細胞(諸如自然殺手(NK)細胞、嗜中性球及巨噬細胞)辨識目標細胞上之經結合抗體且隨後引起目標細胞溶解的細胞介導之反應。ADCC同與FcγRIIIa之結合相關；與FcγRIIIa之結合增加引起ADCC活性提高。為了評估所關注分子之ADCC活性，可執行活體外ADCC分析，諸如美國專利第5,500,362號或第5,821,337號中描述之活體外ADCC分析。如本文所使用之「ADCP」或「抗體依賴性細胞介導之吞噬作用」意謂其中表現FcγR之非特異性細胞毒性細胞辨識目標細胞上之經結合抗體且隨後引起目標細胞吞噬的細胞介導之反應。
「Fc無效」及「Fc無效變異體」可互換使用且在本文中用以描述效應功能減弱或消除之經修飾Fc。該Fc無效或Fc無效變異體對於FcγR及/或補體受體而言減少或消除。較佳地，該Fc無效或Fc無效變異體之效應功能經消除。例示性修飾方法包括但不限於化學改變、胺基酸殘基取代、插入及缺失。其中在位置引入一或多個修飾以使所得變異體之效應功能減弱之Fc分子上之例示性胺基酸位置(基於EU編號方案進行編號)為：i) IgG1：C220、C226、C229、E233、L234、L235、G237、P238、S239 D265、S267、N297、L328、P331、K322、A327及P329；ii) IgG2：V234、G237、D265、H268、N297、V309、A330、A331、K322；及iii) IgG4：L235、G237、D265及E318。效應功能減弱之例示性Fc分子包括具有以下取代中之一或多者之Fc分子：i) IgG1：N297A、N297Q、D265A/N297A、D265A/N297Q、C220S/C226S/C229S/P238S、S267E/L328F、C226S/C229S/E233P/L234V/ L235A、L234F/L235E/P331S、L234A/L235A、L234A/L235A/G237A、L234A/L235A/G237A/K322A、L234A/L235A/G237A/A330S/A331S、L234A/L235A/P329G,E233P/L234V/L235A/G236del/S239K、E233P/L234V/ L235A/G236del/S267K、E233P/L234V/L235A/G236del/S239K/A327G、E233P/L234V/L235A/G236del/S267K/A327G及E233P/L234V/L235A/G236del、L234A/L235A/G237缺失；ii) IgG2：A330S/A331S、V234A/G237A、V234A/G237A/D265A、D265A/A330S/A331S、V234A/G237A/D265A/ A330S/A331S及H268Q/V309L/A330S/A331S；iii) IgG4：L235A/G237A/E318A、D265A、L235A/G237A/D265A及L235A/G237A/D265A/E318A。
如本文所使用之「抗原決定基」係指稱為互補位之能夠與抗體分子之可變區特異性結合的決定子。抗原決定基為諸如胺基酸或糖側鏈之分子群組，且通常具有特異性結構特徵以及特異性電荷特徵。單一抗原可具有超過一個抗原決定基。抗原決定基可包含直接參與結合之胺基酸殘基及不直接參與結合之其他胺基酸殘基，諸如經抗原結合肽有效阻斷之胺基酸殘基(換言之，該胺基酸殘基處於抗原結合肽之覆蓋區內)。抗原決定基可為構形或線性的。抗原決定基通常包括至少3個且更常包括至少5個或8-10個胺基酸。辨識相同抗原決定基之抗體可在顯示一種抗體阻斷另一抗體與目標抗原之結合，例如「框並(binning)」之能力的簡單免疫分析中得到驗證。
如本文所使用之「連接子」係指連接兩個多肽鏈之分子。連接子可為多肽連接子或合成化學連接子(例如參見Protein Engineering, 9(3), 299-305, 1996中所揭示)。多肽連接子之長度及序列不受特定限制且可由熟習此項技術者根據目的進行選擇。多肽連接子包含一或多個胺基酸。較佳地，多肽連接子為長度為至少5個胺基酸、較佳地長度為5至100個、更佳地10至50個胺基酸之肽。在一個實施例中，該肽連接子為G、S、GS、SG、SGG、GGS及GSG (其中G=甘胺酸且S=絲胺酸)。在另一實施例中，該肽連接子為(GGGS) xG n(SEQ ID NO: 294)或(GGGGS) xG n(SEQ ID NO: 295)、(GGGGGS) xG n(SEQ ID NO: 296)、S(GGGS)xGn (SEQ ID NO: 289)、S(GGGGS)xGn (SEQ ID NO: 290)或S(GGGGGS)xGn (SEQ ID NO: 291)，其中x=1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12且n=0、1、2或3。在一些實施例中，連接子為(GGGGS) xG n，其中x=2、3或4且n=0 (SEQ ID NO: 372)；在一些實施例中，連接子為(GGGGS) xG n，其中x=3且n=0 (SEQ ID NO: 373)。在一些實施例中，連接子包含序列SGGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 292)或SGGGGSGGGGSGGGG (SEQ ID NO: 293)。合成化學連接子包括常規用於使肽交聯之交聯劑，例如N-羥基丁二醯亞胺(NHS)、辛二酸二丁二醯亞胺酯(DSS)、雙(丁二醯亞胺基)辛二酸酯(BS3)、二硫代雙(丙酸丁二醯亞胺酯) (DSP)、二硫代雙(丙酸丁二醯亞胺酯) (DTSSP)、乙二醇雙(丁二酸丁二醯亞胺酯) (EGS)、乙二醇雙(丁二酸磺基丁二醯亞胺酯) (磺基-EGS)、酒石酸二丁二醯亞胺酯(DST)、酒石酸二磺基丁二醯亞胺酯(磺基-DST)、雙[2-(丁二醯亞胺氧基羰基氧基)乙基]碸(BSOCOES)及雙[2-(丁二醯亞胺氧基羰基氧基)乙基]碸(磺基-BSOCOES)。
如本文所使用之術語「核苷酸」一般指鹼基-糖-磷酸酯組合。核苷酸可包含合成核苷酸。核苷酸可包含合成核苷酸類似物。核苷酸可為具有核酸序列之單體單元(例如去氧核糖核酸(DNA)及核糖核酸(RNA))。術語核苷酸可包括三磷酸核糖核苷三磷酸腺苷(ATP)、三磷酸尿苷(UTP)、三磷酸胞嘧啶(CTP)、三磷酸鳥苷(GTP)及諸如dATP、dCTP、dITP、dUTP、dGTP、dTTP或其衍生物之三磷酸去氧核苷。該等衍生物可包括例如[αS]dATP、7-去氮-dGTP及7-去氮-dATP及賦予含有其之核酸分子以核酸酶抗性之核苷酸衍生物。在一些實例中，如本文所使用之術語核苷酸係指三磷酸二去氧核苷(ddNTP)及其衍生物。三磷酸二去氧核苷之說明性實例可包括但不限於ddATP、ddCTP、ddGTP、ddITP及ddTTP。核苷酸可未經標記或藉由熟知技術可偵測地經標記。標記亦可用量子點進行。可偵測標籤可包括例如放射性同位素、螢光標籤、化學發光標籤、生物發光標籤及酶標籤。核苷酸之螢光標籤可包括但不限於螢光素、5-羧基螢光素(FAM)、2'7'-二甲氧基-4'5-二氯-6-羧基螢光素(JOE)、若丹明(rhodamine)、6-羧基若丹明(R6G)、N,N,N',N'-四甲基-6-羧基若丹明(TAMRA)、6-羧基-X-若丹明(ROX)、4-(4'二甲胺基苯偶氮基)苯甲酸(DABCYL)、喀斯喀特藍(Cascade Blue)、俄勒岡綠(Oregon Green)、德克薩斯紅(Texas Red)、花青及5-(2'-胺乙基)胺基萘-1-磺酸(EDANS)。經螢光標記之核苷酸之具體實例可包括：[R6G]dUTP、[TAMRA]dUTP、[R110]dCTP、[R6G]dCTP、[TAMRA]dCTP、[JOE]ddATP、[R6G]ddATP、[FAM]ddCTP、[R110]ddCTP、[TAMRA]ddGTP、[ROX]ddTTP、[dR6G]ddATP、[dR110]ddCTP、[dTAMRA]ddGTP及[dROX]ddTTP，其可獲自Perkin Elmer, Foster City, Calif；FluoroLink去氧核苷酸、FluoroLink Cy3-dCTP、FluoroLink Cy5-dCTP、FluoroLink Fluor X-dCTP、FluoroLink Cy3-dUTP及FluoroLink Cy5-dUTP，其可獲自Amersham, Arlington Heights, Ill.；螢光素-15-dATP、螢光素-12-dUTP、四甲基-若丹明-6-dUTP、IR770-9-dATP、螢光素-12-ddUTP、螢光素-12-UTP及螢光素-15-2'-dATP，其可獲自Boehringer Mannheim, Indianapolis, Ind.；以及經染色體標記之核苷酸、BODIPY-FL-14-UTP、BODIPY-FL-4-UTP、BODIPY-TMR-14-UTP、BODIPY-TMR-14-dUTP、BODIPY-TR-14-UTP、BODIPY-TR-14-dUTP、喀斯喀特藍-7-UTP、喀斯喀特藍-7-dUTP、螢光素-12-UTP、螢光素-12-dUTP、俄勒岡綠488-5-dUTP、若丹明綠-5-UTP、若丹明綠-5-dUTP、四甲基若丹明-6-UTP、四甲基若丹明-6-dUTP、德克薩斯紅-5-UTP、德克薩斯紅-5-dUTP及德克薩斯紅-12-dUTP，其可獲自Molecular Probes, Eugene, Oreg。核苷酸亦可藉由化學修飾經標記或標示。經化學修飾之單一核苷酸可為生物素-dNTP。經生物素標記之dNTP之一些非限制性實例可包括生物素-dATP (例如bio-N6-ddATP、生物素-14-dATP)、生物素-dCTP (例如生物素-11-dCTP、生物素-14-dCTP)及生物素-dUTP (例如生物素-11-dUTP、生物素-16-dUTP、生物素-20-dUTP)。
術語「聚核苷酸」、「寡核苷酸」及「核酸」可互換使用以指呈單股、雙股或多股形式之作為去氧核糖核苷酸或核糖核苷酸之任何長度之核苷酸的聚合形式或其類似物。對於細胞而言，聚核苷酸可為外源或內源的。聚核苷酸可存在於無細胞環境中。聚核苷酸可為基因或其片段。聚核苷酸可為DNA。聚核苷酸可為RNA。聚核苷酸可具有任何三維結構，且可執行任何已知或未知功能。聚核苷酸可包含一或多種類似物(例如經改變之骨幹、糖或核鹼基)。若存在，則可在裝配聚合物之前或之後賦予核苷酸結構以修飾。類似物之一些非限制性實例包括：5-溴尿嘧啶、肽核酸、異種核酸、嗎啉核酸、鎖定核酸、乙二醇核酸、異赤絲藻糖核酸、二去氧核苷酸、蛹蟲草菌素、7-去氮-GTP、螢光團(例如若丹明或連接至糖之螢光素)、含硫醇核苷酸、生物素連接之核苷酸、螢光鹼基類似物、CpG島、甲基-7-鳥苷、甲基化核苷酸、肌苷、硫代尿苷、假尿苷、二氫尿苷、Q核苷(queuosine)及懷俄苷(wyosine)。聚核苷酸之非限制性實例包括基因或基因片段之編碼區或非編碼區、自聯結分析界定之基因座、外顯子、內含子、信使RNA (mRNA)、轉移RNA (tRNA)、核糖體RNA (rRNA)、短干擾RNA (siRNA)、短髮夾RNA (shRNA)、微小RNA (miRNA)、核糖核酸酶、cDNA、重組聚核苷酸、分支鏈聚核苷酸、質體、載體、具有任何序列之經分離DNA、具有任何序列之經分離RNA、包括游離DNA (cfDNA)及游離RNA (cfRNA)之游離聚核苷酸、核酸探針及引子。核苷酸序列可間雜有非核苷酸組分。
如本文所使用之術語「基因」係指參與編碼RNA轉錄物之核酸(例如DNA，諸如基因體DNA及cDNA)及其對應核苷酸序列。如本文關於基因體DNA使用之該術語包括中間非編碼區以及調控區且可包括5'端及3'端。在一些用途中，該術語涵蓋經轉錄序列，包括5'非轉譯區及3'非轉譯區(5'-UTR及3'-UTR)、外顯子及內含子。在一些基因中，經轉錄區將含有編碼多肽之「開放閱讀框架」。在該術語之一些用途中，「基因」僅包含編碼多肽所必需之編碼序列(例如「開放閱讀框架」或「編碼區」)。在一些情況下，基因不編碼多肽，例如核糖體RNA基因(rRNA)及轉移RNA (tRNA)基因。在一些情況下，術語「基因」不僅包括經轉錄序列，且亦另外包括非經轉錄區，包括上游及下游調控區、增強子及啟動子。在一些情況下，基因係指在其天然位置中處於生物體基因體中之「內源基因」或原生基因。在一些情況下，基因係指「外源基因」或非原生基因。在一些情況下，非原生基因係指通常未發現於宿主生物體中、但藉由基因轉移引入宿主生物體中之基因。在一些情況下，非原生基因係指非在其天然位置中處於生物體基因體中之基因。在一些情況下，非原生基因亦指包含突變、插入及/或缺失之天然存在之核酸或多肽序列(例如非原生序列)。
如本文關於表現或活性使用之術語「調控」係指改變表現或活性位準。調控可發生在轉錄層級及/或轉譯層級下。
術語「肽」、「多肽」及「蛋白質」在本文中可互換使用以指具有藉由(多個)肽鍵連接之至少兩個胺基酸殘基的聚合物。此術語不意味著特定長度之聚合物，亦不意欲暗示或區分該肽係使用重組技術、化學或酶促合成而產生抑或天然存在的。該等術語適用於天然存在之胺基酸聚合物以及包含至少一個經修飾胺基酸之胺基酸聚合物。在一些情況下，該聚合物可間雜有非胺基酸。該等術語包括任何長度之胺基酸鏈，包括全長蛋白，及具有或不具有二級結構及/或三級結構(例如域)之蛋白質。該等術語亦涵蓋已經修飾，例如藉由二硫鍵形成、醣化、脂質化、乙醯化、磷酸化、氧化及諸如與標記組分結合之任何其他操縱而經修飾之胺基酸聚合物。如本文所使用之術語「胺基酸(amino acid/amino acids)」一般指包括但不限於經修飾胺基酸及胺基酸類似物之天然胺基酸及非天然胺基酸。經修飾胺基酸可包括已經化學修飾以包括非天然存在於胺基酸上之基團或化學部分的天然胺基酸及非天然胺基酸。胺基酸類似物可指胺基酸衍生物。術語「胺基酸」包括D-胺基酸及L-胺基酸兩者。
當在本文中關於多肽使用時，術語「衍生物」、「變異體」及「片段」係指例如藉由胺基酸序列、結構(例如二級及/或三級)、活性(例如酶促活性)及/或功能而與野生型多肽相關之多肽。多肽之衍生物、變異體及片段可包含相較於野生型多肽之一或多種胺基酸變化(例如突變、插入及缺失)、截短、修飾或其組合。
如本文所使用之術語「殘基」意謂在蛋白質中之位置及其相關胺基酸一致性。舉例而言，Leu 234 (亦稱為Leu234或L234)為人類抗體IgG1中位置234之殘基。
如本文所使用之術語「野生型」意謂在自然界中發現之胺基酸序列或核苷酸序列，包括對偶基因變體。野生型蛋白具有未經刻意修飾之胺基酸序列或核苷酸序列。
術語「取代」或「突變」係指多肽骨幹變化，其中多肽之野生型序列中天然存在之胺基酸經該多肽中相同位置處非天然存在之另一胺基酸取代。在一些情況下，引入一或多個突變以修改多肽對其受體之親和力，藉此改變其活性，以使得其親和力及活性變得與野生型同源多肽不同。突變亦可改善多肽之生物物理特性。胺基酸突變可使用此項技術中熟知之基因或化學方法產生。基因方法可包括定點突變誘發、PCR、基因合成及其類似方法。經考慮，藉由除基因工程改造之外的諸如化學修飾之方法改變胺基酸側鏈基團之方法亦可為有用的。
術語「親和力」或「結合親和力」係指分子(例如抗體)之單一結合位點與其結合搭配物(例如抗原)之間的非共價相互作用之強度總和。除非另外指示，否則如本文所使用之「結合親和力」係指反映結合對(例如抗體與抗原)成員之間的1:1相互作用之固有結合親和力。親和力一般可由解離常數(K D)表示，K D係解離速率常數與締合速率常數(分別為koff與kon)之比率。因此，等效親和力可包含不同速率常數，只要速率常數之比率保持相同即可。親和力可藉由諸如酶聯結免疫吸附分析(ELISA)、表面電漿子共振(SPR)技術(例如BIAcore)、生物層干涉術(BLI)技術(例如Octet)及其他傳統結合分析(Heeley, Endocr Res 28, 217-229 (2002)之此項技術中已知之常用方法來量測。在一些實例中，結合親和力係藉由史卡查分析(Scatchard analysis)來測定，該分析包含產生史卡查圖，該史卡查圖為經結合配位體與未經結合配位體之濃度相對於經結合配位體濃度之比率圖。
如此處所使用之術語「結合」或「特異性結合」可指多肽或抗原結合域能夠分別與多肽或目標抗原之受體選擇性相互作用，且此特異性相互作用可區別於非靶向或非所需或非特異性相互作用。特異性結合之實例可包括但不限於IL-21細胞介素與其特異性受體(例如IL-21R及共同γ鏈)之結合及抗原結合域與特異性抗原(例如CD8或PD-1)之結合。
術語「個體(subject)」、「個人(individual)」及「患者(patient)」在本文中可互換使用以指脊椎動物、較佳地哺乳動物，諸如人類。哺乳動物包括但不限於鼠類、猿猴、人類、農場動物、運動型動物及寵物。亦涵蓋活體內獲得或活體外培養之生物實體之組織、細胞及其後代。
如本文所使用之術語「治療(treatment/treating)」係指獲得包括但不限於治療效益及/或預防效益之有益或所需結果之方法。舉例而言，治療可包含投與本文所揭示之系統或細胞群體。治療效益意謂針對一或多種正在治療之疾病、病況或症狀之任何治療相關改善或效果。為了預防效益，可向處於罹患特定疾病、病況或症狀之風險下之個體投與組合物，或向報導疾病之生理症狀中之一或多種、即使可能尚未顯現出疾病、病況或症狀之個體投與組合物。
術語「有效量」或「治療有效量」或「有效劑量(effective dose/effective dosage)」係指組合物，例如包含可與本發明之靶向細胞介素構築體組合之諸如淋巴球(例如T淋巴球及/或NK細胞)之免疫細胞的組合物足以在投與有需要之個體後產生所需活性的數量。在本發明之上下文內，術語「治療有效」係指組合物足以延遲藉由本發明方法治療之病症之至少一種症狀顯現、遏制其惡化、使其減輕或緩解的數量。
如本文所使用之關於序列之術語「胺基酸序列一致性百分比(%)」經定義為在比對候選序列與特異性序列且必要時引入間隙以達成最大序列一致性百分比且不將任何保守取代視為序列一致性之一部分之後，候選序列中之胺基酸殘基與特異性序列中之胺基酸殘基的一致性百分比。出於測定胺基酸序列一致性百分比之目的之比對可以在此項技術之技能範圍內之各種方式，例如使用諸如EMBOSS MATCHER、EMBOSS WATER、EMBOSS STRETCHER、EMBOSS NEEDLE、EMBOSS LALIGN、BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign (DNASTAR)軟體之公開可用電腦軟體來達成。熟習此項技術者可確定適用於量測比對之參數，包括在所比較之序列全長內達成最大比對所需之任何演算法。出於測定胺基酸序列一致性百分比之目的之比對可例如使用公開可用序列比較電腦程式ALIGN-2來達成。ALIGN-2序列比較電腦程式之原始碼已與使用者文件在美國著作權局(U.S. Copyright Office), Washington D.C., 20559可獲得，其中其係以美國著作權註冊號TXU510087註冊。ALIGN-2程式可經編譯用於UNIX作業系統，諸如數位UNIX V4.0D。所有序列比較參數皆由ALIGN-2程式設定且不會變化。
對於本發明中所論述之所有胺基酸位置，在抗體或其抗原結合片段之情形下，編號係根據EU索引。「EU索引」或「如Kabat等人之EU索引」或「EU編號方案」係指EU抗體編號(參見Edelman等人, 1969；Kabat等人, 1991)。 介白素 - 21 多肽
介白素-21 (IL-21)為可由T細胞、B細胞、NK細胞及骨髓細胞表現且調控先天性免疫細胞及適應性免疫細胞兩者之活性且改善T細胞存活率及效應功能的細胞介素。若干I期及II期臨床試驗包括IL-21作為用於治療癌症、發炎性疾病及自體免疫疾病之研究產品，該等疾病包括黑色素瘤、腎細胞癌、急性骨髓白血病、非霍奇金氏淋巴瘤、卵巢癌、結腸直腸癌、全身性紅斑狼瘡、克羅恩氏病(Crohn's disease)及類風濕性關節炎。
IL-21具有四螺旋束結構且以單體形式存在。在人類中，IL-21之兩種同功異型物係已知的，其中之各者衍生自前驅體分子。第一IL-21同功異型物包含162個胺基酸(aa)，其中前29個構成信號肽；且第二IL-21同功異型物包含153個aa，其中前29個構成信號肽，如同第一同功異型物一般。
IL-21結合至包含IL-21受體(IL-21R)及共同γ鏈(γc)之異二聚IL-21受體複合物。IL-21受體複合物於T細胞、B細胞及NK細胞之表面上表現。IL-21受體複合物之結構與IL-2受體複合物之結構類似，此係因為此等細胞介素受體複合物中之各者包含γc。
當IL-21結合至IL-21受體複合物時，活化JAK/STAT信號傳導路徑以活化目標基因。儘管IL-21誘導之信號傳導可為治療上合乎需要的，但鑒於IL-21之寬表現圖譜且由於IL-21能夠增強CD8+ T細胞反應以及抑制抗原呈現及T細胞激活，需要謹慎考慮信號傳導之時序及位置。
在一些實施例中，本發明提供相對於本文以SEQ ID NO: 1形式提供之野生型IL-21胺基酸序列包含至少一個胺基酸取代之IL-21多肽或其功能片段或變異體。除非另外指出，否則術語「野生型IL-21」、「野生型IL-21多肽」、「人類IL-21」及「人類IL-21多肽」可互換使用且可指SEQ ID NO: 1之胺基酸序列。相對於SEQ ID NO: 1包含至少一個胺基酸取代之該等IL-21多肽在本文中亦稱為IL-21突變蛋白。在例示性態樣中，如本文所描述之IL-21多肽或其功能片段或變異體包含至少一個且不超過X個胺基酸取代，其中X為2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34或更大。在一些實施例中，如本文所描述之IL-21多肽或其功能片段或變異體包含相較於SEQ ID NO: 1至少35個胺基酸取代。在例示性實施例中，如本文所描述之IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與人類IL-21 (SEQ ID NO: 1)之胺基酸序列相差10個胺基酸、15個胺基酸、20個胺基酸或25個胺基酸的胺基酸序列。在一些實施例中，如本文所描述之IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與人類IL-21 (SEQ ID NO: 1)之胺基酸序列相差不超過16個胺基酸的胺基酸序列。在一些實施例中，如本文所描述之IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與人類IL-21 (SEQ ID NO: 1)之胺基酸序列相差4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或16個胺基酸的胺基酸序列。在例示性實施例中，如本文所描述之IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與人類IL-21 (SEQ ID NO: 1)之胺基酸序列相差不超過7個胺基酸或不超過5個胺基酸的胺基酸序列。在一些實施例中，如本文所描述之IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與人類IL-21 (SEQ ID NO: 1)之胺基酸序列相差10、11、12、13、14、15或16個胺基酸的胺基酸序列。在例示性實施例中，如本文所描述之IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與人類IL-21 (SEQ ID NO: 1)之胺基酸序列相差3、4、5或6個胺基酸的胺基酸序列。在一些實施例中，如本文所描述之IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與人類IL-21 (SEQ ID NO: 1)之胺基酸序列不同5至16個胺基酸的胺基酸序列。在例示性實施例中，如本文所描述之IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與人類IL-21 (SEQ ID NO: 1)之胺基酸序列相差3至6個胺基酸或1至5個胺基酸的胺基酸序列。在例示性實施例中，如本文所描述之IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與人類IL-21 (SEQ ID NO: 1)之胺基酸序列相差一或兩個胺基酸的胺基酸序列。 經改變之等電點或電荷分佈
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含在影響或不影響其與IL-21R之結合之情況下改變等電點之至少一個突變。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含在不影響與IL-21R之結合之情況下改變等電點之至少一個突變。蛋白質之經改變等電點可改變表面電荷分佈，藉此影響既定蛋白質之蛋白質產量、非特異性結合及血液或循環半衰期。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體中之突變使理論等電點降低了既定單位，此係藉由特此以引用之方式併入之公開可用資料庫ProtParam (SwissProt)來量測。
在一些實施例中，相較於具有約9.42之等電點之SEQ ID NO: 1之等電點，IL-21多肽或其功能片段或變異體具有約0.6至約5.0個單位之等電點差。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體具有約6.0至約9.0之等電點。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含約6至約9之理論等電點。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含至少約6之理論等電點。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含至多約9之理論等電點。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含約9至約8.9、約9至約8.8、約9至約8.7、約9至約8.5、約9至約8.3、約9至約8.1、約9至約7.9、約9至約7.7、約9至約7.5、約9至約7.3、約9至約7、約9至約6.5、約9至約6.0、約8.9至約8.8、約8.9至約8.7、約8.9至約8.5、約8.9至約8.3、約8.9至約8.1、約8.9至約7.9、約8.9至約7.7、約8.9至約7.5、約8.9至約7.3、約8.9至約7、約8.9至約6.5、約8.9至約6.0、約8.8至約8.7、約8.8至約8.5、約8.8至約8.3、約8.8至約8.1、約8.8至約7.9、約8.8至約7.7、約8.8至約7.5、約8.8至約7.3、約8.8至約7、約8.8至約6.5、約8.8至約6.0、約8.7至約8.6、約8.7至約8.5、約8.7至約8.3、約8.7至約8.1、約8.7至約7.9、約8.7至約7.7、約8.7至約7.5、約8.7至約7.3、約8.7至約7、約8.7至約6.5、約8.7至約6.0、約8.5至約8.3、約8.5至約8.4、約8.5至約8.39、約8.5至約8.1、約8.5至約7.9、約8.5至約7.7、約8.5至約7.5、約8.5至約7.3、約8.5至約7、約8.5至約6.5、約8.5至約6.0、約8.39、約8.3至約8.1、約8.3至約7.9、約8.3至約7.7、約8.3至約7.5、約8.3至約7.3、約8.3至約7、約8.3至約6.5、約8.3至約6.0、約8.1至約7.9、約8.1至約7.7、約8.1至約7.5、約8.1至約7.3、約8.1至約7、約8.1至約6.5、約8.1至約6.0、約7.9至約7.7、約7.9至約7.5、約7.9至約7.3、約7.9至約7、約7.9至約6.5、約7.9至約6.0、約7.7至約7.5、約7.7至約7.3、約7.7至約7、約7.5至約7.3、約7.5至約7或約7.3至約7、約7.3至約6.5、約7.3至約6.0、約7.0至約6.5、約7.0至約6.0或約6.5至約6.0之理論等電點。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含約9、約8.9、約8.8、約8.79、約8.7、約8.5、約8.39、約8.3、約8.1、約7.9、約7.7、約7.5、約7.3、約7、約6.5或約6.0之理論等電點。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體具有小於9.0之理論等電點。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體具有小於8.9、小於8.8、小於8.7、小於8.5、小於8.3、小於8.1、小於7.9、小於7.7、小於7.5、小於7.3、小於7.2、小於7.0、小於6.5或小於6.2之理論等電點。
在一些情況下，相較於野生型IL-21，經改變之等電點可增加純化期間IL-21多肽或其功能片段或變異體之蛋白質產量。在一些實施例中，相比於野生型IL-21，增加之蛋白質產量大至少5%。在一些實施例中，相比於野生型IL-21，增加之蛋白質產量大至少5%、10%、15%、20%、25%、50%、75%、100%、125%、150%、175%、200%、225%、250%、275%或300%。在一些實施例中，相比於野生型IL-21，增加之蛋白質產量大至少5%、10%、15%、20%、25%、50%、75%、100%、125%、150%、175%、200%、225%、250%、275%或300%。在一些實施例中，增加之蛋白質產量為5%至10%、5%至15%、5%至20%、5%至25%、5%至50%、5%至75%、5%至100%、5%至125%、5%至150%、5%至175%、5%至200%、5%至225%、5%至250%、5%至275%、5%至300%、10%至15%、10%至20%、10%至25%、10%至50%、10%至75%、10%至100%、10%至125%、10%至150%、10%至175%、10%至200%、10%至225%、10%至250%、10%至275%、10%至300%、15%至20%、15%至25%、15%至50%、15%至75%、15%至100%、15%至125%、15%至150%、15%至175%、15%至200%、15%至225%、15%至250%、15%至275%、15%至300%、20%至25%、20%至50%、20%至75%、20%至100%、20%至125%、20%至150%、20%至175%、20%至200%、20%至225%、20%至250%、20%至275%、20%至300%、25%至50%、25%至75%、25%至100%、25%至125%、25%至150%、25%至175%、25%至200%、25%至225%、25%至250%、25%至275%、25%至300%、50%至75%、50%至100%、50%至125%、50%至150%、50%至175%、50%至200%、75%至100%、75%至125%、75%至150%、75%至175%、75%至200%、75%至225%、75%至250%、75%至275%、75%至300%、100%至125%、100%至150%、100%至175%、100%至200%、100%至225%、100%至250%、100%至275%、100%至300%、125%至150%、125%至175%、125%至200%、125%至225%、125%至250%、125%至275%、125%至300%、150%至175%、150%至200%、175%至200%、175%至225%、175%至250%、175%至275%、175%至300%、200%至225%、200%至250%、200%至275%、200%至300%、225%至250%、225%至275%、225%至300%、250%至275%、250%至300%或275%至300%。在一些實施例中，增加之蛋白質產量為約5%、10%、15%、20%、25%、50%、75%、100%、125%、150%、175%、200%、225%、250%、275%或300%。
在一些實施例中，相對於包含一或多個帶正電胺基酸殘基之野生型IL-21多肽之區域，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含一或多個帶正電胺基酸殘基之至少一個胺基酸取代。在一些情況下，野生型IL-21之區域包含2-20個帶正電胺基酸殘基。在一些實施例中，野生型IL-21中之區域包含2-3、2-4、2-5、2-7、2-8、2-9、2-10、2-11、2-12、2-13、2-14、2-15、2-16、2-17、2-18、2-19、2-20、3-4、3-5、3-6、3-7、3-8、3-9、3-10、3-11、3-12、3-13、3-14、3-15、3-16、3-17、3-18、3-19、3-20、4-5、4-6、4-7、4-8、4-9、4-10、4-11、4-12、4-13、4-14、4-15、4-16、4-17、4-18、4-19、4-20、5-6、5-7、5-8、5-9、5-10、5-11、5-12、5-13、5-14、5-15、5-16、5-17、5-18、5-19、5-20、6-7、6-8、6-9、6-10、6-11、6-12、6-13、6-14、6-15、6-16、6-17、6-18、6-19、6-20、7-8、7-9、7-10、7-11、7-12、7-13、7-14、7-15、7-16、7-17、7-18、7-19、7-20、8-9、8-10、8-11、8-12、8-13、8-14、8-15、8-16、8-17、8-18、8-19、8-20、9-10、9-11、9-12、9-13、9-14、9-15、9-16、9-17、9-18、9-19、9-20、10-11、10-12、10-13、10-14、10-15、10-16、10-17、10-18、10-19、10-20、11-12、11-13、11-14、11-15、11-16、11-17、11-18、11-19、11-20、12-13、12-14、12-15、12-16、12-17、12-18、12-19、12-20、13-14、13-15、13-16、13-17、13-18、13-19、13-20、14-15、14-16、14-17、3-18、14-19、14-20、15-16、15-17、15-18、15-19、15-20、16-17、16-18、16-19、16-20、17-18、17-19、17-20、18-19、18-20或19-20個帶正電胺基酸殘基。在一些實施例中，野生型IL-21之區域包含12個帶正電胺基酸殘基。在一些實施例中，野生型IL-21之區域包含2-20個胺基酸殘基，其中至少一個胺基酸帶正電。在一些實施例中，野生型IL-21之區域包含2-3、2-4、2-5、2-7、2-8、2-9、2-10、2-11、2-12、2-13、2-14、2-15、2-16、2-17、2-18、2-19、2-20、3-4、3-5、3-6、3-7、3-8、3-9、3-10、3-11、3-12、3-13、3-14、3-15、3-16、3-17、3-18、3-19、3-20、4-5、4-6、4-7、4-8、4-9、4-10、4-11、4-12、4-13、4-14、4-15、4-16、4-17、4-18、4-19、4-20、5-6、5-7、5-8、5-9、5-10、5-11、5-12、5-13、5-14、5-15、5-16、5-17、5-18、5-19、5-20、6-7、6-8、6-9、6-10、6-11、6-12、6-13、6-14、6-15、6-16、6-17、6-18、6-19、6-20、7-8、7-9、7-10、7-11、7-12、7-13、7-14、7-15、7-16、7-17、7-18、7-19、7-20、8-9、8-10、8-11、8-12、8-13、8-14、8-15、8-16、8-17、8-18、8-19、8-20、9-10、9-11、9-12、9-13、9-14、9-15、9-16、9-17、9-18、9-19、9-20、10-11、10-12、10-13、10-14、10-15、10-16、10-17、10-18、10-19、10-20、11-12,11-13、11-14、11-15、11-16、11-17、11-18、11-19、11-20、12-13、12-14、12-15、12-16、12-17、12-18、12-19、12-20、13-14、13-15、13-16、13-17、13-18、13-19、13-20、14-15、14-16、14-17、3-18、14-19、14-20、15-16、15-17、15-18、15-19、15-20、16-17、16-18、16-19、16-20、17-18、17-19、17-20、18-19、18-20或19-20個胺基酸殘基，其中至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個為帶正電胺基酸殘基。在一些實施例中，野生型IL-21之區域包含12個胺基酸殘基，其中2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12個胺基酸殘基帶正電。在一些實施例中，野生型IL-21之區域包含12個胺基酸殘基，其中2、3、4、5或6個胺基酸殘基帶正電。
在一些實施例中，野生型IL-21之區域內之胺基酸不結合人類IL-21受體。在一些實施例中，野生型IL-21之區域包含SEQ ID NO: 1之胺基酸殘基S80-T92。在一些實施例中，野生型IL-21之區域包含帶正電胺基酸殘基R85、R86、K88、H89及R90。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含野生型IL-21之區域中之至少一個胺基酸取代。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含S80-T92之至少一個胺基酸取代。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含S80-T92之至少四個胺基酸取代。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含S80-T92之至少四個胺基酸取代，限制條件為G84未經取代。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R85、R86、K88、H89或R90之至少一個胺基酸取代。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含胺基酸取代在S80、T81、N82、A83、R85、R86、Q87、K88、H89、R90、L91及T92中一或多者。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含胺基酸取代在S80、T81、N82、A83、R85、R86、Q87、K88、H89、R90、L91及T92。
在一些實施例中，相對於野生型IL-21 (SEQ ID NO: 1)包含經改變之等電點之IL-21多肽或其功能片段或變異體包含選自由以下組成之群之位置中之突變：SEQ ID NO: 1之K56、S80、T81、N82、A83、G84、R85、R86、Q87、K88、H89、R90、L91及T92。在一些實施例中，相對於野生型IL-21 (SEQ ID NO: 1)包含經改變之等電點之IL-21多肽或其功能片段或變異體包含選自由以下組成之群之位置中之突變：SEQ ID NO: 1之K56、T81、N82、A83、G84、R85、R86、Q87、K88、H89、R90、L91及T92。在一些實施例中，相對於野生型IL-21 (SEQ ID NO: 1)包含經改變之等電點之IL-21多肽或其功能片段或變異體包含選自由以下組成之群之位置中之突變：SEQ ID NO: 1之S80、T81、N82、A83、G84、R85、R86、Q87、K88、H89、R90、L91及T92。在一些實施例中，相對於野生型IL-21 (SEQ ID NO: 1)包含經改變之等電點之IL-21多肽或其功能片段或變異體包含選自由以下組成之群之位置中之突變：SEQ ID NO: 1之S80、T81、N82、A83、R85、R86、Q87、K88、H89、R90、L91及T92。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含SEQ ID NO: 1之位置K56之突變。在一些情況下，突變包含K56G、K56S、K56E、K56D或K56A。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含位置S80之突變。在一些實施例中，突變包含S80G、S80A、S80D或S80E。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含SEQ ID NO: 1之位置T81之突變。在一些情況下，突變包含T81G、T81S、T81E、T81D或T81A。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含SEQ ID NO: 1之位置N82之突變。在一些情況下，突變包含N82G、N82S、N82E、N82D或N82A。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含SEQ ID NO: 1之位置A83之突變。在一些情況下，突變包含A83G、A83S、A83E或A83D。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含SEQ ID NO: 1之位置G84之突變。在一些情況下，突變包含G84A、G84S、G84E或G84D。在一些實施例中，G84未經突變。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含SEQ ID NO: 1之位置R85之突變。在一些情況下，突變包含R85G、R85S、R85E、R85D或R85A。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含SEQ ID NO: 1之位置R86之突變。在一些情況下，突變包含R86G、R86S、R86E、R86D或R86A。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含SEQ ID NO: 1之位置Q87之突變。在一些情況下，突變包含Q87G、Q87S、Q87E、Q87D或Q87A。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含SEQ ID NO: 1之位置K88之突變。在一些情況下，突變包含K88G、K88S、K88E、K88D或K88A。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含SEQ ID NO: 1之位置H89之突變。在一些情況下，突變包含H89G、H89S、H89E、H89D或H89A。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含SEQ ID NO: 1之位置R90之突變。在一些情況下，突變包含R90G、R90S、R90E、R90D或R90A。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含SEQ ID NO: 1之位置L91之突變。在一些情況下，突變包含L91G、L91S、L91E、L91D或L91A。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含SEQ ID NO: 1之位置T92之突變。在一些情況下，突變包含T92G、T92S、T92E、T92D或T92A。
在一些實施例中，相對於具有SEQ ID NO: 1之IL-21具有經改變之等電點之IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 1之序列至少75%一致之胺基酸序列且包含選自由SEQ ID NO: 1之位置K56及R90組成之群之至少一個位置中之突變。在一些實施例中，相對於具有SEQ ID NO: 1之IL-21具有經改變之等電點之IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 1之序列至少80%、85%、90%、95%、97%、98%、99%或100%一致之胺基酸序列且包含選自由SEQ ID NO: 1之位置K56及R90組成之群之至少一個位置中之突變。在一些情況下，位置K56之突變為K56G、K56S、K56E、K56D或K56A；在一些情況下，位置R90之突變為R90G、R90S、R90E、R90D或R90A。在一些實例中，經改變之等電點為相較於具有SEQ ID NO: 1之IL-21之等電點(其為約9.42)降低之等電點，例如降低了至少約0.6個單位。
在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 1至少80%序列一致性且包含選自由以下組成之群之胺基酸：G85、G86、G88及A90；G85、G86、G88及E90；A56、A75、G85、G86、G88及E90；A56、E75、G85、G86、G88及A90；E56、A75、G85、G86、G88及A90；G80、G81、G82、S83、E85、G86、S87、G88、G89及S90；G80、G81、G82、S83、G85、G86、S87、G88、G89、S90；G85、G86、S87、G88、G89及E90；G85、G86、S87、G88、G89及S90；G85、G86、G87、G88、G89及E90；G85、G86、G87、G88、G89及G90；或G85、G86、E87、G88、G89及G90，其中位置編號對應於SEQ ID NO: 1。
在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 1至少80%序列一致性且包含胺基酸G85、G86、G88及A90。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 1至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性且包含胺基酸G85、G86、G88及A90。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 1至少80%序列一致性且包含胺基酸G85、G86、G88及E90。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 1至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性且包含胺基酸G85、G86、G88及E90。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 1至少80%序列一致性且包含胺基酸A56、A75、G85、G86、G88及E90。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 1至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性且包含胺基酸A56、A75、G85、G86、G88及E90。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 1至少80%序列一致性且包含胺基酸：A56、E75、G85、G86、G88及A90。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 1至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性且包含胺基酸A56、E75、G85、G86、G88及A90。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 1至少80%序列一致性且包含胺基酸：A56、A75、G85、G86、G88及A90。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 1至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性且包含胺基酸A56、A75、G85、G86、G88及A90。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 1至少80%序列一致性且包含胺基酸：E56、A75、G85、G86、G88及A90。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 1至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性且包含胺基酸E56、A75、G85、G86、G88及A90。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 1至少80%序列一致性且包含胺基酸：G80、G81、G82、S83、E85、G86、S87、G88、G89及S90。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 1至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性且包含胺基酸G80、G81、G82、S83、E85、G86、S87、G88、G89及S90。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 1至少80%序列一致性且包含胺基酸：G80、G81、G82、S83、G85、G86、S87、G88、G89及S90。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 1至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性且包含胺基酸G80、G81、G82、S83、G85、G86、S87、G88、G89及S90。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 1至少80%序列一致性且包含胺基酸：G80、G81、G82、S83、G85、G86、S87、G88、G89及E90。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 1至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性且包含胺基酸G80、G81、G82、S83、G85、G86、S87、G88、G89及E90。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 1至少80%序列一致性且包含胺基酸：G85、G86、S87、G88、G89及E90。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 1至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性且包含胺基酸G85、G86、S87、G88、G89及E90。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 1至少80%序列一致性且包含胺基酸：G85、G86、S87、G88、G89及S90。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 1至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性且包含胺基酸G85、G86、S87、G88、G89及S90。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 1至少80%序列一致性且包含胺基酸：G85、G86、G87、G88、G89及E90。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 1至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性且包含胺基酸G85、G86、G87、G88、G89及E90。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 1至少80%序列一致性且包含胺基酸：G85、G86、G87、G88、G89及G90。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 1至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性且包含胺基酸G85、G86、G87、G88、G89及G90。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 1至少80%序列一致性且包含胺基酸：G85、G86、E87、G88、G89及G90。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 1至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性且包含胺基酸G85、G86、E87、G88、G89及G90。在一些實施例中，提供電荷變異體IL-21多肽或其功能片段或變異體，其包含與選自由SEQ ID NO: 2、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14及15組成之群之序列至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之序列。
在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 1至少80%序列一致性且包含胺基酸：G80、G81、G82、S83、G85、G86、S87、G88、G89、G90、S91及G92。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 1至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性且包含胺基酸G80、G81、G82、S83、G85、G86、S87、G88、G89、G90、S91及G92。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 1至少80%序列一致性且包含胺基酸：G80、G81、G82、G83、G85、G86、G87、G88、G89、G90、G91及G92。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 1至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性且包含胺基酸G80、G81、G82、G83、G85、G86、G87、G88、G89、G90、G91及G92。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 1至少80%序列一致性且包含胺基酸：G80、G81、G82、S83、G85、G86、E87、G88、G89、G90、S91及G92。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 1至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性且包含胺基酸G80、G81、G82、S83、G85、G86、E87、G88、G89、G90、S91及G92。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 1至少80%序列一致性且包含胺基酸：G80、G81、G82、E83、G85、G86、E87、G88、G89、G90、S91及G92。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 1至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性且包含胺基酸G80、G81、G82、E83、G85、G86、E87、G88、G89、G90、S91及G92。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 1至少80%序列一致性且包含胺基酸：G82、G83、S85、G86、G87、G88、S89、G90、G91及S92。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 1至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性且包含胺基酸G82、G83、S85、G86、G87、G88、S89、G90、G91及S92。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 1至少80%序列一致性且包含胺基酸：G82、G83、E85、G86、G87、G88、S89、G90、G91及S92。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 1至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性且包含胺基酸G82、G83、E85、G86、G87、G88、S89、G90、G91及S92。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 1至少80%序列一致性且包含胺基酸：G80、G81、G82、G83、E85、G86、G87、G88、G89、G90、G91及G92。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 1至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性且包含胺基酸G80、G81、G82、G83、E85、G86、G87、G88、G89、G90、G91及G92。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 1至少80%序列一致性且包含胺基酸：G80、G81、G82、S83、G85、G86、S87、G88、G89、E90、G91及G92。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 1至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性且包含胺基酸G80、G81、G82、S83、G85、G86、S87、G88、G89、E90、G91及G92。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 1至少80%序列一致性且包含胺基酸：G80、G81、G82、G83、G85、G86、G87、G88、G89、E90、G91及G92。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 1至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性且包含胺基酸G80、G81、G82、G83、G85、G86、G87、G88、G89、E90、G91及G92。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 1至少80%序列一致性且包含胺基酸：G82、G83、S85、G86、G87、G88、S89、E90、G91及S92。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 1至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性且包含胺基酸G82、G83、S85、G86、G87、G88、S89、E90、G91及S92。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 1至少80%序列一致性且包含胺基酸：G82、G83、G85、G86、G87、G88、G89、E90、G91及G92。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 1至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性且包含胺基酸G82、G83、G85、G86、G87、G88、G89、E90、G91及G92。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 1至少80%序列一致性且包含胺基酸：G85、G86、G87、G88、G89、E90及G91。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 1至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性且包含胺基酸G85、G86、G87、G88、G89、E90及G91。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 1至少80%序列一致性且包含胺基酸：G82、G83、G85、G86、G87、G88、G89、E90及G91。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 1至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性且包含胺基酸G82、G83、G85、G86、G87、G88、G89、E90及G91。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 1至少80%序列一致性且包含胺基酸：G82、G83、G85、E86、G87、G88、G89、E90及G91。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 1至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性且包含胺基酸G82、G83、G85、E86、G87、G88、G89、E90及G91。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 1至少80%序列一致性且包含胺基酸：G82、G83、E85、G86、G87、G88、G89、E90及G91。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 1至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性且包含胺基酸G82、G83、E85、G86、G87、G88、G89、E90及G91。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 1至少80%序列一致性且包含胺基酸：G80、G81、G82、G83、E84、G85、G86、G87、G88、G89、E90、G91及G92。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 1至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性且包含胺基酸G80、G81、G82、G83、E84、G85、G86、G87、G88、G89、E90、G91及G92。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 1至少80%序列一致性且包含胺基酸：G80、G81、G82、E83、G85、G86、G87、G88、G89、E90、G91及G92。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 1至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性且包含胺基酸G80、G81、G82、E83、G85、G86、G87、G88、G89、E90、G91及G92。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 1至少80%序列一致性且包含胺基酸：G80、G81、E82、G83、G85、G86、G87、G88、G89、E90、G91及G92。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 1至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性且包含胺基酸G80、G81、E82、G83、G85、G86、G87、G88、G89、E90、G91及G92。在一些實施例中，提供電荷變異體IL-21多肽或其功能片段或變異體，其包含與選自由SEQ ID NO. 23-40組成之群之序列至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之序列。在一些實施例中，提供電荷變異體IL-21多肽或其功能片段或變異體，其包含與選自由SEQ ID NO. 2、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39及40組成之群之序列至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之序列。
在一些實施例中，IL-21多肽包含與選自由SEQ ID NO. 2、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14及15組成之群之序列約75%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與選自由SEQ ID NO. 2、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14及15組成之群之序列至少約75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與選自由SEQ ID NO. 2、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14及15組成之群之序列多至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與選自由SEQ ID NO. 2、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14及15組成之群之序列約75%序列一致性至約80%序列一致性、約75%序列一致性至約85%序列一致性、約75%序列一致性至約90%序列一致性、約75%序列一致性至約95%序列一致性、約75%序列一致性至約96%序列一致性、約75%序列一致性至約97%序列一致性、約75%序列一致性至約98%序列一致性、約75%序列一致性至約99%序列一致性、約75%序列一致性至約100%序列一致性、約80%序列一致性至約85%序列一致性、約80%序列一致性至約90%序列一致性、約80%序列一致性至約95%序列一致性、約80%序列一致性至約96%序列一致性、約80%序列一致性至約97%序列一致性、約80%序列一致性至約98%序列一致性、約80%序列一致性至約99%序列一致性、約80%序列一致性至約100%序列一致性、約85%序列一致性至約90%序列一致性、約85%序列一致性至約95%序列一致性、約85%序列一致性至約96%序列一致性、約85%序列一致性至約97%序列一致性、約85%序列一致性至約98%序列一致性、約85%序列一致性至約99%序列一致性、約85%序列一致性至約100%序列一致性、約90%序列一致性至約95%序列一致性、約90%序列一致性至約96%序列一致性、約90%序列一致性至約97%序列一致性、約90%序列一致性至約98%序列一致性、約90%序列一致性至約99%序列一致性、約90%序列一致性至約100%序列一致性、約95%序列一致性至約96%序列一致性、約95%序列一致性至約97%序列一致性、約95%序列一致性至約98%序列一致性、約95%序列一致性至約99%序列一致性、約95%序列一致性至約100%序列一致性、約96%序列一致性至約97%序列一致性、約96%序列一致性至約98%序列一致性、約96%序列一致性至約99%序列一致性、約96%序列一致性至約100%序列一致性、約97%序列一致性至約98%序列一致性、約97%序列一致性至約99%序列一致性、約97%序列一致性至約100%序列一致性、約98%序列一致性至約99%序列一致性、約98%序列一致性至約100%序列一致性或約99%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與選自由SEQ ID NO. 2、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14及15組成之群之序列約75%序列一致性、約80%序列一致性、約85%序列一致性、約90%序列一致性、約95%序列一致性、約96%序列一致性、約97%序列一致性、約98%序列一致性、約99%序列一致性或約100%序列一致性。
在一些實施例中，IL-21多肽包含與選自由SEQ ID NO. 23-40組成之群之序列約75%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與選自由SEQ ID NO. 23-40組成之群之序列至少約75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與選自由SEQ ID NO. 23-40組成之群之序列多至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與選自由SEQ ID NO. 23-40組成之群之序列約75%序列一致性至約80%序列一致性、約75%序列一致性至約85%序列一致性、約75%序列一致性至約90%序列一致性、約75%序列一致性至約95%序列一致性、約75%序列一致性至約96%序列一致性、約75%序列一致性至約97%序列一致性、約75%序列一致性至約98%序列一致性、約75%序列一致性至約99%序列一致性、約75%序列一致性至約100%序列一致性、約80%序列一致性至約85%序列一致性、約80%序列一致性至約90%序列一致性、約80%序列一致性至約95%序列一致性、約80%序列一致性至約96%序列一致性、約80%序列一致性至約97%序列一致性、約80%序列一致性至約98%序列一致性、約80%序列一致性至約99%序列一致性、約80%序列一致性至約100%序列一致性、約85%序列一致性至約90%序列一致性、約85%序列一致性至約95%序列一致性、約85%序列一致性至約96%序列一致性、約85%序列一致性至約97%序列一致性、約85%序列一致性至約98%序列一致性、約85%序列一致性至約99%序列一致性、約85%序列一致性至約100%序列一致性、約90%序列一致性至約95%序列一致性、約90%序列一致性至約96%序列一致性、約90%序列一致性至約97%序列一致性、約90%序列一致性至約98%序列一致性、約90%序列一致性至約99%序列一致性、約90%序列一致性至約100%序列一致性、約95%序列一致性至約96%序列一致性、約95%序列一致性至約97%序列一致性、約95%序列一致性至約98%序列一致性、約95%序列一致性至約99%序列一致性、約95%序列一致性至約100%序列一致性、約96%序列一致性至約97%序列一致性、約96%序列一致性至約98%序列一致性、約96%序列一致性至約99%序列一致性、約96%序列一致性至約100%序列一致性、約97%序列一致性至約98%序列一致性、約97%序列一致性至約99%序列一致性、約97%序列一致性至約100%序列一致性、約98%序列一致性至約99%序列一致性、約98%序列一致性至約100%序列一致性或約99%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與選自由SEQ ID NO. 23-40組成之群之序列約75%序列一致性、約80%序列一致性、約85%序列一致性、約90%序列一致性、約95%序列一致性、約96%序列一致性、約97%序列一致性、約98%序列一致性、約99%序列一致性或約100%序列一致性。
在一些實施例中，IL-21多肽包含與選自由SEQ ID NO. 2、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39及40組成之群之序列約75%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與選自由SEQ ID NO. 2、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39及40組成之群之序列至少約75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與選自由SEQ ID NO. 2、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39及40組成之群之序列多至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與選自由SEQ ID NO. 2、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39及40組成之群之序列約75%序列一致性至約80%序列一致性、約75%序列一致性至約85%序列一致性、約75%序列一致性至約90%序列一致性、約75%序列一致性至約95%序列一致性、約75%序列一致性至約96%序列一致性、約75%序列一致性至約97%序列一致性、約75%序列一致性至約98%序列一致性、約75%序列一致性至約99%序列一致性、約75%序列一致性至約100%序列一致性、約80%序列一致性至約85%序列一致性、約80%序列一致性至約90%序列一致性、約80%序列一致性至約95%序列一致性、約80%序列一致性至約96%序列一致性、約80%序列一致性至約97%序列一致性、約80%序列一致性至約98%序列一致性、約80%序列一致性至約99%序列一致性、約80%序列一致性至約100%序列一致性、約85%序列一致性至約90%序列一致性、約85%序列一致性至約95%序列一致性、約85%序列一致性至約96%序列一致性、約85%序列一致性至約97%序列一致性、約85%序列一致性至約98%序列一致性、約85%序列一致性至約99%序列一致性、約85%序列一致性至約100%序列一致性、約90%序列一致性至約95%序列一致性、約90%序列一致性至約96%序列一致性、約90%序列一致性至約97%序列一致性、約90%序列一致性至約98%序列一致性、約90%序列一致性至約99%序列一致性、約90%序列一致性至約100%序列一致性、約95%序列一致性至約96%序列一致性、約95%序列一致性至約97%序列一致性、約95%序列一致性至約98%序列一致性、約95%序列一致性至約99%序列一致性、約95%序列一致性至約100%序列一致性、約96%序列一致性至約97%序列一致性、約96%序列一致性至約98%序列一致性、約96%序列一致性至約99%序列一致性、約96%序列一致性至約100%序列一致性、約97%序列一致性至約98%序列一致性、約97%序列一致性至約99%序列一致性、約97%序列一致性至約100%序列一致性、約98%序列一致性至約99%序列一致性、約98%序列一致性至約100%序列一致性或約99%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與選自由SEQ ID NO. 2、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39及40組成之群之序列約75%序列一致性、約80%序列一致性、約85%序列一致性、約90%序列一致性、約95%序列一致性、約96%序列一致性、約97%序列一致性、約98%序列一致性、約99%序列一致性或約100%序列一致性。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 4至少80%序列一致性且包含胺基酸G85、G86、G88及A90。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 4至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性且包含胺基酸G85、G86、G88及A90。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 2至少80%序列一致性且包含胺基酸G85、G86、G88及E90。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 2至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性且包含胺基酸G85、G86、G88及E90。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 5至少80%序列一致性且包含胺基酸A56、A75、G85、G86、G88及E90。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 5至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性且包含胺基酸A56、A75、G85、G86、G88及E90。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 6至少80%序列一致性且包含胺基酸：A56、E75、G85、G86、G88及A90。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 6至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性且包含胺基酸A56、E75、G85、G86、G88及A90。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 7至少80%序列一致性且包含胺基酸：A56、A75、G85、G86、G88及A90。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 7至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性且包含胺基酸A56、A75、G85、G86、G88及A90。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 8至少80%序列一致性且包含胺基酸：E56、A75、G85、G86、G88及A90。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 8至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性且包含胺基酸E56、A75、G85、G86、G88及A90。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 9至少80%序列一致性且包含胺基酸：G80、G81、G82、S83、E85、G86、S87、G88、G89及S90。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 9至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性且包含胺基酸G80、G81、G82、S83、E85、G86、S87、G88、G89及S90。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 10至少80%序列一致性且包含胺基酸：G80、G81、G82、S83、G85、G86、S87、G88、G89、S90。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 10至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性且包含胺基酸G80、G81、G82、S83、G85、G86、S87、G88、G89、S90。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 10至少80%序列一致性且包含胺基酸：G80、G81、G82、S83、G85、G86、S87、G88、G89、E90。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 10至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性且包含胺基酸G80、G81、G82、S83、G85、G86、S87、G88、G89、E90。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 11至少80%序列一致性且包含胺基酸：G85、G86、S87、G88、G89及E90。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 11至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性且包含胺基酸G85、G86、S87、G88、G89及E90。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 12至少80%序列一致性且包含胺基酸：G85、G86、S87、G88、G89及S90。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 12至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性且包含胺基酸G85、G86、S87、G88、G89及S90。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 13至少80%序列一致性且包含胺基酸：G85、G86、G87、G88、G89及E90。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 13至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性且包含胺基酸G85、G86、G87、G88、G89及E90。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 14至少80%序列一致性且包含胺基酸：G85、G86、G87、G88、G89及G90。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 14至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性且包含胺基酸G85、G86、G87、G88、G89及G90。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 15至少80%序列一致性且包含胺基酸：G85、G86、E87、G88、G89及G90。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 15至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性且包含胺基酸G85、G86、E87、G88、G89及G90。
在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 23至少80%序列一致性且包含胺基酸：G80、G81、G82、S83、G85、G86、S87、G88、G89、G90、S91及G92。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 23至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性且包含胺基酸G80、G81、G82、S83、G85、G86、S87、G88、G89、G90、S91及G92。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 24至少80%序列一致性且包含胺基酸：G80、G81、G82、G83、G85、G86、G87、G88、G89、G90、G91及G92。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 24至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性且包含胺基酸G80、G81、G82、G83、G85、G86、G87、G88、G89、G90、G91及G92。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 25至少80%序列一致性且包含胺基酸：G80、G81、G82、S83、G85、G86、E87、G88、G89、G90、S91及G92。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 25至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性且包含胺基酸G80、G81、G82、S83、G85、G86、E87、G88、G89、G90、S91及G92。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 26至少80%序列一致性且包含胺基酸：G80、G81、G82、E83、G85、G86、E87、G88、G89、G90、S91及G92。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 26至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性且包含胺基酸G80、G81、G82、E83、G85、G86、E87、G88、G89、G90、S91及G92。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 27至少80%序列一致性且包含胺基酸：G82、G83、S85、G86、G87、G88、S89、G90、G91及S92。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 27至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性且包含胺基酸G82、G83、S85、G86、G87、G88、S89、G90、G91及S92。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 28至少80%序列一致性且包含胺基酸：G82、G83、E85、G86、G87、G88、S89、G90、G91及S92。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 28至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性且包含胺基酸G82、G83、E85、G86、G87、G88、S89、G90、G91及S92。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 29至少80%序列一致性且包含胺基酸：G80、G81、G82、G83、E85、G86、G87、G88、G89、G90、G91及G92。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 29至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性且包含胺基酸G80、G81、G82、G83、E85、G86、G87、G88、G89、G90、G91及G92。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 30至少80%序列一致性且包含胺基酸：G80、G81、G82、S83、G85、G86、S87、G88、G89、E90、G91及G92。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 30至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性且包含胺基酸G80、G81、G82、S83、G85、G86、S87、G88、G89、E90、G91及G92。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 31至少80%序列一致性且包含胺基酸：G80、G81、G82、G83、G85、G86、G87、G88、G89、E90、G91及G92。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 31至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性且包含胺基酸G80、G81、G82、G83、G85、G86、G87、G88、G89、E90、G91及G92。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 32至少80%序列一致性且包含胺基酸：G82、G83、S85、G86、G87、G88、S89、E90、G91及S92。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 32至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性且包含胺基酸G82、G83、S85、G86、G87、G88、S89、E90、G91及S92。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 33至少80%序列一致性且包含胺基酸：G82、G83、G85、G86、G87、G88、G89、E90、G91及G92。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 33至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性且包含胺基酸G82、G83、G85、G86、G87、G88、G89、E90、G91及G92。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 34至少80%序列一致性且包含胺基酸：G85、G86、G87、G88、G89、E90及G91。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 34至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性且包含胺基酸G85、G86、G87、G88、G89、E90及G91。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 35至少80%序列一致性且包含胺基酸：G82、G83、G85、G86、G87、G88、G89、E90及G91。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 35至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性且包含胺基酸G82、G83、G85、G86、G87、G88、G89、E90及G91。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 36至少80%序列一致性且包含胺基酸：G82、G83、G85、E86、G87、G88、G89、E90及G91。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 36至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性且包含胺基酸G82、G83、G85、E86、G87、G88、G89、E90及G91。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 37至少80%序列一致性且包含胺基酸：G82、G83、E85、G86、G87、G88、G89、E90及G91。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 37至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性且包含胺基酸G82、G83、E85、G86、G87、G88、G89、E90及G91。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 38至少80%序列一致性且包含胺基酸：G80、G81、G82、G83、E84、G85、G86、G87、G88、G89、E90、G91及G92。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 38至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性且包含胺基酸G80、G81、G82、G83、E84、G85、G86、G87、G88、G89、E90、G91及G92。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 39至少80%序列一致性且包含胺基酸：G80、G81、G82、E83、G85、G86、G87、G88、G89、E90、G91及G92。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 39至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性且包含胺基酸G80、G81、G82、E83、G85、G86、G87、G88、G89、E90、G91及G92。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 40至少80%序列一致性且包含胺基酸：G80、G81、E82、G83、G85、G86、G87、G88、G89、E90、G91及G92。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 40至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性且包含胺基酸G80、G81、E82、G83、G85、G86、G87、G88、G89、E90、G91及G92。
在一些實施例中，IL-21多肽包含QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLX 1SANTGNNERIINVSIKKLX 2RKPPX 3X 4X 5X 6X 7X 8X 9X 10X 11X 12X 13X 14X 15CPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS (SEQ ID NO: 383)，其中X 1= A、E、K；X 2= A、E、K；X 3= G、S；X 4= G、T；X 5= G、E、N；X 6= G、S、E、A；X 7= E、G；X 8= G、E、S、R；X 9= G、E、R；X 10= S、G、E、Q；X 11= G、K；X 12= G、S、H；X 13= A、E、S、G、R；X 14= S、G、L；X 15= G、S、T；且其中至少一個胺基酸殘基不為SEQ ID NO: 1中所述之一致位置之胺基酸殘基。在一些實施例中，X 8、X 9、X 11、X 12及X 13中之至少一者不為SEQ ID NO: 1中所述之一致位置之胺基酸殘基。
在一些實施例中，IL-21多肽包含胺基酸序列：QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPX 1X 2X 3X 4GX 5X 6X 7X 8X 9X 10X 11X 12CPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS (SEQ ID NO: 380)，其中X 1= G、S；X 2= G、T；X 3= G、E、N；X 4= G、S、E、A；X 5= G、E、S、R；X 6= G、E、R；X 7= S、G、E、Q；X 8= G、K；X 9= G、S、H；X 10= A、E、S、G、R；X 11= S、G、L；及X 12= G、S、T，限制條件為X 5、X 6、X 8、X 9及X 10中之至少一者不為SEQ ID NO: 1中所述之一致位置之胺基酸殘基。在一些實施例中，X 5= G，X 6= G，X 8= G，X 10= A。在一些實施例中，X 5= G，X 6= G，X 8= G，X 10= E。在一些實施例中，X 1= G，X 2= G，X 3= G，X 4= S，X 5= E，X 6= G，X 7= S，X 8= G，X 9= G，X 10= S。在一些實施例中，X 1= G，X 2= G，X 3= G，X 4= S，X 5= G，X 6= G，X 7= S，X 8= G，X 9= G，X 10= E。在一些實施例中，X 5= G，X 6= G，X 7= S，X 8= G，X 9= G，X 10= E。在一些實施例中，X 5= G，X 6= G，X 7= S，X 8= G，X 9= G，X 10= S。在一些實施例中，X 5= G，X 6= G，X 7= G，X 8= G，X 9= G，X 10= E。在一些實施例中，X 5= G，X 6= G，X 7= G，X 8= G，X 9= G，X 10= G。在一些實施例中，X 5= G，X 6= G，X 7= E，X 8= G，X 9= G，X 10= G。在一些實施例中，X 1= G，X 2= G，X 3= G，X 4= S，X 5= G，X 6= G，X 7= S，X 8= G，X 9= G，X 10= G，X 11= S，X 12= G。在一些實施例中，X 1= G，X 2= G，X 3= G，X 4= G，X 5= G，X 6= G，X 7= G，X 8= G，X 9= G，X 10= G，X 11= G，X 12= G。在一些實施例中，X 1= G，X 2= G，X 3= G，X 4= S，X 5= G，X 6= G，X 7= E，X 8= G，X 9= G，X 10= G，X 11= S，X 12= G。在一些實施例中，X 1= G，X 2= G，X 3= G，X 4= E，X 5= G，X 6= G，X 7= E，X 8= G，X 9= G，X 10= G，X 11= S，X 12= G。在一些實施例中，X 3= G，X 4= G，X 5= S，X 6= G，X 7= G，X 8= G，X 9= S，X 10= G，X 11= G，X 12= S。在一些實施例中，X 3= G，X 4= G，X 5= E，X 6= G，X 7= G，X 8= G，X 9= S，X 10= G，X 11= G，X 12= S。在一些實施例中，X 1= G，X 2= G，X 3= G，X 4= G，X 5= E，X 6= G，X 7= G，X 8= G，X 9= G，X 10= G，X 11= G，X 12= G。在一些實施例中，X 1= G，X 2= G，X 3= G，X 4= S，X 5= G，X 6= G，X 7= S，X 8= G，X 9= G，X 10= E，X 11= G，X 12= G。在一些實施例中，X 1= G，X 2= G，X 3= G，X 4= G，X 5= G，X 6= G，X 7= G，X 8= G，X 9= G，X 10= E，X 11= G，X 12= G。在一些實施例中，X 3= G，X 4= G，X 5= S，X 6= G，X 7= G，X 8= G，X 9= S，X 10= E，X 11= G，X 12= S。在一些實施例中，X 3= G，X 4= G，X 5= G，X 6= G，X 7= G，X 8= G，X 9= G，X 10= E，X 11= G，X 12= G。在一些實施例中，X 5= G，X 6= G，X 7= G，X 8= G，X 9= G，X 10= E，X 11= G。在一些實施例中，X 3= G，X 4= G，X 5= G，X 6= G，X 7= G，X 8= G，X 9= G，X 10= E，X 11= G。在一些實施例中，X 3= G，X 4= G，X 5= G，X 6= E，X 7= G，X 8= G，X 9= G，X 10= E，X 11= G。在一些實施例中，X 3= G，X 4= G，X 5= E，X 6= G，X 7= G，X 8= G，X 9= G，X 10= E，X 11= G。在一些實施例中，X 1= G，X 2= G，X 3= G，X 4= E，X 5= G，X 6= G，X 7= G，X 8= G，X 9= G，X 10= E，X 11= G，X 12= G。在一些實施例中，X 1= G，X 2= G，X 3= E，X 4= G，X 5= G，X 6= G，X 7= G，X 8= G，X 9= G，X 10= E，X 11= G，X 12= G。
在一些實施例中，IL-21多肽包含如由SEQ ID NO: 1所界定之在位置78處起始之胺基酸序列，其中該胺基酸序列為PPX 1X 2X 3X 4GX 5X 6X 7X 8X 9X 10X 11X 12CP (SEQ ID NO: 386)，其中X 1= G、S；X 2= G、T；X 3= G、E、N；X 4= G、S、E、A；X 5= G、E、S、R；X 6= G、E、R；X 7= S、G、E、Q；X 8= G、K；X 9= G、S、H；X 10= A、E、S、G、R；X 11= S、G、L；及X 12= G、S、T、限制條件為X 5、X 6、X 8、X 9及X 10中之至少一者不為SEQ ID NO: 1中所述之一致位置之胺基酸殘基。
在一些實施例中，IL-21多肽包含如由SEQ ID NO: 1所界定之在位置80處起始之胺基酸序列，其中該胺基酸序列為X 1X 2X 3X 4GX 5X 6X 7X 8X 9X 10X 11X 12，其中X 1= G、S；X 2= G、T；X 3= G、E、N；X 4= G、S、E、A；X 5= G、E、S、R；X 6= G、E、R；X 7= S、G、E、Q；X 8= G、K；X 9= G、S、H；X 10= A、E、S、G、R；X 11= S、G、L；及X 12= G、S、T、限制條件為X 5、X 6、X 8、X 9及X 10中之至少一者不為SEQ ID NO: 1中所述之一致位置之胺基酸殘基。 減少之 IL - 21R 結合
在一些實施例中，本發明提供對IL-21R具有降低之結合親和力的IL-21多肽或其功能片段或變異體。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含降低其對IL-21R之結合親和力之至少一個突變。在一些實施例中，該等突變係在選自由以下組成之群之一或多個位置中：R5、I8、R9、R11、Q12、I14、D15、D18、Q19、Y23、R65、S70、K72、K73、K75、R76、K77、S80、Q116及K117，其中位置編號為根據SEQ ID NO: 1之胺基酸序列之編號。在一些實施例中，該等突變係在選自由以下組成之群之一或多個位置中：R5、I8、R9、R11、L13、I14、I16、V17、D18、K72、K73、L74、K75、R76、K77及K117，其中位置編號為根據SEQ ID NO: 1之胺基酸序列之編號。在一些實施例中，位置R5之突變包含選自由以下組成之群之胺基酸取代：A、D、E、S、T、N、Q、V、I、L、Y或F。在一些實施例中，位置I8之突變包含選自由以下組成之群之胺基酸取代：Q、H、E。在一些實施例中，位置R9之突變包含選自由以下組成之群之胺基酸取代：A、D、E、S、T、N、Q、V、I、L、Y或F。在一些實施例中，位置R11之突變包含選自由以下組成之群之胺基酸取代：D或E。在一些實施例中，位置Q12之突變包含選自由以下組成之群之胺基酸取代：L、I或Y。在一些實施例中，位置L13之突變包含選自由以下組成之群之胺基酸取代：F或R。在一些實施例中，位置I14之突變包含選自由以下組成之群之胺基酸取代：D或E。在一些實施例中，位置D15之突變包含選自由以下組成之群之胺基酸取代：R、K、H、L、Y或F。在一些實施例中，位置I16之突變包含選自由以下組成之群之胺基酸取代：A、S或R。在一些實施例中，位置V17之突變包含選自由以下組成之群之胺基酸取代：I或A。在一些實施例中，位置D18之突變包含選自由以下組成之群之胺基酸取代：A、K或R。在一些實施例中，位置Q19之突變包含選自由以下組成之群之胺基酸取代：L或Y。在一些實施例中，位置Y23之突變包含E之胺基酸取代。在一些實施例中，位置R65之突變包含選自由以下組成之群之胺基酸取代：G、S、E、D或A。在一些實施例中，位置S70之突變包含選自由以下組成之群之胺基酸取代：H、Y、L、V或F。在一些實施例中，位置K72之突變包含選自由以下組成之群之胺基酸取代：G、S、E、D或A。在一些實施例中，位置K73之突變包含選自由以下組成之群之胺基酸取代：A、Y、L、F、G、S、T、E或D。在一些實施例中，位置L74之突變包含選自由以下組成之群之胺基酸取代：I、F、V或M。在一些實施例中，位置K75之突變包含選自由以下組成之群之胺基酸取代：G、S、E、D或A。在一些實施例中，位置R76之突變包含選自由以下組成之群之胺基酸取代：A、D、E、S、T、N、Q、V、I、L、Y或F。在一些實施例中，位置K77之突變包含選自由以下組成之群之胺基酸取代：G、S、E、D或A。在一些實施例中，位置S80之突變包含H、A、G、E或D之胺基酸取代。在一些實施例中，位置Q116之突變包含Y之胺基酸取代。在一些實施例中，位置K117之突變包含選自由以下組成之群之胺基酸取代：A、D或E。
在一些情況下，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含選自以下之至少一個胺基酸取代：R5F、R5A、R5E、R5S、R5T、R5N、R5Q、R5V、R5I、R5L、R5Y、I8E、R9A、R9D、R9E、R9H、R9S、R9T、R9N、R9G、R9V、R9I、R9L、R9Y、R11D、R11E、L13F、L13R、I14D、I16A、I16S、I16R、V17I、V17A、D18A、K72A、K72E、K73A、K73E、K75A、K75E、L74I、L74F、L74M、L74V、R76E、R76F、R76A、R76N、R76D、R76S、R76T、R76Q、R76V、R76I、R76L、R76Y、R76M、K77A、K77E及K117A。在一些情況下，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76E或R76Q之胺基酸取代。
本發明之IL-21多肽或其功能片段或變異體之例示性序列提供如下：QGQDX 1HMX 2X 3MX 4X 5LX 6X 7IVX 8X 9LKNX 10VNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNEX 11IINVX 12IX 13X 14LX 15X 16X 17PPX 18TNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLX 19X 20MIHQHLSSRTHGSEDS (SEQ ID NO: 22)。在一些實施例中，X 1= R、A、D、E、S、T、N、Q、V、I、L、Y或F。在一些實施例中，X 2= I、Q、H、E。在一些實施例中，X 3= R、A、D、E、S、T、N、Q、V、I、L、Y或F。在一些實施例中，X 4= R、D或E。在一些實施例中，X 5= Q、L、I或Y。在一些實施例中，X 6= I、D或E。在一些實施例中，X 7= D、R、K、H、L、Y或F。在一些實施例中，X 8= D、A、K或R。在一些實施例中，X 9= Q、L或Y。在一些實施例中，X 10= Y或E。在一些實施例中，X 11= R、G、S、E、D或A。在一些實施例中，X 12= S、H、Y、L、V或F。在一些實施例中，X 13= K、G、S、E、D或A。在一些實施例中，X 14= K、A、Y、L、F、G、S、T、E、A或D。在一些實施例中，X 15= K、G、S、E、D或A。在一些實施例中，X 16= R、A、D、E、S、T、N、Q、V、I、L、Y或F。在一些實施例中，X 17= K、G、S、E、D或A。在一些實施例中，X 18= S、H、A、G、E或D。在一些實施例中，X 19= Q或Y。在一些實施例中，X 20= K、A、D或E。
在一些實施例中，與IL-21R具有減少結合的IL-21多肽或其功能片段或變異體包含以下序列：QGQDX 1HMX 2X 3MX 4QX 5X 6DX 7X 8X 9QLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIX 10X 11X 12X 13X 14X 15PPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQX 16MIHQHLSSRTHGSEDS (SEQ ID NO: 384)，其中X 1= F、A、E、S、T、N、Q、V、I、L、Y、R；X 2= E、I；X 3= A、D、E、H、S、T、N、G、V、I、L、Y、R；X 4= D、E、R；X 5= F、R、L；X 6= D、I；X 7= A、S、R、I；X 8= I、A、V；X 9= A、D；X 10= A、E、K；X 11= A、E、K；X 12= I、F、M、L；X 13= A、K、E；X 14= E、F、A、N、D、S、T、Q、V、I、L、Y、M、R；X 15= A、E、K；X 16= A、K；限制條件為X 1-X 16中之至少一者不為SEQ ID NO: 1中所述之一致位置之胺基酸殘基。
在一些實施例中，本發明提供包含胺基酸序列與選自SEQ ID NO: 313-371之胺基酸序列至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之IL-21多肽。在一些實施例中，本發明提供包含選自SEQ ID NO: 313-371之胺基酸序列的IL-21多肽。 突變組合
在一些實施例中，如本文所描述之IL-21多肽或其功能片段或變異體包含以下之組合：(a)相對於野生型IL-21 (SEQ ID NO: 1)改變其等電點之突變及(b)相對於該野生型IL-21減弱其與IL-21R之結合的突變。在一些實施例中，群組 ( a )中之突變係在選自以下位置之位置：K56、T81、N82、A83、G84、R85、R86、Q87、K88、H89、R90、L91及T92；且群組 ( b )中之突變係在選自由以下組成之群之位置：R5、I8、R9、R11、Q12、I14、D15、D18、Q19、Y23、R65、S70、K72、K73、K75、R76、K77、S80、Q116及K117，其中位置編號係根據SEQ ID NO: 1之胺基酸序列。在一些實施例中，群組 ( a )中之突變係在選自以下位置之位置：S80、T81、N82、A83、G84、R85、R86、Q87、K88、H89、R90、L91及T92；且群組 ( b )中之突變係在選自由以下組成之群之位置：R5、I8、R9、R11、L13、I14、I16、V17、D18、K72、K73、L74、K75、R76、K77及K117，其中位置編號係根據SEQ ID NO: 1之胺基酸序列。在一些實施例中，群組 ( a )中之突變係在選自以下位置之位置：S80、T81、N82、A83、R85、R86、Q87、K88、H89、R90、L91及T92；且群組 ( b )中之突變係在選自由以下組成之群之位置：R5、I8、R9、R11、L13、I14、I16、V17、D18、K72、K73、L74、K75、R76、K77及K117，其中位置編號係根據SEQ ID NO: 1之胺基酸序列。在一些實施例中，群組 ( a )中之突變係在選自以下位置之位置：S80、T81、N82、A83、G84、R85、R86、Q87、K88、H89、R90、L91及T92；且群組 ( b )中之突變係在位置R76處，其中位置編號係根據SEQ ID NO: 1之胺基酸序列。
在一些實施例中，IL-21多肽包含如下共同序列：QGQDX 1HMX 2X 3MX 4X 5LX 6X 7IVX 8X 9LKNX 10VNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLX 11SANTGNNEX 12IINVX 13IX 14X 15LX 16X 17X 18PPX 19X 20X 21X 22X 23X 24X 25X 26X 27X 28X 29X 30X 31CPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLX 32X 33MIHQHLSSRTHGSEDS (SEQ ID NO: 3)。在一些實施例中，X 1= R、A、D、E、S、T、N、Q、V、I、L、Y或F。在一些實施例中，X 2= I、Q、H、E。在一些實施例中，X 3= R、A、D、E、S、T、N、Q、V、I、L、Y或F。在一些實施例中，X 4= R、D或E。在一些實施例中，X 5= Q、L、I或Y。在一些實施例中，X 6= I或D或E。在一些實施例中，X 7= D、R、K、H、L、Y或F。在一些實施例中，X 8= D、A、K或R。在一些實施例中，X 9= Q、L或Y。在一些實施例中，X 10= Y或E，X 11= G、S、E、D或A。在一些實施例中，X 12= R、G、S、E、D或A。在一些實施例中，X 13= S、H、Y、L、V或F。在一些實施例中，X 14= K、G、S、E、D或A。在一些實施例中，X 15= K、A、Y、L、F、G、S、T、E、A或D。在一些實施例中，X 16= K、G、S、E、D或A。在一些實施例中，X 17= R、A、D、E、S、T、N、Q、V、I、L、Y或F。在一些實施例中，X 18= K、G、S、E、D或A。在一些實施例中，X 19= S、H、A、G、E或D。在一些實施例中，X 20= G、S、E、D或A。在一些實施例中，X 21= G、S、E、D或A。在一些實施例中，X 22= G、S、E或D。在一些實施例中，X 23= A、S、E或D。在一些實施例中，X 24= G、S、E、D或A。在一些實施例中，X 25= G、S、E、D或A。在一些實施例中，X 26= G、S、E、D或A。在一些實施例中，X 27= G、S、E、D或A。在一些實施例中，X 28= G、S、E、D或A。在一些實施例中，X 29= G、S、E、D或A。在一些實施例中，X 30= G、S、E、D或A。在一些實施例中，X 31= G、S、E、D或A。在一些實施例中，X 32= Y。在一些實施例中，X 33= A、D或E。
在一些實施例中，IL-21多肽包含如下共同序列：QGQDX 1HMX 2X 3MX 4QX 5X 6DX 7X 8X 9QLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLX 10SANTGNNERIINVSIX 11X 12X 13X 14X 15X 16PPX 17X 18X 19X 20X 21X 22X 23X 24X 25X 26X 27X 28X 29CPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQ X 30MIHQHLSSRTHGSEDS (SEQ ID NO: 385)，其中X 1= F、A、E、S、T、N、Q、V、I、L、Y、R；X 2= E、I；X 3= A、D、E、H、S、T、N、G、V、I、L、Y、R；X 4= D、E、R；X 5= F、R、L；X 6= D、I；X 7= A、S、R、I；X 8= I、A、V；X 9= A、D；X 10= A、E、K；X 11= A、E、K；X 12= A、E、K；X 13= I、F、M、L；X 14= A、K、E；X 15= E、F、A、N、D、S、T、Q、V、I、L、Y、M、R；X 16= A、E、K；X 17= G、S；X 18= G、T；X 19= G、E、N；X 20= G、S、E、A；X 21= E、G；X 22= G、E、S、R；X 23= G、E、R；X 24= S、G、E、Q；X 25= G、K；X 26= G、S、H；X 27= A、E、S、G、R；X 28= S、G、L；X 29= G、S、T；X 30= A、K，限制條件為X 1-X 9、X 11-X 16及X 30中之至少一者不為SEQ ID NO: 1中所述之一致位置之胺基酸殘基且減少與IL-21R之結合，及限制條件為X 10及X 17-X 29中之至少一者不為SEQ ID NO: 1中所述之一致位置之胺基酸殘基且相對於人類IL-21 (SEQ ID NO: 1)降低等電點。
在一些實施例中，包含突變組合之IL-21多肽或其功能片段或變異體包含SEQ ID NO: 2之位置中之至少一個突變。在一些實施例中，包含突變組合之IL-21多肽或其功能片段或變異體包含選自由以下位置組成之群之位置中之至少一個突變：R5、I8、R9、R11、Q12、I14、D15、D18、Q19、Y23、R65、S70、K72、K73、K75、R76、K77、S80、Q116及K117，其中位置編號係根據SEQ ID NO: 2。在一些實施例中，包含突變組合之IL-21多肽或其功能片段或變異體包含選自由以下位置組成之群之位置中之至少一個突變：R5、I8、R9、R11、L13、I14、I16、V17、D18、K72、K73、L74、K75、R76、K77及K117，其中位置編號係根據SEQ ID NO: 2。
在一些實施例中，包含突變組合之IL-21多肽或其功能片段或變異體包含SEQ ID NO: 40之位置中之至少一個突變。在一些實施例中，包含突變組合之IL-21多肽或其功能片段或變異體包含選自由以下位置組成之群之位置中之至少一個突變：R5、I8、R9、R11、Q12、I14、D15、D18、Q19、Y23、R65、S70、K72、K73、K75、R76、K77、S80、Q116及K117，其中位置編號係根據SEQ ID NO: 40。在一些實施例中，包含突變組合之IL-21多肽或其功能片段或變異體包含選自由以下位置組成之群之位置中之至少一個突變：R5、I8、R9、R11、L13、I14、I16、V17、D18、K72、K73、L74、K75、R76、K77及K117，其中位置編號係根據SEQ ID NO: 40。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含(i)提供相對於包含SEQ ID NO: 1之人類IL-21多肽降低之等電點的四個或更多個胺基酸取代，其中該四個或更多個胺基酸取代係在SEQ ID NO: 1之S80至T92內，其中至少四個胺基酸取代係在殘基R85、R86、K88、H89、R90或其組合，及(ii)選自以下之至少一個胺基酸取代：(a) R11D；(b) R11E；(c) I14D、D18A及K117A；(d) R76E；(e) R5F；(f) R76F；(g) I8E；(h) R5A；(i) R5E；(j) R5S；(k) R5T；(l) R5N；(m) R5Q；(n) R5V；(o) R5I；(p) R5L；(q) R5Y；(r) R76A；(s) R76N；(t) R76D；(u) R76S；(v) R76T；(w) R76Q；(x) R76V；(y) R76I；(z) R76L；(aa) R76Y；(bb) K77A；(cc) K77E；(dd) K72A；(ee) K72E；(ff) K75A；(gg) K75E；(hh) K73A；(ii) K73E；(jj) R5F及K77A；(kk) R5F及K77E；(ll) R5F及K72A；(mm) R5F及K72E；(nn) R5F及K76A；(oo) R5F及K76E；(pp) K73A及K76F；(qq) K73E及K76F；(rr) R9A；(ss) R9D；(tt) R9E；(uu) R9H；(vv) R9S；(ww) R9T；(xx) R9N；(zz) R9G；(aaa) R9V；(bbb) R9I；(ccc) R9L；(ddd) R9Y；(eee) K72A及R76F；(fff) K75A及R76F；(ggg) R76F及K77A；(hhh) K75E及R76F；(iii) V17I及L74I；(jjj) I16A及L74F；(kkk) I16S、V17I及L74V；(lll) I16R、V17I及L74I；(mmm) L13F、I16A、V17A及L74M；及(nnn) L13R、I16A、V17I及L74I。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含(i)選自SEQ ID No: 2、4-15及23-40之胺基酸序列，及(ii)選自以下之至少一個胺基酸取代：(a) R11D；(b) R11E；(c) I14D、D18A及K117A；(d) R76E；(e) R5F；(f) R76F；(g) I8E；(h) R5A；(i) R5E；(j) R5S；(k) R5T；(l) R5N；(m) R5Q；(n) R5V；(o) R5I；(p) R5L；(q) R5Y；(r) R76A；(s) R76N；(t) R76D；(u) R76S；(v) R76T；(w) R76Q；(x) R76V；(y) R76I；(z) R76L；(aa) R76Y；(bb) K77A；(cc) K77E；(dd) K72A；(ee) K72E；(ff) K75A；(gg) K75E；(hh) K73A；(ii) K73E；(jj) R5F及K77A；(kk) R5F及K77E；(ll) R5F及K72A；(mm) R5F及K72E；(nn) R5F及K76A；(oo) R5F及K76E；(pp) K73A及K76F；(qq) K73E及K76F；(rr) R9A；(ss) R9D；(tt) R9E；(uu) R9H；(vv) R9S；(ww) R9T；(xx) R9N；(zz) R9G；(aaa) R9V；(bbb) R9I；(ccc) R9L；(ddd) R9Y；(eee) K72A及R76F；(fff) K75A及R76F；(ggg) R76F及K77A；(hhh) K75E及R76F；(iii) V17I及L74I；(jjj) I16A及L74F；(kkk) I16S、V17I及L74V；(lll) I16R、V17I及L74I；(mmm) L13F、I16A、V17A及L74M；及(nnn) L13R、I16A、V17I及L74I。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R11D突變且包含與SEQ ID NO: 16約75%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R11D突變且包含與SEQ ID NO: 16至少約75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R11D突變且包含與SEQ ID NO: 16多至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R11D突變且包含與SEQ ID NO: 16約75%序列一致性至約80%序列一致性、約75%序列一致性至約85%序列一致性、約75%序列一致性至約90%序列一致性、約75%序列一致性至約95%序列一致性、約75%序列一致性至約96%序列一致性、約75%序列一致性至約97%序列一致性、約75%序列一致性至約98%序列一致性、約75%序列一致性至約99%序列一致性、約75%序列一致性至約100%序列一致性、約80%序列一致性至約85%序列一致性、約80%序列一致性至約90%序列一致性、約80%序列一致性至約95%序列一致性、約80%序列一致性至約96%序列一致性、約80%序列一致性至約97%序列一致性、約80%序列一致性至約98%序列一致性、約80%序列一致性至約99%序列一致性、約80%序列一致性至約100%序列一致性、約85%序列一致性至約90%序列一致性、約85%序列一致性至約95%序列一致性、約85%序列一致性至約96%序列一致性、約85%序列一致性至約97%序列一致性、約85%序列一致性至約98%序列一致性、約85%序列一致性至約99%序列一致性、約85%序列一致性至約100%序列一致性、約90%序列一致性至約95%序列一致性、約90%序列一致性至約96%序列一致性、約90%序列一致性至約97%序列一致性、約90%序列一致性至約98%序列一致性、約90%序列一致性至約99%序列一致性、約90%序列一致性至約100%序列一致性、約95%序列一致性至約96%序列一致性、約95%序列一致性至約97%序列一致性、約95%序列一致性至約98%序列一致性、約95%序列一致性至約99%序列一致性、約95%序列一致性至約100%序列一致性、約96%序列一致性至約97%序列一致性、約96%序列一致性至約98%序列一致性、約96%序列一致性至約99%序列一致性、約96%序列一致性至約100%序列一致性、約97%序列一致性至約98%序列一致性、約97%序列一致性至約99%序列一致性、約97%序列一致性至約100%序列一致性、約98%序列一致性至約99%序列一致性、約98%序列一致性至約100%序列一致性或約99%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R11D突變且包含與SEQ ID NO: 16約75%序列一致性、約80%序列一致性、約85%序列一致性、約90%序列一致性、約95%序列一致性、約96%序列一致性、約97%序列一致性、約98%序列一致性、約99%序列一致性或約100%序列一致性。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R11E突變且包含與SEQ ID NO: 17約75%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R11E突變且包含與SEQ ID NO: 17至少約75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R11E突變且包含與SEQ ID NO: 17多至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R11E突變且包含與SEQ ID NO: 17約75%序列一致性至約80%序列一致性、約75%序列一致性至約85%序列一致性、約75%序列一致性至約90%序列一致性、約75%序列一致性至約95%序列一致性、約75%序列一致性至約96%序列一致性、約75%序列一致性至約97%序列一致性、約75%序列一致性至約98%序列一致性、約75%序列一致性至約99%序列一致性、約75%序列一致性至約100%序列一致性、約80%序列一致性至約85%序列一致性、約80%序列一致性至約90%序列一致性、約80%序列一致性至約95%序列一致性、約80%序列一致性至約96%序列一致性、約80%序列一致性至約97%序列一致性、約80%序列一致性至約98%序列一致性、約80%序列一致性至約99%序列一致性、約80%序列一致性至約100%序列一致性、約85%序列一致性至約90%序列一致性、約85%序列一致性至約95%序列一致性、約85%序列一致性至約96%序列一致性、約85%序列一致性至約97%序列一致性、約85%序列一致性至約98%序列一致性、約85%序列一致性至約99%序列一致性、約85%序列一致性至約100%序列一致性、約90%序列一致性至約95%序列一致性、約90%序列一致性至約96%序列一致性、約90%序列一致性至約97%序列一致性、約90%序列一致性至約98%序列一致性、約90%序列一致性至約99%序列一致性、約90%序列一致性至約100%序列一致性、約95%序列一致性至約96%序列一致性、約95%序列一致性至約97%序列一致性、約95%序列一致性至約98%序列一致性、約95%序列一致性至約99%序列一致性、約95%序列一致性至約100%序列一致性、約96%序列一致性至約97%序列一致性、約96%序列一致性至約98%序列一致性、約96%序列一致性至約99%序列一致性、約96%序列一致性至約100%序列一致性、約97%序列一致性至約98%序列一致性、約97%序列一致性至約99%序列一致性、約97%序列一致性至約100%序列一致性、約98%序列一致性至約99%序列一致性、約98%序列一致性至約100%序列一致性或約99%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R11E突變且包含與SEQ ID NO: 17約75%序列一致性、約80%序列一致性、約85%序列一致性、約90%序列一致性、約95%序列一致性、約96%序列一致性、約97%序列一致性、約98%序列一致性、約99%序列一致性或約100%序列一致性。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含I14D、D18A及K117A突變且包含與SEQ ID NO: 18約75%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含I14D、D18A及K117A突變且包含與SEQ ID NO: 18至少約75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含I14D、D18A及K117A突變且包含與SEQ ID NO: 18多至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含I14D、D18A及K117A突變且包含與SEQ ID NO: 18約75%序列一致性至約80%序列一致性、約75%序列一致性至約85%序列一致性、約75%序列一致性至約90%序列一致性、約75%序列一致性至約95%序列一致性、約75%序列一致性至約96%序列一致性、約75%序列一致性至約97%序列一致性、約75%序列一致性至約98%序列一致性、約75%序列一致性至約99%序列一致性、約75%序列一致性至約100%序列一致性、約80%序列一致性至約85%序列一致性、約80%序列一致性至約90%序列一致性、約80%序列一致性至約95%序列一致性、約80%序列一致性至約96%序列一致性、約80%序列一致性至約97%序列一致性、約80%序列一致性至約98%序列一致性、約80%序列一致性至約99%序列一致性、約80%序列一致性至約100%序列一致性、約85%序列一致性至約90%序列一致性、約85%序列一致性至約95%序列一致性、約85%序列一致性至約96%序列一致性、約85%序列一致性至約97%序列一致性、約85%序列一致性至約98%序列一致性、約85%序列一致性至約99%序列一致性、約85%序列一致性至約100%序列一致性、約90%序列一致性至約95%序列一致性、約90%序列一致性至約96%序列一致性、約90%序列一致性至約97%序列一致性、約90%序列一致性至約98%序列一致性、約90%序列一致性至約99%序列一致性、約90%序列一致性至約100%序列一致性、約95%序列一致性至約96%序列一致性、約95%序列一致性至約97%序列一致性、約95%序列一致性至約98%序列一致性、約95%序列一致性至約99%序列一致性、約95%序列一致性至約100%序列一致性、約96%序列一致性至約97%序列一致性、約96%序列一致性至約98%序列一致性、約96%序列一致性至約99%序列一致性、約96%序列一致性至約100%序列一致性、約97%序列一致性至約98%序列一致性、約97%序列一致性至約99%序列一致性、約97%序列一致性至約100%序列一致性、約98%序列一致性至約99%序列一致性、約98%序列一致性至約100%序列一致性或約99%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含I14D、D18A及K117A突變且包含與SEQ ID NO: 18約75%序列一致性、約80%序列一致性、約85%序列一致性、約90%序列一致性、約95%序列一致性、約96%序列一致性、約97%序列一致性、約98%序列一致性、約99%序列一致性或約100%序列一致性。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76E突變且包含與SEQ ID NO: 19約75%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76E突變且包含與SEQ ID NO: 19至少約75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76E突變且包含與SEQ ID NO: 19多至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 19約75%序列一致性至約80%序列一致性、約75%序列一致性至約85%序列一致性、約75%序列一致性至約90%序列一致性、約75%序列一致性至約95%序列一致性、約75%序列一致性至約96%序列一致性、約75%序列一致性至約97%序列一致性、約75%序列一致性至約98%序列一致性、約75%序列一致性至約99%序列一致性、約75%序列一致性至約100%序列一致性、約80%序列一致性至約85%序列一致性、約80%序列一致性至約90%序列一致性、約80%序列一致性至約95%序列一致性、約80%序列一致性至約96%序列一致性、約80%序列一致性至約97%序列一致性、約80%序列一致性至約98%序列一致性、約80%序列一致性至約99%序列一致性、約80%序列一致性至約100%序列一致性、約85%序列一致性至約90%序列一致性、約85%序列一致性至約95%序列一致性、約85%序列一致性至約96%序列一致性、約85%序列一致性至約97%序列一致性、約85%序列一致性至約98%序列一致性、約85%序列一致性至約99%序列一致性、約85%序列一致性至約100%序列一致性、約90%序列一致性至約95%序列一致性、約90%序列一致性至約96%序列一致性、約90%序列一致性至約97%序列一致性、約90%序列一致性至約98%序列一致性、約90%序列一致性至約99%序列一致性、約90%序列一致性至約100%序列一致性、約95%序列一致性至約96%序列一致性、約95%序列一致性至約97%序列一致性、約95%序列一致性至約98%序列一致性、約95%序列一致性至約99%序列一致性、約95%序列一致性至約100%序列一致性、約96%序列一致性至約97%序列一致性、約96%序列一致性至約98%序列一致性、約96%序列一致性至約99%序列一致性、約96%序列一致性至約100%序列一致性、約97%序列一致性至約98%序列一致性、約97%序列一致性至約99%序列一致性、約97%序列一致性至約100%序列一致性、約98%序列一致性至約99%序列一致性、約98%序列一致性至約100%序列一致性或約99%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76E突變且包含與SEQ ID NO: 19約75%序列一致性、約80%序列一致性、約85%序列一致性、約90%序列一致性、約95%序列一致性、約96%序列一致性、約97%序列一致性、約98%序列一致性、約99%序列一致性或約100%序列一致性。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5F突變且包含與SEQ ID NO: 20約75%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5F突變且包含與SEQ ID NO: 20至少約75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 20多至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5F突變且包含與SEQ ID NO: 29約75%序列一致性至約80%序列一致性、約75%序列一致性至約85%序列一致性、約75%序列一致性至約90%序列一致性、約75%序列一致性至約95%序列一致性、約75%序列一致性至約96%序列一致性、約75%序列一致性至約97%序列一致性、約75%序列一致性至約98%序列一致性、約75%序列一致性至約99%序列一致性、約75%序列一致性至約100%序列一致性、約80%序列一致性至約85%序列一致性、約80%序列一致性至約90%序列一致性、約80%序列一致性至約95%序列一致性、約80%序列一致性至約96%序列一致性、約80%序列一致性至約97%序列一致性、約80%序列一致性至約98%序列一致性、約80%序列一致性至約99%序列一致性、約80%序列一致性至約100%序列一致性、約85%序列一致性至約90%序列一致性、約85%序列一致性至約95%序列一致性、約85%序列一致性至約96%序列一致性、約85%序列一致性至約97%序列一致性、約85%序列一致性至約98%序列一致性、約85%序列一致性至約99%序列一致性、約85%序列一致性至約100%序列一致性、約90%序列一致性至約95%序列一致性、約90%序列一致性至約96%序列一致性、約90%序列一致性至約97%序列一致性、約90%序列一致性至約98%序列一致性、約90%序列一致性至約99%序列一致性、約90%序列一致性至約100%序列一致性、約95%序列一致性至約96%序列一致性、約95%序列一致性至約97%序列一致性、約95%序列一致性至約98%序列一致性、約95%序列一致性至約99%序列一致性、約95%序列一致性至約100%序列一致性、約96%序列一致性至約97%序列一致性、約96%序列一致性至約98%序列一致性、約96%序列一致性至約99%序列一致性、約96%序列一致性至約100%序列一致性、約97%序列一致性至約98%序列一致性、約97%序列一致性至約99%序列一致性、約97%序列一致性至約100%序列一致性、約98%序列一致性至約99%序列一致性、約98%序列一致性至約100%序列一致性或約99%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5F突變且包含與SEQ ID NO: 20約75%序列一致性、約80%序列一致性、約85%序列一致性、約90%序列一致性、約95%序列一致性、約96%序列一致性、約97%序列一致性、約98%序列一致性、約99%序列一致性或約100%序列一致性。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76F突變且包含與SEQ ID NO: 21約75%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76F突變且包含與SEQ ID NO: 21至少約75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76F突變且包含與SEQ ID NO: 21多至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76F突變且包含與SEQ ID NO: 21約75%序列一致性至約80%序列一致性、約75%序列一致性至約85%序列一致性、約75%序列一致性至約90%序列一致性、約75%序列一致性至約95%序列一致性、約75%序列一致性至約96%序列一致性、約75%序列一致性至約97%序列一致性、約75%序列一致性至約98%序列一致性、約75%序列一致性至約99%序列一致性、約75%序列一致性至約100%序列一致性、約80%序列一致性至約85%序列一致性、約80%序列一致性至約90%序列一致性、約80%序列一致性至約95%序列一致性、約80%序列一致性至約96%序列一致性、約80%序列一致性至約97%序列一致性、約80%序列一致性至約98%序列一致性、約80%序列一致性至約99%序列一致性、約80%序列一致性至約100%序列一致性、約85%序列一致性至約90%序列一致性、約85%序列一致性至約95%序列一致性、約85%序列一致性至約96%序列一致性、約85%序列一致性至約97%序列一致性、約85%序列一致性至約98%序列一致性、約85%序列一致性至約99%序列一致性、約85%序列一致性至約100%序列一致性、約90%序列一致性至約95%序列一致性、約90%序列一致性至約96%序列一致性、約90%序列一致性至約97%序列一致性、約90%序列一致性至約98%序列一致性、約90%序列一致性至約99%序列一致性、約90%序列一致性至約100%序列一致性、約95%序列一致性至約96%序列一致性、約95%序列一致性至約97%序列一致性、約95%序列一致性至約98%序列一致性、約95%序列一致性至約99%序列一致性、約95%序列一致性至約100%序列一致性、約96%序列一致性至約97%序列一致性、約96%序列一致性至約98%序列一致性、約96%序列一致性至約99%序列一致性、約96%序列一致性至約100%序列一致性、約97%序列一致性至約98%序列一致性、約97%序列一致性至約99%序列一致性、約97%序列一致性至約100%序列一致性、約98%序列一致性至約99%序列一致性、約98%序列一致性至約100%序列一致性，或約99%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76F突變且包含與SEQ ID NO: 21約75%序列一致性、約80%序列一致性、約85%序列一致性、約90%序列一致性、約95%序列一致性、約96%序列一致性、約97%序列一致性、約98%序列一致性、約99%序列一致性，或約100%序列一致性。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含I8E突變且包含與SEQ ID NO: 41約75%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含I8E突變且包含與SEQ ID NO: 41至少約75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含I8E突變且包含與SEQ ID NO: 41多至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含I8E突變且包含與SEQ ID NO: 41約75%序列一致性至約80%序列一致性、約75%序列一致性至約85%序列一致性、約75%序列一致性至約90%序列一致性、約75%序列一致性至約95%序列一致性、約75%序列一致性至約96%序列一致性、約75%序列一致性至約97%序列一致性、約75%序列一致性至約98%序列一致性、約75%序列一致性至約99%序列一致性、約75%序列一致性至約100%序列一致性、約80%序列一致性至約85%序列一致性、約80%序列一致性至約90%序列一致性、約80%序列一致性至約95%序列一致性、約80%序列一致性至約96%序列一致性、約80%序列一致性至約97%序列一致性、約80%序列一致性至約98%序列一致性、約80%序列一致性至約99%序列一致性、約80%序列一致性至約100%序列一致性、約85%序列一致性至約90%序列一致性、約85%序列一致性至約95%序列一致性、約85%序列一致性至約96%序列一致性、約85%序列一致性至約97%序列一致性、約85%序列一致性至約98%序列一致性、約85%序列一致性至約99%序列一致性、約85%序列一致性至約100%序列一致性、約90%序列一致性至約95%序列一致性、約90%序列一致性至約96%序列一致性、約90%序列一致性至約97%序列一致性、約90%序列一致性至約98%序列一致性、約90%序列一致性至約99%序列一致性、約90%序列一致性至約100%序列一致性、約95%序列一致性至約96%序列一致性、約95%序列一致性至約97%序列一致性、約95%序列一致性至約98%序列一致性、約95%序列一致性至約99%序列一致性、約95%序列一致性至約100%序列一致性、約96%序列一致性至約97%序列一致性、約96%序列一致性至約98%序列一致性、約96%序列一致性至約99%序列一致性、約96%序列一致性至約100%序列一致性、約97%序列一致性至約98%序列一致性、約97%序列一致性至約99%序列一致性、約97%序列一致性至約100%序列一致性、約98%序列一致性至約99%序列一致性、約98%序列一致性至約100%序列一致性或約99%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含I8E突變且包含與SEQ ID NO: 41約75%序列一致性、約80%序列一致性、約85%序列一致性、約90%序列一致性、約95%序列一致性、約96%序列一致性、約97%序列一致性、約98%序列一致性、約99%序列一致性或約100%序列一致性。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5A突變且包含與SEQ ID NO: 42約75%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5A突變且包含與SEQ ID NO: 42至少約75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5A突變且包含與SEQ ID NO: 42多至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5A突變且包含與SEQ ID NO: 42約75%序列一致性至約80%序列一致性、約75%序列一致性至約85%序列一致性、約75%序列一致性至約90%序列一致性、約75%序列一致性至約95%序列一致性、約75%序列一致性至約96%序列一致性、約75%序列一致性至約97%序列一致性、約75%序列一致性至約98%序列一致性、約75%序列一致性至約99%序列一致性、約75%序列一致性至約100%序列一致性、約80%序列一致性至約85%序列一致性、約80%序列一致性至約90%序列一致性、約80%序列一致性至約95%序列一致性、約80%序列一致性至約96%序列一致性、約80%序列一致性至約97%序列一致性、約80%序列一致性至約98%序列一致性、約80%序列一致性至約99%序列一致性、約80%序列一致性至約100%序列一致性、約85%序列一致性至約90%序列一致性、約85%序列一致性至約95%序列一致性、約85%序列一致性至約96%序列一致性、約85%序列一致性至約97%序列一致性、約85%序列一致性至約98%序列一致性、約85%序列一致性至約99%序列一致性、約85%序列一致性至約100%序列一致性、約90%序列一致性至約95%序列一致性、約90%序列一致性至約96%序列一致性、約90%序列一致性至約97%序列一致性、約90%序列一致性至約98%序列一致性、約90%序列一致性至約99%序列一致性、約90%序列一致性至約100%序列一致性、約95%序列一致性至約96%序列一致性、約95%序列一致性至約97%序列一致性、約95%序列一致性至約98%序列一致性、約95%序列一致性至約99%序列一致性、約95%序列一致性至約100%序列一致性、約96%序列一致性至約97%序列一致性、約96%序列一致性至約98%序列一致性、約96%序列一致性至約99%序列一致性、約96%序列一致性至約100%序列一致性、約97%序列一致性至約98%序列一致性、約97%序列一致性至約99%序列一致性、約97%序列一致性至約100%序列一致性、約98%序列一致性至約99%序列一致性、約98%序列一致性至約100%序列一致性或約99%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5A突變且包含與SEQ ID NO: 42約75%序列一致性、約80%序列一致性、約85%序列一致性、約90%序列一致性、約95%序列一致性、約96%序列一致性、約97%序列一致性、約98%序列一致性、約99%序列一致性或約100%序列一致性。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5E突變且包含與SEQ ID NO: 43約75%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5E突變且包含與SEQ ID NO: 43至少約75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5E突變且包含與SEQ ID NO: 43多至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5E突變且包含與SEQ ID NO: 43約75%序列一致性至約80%序列一致性、約75%序列一致性至約85%序列一致性、約75%序列一致性至約90%序列一致性、約75%序列一致性至約95%序列一致性、約75%序列一致性至約96%序列一致性、約75%序列一致性至約97%序列一致性、約75%序列一致性至約98%序列一致性、約75%序列一致性至約99%序列一致性、約75%序列一致性至約100%序列一致性、約80%序列一致性至約85%序列一致性、約80%序列一致性至約90%序列一致性、約80%序列一致性至約95%序列一致性、約80%序列一致性至約96%序列一致性、約80%序列一致性至約97%序列一致性、約80%序列一致性至約98%序列一致性、約80%序列一致性至約99%序列一致性、約80%序列一致性至約100%序列一致性、約85%序列一致性至約90%序列一致性、約85%序列一致性至約95%序列一致性、約85%序列一致性至約96%序列一致性、約85%序列一致性至約97%序列一致性、約85%序列一致性至約98%序列一致性、約85%序列一致性至約99%序列一致性、約85%序列一致性至約100%序列一致性、約90%序列一致性至約95%序列一致性、約90%序列一致性至約96%序列一致性、約90%序列一致性至約97%序列一致性、約90%序列一致性至約98%序列一致性、約90%序列一致性至約99%序列一致性、約90%序列一致性至約100%序列一致性、約95%序列一致性至約96%序列一致性、約95%序列一致性至約97%序列一致性、約95%序列一致性至約98%序列一致性、約95%序列一致性至約99%序列一致性、約95%序列一致性至約100%序列一致性、約96%序列一致性至約97%序列一致性、約96%序列一致性至約98%序列一致性、約96%序列一致性至約99%序列一致性、約96%序列一致性至約100%序列一致性、約97%序列一致性至約98%序列一致性、約97%序列一致性至約99%序列一致性、約97%序列一致性至約100%序列一致性、約98%序列一致性至約99%序列一致性、約98%序列一致性至約100%序列一致性或約99%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5E突變且包含與SEQ ID NO: 43約75%序列一致性、約80%序列一致性、約85%序列一致性、約90%序列一致性、約95%序列一致性、約96%序列一致性、約97%序列一致性、約98%序列一致性、約99%序列一致性或約100%序列一致性。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5S突變且包含與SEQ ID NO: 44約75%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5S突變且包含與SEQ ID NO: 44至少約75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5S突變且包含與SEQ ID NO: 44多至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5S突變且包含與SEQ ID NO: 44約75%序列一致性至約80%序列一致性、約75%序列一致性至約85%序列一致性、約75%序列一致性至約90%序列一致性、約75%序列一致性至約95%序列一致性、約75%序列一致性至約96%序列一致性、約75%序列一致性至約97%序列一致性、約75%序列一致性至約98%序列一致性、約75%序列一致性至約99%序列一致性、約75%序列一致性至約100%序列一致性、約80%序列一致性至約85%序列一致性、約80%序列一致性至約90%序列一致性、約80%序列一致性至約95%序列一致性、約80%序列一致性至約96%序列一致性、約80%序列一致性至約97%序列一致性、約80%序列一致性至約98%序列一致性、約80%序列一致性至約99%序列一致性、約80%序列一致性至約100%序列一致性、約85%序列一致性至約90%序列一致性、約85%序列一致性至約95%序列一致性、約85%序列一致性至約96%序列一致性、約85%序列一致性至約97%序列一致性、約85%序列一致性至約98%序列一致性、約85%序列一致性至約99%序列一致性、約85%序列一致性至約100%序列一致性、約90%序列一致性至約95%序列一致性、約90%序列一致性至約96%序列一致性、約90%序列一致性至約97%序列一致性、約90%序列一致性至約98%序列一致性、約90%序列一致性至約99%序列一致性、約90%序列一致性至約100%序列一致性、約95%序列一致性至約96%序列一致性、約95%序列一致性至約97%序列一致性、約95%序列一致性至約98%序列一致性、約95%序列一致性至約99%序列一致性、約95%序列一致性至約100%序列一致性、約96%序列一致性至約97%序列一致性、約96%序列一致性至約98%序列一致性、約96%序列一致性至約99%序列一致性、約96%序列一致性至約100%序列一致性、約97%序列一致性至約98%序列一致性、約97%序列一致性至約99%序列一致性、約97%序列一致性至約100%序列一致性、約98%序列一致性至約99%序列一致性、約98%序列一致性至約100%序列一致性或約99%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5S突變且包含與SEQ ID NO: 44約75%序列一致性、約80%序列一致性、約85%序列一致性、約90%序列一致性、約95%序列一致性、約96%序列一致性、約97%序列一致性、約98%序列一致性、約99%序列一致性或約100%序列一致性。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5T突變且包含與SEQ ID NO: 45約75%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5T突變且包含與SEQ ID NO: 45至少約75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5T突變且包含與SEQ ID NO: 45多至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5T突變且包含與SEQ ID NO: 45約75%序列一致性至約80%序列一致性、約75%序列一致性至約85%序列一致性、約75%序列一致性至約90%序列一致性、約75%序列一致性至約95%序列一致性、約75%序列一致性至約96%序列一致性、約75%序列一致性至約97%序列一致性、約75%序列一致性至約98%序列一致性、約75%序列一致性至約99%序列一致性、約75%序列一致性至約100%序列一致性、約80%序列一致性至約85%序列一致性、約80%序列一致性至約90%序列一致性、約80%序列一致性至約95%序列一致性、約80%序列一致性至約96%序列一致性、約80%序列一致性至約97%序列一致性、約80%序列一致性至約98%序列一致性、約80%序列一致性至約99%序列一致性、約80%序列一致性至約100%序列一致性、約85%序列一致性至約90%序列一致性、約85%序列一致性至約95%序列一致性、約85%序列一致性至約96%序列一致性、約85%序列一致性至約97%序列一致性、約85%序列一致性至約98%序列一致性、約85%序列一致性至約99%序列一致性、約85%序列一致性至約100%序列一致性、約90%序列一致性至約95%序列一致性、約90%序列一致性至約96%序列一致性、約90%序列一致性至約97%序列一致性、約90%序列一致性至約98%序列一致性、約90%序列一致性至約99%序列一致性、約90%序列一致性至約100%序列一致性、約95%序列一致性至約96%序列一致性、約95%序列一致性至約97%序列一致性、約95%序列一致性至約98%序列一致性、約95%序列一致性至約99%序列一致性、約95%序列一致性至約100%序列一致性、約96%序列一致性至約97%序列一致性、約96%序列一致性至約98%序列一致性、約96%序列一致性至約99%序列一致性、約96%序列一致性至約100%序列一致性、約97%序列一致性至約98%序列一致性、約97%序列一致性至約99%序列一致性、約97%序列一致性至約100%序列一致性、約98%序列一致性至約99%序列一致性、約98%序列一致性至約100%序列一致性或約99%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5T突變且包含與SEQ ID NO: 45約75%序列一致性、約80%序列一致性、約85%序列一致性、約90%序列一致性、約95%序列一致性、約96%序列一致性、約97%序列一致性、約98%序列一致性、約99%序列一致性或約100%序列一致性。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5N突變且包含與SEQ ID NO: 46約75%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5N突變且包含與SEQ ID NO: 46至少約75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5N突變且包含與SEQ ID NO: 46多至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5N突變且包含與SEQ ID NO: 46約75%序列一致性至約80%序列一致性、約75%序列一致性至約85%序列一致性、約75%序列一致性至約90%序列一致性、約75%序列一致性至約95%序列一致性、約75%序列一致性至約96%序列一致性、約75%序列一致性至約97%序列一致性、約75%序列一致性至約98%序列一致性、約75%序列一致性至約99%序列一致性、約75%序列一致性至約100%序列一致性、約80%序列一致性至約85%序列一致性、約80%序列一致性至約90%序列一致性、約80%序列一致性至約95%序列一致性、約80%序列一致性至約96%序列一致性、約80%序列一致性至約97%序列一致性、約80%序列一致性至約98%序列一致性、約80%序列一致性至約99%序列一致性、約80%序列一致性至約100%序列一致性、約85%序列一致性至約90%序列一致性、約85%序列一致性至約95%序列一致性、約85%序列一致性至約96%序列一致性、約85%序列一致性至約97%序列一致性、約85%序列一致性至約98%序列一致性、約85%序列一致性至約99%序列一致性、約85%序列一致性至約100%序列一致性、約90%序列一致性至約95%序列一致性、約90%序列一致性至約96%序列一致性、約90%序列一致性至約97%序列一致性、約90%序列一致性至約98%序列一致性、約90%序列一致性至約99%序列一致性、約90%序列一致性至約100%序列一致性、約95%序列一致性至約96%序列一致性、約95%序列一致性至約97%序列一致性、約95%序列一致性至約98%序列一致性、約95%序列一致性至約99%序列一致性、約95%序列一致性至約100%序列一致性、約96%序列一致性至約97%序列一致性、約96%序列一致性至約98%序列一致性、約96%序列一致性至約99%序列一致性、約96%序列一致性至約100%序列一致性、約97%序列一致性至約98%序列一致性、約97%序列一致性至約99%序列一致性、約97%序列一致性至約100%序列一致性、約98%序列一致性至約99%序列一致性、約98%序列一致性至約100%序列一致性或約99%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5N突變且包含與SEQ ID NO: 46約75%序列一致性、約80%序列一致性、約85%序列一致性、約90%序列一致性、約95%序列一致性、約96%序列一致性、約97%序列一致性、約98%序列一致性、約99%序列一致性或約100%序列一致性。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5Q突變且包含與SEQ ID NO: 47約75%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5Q突變且包含與SEQ ID NO: 47至少約75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5Q突變且包含與SEQ ID NO: 47多至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5Q突變且包含與SEQ ID NO: 47約75%序列一致性至約80%序列一致性、約75%序列一致性至約85%序列一致性、約75%序列一致性至約90%序列一致性、約75%序列一致性至約95%序列一致性、約75%序列一致性至約96%序列一致性、約75%序列一致性至約97%序列一致性、約75%序列一致性至約98%序列一致性、約75%序列一致性至約99%序列一致性、約75%序列一致性至約100%序列一致性、約80%序列一致性至約85%序列一致性、約80%序列一致性至約90%序列一致性、約80%序列一致性至約95%序列一致性、約80%序列一致性至約96%序列一致性、約80%序列一致性至約97%序列一致性、約80%序列一致性至約98%序列一致性、約80%序列一致性至約99%序列一致性、約80%序列一致性至約100%序列一致性、約85%序列一致性至約90%序列一致性、約85%序列一致性至約95%序列一致性、約85%序列一致性至約96%序列一致性、約85%序列一致性至約97%序列一致性、約85%序列一致性至約98%序列一致性、約85%序列一致性至約99%序列一致性、約85%序列一致性至約100%序列一致性、約90%序列一致性至約95%序列一致性、約90%序列一致性至約96%序列一致性、約90%序列一致性至約97%序列一致性、約90%序列一致性至約98%序列一致性、約90%序列一致性至約99%序列一致性、約90%序列一致性至約100%序列一致性、約95%序列一致性至約96%序列一致性、約95%序列一致性至約97%序列一致性、約95%序列一致性至約98%序列一致性、約95%序列一致性至約99%序列一致性、約95%序列一致性至約100%序列一致性、約96%序列一致性至約97%序列一致性、約96%序列一致性至約98%序列一致性、約96%序列一致性至約99%序列一致性、約96%序列一致性至約100%序列一致性、約97%序列一致性至約98%序列一致性、約97%序列一致性至約99%序列一致性、約97%序列一致性至約100%序列一致性、約98%序列一致性至約99%序列一致性、約98%序列一致性至約100%序列一致性或約99%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5Q突變且包含與SEQ ID NO: 47約75%序列一致性、約80%序列一致性、約85%序列一致性、約90%序列一致性、約95%序列一致性、約96%序列一致性、約97%序列一致性、約98%序列一致性、約99%序列一致性或約100%序列一致性。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5V突變且包含與SEQ ID NO: 48約75%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5V突變且包含與SEQ ID NO: 48至少約75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5V突變且包含與SEQ ID NO: 48多至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5V突變且包含與SEQ ID NO: 48約75%序列一致性至約80%序列一致性、約75%序列一致性至約85%序列一致性、約75%序列一致性至約90%序列一致性、約75%序列一致性至約95%序列一致性、約75%序列一致性至約96%序列一致性、約75%序列一致性至約97%序列一致性、約75%序列一致性至約98%序列一致性、約75%序列一致性至約99%序列一致性、約75%序列一致性至約100%序列一致性、約80%序列一致性至約85%序列一致性、約80%序列一致性至約90%序列一致性、約80%序列一致性至約95%序列一致性、約80%序列一致性至約96%序列一致性、約80%序列一致性至約97%序列一致性、約80%序列一致性至約98%序列一致性、約80%序列一致性至約99%序列一致性、約80%序列一致性至約100%序列一致性、約85%序列一致性至約90%序列一致性、約85%序列一致性至約95%序列一致性、約85%序列一致性至約96%序列一致性、約85%序列一致性至約97%序列一致性、約85%序列一致性至約98%序列一致性、約85%序列一致性至約99%序列一致性、約85%序列一致性至約100%序列一致性、約90%序列一致性至約95%序列一致性、約90%序列一致性至約96%序列一致性、約90%序列一致性至約97%序列一致性、約90%序列一致性至約98%序列一致性、約90%序列一致性至約99%序列一致性、約90%序列一致性至約100%序列一致性、約95%序列一致性至約96%序列一致性、約95%序列一致性至約97%序列一致性、約95%序列一致性至約98%序列一致性、約95%序列一致性至約99%序列一致性、約95%序列一致性至約100%序列一致性、約96%序列一致性至約97%序列一致性、約96%序列一致性至約98%序列一致性、約96%序列一致性至約99%序列一致性、約96%序列一致性至約100%序列一致性、約97%序列一致性至約98%序列一致性、約97%序列一致性至約99%序列一致性、約97%序列一致性至約100%序列一致性、約98%序列一致性至約99%序列一致性、約98%序列一致性至約100%序列一致性或約99%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5V突變且包含與SEQ ID NO: 48約75%序列一致性、約80%序列一致性、約85%序列一致性、約90%序列一致性、約95%序列一致性、約96%序列一致性、約97%序列一致性、約98%序列一致性、約99%序列一致性或約100%序列一致性。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5I突變且包含與SEQ ID NO: 49約75%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5I突變且包含與SEQ ID NO: 49至少約75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5I突變且包含與SEQ ID NO: 49多至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5I突變且包含與SEQ ID NO: 49約75%序列一致性至約80%序列一致性、約75%序列一致性至約85%序列一致性、約75%序列一致性至約90%序列一致性、約75%序列一致性至約95%序列一致性、約75%序列一致性至約96%序列一致性、約75%序列一致性至約97%序列一致性、約75%序列一致性至約98%序列一致性、約75%序列一致性至約99%序列一致性、約75%序列一致性至約100%序列一致性、約80%序列一致性至約85%序列一致性、約80%序列一致性至約90%序列一致性、約80%序列一致性至約95%序列一致性、約80%序列一致性至約96%序列一致性、約80%序列一致性至約97%序列一致性、約80%序列一致性至約98%序列一致性、約80%序列一致性至約99%序列一致性、約80%序列一致性至約100%序列一致性、約85%序列一致性至約90%序列一致性、約85%序列一致性至約95%序列一致性、約85%序列一致性至約96%序列一致性、約85%序列一致性至約97%序列一致性、約85%序列一致性至約98%序列一致性、約85%序列一致性至約99%序列一致性、約85%序列一致性至約100%序列一致性、約90%序列一致性至約95%序列一致性、約90%序列一致性至約96%序列一致性、約90%序列一致性至約97%序列一致性、約90%序列一致性至約98%序列一致性、約90%序列一致性至約99%序列一致性、約90%序列一致性至約100%序列一致性、約95%序列一致性至約96%序列一致性、約95%序列一致性至約97%序列一致性、約95%序列一致性至約98%序列一致性、約95%序列一致性至約99%序列一致性、約95%序列一致性至約100%序列一致性、約96%序列一致性至約97%序列一致性、約96%序列一致性至約98%序列一致性、約96%序列一致性至約99%序列一致性、約96%序列一致性至約100%序列一致性、約97%序列一致性至約98%序列一致性、約97%序列一致性至約99%序列一致性、約97%序列一致性至約100%序列一致性、約98%序列一致性至約99%序列一致性、約98%序列一致性至約100%序列一致性或約99%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5I突變且包含與SEQ ID NO: 49約75%序列一致性、約80%序列一致性、約85%序列一致性、約90%序列一致性、約95%序列一致性、約96%序列一致性、約97%序列一致性、約98%序列一致性、約99%序列一致性或約100%序列一致性。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5L突變且包含與SEQ ID NO: 50約75%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5L突變且包含與SEQ ID NO: 50至少約75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5L突變且包含與SEQ ID NO: 50多至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5L突變且包含與SEQ ID NO: 50約75%序列一致性至約80%序列一致性、約75%序列一致性至約85%序列一致性、約75%序列一致性至約90%序列一致性、約75%序列一致性至約95%序列一致性、約75%序列一致性至約96%序列一致性、約75%序列一致性至約97%序列一致性、約75%序列一致性至約98%序列一致性、約75%序列一致性至約99%序列一致性、約75%序列一致性至約100%序列一致性、約80%序列一致性至約85%序列一致性、約80%序列一致性至約90%序列一致性、約80%序列一致性至約95%序列一致性、約80%序列一致性至約96%序列一致性、約80%序列一致性至約97%序列一致性、約80%序列一致性至約98%序列一致性、約80%序列一致性至約99%序列一致性、約80%序列一致性至約100%序列一致性、約85%序列一致性至約90%序列一致性、約85%序列一致性至約95%序列一致性、約85%序列一致性至約96%序列一致性、約85%序列一致性至約97%序列一致性、約85%序列一致性至約98%序列一致性、約85%序列一致性至約99%序列一致性、約85%序列一致性至約100%序列一致性、約90%序列一致性至約95%序列一致性、約90%序列一致性至約96%序列一致性、約90%序列一致性至約97%序列一致性、約90%序列一致性至約98%序列一致性、約90%序列一致性至約99%序列一致性、約90%序列一致性至約100%序列一致性、約95%序列一致性至約96%序列一致性、約95%序列一致性至約97%序列一致性、約95%序列一致性至約98%序列一致性、約95%序列一致性至約99%序列一致性、約95%序列一致性至約100%序列一致性、約96%序列一致性至約97%序列一致性、約96%序列一致性至約98%序列一致性、約96%序列一致性至約99%序列一致性、約96%序列一致性至約100%序列一致性、約97%序列一致性至約98%序列一致性、約97%序列一致性至約99%序列一致性、約97%序列一致性至約100%序列一致性、約98%序列一致性至約99%序列一致性、約98%序列一致性至約100%序列一致性或約99%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5L突變且包含與SEQ ID NO: 50約75%序列一致性、約80%序列一致性、約85%序列一致性、約90%序列一致性、約95%序列一致性、約96%序列一致性、約97%序列一致性、約98%序列一致性、約99%序列一致性或約100%序列一致性。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5Y突變且包含與SEQ ID NO: 51約75%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5Y突變且包含與SEQ ID NO: 51至少約75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5Y突變且包含與SEQ ID NO: 51多至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5Y突變且包含與SEQ ID NO: 51約75%序列一致性至約80%序列一致性、約75%序列一致性至約85%序列一致性、約75%序列一致性至約90%序列一致性、約75%序列一致性至約95%序列一致性、約75%序列一致性至約96%序列一致性、約75%序列一致性至約97%序列一致性、約75%序列一致性至約98%序列一致性、約75%序列一致性至約99%序列一致性、約75%序列一致性至約100%序列一致性、約80%序列一致性至約85%序列一致性、約80%序列一致性至約90%序列一致性、約80%序列一致性至約95%序列一致性、約80%序列一致性至約96%序列一致性、約80%序列一致性至約97%序列一致性、約80%序列一致性至約98%序列一致性、約80%序列一致性至約99%序列一致性、約80%序列一致性至約100%序列一致性、約85%序列一致性至約90%序列一致性、約85%序列一致性至約95%序列一致性、約85%序列一致性至約96%序列一致性、約85%序列一致性至約97%序列一致性、約85%序列一致性至約98%序列一致性、約85%序列一致性至約99%序列一致性、約85%序列一致性至約100%序列一致性、約90%序列一致性至約95%序列一致性、約90%序列一致性至約96%序列一致性、約90%序列一致性至約97%序列一致性、約90%序列一致性至約98%序列一致性、約90%序列一致性至約99%序列一致性、約90%序列一致性至約100%序列一致性、約95%序列一致性至約96%序列一致性、約95%序列一致性至約97%序列一致性、約95%序列一致性至約98%序列一致性、約95%序列一致性至約99%序列一致性、約95%序列一致性至約100%序列一致性、約96%序列一致性至約97%序列一致性、約96%序列一致性至約98%序列一致性、約96%序列一致性至約99%序列一致性、約96%序列一致性至約100%序列一致性、約97%序列一致性至約98%序列一致性、約97%序列一致性至約99%序列一致性、約97%序列一致性至約100%序列一致性、約98%序列一致性至約99%序列一致性、約98%序列一致性至約100%序列一致性或約99%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5Y突變且包含與SEQ ID NO: 51約75%序列一致性、約80%序列一致性、約85%序列一致性、約90%序列一致性、約95%序列一致性、約96%序列一致性、約97%序列一致性、約98%序列一致性、約99%序列一致性或約100%序列一致性。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76A突變且包含與SEQ ID NO: 52約75%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76A突變且包含與SEQ ID NO: 52至少約75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76A突變且包含與SEQ ID NO: 52多至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76A突變且包含與SEQ ID NO: 52約75%序列一致性至約80%序列一致性、約75%序列一致性至約85%序列一致性、約75%序列一致性至約90%序列一致性、約75%序列一致性至約95%序列一致性、約75%序列一致性至約96%序列一致性、約75%序列一致性至約97%序列一致性、約75%序列一致性至約98%序列一致性、約75%序列一致性至約99%序列一致性、約75%序列一致性至約100%序列一致性、約80%序列一致性至約85%序列一致性、約80%序列一致性至約90%序列一致性、約80%序列一致性至約95%序列一致性、約80%序列一致性至約96%序列一致性、約80%序列一致性至約97%序列一致性、約80%序列一致性至約98%序列一致性、約80%序列一致性至約99%序列一致性、約80%序列一致性至約100%序列一致性、約85%序列一致性至約90%序列一致性、約85%序列一致性至約95%序列一致性、約85%序列一致性至約96%序列一致性、約85%序列一致性至約97%序列一致性、約85%序列一致性至約98%序列一致性、約85%序列一致性至約99%序列一致性、約85%序列一致性至約100%序列一致性、約90%序列一致性至約95%序列一致性、約90%序列一致性至約96%序列一致性、約90%序列一致性至約97%序列一致性、約90%序列一致性至約98%序列一致性、約90%序列一致性至約99%序列一致性、約90%序列一致性至約100%序列一致性、約95%序列一致性至約96%序列一致性、約95%序列一致性至約97%序列一致性、約95%序列一致性至約98%序列一致性、約95%序列一致性至約99%序列一致性、約95%序列一致性至約100%序列一致性、約96%序列一致性至約97%序列一致性、約96%序列一致性至約98%序列一致性、約96%序列一致性至約99%序列一致性、約96%序列一致性至約100%序列一致性、約97%序列一致性至約98%序列一致性、約97%序列一致性至約99%序列一致性、約97%序列一致性至約100%序列一致性、約98%序列一致性至約99%序列一致性、約98%序列一致性至約100%序列一致性或約99%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76A突變且包含與SEQ ID NO: 52約75%序列一致性、約80%序列一致性、約85%序列一致性、約90%序列一致性、約95%序列一致性、約96%序列一致性、約97%序列一致性、約98%序列一致性、約99%序列一致性或約100%序列一致性。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76N突變且包含與SEQ ID NO: 53約75%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76N突變且包含與SEQ ID NO: 53至少約75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76N突變且包含與SEQ ID NO: 53多至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76N突變且包含與SEQ ID NO: 53約75%序列一致性至約80%序列一致性、約75%序列一致性至約85%序列一致性、約75%序列一致性至約90%序列一致性、約75%序列一致性至約95%序列一致性、約75%序列一致性至約96%序列一致性、約75%序列一致性至約97%序列一致性、約75%序列一致性至約98%序列一致性、約75%序列一致性至約99%序列一致性、約75%序列一致性至約100%序列一致性、約80%序列一致性至約85%序列一致性、約80%序列一致性至約90%序列一致性、約80%序列一致性至約95%序列一致性、約80%序列一致性至約96%序列一致性、約80%序列一致性至約97%序列一致性、約80%序列一致性至約98%序列一致性、約80%序列一致性至約99%序列一致性、約80%序列一致性至約100%序列一致性、約85%序列一致性至約90%序列一致性、約85%序列一致性至約95%序列一致性、約85%序列一致性至約96%序列一致性、約85%序列一致性至約97%序列一致性、約85%序列一致性至約98%序列一致性、約85%序列一致性至約99%序列一致性、約85%序列一致性至約100%序列一致性、約90%序列一致性至約95%序列一致性、約90%序列一致性至約96%序列一致性、約90%序列一致性至約97%序列一致性、約90%序列一致性至約98%序列一致性、約90%序列一致性至約99%序列一致性、約90%序列一致性至約100%序列一致性、約95%序列一致性至約96%序列一致性、約95%序列一致性至約97%序列一致性、約95%序列一致性至約98%序列一致性、約95%序列一致性至約99%序列一致性、約95%序列一致性至約100%序列一致性、約96%序列一致性至約97%序列一致性、約96%序列一致性至約98%序列一致性、約96%序列一致性至約99%序列一致性、約96%序列一致性至約100%序列一致性、約97%序列一致性至約98%序列一致性、約97%序列一致性至約99%序列一致性、約97%序列一致性至約100%序列一致性、約98%序列一致性至約99%序列一致性、約98%序列一致性至約100%序列一致性或約99%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76N突變且包含與SEQ ID NO: 53約75%序列一致性、約80%序列一致性、約85%序列一致性、約90%序列一致性、約95%序列一致性、約96%序列一致性、約97%序列一致性、約98%序列一致性、約99%序列一致性或約100%序列一致性。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76D突變且包含與SEQ ID NO: 54約75%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76D突變且包含與SEQ ID NO: 54至少約75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76D突變且包含與SEQ ID NO: 54多至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76D突變且包含與SEQ ID NO: 54約75%序列一致性至約80%序列一致性、約75%序列一致性至約85%序列一致性、約75%序列一致性至約90%序列一致性、約75%序列一致性至約95%序列一致性、約75%序列一致性至約96%序列一致性、約75%序列一致性至約97%序列一致性、約75%序列一致性至約98%序列一致性、約75%序列一致性至約99%序列一致性、約75%序列一致性至約100%序列一致性、約80%序列一致性至約85%序列一致性、約80%序列一致性至約90%序列一致性、約80%序列一致性至約95%序列一致性、約80%序列一致性至約96%序列一致性、約80%序列一致性至約97%序列一致性、約80%序列一致性至約98%序列一致性、約80%序列一致性至約99%序列一致性、約80%序列一致性至約100%序列一致性、約85%序列一致性至約90%序列一致性、約85%序列一致性至約95%序列一致性、約85%序列一致性至約96%序列一致性、約85%序列一致性至約97%序列一致性、約85%序列一致性至約98%序列一致性、約85%序列一致性至約99%序列一致性、約85%序列一致性至約100%序列一致性、約90%序列一致性至約95%序列一致性、約90%序列一致性至約96%序列一致性、約90%序列一致性至約97%序列一致性、約90%序列一致性至約98%序列一致性、約90%序列一致性至約99%序列一致性、約90%序列一致性至約100%序列一致性、約95%序列一致性至約96%序列一致性、約95%序列一致性至約97%序列一致性、約95%序列一致性至約98%序列一致性、約95%序列一致性至約99%序列一致性、約95%序列一致性至約100%序列一致性、約96%序列一致性至約97%序列一致性、約96%序列一致性至約98%序列一致性、約96%序列一致性至約99%序列一致性、約96%序列一致性至約100%序列一致性、約97%序列一致性至約98%序列一致性、約97%序列一致性至約99%序列一致性、約97%序列一致性至約100%序列一致性、約98%序列一致性至約99%序列一致性、約98%序列一致性至約100%序列一致性或約99%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76D突變且包含與SEQ ID NO: 54約75%序列一致性、約80%序列一致性、約85%序列一致性、約90%序列一致性、約95%序列一致性、約96%序列一致性、約97%序列一致性、約98%序列一致性、約99%序列一致性或約100%序列一致性。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76S突變且包含與SEQ ID NO: 55約75%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76S突變且包含與SEQ ID NO: 55至少約75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76S突變且包含與SEQ ID NO: 55多至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76S突變且包含與SEQ ID NO: 55約75%序列一致性至約80%序列一致性、約75%序列一致性至約85%序列一致性、約75%序列一致性至約90%序列一致性、約75%序列一致性至約95%序列一致性、約75%序列一致性至約96%序列一致性、約75%序列一致性至約97%序列一致性、約75%序列一致性至約98%序列一致性、約75%序列一致性至約99%序列一致性、約75%序列一致性至約100%序列一致性、約80%序列一致性至約85%序列一致性、約80%序列一致性至約90%序列一致性、約80%序列一致性至約95%序列一致性、約80%序列一致性至約96%序列一致性、約80%序列一致性至約97%序列一致性、約80%序列一致性至約98%序列一致性、約80%序列一致性至約99%序列一致性、約80%序列一致性至約100%序列一致性、約85%序列一致性至約90%序列一致性、約85%序列一致性至約95%序列一致性、約85%序列一致性至約96%序列一致性、約85%序列一致性至約97%序列一致性、約85%序列一致性至約98%序列一致性、約85%序列一致性至約99%序列一致性、約85%序列一致性至約100%序列一致性、約90%序列一致性至約95%序列一致性、約90%序列一致性至約96%序列一致性、約90%序列一致性至約97%序列一致性、約90%序列一致性至約98%序列一致性、約90%序列一致性至約99%序列一致性、約90%序列一致性至約100%序列一致性、約95%序列一致性至約96%序列一致性、約95%序列一致性至約97%序列一致性、約95%序列一致性至約98%序列一致性、約95%序列一致性至約99%序列一致性、約95%序列一致性至約100%序列一致性、約96%序列一致性至約97%序列一致性、約96%序列一致性至約98%序列一致性、約96%序列一致性至約99%序列一致性、約96%序列一致性至約100%序列一致性、約97%序列一致性至約98%序列一致性、約97%序列一致性至約99%序列一致性、約97%序列一致性至約100%序列一致性、約98%序列一致性至約99%序列一致性、約98%序列一致性至約100%序列一致性或約99%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76S突變且包含與SEQ ID NO: 55約75%序列一致性、約80%序列一致性、約85%序列一致性、約90%序列一致性、約95%序列一致性、約96%序列一致性、約97%序列一致性、約98%序列一致性、約99%序列一致性或約100%序列一致性。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76T突變且包含與SEQ ID NO: 56約75%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76T突變且包含與SEQ ID NO: 56至少約75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76T突變且包含與SEQ ID NO: 56多至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76T突變且包含與SEQ ID NO: 6約75%序列一致性至約80%序列一致性、約75%序列一致性至約85%序列一致性、約75%序列一致性至約90%序列一致性、約75%序列一致性至約95%序列一致性、約75%序列一致性至約96%序列一致性、約75%序列一致性至約97%序列一致性、約75%序列一致性至約98%序列一致性、約75%序列一致性至約99%序列一致性、約75%序列一致性至約100%序列一致性、約80%序列一致性至約85%序列一致性、約80%序列一致性至約90%序列一致性、約80%序列一致性至約95%序列一致性、約80%序列一致性至約96%序列一致性、約80%序列一致性至約97%序列一致性、約80%序列一致性至約98%序列一致性、約80%序列一致性至約99%序列一致性、約80%序列一致性至約100%序列一致性、約85%序列一致性至約90%序列一致性、約85%序列一致性至約95%序列一致性、約85%序列一致性至約96%序列一致性、約85%序列一致性至約97%序列一致性、約85%序列一致性至約98%序列一致性、約85%序列一致性至約99%序列一致性、約85%序列一致性至約100%序列一致性、約90%序列一致性至約95%序列一致性、約90%序列一致性至約96%序列一致性、約90%序列一致性至約97%序列一致性、約90%序列一致性至約98%序列一致性、約90%序列一致性至約99%序列一致性、約90%序列一致性至約100%序列一致性、約95%序列一致性至約96%序列一致性、約95%序列一致性至約97%序列一致性、約95%序列一致性至約98%序列一致性、約95%序列一致性至約99%序列一致性、約95%序列一致性至約100%序列一致性、約96%序列一致性至約97%序列一致性、約96%序列一致性至約98%序列一致性、約96%序列一致性至約99%序列一致性、約96%序列一致性至約100%序列一致性、約97%序列一致性至約98%序列一致性、約97%序列一致性至約99%序列一致性、約97%序列一致性至約100%序列一致性、約98%序列一致性至約99%序列一致性、約98%序列一致性至約100%序列一致性或約99%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76T突變且包含與SEQ ID NO: 56約75%序列一致性、約80%序列一致性、約85%序列一致性、約90%序列一致性、約95%序列一致性、約96%序列一致性、約97%序列一致性、約98%序列一致性、約99%序列一致性或約100%序列一致性。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76Q突變且包含與SEQ ID NO: 57約75%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76Q突變且包含與SEQ ID NO: 57至少約75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76Q突變且包含與SEQ ID NO: 57多至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76Q突變且包含與SEQ ID NO: 57約75%序列一致性至約80%序列一致性、約75%序列一致性至約85%序列一致性、約75%序列一致性至約90%序列一致性、約75%序列一致性至約95%序列一致性、約75%序列一致性至約96%序列一致性、約75%序列一致性至約97%序列一致性、約75%序列一致性至約98%序列一致性、約75%序列一致性至約99%序列一致性、約75%序列一致性至約100%序列一致性、約80%序列一致性至約85%序列一致性、約80%序列一致性至約90%序列一致性、約80%序列一致性至約95%序列一致性、約80%序列一致性至約96%序列一致性、約80%序列一致性至約97%序列一致性、約80%序列一致性至約98%序列一致性、約80%序列一致性至約99%序列一致性、約80%序列一致性至約100%序列一致性、約85%序列一致性至約90%序列一致性、約85%序列一致性至約95%序列一致性、約85%序列一致性至約96%序列一致性、約85%序列一致性至約97%序列一致性、約85%序列一致性至約98%序列一致性、約85%序列一致性至約99%序列一致性、約85%序列一致性至約100%序列一致性、約90%序列一致性至約95%序列一致性、約90%序列一致性至約96%序列一致性、約90%序列一致性至約97%序列一致性、約90%序列一致性至約98%序列一致性、約90%序列一致性至約99%序列一致性、約90%序列一致性至約100%序列一致性、約95%序列一致性至約96%序列一致性、約95%序列一致性至約97%序列一致性、約95%序列一致性至約98%序列一致性、約95%序列一致性至約99%序列一致性、約95%序列一致性至約100%序列一致性、約96%序列一致性至約97%序列一致性、約96%序列一致性至約98%序列一致性、約96%序列一致性至約99%序列一致性、約96%序列一致性至約100%序列一致性、約97%序列一致性至約98%序列一致性、約97%序列一致性至約99%序列一致性、約97%序列一致性至約100%序列一致性、約98%序列一致性至約99%序列一致性、約98%序列一致性至約100%序列一致性或約99%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76Q突變且包含與SEQ ID NO: 57約75%序列一致性、約80%序列一致性、約85%序列一致性、約90%序列一致性、約95%序列一致性、約96%序列一致性、約97%序列一致性、約98%序列一致性、約99%序列一致性或約100%序列一致性。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76V突變且包含與SEQ ID NO: 58約75%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76V突變且包含與SEQ ID NO: 58至少約75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76V突變且包含與SEQ ID NO: 58多至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76V突變且包含與SEQ ID NO: 58約75%序列一致性至約80%序列一致性、約75%序列一致性至約85%序列一致性、約75%序列一致性至約90%序列一致性、約75%序列一致性至約95%序列一致性、約75%序列一致性至約96%序列一致性、約75%序列一致性至約97%序列一致性、約75%序列一致性至約98%序列一致性、約75%序列一致性至約99%序列一致性、約75%序列一致性至約100%序列一致性、約80%序列一致性至約85%序列一致性、約80%序列一致性至約90%序列一致性、約80%序列一致性至約95%序列一致性、約80%序列一致性至約96%序列一致性、約80%序列一致性至約97%序列一致性、約80%序列一致性至約98%序列一致性、約80%序列一致性至約99%序列一致性、約80%序列一致性至約100%序列一致性、約85%序列一致性至約90%序列一致性、約85%序列一致性至約95%序列一致性、約85%序列一致性至約96%序列一致性、約85%序列一致性至約97%序列一致性、約85%序列一致性至約98%序列一致性、約85%序列一致性至約99%序列一致性、約85%序列一致性至約100%序列一致性、約90%序列一致性至約95%序列一致性、約90%序列一致性至約96%序列一致性、約90%序列一致性至約97%序列一致性、約90%序列一致性至約98%序列一致性、約90%序列一致性至約99%序列一致性、約90%序列一致性至約100%序列一致性、約95%序列一致性至約96%序列一致性、約95%序列一致性至約97%序列一致性、約95%序列一致性至約98%序列一致性、約95%序列一致性至約99%序列一致性、約95%序列一致性至約100%序列一致性、約96%序列一致性至約97%序列一致性、約96%序列一致性至約98%序列一致性、約96%序列一致性至約99%序列一致性、約96%序列一致性至約100%序列一致性、約97%序列一致性至約98%序列一致性、約97%序列一致性至約99%序列一致性、約97%序列一致性至約100%序列一致性、約98%序列一致性至約99%序列一致性、約98%序列一致性至約100%序列一致性或約99%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76V突變且包含與SEQ ID NO: 58約75%序列一致性、約80%序列一致性、約85%序列一致性、約90%序列一致性、約95%序列一致性、約96%序列一致性、約97%序列一致性、約98%序列一致性、約99%序列一致性或約100%序列一致性。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76I突變且包含與SEQ ID NO: 59約75%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76I突變且包含與SEQ ID NO: 59至少約75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76I突變且包含與SEQ ID NO: 59多至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76I突變且包含與SEQ ID NO: 59約75%序列一致性至約80%序列一致性、約75%序列一致性至約85%序列一致性、約75%序列一致性至約90%序列一致性、約75%序列一致性至約95%序列一致性、約75%序列一致性至約96%序列一致性、約75%序列一致性至約97%序列一致性、約75%序列一致性至約98%序列一致性、約75%序列一致性至約99%序列一致性、約75%序列一致性至約100%序列一致性、約80%序列一致性至約85%序列一致性、約80%序列一致性至約90%序列一致性、約80%序列一致性至約95%序列一致性、約80%序列一致性至約96%序列一致性、約80%序列一致性至約97%序列一致性、約80%序列一致性至約98%序列一致性、約80%序列一致性至約99%序列一致性、約80%序列一致性至約100%序列一致性、約85%序列一致性至約90%序列一致性、約85%序列一致性至約95%序列一致性、約85%序列一致性至約96%序列一致性、約85%序列一致性至約97%序列一致性、約85%序列一致性至約98%序列一致性、約85%序列一致性至約99%序列一致性、約85%序列一致性至約100%序列一致性、約90%序列一致性至約95%序列一致性、約90%序列一致性至約96%序列一致性、約90%序列一致性至約97%序列一致性、約90%序列一致性至約98%序列一致性、約90%序列一致性至約99%序列一致性、約90%序列一致性至約100%序列一致性、約95%序列一致性至約96%序列一致性、約95%序列一致性至約97%序列一致性、約95%序列一致性至約98%序列一致性、約95%序列一致性至約99%序列一致性、約95%序列一致性至約100%序列一致性、約96%序列一致性至約97%序列一致性、約96%序列一致性至約98%序列一致性、約96%序列一致性至約99%序列一致性、約96%序列一致性至約100%序列一致性、約97%序列一致性至約98%序列一致性、約97%序列一致性至約99%序列一致性、約97%序列一致性至約100%序列一致性、約98%序列一致性至約99%序列一致性、約98%序列一致性至約100%序列一致性或約99%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76I突變且包含與SEQ ID NO: 59約75%序列一致性、約80%序列一致性、約85%序列一致性、約90%序列一致性、約95%序列一致性、約96%序列一致性、約97%序列一致性、約98%序列一致性、約99%序列一致性或約100%序列一致性。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76L突變且包含與SEQ ID NO: 60約75%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76L突變且包含與SEQ ID NO: 60至少約75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76L突變且包含與SEQ ID NO: 60多至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76L突變且包含與SEQ ID NO: 60約75%序列一致性至約80%序列一致性、約75%序列一致性至約85%序列一致性、約75%序列一致性至約90%序列一致性、約75%序列一致性至約95%序列一致性、約75%序列一致性至約96%序列一致性、約75%序列一致性至約97%序列一致性、約75%序列一致性至約98%序列一致性、約75%序列一致性至約99%序列一致性、約75%序列一致性至約100%序列一致性、約80%序列一致性至約85%序列一致性、約80%序列一致性至約90%序列一致性、約80%序列一致性至約95%序列一致性、約80%序列一致性至約96%序列一致性、約80%序列一致性至約97%序列一致性、約80%序列一致性至約98%序列一致性、約80%序列一致性至約99%序列一致性、約80%序列一致性至約100%序列一致性、約85%序列一致性至約90%序列一致性、約85%序列一致性至約95%序列一致性、約85%序列一致性至約96%序列一致性、約85%序列一致性至約97%序列一致性、約85%序列一致性至約98%序列一致性、約85%序列一致性至約99%序列一致性、約85%序列一致性至約100%序列一致性、約90%序列一致性至約95%序列一致性、約90%序列一致性至約96%序列一致性、約90%序列一致性至約97%序列一致性、約90%序列一致性至約98%序列一致性、約90%序列一致性至約99%序列一致性、約90%序列一致性至約100%序列一致性、約95%序列一致性至約96%序列一致性、約95%序列一致性至約97%序列一致性、約95%序列一致性至約98%序列一致性、約95%序列一致性至約99%序列一致性、約95%序列一致性至約100%序列一致性、約96%序列一致性至約97%序列一致性、約96%序列一致性至約98%序列一致性、約96%序列一致性至約99%序列一致性、約96%序列一致性至約100%序列一致性、約97%序列一致性至約98%序列一致性、約97%序列一致性至約99%序列一致性、約97%序列一致性至約100%序列一致性、約98%序列一致性至約99%序列一致性、約98%序列一致性至約100%序列一致性或約99%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76L突變且包含與SEQ ID NO: 60約75%序列一致性、約80%序列一致性、約85%序列一致性、約90%序列一致性、約95%序列一致性、約96%序列一致性、約97%序列一致性、約98%序列一致性、約99%序列一致性或約100%序列一致性。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76Y突變且包含與SEQ ID NO: 61約75%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76Y突變且包含與SEQ ID NO: 61至少約75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76Y突變且包含與SEQ ID NO: 61多至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76Y突變且包含與SEQ ID NO: 61約75%序列一致性至約80%序列一致性、約75%序列一致性至約85%序列一致性、約75%序列一致性至約90%序列一致性、約75%序列一致性至約95%序列一致性、約75%序列一致性至約96%序列一致性、約75%序列一致性至約97%序列一致性、約75%序列一致性至約98%序列一致性、約75%序列一致性至約99%序列一致性、約75%序列一致性至約100%序列一致性、約80%序列一致性至約85%序列一致性、約80%序列一致性至約90%序列一致性、約80%序列一致性至約95%序列一致性、約80%序列一致性至約96%序列一致性、約80%序列一致性至約97%序列一致性、約80%序列一致性至約98%序列一致性、約80%序列一致性至約99%序列一致性、約80%序列一致性至約100%序列一致性、約85%序列一致性至約90%序列一致性、約85%序列一致性至約95%序列一致性、約85%序列一致性至約96%序列一致性、約85%序列一致性至約97%序列一致性、約85%序列一致性至約98%序列一致性、約85%序列一致性至約99%序列一致性、約85%序列一致性至約100%序列一致性、約90%序列一致性至約95%序列一致性、約90%序列一致性至約96%序列一致性、約90%序列一致性至約97%序列一致性、約90%序列一致性至約98%序列一致性、約90%序列一致性至約99%序列一致性、約90%序列一致性至約100%序列一致性、約95%序列一致性至約96%序列一致性、約95%序列一致性至約97%序列一致性、約95%序列一致性至約98%序列一致性、約95%序列一致性至約99%序列一致性、約95%序列一致性至約100%序列一致性、約96%序列一致性至約97%序列一致性、約96%序列一致性至約98%序列一致性、約96%序列一致性至約99%序列一致性、約96%序列一致性至約100%序列一致性、約97%序列一致性至約98%序列一致性、約97%序列一致性至約99%序列一致性、約97%序列一致性至約100%序列一致性、約98%序列一致性至約99%序列一致性、約98%序列一致性至約100%序列一致性或約99%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76Y突變且包含與SEQ ID NO: 61約75%序列一致性、約80%序列一致性、約85%序列一致性、約90%序列一致性、約95%序列一致性、約96%序列一致性、約97%序列一致性、約98%序列一致性、約99%序列一致性或約100%序列一致性。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含K77A突變且包含與SEQ ID NO: 62約75%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含K77A突變且包含與SEQ ID NO: 62至少約75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含K77A突變且包含與SEQ ID NO: 62多至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含K77A突變且包含與SEQ ID NO: 62約75%序列一致性至約80%序列一致性、約75%序列一致性至約85%序列一致性、約75%序列一致性至約90%序列一致性、約75%序列一致性至約95%序列一致性、約75%序列一致性至約96%序列一致性、約75%序列一致性至約97%序列一致性、約75%序列一致性至約98%序列一致性、約75%序列一致性至約99%序列一致性、約75%序列一致性至約100%序列一致性、約80%序列一致性至約85%序列一致性、約80%序列一致性至約90%序列一致性、約80%序列一致性至約95%序列一致性、約80%序列一致性至約96%序列一致性、約80%序列一致性至約97%序列一致性、約80%序列一致性至約98%序列一致性、約80%序列一致性至約99%序列一致性、約80%序列一致性至約100%序列一致性、約85%序列一致性至約90%序列一致性、約85%序列一致性至約95%序列一致性、約85%序列一致性至約96%序列一致性、約85%序列一致性至約97%序列一致性、約85%序列一致性至約98%序列一致性、約85%序列一致性至約99%序列一致性、約85%序列一致性至約100%序列一致性、約90%序列一致性至約95%序列一致性、約90%序列一致性至約96%序列一致性、約90%序列一致性至約97%序列一致性、約90%序列一致性至約98%序列一致性、約90%序列一致性至約99%序列一致性、約90%序列一致性至約100%序列一致性、約95%序列一致性至約96%序列一致性、約95%序列一致性至約97%序列一致性、約95%序列一致性至約98%序列一致性、約95%序列一致性至約99%序列一致性、約95%序列一致性至約100%序列一致性、約96%序列一致性至約97%序列一致性、約96%序列一致性至約98%序列一致性、約96%序列一致性至約99%序列一致性、約96%序列一致性至約100%序列一致性、約97%序列一致性至約98%序列一致性、約97%序列一致性至約99%序列一致性、約97%序列一致性至約100%序列一致性、約98%序列一致性至約99%序列一致性、約98%序列一致性至約100%序列一致性或約99%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含K77A突變且包含與SEQ ID NO: 62約75%序列一致性、約80%序列一致性、約85%序列一致性、約90%序列一致性、約95%序列一致性、約96%序列一致性、約97%序列一致性、約98%序列一致性、約99%序列一致性或約100%序列一致性。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含K77E突變且包含與SEQ ID NO: 63約75%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含K77E突變且包含與SEQ ID NO: 63至少約75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含K77E突變且包含與SEQ ID NO: 63多至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含K77E突變且包含與SEQ ID NO: 63約75%序列一致性至約80%序列一致性、約75%序列一致性至約85%序列一致性、約75%序列一致性至約90%序列一致性、約75%序列一致性至約95%序列一致性、約75%序列一致性至約96%序列一致性、約75%序列一致性至約97%序列一致性、約75%序列一致性至約98%序列一致性、約75%序列一致性至約99%序列一致性、約75%序列一致性至約100%序列一致性、約80%序列一致性至約85%序列一致性、約80%序列一致性至約90%序列一致性、約80%序列一致性至約95%序列一致性、約80%序列一致性至約96%序列一致性、約80%序列一致性至約97%序列一致性、約80%序列一致性至約98%序列一致性、約80%序列一致性至約99%序列一致性、約80%序列一致性至約100%序列一致性、約85%序列一致性至約90%序列一致性、約85%序列一致性至約95%序列一致性、約85%序列一致性至約96%序列一致性、約85%序列一致性至約97%序列一致性、約85%序列一致性至約98%序列一致性、約85%序列一致性至約99%序列一致性、約85%序列一致性至約100%序列一致性、約90%序列一致性至約95%序列一致性、約90%序列一致性至約96%序列一致性、約90%序列一致性至約97%序列一致性、約90%序列一致性至約98%序列一致性、約90%序列一致性至約99%序列一致性、約90%序列一致性至約100%序列一致性、約95%序列一致性至約96%序列一致性、約95%序列一致性至約97%序列一致性、約95%序列一致性至約98%序列一致性、約95%序列一致性至約99%序列一致性、約95%序列一致性至約100%序列一致性、約96%序列一致性至約97%序列一致性、約96%序列一致性至約98%序列一致性、約96%序列一致性至約99%序列一致性、約96%序列一致性至約100%序列一致性、約97%序列一致性至約98%序列一致性、約97%序列一致性至約99%序列一致性、約97%序列一致性至約100%序列一致性、約98%序列一致性至約99%序列一致性、約98%序列一致性至約100%序列一致性或約99%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含K77E突變且包含與SEQ ID NO: 63約75%序列一致性、約80%序列一致性、約85%序列一致性、約90%序列一致性、約95%序列一致性、約96%序列一致性、約97%序列一致性、約98%序列一致性、約99%序列一致性或約100%序列一致性。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含K72A突變且包含與SEQ ID NO: 64約75%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含K72A突變且包含與SEQ ID NO: 64至少約75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含K72A突變且包含與SEQ ID NO: 64多至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含K72A突變且包含與SEQ ID NO: 64約75%序列一致性至約80%序列一致性、約75%序列一致性至約85%序列一致性、約75%序列一致性至約90%序列一致性、約75%序列一致性至約95%序列一致性、約75%序列一致性至約96%序列一致性、約75%序列一致性至約97%序列一致性、約75%序列一致性至約98%序列一致性、約75%序列一致性至約99%序列一致性、約75%序列一致性至約100%序列一致性、約80%序列一致性至約85%序列一致性、約80%序列一致性至約90%序列一致性、約80%序列一致性至約95%序列一致性、約80%序列一致性至約96%序列一致性、約80%序列一致性至約97%序列一致性、約80%序列一致性至約98%序列一致性、約80%序列一致性至約99%序列一致性、約80%序列一致性至約100%序列一致性、約85%序列一致性至約90%序列一致性、約85%序列一致性至約95%序列一致性、約85%序列一致性至約96%序列一致性、約85%序列一致性至約97%序列一致性、約85%序列一致性至約98%序列一致性、約85%序列一致性至約99%序列一致性、約85%序列一致性至約100%序列一致性、約90%序列一致性至約95%序列一致性、約90%序列一致性至約96%序列一致性、約90%序列一致性至約97%序列一致性、約90%序列一致性至約98%序列一致性、約90%序列一致性至約99%序列一致性、約90%序列一致性至約100%序列一致性、約95%序列一致性至約96%序列一致性、約95%序列一致性至約97%序列一致性、約95%序列一致性至約98%序列一致性、約95%序列一致性至約99%序列一致性、約95%序列一致性至約100%序列一致性、約96%序列一致性至約97%序列一致性、約96%序列一致性至約98%序列一致性、約96%序列一致性至約99%序列一致性、約96%序列一致性至約100%序列一致性、約97%序列一致性至約98%序列一致性、約97%序列一致性至約99%序列一致性、約97%序列一致性至約100%序列一致性、約98%序列一致性至約99%序列一致性、約98%序列一致性至約100%序列一致性或約99%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含K72A突變且包含與SEQ ID NO: 64約75%序列一致性、約80%序列一致性、約85%序列一致性、約90%序列一致性、約95%序列一致性、約96%序列一致性、約97%序列一致性、約98%序列一致性、約99%序列一致性或約100%序列一致性。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含K72E突變且包含與SEQ ID NO: 65約75%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含K72E突變且包含與SEQ ID NO: 65至少約75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含K72E突變且包含與SEQ ID NO: 65多至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含K72E突變且包含與SEQ ID NO: 65約75%序列一致性至約80%序列一致性、約75%序列一致性至約85%序列一致性、約75%序列一致性至約90%序列一致性、約75%序列一致性至約95%序列一致性、約75%序列一致性至約96%序列一致性、約75%序列一致性至約97%序列一致性、約75%序列一致性至約98%序列一致性、約75%序列一致性至約99%序列一致性、約75%序列一致性至約100%序列一致性、約80%序列一致性至約85%序列一致性、約80%序列一致性至約90%序列一致性、約80%序列一致性至約95%序列一致性、約80%序列一致性至約96%序列一致性、約80%序列一致性至約97%序列一致性、約80%序列一致性至約98%序列一致性、約80%序列一致性至約99%序列一致性、約80%序列一致性至約100%序列一致性、約85%序列一致性至約90%序列一致性、約85%序列一致性至約95%序列一致性、約85%序列一致性至約96%序列一致性、約85%序列一致性至約97%序列一致性、約85%序列一致性至約98%序列一致性、約85%序列一致性至約99%序列一致性、約85%序列一致性至約100%序列一致性、約90%序列一致性至約95%序列一致性、約90%序列一致性至約96%序列一致性、約90%序列一致性至約97%序列一致性、約90%序列一致性至約98%序列一致性、約90%序列一致性至約99%序列一致性、約90%序列一致性至約100%序列一致性、約95%序列一致性至約96%序列一致性、約95%序列一致性至約97%序列一致性、約95%序列一致性至約98%序列一致性、約95%序列一致性至約99%序列一致性、約95%序列一致性至約100%序列一致性、約96%序列一致性至約97%序列一致性、約96%序列一致性至約98%序列一致性、約96%序列一致性至約99%序列一致性、約96%序列一致性至約100%序列一致性、約97%序列一致性至約98%序列一致性、約97%序列一致性至約99%序列一致性、約97%序列一致性至約100%序列一致性、約98%序列一致性至約99%序列一致性、約98%序列一致性至約100%序列一致性或約99%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含K72E突變且包含與SEQ ID NO: 65約75%序列一致性、約80%序列一致性、約85%序列一致性、約90%序列一致性、約95%序列一致性、約96%序列一致性、約97%序列一致性、約98%序列一致性、約99%序列一致性或約100%序列一致性。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含K75A突變且包含與SEQ ID NO: 66約75%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含K75A突變且包含與SEQ ID NO: 66至少約75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含K75A突變且包含與SEQ ID NO: 66多至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含K75A突變且包含與SEQ ID NO: 66約75%序列一致性至約80%序列一致性、約75%序列一致性至約85%序列一致性、約75%序列一致性至約90%序列一致性、約75%序列一致性至約95%序列一致性、約75%序列一致性至約96%序列一致性、約75%序列一致性至約97%序列一致性、約75%序列一致性至約98%序列一致性、約75%序列一致性至約99%序列一致性、約75%序列一致性至約100%序列一致性、約80%序列一致性至約85%序列一致性、約80%序列一致性至約90%序列一致性、約80%序列一致性至約95%序列一致性、約80%序列一致性至約96%序列一致性、約80%序列一致性至約97%序列一致性、約80%序列一致性至約98%序列一致性、約80%序列一致性至約99%序列一致性、約80%序列一致性至約100%序列一致性、約85%序列一致性至約90%序列一致性、約85%序列一致性至約95%序列一致性、約85%序列一致性至約96%序列一致性、約85%序列一致性至約97%序列一致性、約85%序列一致性至約98%序列一致性、約85%序列一致性至約99%序列一致性、約85%序列一致性至約100%序列一致性、約90%序列一致性至約95%序列一致性、約90%序列一致性至約96%序列一致性、約90%序列一致性至約97%序列一致性、約90%序列一致性至約98%序列一致性、約90%序列一致性至約99%序列一致性、約90%序列一致性至約100%序列一致性、約95%序列一致性至約96%序列一致性、約95%序列一致性至約97%序列一致性、約95%序列一致性至約98%序列一致性、約95%序列一致性至約99%序列一致性、約95%序列一致性至約100%序列一致性、約96%序列一致性至約97%序列一致性、約96%序列一致性至約98%序列一致性、約96%序列一致性至約99%序列一致性、約96%序列一致性至約100%序列一致性、約97%序列一致性至約98%序列一致性、約97%序列一致性至約99%序列一致性、約97%序列一致性至約100%序列一致性、約98%序列一致性至約99%序列一致性、約98%序列一致性至約100%序列一致性或約99%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含K75A突變且包含與SEQ ID NO: 66約75%序列一致性、約80%序列一致性、約85%序列一致性、約90%序列一致性、約95%序列一致性、約96%序列一致性、約97%序列一致性、約98%序列一致性、約99%序列一致性或約100%序列一致性。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含K75E突變且包含與SEQ ID NO: 67約75%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含K75E突變且包含與SEQ ID NO: 67至少約75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含K75E突變且包含與SEQ ID NO: 67多至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含K75E突變且包含與SEQ ID NO: 67約75%序列一致性至約80%序列一致性、約75%序列一致性至約85%序列一致性、約75%序列一致性至約90%序列一致性、約75%序列一致性至約95%序列一致性、約75%序列一致性至約96%序列一致性、約75%序列一致性至約97%序列一致性、約75%序列一致性至約98%序列一致性、約75%序列一致性至約99%序列一致性、約75%序列一致性至約100%序列一致性、約80%序列一致性至約85%序列一致性、約80%序列一致性至約90%序列一致性、約80%序列一致性至約95%序列一致性、約80%序列一致性至約96%序列一致性、約80%序列一致性至約97%序列一致性、約80%序列一致性至約98%序列一致性、約80%序列一致性至約99%序列一致性、約80%序列一致性至約100%序列一致性、約85%序列一致性至約90%序列一致性、約85%序列一致性至約95%序列一致性、約85%序列一致性至約96%序列一致性、約85%序列一致性至約97%序列一致性、約85%序列一致性至約98%序列一致性、約85%序列一致性至約99%序列一致性、約85%序列一致性至約100%序列一致性、約90%序列一致性至約95%序列一致性、約90%序列一致性至約96%序列一致性、約90%序列一致性至約97%序列一致性、約90%序列一致性至約98%序列一致性、約90%序列一致性至約99%序列一致性、約90%序列一致性至約100%序列一致性、約95%序列一致性至約96%序列一致性、約95%序列一致性至約97%序列一致性、約95%序列一致性至約98%序列一致性、約95%序列一致性至約99%序列一致性、約95%序列一致性至約100%序列一致性、約96%序列一致性至約97%序列一致性、約96%序列一致性至約98%序列一致性、約96%序列一致性至約99%序列一致性、約96%序列一致性至約100%序列一致性、約97%序列一致性至約98%序列一致性、約97%序列一致性至約99%序列一致性、約97%序列一致性至約100%序列一致性、約98%序列一致性至約99%序列一致性、約98%序列一致性至約100%序列一致性或約99%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含K75E突變且包含與SEQ ID NO: 67約75%序列一致性、約80%序列一致性、約85%序列一致性、約90%序列一致性、約95%序列一致性、約96%序列一致性、約97%序列一致性、約98%序列一致性、約99%序列一致性或約100%序列一致性。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含K73A突變且包含與SEQ ID NO: 68約75%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含K73A突變且包含與SEQ ID NO: 68至少約75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含K73A突變且包含與SEQ ID NO: 68多至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含K73A突變且包含與SEQ ID NO: 68約75%序列一致性至約80%序列一致性、約75%序列一致性至約85%序列一致性、約75%序列一致性至約90%序列一致性、約75%序列一致性至約95%序列一致性、約75%序列一致性至約96%序列一致性、約75%序列一致性至約97%序列一致性、約75%序列一致性至約98%序列一致性、約75%序列一致性至約99%序列一致性、約75%序列一致性至約100%序列一致性、約80%序列一致性至約85%序列一致性、約80%序列一致性至約90%序列一致性、約80%序列一致性至約95%序列一致性、約80%序列一致性至約96%序列一致性、約80%序列一致性至約97%序列一致性、約80%序列一致性至約98%序列一致性、約80%序列一致性至約99%序列一致性、約80%序列一致性至約100%序列一致性、約85%序列一致性至約90%序列一致性、約85%序列一致性至約95%序列一致性、約85%序列一致性至約96%序列一致性、約85%序列一致性至約97%序列一致性、約85%序列一致性至約98%序列一致性、約85%序列一致性至約99%序列一致性、約85%序列一致性至約100%序列一致性、約90%序列一致性至約95%序列一致性、約90%序列一致性至約96%序列一致性、約90%序列一致性至約97%序列一致性、約90%序列一致性至約98%序列一致性、約90%序列一致性至約99%序列一致性、約90%序列一致性至約100%序列一致性、約95%序列一致性至約96%序列一致性、約95%序列一致性至約97%序列一致性、約95%序列一致性至約98%序列一致性、約95%序列一致性至約99%序列一致性、約95%序列一致性至約100%序列一致性、約96%序列一致性至約97%序列一致性、約96%序列一致性至約98%序列一致性、約96%序列一致性至約99%序列一致性、約96%序列一致性至約100%序列一致性、約97%序列一致性至約98%序列一致性、約97%序列一致性至約99%序列一致性、約97%序列一致性至約100%序列一致性、約98%序列一致性至約99%序列一致性、約98%序列一致性至約100%序列一致性或約99%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含K73A突變且包含與SEQ ID NO: 68約75%序列一致性、約80%序列一致性、約85%序列一致性、約90%序列一致性、約95%序列一致性、約96%序列一致性、約97%序列一致性、約98%序列一致性、約99%序列一致性或約100%序列一致性。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含K73E突變且包含與SEQ ID NO: 69約75%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含K73E突變且包含與SEQ ID NO: 69至少約75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含K73E突變且包含與SEQ ID NO: 69多至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含K73E突變且包含與SEQ ID NO: 69約75%序列一致性至約80%序列一致性、約75%序列一致性至約85%序列一致性、約75%序列一致性至約90%序列一致性、約75%序列一致性至約95%序列一致性、約75%序列一致性至約96%序列一致性、約75%序列一致性至約97%序列一致性、約75%序列一致性至約98%序列一致性、約75%序列一致性至約99%序列一致性、約75%序列一致性至約100%序列一致性、約80%序列一致性至約85%序列一致性、約80%序列一致性至約90%序列一致性、約80%序列一致性至約95%序列一致性、約80%序列一致性至約96%序列一致性、約80%序列一致性至約97%序列一致性、約80%序列一致性至約98%序列一致性、約80%序列一致性至約99%序列一致性、約80%序列一致性至約100%序列一致性、約85%序列一致性至約90%序列一致性、約85%序列一致性至約95%序列一致性、約85%序列一致性至約96%序列一致性、約85%序列一致性至約97%序列一致性、約85%序列一致性至約98%序列一致性、約85%序列一致性至約99%序列一致性、約85%序列一致性至約100%序列一致性、約90%序列一致性至約95%序列一致性、約90%序列一致性至約96%序列一致性、約90%序列一致性至約97%序列一致性、約90%序列一致性至約98%序列一致性、約90%序列一致性至約99%序列一致性、約90%序列一致性至約100%序列一致性、約95%序列一致性至約96%序列一致性、約95%序列一致性至約97%序列一致性、約95%序列一致性至約98%序列一致性、約95%序列一致性至約99%序列一致性、約95%序列一致性至約100%序列一致性、約96%序列一致性至約97%序列一致性、約96%序列一致性至約98%序列一致性、約96%序列一致性至約99%序列一致性、約96%序列一致性至約100%序列一致性、約97%序列一致性至約98%序列一致性、約97%序列一致性至約99%序列一致性、約97%序列一致性至約100%序列一致性、約98%序列一致性至約99%序列一致性、約98%序列一致性至約100%序列一致性或約99%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含K73E突變且包含與SEQ ID NO: 69約75%序列一致性、約80%序列一致性、約85%序列一致性、約90%序列一致性、約95%序列一致性、約96%序列一致性、約97%序列一致性、約98%序列一致性、約99%序列一致性或約100%序列一致性。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5F及K77A突變且包含與SEQ ID NO: 70約75%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5F及K77A突變且包含與SEQ ID NO: 70至少約75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5F及K77A突變且包含與SEQ ID NO: 70多至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5F及K77A突變且包含與SEQ ID NO: 70約75%序列一致性至約80%序列一致性、約75%序列一致性至約85%序列一致性、約75%序列一致性至約90%序列一致性、約75%序列一致性至約95%序列一致性、約75%序列一致性至約96%序列一致性、約75%序列一致性至約97%序列一致性、約75%序列一致性至約98%序列一致性、約75%序列一致性至約99%序列一致性、約75%序列一致性至約100%序列一致性、約80%序列一致性至約85%序列一致性、約80%序列一致性至約90%序列一致性、約80%序列一致性至約95%序列一致性、約80%序列一致性至約96%序列一致性、約80%序列一致性至約97%序列一致性、約80%序列一致性至約98%序列一致性、約80%序列一致性至約99%序列一致性、約80%序列一致性至約100%序列一致性、約85%序列一致性至約90%序列一致性、約85%序列一致性至約95%序列一致性、約85%序列一致性至約96%序列一致性、約85%序列一致性至約97%序列一致性、約85%序列一致性至約98%序列一致性、約85%序列一致性至約99%序列一致性、約85%序列一致性至約100%序列一致性、約90%序列一致性至約95%序列一致性、約90%序列一致性至約96%序列一致性、約90%序列一致性至約97%序列一致性、約90%序列一致性至約98%序列一致性、約90%序列一致性至約99%序列一致性、約90%序列一致性至約100%序列一致性、約95%序列一致性至約96%序列一致性、約95%序列一致性至約97%序列一致性、約95%序列一致性至約98%序列一致性、約95%序列一致性至約99%序列一致性、約95%序列一致性至約100%序列一致性、約96%序列一致性至約97%序列一致性、約96%序列一致性至約98%序列一致性、約96%序列一致性至約99%序列一致性、約96%序列一致性至約100%序列一致性、約97%序列一致性至約98%序列一致性、約97%序列一致性至約99%序列一致性、約97%序列一致性至約100%序列一致性、約98%序列一致性至約99%序列一致性、約98%序列一致性至約100%序列一致性或約99%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5F及K77A突變且包含與SEQ ID NO: 70約75%序列一致性、約80%序列一致性、約85%序列一致性、約90%序列一致性、約95%序列一致性、約96%序列一致性、約97%序列一致性、約98%序列一致性、約99%序列一致性或約100%序列一致性。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5F及K77E突變且包含與SEQ ID NO: 71約75%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5F及K77E突變且包含與SEQ ID NO: 71至少約75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5F及K77E突變且包含與SEQ ID NO: 71多至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5F及K77E突變且包含與SEQ ID NO: 71約75%序列一致性至約80%序列一致性、約75%序列一致性至約85%序列一致性、約75%序列一致性至約90%序列一致性、約75%序列一致性至約95%序列一致性、約75%序列一致性至約96%序列一致性、約75%序列一致性至約97%序列一致性、約75%序列一致性至約98%序列一致性、約75%序列一致性至約99%序列一致性、約75%序列一致性至約100%序列一致性、約80%序列一致性至約85%序列一致性、約80%序列一致性至約90%序列一致性、約80%序列一致性至約95%序列一致性、約80%序列一致性至約96%序列一致性、約80%序列一致性至約97%序列一致性、約80%序列一致性至約98%序列一致性、約80%序列一致性至約99%序列一致性、約80%序列一致性至約100%序列一致性、約85%序列一致性至約90%序列一致性、約85%序列一致性至約95%序列一致性、約85%序列一致性至約96%序列一致性、約85%序列一致性至約97%序列一致性、約85%序列一致性至約98%序列一致性、約85%序列一致性至約99%序列一致性、約85%序列一致性至約100%序列一致性、約90%序列一致性至約95%序列一致性、約90%序列一致性至約96%序列一致性、約90%序列一致性至約97%序列一致性、約90%序列一致性至約98%序列一致性、約90%序列一致性至約99%序列一致性、約90%序列一致性至約100%序列一致性、約95%序列一致性至約96%序列一致性、約95%序列一致性至約97%序列一致性、約95%序列一致性至約98%序列一致性、約95%序列一致性至約99%序列一致性、約95%序列一致性至約100%序列一致性、約96%序列一致性至約97%序列一致性、約96%序列一致性至約98%序列一致性、約96%序列一致性至約99%序列一致性、約96%序列一致性至約100%序列一致性、約97%序列一致性至約98%序列一致性、約97%序列一致性至約99%序列一致性、約97%序列一致性至約100%序列一致性、約98%序列一致性至約99%序列一致性、約98%序列一致性至約100%序列一致性或約99%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5F及K77E突變且包含與SEQ ID NO: 71約75%序列一致性、約80%序列一致性、約85%序列一致性、約90%序列一致性、約95%序列一致性、約96%序列一致性、約97%序列一致性、約98%序列一致性、約99%序列一致性或約100%序列一致性。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5F及K72A突變且包含與SEQ ID NO: 72約75%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5F及K72A突變且包含與SEQ ID NO: 72至少約75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5F及K72A突變且包含與SEQ ID NO: 72多至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5F及K72A突變且包含與SEQ ID NO: 72約75%序列一致性至約80%序列一致性、約75%序列一致性至約85%序列一致性、約75%序列一致性至約90%序列一致性、約75%序列一致性至約95%序列一致性、約75%序列一致性至約96%序列一致性、約75%序列一致性至約97%序列一致性、約75%序列一致性至約98%序列一致性、約75%序列一致性至約99%序列一致性、約75%序列一致性至約100%序列一致性、約80%序列一致性至約85%序列一致性、約80%序列一致性至約90%序列一致性、約80%序列一致性至約95%序列一致性、約80%序列一致性至約96%序列一致性、約80%序列一致性至約97%序列一致性、約80%序列一致性至約98%序列一致性、約80%序列一致性至約99%序列一致性、約80%序列一致性至約100%序列一致性、約85%序列一致性至約90%序列一致性、約85%序列一致性至約95%序列一致性、約85%序列一致性至約96%序列一致性、約85%序列一致性至約97%序列一致性、約85%序列一致性至約98%序列一致性、約85%序列一致性至約99%序列一致性、約85%序列一致性至約100%序列一致性、約90%序列一致性至約95%序列一致性、約90%序列一致性至約96%序列一致性、約90%序列一致性至約97%序列一致性、約90%序列一致性至約98%序列一致性、約90%序列一致性至約99%序列一致性、約90%序列一致性至約100%序列一致性、約95%序列一致性至約96%序列一致性、約95%序列一致性至約97%序列一致性、約95%序列一致性至約98%序列一致性、約95%序列一致性至約99%序列一致性、約95%序列一致性至約100%序列一致性、約96%序列一致性至約97%序列一致性、約96%序列一致性至約98%序列一致性、約96%序列一致性至約99%序列一致性、約96%序列一致性至約100%序列一致性、約97%序列一致性至約98%序列一致性、約97%序列一致性至約99%序列一致性、約97%序列一致性至約100%序列一致性、約98%序列一致性至約99%序列一致性、約98%序列一致性至約100%序列一致性或約99%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5F及K72A突變且包含與SEQ ID NO: 72約75%序列一致性、約80%序列一致性、約85%序列一致性、約90%序列一致性、約95%序列一致性、約96%序列一致性、約97%序列一致性、約98%序列一致性、約99%序列一致性或約100%序列一致性。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5F及K72E突變且包含與SEQ ID NO: 73約75%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5F及K72E突變且包含與SEQ ID NO: 73至少約75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5F及K72E突變且包含與SEQ ID NO: 73多至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5F及K72E突變且包含與SEQ ID NO: 73約75%序列一致性至約80%序列一致性、約75%序列一致性至約85%序列一致性、約75%序列一致性至約90%序列一致性、約75%序列一致性至約95%序列一致性、約75%序列一致性至約96%序列一致性、約75%序列一致性至約97%序列一致性、約75%序列一致性至約98%序列一致性、約75%序列一致性至約99%序列一致性、約75%序列一致性至約100%序列一致性、約80%序列一致性至約85%序列一致性、約80%序列一致性至約90%序列一致性、約80%序列一致性至約95%序列一致性、約80%序列一致性至約96%序列一致性、約80%序列一致性至約97%序列一致性、約80%序列一致性至約98%序列一致性、約80%序列一致性至約99%序列一致性、約80%序列一致性至約100%序列一致性、約85%序列一致性至約90%序列一致性、約85%序列一致性至約95%序列一致性、約85%序列一致性至約96%序列一致性、約85%序列一致性至約97%序列一致性、約85%序列一致性至約98%序列一致性、約85%序列一致性至約99%序列一致性、約85%序列一致性至約100%序列一致性、約90%序列一致性至約95%序列一致性、約90%序列一致性至約96%序列一致性、約90%序列一致性至約97%序列一致性、約90%序列一致性至約98%序列一致性、約90%序列一致性至約99%序列一致性、約90%序列一致性至約100%序列一致性、約95%序列一致性至約96%序列一致性、約95%序列一致性至約97%序列一致性、約95%序列一致性至約98%序列一致性、約95%序列一致性至約99%序列一致性、約95%序列一致性至約100%序列一致性、約96%序列一致性至約97%序列一致性、約96%序列一致性至約98%序列一致性、約96%序列一致性至約99%序列一致性、約96%序列一致性至約100%序列一致性、約97%序列一致性至約98%序列一致性、約97%序列一致性至約99%序列一致性、約97%序列一致性至約100%序列一致性、約98%序列一致性至約99%序列一致性、約98%序列一致性至約100%序列一致性或約99%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5F及K72E突變且包含與SEQ ID NO: 73約75%序列一致性、約80%序列一致性、約85%序列一致性、約90%序列一致性、約95%序列一致性、約96%序列一致性、約97%序列一致性、約98%序列一致性、約99%序列一致性或約100%序列一致性。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5F及K76A突變且包含與SEQ ID NO: 74約75%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5F及K76A突變且包含與SEQ ID NO: 74至少約75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5F及K76A突變且包含與SEQ ID NO: 74多至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5F及K76A突變且包含與SEQ ID NO: 74約75%序列一致性至約80%序列一致性、約75%序列一致性至約85%序列一致性、約75%序列一致性至約90%序列一致性、約75%序列一致性至約95%序列一致性、約75%序列一致性至約96%序列一致性、約75%序列一致性至約97%序列一致性、約75%序列一致性至約98%序列一致性、約75%序列一致性至約99%序列一致性、約75%序列一致性至約100%序列一致性、約80%序列一致性至約85%序列一致性、約80%序列一致性至約90%序列一致性、約80%序列一致性至約95%序列一致性、約80%序列一致性至約96%序列一致性、約80%序列一致性至約97%序列一致性、約80%序列一致性至約98%序列一致性、約80%序列一致性至約99%序列一致性、約80%序列一致性至約100%序列一致性、約85%序列一致性至約90%序列一致性、約85%序列一致性至約95%序列一致性、約85%序列一致性至約96%序列一致性、約85%序列一致性至約97%序列一致性、約85%序列一致性至約98%序列一致性、約85%序列一致性至約99%序列一致性、約85%序列一致性至約100%序列一致性、約90%序列一致性至約95%序列一致性、約90%序列一致性至約96%序列一致性、約90%序列一致性至約97%序列一致性、約90%序列一致性至約98%序列一致性、約90%序列一致性至約99%序列一致性、約90%序列一致性至約100%序列一致性、約95%序列一致性至約96%序列一致性、約95%序列一致性至約97%序列一致性、約95%序列一致性至約98%序列一致性、約95%序列一致性至約99%序列一致性、約95%序列一致性至約100%序列一致性、約96%序列一致性至約97%序列一致性、約96%序列一致性至約98%序列一致性、約96%序列一致性至約99%序列一致性、約96%序列一致性至約100%序列一致性、約97%序列一致性至約98%序列一致性、約97%序列一致性至約99%序列一致性、約97%序列一致性至約100%序列一致性、約98%序列一致性至約99%序列一致性、約98%序列一致性至約100%序列一致性或約99%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5F及K76A突變且包含與SEQ ID NO: 74約75%序列一致性、約80%序列一致性、約85%序列一致性、約90%序列一致性、約95%序列一致性、約96%序列一致性、約97%序列一致性、約98%序列一致性、約99%序列一致性或約100%序列一致性。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5F及K76E突變且包含與SEQ ID NO: 75約75%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5F及K76E突變且包含與SEQ ID NO: 75至少約75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5F及K76E突變且包含與SEQ ID NO: 75多至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5F及K76E突變且包含與SEQ ID NO: 75約75%序列一致性至約80%序列一致性、約75%序列一致性至約85%序列一致性、約75%序列一致性至約90%序列一致性、約75%序列一致性至約95%序列一致性、約75%序列一致性至約96%序列一致性、約75%序列一致性至約97%序列一致性、約75%序列一致性至約98%序列一致性、約75%序列一致性至約99%序列一致性、約75%序列一致性至約100%序列一致性、約80%序列一致性至約85%序列一致性、約80%序列一致性至約90%序列一致性、約80%序列一致性至約95%序列一致性、約80%序列一致性至約96%序列一致性、約80%序列一致性至約97%序列一致性、約80%序列一致性至約98%序列一致性、約80%序列一致性至約99%序列一致性、約80%序列一致性至約100%序列一致性、約85%序列一致性至約90%序列一致性、約85%序列一致性至約95%序列一致性、約85%序列一致性至約96%序列一致性、約85%序列一致性至約97%序列一致性、約85%序列一致性至約98%序列一致性、約85%序列一致性至約99%序列一致性、約85%序列一致性至約100%序列一致性、約90%序列一致性至約95%序列一致性、約90%序列一致性至約96%序列一致性、約90%序列一致性至約97%序列一致性、約90%序列一致性至約98%序列一致性、約90%序列一致性至約99%序列一致性、約90%序列一致性至約100%序列一致性、約95%序列一致性至約96%序列一致性、約95%序列一致性至約97%序列一致性、約95%序列一致性至約98%序列一致性、約95%序列一致性至約99%序列一致性、約95%序列一致性至約100%序列一致性、約96%序列一致性至約97%序列一致性、約96%序列一致性至約98%序列一致性、約96%序列一致性至約99%序列一致性、約96%序列一致性至約100%序列一致性、約97%序列一致性至約98%序列一致性、約97%序列一致性至約99%序列一致性、約97%序列一致性至約100%序列一致性、約98%序列一致性至約99%序列一致性、約98%序列一致性至約100%序列一致性或約99%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R5F及K76E突變且包含與SEQ ID NO: 75約75%序列一致性、約80%序列一致性、約85%序列一致性、約90%序列一致性、約95%序列一致性、約96%序列一致性、約97%序列一致性、約98%序列一致性、約99%序列一致性或約100%序列一致性。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含K73A及K76F突變且包含與SEQ ID NO: 76約75%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含K73A及K76F突變且包含與SEQ ID NO: 76至少約75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含K73A及K76F突變且包含與SEQ ID NO: 76多至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含K73A及K76F突變且包含與SEQ ID NO: 76約75%序列一致性至約80%序列一致性、約75%序列一致性至約85%序列一致性、約75%序列一致性至約90%序列一致性、約75%序列一致性至約95%序列一致性、約75%序列一致性至約96%序列一致性、約75%序列一致性至約97%序列一致性、約75%序列一致性至約98%序列一致性、約75%序列一致性至約99%序列一致性、約75%序列一致性至約100%序列一致性、約80%序列一致性至約85%序列一致性、約80%序列一致性至約90%序列一致性、約80%序列一致性至約95%序列一致性、約80%序列一致性至約96%序列一致性、約80%序列一致性至約97%序列一致性、約80%序列一致性至約98%序列一致性、約80%序列一致性至約99%序列一致性、約80%序列一致性至約100%序列一致性、約85%序列一致性至約90%序列一致性、約85%序列一致性至約95%序列一致性、約85%序列一致性至約96%序列一致性、約85%序列一致性至約97%序列一致性、約85%序列一致性至約98%序列一致性、約85%序列一致性至約99%序列一致性、約85%序列一致性至約100%序列一致性、約90%序列一致性至約95%序列一致性、約90%序列一致性至約96%序列一致性、約90%序列一致性至約97%序列一致性、約90%序列一致性至約98%序列一致性、約90%序列一致性至約99%序列一致性、約90%序列一致性至約100%序列一致性、約95%序列一致性至約96%序列一致性、約95%序列一致性至約97%序列一致性、約95%序列一致性至約98%序列一致性、約95%序列一致性至約99%序列一致性、約95%序列一致性至約100%序列一致性、約96%序列一致性至約97%序列一致性、約96%序列一致性至約98%序列一致性、約96%序列一致性至約99%序列一致性、約96%序列一致性至約100%序列一致性、約97%序列一致性至約98%序列一致性、約97%序列一致性至約99%序列一致性、約97%序列一致性至約100%序列一致性、約98%序列一致性至約99%序列一致性、約98%序列一致性至約100%序列一致性或約99%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含K73A及K76F突變且包含與SEQ ID NO: 76約75%序列一致性、約80%序列一致性、約85%序列一致性、約90%序列一致性、約95%序列一致性、約96%序列一致性、約97%序列一致性、約98%序列一致性、約99%序列一致性或約100%序列一致性。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含K73E及K76F突變且包含與SEQ ID NO: 77約75%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含K73E及K76F突變且包含與SEQ ID NO: 77至少約75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含K73E及K76F突變且包含與SEQ ID NO: 77多至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含K73E及K76F突變且包含與SEQ ID NO: 77約75%序列一致性至約80%序列一致性、約75%序列一致性至約85%序列一致性、約75%序列一致性至約90%序列一致性、約75%序列一致性至約95%序列一致性、約75%序列一致性至約96%序列一致性、約75%序列一致性至約97%序列一致性、約75%序列一致性至約98%序列一致性、約75%序列一致性至約99%序列一致性、約75%序列一致性至約100%序列一致性、約80%序列一致性至約85%序列一致性、約80%序列一致性至約90%序列一致性、約80%序列一致性至約95%序列一致性、約80%序列一致性至約96%序列一致性、約80%序列一致性至約97%序列一致性、約80%序列一致性至約98%序列一致性、約80%序列一致性至約99%序列一致性、約80%序列一致性至約100%序列一致性、約85%序列一致性至約90%序列一致性、約85%序列一致性至約95%序列一致性、約85%序列一致性至約96%序列一致性、約85%序列一致性至約97%序列一致性、約85%序列一致性至約98%序列一致性、約85%序列一致性至約99%序列一致性、約85%序列一致性至約100%序列一致性、約90%序列一致性至約95%序列一致性、約90%序列一致性至約96%序列一致性、約90%序列一致性至約97%序列一致性、約90%序列一致性至約98%序列一致性、約90%序列一致性至約99%序列一致性、約90%序列一致性至約100%序列一致性、約95%序列一致性至約96%序列一致性、約95%序列一致性至約97%序列一致性、約95%序列一致性至約98%序列一致性、約95%序列一致性至約99%序列一致性、約95%序列一致性至約100%序列一致性、約96%序列一致性至約97%序列一致性、約96%序列一致性至約98%序列一致性、約96%序列一致性至約99%序列一致性、約96%序列一致性至約100%序列一致性、約97%序列一致性至約98%序列一致性、約97%序列一致性至約99%序列一致性、約97%序列一致性至約100%序列一致性、約98%序列一致性至約99%序列一致性、約98%序列一致性至約100%序列一致性或約99%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含K73E及K76F突變且包含與SEQ ID NO: 77約75%序列一致性、約80%序列一致性、約85%序列一致性、約90%序列一致性、約95%序列一致性、約96%序列一致性、約97%序列一致性、約98%序列一致性、約99%序列一致性或約100%序列一致性。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R9A突變且包含與SEQ ID NO: 78約75%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R9A突變且包含與SEQ ID NO: 78至少約75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R9A突變且包含與SEQ ID NO: 78多至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R9A突變且包含與SEQ ID NO: 78約75%序列一致性至約80%序列一致性、約75%序列一致性至約85%序列一致性、約75%序列一致性至約90%序列一致性、約75%序列一致性至約95%序列一致性、約75%序列一致性至約96%序列一致性、約75%序列一致性至約97%序列一致性、約75%序列一致性至約98%序列一致性、約75%序列一致性至約99%序列一致性、約75%序列一致性至約100%序列一致性、約80%序列一致性至約85%序列一致性、約80%序列一致性至約90%序列一致性、約80%序列一致性至約95%序列一致性、約80%序列一致性至約96%序列一致性、約80%序列一致性至約97%序列一致性、約80%序列一致性至約98%序列一致性、約80%序列一致性至約99%序列一致性、約80%序列一致性至約100%序列一致性、約85%序列一致性至約90%序列一致性、約85%序列一致性至約95%序列一致性、約85%序列一致性至約96%序列一致性、約85%序列一致性至約97%序列一致性、約85%序列一致性至約98%序列一致性、約85%序列一致性至約99%序列一致性、約85%序列一致性至約100%序列一致性、約90%序列一致性至約95%序列一致性、約90%序列一致性至約96%序列一致性、約90%序列一致性至約97%序列一致性、約90%序列一致性至約98%序列一致性、約90%序列一致性至約99%序列一致性、約90%序列一致性至約100%序列一致性、約95%序列一致性至約96%序列一致性、約95%序列一致性至約97%序列一致性、約95%序列一致性至約98%序列一致性、約95%序列一致性至約99%序列一致性、約95%序列一致性至約100%序列一致性、約96%序列一致性至約97%序列一致性、約96%序列一致性至約98%序列一致性、約96%序列一致性至約99%序列一致性、約96%序列一致性至約100%序列一致性、約97%序列一致性至約98%序列一致性、約97%序列一致性至約99%序列一致性、約97%序列一致性至約100%序列一致性、約98%序列一致性至約99%序列一致性、約98%序列一致性至約100%序列一致性或約99%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R9A突變且包含與SEQ ID NO: 78約75%序列一致性、約80%序列一致性、約85%序列一致性、約90%序列一致性、約95%序列一致性、約96%序列一致性、約97%序列一致性、約98%序列一致性、約99%序列一致性或約100%序列一致性。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R9D突變且包含與SEQ ID NO: 79約75%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R9D突變且包含與SEQ ID NO: 79至少約75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R9D突變且包含與SEQ ID NO: 79多至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R9D突變且包含與SEQ ID NO: 79約75%序列一致性至約80%序列一致性、約75%序列一致性至約85%序列一致性、約75%序列一致性至約90%序列一致性、約75%序列一致性至約95%序列一致性、約75%序列一致性至約96%序列一致性、約75%序列一致性至約97%序列一致性、約75%序列一致性至約98%序列一致性、約75%序列一致性至約99%序列一致性、約75%序列一致性至約100%序列一致性、約80%序列一致性至約85%序列一致性、約80%序列一致性至約90%序列一致性、約80%序列一致性至約95%序列一致性、約80%序列一致性至約96%序列一致性、約80%序列一致性至約97%序列一致性、約80%序列一致性至約98%序列一致性、約80%序列一致性至約99%序列一致性、約80%序列一致性至約100%序列一致性、約85%序列一致性至約90%序列一致性、約85%序列一致性至約95%序列一致性、約85%序列一致性至約96%序列一致性、約85%序列一致性至約97%序列一致性、約85%序列一致性至約98%序列一致性、約85%序列一致性至約99%序列一致性、約85%序列一致性至約100%序列一致性、約90%序列一致性至約95%序列一致性、約90%序列一致性至約96%序列一致性、約90%序列一致性至約97%序列一致性、約90%序列一致性至約98%序列一致性、約90%序列一致性至約99%序列一致性、約90%序列一致性至約100%序列一致性、約95%序列一致性至約96%序列一致性、約95%序列一致性至約97%序列一致性、約95%序列一致性至約98%序列一致性、約95%序列一致性至約99%序列一致性、約95%序列一致性至約100%序列一致性、約96%序列一致性至約97%序列一致性、約96%序列一致性至約98%序列一致性、約96%序列一致性至約99%序列一致性、約96%序列一致性至約100%序列一致性、約97%序列一致性至約98%序列一致性、約97%序列一致性至約99%序列一致性、約97%序列一致性至約100%序列一致性、約98%序列一致性至約99%序列一致性、約98%序列一致性至約100%序列一致性或約99%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R9D突變且包含與SEQ ID NO: 79約75%序列一致性、約80%序列一致性、約85%序列一致性、約90%序列一致性、約95%序列一致性、約96%序列一致性、約97%序列一致性、約98%序列一致性、約99%序列一致性或約100%序列一致性。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R9E突變且包含與SEQ ID NO: 80約75%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R9E突變且包含與SEQ ID NO: 80至少約75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R9E突變且包含與SEQ ID NO: 80多至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R9E突變且包含與SEQ ID NO: 80約75%序列一致性至約80%序列一致性、約75%序列一致性至約85%序列一致性、約75%序列一致性至約90%序列一致性、約75%序列一致性至約95%序列一致性、約75%序列一致性至約96%序列一致性、約75%序列一致性至約97%序列一致性、約75%序列一致性至約98%序列一致性、約75%序列一致性至約99%序列一致性、約75%序列一致性至約100%序列一致性、約80%序列一致性至約85%序列一致性、約80%序列一致性至約90%序列一致性、約80%序列一致性至約95%序列一致性、約80%序列一致性至約96%序列一致性、約80%序列一致性至約97%序列一致性、約80%序列一致性至約98%序列一致性、約80%序列一致性至約99%序列一致性、約80%序列一致性至約100%序列一致性、約85%序列一致性至約90%序列一致性、約85%序列一致性至約95%序列一致性、約85%序列一致性至約96%序列一致性、約85%序列一致性至約97%序列一致性、約85%序列一致性至約98%序列一致性、約85%序列一致性至約99%序列一致性、約85%序列一致性至約100%序列一致性、約90%序列一致性至約95%序列一致性、約90%序列一致性至約96%序列一致性、約90%序列一致性至約97%序列一致性、約90%序列一致性至約98%序列一致性、約90%序列一致性至約99%序列一致性、約90%序列一致性至約100%序列一致性、約95%序列一致性至約96%序列一致性、約95%序列一致性至約97%序列一致性、約95%序列一致性至約98%序列一致性、約95%序列一致性至約99%序列一致性、約95%序列一致性至約100%序列一致性、約96%序列一致性至約97%序列一致性、約96%序列一致性至約98%序列一致性、約96%序列一致性至約99%序列一致性、約96%序列一致性至約100%序列一致性、約97%序列一致性至約98%序列一致性、約97%序列一致性至約99%序列一致性、約97%序列一致性至約100%序列一致性、約98%序列一致性至約99%序列一致性、約98%序列一致性至約100%序列一致性或約99%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R9E突變且包含與SEQ ID NO: 80約75%序列一致性、約80%序列一致性、約85%序列一致性、約90%序列一致性、約95%序列一致性、約96%序列一致性、約97%序列一致性、約98%序列一致性、約99%序列一致性或約100%序列一致性。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R9H突變且包含與SEQ ID NO: 81約75%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R9H突變且包含與SEQ ID NO: 81至少約75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R9HE突變且包含與SEQ ID NO: 81多至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R9H突變且包含與SEQ ID NO: 81約75%序列一致性至約80%序列一致性、約75%序列一致性至約85%序列一致性、約75%序列一致性至約90%序列一致性、約75%序列一致性至約95%序列一致性、約75%序列一致性至約96%序列一致性、約75%序列一致性至約97%序列一致性、約75%序列一致性至約98%序列一致性、約75%序列一致性至約99%序列一致性、約75%序列一致性至約100%序列一致性、約80%序列一致性至約85%序列一致性、約80%序列一致性至約90%序列一致性、約80%序列一致性至約95%序列一致性、約80%序列一致性至約96%序列一致性、約80%序列一致性至約97%序列一致性、約80%序列一致性至約98%序列一致性、約80%序列一致性至約99%序列一致性、約80%序列一致性至約100%序列一致性、約85%序列一致性至約90%序列一致性、約85%序列一致性至約95%序列一致性、約85%序列一致性至約96%序列一致性、約85%序列一致性至約97%序列一致性、約85%序列一致性至約98%序列一致性、約85%序列一致性至約99%序列一致性、約85%序列一致性至約100%序列一致性、約90%序列一致性至約95%序列一致性、約90%序列一致性至約96%序列一致性、約90%序列一致性至約97%序列一致性、約90%序列一致性至約98%序列一致性、約90%序列一致性至約99%序列一致性、約90%序列一致性至約100%序列一致性、約95%序列一致性至約96%序列一致性、約95%序列一致性至約97%序列一致性、約95%序列一致性至約98%序列一致性、約95%序列一致性至約99%序列一致性、約95%序列一致性至約100%序列一致性、約96%序列一致性至約97%序列一致性、約96%序列一致性至約98%序列一致性、約96%序列一致性至約99%序列一致性、約96%序列一致性至約100%序列一致性、約97%序列一致性至約98%序列一致性、約97%序列一致性至約99%序列一致性、約97%序列一致性至約100%序列一致性、約98%序列一致性至約99%序列一致性、約98%序列一致性至約100%序列一致性或約99%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R9H突變且包含與SEQ ID NO: 81約75%序列一致性、約80%序列一致性、約85%序列一致性、約90%序列一致性、約95%序列一致性、約96%序列一致性、約97%序列一致性、約98%序列一致性、約99%序列一致性或約100%序列一致性。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R9S突變且包含與SEQ ID NO: 82約75%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R9S突變且包含與SEQ ID NO: 82至少約75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R9S突變且包含與SEQ ID NO: 82多至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R9S突變且包含與SEQ ID NO: 82約75%序列一致性至約80%序列一致性、約75%序列一致性至約85%序列一致性、約75%序列一致性至約90%序列一致性、約75%序列一致性至約95%序列一致性、約75%序列一致性至約96%序列一致性、約75%序列一致性至約97%序列一致性、約75%序列一致性至約98%序列一致性、約75%序列一致性至約99%序列一致性、約75%序列一致性至約100%序列一致性、約80%序列一致性至約85%序列一致性、約80%序列一致性至約90%序列一致性、約80%序列一致性至約95%序列一致性、約80%序列一致性至約96%序列一致性、約80%序列一致性至約97%序列一致性、約80%序列一致性至約98%序列一致性、約80%序列一致性至約99%序列一致性、約80%序列一致性至約100%序列一致性、約85%序列一致性至約90%序列一致性、約85%序列一致性至約95%序列一致性、約85%序列一致性至約96%序列一致性、約85%序列一致性至約97%序列一致性、約85%序列一致性至約98%序列一致性、約85%序列一致性至約99%序列一致性、約85%序列一致性至約100%序列一致性、約90%序列一致性至約95%序列一致性、約90%序列一致性至約96%序列一致性、約90%序列一致性至約97%序列一致性、約90%序列一致性至約98%序列一致性、約90%序列一致性至約99%序列一致性、約90%序列一致性至約100%序列一致性、約95%序列一致性至約96%序列一致性、約95%序列一致性至約97%序列一致性、約95%序列一致性至約98%序列一致性、約95%序列一致性至約99%序列一致性、約95%序列一致性至約100%序列一致性、約96%序列一致性至約97%序列一致性、約96%序列一致性至約98%序列一致性、約96%序列一致性至約99%序列一致性、約96%序列一致性至約100%序列一致性、約97%序列一致性至約98%序列一致性、約97%序列一致性至約99%序列一致性、約97%序列一致性至約100%序列一致性、約98%序列一致性至約99%序列一致性、約98%序列一致性至約100%序列一致性或約99%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R9S突變且包含與SEQ ID NO: 82約75%序列一致性、約80%序列一致性、約85%序列一致性、約90%序列一致性、約95%序列一致性、約96%序列一致性、約97%序列一致性、約98%序列一致性、約99%序列一致性或約100%序列一致性。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R9T突變且包含與SEQ ID NO: 83約75%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R9T突變且包含與SEQ ID NO: 83至少約75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R9T突變且包含與SEQ ID NO: 83多至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R9T突變且包含與SEQ ID NO: 83約75%序列一致性至約80%序列一致性、約75%序列一致性至約85%序列一致性、約75%序列一致性至約90%序列一致性、約75%序列一致性至約95%序列一致性、約75%序列一致性至約96%序列一致性、約75%序列一致性至約97%序列一致性、約75%序列一致性至約98%序列一致性、約75%序列一致性至約99%序列一致性、約75%序列一致性至約100%序列一致性、約80%序列一致性至約85%序列一致性、約80%序列一致性至約90%序列一致性、約80%序列一致性至約95%序列一致性、約80%序列一致性至約96%序列一致性、約80%序列一致性至約97%序列一致性、約80%序列一致性至約98%序列一致性、約80%序列一致性至約99%序列一致性、約80%序列一致性至約100%序列一致性、約85%序列一致性至約90%序列一致性、約85%序列一致性至約95%序列一致性、約85%序列一致性至約96%序列一致性、約85%序列一致性至約97%序列一致性、約85%序列一致性至約98%序列一致性、約85%序列一致性至約99%序列一致性、約85%序列一致性至約100%序列一致性、約90%序列一致性至約95%序列一致性、約90%序列一致性至約96%序列一致性、約90%序列一致性至約97%序列一致性、約90%序列一致性至約98%序列一致性、約90%序列一致性至約99%序列一致性、約90%序列一致性至約100%序列一致性、約95%序列一致性至約96%序列一致性、約95%序列一致性至約97%序列一致性、約95%序列一致性至約98%序列一致性、約95%序列一致性至約99%序列一致性、約95%序列一致性至約100%序列一致性、約96%序列一致性至約97%序列一致性、約96%序列一致性至約98%序列一致性、約96%序列一致性至約99%序列一致性、約96%序列一致性至約100%序列一致性、約97%序列一致性至約98%序列一致性、約97%序列一致性至約99%序列一致性、約97%序列一致性至約100%序列一致性、約98%序列一致性至約99%序列一致性、約98%序列一致性至約100%序列一致性或約99%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R9T突變且包含與SEQ ID NO: 83約75%序列一致性、約80%序列一致性、約85%序列一致性、約90%序列一致性、約95%序列一致性、約96%序列一致性、約97%序列一致性、約98%序列一致性、約99%序列一致性或約100%序列一致性。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R9N突變且包含與SEQ ID NO: 84約75%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R9N突變且包含與SEQ ID NO: 84至少約75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R9N突變且包含與SEQ ID NO: 84多至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R9N突變且包含與SEQ ID NO: 84約75%序列一致性至約80%序列一致性、約75%序列一致性至約85%序列一致性、約75%序列一致性至約90%序列一致性、約75%序列一致性至約95%序列一致性、約75%序列一致性至約96%序列一致性、約75%序列一致性至約97%序列一致性、約75%序列一致性至約98%序列一致性、約75%序列一致性至約99%序列一致性、約75%序列一致性至約100%序列一致性、約80%序列一致性至約85%序列一致性、約80%序列一致性至約90%序列一致性、約80%序列一致性至約95%序列一致性、約80%序列一致性至約96%序列一致性、約80%序列一致性至約97%序列一致性、約80%序列一致性至約98%序列一致性、約80%序列一致性至約99%序列一致性、約80%序列一致性至約100%序列一致性、約85%序列一致性至約90%序列一致性、約85%序列一致性至約95%序列一致性、約85%序列一致性至約96%序列一致性、約85%序列一致性至約97%序列一致性、約85%序列一致性至約98%序列一致性、約85%序列一致性至約99%序列一致性、約85%序列一致性至約100%序列一致性、約90%序列一致性至約95%序列一致性、約90%序列一致性至約96%序列一致性、約90%序列一致性至約97%序列一致性、約90%序列一致性至約98%序列一致性、約90%序列一致性至約99%序列一致性、約90%序列一致性至約100%序列一致性、約95%序列一致性至約96%序列一致性、約95%序列一致性至約97%序列一致性、約95%序列一致性至約98%序列一致性、約95%序列一致性至約99%序列一致性、約95%序列一致性至約100%序列一致性、約96%序列一致性至約97%序列一致性、約96%序列一致性至約98%序列一致性、約96%序列一致性至約99%序列一致性、約96%序列一致性至約100%序列一致性、約97%序列一致性至約98%序列一致性、約97%序列一致性至約99%序列一致性、約97%序列一致性至約100%序列一致性、約98%序列一致性至約99%序列一致性、約98%序列一致性至約100%序列一致性或約99%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R9N突變且包含與SEQ ID NO: 84約75%序列一致性、約80%序列一致性、約85%序列一致性、約90%序列一致性、約95%序列一致性、約96%序列一致性、約97%序列一致性、約98%序列一致性、約99%序列一致性或約100%序列一致性。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R9G突變且包含與SEQ ID NO: 85約75%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R9G突變且包含與SEQ ID NO: 85至少約75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R9G突變且包含與SEQ ID NO: 85多至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R9G突變且包含與SEQ ID NO: 85約75%序列一致性至約80%序列一致性、約75%序列一致性至約85%序列一致性、約75%序列一致性至約90%序列一致性、約75%序列一致性至約95%序列一致性、約75%序列一致性至約96%序列一致性、約75%序列一致性至約97%序列一致性、約75%序列一致性至約98%序列一致性、約75%序列一致性至約99%序列一致性、約75%序列一致性至約100%序列一致性、約80%序列一致性至約85%序列一致性、約80%序列一致性至約90%序列一致性、約80%序列一致性至約95%序列一致性、約80%序列一致性至約96%序列一致性、約80%序列一致性至約97%序列一致性、約80%序列一致性至約98%序列一致性、約80%序列一致性至約99%序列一致性、約80%序列一致性至約100%序列一致性、約85%序列一致性至約90%序列一致性、約85%序列一致性至約95%序列一致性、約85%序列一致性至約96%序列一致性、約85%序列一致性至約97%序列一致性、約85%序列一致性至約98%序列一致性、約85%序列一致性至約99%序列一致性、約85%序列一致性至約100%序列一致性、約90%序列一致性至約95%序列一致性、約90%序列一致性至約96%序列一致性、約90%序列一致性至約97%序列一致性、約90%序列一致性至約98%序列一致性、約90%序列一致性至約99%序列一致性、約90%序列一致性至約100%序列一致性、約95%序列一致性至約96%序列一致性、約95%序列一致性至約97%序列一致性、約95%序列一致性至約98%序列一致性、約95%序列一致性至約99%序列一致性、約95%序列一致性至約100%序列一致性、約96%序列一致性至約97%序列一致性、約96%序列一致性至約98%序列一致性、約96%序列一致性至約99%序列一致性、約96%序列一致性至約100%序列一致性、約97%序列一致性至約98%序列一致性、約97%序列一致性至約99%序列一致性、約97%序列一致性至約100%序列一致性、約98%序列一致性至約99%序列一致性、約98%序列一致性至約100%序列一致性或約99%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R9G突變且包含與SEQ ID NO: 85約75%序列一致性、約80%序列一致性、約85%序列一致性、約90%序列一致性、約95%序列一致性、約96%序列一致性、約97%序列一致性、約98%序列一致性、約99%序列一致性或約100%序列一致性。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R9V突變且包含與SEQ ID NO: 86約75%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R9V突變且包含與SEQ ID NO: 86至少約75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R9V突變且包含與SEQ ID NO: 86多至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R9V突變且包含與SEQ ID NO: 86約75%序列一致性至約80%序列一致性、約75%序列一致性至約85%序列一致性、約75%序列一致性至約90%序列一致性、約75%序列一致性至約95%序列一致性、約75%序列一致性至約96%序列一致性、約75%序列一致性至約97%序列一致性、約75%序列一致性至約98%序列一致性、約75%序列一致性至約99%序列一致性、約75%序列一致性至約100%序列一致性、約80%序列一致性至約85%序列一致性、約80%序列一致性至約90%序列一致性、約80%序列一致性至約95%序列一致性、約80%序列一致性至約96%序列一致性、約80%序列一致性至約97%序列一致性、約80%序列一致性至約98%序列一致性、約80%序列一致性至約99%序列一致性、約80%序列一致性至約100%序列一致性、約85%序列一致性至約90%序列一致性、約85%序列一致性至約95%序列一致性、約85%序列一致性至約96%序列一致性、約85%序列一致性至約97%序列一致性、約85%序列一致性至約98%序列一致性、約85%序列一致性至約99%序列一致性、約85%序列一致性至約100%序列一致性、約90%序列一致性至約95%序列一致性、約90%序列一致性至約96%序列一致性、約90%序列一致性至約97%序列一致性、約90%序列一致性至約98%序列一致性、約90%序列一致性至約99%序列一致性、約90%序列一致性至約100%序列一致性、約95%序列一致性至約96%序列一致性、約95%序列一致性至約97%序列一致性、約95%序列一致性至約98%序列一致性、約95%序列一致性至約99%序列一致性、約95%序列一致性至約100%序列一致性、約96%序列一致性至約97%序列一致性、約96%序列一致性至約98%序列一致性、約96%序列一致性至約99%序列一致性、約96%序列一致性至約100%序列一致性、約97%序列一致性至約98%序列一致性、約97%序列一致性至約99%序列一致性、約97%序列一致性至約100%序列一致性、約98%序列一致性至約99%序列一致性、約98%序列一致性至約100%序列一致性或約99%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R9V突變且包含與SEQ ID NO: 86約75%序列一致性、約80%序列一致性、約85%序列一致性、約90%序列一致性、約95%序列一致性、約96%序列一致性、約97%序列一致性、約98%序列一致性、約99%序列一致性或約100%序列一致性。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R9I突變且包含與SEQ ID NO: 87約75%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R9I突變且包含與SEQ ID NO: 87至少約75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R9I突變且包含與SEQ ID NO: 87多至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R9I突變且包含與SEQ ID NO: 87約75%序列一致性至約80%序列一致性、約75%序列一致性至約85%序列一致性、約75%序列一致性至約90%序列一致性、約75%序列一致性至約95%序列一致性、約75%序列一致性至約96%序列一致性、約75%序列一致性至約97%序列一致性、約75%序列一致性至約98%序列一致性、約75%序列一致性至約99%序列一致性、約75%序列一致性至約100%序列一致性、約80%序列一致性至約85%序列一致性、約80%序列一致性至約90%序列一致性、約80%序列一致性至約95%序列一致性、約80%序列一致性至約96%序列一致性、約80%序列一致性至約97%序列一致性、約80%序列一致性至約98%序列一致性、約80%序列一致性至約99%序列一致性、約80%序列一致性至約100%序列一致性、約85%序列一致性至約90%序列一致性、約85%序列一致性至約95%序列一致性、約85%序列一致性至約96%序列一致性、約85%序列一致性至約97%序列一致性、約85%序列一致性至約98%序列一致性、約85%序列一致性至約99%序列一致性、約85%序列一致性至約100%序列一致性、約90%序列一致性至約95%序列一致性、約90%序列一致性至約96%序列一致性、約90%序列一致性至約97%序列一致性、約90%序列一致性至約98%序列一致性、約90%序列一致性至約99%序列一致性、約90%序列一致性至約100%序列一致性、約95%序列一致性至約96%序列一致性、約95%序列一致性至約97%序列一致性、約95%序列一致性至約98%序列一致性、約95%序列一致性至約99%序列一致性、約95%序列一致性至約100%序列一致性、約96%序列一致性至約97%序列一致性、約96%序列一致性至約98%序列一致性、約96%序列一致性至約99%序列一致性、約96%序列一致性至約100%序列一致性、約97%序列一致性至約98%序列一致性、約97%序列一致性至約99%序列一致性、約97%序列一致性至約100%序列一致性、約98%序列一致性至約99%序列一致性、約98%序列一致性至約100%序列一致性或約99%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R9I突變且包含與SEQ ID NO: 87約75%序列一致性、約80%序列一致性、約85%序列一致性、約90%序列一致性、約95%序列一致性、約96%序列一致性、約97%序列一致性、約98%序列一致性、約99%序列一致性或約100%序列一致性。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R9L突變且包含與SEQ ID NO: 88約75%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R9L突變且包含與SEQ ID NO: 88至少約75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R9L突變且包含與SEQ ID NO: 88多至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R9L突變且包含與SEQ ID NO: 88約75%序列一致性至約80%序列一致性、約75%序列一致性至約85%序列一致性、約75%序列一致性至約90%序列一致性、約75%序列一致性至約95%序列一致性、約75%序列一致性至約96%序列一致性、約75%序列一致性至約97%序列一致性、約75%序列一致性至約98%序列一致性、約75%序列一致性至約99%序列一致性、約75%序列一致性至約100%序列一致性、約80%序列一致性至約85%序列一致性、約80%序列一致性至約90%序列一致性、約80%序列一致性至約95%序列一致性、約80%序列一致性至約96%序列一致性、約80%序列一致性至約97%序列一致性、約80%序列一致性至約98%序列一致性、約80%序列一致性至約99%序列一致性、約80%序列一致性至約100%序列一致性、約85%序列一致性至約90%序列一致性、約85%序列一致性至約95%序列一致性、約85%序列一致性至約96%序列一致性、約85%序列一致性至約97%序列一致性、約85%序列一致性至約98%序列一致性、約85%序列一致性至約99%序列一致性、約85%序列一致性至約100%序列一致性、約90%序列一致性至約95%序列一致性、約90%序列一致性至約96%序列一致性、約90%序列一致性至約97%序列一致性、約90%序列一致性至約98%序列一致性、約90%序列一致性至約99%序列一致性、約90%序列一致性至約100%序列一致性、約95%序列一致性至約96%序列一致性、約95%序列一致性至約97%序列一致性、約95%序列一致性至約98%序列一致性、約95%序列一致性至約99%序列一致性、約95%序列一致性至約100%序列一致性、約96%序列一致性至約97%序列一致性、約96%序列一致性至約98%序列一致性、約96%序列一致性至約99%序列一致性、約96%序列一致性至約100%序列一致性、約97%序列一致性至約98%序列一致性、約97%序列一致性至約99%序列一致性、約97%序列一致性至約100%序列一致性、約98%序列一致性至約99%序列一致性、約98%序列一致性至約100%序列一致性或約99%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R9L突變且包含與SEQ ID NO: 88約75%序列一致性、約80%序列一致性、約85%序列一致性、約90%序列一致性、約95%序列一致性、約96%序列一致性、約97%序列一致性、約98%序列一致性、約99%序列一致性或約100%序列一致性。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R9Y突變且包含與SEQ ID NO: 89約75%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R9Y突變且包含與SEQ ID NO: 89至少約75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R9Y突變且包含與SEQ ID NO: 89多至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R9Y突變且包含與SEQ ID NO: 89約75%序列一致性至約80%序列一致性、約75%序列一致性至約85%序列一致性、約75%序列一致性至約90%序列一致性、約75%序列一致性至約95%序列一致性、約75%序列一致性至約96%序列一致性、約75%序列一致性至約97%序列一致性、約75%序列一致性至約98%序列一致性、約75%序列一致性至約99%序列一致性、約75%序列一致性至約100%序列一致性、約80%序列一致性至約85%序列一致性、約80%序列一致性至約90%序列一致性、約80%序列一致性至約95%序列一致性、約80%序列一致性至約96%序列一致性、約80%序列一致性至約97%序列一致性、約80%序列一致性至約98%序列一致性、約80%序列一致性至約99%序列一致性、約80%序列一致性至約100%序列一致性、約85%序列一致性至約90%序列一致性、約85%序列一致性至約95%序列一致性、約85%序列一致性至約96%序列一致性、約85%序列一致性至約97%序列一致性、約85%序列一致性至約98%序列一致性、約85%序列一致性至約99%序列一致性、約85%序列一致性至約100%序列一致性、約90%序列一致性至約95%序列一致性、約90%序列一致性至約96%序列一致性、約90%序列一致性至約97%序列一致性、約90%序列一致性至約98%序列一致性、約90%序列一致性至約99%序列一致性、約90%序列一致性至約100%序列一致性、約95%序列一致性至約96%序列一致性、約95%序列一致性至約97%序列一致性、約95%序列一致性至約98%序列一致性、約95%序列一致性至約99%序列一致性、約95%序列一致性至約100%序列一致性、約96%序列一致性至約97%序列一致性、約96%序列一致性至約98%序列一致性、約96%序列一致性至約99%序列一致性、約96%序列一致性至約100%序列一致性、約97%序列一致性至約98%序列一致性、約97%序列一致性至約99%序列一致性、約97%序列一致性至約100%序列一致性、約98%序列一致性至約99%序列一致性、約98%序列一致性至約100%序列一致性或約99%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R9Y突變且包含與SEQ ID NO: 89約75%序列一致性、約80%序列一致性、約85%序列一致性、約90%序列一致性、約95%序列一致性、約96%序列一致性、約97%序列一致性、約98%序列一致性、約99%序列一致性或約100%序列一致性。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含K72A及R76F突變且包含與SEQ ID NO: 90約75%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含K72A及R76F突變且包含與SEQ ID NO: 90至少約75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含K72A及R76F突變且包含與SEQ ID NO: 90多至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含K72A及R76F突變且包含與SEQ ID NO: 90約75%序列一致性至約80%序列一致性、約75%序列一致性至約85%序列一致性、約75%序列一致性至約90%序列一致性、約75%序列一致性至約95%序列一致性、約75%序列一致性至約96%序列一致性、約75%序列一致性至約97%序列一致性、約75%序列一致性至約98%序列一致性、約75%序列一致性至約99%序列一致性、約75%序列一致性至約100%序列一致性、約80%序列一致性至約85%序列一致性、約80%序列一致性至約90%序列一致性、約80%序列一致性至約95%序列一致性、約80%序列一致性至約96%序列一致性、約80%序列一致性至約97%序列一致性、約80%序列一致性至約98%序列一致性、約80%序列一致性至約99%序列一致性、約80%序列一致性至約100%序列一致性、約85%序列一致性至約90%序列一致性、約85%序列一致性至約95%序列一致性、約85%序列一致性至約96%序列一致性、約85%序列一致性至約97%序列一致性、約85%序列一致性至約98%序列一致性、約85%序列一致性至約99%序列一致性、約85%序列一致性至約100%序列一致性、約90%序列一致性至約95%序列一致性、約90%序列一致性至約96%序列一致性、約90%序列一致性至約97%序列一致性、約90%序列一致性至約98%序列一致性、約90%序列一致性至約99%序列一致性、約90%序列一致性至約100%序列一致性、約95%序列一致性至約96%序列一致性、約95%序列一致性至約97%序列一致性、約95%序列一致性至約98%序列一致性、約95%序列一致性至約99%序列一致性、約95%序列一致性至約100%序列一致性、約96%序列一致性至約97%序列一致性、約96%序列一致性至約98%序列一致性、約96%序列一致性至約99%序列一致性、約96%序列一致性至約100%序列一致性、約97%序列一致性至約98%序列一致性、約97%序列一致性至約99%序列一致性、約97%序列一致性至約100%序列一致性、約98%序列一致性至約99%序列一致性、約98%序列一致性至約100%序列一致性或約99%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含K72A及R76F突變且包含與SEQ ID NO: 90約75%序列一致性、約80%序列一致性、約85%序列一致性、約90%序列一致性、約95%序列一致性、約96%序列一致性、約97%序列一致性、約98%序列一致性、約99%序列一致性或約100%序列一致性。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含K75A及R76F突變且包含與SEQ ID NO: 91約75%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含K75A及R76F突變且包含與SEQ ID NO: 91至少約75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含K75A及R76F突變且包含與SEQ ID NO: 91多至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含K75A及R76F突變且包含與SEQ ID NO: 91約75%序列一致性至約80%序列一致性、約75%序列一致性至約85%序列一致性、約75%序列一致性至約90%序列一致性、約75%序列一致性至約95%序列一致性、約75%序列一致性至約96%序列一致性、約75%序列一致性至約97%序列一致性、約75%序列一致性至約98%序列一致性、約75%序列一致性至約99%序列一致性、約75%序列一致性至約100%序列一致性、約80%序列一致性至約85%序列一致性、約80%序列一致性至約90%序列一致性、約80%序列一致性至約95%序列一致性、約80%序列一致性至約96%序列一致性、約80%序列一致性至約97%序列一致性、約80%序列一致性至約98%序列一致性、約80%序列一致性至約99%序列一致性、約80%序列一致性至約100%序列一致性、約85%序列一致性至約90%序列一致性、約85%序列一致性至約95%序列一致性、約85%序列一致性至約96%序列一致性、約85%序列一致性至約97%序列一致性、約85%序列一致性至約98%序列一致性、約85%序列一致性至約99%序列一致性、約85%序列一致性至約100%序列一致性、約90%序列一致性至約95%序列一致性、約90%序列一致性至約96%序列一致性、約90%序列一致性至約97%序列一致性、約90%序列一致性至約98%序列一致性、約90%序列一致性至約99%序列一致性、約90%序列一致性至約100%序列一致性、約95%序列一致性至約96%序列一致性、約95%序列一致性至約97%序列一致性、約95%序列一致性至約98%序列一致性、約95%序列一致性至約99%序列一致性、約95%序列一致性至約100%序列一致性、約96%序列一致性至約97%序列一致性、約96%序列一致性至約98%序列一致性、約96%序列一致性至約99%序列一致性、約96%序列一致性至約100%序列一致性、約97%序列一致性至約98%序列一致性、約97%序列一致性至約99%序列一致性、約97%序列一致性至約100%序列一致性、約98%序列一致性至約99%序列一致性、約98%序列一致性至約100%序列一致性或約99%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含K75A及R76F突變且包含與SEQ ID NO: 91約75%序列一致性、約80%序列一致性、約85%序列一致性、約90%序列一致性、約95%序列一致性、約96%序列一致性、約97%序列一致性、約98%序列一致性、約99%序列一致性或約100%序列一致性。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76F及K77A突變且包含與SEQ ID NO: 92約75%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76F及K77A突變且包含與SEQ ID NO: 92至少約75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76F及K77A突變且包含與SEQ ID NO: 92多至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76F及K77A突變且包含與SEQ ID NO: 92約75%序列一致性至約80%序列一致性、約75%序列一致性至約85%序列一致性、約75%序列一致性至約90%序列一致性、約75%序列一致性至約95%序列一致性、約75%序列一致性至約96%序列一致性、約75%序列一致性至約97%序列一致性、約75%序列一致性至約98%序列一致性、約75%序列一致性至約99%序列一致性、約75%序列一致性至約100%序列一致性、約80%序列一致性至約85%序列一致性、約80%序列一致性至約90%序列一致性、約80%序列一致性至約95%序列一致性、約80%序列一致性至約96%序列一致性、約80%序列一致性至約97%序列一致性、約80%序列一致性至約98%序列一致性、約80%序列一致性至約99%序列一致性、約80%序列一致性至約100%序列一致性、約85%序列一致性至約90%序列一致性、約85%序列一致性至約95%序列一致性、約85%序列一致性至約96%序列一致性、約85%序列一致性至約97%序列一致性、約85%序列一致性至約98%序列一致性、約85%序列一致性至約99%序列一致性、約85%序列一致性至約100%序列一致性、約90%序列一致性至約95%序列一致性、約90%序列一致性至約96%序列一致性、約90%序列一致性至約97%序列一致性、約90%序列一致性至約98%序列一致性、約90%序列一致性至約99%序列一致性、約90%序列一致性至約100%序列一致性、約95%序列一致性至約96%序列一致性、約95%序列一致性至約97%序列一致性、約95%序列一致性至約98%序列一致性、約95%序列一致性至約99%序列一致性、約95%序列一致性至約100%序列一致性、約96%序列一致性至約97%序列一致性、約96%序列一致性至約98%序列一致性、約96%序列一致性至約99%序列一致性、約96%序列一致性至約100%序列一致性、約97%序列一致性至約98%序列一致性、約97%序列一致性至約99%序列一致性、約97%序列一致性至約100%序列一致性、約98%序列一致性至約99%序列一致性、約98%序列一致性至約100%序列一致性或約99%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76F及K77A突變且包含與SEQ ID NO: 92約75%序列一致性、約80%序列一致性、約85%序列一致性、約90%序列一致性、約95%序列一致性、約96%序列一致性、約97%序列一致性、約98%序列一致性、約99%序列一致性或約100%序列一致性。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含K75E及R76F突變且包含與SEQ ID NO: 93約75%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含K75E及R76F突變且包含與SEQ ID NO: 93至少約75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含K75E及R76F突變且包含與SEQ ID NO: 93多至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含K75E及R76F突變且包含與SEQ ID NO: 93約75%序列一致性至約80%序列一致性、約75%序列一致性至約85%序列一致性、約75%序列一致性至約90%序列一致性、約75%序列一致性至約95%序列一致性、約75%序列一致性至約96%序列一致性、約75%序列一致性至約97%序列一致性、約75%序列一致性至約98%序列一致性、約75%序列一致性至約99%序列一致性、約75%序列一致性至約100%序列一致性、約80%序列一致性至約85%序列一致性、約80%序列一致性至約90%序列一致性、約80%序列一致性至約95%序列一致性、約80%序列一致性至約96%序列一致性、約80%序列一致性至約97%序列一致性、約80%序列一致性至約98%序列一致性、約80%序列一致性至約99%序列一致性、約80%序列一致性至約100%序列一致性、約85%序列一致性至約90%序列一致性、約85%序列一致性至約95%序列一致性、約85%序列一致性至約96%序列一致性、約85%序列一致性至約97%序列一致性、約85%序列一致性至約98%序列一致性、約85%序列一致性至約99%序列一致性、約85%序列一致性至約100%序列一致性、約90%序列一致性至約95%序列一致性、約90%序列一致性至約96%序列一致性、約90%序列一致性至約97%序列一致性、約90%序列一致性至約98%序列一致性、約90%序列一致性至約99%序列一致性、約90%序列一致性至約100%序列一致性、約95%序列一致性至約96%序列一致性、約95%序列一致性至約97%序列一致性、約95%序列一致性至約98%序列一致性、約95%序列一致性至約99%序列一致性、約95%序列一致性至約100%序列一致性、約96%序列一致性至約97%序列一致性、約96%序列一致性至約98%序列一致性、約96%序列一致性至約99%序列一致性、約96%序列一致性至約100%序列一致性、約97%序列一致性至約98%序列一致性、約97%序列一致性至約99%序列一致性、約97%序列一致性至約100%序列一致性、約98%序列一致性至約99%序列一致性、約98%序列一致性至約100%序列一致性或約99%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含K75E及R76F突變且包含與SEQ ID NO: 93約75%序列一致性、約80%序列一致性、約85%序列一致性、約90%序列一致性、約95%序列一致性、約96%序列一致性、約97%序列一致性、約98%序列一致性、約99%序列一致性或約100%序列一致性。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含V17I及L74I突變且包含與SEQ ID NO: 374約75%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含V17I及L74I突變且包含與SEQ ID NO: 374至少約75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含V17I及L74I突變且包含與SEQ ID NO: 374多至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含V17I及L74I突變且包含與SEQ ID NO: 374約75%序列一致性至約80%序列一致性、約75%序列一致性至約85%序列一致性、約75%序列一致性至約90%序列一致性、約75%序列一致性至約95%序列一致性、約75%序列一致性至約96%序列一致性、約75%序列一致性至約97%序列一致性、約75%序列一致性至約98%序列一致性、約75%序列一致性至約99%序列一致性、約75%序列一致性至約100%序列一致性、約80%序列一致性至約85%序列一致性、約80%序列一致性至約90%序列一致性、約80%序列一致性至約95%序列一致性、約80%序列一致性至約96%序列一致性、約80%序列一致性至約97%序列一致性、約80%序列一致性至約98%序列一致性、約80%序列一致性至約99%序列一致性、約80%序列一致性至約100%序列一致性、約85%序列一致性至約90%序列一致性、約85%序列一致性至約95%序列一致性、約85%序列一致性至約96%序列一致性、約85%序列一致性至約97%序列一致性、約85%序列一致性至約98%序列一致性、約85%序列一致性至約99%序列一致性、約85%序列一致性至約100%序列一致性、約90%序列一致性至約95%序列一致性、約90%序列一致性至約96%序列一致性、約90%序列一致性至約97%序列一致性、約90%序列一致性至約98%序列一致性、約90%序列一致性至約99%序列一致性、約90%序列一致性至約100%序列一致性、約95%序列一致性至約96%序列一致性、約95%序列一致性至約97%序列一致性、約95%序列一致性至約98%序列一致性、約95%序列一致性至約99%序列一致性、約95%序列一致性至約100%序列一致性、約96%序列一致性至約97%序列一致性、約96%序列一致性至約98%序列一致性、約96%序列一致性至約99%序列一致性、約96%序列一致性至約100%序列一致性、約97%序列一致性至約98%序列一致性、約97%序列一致性至約99%序列一致性、約97%序列一致性至約100%序列一致性、約98%序列一致性至約99%序列一致性、約98%序列一致性至約100%序列一致性或約99%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含V17I及L74I突變且包含與SEQ ID NO: 374約75%序列一致性、約80%序列一致性、約85%序列一致性、約90%序列一致性、約95%序列一致性、約96%序列一致性、約97%序列一致性、約98%序列一致性、約99%序列一致性或約100%序列一致性。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含I16A及L74F突變且包含與SEQ ID NO: 375約75%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含I16A及L74F突變且包含與SEQ ID NO: 375至少約75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含I16A及L74F突變且包含與SEQ ID NO: 375多至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含I16A及L74F突變且包含與SEQ ID NO: 375約75%序列一致性至約80%序列一致性、約75%序列一致性至約85%序列一致性、約75%序列一致性至約90%序列一致性、約75%序列一致性至約95%序列一致性、約75%序列一致性至約96%序列一致性、約75%序列一致性至約97%序列一致性、約75%序列一致性至約98%序列一致性、約75%序列一致性至約99%序列一致性、約75%序列一致性至約100%序列一致性、約80%序列一致性至約85%序列一致性、約80%序列一致性至約90%序列一致性、約80%序列一致性至約95%序列一致性、約80%序列一致性至約96%序列一致性、約80%序列一致性至約97%序列一致性、約80%序列一致性至約98%序列一致性、約80%序列一致性至約99%序列一致性、約80%序列一致性至約100%序列一致性、約85%序列一致性至約90%序列一致性、約85%序列一致性至約95%序列一致性、約85%序列一致性至約96%序列一致性、約85%序列一致性至約97%序列一致性、約85%序列一致性至約98%序列一致性、約85%序列一致性至約99%序列一致性、約85%序列一致性至約100%序列一致性、約90%序列一致性至約95%序列一致性、約90%序列一致性至約96%序列一致性、約90%序列一致性至約97%序列一致性、約90%序列一致性至約98%序列一致性、約90%序列一致性至約99%序列一致性、約90%序列一致性至約100%序列一致性、約95%序列一致性至約96%序列一致性、約95%序列一致性至約97%序列一致性、約95%序列一致性至約98%序列一致性、約95%序列一致性至約99%序列一致性、約95%序列一致性至約100%序列一致性、約96%序列一致性至約97%序列一致性、約96%序列一致性至約98%序列一致性、約96%序列一致性至約99%序列一致性、約96%序列一致性至約100%序列一致性、約97%序列一致性至約98%序列一致性、約97%序列一致性至約99%序列一致性、約97%序列一致性至約100%序列一致性、約98%序列一致性至約99%序列一致性、約98%序列一致性至約100%序列一致性或約99%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含I16A及L74F突變且包含與SEQ ID NO: 375約75%序列一致性、約80%序列一致性、約85%序列一致性、約90%序列一致性、約95%序列一致性、約96%序列一致性、約97%序列一致性、約98%序列一致性、約99%序列一致性或約100%序列一致性。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含I16S、V17I及L74V突變且包含與SEQ ID NO: 376約75%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含I16S、V17I及L74V突變且包含與SEQ ID NO: 376至少約75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含I16S、V17I及L74V突變且包含與SEQ ID NO: 376多至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含I16S、V17I及L74V突變且包含與SEQ ID NO: 376約75%序列一致性至約80%序列一致性、約75%序列一致性至約85%序列一致性、約75%序列一致性至約90%序列一致性、約75%序列一致性至約95%序列一致性、約75%序列一致性至約96%序列一致性、約75%序列一致性至約97%序列一致性、約75%序列一致性至約98%序列一致性、約75%序列一致性至約99%序列一致性、約75%序列一致性至約100%序列一致性、約80%序列一致性至約85%序列一致性、約80%序列一致性至約90%序列一致性、約80%序列一致性至約95%序列一致性、約80%序列一致性至約96%序列一致性、約80%序列一致性至約97%序列一致性、約80%序列一致性至約98%序列一致性、約80%序列一致性至約99%序列一致性、約80%序列一致性至約100%序列一致性、約85%序列一致性至約90%序列一致性、約85%序列一致性至約95%序列一致性、約85%序列一致性至約96%序列一致性、約85%序列一致性至約97%序列一致性、約85%序列一致性至約98%序列一致性、約85%序列一致性至約99%序列一致性、約85%序列一致性至約100%序列一致性、約90%序列一致性至約95%序列一致性、約90%序列一致性至約96%序列一致性、約90%序列一致性至約97%序列一致性、約90%序列一致性至約98%序列一致性、約90%序列一致性至約99%序列一致性、約90%序列一致性至約100%序列一致性、約95%序列一致性至約96%序列一致性、約95%序列一致性至約97%序列一致性、約95%序列一致性至約98%序列一致性、約95%序列一致性至約99%序列一致性、約95%序列一致性至約100%序列一致性、約96%序列一致性至約97%序列一致性、約96%序列一致性至約98%序列一致性、約96%序列一致性至約99%序列一致性、約96%序列一致性至約100%序列一致性、約97%序列一致性至約98%序列一致性、約97%序列一致性至約99%序列一致性、約97%序列一致性至約100%序列一致性、約98%序列一致性至約99%序列一致性、約98%序列一致性至約100%序列一致性或約99%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含I16S、V17I及L74V突變且包含與SEQ ID NO: 376約75%序列一致性、約80%序列一致性、約85%序列一致性、約90%序列一致性、約95%序列一致性、約96%序列一致性、約97%序列一致性、約98%序列一致性、約99%序列一致性或約100%序列一致性。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含I16R、V17I及L74I突變且包含與SEQ ID NO: 377約75%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含I16R、V17I及L74I突變且包含與SEQ ID NO: 377至少約75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含I16R、V17I及L74I突變且包含與SEQ ID NO: 377多至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含I16R、V17I及L74I突變且包含與SEQ ID NO: 377約75%序列一致性至約80%序列一致性、約75%序列一致性至約85%序列一致性、約75%序列一致性至約90%序列一致性、約75%序列一致性至約95%序列一致性、約75%序列一致性至約96%序列一致性、約75%序列一致性至約97%序列一致性、約75%序列一致性至約98%序列一致性、約75%序列一致性至約99%序列一致性、約75%序列一致性至約100%序列一致性、約80%序列一致性至約85%序列一致性、約80%序列一致性至約90%序列一致性、約80%序列一致性至約95%序列一致性、約80%序列一致性至約96%序列一致性、約80%序列一致性至約97%序列一致性、約80%序列一致性至約98%序列一致性、約80%序列一致性至約99%序列一致性、約80%序列一致性至約100%序列一致性、約85%序列一致性至約90%序列一致性、約85%序列一致性至約95%序列一致性、約85%序列一致性至約96%序列一致性、約85%序列一致性至約97%序列一致性、約85%序列一致性至約98%序列一致性、約85%序列一致性至約99%序列一致性、約85%序列一致性至約100%序列一致性、約90%序列一致性至約95%序列一致性、約90%序列一致性至約96%序列一致性、約90%序列一致性至約97%序列一致性、約90%序列一致性至約98%序列一致性、約90%序列一致性至約99%序列一致性、約90%序列一致性至約100%序列一致性、約95%序列一致性至約96%序列一致性、約95%序列一致性至約97%序列一致性、約95%序列一致性至約98%序列一致性、約95%序列一致性至約99%序列一致性、約95%序列一致性至約100%序列一致性、約96%序列一致性至約97%序列一致性、約96%序列一致性至約98%序列一致性、約96%序列一致性至約99%序列一致性、約96%序列一致性至約100%序列一致性、約97%序列一致性至約98%序列一致性、約97%序列一致性至約99%序列一致性、約97%序列一致性至約100%序列一致性、約98%序列一致性至約99%序列一致性、約98%序列一致性至約100%序列一致性或約99%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含I16R、V17I及L74I突變且包含與SEQ ID NO: 377約75%序列一致性、約80%序列一致性、約85%序列一致性、約90%序列一致性、約95%序列一致性、約96%序列一致性、約97%序列一致性、約98%序列一致性、約99%序列一致性或約100%序列一致性。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含L13F、I16A、V17A及L74M突變且包含與SEQ ID NO: 378約75%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含L13F、I16A、V17A及L74M突變且包含與SEQ ID NO: 378至少約75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含L13F、I16A、V17A及L74M突變且包含與SEQ ID NO: 378多至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含L13F、I16A、V17A及L74M突變且包含與SEQ ID NO: 378約75%序列一致性至約80%序列一致性、約75%序列一致性至約85%序列一致性、約75%序列一致性至約90%序列一致性、約75%序列一致性至約95%序列一致性、約75%序列一致性至約96%序列一致性、約75%序列一致性至約97%序列一致性、約75%序列一致性至約98%序列一致性、約75%序列一致性至約99%序列一致性、約75%序列一致性至約100%序列一致性、約80%序列一致性至約85%序列一致性、約80%序列一致性至約90%序列一致性、約80%序列一致性至約95%序列一致性、約80%序列一致性至約96%序列一致性、約80%序列一致性至約97%序列一致性、約80%序列一致性至約98%序列一致性、約80%序列一致性至約99%序列一致性、約80%序列一致性至約100%序列一致性、約85%序列一致性至約90%序列一致性、約85%序列一致性至約95%序列一致性、約85%序列一致性至約96%序列一致性、約85%序列一致性至約97%序列一致性、約85%序列一致性至約98%序列一致性、約85%序列一致性至約99%序列一致性、約85%序列一致性至約100%序列一致性、約90%序列一致性至約95%序列一致性、約90%序列一致性至約96%序列一致性、約90%序列一致性至約97%序列一致性、約90%序列一致性至約98%序列一致性、約90%序列一致性至約99%序列一致性、約90%序列一致性至約100%序列一致性、約95%序列一致性至約96%序列一致性、約95%序列一致性至約97%序列一致性、約95%序列一致性至約98%序列一致性、約95%序列一致性至約99%序列一致性、約95%序列一致性至約100%序列一致性、約96%序列一致性至約97%序列一致性、約96%序列一致性至約98%序列一致性、約96%序列一致性至約99%序列一致性、約96%序列一致性至約100%序列一致性、約97%序列一致性至約98%序列一致性、約97%序列一致性至約99%序列一致性、約97%序列一致性至約100%序列一致性、約98%序列一致性至約99%序列一致性、約98%序列一致性至約100%序列一致性或約99%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含L13F、I16A、V17A及L74M突變且包含與SEQ ID NO: 378約75%序列一致性、約80%序列一致性、約85%序列一致性、約90%序列一致性、約95%序列一致性、約96%序列一致性、約97%序列一致性、約98%序列一致性、約99%序列一致性或約100%序列一致性。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含L13R、I16A、V17I及L74I突變且包含與SEQ ID NO: 379約75%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含L13R、I16A、V17I及L74I突變且包含與SEQ ID NO: 379至少約75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含L13R、I16A、V17I及L74I突變且包含與SEQ ID NO: 379多至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含L13R、I16A、V17I及L74I突變且包含與SEQ ID NO: 379約75%序列一致性至約80%序列一致性、約75%序列一致性至約85%序列一致性、約75%序列一致性至約90%序列一致性、約75%序列一致性至約95%序列一致性、約75%序列一致性至約96%序列一致性、約75%序列一致性至約97%序列一致性、約75%序列一致性至約98%序列一致性、約75%序列一致性至約99%序列一致性、約75%序列一致性至約100%序列一致性、約80%序列一致性至約85%序列一致性、約80%序列一致性至約90%序列一致性、約80%序列一致性至約95%序列一致性、約80%序列一致性至約96%序列一致性、約80%序列一致性至約97%序列一致性、約80%序列一致性至約98%序列一致性、約80%序列一致性至約99%序列一致性、約80%序列一致性至約100%序列一致性、約85%序列一致性至約90%序列一致性、約85%序列一致性至約95%序列一致性、約85%序列一致性至約96%序列一致性、約85%序列一致性至約97%序列一致性、約85%序列一致性至約98%序列一致性、約85%序列一致性至約99%序列一致性、約85%序列一致性至約100%序列一致性、約90%序列一致性至約95%序列一致性、約90%序列一致性至約96%序列一致性、約90%序列一致性至約97%序列一致性、約90%序列一致性至約98%序列一致性、約90%序列一致性至約99%序列一致性、約90%序列一致性至約100%序列一致性、約95%序列一致性至約96%序列一致性、約95%序列一致性至約97%序列一致性、約95%序列一致性至約98%序列一致性、約95%序列一致性至約99%序列一致性、約95%序列一致性至約100%序列一致性、約96%序列一致性至約97%序列一致性、約96%序列一致性至約98%序列一致性、約96%序列一致性至約99%序列一致性、約96%序列一致性至約100%序列一致性、約97%序列一致性至約98%序列一致性、約97%序列一致性至約99%序列一致性、約97%序列一致性至約100%序列一致性、約98%序列一致性至約99%序列一致性、約98%序列一致性至約100%序列一致性或約99%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含L13R、I16A、V17I及L74I突變且包含與SEQ ID NO: 379約75%序列一致性、約80%序列一致性、約85%序列一致性、約90%序列一致性、約95%序列一致性、約96%序列一致性、約97%序列一致性、約98%序列一致性、約99%序列一致性或約100%序列一致性。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76E突變且包含與SEQ ID NO: 94約75%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76E突變且包含與SEQ ID NO: 94至少約75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76E突變且包含與SEQ ID NO: 94多至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 94約75%序列一致性至約80%序列一致性、約75%序列一致性至約85%序列一致性、約75%序列一致性至約90%序列一致性、約75%序列一致性至約95%序列一致性、約75%序列一致性至約96%序列一致性、約75%序列一致性至約97%序列一致性、約75%序列一致性至約98%序列一致性、約75%序列一致性至約99%序列一致性、約75%序列一致性至約100%序列一致性、約80%序列一致性至約85%序列一致性、約80%序列一致性至約90%序列一致性、約80%序列一致性至約95%序列一致性、約80%序列一致性至約96%序列一致性、約80%序列一致性至約97%序列一致性、約80%序列一致性至約98%序列一致性、約80%序列一致性至約99%序列一致性、約80%序列一致性至約100%序列一致性、約85%序列一致性至約90%序列一致性、約85%序列一致性至約95%序列一致性、約85%序列一致性至約96%序列一致性、約85%序列一致性至約97%序列一致性、約85%序列一致性至約98%序列一致性、約85%序列一致性至約99%序列一致性、約85%序列一致性至約100%序列一致性、約90%序列一致性至約95%序列一致性、約90%序列一致性至約96%序列一致性、約90%序列一致性至約97%序列一致性、約90%序列一致性至約98%序列一致性、約90%序列一致性至約99%序列一致性、約90%序列一致性至約100%序列一致性、約95%序列一致性至約96%序列一致性、約95%序列一致性至約97%序列一致性、約95%序列一致性至約98%序列一致性、約95%序列一致性至約99%序列一致性、約95%序列一致性至約100%序列一致性、約96%序列一致性至約97%序列一致性、約96%序列一致性至約98%序列一致性、約96%序列一致性至約99%序列一致性、約96%序列一致性至約100%序列一致性、約97%序列一致性至約98%序列一致性、約97%序列一致性至約99%序列一致性、約97%序列一致性至約100%序列一致性、約98%序列一致性至約99%序列一致性、約98%序列一致性至約100%序列一致性或約99%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76E突變且包含與SEQ ID NO: 94約75%序列一致性、約80%序列一致性、約85%序列一致性、約90%序列一致性、約95%序列一致性、約96%序列一致性、約97%序列一致性、約98%序列一致性、約99%序列一致性或約100%序列一致性。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76F突變且包含與SEQ ID NO: 95約75%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76F突變且包含與SEQ ID NO: 95至少約75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76F突變且包含與SEQ ID NO: 95多至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 95約75%序列一致性至約80%序列一致性、約75%序列一致性至約85%序列一致性、約75%序列一致性至約90%序列一致性、約75%序列一致性至約95%序列一致性、約75%序列一致性至約96%序列一致性、約75%序列一致性至約97%序列一致性、約75%序列一致性至約98%序列一致性、約75%序列一致性至約99%序列一致性、約75%序列一致性至約100%序列一致性、約80%序列一致性至約85%序列一致性、約80%序列一致性至約90%序列一致性、約80%序列一致性至約95%序列一致性、約80%序列一致性至約96%序列一致性、約80%序列一致性至約97%序列一致性、約80%序列一致性至約98%序列一致性、約80%序列一致性至約99%序列一致性、約80%序列一致性至約100%序列一致性、約85%序列一致性至約90%序列一致性、約85%序列一致性至約95%序列一致性、約85%序列一致性至約96%序列一致性、約85%序列一致性至約97%序列一致性、約85%序列一致性至約98%序列一致性、約85%序列一致性至約99%序列一致性、約85%序列一致性至約100%序列一致性、約90%序列一致性至約95%序列一致性、約90%序列一致性至約96%序列一致性、約90%序列一致性至約97%序列一致性、約90%序列一致性至約98%序列一致性、約90%序列一致性至約99%序列一致性、約90%序列一致性至約100%序列一致性、約95%序列一致性至約96%序列一致性、約95%序列一致性至約97%序列一致性、約95%序列一致性至約98%序列一致性、約95%序列一致性至約99%序列一致性、約95%序列一致性至約100%序列一致性、約96%序列一致性至約97%序列一致性、約96%序列一致性至約98%序列一致性、約96%序列一致性至約99%序列一致性、約96%序列一致性至約100%序列一致性、約97%序列一致性至約98%序列一致性、約97%序列一致性至約99%序列一致性、約97%序列一致性至約100%序列一致性、約98%序列一致性至約99%序列一致性、約98%序列一致性至約100%序列一致性或約99%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76F突變且包含與SEQ ID NO: 95約75%序列一致性、約80%序列一致性、約85%序列一致性、約90%序列一致性、約95%序列一致性、約96%序列一致性、約97%序列一致性、約98%序列一致性、約99%序列一致性或約100%序列一致性。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76Q突變且包含與SEQ ID NO: 96約75%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76Q突變且包含與SEQ ID NO: 96至少約75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76Q突變且包含與SEQ ID NO: 96多至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 96約75%序列一致性至約80%序列一致性、約75%序列一致性至約85%序列一致性、約75%序列一致性至約90%序列一致性、約75%序列一致性至約95%序列一致性、約75%序列一致性至約96%序列一致性、約75%序列一致性至約97%序列一致性、約75%序列一致性至約98%序列一致性、約75%序列一致性至約99%序列一致性、約75%序列一致性至約100%序列一致性、約80%序列一致性至約85%序列一致性、約80%序列一致性至約90%序列一致性、約80%序列一致性至約95%序列一致性、約80%序列一致性至約96%序列一致性、約80%序列一致性至約97%序列一致性、約80%序列一致性至約98%序列一致性、約80%序列一致性至約99%序列一致性、約80%序列一致性至約100%序列一致性、約85%序列一致性至約90%序列一致性、約85%序列一致性至約95%序列一致性、約85%序列一致性至約96%序列一致性、約85%序列一致性至約97%序列一致性、約85%序列一致性至約98%序列一致性、約85%序列一致性至約99%序列一致性、約85%序列一致性至約100%序列一致性、約90%序列一致性至約95%序列一致性、約90%序列一致性至約96%序列一致性、約90%序列一致性至約97%序列一致性、約90%序列一致性至約98%序列一致性、約90%序列一致性至約99%序列一致性、約90%序列一致性至約100%序列一致性、約95%序列一致性至約96%序列一致性、約95%序列一致性至約97%序列一致性、約95%序列一致性至約98%序列一致性、約95%序列一致性至約99%序列一致性、約95%序列一致性至約100%序列一致性、約96%序列一致性至約97%序列一致性、約96%序列一致性至約98%序列一致性、約96%序列一致性至約99%序列一致性、約96%序列一致性至約100%序列一致性、約97%序列一致性至約98%序列一致性、約97%序列一致性至約99%序列一致性、約97%序列一致性至約100%序列一致性、約98%序列一致性至約99%序列一致性、約98%序列一致性至約100%序列一致性或約99%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R76Q突變且包含與SEQ ID NO: 96約75%序列一致性、約80%序列一致性、約85%序列一致性、約90%序列一致性、約95%序列一致性、約96%序列一致性、約97%序列一致性、約98%序列一致性、約99%序列一致性或約100%序列一致性。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R9S突變且包含與SEQ ID NO: 97約75%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R9S突變且包含與SEQ ID NO: 97至少約75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R9S突變且包含與SEQ ID NO: 97多至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 97約75%序列一致性至約80%序列一致性、約75%序列一致性至約85%序列一致性、約75%序列一致性至約90%序列一致性、約75%序列一致性至約95%序列一致性、約75%序列一致性至約96%序列一致性、約75%序列一致性至約97%序列一致性、約75%序列一致性至約98%序列一致性、約75%序列一致性至約99%序列一致性、約75%序列一致性至約100%序列一致性、約80%序列一致性至約85%序列一致性、約80%序列一致性至約90%序列一致性、約80%序列一致性至約95%序列一致性、約80%序列一致性至約96%序列一致性、約80%序列一致性至約97%序列一致性、約80%序列一致性至約98%序列一致性、約80%序列一致性至約99%序列一致性、約80%序列一致性至約100%序列一致性、約85%序列一致性至約90%序列一致性、約85%序列一致性至約95%序列一致性、約85%序列一致性至約96%序列一致性、約85%序列一致性至約97%序列一致性、約85%序列一致性至約98%序列一致性、約85%序列一致性至約99%序列一致性、約85%序列一致性至約100%序列一致性、約90%序列一致性至約95%序列一致性、約90%序列一致性至約96%序列一致性、約90%序列一致性至約97%序列一致性、約90%序列一致性至約98%序列一致性、約90%序列一致性至約99%序列一致性、約90%序列一致性至約100%序列一致性、約95%序列一致性至約96%序列一致性、約95%序列一致性至約97%序列一致性、約95%序列一致性至約98%序列一致性、約95%序列一致性至約99%序列一致性、約95%序列一致性至約100%序列一致性、約96%序列一致性至約97%序列一致性、約96%序列一致性至約98%序列一致性、約96%序列一致性至約99%序列一致性、約96%序列一致性至約100%序列一致性、約97%序列一致性至約98%序列一致性、約97%序列一致性至約99%序列一致性、約97%序列一致性至約100%序列一致性、約98%序列一致性至約99%序列一致性、約98%序列一致性至約100%序列一致性或約99%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R9S突變且包含與SEQ ID NO: 97約75%序列一致性、約80%序列一致性、約85%序列一致性、約90%序列一致性、約95%序列一致性、約96%序列一致性、約97%序列一致性、約98%序列一致性、約99%序列一致性或約100%序列一致性。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R9G突變且包含與SEQ ID NO: 98約75%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R9G突變且包含與SEQ ID NO: 98至少約75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R9G突變且包含與SEQ ID NO: 98多至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 98約75%序列一致性至約80%序列一致性、約75%序列一致性至約85%序列一致性、約75%序列一致性至約90%序列一致性、約75%序列一致性至約95%序列一致性、約75%序列一致性至約96%序列一致性、約75%序列一致性至約97%序列一致性、約75%序列一致性至約98%序列一致性、約75%序列一致性至約99%序列一致性、約75%序列一致性至約100%序列一致性、約80%序列一致性至約85%序列一致性、約80%序列一致性至約90%序列一致性、約80%序列一致性至約95%序列一致性、約80%序列一致性至約96%序列一致性、約80%序列一致性至約97%序列一致性、約80%序列一致性至約98%序列一致性、約80%序列一致性至約99%序列一致性、約80%序列一致性至約100%序列一致性、約85%序列一致性至約90%序列一致性、約85%序列一致性至約95%序列一致性、約85%序列一致性至約96%序列一致性、約85%序列一致性至約97%序列一致性、約85%序列一致性至約98%序列一致性、約85%序列一致性至約99%序列一致性、約85%序列一致性至約100%序列一致性、約90%序列一致性至約95%序列一致性、約90%序列一致性至約96%序列一致性、約90%序列一致性至約97%序列一致性、約90%序列一致性至約98%序列一致性、約90%序列一致性至約99%序列一致性、約90%序列一致性至約100%序列一致性、約95%序列一致性至約96%序列一致性、約95%序列一致性至約97%序列一致性、約95%序列一致性至約98%序列一致性、約95%序列一致性至約99%序列一致性、約95%序列一致性至約100%序列一致性、約96%序列一致性至約97%序列一致性、約96%序列一致性至約98%序列一致性、約96%序列一致性至約99%序列一致性、約96%序列一致性至約100%序列一致性、約97%序列一致性至約98%序列一致性、約97%序列一致性至約99%序列一致性、約97%序列一致性至約100%序列一致性、約98%序列一致性至約99%序列一致性、約98%序列一致性至約100%序列一致性或約99%序列一致性至約100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含R9G突變且包含與SEQ ID NO: 98約75%序列一致性、約80%序列一致性、約85%序列一致性、約90%序列一致性、約95%序列一致性、約96%序列一致性、約97%序列一致性、約98%序列一致性、約99%序列一致性或約100%序列一致性。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 16-21至少75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 16-21至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 16-2175%-80%、80%-85%、85%-90%、90%-95%、95%-99%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含選自由以下組成之群之序列：SEQ ID NO: 16-21。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 16-21、41-93及374-379至少75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 16-21、41-93及374-379至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 16-21、41-93及374-379 75%-80%、80%-85%、85%-90%、90%-95%、95%-99%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含選自由以下組成之群之序列：SEQ ID NO: 16-21、41-93及374-379。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 94-98至少75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 94-98至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 94-98 75%-80%、80%-85%、85%-90%、90%-95%、95%-99%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含選自由以下組成之群之序列：SEQ ID NO: 97-98。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 16-21、41-98及374-379至少75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 16-21、41-98及374-379至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 16-21、41-98及374-379 75%-80%、80%-85%、85%-90%、90%-95%、95%-99%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含選自由以下組成之群之序列：SEQ ID NO: 16-21、41-98及374-379。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 16至少75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 16至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 16 75%-80%、80%-85%、85%-90%、90%-95%、95%-99%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含SEQ ID NO: 16。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 17至少75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 17至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 17 75%-80%、80%-85%、85%-90%、90%-95%、95%-99%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含SEQ ID NO: 17。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 18至少75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 18至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 18 75%-80%、80%-85%、85%-90%、90%-95%、95%-99%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含SEQ ID NO: 18。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 19至少75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 19至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 19 75%-80%、80%-85%、85%-90%、90%-95%、95%-99%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含SEQ ID NO: 19。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 20至少75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 20至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 20 75%-80%、80%-85%、85%-90%、90%-95%、95%-99%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含SEQ ID NO: 20。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 21至少75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 21至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 21 75%-80%、80%-85%、85%-90%、90%-95%、95%-99%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含SEQ ID NO: 21。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 41至少75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 41至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 41 75%-80%、80%-85%、85%-90%、90%-95%、95%-99%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含SEQ ID NO: 41。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 42至少75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 42至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 42 75%-80%、80%-85%、85%-90%、90%-95%、95%-99%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含SEQ ID NO: 42。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 43至少75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 43至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 43 75%-80%、80%-85%、85%-90%、90%-95%、95%-99%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含SEQ ID NO: 43。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 44至少75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 44至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 44 75%-80%、80%-85%、85%-90%、90%-95%、95%-99%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含SEQ ID NO: 44。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 45至少75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 45至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 45 75%-80%、80%-85%、85%-90%、90%-95%、95%-99%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含SEQ ID NO: 45。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 46至少75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 46至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 46 75%-80%、80%-85%、85%-90%、90%-95%、95%-99%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含SEQ ID NO: 46。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 47至少75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 47至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 47 75%-80%、80%-85%、85%-90%、90%-95%、95%-99%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含SEQ ID NO: 47。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 48至少75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 48至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 48 75%-80%、80%-85%、85%-90%、90%-95%、95%-99%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含SEQ ID NO: 48。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 49至少75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 49至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 49 75%-80%、80%-85%、85%-90%、90%-95%、95%-99%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含SEQ ID NO: 49。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 50至少75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 50至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 50 75%-80%、80%-85%、85%-90%、90%-95%、95%-99%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含SEQ ID NO: 50。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 51至少75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 51至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO:51 75%-80%、80%-85%、85%-90%、90%-95%、95%-99%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含SEQ ID NO: 51。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 52至少75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 52至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 52 75%-80%、80%-85%、85%-90%、90%-95%、95%-99%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含SEQ ID NO: 52。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 53至少75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 53至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 53 75%-80%、80%-85%、85%-90%、90%-95%、95%-99%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含SEQ ID NO: 53。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 54至少75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 54至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 54 75%-80%、80%-85%、85%-90%、90%-95%、95%-99%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含SEQ ID NO: 54。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 55至少75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 55至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 55 75%-80%、80%-85%、85%-90%、90%-95%、95%-99%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含SEQ ID NO: 55。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 56至少75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 56至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 56 75%-80%、80%-85%、85%-90%、90%-95%、95%-99%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含SEQ ID NO: 56。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 57至少75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 57至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 57 75%-80%、80%-85%、85%-90%、90%-95%、95%-99%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含SEQ ID NO: 57。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 58至少75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 58至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 58 75%-80%、80%-85%、85%-90%、90%-95%、95%-99%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含SEQ ID NO: 58。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 59至少75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 59至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 59 75%-80%、80%-85%、85%-90%、90%-95%、95%-99%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含SEQ ID NO: 59。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 60至少75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 60至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 60 75%-80%、80%-85%、85%-90%、90%-95%、95%-99%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含SEQ ID NO: 60。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 61至少75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 61至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 61 75%-80%、80%-85%、85%-90%、90%-95%、95%-99%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含SEQ ID NO: 61。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 62至少75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 62至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 62 75%-80%、80%-85%、85%-90%、90%-95%、95%-99%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含SEQ ID NO: 62。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 63至少75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 63至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 63 75%-80%、80%-85%、85%-90%、90%-95%、95%-99%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含SEQ ID NO: 63。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 64至少75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 64至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 64 75%-80%、80%-85%、85%-90%、90%-95%、95%-99%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含SEQ ID NO: 64。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 65至少75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 65至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 65 75%-80%、80%-85%、85%-90%、90%-95%、95%-99%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含SEQ ID NO: 65。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 66至少75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 66至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 66 75%-80%、80%-85%、85%-90%、90%-95%、95%-99%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含SEQ ID NO: 66。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 67至少75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 67至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 67 75%-80%、80%-85%、85%-90%、90%-95%、95%-99%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含SEQ ID NO: 67。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 68至少75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 68至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 68 75%-80%、80%-85%、85%-90%、90%-95%、95%-99%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含SEQ ID NO: 68。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 69至少75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 69至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 69 75%-80%、80%-85%、85%-90%、90%-95%、95%-99%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含SEQ ID NO: 69。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 70至少75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 70至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 70 75%-80%、80%-85%、85%-90%、90%-95%、95%-99%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含SEQ ID NO: 70。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 71至少75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 71至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 71 75%-80%、80%-85%、85%-90%、90%-95%、95%-99%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含SEQ ID NO: 71。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 72至少75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 72至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 72 75%-80%、80%-85%、85%-90%、90%-95%、95%-99%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含SEQ ID NO: 72。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 73至少75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 73至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 73 75%-80%、80%-85%、85%-90%、90%-95%、95%-99%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含SEQ ID NO: 73。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 74至少75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 74至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 74 75%-80%、80%-85%、85%-90%、90%-95%、95%-99%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含SEQ ID NO: 74。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 75至少75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 75至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 75 75%-80%、80%-85%、85%-90%、90%-95%、95%-99%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含SEQ ID NO: 75。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 76至少75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 76至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 76 75%-80%、80%-85%、85%-90%、90%-95%、95%-99%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含SEQ ID NO: 76。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 77至少75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 77至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 77 75%-80%、80%-85%、85%-90%、90%-95%、95%-99%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含SEQ ID NO: 77。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 78至少75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 78至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 78 75%-80%、80%-85%、85%-90%、90%-95%、95%-99%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含SEQ ID NO: 78。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 79至少75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 79至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 79 75%-80%、80%-85%、85%-90%、90%-95%、95%-99%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含SEQ ID NO: 79。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 80至少75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 80至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 80 75%-80%、80%-85%、85%-90%、90%-95%、95%-99%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含SEQ ID NO: 80。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 81至少75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 81至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 81 75%-80%、80%-85%、85%-90%、90%-95%、95%-99%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含SEQ ID NO: 81。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 82至少75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 82至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 82 75%-80%、80%-85%、85%-90%、90%-95%、95%-99%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含SEQ ID NO: 82。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 83至少75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 83至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 83 75%-80%、80%-85%、85%-90%、90%-95%、95%-99%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含SEQ ID NO: 83。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 84至少75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 84至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 84 75%-80%、80%-85%、85%-90%、90%-95%、95%-99%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含SEQ ID NO: 84。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 85至少75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 85至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 85 75%-80%、80%-85%、85%-90%、90%-95%、95%-99%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含SEQ ID NO: 85。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 86至少75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 86至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 86 75%-80%、80%-85%、85%-90%、90%-95%、95%-99%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含SEQ ID NO: 86。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 87至少75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 87至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 87 75%-80%、80%-85%、85%-90%、90%-95%、95%-99%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含SEQ ID NO: 87。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 88至少75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 88至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 88 75%-80%、80%-85%、85%-90%、90%-95%、95%-99%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含SEQ ID NO: 88。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 89至少75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 89至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 89 75%-80%、80%-85%、85%-90%、90%-95%、95%-99%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含SEQ ID NO: 89。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 90至少75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 90至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 90 75%-80%、80%-85%、85%-90%、90%-95%、95%-99%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含SEQ ID NO: 90。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 91至少75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 91至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 91 75%-80%、80%-85%、85%-90%、90%-95%、95%-99%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含SEQ ID NO: 91。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 92至少75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 92至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 92 75%-80%、80%-85%、85%-90%、90%-95%、95%-99%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含SEQ ID NO: 92。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 93至少75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 93至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 93 75%-80%、80%-85%、85%-90%、90%-95%、95%-99%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含SEQ ID NO: 93。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 94至少75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 94至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 94 75%-80%、80%-85%、85%-90%、90%-95%、95%-99%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含SEQ ID NO: 94。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 95至少75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 95至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 95 75%-80%、80%-85%、85%-90%、90%-95%、95%-99%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含SEQ ID NO: 95。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 96至少75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 96至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 96 75%-80%、80%-85%、85%-90%、90%-95%、95%-99%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含SEQ ID NO: 96。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 97至少75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 97至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 97 75%-80%、80%-85%、85%-90%、90%-95%、95%-99%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含SEQ ID NO: 97。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 98至少75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 98至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 98 75%-80%、80%-85%、85%-90%、90%-95%、95%-99%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含SEQ ID NO: 98。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 374至少75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 374至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 374 75%-80%、80%-85%、85%-90%、90%-95%、95%-99%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含SEQ ID NO: 374。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 375至少75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 375至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 375 75%-80%、80%-85%、85%-90%、90%-95%、95%-99%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含SEQ ID NO: 375。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 376至少75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 376至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 376 75%-80%、80%-85%、85%-90%、90%-95%、95%-99%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含SEQ ID NO: 376。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 377至少75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 377至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 377 75%-80%、80%-85%、85%-90%、90%-95%、95%-99%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含SEQ ID NO: 377。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 378至少75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 378至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 378 75%-80%、80%-85%、85%-90%、90%-95%、95%-99%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含SEQ ID NO: 378。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與SEQ ID NO: 379至少75%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 379至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含與SEQ ID NO: 379 75%-80%、80%-85%、85%-90%、90%-95%、95%-99%序列一致性。在一些實施例中，IL-21多肽包含SEQ ID NO: 379。 抗原結合蛋白或其功能片段
本發明之一些實施例提供靶向細胞介素構築體，其包含作為靶向蛋白之抗原結合蛋白(例如抗體或其抗原結合片段)及如本文所揭示之IL-21多肽。在一些實施例中，該抗原結合蛋白或其功能片段可特異性結合至CD8+ T細胞且對選自由以下組成之群之至少一種抗原包含特異性：CD8 α或CD8a (CD8-alpha)、CD8- β(CD8-beta)、CD8- αα或CD8-αβ。如本文所提供之術語「CD8-α」可與「CD8 α」或「CD8a」互換使用。如本文所提供之術語「CD8-β」可與術語「CD8- β」或「CD8b」互換使用。如本文所提供之術語「CD8- αα」可與「CD8aa」互換使用。如本文所提供之術語「CD8-αβ」可與「CD8ab」互換使用。在一些實施例中，該抗體或其抗原結合片段可特異性結合至諸如免疫檢查點蛋白之不同抗原。
在一些實施例中，該抗原結合蛋白或其功能片段包含選自由以下組成之群之抗原結合域：scFv、單域抗體、VHH、VNAR、sdAb、奈米抗體或其功能片段。
在一些實施例中，該抗原結合蛋白或其功能片段包含全長完整抗體。全長完整抗體可包含：第一多肽，其自N端至C端排列包含：可變輕鏈(VL)胺基酸序列及輕鏈恆定區胺基酸序列(CL1)；第二多肽，其自N端至C端排列包含：可變重鏈(VH)胺基酸序列、重鏈CH1恆定區胺基酸序列、鉸鏈區胺基酸序列、重鏈CH2恆定區胺基酸序列及重鏈CH3恆定區胺基酸序列；第三多肽，其自N端至C端排列包含：可變重鏈(VH)胺基酸序列、重鏈CH1恆定區胺基酸序列、鉸鏈區胺基酸序列、重鏈CH2恆定區胺基酸序列及重鏈CH3恆定區胺基酸序列；及第四多肽，其自N端至C端排列包含：可變輕鏈(VL)胺基酸序列及輕鏈恆定胺基酸序列(CL1)，其中第二多肽及第三多肽之各CH2域及CH3域形成Fc域。
在一些實施例中，該抗原結合蛋白或其功能片段包含：i)第一多肽，其自N端至C端排列包含：可變輕鏈(VL)胺基酸序列及輕鏈恆定區胺基酸序列(CL1)域；ii)第二多肽，其自N端至C端排列包含：可變重鏈(VH)胺基酸序列、重鏈CH1恆定區胺基酸序列、鉸鏈區胺基酸序列、重鏈CH2恆定區胺基酸序列及重鏈CH3恆定區胺基酸序列；及iii)第三多肽，其自N端至C端排列包含：鉸鏈區胺基酸序列、重鏈CH2恆定區胺基酸序列及重鏈CH3恆定區胺基酸序列，其中第二多肽及第三多肽之各CH2域及CH3域形成Fc域。
在一些實施例中，Fc域為人類IgG Fc域。在一些實施例中，Fc域為IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc域。在一些實施例中，Fc域包含促進異二聚化之一或多個修飾。在一些實施例中，第二多肽在CH2域或CH3域中包含杵修飾，且第三多肽在CH2域或CH3域中包含臼修飾；或其中第三多肽在CH2域或CH3域中包含杵修飾，且第二多肽在CH2域或CH3域中包含臼修飾。在一些實施例中，第二多肽在CH3域中包含杵修飾，且第三多肽在CH3域中包含臼修飾；或其中第三多肽在CH3域中包含杵修飾，且第二多肽在CH3域中包含臼修飾。
在一些實施例中，該抗原結合蛋白或其功能片段為單價抗體或二價抗體。在一些實施例中，二價抗體為單特異性或雙特異性的。在一些實施例中，該抗原結合蛋白或其功能片段為人類化抗體或其功能片段。
雙特異性抗體可包含兩個抗原結合臂，其中該兩個抗原結合臂辨識不同抗原。在一些實施例中，第一抗原結合臂或第二抗原結合臂獨立地結合至免疫檢查點蛋白。在一些實施例中，免疫檢查點蛋白選自由以下組成之群：PD-1、CD28、CTLA-4、ICOS、TMIGD2、4-1BB、BTLA、CD160、LIGHT、LAG3、OX40、CD27、CD39、CD73、CD40L、GITR、DNAM-1、TIGIT、CD96、2B4、TIM-3、CEACAM1、SIRPα、DC-SIGN、CD200R、DR3、PD-L1、PD-L2、CD80、CD86、ICOS配位體、B7-H3、B7-H4、VISTA、B7-H7(HHLA2)、4-1BBL、HVEM、OX40L、CD70、CD40、GITRL、CD155、CD48、半乳糖凝集素-9、腺苷、IDO、TDO、CD47、BTN2A1、CD200、LAYN、LAIR1、CD276、VTCN1、KIR、A2AR、I類MHC、II類MHC、GALS、TGFR、TREM1、TREM2、HLA-G、CCR4、CCR8、CSF1R、MICA/B、LILRB4、SIGLEC-15、精胺酸酶及TL1A。在一些實施例中，第一抗原結合臂結合至PD-1。在一些實施例中，第一抗原結合臂或第二抗原結合臂獨立地結合至CD8 α、CD8 αα、CD8 αβ或CD8 β。
在一些實施例中，本發明之抗原結合分子結合至CD8a上之抗原決定基，其中該抗原結合分子與CD8a之結合不會阻斷CD8aa或CD8ab與目標細胞或抗原呈現細胞上之I類MHC分子之相互作用。在一些實施例中，本發明之抗原結合分子結合至CD8b上之抗原決定基，其中該抗原結合分子與CD8b之結合不會阻斷CD8ab與目標細胞或抗原呈現細胞上之I類MHC分子之相互作用。
在一些實施例中，融合蛋白結合人類CD8，且融合蛋白與CD8之結合不會阻斷CD8與I類MHC之相互作用。在一些實施例中，本發明之抗原結合分子結合至CD8ab上之抗原決定基，其中該抗原結合分子與CD8ab之結合不會阻斷CD8aa或CD8ab與目標細胞或抗原呈現細胞上之I類MHC分子之相互作用。在一些實施例中，本發明之抗原結合分子結合至CD8a上之抗原決定基，其中該抗原結合分子與CD8a之結合不會阻斷CD8ab與目標細胞或抗原呈現細胞上之I類MHC分子之相互作用。
在一些實施例中，融合蛋白結合人類CD8，且融合蛋白與CD8之結合不會阻斷CD8與I類MHC之相互作用。在一些實施例中，本發明之抗原結合分子結合至CD8α上之抗原決定基，其中該抗原結合分子與CD8α之結合不會阻斷CD8αα或CD8αβ與目標細胞或抗原呈現細胞上之I類MHC分子之相互作用。在一些實施例中，本發明之抗原結合分子結合至CD8β上之抗原決定基，其中該抗原結合分子與CD8β之結合不會阻斷CD8αβ與目標細胞或抗原呈現細胞上之I類MHC分子之相互作用。在一些實施例中，可例如藉由在存在或不存在抗CD8抗體或融合蛋白之情況下分析CD8+ T細胞之活化狀態(例如在抗原刺激後)來分析本發明之抗CD8抗體或融合蛋白是否會阻斷CD8與I類MHC之相互作用。
在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體或融合蛋白包含：包含EVQLVESGGGLVQPGRSLKLSCAASGFTFSNYYMAW VRQAPTKGLEWVAYINTGGGTTYYRDSVKGRFTISRDDAKSTLYLQMDSLRSEDTATYYCTTAIGYYFDYWGQGVMVTVSS (SEQ ID NO:99)之序列之VH域及包含DIQLTQSPASLSASLGETVSIECLAS EDIYSYLAWYQQKPGKSPQVLIYAANRLQDGVPSRFSGSGSGTQYSLKISGMQPEDEGDYFCLQGSKFPYTFGAGTKLELK (SEQ ID NO:100)之序列之VL域。在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體或融合蛋白包含：包含EVKLQESGPSLVQPSQTLSLTCSVSGFSLISDSVHWVR QPPGKGLEWMGGIWADGSTDYNSALKSRLSISRDTSKSQGFLKMNSLQTDDTAIYFCTSNRESYYFDYWGQGTMVTVSS (SEQ ID NO: 101)之序列之VH域及包含DIQMTQSPASLSASLGDKVTITCQASQNIDKYIA WYQQKPGKAPRQLIHYTSTLVSGTPSRFSGSGSGRDYSFSISSVESEDIASYYCLQYDTLYTFGAGTKLELK (SEQ ID NO: 102)之序列之VL域。在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體或融合蛋白包含：包含EVKLQESGPSLVQPSQTLSLTCSVSGFSLISDSVHWVRQPPGKGLEWMGGIWADGSTDYNSALKSRLSISRDTSKSQGFLKMNSLQTDDTAIYFCTSARESYYFDYWGQGTMVTVSS (SEQ ID NO: 103)之序列之VH域及包含DIQMTQSPASLSASLGDKVTITCQASQNIDKYIAWYQQ KPGKAPRQLIHYTSTLVSGTPSRFSGSGSGRDYSFSISSVESEDIASYYCLQYATLYTFGAGTKLELK (SEQ ID NO: 104)之序列之VL域。在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體或融合蛋白包含：包含EVQLVESGGALVQPGRSLKLSCAASGLTFSDCYMAWVRQTPTKGLEWVSYISSDGGSTYYGDSVKGRFTISRDNAKSTLYLQMNSLRSEDMATYYCACATDLSSYWSFDFWGPGTMVTVSS (SEQ ID NO: 105)之序列之VH域及包含DIQMTQSPSSLPVSLGERVTISCRASQGISNNLNWY QQKPDGTIKPLIYHTSNLQSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISSLEPEDFAMYYCQQDATFPLTFGSGTKLEIK (SEQ ID NO: 106)之序列之VL域。
在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體或融合蛋白包含：包含SEQ ID NO: 107之序列之VH域及包含SEQ ID NO: 108之序列之VL域。在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體或融合蛋白包含：包含SEQ ID NO: 109之序列之VH域及包含SEQ ID NO:110之序列之VL域。在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體或融合蛋白包含：包含SEQ ID NO: 111之序列之VH域及包含SEQ ID NO: 112之序列之VL域。在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體或融合蛋白包含：包含SEQ ID NO: 113之序列之VH域及包含SEQ ID NO: 114之序列之VL域。在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體或融合蛋白包含：包含SEQ ID NO: 115之序列之VH域及包含SEQ ID NO: 116之序列之VL域。在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體或融合蛋白包含：包含SEQ ID NO: 117之序列之VH域及包含SEQ ID NO: 118之序列之VL域。在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體或融合蛋白包含：包含SEQ ID NO: 119之序列之VH域及包含SEQ ID NO: 120之序列之VL域。在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體或融合蛋白包含：包含SEQ ID NO: 121之序列之VH域及包含SEQ ID NO: 122之序列之VL域。在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體或融合蛋白包含：包含SEQ ID NO: 123之序列之VH域及包含SEQ ID NO: 124之序列之VL域。在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體或融合蛋白包含：包含SEQ ID NO: 125之序列之VH域及包含SEQ ID NO: 126之序列之VL域。在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體或融合蛋白包含：包含SEQ ID NO: 127之序列之VH域及包含SEQ ID NO: 128之序列之VL域。在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體或融合蛋白包含：包含SEQ ID NO: 129之序列之VH域及包含SEQ ID NO: 130之序列之VL域。在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體或融合蛋白包含：包含SEQ ID NO: 131之序列之VH域及包含SEQ ID NO: 132之序列之VL域。在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體或融合蛋白包含：包含SEQ ID NO: 133之序列之VH域及包含SEQ ID NO: 134之序列之VL域。在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體或融合蛋白包含：包含SEQ ID NO: 135之序列之VH域及包含SEQ ID NO: 136之序列之VL域。在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體或融合蛋白包含：包含SEQ ID NO: 258之序列之VH域及包含SEQ ID NO: 259之序列之VL域。
在一些實施例中，本發明之抗原結合分子(及融合蛋白)特異性結合人類CD8b及/或人類CD8ab。
在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體為人類抗體或抗體片段。在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體為人類化抗體或抗體片段。
在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體以比其對例如於自然殺手(NK)細胞(例如人類NK細胞)上表現之人類CD8a及/或人類CD8aa之結合親和力高至少10倍、至少20倍、至少30倍、至少40倍、至少50倍、至少60倍、至少70倍、至少80倍、至少90倍、至少100倍或至少200倍之親和力特異性結合人類CD8b及/或人類CD8ab。在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體以比其對例如於自然殺手(NK)細胞上表現之人類CD8a及/或人類CD8aa之結合親和力高至少10倍之親和力特異性結合人類CD8b及/或人類CD8ab。在一些實施例中，人類CD8b及/或人類CD8ab係於例如人類T細胞之人類細胞之表面上表現。
在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體以小於1000 nM之EC50特異性結合至在表面上表現人類CD8ab異二聚體之細胞(例如人類T細胞)。在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體特異性結合至人類CD8+ T細胞。
在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體包含：VH域，其包含：包含SEQ ID NO: 137之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 138之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 139之胺基酸序列之CDR-H3；及VL域，其包含：包含SEQ ID NO: 140之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 141之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 142之胺基酸序列之CDR-L3。在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體包含抗體xhCD8之1、2或3個重鏈CDR (例如如表10-12中所示)及/或抗體xhCD8之1、2或3個輕鏈CDR (例如如表10-12中所示)。在一些實施例中，該抗體為人類化的。
在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體包含：VH域，其包含：包含SEQ ID NO: 143之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 144之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 145之胺基酸序列之CDR-H3；及VL域，其包含：包含SEQ ID NO: 146之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 147之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 148之胺基酸序列之CDR-L3。在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體包含抗體xhCD8v8之1、2或3個重鏈CDR (例如如表10-12中所示)及/或抗體xhCD8v8之1、2或3個輕鏈CDR (例如如表10-12中所示)。在一些實施例中，該抗體為人類化的。
在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體包含：VH域，其包含：包含SEQ ID NO: 252之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 253之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 254之胺基酸序列之CDR-H3；及VL域，其包含：包含SEQ ID NO: 255之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 256之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 257之胺基酸序列之CDR-L3。在一些實施例中，VH域包含與SEQ ID NO: 258之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列且/或VL域包含與SEQ ID NO: 259之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列。在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體包含抗體xhCD8v1之1、2或3個重鏈CDR (例如如表10-12中所示)及/或抗體xhCD8v1之1、2或3個輕鏈CDR (例如如表10-12中所示)。在一些實施例中，該抗體為人類化的。
在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體包含：VH域，其包含：包含SEQ ID NO: 149之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 150之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 151之胺基酸序列之CDR-H3；及VL域，其包含：包含SEQ ID NO: 152之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 153之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 154之胺基酸序列之CDR-L3。在一些實施例中，VH域包含與SEQ ID NO: 109之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列且/或VL域包含與SEQ ID NO: 110之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列。在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體包含抗體xhCD8v2之1、2或3個重鏈CDR (例如如表10-12中所示)及/或抗體xhCD8v2之1、2或3個輕鏈CDR (例如如表10-12中所示)。在一些實施例中，該抗體為人類化的。
在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體包含：VH域，其包含：包含SEQ ID NO: 155之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 156之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 157之胺基酸序列之CDR-H3；及VL域，其包含：包含SEQ ID NO: 158之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 159之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 160之胺基酸序列之CDR-L3。在一些實施例中，VH域包含與SEQ ID NO: 111之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列且/或VL域包含與SEQ ID NO: 112之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列。在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體包含抗體xhCD8v3之1、2或3個重鏈CDR (例如如表10-12中所示)及/或抗體xhCD8v3之1、2或3個輕鏈CDR (例如如表10-12中所示)。在一些實施例中，該抗體為人類化的。
在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體包含：VH域，其包含：包含SEQ ID NO: 161之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 162之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 163之胺基酸序列之CDR-H3；及VL域，其包含：包含SEQ ID NO: 164之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 165之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 166之胺基酸序列之CDR-L3。在一些實施例中，VH域包含與SEQ ID NO: 113之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列且/或VL域包含與SEQ ID NO: 114之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列。在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體包含抗體xhCD8v4之1、2或3個重鏈CDR (例如如表10-12中所示)及/或抗體xhCD8v4之1、2或3個輕鏈CDR (例如如表10-12中所示)。在一些實施例中，該抗體為人類化的。
在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體包含：VH域，其包含：包含SEQ ID NO: 167之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 168之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 169之胺基酸序列之CDR-H3；及VL域，其包含：包含SEQ ID NO: 170之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 171之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 172之胺基酸序列之CDR-L3。在一些實施例中，VH域包含與SEQ ID NO: 115之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列且/或VL域包含與SEQ ID NO: 116之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列。在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體包含抗體xhCD8v5之1、2或3個重鏈CDR (例如如表10-12中所示)及/或抗體xhCD8v5之1、2或3個輕鏈CDR (例如如表10-12中所示)。在一些實施例中，該抗體為人類化的。
在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體包含：VH域，其包含：包含SEQ ID NO: 173之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 174之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 175之胺基酸序列之CDR-H3；及VL域，其包含：包含SEQ ID NO: 176之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 177之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 178之胺基酸序列之CDR-L3。在一些實施例中，VH域包含與SEQ ID NO: 117之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列且/或VL域包含與SEQ ID NO: 118之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列。在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體包含抗體xhCD8v6之1、2或3個重鏈CDR (例如如表10-12中所示)及/或抗體xhCD8v6之1、2或3個輕鏈CDR (例如如表10-12中所示)。在一些實施例中，該抗體為人類的。
在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體包含：VH域，其包含：包含SEQ ID NO: 179之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 180之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 181之胺基酸序列之CDR-H3；及VL域，其包含：包含SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之CDR-L3。在一些實施例中，VH域包含與SEQ ID NO: 119之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列且/或VL域包含與SEQ ID NO: 120之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列。在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體包含抗體xhCD8v7之1、2或3個重鏈CDR (例如如表10-12中所示)及/或抗體xhCD8v7之1、2或3個輕鏈CDR (例如如表10-12中所示)。在一些實施例中，該抗體為人類的。
在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體包含：VH域，其包含：包含X 1X 2AIS (SEQ ID NO: 185)之胺基酸序列之CDR-H1，其中X 1為S、K、G、N、R、D、T或G，且其中X 2為Y、L、H或F；包含X 1X 2X 3PX 4X 5X 6X 7X 8X 9YX 10QKFX 11G (SEQ ID NO: 186)之胺基酸序列之CDR-H2，其中X 1為G或H，X 2為I或F，X 3為I、N或M，X 4為G、N、H、S、R、I或A，X 5為A、N、H、S、T、F或Y，X 6為A、D或G，X 7為T、E、K、V、Q或A，X 8為A或T，X 9為N或K，X 10為A或N，且X 11為Q或T；及包含X 1X 2X 3GX 4X 5LFX 6X 7(SEQ ID NO: 187)之胺基酸序列之CDR-H3，其中X 1為D或A，X 2為A、G、E、R、Y、K、N、Q、L或F，X 3為A、L、P或Y，X 4為I或L，X 5為R、A、Q或S，X 6為A或D，且X 7為D、E、A或S；及VL域，其包含：包含X 1X 2SX 3X 4IX 5GX 6LN (SEQ ID NO: 188)之胺基酸序列之CDR-L1，其中X 1為R或G，X 2為A或T，X 3為Q或E，X 4為E、N、T、S、A、K、D、G、R或Q，X 5為Y或S，且X 6為A或V；包含GX 1X 2X 3LX 4X 5(SEQ ID NO: 189)之胺基酸序列之CDR-L2，其中X 1為A或S，X 2為T、S、E、Q或D，X 3為N、R、A、E或H，X 4為Q或A，且X 5為S或D；及包含QX 1X 2X 3X 4X 5PWT (SEQ ID NO: 190)之胺基酸序列之CDR-L3，其中X 1為S、N、D、Q、A或E，X 2為T、I或S，X 3為Y、L或F，X 4為D、G、T、E、Q、A或Y，且X 5為A、T、R、S、K或Y。在一些實施例中，VH域進一步包含：包含序列QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFS (SEQ ID NO: 191)之FW-1、包含序列WVRQAPGQGLEWMG (SEQ ID NO: 192)之FW-2、包含序列RVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR (SEQ ID NO: 193)之FW-3及/或包含序列WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 194)之FW-4。在一些實施例中，VL域進一步包含：包含序列DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC (SEQ ID NO: 195)之FW-1、包含序列WYQQKPGKAPKLLIY (SEQ ID NO: 196)之FW-2、包含序列GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC (SEQ ID NO: 197)之FW-3及/或包含序列FGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 198)之FW-4。
在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體包含：VH域，其包含：包含SEQ ID NO: 199之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 200之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 201之胺基酸序列之CDR-H3；及VL域，其包含：包含SEQ ID NO: 152之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 153之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 202之胺基酸序列之CDR-L3。在一些實施例中，VH域包含與SEQ ID NO: 123之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列且/或VL域包含與SEQ ID NO: 124之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列。在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體包含抗體xhCD8v9之1、2或3個重鏈CDR (例如如表10-12中所示)及/或抗體xhCD8v9之1、2或3個輕鏈CDR (例如如表10-12中所示)。在一些實施例中，該抗體為人類化的。在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體包含：VH域，其包含來自SEQ ID NO: 123之序列之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3；及VL域，其包含來自SEQ ID NO: 124之序列之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3。在一些實施例中，VH域進一步包含：包含序列QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFS (SEQ ID NO: 191)之FW-1、包含序列WVRQAPGQGLEWMG (SEQ ID NO: 192)之FW-2、包含序列RVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR (SEQ ID NO: 193)之FW-3及/或包含序列WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 194)之FW-4。在一些實施例中，VL域進一步包含：包含序列DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC (SEQ ID NO: 195)之FW-1、包含序列WYQQKPGKAPKLLIY (SEQ ID NO: 196)之FW-2、包含序列GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC (SEQ ID NO: 197)之FW-3及/或包含序列FGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 198)之FW-4。
在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體包含：VH域，其包含：包含SEQ ID NO: 199之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 203之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 204之胺基酸序列之CDR-H3；及VL域，其包含：包含SEQ ID NO: 205之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 206之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 207之胺基酸序列之CDR-L3。在一些實施例中，VH域包含與SEQ ID NO: 129之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列且/或VL域包含與SEQ ID NO: 130之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列。在一些實施例中，VH域包含SEQ ID NO: 129之胺基酸序列；且VL域包含SEQ ID NO: 130之胺基酸序列。在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體包含抗體xhCD8v12 (xhCD8.1)之1、2或3個重鏈CDR (例如如表10-12中所示)及/或抗體xhCD8v12 (xhCD8.1)之1、2或3個輕鏈CDR (例如如表10-12中所示)。在一些實施例中，該抗體為人類化的。在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體包含：VH域，其包含來自SEQ ID NO: 129之序列之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3；及VL域，其包含來自SEQ ID NO: 130之序列之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3。在一些實施例中，VH域進一步包含：包含序列QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFS (SEQ ID NO: 191)之FW-1、包含序列WVRQAPGQGLEWMG (SEQ ID NO: 192)之FW-2、包含序列RVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR (SEQ ID NO: 193)之FW-3及/或包含序列WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 194)之FW-4。在一些實施例中，VL域進一步包含：包含序列DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC (SEQ ID NO: 195)之FW-1、包含序列WYQQKPGKAPKLLIY (SEQ ID NO: 196)之FW-2、包含序列GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC (SEQ ID NO: 197)之FW-3及/或包含序列FGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 198)之FW-4。
在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體包含：VH域，其包含：包含SEQ ID NO: 199之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 203之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 204之胺基酸序列之CDR-H3；及VL域，其包含：包含SEQ ID NO: 152之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 153之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 202之胺基酸序列之CDR-L3。在一些實施例中，VH域包含與SEQ ID NO: 131之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列且/或VL域包含與SEQ ID NO: 132之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列。在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體包含抗體xhCD8v13之1、2或3個重鏈CDR (例如如表10-12中所示)及/或抗體xhCD8v13之1、2或3個輕鏈CDR (例如如表10-12中所示)。在一些實施例中，該抗體為人類化的。在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體包含：VH域，其包含來自SEQ ID NO: 131之序列之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3；及VL域，其包含來自SEQ ID NO: 132之序列之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3。在一些實施例中，VH域進一步包含：包含序列QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFS (SEQ ID NO: 191)之FW-1、包含序列WVRQAPGQGLEWMG (SEQ ID NO: 192)之FW-2、包含序列RVTITADESTSTAYMELSSLRSED TAVYYCAR (SEQ ID NO: 193)之FW-3及/或包含序列WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 194)之FW-4。在一些實施例中，VL域進一步包含：包含序列DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC (SEQ ID NO: 195)之FW-1、包含序列WYQQKPGKAPKLLIY (SEQ ID NO: 196)之FW-2、包含序列GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC (SEQ ID NO: 197)之FW-3及/或包含序列FGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 198)之FW-4。
在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體包含：VH域，其包含：包含X 1YX 2MS (SEQ ID NO: 208)之胺基酸序列之CDR-H1，其中X 1為S、D、E、A或Q，且X 2為A、G或T；包含DIX 1X 2X 3GX 4X 5TX 6YADSVKG (SEQ ID NO: 209)之胺基酸序列之CDR-H2，其中X 1為T、N、S、Q、E、H、R或A，X 2為Y、W、F或H，X 3為A、S、Q、E或T，X 4為G或E，X 5為S或I，且X 6為A或G；及包含X 1X 2X 3YX 4WX 5X 6AX 7DX 8(SEQ ID NO: 210)之胺基酸序列之CDR-H3，其中X 1為S或A，X 2為N、H、A、D、L、Q、Y或R，X 3為A、N、S或G，X 4為A、V、R、E或S，X 5為D或S，X 6為D、N、Q、E、S、T或L，X 7為L、F或M，且X 8為I、Y或V；及VL域，其包含：包含RASQSVSSNLA (SEQ ID NO: 176)之胺基酸序列之CDR-L1；包含GASSRAT (SEQ ID NO: 177)之胺基酸序列之CDR-L2；及包含QQYGSSPPVT (SEQ ID NO: 178)之胺基酸序列之CDR-L3。在一些實施例中，VH域進一步包含：包含序列EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS (SEQ ID NO: 211)之FW-1、包含序列WVRQAPGKGLEWVS (SEQ ID NO: 212)之FW-2、包含序列RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR (SEQ ID NO: 213)之FW-3及/或包含序列WGQGTMVTVSS (SEQ ID NO: 214)或WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 215)之FW-4。在一些實施例中，VL域進一步包含：包含序列EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC (SEQ ID NO: 216)之FW-1、包含序列WYQQKPGQAPRLLIY (SEQ ID NO: 217)之FW-2、包含序列GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC (SEQ ID NO: 218)之FW-3及/或包含序列FGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 219)之FW-4。
在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體包含：VH域，其包含：包含SEQ ID NO: 220之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 221之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 222之胺基酸序列之CDR-H3；及VL域，其包含：包含SEQ ID NO: 176之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 177之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 178之胺基酸序列之CDR-L3。在一些實施例中，VH域包含與SEQ ID NO: 125之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列且/或VL域包含與SEQ ID NO: 126之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列。在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體包含抗體xhCD8v10之1、2或3個重鏈CDR (例如如表10-12中所示)及/或抗體xhCD8v10之1、2或3個輕鏈CDR (例如如表10-12中所示)。在一些實施例中，該抗體為人類化的。在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體包含：VH域，其包含來自SEQ ID NO: 125之序列之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3；及VL域，其包含來自SEQ ID NO: 126之序列之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3。在一些實施例中，VH域進一步包含：包含序列EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS (SEQ ID NO: 211)之FW-1、包含序列WVRQAPGKGLEWVS (SEQ ID NO: 212)之FW-2、包含序列RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRA EDTAVYYCAR (SEQ ID NO: 213)之FW-3及/或包含序列WGQGTMVTVSS (SEQ ID NO: 214)或WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 215)之FW-4。在一些實施例中，VL域進一步包含：包含序列EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC (SEQ ID NO: 216)之FW-1、包含序列WYQQKPGQAPRLLIY (SEQ ID NO: 217)之FW-2、包含序列GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC (SEQ ID NO: 218)之FW-3及/或包含序列FGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 219)之FW-4。
在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體包含：VH域，其包含：包含SEQ ID NO: 220之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 221之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 222之胺基酸序列之CDR-H3；及VL域，其包含：包含SEQ ID NO: 176之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 177之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 178之胺基酸序列之CDR-L3。在一些實施例中，VH域包含與SEQ ID NO: 127之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列且/或VL域包含與SEQ ID NO: 128之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列。在一些實施例中，VH域包含SEQ ID NO: 127之胺基酸序列；且VL域包含SEQ ID NO: 128之胺基酸序列。在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體包含抗體xhCD8v11之1、2或3個重鏈CDR (例如如表10-12中所示)及/或抗體xhCD8v11之1、2或3個輕鏈CDR (例如如表10-12中所示)。在一些實施例中，該抗體為人類化的。在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體包含：VH域，其包含來自SEQ ID NO: 127之序列之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3；及VL域，其包含來自SEQ ID NO: 128之序列之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3。在一些實施例中，VH域進一步包含：包含序列EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS (SEQ ID NO: 211)之FW-1、包含序列WVRQAPGKGLEWVS (SEQ ID NO: 212)之FW-2、包含序列RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR (SEQ ID NO: 213)之FW-3及/或包含序列WGQGTMVTVSS (SEQ ID NO: 214)或WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 215)之FW-4。在一些實施例中，VL域進一步包含：包含序列EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC (SEQ ID NO: 216)之FW-1、包含序列WYQQKPGQAPRLLIY (SEQ ID NO: 217)之FW-2、包含序列GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC (SEQ ID NO: 218)之FW-3及/或包含序列FGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 219)之FW-4。
在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體包含：VH域，其包含：包含SEQ ID NO: 220之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 260之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 222之胺基酸序列之CDR-H3；及VL域，其包含：包含SEQ ID NO: 176之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 177之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 178之胺基酸序列之CDR-L3。在一些實施例中，VH域包含與SEQ ID NO: 133之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列且/或VL域包含與SEQ ID NO: 134之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列。在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體包含抗體xhCD8v14之1、2或3個重鏈CDR (例如如表10-12中所示)及/或抗體xhCD8v14之1、2或3個輕鏈CDR (例如如表10-12中所示)。在一些實施例中，該抗體為人類化的。在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體包含：VH域，其包含來自SEQ ID NO: 133之序列之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3；及VL域，其包含來自SEQ ID NO: 134之序列之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3。在一些實施例中，VH域進一步包含：包含序列EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS (SEQ ID NO: 211)之FW-1、包含序列WVRQAPGKGLEWVS (SEQ ID NO: 212)之FW-2、包含序列RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAE DTAVYYCAR (SEQ ID NO: 213)之FW-3及/或包含序列WGQGTMVTVSS (SEQ ID NO: 214)或WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 215)之FW-4。在一些實施例中，VL域進一步包含：包含序列EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC (SEQ ID NO: 216)之FW-1、包含序列WYQQKPGQAPRLLIY (SEQ ID NO: 217)之FW-2、包含序列GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC (SEQ ID NO: 218)之FW-3及/或包含序列FGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 219)之FW-4。
在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體包含：VH域，其包含：包含SEQ ID NO: 220之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 260之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 222之胺基酸序列之CDR-H3；及VL域，其包含：包含SEQ ID NO: 176之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 177之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 178之胺基酸序列之CDR-L3。在一些實施例中，VH域包含與SEQ ID NO: 135之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列且/或VL域包含與SEQ ID NO: 136之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列。在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體包含抗體xhCD8v15之1、2或3個重鏈CDR (例如如表10-12中所示)及/或抗體xhCD8v15之1、2或3個輕鏈CDR (例如如表10-12中所示)。在一些實施例中，該抗體為人類化的。在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體包含：VH域，其包含來自SEQ ID NO: 135之序列之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3；及VL域，其包含來自SEQ ID NO: 136之序列之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3。在一些實施例中，VH域進一步包含：包含序列EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS (SEQ ID NO: 211)之FW-1、包含序列WVRQAPGKGLEWVS (SEQ ID NO: 212)之FW-2、包含序列RFTISRDNAKNSLYLQMNSL RAEDTAVYYCAR (SEQ ID NO: 213)之FW-3及/或包含序列WGQGTMVTVSS (SEQ ID NO: 214)或WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 215)之FW-4。在一些實施例中，VL域進一步包含：包含序列EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC (SEQ ID NO: 216)之FW-1、包含序列WYQQKPGQAPRLLIY (SEQ ID NO: 217)之FW-2、包含序列GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC (SEQ ID NO: 218)之FW-3及/或包含序列FGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 219)之FW-4。
抗體可變域之CDR序列之多種定義係此項技術中已知的。除非另外規定，否則CDR序列在本文中係根據Kabat定義(參見例如Kabat等人, Sequences of Proteins of Immunological Interest,第五版, NIH Publication 91-3242, Bethesda MD (1991), 第1-3卷)加以描述。然而，已知且考慮使用其他定義。舉例而言，在一些實施例中，CDR序列可藉由Chothia定義(參見例如Chothia及Lesk, J . Mol . Biol .196:901-917 (1987))加以描述。
在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體包含：VH域，其包含：包含SEQ ID NO: 223之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 224之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 225之胺基酸序列之CDR-H3；及VL域，其包含：包含SEQ ID NO: 140之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 141之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 142之胺基酸序列之CDR-L3。在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體包含：VH域，其包含：包含SEQ ID NO: 226之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 227之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 151之胺基酸序列之CDR-H3；及VL域，其包含：包含SEQ ID NO: 152之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 153之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 154之胺基酸序列之CDR-L3。在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體包含：VH域，其包含：包含SEQ ID NO: 228之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 227之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 157之胺基酸序列之CDR-H3；及VL域，其包含：包含SEQ ID NO: 158之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 159之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 160之胺基酸序列之CDR-L3。在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體包含：VH域，其包含：包含SEQ ID NO: 223之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 227之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 163之胺基酸序列之CDR-H3；及VL域，其包含：包含SEQ ID NO: 164之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 165之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 166之胺基酸序列之CDR-L3。在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體包含：VH域，其包含：包含SEQ ID NO: 229之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 227之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 169之胺基酸序列之CDR-H3；及VL域，其包含：包含SEQ ID NO: 170之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 171之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 172之胺基酸序列之CDR-L3。在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體包含：VH域，其包含：包含SEQ ID NO: 230之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 231之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 175之胺基酸序列之CDR-H3；及VL域，其包含：包含SEQ ID NO: 176之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 177之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 178之胺基酸序列之CDR-L3。在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體包含：VH域，其包含：包含SEQ ID NO: 230之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 232之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 181之胺基酸序列之CDR-H3；及VL域，其包含：包含SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之CDR-L3。在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體包含：VH域，其包含：包含SEQ ID NO: 233之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 234之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 145之胺基酸序列之CDR-H3；及VL域，其包含：包含SEQ ID NO: 146之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 147之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 148之胺基酸序列之CDR-L3。
在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體包含：VH域，其包含：包含GX 1X 2FX 3X 4X 5(SEQ ID NO: 235)之胺基酸序列之CDR-H1，其中X 1為G、Y、S或A，X 2為T、S、G、R、N或H，X 3為S、T、R、H、Y、G或P，X 4為S、K、G、N、R、D、T或G，且X 5為Y、L、H或F；包含X 1PX 2X 3X 4X 5(SEQ ID NO: 236)之胺基酸序列之CDR-H2，其中X 1為I、N或M，X 2為G、N、H、S、R、I或A，X 3為A、N、H、S、T、F或Y，X 4為A、D或G，且X 5為T、E、K、V、Q或A；及包含X 1X 2X 3GX 4X 5LFX 6X 7(SEQ ID NO: 237)之胺基酸序列之CDR-H3，其中X 1為D或A，X 2為A、G、E、R、Y、K、N、Q、L或F，X 3為A、L、P或Y，X 4為I或L，X 5為R、A、Q或S，X 6為A或D，且X 7為D、E、A或S；及VL域，其包含：包含X 1X 2SX 3X 4IX 5GX 6LN (SEQ ID NO:188)之胺基酸序列之CDR-L1，其中X 1為R或G，X 2為A或T，X 3為Q或E，X 4為E、N、T、S、A、K、D、G、R或Q，X 5為Y或S，且X 6為A或V；包含GX 1X 2X 3LX 4X 5(SEQ ID NO: 189)之胺基酸序列之CDR-L2，其中X 1為A或S，X 2為T、S、E、Q或D，X 3為N、R、A、E或H，X 4為Q或A，且X 5為S或D；及包含QX 1X 2X 3X 4X 5PWT (SEQ ID NO: 190)之胺基酸序列之CDR-L3，其中X 1為S、N、D、Q、A或E，X 2為T、I或S，X 3為Y、L或F，X 4為D、G、T、E、Q、A或Y，且X 5為A、T、R、S、K或Y。在一些實施例中，VH域進一步包含：包含序列QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKAS (SEQ ID NO: 238)之FW-1、包含序列AISWVRQAPGQGLEWMGGI (SEQ ID NO: 239)之FW-2、包含序列ANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR (SEQ ID NO: 240)之FW-3及/或包含序列WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 194)之FW-4。在一些實施例中，VL域進一步包含：包含序列DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC (SEQ ID NO: 195)之FW-1、包含序列WYQQKPGKAPKLLIY (SEQ ID NO: 196)之FW-2、包含序列GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC (SEQ ID NO: 197)之FW-3及/或包含序列FGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 198)之FW-4。
在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體包含：VH域，其包含：包含SEQ ID NO: 241之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 242之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 204之胺基酸序列之CDR-H3；及VL域，其包含：包含SEQ ID NO: 152之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 153之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 202之胺基酸序列之CDR-L3。在一些實施例中，VH域進一步包含：包含序列QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKAS (SEQ ID NO: 238)之FW-1、包含序列AISWVRQAPGQGLEWMGGI (SEQ ID NO: 239)之FW-2、包含序列ANYAQKFQGRVTITADESTSTAYM ELSSLRSEDTAVYYCAR (SEQ ID NO: 240)之FW-3及/或包含序列WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 194)之FW-4。在一些實施例中，VL域進一步包含：包含序列DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC (SEQ ID NO: 195)之FW-1、包含序列WYQQKPGKAPKLLIY (SEQ ID NO: 196)之FW-2、包含序列GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC (SEQ ID NO: 197)之FW-3及/或包含序列FGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 198)之FW-4。
在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體包含：VH域，其包含：包含SEQ ID NO: 241之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 243之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 204之胺基酸序列之CDR-H3；及VL域，其包含：包含SEQ ID NO: 205之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 206之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 207之胺基酸序列之CDR-L3。在一些實施例中，VH域進一步包含：包含序列QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKAS (SEQ ID NO: 238)之FW-1、包含序列AISWVRQAPGQGLEWMGGI (SEQ ID NO: 239)之FW-2、包含序列ANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSL RSEDTAVYYCAR (SEQ ID NO: 240)之FW-3及/或包含序列WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 194)之FW-4。在一些實施例中，VL域進一步包含：包含序列DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC (SEQ ID NO: 195)之FW-1、包含序列WYQQKPGKAPKLLIY (SEQ ID NO: 196)之FW-2、包含序列GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC (SEQ ID NO: 197)之FW-3及/或包含序列FGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 198)之FW-4。
在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體包含：VH域，其包含：包含SEQ ID NO: 241之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 243之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 204之胺基酸序列之CDR-H3；及VL域，其包含：包含SEQ ID NO: 152之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 153之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 202之胺基酸序列之CDR-L3。在一些實施例中，VH域進一步包含：包含序列QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKAS (SEQ ID NO: 238)之FW-1、包含序列AISWVRQAPGQGLEWMGGI (SEQ ID NO: 239)之FW-2、包含序列ANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSS LRSEDTAVYYCAR (SEQ ID NO: 240)之FW-3及/或包含序列WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 194)之FW-4。在一些實施例中，VL域進一步包含：包含序列DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC (SEQ ID NO: 195)之FW-1、包含序列WYQQKPGKAPKLLIY (SEQ ID NO: 196)之FW-2、包含序列GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC (SEQ ID NO: 197)之FW-3及/或包含序列FGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 198)之FW-4。
在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體包含：VH域，其包含：包含GFTFX 1X 2Y (SEQ ID NO: 244)之胺基酸序列之CDR-H1，其中X 1為S、D、E、Q、S或A，且X 2為S、D、E、A或Q；包含X 1X 2X 3GX 4X 5(SEQ ID NO: 245)之胺基酸序列之CDR-H2，其中X 1為T、N、S、Q、E、H、R或A，X 2為Y、W、F或H，X 3為A、S、Q、E或T，X 4為G或E，且X 5為S或I；及包含X 1X 2X 3YX 4WX 5X 6AX 7DX 8(SEQ ID NO: 246)之胺基酸序列之CDR-H3，其中X 1為S或A，X 2為N、H、A、D、L、Q、Y或R，X 3為A、N、S或G，X 4為A、V、R、E或S，X 5為D或S，X 6為D、N、Q、E、S、T或L，X 7為L、F或M，且X 8為I、Y或V；及VL域，其包含：包含RASQSVSSNLA (SEQ ID NO: 176)之胺基酸序列之CDR-L1；包含GASSRAT (SEQ ID NO: 177)之胺基酸序列之CDR-L2；及包含QQYGSSPPVT (SEQ ID NO: 178)之胺基酸序列之CDR-L3。在一些實施例中，VH域進一步包含：包含序列EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS (SEQ ID NO: 247)之FW-1、包含序列AMSWVRQAPGKGLEWVSDI (SEQ ID NO: 248)之FW-2、包含序列TAYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAED TAVYYCAR (SEQ ID NO: 249)之FW-3及/或包含序列WGQGTMVTVSS (SEQ ID NO: 214)或WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 215)之FW-4。在一些實施例中，VL域進一步包含：包含序列EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC (SEQ ID NO: 216)之FW-1、包含序列WYQQKPGQAPRLLIY (SEQ ID NO: 217)之FW-2、包含序列GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC (SEQ ID NO: 218)之FW-3及/或包含序列FGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 219)之FW-4。
在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體包含：VH域，其包含：包含SEQ ID NO: 250之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 251之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 288之胺基酸序列之CDR-H3；及VL域，其包含：包含SEQ ID NO: 176之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 177之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 178之胺基酸序列之CDR-L3。在一些實施例中，VH域進一步包含：包含序列EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS (SEQ ID NO: 247)之FW-1、包含序列AMSWVRQAPGKGLEWVSDI (SEQ ID NO: 248)之FW-2、包含序列TAYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAED TAVYYCAR (SEQ ID NO: 249)之FW-3及/或包含序列WGQGTMVTVSS (SEQ ID NO: 214)或WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 215)之FW-4。在一些實施例中，VL域進一步包含：包含序列EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC (SEQ ID NO: 216)之FW-1、包含序列WYQQKPGQAPRLLIY (SEQ ID NO: 217)之FW-2、包含序列GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC (SEQ ID NO: 218)之FW-3及/或包含序列FGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 219)之FW-4。
在一些實施例中，本發明之抗CD8抗體包含：VH域，其包含：包含SEQ ID NO: 250之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 261之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 288之胺基酸序列之CDR-H3；及VL域，其包含：包含SEQ ID NO: 176之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 177之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 178之胺基酸序列之CDR-L3。在一些實施例中，VH域進一步包含：包含序列EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS (SEQ ID NO: 247)之FW-1、包含序列AMSWVRQAPGKGLEWVSDI (SEQ ID NO: 248)之FW-2、包含序列TAYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLR AEDTAVYYCAR (SEQ ID NO: 249)之FW-3及/或包含序列WGQGTMVTVSS (SEQ ID NO: 214)或WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 215)之FW-4。在一些實施例中，VL域進一步包含：包含序列EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC (SEQ ID NO: 216)之FW-1、包含序列WYQQKPGQAPRLLIY (SEQ ID NO: 217)之FW-2、包含序列GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC (SEQ ID NO: 218)之FW-3及/或包含序列FGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 219)之FW-4。在一些實施例中，本發明提供抗CD8抗體，其包含：包含表10中所列之單一抗體之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列的VH域及包含表10中所列之單一抗體之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列的VL域。舉例而言，抗CD8抗體包含表10中所示之抗體xhCD8、xhCD8v1、xhCD8v2、xhCD8v3、xhCD8v4、xhCD8v5、xhCD8v6、xhCD8v7、xhCD8v8、xhCD8v9、xhCD8v10、xhCD8v11、xhCD8v12 (xhCD8.1)、xhCD8v13、xhCD8v14、xhCD8v15、V9家族或V11家族之六個CDR。在一些實施例中，本發明提供抗CD8抗體，其包含：包含表10中所列之單一抗體之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列的VH域及包含表10中所列之單一抗體之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列的VL域。舉例而言，抗CD8抗體包含表10中所示之抗體xhCD8、xhCD8v1、xhCD8v2、xhCD8v3、xhCD8v4、xhCD8v5、xhCD8v6、xhCD8v7、xhCD8v8、xhCD8v9、xhCD8v10、xhCD8v11、xhCD8v12 (xhCD8.1)、xhCD8v13、xhCD8v14、xhCD8v15、V9家族或V11家族之六個CDR。在一些實施例中，本發明提供包含抗CD8抗體之融合蛋白，該抗體包含：包含表10中所列之單一抗體之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列的VH域及包含表10中所列之單一抗體之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列的VL域。舉例而言，融合蛋白之抗CD8抗體包含表10中所示之抗體xhCD8、xhCD8v1、xhCD8v2、xhCD8v3、xhCD8v4、xhCD8v5、xhCD8v6、xhCD8v7、xhCD8v8、xhCD8v9、xhCD8v10、xhCD8v11、xhCD8v12 (xhCD8.1)、xhCD8v13、xhCD8v14、xhCD8v15、V9家族或V11家族之六個CDR。在一些實施例中，本發明提供包含抗CD8抗體之融合蛋白，該抗體包含：包含表11中所列之單一抗體之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列的VH域及包含表11中所列之單一抗體之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列的VL域。舉例而言，融合蛋白之抗CD8抗體包含表11中所示之抗體xhCD8、xhCD8v1、xhCD8v2、xhCD8v3、xhCD8v4、xhCD8v5、xhCD8v6、xhCD8v7、xhCD8v8、xhCD8v9、xhCD8v10、xhCD8v11、xhCD8v12 (xhCD8.1)、xhCD8v13、xhCD8v14、xhCD8v15、V9家族或V11家族之六個CDR。在一些實施例中，本發明提供抗CD8抗體，其包含：包含表12中所列之VH域之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列的VH域及包含表12中所列之VL域之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列的VL域(在一些實施例中，VH域及VL域係來自表12中所列之同一單一抗體)。舉例而言，抗CD8抗體包含表12中所示之抗體xhCD8、xhCD8v1、xhCD8v2、xhCD8v3、xhCD8v4、xhCD8v5、xhCD8v6、xhCD8v7、xhCD8v8、xhCD8v9、xhCD8v10、xhCD8v11、xhCD8v12 (xhCD8.1)、xhCD8v13、xhCD8v14或xhCD8v15之VH及VL。在一些實施例中，本發明提供包含抗CD8抗體之融合蛋白，該抗體包含：包含表12中所列之VH域之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列的VH域及包含表12中所列之VL域之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列的VL域(在一些實施例中，VH域及VL域係來自表12中所列之同一單一抗體)。在一些實施例中，本發明提供抗CD8抗體，其包含如表12中所列之單一抗體之VH域序列及VL域序列。在一些實施例中，本發明提供包含抗CD8抗體之融合蛋白，該抗體包含如表12中所列之單一抗體之VH域序列及VL域序列。舉例而言，融合蛋白之抗CD8抗體包含表12中所示之抗體xhCD8、xhCD8v1、xhCD8v2、xhCD8v3、xhCD8v4、xhCD8v5、xhCD8v6、xhCD8v7、xhCD8v8、xhCD8v9、xhCD8v10、xhCD8v11、xhCD8v12 (xhCD8.1)、xhCD8v13、xhCD8v14或xhCD8v15之VH及VL。 連接子
在一些實施例中，靶向細胞介素構築體包含在抗原結合蛋白或其功能片段(例如如上文所描述之抗體或其抗原結合片段)與IL-21多肽或其功能片段或變異體之間的連接子。許多不同連接子多肽係此項技術中已知的且可在靶向細胞介素構築體之情形下使用。在一些實施例中，靶向細胞介素構築體包含在抗原結合蛋白與IL-21多肽或其功能片段或變異體之間的包含以下序列之肽之一或多個複本：GGGGS (SEQ ID NO: 23)、GGNGT (SEQ ID NO: 24)或YGNGT (SEQ ID NO: 25)。在一些實施例中，在抗原結合蛋白與IL-21多肽或其功能片段或變異體之間的多肽區包含GGGGS (SEQ ID NO: 23)、GGNGT (SEQ ID NO: 24)或YGNGT (SEQ ID NO: 25)之單個複本。 靶向細胞介素蛋白
在一些實施例中，本發明提供包含抗原結合蛋白或功能片段及IL-21多肽或其功能片段或變異體之融合蛋白。在一些實施例中，融合蛋白可包含可操作地連接至IL-21多肽或其功能片段或變異體之抗原結合蛋白或功能片段。在一些實施例中，抗原結合蛋白或其功能片段結合T細胞上之受體。在一些實施例中，T細胞為CD8+ T細胞。在一些實施例中，T細胞不為Treg細胞(例如表現FoxP3之T細胞)。在一些實施例中，抗原結合蛋白或其功能片段為如本文所描述之抗CD8抗體或其抗原結合片段。
在一些實施例中，靶向細胞介素構築體包含具有以下結構之抗體或抗原結合片段：i)第一多肽，其自N端至C端排列包含：可變輕鏈(VL)胺基酸序列及輕鏈恆定區胺基酸序列(CL1)；ii)第二多肽，其自N端至C端排列包含：可變重鏈(VH)胺基酸序列、重鏈CH1恆定區胺基酸序列、鉸鏈區胺基酸序列、重鏈CH2恆定區胺基酸序列及重鏈CH3恆定區胺基酸序列；iii)第三多肽，其自N端至C端排列包含：鉸鏈區胺基酸序列、重鏈CH2恆定區胺基酸序列及重鏈CH3恆定區胺基酸序列，其中第二多肽及第三多肽之各CH2域及CH3域形成Fc域。
在一些實施例中，iii)第三多肽自N端至C端排列包含：可變重鏈(VH)胺基酸序列、重鏈CH1恆定區胺基酸序列、鉸鏈區胺基酸序列、重鏈CH2恆定區胺基酸序列及重鏈CH3恆定區胺基酸序列；其中該抗體或其抗原結合片段進一步包含：iv)第四多肽，其自N端至C端排列包含：可變輕鏈(VL)胺基酸序列及輕鏈恆定胺基酸序列(CL1)。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體及該抗體或其抗原結合片段彼此可操作地連接。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體與該抗體或其抗原結合片段之N端或C端連接。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體與第一多肽、第二多肽或第三多肽之C端結合。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體與第一多肽、第二多肽或第三多肽之N端結合。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體與第一多肽、第二多肽、第三多肽或第四多肽之C端結合。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體與第二多肽或第三多肽之鉸鏈區結合。在一些實施例中，靶向細胞介素構築體包含IL-21多肽或其功能片段或變異體之至少一個分子。在一些實施例中，靶向細胞介素構築體包含IL-21多肽之至少1、2、3、4或5個分子，諸如IL-21多肽或其功能片段或變異體之1至2、1至3、1至4、1至5、2至3、2至4、2至5、3至4、3至5或4至5個分子。
在一些實施例中，Fc域包含諸如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc域之人類IgG Fc域。在一些實施例中，Fc域包含促進異二聚化之一或多個修飾。在一些實施例中，第二多肽在CH2域或CH3域中包含杵修飾，且第三多肽在CH2域或CH3域中包含臼修飾；或其中第三多肽在CH2域或CH3域中包含杵修飾，且第二多肽在CH2或CH3中包含臼修飾。舉例而言，靶向細胞介素構築體之IgG Fc域可在CH3域中包含杵-臼修飾。「臼」重鏈可連接至IL-21多肽且攜帶CH3域中之S354C、T366S、L368A及Y407V突變，而未融合「杵」重鏈可攜帶CH3域中之Y349C及T366W突變(EU編號)。可替代地，「臼」重鏈可為未融合的且攜帶CH3域中之S354C、T366S、L368A及Y407V突變，而「杵」重鏈可連接至IL-21多肽且可攜帶CH3域中之Y349C及T366W突變(EU編號)。在一些實施例中，該等第一Fc域及第二Fc域中之至少一者包含以下根據EU編號之Fc突變：L234A、L235A及G237A。
在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體與以下中之至少一者結合：第二多肽或第三多肽之N端及C端。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體與第二多肽或第三多肽之C端結合。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體與以下中之至少一者結合：第二多肽或第三多肽之N端或C端。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段或變異體與第一多肽或第四多肽之N端或C端結合。在一些實施例中，IL-21多肽與以下中之至少一者結合：第二多肽或第三多肽之鉸鏈區。
在一些實施例中，本發明之融合蛋白展現以下中之一或多者：結合人類CD8且不會阻斷CD8與I類MHC之相互作用；及以例如相較於NK細胞、CD4+ T細胞或B細胞之活化大至少10倍、25倍、50倍、100倍、250倍、500倍或1000倍之效力活化CD8+ T細胞。在一些實施例中，可例如藉由在存在或不存在抗CD8抗體或融合蛋白之情況下分析CD8+ T細胞之活化狀態(例如在抗原刺激後)來分析本發明之抗CD8抗體或融合蛋白是否會阻斷CD8與I類MHC之相互作用。在一些實施例中，可例如藉由分析STAT3磷酸化來量測CD8+ T細胞、CD4+ T細胞及/或NK細胞之活化。對於例示性分析及條件，參見例如 實例 3。
在某些實施例中，靶向細胞介素構築體包含本發明之IL-21多肽或其功能片段或變異體，IL-21多肽以大於約1 nM之K D結合至IL-21R。在一些實施例中，IL-21多肽以大於約10 nM之K D結合至IL-21R。在一些實施例中，IL-21多肽以大於約100 nM之K D結合至IL-21R。在一些實施例中，IL-21多肽以大於約1 μM之K D結合至IL-21R。在一些實施例中，IL-21多肽以大於約10 μM之K D結合至IL-21R。在一些實施例中，IL-21多肽以大於約100 μM之K D結合至IL-21R。在一些實施例中，IL-21多肽或其功能片段具有約1 nM、約5 nM、約10 nM、約20 nM、約25 nM、約50 nM、約100 nM、約200 nM、約300 nM、約400 nM、約500 nM、約600 nM、約700 nM、約800 nM、約900 nM、約1.0 μM、約1.5 μM、約2.0 μM、約2.5 μM、約3.0 μM、約3.5 μM、約4.0 μM、約4.5 μM、約5.0 μM、約10.0 μM、約20.0 μM、約30.0 μM、約40.0 μM、約50.0 μM、約100 μM或約1000 μM之K D。在一些實施例中，IL-21多肽具有約1 nM至約5 nM、約1 nM至約10 nM、約1 nM至約20 nM、約1 nM至約25 nM、約1 nM至約50 nM、約1 nM至約100 nM、約1 nM至約200 nM、約1 nM至約300 nM、約1 nM至約400 nM、約1 nM至約500 nM、約1 nM至約600 nM、約1 nM至約700 nM、約1 nM至約800 nM、約1 nM至約900 nM、約1 nM至約1.0 μM、約1 nM至約1.5 μM、約1 nM至約2.0 μM、約1 nM至約2.5 μM、約1 nM至約3.0 μM、約1 nM至約3.5 μM、約1 nM至約4.0 μM、約1 nM至約4.5 μM、約1 nM至約5.0 μM、約5 nM至約10 nM、約5 nM至約20 nM、約5 nM至約25 nM、約5 nM至約50 nM、約5 nM至約100 nM、約5 nM至約200 nM、約5 nM至約300 nM、約5 nM至約400 nM、約5 nM至約500 nM、約5 nM至約600 nM、約5 nM至約700 nM、約5 nM至約800 nM、約5 nM至約900 nM、約5 nM至約1.0 μM、約5 nM至約1.5 μM、約5 nM至約2.0 μM、約5 nM至約2.5 μM、約5 nM至約3.0 μM、約5 nM至約3.5 μM、約5 nM至約4.0 μM、約5 nM至約4.5 μM、約5 nM至約5.0 μM、10 nM至約20 nM、約10 nM至約25 nM、約10 nM至約50 nM、約10 nM至約100 nM、約10 nM至約200 nM、約10 nM至約300 nM、約10 nM至約400 nM、約10 nM至約500 nM、約10 nM至約600 nM、約10 nM至約700 nM、約10 nM至約800 nM、約10 nM至約900 nM、約10 nM至約1.0 μM、約10 nM至約1.5 μM、約10 nM至約2.0 μM、約10 nM至約2.5 μM、約10 nM至約3.0 M、約10 nM至約3.5 μM、約10 nM至約4.0 μM、約10 nM至約4.5 μM、約10 nM至約5.0 μM、約20 nM至約25 nM、約20 nM至約50 nM、約20 nM至約100 nM、約20 nM至約200 nM、約20 nM至約300 nM、約20 nM至約400 nM、約20 nM至約500 nM、約20 nM至約600 nM、約20 nM至約700 nM、約20 nM至約800 nM、約20 nM至約900 nM、約20 nM至約1.0 μM、約20 nM至約1.5 μM、約20 nM至約2.0 μM、約20 nM至約2.5 μM、約20 nM至約3.0 μM、約20 nM至約3.5 μM、約20 nM至約4.0 μM、約20 nM至約4.5 μM、約20 nM至約5.0 μM、約25 nM至約50 nM、約25 nM至約100 nM、約25 nM至約200 nM、約25 nM至約300 nM、約25 nM至約400 nM、約25 nM至約500 nM、約25 nM至約600 nM、約25 nM至約700 nM、約25 nM至約800 nM、約25 nM至約900 nM、約25 nM至約1.0 μM、約25 nM至約1.5 μM、約25 nM至約2.0 μM、約25 nM至約2.5 μM、約25 nM至約3.0 μM、約25 nM至約3.5 μM、約25 nM至約4.0 μM、約25 nM至約4.5 μM、約25 nM至約5.0 μM、約50 nM至約100 nM、約50 nM至約200 nM、約50 nM至約300 nM、約50 nM至約400 nM、約50 nM至約500 nM、約50 nM至約600 nM、約50 nM至約700 nM、約50 nM至約800 nM、約50 nM至約900 nM、約50 nM至約1.0 μM、約50 nM至約1.5 μM、約50 nM至約2.0 μM、約50 nM至約2.5 μM、約50 nM至約3.0 μM、約50 nM至約3.5 μM、約50 nM至約4.0 μM、約50 nM至約4.5 μM、約50 nM至約5.0 μM、約100 nM至約200 nM、約100 nM至約300 nM、約100 nM至約400 nM、約100 nM至約500 nM、約100 nM至約600 nM、約100 nM至約700 nM、約100 nM至約800 nM、約100 nM至約900 nM、約100 nM至約1.0 μM、約100 nM至約1.5 μM、約100 nM至約2.0 μM、約100 nM至約2.5 μM、約100 nM至約3.0 μM、約100 nM至約3.5 μM、約100 nM至約4.0 μM、約100 nM至約4.5 μM、約100 nM至約5.0 μM、約200 nM至約300 nM、約200 nM至約400 nM、約200 nM至約500 nM、約200 nM至約600 nM、約200 nM至約700 nM、約200 nM至約800 nM、約200 nM至約900 nM、約200 nM至約1.0 μM、約200 nM至約1.5 μM、約200 nM至約2.0 μM、約200 nM至約2.5 μM、約200 nM至約3.0 μM、約200 nM至約3.5 μM、約200 nM至約4.0 μM、約200 nM至約4.5 μM、約200 nM至約5.0 μM、約300 nM至約400 nM、約300 nM至約500 nM、約300 nM至約600 nM、約300 nM至約700 nM、約300 nM至約800 nM、約300 nM至約900 nM、約300 nM至約1.0 μM、約300 nM至約1.5 μM、約300 nM至約2.0 μM、約300 nM至約2.5 μM、約300 nM至約3.0 μM、約300 nM至約3.5 μM、約300 nM至約4.0 μM、約300 nM至約4.5 μM、約300 nM至約5.0 μM、約400 nM至約500 nM、約400 nM至約600 nM、約400 nM至約700 nM、約400 nM至約800 nM、約400 nM至約900 nM、約400 nM至約1.0 μM、約400 nM至約1.5 μM、約400 nM至約2.0 μM、約400 nM至約2.5 μM、約400 nM至約3.0 μM、約400 nM至約3.5 μM、約400 nM至約4.0 μM、約400 nM至約4.5 μM、約400 nM至約5.0 μM 、約500 nM至約600 nM、約500 nM至約700 nM、約500 nM至約800 nM、約500 nM至約900 nM、約500 nM至約1.0 μM、約500 nM至約1.5 μM、約500 nM至約2.0 μM、約500 nM至約2.5 μM、約500 nM至約3.0 μM、約500 nM至約3.5 μM、約500 nM至約4.0 μM、約500 nM至約4.5 μM、約500 nM至約5.0 μM、約600 nM至約700 nM、約600 nM至約800 nM、約600 nM至約900 nM、約600 nM至約1.0 μM、約600 nM至約1.5 μM、約600 nM至約2.0 μM、約600 nM至約2.5 μM、約600 nM至約3.0 μM、約600 nM至約3.5 μM、約600 nM至約4.0 μM、約600 nM至約4.5 μM、約600 nM至約5.0 μM、約700 nM至約800 nM、約700 nM至約900 nM、約700 nM至約1.0 μM、約700 nM至約1.5 μM、約700 nM至約2.0 μM、約700 nM至約2.5 μM、約700 nM至約3.0 M、約700 nM至約3.5 μM、約700 nM至約4.0 μM、約700 nM至約4.5 μM、約700 nM至約5.0 μM、約800 nM至約900 nM、約800 nM至約1.0 μM、約800 nM至約1.5 μM、約800 nM至約2.0 μM、約800 nM至約2.5 μM、約800 nM至約3.0 μM、約800 nM至約3.5 μM、約800 nM至約4.0 μM、約800 nM至約4.5 μM、約800 nM至約5.0 μM、約900 nM至約1.0 μM、約900 nM至約1.5 μM、約900 nM至約2.0 μM、約900 nM至約2.5 μM、約900 nM至約3.0 μM、約900 nM至約3.5 μM、約900 nM至約4.0 μM、約900 nM至約4.5 μM、約900 nM至約5.0 μM、約1.0 μM至約1.5 μM、約1.0 μM至約2.0 μM、約1.0 μM至約2.5 μM、約1.0 μM至約3.0 μM、約1.0 μM至約3.5 μM、約1.0 μM至約4.0 μM、約1.0 μM至約4.5 μM、約1.0 μM至約5.0 μM、約1.5 μM至約2.0 μM、約1.5 μM至約2.5 μM、約1.5 μM至約3.0 μM、約1.5 μM至約3.5 μM、約1.5 μM至約4.0 μM、約1.5 μM至約4.5 μM、約1.5 μM至約5.0 μM、約2.0 μM至約2.5 μM、約2.0 μM至約3.0 μM、約2.0 μM至約3.5 μM、約2.0 μM至約4.0 μM、約2.0 μM至約4.5 μM、約2.0 μM至約5.0 μM、約2.5 μM至約3.0 μM、約2.5 μM至約3.5 μM、約2.5 μM至約4.0 μM、約2.5 μM至約4.5 μM、約2.5 μM至約5.0 μM、約3.0 μM至約3.5 μM、約3.0 μM至約4.0 μM、約3.0 μM至約4.5 μM、約3.0 μM至約5.0 μM、約3.5 μM至約4.0 μM、約3.5 μM至約4.5 μM、約3.5 μM至約5.0 μM、約4.0 μM至約4.5 μM、約4.0 μM至約5.0 μM、約4.5 μM至約5.0 μM、約10 μM至約100 μM或約100 μM至約1000 μM之K D。在一些實施例中，K D係藉由表面電漿子共振或使用BIAcore儀器來測定。
在一些實施例中，本發明提供融合蛋白，其包含：包含SEQ ID NO: 262之胺基酸序列之第一多肽鏈、包含SEQ ID NO: 263之胺基酸序列之第二多肽鏈、包含SEQ ID NO: 264之胺基酸序列之第三多肽鏈及包含SEQ ID NO: 262之胺基酸序列之第四多肽鏈。
在一些實施例中，本發明提供融合蛋白，其包含：包含SEQ ID NO: 266之胺基酸序列之第一多肽鏈、包含SEQ ID NO: 267之胺基酸序列之第二多肽鏈、包含SEQ ID NO: 268之胺基酸序列之第三多肽鏈及包含SEQ ID NO: 266之胺基酸序列之第四多肽鏈。
在一些實施例中，本發明提供融合蛋白，其包含：包含SEQ ID NO: 270之胺基酸序列之第一多肽鏈、包含SEQ ID NO: 271之胺基酸序列之第二多肽鏈、包含SEQ ID NO: 272之胺基酸序列之第三多肽鏈及包含SEQ ID NO: 270之胺基酸序列之第四多肽鏈。
在一些實施例中，本發明提供融合蛋白，其包含：包含SEQ ID NO: 274之胺基酸序列之第一多肽鏈、包含SEQ ID NO: 275之胺基酸序列之第二多肽鏈、包含SEQ ID NO: 276之胺基酸序列之第三多肽鏈及包含SEQ ID NO: 274之胺基酸序列之第四多肽鏈。
在一些實施例中，本發明提供融合蛋白，其包含：包含SEQ ID NO: 278之胺基酸序列之第一多肽鏈、包含SEQ ID NO: 279之胺基酸序列之第二多肽鏈、包含SEQ ID NO: 280之胺基酸序列之第三多肽鏈及包含SEQ ID NO: 278之胺基酸序列之第四多肽鏈。
在一些實施例中，本發明提供融合蛋白，其包含：包含SEQ ID NO: 262之胺基酸序列之第一多肽鏈、包含SEQ ID NO: 263之胺基酸序列之第二多肽鏈、包含SEQ ID NO: 265之胺基酸序列之第三多肽鏈及包含SEQ ID NO: 262之胺基酸序列之第四多肽鏈。
在一些實施例中，本發明提供融合蛋白，其包含：包含SEQ ID NO: 266之胺基酸序列之第一多肽鏈、包含SEQ ID NO: 267之胺基酸序列之第二多肽鏈、包含SEQ ID NO: 269之胺基酸序列之第三多肽鏈及包含SEQ ID NO: 266之胺基酸序列之第四多肽鏈。
在一些實施例中，本發明提供融合蛋白，其包含：包含SEQ ID NO: 270之胺基酸序列之第一多肽鏈、包含SEQ ID NO: 271之胺基酸序列之第二多肽鏈、包含SEQ ID NO: 273之胺基酸序列之第三多肽鏈及包含SEQ ID NO: 270之胺基酸序列之第四多肽鏈。
在一些實施例中，本發明提供融合蛋白，其包含：包含SEQ ID NO: 274之胺基酸序列之第一多肽鏈、包含SEQ ID NO: 275之胺基酸序列之第二多肽鏈、包含SEQ ID NO: 277之胺基酸序列之第三多肽鏈及包含SEQ ID NO: 274之胺基酸序列之第四多肽鏈。
在一些實施例中，本發明提供融合蛋白，其包含：包含SEQ ID NO: 278之胺基酸序列之第一多肽鏈、包含SEQ ID NO: 279之胺基酸序列之第二多肽鏈、包含SEQ ID NO: 281之胺基酸序列之第三多肽鏈及包含SEQ ID NO: 278之胺基酸序列之第四多肽鏈。
在一些實施例中，本發明提供融合蛋白，其包含：包含SEQ ID NO: 297之胺基酸序列之第一多肽鏈、包含SEQ ID NO: 298之胺基酸序列之第二多肽鏈、包含SEQ ID NO: 299之胺基酸序列之第三多肽鏈及包含SEQ ID NO: 297之胺基酸序列之第四多肽鏈。
在一些實施例中，本發明提供融合蛋白，其包含：包含SEQ ID NO: 301之胺基酸序列之第一多肽鏈、包含SEQ ID NO: 302之胺基酸序列之第二多肽鏈、包含SEQ ID NO: 303之胺基酸序列之第三多肽鏈及包含SEQ ID NO: 301之胺基酸序列之第四多肽鏈。
在一些實施例中，本發明提供融合蛋白，其包含：包含SEQ ID NO: 305之胺基酸序列之第一多肽鏈、包含SEQ ID NO: 306之胺基酸序列之第二多肽鏈、包含SEQ ID NO: 307之胺基酸序列之第三多肽鏈及包含SEQ ID NO: 305之胺基酸序列之第四多肽鏈。
在一些實施例中，本發明提供融合蛋白，其包含：包含SEQ ID NO: 309之胺基酸序列之第一多肽鏈、包含SEQ ID NO: 310之胺基酸序列之第二多肽鏈、包含SEQ ID NO: 311之胺基酸序列之第三多肽鏈及包含SEQ ID NO: 309之胺基酸序列之第四多肽鏈。
在一些實施例中，本發明提供融合蛋白，其包含：包含SEQ ID NO: 297之胺基酸序列之第一多肽鏈、包含SEQ ID NO: 298之胺基酸序列之第二多肽鏈、包含SEQ ID NO: 300之胺基酸序列之第三多肽鏈及包含SEQ ID NO: 297之胺基酸序列之第四多肽鏈。
在一些實施例中，本發明提供融合蛋白，其包含：包含SEQ ID NO: 301之胺基酸序列之第一多肽鏈、包含SEQ ID NO: 302之胺基酸序列之第二多肽鏈、包含SEQ ID NO: 304之胺基酸序列之第三多肽鏈及包含SEQ ID NO: 301之胺基酸序列之第四多肽鏈。
在一些實施例中，本發明提供融合蛋白，其包含：包含SEQ ID NO: 305之胺基酸序列之第一多肽鏈、包含SEQ ID NO: 306之胺基酸序列之第二多肽鏈、包含SEQ ID NO: 308之胺基酸序列之第三多肽鏈及包含SEQ ID NO: 305之胺基酸序列之第四多肽鏈。
在一些實施例中，本發明提供融合蛋白，其包含：包含SEQ ID NO: 309之胺基酸序列之第一多肽鏈、包含SEQ ID NO: 310之胺基酸序列之第二多肽鏈、包含SEQ ID NO: 312之胺基酸序列之第三多肽鏈及包含SEQ ID NO: 309之胺基酸序列之第四多肽鏈。
在一些實施例中，亦提供編碼靶向細胞介素構築體、抗體或其功能片段或細胞介素或其功能片段之至少一種聚核苷酸。在一些實施例中，聚核苷酸分子係以DNA構築體形式提供。在其他實施例中，聚核苷酸分子係以信使RNA轉錄物形式提供。
在一些實施例中，提供經密碼子最佳化以用於在例如細菌，諸如大腸桿菌或真核細胞，諸如CHO細胞之宿主細胞中表現的核酸序列。在一些實例中，核酸序列經密碼子最佳化以用於在CHO細胞中表現。
聚核苷酸分子係藉由已知方法，諸如藉由將編碼結合蛋白之基因併入連接至適合的啟動子及視情況適合的轉錄終止子之基因構築體中且使其在細菌或諸如CHO細胞之其他適當的表現系統中表現來構築。視所利用之載體系統及宿主而定，可使用任何數目之適合的轉錄元件及轉譯元件，包括組成性啟動子及誘導性啟動子。啟動子經選擇以使得其驅動聚核苷酸在各別宿主細胞中之表現。
在一些實施例中，將如本文所描述之聚核苷酸插入載體、較佳地表現載體中，此代表另一實施例。此重組載體可根據已知方法來構築。尤其受關注之載體包括質體、噬質體、噬菌體衍生物、病毒(例如逆轉錄病毒、腺病毒、腺相關病毒、疱疹病毒、慢病毒及其類似病毒)及黏質體。
可利用多種表現載體/宿主系統以含有及表現編碼本文所描述之多肽的聚核苷酸。用於在大腸桿菌中表現之表現載體之實例為用於在哺乳動物細胞中表現之pSKK (Le Gall等人, J Immunol Methods. (2004) 285(1):111-27)或pcDNA5 (Invitrogen)。
因此，在一些實施例中，如本文所描述之靶向細胞介素構築體係藉由將編碼如上文所描述之蛋白質之至少一種載體引入宿主細胞中且在藉以表現蛋白域之條件下培養該宿主細胞而產生，可經分離且視情況經進一步純化。 使用方法
本發明進一步提供相對於存在於PBMC群體中之其他細胞選擇性活化CD8+ T細胞之方法。此等其他細胞可包括但不限於CD4+細胞、NK細胞、B細胞、樹突狀細胞及先天性淋巴細胞。在某些實施例中，本發明之方法亦可用於治療癌症、感染性疾病、慢性感染。
在一些實施例中，該疾病或病症可選自由以下組成之群：自體免疫疾病、發炎、自體免疫疾病、異位性疾病、副腫瘤自體免疫疾病、軟骨發炎、關節炎、類風濕性關節炎、幼年型關節炎、幼年型類風濕性關節炎、少關節幼年型類風濕性關節炎、多關節幼年型類風濕性關節炎、全身性發作幼年型類風濕性關節炎、幼年型關節黏連性脊椎炎、幼年型腸病性關節炎、幼年型反應性關節炎、幼年型萊特爾氏症候群(juvenile Reiter's Syndrome)、SEA症候群(血清陰性、著骨點病變、關節病症候群)、幼年型皮肌炎、幼年型牛皮癬性關節炎、幼年型硬皮病、幼年型全身性紅斑狼瘡、幼年型血管炎、少關節類風濕性關節炎、多關節類風濕性關節炎、全身性發作類風濕性關節炎、關節黏連性脊椎炎、腸病性關節炎、反應性關節炎、萊特爾氏症候群、SEA症候群(血清陰性、著骨點病變、關節病症候群)、皮肌炎、牛皮癬性關節炎、硬皮病、血管炎、脊髓炎、多發性肌炎、皮肌炎、結節性多動脈炎、韋格納氏肉芽腫病(Wegener's granulomatosis)、動脈炎、風濕性食道炎、類肉瘤病、硬化、原發性膽硬化、硬化性膽管炎、休格倫氏症候群(Sjogren's syndrome)、牛皮癬、斑塊型牛皮癬、點狀牛皮癬、反轉型牛皮癬、膿皰型牛皮癬、紅皮症型牛皮癬、皮膚炎、異位性皮膚炎、動脈粥樣硬化、狼瘡、斯蒂爾氏病(Still's disease)、全身性紅斑狼瘡(SLE)、重症肌無力、發炎性腸病(IBD)、克羅恩氏病、潰瘍性結腸炎、乳糜瀉、多發性硬化(MS)、哮喘、COPD、鼻竇炎、鼻竇炎伴息肉、嗜酸性球性食道炎、嗜酸性球性支氣管炎、格-巴二氏病(Guillain-Barre disease)、I型糖尿病、甲狀腺炎(例如葛瑞夫茲氏病(Graves' disease))、艾迪森氏病(Addison's disease)、雷諾氏現象(Raynaud's phenomenon)、自體免疫肝炎、GVHD、移植排斥、腎損傷、C型肝炎誘發之血管炎或自然流產。
在一些實施例中，該疾病為癌症。在一些實施例中，該癌症為急性淋巴母細胞性白血病(ALL) (包括非T細胞ALL)、急性骨髓白血病、B細胞前淋巴球白血病、B細胞急性淋巴性白血病(「BALL」)、母細胞性漿細胞樣樹突狀細胞贅瘤、伯基特氏淋巴瘤、慢性淋巴球白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、慢性骨髓白血病、慢性或急性白血病、瀰漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、濾泡性淋巴瘤(FL)、毛細胞白血病、霍奇金氏病、惡性淋巴增生性病況、MALT淋巴瘤、套細胞淋巴瘤、邊緣區淋巴瘤、意義不明單株伽瑪球蛋白症(MGUS)、多發性骨髓瘤、骨髓化生不良及骨髓化生不良症候群、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、漿細胞增生性病症(包括無症狀骨髓瘤、鬱積型多發性骨髓瘤或惰性骨髓瘤)、漿母細胞性淋巴瘤、漿細胞樣樹突狀細胞贅瘤、漿細胞瘤(包括漿細胞惡液質；孤立骨髓瘤；孤立漿細胞瘤；髓外漿細胞瘤；及多發性漿細胞瘤)、POEMS症候群(亦稱為克羅-富克斯症候群；高槻病；及PEP症候群)、原發性縱隔大B細胞淋巴瘤(PMBC)、小細胞或大細胞濾泡性淋巴瘤、脾邊緣區淋巴瘤(SMZL)、全身澱粉樣蛋白輕鏈澱粉樣變性病、T細胞急性淋巴性白血病(「TALL」)、T細胞淋巴瘤、轉化型濾泡性淋巴瘤或瓦爾登斯特倫巨球蛋白血症、套細胞淋巴瘤(MCL)、轉化型濾泡性淋巴瘤(TFL)、原發性縱隔B細胞淋巴瘤(PMBCL)、多發性骨髓瘤、毛細胞淋巴瘤/白血病、肺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺(NSCL)癌、細支氣管肺泡細胞肺癌、鱗狀細胞癌、肺腺癌、鱗狀肺癌、腹膜癌、頭頸癌、骨癌、胰臟癌、皮膚癌、頭頸癌、皮膚或眼內黑色素瘤、甲狀腺癌、子宮癌、胃腸癌、卵巢癌、直腸癌、肛門區癌、胃癌(stomach cancer/gastric cancer)、結腸癌、乳癌、子宮內膜癌、子宮癌、輸卵管癌、子宮頸癌、陰道癌、外陰癌、霍奇金氏病、食道癌、小腸癌、內分泌系統癌、甲狀腺癌、副甲狀腺癌、腎上腺癌、軟組織肉瘤、尿道癌、陰莖癌、前列腺癌、膀胱癌、腎或輸尿管癌、腎細胞癌、腎盂癌、間皮瘤、膀胱癌、肝癌、肝腫瘤、肝細胞癌、子宮頸癌、唾液腺癌、膽道癌、中樞神經系統(CNS)贅瘤、脊髓軸腫瘤、腦幹神經膠質瘤、多形性神經膠質母細胞瘤、星形細胞瘤、神經鞘瘤、室管膜瘤、神經管胚細胞瘤、腦脊髓膜瘤、鱗狀細胞癌、垂體腺瘤及尤文氏肉瘤，包括以上癌症中任一者之難治性型式，或以上癌症中一或多者之組合。
在一些實施例中，本發明提供增強及/或恢復老齡化個體之T細胞活性之方法，其包含向個體投與本文所描述之組合物。在一些實施例中，本發明提供增強疫苗在老齡化個體中之功效的方法，其包含在接受疫苗之前向個體投與本文所描述之組合物。在一些實施例中，本發明提供治療與免疫細胞老化相關之疾病、病症或病況之方法，其包含向個體投與本文所描述之組合物。
本發明之靶向細胞介素提供相對於諸如CD4+ T細胞或NK細胞之其他非CD8+細胞類型，例如CD8+ T細胞之T細胞的選擇性活化。IL-21一般對諸如調控T細胞之廣泛類別之細胞起作用。經由IL-21進行之細胞之刺激及後續活化可藉由STAT3磷酸化來量測。藉由IL-21進行之細胞活化可經報導為STAT3磷酸化(pSTAT3)之EC50。在一些實施例中，在使細胞培養物與包含相同IL-21多肽或其功能片段或變異體、但不包含該抗原結合蛋白或其功能片段之參考構築體接觸之後，接觸引起細胞培養物中之CD8+ T細胞之細胞毒性功能相較於CD8+ T細胞之細胞毒性功能選擇性增強。
在一些實施例中，CD8+ T細胞及其他細胞類型之活化的效力係藉由如利用STAT3磷酸化評估之細胞活化EC50來量測。在一些實施例中，靶向細胞介素構築體對CD8+ T細胞具有相比於其他細胞類型低的STAT3磷酸化EC50。在一些實施例中，其他細胞為非CD8+細胞。非CD8+細胞可為但不限於B細胞、CD4+ T細胞或NK細胞。在一些實施例中，CD8+ T細胞之選擇性活化係藉由細胞培養物中之CD8+ T細胞之STAT3磷酸化相較於非CD8+細胞之STAT3磷酸化之增加來量測。在一些實施例中，在細胞培養物中，相較於非CD8+細胞之STAT3磷酸化，CD8+ T細胞之STAT3磷酸化之增加多至少5倍、至少10倍或至少100倍。在一些實施例中，靶向細胞介素構築體對CD8+ T細胞具有相比於其他細胞類型低至少5倍、至少10倍、至少50倍、至少100倍、至少1,000倍、至少10,000倍或至少100,000倍的STAT3磷酸化EC50。
在一些實施例中，靶向細胞介素構築體以相較於NK細胞之活化至少約10倍或更大之效力活化CD8+ T細胞。在一些實施例中，構築體以相較於NK細胞之活化大至少約10倍至約50倍之效力活化CD8+ T細胞。在一些實施例中，構築體以相較於NK細胞之活化大至少約10倍至約15倍、15倍至約20倍、20倍至約25倍、25倍至約30倍、30倍至約35倍、35倍至約40倍、40倍至約45倍、45倍至約50倍、50倍至約100倍、100倍至約1,000倍、1,000倍至約10,000倍、10,000倍至約100,000倍、約10倍、15倍、20倍、25倍、30倍、35倍、40倍、45倍、50倍、100倍、1,000倍、10,000倍或約100,000倍之效力活化CD8+ T細胞。
在一些實施例中，靶向細胞介素構築體以相較於CD4+ T細胞之活化至少約10倍或更大之效力活化CD8+ T細胞。在一些實施例中，構築體以相較於CD4+ 細胞之活化大至少約10倍至約50倍之效力活化CD8+ T細胞。在一些實施例中，構築體以相較於CD4+ T細胞之活化大至少約10倍至約15倍、15倍至約20倍、20倍至約25倍、25倍至約30倍、30倍至約35倍、35倍至約40倍、40倍至約45倍、45倍至約50倍、50倍至約100倍、100倍至約1,000倍、1,000倍至約10,000倍、10,000倍至約100,000倍、約10倍、15倍、20倍、25倍、30倍、35倍、40倍、45倍、50倍、100倍、1,000倍、10,000倍或約100,000倍之效力活化CD4+ T細胞。 宿主細胞
本文提供包含本發明之核酸或載體之宿主細胞。如本文所使用之術語「宿主細胞」係指可含有本發明所揭示之載體且能夠產生由核酸(例如mRNA、蛋白質)編碼之表現產物的任何類型之細胞。在一些態樣中，宿主細胞為黏附細胞或懸浮細胞，亦即在懸浮液中生長之細胞。在例示性態樣中，宿主細胞為經培養細胞或直接自例如人類之生物體分離之原代細胞。宿主細胞可具有任何細胞類型，可源自任何類型之組織，且可處於任何發育階段。
在例示性態樣中，細胞為真核細胞，包括但不限於酵母細胞、絲狀真菌細胞、原蟲細胞、藻類細胞、昆蟲細胞或哺乳動物細胞。該等宿主細胞描述於此項技術中。參見例如Frenzel等人, Front Immunol 4: 217 (2013)。在例示性態樣中，真核細胞為哺乳動物細胞。在例示性態樣中，哺乳動物細胞為非人類哺乳動物細胞。在一些態樣中，細胞為中國倉鼠卵巢(CHO)細胞及其衍生物(例如CHO-K1、CHO pro-3、CS9)、小鼠骨髓瘤細胞(例如NS0、GS-NS0、Sp2/0)、經工程改造而缺乏二氫葉酸還原酶(DHFR)活性之細胞(例如DUKX-X11、DG44)、人類胎腎293 (HEK293)細胞或其衍生物(例如HEK293T、HEK293-EBNA)、非洲綠猴腎細胞(例如COS細胞、VERO細胞)、人類子宮頸癌細胞(例如HeLa)、人類骨肉瘤上皮細胞U2-OS、腺癌人類肺泡基底上皮細胞A549、人類纖維肉瘤細胞HT1080、小鼠腦瘤細胞CAD、胚胎癌細胞P19、小鼠胚胎纖維母細胞NIH 3T3、小鼠纖維母細胞L929、小鼠神經母細胞瘤細胞N2a、人類乳癌細胞MCF-7、視網膜母細胞瘤細胞Y79、人類視網膜母細胞瘤細胞SO-Rb50、人類肝癌細胞Hep G2、小鼠B骨髓瘤細胞J558L或幼倉鼠腎(BHK)細胞(Gaillet等人2007；Khan, Adv Pharm Bull 3(2): 257-263 (2013))。在一特定實施例中，宿主細胞為CS9 (一種CHO細胞株)。
出於擴增或複製載體之目的，在一些態樣中，宿主細胞為例如細菌細胞之原核細胞。
本發明亦提供包含本文所描述之至少一種宿主細胞的細胞群體。在一些態樣中，細胞群體為除不包含所描述載體中任一者之至少一種其他細胞之外亦含有包含該等載體之宿主細胞的雜族群。可替代地，在一些態樣中，細胞群體為實質上均質之群體，其中該群體包含主要包含該載體(例如基本上由該載體組成)之宿主細胞。在一些態樣中，該群體為純系細胞群體，其中該群體之所有細胞皆為包含載體之單一宿主細胞之純系，以使得該群體之所有細胞皆包含該載體。在本發明之例示性實施例中，細胞群體為包含宿主細胞之純系群體，該等宿主細胞包含如本文所描述之載體。 醫藥組合物
本文提供包含IL-21多肽之組合物、包含IL-21多肽之結合物、包含IL-21多肽及抗原結合蛋白之融合蛋白、包含抗原結合蛋白之結合物、包含本發明之抗原結合蛋白、本發明之核酸、載體或宿主細胞或其組合之融合蛋白。在一些態樣中，該等組合物包含呈經分離及/或經純化形式之本發明之IL-21多肽、抗原結合蛋白、結合物、融合蛋白、核酸、載體或宿主細胞或其組合。在一些態樣中，該組合物包含單一類型(例如相對於野生型IL-21多肽之突變結構/組合)之本發明之IL-21多肽、抗原結合蛋白、結合物、融合蛋白、核酸、載體或宿主細胞，或包含兩種或更多種不同類型之本發明之IL-21多肽、抗原結合蛋白、結合物、融合蛋白、核酸、載體或宿主細胞的組合。
在一些實施例中，該組合物包含例如經由在特定溫度(例如室溫)下穩定化例如IL-21多肽或融合蛋白、延長存放期、減少例如氧化蛋白酶介導之降解的降解、延長例如IL-21突變蛋白或融合蛋白之半衰期等來增強IL-21多肽、抗原結合蛋白、結合物、融合蛋白、核酸、載體或宿主細胞之化學物理特點的藥劑。在一些實施例中，該組合物包含作為異種部分或結合物部分之本文所揭示之藥劑中之任一者與視情況本發明之IL-21多肽、結合物、融合蛋白、核酸、載體或宿主細胞的混合物。
在一些實施例中，該組合物另外包含醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑。在一些實施例中，將如本發明所揭示之IL-21多肽、抗原結合蛋白、結合物、融合蛋白、核酸、載體或宿主細胞(在下文稱為「活性劑」)或其組合調配成包含該活性劑以及醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑之醫藥組合物。就此而言，本發明進一步提供包含活性劑(本發明之IL-21多肽、抗原結合蛋白、結合物、融合蛋白、核酸、載體或宿主細胞中之任一者)之醫藥組合物，該醫藥組合物適用於投與例如哺乳動物之個體。
在一些實施例中，活性劑係以適用於投與個體之純度位準存在於醫藥組合物中。在一些實施例中，活性劑之純度位準為至少約90%、約91%、約92%、約93%、約94%、約95%、約96%、約97%、約98%或約99%，及醫藥學上可接受之稀釋劑、載劑或賦形劑。在一些實施例中，該組合物含有濃度為約0.001 mg/ml至約200.0 mg/ml之活性劑。
在例示性態樣中，醫藥組合物包含醫藥學上可接受之載劑。如本文所使用之術語「醫藥學上可接受之載劑」包括但不限於諸如磷酸鹽緩衝鹽水溶液、水、諸如油/水或水/油乳液之乳液及各種類型之潤濕劑的標準醫藥載劑中的任一者。該術語亦涵蓋經美國聯邦政府管制機構(regulatory agency of the US Federal government)批准或美國藥典(US Pharmacopeia)中列出供包括人類之動物使用之任何藥劑。
醫藥組合物可包含任何醫藥學上可接受之成分，包括例如酸化劑、添加劑、吸附劑、氣溶膠推進劑、排氣劑、鹼化劑、防結塊劑、抗凝劑、抗微生物防腐劑、抗氧化劑、抗菌防腐藥、鹼、黏結劑、緩衝劑、螯合劑、包衣劑、著色劑、除濕劑、清潔劑、稀釋劑、消毒劑、崩解劑、分散劑、溶解增強劑、染料、柔軟劑、乳化劑、乳液穩定劑、填充劑、成膜劑、風味增強劑、調味劑、流動增強劑、膠凝劑、成粒劑、保濕劑、潤滑劑、黏膜黏著劑、軟膏基劑、軟膏、油性媒劑、有機鹼、片劑基劑、顏料、塑化劑、拋光劑、防腐劑、鉗合劑、皮膚滲透劑、增溶劑、溶劑、穩定劑、栓劑基劑、界面活性劑(surface active agent/surfactant)、懸浮劑、甜味劑、治療劑、增稠劑、張力劑、毒性劑、黏度增加劑、吸水劑、水可混溶性共溶劑、水軟化劑或潤濕劑。參見例如以全文引用之方式併入之the Handbook of Pharmaceutical Excipients, 第三版, A. H. Kibbe (Pharmaceutical Press, London, U K, 2000). 以全文引用之方式併入之Remington's Pharmaceutical Sciences, 第十六版, E. W. Martin (Mack Publishing公司, Easton, Pa., 1980)。
在一些實施例中，醫藥組合物包含在所採用之劑量及濃度下對接受者無毒之調配材料。在具體實施例中，醫藥組合物包含活性劑及一或多種醫藥學上可接受之鹽、多元醇、界面活性劑、滲透平衡劑、張力劑、抗氧化劑、抗生素、抗黴劑、增積劑、凍乾保護劑、消泡劑、螯合劑、防腐劑、著色劑、鎮痛劑或另外醫藥劑。在例示性態樣中，除包括但不限於醫藥學上可接受之鹽、滲透平衡劑(張力劑)、抗氧化劑、抗生素、抗黴劑、增積劑、凍乾保護劑、消泡劑、螯合劑、防腐劑、著色劑及鎮痛劑之一或多種賦形劑之外，醫藥組合物視情況亦包含一或多種多元醇及/或一或多種界面活性劑。
在一些實施例中，醫藥組合物可含有用以修改、維持或保持例如組合物之pH、滲透壓、黏度、透明度、顏色、等張性、氣味、無菌性、穩定性、溶解或釋放、吸附或滲透速率之調配材料。在該等實施例中，適合的調配材料包括但不限於胺基酸(諸如甘胺酸、麩醯胺酸、天冬醯胺酸、精胺酸或離胺酸)；抗微生物劑；抗氧化劑(諸如抗壞血酸、亞硫酸鈉或亞硫酸氫鈉)；緩衝劑(諸如硼酸鹽、碳酸氫鹽、Tris-HCl、檸檬酸鹽、磷酸鹽或其他有機酸)；增積劑(諸如甘露糖醇或甘胺酸)；螯合劑(諸如乙二胺四乙酸(EDTA))；複合劑(諸如咖啡鹼、聚乙烯吡咯啶酮、β-環糊精或羥丙基-β-環糊精)；填充劑；單醣；雙醣；及其他碳水化合物(諸如葡萄糖、甘露糖或糊精)；蛋白質(諸如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白)；著色劑、調味劑及稀釋劑；乳化劑；親水性聚合物(諸如聚乙烯吡咯啶酮)；低分子量多肽；成鹽相對離子(諸如鈉)；防腐劑(諸如氯化苄烷銨、苯甲酸、柳酸、硫柳汞、苯乙醇、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸丙酯、氯己定、山梨酸或過氧化氫)；溶劑(諸如甘油、丙二醇或聚乙二醇)；糖醇(諸如甘露糖醇或山梨糖醇)；懸浮劑；界面活性劑或潤濕劑(諸如普洛尼克(pluronic)、PEG、去水山梨醇酯、諸如聚山梨醇酯20之聚山梨醇酯、聚山梨醇酯、曲拉通(triton)、緩血酸胺、卵磷脂、膽固醇、泰洛沙泊(tyloxapal))；穩定性增強劑(諸如蔗糖或山梨糖醇)；張力增強劑(諸如鹼金屬鹵化物，較佳地氯化鈉或氯化鉀，甘露糖醇山梨糖醇)；遞送媒劑；稀釋劑；賦形劑及/或醫藥佐劑。參見REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, 第18版, (A. R. Genrmo編), 1990, Mack Publishing公司。
醫藥組合物可經調配以達成生理上相容之pH。在一些實施例中，醫藥組合物之pH可例如在約4或約5及約8.0或約4.5及約7.5或約5.0至約7.5之間。在例示性實施例中，醫藥組合物之pH係在5.5與7.5之間。 投與途徑
關於本發明，活性劑或包含其之醫藥組合物可經由任何適合的投與途徑來投與個體。舉例而言，活性劑可經由非經腸、經鼻、經口、經肺、局部、經陰道或經直腸投與來投與個體。以下關於投與途徑之論述僅為了說明例示性實施例而提供且不應視為以任何方式限制範疇。
適用於非經腸投與之調配物包括可含有抗氧化劑、緩衝劑、抑菌劑及使調配物與預期接受者之血液等張之溶質的水性及非水性等張無菌注射溶液；及可包括懸浮劑、增溶劑、增稠劑、穩定劑及防腐劑之水性及非水性無菌懸浮液。術語「非經腸」意謂不通過消化管，但利用諸如皮下、肌內、脊椎內或靜脈內之一些其他途徑。本發明之活性劑可與諸如以下之於醫藥載劑中之生理學上可接受之稀釋劑一起投與：無菌液體或液體混合物，包括含或不含添加醫藥學上可接受之界面活性劑，諸如肥皂或清潔劑；懸浮劑，諸如果膠、卡波姆(carbomer)、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素或羧甲基纖維素；或乳化劑及其他醫藥佐劑的水；鹽水；水性右旋糖及相關糖溶液；醇，諸如乙醇或十六醇；二醇，諸如丙二醇或聚乙二醇；二甲亞碸；甘油；縮酮，諸如2,2-二甲基-153-二氧雜環戊烷-4-甲醇；醚；聚(乙二醇) 400；油；脂肪酸；脂肪酸酯或甘油酯或乙醯化脂肪酸甘油酯。
可用於非經腸調配物中之油包括石油、動物油、植物油或合成油。油之具體實例包括花生、大豆、芝麻、棉籽、玉米、橄欖、石蠟脂及礦物質。用於非經腸調配物中之適合的脂肪酸包括油酸、硬脂酸及異硬脂酸。油酸乙酯及肉豆蔻酸異丙酯為適合的脂肪酸酯之實例。
用於非經腸調配物中之適合的肥皂包括脂肪鹼金屬、銨及三乙醇胺鹽，且適合的清潔劑包括(a)陽離子清潔劑，諸如二甲基二烷基銨鹵化物及烷基吡啶鎓鹵化物；(b)陰離子清潔劑，諸如烷基、芳基及烯烴磺酸鹽、烷基、烯烴、醚及單甘油酯硫酸鹽及磺基丁二酸鹽；(c)非離子清潔劑，諸如氧化脂肪胺、脂肪酸烷醇醯胺及聚氧乙烯聚丙烯共聚物；(d)兩性清潔劑，諸如烷基-β-胺基丙酸鹽及2-烷基-咪唑啉四級銨鹽；及其混合物。
在一些實施例中，非經腸調配物含有約0.5重量%至約25重量%呈溶液狀態之本發明之活性劑。可使用防腐劑及緩衝劑。為了使注射部位之刺激降至最低或消除，該等組合物可含有親水親油平衡值(hydrophile-lipophile balance，HLB)為約12至約17之一或多種非離子界面活性劑。該等調配物中界面活性劑之數量將通常在約5重量%至約15重量%範圍內。適合的界面活性劑包括諸如去水山梨醇單油酸酯之聚乙二醇去水山梨醇脂肪酸酯及藉由將環氧丙烷與丙二醇縮合而形成之環氧乙烷與疏水性鹼之高分子量加合物。在一些態樣中，非經腸調配物存在於諸如安瓿及小瓶之單位劑量或多劑量密封容器中，且可在冷凍乾燥(凍乾)條件下儲存，僅需要在即將使用之前添加用於注射之例如水之無菌液體賦形劑。在一些態樣中，即用型注射溶液及懸浮液由先前所描述之種類之無菌散劑、粒劑及錠劑製備。
可注射調配物係根據本發明。關於可注射組合物之有效醫藥載劑之要求為一般熟習此項技術者熟知的(參見例如Pharmaceutics and Pharmacy Practice, J. B. Lippincott公司, Philadelphia, Pa., Banker及Chalmers編, 第238-250頁(1982)，及ASHP Handbook on Injectable Drugs, Toissel, 第4版, 第622-630頁(1986))。 劑量
咸信本發明之活性劑可用於如本文所描述經由IL-21信號傳導更特異性活化CD8+ T細胞之方法中，且因此咸信其可用於治療或預防例如癌症之一或多種疾病之方法中。出於本發明之目的，活性劑之投與量或劑量應足以在合理時間範圍內在個體或動物中實現例如治療或預防反應。舉例而言，本發明之活性劑之劑量應足以在距投與時間約1至4分鐘、1至4小時或1至4週或更長時間，例如5至20週或更多週之時段內治療如本文所描述之癌症。在某些實施例中，時段可甚至為更長的。劑量將藉由特定活性劑之功效及動物(例如人類)之病況以及待治療之動物(例如人類)之體重來測定。
用於確定投與劑量之許多分析為此項技術中已知的。出於本文之目的，可使用包含將在向一組哺乳動物中之哺乳動物投與既定劑量之本發明之活性劑之後的癌症治療程度進行比較之分析以確定向哺乳動物投與之起始劑量，給予各組不同劑量之活性劑。在投與特定劑量之後的癌症治療程度可由例如小鼠異種移植模型中活性劑之細胞毒性或用活性劑達成之腫瘤消退程度表示。量測融合蛋白之細胞毒性之方法及分析腫瘤消退之方法係此項技術中已知的。
本發明之活性劑之劑量亦將藉由可能伴隨投與本發明之特定活性劑的任何不利副作用的存在、性質及程度來確定。通常，主治醫師將考慮諸如年齡、體重、一般健康狀況、飲食、性別、待投與之本發明之活性劑、投與途徑及所治療病況之嚴重程度之多種因素來決定用於治療各個別患者之本發明之活性劑的劑量。舉例而言且不意欲限制本發明，本發明之活性劑之劑量可為約0.000001至約1 g/kg所治療個體之體重/天、約0.000001至約0.001 g/kg體重/天或約0.01 mg至約1 g/kg體重/天。 受控釋放型調配物
在一些實施例中，本文所描述之活性劑可經改質成藥物儲槽形式，以使得其中本發明之活性劑經釋放至投與該活性劑之身體中之方式相對於時間及體內位置受到控制(參見例如美國專利第4,450,150號)。本發明之活性劑之藥物儲槽形式可為例如包含活性劑及諸如聚合物之多孔或無孔材料的植入式組合物，其中活性劑經該材料及/或無孔材料降解物囊封或擴散在整個該材料及/或無孔材料降解物中。隨後，將藥物儲槽植入個體體內所需位置中，且以預定速率自植入物中釋放活性劑。
在某些態樣中，包含活性劑之醫藥組合物經改質以具有任何類型之活體內釋放曲線。在一些態樣中，醫藥組合物為立即釋放型、受控釋放型、持續釋放型、延長釋放型、延遲釋放型或雙相釋放型調配物。調配肽以用於受控釋放之方法係此項技術中已知的。參見例如Qian等人, J Pharm 374: 46-52 (2009)及國際專利申請公開案第WO 2008/130158號、第WO2004/033036號、第WO2000/032218號及第WO 1999/040942號。
本發明之組合物可進一步包含例如微胞或脂質體或一些其他經囊封形式，或可以延長釋放型形式投與以提供延長儲存及/或遞送效果。 組合
在一些實施例中，IL-21多肽或靶向細胞介素構築體組合物與細胞療法(例如授受性細胞療法、T細胞療法，諸如CAR-T細胞療法、TCR-T細胞療法、腫瘤浸潤淋巴球(TIL)療法)、癌症疫苗、抗血管生成劑、抗體藥物結合物、化學治療劑、免疫刺激劑(例如IL-2)、免疫激活劑(例如IL-2)或免疫檢查點抑制劑(ICI)組合投與。在一些實施例中，化學治療劑為激酶抑制劑、抗代謝物、細胞毒素或細胞生長抑制劑、抗激素劑、基於鉑之化學治療劑、甲基轉移酶抑制劑、抗體或抗癌肽。
在一些情況下，本文所揭示之IL-21多肽係用於治療對使用IL-2之療法(例如促進個體之一或多個細胞中之IL-2信號傳導的療法)沒有反應之腫瘤類型或增強與該等腫瘤類型相關之治療功效。在一些情況下，IL-21多肽增強與對靶向PD-1之療法(例如抑制個體之一或多個細胞中之PD-1信號傳導的療法)沒有反應之腫瘤類型相關之治療功效。在一些情況下，IL-21多肽增強與對包含IL-2之療法及靶向PD-1之療法兩者均沒有反應之腫瘤類型相關之治療功效。舉例而言，耐PD-1腫瘤與記憶T細胞數目減少及經耗竭T細胞數目增加相關，此表明使用本發明之IL-21多肽可改善此等腫瘤之治療結果。
在一些實施例中，免疫檢查點抑制劑靶向PD-L1、PD-1、CTLA-4、CEACAM、LAIR1、CD160、2B4、CD80、CD86、CD276、VTCN1、HVEM、KIR、A2AR、I類MHC、II類MHC、GALS、腺苷、TGFR、OX40、CD137、CD40、CD47、TREM1、TREM2、HLA-G、CCR4、CCR8、CD39、CD73、IDO、CSF1R、TIM-3、BTLA、VISTA、LAG-3、TIGIT、IDO、MICA/B、LILRB4、SIGLEC-15或精胺酸酶，包括但不限於PD-1抑制劑(例如抗PD-1抗體)、PD-L1抑制劑(例如抗PD-L1抗體)或CTLA-4抑制劑(例如抗CTLA-4抗體)。
抗PD-1抗體之實例包括但不限於派姆單抗(pembrolizumab)、納武單抗(nivolumab)、西米單抗(cemiplimab)、賽帕利單抗(zimberelimab) (Arcus)、薩桑利單抗(sasanlimab) (Pfizer)、JTX-4014、斯巴達珠單抗(spartalizumab) (PDR001；Novartis)、卡瑞利珠單抗(camrelizumab) (SHR1210；Jiangsu HengRui Medicine)、斯迪利單抗(sintilimab) (IBI308；Innovent及Eli Lilly)、替雷利珠單抗(tislelizumab) (BGB-A317)、特瑞普利單抗(toripalimab) (JS 001)、多斯利單抗(dostarlimab) (TSR-042、WBP-285)、INCMGA00012 (MGA012)、AMP-224及AMP-514 (MEDI0680)。抗PD-L1抗體之實例包括但不限於阿特珠單抗(atezolizumab)、阿維魯單抗(avelumab)、德瓦魯單抗(durvalumab)、KN035及CK-301 (Checkpoint Therapeutics)。PD-L1抑制劑(非基於抗體)之實例包括但不限於AUNP12、CA-170及BMS-986189。抗CTLA-4抗體之實例包括但不限於伊匹單抗(ipilimumab)、曲美木單抗(tremelimumab)、BMS-986218、BMS-986249、BMS-986288、HBM4003、ONC-392、KN044、ADG116、ADU-1604、AGEN1181、AGEN1884、MK-1308及REGN4659。
在一些實施例中，IL-21多肽或其融合蛋白與靶向腫瘤之抗體組合投與。在一些實施例中，靶向腫瘤之抗體對癌症抗原或腫瘤抗原具有特異性。在一些實施例中，靶向腫瘤之抗體為美羅華(Rituxan)或西妥昔單抗(cetuximab)。
本發明之IL-21多肽可與另一細胞介素療法組合投與。在一些實施例中，細胞介素療法包含IL-2或其任何功能變異體或包含IL-2或其功能變異體之目標IL-2構築體(例如描述於國際專利申請案第PCT/US20/36454號及第PCT/US21/56312號中之IL-2或其任何功能變異體或目標IL-2構築體，該等案中之各者特此以全文引用之方式併入)。在一些實施例中，IL-21多肽或目標細胞介素構築體組合物與IL-2或其功能變異體、包含IL-2或其功能變異體之目標IL-2構築體，諸如描述於國際專利申請案第PCT/US20/36454號及第PCT/US21/56312號中之IL-2或其功能變異體、目標IL-2構築體組合投與。 套組
本發明另外提供包含本發明之IL-21多肽或其功能片段或變異體、抗原結合蛋白、結合物、融合蛋白、核酸、載體或宿主細胞或其組合之套組。在例示性態樣中，該套組在容器中包含本發明之至少一種IL-21多肽或其功能片段或變異體、抗原結合蛋白、結合物、融合蛋白、核酸、載體或宿主細胞或其組合。在例示性態樣中，本發明之至少一種IL-21多肽或其功能片段或變異體、抗原結合蛋白、結合物、融合蛋白、核酸、載體或宿主細胞以單位劑量提供於套組中。出於本文之目的，「單位劑量」係指分散於適合的載劑中之離散量。在例示性態樣中，單位劑量為足以向個體提供例如癌症治療之所需效果的量。在例示性態樣中，該套組包含若干單位劑量，例如一週或一月供應之單位劑量，其中之各者視情況經個別地封裝或另外與其他單位劑量分開。在一些實施例中，套組/單位劑量之組件經封裝有用於投與患者之說明書。在一些實施例中，該套組包含例如針及注射器及其類似物之用於投與患者之一或多個裝置。在一些態樣中，本發明之至少一種IL-21多肽或其功能片段或變異體、抗原結合蛋白、結合物、融合蛋白、核酸、載體或宿主細胞或其組合經預封裝於例如注射器、靜脈袋等之備用形式中。在例示性態樣中，備用形式係用於單次使用。在例示性態樣中，該套組包含本發明之至少一種IL-21多肽或其功能片段或變異體、抗原結合蛋白、結合物、融合蛋白、核酸、載體或宿主細胞之多種單次使用、備用形式。在一些態樣中，該套組進一步包含其他治療劑或診斷劑或醫藥學上可接受之載劑(例如溶劑、緩衝劑、稀釋劑等)，包括本文所描述之載劑中之任一者。 製造方法
如本文所描述之IL-21多肽或其功能片段或變異體可藉由此項技術中已知之方法獲得。重新合成多肽之適合的方法描述於例如Chan等人, Fmoc Solid Phase Peptide Synthesis, Oxford University Press, Oxford, United Kingdom, 2005；Peptide and Protein Drug Analysis, 編者Reid, R., Marcel Dekker公司, 2000；Epitope Mapping, 編者Westwood等人, Oxford University Press, Oxford, United Kingdom, 2000；及美國專利第5,449,752號中。本文闡述製造本發明肽之另外例示性方法。
在一些實施例中，如本文所描述之IL-21多肽或其功能片段或變異體可由諸如Synpep (Dublin, Calif.)、Peptide Technologies公司(Gaithersburg, Md.)、Multiple Peptide Systems (San Diego, Calif.)、Peptide 2.0公司(Chantilly, Va.)及American Peptide公司(Sunnyvale, Calif.)之公司商業地合成。就此而言，IL-21突變蛋白可為合成、重組、經分離及/或經純化的。
此外，在一些態樣中，如本文所描述之IL-21多肽或其功能片段或變異體可使用標準重組方法使用編碼肽之胺基酸序列之核酸以重組方式產生。參見例如Sambrook等人, Molecular Cloning: A Laboratory Manual .第3版, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, N.Y. 2001；及Ausubel等人, Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates及John Wiley & Sons, N Y, 1994。
本文提供製造如本文所描述之IL-21多肽或其功能片段或變異體或如本文所描述之包含IL-21多肽或其功能片段或變異體之靶向細胞介素構築體的方法。在例示性實施例中，該方法包含培養本發明之宿主細胞以表現如本文所描述之IL-21多肽或其功能片段或變異體或靶向細胞介素構築體，及收取經表現之IL-21多肽或其功能片段或變異體。
本文亦提供製造包含如本文所描述之IL-21多肽或其功能片段或變異體或靶向細胞介素構築體之融合蛋白的方法。在例示性實施例中，該方法包含培養本發明之宿主細胞以表現融合蛋白及收取經表現之融合蛋白。
在例示性實施例中，該方法包含培養包含編碼如本文所描述之IL-21多肽或其功能片段或變異體或融合蛋白之核酸的宿主細胞，以便表現IL-21多肽或其功能片段或變異體或融合蛋白。宿主細胞可為本文所描述之宿主細胞中之任一者。在例示性態樣中，宿主細胞選自由以下組成之群：CHO細胞、NS0細胞、COS細胞、VERO細胞及BHK細胞。在例示性態樣中，培養宿主細胞之步驟包含在生長培養基中培養宿主細胞以支援宿主細胞之生長及擴增。在例示性態樣中，生長培養基以適時方式增加細胞密度、培養物活力及生產率。在例示性態樣中，生長培養基包含胺基酸、維生素、無機鹽、葡萄糖及血清作為生長因子、激素及附著因子之來源。在例示性態樣中，生長培養基為由胺基酸、維生素、痕量元素、無機鹽、脂質及胰島素或胰島素樣生長因子組成之完全化學性界定培養基。除營養物之外，生長培養基亦有助於維持pH及滲透壓。若干生長培養基係市售的且描述於此項技術中。參見例如Arora, 「Cell Culture Media: A Review」 MATER METHODS 3:175 (2013)。
在例示性態樣中，製造本發明之IL-21多肽或其功能片段或變異體或融合蛋白之方法包含在饋料培養基中培養宿主細胞。在例示性態樣中，該方法包含在饋料培養基中以饋料批式模式進行培養。重組蛋白產生方法係此項技術中已知的。參見例如Li等人, 「Cell culture processes for monoclonal antibody production」 MAbs 2(5): 466-477 (2010)。
製造IL-21多肽或其功能片段或變異體或融合蛋白之方法可包含一或多個用於自細胞培養物或其上清液中純化多肽且較佳地回收經純化蛋白質之步驟。在例示性態樣中，該方法包含一或多個例如親和層析(例如蛋白A親和層析)、離子交換層析、疏水性相互作用層析之層析步驟。在例示性態樣中，該方法包含使用蛋白A親和層析樹脂純化蛋白質。
在例示性實施例中，該方法進一步包含用於調配經純化蛋白質等之步驟，藉此獲得包含經純化蛋白質之調配物。該等步驟描述於Formulation and Process Development Strategies for Manufacturing, 編者Jameel及Hershenson, John Wiley & Sons公司(Hoboken, N.J.), 2010中。 其他實施例
本發明係關於以下實施例。在整個此部分中，術語「實施例」縮寫為「E」，接著為序數。舉例而言，「E1」等效於實施例1。
E1.    一種IL-21多肽或其功能片段或變異體，其包含與SEQ ID NO: 1具有至少80%序列一致性之多肽序列，其中該IL-21多肽之等電點相較於具有SEQ ID NO: 1之序列之野生型IL-21蛋白之等電點低至少約0.6個單位至約5個單位。
E2.    如實施例1之IL-21多肽，其中SEQ ID NO: 1之該等電點為約9.42。
E3.    如實施例1或2之IL-21多肽，其中該IL-21多肽之等電點為約7.12至約8.72。
E4.    如實施例1至3中任一例之IL-21多肽，其中該多肽提供相較於該野生型IL-21蛋白改善之暴露，如相對於該野生型IL-21之曲線下面積(AUC)以等效濃度投與個體時該多肽之曲線下面積(AUC)大至少約1.5倍所量測。
E5.    如實施例1至4中任一例之IL-21多肽，其中該IL-21多肽包含在選自由以下組成之群之一或多個位置之突變：SEQ ID NO: 1之K56、T81、N82、A83、G84、R85、R86、Q87、K88、H89、R90、L91及T92。
E6.    如實施例5之IL-21多肽，其包含在選自由以下組成之群之位置之突變：SEQ ID NO: 1之R5、I8、R9、R11、Q12、I14、D15、D18、Q19、Y23、R65、S70、K72、K73、K75、R76、K77、S80、Q116及K117。
E7.    如實施例1至6中任一例之IL-21多肽，其包含與選自由以下組成之群之序列至少約85%、約90%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%或約100%一致之胺基酸序列：SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 9、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 11、SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO: 13、SEQ ID NO: 14、SEQ ID NO: 15及SEQ ID NO: 23 - SEQ ID NO: 40。
E8.    如實施例1至7中任一例之IL-21多肽，其包含與選自由以下組成之群之序列至少約85%、約90%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%或約100%一致之胺基酸序列：SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 20、SEQ ID NO: 21及SEQ ID NO: 41 - SEQ ID NO: 93。
E9.    一種靶向細胞介素構築體，其包含如實施例1至8中任一例之IL-21多肽或其功能片段或變異體及抗體或其抗原結合片段。
E10.   如實施例9之靶向細胞介素構築體，其中該抗體或其抗原結合片段特異性結合至CD8+ T細胞。
E11.   如實施例9或10之靶向細胞介素構築體，其中該抗體或其抗原結合片段特異性結合至以下中之至少一者：CD8 α、CD8αα或CD8αβ。
E12.   如實施例9或10之靶向細胞介素構築體，其中該抗體或其抗原結合片段特異性結合至CD8 β。
E13.   一種靶向細胞介素構築體，其包含： a)包含胺基酸序列與SEQ ID NO: 1至少80%一致之IL-21多肽或其功能片段或變異體；及  b)特異性結合至CD8 α、CD8αα或CD8αβ中之至少一者之抗體或其抗原結合片段。
E14.   一種靶向細胞介素構築體，其包含： a)包含胺基酸序列與SEQ ID NO: 1至少80%一致之IL-21多肽或其功能片段或變異體；及  b)特異性結合至CD8 β之抗體或其抗原結合片段。
E15.   如實施例13或14之靶向細胞介素構築體，其中該IL-21多肽包含在SEQ ID NO: 1之一或多個胺基酸位置之突變。
E16.   如實施例13至15中任一例之靶向細胞介素構築體，其中該IL-21多肽包含在選自由以下組成之群之一或多個位置之突變：SEQ ID NO: 1之K56、T81、N82、A83、G84、R85、R86、Q87、K88、H89、R90、L91及T92。
E17.   如實施例13至16中任一例之靶向細胞介素構築體，其中該IL-21多肽包含在選自由以下組成之群之位置之突變：SEQ ID NO: 1之R5、I8、R9、R11、Q12、I14、D15、D18、Q19、Y23、R65、S70、K72、K73、K75、R76、K77、S80、Q116及K117。
E18.   如實施例13至17中任一例之靶向細胞介素構築體，其中該IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與選自由以下組成之群之序列至少約85%、約90%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%或約100%一致之胺基酸序列：SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 9、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 11、SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO: 13、SEQ ID NO: 14或SEQ ID NO: 15及SEQ ID NO: 23 - SEQ ID NO: 40。
E19.   如實施例13至18中任一例之靶向細胞介素構築體，其中該IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與選自由以下組成之群之序列至少約85%、約90%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%或約100%一致之胺基酸序列：SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 20、SEQ ID NO: 21及SEQ ID NO: 41 - SEQ ID NO: 93。
E20.   如實施例13至19中任一例之靶向細胞介素構築體，其中該構築體以相較於NK細胞或CD4+ T細胞之活化至少約10倍或更大之效力活化CD8+ T細胞。
E21.   如實施例13至20中任一例之靶向細胞介素構築體，其中該構築體以相較於NK細胞或CD4+ T細胞之活化大至少約10倍至約100,000倍之效力活化CD8+ T細胞。
E22.   如實施例13至21中任一例之靶向細胞介素構築體，其中該抗體或其抗原結合片段包含： i)自N端至C端排列包含以下之第一多肽：  可變輕鏈(VL)胺基酸序列，及 a)   輕鏈恆定區胺基酸序列(CL1)； ii)自N端至C端排列包含以下之第二多肽： a)   可變重鏈(VH)胺基酸序列， b)   重鏈CH1恆定區胺基酸序列， c)   鉸鏈區胺基酸序列， d)   重鏈CH2恆定區胺基酸序列，及 e)   重鏈CH3恆定區胺基酸序列；及 iii)自N端至C端排列包含以下之第三多肽： a)   鉸鏈區胺基酸序列， b)   重鏈CH2恆定區胺基酸序列，及 c)   重鏈CH3恆定區胺基酸序列， 其中該第二多肽及該第三多肽之各CH2域及CH3域形成Fc域。
E23.   如實施例22之靶向細胞介素構築體，其中該第三多肽自N端至C端排列包含以下： a)   可變重鏈(VH)胺基酸序列， b)   重鏈CH1恆定區胺基酸序列， c)   鉸鏈區胺基酸序列， d)   重鏈CH2恆定區胺基酸序列， e)   重鏈CH3恆定區胺基酸序列， 其中該抗體或其抗原結合片段進一步包含： iv)自N端至C端排列包含以下之第四多肽： a)   可變輕鏈(VL)胺基酸序列，及 b)   輕鏈恆定胺基酸序列(CL1)。
E24.   如實施例22或23之靶向細胞介素構築體，其中該IL-21多肽或其功能片段或變異體及該抗體或其抗原結合片段彼此可操作地連接。
E25.   如實施例24之靶向細胞介素構築體，其中該IL-21多肽或其功能片段或變異體與該抗體或其抗原結合片段之N端或C端連接。
E26.   如實施例22至25中任一例之靶向細胞介素構築體，其中該IL-21多肽或其功能片段或變異體與該第二多肽或該第三多肽之該C端結合。
E27.   如實施例9至26中任一例之靶向細胞介素構築體，其包含該IL-21多肽之至少一個分子。
E28.   如實施例22至27中任一例之靶向細胞介素構築體，其中該Fc域為人類IgG Fc域。
E29.   如實施例22至28中任一例之靶向細胞介素構築體，其中該Fc域為IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc域。
E30.   如實施例28或29之靶向細胞介素構築體，其中該Fc域包含促進異二聚化之一或多個修飾。
E31.   如實施例22至30中任一例之靶向細胞介素構築體，其中該第二多肽在該CH2域或該CH3域中包含杵修飾，且該第三多肽在該CH2域或該CH3域中包含臼修飾；或其中該第三多肽在該CH2域或該CH3域中包含杵修飾，且該第二多肽在該CH2或該CH3中包含臼修飾。
E32.   如實施例22至31中任一例之靶向細胞介素構築體，其中該第二多肽及該第三多肽中之至少一者包含以下突變：根據EU索引編號之L234A、L235A及G237A。
E33.   一種靶向細胞介素構築體，其包含： a)包含胺基酸序列與SEQ ID NO: 1至少80%一致之IL-21多肽或其功能片段或變異體；及 b)包含第一抗原結合臂及第二抗原結合臂之抗體或其抗原結合片段，其中該第一抗原結合臂及該第二抗原結合臂結合至兩種不同抗原，其中該第一抗原結合臂及該第二抗原結合臂中之至少一者特異性結合至CD8 α、CD8αα、CD8αβ。
E34.   一種靶向細胞介素構築體，其包含： a)包含胺基酸序列與SEQ ID NO: 1至少80%一致之IL-21多肽或其功能片段或變異體；及 b)包含第一抗原結合臂及第二抗原結合臂之抗體或其抗原結合片段，其中該第一抗原結合臂及該第二抗原結合臂結合至兩種不同抗原，其中該第一抗原結合臂及該第二抗原結合臂中之至少一者特異性結合至CD8 β。
E35.   如實施例33或34之靶向細胞介素構築體，其中該構築體以相較於NK細胞或CD4+ T細胞之活化至少約10倍或更大之效力活化CD8+ T細胞。
E36.   如實施例34或35之靶向細胞介素構築體，其中該構築體以相較於NK細胞或CD4+ T細胞之活化大至少約10倍至約100,000倍之效力活化CD8+ T細胞。
E37.   如實施例34至36中任一例之靶向細胞介素構築體，其中該IL-21多肽或其功能片段或其變異體包含在選自由以下組成之群之位置之突變：SEQ ID NO: 1之K56、T81、N82、A83、R85、G84、R86、Q87、K88、H89、R90、L91及T92。
E38.   如實施例34至37中任一例之靶向細胞介素構築體，其中該IL-21多肽或其功能片段或其變異體包含在選自由以下組成之群之位置之突變：SEQ ID NO: 1之R5、I8、R9、R11、Q12、I14、D15、D18、Q19、Y23、R65、S70、K72、K73、K75、R76、K77、S80、Q116及K117。
E39.   如實施例34至38中任一例之靶向細胞介素構築體，其中該IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與選自由以下組成之群之序列至少約85%、約90%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%或約100%一致之胺基酸序列：SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 9、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 11、SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO: 13、SEQ ID NO: 14、SEQ ID NO: 15及SEQ ID NO: 23 - SEQ ID NO: 40。
E40.   如實施例34至39中任一例之靶向細胞介素構築體，其中該IL-21多肽或其功能片段或變異體包含與選自由以下組成之群之序列至少約85%、約90%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%或約100%一致之胺基酸序列：SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 20、SEQ ID NO: 21及SEQ ID NO: 41 - SEQ ID NO:93。
E41.   一種聚核苷酸，其編碼如實施例1至8中任一例之IL-21多肽或其功能片段或變異體。
E42.   一種聚核苷酸，其編碼如實施例9至40中任一例之包含IL-21多肽或其功能片段或變異體及抗體或其抗原結合片段之靶向細胞介素構築體，該聚核苷酸包含該IL-21多肽之編碼序列及該抗體或其抗原結合片段之編碼序列。
E43.   一種載體，其包含如實施例41或42之聚核苷酸。
E44.   一種宿主細胞，其包含如實施例41或42之聚核苷酸或如實施例43之載體。
E45.   一種醫藥組合物，其包含如實施例1至8中任一例之IL-21多肽或其功能片段或變異體及醫藥學上可接受之載劑。
E46.   一種醫藥組合物，其包含如實施例9至40中任一例之靶向細胞介素構築體及醫藥學上可接受之載劑。
E47.   一種用於選擇性活化CD8+ T細胞之方法，其中該方法包含使包含CD8+ T細胞、CD4+ T細胞及NK細胞之細胞群體與如實施例9至40中任一例之靶向細胞介素構築體接觸。
E48.   如實施例47之方法，其中選擇性活化包含在該細胞群體中相較於NK細胞或CD4+ T細胞之活化以至少約10倍或更大之效力活化CD8+ T細胞。
E49.   如實施例47或48之方法，其中選擇性活化包含在該細胞群體中相較於NK細胞或CD4+ T細胞之活化以大至少約10倍至約100,000倍之效力活化CD8+ T細胞。
E50.   如實施例47至49中任一例之方法，其中CD8+ T細胞之該選擇性活化導致該細胞群體中之該等CD8+ T細胞之STAT3磷酸化相較於該等NK細胞或CD4+ T細胞之該STAT3磷酸化增加。
E51.   一種治療個體之疾病之方法，該方法包含投與如實施例1至8中任一例之IL-21多肽或其功能片段或變異體、如實施例9至40中任一例之靶向細胞介素構築體或如實施例45或46之醫藥組合物。
E52.   如實施例51之方法，其進一步包含另外治療劑。
E53.   如實施例51或52之方法，其中該疾病包含癌症或慢性感染。
E54.   如實施例51至53中任一例之方法，其中該疾病包含該癌症且其中該癌症為急性淋巴母細胞性白血病(ALL) (包括非T細胞ALL)、急性骨髓白血病、B細胞前淋巴球白血病、B細胞急性淋巴性白血病(「BALL」)、母細胞性漿細胞樣樹突狀細胞贅瘤、伯基特氏淋巴瘤、慢性淋巴球白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、慢性骨髓白血病、慢性或急性白血病、瀰漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、濾泡性淋巴瘤(FL)、毛細胞白血病、霍奇金氏病、惡性淋巴增生性病況、MALT淋巴瘤、套細胞淋巴瘤、邊緣區淋巴瘤、意義不明單株伽瑪球蛋白症(MGUS)、多發性骨髓瘤、骨髓化生不良及骨髓化生不良症候群、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、漿細胞增生性病症(包括無症狀骨髓瘤(鬱積型多發性骨髓瘤或惰性骨髓瘤))、漿母細胞性淋巴瘤、漿細胞樣樹突狀細胞贅瘤、漿細胞瘤(包括漿細胞惡液質；孤立骨髓瘤；孤立漿細胞瘤；髓外漿細胞瘤；及多發性漿細胞瘤)、POEMS症候群(亦稱為克羅-富克斯症候群；高槻病；及PEP症候群)、原發性縱隔大B細胞淋巴瘤(PMBC)、小細胞或大細胞濾泡性淋巴瘤、脾邊緣區淋巴瘤(SMZL)、全身澱粉樣蛋白輕鏈澱粉樣變性病、T細胞急性淋巴性白血病(「TALL」)、T細胞淋巴瘤、轉化型濾泡性淋巴瘤或瓦爾登斯特倫巨球蛋白血症、套細胞淋巴瘤(MCL)、轉化型濾泡性淋巴瘤(TFL)、原發性縱隔B細胞淋巴瘤(PMBCL)、多發性骨髓瘤、毛細胞淋巴瘤/白血病、肺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺(NSCL)癌、細支氣管肺泡細胞肺癌、鱗狀細胞癌、肺腺癌、鱗狀肺癌、腹膜癌、頭頸癌、骨癌、胰臟癌、皮膚癌、頭頸癌、皮膚或眼內黑色素瘤、甲狀腺癌、子宮癌、胃腸癌、卵巢癌、直腸癌、肛門區癌、胃癌(stomach cancer/gastric cancer)、結腸癌、乳癌、子宮內膜癌、子宮癌、輸卵管癌、子宮頸癌、陰道癌、外陰癌、霍奇金氏病、食道癌、小腸癌、內分泌系統癌、甲狀腺癌、副甲狀腺癌、腎上腺癌、軟組織肉瘤、尿道癌、陰莖癌、前列腺癌、膀胱癌、腎或輸尿管癌、腎細胞癌、腎盂癌、間皮瘤、膀胱癌、肝癌、肝腫瘤、肝細胞癌、子宮頸癌、唾液腺癌、膽道癌、中樞神經系統(CNS)贅瘤、脊髓軸腫瘤、腦幹神經膠質瘤、多形性神經膠質母細胞瘤、星形細胞瘤、神經鞘瘤、室管膜瘤、神經管胚細胞瘤、腦脊髓膜瘤、鱗狀細胞癌、垂體腺瘤及尤文氏肉瘤，包括以上癌症中任一者之難治性型式，或以上癌症中一或多者之組合。
E55.   如實施例13至40中任一例之靶向細胞介素構築體，其中該抗體或抗原結合片段包含重鏈可變(VH)域及輕鏈可變(VL)域；且其中： (a)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 137之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 138之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 139之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 140之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 141之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 142之胺基酸序列之CDR-L3；  (b)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 149之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 150之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 151之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 152之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 153之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 154之胺基酸序列之CDR-L3；  (c)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 155之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 156之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 157之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 158之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 159之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 160之胺基酸序列之CDR-L3；  (d)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 161之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 162之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 163之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 164之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 165之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 166之胺基酸序列之CDR-L3；  (e)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 167之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 168之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 169之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 170之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 171之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 172之胺基酸序列之CDR-L3；  (f)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 173之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 174之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 175之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 176之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 177之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 178之胺基酸序列之CDR-L3；  (g)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 179之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 180之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 181之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之CDR-L3；  (h)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 143之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 144之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 145之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 146之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 147之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 148之胺基酸序列之CDR-L3； (i)該VH域包含：包含X 1X 2AIS (SEQ ID NO: 185)之胺基酸序列之CDR-H1，其中X 1為S、K、G、N、R、D、T或G，且其中X 2為Y、L、H或F；包含X 1X 2X 3PX 4X 5X 6X 7X 8X 9YX 10QKFX 11G (SEQ ID NO: 186)之胺基酸序列之CDR-H2，其中X 1為G或H，X 2為I或F，X 3為I、N或M，X 4為G、N、H、S、R、I或A，X 5為A、N、H、S、T、F或Y，X 6為A、D或G，X 7為T、E、K、V、Q或A，X 8為A或T，X 9為N或K，X 10為A或N，且X 11為Q或T；及包含X 1X 2X 3GX 4X 5LFX 6X 7(SEQ ID NO: 187)之胺基酸序列之CDR-H3，其中X 1為D或A，X 2為A、G、E、R、Y、K、N、Q、L或F，X 3為A、L、P或Y，X 4為I或L，X 5為R、A、Q或S，X 6為A或D，且X 7為D、E、A或S；且其中該VL域包含：包含X 1X 2SX 3X 4IX 5GX 6LN (SEQ ID NO: 188)之胺基酸序列之CDR-L1，其中X 1為R或G，X 2為A或T，X 3為Q或E，X 4為E、N、T、S、A、K、D、G、R或Q，X 5為Y或S，且X 6為A或V；包含GX 1X 2X 3LX 4X 5(SEQ ID NO: 189)之胺基酸序列之CDR-L2，其中X 1為A或S，X 2為T、S、E、Q或D，X 3為N、R、A、E或H，X 4為Q或A，且X 5為S或D；及包含QX 1X 2X 3X 4X 5PWT (SEQ ID NO: 190)之胺基酸序列之CDR-L3，其中X 1為S、N、D、Q、A或E，X 2為T、I或S，X 3為Y、L或F，X 4為D、G、T、E、Q、A或Y，且X 5為A、T、R、S、K或Y； (j)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 199之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 200之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 201之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 152之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 153之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 202之胺基酸序列之CDR-L3； (k)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 199之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 203之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 204之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 205之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 206之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 207之胺基酸序列之CDR-L3； (l)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 199之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 203之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 204之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 152之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 153之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 202之胺基酸序列之CDR-L3； (m)該VH域包含：包含X 1YX 2MS (SEQ ID NO: 208)之胺基酸序列之CDR-H1，其中X 1為S、D、E、A或Q且X 2為A、G或T；包含DIX 1X 2X 3GX 4X 5TX 6YADSVKG (SEQ ID NO: 209)之胺基酸序列之CDR-H2，其中X 1為T、N、S、Q、E、H、R或A，X 2為Y、W、F或H，X 3為A、S、Q、E或T，X 4為G或E，X 5為S或I，且X 6為A或G；及包含X 1X 2X 3YX 4WX 5X 6AX 7DX 8(SEQ ID NO: 210)之胺基酸序列之CDR-H3，其中X 1為S或A，X 2為N、H、A、D、L、Q、Y或R，X 3為A、N、S或G，X 4為A、V、R、E或S，X 5為D或S，X 6為D、N、Q、E、S、T或L，X 7為L、F或M，且X 8為I、Y或V；且其中該VL域包含：包含RASQSVSSNLA (SEQ ID NO: 176)之胺基酸序列之CDR-L1；包含GASSRAT (SEQ ID NO: 177)之胺基酸序列之CDR-L2；及包含QQYGSSPPVT (SEQ ID NO: 178)之胺基酸序列之CDR-L3； (n)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 220之胺基酸序列之CDR-H1；包含SEQ ID NO: 221之胺基酸序列之CDR-H2；及包含SEQ ID NO: 222之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含RASQSVSSNLA (SEQ ID NO: 176)之胺基酸序列之CDR-L1；包含GASSRAT (SEQ ID NO: 177)之胺基酸序列之CDR-L2；及包含QQYGSSPPVT (SEQ ID NO: 178)之胺基酸序列之CDR-L3； (o)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 220之胺基酸序列之CDR-H1；包含SEQ ID NO: 260之胺基酸序列之CDR-H2；及包含SEQ ID NO: 222之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含RASQSVSSNLA (SEQ ID NO: 176)之胺基酸序列之CDR-L1；包含GASSRAT (SEQ ID NO: 177)之胺基酸序列之CDR-L2；及包含QQYGSSPPVT (SEQ ID NO: 178)之胺基酸序列之CDR-L3；或 (p)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 252之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 253之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 254之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 255之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 256之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 257之胺基酸序列之CDR-L3。
E56.   如實施例13至40中任一例之靶向細胞介素構築體，其中該抗體或抗原結合片段包含重鏈可變(VH)域及輕鏈可變(VL)域；且其中： (a)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 226之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 227之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 151之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 152之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 153之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 154之胺基酸序列之CDR-L3； (b)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 228之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 227之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 157之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 158之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 159之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 160之胺基酸序列之CDR-L3； (c)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 223之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 227之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 163之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 164之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 165之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 166之胺基酸序列之CDR-L3； (d)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 229之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 227之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 169之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 170之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 171之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 172之胺基酸序列之CDR-L3； (e)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 230之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 231之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 175之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 176之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 177之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 178之胺基酸序列之CDR-L3； (f)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 230之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 232之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 181之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之CDR-L3； (g)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 223之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 224之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 225之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 140之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 141之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 142之胺基酸序列之CDR-L3； (h)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 233之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 234之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 145之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 146之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 147之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 148之胺基酸序列之CDR-L3； (i)該VH域包含：包含GX1X2FX3X4X5 (SEQ ID NO: 235)之胺基酸序列之CDR-H1，其中X1為G、Y、S或A，X2為T、S、G、R、N或H，X3為S、T、R、H、Y、G或P，X4為S、K、G、N、R、D、T或G，且X5為Y、L、H或F；包含X1PX2X3X4X5 (SEQ ID NO: 236)之胺基酸序列之CDR-H2，其中X1為I、N或M，X2為G、N、H、S、R、I或A，X3為A、N、H、S、T、F或Y，X4為A、D或G，且X5為T、E、K、V、Q或A；及包含X1X2X3GX4X5LFX6X7 (SEQ ID NO: 237)之胺基酸序列之CDR-H3，其中X1為D或A，X2為A、G、E、R、Y、K、N、Q、L或F，X3為A、L、P或Y，X4為I或L，X5為R、A、Q或S，X6為A或D，且X7為D、E、A或S；且其中該VL域包含：包含X1X2SX3X4IX5GX6LN (SEQ ID NO: 188)之胺基酸序列之CDR-L1，其中X1為R或G，X2為A或T，X3為Q或E，X4為E、N、T、S、A、K、D、G、R或Q，X5為Y或S，且X6為A或V；包含GX1X2X3LX4X5 (SEQ ID NO: 189)之胺基酸序列之CDR-L2，其中X1為A或S，X2為T、S、E、Q或D，X3為N、R、A、E或H，X4為Q或A，且X5為S或D；及包含QX1X2X3X4X5PWT (SEQ ID NO: 190)之胺基酸序列之CDR-L3，其中X1為S、N、D、Q、A或E，X2為T、I或S，X3為Y、L或F，X4為D、G、T、E、Q、A或Y，且X5為A、T、R、S、K或Y； (j)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 241之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 242之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 204之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 152之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 153之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 202之胺基酸序列之CDR-L3； (k)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 241之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 243之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 204之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 205之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 206之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 207之胺基酸序列之CDR-L3； (l)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 241之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 243之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 204之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 152之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 153之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 202之胺基酸序列之CDR-L3； (m)該VH域包含：包含GFTFX1X2Y (SEQ ID NO: 244)之胺基酸序列之CDR-H1，其中X1為S、D、E、Q、S或A且X2為S、D、E、A或Q；包含X1X2X3GX4X5 (SEQ ID NO: 245)之胺基酸序列之CDR-H2，其中X1為T、N、S、Q、E、H、R或A，X2為Y、W、F或H，X3為A、S、Q、E或T，X4為G或E，且X5為S或I；及包含X1X2X3YX4WX5X6AX7DX8 (SEQ ID NO: 246)之胺基酸序列之CDR-H3，其中X1為S或A，X2為N、H、A、D、L、Q、Y或R，X3為A、N、S或G，X4為A、V、R、E或S，X5為D或S，X6為D、N、Q、E、S、T或L，X7為L、F或M，且X8為I、Y或V；且其中該VL域包含：包含RASQSVSSNLA (SEQ ID NO: 176)之胺基酸序列之CDR-L1、包含GASSRAT (SEQ ID NO: 177)之胺基酸序列之CDR-L2及包含QQYGSSPPVT (SEQ ID NO: 178)之胺基酸序列之CDR-L3； (n)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 250之胺基酸序列之CDR-H1；包含SEQ ID NO: 251之胺基酸序列之CDR-H2；及包含SEQ ID NO: 288之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含RASQSVSSNLA (SEQ ID NO: 176)之胺基酸序列之CDR-L1；包含GASSRAT (SEQ ID NO: 177)之胺基酸序列之CDR-L2；及包含QQYGSSPPVT (SEQ ID NO: 178)之胺基酸序列之CDR-L3； (o)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 250之胺基酸序列之CDR-H1；包含SEQ ID NO: 261之胺基酸序列之CDR-H2；及包含SEQ ID NO: 288之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含RASQSVSSNLA (SEQ ID NO: 176)之胺基酸序列之CDR-L1；包含GASSRAT (SEQ ID NO: 177)之胺基酸序列之CDR-L2；及包含QQYGSSPPVT (SEQ ID NO: 178)之胺基酸序列之CDR-L3；或 (p)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 223之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 224之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 284之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 285之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 286之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 287之胺基酸序列之CDR-L3。
E57.   如實施例55或實施例56之靶向細胞介素構築體，其中： (a)該VH域包含與SEQ ID NO: 109之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列，且其中該VL域包含與SEQ ID NO: 110之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列； (b)該VH域包含與SEQ ID NO: 111之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列，且其中該VL域包含與SEQ ID NO: 112之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列； (c)該VH域包含與SEQ ID NO: 113之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列，且其中該VL域包含與SEQ ID NO: 114之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列； (d)該VH域包含與SEQ ID NO: 115之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列，且其中該VL域包含與SEQ ID NO: 116之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列； (e)該VH域包含與SEQ ID NO: 117之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列，且其中該VL域包含與SEQ ID NO: 118之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列； (f)該VH域包含與SEQ ID NO: 119之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列，且其中該VL域包含與SEQ ID NO: 120之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列； (g)該VH域包含與SEQ ID NO: 123之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列；且其中該VL域包含與SEQ ID NO: 124之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列； (h)該VH域包含與SEQ ID NO: 129之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列，且其中該VL域包含與SEQ ID NO: 130之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列； (i)該VH域包含與SEQ ID NO: 131之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列；且其中該VL域包含與SEQ ID NO: 132之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列； (j)該VH域包含與SEQ ID NO: 125之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列；且其中該VL域包含與SEQ ID NO: 126之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列； (k)該VH域包含與SEQ ID NO: 127之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列，且其中該VL域包含與SEQ ID NO: 128之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列； (l)該VH域包含與SEQ ID NO: 133之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列；且其中該VL域包含與SEQ ID NO: 134之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列； (m)該VH域包含與SEQ ID NO: 135之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列；且其中該VL域包含與SEQ ID NO: 136之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列； (n)該VH域包含與SEQ ID NO: 107之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列；且其中該VL域包含與SEQ ID NO: 108之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列；或 (o)該VH域包含與SEQ ID NO: 121之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列；且其中該VL域包含與SEQ ID NO: 122之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列；或 (p)該VH域包含與SEQ ID NO: 258之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列；且其中該VL域包含與SEQ ID NO: 259之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列。
E58.   如實施例13至40及55至57中任一例之靶向細胞介素構築體，其中該靶向細胞介素構築體包含四個多肽鏈，其中： 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 262之胺基酸序列，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 263之胺基酸序列，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 264之胺基酸序列，且該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 262之胺基酸序列； 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 266之胺基酸序列，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 267之胺基酸序列，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 268之胺基酸序列，且該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 266之胺基酸序列； 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 270之胺基酸序列，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 271之胺基酸序列，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 272之胺基酸序列，且該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 270之胺基酸序列； 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 274之胺基酸序列，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 275之胺基酸序列，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 276之胺基酸序列，且該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 274之胺基酸序列；或 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 278之胺基酸序列，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 279之胺基酸序列，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 280之胺基酸序列，且該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 278之胺基酸序列。
E59.   如實施例13至40及55至57中任一例之靶向細胞介素構築體，其中該靶向細胞介素構築體包含四個多肽鏈，其中： 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 262之胺基酸序列，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 263之胺基酸序列，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 265之胺基酸序列，且該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 262之胺基酸序列； 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 266之胺基酸序列，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 267之胺基酸序列，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 269之胺基酸序列，且該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 266之胺基酸序列； 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 270之胺基酸序列，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 271之胺基酸序列，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 273之胺基酸序列，且該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 270之胺基酸序列； 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 274之胺基酸序列，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 275之胺基酸序列，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 277之胺基酸序列，且該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 274之胺基酸序列；或 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 278之胺基酸序列，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 279之胺基酸序列，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 281之胺基酸序列，且該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 278之胺基酸序列。 實例 實例 1 ： 例示性 IL - 21 多肽及包含其之融合蛋白之設計及生物物理學表徵 材料及方法 重組 DNA 技術
用於此研究之涉及重組DNA操縱之技術先前在Sambrook等人, Molecular cloning: A laboratory manual; Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 1989中已有描述。所有試劑皆根據製造商說明書使用。DNA序列係藉由雙股定序來確定。 基因合成
所需基因區段係藉由PCR使用適當模板產生，或在Genewiz (South Plainfield，NJ)、Integrated DNA Technologies (Coralville，IA)或GeneScript (Piscataway，NJ)由合成寡核苷酸合成。使用Gibson assembly®方法或使用限制性消化、接著接合來將該等基因區段選殖至表現載體中。自經轉型細菌純化DNA且藉由UV可見光譜法測定濃度。使用DNA定序確認經次選殖之基因片段之DNA序列。 抗體基因分離
使用小鼠抗體人類化或活體外噬菌體呈現系統產生結合至CD8抗原之抗體。
對於人類化，將小鼠殘基之互補決定區(CDR)移植至展現與親本小鼠構架之緊密序列類似性及良好穩定性的(多個)所選人類構架中。將所得CDR移植抗體進一步人類化以移除任何不必要的非人類突變。
對於活體外呈現方法，將由原生B細胞產生之非免疫人類單鏈Fv噬菌體庫淘選5至6輪以分離針對CD8抗原之抗體。淘選後，鑑別在ELISA中相對於非特異性抗原展現與目標抗原之特異性結合的個別噬菌體純系。隨後，對特異性結合子之重鏈及輕鏈V域之DNA片段進行選殖及定序。 抗體構築體選殖
關於人類免疫球蛋白輕鏈及重鏈之核苷酸序列之總體資訊可見於以下中：來自Lefranc等人IMGT®, the international ImMunoGeneTics information system® 25年於Nucleic Acids Res. 2015年1月;43之IMGT® (the international ImMunoGeneTics information system®)。將重鏈及輕鏈V域之DNA片段同框插入含有人類IgG1及κ輕鏈之哺乳動物表現載體中。 融合構築體選殖
使用IgG重鏈之C端與IL-21之N端之間的(G 4S) 315聚體連接子與重鏈一起同框選殖構築體之IL-21部分。在融合IL-21部分之後，消除IgG重鏈之C端離胺酸殘基。為了產生具有不對稱幾何形狀之構築體，將杵-臼修飾引入Fc區之CH3域中以便於進行異二聚化。具體言之，「臼」域攜帶CH3域中之S354C、T366S、L368A及Y407V突變，而「杵」域攜帶CH3域中之Y349C及T366W突變(EU編號)。為了消除FcγR結合/效應功能且防止FcR共活化，將突變L234A/L235A/G237A (EU編號)引入各IgG重鏈之CH2域或Fc區中。由CMV啟動子驅動抗體-IL-21融合構築體之表現且由位於編碼序列下游之合成polyA信號序列終止轉錄。 具有 IL - 21 多肽之融合蛋白純化
藉由使用聚乙烯亞胺(PEI)將以指數方式生長之Expi293細胞與哺乳動物表現載體共轉染來產生如實例中所使用的編碼具有IL-21多肽之融合蛋白之構築體。在培養5天之後收集上清液。首先藉由親和層析使用蛋白A基質純化IL-21融合構築體。使蛋白A管柱平衡且在磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)中洗滌。用100 mM檸檬酸鈉pH 3.6將融合構築體直接溶離至1 M Tris-HCl pH 9中和緩衝液中。將經溶離之溶離份彙集且稀釋至20 mM MES、25 mM氯化鈉pH 5.5中以藉由離子交換層析(Mono-S，Cytiva)進一步純化，從而將異二聚體與同二聚體分離。裝載蛋白質後，用20 mM MES pH 5.5洗滌管柱。隨後，用25 mM NaCl至500 mM NaCl梯度之氯化鈉/20 mM MES pH 5.5緩衝液溶離蛋白質。收集對應於異二聚體之主溶離峰且藉由分析性粒徑篩析層析(Superdex 200 Increase 5/150 GL，Cytiva)進行分析。對於活體外研究，若單體%為≥98%，則將蛋白質透析至PBS中。另外，且對於所有活體內研究，藉由粒徑篩析層析(HiLoad Superdex 200 pg 16/600或26/600，Cytiva)在PBS中拋光離子交換溶離峰。
藉由量測在280 nm下之光學密度(OD)，使用基於胺基酸序列所計算之莫耳消光係數來測定經純化之IL-21融合構築體之蛋白質濃度。在存在及不存在還原劑(5 mM 1,4-二硫蘇糖醇)且用考馬斯藍(Coomassie blue) (SimpleBlue™ SafeStain，Invitrogen)染色之情況下，藉由SDS-PAGE分析融合構築體之純度、完整性及單體狀態。根據製造商說明書使用NuPAGE®預澆鑄凝膠系統(Invitrogen) (4-20% Tris-甘胺酸凝膠或3-12% Bis-Tris)。使用Superdex 200 5/150 GL分析性粒徑篩析管柱(Cytiva)分析免疫結合物樣本之聚集物含量。 藉由表面電漿子共振 ( SPR ) 測定針對具有人類 IL - 21R 之 IL - 21 融合蛋白的結合親和力
藉由表面電漿子共振(SPR)在37℃下使用BIAcore® T200 (Cytiva)量測具有人類IL-21R之非經減弱IL-21融合蛋白的動力學速率常數( k a及 k d)以及親和力(K D)。簡言之，為了測定親和力，將IL-21融合蛋白稀釋至10 µg/mL且以10 µL/min藉由共價固定之抗人類Fc抗體(Southern Biotech，目錄號2014-01)經由其Fc捕捉至CM4感測器晶片上。在流動細胞1上未捕捉到蛋白質以充當參考表面。使在補充有1 g/L BSA之HBS-P+緩衝液中經稀釋之濃度為0.12、0.37、1.1、3.3及10 nM之人類IL-21R (Biolegend，目錄號773104)或緩衝液在表面捕捉之融合蛋白上以30 µL/min流動2分鐘。監測解離10分鐘，且在三次60秒注射75 mM磷酸之情況下使抗hIgG-Fc表面再生，之後在各後續循環中再捕捉融合蛋白。所有相互作用皆經一式三份量測。雙重參考結合資料且藉由Biacore®評估軟體3.2版使用用於測定 k a、 k d及K D之具有質量輸送模型之1:1 Langmuir使用Biacore評估軟體進行分析。
藉由表面電漿子共振(SPR)在37℃下使用BIAcore® T200 (Cytiva)來量測具有人類IL-21R之經減弱IL-21融合蛋白的結合親和力(K D)。內部產生重組人類IL-21R。簡言之，由HEK293細胞表現呈分泌形式之包含與8×組胺酸標籤融合之IL-21R之胞外域的重組人類IL-21R且藉由IMAC及粒徑篩析管柱層析進行純化。為了測定親和力，將IL-21融合蛋白稀釋至10 µg/mL且以10 µL/min藉由共價固定之抗人類Fc抗體(Southern Biotech)經由其Fc捕捉至CM4感測器晶片上。在流動細胞1上未捕捉到蛋白質以充當參考表面。在補充有1 g/L BSA之HBS-P+緩衝液中進行人類IL-21R之連續稀釋，以20-5 µM之間的標稱濃度起始，接著進行六至七次5倍連續稀釋，且在表面捕捉之融合蛋白上以30 µL/min流動2分鐘。亦使緩衝液在表面上流動以充當空白減除(blank subtraction)。監測解離5-10分鐘，且在三次30至60秒注射75 mM磷酸之情況下使抗hIgG-Fc表面再生，之後在各後續結合循環中再捕捉融合蛋白。雙重參考結合資料且藉由Biacore®評估軟體3.2版使用針對極弱相互作用之穩態親和力或在可能時使用用於測定動力學速率常數( k a、 k d)及K D之具有質量輸送模型之1:1 Langmuir進行分析。 藉由 ELISA 評估多反應性
為了量測候選融合蛋白之多反應性，使用ELISA分析來檢查與一組不相關抗原之結合。以下用作抗原且購自Sigma：匙孔螺血氰蛋白、血紅素及肝素生物素鈉鹽。
將抗原在PBS中稀釋至5 μg/mL之濃度且以每孔25 μL之體積塗覆至384孔Nunc MaxiSorp盤(Thermo Fisher Scientific)上。將盤在4℃下培育隔夜。移除抗原，且用Milli-Q水(Millipore)洗滌盤。用補充有0.05% Tween及1 mM EDTA之PBS (分析緩衝液)填充各孔且隨後在室溫下培育1小時。移除分析緩衝液，且用Milli-Q水洗滌各孔。添加25 μL在分析緩衝液中經稀釋之10 μg/mL僅分析緩衝液(陰性對照)、玻可昔單抗(bococizumab) (針對多反應性之陽性對照)或融合蛋白，且在室溫下培育1小時。移除樣本，且用Milli-Q水洗滌盤。添加25 μl偵測抗體，亦即經1:25000稀釋之結合辣根過氧化酶之山羊抗人類IgG (Jackson ImmunoResearch)，且在室溫下將其培育1小時。移除試劑，且用Milli-Q水洗滌各孔。使用25 μL KPL SureBlue TMB微孔受質(SeraCare)使孔顯影5-7 min且用25 μL 0.1 M HCl淬滅。在SpectraMax iD5盤讀取器(Molecular Devices)上記錄在450 nm下之吸光度且以僅分析緩衝液之對照孔標準化。 結果 IL - 21 電荷變異體多肽設計
各種例示性IL-21多肽設計描繪於 圖 2中，該圖顯示野生型IL-21之胺基酸序列，其中「X」標示替代另一胺基酸之野生型IL-21序列中之胺基酸以產生如本文所描述之例示性IL-21多肽。IL-21多肽為相對於野生型IL-21之等電點等電點改變(例如降低)之電荷變異體。
已顯示基於蛋白質之分子中之表面電荷或pI增加與全身清除率增加及皮下生物可用性降低有關(Boswell, CA等人Bioconjug Chem. 21: 2153-2163, 2010；Herve, F等人AAPS J. 10: 455-472, 2008；Zheng Y. MAbs 4: 243-255, 2012)。另外，已顯示正表面電荷與可溶性表現減少及聚集增加有關(Niwa, T等人PNAS, 106: 4201, 2009；Chan, P等人Sci Reports, 3: 3333, 2013；Dudgeon K.等人, PNAS 109: 10879-84, 2012)。為了評估減少正表面電荷對理論pI為約9.42之野生型IL-21之影響，若干例示性電荷變異體經設計成移除經預測不會干擾與IL-21受體或共同γ鏈之結合的若干位置之帶正電表面殘基。具體言之，進行若干例示性電荷變異體設計(例示性IL-21多肽1至31，亦稱為IL-21 v1至IL-21 v31)，用 表 2中所示之序列對甘胺酸、絲胺酸、天冬胺酸、丙胺酸或麩胺酸進行胺基酸取代。亦列出如藉由ExPASy ProtParam工具計算之經修飾細胞介素變異體之理論pI值。 IL - 21 電荷變異體多肽以抗體融合體形式表現
將具有例示性抗CD8抗體xhCD8或xhCD8.1與例示性IL-21電荷變異體多肽，亦即例示性IL-21多肽1至6之融合蛋白的蛋白質表現特徵與具有野生型IL-21之融合蛋白進行比較，且結果概述於 表 3中。在中間步驟之後、在蛋白A之後以及在兩步純化、蛋白A及離子交換層析之後報導所選蛋白質融合體之產量。在具有例示性IL-21多肽1、例示性IL-21多肽2及例示性IL-21多肽6至31之融合蛋白之情況下，在蛋白A中間階段以及完全純化階段時、在蛋白A及離子交換層析之後，產量高於具有野生型IL-21之融合蛋白之產量。
離子交換層析跡線亦顯示具有所有電荷變異體例示性IL-21多肽之融合蛋白相較於具有野生型IL-21之融合蛋白的改良，如 圖 3A - 3E中所示。在所有跡線中，觀測到兩個峰，一個峰代表同二聚體，亦即僅包含抗體而無細胞介素之非所需產物，且一個峰代表異二聚體，亦即所需抗體-細胞介素融合體產物。相較於野生型IL-21融合蛋白，觀測到所有例示性電荷變異體融合蛋白之異二聚體峰之溶離較早，此與等電點降低及表面電荷減少一致。 圖 3A顯示具有xhCD8及野生型IL-21或例示性IL-21多肽1至6之融合蛋白的離子交換層析跡線。此處，在野生型IL-21融合蛋白之情況下，作為所需產物之總蛋白質比例為約32%，且具有所有IL-21電荷變異體之融合蛋白之總蛋白質比例較高，在約40%至約85%範圍內。在 圖 3B至 圖 3E中，顯示具有xhCD8.1及例示性IL-21多肽2或7至31之融合蛋白的離子交換層析跡線。此處，對於經電荷修飾之例示性IL-21多肽，作為所需產物之總蛋白質比例在77%至88%範圍內，此高於在具有xhCD8.1及野生型IL-21之融合蛋白之情況下約34%之總蛋白質比例( 圖 3F)。 野生型 IL - 21 相較於所選電荷變異體之動力學表徵
將在37℃下與IL-21R之結合動力學同野生型IL-21 (Fc-hIL21 WT)及所選電荷變異體例示性IL-21多肽1 (xhCD8-hIL21 v1)、例示性IL-21多肽2 (xhCD8-Fc-hIL21 v2)及例示性IL-21多肽6 (xhCD8-hIL21 v6)以及例示性IL-21多肽27至31 (xhCD8.1-hIL21 v27-31)進行比較。對於野生型IL-21，使用與人類Fc之融合蛋白，而對於電荷變異體，使用與抗CD8抗體之融合蛋白。自對來自3個複製品實驗之資料取平均值推導出之動力學及親和力參數示於 表 4中。例示性IL-21多肽1、例示性IL-21多肽2、例示性IL-21多肽27至31之IL-21R結合親和力係在野生型IL-21之IL-21R結合親和力的2倍內，此指示例示性IL-21多肽中之電荷修飾對IL-21R親和力無影響。在例示性IL-21多肽6之情況下，親和力存在大致3倍變化。 具有野生型 IL - 21 相對於電荷變異體之融合蛋白之多反應性
量測IL-21融合蛋白與一組不相關蛋白質之結合的多反應性ELISA分析之結果示於 表 5中。亦包括已顯示為具有多反應性之玻可昔單抗作為陽性對照。將具有野生型IL-21之融合蛋白xhCD8.1-hIL21的多反應性與包含相同抗體之融合蛋白xhCD8.1及包含IL-21電荷變異體之融合蛋白的多反應性進行比較。值得注意的是，所有具有IL-21電荷變異體之融合蛋白的與不相關抗原之結合相較於xhCD8.1-hIL21的與不相關抗原之結合減少，此指示電荷變異體之多反應性改善。 實例 2 ： 小鼠之含有例示性 IL - 21 電荷變異體多肽之融合蛋白的藥物動力學 材料及方法 小鼠藥物動力學評估
使用8週齡雌性C57BL/6小鼠以進行含有例示性IL-21多肽2之融合蛋白(xCtrl-hIL21 v2)或含有野生型IL-21多肽之融合蛋白(xCtrl-hIL21)的藥物動力學評估。融合蛋白為：xCtrl-hIL21及xCtrl-hIL21 v2，分別為具有野生型IL-21或例示性IL-21多肽2之不結合小鼠蛋白質之對照(Ctrl)抗體之融合蛋白。對照抗體為不結合小鼠CD8b之xhCD8.1。所有動物皆根據Explora BioLabs之機構動物照顧和使用委員會(Institutional Animal Care and Use Committee)進行圈養及處置。在2隻小鼠群組中以1 mg/kg之劑量靜脈內或皮下投與蛋白質。對於靜脈內給藥小鼠，在給藥後30分鐘、1天、2天、5天及視情況7天之時，以及對於皮下給藥小鼠，在給藥後2小時、1天、2天及4天之時，執行尾部靜脈放血。在各時間點，收集大致25 µL血液及血清。在-20℃下儲存血清直至其用於分析。 血清樣本之 ELISA 評估
藉由ELISA，使用由用於治療之蛋白質產生之標準曲線來量測測試分子之小鼠血清濃度。簡言之，將每孔100 µL之2 µg/mL Fcγ片段特異性AffiniPure F(ab') 2片段驢抗人類IgG (Jackson ImmunoResearch)/PBS在4℃下塗覆至96孔Nunc MaxiSorp盤(Thermo Fisher Scientific)上隔夜。移除塗覆溶液，且在室溫下用每孔250 µL之PBS + 5%脫脂乳阻斷盤2小時。用PBS + 0.05% Tween-20洗滌盤，且添加蛋白質標準物或經稀釋血清。對於蛋白質標準物，以0.03 µg/mL起始，進行連續稀釋，接著進行七次3倍連續稀釋。將血清樣本稀釋至100倍與5000倍之間以便使最終讀數保持在標準曲線範圍內。所有稀釋皆在PBS + 0.5% BSA + 0.05% Tween-20中進行，且每孔使用100 µL。將血清樣本及蛋白質標準物在室溫下培育1-2小時，接著用PBS + 0.05% Tween-20洗滌。接下來，每孔100 µL之偵測抗體(Fcγ片段特異性過氧化酶AffiniPure (F'ab') 2片段山羊抗人類IgG)以1:3000稀釋度於PBS + 0.5% BSA + 0.05% Tween-20中，且將盤在室溫下培育45分鐘。使用100 µL之1步Ultra TMB-ELISA受質溶液(Thermo Fisher Scientific)使盤顯影1-3分鐘，且用100 µL之2 M硫酸停止。在SpectraMax iD5盤讀取器(Molecular Devices)上讀取在450 nm下之吸光度。使用非線性回歸擬合標準曲線，且使用Prism軟體(GraphPad)將經稀釋血清樣本在450 nm下之吸光度內插至標準曲線。隨後，將所有血清濃度轉換成奈莫耳濃度。 結果
藥物動力學結果示於 圖 4A - 4D中。在靜脈內給藥及皮下給藥兩者之情況下，包含電荷變異體例示性IL-21多肽序列之融合蛋白展現比包含野生型IL-21序列之融合蛋白大之暴露。基於使用梯形法則之曲線下面積(AUC)計算，相比於野生型IL-21 (xCtrl-hIL21)，IL-21電荷變異體例示性多肽2 (xCtrl-hIL21 v2)藉由IV給藥存在約2.5倍AUC改善且藉由皮下給藥存在2.3至2.8倍AUC改善。另外，相比於野生型IL-21 (xCtrl-hIL21)，IL-21電荷變異體例示性多肽31 (xCtrl-hIL21 v31)藉由皮下給藥存在約3.5倍AUC改善。當對xCtrl-hIL21 v31及xCtrl-hIL21之靜脈內給藥暴露進行比較時，存在4.2之AUC比( 圖 4D)，此指示相比於野生型hIL21，hIL21 v31電荷修飾之大量改善。
基於 實例 1中報導之動力學，野生型IL-21及例示性IL-21多肽2或例示性IL-21多肽31與IL-21R存在可忽略的結合動力學差異。因此，所觀測到之暴露差異不可歸因於包含例示性IL-21多肽2或例示性IL-21多肽31及野生型IL-21之融合蛋白的目標介導之藥物處置的任何差異。另外，描述於 圖 4A - 4D中之各者中之兩種融合蛋白中之靶向(Ctrl)抗體為相同的且不結合任何小鼠蛋白質。資料表明，例示性IL-21多肽2或例示性IL-21多肽31中之正表面電荷減少引起所觀測到之相比於野生型IL-21之暴露改善。 實例 3 ： 評估 IL - 21 及融合蛋白對 STAT3 之 活化 材料及方法 評估人類原代細胞中之 STAT3 活化
在量測STAT3磷酸化之分析中，藉由流動式細胞測量術測定IL-21活化人類PBMC或人類全血中之各種免疫細胞子集之能力。
使用Ficoll-Paque增強版(Cytiva)自健康供體血液分離PBMC，且使用ACK溶解緩衝液溶解紅血球。使PBMC以40×10 6個細胞/毫升再懸浮於無血清RPMI1640培養基中，且等分至96孔U形底盤中(每孔50 µL)。將IL-21融合蛋白及包括重組IL-21之對照蛋白及對照融合蛋白稀釋至所需濃度且添加至各孔中(添加50 µL作為2×刺激物)。培育通常在37℃下執行10-20 min。將無法在甲醇滲透之後施用之抗體- CD8a (SK1，Biolegend)、CD4 (RPA-T4，Biolegend)、CD62L (DREG-56，Biolegend)及CD19 (HIB19，Biolegend)直接添加至各孔中，緊接著對其進行刺激且在冰上培育10 min。在冰上用100 µL冰冷8% PFA (最終4%)停止染色達10 min。用洗滌緩衝液(2% FBS/PBS)洗滌細胞2次。在冰上將細胞滲透於100 µL預淬冷Phosflow Perm緩衝液III (BD Biosciences)中45分鐘。將細胞用洗滌緩衝液洗滌2次且在4℃下用在滲透緩衝液(eBiosciences)中經稀釋之針對以下之抗體染色30-45 min：CD3 (UCHT1，BD Biosciences)、CD45RO (UCHL1，Biolegend)、HLA-DR (L243，Biolegend)、穿孔蛋白(dG9，BD Biosciences)及pSTAT3 pY705 (4/P-STAT3，BD Biosciences)。隨後，在流式細胞儀上分析細胞。細胞群體定義如下：CD8+ T細胞：CD3+CD8+，CD4+ T細胞：CD3+CD4+，B細胞：CD19+，NK細胞：CD3-CD19-HLA-DR-穿孔蛋白+。資料係以pSTAT3陽性百分比表示，且在一些情況下以pSTAT3平均螢光強度(MFI)表示，且輸入GraphPad Prism中。
對於在人類全血中之分析，在1 mL之96孔深孔盤中每孔使用90 μL人類血液且將其在37℃下預溫熱10分鐘。製備IL-21融合蛋白及諸如野生型IL-21之對照蛋白及對照融合蛋白且將其以10×強度預溫熱至37℃。將10 μL預溫熱之10×刺激物添加至各孔中，以1×刺激物濃度產生100 μL總體積。培育通常在37℃下執行25 min。藉由添加預固定抗體染色混合液，短暫渦旋且在冰上於暗處培育10分鐘來淬滅刺激。預固定染色混合液含有TruStain FcX (Biolgened)及針對以下之抗體：CD4 (RPA-T4，Biolegend)、CD19 (HIB19，BD)、CD56 (NCAM16.2，BD)、CD16 (3G8，Biolegend)及CD8 (SK1，Biolegend)。將900 µL預溫熱之Lyse Fix (BD)添加至樣本孔中且在37℃下培育10分鐘。在含有PBS + 0.5%牛血清白蛋白及2 mM EDTA之預淬冷洗滌緩衝液中洗滌細胞。添加預淬冷Perm緩衝液III (BD)且在-20℃下培育60分鐘，接著在洗滌緩衝液中洗滌兩次且在TFP Perm/Wash (BD)中洗滌一次。使細胞再懸浮於25 μL在含有針對以下之抗體的TFP Perm/Wash中製備之「後甲醇(post-methanol)」染色混合液中：CD3 (UCHT1，BD)、CD14 (MΦP9，BD)、CD11c (B-ly6，BD)、HLA-DR (L243，Biolegend)及pSTAT3 pY705 (4/P-STAT3，BD Biosciences)。將細胞在4℃下於暗處培育30 min，隨後在TFP Perm/Wash緩衝液中洗滌，接著在室溫下在100 μL 4% PFA中固定10分鐘。在洗滌緩衝液中洗滌細胞且在流式細胞儀上對其進行分析。資料係以pSTAT3陽性百分比表示且輸入GraphPad Prism中。細胞群體定義如下：CD8+ T細胞：CD3+CD8+，CD4+ T細胞：CD3+CD4+，B細胞：CD19+，NK細胞：CD3-CD19-CD16+CD56dim，骨髓細胞：CD11c+ HLA-DR+。 結果 評估野生型 IL - 21 對 STAT3 之 活化
重組野生型人類IL-21對人類PBMC或全血中之不同細胞類型之STAT3活化概況分別示於 圖 5A - 5B中。重組IL-21係在於pM範圍內之類似EC 50及高最大STAT3活化之情況下強效活化CD8+ T細胞、CD4+ T細胞、NK細胞及B細胞。 靶向 CD8 之 IL - 21 電荷 變異體對 CD8 + T 細胞之 選擇性活化
針對靶向CD8之經減弱IL-21對CD8+ T細胞之選擇性活化的順式靶向概念示於 圖 6中。IL-21電荷變異體之親和力減弱降低了所有表現IL-21R之細胞上的活性。靶向CD8使得靶向融合體能夠結合至CD8+ T細胞且特異性恢復CD8+ T細胞上之IL-21活性。相比之下，非靶向IL-21突變蛋白融合體對包括CD8+ T細胞之所有IL-21R+細胞類型顯示弱至無活性。
評估CD8+ T細胞上藉由包含抗CD8抗體及野生型IL-21或例示性IL-21電荷變異體多肽之融合蛋白進行的STAT3活化。資料示於 圖 7中。見到包含抗CD8抗體及例示性IL-21多肽1 (xhCD8-hIL21 v1)、例示性IL-21多肽2 (xhCD8-hIL21 v2)或例示性IL-21多肽6 (xhCD8-hIL21 v6)之融合蛋白以與包含抗CD8抗體及野生型IL-21 (xhCD8-hIL21)之融合蛋白之效力等效之效力介導STAT3活化。
首先在例示性IL-21多肽序列2 (SEQ ID NO: 2)上產生初始輪之IL-21突變蛋白作為背景且測試其在人類PBMC中之STAT3活化。 表 6概述此等突變蛋白之序列以及使用 實例 1中所描述之方法量測之親和力常數。顯示包含抗CD8抗體xhCD8以及IL-21 v2.1 ( 圖 8A)、IL-21 v2.2 ( 圖 8B)、IL-21 v2.3 ( 圖 8C)、IL-21 v2.4 ( 圖 8D)、IL-21 v2.5 ( 圖 8E)及IL-21 v2.6 ( 圖 8F)之融合蛋白的STAT3活化概況。對於所有突變蛋白，觀測到CD8+ T細胞之優先STAT3活化，如藉由EC 50以及最大STAT3活化所量測。
減弱結合IL-21R之另外突變係在例示性IL-21多肽序列2之背景上設計，產生IL-21突變蛋白IL-21 v2.7至IL-21 v2.59。此等突變蛋白經構築為與xhCD8共用相同抗原決定基之具有替代抗CD8抗體xhCD8.1之融合蛋白。突變蛋白之序列資訊及結合親和力描述於 表 6中。CD8 T細胞之STAT3活化概況示於 圖 9A 、 圖 9C 、 圖 9E及 圖 9G中，且CD4 T細胞之STAT3活化概況示於 圖 9B 、圖 9D 、圖 9F及 圖 9H中。
隨後，在例示性IL-21多肽序列31 (SEQ ID NO: 94 - SEQ ID NO: 98)上產生減弱IL-21R結合之所選IL-21突變蛋白作為背景且測試其在人類全血中之STAT3活化。 表 7概述此等IL-21突變蛋白之序列，而 表 8概述全長抗體-細胞介素融合蛋白之例示性序列。顯示包含抗CD8抗體xhCD8.1以及IL-21 v31.4 ( 圖 10A)、IL-21 v31.6 ( 圖 10B)、IL-21 v31.23 ( 圖 10C)、IL-21 v31.48 ( 圖 10D)、IL-21 v31.51 ( 圖 10E)之融合蛋白在全血中之STAT3活化概況。作為陽性對照，非靶向非經減弱IL-21融合體Fc-IL-21v2之STAT3活化示於 圖 10F中。來自獨立供體全血之另外資料示於 圖 14A - 14F中，且揭露多個供體中之pSTAT3活化之一致圖案。
構築具有例示性IL-21多肽序列與替代抗CD8抗體xhCD8v11之融合蛋白且在人類全血STAT3活化分析中對其進行評估。此等融合蛋白之結果示於 圖 15A - 15D中，且揭露所有xhCD8v11融合體相比於其他細胞類型選擇性活化CD8 T細胞中之pSTAT3信號傳導。 實例 4 ： 構築及活體外表徵順式靶向 IL - 21 之 小鼠代替物 材料及方法 鼠類融合構築體選殖
使用小鼠IgG2a重鏈之C端與IL-21之N端之間的(G 4S) 315聚體連接子與重鏈一起同框選殖構築體之鼠類IL-21部分。在融合IL-21部分之後，消除IgG重鏈之C端離胺酸殘基。為了產生具有不對稱幾何形狀之構築體，將靜電修飾引入Fc區之CH3域中以便於進行異二聚化。具體言之，帶正電修飾攜帶CH3域中之E356K及D399K突變，而帶負電修飾攜帶CH3域中之K409E及K439D突變(EU編號)。為了消除FcγR結合/效應功能且防止FcR共活化，將突變L234A/L235A/P329G (EU編號)引入各IgG重鏈之CH2域或Fc區中。由CMV啟動子驅動抗體-IL-21融合構築體之表現且由位於編碼序列下游之合成polyA信號序列終止轉錄。 評估小鼠脾細胞中之 STAT3 活化
在量測STAT3磷酸化之分析中，藉由流動式細胞測量術測定IL-21活化小鼠脾細胞中之各種免疫細胞子集之能力。在含有10% FBS之RPMI-1640中使用OctoMACS解離系統(Miltenyi Biotech)機械地解離小鼠脾。使脾細胞以1-5×10 6個細胞/毫升再懸浮於普通RPMI中且在輕輕攪動之情況下在37℃下靜置1小時。在靜置之後，使細胞以40×10 6個細胞/毫升再懸浮於無血清RPMI1640培養基中，且等分至96孔U形底盤中(每孔50 µL)。將IL-21融合蛋白及包括重組IL-21 (Biolegend)之對照蛋白及對照融合蛋白稀釋至所需濃度且添加至各孔中(添加50 µL作為2×刺激物)且在37℃下培育15 min。將無法在甲醇滲透之後施用之抗體- Nkp46 (29A1.4，Biolegend)、B220 (RA3-6B2，Biolegend)直接添加至各孔中，緊接著對其進行刺激且在冰上培育10 min。在含有PBS + 0.5%牛血清白蛋白及2 mM EDTA之預淬冷洗滌緩衝液中洗滌細胞3次且在4℃下於暗處用100 μL BD Fix/Perm緩衝液固定30分鐘。在預淬冷洗滌緩衝液中洗滌細胞3次且在-20℃下使其再懸浮於100 µL預淬冷Phosflow Perm緩衝液III (BD Biosciences)中60分鐘。用洗滌緩衝液洗滌細胞2次且用TFP滲透緩衝液(BD Biosciences)洗滌細胞1次，且在4℃下用在TFP滲透緩衝液中經稀釋之針對以下之抗體染色30-45 min：CD4 (RM4-5，BD Biosciences)、CD3 (17A2，Biolegend)、CD8 (53-6.7，Biolegend)、CD11b (M1/70，Biolegend)、CD11c (N418，Biolegend)及pSTAT3 pY705 (4/P-STAT3，BD Biosciences)。細胞群體定義如下：CD8+ T細胞：CD3+CD8+，CD4+ T細胞：CD3+CD4+，B細胞：CB220+，NK細胞：CD3-Nkp4.6+。資料係以pSTAT3陽性百分比表示，且在一些情況下以pSTAT3平均螢光強度(MFI)表示，且輸入GraphPad Prism中。 結果 經工程改造之鼠類 IL - 21 突變蛋白設計
最初嘗試使用 實例 1中所描述之方法表現且純化具有野生型鼠類IL-21之融合蛋白，產生過低而不能產生可使用材料之小於0.05 mg/L之產量。使用與人類IL-21相同的設計原理來設計用於消除或逆轉預期不會影響與IL-21R或γ共同鏈之結合的鼠類IL-21之區域上之正電荷的鼠類IL-21電荷變異體。具有不結合任何小鼠蛋白質之對照抗體xCtrl及具有示於 表 9中之序列之鼠類IL-21電荷變異體mIL-21 v1的融合蛋白在蛋白A及離子交換層析之後經成功地表現及純化，其中最終產量為大致8.6 mg/L。
為了產生CD8順式靶向鼠類替代物，使用與描述於 實例 3及 圖 6中相同的設計原理。將減弱對小鼠IL-21R之結合親和力的突變引入mIL-21v1中，從而產生具有示於 表 9中之序列之鼠類IL-21突變蛋白mIL-21 v1.1。具有小鼠CD8特異性抗體xmCD8及mIL-21 v1.1之融合蛋白在蛋白A及離子交換層析之後經表現及純化，其中最終產量為36.9 mg/L。 鼠類靶向 CD8 之 IL - 21 電荷 變異體對 CD8 + T 細胞之 選擇性活化
顯示小鼠脾細胞中野生型鼠類IL-21 (Biolegend) ( 圖 11A)、xCtrl-mIL21 v1 ( 圖 11B)及xmCD8-mIL21 v1.1 ( 圖 11C)之STAT3活化概況。野生型鼠類IL-21及xCtrl-mIL21 v1展現可忽略的CD8+ T細胞活化選擇性，而xmCD8-mIL21 v1.1顯示強效活化及＞1000倍CD8+ T細胞選擇性。 實例 5 ： 順式靶向 IL - 21 之 鼠類代替物之活體內功效 材料及方法 MC38 小鼠腫瘤模型
8-10週齡C57BL6雌性小鼠(Jackson Labs)在飼養機構經圈養且適應。收取經培養MC38細胞且使其以1.5×10 7個細胞/毫升再懸浮於無血清培養基(1× DMEM，Sigma D6429)中以用於植入。對小鼠進行刮毛，且在後腿上皮下植入1.5×10 6個細胞(100 μL)。在植入後大致8天之時量測腫瘤直至達到60-120 mm 3腫瘤體積(TV=寬度×寬度×長度×0.5)。隨後，根據腫瘤體積將小鼠隨機分至各組。在經指示之情況下，在植入後6天(治療劑給藥前~2天)之時開始每週3次腹膜內給藥1 mg/kg FTY720 (Sigma)。在隨機分組之後，將各小鼠稱重且在頸背下皮下給藥治療劑。每3-4天量測腫瘤體積及體重直至研究結束(初始劑量後30-40天)或達到最大腫瘤體積(2000 mm 3)。在研究結束時，在適當的二級安樂死之情況下藉由CO 2使小鼠安樂死。 結果
據吾等所知，尚不存在MC38小鼠模型中全身投與之非靶向小鼠IL-21之單一藥劑功效的任何報導。舉例而言，在先前報導之研究(Lewis等人Oncoimmunology, 第7(1)卷: 2018)中，大致10 mg/kg小鼠IL-21之三次劑量產生0/10完全反應(CR)。藉由與非靶向抗體融合延長細胞介素半衰期亦未能控制MC38腫瘤生長，其中自大致2 mg/kg抗體-IL-21融合體之三次劑量觀測到0/5 CR (Deng等人J Clin Invest Insight, 第5(7)卷: 2020)。 圖 12顯示xCtrl-mIL21 v1之強效功效，其中在0.3 mg/kg或1 mg/kg之單次劑量之情況下分別觀測到1/8 CR及5/8 CR。xCtrl-mIL21 v1係自Deng等人使用之構築體分化，在該構築體中其經電荷最佳化。基於所觀測到之 實例 2中之人類IL-21電荷變異體之趨勢，推測xCtrl-mIL21 v1應具有相較於Deng等人構築體改善之生物可用性及暴露，且此等改善之特性可引起MC38腫瘤模型中所觀測到之功效。
靶向CD8之IL-21，亦即xmCD8-mIL21 v1.1亦顯示強效功效，其中在0.1、0.3及1 mg/kg之單次劑量之情況下分別觀測到5/8 CR、7/8 CR及8/8 CR。當將經劑量匹配之xCtrl-mIL21 v1治療之各組中之功效進行比較時，可觀測到就CR頻率以及腫瘤生長抑製程度而言xmCD8-IL21 v1.1勝過xmCtrl-mIL21 v1。此表明，特異性靶向CD8+ T細胞存在功效效益，且非靶向xCtrl-mIL21 v1對除CD8+ T細胞以外之細胞的多效性IL-21活化可能會抑制CD8+ T細胞上之IL-21活性的抗腫瘤功效。
FTY720為阻斷淋巴球運輸之神經鞘胺醇1-磷酸酯受體分子之強效小分子促效劑(Brinkmann等人Nat Rev Drug Disc, 2010)。評估MC38腫瘤模型中FTY720對單次劑量之xmCD8-mIL21 v1.1之功效的影響，其中給藥時程描述於 圖 13A中。在存在及不存在FTY720治療之情況下0.1、0.3或1 mg/kg xmCD8-mIL21 v1.1之腫瘤生長曲線分別示於 圖 13B、 圖 13C及 圖 13D中。在0.1 mg/kg xmCD8-mIL21 v1.1劑量下，當淋巴球運輸經FTY720阻斷時觀測到較少腫瘤生長抑制及較少CR ( 圖 13B)，此指示0.1 mg/kg xmCD8-mIL21 v1.1之治癒反應係由CD8+ T細胞之周邊活化貢獻。 實例 6 ： 評估耐 PD1 腫瘤中之靶向 CD8 之 IL - 21 及 / 或與靶向 CD8 之 IL2 的 組合
使用先前在 實例 5中描述之方法評估另外同基因小鼠腫瘤模型中靶向CD8之IL21之功效。
為了評估耐PD-1治療腫瘤模型中靶向CD8之IL-21之功效，測試一組耐抗PD-1治療同基因腫瘤模型中之功效。耐PD-1腫瘤模型之一些實例包括B16F10、4T1及Pan02。以在0.01 mg/kg至5 mg/kg範圍內之單次劑量靜脈內或皮下投與靶向CD8之IL21，且將量測腫瘤生長。
為了評估靶向CD8之IL-21與靶向CD8之IL2的組合的功效(如國際專利申請案第PCT/US20/36454號及第PCT/US21/56312號中所描述，該等案中之各者特此以全文引用之方式併入)，測試其中作為單一藥劑之靶向CD8之IL2既有效、又無效之腫瘤模型組中的功效。在其中靶向CD8之IL2有效之腫瘤模型中，靶向CD8之IL2之劑量減少至次最佳劑量以得到中等至低單一藥劑功效。將次最佳劑量之靶向CD8之IL2組合與在0.01 mg/kg至5 mg/kg範圍內之各種劑量之靶向CD8之IL21組合，且量測腫瘤生長。在其中作為單一藥劑之靶向CD8之IL2無效之腫瘤模型中，中等至高劑量之靶向CD8之IL2 (例如0.1-5 mg/kg)與在0.1 mg/kg至5 mg/kg範圍內之各種劑量之靶向CD8之IL21組合使用。利用PBS治療以及單一藥劑給藥之對照組係用於比較。亦評估靶向CD8之IL2及靶向CD8之IL21的同時及交錯給藥方案。 實例 7 ： 構築且評估與 IL - 21R 之 結合減弱之另外 IL - 21 變異體 材料及方法 庫構築及選擇
基於與IL-21R複合之IL-21細胞介素之公開晶體結構，鑑別不與IL-21R直接接觸、但可能會以減弱對IL-21R之結合親和力之方式影響IL-21結構的IL-21上之胺基酸殘基。選擇四個殘基之四個不同組合以用於使用NNK簡併密碼子進行多樣化，從而產生四個獨立庫。在以下位點處將多樣化併入IL-21 v2背景上：在位置V17、L20、L55及L74處含有NNK多樣性之庫1；在位置I16、L20、L55及L74處含有NNK多樣性之庫2；在位置I16、V17、L20及L74處含有NNK多樣性之庫3；及在位置L13、I16、V17及L74處含有NNK多樣性之庫4。
使用IL-21 v2序列作為模板，使用利用含簡併核苷酸之引子之PCR (Integrated DNA Technologies)構築NNK多樣化庫。PCR片段經設計成具有匹配線性化酵母呈現質體之側接區。根據用於酵母呈現選擇之公開方案(例如Chao,G等人Nat Protocols. 1: 755-768, 2006)構築庫。
四個NNK庫經呈現於酵母上且經分選以分離對IL21R具有所需親和力之純系。對照hIL-21 v2.4及hIL-21 v2.6亦以酵母呈現格式經純系地表現。隔夜誘導之酵母細胞經小鼠抗人類IL-21 (R&D Systems)及異二聚IL-21R與共同γ鏈之重組人類Fc融合體(IL-21R-gc-Fc)標記。洗滌後，細胞經抗小鼠IgG Alexa488及抗人類IgG Fc DyLight650結合物(Thermo)標記。執行兩輪分選以在hIL-21 v2.4與hIL-21 v2.6之酵母群體之間富集具有與IL-21R-gc-Fc之結合的酵母群體。兩輪分選後，藉由小規模純化(miniprep)自酵母回收質體且將其轉型至大腸桿菌中以對個別純系進行定序。 結果 表徵另外 IL - 21 變異體
鑑別九個所關注序列且其經表現為針對xhCD8.1之融合蛋白。IL-21變異體序列作為IL-21 v2.60至IL-21 v2.65在 表 6中列出。如 實例 1中所描述量測與此等變異體之IL-21R之結合K D且在 表 6中列出。結果表明，IL-21v2.61、IL-21v2.62、IL-21v2.63、IL-21v2.64及IL-21v2.65展現至少50倍與IL-21受體之結合減少。此處資料亦表明，對IL-21受體之親和力減弱可藉由修飾非接觸式殘基來達成。如 實例 3中所描述，IL-21R親和力減弱之變異體在表現IL-21R之細胞上展現降低之活性，而使該等變異體與靶向CD8之域融合使得靶向融合體能夠優先結合至CD8+ T細胞且藉此特異性恢復CD8+ T細胞上之IL-21活性。量測人類全血中具有針對另外IL-21變異體hIL21 v2.63 ( 圖 16A)、hIL21 v2.64 ( 圖 16B)及hIL21 v2.65 ( 圖 16C)之xhCD8.1之所選融合蛋白的STAT3活化。在所有所示情況下，STAT3以相比於非CD8 T細胞＞100倍選擇性在CD8+ T細胞上經活化。 實例 8 ： 表徵所選 hIL - 21 融合蛋白
選擇若干hIL-21融合蛋白，亦即xhCD8.1-hIL21 v31.4、xhCD8.1-hIL-21 v31.23及xhCD8v11-hIL21 v31.23用於另外表徵。
所選融合蛋白在ProA之後及在ProA+IEX純化之後的產量示於 表 13中。此等產量大部分高於 表 3中報導之經電荷修飾之非經減弱融合蛋白，此表明相比於具有野生型IL-21之融合體，產量增加。離子交換層析跡線及代表所需異二聚體產物之規定總信號百分比示於 圖 17A - 17C中。此等結果指示，IL-21R減弱修飾及電荷變異體修飾v31以及不同靶向臂xhCD8v11或xhCD8.1之組合可維持良好的表現特性，其中高百分比材料為恰當地形成之異二聚體。
所選融合蛋白之多反應性資料示於 表 15中且揭露此等融合體展現相較於陽性對照玻可昔單抗有利的多反應性概況。 實例 9 ： 比較野生型或 v31 電荷變異體背景上之 IL - 21R 減弱突變蛋白
如 實例 2中所示，IL-21中之電荷修飾在小鼠中降低多反應性且改善生物可用性及暴露。另外，經測試且報導於 表 4中之所選電荷變異體不影響對IL-21R之結合親和力。然而，用於IL-21R減弱之突變中之一些消除或逆轉帶正電殘基。藉由將野生型IL21背景或IL21 v31電荷變異體背景上之IL-21R減弱突變蛋白進行比較來評估例示性IL-21R減弱突變蛋白對電荷降低之影響。具體言之，將具有hIL-21 v31.4之融合蛋白同與hIL-21 v31.4含有相同的用於IL-21R減弱之精胺酸至麩胺酸突變、但處於野生型IL-21背景上之具有hIL-21 v0.4之融合蛋白進行比較。hIL-21 v0.4之序列可見於 表 14中。
評估具有xhCD8.1與hIL-21 v0.4或hIL-21 v31.4之融合蛋白的多反應性。如 表 15及 表 5中所示，xhCD8.1-hIL21 v0.4展現相較於xhCD8.1-hIL21 (野生型IL-21融合體)改善之多反應性概況，但xhCD8.1-hIL21 v31.4之多反應性概況在併入電荷修飾(v31)之情況下進一步經改善。
高度多反應性蛋白質展現因與細胞組分之非特異性相互作用而減少之活體內暴露。在小鼠中建立藥物動力學研究以評估在存在及不存在v31電荷修飾之情況下多反應性對靶向融合體之活體內暴露的影響。使用諸如xhCD8.1及xhCD8v11之靶向人類CD8之抗體產生靶向融合體，其不與小鼠CD8交叉反應，因此任何所觀測到之暴露差異主要由融合體之細胞介素部分驅動。 圖 18中之結果表明，xhCD8.1-hIL21 v31.4展現相比於缺乏v31電荷修飾之xhCD8.1-hIL21 v0.4增加1.9倍之曲線下面積且展現更高的多反應性概況( 表 15 )。該等結果表明，諸如v31之電荷修飾可降低IL-21變異體之多反應性且繼而增強活體內暴露。類似地，經電荷修飾之xhCD8.1-hIL-21 v31.23及xhCD8v11-hIL21 v31.23顯示相比於xhCD8.1-hIL21 v0.4延長之活體內暴露，此表明v31電荷修飾對生物可用性及暴露改善之重要性。 實例 10 ： 表徵重組 ( 非融合 ) hIL - 21 及 hIL - 21 變異體 材料及方法 非融合多肽之表現及純化
如 實例 1中所描述將重組(非融合) hIL-21及hIL-21變異體選殖至表現載體中且使其表現。將Gly-Gly-Ala-Ser連接子、接著為8His標籤插入用於純化之細胞介素分子下游。在Expi293細胞(Thermo Fisher)中表現5天之後收集上清液，且直接用於Biacore分析或進行純化。首先藉由親和層析使用Ni瓊脂糖凝膠樹脂(Cytiva)來純化IL-21多肽。使管柱平衡且用補充有0.5 M NaCl之PBS洗滌。用補充有0.5 M NaCl及0.25 M咪唑之PBS溶離蛋白質。藉由粒徑篩析層析(HiLoad Superdex 200 pg 16/600，Cytiva)在PBS中拋光經溶離之溶離份。 非融合多肽之多反應性評估
對於重組(非融合) hIL-21及hIL-21變異體之多反應性量測，除了用1:1000稀釋之辣根過氧化酶結合之小鼠抗His標籤抗體(BioLegend)執行偵測之外，如 實例 1中所描述執行ELISA分析。 非融合 IL - 21 變異體之 Biacore 分析
藉由表面電漿子共振(SPR)在25℃下使用BIAcore® 8K (Cytiva)量測具有人類IL-21R之非融合IL-21突變蛋白的動力學速率常數(ka及kd)以及結合親和力(KD)。為了測定親和力，首先在流動細胞1及2上以10 µL/min將經稀釋至10 µg/mL之人類IL-21抗體(R&D Systems，目錄號MAB15001)捕捉至CM5感測器晶片上達2分鐘，該晶片經抗小鼠Fc抗體(Cytiva，目錄號BR100838)共價固定。接下來，在流動細胞2上以10 µL/min捕捉IL-21 WT突變蛋白上清液與人類IL-21抗體達2分鐘。在流動細胞1上未捕捉到蛋白質以充當參考表面。在補充有1 g/L BSA之HBS-P+緩衝液中對如先前所描述內部產生之重組人類IL-21R進行連續稀釋，以20 µM標稱濃度起始，接著進行五次5倍連續稀釋，且使其在表面上以30 µL/min流動2分鐘以量測相關性。亦使緩衝液在表面上流動以充當空白減除。監測解離5分鐘，且在180秒注射10 mM甘胺酸-HCl pH 1.7之情況下使抗小鼠IgG-Fc表面再生，之後在各後續結合循環中再捕捉人類IL-21抗體/hIL-21 WT突變蛋白。雙重參考結合資料且藉由Biacore® Insight評估軟體4.0.8版使用針對極弱相互作用之穩態親和力或在可能時使用用於測定動力學速率常數(ka、kd)及KD之具有質量輸送模型之1:1 Langmuir進行分析。 結果
將IL-21R減弱突變併入野生型hIL-21或hIL-21 v31背景上。不包括下游連接子及8His標籤之細胞介素部分之序列以及在量測之情況下所報導之親和力示於 表 14中。
選擇所選IL-21R突變蛋白用於完全純化。在製備型SEC之後，藉由SDS-PAGE ( 圖 19A)及分析性SEC ( 圖 19B)再分析經完全純化之材料。基於經完全純化之蛋白質之SDS-PAGE分析，所有非融合hIL-21及hIL-21變異體似乎為單體且純的，且未觀測到污染帶。分析性SEC揭露所有基於野生型hIL-21之構築體(hIL-21、hIL-21 v0.4、hIL-21 v0.23及hIL-21 v0.51)相較於基於hIL-21 v31之構築體(hIL-21 v31.4、hIL-21 v31.23及hIL-21 v31.51)的峰寬增加及滯留時間延長。此指示基於野生型hIL-21之構築體具有比基於hIL-21 v31之構築體多的管柱相互作用，且基於hIL-21 v31之構築體具有更好的可發展特性(Kohli等人, MAbs, 7(4): 752-758, 2015)。
亦量測此等經完全純化之構築體之多反應性。結果示於 表 16中。總體而言，在hIL-21 v31之情況下觀測到相較於基於hIL-21野生型(v0)之變異體中之任一者低的多反應性，此表明單獨v31電荷修飾比野生型背景上之任何IL-21R減弱突變更改善多反應性。 實例 11 ： 重組 ( 非融合 ) hIL - 21 及 hIL - 21 變異體之暴露 材料及方法 血清樣本之 ELISA 評估
藉由ELISA，使用利用已知濃度之測試分子產生之標準曲線來量測測試分子之小鼠血清濃度。簡言之，將每孔100 µL之2 µg/mL抗人類IL-21抗體(R&D Systems，目錄號AF15001)/PBS在4℃下塗覆至96孔Nunc MaxiSorp盤(Thermo Fisher Scientific)上隔夜。移除塗覆溶液，且在室溫下用每孔250 µL之Blocker酪蛋白/PBS (ThermoFisher Scientific)阻斷盤2小時。用PBS + 0.1% Tween-20洗滌盤，且添加蛋白質標準物或經稀釋血清。對於蛋白質標準物，以0.00333 µg/mL起始，進行連續稀釋，接著進行四次3倍連續稀釋。將血清樣本稀釋至50倍與2000倍之間以便使最終讀數保持在標準曲線範圍內。所有稀釋皆在PBS + 0.5% BSA + 0.05% Tween-20中進行，且每孔使用100 µL。將血清樣本及蛋白質標準物在室溫下培育1-2小時，接著用PBS + 0.1% Tween-20洗滌。接下來，每孔添加100 µL之10 nM His標籤生物素標記抗體(R&D Systems，目錄號BAM050)，且將盤在室溫下培育1小時。用PBS + 0.1% Tween-20洗滌盤。隨後，每孔添加100 µL之以1:2000稀釋度處於PBS + 0.5% BSA + 0.05% Tween-20中之過氧化酶鏈黴抗生物素蛋白(Jackson ImmunoResearch, Laboratories公司, 目錄號016-030-084)，且將盤在室溫下培育45分鐘。使用100 µL之1步Ultra TMB-ELISA受質溶液(Thermo Fisher Scientific)使盤顯影1-3分鐘，且用100 µL之2 M硫酸停止。在SpectraMax iD5盤讀取器(Molecular Devices)上讀取在450 nm下之吸光度。使用非線性回歸擬合標準曲線，且藉由內插標準曲線將經稀釋血清樣本在450 nm下之吸光度轉換成濃度。 結果
評估小鼠中之人類重組(非融合)野生型IL-21及IL-21電荷變異體v31之暴露。由於兩種IL-21分子(~16kDa)之間缺乏顯著分子量差異，預期腎過濾介導之清除不會貢獻於任何有意義的暴露差異。替代地，野生型IL-21與IL-21v31之間的主要暴露差異係由非特異性清除介導，此係因為v31修飾不改變IL-21R親和力(表14)。 圖 20中之結果表明，相較於野生型IL-21，v31修飾改善暴露，且觀測到AUC比之4.3×增加。總體而言，電荷修飾提高呈非融合體格式之重組IL-21之生物可用性，且此種情況與所觀測到之抗體融合體格式之改善一致( 圖 4D)。 實例 12 ： 量測對 T 細胞活化之 抑制 材料及方法
同種異體 T 細胞 活化分析
購買未成熟人類樹突狀細胞(DC) (HemaCare-Charles River Laboratories)且根據套組方案(R&D Systems)在GM-CSF、IL-4及TNFa中將其活化3天。分離總T細胞且藉由負向選擇磁珠套組(Miltenyi Biotech)使其富集。收取經活化DC且在存在或不存在IL-21分子之情況下以1:10之比率將其與來自錯配供體之T細胞一起塗鋪3天。測試分子包括兩種CD8+ T細胞靶向融合體xhCD8.1-hIL21 v31.4及xhCD8.1-hIL21 v31.23以及非靶向非經減弱Fc-hIL21 v31。在活體外pSTAT3分析中測試呈在CD8 T細胞中產生EC 95反應之各別濃度之所有三種IL-21分子。在共培養完成後，收取上清液且遵循製造方案(IL-2 instant ELISA，ThermoFisher Scientific)藉由ELISA評估其之IL-2分泌。 結果
IL-21可介導對樹突狀細胞(DC)之抑制作用，從而抑制其成熟且誘導習知DC之細胞凋亡。另外，IL-21可抑制混合淋巴球培養物中之T細胞激活(Wan等人, Immunity, (2013) 38:514-27)。評估DC與來自錯配人類供體之T細胞之共培養物中靶向CD8+ T細胞之融合體避免對樹突狀細胞之IL-21介導之抑制作用的能力。在不存在IL-21之情況下，培育同種異體反應性T細胞及DC誘導IL-2在培養物中之釋放。 圖 22表明非經減弱Fc-hIL21 v31抑制IL-2釋放，且因此抑制T細胞活化。相比之下，兩種靶向CD8+ T細胞之融合體xhCD8.1-hIL21 v31.4及xhCD8.1-hIL21 v31.23均維持與對照類似的IL-2釋放位準，此支援靶向CD8+ T細胞之IL-21融合體不會干擾錯配T細胞及樹突狀細胞之同種異體反應。 實例 13 ： 評估食蟹獼猴中之靶向 CD8 之 IL - 21 融合體 材料及方法 評估食蟹獼猴血球中之活體外 STAT3 活化
除了使用食蟹獼猴特異性抗體來對血液中之各種細胞類型進行染色之外，類似地如實例3中所描述藉由IL-21分子執行食蟹獼猴全血中之STAT3活化。具體言之，所使用之抗體為CD3 (SP34.2，BD)、CD4 (L200，BD)、CD8a (SK1，Biolegend)、CD14 (M5E2，Biolegend)、CD20 (2H7，Biolegend)、HLA-DR (L243，Biolegend)、NKG2A (REA110，Miltenyi)及pStat3 pY705 (4/P-STAT3，BD)。細胞群體定義如下：CD8+ T細胞：CD3+CD8+，CD4+ T細胞：CD3+CD4+，B細胞：CD20+，NK細胞：CD3-CD19-NKG2A+。 評估食蟹獼猴中之活體內 STAT3 活化
向兩隻原生食蟹獼猴非人類靈長類動物(食蟹猴(Macaca fascicularis))靜脈內給藥xhCD8.1-IL-21 v31.4。在給藥後20 min收集血液樣本。遵循實例3中所描述之STAT3方案測定各種血球類型中之STAT3活化。使用以下抗體組來對各種細胞類型及磷酸化STAT3進行染色：CD3 (SP34.2，BD)、CD4 (L200，BD)、CD8a (SK1，Biolegend)、CD14 (M5E2，Biolegend)、CD20 (2H7，Biolegend)、HLA-DR (L243，Biolegend)、NKG2A (REA110，Miltenyi)及pStat3 pY705 (4/P-STAT3，BD)。 結果
用各種IL-21分子活體外刺激食蟹獼猴血液，且測定各種血球類型中之STAT3活化。類似於對人類CD8+ T細胞展現之優先活性( 圖 14及 圖 15)，靶向CD8+ T細胞之IL-21融合蛋白xhCD8.1-IL-21 v31.4 ( 圖 23A)、xhCD8.1-IL-21 v31.23 ( 圖 23B)及xhCD8v11-IL-21 v31.23 ( 圖 23C)全部顯示在食蟹獼猴血液中相比於B細胞及CD4+ T細胞，CD8+ T細胞之優先STAT3活化，如藉由EC 50所量測。相比之下，非靶向非經減弱Fc-hIL21 v31 ( 圖 23D)在所有細胞類型中無差別地活化STAT3。
評估靶向CD8+ T細胞之融合體xhCD8.1-IL-21 v31.4之活體內選擇性。向食蟹獼猴給藥xhCD8.1-IL-21 v31.4，且藉由對所收集之血液樣本中一定含量之磷酸化STAT3進行直接染色來測定各種血球類型中之活體內STAT3活化。類似於所觀測到之活體外選擇性， 圖 24表明相比於NK細胞、B細胞及CD4+ T細胞，xhCD8.1-IL-21 v31.4選擇性且優先在CD8+T細胞中活體內活化STAT3。
儘管本文已顯示且描述本發明之較佳實施例，但對於熟習此項技術者將顯而易見的是，該等實施例僅藉助於實例來提供。在不脫離本發明之情況下，熟習此項技術者現將想到許多變化、改變及取代。應理解，本文所描述之本發明實施例之各種替代方案可用於實踐本發明。預期以下申請專利範圍界定本發明之範疇，且藉此覆蓋在此等申請專利範圍及其等效方案之範疇內之方法及結構。 表 1 ： IL-21 序列
SEQ ID NO: 名稱 序列
1 野生型IL-21 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS
2 例示性IL-21多肽序列 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGGGQGHELTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS
3 例示性IL-21骨架序列 QGQDX 1HMX 2X 3MX 4X 5LX 6X 7IVX 8X 9LKNX 10VNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLX 11SANTGNNEX 12IINVX 13IX 14X 15LX 16X 17X 18PPX 19X 20X 21X 22X 23X 24X 25X 26X 27X 28X 29X 30X 31CPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLX 32X 33MIHQHLSSRTHGSEDS
22 例示性IL-21骨架序列 QGQDX 1HMX 2X 3MX 4X 5LX 6X 7IVX 8X 9LKNX 10VNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNEX 11IINVX 12IX 13X 14LX 15X 16X 17PPX 18TNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLX 19X 20MIHQHLSSRTHGSEDS
表 2 ： IL-21 電荷變異體
IL-21變異體 胺基酸序列 理論pI SEQ ID NO
例示性IL-21多肽序列1 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGGGQGHALTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 8.72 4
例示性IL-21多肽序列2 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGGGQGHELTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQ KMIHQHLSSRTHGSEDS 8.39 2
例示性IL-21多肽序列3 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLASANTGNNERIINVSIKKLARKPPSTNAGGGQGHALTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 7.87 5
例示性IL-21多肽序列4 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLESANTGNNERIINVSIKKLARKPPSTNAGGGQGHALTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 7.12 6
例示性IL-21多肽序列5 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLASANTGNNERIINVSIKKLERKPPSTNAGGGQGHALTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 7.12 7
例示性IL-21多肽序列6 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLASANTGNNERIINVSIKKLARKPPSTNAGGGQGHELTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 7.12 8
例示性IL-21多肽序列7 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPGGGSGEGSGGSLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 8.39 9
例示性IL-21多肽序列8 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPGGGSGGGSGGELTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 8.39 10
例示性IL-21多肽序列9 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGGGSGGELTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 8.39 11
例示性IL-21多肽序列10 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGGGSGGSLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 8.72 12
例示性IL-21多肽序列11 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGGGGGGELTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 8.39 13
例示性IL-21多肽序列12 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGGGGGGGLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 8.72 14
例示性IL-21多肽序列13 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGGGEGGGLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 8.39 15
例示性IL-21多肽序列14 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPGGGSGGGSGGGSGCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 8.72 23
例示性IL-21多肽序列15 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPGGGGGGGGGGGGGCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 8.72 24
例示性IL-21多肽序列16 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPGGGSGGGEGGGSGCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 8.39 25
例示性IL-21多肽序列17 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPGGGEGGGEGGGSGCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 7.85 26
例示性IL-21多肽序列18 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTGGGSGGGSGGSCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 8.72 27
例示性IL-21多肽序列19 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTGGGEGGGSGGSCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 8.39 28
例示性IL-21多肽序列20 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPGGGGGEGGGGGGGCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 8.39 29
例示性IL-21多肽序列21 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPGGGSGGGSGGEGGCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 8.39 30
例示性IL-21多肽序列22 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPGGGGGGGGGGEGGCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 8.39 31
例示性IL-21多肽序列23 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTGGGSGGGSEGSCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 8.39 32
例示性IL-21多肽序列24 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTGGGGGGGGEGGCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 8.39 33
例示性IL-21多肽序列25 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGGGGGGEGTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 8.39 34
例示性IL-21多肽序列26 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTGGGGGGGGEGTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 8.39 35
例示性IL-21多肽序列27 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTGGGGEGGGEGTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 7.85 36
例示性IL-21多肽序列28 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTGGGEGGGGEGTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 7.85 37
例示性IL-21多肽序列29 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPGGGGEGGGGGEGGCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 7.85 38
例示性IL-21多肽序列30 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPGGGEGGGGGGEGGCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 7.85 39
例示性IL-21多肽序列31 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPGGEGGGGGGGEGGCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 7.85 40
表 3 ： 中間物及具有 IL - 21 電荷變異體之融合蛋白之最終產量
IL-21突變蛋白 抗體融合體 蛋白A之後的產量(mg/L) 蛋白A+IEX之後的產量(mg/L)
WT xhCD8 36 8
v1 xhCD8 61 21
v2 xhCD8 112 23
v3 xhCD8 35 ND*
v4 xhCD8 31 ND
v5 xhCD8 30 ND
v6 xhCD8 40 9
WT xhCD8.1 32 5
v2 xhCD8.1 129 69
v7 xhCD8.1 132 67
v8 xhCD8.1 114 46
v9 xhCD8.1 120 65
v10 xhCD8.1 111 46
v11 xhCD8.1 126 59
v12 xhCD8.1 117 63
v13 xhCD8.1 153 78
v14 xhCD8.1 78 29
v15 xhCD8.1 87 22
v16 xhCD8.1 111 46
v17 xhCD8.1 127 57
v18 xhCD8.1 81 26
v19 xhCD8.1 97 33
v20 xhCD8.1 99 32
v21 xhCD8.1 90 34
v22 xhCD8.1 97 34
v23 xhCD8.1 130 40
v24 xhCD8.1 110 49
v25 xhCD8.1 119 43
v26 xhCD8.1 99 37
v27 xhCD8.1 123 43
v28 xhCD8.1 107 36
v29 xhCD8.1 97 39
v30 xhCD8.1 136 59
v31 xhCD8.1 116 59
* ND指示量測結果未經測定。 表 4 ： IL - 21 電荷變異體之 IL - 21R 結合動力學
構築體 k a ( × 10 6 M -1s -1) k d ( × 10 -4 s -1) K D (pM)
Fc-hIL21 WT 5.0 ± 0.1 7.6 ± 0.3 154 ± 7
xhCD8-hIL21 v1 8.3 ± 0.5 9.7 ± 2.7 117 ± 33
xhCD8-hIL21 v2 8.9 ± 0.4 11 ± 1 122 ± 14
xhCD8-hIL21 v6 5.2 ± 0.2 25 ± 2 478 ± 53
xhCD8.1-hIL21 v27 13.1 ± 0.5 13.9 ± 0.2 106 ± 4
xhCD8.1-hIL21 v28 13.1 ± 0.6 13.9 ± 0.2 106 ± 5
xhCD8.1-hIL21 v29 12.7 ± 0.2 11.9 ± 0.2 94 ± 2
xhCD8.1-hIL21 v30 11.6 ± 0.2 10.7 ± 0.2 93 ± 2
xhCD8.1-hIL21 v31 12.0 ± 0.3 11.3 ± 0.2 94 ± 3
表 5 ： IL - 21 融合蛋白之多反應性 ELISA
構築體 與KLH之結合 與肝素之結合 與血紅素之結合
玻可昔單抗 47.13 15.58 29.12
xhCD8.1-hIL21 30.11 32.85 10.90
xhCD8.1-hIL21 v2 9.68 11.75 4.95
xhCD8.1-hIL21 v14 13.20 12.37 4.50
xhCD8.1-hIL21 v15 12.01 11.28 5.36
xhCD8.1-hIL21 v16 11.22 10.26 5.20
xhCD8.1-hIL21 v17 9.90 9.47 5.02
xhCD8.1-hIL21 v18 11.49 11.85 5.09
xhCD8.1-hIL21 v19 10.47 12.34 5.13
xhCD8.1-hIL21 v20 11.27 11.20 5.03
xhCD8.1-hIL21 v21 12.22 12.87 6.08
xhCD8.1-hIL21 v22 11.28 12.72 5.37
xhCD8.1-hIL21 v23 11.00 11.18 5.72
xhCD8.1-hIL21 v24 9.24 9.49 5.05
xhCD8.1-hIL21 v25 10.87 11.69 5.77
xhCD8.1-hIL21 v26 9.89 11.14 4.85
xhCD8.1-hIL21 v27 9.49 9.93 4.74
xhCD8.1-hIL21 v28 9.76 9.13 4.26
xhCD8.1-hIL21 v29 10.57 9.08 5.38
xhCD8.1-hIL21 v30 11.36 10.46 5.69
xhCD8.1-hIL21 v31 10.50 8.80 5.29
表 6 ： 對 IL - 21R 具有 降低 之 親和力的 IL - 21 電荷變異體
IL-21突變蛋白 胺基酸序列 在37℃下之K D(nM) SEQ ID NO
IL-21 v2.1 QGQDRHMIRMDQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGGGQGHELTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS ND 16
IL-21 v2.2 QGQDRHMIRMEQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGGGQGHELTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS ND 17
IL-21 v2.3 QGQDRHMIRMRQLDDIVAQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGGGQGHELTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQAMIHQHLSSRTHGSEDS ND 18
IL-21 v2.4 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKEKPPSTNAGGGQGHELTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS ＞5000 19
IL-21 v2.5 QGQDFHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGGGQGHELTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS ND 20
IL-21 v2.6 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKFKPPSTNAGGGQGHELTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 1700 21
IL-21 v2.7 QGQDRHMERMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGGGQGHELTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 156 41
IL-21 v2.8 QGQDAHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGGGQGHELTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 18.9 42
IL-21 v2.9 QGQDEHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGGGQGHELTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 420 43
IL-21 v2.10 QGQDSHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGGGQGHELTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 24.4 44
IL-21 v2.11 QGQDTHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGGGQGHELTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 9.4 45
IL-21 v2.12 QGQDNHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGGGQGHELTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 54.6 46
IL-21 v2.13 QGQDQHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGGGQGHELTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 15.2 47
IL-21 v2.14 QGQDVHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGGGQGHELTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 6.5 48
IL-21 v2.15 QGQDIHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGGGQGHELTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 6.2 49
IL-21 v2.16 QGQDLHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGGGQGHELTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 2.1 50
IL-21 v2.17 QGQDYHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGGGQGHELTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 9.8 51
IL-21 v2.18 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKAKPPSTNAGGGQGHELTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 3180 52
IL-21 v2.19 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKNKPPSTNAGGGQGHELTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 2310 53
IL-21 v2.20 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKDKPPSTNAGGGQGHELTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS NB 54
IL-21 v2.21 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKSKPPSTNAGGGQGHELTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 3800 55
IL-21 v2.22 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKTKPPSTNAGGGQGHELTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 3030 56
IL-21 v2.23 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKQKPPSTNAGGGQGHELTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 2410 57
IL-21 v2.24 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKVKPPSTNAGGGQGHELTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 5180 58
IL-21 v2.25 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKIKPPSTNAGGGQGHELTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 2990 59
IL-21 v2.26 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKLKPPSTNAGGGQGHELTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 651 60
IL-21 v2.27 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKYKPPSTNAGGGQGHELTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 2150 61
IL-21 v2.28 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRAPPSTNAGGGQGHELTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 0.693 62
IL-21 v2.29 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKREPPSTNAGGGQGHELTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 2.8 63
IL-21 v2.30 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIAKLKRKPPSTNAGGGQGHELTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 0.419 64
IL-21 v2.31 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIEKLKRKPPSTNAGGGQGHELTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 3.4 65
IL-21 v2.32 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLARKPPSTNAGGGQGHELTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 0.236 66
IL-21 v2.33 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLERKPPSTNAGGGQGHELTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 1.3 67
IL-21 v2.34 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKALKRKPPSTNAGGGQGHELTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 2.0 68
IL-21 v2.35 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKELKRKPPSTNAGGGQGHELTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 449.0 69
IL-21 v2.36 QGQDFHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRAPPSTNAGGGQGHELTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 125.0 70
IL-21 v2.37 QGQDFHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKREPPSTNAGGGQGHELTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 601.0 71
IL-21 v2.38 QGQDFHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIAKLKRKPPSTNAGGGQGHELTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 66.9 72
IL-21 v2.39 QGQDFHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIEKLKRKPPSTNAGGGQGHELTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 614.0 73
IL-21 v2.40 QGQDFHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLARKPPSTNAGGGQGHELTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 54.7 74
IL-21 v2.41 QGQDFHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLERKPPSTNAGGGQGHELTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 104.0 75
IL-21 v2.42 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKALKFKPPSTNAGGGQGHELTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS NB 76
IL-21 v2.43 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKELKFKPPSTNAGGGQGHELTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS NB 77
IL-21 v2.44 QGQDRHMIAMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGGGQGHELTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 3250 78
IL-21 v2.45 QGQDRHMIDMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGGGQGHELTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS NB 79
IL-21 v2.46 QGQDRHMIEMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGGGQGHELTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS NB 80
IL-21 v2.47 QGQDRHMIHMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGGGQGHELTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 16.5 81
IL-21 v2.48 QGQDRHMISMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGGGQGHELTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 4760 82
IL-21 v2.49 QGQDRHMITMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGGGQGHELTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS ＞5000 83
IL-21 v2.50 QGQDRHMINMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGGGQGHELTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 2880 84
IL-21 v2.51 QGQDRHMIGMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGGGQGHELTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 4840 85
IL-21 v2.52 QGQDRHMIVMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGGGQGHELTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS ＞5000 86
IL-21 v2.53 QGQDRHMIIMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGGGQGHELTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS ＞ 5000 87
IL-21 v2.54 QGQDRHMILMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGGGQGHELTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 4690 88
IL-21 v2.55 QGQDRHMIYMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGGGQGHELTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 394 89
IL-21 v2.56 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIAKLKFKPPSTNAGGGQGHELTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 156 90
IL-21 v2.57 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLAFKPPSTNAGGGQGHELTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 18.9 91
IL-21 v2.58 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKFAPPSTNAGGGQGHELTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 420 92
IL-21 v2.59 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLEFKPPSTNAGGGQGHELTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 24.4 93
IL-21 v2.60 QGQDRHMIRMRQLIDIIDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKIKRKPPSTNAGGGQGHELTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 0.15 374
IL-21 v2.61 QGQDRHMIRMRQLIDAVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKFKRKPPSTNAGGGQGHELTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 11.9 375
IL-21 v2.62 QGQDRHMIRMRQLIDSIDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKVKRKPPSTNAGGGQGHELTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 13.6 376
IL-21 v2.63 QGQDRHMIRMRQLIDRIDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKIKRKPPSTNAGGGQGHELTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 1400 377
IL-21 v2.64 QGQDRHMIRMRQFIDAADQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKMKRKPPSTNAGGGQGHELTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 1050 378
IL-21 v2.65 QGQDRHMIRMRQRIDAIDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKIKRKPPSTNAGGGQGHELTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 5910 379
ND指示親和力未經測定 NB指示在最高測試濃度下未偵測到結合 表 7 ： 對 IL - 21R 具有降低之親和力的另外 IL - 21 電荷變異體
IL-21突變蛋白 胺基酸序列 SEQ ID NO
IL-21 v31.4 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKEKPPGGEGGGGGGGEGGCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 94
IL-21 v31.6 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKFKPPGGEGGGGGGGEGGCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 95
IL-21 v31.23 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKQKPPGGEGGGGGGGEGGCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 96
IL-21 v31.48 QGQDRHMISMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPGGEGGGGGGGEGGCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 97
IL-21 v31.51 QGQDRHMIGMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPGGEGGGGGGGEGGCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 98
表 8 ： 例示性抗體 - 細胞介素融合蛋白序列
名稱 輕鏈序列 重鏈序列 ( 具有 IL-21 融合體 ) 重鏈序列 ( 不具有 IL-21 融合體 ) 重鏈序列 ( 不具有 IL-21 融合體 ) 加上 C 端離胺酸
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xhCD8v11-hIL21 v31.6 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPPVTFGQGTKVEIK RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 301) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSDITYAGGSTAYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARSNAYAWDDALDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGSGGGGSGGGGSGGGGSQGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKFKPPGGEGGGGGGGEGGCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS (SEQ ID NO: 302) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSDITYAGGSTAYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARSNAYAWDDALDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 303) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSDITYAGGSTAYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARSNAYAWDDALDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 304)
xhCD8v11-hIL21 v31.23 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPPVTFGQGTKVEIK RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 305)    EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSDITYAGGSTAYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARSNAYAWDDALDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGSGGGGSGGGGSGGGGSQGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKQKPPGGEGGGGGGGEGGCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS (SEQ ID NO: 306) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSDITYAGGSTAYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARSNAYAWDDALDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 307) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSDITYAGGSTAYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARSNAYAWDDALDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 308)
xhCD8v11-hIL21 v31.51 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPPVTFGQGTKVEIK RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 309) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSDITYAGGSTAYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARSNAYAWDDALDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGSGGGGSGGGGSGGGGSQGQDRHMIGMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPGGEGGGGGGGEGGCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS (SEQ ID NO: 310) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSDITYAGGSTAYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARSNAYAWDDALDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 311) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSDITYAGGSTAYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARSNAYAWDDALDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 312)
表 9 ： 經工程改造之小鼠 IL - 21 突變蛋白
小鼠IL-21突變蛋白 胺基酸序列 SEQ ID NO
mIL-21 v1 QGPDRLLIRLRHLIDIVEQLKIYENDLDPELLSAPQDVKGHCEHAAFACFQKAKLKPSNPGNNKTFIIDLVAQLERRLPAGEGGEGQEHIAKCPSCDSYEKRTPKEFLERLKWLLQKMIHQHLS 282
mIL-21 v1.1 QGPDRLLIRLRHLIDIVEQLKIYENDLDPELLSAPQDVKGHCEHAAFACFQKAKLKPSNPGNNKTFIIDLVAQLEERLPAGEGGEGQEHIAKCPSCDSYEKRTPKEFLERLKWLLQKMIHQHLS 283
表 10 .抗CD8抗體CDR (Kabat)
名稱 CDR-H1 CDR-H2 CDR-H3 CDR-L1 CDR-L2 CDR-L3
xhCD8 KYTMH (SEQ ID NO:137) HFNPNNDETKYNQKFTG (SEQ ID NO:138) DGLGLRLFAD (SEQ ID NO:139) GASENIYGALN (SEQ ID NO:140) GATNLAD (SEQ ID NO:141) QNILDTPWT (SEQ ID NO:142)
xhCD8v1 KYAIS (SEQ ID NO:252) HFNPNNDETKYNQKFQG (SEQ ID NO:253) DGLGLRLFAD (SEQ ID NO:254) RASENIYGALN (SEQ ID NO:255) GATNLAD (SEQ ID NO:256) QNILDTPWT (SEQ ID NO:257)
xhCD8v2 NFAIS (SEQ ID NO:149) GIIPGHAKANYAQKFQG (SEQ ID NO:150) DGLGIRLFAD (SEQ ID NO:151) RASQEIYGALN (SEQ ID NO:152) GATNLQS (SEQ ID NO:153) QDIYDAPWT (SEQ ID NO:154)
xhCD8v3 KFAIS (SEQ ID NO:155) GIIPGHAKANYAQKFQG (SEQ ID NO:156) DGLGIRLFAD (SEQ ID NO:157) RASQEIYGALN (SEQ ID NO:158) GATNLQS (SEQ ID NO:159) QDIYDAPWT (SEQ ID NO:160)
xhCD8v4 KYAIS (SEQ ID NO:161) GIIPGHAKANYAQKFQG (SEQ ID NO:162) DGLGIRLFAD (SEQ ID NO:163) RASQKIYGALN (SEQ ID NO:164) GATNLQS (SEQ ID NO:165) QNTYDTPWT (SEQ ID NO:166)
xhCD8v5 GHAIS (SEQ ID NO:167) GIIPGHAKANYAQKFQG (SEQ ID NO:168) DGLGIRLFAD (SEQ ID NO:169) RASQKIYGALN (SEQ ID NO:170) GATNLQS (SEQ ID NO:171) QNTYDTPWT (SEQ ID NO:172)
xhCD8v6 DYGMS (SEQ ID NO:173) DINWSGEITAYADSVKG (SEQ ID NO:174) SNSYRWDDALDI (SEQ ID NO:175) RASQSVSSNLA (SEQ ID NO:176) GASSRAT (SEQ ID NO:177) QQYGSSPPVT (SEQ ID NO:178)
xhCD8v7 DYAMH (SEQ ID NO:179) VISYDGSNKYYADSVKG (SEQ ID NO:180) DRIGWYDYDAFDI (SEQ ID NO:181) RASHSVGSNLA (SEQ ID NO:182) DASNRAT (SEQ ID NO:183) QQRSNWPPT (SEQ ID NO:184)
xhCD8v8 SYWMN (SEQ ID NO:143) QIYPGDGDTNYNGKFKG (SEQ ID NO:144) SGAAFSSYYAMDY (SEQ ID NO:145) RASENIYSNLA (SEQ ID NO:146) AATNLAD (SEQ ID NO:147) QHFWGTPWT (SEQ ID NO:148)
xhCD8v9 SYAIS (SEQ ID NO:199) GIIPGAATANYAQKFQG (SEQ ID NO:200) DAAGIRLFAD (SEQ ID NO:201) RASQEIYGALN (SEQ ID NO:152) GATNLQS (SEQ ID NO:153) QSTYDAPWT (SEQ ID NO:202)
xhCD8v10 SYAMS (SEQ ID NO:220) DITYAGGSTAYADSVKG (SEQ ID NO:221) SNAYAWDDALDI (SEQ ID NO:222) RASQSVSSNLA (SEQ ID NO:176) GASSRAT (SEQ ID NO:177) QQYGSSPPVT (SEQ ID NO:178)
xhCD8v11 SYAMS (SEQ ID NO:220) DITYAGGSTAYADSVKG (SEQ ID NO:221) SNAYAWDDALDI (SEQ ID NO:222) RASQSVSSNLA (SEQ ID NO:176) GASSRAT (SEQ ID NO:177) QQYGSSPPVT (SEQ ID NO:178)
xhCD8v12 (xhCD8.1) SYAIS (SEQ ID NO:199) GIIPGYATANYAQKFQG (SEQ ID NO:203) DAAGIRLFAD (SEQ ID NO:204) RASQSIYGALN (SEQ ID NO:205) GASNLQS (SEQ ID NO:206) QSTYTAPWT (SEQ ID NO:207)
xhCD8v13 SYAIS (SEQ ID NO:199) GIIPGYATANYAQKFQG (SEQ ID NO:203) DAAGIRLFAD (SEQ ID NO:204) RASQEIYGALN (SEQ ID NO:152) GATNLQS (SEQ ID NO:153) QSTYDAPWT (SEQ ID NO:202)
xhCD8v14 SYAMS (SEQ ID NO:220) DISYAGGSTAYADSVKG (SEQ ID NO:260) SNAYAWDDALDI (SEQ ID NO:222) RASQSVSSNLA (SEQ ID NO:176) GASSRAT (SEQ ID NO:177) QQYGSSPPVT (SEQ ID NO:178)
xhCD8v15 SYAMS (SEQ ID NO:220) DISYAGGSTAYADSVKG (SEQ ID NO:260) SNAYAWDDALDI (SEQ ID NO:222) RASQSVSSNLA (SEQ ID NO:176) GASSRAT (SEQ ID NO:177) QQYGSSPPVT (SEQ ID NO:178)
V9 家族 X 1X 2AIS X 1為S、K、G、N、R、D、T或G X 2為Y、L、H或F (SEQ ID NO: 185) X 1X 2X 3PX 4X 5X 6X 7X 8X 9YX 10QKFX 11G X 1為G或H，X 2為I或F， X 3為I、N或M， X 4為G、N、H、S、R、I或A，X 5為A、N、H、S、T、F或Y，X 6為A、D或G， X 7為T、E、K、V、Q或A， X 8為A或T，X 9為N或K，X 10為A或N，X 11為Q或T (SEQ ID NO: 186) X 1X 2X 3GX 4X 5LFX 6X 7X 1為D或A， X 2為A、G、E、R、Y、K、N、Q、L或F， X 3為A、L、P或Y， X 4為I或L，X 5為R、A、Q或S， X 6為A或D， X 7為D、E、A或S (SEQ ID NO: 187) X 1X 2SX 3X 4IX 5GX 6LN X 1為R或G， X 2為A或T， X 3為Q或E， X 4為E、N、T、S、A、K、D、G、R或Q， X 5為Y或S，X 6為A或V (SEQ ID NO: 188) GX 1X 2X 3LX 4X 5X 1為A或S，X 2為T、S、E、Q或D，X 3為N、R、A、E或H，X 4為Q或A， X 5為S或D (SEQ ID NO: 189) QX 1X 2X 3X 4X 5PWT X 1為S、N、D、Q、A或E， X 2為T、I或S， X 3為Y、L或F， X 4為D、G、T、E、Q、A或Y， X 5為A、T、R、S、K或Y (SEQ ID NO: 190)
V11 家族 X 1YX 2MS X 1為S、D、E、A或Q X 2為A、G或T (SEQ ID NO: 208) DIX 1X 2X 3GX 4X 5TX 6YADSVKG X 1為T、N、S、Q、E、H、R或A， X 2為Y、W、F或H， X 3為A、S、Q、E或T， X 4為G或E，X 5為S或I， X 6為A或G (SEQ ID NO: 209) X 1X 2X 3YX 4WX 5X 6AX 7DX 8X 1為S或A，X 2為N、H、A、D、L、Q、Y或R， X 3為A、N、S或G， X 4為A、V、R、E或S，X 5為D或S，X 6為D、N、Q、E、S、T或L， X 7為L、F或M， X 8為I、Y或V (SEQ ID NO: 210) RASQSVSSNLA (SEQ ID NO: 176) GASSRAT (SEQ ID NO: 177) QQYGSSPPVT (SEQ ID NO: 178)
表 11.抗CD8抗體CDR (Chothia)
名稱 CDR-H1 CDR-H2 CDR-H3 CDR-L1 CDR-L2 CDR-L3
xhCD8 GYTFTKY (SEQ ID NO:223) NPNNDE (SEQ ID NO:224) DGLGLRLFAD (SEQ ID NO:225) GASENIYGALN (SEQ ID NO:140) GATNLAD (SEQ ID NO:141) QNILDTPWT (SEQ ID NO:142)
xhCD8v1 GYTFTKY (SEQ ID NO:223) NPNNDE (SEQ ID NO:224) DGLGLRLFAD (SEQ ID NO:284) RASENIYGALN (SEQ ID NO:285) GATNLAD (SEQ ID NO:286) QNILDTPWT (SEQ ID NO:287)
xhCD8v2 GYRFHNF (SEQ ID NO:226) IPGHAK (SEQ ID NO:227) DGLGIRLFAD (SEQ ID NO:151) RASQEIYGALN (SEQ ID NO:152) GATNLQS (SEQ ID NO:153) QDIYDAPWT (SEQ ID NO:154)
xhCD8v3 GSRFYKF (SEQ ID NO:228) IPGHAK (SEQ ID NO:227) DGLGIRLFAD (SEQ ID NO:157) RASQEIYGALN (SEQ ID NO:158) GATNLQS (SEQ ID NO:159) QDIYDAPWT (SEQ ID NO:160)
xhCD8v4 GYTFTKY (SEQ ID NO:223) IPGHAK (SEQ ID NO:227) DGLGIRLFAD (SEQ ID NO:163) RASQKIYGALN (SEQ ID NO:164) GATNLQS (SEQ ID NO:165) QNTYDTPWT (SEQ ID NO:166)
xhCD8v5 GSGFRGH (SEQ ID NO:229) IPGHAK (SEQ ID NO:227) DGLGIRLFAD (SEQ ID NO:169) RASQKIYGALN (SEQ ID NO:170) GATNLQS (SEQ ID NO:171) QNTYDTPWT (SEQ ID NO:172)
xhCD8v6 GFTFDDY (SEQ ID NO:230) NWSGEI (SEQ ID NO:231) SNSYRWDDALDI (SEQ ID NO:175) RASQSVSSNLA (SEQ ID NO:176) GASSRAT (SEQ ID NO:177) QQYGSSPPVT (SEQ ID NO:178)
xhCD8v7 GFTFDDY (SEQ ID NO:230) SYDGSN (SEQ ID NO:232) DRIGWYDYDAFDI (SEQ ID NO:181) RASHSVGSNLA (SEQ ID NO:182) DASNRAT (SEQ ID NO:183) QQRSNWPPT (SEQ ID NO:184)
xhCD8v8 GYAFSSY (SEQ ID NO:233) YPGDGD (SEQ ID NO:234) SGAAFSSYYAMDY (SEQ ID NO:145) RASENIYSNLA (SEQ ID NO:146) AATNLAD (SEQ ID NO:147) QHFWGTPWT (SEQ ID NO:148)
xhCD8v9 GGTFSSY (SEQ ID NO:241) IPGAAT (SEQ ID NO:242) DAAGIRLFAD (SEQ ID NO:204) RASQEIYGALN (SEQ ID NO:152) GATNLQS (SEQ ID NO:153) QSTYDAPWT (SEQ ID NO:202)
xhCD8v10 GFTFSSY (SEQ ID NO:250) TYAGGS (SEQ ID NO:251) SNAYAWDDALDI (SEQ ID NO:288) RASQSVSSNLA (SEQ ID NO:176) GASSRAT (SEQ ID NO:177) QQYGSSPPVT (SEQ ID NO:178)
xhCD8v11 GFTFSSY (SEQ ID NO:250) TYAGGS (SEQ ID NO:251) SNAYAWDDALDI (SEQ ID NO:288) RASQSVSSNLA (SEQ ID NO:176) GASSRAT (SEQ ID NO:177) QQYGSSPPVT (SEQ ID NO:178)
xhCD8v12 (xhCD8.1) GGTFSSY (SEQ ID NO:241) IPGYAT (SEQ ID NO:243) DAAGIRLFAD (SEQ ID NO:204) RASQSIYGALN (SEQ ID NO:205) GASNLQS (SEQ ID NO:206) QSTYTAPWT (SEQ ID NO:207)
xhCD8v13 GGTFSSY (SEQ ID NO:241) IPGYAT (SEQ ID NO:243) DAAGIRLFAD (SEQ ID NO:204) RASQEIYGALN (SEQ ID NO:152) GATNLQS (SEQ ID NO:153) QSTYDAPWT (SEQ ID NO:202)
xhCD8v14 GFTFSSY (SEQ ID NO:250) SYAGGS (SEQ ID NO:261) SNAYAWDDALDI (SEQ ID NO:288) RASQSVSSNLA (SEQ ID NO:176) GASSRAT (SEQ ID NO:177) QQYGSSPPVT (SEQ ID NO:178)
xhCD8v15 GFTFSSY (SEQ ID NO:250) SYAGGS (SEQ ID NO:261) SNAYAWDDALDI (SEQ ID NO:288) RASQSVSSNLA (SEQ ID NO:176) GASSRAT (SEQ ID NO:177) QQYGSSPPVT (SEQ ID NO:178)
V9 家族 GX 1X 2FX 3X 4X 5X 1為G、Y、S或A， X 2為T、S、G、R、N或H， X 3為S、T、R、H、Y、G或P， X 4為S、K、G、N、R、D、T或G， X 5為Y、L、H或F (SEQ ID NO: 235) X 1PX 2X 3X 4X 5X 1為I、N或M， X 2為G、N、H、S、R、I或A， X 3為A、N、H、S、T、F或Y， X 4為A、D或G， X 5為T、E、K、V、Q或A (SEQ ID NO: 236) X 1X 2X 3GX 4X 5LFX 6X 7X 1為D或A， X 2為A、G、E、R、Y、K、N、Q、L或F， X 3為A、L、P或Y， X 4為I或L，X 5為R、A、Q或S， X 6為A或D， X 7為D、E、A或S (SEQ ID NO: 237) X 1X 2SX 3X 4IX 5GX 6LN X 1為R或G， X 2為A或T， X 3為Q或E， X 4為E、N、T、S、A、K、D、G、R或Q， X 5為Y或S，X 6為A或V (SEQ ID NO: 188) GX 1X 2X 3LX 4X 5X 1為A或S，X 2為T、S、E、Q或D，X 3為N、R、A、E或H，X 4為Q或A， X 5為S或D (SEQ ID NO: 189) QX 1X 2X 3X 4X 5PWT X 1為S、N、D、Q、A或E， X 2為T、I或S， X 3為Y、L或F， X 4為D、G、T、E、Q、A或Y， X 5為A、T、R、S、K或Y (SEQ ID NO: 190)
V11 家族 GFTFX 1X 2Y X 1為S、D、E、Q、S或A X 2為S、D、E、A或Q (SEQ ID NO: 244) X 1X 2X 3GX 4X 5X 1為T、N、S、Q、E、H、R或A， X 2為Y、W、F或H， X 3為A、S、Q、E或T，X 4為G或E， X 5為S或I (SEQ ID NO: 245) X 1X 2X 3YX 4WX 5X 6AX 7DX 8X 1為S或A，X 2為N、H、A、D、L、Q、Y或R， X 3為A、N、S或G， X 4為A、V、R、E或S，X 5為D或S，X 6為D、N、Q、E、S、T或L， X 7為L、F或M， X 8為I、Y或V (SEQ ID NO: 246) RASQSVSSNLA (SEQ ID NO: 176) GASSRAT (SEQ ID NO: 177) QQYGSSPPVT (SEQ ID NO: 178)
表 12 .抗CD8抗體可變域序列
名稱 VH VL
xhCD8 QVHLQQSGPELVKPGASVKMSCKTSGYTFTKYTMHWVKQGHEESLEWIGHFNPNNDETKYNQKFTGKATLTVDKSSTTAYMELRSLTSDDSALYYCARDGLGLRLFADWGQGTLITVSA (SEQ ID NO:107) DIQMTQSPASLSASVGETVTITCGASENIYGALNWYQRKQGKSPQLLIFGATNLADGVSSRFSGSGSDRQYSLKISSLHPDDVATYYCQNILDTPWTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO:108)
xhCD8v1 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTKYAISWVRQAPGQGLEWMGHFNPNNDETKYNQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDGLGLRLFADWGQGT LVTVSS (SEQ ID NO:258) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASENIYGALNWYQQKPGKAPKLLIYGATNLADGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQNILDTPWTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO:259)
xhCD8v2 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYRFHNFAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPGHAKANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDGLGIRLFADWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:109) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQEIYGALNWYQQKPGKAPKLLIYGATNLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQDIYDAPWTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:110)
xhCD8v3 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGSRFYKFAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPGHAKANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDGLGIRLFADWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:111) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQEIYGALNWYQQKPGKAPKLLIYGATNLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQDIYDAPWTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:112)
xhCD8v4 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTKYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPGHAKANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDGLGIRLFADWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:113) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQKIYGALNWYQQKPGKAPKLLIYGATNLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQNTYDTPWTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:114)
xhCD8v5 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGSGFRGHAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPGHAKANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDGLGIRLFADWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:115) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQKIYGALNWYQQKPGKAPKLLIYGATNLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQNTYDTPWTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:116)
xhCD8v6 EVQLVESGGGAVRPGGSLRLSCAASGFTFDDYGMSWVRQAPGKGLEWVSDINWSGEITAYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARSNSYRWDDALDIWGQGTMVTVSS (SEQ ID NO:117) EIVLTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPPVTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO:118)
xhCD8v7 EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDRIGWYDYDAFDIWGQGTMVTVSS (SEQ ID NO:119) EIVLTQSPATLSVTPGEGATLSCRASHSVGSNLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDLAVYYCQQRSNWPPTFGQGTRLEIK (SEQ ID NO:120)
xhCD8v8 QVQLQQSGAELVRPGSSVKISCKASGYAFSSYWMNWVKQRPGQGLEWIGQIYPGDGDTNYNGKFKGKATLTADKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYFCARSGAAFSSYYAMDYWGQGTSVTVSS (SEQ ID NO:121) DIQMTQSPASLSVSVGETVTITCRASENIYSNLAWYQQKQGKSPQLLVYAATNLADGVPSRFSGSGSGTQYSLKINSLQSEDFGSYYCQHFWGTPWTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO:122)
xhCD8v9 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPGAATANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDAAGIRLFADWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:123) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQEIYGALNWYQQKPGKAPKLLIYGATNLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQSTYDAPWTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:124)
xhCD8v10 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSDITYAGGSTAYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARSNAYAWDDALDIWGQGTMVTVSS (SEQ ID NO:125) EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPPVTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO:126)
xhCD8v11 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSDITYAGGSTAYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARSNAYAWDDALDIWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:127) EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPPVTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO:128)
xhCD8v12 (xhCD8.1) QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPGYATANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDAAGIRLFADWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:129) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIYGALNWYQQKPGKAPKLLIYGASNLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQSTYTAPWTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:130)
xhCD8v13 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPGYATANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDAAGIRLFADWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:131) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQEIYGALNWYQQKPGKAPKLLIYGATNLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQSTYDAPWTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:132)
xhCD8v14 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSDISYAGGSTAYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARSNAYAWDDALDIWGQGTMVTVSS (SEQ ID NO:133) EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPPVTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO:134)
xhCD8v15 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSDISYAGGSTAYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARSNAYAWDDALDIWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:135) EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPPVTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO:136)
表 13 ： 中間物及具有 IL - 21 電荷變異體之融合蛋白之最終產量
融合蛋白 蛋白A之後的產量(mg/L) 蛋白A+IEX之後的產量(mg/L)
xhCD8.1-hIL21 v31.4 198 89
xhCD8.1-hIL21 v31.23 170 83
xhCD8v11-hIL21 v31.23 158 77
表 14 ：野生型 IL - 21 變異體
IL-21突變蛋白 胺基酸序列 在25℃下之K D(nM) SEQ ID NO
IL-21 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 0.25 1
IL-21 v0.1 QGQDRHMIRMDQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 0.54 313
IL-21 v0.2 QGQDRHMIRMEQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 0.37 314
IL-21 v0.3 QGQDRHMIRMRQLDDIVAQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQAMIHQHLSSRTHGSEDS NB 315
IL-21 v0.4 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKEKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS ＞ 10000 316
IL-21 v0.5 QGQDFHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 5.5 317
IL-21 v0.6 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKFKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 2205 318
IL-21 v0.7 QGQDRHMERMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 171.9 319
IL-21 v0.8 QGQDAHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 12.4 320
IL-21 v0.9 QGQDEHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 184.6 321
IL-21 v0.10 QGQDSHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 20.8 322
IL-21 v0.11 QGQDTHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 6.6 323
IL-21 v0.12 QGQDNHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 23.4 324
IL-21 v0.13 QGQDQHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 7.7 325
IL-21 v0.14 QGQDVHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 4.6 326
IL-21 v0.15 QGQDIHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 6.2 327
IL-21 v0.16 QGQDLHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 2.5 328
IL-21 v0.17 QGQDYHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 7.2 329
IL-21 v0.18 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKAKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 2976 330
IL-21 v0.19 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKNKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 3981 331
IL-21 v0.20 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKDKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS ＞ 10000 332
IL-21 v0.21 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKSKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 3671 333
IL-21 v0.22 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKTKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 4085 334
IL-21 v0.23 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKQKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 3375 335
IL-21 v0.24 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKVKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 4351 336
IL-21 v0.25 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKIKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 3639 337
IL-21 v0.26 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKLKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 934.1 338
IL-21 v0.27 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKYKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 1353 339
IL-21 v0.28 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRAPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 0.77 340
IL-21 v0.29 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKREPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 0.69 341
IL-21 v0.30 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIAKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 0.72 342
IL-21 v0.31 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIEKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 2.3 343
IL-21 v0.32 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLARKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 0.78 344
IL-21 v0.33 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLERKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 1.2 345
IL-21 v0.34 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKALKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 1.81 346
IL-21 v0.35 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKELKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 511.4 347
IL-21 v0.36 QGQDFHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRAPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 40.2 348
IL-21 v0.37 QGQDFHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKREPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 46.4 349
IL-21 v0.38 QGQDFHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIAKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 35.0 350
IL-21 v0.39 QGQDFHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIEKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 265.1 351
IL-21 v0.40 QGQDFHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLARKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 31.9 352
IL-21 v0.41 QGQDFHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLERKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 86.9 353
IL-21 v0.42 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKALKFKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS ＞10000 354
IL-21 v0.43 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKELKFKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS NB 355
IL-21 v0.44 QGQDRHMIAMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 4982 356
IL-21 v0.45 QGQDRHMIDMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS ＞10000 357
IL-21 v0.46 QGQDRHMIEMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS ＞ 10000 358
IL-21 v0.47 QGQDRHMIHMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 11.9 359
IL-21 v0.48 QGQDRHMISMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 3932 360
IL-21 v0.49 QGQDRHMITMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 11664 361
IL-21 v0.50 QGQDRHMINMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 4159 362
IL-21 v0.51 QGQDRHMIGMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 7677 363
IL-21 v0.52 QGQDRHMIVMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 11082 364
IL-21 v0.53 QGQDRHMIIMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS ＞10000 365
IL-21 v0.54 QGQDRHMILMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 7168 366
IL-21 v0.55 QGQDRHMIYMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 675.7 367
IL-21 v0.56 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIAKLKFKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 3431 368
IL-21 v0.57 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLAFKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 5041 369
IL-21 v0.58 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKFAPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 4760 370
IL-21 v0.59 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLEFKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS NB 371
hIL21 v31 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPGGEGGGGGGGEGGCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 0.24 40
hIL21 v31.4 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKEKPPGGEGGGGGGGEGGCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS ＞10000 94
hIL21 v31.23 QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKQKPPGGEGGGGGGGEGGCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 6059 96
hIL21 v31.51 QGQDRHMIGMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPGGEGGGGGGGEGGCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 7730 98
IL-21 v2.63 QGQDRHMIRMRQLIDRIDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKIKRKPPSTNAGGGQGHELTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 1186 377
IL-21 v2.64 QGQDRHMIRMRQFIDAADQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKMKRKPPSTNAGGGQGHELTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 2823 378
IL-21 v2.65 QGQDRHMIRMRQRIDAIDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKIKRKPPSTNAGGGQGHELTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS 10471 379
表 15 ： IL - 21R 減弱型融合蛋白之多反應性 ELISA
構築體 與KLH之結合 與肝素之結合 與血紅素之結合
玻可昔單抗 24.35 10.20 25.37
xhCD8.1-hIL21 v0.4 5.67 7.39 6.59
xhCD8.1-hIL21 v31.4 2.98 2.92 3.94
xhCD8.1-hIL21 v31.23 4.66 3.61 5.45
xhCD8v11-hIL21 v31.23 3.06 3.37 2.10
表 16 ： 非融合 IL - 21 及 IL - 21 變異體之多反應性 ELISA
構築體 與KLH之結合 與肝素之結合 與血紅素之結合
hIL21 24.06 51.09 31.42
hIL21 v0.51 23.54 48.90 30.58
hIL21 v0.4 22.93 44.65 28.60
hIL21 v0.23 23.76 51.02 30.94
hIL21 v31 20.97 44.73 19.99
hIL21 v31.51 15.67 31.45 12.22
hIL21 v31.4 6.44 12.22 3.40
hIL21 v31.23 12.78 26.22 9.81
本發明之新穎特點在隨附申請專利範圍中細緻闡述。將參考闡述利用本發明原理之說明性實施例及其隨附圖式之以下具體實施方式來獲得對本發明之特點及優勢的更好理解：
圖 1A - 1C顯示以下多肽之胺基酸序列：成熟IL-21 (SEQ ID NO: 1) ( 圖 1A)、IL-21R (SEQ ID NO: 381) ( 圖 1B)及共同γ鏈(SEQ ID NO: 382) ( 圖 1C)。
圖 2顯示成熟野生型IL-21多肽之胺基酸序列(SEQ ID NO: 1)及用於產生電荷變異體之修飾。「X」指示用於產生電荷變異體之在野生型IL-21多肽之序列中經取代之胺基酸位置。
圖 3A - 3F顯示在蛋白A純化之後具有抗CD8抗體及野生型IL-21或IL-21電荷變異體之融合蛋白的離子交換層析跡線。具有xhCD8及野生型IL-21或例示性IL-21電荷變異體v1至v6之融合蛋白示於 圖 3A中，如藉由HPLC量測。具有xhCD8.1及例示性IL-21電荷變異體v2或變異體v7至v31之融合蛋白示於 圖 3B至 圖 3E中，且具有xhCD8.1及野生型IL-21之融合蛋白示於 圖 3F中，如藉由FPLC所量測。在所有情況下，左側上之(多個)峰為非所需產物，主要為同二聚體，而右側上之峰為所需異二聚體融合蛋白，且各標示區域之總百分比示出。
圖 4A - 4D顯示融合蛋白之小鼠藥物動力學資料。針對靜脈內( 圖 4A)或皮下( 圖 4B)給藥之1 mg/kg對照抗體(xCtrl)與野生型IL-21或例示性電荷變異體IL-21多肽IL-21 v2之血清濃度示出。在獨立實驗中，針對皮下( 圖 4C)或靜脈內( 圖 4D)給藥之1 mg/kg野生型IL-21或例示性電荷變異體IL-21多肽IL-21 v2或IL-21 v31之血清濃度另外示出。
圖 5A - 5B顯示在來自人類周邊血液單核細胞(PBMC) ( 圖 5A)或全血( 圖 5B)之CD8+ T細胞、CD4+ T細胞、NK細胞及B細胞中野生型IL-21對STAT3之活化。STAT3活化係藉由流動式細胞測量術來量測，且所有細胞類型皆經野生型IL-21強效活化。
圖 6為顯示具有突變IL-21多肽及CD8抗原結合分子之靶向融合體及具有突變IL-21多肽之非靶向融合體如何起作用來刺激表現或不表現CD8抗原之細胞的一般機制的示意圖。
圖 7顯示在人類CD8+ T細胞中具有抗CD8抗體與野生型IL-21、例示性IL-21多肽電荷變異體IL-21 v1、IL-21 v2或IL-21 v6之融合蛋白對STAT3之活化。
圖 8A - 8F顯示在人類PBMC中具有抗人類CD8抗體xhCD8與IL-21 v2之各種經減弱型式之融合蛋白對STAT3之活化。CD8+ T細胞、CD4+ T細胞、NK細胞及B細胞之STAT3活化示出。具有xhCD8與包含減弱突變之例示性IL-21多肽IL-21 v2.1 ( 圖 8A)、IL-21 v2.2 ( 圖 8B)、IL-21 v2.3 ( 圖 8C)、IL-21 v2.4 ( 圖 8D)、IL-21 v2.5 ( 圖 8E)及IL-21 v2.6 ( 圖 8F)之融合蛋白全部顯示相對於NK細胞、B細胞及CD4+ T細胞，CD8+ T細胞之優先STAT3活化，如藉由EC 50以及最大STAT3活化所量測。
圖 9A - 9H顯示在人類PBMC中具有抗人類CD8抗體xhCD8.1與IL-21 v2之另外經減弱型式之融合蛋白或作為對照之與IL-21 v2之非靶向Fc融合體對STAT3的活化。CD8+ T細胞中之STAT3活化示於 圖 9A 、 圖 9C 、 圖 9E及 圖 9G中，且CD4+ T細胞中之STAT3活化示於 圖 9B 、圖 9D 、圖 9F及 圖 9H中。
圖 10A - 10F顯示在人類全血中具有抗人類CD8抗體xhCD8.1與IL-21 v31之各種經減弱型式之融合蛋白對STAT3之活化。CD8+ T細胞、CD4+ T細胞、NK細胞、B細胞及骨髓細胞之STAT3活化示出。具有xhCD8.1與包含減弱突變之例示性IL-21多肽IL-21 v31.4 ( 圖 10A)、IL-21 v31.6 ( 圖 10B)、IL-21 v31.23 ( 圖 10C)、IL-21 v31.48 ( 圖 10D)及IL-21 v31.51 ( 圖 10E)之融合蛋白全部顯示相對於NK細胞、B細胞及CD4+ T細胞，CD8+ T細胞之優先STAT3活化，如藉由EC 50以及最大STAT3活化所量測。在xhCD8.1-hIL21 v31.6之情況下，兩項獨立實驗之資料示出( 圖 10B)。非靶向非經減弱Fc-hIL21 v2示於 圖 10F中，且在所有細胞類型中觀測到之活化示出。
圖 11A - 11C顯示小鼠脾細胞中之STAT3活化。CD8+ T細胞、CD4+ T細胞、NK細胞及B細胞之STAT3活化示出。重組野生型小鼠IL-21 ( 圖 11A)、具有非靶向對照抗體xCtrl及小鼠IL-21電荷變異體mIL-21 v1之融合蛋白( 圖 11B)以及具有抗小鼠CD8抗體xmCD8及經減弱小鼠IL-21電荷變異體mIL21 v1.1之融合蛋白( 圖 11C)的活化概況示出。對於重組野生型小鼠IL-21及xCtrl-mIL21 v1兩者，所有細胞類型皆經活化，而對於xmCD8-mIL21 v1.1，存在相對於NK細胞、B細胞及CD4+ T細胞，CD8+ T細胞之優先STAT3活化，如藉由EC 50以及最大STAT3活化所量測。
圖 12顯示經以下治療之MC38同基因腫瘤模型中之腫瘤生長曲線：單次劑量之PBS；0.3或1 mg/kg (mpk)之具有非靶向對照抗體xCtrl及非經減弱小鼠IL-21電荷變異體IL-21 v1之融合蛋白xCtrl-mIL21 v1；或0.1、0.3或1 mpk之具有抗小鼠CD8抗體xmCD8及經減弱小鼠IL-21電荷變異體IL21 v1.1之融合蛋白xmCD8-mIL21 v1.1。各子圖顯示各個別動物之腫瘤生長曲線，分數顯示完整反應(CR)且箭頭標示治療時間。
圖 13A - 13D顯示在MC38腫瘤模型中FTY720對xmCD8-mIL21 v1.1之抗腫瘤效力的影響。 圖 13A顯示FTY720及xmCD8-mIL21 v1.1之給藥方案及0.1 mpk ( 圖 13B)、0.3 mpk ( 圖 13C)或1  mpk ( 圖 13D) xmCD8-mIL21 v1.1之腫瘤生長曲線。繪製值為平均腫瘤體積且誤差杠顯示平均值標準誤差，其中各組包含8隻動物。
圖 14A - 14F顯示在來自另外供體之人類全血中具有抗人類CD8抗體xhCD8.1與IL-21 v31之各種經減弱型式之融合蛋白對STAT3之活化。CD8+ T細胞、CD4+ T細胞、NK細胞及B細胞之STAT3活化示出。具有xhCD8.1與包含減弱突變之例示性IL-21多肽IL-21 v31.4 ( 圖 14A)、IL-21 v31.6 ( 圖 14B)、IL-21 v31.23 ( 圖 14C)、IL-21 v31.48 ( 圖 14D)及IL-21 v31.51 ( 圖 14E)之融合蛋白全部顯示相對於NK細胞、B細胞及CD4+ T細胞，CD8+ T細胞之優先STAT3活化，如藉由EC 50所量測。在xhCD8.1-hIL21 v31.4及xhCD8.1-hIL21 v31.23之情況下，在兩項獨立實驗中經分析之兩種不同供體之資料示出( 圖 14A及 圖 14C)。非靶向非經減弱Fc-hIL21 v31示於 圖 14F中，且在所有細胞類型中觀測到之活化示出。
圖 15A - 15D顯示在人類全血中具有抗人類CD8抗體xhCD8v11與IL-21 v31之各種經減弱型式之融合蛋白對STAT3之活化。CD8+ T細胞、CD4+ T細胞、NK細胞及B細胞之STAT3活化示出。具有xhCD8v11與包含減弱突變之例示性IL-21多肽IL-21 v31.4 ( 圖 15A)、IL-21 v31.6 ( 圖 15B)、IL-21 v31.23 ( 圖 15C)及IL-21 v31.51 ( 圖 15D)之融合蛋白全部顯示相對於NK細胞、B細胞及CD4+ T細胞，CD8+ T細胞之優先STAT3活化，如藉由EC 50所量測。在xhCD8v11-hIL21 v31.23之情況下，在兩項獨立實驗中經分析之兩種不同供體之資料示出( 圖 15C)。
圖 16A - 16C顯示在人類全血中具有抗人類CD8抗體xhCD8.1與IL-21 v2電荷變異體之亦含有另外突變之各種型式的融合蛋白對STAT3之活化。CD8+ T細胞、CD4+ T細胞、NK細胞及B細胞之STAT3活化示出。具有xhCD8v.1與包含減弱突變之例示性IL-21多肽IL-21 v2.63 ( 圖 16A)、IL-21 v2.64 ( 圖 16B)及IL-21 v2.65 ( 圖 16C)之融合蛋白全部顯示相對於NK細胞、B細胞及CD4+ T細胞，CD8+ T細胞之優先STAT3活化，如藉由EC 50所量測。
圖 17A - 17C顯示在蛋白A純化之後具有抗CD8抗體及IL-21R減弱型IL-21電荷變異體之融合蛋白的離子交換層析跡線。xhCD8v11-hIL21 v31.23 ( 圖 17A)、xhCD8.1-hIL21 v31.23 ( 圖 17B)及xhCD8.1-hIL21 v31.4 ( 圖 17C)之跡線示出，如藉由FPLC所量測。在所有情況下，主峰左側之(多個)峰為非所需產物，主要為同二聚體，而中間的主峰為所需異二聚體融合蛋白，且所需峰之總百分比示出。
圖 18顯示野生型C57BL6小鼠中之融合蛋白之藥物動力學資料。針對靜脈內給藥之具有抗人類CD8抗體xhCD8.1或xhCD8v11與hIL-21 v31.4、hIL-21 v31.23或hIL-21 v0.4之融合蛋白之血清濃度示出。抗人類CD8抗體xhCD8.1及xhCD8v11對小鼠CD8不具有交叉反應性。針對xhCD8.1-hIL21 v31.4、xhCD8v11-hIL21 v31.23、xhCD8.1-hIL21 v31.23及xhCD8.1-hIL21 v0.4之暴露示出。
圖 19A 及圖 19B顯示基於野生型IL-21或IL-21 v31電荷變異體之重組細胞介素變異體之表徵資料。藉由IMAC、接著為製備型SEC純化之材料之SDS-PAGE示於 圖 19A中。藉由IMAC、接著為製備型SEC純化之材料之分析性SEC示於 圖 19B中。亦報導滯留時間及峰寬以評估管柱相互作用。總而言之，基於IL-21 v31電荷變異體之重組細胞介素變異體具有相較於基於野生型IL-21之變異體較低之滯留時間及較窄之峰寬，此表明基於IL-21 v31之構築體有較低管柱相互作用及較有利的生物物理特性。
圖 20顯示小鼠中之重組(非融合)野生型人類IL-21及IL-21 v31電荷變異體之暴露。IL-21 v31顯示相較於野生型IL-21增加之活體內暴露。
圖 21A 及圖 21B各自提供顯示野生型IL-21 (SEQ ID NO: 1)與IL-21R (SEQ ID NO: 381)之間的相互作用之結構示意圖。SEQ ID NO: 1之殘基S80-T92形成基本上非結構化可撓性環(帶圓圈)。 圖 21A指示可撓性環周圍之殘基P78及P79 (Pro-Pro)以及C93及P94 (Cys-Pro)。 圖 21B顯示野生型IL-21之電荷，此指示可撓性環高度帶電。
圖 22顯示自兩個不同人類PBMC供體分離之同種異體反應性T細胞及經活化樹突狀細胞之培養物中之IL-21融合體分子的活性。測試分子包括兩種CD8+ T細胞靶向融合體xhCD8.1-hIL21 v31.4及xhCD8.1-hIL21 v31.23以及非靶向非經減弱Fc-hIL21 v31。量測培養物中之IL-2釋放以測定同種異體反應性T細胞活化位準。總而言之，Fc-hIL21 v31抑制同種異體反應性T細胞之活化，而CD8+ T細胞靶向融合體並不如此。
圖 23A - 23D顯示在食蟹獼猴全血中具有抗人類CD8抗體xhCD8.1或xhCD8v11與IL-21 v31之各種經減弱型式之融合蛋白對STAT3之活體外活化。CD8+ T細胞、CD4+ T細胞及B細胞之STAT3活化示出。CD8+ T細胞靶向融合蛋白xhCD8.1-IL-21 v31.4 ( 圖 23A)、xhCD8.1-IL-21 v31.23 ( 圖 23B)及xhCD8v11-IL-21 v31.23 ( 圖 23C)全部顯示相對於B細胞及CD4+ T細胞，CD8+ T細胞之優先STAT3活化，如藉由EC 50所量測。非靶向非經減弱Fc-hIL21 v31示於 圖 23D中，且在所有細胞類型中觀測到之活化示出。
圖 24顯示食蟹獼猴中xhCD8.1-IL-21 v31.4對STAT3之活體內活化。給藥後20分鐘評估CD8+ T細胞、CD4+ T細胞、NK細胞及B細胞中之STAT3活化位準。結果表明，相對於CD4+ T細胞、NK細胞及B細胞，xhCD8.1-IL-21 v31.4優先在CD8+ T細胞中活化STAT3，如藉由STAT3 MFI所量測。

Claims (136)

  1. 一種融合蛋白，其包含： a)包含胺基酸序列與包含SEQ ID NO: 1之人類IL-21多肽至少80%一致之IL-21多肽或其功能片段或變異體；及 b)特異性結合至CD8 α、CD8αα或CD8αβ中之至少一者之抗體或其抗原結合片段。
  2. 如請求項1之融合蛋白，其中該IL-21多肽之等電點相較於該人類IL-21多肽之等電點低至少約0.6個單位至約5個單位。
  3. 如請求項2之融合蛋白，其中該IL-21多肽包含至少一個胺基酸取代，使該IL-21多肽之等電點相對於不具有該胺基酸取代之人類IL-21多肽降低約0.6個單位至約5個單位。
  4. 如請求項2之融合蛋白，其中該IL-21多肽包含至少四個胺基酸取代，使該IL-21多肽之等電點相對於不具有該等胺基酸取代之該人類IL-21多肽降低約0.6個單位至約5個單位。
  5. 如請求項3或4之融合蛋白，其中該IL-21多肽包含多至10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個降低該等電點之胺基酸取代。
  6. 如請求項1至5中任一項之融合蛋白，其中該人類IL-21多肽之等電點為約9.42。
  7. 如請求項1至6中任一項之融合蛋白，其中該IL-21多肽之等電點為約7.12至約8.72。
  8. 如請求項1至7中任一項之融合蛋白，其中相對於該人類IL-21多肽，該IL-21多肽在投與個體後造成暴露改善，如對於該IL-21多肽之曲線下面積(AUC)大至少約1.5倍所量測。
  9. 如請求項2至8中任一項之融合蛋白，其中相對於該人類IL-21多肽之包含約2至20個帶正電胺基酸殘基之區域，該IL-21多肽包含該約2至20個帶正電胺基酸殘基之至少一個胺基酸取代。
  10. 如請求項9之融合蛋白，其中該人類IL-21多肽之該區域不包括結合IL-21受體之胺基酸殘基。
  11. 如請求項9或10之融合蛋白，其中該人類IL-21多肽之該區域含有包含SEQ ID NO: 1之該人類IL-21多肽之胺基酸殘基S80至T92。
  12. 如請求項9至11中任一項之融合蛋白，其中該人類IL-21多肽在該人類IL-21多肽之三維結構中在該人類IL-21多肽之表面上包含至少一個帶正電胺基酸殘基且不結合IL-21受體，且其中該IL-21多肽包含該至少一個帶正電胺基酸殘基之至少一個胺基酸取代。
  13. 如請求項11至12中任一項之融合蛋白，其中該IL-21多肽不包含胺基酸取代在包含SEQ ID NO: 1之該人類IL-21多肽之G84處。
  14. 如請求項2至13中任一項之融合蛋白，其中該IL-21多肽包含4、5、6、7、8、9、10、11或12個胺基酸取代在選自SEQ ID NO: 1之S80、T81、N82、A83、R85、R86、Q87、K88、H89、R90、L91或T92之位置。
  15. 如請求項14之融合蛋白，其中該IL-21多肽包含4、5、6、7、8、9、10、11或12個胺基酸取代選自S80G、T81G、N82G、N82E、A82G、A83E、A83S、R85G、R85E、R85S、R86G、R86E、Q87G、Q87E、Q87S、K88G、H89G、H89S、R90G、R90S、R90E、R90A、L91G、L91S、T92G、T92S。
  16. 如請求項14之融合蛋白，其中該IL-21多肽包含(a) R85G、R86G、K88G及R90E或(b) S80G、T81G、N82E、A83G、R85G、R86G、Q87G、K88G、H89G、R90E、L91G及T92G。
  17. 如請求項1至16中任一項之融合蛋白，其中該IL-21多肽包含以下胺基酸序列： QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWS AFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPX 1X 2X 3X 4GX 5X 6X 7X 8X 9X 10X 11X 12CPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS (SEQ ID NO: 380)，其中X 1= G、S；X 2= G、T；X 3= G、E、N；X 4= G、S、E、A；X 5= G、E、S、R；X 6= G、E、R；X 7= S、G、E、Q；X 8= G、K；X 9= G、S、H；X 10= A、E、S、G、R；X 11= S、G、L；及X 12= G、S、T，限制條件為X 5、X 6、X 8、X 9及X 10中之至少一者不為在SEQ ID NO: 1中所述之一致位置之胺基酸殘基，視情況其中： (i) X 5= G，X 6= G，X 8= G，X 10= A； (ii) X 5= G，X 6= G，X 8= G，X 10= E； (iii) X 1= G，X 2= G，X 3= G，X 4= S，X 5= E，X 6= G，X 7= S，X 8= G，X 9= G，X 10= S； (iv) X 1= G，X 2= G，X 3= G，X 4= S，X 5= G，X 6= G，X 7= S，X 8= G，X 9= G，X 10= E； (v) X 5= G，X 6= G，X 7= S，X 8= G，X 9= G，X 10= E； (vi) X 5= G，X 6= G，X 7= S，X 8= G，X 9= G，X 10= S； (vii) X 5= G，X 6= G，X 7= G，X 8= G，X 9= G，X 10= E； (viii) X 5= G，X 6= G，X 7= G，X 8= G，X 9= G，X 10= G； (ix) X 5= G，X 6= G，X 7= E，X 8= G，X 9= G，X 10= G； (x) X 1= G，X 2= G，X 3= G，X 4= S，X 5= G，X 6= G，X 7= S，X 8= G，X 9= G，X 10= G，X 11= S，X 12= G； (xi) X 1= G，X 2= G，X 3= G，X 4= G，X 5= G，X 6= G，X 7= G，X 8= G，X 9= G，X 10= G，X 11= G，X 12= G； (xii) X 1= G，X 2= G，X 3= G，X 4= S，X 5= G，X 6= G，X 7= E，X 8= G，X 9= G，X 10= G，X 11= S，X 12= G； (xiii) X 1= G，X 2= G，X 3= G，X 4= E，X 5= G，X 6= G，X 7= E，X 8= G，X 9= G，X 10= G，X 11= S，X 12= G； (xiv) X 3= G，X 4= G，X 5= S，X 6= G，X 7= G，X 8= G，X 9= S，X 10= G，X 11= G，X 12= S； (xv) X 3= G，X 4= G，X 5= E，X 6= G，X 7= G，X 8= G，X 9= S，X 10= G，X 11= G，X 12= S； (xvi) X 1= G，X 2= G，X 3= G，X 4= G，X 5= E，X 6= G，X 7= G，X 8= G，X 9= G，X 10= G，X 11= G，X 12= G； (xvii) X 1= G，X 2= G，X 3= G，X 4= S，X 5= G，X 6= G，X 7= S，X 8= G，X 9= G，X 10= E，X 11= G，X 12= G； (xviii) X 1= G，X 2= G，X 3= G，X 4= G，X 5= G，X 6= G，X 7= G，X 8= G，X 9= G，X 10= E，X 11= G，X 12= G； (xix) X 3= G，X 4= G，X 5= S，X 6= G，X 7= G，X 8= G，X 9= S，X 10= E，X 11= G，X 12= S； (xx) X 3= G，X 4= G，X 5= G，X 6= G，X 7= G，X 8= G，X 9= G，X 10= E，X 11= G，X 12= G； (xxi) X 5= G，X 6= G，X 7= G，X 8= G，X 9= G，X 10= E，X 11= G； (xxii) X 3= G，X 4= G，X 5= G，X 6= G，X 7= G，X 8= G，X 9= G，X 10= E，X 11= G； (xxiii) X 3= G，X 4= G，X 5= G，X 6= E，X 7= G，X 8= G，X 9= G，X 10= E，X 11= G； (xxiv) X 3= G，X 4= G，X 5= E，X 6= G，X 7= G，X 8= G，X 9= G，X 10= E，X 11= G； (xxv) X 1= G，X 2= G，X 3= G，X 4= E，X 5= G，X 6= G，X 7= G，X 8= G，X 9= G，X 10= E，X 11= G，X 12= G；或 (xxvi) X 1= G，X 2= G，X 3= E，X 4= G，X 5= G，X 6= G，X 7= G，X 8= G，X 9= G，X 10= E，X 11= G，X 12= G。
  18. 如請求項1至17中任一項之融合蛋白，其中該IL-12多肽包含與選自SEQ ID NO: 2、4-15及23-40之胺基酸序列至少90%一致之胺基酸序列。
  19. 如請求項18之融合蛋白，其中該IL-21多肽包含選自SEQ ID NO: 2、4-15及23-40之胺基酸序列。
  20. 如請求項19之融合蛋白，其中該IL-21多肽包含SEQ ID NO: 40之胺基酸序列。
  21. 如請求項1至20中任一項之融合蛋白，其中該IL-21多肽包含至少一個胺基酸取代，使與IL-21受體之結合相較於該人類IL-21多肽之結合減少。
  22. 如請求項21之融合蛋白，其中該至少一個胺基酸取代係在SEQ ID NO: 1之位置R5、I8、R9、R11、L13、I14、I16、V17、D18、K72、K73、L74、K75、R76、K77或K117之一或多個胺基酸殘基。
  23. 如請求項22之融合蛋白，其中該至少一個胺基酸取代係選自：R5F、R5A、R5E、R5S、R5T、R5N、R5Q、R5V、R5I、R5L、R5Y、I8E、R9A、R9D、R9E、R9H、R9S、R9T、R9N、R9G、R9V、R9I、R9L、R9Y、R11D、R11E、L13F、L13R、I14D、I16A、I16S、I16R、V17I、V17A、D18A、K72A、K72E、K73A、K73E、K75A、K75E、L74I、L74F、L74M、L74V、R76E、R76F、R76A、R76N、R76D、R76S、R76T、R76Q、R76V、R76I、R76L、R76Y、R76M、K77A、K77E及K117A。
  24. 如請求項22或23之融合蛋白，其中該至少一個胺基酸取代為R76E或R76Q。
  25. 一種融合蛋白，其包含： a)包含以下之IL-21多肽：(i)一或多個胺基酸取代提供相對於包含SEQ ID NO: 1之人類IL-21多肽降低之等電點，其中該一或多個胺基酸取代係在SEQ ID NO: 1之S80至T92內，其中至少一個胺基酸取代係在殘基R85、R86、K88、H89、R90或其組合；及(ii)至少一個胺基酸取代提供相對於該人類IL-21多肽之結合減少與人類IL-21受體之結合；及 b)特異性結合至CD8αβ或CD8 β之抗體或其抗原結合片段。
  26. 如請求項25之融合蛋白，其中該IL-21多肽不包含G84取代。
  27. 如請求項25或26之融合蛋白，其中提供減少結合的該至少一個胺基酸取代為R76E或R76Q。
  28. 如請求項1至27中任一項之融合蛋白，其中該IL-21多肽包含與選自SEQ ID NO: 16-21、41-98及374-379之胺基酸序列至少90%一致之胺基酸序列。
  29. 如請求項28之融合蛋白，其中該IL-21多肽包含選自SEQ ID NO: 16-21、41-98及374-379之胺基酸序列。
  30. 如請求項1至29中任一項之融合蛋白，其中該IL-21多肽與該抗體或其抗原結合片段經由連接子彼此連接。
  31. 如請求項1至30中任一項之融合蛋白，其中該IL-21多肽與該抗體或其抗原結合片段之N端或C端連接。
  32. 如請求項31之融合蛋白，其中該IL-21多肽與該抗體或其抗原結合片段之C端連接。
  33. 如請求項1至32中任一項之融合蛋白，其中該抗體或其抗原結合片段包含： i)包含可變輕鏈(VL)胺基酸序列及輕鏈恆定區(CL1)胺基酸序列之第一多肽； ii)包含可變重鏈(VH)胺基酸序列及重鏈(HC)恆定區胺基酸序列之第二多肽；及 iii)包含HC恆定區胺基酸序列之第三多肽， 其中該第二多肽及該第三多肽之重鏈恆定區形成Fc域。
  34. 如請求項33之融合蛋白，其中該第三多肽包含VH胺基酸序列。
  35. 如請求項33或34之融合蛋白，其含有包含VL胺基酸序列及CL1胺基酸序列之第四多肽。
  36. 如請求項1至32中任一項之融合蛋白，其中該抗體或其抗原結合片段包含 i)自N端至C端排列包含以下之第一多肽： a)    VL胺基酸序列，及 b)    CL1胺基酸序列； ii)自N端至C端排列包含以下之第二多肽： a)    VH胺基酸序列， b)    重鏈CH1恆定區胺基酸序列， c)    鉸鏈區胺基酸序列， d)    重鏈CH2恆定區胺基酸序列，及 e)    重鏈CH3恆定區胺基酸序列；及 iii)自N端至C端排列包含以下之第三多肽： a)    鉸鏈區胺基酸序列， b)    重鏈CH2恆定區胺基酸序列，及 c)    重鏈CH3恆定區胺基酸序列， 其中該第二多肽及該第三多肽之各CH2域及CH3域形成Fc域。
  37. 如請求項36之融合蛋白，其中該第三多肽自N端至C端排列包含以下： a)   VH胺基酸序列， b)   重鏈CH1恆定區胺基酸序列， c)   該鉸鏈區胺基酸序列， d)   該重鏈CH2恆定區胺基酸序列， e)   該重鏈CH3恆定區胺基酸序列。
  38. 如請求項36或37之融合蛋白，其中該抗體或其抗原結合片段包含： iv)自N端至C端排列包含以下之第四多肽： a)    VL胺基酸序列，及 b)    CL1胺基酸序列。
  39. 如請求項33至38中任一項之融合蛋白，其中該IL-21多肽與該第一多肽、該第二多肽、該第三多肽或該第四多肽連接，限制條件為該IL-21多肽不干擾該抗體或其抗原結合片段之結合。
  40. 如請求項33至35中任一項之融合蛋白，其中該IL-21多肽與該第二多肽或該第三多肽之重鏈恆定區連接。
  41. 如請求項40之融合蛋白，其中該IL-21多肽與該第二多肽或該第三多肽之重鏈恆定區之C端連接。
  42. 如請求項36至38中任一項之融合蛋白，其中該IL-21多肽與該第二多肽或該第三多肽之CH1區、CH2區或CH3區連接。
  43. 如請求項42之融合蛋白，其中該IL-21多肽與該第二多肽或該第三多肽之CH3區連接。
  44. 如請求項33至43中任一項之融合蛋白，其中該Fc域為人類IgG Fc域。
  45. 如請求項44之融合蛋白，其中該Fc域為IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc域。
  46. 如請求項33至45中任一項之融合蛋白，其中該Fc域包含促進異二聚化(heterodimerization)之一或多個修飾。
  47. 如請求項33至35、39至41及44至46中任一項之融合蛋白，其中該第二多肽在HC恆定區中包含杵(knob)修飾，且該第三多肽在HC恆定區中包含臼(hole)修飾；或其中該第三多肽在HC恆定區中包含杵修飾且該第二多肽在HC恆定區中包含臼修飾。
  48. 如請求項36至39及42至46中任一項之融合蛋白，其中該第二多肽在CH3域中包含杵修飾，且該第三多肽在CH3域中包含臼修飾；或其中該第三多肽在CH3域中包含杵修飾且該第二多肽在CH3中包含臼修飾。
  49. 如請求項47或48之融合蛋白，其中該杵修飾包含根據EU編號之胺基酸取代Y349C及T366W，且其中該臼修飾包含根據EU編號之胺基酸取代S354C、T366S、L368A及Y407V。
  50. 如請求項33至49中任一項之融合蛋白，其中該Fc域包含減少該Fc域與Fc γ受體結合的胺基酸突變。
  51. 如請求項50之融合蛋白，其中該Fc域中之胺基酸突變選自根據EU編號之L234A、L235A及G237A。
  52. 如請求項33至50中任一項之融合蛋白，其中該Fc域包含根據EU編號之胺基酸取代L234A、L235A及G237A。
  53. 如請求項1至52中任一項之融合蛋白，其中該抗體或其抗原結合片段特異性結合至CD8αβ或CD8 β。
  54. 一種融合蛋白，其包含： a)包含VL鏈及CL1鏈之第一多肽； b)包含VH鏈及HC恆定域之第二多肽，其中IL-21多肽可操作地連接至該HC恆定域之C端，且其中該HC恆定域包含杵修飾； c)包含VH鏈及HC恆定域之第三多肽，其中該HC恆定域包含臼修飾，且其中該第二多肽及該第三多肽之VH鏈係相同的；及 d)包含VL鏈及CL1鏈之第四多肽，其中該第一多肽及該第四多肽之VL鏈係相同的，且 其中該VH鏈及該VL鏈包含特異性結合至CD8αβ或CD8 β之CDRs， 其中該IL-21多肽包含(i)一或多個胺基酸取代提供相對於包含SEQ ID NO: 1之人類IL-21多肽降低之等電點，其中該一或多個胺基酸取代係在SEQ ID NO: 1之S80至T92內，其中至少一個胺基酸取代係在殘基R85、R86、K88、H89、R90或其組合；及(ii)至少一個胺基酸取代提供相對於該人類IL-21多肽之結合減少之與人類IL-21受體之結合。
  55. 一種融合蛋白，其包含： a)包含VL鏈及CL1鏈之第一多肽； b)包含VH鏈及HC恆定域之第二多肽，其中該HC恆定域包含杵修飾； c)包含VH鏈及HC恆定域之第三多肽，其中IL-21多肽可操作地連接至該HC恆定域之C端，其中該HC恆定域包含臼修飾，且其中該第二多肽及該第三多肽之VH鏈係相同的；及 d)包含VL鏈及CL1鏈之第四多肽，其中該第一多肽及該第四多肽之VL鏈係相同的，且 其中該VH鏈及該VL鏈包含特異性結合至CD8αβ或CD8 β之CDRs， 其中該IL-21多肽包含(i)一或多個胺基酸取代提供相對於包含SEQ ID NO: 1之人類IL-21多肽降低之等電點，其中該一或多個胺基酸取代係在SEQ ID NO: 1之S80至T92內，其中至少一個胺基酸取代係在殘基R85、R86、K88、H89、R90或其組合；及(ii)至少一個胺基酸取代提供相對於該人類IL-21多肽之結合減少之與人類IL-21受體之結合。
  56. 如請求項54或55之融合蛋白，其中提供減少結合的該至少一個胺基酸取代為R76E或R76Q。
  57. 如請求項1至56中任一項之融合蛋白，其中該抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變(VH)域及輕鏈可變(VL)域；且其中： (a)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 137之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 138之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 139之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 140之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 141之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 142之胺基酸序列之CDR-L3； (b)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 149之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 150之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 151之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 152之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 153之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 154之胺基酸序列之CDR-L3； (c)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 155之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 156之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 157之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 158之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 159之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 160之胺基酸序列之CDR-L3； (d)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 161之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 162之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 163之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 164之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 165之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 166之胺基酸序列之CDR-L3； (e)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 167之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 168之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 169之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 170之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 171之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 172之胺基酸序列之CDR-L3； (f)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 173之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 174之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 175之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 176之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 177之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 178之胺基酸序列之CDR-L3； (g)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 179之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 180之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 181之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之CDR-L3； (h)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 143之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 144之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 145之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 146之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 147之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 148之胺基酸序列之CDR-L3； (i)該VH域包含：包含X 1X 2AIS (SEQ ID NO: 185)之胺基酸序列之CDR-H1，其中X 1為S、K、G、N、R、D、T或G，且其中X 2為Y、L、H或F；包含X 1X 2X 3PX 4X 5X 6X 7X 8X 9YX 10QKFX 11G (SEQ ID NO: 186)之胺基酸序列之CDR-H2，其中X 1為G或H，X 2為I或F，X 3為I、N或M，X 4為G、N、H、S、R、I或A，X 5為A、N、H、S、T、F或Y，X 6為A、D或G，X 7為T、E、K、V、Q或A，X 8為A或T，X 9為N或K，X 10為A或N，且X 11為Q或T；及包含X 1X 2X 3GX 4X 5LFX 6X 7(SEQ ID NO: 187)之胺基酸序列之CDR-H3，其中X 1為D或A，X 2為A、G、E、R、Y、K、N、Q、L或F，X 3為A、L、P或Y，X 4為I或L，X 5為R、A、Q或S，X 6為A或D，且X 7為D、E、A或S；且其中該VL域包含：包含X 1X 2SX 3X 4IX 5GX 6LN (SEQ ID NO: 188)之胺基酸序列之CDR-L1，其中X 1為R或G，X 2為A或T，X 3為Q或E，X 4為E、N、T、S、A、K、D、G、R或Q，X 5為Y或S，且X 6為A或V；包含GX 1X 2X 3LX 4X 5(SEQ ID NO: 189)之胺基酸序列之CDR-L2，其中X 1為A或S，X 2為T、S、E、Q或D，X 3為N、R、A、E或H，X 4為Q或A，且X 5為S或D；及包含QX 1X 2X 3X 4X 5PWT (SEQ ID NO: 190)之胺基酸序列之CDR-L3，其中X 1為S、N、D、Q、A或E，X 2為T、I或S，X 3為Y、L或F，X 4為D、G、T、E、Q、A或Y，且X 5為A、T、R、S、K或Y； (j)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 199之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 200之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 201之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 152之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 153之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 202之胺基酸序列之CDR-L3； (k)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 199之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 203之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 204之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 205之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 206之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 207之胺基酸序列之CDR-L3； (l)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 199之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 203之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 204之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 152之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 153之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 202之胺基酸序列之CDR-L3； (m)該VH域包含：包含X 1YX 2MS (SEQ ID NO: 208)之胺基酸序列之CDR-H1，其中X 1為S、D、E、A或Q且X 2為A、G或T；包含DIX 1X 2X 3GX 4X 5TX 6YADSVKG (SEQ ID NO: 209)之胺基酸序列之CDR-H2，其中X 1為T、N、S、Q、E、H、R或A，X 2為Y、W、F或H，X 3為A、S、Q、E或T，X 4為G或E，X 5為S或I，且X 6為A或G；及包含X 1X 2X 3YX 4WX 5X 6AX 7DX 8(SEQ ID NO: 210)之胺基酸序列之CDR-H3，其中X 1為S或A，X 2為N、H、A、D、L、Q、Y或R，X 3為A、N、S或G，X 4為A、V、R、E或S，X 5為D或S，X 6為D、N、Q、E、S、T或L，X 7為L、F或M，且X 8為I、Y或V；且其中該VL域包含：包含RASQSVSSNLA (SEQ ID NO: 176)之胺基酸序列之CDR-L1；包含GASSRAT (SEQ ID NO: 177)之胺基酸序列之CDR-L2；及包含QQYGSSPPVT (SEQ ID NO: 178)之胺基酸序列之CDR-L3； (n)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 220之胺基酸序列之CDR-H1；包含SEQ ID NO: 221之胺基酸序列之CDR-H2；及包含SEQ ID NO: 222之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含RASQSVSSNLA (SEQ ID NO: 176)之胺基酸序列之CDR-L1；包含GASSRAT (SEQ ID NO: 177)之胺基酸序列之CDR-L2；及包含QQYGSSPPVT (SEQ ID NO: 178)之胺基酸序列之CDR-L3； (o)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 220之胺基酸序列之CDR-H1；包含SEQ ID NO: 260之胺基酸序列之CDR-H2；及包含SEQ ID NO: 222之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含RASQSVSSNLA (SEQ ID NO: 176)之胺基酸序列之CDR-L1；包含GASSRAT (SEQ ID NO: 177)之胺基酸序列之CDR-L2；及包含QQYGSSPPVT (SEQ ID NO: 178)之胺基酸序列之CDR-L3；或 (p)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 252之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 253之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 254之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 255之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 256之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 257之胺基酸序列之CDR-L3。
  58. 如請求項1至56中任一項之融合蛋白，其中該抗體或其抗原結合片段包含VH域及VL域；且其中： (a)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 226之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 227之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 151之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 152之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 153之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 154之胺基酸序列之CDR-L3； (b)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 228之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 227之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 157之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 158之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 159之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 160之胺基酸序列之CDR-L3； (c)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 223之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 227之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 163之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 164之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 165之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 166之胺基酸序列之CDR-L3； (d)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 229之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 227之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 169之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 170之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 171之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 172之胺基酸序列之CDR-L3； (e)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 230之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 231之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 175之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 176之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 177之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 178之胺基酸序列之CDR-L3； (f)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 230之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 232之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 181之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之CDR-L3； (g)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 223之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 224之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 225之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 140之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 141之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 142之胺基酸序列之CDR-L3； (h)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 233之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 234之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 145之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 146之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 147之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 148之胺基酸序列之CDR-L3； (i)該VH域包含：包含GX 1X 2FX 3X 4X 5(SEQ ID NO: 235)之胺基酸序列之CDR-H1，其中X 1為G、Y、S或A，X 2為T、S、G、R、N或H，X 3為S、T、R、H、Y、G或P，X 4為S、K、G、N、R、D、T或G，且X 5為Y、L、H或F；包含X 1PX 2X 3X 4X 5(SEQ ID NO: 236)之胺基酸序列之CDR-H2，其中X 1為I、N或M，X 2為G、N、H、S、R、I或A，X 3為A、N、H、S、T、F或Y，X 4為A、D或G，且X 5為T、E、K、V、Q或A；及包含X 1X 2X 3GX 4X 5LFX 6X 7(SEQ ID NO: 237)之胺基酸序列之CDR-H3，其中X 1為D或A，X 2為A、G、E、R、Y、K、N、Q、L或F，X 3為A、L、P或Y，X 4為I或L，X 5為R、A、Q或S，X 6為A或D，且X 7為D、E、A或S；且其中該VL域包含：包含X 1X 2SX 3X 4IX 5GX 6LN (SEQ ID NO: 188)之胺基酸序列之CDR-L1，其中X 1為R或G，X 2為A或T，X 3為Q或E，X 4為E、N、T、S、A、K、D、G、R或Q，X 5為Y或S，且X 6為A或V；包含GX 1X 2X 3LX 4X 5(SEQ ID NO: 189)之胺基酸序列之CDR-L2，其中X 1為A或S，X 2為T、S、E、Q或D，X 3為N、R、A、E或H，X 4為Q或A，且X 5為S或D；及包含QX 1X 2X 3X 4X 5PWT (SEQ ID NO: 190)之胺基酸序列之CDR-L3，其中X 1為S、N、D、Q、A或E，X 2為T、I或S，X 3為Y、L或F，X 4為D、G、T、E、Q、A或Y，且X 5為A、T、R、S、K或Y； (j)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 241之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 242之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 204之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 152之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 153之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 202之胺基酸序列之CDR-L3； (k)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 241之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 243之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 204之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 205之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 206之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 207之胺基酸序列之CDR-L3； (l)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 241之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 243之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 204之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 152之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 153之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 202之胺基酸序列之CDR-L3； (m)該VH域包含：包含GFTFX 1X 2Y (SEQ ID NO: 244)之胺基酸序列之CDR-H1，其中X 1為S、D、E、Q、S或A且X 2為S、D、E、A或Q；包含X 1X 2X 3GX 4X 5(SEQ ID NO: 245)之胺基酸序列之CDR-H2，其中X 1為T、N、S、Q、E、H、R或A，X 2為Y、W、F或H，X 3為A、S、Q、E或T，X 4為G或E，且X 5為S或I；及包含X 1X 2X 3YX 4WX 5X 6AX 7DX 8(SEQ ID NO: 246)之胺基酸序列之CDR-H3，其中X 1為S或A，X 2為N、H、A、D、L、Q、Y或R，X 3為A、N、S或G，X 4為A、V、R、E或S，X 5為D或S，X 6為D、N、Q、E、S、T或L，X 7為L、F或M，且X 8為I、Y或V；且其中該VL域包含：包含RASQSVSSNLA (SEQ ID NO: 176)之胺基酸序列之CDR-L1；包含GASSRAT (SEQ ID NO: 177)之胺基酸序列之CDR-L2；及包含QQYGSSPPVT (SEQ ID NO: 178)之胺基酸序列之CDR-L3； (n)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 250之胺基酸序列之CDR-H1；包含SEQ ID NO: 251之胺基酸序列之CDR-H2；及包含SEQ ID NO: 288之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含RASQSVSSNLA (SEQ ID NO: 176)之胺基酸序列之CDR-L1；包含GASSRAT (SEQ ID NO: 177)之胺基酸序列之CDR-L2；及包含QQYGSSPPVT (SEQ ID NO: 178)之胺基酸序列之CDR-L3； (o)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 250之胺基酸序列之CDR-H1；包含SEQ ID NO: 261之胺基酸序列之CDR-H2；及包含SEQ ID NO: 288之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含RASQSVSSNLA (SEQ ID NO: 176)之胺基酸序列之CDR-L1；包含GASSRAT (SEQ ID NO: 177)之胺基酸序列之CDR-L2；及包含QQYGSSPPVT (SEQ ID NO: 178)之胺基酸序列之CDR-L3；或 (p)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 223之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 224之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 284之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 285之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 286之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 287之胺基酸序列之CDR-L3。
  59. 如請求項1至56中任一項之融合蛋白，其中該抗體或其抗原結合片段包含VH域及VL域；且其中： (a)該VH域包含與SEQ ID NO: 109之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列，且其中該VL域包含與SEQ ID NO: 110之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列； (b)該VH域包含與SEQ ID NO: 111之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列，且其中該VL域包含與SEQ ID NO: 112之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列； (c)該VH域包含與SEQ ID NO: 113之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列，且其中該VL域包含與SEQ ID NO: 114之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列； (d)該VH域包含與SEQ ID NO: 115之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列，且其中該VL域包含與SEQ ID NO: 116之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列； (e)該VH域包含與SEQ ID NO: 117之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列，且其中該VL域包含與SEQ ID NO: 118之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列； (f)該VH域包含與SEQ ID NO: 119之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列，且其中該VL域包含與SEQ ID NO: 120之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列； (g)該VH域包含與SEQ ID NO: 123之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列；且其中該VL域包含與SEQ ID NO: 124之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列； (h)該VH域包含與SEQ ID NO: 129之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列，且其中該VL域包含與SEQ ID NO: 130之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列； (i)該VH域包含與SEQ ID NO: 131之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列；且其中該VL域包含與SEQ ID NO: 132之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列； (j)該VH域包含與SEQ ID NO: 125之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列；且其中該VL域包含與SEQ ID NO: 126之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列； (k)該VH域包含與SEQ ID NO: 127之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列，且其中該VL域包含與SEQ ID NO: 128之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列； (l)該VH域包含與SEQ ID NO: 133之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列；且其中該VL域包含與SEQ ID NO: 134之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列； (m)該VH域包含與SEQ ID NO: 135之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列；且其中該VL域包含與SEQ ID NO: 136之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列； (n)該VH域包含與SEQ ID NO: 107之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列；且其中該VL域包含與SEQ ID NO: 108之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列；或 (o)該VH域包含與SEQ ID NO: 121之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列；且其中該VL域包含與SEQ ID NO: 122之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列；或 (p)該VH域包含與SEQ ID NO: 258之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列；且其中該VL域包含與SEQ ID NO: 259之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列。
  60. 如請求項1至56中任一項之融合蛋白，其中該抗體或其抗原結合片段包含VH域及VL域；且其中： (a)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 199之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 203之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 204之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 205之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 206之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 207之胺基酸序列之CDR-L3； (b)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 241之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 243之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 204之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 205之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 206之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 207之胺基酸序列之CDR-L3； (c)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 220之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 221之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 222之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 176之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 177之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 178之胺基酸序列之CDR-L3；或 (d)該VH域包含：包含SEQ ID NO: 250之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 251之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 288之胺基酸序列之CDR-H3；且其中該VL域包含：包含SEQ ID NO: 176之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 177之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 178之胺基酸序列之CDR-L3。
  61. 如請求項1至56中任一項之融合蛋白，其中該抗體或其抗原結合片段包含VH域及VL域；且其中： (a)該VH域包含與SEQ ID NO: 129之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列，且其中該VL域包含與SEQ ID NO: 130之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列；或 (b)該VH域包含與SEQ ID NO: 127之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列，且其中該VL域包含與SEQ ID NO: 128之序列至少90%、至少95%、至少99%或100%一致之胺基酸序列。
  62. 一種融合蛋白，其包含： a)包含VL鏈及CL1鏈之第一多肽，其中該VL鏈包含：包含SEQ ID NO: 205之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 206之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 207之胺基酸序列之CDR-L3； b)包含VH鏈及HC恆定域之第二多肽，其中IL-21多肽可操作地連接至該HC恆定域之C端，其中該HC恆定域包含杵修飾，且其中該VH鏈包含：包含SEQ ID NO: 199之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 203之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 204之胺基酸序列之CDR-H3； c)包含VH鏈及HC恆定域之第三多肽，其中該HC恆定域包含臼修飾，且其中該第二多肽及該第三多肽之VH鏈係相同的；及 d)包含VL鏈及CL1鏈之第四多肽，其中該第一多肽及該第四多肽之VL鏈係相同的，且 其中該VH鏈及該VL鏈包含特異性結合至CD8αβ或CD8 β之CDRs， 其中該IL-21多肽包含(i)一或多個胺基酸取代提供相對於包含SEQ ID NO: 1之人類IL-21多肽降低之等電點，其中該一或多個胺基酸取代係在SEQ ID NO: 1之S80至T92內，其中至少一個胺基酸取代係在殘基R85、R86、K88、H89、R90或其組合；及(ii)至少一個胺基酸取代提供相對於該人類IL-21多肽之結合減少之與人類IL-21受體之結合。
  63. 一種融合蛋白，其包含： a)包含VL鏈及CL1鏈之第一多肽，其中該VL鏈包含：包含SEQ ID NO: 205之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 206之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 207之胺基酸序列之CDR-L3； b)包含VH鏈及HC恆定域之第二多肽，其中該HC恆定域包含杵修飾，且其中該VH鏈包含：包含SEQ ID NO: 199之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 203之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 204之胺基酸序列之CDR-H3； c)包含VH鏈及HC恆定域之第三多肽，其中IL-21多肽可操作地連接至該HC恆定域之C端，其中該HC恆定域包含臼修飾，且其中該第二多肽及該第三多肽之VH鏈係相同的；及 d)包含VL鏈及CL1鏈之第四多肽，其中該第一多肽及該第四多肽之VL鏈係相同的，且 其中該VH鏈及該VL鏈包含特異性結合至CD8αβ或CD8 β之CDRs， 其中該IL-21多肽包含(i)一或多個胺基酸取代提供相對於包含SEQ ID NO: 1之人類IL-21多肽降低之等電點，其中該一或多個胺基酸取代係在SEQ ID NO: 1之S80至T92內，其中至少一個胺基酸取代係在殘基R85、R86、K88、H89、R90或其組合；及(ii)至少一個胺基酸取代提供相對於該人類IL-21多肽之結合減少之與人類IL-21受體之結合。
  64. 一種融合蛋白，其包含： a)包含VL鏈及CL1鏈之第一多肽，其中該VL鏈包含：包含SEQ ID NO: 176之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 177之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 178之胺基酸序列之CDR-L3； b)包含VH鏈及HC恆定域之第二多肽，其中IL-21多肽可操作地連接至該HC恆定域之C端，其中該HC恆定域包含杵修飾，且其中該VH鏈包含：包含SEQ ID NO: 220之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 221之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 222之胺基酸序列之CDR-H3； c)包含VH鏈及HC恆定域之第三多肽，其中該HC恆定域包含臼修飾，且其中該第二多肽及該第三多肽之VH鏈係相同的；及 d)包含VL鏈及CL1鏈之第四多肽，其中該第一多肽及該第四多肽之VL鏈係相同的，且 其中該VH鏈及該VL鏈包含特異性結合至CD8αβ或CD8 β之CDRs， 其中該IL-21多肽包含(i)一或多個胺基酸取代提供相對於包含SEQ ID NO: 1之人類IL-21多肽降低之等電點，其中該一或多個胺基酸取代係在SEQ ID NO: 1之S80至T92內，其中至少一個胺基酸取代係在殘基R85、R86、K88、H89、R90或其組合；及(ii)至少一個胺基酸取代提供相對於該人類IL-21多肽之結合減少之與人類IL-21受體之結合。
  65. 一種融合蛋白，其包含： a)包含VL鏈及CL1鏈之第一多肽，其中該VL鏈包含：包含SEQ ID NO: 176之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO: 177之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO: 178之胺基酸序列之CDR-L3； b)包含VH鏈及HC恆定域之第二多肽，其中該HC恆定域包含杵修飾，且其中該VH鏈包含：包含SEQ ID NO: 220之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO: 221之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO: 222之胺基酸序列之CDR-H3； c)包含VH鏈及HC恆定域之第三多肽，其中IL-21多肽可操作地連接至該HC恆定域之C端，其中該HC恆定域包含臼修飾，且其中該第二多肽及該第三多肽之VH鏈係相同的；及 d)包含VL鏈及CL1鏈之第四多肽，其中該第一多肽及該第四多肽之VL鏈係相同的，且 其中該VH鏈及該VL鏈包含特異性結合至CD8αβ或CD8 β之CDRs， 其中該IL-21多肽包含(i)一或多個胺基酸取代提供相對於包含SEQ ID NO: 1之人類IL-21多肽降低之等電點，其中該一或多個胺基酸取代係在SEQ ID NO: 1之S80至T92內，其中至少一個胺基酸取代係在殘基R85、R86、K88、H89、R90或其組合；及(ii)至少一個胺基酸取代提供相對於該人類IL-21多肽之結合減少之與人類IL-21受體之結合。
  66. 如請求項62至65中任一項之融合蛋白，其中提供減少結合的該至少一個胺基酸取代為R76E或R76Q。
  67. 如請求項1至8中任一項之融合蛋白，其包含第一多肽鏈、第二多肽鏈、第三多肽鏈及第四多肽鏈，其中： (a)該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 262之胺基酸序列，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 263之胺基酸序列，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 264之胺基酸序列，且該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 262之胺基酸序列； (b)該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 266之胺基酸序列，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 267之胺基酸序列，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 268之胺基酸序列，且該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 266之胺基酸序列； (c)該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 270之胺基酸序列，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 271之胺基酸序列，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 272之胺基酸序列，且該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 270之胺基酸序列； (d)該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 274之胺基酸序列，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 275之胺基酸序列，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 276之胺基酸序列，且該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 274之胺基酸序列；或 (e)該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 278之胺基酸序列，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 279之胺基酸序列，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 280之胺基酸序列，且該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 278之胺基酸序列。
  68. 如請求項1至8中任一項之融合蛋白，其包含第一多肽鏈、第二多肽鏈、第三多肽鏈及第四多肽鏈，其中： (a)該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 262之胺基酸序列，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 263之胺基酸序列，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 265之胺基酸序列，且該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 262之胺基酸序列； (b)該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 266之胺基酸序列，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 267之胺基酸序列，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 269之胺基酸序列，且該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 266之胺基酸序列； (c)該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 270之胺基酸序列，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 271之胺基酸序列，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 273之胺基酸序列，且該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 270之胺基酸序列； (d)該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 274之胺基酸序列，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 275之胺基酸序列，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 277之胺基酸序列，且該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 274之胺基酸序列；或 (e)該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 278之胺基酸序列，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 279之胺基酸序列，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 281之胺基酸序列，且該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 278之胺基酸序列。
  69. 如請求項1至8中任一項之融合蛋白，其包含第一多肽鏈、第二多肽鏈、第三多肽鏈及第四多肽鏈，其中： (a)該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 297之胺基酸序列，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 298之胺基酸序列，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 299之胺基酸序列，且該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 297之胺基酸序列； (b)該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 301之胺基酸序列，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 302之胺基酸序列，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 303之胺基酸序列，且該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 301之胺基酸序列； (c)該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 305之胺基酸序列，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 306之胺基酸序列，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 307之胺基酸序列，且該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 305之胺基酸序列；或 (d)該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 309之胺基酸序列，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 310之胺基酸序列，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 311之胺基酸序列，且該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 309之胺基酸序列。
  70. 如請求項1至8中任一項之融合蛋白，其包含第一多肽鏈、第二多肽鏈、第三多肽鏈及第四多肽鏈，其中： (a)該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 297之胺基酸序列，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 298之胺基酸序列，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 300之胺基酸序列，且該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 297之胺基酸序列； (b)該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 301之胺基酸序列，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 302之胺基酸序列，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 304之胺基酸序列，且該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 301之胺基酸序列； (c)該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 305之胺基酸序列，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 306之胺基酸序列，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 308之胺基酸序列，且該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 305之胺基酸序列；或 (d)該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 309之胺基酸序列，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 310之胺基酸序列，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 312之胺基酸序列，且該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 309之胺基酸序列。
  71. 一種聚核苷酸，其編碼如請求項1至70中任一項之融合蛋白。
  72. 如請求項71之聚核苷酸，其包含編碼該IL-21多肽或突變IL-21多肽之核苷酸序列及至少一個編碼該抗體或其抗原結合片段之核苷酸序列。
  73. 一種載體，其包含如請求項71或72之聚核苷酸。
  74. 一種宿主細胞，其包含如請求項73之載體。
  75. 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至70中任一項之融合蛋白。
  76. 一種活化CD8+ T細胞群體之方法，其包含使該CD8+ T細胞群體與如請求項1至70中任一項之融合蛋白或如請求項75之醫藥組合物接觸。
  77. 一種選擇性活化CD8+ T細胞之方法，其包含使包含CD8+ T細胞、CD4+ T細胞及NK細胞之細胞群體與如請求項1至70中任一項之融合蛋白或如請求項75之醫藥組合物接觸。
  78. 如請求項76或77之方法，其中藉由該融合蛋白或醫藥組合物活化之該等CD8+ T細胞相較於該等NK細胞或該等CD4+ T細胞之活化高至少約10倍。
  79. 如請求項77至78中任一項之方法，其中該細胞群體中之該等CD8+ T細胞之活化的效力相較於該等NK細胞或該等CD4+ T細胞之活化大至少約10倍至約100,000倍。
  80. 如請求項76至79中任一項之方法，其中CD8+ T細胞之活化導致該等CD8+ T細胞之STAT3磷酸化相較於該等NK細胞或該等CD4+ T細胞之STAT3磷酸化增加。
  81. 一種治療個體之疾病之方法，該方法包含向該個體投與有效量之如請求項1至70中任一項之融合蛋白或如請求項75之醫藥組合物，藉此治療該疾病。
  82. 如請求項81之方法，其包含投與另外治療劑。
  83. 如請求項81或82之方法，其中該疾病包含癌症或慢性感染。
  84. 如請求項81或82之方法，其中該疾病包含癌症，且其中該癌症選自急性淋巴母細胞性白血病(ALL) (包括非T細胞ALL)、急性骨髓白血病、B細胞前淋巴球白血病、B細胞急性淋巴性白血病(「BALL」)、母細胞性漿細胞樣樹突狀細胞贅瘤、伯基特氏淋巴瘤(Burkitt's lymphoma)、慢性淋巴球白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、慢性骨髓白血病、慢性或急性白血病、瀰漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、濾泡性淋巴瘤(FL)、毛細胞白血病、霍奇金氏病(Hodgkin's Disease)、惡性淋巴增生性病況、MALT淋巴瘤、套細胞淋巴瘤、邊緣區淋巴瘤、意義不明單株伽瑪球蛋白症(MGUS)、多發性骨髓瘤、骨髓化生不良及骨髓化生不良症候群、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、漿細胞增生性病症(包括無症狀骨髓瘤(鬱積型(smoldering)多發性骨髓瘤或惰性(indolent)骨髓瘤))、漿母細胞性淋巴瘤、漿細胞樣樹突狀細胞贅瘤、漿細胞瘤(包括漿細胞惡液質(dyscrasia)；孤立(solitary)骨髓瘤；孤立漿細胞瘤；髓外漿細胞瘤；及多發性漿細胞瘤)、POEMS症候群(亦稱為克羅-富克斯症候群(Crow-Fukase syndrome)；高槻病(Takatsuki disease)；及PEP症候群)、原發性縱隔大B細胞淋巴瘤(PMBC)、小細胞或大細胞濾泡性淋巴瘤、脾邊緣區淋巴瘤(SMZL)、全身澱粉樣蛋白輕鏈澱粉樣變性病、T細胞急性淋巴性白血病(「TALL」)、T細胞淋巴瘤、轉化型濾泡性淋巴瘤，或瓦爾登斯特倫巨球蛋白血症(Waldenstrom macroglobulinemia)、套細胞淋巴瘤(MCL)、轉化型濾泡性淋巴瘤(TFL)、原發性縱隔B細胞淋巴瘤(PMBCL)、多發性骨髓瘤、毛細胞淋巴瘤/白血病、肺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺(NSCL)癌、細支氣管肺泡細胞肺癌、鱗狀細胞癌、肺腺癌、鱗狀肺癌、腹膜癌、頭頸癌、骨癌、胰臟癌、皮膚癌、頭頸癌、皮膚或眼內黑色素瘤、甲狀腺癌、子宮癌、胃腸癌、卵巢癌、直腸癌、肛門區癌、胃癌(stomach cancer/gastric cancer)、結腸癌、乳癌、子宮內膜癌、子宮癌、輸卵管癌、子宮頸癌、陰道癌、外陰癌、霍奇金氏病、食道癌、小腸癌、內分泌系統癌、甲狀腺癌、副甲狀腺癌、腎上腺癌、軟組織肉瘤、尿道癌、陰莖癌、前列腺癌、膀胱癌、腎或輸尿管癌、腎細胞癌、腎盂癌、間皮瘤、膀胱癌、肝癌、肝腫瘤、肝細胞癌、子宮頸癌、唾液腺癌、膽道癌(biliary cancer)、中樞神經系統(CNS)贅瘤、脊髓軸腫瘤、腦幹神經膠質瘤、多形性神經膠質母細胞瘤、星形細胞瘤、神經鞘瘤、室管膜瘤、神經管胚細胞瘤、腦脊髓膜瘤、鱗狀細胞癌、垂體腺瘤及尤文氏肉瘤(Ewing's sarcoma)，包括以上癌症中任一者之難治性型式，及以上癌症中一或多者之任何組合。
  85. 一種如請求項1至70中任一項之融合蛋白用於選擇性活化CD8+ T細胞之用途，其包含使包含CD8+ T細胞、CD4+ T細胞及NK細胞之細胞群體與該融合蛋白接觸，其中在該細胞群體中，相較於該等CD4+ T細胞或該等NK細胞之活化，該等CD8+ T細胞經選擇性活化。
  86. 如請求項1至70中任一項之融合蛋白，其用於選擇性活化CD8+ T細胞之方法中，該方法包含使包含CD8+ T細胞、CD4+ T細胞及NK細胞之細胞群體與該融合蛋白接觸，其中在該細胞群體中，相較於該等CD4+ T細胞或該等NK細胞之活化，該等CD8+ T細胞經選擇性活化。
  87. 一種如請求項1至70中任一項之融合蛋白用於治療個體之疾病之用途，其包含向該個體投與該融合蛋白。
  88. 如請求項1至70中任一項之融合蛋白，其用於治療個體之疾病之方法中，該方法包含向該個體投與該融合蛋白。
  89. 一種套組，其包含容器，該容器包含如請求項1至70中任一項之融合蛋白及視情況醫藥學上可接受之載劑，以及用於向患有疾病之個體投與該融合蛋白之說明書。
  90. 如請求項87之用途、如請求項88之融合蛋白或如請求項89之套組，其中該疾病為癌症或慢性感染。
  91. 一種IL-21多肽或其功能片段或變異體，其包含與SEQ ID NO: 1具有至少80%序列一致性之多肽序列，其中該IL-21多肽之等電點相較於具有SEQ ID NO: 1之序列之人類IL-21多肽之等電點低至少約0.6個單位至約5個單位。
  92. 如請求項91之IL-21多肽，其中該人類IL-21多肽之等電點為約9.42。
  93. 如請求項91或92之IL-21多肽，其包含約7.12至約8.72之等電點。
  94. 如請求項91至93中任一項之IL-21多肽，其包含至少一個胺基酸取代，使該IL-21多肽之等電點相對於不具有該胺基酸取代之該人類IL-21多肽降低約0.6個單位至約5個單位。
  95. 如請求項94之IL-21多肽，其包含多至10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個降低該等電點之胺基酸取代。
  96. 如請求項91至95中任一項之IL-21多肽，其中相對於該人類IL-21多肽，該IL-21多肽在投與個體後造成暴露改善，如對於該IL-21多肽之曲線下面積(AUC)大至少約1.5倍所量測。
  97. 如請求項91至96中任一項之IL-21多肽，其中相對於該人類IL-21多肽之包含約2至20個帶正電胺基酸殘基之區域，該IL-21多肽包含該約2至20個帶正電胺基酸殘基之至少一個胺基酸取代。
  98. 如請求項97之IL-21多肽，其中該人類IL-21多肽之該區域不包括結合IL-21受體之胺基酸殘基。
  99. 如請求項97或98之IL-21多肽，其中該人類IL-21多肽之該區域含有包含SEQ ID NO: 1之該人類IL-21多肽之胺基酸殘基S80至T92。
  100. 如請求項97至99中任一項之IL-21多肽，其中該人類IL-21多肽在該人類IL-21多肽之三維結構中包含位於該區域之空間鄰近處之至少一個帶正電胺基酸殘基，且其中該IL-21多肽包含位於該區域之空間鄰近處之至少一個帶正電胺基酸殘基之至少一個胺基酸取代。
  101. 如請求項99至100中任一項之IL-21多肽，其中該IL-21多肽不包含胺基酸取代在包含SEQ ID NO: 1之該人類IL-21多肽之G84處。
  102. 如請求項91至101中任一項之IL-21多肽，其包含至少四個胺基酸取代在選自SEQ ID NO: 1之S80、T81、N82、A83、R85、R86、Q87、K88、H89、R90、L91或T92之位置。
  103. 如請求項102之IL-21多肽，其包含至少四個胺基酸取代選自S80G、T81G、N82G、N82E、A82G、A83E、A83S、R85G、R85E、R85S、R86G、R86E、Q87G、Q87E、Q87S、K88G、H89G、H89S、R90G、R90S、R90E、R90A、L91G、L91S、T92G、T92S。
  104. 如請求項102之IL-21多肽，其包含4-12個胺基酸取代選自S80G、T81G、N82G、N82E、A82G、A83E、A83S、R85G、R85E、R85S、R86G、R86E、Q87G、Q87E、Q87S、K88G、H89G、H89S、R90G、R90S、R90E、R90A、L91G、L91S、T92G、T92S。
  105. 如請求項91至104中任一項之IL-21多肽，其包含以下胺基酸序列：QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPX 1X 2X 3X 4GX 5X 6X 7X 8X 9X 10X 11X 12CPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS (SEQ ID NO: 380)，其中X 1= G、S；X 2= G、T；X 3= G、E、N；X 4= G、S、E、A；X 5= G、E、S、R；X 6= G、E、R；X 7= S、G、E、Q；X 8= G、K；X 9= G、S、H；X 10= A、E、S、G、R；X 11= S、G、L；及X 12= G、S、T，限制條件為X 5、X 6、X 8、X 9及X 10中之至少一者不為在SEQ ID NO: 1中所述之一致位置之胺基酸殘基，視情況其中： (i) X 5= G，X 6= G，X 8= G，X 10= A； (ii) X 5= G，X 6= G，X 8= G，X 10= E； (iii) X 1= G，X 2= G，X 3= G，X 4= S，X 5= E，X 6= G，X 7= S，X 8= G，X 9= G，X 10= S； (iv) X 1= G，X 2= G，X 3= G，X 4= S，X 5= G，X 6= G，X 7= S，X 8= G，X 9= G，X 10= E； (v) X 5= G，X 6= G，X 7= S，X 8= G，X 9= G，X 10= E； (vi) X 5= G，X 6= G，X 7= S，X 8= G，X 9= G，X 10= S； (vii) X 5= G，X 6= G，X 7= G，X 8= G，X 9= G，X 10= E； (viii) X 5= G，X 6= G，X 7= G，X 8= G，X 9= G，X 10= G； (ix) X 5= G，X 6= G，X 7= E，X 8= G，X 9= G，X 10= G； (x) X 1= G，X 2= G，X 3= G，X 4= S，X 5= G，X 6= G，X 7= S，X 8= G，X 9= G，X 10= G，X 11= S，X 12= G； (xi) X 1= G，X 2= G，X 3= G，X 4= G，X 5= G，X 6= G，X 7= G，X 8= G，X 9= G，X 10= G，X 11= G，X 12= G； (xii) X 1= G，X 2= G，X 3= G，X 4= S，X 5= G，X 6= G，X 7= E，X 8= G，X 9= G，X 10= G，X 11= S，X 12= G； (xiii) X 1= G，X 2= G，X 3= G，X 4= E，X 5= G，X 6= G，X 7= E，X 8= G，X 9= G，X 10= G，X 11= S，X 12= G； (xiv) X 3= G，X 4= G，X 5= S，X 6= G，X 7= G，X 8= G，X 9= S，X 10= G，X 11= G，X 12= S； (xv) X 3= G，X 4= G，X 5= E，X 6= G，X 7= G，X 8= G，X 9= S，X 10= G，X 11= G，X 12= S； (xvi) X 1= G，X 2= G，X 3= G，X 4= G，X 5= E，X 6= G，X 7= G，X 8= G，X 9= G，X 10= G，X 11= G，X 12= G； (xvii) X 1= G，X 2= G，X 3= G，X 4= S，X 5= G，X 6= G，X 7= S，X 8= G，X 9= G，X 10= E，X 11= G，X 12= G； (xviii) X 1= G，X 2= G，X 3= G，X 4= G，X 5= G，X 6= G，X 7= G，X 8= G，X 9= G，X 10= E，X 11= G，X 12= G； (xix) X 3= G，X 4= G，X 5= S，X 6= G，X 7= G，X 8= G，X 9= S，X 10= E，X 11= G，X 12= S； (xx) X 3= G，X 4= G，X 5= G，X 6= G，X 7= G，X 8= G，X 9= G，X 10= E，X 11= G，X 12= G； (xxi) X 5= G，X 6= G，X 7= G，X 8= G，X 9= G，X 10= E，X 11= G； (xxii) X 3= G，X 4= G，X 5= G，X 6= G，X 7= G，X 8= G，X 9= G，X 10= E，X 11= G； (xxiii) X 3= G，X 4= G，X 5= G，X 6= E，X 7= G，X 8= G，X 9= G，X 10= E，X 11= G； (xxiv) X 3= G，X 4= G，X 5= E，X 6= G，X 7= G，X 8= G，X 9= G，X 10= E，X 11= G； (xxv) X 1= G，X 2= G，X 3= G，X 4= E，X 5= G，X 6= G，X 7= G，X 8= G，X 9= G，X 10= E，X 11= G，X 12= G；或 (xxvi) X 1= G，X 2= G，X 3= E，X 4= G，X 5= G，X 6= G，X 7= G，X 8= G，X 9= G，X 10= E，X 11= G，X 12= G。
  106. 如請求項91至105中任一項之IL-21多肽，其包含與選自SEQ ID NO: 2、4-15及23-40之胺基酸序列至少90%一致之胺基酸序列。
  107. 如請求項106之IL-21多肽，其包含選自SEQ ID NO: 2、4-15及23-40之胺基酸序列。
  108. 如請求項107之IL-21多肽，其包含SEQ ID NO: 40之胺基酸序列。
  109. 如請求項91至108中任一項之IL-21多肽，其包含至少一個胺基酸取代，使與IL-21受體之結合相較於該人類IL-21多肽之結合減少。
  110. 如請求項109之IL-21多肽，其中該至少一個胺基酸取代係在SEQ ID NO: 1之位置R5、I8、R9、R11、L13、I14、I16、V17、D18、K72、K73、L74、K75、R76、K77或K117之一或多個胺基酸殘基。
  111. 如請求項110之IL-21多肽，其中該至少一個胺基酸取代係選自：R5F、R5A、R5E、R5S、R5T、R5N、R5Q、R5V、R5I、R5L、R5Y、I8E、R9A、R9D、R9E、R9H、R9S、R9T、R9N、R9G、R9V、R9I、R9L、R9Y、R11D、R11E、L13F、L13R、I14D、I16A、I16S、I16R、V17I、V17A、D18A、K72A、K72E、K73A、K73E、K75A、K75E、L74I、L74F、L74M、L74V、R76E、R76F、R76A、R76N、R76D、R76S、R76T、R76Q、R76V、R76I、R76L、R76Y、R76M、K77A、K77E及K117A。
  112. 如請求項110或111之IL-21多肽，其中該至少一個胺基酸取代為R76E或R76Q。
  113. 如請求項91至112中任一項之IL-21多肽，其包含與選自SEQ ID NO: 16-21、41-98及374-379之胺基酸序列至少90%一致之胺基酸序列。
  114. 如請求項91至112中任一項之IL-21多肽，其包含選自SEQ ID NO: 16-21、41-98及374-379之胺基酸序列。
  115. 一種IL-21多肽，其包含(i)一或多個胺基酸取代提供相對於包含SEQ ID NO: 1之人類IL-21多肽降低之等電點，其中該一或多個胺基酸取代係在SEQ ID NO: 1之S80至T92內，其中至少一個胺基酸取代係在殘基R85、R86、K88、H89、R90或其組合；及(ii)至少一個胺基酸取代提供相對於該人類IL-21多肽之結合減少之與人類IL-21受體之結合。
  116. 一種融合蛋白，其包含(i)如請求項91至115中任一項之IL-21多肽；及(ii)所關注之多肽。
  117. 如請求項116之融合蛋白，其中該所關注之多肽為抗體或其抗原結合片段。
  118. 如請求項117之融合蛋白，其中該抗體或其抗原結合片段結合T細胞上之受體。
  119. 如請求項118之融合蛋白，其中該受體係在CD8+ T細胞上。
  120. 如請求項118之融合蛋白，其中該受體係在表現IL-21受體之T細胞上。
  121. 如請求項118至120中任一項之融合蛋白，其中該受體不在Treg細胞上表現。
  122. 一種聚核苷酸，其編碼如請求項91至115中任一項之IL-21多肽或如請求項116至121中任一項之融合蛋白。
  123. 一種載體，其包含如請求項122之聚核苷酸。
  124. 一種宿主細胞，其包含如請求項123之載體。
  125. 一種醫藥組合物，其包含如請求項91至121中任一項之IL-21多肽或融合蛋白。
  126. 一種活化T細胞之方法，其包含使該等T細胞與如請求項91至115中任一項之IL-21多肽、如請求項116至121中任一項之融合蛋白或如請求項125之醫藥組合物接觸。
  127. 一種治療個體之疾病之方法，其包含向該個體投與如請求項91至115中任一項之IL-21多肽、如請求項116至121中任一項之融合蛋白或如請求項125之醫藥組合物。
  128. 如請求項127之方法，其包含投與另外治療劑。
  129. 如請求項127或128之方法，其中該疾病包含癌症或慢性感染。
  130. 如請求項127或128之方法，其中該疾病包含癌症，且其中該癌症選自急性淋巴母細胞性白血病(ALL) (包括非T細胞ALL)、急性骨髓白血病、B細胞前淋巴球白血病、B細胞急性淋巴性白血病(「BALL」)、母細胞性漿細胞樣樹突狀細胞贅瘤、伯基特氏淋巴瘤、慢性淋巴球白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、慢性骨髓白血病、慢性或急性白血病、瀰漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、濾泡性淋巴瘤(FL)、毛細胞白血病、霍奇金氏病、惡性淋巴增生性病況、MALT淋巴瘤、套細胞淋巴瘤、邊緣區淋巴瘤、意義不明單株伽瑪球蛋白症(MGUS)、多發性骨髓瘤、骨髓化生不良及骨髓化生不良症候群、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、漿細胞增生性病症(包括無症狀骨髓瘤(鬱積型多發性骨髓瘤或惰性骨髓瘤))、漿母細胞性淋巴瘤、漿細胞樣樹突狀細胞贅瘤、漿細胞瘤(包括漿細胞惡液質；孤立骨髓瘤；孤立漿細胞瘤；髓外漿細胞瘤；及多發性漿細胞瘤)、POEMS症候群(亦稱為克羅-富克斯症候群；高槻病；及PEP症候群)、原發性縱隔大B細胞淋巴瘤(PMBC)、小細胞或大細胞濾泡性淋巴瘤、脾邊緣區淋巴瘤(SMZL)、全身澱粉樣蛋白輕鏈澱粉樣變性病、T細胞急性淋巴性白血病(「TALL」)、T細胞淋巴瘤、轉化型濾泡性淋巴瘤，或瓦爾登斯特倫巨球蛋白血症、套細胞淋巴瘤(MCL)、轉化型濾泡性淋巴瘤(TFL)、原發性縱隔B細胞淋巴瘤(PMBCL)、多發性骨髓瘤、毛細胞淋巴瘤/白血病、肺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺(NSCL)癌、細支氣管肺泡細胞肺癌、鱗狀細胞癌、肺腺癌、鱗狀肺癌、腹膜癌、頭頸癌、骨癌、胰臟癌、皮膚癌、頭頸癌、皮膚或眼內黑色素瘤、甲狀腺癌、子宮癌、胃腸癌、卵巢癌、直腸癌、肛門區癌、胃癌(stomach cancer/gastric cancer)、結腸癌、乳癌、子宮內膜癌、子宮癌、輸卵管癌、子宮頸癌、陰道癌、外陰癌、霍奇金氏病、食道癌、小腸癌、內分泌系統癌、甲狀腺癌、副甲狀腺癌、腎上腺癌、軟組織肉瘤、尿道癌、陰莖癌、前列腺癌、膀胱癌、腎或輸尿管癌、腎細胞癌、腎盂癌、間皮瘤、膀胱癌、肝癌、肝腫瘤、肝細胞癌、子宮頸癌、唾液腺癌、膽道癌、中樞神經系統(CNS)贅瘤、脊髓軸腫瘤、腦幹神經膠質瘤、多形性神經膠質母細胞瘤、星形細胞瘤、神經鞘瘤、室管膜瘤、神經管胚細胞瘤、腦脊髓膜瘤、鱗狀細胞癌、垂體腺瘤及尤文氏肉瘤，包括以上癌症中任一者之難治性型式，及以上癌症中一或多者之任何組合。
  131. 一種如請求項91至115中任一項之IL-21多肽或如請求項116至121中任一項之融合蛋白用於活化T細胞之用途，其包含使T細胞與該IL-21多肽或融合蛋白接觸。
  132. 如請求項91至115中任一項之IL-21多肽或如請求項116至121中任一項之融合蛋白，其用於活化T細胞之方法中，該方法包含使T細胞與該IL-21多肽或該融合蛋白接觸。
  133. 一種如請求項91至115中任一項之IL-21多肽或如請求項116至121中任一項之融合蛋白用於治療個體之疾病之用途，其包含向該個體投與該融合蛋白。
  134. 如請求項91至115中任一項之IL-21多肽或如請求項116至121中任一項之融合蛋白，其用於治療個體之疾病之方法中，該方法包含向該個體投與該融合蛋白。
  135. 一種套組，其包含容器，該容器包含如請求項91至115中任一項之IL-21多肽或如請求項116至121中任一項之融合蛋白及視情況醫藥學上可接受之載劑，以及用於向患有疾病之個體投與該融合蛋白之說明書。
  136. 如請求項133之用途、如請求項134之融合蛋白或如請求項135之套組，其中該疾病為癌症或慢性感染。
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