TW202306968A - 用於誘導對流感病毒的特異性免疫和／或預防流感病毒相關疾病的基於流感病毒的分離重組病毒 - Google Patents

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Abstract

本發明涉及生物技術、免疫學、病毒學、遺傳學和分子生物學領域。更具體地，本發明涉及編碼用於增加流感病毒(變體)抗體滴度的重組多肽的分離核酸；用於誘導對流感病毒的特異性免疫和/或預防流感病毒相關疾病的基於流感病毒的重組病毒；包含上述基於流感病毒的重組病毒的藥物組合物和疫苗；以及它們用於誘導對流感病毒的特異性免疫和/或預防流感病毒相關疾病的用途。

Description

用於誘導對流感病毒的特異性免疫和／或預防流感病毒相關疾病的基於流感病毒的分離重組病毒
本發明涉及生物技術、免疫學、病毒學、遺傳學和分子生物學領域。更具體地，本發明涉及編碼用於增加流感病毒(變體)抗體滴度的重組多肽的分離核酸；用於誘導對流感病毒的特異性免疫和/或預防流感病毒-相關疾病的基於流感病毒的重組病毒；包含上述基於流感病毒的重組病毒的藥物組合物和疫苗；以及它們用於誘導對流感病毒的特異性免疫和/或預防流感病毒相關疾病的用途。
流感是一種在世界範圍內發生的急性病毒感染。每年的流感流行通常發生在秋季和冬季，並且可感染至多20%的人口。 季節性流感相關的呼吸道疾病可能導致相當大的死亡率。特別是，2017年的一項研究發現，全球每年此類死亡人數可能達到65萬人。 流感感染後最有可能患上嚴重疾病的人包括65歲及超過65歲的人、孕婦、幼兒、免疫受損的人和患有慢性病的人。 引起人類疾病的季節性流感病毒主要有2種類型：甲型和乙型。甲型流感病毒進一步分為亞型，而乙型流感病毒則按譜系分類。最常見的流行性甲型流感病毒屬於亞型A(H1N1)和A(H3N2)，而最常見的流行性乙型流感病毒屬於Yamagata和Victoria譜系。 每年接種疫苗是預防流感及其嚴重後果的最有效方式。由於流感病毒的高度可變性，WHO每年兩次更新流感疫苗組合物的建議：北半球在2月更新，而南半球在9月更新。疫苗組合物的建議是基於會員國通過監測發現和表徵的病毒。 專利檔RU92006182提供了一種減毒的冷適應流感病毒株A/Leningrad/134/17/57(H2N2)，用於生產活的鼻內流感疫苗株。 專利檔RU2556833C2提供了一種減毒的冷適應流感病毒株а/рr/8/59/m2(h1n1)，旨在生產疫苗流感病毒株作為減毒供體，以及疫苗流感病毒株a/59/m2/california/66/2211 (h2n2)和a/59/m2/tokyo/67/22111(h2n2)。 專利檔RU2563352C2提供了一種流感病毒株 A/17/Texas/2012/30(H3N2)，用於生產成人和兒童用的流感鼻內活疫苗。 儘管有多種已知的疫苗流感病毒株，但仍需要生產具有改進特性的基於流感病毒的重組病毒，例如，當給予哺乳動物時允許獲得更高水準的流感病毒抗體的重組病毒，即使用中更有效。 此外，截至本申請提交日，已有超過1.86億人感染了SARS-CoV-2相關疾病，超過400萬人死於SARS-CoV-2相關疾病。此外，在本申請提交日，COVID-19大流行仍在繼續。全球迫切需要有效的手段來預防和治療由嚴重急性呼吸綜合征病毒SARS-CoV-2引起的疾病。 因此，需要生產一種重組病毒，該病毒將允許形成對冠狀病毒的特異性T細胞免疫和對流感病毒的特異性免疫，從而有可能生產一種可用於預防流感病毒相關疾病和冠狀病毒相關疾病的疫苗株。
本發明人開發了一種核酸，該核酸編碼基於冠狀病毒蛋白片段的重組多肽。本發明人開發了一種基於流感病毒的重組病毒，其包含上述核酸。本發明的作者開發了一種藥物組合物和一種疫苗，其包含上述基於流感病毒的重組病毒以及各種變體，用於誘導對流感病毒的特異性免疫和/或預防流感病毒相關疾病。本發明人驚奇地發現，所開發的編碼基於冠狀病毒蛋白片段的重組多肽的核酸，當嵌入流感病毒的神經氨酸酶(NA)基因或NS基因中時，可以產生重組流感病毒，當給予哺乳動物時，與沒有上述插入物的流感病毒相比，所述重組流感病毒產生更高水準的流感病毒抗體。此外，包含上述編碼基於冠狀病毒蛋白片段的重組多肽的核酸的重組流感病毒在給予哺乳動物時允許形成針對冠狀病毒的特異性T細胞免疫。 一方面，本發明涉及一種分離核酸，其編碼用於增加流感病毒抗體滴度的重組多肽，所述重組多肽包含： 來自冠狀病毒S糖蛋白的至少1個片段，所述冠狀病毒S糖蛋白具有SEQ ID NO: 1的氨基酸序列； 來自冠狀病毒核蛋白的至少1個片段，所述冠狀病毒核蛋白具有SEQ ID NO: 3的氨基酸序列； 以及，如果需要，來自冠狀病毒膜蛋白的1個片段，所述冠狀病毒膜蛋白具有SEQ ID NO: 5的氨基酸序列， 其中 來自冠狀病毒S糖蛋白的至少1個片段選自：SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 9、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 11、SEQ ID NO: 12或SEQ ID NO: 13； 來自冠狀病毒核蛋白的至少1個片段選自：SEQ ID NO: 15、SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 20或SEQ ID NO: 21； 來自冠狀病毒膜蛋白的片段是SEQ ID NO: 22。 在本發明的一些實施方案中，分離核酸編碼包含來自冠狀病毒S糖蛋白的1至4個片段的多肽。 在本發明的一些實施方案中，分離核酸編碼包含來自冠狀病毒S糖蛋白的1個片段的多肽。 在本發明的一些實施方案中，分離核酸編碼包含來自冠狀病毒S糖蛋白的2個片段的多肽。 在本發明的一些實施方案中，分離核酸編碼包含來自冠狀病毒S糖蛋白的3個片段的多肽。 在本發明的一些實施方案中，分離核酸編碼包含來自冠狀病毒S糖蛋白的4個片段的多肽。 在本發明的一些實施方案中，分離核酸編碼包含來自冠狀病毒核蛋白的1至4個片段的多肽。 在本發明的一些實施方案中，分離核酸編碼包含來自冠狀病毒核蛋白的1個片段的多肽。 在本發明的一些實施方案中，分離核酸編碼包含來自冠狀病毒核蛋白的2個片段的多肽。 在本發明的一些實施方案中，分離核酸編碼包含來自冠狀病毒核蛋白的3個片段的多肽。 在本發明的一些實施方案中，分離核酸編碼包含來自冠狀病毒核蛋白的4個片段的多肽。 在本發明的一些實施方案中，分離核酸編碼包含冠狀病毒膜蛋白片段的多肽。 在本發明的一些實施方案中，分離核酸編碼包含選自包括SEQ ID NO: 33或SEQ ID NO: 36的氨基酸序列的組的氨基酸序列的多肽。 在本發明的一些實施方案中，分離核酸編碼包含選自包括SEQ ID NO: 24或SEQ ID NO: 25的氨基酸序列的組的氨基酸序列的多肽。 在本發明的一些實施方案中，分離核酸編碼包含選自包括SEQ ID NO: 32或SEQ ID NO: 35的氨基酸序列的組的氨基酸序列的多肽。 在本發明的一些實施方案中，分離核酸編碼包含選自包括SEQ ID NO: 23、SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 27、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 30或SEQ ID NO: 31的氨基酸序列的組的氨基酸序列的多肽。 在本發明的一些實施方案中，分離核酸編碼包含選自包括SEQ ID NO: 34或SEQ ID NO: 37的氨基酸序列的組的氨基酸序列的多肽。 在本發明的一些實施方案中，分離核酸編碼包含SEQ ID NO: 38的氨基酸序列的多肽。 在本發明的一些實施方案中，分離核酸編碼包含SEQ ID NO: 39的氨基酸序列的多肽。 在本發明的一些實施方案中，分離核酸編碼包含SEQ ID NO: 40的氨基酸序列的多肽。 在本發明的一些實施方案中，分離核酸包含選自包括SEQ ID NO: 59-76的核苷酸序列的組的核苷酸序列。 一方面，本發明涉及編碼重組多肽以增加流感病毒抗體滴度的分離核酸，所述重組多肽包含來自冠狀病毒蛋白的片段並且包含選自包括SEQ ID NO: 23-40的氨基酸序列的組的氨基酸序列。 在本發明的一些實施方案中，分離核酸包含選自包括分別編碼SEQ ID NO: 23-40的氨基酸序列的SEQ ID NO: 59-76的核苷酸序列的核苷酸序列。 在本發明的一些實施方案中，分離核酸編碼來自冠狀病毒的多肽，其中冠狀病毒是β冠狀病毒。 在本發明的一些實施方案中，分離核酸編碼來自β-冠狀病毒的多肽，其中β-冠狀病毒是SARS-CoV-2病毒。 一方面，本發明涉及一種基於流感病毒的分離重組病毒，用於誘導對流感病毒的特異性免疫和/或預防流感病毒相關疾病，所述重組病毒包含任何上述核酸。 在本發明的一些實施方案中，基於流感病毒的分離重組病毒由減毒流感病毒產生。 在本發明的一些實施方案中，基於流感病毒的分離重組病毒由冷適應流感病毒產生的。 在本發明的一些實施方案中，基於流感病毒的分離重組病毒由H2N2流感病毒產生。 在本發明的一些實施方案中，基於流感病毒的分離重組病毒由病毒A/Leningrad/134/17/57(H2N2)或其衍生物產生。 在本發明的一些實施方案中，基於流感病毒的分離重組病毒包含本發明的任何上述核酸，其存在於流感病毒的神經氨酸酶(NA)基因或NS基因中。 一方面，本發明涉及一種用於誘導對流感病毒的特異性免疫和/或預防由流感病毒引起的疾病的藥物組合物，其包含上述重組病毒中的任一種與一種或多種藥學上可接受的賦形劑的組合。 一方面，本發明涉及任何上述基於流感病毒的重組病毒或上述組合物用於誘導對流感病毒的特異性免疫和/或預防流感病毒相關疾病的用途。 在用途的一些實施方案中，任何上述基於流感病毒的重組病毒或上述組合物用於誘導對流感病毒和冠狀病毒的特異性免疫和/或預防流感病毒相關疾病和冠狀病毒相關疾病。 在用途的一些實施方案中，對冠狀病毒的特異性免疫是特異性T細胞免疫。 在用途的一些實施方案中，冠狀病毒是β冠狀病毒。 在用途的一些疫苗實施方案中，冠狀病毒選自包括人冠狀病毒OC43、人冠狀病毒HKU1、MERS-CoV、SARS-CoV或SARS-CoV-2的組。 一方面，本發明涉及用於誘導對流感病毒的特異性免疫和/或預防流感病毒相關疾病的疫苗，其包含有效量的任何上述基於流感病毒的重組病毒。 在本發明的一些實施方案中，疫苗用於誘導對流感病毒和冠狀病毒的特異性免疫和/或預防流感病毒相關疾病和冠狀病毒相關疾病。 在疫苗的一些實施方案中，冠狀病毒是β冠狀病毒。 在疫苗的一些實施方案中，冠狀病毒選自包括人冠狀病毒OC43、人冠狀病毒HKU1、MERS-CoV、SARS-CoV或SARS-CoV-2的組。 在疫苗的一些實施方案中，對冠狀病毒的特異性免疫是特異性T細胞免疫。 一方面，本發明涉及用於誘導針對流感病毒的特異性免疫和/或預防流感病毒相關疾病，或誘導針對流感病毒和冠狀病毒的特異性免疫，或聯合預防流感病毒相關疾病和冠狀病毒相關疾病的方法，包括將有效量的任何上述基於流感病毒的重組病毒或上述組合物或上述疫苗給予哺乳動物生物體。 在方法的一些實施方案中，冠狀病毒是β冠狀病毒。 在方法的一些疫苗實施方案中，冠狀病毒選自包括人冠狀病毒OC43、人冠狀病毒HKU1、MERS-CoV、SARS-CoV或SARS-CoV-2的組。 在方法的一些實施方案中，對冠狀病毒的特異性免疫是特異性T細胞免疫。
定義和一般方法除非本文另有定義，否則與本發明有關的所有技術和科學術語將具有與本領域技術人員通常理解的相同的含義。 此外，除非上下文另有要求，否則單數術語應包括複數術語，並且複數術語應包括單數術語。通常，本文所述的細胞培養、分子生物學、免疫學、微生物學、遺傳學、分析化學、有機合成化學、醫學和藥物化學以及蛋白質和核酸的雜交和化學的本申請分類和方法是本領域技術人員眾所周知的並廣泛應用於本領域。酶反應和純化方法根據製造商的指南進行，如本領域中常見的，或如本文所述。 “分離的”是指從天然狀態改變或移出的。例如，動物體內天然存在的核酸或肽不是“分離的”，但與其天然狀態的共存材料部分或完全分離的相同核酸或肽是“分離的”。分離核酸或蛋白質可以基本上以純化形式存在，或者可以存在于非天然環境中，例如遺傳修飾的細胞。 術語“天然存在的”、“天然”或“野生型”用於描述可以在自然界中找到的與人工生產不同的物件。例如，存在於生物體(包括病毒)中的蛋白質或核苷酸序列，可以從自然界的來源中分離出來，並且未經實驗室人員有意修飾，是天然存在的。 如在本說明書和隨後的權利要求中使用的，除非上下文另有規定，否則詞語“包括”和“包含”或其變體例如“包括”、“包括”、“包含”或“包含”將被理解為暗示包含指定的整體或整體組，但不排除任何其它整體或整體組。 蛋白質 ( 肽 )如在本說明書中使用的，術語“肽”、“多肽”和“蛋白質”可互換使用，並且它們是指由通過肽鍵共價連接的氨基酸殘基組成的化合物。蛋白質或肽必須包含至少兩個氨基酸，並且對可以構成蛋白質或肽序列的氨基酸的最大數量沒有限制。多肽包括包含通過肽鍵彼此連接的兩個或更多個氨基酸的任何肽或蛋白質。如在本說明書中使用的，該術語既指短鏈，本領域也通常稱為例如肽、寡肽和寡聚體，以及還指長鏈，其通常在本領域中稱為蛋白質，其中有很多類型。“多肽”尤其包括例如生物活性片段、基本上同源的多肽、寡肽、同源二聚體、異源二聚體、多肽的變體、修飾的多肽、衍生物、類似物、融合蛋白。多肽包含天然肽、重組肽、合成肽或它們的組合。 核酸分子在本說明書中可互換使用的術語“核酸”、“核序列”、“核酸序列”、“多核苷酸”、“寡核苷酸”、“多核苷酸序列”和“核苷酸序列”是指核苷酸的精確序列，不論修飾與否，確定核酸的片段或區域，是否含有非天然核苷酸，是雙鏈DNA或RNA，單鏈DNA或RNA，或所述DNA的轉錄產物。 本領域技術人員具有一般知識，即核酸是可以水解成單體“核苷酸”的多核苷酸。單體核苷酸可以水解成核苷。如在本說明書中使用的，多核苷酸包括，作為非限制性實例，通過本領域可用的任何手段獲得的所有核酸序列，包括，作為非限制性實例，重組手段，即從重組文庫或細胞基因組，採用普通的克隆技術和PCR等克隆核酸序列，以及通過合成手段。 此處還應包括，本發明不涉及在其天然染色體環境中，即在天然狀態下的核苷酸序列。本發明的序列已被分離和/或純化，即它們被直接或間接地取樣，例如通過複製，它們的環境已被至少部分地改變。因此，此處還應提及通過重組遺傳學，例如借助宿主細胞獲得或通過化學合成獲得的分離核酸。 除非另有說明，否則術語核苷酸序列包括其互補序列。因此，具有特定序列的核酸應理解為包含具有其互補序列的其互補鏈的核酸。 載體如本文所用，術語“載體”是指能夠轉運與其連接的另一種核酸的核酸分子。此外，本文中的術語“載體”是指能夠轉運核酸的病毒顆粒。 用途術語“預防”或“防止”等意指減緩或防止疾病、病症或感染的症狀的發作。 本發明中使用的術語“免疫反應的誘導”是指對免疫反應活性的特異性控制或影響，並且包括免疫反應的啟動、免疫反應的刺激、免疫反應的增強。 本發明中使用的術語“特異性免疫”是指在誘導免疫反應後對疾病免疫的狀態。 術語“病症”是指將受益于本發明化合物治療的任何病況。這包括慢性和急性病症或疾病，包括使哺乳動物易患所述病症的那些病理狀況。 “疾病”是動物無法維持穩態的一種健康狀態，並且如果疾病沒有得到改善，那麼動物的健康就會繼續惡化。 術語“受試者”、“患者”、“個體”等在本說明書中可互換使用，並且它們指的是任何適用於本說明書中描述的方法的動物。在某些非限制性實施方案中，受試者、患者或個體是人。所述受試者可以是任何年齡的男性或女性。 “治療有效量”或“有效量”是指將在一定程度上減輕所預防疾病的一種或多種症狀的所給予治療劑的量。 發明詳述 用於增加流感病毒抗體滴度的重組多肽及編碼該多肽的核酸一方面，本發明涉及一種分離核酸，其編碼用於增加流感病毒抗體滴度的重組多肽，所述重組多肽包含： 來自冠狀病毒S糖蛋白的至少1個片段，所述冠狀病毒S糖蛋白具有氨基酸序列
Figure 02_image001
來自冠狀病毒核蛋白的至少1個片段，所述冠狀病毒核蛋白具有氨基酸序列
Figure 02_image003
以及，如果需要，來自冠狀病毒膜蛋白的1個片段，所述冠狀病毒膜蛋白具有氨基酸序列
Figure 02_image005
其中 來自冠狀病毒S糖蛋白的至少1個片段選自：
Figure 02_image007
來自冠狀病毒核蛋白的至少1個片段選自：
Figure 02_image009
來自冠狀病毒膜蛋白的片段 FLWLLWPVTLACFVLAAVYRI (SEQ ID NO: 22)。 在本發明的一些實施方案中，分離核酸編碼包含來自冠狀病毒S糖蛋白的1至4個片段的多肽。 在本發明的一些實施方案中，分離核酸編碼包含來自冠狀病毒S糖蛋白的1個片段的多肽。 在本發明的一些實施方案中，分離核酸編碼包含來自冠狀病毒S糖蛋白的2個片段的多肽。 在本發明的一些實施方案中，分離核酸編碼包含來自冠狀病毒S糖蛋白的3個片段的多肽。 在本發明的一些實施方案中，分離核酸編碼包含來自冠狀病毒S糖蛋白的4個片段的多肽。 在本發明的一些實施方案中，分離核酸編碼包含來自冠狀病毒核蛋白的1至4個片段的多肽。 在本發明的一些實施方案中，分離核酸編碼包含來自冠狀病毒核蛋白的1個片段的多肽。 在本發明的一些實施方案中，分離核酸編碼包含來自冠狀病毒核蛋白的2個片段的多肽。 在本發明的一些實施方案中，分離核酸編碼包含來自冠狀病毒核蛋白的3個片段的多肽。 在本發明的一些實施方案中，分離核酸編碼包含來自冠狀病毒核蛋白的4個片段的多肽。 在本發明的一些實施方案中，分離核酸編碼包含冠狀病毒膜蛋白片段的多肽。 在本發明的一些實施方案中，分離核酸編碼包含來自冠狀病毒S糖蛋白的2個片段和來自冠狀病毒核蛋白的1個片段的多肽。 在本發明的一些實施方案中，分離核酸編碼包含來自冠狀病毒S糖蛋白的3個片段、來自冠狀病毒核蛋白的1個片段和冠狀病毒膜蛋白片段的多肽。 在本發明的一些實施方案中，分離核酸編碼包含來自冠狀病毒S糖蛋白的2個片段和來自冠狀病毒核蛋白的3個片段的多肽。 在本發明的一些實施方案中，分離核酸編碼包含來自冠狀病毒S糖蛋白的1個片段和來自冠狀病毒核蛋白的3個片段的多肽。 在本發明的一些實施方案中，分離核酸編碼包含來自冠狀病毒S糖蛋白的3個片段和來自冠狀病毒核蛋白的2個片段的多肽。 在本發明的一些實施方案中，分離核酸編碼包含來自冠狀病毒S糖蛋白的2個片段和來自冠狀病毒核蛋白的4個片段的多肽。 在本發明的一些實施方案中，分離核酸編碼包含來自冠狀病毒S糖蛋白的4個片段和來自冠狀病毒核蛋白的3個片段的多肽。 在本發明的一些實施方案中，分離核酸編碼包含來自冠狀病毒S糖蛋白的3個片段和來自冠狀病毒核蛋白的4個片段的多肽。 在本發明的一些實施方案中，分離核酸編碼這樣的多肽，其包含來自冠狀病毒S糖蛋白具有SEQ ID NO: 7和SEQ ID NO: 8的氨基酸序列的2個片段，以及來自冠狀病毒核蛋白具有SEQ ID NO: 20的氨基酸序列的1個片段。 在本發明的一些實施方案中，分離核酸編碼這樣的多肽，其包含來自冠狀病毒S糖蛋白具有SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 8和SEQ ID NO: 9的氨基酸序列的3個片段，來自冠狀病毒核蛋白具有SEQ ID NO: 15的氨基酸序列的1個片段和具有SEQ ID NO: 22的氨基酸序列的冠狀病毒膜蛋白片段。 在本發明的一些實施方案中，分離核酸編碼這樣的多肽，其包含來自冠狀病毒S糖蛋白具有SEQ ID NO: 10和SEQ ID NO: 11的氨基酸序列的2個片段，以及來自冠狀病毒核蛋白具有SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 17和SEQ ID NO: 18的氨基酸序列的3個片段。 在本發明的一些實施方案中，分離核酸編碼這樣的多肽，其包含來自冠狀病毒S糖蛋白具有SEQ ID NO: 10和SEQ ID NO: 11的氨基酸序列的2個片段，以及來自冠狀病毒核蛋白具有SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 18和SEQ ID NO: 21的氨基酸序列的3個片段。 在本發明的一些實施方案中，分離核酸編碼這樣的多肽，其包含來自冠狀病毒S糖蛋白具有SEQ ID NO: 10的氨基酸序列的1個片段和來自冠狀病毒核蛋白具有SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 17和SEQ ID NO: 18的氨基酸序列的3個片段。 在本發明的一些實施方案中，分離核酸編碼這樣的多肽，其包含來自冠狀病毒S糖蛋白具有SEQ ID NO: 10的氨基酸序列的1個片段和來自冠狀病毒核蛋白具有SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 18和SEQ ID NO: 21的氨基酸序列的3個片段。 在本發明的一些實施方案中，分離核酸編碼這樣的多肽，其包含來自冠狀病毒S糖蛋白具有SEQ ID NO: 11、SEQ ID NO: 12和SEQ ID NO: 13的氨基酸序列的3個片段，以及來自冠狀病毒核蛋白具有SEQ ID NO: 16和SEQ ID NO: 21的氨基酸序列的2個片段。 在本發明的一些實施方案中，分離核酸編碼這樣的多肽，其包含來自冠狀病毒S糖蛋白的具有SEQ ID NO: 12和SEQ ID NO: 13的氨基酸序列的2個片段和來自冠狀病毒核蛋白具有SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 20和SEQ ID NO: 21的氨基酸序列的4個片段。 在本發明的一些實施方案中，分離核酸編碼這樣的多肽，其包含來自冠狀病毒S糖蛋白具有SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 11、SEQ ID NO: 12和SEQ ID NO: 13的氨基酸序列的4個片段，以及來自冠狀病毒核蛋白具有SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 17和SEQ ID NO: 18的氨基酸序列的3個片段。 在本發明的一些實施方案中，分離核酸編碼這樣的多肽，其包含來自冠狀病毒S糖蛋白具有SEQ ID NO: 11、SEQ ID NO: 12和SEQ ID NO: 13的氨基酸序列的3個片段，以及來自冠狀病毒核蛋白具有SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 20和SEQ ID NO: 21的氨基酸序列的4個片段。 在本發明的一些實施方案中，分離核酸編碼包含氨基酸序列的多肽，所述氨基酸序列選自包括SEQ ID NO: 33或SEQ ID NO: 36的氨基酸序列的組。 在本發明的一些實施方案中，分離核酸編碼包含氨基酸序列的多肽，所述氨基酸序列選自包括SEQ ID NO: 24或SEQ ID NO: 25的氨基酸序列的組。 在本發明的一些實施方案中，分離核酸編碼包含氨基酸序列的多肽，所述氨基酸序列選自包括SEQ ID NO: 32或SEQ ID NO: 35的氨基酸序列的組。 在本發明的一些實施方案中，分離核酸編碼包含氨基酸序列的多肽，所述氨基酸序列選自包括以下氨基酸序列的組：SEQ ID NO: 23、SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 27、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 30或SEQ ID NO: 31。 在本發明的一些實施方案中，分離核酸編碼包含氨基酸序列的多肽，所述氨基酸序列選自包括SEQ ID NO: 34或SEQ ID NO: 37的氨基酸序列的組。 在本發明的一些實施方案中，分離核酸編碼包含氨基酸序列SEQ ID NO: 38的多肽。 在本發明的一些實施方案中，分離核酸編碼包含氨基酸序列SEQ ID NO: 39的多肽。 在本發明的一些實施方案中，分離核酸編碼包含氨基酸序列SEQ ID NO: 40的多肽。 在本發明的一些實施方案中，分離核酸包含選自包括SEQ ID NO: 59-76的核苷酸序列的組的核苷酸序列。 任何上述核酸編碼重組多肽以增加流感病毒抗體滴度。所述多肽是針對冠狀病毒蛋白的T細胞反應的多表位盒。在本申請材料中，所述多肽也稱為根據本發明的盒。 根據本發明的盒包括至少一種選自下組的序列： 1)上述SARS-CoV-2病毒S糖蛋白(SEQ ID NO: 1)的片段(1184-1190aar)，來自參與病毒侵入感染細胞的七肽重複2區：DRLNEVA(SEQ ID NO: 7)。 該片段可以作為例如以下變體的一部分提供在盒中： 上述SARS-CoV-2病毒S糖蛋白(SEQ ID NO: 1)的片段(1180-1197aar)，來自參與病毒侵入感染細胞的七肽重複2區：QKEIDRLNEVAKNLNESL(SEQ ID NO: 95)； 上述SARS-CoV-2病毒S糖蛋白(SEQ ID NO: 1)的片段(1164-1178aar)，來自參與病毒侵入感染細胞的七肽重複2區：EIDRLNEVAKNLNES(SEQ ID NO: 96)。 2)上述SARS-CoV-2病毒S糖蛋白(SEQ ID NO: 1)的片段(1220-1228aar)：FIAGLIAIV(SEQ ID NO: 8)。 該片段可以作為例如以下變體的一部分提供在盒中： 上述SARS-CoV-2病毒S糖蛋白(SEQ ID NO: 1)的片段(1199-1213aar)：WLGFIAGLIAIVMVT(SEQ ID NO: 97)； 上述SARS-CoV-2病毒S糖蛋白(SEQ ID NO: 1)的片段(1220-1231aar)：FIAGLIAIVMVT(SEQ ID NO: 98)； 上述SARS-CoV-2病毒S糖蛋白(SEQ ID NO: 1)的片段(1220-1229aar)：FIAGLIAIVM(SEQ ID NO: 99)。 3)上述SARS-CoV-2病毒S糖蛋白(SEQ ID NO: 1)的片段(1056-1068aar)：APHGVVFLHVTYV(SEQ ID NO: 9)。 該片段可以作為例如以下變體的一部分提供在盒中： SARS-CoV-1病毒S糖蛋白的片段(1035-1062aar)，與SARS-CoV-2病毒S糖蛋白(SEQ ID NO: 1)的片段部分一致：PQAAPHGVVFLHVTYVPSQERNFTTAPA(SEQ ID NO: 100)； 上述SARS-CoV-2病毒S糖蛋白(SEQ ID NO: 1)的片段(1056-1078aar)：APHGVVFLHVTYVPAQEKNFTTA(SEQ ID NO: 101)； 上述SARS-CoV-2病毒S糖蛋白(SEQ ID NO: 1)的片段(1056-1073aar)：APHGVVFLHVTYVPAQEK(SEQ ID NO: 102)； 上述SARS-CoV-2病毒S糖蛋白(SEQ ID NO: 1)的片段(1055-1073aar)：SAPHGVVFLHVTYVPAQEK(SEQ ID NO: 103)； 上述SARS-CoV-2病毒S糖蛋白(SEQ ID NO: 1)的片段(1055-1070aar)：SAPHGVVFLHVTYVPA(SEQ ID NO: 104)。 4)上述SARS-CoV-2病毒S糖蛋白(SEQ ID NO: 1)的片段(504-515aar)，來自負責與感染細胞表面受體結合的受體結合結構域(RBD)的區域：GYQPYRVVVLSF(SEQ ID NO: 10)。 5)上述SARS-CoV-2病毒S糖蛋白(SEQ ID NO: 1)的片段(504-522aar)，來自負責與感染細胞表面受體結合的受體結合結構域(RBD)的區域：GYQPYRVVVLSFELLHAPA (SEQ ID NO: 105)。 6)上述SARS-CoV-2病毒S糖蛋白(SEQ ID NO: 1)的片段(504-516aar)，來自負責與感染細胞表面受體結合的受體結合結構域(RBD)的區域：GYQPYRVVVLSFE(SEQ ID NO: 106)。 7)上述SARS-CoV-2病毒S糖蛋白(SEQ ID NO: 1)的片段(958-966aar)，來自參與病毒侵入感染細胞的七肽重複1區：ALNTLVKQL(SEQ ID NO: 11)。 該片段可以作為例如以下變體的一部分提供在盒中： 上述SARS-CoV-2病毒S糖蛋白(SEQ ID NO: 1)的片段(946-971aar)，來自參與病毒侵入感染細胞的七肽重複1區：GKLQDVVNQNAQALNTLVKQLSSNFG(SEQ ID NO: 107)； 上述SARS-CoV-2病毒S糖蛋白(SEQ ID NO: 1)的片段(947-970aar)，來自參與病毒侵入感染細胞的七肽重複1區：KLQDVVNQNAQALNTLVKQLSSNF(SEQ ID NO: 108)。 8)上述SARS-CoV-2病毒S糖蛋白(SEQ ID NO: 1)的片段(976-984aar)：VLDNDILSRL(SEQ ID NO: 12)。 9)上述SARS-CoV-2病毒S糖蛋白(SEQ ID NO: 1)的片段(996-1008aar)：LITGRLQSL QTYV (SEQ ID NO: 13)。 10)上述SARS-CoV-2病毒S糖蛋白(SEQ ID NO: 1)的片段(996-1004aar)：LITGRLQSL(SEQ ID NO: 14)。 根據本發明的盒包括至少一種選自下組的序列： 1)上述SARS-CoV-2病毒N核蛋白(SEQ ID NO: 3)的片段(218-230aar)：ALALLLLDRLNQL(SEQ ID NO: 15)。 該片段可以作為例如以下變體的一部分提供在盒中： SARS-CoV-1病毒N核蛋白的片段(216-234aar)，與SARS-CoV-2病毒N核蛋白(SEQ ID NO: 3)的片段部分一致：GETALALLLLDRLNQLESK(SEQ ID NO: 109)； 上述SARS-CoV-2病毒N核蛋白(SEQ ID NO: 3)的片段(214-234aar)：GGDAALALLLLDRLNQLESKM(SEQ ID NO: 110)； 上述SARS-CoV-2病毒N核蛋白(SEQ ID NO: 3)的片段(216-235aar)：DAALALLLLDRLNQLESKMS(SEQ ID NO: 111)； 上述SARS-CoV-2病毒N核蛋白(SEQ ID NO: 3)的片段(216-234aar)：DAALALLLLDRLNQLESKM(SEQ ID NO: 112)； 上述SARS-CoV-2病毒N核蛋白(SEQ ID NO: 3)的片段(216-233aar)：DAALALLLLDRLNQLESK(SEQ ID NO: 113)； 2)上述SARS-CoV-2病毒N核蛋白(SEQ ID NO: 3)的片段(104-113aar)：LSPRWYFYYL(SEQ ID NO: 16)。 該片段可以作為例如以下變體的一部分提供在盒中： 上述SARS-CoV-2病毒N核蛋白(SEQ ID NO: 3)的片段(92-118aar)：RRIRGGDGKMKDLSPRWYFYYLGTGPE(SEQ ID NO: 114)； 上述SARS-CoV-2病毒N核蛋白(SEQ ID NO: 3)的片段(92-117aar)：RRIRGGDGKMKDLSPRWYFYYLGTGP(SEQ ID NO: 115)； 上述SARS-CoV-2病毒N核蛋白(SEQ ID NO: 3)的片段(98-119aar)：DGKMKDLSPRWYFYYLGTGPE(SEQ ID NO: 116)。 3)上述SARS-CoV-2病毒N核蛋白(SEQ ID NO: 3)的片段(138-146aar)：ALNTPKDHI(SEQ ID NO: 17)。 4)上述SARS-CoV-2病毒N核蛋白(SEQ ID NO: 3)的片段(160-167aar)：QLPQGTTL(SEQ ID NO: 18)。 5)上述SARS-CoV-2病毒N核蛋白(SEQ ID NO: 3)的片段(293-302aar)：RQGTDYKHWP(SEQ ID NO: 19)。 6)上述SARS-CoV-2病毒N核蛋白(SEQ ID NO: 3)的片段(316-324aar)：GMSRIGMEV(SEQ ID NO: 20)。 該片段可以作為例如以下變體的一部分提供在盒中： SARS-CoV-1病毒N核蛋白的片段(303-337aar)，與SARS-CoV-2病毒N核蛋白(SEQ ID NO: 3)的片段部分一致：PQIAQFAPSASAFFGMSRIGMEVTPSGTWLTYHGA (SEQ ID NO: 117)。 7)上述SARS-CoV-2病毒N核蛋白(SEQ ID NO: 3)的片段(351-359aar)：ILLNKHIDA(SEQ ID NO: 21)。 該片段可以作為例如以下變體的一部分提供在盒中： 上述SARS-CoV-2病毒N核蛋白(SEQ ID NO: 3)的片段(340-365aar)：DDKDPNFKDQVILLNKHIDAYKTFPP(SEQ ID NO: 118)； 上述SARS-CoV-2病毒N核蛋白(SEQ ID NO: 3)的片段(341-359aar)：DKDPNFKDQVILLNKHIDA(SEQ ID NO: 119)； 上述SARS-CoV-2病毒N核蛋白(SEQ ID NO: 3)的片段(340-359aar)：DDKDPNFKDQVILLNKHIDA(SEQ ID NO: 120)。 如果需要，根據本發明的盒包括上述SARS-CoV-2病毒膜M蛋白(SEQ ID NO: 5)的片段(53-73aar)的序列：FLWLLWPVTLACFVLAAVYRI(SEQ ID NO: 22). 該片段可以作為例如以下變體的一部分提供在盒中： SARS-CoV-1病毒膜M蛋白的片段(40-75aar)，與SARS-CoV-2病毒膜M蛋白(SEQ ID NO: 5)的片段部分一致：NRNRFLYIIKLVFLWLLWPVTLACFVLAAVYRINWV (SEQ ID NO: 121)； 上述SARS-CoV-2病毒膜M蛋白(SEQ ID NO: 5)的片段(42-75aar)： RNRFLYIIKLIFLWLLWPVTLACFVLAAVYRINW(SEQ ID NO: 122)； 上述SARS-CoV-2病毒膜M蛋白(SEQ ID NO: 5)的片段(50-79aar)：KLIFLWLLWPVTLACFVLAAVYRINWITGG (SEQ ID NO: 123)； 上述SARS-CoV-2病毒膜M蛋白(SEQ ID NO: 5)的片段(50-77aar)：KLIFLWLLWPVTLACFVLAAVYRINWIT(SEQ ID NO: 124)。 在特定變體中，上述序列被用作特定抗原盒的一部分： 盒1包含以下表位片段： 上述SARS-CoV-2病毒S糖蛋白(SEQ ID NO: 1)的片段(1184-1190aar)，來自參與病毒侵入感染細胞的七肽重複2區DRLNEVA(SEQ ID NO: 7)； 上述SARS-CoV-2病毒S糖蛋白(SEQ ID NO: 1)的片段(1220-1228aar)：FIAGLIAIV(SEQ ID NO: 8)； 上述SARS-CoV-2病毒S糖蛋白(SEQ ID NO: 1)的片段(1056-1068aar)：APHGVVFLHVTYV(SEQ ID NO: 9)； 上述SARS-CoV-2病毒N核蛋白(SEQ ID NO: 3)的片段(218-230aar)：ALALLLLDRLNQL(SEQ ID NO: 15)； 上述SARS-CoV-2病毒膜M蛋白(SEQ ID NO: 5)的片段(53-73aar)：FLWLLWPVTLACFVLAAVYRI(SEQ ID NO: 22)。 抗原盒1由以下序列描述：
Figure 02_image011
此外，應該注意，作為載體的一部分的上述抗原盒1與自切割肽融合。該融合多肽具有以下序列：
Figure 02_image013
本領域技術人員可以理解，由於遺傳密碼的冗餘性，多種不同的DNA序列可以編碼具有氨基酸序列SEQ ID NO: 23或SEQ ID NO: 41的多肽。產生編碼相同氨基酸序列的這些替代DNA序列完全在本領域受過訓練的人員的技能範圍內。這種變體DNA序列在本發明的範圍內。 除非另有說明，對核苷酸序列的提及包括其互補序列。因此，提及具有特定序列的核酸應理解為包含具有其互補序列的其互補鏈的核酸。 在一個具體實施方案中，編碼抗原盒1的核酸包括核苷酸序列：
Figure 02_image015
在一個具體實施方案中，編碼抗原盒1和自切割肽的核酸包括核苷酸序列：
Figure 02_image017
盒2包含以下表位片段： 上述SARS-CoV-2病毒S糖蛋白(SEQ ID NO: 1)的片段(1184-1190aar)，來自參與病毒侵入感染細胞的七肽重複2區：DRLNEVA(SEQ ID NO: 7)； 上述SARS-CoV-2病毒S糖蛋白(SEQ ID NO: 1)的片段(1220-1228aar)：FIAGLIAIV(SEQ ID NO: 8)； 上述SARS-CoV-2病毒N核蛋白(SEQ ID NO: 3)的片段(316-324aar)：GMSRIGMEV(SEQ ID NO: 20)。 抗原盒2由以下序列描述：
Figure 02_image019
此外，應該注意，作為載體的一部分的上述抗原盒2與自切割肽融合。該融合多肽具有以下序列：
Figure 02_image021
本領域技術人員可以理解，由於遺傳密碼的冗餘性，多種不同的DNA序列可以編碼具有氨基酸序列SEQ ID NO: 24或SEQ ID NO: 42的多肽。產生編碼相同氨基酸序列的這些替代DNA序列完全在本領域受過訓練的人員的技能範圍內。這種變體DNA序列在本發明的範圍內。 除非另有說明，對核苷酸序列的提及包括其互補序列。因此，提及具有特定序列的核酸應理解為包含具有其互補序列的其互補鏈的核酸。 在一個具體實施方案中，編碼抗原盒2的核酸包括核苷酸序列：
Figure 02_image023
在一個具體實施方案中，編碼抗原盒2和自切割肽的核酸包括核苷酸序列：
Figure 02_image025
盒3包含以下表位片段： 上述SARS-CoV-2病毒S糖蛋白(SEQ ID NO: 1)的片段(1184-1190aar),來自參與病毒侵入感染細胞的七肽重複2區：DRLNEVA(SEQ ID NO: 7)； 上述SARS-CoV-2病毒S糖蛋白(SEQ ID NO: 1)的片段(1220-1228aar)：FIAGLIAIV(SEQ ID NO: 8)； 上述SARS-CoV-2病毒N核蛋白(SEQ ID NO: 3)的片段(316-324aar)：GMSRIGMEV(SEQ ID NO: 20)。 抗原盒3由以下序列描述：
Figure 02_image027
此外，應當注意，作為載體的一部分的上述抗原盒3與自切割肽融合。該融合多肽具有以下序列：
Figure 02_image029
本領域技術人員可以理解，由於遺傳密碼的冗餘性，多種不同的DNA序列可以編碼具有氨基酸序列SEQ ID NO: 25或SEQ ID NO: 43的多肽。產生編碼相同氨基酸序列的這些替代DNA序列完全在本領域受過訓練的人員的技能範圍內。這種變體DNA序列在本發明的範圍內。 除非另有說明，對核苷酸序列的提及包括其互補序列。因此，提及具有特定序列的核酸應理解為包含具有其互補序列的其互補鏈的核酸。 在一個具體實施方案中，編碼抗原盒3的核酸包括核苷酸序列：
Figure 02_image031
在一個具體實施方案中，編碼抗原盒3和自切割肽的核酸包括核苷酸序列：
Figure 02_image033
盒4包含以下表位片段： 上述SARS-CoV-2病毒S糖蛋白(SEQ ID NO: 1)的片段(1184-1190aar)，來自參與病毒侵入感染細胞的七肽重複2區：DRLNEVA(SEQ ID NO: 7)； 上述SARS-CoV-2病毒S糖蛋白(SEQ ID NO: 1)的片段(1220-1228aar)：FIAGLIAIV(SEQ ID NO: 8)； 上述SARS-CoV-2病毒S糖蛋白(SEQ ID NO: 1)的片段(1056-1068aar)：APHGVVFLHVTYV(SEQ ID NO: 9)； 上述SARS-CoV-2病毒N核蛋白(SEQ ID NO: 3)的片段(218-230aar)：ALALLLLDRLNQL(SEQ ID NO: 15)； 上述SARS-CoV-2病毒膜M蛋白(SEQ ID NO: 5)的片段(53-73aar)：FLWLLWPVTLACFVLAAVYRI(SEQ ID NO: 22)。 抗原盒4由以下序列描述：
Figure 02_image035
此外，應當注意，作為載體的一部分的上述抗原盒4與自切割肽融合。該融合多肽具有以下序列：
Figure 02_image037
本領域技術人員可以理解，由於遺傳密碼的冗餘性，多種不同的DNA序列可以編碼具有氨基酸序列SEQ ID NO: 26或SEQ ID NO: 44的多肽。產生編碼相同氨基酸序列的這些替代DNA序列完全在本領域受過訓練的人員的技能範圍內。這種變體DNA序列在本發明的範圍內。 除非另有說明，對核苷酸序列的提及包括其互補序列。因此，提及具有特定序列的核酸應理解為包含具有其互補序列的其互補鏈的核酸。 在一個具體實施方案中，編碼抗原盒4的核酸包括核苷酸序列：
Figure 02_image039
在一個具體實施方案中，編碼抗原盒4和自切割肽的核酸包括核苷酸序列：
Figure 02_image041
盒5包含以下表位片段： 上述SARS-CoV-2病毒S糖蛋白(SEQ ID NO: 1)的片段(1184-1190aar)，來自參與病毒侵入感染細胞的七肽重複2區：DRLNEVA(SEQ ID NO: 7)； 上述SARS-CoV-2病毒S糖蛋白(SEQ ID NO: 1)的片段(1220-1228aar)：FIAGLIAIV(SEQ ID NO: 8)； 上述SARS-CoV-2病毒S糖蛋白(SEQ ID NO: 1)的片段(1056-1068aar)：APHGVVFLHVTYV(SEQ ID NO: 9)； 上述SARS-CoV-2病毒N核蛋白(SEQ ID NO: 3)的片段(218-230aar)：ALALLLLDRLNQL(SEQ ID NO: 15)； 上述SARS-CoV-2病毒膜M蛋白(SEQ ID NO: 5)的片段(53-73aar)：FLWLLWPVTLACFVLAAVYRI(SEQ ID NO: 22)。 抗原盒5由以下序列描述：
Figure 02_image043
此外，應當注意，作為載體的一部分的上述抗原盒5與自切割肽融合。該融合多肽具有以下序列：
Figure 02_image045
本領域技術人員可以理解，由於遺傳密碼的冗餘性，多種不同的DNA序列可以編碼具有氨基酸序列SEQ ID NO: 27或SEQ ID NO: 45的多肽。產生編碼相同氨基酸序列的這些替代DNA序列完全在本領域受過訓練的人員的技能範圍內。這種變體DNA序列在本發明的範圍內。 除非另有說明，對核苷酸序列的提及包括其互補序列。因此，提及具有特定序列的核酸應理解為包含具有其互補序列的其互補鏈的核酸。 在一個具體實施方案中，編碼抗原盒5的核酸包括核苷酸序列：
Figure 02_image047
在一個具體實施方案中，編碼抗原盒5和自切割肽的核酸包括核苷酸序列：
Figure 02_image049
盒6包含以下表位片段： 上述SARS-CoV-2病毒S糖蛋白(SEQ ID NO: 1)的片段(1184-1190aar)，來自參與病毒侵入感染細胞的七肽重複2區：DRLNEVA(SEQ ID NO: 7)； 上述SARS-CoV-2病毒S糖蛋白(SEQ ID NO: 1)的片段(1220-1228aar)：FIAGLIAIV(SEQ ID NO: 8)； 上述SARS-CoV-2病毒S糖蛋白(SEQ ID NO: 1)的片段(1056-1068aar)：APHGVVFLHVTYV(SEQ ID NO: 9)； 上述SARS-CoV-2病毒N核蛋白(SEQ ID NO: 3)的片段(218-230aar)：ALALLLLDRLNQL(SEQ ID NO: 15)； 上述SARS-CoV-2病毒膜M蛋白(SEQ ID NO: 5)的片段(53-73aar)：FLWLLWPVTLACFVLAAVYRI(SEQ ID NO: 22)。 抗原盒6由以下序列描述：
Figure 02_image051
此外，應該注意，作為載體的一部分的上述抗原盒6與自切割肽融合。該融合多肽具有以下序列：
Figure 02_image053
本領域技術人員可以理解，由於遺傳密碼的冗餘性，多種不同的DNA序列可以編碼具有氨基酸序列SEQ ID NO: 28或SEQ ID NO: 46的多肽。產生編碼相同氨基酸序列的這些替代DNA序列完全在本領域受過訓練的人員的技能範圍內。這種變體DNA序列在本發明的範圍內。 除非另有說明，對核苷酸序列的提及包括其互補序列。因此，提及具有特定序列的核酸應理解為包含具有其互補序列的其互補鏈的核酸。 在一個具體實施方案中，編碼抗原盒6的核酸包括核苷酸序列：
Figure 02_image055
在一個具體實施方案中，編碼抗原盒6和自切割肽的核酸包括核苷酸序列：
Figure 02_image057
盒7包含以下表位片段： 上述SARS-CoV-2病毒S糖蛋白(SEQ ID NO: 1)的片段(1184-1190aar)，來自參與病毒侵入感染細胞的七肽重複2區：DRLNEVA(SEQ ID NO: 7)； 上述SARS-CoV-2病毒S糖蛋白(SEQ ID NO: 1)的片段(1220-1228aar)：FIAGLIAIV(SEQ ID NO: 8)； 上述SARS-CoV-2病毒S糖蛋白(SEQ ID NO: 1)的片段(1056-1068aar)：APHGVVFLHVTYV(SEQ ID NO: 9)； 上述SARS-CoV-2病毒N核蛋白(SEQ ID NO: 3)的片段(218-230aar)：ALALLLLDRLNQL(SEQ ID NO: 15)； 上述SARS-CoV-2病毒膜M蛋白(SEQ ID NO: 5)的片段(53-73aar)：FLWLLWPVTLACFVLAAVYRI(SEQ ID NO: 22)。 抗原盒7由以下序列描述：
Figure 02_image059
此外，應該注意，作為載體的一部分的上述抗原盒7與自切割肽融合。該融合多肽具有以下序列：
Figure 02_image061
本領域技術人員可以理解，由於遺傳密碼的冗餘性，多種不同的DNA序列可以編碼具有氨基酸序列SEQ ID NO: 29或SEQ ID NO: 47的多肽。產生編碼相同氨基酸序列的這些替代DNA序列完全在本領域受過訓練的人員的技能範圍內。這種變體DNA序列在本發明的範圍內。 除非另有說明，對核苷酸序列的提及包括其互補序列。因此，提及具有特定序列的核酸應理解為包含具有其互補序列的其互補鏈的核酸。 在一個具體實施方案中，編碼抗原盒7的核酸包括核苷酸序列：
Figure 02_image063
在一個具體實施方案中，編碼抗原盒7和自切割肽的核酸包括核苷酸序列：
Figure 02_image065
盒8包含以下表位片段： 上述SARS-CoV-2病毒S糖蛋白(SEQ ID NO: 1)的片段(1184-1190aar)，來自參與病毒侵入感染細胞的七肽重複2區：DRLNEVA(SEQ ID NO: 7)； 上述SARS-CoV-2病毒S糖蛋白(SEQ ID NO: 1)的片段(1220-1228aar)：FIAGLIAIV(SEQ ID NO: 8)； 上述SARS-CoV-2病毒S糖蛋白(SEQ ID NO: 1)的片段(1056-1068aar)：APHGVVFLHVTYV(SEQ ID NO: 9)； 上述SARS-CoV-2病毒N核蛋白(SEQ ID NO: 3)的片段(218-230aar)：ALALLLLDRLNQL(SEQ ID NO: 15)； 上述SARS-CoV-2病毒膜M蛋白(SEQ ID NO: 5)的片段(53-73aar)：FLWLLWPVTLACFVLAAVYRI(SEQ ID NO: 22)。 抗原盒8由以下序列描述：
Figure 02_image067
此外，應當注意，作為載體一部分的上述抗原盒8與自切割肽融合。該融合多肽具有以下序列：
Figure 02_image069
本領域技術人員可以理解，由於遺傳密碼的冗餘性，多種不同的DNA序列可以編碼具有氨基酸序列SEQ ID NO: 30或SEQ ID NO: 48的多肽。產生編碼相同氨基酸序列的這些替代DNA序列完全在本領域受過訓練的人員的技能範圍內。這種變體DNA序列在本發明的範圍內。 除非另有說明，對核苷酸序列的提及包括其互補序列。因此，提及具有特定序列的核酸應理解為包含具有其互補序列的其互補鏈的核酸。 在一個具體實施方案中，編碼抗原盒8的核酸包括核苷酸序列：
Figure 02_image071
在一個具體實施方案中，編碼抗原盒8和自切割肽的核酸包括核苷酸序列：
Figure 02_image073
盒9包含以下表位片段： 上述SARS-CoV-2病毒S糖蛋白(SEQ ID NO: 1)的片段(1184-1190aar)，來自參與病毒侵入感染細胞的七肽重複2區：DRLNEVA(SEQ ID NO: 7)； 上述SARS-CoV-2病毒S糖蛋白(SEQ ID NO: 1)的片段(1220-1228aar)：FIAGLIAIV(SEQ ID NO: 8)； 上述SARS-CoV-2病毒S糖蛋白(SEQ ID NO: 1)的片段(1056-1068aar)：APHGVVFLHVTYV(SEQ ID NO: 9)； 上述SARS-CoV-2病毒N核蛋白(SEQ ID NO: 3)的片段(218-230aar)：ALALLLLDRLNQL(SEQ ID NO: 15)； 上述SARS-CoV-2病毒膜M蛋白(SEQ ID NO: 5)的片段(53-73aar)：FLWLLWPVTLACFVLAAVYRI(SEQ ID NO: 22)。 抗原盒9由以下序列描述：
Figure 02_image075
此外，應該注意，作為載體的一部分的上述抗原盒9與自切割肽融合。該融合多肽具有以下序列：
Figure 02_image077
本領域技術人員可以理解，由於遺傳密碼的冗餘性，多種不同的DNA序列可以編碼具有氨基酸序列SEQ ID NO: 31或SEQ ID NO: 49的多肽。產生編碼相同氨基酸序列的這些替代DNA序列完全在本領域受過訓練的人員的技能範圍內。這種變體DNA序列在本發明的範圍內。 除非另有說明，對核苷酸序列的提及包括其互補序列。因此，提及具有特定序列的核酸應理解為包含具有其互補序列的其互補鏈的核酸。 在一個具體實施方案中，編碼抗原盒9的核酸包括核苷酸序列：
Figure 02_image079
在一個具體實施方案中，編碼抗原盒9和自切割肽的核酸包括核苷酸序列：
Figure 02_image081
盒10包含以下表位片段： 上述SARS-CoV-2病毒S糖蛋白(SEQ ID NO: 1)的片段(958-966aar)，來自參與病毒侵入感染細胞的七肽重複1區：ALNTLVKQL(SEQ ID NO: 11)； 上述SARS-CoV-2病毒S糖蛋白(SEQ ID NO: 1)的片段(504-515aar)，來自負責與感染細胞表面受體結合的受體結合結構域(RBD)的區域：GYQPYRVVVLSF(SEQ ID NO: 10)； 上述SARS-CoV-2病毒N核蛋白(SEQ ID NO: 3)的片段(104-113aar)：LSPRWYFYYL(SEQ ID NO: 16)； 上述SARS-CoV-2病毒N核蛋白(SEQ ID NO: 3)的片段(138-146aar)：ALNTPKDHI(SEQ ID NO: 17)； 上述SARS-CoV-2病毒N核蛋白(SEQ ID NO: 3)的片段(160-167aar)：QLPQGTTL(SEQ ID NO: 18)。 抗原盒10由以下序列描述：
Figure 02_image083
此外，應當注意，作為載體的一部分的上述抗原盒10與自切割肽融合。該融合多肽具有以下序列：
Figure 02_image085
本領域技術人員可以理解，由於遺傳密碼的冗餘性，多種不同的DNA序列可以編碼具有氨基酸序列SEQ ID NO: 32或SEQ ID NO: 50的多肽。產生編碼相同氨基酸序列的這些替代DNA序列完全在本領域受過訓練的人員的技能範圍內。這種變體DNA序列在本發明的範圍內。 除非另有說明，對核苷酸序列的提及包括其互補序列。因此，提及具有特定序列的核酸應理解為包含具有其互補序列的其互補鏈的核酸。 在一個具體實施方案中，編碼抗原盒10的核酸包括核苷酸序列：
Figure 02_image087
在一個具體實施方案中，編碼抗原盒10和自切割肽的核酸包括核苷酸序列：
Figure 02_image089
盒11包含以下表位片段： 上述SARS-CoV-2病毒S糖蛋白(SEQ ID NO: 1)的片段(504-515aar)，來自負責與感染細胞表面受體結合的受體結合結構域(RBD)的區域：GYQPYRVVVLSF(SEQ ID NO: 10)； 上述SARS-CoV-2病毒N核蛋白(SEQ ID NO: 3)的片段(104-113aar)：LSPRWYFYYL(SEQ ID NO: 16)； 上述SARS-CoV-2病毒N核蛋白(SEQ ID NO: 3)的片段(138-146aar)：ALNTPKDHI(SEQ ID NO: 17)； 上述SARS-CoV-2病毒N核蛋白(SEQ ID NO: 3)的片段(160-167aar)：QLPQGTTL(SEQ ID NO: 18)。 抗原盒11由以下序列描述：
Figure 02_image091
此外，應注意，作為載體的一部分的上述抗原盒11與自切割肽融合。該融合多肽具有以下序列：
Figure 02_image093
本領域技術人員可以理解，由於遺傳密碼的冗餘性，多種不同的DNA序列可以編碼具有氨基酸序列SEQ ID NO: 33或SEQ ID NO: 51的多肽。產生編碼相同氨基酸序列的這些替代DNA序列完全在本領域受過訓練的人員的技能範圍內。這種變體DNA序列在本發明的範圍內。 除非另有說明，對核苷酸序列的提及包括其互補序列。因此，提及具有特定序列的核酸應理解為包含具有其互補序列的其互補鏈的核酸。 在一個具體實施方案中，編碼抗原盒11的核酸包括核苷酸序列：
Figure 02_image095
在一個具體實施方案中，編碼抗原盒11和自切割肽的核酸包括核苷酸序列：
Figure 02_image097
盒12包含以下表位片段： 上述SARS-CoV-2病毒S糖蛋白(SEQ ID NO: 1)的片段(958-966aar)，來自參與病毒侵入感染細胞的七肽重複1區：ALNTLVKQL(SEQ ID NO: 11)； 上述SARS-CoV-2病毒S糖蛋白(SEQ ID NO: 1)的片段(976-984aar)：VLNDILSRL(SEQ ID NO: 12)； 上述SARS-CoV-2病毒S糖蛋白(SEQ ID NO: 1)的片段(996-1008aar)：LITGRLQSLQTYV(SEQ ID NO: 13)； 上述SARS-CoV-2病毒N核蛋白(SEQ ID NO: 3)的片段(104-113aar)：LSPRWYFYYL(SEQ ID NO: 16)； 上述SARS-CoV-2病毒N核蛋白(SEQ ID NO: 3)的片段(351-359aar)：ILLNKHIDA(SEQ ID NO: 21)。 抗原盒12由以下序列描述：
Figure 02_image099
此外，應當注意，作為載體的一部分的上述抗原盒12與自切割肽融合。該融合多肽具有以下序列：
Figure 02_image101
本領域技術人員可以理解，由於遺傳密碼的冗餘性，多種不同的DNA序列可以編碼具有氨基酸序列SEQ ID NO: 34或SEQ ID NO: 52的多肽。產生編碼相同氨基酸序列的這些替代DNA序列完全在本領域受過訓練的人員的技能範圍內。這種變體DNA序列在本發明的範圍內。 除非另有說明，對核苷酸序列的提及包括其互補序列。因此，提及具有特定序列的核酸應理解為包含具有其互補序列的其互補鏈的核酸。 在一個具體實施方案中，編碼抗原盒12的核酸包括核苷酸序列：
Figure 02_image103
在一個具體實施方案中，編碼抗原盒12和自切割肽的核酸包括核苷酸序列：
Figure 02_image105
盒13包含以下表位片段： 上述SARS-CoV-2病毒S糖蛋白(SEQ ID NO: 1)的片段(958-966aar)，來自參與病毒侵入感染細胞的七肽重複1區：ALNTLVKQL(SEQ ID NO: 11)； 上述SARS-CoV-2病毒S糖蛋白(SEQ ID NO: 1)的片段(504-515aar) ，來自負責與感染細胞表面受體結合的受體結合結構域(RBD)的區域：GYQPYRVVVLSF(SEQ ID NO: 10)； 上述SARS-CoV-2病毒N核蛋白(SEQ ID NO: 3)的片段(138-146aar)：ALNTPKDHI(SEQ ID NO: 17)； 上述SARS-CoV-2病毒N核蛋白(SEQ ID NO: 3)的片段(160-167aar)：QLPQGTTL(SEQ ID NO: 18)； 上述SARS-CoV-2病毒N核蛋白(SEQ ID NO: 3)的片段(351-359aar)：ILLNKHIDA(SEQ ID NO: 21)。 抗原盒13由以下序列描述：
Figure 02_image107
此外，應當注意，作為載體的一部分的上述抗原盒13與自切割肽融合。該融合多肽具有以下序列：
Figure 02_image109
本領域技術人員可以理解，由於遺傳密碼的冗餘性，多種不同的DNA序列可以編碼具有氨基酸序列SEQ ID NO: 35或SEQ ID NO: 53的多肽。產生編碼相同氨基酸序列的這些替代DNA序列完全在本領域受過訓練的人員的技能範圍內。這種變體DNA序列在本發明的範圍內。 除非另有說明，對核苷酸序列的提及包括其互補序列。因此，提及具有特定序列的核酸應理解為包含具有其互補序列的其互補鏈的核酸。 在一個具體實施方案中，編碼抗原盒13的核酸包括核苷酸序列：
Figure 02_image111
在一個具體實施方案中，編碼抗原盒13和自切割肽的核酸包括核苷酸序列：
Figure 02_image113
盒14包含以下表位片段： 上述SARS-CoV-2病毒S糖蛋白(SEQ ID NO: 1)的片段(504-515aar)，來自負責與感染細胞表面受體結合的受體結合結構域(RBD)的區域：GYQPYRVVVLSF(SEQ ID NO: 10)； 上述SARS-CoV-2病毒N核蛋白(SEQ ID NO: 3)的片段(138-146aar)：ALNTPKDHI(SEQ ID NO: 17)； 上述SARS-CoV-2病毒N核蛋白(SEQ ID NO: 3)的片段(160-167aar)：QLPQGTTL(SEQ ID NO: 18)； 上述SARS-CoV-2病毒N核蛋白(SEQ ID NO: 3)的片段(351-359aar)：ILLNKHIDA(SEQ ID NO: 21)。 抗原盒14由以下序列描述：
Figure 02_image115
此外，應當注意，作為載體的一部分的上述抗原盒14與自切割肽融合。該融合多肽具有以下序列：
Figure 02_image117
本領域技術人員可以理解，由於遺傳密碼的冗餘性，多種不同的DNA序列可以編碼具有氨基酸序列SEQ ID NO: 36或SEQ ID NO: 54的多肽。產生編碼相同氨基酸序列的這些替代DNA序列完全在本領域受過訓練的人員的技能範圍內。這種變體DNA序列在本發明的範圍內。 除非另有說明，對核苷酸序列的提及包括其互補序列。因此，提及具有特定序列的核酸應理解為包含具有其互補序列的其互補鏈的核酸。 在一個具體實施方案中，編碼抗原盒14的核酸包括核苷酸序列：
Figure 02_image119
在一個具體實施方案中，編碼抗原盒14和自切割肽的核酸包括核苷酸序列：
Figure 02_image121
盒15包含以下表位片段： 上述SARS-CoV-2病毒S糖蛋白(SEQ ID NO: 1)的片段(958-966aar)，來自參與病毒侵入感染細胞的七肽重複1區：ALNTLVKQL(SEQ ID NO: 11)； 上述SARS-CoV-2病毒S糖蛋白(SEQ ID NO: 1)的片段(976-984aar)：VLNDILSRL(SEQ ID NO: 12)； 上述SARS-CoV-2病毒S糖蛋白(SEQ ID NO: 1)的片段(996-1008aar)：LITGRLQSLQTYV(SEQ ID NO: 13)； 上述SARS-CoV-2病毒N核蛋白(SEQ ID NO: 3)的片段(104-113aar)：LSPRWYFYYL(SEQ ID NO: 16)； 上述SARS-CoV-2病毒N核蛋白(SEQ ID NO: 3)的片段(351-359aar)：ILLNKHIDA(SEQ ID NO: 21)。 抗原盒15由以下序列描述：
Figure 02_image123
此外，應當注意，作為載體的一部分的上述抗原盒15與自切割肽融合。該融合多肽具有以下序列：
Figure 02_image125
本領域技術人員可以理解，由於遺傳密碼的冗餘性，多種不同的DNA序列可以編碼具有氨基酸序列SEQ ID NO: 37或SEQ ID NO: 55的多肽。產生編碼相同氨基酸序列的這些替代DNA序列完全在本領域受過訓練的人員的技能範圍內。這種變體DNA序列在本發明的範圍內。 除非另有說明，對核苷酸序列的提及包括其互補序列。因此，提及具有特定序列的核酸應理解為包含具有其互補序列的其互補鏈的核酸。 在一個具體實施方案中，編碼抗原盒15的核酸包括核苷酸序列：
Figure 02_image127
在一個具體實施方案中，編碼抗原盒15和自切割肽的核酸包括核苷酸序列：
Figure 02_image129
盒16包含以下表位片段： 上述SARS-CoV-2病毒S糖蛋白(SEQ ID NO: 1)的片段(976-984aar)：VLNDILSRL(SEQ ID NO: 12)； 上述SARS-CoV-2病毒S糖蛋白(SEQ ID NO: 1)的片段(996-1008aar)：LITGRLQSLQTYV(SEQ ID NO: 13)； 上述SARS-CoV-2病毒N核蛋白(SEQ ID NO: 3)的片段(104-113aar)：LSPRWYFYYL(SEQ ID NO: 16)； 上述SARS-CoV-2病毒N核蛋白(SEQ ID NO: 3)的片段(351-359aar)：ILLNKHIDA(SEQ ID NO: 21)； 上述SARS-CoV-2病毒N核蛋白(SEQ ID NO: 3)的片段(293-302aar)：RQGTDYKHWP(SEQ ID NO: 19)； 上述SARS-CoV-2病毒N核蛋白(SEQ ID NO: 3)的片段(316-324aar)：GMSRIGMEV(SEQ ID NO: 20)。 抗原盒16由以下序列描述：
Figure 02_image131
此外，應當注意，作為載體的一部分的上述抗原盒16與自切割肽融合。該融合多肽具有以下序列：
Figure 02_image133
本領域技術人員可以理解，由於遺傳密碼的冗餘性，多種不同的DNA序列可以編碼具有氨基酸序列SEQ ID NO: 38或SEQ ID NO: 56的多肽。產生編碼相同氨基酸序列的這些替代DNA序列完全在本領域受過訓練的人員的技能範圍內。這種變體DNA序列在本發明的範圍內。 除非另有說明，對核苷酸序列的提及包括其互補序列。因此，提及具有特定序列的核酸應理解為包含具有其互補序列的其互補鏈的核酸。 在一個具體實施方案中，編碼抗原盒16的核酸包括核苷酸序列：
Figure 02_image135
在一個具體實施方案中，編碼抗原盒16和自切割肽的核酸包括核苷酸序列：
Figure 02_image137
盒17包含以下表位片段： 上述SARS-CoV-2病毒S糖蛋白(SEQ ID NO: 1)的片段(958-966aar)，來自參與病毒侵入感染細胞的七肽重複1區：ALNTLVKQL(SEQ ID NO: 11)； 上述SARS-CoV-2病毒S糖蛋白(SEQ ID NO: 1)的片段(976-984aar)：VLNDILSRL(SEQ ID NO: 12)； 上述SARS-CoV-2病毒S糖蛋白(SEQ ID NO: 1)的片段(504-515aar)，來自負責與感染細胞表面受體結合的受體結合結構域(RBD)的區域：GYQPYRVVVLSF(SEQ ID NO: 10)； 上述SARS-CoV-2病毒S糖蛋白(SEQ ID NO: 1)的片段(996-1008aar)：LITGRLQSLQTYV(SEQ ID NO: 13)； 上述SARS-CoV-2病毒N核蛋白(SEQ ID NO: 3)的片段(104-113aar)：LSPRWYFYYL(SEQ ID NO: 16)； 上述SARS-CoV-2病毒N核蛋白(SEQ ID NO: 3)的片段(138-146aar)：ALNTPKDHI(SEQ ID NO: 17)； 上述SARS-CoV-2病毒N核蛋白(SEQ ID NO: 3)的片段(160-167aar)：QLPQGTTL(SEQ ID NO: 18)。 抗原盒17由以下序列描述：
Figure 02_image139
此外，應當注意，作為載體的一部分的上述抗原盒17與自切割肽融合。該融合多肽具有以下序列：
Figure 02_image141
本領域技術人員可以理解，由於遺傳密碼的冗餘性，多種不同的DNA序列可以編碼具有氨基酸序列SEQ ID NO: 39或SEQ ID NO: 57的多肽。產生編碼相同氨基酸序列的這些替代DNA序列完全在本領域受過訓練的人員的技能範圍內。這種變體DNA序列在本發明的範圍內。 除非另有說明，對核苷酸序列的提及包括其互補序列。因此，提及具有特定序列的核酸應理解為包含具有其互補序列的其互補鏈的核酸。 在一個具體實施方案中，編碼抗原盒17的核酸包括核苷酸序列：
Figure 02_image143
在一個具體實施方案中，編碼抗原盒17和自切割肽的核酸包括核苷酸序列：
Figure 02_image145
盒18包含以下表位片段： 上述SARS-CoV-2病毒S糖蛋白(SEQ ID NO: 1)的片段(958-966aar)，來自參與病毒侵入感染細胞的七肽重複1區：ALNTLVKQL(SEQ ID NO: 11)； 上述SARS-CoV-2病毒S糖蛋白(SEQ ID NO: 1)的片段(976-984aar)：VLNDILSRL(SEQ ID NO: 12)； 上述SARS-CoV-2病毒S糖蛋白(SEQ ID NO: 1)的片段(996-1008aar)：LITGRLQSLQTYV(SEQ ID NO: 13)； 上述SARS-CoV-2病毒N核蛋白(SEQ ID NO: 3)的片段(104-113aar)：LSPRWYFYYL(SEQ ID NO: 16)； 上述SARS-CoV-2病毒N核蛋白(SEQ ID NO: 3)的片段(351-359aar)：ILLNKHIDA(SEQ ID NO: 21)； 上述SARS-CoV-2病毒N核蛋白(SEQ ID NO: 3)的片段(293-302aar)：RQGTDYKHWP(SEQ ID NO: 19)； 上述SARS-CoV-2病毒N核蛋白(SEQ ID NO: 3)的片段(316-324aar)：GMSRIGMEV(SEQ ID NO: 20)。 抗原盒18由以下序列描述：
Figure 02_image147
此外，應當注意，作為載體的一部分的上述抗原盒18與自切割肽融合。該融合多肽具有以下序列：
Figure 02_image149
本領域技術人員可以理解，由於遺傳密碼的冗餘性，多種不同的DNA序列可以編碼具有氨基酸序列SEQ ID NO: 40或SEQ ID NO: 58的多肽。產生編碼相同氨基酸序列的這些替代DNA序列完全在本領域受過訓練的人員的技能範圍內。這種變體DNA序列在本發明的範圍內。 除非另有說明，對核苷酸序列的提及包括其互補序列。因此，提及具有特定序列的核酸應理解為包含具有其互補序列的其互補鏈的核酸。 在一個具體實施方案中，編碼抗原盒18的核酸包括核苷酸序列：
Figure 02_image151
在一個具體實施方案中，編碼抗原盒18和自切割肽的核酸包括核苷酸序列：
Figure 02_image153
一方面，本發明涉及編碼重組多肽以增加流感病毒抗體滴度的分離核酸，所述重組多肽包含選自包括SEQ ID NO: 23-40的氨基酸序列的組的氨基酸序列。 在本發明的一些實施方案中，分離核酸包括核苷酸序列，其選自包括分別編碼SEQ ID NO: 23-40的氨基酸序列的SEQ ID NO: 59-76的核苷酸序列的組。 在本發明的一些實施方案中，分離核酸編碼冠狀病毒的多肽，其中冠狀病毒是β冠狀病毒。 在本發明的一些實施方案中，分離核酸編碼β-冠狀病毒的多肽，其中β-冠狀病毒是SARS-CoV-2病毒。 用於誘導對流感病毒的特異性免疫和 / 或預防流感病毒相關疾病的基於流感病毒的重組病毒一方面，本發明涉及一種基於流感病毒的分離重組病毒，其用於誘導對流感病毒的特異性免疫和/或預防流感病毒相關疾病，其包含任何上述核酸。 在本說明書的上下文中，術語“基於流感病毒的重組病毒”(或“基於流感病毒的病毒樣顆粒”或“流感病毒的重組毒株”)是指包含任何上述核酸的流感病毒，所述核酸編碼上述重組多肽，用於誘導對流感病毒的特異性免疫和/或預防流感病毒相關疾病。由於其構造特徵，基於流感病毒的重組病毒在給予哺乳動物時能夠產生較高水準的流感病毒抗體。此外，包含上述編碼基於冠狀病毒蛋白片段的重組多肽的核酸的重組流感病毒在給予哺乳動物時允許形成針對冠狀病毒的特異性T細胞免疫，因此，可以使用給定的基於流感病毒的重組病毒用於聯合預防冠狀病毒相關疾病和流感病毒相關疾病。 特徵“流感病毒”是指來自正粘病毒科 ( Orthomyxoviridae)的病毒，包括單種屬 Alphainfluenzavirus(以前稱為甲型流感病毒)、 Betainfluenzavirus(以前稱為乙型流感病毒)、 Gammainfluenzavirus(以前稱為丙型流感病毒)和 Deltainfluenzavirus(以前稱為丁型流感病毒)，其中屬的劃分是基於核糖核蛋白複合物的抗原特性。流感病毒是一種直徑為100-120nm的球形包膜病毒，其外層由暴露病毒的主要糖蛋白血凝素(HA)和神經氨酸酶(NA)的脂質膜，以及形成離子通道基質蛋白M2組成。在脂質膜下設置有基質蛋白1(M1)，其定義病毒顆粒的形狀。流感病毒的基因組是分段的，其特徵在於以核糖核蛋白複合物(RNP)形式位於病毒體內部的負鏈RNA。在甲型流感病毒中，8個RNA片段編碼至少12種蛋白質：HA、M1、M2、NA、NP、NS1、NS2、PA、РА-Х、PB1、PB1-F2、PB2。根據HA和NA表面抗原的抗原特性，甲型流感病毒分為血清型亞型，例如H1N1、H1N2、H2N2、H3N2、H5N1等。 在一些實施方案中，分離的基於流感病毒的重組病毒是疫苗流感病毒株。 疫苗毒株的特徵在於它們含有編碼來自特殊實驗室毒株A/Leningrad/134/17/57(H2N2)或其衍生物的流感病毒內部和非結構蛋白(M1、M2、NP、NS1、NS2、PA、PA-X、PB1、PB1-F2、PB2)的基因。A/Leningrad/134/17/57 (H2N2)毒株是通過流行病毒A/Leningrad/134/57(H2N2)的冷適應通過在降至25°C的溫度下在含胚雞蛋中傳代17倍產生的[Alexandrova G.I.,Smorodintsev A.A. Obtaining of an additionally attenuated vaccinating cryophilic influenza strain// Rev Roum Inframicrobiol. - 1965. - V. 2. - №. - p. 179-189.]。作為傳代的結果，病毒A/Leningrad/134/17/57 (H2N2)在編碼病毒體表面和內部蛋白的基因中獲得了一組突變(表A)，這定義了它的溫度敏感、冷-適應和減毒的表型。我們確定了毒株的主要核苷酸序列(GISAID資料庫分離號EPI_ISL_169836，基因存取碼EPI555079至EPI555086)。先前的研究表明，突變PB2蛋白是毒株A/Leningrad/134/17/57(H2N2)減毒表型的關鍵因素，而聚合酶基因PB1和PA補充了這一特徵[Klimov A.I., Kiseleva I.V., Alexandrova G.I., Cox N.J. Genes coding for polymerase proteins are essential for attenuation of the cold-adapted A/Leningrad/134/17/57 (H2N2) influenza virus. in Options for the Control of Influenza IV. 2001. Okinawa, Japan: Elsevier Science BV.]。我們進一步確定了毒株A/Leningrad/134/17/57(H2N2)基因組中個體突變在病毒主要表型特徵方面的作用——對升高的溫育溫度的敏感性[Isakova-Sivak I, Chen LM, Matsuoka Y, Voeten JT, Kiseleva I, Heldens JG, den Bosch Hv, Klimov A, Rudenko L, Cox NJ, Donis RO. Genetic bases of the temperature-sensitive phenotype of a master donor virus used in live attenuated influenza vaccines: A/Leningrad/134/17/57 (H2N2). Virology. 2011 Apr 10;412(2):297-305. doi: 10.1016/j.virol.2011.01.004]。
Figure 02_image155
在本發明的一些實施方案中，基於流感病毒的分離重組病毒由減毒流感病毒產生。 在本發明的一些實施方案中，基於流感病毒的分離重組病毒由冷適應流感病毒產生。 在本發明的一些實施方案中，基於流感病毒的分離重組病毒由H2N2流感病毒產生。 在本發明的一些實施方案中，基於流感病毒的分離重組病毒由病毒A/Leningrad/134/17/57(H2N2)或其衍生物產生。 在本發明的一些實施方案中，基於流感病毒的分離重組病毒包含本發明的任何上述核酸，其存在於流感病毒的神經氨酸酶(NA)基因或NS基因中。 A/Leningrad/134/17/57(H2N2)病毒的衍生物指： 1) 甲型流感病毒，其中HA和NA表面抗原屬於先前流行、潛在大流行、大流行或季節性流行的甲型流感病毒亞型H1N1、H1N2、H2N2、H3N2、H5N1、H5N2、H5N6、H5N8、H6N1、H7N2、H7N3、H7N7、H7N9、H9N2、H10N7、H17N10、H18N11，而內部和非結構蛋白的基因屬於A/Leningrad/134/17/57(H2N2)毒株； 2)甲型流感病毒，其中一個或多個A/Leningrad/134/ 17/57(H2N2)基因被任何其它甲型流感病毒的相應基因替換； 3)甲型流感病毒，具有由與A/Leningrad/134/17/57 (H2N2)相同的任何核苷酸序列(考慮到某些氨基酸的密碼子簡並性)編碼的病毒蛋白的氨基酸序列； 4)任何血清型亞型的甲型流感病毒，其包含對於減毒供體A/Leningrad/134/17/57(H2N2)(PB2-Leu478；PB1-Asn265；PB1-Ile591；PA-Pro28；PA-Leu341；M1-Val15；M1-Leu144；NS2-Ile100)描述的內部和非結構蛋白中的氨基酸殘基，全部或各種組合； 5)甲型流感病毒，其內部和非結構蛋白序列(M1、M2、NP、NS1、NS2、PA、PA-X、PB1、PB1-F2、PB2)與A/Leningrad/134/17/57(H2N2)病毒在多個氨基酸方面不同； 6)任何血清型亞型的甲型流感病毒，包含A/Leningrad /134/17/57(H2N2)毒株的修飾基因(考慮到NS1基因閱讀框的截斷)。 藥物組合物 / 疫苗一方面，本發明涉及一種用於誘導對流感病毒的特異性免疫和/或預防由流感病毒引起的疾病的藥物組合物，其包含上述重組病毒中的任一種與一種或多種藥學上可接受的賦形劑的組合。 在本發明的一些實施方案中，上述組合物中的活性物質以有效量存在，例如，以生物有效量存在。 在本發明的一些實施方案中，上述組合物中的活性物質以有效量存在，例如，以治療有效量存在。 在具體的實施方案中，本發明涉及一種藥物組合物，其包含在藥學上可接受的載體或其它藥劑、佐劑、稀釋劑等中的本發明的基於流感病毒的重組病毒。對於注射，載體通常是液體載體。對於其它給藥方法，載體可以是固體或液體，例如無菌無熱原水或無菌無熱原磷酸鹽緩衝鹽水溶液。對於吸入給藥，載體是可吸入的，並且優選為固體或液體顆粒形式。作為注射介質，優選使用含有對於注射溶液常用添加劑的水，例如穩定劑、鹽或鹽水，和/或緩衝劑。 “藥物組合物”是指包含上述本發明的基於流感病毒的重組病毒和選自藥學上可接受的和藥理學相容的賦形劑中的至少一種組分的組合物，所述賦形劑例如填充劑、溶劑、稀釋劑、載體、助劑、分佈劑、遞送劑、防腐劑、穩定劑、乳化劑、懸浮劑、增稠劑、延長遞送控制劑，它們的選擇和比例取決於給藥的類型和途徑以及劑量。本發明的藥物組合物及其製備方法對於本領域技術人員來說無疑是顯而易見的。藥物組合物應優選按照GMP(良好生產規範)要求製造。該組合物可以包含緩衝組合物、張度劑、穩定劑和增溶劑。 “藥學上可接受的”是指不具有生物學或其它負面副作用的材料，例如，該材料可以給予受試者而不引起任何不希望的生物學效應。因此，此類藥物組合物可用於例如離體轉導細胞或將本發明的基於流感病毒的重組病毒在體內直接給予受試者。 術語“賦形劑”在本文中用於描述除了本發明的上述成分之外的任何成分。這些是用於藥品生產/製造的無機或有機性質的物質，以賦予藥品必要的物理化學特性。 “穩定劑”是指提供活性劑的物理和/或化學穩定性的賦形劑或兩種或更多種賦形劑的混合物。 術語“緩衝液”、“緩衝液組合物”、“緩衝劑”是指能夠通過其酸堿共軛組分的作用抵抗pH變化的溶液，其允許基於流感病毒的載體產品抵抗pH變化。通常，藥物組合物優選具有4.0至8.0範圍內的pH。所用緩衝液的實例包括但不限於乙酸鹽、磷酸鹽、檸檬酸鹽、組氨酸、琥珀酸鹽等緩衝溶液。 如果活性劑在例如2-8℃的儲存溫度下在指定的保質期內保持其物理穩定性和/或化學穩定性和/或生物活性，則藥物組合物是“穩定的”。優選地，活性劑保持物理和化學穩定性以及生物活性。儲存期根據加速或自然老化條件下的穩定性測試結果進行調整。 根據本發明的藥物組合物可以以單一單位劑量的形式或以多個單一單位劑量的形式以現成製劑形式製造、包裝或廣泛銷售。如本文所用，術語“單一單位劑量”是指包含預定量的活性成分的離散量的藥物組合物。活性成分的量通常等於待在受試者中給予的活性成分的劑量，或該劑量的方便部分，例如該劑量的一半或三分之一。 一方面，本發明涉及用於誘導對流感病毒的特異性免疫和/或預防流感病毒相關疾病的疫苗，其包含有效量的任何上述基於流感病毒的重組病毒。 在本發明的一些實施方案中，疫苗用於誘導對流感病毒和冠狀病毒的特異性免疫和/或預防流感病毒相關疾病和冠狀病毒相關疾病。 冠狀病毒是指屬於冠狀病毒科(Coronaviridae)成員的病毒。 該家族包括α冠狀病毒屬和β冠狀病毒屬。 α冠狀病毒屬包括： 1)人冠狀病毒229E，引起ARVI； 2)人冠狀病毒NL63，引起ARVI。 β冠狀病毒屬包括： 1)人冠狀病毒OC43，引起ARVI； 2)人冠狀病毒HKU1，引起ARVI； 3) MERS-CoV； 4) SARS-CoV； 5) SARS-CoV-2。 上述藥物組合物或疫苗可用於預防與上述任何冠狀病毒相關的疾病。 在疫苗的一些實施方案中，冠狀病毒是β冠狀病毒。 在疫苗的一些實施方案中，冠狀病毒選自包括人冠狀病毒OC43、人冠狀病毒HKU1、MERS-CoV、SARS-CoV或SARS-CoV-2的組。 在疫苗的一些實施方案中，對冠狀病毒的特異性免疫是特異性T細胞免疫。 術語“疫苗”是指包含源自病原體的抗原的免疫原性組合物，其用於誘導賦予保護性免疫的針對病原體的免疫反應(例如，保護受試者免受由病原體引起的感染和/或降低由病原體感染引起的疾病或病況的嚴重程度)。保護性免疫可能包括產生抗體和/或細胞介導的反應。 根據上下文，術語“疫苗”還可以指抗原懸浮液或溶液，其被給予脊椎動物以產生保護性免疫。 在本發明的一些實施方案中，疫苗包含優選以生物學有效量存在的基於流感病毒的重組病毒。 在本發明的一些實施方案中，疫苗包含優選以治療有效量存在的基於流感病毒的重組病毒。 所有與藥物組合物有關的定義和解釋也適用於疫苗。 用途一方面，本發明涉及任何上述基於流感病毒的重組病毒或上述組合物用於誘導對流感病毒的特異性免疫和/或預防流感病毒相關疾病的用途。 在用途的一些實施方案中，任何上述基於流感病毒的重組病毒或上述組合物用於誘導對流感病毒和冠狀病毒的特異性免疫和/或預防流感病毒相關疾病和冠狀病毒相關疾病。 任何上述基於流感病毒的重組病毒或上述組合物均可用於誘導對流感病毒和冠狀病毒的特異性免疫和/或預防流感病毒相關疾病和冠狀病毒相關疾病，其中冠狀病毒是指來自冠狀病毒科(Coronaviridae)的病毒，特別是包括人冠狀病毒229E或人冠狀病毒NL63的α冠狀病毒，以及包括人冠狀病毒OC43、人冠狀病毒HKU1、MERS-CoV、SARS-CoV、SARS-CoV-2的β冠狀病毒。 在用途的一些實施方案中，對冠狀病毒的特異性免疫是特異性T細胞免疫。 在用途的一些實施方案中，冠狀病毒是β冠狀病毒。 在用途的一些疫苗實施方案中，冠狀病毒選自包括人冠狀病毒OC43、人冠狀病毒HKU1、MERS-CoV、SARS-CoV或SARS-CoV-2的組。 一方面，本發明涉及用於誘導針對流感病毒的特異性免疫和/或預防流感病毒相關疾病，或誘導針對流感病毒和冠狀病毒的特異性免疫，或聯合預防流感病毒相關疾病和冠狀病毒相關疾病的方法，包括將任何上述基於流感病毒的重組病毒或上述組合物或上述疫苗以有效量給予哺乳動物生物體。 在方法的一些實施方案中，冠狀病毒是β冠狀病毒。 在方法的一些疫苗實施方案中，冠狀病毒選自包括人冠狀病毒OC43、人冠狀病毒HKU1、MERS-CoV、SARS-CoV或SARS-CoV-2的組。 在方法的一些實施方案中，對冠狀病毒的特異性免疫是特異性T細胞免疫。 本領域公認的基於流感病毒的重組病毒的任何給藥方法都可以適合用於本發明的上述基於流感病毒的重組病毒。 示例性給藥方式包括局部施用、鼻內、吸入、經粘膜、透皮、腸內(例如口服、直腸)、腸胃外(例如靜脈內、皮下、皮內、肌肉內)給藥，以及直接組織或器官注射。 本發明的上述基於流感病毒的重組病毒的優選給藥方法是鼻內給藥。 注射劑可以以常規形式製備，作為液體溶液或懸浮液、適合在注射前在液體中製備溶液或懸浮液的固體形式，或者作為乳液。或者，可以以局部而非全身方式給予本發明的上述基於流感病毒的重組病毒，例如以貯庫或緩釋製劑。 本發明的基於流感病毒的重組病毒以有效量給予生物體。 在一些實施方案中，本發明的基於流感病毒的重組病毒優選以生物學有效量給予生物體。 在一些實施方案中，本發明的基於流感病毒的重組病毒優選以治療有效量給予生物體。 本發明的上述基於流感病毒的重組病毒的劑量將取決於給藥方式、特定的病毒載體，並且它們可以以常規方式確定。實現治療效果的示例性劑量是至少約10 5、10 6、10 7、10 8個感染單位或更多，優選10 7至10 8個感染單位的病毒滴度。 任何上述基於流感病毒的重組病毒或上述組合物可用於誘導對選自以下組的冠狀病毒科(Coronaviridae)成員的病毒的特異性免疫：人冠狀病毒229E、人冠狀病毒NL63、人冠狀病毒OC43、人冠狀病毒HKU1、MERS-CoV、SARS-CoV或SARS-CoV-2。根據本發明的上述重組病毒作為預防上述組的任何冠狀病毒的手段的多功能性是由於以下原因而實現的。 用於誘導針對SARS-COV-2的細胞免疫反應的本發明的抗原盒使用在IEDB資料庫(iedb.org)中註冊的與SARS-CoV-1和SARS-COV-2蛋白一致的至少102個氨基酸序列片段作為免疫原性片段：GYQPYRVVVL、QPYRVVVLSF、PYRVVVLSF、LQDVVNQNAQALNTL、 DVVNQNAQALNTLVKQL、AQALNTLVK、 QALNTLVKQLSSNFGAI、ALNTLVKQL、 LNTLVKQLSSNFGAI、SSNFGAISSVLNDIL、AISSVLNDILSRLDKVE、SVLNDILSR、VLNDILSRL、ILSRLDKVEAEVQIDRL、RLDKVEAEV、EAEVQIDRLITGRLQSL、AEVQIDRLIT、AEVQIDRLI、VQIDRLITGR、IDRLITGRLQSLQTY、RLITGRLQSLQTYVTQQ、LITGRLQSL、TGRLQSLQTYVTQQL、GRLQSLQTY、RLQSLQTYV、LQSLQTYVTQQLIRA、SLQTYVTQQLIRAAEIR、LQTYVTQQLIRAAEI、QTYVTQQLIRAAEIR、APHGVVFLHV、GVVFLHVTY、VVFLHVTYV、EIDRLNEVAKNLNESLIDLQELGKYEQY、EIDRLNEVAKNLNESLIDLQELGKYEQY、RLNEVAKNL、EVAKNLNESLIDLQELG、NLNESLIDL、SLIDLQELGK、LIDLQELGKY、QELGKYEQYI、YEQYIKWPWY、WLGFIAGLIAIVMVT、LGFIAGLIAIVMVTI、FIAGLIAIV、GLIAIVMVTI、LSPRWYFYY、SPRWYFYYL、ATEGALNTPK、ALNTPKDHI、VLQLPQGTTLPKGFY、VLQLPQGTTL、LQLPQGTTL、QLPQGTTLPKGFYAEGSR、QLPQGTTLPKGFYAEGSRGGSQ、QLPQGTTLPKGFYAE、QLPQGTTLPK、LPQGTTLPKG、GTTLPK、GTTLPKGFY、ALALLLLDR、LALLLLDRL、LLLLDRLNQ、LLLLDRLNQL、LLLDRLNQL、IRQGTDYKHWPQIAQFA、QGTDYKHW、KHWPQIAQFAPSASAFF、AQFAPSASAFFGMSR、AQFAPSASA、AQFAPSASAFFGMSRIGM、QFAPSASAFFGMSRIGM、APSASAFFGM、SASAFFGMSR、ASAFFGMSR、AFFGMSRIGMEVTPSGTW、FFGMSRIGMEVTPSGTW、GMSRIGMEV、MSRIGMEVTPSGTWL、GMEVTPSGTWL、MEVTPSGTWL、VTPSGTWLTY、TPSGTWLTY、ILLNKHID、ILLNKHIDA、LLNKHIDAYKTFPPTEPK、LNKHIDAYKTFPPTEPK、NKHIDAYKTFPPTEP、TFPPT、KTFPPTEPKK、KTFPPTEPK、TFPPTEPK、FLWLLWPVT、FLWLLWPVTLACFVL、FLWLLWPVTL、LWLLWPVTL、WLLWPVTLA、LWPVTLACF、WPVTLACFVL、TLACFVLAA、TLACFVLAAV、FVLAAVYRI。 在一些情況下，表位元相互重疊以形成更多擴展的免疫原性區域(相應地，在SARS-COV-1和SARS-COV-2中也一致)：LQDVVNQNAQALNTLVKQLSSNFGAISSVLNDIL SRLDKVEAEVQIDRLITGRLQSLQTYVTQQLIRAAEIR、EIDRLNEVAKNLNESLIDLQELGKYEQYIKWPWY、GYQPYRVVVLSF、WLGFIAGLIAIVMVTI、IRQGTDYKHWPQIAQFAPSASAFFGMSRIGMEVTPSGTWLTY、VLQLPQGTTLPKGFYAEGSRGGSQ、ILLNKHIDAYKTFPPTEPKK、ALALLLLDRLNQL、ATEGALNTPKDHI、LSPRWYFYYL、FLWLLWPVTLACFVLAAVYRI。 大多數這些區域表現出共有疏水基序，這些基序是由不同類別的主要組織相容性複合物(MHC)蛋白結合的抗原肽的典型特徵，例如 FLWLLWP VT LAC FVLAAVY、 WLG FIAG LIAIVMVT I、 APHG VVFLH VTY V、 FAPS AS AFFG M、 FG AISS VL、 ALALLLL(疏水殘基加底線)。由於這一特徵性特徵，一些包含最通用基序的冠狀病毒蛋白片段被幾種HLA等位基因變體識別。例如，表位LSPRWYFYY與至少七種HLA等位基因形式結合(http://www.iedb.org/epitope/39576)。同時，表位元 FIAG LIAIV顯示與所有HLA-A2變體結合，包括世界人群中最常見的一種HLA-A*02:01 (http://www.iedb.org/epitope/16156)。 在本發明使用的先前選擇的序列中，發現至少10個抗原片段與其它大流行和流行的冠狀病毒株具有顯著同源性，包括引起季節性ARVI的那些(β冠狀病毒HKU1和OC43，α冠狀病毒229E和NL63)。 本發明中使用的大多數保守位點與S糖蛋白的C末端區域有關。它們在健康人群中具有最大的免疫原性，因為它們與導致季節性ARVI的冠狀病毒序列更加相似：HKU1、OC43、229E和NL63[Braun, J., Loyal, L., Frentsch, M. et al. SARS-CoV-2-reactive T cells in healthy donors and patients with COVID-19. Nature 587, 270-274 (2020). https://doi.org/10.1038/s41586-020-2598-9]。 因此，SARS-CoV-2 S糖蛋白的片段 ILSRLDKVEAEVQIDRLITGRL與引起人類急性呼吸道感染的β冠狀病毒HKU1和OC43的相應片段有81.8%的一致性；區域VVNQNAQALNTLVKQL的一致性為81.2%，而區域AEVQIDRLITGR的一致性為83.3%：
Figure 02_image157
共同序列(SARS-CoV-2 S糖蛋白的948-1012aar)包括以下用於本發明的片段：ALNTLVKQL (IEDB ID: 2801)、VLNDILSRL (IEDB ID: 69657)、RLDKVEAEV (IEDB ID: 54507)、LITGRLQSL (IEDB ID: 36724)、RLQSLQTYV (IEDB ID: 54725)。 對於所有給定的片段，已經描述了與世界人群中最常見的等位基因變體HLA-A*02:01的結合，該結合的特徵在於與具有免疫表位元資料庫(IEDB) (https://www.iedb.org/mhc/143)中指定結構的肽相互作用。 對於表位RLDKVEAEV、LITGRLQSL、RLQSLQTYV ，還描述了與等位基因變體HLA-A*02:02的結合(而對於LITGRLQSL，已經描述了與所有HLA-A*02的結合)，其結合的特徵在於與具有免疫表位元資料庫(IEDB) (https://www.iedb.org/mhc/200)中指定結構的肽相互作用。 最後，對於表位RLDKVEAEV和RLQSLQTYV還描述了與等位基因變體HLA-A*02:03、HLA-A*02:06和HLA-A*68:02的結合。 HLA-A*02:03的特徵在於與具有免疫表位元資料庫(IEDB) (https://www.iedb.org/mhc/201)中指定結構的肽相互作用。 HLA-A*02:06的特徵在於與具有免疫表位元資料庫(IEDB) (https://www.iedb.org/mhc/204)中指定結構的肽相互作用。 HLA-A*68:02的特徵在於與具有免疫表位元資料庫(IEDB) (https://www.iedb.org/mhc/231)中指定結構的肽相互作用。 這些共有序列的所有關鍵殘基，作為與HLA結合的“疏水錨”(在第9、2位元，在一種情況下，在第1位)，都存在於所述所有冠狀病毒的所有相應表位元中(RLDKVEAEV除外)(下文中與SARS-CoV-2一致的殘基用底線表示，與HLA結合的關鍵殘基用粗體表示)：
Figure 02_image159
根據IEDB，不同毒株序列的剩餘氨基酸變異或對與各自HLA的結合沒有顯著影響，或進一步增強與所述HLA的相互作用(例如，對於HLA-A*02:01，將SARS-CoV-2中RLDKVEAEV中的賴氨酸殘基4置換為HKU1中的天冬醯胺殘基和OC43中的丙氨酸殘基；或將SARS-CoV-2中ALNTLVKQL中的賴氨酸殘基7置換為其它毒株中的絲氨酸或穀氨醯胺殘基)。每個抗原位置上每個氨基酸殘基的詳細結合效率圖可在IEDB網站上獲得：HLA-A*02:01 (www.iedb.org/motif_output/HLA-A-02:01-9.html)、HLA-A*02:02 (www.iedb.org/motif_output/HLA-A-02:02-9.html) 、HLA-A*02:03(www.iedb.org/motif_output/HLA-A-02:03-9.html)、HLA-A*02:06(www.iedb.org/motif_output/HLA-A-02:06-9.html)、HLA-A*68:02 (www.iedb.org/motif_output/HLA-A-68:02-9.html)。 本發明中使用的S糖蛋白的另一個保守C末端區域是序列KNLNESLIDLQELGKYEQYIKWPWYIWL(SARS-CoV-2中的1191-1218aar)：
Figure 02_image161
該區域尤其包括用於本發明的片段NLNESLIDL(IEDB ID：44814)和YEQYIKWPWY(IEDBI D：73751)。對於NLNESLIDL，已經描述了與HLA-A*02:01的結合(參見上文結合抗原的共有序列)，對於YEQYIKWPWY，已經描述了與HLA-B*18:01、HLA-B*40:01、HLA-B* 44:02、HLA-B*44:03和HLA-B*45:01的結合，但抗原的共有序列僅對於HLA-B*44:03和HLA-B*45:01描述。 HLA-B*44:03的特徵在於與具有免疫表位元資料庫(IEDB)(https://www.iedb.org/mhc/34)中指定結構的肽相互作用。 HLA-B*45:01的特徵在於與具有免疫表位元資料庫(IEDB)(https://www.iedb.org/mhc/36)中指定結構的肽相互作用。 作為與HLA結合的“疏水錨”的這些共有序列的所有關鍵殘基或存在於所考慮的所有冠狀病毒(MERS除外)的所有各自表位中，或與SARS-CoV-2的表位一致：
Figure 02_image163
根據IEDB，不同毒株序列中剩餘的氨基酸變異對與各自HLA的結合沒有明顯影響 (www.iedb.org/motif_output/HLA-A-02:01-9.html; www.iedb.org/motif_output/HLA-B-44:03-10.html; www.iedb.org/motif_output/HLA-B-45:01-10.html)。 此外，S糖蛋白的C末端區域包含本發明中使用的片段APHGVVFLHVTYV(SARS-CoV-2中的1056-1068aar)和FIAGLIAIV(SARS-CoV-2中的1220-1228aar)。 對於免疫原性序列VVFLHVTYV(IEDBID:71663)和FIAGLIAIV(IEDB ID:16156)，已經描述了與HLA-A*02:01、HLA-A*02:02、HLA-A*02:03、HLA-A*02:06，HLA-A*68:02的結合(見上文對於結合抗原的共有序列)。 這兩個片段在大多數冠狀病毒中的保守性較低，但與個別毒株保持同源性(VVFLHVTYV SARS-CoV-2與α冠狀病毒229E序列；FIAGLIAIV與MERS序列)：
Figure 02_image165
根據IEDB，不同毒株序列中不顯著的氨基酸變異對與各自HLA的結合沒有顯著影響(參見上文對於抗原結合效率圖)。 在本發明使用的SARS-CoV-2冠狀病毒核蛋白序列中，片段104-118aar (LSPRWYFYYLGTGPE)最保守：與β冠狀病毒HKU1和OC43序列的一致性達到92.8%，而與MERS序列的一致性達到86.7%：
Figure 02_image167
共同序列尤其包括抗原片段SPRWYFYYL(IEDBID: 60242)，已經描述其與HLA-B的結合：HLA-B*07:02、HLA-B*51:01、HLA-B*53:01，HLA-B*54:01。僅對於HLA-B*07:02和HLA-B*51:01描述了結合抗原的共有序列： HLA-B*07:02的特徵在於與具有免疫表位元資料庫(IEDB)(https://www.iedb.org/mhc/251)中指定結構的肽相互作用。 HLA-B*51:01的特徵在於與具有免疫表位元資料庫(IEDB)(https://www.iedb.org/mhc/40)中指定結構的肽相互作用。 在所有所述冠狀病毒(SARS-CoV-2、SARS-CoV-1、HKU1、OC43、229E、NL63)序列中，作為與HLA結合的“疏水錨”的關鍵殘基(第2位和第9位)保持不變，而其它取代對結合沒有顯著影響，除了NL63的第1位的脯氨酸殘基，它阻礙與HLA-B*07:02的結合 (https://www.iedb.org/motif_output/HLA-B-07:02-9.html; https://www.iedb.org/motif_output/HLA-B-51:01-9.html)。
Figure 02_image169
本發明中使用的一些片段(ALNTLVKQL、 VLNDILLSRL、FIAGLIAIV)被證明在廣泛的已知冠狀病毒之間高度保守，在21種蝙蝠、穿山甲和果子狸冠狀病毒毒株中具有至多100%的同源性[Prakash S, Srivastava R, Coulon PG, et al. Genome-Wide B Cell, CD4+, and CD8+ T Cell Epitopes That Are Highly Conserved between Human and Animal Coronaviruses, Identified from SARS-CoV-2 as Targets for Preemptive Pan-Coronavirus Vaccines. J Immunol. 2021;206(11):2566-2582. doi:10.4049/jimmunol. 2001438. Supplemental 1]，使得有可能期望在未來形成針對新的人畜共患冠狀病毒大流行病例的記憶細胞。圖19顯示了各種冠狀病毒的S糖蛋白片段序列之間的比較，並指示了同一性的百分比。 由於針對不同冠狀病毒蛋白質序列的抗原加工特性的評估，考慮到大量個別因素，例如取決於干擾素對病毒的反應強度，具有不同蛋白水解活性的免疫蛋白酶體形成的不同概率[Neefjes, J., Jongsma, M., Paul, P. et al. Towards a systems understanding of MHC class I and MHC class II antigen presentation. Nat Rev Immunol 11, 823-836 (2011). https://doi.org/10.1038/nri3084] [Seifert U, Bialy LP, Ebstein F, et al. Immunoproteasomes preserve protein homeostasis upon interferon-induced oxidative stress. Cell. 2010;142(4):613-624. doi:10.1016/j.cell.2010.07.036]，以及對此事知之甚少，因此很難準確評估免疫系統啟動對多種冠狀病毒的有效性。然而，在大多數情況下，用於本發明的冠狀病毒的關鍵免疫原性片段側翼的序列也彼此極其相同。 因此，使用含有本發明抗原盒的疫苗可以對SARS-CoV-2和SARS-CoV-1以及對在本發明發表時已知的SARS-CoV-2的所有區域特異性變體同樣形成穩定的細胞免疫，包括“英國”毒株SARS-CoV-2B.1.1.7、“巴西”毒株SARS-CoV-2P.1、“南非”毒株SARS-CoV-2B.1.351和“印度”毒株SARS-CoV-2B.1.617.2(變體)。例如，已知在過去曾接觸過COVID-19的患者中，超過70%的患者觀察到可識別表位RLQSLQTYV的啟動T細胞[Shomuradova AS, Vagida MS, Sheetikov SA, et al. SARS-CoV-2 Epitopes Are Recognized by a Public and Diverse Repertoire of Human T Cell Receptors. Immunity. 2020;53(6):1245-1257.e5. doi:10.1016/j.immuni.2020.11.004] [Liao, M., Liu, Y., Yuan, J. et al. Single-cell landscape of bronchoalveolar immune cells in patients with COVID-19. Nat Med 26, 842-844 (2020). https://doi.org/10.1038/s41591-020-0901-9]，該表位是本發明的抗原盒的一部分。 此外，本發明使用的上述所有抗原片段不僅顯示在與不同組的HLA相互作用中與冠狀病毒科其它毒株的相應片段具有高度的同一性，而且還被實驗證實可誘導T細胞免疫隨後啟動干擾素反應，該事實表明細胞免疫也可能針對潛在的大流行MERS毒株和引起季節性急性呼吸道病毒感染的毒株(β冠狀病毒HKU1和OC43、α冠狀病毒229E和NL63)形成。 上述計算得到領先科學期刊上最新科學出版物的證實。例如，論文[Katja G. Schmidt et al., SARS-CoV-2-Seronegative Subjects Target CTL Epitopes in the SARS-CoV-2 Nucleoprotein Cross-Reactive to Common Cold Coronaviruses; Front Immunol. 2021; 12: 627568; doi: 10.3389/fimmu.2021.627568]證明了對SARS-CoV-2和人ARVI相關β冠狀病毒：OC43和HKU1的交叉反應性細胞免疫反應。特別是，識別來自本發明中使用的SARS-CoV-2片段DLSPRWYFYYL的表位的絕大多數T細胞對來自OC43和HKU1蛋白的肽QLLSPRWYFYYL顯示出明顯的干擾素反應。此外，論文[Kevin O. Saunders ET ALL., Neutralizing antibody vaccine for pandemic and pre-emergent coronaviruses, Nature, 2021, 1-24, https://doi.org/10.1038/s41586-021- 03594-0]描述了已成功中和四種不同冠狀病毒的通用疫苗抗體。根據這篇論文，在對獼猴的測試中，新型納米顆粒疫苗表明，疫苗接種後產生的抗體不僅可以有效中和SARS-CoV-2，而且還可以有效中和兩種SARS-CoV-2-樣蝙蝠冠狀病毒和SARS-1。給定論文的作者認為，主題疫苗不僅可以保護免受SARS-CoV-2，而且還可以保護免受可以從動物傳染給人類的其它潛在感染，因為在所有病例中，抗體不僅可以中和SARS-CoV-2(包括“英國”變體B.1.1.7、“南非”變體B.1.351和“巴西”變體P.1)，而且還可以中和SARS-CoV-1和兩種蝙蝠冠狀病毒。 實施例提供以下實施例以更好地理解本發明。這些實施例僅用於說明的目的，不應解釋為以任何方式限制本發明的範圍。 本說明書中引用的所有出版物、專利和專利申請均通過引用併入本文。儘管為了清楚理解的目的已經通過說明和示例的方式對前述發明進行了一些詳細的描述，但是根據本發明的教導，對於本領域的普通技術人員將很容易明白，可以對其進行某些變化和修改而不背離所附實施方案的精神或範圍。 材料和一般方法 重組 DNA 技術標準方法用於操作DNA，如Sambrook, J. et al, Molecular cloning: A laboratory manual; Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York, 1989中所述。根據製造商方案使用分子生物學試劑。簡而言之，產生質粒DNA用於在選擇性抗生素壓力下生長的大腸桿菌細胞中進一步操作，以使質粒不會在細胞群體中丟失。我們使用商業試劑盒從細胞中分離出質粒DNA，測量濃度，並通過限制性內切酶處理或PCR擴增將其用於克隆。使用連接酶將DNA片段相互連接並轉化到細菌細胞中，用於選擇克隆和進一步生產。所有產生的遺傳構建體都通過限制模式和完整的Sanger測序得到證實。 基因合成所需的基因區段由化學合成產生的寡核苷酸製備。300到1000bp長的基因區段，兩側是獨特的限制性位點，通過將寡核苷酸逐一複性收集，然後從邊界引物進行PCR擴增。結果，產生片段混合物，包括所需片段。將片段在限制性位點克隆到中間載體中，然後通過DNA測序確認亞克隆片段的DNA序列。 DNA 序列測定DNA序列通過Sanger測序確定。分析DNA和蛋白質序列，並在SnapGeneViewer4.2或更高版本中處理序列資料，用於序列創建、映射、分析、注釋和說明。 攜帶基於減毒的 A/Leningrad/134/17/57 毒株的流感病毒疫苗株的重組基因組區段的遺傳構建體的組裝和克隆的一般描述，所述遺傳構建體編碼與本發明相關的抗原盒。本發明使用的所有核苷酸序列，編碼SARS-CoV-2病毒蛋白的某些免疫原性片段，以及各種輔助調控序列，如信號肽、接頭、其它蛋白的功能結構域、自切割肽等，通過從頭組裝約100個核苷酸長的單個寡核苷酸片段，通過將它們逐一複性，然後從兩端引物進行PCR擴增而產生。為了優化組裝過程和穩定最終二級結構，使用了JSC“Biocad”開發的軟體。在合成轉基因序列時，將20-40個核苷酸長的所需SapI限制性位點或重疊(對於插入和載體相同的序列區域)添加到分子的5'和3'端，以通過無連接酶方法進一步進行分子克隆(SLIC，Gibson方法)。 通過各種方法將所得合成序列引入流感病毒反向遺傳學載體pCIPolISapIT中，該載體包含流感病毒基因組特定區段的序列： 1.通過限制和連接進行克隆。 2.利用T4聚合酶的一步分子克隆SLIC(不依賴序列和連接酶的克隆)，廣泛描述在包括“Sambrook J. et al. Molecular cloning: A laboratory manual”中，並在JSC“Biocad”中進行了優化。 3. Gibson方法。 克隆片段的DNA序列通過Sanger方法對載體進行測序確認。 以下序列之一：TAATGATAA、TAATGATTAA用作終止抗原盒翻譯的終止密碼子。 本發明所公開的重組質粒能夠顯著誘導免疫反應的兩個分支，同時保持載體的功能——主要保持其複製和重複將靶SARS-CoV-2抗原呈遞給免疫系統的能力。 使用SnapGene和SnapGene Viewer軟體 (https://www.snapgene.com)生成遺傳構建體方案。 實施例 1. 攜帶 A/Anhiu/1/2013(H7N9) 流感病毒株基因組的重組第六區段的遺傳構建體的組裝，所述遺傳構建體編碼修飾的 NA 基因和抗原盒。本發明的編碼多表位元抗原盒的核苷酸序列通過上述從頭合成產生，所述多表位抗原盒由SARS-CoV-2β冠狀病毒的S(或刺突)糖蛋白(SEQ ID NO: 1)的蛋白質片段、核蛋白(SEQ ID NO: 3)的蛋白質片段，並且如果需要，膜蛋白(SEQ ID NO: 5)的蛋白質片段的組合組成，所述多表位抗原盒在發明詳述的相關段落中描述(具體變體在SEQ ID NO: 59-94中提供)並用於誘導細胞免疫反應 。在轉基因序列的合成過程中，所需的SapI限制性位點被添加到分子的5'和3'端。 通過上述限制和連接方法將所得序列引入流感病毒反向遺傳學通用載體pCIPolISapIT_NA-AnhuiN9，該載體包含流感病毒基因組第六區段的序列，包括編碼A/Anhiu/1/2013(H7N9)毒株9型神經氨酸酶的NA(N9)基因(在基因(ctc)的蛋白質編碼部分的最後一個3'-端密碼子之後)，同時保持開放閱讀框，用於與修飾的流感病毒的蛋白質共翻譯(在157個核苷酸的保護性3'-非翻譯區之前)(圖1)。 因此，在翻譯時形成全長神經氨酸酶，由於自切割肽P2A而與雜合多肽鏈分離，從而使所述神經氨酸酶具有完全功能，並且在翻譯時形成包含多個靶標SARS-CoV-2表位的抗原盒，所述盒在細胞蛋白酶體中被進一步切割成所需的表位，然後與1類MHC蛋白複合呈遞在表面細胞上。 所得遺傳構建體的長度為6333至6577bp，且僅在上述轉基因的獨特序列上有所不同，而其它方面完全相同。例如，圖2顯示了總長度為6577bp的載體的圖譜，其編碼長度為597bp的插入物作為轉基因。 最終載體包含表達流感病毒天然基因和靶轉基因所需的所有元件，以及重組疫苗株的組裝和所需功能所需的所有元件。 實施例 2. 攜帶減毒 A/Leningrad/134/17/57 流感病毒株基因組的重組第八區段的遺傳構建體的組裝，所述遺傳構建體編碼經修飾的 NS 基因和抗原盒。本發明的編碼SARS-CoV-2刺突蛋白的受體結合域(RBD)、其衍生物或多表位抗原盒的核苷酸序列通過上述從頭合成產生，所述SARS-CoV-2刺突蛋白的受體結合域(RBD)、其衍生物或多表位抗原盒由SARS-CoV-2β冠狀病毒的S(或刺突)糖蛋白(SEQ ID NO: 1)的蛋白質片段、核蛋白(SEQ ID NO: 3)的蛋白質片段，並且如果需要，膜蛋白(SEQ ID NO: 5)的蛋白質片段的組合組成，所述SARS-CoV-2刺突蛋白的受體結合域(RBD)、其衍生物或多表位抗原盒在發明詳述的相關段落中描述(具體變體在SEQ ID NO: 59-94中提供)並用於誘導免疫反應。在合成轉基因序列時，將所需的30-40個核苷酸長的重疊(對於插入和載體相同的序列區域)添加到分子的5'和3'端，以通過無連接酶方法進行進一步的分子克隆。 通過上述Gibson方法將所得序列引入流感病毒反向遺傳學通用載體pCIPolISapIT_NS-Len17中，該載體包含流感病毒基因組第八區段的序列，包括來自減毒供體A/Leningrad/134/17/57的修飾NS基因。 鑒於NS基因可變剪接的複雜結構和調控，以及NS1和NS2(NEP)蛋白對流感病毒充分發揮功能的重要性，可採用以下方案進行克隆： 靶序列被插入到第一個閱讀框，在蛋白質編碼NS1部分的第126個密碼子(aag)的3'端，同時保持控制基因剪接的NS基因的調控序列不變(圖3)。 在任何情況下，翻譯都會產生三個獨立的多肽鏈：NS1蛋白的截短變體(1-126aar)，該變體在維持重組流感病毒的複製活性方面具有完全的功能，構成了發明的基礎；全長NS2蛋白；以及編碼SARS-CoV-2β冠狀病毒的S(或刺突)糖蛋白(SEQ ID NO: 1)、核蛋白(SEQ ID NO: 3)和必要時膜蛋白(SEQ ID NO: 5)的蛋白質片段組合的靶插入序列。 使用本發明的所述重組質粒啟動免疫系統以各種方式實現，這取決於“發明詳述”部分中描述的調節元件和功能結構域，並且尤其包括：感染細胞的膜上呈遞免疫原性表位聯合這兩類MHC蛋白。 所得遺傳構建體的長度為5656至6286bp，並且在單一克隆方案的範圍內，僅在上述轉基因的獨特序列上有所不同，而其它方面完全相同。舉例來說，顯示了總長度為5899bp的載體的圖譜，分別根據上述克隆方案生成；將597長的插入物編碼為轉基因(圖4)。 最終載體包含表達流感病毒天然基因和靶轉基因所需的所有元件，以及重組疫苗株的組裝和所需功能所需的所有元件。 實施例 3. 基於減毒流感病毒的候選疫苗的組裝。在其基因組中攜帶新型SARS-CoV-2冠狀病毒的免疫原性位元點的重組流感病毒是在為減毒供體A/Leningrad/134/17/57開發的反向遺傳學系統的基礎上產生的(Isakova-Sivak, I. ET AL., “Characterization of reverse genetics-derived cold-adapted master donor virus A/Leningrad/134/17/57 (H2N2) and reassortants with H5N1 surface genes in a mouse model.”, 2014, Clin Vaccine Immunol 21(5): 722-731以及Isakova-Sivak, I. ET AL., “Genetic bases of the temperature-sensitive phenotype of a master donor virus used in live attenuated influenza vaccines: A/Leningrad/134/17/57 (H2N2).”, 2011, Virology 412(2): 297-305)。通過批准的Vero(WHO)細胞系的電穿孔生產候選疫苗。該實施例顯示了攜帶在三種流感病毒基因之一中編碼的各種多表位元冠狀病毒盒的活的重組流感病毒的生產。 實驗中使用了以下材料： •    質粒(流感病毒反向遺傳學載體)，其中插入物編碼流感活疫苗A/Leningrad/134/17/57(H2N2)的減毒供體基因(表1)。
Figure 02_image171
•   編碼甲型流感病毒/Anhui/1/2013(H7N9)基因的質粒(表2)。
Figure 02_image173
•   編碼甲型流感病毒/Guangdong-Maonan/ SWL1536/2019 (H1N1)基因的質粒(表3)。
Figure 02_image175
•   編碼甲型流感病毒/Leningrad/134/17/57(H2N2)修飾基因的質粒(表4)。
Figure 02_image177
•   編碼甲型流感病毒/Anhui/01/2013(H7N9)的修飾基因的質粒(表5)。
Figure 02_image179
•     Vero細胞系 •     無血清細胞培養基 •     細胞解離試劑抗生素-抗真菌溶液 •     細胞生長補充劑 •     胰蛋白酶 •     Dulbecco磷酸鹽緩衝鹽水 •     6孔細胞培養板 •     乙醇70% •     Tris-EDTA緩衝液 •    含有3M NaOAc的乙酸鈉緩衝液(pH4.8)。為製備緩衝液，將95ml 100%乙醇與4ml 3M NaOAc (pH4.8)和1ml無菌水混合。將瓶子翻過來混合並儲存在-20。為製備10ml 3M NaOAc溶液，將4.08g NaOAc*3H2O溶解在8.38ml H2O中直至完全溶解 •     轉染系統 •     用於電穿孔程式的試劑盒 •     10-11日齡發育中的雞胚胎(SPF) •     用於免疫反應的96孔U型底板 •     0.2μ篩檢程式 Vero 細胞系的製備。預先將Vero細胞系從低溫儲存中取出。為此，將從低溫儲存中提取的細胞在10ml加熱 培養基 A中從二甲基亞碸中洗滌，在20℃下以1500rpm離心15分鐘，然後將細胞沉澱物引入T-75培養瓶中，加入培養基A，在37℃和5%CO 2的恒溫箱中培養細胞。在細胞單層達到95-100%匯合後，開始進一步的方案。 用於轉染的 Vero 細胞的製備。製備 培養基 b，不添加抗生素，使用0.2μ篩檢程式過濾培養基。從含有細胞的小瓶中除去培養基A，用溫熱的DPBS溶液洗滌小瓶兩次，並用accutase(每T-75小瓶1ml)從基底上除去細胞；為此，將小瓶在37℃的CO 2培養箱中溫育1分鐘。將¾細胞轉移到另一個N150小瓶(Nunc)中，加入100ml培養基，將混合物在CO 2培養箱中在37℃下培養16-18小時。 第二天，根據相同的方案，用Accutase將細胞從基底中取出。加入10ml加熱至37℃的培養基B，將培養基中的細胞轉移至無菌試管中，並在20℃下以1500rpm離心15分鐘。 製備用於產生流感病毒的質粒 ( 組裝和濃縮 ) 。轉染前一天，以每個質粒2μg的比率，將編碼8個流感病毒基因的質粒混合在1個Eppendorf管中，然後加入120μg乙酸鈉緩衝液(在質粒濃度低的情況下，緩衝液體積基於2.5體積的pDNA溶液)。將混合物渦旋5秒，然後在-20溫育16-18小時，然後進行濃縮方案。 為了濃縮，將含有質粒的Eppendorf管在4℃、13.2×10 3rpm下離心15分鐘；離心後立即完全除去上清液，不接觸沉澱物。如果沒有沉澱物，則中斷該方案並從質粒組裝時間點重新開始。 向每個管中加入120ml 70%乙醇，輕輕處理沉澱物以將其從管壁上洗掉，而不用移液管重新懸浮。然後將混合物在4℃、13.2×10 3rpm下離心5分鐘，隨後完全去除上清液而不接觸沉澱物。然後將沉澱物在未加蓋的試管中在室溫下乾燥15分鐘以除去乙醇殘留物。 將沉澱物重新懸浮在8µl TE緩衝液中，然後進行轉染方案。 用編碼 8 個流感病毒基因的質粒轉染 Vero 細胞。在轉染之前，將分配器、Neon比色皿和電穿孔裝置放置在層流櫃中並用紫外線照射以確保無菌操作。將3ml加熱培養基B加入6孔細胞培養板的每個孔中。將3ml E2緩衝液倒入Neon轉染比色皿中，然後將其置於電穿孔裝置(Neon Pipette Station)中。細胞離心後，除去培養基B，並以110µl懸浮液/病毒的比率，將細胞小心重懸於R緩衝液中。 將110µl在R緩衝液中的Vero細胞懸浮液加入到含有質粒DNA(8µl)的Eppendorf管中。使用帶有一次性轉染尖端的Neon分配器小心攪拌含有質粒溶液的細胞懸浮液，然後將懸浮液收集到尖端中，並將Neon分配器放置在帶有準備好的比色皿的電穿孔裝置中。根據以下方案進行電穿孔：1150V，20ms，2個脈衝。然後將懸浮液移到裝有培養基B的準備好的培養皿(板孔)上。 電穿孔後，將板置於37℃的CO 2培養箱中6小時以進行細胞貼壁，6小時後，去除培養基B，用溫DPBS溶液洗滌細胞兩次並加入3ml 培養基 C，然後將板在CO 2培養箱中在33℃下溫育64-72小時。 轉染後用材料感染含胚雞蛋 (ECE) 。使用細胞刮刀將轉染的Vero細胞從板中取出。將細胞重新懸浮在培養基中。根據標準程式，用含有轉染細胞的未稀釋培養基以0.2ml/胚胎的體積感染10-11日齡雞胚。將培養基中剩餘的轉染細胞轉移到小瓶中並儲存在-70℃。胚胎在恒溫器中在33℃下溫育。 在血凝反應中檢測病毒。72小時後，將胚胎在+4℃的溫度下冷卻3小時，打開外殼以去除絨毛尿囊液(CAF)。96孔U形底免疫反應板的7行載入50μlPBS，並且將來自每個胚胎的100μl CAF添加到頂行。我們通過7行加倍稀釋來滴定50µl體積，然後將50µl 1%雞紅細胞懸浮液添加到每個板孔中。20-30分鐘後通過孔中的紅細胞凝集檢測病毒。基於血凝的病毒滴度由顯示紅細胞凝集的最後病毒稀釋度確定。 盲傳代。如果沒有一個孔顯示紅細胞凝集，則用注射器將來自第E1代的每個胚胎的0.3ml CAF轉移到新胚胎中，以便在數量不足以檢測時可能積聚病毒。胚胎在33℃下溫育72小時。每次轉染後總共進行了至多3次連續的盲傳代。 病毒在 ECE 中的積累和克隆。如果檢測到紅細胞凝集，則收集CAF，通過低速離心(3000rpm，15分鐘)澄清，分裝到1ml小瓶中並儲存在-70℃。此外，通過有限稀釋將病毒克隆到ECE中，將CAF從單個克隆在空間上收集到單獨的小瓶中。此外，基於其中一個不包含突變的克隆，通過滴定在ECE中積累了工作病毒儲液。 通過 PCR 和測序控制病毒組裝。為了控制病毒在通過血凝作用顯示病毒存在的第一代中的組裝，從140μl CAF中分離RNA以通過特異性引物-PCR確認病毒中存在一個或多個基因中的特定插入物。通過PCR分析單個克隆，然後對包含插入物的基因序列進行Sanger測序。還通過測序分析工作儲液。 表6顯示了已組裝的候選疫苗列表，以及轉染日期和組裝結果。表格的最後一列包含收到工作儲液日期的資料，以及由於各種原因提前終止研究的候選物的資料。
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通過使用特定的構建體設計，嵌合流感病毒的組裝是成功的。嵌入流感病毒基因給定區域的給定大小的盒不干擾活流感病毒的組裝。 實施例 4. 用小鼠鼻內免疫誘導對流感病毒的體液免疫反應疫苗病毒在含胚雞蛋(ECE)中積累。病毒感染性通過有限稀釋法在ECE中測定，通過Reed&Muench方法計算並以50%胚胎感染劑量(EID 50)表示。在對HLA-A2.1 RANDOM TRANSGENIC小鼠(Taconic，USA)的實驗中評估了攜帶來自SARS-CoV-2的多表位T細胞盒的LIV H7N9候選疫苗針對流感病毒的免疫原性特性。我們對表7中指定的疫苗病毒進行了兩次獨立實驗。第一個實驗研究了四種帶有SARS-CoV-2片段插入物的重組流感病毒與載體對照LIV H7N9毒株[PMID:30903496]相比的免疫原性。接受安慰劑(鹽水溶液，PBS)的小鼠用作陰性對照。第二個實驗研究了一種重組毒株與載體對照安慰劑組相比的免疫原性。每組包括6只6-10周齡的小鼠。動物用10 6EID 50劑量的疫苗病毒鼻內免疫，兩次，間隔21天，體積為50μl/小鼠，在異氟醚輕度吸入麻醉下。 在第二次免疫後10天收集小鼠血清，並在酶免疫測定法(ELISA)中評估流感抗體水準。ELISA抗原是完整的LIV H7N9病毒，通過蔗糖密度梯度純化，濃度為50ng/孔。將抗原板用補充有0.05% Tween20(PBS-T)的PBS溶液洗滌3次，然後用PBS中的1%BSA溶液封閉非特異性結合。從1:100的稀釋度開始，將PBS中血清的兩倍稀釋液以50µl體積引入板孔中。在37℃下溫育1小時後，將板用PBS-T洗滌3次，載入50µl以1:10000稀釋的與辣根過氧化物酶(Sigma-Aldrich A9044，USA)綴合的抗小鼠IgG二抗。溫育30分鐘後，將板用PBS-T溶液洗滌4次，乾燥並載入50ml TMB底物(1-Step™ Ultra TMB-ELISA底物溶液，Thermo，USA)。將板在暗處溫育5-10分鐘，然後用25µl 1M硫酸終止反應。使用XMark微孔板分光光度計(BIORAD)在450nm波長下讀取結果。實驗通過光密度參數曲線下面積AUC確定產生的IgG抗體的水準，AUC根據每種血清的梯形規則分別計算。使用GraphPad Prism 5進行結果的視覺化和統計處理。組間的統計差異依次由ANOVA單因素方差分析和Tukey多重比較檢驗確定。 圖5-8顯示了針對完整流感病毒的抗體IgG水準的評估結果。所有疫苗變體均誘導高水準的抗H7N9 IgG抗體，與PBS對照組顯著不同(p＜0.0001)。此外，與用作病毒載體的對照LIV H7N9毒株相比，包含來自SARS-CoV-2的多表位元盒的重組病毒具有更高的免疫原性。這些資料表明，通過將新型冠狀病毒的多表位元T細胞盒嵌入疫苗毒株的基因組，增加了活流感疫苗針對流感病毒的免疫原性，無論流感病毒基因組的哪個部分已被修飾(NA基因或NS1基因)。
Figure 02_image183
實施例 5. 在體外 試驗中評估來自具有體內 COVID-19 病史的志願者的外周血單核細胞的病毒特異性記憶 T 細胞水準。本實驗旨在確認人免疫細胞正確處理嵌入流感疫苗病毒基因組中的SARS-CoV-2多表位T細胞盒。由於COVID-19恢復期患者對於新型冠狀病毒的各種表位元有記憶T細胞池，因此將這些供體的РВМС與候選疫苗進行體外溫育可瞭解重組病毒表達嵌入的T細胞表位的能力，因此，刺激SARS-CoV-2特異性T細胞的增殖。建立實驗的先決條件是研究中的重組病毒和用作病毒載體的LIV常規毒株對單核細胞的平行刺激。這種刺激後T細胞亞群水準的差異將顯示T細胞對冠狀病毒的嵌入T細胞表位的啟動。進行了兩個獨立的實驗，涉及重組流感病毒和載體對照(表8)。病毒在ECE中積累並在蔗糖密度梯度上純化，以從雞蛋白中純化含病毒的液體。根據Reed&Meunch方法[1938]將病毒稀釋10倍並重複3-5次重複，測定ECE中的純化流感病毒的感染滴度，並以50%胚胎感染劑量/ml(EID 50/ml)表示。 實驗1涉及13名志願者，實驗2涉及17名志願者。受試者的人口統計資料顯示在表9中。受試者病史中的COVID-19通過病毒RNA塗片試驗(即時RT-PCR)的陽性結果和/或血清中存在的SARS-CoV-2-特異性IgG抗體(抗SARS-CoV-2 RBD ELISA)得到證實。該實驗在聯邦國家預算科學機構“實驗醫學研究所”的地方倫理委員會會議上獲得批准(摘自2020年4月7日第2/20號LEC會議紀要)，所有志願者都簽署了研究的知情同意書。此外，從未感染過SARS-CoV-2的志願者的РВМС樣品(通過ELISA確認沒有冠狀病毒抗體)被用作陰性對照。 為了獲得РВМС培養物，將COVID-19恢復期患者的全血收集到EDTA真空管中，然後以1:1的比例與Hank溶液混合，並使用Ficoll密度梯度通過離心分離。將分離的單核細胞部分重懸於含有抗真菌抗生素、10mM HEPES、β-巰基乙醇和20U Roncoleukin的RPMI-1640培養基中，所得懸浮液濃度為4×10 7個細胞/ml，用於通過測試病毒進行刺激(50µl/孔細胞懸浮液或2×10 6個細胞/樣品)。為了刺激細胞，使用純化的流感病毒以及作為陽性對照的佛波醇和離子黴素。將候選疫苗以3的感染複數(每個細胞的感染單位量)添加到具有50µl體積的淋巴細胞的板孔中，然後將細胞在37℃和5%CO 2下在含有30%胎牛血清的培養基中培養16-18小時。由抗原刺激誘導的細胞因數的細胞內染色分以下幾個步驟進行：細胞蛋白轉運的停止、表面抗原的染色、細胞的固定和透化、細胞內抗原即細胞因數的染色。為了停止蛋白轉運，使用1:1000稀釋的Brefeldin A，然後將細胞在37℃和5%CO 2下進一步溫育5小時，然後用CD4、CD8、CD3、CD45RA、CCR7標記物抗體染色表面抗原，以及用ZombieAqua試劑    識別活細胞。對於細胞的固定和透化，添加Fix/Perm緩衝液，然後用針對IFN-γ的抗細胞因數抗體對固定和透化的細胞進行染色。用PermWash緩衝液洗滌染色細胞後，將細胞固定在CytoLast緩衝液中，並在4℃下避光儲存，直到在流式細胞儀上分析。使用Navios流式細胞儀(Beckman Coulter)檢查樣品。FACS文件在FlowJo套裝軟體中處理。通過從細胞受到適當病毒刺激時檢測到的T細胞水準減去自發產生干擾素的細胞(未刺激的外周血單核細胞)的比例，獲得病毒特異性記憶T細胞的百分比。結果的統計處理在GraphPad Prizm7.0軟體中通過使用Wilcoxon符號秩檢驗的非參數分析進行。 圖9-17顯示的資料說明，與對照疫苗株-病毒載體的刺激相比，通過候選疫苗刺激COVID-恢復期患者的外周血單核細胞，產生IFN-γ的細胞毒性和/或輔助記憶T細胞的水準。與病毒載體相比，重組CoVac-13、CoVac-15、CoVac-16病毒的CD4+效應記憶T細胞亞群(CD3+CD4+CCR7-)顯示出顯著增加(圖9-11)。與病毒載體相比，重組CoVac-17、CoVac-29、CoVac-30、CoVac-31、CoVac-32和CoVac-30病毒在T輔助細胞(CD4+)亞群和細胞毒性(CD8+)效應記憶T細胞亞群方面均顯示出顯著增加(圖12-17)。 與LIV H7N9病毒載體的刺激相比，用所研究的所有重組病毒刺激之前未感染過SARS-CoV-2的兩名獻血者的單核細胞並沒有導致輔助性或細胞毒性記憶T細胞顯著增加IFN-γ分泌(圖18)，這一事實證實了用於評估人免疫細胞對嵌入流感病毒基因組中的多表位SARS-CoV-2盒進行處理的方法的特異性。
Figure 02_image185
Figure 02_image187
[圖1]是編碼流感病毒的NA基因中的轉基因的主題抗原盒(由SARS-CoV-2β冠狀病毒的S(或刺突)糖蛋白(SEQ ID NO: 1)、核蛋白(SEQ ID NO: 3)的蛋白質片段，和如果必要，膜蛋白(SEQ ID NO: 5)的蛋白質片段組合組成的多表位元盒)的克隆圖解。 [圖2]是基於流感病毒反向遺傳學載體pCIPolISapIT的遺傳構建體圖解，該遺傳構建體包含流感病毒基因組第六區段的序列，包括NA基因，以及轉基因(由SARS-CoV-2β冠狀病毒的S(或刺突)糖蛋白(SEQ ID NO: 1)、核蛋白(SEQ ID NO: 3)的蛋白質片段，和如果必要，膜蛋白(SEQ ID NO: 5)的蛋白質片段組合組成的多表位元盒)以產生疫苗株的改良流感病毒顆粒。 圖1-2的元件描述。
元件 注釋
CMV 增強子和啟動子 由巨細胞病毒(CMV)增強子和啟動子組成的調節元件，它是靶標插入物(+)RNA轉錄起始所必需的。
內含子 人β-珠蛋白和免疫球蛋白重鏈基因的嵌合內含子區域，增加mRNA穩定性。
(-)RNA 轉錄終止子 來自小鼠RNA聚合酶I基因的病毒(-)RNA轉錄終止信號。
5'UTR 流感病毒基因組第六區段的5'-非翻譯區，調節病毒基因的翻譯。
神經氨酸酶 (NA) 流感病毒神經氨酸酶的完整序列，它是從感染細胞中分離病毒顆粒以及防止其聚集和促進向靶細胞移動所必需的。
P2A 豬捷申病毒(Porcine teschovirus)-1自切割肽(22aar)，其對於在翻譯過程中將C末端轉基因與神經氨酸酶的N末端區域分離是必需的。
轉基因 由SARS-CoV-2β冠狀病毒的S(或刺突)糖蛋白(SEQ ID NO: 1)、核蛋白(SEQ ID NO: 3)的蛋白質片段，和如果必要，膜蛋白(SEQ ID NO: 5)的蛋白質片段組合組成的多表位元盒。
終止 終止mRNA翻譯所需的終止密碼子。
RNA 保護區 由流感病毒基因組第六區段的157個3'端核苷酸組成的序列，這是將該區段包裝成衣殼所必需的(進一步重新包括編碼42個C末端神經氨酸酶aar的序列，沒有它們的翻譯)。
3'UTR 流感病毒基因組第六區段的3'-非翻譯區，作為多聚腺苷酸化位元點，用於終止病毒基因轉錄，以及穩定和防止mRNA降解。
(-)RNA 啟動子 人類RNA聚合酶I基因啟動子，它是啟動流感病毒(-)RNA轉錄以進行後續病毒粒子組裝所必需的。
SV40 多聚腺苷酸化信號 SV40病毒的附加(+)RNA轉錄終止多聚腺苷酸化信號。
f1 起點 噬菌體f1單鏈複製的起點。
AmpR 啟動子 野生型 大腸桿菌β-內醯胺酶(BLa)基因的弱組成型啟動子(也在轉座子Tn2660中發現)。它包括啟動子和操縱子。
β- 內醯胺酶 賦予氨苄青黴素抗性的β-內醯胺酶基因。它使得能夠選擇 大腸桿菌細胞培養物
多聚腺苷酸化位點 終止β-內醯胺酶基因轉錄的多聚腺苷酸化信號。
複製起點 複雜的高拷貝複製起點pUC/pBR322/ColE1/pMB1是在原核細胞中起作用的複製起點。
[圖3]是編碼流感病毒的NA基因中的多表位元盒的主題抗原盒的克隆方案，該多表位盒由SARS-CoV-2β冠狀病毒的S(或刺突)糖蛋白(SEQ ID NO: 1)、核蛋白(SEQ ID NO: 3)的蛋白質片段，和如果必要，膜蛋白(SEQ ID NO: 5)的蛋白質片段組合組成。 [圖4]是基於流感病毒反向遺傳學載體pCIPolISapIT的遺傳構建體圖解，該遺傳構建體包含流感病毒基因組第八區段的序列，包括來自減毒供體A/Leningrad/134/17/57的修飾的NS基因或其衍生物，以及轉基因(由SARS-CoV-2β冠狀病毒的S(或刺突)糖蛋白(SEQ ID NO: 1)、核蛋白(SEQ ID NO: 3)的蛋白質片段，和如果必要，膜蛋白(SEQ ID NO: 5)的蛋白質片段組合組成的多表位元盒)以產生疫苗株的改良流感病毒顆粒。 圖3-4的元件描述。
元件 注釋
CMV 增強子和啟動子 由巨細胞病毒(CMV)增強子和啟動子組成的調節元件，它是靶標插入物(+)RNA轉錄起始所必需的。
內含子 人β-珠蛋白和免疫球蛋白重鏈基因的嵌合內含子區域，增加mRNA穩定性。
(-)RNA 轉錄終止子 來自小鼠RNA聚合酶I基因的病毒(-)RNA轉錄終止信號。
5'UTR 來自減毒供體A/Leningrad/134/17/57的流感病毒基因組第八區段的5'-非翻譯區，它調節病毒基因的翻譯
NS1 1-126 來自減毒供體A/Leningrad/134/17/57的流感病毒修飾NS1蛋白(UniProt:P69273)的片段(1-126aar)，這是病毒RNA轉運、剪接和翻譯所必需的。
NS2(NEP)1-10 來自減毒供體A/Leningrad/134/17/57的流感病毒NS2蛋白(也稱為NEP，UniProt：P69266)的第一個片段(1-10aar)，這是從細胞核轉運病毒RNA所必需的。
5' 剪接位點 流感病毒NS基因的5'端剪接位點，這是NS2正確表達所必需的。
P2A 豬捷申病毒(Porcine teschovirus)-1自切割肽(22aar)，其對於在翻譯過程中將C末端插入物與NS1蛋白(1-126aar)的N末端片段分離是必需的。
轉基因 由SARS-CoV-2β冠狀病毒的S(或刺突)糖蛋白(SEQ ID NO: 1)、核蛋白(SEQ ID NO: 3)的蛋白質片段，和如果必要，膜蛋白(SEQ ID NO: 5)的蛋白質片段組合組成的多表位元盒。
終止 終止mRNA翻譯所需的終止密碼子。
3' 剪接位點 流感病毒NS基因的3'端剪接位點，這是NS2正確表達所必需的。
NS2(NEP)11-121 來自減毒供體A/Leningrad/134/17/57的流感病毒NS2蛋白(也稱為NEP，UniProt：P69266)的第二個片段(11-121aar)，這是從細胞核轉運病毒RNA所必需的。
NS2(NEP)1-121 來自減毒供體A/Leningrad/134/17/57的流感病毒NS2蛋白(也稱為NEP，UniProt：P69266)的完整序列，這是從細胞核轉運病毒RNA所必需的。
3'UTR 來自減毒供體A/Leningrad/134/17/57的流感病毒基因組第八區段的3'-非翻譯區，作為多聚腺苷酸化位元點，用於終止病毒基因轉錄，以及穩定和防止mRNA降解。
(-)RNA 啟動子 人類RNA聚合酶I基因啟動子，它是啟動流感病毒(-)RNA轉錄以進行後續病毒粒子組裝所必需的。
SV40 多聚腺苷酸化信號 SV40病毒的附加(+)RNA轉錄終止多聚腺苷酸化信號。
f1 起點 噬菌體f1單鏈複製的起點。
AmpR 啟動子 野生型 大腸桿菌β-內醯胺酶(BLa)基因的弱組成型啟動子(也在轉座子Tn2660中發現)。它包括啟動子和操縱子。
β- 內醯胺酶 賦予氨苄青黴素抗性的β-內醯胺酶基因。它使得能夠選擇 大腸桿菌細胞培養物
多聚腺苷酸化位點 終止β-內醯胺酶基因轉錄的多聚腺苷酸化信號。
複製起點 複雜的高拷貝複製起點pUC/pBR322/ColE1/pMB1是在原核細胞中起作用的複製起點。
[圖5]是顯示與病毒載體相比，用含有SARS-CoV-2多表位盒插入物的重組流感病毒接種兩次的小鼠血清中血清IgG抗體水準的圖。它指示作為血清稀釋度函數的根據ELISA的光密度。依次使用ANOVA單因素方差分析和Tukey多重比較檢驗，比較AUC資料。*p＜0.05；**p＜0.01 ；***p＜0.001；****p＜0.0001。 PBS是磷酸鹽緩衝鹽水。 LIV H7N9是減毒活的H7N9流感病毒。 [圖6]是顯示與病毒載體相比，用含有SARS-CoV-2多表位盒插入物的重組流感病毒接種兩次的小鼠血清中血清IgG抗體水準的圖。它指示作為血清稀釋度函數的根據ELISA的光密度。依次使用ANOVA單因素方差分析和Tukey多重比較檢驗，比較AUC資料。*p＜0.05；**p＜0.01 ；***p＜0.001；****p＜0.0001。 PBS是磷酸鹽緩衝鹽水。 LIV H7N9是減毒活的H7N9流感病毒。 [圖7]是顯示與病毒載體相比，用含有SARS-CoV-2多表位盒插入物的重組流感病毒接種兩次的小鼠血清中血清IgG抗體水準的圖。它表示每只動物的OD 450曲線下面積值。依次使用ANOVA單因素方差分析和Tukey多重比較檢驗，比較AUC資料。*p＜0.05；**p＜0.01；***p＜0.001；****p＜0.0001。 PBS是磷酸鹽緩衝鹽水。 LIV H7N9是減毒活的H7N9流感病毒。 [圖8]是顯示與病毒載體相比，用含有SARS-CoV-2多表位盒插入物的重組流感病毒接種兩次的小鼠血清中血清IgG抗體水準的圖。它表示每只動物的OD 450曲線下面積值。依次使用ANOVA單因素方差分析和Tukey多重比較檢驗，比較AUC資料。*p＜0.05；**p＜0.01；***p＜0.001；****p＜0.0001。 PBS是磷酸鹽緩衝鹽水。 LIV H7N9是減毒活的H7N9流感病毒。 [圖9]是顯示COVID-19恢復期患者在CoVac-13候選疫苗和LIV H7N9病毒載體刺激後外周血單核樣品中病毒特異性IFN-γ產生CD4+記憶T細胞水準的圖。 LIV H7N9是減毒活的H7N9流感病毒。 [圖10]是顯示COVID-19恢復期患者在CoVac-15候選疫苗和LIV H7N9病毒載體刺激後外周血單核樣品中病毒特異性IFN-γ產生CD4+記憶T細胞水準的圖。 LIV H7N9是減毒活的H7N9流感病毒。 [圖11]是顯示COVID-19恢復期患者在CoVac-16候選疫苗和LIV H7N9病毒載體刺激後外周血單核樣品中病毒特異性IFN-γ產生CD4+記憶T細胞水準的圖。 LIV H7N9是減毒活的H7N9流感病毒。 [圖12]是顯示COVID-19恢復期患者在CoVac-17候選疫苗和LIV H7N9病毒載體刺激後外周血單核樣品中病毒特異性IFN-γ產生CD4+(左)和CD8+(右)記憶T細胞水準的圖。 LIV H7N9是減毒活的H7N9流感病毒。 [圖13]是顯示COVID-19恢復期患者在CoVac-19候選疫苗和LIV H7N9病毒載體刺激後外周血單核樣品中病毒特異性IFN-γ產生CD4+(左)和CD8+(右)記憶T細胞水準的圖。 LIV H7N9是減毒活的H7N9流感病毒。 [圖14]是顯示COVID-19恢復期患者在CoVac-30候選疫苗和LIV H7N9病毒載體刺激後外周血單核樣品中病毒特異性IFN-γ產生CD4+(左)和CD8+(右)記憶T細胞水準的圖。 LIV H7N9是減毒活流感病毒H7N9。 [圖15]是顯示COVID-19恢復期患者在CoVac-31候選疫苗和LIV H7N9病毒載體刺激後外周血單核樣品中病毒特異性IFN-γ產生CD4+(左)和CD8+(右)記憶T細胞水準的圖。 LIV H7N9是減毒活流感病毒H7N9。 [圖16]是顯示COVID-19恢復期患者在CoVac-32候選疫苗和LIV H7N9病毒載體刺激後外周血單核樣品中病毒特異性IFN-γ產生CD4+(左)和CD8+(右)記憶T細胞水準的圖。 LIV H7N9是減毒活流感病毒H7N9。 [圖17]是顯示COVID-19恢復期患者在CoVac-33候選疫苗和LIV H7N9病毒載體刺激後外周血單核樣品中病毒特異性IFN-γ產生CD4+(左)和CD8+(右)記憶T細胞水準的圖。 LIV H7N9是減毒活的H7N9流感病毒。 [圖18]是顯示對照供體在用候選疫苗和LIV H7N9病毒載體刺激後外周血單核樣品中病毒特異性IFN-γ產生CD4+(上)和CD8+(下)記憶T細胞的圖。 LIV H7N9是減毒活的H7N9流感病毒。 [圖19]是各種冠狀病毒中S糖蛋白片段序列的比較。 

          <![CDATA[<110> 俄羅斯聯邦商拜奧卡德聯合股份公司(Joint Stock Company “BIOCAD”)]]>
                聯邦國家預算科學機構“實驗醫學學會”(Federal State Budgetary Scientific 
                Institution“Institution of Experimental Medicine”)
          <![CDATA[<120> 用於誘導對流感病毒的特異性免疫和/或預防流感病毒相關疾病的基於流感病毒的分]]>
                離重組病毒
          <![CDATA[<140> TW 111120317]]>
          <![CDATA[<141> 2022-05-31]]>
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          <![CDATA[<151> 2021-07-16]]>
          <![CDATA[<160> 124]]>
          <![CDATA[<170> BiSSAP 1.3.6]]>
          <![CDATA[<210> 1]]>
          <![CDATA[<211> 1273]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 天然序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> SARS-CoV-2病毒糖蛋白S的氨基酸序列]]>
          <![CDATA[<400> 1]]>
          Met Phe Val Phe Leu Val Leu Leu Pro Leu Val Ser Ser Gln Cys Val 
          1               5                   10                  15      
          Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala Tyr Thr Asn Ser Phe 
                      20                  25                  30          
          Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe Arg Ser Ser Val Leu 
                  35                  40                  45              
          His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe Ser Asn Val Thr Trp 
              50                  55                  60                  
          Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr Asn Gly Thr Lys Arg Phe Asp 
          65                  70                  75                  80  
          Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val Tyr Phe Ala Ser Thr Glu 
                          85                  90                  95      
          Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe Gly Thr Thr Leu Asp Ser 
                      100                 105                 110         
          Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn Ala Thr Asn Val Val Ile 
                  115                 120                 125             
          Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Asp Pro Phe Leu Gly Val Tyr 
              130                 135                 140                 
          Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met Glu Ser Glu Phe Arg Val Tyr 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Val Ser Gln Pro Phe Leu 
                          165                 170                 175     
          Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn Phe Lys Asn Leu Arg Glu Phe 
                      180                 185                 190         
          Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile Tyr Ser Lys His Thr 
                  195                 200                 205             
          Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro Gln Gly Phe Ser Ala Leu Glu 
              210                 215                 220                 
          Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile Asn Ile Thr Arg Phe Gln Thr 
          225                 230                 235                 240 
          Leu Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu Thr Pro Gly Asp Ser Ser Ser 
                          245                 250                 255     
          Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Gly Tyr Leu Gln Pro 
                      260                 265                 270         
          Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr Ile Thr Asp Ala 
                  275                 280                 285             
          Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys Thr Leu Lys 
              290                 295                 300                 
          Ser Phe Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Phe Arg Val 
          305                 310                 315                 320 
          Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys 
                          325                 330                 335     
          Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala 
                      340                 345                 350         
          Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu 
                  355                 360                 365             
          Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro 
              370                 375                 380                 
          Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe 
          385                 390                 395                 400 
          Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly 
                          405                 410                 415     
          Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys 
                      420                 425                 430         
          Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn 
                  435                 440                 445             
          Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe 
              450                 455                 460                 
          Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro Cys 
          465                 470                 475                 480 
          Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly 
                          485                 490                 495     
          Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val 
                      500                 505                 510         
          Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro Lys 
                  515                 520                 525             
          Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe Asn Phe Asn 
              530                 535                 540                 
          Gly Leu Thr Gly Thr Gly Val Leu Thr Glu Ser Asn Lys Lys Phe Leu 
          545                 550                 555                 560 
          Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp Ile Ala Asp Thr Thr Asp Ala Val 
                          565                 570                 575     
          Arg Asp Pro Gln Thr Leu Glu Ile Leu Asp Ile Thr Pro Cys Ser Phe 
                      580                 585                 590         
          Gly Gly Val Ser Val Ile Thr Pro Gly Thr Asn Thr Ser Asn Gln Val 
                  595                 600                 605             
          Ala Val Leu Tyr Gln Asp Val Asn Cys Thr Glu Val Pro Val Ala Ile 
              610                 615                 620                 
          His Ala Asp Gln Leu Thr Pro Thr Trp Arg Val Tyr Ser Thr Gly Ser 
          625                 630                 635                 640 
          Asn Val Phe Gln Thr Arg Ala Gly Cys Leu Ile Gly Ala Glu His Val 
                          645                 650                 655     
          Asn Asn Ser Tyr Glu Cys Asp Ile Pro Ile Gly Ala Gly Ile Cys Ala 
                      660                 665                 670         
          Ser Tyr Gln Thr Gln Thr Asn Ser Pro Arg Arg Ala Arg Ser Val Ala 
                  675                 680                 685             
          Ser Gln Ser Ile Ile Ala Tyr Thr Met Ser Leu Gly Ala Glu Asn Ser 
              690                 695                 700                 
          Val Ala Tyr Ser Asn Asn Ser Ile Ala Ile Pro Thr Asn Phe Thr Ile 
          705                 710                 715                 720 
          Ser Val Thr Thr Glu Ile Leu Pro Val Ser Met Thr Lys Thr Ser Val 
                          725                 730                 735     
          Asp Cys Thr Met Tyr Ile Cys Gly Asp Ser Thr Glu Cys Ser Asn Leu 
                      740                 745                 750         
          Leu Leu Gln Tyr Gly Ser Phe Cys Thr Gln Leu Asn Arg Ala Leu Thr 
                  755                 760                 765             
          Gly Ile Ala Val Glu Gln Asp Lys Asn Thr Gln Glu Val Phe Ala Gln 
              770                 775                 780                 
          Val Lys Gln Ile Tyr Lys Thr Pro Pro Ile Lys Asp Phe Gly Gly Phe 
          785                 790                 795                 800 
          Asn Phe Ser Gln Ile Leu Pro Asp Pro Ser Lys Pro Ser Lys Arg Ser 
                          805                 810                 815     
          Phe Ile Glu Asp Leu Leu Phe Asn Lys Val Thr Leu Ala Asp Ala Gly 
                      820                 825                 830         
          Phe Ile Lys Gln Tyr Gly Asp Cys Leu Gly Asp Ile Ala Ala Arg Asp 
                  835                 840                 845             
          Leu Ile Cys Ala Gln Lys Phe Asn Gly Leu Thr Val Leu Pro Pro Leu 
              850                 855                 860                 
          Leu Thr Asp Glu Met Ile Ala Gln Tyr Thr Ser Ala Leu Leu Ala Gly 
          865                 870                 875                 880 
          Thr Ile Thr Ser Gly Trp Thr Phe Gly Ala Gly Ala Ala Leu Gln Ile 
                          885                 890                 895     
          Pro Phe Ala Met Gln Met Ala Tyr Arg Phe Asn Gly Ile Gly Val Thr 
                      900                 905                 910         
          Gln Asn Val Leu Tyr Glu Asn Gln Lys Leu Ile Ala Asn Gln Phe Asn 
                  915                 920                 925             
          Ser Ala Ile Gly Lys Ile Gln Asp Ser Leu Ser Ser Thr Ala Ser Ala 
              930                 935                 940                 
          Leu Gly Lys Leu Gln Asp Val Val Asn Gln Asn Ala Gln Ala Leu Asn 
          945                 950                 955                 960 
          Thr Leu Val Lys Gln Leu Ser Ser Asn Phe Gly Ala Ile Ser Ser Val 
                          965                 970                 975     
          Leu Asn Asp Ile Leu Ser Arg Leu Asp Lys Val Glu Ala Glu Val Gln 
                      980                 985                 990         
          Ile Asp Arg Leu Ile Thr Gly Arg Leu Gln Ser Leu Gln Thr Tyr Val 
                  995                 1000                1005            
          Thr Gln Gln Leu Ile Arg Ala Ala Glu Ile Arg Ala Ser Ala Asn Leu 
              1010                1015                1020                
          Ala Ala Thr Lys Met Ser Glu Cys Val Leu Gly Gln Ser Lys Arg Val 
          1025                1030                1035                1040
          Asp Phe Cys Gly Lys Gly Tyr His Leu Met Ser Phe Pro Gln Ser Ala 
                          1045                1050                1055    
          Pro His Gly Val Val Phe Leu His Val Thr Tyr Val Pro Ala Gln Glu 
                      1060                1065                1070        
          Lys Asn Phe Thr Thr Ala Pro Ala Ile Cys His Asp Gly Lys Ala His 
                  1075                1080                1085            
          Phe Pro Arg Glu Gly Val Phe Val Ser Asn Gly Thr His Trp Phe Val 
              1090                1095                1100                
          Thr Gln Arg Asn Phe Tyr Glu Pro Gln Ile Ile Thr Thr Asp Asn Thr 
          1105                1110                1115                1120
          Phe Val Ser Gly Asn Cys Asp Val Val Ile Gly Ile Val Asn Asn Thr 
                          1125                1130                1135    
          Val Tyr Asp Pro Leu Gln Pro Glu Leu Asp Ser Phe Lys Glu Glu Leu 
                      1140                1145                1150        
          Asp Lys Tyr Phe Lys Asn His Thr Ser Pro Asp Val Asp Leu Gly Asp 
                  1155                1160                1165            
          Ile Ser Gly Ile Asn Ala Ser Val Val Asn Ile Gln Lys Glu Ile Asp 
              1170                1175                1180                
          Arg Leu Asn Glu Val Ala Lys Asn Leu Asn Glu Ser Leu Ile Asp Leu 
          1185                1190                1195                1200
          Gln Glu Leu Gly Lys Tyr Glu Gln Tyr Ile Lys Trp Pro Trp Tyr Ile 
                          1205                1210                1215    
          Trp Leu Gly Phe Ile Ala Gly Leu Ile Ala Ile Val Met Val Thr Ile 
                      1220                1225                1230        
          Met Leu Cys Cys Met Thr Ser Cys Cys Ser Cys Leu Lys Gly Cys Cys 
                  1235                1240                1245            
          Ser Cys Gly Ser Cys Cys Lys Phe Asp Glu Asp Asp Ser Glu Pro Val 
              1250                1255                1260                
          Leu Lys Gly Val Lys Leu His Tyr Thr 
          1265                1270            
          <![CDATA[<210> 2]]>
          <![CDATA[<211> 3819]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 天然序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 編碼SARS-CoV-2病毒糖蛋白S的核酸]]>
          <![CDATA[<400> 2]]>
          atgtttgttt ttcttgtttt attgccacta gtctctagtc agtgtgttaa tcttacaacc       60
          agaactcaat taccccctgc atacactaat tctttcacac gtggtgttta ttaccctgac      120
          aaagttttca gatcctcagt tttacattca actcaggact tgttcttacc tttcttttcc      180
          aatgttactt ggttccatgc tatacatgtc tctgggacca atggtactaa gaggtttgat      240
          aaccctgtcc taccatttaa tgatggtgtt tattttgctt ccactgagaa gtctaacata      300
          ataagaggct ggatttttgg tactacttta gattcgaaga cccagtccct acttattgtt      360
          aataacgcta ctaatgttgt tattaaagtc tgtgaatttc aattttgtaa tgatccattt      420
          ttgggtgttt attaccacaa aaacaacaaa agttggatgg aaagtgagtt cagagtttat      480
          tctagtgcga ataattgcac ttttgaatat gtctctcagc cttttcttat ggaccttgaa      540
          ggaaaacagg gtaatttcaa aaatcttagg gaatttgtgt ttaagaatat tgatggttat      600
          tttaaaatat attctaagca cacgcctatt aatttagtgc gtgatctccc tcagggtttt      660
          tcggctttag aaccattggt agatttgcca ataggtatta acatcactag gtttcaaact      720
          ttacttgctt tacatagaag ttatttgact cctggtgatt cttcttcagg ttggacagct      780
          ggtgctgcag cttattatgt gggttatctt caacctagga cttttctatt aaaatataat      840
          gaaaatggaa ccattacaga tgctgtagac tgtgcacttg accctctctc agaaacaaag      900
          tgtacgttga aatccttcac tgtagaaaaa ggaatctatc aaacttctaa ctttagagtc      960
          caaccaacag aatctattgt tagatttcct aatattacaa acttgtgccc ttttggtgaa     1020
          gtttttaacg ccaccagatt tgcatctgtt tatgcttgga acaggaagag aatcagcaac     1080
          tgtgttgctg attattctgt cctatataat tccgcatcat tttccacttt taagtgttat     1140
          ggagtgtctc ctactaaatt aaatgatctc tgctttacta atgtctatgc agattcattt     1200
          gtaattagag gtgatgaagt cagacaaatc gctccagggc aaactggaaa gattgctgat     1260
          tataattata aattaccaga tgattttaca ggctgcgtta tagcttggaa ttctaacaat     1320
          cttgattcta aggttggtgg taattataat tacctgtata gattgtttag gaagtctaat     1380
          ctcaaacctt ttgagagaga tatttcaact gaaatctatc aggccggtag cacaccttgt     1440
          aatggtgttg aaggttttaa ttgttacttt cctttacaat catatggttt ccaacccact     1500
          aatggtgttg gttaccaacc atacagagta gtagtacttt cttttgaact tctacatgca     1560
          ccagcaactg tttgtggacc taaaaagtct actaatttgg ttaaaaacaa atgtgtcaat     1620
          ttcaacttca atggtttaac aggcacaggt gttcttactg agtctaacaa aaagtttctg     1680
          cctttccaac aatttggcag agacattgct gacactactg atgctgtccg tgatccacag     1740
          acacttgaga ttcttgacat tacaccatgt tcttttggtg gtgtcagtgt tataacacca     1800
          ggaacaaata cttctaacca ggttgctgtt ctttatcagg atgttaactg cacagaagtc     1860
          cctgttgcta ttcatgcaga tcaacttact cctacttggc gtgtttattc tacaggttct     1920
          aatgtttttc aaacacgtgc aggctgttta ataggggctg aacatgtcaa caactcatat     1980
          gagtgtgaca tacccattgg tgcaggtata tgcgctagtt atcagactca gactaattct     2040
          cctcggcggg cacgtagtgt agctagtcaa tccatcattg cctacactat gtcacttggt     2100
          gcagaaaatt cagttgctta ctctaataac tctattgcca tacccacaaa ttttactatt     2160
          agtgttacca cagaaattct accagtgtct atgaccaaga catcagtaga ttgtacaatg     2220
          tacatttgtg gtgattcaac tgaatgcagc aatcttttgt tgcaatatgg cagtttttgt     2280
          acacaattaa accgtgcttt aactggaata gctgttgaac aagacaaaaa cacccaagaa     2340
          gtttttgcac aagtcaaaca aatttacaaa acaccaccaa ttaaagattt tggtggtttt     2400
          aatttttcac aaatattacc agatccatca aaaccaagca agaggtcatt tattgaagat     2460
          ctacttttca acaaagtgac acttgcagat gctggcttca tcaaacaata tggtgattgc     2520
          cttggtgata ttgctgctag agacctcatt tgtgcacaaa agtttaacgg ccttactgtt     2580
          ttgccacctt tgctcacaga tgaaatgatt gctcaataca cttctgcact gttagcgggt     2640
          acaatcactt ctggttggac ctttggtgca ggtgctgcat tacaaatacc atttgctatg     2700
          caaatggctt ataggtttaa tggtattgga gttacacaga atgttctcta tgagaaccaa     2760
          aaattgattg ccaaccaatt taatagtgct attggcaaaa ttcaagactc actttcttcc     2820
          acagcaagtg cacttggaaa acttcaagat gtggtcaacc aaaatgcaca agctttaaac     2880
          acgcttgtta aacaacttag ctccaatttt ggtgcaattt caagtgtttt aaatgatatc     2940
          ctttcacgtc ttgacaaagt tgaggctgaa gtgcaaattg ataggttgat cacaggcaga     3000
          cttcaaagtt tgcagacata tgtgactcaa caattaatta gagctgcaga aatcagagct     3060
          tctgctaatc ttgctgctac taaaatgtca gagtgtgtac ttggacaatc aaaaagagtt     3120
          gatttttgtg gaaagggcta tcatcttatg tccttccctc agtcagcacc tcatggtgta     3180
          gtcttcttgc atgtgactta tgtccctgca caagaaaaga acttcacaac tgctcctgcc     3240
          atttgtcatg atggaaaagc acactttcct cgtgaaggtg tctttgtttc aaatggcaca     3300
          cactggtttg taacacaaag gaatttttat gaaccacaaa tcattactac agacaacaca     3360
          tttgtgtctg gtaactgtga tgttgtaata ggaattgtca acaacacagt ttatgatcct     3420
          ttgcaacctg aattagactc attcaaggag gagttagata aatattttaa gaatcataca     3480
          tcaccagatg ttgatttagg tgacatctct ggcattaatg cttcagttgt aaacattcaa     3540
          aaagaaattg accgcctcaa tgaggttgcc aagaatttaa atgaatctct catcgatctc     3600
          caagaacttg gaaagtatga gcagtatata aaatggccat ggtacatttg gctaggtttt     3660
          atagctggct tgattgccat agtaatggtg acaattatgc tttgctgtat gaccagttgc     3720
          tgtagttgtc tcaagggctg ttgttcttgt ggatcctgct gcaaatttga tgaagacgac     3780
          tctgagccag tgctcaaagg agtcaaatta cattacaca                            3819
          <![CDATA[<210> 3]]>
          <![CDATA[<211> 419]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 天然序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> SARS-CoV-2病毒核蛋白的氨基酸序列]]>
          <![CDATA[<400> 3]]>
          Met Ser Asp Asn Gly Pro Gln Asn Gln Arg Asn Ala Pro Arg Ile Thr 
          1               5                   10                  15      
          Phe Gly Gly Pro Ser Asp Ser Thr Gly Ser Asn Gln Asn Gly Glu Arg 
                      20                  25                  30          
          Ser Gly Ala Arg Ser Lys Gln Arg Arg Pro Gln Gly Leu Pro Asn Asn 
                  35                  40                  45              
          Thr Ala Ser Trp Phe Thr Ala Leu Thr Gln His Gly Lys Glu Asp Leu 
              50                  55                  60                  
          Lys Phe Pro Arg Gly Gln Gly Val Pro Ile Asn Thr Asn Ser Ser Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Asp Asp Gln Ile Gly Tyr Tyr Arg Arg Ala Thr Arg Arg Ile Arg Gly 
                          85                  90                  95      
          Gly Asp Gly Lys Met Lys Asp Leu Ser Pro Arg Trp Tyr Phe Tyr Tyr 
                      100                 105                 110         
          Leu Gly Thr Gly Pro Glu Ala Gly Leu Pro Tyr Gly Ala Asn Lys Asp 
                  115                 120                 125             
          Gly Ile Ile Trp Val Ala Thr Glu Gly Ala Leu Asn Thr Pro Lys Asp 
              130                 135                 140                 
          His Ile Gly Thr Arg Asn Pro Ala Asn Asn Ala Ala Ile Val Leu Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Leu Pro Gln Gly Thr Thr Leu Pro Lys Gly Phe Tyr Ala Glu Gly Ser 
                          165                 170                 175     
          Arg Gly Gly Ser Gln Ala Ser Ser Arg Ser Ser Ser Arg Ser Arg Asn 
                      180                 185                 190         
          Ser Ser Arg Asn Ser Thr Pro Gly Ser Ser Arg Gly Thr Ser Pro Ala 
                  195                 200                 205             
          Arg Met Ala Gly Asn Gly Gly Asp Ala Ala Leu Ala Leu Leu Leu Leu 
              210                 215                 220                 
          Asp Arg Leu Asn Gln Leu Glu Ser Lys Met Ser Gly Lys Gly Gln Gln 
          225                 230                 235                 240 
          Gln Gln Gly Gln Thr Val Thr Lys Lys Ser Ala Ala Glu Ala Ser Lys 
                          245                 250                 255     
          Lys Pro Arg Gln Lys Arg Thr Ala Thr Lys Ala Tyr Asn Val Thr Gln 
                      260                 265                 270         
          Ala Phe Gly Arg Arg Gly Pro Glu Gln Thr Gln Gly Asn Phe Gly Asp 
                  275                 280                 285             
          Gln Glu Leu Ile Arg Gln Gly Thr Asp Tyr Lys His Trp Pro Gln Ile 
              290                 295                 300                 
          Ala Gln Phe Ala Pro Ser Ala Ser Ala Phe Phe Gly Met Ser Arg Ile 
          305                 310                 315                 320 
          Gly Met Glu Val Thr Pro Ser Gly Thr Trp Leu Thr Tyr Thr Gly Ala 
                          325                 330                 335     
          Ile Lys Leu Asp Asp Lys Asp Pro Asn Phe Lys Asp Gln Val Ile Leu 
                      340                 345                 350         
          Leu Asn Lys His Ile Asp Ala Tyr Lys Thr Phe Pro Pro Thr Glu Pro 
                  355                 360                 365             
          Lys Lys Asp Lys Lys Lys Lys Ala Asp Glu Thr Gln Ala Leu Pro Gln 
              370                 375                 380                 
          Arg Gln Lys Lys Gln Gln Thr Val Thr Leu Leu Pro Ala Ala Asp Leu 
          385                 390                 395                 400 
          Asp Asp Phe Ser Lys Gln Leu Gln Gln Ser Met Ser Ser Ala Asp Ser 
                          405                 410                 415     
          Thr Gln Ala 
          <![CDATA[<210> 4]]>
          <![CDATA[<211> 1257]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 天然序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 編碼SARS-CoV-2病毒核蛋白的核酸]]>
          <![CDATA[<400> 4]]>
          atgtctgata atggacccca aaatcagcga aatgcacccc gcattacgtt tggtggaccc      60
          tcagattcaa ctggcagtaa ccagaatgga gaacgcagtg gggcgcgatc aaaacaacgt     120
          cggccccaag gtttacccaa taatactgcg tcttggttca ccgctctcac tcaacatggc     180
          aaggaagacc ttaaattccc tcgaggacaa ggcgttccaa ttaacaccaa tagcagtcca     240
          gatgaccaaa ttggctacta ccgaagagct accagacgaa ttcgtggtgg tgacggtaaa     300
          atgaaagatc tcagtccaag atggtatttc tactacctag gaactgggcc agaagctgga     360
          cttccctatg gtgctaacaa agacggcatc atatgggttg caactgaggg agccttgaat     420
          acaccaaaag atcacattgg cacccgcaat cctgctaaca atgctgcaat cgtgctacaa     480
          cttcctcaag gaacaacatt gccaaaaggc ttctacgcag aagggagcag aggcggcagt     540
          caagcctctt ctcgttcctc atcacgtagt cgcaacagtt caagaaattc aactccaggc     600
          agcagtaggg gaacttctcc tgctagaatg gctggcaatg gcggtgatgc tgctcttgct     660
          ttgctgctgc ttgacagatt gaaccagctt gagagcaaaa tgtctggtaa aggccaacaa     720
          caacaaggcc aaactgtcac taagaaatct gctgctgagg cttctaagaa gcctcggcaa     780
          aaacgtactg ccactaaagc atacaatgta acacaagctt tcggcagacg tggtccagaa     840
          caaacccaag gaaattttgg ggaccaggaa ctaatcagac aaggaactga ttacaaacat     900
          tggccgcaaa ttgcacaatt tgcccccagc gcttcagcgt tcttcggaat gtcgcgcatt     960
          ggcatggaag tcacaccttc gggaacgtgg ttgacctaca caggtgccat caaattggat    1020
          gacaaagatc caaatttcaa agatcaagtc attttgctga ataagcatat tgacgcatac    1080
          aaaacattcc caccaacaga gcctaaaaag gacaaaaaga agaaggctga tgaaactcaa    1140
          gccttaccgc agagacagaa gaaacagcaa actgtgactc ttcttcctgc tgcagatttg    1200
          gatgatttct ccaaacaatt gcaacaatcc atgagcagtg ctgactcaac tcaggcc       1257
          <![CDATA[<210> 5]]>
          <![CDATA[<211> 222]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 天然序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> SARS-CoV-2病毒膜蛋白的氨基酸序列]]>
          <![CDATA[<400> 5]]>
          Met Ala Asp Ser Asn Gly Thr Ile Thr Val Glu Glu Leu Lys Lys Leu 
          1               5                   10                  15      
          Leu Glu Gln Trp Asn Leu Val Ile Gly Phe Leu Phe Leu Thr Trp Ile 
                      20                  25                  30          
          Cys Leu Leu Gln Phe Ala Tyr Ala Asn Arg Asn Arg Phe Leu Tyr Ile 
                  35                  40                  45              
          Ile Lys Leu Ile Phe Leu Trp Leu Leu Trp Pro Val Thr Leu Ala Cys 
              50                  55                  60                  
          Phe Val Leu Ala Ala Val Tyr Arg Ile Asn Trp Ile Thr Gly Gly Ile 
          65                  70                  75                  80  
          Ala Ile Ala Met Ala Cys Leu Val Gly Leu Met Trp Leu Ser Tyr Phe 
                          85                  90                  95      
          Ile Ala Ser Phe Arg Leu Phe Ala Arg Thr Arg Ser Met Trp Ser Phe 
                      100                 105                 110         
          Asn Pro Glu Thr Asn Ile Leu Leu Asn Val Pro Leu His Gly Thr Ile 
                  115                 120                 125             
          Leu Thr Arg Pro Leu Leu Glu Ser Glu Leu Val Ile Gly Ala Val Ile 
              130                 135                 140                 
          Leu Arg Gly His Leu Arg Ile Ala Gly His His Leu Gly Arg Cys Asp 
          145                 150                 155                 160 
          Ile Lys Asp Leu Pro Lys Glu Ile Thr Val Ala Thr Ser Arg Thr Leu 
                          165                 170                 175     
          Ser Tyr Tyr Lys Leu Gly Ala Ser Gln Arg Val Ala Gly Asp Ser Gly 
                      180                 185                 190         
          Phe Ala Ala Tyr Ser Arg Tyr Arg Ile Gly Asn Tyr Lys Leu Asn Thr 
                  195                 200                 205             
          Asp His Ser Ser Ser Ser Asp Asn Ile Ala Leu Leu Val Gln 
              210                 215                 220         
          <![CDATA[<210> 6]]>
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          <![CDATA[<212> DNA]]>
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          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 編碼SARS-CoV-2病毒膜蛋白的核酸]]>
          <![CDATA[<400> 6]]>
          atggcagatt ccaacggtac tattaccgtt gaagagctta aaaagctcct tgaacaatgg      60
          aacctagtaa taggtttcct attccttaca tggatttgtc ttctacaatt tgcctatgcc     120
          aacaggaata ggtttttgta tataattaag ttaattttcc tctggctgtt atggccagta     180
          actttagctt gttttgtgct tgctgctgtt tacagaataa attggatcac cggtggaatt     240
          gctatcgcaa tggcttgtct tgtaggcttg atgtggctca gctacttcat tgcttctttc     300
          agactgtttg cgcgtacgcg ttccatgtgg tcattcaatc cagaaactaa cattcttctc     360
          aacgtgccac tccatggcac tattctgacc agaccgcttc tagaaagtga actcgtaatc     420
          ggagctgtga tccttcgtgg acatcttcgt attgctggac accatctagg acgctgtgac     480
          atcaaggacc tgcctaaaga aatcactgtt gctacatcac gaacgctttc ttattacaaa     540
          ttgggagctt cgcagcgtgt agcaggtgac tcaggttttg ctgcatacag tcgctacagg     600
          attggcaact ataaattaaa cacagaccat tccagtagca gtgacaatat tgctttgctt     660
          gtacag                                                                666
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          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> SARS-CoV-2病毒糖蛋白S片段的氨基酸序列]]>
          <![CDATA[<400> 7]]>
          Asp Arg Leu Asn Glu Val Ala 
          1               5           
          <![CDATA[<210> 8]]>
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          <![CDATA[<212> PRT]]>
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          <![CDATA[<223> SARS-CoV-2病毒糖蛋白S片段的氨基酸序列]]>
          <![CDATA[<400> 8]]>
          Phe Ile Ala Gly Leu Ile Ala Ile Val 
          1               5                   
          <![CDATA[<210> 9]]>
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          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> SARS-CoV-2病毒糖蛋白S片段的氨基酸序列]]>
          <![CDATA[<400> 9]]>
          Ala Pro His Gly Val Val Phe Leu His Val Thr Tyr Val 
          1               5                   10              
          <![CDATA[<210> 10]]>
          <![CDATA[<211> 12]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> SARS-CoV-2病毒糖蛋白S片段的氨基酸序列]]>
          <![CDATA[<400> 10]]>
          Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val Leu Ser Phe 
          1               5                   10          
          <![CDATA[<210> 11]]>
          <![CDATA[<211> 9]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
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          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> SARS-CoV-2病毒糖蛋白S片段的氨基酸序列]]>
          <![CDATA[<400> 11]]>
          Ala Leu Asn Thr Leu Val Lys Gln Leu 
          1               5                   
          <![CDATA[<210> 12]]>
          <![CDATA[<211> 9]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> SARS-CoV-2病毒糖蛋白S片段的氨基酸序列]]>
          <![CDATA[<400> 12]]>
          Val Leu Asn Asp Ile Leu Ser Arg Leu 
          1               5                   
          <![CDATA[<210> 13]]>
          <![CDATA[<211> 13]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> SARS-CoV-2病毒糖蛋白S片段的氨基酸序列]]>
          <![CDATA[<400> 13]]>
          Leu Ile Thr Gly Arg Leu Gln Ser Leu Gln Thr Tyr Val 
          1               5                   10              
          <![CDATA[<210> 14]]>
          <![CDATA[<211> 9]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> SARS-CoV-2病毒糖蛋白S片段的氨基酸序列]]>
          <![CDATA[<400> 14]]>
          Leu Ile Thr Gly Arg Leu Gln Ser Leu 
          1               5                   
          <![CDATA[<210> 15]]>
          <![CDATA[<211> 13]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> SARS-CoV-2病毒核蛋白片段的氨基酸序列]]>
          <![CDATA[<400> 15]]>
          Ala Leu Ala Leu Leu Leu Leu Asp Arg Leu Asn Gln Leu 
          1               5                   10              
          <![CDATA[<210> 16]]>
          <![CDATA[<211> 10]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
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          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> SARS-CoV-2病毒核蛋白片段的氨基酸序列]]>
          <![CDATA[<400> 16]]>
          Leu Ser Pro Arg Trp Tyr Phe Tyr Tyr Leu 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210> 17]]>
          <![CDATA[<211> 9]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> SARS-CoV-2病毒核蛋白片段的氨基酸序列]]>
          <![CDATA[<400> 17]]>
          Ala Leu Asn Thr Pro Lys Asp His Ile 
          1               5                   
          <![CDATA[<210> 18]]>
          <![CDATA[<211> 8]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
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          <![CDATA[<220> ]]>
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          <![CDATA[<400> 18]]>
          Gln Leu Pro Gln Gly Thr Thr Leu 
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          <![CDATA[<210> 19]]>
          <![CDATA[<211> 10]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
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          <![CDATA[<220> ]]>
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          <![CDATA[<400> 19]]>
          Arg Gln Gly Thr Asp Tyr Lys His Trp Pro 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210> 20]]>
          <![CDATA[<211> 9]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
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          <![CDATA[<223> SARS-CoV-2病毒核蛋白片段的氨基酸序列]]>
          <![CDATA[<400> 20]]>
          Gly Met Ser Arg Ile Gly Met Glu Val 
          1               5                   
          <![CDATA[<210> 21]]>
          <![CDATA[<211> 9]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> SARS-CoV-2病毒核蛋白片段的氨基酸序列]]>
          <![CDATA[<400> 21]]>
          Ile Leu Leu Asn Lys His Ile Asp Ala 
          1               5                   
          <![CDATA[<210> 22]]>
          <![CDATA[<211> 21]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> SARS-CoV-2病毒膜蛋白片段的氨基酸序列]]>
          <![CDATA[<400> 22]]>
          Phe Leu Trp Leu Leu Trp Pro Val Thr Leu Ala Cys Phe Val Leu Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ala Val Tyr Arg Ile 
                      20      
          <![CDATA[<210> 23]]>
          <![CDATA[<211> 113]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 盒1的氨基酸序列]]>
          <![CDATA[<400> 23]]>
          Asn Arg Asn Arg Phe Leu Tyr Ile Ile Lys Leu Val Phe Leu Trp Leu 
          1               5                   10                  15      
          Leu Trp Pro Val Thr Leu Ala Cys Phe Val Leu Ala Ala Val Tyr Arg 
                      20                  25                  30          
          Ile Asn Trp Val Gly Glu Thr Ala Leu Ala Leu Leu Leu Leu Asp Arg 
                  35                  40                  45              
          Leu Asn Gln Leu Glu Ser Lys Glu Ile Asp Arg Leu Asn Glu Val Ala 
              50                  55                  60                  
          Lys Asn Leu Asn Glu Ser Trp Leu Gly Phe Ile Ala Gly Leu Ile Ala 
          65                  70                  75                  80  
          Ile Val Met Val Thr Pro Gln Ala Ala Pro His Gly Val Val Phe Leu 
                          85                  90                  95      
          His Val Thr Tyr Val Pro Ser Gln Glu Arg Asn Phe Thr Thr Ala Pro 
                      100                 105                 110         
          Ala 
          <![CDATA[<210> 24]]>
          <![CDATA[<211> 92]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 盒2的氨基酸序列]]>
          <![CDATA[<400> 24]]>
          Ile Gln Lys Glu Ile Asp Arg Leu Asn Glu Val Ala Lys Asn Leu Asn 
          1               5                   10                  15      
          Glu Ser Leu Ile Asp Leu Gln Glu Leu Gly Lys Tyr Glu Gln Tyr Ile 
                      20                  25                  30          
          Lys Trp Pro Trp Tyr Val Trp Leu Gly Phe Ile Ala Gly Leu Ile Ala 
                  35                  40                  45              
          Ile Val Met Val Thr Ile Leu Leu Cys Pro Gln Ile Ala Gln Phe Ala 
              50                  55                  60                  
          Pro Ser Ala Ser Ala Phe Phe Gly Met Ser Arg Ile Gly Met Glu Val 
          65                  70                  75                  80  
          Thr Pro Ser Gly Thr Trp Leu Thr Tyr His Gly Ala 
                          85                  90          
          <![CDATA[<210> 25]]>
          <![CDATA[<211> 92]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 盒3的氨基酸序列]]>
          <![CDATA[<400> 25]]>
          Pro Gln Ile Ala Gln Phe Ala Pro Ser Ala Ser Ala Phe Phe Gly Met 
          1               5                   10                  15      
          Ser Arg Ile Gly Met Glu Val Thr Pro Ser Gly Thr Trp Leu Thr Tyr 
                      20                  25                  30          
          His Gly Ala Ile Gln Lys Glu Ile Asp Arg Leu Asn Glu Val Ala Lys 
                  35                  40                  45              
          Asn Leu Asn Glu Ser Leu Ile Asp Leu Gln Glu Leu Gly Lys Tyr Glu 
              50                  55                  60                  
          Gln Tyr Ile Lys Trp Pro Trp Tyr Val Trp Leu Gly Phe Ile Ala Gly 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Ile Ala Ile Val Met Val Thr Ile Leu Leu Cys 
                          85                  90          
          <![CDATA[<210> 26]]>
          <![CDATA[<211> 115]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 盒4的氨基酸序列]]>
          <![CDATA[<400> 26]]>
          Gln Lys Glu Ile Asp Arg Leu Asn Glu Val Ala Lys Asn Leu Asn Glu 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Ile Asp Leu Gln Glu Leu Gly Lys Tyr Glu Gln Tyr Ile Lys 
                      20                  25                  30          
          Trp Pro Trp Tyr Ile Trp Leu Gly Phe Ile Ala Gly Leu Ile Ala Ile 
                  35                  40                  45              
          Val Met Val Thr Lys Leu Ile Phe Leu Trp Leu Leu Trp Pro Val Thr 
              50                  55                  60                  
          Leu Ala Cys Phe Val Leu Ala Ala Val Tyr Arg Ile Asn Trp Ile Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Asp Ala Ala Leu Ala Leu Leu Leu Leu Asp Arg Leu Asn Gln Leu Glu 
                          85                  90                  95      
          Ser Lys Met Ser Ala Pro His Gly Val Val Phe Leu His Val Thr Tyr 
                      100                 105                 110         
          Val Pro Ala 
                  115 
          <![CDATA[<210> 27]]>
          <![CDATA[<211> 122]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 盒5的氨基酸序列]]>
          <![CDATA[<400> 27]]>
          Gln Lys Glu Ile Asp Arg Leu Asn Glu Val Ala Lys Asn Leu Asn Glu 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Ile Asp Leu Gln Glu Leu Gly Lys Tyr Glu Gln Tyr Ile Lys 
                      20                  25                  30          
          Trp Pro Trp Tyr Ile Trp Leu Gly Phe Ile Ala Gly Leu Ile Ala Ile 
                  35                  40                  45              
          Val Met Val Thr Gly Gly Asp Ala Ala Leu Ala Leu Leu Leu Leu Asp 
              50                  55                  60                  
          Arg Leu Asn Gln Leu Glu Ser Lys Met Ser Ala Pro His Gly Val Val 
          65                  70                  75                  80  
          Phe Leu His Val Thr Tyr Val Pro Ala Gln Glu Lys Lys Leu Ile Phe 
                          85                  90                  95      
          Leu Trp Leu Leu Trp Pro Val Thr Leu Ala Cys Phe Val Leu Ala Ala 
                      100                 105                 110         
          Val Tyr Arg Ile Asn Trp Ile Thr Gly Gly 
                  115                 120         
          <![CDATA[<210> 28]]>
          <![CDATA[<211> 96]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 盒6的氨基酸序列]]>
          <![CDATA[<400> 28]]>
          Gln Lys Glu Ile Asp Arg Leu Asn Glu Val Ala Lys Asn Leu Asn Glu 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Ala Pro His Gly Val Val Phe Leu His Val Thr Tyr Val Pro 
                      20                  25                  30          
          Ala Gln Glu Lys Lys Leu Ile Phe Leu Trp Leu Leu Trp Pro Val Thr 
                  35                  40                  45              
          Leu Ala Cys Phe Val Leu Ala Ala Val Tyr Arg Ile Asn Trp Ile Thr 
              50                  55                  60                  
          Asp Ala Ala Leu Ala Leu Leu Leu Leu Asp Arg Leu Asn Gln Leu Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Lys Met Ser Phe Ile Ala Gly Leu Ile Ala Ile Val Met Val Thr 
                          85                  90                  95      
          <![CDATA[<210> 29]]>
          <![CDATA[<211> 96]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 盒7的氨基酸序列]]>
          <![CDATA[<400> 29]]>
          Gln Lys Glu Ile Asp Arg Leu Asn Glu Val Ala Lys Asn Leu Asn Glu 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Ala Pro His Gly Val Val Phe Leu His Val Thr Tyr Val Pro 
                      20                  25                  30          
          Ala Gln Glu Lys Asp Ala Ala Leu Ala Leu Leu Leu Leu Asp Arg Leu 
                  35                  40                  45              
          Asn Gln Leu Glu Ser Lys Met Ser Phe Ile Ala Gly Leu Ile Ala Ile 
              50                  55                  60                  
          Val Met Lys Leu Ile Phe Leu Trp Leu Leu Trp Pro Val Thr Leu Ala 
          65                  70                  75                  80  
          Cys Phe Val Leu Ala Ala Val Tyr Arg Ile Asn Trp Ile Thr Gly Gly 
                          85                  90                  95      
          <![CDATA[<210> 30]]>
          <![CDATA[<211> 101]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 盒8的氨基酸序列]]>
          <![CDATA[<400> 30]]>
          Gln Lys Glu Ile Asp Arg Leu Asn Glu Val Ala Lys Asn Leu Asn Glu 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Ala Pro His Gly Val Val Phe Leu His Val Thr Tyr Val Pro 
                      20                  25                  30          
          Ala Gln Glu Lys Asn Phe Thr Thr Ala Phe Ile Ala Gly Leu Ile Ala 
                  35                  40                  45              
          Ile Val Met Val Thr Asp Ala Ala Leu Ala Leu Leu Leu Leu Asp Arg 
              50                  55                  60                  
          Leu Asn Gln Leu Glu Ser Lys Lys Leu Ile Phe Leu Trp Leu Leu Trp 
          65                  70                  75                  80  
          Pro Val Thr Leu Ala Cys Phe Val Leu Ala Ala Val Tyr Arg Ile Asn 
                          85                  90                  95      
          Trp Ile Thr Gly Gly 
                      100     
          <![CDATA[<210> 31]]>
          <![CDATA[<211> 122]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 盒9的氨基酸序列]]>
          <![CDATA[<400> 31]]>
          Arg Asn Arg Phe Leu Tyr Ile Ile Lys Leu Ile Phe Leu Trp Leu Leu 
          1               5                   10                  15      
          Trp Pro Val Thr Leu Ala Cys Phe Val Leu Ala Ala Val Tyr Arg Ile 
                      20                  25                  30          
          Asn Trp Lys Glu Ile Asp Arg Leu Asn Glu Val Ala Lys Asn Leu Asn 
                  35                  40                  45              
          Glu Ser Leu Ile Asp Leu Gln Glu Leu Gly Lys Tyr Glu Gln Tyr Ile 
              50                  55                  60                  
          Lys Trp Pro Trp Tyr Ile Trp Leu Gly Phe Ile Ala Gly Leu Ile Ala 
          65                  70                  75                  80  
          Ile Val Met Val Thr Gly Gly Asp Ala Ala Leu Ala Leu Leu Leu Leu 
                          85                  90                  95      
          Asp Arg Leu Asn Gln Leu Glu Ser Lys Met Ser Ala Pro His Gly Val 
                      100                 105                 110         
          Val Phe Leu His Val Thr Tyr Val Pro Ala 
                  115                 120         
          <![CDATA[<210> 32]]>
          <![CDATA[<211> 122]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 盒10的氨基酸序列]]>
          <![CDATA[<400> 32]]>
          Arg Arg Ile Arg Gly Gly Asp Gly Lys Met Lys Asp Leu Ser Pro Arg 
          1               5                   10                  15      
          Trp Tyr Phe Tyr Tyr Leu Gly Thr Gly Pro Glu Ala Gly Leu Pro Tyr 
                      20                  25                  30          
          Gly Ala Asn Lys Asp Gly Ile Ile Trp Val Ala Thr Glu Gly Ala Leu 
                  35                  40                  45              
          Asn Thr Pro Lys Asp His Ile Gly Thr Arg Asn Pro Ala Asn Asn Ala 
              50                  55                  60                  
          Ala Ile Val Leu Gln Leu Pro Gln Gly Thr Thr Leu Pro Lys Gly Lys 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Asp Val Val Asn Gln Asn Ala Gln Ala Leu Asn Thr Leu Val 
                          85                  90                  95      
          Lys Gln Leu Ser Ser Asn Phe Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val 
                      100                 105                 110         
          Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala 
                  115                 120         
          <![CDATA[<210> 33]]>
          <![CDATA[<211> 118]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 盒11的氨基酸序列]]>
          <![CDATA[<400> 33]]>
          Arg Arg Ile Arg Gly Gly Asp Gly Lys Met Lys Asp Leu Ser Pro Arg 
          1               5                   10                  15      
          Trp Tyr Phe Tyr Tyr Leu Gly Thr Gly Pro Glu Arg Ser Gly Ala Arg 
                      20                  25                  30          
          Ser Lys Gln Arg Arg Pro Gln Gly Leu Pro Asn Asn Thr Ala Ser Trp 
                  35                  40                  45              
          Phe Thr Ala Leu Thr Gln His Gly Lys Glu Asp Leu Gly Tyr Gln Pro 
              50                  55                  60                  
          Tyr Arg Val Val Val Leu Ser Phe Glu Thr Glu Gly Ala Leu Asn Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Pro Lys Asp His Ile Gly Thr Arg Asn Pro Ala Asn Asn Ala Ala Ile 
                          85                  90                  95      
          Val Leu Gln Leu Pro Gln Gly Thr Thr Leu Pro Lys Gly Phe Tyr Ala 
                      100                 105                 110         
          Glu Gly Ser Arg Gly Gly 
                  115             
          <![CDATA[<210> 34]]>
          <![CDATA[<211> 116]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 盒12的氨基酸序列]]>
          <![CDATA[<400> 34]]>
          Arg Arg Ile Arg Gly Gly Asp Gly Lys Met Lys Asp Leu Ser Pro Arg 
          1               5                   10                  15      
          Trp Tyr Phe Tyr Tyr Leu Gly Thr Gly Pro Asp Lys Asp Pro Asn Phe 
                      20                  25                  30          
          Lys Asp Gln Val Ile Leu Leu Asn Lys His Ile Asp Ala Gly Lys Leu 
                  35                  40                  45              
          Gln Asp Val Val Asn Gln Asn Ala Gln Ala Leu Asn Thr Leu Val Lys 
              50                  55                  60                  
          Gln Leu Ser Ser Asn Phe Gly Ala Ile Ser Ser Val Leu Asn Asp Ile 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Ser Arg Leu Asp Lys Val Glu Ala Glu Val Gln Ile Asp Arg Leu 
                          85                  90                  95      
          Ile Thr Gly Arg Leu Gln Ser Leu Gln Thr Tyr Val Thr Gln Gln Leu 
                      100                 105                 110         
          Ile Arg Ala Ala 
                  115     
          <![CDATA[<210> 35]]>
          <![CDATA[<211> 104]]>
          <![CDATA[<212> PR]]>T
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 盒13的氨基酸序列]]>
          <![CDATA[<400> 35]]>
          Asp Asp Lys Asp Pro Asn Phe Lys Asp Gln Val Ile Leu Leu Asn Lys 
          1               5                   10                  15      
          His Ile Asp Ala Gly Lys Leu Gln Asp Val Val Asn Gln Asn Ala Gln 
                      20                  25                  30          
          Ala Leu Asn Thr Leu Val Lys Gln Leu Ser Ser Asn Phe Gly Thr Glu 
                  35                  40                  45              
          Gly Ala Leu Asn Thr Pro Lys Asp His Ile Gly Thr Arg Asn Pro Ala 
              50                  55                  60                  
          Asn Asn Ala Ala Ile Val Leu Gln Leu Pro Gln Gly Thr Thr Leu Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Lys Gly Phe Tyr Ala Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val Leu Ser 
                          85                  90                  95      
          Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala 
                      100                 
          <![CDATA[<210> 36]]>
          <![CDATA[<211> 114]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 盒14的氨基酸序列]]>
          <![CDATA[<400> 36]]>
          Asp Asp Lys Asp Pro Asn Phe Lys Asp Gln Val Ile Leu Leu Asn Lys 
          1               5                   10                  15      
          His Ile Asp Ala Asn Gly Glu Arg Ser Gly Ala Arg Ser Lys Gln Arg 
                      20                  25                  30          
          Arg Pro Gln Gly Leu Pro Asn Asn Thr Ala Ser Trp Phe Thr Ala Leu 
                  35                  40                  45              
          Thr Gln His Gly Lys Glu Asp Leu Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val 
              50                  55                  60                  
          Val Leu Ser Phe Glu Thr Glu Gly Ala Leu Asn Thr Pro Lys Asp His 
          65                  70                  75                  80  
          Ile Gly Thr Arg Asn Pro Ala Asn Asn Ala Ala Ile Val Leu Gln Leu 
                          85                  90                  95      
          Pro Gln Gly Thr Thr Leu Pro Lys Gly Phe Tyr Ala Glu Gly Ser Arg 
                      100                 105                 110         
          Gly Gly 
          <![CDATA[<210> 37]]>
          <![CDATA[<211> 117]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 盒15的氨基酸序列]]>
          <![CDATA[<400> 37]]>
          Asp Asp Lys Asp Pro Asn Phe Lys Asp Gln Val Ile Leu Leu Asn Lys 
          1               5                   10                  15      
          His Ile Asp Ala Tyr Lys Thr Phe Pro Pro Asp Gly Lys Met Lys Asp 
                      20                  25                  30          
          Leu Ser Pro Arg Trp Tyr Phe Tyr Tyr Leu Gly Thr Gly Pro Glu Lys 
                  35                  40                  45              
          Leu Gln Asp Val Val Asn Gln Asn Ala Gln Ala Leu Asn Thr Leu Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gln Leu Ser Ser Asn Phe Gly Ala Ile Ser Ser Val Leu Asn Asp 
          65                  70                  75                  80  
          Ile Leu Ser Arg Leu Asp Lys Val Glu Ala Glu Val Gln Ile Asp Arg 
                          85                  90                  95      
          Leu Ile Thr Gly Arg Leu Gln Ser Leu Gln Thr Tyr Val Thr Gln Gln 
                      100                 105                 110         
          Leu Ile Arg Ala Ala 
                  115         
          <![CDATA[<210> 38]]>
          <![CDATA[<211> 147]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
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          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 盒16的氨基酸序列]]>
          <![CDATA[<400> 38]]>
          Arg Arg Ile Arg Gly Gly Asp Gly Lys Met Lys Asp Leu Ser Pro Arg 
          1               5                   10                  15      
          Trp Tyr Phe Tyr Tyr Leu Gly Thr Gly Pro Glu Arg Gln Gly Thr Asp 
                      20                  25                  30          
          Tyr Lys His Trp Pro Gln Ile Ala Gln Phe Ala Pro Ser Ala Ser Ala 
                  35                  40                  45              
          Phe Phe Gly Met Ser Arg Ile Gly Met Glu Val Thr Pro Ser Gly Thr 
              50                  55                  60                  
          Trp Leu Thr Tyr Thr Gly Ala Ile Lys Leu Asp Asp Lys Asp Pro Asn 
          65                  70                  75                  80  
          Phe Lys Asp Gln Val Ile Leu Leu Asn Lys His Ile Asp Ala Tyr Lys 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Pro Pro Thr Glu Pro Lys Lys Ser Val Leu Asn Asp Ile Leu 
                      100                 105                 110         
          Ser Arg Leu Asp Lys Val Glu Ala Glu Val Gln Ile Asp Arg Leu Ile 
                  115                 120                 125             
          Thr Gly Arg Leu Gln Ser Leu Gln Thr Tyr Val Thr Gln Gln Leu Ile 
              130                 135                 140                 
          Arg Ala Ala 
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          <![CDATA[<210> 39]]>
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          <![CDATA[<212> PRT]]>
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          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 盒17的氨基酸序列]]>
          <![CDATA[<400> 39]]>
          Arg Arg Ile Arg Gly Gly Asp Gly Lys Met Lys Asp Leu Ser Pro Arg 
          1               5                   10                  15      
          Trp Tyr Phe Tyr Tyr Leu Gly Thr Gly Pro Glu Ala Gly Leu Pro Tyr 
                      20                  25                  30          
          Gly Ala Asn Lys Asp Gly Ile Ile Trp Val Ala Thr Glu Gly Ala Leu 
                  35                  40                  45              
          Asn Thr Pro Lys Asp His Ile Gly Thr Arg Asn Pro Ala Asn Asn Ala 
              50                  55                  60                  
          Ala Ile Val Leu Gln Leu Pro Gln Gly Thr Thr Leu Pro Lys Gly Ala 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Asn Thr Leu Val Lys Gln Leu Ser Ser Asn Phe Gly Ala Ile Ser 
                          85                  90                  95      
          Ser Val Leu Asn Asp Ile Leu Ser Arg Leu Asp Lys Val Glu Ala Glu 
                      100                 105                 110         
          Val Gln Ile Asp Arg Leu Ile Thr Gly Arg Leu Gln Ser Leu Gln Thr 
                  115                 120                 125             
          Tyr Val Thr Gln Gln Leu Ile Arg Ala Ala Glu Ile Arg Ala Gly Tyr 
              130                 135                 140                 
          Gln Pro Tyr Arg Val Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro 
          145                 150                 155                 160 
          Ala 
          <![CDATA[<210> 40]]>
          <![CDATA[<211> 174]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
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          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 盒18的氨基酸序列]]>
          <![CDATA[<400> 40]]>
          Arg Arg Ile Arg Gly Gly Asp Gly Lys Met Lys Asp Leu Ser Pro Arg 
          1               5                   10                  15      
          Trp Tyr Phe Tyr Tyr Leu Gly Thr Gly Pro Glu Arg Gln Gly Thr Asp 
                      20                  25                  30          
          Tyr Lys His Trp Pro Gln Ile Ala Gln Phe Ala Pro Ser Ala Ser Ala 
                  35                  40                  45              
          Phe Phe Gly Met Ser Arg Ile Gly Met Glu Val Thr Pro Ser Gly Thr 
              50                  55                  60                  
          Trp Leu Thr Tyr Thr Gly Ala Ile Lys Leu Asp Asp Lys Asp Pro Asn 
          65                  70                  75                  80  
          Phe Lys Asp Gln Val Ile Leu Leu Asn Lys His Ile Asp Ala Tyr Lys 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Pro Pro Thr Glu Pro Lys Lys Leu Gln Asp Val Val Asn Gln 
                      100                 105                 110         
          Asn Ala Gln Ala Leu Asn Thr Leu Val Lys Gln Leu Ser Ser Asn Phe 
                  115                 120                 125             
          Gly Ala Ile Ser Ser Val Leu Asn Asp Ile Leu Ser Arg Leu Asp Lys 
              130                 135                 140                 
          Val Glu Ala Glu Val Gln Ile Asp Arg Leu Ile Thr Gly Arg Leu Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Leu Gln Thr Tyr Val Thr Gln Gln Leu Ile Arg Ala Ala 
                          165                 170                 
          <![CDATA[<210> 41]]>
          <![CDATA[<211> 135]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
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          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 盒1和自切割肽的氨基酸序列]]>
          <![CDATA[<400> 41]]>
          Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val 
          1               5                   10                  15      
          Glu Glu Asn Pro Gly Pro Asn Arg Asn Arg Phe Leu Tyr Ile Ile Lys 
                      20                  25                  30          
          Leu Val Phe Leu Trp Leu Leu Trp Pro Val Thr Leu Ala Cys Phe Val 
                  35                  40                  45              
          Leu Ala Ala Val Tyr Arg Ile Asn Trp Val Gly Glu Thr Ala Leu Ala 
              50                  55                  60                  
          Leu Leu Leu Leu Asp Arg Leu Asn Gln Leu Glu Ser Lys Glu Ile Asp 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Leu Asn Glu Val Ala Lys Asn Leu Asn Glu Ser Trp Leu Gly Phe 
                          85                  90                  95      
          Ile Ala Gly Leu Ile Ala Ile Val Met Val Thr Pro Gln Ala Ala Pro 
                      100                 105                 110         
          His Gly Val Val Phe Leu His Val Thr Tyr Val Pro Ser Gln Glu Arg 
                  115                 120                 125             
          Asn Phe Thr Thr Ala Pro Ala 
              130                 135 
          <![CDATA[<210> 42]]>
          <![CDATA[<211> 114]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 盒2和自切割肽的氨基酸序列]]>
          <![CDATA[<400> 42]]>
          Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val 
          1               5                   10                  15      
          Glu Glu Asn Pro Gly Pro Ile Gln Lys Glu Ile Asp Arg Leu Asn Glu 
                      20                  25                  30          
          Val Ala Lys Asn Leu Asn Glu Ser Leu Ile Asp Leu Gln Glu Leu Gly 
                  35                  40                  45              
          Lys Tyr Glu Gln Tyr Ile Lys Trp Pro Trp Tyr Val Trp Leu Gly Phe 
              50                  55                  60                  
          Ile Ala Gly Leu Ile Ala Ile Val Met Val Thr Ile Leu Leu Cys Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Ile Ala Gln Phe Ala Pro Ser Ala Ser Ala Phe Phe Gly Met Ser 
                          85                  90                  95      
          Arg Ile Gly Met Glu Val Thr Pro Ser Gly Thr Trp Leu Thr Tyr His 
                      100                 105                 110         
          Gly Ala 
          <![CDATA[<210> 43]]>
          <![CDATA[<211> 114]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 盒3和自切割肽的氨基酸序列]]>
          <![CDATA[<400> 43]]>
          Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val 
          1               5                   10                  15      
          Glu Glu Asn Pro Gly Pro Pro Gln Ile Ala Gln Phe Ala Pro Ser Ala 
                      20                  25                  30          
          Ser Ala Phe Phe Gly Met Ser Arg Ile Gly Met Glu Val Thr Pro Ser 
                  35                  40                  45              
          Gly Thr Trp Leu Thr Tyr His Gly Ala Ile Gln Lys Glu Ile Asp Arg 
              50                  55                  60                  
          Leu Asn Glu Val Ala Lys Asn Leu Asn Glu Ser Leu Ile Asp Leu Gln 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Leu Gly Lys Tyr Glu Gln Tyr Ile Lys Trp Pro Trp Tyr Val Trp 
                          85                  90                  95      
          Leu Gly Phe Ile Ala Gly Leu Ile Ala Ile Val Met Val Thr Ile Leu 
                      100                 105                 110         
          Leu Cys 
          <![CDATA[<210> 44]]>
          <![CDATA[<21]]>1> 137]]&gt;
          <br/>&lt;![CDATA[&lt;212&gt; PRT]]&gt;
          <br/>&lt;![CDATA[&lt;213&gt; 人工序列]]&gt;
          <br/>&lt;![CDATA[&lt;220&gt; ]]&gt;
          <br/>&lt;![CDATA[&lt;223&gt; 盒4和自切割肽的氨基酸序列]]&gt;
          <br/>&lt;![CDATA[&lt;400&gt; 44]]&gt;
          <br/><![CDATA[Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val 
          1               5                   10                  15      
          Glu Glu Asn Pro Gly Pro Gln Lys Glu Ile Asp Arg Leu Asn Glu Val 
                      20                  25                  30          
          Ala Lys Asn Leu Asn Glu Ser Leu Ile Asp Leu Gln Glu Leu Gly Lys 
                  35                  40                  45              
          Tyr Glu Gln Tyr Ile Lys Trp Pro Trp Tyr Ile Trp Leu Gly Phe Ile 
              50                  55                  60                  
          Ala Gly Leu Ile Ala Ile Val Met Val Thr Lys Leu Ile Phe Leu Trp 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Leu Trp Pro Val Thr Leu Ala Cys Phe Val Leu Ala Ala Val Tyr 
                          85                  90                  95      
          Arg Ile Asn Trp Ile Thr Asp Ala Ala Leu Ala Leu Leu Leu Leu Asp 
                      100                 105                 110         
          Arg Leu Asn Gln Leu Glu Ser Lys Met Ser Ala Pro His Gly Val Val 
                  115                 120                 125             
          Phe Leu His Val Thr Tyr Val Pro Ala 
              130                 135         
          <![CDATA[<210> 45]]>
          <![CDATA[<211> 144]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 盒5和自切割肽的氨基酸序列]]>
          <![CDATA[<400> 45]]>
          Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val 
          1               5                   10                  15      
          Glu Glu Asn Pro Gly Pro Gln Lys Glu Ile Asp Arg Leu Asn Glu Val 
                      20                  25                  30          
          Ala Lys Asn Leu Asn Glu Ser Leu Ile Asp Leu Gln Glu Leu Gly Lys 
                  35                  40                  45              
          Tyr Glu Gln Tyr Ile Lys Trp Pro Trp Tyr Ile Trp Leu Gly Phe Ile 
              50                  55                  60                  
          Ala Gly Leu Ile Ala Ile Val Met Val Thr Gly Gly Asp Ala Ala Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Ala Leu Leu Leu Leu Asp Arg Leu Asn Gln Leu Glu Ser Lys Met Ser 
                          85                  90                  95      
          Ala Pro His Gly Val Val Phe Leu His Val Thr Tyr Val Pro Ala Gln 
                      100                 105                 110         
          Glu Lys Lys Leu Ile Phe Leu Trp Leu Leu Trp Pro Val Thr Leu Ala 
                  115                 120                 125             
          Cys Phe Val Leu Ala Ala Val Tyr Arg Ile Asn Trp Ile Thr Gly Gly 
              130                 135                 140                 
          <![CDATA[<210> 46]]>
          <![CDATA[<211> 118]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 盒6和自切割肽的氨基酸序列]]>
          <![CDATA[<400> 46]]>
          Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val 
          1               5                   10                  15      
          Glu Glu Asn Pro Gly Pro Gln Lys Glu Ile Asp Arg Leu Asn Glu Val 
                      20                  25                  30          
          Ala Lys Asn Leu Asn Glu Ser Leu Ala Pro His Gly Val Val Phe Leu 
                  35                  40                  45              
          His Val Thr Tyr Val Pro Ala Gln Glu Lys Lys Leu Ile Phe Leu Trp 
              50                  55                  60                  
          Leu Leu Trp Pro Val Thr Leu Ala Cys Phe Val Leu Ala Ala Val Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Ile Asn Trp Ile Thr Asp Ala Ala Leu Ala Leu Leu Leu Leu Asp 
                          85                  90                  95      
          Arg Leu Asn Gln Leu Glu Ser Lys Met Ser Phe Ile Ala Gly Leu Ile 
                      100                 105                 110         
          Ala Ile Val Met Val Thr 
                  115             
          <![CDATA[<210> 47]]>
          <![CDATA[<211> 118]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 盒7和自切割肽的氨基酸序列]]>
          <![CDATA[<400> 47]]>
          Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val 
          1               5                   10                  15      
          Glu Glu Asn Pro Gly Pro Gln Lys Glu Ile Asp Arg Leu Asn Glu Val 
                      20                  25                  30          
          Ala Lys Asn Leu Asn Glu Ser Leu Ala Pro His Gly Val Val Phe Leu 
                  35                  40                  45              
          His Val Thr Tyr Val Pro Ala Gln Glu Lys Asp Ala Ala Leu Ala Leu 
              50                  55                  60                  
          Leu Leu Leu Asp Arg Leu Asn Gln Leu Glu Ser Lys Met Ser Phe Ile 
          65                  70                  75                  80  
          Ala Gly Leu Ile Ala Ile Val Met Lys Leu Ile Phe Leu Trp Leu Leu 
                          85                  90                  95      
          Trp Pro Val Thr Leu Ala Cys Phe Val Leu Ala Ala Val Tyr Arg Ile 
                      100                 105                 110         
          Asn Trp Ile Thr Gly Gly 
                  115             
          <![CDATA[<210> 48]]>
          <![CDATA[<211> 123]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 盒8和自切割肽的氨基酸序列]]>
          <![CDATA[<400> 48]]>
          Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val 
          1               5                   10                  15      
          Glu Glu Asn Pro Gly Pro Gln Lys Glu Ile Asp Arg Leu Asn Glu Val 
                      20                  25                  30          
          Ala Lys Asn Leu Asn Glu Ser Leu Ala Pro His Gly Val Val Phe Leu 
                  35                  40                  45              
          His Val Thr Tyr Val Pro Ala Gln Glu Lys Asn Phe Thr Thr Ala Phe 
              50                  55                  60                  
          Ile Ala Gly Leu Ile Ala Ile Val Met Val Thr Asp Ala Ala Leu Ala 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Leu Leu Leu Asp Arg Leu Asn Gln Leu Glu Ser Lys Lys Leu Ile 
                          85                  90                  95      
          Phe Leu Trp Leu Leu Trp Pro Val Thr Leu Ala Cys Phe Val Leu Ala 
                      100                 105                 110         
          Ala Val Tyr Arg Ile Asn Trp Ile Thr Gly Gly 
                  115                 120             
          <![CDATA[<210> 49]]>
          <![CDATA[<211> 144]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 盒9和自切割肽的氨基酸序列]]>
          <![CDATA[<400> 49]]>
          Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val 
          1               5                   10                  15      
          Glu Glu Asn Pro Gly Pro Arg Asn Arg Phe Leu Tyr Ile Ile Lys Leu 
                      20                  25                  30          
          Ile Phe Leu Trp Leu Leu Trp Pro Val Thr Leu Ala Cys Phe Val Leu 
                  35                  40                  45              
          Ala Ala Val Tyr Arg Ile Asn Trp Lys Glu Ile Asp Arg Leu Asn Glu 
              50                  55                  60                  
          Val Ala Lys Asn Leu Asn Glu Ser Leu Ile Asp Leu Gln Glu Leu Gly 
          65                  70                  75                  80  
          Lys Tyr Glu Gln Tyr Ile Lys Trp Pro Trp Tyr Ile Trp Leu Gly Phe 
                          85                  90                  95      
          Ile Ala Gly Leu Ile Ala Ile Val Met Val Thr Gly Gly Asp Ala Ala 
                      100                 105                 110         
          Leu Ala Leu Leu Leu Leu Asp Arg Leu Asn Gln Leu Glu Ser Lys Met 
                  115                 120                 125             
          Ser Ala Pro His Gly Val Val Phe Leu His Val Thr Tyr Val Pro Ala 
              130                 135                 140                 
          <![CDATA[<210> 50]]>
          <![CDATA[<211> 144]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 盒10和自切割肽的氨基酸序列]]>
          <![CDATA[<400> 50]]>
          Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val 
          1               5                   10                  15      
          Glu Glu Asn Pro Gly Pro Arg Arg Ile Arg Gly Gly Asp Gly Lys Met 
                      20                  25                  30          
          Lys Asp Leu Ser Pro Arg Trp Tyr Phe Tyr Tyr Leu Gly Thr Gly Pro 
                  35                  40                  45              
          Glu Ala Gly Leu Pro Tyr Gly Ala Asn Lys Asp Gly Ile Ile Trp Val 
              50                  55                  60                  
          Ala Thr Glu Gly Ala Leu Asn Thr Pro Lys Asp His Ile Gly Thr Arg 
          65                  70                  75                  80  
          Asn Pro Ala Asn Asn Ala Ala Ile Val Leu Gln Leu Pro Gln Gly Thr 
                          85                  90                  95      
          Thr Leu Pro Lys Gly Lys Leu Gln Asp Val Val Asn Gln Asn Ala Gln 
                      100                 105                 110         
          Ala Leu Asn Thr Leu Val Lys Gln Leu Ser Ser Asn Phe Gly Tyr Gln 
                  115                 120                 125             
          Pro Tyr Arg Val Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala 
              130                 135                 140                 
          <![CDATA[<210> 51]]>
          <![CDATA[<211> 140]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 盒11和自切割肽的氨基酸序列]]>
          <![CDATA[<400> 51]]>
          Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val 
          1               5                   10                  15      
          Glu Glu Asn Pro Gly Pro Arg Arg Ile Arg Gly Gly Asp Gly Lys Met 
                      20                  25                  30          
          Lys Asp Leu Ser Pro Arg Trp Tyr Phe Tyr Tyr Leu Gly Thr Gly Pro 
                  35                  40                  45              
          Glu Arg Ser Gly Ala Arg Ser Lys Gln Arg Arg Pro Gln Gly Leu Pro 
              50                  55                  60                  
          Asn Asn Thr Ala Ser Trp Phe Thr Ala Leu Thr Gln His Gly Lys Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Asp Leu Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val Leu Ser Phe Glu Thr 
                          85                  90                  95      
          Glu Gly Ala Leu Asn Thr Pro Lys Asp His Ile Gly Thr Arg Asn Pro 
                      100                 105                 110         
          Ala Asn Asn Ala Ala Ile Val Leu Gln Leu Pro Gln Gly Thr Thr Leu 
                  115                 120                 125             
          Pro Lys Gly Phe Tyr Ala Glu Gly Ser Arg Gly Gly 
              130                 135                 140 
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          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 盒12和自切割肽的氨基酸序列]]>
          <![CDATA[<400> 52]]>
          Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val 
          1               5                   10                  15      
          Glu Glu Asn Pro Gly Pro Arg Arg Ile Arg Gly Gly Asp Gly Lys Met 
                      20                  25                  30          
          Lys Asp Leu Ser Pro Arg Trp Tyr Phe Tyr Tyr Leu Gly Thr Gly Pro 
                  35                  40                  45              
          Asp Lys Asp Pro Asn Phe Lys Asp Gln Val Ile Leu Leu Asn Lys His 
              50                  55                  60                  
          Ile Asp Ala Gly Lys Leu Gln Asp Val Val Asn Gln Asn Ala Gln Ala 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Asn Thr Leu Val Lys Gln Leu Ser Ser Asn Phe Gly Ala Ile Ser 
                          85                  90                  95      
          Ser Val Leu Asn Asp Ile Leu Ser Arg Leu Asp Lys Val Glu Ala Glu 
                      100                 105                 110         
          Val Gln Ile Asp Arg Leu Ile Thr Gly Arg Leu Gln Ser Leu Gln Thr 
                  115                 120                 125             
          Tyr Val Thr Gln Gln Leu Ile Arg Ala Ala 
              130                 135             
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          1               5                   10                  15      
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                  35                  40                  45              
          Val Asn Gln Asn Ala Gln Ala Leu Asn Thr Leu Val Lys Gln Leu Ser 
              50                  55                  60                  
          Ser Asn Phe Gly Thr Glu Gly Ala Leu Asn Thr Pro Lys Asp His Ile 
          65                  70                  75                  80  
          Gly Thr Arg Asn Pro Ala Asn Asn Ala Ala Ile Val Leu Gln Leu Pro 
                          85                  90                  95      
          Gln Gly Thr Thr Leu Pro Lys Gly Phe Tyr Ala Gly Tyr Gln Pro Tyr 
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          Val Ile Leu Leu Asn Lys His Ile Asp Ala Asn Gly Glu Arg Ser Gly 
                  35                  40                  45              
          Ala Arg Ser Lys Gln Arg Arg Pro Gln Gly Leu Pro Asn Asn Thr Ala 
              50                  55                  60                  
          Ser Trp Phe Thr Ala Leu Thr Gln His Gly Lys Glu Asp Leu Gly Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Pro Tyr Arg Val Val Val Leu Ser Phe Glu Thr Glu Gly Ala Leu 
                          85                  90                  95      
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                      100                 105                 110         
          Ala Ile Val Leu Gln Leu Pro Gln Gly Thr Thr Leu Pro Lys Gly Phe 
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          Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val 
          1               5                   10                  15      
          Glu Glu Asn Pro Gly Pro Asp Asp Lys Asp Pro Asn Phe Lys Asp Gln 
                      20                  25                  30          
          Val Ile Leu Leu Asn Lys His Ile Asp Ala Tyr Lys Thr Phe Pro Pro 
                  35                  40                  45              
          Asp Gly Lys Met Lys Asp Leu Ser Pro Arg Trp Tyr Phe Tyr Tyr Leu 
              50                  55                  60                  
          Gly Thr Gly Pro Glu Lys Leu Gln Asp Val Val Asn Gln Asn Ala Gln 
          65                  70                  75                  80  
          Ala Leu Asn Thr Leu Val Lys Gln Leu Ser Ser Asn Phe Gly Ala Ile 
                          85                  90                  95      
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                      100                 105                 110         
          Glu Val Gln Ile Asp Arg Leu Ile Thr Gly Arg Leu Gln Ser Leu Gln 
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          Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val 
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          Lys Asp Leu Ser Pro Arg Trp Tyr Phe Tyr Tyr Leu Gly Thr Gly Pro 
                  35                  40                  45              
          Glu Arg Gln Gly Thr Asp Tyr Lys His Trp Pro Gln Ile Ala Gln Phe 
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          Ala Pro Ser Ala Ser Ala Phe Phe Gly Met Ser Arg Ile Gly Met Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Val Thr Pro Ser Gly Thr Trp Leu Thr Tyr Thr Gly Ala Ile Lys Leu 
                          85                  90                  95      
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                      100                 105                 110         
          His Ile Asp Ala Tyr Lys Thr Phe Pro Pro Thr Glu Pro Lys Lys Ser 
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          Val Thr Gln Gln Leu Ile Arg Ala Ala 
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          Lys Asp Leu Ser Pro Arg Trp Tyr Phe Tyr Tyr Leu Gly Thr Gly Pro 
                  35                  40                  45              
          Glu Ala Gly Leu Pro Tyr Gly Ala Asn Lys Asp Gly Ile Ile Trp Val 
              50                  55                  60                  
          Ala Thr Glu Gly Ala Leu Asn Thr Pro Lys Asp His Ile Gly Thr Arg 
          65                  70                  75                  80  
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                      20                  25                  30          
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          Asp Asp Lys Asp Pro Asn Phe Lys Asp Gln Val Ile Leu Leu Asn Lys 
                      100                 105                 110         
          His Ile Asp Ala Tyr Lys Thr Phe Pro Pro Thr Glu Pro Lys Lys Leu 
                  115                 120                 125             
          Gln Asp Val Val Asn Gln Asn Ala Gln Ala Leu Asn Thr Leu Val Lys 
              130                 135                 140                 
          Gln Leu Ser Ser Asn Phe Gly Ala Ile Ser Ser Val Leu Asn Asp Ile 
          145                 150                 155                 160 
          Leu Ser Arg Leu Asp Lys Val Glu Ala Glu Val Gln Ile Asp Arg Leu 
                          165                 170                 175     
          Ile Thr Gly Arg Leu Gln Ser Leu Gln Thr Tyr Val Thr Gln Gln Leu 
                      180                 185                 190         
          Ile Arg Ala Ala 
                  195     
          <![CDATA[<210> 59]]>
          <![CDATA[<211> 339]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 編碼盒1的核酸]]>
          <![CDATA[<400> 59]]>
          aatcggaaca ggtttttgta cataataaag cttgttttcc tctggctctt gtggccagta      60
          acacttgctt gttttgtgct tgctgctgtc tacagaatta attgggtggg tgaaactgcc     120
          ctcgcgctat tgctgctaga cagattgaac cagcttgaga gcaaagaaat tgaccgcctc     180
          aatgaggtcg ctaaaaattt aaatgaatca tggctcggct tcattgctgg actaattgcc     240
          atcgtcatgg ttacaccaca agcagccccg catggtgttg tcttcctaca tgtcacgtat     300
          gtgccatccc aggagaggaa cttcaccaca gcgccagca                            339
          <![CDATA[<210> 60]]>
          <![CDATA[<211> 276]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 編碼盒2的核酸]]>
          <![CDATA[<400> 60]]>
          attcaaaaag aaattgaccg cctcaatgag gtcgctaaaa atttaaatga atcactcatt     60
          gaccttcaag aattgggaaa atatgagcaa tatattaaat ggccttggta tgtttggctc    120
          ggcttcattg ctggactaat tgccatcgtc atggttacaa tcttgctttg tccgcaaatt    180
          gcacaatttg ctccaagtgc ctctgcattc tttggaatgt cacgcattgg catggaagtc    240
          acaccttcgg gaacatggct gacttatcat ggagcc                              276
          <![CDATA[<210> 61]]>
          <![CDATA[<211> 276]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 編碼盒3的核酸]]>
          <![CDATA[<400> 61]]>
          ccgcaaattg cacaatttgc tccaagtgcc tctgcattct ttggaatgtc acgcattggc     60
          atggaagtca caccttcggg aacatggctg acttatcatg gagccattca aaaagaaatt    120
          gaccgcctca atgaggtcgc taaaaattta aatgaatcac tcattgacct tcaagaattg    180
          ggaaaatatg agcaatatat taaatggcct tggtatgttt ggctcggctt cattgctgga    240
          ctaattgcca tcgtcatggt tacaatcttg ctttgt                              276
          <![CDATA[<210> 62]]>
          <![CDATA[<211> 345]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 編碼盒4的核酸]]>
          <![CDATA[<400> 62]]>
          caaaaagaaa ttgaccgcct caatgaggtt gccaagaatt taaatgaatc tctcatcgat      60
          ctccaagaac ttggaaagta tgagcagtat ataaaatggc catggtacat ttggctaggt     120
          tttatagctg gcttgattgc catagtaatg gtgacaaagt taattttcct ctggctgtta     180
          tggccagtaa ctttagcttg ttttgtgctt gctgctgttt acagaataaa ttggatcacc     240
          gatgctgctc ttgctttgct gctgcttgac agattgaacc agcttgagag caaaatgtca     300
          gcacctcatg gtgtagtctt cttgcatgtg acttatgtcc ctgca                     345
          <![CDATA[<210> 63]]>
          <![CDATA[<211> 366]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 編碼盒5的核酸]]>
          <![CDATA[<400> 63]]>
          caaaaagaaa ttgaccgcct caatgaggtt gccaagaatt taaatgaatc tctcatcgat      60
          ctccaagaac ttggaaagta tgagcagtat ataaaatggc catggtacat ttggctaggt     120
          tttatagctg gcttgattgc catagtaatg gtgacaggcg gtgatgctgc tcttgctttg     180
          ctgctgcttg acagattgaa ccagcttgag agcaaaatgt cagcacctca tggtgtagtc     240
          ttcttgcatg tgacttatgt ccctgcacaa gaaaagaagt taattttcct ctggctgtta     300
          tggccagtaa ctttagcttg ttttgtgctt gctgctgttt acagaataaa ttggatcacc     360
          ggtgga                                                                366
          <![CDATA[<210> 64]]>
          <![CDATA[<211> 288]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 編碼盒6的核酸]]>
          <![CDATA[<400> 64]]>
          caaaaagaaa ttgaccgcct caatgaggtt gccaagaatt taaatgaatc tctcgcacct     60
          catggtgtag tcttcttgca tgtgacttat gtccctgcac aagaaaagaa gttaattttc    120
          ctctggctgt tatggccagt aactttagct tgttttgtgc ttgctgctgt ttacagaata    180
          aattggatca ccgatgctgc tcttgctttg ctgctgcttg acagattgaa ccagcttgag    240
          agcaaaatgt cttttatagc tggcttgatt gccatagtaa tggtgaca                 288
          <![CDATA[<210> 65]]>
          <![CDATA[<211> 288]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 編碼盒7的核酸]]>
          <![CDATA[<400> 65]]>
          caaaaagaaa ttgaccgcct caatgaggtt gccaagaatt taaatgaatc tctcgcacct     60
          catggtgtag tcttcttgca tgtgacttat gtccctgcac aagaaaagga tgctgctctt    120
          gctttgctgc tgcttgacag attgaaccag cttgagagca aaatgtcttt tatagctggc    180
          ttgattgcca tagtaatgaa gttaattttc ctctggctgt tatggccagt aactttagct    240
          tgttttgtgc ttgctgctgt ttacagaata aattggatca ccggtgga                 288
          <![CDATA[<210> 66]]>
          <![CDATA[<211> 303]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 編碼盒8的核酸]]>
          <![CDATA[<400> 66]]>
          caaaaagaaa ttgaccgcct caatgaggtt gccaagaatt taaatgaatc tctcgcacct     60
          catggtgtag tcttcttgca tgtgacttat gtccctgcac aagaaaagaa cttcacaact    120
          gcttttatag ctggcttgat tgccatagta atggtgacag atgctgctct tgctttgctg    180
          ctgcttgaca gattgaacca gcttgagagc aaaaagttaa ttttcctctg gctgttatgg    240
          ccagtaactt tagcttgttt tgtgcttgct gctgtttaca gaataaattg gatcaccggt    300
          gga                                                                  303
          <![CDATA[<210> 67]]>
          <![CDATA[<211> 366]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 編碼盒9的核酸]]>
          <![CDATA[<400> 67]]>
          aggaataggt ttttgtatat aattaagtta attttcctct ggctgttatg gccagtaact      60
          ttagcttgtt ttgtgcttgc tgctgtttac agaataaatt ggaaagaaat tgaccgcctc     120
          aatgaggttg ccaagaattt aaatgaatct ctcatcgatc tccaagaact tggaaagtat     180
          gagcagtata taaaatggcc atggtacatt tggctaggtt ttatagctgg cttgattgcc     240
          atagtaatgg tgacaggcgg tgatgctgct cttgctttgc tgctgcttga cagattgaac     300
          cagcttgaga gcaaaatgtc agcacctcat ggtgtagtct tcttgcatgt gacttatgtc     360
          cctgca                                                                366
          <![CDATA[<210> 68]]>
          <![CDATA[<211> 366]]>
          <![CDATA[<212> D]]>NA
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 編碼盒10的核酸]]>
          <![CDATA[<400> 68]]>
          agacgaattc gtggtggtga cggtaaaatg aaagatctca gtccaagatg gtatttctac      60
          tacctaggaa ctgggccaga agctggactt ccctatggtg ctaacaaaga cggcatcata     120
          tgggttgcaa ctgagggagc cttgaataca ccaaaagatc acattggcac ccgcaatcct     180
          gctaacaatg ctgcaatcgt gctacaactt cctcaaggaa caacattgcc aaaaggcaaa     240
          cttcaagatg tggtcaacca aaatgcacaa gctttaaaca cgcttgttaa acaacttagc     300
          tccaattttg gttaccaacc atacagagta gtagtacttt cttttgaact tctacatgca     360
          ccagca                                                                366
          <![CDATA[<210> 69]]>
          <![CDATA[<211> 354]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 編碼盒11的核酸]]>
          <![CDATA[<400> 69]]>
          agacgaattc gtggtggtga cggtaaaatg aaagatctca gtccaagatg gtatttctac      60
          tacctaggaa ctgggccaga acgcagtggg gcgcgatcaa aacaacgtcg gccccaaggt     120
          ttacccaata atactgcgtc ttggttcacc gctctcactc aacatggcaa ggaagacctt     180
          ggttaccaac catacagagt agtagtactt tcttttgaaa ctgagggagc cttgaataca     240
          ccaaaagatc acattggcac ccgcaatcct gctaacaatg ctgcaatcgt gctacaactt     300
          cctcaaggaa caacattgcc aaaaggcttc tacgcagaag ggagcagagg cggc           354
          <![CDATA[<210> 70]]>
          <![CDATA[<211> 348]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 編碼盒12的核酸]]>
          <![CDATA[<400> 70]]>
          agacgaattc gtggtggtga cggtaaaatg aaagatctca gtccaagatg gtatttctac      60
          tacctaggaa ctgggccagg aaaacttcaa gatgtggtca accaaaatgc acaagcttta     120
          aacacgcttg ttaaacaact tagctccaat tttggtgcaa tttcaagtgt tttaaatgat     180
          atcctttcac gtcttgacaa agttgaggct gaagtgcaaa ttgataggtt gatcacaggc     240
          agacttcaaa gtttgcagac atatgtgact caacaattaa ttagagctgc agacaaagat     300
          ccaaatttca aagatcaagt cattttgctg aataagcata ttgacgca                  348
          <![CDATA[<210> 71]]>
          <![CDATA[<211> 312]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 編碼盒13的核酸]]>
          <![CDATA[<400> 71]]>
          gatgacaaag atccaaattt caaagatcaa gtcattttgc tgaataagca tattgacgca     60
          ggaaaacttc aagatgtggt caaccaaaat gcacaagctt taaacacgct tgttaaacaa    120
          cttagctcca attttggtac tgagggagcc ttgaatacac caaaagatca cattggcacc    180
          cgcaatcctg ctaacaatgc tgcaatcgtg ctacaacttc ctcaaggaac aacattgcca    240
          aaaggcttct acgcaggtta ccaaccatac agagtagtag tactttcttt tgaacttcta    300
          catgcaccag ca                                                        312
          <![CDATA[<210> 72]]>
          <![CDATA[<211> 342]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 編碼盒14的核酸]]>
          <![CDATA[<400> 72]]>
          gatgacaaag atccaaattt caaagatcaa gtcattttgc tgaataagca tattgacgca      60
          aatggagaac gcagtggggc gcgatcaaaa caacgtcggc cccaaggttt acccaataat     120
          actgcgtctt ggttcaccgc tctcactcaa catggcaagg aagaccttgg ttaccaacca     180
          tacagagtag tagtactttc ttttgaaact gagggagcct tgaatacacc aaaagatcac     240
          attggcaccc gcaatcctgc taacaatgct gcaatcgtgc tacaacttcc tcaaggaaca     300
          acattgccaa aaggcttcta cgcagaaggg agcagaggcg gc                        342
          <![CDATA[<210> 73]]>
          <![CDATA[<211> 351]]>
          <![CDATA[<212> D]]>NA
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 編碼盒15的核酸]]>
          <![CDATA[<400> 73]]>
          gatgacaaag atccaaattt caaagatcaa gtcattttgc tgaataagca tattgacgca      60
          tacaaaacat tcccaccaga cggtaaaatg aaagatctca gtccaagatg gtatttctac     120
          tacctaggaa ctgggccaga aaaacttcaa gatgtggtca accaaaatgc acaagcttta     180
          aacacgcttg ttaaacaact tagctccaat tttggtgcaa tttcaagtgt tttaaatgat     240
          atcctttcac gtcttgacaa agttgaggct gaagtgcaaa ttgataggtt gatcacaggc     300
          agacttcaaa gtttgcagac atatgtgact caacaattaa ttagagctgc a              351
          <![CDATA[<210> 74]]>
          <![CDATA[<211> 441]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 編碼盒16的核酸]]>
          <![CDATA[<400> 74]]>
          agacgaattc gtggtggtga cggtaaaatg aaagatctca gtccaagatg gtatttctac      60
          tacctaggaa ctgggccaga aagacaagga actgattaca aacattggcc gcaaattgca     120
          caatttgccc ccagcgcttc agcgttcttc ggaatgtcgc gcattggcat ggaagtcaca     180
          ccttcgggaa cgtggttgac ctacacaggt gccatcaaat tggatgacaa agatccaaat     240
          ttcaaagatc aagtcatttt gctgaataag catattgacg catacaaaac attcccacca     300
          acagagccta aaaagagtgt tttaaatgat atcctttcac gtcttgacaa agttgaggct     360
          gaagtgcaaa ttgataggtt gatcacaggc agacttcaaa gtttgcagac atatgtgact     420
          caacaattaa ttagagctgc a                                               441
          <![CDATA[<210> 75]]>
          <![CDATA[<211> 483]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 編碼盒17的核酸]]>
          <![CDATA[<400> 75]]>
          agacgaattc gtggtggtga cggtaaaatg aaagatctca gtccaagatg gtatttctac      60
          tacctaggaa ctgggccaga agctggactt ccctatggtg ctaacaaaga cggcatcata     120
          tgggttgcaa ctgagggagc cttgaataca ccaaaagatc acattggcac ccgcaatcct     180
          gctaacaatg ctgcaatcgt gctacaactt cctcaaggaa caacattgcc aaaaggcgct     240
          ttaaacacgc ttgttaaaca acttagctcc aattttggtg caatttcaag tgttttaaat     300
          gatatccttt cacgtcttga caaagttgag gctgaagtgc aaattgatag gttgatcaca     360
          ggcagacttc aaagtttgca gacatatgtg actcaacaat taattagagc tgcagaaatc     420
          agagctggtt accaaccata cagagtagta gtactttctt ttgaacttct acatgcacca     480
          gca                                                                   483
          <![CDATA[<210> 76]]>
          <![CDATA[<211> 522]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 編碼盒18的核酸]]>
          <![CDATA[<400> 76]]>
          agacgaattc gtggtggtga cggtaaaatg aaagatctca gtccaagatg gtatttctac      60
          tacctaggaa ctgggccaga aagacaagga actgattaca aacattggcc gcaaattgca     120
          caatttgccc ccagcgcttc agcgttcttc ggaatgtcgc gcattggcat ggaagtcaca     180
          ccttcgggaa cgtggttgac ctacacaggt gccatcaaat tggatgacaa agatccaaat     240
          ttcaaagatc aagtcatttt gctgaataag catattgacg catacaaaac attcccacca     300
          acagagccta aaaaacttca agatgtggtc aaccaaaatg cacaagcttt aaacacgctt     360
          gttaaacaac ttagctccaa ttttggtgca atttcaagtg ttttaaatga tatcctttca     420
          cgtcttgaca aagttgaggc tgaagtgcaa attgataggt tgatcacagg cagacttcaa     480
          agtttgcaga catatgtgac tcaacaatta attagagctg ca                        522
          <![CDATA[<210> 77]]>
          <![CDATA[<211> 405]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 編碼盒1和自切割肽的核酸]]>
          <![CDATA[<400> 77]]>
          ggaagtggag ccaccaactt cagcctgctg aagcaggctg gagacgtgga ggagaaccct      60
          ggacctaatc ggaacaggtt tttgtacata ataaagcttg ttttcctctg gctcttgtgg     120
          ccagtaacac ttgcttgttt tgtgcttgct gctgtctaca gaattaattg ggtgggtgaa     180
          actgccctcg cgctattgct gctagacaga ttgaaccagc ttgagagcaa agaaattgac     240
          cgcctcaatg aggtcgctaa aaatttaaat gaatcatggc tcggcttcat tgctggacta     300
          attgccatcg tcatggttac accacaagca gccccgcatg gtgttgtctt cctacatgtc     360
          acgtatgtgc catcccagga gaggaacttc accacagcgc cagca                     405
          <![CDATA[<210> 78]]>
          <![CDATA[<211> 342]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 編碼盒2和自切割肽的核酸]]>
          <![CDATA[<400> 78]]>
          ggaagtggag ccaccaactt cagcctgctg aagcaggctg gagacgtgga ggagaaccct      60
          ggacctattc aaaaagaaat tgaccgcctc aatgaggtcg ctaaaaattt aaatgaatca     120
          ctcattgacc ttcaagaatt gggaaaatat gagcaatata ttaaatggcc ttggtatgtt     180
          tggctcggct tcattgctgg actaattgcc atcgtcatgg ttacaatctt gctttgtccg     240
          caaattgcac aatttgctcc aagtgcctct gcattctttg gaatgtcacg cattggcatg     300
          gaagtcacac cttcgggaac atggctgact tatcatggag cc                        342
          <![CDATA[<210> 79]]>
          <![CDATA[<211> 342]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 編碼盒3和自切割肽的核酸]]>
          <![CDATA[<400> 79]]>
          ggaagtggag ccaccaactt cagcctgctg aagcaggctg gagacgtgga ggagaaccct      60
          ggacctccgc aaattgcaca atttgctcca agtgcctctg cattctttgg aatgtcacgc     120
          attggcatgg aagtcacacc ttcgggaaca tggctgactt atcatggagc cattcaaaaa     180
          gaaattgacc gcctcaatga ggtcgctaaa aatttaaatg aatcactcat tgaccttcaa     240
          gaattgggaa aatatgagca atatattaaa tggccttggt atgtttggct cggcttcatt     300
          gctggactaa ttgccatcgt catggttaca atcttgcttt gt                        342
          <![CDATA[<210> 80]]>
          <![CDATA[<211> 411]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 編碼盒4和自切割肽的核酸]]>
          <![CDATA[<400> 80]]>
          ggaagtggag ccaccaactt cagcctgctg aagcaggctg gagacgtgga ggagaaccct      60
          ggacctcaaa aagaaattga ccgcctcaat gaggttgcca agaatttaaa tgaatctctc     120
          atcgatctcc aagaacttgg aaagtatgag cagtatataa aatggccatg gtacatttgg     180
          ctaggtttta tagctggctt gattgccata gtaatggtga caaagttaat tttcctctgg     240
          ctgttatggc cagtaacttt agcttgtttt gtgcttgctg ctgtttacag aataaattgg     300
          atcaccgatg ctgctcttgc tttgctgctg cttgacagat tgaaccagct tgagagcaaa     360
          atgtcagcac ctcatggtgt agtcttcttg catgtgactt atgtccctgc a              411
          <![CDATA[<210> 81]]>
          <![CDATA[<211> 432]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 編碼盒5和自切割肽的核酸]]>
          <![CDATA[<400> 81]]>
          ggaagtggag ccaccaactt cagcctgctg aagcaggctg gagacgtgga ggagaaccct      60
          ggacctcaaa aagaaattga ccgcctcaat gaggttgcca agaatttaaa tgaatctctc     120
          atcgatctcc aagaacttgg aaagtatgag cagtatataa aatggccatg gtacatttgg     180
          ctaggtttta tagctggctt gattgccata gtaatggtga caggcggtga tgctgctctt     240
          gctttgctgc tgcttgacag attgaaccag cttgagagca aaatgtcagc acctcatggt     300
          gtagtcttct tgcatgtgac ttatgtccct gcacaagaaa agaagttaat tttcctctgg     360
          ctgttatggc cagtaacttt agcttgtttt gtgcttgctg ctgtttacag aataaattgg     420
          atcaccggtg ga                                                         432
          <![CDATA[<210> 82]]>
          <![CDATA[<211> 354]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 編碼盒6和自切割肽的核酸]]>
          <![CDATA[<400> 82]]>
          ggaagtggag ccaccaactt cagcctgctg aagcaggctg gagacgtgga ggagaaccct      60
          ggacctcaaa aagaaattga ccgcctcaat gaggttgcca agaatttaaa tgaatctctc     120
          gcacctcatg gtgtagtctt cttgcatgtg acttatgtcc ctgcacaaga aaagaagtta     180
          attttcctct ggctgttatg gccagtaact ttagcttgtt ttgtgcttgc tgctgtttac     240
          agaataaatt ggatcaccga tgctgctctt gctttgctgc tgcttgacag attgaaccag     300
          cttgagagca aaatgtcttt tatagctggc ttgattgcca tagtaatggt gaca           354
          <![CDATA[<210> 83]]>
          <![CDATA[<211> 354]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 編碼盒7和自切割肽的核酸]]>
          <![CDATA[<400> 83]]>
          ggaagtggag ccaccaactt cagcctgctg aagcaggctg gagacgtgga ggagaaccct      60
          ggacctcaaa aagaaattga ccgcctcaat gaggttgcca agaatttaaa tgaatctctc     120
          gcacctcatg gtgtagtctt cttgcatgtg acttatgtcc ctgcacaaga aaaggatgct     180
          gctcttgctt tgctgctgct tgacagattg aaccagcttg agagcaaaat gtcttttata     240
          gctggcttga ttgccatagt aatgaagtta attttcctct ggctgttatg gccagtaact     300
          ttagcttgtt ttgtgcttgc tgctgtttac agaataaatt ggatcaccgg tgga           354
          <![CDATA[<210> 84]]>
          <![CDATA[<211> 369]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 編碼盒8和自切割肽的核酸]]>
          <![CDATA[<400> 84]]>
          ggaagtggag ccaccaactt cagcctgctg aagcaggctg gagacgtgga ggagaaccct      60
          ggacctcaaa aagaaattga ccgcctcaat gaggttgcca agaatttaaa tgaatctctc     120
          gcacctcatg gtgtagtctt cttgcatgtg acttatgtcc ctgcacaaga aaagaacttc     180
          acaactgctt ttatagctgg cttgattgcc atagtaatgg tgacagatgc tgctcttgct     240
          ttgctgctgc ttgacagatt gaaccagctt gagagcaaaa agttaatttt cctctggctg     300
          ttatggccag taactttagc ttgttttgtg cttgctgctg tttacagaat aaattggatc     360
          accggtgga                                                             369
          <![CDATA[<210> 85]]>
          <![CDATA[<211> 432]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]> 
          <![CDATA[<223> 編碼盒9和自切割肽的核酸]]>
          <![CDATA[<400> 85]]>
          ggaagtggag ccaccaactt cagcctgctg aagcaggctg gagacgtgga ggagaaccct      60
          ggacctagga ataggttttt gtatataatt aagttaattt tcctctggct gttatggcca     120
          gtaactttag cttgttttgt gcttgctgct gtttacagaa taaattggaa agaaattgac     180
          cgcctcaatg aggttgccaa gaatttaaat gaatctctca tcgatctcca agaacttgga     240
          aagtatgagc agtatataaa atggccatgg tacatttggc taggttttat agctggcttg     300
          attgccatag taatggtgac aggcggtgat gctgctcttg ctttgctgct gcttgacaga     360
          ttgaaccagc ttgagagcaa aatgtcagca cctcatggtg tagtcttctt gcatgtgact     420
          tatgtccctg ca                                                         432
          <![CDATA[<210> 86]]>
          <![CDATA[<211> 432]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 編碼盒10和自切割肽的核酸]]>
          <![CDATA[<400> 86]]>
          ggaagtggag ccaccaactt cagcctgctg aagcaggctg gagacgtgga ggagaaccct      60
          ggacctagac gaattcgtgg tggtgacggt aaaatgaaag atctcagtcc aagatggtat     120
          ttctactacc taggaactgg gccagaagct ggacttccct atggtgctaa caaagacggc     180
          atcatatggg ttgcaactga gggagccttg aatacaccaa aagatcacat tggcacccgc     240
          aatcctgcta acaatgctgc aatcgtgcta caacttcctc aaggaacaac attgccaaaa     300
          ggcaaacttc aagatgtggt caaccaaaat gcacaagctt taaacacgct tgttaaacaa     360
          cttagctcca attttggtta ccaaccatac agagtagtag tactttcttt tgaacttcta     420
          catgcaccag ca                                                         432
          <![CDATA[<210> 87]]>
          <![CDATA[<211> 42]]>0
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 編碼盒11和自切割肽的核酸]]>
          <![CDATA[<400> 87]]>
          ggaagtggag ccaccaactt cagcctgctg aagcaggctg gagacgtgga ggagaaccct      60
          ggacctagac gaattcgtgg tggtgacggt aaaatgaaag atctcagtcc aagatggtat     120
          ttctactacc taggaactgg gccagaacgc agtggggcgc gatcaaaaca acgtcggccc     180
          caaggtttac ccaataatac tgcgtcttgg ttcaccgctc tcactcaaca tggcaaggaa     240
          gaccttggtt accaaccata cagagtagta gtactttctt ttgaaactga gggagccttg     300
          aatacaccaa aagatcacat tggcacccgc aatcctgcta acaatgctgc aatcgtgcta     360
          caacttcctc aaggaacaac attgccaaaa ggcttctacg cagaagggag cagaggcggc     420
          <![CDATA[<210> 88]]>
          <![CDATA[<211> 414]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 編碼盒12和自切割肽的核酸]]>
          <![CDATA[<400> 88]]>
          ggaagtggag ccaccaactt cagcctgctg aagcaggctg gagacgtgga ggagaaccct      60
          ggacctagac gaattcgtgg tggtgacggt aaaatgaaag atctcagtcc aagatggtat     120
          ttctactacc taggaactgg gccaggaaaa cttcaagatg tggtcaacca aaatgcacaa     180
          gctttaaaca cgcttgttaa acaacttagc tccaattttg gtgcaatttc aagtgtttta     240
          aatgatatcc tttcacgtct tgacaaagtt gaggctgaag tgcaaattga taggttgatc     300
          acaggcagac ttcaaagttt gcagacatat gtgactcaac aattaattag agctgcagac     360
          aaagatccaa atttcaaaga tcaagtcatt ttgctgaata agcatattga cgca           414
          <![CDATA[<210> 89]]>
          <![CDATA[<211> 378]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 編碼盒13和自切割肽的核酸]]>
          <![CDATA[<400> 89]]>
          ggaagtggag ccaccaactt cagcctgctg aagcaggctg gagacgtgga ggagaaccct      60
          ggacctgatg acaaagatcc aaatttcaaa gatcaagtca ttttgctgaa taagcatatt     120
          gacgcaggaa aacttcaaga tgtggtcaac caaaatgcac aagctttaaa cacgcttgtt     180
          aaacaactta gctccaattt tggtactgag ggagccttga atacaccaaa agatcacatt     240
          ggcacccgca atcctgctaa caatgctgca atcgtgctac aacttcctca aggaacaaca     300
          ttgccaaaag gcttctacgc aggttaccaa ccatacagag tagtagtact ttcttttgaa     360
          cttctacatg caccagca                                                   378
          <![CDATA[<210> 90]]>
          <![CDATA[<211> 408]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 編碼盒14和自切割肽的核酸]]>
          <![CDATA[<400> 90]]>
          ggaagtggag ccaccaactt cagcctgctg aagcaggctg gagacgtgga ggagaaccct      60
          ggacctgatg acaaagatcc aaatttcaaa gatcaagtca ttttgctgaa taagcatatt     120
          gacgcaaatg gagaacgcag tggggcgcga tcaaaacaac gtcggcccca aggtttaccc     180
          aataatactg cgtcttggtt caccgctctc actcaacatg gcaaggaaga ccttggttac     240
          caaccataca gagtagtagt actttctttt gaaactgagg gagccttgaa tacaccaaaa     300
          gatcacattg gcacccgcaa tcctgctaac aatgctgcaa tcgtgctaca acttcctcaa     360
          ggaacaacat tgccaaaagg cttctacgca gaagggagca gaggcggc                  408
          <![CDATA[<210> 91]]>
          <![CDATA[<211> 417]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 編碼盒15和自]]>切割肽的核酸
          <![CDATA[<400> 91]]>
          ggaagtggag ccaccaactt cagcctgctg aagcaggctg gagacgtgga ggagaaccct      60
          ggacctgatg acaaagatcc aaatttcaaa gatcaagtca ttttgctgaa taagcatatt     120
          gacgcataca aaacattccc accagacggt aaaatgaaag atctcagtcc aagatggtat     180
          ttctactacc taggaactgg gccagaaaaa cttcaagatg tggtcaacca aaatgcacaa     240
          gctttaaaca cgcttgttaa acaacttagc tccaattttg gtgcaatttc aagtgtttta     300
          aatgatatcc tttcacgtct tgacaaagtt gaggctgaag tgcaaattga taggttgatc     360
          acaggcagac ttcaaagttt gcagacatat gtgactcaac aattaattag agctgca        417
          <![CDATA[<210> 92]]>
          <![CDATA[<211> 507]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 編碼盒16和自切割肽的核酸]]>
          <![CDATA[<400> 92]]>
          ggaagtggag ccaccaactt cagcctgctg aagcaggctg gagacgtgga ggagaaccct      60
          ggacctagac gaattcgtgg tggtgacggt aaaatgaaag atctcagtcc aagatggtat     120
          ttctactacc taggaactgg gccagaaaga caaggaactg attacaaaca ttggccgcaa     180
          attgcacaat ttgcccccag cgcttcagcg ttcttcggaa tgtcgcgcat tggcatggaa     240
          gtcacacctt cgggaacgtg gttgacctac acaggtgcca tcaaattgga tgacaaagat     300
          ccaaatttca aagatcaagt cattttgctg aataagcata ttgacgcata caaaacattc     360
          ccaccaacag agcctaaaaa gagtgtttta aatgatatcc tttcacgtct tgacaaagtt     420
          gaggctgaag tgcaaattga taggttgatc acaggcagac ttcaaagttt gcagacatat     480
          gtgactcaac aattaattag agctgca                                         507
          <![CDATA[<210> 93]]>
          <![CDATA[<211> 549]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 編碼盒17和自切割肽的核酸]]>
          <![CDATA[<400> 93]]>
          ggaagtggag ccaccaactt cagcctgctg aagcaggctg gagacgtgga ggagaaccct      60
          ggacctagac gaattcgtgg tggtgacggt aaaatgaaag atctcagtcc aagatggtat     120
          ttctactacc taggaactgg gccagaagct ggacttccct atggtgctaa caaagacggc     180
          atcatatggg ttgcaactga gggagccttg aatacaccaa aagatcacat tggcacccgc     240
          aatcctgcta acaatgctgc aatcgtgcta caacttcctc aaggaacaac attgccaaaa     300
          ggcgctttaa acacgcttgt taaacaactt agctccaatt ttggtgcaat ttcaagtgtt     360
          ttaaatgata tcctttcacg tcttgacaaa gttgaggctg aagtgcaaat tgataggttg     420
          atcacaggca gacttcaaag tttgcagaca tatgtgactc aacaattaat tagagctgca     480
          gaaatcagag ctggttacca accatacaga gtagtagtac tttcttttga acttctacat     540
          gcaccagca                                                             549
          <![CDATA[<210> 94]]>
          <![CDATA[<211> 588]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 編碼盒18和自切割肽的核酸]]>
          <![CDATA[<400> 94]]>
          ggaagtggag ccaccaactt cagcctgctg aagcaggctg gagacgtgga ggagaaccct      60
          ggacctagac gaattcgtgg tggtgacggt aaaatgaaag atctcagtcc aagatggtat     120
          ttctactacc taggaactgg gccagaaaga caaggaactg attacaaaca ttggccgcaa     180
          attgcacaat ttgcccccag cgcttcagcg ttcttcggaa tgtcgcgcat tggcatggaa     240
          gtcacacctt cgggaacgtg gttgacctac acaggtgcca tcaaattgga tgacaaagat     300
          ccaaatttca aagatcaagt cattttgctg aataagcata ttgacgcata caaaacattc     360
          ccaccaacag agcctaaaaa acttcaagat gtggtcaacc aaaatgcaca agctttaaac     420
          acgcttgtta aacaacttag ctccaatttt ggtgcaattt caagtgtttt aaatgatatc     480
          ctttcacgtc ttgacaaagt tgaggctgaa gtgcaaattg ataggttgat cacaggcaga     540
          cttcaaagtt tgcagacata tgtgactcaa caattaatta gagctgca                  588
          <![CDATA[<210> 95]]>
          <![CDATA[<211> 18]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223>  SARS-CoV-2病毒糖蛋白S(SEQ ID NO: 1) 片段(1180-1197 a.o.)的氨基酸序列 ]]>
          來自參與病毒侵入感染細胞的七肽重複2區
          <![CDATA[<400> 95]]>
          Gln Lys Glu Ile Asp Arg Leu Asn Glu Val Ala Lys Asn Leu Asn Glu 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu 
          <![CDATA[<210> 96]]>
          <![CDATA[<211> 15]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223>  SARS-CoV-2病毒糖蛋白S(SEQ ID NO: 1)片段(1164-1178 a.o.)的氨基酸序列 ]]>
          來自參與病毒侵入感染細胞的七肽重複2區
          <![CDATA[<400> 96]]>
          Glu Ile Asp Arg Leu Asn Glu Val Ala Lys Asn Leu Asn Glu Ser 
          1               5                   10                  15  
          <![CDATA[<210> 97]]>
          <![CDATA[<211> 15]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> SARS-CoV-2病毒糖蛋白S(SEQ ID NO: 1)片段(1199-1213 a.o.)的氨基酸序列 ]]>
          <![CDATA[<400> 97]]>
          Trp Leu Gly Phe Ile Ala Gly Leu Ile Ala Ile Val Met Val Thr 
          1               5                   10                  15  
          <![CDATA[<210> 98]]>
          <![CDATA[<211> 12]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> SARS-CoV-2病毒糖蛋白S(SEQ ID NO: 1)片段(1220-1231 a.o.)的氨基酸序列 ]]>
          <![CDATA[<400> 98]]>
          Phe Ile Ala Gly Leu Ile Ala Ile Val Met Val Thr 
          1               5                   10          
          <![CDATA[<210> 99]]>
          <![CDATA[<211> 10]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> SARS-CoV-2病毒糖蛋白S(SEQ ID NO: 1)片段(1220-1229 a.o.)的氨基酸序列 ]]>
          <![CDATA[<400> 99]]>
          Phe Ile Ala Gly Leu Ile Ala Ile Val Met 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210> 100]]>
          <![CDATA[<211> 28]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> SARS-CoV-2病毒糖蛋白S(SEQ ID NO: 1)片段(1035-1062 a.o.)的氨基酸序列 ]]>
          <![CDATA[<400> 100]]>
          Pro Gln Ala Ala Pro His Gly Val Val Phe Leu His Val Thr Tyr Val 
          1               5                   10                  15      
          Pro Ser Gln Glu Arg Asn Phe Thr Thr Ala Pro Ala 
                      20                  25              
          <![CDATA[<210> 101]]>
          <![CDATA[<211> 23]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> SARS-CoV-2病毒糖蛋白S(SEQ ID NO: 1)片段(1056-1078 a.o.)的氨基酸序列 ]]>
          <![CDATA[<400> 101]]>
          Ala Pro His Gly Val Val Phe Leu His Val Thr Tyr Val Pro Ala Gln 
          1               5                   10                  15      
          Glu Lys Asn Phe Thr Thr Ala 
                      20              
          <![CDATA[<210> 102]]>
          <![CDATA[<211> 18]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> SARS-CoV-2病毒糖蛋白S(SEQ ID NO: 1)片段(1056-1073 a.o.)的氨基酸序列 ]]>
          <![CDATA[<400> 102]]>
          Ala Pro His Gly Val Val Phe Leu His Val Thr Tyr Val Pro Ala Gln 
          1               5                   10                  15      
          Glu Lys 
          <![CDATA[<210> 103]]>
          <![CDATA[<211> 19]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> SARS-CoV-2病毒糖蛋白S(SEQ ID NO: 1)片段(1055-1073 a.o.)的氨基酸序列 ]]>
          <![CDATA[<400> 103]]>
          Ser Ala Pro His Gly Val Val Phe Leu His Val Thr Tyr Val Pro Ala 
          1               5                   10                  15      
          Gln Glu Lys 
          <![CDATA[<210> 104]]>
          <![CDATA[<211> 16]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> SARS-CoV-2病毒糖蛋白S(SEQ ID NO: 1)片段(1055-1070 a.o.)的氨基酸序列 ]]>
          <![CDATA[<400> 104]]>
          Ser Ala Pro His Gly Val Val Phe Leu His Val Thr Tyr Val Pro Ala 
          1               5                   10                  15      
          <![CDATA[<210> 105]]>
          <![CDATA[<211> 19]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> SARS-CoV-2病毒糖蛋白S(SEQ ID NO: 1)片段(504-522 a.o.)的氨基酸序列 ]]>
                來自受體結合結構域(RBD)的區域
          <![CDATA[<400> 105]]>
          Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His 
          1               5                   10                  15      
          Ala Pro Ala 
          <![CDATA[<210> 106]]>
          <![CDATA[<211> 13]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> SARS-CoV-2病毒糖蛋白S(SEQ ID NO: 1)片段(504-516 a.o.)的氨基酸序列 ]]>
           來自受體結合結構域(RBD)的區域
          <![CDATA[<400> 106]]>
          Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val Leu Ser Phe Glu 
          1               5                   10              
          <![CDATA[<210> 107]]>
          <![CDATA[<211> 26]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> SARS-CoV-2病毒糖蛋白S(SEQ ID NO: 1)片段(946-971 a.o.)的氨基酸序列，部分來自七肽重複1區]]>
          <![CDATA[<400> 107]]>
          Gly Lys Leu Gln Asp Val Val Asn Gln Asn Ala Gln Ala Leu Asn Thr 
          1               5                   10                  15      
          Leu Val Lys Gln Leu Ser Ser Asn Phe Gly 
                      20                  25      
          <![CDATA[<210> 108]]>
          <![CDATA[<211> 24]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> SARS-CoV-2病毒糖蛋白S(SEQ ID NO: 1)片段(947-970 a.o.)的氨基酸序列]]>
          　　　來自七肽重複1區
          <![CDATA[<400> 108]]>
          Lys Leu Gln Asp Val Val Asn Gln Asn Ala Gln Ala Leu Asn Thr Leu 
          1               5                   10                  15      
          Val Lys Gln Leu Ser Ser Asn Phe 
                      20                  
          <![CDATA[<210> 109]]>
          <![CDATA[<211> 19]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223>  SARS-CoV-1病毒核蛋白N片段(216-234 a.o.)的氨基酸序列，]]>
                與SARS-CoV-2病毒核蛋白N(SEQ ID NO: 3)的片段部分一致
          <![CDATA[<400> 109]]>
          Gly Glu Thr Ala Leu Ala Leu Leu Leu Leu Asp Arg Leu Asn Gln Leu 
          1               5                   10                  15      
          Glu Ser Lys 
          <![CDATA[<210> 110]]>
          <![CDATA[<211> 21]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> SARS-CoV-2病毒核蛋白N(SEQ ID NO: 3)片段(214-234 а.о.)的氨基酸]]>序列
          <![CDATA[<400> 110]]>
          Gly Gly Asp Ala Ala Leu Ala Leu Leu Leu Leu Asp Arg Leu Asn Gln 
          1               5                   10                  15      
          Leu Glu Ser Lys Met 
                      20      
          <![CDATA[<210> 111]]>
          <![CDATA[<211> 20]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223>  SARS-CoV-2病毒核蛋白N(SEQ ID NO: 3)片段(216-235 а.о.)的氨基酸序列]]>
          <![CDATA[<400> 111]]>
          Asp Ala Ala Leu Ala Leu Leu Leu Leu Asp Arg Leu Asn Gln Leu Glu 
          1               5                   10                  15      
          Ser Lys Met Ser 
                      20  
          <![CDATA[<210> 112]]>
          <![CDATA[<211> 19]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> SARS-CoV-2病毒核蛋白N(SEQ ID NO: 3)片段(216-234 а.о.)的氨基酸序列]]>
          <![CDATA[<400> 112]]>
          Asp Ala Ala Leu Ala Leu Leu Leu Leu Asp Arg Leu Asn Gln Leu Glu 
          1               5                   10                  15      
          Ser Lys Met 
          <![CDATA[<210> 113]]>
          <![CDATA[<211> 18]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> SARS-CoV-2病毒核蛋白N(SEQ ID NO: 3)片段(216-233 а.о.)的氨基酸序列]]>
          <![CDATA[<400> 113]]>
          Asp Ala Ala Leu Ala Leu Leu Leu Leu Asp Arg Leu Asn Gln Leu Glu 
          1               5                   10                  15      
          Ser Lys 
          <![CDATA[<210> 114]]>
          <![CDATA[<211> 27]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> SARS-CoV-2病毒核蛋白N(SEQ ID NO: 3)片段(92-118 а.о.)的氨基酸序列]]>
          <![CDATA[<400> 114]]>
          Arg Arg Ile Arg Gly Gly Asp Gly Lys Met Lys Asp Leu Ser Pro Arg 
          1               5                   10                  15      
          Trp Tyr Phe Tyr Tyr Leu Gly Thr Gly Pro Glu 
                      20                  25          
          <![CDATA[<210> 115]]>
          <![CDATA[<211> 26]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> SARS-CoV-2病毒核蛋白N(SEQ ID NO: 3)片段(92-117 а.о.)的氨基酸序列]]>
          <![CDATA[<400> 115]]>
          Arg Arg Ile Arg Gly Gly Asp Gly Lys Met Lys Asp Leu Ser Pro Arg 
          1               5                   10                  15      
          Trp Tyr Phe Tyr Tyr Leu Gly Thr Gly Pro 
                      20                  25      
          <![CDATA[<210> 116]]>
          <![CDATA[<211> 21]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> SARS-CoV-2病毒核蛋白N(SEQ ID NO: 3)片段(98-119 а.о.)的氨基酸序列]]>
          <![CDATA[<400> 116]]>
          Asp Gly Lys Met Lys Asp Leu Ser Pro Arg Trp Tyr Phe Tyr Tyr Leu 
          1               5                   10                  15      
          Gly Thr Gly Pro Glu 
                      20      
          <![CDATA[<210> 117]]>
          <![CDATA[<211> 35]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> SARS-CoV-1病毒核蛋白N片段(303-337 a.o.)的氨基酸序列，]]>
               與SARS-CoV-2病毒N核蛋白(SEQ ID NO: 3)的片段部分一致
          <![CDATA[<400> 117]]>
          Pro Gln Ile Ala Gln Phe Ala Pro Ser Ala Ser Ala Phe Phe Gly Met 
          1               5                   10                  15      
          Ser Arg Ile Gly Met Glu Val Thr Pro Ser Gly Thr Trp Leu Thr Tyr 
                      20                  25                  30          
          His Gly Ala 
                  35  
          <![CDATA[<210> 118]]>
          <![CDATA[<211> 26]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> SARS-CoV-2病毒核蛋白N(SEQ ID NO: 3)片段(340-365 a.o.)的氨基酸序列]]>
          <![CDATA[<400> 118]]>
          Asp Asp Lys Asp Pro Asn Phe Lys Asp Gln Val Ile Leu Leu Asn Lys 
          1               5                   10                  15      
          His Ile Asp Ala Tyr Lys Thr Phe Pro Pro 
                      20                  25      
          <![CDATA[<210> 119]]>
          <![CDATA[<211> 19]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> SARS-CoV-2病毒核蛋白N(SEQ ID NO: 3)片段(341-359 a.o.)的氨基酸序列]]>
          <![CDATA[<400>]]> 119
          Asp Lys Asp Pro Asn Phe Lys Asp Gln Val Ile Leu Leu Asn Lys His 
          1               5                   10                  15      
          Ile Asp Ala 
          <![CDATA[<210> 120]]>
          <![CDATA[<211> 20]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> SARS-CoV-2病毒核蛋白N(SEQ ID NO:]]> 3)片段(340-359 a.o.)的氨基酸序列
          <![CDATA[<400> 120]]>
          Asp Asp Lys Asp Pro Asn Phe Lys Asp Gln Val Ile Leu Leu Asn Lys 
          1               5                   10                  15      
          His Ile Asp Ala 
                      20  
          <![CDATA[<210> 121]]>
          <![CDATA[<211> 36]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> SARS-CoV-1病毒膜蛋白M片段(40-75 a.o.)的氨基酸序列，]]>
               與SARS-CoV-2病毒膜蛋白M(SEQ ID NO: 5)的片段部分一致
          <![CDATA[<400> 121]]>
          Asn Arg Asn Arg Phe Leu Tyr Ile Ile Lys Leu Val Phe Leu Trp Leu 
          1               5                   10                  15      
          Leu Trp Pro Val Thr Leu Ala Cys Phe Val Leu Ala Ala Val Tyr Arg 
                      20                  25                  30          
          Ile Asn Trp Val 
                  35      
          <![CDATA[<210> 122]]>
          <![CDATA[<211> 34]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> SARS-CoV-2病毒膜蛋白M(SEQ ID NO: 5)片段(42-75 a.o.)的氨基酸序列]]>
          <![CDATA[<400> 122]]>
          Arg Asn Arg Phe Leu Tyr Ile Ile Lys Leu Ile Phe Leu Trp Leu Leu 
          1               5                   10                  15      
          Trp Pro Val Thr Leu Ala Cys Phe Val Leu Ala Ala Val Tyr Arg Ile 
                      20                  25                  30          
          Asn Trp 
          <![CDATA[<210> 123]]>
          <![CDATA[<211> 30]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> SARS-CoV-2病毒膜蛋白M(SEQ ID NO: 5)片段(50-79 a.o.)的氨基酸序列]]>
          <![CDATA[<400> 123]]>
          Lys Leu Ile Phe Leu Trp Leu Leu Trp Pro Val Thr Leu Ala Cys Phe 
          1               5                   10                  15      
          Val Leu Ala Ala Val Tyr Arg Ile Asn Trp Ile Thr Gly Gly 
                      20                  25                  30  
          <![CDATA[<210> 124]]>
          <![CDATA[<211> 28]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> SARS-CoV-2病毒膜蛋白M(SEQ ID NO: 5)片段(50-77 a.o.)的氨基酸序列]]>
          <![CDATA[<400> 124]]>
          Lys Leu Ile Phe Leu Trp Leu Leu Trp Pro Val Thr Leu Ala Cys Phe 
          1               5                   10                  15      
          Val Leu Ala Ala Val Tyr Arg Ile Asn Trp Ile Thr 
                      20                  25
Figure 12_A0101_SEQ_0001
Figure 12_A0101_SEQ_0002
Figure 12_A0101_SEQ_0003
Figure 12_A0101_SEQ_0004
Figure 12_A0101_SEQ_0005
Figure 12_A0101_SEQ_0006
Figure 12_A0101_SEQ_0007
Figure 12_A0101_SEQ_0008
Figure 12_A0101_SEQ_0009
Figure 12_A0101_SEQ_0010
Figure 12_A0101_SEQ_0011
Figure 12_A0101_SEQ_0012
Figure 12_A0101_SEQ_0013
Figure 12_A0101_SEQ_0014
Figure 12_A0101_SEQ_0015
Figure 12_A0101_SEQ_0016
Figure 12_A0101_SEQ_0017
Figure 12_A0101_SEQ_0018
Figure 12_A0101_SEQ_0019
Figure 12_A0101_SEQ_0020
Figure 12_A0101_SEQ_0021
Figure 12_A0101_SEQ_0022
Figure 12_A0101_SEQ_0023
Figure 12_A0101_SEQ_0024
Figure 12_A0101_SEQ_0025
Figure 12_A0101_SEQ_0026
Figure 12_A0101_SEQ_0027
Figure 12_A0101_SEQ_0028
Figure 12_A0101_SEQ_0029
Figure 12_A0101_SEQ_0030
Figure 12_A0101_SEQ_0031
Figure 12_A0101_SEQ_0032
Figure 12_A0101_SEQ_0033
Figure 12_A0101_SEQ_0034
Figure 12_A0101_SEQ_0035
Figure 12_A0101_SEQ_0036
Figure 12_A0101_SEQ_0037
Figure 12_A0101_SEQ_0038
Figure 12_A0101_SEQ_0039
Figure 12_A0101_SEQ_0040
Figure 12_A0101_SEQ_0041
Figure 12_A0101_SEQ_0042
Figure 12_A0101_SEQ_0043
Figure 12_A0101_SEQ_0044
Figure 12_A0101_SEQ_0045

Claims (47)

  1. 一種編碼用於增加流感病毒抗體滴度的重組多肽的分離核酸，所述重組多肽包含： 來自冠狀病毒S糖蛋白的至少1個片段，所述冠狀病毒S糖蛋白具有SEQ ID NO: 1的氨基酸序列； 來自冠狀病毒核蛋白的至少1個片段，所述冠狀病毒核蛋白具有SEQ ID NO: 3的氨基酸序列； 以及，如果需要，來自冠狀病毒膜蛋白的1個片段，所述冠狀病毒膜蛋白具有SEQ ID NO: 5的氨基酸序列， 其中 來自冠狀病毒S糖蛋白的至少1個片段選自：SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 9、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 11、SEQ ID NO: 12或SEQ ID NO: 13； 來自冠狀病毒核蛋白的至少1個片段選自：SEQ ID NO: 15、SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 20或SEQ ID NO: 21； 來自冠狀病毒膜蛋白的片段是SEQ ID NO: 22。
  2. 如請求項1所述的分離核酸，其中所述編碼的多肽包含來自冠狀病毒S糖蛋白的1至4個片段。
  3. 如請求項2所述的分離核酸，其中所述編碼的多肽包含來自冠狀病毒S糖蛋白的1個片段。
  4. 如請求項2所述的分離核酸，其中所述編碼的多肽包含來自冠狀病毒S糖蛋白的2個片段。
  5. 如請求項2所述的分離核酸，其中所述編碼的多肽包含來自冠狀病毒S糖蛋白的3個片段。
  6. 如請求項2所述的分離核酸，其中所述編碼的多肽包含來自冠狀病毒S糖蛋白的4個片段。
  7. 如請求項1所述的分離核酸，其中所述編碼的多肽包含來自冠狀病毒核蛋白的1至4個片段。
  8. 如請求項7所述的分離核酸，其中所述編碼的多肽包含來自冠狀病毒核蛋白的1個片段。
  9. 如請求項7所述的分離核酸，其中所述編碼的多肽包含來自冠狀病毒核蛋白的2個片段。
  10. 如請求項7所述的分離核酸，其中所述編碼的多肽包含來自冠狀病毒核蛋白的3個片段。
  11. 如請求項7所述的分離核酸，其中所述編碼的多肽包含來自冠狀病毒核蛋白的4個片段。
  12. 如請求項1所述的分離核酸，其中所述編碼的多肽包含冠狀病毒膜蛋白的片段。
  13. 如請求項1、3和10中任一項所述的分離核酸，其中所述編碼的多肽包含選自包括SEQ ID NO: 33或SEQ ID NO: 36的氨基酸序列的組的氨基酸序列。
  14. 如請求項1、4和8中任一項所述的分離核酸，其中所述編碼的多肽包含選自包括SEQ ID NO: 24或SEQ ID NO: 25的氨基酸序列的組的氨基酸序列。
  15. 如請求項1、4和10中任一項所述的分離核酸，其中所述編碼的多肽包含選自包括SEQ ID NO: 32或SEQ ID NO: 35的氨基酸序列的組的氨基酸序列。
  16. 如請求項1、5、8和12中任一項所述的分離核酸，其中所述編碼的多肽包含選自包括SEQ ID NO: 23、SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 27、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 30 或SEQ ID NO: 31的氨基酸序列的組的氨基酸序列。
  17. 如請求項1、5和9中任一項所述的分離核酸，其中所述編碼的多肽包含選自包括SEQ ID NO: 34或SEQ ID NO: 37的氨基酸序列的組的氨基酸序列。
  18. 如請求項1、4和11中任一項所述的分離核酸，其中所述編碼的多肽包含SEQ ID NO: 38的氨基酸序列。
  19. 如請求項1、6和10中任一項所述的分離核酸，其中所述編碼的多肽包含SEQ ID NO: 39的氨基酸序列。
  20. 如請求項1、5和11中任一項所述的分離核酸，其中所述編碼的多肽包含SEQ ID NO: 40的氨基酸序列。
  21. 如請求項1所述的分離核酸，其包含選自包括SEQ ID NO: 59-76的核苷酸序列的組的核苷酸序列。
  22. 如請求項1所述的分離核酸，其中所述冠狀病毒是β冠狀病毒。
  23. 如請求項22所述的分離核酸，其中所述β冠狀病毒是SARS-CoV-2病毒。
  24. 一種編碼用於增加流感病毒抗體滴度的重組多肽的分離核酸，所述重組多肽包含來自冠狀病毒蛋白的片段並且包含選自包括SEQ ID NO: 23-40的氨基酸序列的組的氨基酸序列。
  25. 如請求項24所述的分離核酸，其包括選自包括SEQ ID NO: 59-76的核苷酸序列的組的核苷酸序列，其分別編碼SEQ ID NO: 23-40的氨基酸序列。
  26. 如請求項24所述的分離核酸，其中所述冠狀病毒是β冠狀病毒。
  27. 如請求項26所述的分離核酸，其中所述β冠狀病毒是SARS-CoV-2病毒。
  28. 一種用於誘導對流感病毒的特異性免疫和/或預防流感病毒相關疾病的基於流感病毒的分離重組病毒，其包含如請求項1-27中任一項所述的核酸。
  29. 如請求項28所述的基於流感病毒的分離重組病毒，其中所述基於流感病毒的分離重組病毒由減毒流感病毒產生。
  30. 如請求項28所述的基於流感病毒的分離重組病毒，其中所述基於流感病毒的分離重組病毒由H2N2流感病毒產生。
  31. 如請求項28所述的基於流感病毒的分離重組病毒，其中所述基於流感病毒的分離重組病毒由病毒A/Leningrad/134/17/57(H2N2)或其衍生物產生。
  32. 如請求項28所述的基於流感病毒的分離重組病毒，其中如請求項1-27中任一項所述的核酸存在於流感病毒的神經氨酸酶(NA)基因或NS基因中。
  33. 一種用於誘導對流感病毒的特異性免疫和/或預防流感病毒相關疾病的藥物組合物，其包含如請求項28-32中任一項所述的基於流感病毒的重組病毒與一種或多種藥學上可接受的賦形劑的組合。
  34. 如請求項28-32中任一項所述的基於流感病毒的重組病毒或如請求項33所述的藥物組合物於誘導對流感病毒的特異性免疫和/或預防流感病毒相關疾病的用途。
  35. 如請求項34所述的用途，其係用於誘導對流感病毒的特異性免疫和/或預防流感病毒相關疾病和冠狀病毒相關疾病。
  36. 如請求項35所述的用途，其中對冠狀病毒的特異性免疫是特異性T細胞免疫。
  37. 如請求項35所述的用途，其中所述冠狀病毒是β冠狀病毒。
  38. 如請求項35所述的用途，其中所述冠狀病毒選自包括人冠狀病毒OC43、人冠狀病毒HKU1、MERS-CoV、SARS-CoV或SARS-CoV-2的組。
  39. 一種用於誘導對流感病毒的特異性免疫和/或預防流感病毒相關疾病的疫苗，其包含有效量的如請求項28-32中任一項所述的基於流感病毒的重組病毒。
  40. 如請求項39所述的疫苗，用於誘導對流感病毒的特異性免疫和/或預防流感病毒相關疾病和冠狀病毒相關疾病。
  41. 如請求項40所述的疫苗，其中所述冠狀病毒是β冠狀病毒。
  42. 如請求項40所述的疫苗，其中所述冠狀病毒選自包括人冠狀病毒OC43、人冠狀病毒HKU1、MERS-CoV、SARS-CoV或SARS-CoV-2的組。
  43. 如請求項40所述的疫苗，其中對冠狀病毒的特異性免疫是特異性T細胞免疫。
  44. 一種誘導對流感病毒的特異性免疫和/或預防流感病毒相關疾病，或誘導對流感病毒和冠狀病毒的特異性免疫，或聯合預防流感病毒相關疾病和冠狀病毒相關疾病的方法，其包括將有效量的如請求項28-32中任一項所述的基於流感病毒的重組病毒、如請求項33所述的藥物組合物或如請求項39所述的疫苗給予哺乳動物生物體。
  45. 如請求項44所述的方法，其中所述冠狀病毒是β冠狀病毒。
  46. 如請求項44所述的方法，其中所述冠狀病毒選自包括人冠狀病毒OC43、人冠狀病毒HKU1、MERS-CoV、SARS-CoV或SARS-CoV-2的組。
  47. 如請求項44所述的方法，其中對冠狀病毒的特異性免疫是特異性T細胞免疫。
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