TW202304980A - 經修飾的抗ｔｓｌｐ抗體 - Google Patents

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Abstract

本申請總體上關於，當長時間儲存時，與泰派魯單抗相比具有增加的穩定性的抗TSLP抗體泰派魯單抗之組成物或變體。

Description

經修飾的抗TSLP抗體
本申請總體上關於抗TSLP抗體泰派魯單抗（tezepelumab）之組成物和變體，當長時間儲存時，與泰派魯單抗相比該組成物和變體具有增加的穩定性。
胸腺基質淋巴細胞生成素（TSLP）係對環境和促炎性刺激起響應而產生的上皮細胞衍生的細胞介素，引起多種炎性細胞和下游途徑之活化（Soumelis等人. Nat Immunol [自然免疫學] 2002;3:673-80；Allakhverdi等人. J Exp Med [實驗醫學雜誌] 2007;204:253-8）。TSLP在患有氣喘的患者之氣道中有所增加，並且與Th2細胞介素和趨化介素表現（Shikotra等人. J Allergy Clin Immunol [過敏臨床免疫雜誌] 2012;129:104-11 e1-9）以及疾病嚴重度（Ying等人. J Immunol [免疫學雜誌] 2005;174:8183-90；Ying等人. J Immunol [免疫學雜誌] 2008;181:2790-8）相關。雖然TSLP對Th2免疫力之調節很重要，但其還可能在其他炎症途徑中起關鍵作用，並且因此與多種氣喘表現型有關。
泰派魯單抗為結合TSLP的人免疫球蛋白G2（IgG2）單株抗體（mAb），可防止TSLP與TSLP受體複合物相互作用。在輕度異位性氣喘患者中的概念驗證研究證明，泰派魯單抗抑制早期和晚期氣喘響應，並且在吸入性過敏原激發後抑制Th2炎症之生物標誌物（Gauvreau等人. N Engl J Med [新英格蘭醫學雜誌] 2014;370:2102-10）。
隨著時間的推移，監測配製物中之抗體治療劑對於確定減少治療劑之任何分解並保持產品完整性的儲存條件非常重要。本揭露提供了抗TSLP抗體的屬性之研究，該等屬性可以在儲存中隨時間改變，並且該等屬性可以有利於或不利於抗體穩定性。
在一方面，本揭露提供了抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段，該抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段包含 (A) 輕鏈可變結構域，該輕鏈可變結構域包含：(i) 含有SEQ ID NO: 3中所示的胺基酸序列之輕鏈CDR1序列；(ii) 含有SEQ ID NO: 4中所示的胺基酸序列之輕鏈CDR2序列；以及 (iii) 含有SEQ ID NO: 5中所示的胺基酸序列之輕鏈CDR3序列；和 (B) 重鏈可變結構域，該重鏈可變結構域包含：(i) 含有SEQ ID NO: 6中所示的胺基酸序列之重鏈CDR1序列；(ii) 包含在SEQ ID NO: 7中所示的以下殘基D54或G55之一處具有突變的胺基酸序列之重鏈CDR2序列，以及 (iii) 包含SEQ ID NO: 8中所示的胺基酸序列之重鏈CDR3序列。在多個實施方式中，HCDR2具有序列VIWYX 1X 2SNKHYADSVKG（SEQ ID NO: 13），其中X 1為D或E，並且X 2為G或A。在多個實施方式中，HCDR2具有以下序列：VIWYEGSNKHYADSVKG（SEQ ID NO: 14）、VIWYDASNKHYADSVKG（SEQ ID NO: 15）或VIWYEASNKHYADSVKG（SEQ ID NO: 16）。
在多個實施方式中，HCDR2中之突變為D54E。在多個實施方式中，HCDR2中之突變為G55A。在多個實施方式中，抗TSLP抗原結合蛋白或其片段視需要包含在SEQ ID NO: 4之以下殘基LCDR2 D49、D50或S51之一處的突變。在多個實施方式中，LCDR2之突變為D49E、D50E或S51A之一或多個。在多個實施方式中，LCDR2具有序列X 1X 2X 3DRPS，其中X 1為D或E，X 2為D或E，並且X 3為S或A（SEQ ID NO: 17）。在多個實施方式中，LCDR2具有以下序列：EDSDRPS（SEQ ID NO: 18）、DESDRPS（SEQ ID NO: 19）、EESDRPS（SEQ ID NO: 20）、DDADRPS（SEQ ID NO: 21）、DEADRPS（SEQ ID NO: 22）、EDADRPS（SEQ ID NO: 23）或EEADRPS（SEQ ID NO: 24）。
在多個實施方式中，本揭露提供了抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段，該抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段包含 (A) 輕鏈可變結構域，該輕鏈可變結構域包含：(i) 含有SEQ ID NO: 3中所示的胺基酸序列之輕鏈CDR1序列；(ii) 輕鏈CDR2序列，該序列包含在SEQ ID NO: 4之以下殘基D49、D50或S51之一處具有突變的胺基酸序列；以及 (iii) 含有SEQ ID NO: 5中所示的胺基酸序列之輕鏈CDR3序列；和 (B) 重鏈可變結構域，該重鏈可變結構域包含：(i) 含有SEQ ID NO: 6中所示的胺基酸序列之重鏈CDR1序列；(ii) 含有SEQ ID NO: 7中所示的胺基酸序列之重鏈CDR2序列，以及 (iii) 含有SEQ ID NO: 8中所示的胺基酸序列之重鏈CDR3序列。
在多個實施方式中，LCDR2具有序列X 1X 2X 3DRPS，其中X 1為D或E，X 2為D或E，並且X 3為S或A（SEQ ID NO: 17）。視需要地，LCDR2具有以下序列：EDSDRPS（SEQ ID NO: 18）、DESDRPS（SEQ ID NO: 19）、EESDRPS（SEQ ID NO: 20）、DDADRPS（SEQ ID NO: 21）、DEADRPS（SEQ ID NO: 22）、EDADRPS（SEQ ID NO: 23）或EEADRPS（SEQ ID NO: 24）。在多個實施方式中，LCDR2中之突變為D49E。在多個實施方式中，LCDR2中之突變為D50E。在多個實施方式中，LCDR2中之突變為S51A。在多個實施方式中，抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段視需要地包含SEQ ID NO: 7中列出的HCDR2的以下殘基D54或G55之一的突變。在多個實施方式中，HCDR2中之突變為SEQ ID NO: 7中的D54E或G55A之一或多個。在多個實施方式中，HCDR2具有序列VIWYX 1X 2SNKHYADSVKG（SEQ ID NO: 13），其中X 1為D或E，並且X 2為G或A。在多個實施方式中，HCDR2具有以下序列：VIWYEGSNKHYADSVKG（SEQ ID NO: 14）、VIWYDASNKHYADSVKG（SEQ ID NO: 15）或VIWYEASNKHYADSVKG（SEQ ID NO: 16）。
在多個實施方式中，本揭露提供了抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段，該抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段包含 (A) 輕鏈可變結構域，該輕鏈可變結構域選自由以下組成之群組：i. 與SEQ ID NO: 12具有至少80%同一性的胺基酸序列；ii. 由與SEQ ID NO: 11具有至少80%同一性的多核苷酸序列編碼的胺基酸序列；或iii. 由在中等嚴格條件下與由SEQ ID NO: 11組成的多核苷酸補體雜交的多核苷酸編碼的胺基酸序列；或 (B) 重鏈可變結構域，該重鏈可變結構域選自由以下組成之群組：i. 與SEQ ID NO: 10具有至少80%同一性的胺基酸序列；ii. 由與SEQ ID NO: 9具有至少80%同一性的多核苷酸序列編碼的胺基酸序列；或iii. 由在中等嚴格條件下與由SEQ ID NO: 9組成的多核苷酸補體雜交的多核苷酸編碼的胺基酸序列；或 (C) (A) 之輕鏈可變結構域和 (B) 之重鏈可變結構域，其中抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段保留抗TSLP抗原結合蛋白或其片段之一或多個CDR，並且包含SEQ ID NO: 7的HCDR2 D54或G55的一或多個之突變，或SEQ ID NO: 4的LCDR2 D49、D50或S51的一或多個之突變。
在多個實施方式中，抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段包含重鏈和輕鏈，該重鏈包含SEQ ID NO: 10或SEQ ID NO: 25-28的胺基酸序列，該輕鏈包含SEQ ID NO: 12或SEQ ID NO: 29-36的胺基酸序列。
在多個實施方式中，抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段包含抗TSLP抗原結合蛋白，該抗TSLP抗原結合蛋白選自由以下組成之群組：人抗體、人源化抗體、嵌合抗體、單株抗體、重組抗體、抗原結合抗體片段、單鏈抗體、單體抗體、雙抗體、三抗體、四抗體、Fab片段、IgM抗體、IgG1抗體、IgG2抗體、IgG3抗體和IgG4抗體。
在多個實施方式中，免疫球蛋白、抗原結合蛋白或抗體為人抗體。在多個實施方式中，抗體為IgG2抗體。在多個實施方式中，抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段特異性結合如SEQ ID NO: 2之胺基酸29-159中所示的TSLP多肽。在多個實施方式中，抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段之兩個結合位點具有與TSLP的相同的結合。
在多個實施方式中，抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段以數值不超過10 -8M Kd之親和力結合TSLP。
進一步考慮了組成物和藥學上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑，該組成物包含本文所述之抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段。
本揭露也提供了包含多核苷酸序列之分離的核酸，該多核苷酸序列編碼本文所述之免疫球蛋白、抗原結合蛋白或抗體之輕鏈可變結構域、重鏈可變結構域或兩者。
本揭露進一步考慮了包含核酸之重組表現載體，該核酸編碼如本文所述之抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或抗體。還提供了包含表現載體之宿主細胞。
本文進一步考慮了產生特異性結合包含SEQ ID NO: 2之胺基酸29-159的TSLP多肽之免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段之方法，該方法包括在允許宿主細胞表現該免疫球蛋白、抗原結合蛋白或抗體的條件下孵育該宿主細胞，其中所述宿主細胞包含 (i) 編碼如本文所述之抗原結合蛋白之輕鏈可變結構域之重組表現載體和編碼如本文所述之抗原結合蛋白之重鏈可變結構域之重組表現載體，或 (ii) 編碼如本文所述之免疫球蛋白、抗原結合蛋白或抗體之輕鏈可變結構域和重鏈可變結構域的兩者之重組表現載體。
在多個實施方式中，抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段與具有SEQ ID NO: 10和SEQ ID NO: 12中列出的胺基酸序列的抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段相比，在25°C下具有增加的穩定性。在多個實施方式中，抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段與具有SEQ ID NO: 10和SEQ ID NO: 12中列出的胺基酸序列的抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段相比，在4週後在40°C下具有增加的穩定性。在多個實施方式中，抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段與具有SEQ ID NO: 10和SEQ ID NO: 12中列出的胺基酸序列的抗TSLP抗原結合蛋白或其片段相比，在4週後在40°C下具有降低的高分子量種類。
在多個實施方式中，抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段與具有SEQ ID NO: 10和SEQ ID NO: 12中列出的胺基酸序列的抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段相比，在50°C下具有降低的異構化。
在多個實施方式中，如藉由SEC（例如抗體-抗原複合物之SEC）確定的，在約25°C下儲存至少2週之後（視需要地，至少1個月之後、至少2個月之後、至少3個月之後、至少4個月之後、至少5個月之後或至少6個月之後），小於2%的該抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段顯示出異構化。在多個實施方式中，如藉由SEC確定的，在2°C至8°C下儲存約22個月至約36個月之後，隨後在約25°C下儲存至少2週或至少1個月或至少2個月或至少3個月，小於2%的抗原結合蛋白或其片段顯示出異構化。
本文還提供了用於治療受試者的炎性疾病之方法，該方法包括向該受試者投與治療有效量的如本文所述之免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段或其組成物。在多個實施方式中，炎性疾病選自由以下組成之群組：氣喘、異位性皮膚炎、慢性阻塞性肺病（COPD）、嗜酸性球性食道炎（EoE）、鼻息肉、慢性自發性蕁麻疹、Ig驅動的疾病、IgA腎病、狼瘡性腎炎、嗜酸性球性胃炎、無鼻息肉的慢性鼻竇炎和特發性肺纖維化（IPF）。在多個實施方式中，氣喘為輕度、中度或重度氣喘。在多個實施方式中，氣喘係重度氣喘。在多個實施方式中，氣喘為嗜酸性球性氣喘或非嗜酸性球性氣喘。
在多個實施方式中，該方法包括以每2週或每4週的間隔投與該組成物。在多個實施方式中，將該組成物投與至少4個月、6個月、9個月、1年或更長時間的時期。
在多個實施方式中，本揭露提供了製備組成物之方法，該組成物包含多個抗TSLP單株抗體或其抗原結合片段，每種抗體或其抗原結合片段包含：含有SEQ ID NO: 3中所示的胺基酸序列之輕鏈CDR1序列；含有SEQ ID NO: 4中所示的胺基酸序列之輕鏈CDR2序列；含有SEQ ID NO: 5中所示的胺基酸序列之輕鏈CDR3序列；含有SEQ ID NO: 6中所示的胺基酸序列之重鏈CDR1序列；含有SEQ ID NO: 7中所示的胺基酸序列之重鏈CDR2序列；以及含有SEQ ID NO: 8中所示的胺基酸序列之重鏈CDR3序列，該方法包括富集IgG2抗TSLP單株抗體之組成物，該抗體包含以下的至少一種：相對於SEQ ID NO: 7中列出的HCDR2中的異天冬胺酸（isoAsp）或環狀天冬胺酸（cAsp），在HC位置54處的L-天冬胺酸；相對於SEQ ID NO: 8中列出的HCDR3中的氧化的W102，非氧化的HC W102；相對於SEQ ID NO: 4中列出的LCDR2中的isoAsp或cAsp，在LC位置49或位置50處的L-天冬胺酸；相對於LC SEQ ID NO: 12中列出的脫醯胺化N65之LC N65；或相對於isoAsp或cAsp，SEQ ID NO: 5中列出的LCDR3之在LC位置91處的L-天冬胺酸。cAsp也稱為琥珀醯亞胺，相對於Asp或isoAsp，其特徵為H 2O損失。
在多個實施方式中，小於2.0%的抗TSLP單株抗體包含異構化的HC D54。在多個實施方式中，不超過0.9%的抗TSLP單株抗體包含異構化的HC D54。在多個實施方式中，不超過2%的抗TSLP單株抗體包含氧化的HC W102。在多個實施方式中，小於2.0%的抗TSLP單株抗體包含異構化的LC D49或D50。在多個實施方式中，不超過0.9%的抗TSLP單株抗體包含異構化的LC D49或D50。在多個實施方式中，不超過0.5%的抗TSLP單株抗體包含脫醯胺化的LC N65。在多個實施方式中，不超過0.9%的抗TSLP單株抗體包含異構化的LC D91。
進一步考慮的組成物包含抗TSLP單株抗體，每種抗體包含：含有SEQ ID NO: 3中所示的胺基酸序列之輕鏈CDR1序列；含有SEQ ID NO: 4中所示的胺基酸序列之輕鏈CDR2序列；含有SEQ ID NO: 5中所示的胺基酸序列之輕鏈CDR3序列；含有SEQ ID NO: 6中所示的胺基酸序列之重鏈CDR1序列；含有SEQ ID NO: 7中所示的胺基酸序列之重鏈CDR2序列；以及含有SEQ ID NO: 8中所示的胺基酸序列之重鏈CDR3序列，該組成物包含有限含量的異構化的HC D54（SEQ ID NO: 7）和/或有限含量的異構化的LC D49或D50（SEQ ID NO: 4），對該組成物之抗TSLP單株抗體以數值小於或等於10 -8M的Kd結合TLSP有效。
還提供了包含IgG2抗TSLP單株抗體之組成物，每種抗體包含含有SEQ ID NO: 3中所示的胺基酸序列之輕鏈CDR1序列；含有SEQ ID NO: 4中所示的胺基酸序列之輕鏈CDR2序列；含有SEQ ID NO: 5中所示的胺基酸序列之輕鏈CDR3序列；含有SEQ ID NO: 6中所示的胺基酸序列之重鏈CDR1序列；含有SEQ ID NO: 7中所示的胺基酸序列之重鏈CDR2序列；以及含有SEQ ID NO: 8中所示的胺基酸序列之重鏈CDR3序列，其中以下的至少一種：不超過0.9%的抗TSLP單株抗體包含異構化的HC D54；不超過2%的抗TSLP單株抗體包含氧化的HC W102；不超過6.7%的抗TSLP單株抗體包含異構化的LC D49或D50；不超過0.5%的抗TSLP單株抗體包含脫醯胺化的LC N65；或不超過0.9%的抗TSLP單株抗體包含異構化的LC D91。在多個實施方式中，不超過0.9%的抗TSLP單株抗體包含異構化的HC D54。在多個實施方式中，不超過2%的抗TSLP單株抗體包含氧化的HC W102。在多個實施方式中，不超過0.9%的抗TSLP單株抗體包含異構化的LC D49或LC D50。在多個實施方式中，不超過0.5%的抗TSLP單株抗體包含脫醯胺化的LC N65。在多個實施方式中，不超過0.9%的抗TSLP單株抗體包含異構化的LC D91。
還提供了包含IgG2抗TSLP單株抗體之組成物，每種抗體包含含有SEQ ID NO: 3中所示的胺基酸序列之輕鏈CDR1序列；含有SEQ ID NO: 4中所示的胺基酸序列之輕鏈CDR2序列；含有SEQ ID NO: 5中所示的胺基酸序列之輕鏈CDR3序列；含有SEQ ID NO: 6中所示的胺基酸序列之重鏈CDR1序列；含有SEQ ID NO: 7中所示的胺基酸序列之重鏈CDR2序列；以及含有SEQ ID NO: 8中所示的胺基酸序列之重鏈CDR3序列，其中以下的至少一種：不超過0.9%的抗TSLP單株抗體包含異構化的HC D54；不超過2%的抗TSLP單株抗體包含氧化的HC W102；不超過12.9%的抗TSLP單株抗體包含異構化的LC D49或D50；不超過0.5%的抗TSLP單株抗體包含脫醯胺化的LC N65；或不超過0.9%的抗TSLP單株抗體包含異構化的LC D91。在多個實施方式中，不超過0.9%的抗TSLP單株抗體包含異構化的HC D54。在多個實施方式中，不超過2%的抗TSLP單株抗體包含氧化的HC W102。在多個實施方式中，不超過0.9%的抗TSLP單株抗體包含異構化的LC D49或LC D50。在多個實施方式中，不超過0.5%的抗TSLP單株抗體包含脫醯胺化的LC N65。在多個實施方式中，不超過0.9%的抗TSLP單株抗體包含異構化的LC D91。
在多個實施方式中，抗TSLP抗體包含在HC D54處的L-天冬胺酸和在LC D49或D50處的L-天冬胺酸之組合。在多個實施方式中，抗TSLP抗體富集HC D54處的L-天冬胺酸，比isoAsp的水平高至少6倍。
在多個實施方式中，抗體為IgG2抗體。在多個實施方式中，抗TSLP抗體包含SEQ ID NO: 10或SEQ ID NO: 25-28中列出的重鏈可變區和SEQ ID NO: 12或SEQ ID NO: 29-36中列出的輕鏈可變區，並且包含本文所述之一或多種的序列修飾。
本揭露還提供了包含抗TSLP單株抗體之組成物，每種抗體包含含有SEQ ID NO: 3中所示的胺基酸序列之輕鏈CDR1序列；含有SEQ ID NO: 4中所示的胺基酸序列之輕鏈CDR2序列；含有SEQ ID NO: 5中所示的胺基酸序列之輕鏈CDR3序列；含有SEQ ID NO: 6中所示的胺基酸序列之重鏈CDR1序列；含有SEQ ID NO: 7中所示的胺基酸序列之重鏈CDR2序列；以及含有SEQ ID NO: 8中所示的胺基酸序列之重鏈CDR3序列，其中以下的至少一種：大於98%的組成物之抗TSLP單株抗體包含，相對於在位置54處的isoAsp或cAsp，在HC位置54處的L-天冬胺酸（SEQ ID NO: 7）；至少99%的組成物之抗TSLP單株抗體包含相對於氧化的W102的非氧化的HC W102（SEQ ID NO: 8）；至少97%的組成物之抗TSLP單株抗體包含，相對於在位置49或50處的isoAsp或cAsp，在LC位置49或位置50處的L-天冬胺酸（SEQ ID NO: 4）；至少99.1%的該組成物之抗TSLP單株抗體包含相對於脫醯胺化的LC N65之LC N65（SEQ ID NO: 12）；或至少99.1%的組成物之抗TSLP單株抗體包含，相對於在位置91處的isoAsp或cAsp，在LC位置91處的L-天冬胺酸（SEQ ID NO: 5）。
本揭露還提供了組成物，該組成物包含如本文所述之抗TSLP抗體或其抗原結合片段，用於在治療如本文所述之炎性疾病中使用。在某些實施方式中，本揭露提供了包含如本文所述之抗TSLP抗體或其抗原結合片段之組成物在製備用於治療炎性疾病的藥物中之用途。
還考慮了注射器，例如一次性使用或載藥注射器、無菌密封容器（例如小瓶、瓶子、容器、和/或套組（kit）或包裝），該注射器包含上述抗體或組成物中之任何一種，視需要地帶有合適的使用說明。
應當理解，本文所述之每個特徵或實施方式或組合係本發明任何方面之非限制性、說明性示例，並且因此，意在與本文所述之任何其他特徵或實施方式或組合相結合。例如，在使用如「一個實施方式」、「一些實施方式」、「某些實施方式」、「另外的實施方式」、「特定的示例性實施方式」和/或「另一個實施方式」的語言描述特徵的情況下，該等實施方式的類型中之每一種都是旨在與本文所述之任何其他特徵或特徵之組合相結合而不必列出每一種可能的組合的特徵之非限制性示例。此類特徵或特徵之組合適用於本發明之任何方面。在揭露了落入範圍內的值之實例的情況下，該等實例中之任何一個都被考慮為範圍之可能端點，此類端點之間的任何和所有數值都被考慮，並且考慮了上下端點之任何和所有組合。
本文的標題係為了方便讀者，而不旨在進行限制。本發明之其他方面、實施方式和變化將自實施方式和/或附圖和/或申請專利範圍變得顯而易見。
相關申請的交叉引用
本申請要求於2021年4月23日提交的美國臨時專利申請案號63/178,915之優先權，該臨時專利申請藉由引用以其全文併入本文。
進一步預期用泰派魯單抗治療可消除每日疾病活動度，並且使更多患者不用類固醇或減少使用類固醇治療炎性疾病（如氣喘）之必要。
除非另有說明，否則用於本申請（包括說明書和申請專利範圍）中的以下術語具有以下給出的定義。
除非上下文另外清楚規定，否則如說明書及所附申請專利範圍中所用，不定冠詞「一個/種（a/an）」及定冠詞「該/該等（the）」包括複數以及單數指示物。
除非另外定義，否則本文所用的所有技術和科學術語均具有與本揭露所屬領域的普通技術者通常所理解的含義相同的含義。以下參考文獻為技術者提供關於本揭露中使用的許多術語之通用定義，包括但不限於：Singleton等人, DICTIONARY OF MICROBIOLOGY AND MOLECULAR BIOLOGY [微生物學與分子生物學詞典]（第2版1994）；THE CAMBRIDGE DICTIONARY OF SCIENCE AND TECHNOLOGY [劍橋科技詞典]（Walker編輯, 1988）；THE GLOSSARY OF GENETICS [遺傳學術語表], 第5版, R. Rieger等人（編輯）, Springer Verlag [施普林格出版公司] (1991)；以及Hale和Marham, THE HARPER COLLINS DICTIONARY OF BIOLOGY [哈珀·柯林斯生物學詞典] (1991)。
術語「約」或「大約」意指如由熟悉該項技術者所確定的具體值之可接受誤差，其部分地取決於如何測量或確定該值。在某些實施方式中，術語「約」或「大約」意指1、2、3或4個標準偏差內。在某些實施方式中，術語「約」或「大約」意指給定值或範圍之30%、25%、20%、15%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%、0.5%或0.05%內。每當術語「約」或「大約」在一系列兩個或更多個數值中之第一數值前面時，應瞭解術語「約」或「大約」適用於該系列中之每個數值。
術語「炎性疾病」係指涉及由免疫系統攻擊人體自身的細胞或組織引起的異常炎症之醫學病症，這可能導致慢性疼痛、發紅、腫脹、僵硬、以及對正常組織的損害。炎性疾病包括例如氣喘、慢性消化性潰瘍、結核病、牙周炎、竇炎、活動性肝炎、僵直性脊柱炎、類風濕性關節炎、慢性阻塞性肺病（COPD）、克羅恩病、潰瘍性結腸炎、骨關節炎、動脈粥樣硬化、全身性紅斑狼瘡、異位性皮膚炎、嗜酸性球性食道炎（EoE）、鼻息肉、慢性自發性蕁麻疹、Ig驅動的疾病（例如IgA腎病和狼瘡性腎炎）、嗜酸性球性胃炎、無鼻息肉的慢性鼻竇炎、特發性肺纖維化（IPF）等。在示例性方面中，該炎性疾病係氣喘、異位性皮膚炎、或COPD。在示例性方面中，該炎性疾病係氣喘，並且在一些情況下，該氣喘係重度氣喘、嗜酸性球性氣喘、非嗜酸性球性氣喘、或低嗜酸性球性氣喘。
如本文所用的術語「氣喘」係指過敏性氣喘、非過敏性氣喘、嗜酸性球性氣喘和非嗜酸性球性氣喘。
如本文所用的術語「過敏性氣喘」係指由一或多種吸入性過敏原引發的氣喘。此類患者對引發氣喘響應的一或多種過敏原具有陽性的IgE螢光酶免疫測定（FEIA）水平。通常，大部分過敏性氣喘與Th2型炎症有關。
術語「非過敏性氣喘」係指在診斷時具有低嗜酸性球性、低Th2或低IgE的患者。通常，在IgE螢光酶免疫測定（FEIA）中，患有「非過敏性氣喘」的患者對包括地區特異性過敏原的一組過敏原的響應呈陰性。除低IgE之外，那些患者經常在診斷時具有低嗜酸性球計數或無嗜酸性球計數和低Th2計數。
如本文所用的術語「重度氣喘」係指需要高強度治療（例如GINA步驟4和步驟5）來維持良好控制或儘管進行高強度治療但仍未實現良好控制的氣喘（GINA, Global Strategy for Asthma Management and Prevention [全球氣喘管理和預防戰略].Global Initiative for Asthma [全球氣喘防治創議]（GINA）2012年12月）。
如本文所用的術語「嗜酸性球性氣喘」係指具有篩選血液嗜酸性球計數小於或等於300個細胞/µL，或小於或等於250個細胞/µL的氣喘患者。「低嗜酸性球性」氣喘係指具有小於250個細胞/µL血液或血清的氣喘患者。可替代地，「低嗜酸性球性」氣喘係指具有小於300個細胞/µL血液或血清的氣喘患者。
「輔助性T細胞（Th）1細胞介素」或「Th1特異性細胞介素」係指由Th1 T細胞表現（細胞內和/或分泌）的細胞介素，並且包括IFN-g、TNF-a和IL-12。「Th2細胞介素」或「Th2特異性細胞介素」係指由Th2 T細胞表現（細胞內和/或分泌）的細胞介素，包括IL-4、IL-5、IL-13和IL-10。「Th17細胞介素」或「Th17特異性細胞介素」係指由Th17 T細胞表現（細胞內和/或分泌）的細胞介素，包括IL-17A、IL-17F、IL-22和IL-21。除本文中所列出的Th17細胞介素之外，Th17細胞之某些群體還表現IFN-g和/或IL-2。多功能CTL細胞介素包括IFN-g、TNF-a、IL-2和IL-17。
術語「特異性地結合」為「抗原特異性的」、「對抗原具有特異性」、「選擇性結合劑」、「特異性結合劑」、「抗原靶標」或與抗原「免疫反應」係指抗體或多肽以比相似序列的其他抗原更大的親和力結合靶標抗原。本文預期該藥劑特異性地結合可用於鑒別免疫細胞類型的靶標蛋白，例如表面抗原（例如T細胞受體、CD3）、細胞介素（例如TSLP、IL-4、IL-5、IL-13、IL-17、IFN-g、TNF-a）及其類似物。在多個實施方式中，抗體特異性地結合靶標抗原，但可以與密切相關的物種之異種同源物交叉反應，例如抗體可為人類蛋白並且還結合密切相關的靈長類動物蛋白質。在多個實施方式中，免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或對TLSP特異性的抗體或其片段以數值小於或等於10 -8M的Kd結合。在多個實施方式中，本文所述之抗TSLP抗體至少以10 -8M、10 -9M、10 -10M、10 -11M、10 -12M、10 -13M或更少的親和力（Kd）結合。
術語「抗體」係指由各自包含可變區和恒定區的兩條重鏈和兩條輕鏈組成的四聚體醣蛋白。「重鏈」和「輕鏈」係指基本上全長的標準免疫球蛋白之輕鏈和重鏈（參見例如Immunobiology [免疫學], 第5版（Janeway和Travers等人編輯, 2001））。抗原結合部分可藉由重組DNA技術或藉由完整抗體之酶促或化學裂解產生。
抗原結合蛋白包括抗體、抗體片段和抗體樣蛋白，可以對標準四聚體抗體之結構進行結構改變。抗體「變體」係指與具有已知序列的親本抗體相比，在抗體序列或功能中可以具有結構變化的抗原結合蛋白或其片段。抗體變體包括變為恒定區的V區，或可替代地，視需要地以非標準方式添加V區至恒定區。實例包括多特異性抗體（例如具有額外V區的雙特異性抗體）、可結合抗原的抗體片段（例如Fab'、F’(ab)2、Fv、單鏈抗體、雙抗體），包含前述項的雙互補位肽和重組肽（只要其展現所需生物活性即可）。
抗體片段包括抗體之抗原結合部分，尤其包括Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、域抗體（dAb）、互補決定區（CDR）片段、CDR移植抗體結合區、單鏈抗體（scFv）、單鏈抗體片段、嵌合抗體、雙抗體、三抗體、四抗體、微型抗體、線性抗體；螯合重組抗體、三抗體或雙抗體、胞內抗體、奈米抗體、小模組免疫藥物（SMIP）、抗原結合域免疫球蛋白融合蛋白、單域抗體（包括駱駝化抗體）、含VHH抗體或其變體或衍生物，以及含有足夠賦予對多肽的抗原特異性結合的免疫球蛋白之至少一部分（如一個、兩個、三個、四個、五個或六個CDR序列）的多肽，只要抗體保留所需生物活性即可。
「價數（valency）」係指靶向表位的各抗體或抗體片段上的抗原結合位點之數目。典型全長IgG分子或F(ab)2係「二價」的，因為其具有兩個相同的靶標結合位點。「單價」抗體片段，如F(ab)’或scFc，具有單個抗原結合位點。三價或四價抗原結合蛋白還可工程改造成多價。
術語「單株抗體」係指自基本上均質的抗體群體（即構成該群體的個體抗體除可少量存在的天然存在的可能突變外均一致）獲得的抗體。
術語「抑制TSLP活性」包括抑制以下任一或多個：TSLP結合其受體；在TSLP存在下表現TSLPR的細胞之增殖、活化或分化；在極化分析中在TSLP存在下Th2細胞介素產生之抑制；在TSLP存在下樹突狀細胞活化或成熟；以及在TSLP存在下肥胖細胞細胞介素釋放。參見例如美國專利7982016 B2之第6欄和實例8，以及US 2012/0020988 A1之實例7-10。
術語「樣本」或「生物樣本」係指自受試者獲得以用於本發明之方法中的樣本，並且包括尿、全血、血漿、血清、唾液、痰液、組織切片、腦脊髓液、有活體外刺激的周邊血單核細胞、無活體外刺激的周邊血單核細胞、有活體外刺激的腸淋巴組織、無活體外刺激的腸淋巴組織、腸灌洗液、支氣管肺泡灌洗液、鼻灌洗液和誘導的痰液。
術語「治療（treat、treating和treatment）」係指與本文所述之炎性障礙有關的事件、疾病或病症之臨床症狀、表現或進展暫時或永久、部分或完全地消除、減少、壓制或改善。如相關領域中所認識到，用作治療劑的藥物可降低既定疾病狀態之嚴重度，但不必消除疾病之每種表現才被認為是有用治療劑。相似地，預防性投與的治療不必完全有效地預防病症發作才可成為可行的預防劑。僅僅降低疾病之影響（例如藉由減少其症狀之次數或降低其症狀之嚴重度，或藉由增加另一治療之有效性，或藉由產生另一有益作用）或降低疾病在受試者中發生或惡化的可能性即為足夠。本發明之一個實施方式涉及用於確定治療功效之方法，該方法包括向患者投與治療劑，該治療劑投與的量和時間足以引起持續好轉，超越反映特定障礙之嚴重度的指示劑之基線。
術語「治療有效量」係指治療劑有效改善或減輕與疾病或障礙有關的症狀或徵象之量。 TSLP
胸腺基質淋巴細胞生成素（TSLP）係上皮細胞衍生的細胞介素，其係對促炎性刺激響應而產生，並且主要經由其在樹突狀細胞（Gilliet, J Exp Med.[實驗醫學雜誌] 197:1059-1067, 2003；Soumelis, Nat Immunol.[自然免疫學] 3:673-680, 2002；Reche, J Immunol.[免疫學雜誌] 167:336-343, 2001）、肥胖細胞（Allakhverdi, J Exp Med.[實驗醫學雜誌] 204:253-258, 2007）和CD34+前驅細胞（Swedin等人. Pharmacol Ther [藥理學與治療學] 2017;169:13-34）中的活性來驅動過敏性炎症響應。TSLP藉由由白血球介素（IL）-7受體α（IL-7Rα）鏈和常見γ鏈樣受體（TSLPR）組成的異二聚物受體發訊息（Pandey, Nat Immunol.[自然免疫學] 1:59-64, 2000；Park, J Exp Med.[實驗醫學雜誌] 192:659-669, 2000）。
與對照相比，氣喘個體氣道中人TSLP mRNA（Brightling等人, J Allergy Clin Immunol [過敏與臨床免疫雜誌] 2008;121:5-10；quiz 1-2；Ortega等人. N Engl J Med [新英格蘭醫學雜誌] 2014;371:1198-207）和蛋白質水平（Ortega等人, 同上）有所增加，並且此表現程度與疾病嚴重度相關（Brightling等人, 同上）。最近的研究已證明，人TSLP基因座中的單核苷酸多態性與預防氣喘、異位性氣喘、和氣道過度反應有關，這表明TSLP基因表現之差別調節可影響疾病易感性（Ortega等人. N Engl J Med [新英格蘭醫學雜誌] 2014;371:1198-207；To等人. BMC Public Health [BMC公共健康] 2012;12:204）。該等數據表明靶向TSLP可抑制與氣喘有關的多個生物途徑。
TSLP之早期非臨床研究表明在自氣道上皮細胞或基質細胞釋放TSLP之後，其活化肥胖細胞、樹突狀細胞及T細胞，從而釋放Th2細胞介素（例如IL-4/13/5）。最近公開的人類數據證明在重度氣喘中在組織TSLP基因與蛋白質表現、Th2基因特徵評分和組織嗜酸性球之間存在良好相關性。因此，抗TSLP靶標療法可能對具有Th2型炎症的氣喘患者有效（Shikotra等人, J Allergy Clin Immunol.[過敏與臨床免疫雜誌] 129(1):104-11, 2012）。
來自其他研究的數據表明，TSLP可經由與Th2無關的途徑，如氣道平滑肌與肥胖細胞之間的串擾，引起氣道炎症（Allakhverdi等人, J Allergy Clin Immunol.[過敏與臨床免疫雜誌] 123(4):958-60, 2009；Shikotra等人, 同上）。TSLP還可促進誘導T細胞分化成產生Th-17-細胞介素的細胞，從而在更重度氣喘中常見到嗜中性球炎症增加（Tanaka等人, Clin Exp Allergy.[臨床和實驗過敏] 39(1):89-100, 2009）。該等數據和其他出現的證據表明阻斷TSLP可用於壓制多個生物途徑，包括但不限於涉及Th2細胞介素（IL-4/13/5）的途徑。 抗體
預期對TSLP具有特異性的抗體或抗體變體或抗原結合蛋白可用於治療氣喘，包括重度氣喘、嗜酸性球性氣喘、非嗜酸性球性/低嗜酸性球性氣喘和本文所述之其他形式氣喘、異位性皮膚炎和COPD。
如結合靶標抗原（例如TSLP）的特異性結合劑（如抗體和抗體變體或片段）可用於本發明之方法中。在一個實施方式中，特異性結合劑係抗體。該等抗體可為單株的（MAb）；重組的；嵌合的；人源化的，如互補決定區（CDR）移植的；人的；抗體變體，包括單鏈；和/或雙特異性的；以及其片段；變體；或其衍生物。抗體片段包括抗體之結合目的多肽之表位的那些部分。此類片段之實例包括由全長抗體之酶促裂解產生的Fab和F(ab')片段。其他結合片段包括由重組DNA技術產生的片段，該等技術如表現含有編碼抗體可變區的核酸序列之重組質體。
單株抗體可經修飾用作治療劑或診斷劑。一個實施方式為「嵌合」抗體，其中一部分重鏈（H）和/或輕鏈（L）與來源於特定物種或屬於特定抗體類別或子類的抗體中的對應序列相同或同源，而鏈之剩餘部分與來源於另一物種或屬於另一抗體類別或子類的抗體中的對應序列相同或同源。還包括此類抗體之片段，只要其展現所需生物活性即可。參見美國專利案號4,816,567；Morrison等人, 1985, Proc. Natl. Acad. Sci.[美國國家科學院院刊] 81:6851-55。
在另一個實施方式中，單株抗體係「人源化」抗體。用於將非人抗體人源化的方法為本領域中所熟知。參見美國專利案號5,585,089和5,693,762。通常，人源化抗體具有一或多個自非人類來源引入其中的胺基酸殘基。可例如使用本領域中所述之方法（Jones等人, 1986, Nature [自然] 321:522-25；Riechmann等人, 1998, Nature [自然] 332:323-27；Verhoeyen等人, 1988, Science [科學] 239:1534-36），藉由用齧齒類動物互補決定區之至少一部分代替人抗體之對應區域來進行人源化。
本發明還涵蓋結合TSLP的人抗體變體（包括抗體片段）。使用在缺少內源性免疫球蛋白產生時能夠產生人抗體譜的轉基因動物（例如小鼠），藉由用多肽抗原（即具有至少6個相鄰胺基酸）進行免疫接種，視需要地結合載體，來產生此類抗體。參見，例如Jakobovits等人, 1993, Proc. Natl. Acad. Sci.[美國國家科學院院刊] 90:2551-55；Jakobovits等人, 1993, Nature [自然] 362:255-58；Bruggermann等人, 1993, Year in Immuno.[年度免疫學] 7:33。還參見PCT申請案號PCT/US 96/05928和PCT/US 93/06926。其他方法描述於美國專利案號5,545,807、PCT申請案號PCT/US 91/245和PCT/GB 89/01207、以及歐洲專利案號546073 B1和546073 A1中。人抗體還可藉由在宿主細胞中表現重組DNA或藉由在如本文所述之融合瘤細胞中表現來產生。
嵌合的、CDR移植的以及人源化抗體和/或抗體變體通常藉由重組方法產生。將編碼抗體的核酸引入宿主細胞中並且使用本文所述之材料和程序表現。在較佳的實施方式中，在如CHO細胞的哺乳動物宿主細胞中產生抗體。單株（例如人）抗體可藉由在宿主細胞中表現重組DNA或藉由在如本文所述之融合瘤細胞中表現來產生。
抗TSLP抗體泰派魯單抗描述於美國專利案號7,982,016和美國專利申請案號15/951,602。本文發現，在應激儲存條件下，例如40°C持續4週（40C4W）或50°C持續一週（50C1W），泰派魯單抗抗體上的殘基發生不利於抗體穩定性的變化，如異構化、脫醯胺化或氧化。在抗TSLP抗體泰派魯單抗CDR（SEQ ID NO: 3-8）或在可變區（SEQ ID NO: 10和12）中被鑒定為降低的穩定性之來源的殘基包括CDRH1 M34、CDRH2 W52、CDRH2 D54、CDRH2 N57、CDRH2 D62、CDRH3 W102、FRH1 N25、FRH1 N26、CDRL2 D49、CDRL2 D50、FRL2 N65、CDRL3 W90、CDRL3 D91、CDRL3 S92、S93、S94、CDRL3 D95。泰派魯單抗中的殘基編號分別基於SEQ ID NO: 10和12中列出的重鏈和輕鏈序列。
可用於本發明之方法中的抗TSLP抗原結合蛋白（包括其片段）包含抗TSLP抗體，該抗體包含a.輕鏈可變結構域，該輕鏈可變結構域包含：i. 含有SEQ ID NO: 3中所示的胺基酸序列之輕鏈CDR1序列；ii. 含有SEQ ID NO: 4中所示的胺基酸序列之輕鏈CDR2序列；iii. 含有SEQ ID NO: 5中所示的胺基酸序列之輕鏈CDR3序列；以及b. 重鏈可變結構域，該重鏈可變結構域包含：i. 含有SEQ ID NO: 6中所示的胺基酸序列之重鏈CDR1序列；ii. 含有SEQ ID NO: 7中所示的胺基酸序列之重鏈CDR2序列，以及iii. 含有SEQ ID NO: 8中所示的胺基酸序列之重鏈CDR3序列，其中該抗體或抗體變體特異性地結合如SEQ ID NO: 2之胺基酸29-159中所示的TSLP多肽。
還預期一種包含以下的抗體或抗體變體：a. 輕鏈可變結構域，該輕鏈可變結構域選自由以下組成之群組：i. 與SEQ ID NO: 12具有至少80%同一性的胺基酸序列；ii. 由與SEQ ID NO: 11具有至少80%同一性的多核苷酸序列編碼的胺基酸序列；iii. 由在中等嚴格條件下與由SEQ ID NO: 11組成的多核苷酸補體雜交的多核苷酸編碼的胺基酸序列；以及b. 重鏈可變結構域，該重鏈可變結構域選自由以下組成之群組：i. 與SEQ ID NO: 10具有至少80%同一性的胺基酸序列；ii. 由與SEQ ID NO: 9具有至少80%同一性的多核苷酸序列編碼的胺基酸序列；iii. 由在中等嚴格條件下與由SEQ ID NO: 9組成的多核苷酸補體雜交的多核苷酸編碼的胺基酸序列；或c. (a) 之輕鏈可變結構域和 (b) 之重鏈可變結構域，其中該抗體或抗體變體特異性地結合如SEQ ID NO: 2之胺基酸29-159中所示的TSLP多肽。
泰派魯單抗為一種示例性抗TSLP抗體，其具有：a. i. 含有SEQ ID NO: 3中所示的胺基酸序列之輕鏈CDR1序列；ii. 含有SEQ ID NO: 4中所示的胺基酸序列之輕鏈CDR2序列；iii. 含有SEQ ID NO: 5中所示的胺基酸序列之輕鏈CDR3序列；以及b. 重鏈可變結構域，其包含：i. 含有SEQ ID NO: 6中所示的胺基酸序列之重鏈CDR1序列；ii. 含有SEQ ID NO: 7中所示的胺基酸序列之重鏈CDR2序列，以及iii. 含有SEQ ID NO: 8中所示的胺基酸序列之重鏈CDR3序列。
泰派魯單抗還包含輕鏈可變結構域，該輕鏈可變結構域具有SEQ ID NO: 12中列出的胺基酸序列；由SEQ ID NO: 11中列出的多核苷酸序列編碼；和重鏈可變結構域，該重鏈可變結構域具有SEQ ID NO: 10中列出的胺基酸序列，由SEQ ID NO: 9中列出的多核苷酸序列編碼。
泰派魯單抗為IgG2抗體。包括IgG2鏈的泰派魯單抗的全長重鏈和輕鏈之序列分別在SEQ ID NO: 37和38中示出。
在多個實施方式中，抗TSLP抗體或其抗體變體係二價的並且選自由以下組成之群組：人抗體、人源化抗體、嵌合抗體、單株抗體、重組抗體、抗原結合抗體片段、單鏈抗體、單體抗體、雙抗體、三抗體、四抗體、Fab片段、IgG1抗體、IgG2抗體、IgG3抗體和IgG4抗體。
在多個實施方式中，抗TSLP抗體變體選自由以下組成之群組：雙抗體、三抗體、四抗體、Fab片段、單域抗體、scFv，其中該劑量經調整，使得該等結合位點與投與二價抗體的結合位點係等莫耳的。
預期抗體或抗體變體係IgG2抗體。人IgG2恒定區之示例性序列能以Uniprot編號P01859自Uniprot數據庫獲得，該Uniprot數據庫藉由引用併入本文。包括關於其他抗體重鏈及輕鏈恒定區的序列資訊的資訊還可經由Uniprot數據庫以及在抗體工程改造及產生領域熟知的其他數據庫公開獲得。
在某些實施方式中，抗體衍生物包括四聚體糖基化抗體，其中與親本多肽之胺基酸序列相比，糖基化位點之數目和/或類型改變。在某些實施方式中，變體包含比天然蛋白質更多或更少數目的N連接的糖基化位點。可替代地，消除此序列的取代將移除已存在的N連接的碳水化合物鏈。還提供N連接的碳水化合物鏈之重排，其中消除一或多個N連接的糖基化位點（典型地天然存在的那些）並且創造一或多個新的N連接的位點。另外的較佳的抗體變體包括半胱胺酸變體，其中與親本胺基酸序列相比，一或多個半胱胺酸殘基缺失或取代另一個胺基酸（例如絲胺酸）。當抗體必須重新折疊成生物學上活性構象時，如在分離不溶性包涵體之後，半胱胺酸變體可能有用。半胱胺酸變體一般具有少於天然蛋白質的半胱胺酸殘基，且典型地具有偶數個以使由未配對的半胱胺酸引起的相互作用最小。
所希望的胺基酸取代（無論保守或非保守）可由熟悉該項技術者在需要此類取代時來確定。在某些實施方式中，胺基酸取代可用於鑒別人TSLP的抗體之重要殘基，或增加或減少抗體對本文所述之人TSLP的親和力。
根據某些實施方式，較佳的胺基酸取代為以下那些：(1) 降低對蛋白質水解的敏感性；(2) 降低對氧化的敏感性；(3) 改變結合親和力親和性；(4) 抑制形成高分子量（HMW）種類和/或 (5) 賦予或改變此類多肽上的其他生理化學特性或功能特性。根據某些實施方式，可在天然存在的序列中（在某些實施方式中，在形成分子間接觸的一或多個結構域外的多肽部分中）進行單個或多個胺基酸取代（在某些實施方式中為保守胺基酸取代）。在某些實施方式中，保守胺基酸取代典型地基本上不會改變親本序列之結構特性（例如替代胺基酸不應傾向於使親本序列中存在的螺旋斷裂，或破壞親本序列特徵性的其他類型二級結構）。領域公認的多肽二級和三級結構之實例描述於Proteins, Structures and Molecular Principles [蛋白質、結構和分子原理] (Creighton編輯, W. H. Freeman and Company [W.H.弗裡曼公司], 紐約 (1984))；Introduction to Protein Structure [蛋白質結構簡介] (C.Branden和J. Tooze編輯, Garland Publishing [加蘭出版社], 紐約, 紐約州(1991))；以及Thornton等人 Nature [自然] 354:105 (1991)，將該等文獻各自藉由引用併入本文。 鑒定促進穩定性和蛋白結合的屬性
為了確定促進蛋白結合和活性的屬性，將本文所述之抗TSLP抗原結合蛋白置於導致其結構改變的條件下，例如治療性蛋白的胺基酸結構之改變，導致一種治療性蛋白之形成。在示例性方面，胺基酸之改變的結構被稱為「屬性」並且可能根據其化學身份或屬性類型以及在抗原結合蛋白之胺基酸序列中的位置（例如，其上存在屬性的胺基酸位置）來表徵。例如，天冬醯胺和麩醯胺殘基易於脫醯胺化。在蛋白質胺基酸序列之位置10處的脫醯胺化天冬醯胺係屬性之實例。表A中提供了特定胺基酸之示例性屬性類型清單。因此，如本文所用的「結構」可包含以下、基本上由以下組成或由以下組成：表A中所列的屬性類型，或表A中所列的兩種或多種屬性類型之組合。應當理解，屬性係結構之實例，並且除非另有說明，否則在本文提及「結構」的任何地方，屬性都被視為結構之實例。例如，高分子量種類（HMW）和片段亦為屬性之實例。
[表A]
示例性屬性類型 胺基酸殘基
脫醯胺化 Asn、Gln
脫胺基 Glu、Ser、Gly
糖基化、羥離胺酸 Lys
糖基化 Asn
環化 N末端Gln，N末端Glu
氧化 Met、Trp、His
異構化 Asp
片段化/剪裁 Asp/Pro
由於免疫球蛋白或其片段、抗體或抗原結合蛋白包含本文所述之多個胺基酸、抗體或抗原結合蛋白可具有多於一個屬性（例如，具有改變的結構之多於一個胺基酸），並且可根據其屬性譜來描述。如本文所用，術語「屬性譜」係指抗原結合蛋白之屬性清單。在各種情況中，屬性譜提供化學身份或屬性類型，例如脫醯胺化，視需要地，相對於治療性蛋白之天然結構。在各種情況中，屬性譜提供了屬性之位置，例如，其上存在屬性的胺基酸之位置。在一些方面，屬性譜提供了抗原結合蛋白上存在的所有屬性之描述。在其他方面，屬性譜提供了蛋白質上存在的屬性子集之描述。例如，屬性譜可以僅提供存在於蛋白質之特定部分（例如恒定區、可變區、CDR）中的那些屬性。一種治療性蛋白（如抗體或抗原結合蛋白）之特徵在於在蛋白質上存在的一或多種屬性。一種抗原結合蛋白可以藉由具有不同的屬性譜而不同於相同蛋白質之另一種類。當兩種治療性蛋白具有不同的屬性譜時，治療性蛋白代表治療性蛋白之兩個不同種類。當兩種治療性蛋白具有相同的屬性譜時，治療性蛋白被認為是治療性蛋白之同一種類。
在各種情況中，將免疫球蛋白、抗體或抗原結合蛋白置於導致其結構改變的條件下，例如形成一或多種屬性，並且結構之變化改變了治療性蛋白對其靶標的親和力。在各個方面中，將免疫球蛋白、抗體或抗原結合蛋白置於導致其結構改變的條件下，例如形成一或多種屬性，並且結構之變化減少了抗原結合蛋白對其靶標的親和力。在一些方面，降低的親和力導致免疫球蛋白、抗體或抗原結合蛋白部分或完全喪失與靶標相互作用（例如，結合）的能力。在各種情況中，免疫球蛋白、抗體或抗原結合蛋白部分或完全喪失與靶標相互作用（例如結合）的能力最終會降低抗原結合蛋白之效力。在可替代的情況中，將免疫球蛋白、抗體或抗原結合蛋白置於導致其結構改變的條件下，例如形成一或多種屬性，並且結構之變化未改變免疫球蛋白、抗體或抗原結合蛋白對其靶標的親和力。在各個方面中，結構之變化未減少蛋白質對其靶標的親和力。不受任何特定理論的束縛，本揭露之方法以精確性和準確性有利地區分影響免疫球蛋白、抗體或抗原結合蛋白和靶標之間相互作用的免疫球蛋白、抗體或抗原結合蛋白的那些屬性與不影響相互作用的屬性。
在各個方面中，本文的組成物包含免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段之種類之群體。在各種情況中，群體係免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段之同質群體，視需要地，在組成物樣本中存在的每種蛋白質係相同的種類。在各種情況中，群體係異質群體，該異質群體包含具有本文所述之屬性的免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段之至少兩個不同種類。在各個方面中，異質群體包含免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段之至少2個、至少3個、至少4個、至少5個、至少6個或更多個不同種類。視需要地，異質群體包含多於7個、多於8個、多於9個、多於10個、多於20個、多於30個、多於40個、多於50個不同蛋白質種類。在一些方面，群體之每個種類具有獨特的屬性譜。在示例性情況中，免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段之種類係僅在組成物中存在的蛋白質。在一些方面，組成物包含 (i) 群體免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段，免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段，和 (ii) 藥學上可接受的載體、稀釋劑、賦形劑、或其組合。在一些實施方式中，至少80%、85%、90%、95%或99%的異質群體之免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段包含如本文所述之屬性。在一些實施方式中，不超過20%、15%、10%、5%或1%的異質群體之免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段包含如本文所述之屬性。
在示例性實施方式中，方法包括對免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段樣本施加應激。在各種情況中，應激可為導致免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段或靶標之胺基酸結構之至少一種改變的任何條件，例如，應激可為導致免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段或靶標之胺基酸形成至少一種屬性的任何條件。視需要地，應激導致免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段或靶標之多於一個胺基酸之結構變化，例如，應激導致形成一種屬性或多於一種屬性（例如，至少或約2種、至少或約3種、至少或約4種、至少或約5種、至少或約6種、至少或約7種、至少或約8種、至少或約9種、至少或約10種、或更多種屬性）。在各種情況中，應激導致形成在施加應激前免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段或靶標中不存在的一或多種屬性。因此，在一些方面，施加應激導致形成在施加應激前樣本中不存在的免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段或靶標之種類。
在示例性方面，應激係視需要地，在一或多種緩衝液或配製物中暴露於高溫（例如，25攝氏度、40攝氏度、50攝氏度）。在示例性情況中，這種暴露於高溫類比了加速的應激程式。
視需要地，應激造成在免疫球蛋白、抗體或抗原結合蛋白和靶標之間形成的複合物的約5%至約30%、約10%至約30%、約15%至約30%、約20%至約30%、約25%至約30%、約5%至約25%、約5%至約20%、約5%至約15%、或約5%至約10%的降解或解離。在各個方面中，應激造成在免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段和其靶標之間的降低的相互作用水平。在一些方面，相對於缺乏應激的對應條件下的相互作用，應激造成相互作用降低約10%至約50%（例如，約10%至約45%、約10%至約40%、約10%至約35%、約10%至約30%、約10%至約25%、約10%至約20%、約10%至約15%、約10%至約40%、約10%至約35%、約10%至約30%、約10%至約25%、約10%至約20%,或約10%至約15%）。在一些方面，應激造成抗體或抗原結合蛋白對其靶標的K D之增加，其中K D與更弱的結合有關。在一些方面，應激造成未結合的抗體或抗原結合蛋白之量增加10%至約50%（例如，約10%至約45%、約10%至約40%、約10%至約35%、約10%至約30%、約10%至約25%、約10%至約20%、約10%至約15%、約10%至約40%、約10%至約35%、約10%至約30%、約10%至約25%、約10%至約20%、或約10%至約15%）。不受特定理論的束縛，在當前揭露的方法中施加的應激導致以更快和更穩健、可再現的方式產生抗體或抗原結合蛋白種類，以獲得用於增強檢測在製造、儲存和人類循環（人類受試者中的靜脈內空間或皮下空間）期間可能產生的種類之種類豐度和多樣性。
分離
在示例性實施方式中，本揭露之方法包括將包含不同種類的抗原之混合物分離為至少兩個級分。在一些方面，將混合物分離為多個（例如，2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多）級分。在一些方面，當前揭露的方法之分離步驟保持抗原結合蛋白和其靶標之天然折疊、高序結構以及結合的能力。在各個方面中，將混合物分離為包含未結合的抗體或抗原結合蛋白或靶標之未結合的級分和包含抗體/抗原結合蛋白-靶標複合物之結合的級分。
用於將混合物分離為級分的適合的方法和技術係本領域已知的。參見，例如，Coskun, North Clin Istanb [伊斯坦布爾北部診所] 3(2): 156-160 (2016)；Snyder等人, Practical HPLC Method Development [實用高效液相層析法的建立], 編輯, 第2版, John Wiley & Sons, Inc.[約翰•威利父子公司] 1997；Snyder等人, Introduction to Modern Liquid Chromatography [現代液相層析法導論], John Wiley & Sons, Inc.[約翰•威利父子公司], 新澤西州霍博肯市（Hoboken, NJ）, 2010；Heftmann, Chromatography: Fundamentals and applications of chromatography and related differential migration methods [層析法：層析法和相關差異遷移方法之基礎和應用], 編輯, 第6版, 第69A卷, 愛思唯爾出版公司（Elsevier）, 荷蘭阿姆斯特丹, 2004；Mori和Barth, Size Exclusion Chromatography [尺寸排阻層析法], 施普林格公司（Springer-Verlag）, 柏林, 1999。在一些方面，分離基於電荷，如，例如離子交換層析、毛細管等電聚焦（cIEF）和/或毛細管區帶電泳（CZE），或基於疏水性，如，例如逆相分離（RP；例如，RP-HPLC）和疏水性相互作用層析（HIC-HPLC）。在各個方面中，分離基於尺寸，如例如，尺寸排阻層析（SEC；例如，SE-HPLC）、十二烷基硫酸鈉-聚丙烯醯胺凝膠電泳（SDS-PAGE）、具有十二烷基硫酸鈉的毛細管電泳（CE-SDS）。本文所述之方法用於檢測產物的Met或Trp殘基之氧化、片段化/剪裁、Asp之異構化、脫醯胺化、在N末端形成焦麩胺酸。在多個實施方式中，使用基於尺寸、電荷、疏水性、對捕獲分子的親和力或其組合來分離混合物的組分之技術，將混合物分離成至少兩個級分。在各種情況中，技術為尺寸排阻層析（SEC）、親和層析、使用珠或細胞的沈澱、自由流動分級法（FFF）、離子交換層析（IEX）、陽離子交換層析（CEX）、疏水性相互作用層析（HIC）或超速離心（UC）。視需要地，使用基於尺寸來分離混合物的組分之技術，視需要地，其中該技術為尺寸排阻層析（SEC），將混合物分離成至少兩個級分。
在各個方面中，使用基於捕獲分子結合固體支持物（視需要地，珠或細胞）的親和力來分離混合物的組分之技術，將混合物分離成至少兩個級分。在各種情況中，藉由以下將混合物分離：(i) 添加混合物至容器（例如管），該容器包含與捕獲分子結合的珠或在其表面表現捕獲分子的細胞，(ii) 離心該容器（例如，管）以獲得上清液和沈澱，(iii) 由沈澱收集上清液以獲得未結合的級分，(iv) 由具有溶液的沈澱釋放結合的級分，(v) 離心該容器（例如，管），該容器包含該沈澱和該溶液以獲得包含該結合的級分的第二上清液和包含該珠或細胞的第二沈澱，以及 (vi) 收集該第二上清液以獲得該結合的級分。在一些方面，藉由以下將混合物分離：(i) 添加該混合物至包含與捕獲分子結合的珠的柱以獲得流通級分和結合的級分，(ii) 收集該流通級分以獲得該未結合的級分，(iii) 由具有溶液的珠中釋放結合部分並收集包含該結合部分的溶液。適合的固體支持物包括，例如，珠、樹脂、紙，視需要地，由纖維素、二氧化矽、氧化鋁、玻璃、塑膠或其組合製成。在示例性方面，與固體支持物結合的捕獲分子係蛋白質。捕獲分子可能與靶標相同。有利地，捕獲分子不限於任何特定的分子。
在鑒定影響抗原結合蛋白和靶標之間的相互作用的免疫球蛋白、抗原結合蛋白或靶標的屬性的方法之多個實施方式中，該方法包括對於未結合的級分和結合的級分中之每一種，鑒定和定量存在於抗原結合蛋白或靶標之種類上的每種屬性之豐度，其中，當未結合的級分中的屬性之豐度大於結合的級分中的屬性之豐度時，該屬性負面地影響抗原結合蛋白和靶標之間的相互作用。在各個方面中，該方法包括使用質譜儀以鑒定和定量在未結合的級分和結合的級分之每一種中的抗原結合蛋白或靶標之種類的每種屬性之豐度。
在確定存在於抗原結合蛋白或靶標之種類上的已知屬性對抗原結合蛋白和靶標之間的相互作用的影響的方法之多個實施方式中，該方法包括對於未結合的級分和結合的級分中之每一種，定量已知屬性之豐度，其中，當未結合的級分中已知屬性之豐度大於結合的級分中已知屬性之豐度時，該已知屬性對抗原結合蛋白和靶標之間的相互作用具有負面影響。在各個方面中，該方法包括使用質譜儀以定量在未結合的級分和結合的級分之每一種中的已知屬性之豐度。
穩定性係指對胺基酸殘基之化學修飾和生物物理蛋白修飾的耐受性，如在製造、儲存和/或另外的或可替代的應激條件下可能發生的應激條件下的HMW種類之形成。對於本文描述的實施方式之方法和免疫球蛋白、抗原結合蛋白及其片段，可以使用尺寸排阻層析（SEC）確定「穩定性」和/或「HMW」種類。包含免疫球蛋白、抗原結合蛋白或片段之組成物可以藉由SEC（如SEC-UV）分離。SEC可以使用包含100 mM磷酸鈉和250 mM NaCl（pH 6.8）的流動相，流速可以設置為0.5 ml/min，柱溫可以設置為37°C，執行時間可以設置為35分鐘，並且自動進樣器可以設置為4°C。適用於SEC的柱之實例包括含有二氧化矽顆粒的凝膠柱，該二氧化矽顆粒包含二醇官能基並且平均直徑為5 µm和平均孔徑約為25 nM的（可商購，例如，作為來自東曹生命科學公司（TOSOH Bioscience）的G3000SWxl柱）。對於SEC-UV，可以在214 nm和280 nm進行紫外/可見光譜（UV/VIS）檢測。應當理解，分離後，代表單體和HMW種類的峰可在SEC洗脫曲線中的不同時間洗脫。
在確定穩定性的情況下，用於SEC分析的組成物可以包含應激的免疫球蛋白、抗原結合蛋白或片段，它們可以在高溫下應激一段時間，如在40°C下持續四週。值得注意的是，40°C下持續四週通常很好地推斷出免疫球蛋白、抗原結合蛋白及其片段之保質期穩定性（保質期穩定性通常為2°C-8°C下2年（2Y4C），隨後在室溫下1個月，室溫取決於地理位置為25°C或30°C）。此外或可替代地，紫外光（klux/hr冷白光和10 W/m 2UVA光，在25°C下持續7天）、極端pH（pH ≥ 8或 ≤ 3.6）、或氧化催化劑（例如，0.1% H 2O 2，在25°C下持續5小時）可用作應激源。除非本文另有說明或科學背景另有要求，否則出於「穩定性」的目的，應激應理解為係指40°C下持續四週。例如在國際公開案號WO 2020/247790中，可以找到應激源和SEC分析的另外的資訊，將其藉由引用以其全文併入本文。
SEC分析之後，可以視需要地進行肽作圖，並且可以鑒定與結合的種類和未結合的種類有關的肽修飾，例如如本文和/或在國際公開案號WO 2020/247790中描述。對於肽作圖，可以使用具有分子量截留（例如，大於10 kDa）的過濾器收集洗脫級分，並且用7.5 M胍洗脫緩衝液來洗脫。為確定影響與抗原結合的化學修飾，可以將應激的免疫球蛋白（或抗原結合蛋白或其片段）和抗原一起混合，並且分離較早洗脫的結合抗原的複合物和較晚洗脫的未結合的免疫球蛋白（或抗原結合蛋白或其片段）。為確定影響或與HMW相關的化學修飾，可以收集單體和HMW種類。在所述研究中，使用在40°C下持續1個月（40C1M）的熱強制應激和抗體的相關降解。將應激的抗體與其靶標（TSLP）混合，並且藉由SEC在抗體-靶標複合物和未結合的抗體上，將混合物分離。應該注意這種應用的SEC抗體-抗原方法之兩種局限性。與在25°C或30°C下的室溫降解相比，40C1M應激可以導致更大的降解。此外，一個殘基的降解/修飾可以藉由長程變構相互作用（long range, allosteric interaction）造成另一個殘基的修飾。這種作用會在更高的溫度下增加，因為結構會更易於動態運動。此外，所述之SEC抗原-抗體方法分析了樣本中的所有種類。這不同於常規方法，該常規方法包括在單個峰上進行CEX分離，隨後進行表徵，其中更好地定義了所收集的種類，並避免了每個分子具有兩個或多個修飾的「主峰之間」的種類。
應當理解，「親和力」或「結合」可以藉由表面電漿共振（SPR）、生物膜層干涉，或也可以藉由如本文所述之SEC結合親和力實驗來確定。除非本文另有說明或科學背景另有要求，否則「親和力」應理解為係指如藉由SPR測量的親和力。可以使用生物感測器系統（如BIAcore®系統）藉由SPR測量Kd值。用BIAcore®系統的分析可以包含分析抗原（例如，TSLP）與具有固定化分子（例如，如本文所述之抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白、或其片段）的晶片的結合和解離。可以使用SPR檢測Kd ＜ 10 -6M的結合複合物。在多個實施方式中，可以在20°C、25°C、30°C或37°C下進行SPR。 組成物
在多個實施方式中，提供了包含多個抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段之組成物，該等抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段每種包含：含有SEQ ID NO: 3中所示的胺基酸序列之輕鏈CDR1序列；含有SEQ ID NO: 4中所示的胺基酸序列之輕鏈CDR2序列；含有SEQ ID NO: 5中所示的胺基酸序列之輕鏈CDR3序列；含有SEQ ID NO: 6中所示的胺基酸序列之重鏈CDR1序列；含有SEQ ID NO: 7中所示的胺基酸序列之重鏈CDR2序列；以及含有SEQ ID NO: 8中所示的胺基酸序列之重鏈CDR3序列，該組成物包含以下的至少一種：在SEQ ID NO: 7的HC位置54處的L-天冬胺酸，不包含異天冬胺酸（isoAsp）或環狀天冬胺酸（cAsp）；SEQ ID NO: 8之非氧化的HC W102；在SEQ ID NO: 7的LC位置49或位置50的L-天冬胺酸，不包含isoAsp或cAsp；SEQ ID NO: 12中列出的LC N65，不包含脫醯胺化N65；或在SEQ ID NO: 5的LC位置91處的L-天冬胺酸，不包含isoAsp或cAsp。
在多個實施方式中，提供了包含多個抗TSLP單株抗體或其抗原結合片段之組成物，每種抗體或其抗原結合片段包含：含有SEQ ID NO: 3中所示的胺基酸序列之輕鏈CDR1序列；含有SEQ ID NO: 4中所示的胺基酸序列之輕鏈CDR2序列；含有SEQ ID NO: 5中所示的胺基酸序列之輕鏈CDR3序列；含有SEQ ID NO: 6中所示的胺基酸序列之重鏈CDR1序列；含有SEQ ID NO: 7中所示的胺基酸序列之重鏈CDR2序列；以及含有SEQ ID NO: 8中所示的胺基酸序列之重鏈CDR3序列，該組成物包含以下的至少一種：在SEQ ID NO: 7的HC位置54處的L-天冬胺酸，不包含異天冬胺酸（isoAsp）或環狀天冬胺酸（cAsp）；SEQ ID NO: 8之非氧化的HC W102；在SEQ ID NO: 4的LC位置49或位置50的L-天冬胺酸，不包含isoAsp或cAsp；SEQ ID NO: 12之脫醯胺化的LC N65；或在SEQ ID NO: 5的LC位置91處的L-天冬胺酸，不包含isoAsp或cAsp。
在多個實施方式中，不超過0.9%的抗TSLP單株抗體包含異構化的HC D54。在多個實施方式中，不超過2%的抗TSLP單株抗體包含氧化的HC W102。在多個實施方式中，不超過0.9%的抗TSLP單株抗體包含異構化的LC D50。在多個實施方式中，不超過0.5%的抗TSLP單株抗體包含脫醯胺化的LC N65。在多個實施方式中，不超過0.9%的抗TSLP單株抗體包含異構化的HC D91。在多個實施方式中，抗TSLP抗體包含在HC 54處的L-天冬胺酸和在LC 49或50處的L-天冬胺酸之組合。在多個實施方式中，抗TSLP抗體富集位於HC54的L-天冬胺酸，比isoAsp的水平高至少6倍。在多個實施方式中，抗TSLP抗體係IgG2抗體。
在一方面，組成物包含抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段，該抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段包含 (A) 輕鏈可變結構域，該輕鏈可變結構域包含：(i) 含有SEQ ID NO: 3中所示的胺基酸序列之輕鏈CDR1序列；(ii) 含有SEQ ID NO: 4中所示的胺基酸序列之輕鏈CDR2序列；以及 (iii) 含有SEQ ID NO: 5中所示的胺基酸序列之輕鏈CDR3序列；和 (B) 重鏈可變結構域，該重鏈可變結構域包含：(i) 含有SEQ ID NO: 6中所示的胺基酸序列之重鏈CDR1序列；(ii) 包含在SEQ ID NO: 7中所示的以下殘基D54或G55之一處具有突變的胺基酸序列之重鏈CDR2序列，以及 (iii) 包含SEQ ID NO: 8中所示的胺基酸序列之重鏈CDR3序列。在多個實施方式中，HCDR2具有序列VIWYX 1X 2SNKHYADSVKG，其中X 1為D或E，並且X 2為G或A（SEQ ID NO: 13）。視需要地，HCDR2具有以下序列：VIWYEGSNKHYADSVKG（SEQ ID NO: 14）、VIWYDASNKHYADSVKG（SEQ ID NO: 15）或VIWYEASNKHYADSVKG（SEQ ID NO: 16）。
在多個實施方式中，HCDR2中之突變為D54E。在多個實施方式中，HCDR2中之突變為G55A。在多個實施方式中，抗TSLP抗原結合蛋白或其片段視需要地包含在SEQ ID NO: 4之以下殘基LCDR2 D49、D50或S51之一處的突變。在多個實施方式中，LCDR2之突變為D49E、D50E或S51A之一或多個。在多個實施方式中，LCDR2具有序列X 1X 2X 3DRPS，其中X 1為D或E，X 2為D或E，並且X 3為S或A（SEQ ID NO: 17）。視需要地，LCDR2具有以下序列：EDSDRPS（SEQ ID NO: 18）、DESDRPS（SEQ ID NO: 19）、EESDRPS（SEQ ID NO: 20）、DDADRPS（SEQ ID NO: 21）、DEADRPS（SEQ ID NO: 22）、EDADRPS（SEQ ID NO: 23）或EEADRPS（SEQ ID NO: 24）。
在多個實施方式中，組成物包含抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段，該抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段包含 (A) 輕鏈可變結構域，該輕鏈可變結構域包含：(i) 含有SEQ ID NO: 3中所示的胺基酸序列之輕鏈CDR1序列；(ii) 輕鏈CDR2序列，該序列包含在SEQ ID NO: 4之以下殘基D49、D50或S51之一處具有突變的胺基酸序列；以及 (iii) 含有SEQ ID NO: 5中所示的胺基酸序列之輕鏈CDR3序列；和 (B) 重鏈可變結構域，該重鏈可變結構域包含：(i) 含有SEQ ID NO: 6中所示的胺基酸序列之重鏈CDR1序列；(ii) 含有SEQ ID NO: 7中所示的胺基酸序列之重鏈CDR2序列，以及 (iii) 含有SEQ ID NO: 8中所示的胺基酸序列之重鏈CDR3序列。
在多個實施方式中，LCDR2具有序列X 1X 2X 3DRPS（SEQ ID NO: 17），其中X 1為D或E，X 2為D或E，並且X 3為S或A。視需要地，LCDR2具有以下序列：EDSDRPS（SEQ ID NO: 18）、DESDRPS（SEQ ID NO: 19）、EESDRPS（SEQ ID NO: 20）、DDADRPS（SEQ ID NO: 21）、DEADRPS（SEQ ID NO: 22）、EDADRPS（SEQ ID NO: 23）或EEADRPS（SEQ ID NO: 24）。在多個實施方式中，LCDR2中之突變為D49E。在多個實施方式中，LCDR2中之突變為D50E。在多個實施方式中，LCDR2中之突變為S51A。在多個實施方式中，抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段視需要地包含SEQ ID NO: 7中列出的HCDR2的以下殘基D54或G55之一的突變。在多個實施方式中，HCDR2中之突變為SEQ ID NO: 7中的D54E或G55A之一或多個。在多個實施方式中，HCDR2具有序列VIWYX 1X 2SNKHYADSVKG，其中X 1為D或E，並且X 2為G或A（SEQ ID NO: 13）。視需要地，HCDR2具有以下序列：VIWYEGSNKHYADSVKG（SEQ ID NO: 14）、VIWYDASNKHYADSVKG（SEQ ID NO: 15）或VIWYEASNKHYADSVKG（SEQ ID NO: 16）。
在多個實施方式中，組成物包含抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段，該抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段包含 (A) 輕鏈可變結構域，該輕鏈可變結構域選自由以下組成之群組：i. 與SEQ ID NO: 12具有至少80%同一性的胺基酸序列；ii. 由與SEQ ID NO: 11具有至少80%同一性的多核苷酸序列編碼的胺基酸序列；或iii. 由在中等嚴格條件下與由SEQ ID NO: 11組成的多核苷酸補體雜交的多核苷酸編碼的胺基酸序列；或 (B) 重鏈可變結構域，該重鏈可變結構域選自由以下組成之群組：i. 與SEQ ID NO: 10具有至少80%同一性的胺基酸序列；ii. 由與SEQ ID NO: 9具有至少80%同一性的多核苷酸序列編碼的胺基酸序列；或iii. 由在中等嚴格條件下與由SEQ ID NO: 9組成的多核苷酸補體雜交的多核苷酸編碼的胺基酸序列；或 (C) (A) 之輕鏈可變結構域和 (B) 之重鏈可變結構域，其中抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段保留抗TSLP抗原結合蛋白或其片段之一或多個CDR，並且包含SEQ ID NO: 7的HCDR2 D54或G55的一或多個之突變，或SEQ ID NO: 4的LCDR2 D49、D50或S51的一或多個之突變。
在多個實施方式中，抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段包含重鏈，該重鏈包含胺基酸序列 QMQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFRTYGMHWVRQAPGKGLEWVA VIWY X 1X 2 SNKHYADSVKG RFTITRDNSKNTLNLQMNSLRAEDTAVYYCARAPQWELVHEAFDIWGQGTMVTVSS（SEQ ID NO: 25）（HCDR2加下劃線）。
其中X 1為D或E，並且X 2為G或A，視需要地QMQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFRTYGMHWVRQAPGKGLEWVA VIWY EGSNKHYADSVKG RFTITRDNSKNTLNLQMNSLRAEDTAVYYCARAPQWELVHEAFDIWGQGTMVTVSS（SEQ ID NO: 26）；或 QMQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFRTYGMHWVRQAPGKGLEWVA VIWYD ASNKHYADSVKG RFTITRDNSKNTLNLQMNSLRAEDTAVYYCARAPQWELVHEAFDIWGQGTMVTVSS（SEQ ID NO: 27）；或 QMQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFRTYGMHWVRQAPGKGLEWVA VIWY EASNKHYADSVKG RFTITRDNSKNTLNLQMNSLRAEDTAVYYCARAPQWELVHEAFDIWGQGTMVTVSS（SEQ ID NO: 28），或其混合物。
在多個實施方式中，抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段包含輕鏈，該輕鏈包含胺基酸序列 SYVLTQPPSVSVAPGQTARITC GGNNLGSKSVHWYQQKPGQAPVLVVY X 1X 2X 3 DRPSWIPERFSGSNSGNTATLTISRGEAGDEADYYC QVWDSSSDHVVFGGGTKLTVL（SEQ ID NO: 29）（LCDR1-3加下劃線）。
其中X 1為D或E，X 2為D或E，並且X 3為S或A，視需要地SYVLTQPPSVSVAPGQTARITC GGNNLGSKSVHWYQQKPGQAPVLVVY E DSDRPSWIPERFSGSNSGNTATLTISRGEAGDEADYYC QVWDSSSDHVVFGGGTKLTVL（SEQ ID NO: 30）；或 SYVLTQPPSVSVAPGQTARITC GGNNLGSKSVHWYQQKPGQAPVLVVY D ESDRPS WIPERFSGSNSGNTATLTISRGEAGDEADYYC QVWDSSSDHVVFGGGTKLTVL（SEQ ID NO: 31）；或 SYVLTQPPSVSVAPGQTARITC GGNNLGSKSVHWYQQKPGQAPVLVVY EE SDRPSWIPERFSGSNSGNTATLTISRGEAGDEADYYC QVWDSSSDHVVFGGGTKLTVL（SEQ ID NO: 32）；或 SYVLTQPPSVSVAPGQTARITC GGNNLGSKSVHWYQQKPGQAPVLVVY DD ADRPS WIPERFSGSNSGNTATLTISRGEAGDEADYYC QVWDSSSDHVVFGGGTKLTVL（SEQ ID NO: 33）；或 SYVLTQPPSVSVAPGQTARITC GGNNLGSKSVHWYQQKPGQAPVLVVY D EADRPS WIPERFSGSNSGNTATLTISRGEAGDEADYYC QVWDSSSDHVVFGGGTKLTVL（SEQ ID NO: 34）；或 SYVLTQPPSVSVAPGQTARITC GGNNLGSKSVHWYQQKPGQAPVLVVY E D ADRPS WIPERFSGSNSGNTATLTISRGEAGDEADYYC QVWDSSSDHVVFGGGTKLTVL（SEQ ID NO: 35）；或 SYVLTQPPSVSVAPGQTARITC GGNNLGSKSVHWYQQKPGQAPVLVVY EEA DRPSWIPERFSGSNSGNTATLTISRGEAGDEADYYC QVWDSSSDHVVFGGGTKLTVL（SEQ ID NO: 36）；或其混合物。
還提供了包含抗TSLP單株抗體之組成物，每個抗TSLP單株抗體包含具有本文所述之序列的TSLP抗體，例如，SEQ ID NO: 3-8和SEQ ID NO: 13-24中列出的一或多個CDR，以及SEQ ID NO: 10和12以及SEQ ID NO: 25-36中列出的一或多個可變區，該組成物包含有限含量的異構化的HC D54和/或有限含量的異構化的LC D49或D50，對該組成物之抗TSLP單株抗體以數值小於或等於10 -8M的Kd結合TLSP有效。在多個實施方式中，本文所述之抗TSLP抗體至少以10 -8M、10 -9M、10 -10M、10 -11M、10 -12M、10 -13M或更小的親和力（Kd）結合。
還提供了包含抗TSLP單株抗體之組成物，每種抗TSLP單株抗體包含具有本文所述之序列的TSLP抗體，例如，SEQ ID NO: 3-8或SEQ ID NO: 13-24中列出的CDR和/或SEQ ID NO: 10和12或SEQ ID NO: 25-36中列出的可變區，該組成物包含IgG2抗TSLP單株抗體，其中以下的至少一種：不超過0.9%的抗TSLP單株抗體包含異構化的HC D54；不超過2%的抗TSLP單株抗體包含氧化的HC W102；不超過0.9%的抗TSLP單株抗體包含異構化的LC D50；不超過0.5%的抗TSLP單株抗體包含脫醯胺化的LC N65；或不超過0.9%的抗TSLP單株抗體包含異構化的LC D91。
在一些實施方式中，組成物係本文所述之配製物之一部分。在一些實施方式中，組成物係用於產生如本文所述之配製物的原料藥。 投與方法
在一方面，本揭露之方法包括投與本文所述之治療性抗TSLP抗體或抗體變體的步驟，該抗體或抗體變體視需要地在藥學上可接受的載體或賦形劑中。在某些實施方式中，藥物組成物為無菌組成物。
本文預期的是用於用如本文所述之抗TSLP抗體或抗原結合蛋白或其片段治療炎性疾病、病症或障礙之方法，該炎性疾病、病症或障礙如氣喘、慢性阻塞性肺病（COPD）、異位性皮膚炎、嗜酸性球性食道炎（EoE）、鼻息肉、慢性自發性蕁麻疹、Ig驅動的疾病、IgA腎病、狼瘡性腎炎、嗜酸性球性胃炎、無鼻息肉的慢性鼻竇炎和特發性肺纖維化（IPF）。在多個實施方式中，疾病、病症或障礙係氣喘，包括重度氣喘、嗜酸性球性或非嗜酸性球性氣喘和低嗜酸性球性氣喘。
氣喘係氣道之一種慢性炎性病症。據估計美國每年氣喘占110萬門診病人就診、160萬急診、444,000住院治療，（Defrances等人, 2008），該資訊可獲自：疾病管制署網站，www.cdc.gov/nchs/data/nhsr/nhsr005.pdf，且3,500例死亡。在易感個體中，氣喘炎症引起喘鳴、呼吸急促、胸悶和咳嗽之復發性事件。認為氣喘之病因係多因素的，受遺傳環境機制（To等人, BMC Public Health [BMC公共健康] 2012;12:204；Chung等人. Eur Respir J [歐洲呼吸雜誌] 2014;43:343-73），與環境過敏原（一種重要起因）（Chung等人, 同上；Pavord ID, 等人, NPJ Prim Care Respir Med [NPJ呼吸初級保健雜誌] 2017;27:17）兩者的影響。大部分病例在一個人變得對過敏原超敏感時出現（異位性）。異位性之特徵在於Th2細胞增加以及Th2細胞介素表現和IgE產生。認為美國大約1000萬患者患有過敏症誘發的氣喘。儘管具有可利用的治療選擇，但氣喘仍然為主要健康問題。在世界範圍內，當前氣喘影響大約3億人；至2020年，預計氣喘影響4億人（Partridge, Eur Resp Rev.[歐洲呼吸綜述] 16:67-72, 2007）。
異位性氣喘患者吸入過敏原誘發一些氣喘表現，包括可逆的氣流阻塞、氣道高反應性、以及嗜酸性球性和嗜鹼性氣道炎症。過敏原吸入激發已成為許多物種中氣喘之主要模型（Bates等人, Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol.[美國生理學雜誌-肺細胞生理學與分子生理學] 297(3):L401-10, 2009；Diamant等人, J Allergy Clin Immunol.[過敏與臨床免疫學雜誌] 132(5):1045-1055, 2013）。
已鑒別出難以用類固醇治療來治療的不同氣喘亞型。嗜酸性球為特有地由Th2型CD4+ T細胞介導的過敏性氣喘中的重要炎性細胞。在重度氣喘中嗜中性球氣道炎症與皮質類固醇治療有關且可由Th1或Th17型T細胞介導（Mishra等人, Dis.Model.Mech.[疾病模型與機制] 6:877-888, 2013）。
診斷和評估氣喘的量度包括以下：使用標準化單次呼吸的呼出氣一氧化氮分數（FeNO）（美國胸科學會（American Thoracic Society）；ATS, Am J Respir Crit Care Med.[美國呼吸與危重症醫學雜誌] 171(8):912-30, 2005）測試而評估的氣道炎症。根據ATS/歐洲呼吸協會（European Respiratory Society，ERS）指南進行肺活量測定法（Miller等人, Eur Respir J.[歐洲呼吸雜誌] 26(1):153-61, 2005）。在受試者進行BD前肺活量測定法之後評估支氣管擴張劑後（BD後）肺活量測試。使用SABA，如舒喘寧（albuterol）（90 μg計量的劑量）或沙丁胺醇（salbutamol）（100 μg計量的劑量）或等同物，利用隔離裝置，誘發最大支氣管擴張，最多進行總共8次吹吸（Sorkness等人, J Appl Physiol.[應用生理學雜誌] 104(2):394-403, 2008）。將在4次、6次或8次吹吸之後獲得的最高BD前和BD後FEV 1用於測定可逆性及進行分析。氣喘控制問卷（ACQ）6為評估氣喘症狀（即夜間醒來、醒來症狀、活動限制、呼吸淺短、喘鳴）和每日使用拯救支氣管擴張劑和FEV 1的由患者報告的問卷（Juniper等人, 1999年10月）。ACQ-6為ACQ之縮短版本，其自初始ACQ評分省略FEV 1測量。平均ACQ評分為響應平均值。平均評分 ≤ 0.75指示氣喘控制良好，評分在0.75與 ≤ 1.5之間指示氣喘得到部分控制，且評分 ＞ 1.5指示氣喘不受控制（Juniper等人, Respir Med.[呼吸道醫學] 100(4):616-21, 2006）。認為至少0.5的個體變化為臨床上有意義的（Juniper等人, Respir Med.[呼吸道醫學] 99(5):553-8, 2005）。標準化氣喘生活品質問卷（AQLQ[S]）+12（AQLQ(S)+12）為測量氣喘患者所經歷的HRQoL的32項問卷（Juniper等人, Chest.[胸]115(5):1265-70, 1999年5月）。氣喘每日日誌也用於評估。
相關的美國專利公開案號US-2018-0296669（藉由引用併入本文）揭露了用抗TSLP抗體治療有效地減少非嗜酸性球性/低嗜酸性球性群體中的氣喘症狀（如同其在高嗜酸性球性群體中一般）。還預期降低受試者的氣喘惡化頻率之方法。
本文還預期治療具有Th2高氣喘概況或Th2低氣喘概況的受試者的氣喘之方法。預期抑制TSLP蛋白與其受體複合物結合的TSLP拮抗劑將與本文所述之抗體一樣有效地治療低嗜酸性球性氣喘群體。相似地，預期抑制TSLP與其受體複合物結合的TSLP拮抗劑將有效地治療Th2低氣喘群體。還預期用於治療受試者的慢性阻塞性肺病（COPD）之方法，該方法包括投與本文所述之抗TSLP抗體或抗體變體或抗原結合蛋白。預期待治療的受試者為人類。受試者可為成人、青少年或兒童。
治療性抗體（或抗體變體）組成物可在多個部位遞送至患者。多次投與可同時進行或可在一段時間內投與。在某些情況下，提供治療性組成物的連續流動為有益的。可週期性投與其他療法，例如每小時、每日、每週、每2週、每3週、每月或以更長時間間隔。
在多個實施方式中，既定劑量的治療劑（如具有兩個TSLP結合位點的二價抗體）之量可根據療法投與的個體之體型以及所治療的病症之特徵而變化。
在示例性治療中，抗TSLP抗體或抗體變體以每日劑量約70 mg至約280 mg的劑量範圍投與。例如，劑量能以約70 mg、210 mg或280 mg投與。在多個實施方式中，抗TSLP抗體或抗體變體能以每劑70 mg、80 mg、90 mg、100 mg、110 mg、120 mg、130 mg、140 mg、150 mg、160 mg、10 mg、180 mg、190 mg、200 mg、210 mg、220 mg、230 mg、240 mg、250 mg、260 mg、270 mg或280 mg的劑量投與。該等濃度能以單個劑型或多個劑量投與。以上劑量每兩週或每四週投與。在多個實施方式中，抗TSLP抗體或抗體變體以70 mg的單次劑量每兩週或每四週投與。在多個實施方式中，抗TSLP抗體或抗體變體以210 mg的單次劑量每兩週或每四週投與。在多個實施方式中，抗TSLP抗體或抗體變體以280 mg的單次劑量每兩週或每四週投與。
對於抗體變體，抗體變體之量應使劑量中的TSLP結合位點之數目與上述標準二價抗體的TSLP結合位點數目係等莫耳的。
預期抗TSLP抗體或抗體變體每2週或每4週投與至少4個月、6個月、9個月、1年或更長時間的時期。在多個實施方式中，該投與為皮下或靜脈內。
預期用抗TSLP抗體或抗體變體治療會減少受試者的血液、痰液、支氣管肺泡液或肺中之嗜酸性球。還預期該投與將受試者中的細胞計數自Th2高群體變成Th2低群體。進一步預期投與抗TSLP抗體改善受試者中一或多個氣喘量度，該氣喘量度選自由以下組成之群組：用力呼氣量（FEV）、FEV1可逆性、用力肺活量（FVC）、FeNO、氣喘控制問卷-6評分和AQLQ(S) +12評分。
氣喘改善可被測量為以下中之一或多個：AER（年惡化率）降低；氣喘的住院治療/重度惡化減少；首次氣喘惡化（在開始用抗TSLP抗體治療後）的時間自基線的變化（增加）；在治療過程（例如52週）中具有一或多次氣喘惡化或重度惡化的受試者之比例相對於安慰劑減少；FEV1和FVC（支氣管擴張劑前和支氣管擴張劑後）自基線的變化（增加）；血液或痰液的嗜酸性球（或若獲得活檢或BAL流體，則為肺嗜酸性球性）自基線的變化（減少）；FeNO自基線的變化（減少）；IgE自基線的變化（減少）；如藉由包括ACQ和變體、AQLQ和變體、SGRQ和氣喘症狀日誌的PRO所測量的氣喘症狀和控制有所改善；拯救藥物之使用變化（減少）；全身性皮質類固醇之使用減少；血液中Th2/Th1細胞比率下降。大部分/所有該等量度應在總群體和亞群中，包括高和低嗜酸性球（大於或等於250為高；小於250為低）、過敏性和非過敏性、Th2高和低、骨膜蛋白高和低（與中位數值相比）和FeNO高和低（大於或等於24或小於24）。
本揭露中還預期投與多種藥劑，如抗體組成物結合如本文所述之第二藥劑，包括但不限於消炎劑或氣喘療法。
然而，預期在多個實施方式中，該投與降低受試者中共同投與的療法之頻率或水平。示例性共同投與的療法包括但不限於吸入型皮質類固醇（ICS）、長效β2促效劑（LABA）、白三烯受體拮抗劑[LTRA]、長效抗蕈毒鹼藥[LAMA]、色甘酸鈉、短效β2促效劑（SABA）、以及茶鹼或口服皮質類固醇。在多個實施方式中，該投與消除對皮質類固醇療法的需要。 配製物
在一些實施方式中，本揭露涵蓋藥物組成物之用途，該藥物組成物包含治療有效量的抗TSLP抗體或抗體變體連同藥學上可接受的稀釋劑、載體、增溶劑、乳化劑、防腐劑和/或輔助劑。另外，本揭露提供藉由投與此類藥物組成物治療受試者之方法。
在某些實施方式中，可接受的配製物質較佳的是在所用劑量和濃度下對接受者無毒。在某些實施方式中，藥物組成物可含有用於改變、維持或保持例如組成物之pH值、滲透壓度、黏度、透明度、顏色、等滲性、氣味、無菌性、穩定性、溶解或釋放速率、吸附或穿透的配製物質。在此類實施方式中，適合的配製物質包括但不限於胺基酸（如甘胺酸、麩醯胺、天冬醯胺、精胺酸或離胺酸）；抗微生物劑；抗氧化劑（如抗壞血酸、亞硫酸鈉或亞硫酸氫鈉）；緩衝劑（如硼酸鹽、碳酸氫鹽、Tris-HCl、檸檬酸鹽、磷酸鹽或其他有機酸）；疏鬆劑（如甘露糖醇或甘胺酸）；螯合劑（如乙二胺四乙酸（EDTA））；錯合劑（如咖啡因、聚乙烯吡咯啶酮、β-環糊精或羥丙基-β-環糊精）；填充劑；單糖；二糖；和其他碳水化合物（如葡萄糖、蔗糖、甘露糖或糊精）；蛋白質（如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白）；著色劑、調味劑和稀釋劑；乳化劑；親水聚合物（如聚乙烯吡咯啶酮）；低分子量多肽；成鹽抗衡離子（如鈉）；防腐劑（如氯化苯二甲烴銨、苯甲酸、水楊酸、乙汞硫柳酸鈉、苯乙醇、對羥苯甲酸甲酯、對羥苯甲酸丙酯、洛赫西定、山梨酸或過氧化氫）；溶劑（如甘油、丙二醇或聚乙二醇）；糖醇（如甘露糖醇或山梨糖醇）；助懸劑；界面活性劑或潤濕劑（如普朗尼克（pluronics）、PEG、山梨醇酯、聚山梨醇酯（如聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯）、氚核、三木甲胺、卵磷脂、膽固醇、泰洛沙星（tyloxapal））；穩定性增強劑（如蔗糖或山梨糖醇）；張力增強劑（如鹼金屬鹵化物、較佳的是氯化鈉或氯化鉀，甘露糖醇，山梨糖醇）；遞送媒介物；稀釋劑；賦形劑和/或藥用輔助劑。參見REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES [雷明頓藥物科學], 第18''版, （A. R. Genrmo編輯）, 1990, Mack Publishing Company [麥克出版公司]。
適合的媒介物或載體可為注射用水、生理鹽水溶液或人造腦脊髓液，可能補充有組成物中常見的用於腸胃外投與的其他物質。中性緩衝鹽水或與血清白蛋白混合的鹽水係另外的示例性媒介物。在特定實施方式中，藥物組成物包含約pH 7.0-8.5的Tris緩衝液或約pH 4.0-5.5的乙酸鹽緩衝液，且可進一步包括山梨糖醇或其適合取代物。
配製物組分較佳的是以對投與部位可接受的濃度存在。在某些實施方式中，使用緩衝液以將組成物維持在生理pH值或稍低pH值下，典型地在約4.5至約8的pH值範圍內。包括約4.5、約4.6、約4.7、約4.8、約4.9、約5.0、約5.1、約5.2、約5.3、約5.4、約5.5、約5.6、約5.7、約5.8、約5.9、約6.0、約6.1、約6.2、約6.3、約6.4、約6.5、約6.6、約6.7、約6.8、約6.9、約7.0、約7.1、約7.2、約7.3、約7.4、約7.5、約7.6、約7.7、約7.8、約7.9和約8.0。
在多個實施方式中，抗TSLP抗體或抗體變體呈含有乙酸鹽以及脯胺酸、蔗糖、聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80中的一或多種之配製物。在多個實施方式中，配製物包含5-50 mM乙酸鹽、小於或等於3%（w/v）脯胺酸、0.015%（w/v） ± 0.005%（w/v）聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80，pH在4.9和6.0之間。視需要地，抗體或抗體片段處於約100和約150 mg/ml之間的濃度。配製物可儲存在-20°C至-70°C下。包含該等賦形劑的示例性抗TSLP配製物描述於國際申請案號PCT/US 2021/018561中，藉由引用併入本文。
在可替代的實施方式中，抗TSLP抗體或抗體變體呈含有界面活性劑以及至少一種鹼性胺基酸或其鹽之配製物。在示例性情況中，鹼性胺基酸係精胺酸或組胺酸。在多個實施方式中，鹽係精胺酸麩胺酸鹽或組胺酸麩胺酸鹽，視需要地呈10至200 mM的濃度。視需要地，配製物進一步包含脯胺酸。在可替代的實施方式中，抗TSLP抗體或抗體變體呈含有界面活性劑以及鈣或其鹽之配製物。在多個實施方式中，鹽係麩胺酸鈣，視需要地呈15 mM至約150 mM的濃度。視需要地，配製物進一步包含脯胺酸。在多個實施方式中，界面活性劑係聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80、或其混合物。視需要地，抗體或抗體片段處於大於約110 mg/ml，或大於約140 mg/ml的濃度。包含該等賦形劑的示例性抗TSLP配製物描述於國際專利申請案號PCT/US 2021/017880中，藉由引用併入本文。
當考慮腸胃外投與時，使用的治療性組成物可呈無熱原的腸胃外可接受的水溶液形式提供，該水溶液包含在藥學上可接受的媒介物中的所需抗TSLP抗體中。一種尤其適合腸胃外注射的媒介物為無菌蒸餾水，其中抗體配製成適當防腐的無菌等滲溶液。在某些實施方式中，該製備可以涉及用試劑配製所需分子，該試劑如可注射微球、生物可侵蝕顆粒、聚合化合物（如聚乳酸或聚乙醇酸）、珠粒或脂質體，它們可提供可經由積存注射遞送的產品之控制釋放或持續釋放。在某些實施方式中，也可以使用透明質酸，其具有促進在循環中的持續時間的作用。在某些實施方式中，可植入的藥物遞送裝置可用於引入抗體。在多個實施方式中，可以經由載藥注射器或自動注射器投與。在多個實施方式中，自動注射器係Ypsomed YpsoMate®裝置。在多種實施方式中，自動注射器揭露於WO 2018/226565、WO 2019/094138、WO 2019/178151、WO 20120/072577、WO 2020/081479、WO 2020/081480、PCT/US20/70590、PCT/US20/70591、PCT/US20/53180、PCT/US20/53179、PCT/US20/53178、或PCT/US20/53176。 套組
作為另外的一方面，本揭露包括含有一或多種化合物或組成物之套組，該化合物或組成物以有利於其用於實施本揭露方法的方式包裝。在一個實施方式中，這種套組包括本文所述之化合物或組成物，該化合物或組成物包裝在容器，如密封的瓶或容器中，標籤貼在容器上或包括在包裝中，該標籤描述了化合物或組成物在實踐該方法中之用途。較佳的是，化合物或組成物以單位劑型包裝。套組進一步包括適於根據具體的投與途徑投與組成物的裝置或適於實踐篩選測定。較佳的是，套組含有描述抗體組成物之用途的標籤。
本揭露之另外的方面和細節將從以下實例中顯而易見，該等實例旨在說明而非限制。 實例 實例 1
測試了泰派魯單抗（AMG157）之穩定性和在高應激溫度下形成HMW種類的能力。泰派魯單抗經受溫度應激條件，在37°C下攝取配製物中之抗體，並且將溫度升高至如下文所述之條件。使用尺寸排阻層析和肽作圖來確定影響結合和穩定性的屬性。 材料與方法
潛在地影響結合的 AMG 157 和不穩定殘基：作為序列A5（和作為鏈H5、L5）的AMG157之胺基酸序列以及其他幾種TSLP結合抗體先前描述於專利US 7,982,016 B2中。
具有A2G0F/A2G0F糖基化的抗體（C6500 H9998 O2068 N1734 S52）之分子量為147189.4 Da，該抗體包括去除重鏈N末端焦麩胺酸和C末端K。TSLP含有74%單體、23%二聚物和3%四聚體種類。
分子評估後的序列電腦模擬評估鑒定了CDR中的幾個殘基，該等殘基潛在地易受影響結合和功效的化學修飾。考慮了那些CDR殘基以及框架中的其他幾個殘基，並且它們包括基於目前理解的期望目標範圍（圖1，頂部）。CDR中的殘基及其常見修飾被選為可能的屬性，因為它們可能潛在地影響與靶標的結合和功效。
用於鑒定影響結合的化學修飾之方法； 尺寸排阻層析（ SEC ）和級分收集：孵育後，藉由SEC，使用G3000SWxl東曹生命科學公司的7.8 mm ID x 30 cm柱（目錄號08541，東曹生命科學公司，三藩市，加利福尼亞州）以及包括100 mM磷酸鈉和250 mM NaCl（pH 6.8）的流動相，將AMG157混合物分離。將流速設置為0.5 ml/min，將柱溫設置為37°C，執行時間為35分鐘，並且將自動進樣器設置為4°C。在214 nm和280 nm進行紫外/可見光譜（UV/VIS）檢測。使用具有大於10 kDa的分子量截留的過濾器收集洗脫級分，並且用7.5 M胍洗脫緩衝液來洗脫。對洗脫級分進行樣本製備，用於下文所述之肽作圖。
具有配位基複合物抗體的SEC、隨後的LC-MS/MS表徵確定了抗體之未結合級分和結合級分中的修飾比率。該方法不同於SEC方法，SEC方法通常檢測蛋白質之聚集，例如區分單體和二聚物等，因為該方法檢測抗體和配位基之間的結合，而不僅僅是抗體本身的聚集。藉由AMG157蛋白質與其靶標混合，開始SEC結合親和力實驗。藉由SEC-UV分離抗體-抗原混合物後，代表治療性蛋白的結合複合物、配位基，以及含有屬性的未結合的治療性蛋白的該等峰在SEC洗脫曲線中在不同時間下洗脫。這允許收集結合的抗體-抗原複合物和未結合的抗體之級分。一旦收集的級分藉由胰蛋白酶消化並且使用LC-MS/MS方法進行分析，就產生了結合的和未結合的級分中治療性蛋白質屬性之豐度圖。還產生了火山圖，其中log2倍數變化為x軸，並且-log10 p值為y軸。Log2倍數變化代表未結合的/結合的級分中的屬性比率，該倍數變化表示屬性在多大程度上影響治療性蛋白與配位基的結合。p值之負log10代表表示變化倍數的信賴度。
用於鑒定在 50°C 下影響聚集的化學修飾之方法：將相似的方法用於研究AMG 157之50°C1W樣本中的高分子量（HMW）種類和單體種類的屬性。藉由AMG 157 50°C 1W之SEC-UV，隨後藉由LC-MS/MS表徵確定抗體的HMW和單體級分中的修飾比率。SEC分離後，代表具有經鑒定的屬性的單體和HMW種類的峰可以在SEC洗脫曲線中的不同時間洗脫。收集AMG 157 50°C1W之HWW和單體級分，消化，並且使用LC-MS/MS方法分析。產生了HMW和單體抗體中的治療性蛋白的屬性之豐度圖。還產生了火山圖，其中log2倍數變化為x軸，並且-log10 p值為y軸。log2倍數變化代表HMW/單體級分中的屬性之比率，其表示屬性在多大程度上造成HMW抗體之形成。p值之負log10代表變化倍數的信賴度。
肽作圖：使用如在（Ren等人, Anal.Biochem.[分析生物化學] 392 :12-21 (2009)）中所述之樣本製備程序，包括用胍重折疊，二硫鍵之還原和烷基化，緩衝液交換以及用適用於LC-MS分析的肽上的胰蛋白酶消化，進行收集的級分之肽作圖。易言之，將包含AMG157的樣本在0.5 ml的pH 7.5變性緩衝液（7.5 M鹽酸胍（GdnHCl）和0.25 M Tris）中稀釋至約1 mg/ml。藉由添加3 µl的0.5 M二硫蘇糖醇（DTT），隨後在室溫下孵育30分鐘完成還原。藉由添加7 µl的0.5 M碘乙酸（IAA）完成羧甲基化。將反應在黑暗中、在室溫下持續15分鐘。藉由添加4 µl的0.5 M DTT淬滅過量IAA。使用NAP-5柱（通用電氣醫療集團（GE Healthcare），皮斯卡塔韋（iscataway），澤西州, 美國），還原的和烷基化的AMG157樣本緩衝液交換至pH 7.5消化緩衝液（0.1 M Tris或0.1 M碳酸氫銨）中。將冷凍乾燥的胰蛋白酶溶於水中以至終濃度為1 mg/ml。藉由向還原的、烷基化的以及緩衝液交換的抗體1樣本中添加1-mg/ml胰蛋白酶溶液開始消化，以實現1 : 25的酶/底物比率。消化在37°C下進行30分鐘。藉由添加5 tl的20% FA將最終消化物淬滅。如在（Ren等人, Anal.Biochem.[分析生物化學] 392:12-21, 2009）中所述，在Agilent 1290 UHPLC系統上進行消化的抗體樣本之LC-MS/MS肽作圖分析，該系統連接至賽默飛世爾科技公司（Thermo Scientific）Q-Exactive Biopharma質譜儀。藉由MassAnalyzer軟體（Zhang, Anal.Chem.[分析化學] 81 :8354-8364 (2009)），將獲取的LC-MS/MS原始數據和AMG157之序列用於鑒定且定量修飾。
表面電漿共振（SPR）係一種可以測量結合複合物的結合親和力之傳統方法。可以使用SPR檢測Kd ＜ 10 -6M的結合複合物。相比之下，SEC結合親和力實驗可以測量Kd ＜ 10 -8M的抗體/配位基複合物。較弱的結合複合物（Kd ＞ 10 -8M）在SEC柱上解離。因此，抗體和配位基分子作為未結合的種類分別洗脫。
泰派魯單抗之50°C一週（1W）應激產生很大百分比（約67%）的高分子量（HMW）種類。HMW種類含有高百分比的化學修飾，包括在幾個殘基上的異構化和脫醯胺化，尤其是LC D91之異構化。D91異構化在HMW級分中顯著增加至約23%，而在單體中增加至1%。
還評估了在40°C下持續四週（40C4W）的4週應激對泰派魯單抗與TSLP結合的影響。藉由使用SEC親和力結合，隨後藉由使用肽作圖，選擇潛在地影響TSLP結合的AMG 157之五種屬性（例如，化學修飾）用於分析：HC D54異構化、HC W102氧化、LC D49或D50異構化、LC N65脫醯胺化以及LC D91異構化（圖3）。對於D49或D50對，難以區分這兩個殘基對結合的影響，因為它們都促進結合。對結合的影響按以下排序：D54＞W102＞D49/D50＞N65＞D91。在保質期結束條件下進行測試後，只有該等修飾（LC D49或D50異構化）中的一種可能超過2%的可檢測水平，保質期條件確定為在5°C下儲存2年，然後在25°C下儲存2個月（2Y5C + 2M25C）。從典型抗體-抗原平衡解離常數為Kd = 10 -10M起，結合變得比Kd = 10 -8M更弱，導致抗體-抗原複合物在SEC柱上解離，並且分別洗脫兩種分子。該方法與表徵CEX級分的傳統方法顯示出良好的相關性，這表明HC D54異構化與藉由基於細胞的測定測量的功效損失密切相關。
為驗證肽作圖方法的適用性，已對CDR和鄰近區域中的不穩定殘基進行了電腦模擬預測，表明將可能發生泰派魯單抗（AMG157）之16種修飾（屬性），並且可能影響AMG 157對TSLP之結合。在AMG 157 T0和40C4W樣本上進行肽作圖，並且鑒定16種預測的修飾。含有肽的HC D62回收率低，並且不可有效地定量HC D62異構化。肽作圖結果證實，肽作圖方法可以檢測除了HC D62的所有修飾，並且適用於該研究（圖2）。
提出了幾個可能的抗體屬性之突變（具有化學修飾的殘基和以下殘基），包括HC D54E、HC G55A、LC D49E或D50E、LC S51A，以增加室溫穩定性。美國專利案號7,982,016揭露了作為序列A5（和作為鏈H5、L5）的抗TSLP抗體，其在CDR SEQ ID NO: 3-8中列出。
泰派魯單抗之50C1W應激產生了很大百分比（約67%）的HMW種類。HMW種類含有高百分比的化學修飾，包括在幾個殘基上的異構化和脫醯胺化，尤其是LC D91和HC D54之異構化，表明由於影響結合的化學修飾（屬性），HMW級分可能具有較低的功效。此外，在結合後，泰派魯單抗40C4W樣本之HMW種類保持不變，表明該種類不參與TSLP結合。 結果
總計，基於電腦模擬序列分析，15種修飾被認為是AMG 157與TSLP結合中的潛在的修飾屬性（圖1）。應用肽作圖來測量AMG 157 T0和40°C4W樣本中預測的屬性之百分比（圖2）。40°C4W對應於液體配製物之保質期（4°C2Y），並且被認為是產生和儲存之合理的條件。在產生和儲存之合理的條件下，＞ 2%的修飾係HC D54異構化、HC N57脫醯胺化、HC D62異構化以及LC D49D50異構化，然而並非所有該等修飾影響與TSLP之結合。
影響與 TSLP 結合的 AMG 157 之化學修飾：AMG157 40°C4W和TSLP之SEC親和力結合用於實驗確定影響結合的殘基和修飾。SEC-UV譜表明，40°C4W應激之後，在15.5分鐘洗脫的未結合的AMG157構成小於10%，表示功效之損失應小於10%，這與功效測量值非常一致（圖8A）。基於AMG 157（147 kDa）和TSLP（16 kDa）之洗脫時間和理論分子量，將在14分鐘時洗脫的峰指定為含有1個抗體和2個TSLT分子之複合物，15分鐘時洗脫的峰指定為含有1個抗體和1個TSLP分子。使用相同SEC條件和多角度光散射（MALS）檢測器的其他實驗在該等時間洗脫的質量複合物中鑒定出相似性。當AMG 157 T0或40°C4W與TSLP結合時，還觀察到在約10.5至12.5分鐘洗脫的大的複合物（圖3A）。它們可以用TSLP含有23%二聚物和3%四聚體種類的事實來解釋（參見「材料和方法」部分），這可以潛在地交聯幾種抗體，形成更大的複合物。可以注意到，CEX鹼性級分之生物學表徵顯示受體-配位基結合和基於細胞的報告基因功效下降（圖8C）。生化表徵（包括肽作圖）鑒定了CDR天冬胺酸異構化和幾個其他富含鹼性CEX級分之修飾，包括片段種類（HMW）之聚集、部分還原種類、高甘露糖和非岩藻糖基化聚糖、非CDR Met氧化、重鏈C末端離胺酸和N末端傳訊肽、二硫化物同種型A。將包括抗體-抗原之SEC的方法用作正交方法，以評估並區分影響與TSLP結合的抗體之化學修飾和不影響結合之修飾。
藉由AMG157 40°C4W和TSLP複合物之SEC，隨後藉由LC-MS/MS表徵確定了在AMG157之未結合的級分 (5) 和結合的級分 (3) 中的修飾之比率。統計學顯著性p ＜ 0.03，五個殘基被認為具有相關的屬性：HC D54異構化、HC W102氧化、LC D49或D50異構化、LC N65脫醯胺化以及LC D91異構化。對於D49D50對，難以區分這兩個殘基中的哪個發生了突變，它們兩者都促進結合。每種修飾之相對豐度總結於圖3B。AMG 157之結合的和未結合的級分中的所有五種屬性都小於10%。在AMG 157之HC D54異構化中，發現結合的和未結合的級分之間的修飾百分比差異最大（比率或倍數變化）。在結合的和未結合的級分中HC D54異構化之豐度分別為約0.5%和約3.5%。在AMG 157 40°C4W之未結合的級分中，LC D49D50異構化顯示出最高的百分比（約6.2%）。
天冬胺酸（D）易受HCDR2中當前DG模體異構化影響，但如果其中一個殘基發生變化（例如，G變為A或D變為E），則受不同組態的影響較小。相似地，LCDR2具有模體DDSDRPS，其中一或多個天冬胺酸易受異構化影響，所以提出改變殘基（例如，D至E或S至A）以改善穩定性。
圖4顯示出火山圖，該火山圖用於確定AMG157 40°C4W中與TSLP結合的相關屬性。在統計圖中，log2（未結合的/結合的）表示結合強度，該強度為D54＞W102＞D49D50＞N65＞D91。據估計，未結合的AMG 157對TSLP的平衡解離常數（Kd）變為Kd ＞ 10 -8M，此時降解的抗體在柱上與TSLP解離。與典型的AMG157 Kd在nM範圍內相比，未結合的AMG157表現出更加弱的結合。在SEC親和力結合方法中，D54異構化顯示出未結合的%/結合的%之最高的倍數變化（值為6），其中鑒定出高信賴度（p值 = 4 x 10 -4）。與AMG 157之屬性建模結合，SEC親和力結合實驗表明幾個相關屬性之突變（具有化學修飾的殘基和以下殘基），包括HC D54E、HC G55A、LC D49D50E以及LC S51A，可以增強室溫穩定性（圖1，上圖）。
對結合顯示出潛在影響的殘基和修飾（HC D54異構化、HC W102氧化、LC D49D50異構化、LC N65脫醯胺化以及LC D91異構化）被列為可能的屬性。另一方面，被認為有可能的屬性之幾個其他殘基不影響SEC親和法的結合。圖5總結了AMG157 40°C4W中的11種修飾之結合的和未結合的級分之相對豐度，該等修飾在結合的和未結合的級分之間未發生統計學上顯著的改變（圖1和圖4）。此外，除了HC M34氧化和HC D62異構化之外，在配製物中40°C下4週應激之後，所有修飾百分比都低於1%，表示該等修飾不會構成顯著的修飾百分比。
在15.6分鐘洗脫的未結合的抗體（峰5）相比於在10.5-12.5分鐘洗脫的複合物（峰1+2）之屬性與峰5相比於峰3之屬性相同，但統計更差。這表示大的複合物係抗體-TSLP複合物。
本發現與AMG 157 Fab與TSLP結合的晶體結構一致，表明HC D54、HC W102和LC D49與TSLP的距離很近（在6 Å之內），並且很可能直接參與結合。應當提到的是，異天冬胺酸形成（HC D54、LC D49D50、D91）導致骨架延伸（和側鏈縮短），從而改變該等殘基和附近殘基之位置和取向。這可能導致結合之損失。選擇複合物中最接近的原子來測量距離，而不考慮可能相互作用的性質（疏水性、氫鍵、鹽橋）。總之，在LC D49D50、LC N65和LC D91發生異構化後，可能會發生長程變構作用，導致與TSLP之結合損失。
與傳統方法相關：按照傳統方法，藉由CEX將AMG 157 40°C4W樣本分離成主要級分和三個鹼性級分，收集級分，並且藉由肽作圖和其相關功效表徵化學修飾。藉由基於細胞的測定和結合測定測量相關功效。該等測定之結果表示，鹼性級分3含有39%的D54異構化，並且其基於細胞的功效僅有61%，表示該化學修飾影響基於細胞的測定中的功效。該結果與結合TSLP之SEC親和力非常一致，鑒定出HC D54異構化在未結合的級分與結合的級分中的比率最高，並且對結合的影響最大。
在 50°C 下與聚集相關的化學修飾：AMG157 40°C4W樣本中，HMW種類之百分比為約9%。AMG157之50°C1W應激產生很大百分比（約67%）的HMW種類，表明在此溫度下抗體分子之部分解折疊。藉由SEC分離後，收集在AMG157 50°C1W中的HMW和單體種類，並且使用肽作圖分析。藉由使用SEC親和力結合測量中採用的相似的統計方法，生成了火山圖以評估AMG 157之HMW種類形成中涉及的屬性（圖6A）。在火山圖之右上角，七個屬性似乎與具有統計學顯著性的HMW形成相關（圖6B中用星號標出）。繪製HMW和單體之該等修飾和來自「具有相近統計學顯著性的灰色區域」的幾個其他修飾之豐度（圖6B）。異構化、脫醯胺化和琥珀醯亞胺形成（H 2O損失）構成了與HMW形成密切相關的大部分修飾。例如，LC D91異構化在HMW級分中顯著增加至約23%，而在單體中增加至1%。另一種潛在地影響結合的修飾（HC D54異構化）在HMW級分中為10%，而在單體中為2%。也就是說，LC D91異構化和HC D54異構化各自與HMW種類之形成相關。影響HMW級分結合的高水平化學修飾表明，與單體相比，HMW級分可能具有較低的功效。此外，在與TSLP結合後，在10.5分鐘下由SEC洗脫的AMG 157之HMW種類保持「未消耗」，進一步表明HMW種類具有弱結合。值得注意的是，AMG 157 40C4W HMW種類之尺寸較大，並且在極端的尺寸分離下洗脫。
在50°C1W之後，AMG157中疑似部分解折疊和觀察到的顯著的HMW種類形成可能暴露了未在典型過程中暴露和修飾的殘基。利用40°C4W應激物質，產生了較少的HMW種類和修飾，應該更能代表典型過程。
總的來說，SEC親和力結合方法實驗確定了影響AMG 157與TSLP結合的殘基和修飾。當統計學顯著性為p ＜ 0.03時，HC D54異構化、HC W102氧化、LC D49或D50異構化、LC N65脫醯胺化以及LC D91異構化似乎是AMG157與TSLP之結合的相關屬性。具有高度統計學顯著性的以及40°C4W後大於2%的、影響結合的修飾係HC D54和LC D50異構化。值得注意的是，在其他研究（如生物測定）中，D49/50異構化與功效損失不相關，並且當前在高應激條件下的發現可能是該方法之假影。化學修飾與50°C1W應激之後HMW種類之形成相關，尤其是LC D91異構化。考慮到該等結果，提出了AMG157屬性之幾個突變（具有化學修飾的殘基和以下殘基），包括HC D54E、HC G55A、LC D49E或LC D50E、LC S51A，以改善室溫穩定性。
本文討論和引用的所有出版物、專利和專利申請均藉由引用以其整體特此併入。應理解，所揭露的發明不限於所描述的特定方法、方案和材料，因為該等可以變化。還應理解，本文所用的術語僅用於描述特定實施方式的目的，並不旨在限制所附申請專利範圍之範圍。
熟悉該項技術者將認識到或能夠確定本文所述之本發明之該等特定實施方式之許多等效形式。此類等效形式旨在被以下申請專利範圍所涵蓋。
無
[圖1]展示了表徵潛在影響結合的殘基和修飾之工作流程，該結合由熱應激AMG157（40C4W）和TSLP之SEC親和力結合確定。顯示了電腦模擬序列分析（上圖）。經過修飾的幾個殘基突變被認為改善了AMG 157在室溫下的穩定性（下圖）。
[圖2]顯示出如藉由抗原-抗體複合物之SEC確定的AMG 157之T0、40C4W和22M5C+2M25C樣本中的潛在屬性之相對豐度。根據電腦模擬序列（如圖1所示），預測該等屬性潛在地影響TSLP穩定性。白色、黑色和灰色條柱分別代表AMG 157 T0、40C4W和22M5C+2M25C樣本中的修飾百分比。顯示的虛線代表2%。
[圖3A]顯示出AMG157 T0、AMG157 40C4W、TSLP、AMG157 T0 + TSLP混合物，以及AMG157 40C4W + TSLP混合物之SEC-UV譜。基於峰形和分子量指定五個SEC-UV峰區域。峰3代表AMG 157與TSLP之結合級分，並且峰5對應於AMG 157之未結合級分。每個指定的峰之動畫顯示在對應峰值之頂部。圖3B顯示出SEC結合和未結合的級分中的五個屬性之修飾百分比。
[圖4]係火山圖，顯示出AMG 157之屬性如何在影響TSLP結合的統計中分佈。出現在右上角的屬性係潛在地影響TSLP結合的AMG 157之修飾。X軸係未結合和結合之間的變化倍數之log2值，並且y軸係代表統計學顯著性的p值之-log 10值。灰色區域被認為是背景。
[圖5A和5B]顯示出10個殘基中結合的和未結合的AMG157級分之修飾百分比，基於電腦模擬序列分析該等殘基被認為是潛在重要的。然而，抗體-抗原之SEC表明未結合的與結合的級分中修飾之比率沒有統計學差異。據推測，修飾不會影響如藉由抗體-抗原方法之SEC測量的結合。圖5A和5B之百分比刻度分別為0-50%和0-1%。
[圖6]顯示出AMG 157 T0、40°C4W和50°C1W之SEC-UV譜。AMG 157 T0、40°C4W和50°C1W之SEC-UV譜分別以黑色實線、藍色點線和紅色虛線顯示。基於AMG 157之洗脫時間和理論分子量，將在約10.5分鐘洗脫的峰指定為AMG 157之高分子量種類（HMW），並且將在約15.5分鐘洗脫的峰指定為AMG 157之單體。根據積分峰面積，在40°C4W和50°C1W中的HMW種類之百分比分別為約9%和67%，並且在該圖中左上方標出。
[圖7A]顯示了火山圖，該火山圖顯示了50C1W應激之後AMG 157之屬性如何在HMW和單體種類之間分佈和統計意義。出現在右上角的屬性係與50C1W中HMW之形成相關的AMG 157之修飾。X軸係HMW和單體種類之間的倍數變化之log2值，並且y軸係代表統計學顯著性的p值之-log 10值。灰色區域被認為是背景雜訊，但也可能含有信賴度較低的真值。圖7B顯示出AMG 157 50C1W樣本之HMW種類和單體中的20個修飾之百分比。這20個修飾包括右上角白色的統計學顯著性修飾（帶有星號的7個修飾標誌）和鄰近「具有相近統計學顯著性的灰色區域」的修飾。這20個修飾之每一個具有相對高的倍數變化值和顯著性。這20個修飾的p值之-log 10值與倍數變化之log2值之總和 ＞ 4.6。
[圖8A]顯示出藉由肽作圖進行的異構化水平測量以及在40°C下應激持續4週的抗體原料藥和抗體之功效測量。圖8B顯示出抗體之CEX-HPLC譜。圖8C顯示出藉由肽作圖進行化學修飾的AMG 157 40°C4W樣本的CEX級分之傳統表徵方法和相對功效之結果。圖8D顯示出的保質期即將結束的長期穩定性研究之結果。
無
 

          <![CDATA[<110>  美商安進公司（Amgen Inc.）]]>
          <![CDATA[<120>]]>  經修飾的抗TSLP抗體
          <![CDATA[<130>  32053/55581]]>
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                               1               5                   10               
          gtt tct ttc agg aaa atc ttc atc tta caa ctt gta ggg ctg gtg tta        280
          Val Ser Phe Arg Lys Ile Phe Ile Leu Gln Leu Val Gly Leu Val Leu           
                      15                  20                  25                    
          act tac gac ttc act aac tgt gac ttt gag aag att aaa gca gcc tat        328
          Thr Tyr Asp Phe Thr Asn Cys Asp Phe Glu Lys Ile Lys Ala Ala Tyr           
                  30                  35                  40                        
          ctc agt act att tct aaa gac ctg att aca tat atg agt ggg acc aaa        376
          Leu Ser Thr Ile Ser Lys Asp Leu Ile Thr Tyr Met Ser Gly Thr Lys           
              45                  50                  55                            
          agt acc gag ttc aac aac acc gtc tct tgt agc aat cgg cca cat tgc        424
          Ser Thr Glu Phe Asn Asn Thr Val Ser Cys Ser Asn Arg Pro His Cys           
          60                  65                  70                  75            
          ctt act gaa atc cag agc cta acc ttc aat ccc acc gcc ggc tgc gcg        472
          Leu Thr Glu Ile Gln Ser Leu Thr Phe Asn Pro Thr Ala Gly Cys Ala           
                          80                  85                  90                
          tcg ctc gcc aaa gaa atg ttc gcc atg aaa act aag gct gcc tta gct        520
          Ser Leu Ala Lys Glu Met Phe Ala Met Lys Thr Lys Ala Ala Leu Ala           
                      95                  100                 105                   
          atc tgg tgc cca ggc tat tcg gaa act cag ata aat gct act cag gca        568
          Ile Trp Cys Pro Gly Tyr Ser Glu Thr Gln Ile Asn Ala Thr Gln Ala           
                  110                 115                 120                       
          atg aag aag agg aga aaa agg aaa gtc aca acc aat aaa tgt ctg gaa        616
          Met Lys Lys Arg Arg Lys Arg Lys Val Thr Thr Asn Lys Cys Leu Glu           
              125                 130                 135                           
          caa gtg tca caa tta caa gga ttg tgg cgt cgc ttc aat cga cct tta        664
          Gln Val Ser Gln Leu Gln Gly Leu Trp Arg Arg Phe Asn Arg Pro Leu           
          140                 145                 150                 155           
          ctg aaa caa cag taaaccatct ttattatggt catatttcac agcccaaaat            716
          Leu Lys Gln Gln                                                           
          aaatcatctt tattaagtaa aaaaaaa                                          743
          <![CDATA[<210>  2]]>
          <![CDATA[<211>  159]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  2]]>
          Met Phe Pro Phe Ala Leu Leu Tyr Val Leu Ser Val Ser Phe Arg Lys 
          1               5                   10                  15      
          Ile Phe Ile Leu Gln Leu Val Gly Leu Val Leu Thr Tyr Asp Phe Thr 
                      20                  25                  30          
          Asn Cys Asp Phe Glu Lys Ile Lys Ala Ala Tyr Leu Ser Thr Ile Ser 
                  35                  40                  45              
          Lys Asp Leu Ile Thr Tyr Met Ser Gly Thr Lys Ser Thr Glu Phe Asn 
              50                  55                  60                  
          Asn Thr Val Ser Cys Ser Asn Arg Pro His Cys Leu Thr Glu Ile Gln 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Leu Thr Phe Asn Pro Thr Ala Gly Cys Ala Ser Leu Ala Lys Glu 
                          85                  90                  95      
          Met Phe Ala Met Lys Thr Lys Ala Ala Leu Ala Ile Trp Cys Pro Gly 
                      100                 105                 110         
          Tyr Ser Glu Thr Gln Ile Asn Ala Thr Gln Ala Met Lys Lys Arg Arg 
                  115                 120                 125             
          Lys Arg Lys Val Thr Thr Asn Lys Cys Leu Glu Gln Val Ser Gln Leu 
              130                 135                 140                 
          Gln Gly Leu Trp Arg Arg Phe Asn Arg Pro Leu Leu Lys Gln Gln 
          145                 150                 155                 
          <![CDATA[<210>  3]]>
          <![CDATA[<211>  11]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  尚未歸類的特徵]]>
          <![CDATA[<223>  LCDR1]]>
          <![CDATA[<400>  3]]>
          Gly Gly Asn Asn Leu Gly Ser Lys Ser Val His 
          1               5                   10      
          <![CDATA[<210>  4]]>
          <![CDATA[<211>  7]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  尚未歸類的特徵]]>
          <![CDATA[<223>  LCDR2]]>
          <![CDATA[<400>  4]]>
          Asp Asp Ser Asp Arg Pro Ser 
          1               5           
          <![CDATA[<210>  5]]>
          <![CDATA[<211>  11]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  尚未歸類的特徵]]>
          <![CDATA[<223>  LCDR3]]>
          <![CDATA[<400>  5]]>
          Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser Asp His Val Val 
          1               5                   10      
          <![CDATA[<210>  6]]>
          <![CDATA[<211>  5]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  尚未歸類的特徵]]>
          <![CDATA[<223>  HCDR1]]>
          <![CDATA[<400>  6]]>
          Thr Tyr Gly Met His 
          1               5   
          <![CDATA[<210>  7]]>
          <![CDATA[<211>  17]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  尚未歸類的特徵]]>
          <![CDATA[<223>  HCDR2]]>
          <![CDATA[<400>  7]]>
          Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys His Tyr Ala Asp Ser Val Lys 
          1               5                   10                  15      
          Gly 
          <![CDATA[<210>  8]]>
          <![CDATA[<211>  13]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  尚未歸類的特徵]]>
          <![CDATA[<223>  HCDR3]]>
          <![CDATA[<400>  8]]>
          Ala Pro Gln Trp Glu Leu Val His Glu Ala Phe Asp Ile 
          1               5                   10              
          <![CDATA[<210>  9]]>
          <![CDATA[<211>  366]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  尚未歸類的特徵]]>
          <![CDATA[<223>  重鏈VH]]>
          <![CDATA[<400>  9]]>
          cagatgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc       60
          tcctgtgcag cgtctggatt caccttcaga acctatggca tgcactgggt ccgccaggct      120
          ccaggcaagg gactggagtg ggtggcagtt atatggtatg atggaagtaa taaacactat      180
          gcagactccg tgaagggccg attcaccatc accagagaca attccaagaa cactctgaat      240
          ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagcccct      300
          cagtgggagc tagttcatga agcttttgat atctggggcc aagggacaat ggtcaccgtc      360
          tcttca                                                                 366
          <![CDATA[<210>  10]]>
          <![CDATA[<211>  122]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  尚未歸類的特徵]]>
          <![CDATA[<223>  重鏈VH]]>
          <![CDATA[<400>  10]]>
          Gln Met Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Thr Tyr 
                      20                  25                  30          
          Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys His Tyr Ala Asp Ser Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Thr Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Asn 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Ala Pro Gln Trp Glu Leu Val His Glu Ala Phe Asp Ile Trp 
                      100                 105                 110         
          Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120         
          <![CDATA[<210>  11]]>
          <![CDATA[<211>  325]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  尚未歸類的特徵]]>
          <![CDATA[<223>  輕鏈VL]]>
          <![CDATA[<400>  11]]>
          tcctatgtgc tgactcagcc accctcggtg tcagtggccc caggacagac ggccaggatt       60
          acctgtgggg gaaacaacct tggaagtaaa agtgtgcact ggtaccagca gaagccaggc      120
          caggcccctg tgctggtcgt ctatgatgat agcgaccggc cctcatggat ccctgagcga      180
          ttctctggct ccaactctgg gaacacggcc accctgacca tcagcagggg cgaagccggg      240
          gatgaggccg actattactg tcaggtgtgg gatagtagta gtgatcatgt ggtatttcgg      300
          cggagggacc aagctgaccg tccta                                            325
          <![CDATA[<210>  12]]>
          <![CDATA[<211>  108]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  尚未歸類的特徵]]>
          <![CDATA[<223>  輕鏈VL]]>
          <![CDATA[<400>  12]]>
          Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln 
          1               5                   10                  15      
          Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Leu Gly Ser Lys Ser Val 
                      20                  25                  30          
          His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val Tyr 
                  35                  40                  45              
          Asp Asp Ser Asp Arg Pro Ser Trp Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 
              50                  55                  60                  
          Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Gly Glu Ala Gly 
          65                  70                  75                  80  
          Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser Asp His 
                          85                  90                  95      
          Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 
                      100                 105             
          <![CDATA[<210>  13]]>
          <![CDATA[<211>  17]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多肽]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  尚未歸類的特徵]]>
          <![CDATA[<222>  (5)..(5)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa為D或E]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  尚未歸類的特徵]]>
          <![CDATA[<222>  (6)..(6)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa為G或A]]>
          <![CDATA[<400>  13]]>
          Val Ile Trp Tyr Xaa Xaa Ser Asn Lys His Tyr Ala Asp Ser Val Lys 
          1               5                   10                  15      
          Gly 
          <![CDATA[<210>  14]]>
          <![CDATA[<211>  17]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多肽]]>
          <![CDATA[<400>  14]]>
          Val Ile Trp Tyr Glu Gly Ser Asn Lys His Tyr Ala Asp Ser Val Lys 
          1               5                   10                  15      
          Gly 
          <![CDATA[<210>  15]]>
          <![CDATA[<211>  17]]>
          <![CDATA[<212>  PR]]>T
          <![CDATA[<213>  人工]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多肽]]>
          <![CDATA[<400>  15]]>
          Val Ile Trp Tyr Asp Ala Ser Asn Lys His Tyr Ala Asp Ser Val Lys 
          1               5                   10                  15      
          Gly 
          <![CDATA[<210>  16]]>
          <![CDATA[<211>  17]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多肽]]>
          <![CDATA[<400>  16]]>
          Val Ile Trp Tyr Glu Ala Ser Asn Lys His Tyr Ala Asp Ser Val Lys 
          1               5                   10                  15      
          Gly 
          <![CDATA[<210>  17]]>
          <![CDATA[<211>  7]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多肽]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  尚未歸類的特徵]]>
          <![CDATA[<222>  (1)..(1)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa為D或E]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  尚未歸類的特徵]]>
          <![CDATA[<222>  (2)..(2)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa為D或E]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  尚未歸類的特徵]]>
          <![CDATA[<222>  (3)..(3)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa為S或A]]>
          <![CDATA[<400>  17]]>
          Xaa Xaa Xaa Asp Arg Pro Ser 
          1               5           
          <![CDATA[<210>  18]]>
          <![CDATA[<211>  7]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多肽]]>
          <![CDATA[<400>  18]]>
          Glu Asp Ser Asp Arg Pro Ser 
          1               5           
          <![CDATA[<210>  19]]>
          <![CDATA[<211>  7]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多肽]]>
          <![CDATA[<400>  19]]>
          Asp Glu Ser Asp Arg Pro Ser 
          1               5           
          <![CDATA[<210>  20]]>
          <![CDATA[<211>  7]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多肽]]>
          <![CDATA[<400>  20]]>
          Glu Glu Ser Asp Arg Pro Ser 
          1               5           
          <![CDATA[<210>  21]]>
          <![CDATA[<211>  7]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多肽]]>
          <![CDATA[<400>  21]]>
          Asp Asp Ala Asp Arg Pro Ser 
          1               5           
          <![CDATA[<210>  22]]>
          <![CDATA[<211>  7]]>
          <![CDATA[<212> ]]> PRT
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多肽]]>
          <![CDATA[<400>  22]]>
          Asp Glu Ala Asp Arg Pro Ser 
          1               5           
          <![CDATA[<210>  23]]>
          <![CDATA[<211>  7]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多肽]]>
          <![CDATA[<400>  23]]>
          Glu Asp Ala Asp Arg Pro Ser 
          1               5           
          <![CDATA[<210>  24]]>
          <![CDATA[<211>  7]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多肽]]>
          <![CDATA[<400>  24]]>
          Glu Glu Ala Asp Arg Pro Ser 
          1               5           
          <![CDATA[<210>  25]]>
          <![CDATA[<211>  122]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多肽]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  尚未歸類的特徵]]>
          <![CDATA[<222>  (54)..(54)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa為D或E]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  尚未歸類的特徵]]>
          <![CDATA[<222>  (55)..(55)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa為G或A]]>
          <![CDATA[<400>  25]]>
          Gln Met Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Thr Tyr 
                      20                  25                  30          
          Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ala Val Ile Trp Tyr Xaa Xaa Ser Asn Lys His Tyr Ala Asp Ser Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Thr Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Asn 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Ala Pro Gln Trp Glu Leu Val His Glu Ala Phe Asp Ile Trp 
                      100                 105                 110         
          Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120         
          <![CDATA[<210>  26]]>
          <![CDATA[<211>  122]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多肽]]>
          <![CDATA[<400>  26]]>
          Gln Met Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Thr Tyr 
                      20                  25                  30          
          Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ala Val Ile Trp Tyr Glu Gly Ser Asn Lys His Tyr Ala Asp Ser Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Thr Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Asn 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Ala Pro Gln Trp Glu Leu Val His Glu Ala Phe Asp Ile Trp 
                      100                 105                 110         
          Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120         
          <![CDATA[<210>  27]]>
          <![CDATA[<211>  122]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多肽]]>
          <![CDATA[<400>  27]]>
          Gln Met Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Thr Tyr 
                      20                  25                  30          
          Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ala Val Ile Trp Tyr Asp Ala Ser Asn Lys His Tyr Ala Asp Ser Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Thr Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Asn 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Ala Pro Gln Trp Glu Leu Val His Glu Ala Phe Asp Ile Trp 
                      100                 105                 110         
          Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120         
          <![CDATA[<210>  28]]>
          <![CDATA[<211>  122]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多肽]]>
          <![CDATA[<400>  28]]>
          Gln Met Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Thr Tyr 
                      20                  25                  30          
          Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ala Val Ile Trp Tyr Glu Ala Ser Asn Lys His Tyr Ala Asp Ser Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Thr Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Asn 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Ala Pro Gln Trp Glu Leu Val His Glu Ala Phe Asp Ile Trp 
                      100                 105                 110         
          Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120         
          <![CDATA[<210>  29]]>
          <![CDATA[<211>  108]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多肽]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  尚未歸類的特徵]]>
          <![CDATA[<222>  (49)..(49)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa為D或E]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  尚未歸類的特徵]]>
          <![CDATA[<222>  (50)..(50)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa為D或E]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  尚未歸類的特徵]]>
          <![CDATA[<222>  (51)..(51)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa為S或A]]>
          <![CDATA[<400>  29]]>
          Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln 
          1               5                   10                  15      
          Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Leu Gly Ser Lys Ser Val 
                      20                  25                  30          
          His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val Tyr 
                  35                  40                  45              
          Xaa Xaa Xaa Asp Arg Pro Ser Trp Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 
              50                  55                  60                  
          Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Gly Glu Ala Gly 
          65                  70                  75                  80  
          Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser Asp His 
                          85                  90                  95      
          Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 
                      100                 105             
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          Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln 
          1               5                   10                  15      
          Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Leu Gly Ser Lys Ser Val 
                      20                  25                  30          
          His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val Tyr 
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          Glu Asp Ser Asp Arg Pro Ser Trp Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 
              50                  55                  60                  
          Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Gly Glu Ala Gly 
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          Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser Asp His 
                          85                  90                  95      
          Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 
                      100                 105             
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          Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln 
          1               5                   10                  15      
          Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Leu Gly Ser Lys Ser Val 
                      20                  25                  30          
          His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val Tyr 
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              50                  55                  60                  
          Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Gly Glu Ala Gly 
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                          85                  90                  95      
          Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 
                      100                 105             
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          Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln 
          1               5                   10                  15      
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          His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val Tyr 
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              50                  55                  60                  
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                      100                 105             
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          1               5                   10                  15      
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                      100                 105             
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          Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln 
          1               5                   10                  15      
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                      100                 105             
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          Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln 
          1               5                   10                  15      
          Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Leu Gly Ser Lys Ser Val 
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                      100                 105             
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          Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln 
          1               5                   10                  15      
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                      20                  25                  30          
          His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val Tyr 
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          Gln Met Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 
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          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Thr Tyr 
                      20                  25                  30          
          Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
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              50                  55                  60                  
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                          85                  90                  95      
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                      100                 105                 110         
          Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 
                  115                 120                 125             
          Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr 
              130                 135                 140                 
          Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr 
          145                 150                 155                 160 
          Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro 
                          165                 170                 175     
          Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr 
                      180                 185                 190         
          Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp 
                  195                 200                 205             
          His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys 
              210                 215                 220                 
          Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser 
          225                 230                 235                 240 
          Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 
                          245                 250                 255     
          Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 
                      260                 265                 270         
          Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 
                  275                 280                 285             
          Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val 
              290                 295                 300                 
          Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr 
                          325                 330                 335     
          Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 
                      340                 345                 350         
          Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 
                  355                 360                 365             
          Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 
              370                 375                 380                 
          Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp 
          385                 390                 395                 400 
          Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 
                          405                 410                 415     
          Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 
                      420                 425                 430         
          Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 
                  435                 440                 445             
          <![CDATA[<210>  38]]>
          <![CDATA[<211>  214]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多肽]]>
          <![CDATA[<400>  38]]>
          Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln 
          1               5                   10                  15      
          Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Leu Gly Ser Lys Ser Val 
                      20                  25                  30          
          His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val Tyr 
                  35                  40                  45              
          Asp Asp Ser Asp Arg Pro Ser Trp Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 
              50                  55                  60                  
          Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Gly Glu Ala Gly 
          65                  70                  75                  80  
          Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser Asp His 
                          85                  90                  95      
          Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys 
                      100                 105                 110         
          Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln 
                  115                 120                 125             
          Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly 
              130                 135                 140                 
          Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly 
          145                 150                 155                 160 
          Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala 
                          165                 170                 175     
          Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg Ser 
                      180                 185                 190         
          Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val 
                  195                 200                 205             
          Ala Pro Thr Glu Cys Ser 
              210                 
          <![CDATA[<210>  39]]>
          <![CDATA[<211>  140]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多肽]]>
          <![CDATA[<400>  39]]>
          Tyr Asp Phe Thr Asn Cys Asp Phe Glu Lys Ile Lys Ala Ala Tyr Leu 
          1               5                   10                  15      
          Ser Thr Ile Ser Lys Asp Leu Ile Thr Tyr Met Ser Gly Thr Lys Ser 
                      20                  25                  30          
          Thr Glu Phe Asn Asn Thr Val Ser Cys Ser Asn Arg Pro His Cys Leu 
                  35                  40                  45              
          Thr Glu Ile Gln Ser Leu Thr Phe Asn Pro Thr Ala Gly Cys Ala Ser 
              50                  55                  60                  
          Leu Ala Lys Glu Met Phe Ala Met Lys Thr Lys Ala Ala Leu Ala Ile 
          65                  70                  75                  80  
          Trp Cys Pro Gly Tyr Ser Glu Thr Gln Ile Asn Ala Thr Gln Ala Met 
                          85                  90                  95      
          Lys Lys Arg Thr Thr Asn Lys Cys Leu Glu Gln Val Ser Gln Leu Gln 
                      100                 105                 110         
          Gly Leu Trp Arg Arg Phe Asn Arg Pro Leu Leu Lys Gln Gln His His 
                  115                 120                 125             
          His His His His Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys 
              130                 135                 140
Figure 12_A0101_SEQ_0001
Figure 12_A0101_SEQ_0002
Figure 12_A0101_SEQ_0003
Figure 12_A0101_SEQ_0004
Figure 12_A0101_SEQ_0005
Figure 12_A0101_SEQ_0006
Figure 12_A0101_SEQ_0007
Figure 12_A0101_SEQ_0008
Figure 12_A0101_SEQ_0009
Figure 12_A0101_SEQ_0010
Figure 12_A0101_SEQ_0011
Figure 12_A0101_SEQ_0012
Figure 12_A0101_SEQ_0013
Figure 12_A0101_SEQ_0014
Figure 12_A0101_SEQ_0015
Figure 12_A0101_SEQ_0016
Figure 12_A0101_SEQ_0017
Figure 12_A0101_SEQ_0018
Figure 12_A0101_SEQ_0019
Figure 12_A0101_SEQ_0020
Figure 12_A0101_SEQ_0021
Figure 12_A0101_SEQ_0022
Figure 12_A0101_SEQ_0023
Figure 12_A0101_SEQ_0024
Figure 12_A0101_SEQ_0025
Figure 12_A0101_SEQ_0026
Figure 12_A0101_SEQ_0027

Claims (63)

  1. 一種抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段，該抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段包含 (A)  輕鏈可變結構域，該輕鏈可變結構域包含： (i) 含有SEQ ID NO: 3中所示的胺基酸序列之輕鏈CDR1序列； (ii) 含有SEQ ID NO: 4中所示的胺基酸序列之輕鏈CDR2序列；以及 (iii) 含有SEQ ID NO: 5中所示的胺基酸序列之輕鏈CDR3序列；以及 (B) 重鏈可變結構域，該重鏈可變結構域包含： (i) 含有SEQ ID NO: 6中所示的胺基酸序列之重鏈CDR1序列； (ii) 重鏈CDR2序列，該序列包含在SEQ ID NO: 7中所示的以下殘基D54或G55之一處具有突變的胺基酸序列，以及 (iii) 含有SEQ ID NO: 8中所示的胺基酸序列之重鏈CDR3序列。
  2. 如請求項1所述之抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段，其中HCDR2中之突變為D54E。
  3. 如請求項1所述之抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段，其中HCDR2中之突變為G55A。
  4. 如請求項1至3中任一項所述之抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段，其中該HCDR2具有序列VIWYX 1X 2SNKHYADSVKG，其中X 1為D或E，並且X 2為G或A（SEQ ID NO: 13），視需要地該HCDR2具有以下序列：VIWYEGSNKHYADSVKG（SEQ ID NO: 14）、VIWYDASNKHYADSVKG（SEQ ID NO: 15）或VIWYEASNKHYADSVKG（SEQ ID NO: 16）。
  5. 如請求項1至4中任一項所述之抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段，該抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段視需要地包含SEQ ID NO: 4之以下殘基LCDR2 D49、D50或S51之一處的突變。
  6. 如請求項5所述之抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段，其中該突變為D49E、D50E和/或S51A中之任一個。
  7. 如請求項5或6所述之抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段，其中該LCDR2具有序列X 1X 2X 3DRPS，其中X 1為D或E，X 2為D或E，並且X 3為S或A（SEQ ID NO: 17），視需要地該LCDR2具有以下序列：EDSDRPS（SEQ ID NO: 18）、DESDRPS（SEQ ID NO: 19）、EESDRPS（SEQ ID NO: 20）、DDADRPS（SEQ ID NO: 21）、DEADRPS（SEQ ID NO: 22）、EDADRPS（SEQ ID NO: 23）或EEADRPS（SEQ ID NO: 24）。
  8. 一種抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段，該抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段包含 (A)  輕鏈可變結構域，該輕鏈可變結構域包含： (i) 含有SEQ ID NO: 3中所示的胺基酸序列之輕鏈CDR1序列； (ii) 輕鏈CDR2序列，該序列包含在SEQ ID NO: 4之以下殘基D49、D50或S51之一處具有突變的胺基酸序列；以及 (iii) 含有SEQ ID NO: 5中所示的胺基酸序列之輕鏈CDR3序列；以及 (B) 重鏈可變結構域，該重鏈可變結構域包含： (i) 含有SEQ ID NO: 6中所示的胺基酸序列之重鏈CDR1序列； (ii) 含有SEQ ID NO: 7中所示的胺基酸序列之重鏈CDR2序列，以及 (iii) 含有SEQ ID NO: 8中所示的胺基酸序列之重鏈CDR3序列。
  9. 如請求項8所述之抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段，其中LCDR2中之突變為D49E、D50E和/或S51A。
  10. 如請求項8或9所述之抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段，其中LCDR2中之突變為D49E。
  11. 如請求項8或9所述之抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段，其中LCDR2中之突變為D50E。
  12. 如請求項8或9所述之抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段，其中LCDR2中之突變為S51A。
  13. 如請求項8至12中任一項所述之抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段，其中該LCDR2具有序列X 1X 2X 3DRPS，其中X 1為D或E，X 2為D或E，並且X 3為S或A（SEQ ID NO: 17），視需要地該LCDR2具有以下序列：EDSDRPS（SEQ ID NO: 18）、DESDRPS（SEQ ID NO: 19）、EESDRPS（SEQ ID NO: 20）、DDADRPS（SEQ ID NO: 21）、DEADRPS（SEQ ID NO: 22）、EDADRPS（SEQ ID NO: 23）或EEADRPS（SEQ ID NO: 24）。
  14. 如請求項8至13中任一項所述之抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段，該抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段視需要地包含SEQ ID NO: 7中列出的HCDR2中之以下殘基D54或G55的一處或多處的突變。
  15. 如請求項14所述之抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段，其中該突變為SEQ ID NO: 7中列出的HCDR2中的D54E和/或G55A之任一項。
  16. 如請求項14或15所述之抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段，其中該HCDR2具有序列VIWYX 1X 2SNKHYADSVKG，其中X 1為D或E，並且X 2為G或A（SEQ ID NO: 13），視需要地該HCDR2具有以下序列：VIWYEGSNKHYADSVKG（SEQ ID NO: 14）、VIWYDASNKHYADSVKG（SEQ ID NO: 15）或VIWYEASNKHYADSVKG（SEQ ID NO: 16）。
  17. 如請求項1-16中任一項所述之抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段，該抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段包含： (A) 輕鏈可變結構域，該輕鏈可變結構域選自由以下組成之群組： i.      與SEQ ID NO: 12具有至少80%同一性的胺基酸序列； ii.     由與SEQ ID NO: 11具有至少80%同一性的多核苷酸序列編碼的胺基酸序列；或 iii.    由在中等嚴格條件下與由SEQ ID NO: 11組成的多核苷酸補體雜交的多核苷酸編碼的胺基酸序列；或 (B) 重鏈可變結構域，該重鏈可變結構域選自由以下組成之群組： i.      與SEQ ID NO: 10具有至少80%同一性的胺基酸序列； ii.     由與SEQ ID NO: 9具有至少80%同一性的多核苷酸序列編碼的胺基酸序列；或 iii.    由在中等嚴格條件下與由SEQ ID NO: 9組成的多核苷酸補體雜交的多核苷酸編碼的胺基酸序列；或 (C) (A) 之輕鏈可變結構域和 (B) 之重鏈可變結構域， 其中該抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段保留該抗TSLP抗原結合蛋白或其片段之CDR。
  18. 如請求項1至17中任一項所述之抗原結合蛋白或其片段，其中該抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段包含重鏈、輕鏈，該重鏈包含SEQ ID NO: 10或SEQ ID NO: 25-28的胺基酸序列，該輕鏈包含SEQ ID NO: 12或SEQ ID NO: 29-36的胺基酸序列。
  19. 如請求項1至18中任一項所述之抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段，其中該抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段選自由以下組成之群組：人抗體、人源化抗體、嵌合抗體、單株抗體、重組抗體、抗原結合抗體片段、單鏈抗體、單體抗體、雙抗體、三抗體、四抗體、Fab片段、IgM抗體、IgG1抗體、IgG2抗體、IgG3抗體和IgG4抗體。
  20. 如請求項1至18中任一項所述之抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段，其中該抗原結合蛋白為人抗體。
  21. 如請求項19或20所述之抗體為IgG2抗體。
  22. 如請求項1至21中任一項所述之免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段，其中該抗TSLP抗原結合蛋白或其片段特異性結合如SEQ ID NO: 2之胺基酸29-159中所示的TSLP多肽。
  23. 如請求項1至22中任一項所述之抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段，其中該抗TSLP抗原結合蛋白或其片段之兩個結合位點具有與TSLP的相同的結合。
  24. 如請求項1至23中任一項所述之抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段，以數值不超過10 -8M Kd之親和力結合TSLP。
  25. 一種組成物，該組成物包含如請求項1至24中任一項所述之抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段，以及藥學上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑。
  26. 一種分離的核酸，該核酸包含編碼如請求項1至24中任一項所述之免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段的輕鏈可變結構域、重鏈可變結構域或兩者之多核苷酸序列。
  27. 一種重組表現載體，該重組表現載體包含如請求項26所述之核酸。
  28. 一種宿主細胞，該宿主細胞包含如請求項27所述之載體。
  29. 一種產生免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段之方法，該免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段特異性結合包含SEQ ID NO: 2之胺基酸29-159的TSLP多肽，該方法包括在允許如請求項28所述之宿主細胞表現該免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段的條件下孵育該宿主細胞，其中所述宿主細胞包含 (i) 編碼如請求項1-24中任一項所述之免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段的輕鏈可變結構域之重組表現載體，以及編碼如請求項1-24中任一項所述之免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段的重鏈可變結構域之重組表現載體，或 (ii) 編碼如請求項1至24所述之免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段的輕鏈可變結構域和重鏈可變結構域兩者之重組表現載體。
  30. 如請求項1至24中任一項所述之抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段，與具有SEQ ID NO: 10和SEQ ID NO: 12中列出的胺基酸序列的抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段相比，在25°C下具有增加的穩定性。
  31. 如請求項1至24中任一項所述之抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段，與具有SEQ ID NO: 10和SEQ ID NO: 12中列出的胺基酸序列的抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段相比，在4週後在40°C下具有增加的穩定性。
  32. 如請求項1至24中任一項所述之抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段，與具有SEQ ID NO: 10和SEQ ID NO: 12中列出的胺基酸序列的抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段相比，在4週後在40°C下具有降低的高分子量種類。
  33. 如請求項1至24中任一項所述之抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段，其中該抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段與具有SEQ ID NO: 10和SEQ ID NO: 12中列出的胺基酸序列的抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段相比，在50°C下具有降低的異構化。
  34. 如請求項1至24中任一項所述之抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段，其中如藉由SEC確定的，在約25°C下儲存至少2週之後（視需要地，至少1個月之後、至少2個月之後、至少3個月之後、至少4個月之後、至少5個月之後或至少6個月之後），小於2%的該抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段顯示出異構化和/或脫醯胺化。
  35. 如請求項1至24中任一項所述之抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段，其中如藉由SEC確定的，在2°C至8°C下儲存約22個月至約36個月之後，隨後在約25°C下儲存至少2週或至少1個月或至少2個月之後，小於2%的該免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段顯示出異構化和/或脫醯胺化。
  36. 一種用於治療受試者的炎性疾病之方法，該方法包括向該受試者投與治療有效量的如請求項1-24中任一項所述之免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段，或如請求項25所述之組成物。
  37. 如請求項36所述之方法，其中該炎性疾病選自由以下組成之群組：氣喘、異位性皮膚炎、慢性阻塞性肺病（COPD）、嗜酸性球性食道炎（EoE）、鼻息肉、慢性自發性蕁麻疹、Ig驅動的疾病、IgA腎病、狼瘡性腎炎、嗜酸性球性胃炎、無鼻息肉的慢性鼻竇炎和特發性肺纖維化（IPF）。
  38. 如請求項36或37所述之方法，該方法包括以每2週或每4週的間隔投與該組成物。
  39. 如請求項36至38中任一項所述之方法，其中將該組成物投與至少4個月、6個月、9個月、1年或更長時間的時期。
  40. 如請求項37至39中任一項所述之方法，其中該氣喘係重度氣喘。
  41. 如請求項37至40中任一項所述之方法，其中該氣喘係嗜酸性球性氣喘或非嗜酸性球性氣喘。
  42. 一種製備組成物之方法，該組成物包含多個抗TSLP單株抗體或其抗原結合片段，每種抗體或其抗原結合片段包含： 含有SEQ ID NO: 3中所示的胺基酸序列之輕鏈CDR1序列； 含有SEQ ID NO: 4中所示的胺基酸序列之輕鏈CDR2序列； 含有SEQ ID NO: 5中所示的胺基酸序列之輕鏈CDR3序列； 含有SEQ ID NO: 6中所示的胺基酸序列之重鏈CDR1序列； 含有SEQ ID NO: 7中所示的胺基酸序列之重鏈CDR2序列；以及 含有SEQ ID NO: 8中所示的胺基酸序列之重鏈CDR3序列， 該方法包括富集IgG2抗TSLP單株抗體或其抗原結合片段之組成物，該抗體具有至少一種以下屬性： 相對於在HC位置54處的異天冬胺酸（isoAsp）或環狀天冬胺酸（cAsp），在HC位置54處的L-天冬胺酸； 相對於氧化的HC W102，非氧化的HC W102； 相對於在LC位置49或位置50處的isoAsp或cAsp，在LC位置49或位置50處的L-天冬胺酸； 相對於脫醯胺化的LC N65之LC N65；或 相對於在LC位置91處的isoAsp或cAsp，在LC位置91處的L-天冬胺酸。
  43. 如請求項42所述之方法，其中不超過0.9%的抗TSLP單株抗體包含異構化的HC D54。
  44. 如請求項42或43所述之方法，其中不超過2%的抗TSLP單株抗體包含氧化的HC W102。
  45. 如請求項42至44中任一項所述之方法，其中不超過0.9%的抗TSLP單株抗體包含異構化的LC D50或LC D49。
  46. 如請求項42至45中任一項所述之方法，其中不超過0.5%的抗TSLP單株抗體包含脫醯胺化的LC N65。
  47. 如請求項42至46中任一項所述之方法，其中不超過0.9%的抗TSLP單株抗體包含異構化的LC D91。
  48. 如請求項42至47中任一項所述之方法，其中該抗TSLP抗體係IgG2抗體。
  49. 如請求項42至48中任一項所述之方法，其中該抗TSLP抗體包含 (i) 在HC D54處的L-天冬胺酸和 (ii) 在LC D49和/或D50處的L-天冬胺酸。
  50. 如請求項42至49中任一項所述之方法，其中該抗TSLP抗體富集位於HC D54的L-天冬胺酸，比isoAsp的水平高至少6倍。
  51. 如請求項42至50中任一項所述之方法，其中該抗TSLP抗體包含SEQ ID NO: 10中列出的重鏈可變區和SEQ ID NO: 12中列出的輕鏈可變區。
  52. 一種組成物，該組成物包含抗TSLP單株抗體，每種抗體包含： 含有SEQ ID NO: 3中所示的胺基酸序列之輕鏈CDR1序列； 含有SEQ ID NO: 4中所示的胺基酸序列之輕鏈CDR2序列； 含有SEQ ID NO: 5中所示的胺基酸序列之輕鏈CDR3序列； 含有SEQ ID NO: 6中所示的胺基酸序列之重鏈CDR1序列； 含有SEQ ID NO: 7中所示的胺基酸序列之重鏈CDR2序列；以及 含有SEQ ID NO: 8中所示的胺基酸序列之重鏈CDR3序列， 該組成物包含有限含量的異構化的HC D54和/或有限含量的異構化的LC D49或D50，對該組成物之抗TSLP單株抗體以數值小於或等於10 -8M的Kd結合TLSP有效。
  53. 一種組成物，該組成物包含IgG2抗TSLP單株抗體，每種IgG2抗TSLP單株抗體包含含有SEQ ID NO: 3中所示的胺基酸序列之輕鏈CDR1序列；含有SEQ ID NO: 4中所示的胺基酸序列之輕鏈CDR2序列；含有SEQ ID NO: 5中所示的胺基酸序列之輕鏈CDR3序列；含有SEQ ID NO: 6中所示的胺基酸序列之重鏈CDR1序列；含有SEQ ID NO: 7中所示的胺基酸序列之重鏈CDR2序列；以及含有SEQ ID NO: 8中所示的胺基酸序列之重鏈CDR3序列， 其中以下的至少一種：不超過0.9%的抗TSLP單株抗體包含異構化的HC D54； 不超過2%的抗TSLP單株抗體包含氧化的HC W102； 不超過0.9%的抗TSLP單株抗體包含異構化的LCD49或LC D50； 不超過0.5%的抗TSLP單株抗體包含脫醯胺化的LC N65；或 不超過0.9%的抗TSLP單株抗體包含異構化的LC D91。
  54. 如請求項53所述之組成物，其中不超過0.9%的抗TSLP單株抗體包含異構化的HC D54。
  55. 如請求項53或54所述之組成物，其中不超過2%的抗TSLP單株抗體包含氧化的HC W102。
  56. 如請求項53至55中任一項所述之組成物，其中不超過0.9%的抗TSLP單株抗體包含異構化的LCD49或LC D50。
  57. 如請求項53至56中任一項所述之組成物，其中不超過0.5%的抗TSLP單株抗體包含脫醯胺化的LC N65。
  58. 如請求項53至57中任一項所述之組成物，其中不超過0.9%的抗TSLP單株抗體包含異構化的LC D91。
  59. 如請求項53至58中任一項所述之組成物，其中該抗TSLP抗體係IgG2抗體。
  60. 如請求項53至59中任一項所述之組成物，其中該抗TSLP抗體包含在HC 54處的L-天冬胺酸和在LC 49和/或LC 50處的L-天冬胺酸之組合。
  61. 如請求項4538至60中任一項所述之組成物，其中該抗TSLP抗體富集位於HC 54的L-天冬胺酸，比isoAsp的水平高至少6倍。
  62. 如請求項53至61中任一項所述之組成物，其中該抗TSLP抗體包含SEQ ID NO: 10中列出的重鏈可變區和SEQ ID NO: 12中列出的輕鏈可變區，並且 其中以下的至少一種：不超過0.9%的抗TSLP單株抗體包含異構化的HC D54； 不超過2%的抗TSLP單株抗體包含氧化的HC W102； 不超過0.9%的抗TSLP單株抗體包含異構化的LCD49或LC D50； 不超過0.5%的抗TSLP單株抗體包含脫醯胺化的LC N65；或 不超過0.9%的抗TSLP單株抗體包含異構化的LC D91。
  63. 一種組成物，該組成物包含抗TSLP單株抗體，每種抗TSLP單株抗體包含含有SEQ ID NO: 3中所示的胺基酸序列之輕鏈CDR1序列；含有SEQ ID NO: 4中所示的胺基酸序列之輕鏈CDR2序列；含有SEQ ID NO: 5中所示的胺基酸序列之輕鏈CDR3序列；含有SEQ ID NO: 6中所示的胺基酸序列之重鏈CDR1序列；含有SEQ ID NO: 7中所示的胺基酸序列之重鏈CDR2序列；以及含有SEQ ID NO: 8中所示的胺基酸序列之重鏈CDR3序列，其中以下的至少一種： 大於98%的組成物之抗TSLP單株抗體包含，相對於在HC位置54處的isoAsp或cAsp，在HC位置54處的L-天冬胺酸； 至少99%的該組成物之抗TSLP單株抗體包含，相對於氧化的HC W102的非氧化的HC W102； 至少97%的該組成物之抗TSLP單株抗體包含，相對於在LC位置49或位置50處的isoAsp或cAsp，在LC位置49或50處的L-天冬胺酸； 至少99.1%的該組成物之抗TSLP單株抗體包含相對於脫醯胺化的LC N65之LC N65；或 至少99.1%的該組成物之抗TSLP單株抗體包含，相對於在LC位置91處的isoAsp或cAsp，在LC位置91處的L-天冬胺酸。
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