TW202308690A - 抗ｔｓｌｐ抗體組成物及其用途 - Google Patents

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Abstract

本申請總體上關於包含抗TSLP抗體泰派魯單抗及其具有抗體品質屬性的衍生物之組成物。

Description

抗TSLP抗體組成物及其用途
本申請總體上關於包含抗TSLP抗體泰派魯單抗（tezepelumab）及其包含抗體品質屬性的衍生物之組成物。
胸腺基質淋巴細胞生成素（TSLP）係對環境和促炎性刺激起響應而產生的上皮細胞衍生的細胞介素，引起多種炎性細胞和下游途徑之活化（Soumelis等人. Nat Immunol [自然免疫學] 2002;3:673-80；Allakhverdi等人. J Exp Med [實驗醫學雜誌] 2007;204:253-8）。TSLP在患有氣喘的患者之氣道中有所增加，並且與Th2細胞介素和趨化介素表現（Shikotra等人. J Allergy Clin Immunol [過敏臨床免疫雜誌] 2012;129:104-11 e1-9）以及疾病嚴重度（Ying等人. J Immunol [免疫學雜誌] 2005;174:8183-90；Ying等人. J Immunol [免疫學雜誌] 2008;181:2790-8）相關。雖然TSLP對Th2免疫力之調節很重要，但其還可能在其他炎症途徑中起關鍵作用，並且因此與多種氣喘表現型有關。
泰派魯單抗為結合TSLP的人免疫球蛋白G2（IgG2）單株抗體（mAb），可防止TSLP與TSLP受體複合物相互作用。應當理解，泰派魯單抗為包含兩個重鏈和兩個輕鏈並且包含兩個與TSLP結合的位點之異源四聚體。在輕度異位性氣喘患者中的概念驗證研究證明，泰派魯單抗抑制早期和晚期氣喘響應，並且在吸入性過敏原激發後抑制Th2炎症之生物標誌物（Gauvreau等人. N Engl J Med [新英格蘭醫學雜誌] 2014;370:2102-10）。
隨著時間的推移，監測配製物中之抗體治療劑對於確定減少治療劑之任何分解並保持產品完整性之儲存條件非常重要。本揭露提供了抗TSLP抗體的屬性之研究，該等屬性可以在製造和儲存期間隨時間變化，包括可以有利於或不利於抗體耐受性和/或功效之屬性。
在一方面，本揭露提供了包含泰派魯單抗和一或多種泰派魯單抗衍生物之組成物，其中該一或多種泰派魯單抗衍生物包含異構化衍生物，並且其中該組成物中的異構化衍生物之量小於約30%，其中泰派魯單抗包含 (A) 輕鏈可變結構域，該輕鏈可變結構域包含：(i) SEQ ID NO: 3中列出的輕鏈CDR1胺基酸序列；(ii) SEQ ID NO: 4中列出的輕鏈CDR2胺基酸序列；以及 (iii) SEQ ID NO: 5中列出的輕鏈CDR3胺基酸序列；和 (B) 重鏈可變結構域，該重鏈可變結構域包含：(i) SEQ ID NO: 6中列出的重鏈CDR1胺基酸序列；(ii) SEQ ID NO: 7中列出的重鏈CDR2胺基酸序列以及 (iii) SEQ ID NO: 8中列出的重鏈CDR3胺基酸序列。
在多個實施方式中，組成物中的異構化衍生物之量小於約30%、25%、20%、15%、10%、5%、4%、3%、2%或1%。在多個實施方式中，組成物中的異構化衍生物之量為約0.5%至約13%。在多個實施方式中，組成物中的異構化衍生物之量為約1%至12%、2%至10%或約4%至7%。在多個實施方式中，異構化衍生物包含在重鏈或輕鏈互補決定區（CDR）中之修飾。在多個實施方式中，異構化衍生物包含位於任一或兩個可變區鏈中的SEQ ID NO: 7之重鏈CDR殘基D54，和/或SEQ ID NO: 4之輕鏈CDR殘基D49、D50或D52之變化。在多個實施方式中，異構化衍生物包含位於D54處以小於約5%的量之異構化。在多個實施方式中，異構化衍生物包含位於D54處以小於約4%、3%、2%或1%的量之異構化。在多個實施方式中，異構化衍生物包含位於SEQ ID NO: 4之殘基D49、D50或D52中之一或多個處以小於約26%的量之異構化。在多個實施方式中，異構化衍生物包含位於SEQ ID NO: 4之殘基D49、D50或D52中之一或多個處以小於約25%、20%、18%、15%、13%、10%、7%、5%、3%或2%的量之異構化。在多個實施方式中，異構化衍生物為異天冬胺酸（isoAsp）、環狀天冬胺酸（cAsp）、琥珀醯亞胺或異構化中間體。在多個實施方式中，異構化衍生物為異天冬胺酸（isoAsp）或環狀天冬胺酸（cAsp）。在多個實施方式中，組成物中的異構化衍生物之量藉由還原性肽作圖來確定。在多個實施方式中，泰派魯單抗和泰派魯單抗衍生物具有比組成物更高的功效和/或耐受性，該組成物包含大於30%的異構化衍生物，其中所述功效包含抑制固定在供體珠粒上的生物素化的TSLPR與固定在受體珠粒上的TSLP-His結合的能力。在多個實施方式中，泰派魯單抗和泰派魯單抗衍生物具有比組成物更高的功效和/或耐受性，該組成物包含大於30%的異構化衍生物，其中所述功效包含抑制在編碼Stat螢光素酶報告基因的Stat/BaF/HTR細胞之表面上表現的TSLPR之結合的能力，Stat螢光素酶報告基因之表現指示TSLP與TSLPR之結合。
一種組成物，該組成物包含泰派魯單抗和一或多種泰派魯單抗衍生物，其中該一或多種泰派魯單抗衍生物包含脫醯胺化衍生物，並且其中該組成物中的脫醯胺化衍生物之量小於約15%，其中泰派魯單抗包含 (A) 輕鏈可變結構域，該輕鏈可變結構域包含：(i) SEQ ID NO: 3中列出的輕鏈CDR1胺基酸序列；(ii) SEQ ID NO: 4中列出的輕鏈CDR2胺基酸序列；以及 (iii) SEQ ID NO: 5中列出的輕鏈CDR3胺基酸序列；和 (B) 重鏈可變結構域，該重鏈可變結構域包含：(i) SEQ ID NO: 6中列出的重鏈CDR1胺基酸序列；(ii) SEQ ID NO: 7中列出的重鏈CDR2胺基酸序列以及 (iii) SEQ ID NO: 8中列出的重鏈CDR3胺基酸序列。在多個實施方式中，組成物中的脫醯胺化衍生物之量小於約15%、約10%、約7%、約5%、約4%、約3%、約2%或約1%。在多個實施方式中，組成物中的脫醯胺化衍生物之量為約0.5%至約13%。在多個實施方式中，組成物中的脫醯胺化衍生物之量為約0.5%-10%、約1%至8%、約2%至7%或約3%至6%。在多個實施方式中，脫醯胺化衍生物包含脫醯胺化的天冬醯胺：SEQ ID NO: 3中列出的LCDR1中之殘基N25/N26、SEQ ID NO: 13中列出的重鏈中之殘基N316、和/或SEQ ID NO: 13中列出的重鏈中之殘基N385/390。在多個實施方式中，脫醯胺化衍生物包含位於N25/N26處以小於約3%的量之脫醯胺化。在多個實施方式中，脫醯胺化衍生物包含N316和/或N385/390中之一或多個處以小於約13%的量之脫醯胺化。在多個實施方式中，脫醯胺化衍生物為脫醯胺化的天冬醯胺或脫醯胺化中間體。在多個實施方式中，組成物中的脫醯胺化衍生物之量藉由還原性肽作圖來確定。在多個實施方式中，泰派魯單抗和泰派魯單抗衍生物具有比組成物更高的功效和/或耐受性，該組成物包含大於15%的脫醯胺化衍生物，其中所述功效包含抑制固定在供體珠粒上的生物素化的TSLPR與固定在受體珠粒上的TSLP-His結合的能力。在多個實施方式中，泰派魯單抗和泰派魯單抗衍生物具有比組成物更高的功效和/或耐受性，該組成物包含大於15%的脫醯胺化衍生物，其中所述功效包含抑制在編碼Stat螢光素酶報告基因的Stat/BaF/HTR細胞之表面上表現的TSLPR之結合的能力，Stat螢光素酶報告基因之表現指示TSLP與TSLPR之結合。
本揭露還提供了包含泰派魯單抗和一或多種泰派魯單抗衍生物之組成物，其中該一或多種泰派魯單抗衍生物包含氧化衍生物，並且其中該組成物中的氧化衍生物之量小於約7%，其中泰派魯單抗包含 (A) 輕鏈可變結構域，該輕鏈可變結構域包含：(i) SEQ ID NO: 3中列出的輕鏈CDR1胺基酸序列；(ii) SEQ ID NO: 4中列出的輕鏈CDR2胺基酸序列；以及 (iii) SEQ ID NO: 5中列出的輕鏈CDR3胺基酸序列；和 (B) 重鏈可變結構域，該重鏈可變結構域包含：(i) SEQ ID NO: 6中列出的重鏈CDR1胺基酸序列；(ii) SEQ ID NO: 7中列出的重鏈CDR2胺基酸序列以及 (iii) SEQ ID NO: 8中列出的重鏈CDR3胺基酸序列。
在多個實施方式中，氧化衍生物之量小於約6%、約5%、約4%、約3%、約2%或約1%。在多個實施方式中，組成物中的氧化衍生物之量為約0.4%至約7%、約1%至約6%、約2%至約5%或約0.4%至約4%。在多個實施方式中，氧化衍生物包含位於任一或兩個重鏈中的SEQ ID NO: 6中列出的HCDR1之重鏈甲硫胺酸殘基M34、或在SEQ ID NO: 13中列出的重鏈恒定區中之殘基M253或M359，或SEQ ID NO: 7中列出的HCDR2之重鏈色胺酸殘基W52、SEQ ID NO: 5中列出的LCDR3之W90、或SEQ ID NO: 8中列出的HCDR3之W102之一或多個之氧化。在多個實施方式中，氧化衍生物包含位於任一或兩個重鏈中之重鏈甲硫胺酸殘基M34、M253、M359之一或多個之氧化，視需要地其中該氧化之量小於約7%。在多個實施方式中，氧化衍生物包含位於任一或兩個重鏈中之色胺酸殘基W52、W90或W102之一或多個之氧化，視需要地其中該氧化之量小於約3%。在多個實施方式中，組成物中的氧化衍生物之量藉由還原性肽作圖來確定。在多個實施方式中，泰派魯單抗和泰派魯單抗衍生物具有比組成物更高的功效和/或耐受性，該組成物包含大於7%的氧化衍生物，其中所述功效包含抑制固定在供體珠粒上的生物素化的TSLPR與固定在受體珠粒上的TSLP-His結合的能力。在多個實施方式中，泰派魯單抗和泰派魯單抗衍生物具有比組成物更高的功效和/或耐受性，該組成物包含大於7%的氧化衍生物，其中所述功效包含抑制在編碼Stat螢光素酶報告基因的Stat/BaF/HTR細胞之表面上表現的TSLPR之結合的能力，Stat螢光素酶報告基因之表現指示TSLP與TSLPR之結合。
在另一個實施方式中，本揭露提供了包含泰派魯單抗和一或多種泰派魯單抗衍生物之組成物，其中該一或多種泰派魯單抗衍生物包含糖基化衍生物，並且其中該組成物中的糖基化衍生物之量小於約40%，其中泰派魯單抗包含 (A) 輕鏈可變結構域，該輕鏈可變結構域包含：(i) SEQ ID NO: 3中列出的輕鏈CDR1胺基酸序列；(ii) SEQ ID NO: 4中列出的輕鏈CDR2胺基酸序列；以及 (iii) SEQ ID NO: 5中列出的輕鏈CDR3胺基酸序列；和 (B) 重鏈可變結構域，該重鏈可變結構域包含：(i) SEQ ID NO: 6中列出的重鏈CDR1胺基酸序列；(ii) SEQ ID NO: 7中列出的重鏈CDR2胺基酸序列以及 (iii) SEQ ID NO: 8中列出的重鏈CDR3胺基酸序列。
在多個實施方式中，組成物中的糖基化衍生物之量小於約35%、約30%、約25%、約20%、約15%、約10%、約9%、約8%約7%、約6%或約5%。在多個實施方式中，組成物中的糖基化衍生物之量為約1%至約35%、約3%至約30%、約5%至約25%、約10%至約20%。在多個實施方式中，糖基化衍生物包含在一或兩個重鏈上的SEQ ID NO: 13之殘基N298上的泰派魯單抗糖基化之改變。在多個實施方式中，糖基化衍生物包含泰派魯單抗對高甘露糖部分或半乳糖基部分的非岩藻糖基化或糖基化之改變。在多個實施方式中，糖基化衍生物包含小於約5%的量之非岩藻糖基化衍生物。在多個實施方式中，糖基化衍生物包含小於約30%的量之半乳糖基部分。在多個實施方式中，糖基化衍生物包含小於約5%的量之高甘露糖部分。在多個實施方式中，組成物中的糖基化衍生物之量藉由聚糖作圖法來確定。在多個實施方式中，泰派魯單抗和泰派魯單抗衍生物具有比組成物更高的功效和/或耐受性，該組成物包含大於40%的糖基化衍生物，其中所述功效包含抑制固定在供體珠粒上的生物素化的TSLPR與固定在受體珠粒上的TSLP-His結合的能力。在多個實施方式中，泰派魯單抗和泰派魯單抗衍生物具有比組成物更高的功效和/或耐受性，該組成物包含大於40%的糖基化衍生物，其中所述功效包含抑制在編碼Stat螢光素酶報告基因的Stat/BaF/HTR細胞之表面上表現的TSLPR之結合的能力，Stat螢光素酶報告基因之表現指示TSLP與TSLPR之結合。
糖基化衍生物也可以與效應子功能和抗體清除率（應當理解，更低的抗體清除率可以指示更長的半衰期；因此具有比參考抗體或抗體組成物「更少的清除率」之抗體或抗體組成物將被理解為係指在數值上比參考抗體或抗體組成物更長的半衰期）有關。在多個實施方式中，泰派魯單抗和泰派魯單抗衍生物具有比組成物更低的抗體清除率和/或更高的耐受性，該組成物包含大於約15%、約13%、約11%、約8%或約6%的高甘露糖糖基化衍生物。在多個實施方式中，泰派魯單抗和泰派魯單抗衍生物具有比組成物更低的抗體清除率和/或更高的耐受性，該組成物包含大於約25%、約23%（例如，約23.1%）、約21%、約18%、約15%、約13%、約11%、約8%、約6%或約5%的高甘露糖糖基化衍生物。在多個實施方式中，泰派魯單抗和泰派魯單抗衍生物具有比組成物更低的抗體清除率和/或更高的耐受性，該組成物包含大於約23.1%的高甘露糖糖基化衍生物。在多個實施方式中，高甘露糖種類增加了5%至23.1%，導致泰派魯單抗和泰派魯單抗衍生物之清除率增加了不超過1.7%或10%。
還提供了組成物，該組成物包含泰派魯單抗和一或多種其二硫化物同種型衍生物，其中該一或多種二硫化物同種型衍生物包含IgG2-B同種型和/或IgG2-A/B同種型，並且其中組成物中的二硫化物同種型之量小於約75%。在多個實施方式中，組成物中的二硫化物同種型之量小於約70%、約65%、約60%、約55%、約50%、約45%、約40%、約35%、約30%、約25%、約20%、約15%、約10%、約5%、約4%、約3%、約2%或約1%。
在多個實施方式中，一或多種二硫化物同種型衍生物包含IgG2-B同種型。在多個實施方式中，IgG2-B同種型之量小於約5%。在多個實施方式中，一或多種二硫化物同種型衍生物包含IgG2-A/B同種型。在多個實施方式中，組成物中的IgG2-A/B同種型之量小於約75%。在多個實施方式中，組成物中的IgG2-A/B同種型之量為約38%至約43%。在多個實施方式中，組成物中的二硫化物同種型衍生物之量藉由非還原性逆相高效液相層析（RP-HPLC）來確定。
還預期了包含泰派魯單抗和一或多種泰派魯單抗衍生物之組成物，其中該一或多種泰派魯單抗衍生物為高分子量（HMW）種類，並且其中組成物中的HMW種類之量小於約20%，其中泰派魯單抗包含 (A) 輕鏈可變結構域，該輕鏈可變結構域包含：(i) SEQ ID NO: 3中列出的輕鏈CDR1胺基酸序列；(ii) SEQ ID NO: 4中列出的輕鏈CDR2胺基酸序列；以及 (iii) SEQ ID NO: 5中列出的輕鏈CDR3胺基酸序列；和 (B) 重鏈可變結構域，該重鏈可變結構域包含：(i) SEQ ID NO: 6中列出的重鏈CDR1胺基酸序列；(ii) SEQ ID NO: 7中列出的重鏈CDR2胺基酸序列以及 (iii) SEQ ID NO: 8中列出的重鏈CDR3胺基酸序列。
在多個實施方式中，組成物中的HMW種類小於約20%、15%、10%、5%、4%、3%、2%或1%。在多個實施方式中，組成物中的HMW種類之量為約0.5%至約13%、約1%至約11%、約2%至約10%、或約3%至約8%、或約4%至約7%。在多個實施方式中，組成物中的HMW種類之量為約1.7%或更少。在多個實施方式中，組成物中的HMW種類之量為約1.4%或更少。在多個實施方式中，HMW種類包含泰派魯單抗之二聚物。
在多個實施方式中，組成物中的HMW種類之量藉由尺寸排阻高效液相層析（SE-HPLC）、沈降速度超速離心（SV-AUC）、或還原性十二烷基硫酸鈉毛細管電泳（rCE-SDS）來確定。在多個實施方式中，SE-HPLC為SE-ultra HPLC（SE-UHPLC）或具有靜態光散射的SE-HPLC（SE-HPLC-SLS）。在多個實施方式中，SE-HPLC為SE-UHPLC。在多個實施方式中，當SE-HPLC為SE-UHPLC時，使用流動相將蛋白質等度分離，該流動相包含100 mM磷酸鈉、250 mM氯化鈉，pH 6.8。在多個實施方式中，泰派魯單抗和泰派魯單抗衍生物具有比組成物更高的功效和/或耐受性，該組成物包含大於20%的HWM種類，其中所述功效包含抑制固定在供體珠粒上的生物素化的TSLPR與固定在受體珠粒上的TSLP-His結合的能力。在多個實施方式中，泰派魯單抗和泰派魯單抗衍生物具有比組成物更高的功效和/或耐受性，該組成物包含大於20%的HWM種類，其中所述功效包含抑制在編碼Stat螢光素酶報告基因的Stat/BaF/HTR細胞之表面上表現的TSLPR之結合的能力，Stat螢光素酶報告基因之表現指示TSLP與TSLPR之結合。
在組成物之多個實施方式中，(a) 泰派魯單抗和泰派魯單抗衍生物具有比組成物更高的功效和/或耐受性，該組成物包含大於40%的糖基化衍生物，其中所述功效包含抑制固定在供體珠粒上的生物素化的TSLPR與固定在受體珠粒上的TSLP-His之結合的能力，或抑制在編碼Stat螢光素酶報告基因的Stat/BaF/HTR細胞表面上表現的TSLPR之結合的能力，Stat螢光素酶報告基因之表現指示TSLP與TSLPR之結合；或 (b) 泰派魯單抗和泰派魯單抗衍生物包含不超過15%的高甘露糖，並且具有比具有大於15%的高甘露糖之組成物更低的清除率。
在組成物之多個實施方式中，(a) 泰派魯單抗和泰派魯單抗衍生物具有比組成物更高的功效和/或耐受性，該組成物包含大於40%的糖基化衍生物，其中所述功效包含抑制固定在供體珠粒上的生物素化的TSLPR與固定在受體珠粒上的TSLP-His之結合的能力，或抑制在編碼Stat螢光素酶報告基因的Stat/BaF/HTR細胞表面上表現的TSLPR之結合的能力，Stat螢光素酶報告基因之表現指示TSLP與TSLPR之結合；或 (b) 泰派魯單抗和泰派魯單抗衍生物包含不超過25%的高甘露糖，並且具有比具有大於25%的高甘露糖之組成物更低的清除率。
還提供了包含泰派魯單抗和一或多種泰派魯單抗衍生物之組成物，其中該一或多種泰派魯單抗衍生物包含泰派魯單抗片段，並且其中組成物中的泰派魯單抗片段之量小於約15%，其中泰派魯單抗包含 (A) 輕鏈可變結構域，該輕鏈可變結構域包含：(i) SEQ ID NO: 3中列出的輕鏈CDR1胺基酸序列；(ii) SEQ ID NO: 4中列出的輕鏈CDR2胺基酸序列；以及 (iii) SEQ ID NO: 5中列出的輕鏈CDR3胺基酸序列；和 (B) 重鏈可變結構域，該重鏈可變結構域包含：(i) SEQ ID NO: 6中列出的重鏈CDR1胺基酸序列；(ii) SEQ ID NO: 7中列出的重鏈CDR2胺基酸序列以及 (iii) SEQ ID NO: 8中列出的重鏈CDR3胺基酸序列。
在多個實施方式中，組成物中的片段之量小於約15%、10%、5%、4%、3%、2%或1%。在多個實施方式中，組成物中的片段之量為約0.5%至約13%、約1%至約11%、約2%至約10%、或約3%至約8%、或約4%至約7%。在多個實施方式中，泰派魯單抗片段為低分子量（LMW）或中等分子量（MMW）種類或其組合。在多個實施方式中，該等片段為小於約25 kD的低分子量種類。在多個實施方式中，該等片段為具有約25至50 kD的分子量之中等分子量種類。在多個實施方式中，組成物中的泰派魯單抗片段之量藉由還原性的具有十二烷基硫酸鈉的毛細管電泳（rCE-SDS）來確定。在多個實施方式中，泰派魯單抗和泰派魯單抗衍生物具有比組成物更高的功效和/或耐受性，該組成物包含大於20%的泰派魯單抗片段，其中所述功效包含抑制固定在供體珠粒上的生物素化的TSLPR與固定在受體珠粒上的TSLP-His結合的能力。在多個實施方式中，泰派魯單抗和泰派魯單抗衍生物具有比組成物更高的功效和/或耐受性，該組成物包含大於15%的泰派魯單抗片段，其中所述功效包含抑制在編碼Stat螢光素酶報告基因的Stat/BaF/HTR細胞之表面上表現的TSLPR之結合的能力，Stat螢光素酶報告基因之表現指示TSLP與TSLPR之結合。
本文提供了包含泰派魯單抗和一或多種泰派魯單抗衍生物之組成物，其中該等泰派魯單抗衍生物包含異構化衍生物、脫醯胺化衍生物、氧化衍生物、糖基化衍生物、HMW種類、片段、二硫化物異構物或其組合，其中該組成物具有以下特徵之一或多種：(a) 該組成物中的異構化衍生物之量為約30%或更少，如藉由還原性肽作圖測量的；(b) 該組成物中的脫醯胺化衍生物之量為約15%或更少，如藉由肽作圖測量的；(c) 該組成物中的氧化衍生物之量為約7%或更少，如藉由還原性肽作圖測量的；(d) 該組成物中的糖基化衍生物之量為約75%或更少，如藉由聚糖作圖測量的；(e) 該組成物中的二硫化物異構物之量為約40%或更少，如藉由非還原性逆相高效液相層析（RP-HPLC）測量的；(f) 該組成物中的HMW種類之量為約20%或更少，如藉由SE-HPLC測量的；和/或 (g) 該組成物中的片段之量為約20%或更少，如藉由rCE-SDS測量的。
在多個實施方式中，泰派魯單抗包含SEQ ID NO: 10中列出的重鏈胺基酸序列和SEQ ID NO: 12中列出的輕鏈胺基酸序列。
在另一方面，本揭露提供了用於評估泰派魯單抗組成物的品質之方法，該方法包括：獲得含有泰派魯單抗和一或多種泰派魯單抗衍生物之泰派魯單抗組成物；測量組成物中之一或多種泰派魯單抗衍生物之量，其中該等泰派魯單抗衍生物包含異構化衍生物、脫醯胺化衍生物、氧化衍生物、糖基化衍生物、二硫化物同種型衍生物、HMW種類、片段或其組合；將一或多種泰派魯單抗衍生物之測量的量與預先確定的參考標準進行比較；並且如果比較表明滿足該預先確定的參考標準，則製備泰派魯單抗組成物之藥物配製物或藥物產品。在多個實施方式中，測量異構化衍生物之量，並且預先確定的參考標準為約30%或更少。在多個實施方式中，泰派魯單抗組成物中的異構化之量藉由還原性肽作圖測量。在多個實施方式中，測量脫醯胺化衍生物之量，並且預先確定的參考標準為約15%或更少。在多個實施方式中，泰派魯單抗組成物中的脫醯胺化之量藉由還原性肽作圖測量。在多個實施方式中，測量氧化衍生物之量，並且預先確定的參考標準為約7%或更少。在多個實施方式中，泰派魯單抗組成物中的氧化之量藉由還原性肽作圖測量。在多個實施方式中，測量糖基化衍生物之量，並且預先確定的參考標準為約40%或更少。在多個實施方式中，泰派魯單抗組成物中的糖基化之量藉由聚糖作圖測量。在多個實施方式中，測量二硫化物同種型衍生物之量，並且預先確定的參考標準為約75%或更少。在多個實施方式中，泰派魯單抗組成物中的二硫化物同種型之量藉由非還原性逆相高效液相層析（RP-HPLC）測量。在多個實施方式中，測量HMW種類之量，並且預先確定的參考標準為約20%或更少。在多個實施方式中，HMW種類之量藉由SE-HPLC測量。在多個實施方式中，測量片段之量，並且預先確定的參考標準為約15%或更少。在多個實施方式中，泰派魯單抗組成物中的片段之量藉由rCE-SDS測量。
在多個實施方式中，泰派魯單抗組成物獲得自中國倉鼠卵巢（CHO）細胞系，該細胞系表現編碼SEQ ID NO: 10的重鏈之核酸和編碼SEQ ID NO: 12的輕鏈之核酸。
在多個實施方式中，免疫球蛋白、抗原結合蛋白或抗體為人抗體。在多個實施方式中，抗體為IgG2抗體。在多個實施方式中，泰派魯單抗或其衍生物特異性結合SEQ ID NO: 2之胺基酸29-159中所示的TSLP多肽。在多個實施方式中，泰派魯單抗或其衍生物之兩個結合位點均具有與TSLP相同的結合。
在多個實施方式中，泰派魯單抗或其衍生物以數值上不超過10 -8M Kd的親和力結合TSLP。
進一步預期了組成物，該組成物包含如本文所述之泰派魯單抗或其衍生物和藥學上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑。
本揭露也提供了包含多核苷酸序列之分離的核酸，該多核苷酸序列編碼本文所述之泰派魯單抗或其衍生物之輕鏈可變結構域、重鏈可變結構域或兩者。
本揭露進一步預期了包含核酸之重組表現載體，該核酸編碼如本文所述之泰派魯單抗。還提供了包含表現載體之宿主細胞。
本文進一步預期了生產包含泰派魯單抗或其衍生物之組成物之方法，該泰派魯單抗或其衍生物特異性結合包含SEQ ID NO: 2之胺基酸29-159的TSLP多肽，該方法包括在允許宿主細胞表現該免疫球蛋白、抗原結合蛋白或抗體的條件下孵育該宿主細胞，其中所述宿主細胞包含 (i) 編碼如本文所述之抗原結合蛋白之輕鏈可變結構域之重組表現載體和編碼如本文所述之抗原結合蛋白之重鏈可變結構域之重組表現載體，或 (ii) 編碼泰派魯單抗之輕鏈可變結構域和重鏈可變結構域兩者之重組表現載體。
本文還提供了用於治療受試者之炎性疾病之方法，該方法包括向該受試者投與治療有效量的包含泰派魯單抗及其衍生物之組成物。在多個實施方式中，炎性疾病選自由以下組成之群組：氣喘、異位性皮膚炎、慢性阻塞性肺病（COPD）、嗜酸性球性食道炎（EoE）、鼻息肉、慢性自發性蕁麻疹、Ig驅動的疾病、IgA腎病、狼瘡性腎炎、嗜酸性球性胃炎、無鼻息肉的慢性鼻竇炎和特發性肺纖維化（IPF）。在多個實施方式中，氣喘為輕度、中度或重度氣喘。在多個實施方式中，氣喘係重度氣喘。在多個實施方式中，氣喘為嗜酸性球性氣喘或非嗜酸性球性氣喘。
在多個實施方式中，該方法包括以每2週或每4週的間隔投與該組成物。在多個實施方式中，將該組成物投與至少4個月、6個月、9個月、1年或更長時間的時期。
在多個實施方式中，抗體為IgG2抗體。在多個實施方式中，泰派魯單抗或泰派魯單抗衍生物包含SEQ ID NO: 10中列出的重鏈可變區和SEQ ID NO: 12中列出的輕鏈可變區，並且包含本文所述之屬性之一或多種。
本揭露還提供了組成物，該組成物包含本文所述之泰派魯單抗及其衍生物，用於在治療炎性疾病中使用。在某些實施方式中，本揭露提供了包含本文所述之泰派魯單抗及其衍生物之組成物在製備用於治療炎性疾病的藥物中之用途。
還考慮了注射器，例如一次性使用或載藥注射器、無菌密封容器（例如小瓶、瓶子、容器、和/或套組（kit）或包裝），該注射器包含上述抗體或組成物中之任何一種，視需要地帶有合適的使用說明。在多個實施方式中，投與經由載藥注射器或自動注射器進行。在多個實施方式中，自動注射器係Ypsomed YpsoMate®裝置。
應當理解，本文所述之每個特徵或實施方式或組合係本發明任何方面之非限制性、說明性示例，並且因此，意在與本文所述之任何其他特徵或實施方式或組合相結合。例如，在使用如「一個實施方式」、「一些實施方式」、「某些實施方式」、「另外的實施方式」、「特定的示例性實施方式」和/或「另一個實施方式」的語言描述特徵的情況下，該等實施方式的類型中之每一種都是旨在與本文所述之任何其他特徵或特徵之組合相結合而不必列出每一種可能的組合的特徵之非限制性示例。此類特徵或特徵之組合適用於本發明之任何方面。在揭露了落入範圍內的值之實例的情況下，該等實例中之任何一個都被考慮為範圍之可能端點，此類端點之間的任何和所有數值都被考慮，並且考慮了上下端點之任何和所有組合。
本文的標題係為了方便讀者，而不旨在進行限制。本發明之其他方面、實施方式和變化將自實施方式和/或附圖和/或申請專利範圍變得顯而易見。
相關申請的交叉引用
本申請要求於2021年4月23日提交的美國臨時專利申請案號63/178,938之優先權，該臨時專利申請藉由引用以其全文併入本文。
從各種生物、生化和生物物理技術闡述泰派魯單抗之結構以提供對其結構和功能性質之理解，以及關鍵品質屬性之評估。
除非另有說明，否則用於本申請（包括說明書和申請專利範圍）中的以下術語具有以下給出的定義。
除非上下文另外清楚規定，否則如說明書及所附申請專利範圍中所用，不定冠詞「一個/種（a/an）」及定冠詞「該/該等（the）」包括複數以及單數指示物。
除非另外定義，否則本文所用的所有技術和科學術語均具有與本揭露所屬領域的普通技術者通常所理解的含義相同的含義。
術語「約」或「大約」意指如由熟悉該項技術者所確定的具體值之可接受誤差，其部分地取決於如何測量或確定該值。在某些實施方式中，術語「約」或「大約」意指1、2、3或4個標準偏差內。在某些實施方式中，術語「約」或「大約」意指給定值或範圍之30%、25%、20%、15%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%、0.5%或0.05%內。每當術語「約」或「大約」在一系列兩個或更多個數值中之第一數值前面時，應瞭解術語「約」或「大約」適用於該系列中之每個數值。
術語「炎性疾病」係指涉及由免疫系統攻擊人體自身的細胞或組織引起的異常炎症之醫學病症，這可能導致慢性疼痛、發紅、腫脹、僵硬、以及對正常組織的損害。炎性疾病包括例如氣喘、慢性消化性潰瘍、結核病、牙周炎、竇炎、活動性肝炎、僵直性脊柱炎、類風濕性關節炎、慢性阻塞性肺病（COPD）、克隆氏症、潰瘍性結腸炎、骨關節炎、動脈粥樣硬化、全身性紅斑狼瘡、異位性皮膚炎、嗜酸性球性食道炎（EoE）、鼻息肉、慢性自發性蕁麻疹、Ig驅動的疾病（例如IgA腎病和狼瘡性腎炎）、嗜酸性球性胃炎、無鼻息肉的慢性鼻竇炎、特發性肺纖維化（IPF）等。在示例性方面中，該炎性疾病係氣喘、異位性皮膚炎、或COPD。在示例性方面中，該炎性疾病係氣喘，並且在一些情況下，該氣喘係重度氣喘、嗜酸性球性氣喘、非嗜酸性球性氣喘、或低嗜酸性球性氣喘。
如本文所用的術語「氣喘」係指過敏性氣喘、非過敏性氣喘、嗜酸性球性氣喘和非嗜酸性球性氣喘。
如本文所用的術語「過敏性氣喘」係指由一或多種吸入性過敏原引發的氣喘。此類患者對引發氣喘響應的一或多種過敏原具有陽性的IgE螢光酶免疫測定（FEIA）水平。通常，大部分過敏性氣喘與Th2型炎症有關。
術語「非過敏性氣喘」係指在診斷時具有低嗜酸性球性、低Th2或低IgE的患者。通常，在IgE螢光酶免疫測定（FEIA）中，患有「非過敏性氣喘」的患者對包括地區特異性過敏原的一組過敏原的響應呈陰性。除低IgE之外，那些患者經常在診斷時具有低嗜酸性球計數或無嗜酸性球計數和低Th2計數。
如本文所用的術語「重度氣喘」係指需要高強度治療（例如GINA步驟4和步驟5）來維持良好控制或儘管進行高強度治療但仍未實現良好控制的氣喘（GINA, Global Strategy for Asthma Management and Prevention [全球氣喘管理和預防戰略].Global Initiative for Asthma [全球氣喘防治創議]（GINA）2012年12月）。
如本文所用的術語「嗜酸性球性氣喘」係指具有篩選血液嗜酸性球計數小於或等於300個細胞/µL，或小於或等於250個細胞/µL的氣喘患者。「低嗜酸性球性」氣喘係指具有小於250個細胞/µL血液或血清的氣喘患者。可替代地，「低嗜酸性球性」氣喘係指具有小於300個細胞/µL血液或血清的氣喘患者。
「輔助性T細胞（Th）1細胞介素」或「Th1特異性細胞介素」係指由Th1 T細胞表現（細胞內和/或分泌）的細胞介素，並且包括IFN-g、TNF-a和IL-12。「Th2細胞介素」或「Th2特異性細胞介素」係指由Th2 T細胞表現（細胞內和/或分泌）的細胞介素，包括IL-4、IL-5、IL-13和IL-10。「Th17細胞介素」或「Th17特異性細胞介素」係指由Th17 T細胞表現（細胞內和/或分泌）的細胞介素，包括IL-17A、IL-17F、IL-22和IL-21。除本文中所列出的Th17細胞介素之外，Th17細胞之某些群體還表現IFN-g和/或IL-2。多功能CTL細胞介素包括IFN-g、TNF-a、IL-2和IL-17。
術語「特異性地結合」為「抗原特異性的」、「對抗原具有特異性」、「選擇性結合劑」、「特異性結合劑」、「抗原靶標」或與抗原「免疫反應」係指抗體或多肽以比相似序列的其他抗原更大的親和力結合靶標抗原。本文預期該藥劑特異性地結合可用於鑒別免疫細胞類型的靶標蛋白，例如表面抗原（例如T細胞受體、CD3）、細胞介素（例如TSLP、IL-4、IL-5、IL-13、IL-17、IFN-g、TNF-a）及其類似物。在多個實施方式中，抗體特異性地結合靶標抗原，但可以與密切相關的物種之異種同源物交叉反應，例如抗體可結合人類蛋白並且還結合密切相關的靈長類動物蛋白質。在多個實施方式中，免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或對TLSP特異性的抗體或其片段以數值小於或等於10 -8M的Kd結合。在多個實施方式中，本文所述之抗TSLP抗體至少以10 -8M、10 -9M、10 -10M、10 -11M、10 -12M、10 -13M或更少的親和力（Kd）結合。
術語「抗體」係指由各自包含可變區和恒定區的兩條重鏈和兩條輕鏈組成的四聚體醣蛋白。「重鏈」和「輕鏈」係指基本上全長的標準免疫球蛋白之輕鏈和重鏈（參見例如Immunobiology [免疫學], 第5版（Janeway和Travers等人編輯, 2001））。抗原結合部分可藉由重組DNA技術或藉由完整抗體之酶促或化學裂解產生。
抗原結合蛋白包括抗體、抗體片段和抗體樣蛋白，可以對標準四聚體抗體之結構進行結構改變。抗體「變體」係指與具有已知序列的親本抗體相比，在抗體序列或功能中可以具有結構變化的抗原結合蛋白或其片段。抗體變體包括變為恒定區的V區，或可替代地，視需要地以非標準方式添加V區至恒定區。實例包括多特異性抗體（例如具有額外V區的雙特異性抗體）、可結合抗原的抗體片段（例如Fab'、F’(ab)2、Fv、單鏈抗體、雙抗體），包含前述項的雙互補位肽和重組肽（只要其展現所需生物活性即可）。
抗體片段包括抗體之抗原結合部分，尤其包括Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、域抗體（dAb）、互補決定區（CDR）片段、CDR移植抗體結合區、單鏈抗體（scFv）、單鏈抗體片段、嵌合抗體、雙抗體、三抗體、四抗體、微型抗體、線性抗體；螯合重組抗體、三抗體或雙抗體、胞內抗體、奈米抗體、小模組免疫藥物（SMIP）、抗原結合域免疫球蛋白融合蛋白、單域抗體（包括駱駝化抗體）、含VHH抗體或其變體或衍生物，以及含有足夠賦予對多肽的抗原特異性結合的免疫球蛋白之至少一部分（如一個、兩個、三個、四個、五個或六個CDR序列）的多肽，只要抗體保留所需生物活性即可。
如本文所用，「抗體衍生物」係指包含本文所述之一或多種屬性之抗體、抗原結合蛋白或其片段，該抗體衍生物可根據其化學特性、化學修飾或結構屬性類型（例如，HMW種類、片段或同種型）來表徵，並表現出所需的生物活性。
「價數（valency）」係指靶向表位的各抗體或抗體片段上的抗原結合位點之數目。典型全長IgG分子或F(ab)2係「二價」的，因為其具有兩個相同的靶標結合位點。「單價」抗體片段，如F(ab)’或scFc，具有單個抗原結合位點。三價或四價抗原結合蛋白還可工程改造成多價。
術語「單株抗體」係指自基本上均質的抗體群體（即構成該群體的個體抗體除可少量存在的天然存在的可能突變外均一致）獲得的抗體。
術語「抑制TSLP活性」包括抑制以下任一或多個：TSLP結合其受體；在TSLP存在下表現TSLPR的細胞之增殖、活化或分化；在極化分析中在TSLP存在下Th2細胞介素產生之抑制；在TSLP存在下樹突狀細胞活化或成熟；以及在TSLP存在下肥胖細胞細胞介素釋放。參見，例如美國專利7982016 B2之第6欄和實例8，以及US 2012/0020988 A1之實例7-10。
術語「樣本」或「生物樣本」係指自受試者獲得以用於本發明之方法中的樣本，並且包括尿、全血、血漿、血清、唾液、痰液、組織切片、腦脊髓液、有活體外刺激的周邊血單核細胞、無活體外刺激的周邊血單核細胞、有活體外刺激的腸淋巴組織、無活體外刺激的腸淋巴組織、腸灌洗液、支氣管肺泡灌洗液、鼻灌洗液和誘導的痰液。
術語「治療（treat、treating和treatment）」係指與本文所述之炎性障礙有關的事件、疾病或病症之臨床症狀、表現或進展暫時或永久、部分或完全地消除、減少、壓制或改善。如相關領域中所認識到，用作治療劑的藥物可降低既定疾病狀態之嚴重度，但不必消除疾病之每種表現才被認為是有用治療劑。相似地，預防性投與的治療不必完全有效地預防病症發作才可成為可行的預防劑。僅僅降低疾病之影響（例如藉由減少其症狀之次數或降低其症狀之嚴重度，或藉由增加另一治療之有效性，或藉由產生另一有益作用）或降低疾病在受試者中發生或惡化的可能性即為足夠。本發明之一個實施方式涉及用於確定治療功效之方法，該方法包括向患者投與治療劑，該治療劑投與的量和時間足以引起持續好轉，超越反映特定障礙之嚴重度的指示劑之基線。
術語「治療有效量」係指治療劑有效改善或減輕與疾病或障礙有關的症狀或徵象之量。 TSLP
胸腺基質淋巴細胞生成素（TSLP）係上皮細胞衍生的細胞介素，其係對促炎性刺激響應而產生，並且主要經由其在樹突狀細胞（Gilliet, J Exp Med.[實驗醫學雜誌] 197:1059-1067, 2003；Soumelis, Nat Immunol.[自然免疫學] 3:673-680, 2002；Reche, J Immunol.[免疫學雜誌] 167:336-343, 2001）、肥胖細胞（Allakhverdi, J Exp Med.[實驗醫學雜誌] 204:253-258, 2007）和CD34+前驅細胞（Swedin等人. Pharmacol Ther [藥理學與治療學] 2017;169:13-34）中的活性來驅動過敏性炎症響應。TSLP藉由由白血球介素（IL）-7受體α（IL-7Rα）鏈和常見γ鏈樣受體（TSLPR）組成的異二聚物受體發訊息（Pandey, Nat Immunol.[自然免疫學] 1:59-64, 2000；Park, J Exp Med.[實驗醫學雜誌] 192:659-669, 2000）。
與對照相比，氣喘個體氣道中人TSLP mRNA（Brightling等人, J Allergy Clin Immunol [過敏與臨床免疫雜誌] 2008;121:5-10；quiz 1-2；Ortega等人. N Engl J Med [新英格蘭醫學雜誌] 2014;371:1198-207）和蛋白質水平（Ortega等人, 同上）有所增加，並且此表現程度與疾病嚴重度相關（Brightling等人, 同上）。最近的研究已證明，人TSLP基因座中的單核苷酸多態性與預防氣喘、異位性氣喘、和氣道高反應性有關，這表明TSLP基因表現之差別調節可影響疾病易感性（Ortega等人. N Engl J Med [新英格蘭醫學雜誌] 2014;371:1198-207；To等人. BMC Public Health [BMC公共健康] 2012;12:204）。該等數據表明靶向TSLP可抑制與氣喘有關的多個生物途徑。
TSLP之早期非臨床研究表明在自氣道上皮細胞或基質細胞釋放TSLP之後，其活化肥胖細胞、樹突狀細胞及T細胞，從而釋放Th2細胞介素（例如IL-4/13/5）。最近公開的人類數據證明在重度氣喘中在組織TSLP基因與蛋白質表現、Th2基因特徵評分和組織嗜酸性球之間存在良好相關性。因此，抗TSLP靶標療法可在具有Th2型炎症的氣喘患者中為有效的（Shikotra等人, J Allergy Clin Immunol.[過敏與臨床免疫雜誌] 129(1):104-11, 2012）。
來自其他研究的數據表明，TSLP可經由與Th2無關的途徑，如氣道平滑肌與肥胖細胞之間的串擾，引起氣道炎症（Allakhverdi等人, J Allergy Clin Immunol.[過敏與臨床免疫雜誌] 123(4):958-60, 2009；Shikotra等人, 同上）。TSLP還可促進誘導T細胞分化成產生Th-17-細胞介素的細胞，從而在更重度氣喘中常見到嗜中性球炎症增加（Tanaka等人, Clin Exp Allergy.[臨床和實驗過敏] 39(1):89-100, 2009）。該等數據和其他出現的證據表明阻斷TSLP可用於壓制多個生物途徑，包括但不限於涉及Th2細胞介素（IL-4/13/5）的途徑。 抗體
預期了對TSLP具有特異性的抗體或抗體衍生物或抗原結合蛋白可用於治療炎性疾病，包括氣喘，如重度氣喘、嗜酸性球性氣喘、非嗜酸性球性/低嗜酸性球性氣喘以及本文所述之其他形式氣喘、異位性皮膚炎、EoE和COPD。
結合靶標抗原（例如，TSLP）的特異性結合劑（如抗體和抗體衍生物或片段）可用於本揭露之方法和組成物中。在一個實施方式中，特異性結合劑係抗體。該等抗體可為單株的（MAb）；重組的；嵌合的；人源化的，如互補決定區（CDR）移植的；人的；抗體變體，包括單鏈；和/或雙特異性的；以及其片段；變體；或其衍生物。抗體片段包括抗體之結合目的多肽之表位的那些部分。此類片段之實例包括由全長抗體之酶促裂解產生的Fab和F(ab')片段。其他結合片段包括由重組DNA技術產生的片段，該等技術如表現含有編碼抗體可變區的核酸序列之重組質體。
單株抗體可經修飾用作治療劑或診斷劑。一個實施方式為「嵌合」抗體，其中一部分重鏈（H）和/或輕鏈（L）與來源於特定物種或屬於特定抗體類別或子類的抗體中的對應序列相同或同源，而鏈之剩餘部分與來源於另一物種或屬於另一抗體類別或子類的抗體中的對應序列相同或同源。還包括此類抗體之片段，只要其展現所需生物活性即可。參見美國專利案號4,816,567；Morrison等人, 1985, Proc. Natl. Acad. Sci.[美國國家科學院院刊] 81:6851-55。
在另一個實施方式中，單株抗體係「人源化」抗體。用於將非人抗體人源化的方法為本領域中所熟知。參見美國專利案號5,585,089和5,693,762。通常，人源化抗體具有一或多個自非人類來源引入其中的胺基酸殘基。可例如使用本領域中所述之方法（Jones等人, 1986, Nature [自然] 321:522-25；Riechmann等人, 1998, Nature [自然] 332:323-27；Verhoeyen等人, 1988, Science [科學] 239:1534-36），藉由用齧齒類動物互補決定區之至少一部分代替人抗體之對應區域來進行人源化。
本發明還涵蓋結合TSLP的人抗體變體和衍生物（包括抗體片段）。使用在缺少內源性免疫球蛋白產生時能夠產生人抗體譜的轉基因動物（例如小鼠），藉由用多肽抗原（即具有至少6個相鄰胺基酸）進行免疫接種，視需要地結合載體，來產生此類抗體。參見，例如Jakobovits等人, 1993, Proc. Natl. Acad. Sci.[美國國家科學院院刊] 90:2551-55；Jakobovits等人, 1993, Nature [自然] 362:255-58；Bruggermann等人, 1993, Year in Immuno.[年度免疫學] 7:33。還參見PCT申請案號PCT/US 96/05928和PCT/US 93/06926。其他方法描述於美國專利案號5,545,807、PCT申請案號PCT/US 91/245和PCT/GB 89/01207、以及歐洲專利案號546073 B1和546073 A1中。人抗體還可藉由在宿主細胞中表現重組DNA或藉由在如本文所述之融合瘤細胞中表現來產生。
嵌合的、CDR移植的以及人源化抗體、抗體片段和/或抗體變體以及衍生物典型地藉由重組方法產生。將編碼抗體的核酸引入宿主細胞中並且使用本文所述之材料和程序表現。在較佳的實施方式中，在如CHO細胞的哺乳動物宿主細胞中產生抗體。單株（例如人）抗體可藉由在宿主細胞中表現重組DNA或藉由在如本文所述之融合瘤細胞中表現來產生。哺乳動物細胞之另外的實例包括獲得自美國典型培養物保藏中心（維吉尼亞州馬納薩斯（Manassas, VA））的永生化細胞系，除了中國倉鼠卵巢（CHO）細胞之外，還包括希拉（HeLa）細胞、幼倉鼠腎（BHK）細胞、猴腎細胞（COS）、人肝細胞癌細胞（例如Hep G2）和人上皮腎293細胞。此外，可以選擇細胞系或宿主系統以確保泰派魯單抗或泰派魯單抗衍生物之正確修飾和加工。可以使用具有用於初級轉錄本之適當加工、基因產物之糖基化和磷酸化的細胞機器之真核宿主細胞。該等包括CHO、VERY、BHK、希拉（Hela）、COS、MDCK、293、3T3、W138、BT483、Hs578T、HTB2、BT20和T47D、NS0（不內源性產生任何功能性免疫球蛋白鏈之鼠骨髓瘤細胞系）、SP20、CRL7030和HsS78Bst細胞。也可以使用藉由永生化人淋巴細胞產生的人細胞系。還可以使用人細胞系PER.C6®（美商詹森藥物公司（Janssen）；新澤西州泰特斯維爾（Titusville, NJ））以重組產生單株抗體。
舉例來說，具有如本文所述之分子屬性的泰派魯單抗和泰派魯單抗衍生物可以藉由選擇表現具有該分子屬性的泰派魯單抗或泰派魯單抗衍生物之細胞殖株來獲得。可以使用重組DNA方法，用於產生此類泰派魯單抗或泰派魯單抗衍生物。例如，可以將編碼泰派魯單抗或泰派魯單抗衍生物的重鏈和輕鏈之DNA插入合適的一種表現載體（或多種載體中，例如一種用於重鏈的載體和一種用於輕鏈的載體），該DNA可轉染到合適的宿主細胞，例如哺乳動物細胞系之細胞。合適的表現載體係本領域已知的，該等表現載體含有例如編碼與啟動子連接的泰派魯單抗多肽之多核苷酸。表現載體可以藉由常規技術轉移至宿主細胞，並且可以將轉移的細胞培養以產生抗體。視需要地，宿主細胞可以工程化以調節分子屬性。例如，為了調節岩藻糖基化，可對糖基化感受態細胞進行遺傳修飾，以改變岩藻糖基轉移酶或高爾基氏體GDP-岩藻糖運輸蛋白之活性。舉例來說，工程化以調節糖基化的細胞系描述於PCT公開案號WO 2015/116315中。
可以選擇產生包含相關分子屬性的泰派魯單抗或泰派魯單抗衍生物之殖株。舉例來說，可以進行已建立的基於微孔盤的殖株產生和生長之方法。可以藉由如螢光活化細胞分選（FACS）或有限稀釋等過程將數百種混合的異質細胞分選到單細胞培養物中。在被允許恢復至健康和穩定的群體後，可以分析該等選殖衍生的細胞，並且選擇群體用於進一步分析。為了進一步分析，殖株細胞可以在小容器中培養，如旋轉管、24孔板或96深孔板在「小規模細胞培養」中培養（例如，10天補料分批過程）。在這個小規模的過程中，定期添加大量營養物種，並且獲得細胞生長和活力之不同測量值。數百種或甚至數千種該等小規模培養可能是平行的。培養結束時（例如，第十天），收穫細胞用於測定和分析。視需要地，基於微孔盤的殖株產生和生長方法（例如，亞選殖）可以藉由使用自動化或部分自動化的高通量和高含量篩選工具，例如，如一級克利照明公司（Berkeley Lights）Beacon™光電細胞系產生和分析系統。視需要地，可以使用高通量篩選方法和機器學習工具以加速選擇產生相關分子屬性之殖株（參見，例如PCT公開案號WO 2020/223422）。
抗TSLP抗體泰派魯單抗描述於美國專利案號7,982,016和美國專利申請案號15/951,602。
可用於本發明之方法中的抗TSLP抗原結合蛋白（包括其片段）包含抗TSLP抗體，該抗體包含a.輕鏈可變結構域，該輕鏈可變結構域包含：i. 包含SEQ ID NO: 3中所示的胺基酸序列之輕鏈CDR1序列；ii. 包含SEQ ID NO: 4中所示的胺基酸序列之輕鏈CDR2序列；iii. 包含SEQ ID NO: 5中所示的胺基酸序列之輕鏈CDR3序列；以及b. 重鏈可變結構域，該重鏈可變結構域包含：i. 包含SEQ ID NO: 6中所示的胺基酸序列之重鏈CDR1序列；ii. 包含SEQ ID NO: 7中所示的胺基酸序列之重鏈CDR2序列，以及iii. 包含SEQ ID NO: 8中所示的胺基酸序列之重鏈CDR3序列，其中該抗體或抗體衍生物特異性結合如SEQ ID NO: 2之胺基酸29-159中所示的TSLP多肽。
還預期了抗體或抗體衍生物，該抗體或抗體衍生物包含a. 輕鏈可變結構域，該輕鏈可變結構域選自由以下組成之群組：i. 與SEQ ID NO: 12具有至少80%同一性的胺基酸序列；ii. 由與SEQ ID NO: 11具有至少80%同一性的多核苷酸序列編碼的胺基酸序列；iii. 由在中等嚴格條件下與由SEQ ID NO: 11組成的多核苷酸補體雜交的多核苷酸編碼的胺基酸序列；以及b. 重鏈可變結構域，該重鏈可變結構域選自由以下組成之群組：i. 與SEQ ID NO: 10具有至少80%同一性的胺基酸序列；ii. 由與SEQ ID NO: 9具有至少80%同一性的多核苷酸序列編碼的胺基酸序列；iii. 由在中等嚴格條件下與由SEQ ID NO: 9組成的多核苷酸補體雜交的多核苷酸編碼的胺基酸序列；或c. (a) 之輕鏈可變結構域和 (b) 之重鏈可變結構域，其中該抗體或抗體衍生物特異性結合如SEQ ID NO: 2之胺基酸29-159中所示的TSLP多肽。
泰派魯單抗為一種示例性抗TSLP抗體，其具有：a. i. 包含SEQ ID NO: 3中所示的胺基酸序列之輕鏈CDR1序列；ii. 包含SEQ ID NO: 4中所示的胺基酸序列之輕鏈CDR2序列；iii. 包含SEQ ID NO: 5中所示的胺基酸序列之輕鏈CDR3序列；以及b. 重鏈可變結構域，其包含：i. 包含SEQ ID NO: 6中所示的胺基酸序列之重鏈CDR1序列；ii. 包含SEQ ID NO: 7中所示的胺基酸序列之重鏈CDR2序列，以及iii. 包含SEQ ID NO: 8中所示的胺基酸序列之重鏈CDR3序列。
泰派魯單抗還包含輕鏈可變結構域，該輕鏈可變結構域具有SEQ ID NO: 12中列出的胺基酸序列；由SEQ ID NO: 11中列出的多核苷酸序列編碼；和具有SEQ ID NO: 10中所示的由SEQ ID NO: 9中所示的多核苷酸序列編碼的胺基酸序列之重鏈可變結構域。
在多個實施方式中，抗TSLP抗體或其抗體衍生物為二價，並且選自由以下組成之群組：人抗體、人源化抗體、嵌合抗體、單株抗體、重組抗體、抗原結合抗體片段、單鏈抗體、單體抗體、雙抗體、三抗體、四抗體、Fab片段、IgG1抗體、IgG2抗體、IgG3抗體以及IgG4抗體。
在多個實施方式中，抗TSLP抗體衍生物選自由以下組成之群組：雙抗體、三抗體、四抗體、Fab片段、單域抗體、scFv，其中該劑量經調整，使得該等結合位點相對於投與二價抗體之結合位點係等莫耳的。
預期抗體或抗體衍生物為IgG2抗體。人IgG2恒定區之示例性序列能以Uniprot編號P01859自Uniprot數據庫獲得，該Uniprot數據庫藉由引用併入本文。包括關於其他抗體重鏈及輕鏈恒定區的序列資訊的資訊還可經由Uniprot數據庫以及在抗體工程改造及產生領域熟知的其他數據庫公開獲得。泰派魯單抗為IgG2抗體。包括IgG2鏈的泰派魯單抗的全長重鏈和輕鏈之序列分別在SEQ ID NO: 13和14中列出。
在某些實施方式中，抗體衍生物包括四聚體糖基化抗體，其中與親本多肽之胺基酸序列相比，糖基化位點之數目和/或類型改變。在某些實施方式中，變體包含比天然蛋白質更多或更少數目的N連接的糖基化位點。可替代地，消除此序列的取代將移除已存在的N連接的碳水化合物鏈。還提供N連接的碳水化合物鏈之重排，其中消除一或多個N連接的糖基化位點（典型地天然存在的那些）並且創造一或多個新的N連接的位點。另外的抗體變體包括半胱胺酸變體，其中與親本胺基酸序列相比，一或多個半胱胺酸殘基缺失或取代另一個胺基酸（例如，絲胺酸）。當抗體必須重新折疊成生物學上活性構象時，如在分離不溶性包涵體之後，半胱胺酸變體可能有用。半胱胺酸變體一般具有少於天然蛋白質的半胱胺酸殘基，且典型地具有偶數個以使由未配對的半胱胺酸引起的相互作用最小。
所希望的胺基酸取代（無論保守或非保守）可由熟悉該項技術者在需要此類取代時來確定。在某些實施方式中，胺基酸取代可用於鑒別人TSLP的抗體之重要殘基，或增加或減少抗體對本文所述之人TSLP的親和力。
根據某些實施方式，較佳的胺基酸取代為以下那些：(1) 降低對蛋白質水解的敏感性；(2) 降低對氧化之敏感性；(3) 改變結合親和力親和性；(4) 抑制形成高分子量（HMW）種類和/或 (5) 賦予或改變此類多肽上的其他生理化學特性或功能特性。根據某些實施方式，可在天然存在的序列中（在某些實施方式中，在形成分子間接觸的一或多個結構域外的多肽部分中）進行單個或多個胺基酸取代（在某些實施方式中為保守胺基酸取代）。在某些實施方式中，保守胺基酸取代典型地基本上不會改變親本序列之結構特性（例如替代胺基酸不應傾向於使親本序列中存在的螺旋斷裂，或破壞親本序列特徵性的其他類型二級結構）。領域公認的多肽二級和三級結構之實例描述於Proteins, Structures and Molecular Principles [蛋白質、結構和分子原理] (Creighton編輯, W. H. Freeman and Company [W.H.弗裡曼公司], 紐約 (1984))；Introduction to Protein Structure [蛋白質結構簡介] (C.Branden和J. Tooze編輯, Garland Publishing [加蘭出版社], 紐約, 紐約州(1991))；以及Thornton等人 Nature [自然] 354:105 (1991)，將該等文獻各自藉由引用併入本文。 製備方法
本揭露之泰派魯單抗組成物可以藉由重組表現核酸製備，該等核酸編碼宿主細胞中之重鏈和輕鏈，從宿主細胞培養物或宿主細胞裂解物中部分純化或純化泰派魯單抗，並根據下文更詳細地描述的方法分析所得組成物中之一或多種的本文詳述的泰派魯單抗衍生物。
為重組產生泰派魯單抗或泰派魯單抗衍生物，將編碼重鏈（例如，包含SEQ ID NO: 10的胺基酸序列之重鏈多肽）和輕鏈（例如，包含SEQ ID NO: 12的胺基酸序列之輕鏈多肽）之一或多種核酸插入一或多種表現載體。可以將編碼重鏈之核酸和編碼輕鏈之核酸插入單個表現載體中或可以將它們插入分開的表現載體中。如本文所用的，術語「表現載體」或「表現構建體」係指含有所需編碼序列和用於在特定宿主細胞中表現可操作地連接的編碼序列所必需的適合的核酸控制序列之重組DNA分子。表現載體可包括影響或控制轉錄、翻譯以及如果存在內含子則影響與其可操作連接的編碼區的RNA剪接之序列。用於在原核生物中表現所必需的核酸序列包括啟動子，視需要地操縱序列、核糖體結合位點和可能的其他序列。已知真核細胞利用啟動子、強化子、和終止子以及多腺苷酸化訊息。分泌訊息肽序列還可以視需要地由表現載體編碼，與目的編碼序列可操作地連接，使得表現的多肽可以由重組宿主細胞分泌，如果需要，以便更容易地從細胞中分離目的多肽。載體還可以包括一或多個選擇性標記基因以促進向其中引入載體之宿主細胞之選擇。編碼泰派魯單抗的重鏈和輕鏈之示例性核酸以及用於重組表現泰派魯單抗的表現載體之合適的訊息肽序列和其他組分描述於美國專利7,982,016中，將其藉由引用以其全文特此併入，並且在本文SEQ ID NO: 9和SEQ ID NO: 11中列出。
在構建表現載體並且將編碼泰派魯單抗或其衍生物的重鏈和輕鏈組分之一或多種核酸分子插入載體之一或多個適當位點或載體之後，這一或多種完整的載體可以插入至用於擴增和/或多肽表現的合適的宿主細胞。可以藉由熟知的方法，包括轉染、感染、磷酸鈣共沈澱、電穿孔、顯微注射、脂質轉染、DEAE-聚葡萄醣介導的轉染或其他已知技術，將泰派魯單抗或其衍生物之表現載體轉染至所選宿主細胞。所選方法將部分隨待使用的宿主細胞類型而變化。該等方法和其他合適的方法係熟悉該項技術者熟知的，並且在例如Sambrook, Fritsch和Maniatis (編輯), Molecular Cloning; A Laboratory Manual [分子選殖;實驗室手冊], 第二版, Cold Spring Harbor [冷泉港實驗室出版社], 紐約, (1989)，Ausubel等人. (編輯) Current Protocols in Molecular Biology [分子生物學實驗指南], Greene Publishing Associates [格林出版協會], (1989) 中所示。
當在適當條件下培養時，宿主細胞合成泰派魯單抗或其衍生物，隨後該泰派魯單抗或其衍生物可以從培養基（如果宿主細胞將其分泌至培養基中）收集或直接由產生其的宿主細胞（如果其並非分泌的）收集。適當的宿主細胞之選擇將取決於各種因素，例如所希望的表現水平、活性所希望的或所需的多肽修飾（例如糖基化或磷酸化）和易於折疊成生物活性分子。
示例性宿主細胞包括原核生物細胞、酵母或高等真核細胞。原核宿主細胞包括真細菌，如革蘭氏陰性或革蘭氏陽性生物，例如腸桿菌科（ Enterobacteriaceae）如艾氏菌屬（ Escherichia），例如大腸桿菌（ E. coli）、腸桿菌屬（ Enterobacter）、伊文氏桿菌屬（ Erwinia）、克留氏菌屬（ Klebsiella）、變形桿菌屬（ Proteus）、沙氏桿菌屬（ Salmonella），例如鼠傷寒沙氏桿菌（ Salmonella typhimurium）、沙雷氏菌屬（ Serratia），例如黏質沙雷氏菌（ Serratia marcescans）、和志賀桿菌屬（ Shigella）、以及芽孢桿菌屬（ Bacillus），例如枯草桿菌（ B. subtilis）和地衣芽孢桿菌（ B. licheniformis）、假單胞菌屬（ Pseudomonas）、和鏈黴菌屬（ Streptomyces）。真核微生物（如絲狀真菌或酵母）為用於重組多肽的合適的選殖或表現宿主。釀酒酵母（ Saccharomyces cerevisiae）或普通麵包酵母為低等真核宿主微生物中最常用的。然而，多種其他屬、種和菌株為常用的且可用於本文中，例如畢赤酵母屬（ Pichia），例如巴斯德畢赤酵母（ P. pastoris）、裂殖酵母（ Schizosaccharomyces pombe）；克魯維酵母屬（ Kluyveromyces），耶氏酵母屬（ Yarrowia）；念珠菌屬（ Candida）；瑞氏木黴（ Trichoderma reesia）；粗厚神經胞子菌（ Neurospora crassa）；許旺酵母屬（ Schwanniomyces），例如西方許旺酵母（ Schwanniomyces occidentalis）；和絲狀真菌，例如像神經胞子菌屬（ Neurospora）、青黴菌屬（ Penicillium）、木黴菌屬（ Tolypocladium）和麴菌屬（ Aspergillus）宿主，例如小巢狀麴菌（ A. nidulans）和黑麴菌（ A. niger）。
用於表現糖基化抗體之宿主細胞可以來源於多細胞生物。無脊椎動物細胞之實例包括植物細胞和昆蟲細胞。已經鑒定了許多桿狀病毒株和變體以及來自以下宿主的相應的許可性昆蟲宿主細胞，例如草地貪夜蛾（ Spodoptera frugiperda）（毛蟲），埃及斑蚊（ Aedes aegypti）（蚊子），白紋伊蚊（ Aedes albopictus）（蚊子），黑腹果蠅（ Drosophila melanogaster）（果蠅）和家蠶（ Bombyx mori）。用於轉染此類細胞之多種病毒株為公開可獲得的，例如，苜蓿銀紋夜蛾（ Autographa californica）NPV之L-1變體和家蠶NPV之Bm-5株。
脊椎動物宿主細胞也可以為合適的宿主，並且來自該等細胞的抗體之重組產生已成為常規程序。可用於表現的宿主之哺乳動物細胞系為本領域熟知的，並且包括但不限於可從美國典型培養物保藏中心（ATCC）獲得的永生化細胞系，包括但不限於中國倉鼠卵巢（CHO）細胞，包括CHOK1細胞（ATCC CCL61）、DXB-11、DG-44和中國倉鼠卵巢細胞/-DHFR（CHO，Urlaub等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA [美國國家科學院院刊] 77: 4216, 1980）；由SV40轉化的猴腎CV1系（COS-7，ATCC CRL 1651）；人胚胎腎系（293細胞或亞選殖用於在懸浮培養中生長的293細胞（Graham等人, J. Gen Virol. [普通病毒學雜誌] 36: 59, 1977）；幼倉鼠腎細胞（BHK，ATCC CCL 10）；小鼠賽特利細胞（TM4, Mather, Biol. Reprod.[生殖生物學] 23: 243-251, 1980）；猴腎細胞（CV1、ATCC CCL 70）；非洲綠猴腎細胞（VERO-76，ATCC CRL-1587）；人子宮頸癌細胞（HELA，ATCC CCL 2）；犬腎細胞（MDCK，ATCC CCL 34）；布法羅大鼠肝細胞（BRL 3A，ATCC CRL 1442）；人肺細胞（W138，ATCC CCL 75）；人肝癌細胞（Hep G2，HB 8065）；小鼠乳腺腫瘤（MMT 060562，ATCC CCL51）；TRI細胞（Mather等人, Annals N.Y Acad. Sci. [紐約科學院年報] 383: 44-68, 1982）；MRC 5細胞或FS4細胞；哺乳動物骨髓瘤細胞，以及許多其他的細胞系。在一些實施方式中，CHO細胞較佳的是用於表現泰派魯單抗或其衍生物之宿主細胞。
將宿主細胞用上述用於產生泰派魯單抗或其衍生物之表現載體轉化或轉染，並且在適當修飾的常規營養培養基中培養，用於誘導啟動子、選擇轉化子或擴增編碼所需序列之基因。用於產生泰派魯單抗或其衍生物之宿主細胞可以在各種培養基中培養。適用於培養宿主細胞之可商購的培養基，如Ham's F10（西格瑪公司（Sigma））、極限必需培養基（MEM，西格瑪公司）、RPMI-1640（西格瑪公司）和杜爾貝科改良伊格爾培養基（DMEM，西格瑪公司）。另外，在Ham等人, Meth. Enz. [酶學方法] 58: 44, 1979；Barnes等人, Anal. Biochem. [分析生物化學] 102: 255, 1980；美國專利案號4,767,704；4,657,866；4,927,762；4,560,655；或5,122,469；WO 90/03430；或WO 87/00195。必要時，該等培養基中之任一種可以補充有激素和/或其他生長因子（如胰島素、運鐵蛋白或上皮生長因子）、鹽（如氯化鈉、鈣、鎂和磷酸鹽）、緩衝液（如HEPES）、核苷酸（如腺苷和胸苷）、抗生素（如健他黴素（Gentamycin™）藥物）、微量元素（定義為通常以在微莫耳濃度範圍內的最終濃度存在的無機化合物）和葡萄糖或等效能量來源。還可包括適當濃度的按熟悉該項技術者已知任何其他必需的補充劑。培養條件（如溫度，pH等）為先前與選擇用於表現的宿主細胞一起使用的那些條件，並且對於普通技術者將為顯而易見的。
在培養宿主細胞後，抗體可以在細胞內、周質間隙中產生，或直接分泌到培養基中。如果抗體在細胞內產生，作為第一步，裂解宿主細胞（例如，藉由機械剪切、滲透壓休克、或酶促方法），並且例如藉由離心、微濾或超濾去除例如顆粒碎片（例如，宿主細胞和裂解的片段）。如果抗體分泌到培養基中，可以藉由離心或微濾，並視需要地隨後藉由超濾將抗體與宿主細胞分離。可以使用例如，一或多種層析步驟，如親和層析（例如，蛋白質A或蛋白質G親和層析）、陽離子交換層析、陰離子交換層析、羥磷灰石層析、疏水相互作用層析或混合模式層析，進一步純化或部分純化泰派魯單抗或其衍生物。
一旦產生或獲得泰派魯單抗組成物，可以評估組成物中的本文所述之一或多種泰派魯單抗衍生物之存在和量，該等一或多種泰派魯單抗衍生物包括異構化衍生物（包括其異構化中間體）、脫醯胺化衍生物（包括其脫醯胺化中間體）、氧化衍生物、糖基化衍生物、二硫化物同種型衍生物以及尺寸衍生物（例如，HMW種類或片段）。因此，本揭露包括用於評估泰派魯單抗組成物的品質之方法，該等方法包括獲得含有泰派魯單抗和一或多種泰派魯單抗衍生物之泰派魯單抗組成物；測量組成物中之一或多種泰派魯單抗衍生物之量；將一或多種泰派魯單抗衍生物之測量的量與預先確定的參考標準進行比較；並且如果比較表明滿足該預先確定的參考標準，則製備泰派魯單抗組成物之藥物配製物或藥物產品。在一些實施方式中，該等方法包括以下一種、兩種、三種、四種、五種、六種或七種：(1) 測量組成物中的異構化衍生物（包括其異構化中間體）之量，(2) 測量組成物中的脫醯胺化衍生物（包括其脫醯胺化中間體）之量，(3) 測量在組成物中的氧化衍生物之量，(4) 測量組成物中的糖基化衍生物之量，(5) 測量組成物中的二硫化物同種型衍生物之量，(6) 測量組成物中的HMW種類之量，和/或 (7) 測量組成物中的片段之量。在某些實施方式中，所有七種測量都在泰派魯單抗組成物上進行。
每種泰派魯單抗衍生物之預先確定的參考標準可為衍生物之閾值量或該等量之範圍，該衍生物未顯著影響泰派魯單抗組成物之功效和/或耐受性，例如用於投與期間的安全性目的或用於抑制配體誘導的TSLP受體活化。例如，每種泰派魯單抗衍生物之預先確定的參考標準可為本文揭露的每種衍生物之任何限度或範圍，因為具有該等衍生物的該等限度/範圍之泰派魯單抗組成物具有與臨床試驗中評價並且顯示具有臨床療效的泰派魯單抗組成物相比的相當的功效和/或耐受性。應當理解，本文所述之預先確定的參考標準可以在本文所述之方法開始之前指明。
在該等方法之某些實施方式中，如果組成物中的泰派魯單抗衍生物之測量的量滿足預先確定的參考標準，則然後可以將泰派魯單抗組成物歸類為可接受的，並且進行到製造或分配過程中的下一步驟，如，例如藉由製備組成物之藥物配製物（例如，藉由與一或多種賦形劑或稀釋劑結合）；藉由製備組成物之藥物產品（例如，藉由填充到小瓶、注射器、自動注射器、或其他容器或遞送裝置中）；將組成物與使用說明、稀釋劑和/或遞送裝置一起包裝；或商業銷售組成物或運送組成物給經銷商。在該等方法之一些實施方式中，如果組成物中的泰派魯單抗衍生物之測量的量滿足預先確定的參考標準，則製備泰派魯單抗組成物之藥物配製物。在該等方法之其他實施方式中，如果組成物中的泰派魯單抗衍生物之測量的量滿足預先確定的參考標準，則製備泰派魯單抗組成物之藥物產品。製備泰派魯單抗組成物之藥物配製物和藥物產品之方法於下文更詳細地描述。如果組成物中的泰派魯單抗衍生物之測量的量未滿足預先確定的參考標準，則然後在該等方法之一些實施方式中，可以將泰派魯單抗組成物歸類為不可接受的，並且丟棄、銷毀或進行另外的製造步驟，如另外的純化以去除或減少組成物中的泰派魯單抗衍生物之量，使得滿足預先確定的參考標準。
在一個實施方式中，該等用於評估泰派魯單抗組成物的品質之方法包括獲得含有泰派魯單抗和泰派魯單抗異構化衍生物（包括其異構化中間體）之泰派魯單抗組成物；測量組成物中的異構化衍生物之量；將異構化衍生物測量的量與預先確定的參考標準進行比較；並且如果比較表明滿足該預先確定的參考標準，則製備泰派魯單抗組成物之藥物配製物或藥物產品。泰派魯單抗組成物中的異構化衍生物之量之預先確定的參考標準可以為小於約30%，例如小於約25%、約20%或更少、約17%或更少、約15%或更少、約12%或更少、約10%或更少、約8%或更少、約6%或更少、或約4%或更少。在一個實施方式中，泰派魯單抗組成物中的異構化衍生物之量之預先確定的參考標準為約15%或更少。在另一個實施方式中，泰派魯單抗組成物中的異構化衍生物之量之預先確定的參考標準為約13%或更少。在另一個實施方式中，泰派魯單抗組成物中的異構化衍生物之量之預先確定的參考標準為小於約10%、約8%、約5%、約3%或約2%。在一些實施方式中，泰派魯單抗組成物中的異構化衍生物之量之預先確定的參考標準可為該等量之範圍，例如，約0.5%至約13%的泰派魯單抗組成物、約1%至約10%的泰派魯單抗組成物、或約0.5%至約5%的泰派魯單抗組成物。在另一個實施方式中，泰派魯單抗組成物中的異構化衍生物之量之預先確定的參考標準為小於約5%、4%、3%、2%或1%的位於任一或兩個可變區鏈中的SEQ ID NO: 7的D54之異構化。在多個實施方式中，泰派魯單抗組成物中的異構化衍生物之量之預先確定的參考標準為小於約13%、約10%、約8%、約5%、約3%或約2%的SEQ ID NO: 4的D49、D50或D52之一或多個之異構化。在某些實施方式中，泰派魯單抗組成物中的異構化衍生物之量藉由還原性肽作圖測量。
在一個實施方式中，該等用於評估泰派魯單抗組成物的品質之方法包括獲得含有泰派魯單抗和泰派魯單抗脫醯胺化衍生物（包括其脫醯胺化中間體）之泰派魯單抗組成物；測量組成物中的脫醯胺化衍生物之量；將脫醯胺化衍生物測量的量與預先確定的參考標準進行比較；並且如果比較表明滿足該預先確定的參考標準，則製備泰派魯單抗組成物之藥物配製物或藥物產品。泰派魯單抗組成物中的脫醯胺化衍生物之量之預先確定的參考標準可以為小於約15%，例如約13%或更少、約10%或更少、約8%或更少、約6%或更少、約4%或更少、約3%或更少、約2%或更少、或約1%或更少。在一個實施方式中，泰派魯單抗組成物中的脫醯胺化衍生物之量之預先確定的參考標準為約7%或更少。在另一個實施方式中，泰派魯單抗組成物中的脫醯胺化衍生物之量之預先確定的參考標準為約5%或更少。在另一個實施方式中，泰派魯單抗組成物中的脫醯胺化衍生物之量之預先確定的參考標準為約2%或更少。在一些實施方式中，泰派魯單抗組成物中的脫醯胺化衍生物之量之預先確定的參考標準可為該等量之範圍，例如，約0.4%至約10%的泰派魯單抗組成物、約1%至約7%的泰派魯單抗組成物、或約0.1%至約4%的泰派魯單抗組成物。在多個實施方式中，泰派魯單抗組成物中的脫醯胺化衍生物之量之預先確定的參考標準為小於約3%的位於SEQ ID NO: 3中列出的LCDR1中的N25/N26處的脫醯胺化。在多個實施方式中，泰派魯單抗組成物中的脫醯胺化衍生物之量之預先確定的參考標準為小於約13%的位於SEQ ID NO: 13中列出的重鏈中的N316和/或SEQ ID NO: 13中列出的重鏈中的N385/390處的脫醯胺化。在某些實施方式中，泰派魯單抗組成物中的脫醯胺化衍生物之量藉由還原性肽作圖測量。
在一個實施方式中，該等用於評估泰派魯單抗組成物的品質之方法包括獲得含有泰派魯單抗和泰派魯單抗氧化衍生物之泰派魯單抗組成物；測量組成物中的氧化衍生物之量；將氧化衍生物測量的量與預先確定的參考標準進行比較；並且如果比較表明滿足該預先確定的參考標準，則製備泰派魯單抗組成物之藥物配製物或藥物產品。泰派魯單抗組成物中的氧化衍生物之量之預先確定的參考標準可以為小於約7%或更少、約6%或更少、約4%或更少、約3%或更少、約2%或更少、或約1%或更少。在一個實施方式中，泰派魯單抗組成物中的氧化衍生物之量之預先確定的參考標準為約7%或更少。在另一個實施方式中，泰派魯單抗組成物中的氧化衍生物之量之預先確定的參考標準為約5%或更少。在另一個實施方式中，泰派魯單抗組成物中的氧化衍生物之量之預先確定的參考標準為約3%或更少。在一些實施方式中，泰派魯單抗組成物中的氧化衍生物之量之預先確定的參考標準可為該等量之範圍，例如，約0.1%至約7%的泰派魯單抗組成物、約0.4%至約5%的泰派魯單抗組成物、或約0.8%至約3%的泰派魯單抗組成物。在另一個實施方式中，泰派魯單抗組成物中的氧化衍生物之量之預先確定的參考標準為位於SEQ ID NO: 8中列出的HCDR3中的W102處的約7%或更少、或約6%或更少、或約5%或更少、或約3%或更少的氧化。在某些實施方式中，泰派魯單抗組成物中的氧化衍生物之量藉由還原性肽作圖測量。
在一個實施方式中，該等用於評估泰派魯單抗組成物的品質之方法包括獲得含有泰派魯單抗和泰派魯單抗糖基化衍生物之泰派魯單抗組成物；測量組成物中的糖基化衍生物之量；將糖基化衍生物測量的量與預先確定的參考標準進行比較；並且如果比較表明滿足該預先確定的參考標準，則製備泰派魯單抗組成物之藥物配製物或藥物產品。泰派魯單抗組成物中的糖基化衍生物之量之預先確定的參考標準可以為小於約40%，例如，約35%或更少、約30%或更少、約25%或更少、約20%或更少、約17%或更少、約15%或更少、約12%或更少、約10%或更少、約8%或更少、約6%或更少、或約4%或更少。在一個實施方式中，泰派魯單抗組成物中的糖基化衍生物之量之預先確定的參考標準為約30%或更少。在另一個實施方式中，泰派魯單抗組成物中的糖基化衍生物之量之預先確定的參考標準為約20%或更少。在另一個實施方式中，泰派魯單抗組成物中的糖基化衍生物之量之預先確定的參考標準為約15%或更少。在另一個實施方式中，泰派魯單抗組成物中的糖基化衍生物之量之預先確定的參考標準為約10%或更少。在一些實施方式中，泰派魯單抗組成物中的糖基化衍生物之量之預先確定的參考標準可為該等量之範圍，例如，約1%至約40%的泰派魯單抗組成物、約4%至約30%的泰派魯單抗組成物、約2%至約20%的泰派魯單抗組成物、或約5%至約15%的泰派魯單抗組成物。在多個實施方式中，泰派魯單抗組成物中的糖基化衍生物之量之預先確定的參考標準為組成物中的約17%或更少、約15%或更少、約12%或更少、約10%或更少、約8%或更少、約5%或更少、或約4%或更少的高甘露糖糖基化。在多個實施方式中，泰派魯單抗組成物中的糖基化衍生物之量之預先確定的參考標準為組成物中的約25%或更少、約23%或更少（例如，約23.1%或更少）、約21%或更少、約19%或更少、約17%或更少、約15%或更少、約12%或更少、約10%或更少、約8%或更少、約6%或更少、約5%或更少、或約4%或更少的高甘露糖糖基化。在多個實施方式中，泰派魯單抗組成物中的糖基化衍生物之量之預先確定的參考標準為組成物中的約23.1%或更少的高甘露糖糖基化。在多個實施方式中，泰派魯單抗組成物中的糖基化衍生物之量之預先確定的參考標準為組成物中的約30%或更少、約25%或更少、約20%或更少、約17%或更少、約15%或更少、約12%或更少、約10%或更少、約8%或更少、約5%或更少、或約4%或更少的半乳糖基化。在多個實施方式中，泰派魯單抗組成物中的糖基化衍生物之量之預先確定的參考標準為約5%或更少、約4%或更少、約3%或更少、約2%或更少、約1%或更少的非岩藻糖基化的糖基化。在某些實施方式中，泰派魯單抗組成物中的糖基化衍生物之量藉由聚糖作圖測量。
在一個實施方式中，該等用於評估泰派魯單抗組成物的品質之方法包括獲得含有泰派魯單抗和泰派魯單抗二硫化物同種型衍生物之泰派魯單抗組成物；測量組成物中的二硫化物同種型衍生物之量；將二硫化物同種型測量的量與預先確定的參考標準進行比較；並且如果比較表明滿足該預先確定的參考標準，則製備泰派魯單抗組成物之藥物配製物或藥物產品。泰派魯單抗組成物中的二硫化物同種型衍生物之量之預先確定的參考標準可以為小於約75%，例如，約70%或更少、約65%或更少、約55%或更少、約50%或更少、約45%或更少、約40%或更少、約35%或更少、約30%或更少、約25%或更少、約20%或更少、約17%或更少、約15%或更少、約12%或更少、約10%或更少、約8%或更少、約6%或更少、或約4%或更少。在一個實施方式中，泰派魯單抗組成物中的二硫化物同種型衍生物之量之預先確定的參考標準為約50%或更少。在一個實施方式中，泰派魯單抗組成物中的二硫化物同種型衍生物之量之預先確定的參考標準為約35%或更少。在一個實施方式中，泰派魯單抗組成物中的二硫化物同種型衍生物之量之預先確定的參考標準為約25%或更少。在一個實施方式中，泰派魯單抗組成物中的二硫化物同種型衍生物之量之預先確定的參考標準為約15%或更少。在另一個實施方式中，泰派魯單抗組成物中的二硫化物同種型衍生物之量之預先確定的參考標準為約10%或更少。在另一個實施方式中，泰派魯單抗組成物中的二硫化物同種型衍生物之量之預先確定的參考標準為約8%或更少。在一些實施方式中，泰派魯單抗組成物中的二硫化物同種型衍生物之量之預先確定的參考標準可為該等量之範圍，例如，約10%至約70%的泰派魯單抗組成物、約15%至約50%的泰派魯單抗組成物、或約20%至約40%的泰派魯單抗組成物。在一個實施方式中，泰派魯單抗組成物中的二硫化物同種型衍生物之量之預先確定的參考標準為約50%或更少的IgG2-A/B同種型。在一個實施方式中，泰派魯單抗組成物中的二硫化物同種型衍生物之量之預先確定的參考標準為約5%或更少的IgG2-B同種型。在某些實施方式中，泰派魯單抗組成物中的二硫化物同種型衍生物之量藉由逆相-HPLC測量。
在另一個實施方式中，該等用於評估泰派魯單抗組成物的品質之方法包括獲得含有泰派魯單抗和泰派魯單抗的HMW種類之泰派魯單抗組成物；測量該組成物中HMW種類之量；將HMW種類之測量的量與預先確定的參考標準進行比較；並且如果比較表明滿足該預先確定的參考標準，則製備泰派魯單抗組成物之藥物配製物或藥物產品。泰派魯單抗組成物中的HMW種類之量之預先確定的參考標準可以為小於約20%，例如，約15%或更少、約12%或更少、約10%或更少、約9%或更少、約8%或更少、約7%或更少、約6%或更少、約5%或更少、或約4%或更少。泰派魯單抗組成物中的HMW種類之量之預先確定的參考標準可以為小於約3.0%，例如，約2.5%或更少、約2.4%或更少、約2.3%或更少、約2.2%或更少、約2.1%或更少、約2.0%或更少、約1.8%或更少、約1.6%或更少、約1.4%或更少、約1.2%或更少、約1.0%或更少、約0.8%或更少、約0.6%或更少、或約0.4%或更少。在一個實施方式中，泰派魯單抗組成物中的HMW種類之量之預先確定的參考標準為約2.5%或更少。在另一個實施方式中，泰派魯單抗組成物中的HMW種類之量之預先確定的參考標準為約1.7%或更少。在另一個實施方式中，泰派魯單抗組成物中的HMW種類之量之預先確定的參考標準為約1.4%或更少。在又另一個實施方式中，泰派魯單抗組成物中的HMW種類之量之預先確定的參考標準為約1.2%或更少。在仍另一個實施方式中，泰派魯單抗組成物中的HMW種類之量之預先確定的參考標準為約0.6%或更少。在一些實施方式中，泰派魯單抗組成物中的HMW種類之量之預先確定的參考標準可為該等量之範圍，例如，約0.3%至約2.4%的泰派魯單抗組成物、約0.6%至約2.1%的泰派魯單抗組成物、約0.4%至約1.2%的泰派魯單抗組成物、或約0.6%至約1.4%的泰派魯單抗組成物。在某些實施方式中，泰派魯單抗組成物中的HMW種類之量藉由SE-HPLC測量，例如，藉由SE-UHPLC、SE-HPLC-SLS或沈降速度超速離心（SV-AUC）。
在另一個實施方式中，該等用於評估泰派魯單抗組成物的品質之方法包括獲得含有泰派魯單抗和泰派魯單抗的片段（例如，LMW或MMW）之泰派魯單抗組成物；測量組成物中的片段之量；將片段測量的量與預先確定的參考標準進行比較；並且如果比較表明滿足該預先確定的參考標準，則製備泰派魯單抗組成物之藥物配製物或藥物產品。泰派魯單抗組成物中的HMW種類之量之預先確定的參考標準可以為約15%或更少、約12%或更少、約10%或更少、約9%或更少、約8%或更少、約7%或更少、約6%或更少、約5%或更少、或約4%或更少。泰派魯單抗組成物中的片段之量之預先確定的參考標準可以為小於約3.0%，例如，約2.5%或更少、約2.4%或更少、約2.3%或更少、約2.2%或更少、約2.1%或更少、約2.0%或更少、約1.8%或更少、約1.6%或更少、約1.4%或更少、約1.2%或更少、約1.0%或更少、約0.8%或更少、約0.6%或更少、或約0.4%或更少。在一個實施方式中，泰派魯單抗組成物中的片段之量之預先確定的參考標準為約2.5%或更少。在另一個實施方式中，泰派魯單抗組成物中的片段之量之預先確定的參考標準為約1.7%或更少。在另一個實施方式中，泰派魯單抗組成物中的片段之量之預先確定的參考標準為約1.4%或更少。在又另一個實施方式中，泰派魯單抗組成物中的片段之量之預先確定的參考標準為約1.2%或更少。在仍另一個實施方式中，泰派魯單抗組成物中的片段之量之預先確定的參考標準為約0.6%或更少。在一些實施方式中，泰派魯單抗組成物中的片段之量之預先確定的參考標準可為該等量之範圍，例如，約0.3%至約2.4%的泰派魯單抗組成物、約0.6%至約2.1%的泰派魯單抗組成物、約0.4%至約1.2%的泰派魯單抗組成物、或約0.6%至約1.4%的泰派魯單抗組成物。在某些實施方式中，泰派魯單抗組成物中的片段之量藉由rCE-SDS測量。
在本發明之方法之某些實施方式中，該等方法包括： (a) 獲得含有泰派魯單抗和一或多種泰派魯單抗衍生物之泰派魯單抗組成物，其中該等泰派魯單抗衍生物包含異構化衍生物、脫醯胺化衍生物、氧化衍生物、糖基化衍生物、二硫化物同種型衍生物、HMW種類、片段或其組合； (b) 藉由進行以下的一或多個評估泰派魯單抗組成物： (i) 藉由還原性肽作圖測量組成物中的異構化衍生物之量，並且將測量的量與為約30%或更少的預先確定的參考標準進行比較； (ii) 藉由還原性肽作圖測量組成物中的脫醯胺化衍生物之量，並且將測量的量與為約15%或更少的預先確定的參考標準進行比較； (iii) 藉由還原性肽作圖測量組成物中的氧化衍生物之量，並且將測量的量與為約7%或更少的預先確定的參考標準進行比較； (iv) 藉由聚糖作圖測量組成物中的糖基化衍生物之量，並且將測量的量與為約40%或更少的預先確定的參考標準進行比較； (vi) 藉由非還原性逆相高效液相層析（RP-HPLC）測量組成物中的二硫化物同種型衍生物之量，並且將測量的量與為約75%或更少的預先確定的參考標準進行比較； (vi) 藉由SE-HPLC中的前峰測量組成物中的HMW種類之量，並且將測量的量與為約20%或更少的預先確定的參考標準進行比較；和/或 (vii) 藉由rCE-SDS中的前峰測量組成物中的片段之量，並且將測量的量與為約15%或更少的預先確定的參考標準進行比較； 並且 (c) 如果步驟 (b) 中之一或多種比較表明滿足預先確定的參考標準/標準，則製備泰派魯單抗組成物之藥物配製物或藥物產品。在一些實施方式中，進行所有步驟 (b)(i)、(b)(ii)、(b)(iii)、(b)(iv)、b)(v)、(b)(vi) 以及b)(vii)。在其他實施方式中，僅進行步驟 (b)(vi) 和 (b)(vii)。在某些實施方式中，進行步驟 (b)(iv)、(b)(vi) 和 (b)(vii)。 鑒定促進蛋白結合的屬性
為了確定促進蛋白結合和活性的屬性，將如本文所述之抗TSLP抗體泰派魯單抗置於導致其結構改變的條件下，例如治療性蛋白之胺基酸結構之變化，導致治療性蛋白的衍生物之形成。在示例性方面，胺基酸之改變的結構被稱為「屬性」並且可能根據其化學身份或屬性類型以及在抗原結合蛋白之胺基酸序列中的位置（例如，其上存在屬性的胺基酸位置）來表徵。例如，天冬醯胺和麩醯胺殘基易於脫醯胺化。在蛋白質胺基酸序列之位置10處的脫醯胺天冬醯胺係屬性之實例。表A中提供了特定胺基酸之示例性屬性類型清單。因此，如本文所用的「結構」可包含以下、基本上由以下組成或由以下組成：表A中所列的屬性類型，或表A中所列的兩種或多種屬性類型之組合。應當理解，屬性係結構之實例，並且除非另有說明，否則在本文提及「結構」的任何地方，屬性都被視為結構之實例。例如，高分子量種類（HMW）和片段亦為屬性之實例。
[表A]
示例性屬性類型 胺基酸殘基
脫醯胺化 Asn、Gln
脫胺基 Glu、Ser、Gly
糖基化、羥離胺酸 Lys
糖基化 Asn
環化 N末端Gln，N末端Glu
氧化 Met、Trp、His
異構化 Asp
片段化/剪裁 Asp/Pro
由於免疫球蛋白或其片段、抗體或抗原結合蛋白（如泰派魯單抗）包含本文所述之多個胺基酸、抗體或抗原結合蛋白可具有多於一個屬性（例如，具有改變的結構之多於一個胺基酸），並且可根據其屬性譜來描述。如本文所用，術語「屬性譜」係指抗原結合蛋白之屬性清單。在各種情況中，屬性譜提供化學身份或屬性類型，例如脫醯胺化，視需要地，相對於治療性蛋白之天然結構。在各種情況中，屬性譜提供了屬性之位置，例如，其上存在屬性的胺基酸之位置。在一些方面，屬性譜提供了抗原結合蛋白上存在的所有屬性之描述。在其他方面，屬性譜提供了蛋白質上存在的屬性子集之描述。例如，屬性譜可以僅提供存在於蛋白質之特定部分，例如恒定區、可變區、CDR（如三個輕鏈CDR和三個重鏈CDR）中的那些屬性。一種治療性蛋白（如抗體或抗原結合蛋白）之特徵在於在蛋白質上存在的一或多種屬性。一種抗體或抗原結合蛋白可以藉由具有不同的屬性譜而不同於相同蛋白質之另一種類。當兩種治療性蛋白具有不同的屬性譜時，治療性蛋白代表治療性蛋白之兩個不同種類或衍生物。當兩種治療性蛋白具有相同的屬性譜時，治療性蛋白被認為是治療性蛋白之同一種類或衍生物。
在各種情況中，將免疫球蛋白、抗體或抗原結合蛋白置於導致其結構改變的條件下，例如形成一或多種屬性，並且結構之變化可以改變治療性蛋白對其靶標的親和力。在各個方面中，將免疫球蛋白、抗體或抗原結合蛋白置於導致其結構改變的條件下，例如形成一或多種屬性，並且結構之變化減少了抗原結合蛋白對其靶標的親和力。在一些方面，降低的親和力導致免疫球蛋白、抗體或抗原結合蛋白部分或完全喪失與靶標相互作用（例如，結合）的能力。在各種情況中，免疫球蛋白、抗體或抗原結合蛋白部分或完全喪失與靶標相互作用（例如結合）的能力最終會降低抗原結合蛋白之效力。在可替代的情況中，將免疫球蛋白、抗體或抗原結合蛋白置於導致其結構改變的條件下，例如形成一或多種屬性，並且結構之變化未改變免疫球蛋白、抗體或抗原結合蛋白對其靶標的親和力。在各個方面中，結構之變化未減少蛋白質對其靶標的親和力。不受任何特定理論的束縛，本揭露之方法以精確性和準確性有利地區分影響免疫球蛋白、抗體或抗原結合蛋白和靶標之間相互作用的免疫球蛋白、抗體或抗原結合蛋白的那些屬性與不影響相互作用的屬性。
在各個方面中，本文的組成物包含免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段之種類或衍生物之群體。在各種情況中，群體係免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段之同質群體，視需要地，在組成物樣本中存在的每種蛋白質係相同的種類或衍生物。在各種情況中，群體係異質群體，該異質群體包含具有本文所述之屬性的免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段之至少兩個不同種類或衍生物。在各個方面中，異質群體包含免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段之至少2個、至少3個、至少4個、至少5個、至少6個、至少7個或更多個不同種類或衍生物。視需要地，異質群體包含超過7個、超過8個、超過9個、超過10個、超過20個、超過30個、超過40個、超過50個不同蛋白質之種類或衍生物。在一些方面，群體之每個種類或衍生物具有獨特的屬性譜。在示例性情況中，免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段之種類係僅在組成物中存在的蛋白質。在一些方面，組成物包含 (i) 群體免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段，免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段，和 (ii) 藥學上可接受的載體、稀釋劑、賦形劑、或其組合。在一些實施方式中，至少80%、85%、90%、95%或99%的異質群體之免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段包含如本文所述之屬性。在一些實施方式中，不超過20%、15%、10%、5%或1%的異質群體之免疫球蛋白、抗原結合蛋白或其片段、或抗體或其片段包含如本文所述之屬性。 分離
在示例性實施方式中，本揭露包括用於將包含不同種類的抗原之混合物分離為至少兩個級分之方法。在一些方面，將混合物分離為多個（例如，2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多）級分。在一些方面，當前揭露的方法之分離步驟保持抗原結合蛋白和其靶標之天然折疊、高序結構以及結合的能力。在各個方面中，將混合物分離為包含未結合的抗體或抗原結合蛋白或靶標之未結合的級分和包含抗體/抗原結合蛋白-靶標複合物之結合的級分。
用於將混合物分離為級分的適合的方法和技術係本領域已知的。參見，例如，Coskun, North Clin Istanb [伊斯坦布爾北部診所] 3(2): 156-160 (2016)；Snyder等人, Practical HPLC Method Development [實用高效液相層析法的建立], 編輯, 第2版, John Wiley & Sons, Inc.[約翰•威利父子公司] 1997；Snyder等人, Introduction to Modern Liquid Chromatography [現代液相層析法導論], John Wiley & Sons, Inc.[約翰•威利父子公司], 新澤西州霍博肯市（Hoboken, NJ）, 2010；Heftmann, Chromatography: Fundamentals and applications of chromatography and related differential migration methods [層析法：層析法和相關差異遷移方法之基礎和應用], 編輯, 第6版, 第69A卷, 愛思唯爾出版公司（Elsevier）, 荷蘭阿姆斯特丹, 2004；Mori和Barth, Size Exclusion Chromatography [尺寸排阻層析法], 施普林格公司（Springer-Verlag）, 柏林, 1999。在一些方面，分離基於電荷，如，例如離子交換層析、毛細管等電聚焦（cIEF）和/或毛細管區帶電泳（CZE），或基於疏水性，如，例如逆相分離（RP；例如，RP-HPLC）和疏水性相互作用層析（HIC-HPLC）。在各個方面中，分離基於尺寸，如例如，尺寸排阻層析（SEC；例如，SE-HPLC）、十二烷基硫酸鈉-聚丙烯醯胺凝膠電泳（SDS-PAGE）、具有十二烷基硫酸鈉的毛細管電泳（CE-SDS）。本文所述之方法用於檢測產物的Met或Trp殘基之氧化、片段化/剪裁、Asp之異構化、脫醯胺化、在N末端形成焦麩胺酸。在多個實施方式中，使用基於尺寸、電荷、疏水性、對捕獲分子的親和力或其組合來分離混合物的組分之技術，將混合物分離成至少兩個級分。在各種情況中，技術為尺寸排阻層析（SEC）、親和層析、使用珠或細胞的沈澱、自由流動分級法（FFF）、離子交換層析（IEX）、陽離子交換層析（CEX）、疏水性相互作用層析（HIC）或超速離心（UC）。視需要地，使用基於尺寸來分離混合物的組分之技術，視需要地，其中該技術為尺寸排阻層析（SEC），將混合物分離成至少兩個級分。
在各個方面中，使用基於捕獲分子結合固體支持物（視需要地，珠或細胞）的親和力來分離混合物的組分之技術，將混合物分離成至少兩個級分。在各種情況中，藉由以下將混合物分離：(i) 添加混合物至容器（例如管），該容器包含與捕獲分子結合的珠或在其表面表現捕獲分子的細胞，(ii) 離心該容器（例如，管）以獲得上清液和沈澱，(iii) 由沈澱收集上清液以獲得未結合的級分，(iv) 由具有溶液的沈澱釋放結合的級分，(v) 離心該容器（例如，管），該容器包含該沈澱和該溶液以獲得包含該結合的級分的第二上清液和包含該珠或細胞的第二沈澱，以及 (vi) 收集該第二上清液以獲得該結合的級分。在一些方面，藉由以下將混合物分離：(i) 添加該混合物至包含與捕獲分子結合的珠的柱以獲得流通級分和結合的級分，(ii) 收集該流通級分以獲得該未結合的級分，(iii) 由具有溶液的珠中釋放結合部分並收集包含該結合部分的溶液。適合的固體支持物包括，例如，珠、樹脂、紙，視需要地，由纖維素、二氧化矽、氧化鋁、玻璃、塑膠或其組合製成。在示例性方面，與固體支持物結合的捕獲分子係蛋白質。捕獲分子可能與靶標相同。有利地，捕獲分子不限於任何特定的分子。
在鑒定影響抗原結合蛋白和靶標之間的相互作用的免疫球蛋白、抗原結合蛋白（例如，泰派魯單抗）或靶標的屬性的方法之多個實施方式中，對於未結合的級分和結合的級分中之每一種，該方法包括鑒定和定量存在於抗原結合蛋白或靶標之種類或衍生物上的每種屬性之豐度，其中，當未結合的級分中的屬性之豐度大於結合的級分中的屬性之豐度時，該屬性負面地影響抗原結合蛋白和靶標之間的相互作用。在各個方面中，該方法包括使用質譜儀以鑒定和定量在未結合的級分和結合的級分之每一種中的抗原結合蛋白或靶標之種類的每種屬性之豐度。
在確定存在於抗原結合蛋白或靶標之種類上的已知屬性對抗原結合蛋白和靶標之間的相互作用的影響的方法之多個實施方式中，該方法包括對於未結合的級分和結合的級分中之每一種，定量已知屬性之豐度，其中，當未結合的級分中已知屬性之豐度大於結合的級分中已知屬性之豐度時，該已知屬性對抗原結合蛋白和靶標之間的相互作用具有負面影響。在各個方面中，該方法包括使用質譜儀以定量在未結合的級分和結合的級分之每一種中的已知屬性之豐度。
穩定性係指對胺基酸殘基之化學修飾和生物物理蛋白修飾的耐受性，如在製造、儲存和/或另外的或可替代的應激條件下可能發生的應激條件下的HMW種類之形成。對於本文描述的實施方式之方法和免疫球蛋白、抗原結合蛋白及其片段，可以使用尺寸排阻層析（SEC）確定「穩定性」和/或「HMW」種類。包含免疫球蛋白、抗原結合蛋白或片段或衍生物之組成物可以藉由SEC（如SEC-UV）分離。SEC可以使用包含100 mM磷酸鈉和250 mM NaCl（pH 6.8）的流動相，流速可以設置為0.5 ml/min，柱溫可以設置為37°C，執行時間可以設置為35分鐘，並且自動進樣器可以設置為4°C。適用於SEC的柱之實例包括含有二氧化矽顆粒的凝膠柱，該二氧化矽顆粒包含二醇官能基並且平均直徑為5 µm和平均孔徑約為25 nM的（可商購，例如，作為來自東曹生命科學公司（TOSOH Bioscience）的G3000SWxl柱）。對於SEC-UV，可以在214 nm和280 nm進行紫外/可見光譜（UV/VIS）檢測。應當理解，分離後，代表單體和HMW種類的峰可在SEC洗脫曲線中的不同時間洗脫。
SEC分析之後，可以視需要地進行肽作圖，並且可以鑒定與結合的種類和未結合的種類有關的肽修飾，例如如本文和/或在國際公開案號WO 2020/247790中描述。對於肽作圖，可以使用具有分子量截留（例如，大於10 kDa）的過濾器收集洗脫級分，並且用7.5 M胍洗脫緩衝液來洗脫。為確定影響與抗原結合的化學修飾，可以將應激的免疫球蛋白（或抗原結合蛋白或其片段）和抗原一起混合，並且分離較早洗脫的結合抗原的複合物和較晚洗脫的未結合的免疫球蛋白（或抗原結合蛋白或其片段）。為確定影響或與HMW相關的化學修飾，可以收集單體和HMW種類。
應當理解，「親和力」或「結合」可以藉由表面電漿共振（SPR）、生物膜層干涉，或也可以藉由如本文所述之SEC結合親和力實驗來確定。除非本文另有說明或科學背景另有要求，否則「親和力」應理解為係指如藉由SPR測量的親和力。可以使用生物感測器系統（如BIAcore®系統）藉由SPR測量Kd值。用BIAcore®系統的分析可以包含分析抗原（例如，TSLP）與具有固定化分子（例如，如本文所述之抗TSLP免疫球蛋白、抗原結合蛋白、或其片段）的晶片的結合和解離。可以使用SPR檢測Kd ＜ 10 -6M的結合複合物。在多個實施方式中，可以在20°C、25°C、30°C或37°C下進行SPR。 組成物
應當理解，泰派魯單抗中之殘基之編號係基於分別在SEQ ID NO: 10和12中列出的重鏈和輕鏈可變序列，以及分別在SEQ ID NO: 13和14中列出的全長抗體重鏈和輕鏈。
在多個實施方式中，提供了包含泰派魯單抗和一或多種泰派魯單抗衍生物之組成物，每種泰派魯單抗衍生物包含：含有SEQ ID NO: 3中所示的胺基酸序列之輕鏈CDR1序列；含有SEQ ID NO: 4中所示的胺基酸序列之輕鏈CDR2序列；含有SEQ ID NO: 5中所示的胺基酸序列之輕鏈CDR3序列；含有SEQ ID NO: 6中所示的胺基酸序列之重鏈CDR1序列；含有SEQ ID NO: 7中所示的胺基酸序列之重鏈CDR2序列；以及包含SEQ ID NO: 8中所示的胺基酸序列之重鏈CDR3序列，其中該等衍生物包含以下的至少一種：異構化衍生物、脫醯胺化衍生物、氧化衍生物、糖基化衍生物、HMW種類、片段、二硫化物同種型衍生物或其組合。在多個實施方式中，組成物包含泰派魯單抗和一或多種泰派魯單抗衍生物，每種泰派魯單抗衍生物包含SEQ ID NO: 10中列出的重鏈胺基酸序列和SEQ ID NO: 12中列出的輕鏈胺基酸序列。
異構化衍生物包含天冬胺酸殘基之改變。天冬胺酸之示例性異構化包括異天冬胺酸（isoAsp）、環狀天冬胺酸（cAsp）、琥珀醯亞胺或其他異構化中間體。組成物中的異構化衍生物可以包含重鏈或輕鏈互補決定區（CDR）或可變區內其他部分中的衍生物。在多個實施方式中，異構化在CDR中。異構化衍生物包含位於任一或兩個可變區鏈中的SEQ ID NO: 7之重鏈CDR D54，和/或SEQ ID NO: 4之輕鏈CDR D49、D50或D52之變化。在多個實施方式中，組成物中的異構化衍生物之量為約0.5%至約30%、或約0.5%至13%。在一些實施方式中，組成物包含泰派魯單抗及其衍生物，其中位於D54處的異構化之量小於約5%，和/或其中位於D49、D50或D52之一或多個處異構化之量小於約13%。在多個實施方式中，泰派魯單抗和泰派魯單抗衍生物具有比組成物更高的功效和/或耐受性，該組成物包含大於30%的異構化衍生物，其中所述功效包含抑制固定在供體珠粒上的生物素化的TSLPR與固定在受體珠粒上的TSLP-His結合的能力。在多個實施方式中，泰派魯單抗和泰派魯單抗衍生物具有比組成物更高的功效和/或耐受性，該組成物包含大於30%的異構化衍生物，其中所述功效包含抑制在編碼Stat螢光素酶報告基因的Stat/BaF/HTR細胞之表面上表現的TSLPR之結合的能力，Stat螢光素酶報告基因之表現指示TSLP與TSLPR之結合。
脫醯胺化衍生物包含天冬醯殘基之改變。示例性脫醯胺化衍生物包括完整脫醯胺化和脫醯胺化中間體。組成物中的脫醯胺化衍生物可以包含脫醯胺化天冬醯胺：SEQ ID NO: 3中列出的LCDR1中的N25/N26、SEQ ID NO: 13中列出的重鏈可變區中的N316、和/或SEQ ID NO: 13中列出的重鏈可變區中的N385/390。在多個實施方式中，組成物包含脫醯胺化衍生物，該脫醯胺化衍生物包含位於N25/N26處以小於約3%的量之脫醯胺化，和/或位於一或多個的N316和/或N385/390處以小於約13%量之脫醯胺化。在一些實施方式中，組成物中的脫醯胺化衍生物之量為約0.5%-10%。在多個實施方式中，泰派魯單抗和泰派魯單抗衍生物具有比組成物更高的功效和/或耐受性，該組成物包含大於15%的脫醯胺化衍生物，其中所述功效包含抑制固定在供體珠粒上的生物素化的TSLPR與固定在受體珠粒上的TSLP-His結合的能力。在多個實施方式中，泰派魯單抗和泰派魯單抗衍生物具有比組成物更高的功效和/或耐受性，該組成物包含大於15%的脫醯胺化衍生物，其中所述功效包含抑制在編碼Stat螢光素酶報告基因的Stat/BaF/HTR細胞之表面上表現的TSLPR之結合的能力，Stat螢光素酶報告基因之表現指示TSLP與TSLPR之結合。
氧化衍生物包含在蛋白質中之一或多種甲硫胺酸或色胺酸殘基之改變。示例性氧化衍生物包括完整氧化或氧化中間體。組成物中的氧化衍生物可以包含位於任一或兩個重鏈（或輕鏈，如果適用）中之重鏈甲硫胺酸之氧化：SEQ ID NO: 6中列出的HCDR1之M34、或SEQ ID NO: 13中列出的重鏈恒定區的M253或M359，或重鏈色胺酸之氧化：SEQ ID NO: 7中列出的HCDR2之W52、SEQ ID NO: 5中列出的LCDR3之W90、或SEQ ID NO: 8中列出的HCDR3之W102之一或多個處。例如，組成物中的氧化衍生物可以包含位於任一或兩個重鏈（或輕鏈，如果適用）中的SEQ ID NO: 6中列出的HCDR1之重鏈甲硫胺酸M34、SEQ ID NO: 7中列出的HCDR2之重鏈色胺酸W52、SEQ ID NO: 5中列出的LCDR3之輕鏈W90、或SEQ ID NO: 8中列出的HCDR3之重鏈W102之一或多個處的氧化。在多個實施方式中，氧化衍生物包含位於任一或兩個重鏈中之重鏈甲硫胺酸M34、M253、M359之一或多個處的氧化，視需要地其中該氧化之量小於約7%的量。在多個實施方式中，氧化衍生物包含位於任一或兩個重鏈中之色胺酸W52、W90或W102之一或多個處的氧化，視需要地其中該氧化以小於約7%的量，視需要地小於約5%或小於約3%。在一些實施方式中，組成物中的氧化衍生物之量為約0.4%至約7%。在多個實施方式中，泰派魯單抗和泰派魯單抗衍生物具有比組成物更高的功效和/或耐受性，該組成物包含大於7%的氧化衍生物，其中所述功效包含抑制固定在供體珠粒上的生物素化的TSLPR與固定在受體珠粒上的TSLP-His結合的能力。在多個實施方式中，泰派魯單抗和泰派魯單抗衍生物具有比組成物更高的功效和/或耐受性，該組成物包含大於7%的氧化衍生物，其中所述功效包含抑制在編碼Stat螢光素酶報告基因的Stat/BaF/HTR細胞之表面上表現的TSLPR之結合的能力，Stat螢光素酶報告基因之表現指示TSLP與TSLPR之結合。
高分子量衍生物包含抗體之聚集，或形成二聚物或更大的蛋白質聚集體。本文考慮的HMW種類包括泰派魯單抗之二聚物和寡聚體。在多個實施方式中，HMW種類為二聚物。在多個實施方式中，二聚物係共價或非共價締合的。在多個實施方式中，組成物中的HMW種類之量為約1.7%或更少、約1.6%或更少、約1.5%或更少、約1.4%或更少、約1.3%或更少、約1.2%或更少、約1.1%或更少、約1.0%或更少、約0.9%或更少、約0.8%或更少、約0.7%或更少、約0.6%或更少、約0.5%或更少、或約0.4%或更少。在多個實施方式中，泰派魯單抗和泰派魯單抗衍生物具有比組成物更高的功效和/或耐受性，該組成物包含大於20%的HWM種類，其中所述功效包含抑制固定在供體珠粒上的生物素化的TSLPR與固定在受體珠粒上的TSLP-His結合的能力。在多個實施方式中，泰派魯單抗和泰派魯單抗衍生物具有比組成物更高的功效和/或耐受性，該組成物包含大於20%的HWM種類，其中所述功效包含抑制在編碼Stat螢光素酶報告基因的Stat/BaF/HTR細胞之表面上表現的TSLPR之結合的能力，Stat螢光素酶報告基因之表現指示TSLP與TSLPR之結合。
泰派魯單抗片段衍生物包括蛋白產物，該等蛋白產物在生產期間可藉由內部肽酶切割或藉由生產過程中的其他步驟產生。泰派魯單抗片段包括低分子量（LMW）種類（例如小於約25 kD）或中等分子量（MMW）種類（例如25至50 kD之間），或其組合。在多個實施方式中，組成物中的片段之量為約1.7%或更少、約1.6%或更少、約1.5%或更少、約1.4%或更少、約1.3%或更少、約1.2%或更少、約1.1%或更少、約1.0%或更少、約0.9%或更少、約0.8%或更少、約0.7%或更少、約0.6%或更少、約0.5%或更少、或約0.4%或更少。在多個實施方式中，泰派魯單抗和泰派魯單抗衍生物具有比組成物更高的功效和/或耐受性，該組成物包含大於15%的片段種類，其中所述功效包含抑制固定在供體珠粒上的生物素化的TSLPR與固定在受體珠粒上的TSLP-His結合的能力。在多個實施方式中，泰派魯單抗和泰派魯單抗衍生物具有比組成物更高的功效和/或耐受性，該組成物包含大於15%的片段種類，其中所述功效包含抑制在編碼Stat螢光素酶報告基因的Stat/BaF/HTR細胞之表面上表現的TSLPR之結合的能力，Stat螢光素酶報告基因之表現指示TSLP與TSLPR之結合。
泰派魯單抗之糖基化衍生物包含糖殘基特徵之改變，該等糖殘基可翻譯後應用於抗體Fc區之天冬醯胺殘基。示例性糖基化衍生物包括非岩藻糖基化、半乳糖基部分（半乳糖基化）之應用和高甘露糖部分對天冬醯胺之應用。本文考慮的糖基化衍生物係位於一或兩個重鏈上的SEQ ID NO: 13中列出的Fc區中之天冬醯胺N298的糖殘基之變化。在多個實施方式中，組成物中的糖基化衍生物之量為小於約40%、約35%、約30%、約25%、約20%、約15%、約10%或約5%。在一些實施方式中，糖基化衍生物包含小於約5%、約4%、約3%或約2%的量之非岩藻糖基化衍生物。在多個實施方式中，糖基化衍生物包含小於約30%、約25%、約20%、約15%、約10%或約5%的量之半乳糖基部分。在多個實施方式中，糖基化衍生物包含約25%或更少、約23%或更少（例如，約23.1%或更少）、約21%或更少、約19%或更少、約17%或更少、約15%或更少、約12%或更少、約10%或更少、約8%或更少、約5%或更少、或約4%或更少的量之高甘露糖部分。在多個實施方式中，糖基化衍生物包含以約23.1%或更少的量之高甘露糖部分。在多個實施方式中，糖基化衍生物包含小於約5%、約4%、約3%、約2%或約1%的量之高甘露糖部分。在多個實施方式中，泰派魯單抗和泰派魯單抗衍生物具有比組成物更高的功效和/或耐受性，該組成物包含大於40%的糖基化衍生物，其中所述功效包含抑制固定在供體珠粒上的生物素化的TSLPR與固定在受體珠粒上的TSLP-His結合的能力。在多個實施方式中，泰派魯單抗和泰派魯單抗衍生物具有比組成物更高的功效和/或耐受性，該組成物包含大於40%的糖基化衍生物，其中所述功效包含抑制在編碼Stat螢光素酶報告基因的Stat/BaF/HTR細胞之表面上表現的TSLPR之結合的能力，Stat螢光素酶報告基因之表現指示TSLP與TSLPR之結合。在多個實施方式中，泰派魯單抗和泰派魯單抗衍生物包含不超過15%、13%、11%、8%或5%的高甘露糖，並且具有比具有大於15%的高甘露糖之組成物更少的清除率（和/或更長的半衰期）。在多個實施方式中，泰派魯單抗和泰派魯單抗衍生物包含不超過約25%、約23%、約21%、約19%、約17%、約15%、約13%、約11%、約8%或約5%的高甘露糖，並且具有比具有大於約25%的高甘露糖之組成物更少的清除率（和/或更長的半衰期）。在多個實施方式中，泰派魯單抗和泰派魯單抗衍生物包含不超過約23.1%的高甘露糖，並且具有比具有大於23.1%的高甘露糖之組成物更少的清除率（和/或更長的半衰期）。高甘露糖百分比可以藉由HILIC確定。
具有「更少的清除率」之泰派魯單抗或泰派魯單抗衍生物係指當與參考抗體（例如泰派魯單抗或其他IgG2抗體）之清除率相比時，活體內（血液或血清）之清除率的量更少。泰派魯單抗或泰派魯單抗衍生物之清除率與參考抗體相比可以為小於1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%或更多的清除率水平。泰派魯單抗或泰派魯單抗衍生物之「更長的半衰期」係指當與參考抗體（例如，泰派魯單抗或其他IgG2抗體）在活體內的半衰期相比，抗體在活體內（血液或血清）可檢測的時間長度更長。泰派魯單抗或泰派魯單抗衍生物之半衰期可以比參考抗體之半衰期長1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%或更多。
在多個實施方式中，泰派魯單抗和泰派魯單抗衍生物具有比組成物更高的功效和/或耐受性，該組成物包含大於約40%、35%、30%、25%、23%、21%、20%、19%、18%、17%、16%、15%、14%、13%、12%、11%、10%、9%、8%、7%、6%、5%或4%的糖基化衍生物。
糖基化衍生物之功效和/或耐受性也可以與效應子功能和抗體清除率相關。在多個實施方式中，泰派魯單抗和泰派魯單抗衍生物具有比組成物更低的抗體清除率和/或更高的耐受性，該組成物包含大於約15%、約13%、約11%、約8%或約6%的高甘露糖糖基化衍生物。在多個實施方式中，泰派魯單抗和泰派魯單抗衍生物具有比組成物更低的抗體清除率和/或更高的耐受性，該組成物包含大於約25%、約23%、約19%、約17%、約15%、約13%、約11%、約8%或約6%的高甘露糖糖基化衍生物。在多個實施方式中，泰派魯單抗和泰派魯單抗衍生物具有比組成物更低的抗體清除率和/或更高的耐受性，該組成物包含大於約23.1%的高甘露糖糖基化衍生物。
二硫化物結構異質性係重組的和天然存在的IgG2分子所固有的，該等分子含有18個二硫鍵 - 6個鏈間和12個鏈內。鉸鏈：在典型IgG2-A結構中鉸鏈肽含有四種二硫鍵。與典型IgG2-A結構不同，異構物IgG2-B含有連接Fab肽（C H1-C L-鉸鏈）的兩個拷貝和鉸鏈肽的兩個拷貝的對稱鍵。IgG2-A/B呈中間體形式，摻入了IgG2-A和IgG2-B之部分特徵，藉由涉及一個Fab臂由二硫鍵與鉸鏈肽的兩個拷貝共價連接的不對稱排列來定義。二硫化物同種型衍生物包含IgG2-B同種型和/或IgG2-A/B同種型。在多個實施方式中，組成物中的二硫化物同種型衍生物之量小於約75%。在一些實施方式中，當衍生物包含IgG2-B同種型，組成物中的二硫化物同種型衍生物之量小於約20%、約15%、約10%或約5%。在一些實施方式中，當衍生物包含IgG2-A/B同種型，組成物中的IgG2-A/B同種型之量小於約75%、約70%、約65%、約60%、約55%、約50%、約45%或約35%。在多個實施方式中，組成物中的IgG2-A/B同種型之量為約38%至約43%。在多個實施方式中，泰派魯單抗和泰派魯單抗衍生物具有比組成物更高的功效和/或耐受性，該組成物包含大於75%的二硫化物同種型衍生物，其中所述功效包含抑制固定在供體珠粒上的生物素化的TSLPR與固定在受體珠粒上的TSLP-His結合的能力。在多個實施方式中，泰派魯單抗和泰派魯單抗衍生物具有比組成物更高的功效和/或耐受性，該組成物包含大於75%的二硫化物同種型衍生物，其中所述功效包含抑制在編碼Stat螢光素酶報告基因的Stat/BaF/HTR細胞之表面上表現的TSLPR之結合的能力，Stat螢光素酶報告基因之表現指示TSLP與TSLPR之結合。
在多個實施方式中，組成物具有以下特徵之一或多種： (a) 該組成物中的異構化衍生物之量為約30%或更少，如藉由還原性肽作圖測量的； (b) 該組成物中的脫醯胺化衍生物之量為約15%或更少，如藉由肽作圖測量的； (c) 該組成物中的氧化衍生物之量為約7%或更少，如藉由還原性肽作圖測量的； (d) 該組成物中的糖基化衍生物之量為約40%或更少，如藉由聚糖作圖測量的； (e) 該組成物中的二硫化物同種型衍生物之量為約75%或更少，如藉由非還原性逆相高效液相層析（RP-HPLC）測量的； (f) 該組成物中的HMW種類之量為約20%或更少，如藉由SE-HPLC測量的；和/或 (g) 該組成物中的片段之量為約15%或更少，如藉由rCE-SDS測量的。
在一些實施方式中，組成物係本文所述之配製物之一部分。在一些實施方式中，組成物係用於產生如本文所述之配製物的原料藥。 投與方法
在一方面，本揭露之方法包括投與本文所述之治療性抗TSLP抗體或抗體衍生物的步驟，該抗體或抗體衍生物視需要地在藥學上可接受的載體或賦形劑中。在某些實施方式中，藥物組成物為無菌組成物。
本文預期的是用於用如本文所述之抗TSLP抗體或抗原結合蛋白或其片段治療炎性疾病、病症或障礙之方法，該炎性疾病、病症或障礙如氣喘、慢性阻塞性肺病（COPD）、異位性皮膚炎、嗜酸性球性食道炎（EoE）、鼻息肉、慢性自發性蕁麻疹、Ig驅動的疾病、IgA腎病、狼瘡性腎炎、嗜酸性球性胃炎、無鼻息肉的慢性鼻竇炎和特發性肺纖維化（IPF）。在多個實施方式中，疾病、病症或障礙係氣喘，包括重度氣喘、嗜酸性球性或非嗜酸性球性氣喘和低嗜酸性球性氣喘。
氣喘係氣道之一種慢性炎性病症。據估計美國每年氣喘占110萬門診病人就診、160萬急診、444,000住院治療，（Defrances等人, 2008），該資訊可獲自：疾病管制署網站，www.cdc.gov/nchs/data/nhsr/nhsr005.pdf，且3,500例死亡。在易感個體中，氣喘炎症引起喘鳴、呼吸急促、胸悶和咳嗽之復發性事件。認為氣喘之病因係多因素的，受遺傳環境機制（To等人, BMC Public Health [BMC公共健康] 2012;12:204；Chung等人. Eur Respir J [歐洲呼吸雜誌] 2014;43:343-73），與環境過敏原（一種重要起因）（Chung等人, 同上；Pavord ID, 等人, NPJ Prim Care Respir Med [NPJ呼吸初級保健雜誌] 2017;27:17）兩者的影響。大部分病例在一個人變得對過敏原超敏感時出現（異位性）。異位性之特徵在於Th2細胞增加以及Th2細胞介素表現和IgE產生。認為美國大約1000萬患者患有過敏症誘發的氣喘。儘管具有可利用的治療選擇，但氣喘仍然為主要健康問題。在世界範圍內，當前氣喘影響大約3億人；至2020年，預計氣喘影響4億人（Partridge, Eur Resp Rev.[歐洲呼吸綜述] 16:67-72, 2007）。
異位性氣喘患者吸入過敏原誘發一些氣喘表現，包括可逆的氣流阻塞、氣道高反應性、以及嗜酸性球性和嗜鹼性氣道炎症。過敏原吸入激發已成為許多物種中氣喘之主要模型（Bates等人, Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol.[美國生理學雜誌-肺細胞生理學與分子生理學] 297(3): L401-10, 2009；Diamant等人, J Allergy Clin Immunol.[過敏與臨床免疫學雜誌] 132(5):1045-1055, 2013）。
已鑒別出難以用類固醇治療來治療的不同氣喘亞型。嗜酸性球為特有地由Th2型CD4+ T細胞介導的過敏性氣喘中的重要炎性細胞。在重度氣喘中嗜中性球氣道炎症與皮質類固醇治療有關且可由Th1或Th17型T細胞介導（Mishra等人, Dis.Model.Mech.[疾病模型與機制] 6:877-888, 2013）。
診斷和評估氣喘的量度包括以下：使用標準化單次呼吸的呼出氣一氧化氮分數（FeNO）（美國胸科學會（American Thoracic Society）；ATS, Am J Respir Crit Care Med.[美國呼吸與危重症醫學雜誌] 171(8):912-30, 2005）測試而評估的氣道炎症。根據ATS/歐洲呼吸協會（European Respiratory Society，ERS）指南進行肺活量測定法（Miller等人, Eur Respir J.[歐洲呼吸雜誌] 26(1):153-61, 2005）。在受試者進行BD前肺活量測定法之後評估支氣管擴張劑後（BD後）肺活量測試。使用SABA，如舒喘寧（albuterol）（90 μg計量的劑量）或沙丁胺醇（salbutamol）（100 μg計量的劑量）或等同物，利用隔離裝置，誘發最大支氣管擴張，最多進行總共8次吹吸（Sorkness等人, J Appl Physiol.[應用生理學雜誌] 104(2):394-403, 2008）。將在4次、6次或8次吹吸之後獲得的最高BD前和BD後FEV 1用於測定可逆性及進行分析。氣喘控制問卷（ACQ）6為評估氣喘症狀（即夜間醒來、醒來症狀、活動限制、呼吸淺短、喘鳴）和每日使用拯救支氣管擴張劑和FEV 1的由患者報告的問卷（Juniper等人, 1999年10月）。ACQ-6為ACQ之縮短版本，其自初始ACQ評分省略FEV 1測量。平均ACQ評分為響應平均值。平均評分 ≤ 0.75指示氣喘控制良好，評分在0.75與 ≤ 1.5之間指示氣喘得到部分控制，且評分 ＞ 1.5指示氣喘不受控制（Juniper等人, Respir Med.[呼吸道醫學] 100(4):616-21, 2006）。認為至少0.5的個體變化為臨床上有意義的（Juniper等人, Respir Med.[呼吸道醫學] 99(5):553-8, 2005）。標準化氣喘生活品質問卷（AQLQ[S]）+12（AQLQ(S)+12）為測量氣喘患者所經歷的HRQoL的32項問卷（Juniper等人, Chest.[胸] 115(5):1265-70, 1999年5月）。氣喘每日日誌也用於評估。
相關的美國專利公開案號US-2018-0296669（藉由引用併入本文）揭露了用抗TSLP抗體治療有效地減少非嗜酸性球/低嗜酸性球群體中的氣喘症狀（如同其在高嗜酸性球群體中一般）。還預期降低受試者的氣喘惡化頻率之方法。
本文還預期治療具有Th2高氣喘概況或Th2低氣喘概況的受試者的氣喘之方法。預期抑制TSLP蛋白與其受體複合物結合的TSLP拮抗劑將與本文所述之抗體一樣有效地治療低嗜酸性球性氣喘群體。相似地，預期抑制TSLP與其受體複合物結合的TSLP拮抗劑將有效地治療Th2低氣喘群體。還預期用於治療受試者的慢性阻塞性肺病（COPD）之方法，該方法包括投與本文所述之抗TSLP抗體或抗體衍生物或抗原結合蛋白。預期待治療的受試者為人類。受試者可為成人、青少年或兒童。
治療性抗體（或抗體衍生物）組成物可在多個部位遞送至患者。多次投與可同時進行或可在一段時間內投與。在某些情況下，提供治療性組成物的連續流動為有益的。可週期性投與其他療法，例如每小時、每日、每週、每2週、每3週、每月或以更長時間間隔。
在多個實施方式中，既定劑量的治療劑（如具有兩個TSLP結合位點的二價抗體）之量可根據療法投與的個體之體型以及所治療的病症之特徵而變化。
在示例性治療中，抗TSLP抗體或抗體衍生物以每日劑量約70 mg至約280 mg的劑量範圍投與。例如，劑量能以約70 mg、210 mg或280 mg投與。在多個實施方式中，抗TSLP抗體或抗體衍生物可以每劑70 mg、80 mg、90 mg、100 mg、110 mg、120 mg、130 mg、140 mg、150 mg、160 mg、10 mg、180 mg、190 mg、200 mg、210 mg、220 mg、230 mg、240 mg、250 mg、260 mg、270 mg或280 mg的劑量投與。該等濃度能以單個劑型或多個劑量投與。以上劑量每兩週或每四週投與。在多個實施方式中，抗TSLP抗體或抗體衍生物以70 mg的單次劑量每兩週或每四週投與。在多個實施方式中，抗TSLP抗體或抗體衍生物以210 mg的單次劑量每兩週或每四週投與。在多個實施方式中，抗TSLP抗體或抗體衍生物以280 mg的單次劑量每兩週或每四週投與。
對於抗體衍生物，抗體衍生物之量應使得劑量中的TSLP結合位點之數量與上述標準二價抗體的TSLP結合位點之數量係等莫耳的。
預期抗TSLP抗體或抗體衍生物每2週或每4週投與至少4個月、6個月、9個月、1年或更長時間的時期。在多個實施方式中，該投與為皮下或靜脈內。
預期用抗TSLP抗體或抗體衍生物治療會減少受試者的血液、痰液、支氣管肺泡液或肺中之嗜酸性球。還預期該投與將受試者中的細胞計數自Th2高群體變成Th2低群體。進一步預期投與抗TSLP抗體改善受試者中一或多個氣喘量度，該氣喘量度選自由以下組成之群組：用力呼氣量（FEV）、FEV1可逆性、用力肺活量（FVC）、FeNO、氣喘控制問卷-6評分和AQLQ(S) +12評分。
氣喘改善可被測量為以下中之一或多個：AER（年惡化率）降低；氣喘的住院治療/重度惡化減少；首次氣喘惡化（在開始用抗TSLP抗體治療後）的時間自基線的變化（增加）；在治療過程（例如52週）中具有一或多次氣喘惡化或重度惡化的受試者之比例相對於安慰劑減少；FEV1和FVC（支氣管擴張劑前和支氣管擴張劑後）自基線的變化（增加）；血液或痰液的嗜酸性球（或若獲得活檢或BAL流體，則為肺嗜酸性球）自基線的變化（減少）；FeNO自基線的變化（減少）；IgE自基線的變化（減少）；如藉由包括ACQ和變體、AQLQ和變體、SGRQ和氣喘症狀日誌的PRO所測量的氣喘症狀和控制有所改善；拯救藥物之使用變化（減少）；全身性皮質類固醇之使用減少；血液中Th2/Th1細胞比率下降。大部分/所有該等量度應在總群體和亞群中，包括高和低嗜酸性球（大於或等於250為高；小於250為低）、過敏性和非過敏性、Th2高和低、骨膜蛋白高和低（與中位數值相比）和FeNO高和低（大於或等於24或小於24）。
本揭露中還預期投與多種藥劑，如抗體組成物結合如本文所述之第二藥劑，包括但不限於消炎劑或氣喘療法。
然而，預期在多個實施方式中，該投與降低受試者中共同投與的療法之頻率或水平。示例性共同投與的療法包括但不限於吸入型皮質類固醇（ICS）、長效β2促效劑（LABA）、白三烯受體拮抗劑[LTRA]、長效抗蕈毒鹼藥[LAMA]、色甘酸鈉、短效β2促效劑（SABA）、以及茶鹼或口服皮質類固醇。在多個實施方式中，該投與消除對皮質類固醇療法的需要。 配製物
在一些實施方式中，本揭露考慮了藥物組成物之用途，該等藥物組成物包含治療有效量的抗TSLP抗體或抗體衍生物，以及藥學上可接受的稀釋劑、載體、增溶劑、乳化劑、防腐劑、和/或輔助劑。另外，本揭露提供藉由投與此類藥物組成物治療受試者之方法。
在某些實施方式中，可接受的配製物質較佳的是在所用劑量和濃度下對接受者無毒。在某些實施方式中，藥物組成物可含有用於改變、維持或保持例如組成物之pH值、滲透壓度、黏度、透明度、顏色、等滲性、氣味、無菌性、穩定性、溶解或釋放速率、吸附或穿透的配製物質。在此類實施方式中，適合的配製物質包括但不限於胺基酸（如甘胺酸、麩醯胺、天冬醯胺、精胺酸或離胺酸）；抗微生物劑；抗氧化劑（如抗壞血酸、亞硫酸鈉或亞硫酸氫鈉）；緩衝劑（如硼酸鹽、碳酸氫鹽、Tris-HCl、檸檬酸鹽、磷酸鹽或其他有機酸）；疏鬆劑（如甘露糖醇或甘胺酸）；螯合劑（如乙二胺四乙酸（EDTA））；錯合劑（如咖啡因、聚乙烯吡咯啶酮、β-環糊精或羥丙基-β-環糊精）；填充劑；單糖；二糖；和其他碳水化合物（如葡萄糖、蔗糖、甘露糖或糊精）；蛋白質（如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白）；著色劑、調味劑和稀釋劑；乳化劑；親水聚合物（如聚乙烯吡咯啶酮）；低分子量多肽；成鹽抗衡離子（如鈉）；防腐劑（如氯化苯二甲烴銨、苯甲酸、水楊酸、乙汞硫柳酸鈉、苯乙醇、對羥苯甲酸甲酯、對羥苯甲酸丙酯、洛赫西定、山梨酸或過氧化氫）；溶劑（如甘油、丙二醇或聚乙二醇）；糖醇（如甘露糖醇或山梨糖醇）；助懸劑；界面活性劑或潤濕劑（如普朗尼克（pluronics）、PEG、山梨醇酯、聚山梨醇酯（如聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯）、氚核、三木甲胺、卵磷脂、膽固醇、泰洛沙星（tyloxapal））；穩定性增強劑（如蔗糖或山梨糖醇）；張力增強劑（如鹼金屬鹵化物、較佳的是氯化鈉或氯化鉀，甘露糖醇，山梨糖醇）；遞送媒介物；稀釋劑；賦形劑和/或藥用輔助劑。參見REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES [雷明頓藥物科學], 第18''版, （A. R. Genrmo編輯）, 1990, Mack Publishing Company [麥克出版公司]。
適合的媒介物或載體可為注射用水、生理鹽水溶液或人造腦脊髓液，可能補充有組成物中常見的用於腸胃外投與的其他物質。中性緩衝鹽水或與血清白蛋白混合的鹽水係另外的示例性媒介物。在特定實施方式中，藥物組成物包含約pH 7.0-8.5的Tris緩衝液或約pH 4.0-5.5的乙酸鹽緩衝液，且可進一步包括山梨糖醇或其適合取代物。
配製物組分較佳的是以對投與部位可接受的濃度存在。在某些實施方式中，使用緩衝液以將組成物維持在生理pH值或稍低pH值下，典型地在約4.5至約8的pH值範圍內。包括約4.5、約4.6、約4.7、約4.8、約4.9、約5.0、約5.1、約5.2、約5.3、約5.4、約5.5、約5.6、約5.7、約5.8、約5.9、約6.0、約6.1、約6.2、約6.3、約6.4、約6.5、約6.6、約6.7、約6.8、約6.9、約7.0、約7.1、約7.2、約7.3、約7.4、約7.5、約7.6、約7.7、約7.8、約7.9和約8.0。
在多個實施方式中，抗TSLP抗體或抗體衍生物呈含有乙酸鹽以及脯胺酸、蔗糖、聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80中之一或多種之配製物。在多個實施方式中，配製物包含5-50 mM乙酸鹽、小於或等於3%（w/v）脯胺酸、0.015%（w/v）± 0.005%（w/v）聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80，pH在4.9和6.0之間。視需要地，抗體或抗體衍生物處於約100和約150 mg/ml之間的濃度。配製物可儲存在-20°C至-70°C下。包含該等賦形劑的示例性抗TSLP配製物描述於國際申請案號PCT/US 2021/018561中，藉由引用併入本文。
在替代性實施方式中，抗TSLP抗體或抗體衍生物呈含有界面活性劑以及至少一種鹼性胺基酸或其鹽之配製物。在示例性情況中，鹼性胺基酸係精胺酸或組胺酸。在多個實施方式中，鹽係精胺酸麩胺酸鹽或組胺酸麩胺酸鹽，視需要地呈10至200 mM的濃度。視需要地，配製物進一步包含脯胺酸。在替代性實施方式中，抗TSLP抗體或抗體衍生物呈含有界面活性劑以及鈣或其鹽之配製物。在多個實施方式中，鹽係麩胺酸鈣，視需要地呈15 mM至約150 mM的濃度。視需要地，配製物進一步包含脯胺酸。在多個實施方式中，界面活性劑係聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80、或其混合物。視需要地，抗體或抗體衍生物處於大於約110 mg/ml，或大於約140 mg/ml的濃度。包含該等賦形劑的示例性抗TSLP配製物描述於國際專利申請案號PCT/US 2021/017880中，藉由引用併入本文。
當考慮腸胃外投與時，使用的治療性組成物可呈無熱原的腸胃外可接受的水溶液形式提供，該水溶液包含在藥學上可接受的媒介物中的所需抗TSLP抗體或其衍生物中。一種尤其適合腸胃外注射的媒介物為無菌蒸餾水，其中抗體配製成適當防腐的無菌等滲溶液。在某些實施方式中，該製備可以涉及用試劑配製所需分子，該試劑如可注射微球、生物可侵蝕顆粒、聚合化合物（如聚乳酸或聚乙醇酸）、珠粒或脂質體，它們可提供可經由積存注射遞送的產品之控制釋放或持續釋放。在某些實施方式中，也可以使用透明質酸，其具有促進在循環中的持續時間的作用。在某些實施方式中，可植入的藥物遞送裝置可用於引入抗體。在多個實施方式中，可以經由載藥注射器或自動注射器投與。在多個實施方式中，自動注射器係Ypsomed YpsoMate®。在多種實施方式中，自動注射器揭露於WO 2018/226565、WO 2019/094138、WO 2019/178151、WO 20120/072577、WO 2020/081479、WO 2020/081480、PCT/US 20/70590、PCT/US 20/70591、PCT/US 20/53180、PCT/US 20/53179、PCT/US 20/53178、或PCT/US 20/53176。 套組
作為另外的一方面，本揭露包括含有一或多種化合物或組成物之套組，該化合物或組成物以有利於其用於實施本揭露方法的方式包裝。在一個實施方式中，這種套組包括本文所述之化合物或組成物，該化合物或組成物包裝在容器，如密封的瓶或容器中，標籤貼在容器上或包括在包裝中，該標籤描述了化合物或組成物在實踐該方法中之用途。較佳的是，化合物或組成物以單位劑型包裝。套組進一步包括適於根據具體的投與途徑投與組成物的裝置或適於實踐篩選測定。較佳的是，套組含有描述抗體組成物之用途的標籤。
本揭露之另外的方面和細節將從以下實例中顯而易見，該等實例旨在說明而非限制。 實例 實例 1- 鑒定泰派魯單抗屬性
泰派魯單抗係在中國倉鼠卵巢（CHO）細胞中產生的IgG2亞類之全長人單株抗體。其由λ亞類之2個重鏈（HC）和2個輕鏈（LC）組成。重鏈和輕鏈藉由二硫鍵共價連接。進行泰派魯單抗之生化學、生物物理學和生物學表徵，以提供對其結構和功能性質之全面瞭解，並能夠評估可能影響結合和功效的抗體屬性。 材料與方法
潛在地影響結合的 AMG 157 和不穩定殘基：作為序列A5（和作為鏈H5、L5）的AMG157之胺基酸序列以及其他幾種TSLP結合抗體先前描述於專利US 7,982,016 B2中。
具有A2G0F/A2G0F糖基化的抗體（C6500 H9998 O2068 N1734 S52）之分子量為147189.4 Da，該抗體包括去除重鏈N末端焦麩胺酸和C末端K。TSLP含有74%單體、23%二聚物和3%四聚體種類。
肽作圖：使用如在（Ren等人, Anal.Biochem.[分析生物化學] 392 :12-21 (2009)）中所述之樣本製備程序，包括用胍重折疊，二硫鍵之還原和烷基化，緩衝液交換以及用適用於LC-MS分析的肽上的胰蛋白酶消化，進行泰派魯單抗樣本之肽作圖。易言之，將包含泰派魯單抗的樣本在0.5 ml的pH 7.5變性緩衝液（7.5 M鹽酸胍（GdnHCl）和0.25 M Tris）中稀釋至約1 mg/ml。藉由添加3 µl的0.5 M二硫蘇糖醇（DTT），隨後在室溫下孵育30分鐘完成還原。藉由添加7 µl的0.5 M碘乙酸（IAA）完成羧甲基化。將反應在黑暗中、在室溫下持續15分鐘。藉由添加4 µl的0.5 M DTT淬滅過量IAA。使用NAP-5柱（通用電氣醫療集團（GE Healthcare），皮斯卡塔韋（iscataway），澤西州, 美國），還原的和烷基化泰派魯單抗樣本緩衝液交換至pH 7.5消化緩衝液（0.1 M Tris或0.1 M碳酸氫銨）中。將冷凍乾燥的胰蛋白酶溶於水中以至終濃度為1 mg/ml。藉由向還原的、烷基化的以及緩衝液交換的泰派魯單抗樣本添加1-mg/ml胰蛋白酶溶液開始消化，以實現1 : 25的酶/底物比率。消化在37°C下進行30分鐘。藉由添加5 tl的20% FA將最終消化物淬滅。如在（Ren等人, 2009, 同上）中所述，在Agilent 1290 UHPLC系統上進行消化的泰派魯單抗樣本之LC-MS/MS肽作圖分析，該系統連接至賽默飛世爾科技公司（Thermo Scientific）Q-Exactive Biopharma質譜儀。藉由MassAnalyzer軟體（Zhang, Anal.Chem.[分析化學] 81 :8354-8364 (2009)），將獲取的LC-MS/MS原始數據和泰派魯單抗和靶標之序列用於鑒定且定量修飾。
SE-UHPLC：將泰派魯單抗樣本加載到分析型SE-UHPLC柱（BEH200柱，1.7 µm粒度，4.6 mm × 150 mm，沃特斯公司（Waters Corporation））上，並且使用包含100 mM磷酸鈉、250 mM氯化鈉（pH 6.8）的流動相將蛋白質等度分離。藉由在280 nm處的UV吸光度監測洗脫液。在環境溫度下操作柱，並以0.4 mL/min的流速將流動相施加到柱上。
非還原性 RP-HPLC：藉由RP-HPLC使用Waters BEH300 C4柱（1.7 µm粒度，2.1 mm × 50 mm）分析泰派魯單抗樣本，並且在75°C下使用含有0.1% TFA的流動相和1-丙醇的梯度洗脫。檢測在215 nm處的吸光度。
還原性 CE-SDS：藉由rCE-SDS分析泰派魯單抗樣本。在pH 6.5的十二烷基硫酸鈉（SDS）和β-巰基乙醇存在下，藉由加熱將樣本還原且變性，然後在25°C下將樣本電動注射至填充有SDS凝膠緩衝液的裸露熔融石英毛細管中。在220 nm處監測吸光度。
CEX-UHPLC：將泰派魯單抗原料藥之樣本加載到分析CEX-HPLC柱（BioPro SP-F，5 µm粒度，4.6 mm × 100 mm，YMC美洲公司（YMC America, Inc.））上。流動相A包含20 mM磷酸鈉（pH 6.6），並且流動相B由20 mM磷酸鈉、500 mM氯化鈉（pH 6.6）組成。使用從0 min至4 min的5%至12%流動相B，在18 min至23%流動相B，在18.5 min至20.5 min至100%流動相B，和在21 min至25 min返回至5%流動相B產生的線性鹽梯度來分離蛋白質。藉由在280 nm處的UV吸光度監測洗脫液。將柱在28°C下處理，並且將流動相在0.6 mL/min的流速下施加至該柱。
聚糖作圖：N-聚糖作圖係分析技術，其中附接天冬醯胺殘基的寡糖藉由酶裂解來釋放。隨後用螢光標籤衍生的游離寡糖用於檢測和定量。藉由親水相互作用液相層析（HILIC）與螢光檢測對經標記的寡糖進行分離，以生成聚糖譜。在該方法中，泰派魯單抗用N-醣苷酶F（PNGase F）進行酶消化，該N-醣苷酶F特異性裂解寡糖之N-乙醯葡萄糖胺（GlcNAc）與天冬醯胺殘基之間的鍵。釋放的寡糖藉由還原胺化用2-胺基苯甲酸（2-AA）標記。在離心清除步驟後，藉由超高效液相層析（UPLC）系統上的HILIC分離寡糖。計算主要寡糖種類之相對%峰面積。
功效：藉由受體-配體結合生物測定和/或基於細胞的報告基因生物測定觀察包含本文所述之屬性的泰派魯單抗組成物之功效。
受體-配體結合測定：該測定提供了泰派魯單抗活性之近端測量，並且直接反映了泰派魯單抗之分子作用機制，泰派魯單抗結合TSLP並且防止其與TSLP受體（TSLPR）結合。該方法提供了泰派魯單抗對抑制TSLP與TSLPR之結合的能力之定量測量。泰派魯單抗與重組TSLP-His配體（TSLP-His）結合，並且抑制其與生物素化TSLP受體（TSLPR）結合。功效測定係檢測生物分子相互作用之基於珠粒的放大化學發光親和均相檢測（α）。該測定含有兩種珠粒類型：受體珠粒和供體珠粒。供體珠粒用水凝膠（含有酞青素、光敏劑和卵白素）包被。受體珠粒用含有二甲噻吩衍生物以及鎳螯合物的水凝膠包被。供體珠粒藉由卵白素和生物素之間的相互作用結合生物素化的TSLPR，並且由於鎳螯合物和組胺酸之間的相互作用，受體珠結合帶有組胺酸標籤的TSLP。當TSLP-His和生物素化的TSLPR相互結合時，受體珠粒和供體珠粒緊密接近。當將雷射應用於該複合物時，環境氧經由供體珠粒轉化為單重態氧。如果該等珠粒緊密接近，則會發生向受體珠粒的能量轉移，從而產生發光，這係在配備有AlphaScreen®訊息檢測能力的板讀取器中測量的。泰派魯單抗結合TSLP-His並且阻止其結合生物素化的TSLPR，因此以劑量依賴性方式降低發光輸出。藉由比較測試樣本響應與獲得自參考標準的響應確定測試樣本活性。應當理解，本段中的受體-配體結合測定係適用於確定組成物抑制固定在供體珠粒上的生物素化的TSLPR與固定在受體珠粒上的TSLP-His結合的能力之測定。
基於細胞的報告基因生物測定：人胸腺基質淋巴細胞生成素（TSLP）蛋白與在穩定的鼠BaF細胞之表面上表現的與人TSLP受體（TSLPR）複合物結合，誘導了Stat 5活化和細胞增殖。該方法利用鼠BaF / hu HTR細胞系，該鼠BaF/hu HTR細胞系用編碼Stat螢光素酶報告基因和殺稻瘟菌素抗性基因之質體共轉染。當Stat/BaF/HTR細胞用重組人TSLP孵育，訊息傳遞發生在結合TSLPR後，導致螢光素酶活性增加。AMG 157拮抗誘導TSLPR的活性的TSLP，因此抑制介導螢光素酶響應的TSLP。該方法測量了AMG 157參考標準和在用TSLP刺激的Stat/BaF/HTR細胞上的測試樣本之劑量依賴性抑制作用。用TSLP和泰派魯單抗孵育後，將該等細胞用含有洗滌劑（用於細胞裂解）和螢光素、螢光素酶的底物之試劑處理。螢光素酶與螢光素之反應導致在光度計中測量的發光。在添加螢光素酶底物之後，藉由發光讀數對報告細胞中響應於TSLP刺激的螢光素酶之產生進行定量。誘導螢光素酶報告活性活化的TSLP之抑制程度與泰派魯單抗之量成比例。藉由比較測試樣本對參考標準的響應確定測試樣本生物活性。應當理解，本段中所述之基於細胞的報告基因測定係適用於測定組成物抑制在編碼Stat螢光素酶報告基因的Stat/BaF/HTR細胞表面上表現的TSLPR之結合的能力之測定，Stat螢光素酶報告基因之表現指示TSLP與TSLPR之結合。 結果
泰派魯單抗之生化學表徵鑒定了經修飾的泰派魯單抗抗體，該等抗體可從泰派魯單抗製劑和儲存後的原料藥中分離出來，該原料藥包括異構化衍生物、脫醯胺化衍生物、氧化衍生物、高分子量種類、片段化種類、部分還原性種類、高甘露糖聚糖衍生物或二硫化物同種型衍生物。評估了該等屬性對泰派魯單抗之功效和耐受性之潛在影響。
異構化：藉由還原性肽作圖與LC-MS/MS評估天冬胺酸異構化。天冬胺酸殘基，無論是天然的還是藉由Asn脫醯胺化形成的，都可能經由環狀醯亞胺中間體發生異構化。基於經修飾的殘基與CDR的接近度，異構化可能會影響靶標結合和功效。藉由肽作圖研究的質譜分析評估泰派魯單抗中的天然異構化水平。在原料藥中未觀察到顯著水平的位於HC CDR2 Asp 54和LC CDR3 Asp 91/95的異構化。熱暴露強制降解研究顯示出，LC CDR2 Asp 49/50在高溫下對異構化敏感。此外，也顯示出HC CDR2 Asp 54之異構化水平在高溫下略微增加（＜ 2%）。因此，在5週的熱強制降解（40°C）後，主要異構化位點被鑒定為LC CDR Asp 49/50和HC CDR Asp 54，分別為10%和2%。
在原料藥中，觀察到在輕鏈CDR2中之Asp 49/50之異構化為約0.2%。在原料藥中未觀察到顯著水平的位於HC CDR2 Asp 54和LC CDR3 Asp 91/95的異構化。
在儲存壽命結束時，對臨床試驗中使用的產品批次監測雜質水平，如HMW種類、碎片、異構化等，並且與同一批次初始釋放時的雜質比較。雜質隨時間的增加允許用於計算受試者對雜質水平的臨床暴露和確定該等屬性對產品安全性之影響，並且提供了在原料藥中雜質的耐受性之測量。例如，泰派魯單抗之臨床研究利用原料藥，該原料藥的給藥直到其36個月臨床儲存壽命之最後一個月。與使用新藥物產品批次相比，使用過期藥物產品結合更高和更頻繁的給藥使患者暴露於更高水平的產品相關物質和產品相關雜質。與每月皮下注射給藥210 mg的劑量相比，增加的暴露量主要是由於每月治療的累積給藥增加（例如，藉由420 mg Q14D皮下注射給藥）。
藉由每兩週皮下注射420 mg的臨床劑量比每月210 mg的劑量高約4X。根據該給藥計畫，計算出如藉由「曲線下面積」（AUC）或最大血清濃度（C max）表示的較高劑量方案的全身暴露量，分別比較低臨床劑量高3.2X至3.7X。根據臨床研究方案，僅當在暴露量出現出乎意料的變化或出現潛在地與抗藥物抗體相關的安全事件時，才會進行抗體測試。未觀察到該等結果，並且藥物耐受良好。
基於該臨床試驗中投與時的劑量和估計的屬性水平，估計了臨床試驗患者之屬性暴露水平，並且評估了耐受性。例如，在藥物產品（例如，HWM）的屬性%可以乘以臨床暴露乘數，以確定在210 mg Q28D的建議劑量下投與的產品批次中的等效%屬性水平。
對於異構化，基於劑量210 mg Q28D計算的多達30%的總異構化與任何活體內安全性相關問題無關。基於210 mg Q28D的劑量計算的26%的D49/D50或D52異構化與任何活體內安全性相關問題無關，而基於210 mg Q28D的劑量計算的4%的D54異構化與任何活體內安全性相關問題無關。
氧化：使用還原性胰蛋白酶肽圖LC-MS評估氧化。位於甲硫胺酸（Met）殘基處的氧化係翻譯後修飾，其可由於暴露於氧氣和/或化學氧化劑以及光暴露而潛在地產生。泰派魯單抗在每個重鏈中含有8個Met殘基（Met 2、Met 34、Met 83、Met 117、Met 253、Met 359、Met 398、Met 429）。在輕鏈中沒有Met殘基。僅一個Met殘基（Met 34 ）位於互補決定區（CDR）。在位於重鏈之殘基Met 2、Met 117、Met 253、Met 359、Met 398處觀察到低但可檢測的氧化水平（表1）。CDR中之甲硫胺酸氧化可潛在地影響功效，然而未觀察到CDR區的Met 34之氧化。藉由還原性肽圖與質譜檢測（ESI-MS）估計氧化程度。將來自氧化和未氧化種類之相對強度的推斷用於計算相對百分比；然而，由於干擾種類的電離效率和共洗脫之潛在差異，該方法被認為是半定量的。將強氧化下的泰派魯單抗之分析用於闡明分子上特異性位點對氧化之敏感性。 [ 表 1] . 泰派魯單抗原料藥中之甲硫胺酸氧化水平
殘基 氧化 環（元素）
Met 2 約1% V H（Fab）
Met 117 約1% CH 1（Fab）
Met 253 約2% CH 2（Fc）
Met 359 約3% CH 2（Fc）
Met 398 約1% CH 3（Fc）
Met 429 ＜ 1% CH 3（Fc）
強化學氧化顯示出重鏈甲硫胺酸之敏感性順序為Met 117＞ Met 253＞ Met 2＞ Met 429，表明Met 117和Met 253係具有最大的溶劑暴露的位點。與上述化學氧化研究相似，光降解研究確定了重鏈Met殘基對光誘導氧化之相對敏感性如下所示：Met 253＞ Met 117＞ Met 398＞ Met 359。Met34氧化水平低於定量水平，並且給定的序列和分子折疊表明該殘基不可用於氧化。此外，光降解研究顯示出色胺酸殘基之氧化水平增加順序為Trp 102＞ Trp 56＞ Trp 52＞ Trp 90，表明重鏈可變區Trp 102和輕鏈Trp 56係具有最大的溶劑暴露的位點（表2）。 [ 表 2] . 泰派魯單抗原料藥中之色胺酸氧化水平
殘基 氧化 環（元素）
Trp 56 ＜ 1% V L（Fab）
Trp 102 ＜ 1% V H（Fab，CDR3）
Trp 150 ＜ 1% CH 1（Fab）
Trp 278 約2% CH 2（Fc）
在儲存壽命結束時觀察到的氧化EOS（最大值36個月2-8C加上2個月30C）顯示出，HCDR中W52處氧化約0.2%，W102處氧化1.1%。原料藥氧化檢測0.3%至0.5%氧化的W102。基於人臨床試驗中投與時的劑量和估計的屬性水平，估計了臨床試驗患者之屬性暴露水平。基於210 mg Q28D的劑量計算的多達6%-7%氧化的W102與任何活體內安全性問題無關。色胺酸氧化可能發生在高溫和極端的可見光和UV光暴露下。藉由極端條件造成的CDR色胺酸氧化與功效之適度降低有關。色胺酸氧化與黃色指數之間有很強的相關性。
脫醯胺化：使用胰蛋白酶肽作圖與LC-MS評估天冬醯胺脫醯胺化。藉由肽作圖研究之ESI-MS/MS分析評估泰派魯單抗中之天然脫醯胺化水平。僅觀察到位於重鏈之殘基Asn 316和Asn 385處的低水平脫醯胺化（表3）。在原料藥中其他位點未觀察到脫醯胺化，該等位點包括分別在重鏈CDR2和輕鏈CDR1中之Asn 57和Asn 25/26。 [ 表 3] . 泰派魯單抗原料藥中之天冬醯胺脫醯胺化水平
殘基 脫醯胺化 環（元素）
Asn 316 ＜ 1% C H2（Fc）
Asn 385 2% C H3（Fc）
使用在強脫醯胺化條件下的泰派魯單抗分析，以評估特異性分子位點對脫醯胺化之敏感性。在生理pH 7.4下，確定最敏感的位點為Asn 390和Asn 385（原料藥3%；EOS 5%），而次要敏感位點鑒定為Asn316（原料藥0.09%-0.1%；EOS 0.4%），所有該等位於Fc區。LC可變CDR區中位於Asn 25處的脫醯胺化僅在低水平下觀察到（原料藥0.1%至0.2%；EOS 0.4%）。基於人臨床試驗中投與時的劑量和估計的屬性水平，估計了臨床試驗患者之屬性暴露水平。位於Asn25處的計算的脫醯胺化多達2%（基於210 mg Q28D的劑量）與任何活活體內安全性相關問題無關，並且位於Asn385/390處的計算的脫醯胺化多達13%（基於210 mg Q28D的劑量）與任何活體內安全性相關問題無關。
糖基化：糖基化與抗體效應子功能和抗體與細胞表面上的Fc受體之結合相關，並且改變的糖基化可干擾該等功能之一或多種。效應子功能包括抗體依賴性細胞介導的細胞毒性（ADCC）和抗體依賴性細胞吞噬作用（ADCP）。
基於共通序列之存在以及從哺乳動物細胞培養物產生的IgG2單株抗體之歷史特徵，預計泰派魯單抗在每個重鏈上的Asn 298處含有單個N-糖基化位點。藉由比較使用和未使用PNGaseF處理的胰蛋白酶肽圖評估糖基化位點。PNGaseF切割聚糖之還原末端N-乙醯葡萄糖胺殘基和肽主鏈之Asn殘基之間的高甘露糖、雜交體和複合聚糖部分。藉由將層析分離之出口偶合至Orbitrap質譜儀來確定N-連接聚糖圖中的種類之組成物。
泰派魯單抗的聚糖補體之綜合表徵證明，存在具有不同程度的末端半乳糖基化的雙觸角N-連接結構作為主要種類和高水平（約95%）岩藻糖基化。如藉由HILIC確定的每種CEX原料藥之聚糖分佈顯示於表4中。 [ 表 4] . 泰派魯單抗原料藥（ DS ）之聚糖峰面積 %
樣本 岩藻糖基化 （%） 高甘露糖（%） β-半乳糖基化（%） 唾液酸化 （%）
DS 93.8 3.9 22.8 0.1
泰派魯單抗聚糖衍生物群體含有半乳糖基化種類（DS 19.9%-28.6%）、非岩藻糖基化種類（DS 1.1%-1.2%）以及DS中3.9%-4.8%的高甘露糖種類（主要作為寡甘露糖5）。基於人臨床試驗中投與時的劑量和估計的屬性水平，估計了臨床試驗患者之屬性暴露水平。計算的多達約5%的非岩藻糖基化種類、計算的多達75%-90%的半乳糖基化種類、以及計算的多達14%至18%的高甘露糖衍生物與任何活體內安全性相關問題無關，所有估計值基於210 mg Q28D的劑量。
為研究去除N-連接聚糖之生物學作用，用PNGaseF處理泰派魯單抗，純化，並且藉由受體-配體結合測定和基於細胞的報告基因生物測定來測試（表5）。該等結果證明，去除N-聚糖在任一功效測定中對泰派魯單抗均無作用。 [ 表 5] . 去糖基化的泰派魯單抗之生物活性
評估條件 受體-配體結合測定 基於細胞的報告基因生物測定
相對功效%* 相對功效%*
去糖基化的 112 98
*3次重複之平均值
高甘露糖聚糖水平可能潛在地影響產品半衰期，並且生產生物反應器之製程條件可能影響高甘露糖水平。在製程表徵研究中評估了生產生物反應器製程參數對高甘露糖之影響，其中鑒定出pH係影響高甘露糖之主要製程參數。建立了可接受的pH範圍以支持一致的高甘露糖水平。在製程表徵研究中的高甘露糖水平為 ≤ 7.5%。 實例 2- 大小衍生物
除了泰派魯單抗的胺基酸水平之化學變化外，具有聚集體或片段之衍生物亦為可能的。
假定存在2個未修飾的輕鏈、2個N-末端焦麩胺酸化的重鏈和18個二硫化物，完整泰派魯單抗的肽主鏈之總預期質量為144,298 Da。此外，天然泰派魯單抗在兩個重鏈之每一個上的Asn 298處含有單一N-連接糖基化位點。具有在Asn298處的2個拷貝的聚糖、2個拷貝的主要重鏈C-末端Gly衍生物以及2個拷貝的主要重鏈N-末端焦麩醯胺的完整的糖基化泰派魯單抗之理論質量為147,189 Da。用PNGaseF處理的完整泰派魯單抗去除N-糖基化，同時由於攜帶聚糖的Asn轉化為Asp殘基，多肽質量中每個鏈隨之增加1 Da，並且降低了去卷積質譜之異質性。去糖基化物質之理論質量為144,300 Da。
大小異質性係蛋白質藉由化學或酶切割作用以及藉由各種機制自締合的固有性質。潛在的大小衍生物可包括：高分子量（HMW）種類藉由自締合以形成比單體更大的種類（二聚物、更高階的寡聚種類）。HMW可以藉由非共價締合、可還原共價締合和/或非可還原共價締合形成；低分子量（LMW）種類可以藉由多肽主鏈之截短和/或亞基成分（即，輕鏈和重鏈）之不完整組裝形成。
泰派魯單抗之大小異質性使用以下分析方法評估：在天然條件下尺寸排阻超高效液相層析（SE-UHPLC）來評估大小和純度；沈降速度超速離心（SV-AUC）和具有靜態光散射（SLS）的SE-HPLC檢測來提供莫耳質量之另外的評估；在還原和變性條件下還原性十二烷基硫酸鈉毛細管電泳（rCE-SDS）來確定大小和純度。分離的衍生物包括片段、非可還原共價鍵、缺少正常糖基化或含有另外的糖基化位點之多肽；在變性條件下非還原性十二烷基硫酸鈉毛細管電泳（nrCE-SDS）來確定大小和純度。分離的衍生物包括部分組裝的分子、片段、共價鍵。
該等分析技術之結果表明：基於SE-UHPLC、SE-HPLC-SLS以及沈降速度分析超速離心（SV-AUC）結果，泰派魯單抗原料藥主要由單體組成，二聚物和LMW種類之水平較低。在變性（nrCE-SDS）條件以及還原和變性條件（rCE-SDS）下觀察到低水平的LMW種類。基於rCE-SDS結果，泰派魯單抗主要還原為HC和LC組分，片段化和HMW種類之水平略低。該等包括LMW（比LC小）、中等分子量（MMW，比HC小，但比LC大）以及HMW（比HC大）種類。LMW種類（例如，小於25 kD）和MMW種類（約25至50 kD）被共同檢測為片段，並且在小於2%的泰派魯單抗製劑中觀察到[DS：＜ 0.4%（HC+LC為98.7%-99%）；EOS：1.5%（HC+LC為97.3%-97.5%）]。
藉由非變性SE-UHPLC（係過程中控制的方法，並且係原料藥和藥物產品釋放及穩定性測試計畫之一部分）監測泰派魯單抗之大小異質性。在非變性條件下進行方法，以從單體主峰中分離HMW種類。藉由SE‑UHPLC在Waters BEH200 4.6 x 150 mm 1.7 mm粒度柱上，流動相為100 mM磷酸鈉、250 mM氯化鈉，pH 6.8，流速為0.4 mL/min和在280 nm吸光度下檢測，分析泰派魯單抗原料藥。曲線由主峰之存在來主導（相對面積百分比為99.6%），在約為2.8分鐘洗脫。在約2.2分鐘的滯留時間內，在主峰之前洗脫出最好在20X增強層析中觀察到的次要的峰。該峰含有泰派魯單抗HMW，並且具有0.4%的相對面積百分比，如在表6中所示。 [ 表 6] . 藉由 SE-UHPLC 的泰派魯單抗原料藥之峰面積百分比
峰鑒定 相對面積%
主峰 99.6
HMW 0.4
總體而言，在原料藥（DS）中檢測到HMW種類為約0.3%-0.6%，但在EOS中為1.7%，例如 ≤ 1.4% HMW（釋放）和 ≤ 1.7% HMW（穩定度）。基於人臨床試驗中投與時的劑量和估計的屬性水平，估計了臨床試驗患者之屬性暴露水平。計算的多達20% HMW的HMW種類（基於210 mg Q28D的劑量）與任何活體內安全性相關的問題無關。
將rCE-SDS用於評估重鏈和輕鏈，以及LMW和MMW種類。泰派魯單抗之rCE-SDS電泳圖呈現在如表7中所示的峰面積%值。該等數據證明，泰派魯單抗由二硫鍵連接重鏈和輕鏈組成。在泰派魯單抗原料藥中，在LMW和MMW區域觀察到的次要峰位於該方法之基線雜訊和可變性內。與SE-UHPLC結果一致，幾乎未觀察到LMW或MMW種類。基於人臨床試驗中投與時的劑量和估計的屬性水平，估計了臨床試驗患者之屬性暴露水平。基於210 mg Q28D的劑量計算的多達15%的片段種類與任何活體內安全性問題無關。 [ 表 7] . 藉由 rCE-SDS 的泰派魯單抗原料藥之峰面積百分比
峰鑒定 相對面積%
LC + HC 98.7
LMW ＜ LOQ*
MMW ＜ LOQ*
NGHC 0.6
HMW 0.4
     
*LOQ = 0.3%
還可以在非還原條件下進行CE-SDS以便評估非單體種類之存在。該技術在變性條件下進行，以解折疊蛋白質並且破壞非共價締合，並且特別適用於檢測部分分子種類和部分還原的完整分子，即那些缺少單體抗體預期的2個輕鏈和2個重鏈組分或各自鏈內鍵聯中之一或多個的分子。已在某些細胞培養條件下報告了由與單個輕鏈相關的2個重鏈（HHL）或與單個輕鏈相關的單個重鏈（HL，也稱為半分子）組成的種類（Trexler-Schmidt M等人, 2010）。在SDS和N-乙基順丁烯二醯亞胺（pH 6.5）之存在下，藉由加熱將泰派魯單抗變性，然後在25°C下將泰派魯單抗電動注射至填充有SDS凝膠緩衝液的裸露熔融石英毛細管中（50 mm ID x 30.2 cm）。注射電壓為10.0 kV，分離電壓為15.0 kV，並且在220 nm下監測吸光度。該數據證明，泰派魯單抗原料藥主要由二硫鍵連接的重鏈和輕鏈單體組成，包含低於4.5%的分佈的低水平種類的（表8）。 [ 表 8] . 藉由 nrCE-SDS 的泰派魯單抗原料藥之峰面積百分比
峰鑒定 相對面積%
主峰，HC+LC單體 95.5
前鋒，較小的種類 4.5
將靜態光散射（SLS）檢測添加至SE-HPLC方法中，允許確定層析圖中各峰之莫耳質量。藉由洗脫種類散射的光強度與種類之濃度和分子量均成比例。UV吸光度（280 nm）之強度與蛋白質濃度成比例。藉由儀器製造商之軟體，利用每個峰之光散射強度和濃度，可以確定每種洗脫物質之莫耳質量。藉由與線上多角度光散射檢測偶合的SE-HPLC層析，使用具有TSK-GEL G3000SWxl，5 μm粒度，7.8 mm ID x 300 mm長度柱的Agilent 1100 HPLC系統，分析泰派魯單抗原料藥。使用的檢測器係Wyatt Heleos II檢測器、Wyatt Optilab TrEX RI檢測器、以及Agilent UV檢測器，其中波長設定在280 nm處。SE-HPLC運行在室溫下進行，其中將100 mM磷酸鈉、250 mM氯化鈉（pH 6.8 ± 0.1）的緩衝液用作流動相，且流速為0.5 mL/min。
由泰派魯單抗原料藥生成的SLS數據計算的UV曲線和相應的莫耳質量表明，主峰之莫耳質量為145 kDa，與泰派魯單抗單體之理論質量（147 kDa）非常一致。單體前洗脫峰莫耳質量平均為284 kDa，與泰派魯單抗二聚物之理論質量（294 kDa）非常一致，表明大多數HMW種類係泰派魯單抗二聚物（表9）。 [ 表 9] . 藉由 SE-HPLC-SLS 確定泰派魯單抗原料藥之主峰和大多數 HMW 峰之分子量
峰鑒定 分子量（kDa） a
單體 145 ± 0.2
二聚物（HMW） 284 ± 6
藉由受體-配體結合測定和基於細胞的報告基因生物測定，評估了富集的HMW級分（富集泰派魯單抗二聚物）和主峰（主要含有單體）之功效。該等結果顯示出，如藉由受體-配體結合測定和基於細胞的報告基因生物測定確定的功效降低，泰派魯單抗活性分別降低了64%和62%（表10）。 [ 表 10] . SE-UHPLC 級分之功效確定
樣本描述 受體-配體結合測定 相對功效% 基於細胞的報告基因生物測定 相對功效%
HMW 64 62
主峰 108 96
這係預期的結果，因為自締合施加了空間限制，並且可能導致構象變化，進而可能影響結合。在高溫、低pH、生理pH、可見光和UV光暴露下，聚集體形成的速率會增加。生物學表徵確定HMW種類顯示出功效降低。只有當它們的富集水平顯著超過正常加工和儲存條件下的可檢測到的量時，才能檢測到活體外功效之降低。
二硫化物同種型：泰派魯單抗係IgG2亞類之抗體，並且因此預計顯示二硫鍵介導的結構衍生物和同種型（Wypych等人, Journal of Biological Chemistry [生物化學雜誌], 第283卷(23):16194-16205, 2008；Dillon等人, Journal of Biological Chemistry [生物化學雜誌], 第283卷(23):16206-16215, 2008）。二硫化物結構異質性係重組的和天然存在的IgG2分子固有的，該等分子含有18個二硫鍵 - 6個鏈間和12個鏈內（Wang等人, 2007；Zhang和Czupryn, 2002）。根據非還原肽中存在的鍵聯之數量，使用不同的方法闡述了在泰派魯單抗中檢測到的二硫鍵之連接性。對於含有單個二硫鍵的肽，使用還原性和非還原性胰蛋白酶肽圖之比較來指定二硫化物之連接性。
與典型IgG2-A結構不同，IgG2-B同種型含有連接兩個拷貝的Fab肽（C H1-C L-鉸鏈）與兩個拷貝的鉸鏈肽之對稱鍵。IgG2-A/B呈中間體形式表現，摻入了IgG2-A和IgG2-B之部分特徵，藉由涉及一個Fab臂由二硫鍵與鉸鏈肽的兩個拷貝共價連接的不對稱排列來定義（Wypych等人, Journal of Biological Chemistry [生物化學雜誌], 第283卷(23):16194-16205, 2008；Dillon等人, Journal of Biological Chemistry [生物化學雜誌], 第283卷(23):16206-16215, 2008；Zhang等人, Anal Chem.[分析化學], 第82卷(3):1090-1099, 2010）。
在非還原和還原條件下使用內切蛋白酶胰蛋白酶藉由肽作圖在未分級的原料藥中鑒定二硫鍵連接的肽。除了UV檢測外，將RP-HPLC分離之出口與電噴霧電離質譜儀（ESI-MS）偶合用於質量分析。隨後用還原劑[三(2-羧乙基)磷化氫鹽酸鹽（TCEP）]處理非還原消化物，並使用相同的條件進行重新分析。在還原條件下，藉由質譜分析了來自泰派魯單抗原料藥的非還原性胰蛋白酶肽圖中的每種二硫鍵連接肽之組成肽。綜上所述，指定為A至H的二硫鍵連接肽之表徵闡述了表11中總結的特定Cys殘基之間的鍵聯，該等鍵聯證實了典型二硫鍵結構IgG2-A之存在。 [ 表 11] . 證實肽 A 至 H 之 IgG2-A 連接性
二硫鍵連接肽 組成肽 鑒定出的Cys-Cys鍵（肽） 環（元素）
A (H3)/(H12) Cys 22(H3) - Cys 96(H12) V H（Fab）
B (H15)/(H16) Cys 149(H15) - Cys 205(H16) C H1（Fab）
C (L2)/(L5) Cys 22(L2) - Cys 87(L5) V L（Fab）
D (L8)/(L14) Cys 136(L8) - Cys 195(L14) C L（Fab）
E (H14)/(L15) Cys 136(H14) - Cys 213(L15) HC-LC間
F (H22)/(H27) Cys 262(H22) - Cys 322(H27) C H2（Fc）
G (H35)/(H40) Cys 368(H35) - Cys 426(H40) C H3（Fc）
H (H20)/(H20) Cys 224(H20) - Cys 224(H20) 鉸鏈
Cys 225(H20) - Cys 225(H20)
Cys 228(H20) - Cys 228(H20)
Cys 231(H20) - Cys 231(H20)
非還原性胰蛋白酶肽圖也顯示出IgG2-B衍生物之存在。藉由非還原性RP-HPLC對IgG2-B二硫化物衍生物進行進一步確認。綜上所述，二硫鍵連接肽A至D、肽F至G以及肽I之表徵闡述了表12中總結的特定Cys殘基之間的鍵聯，該等鍵聯證實了二硫化物同種型結構IgG2-B之存在。 [ 表 12] . 證實肽 A 至 D 、 F 至 G 以及 I 之 IgG2-B 連接性
二硫鍵連接肽 組成肽 鑒定出的Cys-Cys鍵（肽） 環（元素）
A (H3)/(H12) Cys 22(H3) - Cys 96(H12) V H（Fab）
B (H15)/(H16) Cys 149(H15) - Cys 205(H16) C H1（Fab）
C (L2)/(L5) Cys 22(L2) - Cys 87(L5) V L（Fab）
D (L8)/(L14) Cys 136(L8) - Cys 195(L14) C L（Fab）
F (H22)/(H27) Cys 262(H22) - Cys 322(H27) C H2（Fc）
G (H35)/(H40) Cys 368(H35) - Cys 426(H40) C H3（Fc）
I (H20)/(L15) (H14)/(H20) (H20)/(H20) (H20)/(H20) Cys 224(H20) - Cys 213(L15) Cys 136(H14) - Cys 225(H20) Cys 228(H20) - Cys 228(H20) Cys 231(H20) - Cys 231(H20) IgG2-B形式
還在泰派魯單抗之非還原性胰蛋白酶肽圖中發現了結構同種型IgG2-A/B之存在。藉由非還原性RP-HPLC對IgG2-A/B二硫化物同種型衍生物進行進一步確認。綜上所述，二硫鍵連接肽A至G和肽J之表徵闡述了表13中總結的特定Cys殘基之間的鍵聯，該等鍵聯證實了二硫化物同種型結構IgG2-A/B之存在。 [ 表 13] . 證實肽 A 至 G 和 J 之 IgG2-A/B 連接性
二硫鍵連接肽 組成肽 鑒定出的Cys-Cys鍵（肽） 環（元素）
A (H3)/(H12) Cys 22(H3) - Cys 96(H12) V H（Fab）
B (H15)/(H16) Cys 149(H15) - Cys 205(H16) C H1（Fab）
C (L2)/(L5) Cys 22(L2) - Cys 87(L5) V L（Fab）
D (L8)/(L14) Cys 136(L8) - Cys 195(L14) C L（Fab）
E (H14)/(L15) Cys 136(H14) - Cys 213(L15) HC-LC間
F (H22)/(H27) Cys 262(H22) - Cys 322(H27) C H2（Fc）
G (H35)/(H40) Cys 368(H35) - Cys 426(H40) C H3（Fc）
   J (H14)/(H20) (H20)/(L15) (H20)/(H20) (H20)/(H20) (H20)/(H20) Cys 136(H14) - Cys 224(H20) Cys 224(H20) - Cys 213(L15) Cys 225(H20) - Cys 225(H20) Cys 228(H20) - Cys 228(H20) Cys 231(H20) - Cys 231(H20)    IgG2-A/B形式
還原性和非還原性胰蛋白酶肽作圖之比較揭示了，預期的主要的IgG2-A結構的二硫鍵連接的肽之存在，以及具有與另外的IgG2-A/B和IgG2-B二硫鍵結構同種型相關的連接性之肽。基於RP-HPLC，泰派魯單抗中的二硫化物同種型之相對水平範圍在約3.4%-4.2%的IgG2-B、39.2%-42%的IgG2-A/B，以及54.2%-57.1%的IgG2-A。基於人臨床試驗中投與時的劑量和估計的屬性水平，估計了臨床試驗患者之屬性暴露水平。基於210 mg Q28D的劑量計算的多達15%的二硫化物同種型衍生物IgG2-B，以及基於210 mg Q28D的劑量計算的多達75%的二硫化物同種型衍生物IgG2-A/B均與任何活體內安全性問題無關。藉由使用CEX-UHPLC富集原料藥、IgG2-A、IgG2-A/B以及IgG2-B中的同種型，評估二硫化物同種型之功效。該等結果證明，在測定能力範圍內，所有同種型均顯示出全部功效。 實例 3- 屬性和功效之杠桿分析
利用最小平方迴歸模型進行統計分析，以評估HMW種類、位於D49D50處的CDR isoAsp以及總CDR氧化之間的關係。該分析基於如實例1中所述之強降解分析確定的該等屬性。
使用本文所述之基於細胞的報告基因生物測定（圖1A-C）進行的功效測量，和使用本文所述之受體-配體結合測定（圖1D-F）功效測量，進行分析。對於兩種功效測定，屬性之間鑒定出的關係相當。鑒定出HMW種類和總CDR trp氧化之間之統計上顯著的負相關（圖1B-C和1E-F）。CDR IsoAsp D49D50和功效之間的關係未達到統計顯著性。 實例 4- 高甘露糖種類和藥物動力學（ PK ）建模
使用建模方法以評估高甘露糖（HM）之增加%對泰派魯單抗的清除率之潛在的影響。該模型假定半衰期為24.5天（臨床研究中泰派魯單抗IV給藥之PK曲線），並且基於單次IV給藥後參考IgG2單株抗體之HM%降低率，第1天泰派魯單抗的HM形式之增加的速率常數為0.035。參考IgG2單株抗體HM形式之增加的速率常數具有迄今為止所分析出的最高值，並且被選擇作為泰派魯單抗HM半衰期之保守估計值。PK曲線之建模時間多達122.5天（相當於5個半衰期），並且沒有使用優先配對校正。如下 表 14中所示，模擬了HM水平與評估的泰派魯單抗清除率增加之間的關係。 [ 表 14] ：高甘露糖水平和對清除率之估計影響
HM水平 清除率增加的估計量
5% N/A
8% 1.7%
11% 3.3%
13% 4.4%
15% 5.5%
18% 7.2%
21% 9.4%
23.1% 10.0%
該等結果表明，具有5%或更少的HM種類之泰派魯單抗組成物顯示出清除率幾乎沒有增加，並且在泰派魯單抗組成物中約23%的HM種類導致抗體清除率增加約10%。
本文討論和引用的所有出版物、專利和專利申請均藉由引用以其整體特此併入。應理解，所揭露的發明不限於所描述的特定方法、方案和材料，因為該等可以變化。還應理解，本文所用的術語僅用於描述特定實施方式的目的，並不旨在限制所附申請專利範圍之範圍。
熟悉該項技術者將認識到或能夠確定本文所述之本發明之該等特定實施方式之許多等效形式。此類等效形式旨在被以下申請專利範圍所涵蓋。
無
[ 圖 1A-1F] 係一系列杠桿圖，描繪了功效和總CDR IsoAsp（圖1A和1D）、HMW種類（圖1B和1E）以及總CDR Trp氧化（圖1C和1F）之間的關係。
無
 

          <![CDATA[<110>  美商安進公司（Amgen Inc.）]]>
          <![CDATA[<120>  抗TSLP抗體組成物及其用途]]>
          <![CDATA[<130>  32053/56674/PC]]>
          <![CDATA[<140>  TW 111115482]]>
          <![CDATA[<141>  2022-04-22]]>
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          <![CDATA[<170>  PatentIn 3.5版]]>
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          <![CDATA[<221>  CDS]]>
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          <![CDATA[<400>  1]]>
          gcagccagaa agctctggag catcagggag actccaactt aaggcaacag catgggtgaa       60
          taagggcttc ctgtggactg gcaatgagag gcaaaacctg gtgcttgagc actggcccct      120
          aaggcaggcc ttacagatct cttacactcg tggtgggaag agtttagtgt gaaactgggg      180
          tggaattggg tgtccacgt atg ttc cct ttt gcc tta cta tat gtt ctg tca       232
                               Met Phe Pro Phe Ala Leu Leu Tyr Val Leu Ser          
                               1               5                   10               
          gtt tct ttc agg aaa atc ttc atc tta caa ctt gta ggg ctg gtg tta        280
          Val Ser Phe Arg Lys Ile Phe Ile Leu Gln Leu Val Gly Leu Val Leu           
                      15                  20                  25                    
          act tac gac ttc act aac tgt gac ttt gag aag att aaa gca gcc tat        328
          Thr Tyr Asp Phe Thr Asn Cys Asp Phe Glu Lys Ile Lys Ala Ala Tyr           
                  30                  35                  40                        
          ctc agt act att tct aaa gac ctg att aca tat atg agt ggg acc aaa        376
          Leu Ser Thr Ile Ser Lys Asp Leu Ile Thr Tyr Met Ser Gly Thr Lys           
              45                  50                  55                            
          agt acc gag ttc aac aac acc gtc tct tgt agc aat cgg cca cat tgc        424
          Ser Thr Glu Phe Asn Asn Thr Val Ser Cys Ser Asn Arg Pro His Cys           
          60                  65                  70                  75            
          ctt act gaa atc cag agc cta acc ttc aat ccc acc gcc ggc tgc gcg        472
          Leu Thr Glu Ile Gln Ser Leu Thr Phe Asn Pro Thr Ala Gly Cys Ala           
                          80                  85                  90                
          tcg ctc gcc aaa gaa atg ttc gcc atg aaa act aag gct gcc tta gct        520
          Ser Leu Ala Lys Glu Met Phe Ala Met Lys Thr Lys Ala Ala Leu Ala           
                      95                  100                 105                   
          atc tgg tgc cca ggc tat tcg gaa act cag ata aat gct act cag gca        568
          Ile Trp Cys Pro Gly Tyr Ser Glu Thr Gln Ile Asn Ala Thr Gln Ala           
                  110                 115                 120                       
          atg aag aag agg aga aaa agg aaa gtc aca acc aat aaa tgt ctg gaa        616
          Met Lys Lys Arg Arg Lys Arg Lys Val Thr Thr Asn Lys Cys Leu Glu           
              125                 130                 135                           
          caa gtg tca caa tta caa gga ttg tgg cgt cgc ttc aat cga cct tta        664
          Gln Val Ser Gln Leu Gln Gly Leu Trp Arg Arg Phe Asn Arg Pro Leu           
          140                 145                 150                 155           
          ctg aaa caa cag taaaccatct ttattatggt catatttcac agcccaaaat            716
          Leu Lys Gln Gln                                                           
          aaatcatctt tattaagtaa aaaaaaa                                          743
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          <![CDATA[<213>  智人]]>
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          Met Phe Pro Phe Ala Leu Leu Tyr Val Leu Ser Val Ser Phe Arg Lys 
          1               5                   10                  15      
          Ile Phe Ile Leu Gln Leu Val Gly Leu Val Leu Thr Tyr Asp Phe Thr 
                      20                  25                  30          
          Asn Cys Asp Phe Glu Lys Ile Lys Ala Ala Tyr Leu Ser Thr Ile Ser 
                  35                  40                  45              
          Lys Asp Leu Ile Thr Tyr Met Ser Gly Thr Lys Ser Thr Glu Phe Asn 
              50                  55                  60                  
          Asn Thr Val Ser Cys Ser Asn Arg Pro His Cys Leu Thr Glu Ile Gln 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Leu Thr Phe Asn Pro Thr Ala Gly Cys Ala Ser Leu Ala Lys Glu 
                          85                  90                  95      
          Met Phe Ala Met Lys Thr Lys Ala Ala Leu Ala Ile Trp Cys Pro Gly 
                      100                 105                 110         
          Tyr Ser Glu Thr Gln Ile Asn Ala Thr Gln Ala Met Lys Lys Arg Arg 
                  115                 120                 125             
          Lys Arg Lys Val Thr Thr Asn Lys Cys Leu Glu Gln Val Ser Gln Leu 
              130                 135                 140                 
          Gln Gly Leu Trp Arg Arg Phe Asn Arg Pro Leu Leu Lys Gln Gln 
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          Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser Asp His Val Val 
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          <![CDATA[<210>  6]]>
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          Thr Tyr Gly Met His 
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          Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys His Tyr Ala Asp Ser Val Lys 
          1               5                   10                  15      
          Gly 
          <![CDATA[<210>  8]]>
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          <![CDATA[<223>  HCDR3]]>
          <![CDATA[<400>  8]]>
          Ala Pro Gln Trp Glu Leu Val His Glu Ala Phe Asp Ile 
          1               5                   10              
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          <![CDATA[<223>  重鏈VH]]>
          <![CDATA[<400>  9]]>
          cagatgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc       60
          tcctgtgcag cgtctggatt caccttcaga acctatggca tgcactgggt ccgccaggct      120
          ccaggcaagg gactggagtg ggtggcagtt atatggtatg atggaagtaa taaacactat      180
          gcagactccg tgaagggccg attcaccatc accagagaca attccaagaa cactctgaat      240
          ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagcccct      300
          cagtgggagc tagttcatga agcttttgat atctggggcc aagggacaat ggtcaccgtc      360
          tcttca                                                                 366
          <![CDATA[<210>  10]]>
          <![CDATA[<211>  122]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  尚未歸類的特徵]]>
          <![CDATA[<223>  重鏈VH]]>
          <![CDATA[<400>  10]]>
          Gln Met Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Thr Tyr 
                      20                  25                  30          
          Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys His Tyr Ala Asp Ser Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Thr Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Asn 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Ala Pro Gln Trp Glu Leu Val His Glu Ala Phe Asp Ile Trp 
                      100                 105                 110         
          Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120         
          <![CDATA[<210>  11]]>
          <![CDATA[<211>  325]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  尚未歸類的特徵]]>
          <![CDATA[<223>  輕鏈VL]]>
          <![CDATA[<400>  11]]>
          tcctatgtgc tgactcagcc accctcggtg tcagtggccc caggacagac ggccaggatt       60
          acctgtgggg gaaacaacct tggaagtaaa agtgtgcact ggtaccagca gaagccaggc      120
          caggcccctg tgctggtcgt ctatgatgat agcgaccggc cctcatggat ccctgagcga      180
          ttctctggct ccaactctgg gaacacggcc accctgacca tcagcagggg cgaagccggg      240
          gatgaggccg actattactg tcaggtgtgg gatagtagta gtgatcatgt ggtatttcgg      300
          cggagggacc aagctgaccg tccta                                            325
          <![CDATA[<210>  12]]>
          <![CDATA[<211>  108]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  尚未歸類的特徵]]>
          <![CDATA[<223>  輕鏈VL]]>
          <![CDATA[<400>  12]]>
          Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln 
          1               5                   10                  15      
          Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Leu Gly Ser Lys Ser Val 
                      20                  25                  30          
          His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val Tyr 
                  35                  40                  45              
          Asp Asp Ser Asp Arg Pro Ser Trp Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 
              50                  55                  60                  
          Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Gly Glu Ala Gly 
          65                  70                  75                  80  
          Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser Asp His 
                          85                  90                  95      
          Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 
                      100                 105             
          <![CDATA[<210>  13]]>
          <![CDATA[<211>  448]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多肽]]>
          <![CDATA[<400>  13]]>
          Gln Met Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Thr Tyr 
                      20                  25                  30          
          Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys His Tyr Ala Asp Ser Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Thr Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Asn 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Ala Pro Gln Trp Glu Leu Val His Glu Ala Phe Asp Ile Trp 
                      100                 105                 110         
          Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 
                  115                 120                 125             
          Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr 
              130                 135                 140                 
          Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr 
          145                 150                 155                 160 
          Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro 
                          165                 170                 175     
          Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr 
                      180                 185                 190         
          Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp 
                  195                 200                 205             
          His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys 
              210                 215                 220                 
          Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser 
          225                 230                 235                 240 
          Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 
                          245                 250                 255     
          Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 
                      260                 265                 270         
          Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 
                  275                 280                 285             
          Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val 
              290                 295                 300                 
          Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr 
                          325                 330                 335     
          Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 
                      340                 345                 350         
          Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 
                  355                 360                 365             
          Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 
              370                 375                 380                 
          Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp 
          385                 390                 395                 400 
          Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 
                          405                 410                 415     
          Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 
                      420                 425                 430         
          Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 
                  435                 440                 445             
          <![CDATA[<210>  14]]>
          <![CDATA[<211>  214]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  ]]>合成多肽
          <![CDATA[<400>  14]]>
          Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln 
          1               5                   10                  15      
          Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Leu Gly Ser Lys Ser Val 
                      20                  25                  30          
          His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val Tyr 
                  35                  40                  45              
          Asp Asp Ser Asp Arg Pro Ser Trp Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 
              50                  55                  60                  
          Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Gly Glu Ala Gly 
          65                  70                  75                  80  
          Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser Asp His 
                          85                  90                  95      
          Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys 
                      100                 105                 110         
          Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln 
                  115                 120                 125             
          Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly 
              130                 135                 140                 
          Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly 
          145                 150                 155                 160 
          Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala 
                          165                 170                 175     
          Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg Ser 
                      180                 185                 190         
          Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val 
                  195                 200                 205             
          Ala Pro Thr Glu Cys Ser 
              210
Figure 12_A0101_SEQ_0001
Figure 12_A0101_SEQ_0002
Figure 12_A0101_SEQ_0003
Figure 12_A0101_SEQ_0004
Figure 12_A0101_SEQ_0005
Figure 12_A0101_SEQ_0006
Figure 12_A0101_SEQ_0007
Figure 12_A0101_SEQ_0008
Figure 12_A0101_SEQ_0009
Figure 12_A0101_SEQ_0010
Figure 12_A0101_SEQ_0011
Figure 12_A0101_SEQ_0012

Claims (89)

  1. 一種組成物，該組成物包含泰派魯單抗和一或多種泰派魯單抗衍生物，其中該一或多種泰派魯單抗衍生物包含異構化衍生物，並且其中該組成物中的異構化衍生物之量小於約30%，其中泰派魯單抗包含 A) 輕鏈可變結構域，該輕鏈可變結構域包含： (i) SEQ ID NO: 3中列出的輕鏈CDR1胺基酸序列； (ii) SEQ ID NO: 4中列出的輕鏈CDR2胺基酸序列；以及 (iii) SEQ ID NO: 5中列出的輕鏈CDR3胺基酸序列；以及 (B) 重鏈可變結構域，該重鏈可變結構域包含： (i) SEQ ID NO: 6中列出的重鏈CDR1胺基酸序列； (ii) SEQ ID NO: 7中列出的重鏈CDR2胺基酸序列，以及 (iii) SEQ ID NO: 8中列出的重鏈CDR3胺基酸序列。
  2. 如請求項1所述之組成物，其中該組成物中的異構化衍生物之量為約0.5%至約13%。
  3. 如請求項1或2所述之組成物，其中該異構化衍生物包含在該重鏈或輕鏈互補決定區（CDR）中之修飾。
  4. 如請求項1至3中任一項所述之組成物，其中該異構化衍生物包含位於任一或兩個可變區鏈中的SEQ ID NO: 7之重鏈CDR D54，和/或SEQ ID NO: 4之輕鏈CDR D49、D50或D52之變化。
  5. 如請求項1至4中任一項所述之組成物，其中該異構化衍生物包含位於SEQ ID NO: 7的D54處的小於約5%的量之異構化。
  6. 如請求項1至4中任一項所述之組成物，其中該異構化衍生物包含位於SEQ ID NO: 4的D49、D50或D52之一或多個處的小於約13%的量之異構化。
  7. 如請求項1至6中任一項所述之組成物，其中該異構化衍生物為異天冬胺酸（isoAsp）或環狀天冬胺酸（cAsp）。
  8. 如請求項1至7中任一項所述之組成物，其中該組成物中的異構化衍生物之量藉由還原性肽作圖來確定。
  9. 如請求項1至8中任一項所述之組成物，其中該泰派魯單抗和泰派魯單抗衍生物具有比組成物更高的功效和/或耐受性，該組成物包含大於30%的異構化衍生物，其中所述功效包含抑制固定在供體珠粒上的生物素化的TSLPR與固定在受體珠粒上的TSLP-His之結合的能力，或抑制在編碼Stat螢光素酶報告基因的Stat/BaF/HTR細胞表面上表現的TSLPR之結合的能力，Stat螢光素酶報告基因之表現指示TSLP與TSLPR之結合。
  10. 一種組成物，該組成物包含泰派魯單抗和一或多種泰派魯單抗衍生物，其中該一或多種泰派魯單抗衍生物包含脫醯胺化衍生物，並且其中該組成物中的脫醯胺化衍生物之量小於約15%，其中泰派魯單抗包含 A) 輕鏈可變結構域，該輕鏈可變結構域包含： (i) SEQ ID NO: 3中列出的輕鏈CDR1胺基酸序列； (ii) SEQ ID NO: 4中列出的輕鏈CDR2胺基酸序列；以及 (iii) SEQ ID NO: 5中列出的輕鏈CDR3胺基酸序列；以及 (B) 重鏈可變結構域，該重鏈可變結構域包含： (i) SEQ ID NO: 6中列出的重鏈CDR1胺基酸序列； (ii) SEQ ID NO: 7中列出的重鏈CDR2胺基酸序列，以及 (iii) SEQ ID NO: 8中列出的重鏈CDR3胺基酸序列。
  11. 如請求項10所述之組成物，其中該組成物中的脫醯胺化衍生物之量為約0.5%-10%。
  12. 如請求項10或11所述之組成物，其中該脫醯胺化衍生物包含脫醯胺化天冬醯胺：SEQ ID NO: 3之N25/N26、SEQ ID NO: 13之N316、和/或SEQ ID NO: 13之N385/390。
  13. 如請求項10至12中任一項所述之組成物，其中該脫醯胺化衍生物包含位於SEQ ID NO: 3之N25/N26處的小於約3%的量之脫醯胺化。
  14. 如請求項10至12中任一項所述之組成物，其中該脫醯胺化衍生物包含位於SEQ ID NO: 13之N316、和/或N385/390的一或多個處的小於約13%的量之脫醯胺化。
  15. 如請求項10至14中任一項所述之組成物，其中該組成物中的脫醯胺化衍生物之量藉由還原性肽作圖來確定。
  16. 如請求項10至15中任一項所述之組成物，其中該泰派魯單抗和泰派魯單抗衍生物具有比組成物更高的功效和/或耐受性，該組成物包含大於15%的脫醯胺化衍生物，其中所述功效包含抑制固定在供體珠粒上的生物素化的TSLPR與固定在受體珠粒上的TSLP-His之結合的能力，或抑制在編碼Stat螢光素酶報告基因的Stat/BaF/HTR細胞表面上表現的TSLPR之結合的能力，Stat螢光素酶報告基因之表現指示TSLP與TSLPR之結合。
  17. 一種組成物，該組成物包含泰派魯單抗和一或多種泰派魯單抗衍生物，其中該一或多種泰派魯單抗衍生物包含氧化衍生物，並且其中該組成物中的氧化衍生物之量小於約7%，其中泰派魯單抗包含 A) 輕鏈可變結構域，該輕鏈可變結構域包含： (i) SEQ ID NO: 3中列出的輕鏈CDR1胺基酸序列； (ii) SEQ ID NO: 4中列出的輕鏈CDR2胺基酸序列；以及 (iii) SEQ ID NO: 5中列出的輕鏈CDR3胺基酸序列；以及 (B) 重鏈可變結構域，該重鏈可變結構域包含： (i) SEQ ID NO: 6中列出的重鏈CDR1胺基酸序列； (ii) SEQ ID NO: 7中列出的重鏈CDR2胺基酸序列，以及 (iii) SEQ ID NO: 8中列出的重鏈CDR3胺基酸序列。
  18. 如請求項17所述之組成物，其中該組成物中的氧化衍生物之量為約0.4%至約7%。
  19. 如請求項17或18所述之組成物，其中該氧化衍生物包含位於任一或兩個重鏈中之重鏈甲硫胺酸：SEQ ID NO: 6之M34、SEQ ID NO: 13之M253、M359，或重鏈色胺酸：SEQ ID NO: 7之W52、SEQ ID NO: 5之W90或SEQ ID NO: 8之W102之一或多個處的氧化。
  20. 如請求項17至19中任一項所述之組成物，其中該氧化衍生物包含位於任一或兩個重鏈中之重鏈甲硫胺酸：SEQ ID NO: 6之M34、SEQ ID NO: 13之M253、M359之一或多個處的氧化，視需要地其中該氧化呈小於約7%的量。
  21. 如請求項17至19中任一項所述之組成物，其中該氧化衍生物包含位於任一或兩個重鏈中之色胺酸：SEQ ID NO: 7之W52、SEQ ID NO: 5之W90或SEQ ID NO: 8之W102之一或多個處的氧化，視需要地其中該氧化呈小於約3%的量。
  22. 如請求項17至21中任一項所述之組成物，其中該組成物中的氧化衍生物之量藉由還原性肽作圖來確定。
  23. 如請求項17至22中任一項所述之組成物，其中該泰派魯單抗和泰派魯單抗衍生物具有比組成物更高的功效和/或耐受性，該組成物包含大於7%的氧化衍生物，其中所述功效包含抑制固定在供體珠粒上的生物素化的TSLPR與固定在受體珠粒上的TSLP-His之結合的能力，或抑制在編碼Stat螢光素酶報告基因的Stat/BaF/HTR細胞表面上表現的TSLPR之結合的能力，Stat螢光素酶報告基因之表現指示TSLP與TSLPR之結合。
  24. 一種組成物，該組成物包含泰派魯單抗和一或多種泰派魯單抗衍生物，其中該一或多種泰派魯單抗衍生物為高分子量（HMW）種類，並且其中該組成物中的HMW種類之量小於約20%，其中泰派魯單抗包含 A) 輕鏈可變結構域，該輕鏈可變結構域包含： (i) SEQ ID NO: 3中列出的輕鏈CDR1胺基酸序列； (ii) SEQ ID NO: 4中列出的輕鏈CDR2胺基酸序列；以及 (iii) SEQ ID NO: 5中列出的輕鏈CDR3胺基酸序列；以及 (B) 重鏈可變結構域，該重鏈可變結構域包含： (i) SEQ ID NO: 6中列出的重鏈CDR1胺基酸序列； (ii) SEQ ID NO: 7中列出的重鏈CDR2胺基酸序列；以及 (iii) SEQ ID NO: 8中列出的重鏈CDR3胺基酸序列。
  25. 如請求項24所述之組成物，其中該組成物中的HMW種類之量為約1.7%或更少。
  26. 如請求項24或25所述之組成物，其中該組成物中的HMW種類之量為約1.4%或更少。
  27. 如請求項24至26中任一項所述之組成物，其中該HMW種類包含泰派魯單抗之二聚物。
  28. 如請求項24至27中任一項所述之組成物，其中該組成物中的HMW種類之量藉由尺寸排阻高效液相層析（SE-HPLC）來確定。
  29. 如請求項28所述之組成物，其中該SE-HPLC為SE-Ultra HPLC，其中使用流動相等度分離該蛋白質，該流動相包含100 mM磷酸鈉、250 mM氯化鈉，pH 6.8。
  30. 如請求項24至29中任一項所述之組成物，其中該泰派魯單抗和泰派魯單抗衍生物具有比組成物更高的功效和/或耐受性，該組成物包含大於20%的HWM種類，其中所述功效包含抑制固定在供體珠粒上的生物素化的TSLPR與固定在受體珠粒上的TSLP-His之結合的能力，或抑制在編碼Stat螢光素酶報告基因的Stat/BaF/HTR細胞表面上表現的TSLPR之結合的能力，Stat螢光素酶報告基因之表現指示TSLP與TSLPR之結合。
  31. 一種組成物，該組成物包含泰派魯單抗和一或多種泰派魯單抗衍生物，其中該一或多種泰派魯單抗衍生物包含泰派魯單抗片段，並且其中該組成物中的泰派魯單抗片段之量小於約15%，其中泰派魯單抗包含 (A) 輕鏈可變結構域，該輕鏈可變結構域包含： (i) SEQ ID NO: 3中列出的輕鏈CDR1胺基酸序列； (ii) SEQ ID NO: 4中列出的輕鏈CDR2胺基酸序列；以及 (iii) SEQ ID NO: 5中列出的輕鏈CDR3胺基酸序列；以及 (B) 重鏈可變結構域，該重鏈可變結構域包含： (i) SEQ ID NO: 6中列出的重鏈CDR1胺基酸序列； (ii) SEQ ID NO: 7中列出的重鏈CDR2胺基酸序列，以及 (iii) SEQ ID NO: 8中列出的重鏈CDR3胺基酸序列。
  32. 如請求項31所述之組成物，其中該泰派魯單抗片段為低分子量（LMW）或中等分子量（MMW）種類或其組合。
  33. 如請求項31或32所述之組成物，其中該等片段為小於約25 kD的低分子量種類。
  34. 如請求項31或32所述之組成物，其中該等片段為具有約25至50 kD的分子量之中等分子量種類。
  35. 如請求項31至34中任一項所述之組成物，其中該組成物中的泰派魯單抗片段之量藉由還原性的具有十二烷基硫酸鈉的毛細管電泳（rCE-SDS）來確定。
  36. 如請求項31至35中任一項所述之組成物，其中該泰派魯單抗和泰派魯單抗衍生物具有比組成物更高的功效和/或耐受性，該組成物包含大於15%的泰派魯單抗片段，其中所述功效包含抑制固定在供體珠粒上的生物素化的TSLPR與固定在受體珠粒上的TSLP-His之結合的能力，或抑制在編碼Stat螢光素酶報告基因的Stat/BaF/HTR細胞表面上表現的TSLPR之結合的能力，Stat螢光素酶報告基因之表現指示TSLP與TSLPR之結合。
  37. 一種組成物，該組成物包含泰派魯單抗和一或多種泰派魯單抗衍生物，其中該一或多種泰派魯單抗衍生物包含糖基化衍生物，並且其中該組成物中的糖基化衍生物之量小於約40%，其中泰派魯單抗包含 (A) 輕鏈可變結構域，該輕鏈可變結構域包含： (i) SEQ ID NO: 3中列出的輕鏈CDR1胺基酸序列； (ii) SEQ ID NO: 4中列出的輕鏈CDR2胺基酸序列；以及 (iii) SEQ ID NO: 5中列出的輕鏈CDR3胺基酸序列；以及 (B) 重鏈可變結構域，該重鏈可變結構域包含： (i) SEQ ID NO: 6中列出的重鏈CDR1胺基酸序列； (ii) SEQ ID NO: 7中列出的重鏈CDR2胺基酸序列，以及 (iii) SEQ ID NO: 8中列出的重鏈CDR3胺基酸序列。
  38. 如請求項37所述之組成物，其中該組成物中的糖基化衍生物之量小於約35%、約30%、約25%、約20%、約15%、約10%或約5%。
  39. 如請求項37或38所述之組成物，其中該糖基化衍生物包含在一或兩個重鏈上的SEQ ID NO: 13之殘基N298上的泰派魯單抗糖基化之改變。
  40. 如請求項37至39中任一項所述之組成物，其中該糖基化衍生物包含泰派魯單抗對高甘露糖部分或半乳糖基部分的非岩藻糖基化或糖基化之改變。
  41. 如請求項37至40中任一項所述之組成物，其中該糖基化衍生物包含小於約5%的量之非岩藻糖基化衍生物。
  42. 如請求項37至40中任一項所述之組成物，其中該糖基化衍生物包含小於約30%的量之半乳糖基部分。
  43. 如請求項37至40中任一項所述之組成物，其中該糖基化衍生物包含小於約5%的量之高甘露糖部分。
  44. 如請求項37至40或43中任一項所述之組成物，其中該泰派魯單抗和泰派魯單抗衍生物包含不超過約25%、約23%、約21%、約19%、約17%、約15%、約13%、約11%、約8%或約5%的高甘露糖糖基化衍生物。
  45. 如請求項37至40、43或43A中任一項所述之組成物，其中該泰派魯單抗和泰派魯單抗衍生物具有比具有大於25%的高甘露糖糖基化衍生物之組成物更低的清除率和/或更長的半衰期。
  46. 如請求項37至45中任一項所述之組成物，其中該組成物中的糖基化衍生物之量藉由聚糖作圖法來確定。
  47. 如請求項37至46中任一項所述之組成物，其中 (a) 該泰派魯單抗和泰派魯單抗衍生物具有比組成物更高的功效和/或耐受性，該組成物包含大於40%的糖基化衍生物，其中所述功效包含抑制固定在供體珠粒上的生物素化的TSLPR與固定在受體珠粒上的TSLP-His之結合的能力，或抑制在編碼Stat螢光素酶報告基因的Stat/BaF/HTR細胞表面上表現的TSLPR之結合的能力，Stat螢光素酶報告基因之表現指示TSLP與TSLPR之結合；或 (b) 該泰派魯單抗和泰派魯單抗衍生物包含不超過15%的高甘露糖，並且具有比具有大於15%的高甘露糖之組成物更低的清除率。
  48. 如請求項37至46中任一項所述之組成物，其中 (a) 該泰派魯單抗和泰派魯單抗衍生物具有比組成物更高的功效和/或耐受性，該組成物包含大於40%的糖基化衍生物，其中所述功效包含抑制固定在供體珠粒上的生物素化的TSLPR與固定在受體珠粒上的TSLP-His之結合的能力，或抑制在編碼Stat螢光素酶報告基因的Stat/BaF/HTR細胞表面上表現的TSLPR之結合的能力，Stat螢光素酶報告基因之表現指示TSLP與TSLPR之結合；或 (b) 該泰派魯單抗和泰派魯單抗衍生物包含不超過25%的高甘露糖，並且具有比具有大於25%的高甘露糖之組成物更低的清除率。
  49. 一種組成物，該組成物包含泰派魯單抗和一或多種其二硫化物同種型衍生物，其中該一或多種二硫化物同種型衍生物包含IgG2-B同種型和或IgG2-A/B同種型，並且其中該組成物中的二硫化物同種型衍生物之量小於約75%。
  50. 如請求項49所述之組成物，其中該一或多種二硫化物同種型衍生物包含IgG2-B同種型，並且其中該組成物中的二硫化物衍生物之量小於約20%。
  51. 如請求項50所述之組成物，其中該IgG2-B同種型之量小於約5%。
  52. 如請求項49所述之組成物，其中該一或多種二硫化物同種型衍生物包含IgG2-A/B同種型。
  53. 如請求項52所述之組成物，其中該組成物中的IgG2-A/B同種型之量小於約75%。
  54. 如請求項52所述之組成物，其中該組成物中的IgG2-A/B同種型之量為約38%至約43%。
  55. 如請求項48至54中任一項所述之組成物，其中該組成物中的二硫化物同種型衍生物之量藉由非還原性逆相高效液相層析（RP-HPLC）來確定。
  56. 一種組成物，該組成物包含泰派魯單抗和一或多種泰派魯單抗衍生物，其中該等泰派魯單抗衍生物包含異構化衍生物、脫醯胺化衍生物、氧化衍生物、糖基化衍生物、HMW種類、片段、二硫化物同種型衍生物或其組合，其中該組成物具有以下特徵之一或多種： (a) 該組成物中的異構化衍生物之量為約30%或更少，如藉由還原性肽作圖測量的； (b) 該組成物中的脫醯胺化衍生物之量為約15%或更少，如藉由肽作圖測量的； (c) 該組成物中的氧化衍生物之量為約7%或更少，如藉由還原性肽作圖測量的； (d) 該組成物中的糖基化衍生物之量為約40%或更少，如藉由聚糖作圖測量的； (e) 該組成物中的二硫化物同種型衍生物之量為約75%或更少，如藉由非還原性逆相高效液相層析（RP-HPLC）測量的； (f) 該組成物中的HMW種類之量為約20%或更少，如藉由SE-HPLC測量的；和/或 (g) 該組成物中的片段之量為約15%或更少，如藉由rCE-SDS測量的。
  57. 如請求項49至56中任一項所述之組成物，其中泰派魯單抗包含 (A) 輕鏈可變結構域，該輕鏈可變結構域包含： (i) SEQ ID NO: 3中列出的輕鏈CDR1胺基酸序列； (ii) SEQ ID NO: 4中列出的輕鏈CDR2胺基酸序列；以及 (iii) SEQ ID NO: 5中列出的輕鏈CDR3胺基酸序列；以及 (B) 重鏈可變結構域，該重鏈可變結構域包含： (i) SEQ ID NO: 6中列出的重鏈CDR1胺基酸序列； (ii) SEQ ID NO: 7中列出的重鏈CDR2胺基酸序列，以及 (iii) SEQ ID NO: 8中列出的重鏈CDR3胺基酸序列。
  58. 如請求項1至57中任一項所述之組成物，其中泰派魯單抗包含SEQ ID NO: 10中列出的重鏈胺基酸序列和SEQ ID NO: 12中列出的輕鏈胺基酸序列。
  59. 一種藥物配製物，該藥物配製物包含如請求項1至58中任一項所述之組成物和一或多種藥學上可接受的賦形劑。
  60. 一種用於治療受試者之炎性疾病之方法，該方法包括向該受試者投與治療有效量的如請求項1至58中任一項所述之組成物或如請求項59所述之藥物配製物。
  61. 如請求項60所述之方法，其中該炎性疾病選自由以下組成之群組：氣喘、異位性皮膚炎、慢性阻塞性肺病（COPD）、嗜酸性球性食道炎（EoE）、鼻息肉、慢性自發性蕁麻疹、Ig驅動的疾病、IgA腎病、狼瘡性腎炎、嗜酸性球性胃炎、無鼻息肉的慢性鼻竇炎和特發性肺纖維化（IPF）。
  62. 如請求項60或61所述之方法，該方法包括以每2週或每4週的間隔投與該組成物。
  63. 如請求項60至62中任一項所述之方法，其中將該組成物投與至少4個月、6個月、9個月、1年或更長時間的時期。
  64. 如請求項60至63中任一項所述之方法，其中該氣喘係重度氣喘。
  65. 如請求項60至64中任一項所述之方法，其中該氣喘係嗜酸性球性氣喘或非嗜酸性球性氣喘。
  66. 如請求項60-65中任一項所述之方法，其中該投與經由載藥注射器或自動注射器進行。
  67. 如請求項66所述之方法，其中該自動注射器為Ypsomed YpsoMate®裝置。
  68. 如請求項1至58中任一項所述之泰派魯單抗組成物或如請求項59所述之藥物組成物，用於在治療受試者之炎性疾病中使用。
  69. 如請求項68所述之組成物，其中該炎性疾病選自由以下組成之群組：氣喘、異位性皮膚炎、慢性阻塞性肺病（COPD）、嗜酸性球性食道炎（EoE）、鼻息肉、慢性自發性蕁麻疹、Ig驅動的疾病、IgA腎病、狼瘡性腎炎、嗜酸性球性胃炎、無鼻息肉的慢性鼻竇炎和特發性肺纖維化（IPF）。
  70. 如請求項1至58中任一項所述之泰派魯單抗組成物或如請求項59所述之藥物組成物在製備用於治療受試者之炎性疾病的藥物中之用途。
  71. 如請求項68至70中任一項所述之組成物或用途，其中該投與經由載藥注射器或自動注射器進行。
  72. 如請求項71的組成物或用途，其中該自動注射器為Ypsomed YpsoMate®裝置。
  73. 如請求項68至72中任一項所述之組成物或用途，其中該炎性疾病選自由以下組成之群組：氣喘、異位性皮膚炎、慢性阻塞性肺病（COPD）、嗜酸性球性食道炎（EoE）、鼻息肉、慢性自發性蕁麻疹、Ig驅動的疾病、IgA腎病、狼瘡性腎炎、嗜酸性球性胃炎、無鼻息肉的慢性鼻竇炎和特發性肺纖維化（IPF）。
  74. 一種用於評估泰派魯單抗組成物的品質之方法，該方法包括： 獲得含有泰派魯單抗和一或多種泰派魯單抗衍生物之泰派魯單抗組成物； 測量該組成物中之一或多種泰派魯單抗衍生物之量，其中該等泰派魯單抗衍生物包含異構化衍生物、脫醯胺化衍生物、氧化衍生物、糖基化衍生物、二硫化物同種型衍生物、HMW種類、片段或其組合； 將一或多種泰派魯單抗衍生物之測量的量與預先確定的參考標準進行比較；並且 如果該比較表明滿足該預先確定的參考標準，則製備該泰派魯單抗組成物之藥物配製物或藥物產品。
  75. 如請求項74所述之方法，其中測量異構化衍生物之量，並且該預先確定的參考標準為約30%或更少。
  76. 如請求項74或75所述之方法，其中在該泰派魯單抗組成物中的異構化之量藉由還原性肽作圖測量。
  77. 如請求項74所述之方法，其中測量脫醯胺化衍生物之量，並且該預先確定的參考標準為約15%或更少。
  78. 如請求項74或77所述之方法，其中在該泰派魯單抗組成物中的脫醯胺化之量藉由還原性肽作圖測量。
  79. 如請求項74所述之方法，其中測量氧化衍生物之量，並且該預先確定的參考標準為約7%或更少。
  80. 如請求項74或79所述之方法，其中在該泰派魯單抗組成物中的氧化之量藉由還原性肽作圖測量。
  81. 如請求項74所述之方法，其中測量糖基化衍生物之量，並且該預先確定的參考標準為約40%或更少。
  82. 如請求項74或81所述之方法，其中在該泰派魯單抗組成物中的糖基化之量藉由聚糖作圖測量。
  83. 如請求項74所述之方法，其中測量二硫化物同種型衍生物之量，並且該預先確定的參考標準為約75%或更少。
  84. 如請求項74或83所述之方法，其中在該泰派魯單抗組成物中的二硫化物同種型之量藉由非還原性逆相高效液相層析（RP-HPLC）測量。
  85. 如請求項74所述之方法，其中測量HMW種類之量，並且該預先確定的參考標準為約20%或更少。
  86. 如請求項74或85所述之方法，其中HMW種類之量藉由SE-HPLC測量。
  87. 如請求項74所述之方法，其中測量片段之量，並且該預先確定的參考標準為約15%或更少。
  88. 如請求項74或87所述之方法，其中在該泰派魯單抗組成物中的片段之量藉由rCE-SDS測量。
  89. 如請求項74至88中任一項所述之方法，其中該泰派魯單抗組成物獲得自中國倉鼠卵巢（CHO）細胞系，該細胞系表現編碼SEQ ID NO: 10的重鏈之核酸和編碼SEQ ID NO: 12的輕鏈之核酸。
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