TW202233644A - 用於獲得水解酵素活性率降低的醫藥組成物之純化平台 - Google Patents

用於獲得水解酵素活性率降低的醫藥組成物之純化平台 Download PDF

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馬克 王
史蒂芬 伍
雲高 李
史蒂芬妮 古
威廉 歐達伊爾
艾琳 杜納斯
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Abstract

本揭示提供包含深層過濾步驟及/或疏水性交互作用層析 (HIC) 步驟及/或 MM-HIC/IEX 層析步驟之純化平台，且可用於提供降低獲自該等純化平台之組成物的水解酵素活性率之方法。本文亦揭示使用本文所述的該等純化平台之方法，以及獲自該等純化平台的組成物，諸如醫藥組成物。

Description

用於獲得水解酵素活性率降低的醫藥組成物之純化平台
本揭示涉及用於獲得具有降低的水解酵素活性率的組成物諸如醫藥組成物的純化平台。本文還揭示了使用本文所述的純化平台和由其獲得的組成物的方法。
從宿主細胞培養物中產生的生物治療產品，諸如抗體，需要純化以去除宿主細胞蛋白質和其他可能影響例如產品質量和治療效果的不純物。當前的純化方法可能無法去除所有宿主細胞蛋白質和不純物，包括宿主細胞水解酵素。因此，純化標的物中殘留宿主細胞蛋白質和不純物會影響純化標的物本身以及其他添加物，例如，為調配目的而添加的組分，諸如界面活性劑。因此，需要改進的方法來純化由宿主細胞培養物產生的用於醫藥用途的產品。
在本文中引用的所有參考文獻，包括專利申請和出版物，是藉由引用方式全部併入本文。
在一些方面，提供了一種降低從純化平台獲得的組成物的水解酵素活性率的方法，該方法包含使樣品經歷純化平台，該純化平台包含：捕獲步驟；一個或多個離子交換 (IEX) 層析步驟；和深層過濾步驟，從而與沒有深層過濾步驟的樣品純化相比，降低了組成物的水解酵素活性率。
在一些實施例中，一個或多個 IEX 層析步驟中的每一個選自由以下所組成之群組：陰離子交換 (AEX) 層析步驟、陽離子交換 (CEX) 層析步驟和多模式離子交換 (MMIEX) 層析步驟。在一些實施例中，MMIEX 層析步驟包含多模式陽離子交換/陰離子交換 (MM-AEX/CEX) 層析步驟。
在一些實施例中，該方法進一步包含病毒過濾步驟。
在一些實施例中，該方法進一步包含超過濾/透析過濾 (UF/DF) 步驟。
在一些實施例中，純化平台依序包含：捕獲步驟； CEX 層析步驟； AEX 層析步驟；深層過濾步驟；病毒過濾步驟；和 UF/DF 步驟。
在一些實施例中，深層過濾步驟包含經由深層過濾器之處理，並且其中深層過濾器是 X0SP 深層過濾器、C0SP 深層過濾器、D0SP 深層過濾器或 EMPHAZE™ 深層過濾器。
在一些實施例中，該方法進一步包含 HIC 步驟，該步驟包含經由 Sartobind®phenyl 之處理。
在其他方面，提供了一種降低從純化平台獲得的組成物的水解酵素活性率的方法，該方法包含使樣品經歷純化平台，該純化平台包含：捕獲步驟；多模式疏水性交互作用/離子交換 (MM-HIC/IEX) 層析步驟；和疏水性交互作用層析 (HIC) 步驟，從而與沒有 HIC 步驟及/或 MM-HIC/IEX 層析步驟的樣品純化相比，降低了組成物的水解酵素活性率。
在一些實施例中，MM-HIC/IEX 層析步驟包含經由 MM-HIC/IEX 層析介質之處理並且在約 5.5 至約 8 的 pH 之條件下執行。在一些實施例中，MM-HIC/IEX 層析步驟是多模式疏水性交互作用/陰離子交換 (MM-HIC/AEX) 層析步驟。在一些實施例中，MM-HIC/AEX 層析步驟包含經由 Capto™ Adhere 或 Capto™ Adhere ImpRes 之處理。在一些實施例中，MM-HIC/IEX 層析步驟是多模式疏水性交互作用/陽離子交換 (MM-HIC/CEX) 層析步驟。在一些實施例中，MM-HIC/CEX 層析步驟包含 Capto™ MMC 或 Capto™ MMC ImpRes。
在一些實施例中，純化平台依序包含：捕獲步驟；MM-HIC/IEX 層析步驟；和 HIC 步驟。
在一些實施例中，該方法進一步包含病毒過濾步驟。
在一些實施例中，該方法進一步包含超過濾/透析過濾 (UF/DF) 步驟。
在一些實施例中，純化平台依序包含：捕獲步驟；MM-HIC/AEX 層析步驟；HIC 步驟；病毒過濾步驟；和 UF/DF 步驟。
在一些實施例中，該方法進一步包含深層過濾步驟。
在一些實施例中，純化平台依序包含：捕獲步驟；深層過濾步驟；MM-HIC/AEX 層析步驟；和 HIC 步驟。在一些實施例中，深層過濾步驟包含經由深層過濾器之處理，並且其中深層過濾器是 X0SP 深層過濾器。在一些實施例中，深層過濾步驟包含經由深層過濾器之處理，並且深層過濾器是 EMPHAZE™ 深層過濾器。
在一些實施例中，深層過濾器結合 MM-HIC/AEX 層析步驟用為負載過濾器。
在一些實施例中，MM-HIC/AEX 層析步驟包含經由 Capto™ Adhere 或 Capto™ Adhere ImpRes 之處理。
在一些實施例中，純化平台依序包含：捕獲步驟；MM-HIC/AEX 層析步驟；深層過濾步驟；和 HIC 步驟。在一些實施例中，深層過濾步驟包含經由深層過濾器之處理，並且其中深層過濾器是 X0SP 深層過濾器、C0SP 深層過濾器或 D0SP 深層過濾器。在一些實施例中，深層過濾步驟包含經由深層過濾器之處理，並且深層過濾器是 EMPHAZE™ 深層過濾器。在一些實施例中，MM-HIC/AEX 層析步驟包含經由 Capto™ Adhere 或 Capto™ Adhere ImpRes 之處理。
在其他方面，提供了一種降低從純化平台獲得的組成物的水解酵素活性率的方法，該方法包含使樣品經歷純化平台，該純化平台包含：捕獲步驟；一個或多個離子交換 (IEX) 層析步驟；和疏水性交互作用層析 (HIC) 步驟，從而與沒有 HIC 步驟的樣品純化相比，降低了組成物的水解酵素活性率。
在一些實施例中，一個或多個 IEX 層析步驟是陽離子交換 (CEX) 層析步驟。
在一些實施例中，該方法進一步包含病毒過濾步驟。
在一些實施例中，該方法進一步包含超過濾/透析過濾 (UF/DF) 步驟。
在一些實施例中，該方法進一步包含在 UF/DF 步驟之前的任何階段執行的深層過濾步驟。
在一些實施例中，純化平台依序包含：捕獲步驟；CEX 層析步驟；HIC 步驟；病毒過濾步驟；和 UF/DF 步驟。
在其他方面，提供了一種降低從純化平台獲得的組成物的水解酵素活性率的方法，該方法包含使樣品經歷純化平台，該純化平台包含：一個或多個離子交換 (IEX) 層析步驟；疏水性交互作用層析 (HIC) 步驟；和深層過濾步驟，從而與沒有 HIC 步驟或深層過濾步驟的樣品純化相比，降低了組成物的水解酵素活性率。在一些實施例中，減少是與沒有 HIC 和深層過濾步驟的樣品的純化相比。
在一些實施例中，一個或多個 IEX 層析步驟中的每一個選自由以下所組成之群組：陰離子交換 (AEX) 層析步驟、陽離子交換 (CEX) 層析步驟和多模式離子交換 (MMIEX) 層析步驟。在一些實施例中，MMIEX 層析步驟包含多模式陽離子交換/陰離子交換 (MM-AEX/CEX) 層析步驟。
在一些實施例中，該方法進一步包含超過濾/透析過濾 (UF/DF) 步驟。
在一些實施例中，純化平台依序包含：CEX 層析步驟；HIC 步驟；MMIEX 層析步驟；AEX 層析步驟；深層過濾步驟；和 UF/DF 步驟。
在其他方面，提供了一種降低從純化平台獲得的組成物的水解酵素活性率的方法，該方法包含使樣品經歷純化平台，該純化平台包含：捕獲步驟；一個或多個離子交換 (IEX) 層析步驟；多模式疏水性交互作用/離子交換 (MM-HIC/IEX) 層析步驟；以及以下之一者或兩者：疏水性交互作用層析 (HIC) 步驟；和深層過濾步驟，從而與沒有 HIC 步驟或深層過濾步驟的樣品純化相比，降低了組成物的水解酵素活性率。
在一些實施例中，減少是與沒有 HIC 和深層過濾步驟的樣品的純化相比。
在一些實施例中，該方法進一步包含病毒過濾步驟。
在一些實施例中，該方法進一步包含超過濾/透析過濾 (UF/DF) 步驟。
在一些實施例中，深層過濾步驟作為負載過濾器而執行以用於 MM-HIC/IEX 層析步驟、作為負載過濾器而執行以用於 HIC 步驟，或接續 HIC 步驟而執行。
在一些實施例中，一個或多個 IEX 層析步驟中的每一個選自由以下所組成之群組：陽離子交換 (CEX) 層析步驟、陰離子交換 (AEX) 層析步驟和多模式離子交換 (MMIEX) 層析步驟。
在一些實施例中，MM-HIC/IEX 層析步驟是多模式疏水性交互作用/陰離子交換 (MM-HIC/AEX) 層析步驟。在一些實施例中，MM-HIC/AEX 層析步驟包含經由 Capto™ Adhere 或 Capto™ Adhere ImpRes 之處理。
在一些實施例中，捕獲步驟包含經由親和力層析之處理。在一些實施例中，捕獲步驟以結合及洗提模式執行。在一些實施例中，親和力層析選自由以下所組成之群組：蛋白質 A 層析、蛋白質 G 層析、蛋白質 A/G 層析、FcXL 層析、蛋白質 XL 層析、κ 層析和 κXL 層析。
在一些實施例中，深層過濾步驟包含經由深層過濾器之處理。在一些實施例中，深層過濾器用為負載過濾器。在一些實施例中，深層過濾器包含受質，該受質包含矽藻土組成物、二氧化矽組成物、纖維素纖維、聚合物纖維、黏合樹脂和灰分組成物中的一種或多種。在一些實施例中，深層過濾器的受質的至少一部分包含表面改質。在一些實施例中，表面改質是四級胺表面改質（諸如四級銨，Q，功能性）、胍表面改質、陽離子表面改質和陰離子表面改質中的一種或多種。在一些實施例中，深層過濾器選自由以下所組成之群組：X0SP 深層過濾器、D0SP 深層過濾器、C0SP 深層過濾器、EMPHAZE™ 深層過濾器、PDD1 深層過濾器、PDE1 深層過濾器、PDH5 深層過濾器、ZETA PLUS™ 120ZA 深層過濾器、ZETA PLUS™ 120ZB 深層過濾器、ZETA PLUS™ DELI 深層過濾器、ZETA PLUS™ DELP 深層過濾器和 Polisher ST（耐鹽）深層過濾器。在一些實施例中，深層過濾器是 X0SP 深層過濾器、D0SP 深層過濾器或 C0SP 深層過濾器，並且其中經由深層過濾器之處理在約 4.5 至約 8 的 pH 之條件下執行。在一些實施例中，深層過濾器是 EMPHAZE™ 深層過濾器，並且其中經由深層過濾器之處理在約 7 至約 9.5 的 pH 之條件下執行。在一些實施例中，深層過濾器是 Polisher ST 深層過濾器，並且其中經由深層過濾器之處理在約 5 至約 9 的 pH 之條件下執行。
在一些實施例中，HIC 步驟包含經由 HIC 膜或 HIC 管柱之處理。在一些實施例中，經由 HIC 膜或 HIC 管柱之處理使用低鹽濃度執行。在一些實施例中，經由 HIC 膜或 HIC 管柱之處理以順流模式執行。在一些實施例中，HIC 膜或 HIC 管柱包含受質，該受質包含醚基、乙基、丙基、異丙基、丁基、己基、辛基和苯基中的一種或多種。在一些實施例中，HIC 膜或 HIC 管柱選自由以下所組成之群組：Bakerbond WP HI-Propyl™、Phenyl Sepharose® Fast Flow (Phenyl-SFF)、Phenyl Sepharose® Fast Flow Hi-sub (Phenyl-SFF HS)、Toyopearl® Hexyl-650C、Toyopearl® Hexyl-650M、Toyopearl® Hexyl-650S、Poros™ Benzyl Ultra 和 Sartobind® phenyl。在一些實施例中，經由 HIC 膜或 HIC 管柱之處理在約 4.5 至約 7 的 pH 之條件下執行。
在一些實施例中，一個或多個 IEX 層析步驟中的每一個包含經由 IEX 層析膜或 IEX 層析管柱之處理。在一些實施例中，IEX 層析膜或 IEX 層析管柱選自由以下所組成之群組：SPSFF、QSFF、SPXL、Streamline™ SPXL、ABx™、Poros™ XS、Poros™ 50HS、DEAE、DMAE、TMAE、QAE 及 MEP-Hypercel™。
在一些實施例中，純化平台用於從樣品中純化標的物，並且其中樣品包含標的物和一種或多種宿主細胞不純物。在一些實施例中，標的物包含多肽。在一些實施例中，標的物是抗體部分。在一些實施例中，抗體部分是單株抗體。在一些實施例中，抗體部分是人類抗體、人源化抗體或嵌合抗體。在一些實施例中，抗體部分選自由以下所組成之群組：抗 TAU 抗體、抗 TGFβ3 抗體、抗 VEGF-A 抗體、抗 CD20 抗體、抗 CD40 抗體、抗 HER2 抗體、抗 IL6 抗體、抗 IgE 抗體、抗 IL13 抗體、抗 TIGIT 抗體、抗 PD-L1 抗體、抗 VEGF-A/ANG2 抗體、抗 CD79b 抗體、抗 ST2 抗體、抗因子 D 抗體、抗因子 IX 抗體、抗因子 X 抗體、抗 aβ 抗體、抗 CEA 抗體、抗 CEA/CD3 抗體、抗 CD20/CD3 抗體、抗 FcRH5/CD3 抗體、抗 Her2/CD3 抗體、抗 FGFR1/KLB 抗體、FAP-4-1 BBL 融合蛋白、FAP-IL2v 融合蛋白和 TYRP1 TCB 抗體。在一些實施例中，抗體部分選自由以下所組成之群組：奧瑞珠單抗 (ocrelizumab)、帕妥珠單抗 (pertuzumab)、蘭尼單抗 (ranibizumab)、曲妥珠單抗 (trastuzumab)、托珠單抗 (tocilizumab)、法利昔單抗 (faricimab)、帕羅托珠單抗 (polatuzumab)、甘特珠單抗 (gantenerumab)、賽必妥單抗 (cibisatamab)、克瑞珠單抗 (crenezumab)、莫蘇尼妥珠單抗 (mosunetuzumab)、替瑞利尤單抗 (tiragolumab)、貝伐珠單抗 (bevacizumab)、利妥昔單抗 (rituximab)、阿替利珠單抗 (atezolizumab)、阿托珠單抗 (obinutuzumab)、蘭帕利珠單抗 (lampalizumab)、奧馬珠單抗 (omalizumab)、蘭尼單抗 (ranibizumab)、艾美賽珠單抗 (emicizumab)、塞魯單抗 (selicrelumab)、prasinezumab、RO6874281 及 RO7122290。
在一些實施例中，一種或多種宿主細胞不純物包含宿主細胞蛋白質。在一些實施例中，宿主細胞蛋白質是水解酵素。在一些實施例中，水解酵素是脂肪酶、酯酶、硫酯酶、磷脂酶、羧酸酯酶、水解酶、角質酶或神經醯胺酶。
在一些實施例中，樣品包含宿主細胞或源自其的組分。在一些實施例中，樣品是細胞培養樣品或源自細胞培養樣品。在一些實施例中，細胞培養樣品包含宿主細胞，並且其中宿主細胞是中華倉鼠卵巢 (Chinese hamster ovary，CHO) 細胞或大腸桿菌 ( E. coli) 細胞。
在一些實施例中，該方法進一步包含樣品處理步驟。
在一些實施例中，水解酵素活性率的降低為至少約 20%。
在一些實施例中，該方法進一步包含確定組成物的水解酵素活性率。
在一些實施例中，該方法進一步包含確定組成物中一種或多種水解酵素的含量。
在一些實施例中，組成物包含聚山梨醇酯。在一些實施例中，聚山梨醇酯選自由以下所組成之群組：聚山梨醇酯 20、聚山梨醇酯 40、聚山梨醇酯 60 和聚山梨醇酯 80。
在其他方面，提供了從本文所述的方法獲得的醫藥組成物。
在其他方面，提供了包含抗體部分和聚山梨醇酯的經調配之抗體部分組成物，其中該組成物具有降低的聚山梨醇酯水解率，其中該組成物的保存期限超過 12 個月。
在其他方面，提供了包含抗體部分和聚山梨醇酯的經調配之抗體部分組成物，其中該組成物具有降低的聚山梨醇酯水解活性率，其中相較於提交衛生主管機關與該經調配之抗體部分組成物有關的文件中所指的保存期限，該組成物的保存期限延長，其中相較於該等文件中所指的保存期限，該保存期限延長了至少 3 個月。
在一些實施例中，聚山梨醇酯水解率降低至少約 20%。
在其他方面，提供了包含抗體部分的經調配之抗體部分組成物，其中經調配之抗體部分組成物具有降解程度減弱的聚山梨醇酯，其中相較於提交衛生主管機關與該經調配之抗體部分組成物有關的文件中所指的降解，該降解程度減弱了至少約 20%。
在其他方面，提供了包含抗體部分和聚山梨醇酯的經調配之抗體部分組成物，其中聚山梨醇酯在液體組成物的儲存期間每年降解 50% 或更少。
在一些實施例中，抗體部分是單株抗體。在一些實施例中，抗體部分是人類抗體、人源化抗體或嵌合抗體。在一些實施例中，抗體選自由以下所組成之群組：抗 TAU 抗體、抗 TGFβ3 抗體、抗 VEGF-A 抗體、抗 CD20 抗體、抗 CD40 抗體、抗 HER2 抗體、抗 IL6 抗體、抗 IgE 抗體、抗 IL13 抗體、抗 TIGIT 抗體、抗 PD-L1 抗體、抗 VEGF-A/ANG2 抗體、抗 CD79b 抗體、抗 ST2 抗體、抗因子 D 抗體、抗因子 IX 抗體、抗因子 X 抗體、抗 aβ 抗體、抗 CEA 抗體、抗 CEA/CD3 抗體、抗 CD20/CD3 抗體、抗 FcRH5/CD3 抗體、抗 Her2/CD3 抗體、抗 FGFR1/KLB 抗體、FAP-4-1 BBL 融合蛋白、FAP-IL2v 融合蛋白和 TYRP1 TCB 抗體。在一些實施例中，抗體部分選自由以下所組成之群組：奧瑞珠單抗、帕妥珠單抗、蘭尼單抗、曲妥珠單抗、托珠單抗、法利昔單抗、帕羅托珠單抗、甘特珠單抗、賽必妥單抗、克瑞珠單抗、莫蘇尼妥珠單抗、替瑞利尤單抗、貝伐珠單抗、利妥昔單抗、阿替利珠單抗、阿托珠單抗、蘭帕利珠單抗、奧馬珠單抗、蘭尼單抗、艾美賽珠單抗、塞魯單抗、prasinezumab、RO6874281 及 RO7122290。
在一些實施例中，聚山梨醇酯選自由以下所組成之群組：聚山梨醇酯 20、聚山梨醇酯 40、聚山梨醇酯 60 和聚山梨醇酯 80。
本領域習知此項技術者將認識到，在本申請揭示之範圍和精神內，若干實施例是可能的。藉由以下實例進一步說明本揭示，其不應將其解釋為將本揭示在範圍或精神上限制於其中描述的具體程序。
相關申請的交叉引用
本案主張 2020 年 10 月 30 日申請的美國臨時申請號 63/108,194 的優先權權益，其內容藉由引用方式全文併入本文。
在一些方面，本申請提供了用於從包含標的物的樣品中純化標的物的方法，該方法包含使樣品經歷本文揭示的純化平台，該純化平台包含一個或多個深層過濾步驟及/或一個或多個疏水性交互作用層析 (HIC) 步驟及/或一個或多個多模式疏水性交互作用/離子交換 (MM-HIC/IEX) 層析步驟。在一些實施例中，純化的標的物用於醫藥組成物。在一些實施例中，標的物是多肽，諸如重組多肽，例如抗體部分。
本揭示至少部分基於非預期的發現，該發現表明與從不具有一個或多個深層過濾步驟及/或一個或多個 HIC 步驟及/或 MM-HIC/IEX 層析步驟的純化平台獲得的組成物相比，包含一個或多個深層過濾步驟及/或一個或多個 HIC 步驟及/或一個或多個 MM-HIC/IEX 層析步驟的純化平台降低了由此獲得的組成物的水解酵素活性率。非預期的發現證明本文所述的純化平台對於純化宿主細胞產生的標的物特別有用。如本文所討論的，某些宿主細胞蛋白質和不純物，包括宿主細胞水解酵素，可能具有與標的物共純化的傾向。此類宿主細胞水解酵素可降解標的物及/或添加到標的物的添加劑，該添加劑用於製備和調配其組成物。從本文所述的純化平台獲得的組成物中水解酵素活性率的經證明之降低確保包括在標的物的組成物中的添加劑，諸如界面活性劑，例如聚山梨醇酯，不會被宿主細胞不純物降解，從而提高了標的物的穩定性和組成物保存期限。
因此在一些方面，本文提供了一種降低從純化平台獲得的組成物的水解酵素活性率的方法，該方法包含使樣品經歷純化平台，該純化平台包含：捕獲步驟；一個或多個離子交換 (IEX) 層析步驟；和深層過濾步驟，從而與沒有深層過濾步驟的樣品純化相比，降低了組成物的水解酵素活性率。
在其他方面，本文提供了一種降低從純化平台獲得的組成物的水解酵素活性率的方法，該方法包含使樣品經歷純化平台，該純化平台包含：捕獲步驟；多模式疏水性交互作用/離子交換 (MM-HIC/IEX) 層析步驟；和疏水性交互作用層析 (HIC) 步驟，從而與沒有 HIC 步驟及/或 MM-HIC/IEX 層析步驟的樣品純化相比，降低了組成物的水解酵素活性率。
在其他方面，本文提供了一種降低從純化平台獲得的組成物的水解酵素活性率的方法，該方法包含使樣品經歷純化平台，該純化平台包含：捕獲步驟；一個或多個離子交換 (IEX) 層析步驟；和疏水性交互作用層析 (HIC) 步驟，從而與沒有 HIC 步驟的樣品純化相比，降低了組成物的水解酵素活性率。
在其他方面，本文提供了一種降低從純化平台獲得的組成物的水解酵素活性率的方法，該方法包含使樣品經歷純化平台，該純化平台包含：一個或多個離子交換 (IEX) 層析步驟；疏水性交互作用層析 (HIC) 步驟；和深層過濾步驟，從而與沒有 HIC 步驟或深層過濾步驟的樣品純化相比，降低了組成物的水解酵素活性率。
在其他方面，本文提供了一種降低從純化平台獲得的組成物的水解酵素活性率的方法，該方法包含使樣品經歷純化平台，該純化平台包含：捕獲步驟；一個或多個離子交換 (IEX) 層析步驟；多模式疏水性交互作用/離子交換 (MM-HIC/IEX) 層析步驟；以及以下之一者或兩者：疏水性交互作用層析 (HIC) 步驟；和深層過濾步驟，從而與沒有 HIC 步驟或深層過濾步驟及/或 MM-HIC/IEX 層析步驟的樣品純化相比，降低了組成物的水解酵素活性率。
在其他方面，本文提供了從本文描述的方法獲得的醫藥組成物。
在其他方面，本文提供了包含抗體部分和聚山梨醇酯的經調配之抗體部分組成物，其中該組成物具有降低的聚山梨醇酯水解率，其中該組成物的保存期限超過 12 個月。
在其他方面，本文提供了包含抗體部分和聚山梨醇酯的經調配之抗體部分組成物，其中該組成物具有降低的聚山梨醇酯水解率，其中相較於提交衛生主管機關與該經調配之抗體部分組成物有關的文件中所指的保存期限，該組成物的保存期限延長，其中相較於該等文件中所指的保存期限，該保存期限延長了至少 3 個月。
在其他方面，本文提供了包含抗體部分的經調配之抗體部分組成物，其中經調配之抗體部分組成物具有降解程度減弱的聚山梨醇酯，其中相較於提交衛生主管機關與該經調配之抗體部分組成物有關的文件中所指的降解，該降解程度減弱了至少約 50%。
在其他方面，本文提供了包含抗體部分和聚山梨醇酯的經調配之抗體部分組成物，其中聚山梨醇酯在液體組成物的儲存期間每年降解 50% 或更少。
本領域技術人員還將理解，在不脫離本揭示的範圍的情況下，可以對本文描述的實施方案的形式和細節進行改變。此外，雖然已經參考各種實施方案描述了各種優點、方面和目的，但是本揭示的範圍不應受此類優點、方面和目的的限制。 I. 定義
出於解釋本說明書之目的，將適用以下定義，且在任何適當的情況下，以單數使用的術語還將包括複數，反之亦然。如果下文示出之任何定義與通過引用併入本文之任何文件相衝突，則所示之定義為準。
術語「抗體部分」包括全長抗體及其抗原結合片段。在一些實施例中，全長抗體包含兩條重鏈和兩條輕鏈。輕鏈和重鏈的可變區負責抗原結合。兩條鏈中的可變區通常含有三個高度可變的環，稱為互補決定區 (CDR)（輕鏈 (LC) CDR，包括 LC-CDR1、LC-CDR2 和 LC-CDR3；重鏈 (HC) CDR，包括 HC-CDR1、HC-CDR2 和 HC-CDR3）。本文揭示的抗體和抗原結合片段的 CDR 邊界可以藉由 Kabat、Chothia 或 Al-Lazikani 的約定來定義或鑑定（Al-Lazikani 1997；Chothia 1985；Chothia 1987；Chothia 1989；Kabat 1987；Kabat 1991）。重鏈或輕鏈的三個 CDR 介於稱為框架區 (FR) 的側翼段之間，其比 CDR 更加高度保守並形成支架以支持高變環。重鏈和輕鏈的恆定區不參與抗原結合，但表現出多種效應子功能。抗體基於其重鏈的恆定區的胺基酸序列進行分類。抗體的五個主要類別或同型是 IgA、IgD、IgE、IgG 和 IgM，其特徵分別是存在 α、δ、ε、γ 和 μ 重鏈。幾個主要的抗體類別被分為亞類，諸如 lgG1（γ1 重鏈）、lgG2（γ2 重鏈）、lgG3（γ3 重鏈）、lgG4（γ4 重鏈）、lgA1（α1 重鏈）或 lgA2（α2 重鏈）。在一些實施例中，抗體部分為嵌合抗體。在一些實施例中，抗體部分為半合成抗體。在一些實施例中，抗體部分為雙抗體。在一些實施例中，抗體部分為人源化抗體。在一些實施例中，抗體部分為多特異性抗體，諸如雙特異性抗體。在一些實施例中，免疫部分連接至融合蛋白。在一些實施例中，抗體部分連接至免疫刺激蛋白，諸如白介素。在一些實施例中，抗體部分與促進穿過血腦屏障進入的蛋白質連接。
如本文所用，術語「抗原結合片段」是指抗體片段，包括例如雙抗體、Fab、Fab'、F(ab')2、Fv 片段、二硫鍵穩定的 Fv 片段（dsFv )、(dsFv)2、雙特異性 dsFv (dsFv-dsFv')、二硫化物穩定的雙抗體 (ds diabody)、單鏈抗體分子 (scFv)、scFv 二聚體（二價雙抗體）、由包含一個或多個 CDR 的抗體的一部分形成的多特異性抗體、駱駝化單域抗體、奈米抗體、域抗體、二價域抗體或結合抗原但不包含完整抗體結構的任何其他抗體片段。抗原結合片段能夠結合親本抗體或親本抗體片段（例如親本 scFv）所結合的相同抗原。在一些實施例中，抗原結合片段可包含移植到來自一種或多種不同人類抗體的框架區的來自特定人類抗體的一個或多個 CDR。
術語「嵌合抗體」是指以下抗體：其中重鏈及/或輕鏈之一部分與源自特定物種或屬於特定抗體種類或子類之抗體之相應序列相同或同源，而鏈之其餘部分與源自另一物種或屬於另一抗體種類或子類之抗體以及該等抗體之片段之相應序列相同或同源，只要其展現本發明的生物活性即可 (參見美國專利第 4,816,567 號；及 Morrison 等人， Proc. Natl. Acad. Sci. USA81:6851-6855 (1984))。
本文所用之術語「多特異性抗體」是指針對至少兩個不同位點 (即不同抗原上之不同抗原決定位或同一抗原上之不同抗原決定位) 具有結合特異性的單株抗體。在某些方面，多特異性抗體具有兩種結合特異性（雙特異性抗體）。在某些實施例中，多特異性抗體具有三種或更多種結合特異性。多特異性抗體可製成全長抗體或抗體片段。
關於抗體或抗體部分的術語「半合成」是指抗體或抗體部分具有一種或多種天然存在的序列以及一種或多種非天然存在的（即合成的）序列。
「Fv」為包含完整抗原識別與結合位點之最小抗體片段。該片段由一個重鏈和一個輕鏈可變區域的二聚體緊密、非共價結合而成。由這兩個結構域的折疊產生六個高變環 (重鏈和輕鏈各 3 個環)，這些環形成用於抗原結合之胺基酸殘基，並賦予抗體以抗原結合特異性。然而，即使單個可變域 (或僅包含對抗原具有特異性之三個 HVR 的 Fv 的一半) 亦具有識別及結合抗原之能力，儘管其親和力低於整個結合位點。
「單鏈 Fv」也簡稱為「sFv」或「scFv」，是包含連接到單一多肽鏈中的 VH 和 VL 抗體域的抗體片段。在一些實施例中，scFv 多肽在 VH 與 VL 結構域之間進一步包含多肽連接子，其使得 scFv 能夠形成用於抗原結合之所需結構。有關 scFv 的綜述，參見 Pluckthun 的 The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994)。
術語「雙抗體 (diabody)」是指藉由構建在 VH 和 VL 結構域之間通常具有短連接子 (諸如約 5 至約 10 個殘基) 的 scFv 片段 (參見前段) 而製備的小抗體片段，使得 V 域的鏈間而非鏈內配對達成，從而產生二價片段，即，具有兩個抗原結合位點的片段。雙特異性雙抗體是兩個「交叉」scFv 片段的異二聚體，其中兩個抗體的 VH 和 VL 結構域存在於不同的多肽鏈上。雙抗體更完整說明於例如下列者：EP 404,097；WO 93/11161；及 Hollinger 等人， Proc. Natl. Acad. Sci. USA90:6444-6448 (1993)。
非人類 (例如，囓齒類動物) 抗體的「人源化」形式是含有衍生自非人類抗體的最小序列的嵌合抗體。針對大多數部分，人源化抗體是人類免疫球蛋白 (接受者抗體)，其中來自接受者的高變區 (HVR) 的殘基被非人類物種 (提供者抗體) (諸如小鼠、大鼠、兔或非人類靈長類動物) 的具有所需抗體特異性、親和力、及能力的高變區之殘基替換。在一些情況下，人類免疫球蛋白的骨架區 (FR) 殘基被相應的非人類殘基取代。此外，人源化抗體可包含未見於接受者抗體或提供者抗體的殘基。這些修飾是進行以進一步改善抗體效能。通常，人源化抗體將包括實質上所有至少一個（且通常兩個）可變域，其中，所有或實質上所有高度變異環對應於非人類免疫球蛋白之高度變異環，並且所有或實質上所有 FR 是人免疫球蛋白序列之 FR。人源化抗體亦視情況將包含免疫球蛋白恆定區 (Fc) 的至少一部分，通常是人類免疫球蛋白的恆定區。關於其他細節，參見 Jones 等人， Nature321:522-525, 1986；Riechmann 等人， Nature332:323-329, 1988；及 Presta, Curr. Op. Struct. Biol.2:593-596, 1992。
術語「包含」、「具有」、「含有」和「包括」以及其他類似形式及其語法等效詞，如本文所用，旨在在含義上是等效的並且是開放式的，即在這些詞中的任何一個之後的一個或多個項目並不意味著是此類一個或多個項目的詳盡列表，或意味著僅限於列出的一個或多個項目。例如，「包含」組分 A、B 和 C 的物品可以由（即，僅含有）組分 A、B 和 C 組成，或者不僅可以含有組分 A、B 和 C，還可以含有一種或多種其他組分。因此，旨在並理解「包含」及其類似形式以及其語法等效詞包括「基本上由……組成」或「由……組成」的實施例的揭示。
在提供數值範圍的情況下，應瞭解，除非上下文另有明確規定，否則在該範圍的上限與下限之間的每個中間值至下限單位之十分之一或該所述範圍中之中間值涵蓋於本揭示內，在規定的範圍中受任何特別排除的限制。在所述範圍包括一個或兩個限值時，排除那些包括的一者或兩者的範圍亦包括在本揭示中。
本文提及「約」值或參數包括 (和描述) 針對該值或參數本身的變化。例如，涉及「約 X」的描述包括對「X」的描述。
如本文所用，包括在所附申請專利範圍中，單數形式「一個」、「或」和「該」包括複數指示物，除非上下文另外明確指出。 II. 純化平台及其步驟
在一些方面，本文提供了設計用於從樣品中純化標的物的純化平台，其中純化平台包含一個或多個深層過濾步驟及/或一個或多個 HIC 步驟及/或一個或多個多模式疏水性交互作用層析/離子交換 (MM-HIC/IEX) 層析步驟。與沒有深層過濾步驟及/或 HIC 步驟及/或一個或多個 MM-HIC/IEX 層析步驟的樣品純化相比，該所述純化平台可用於獲得具有降低的水解酵素活性率的純化組成物。在一些實施例中，純化平台包含深層過濾步驟。在一些實施例中，純化平台包含 HIC 步驟。在一些實施例中，純化平台包含深層過濾步驟和 HIC 步驟。在一些實施例中，純化平台進一步包含一個或多個額外步驟，其中每個步驟選自離子交換 (IEX) 層析步驟、MM-HIC/IEX 層析步驟、捕獲步驟、病毒過濾步驟、超過濾/透析過濾 (UF/DF) 步驟和調節步驟。
在一些實施例中，純化平台代表用於在任何程度上從包含標的物的樣品中純化標的物的工作流程。在本揭示的一些實例中，以模塊化方式提供純化平台的組件和特徵及其使用方法的描述。本領域的普通技術人員將容易理解，此類揭示並不意在限制本申請的範圍，並且本揭示涵蓋本文描述所涵蓋的純化平台或其特徵的多種佈置。例如，在一些實施例中，特定類型的層析介質可以容易地理解為藉由將純化平台描述為包含一種層析介質所涵蓋。PCT/US2020/031164 中描述了本文所涵蓋的純化平台的某些特徵和實施例，諸如用於執行其步驟的方法，其在此藉由引用整體併入本文。
此外，本領域的普通技術人員將認識到，本文所述的某些層析介質可具有多於一種不同的特徵來決定介質與組分諸如標的物的交互作用。例如，多模式 HIC/IEX 層析介質可具有配位體，該配位體具有疏水性交互作用特徵和靜電交互作用特徵兩者。以下部分中對層析介質的描述不限制其上可能存在的特徵的類型。 A. 深層過濾步驟
在一些實施例中，本文所述的純化平台包含深層過濾步驟。如本文所述，深層過濾步驟可放置在純化平台內的一個或多個位置中的任一位置。在一些實施例中，本文所述的純化平台包含一個或多個深層過濾步驟，諸如位於進程工作流程的任何階段的 2、3、4 或 5 個深層過濾步驟中的任一個。在一些實施例中，其中純化平台包含多於一個深層過濾步驟，該深層過濾步驟不以直接順序執行，即在深層過濾步驟之間沒有執行純化平台的一些干預步驟。在一些實施例中，其中純化平台包含多於一個深層過濾步驟，該深層過濾步驟相同。在一些實施例中，其中純化平台包含多於一個深層過濾步驟，該深層過濾步驟不同，例如包含使用不同的深層過濾器。
在一些實施例中，深層過濾步驟結合純化平台的另一方面用為負載過濾。在一些實施例中，在「深層過濾步驟」中使用術語「步驟」不排除純化平台，其中該純化平台的深層過濾特徵直接與另一特徵組合，例如深層過濾洗提液直接流向純化平台的後續特徵或步驟。
深層過濾步驟，包括經由深層過濾器之處理所涉及的步驟，在本領域中是已知的。參見，例如，Yigzaw 等人， Biotechnol Prog,22, 2006 和 Liu 等人， mAbs, 2,2010，其據此藉由引用整體併入本文。基於現有技術和本文揭示的內容，本領域普通技術人員將理解執行深層過濾步驟所涉及的組分、條件和試劑。
在一些實施例中，深層過濾步驟包含經由深層過濾器之處理。在一些實施例中，深層過濾器包含能夠保留樣品的部分諸如細胞組分和碎片的多孔過濾介質，其中過濾發生在例如過濾材料的深層內。在一些實施例中，深層過濾器包含合成材料、非合成材料或其組合。在一些實施例中，深層過濾器包含受質，該受質包含矽藻土組成物、二氧化矽組成物、纖維素纖維、聚合物纖維、聚丙烯酸纖維、黏合樹脂、合成顆粒、帶離子電荷的樹脂和灰分組成物中的一種或多種。在一些實施例中，深層過濾器包含矽藻土。在一些實施例中，深層過濾器包含陰離子交換介質。在一些實施例中，深層過濾器包含疏水性交互作用介質。在一些實施例中，深層過濾器的受質的至少一部分包含表面改質。在一些實施例中，表面改質是四級胺表面改質（諸如四級銨，Q，功能性）、胍表面改質、陽離子表面改質、陰離子表面改質和疏水改質中的一種或多種。在一些實施例中，表面改質包含具有一個或多個特徵的配位體，該特徵被設計為促進與另一組分諸如標的物的交互作用；此類特徵可包括涉及例如氫鍵、親水性交互作用、疏水性交互作用和離子交互作用（陽離子和陰離子）的部分。
在一些實施例中，深層過濾步驟經組態以在預定的 pH 或其範圍執行，例如，輸入材料具有預定的 pH 或其範圍。在一些實施例中，深層過濾步驟經組態以在例如輸入材料具有約 4.5 至約 9.5，諸如約 4.5 至約 7、約 5 至約 6、約 5 至約 5.5、約 7 至約 9.5、約 4.5 至約 9、約 5 至約 8.5 或約 7.5 至約 8.5 中的任一者的 pH 之條件下執行。在一些實施例中，深層過濾步驟經組態以在例如輸入材料具有至少約 4.5，諸如至少約 4.6、4.7、4.8、4.9、5、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9、9.1、9.2、9.3、9.4 或 9.5 中的任一者的 pH 之條件下執行。在一些實施例中，深層過濾步驟經組態以在例如輸入材料具有小於約 9.5，諸如小於約 9.4、9.3、9.2、9.1、9、8.9、8.8、8.7、8.6、8.5、8.4、8.3、8.2、8.1、8、7.9、7.8、7.7、7.6、7.5、7.4、7.3、7.2、7.1、7、6.9、6.8、6.7、6.6、6.5、6.4、6.3、6.2、6.1、6、5.9、5.8、5.7、5.6、5.5、5.4、5.3、5.2、5.1、5、4.9、4.8、4.7、4.6 或 4.5 中的任一者的 pH 之條件下執行。在一些實施例中，深層過濾步驟經組態以在例如輸入材料具有約 4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9、9.1、9.2、9.3、9.4 或 9.5 中的任一者的 pH 之條件下執行。
在一些實施例中，深層過濾器選自由以下所組成之群組：X0SP 深層過濾器、D0SP 深層過濾器、C0SP 深層過濾器、EMPHAZE™ 深層過濾器、PDD1 深層過濾器、PDE1 深層過濾器、PDH5 深層過濾器、ZETA PLUS™ 120ZA 深層過濾器、ZETA PLUS™ 120ZB 深層過濾器、ZETA PLUS™ DELI 深層過濾器和 ZETA PLUS™ DELP 深層過濾器。
在一些實施例中，深層過濾器包含有或沒有聚丙烯酸纖維的二氧化矽材料，諸如二氧化矽助濾劑。在一些實施例中，深層過濾器包含兩層或更多層過濾介質，其中第一層包含二氧化矽材料，諸如二氧化矽助濾劑，而第二層包含聚丙烯酸纖維，諸如聚丙烯酸纖維紙漿。在一些實施例中，深層過濾器是包含合成材料且不包含矽藻土及/或珍珠岩的深層過濾器。在一些實施例中，深層過濾器是 X0SP 深層過濾器。在一些實施例中，深層過濾器是 D0SP 深層過濾器。在一些實施例中，深層過濾器是 C0SP 深層過濾器。
在一些實施例中，二氧化矽助濾劑是沉澱的二氧化矽助濾劑。在一些實施例中，助濾劑是過濾器的一方面，諸如有助於執行過濾功能的層。在一些實施例中，二氧化矽助濾劑是矽膠助濾劑。在一些實施例中，二氧化矽助濾劑具有在 pH 7 約 50% 電離的矽烷醇。在一些實施例中，二氧化矽助濾劑是矽膠助濾劑，其中在 pH 7 二氧化矽助濾劑的約 50% 的矽烷醇被電離。在一些實施例中，二氧化矽助濾劑從二氧化矽諸如 SIPERNAT® (Evonik Industries AG) 或矽膠諸如 Kieseigel 60 (Merck KGaA) 沉澱。在一些實施例中，聚丙烯酸纖維是非紡織聚丙烯酸纖維紙漿。在一些實施例中，聚丙烯酸纖維是靜電紡聚丙烯酸奈米纖維。在一些實施例中，聚丙烯酸纖維的原纖化程度與約 10 mL 至約 800 mL 的加拿大標準游離度 (Canadian Standard Freeness，CSF) 相關。在一些實施例中，深層過濾器的孔徑為約 0.05 μm 至約 0.2 μm，諸如約 0.1 μm。在一些實施例中，深層過濾器具有約 0.1 m 2至約 1.5 m 2，諸如約 0.11 m 2、約 0.55 m 2、0.77 m 2或約 1.1 m 2的表面積。在一些實施例中，深層過濾器不包含矽藻土及/或珍珠岩。在一些實施例中，深層過濾器包含兩層過濾介質，其中第一層包含在 pH 7 時具有約 50% 的電離的矽烷醇的二氧化矽助濾劑，而第二層包含具有與約 10 mL 至約 800 mL 的加拿大標準游離度 (CSF) 相關的一定程度的聚丙烯酸纖維之纖維化的聚丙烯酸纖維紙漿，並且其中深層過濾器不包含矽藻土。
在一些實施例中，深層過濾器包含二氧化矽 (諸如二氧化矽助濾劑) 和聚丙烯酸纖維，諸如 X0SP 深層過濾器、C0SP 深層過濾器或 D0SP 深層過濾器，其中該深層過濾步驟經組態以在例如輸入材料具有約 4.5 至約 8、約 5 至約 6、約 5.3 至約 5.7、或約 7.3 至約 7.7 的 pH 之條件下執行。在一些實施例中，深層過濾器包含二氧化矽 (諸如二氧化矽助濾劑) 和聚丙烯酸纖維，諸如 X0SP 深層過濾器、C0SP 深層過濾器或 D0SP 深層過濾器，其中該深層過濾步驟經組態以在例如輸入材料具有至少約 4.5，諸如至少約 4.6、4.7、4.8、4.9、5、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9 或 8 中的任一者的 pH 之條件下執行。在一些實施例中，深層過濾器包含二氧化矽 (諸如二氧化矽助濾劑) 和聚丙烯酸纖維，諸如 X0SP 深層過濾器、C0SP 深層過濾器或 D0SP 深層過濾器，其中該深層過濾步驟經組態以在例如輸入材料具有小於約 8，諸如小於約 7.9、7.8、7.7、7.6、7.5、7.4、7.3、7.2、7.1、7、6.9、6.8、6.7、6.6、6.5、6.4、6.3、6.2、6.1、6、5.9、5.8、5.7、5.6、5.5、5.4、5.3、5.2、5.1、5、4.9、4.8、4.7、4.6 或 4.5 中的任一者的 pH 之條件下執行。在一些實施例中，深層過濾器包含二氧化矽 (諸如二氧化矽助濾劑)和聚丙烯酸纖維，諸如 X0SP 深層過濾器、C0SP 深層過濾器或 D0SP 深層過濾器，其中該深層過濾步驟經組態以在例如輸入材料具有約 4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9 或 8 中的任一者的 pH 之條件下執行。
在一些實施例中，深層過濾器包含水凝膠 Q（四級胺，也稱為四級銨）功能化的非紡織材料和多區微孔膜。在一些實施例中，深層過濾器包含四層，該四層包含水凝膠 Q-功能化非紡織材料和九區微孔膜。在一些實施例中，非紡織材料包含聚丙烯。在一些實施例中，深層過濾器是包含合成材料且不包含矽藻土及/或珍珠岩的深層過濾器。在一些實施例中，深層過濾器是 EMPHAZE™ 深層過濾器，例如，EMPHAZE™ AEX 深層過濾器。
在一些實施例中，深層過濾器包含多個組件或層。在一些實施例中，深層過濾器包含多個層，該多個層包含一個或多個包含陰離子交換 (AEX) 功能性聚合物的層。在一些實施例中，包含 AEX 功能性聚合物的層包含四級銨 (Q)，諸如 Q 功能性水凝膠。在一些實施例中，包含 AEX 功能性聚合物的層包含與非紡織製品締合的四級銨 (Q) 功能性聚合物。在一些實施例中，包含 AEX 功能性聚合物的層包含共價接枝至細纖維聚丙烯非紡織支架的四級銨 (Q) 功能性水凝膠。在一些實施例中，深層過濾器包含多個層，該多個層包含含有多區膜的層，該多區膜包含孔徑為約 0.05 μm 至約 0.3 μm，諸如約 0.22 μm 的九區膜。在一些實施例中，深層過濾器不包含矽藻土。
在一些實施例中，深層過濾器包含水凝膠 Q（四級胺，也稱為四級銨）功能化的非紡織材料，諸如 EMPHAZE™ AEX 深層過濾器，其中該深層過濾步驟經組態以在例如輸入材料具有約 7 至約 9.5，諸如約 7.5 至約 8.5 或約 7.8 至約 8.2 中的任一者的 pH 之條件下執行。在一些實施例中，深層過濾器包含水凝膠 Q（四級胺，也稱為四級銨）功能化的非紡織材料，諸如 EMPHAZE™ AEX 深層過濾器，其中該深層過濾步驟經組態以在例如輸入材料具有至少約 7，諸如至少約 7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9、9.1、9.2、9.3、9.4 或 9.5 中的任一者的 pH 之條件下執行。在一些實施例中，深層過濾器包含水凝膠 Q（四級胺，也稱為四級銨）功能化的非紡織材料，諸如 EMPHAZE™ AEX 深層過濾器，其中該深層過濾步驟經組態以在例如輸入材料具有小於約 9.5，諸如小於約 9.4、9.3、9.2、9.1、9、8.9、8.8、8.7、8.6、8.5、8.4、8.3、8.2、8.1、8、7.9、7.8、7.7、7.6、7.5、7.4、7.3、7.2、7.1 或 7 中的任一者的 pH 之條件下執行。在一些實施例中，深層過濾器包含水凝膠 Q（四級胺，也稱為四級銨）功能化的非紡織材料，諸如 EMPHAZE™ AEX 深層過濾器，其中該深層過濾步驟經組態以在例如輸入材料具有約 7、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9、9.1、9.2、9.3、9.4 或 9.5 中的任一者的 pH 之條件下執行。
在一些實施例中，深層過濾器包含 Q (四級胺，也稱為四級銨)-功能化的非紡織材料和 Gu(胍)-功能化的膜。在一些實施例中，Q-功能化非紡織材料經組態為一層或多層，諸如 1、2 或 3 層中的任一者。在一些實施例中，Gu 功能化膜經組態為一層或多層，諸如 1、2、3 或 4 層中的任一者。在一些實施例中，深層過濾器包含三層 Q 功能化非紡織材料和四層 Gu 功能化膜。在一些實施例中，非紡織材料包含聚丙烯。在一些實施例中，Gu 功能化膜是聚醯胺膜。在一些實施例中，深層過濾器是 Polisher ST 深層過濾器。在一些實施例中，深層過濾器包含 Q-功能化非紡織材料和 Gu-功能化膜，諸如 Polisher ST 深層過濾器，其中使用深層過濾器的深層過濾步驟經組態以在例如輸入材料具有約 4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9 或 9.0 中的任一者的 pH 之條件下執行。
在一些實施例中，深層過濾器包含 Q（四級胺，也稱為四級銨）功能化的非紡織材料和 Gu(胍)-功能化的膜，諸如 Polisher ST 深層過濾器，其中該深層過濾步驟經組態以在例如輸入材料具有約 4.5 至約 9，諸如約 5 至約 8 或約 7 至約 9 中的任一者的 pH 之條件下執行。在一些實施例中，深層過濾器包含 Q (四級胺，也稱為四級銨)-功能化的非紡織材料和 Gu(胍)-功能化的膜，諸如 Polisher ST 深層過濾器，其中該深層過濾步驟經組態以在例如輸入材料具有至少約 4.5，諸如至少約 4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9 或 9.0 中的任一者的 pH 之條件下執行。在一些實施例中，深層過濾器包含 Q (四級胺，也稱為四級銨)-功能化的非紡織材料和 Gu(胍)-功能化的膜，諸如 Polisher ST 深層過濾器，其中該深層過濾步驟經組態以在例如輸入材料具有小於約 9.0，諸如小於約 8.9、8.8、8.7、8.6、8.5、8.4、8.3、8.2、8.1、8、7.9、7.8、7.7、7.6、7.5、7.4、7.3、7.2、7.1、7、6.9、6.8、6.7、6.6、6.5、6.4、6.3、6.2、6.1、6.0、5.9、5.8、5.7、5.6、5.5、5.4、5.3、5.2、5.1、5.0、4.9、4.8、4.7、4.6 或 4.5 中的任一者的 pH 之條件下執行。在一些實施例中，深層過濾器包含 Q (四級胺，也稱為四級銨)-功能化的非紡織材料和 Gu(胍)-功能化的膜，諸如 Polisher ST 深層過濾器，其中該深層過濾步驟經組態以在例如輸入材料具有約 4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9 或 9.0 中的任一者的 pH 之條件下執行。
在一些實施例中，深層過濾器包含纖維素纖維、矽藻土和珍珠岩。在一些實施例中，深層過濾器包含兩層，其中每層包含纖維素過濾器基質，並且其中纖維素過濾器基質浸漬有包含一種或多種矽藻土或珍珠岩的助濾劑。在一些實施例中，深層過濾器包含兩層，其中每層包含纖維素過濾器基質，其中纖維素過濾器基質浸漬有包含一種或多種矽藻土或珍珠岩的助濾劑，並且其中每層進一步包含樹脂黏合劑。在一些實施例中，深層過濾器是 PDD1 深層過濾器。在一些實施例中，深層過濾器是 PDE1 深層過濾器。在一些實施例中，深層過濾器是 PDH5 深層過濾器。 B. HIC 步驟
在一些實施例中，本文所述的純化平台包含 HIC 步驟。如本文所述，HIC 步驟可放置在純化平台內的任何一個或多個位置。在一些實施例中，本文所述的純化平台包含一個或多個 HIC 步驟，諸如位於進程工作流程的任何階段的 2、3、4 或 5 個 HIC 步驟中的任一個。在一些實施例中，其中純化平台包含多於一個 HIC 步驟，HIC 步驟不以直接順序執行，即在 HIC 步驟之間沒有執行純化平台的一些干預步驟。在一些實施例中，其中純化平台包含多於一個 HIC 步驟，HIC 步驟是相同的。在一些實施例中，其中純化平台包含多於一個 HIC 步驟，HIC 步驟是不同的 ，例如，包含使用不同的 HIC 介質。
在一些實施例中，HIC 步驟與純化平台的另一方面結合使用。在一些實施例中，在「HIC 步驟」中使用術語「步驟」不排除純化平台，其中純化平台的 HIC 特徵與另一特徵直接組合，例如洗提液直接流向 HIC 特徵。在一些實施例中，HIC 步驟包含含有 HIC 特徵的層析介質，包括包含 HIC 特徵的多模式層析介質，諸如 MM-HIC/IEX。
在一些實施例中，HIC 步驟包含經由 HIC 介質之處理，諸如 HIC 管柱及/或 HIC 膜。HIC 步驟，包括涉及經由 HIC 介質之處理的步驟，是本領域已知的。參見，例如，Liu 等人 mAbs, 2, 2010，其在此藉由引用整體併入本文。基於現有技術和本文揭示的內容，本領域普通技術人員將理解例如 HIC 步驟所涉及的組分、條件和試劑。
HIC 步驟允許基於 HIC 介質的疏水配位體與樣品組分（例如，標的物或非標的物組分）之間的疏水性交互作用進行分離。例如，在一些實施例中，使用高鹽條件來減少標的物的溶劑化，從而暴露疏水區域，然後該區域可以與 HIC 介質交互作用。在一些實施例中，HIC 介質包含受質，諸如惰性基質，例如交聯瓊脂糖、瓊脂糖凝膠或樹脂基質。在一些實施例中，HIC 介質的至少一部分受質包含含有疏水性配位體的表面改質。在一些實施例中，HIC 配位體是包含約 1 至 18 個碳的配位體。在一些實施例中，HIC 配位體包含 1 個或更多個碳，諸如 2 個或更多個碳、3 個或更多個碳、4 個或更多個碳、5 個或更多個碳、6 個或更多個碳、7 個或更多個碳、8 個或更多個碳、9 個或更多個碳、10 個或更多個碳、11 個或更多個碳、12 個或更多個碳、13 個或更多個碳、14 個或更多個碳、15 個或更多個碳、16 個或更多個碳、17 個或更多個碳、或 18 個或更多個碳中的任一者。在一些實施例中，HIC 配位體包含 1 個碳、2 個碳、3 個碳、4 個碳、5 個碳、6 個碳、7 個碳、8 個碳、9 個碳、10 個碳、11 個碳、12 個碳、13 個碳、14 個碳、15 個碳、16 個碳、17 個碳或 18 個碳中的任一者。在一些實施例中，疏水配位體選自由以下所組成之群組：醚基、甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、叔丁基、己基、辛基、苯基和聚丙二醇基。在一些實施例中，HIC 介質是疏水電荷誘導層析介質。
在一些實施例中，HIC 步驟經組態以在預定的 pH 或其範圍執行，例如，輸入材料具有預定的 pH 或其範圍。在一些實施例中，HIC 步驟經組態以在例如輸入材料具有約 4.5 至約 7，諸如約 5 至約 6、約 5 至約 5.5 或約 5.3 至約 5.7 中的任一者的 pH 之條件下執行。在一些實施例中，HIC 步驟經組態以在例如輸入材料具有至少約 4.5，諸如至少約 4.6、4.7、4.8、4.9、5、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9 或 7 中的任一者的 pH 之條件下執行。在一些實施例中，HIC 步驟經組態以在例如輸入材料具有小於約 7，諸如小於約 6.9、6.8、6.7、6.6、6.5、6.4、6.3、6.2、6.1、6、5.9、5.8、5.7、5.6、5.5、5.4、5.3、5.2、5.1、5、4.9、4.8、4.7、4.6 或 4.5 中的任一者的 pH 之條件下執行。在一些實施例中，HIC 步驟經組態以在例如輸入材料具有約 4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9 或 7 中的任一者的 pH 之條件下執行。
在一些實施例中，HIC 步驟包含經由 HIC 介質之處理，其中經由 HIC 介質之處理以結合及洗提模式執行（即，HIC 步驟是結合及洗提模式 HIC 步驟）。在一些實施例中，使用逐步洗提的具有降低鹽濃度、增加去污劑濃度及/或調節 pH 的水性緩衝劑，從 HIC 介質中洗提標的物多肽。
在一些實施例中，HIC 步驟包含經由 HIC 介質之處理，其中經由 HIC 介質之處理以順流模式執行（即，HIC 步驟是順流模式 HIC 步驟）。在一些實施例中，經由 HIC 膜或 HIC 管柱之處理使用低鹽條件執行，例如在將材料裝載到 HIC 膜或 HIC 管柱上之前不添加鹽，諸如 HIC 調節鹽。例如，在一些實施例中，HIC 步驟不包含藉由添加鹽諸如 HIC 調節鹽來調節導電率。在一些實施例中，HIC 調節鹽包含硫酸鈉、硫酸銨、檸檬酸鈉、磷酸鉀、磷酸鈉或用於針對 HIC 調節負載的任何其他鹽中的一種或多種。在一些實施例中，HIC 步驟是使用平衡緩衝劑和包含乙酸鈉（pH 為約 4.5 至約 6，諸如約 5 或約 6）的洗滌緩衝劑執行的順流模式 HIC 步驟。
在一些實施例中，HIC 介質，諸如 HIC 膜或 HIC 管柱，選自由以下所組成之群組：Bakerbond WP HI-Propyl™、Phenyl Sepharose® Fast Flow (Phenyl-SFF)、Phenyl Sepharose® Fast Flow Hi- sub (Phenyl-SFF HS)、Toyopearl® Hexyl-650、Poros™ Benzyl Ultra 和 Sartobind® phenyl。在一些實施例中，Toyopearl® Hexyl-650 是 Toyopearl® Hexyl-650M。在一些實施例中，Toyopearl® Hexyl-650 是 Toyopearl® Hexyl-650C。在一些實施例中，Toyopearl® Hexyl-650 是 Toyopearl® Hexyl-650S。
在一些實施例中，HIC 介質包含與連接至受質的聚乙烯亞胺 (PEI) 配位體上的氮共價連接的丙基。在一些實施例中，HIC 介質是 Bakerbond WP HI-Propyl™。在一些實施例中，受質是顆粒，其中顆粒具有 40 μm 的平均尺寸（例如，Bakerbond WP HI-Propyl™ C3）。
在一些實施例中，HIC 介質包含經由不帶電荷且化學穩定的醚鍵用芳族苯基修飾的交聯的 6% 瓊脂糖珠。在一些實施例中，瓊脂糖珠具有 90 μm 的平均直徑。在一些實施例中，HIC 介質是 Phenyl Sepharose® Fast Flow (Phenyl SFF)。如本文所述，除非另有說明，否則對 Phenyl SFF 的通用參考包括 Sepharose® Fast Flow Low Sub (Phenyl SFF LS) 和 Sepharose® Fast Flow High Sub (Phenyl SFF HS) 兩者。在一些實施例中，HIC 介質包含約 15 μmol phenyl/mL 至約 30 μmol phenyl/mL 介質，包括大約 20 μmol phenyl/mL 介質或大約 25 μmol phenyl/mL 介質。在一些實施例中，HIC 介質是 Phenyl Sepharose® Fast Flow Low Sub (Phenyl SFF LS)。在一些實施例中，HIC 介質包含約 35 μmol phenyl/mL 至約 50 μmol phenyl/mL 介質，包括大約 40 μmol phenyl/mL 介質或大約 45 μmol phenyl/mL 介質。在一些實施例中，HIC 介質是 Phenyl Sepharose® Fast Flow High Sub (Phenyl SFF HS)。
在一些實施例中，HIC 介質包含與 C6 基團 (己基) 鍵合的 100 nm 孔徑的基於聚甲基丙烯酸酯的材料。在一些實施例中，HIC 介質包含平均尺寸為 100 μm 且平均孔徑為 100 nm 的聚甲基丙烯酸酯基顆粒（例如 Toyopearl® Hexyl-650C）。在一些實施例中，HIC 介質包含平均尺寸為 65 μm 且平均孔徑為 100 nm 的聚甲基丙烯酸酯基顆粒（例如 Toyopearl® Hexyl-650M）。在一些實施例中，HIC 介質包含平均尺寸為 35 μm 且平均孔徑為 100 nm 的聚甲基丙烯酸酯基顆粒（例如 Toyopearl® Hexyl-650S）。
在一些實施例中，HIC 介質包含具有芳香族疏水性芐基配位體的交聯聚(苯乙烯-二乙烯基苯) POROS™ 基珠。在一些實施例中，HIC 介質是 Poros™ Benzyl Ultra。
在一些實施例中，HIC 介質是包含疏水性配位體的膜吸附劑。在一些實施例中，HIC 介質包含與穩定的強化纖維素過濾器結合的苯基部分。在一些實施例中，HIC 介質是 Sartobind® Phenyl。在一些實施例中，HIC 介質包含與穩定的強化細胞過濾器 例如Sartobind® Phenyl 結合的苯基部分，其中 HIC 步驟經組態以在 例如輸入材料具有約 4.5 至約 7、約 5 至約 6、或約 5.3 至約 5.7 的 pH 之條件下執行。在一些實施例中，HIC 介質包含與穩定的強化細胞過濾器例如 Sartobind® Phenyl 結合的苯基部分，其中 HIC 步驟經組態以在例如輸入材料具有至少約 4.5，諸如至少約 4.6、4.7、4.8、4.9、5、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9 或 7 中的任一者的 pH 之條件下執行。在一些實施例中，HIC 介質包含與穩定的強化細胞過濾器例如 Sartobind® Phenyl 結合的苯基部分，其中 HIC 步驟經組態以在例如輸入材料具有小於約 7，諸如小於約 6.9、6.8、6.7、6.6、6.5、6.4、6.3、6.2、6.1、6、5.9、5.8、5.7、5.6、5.5、5.4、5.3、5.2、5.1、5、4.9、4.8、4.7、4.6 或 4.5 中的任一者的 pH 之條件下執行。在一些實施例中，HIC 介質包含與穩定的強化細胞過濾器例如 Sartobind® Phenyl 結合的苯基部分，其中 HIC 步驟經組態以在例如輸入材料具有約 4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9 或 7 中的任一者的 pH 之條件下執行。 C. 離子交換層析步驟
在一些實施例中，本文所述的純化平台包含一個或多個離子交換 (IEX) 層析步驟。如本文所述，IEX 層析步驟可放置在純化平台內的任何一個或多個位置。在一些實施例中，一個或多個 IEX 層析步驟包含位於進程工作流程的任何階段的多於一個 IEX 層析步驟，諸如 2、3、4 或 5 個中的任一個。在一些實施例中，其中純化平台包含多於一個 IEX 層析步驟，IEX 層析步驟不以直接順序執行，即在 IEX 層析步驟之間沒有執行純化平台的一些干預步驟。在一些實施例中，其中純化平台包含多於一個 IEX 層析步驟，IEX 層析步驟相同。在一些實施例中，其中純化平台包含多於一個 IEX 層析步驟，IEX 層析步驟不同，例如，包含使用不同的 IEX 層析介質。
在一些實施例中，IEX 層析步驟與純化平台的另一方面結合使用。在一些實施例中，在「IEX 層析步驟」中使用的術語「步驟」或由此涵蓋的術語不排除純化平台，其中純化平台的 IEX 層析特徵與另一特徵直接組合，例如洗提液直接流向 IEX 層析特徵。
在一些實施例中，IEX 層析步驟包含經由 IEX 層析介質諸如 IEX 管柱及/或 IEX 膜之處理。IEX 層析步驟，包括與多肽 IEX 層析步驟之處理有關的步驟，是本領域已知的。參見，例如，Liu 等人 mAbs, 2, 2010，其在此藉由引用整體併入本文。基於現有技術和本文揭示的內容，本領域普通技術人員將理解例如與 IEX 層析步驟相關的組分、條件和試劑。
在一些實施例中，IEX 層析步驟以結合及洗提模式執行（即，IEX 層析步驟是結合及洗提模式 IEX 層析步驟）。在一些實施例中，IEX 層析步驟以順流模式執行（即，IEX 層析步驟是順流模式 IEX 層析步驟）。在一些實施例中，IEX 層析步驟在過載多肽純化步驟中執行（即，IEX 層析步驟是過載模式 IEX 層析步驟）。
IEX 層析步驟允許基於 IEX 層析介質的配位體和樣品組分（例如，標的物或非標的物組分）之間的靜電交互作用（陰離子和陽離子）進行分離。在一些實施例中，IEX 層析介質包含陽離子交換 (CEX) 介質及/或特徵。在一些實施例中，IEX 層析介質包含強 CEX 介質及/或特徵。在一些實施例中，IEX 層析介質包含弱 CEX 介質及/或特徵。在一些實施例中，IEX 層析介質包含陰離子交換 (AEX) 介質及/或特徵。在一些實施例中，IEX 層析介質包含強 AEX 介質及/或特徵。在一些實施例中，IEX 層析介質包含弱 AEX 介質及/或特徵。
在一些實施例中，IEX 層析介質是多模式離子交換 (MMIEX) 層析介質。MMIEX 層析介質包含陽離子交換組分及/或特徵和陰離子交換組分及/或特徵兩者。在一些實施例中，MMIEX 介質是多模式陰離子/陽離子交換 (MM-AEX/CEX) 層析介質。在一些實施例中，IEX 層析介質是陶瓷羥基磷灰石層析介質。
在一些實施例中，IEX 層析介質，諸如 IEX 層析管柱介質或 IEX 層析膜，選自由以下所組成之群組：磺丙基 (SP) Sepharose® Fast Flow (SPSFF)、四級銨 (Q) Sepharose® Fast Flow (QSFF)、SP Sepharose® XL (SPXL)、Streamline™ SPXL、ABx™（MM-AEX/CEX 介質）、Poros™ XS、Poros™ 50HS、二乙胺基乙基 (DEAE)、二甲基胺基乙基 (DMAE)、三甲基胺基乙基 (TMAE)、四級胺乙基 (QAE)、巰基乙基吡啶 (MEP)-Hypercel™、HiPrep™ Q XL、Q Sepharose® XL 及 HiPrep™ SP XL。
在一些實施例中，AEX 層析介質包含具有四級銨 (Q) 強陰離子交換基團的交聯的 6% 瓊脂糖珠。在一些實施例中，AEX 層析介質是強陰離子交換劑介質。在一些實施例中，AEX 層析介質是 Q Sepharose® Fast Flow (QSFF)。
在一些實施例中，CEX 層析介質包含具有磺丙基 (SP) 強陽離子交換基團的交聯的 6% 瓊脂糖珠。在一些實施例中，CEX 層析介質是強陽離子交換劑介質。在一些實施例中，CEX 層析介質是 SP Sepharose® Fase Flow (SPSFF)。
在一些實施例中，CEX 層析介質包含具有共價偶聯至瓊脂糖基質的葡聚醣鏈的交聯的 6% 瓊脂糖珠，該瓊脂糖基質經磺丙基 (SP) 強陽離子交換基團修飾。在一些實施例中，CEX 層析介質是強陽離子交換劑介質。在一些實施例中，CEX 層析介質是 SP Sepharose® XL (SPXL)。在一些實施例中，CEX 層析介質是 Streamline™ SPXL。
在一些實施例中，CEX 層析介質包含剛性聚合物樹脂顆粒，該樹脂顆粒包含具有多羥基表面塗層的交聯聚[苯乙烯-二乙烯基苯]，該多羥基表面塗層進一步被磺丙基 (SP) 強陽離子交換基團功能化。在一些實施例中，平均粒度為 50 μm。在一些實施例中，CEX 層析介質是強陽離子交換劑介質。在一些實施例中，CEX 層析介質是 Poros™ XS。
在一些實施例中，CEX 層析介質包含剛性聚合物樹脂顆粒，該樹脂顆粒包含具有多羥基表面塗層的交聯聚[苯乙烯-二乙烯基苯]，該多羥基表面塗層進一步被磺丙基 (SP) 強陽離子交換基團功能化。在一些實施例中，平均粒度為 50 μm。在一些實施例中，CEX 層析介質是強陽離子交換劑介質。在一些實施例中，CEX 層析介質是 Poros™ 50HS。
在一些實施例中，MM-AEX/CEX 層析介質包含矽膠固相顆粒，該矽膠固相顆粒包含混合模式的陰離子/陽離子交換劑。在一些實施例中，矽膠固相顆粒具有約 45 μm 至約 65 μm 的平均粒度。在一些實施例中，MM-AEX/CEX 層析介質是 Bakerbond ABx™。 D. 多模式疏水性交互作用 / 離子交換 (MM-HIC/IEX) 層析步驟
在一些實施例中，本文所述的純化平台包含多模式疏水性交互作用/離子交換 (MM-HIC/IEX) 層析步驟。
如本文所述，MM-HIC/IEX 層析步驟可放置在純化平台內的任何一個或多個位置。在一些實施例中，本文所述的純化平台包含一個或多個 MM-HIC/IEX 層析步驟，諸如位於進程工作流程的任何階段的 2、3、4 或 5 個 MM-HIC/IEX 層析步驟中的任一個。在一些實施例中，其中純化平台包含多於一個 MM-HIC/IEX 層析步驟，MM-HIC/IEX 層析步驟不以直接順序執行，即在 MM-HIC/IEX 層析步驟之間沒有執行純化平台的一些干預步驟。在一些實施例中，其中純化平台包含多於一個 MM-HIC/IEX 層析步驟，兩個或更多個 MM-HIC/IEX 層析步驟是相同的。在一些實施例中，其中純化平台包含多於一個 MM-HIC/IEX 層析步驟，兩個或更多個 MM-HIC/IEX 層析步驟是不同的，例如，包含使用不同的 MM-HIC/IEX 層析介質。
在一些實施例中，MM-HIC/IEX 層析步驟與純化平台的另一方面結合使用。在一些實施例中，在「MM-HIC/IEX 層析步驟」中使用術語「步驟」不排除純化平台，其中純化平台的 MM-HIC/IEX 層析特徵與另一特徵直接組合，例如，深層過濾器用於與 MM-HIC/IEX 層析步驟結合的負載過濾器。
在一些實施例中，MM-HIC/IEX 層析介質包含陰離子交換 (AEX) 材料及/或特徵（例如，MM-HIC/AEX 層析介質）。在一些實施例中，AEX 材料及/或特徵是強陰離子交換材料及/或特徵。在一些實施例中，AEX 材料及/或特徵是弱陰離子交換材料及/或特徵。
在一些實施例中，MM-HIC/IEX 層析介質包含陽離子交換材料及/或特徵（例如，MM-HIC/CEX 層析介質）。在一些實施例中，CEX 材料及/或特徵是強陰離子交換材料及/或特徵。在一些實施例中，CEX 材料及/或特徵是弱陰離子交換材料及/或特徵。
在一些實施例中，MM-HIC/IEX 層析步驟包含經由 MM-HIC/IEX 層析管柱或 MM-HIC/IEX 層析膜之處理。在一些實施例中，MM-HIC/IEX 層析管柱或膜包含惰性介質，該惰性介質包含 MM-HIC/IEX 配位體。在一些實施例中，惰性介質是剛性基於瓊脂糖的基質，諸如瓊脂糖顆粒。
在一些實施例中，MM-HIC/IEX 層析步驟包含經由 Capto™ Adhere、Capto™ Adhere ImpRes、Capto™ MMC 或 Capto™ MMC ImpRes 之處理。
在一些實施例中，MM-HIC/AEX 層析介質是使用 N-芐基- N-甲基乙醇胺配位體的多模式強陰離子交換劑。在一些實施例中， N-芐基- N-甲基乙醇胺配位體能夠進行蛋白質交互作用，包括氫鍵、疏水性交互作用和靜電交互作用（與陰離子）。在一些實施例中，MM-HIC/AEX 層析介質是 Capto™ Adhere。在一些實施例中，MM-HIC/AEX 層析介質是 Capto™ Adhere ImpRes。
在一些實施例中，MM-HIC/CEX 層析介質是使用 N-苯甲醯基-升半胱胺酸配位體的多模式弱陽離子交換劑。在一些實施例中， N-苯甲醯基-升半胱胺酸配位體能夠進行蛋白質交互作用，其包括疏水性交互作用、氫鍵、親硫交互作用和靜電交互作用（與陽離子）。在一些實施例中，MM-HIC/CEX 層析介質是 Capto™ MMC。在一些實施例中，MM-HIC/CEX 層析介質是 Capto™ MMC ImpRes。 E. 捕獲步驟
在一些實施例中，純化平台包含捕獲步驟。在一些實施例中，本文所述的捕獲步驟包含使用親和力層析，其中親和力層析利用固定的配位體特異性結合標的物或其部分，諸如抗體。
捕獲步驟，包括經由例如親和力層析之處理所涉及的步驟，是本領域已知的。參見，例如，Liu 等人 mAbs, 2, 2010，其在此藉由引用併入。基於現有技術和本文揭示的內容，本領域普通技術人員將理解執行捕獲步驟所涉及的組分、條件和試劑。
在一些實施例中，親和力層析選自由以下所組成之群組：蛋白質 A 層析、蛋白質 G 層析、蛋白質 A/G 層析、FcXL 層析、蛋白質 XL 層析、κ 層析和 κXL 層析。在一些實施例中，親和力層析包含使用親和介質，諸如其上固定有親和配位體的惰性基質，諸如固定在其上的蛋白質 A 或其部分。在一些實施例中，親和配位體是蛋白質 A 或其部分。在一些實施例中，蛋白質 A 是重組蛋白質 A。在一些實施例中，蛋白質 A 是天然蛋白 A。在一些實施例中，蛋白質 A 是蛋白質 A 衍生物，諸如基於蛋白質 A 序列設計的多肽並且具有某些修飾，諸如胺基酸添加、缺失及/或替換。在一些實施例中，惰性基質是基於二氧化矽的惰性基質，諸如基於二氧化矽的過濾器或顆粒。在一些實施例中，惰性基質是基於瓊脂糖的基質，諸如瓊脂糖顆粒。在一些實施例中，惰性基質是基於有機聚合物的基質，諸如有機聚合物顆粒。
在一些實施例中，捕獲步驟包含經由親和力層析之處理。在一些實施例中，捕獲步驟包含經由蛋白質 A 層析之處理。在一些實施例中，捕獲步驟以結合及洗提模式執行。
在一些實施例中，蛋白質 A 層析介質選自由以下所組成之群組：MabSelect™、MabSelect SuRe™、MabSelect SuRe™ LX、MabSelect Xtra™、MabSelect™ PrismA、ProSep®-vA、Prosep®-vA Ultra、Protein A Sepharose® Fast Flow、Poros® A 和 MabCapture™。
在一些實施例中，蛋白質 A 層析介質包含剛性、高流動性瓊脂糖基質及鹼穩定的蛋白質 A 衍生配位體，其中對鹼特別敏感的胺基酸在鹼環境中被更穩定的殘基取代。在一些實施例中，基質是球形顆粒。在一些實施例中，蛋白質 A 層析介質是 MabSelect SuRe™。
在一些實施例中，蛋白質 A 層析介質包含剛性、高流動性瓊脂糖基質和具有鹼穩定性的蛋白質 A 衍生配位體。在一些實施例中，基質是球形顆粒。在一些實施例中，蛋白質 A 層析介質是 MabSelect™ PrismA。 F. 病毒過濾步驟
在一些實施例中，純化平台包含病毒過濾步驟。在一些實施例中，病毒過濾步驟在一個或多個純化步驟之後執行。
病毒過濾步驟，包括病毒過濾步驟之處理所涉及的步驟，是本領域已知的。參見，例如，Liu 等人 mAbs, 2, 2010 和美國申請號 20140309403，其在此藉由引用併入。基於現有技術和本文揭示的內容，本領域普通技術人員將理解執行捕獲步驟所涉及的組分、條件和試劑。
在一些實施例中，病毒過濾步驟包含經由病毒過濾器之處理。在一些實施例中，病毒過濾器包含保留有包膜和無包膜病毒兩者的孔徑。在一些實施例中，病毒過濾器的孔徑基於標的物病毒的尺寸。 G. 超過濾 / 透析過濾 (UF/DF) 步驟
在一些實施例中，純化平台包含 UF/DF 步驟。在一些實施例中，UF/DF 步驟在純化平台的步驟諸如 IEX 層析步驟、MM-HIC/IEX 層析、HIC 步驟、深層過濾步驟之後執行。在一些實施例中，UF/DF 步驟在病毒過濾步驟之後執行。
UF/DF 步驟，包括 UF/DF 步驟之處理所涉及的步驟，是本領域已知的。參見，例如，Liu 等人 mAbs, 2, 2010，其在此藉由引用併入。基於現有技術和本文揭示的內容，本領域普通技術人員將理解執行 UF/DF 步驟所涉及的組分、條件和試劑。在一些實施例中，UF/DF 步驟包含經由超過濾之處理。在一些實施例中，UF/DF 步驟以切向流過濾 (TFF) 模式執行。在一些實施例中，UF/DF 步驟包含經由切向流過濾之處理，諸如高性能切向流過濾。 H. 調節步驟
在一些實施例中，純化平台包含調節步驟。在一些實施例中，調節步驟包含在對從純化平台獲得的樣品或組成物進行進一步處理之前調整從純化平台獲得的樣品或組成物的特徵或特性。例如，在一些實施例中，調節步驟包含調整 pH。在一些實施例中，調節步驟包含調整溫度。在一些實施例中，調節步驟包含調整緩衝劑或鹽濃度。
在一些實施例中，調節步驟在捕獲步驟之後執行。在一些實施例中，調節步驟在深層過濾步驟之前執行。在一些實施例中，調節步驟在 HIC 步驟之前執行。在一些實施例中，調節步驟在病毒過濾步驟之前執行。
調節步驟，包括與調節步驟之處理有關的步驟，是本領域已知的。參見，例如，Liu 等人 mAbs, 2, 2010，其在此藉由引用併入。基於現有技術和本文揭示的內容，本領域普通技術人員將理解執行調節步驟所涉及的組分、條件和試劑。 I. 例示性純化平台
在一些方面，本文提供了用於從樣品中純化標的物的純化平台，其中該純化平台包含一個或多個深層過濾步驟及/或一個或多個 HIC 步驟及/或一個或多個 MM-HIC/IEX 層析步驟，並且其中與沒有一個或多個深層過濾步驟及/或一個或多個 HIC 步驟及/或一個或多個 MM-HIC/IEX 層析步驟的純化平台相比，該純化平台能夠獲得具有降低的水解酵素活性率的組成物。在一些方面，水解酵素活性率降低至少約 20%，諸如至少約 25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、85%、90% 或 95% 中的任一者。
在一些方面，提供了純化平台，其包含：捕獲步驟；一個或多個離子交換 (IEX) 層析步驟；和深層過濾步驟。在一些實施例中，純化平台進一步包含病毒過濾步驟及/或 UF/DF 步驟。在一些實施例中，深層過濾步驟直接在病毒過濾步驟或 UF/DF 步驟之前。在一些實施例中，深層過濾步驟與 IEX 層析步驟連續或直接在其之後。在一些實施例中，深層過濾步驟包含在 EMPHAZE™ 深層過濾器上的 X0SP 深層過濾器。在一些實施例中，純化平台進一步包含 HIC 步驟。涵蓋在所述純化平台內的例示性純化平台顯示在 圖 1A中並在下面更詳細地描述。
在一些實施例中，純化平台依序包含：(a) 捕獲步驟；(b) CEX 層析步驟；(c) AEX 層析步驟；(d) 深層過濾步驟；(e) 病毒過濾步驟；及 (f) UF/DF 步驟。在一些實施例中，捕獲步驟包含經由基於蛋白質 A 的親和介質之處理，例如 MabSelect SuRe™ 或 MabSelect™ PrimaA 介質。在一些實施例中，捕獲步驟包含結合及洗提模式親和力層析步驟。在一些實施例中，CEX 層析步驟包含 CEX 層析介質，該介質包含具有磺丙基 (SP) 強陽離子交換基團的交聯的 6% 瓊脂糖珠，例如 SP Sepharose® Fase Flow (SPSFF) 介質。在一些實施例中，AEX 層析步驟包含 AEX 層析介質，該介質包含具有四級銨 (Q) 強陰離子交換基團的交聯的 6% 瓊脂糖珠，例如 Q Sepharose® Fast Flow (QSFF) 介質。在一些實施例中，深層過濾步驟包含深層過濾器，該深層過濾器包含二氧化矽諸如二氧化矽助濾劑及/或聚丙烯酸纖維，例如 X0SP 深層過濾器、C0SP 深層過濾器或 D0SP 深層過濾器。
在一些實施例中，純化平台依序包含：(a) 捕獲步驟，其中捕獲步驟包含基於蛋白質 A 的親和介質，例如 MabSelect SuRe™ 或 MabSelect™ PrimaA 介質，並且其中捕獲步驟經組態為結合及洗提親和力層析步驟；(b) CEX 層析步驟，其中 CEX 層析步驟包含 CEX 層析介質，該層析介質包含具有磺丙基 (SP) 強陽離子交換基團的交聯 6% 瓊脂糖珠，例如 SP Sepharose® Fase Flow (SPSFF) 介質；(c) AEX 層析步驟，其中 AEX 層析步驟包含 AEX 層析介質，該層析介質包含具有四級銨 (Q) 強陰離子交換基團的交聯 6% 瓊脂糖珠，例如 Q Sepharose® Fast Flow (QSFF) 介質；(d) 深層過濾步驟，其中深層過濾步驟包含深層過濾器，該深層過濾器包含二氧化矽諸如二氧化矽助濾劑及/或聚丙烯酸纖維，例如 X0SP 深層過濾器、C0SP 深層過濾器或 D0SP 深層過濾器；病毒過濾步驟；以及 UF/DF 步驟。在一些實施例中，純化平台進一步包含位於任意位置的深層過濾步驟，其中深層過濾步驟包含深層過濾器，該深層過濾器包含二氧化矽諸如二氧化矽助濾劑及/或聚丙烯酸纖維， 例如X0SP 深層過濾器、C0SP 深層過濾器或 D0SP 深層過濾器，並且其中深層過濾步驟經組態以在 例如輸入材料具有約 5 至約 6.5，諸如約 5 至約 5.5 或約 5.8 至約 6.2 的 pH 之條件下執行。在一些實施例中，純化平台進一步包含位於任意位置的深層過濾步驟，其中深層過濾步驟包含深層過濾器，該深層過濾器包含水凝膠 Q (四級胺，也稱為四級銨)-功能化非紡織材料和多區微孔膜，例如 EMPHAZE™ AEX 深層過濾器，並且其中深層過濾步驟經組態以在例如輸入材料具有約 7.5 至約 8.5 諸如約 8 的 pH 之條件下執行。在一些實施例中，純化平台進一步包含位於任意位置的 HIC 步驟，其中 HIC 步驟包含 HIC 介質，諸如 HIC 膜，該 HIC 介質包含與穩定的強化纖維素過濾器例如 Sartobind®Phenyl 介質結合的苯基部分，其中該 HIC 步驟經組態以在例如輸入材料具有約 5 至約 6，諸如約 5.5 的 pH 之條件下執行。
在一些實施例中，純化平台依序包含：(a) 捕獲步驟，其中捕獲步驟包含基於蛋白質 A 的親和介質，例如 MabSelect SuRe™ 或 MabSelect™ PrimaA 介質，並且其中捕獲步驟經組態為結合及洗提親和力層析步驟；(b) CEX 層析步驟，其中 CEX 層析步驟包含 CEX 層析介質，該層析介質包含具有磺丙基 (SP) 強陽離子交換基團的交聯 6% 瓊脂糖珠，例如 SP Sepharose® Fase Flow (SPSFF) 介質；(c) AEX 層析步驟，其中 AEX 層析步驟包含 AEX 層析介質，該層析介質包含具有四級銨 (Q) 強陰離子交換基團的交聯 6% 瓊脂糖珠，例如 Q Sepharose® Fast Flow (QSFF) 介質；(d) 深層過濾步驟，其中深層過濾步驟包含深層過濾器，該深層過濾器包含水凝膠 Q (四級胺，也稱為四級銨)-功能化的非紡織材料和多區微孔膜，例如 EMPHAZE ™ AEX 深層過濾器；病毒過濾步驟；以及 UF/DF 步驟。在一些實施例中，純化平台進一步包含位於任意位置的深層過濾步驟，其中深層過濾步驟包含深層過濾器，該深層過濾器包含二氧化矽諸如二氧化矽助濾劑及聚丙烯酸纖維，例如 X0SP 深層過濾器、C0SP 深層過濾器或 D0SP 深層過濾器，並且其中該深層過濾步驟經組態以在例如輸入材料具有約 5 至約 6 諸如約 5.5 的 pH 之條件下執行。在一些實施例中，純化平台進一步包含位於任意位置的深層過濾步驟，其中深層過濾步驟包含深層過濾器，該深層過濾器包含水凝膠 Q (四級胺，也稱為四級銨)-功能化非紡織材料和多區微孔膜，例如 EMPHAZE™ AEX 深層過濾器，並且其中深層過濾步驟經組態以在例如輸入材料具有約 7.5 至約 8.5 諸如約 8 的 pH 之條件下執行。在一些實施例中，純化平台進一步包含位於任意位置的 HIC 步驟，其中 HIC 步驟包含 HIC 介質，諸如 HIC 膜，該 HIC 介質包含與穩定的強化纖維素過濾器例如 Sartobind®Phenyl 介質結合的苯基部分，其中該 HIC 步驟經組態以在例如輸入材料具有約 5 至約 6，諸如約 5.5 的 pH 之條件下執行。
在一些實施例中，純化平台依序包含：(a) 捕獲步驟，其中捕獲步驟包含基於蛋白質 A 的親和介質，例如 MabSelect SuRe™ 或 MabSelect™ PrimaA 介質，並且其中捕獲步驟經組態為結合及洗提親和力層析步驟；(b) CEX 層析步驟，其中 CEX 層析步驟包含 CEX 層析介質，該層析介質包含具有複硫丙基 (SP) 強陽離子交換基團的交聯 6% 瓊脂糖珠，例如 SP Sepharose® Fase Flow (SPSFF) 介質；(c) AEX 層析步驟，其中 AEX 層析步驟包含 AEX 層析介質，該層析介質包含具有四級銨 (Q) 強陰離子交換基團的交聯 6% 瓊脂糖珠，例如 Q Sepharose® Fast Flow (QSFF) 介質；(d) HIC 步驟，其中 HIC 步驟包含 HIC 介質，該介質包含與穩定的強化纖維素過濾器例如 Sartobind®Phenyl 結合的苯基部分；病毒過濾步驟；以及 UF/DF 步驟。在一些實施例中，純化平台進一步包含位於任意位置的深層過濾步驟，其中深層過濾步驟包含深層過濾器，該深層過濾器包含二氧化矽諸如二氧化矽助濾劑及聚丙烯酸纖維，例如 X0SP 深層過濾器、C0SP 深層過濾器或 D0SP 深層過濾器，並且其中該深層過濾步驟經組態以在例如輸入材料具有約 5 至約 6 諸如約 5.5 的 pH 之條件下執行。在一些實施例中，純化平台進一步包含位於任意位置的深層過濾步驟，其中深層過濾步驟包含深層過濾器，該深層過濾器包含水凝膠 Q (四級胺，也稱為四級銨)-功能化非紡織材料和多區微孔膜，例如 EMPHAZE™ AEX 深層過濾器，並且其中深層過濾步驟經組態以在例如輸入材料具有約 7.5 至約 8.5 諸如約 8 的 pH 之條件下執行。在一些實施例中，純化平台進一步包含位於任意位置的 HIC 步驟，其中 HIC 步驟包含 HIC 介質，諸如 HIC 膜，該 HIC 介質包含與穩定的強化纖維素過濾器例如 Sartobind®Phenyl 介質結合的苯基部分，其中該 HIC 步驟經組態以在例如輸入材料具有約 5 至約 6，諸如約 5.5 的 pH 之條件下執行。
在一些方面，提供了純化平台，其包含：捕獲步驟；多模式疏水性交互作用/離子交換 (MM-HIC/IEX) 層析步驟；和疏水性交互作用層析 (HIC) 步驟。在一些實施例中，純化平台進一步包含病毒過濾步驟。在一些實施例中，純化平台進一步包含 UF/DF 步驟。涵蓋在所述純化平台內的例示性純化平台顯示在 圖 1B中並在下面更詳細地描述。
在一些實施例中，純化平台依序包含：(a) 捕獲步驟；(b) MM-HIC/IEX 層析步驟；及 (c) HIC 步驟。在一些實施例中，捕獲步驟包含基於蛋白質 A 的親和介質，例如 MabSelect SuRe™ 或 MabSelect™ PrimaA 介質。在一些實施例中，捕獲步驟包含結合及洗提模式親和力層析步驟。在一些實施例中，MM-HIC/IEX 層析步驟包含 MM-HIC/AEX 層析步驟。在一些實施例中，MM-HIC/AEX 層析步驟包含含有使用 N-芐基- N-甲基乙醇胺配位體的多模式強陰離子交換劑的介質，例如 Capto™ Adhere 介質。在一些實施例中，MM-HIC/IEX 層析步驟是 MM-HIC/CEX 層析步驟。在一些實施例中，MM-HIC/CEX 層析步驟包含含有使用 N-苯甲醯基-升半胱胺酸配位體的多模式弱陽離子交換劑的介質，例如 Capto™ MMC 介質。在一些實施例中，HIC 步驟包含含有經由不帶電荷且化學穩定的醚鍵用芳族苯基基團修飾的交聯的 6% 瓊脂糖珠的介質，例如苯基 SFF 介質，諸如苯基 SFF HS 或苯基 SFF LS。在一些實施例中，HIC 步驟包含含有與 C6 基團（己基）鍵合的 100 nm 孔徑基於聚甲基丙烯酸酯材料的介質，例如 Toyopearl® Hexyl-650 介質，諸如 Toyopearl® Hexyl-650C。在一些實施例中，HIC 步驟包含介質，該介質包含具有芳香族疏水芐基配位體例如 Poros™ Benzyl Ultra 的交聯聚(苯乙烯-二乙烯基苯) POROS™ 基珠。
在一些實施例中，提供了純化平台，其依序包含：(a) 捕獲步驟，其中捕獲步驟包含基於蛋白質 A 的親和介質，例如 MabSelect SuRe™ 或 MabSelect™ PrimaA 介質，並且其中捕獲步驟經組態為結合及洗提親和力層析步驟；(b) MM-HIC/AEX 層析步驟，其中 MM-HIC/AEX 層析步驟包含介質，該介質包含使用 N-芐基- N-甲基乙醇胺配位體的多模式強陰離子交換劑，例如 Capto™ Adhere 介質；以及 (c) HIC 步驟，其中 HIC 步驟包含介質，該介質包含經由不帶電荷且化學穩定的醚鍵用芳香苯基基團修飾的交聯的 6% 瓊脂糖珠，例如苯基 SFF 介質，諸如苯基 SFF HS 或苯基 SFF LS。
在一些實施例中，提供了純化平台，其依序包含：(a) 捕獲步驟，其中捕獲步驟包含基於蛋白質 A 的親和介質，例如 MabSelect SuRe™ 或 MabSelect™ PrimaA 介質，並且其中捕獲步驟經組態為結合及洗提親和力層析步驟；(b) MM-HIC/AEX 層析步驟，其中 MM-HIC/AEX 層析步驟包含介質，該介質包含使用 N-芐基- N-甲基乙醇胺配位體的多模式強陰離子交換劑，例如 Capto™ Adhere 介質；以及 (c) HIC 步驟，其中 HIC 步驟包含介質，該介質包含與 C6 基團（己基）鍵合的 100 nm 孔徑基於聚甲基丙烯酸酯材料，例如 Toyopearl® Hexyl-650 介質。
在一些實施例中，提供了純化平台，其依序包含：(a) 捕獲步驟，其中捕獲步驟包含基於蛋白質 A 的親和介質，例如 MabSelect SuRe™ 或 MabSelect™ PrimaA 介質，並且其中捕獲步驟經組態為結合及洗提親和力層析步驟；(b) MM-HIC/AEX 層析步驟，其中 MM-HIC/AEX 層析步驟包含介質，該介質包含使用 N-芐基- N-甲基乙醇胺配位體的多模式強陰離子交換劑，例如 Capto™ Adhere 介質；以及 (c) HIC 步驟，其中 HIC 步驟包含介質，該介質包含具有芳香族疏水芐基配位體的交聯的基於聚(苯乙烯-二乙烯基苯) POROS™ 珠，例如 Poros™ Benzyl Ultra 介質。
在一些實施例中，提供了純化平台，其依序包含：(a) 捕獲步驟，其中捕獲步驟包含基於蛋白質 A 的親和介質，例如 MabSelect SuRe™ 或 MabSelect™ PrimaA 介質，並且其中捕獲步驟經組態為結合及洗提親和力層析步驟；(b) MM-HIC/CEX 層析步驟，其中 MM-HIC/CEX 層析步驟包含介質，該介質包含使用 N-苯甲醯基-升半胱胺酸配位體的多模式弱陽離子交換劑，例如 Capto™ MMC 介質；以及 (c) HIC 步驟，其中 HIC 步驟包含介質，該介質包含經由不帶電荷且化學穩定的醚鍵用芳香苯基基團修飾的交聯的 6% 瓊脂糖珠，例如苯基 SFF 介質，諸如苯基 SFF HS 或苯基 SFF LS。
在一些實施例中，提供了純化平台，其依序包含：(a) 捕獲步驟，其中捕獲步驟包含基於蛋白質 A 的親和介質，例如 MabSelect SuRe™ 或 MabSelect™ PrimaA 介質，並且其中捕獲步驟經組態為結合及洗提親和力層析步驟；(b) MM-HIC/CEX 層析步驟，其中 MM-HIC/CEX 層析步驟包含介質，該介質包含使用 N-苯甲醯基-升半胱胺酸配位體的多模式弱陽離子交換劑，例如 Capto™ MMC 介質；以及 (c) HIC 步驟，其中 HIC 步驟包含介質，該介質包含與 C6 基團（己基）鍵合的 100 nm 孔徑基於聚甲基丙烯酸酯材料，例如 Toyopearl® Hexyl-650 介質。
在一些實施例中，提供了純化平台，其依序包含：(a) 捕獲步驟，其中捕獲步驟包含基於蛋白質 A 的親和介質，例如 MabSelect SuRe™ 或 MabSelect™ PrimaA 介質，並且其中捕獲步驟經組態為結合及洗提親和力層析步驟；(b) MM-HIC/CEX 層析步驟，其中 MM-HIC/CEX 層析步驟包含介質，該介質包含使用 N-苯甲醯基-升半胱胺酸配位體的多模式弱陽離子交換劑，例如 Capto™ MMC 介質；以及 (c) HIC 步驟，其中 HIC 步驟包含介質，該介質包含具有芳香族疏水芐基配位體的交聯的基於聚(苯乙烯-二乙烯基苯) POROS™ 珠，例如 Poros™ Benzyl Ultra 介質。在一些實施例中，純化平台進一步包含位於任意位置的深層過濾步驟。
在一些實施例中，純化平台依序包含：(a) 捕獲步驟；(b) MM-HIC/AEX 層析步驟；(c) HIC 步驟；(d) 病毒過濾步驟；以及 (e) UF/DF 步驟。在一些實施例中，捕獲步驟包含經由基於蛋白質 A 的親和介質之處理，例如 MabSelect SuRe™ 或 MabSelect™ PrimaA 介質。在一些實施例中，捕獲步驟包含結合及洗提模式親和力層析步驟。在一些實施例中，MM-HIC/AEX 層析步驟包含含有使用 N-芐基- N-甲基乙醇胺配位體的多模式強陰離子交換劑的介質，例如 Capto™ Adhere 介質。在一些實施例中，HIC 步驟包含介質，該介質包含經由不帶電荷且化學穩定的醚鍵經芳族苯基基團修飾的交聯的 6% 瓊脂糖珠，其中該介質包含大約 40-45 μmol 苯基/mL 介質，例如，苯基 SFF HS 介質。在一些實施例中，HIC 步驟包含介質，該介質包含與 C6 基團（己基）鍵合的 100 nm 孔徑基於聚甲基丙烯酸酯材料，例如 Toyopearl® Hexyl-650 介質。在一些實施例中，HIC 步驟包含介質，該介質包含具有芳香族疏水芐基配位體例如 Poros™ Benzyl Ultra 的交聯聚(苯乙烯-二乙烯基苯) POROS™ 基珠。
在一些實施例中，提供了純化平台，其依序包含：(a) 捕獲步驟，其中捕獲步驟包含基於蛋白質 A 的親和介質，例如 MabSelect SuRe™ 或 MabSelect™ PrimaA 介質，並且其中捕獲步驟經組態為結合及洗提親和力層析步驟；(b) MM-HIC/AEX 層析步驟，其中 MM-HIC/AEX 層析步驟包含介質，該介質包含使用 N-芐基- N-甲基乙醇胺配位體的多模式強陰離子交換劑，例如 Capto™ Adhere 介質；(c) HIC 步驟，其中 HIC 步驟包含介質，該介質包含經由不帶電荷且化學穩定的醚鍵用芳香苯基基團修飾的交聯的 6% 瓊脂糖珠，並且其中該介質包含大約 40-45 μmol 苯基/ mL 介質，例如苯基 SFF HS 介質；(d) 病毒過濾步驟；以及 (e) UF/DF 步驟。
在一些實施例中，提供了純化平台，其依序包含：(a) 捕獲步驟，其中捕獲步驟包含基於蛋白質 A 的親和介質，例如 MabSelect SuRe™ 或 MabSelect™ PrimaA 介質，並且其中捕獲步驟經組態為結合及洗提親和力層析步驟；(b) MM-HIC/AEX 層析步驟，其中 MM-HIC/AEX 層析步驟包含介質，該介質包含使用 N-芐基- N-甲基乙醇胺配位體的多模式強陰離子交換劑，例如 Capto™ Adhere 介質；以及 (c) HIC 步驟，其中 HIC 步驟包含介質，該介質包含與 C6 基團（己基）鍵合的 100 nm 孔徑基於聚甲基丙烯酸酯材料，例如 Toyopearl® Hexyl-650 介質；(d) 病毒過濾步驟；以及 (e) UF/DF 步驟。
在一些實施例中，提供了純化平台，其依序包含：(a) 捕獲步驟，其中捕獲步驟包含基於蛋白質 A 的親和介質，例如 MabSelect SuRe™ 或 MabSelect™ PrimaA 介質，並且其中捕獲步驟經組態為結合及洗提親和力層析步驟；(b) MM-HIC/AEX 層析步驟，其中 MM-HIC/AEX 層析步驟包含介質，該介質包含使用 N-芐基- N-甲基乙醇胺配位體的多模式強陰離子交換劑，例如 Capto™ Adhere 介質；以及 (c) HIC 步驟，其中 HIC 步驟包含介質，該介質包含具有芳香族疏水芐基配位體的交聯的基於聚(苯乙烯-二乙烯基苯) POROS™ 珠，例如 Poros™ Benzyl Ultra 介質；(d) 病毒過濾步驟；以及 (e) UF/DF 步驟。
在一些實施例中，提供了純化平台，其依序包含：(a) 捕獲步驟；(b) 使用深層過濾步驟作為負載過濾步驟的 MM-HIC/AEX 層析步驟；以及 (c) HIC 步驟。在一些實施例中，捕獲步驟包含結合及洗提模式親和力層析步驟。在一些實施例中，捕獲步驟包含基於蛋白質 A 的親和介質，該親和介質包含剛性、高流動性瓊脂糖基質及鹼穩定的蛋白質 A 衍生配位體，其中對鹼特別敏感的胺基酸在鹼環境中被更穩定的殘基取代，例如 MabSelect SuRe™ 介質。在一些實施例中，捕獲步驟包含基於蛋白質 A 的親和介質，該親和介質包含剛性、高流動性瓊脂糖基質和具有鹼性穩定性的蛋白質 A 衍生配位體，例如 MabSelect™ PrismA 介質。在一些實施例中，MM-HIC/AEX 層析步驟包含含有使用 N-芐基- N-甲基乙醇胺配位體的多模式強陰離子交換劑的介質，例如 Capto™ Adhere 介質。在一些實施例中，深層過濾步驟包含深層過濾器，該深層過濾器包含二氧化矽諸如二氧化矽助濾劑及聚丙烯酸纖維，例如 X0SP 深層過濾器、C0SP 深層過濾器或 D0SP 深層過濾器。在一些實施例中，深層過濾步驟包含深層過濾器，該深層過濾器包含水凝膠 Q（四級胺，也稱為四級銨）功能化的非紡織材料和多區微孔膜，例如 EMPHAZE™ AEX 深層過濾器。在一些實施例中，HIC 步驟是順流模式 HIC 步驟。在一些實施例中，HIC 步驟包含介質，該介質包含與 C6 基團（己基）鍵合的 100 nm 孔徑基於聚甲基丙烯酸酯材料，例如 Toyopearl® Hexyl-650 介質。在一些實施例中，HIC 步驟包含介質，該介質包含具有芳香族疏水芐基配位體例如 Poros™ Benzyl Ultra 的交聯聚(苯乙烯-二乙烯基苯) POROS™ 基珠。在一些實施例中，HIC 步驟包含介質，該介質包含經由不帶電荷且化學穩定的醚鍵經芳族苯基基團修飾的交聯的 6% 瓊脂糖珠，其中該介質包含大約 40-45 μmol 苯基/mL 介質，例如，苯基 SFF HS 介質。在一些實施例中，HIC 步驟包含 pH 調節步驟，其中輸入材料的 pH 是調節至 pH 約 4.5 至約 6 的 pH。在一些實施例中，HIC 步驟是低鹽 HIC 步驟，諸如在將材料裝載到 HIC 膜或 HIC 管柱上之前不添加鹽，諸如 HIC 調節鹽。
在一些實施例中，提供了純化平台，其依序包含：(a) 捕獲步驟，其中捕獲步驟包含基於蛋白質 A 的親和介質，該介質包含剛性、高流動性瓊脂糖基質和具有鹼性穩定性的蛋白質 A 衍生配位體，例如 MabSelect™ PrismA 介質；(b) 使用深層過濾步驟作為負載過濾步驟的 MM-HIC/AEX 層析步驟，其中 MM-HIC/AEX 層析步驟包含介質，該介質包含使用 N-芐基- N-甲基乙醇胺配位體的多模式強陰離子交換劑，例如 Capto™ Adhere 介質，並且其中深層過濾步驟包含深層過濾器，該深層過濾器包含二氧化矽諸如二氧化矽助濾劑和聚丙烯酸纖維，例如 X0SP 深層過濾器、C0SP 深層過濾器或 D0SP 深層過濾器；以及 (c) HIC 步驟，其中 HIC 步驟是順流模式 HIC 步驟，並且其中 HIC 步驟包含介質，該介質包含與 C6 基團(己基)鍵合的 100 nm 孔徑的基於聚甲基丙烯酸酯的材料，例如，Toyopearl® Hexyl-650 介質。在一些實施例中，HIC 步驟包含 pH 調節步驟，其中輸入材料的 pH 是調節至 pH 約 4.5 至約 5.5，諸如約 5.0 的 pH。在一些實施例中，HIC 步驟是低鹽 HIC 步驟，諸如在將材料裝載到 HIC 膜或 HIC 管柱上之前不添加鹽，諸如 HIC 調節鹽。
在一些實施例中，提供了純化平台，其依序包含：(a) 捕獲步驟，其中捕獲步驟包含基於蛋白質 A 的親和介質，該介質包含剛性、高流動性瓊脂糖基質和具有鹼性穩定性的蛋白質 A 衍生配位體，例如 MabSelect™ PrismA 介質；(b) 使用深層過濾步驟作為負載過濾步驟的 MM-HIC/AEX 層析步驟，其中 MM-HIC/AEX 層析步驟包含介質，該介質包含使用 N-芐基- N-甲基乙醇胺配位體的多模式強陰離子交換劑，例如 Capto™ Adhere 介質，並且其中深層過濾步驟包含深層過濾器，該深層過濾器包含二氧化矽諸如二氧化矽助濾劑和聚丙烯酸纖維，例如 X0SP 深層過濾器、C0SP 深層過濾器或 D0SP 深層過濾器；以及 (c) HIC 步驟，其中 HIC 步驟是順流模式 HIC 步驟，並且其中 HIC 步驟包含介質，該介質包含具有芳香族疏水性芐基配位體的交聯的基於聚(苯乙烯-二乙烯基苯) POROS™ 珠，例如，Poros™ Benzyl Ultra。在一些實施例中，HIC 步驟包含 pH 調節步驟，其中輸入材料的 pH 是調節至 pH 約 4.5 至約 5.5，諸如約 5.0 的 pH。在一些實施例中，HIC 步驟是低鹽 HIC 步驟，諸如在將材料裝載到 HIC 膜或 HIC 管柱上之前不添加鹽，諸如 HIC 調節鹽。
在一些實施例中，提供了純化平台，其依序包含：(a) 捕獲步驟，其中捕獲步驟包含基於蛋白質 A 的親和介質，該介質包含剛性、高流動性瓊脂糖基質和鹼穩定的蛋白質 A 衍生配位體，其中對鹼特別敏感的胺基酸被鹼性環境中更穩定的殘基取代，例如 MabSelect SuRe™ 介質；(b) 使用深層過濾步驟作為負載過濾步驟的 MM-HIC/AEX 層析步驟，其中 MM-HIC/AEX 層析步驟包含介質，該介質包含使用 N-芐基- N-甲基乙醇胺配位體的多模式強陰離子交換劑，例如 Capto™ Adhere 介質，並且其中深層過濾步驟包含深層過濾器，該深層過濾器包含水凝膠 Q（四級胺，也稱為四級銨）功能化的非紡織材料和多區微孔膜，例如，EMPHAZE™ AEX 深層過濾器；以及 (c) HIC 步驟，其中 HIC 步驟是順流模式 HIC 步驟，並且其中 HIC 步驟包含含有交聯的 6% 瓊脂糖珠的介質，該珠被經由不帶電荷且化學穩定的醚鍵的芳香苯基基團修飾，其中該介質包含大約 40-45 μmol 苯基/mL 介質，例如苯基 SFF HS 介質。在一些實施例中，HIC 步驟包含 pH 調節步驟，其中輸入材料的 pH 是調節至 pH 約 5.0 至約 6.0，諸如約 5.5 的 pH。在一些實施例中，HIC 步驟是低鹽 HIC 步驟，諸如在將材料裝載到 HIC 膜或 HIC 管柱上之前不添加鹽，諸如 HIC 調節鹽。
在一些實施例中，本文提供了純化平台，其包含：捕獲步驟；一個或多個離子交換 (IEX) 層析步驟；和疏水性交互作用層析 (HIC) 步驟。在一些實施例中，IEX 層析步驟是 CEX 層析步驟。在一些實施例中，純化平台進一步包含病毒過濾步驟。在一些實施例中，純化平台進一步包含 UF/DF 步驟。在一些實施例中，純化平台進一步包含深層過濾步驟。在一些實施例中，純化平台進一步包含 HIC 步驟。涵蓋在所述純化平台內的例示性純化平台顯示在 圖 1C中並在下面更詳細地描述。
在一些實施例中，純化平台依序包含：(a) 捕獲步驟；(b) CEX 層析步驟；(c) HIC 步驟；(d) 病毒過濾步驟；以及 (e) UF/DF 步驟。在一些實施例中，捕獲步驟包含基於蛋白質 A 的親和介質，例如 MabSelect SuRe™ 或 MabSelect™ PrimaA 介質。在一些實施例中，捕獲步驟包含結合及洗提模式親和力層析步驟。在一些實施例中，CEX 層析步驟包含含有剛性聚合物樹脂顆粒的 CEX 層析介質，該樹脂顆粒包含具有多羥基表面塗層的交聯聚[苯乙烯-二乙烯基苯]，該多羥基表面塗層進一步被磺丙基 (SP) 強陽離子交換基團功能化，例如 Poros™ XS 介質。在一些實施例中，CEX 層析步驟包含含有剛性聚合物樹脂顆粒的 CEX 層析介質，該樹脂顆粒包含具有多羥基表面塗層的交聯聚[苯乙烯-二乙烯基苯]，該多羥基表面塗層進一步被磺丙基 (SP) 強陽離子交換基團功能化，例如 Poros™ 50HS。在一些實施例中，HIC 步驟包含介質，該介質包含經由不帶電荷且化學穩定的醚鍵經芳族苯基基團修飾的交聯的 6% 瓊脂糖珠，其中該介質包含大約 40-45 μmol 苯基/mL 介質，例如，苯基 SFF HS 介質。在一些實施例中，HIC 步驟包含介質，該介質包含與 C6 基團（己基）鍵合的 100 nm 孔徑基於聚甲基丙烯酸酯材料，例如 Toyopearl® Hexyl-650 介質。在一些實施例中，HIC 步驟包含介質，該介質包含具有芳香族疏水芐基配位體例如 Poros™ Benzyl Ultra 的交聯聚(苯乙烯-二乙烯基苯) POROS™ 基珠。
在一些實施例中，純化平台依序包含：(a) 捕獲步驟，其中捕獲步驟包含基於蛋白質 A 的親和介質，例如 MabSelect SuRe™ 或 MabSelect™ PrimaA 介質，並且其中捕獲步驟經組態為結合及洗提親和力層析步驟；(b) CEX 層析步驟，其中 CEX 層析步驟包含 CEX 層析介質，該層析介質包含剛性聚合物樹脂顆粒，該剛性聚合物樹脂顆粒包含交聯聚[苯乙烯-二乙烯基苯]，其具有與磺丙基 (SP) 強陽離子交換基團進一步功能化的多羥基表面塗層，例如，Poros™ XS 介質；(c) HIC 步驟，其中 HIC 步驟包含介質，該介質包含經由不帶電荷且化學穩定的醚鍵用芳香苯基基團修飾的交聯的 6% 瓊脂糖珠，其中該介質包含大約 40-45 μmol 苯基/ mL 介質，例如苯基 SFF HS 介質；(d) 病毒過濾步驟；以及 (e) UF/DF 步驟。
在一些實施例中，純化平台依序包含：(a) 捕獲步驟，其中捕獲步驟包含基於蛋白質 A 的親和介質，例如 MabSelect SuRe™ 或 MabSelect™ PrimaA 介質，並且其中捕獲步驟經組態為結合及洗提親和力層析步驟；(b) CEX 層析步驟，其中 CEX 層析步驟包含 CEX 層析介質，該層析介質包含剛性聚合物樹脂顆粒，該剛性聚合物樹脂顆粒包含交聯聚[苯乙烯-二乙烯基苯]，其具有與磺丙基 (SP) 強陽離子交換基團進一步功能化的多羥基表面塗層，例如，Poros™ XS 介質；(c) HIC 步驟，其中 HIC 步驟包含介質，該介質包含與 C6 基團（己基）鍵合的 100 nm 孔徑的基於聚甲基丙烯酸酯材料，例如 Toyopearl® Hexyl-650 介質；(d) 病毒過濾步驟；以及 (e) UF/DF 步驟。
在一些實施例中，純化平台依序包含：(a) 捕獲步驟，其中捕獲步驟包含結合及洗提模式親和力層析步驟；(b) CEX 層析步驟，其中 CEX 層析步驟包含 CEX 層析介質，該層析介質包含剛性聚合物樹脂顆粒，該剛性聚合物樹脂顆粒包含交聯聚[苯乙烯-二乙烯基苯]，其具有與磺丙基 (SP) 強陽離子交換基團進一步功能化的多羥基表面塗層，例如，Poros™ XS 介質；(c) HIC 步驟，其中 HIC 步驟包含介質，該介質包含具有芳香族疏水性芐基配位體的交聯的基於聚(苯乙烯-二乙烯基苯) POROS™ 珠，例如 Poros™ Benzyl Ultra 介質；(d) 病毒過濾步驟；以及 (e) UF/DF 步驟。
在一些實施例中，純化平台依序包含：(a) 捕獲步驟，其中捕獲步驟包含結合及洗提模式親和力層析步驟；(b) CEX 層析步驟，其中 CEX 層析步驟包含 CEX 層析介質，該層析介質包含剛性聚合物樹脂顆粒，該剛性聚合物樹脂顆粒包含交聯聚[苯乙烯-二乙烯基苯]，其具有與磺丙基 (SP) 強陽離子交換基團進一步功能化的多羥基表面塗層，例如，Poros™ 50HS 介質；(c) HIC 步驟，其中 HIC 步驟包含介質，該介質包含經由不帶電荷且化學穩定的醚鍵用芳香苯基基團修飾的交聯的 6% 瓊脂糖珠，其中該介質包含大約 40-45 μmol 苯基/ mL 介質，例如苯基 SFF HS 介質；(d) 病毒過濾步驟；以及 (e) UF/DF 步驟。
在一些實施例中，純化平台依序包含：(a) 捕獲步驟，其中捕獲步驟包含基於蛋白質 A 的親和介質，例如 MabSelect SuRe™ 或 MabSelect™ PrimaA 介質，並且其中捕獲步驟經組態為結合及洗提親和力層析步驟；(b) CEX 層析步驟，其中 CEX 層析步驟包含 CEX 層析介質，該層析介質包含剛性聚合物樹脂顆粒，該剛性聚合物樹脂顆粒包含交聯聚[苯乙烯-二乙烯基苯]，其具有與磺丙基 (SP) 強陽離子交換基團進一步功能化的多羥基表面塗層，例如，Poros™ 50HS 介質；(c) HIC 步驟，其中 HIC 步驟包含介質，該介質包含與 C6 基團（己基）鍵合的 100 nm 孔徑的基於聚甲基丙烯酸酯材料，例如 Toyopearl® Hexyl-650 介質；(d) 病毒過濾步驟；以及 (e) UF/DF 步驟。
在一些實施例中，純化平台依序包含：(a) 捕獲步驟，其中捕獲步驟包含基於蛋白質 A 的親和介質，例如 MabSelect SuRe™ 或 MabSelect™ PrimaA 介質，並且其中捕獲步驟經組態為結合及洗提親和力層析步驟；(b) CEX 層析步驟，其中 CEX 層析步驟包含 CEX 層析介質，該層析介質包含剛性聚合物樹脂顆粒，該剛性聚合物樹脂顆粒包含交聯聚[苯乙烯-二乙烯基苯]，其具有與磺丙基 (SP) 強陽離子交換基團進一步功能化的多羥基表面塗層，例如，Poros™ 50HS 介質；(c) HIC 步驟，其中 HIC 步驟包含介質，該介質包含具有芳香族疏水芐基配位體的交聯的基於聚(苯乙烯-二乙烯基苯) POROS™ 珠，例如 Poros™ Benzyl Ultra 介質；(d) 病毒過濾步驟；以及 (e) UF/DF 步驟。在一些實施例中，純化平台進一步包含位於任意位置的深層過濾步驟。
在一些實施例中，提供了純化平台，其包含：一個或多個離子交換 (IEX) 層析步驟；疏水性交互作用層析 (HIC) 步驟；和深層過濾步驟。在一些實施例中，純化平台進一步包含病毒過濾步驟及/或 UF/DF 步驟。在一些實施例中，深層過濾步驟及/或 HIC 步驟直接在 UF/DF 步驟的病毒過濾步驟之前。在一些實施例中，深層過濾步驟及/或 HIC 步驟與 IEX 層析步驟連續或直接在 IEX 層析步驟之後。涵蓋在所述純化平台內的例示性純化平台顯示在 圖 1D中並在下面更詳細地描述。
在一些實施例中，純化平台依序包含：(a) CEX 層析步驟；(b) HIC 步驟；(c) MMIEX 層析步驟；(d) AEX 層析步驟；(e) 深層過濾步驟；以及 (f) UF/DF 步驟。在一些實施例中，CEX 層析步驟包含 CEX 層析介質，該層析介質包含具有共價偶聯至瓊脂糖基質的葡聚醣鏈的交聯的 6% 瓊脂糖珠，該瓊脂糖基質經磺丙基 (SP) 強陽離子交換基團修飾，例如 SP Sepharose® XL (SPXL) 介質或 Streamline(TM) SPXL 介質。在一些實施例中，HIC 步驟包含 HIC 介質，該介質包含共價連接至聚乙烯亞胺 (PEI) 配位體上的氮的丙基基團，該配位體連接至受質，例如 Bakerbond WP HI-Propyl™ 介質。在一些實施例中，MMIEX 層析步驟包含含有矽膠固相顆粒的 MMIEX 層析介質，該矽膠固相顆粒包含混合模式陰離子/陽離子交換劑，例如 Bakerbond ABx™ 介質。在一些實施例中，AEX 層析步驟包含 AEX 層析介質，該介質包含具有四級銨 (Q) 強陰離子交換基團的交聯的 6% 瓊脂糖珠，例如 Q Sepharose® Fast Flow (QSFF) 介質。在一些實施例中，深層過濾步驟包含深層過濾器，該深層過濾器包含二氧化矽諸如二氧化矽助濾劑及聚丙烯酸纖維，例如 X0SP 深層過濾器、C0SP 深層過濾器或 D0SP 深層過濾器。
在一些實施例中，純化平台依序包含：(a) CEX 層析步驟，其中 CEX 層析步驟包含 CEX 層析介質，該 CEX 層析介質包含交聯的 6% 瓊脂糖珠，該珠具有共價偶聯至經磺丙基 (SP) 強陽離子交換基團修飾的瓊脂糖基質的葡聚醣鏈，例如，SP Sepharose® XL (SPXL) 介質或 Streamline(TM) SPXL 介質；(b) HIC 步驟，其中 HIC 步驟包含 HIC 介質，該 HIC 介質包含共價連接至聚乙烯亞胺 (PEI) 配位體上的氮的丙基，該配位體連接至受質，例如 Bakerbond WP HI-Propyl™ 介質；(c) MMIEX 層析步驟，其中 MMIEX 層析步驟包含 MMIEX 層析介質，該 MMIEX 層析介質包含矽膠固相顆粒，該顆粒包含混合模式陰離子/陽離子交換劑，例如 Bakerbond ABx™ 介質；(d) AEX 層析步驟，其中 AEX 層析步驟包含 AEX 層析介質，該 AEX 層析介質包含具有四級銨 (Q) 強陰離子交換基團的交聯 6% 瓊脂糖珠，例如 Q Sepharose® Fast Flow (QSFF) 介質；(e) 深層過濾步驟，其中深層過濾步驟包含深層過濾器，該深層過濾器包含二氧化矽諸如二氧化矽助濾劑和聚丙烯酸纖維，例如 X0SP 深層過濾器、C0SP 深層過濾器或 D0SP 深層過濾器；以及 (f) UF/DF 步驟。在一些實施例中，純化平台進一步包含位於任意位置的深層過濾步驟，其中深層過濾步驟包含深層過濾器，該深層過濾器包含二氧化矽諸如二氧化矽助濾劑及聚丙烯酸纖維，例如 X0SP 深層過濾器、C0SP 深層過濾器或 D0SP 深層過濾器，並且其中該深層過濾步驟經組態以在例如輸入材料具有約 6 至約 7 諸如約 6.5 的 pH 之條件下執行。在一些實施例中，純化平台進一步包含位於任意位置的深層過濾步驟，其中深層過濾步驟包含深層過濾器，該深層過濾器包含水凝膠 Q (四級胺，也稱為四級銨)-功能化非紡織材料和多區微孔膜，例如 EMPHAZE™ AEX 深層過濾器，並且其中深層過濾步驟經組態以在例如輸入材料具有約 8.5 至約 9.5 諸如約 9.1 的 pH 之條件下執行。在一些實施例中，純化平台進一步包含位於任意位置的 HIC 步驟，其中 HIC 步驟包含 HIC 介質，諸如 HIC 膜，該 HIC 介質包含與穩定的強化纖維素過濾器例如 Sartobind®Phenyl 介質結合的苯基部分，其中該 HIC 步驟經組態以在例如輸入材料具有約 6 至約 7，諸如約 6.5 的 pH 之條件下執行。
在一些實施例中，提供了純化平台，其包含：(a) 捕獲步驟；(b) 一個或多個離子交換 (IEX) 層析步驟，諸如 CEX 層析步驟；(c) 多模式疏水性交互作用/離子交換 (MM-HIC/IEX) 層析步驟；以及 (d) 以下中的一項或兩項：(i) 疏水性交互作用層析 (HIC) 步驟；及 (ii) 深層過濾步驟。在一些實施例中，純化平台進一步包含病毒過濾步驟。在一些實施例中，純化平台進一步包含 UF/DF 步驟。涵蓋在所述純化平台內的例示性純化平台顯示在 圖 1E中。在一些實施例中，捕獲步驟包含基於蛋白質 A 的親和介質，例如 MabSelect SuRe™ 或 MabSelect™ PrimaA 介質。在一些實施例中，捕獲步驟包含結合及洗提模式親和力層析步驟。在一些實施例中，CEX 層析步驟包含含有剛性聚合物樹脂顆粒的 CEX 層析介質，該樹脂顆粒包含具有多羥基表面塗層的交聯聚[苯乙烯-二乙烯基苯]，該多羥基表面塗層進一步被磺丙基 (SP) 強陽離子交換基團功能化，例如 Poros™ XS 介質。在一些實施例中，CEX 層析步驟包含含有剛性聚合物樹脂顆粒的 CEX 層析介質，該樹脂顆粒包含具有多羥基表面塗層的交聯聚[苯乙烯-二乙烯基苯]，該多羥基表面塗層進一步被磺丙基 (SP) 強陽離子交換基團功能化，例如 Poros™ 50HS。在一些實施例中，MM-HIC/AEX 層析步驟包含含有使用 N-芐基- N-甲基乙醇胺配位體的多模式強陰離子交換劑的介質，例如 Capto™ Adhere 介質。在一些實施例中，純化平台進一步包含位於任意位置的深層過濾步驟。 II. 純化平台的使用方法
在一些方面，本揭示提供使用本文所述的純化平台的方法。在一些實施例中，該方法包含使包含標的物的樣品經歷本文所述的純化平台。
在一些實施例中，本文所述的方法能夠降低從純化平台獲得的組成物的水解酵素活性率。在一些實施例中，水解酵素活性率代表一種或多種水解酵素，諸如一種或多種不同水解酵素的活性率。如本文其他部分所討論的，在一些實施例中，水解酵素活性率是組成物中一種或多種酵素活性的替代量測值。在一些實施例中，水解酵素活性率是經由替代受質量測的。在一些實施例中，水解酵素活性率藉由量測一種或多種水解酵素的水解產物來評估。在一些方面，水解酵素活性率降低至少約 20%，諸如至少約 25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、85%、90% 或 95% 中的任一者。
在一些方面，提供了包含使樣品經歷純化平台以從樣品中純化標的物的方法，其中純化平台包含：捕獲步驟；一個或多個離子交換 (IEX) 層析步驟；及深層過濾步驟。在一些實施例中，純化平台進一步包含病毒過濾步驟及/或 UF/DF 步驟。在一些實施例中，深層過濾步驟直接在病毒過濾步驟或 UF/DF 步驟之前。在一些實施例中，深層過濾步驟與 IEX 層析步驟連續或直接在其之後。在一些實施例中，深層過濾步驟包含在 EMPHAZE™ 深層過濾器上的 X0SP 深層過濾器。在一些實施例中，純化平台進一步包含 HIC 步驟。
在一些實施例中，該方法包含使樣品經歷純化平台以從樣品中純化標的物，其中純化平台依序包含：(a) 捕獲步驟；(b) CEX 層析步驟；(c) AEX 層析步驟；(d) 深層過濾步驟；(e) 病毒過濾步驟；及 (f) UF/DF 步驟。在一些實施例中，捕獲步驟包含經由基於蛋白質 A 的親和介質之處理，例如 MabSelect SuRe™ 或 MabSelect™ PrimaA 介質。在一些實施例中，捕獲步驟包含結合及洗提模式親和力層析步驟。在一些實施例中，CEX 層析步驟包含 CEX 層析介質，該介質包含具有磺丙基 (SP) 強陽離子交換基團的交聯的 6% 瓊脂糖珠，例如 SP Sepharose® Fase Flow (SPSFF) 介質。在一些實施例中，AEX 層析步驟包含 AEX 層析介質，該介質包含具有四級銨 (Q) 強陰離子交換基團的交聯的 6% 瓊脂糖珠，例如 Q Sepharose® Fast Flow (QSFF) 介質。在一些實施例中，深層過濾步驟包含深層過濾器，該深層過濾器包含二氧化矽諸如二氧化矽助濾劑及/或聚丙烯酸纖維，例如 X0SP 深層過濾器、C0SP 深層過濾器或 D0SP 深層過濾器。
在一些實施例中，該方法包含使樣品經歷純化平台以從樣品中純化標的物，其中純化平台依序包含：(a) 捕獲步驟，其中捕獲步驟包含基於蛋白質 A 的親和介質，例如 MabSelect SuRe™ 或 MabSelect™ PrimaA 介質，並且其中捕獲步驟經組態為結合及洗提親和力層析步驟；(b) CEX 層析步驟，其中 CEX 層析步驟包含 CEX 層析介質，該層析介質包含具有磺丙基 (SP) 強陽離子交換基團的交聯 6% 瓊脂糖珠，例如 SP Sepharose® Fase Flow (SPSFF) 介質；(c) AEX 層析步驟，其中 AEX 層析步驟包含 AEX 層析介質，該層析介質包含具有四級銨 (Q) 強陰離子交換基團的交聯 6% 瓊脂糖珠，例如 Q Sepharose® Fast Flow (QSFF) 介質；(d) 深層過濾步驟，其中深層過濾步驟包含深層過濾器，該深層過濾器包含二氧化矽諸如二氧化矽助濾劑及/或聚丙烯酸纖維，例如 X0SP 深層過濾器、C0SP 深層過濾器或 D0SP 深層過濾器；病毒過濾步驟；以及 UF/DF 步驟。在一些實施例中，純化平台進一步包含位於任意位置的深層過濾步驟，其中深層過濾步驟包含深層過濾器，該深層過濾器包含二氧化矽諸如二氧化矽助濾劑及/或聚丙烯酸纖維， 例如X0SP 深層過濾器、C0SP 深層過濾器或 D0SP 深層過濾器，並且其中深層過濾步驟經組態以在 例如輸入材料具有約 5 至約 6.5，諸如約 5 至約 5.5 或約 5.8 至約 6.2 的 pH 之條件下執行。在一些實施例中，純化平台進一步包含位於任意位置的深層過濾步驟，其中深層過濾步驟包含深層過濾器，該深層過濾器包含水凝膠 Q (四級胺，也稱為四級銨)-功能化非紡織材料和多區微孔膜，例如 EMPHAZE™ AEX 深層過濾器，並且其中深層過濾步驟經組態以在例如輸入材料具有約 7.5 至約 8.5 諸如約 8 的 pH 之條件下執行。在一些實施例中，純化平台進一步包含位於任意位置的 HIC 步驟，其中 HIC 步驟包含 HIC 介質，諸如 HIC 膜，該 HIC 介質包含與穩定的強化纖維素過濾器例如 Sartobind®Phenyl 介質結合的苯基部分，其中該 HIC 步驟經組態以在例如輸入材料具有約 5 至約 6，諸如約 5.5 的 pH 之條件下執行。
在一些實施例中，該方法包含使樣品經歷純化平台以從樣品中純化標的物，其中純化平台依序包含：(a) 捕獲步驟，其中捕獲步驟包含基於蛋白質 A 的親和介質，例如 MabSelect SuRe™ 或 MabSelect™ PrimaA 介質，並且其中捕獲步驟經組態為結合及洗提親和力層析步驟；(b) CEX 層析步驟，其中 CEX 層析步驟包含 CEX 層析介質，該層析介質包含具有磺丙基 (SP) 強陽離子交換基團的交聯 6% 瓊脂糖珠，例如 SP Sepharose® Fase Flow (SPSFF) 介質；(c) AEX 層析步驟，其中 AEX 層析步驟包含 AEX 層析介質，該層析介質包含具有四級銨 (Q) 強陰離子交換基團的交聯 6% 瓊脂糖珠，例如 Q Sepharose® Fast Flow (QSFF) 介質；(d) 深層過濾步驟，其中深層過濾步驟包含深層過濾器，該深層過濾器包含水凝膠 Q (四級胺，也稱為四級銨)-功能化的非紡織材料和多區微孔膜，例如 EMPHAZE ™ AEX 深層過濾器；病毒過濾步驟；以及 UF/DF 步驟。在一些實施例中，純化平台進一步包含位於任意位置的深層過濾步驟，其中深層過濾步驟包含深層過濾器，該深層過濾器包含二氧化矽諸如二氧化矽助濾劑及聚丙烯酸纖維，例如 X0SP 深層過濾器、C0SP 深層過濾器或 D0SP 深層過濾器，並且其中該深層過濾步驟經組態以在例如輸入材料具有約 5 至約 6 諸如約 5.5 的 pH 之條件下執行。在一些實施例中，純化平台進一步包含位於任意位置的深層過濾步驟，其中深層過濾步驟包含深層過濾器，該深層過濾器包含水凝膠 Q (四級胺，也稱為四級銨)-功能化非紡織材料和多區微孔膜，例如 EMPHAZE™ AEX 深層過濾器，並且其中深層過濾步驟經組態以在例如輸入材料具有約 7.5 至約 8.5 諸如約 8 的 pH 之條件下執行。在一些實施例中，純化平台進一步包含位於任意位置的 HIC 步驟，其中 HIC 步驟包含 HIC 介質，諸如 HIC 膜，該 HIC 介質包含與穩定的強化纖維素過濾器例如 Sartobind®Phenyl 介質結合的苯基部分，其中該 HIC 步驟經組態以在例如輸入材料具有約 5 至約 6，諸如約 5.5 的 pH 之條件下執行。
在一些實施例中，該方法包含使樣品經歷純化平台以從樣品中純化標的物，其中純化平台依序包含：(a) 捕獲步驟，其中捕獲步驟包含基於蛋白質 A 的親和介質，例如 MabSelect SuRe™ 或 MabSelect™ PrimaA 介質，並且其中捕獲步驟經組態為結合及洗提親和力層析步驟；(b) CEX 層析步驟，其中 CEX 層析步驟包含 CEX 層析介質，該層析介質包含具有複硫丙基 (SP) 強陽離子交換基團的交聯 6% 瓊脂糖珠，例如 SP Sepharose® Fase Flow (SPSFF) 介質；(c) AEX 層析步驟，其中 AEX 層析步驟包含 AEX 層析介質，該層析介質包含具有四級銨 (Q) 強陰離子交換基團的交聯 6% 瓊脂糖珠，例如 Q Sepharose® Fast Flow (QSFF) 介質；(d) HIC 步驟，其中 HIC 步驟包含 HIC 介質，該介質包含與穩定的強化纖維素過濾器例如 Sartobind®Phenyl 結合的苯基部分；病毒過濾步驟；以及 UF/DF 步驟。在一些實施例中，純化平台進一步包含位於任意位置的深層過濾步驟，其中深層過濾步驟包含深層過濾器，該深層過濾器包含二氧化矽諸如二氧化矽助濾劑及聚丙烯酸纖維，例如 X0SP 深層過濾器、C0SP 深層過濾器或 D0SP 深層過濾器，並且其中該深層過濾步驟經組態以在例如輸入材料具有約 5 至約 6 諸如約 5.5 的 pH 之條件下執行。在一些實施例中，純化平台進一步包含位於任意位置的深層過濾步驟，其中深層過濾步驟包含深層過濾器，該深層過濾器包含水凝膠 Q (四級胺，也稱為四級銨)-功能化非紡織材料和多區微孔膜，例如 EMPHAZE™ AEX 深層過濾器，並且其中深層過濾步驟經組態以在例如輸入材料具有約 7.5 至約 8.5 諸如約 8 的 pH 之條件下執行。在一些實施例中，純化平台進一步包含位於任意位置的 HIC 步驟，其中 HIC 步驟包含 HIC 介質，諸如 HIC 膜，該 HIC 介質包含與穩定的強化纖維素過濾器例如 Sartobind®Phenyl 介質結合的苯基部分，其中該 HIC 步驟經組態以在例如輸入材料具有約 5 至約 6，諸如約 5.5 的 pH 之條件下執行。
在一些方面，提供了包含使樣品經歷純化平台以從樣品中純化標的物的方法，其中純化平台包含：捕獲步驟；多模式疏水性交互作用/離子交換 (MM-HIC/IEX) 層析步驟；及疏水性交互作用層析 (HIC) 步驟。在一些實施例中，純化平台進一步包含病毒過濾步驟。在一些實施例中，純化平台進一步包含 UF/DF 步驟。涵蓋在所述純化平台內的例示性純化平台顯示在 圖 1B中並在下面更詳細地描述。
在一些實施例中，該方法包含使樣品經歷純化平台以從樣品中純化標的物，其中純化平台依序包含：(a) 捕獲步驟；(b) MM-HIC/IEX 層析步驟；及 (c) HIC 步驟。在一些實施例中，捕獲步驟包含基於蛋白質 A 的親和介質，例如 MabSelect SuRe™ 或 MabSelect™ PrimaA 介質。在一些實施例中，捕獲步驟包含結合及洗提模式親和力層析步驟。在一些實施例中，MM-HIC/IEX 層析步驟包含 MM-HIC/AEX 層析步驟。在一些實施例中，MM-HIC/AEX 層析步驟包含含有使用 N-芐基- N-甲基乙醇胺配位體的多模式強陰離子交換劑的介質，例如 Capto™ Adhere 介質。在一些實施例中，MM-HIC/IEX 層析步驟是 MM-HIC/CEX 層析步驟。在一些實施例中，MM-HIC/CEX 層析步驟包含含有使用 N-苯甲醯基-升半胱胺酸配位體的多模式弱陽離子交換劑的介質，例如 Capto™ MMC 介質。在一些實施例中，HIC 步驟包含含有經由不帶電荷且化學穩定的醚鍵用芳族苯基基團修飾的交聯的 6% 瓊脂糖珠的介質，例如苯基 SFF 介質，諸如苯基 SFF HS 或苯基 SFF LS。在一些實施例中，HIC 步驟包含含有與 C6 基團（己基）鍵合的 100 nm 孔徑基於聚甲基丙烯酸酯材料的介質，例如 Toyopearl® Hexyl-650 介質，諸如 Toyopearl® Hexyl-650C。在一些實施例中，HIC 步驟包含介質，該介質包含具有芳香族疏水芐基配位體例如 Poros™ Benzyl Ultra 的交聯聚(苯乙烯-二乙烯基苯) POROS™ 基珠。
在一些實施例中，該方法包含使樣品經歷純化平台以從樣品中純化標的物，其中純化平台依序包含：(a) 捕獲步驟，其中捕獲步驟包含基於蛋白質 A 的親和介質，例如 MabSelect SuRe™ 或 MabSelect™ PrimaA 介質，並且其中捕獲步驟經組態為結合及洗提親和力層析步驟；(b) MM-HIC/AEX 層析步驟，其中 MM-HIC/AEX 層析步驟包含介質，該介質包含使用 N-芐基- N-甲基乙醇胺配位體的多模式強陰離子交換劑，例如 Capto™ Adhere 介質；以及 (c) HIC 步驟，其中 HIC 步驟包含介質，該介質包含經由不帶電荷且化學穩定的醚鍵用芳香苯基基團修飾的交聯的 6% 瓊脂糖珠，例如苯基 SFF 介質，諸如苯基 SFF HS 或苯基 SFF LS。
在一些實施例中，該方法包含使樣品經歷純化平台以從樣品中純化標的物，其中純化平台依序包含：(a) 捕獲步驟，其中捕獲步驟包含基於蛋白質 A 的親和介質，例如 MabSelect SuRe™ 或 MabSelect™ PrimaA 介質，並且其中捕獲步驟經組態為結合及洗提親和力層析步驟；(b) MM-HIC/AEX 層析步驟，其中 MM-HIC/AEX 層析步驟包含介質，該介質包含使用 N-芐基- N-甲基乙醇胺配位體的多模式強陰離子交換劑，例如 Capto™ Adhere 介質；以及 (c) HIC 步驟，其中 HIC 步驟包含介質，該介質包含與 C6 基團（己基）鍵合的 100 nm 孔徑基於聚甲基丙烯酸酯材料，例如 Toyopearl® Hexyl-650 介質。
在一些實施例中，該方法包含使樣品經歷純化平台以從樣品中純化標的物，其中純化平台依序包含：(a) 捕獲步驟，其中捕獲步驟包含基於蛋白質 A 的親和介質，例如 MabSelect SuRe™ 或 MabSelect™ PrimaA 介質，並且其中捕獲步驟經組態為結合及洗提親和力層析步驟；(b) MM-HIC/AEX 層析步驟，其中 MM-HIC/AEX 層析步驟包含介質，該介質包含使用 N-芐基- N-甲基乙醇胺配位體的多模式強陰離子交換劑，例如 Capto™ Adhere 介質；以及 (c) HIC 步驟，其中 HIC 步驟包含介質，該介質包含具有芳香族疏水芐基配位體的交聯的基於聚(苯乙烯-二乙烯基苯) POROS™ 珠，例如 Poros™ Benzyl Ultra 介質。
在一些實施例中，該方法包含使樣品經歷純化平台以從樣品中純化標的物，其中純化平台依序包含：(a) 捕獲步驟，其中捕獲步驟包含基於蛋白質 A 的親和介質，例如 MabSelect SuRe™ 或 MabSelect™ PrimaA 介質，並且其中捕獲步驟經組態為結合及洗提親和力層析步驟；(b) MM-HIC/CEX 層析步驟，其中 MM-HIC/CEX 層析步驟包含介質，該介質包含使用 N-苯甲醯基-升半胱胺酸配位體的多模式弱陽離子交換劑，例如 Capto™ MMC 介質；以及 (c) HIC 步驟，其中 HIC 步驟包含介質，該介質包含經由不帶電荷且化學穩定的醚鍵用芳香苯基基團修飾的交聯的 6% 瓊脂糖珠，例如苯基 SFF 介質，諸如苯基 SFF HS 或苯基 SFF LS。
在一些實施例中，該方法包含使樣品經歷純化平台以從樣品中純化標的物，其中純化平台依序包含：(a) 捕獲步驟，其中捕獲步驟包含基於蛋白質 A 的親和介質，例如 MabSelect SuRe™ 或 MabSelect™ PrimaA 介質，並且其中捕獲步驟經組態為結合及洗提親和力層析步驟；(b) MM-HIC/CEX 層析步驟，其中 MM-HIC/CEX 層析步驟包含介質，該介質包含使用 N-苯甲醯基-升半胱胺酸配位體的多模式弱陽離子交換劑，例如 Capto™ MMC 介質；以及 (c) HIC 步驟，其中 HIC 步驟包含介質，該介質包含與 C6 基團（己基）鍵合的 100 nm 孔徑基於聚甲基丙烯酸酯材料，例如 Toyopearl® Hexyl-650 介質。
在一些實施例中，該方法包含使樣品經歷純化平台以從樣品中純化標的物，其中純化平台依序包含：(a) 捕獲步驟，其中捕獲步驟包含基於蛋白質 A 的親和介質，例如 MabSelect SuRe™ 或 MabSelect™ PrimaA 介質，並且其中捕獲步驟經組態為結合及洗提親和力層析步驟；(b) MM-HIC/CEX 層析步驟，其中 MM-HIC/CEX 層析步驟包含介質，該介質包含使用 N-苯甲醯基-升半胱胺酸配位體的多模式弱陽離子交換劑，例如 Capto™ MMC 介質；以及 (c) HIC 步驟，其中 HIC 步驟包含介質，該介質包含具有芳香族疏水芐基配位體的交聯的基於聚(苯乙烯-二乙烯基苯) POROS™ 珠，例如 Poros™ Benzyl Ultra 介質。在一些實施例中，純化平台進一步包含位於任意位置的深層過濾步驟。
在一些實施例中，該方法包含使樣品經歷純化平台以從樣品中純化標的物，其中純化平台依序包含：(a) 捕獲步驟；(b) MM-HIC/AEX 層析步驟；(c) HIC 步驟；(d) 病毒過濾步驟；以及 (e) UF/DF 步驟。在一些實施例中，捕獲步驟包含經由基於蛋白質 A 的親和介質之處理，例如 MabSelect SuRe™ 或 MabSelect™ PrimaA 介質。在一些實施例中，捕獲步驟包含結合及洗提模式親和力層析步驟。在一些實施例中，MM-HIC/AEX 層析步驟包含含有使用 N-芐基- N-甲基乙醇胺配位體的多模式強陰離子交換劑的介質，例如 Capto™ Adhere 介質。在一些實施例中，HIC 步驟包含介質，該介質包含經由不帶電荷且化學穩定的醚鍵經芳族苯基基團修飾的交聯的 6% 瓊脂糖珠，其中該介質包含大約 40-45 μmol 苯基/mL 介質，例如，苯基 SFF HS 介質。在一些實施例中，HIC 步驟包含介質，該介質包含與 C6 基團（己基）鍵合的 100 nm 孔徑基於聚甲基丙烯酸酯材料，例如 Toyopearl® Hexyl-650 介質。在一些實施例中，HIC 步驟包含介質，該介質包含具有芳香族疏水芐基配位體例如 Poros™ Benzyl Ultra 的交聯聚(苯乙烯-二乙烯基苯) POROS™ 基珠。
在一些實施例中，該方法包含使樣品經歷純化平台以從樣品中純化標的物，其中純化平台依序包含：(a) 捕獲步驟，其中捕獲步驟包含基於蛋白質 A 的親和介質，例如 MabSelect SuRe™ 或 MabSelect™ PrimaA 介質，並且其中捕獲步驟經組態為結合及洗提親和力層析步驟；(b) MM-HIC/AEX 層析步驟，其中 MM-HIC/AEX 層析步驟包含介質，該介質包含使用 N-芐基- N-甲基乙醇胺配位體的多模式強陰離子交換劑，例如 Capto™ Adhere 介質；(c) HIC 步驟，其中 HIC 步驟包含介質，該介質包含經由不帶電荷且化學穩定的醚鍵用芳香苯基基團修飾的交聯的 6% 瓊脂糖珠，並且其中該介質包含大約 40-45 μmol 苯基/ mL 介質，例如苯基 SFF HS 介質；(d) 病毒過濾步驟；以及 (e) UF/DF 步驟。
在一些實施例中，該方法包含使樣品經歷純化平台以從樣品中純化標的物，其中純化平台依序包含：(a) 捕獲步驟，其中捕獲步驟包含基於蛋白質 A 的親和介質，例如 MabSelect SuRe™ 或 MabSelect™ PrimaA 介質，並且其中捕獲步驟經組態為結合及洗提親和力層析步驟；(b) MM-HIC/AEX 層析步驟，其中 MM-HIC/AEX 層析步驟包含介質，該介質包含使用 N-芐基- N-甲基乙醇胺配位體的多模式強陰離子交換劑，例如 Capto™ Adhere 介質；以及 (c) HIC 步驟，其中 HIC 步驟包含介質，該介質包含與 C6 基團（己基）鍵合的 100 nm 孔徑基於聚甲基丙烯酸酯材料，例如 Toyopearl® Hexyl-650 介質；(d) 病毒過濾步驟；以及 (e) UF/DF 步驟。
在一些實施例中，該方法包含使樣品經歷純化平台以從樣品中純化標的物，其中純化平台依序包含：(a) 捕獲步驟，其中捕獲步驟包含基於蛋白質 A 的親和介質，例如 MabSelect SuRe™ 或 MabSelect™ PrimaA 介質，並且其中捕獲步驟經組態為結合及洗提親和力層析步驟；(b) MM-HIC/AEX 層析步驟，其中 MM-HIC/AEX 層析步驟包含介質，該介質包含使用 N-芐基- N-甲基乙醇胺配位體的多模式強陰離子交換劑，例如 Capto™ Adhere 介質；以及 (c) HIC 步驟，其中 HIC 步驟包含介質，該介質包含具有芳香族疏水芐基配位體的交聯的基於聚(苯乙烯-二乙烯基苯) POROS™ 珠，例如 Poros™ Benzyl Ultra 介質；(d) 病毒過濾步驟；以及 (e) UF/DF 步驟。
在一些實施例中，該方法包含使樣品經歷純化平台以從樣品中純化標的物，其中純化平台依序包含：(a) 捕獲步驟；(b) 使用深層過濾步驟作為負載過濾步驟的 MM-HIC/AEX 層析步驟；以及 (c) HIC 步驟。在一些實施例中，捕獲步驟包含結合及洗提模式親和力層析步驟。在一些實施例中，捕獲步驟包含基於蛋白質 A 的親和介質，該親和介質包含剛性、高流動性瓊脂糖基質及鹼穩定的蛋白質 A 衍生配位體，其中對鹼特別敏感的胺基酸在鹼環境中被更穩定的殘基取代，例如 MabSelect SuRe™ 介質。在一些實施例中，捕獲步驟包含基於蛋白質 A 的親和介質，該親和介質包含剛性、高流動性瓊脂糖基質和具有鹼性穩定性的蛋白質 A 衍生配位體，例如 MabSelect™ PrismA 介質。在一些實施例中，MM-HIC/AEX 層析步驟包含含有使用 N-芐基- N-甲基乙醇胺配位體的多模式強陰離子交換劑的介質，例如 Capto™ Adhere 介質。在一些實施例中，深層過濾步驟包含深層過濾器，該深層過濾器包含二氧化矽諸如二氧化矽助濾劑及聚丙烯酸纖維，例如 X0SP 深層過濾器、C0SP 深層過濾器或 D0SP 深層過濾器。在一些實施例中，深層過濾步驟包含深層過濾器，該深層過濾器包含水凝膠 Q（四級胺，也稱為四級銨）功能化的非紡織材料和多區微孔膜，例如 EMPHAZE™ AEX 深層過濾器。在一些實施例中，HIC 步驟是順流模式 HIC 步驟。在一些實施例中，HIC 步驟包含介質，該介質包含與 C6 基團（己基）鍵合的 100 nm 孔徑基於聚甲基丙烯酸酯材料，例如 Toyopearl® Hexyl-650 介質。在一些實施例中，HIC 步驟包含介質，該介質包含具有芳香族疏水芐基配位體例如 Poros™ Benzyl Ultra 的交聯聚(苯乙烯-二乙烯基苯) POROS™ 基珠。在一些實施例中，HIC 步驟包含介質，該介質包含經由不帶電荷且化學穩定的醚鍵經芳族苯基基團修飾的交聯的 6% 瓊脂糖珠，其中該介質包含大約 40-45 μmol 苯基/mL 介質，例如，苯基 SFF HS 介質。在一些實施例中，HIC 步驟包含 pH 調節步驟，其中輸入材料的 pH 是調節至 pH 約 4.5 至約 6 的 pH。在一些實施例中，HIC 步驟是低鹽 HIC 步驟，諸如在將材料裝載到 HIC 膜或 HIC 管柱上之前不添加鹽，諸如 HIC 調節鹽。
在一些實施例中，該方法包含使樣品經歷純化平台以從樣品中純化標的物，其中純化平台依序包含：(a) 捕獲步驟，其中捕獲步驟包含基於蛋白質 A 的親和介質，該介質包含剛性、高流動性瓊脂糖基質和具有鹼性穩定性的蛋白質 A 衍生配位體，例如 MabSelect™ PrismA 介質；(b) 使用深層過濾步驟作為負載過濾步驟的 MM-HIC/AEX 層析步驟，其中 MM-HIC/AEX 層析步驟包含介質，該介質包含使用 N-芐基- N-甲基乙醇胺配位體的多模式強陰離子交換劑，例如 Capto™ Adhere 介質，並且其中深層過濾步驟包含深層過濾器，該深層過濾器包含二氧化矽諸如二氧化矽助濾劑和聚丙烯酸纖維，例如 X0SP 深層過濾器、C0SP 深層過濾器或 D0SP 深層過濾器；以及 (c) HIC 步驟，其中 HIC 步驟是順流模式 HIC 步驟，並且其中 HIC 步驟包含介質，該介質包含與 C6 基團(己基)鍵合的 100 nm 孔徑的基於聚甲基丙烯酸酯的材料，例如，Toyopearl® Hexyl-650 介質。在一些實施例中，HIC 步驟包含 pH 調節步驟，其中輸入材料的 pH 是調節至 pH 約 4.5 至約 5.5，諸如約 5.0 的 pH。在一些實施例中，HIC 步驟是低鹽 HIC 步驟，諸如在將材料裝載到 HIC 膜或 HIC 管柱上之前不添加鹽，諸如 HIC 調節鹽。
在一些實施例中，該方法包含使樣品經歷純化平台以從樣品中純化標的物，其中純化平台依序包含：(a) 捕獲步驟，其中捕獲步驟包含基於蛋白質 A 的親和介質，該介質包含剛性、高流動性瓊脂糖基質和具有鹼性穩定性的蛋白質 A 衍生配位體，例如 MabSelect™ PrismA 介質；(b) 使用深層過濾步驟作為負載過濾步驟的 MM-HIC/AEX 層析步驟，其中 MM-HIC/AEX 層析步驟包含介質，該介質包含使用 N-芐基- N-甲基乙醇胺配位體的多模式強陰離子交換劑，例如 Capto™ Adhere 介質，並且其中深層過濾步驟包含深層過濾器，該深層過濾器包含二氧化矽諸如二氧化矽助濾劑和聚丙烯酸纖維，例如 X0SP 深層過濾器、C0SP 深層過濾器或 D0SP 深層過濾器；以及 (c) HIC 步驟，其中 HIC 步驟是順流模式 HIC 步驟，並且其中 HIC 步驟包含介質，該介質包含具有芳香族疏水性芐基配位體的交聯的基於聚(苯乙烯-二乙烯基苯) POROS™ 珠，例如，Poros™ Benzyl Ultra。在一些實施例中，HIC 步驟包含 pH 調節步驟，其中輸入材料的 pH 是調節至 pH 約 4.5 至約 5.5，諸如約 5.0 的 pH。在一些實施例中，HIC 步驟是低鹽 HIC 步驟，諸如在將材料裝載到 HIC 膜或 HIC 管柱上之前不添加鹽，諸如 HIC 調節鹽。
在一些實施例中，該方法包含使樣品經歷純化平台以從樣品中純化標的物，其中純化平台依序包含：(a) 捕獲步驟，其中捕獲步驟包含基於蛋白質 A 的親和介質，該介質包含剛性、高流動性瓊脂糖基質和鹼穩定的蛋白質 A 衍生配位體，其中對鹼特別敏感的胺基酸被鹼性環境中更穩定的殘基取代，例如 MabSelect SuRe™ 介質；(b) 使用深層過濾步驟作為負載過濾步驟的 MM-HIC/AEX 層析步驟，其中 MM-HIC/AEX 層析步驟包含介質，該介質包含使用 N-芐基- N-甲基乙醇胺配位體的多模式強陰離子交換劑，例如 Capto™ Adhere 介質，並且其中深層過濾步驟包含深層過濾器，該深層過濾器包含水凝膠 Q（四級胺，也稱為四級銨）功能化的非紡織材料和多區微孔膜，例如，EMPHAZE™ AEX 深層過濾器；以及 (c) HIC 步驟，其中 HIC 步驟是順流模式 HIC 步驟，並且其中 HIC 步驟包含含有交聯的 6% 瓊脂糖珠的介質，該珠被經由不帶電荷且化學穩定的醚鍵的芳香苯基基團修飾，其中該介質包含大約 40-45 μmol 苯基/mL 介質，例如苯基 SFF HS 介質。在一些實施例中，HIC 步驟包含 pH 調節步驟，其中輸入材料的 pH 是調節至 pH 約 5.0 至約 6.0，諸如約 5.5 的 pH。在一些實施例中，HIC 步驟是低鹽 HIC 步驟，諸如在將材料裝載到 HIC 膜或 HIC 管柱上之前不添加鹽，諸如 HIC 調節鹽。
在一些實施例中，提供了包含使樣品經歷純化平台以從樣品中純化標的物的方法，其中純化平台包含：捕獲步驟；一個或多個離子交換 (IEX) 層析步驟；及疏水性交互作用層析 (HIC) 步驟。在一些實施例中，IEX 層析步驟是 CEX 層析步驟。在一些實施例中，純化平台進一步包含病毒過濾步驟。在一些實施例中，純化平台進一步包含 UF/DF 步驟。在一些實施例中，純化平台進一步包含深層過濾步驟。在一些實施例中，純化平台進一步包含 HIC 步驟。涵蓋在所述純化平台內的例示性純化平台顯示在 圖 1C中並在下面更詳細地描述。
在一些實施例中，該方法包含使樣品經歷純化平台以從樣品中純化標的物，其中純化平台依序包含：(a) 捕獲步驟；(b) CEX 層析步驟；(c) HIC 步驟；(d) 病毒過濾步驟；以及 (e) UF/DF 步驟。在一些實施例中，捕獲步驟包含基於蛋白質 A 的親和介質，例如 MabSelect SuRe™ 或 MabSelect™ PrimaA 介質。在一些實施例中，捕獲步驟包含結合及洗提模式親和力層析步驟。在一些實施例中，CEX 層析步驟包含含有剛性聚合物樹脂顆粒的 CEX 層析介質，該樹脂顆粒包含具有多羥基表面塗層的交聯聚[苯乙烯-二乙烯基苯]，該多羥基表面塗層進一步被磺丙基 (SP) 強陽離子交換基團功能化，例如 Poros™ XS 介質。在一些實施例中，CEX 層析步驟包含含有剛性聚合物樹脂顆粒的 CEX 層析介質，該樹脂顆粒包含具有多羥基表面塗層的交聯聚[苯乙烯-二乙烯基苯]，該多羥基表面塗層進一步被磺丙基 (SP) 強陽離子交換基團功能化，例如 Poros™ 50HS。在一些實施例中，HIC 步驟包含介質，該介質包含經由不帶電荷且化學穩定的醚鍵經芳族苯基基團修飾的交聯的 6% 瓊脂糖珠，其中該介質包含大約 40-45 μmol 苯基/mL 介質，例如，苯基 SFF HS 介質。在一些實施例中，HIC 步驟包含介質，該介質包含與 C6 基團（己基）鍵合的 100 nm 孔徑基於聚甲基丙烯酸酯材料，例如 Toyopearl® Hexyl-650 介質。在一些實施例中，HIC 步驟包含介質，該介質包含具有芳香族疏水芐基配位體例如 Poros™ Benzyl Ultra 的交聯聚(苯乙烯-二乙烯基苯) POROS™ 基珠。
在一些實施例中，該方法包含使樣品經歷純化平台以從樣品中純化標的物，其中純化平台依序包含：(a) 捕獲步驟，其中捕獲步驟包含基於蛋白質 A 的親和介質，例如 MabSelect SuRe™ 或 MabSelect™ PrimaA 介質，並且其中捕獲步驟經組態為結合及洗提親和力層析步驟；(b) CEX 層析步驟，其中 CEX 層析步驟包含 CEX 層析介質，該層析介質包含剛性聚合物樹脂顆粒，該剛性聚合物樹脂顆粒包含交聯聚[苯乙烯-二乙烯基苯]，其具有與磺丙基 (SP) 強陽離子交換基團進一步功能化的多羥基表面塗層，例如，Poros™ XS 介質；(c) HIC 步驟，其中 HIC 步驟包含介質，該介質包含經由不帶電荷且化學穩定的醚鍵用芳香苯基基團修飾的交聯的 6% 瓊脂糖珠，其中該介質包含大約 40-45 μmol 苯基/ mL 介質，例如苯基 SFF HS 介質；(d) 病毒過濾步驟；以及 (e) UF/DF 步驟。
在一些實施例中，該方法包含使樣品經歷純化平台以從樣品中純化標的物，其中純化平台依序包含：(a) 捕獲步驟，其中捕獲步驟包含基於蛋白質 A 的親和介質，例如 MabSelect SuRe™ 或 MabSelect™ PrimaA 介質，並且其中捕獲步驟經組態為結合及洗提親和力層析步驟；(b) CEX 層析步驟，其中 CEX 層析步驟包含 CEX 層析介質，該層析介質包含剛性聚合物樹脂顆粒，該剛性聚合物樹脂顆粒包含交聯聚[苯乙烯-二乙烯基苯]，其具有與磺丙基 (SP) 強陽離子交換基團進一步功能化的多羥基表面塗層，例如，Poros™ XS 介質；(c) HIC 步驟，其中 HIC 步驟包含介質，該介質包含與 C6 基團（己基）鍵合的 100 nm 孔徑的基於聚甲基丙烯酸酯材料，例如 Toyopearl® Hexyl-650 介質；(d) 病毒過濾步驟；以及 (e) UF/DF 步驟。
在一些實施例中，該方法包含使樣品經歷純化平台以從樣品中純化標的物，其中純化平台依序包含：(a) 捕獲步驟，其中捕獲步驟包含結合及洗提模式親和力層析步驟；(b) CEX 層析步驟，其中 CEX 層析步驟包含 CEX 層析介質，該層析介質包含剛性聚合物樹脂顆粒，該剛性聚合物樹脂顆粒包含交聯聚[苯乙烯-二乙烯基苯]，其具有與磺丙基 (SP) 強陽離子交換基團進一步功能化的多羥基表面塗層，例如，Poros™ XS 介質；(c) HIC 步驟，其中 HIC 步驟包含介質，該介質包含具有芳香族疏水性芐基配位體的交聯的基於聚(苯乙烯-二乙烯基苯) POROS™ 珠，例如 Poros™ Benzyl Ultra 介質；(d) 病毒過濾步驟；以及 (e) UF/DF 步驟。
在一些實施例中，該方法包含使樣品經歷純化平台以從樣品中純化標的物，其中純化平台依序包含：(a) 捕獲步驟，其中捕獲步驟包含結合及洗提模式親和力層析步驟；(b) CEX 層析步驟，其中 CEX 層析步驟包含 CEX 層析介質，該層析介質包含剛性聚合物樹脂顆粒，該剛性聚合物樹脂顆粒包含交聯聚[苯乙烯-二乙烯基苯]，其具有與磺丙基 (SP) 強陽離子交換基團進一步功能化的多羥基表面塗層，例如，Poros™ 50HS 介質；(c) HIC 步驟，其中 HIC 步驟包含介質，該介質包含經由不帶電荷且化學穩定的醚鍵用芳香苯基基團修飾的交聯的 6% 瓊脂糖珠，其中該介質包含大約 40-45 μmol 苯基/ mL 介質，例如苯基 SFF HS 介質；(d) 病毒過濾步驟；以及 (e) UF/DF 步驟。
在一些實施例中，該方法包含使樣品經歷純化平台以從樣品中純化標的物，其中純化平台依序包含：(a) 捕獲步驟，其中捕獲步驟包含基於蛋白質 A 的親和介質，例如 MabSelect SuRe™ 或 MabSelect™ PrimaA 介質，並且其中捕獲步驟經組態為結合及洗提親和力層析步驟；(b) CEX 層析步驟，其中 CEX 層析步驟包含 CEX 層析介質，該層析介質包含剛性聚合物樹脂顆粒，該剛性聚合物樹脂顆粒包含交聯聚[苯乙烯-二乙烯基苯]，其具有與磺丙基 (SP) 強陽離子交換基團進一步功能化的多羥基表面塗層，例如，Poros™ 50HS 介質；(c) HIC 步驟，其中 HIC 步驟包含介質，該介質包含與 C6 基團（己基）鍵合的 100 nm 孔徑的基於聚甲基丙烯酸酯材料，例如 Toyopearl® Hexyl-650 介質；(d) 病毒過濾步驟；以及 (e) UF/DF 步驟。
在一些實施例中，該方法包含使樣品經歷純化平台以從樣品中純化標的物，其中純化平台依序包含：(a) 捕獲步驟，其中捕獲步驟包含基於蛋白質 A 的親和介質，例如 MabSelect SuRe™ 或 MabSelect™ PrimaA 介質，並且其中捕獲步驟經組態為結合及洗提親和力層析步驟；(b) CEX 層析步驟，其中 CEX 層析步驟包含 CEX 層析介質，該層析介質包含剛性聚合物樹脂顆粒，該剛性聚合物樹脂顆粒包含交聯聚[苯乙烯-二乙烯基苯]，其具有與磺丙基 (SP) 強陽離子交換基團進一步功能化的多羥基表面塗層，例如，Poros™ 50HS 介質；(c) HIC 步驟，其中 HIC 步驟包含介質，該介質包含具有芳香族疏水芐基配位體的交聯的基於聚(苯乙烯-二乙烯基苯) POROS™ 珠，例如 Poros™ Benzyl Ultra 介質；(d) 病毒過濾步驟；以及 (e) UF/DF 步驟。在一些實施例中，純化平台進一步包含位於任意位置的深層過濾步驟。
在一些實施例中，提供了包含使樣品經歷純化平台以從樣品中純化標的物的方法，其中純化平台包含：一個或多個離子交換 (IEX) 層析步驟；疏水性交互作用層析 (HIC) 步驟；和深層過濾步驟。在一些實施例中，純化平台進一步包含病毒過濾步驟及/或 UF/DF 步驟。在一些實施例中，深層過濾步驟及/或 HIC 步驟直接在 UF/DF 步驟的病毒過濾步驟之前。在一些實施例中，深層過濾步驟及/或 HIC 步驟與 IEX 層析步驟連續或直接在 IEX 層析步驟之後。涵蓋在所述純化平台內的例示性純化平台顯示在 圖 1D中並在下面更詳細地描述。
在一些實施例中，該方法包含使樣品經歷純化平台以從樣品中純化標的物，其中純化平台依序包含：(a) CEX 層析步驟；(b) HIC 步驟；(c) MMIEX 層析步驟；(d) AEX 層析步驟；(e) 深層過濾步驟；以及 (f) UF/DF 步驟。在一些實施例中，CEX 層析步驟包含 CEX 層析介質，該層析介質包含具有共價偶聯至瓊脂糖基質的葡聚醣鏈的交聯的 6% 瓊脂糖珠，該瓊脂糖基質經磺丙基 (SP) 強陽離子交換基團修飾，例如 SP Sepharose® XL (SPXL) 介質或 Streamline(TM) SPXL 介質。在一些實施例中，HIC 步驟包含 HIC 介質，該介質包含共價連接至聚乙烯亞胺 (PEI) 配位體上的氮的丙基基團，該配位體連接至受質，例如 Bakerbond WP HI-Propyl™ 介質。在一些實施例中，MMIEX 層析步驟包含含有矽膠固相顆粒的 MMIEX 層析介質，該矽膠固相顆粒包含混合模式陰離子/陽離子交換劑，例如 Bakerbond ABx™ 介質。在一些實施例中，AEX 層析步驟包含 AEX 層析介質，該介質包含具有四級銨 (Q) 強陰離子交換基團的交聯的 6% 瓊脂糖珠，例如 Q Sepharose® Fast Flow (QSFF) 介質。在一些實施例中，深層過濾步驟包含深層過濾器，該深層過濾器包含二氧化矽諸如二氧化矽助濾劑及聚丙烯酸纖維，例如 X0SP 深層過濾器、C0SP 深層過濾器或 D0SP 深層過濾器。
在一些實施例中，該方法包含使樣品經歷純化平台以從樣品中純化標的物，其中純化平台依序包含：(a) CEX 層析步驟，其中 CEX 層析步驟包含 CEX 層析介質，該 CEX 層析介質包含交聯的 6% 瓊脂糖珠，該珠具有共價偶聯至經磺丙基 (SP) 強陽離子交換基團修飾的瓊脂糖基質的葡聚醣鏈，例如，SP Sepharose® XL (SPXL) 介質或 Streamline(TM) SPXL 介質；(b) HIC 步驟，其中 HIC 步驟包含 HIC 介質，該 HIC 介質包含共價連接至聚乙烯亞胺 (PEI) 配位體上的氮的丙基，該配位體連接至受質，例如 Bakerbond WP HI-Propyl™ 介質；(c) MMIEX 層析步驟，其中 MMIEX 層析步驟包含 MMIEX 層析介質，該 MMIEX 層析介質包含矽膠固相顆粒，該顆粒包含混合模式陰離子/陽離子交換劑，例如 Bakerbond ABx™ 介質；(d) AEX 層析步驟，其中 AEX 層析步驟包含 AEX 層析介質，該 AEX 層析介質包含具有四級銨 (Q) 強陰離子交換基團的交聯 6% 瓊脂糖珠，例如 Q Sepharose® Fast Flow (QSFF) 介質；(e) 深層過濾步驟，其中深層過濾步驟包含深層過濾器，該深層過濾器包含二氧化矽諸如二氧化矽助濾劑和聚丙烯酸纖維，例如 X0SP 深層過濾器、C0SP 深層過濾器或 D0SP 深層過濾器；以及 (f) UF/DF 步驟。在一些實施例中，純化平台進一步包含位於任意位置的深層過濾步驟，其中深層過濾步驟包含深層過濾器，該深層過濾器包含二氧化矽諸如二氧化矽助濾劑及聚丙烯酸纖維，例如 X0SP 深層過濾器、C0SP 深層過濾器或 D0SP 深層過濾器，並且其中該深層過濾步驟經組態以在例如輸入材料具有約 6 至約 7 諸如約 6.5 的 pH 之條件下執行。在一些實施例中，純化平台進一步包含位於任意位置的深層過濾步驟，其中深層過濾步驟包含深層過濾器，該深層過濾器包含水凝膠 Q (四級胺，也稱為四級銨)-功能化非紡織材料和多區微孔膜，例如 EMPHAZE™ AEX 深層過濾器，並且其中深層過濾步驟經組態以在例如輸入材料具有約 8.5 至約 9.5 諸如約 9.1 的 pH 之條件下執行。在一些實施例中，純化平台進一步包含位於任意位置的 HIC 步驟，其中 HIC 步驟包含 HIC 介質，諸如 HIC 膜，該 HIC 介質包含與穩定的強化纖維素過濾器例如 Sartobind®Phenyl 介質結合的苯基部分，其中該 HIC 步驟經組態以在例如輸入材料具有約 6 至約 7，諸如約 6.5 的 pH 之條件下執行。
在一些實施例中，提供了包含使樣品經歷純化平台以從樣品中純化標的物的方法，其中純化平台包含：(a) 捕獲步驟；(b) 一個或多個離子交換 (IEX) 層析步驟，諸如 CEX 層析步驟；(c) 多模式疏水性交互作用/離子交換 (MM-HIC/IEX) 層析步驟；以及 (d) 以下中的一項或兩項：(i) 疏水性交互作用層析 (HIC) 步驟；及 (ii) 深層過濾步驟。在一些實施例中，純化平台進一步包含病毒過濾步驟。在一些實施例中，純化平台進一步包含 UF/DF 步驟。涵蓋在所述純化平台內的例示性純化平台顯示在 圖 1E中。在一些實施例中，捕獲步驟包含基於蛋白質 A 的親和介質，例如 MabSelect SuRe™ 或 MabSelect™ PrimaA 介質。在一些實施例中，捕獲步驟包含結合及洗提模式親和力層析步驟。在一些實施例中，CEX 層析步驟包含含有剛性聚合物樹脂顆粒的 CEX 層析介質，該樹脂顆粒包含具有多羥基表面塗層的交聯聚[苯乙烯-二乙烯基苯]，該多羥基表面塗層進一步被磺丙基 (SP) 強陽離子交換基團功能化，例如 Poros™ XS 介質。在一些實施例中，CEX 層析步驟包含含有剛性聚合物樹脂顆粒的 CEX 層析介質，該樹脂顆粒包含具有多羥基表面塗層的交聯聚[苯乙烯-二乙烯基苯]，該多羥基表面塗層進一步被磺丙基 (SP) 強陽離子交換基團功能化，例如 Poros™ 50HS。在一些實施例中，MM-HIC/AEX 層析步驟包含含有使用 N-芐基- N-甲基乙醇胺配位體的多模式強陰離子交換劑的介質，例如 Capto™ Adhere 介質。在一些實施例中，純化平台進一步包含位於任意位置的深層過濾步驟。 III. 額外步驟和方法
在一些方面，本揭示提供了涉及或與本文所述的純化平台相關的額外步驟。涉及或與純化平台相關的額外步驟，以及進行這些步驟的方法是已知的。參見，例如，Liu 等人 mAbs, 2, 2010，其在此藉由引用整體併入本文。
在一些實施例中，該方法進一步包含細胞培養步驟。在一些實施例中，該方法進一步包含樣品處理步驟，諸如樣品製備步驟。在一些實施例中，該方法進一步包含澄清步驟，諸如澄清 HCCF。在一些實施例中，該方法進一步包含宿主細胞和宿主細胞碎片去除步驟，諸如從獲自純化平台的樣品及/或組成物中去除宿主細胞和宿主細胞碎片。在一些實施例中，該方法進一步包含離心步驟。在一些實施例中，該方法進一步包含無菌過濾步驟。在一些實施例中，該方法進一步包含切向流微過濾步驟。在一些實施例中，該方法進一步包含凝聚/沉澱步驟。
在一些實施例中，該方法進一步包含調配步驟，諸如處理組成物以形成醫藥上可接受之組成物或其前驅物。
在一些實施例中，該方法進一步包含確定組成物的水解酵素活性率。在一些實施例中，該方法進一步包含對從本文所述的純化平台獲得的組成物執行水解活性測定。在一些實施例中，水解活性測定包含藉由監測受質諸如非螢光受質向水解酵素的可檢測產物諸如螢光產物的轉化來量測一種或多種水解酵素的水解活性。在一些實施例中，受質包含酯鍵。在一些實施例中，該方法進一步包含確定一種或多種水解酵素的產物，例如，如 WO2018035025 中所述，其在此藉由引用整體併入本文。在一些實施例中，該方法進一步包含藉由執行脂肪酸質譜 (FAMS) 測定來確定從本文所述的純化平台獲得的組成物中游離脂肪酸 (FFA) 的含量。在一些實施例中，為了監測各洗提池中 PS20 降解後游離脂肪酸的含量，首先製備樣品用於 PS20 穩定性研究，並隨後藉由質譜法進行分析。在一些實施例中，該方法進一步包含確定組成物中一種或多種水解酵素的含量。在一些實施例中，該方法進一步包含確定組成物的保存期限。在一些實施例中，該方法進一步包含確定組成物中標的物的聚集物的含量。
在一些實施例中，水解活性測定 (LEAP 測定) 包含藉由監測非螢光受質通過受質酯鍵斷裂向螢光產物的轉化來量測水解活性。在一些實施例中，藉由從樣品的反應率 (k raw[RFU/h]) 中減去酶空白的反應率 (k self-cleavage [RFU/h]) 來確定以 [μM MU/h] 的水解活性，並藉由將項除以轉換因子 a [RFU/µM] 將螢光信號轉換為 µM MU/h。在一些實施例中，將水解活性標準化為每孔施加的蛋白質濃度。在一些實施例中，當參考樣品代表 100% 水解活性時，水解活性被報告為參考樣品的水解活性的百分比。
在一些實施例中，脂肪酸質譜 (FAMS) 測定包含獲得月桂酸、肉豆蔻酸和同位素標記的 (D 23)-月桂酸和 ( 13C 14) 肉豆蔻酸的質量的萃取離子層析圖 (XIC)。在一些實施例中，對各自峰進行積分並確定月桂酸和 D 23-月桂酸之間的峰面積比以及肉豆蔻酸和 13C 14-肉豆蔻酸之間的比值。在一些實施例中，峰面積比用於計算樣品中月桂酸及/或肉豆蔻酸的濃度。在一些實施例中，當參考樣品的量設置為 100% 時，FFA（月桂酸 (LA) 及/或肉豆蔻酸 (MA)）的量報告為百分比。 IV. 樣品及其組分
在一些實施例中，本文所述的純化平台和方法用於在任何程度上從包含標的物的樣品中純化標的物。
在一些實施例中，樣品是宿主細胞樣品。在一些實施例中，樣品是宿主細胞培養液 (HCCF)。在一些實施例中，樣品包含宿主細胞培養液的一部分。在一些實施例中，樣品源自宿主細胞培養液。在一些實施例中，樣品包含宿主細胞。在一些實施例中，樣品包含宿主細胞的組分，諸如宿主細胞碎片。在一些實施例中，宿主細胞是細菌細胞。在一些實施例中，宿主細胞是大腸桿菌 ( E. coli) 細胞。在一些實施例中，宿主細胞是昆蟲細胞。在一些實施例中，宿主細胞是哺乳動物細胞。在一些實施例中，宿主細胞是中華倉鼠卵巢 (CHO) 細胞。在一些實施例中，宿主細胞是人類細胞。
在一些實施例中，樣品已被處理，諸如經歷在使樣品經歷本文所述的純化平台之前執行的處理步驟。在一些實施例中，樣品包含界面活性劑。在一些實施例中，樣品包含聚山梨醇酯。在一些實施例中，聚山梨醇酯選自由以下所組成之群組：聚山梨醇酯 20、聚山梨醇酯 40、聚山梨醇酯 60 和聚山梨醇酯 80。
在一些實施例中，樣品包含標的物。在一些實施例中，標的物包含多肽。在一些實施例中，標的物是多肽。在一些實施例中，標的物是重組多肽。在一些實施例中，標的物是多肽複合物。在一些實施例中，標的物是抗體部分。在一些實施例中，抗體部分是單株抗體。在一些實施例中，抗體部分為人源化抗體。在一些實施例中，抗體部分選自由以下所組成之群組：抗 TAU 抗體、抗 TGFβ3 抗體、抗 VEGF-A 抗體、抗 CD20 抗體、抗 CD40 抗體、抗 HER2 抗體、抗 IL6 抗體、抗 IgE 抗體、抗 IL13 抗體、抗 TIGIT 抗體、抗 PD-L1 抗體、抗 VEGF-A/ANG2 抗體、抗 CD79b 抗體、抗 ST2 抗體、抗因子 D 抗體、抗因子 IX 抗體、抗因子 X 抗體、抗 aβ 抗體、抗 CEA 抗體、抗 CEA/CD3 抗體、抗 CD20/CD3 抗體、抗 FcRH5/CD3 抗體、抗 Her2/CD3 抗體、抗 FGFR1/KLB 抗體、FAP-4-1 BBL 融合蛋白、FAP-IL2v 融合蛋白和 TYRP1 TCB 抗體。在一些實施例中，抗體部分選自由以下所組成之群組：奧瑞珠單抗、帕妥珠單抗、蘭尼單抗、曲妥珠單抗、托珠單抗、法利昔單抗、帕羅托珠單抗、甘特珠單抗、賽必妥單抗、克瑞珠單抗、莫蘇尼妥珠單抗、替瑞利尤單抗、貝伐珠單抗、利妥昔單抗、阿替利珠單抗、阿托珠單抗、蘭帕利珠單抗、奧馬珠單抗、蘭尼單抗、艾美賽珠單抗、塞魯單抗、prasinezumab、RO6874281 及 RO7122290。
在一些實施例中，樣品包含一種或多種宿主細胞蛋白質。在一些實施例中，宿主細胞蛋白質是水解酵素。在一些實施例中，水解酵素是脂肪酶、酯酶、硫酯酶、磷脂酶、羧酸酯酶、水解酶、角質酶或神經醯胺酶。在一些實施例中，水解酵素是多酶蛋白。在一些實施例中，多酶蛋白是脂肪酸合成酶。在一些實施例中，脂肪酸合成酶包含硫酯酶次單元。
在一些實施例中，樣品具有基線水解酵素活性率，諸如藉由本文所述的水解酵素活性測定法所量測。在一些實施例中，樣品的基線水解酵素活性率至少部分地基於宿主細胞水解酵素的存在。在一些實施例中，水解酵素是脂肪酶、酯酶、硫酯酶、磷脂酶、羧酸酯酶、水解酶、角質酶或神經醯胺酶。
在一些實施例中，樣品包含添加的組分，諸如界面活性劑，例如聚山梨醇酯。在一些實施例中，在純化之前將組分添加到樣品中，諸如添加到 HCCF 中。 V. 從純化平台獲得的組成物及醫藥組成物
本文所述的純化平台包含許多步驟。在一些實施例中，術語「組成物」在本文中用於描述純化平台的任何階段的任何輸入（純化平台的初始樣品輸入除外）、中間體或輸出。例如，在一些實施例中，術語「組成物」的使用不限於描述純化平台的最終輸出。在一些實施例中，組成物已經藉由 HIC 步驟及/或深層過濾步驟及/或 MM-HIC/IEX 層析步驟進行處理。
在一些實施例中，組成物包含界面活性劑。在一些實施例中，組成物包含聚山梨醇酯。在一些實施例中，聚山梨醇酯選自由以下所組成之群組：聚山梨醇酯 20、聚山梨醇酯 40、聚山梨醇酯 60 和聚山梨醇酯 80。
在一些實施例中，組成物包含標的物。在一些實施例中，標的物包含多肽。在一些實施例中，標的物是多肽。在一些實施例中，標的物是多肽複合物。在一些實施例中，標的物是抗體部分。在一些實施例中，抗體部分是單株抗體。在一些實施例中，抗體部分為人源化抗體。在一些實施例中，抗體部分選自由以下所組成之群組：抗 TAU 抗體、抗 TGFβ3 抗體、抗 VEGF-A 抗體、抗 CD20 抗體、抗 CD40 抗體、抗 HER2 抗體、抗 IL6 抗體、抗 IgE 抗體、抗 IL13 抗體、抗 TIGIT 抗體、抗 PD-L1 抗體、抗 VEGF-A/ANG2 抗體、抗 CD79b 抗體、抗 ST2 抗體、抗因子 D 抗體、抗因子 IX 抗體、抗因子 X 抗體、抗 aβ 抗體、抗 CEA 抗體、抗 CEA/CD3 抗體、抗 CD20/CD3 抗體、抗 FcRH5/CD3 抗體、抗 Her2/CD3 抗體、抗 FGFR1/KLB 抗體、FAP-4-1 BBL 融合蛋白、FAP-IL2v 融合蛋白和 TYRP1 TCB 抗體。在一些實施例中，抗體部分選自由以下所組成之群組：奧瑞珠單抗、帕妥珠單抗、蘭尼單抗、曲妥珠單抗、托珠單抗、法利昔單抗、帕羅托珠單抗、甘特珠單抗、賽必妥單抗、克瑞珠單抗、莫蘇尼妥珠單抗、替瑞利尤單抗、貝伐珠單抗、利妥昔單抗、阿替利珠單抗、阿托珠單抗、蘭帕利珠單抗、奧馬珠單抗、蘭尼單抗、艾美賽珠單抗、塞魯單抗、prasinezumab、RO6874281 及 RO7122290。
在一些實施例中，組成物包含一種或多種宿主細胞蛋白質。在一些實施例中，宿主細胞蛋白質是水解酵素。在一些實施例中，水解酵素是脂肪酶、酯酶、硫酯酶、磷脂酶、羧酸酯酶、水解酶、角質酶或神經醯胺酶。
在一些實施例中，與相關參考相比，諸如從不包含 HIC 步驟及/或深層過濾步驟及/或 MM-HIC/IEX 層析步驟的純化平台獲得的組成物，該組成物具有降低的水解酵素活性率，其中水解酵素活性率的降低至少為約 20%，諸如至少約 25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90% 或 95% 中的任一者。在一些實施例中，參考來自使用相同純化平台純化的樣品，該純化平台沒有一個或多個深層過濾步驟及/或一個或多個 HIC 步驟及/或 MM-HIC/IEX 層析步驟。
在一些實施例中，本揭示提供了從本文所述的純化平台獲得的醫藥組成物。在一些實施例中，醫藥組成物是從本文所述的方法獲得的。在一些實施例中，醫藥組成物是純化的組成物。在一些實施例中，醫藥組成物是無菌的醫藥組成物。
在一些實施例中，醫藥組成物包含抗體部分。在一些實施例中，醫藥組成物包含抗體部分和聚山梨醇酯。在一些實施例中，醫藥組成物包含抗體部分、聚山梨醇酯和宿主細胞不純物，諸如宿主細胞蛋白質，例如水解酵素。
在一些實施例中，醫藥組成物包含聚山梨醇酯。在一些實施例中，醫藥組成物選自由以下所組成之群組：聚山梨醇酯 20、聚山梨醇酯 40、聚山梨醇酯 60 和聚山梨醇酯 80。
在一些實施例中，與相關參考相比，諸如從不包含 HIC 步驟及/或深層過濾步驟及/或 MM-HIC/IEX 層析步驟的純化平台獲得的醫藥組成物，該醫藥組成物具有降低的水解酵素活性率，其中水解酵素活性率的降低至少為約 20%，諸如至少約 25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90% 或 95% 中的任一者。在一些實施例中，參考來自使用相同純化平台純化的樣品，該純化平台沒有一個或多個深層過濾步驟及/或一個或多個 HIC 步驟及/或一個或多個 MM-HIC/IEX 層析步驟。
在一些實施例中，與從使用相同純化平台純化相同樣品而沒有一個或多個深層過濾步驟及/或一個或多個 HIC 步驟及/或一個或多個 MM-HIC/IEX 層析步驟獲得的組成物相比，醫藥組成物具有一種或多種水解酵素降低的含量。
在一些實施例中，與從使用相同純化平台純化相同樣品而沒有一個或多個深層過濾步驟及/或一個或多個 HIC 步驟及/或一個或多個 MM-HIC/IEX 層析步驟獲得的組成物相比，醫藥組成物具有減弱的聚山梨醇酯之降解。
在一些實施例中，與從使用相同純化平台純化相同樣品而沒有一個或多個深層過濾步驟及/或一個或多個 HIC 步驟及/或一個或多個 MM-HIC/IEX 層析步驟獲得的組成物相比，醫藥組成物具有延長的保存期限。
在一些實施例中，與從使用相同純化平台純化相同樣品而沒有一個或多個深層過濾步驟及/或一個或多個 HIC 步驟及/或一個或多個 MM-HIC/IEX 層析步驟獲得的組成物相比，醫藥組成物具有較少的經降解之聚山梨醇酯。
在一些實施例中，與從使用相同純化平台純化相同樣品而沒有一個或多個深層過濾步驟及/或一個或多個 HIC 步驟及/或一個或多個 MM-HIC/IEX 層析步驟獲得的組成物相比，醫藥組成物具有降低的標的物聚集。
在一些方面，本揭示提供了從本文所述的純化平台獲得的經調配之抗體部分組成物。在一些實施例中，經調配之抗體部分組成物從本文所述的方法獲得。
在一些實施例中，經調配之抗體部分組成物包含抗體部分。在一些實施例中，經調配之抗體部分組成物包含抗體部分和聚山梨醇酯。在一些實施例中，經調配之抗體部分組成物包含抗體部分、聚山梨醇酯和宿主細胞不純物，諸如宿主細胞蛋白質，例如一種或多種水解酵素。
在一些實施例中，與參考相比，諸如在沒有一個或多個深層過濾步驟及/或一個或多個 HIC 步驟及/或一個或多個 MM-HIC/IEX 層析步驟的情況下從相同純化平台獲得的經調配之抗體部分組成物，本文所述的經調配之抗體部分組成物具有延長的保存期限。在一些實施例中，經由聚集經調配之抗體部分組成物的抗體部分來評估，諸如量測保存期限。在一些實施例中，經由保存經調配之抗體部分組成物的抗體部分的一種或多種功能性來評估，諸如量測保存期限。在一些實施例中，經由經調配之抗體部分組成物的抗體部分的活性，諸如結合活性來評估，諸如量測保存期限。
在一些實施例中，包含抗體部分和聚山梨醇酯的經調配之抗體部分組成物具有降低的聚山梨醇酯水解率，其中組成物的保存期限超過約 8 個月，諸如超過約 9 個月、10 個月、11 個月、12 個月、13 個月、14 個月、15 個月、16 個月、17 個月、18 個月、19 個月、20 個月、21 個月、22 個月、23 個月、24 個月、25 個月、26 個月、27 個月、28 個月、29 個月、30 個月、31 個月、32 個月、33 個月、34 個月、35 個月或 36 個月中的任一者。在一些實施例中，具有降低的聚山梨醇酯水解率的經調配之抗體部分組成物與參考相比，該參考係諸如在沒有一個或多個深層過濾步驟及/或一個或多個 HIC 步驟及/或一個或多個 MM-HIC/IEX 層析步驟的情況下從相同純化平台獲得的經調配之抗體部分組成物。在一些實施例中，降低的聚山梨醇酯水解率是降低的聚山梨醇酯水解的相對率。
在一些實施例中，包含抗體部分和聚山梨醇酯的經調配之抗體部分組成物具有降低的聚山梨醇酯水解率，其中相較於提交衛生主管機關與該經調配之抗體部分組成物有關的文件中所指的保存期限，該組成物的保存期限延長，並且其中相較於該等文件中所指的保存期限，保存期限延長了至少約 2 個月，諸如至少約 3 個月、4 個月、5 個月、6 個月、7 個月、8 個月、9 個月、10 個月、11 個月或 12 個月中的任一者。在一些實施例中，具有降低的聚山梨醇酯水解率的經調配之抗體部分組成物與參考相比，該參考係諸如在沒有一個或多個深層過濾步驟及/或一個或多個 HIC 步驟及/或一個或多個 MM-HIC/IEX 層析步驟的情況下從相同純化平台獲得的經調配之抗體部分組成物。在一些實施例中，降低的聚山梨醇酯水解率是降低的聚山梨醇酯水解的相對率。
在一些實施例中，包含抗體部分和聚山梨醇酯的經調配之抗體部分組成物具有降解程度減弱的聚山梨醇酯，其中相較於提交衛生主管機關與該經調配之抗體部分組成物有關的文件中所指的降解，該降解降低至少約 5%，諸如至少約 10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95% 或 100% 中的任一者。在一些實施例中，具有減少的聚山梨醇酯之降解的經調配之抗體部分組成物與參考相比，該參考係諸如在沒有一個或多個深層過濾步驟及/或一個或多個 HIC 步驟及/或 MM-HIC/IEX 層析步驟的情況下從相同純化平台獲得的經調配之抗體部分組成物。在一些實施例中，減少的聚山梨醇酯之降解是減少的聚山梨醇酯之相對降解。
在一些實施例中，與參考相比，經調配之抗體部分組成物的聚山梨醇酯水解率降低至少約 5%，諸如至少約 10%、15%、20%、25%、30%、35%、40 %、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95% 或 100% 中的任一者。
在一些實施例中，經調配之抗體部分組成物包含抗體部分和聚山梨醇酯，其中聚山梨醇酯在液體組成物的儲存期間降解約每年 60% 或更少，諸如約每年 55% 或更少、每年 50% 或更少、每年 45% 或更少、每年 40% 或更少、每年 35% 或更少、每年 30% 或更少、每年 25% 或更少、每年 20% 或更少、每年 15% 或更少，每年 10% 或更少，或每年 5% 或更少中的任一者。
在一些實施例中，與參考相比，諸如在沒有一個或多個深層過濾步驟及/或一個或多個 HIC 步驟及/或一個或多個 MM-HIC/IEX 層析步驟的情況下從相同純化平台獲得的經調配之抗體部分組成物，本文所述的經調配之抗體部分組成物在至少約 6 個月，諸如至少約 7 個月、8 個月、9 個月、10 個月、11 個月、12 個月、13 個月、14 個月、15 個月、16 個月、17 個月、18 個月、19 個月、20 個月、21 個月、22 個月、23 個月或 24 個月中的任一者具有降低的聚集物形成。在一些實施例中，與持續至少約 6 個月，諸如至少約 7 個月、8 個月、9 個月、10 個月、11 個月、12 個月、13 個月、14 個月、15 個月、16 個月、17 個月、18 個月、19 個月、20 個月、21 個月、22 個月、23 個月或 24 個月中的任一者的參考相比，其中該參考是在沒有一個或多個深層過濾步驟及/或一個或多個 HIC 步驟及/或一個或多個 MM-HIC/IEX 層析步驟的情況下從相同純化平台獲得的經調配之抗體部分組成物，本文所述的經調配之抗體部分組成物具有至少約減少 20%，諸如至少約減少 25%、減少 30%、減少 35%、減少 40%、減少 45%、減少 50%、減少 55%、減少 65%、減少 70%、減少 75%、減少 80%、減少 85%、減少 90%、減少 95% 或減少 100% 中的任一者的聚集物形成。用於評估諸如量測聚集物形成的方法是本領域已知的並且包括例如目視檢查、動態光散射、靜態光散射和光密度量測。
在一些實施例中，諸如與持續至少約 6 個月，諸如至少約 7 個月、8 個月、9 個月、10 個月、11 個月、12 個月、13 個月、14 個月、15 個月、16 個月、17 個月、18 個月、19 個月、20 個月、21 個月、22 個月、23 個月或 24 個月中的任一者的參考相比，其中該參考是在沒有一個或多個深層過濾步驟及/或一個或多個 HIC 步驟及/或一個或多個 MM-HIC/IEX 層析步驟的情況下從相同純化平台獲得的經調配之抗體部分組成物，本文所述的經調配之抗體部分組成物保持至少約 50%，諸如至少約 55%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99% 的抗體部分活性的。
在一些實施例中，抗體部分是單株抗體。
在一些實施例中，抗體部分是人類抗體、人源化抗體或嵌合抗體。
在一些實施例中，抗體選自由以下所組成之群組：抗 TAU 抗體、抗 TGFβ3 抗體、抗 VEGF-A 抗體、抗 CD20 抗體、抗 CD40 抗體、抗 HER2 抗體、抗 IL6 抗體、抗 IgE 抗體、抗 IL13 抗體、抗 TIGIT 抗體、抗 PD-L1 抗體、抗 VEGF-A/ANG2 抗體、抗 CD79b 抗體、抗 ST2 抗體、抗因子 D 抗體、抗因子 IX 抗體、抗因子 X 抗體、抗 aβ 抗體、抗 CEA 抗體、抗 CEA/CD3 抗體、抗 CD20/CD3 抗體、抗 FcRH5/CD3 抗體、抗 Her2/CD3 抗體、抗 FGFR1/KLB 抗體、FAP-4-1 BBL 融合蛋白、FAP-IL2v 融合蛋白和 TYRP1 TCB 抗體。
在一些實施例中，抗體部分選自由以下所組成之群組：奧瑞珠單抗、帕妥珠單抗、蘭尼單抗、曲妥珠單抗、托珠單抗、法利昔單抗、帕羅托珠單抗、甘特珠單抗、賽必妥單抗、克瑞珠單抗、莫蘇尼妥珠單抗、替瑞利尤單抗、貝伐珠單抗、利妥昔單抗、阿替利珠單抗、阿托珠單抗、蘭帕利珠單抗、奧馬珠單抗、蘭尼單抗、艾美賽珠單抗、塞魯單抗、prasinezumab、RO6874281 及 RO7122290。
在一些實施例中，聚山梨醇酯選自由以下所組成之群組：聚山梨醇酯 20、聚山梨醇酯 40、聚山梨醇酯 60 和聚山梨醇酯 80。
本文報導的其他方面是在儲存期間具有低聚山梨醇酯降解的經調配之抗體組成物。本發明的一個方面是包含抗體/蛋白質和聚山梨醇酯的經調配之抗體組成物，其中聚山梨醇酯在經調配之抗體組成物的儲存/保存期限期間每年降解約 50% 或更少（諸如約 45% 或更少、40% 或更少、35% 或更少、30% 或更少、25% 或更少、20% 或更少、15% 或更少、10% 或更少、9% 或更少、8% 或更少、7% 或更少、6% 或更少、5% 或更少、4% 或更少、3% 或更少、2% 或更少、或 1% 或更少中的任一者。在一個實施例中，聚山梨醇酯在液體組成物的儲存期間每年降解 10% 或更少。
另一方面是包含抗體和聚山梨醇酯的經調配之抗體組成物，其中一年之後聚山梨醇酯以初始濃度的至少約 50%，諸如至少約 55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98% 或 99% 中的任一者的濃度存在於組成物中，其中初始濃度是抗體在液體組成物中調配或開始儲存時的濃度。本領域習知此項技術者將認識到，在本申請揭示之範圍和精神內，若干實施例是可能的。藉由以下實例進一步說明本揭示，其不應將其解釋為將本揭示在範圍或精神上限制於其中描述的具體程序。 例示性實施例
實施例 1.一種降低從純化平台獲得的組成物的水解酵素活性率的方法，該方法包含使樣品經歷純化平台，該純化平台包含：捕獲步驟；一個或多個離子交換 (IEX) 層析步驟；和深層過濾步驟，從而與沒有深層過濾步驟的樣品純化相比，降低了組成物的水解酵素活性率。
實施例 2.如實施例 1 之方法，其中一個或多個 IEX 層析步驟中的每一個步驟選自由以下所組成之群組：陰離子交換 (AEX) 層析步驟、陽離子交換 (CEX) 層析步驟及多模式離子交換 (MMIEX) 層析步驟。
實施例 3.如實施例 2 之方法，其中 MMIEX 層析步驟包含多模式陽離子交換/陰離子交換 (MM-AEX/CEX) 層析步驟。
實施例 4.如實施例 1 至 3 中任一項之方法，其進一步包含病毒過濾步驟。
實施例 5.如實施例 1 至 4 中任一項之方法，其進一步包含超過濾/透析過濾 (UF/DF) 步驟。
實施例 6.如實施例 5 之方法，其中純化平台依序包含：捕獲步驟；CEX 層析步驟；AEX 層析步驟；深層過濾步驟；病毒過濾步驟；和 UF/DF 步驟。
實施例 7.如實施例 1 至 6 中任一項之方法，其中深層過濾步驟包含經由深層過濾器之處理，且其中該深層過濾器為 X0SP 深層過濾器、C0SP 深層過濾器、D0SP 深層過濾器、Polisher ST 深層過濾器或 EMPHAZE™ 深層過濾器。
實施例 8.如實施例 1 至 6 中任一項之方法，其進一步包含 HIC 步驟，該 HIC 步驟包含經由 Sartobind® phenyl 之處理。
實施例 9.一種降低從純化平台獲得的組成物的水解酵素活性率的方法，該方法包含使樣品經歷純化平台，該純化平台包含：捕獲步驟；多模式疏水性交互作用/離子交換 (MM-HIC/IEX) 層析步驟；和疏水性交互作用層析 (HIC) 步驟，從而與沒有 HIC 步驟及/或 MM-HIC/IEX 層析步驟的樣品純化相比，降低了組成物的水解酵素活性率。
實施例 10.如實施例 9 之方法，其中 MM-HIC/IEX 層析步驟包含經由 MM-HIC/IEX 層析介質之處理且在 pH 約 4.5 至約 9 執行該處理。
實施例 11.如實施例 9 或 10 之方法，其中 MM-HIC/IEX 層析步驟為多模式疏水性交互作用/陰離子交換 (MM-HIC/AEX) 層析步驟。
實施例 12.如實施例 11 之方法，其中 MM-HIC/AEX 層析步驟包含經由 Capto™ Adhere 或 Capto™ Adhere ImpRes 之處理。
實施例 13.如實施例 9 或 10 之方法，其中 MM-HIC/IEX 層析步驟為多模式疏水性交互作用/陽離子交換 (MM-HIC/CEX) 層析步驟。
實施例 14.如實施例 13 之方法，其中 MM-HIC/CEX 層析步驟包含 Capto™ MMC 或 Capto™ MMC ImpRes。
實施例 15.如實施例 9 至 14 中任一項之方法，其中純化平台依序包含：捕獲步驟；MM-HIC/IEX 層析步驟；和 HIC 步驟。
實施例 16.如實施例 9 至 15 中任一項之方法，其進一步包含病毒過濾步驟。
實施例 17.如實施例 9 至 16 中任一項之方法，其進一步包含超過濾/透析過濾 (UF/DF) 步驟。
實施例 18.如實施例 17 之方法，其中純化平台依序包含：捕獲步驟；MM-HIC/AEX 層析步驟；HIC 步驟；病毒過濾步驟；和 UF/DF 步驟。
實施例 19.如實施例 9 至 18 中任一項之方法，其進一步包含深層過濾步驟。
實施例 20.如實施例 19 之方法，其中純化平台依序包含：捕獲步驟；深層過濾步驟；MM-HIC/AEX 層析步驟；和 HIC 步驟。
實施例 21.如實施例 19 或 20 之方法，其中深層過濾步驟包含經由深層過濾器之處理，且其中該深層過濾器為 X0SP 深層過濾器。
實施例 22.如實施例 19 或 20 之方法，其中深層過濾步驟包含經由深層過濾器之處理，且其中該深層過濾器為 EMPHAZE™ 深層過濾器或 Polisher ST 深層過濾器。
實施例 23.如實施例 19 至 22 中任一項之方法，其中深層過濾器結合 MM-HIC/AEX 層析步驟用為負載過濾器。
實施例 24.如實施例 23 之方法，其中 MM-HIC/AEX 層析步驟包含經由 Capto™ Adhere 或 Capto™ Adhere ImpRes 之處理。
實施例 25.如實施例 19 之方法，其中純化平台依序包含：捕獲步驟；MM-HIC/AEX 層析步驟；深層過濾步驟；和 HIC 步驟。
實施例 26.如實施例 25 之方法，其中深層過濾步驟包含經由深層過濾器之處理，且其中該深層過濾器為 X0SP 深層過濾器、C0SP 深層過濾器或 D0SP 深層過濾器。
實施例 27.如實施例 25 之方法，其中深層過濾步驟包含經由深層過濾器之處理，且其中該深層過濾器為 EMPHAZE™ 深層過濾器或 Polisher ST 深層過濾器。
實施例 28.如實施例 25 至 27 中任一項之方法，其中 MM-HIC/AEX 層析步驟包含經由 Capto™ Adhere 或 Capto™ Adhere ImpRes 之處理。
實施例 29.一種降低從純化平台獲得的組成物的水解酵素活性率的方法，該方法包含使樣品經歷純化平台，該純化平台包含：捕獲步驟；一個或多個離子交換 (IEX) 層析步驟；和疏水性交互作用層析 (HIC) 步驟，從而與沒有 HIC 步驟的樣品純化相比，降低了組成物的水解酵素活性率。
實施例 30.如實施例 29 之方法，其中一個或多個 IEX 層析步驟為陽離子交換 (CEX) 層析步驟。
實施例 31.如實施例 29 或 30 之方法，其進一步包含病毒過濾步驟。
實施例 32.如實施例 29 至 31 中任一項之方法，其進一步包含超過濾/透析過濾 (UF/DF) 步驟。
實施例 33.如實施例 32 之方法，其進一步包含在 UF/DF 步驟之前的任何階段執行的深層過濾步驟。
實施例 34.如實施例 33 之方法，其中純化平台依序包含：捕獲步驟；CEX 層析步驟；HIC 步驟；病毒過濾步驟；和 UF/DF 步驟。
實施例 35.一種降低從純化平台獲得的組成物的水解酵素活性率的方法，該方法包含使樣品經歷純化平台，該純化平台包含：一個或多個離子交換 (IEX) 層析步驟；疏水性交互作用層析 (HIC) 步驟；和深層過濾步驟，從而與沒有 HIC 步驟或深層過濾步驟的樣品純化相比，降低了組成物的水解酵素活性率。
實施例 36.如實施例 35 之方法，其中該降低是相較於未經 HIC 及深層過濾步驟之樣品的純化。
實施例 37.如實施例 35 或 36 之方法，其中一個或多個 IEX 層析步驟中的每一個步驟選自由以下所組成之群組：陰離子交換 (AEX) 層析步驟、陽離子交換 (CEX) 層析步驟及多模式離子交換 (MMIEX) 層析步驟。
實施例 38.如實施例 37 之方法，其中 MMIEX 層析步驟包含多模式陽離子交換/陰離子交換 (MM-AEX/CEX) 層析步驟。
實施例 39.如實施例 35 至 38 中任一項之方法，其進一步包含超過濾/透析過濾 (UF/DF) 步驟。
實施例 40.如實施例 39 之方法，其中純化平台依序包含：CEX 層析步驟；HIC 步驟；MMIEX 層析步驟；AEX 層析步驟；深層過濾步驟；和 UF/DF 步驟。
實施例 41.一種降低從純化平台獲得的組成物的水解酵素活性率的方法，該方法包含使樣品經歷純化平台，該純化平台包含：捕獲步驟；一個或多個離子交換 (IEX) 層析步驟；多模式疏水性交互作用/離子交換 (MM-HIC/IEX) 層析步驟；以及以下之一者或兩者：疏水性交互作用層析 (HIC) 步驟；和深層過濾步驟，從而與沒有 HIC 步驟或深層過濾步驟的樣品純化相比，降低了組成物的水解酵素活性率。
實施例 42.如實施例 41 之方法，其中該降低是相較於未經 HIC 及深層過濾步驟之樣品的純化。
實施例 43.如實施例 41 或 42 之方法，其進一步包含病毒過濾步驟。
實施例 44.如實施例 41 至 43 中任一項之方法，其進一步包含超過濾/透析過濾 (UF/DF) 步驟。
實施例 45.如實施例 41 至 44 中任一項之方法，其中深層過濾步驟作為負載過濾器而執行以用於 MM-HIC/IEX 層析步驟、作為負載過濾器而執行以用於 HIC 步驟，或接續 HIC 步驟而執行。
實施例 46.如實施例 41 至 45 中任一項之方法，其中一個或多個 IEX 層析步驟中的每一個步驟選自由以下所組成之群組：陽離子交換 (CEX) 層析步驟、陰離子交換 (AEX) 層析步驟及多模式離子交換 (MMIEX) 層析步驟。
實施例 47.如實施例 41 至 46 中任一項之方法，其中 MM-HIC/IEX 層析步驟為多模式疏水性交互作用/陰離子交換 (MM-HIC/AEX) 層析步驟。
實施例 48.如實施例 47 之方法，其中 MM-HIC/AEX 層析步驟包含經由 Capto™ Adhere 或 Capto™ Adhere ImpRes 之處理。
實施例 49.如實施例 1 至 34 及實施例 41 至 48 中任一項之方法，其中捕獲步驟包含經由親和力層析之處理。
實施例 50.如實施例 1 至 34 及實施例 41 至 48 中任一項之方法，其中以結合及洗提模式執行捕獲步驟。
實施例 51.如實施例 49 或 50 之方法，其中親和力層析選自由蛋白質 A 層析、蛋白質 G 層析、蛋白質 A/G 層析、FcXL 層析、蛋白質 XL 層析、kappa 層析及 kappaXL 層析所組成之群組。
實施例 52.如實施例 1 至 6、19、20 及實施例 35 至 51 中任一項之方法，其中深層過濾步驟包含經由深層過濾器之處理。
實施例 53.如實施例 52 之方法，其中深層過濾器用為負載過濾器。
實施例 54.如實施例 52 或 53 之方法，其中深層過濾器包含受質，該受質包含矽藻土組成物、二氧化矽組成物、纖維素纖維、聚合物纖維、黏合樹脂及灰分組成物中之一者或多者。
實施例 55.如實施例 54 之方法，其中深層過濾器的受質的至少一部分包含表面改質。
實施例 56.如實施例 55 之方法，其中表面改質為四級胺表面改質、陽離子表面改質及陰離子表面改質中之一者或多者。
實施例 57.如實施例 52 至 56 中任一項之方法，其中深層過濾器選自由以下所組成之群組：X0SP 深層過濾器、D0SP 深層過濾器、C0SP 深層過濾器、EMPHAZE™ 深層過濾器、PDD1 深層過濾器、PDE1 深層過濾器、PDH5 深層過濾器、ZETA PLUS™ 120ZA 深層過濾器、ZETA PLUS™ 120ZB 深層過濾器、ZETA PLUS™ DELI 深層過濾器、ZETA PLUS™ DELP 深層過濾器及 Polisher ST 深層過濾器。
實施例 58.如實施例 57 之方法，其中深層過濾器為 X0SP 深層過濾器、D0SP 深層過濾器或 C0SP 深層過濾器，且其中在 pH 約 4.5 至約 8 執行經由該深層過濾器之處理。
實施例 59.如實施例 57 之方法，其中深層過濾器為 EMPHAZE™ 深層過濾器，且其中在 pH 約 7 至約 9.5 執行經由該深層過濾器之處理。
實施例 60.如實施例 57 之方法，其中深層過濾器為 Polisher ST 深層過濾器，且其中在 pH 約 4.5 至約 9 執行經由該深層過濾器之處理。
實施例 61.如實施例 9 至 60 中任一項之方法，其中 HIC 步驟包含經由 HIC 膜或 HIC 管柱之處理。
實施例 62.如實施例 61 之方法，其中使用低鹽濃度執行經由 HIC 膜或 HIC 管柱之處理。
實施例 63.如實施例 59 至 61 中任一項之方法，其中以順流模式執行經由 HIC 膜或 HIC 管柱之處理。
實施例 64.如實施例 61 至 63 中任一項之方法，其中 HIC 膜或 HIC 管柱包含受質，該受質包含醚基、乙基、丙基、異丙基、丁基、己基、辛基及苯基中之一者或多者。
實施例 65.如實施例 61 至 64 中任一項之方法，其中 HIC 膜或 HIC 管柱選自由 Bakerbond WP HI-Propyl™、Phenyl Sepharose® Fast Flow (Phenyl-SFF)、Phenyl Sepharose® Fast Flow Hi-sub (Phenyl-SFF HS)、Toyopearl® Hexyl-650C、Toyopearl® Hexyl-650M、Toyopearl® Hexyl-650S、Poros™ Benzyl Ultra 及 Sartobind® phenyl 所組成之群組。
實施例 66.如實施例 64 或 65 之方法，其中在 pH 約 4.5 至約 7 執行經由 HIC 膜或 HIC 管柱之處理。
實施例 67.如實施例 1 至 8 及實施例 29 至 66 中任一項之方法，其中一個或多個 IEX 層析步驟中的每一個步驟包含經由 IEX 層析膜或 IEX 層析管柱之處理。
實施例 68.如實施例 67 之方法，其中 IEX 層析膜或 IEX 層析管柱選自由以下所組成之群組：SPSFF、QSFF、SPXL、Streamline™ SPXL、ABx™、Poros™ XS、Poros™ 50HS、DEAE、DMAE、TMAE、QAE 及 MEP-Hypercel™。
實施例 69.如實施例 1 至 68 中任一項之方法，其中純化平台用於自樣品純化標的物，且其中該樣品包含該標的物及一種或多種宿主細胞不純物。
實施例 70.如實施例 69 之方法，其中標的物包含多肽。
實施例 71.如實施例 1 至 70 中任一項之方法，其中標的物為抗體部分。
實施例 72.如實施例 71 之方法，其中抗體部分為單株抗體。
實施例 73.如實施例 71 或 72 之方法，其中抗體部分為人類抗體、人源化抗體或嵌合抗體。
實施例 74.如實施例 71 至 73 中任一項之方法，其中抗體部分選自由以下所組成之群組：抗 TAU 抗體、抗 TGFβ3 抗體、抗 VEGF-A 抗體、抗 CD20 抗體、抗 CD40 抗體、抗 HER2 抗體、抗 IL6 抗體、抗 IgE 抗體、抗 IL13 抗體、抗 TIGIT 抗體、抗 PD-L1 抗體、抗 VEGF-A/ANG2 抗體、抗 CD79b 抗體、抗 ST2 抗體、抗因子 D 抗體、抗因子 IX 抗體、抗因子 X 抗體、抗 abeta 抗體、抗 CEA 抗體、抗 CEA/CD3 抗體、抗 CD20/CD3 抗體、抗 FcRH5/CD3 抗體、抗 Her2/CD3 抗體、抗 FGFR1/KLB 抗體、FAP-4-1 BBL 融合蛋白、FAP-IL2v 融合蛋白及 TYRP1 TCB 抗體。
實施例 75.如實施例 71 至 74 中任一項之方法，其中抗體部分選自由以下所組成之群組：奧瑞珠單抗、帕妥珠單抗、蘭尼單抗、曲妥珠單抗、托珠單抗、法利昔單抗、帕羅托珠單抗、甘特珠單抗、賽必妥單抗、克瑞珠單抗、莫蘇尼妥珠單抗、替瑞利尤單抗、貝伐珠單抗、利妥昔單抗、阿替利珠單抗、阿托珠單抗、蘭帕利珠單抗、奧馬珠單抗、蘭尼單抗、艾美賽珠單抗、塞魯單抗、prasinezumab、RO6874281 及 RO7122290。
實施例 76.如實施例 69 至 75 中任一項之方法，其中一種或多種宿主細胞不純物包含宿主細胞蛋白質。
實施例 77.如實施例 76 之方法，其中宿主細胞蛋白質為水解酵素。
實施例 78.如實施例 77 之方法，其中水解酵素為脂肪酶、酯酶、硫酯酶、磷脂酶、羧酸酯酶、水解酶、角質酶或神經醯胺酶。
實施例 79.如實施例 1 至 78 中任一項之方法，其中樣品包含宿主細胞或源自其之組分。
實施例 80.如實施例 1 至 79 中任一項之方法，其中樣品為或衍生自細胞培養樣品。
實施例 81.如實施例 80 之方法，其中細胞培養樣品包含宿主細胞，且其中該宿主細胞為中華倉鼠卵巢 (CHO) 細胞或 E. coli細胞。
實施例 82.如實施例 1 至 81 中任一項之方法，其進一步包含樣品處理步驟。
實施例 83.如實施例 1 至 82 中任一項之方法，其中水解酵素活性率的降低係至少約 20%。
實施例 84.如實施例 1 至 83 中任一項之方法，其進一步包含確定組成物的水解酵素活性率。
實施例 85.如實施例 1 至 84 中任一項之方法，其進一步包含確定組成物中一種或多種水解酵素的含量。
實施例 86.如實施例 1 至 85 中任一項之方法，其中組成物包含聚山梨醇酯。
實施例 87.如實施例 86 之方法，其中聚山梨醇酯選自由聚山梨醇酯 20、聚山梨醇酯 40、聚山梨醇酯 60 及聚山梨醇酯 80 所組成之群組。
實施例 88.一種醫藥組成物，該醫藥組成物藉由如實施例 1 至 87 中任一項之方法獲得。
實施例 89.一種經調配之抗體部分組成物，其包含抗體部分及聚山梨醇酯，其中該組成物具有降低的聚山梨醇酯水解率，其中該組成物的保存期限大於 12 個月。
實施例 90.一種經調配之抗體部分組成物，其包含抗體部分及聚山梨醇酯，其中該組成物具有降低的聚山梨醇酯水解活性率，其中相較於提交衛生主管機關與該經調配之抗體部分組成物有關的文件中所指的保存期限，該組成物之該保存期限被延長，其中相較於該等文件中所指的保存期限，該保存期限延長至少 3 個月。
實施例 91.如實施例 89 或 90 之經調配之抗體部分組成物，其中聚山梨醇酯水解率降低至少約 20%。
實施例 92.一種經調配之抗體部分組成物，其包含抗體部分，其中該經調配之抗體部分組成物具有降解程度減弱的聚山梨醇酯，其中相較於提交衛生主管機關與該經調配之抗體部分組成物有關的文件中所指的降解，該降解程度減弱至少約 20%。
實施例 93.一種經調配之抗體部分組成物，其包含抗體部分及聚山梨醇酯，其中該聚山梨醇酯於液體組成物的儲存期間每年降解 50% 或更少。
實施例 94.如實施例 89 至 93 中任一項之經調配之抗體部分組成物，其中抗體部分為單株抗體。
實施例 95.如實施例 89 至 94 中任一項之經調配之抗體部分組成物，其中抗體部分為人類抗體、人源化抗體或嵌合抗體。
實施例 96.如實施例 89 至 95 中任一項之經調配之抗體部分組成物，其中抗體選自由以下所組成之群組：抗 TAU 抗體、抗 TGFβ3 抗體、抗 VEGF-A 抗體、抗 CD20 抗體、抗 CD40 抗體、抗 HER2 抗體、抗 IL6 抗體、抗 IgE 抗體、抗 IL13 抗體、抗 TIGIT 抗體、抗 PD-L1 抗體、抗 VEGF-A/ANG2 抗體、抗 CD79b 抗體、抗 ST2 抗體、抗因子 D 抗體、抗因子 IX 抗體、抗因子 X 抗體、抗 abeta 抗體、抗 CEA 抗體、抗 CEA/CD3 抗體、抗 CD20/CD3 抗體、抗 FcRH5/CD3 抗體、抗 Her2/CD3 抗體、抗 FGFR1/KLB 抗體、FAP-4-1 BBL 融合蛋白、FAP-IL2v 融合蛋白及 TYRP1 TCB 抗體。
實施例 97.如實施例 89 至 96 中任一項之經調配之抗體部分組成物，其中抗體部分選自由以下所組成之群組：奧瑞珠單抗、帕妥珠單抗、蘭尼單抗、曲妥珠單抗、托珠單抗、法利昔單抗、帕羅托珠單抗、甘特珠單抗、賽必妥單抗、克瑞珠單抗、莫蘇尼妥珠單抗、替瑞利尤單抗、貝伐珠單抗、利妥昔單抗、阿替利珠單抗、阿托珠單抗、蘭帕利珠單抗、奧馬珠單抗、蘭尼單抗、艾美賽珠單抗、塞魯單抗、prasinezumab、RO6874281 及 RO7122290。
實施例 98.如實施例 89 至 97 中任一項之經調配之抗體部分組成物，其中聚山梨醇酯選自由聚山梨醇酯 20、聚山梨醇酯 40、聚山梨醇酯 60 及聚山梨醇酯 80 所組成之群組。 實例 實例 1
本實例展示了以下純化平台之間的比較，純化平台依序包含：( 1) 捕獲步驟、包含 SP Sepharose® Fase Flow (SPSFF) 的 CEX 層析步驟、包含 Q Sepharose® Fast Flow (QSFF) 的 AEX 層析步驟、病毒過濾步驟和 UF/DF 步驟（控制純化平台）；( 2) 捕獲步驟、包含 SP Sepharose® Fase Flow (SPSFF) 的 CEX 層析步驟、包含 Q Sepharose® Fast Flow (QSFF) 的 AEX 層析步驟、包含 Sartobind® Phenyl 的 HIC 步驟、病毒過濾步驟和 UF/DF 步驟；以及 ( 3) 捕獲步驟、包含 SP Sepharose® Fase Flow (SPSFF) 的 CEX 層析步驟、包含 Q Sepharose® Fast Flow (QSFF) 的 AEX 層析步驟、包含 X0SP 深層過濾器的深層過濾步驟、病毒過濾步驟和 UF/DF 步驟。
如 材料和方法部分所述，使用 FAMS 測定量測所得純化組成物的水解活性。如 圖 2所示，與對照純化平台相比，具有包含 Sartobind® Phenyl 的 HIC 步驟的純化平台 ( 2) 以及具有包含 X0SP 深層過濾器的深層過濾步驟的純化平台 ( 3) 具有降低的水解活性。 實例 2
本實例展示了使用以下純化平台對比三個不同 HIC 步驟之使用，該平台依序包含：(1) 捕獲步驟、Capto™ Adhere (MM-HIC/AEX) 層析步驟和 HIC 步驟。測試的三種不同的 HIC 介質是：Phenyl SFF HS、Toyopearl® Hexyl-650C 和 Poros® Benzyl Ultra。每個 HIC 步驟都使用低鹽順流模式執行，其中沒有將 HIC 調節鹽添加到 HIC 負載中。量測了在 HIC 步驟之前（HIC 負載）和 HIC 步驟之後（HIC 池）的組成物的水解活性。HIC 步驟在順流和低鹽模式下執行（沒有 HIC 調節鹽添加到 HIC 負載）。下 表 1中提供了順流和低鹽模式下 HIC 步驟的操作條件。 表 1.HIC 步驟操作條件。
步驟 溶液
平衡 HIC 平衡緩衝劑，醋酸鈉，pH5 - 5.5
負載 pH 5 - 5.5，無需藉由添加鹽調節導電率
平衡洗滌/短暫標記 與平衡緩衝劑相同
如 材料和方法部分所述，使用 FAMS 測定量測 HIC 負載和 HIC 池的水解活性。如 圖 3所示，與 HIC 負載的起始材料相比，HIC 步驟降低了所得 HIC 池中的水解活性。 實例 3
本實例展示了在用於純化兩種分子的純化平台中包括 MM-HIC/AEX 層析步驟的影響，該純化平台依序包含：捕獲步驟、CEX 步驟，例如 Poros® 50HS，以及，視情況，包含 Capto™ Adhere 的 MM-HIC/AEX 層析步驟。評估了沒有 MM-HIC/AEX 層析步驟，即 Capto™ Adhere（Capto™ Adhere 負載）以及在 Capto™ Adhere 層析步驟（Capto™ Adhere 池）之後的純化組成物的水解活性。Capto™ Adhere 步驟以順流模式執行，並在 pH 5.5 和 8 兩者執行測試。MM-HIC/AEX 在順流模式的操作條件在下 表 2中提供。 表 2.MM-HIC/AEX 層析步驟操作條件。
步驟 溶液
平衡 平衡緩衝劑，醋酸鈉，pH 5.5（低 pI 分子）或 Tris，pH 8（高 pI 分子）
負載 調整到 pH 5.5 或 pH 8 以匹配平衡緩衝劑 無需藉由添加鹽調節導電率
平衡洗滌/短暫標記 與平衡緩衝劑相同
如 材料和方法部分所述，使用 FAMS 測定量測 Capto™ Adhere 負載和 Capto™ Adhere 池的水解活性。如 圖 4所示，與 Capto™ Adhere 負載的起始材料相比，Capto™ Adhere 層析步驟降低了每個分子純化所得 Capto™ Adhere 池中的水解活性。在 pH 5.5（對於分子 A）和 8（對於分子 B）兩者時都觀察到了這種水解活性的降低。 實例 4
本實例展示了以下純化平台之間的比較，純化平台依序包含：( 1) 包含 SP Sepharose® XL (SPXL) 的 CEX 層析步驟，包含 Bakerbond WP HI-Propyl™ 的 HIC 步驟，包含 ABx™ 的多模式陰離子/陽離子交換 (MM-AEX/CEX) 層析步驟、包含 Q Sepharose® Fast Flow (QSFF) 的 AEX 層析步驟和 UF/DF 步驟；( 2) 包含 SPXL 的 CEX 層析步驟、包含 Bakerbond WP HI-Propyl™ 的 HIC 步驟、包含 ABx™ 的 MM-AEX/CEX 層析步驟、包含 QSFF 的 AEX 層析步驟、包含 EMPHAZE™ AEX 深層過濾器的深層過濾步驟和 UF/DF 步驟；( 3) 包含 SPXL 的 CEX 層析步驟、包含 Bakerbond WP HI-Propyl™ 的 HIC 步驟、包含 ABx™ 的 MM-AEX/CEX 層析步驟、包含 QSFF 的 AEX 層析步驟、包含 Sartobind® Phenyl 的 HIC 步驟和 UF/DF 步驟；以及 ( 4) 包含 SPXL 的 CEX 層析步驟、包含 Bakerbond WP HI-Propyl™ 的 HIC 步驟、包含 ABx™ 的 MM-AEX/CEX 層析步驟、包含 QSFF 的 AEX 層析步驟、包含 X0SP 深層過濾器的深層過濾步驟和 UF/DF 步驟。
如 材料和方法部分所述，使用 FAMS 測定量測每個平台的來自純化平台 ( 1) 和深層過濾步驟（對於 ( 2) 和 ( 4)）之後或 Sartobind® Phenyl HIC 步驟之後的組成物的水解活性。如 圖 5所示，與對照純化平台 ( 1) 相比，具有包含 EMPHAZE™ AEX 深層過濾器的深層過濾步驟的純化平台 ( 2)、具有包含 Sartobind® Phenyl 的 HIC 步驟的純化平台 ( 3) 以及具有包含 X0SP 深層過濾器的深層過濾步驟的純化平台 ( 4) 水解活性降低。 材料與方法
蛋白質濃度的確定。使用 Cary® 50 紫外-可見分光光度計 (Varian) 或 NanoDrop™ OneC (Thermo Scientific) 藉由紫外光譜法確定蛋白質濃度。蛋白質樣品在其各自的緩衝劑中稀釋並重複量測。根據源自朗伯-比爾定律 (Lambert-Beer law) 的以下等式確定濃度： 𝑐 = (𝐴 280 nm – 𝐴 320 nm)/ 𝜀 ∙ 𝑑∙ F 其中 𝑐 蛋白質濃度 [mg/ml]、 𝐴 吸光度、ε 消光係數 [ml/(mg∙cm)]、 𝑑 細胞長度 [cm] 以及 F 稀釋因子。
水解活性測定（ LEAP 測定）。水解活性測定藉由監測非螢光受質（4-MU，Chem Impex Int'l Inc）通過受質酯鍵的裂解轉化為螢光產物（MU，Sigma-Aldrich）來量測水解活性。藉由使用 Amicon Ultra-0.5 ml 離心過濾裝置（10,000 Da 截斷值，Merck Millipore）將待分析的蛋白質池樣品重新緩衝至 150 mM Tris-Cl pH 8.0。測定反應混合物含有 80 µL 反應緩衝劑（150 mM Tris-Cl pH 8.0、0.25% (w/v) Triton X-100 和 0.125% (w/v) 阿拉伯膠）、10 µL 4-MU 受質（1 mM 在 DMSO 中）和 10 µL 蛋白質池樣品。將蛋白質池樣品濃度調整至 10-30 g/L，並在三種不同濃度進行測試。每個反應在 96 孔半面積聚苯乙烯板（黑色帶蓋和透明平底，Corning Incorporated）中設置三個技術重複，並且藉由在 Infinite 200Pro 酶標儀 (Tecan Life Sciences) 中將反應板在 37℃ 孵育兩小時，每 10 分鐘監測螢光信號（355 nm 激發，460 nm 發射）的增加。MU 生產率源自螢光時間過程的斜率（0.5 小時 - 2 小時），並且代表反應的原始速率（k raw[RFU/h]）。
另外建立酶空白反應以量測由緩衝基質引起的受質的任何非酶促裂解。10 µL 蛋白質池樣品在反應混合物中被 10 µL 150 mM Tris-Cl pH 8.0 替換。自裂解率 (k self-cleavage [RFU/h]) 源自螢光時間進程的斜率 (0.5 小時 - 2 小時)。為了將螢光信號 (RFU) 轉換為 μM 的 MU，每塊板添加了標準的 MU 一式三份。10 µL MU（100 µM 在 DMSO 中）補充有 10 µL 的 150 mM Tris-Cl pH 8.0 和 80 µL 的反應緩衝劑。轉換因子 a [RFU/µM] 是藉由將螢光信號平均（0.5 小時 - 2 小時）並將其除以孔中存在的 MU 最終濃度來進行計算。
藉由從樣品的反應率 (k raw[RFU/h]) 中減去酶空白的反應率 (k self-cleavage [RFU/h]) 來確定樣品的水解活性，以 [μM MU/h] 表示，並將該項除以轉換因子 a [RFU/µM] 將螢光信號轉換為 µM MU/h。將活性標準化為每孔施加的蛋白質濃度。為了以百分比報告水解活性，參考樣品的水解活性設置為 100%。
游離脂肪酸和質譜法 (FAMS) 測定。為了監測各洗提池中 PS20 降解後游離脂肪酸的含量，首先製備樣品用於 PS20 穩定性研究，並隨後藉由質譜法進行分析。除非另有說明，否則將蛋白質池樣品調整為相同的蛋白質濃度（如各自的實驗說明中所示），含有 0.04% (w/v) SR-PS20、10 mM L-甲硫胺酸和 100 mM Tris pH 8。L-甲硫胺酸作為有效的抗氧化劑添加，以控制實驗過程期間 PS20 的氧化降解。作為緩衝劑對照樣品，施加的蛋白質體積被相同體積的相應洗提緩衝系統替換。
所有反應混合物在 Thermomixer (Eppendorf) 中在 25℃ 或 40℃ 孵育。在定義的時間點（如各自的圖中所示）後取出樣品，並在 -80℃ 儲存直至隨後的分析。
將 50 µL 樣品轉移到新的 Eppendorf 杯中。加入 200 µL FFA 溶劑溶液（500 ng/mL D 23-月桂酸和 500 ng/mL 13C 14-肉豆蔻酸的乙腈溶液）並短暫渦旋。將樣品以 14.000 rpm 離心 5 分鐘，並轉移到 HPLC 小瓶中進行 MS 分析。在 Thermo Scientific™ Vanquish™ UHPLC 系統上使用 ACQUITY UPLC® Peptide BEH C18 管柱（1.7 µm 2.1x150 mm 和 300 Å）執行從 5 µL 的進樣樣品中分離脂肪酸。流速為 0.3 mL/min 且管柱溫度為 60℃，洗提液 A（0.1% 氫氧化銨水溶液）和洗提液 B（100% 乙腈）用於之後的梯度。初始條件為 70% 洗提液 B。梯度從 0.2 分鐘線性變化至 5.5 分鐘，將洗提液 A 增加至 100% 並保持至 6.0。洗提液 B 在 6.1 min 設為 70%，並保持至 10.0 min 以達到平衡。質譜儀（Triple TOF® 6600，AB Sciex）在負離子化模式下運行，其中離子噴霧電壓為 – 4500 V。源溫度設置為 450℃，且 TOF 質量範圍為 100-1000 m/Z。去簇電位為 -120 V，且碰撞能量為 -10 V。
生成月桂酸、肉豆蔻酸和同位素標記的 (D 23)-月桂酸以及 ( 13C 14) 肉豆蔻酸的質量的 XIC。對各自峰進行積分並確定月桂酸和 D 23-月桂酸之間的峰面積比以及肉豆蔻酸和 13C 14-肉豆蔻酸之間的比值。峰面積比用於計算樣品中月桂酸和肉豆蔻酸的濃度。藉由二重複方式執行量測。為了以百分比形式報告 FFA（月桂酸 (LA) 和肉豆蔻酸 (MA)）的量，參考樣品的量設置為 100%。 實例 5
本實例展示了用於純化分子 D 的以下純化平台之間的比較，純化平台依序包含：( 1) 捕獲步驟、包含 SP Sepharose® Fase Flow (SPSFF) 的 CEX 層析步驟、包含 Q Sepharose® Fast Flow (QSFF) 的 AEX 層析步驟、病毒過濾步驟和 UF/DF 步驟（控制純化平台）；以及 ( 2) 捕獲步驟、包含 SP Sepharose® Fase Flow (SPSFF) 的 CEX 層析步驟、包含 Q Sepharose® Fast Flow (QSFF) 的 AEX 層析步驟、包含 Polisher ST 深層過濾器的深層過濾步驟、病毒過濾步驟和 UF/DF 步驟。對於純化平台 ( 2)，深層過濾步驟在 pH 6 執行。
如實例 4 的 材料和方法部分所述，使用 FAMS 測定量測所得純化組成物的水解活性。如 圖 6所示，與沒有 Polisher ST 深層過濾步驟的對照純化平台相比，具有包含 Polisher ST 深層過濾器的深層過濾步驟的純化平台 ( 2) 提供了水解活性降低的所得組成物。 實例 6
本實例展示了用於純化分子 E 的以下純化平台之間的比較，純化平台依序包含：( 1) 捕獲步驟、CEX 步驟（例如 Poros® 50HS）以及包含 Capto™ Adhere 的 MM-HIC/AEX 層析步驟（對照純化平台）；以及 ( 2) 捕獲步驟、CEX 步驟（例如 Poros® 50HS）以及深層過濾步驟，該深層過濾步驟包含 Polisher ST 深層過濾器以對包含 Capto™ Adhere 的 MM-HIC/AEX 層析步驟的負載進行過濾。對於純化平台 ( 2)，深層過濾步驟在 pH 8 執行。
如實例 4 的 材料和方法部分所述，使用 FAMS 測定量測所得純化組成物的水解活性。如 圖 7所示，與沒有 Polisher ST 深層過濾步驟的對照純化平台相比，具有包含 Polisher ST 深層過濾器的深層過濾步驟的純化平台 ( 2) 提供了水解活性降低的所得組成物。
圖 1A-1E顯示了本文所述的例示性純化平台的示意圖。 圖 2顯示了從例示性純化平台獲得的組成物的水解活性（標準化為對照）的條形圖。使用 FAMS 測定法量測水解活性率。 圖 3顯示了從例示性純化平台獲得的組成物的水解活性（標準化為對照）的條形圖。使用 FAMS 測定法量測水解活性率。 圖 4顯示了從例示性純化平台獲得的組成物的水解活性（標準化為對照）的條形圖。使用 FAMS 測定法量測水解活性率。 圖 5顯示了從例示性純化平台獲得的組成物的水解活性（標準化為對照）的條形圖。使用 FAMS 測定法量測水解活性率。 圖 6顯示了從例示性純化平台獲得的組成物的水解活性（標準化為對照）的條形圖。使用 FAMS 測定法量測水解活性率。 圖 7顯示了從例示性純化平台獲得的組成物的水解活性（標準化為對照）的條形圖。使用 FAMS 測定法量測水解活性率。

Claims (98)

  1. 一種降低獲自純化平台之組成物的水解酵素活性率之方法，該方法包含使樣品經歷包含下述步驟的該純化平台： 捕獲步驟； 一個或多個離子交換 (IEX) 層析步驟；以及 深層過濾步驟， 從而相較於未經該深層過濾步驟之該樣品的純化，降低該組成物的該水解酵素活性率。
  2. 如請求項 1 之方法，其中該一個或多個 IEX 層析步驟中的每一個步驟選自由以下所組成之群組：陰離子交換 (AEX) 層析步驟、陽離子交換 (CEX) 層析步驟及多模式離子交換 (MMIEX) 層析步驟。
  3. 如請求項 2 之方法，其中該 MMIEX 層析步驟包含多模式陽離子交換/陰離子交換 (MM-AEX/CEX) 層析步驟。
  4. 如請求項 1 至 3 中任一項之方法，其進一步包含病毒過濾步驟。
  5. 如請求項 1 至 4 中任一項之方法，其進一步包含超過濾/透析過濾 (UF/DF) 步驟。
  6. 如請求項 5 之方法，其中該純化平台依序包含： 該捕獲步驟； 該 CEX 層析步驟； 該 AEX 層析步驟； 該深層過濾步驟； 該病毒過濾步驟；以及 該 UF/DF 步驟。
  7. 如請求項 1 至 6 中任一項之方法，其中該深層過濾步驟包含經由深層過濾器之處理，且其中該深層過濾器為 X0SP 深層過濾器、C0SP 深層過濾器、D0SP 深層過濾器、Polisher ST 深層過濾器或 EMPHAZE™ 深層過濾器。
  8. 如請求項 1 至 6 中任一項之方法，其進一步包含 HIC 步驟，該 HIC 步驟包含經由 Sartobind® phenyl 之處理。
  9. 一種降低獲自純化平台之組成物的水解酵素活性率之方法，該方法包含使樣品經歷包含下述步驟的該純化平台： 捕獲步驟； 多模式疏水性交互作用/離子交換 (MM-HIC/IEX) 層析步驟；以及 疏水性交互作用層析(HIC) 步驟， 從而相較於未經該 HIC 步驟及/或該 MM-HIC/IEX 層析步驟之該樣品的純化，降低該組成物的該水解酵素活性率。
  10. 如請求項 9 之方法，其中該 MM-HIC/IEX 層析步驟包含經由 MM-HIC/IEX 層析介質之處理且在 pH 約 4.5 至約 9 執行該處理。
  11. 如請求項 9 或 10 之方法，其中該 MM-HIC/IEX 層析步驟為多模式疏水性交互作用/陰離子交換 (MM-HIC/AEX) 層析步驟。
  12. 如請求項 11 之方法，其中該 MM-HIC/AEX 層析步驟包含經由 Capto™ Adhere 或 Capto™ Adhere ImpRes 之處理。
  13. 如請求項 9 或 10 之方法，其中該 MM-HIC/IEX 層析步驟為多模式疏水性交互作用/陽離子交換 (MM-HIC/CEX) 層析步驟。
  14. 如請求項 13 之方法，其中該 MM-HIC/CEX 層析步驟包含 Capto™ MMC 或 Capto™ MMC ImpRes。
  15. 如請求項 9 至 14 中任一項之方法，其中該純化平台依序包含： 該捕獲步驟； 該 MM-HIC/IEX 層析步驟；以及 該 HIC 步驟。
  16. 如請求項 9 至 15 中任一項之方法，其進一步包含病毒過濾步驟。
  17. 如請求項 9 至 16 中任一項之方法，其進一步包含超過濾/透析過濾 (UF/DF) 步驟。
  18. 如請求項 17 之方法，其中該純化平台依序包含： 該捕獲步驟； 該 MM-HIC/AEX 層析步驟； 該 HIC 步驟； 該病毒過濾步驟；以及 該 UF/DF 步驟。
  19. 如請求項 9 至 18 中任一項之方法，其進一步包含深層過濾步驟。
  20. 如請求項 19 之方法，其中該純化平台依序包含： 該捕獲步驟； 該深層過濾步驟； 該 MM-HIC/AEX 層析步驟；以及 該 HIC 步驟。
  21. 如請求項 19 或 20 之方法，其中該深層過濾步驟包含經由深層過濾器之處理，且其中該深層過濾器為 X0SP 深層過濾器。
  22. 如請求項 19 或 20 之方法，其中該深層過濾步驟包含經由深層過濾器之處理，且該深層過濾器為 EMPHAZE™ 深層過濾器或 Polisher ST 深層過濾器。
  23. 如請求項 19 至 22 中任一項之方法，其中該深層過濾器結合該 MM-HIC/AEX 層析步驟用為負載過濾器。
  24. 如請求項 23 之方法，其中該 MM-HIC/AEX 層析步驟包含經由 Capto™ Adhere 或 Capto™ Adhere ImpRes 之處理。
  25. 如請求項 19 之方法，其中該純化平台依序包含： 該捕獲步驟； 該 MM-HIC/AEX 層析步驟； 該深層過濾步驟；以及 該 HIC 步驟。
  26. 如請求項 25 之方法，其中該深層過濾步驟包含經由深層過濾器之處理，且其中該深層過濾器為 X0SP 深層過濾器、C0SP 深層過濾器或 D0SP 深層過濾器。
  27. 如請求項 25 之方法，其中該深層過濾步驟包含經由深層過濾器之處理，且該深層過濾器為 EMPHAZE™ 深層過濾器或 Polisher ST 深層過濾器。
  28. 如請求項 25 至 27 中任一項之方法，其中該 MM-HIC/AEX 層析步驟包含經由 Capto™ Adhere 或 Capto™ Adhere ImpRes 之處理。
  29. 一種降低獲自純化平台之組成物的水解酵素活性率之方法，該方法包含使樣品經歷包含下述步驟的該純化平台： 捕獲步驟； 一個或多個離子交換 (IEX) 層析步驟；以及 疏水性交互作用層析(HIC) 步驟， 從而相較於未經該 HIC 步驟之該樣品的純化，降低該組成物的該水解酵素活性率。
  30. 如請求項 29 之方法，其中該一個或多個 IEX 層析步驟為陽離子交換 (CEX) 層析步驟。
  31. 如請求項 29 或 30 之方法，其進一步包含病毒過濾步驟。
  32. 如請求項 29 至 31 中任一項之方法，其進一步包含超過濾/透析過濾 (UF/DF) 步驟。
  33. 如請求項 32 之方法，其進一步包含在該 UF/DF 步驟之前的任何階段執行的深層過濾步驟。
  34. 如請求項 33 之方法，其中該純化平台依序包含： 該捕獲步驟； 該 CEX 層析步驟； 該 HIC 步驟； 該病毒過濾步驟；以及 該 UF/DF 步驟。
  35. 一種降低獲自純化平台之組成物的水解酵素活性率之方法，該方法包含使樣品經歷包含下述步驟的該純化平台： 一個或多個離子交換 (IEX) 層析步驟； 疏水性交互作用層析 (HIC) 步驟；以及 深層過濾步驟， 從而相較於未經該 HIC 步驟或該深層過濾步驟之該樣品的純化，降低該組成物的該水解酵素活性率。
  36. 如請求項 35 之方法，其中該降低是相較於未經該 HIC 及該深層過濾步驟之該樣品的純化。
  37. 如請求項 35 或 36 之方法，其中該一個或多個 IEX 層析步驟中的每一個步驟選自由以下所組成之群組：陰離子交換 (AEX) 層析步驟、陽離子交換 (CEX) 層析步驟及多模式離子交換 (MMIEX) 層析步驟。
  38. 如請求項 37 之方法，其中該 MMIEX 層析步驟包含多模式陽離子交換/陰離子交換 (MM-AEX/CEX) 層析步驟。
  39. 如請求項 35 至 38 中任一項之方法，其進一步包含超過濾/透析過濾 (UF/DF) 步驟。
  40. 如請求項 39 之方法，其中該純化平台依序包含： 該 CEX 層析步驟； 該 HIC 步驟； 該 MMIEX 層析步驟； 該 AEX 層析步驟； 該深層過濾步驟；以及 該 UF/DF 步驟。
  41. 一種降低獲自純化平台之組成物的水解酵素活性率之方法，該方法包含使樣品經歷包含下述步驟的該純化平台： 捕獲步驟； 一個或多個離子交換 (IEX) 層析步驟； 多模式疏水性交互作用/離子交換 (MM-HIC/IEX) 層析步驟；以及 下述中之一者或兩者： 疏水性交互作用層析 (HIC) 步驟；以及 深層過濾步驟， 從而相較於未經該 HIC 步驟或該深層過濾步驟之該樣品的純化，降低該組成物的該水解酵素活性率。
  42. 如請求項 41 之方法，其中該降低是相較於未經該 HIC 及該深層過濾步驟之該樣品的純化。
  43. 如請求項 41 或 42 之方法，其進一步包含病毒過濾步驟。
  44. 如請求項 41 至 43 中任一項之方法，其進一步包含超過濾/透析過濾 (UF/DF) 步驟。
  45. 如請求項 41 至 44 中任一項之方法，其中該深層過濾步驟作為負載過濾器而執行以用於該 MM-HIC/IEX 層析步驟、作為負載過濾器而執行以用於該 HIC 步驟，或接續該 HIC 步驟而執行。
  46. 如請求項 41 至 45 中任一項之方法，其中該一個或多個 IEX 層析步驟中的每一個步驟選自由以下所組成之群組：陽離子交換 (CEX) 層析步驟 、陰離子交換 (AEX) 層析步驟及多模式離子交換 (MMIEX) 層析步驟。
  47. 如請求項 41 至 46 中任一項之方法，其中該 MM-HIC/IEX 層析步驟為多模式疏水性交互作用/陰離子交換 (MM-HIC/AEX) 層析步驟。
  48. 如請求項 47 之方法，其中該 MM-HIC/AEX 層析步驟包含經由 Capto™ Adhere 或 Capto™ Adhere ImpRes 之處理。
  49. 如請求項 1 至 34 及 41 至 48 中任一項之方法，其中該捕獲步驟包含經由親和力層析之處理。
  50. 如請求項 1 至 34 及 41 至 48 中任一項之方法，其中以結合及洗提模式執行該捕獲步驟。
  51. 如請求項 49 或 50 之方法，其中該親和力層析選自由蛋白質 A 層析、蛋白質 G 層析、蛋白質 A/G 層析、FcXL 層析、蛋白質 XL 層析、kappa 層析及 kappaXL 層析所組成之群組。
  52. 如請求項 1 至 6、19、20 及 35 至 51 中任一項之方法，其中該深層過濾步驟包含經由深層過濾器之處理。
  53. 如請求項 52 之方法，其中該深層過濾器用為負載過濾器。
  54. 如請求項 52 或 53 之方法，其中該深層過濾器包含受質，該受質包含矽藻土組成物、二氧化矽組成物、纖維素纖維、聚合物纖維、黏合樹脂及灰分組成物中之一者或多者。
  55. 如請求項 54 之方法，其中該深層過濾器的該受質的至少一部分包含表面改質。
  56. 如請求項 55 之方法，其中該表面改質為四級胺表面改質、陽離子表面改質及陰離子表面改質中之一者或多者。
  57. 如請求項 52 至 56 中任一項之方法，其中該深層過濾器選自由以下所組成之群組：X0SP 深層過濾器、D0SP 深層過濾器、C0SP 深層過濾器、EMPHAZE™ 深層過濾器、PDD1 深層過濾器、PDE1 深層過濾器、PDH5 深層過濾器、ZETA PLUS™ 120ZA 深層過濾器、ZETA PLUS™ 120ZB 深層過濾器、ZETA PLUS™ DELI 深層過濾器、ZETA PLUS™ DELP 深層過濾器及 Polisher ST 深層過濾器。
  58. 如請求項 57 之方法，其中該深層過濾器為 X0SP 深層過濾器、D0SP 深層過濾器或 C0SP 深層過濾器，且其中在 pH 約 4.5 至約 8 執行經由該深層過濾器之該處理。
  59. 如請求項 57 之方法，其中該深層過濾器為 EMPHAZE™ 深層過濾器，且其中在 pH 約 7 至約 9.5 執行經由該深層過濾器之處理。
  60. 如請求項 57 之方法，其中該深層過濾器為 Polisher ST 深層過濾器，且其中在 pH 約 4.5 至約 9 執行經由該深層過濾器之處理。
  61. 如請求項 9 至 60 中任一項之方法，其中該 HIC 步驟包含經由 HIC 膜或 HIC 管柱之處理。
  62. 如請求項 61 之方法，其中使用低鹽濃度執行經由該 HIC 膜或該 HIC 管柱之處理。
  63. 如請求項 59 至 61 中任一項之方法，其中以順流模式執行經由該 HIC 膜或該 HIC 管柱之處理。
  64. 如請求項 61 至 63 中任一項之方法，其中該 HIC 膜或 HIC 管柱包含受質，該受質包含醚基、乙基、丙基、異丙基、丁基、己基、辛基及苯基中之一者或多者。
  65. 如請求項 61 至 64 中任一項之方法，其中該 HIC 膜或該 HIC 管柱選自由 Bakerbond WP HI-Propyl™、Phenyl Sepharose® Fast Flow (Phenyl-SFF)、Phenyl Sepharose® Fast Flow Hi-sub (Phenyl-SFF HS)、Toyopearl® Hexyl-650C、Toyopearl® Hexyl-650M、Toyopearl® Hexyl-650S、Poros™ Benzyl Ultra 及 Sartobind® phenyl 所組成之群組。
  66. 如請求項 64 或 65 之方法，其中在 pH 約 4.5 至約 7 執行經由該 HIC 膜或該 HIC 管柱之處理。
  67. 如請求項 1 至 8 及 29 至 66 中任一項之方法，其中該一個或多個 IEX 層析步驟中的每一個步驟包含經由 IEX 層析膜或 IEX 層析管柱之處理。
  68. 如請求項 67 之方法，其中該 IEX 層析膜或該 IEX 層析管柱選自由以下所組成之群組：SPSFF、QSFF、SPXL、Streamline™ SPXL、ABx™、Poros™ XS、Poros™ 50HS、DEAE、DMAE、TMAE、QAE 及 MEP-Hypercel™。
  69. 如請求項 1 至 68 中任一項之方法，其中該純化平台用於自該樣品純化標的物，且其中該樣品包含該標的物及一種或多種宿主細胞不純物。
  70. 如請求項 69 之方法，其中該標的物包含多肽。
  71. 如請求項 1 至 70 中任一項之方法，其中該標的物為抗體部分。
  72. 如請求項 71 之方法，其中該抗體部分為單株抗體。
  73. 如請求項 71 或 72 之方法，其中該抗體部分為人類抗體、人源化抗體或嵌合抗體。
  74. 如請求項 71 至 73 中任一項之方法，其中該抗體部分選自由以下所組成之群組：抗 TAU 抗體、抗 TGFβ3 抗體、抗 VEGF-A 抗體、抗 CD20 抗體、抗 CD40 抗體、抗 HER2 抗體、抗 IL6 抗體、抗 IgE 抗體、抗 IL13 抗體、抗 TIGIT 抗體、抗 PD-L1 抗體、抗 VEGF-A/ANG2 抗體、抗 CD79b 抗體、抗 ST2 抗體、抗因子 D 抗體、抗因子 IX 抗體、抗因子 X 抗體、抗 abeta 抗體、抗 CEA 抗體、抗 CEA/CD3 抗體、抗 CD20/CD3 抗體、抗 FcRH5/CD3 抗體、抗 Her2/CD3 抗體、抗 FGFR1/KLB 抗體、FAP-4-1 BBL 融合蛋白、FAP-IL2v 融合蛋白及 TYRP1 TCB 抗體。
  75. 如請求項 71 至 74 中任一項之方法，其中該抗體部分選自由以下所組成之群組：奧瑞珠單抗 (ocrelizumab)、帕妥珠單抗 (pertuzumab)、蘭尼單抗 (ranibizumab)、曲妥珠單抗 (trastuzumab)、托珠單抗 (tocilizumab)、法利昔單抗 (faricimab)、帕羅托珠單抗 (polatuzumab)、甘特珠單抗 (gantenerumab)、賽必妥單抗 (cibisatamab)、克瑞珠單抗 (crenezumab)、莫蘇尼妥珠單抗 (mosunetuzumab)、替瑞利尤單抗 (tiragolumab)、貝伐珠單抗 (bevacizumab)、利妥昔單抗 (rituximab)、阿替利珠單抗 (atezolizumab)、阿托珠單抗 (obinutuzumab)、蘭帕利珠單抗 (lampalizumab)、奧馬珠單抗 (omalizumab)、蘭尼單抗 (ranibizumab)、艾美賽珠單抗 (emicizumab)、塞魯單抗 (selicrelumab)、普拉辛珠單抗 (prasinezumab)、RO6874281 及 RO7122290。
  76. 如請求項 69 至 75 中任一項之方法，其中該一種或多種宿主細胞不純物包含宿主細胞蛋白質。
  77. 如請求項 76 之方法，其中該宿主細胞蛋白質為水解酵素。
  78. 如請求項 77 之方法，其中該水解酵素為脂肪酶、酯酶、硫酯酶、磷脂酶、羧酸酯酶、水解酶、角質酶或神經醯胺酶。
  79. 如請求項 1 至 78 中任一項之方法，其中該樣品包含宿主細胞或源自其之組分。
  80. 如請求項 1 至 79 中任一項之方法，其中該樣品為細胞培養樣品或衍生自細胞培養樣品。
  81. 如請求項 80 之方法，其中該細胞培養樣品包含宿主細胞，且其中該宿主細胞為中華倉鼠卵巢 (CHO) 細胞或大腸桿菌 ( E. coli) 細胞。
  82. 如請求項 1 至 81 中任一項之方法，其進一步包含樣品處理步驟。
  83. 如請求項 1 至 82 中任一項之方法，其中該水解酵素活性率的該降低係至少約 20%。
  84. 如請求項 1 至 83 中任一項之方法，其進一步包含確定該組成物的該水解酵素活性率。
  85. 如請求項 1 至 84 中任一項之方法，其進一步包含確定該組成物中一種或多種水解酵素的含量。
  86. 如請求項 1 至 85 中任一項之方法，其中該組成物包含聚山梨醇酯。
  87. 如請求項 86 之方法，其中該聚山梨醇酯選自由聚山梨醇酯 20、聚山梨醇酯 40、聚山梨醇酯 60 及聚山梨醇酯 80 所組成之群組。
  88. 一種醫藥組成物，該醫藥組成物藉由如請求項 1 至 87 中任一項之方法獲得。
  89. 一種經調配之抗體部分組成物，其包含抗體部分及聚山梨醇酯，其中該組成物具有降低的聚山梨醇酯水解率，其中該組成物的保存期限大於 12 個月。
  90. 一種經調配之抗體部分組成物，其包含抗體部分及聚山梨醇酯，其中該組成物具有降低的聚山梨醇酯水解活性率，其中相較於提交衛生主管機關與該經調配之抗體部分組成物有關的文件中所指的保存期限，該組成物之該保存期限被延長，其中相較於該等文件中所指的保存期限，該保存期限延長至少 3 個月。
  91. 如請求項 89 或 90 之經調配之抗體部分組成物，其中該聚山梨醇酯水解率降低至少約 20%。
  92. 一種經調配之抗體部分組成物，其包含抗體部分，其中該經調配之抗體部分組成物具有降解程度減弱的聚山梨醇酯，其中相較於提交衛生主管機關與該經調配之抗體部分組成物有關的文件中所指的降解，該降解程度減弱至少約 20%。
  93. 一種經調配之抗體部分組成物，其包含抗體部分及聚山梨醇酯，其中該聚山梨醇酯於液體組成物的儲存期間每年降解 50% 或更少。
  94. 如請求項 89 至 93 中任一項之經調配之抗體部分組成物，其中該抗體部分為單株抗體。
  95. 如請求項 89 至 94 中任一項之經調配之抗體部分組成物，其中該抗體部分為人類抗體、人源化抗體或嵌合抗體。
  96. 如請求項 89 至 95 中任一項之經調配之抗體部分組成物，其中該抗體選自由以下所組成之群組：抗 TAU 抗體、抗 TGFβ3 抗體、抗 VEGF-A 抗體、抗 CD20 抗體、抗 CD40 抗體、抗 HER2 抗體、抗 IL6 抗體、抗 IgE 抗體、抗 IL13 抗體、抗 TIGIT 抗體、抗 PD-L1 抗體、抗 VEGF-A/ANG2 抗體、抗 CD79b 抗體、抗 ST2 抗體、抗因子 D 抗體、抗因子 IX 抗體、抗因子 X 抗體、抗 abeta 抗體、抗 CEA 抗體、抗 CEA/CD3 抗體、抗 CD20/CD3 抗體、抗 FcRH5/CD3 抗體、抗 Her2/CD3 抗體、抗 FGFR1/KLB 抗體、FAP-4-1 BBL 融合蛋白、FAP-IL2v 融合蛋白及 TYRP1 TCB 抗體。
  97. 如請求項 89 至 96 中任一項之經調配之抗體部分組成物，其中該抗體部分選自由以下所組成之群組：奧瑞珠單抗 (ocrelizumab)、帕妥珠單抗 (pertuzumab)、蘭尼單抗 (ranibizumab)、曲妥珠單抗 (trastuzumab)、托珠單抗 (tocilizumab)、法利昔單抗 (faricimab)、帕羅托珠單抗 (polatuzumab)、甘特珠單抗 (gantenerumab)、賽必妥單抗 (cibisatamab)、克瑞珠單抗 (crenezumab)、莫蘇尼妥珠單抗 (mosunetuzumab)、替瑞利尤單抗 (tiragolumab)、貝伐珠單抗 (bevacizumab)、利妥昔單抗 (rituximab)、阿替利珠單抗 (atezolizumab)、阿托珠單抗 (obinutuzumab)、蘭帕利珠單抗 (lampalizumab)、奧馬珠單抗 (omalizumab)、蘭尼單抗 (ranibizumab)、艾美賽珠單抗 (emicizumab)、塞魯單抗 (selicrelumab)、普拉辛珠單抗 (prasinezumab)、RO6874281 及 RO7122290。
  98. 如請求項 89 至 97 中任一項之經調配之抗體部分組成物，其中該聚山梨醇酯選自由聚山梨醇酯 20、聚山梨醇酯 40、聚山梨醇酯 60 及聚山梨醇酯 80 所組成之群組。
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