TW202233233A - 包含抗原和其醣工程化抗體之免疫組合物 - Google Patents

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Abstract

本發明係關於一種用於誘導免疫反應之組合物，其包含對具有病毒之表面蛋白之受體結合域(RBD)的抗原部分具有特異性的醣工程化抗體或其抗原結合片段。本發明亦係關於一種免疫組合及一種用於治療病毒感染之方法。

Description

包含抗原和其醣工程化抗體之免疫組合物
本發明係關於一種免疫組合物，特定言之，係關於一種用於誘導免疫反應的包含醣工程化抗體之組合物。
眾所周知，宿主免疫防禦在人類疾病之各個階段均會發揮作用。例如，在病毒感染期間，回應於先前免疫接種而受激之抗體可能會在附著及穿透易感的靶細胞之前中和所進入之病毒。在細胞受感染及在其表面呈現病毒相關的抗原之情況下，細胞免疫反應亦可能被活化。在後一種情況下，細胞毒性T細胞可殺傷受感染之細胞，從而限制感染之進展。此等體液及細胞免疫反應通常係針對各種病毒之感染而產生，包括具有DNA或RNA基因體及由蛋白衣殼或膜包膜構成之外殼的病毒。
治療傳染病之策略通常集中於提高免疫性之方法。舉例而言，最常見的治療病毒感染之方法涉及誘導基於免疫之記憶反應的預防性疫苗。另一種用於治療病毒感染之方法包括經由免疫球蛋白療法進行被動免疫接種。
仍需要新穎的用於治療病毒感染之方法。
本發明係關於一種用於誘導免疫反應之組合物及用於治療病毒感染之免疫組合。
在一個態樣中，本發明提供一種用於誘導免疫反應之組合物，其包含： 醣工程化抗體或其抗原結合片段，其對具有病毒之表面蛋白之受體結合域(RBD)的抗原部分具有特異性，其中醣工程化抗體或其抗原結合片段具有片段可結晶區(Fc區)及位於該Fc區上之一N-聚醣，且N-聚醣由通式(I)表示
Figure 02_image001
式(I) 其中： 各X及Y表示聚醣，且X及Y相同。
在本發明之一些實施例中，組合物進一步包含具有病毒之表面蛋白之RBD的抗原部分。在本發明之一些實施例中，抗原部分及醣工程化抗體或其抗原結合片段形成免疫複合物。
在本發明之一些實施例中，表面蛋白為刺突蛋白。
病毒之實例包括(但不限於)冠狀病毒(CoV)、人類免疫缺陷病毒或正黏液病毒科(Orthomyxoviridae)。CoV之實例包括(但不限於) α-CoV、β-CoV、γ-CoV或δ-CoV。
在本發明之一些實施例中，抗原部分包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1 (RVQPTESIVRFPNITNL CPFGEVFNATR FASVYAWNRKR ISNCVADYSVLYNSASFSTFKCYGVSPTKLNDLCFTNVYADSFVIRGDEVRQIAPGQTGKIADYNYKLPDDFTGCVIAWNSNNLDSKVGGNYNYLYRLFRKSNLKPFERDISTEIYQAGSTPCNGVEGFNCYFPLQSYGFQPTNGVGYQPYRVVVLSFELLHAPATVCGPKKSTNLVKNKCVNF)。
在本發明之一些實施例中，在式(I)中，各X及Y表示GlcNAc-、GalGlcNAc-、Sia(α2-3)GalGlcNAc-或Sia(α2-6)GalGlcNAc-。
在本發明之一些實施例中，N-聚醣係選自由以下組成之群：GlcNAc 2Man 3GlcNAc 2(Fuc) (G0F)、GlcNAc 2Man 3GlcNAc 2(G0)、Gal 2GlcNAc 2Man 3GlcNAc 2(Fuc) (G2F)、Gal 2GlcNAc 2Man 3GlcNAc 2(G2)、Sia 2(α2-3)Gal 2GlcNAc 2Man 3GlcNAc 2(Fuc) (G2S2F (α2,3鍵))、Sia 2(α2-6)Gal 2GlcNAc 2Man 3GlcNAc 2(Fuc) (G2S2F (α2,6鍵))、Sia 2(α2-6)Gal 2GlcNAc 2Man 3GlcNAc 2(G2S2 (α2,6鍵))及Sia 2(α2-3)Gal 2GlcNAc 2Man 3GlcNAc 2(G2S2 (α2,3鍵))。
在本發明之一些實施例中，複數個醣工程化抗體或其抗原結合片段係以群體形式提供，且該群體中之超過約90%的抗體或其抗原結合片段具有相同的N-聚醣。
在本發明之一些實施例中，醣工程化抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區，該重鏈可變區包含胺基酸序列SEQ ID NO: 2 (QMQLVQSGTEVKKPGESLKISCKGSGYGFITYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSETRYSPSFQGQVTISADKSINTAYLQWSSLKASDTAIYYCAGGSGISTPMDVWGQGTTVTV)或其實質上類似的序列；及輕鏈可變區，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 3 (DIQLTQSPD SLAVSLGERATIN CKSSQSVLYSSINKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSTPYTFGQGTKVEIK)或其實質上類似的序列。
本發明亦提供一種免疫組合，其包含有效量之如本文中所揭示之包含醣工程化抗體或其抗原結合片段的組合物，及有效量之具有病毒之表面蛋白之RBD的抗原部分及醫藥學上可接受之載體及/或佐劑。
在本發明之一些實施例中，免疫組合進一步包含病毒之疫苗。在本發明之一些實施例中，疫苗包含抗原部分。
本發明提供一種於需要治療之個體中治療病毒感染的方法，其包含向該個體投與如本文中所揭示之包含醣工程化抗體或其抗原結合片段的組合物或免疫組合。
在本發明之一些實施例中，組合物及抗原部分係同時、分開或依序共同投與，或以共調配物形式組合共同投與。
在本發明之一些實施例中，免疫組合進一步包含病毒之疫苗，且疫苗係在組合物之前投與。
在本發明之一些實施例中，方法包含僅投與組合物一次。
在本發明之一些實施例中，方法包含至少投與組合物兩次。
在本發明之一些實施例中，方法係用於在不同時間引發及隨後增強免疫反應。
在本發明之一些實施例中，方法係用於中和個體中之病毒及/或增強抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)。
在以下部分中詳細描述本發明。本發明之其他特徵、目的及優點可見於實施方式及申請專利範圍中。
優先權
本申請案主張2020年11月6日提交之美國臨時申請案第63/110,845號及2021年4月22日提交之第63/178,177號之優先權，該等申請案以全文引用之方式併入本文中。
在以下描述中，使用大量術語且提供以下定義以有助於理解所主張之標的物。在本文中未明確定義之術語係根據其普通及一般含義使用。
除非另外說明，否則「一(a/an)」意謂「一或多」。
術語「及/或」用於同時指代兩種事物或指代所提及之兩種事物中之任一者。
如本文中所使用，「免疫複合物」係指當至少一個標靶分子與至少一個含Fc區之異源性多肽彼此結合以形成較大分子量複合物時所形成的結構。免疫複合物之實例為抗原-抗體複合物，其可為可溶的或微粒狀的(例如細胞表面上之抗原/抗體複合物)且與活化FcγRs結合，藉此觸發免疫反應。
如本文中所使用，術語「Ag」或「抗原」係指能夠與免疫球蛋白分子之抗原結合區結合或能夠誘發免疫反應的物質。如本文中所使用，「抗原」包括(但不限於)抗原決定子、半抗原及免疫原，其可為肽、小分子、碳水化合物、脂質、核酸或其組合。當在B細胞介導之免疫反應的情況下，以對「抗原」具有特異性之抗體的形式使用時，抗原中之與抗體之可變域(輕鏈及重鏈)之互補決定區結合的部分，即結合部分，可為線性或三維抗原決定基。
如本文中所使用，術語「受體」意謂由病毒可結合之細胞表現的任何多肽。通常，此類受體天然存在於細胞表面上，但可經工程化。受體多肽可非共價或共價結合於其他分子實體，諸如碳水化合物、脂肪酸、脂質及其類似物。
如本文中所使用，「結合域」係指具有特異性識別及結合於標靶(例如受體)之能力的一或多種蛋白、多肽、寡肽或肽。結合域包括用於生物分子或另一感興趣標靶的任何天然存在、合成、半合成或以重組方式產生之結合搭配物。
如本文中所使用，術語「表面蛋白」係指所有表面可發生作用之蛋白，例如內膜及外膜蛋白、黏附於細胞壁之蛋白及分泌蛋白。
如本文中所使用，術語「抗體」意謂包含與特定抗原特異性結合或相互作用之至少一個互補決定區(CDR)的任何抗原結合分子或分子複合物。術語「抗體」包括免疫球蛋白分子以及其多聚體(例如IgM)，該等免疫球蛋白分子包含由二硫鍵互連之四條多肽鏈，亦即兩條重(H)鏈及兩條輕(L)鏈。各重鏈包含重鏈可變區(本文中縮寫為HCVR或V H)及重鏈恆定區。重鏈恆定區包含三個域，C H1、C H2及C H3。各輕鏈包含輕鏈可變區(本文中縮寫為LCVR或V L)及輕鏈恆定區。輕鏈恆定區包含一個域(C L1)。V H及V L區可進一步細分成稱為互補決定區(CDR)之高變區，其間穿插有稱為構架區(FR)之保守性較高之區域。各V H及V L由自胺基端至羧基端按以下次序排列之三個CDR及四個FR構成：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。在本發明之不同實施例中，抗α-毒素抗體(或其抗原結合部分)之FR可與人類生殖系序列一致，或可經天然或人工修飾。胺基酸共有序列可基於兩個或更多個CDR之並列分析來定義。
如本文中所使用，術語「互補決定區」(CDR)係指在重鏈及輕鏈多肽之可變區內發現的非連續抗原組合位點。Kabat等人, J. Biol. Chem. 252:6609-6616 (1977)；Kabat等人, 美國衛生及公共服務部(U.S. Dept. of Health and Human Services), 「Sequences of proteins of immunological interest」 (1991)；Chothia等人, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)；及MacCallum等人, J. Mol. Biol. 262:732-745 (1996)已描述CDR，其中定義包括相互比較時胺基酸殘基的重疊或子集。
如本文中所使用，術語抗體之「抗原結合部分」、抗體之「抗原結合片段」及其類似術語包括特異性結合抗原以形成複合物的任何天然存在、可以酶促方式獲得、合成或經基因工程化之多肽或醣蛋白。
如本文中所使用，術語「特異性結合」意謂抗體不與其他抗原決定基發生顯著程度的交叉反應。
本發明提供一種用於誘導免疫反應之組合物，其包含： 醣工程化抗體或其抗原結合片段，其對具有病毒之表面蛋白之受體結合域(RBD)的抗原部分具有特異性，其中醣工程化抗體或其抗原結合片段具有片段可結晶區(Fc區)及位於該Fc區上之一N-聚醣，且N-聚醣由通式(I)表示
Figure 02_image003
式(I) 其中： 各X及Y表示聚醣，且X及Y相同。
受體結合域係位於病毒之表面蛋白(刺突蛋白)上之關鍵部分，其使得病毒能夠與體受體對接，從而進入細胞且引起感染。受體結合域為來自與特異性內源性受體序列結合以進入宿主細胞之病毒的短免疫原性片段。表面蛋白之實例包括(但不限於)流感之血球凝集素、由人類免疫缺陷病毒之子單元gp120及gp41構成之gp120或冠狀病毒之刺突(S)蛋白。
在本發明之特定實施例中，抗原部分包含具有胺基酸序列SEQ ID NO: 1之SARS-CoV-2刺突蛋白RBD。
病毒之實例包括(但不限於)「非洲豬瘟病毒(African Swine Fever Virus)」、節足動物攜帶性病毒(Arbovirus)、腺病毒科(Adenoviridae)、沙狀病毒科(Arenaviridae)、動脈炎病毒屬(Arterivirus)、星狀病毒科(Astroviridae)、桿狀病毒科(Baculoviridae)、雙股DNA病毒科(Bimaviridae)、雙股RNA病毒科(Birnaviridae)、布尼亞病毒科(Bunyaviridae)、杯狀病毒科(Caliciviridae)、花椰菜病毒科(Caulimoviridae)、圓環病毒科(Circoviridae)、冠狀病毒科(Coronaviridae)、囊狀噬菌體科(Cystoviridae)、登革熱(Dengue)、EBV、HIV、德爾塔病毒科(Deltaviridae)、絲病毒科(Filviridae)、絲狀病毒科(Filoviridae)、黃病毒科(Flaviviridae)、肝病毒科(Hepadnaviridae)(肝炎)、疱疹病毒科(Herpesviridae)(諸如巨細胞病毒、單純疱疹、帶狀疱疹)、虹彩病毒科(Iridoviridae)、單股反鏈病毒(Mononegavirus)(例如副黏病毒科、麻疹病毒、彈狀病毒科)、肌病毒科(Myoviridae)、正黏液病毒科(例如A型流感、B型流感及副流感)、乳頭瘤病毒(Papiloma virus)、乳多空病毒科(Papovaviridae)、副黏病毒科、朊病毒(Prion)、微小病毒科(Parvoviridae)、藻類DNA病毒科(Phycodnaviridae)、小RNA病毒科(Picomaviridae)(例如鼻病毒、脊髓灰白質炎病毒)、痘病毒科(Poxviridae)(諸如天花或痘瘡)、馬鈴薯Y病毒科(Potyviridae)、呼腸孤病毒科(Reoviridae)(例如輪狀病毒)、反轉錄病毒科(Retroviridae)(HTLV-I、HTLV-II、慢病毒)、彈狀病毒科(Rhabdoviridae)、複層噬菌體科(Tectiviridae)、披膜病毒科(Togaviridae)(例如風疹病毒屬)或其任何組合。在本發明之另一實施例中，病毒感染係由選自由以下組成之群的病毒引起：疱疹病毒、痘病毒、乳頭瘤、冠狀病毒、流感病毒、肝炎病毒、仙台病毒(sendai)、辛德比斯病毒(sindbis)、痘瘡病毒、西尼羅河病毒(west nile)、汗他病毒(hanta)或引起普通感冒之病毒。在本發明之另一實施例中，病毒為冠狀病毒(CoV)、人類免疫缺陷病毒或正黏液病毒科。特定言之，病毒為α-CoV、β-CoV、γ-CoV或δ-CoV。
術語「冠狀病毒」或「CoV」係指冠狀病毒科中之任何病毒，包括(但不限於) SARS-CoV-2、MERS-CoV及SARS-CoV。SARS-CoV-2係指新出現之冠狀病毒，其正迅速地向全球其他地區蔓延。其經由病毒刺突蛋白結合於人類宿主細胞受體血管收縮素轉換酶2 (ACE2)。
在本發明之一些實施例中，抗體為單株抗體、哺乳動物抗體、重組哺乳動物抗體、人類化抗體、人類抗體、抗體Fab片段、F(ab') 2、來自裂解抗體之Fv片段或Fc片段、scFv-Fc片段、微型抗體、雙功能抗體或scFv。
本文中所描述之抗體亦包括完整抗體分子之抗原結合片段。可使用任何適合的標準技術自例如完整抗體分子獲取抗體之抗原結合片段，該等技術諸如涉及編碼抗體可變域及視情況存在之恆定域之DNA之操縱及表現的蛋白水解消化或重組基因工程化技術。此類DNA為已知的及/或易於自例如市售來源、DNA庫(包括例如噬菌體-抗體庫)獲得，或可以合成方式獲得。DNA可以化學方式或藉由使用分子生物學技術定序及操縱，例如將一或多個可變域及/或恆定域排列成適合的構型，或引入密碼子，產生半胱胺酸殘基，修飾、添加或缺失胺基酸等。
抗原結合片段之非限制性實例包括：(i) Fab片段；(ii) F(ab') 2片段；(iii) Fd片段；(iv) Fv片段；(v) 單鏈Fv (scFv)分子；(vi) dAb片段；及(vii)由模擬抗體之高變區(例如分離的互補決定區(CDR)，諸如CDR3肽)的胺基酸殘基或由受限FR3-CDR3-FR4肽組成的最小識別單位。其他經工程化之分子，諸如結構域特異性抗體、單結構域抗體、結構域缺失抗體、嵌合抗體、CDR移植抗體、雙功能抗體、三功能抗體、四功能抗體、微型抗體、奈米抗體(例如單價奈米抗體、二價奈米抗體等)、小模組免疫藥物(SMIP)及鯊魚可變IgNAR結構域亦涵蓋在如本文中所使用之表述「抗原結合片段」內。
抗體之抗原結合片段通常包含至少一個可變域。可變域可以具有任何尺寸或胺基酸組成並且通常將包含與一或多個構架序列相鄰或同框的至少一個CDR。在具有與V L域相關的V H域的抗原結合片段中，V H和V L域可以任何適合的排列相對於彼此定位。舉例而言，可變區可為二聚形式且含有V H-V H、V H-V L或V L-V L二聚體。或者，抗體之抗原結合片段可含有單體V H或V L域。
在某些實施例中，抗體之抗原結合片段可含有與至少一個恆定域共價連接之至少一個可變域。可見於本發明之抗體之抗原結合片段內的可變域及恆定域之非限制性例示性構型包括：(i) V H-C H1；(ii) V H-C H2；(iii) V H-C H3；(iv) V H-C H1-C H2；(V) V H-C H1-C H2-C H3；(vi) V H-C H2-C H3；(vii) V H-C L；(viii) V L-C H1；(ix) V L-C H2；(x) V L-C H3；(xi) V L-C H1-C H2；(xii) V L-C H1-C H2-C H3；(xiii) V L-C H2-C H3；及(xiv) V L-C L。在可變域及恆定域之任何構型，包括以上列出之例示性構型中之任一者中，可變域及恆定域可直接彼此連接或可藉由完全或部分鉸鏈區或連接區連接。鉸鏈區可由至少2個(例如5、10、15、20、40、60個或更多個)胺基酸組成，該等胺基酸在單一多肽分子中之相鄰可變域及/或恆定域之間產生可撓性或半可撓性鍵。此外，本發明之抗體之抗原結合片段可包含彼此非共價結合及/或與一或多個單體V H或V L域非共價結合(例如藉由一或多個二硫鍵)的均二聚體或雜二聚體(或其他多聚體)，其具有以上所列出之可變域及恆定域構型中之任一者。
與完整抗體分子相同，抗原結合片段可為單特異性或多特異性(例如雙特異性)。抗體之多特異性抗原結合片段通常包含至少兩個不同的可變域，其中各可變域能夠特異性結合於獨立抗原或相同抗原上之不同的抗原決定基。任何多特異性抗體型式，包括本文中所揭示之例示性雙特異性抗體型式，可使用此項技術中可用之慣例技術來調適以在本發明抗體之抗原結合片段的情況下使用。
較佳地，本發明之醣工程化抗體或其抗原結合片段為哺乳動物抗體。
如本文中所使用，術語「哺乳動物抗體」意欲包括具有來源於哺乳動物生殖系免疫球蛋白序列之可變區及恆定區的抗體。本發明之哺乳動物抗體可包括未由哺乳動物生殖系免疫球蛋白序列編碼之胺基酸殘基(例如藉由活體外隨機或位點特異性突變誘發或藉由活體內體細胞突變引入之突變)，例如在CDR中，且尤其係在CDR3中。
如本文中所使用，術語「重組哺乳動物抗體」意欲包括藉由重組方式製備、表現、創造或分離之所有哺乳動物抗體，諸如使用重組表現載體轉染至宿主細胞表現之抗體(詳見以下)；自重組、組合哺乳動物抗體文庫分離之抗體(詳見以下)；自轉殖基因之動物(例如小鼠)之哺乳動物免疫球蛋白基因分離之抗體；或藉由任何涉及哺乳動物免疫球蛋白基因序列與其他DNA序列之剪接的其他方式製備、創造或分離之抗體。此類重組哺乳動物抗體具有來源於哺乳動物生殖系免疫球蛋白序列之可變及恆定區。然而，在某些實施例中，此類重組哺乳動物抗體經歷活體外突變誘發(或當使用針對人類Ig序列轉殖基因之動物時為活體內體細胞突變誘發)，且因此重組抗體之V H及V L區的胺基酸序列係來源於人類生殖系V H及V L序列且與人類生殖系V H及V L序列相關，但可能並非在活體內天然地存在於哺乳動物抗體生殖系譜系內。
哺乳動物抗體，諸如人類抗體可以與鉸鏈異質性相關之兩種形式存在。在一種形式中，免疫球蛋白分子包含大致150-160 kDa之穩定四鏈構築體，其中二聚體藉由鏈間重鏈二硫鍵固持在一起。在第二形式中，二聚體不經由鏈間二硫鍵連接且形成由共價偶合輕鏈及重鏈構成的約75-80 kDa之分子(半抗體)。此等形式極難分離，甚至在親和純化之後亦如此。
與衍生出抗體之對應生殖系序列相比，本文中所揭示之抗體在重鏈及輕鏈可變域之構架及/或CDR區中包含一或多個胺基酸取代、插入及/或缺失。此類突變可藉由比較本文中所揭示之胺基酸序列與獲自例如公共抗體序列資料庫之生殖系序列來容易地確定。本發明包括來源於本文中所揭示之任何胺基酸序列的抗體及其抗原結合片段，其中一或多個構架及/或CDR區內之一或多個胺基酸突變成衍生出抗體之生殖系序列的一或多個對應殘基，或突變成另一哺乳動物生殖系序列之一或多個對應殘基，或突變成一或多個對應生殖系殘基之保守胺基酸取代(此等序列變化在本文中統稱為「生殖系突變」)。一般熟習此項技術者以本文中所揭示之重鏈及輕鏈可變區序列為起始物質，可容易地製備許多包含一或多個單獨的生殖系突變或其組合的抗體及抗原結合片段。在某些實施例中，V H及/或V L域內之所有構架及/或CDR殘基均突變回衍生出抗體之初始生殖系序列中所發現之殘基。在其他實施例中，僅某些殘基突變回初始生殖系序列，例如僅在FR1的前8個胺基酸內或在FR4的最後8個胺基酸內發現的突變殘基，或僅在CDR1、CDR2或CDR3內發現的突變殘基。在其他實施例中，構架及/或CDR殘基中之一或多者突變成不同生殖系序列(亦即，不同於最初衍生出抗體之生殖系序列的生殖系序列)的一或多個相應殘基。此外，本發明抗體可在構架及/或CDR區內含有兩個或更多個生殖系突變之任何組合，例如其中某些單獨的殘基突變為特定生殖系序列之對應殘基，而與初始生殖系序列不同的某些其他殘基被保留或突變為不同生殖系序列之對應殘基。一旦獲得，即可針對一或多種所需特性容易地測試含有一或多個生殖系突變之抗體及抗原結合片段，該等特性諸如改良的結合特異性、增強的結合親和力、改良或增強的拮抗或促效生物特性(視具體情況而定)、減小的免疫原性等。本發明內涵蓋以此一般方式獲得的抗體及抗原結合片段。
當應用於多肽時，術語「實質類似性」或「實質上類似」意謂兩個肽序列在諸如藉由程式GAP或BESTFIT，使用預設間隙權數進行最佳比對時共有至少95%序列一致性，甚至更佳至少98%或99%序列一致性。較佳地，不一致的殘基位置因保守胺基酸取代具有差異。「保守胺基酸取代」為一種胺基酸取代，其中胺基酸殘基經側鏈(R基團)具有類似化學特性(例如電荷或疏水性)之另一胺基酸殘基取代。一般而言，保守胺基酸取代將不會實質上改變蛋白之功能特性。在兩個或更多個胺基酸序列因保守取代而彼此不同之情況下，可上調序列一致性百分比或類似性程度以針對取代之性質加以校正。進行此調節之方式為熟習此項技術者所熟知的。側鏈具有類似化學特性之胺基酸基團之實例包括(1)脂族側鏈：甘胺酸、丙胺酸、纈胺酸、白胺酸及異白胺酸；(2)脂族羥基側鏈：絲胺酸及蘇胺酸；(3)含醯胺側鏈：天冬醯胺及麩醯胺酸；(4)芳族側鏈：苯丙胺酸、酪胺酸及色胺酸；(5)鹼性側鏈：離胺酸、精胺酸及組胺酸；(6)酸性側鏈：天冬胺酸及麩胺酸；及(7)含硫側鏈為半胱胺酸及甲硫胺酸。較佳的保守胺基酸取代基團為：纈胺酸-白胺酸-異白胺酸、苯丙胺酸-酪胺酸、離胺酸-精胺酸、丙胺酸-纈胺酸、麩胺酸-天冬胺酸及天冬醯胺-麩醯胺酸。或者，保守置換係在以引用之方式併入本文中的Gonnet等人 (1992) Science 256: 1443-1445中所揭示的PAM250對數似然比矩陣中具有正值之任何變化。「適度保守」置換為在PAM250對數似然比矩陣中具有非負值之任何變化。
通常使用序列分析軟體來量測多肽之序列類似性，其亦稱為序列一致性。蛋白分析軟體使用分配於各種取代、缺失及其他修飾，包括保守胺基酸取代的類似性量度來匹配相似序列。舉例而言，可在預設參數下使用GCG軟體(含有諸如Gap及Bestfit之程式)，以測定密切相關的多肽(諸如來自不同物種之生物體的同源多肽)之間或野生型蛋白與其突變蛋白之間的序列同源性或序列一致性。多肽序列亦可使用FASTA，即6.1版GCG中之程式，使用預設或推薦參數進行比較。FASTA (例如FASTA2及FASTA3)提供查詢序列與檢索序列之間的最佳重疊區之比對及序列一致性百分比(Pearson (2000)，見上文)。當比較本發明序列與含有來自不同生物體之大量序列的資料庫時，另一較佳演算法為使用預設參數之電腦程式BLAST，尤其為BLASTP或TBLASTN。參見例如Altschul等人 (1990) J. Mol. Biol. 215:403-410及Altschul等人 (1997) Nucleic Acids Res. 25:3389-402，其各自以引用之方式併入本文中。
較佳地，本發明之抗體為單株抗體。
本發明之抗體可為單特異性、雙特異性或多特異性。多特異性抗體可對一種標靶多肽之不同抗原決定基具有特異性或可含有對超過一種標靶多肽具有特異性的抗原結合域。本發明之抗α-毒素抗體可與其他功能性分子(例如另一肽或蛋白)連接或共同表現。舉例而言，抗體或其片段可功能性地連接(例如藉由化學偶合、基因融合、非共價結合或其他方式)至一或多個其他分子實體，諸如另一抗體或抗體片段，以產生具有第二結合特異性之雙特異性或多特異性抗體。舉例而言，本發明包括雙特異性抗體，其中免疫球蛋白之一個臂對抗原具有特異性，且免疫球蛋白之另一臂對第二治療標靶具有特異性或結合於治療部分。
在本發明之一些實施例中，抗體CR3022或其抗原結合片段包含：重鏈可變區，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 2或其具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之實質上類似的序列；及輕鏈可變區，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 3或其具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之實質上類似的序列。
本發明之醣工程化抗體或其抗原結合片段具有醣工程化Fc。如本文中所使用，術語「醣工程化Fc」係指在Fc區上之N-聚醣已經由酶促或化學方式改變或工程化。如本文中所使用之術語「Fc之醣工程化」係指用於製備醣工程化Fc的酶促或化學方法。
本發明之醣工程化抗體或其抗原結合片段為醣抗體。如本文中所使用之術語「醣抗體」係指在Fc區上具有單一、均勻醣型的單株抗體之均質群體。均質群體中之個別醣抗體為相同的，結合於相同抗原決定基，且含有具有明確定義之聚醣結構及序列的相同Fc聚醣。
在Fc區醣基化特徵之情況下，術語「均質」意欲意謂由一個所需N-聚醣種類表示之單一醣基化模式，具有極少或不具有前驅體N-聚醣。在某些實施例中，具有所需N-聚醣之Fc的純度大於約85%。在某些實施例中，具有所需N-聚醣之Fc的純度大於約90%。在某些實施例中，具有所需N-聚醣之Fc的純度大於約95%。
如本文中所使用，術語「聚醣」係指多醣、寡醣或單醣。聚醣可為糖殘基之單體或聚合物且可為直鏈或分支鏈的。聚醣可包括天然糖殘基(例如，葡萄糖、N-乙醯葡糖胺、N-乙醯神經胺酸、半乳糖、甘露糖、海藻糖、己糖、阿拉伯糖(arabinose)、核糖、木糖等)及/或經修飾之糖(例如，2'-氟核糖、2'-去氧核糖、磷酸甘露糖、6'磺酸基N-乙醯葡糖胺等)。聚醣在本文中亦用於指醣結合物之碳水化合物部分，諸如醣蛋白、醣脂、醣肽、醣蛋白組、肽聚醣、脂多醣或蛋白聚醣。聚醣通常僅由單醣之間的O-醣苷鍵組成。舉例而言，纖維素為由β-1,4-連接型D-葡萄糖構成的聚醣(或更特定而言，葡聚醣)，且甲殼素為由β-1,4-連接型N-乙醯基-D-葡糖胺構成的聚醣。聚醣可為單醣殘基之均聚物或雜聚物，且可為直鏈或分支鏈的。如在醣蛋白及蛋白聚醣中，可發現聚醣附接於蛋白。其通常發現於細胞外表面上。O連接型及N連接型聚醣在真核生物中很常見，而且可發現於原核生物中(雖然不常見)。發現N連接型聚醣附接於序列子中之天冬醯胺之R基團氮(N)。序列子為Asn-X-Ser或Asn-X-Thr序列，其中X為除脯胺酸以外之任何胺基酸。
如本文中所使用，術語「N-聚醣」係指藉由與含Fc之多肽中之天冬醯胺殘基之醯胺氮連接之N-乙醯基葡糖胺(GlcNAc)而附接的N-連接型寡醣。
如本文中所揭示，醣工程化抗體或其抗原結合片段具有由通式(I)表示之N-聚醣
Figure 02_image005
式(I) 其中： 各X及Y表示聚醣，且X及Y相同。
在本發明之一些實施例中，各X及Y表示GlcNAc-、GalGlcNAc-、Sia(α2-3)GalGlcNAc-或Sia(α2-6)GalGlcNAc-。
在本發明之一些實施例中，N-聚醣係選自由以下組成之群：GlcNAc 2Man 3GlcNAc 2(Fuc) (G0F)、GlcNAc 2Man 3GlcNAc 2(G0)、Gal 2GlcNAc 2Man 3GlcNAc 2(Fuc) (G2F)、Gal 2GlcNAc 2Man 3GlcNAc 2(G2)、Sia 2(α2-3)Gal 2GlcNAc 2Man 3GlcNAc 2(Fuc) (G2S2F (α2,3鍵))、Sia 2(α2-6)Gal 2GlcNAc 2Man 3GlcNAc 2(Fuc) (G2S2F (α2,6鍵))、Sia 2(α2-6)Gal 2GlcNAc 2Man 3GlcNAc 2(G2S2 (α2,6鍵))及Sia 2(α2-3)Gal 2GlcNAc 2Man 3GlcNAc 2(G2S2 (α2,3鍵))，及群體中所提供之複數個抗體或其抗原結合片段，且群體中約90%以上具有相同的N-聚醣。圖1中顯示N-聚醣之示意性結構。在本發明之一些實施例中，N-聚醣係選自由以下組成之群：G2F、G2、G2S2F (α2,3鍵)、G2S2F (α2,6鍵)及G2S2 (α2,6鍵)。
在本發明之一些實施例中，抗原部分與醣工程化抗體或其抗原結合片段的比率在1:10至10:1範圍內，諸如1:10、1:9、1:8、1:7、1:6、1:5、1:4、1:3、1:2、1:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1及10:1。
在另一態樣中，本發明亦提供一種免疫組合，其包含有效量之組合物，該組合物包含如本文中所揭示之醣工程化抗體或其抗原結合片段及醫藥學上可接受之載體及/或佐劑。
本發明亦提供一種於需要治療之個體中治療病毒感染的方法，其包含向該個體投與如本文中所揭示之組合物或免疫組合。
當與包含未經醣工程化之抗體或未在式(I)中定義之抗體(諸如X及Y為不同的)的比較性組合物或免疫組合相比時，如本文中所揭示之組合物或免疫組合出乎意料地顯示極佳的誘導優良免疫反應之能力。對稱性N-聚醣誘導優良免疫反應。在本發明之一些實施例中，組合物或免疫組合包含具有如本文中所揭示之對稱性聚醣的醣工程化抗體或其抗原結合片段，且誘導較高水準之對病毒具有特異性的高親合力抗體及/或誘發針對病毒之穩固的廣譜中和抗體。
如本文中所使用，術語「組合」或「免疫組合」定義一個單位劑型中之固定組合或用於組合投與之分裝部分之套組，其中化合物A及化合物B可同時分開投與或在時間間隔內分開投與。
如本文中所使用，術語「有效量」係指當向哺乳動物或其他個體投與以治療疾病時，足以實現對該疾病之此類治療的藥劑之量。
如本文中所使用，術語「治療(treatment/treating)」及其類似者涵蓋對哺乳動物，尤其人類中之疾病的任何治療，且包括：(a)預防疾病在易患有疾病但尚未診斷患有該疾病之個體中發生；(b)抑制疾病，即遏制其發展；及(c)緩解疾病，即促使疾病消退。
本文中可互換使用之術語「個體」、「受試者」、「宿主」及「患者」係指哺乳動物，包括(但不限於)鼠類(例如大鼠、小鼠)、非人類靈長類動物、人類、犬科動物、貓科動物、有蹄類動物(例如馬科動物、牛科動物、綿羊、豬科動物、山羊)等。
如本文中所使用，術語「需要治療」係指由照護者(例如在人類之情況下，為醫師、護士、護理從業者或個人；在動物(包括非人類之哺乳動物)之情況下，為獸醫)作出的判斷，該判斷為個體需要治療或將受益於治療。除包括知曉個體可由於藉由本發明之化合物治療之病狀而患病或將患病以外，此判斷係基於照護者之專業知識領域內之多種因素而作出。
本發明之免疫組合係用適合的稀釋劑、載體、賦形劑及提供改良之轉移、遞送、耐受性及其類似者之其他藥劑調配。免疫組合可經調配用於特定用途，諸如用於獸醫學用途或人類醫藥學用途。所使用之組合物及賦形劑、稀釋劑及/或載體之形式將視抗體之預期用途及用於治療性用途之投藥模式而定。可於所有醫藥化學家之已知的處方集中查詢眾多適當調配物：Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, Pa。此等調配物包括例如粉劑、糊劑、軟膏、凝膠劑、蠟、油、脂質、含有囊泡之脂質(陽離子型或陰離子型)(諸如LIPOFECTIN™，Life Technologies，Carlsbad，Calif.)、DNA結合物、無水吸收糊劑、水包油及油包水乳液、聚乙二醇乳液(具有各種分子量之聚乙二醇)、半固體凝膠及含有聚乙二醇之半固體混合物。亦參見Powell等人「Compendium of excipients for parenteral formulations」 PDA (1998) J Pharm Sci Technol 52:238-311。
向患者投與之抗體的劑量可視患者之年齡及體型、目標疾病、病狀、投藥途徑及其類似者而變化。較佳劑量通常根據體重或體表面積計算。當本發明之抗體用於治療成人患者中之病毒感染時，靜脈內投與本發明之抗體可為有利的。可視病狀之嚴重程度而定來調節治療之頻率及持續時間。可憑經驗測定投與抗體之有效劑量及時程；舉例而言，可藉由週期性評定來監測患者進展，且相應地調節劑量。此外，可使用本領域中之熟知方法(例如Mordenti等人, 1991, Pharmaceut. Res. 8:1351)進行劑量之種間比例調整。
已知各種遞送系統且可用於投與本發明之免疫組合，該等遞送系統例如脂質體中之封裝、微粒、微膠囊、能夠表現突變病毒之重組細胞、受體介導之內飲作用(Wu等人, 1987, J. Biol. Chem. 262:4429-4432)。引入方法包括(但不限於)皮內、肌肉內、腹膜內、靜脈內、皮下、鼻內、硬膜外及經口途徑。免疫組合可藉由任何便利途徑投與，例如藉由輸注或彈丸注射、藉由經由上皮或黏膜皮膚內層(例如口腔黏膜、直腸黏膜及腸黏膜等)吸收且可與其他生物學活性劑一起投與。可全身性或局部投與。
本發明之免疫組合可使用標準針及注射器皮下或靜脈內遞送。此外，就皮下遞送而言，筆式遞送裝置易於在遞送本發明之免疫組合中應用。此類筆式遞送裝置可為可重複使用的或一次性的。可重複使用的筆式遞送裝置通常利用含有免疫組合之可替換藥筒。一旦在藥筒內之所有免疫組合均已被投與且藥筒係空的，可容易地丟棄空的藥筒且用新的含有免疫組合之藥筒替換。隨後可重複使用筆式遞送裝置。在一次性筆式遞送裝置中，不存在可替換套筒。實際上，一次性筆式遞送裝置預填充有保存於裝置內之儲集器中的醫藥組合物。在儲集器中之醫藥組合物被清空後，丟棄整個裝置。
在某些情況下，免疫組合可在受控釋放系統中遞送。在一個實施例中，可使用泵(參見Langer，見上文；Sefton, 1987, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:201)。在另一實施例中，可使用聚合材料；參見Medical Applications of Controlled Release, Langer及Wise (編), 1974, CRC Pres., Boca Raton, Fla。在另一實施例中，可將受控釋放系統置於組合物之標靶附近，因此僅需要全身性劑量之一部分(參見例如Goodson, 1984, Medical Applications of Controlled Release中, 見上文, 第2卷, 第115-138頁)。其他受控釋放系統論述於Langer, 1990, Science 249:1527-1533之綜述中。
可注射製劑可包括用於靜脈內、皮下、皮內及肌肉內注射、點滴輸注等之劑型。此等可注射製劑可藉由公開已知之方法來製備。舉例而言，可注射製劑可例如藉由將上文中所描述之抗體溶解、懸浮或乳化於習知用於注射之無菌水性介質或油性介質中來製備。舉例而言，生理鹽水、含有葡萄糖及其他輔助試劑之等張溶液等作為用於注射之水性介質，其可與適當助溶劑組合使用，該等助溶劑為諸如醇(例如乙醇)、多元醇(例如丙二醇、聚乙二醇)、非離子型界面活性劑[例如聚山梨醇酯80、HCO-50 (氫化蓖麻油之聚氧化乙烯(50mol)加合物)]等。採用例如芝麻油、大豆油等作為油性介質，其可與助溶劑(諸如苯甲酸苯甲酯、苄醇等)組合使用。較佳將由此製備之注射液填充於適當安瓿中。
有利地，用於上文中所描述之經口或腸胃外用途的醫藥組合物可製備成呈適配於活性成分之劑量的單位劑量之劑型。此類呈單位劑量之劑型包括例如錠劑、丸劑、膠囊、注射劑(安瓿)、栓劑等。
在本發明之一些實施例中，方法係用於中和個體中之病毒及/或增強抗體依賴性細胞介導之細胞毒性。
「中和」係指分子(例如抗體)將冠狀病毒之活性抑制到任何可偵測程度的過程。
如實例中所說明，與用抗原及未經醣工程化之抗體免疫接種的小鼠相比，用本發明之組合物或免疫組合免疫接種之動物展示類似或較高水準之血清IgG抗體，尤其係IgG1抗體。此外，本發明之組合物或免疫組合能夠誘導更加平衡的Th1/Th2反應及高親合力抗體。組合物或免疫組合之雙重給藥方案不僅可誘發針對野生型病毒之穩固中和抗體，且亦可誘發各種突變型變異體。相比之下，由抗原及未經醣工程化之抗體誘發之抗體的病毒中和活性明顯受損。此外，本發明之組合物或免疫組合展示較高的中和活性。
在本發明之一些實施例中，免疫組合進一步包含病毒之疫苗。在另一態樣中，方法包含共同投與組合物或免疫組合及病毒之疫苗。在本發明之一些實施例中，疫苗包含抗原部分。
如本文中所使用，術語「共同投與」或「組合投與」意欲涵蓋向單個患者投與所選之治療劑，且包括未必藉由相同投與途徑投與或同時投與藥劑之治療方案。在本發明之一些實施例中，免疫組合進一步包含病毒之疫苗，且疫苗在組合物或免疫組合之前投與。
組合物及抗原部分可以同時、分開或依序共同投與，或以作為共調配物之組合形式共同投與。
共同投與可包括同時投與組合物及抗原部分及視情況選用之呈相同或不同劑型之疫苗，或分開投與治療劑。舉例而言，組合物及抗原部分及視情況選用之疫苗可同時投與。或者，組合物及抗原部分及視情況選用之疫苗經調配用於分開投與，且同時或依序投與。
在本發明之一些實施例中，方法包含至少投與組合物兩次。在本發明之一些實施例中，方法係用於在不同時間引發及隨後增強免疫反應。舉例而言，方法包含：(i) 向個體投與至少一個劑量之引發免疫原性組合物，以誘發初級免疫反應；及(ii)向個體投與增強型免疫原性組合物，以在其投與後7、10、12、14、15、18、20、21、25、28、30、35、40、42、49、50天內或更早誘發保護性記憶性免疫反應。
如實例中所說明，抗原部分及組合物之異源性初打-加打誘導明顯比僅兩個劑量之抗原更高的效價。類似地，用一個額外劑量之本發明之組合物增強的兩個劑量之抗原顯著提高血清IgG效價。
提供以下實例以幫助熟習此項技術者實施本發明。 實例 實例 1 製備醣工程化 CR3022 (CHOptimax™) 之方法
醣工程化 CR3022 之物質：
酶A：EndoS2 T138E或EndoS2 D184M
酶B：EndoS2 T138Q-Alfc或EndoS2 D184M-Alfc
糖A：Gal 2GlcNAc 2Man 3GlcNAc-㗁唑啉(CT-ox)
糖B：Sia(α2-6)Gal 2GlcNAc 2Man 3GlcNAc-㗁唑啉(2,6-單-Sia-CT-ox)
糖C：Sia 2(α2-6)Gal 2GlcNAc 2Man 3GlcNAc-㗁唑啉(2,6-SCT-ox)
糖D：Sia 2(α2-3)Gal 2GlcNAc 2Man 3GlcNAc-㗁唑啉(2,3-SCT-ox)
糖E：GlcNAcMan 3GlcNAc-㗁唑啉
糖F：GlcNAc 2Man 3GlcNAc-㗁唑啉
糖G：GalGlcNAc 2Man 3GlcNAc-㗁唑啉
醣工程化 CR3022 之通用方案
CR3022在37℃下用於Tris-HCl (pH 7.0)緩衝液中之酶處理16小時。且隨後調節反應溶液之溫度至30℃。藉由水溶解糖，且隨後添加至反應溶液中。在振盪30分鐘之後，反應溶液藉由0.2 μm過濾器過濾，且藉由MabSelect樹脂進一步純化，獲得具有如表1中所示的所需醣型的CR3022。 表1
藉由CHOptimax™ 製備之 醣工程化 CR3022
   酶 A 酶 B
糖A (CT-ox) CR3022-G2F CR3022-G2
糖B (2,6-單-Sia-CT-ox) CR3022-G2S1F (α2-6) CR3022-G2S1 (α2-6)
糖C (2,6-SCT-ox) CR3022-G2S2F (α2-6) CR3022-G2S2 (α2-6)
糖D (2,3-SCT-ox) CR3022-G2S2F (α2-3) CR3022-G2S2 (α2-3)
糖E CR3022-G0F-N   
糖F CR3022-G0F CR3022-G0
糖G CR3022-G1F   
工程化CR3022之醣型藉由質量分析確定且顯示於圖2及表2中。 表2
聚醣工程化 CR3022 之重鏈質量
抗體 分子量
CR3022-G0 50144.80
CR3022-G2 50469.40
CR3022-G2S1 (α2-6) 50760.20
CR3022-G2S2 (α2-6) 51051.40
CR3022-G0F 50291.00
CR3022-G2F 50615.20
CR3022-G2S1F (α2-6) 50906.40
CR3022-G2S2F (α2-6) 51198.00
CR3022-G2S2F (α2-3) 51198.20
CR3022之醣型(%)及其醣工程化變異體顯示於表3中。 表3
      原始 G2F G2 G2S1F (α2,6) G2S2F (α2,3) G2S2F (α2,6) G2S2 (α2,3)
醣型(%) N 1 0 0 0 0.7 0 0 0
NF 2 0 0 0 0 2.5 0 0
Man5 4.8 0 0 0 0 0 0
G0F- N 3 3.7 0 0 0 0 0 0
G0F 57.5 0 0 0 0 0 0
G0 0 0 0 0 0 0 0
G1F 29.4 0 0 0 0 0 0
G2F 4.6 92.8 0 0.7 0 0 0
G2 0 7.2 100 0 0 0 0
G2S1F 0 0 0 93.8 1.8 1.6 0
G2S1 0 0 0 4.8 0 0 1.7
G2S2F 0 0 0 0 88.8 91.6 0
G2S2 0 0 0 0 6.9 6.8 98.3
1「N」意謂單-GlcNAc； 2「NF」意謂具有海藻糖之單-GlcNAc； 3「G0F-N」意謂G0F減去一個末端GlcNAc 實例 2 醣工程化組合物或免疫組合可誘發針對 SARS-CoV-2 RBD 之穩固 IgG 效價
無病原體之BALB/c小鼠(雌性，6週齡，來自BioLASCO)用於疫苗接種研究。將SARS-CoV-2 RBD (10 μg)單獨進行肌肉內遞送，或與原始或醣工程化CR3022以1:1 (Ag:Ab)之莫耳比以複合物形式進行遞送。所有疫苗均用Adju-Phos (InvivoGen)作為佐劑，且每次注射時用PBS (pH 7.4)使最終體積達到100 μL。小鼠分別在第1天及第21天經由肌肉內注射引發及增強免疫反應。增強後十天，將小鼠處死且採集血液以用於ELISA及病毒中和分析法。
進行ELISA以測定抗SARS-CoV-2 RBD抗體之血清總IgG效價。簡言之，塗佈200 ng SARS-CoV-2 RBD (2 μg/mL)於96孔ELISA盤之孔上。用1% BSA阻斷之後，添加100 μL經稀釋之小鼠血清(於PBS中稀釋5,000倍)至孔中，且使其在室溫下培育2小時。在洗滌週期(用0.05% Tween-20/PBS)之後，將HRP結合之抗小鼠IgG特異性抗體施用於偵測。
結果顯示於圖3中。相較於其他組，單獨用SARS-CoV-2 RBD免疫接種之小鼠顯示對RBD之血清IgG效價最低。與用RBD/原始CR3022免疫接種之小鼠相比，用包含RBD加CR3022-F241A (殘基F241處之丙胺酸點突變，未經醣工程化)及RBD加CR3022-G2S1F (α2,6)之免疫複合物免疫接種的小鼠顯示對RBD之血清IgG效價水準較低。與用RBD/原始CR3022免疫接種之小鼠相比，用包含RBD加醣工程化CR3022變異體(包括G2F、G2、G2S2F (α2,3-或α2,6-)及G2S2 (α2,6-))之免疫複合物免疫接種的小鼠顯示類似或較高的血清抗RBD IgG抗體水準。 實例 3 醣工程化組合物或免疫組合可誘導 IgG 子類別轉換
免疫接種係如實例2中所示。
進行ELISA以測定誘導之抗SARS-CoV-2 RBD IgG抗體之子類別。簡言之，塗佈200 ng SARS-CoV-2 RBD (2 μg/mL)於96孔ELISA盤之孔上。用1% BSA阻斷之後，添加100 μL經稀釋之小鼠血清(於PBS中稀釋1,000倍)至孔中，且使其在室溫下培育2小時。在洗滌週期(用0.05% Tween-20/PBS)之後，將HRP結合之抗小鼠IgG特異性抗體子類別施用於偵測。
如圖4及表4中所示之結果顯示，所有經免疫接種之小鼠(除單獨接受SARS-CoV-2 RBD之小鼠組外)展示類似水準之抗RBD IgG1抗體。有趣的是，與用RBD/原始CR3022免疫接種之小鼠相比，用RBD加醣工程化CR3022變異體(包括G2、G2F、G2S2F (α2,3-或α2,6-)及G2S2 (α2,6-))免疫接種的小鼠顯示較高之抗RBD IgG2a或IgG2b抗體水準。此等結果表明，與其他組合物相比，包含具有某些醣型(包括G2、G2F、G2S2F (α2,3-或α2,6-)及G2S2 (α2, 6-))之RBD及CR3022抗體之免疫複合物疫苗可誘導更平衡的Th1/Th2反應。在所有組中僅偵測到微量水準之抗RBD IgG3抗體。 表4
lgG類別 總lgG lgG1 lgG2a lgG2b lgG3
血清稀釋倍數 5,000倍 1,000倍 1,000倍 1,000倍 1,000倍
RBD 31 43 39 58 78
RBD/CR3022 100 100 100 100 100
RBD/CR3022-F241A 92 100 52 49 233
RBD/CR3022-G2F 112 102 126 132 122
RBD/CR3022-G2 118 104 148 143 89
RBD/CR3022-G2S1F 80 99 52 46 89
RBD/CR3022-G2S2F(α2,6) 107 102 91 104 133
RBD/CR3022-G2S2F(α2,3) 104 101 83 125 111
RBD/CR3022-G2S2(α2,6) 102 101 178 153 100
實例 4 抗體親合力
免疫接種係如實例2中所示。
進行ELISA以測定抗SARS-CoV-2 RBD IgG抗體之效價及親合力。為了測定總IgG之效價，將200 ng SARS-CoV-2 RBD (2 μg/mL)塗佈於96孔ELISA盤之孔上。用1% BSA阻斷之後，添加100 μL經稀釋之小鼠血清(於PBS中稀釋1,000倍)至孔中，且使其在室溫下培育2小時。在洗滌週期(用0.05% Tween-20/PBS)之後，將HRP結合之抗小鼠IgG特異性抗體施用於偵測。為了進一步測定高親合力抗體之效價，添加7 M尿素至96孔ELISA盤之孔中，且在室溫下培育15分鐘，隨後添加二級抗體。
結果顯示，所有經免疫接種之小鼠(除單獨接受SARS-CoV-2 RBD之小鼠組外)展示類似水準之抗RBD IgG1抗體(圖5)。
進行7M尿素親合力ELISA以進一步評估所誘導之抗體之品質。與RBD/原始CR3022免疫複合物相比，包含SARS-CoV-2 RBD及醣工程化CR3022變異體(包括G2F、G2、G2S2F (α2,3-或α2,6-)及G2S2 (α2,6-))之免疫複合物疫苗可誘導較高水準之對RBD具有特異性的高親合力抗體。相比之下，由包含RBD/CR3022-F241A (殘基F241處之丙胺酸點突變)及RBD/CR3022-G2S1F (α2,6)之免疫複合物誘發之抗體的親合力明顯低於其他免疫複合物組(圖6)。
親合力指數之結果顯示於圖7及表5中。 表5
lgG類別 總lgG 親合力指數
7M尿素 - a + b OD450比率(b/a) 對RBD/CR3022之%
RBD 1.15 0.28 0.18 39
RBD/CR3022 2.69 1.26 0.46 100
RBD/CR3022-F241A 2.60 0.83 0.32 70
RBD/CR3022-G2F 2.88 1.58 0.54 117
RBD/CR3022-G2 2.89 1.71 0.59 128
RBD/CR3022-G2S1F 2.64 0.95 0.35 76
RBD/CR3022-G2S2F(α2,6) 2.85 1.47 0.51 111
RBD/CR3022-G2S2F(α2,3) 2.81 1.69 0.60 130
RBD/CR3022-G2S2(α2,6) 2.82 1.47 0.51 111
實例 5 假病毒中和
免疫接種係如實例2中所示。
用具有螢光素酶報導基因之SARS-CoV-2刺突蛋白假模式化慢病毒來測定由疫苗誘導之血清RBD特異性IgG的中和活性。
結果顯示於圖8中。包含SARS-CoV-2 RBD及醣工程化CR3022變異體(包括G2F、G2、G2S2F (α2,3-或α2,6-)及G2S2 (α2,6-))之免疫複合物疫苗的雙重給藥方案不僅可誘發針對野生型病毒之穩固廣譜中和抗體，且亦可誘發各種SARS-CoV-2突變型變異體，包括D614G、B.1.1.7及含E484K之病毒株501Y.v2。相比之下，由RBD/初始CR3022、RBD/CR3022-F241A (殘基F241處之丙胺酸點突變)及RBD/CR3022-G2S1F (α2,6)誘發之抗體的病毒中和活性，尤其係對於含E484K之病毒株501Y.v2的病毒中和活性明顯受損。 實例 6 假病毒中和分析法之結果與 SARS-CoV-2 ( 病毒株 hCoV19/ 臺灣 /4/2020) 之彼等結果一致
無病原體之BALB/c小鼠(雌性，6週齡，來自BioLASCO)用於疫苗接種研究。將SARS-CoV-2 RBD (10 μg)單獨進行肌肉內遞送，或與原始或醣工程化CR3022以1:1 (Ag:Ab)之莫耳比以複合物形式進行遞送。所有疫苗均用Adju-Phos (InvivoGen)作為佐劑，且每次注射時用PBS (pH 7.4)使最終體積達到100 μL。小鼠分別在第1天及第21天經由肌肉內注射引發及增強免疫反應。增強後十天，將小鼠處死且在第7天及第30天採集血液以用於ELISA及病毒中和分析法。
G1：僅含磷酸鋁，作為對照組
G2：10 μg SARS-CoV-2 RBD-His與磷酸鋁
G3：免疫複合物(CR3022/SARS-CoV-2 RBD-His)與磷酸鋁
G4：唾液酸化免疫複合物(CR3022-G2S2F/SARS-CoV-2 RBD-His)與磷酸鋁
G5：唾液酸化免疫複合物(CR3022-G2S2/SARS-CoV-2 RBD-His)與磷酸鋁
用具有螢光素酶報導基因之SARS-CoV-2刺突蛋白假模式化慢病毒來測定由疫苗誘導之血清RBD特異性IgG的中和活性。如圖9中所示，包含SARS-CoV-2 RBD/CR3022-G2S2F (G4)及RBD/CR3022-G2S2 (G5)的醣工程化免疫複合物誘導的RBD特異性抗體顯示出較高的中和活性。相比之下，RBD (G2)或包含SARS-CoV-2 RBD及CR3022 (G3)之免疫複合物誘導的RBD特異性抗體顯示出明顯較低的中和活性。
用SARS-CoV-2 (病毒株hCoV19/臺灣/4/2020)來測定由疫苗誘導之血清RBD特異性IgG的中和活性。與假病毒中和分析法的結果一致，與如圖10及表6中所示的其他組相比，包含SARS-CoV-2 RBD/CR3022-G2S2F (G4)及RBD/CR3022-G2S2 (G5)的醣工程化免疫複合物誘導的RBD特異性抗體顯示明顯較高的中和活性。 表6
組 組合物 保護性效價(稀釋倍數)
50% 90%
G1 對照組 ＜200 ＜200
G2 RBD 4,519 1,901
G3 RBD/CR3022 4,519 3,428
G4 RBD/CR3022-G2S2F 18,071 8,433
G5 RBD/CR3022-G2S2 15,205 7,870
實例 7 促進 CHO-V10 之異源性初打 - 加打功效
自BioLASCO Co., Ltd購入總計15隻6-8週齡的雌性Balb/c。在馴化之後，將小鼠隨機分配成3組。小鼠以3週間隔接受一或兩個劑量之SARS-CoV-2刺突蛋白(10 μg 刺突蛋白HexaPro 1)/鋁膠，且隨後經由IM途徑用一個劑量之CHO-V10 候選1號(含有10 μg RBD)加打；或以3週間隔經由IM途徑用三個劑量之SARS-CoV-2刺突蛋白(10 μg 刺突蛋白HexaPro)/鋁膠進行疫苗接種。在第4週或第7週採集免疫血清以評估免疫原性及進行假病毒中和分析法。
CHO-V10 候選1號：CR3022-G2S2F+RBD
IM：肌肉內
病毒株：SARS-CoV-2野生型(野生型)、SARS-CoV-2 D614G突變體(D614G)、SARS-CoV-2 α變異體(α)、β變異體(β)、γ變異體(γ)及δ變異體(δ)假病毒。
在第2次及第3次給藥後一週採集免疫血清，且如圖11中所示藉由ELISA測定針對RBD之血清IgG效價。對於接受兩個劑量之疫苗的小鼠，刺突蛋白及CHO-V10候選1號之異源性初打-加打誘導明顯比兩個劑量之刺突蛋白更高的效價。且對於已經用兩個劑量之刺突蛋白進行疫苗接種的小鼠，額外一個劑量之CHO-V10 候選1號(而非刺突蛋白)之加打顯著改良針對RBD之血清IgG效價。
假病毒中和分析法之結果顯示於圖12中。用兩個劑量之刺突蛋白進行疫苗接種可誘導中和抗體對中和野生型、α及γ變異體之較高效價(IC50＞12,800倍)。但對於β變體，IC50減小至6,400倍。及對於δ變異體，IC50顯著減小至1,600倍-3,200倍。有趣的是，用額外一個劑量之CHO-V10 候選1號對已用一或兩個劑量之刺突蛋白免疫接種的小鼠進行加打，可顯著提高中和抗體對VOC，尤其對δ變異體之效價。相比之下，用額外一個劑量之刺突蛋白加打的S/S組未改良對δ變異體之中和活性。 實例 8 對於 γ 變異體或 δ 變異體之假病毒中和分析法
此實例之主要目的為研究RBD/CR3022-G2S2F (候選1號)及RBD/CR3022-G2 (候選2號)之疫苗功效。
自BioLASCO Co., Ltd購入6-8週齡的雌性Balb/c。在馴化之後，將小鼠隨機分配成2組。小鼠經由IM途徑以3週間隔接受兩個劑量之RBD/CR3022-G2S2F (含有10 μg RBD)或RBD/CR3022-G2 (含有10 μg RBD)。在第4週採集免疫血清以評估免疫原性及進行假病毒中和分析法。
病毒株：SARS-CoV-2野生型(野生型)、SARS-CoV-2 D614G突變體(D614G)、SARS-CoV-2 α變異體(α)、β變異體(β)、γ變異體(γ)及δ變異體(δ)假病毒。
如圖13中所示，由CHO-V10候選1號及候選2號誘發的抗體不僅能有效中和野生型，且能有效中和當前WHO所公佈之VOC，效價非常高。 實例 9 SARS-CoV-2 病毒攻擊
此實例之主要目的為調查C57BL/6中之CHO-V10候選疫苗功效。
分別自BioLASCO Co., Ltd或The Jackson Laboratory購入6-8週齡之雌性C57BL/6及hACE2-Tg C57BL/6。在馴化之後，將小鼠隨機分組(各組N=5-6)。對於C57BL/6小鼠，小鼠以3週間隔接受2個劑量之第1組(G1)_RBD (10 μg)/磷酸鋁、第2組(G2)_ RBD (10 μg)/ CR3022-G2S2F/磷酸鋁或第3組(G3)_RBD/ CR3022-G2/磷酸鋁。隨後採集免疫血清以用於ELISA。為了進一步研究包含RBD/CR3022-G2之疫苗的保護能力，在hACE2-Tg C57BL/6中進行SARS-CoV-2病毒攻擊研究。首先，將小鼠隨機分配成兩組(各組n=6)，且以3週間隔接受2個劑量之PBS/磷酸鋁或RBD (10 μg)/CR3022-G2/磷酸鋁。接受第二劑量後兩週，用SARS-CoV-2病毒(野生型，10 4TCID50)攻擊經免疫接種之hACE2-Tg C57BL/6。每日監測體重及體溫。隨機選擇三隻小鼠且處死，以用於在DPI (感染後之天數) 5及DPI 10時測定肺中之病毒RNA複本。
C57BL/6小鼠中之抗SARS-CoV-2 RBD IgG抗體之血清效價的結果顯示於圖14中。在接受第1劑量後一週採集免疫血清，且藉由ELISA測定針對RBD之血清IgG效價。如圖1中所示，與單獨的RBD/CR3022-G2S2F及RBD相比，RBD/CR3022-G2可在一個劑量免疫接種之後誘導C57BL/6小鼠中之最強的抗RBD IgG抗體。
hACE2-Tg C57BL/6小鼠中之抗SARS-CoV-2 RBD IgG抗體之血清效價的結果顯示於圖15中。在接受第2劑量後一週採集免疫血清，且藉由ELISA測定針對RBD之血清IgG效價。與PBS對照組相比，接受2個劑量之RBD/CR3022-G2的hACE2-Tg C57BL/6小鼠可誘發抗RBD IgG抗體之高效價。
SARS-CoV-2病毒攻擊之結果顯示於圖16A至圖16C中。接受第二劑量後兩週，用SARS-CoV-2病毒(野生型)之10 4TCID50攻擊經免疫接種之小鼠。如圖16A及16B中所示，對照組中之小鼠之體重及體溫在病毒感染後5天開始降低，而接受2個劑量之RBD/CR3022-G2之小鼠保持不變。如16C中所示，在感染後第5天及第10天測定肺組織中之病毒RNA複本。在對照組小鼠中，每微克肺RNA之SARS-CoV-2複本平均值在DPI 5及DPI 10時分別為3×10 7及1×10 7。在經疫苗接種之小鼠中，每微克肺RNA之SARS-CoV-2複本平均值在DPI 5及DPI 10時低於偵測極限(＜100)。 實例 10 針對 HIV 之醣工程化免疫複合物
製備醣工程化抗體之方法如實例1中所描述。對HIV之gp120具有特異性之抗體為G0-PGT121、S-PGT121或NS-PGT121，如Lofano等人, Sci. Immunol. 3, eaat7796 (2018)所描述。經生物素標記之rgp120-YU2 (Immune Technology)用作抗原。
無病原體之BALB/c小鼠(雌性，6週齡，來自BioLASCO)用於疫苗接種研究。經生物素標記之rgp120-YU2 (10 μg)單獨在肌肉內進行遞送，或與原始或醣工程化G0-PGT121、S-PGT121或NS-PGT121以1:1 (Ag:Ab)之比率呈複合物形式遞送。醣工程化G0-PGT121、S-PGT121或NS-PGT121具有醣工程化Fc，其係指Fc區上之工程化N-聚醣。工程化N-聚醣由如下通式(I)表示，且各X及Y表示GlcNAc-、GalGlcNAc-、Sia(α2-3)GalGlcNAc或Sia(α2-6)GalGlcNAc-。
Figure 02_image007
所有疫苗均用Adju-Phos (InvivoGen)作為佐劑，且每次注射時用PBS (pH 7.4)使最終體積達到100 μL。小鼠分別在第1天及第21天經由肌肉內注射引發及增強免疫反應。增強後十天，將小鼠處死且採集血液以用於ELISA及病毒中和分析法。結果表明，當與包含未經醣工程化之抗體或非式(I)中所定義之抗體(諸如X及Y不同)的免疫複合物相比時，藉由包含醣工程化之免疫複合物製備的所有疫苗可誘導優良免疫反應。 實例 11 抗 A 型流感病毒之醣工程化免疫複合物
製備醣工程化抗體之方法如實例1中所描述。對A型流感之血球凝集素(HA)具有特異性之抗體為F241A雙特異性mAb (如Maamary等人, PNAS, 2017年9月19日, 第114卷, 第38期, 10172-10177所描述)及重組抗HA mAb (PY102)(如Dinca等人, Viral immunology. 1993; 6:75-84所描述)經純化之HA用作抗原。
無病原體之BALB/c小鼠(雌性，6週齡，來自BioLASCO)用於疫苗接種研究。將HA (10 μg)單獨進行肌肉內遞送，或與原始或醣工程化F241A或PY102以1:1 (Ag:Ab)之比率呈複合物形式進行遞送。醣工程化F241A或PY102具有醣工程化Fc，其係指Fc區上之工程化N-聚醣。工程化N-聚醣由如下通式(I)表示，且各X及Y表示GlcNAc-、GalGlcNAc-、Sia(α2-3)GalGlcNAc或Sia(α2-6)GalGlcNAc-。
所有疫苗均用Adju-Phos (InvivoGen)作為佐劑，且每次注射時用PBS (pH 7.4)使最終體積達到100 μL。小鼠分別在第1天及第21天經由肌肉內注射引發及增強免疫反應。增強後十天，將小鼠處死且採集血液以用於ELISA及病毒中和分析法。結果表明，當與包含未經醣工程化之抗體或非式(I)中所定義之抗體(諸如X及Y不同)的免疫複合物相比時，藉由包含醣工程化之免疫複合物製備的所有疫苗可誘導優良免疫反應。此外，由包含醣工程化抗體之免疫複合物誘導的抗體不僅顯示對所使用之HA抗原有結合親和力，且亦可與不同類型之HA結合。
雖然已結合所闡述之特定實施例來描述本發明，但其許多替代方案及其修改及變化對於一般技術者而言將顯而易見。所有此類替代方案、修改及變化均被視為屬於本發明之範疇內。
圖1顯示N-聚醣之示意性結構。
圖2顯示醣工程化CR3022之質量分析的結果。
圖3顯示實例2之藉由ELISA獲得之針對SARS-CoV-2 RBD之血清效價的結果。
圖4顯示實例3之藉由ELISA獲得之針對SARS-CoV-2 RBD之血清效價的結果。
圖5顯示實例4之藉由ELISA (稀釋1000倍)獲得之抗體親合力的結果。
圖6顯示實例4之藉由ELISA (稀釋1000倍/7 M尿素洗滌)獲得之抗體親合力之結果。
圖7顯示實例4之藉由ELISA獲得之抗體親合力指數的結果。
圖8顯示實例5之假病毒中和的結果。
圖9顯示實例6之假病毒中和的結果。
圖10顯示實例6之SARS-CoV-2 (病毒株hCoV19/臺灣/4/2020)中和的結果。
圖11顯示實例7之抗SARS-CoV-2 RBD IgG抗體之血清效價的結果。
圖12顯示實例7之假病毒中和分析法。
圖13顯示實例8之假病毒中和分析法的結果。
圖14顯示實例9之C57BL/6小鼠中之抗SARS-CoV-2 RBD IgG抗體之血清效價的結果。
圖15顯示實例9之hACE2-Tg C57BL/6小鼠中之抗SARS-CoV-2 RBD IgG抗體之血清效價的結果。
圖16A至16C顯示實例9之SARS-CoV-2病毒攻擊的結果。圖16A：體重。圖16B：體溫。圖16C：肺組織中之病毒RNA複本。
 
<![CDATA[<110>  醣基生醫股份有限公司]]>
          <![CDATA[<120>  包含抗原和其醣工程化抗體之免疫組合物]]>
          <![CDATA[<130>  無]]>
          <![CDATA[<140>  110141423]]>
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          <![CDATA[<211>  223]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  SARS-CoV-2]]>
          <![CDATA[<400>  1]]>
          Arg Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn 
          1               5                   10                  15      
          Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val 
                      20                  25                  30          
          Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser 
                  35                  40                  45              
          Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val 
              50                  55                  60                  
          Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln 
                          85                  90                  95      
          Thr Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr 
                      100                 105                 110         
          Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly 
                  115                 120                 125             
          Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys 
              130                 135                 140                 
          Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr 
          145                 150                 155                 160 
          Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser 
                          165                 170                 175     
          Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val 
                      180                 185                 190         
          Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly 
                  195                 200                 205             
          Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe 
              210                 215                 220             
          <![CDATA[<210>  2]]>
          <![CDATA[<211>  117]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  2]]>
          Gln Met Gln Leu Val Gln Ser Gly Thr Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Gly Phe Ile Thr Tyr 
                      20                  25                  30          
          Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Glu Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Asn Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Gly Gly Ser Gly Ile Ser Thr Pro Met Asp Val Trp Gly Gln Gly 
                      100                 105                 110         
          Thr Thr Val Thr Val 
                  115         
          <![CDATA[<210>  3]]>
          <![CDATA[<211>  113]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  3]]>
          Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser 
                      20                  25                  30          
          Ser Ile Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 
                  35                  40                  45              
          Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 
              50                  55                  60                  
          Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln 
                          85                  90                  95      
          Tyr Tyr Ser Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile 
                      100                 105                 110         
          Lys
Figure 12_A0101_SEQ_0001
Figure 12_A0101_SEQ_0002
Figure 12_A0101_SEQ_0003
Figure 12_A0101_SEQ_0004

Claims (26)

  1. 一種用於誘導免疫反應之組合物，其包含： 醣工程化抗體或其抗原結合片段，其對具有病毒之表面蛋白之受體結合域(RBD)的抗原部分具有特異性，其中該醣工程化抗體或其抗原結合片段具有片段可結晶區(Fc區)及位於該Fc區上之一N-聚醣，且該N-聚醣由通式(I)表示
    Figure 03_image009
    式(I) 其中： 各X及Y表示聚醣，且X及Y相同。
  2. 如請求項1之組合物，其進一步包含具有該病毒之表面蛋白之RBD的抗原部分。
  3. 如請求項1之組合物，其中該表面蛋白為刺突蛋白。
  4. 如請求項1之組合物，其中該病毒為冠狀病毒(CoV)、人類免疫缺陷病毒或正黏液病毒科(Orthomyxoviridae)。
  5. 如請求項1之組合物，其中該病毒為α-CoV、β-CoV、γ-CoV或δ-CoV。
  6. 如請求項1之組合物，其中該抗原部分包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1。
  7. 如請求項1之組合物，其中各X及Y表示GlcNAc-、GalGlcNAc-、Sia(α2-3)GalGlcNAc-或Sia(α2-6)GalGlcNAc-。
  8. 如請求項1之組合物，其中該N-聚醣係選自由以下組成之群：GlcNAc 2Man 3GlcNAc 2(Fuc) (G0F)、GlcNAc 2Man 3GlcNAc 2(G0)、Gal 2GlcNAc 2Man 3GlcNAc 2(Fuc) (G2F)、Gal 2GlcNAc 2Man 3GlcNAc 2(G2)、Sia 2(α2-3)Gal 2GlcNAc 2Man 3GlcNAc 2(Fuc) (G2S2F (α2,3鍵))、Sia 2(α2-6)Gal 2GlcNAc 2Man 3GlcNAc 2(Fuc) (G2S2F (α2,6鍵))、Sia 2(α2-6)Gal 2GlcNAc 2Man 3GlcNAc 2(G2S2 (α2,6鍵))及Sia 2(α2-3)Gal 2GlcNAc 2Man 3GlcNAc 2(G2S2 (α2,3鍵))。
  9. 如請求項1之組合物，其中群體中提供複數個醣工程化抗體或其抗原結合片段，且該群體中約90%以上具有相同的N-聚醣。
  10. 如請求項1之組合物，其中該醣工程化抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區，該重鏈可變區包含胺基酸序列SEQ ID NO: 2或其實質上類似的序列；及輕鏈可變區，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 3或其實質上類似的序列。
  11. 一種免疫組合，其包含有效量之如請求項1或請求項3至10中任一項之組合物，及有效量之具有該病毒之表面蛋白之RBD的抗原部分及醫藥學上可接受之載體及/或佐劑。
  12. 如請求項11之免疫組合，其中該免疫組合進一步包含該病毒之疫苗。
  13. 如請求項12之免疫組合，其中該疫苗包含該抗原部分。
  14. 一種於需要治療之個體中治療病毒感染的方法，其包含向該個體投與如請求項1至10中任一項之組合物。
  15. 如請求項14之方法，其中該病毒為冠狀病毒、人類免疫缺陷病毒或正黏液病毒科。
  16. 如請求項15之方法，其中該病毒為α-CoV、β-CoV、γ-CoV或δ-CoV2。
  17. 如請求項14之方法，其中該方法係用於中和該個體中之病毒及/或增強抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)。
  18. 一種於需要治療之個體中治療病毒感染的方法，其包含向該個體投與如請求項11之免疫組合。
  19. 如請求項18之方法，其中該組合物及該抗原部分同時、分開或依序共同投與，或以作為共調配物之組合形式共同投與。
  20. 如請求項18之方法，其中該免疫組合進一步包含該病毒之疫苗。
  21. 如請求項20之方法，其中該疫苗在該組合物之前投與。
  22. 如請求項18之方法，其中該方法包含至少投與該組合物兩次。
  23. 如請求項18之方法，其中該病毒為冠狀病毒(CoV)、人類免疫缺陷病毒或正黏液病毒科。
  24. 如請求項18之方法，其中該病毒為α-CoV、β-CoV、γ-CoV或δ-CoV2。
  25. 如請求項18之方法，其中該方法係用於在不同時間引發及隨後增強免疫反應。
  26. 如請求項18之方法，其中該方法用於中和該個體中之病毒及/或增強ADCC。
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