TW202210479A

TW202210479A - 一種含氮的飽和雜環化合物的應用

Info

Publication number: TW202210479A
Application number: TW110132870A
Authority: TW
Inventors: 夏廣新; 蘇威; 王雪松; 柯櫻
Original assignee: 大陸商上海醫藥集團股份有限公司
Priority date: 2020-09-04
Filing date: 2021-09-03
Publication date: 2022-03-16
Also published as: EP4209218A1; KR20230058506A; CN114129569A; US20230330093A1; WO2022048614A1; JP2023539779A; TWI802984B; EP4209218A4

Abstract

本發明提供了一種含氮的飽和雜環化合物的應用。具體地，本發明提供了由下式I所示的含氮的飽和雜環化合物或其藥學上可接受的鹽在製備治療和/或預防慢性腎病的藥物中的應用：

Description

一種含氮的飽和雜環化合物的應用

本發明關於一種含氮的飽和雜環化合物或其藥學上可接受的鹽在製備用於治療和/或預防慢性腎病的藥物中的應用。

慢性腎病(chronic kidney disease，CKD)具有患病率高、知曉率低、預後差和醫療費用高等特點，係繼心腦血管疾病、糖尿病和惡性腫瘤之後，又一嚴重危害人類健康的疾病。近年來CKD患病率逐年上升，全球一般人群患病率已高達14.3%，我國橫斷面流行病學研究顯示，18歲以上人群CKD患病率為10.8%。慢性腎病(CKD)係一種進展性疾病，如未能及時有效救治，導致病情惡化進展，則隨病程進展，慢性腎病患者將發展為腎衰竭，如果不進行人工透析或腎臟移植，生存將變得困難。目前對於治療慢性腎病尚無特別有效的方法，因此，積極尋找治療慢性腎病有效並且毒副作用小的藥物，具有較大的臨床價值。

CN103562191B揭露了一種結構式如下所示的含氮的飽和雜環化合物或其藥學上可接受的鹽，顯示出了對腎素的抑制作用，可用於治療高血壓。

式中，R¹表示環烷烴基等，R²²表示可以被取代的芳基等，R表示低級烷烴基等，T表示羰基，Z表示-O-等，R³、R⁴、R⁵和R⁶相同或不同，且表示氫原子等。

CN106928218A揭露了新型的可藥用的嗎啉衍生物(含氮的飽和雜環)的鹽，包括其蘋果酸鹽、酒石酸鹽、鹽酸鹽、醋酸鹽和萘二磷酸鹽，其中酒石酸鹽有A晶型、B晶型和二水合物3種晶態鹽型，蘋果酸鹽、鹽酸鹽、醋酸鹽各有1種晶態鹽型，萘二磷酸鹽為無定形。與已知的嗎啉衍生物的游離鹼相比，嗎啉衍生物的鹽具有一種或多種的改進性能，如具有較好的晶態，極大程度地提高了水溶解度、光穩定性及熱穩定性等。上述的嗎啉衍生物鹽或其晶型，可以用於治療和/或預防高血壓。

本發明所要解決的技術問題係針對先前技術中尚無特別有效的治療慢性腎病的藥物，而提供了一種含氮的飽和雜環化合物或其藥學上可接受的鹽在製備用於治療和/或預防慢性腎病的藥物中的應用。

先前技術中該專利CN103562191B和專利申請CN106928218A的全部內容在此藉由引用併入本說明書中。

在本發明的一個實施方式中，提供了一種由下式I所示的含氮的飽和雜環化合物或其藥學上可接受的鹽在製備治療和/或預防慢性腎病的藥物中的應用：

在本發明的進一步的實施方式中，該藥學上可接受的鹽為鹽酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽、氫溴酸鹽、乙酸鹽、富馬酸鹽、草酸鹽、檸檬酸鹽、甲磺酸鹽、苯磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽、馬來酸鹽、蘋果酸鹽、酒石酸鹽、醋酸鹽或萘二磺酸鹽。

在本發明的又進一步的實施方式中，該藥學上可接受的鹽為蘋果酸鹽、酒石酸鹽、鹽酸鹽、醋酸鹽或萘二磺酸鹽。

在本發明的一個實施方式中，該藥學上可接受的鹽為式I化合物的蘋果酸鹽，其係式I化合物和蘋果酸以1：1莫耳比形成的化合物，其結構式如下：

在本發明的一個實施方式中，該蘋果酸鹽為結晶體，其X射線粉末衍射圖譜在2 θ為7.767°±0.2°、13.897°±0.2°、14.775°±0.2°、17.098°±0.2°、18.999°±0.2°、20.153±0.2°、20.960°±0.2°、21.423°±0.2°、26.348°±0.2°、27.892°±0.2°處具有特徵峰。特別地，該蘋果酸鹽結晶體的X射線粉末衍射圖譜復在2 θ為5.598°±0.2°、7.357°±0.2°、10.395°±0.2°、11.108°±0.2°、16.037°±0.2°、16.523°±0.2°、19.410°±0.2°、22.645°±0.2°、26.630°±0.2°、26.891°±0.2°、27.380°±0.2°、31.056°±0.2°、33.306°±0.2°、33.775°±0.2°、39.231°±0.2°處具有特徵峰。更特別地，該式I化合物的蘋果酸鹽結晶體具有如圖1所示的X射線粉末衍射圖譜。

在本發明的一個實施方式中，該慢性腎病包括高血壓合併腎病、高血壓合併腎病並伴隨糖代謝異常、慢性腎功能不全合併慢性心力衰竭或慢性腎病伴隨糖代謝異常。

在本發明的一個實施方式中，該慢性腎病係指慢性腎病的G1、G2、G3a、G3b、G4期，較佳為G2、G3a或G3b期。

在本發明的一個實施方式中，該高血壓合併腎病中的高血壓為1級高血壓、2級高血壓或3級高血壓，較佳為1級高血壓或2級高血壓。

在本發明的一個實施方式中，該藥物的劑型包括片劑、膠囊劑、靜脈注射劑、吸入劑、霧化劑、凍乾劑、貼劑、凝膠劑、噴霧劑、或栓劑，較佳為片劑。

在本發明的一個實施方式中，該藥物為單元劑量。

在本發明的一個實施方式中，該藥物的單元劑量中，含有25mg至200mg的如上式I所示的含氮的飽和雜環化合物或其藥學上可接受的鹽，例如25mg、50mg、100mg、150mg、200mg的如上式I所示的含氮的飽和雜環化合物或其藥學上可接受的鹽。

美國腎臟基金會(NKF)所屬「腎病預後質量倡議」(KDOQI)工作組於2002年制定了CKD定義和分期標準。

慢性腎病定義為腎臟結構或功能異常>3個月。慢性腎病診斷標準出現下表1中任何一項指標，持續時間超過3個月。

表1：慢性腎病診斷標準

慢性腎病分期：慢性腎病根據腎小球濾過率(GFR)分為5期，見下表2。

表2：慢性腎病根據GFR分期

高血壓定義：未使用降壓藥物的情況下，非同日3次測量診室血壓，收縮壓(SBP)

140mmHg(1mmHg=0.133kPa)和/或舒張壓(DBP)

90mmHg。

SBP

140mmHg和DBP<90mmHg為單純收縮期高血壓。患者既往有高血壓史，目前正在使用降壓藥物，血壓雖低於140/90mmHg，仍應診斷高血壓。

根據血壓升高水平，進一步將高血壓分為1、2和3級。血壓水平分類和定義見下表3。

表3：血壓水平分類和定義

心力衰竭(心衰)係一種臨床綜合症，定義為由於任何心臟結構或功能異常導致心室充盈或射血能力受損的一組複雜臨床綜合症。其主要臨床表現為呼吸困難和乏力(活動耐量受限)，以及液體瀦留(肺淤血和外周性水腫)。

依據左心室射出分率(left ventricular ejection fraction，LVEF)，將心衰分為射出分率降低的心衰(heart failure with reduced ejection fraction，HFrEF)、射出分率保留的心衰(heart failure with preserved ejection fraction，HFpEF)和射出分率中間值的心衰(heart failure with mid-range ejection fraction，HFmrEF)，3種心衰類型的定義見下表4：

表4：心力衰竭的分類與定義

糖代謝異常包括糖尿病前期與糖尿病。

糖尿病前期即係糖調節受損，係指血糖值已超過正常值範圍，但還未達到糖尿病的診斷標準，即正常人與糖尿病患者之間的中間狀態。

糖尿病係一組常見的代謝性疾病，其特徵係為高血糖、糖尿、葡萄糖耐量減低及胰島素釋放試驗異常。

本發明的積極進步效果在於：含氮的飽和雜環化合物鹽連續給藥8週對慢性腎功能不全合併慢性心力衰竭恆河猴(中年/老年)有效性和安全性研究表明，本發明提供的含氮的飽和雜環化合物或其藥學上可接受的鹽可有效預防或治療慢性腎病，該慢性腎病包括高血壓合併腎病、高血壓合併腎病並伴隨糖脂代謝異常、慢性腎功能不全合併慢性心力衰竭或慢性腎病伴隨糖脂代謝異常。同時本發明提供的含氮的飽和雜環化合物或其藥學上可接受的鹽安全性很好，未見與給藥相關的不良事件。

圖1係本發明實施例中所用的式I化合物蘋果酸鹽的XRPD圖譜。

圖2係實施例3中靜脈內(iv)和口服(po)給藥後猴子體內式I化合物的濃度-時間圖。其中，猴子的靜脈內給藥劑量為1mg/kg，口服給藥劑量為1、3和9mg/kg。

下面藉由實施例的方式進一步說明本發明，但並不因此將本發明限制在該實施例範圍之中。下列實施例中未註明具體條件的實驗方法，按照一般方法和條件，或按照商品說明書選擇。

下述實施例中所用的式I化合物蘋果酸鹽係根據專利申請揭露CN106928218A中實施例1該製備方法製備所得並確認結構；纈沙坦(Valsartan)藉由商業途徑購買；所用的恆河猴購買自四川普萊美行之生物科技有限公司(普萊美靈長類研究中心)。

縮略詞

實施例1：式I化合物蘋果酸鹽連續給藥8週對慢性腎功能不全合併慢性心力衰竭恆河猴(中年/老年)有效性和安全性研究

1.研究目的

評估式I化合物蘋果酸鹽連續給藥8週對腎功能的改善，以及能夠延緩或改善腎臟功能起效劑量、作用強度以及CVD事件的風險，為臨床試驗劑量設計、患者入選標準和安全性提供依據。主要療效終點(ENDPOINT)：1.對腎功能改善：腎小球濾過率eGFR_creat-cys、胱抑素C(CysC)、肌酐及UACR；2.對心臟功能改善：超音波心動圖指標分析心臟結構和收縮、舒張功能給藥前後變化；3.安全性指標：血壓、血鉀、糖脂代謝相關指標等。

2.試驗系統

2.1 自發性慢性腎功能不全恆河猴

動物種屬：Macaca mulatta(Rhesus Macaque)

等級：普通級。試驗前檢疫合格，內容包括體檢、2次結核桿菌試驗、寄生蟲、沙門氏菌、致賀氏菌和B病毒檢查。

動物標識：脖環上戴刻有阿拉伯數字的不銹鋼號牌，胸口紋身。

供應單位：雅安普萊美生物科技有限公司。

生產許可證號：SCXK(川)2019-027。

動物合格證號：0016710、0016944、0016966。

2.2 入選標準

23隻雄性/雌性動物，年齡14至24歲(等同於40至70歲成年人)，體重雄性8.45至14.93kg，雌性1隻：6.43kg；

糖脂代謝長期異常3年以上；糖代謝異常為空腹血糖(FPG)>4.8mmol/l，vs年齡匹配對照組4.1±0.3mmol/l；

CKD-EPI評級G3a-G3b，腎小球濾過率eGFR：30至59ml/min/1.73m²；或蛋白尿中重度增多(A2-A3)：尿白蛋白/肌酐比值(UACR)

15mg/g-350mg/g(4-6小時尿液收集)，vs年齡匹配對照組3±2mg/g。

正常血壓、1級或2級高血壓(與臨床患者標準一致)；

HFrEF：LVEF 30%-49%(正常值：50%-70%辛普森雙平面法)或HFpEF(中度以上受損)：Ea<8或E/Ea>10(依據臨床診斷標準)。

2.3 排除標準

1)慢性肝病(包括已知活動性肝炎)和/或篩查丙胺酸轉胺酶(ALT)或天冬胺酸轉胺酶(AST)>3x正常上限(ULN)。

2)與血脂異常有關的排除標準：TC>7mmol/l；TG>3.5mmol/l。

3)任何可能會影響藥效評價的其他疾病史。

下表5顯示基線期-各劑量組受試慢性DKD腎功能不全恆河猴基礎病因和特徵。

表5：基線期-各劑量組受試慢性DKD腎功能不全恆河猴基礎病因和特徵

表5：基線期-各劑量組受試慢性DKD腎功能不全恆河猴基礎病因和特徵(續)

3.試驗設計

3.1 分組及劑量設計

本次試驗分三個階段納入動物，第一階段共兩個組：式I化合物蘋果酸鹽5mg/kg組3隻動物(#257，#4721，#287)，安慰劑組2隻動物(#1029，#4713)，第二階段式I化合物蘋果酸鹽5mg/kg組3隻動物(#144，#5073，#6651)，Valsartan組3隻動物(#2091，#4861，#6645)，安慰劑組2隻動物(#6653，#231)，第三階段式I化合物蘋果酸鹽2mg/kg組5隻動物(#4829，#6501，#287， #4721，#2091)，式I化合物蘋果酸鹽1mg/kg組5隻動物(#1567，#4861，#5453，#6653，#5073)，

其中第一階段2例動物(#287和#4721)停藥沖提約9個月，第二階段4例動物(#5073，#2091，#4861和#6653)停藥沖提約5個月後進入第三階段基線期(基線期為1個月)。

詳見下表6。

表6：組別設計信息

3.2 給藥信息

給藥途徑：口服給藥。

給藥頻率：式I化合物蘋果酸鹽每天1次，Valsartan組給藥期第1至2週每天1次，第3至8週每天2次。

給藥量計算：以每次稱量的體重計算接下來一週的給藥量。

給藥時間：08：00至09：00給藥。

3.3 主要藥效指標

腎小球濾過率eGFR_creat-cys：檢測肌酐(Cr-P)、尿素氮(BUN)、胱抑素(CysC)，計算獲eGFR值。給藥前1次，給藥後每兩週檢測1次。

eGFR_male=135×min(Cr/0.9,1)^-0.207×max(Cr/0.9,1)^-0.601×min(CysC/0.8,1)^-0.375×max(CysC/0.8,1)^-0.711×0.995^Age×3

eGFR_female=135×min(Cr/0.7,1)^-0.284×max(Cr/0.7,1)^-0.601×min(CysC/0.8,1)^-0.375×max(CysC/0.8,1)^-0.711×0.995^Age×3×0.969

UACR：4h/6h尿液收集，檢測尿微量白蛋白(malb)和尿肌酐(Cr-U)，計算獲得UACR值。給藥前1次，給藥結束1次。UACR=MALB/Cr-U。

血壓：麻醉後檢測血壓，包括收縮壓(SBP)，舒張壓(DBP)，平均血壓(MBP)和心率(HR)。給藥前1次，給藥後4週和8週各1次。

心臟GE多普勒超音波：1年內歷史心超一次(入選動物)、給藥前一次(基線期D-30天內)，給藥後8週一次。

3.4 次要藥效指標

血鉀，給藥前2次，給藥期每2週一次；

糖脂代謝及肝功：FPG、FRA、LDL-c、HDL-c、TG、TC、NT-proBNP、ALT、AST、TBIL等，給藥前2次，給藥期4週和8週各1次；

其他生化指標和血液學，給藥前後各1次；

體重：給藥前一次，給藥期每週一次；

給藥後每天觀察24小時攝食、行為等變化。

3.5 檢測方法和設備

檢測方法：見下表7和下表8。

血液學檢測儀器：Siemens ADVIA 2120i Hematolagy Systems。

血生化和尿液指標檢測儀器：Roche cobas6000 analyzer series C501模塊檢測，NT-proBNP採用ELISA試劑盒檢測。

表7：生化檢測項目

表8：血液學檢測項目

3.6 心臟多普勒超音波

麻醉方法：採用15mg/kg鹽酸氯胺酮肌肉注射麻醉，根據動物麻醉狀態，獸醫判定後進行補充麻醉，每次補充麻醉的劑量為初始劑量的1/2。

檢測方法：動物取左側臥位，採用6S-RS探頭(頻率2.7-8.0MHz)進行圖像採集。

分析方法：圖像採集保存後使用配套分析工作站EchoPAC Software在連續的3個心動週期內重複檢測心臟收縮及舒張功能各項指標。

檢測指標及超音波技術：見下表9。

檢測儀器：GE Vivid S5彩色多普勒超音波診斷儀。

3.7 血壓檢測

檢測方法：肌肉注射15mg/kg鹽酸氯胺酮對動物進行麻醉，麻醉後呈仰臥位，將左上臂毛髮剃除乾淨，並按標準綁上合適大小的袖帶，將血氧探頭夾在動物手指或腳趾(左手除外)上，紅色感光面在指肚一側，使用自動模式連續檢測3次動物血壓，每次間隔1min。若三次以上血壓的DBP、SBP和MBP差異不大(最高值與最低值差異小於15mmHg)，測定結束。

檢測指標：檢測指標包括收縮壓(SBP)、舒張壓(DBP)、平均血壓(MBP)和心率(HR)。

檢測儀器：GE B40i電生理監護儀。

表9：心臟超音波檢測指標

3.8 臨床觀察

觀察次數：每天觀察1次。

觀察方法：隔籠觀察。

觀察內容：注射部位、皮膚、被毛、眼、耳、鼻、口腔、胸部、腹部、泌尿生殖部、四肢等部位，以及呼吸、運動、泌尿、排便和行為改變等。

3.9 攝食量測定

給料方法：上午8：00至9：00、10：00、下午2：00和下午4：00各給食一次，保證食盒中有食物，自由採食，第二天上午07：40至08：00撤去剩餘飼料。

給料量：約250至500g/隻/天，試驗中保證食盒中24h有飼料，動物自由攝食。

攝食量測定方法：飼料採用半定量方法估算，每天記錄給食量、丟棄量和食盒剩餘量。攝食量=給食量-丟棄量-食盒剩餘量。

3.10 體重測定

稱重時間：當天餵食前。

測定方法：稱重前動物禁食14至16h，動物在清醒狀態下，進入轉移籠後，用大動物稱稱重。

測定儀器：METTLER TOLEDO電子臺秤。

4.0 終止試驗標準

a.發生嚴重不良事件。

b.發生嚴重感染。

5.結果與分析

5.1 對UACR的影響

各組給藥對蛋白尿(UACR)的影響見下表10。各組選擇蛋白尿中重度增多，表現為基線尿白蛋白/肌酐比值(UACR)

15mg/g至350mg/g(4至6小時尿液收集)的CKD恆河猴分析基線和給藥8週(W8)的白蛋白/肌酐比值變化。

安慰劑組(n=4)：與基線比，試驗期結束W8的UACR平均升高30.64±34.50%；4例動物蛋白尿UACR在一定範圍內穩定波動，未表現快速進展。

Valsartan組(n=3，中重度蛋白尿增多納入統計)：與基線比，給藥W8的2例動物(#2091，#4861)UACR下降40%至70%，均呈現獲益；1例動物基線的UACR為15mg/g，給藥後W8的UACR為20.4%，獲益不明顯。由於入組動物數少，與安慰組比無統計學差異。

式I化合物蘋果酸鹽(5mg/kg每天一次(qd))組(n=6，4/6隻中重度蛋白尿增多納入統計)：與基線比，給藥後W8的UACR平均下降46.87±36.93%，與安慰劑組比呈顯著降低(p<0.05)。其中3例動物給藥W8與基線比UACR下降60%至70%，均呈現獲益；1例動物未見獲益。

式I化合物蘋果酸鹽(2mg/kg qd)組(n=5，3/5隻中重度蛋白尿增多納入統計)：與基線比，給藥後W8的UACR平均下降66.00±17.42%，與安慰劑組比呈顯著降低(p<0.01)。其中3例動物給藥W8與基線比UACR下降約50%至80%，均呈現獲益。

式I化合物蘋果酸鹽(1mg/kg qd)組(n=5，2/5隻中重度蛋白尿增多納入統計)：與基線比，1例動物給藥後W8的UACR降低39%，1例獲益不明顯。

總之，式I化合物蘋果酸鹽的2至5mg/kg qd，給藥8週能顯著改善蛋白尿(UACR)。

表10：式I化合物蘋果酸鹽給藥8週對自發性慢性腎病(CKD)恆河猴UACR的影響

表10：式I化合物蘋果酸鹽給藥8週對自發性慢性腎病(CKD)恆河猴UACR的影響(續)

5.2 對腎小球濾過率eGFR _creat-cys 影響

各組對eGFR的影響見下表11和下表12。各組入選eGFR_creat-cys：30至59ml/min/1.73m²，分析對基線和給藥後W8的腎小球濾過率變化。

安慰劑組(n=4)：與基線比，4例動物腎小球濾過率eGFR_creat-cys在一定範圍內穩定波動未表現快速進展。

纈沙坦(Valsartan)組(n=3)：與基線比，給藥後W8 Valsartan組腎小球濾過率eGFR_creat-cys平均增加6±2ml/min/1.73m²，與安慰組變化值比呈極顯著增加(p<0.01)，顯著改善了腎小球惡化，且療效呈現時效性。

式I化合物蘋果酸鹽(5mg/kg qd)組(n=6)：與基線比，給藥後W8腎小球濾過率eGFR_creat-cys平均增加6±6ml/min/1.73m²，與安慰組變化值比呈顯著增加(p<0.05)，療效呈現時效性。

式I化合物蘋果酸鹽(2mg/kg qd)組(n=5)：與基線比，給藥後W8腎小球濾過率eGFR_creat-cys平均增加3±3ml/min/1.73m²，與安慰組變化值比呈顯著增加(p<0.05)。

式I化合物蘋果酸鹽(1mg/kg qd)組(n=5)：與基線比，給藥後W8腎小球濾過率eGFR_creat-cys平均增加3±4ml/min/1.73m²，與安慰組變化值比無統計學意義上改變。

總之，式I化合物蘋果酸鹽的2-5mg/kg qd，給藥8週能顯著改善腎小球濾過率eGFR _creat-cys 。

表11：式I化合物蘋果酸鹽給藥8週對自發性慢性腎病恆河猴eGFRcreat-cys的影響

表12：式I化合物蘋果酸鹽給藥8週自發性慢性腎病恆河猴eGFRcreat-cys變化值

5.3 對CysC、Cr-P和BUN影響

各組給藥後對CysC、Cr-P和BUN的影響見下表13至表15。

表13：式I化合物蘋果酸鹽給藥8週對自發性慢性腎病恆河猴Cr-P的影響

表14：式I化合物蘋果酸鹽給藥8週對自發性慢性腎病恆河猴CysC的影響

表15：式I化合物蘋果酸鹽給藥8週對自發性慢性腎病恆河猴BUN的影響

5.4 對血壓的影響

各給藥組給藥對血壓的影響見表16。靈長類的血壓測試由於需要麻醉，因此需要控制心率在各個時間點的變異性才能統計。

安慰劑組(n=4，2/4高血壓)：與基線比，4例動物血壓在一定範圍內穩定波動。

Valsartan組(n=3，1/3隻高血壓)：與基線比，給藥後W8，SBP和DBP分別平均降低14±4mmHg和7±0mmHg，與安慰組變化值比呈極顯著降低(p<0.01)。

式I化合物蘋果酸鹽(5mg/kg qd)組(n=6，4/6例高血壓)：與基線比，給藥後W8，SBP和DBP分別平均降低21±8mmHg和10±7mmHg，與安慰組變化值比呈極顯著降低(p<0.01)，療效呈現時效性。

式I化合物蘋果酸鹽(2mg/kg qd)組(n=5，2/5例高血壓)：與基線比，給藥後W8，SBP和DBP分別平均降低19±9mmHg和9±8mmHg，與安慰組變化值比呈極顯著降低(p<0.01)，療效呈現時效性。

式I化合物蘋果酸鹽(1mg/kg qd)組(n=5)：與基線比，給藥後W8，SBP和DBP分別平均降低11±4mmHg和5±4mmHg，與安慰組變化值比呈顯著降低(p<0.05)。

總之，式I化合物蘋果酸鹽的1至5mg/kg qd，給藥8週均呈現降低血壓的活性。

表16：式I化合物蘋果酸鹽給藥8週對自發性慢性腎病恆河猴血壓的影響

5.5 對心功能的影響

各組對超音波心動圖指標的影響見表17。

式I化合物蘋果酸鹽各給藥劑量組，Valsartan組和安慰劑組給藥後心臟收縮和舒張功能未見明顯不良反應。

另外，式I化合物蘋果酸鹽5mg/kg組2例表現為射出分率低下心功能不全(SD)恆河猴動物(#5073和#287)與基線比給藥後8週LVEF%升高。但本品是否能有治療慢性心衰作用需要後續更多的研究隊列數據支持。

表17：式I化合物蘋果酸鹽給藥8週對自發性慢性腎病恆河猴心臟功能主要指標的影響及療效評價

5.6 對心功能損傷血液Biomarker的影響

5.6.1 對NT-proBNP的影響

式I化合物蘋果酸鹽對NT-proBNP的影響見表18。

與基線期比，給藥8週後各給藥組動物NT-proBNP水平未見明顯改變。

表18：式I化合物蘋果酸鹽給藥8週對自發性慢性腎病恆河猴NT-proBNP的影響

5.6.2 對K ⁺ 的影響

式I化合物蘋果酸鹽對K⁺的影響見表19。

與基線期比，給藥8週後各給藥組動物血清K⁺水平未見明顯改變。

表19：式I化合物蘋果酸鹽給藥8週對自發性慢性腎病恆河猴K⁺的影響

5.7 安全性耐受研究

給藥期間式I化合物蘋果酸鹽組未見與給藥相關的不良事件，肝功、腎功、攝食量、體重、血液學指標等未見明顯改變。

6.結論

式I化合物蘋果酸鹽2-5mg/kg qd，給藥8週能顯著改善蛋白尿(UACR)，顯著改善腎小球濾過率eGFR_creat-cys，療效與Valaartan組相當。

式I化合物蘋果酸鹽1-5mg/kg qd，給藥8週均呈現降低血壓的活性。同時在本試驗條件下未見高血鉀症的風險。

實施例2：式I化合物的臨床前安全性評估

1.材料和方法

1.1.測試物質

式I化合物按照CN103562191B中的方法製備並確認結構。溶媒係0.5%的羧甲基纖維素鈉(Sodium carboxymethyl cellulose，CMC-Na)。式I化合物在室溫下保存，避免光照和潮濕。食蟹猴的安全性研究中，將測試物質以相關濃度懸浮於0.5%CMC-Na中。分析製備的懸浮液的均質性、濃度和一週穩定性，以確保正確施用報告的劑量。對活性藥物成分(API)的六個月加速穩定性進行了測試。

1.2.動物飼養

3-4歲的健康雄性和雌性食蟹猴由海南新源生物技術有限公司(中國海南)提供。在治療開始時，雄性體重範圍為3.2至5.8kg，雌性體重範圍為2.5至3.7kg。在研究之前，他們被安置了36天馴化期。每天早上一次，動物自由飲食和取水。

這項非臨床實驗研究按照中國食品藥品監督管理局(CFDA)的指南進行。該實驗係在國際實驗室動物護理評估與鑑定協會(AAA LAC)批准的設施中進行的，並且根據《實驗室動物護理和使用指南》(Nussberger等，2008)對動物進行飼養。

1.3.劑量和治療時間表

使用基於體重的計算機隨機程序選擇食蟹猴(5/性別/組)，並藉由鼻飼餵養式I化合物(劑量水平為0(對照組)、20、100、450mg/kg/天，體積為5ml/kg)。每週根據動物的體重調整受試者劑量。對於所有組，在第28天隨機選擇2/3的動物並實施安樂死。在停藥28天後對其餘動物實施安樂死。

1.4.臨床觀察

從隔離期開始每天評估死亡率和臨床體徵。每天至少兩次檢查每隻動物的行為、給藥後的反應或疾病的發生。

觀察包括但不限於以下內容：皮膚和毛皮的變化；眼睛和黏膜；呼吸、循環、自主、中樞神經系統和行為模式。分別在給藥前(兩次)，第一次給藥後1和24小時，以及在第26天給藥前和給藥後1和24小時，測量直腸溫度。每週測量體重。每天估算猴子的食物消耗量。使用便攜式裂隙燈(YZ2)和直接檢眼鏡(GFJY-01B)對猴子進行檢眼鏡檢查。

1.5.實驗室測試

對於猴子研究，在隔離期(兩次，第01天和第02天)，第14天，第28天和第56天，測量了以下參數，如下表20所示。(1)使用Bayer ADVIA2120(德國)和Sysmex CA-1500(日本)進行血液和凝血指數檢查。(2)使用HITACHI 7080自動分析儀(日本)和Easylyte PLUS電解質分析儀(美國MEDICA)評估血清生化檢查。(3)藉由每個籠子下面的託盤收集每隻動物的24小時合併尿液。使用Uritest-300(中國)進行尿液分析。(4)藉由每個籠子下面的託盤收集每隻猴子的24小時彙集的糞便。檢測糞便潛血。(5)ACCESS 2化學發光免疫分析法用於心肌肌鈣蛋白(TropI，非GLP)測試。

表20：在血液學，血清化學和尿液分析中評估的參數

1.6.一般心電圖分析

在每個計劃的時間(給藥後第1天，給藥後第01天，第02天，給藥後第1天的第1和24小時，給藥前，以及給藥後第26天、第56天的第1小時，第24小時)進行一般ECG分析。ECG系統使用派生DII(ECG-6951E，中國上海)記錄P波、R波、T波、PR間隔、Q-T間隔、QRS持續時間和心率。

1.7.屍檢和組織病理學

在暴露階段(第28天)和恢復階段(第56天)結束時，藉由目視檢查對所有動物進行完整的屍檢。修剪，稱重並評估以下選定器官的絕對重量以及最終體重或腦重的百分比：大腦、心臟、腎臟、腎臟、肝臟、脾臟、胸腺、睾丸、附睾、子宮、卵巢、腎上腺和甲狀腺(包括甲狀旁腺)。將以下組織保存在10%的中性福爾馬林中：腦、垂體、甲狀腺(包括甲狀旁腺)、氣管、心臟、胰腺、脾、腎上腺、前列腺、卵巢、子宮(包括子宮頸和輸卵管)、陰道、睾丸、附睾、精囊、食道、十二指腸、空腸、回腸、盲腸、結腸、直腸、腸系膜淋巴結、淋巴集結、上頜下淋巴結、主動脈、眼睛、骨骼肌、坐骨神經、股骨(包括幹骺端)、乳腺、胸骨、唾液腺、脊髓、膀胱、肺(包括支氣管)、肝、腎、胃、骨髓(胸骨)、胸腺、胸骨、膽囊、任何明顯的病變或腫塊。屍檢時肺組織被固定劑感染。所有保存的組織均進行包埋、切片、蘇木精和曙紅(HE)染色，並進行顯微鏡檢查。塗片(猴胸骨)和成對包埋的胸骨切片均進行了骨髓細胞形態學檢查。

1.8.毒物代謝動力學

在給藥後第1天和第26天的0小時、0.5小時、1.5小時、3小時、5小時、7小時和24小時採集血樣。每次從靜脈中抽取約1.0mL血液，並將其收集到EDTA-K₂抗凝管中。將血樣放在冰上，然後在4℃下離心(3500rpm，5分鐘)獲得血漿樣品，將其冷凍在約-80℃下直至分析。式I化合物的毒物代謝動力學測定係在中國科學院上海藥物研究所進行的。

1.9.統計分析

對於每種性別，使用統計軟件SAS 9.3對體重、直腸溫度、ECG、器官重量、血液學參數和血清生化數據進行分析。首先，使用Levene檢驗分析方差的均勻性。如果P>0.05，則採用單向方差分析。如果P<0.05，則使用Kruskal- Wallis檢驗。如果所得的ANOVA p值<0.05，則使用Dunnett T檢驗對每組進行比較。如果所得的Kruskal-Wallis檢驗p值<0.05，則在數據秩轉換後執行Dunnett T檢驗。

2.結果

2.1.臨床觀察

與對照組相比，高劑量組的體重增加量略有下降(雌性為2.7±0.4對3.2±0.2；雄性為4.1±0.5對4.6±0.5)，無統計學意義。

與給藥有關的早期死亡發生在第23天，一隻高劑量雌性發生，臨床體徵包括活動不足、駝背、體溫低下、腹瀉、輕度腸鼓膜和胸腺萎縮。在其他動物中沒有觀察到與治療相關的明顯臨床毒性跡象。

2.2.血液學與凝血

在所有接受治療的雌性和大劑量雄性中均觀察到NEUT%升高和LYMPH%降低。復觀察到中高劑量動物的Fbg升高，高劑量雌性動物的APTT升高(表21)。

表21：式I化合物處理4週的猴子的血液學數據。

2.3.血清生化

雄性雌性高劑量食蟹猴的血清化學參數CPK，BUN和CREA均顯著增加，尤其係在第23天早期死亡的猴子中(第14天數據，BUN：34.99；CREA：526)。高劑量雄性的CHOL明顯降低。高劑量雄性的血清Na水平略有下降，但在第26天時有統計學意義。其他統計學上有意義的發現係單獨發生的事件，被認為沒有毒理學意義(表22)。

表22：式I化合物處理4週的猴子的血清化學成分

2.4.尿液分析

在雄性或雌性猴子中檢查的任何尿液分析參數均未報告有明顯變化。

2.5.ECG參數

一隻中劑量雌性在給藥後第26天的1小時觀察到QTc間隔延長(動物# 303為296ms)。一隻高劑量雄性在給藥後第26天的1小時觀察到竇性心律不齊，QRS間隔延長(動物# 411為60ms)高劑量雌性在服藥後第1天和第26天的1小時和也觀察到QRS間隔延長(表23)。

表23：式I化合物處理4週的猴子的心電圖數據

2.6.屍檢

2.6.1.總體病理和器官重量

沒有猴子的宏觀發現被認為與服用測試物質有關，但對於較早死亡的猴子而言，輕度的腸鼓膜和胸腺萎縮除外。高劑量猴子的肝臟和腎臟相對重量較高，胸腺相對重量較低，子宮的絕對或相對重量較低(表24)。

表24：式I化合物處理4週的食蟹猴的器官重量。

2.7.毒物代謝動力學

在20-450mg/kg劑量範圍內全身暴露量(由化合物原型和主要代謝物的血漿AUC_0-24h和C_max表示)的增加比例比劑量的增加比例大得多。連續28天給藥後，未見積累。

實施例3：非臨床藥物代謝動力學

1.材料和方法

1.1.材料

式I化合物按照CN103562191B中的方法製備並確認結構。

1.2.動物

食蟹猴(3/性別/組：體重3-5公斤，年齡5-6歲)來自蘇州西山中科實驗動物(中國上海)。研究前將動物馴化7天。將猴子單獨關進籠子，放在可控溫度(18-26℃)和濕度(50±20%)的動物房中，空氣流量為10，每小時換新鮮空氣。光照週期為12小時開和12小時關，每天早晨給猴子喂一次飼料和水。所有動物實驗均按照AMMS動物護理和使用委員會制定的《動物護理和使用指南》進行。

2.式I化合物的靜脈和口服給藥

將式I化合物靜脈或口服給予禁食過夜的食蟹猴。劑量分別為1mg/kg(靜脈)，1mg/kg，3mg/kg，9mg/kg(口服)。在給藥後0，5和15分鐘時，分別在0.25、0.5、1、2、4、6、8、12和24小時從靜脈採集血液樣本(每個時間點0.2mL)。採集後，將所有血樣立即以10,000×g離心5分鐘，並將血漿保存在-75±10℃直至分析。藉由蛋白質沉澱製備血漿樣品。血漿中將式I化合物的濃度藉由驗證的液相層析-串聯質譜法測定。

藥物代謝動力學參數，例如血漿濃度-時間曲線下面積(AUC)、最大血漿濃度(C_max)、達到C_max的時間(T_max)、半衰期(T_1/2)、全身血漿清除率(CL)、平均停留時間(MRT)和穩態時的分佈體積(V_ss)係藉由WinNonlin v1.3(美國加利福尼亞州山景市的Pharsight)藉由非房室分析計算得出的。對於異速生長模型，動物的藥物代謝動力學數據係藉由兩室模型和Kinetica 5.1軟件包(v.3.0；InnaPhase，費城，賓夕法尼亞州，美國)來模擬的。

3.結果

血漿藥物代謝動力學和生物利用度

表25和圖2顯示了在食蟹猴靜脈和口服給藥後的藥物代謝動力學數據。靜脈注射後，藥物濃度雙指數下降，清除率為1.96L/h/kg，猴子的分佈體積為1.86L/kg。口服後，式I化合物在1.0至1.30h達到C_max，在血漿中的T_1/2消失為2.73至5.99h。從靜脈內和口服給藥後的AUC_0-24h計算得出，式I化合物在猴子中的口服生物利用度為3.3至11.3%，這表明關於外排轉運蛋白。

表25：

Claims

一種由下式I所示的含氮的飽和雜環化合物或其藥學上可接受的鹽在製備治療和/或預防慢性腎病之藥物的應用：
如請求項1所述的應用，其中，該藥學上可接受的鹽為鹽酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽、氫溴酸鹽、乙酸鹽、富馬酸鹽、草酸鹽、檸檬酸鹽、甲磺酸鹽、苯磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽、馬來酸鹽、蘋果酸鹽、酒石酸鹽、醋酸鹽或萘二磺酸鹽。
如請求項1或2所述的應用，其中，該藥學上可接受的鹽為式I化合物的蘋果酸鹽，其係式I化合物和蘋果酸以1：1莫耳比形成的化合物，其結構式如下：
如請求項3所述的應用，其中，該蘋果酸鹽為結晶體，其X射線粉末衍射圖譜在2 θ為7.767°±0.2°、13.897°±0.2°、14.775°±0.2°、17.098°±0.2°、 18.999°±0.2°、20.153±0.2°、20.960°±0.2°、21.423°±0.2°、26.348°±0.2°、27.892°±0.2°處具有特徵峰，

特別地，該蘋果酸鹽結晶體的X射線粉末衍射圖譜復在2 θ為5.598°±0.2°、7.357°±0.2°、10.395°±0.2°、11.108°±0.2°、16.037°±0.2°、16.523°±0.2°、19.410°±0.2°、22.645°±0.2°、26.630°±0.2°、26.891°±0.2°、27.380°±0.2°、31.056°±0.2°、33.306°±0.2°、33.775°±0.2°、39.231°±0.2°處具有特徵峰。
如請求項4所述的應用，其中，該式I化合物的蘋果酸鹽結晶體具有如圖1所示的X射線粉末衍射圖譜。
如請求項1至5中任一項所述的應用，其中，該慢性腎病為高血壓合併腎病、高血壓合併腎病並伴隨糖代謝異常、慢性腎功能不全合併慢性心力衰竭或慢性腎病伴隨糖代謝異常。
如請求項6所述的應用，其中，該高血壓合併腎病中的高血壓為1級高血壓、2級高血壓或3級高血壓，較佳為1級高血壓或2級高血壓。
如請求項1至7中任一項所述的應用，其中，該慢性腎病係指慢性腎病的G1、G2、G3a、G3b、G4期，較佳為G2、G3a或G3b期。
如請求項1至8中任一項所述的應用，其中，該藥物的劑型包括片劑、膠囊劑、靜脈注射劑、吸入劑、霧化劑、凍乾劑、貼劑、凝膠劑、噴霧劑或栓劑，較佳為片劑。
如請求項1至9中任一項所述的應用，其中，該藥物為單元劑量，較佳地，該單元劑量中，含有25mg至200mg的由式I所示的含氮的飽和雜環化合物或其藥學上可接受的鹽，例如25mg、50mg、100mg、150mg、200mg的由式I所示的含氮的飽和雜環化合物或其藥學上可接受的鹽。