KR20230058506A - 질소 함유 포화 헤테로사이클릭 화합물의 응용 - Google Patents

질소 함유 포화 헤테로사이클릭 화합물의 응용 Download PDF

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Abstract

본 발명은 질소 함유 포화 헤테로사이클릭 화합물의 응용을 제공한다. 구체적으로, 본 발명은 하기 식 I로 표시되는 질소 함유 포화 헤테로사이클릭 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 만성 신장 질환의 치료 및/예방을 위한 약물의 제조에 있어서의 응용을 제공한다.
Figure pct00052

Description

질소 함유 포화 헤테로사이클릭 화합물의 응용
본 발명은 질소 함유 포화 헤테로사이클릭 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 만성 신장 질환의 치료 및/또는 예방을 위한 약물의 제조에 있어서의 응용에 관한 것이다.
만성 신장 질환(chronic kidney disease, CKD)은 유병률이 높고, 인식률이 낮으며, 예후가 좋지 않고, 의료비가 비싼 특징이 있어 심혈관 및 뇌혈관 질환, 당뇨병, 악성 종양 다음으로 인류의 건강을 심각하게 위협하는 또 다른 질환이다. 최근 만성 신장 질환의 유병률은 해마다 증가하여 전 세계 일반 인구의 유병률은 14.3%에 달하고, 중국의 단면 역학 연구에 따르면 18세 이상 사람들의 CKD 유병률은 10.8%였다. 만성 신장 질환(CKD)은 진행성 질환으로 적시에 효과적으로 치료하지 못하여 악화되면, 병이 진행됨에 따라 만성 신장 질환 환자는 신부전으로 발전하게 되며, 인공투석이나 신장이식 없이는 생존이 어려워진다. 현재로서는 특별히 효과적인 만성 신장 질환의 치료 방법이 없기 때문에 만성 신장 질환 치료에 효과가 있고 부작용이 적은 약물을 적극적으로 찾는 것이 임상적 가치가 크다.
CN103562191B는 레닌에 대한 억제 작용을 나타내고, 고혈압 치료에 사용할 수 있는, 하기 식으로 표시되는 질소 함유 포화 헤테로사이클릭 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 개시했다.
Figure pct00001
식 중, R1은 사이클로알킬렌기 등을 나타내고, R22는 치환 가능한 아릴기 등을 나타내고, R은 저급 알킬렌기 등을 나타내고, T는 카르보닐기를 나타내고, Z는 -O- 등을 나타내고, R3, R4, R5 및 R6은 동일하거나 상이하며, 수소 원자 등을 나타낸다.
CN106928218A는 말레이트, 타르트레이트, 하이드로클로라이드, 에타노에이트 및 나프탈렌 디포스페이트를 포함하는 신규한 약학적으로 허용되는 모르폴린 유도체(질소 함유 포화 헤테로사이클)의 염을 개시하였고, 상기 타르트레이트는 A 결정 형태, B 결정 형태 및 이수화물의 3가지 결정 염 형태를 가지며, 말레이트, 하이드로클로라이드 및 에타노에이트는 각각 하나의 결정 염 형태를 가지며, 나프탈렌 디포스페이트는 무정형이다. 공지된 모르폴린 유도체의 유리 염기와 비교할 때, 모르폴린 유도체의 염은 하나 이상의 개선된 특성(예를 들어 우수한 결정 상태)을 가지며, 수용성, 광 안정성 및 열 안정성 등을 크게 개선하였다. 상기 모르폴린 유도체 염 또는 이의 결정 형태는 고혈압의 치료 및/또는 예방에 사용될 수 있다.
본 발명이 해결하고자 하는 기술문제는 종래 기술에 만성 신장 질환의 치료에 특별히 효과적인 약물이 없는 점에 대해, 질소 함유 포화 헤테로사이클릭 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 만성 신장 질환의 치료 및/또는 예방을 위한 약물의 제조에 있어서의 응용을 제공하는 것이다.
배경 기술의 상기 특허 CN103562191B 및 특허출원 CN106928218A의 모든 내용은 인용을 통해 본 명세서에 포함된다.
본 발명의 일 실시방안에서, 하기 식 I로 표시되는 질소 함유 포화 헤테로사이클릭 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 만성 신장 질환의 치료 및/예방을 위한 약물의 제조에 있어서의 응용을 제공한다:
Figure pct00002
본 발명의 추가적인 실시방안에서, 상기 약학적으로 허용가능한 염은 하이드로클로라이드, 설페이트, 포스페이트, 하이드로브로마이드, 아세테이트, 푸마레이트, 옥살레이트, 시트레이트, 메탄설포네이트, 벤젠설포네이트, p-톨루엔설포네이트, 말레에이트, 말레이트, 타르트레이트, 에타노에이트 또는 나프탈렌 디설포네이트이다.
본 발명의 또 다른 추가적인 실시방안에서, 상기 약학적으로 허용가능한 염은 말레이트, 타르트레이트, 하이드로클로라이드, 에타노에이트 또는 나프탈렌 디설포네이트이다.
본 발명의 일 실시방안에서, 상기 약학적으로 허용가능한 염은 식 I의 화합물의 말레이트이고, 이는 식 I의 화합물 및 말산이 1:1 몰비로 형성되는 화합물이고, 구조식은 아래와 같다:
Figure pct00003
본 발명의 일 실시방안에서, 상기 말레이트는 결정체이며, X선 분말 회절 패턴은 7.767°±0.2°, 13.897°±0.2°, 14.775°±0.2°, 17.098°±0.2°, 18.999°±0.2°, 20.153±0.2°, 20.960°±0.2°, 21.423°±0.2°, 26.348°±0.2°, 27.892°±0.2°의 2θ에서 특징 피크를 가진다. 특히, 상기 말레이트 결정체의 X선 분말 회절 패턴은 또한 5.598°±0.2°, 7.357°±0.2°, 10.395°±0.2°, 11.108°±0.2°, 16.037°±0.2°, 16.523°±0.2°, 19.410°±0.2°, 22.645°±0.2°, 26.630°±0.2°, 26.891°±0.2°, 27.380°±0.2°, 31.056°±0.2°, 33.306°±0.2°, 33.775°±0.2°, 39.231°±0.2°의 2θ에서 특징 피크를 가진다. 더 구체적으로, 상기 식 I의 화합물의 말레이트 결정체는 도 1에 도시된 바와 같은 X선 분말 회절 패턴을 가진다.
본 발명의 일 실시방안에서, 상기 만성 신장 질환은 고혈압 합병 신장 질환, 당대사 이상을 동반한 고혈압 합병 신장 질환, 만성 신부전 합병 만성 심부전 또는 당대사 이상을 동반한 만성 신장 질환을 포함한다.
본 발명의 일 실시방안에서, 상기 만성 신장 질환은 만성 신장 질환의 G1, G2, G3a, G3b, G4기를 의미하고, 바람직하게는 G2, G3a 또는 G3b기이다.
본 발명의 일 실시방안에서, 상기 고혈압 합병 신장 질환에서 고혈압은 1급 고혈압, 2급 고혈압 또는 3급 고혈압이고, 바람직하게는 1급 고혈압 또는 2급 고혈압이다.
본 발명의 일 실시방안에서, 상기 약물의 제형은 정제, 캡슐, 정맥내 주사제, 흡입제, 연무제, 동결건조제, 패치, 겔, 분무제 또는 좌제, 바람직하게는 정제를 포함한다.
본 발명의 일 실시방안에서, 상기 약물은 단위 용량이다.
본 발명의 일 실시방안에서, 상기 약물의 단위 용량에는, 25 mg - 200 mg의 상기 식 I로 표시된 바와 같은 질소 함유 포화 헤테로사이클릭 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 예를 들면 25 mg, 50 mg, 100 mg, 150 mg, 200 mg의 상기 식 I로 표시된 바와 같은 질소 함유 포화 헤테로사이클릭 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이 포함된다.
미국 국립신장재단(NKF) 소속 KDOQI(Kidney Disease Outcomes Quality Initiative)의 작업팀은 2002년에 CKD의 정의 및 병기(病期) 기준을 확립하였다.
만성 신장 질환(CKD)은 신장 구조 또는 기능 이상이 3개월 이상 지속되는 경우로 정의된다. 만성 신장 질환의 진단 기준은 하기 표 1의 지표 중 하나가 나타나고, 3개월 이상 지속되는 경우이다.
표 1: 만성 신장 질환의 진단 기준
Figure pct00004
만성 신장 질환 병기: 만성 신장 질환은 사구체 여과율(GFR)에 따라 5기로 나누며, 하기 표 2 를 참조하기 바란다.
표 2: 만성 신장 질환의 GFR에 따른 병기
Figure pct00005
고혈압 정의: 항고혈압제를 사용하지 않은 상황에서, 진료실 혈압은 서로 다른 날에 3회 측정되고, 수축기 혈압(SBP)≥140 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa) 및/또는 이완기 혈압(DBP)≥90 mmHg이다.
SBP≥140 mmHg 및 DBP<90 mmHg는 단순 수축기 고혈압이다. 환자에게 고혈압 병력이 있고, 현재 항고혈압제를 복용하고 있는 경우, 혈압이 140/90 mmHg 미만이더라도, 여전히 고혈압으로 진단해야 한다.
혈압 상승 수준에 따라, 추가로 고혈압을 1, 2 및 3급으로 나눈다. 혈압 수준의 분류 및 정의는 하기 표 3을 참조하기 바란다.
표 3: 혈압 수준의 분류 및 정의
Figure pct00006
심부전은 심장 구조 또는 기능적 이상으로 인해 심실 충만 또는 박출 능력이 손상된 복잡 임상 증후군으로 정의되는 임상 증후군이다. 주요 임상 증상은 호흡곤란과 피로(운동 내성 제한), 및 체액 저류(폐울혈 및 말초 부종)이다.
좌심실 박출률(left ventricular ejection fraction, LVEF)에 따라, 심부전은 박출률 감소 심부전(heart failure with reduced ejection fraction, HFrEF), 박출률 보존 심부전(heart failure with preserved ejection fraction, HFpEF) 및 박출률 경계 심부전(heart failure with mid-range ejection fraction, HFmrEF)으로 나뉘며, 세가지 심부전 유형의 정의는 하기 표 4를 참조하기 바란다:
표 4: 심부전의 분류 및 정의
Figure pct00007
당대사 이상은 당뇨병 전증과 당뇨병을 포함한다.
당뇨병 전증은 바로 당 조절 장애로서, 혈당 수치가 정상 범위를 넘었지만, 아직 당뇨병의 진단 기준에 도달하지 않은 상태, 즉 정상인과 당뇨병 환자 사이의 중간 상태를 의미한다.
당뇨병은 고혈당, 당뇨, 포도당 내성 감소 및 인슐린 분비 실험 이상을 특징으로 하는 일반적인 대사성 질환이다.
본 발명의 긍정적고 진보적인 효과는 다음과 같다: 만성 신부전 합병 만성 심부전이 있는 레서스 원숭이(Rhesus Macaque)(중년/고령)에게 8주 동안 연속으로 투여된 질소 함유 포화 헤테로사이클릭 화합물 염의 유효성 및 안전성 연구에 따르면, 본 발명에서 제공하는 질소 함유 포화 헤테로사이클릭 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 만성 신장 질환을 효과적으로 예방하거나 치료할 수 있고, 상기 만성 신장 질환은 고혈압 합병 신장 질환, 혈당지질 대사 이상을 동반한 고혈압 합병 신장 질환, 만성 신부전 합병 만성 심부전 또는 혈당지질 대사 이상을 동반한 만성 신장 질환을 포함한다. 동시에 본 발명에서 제공하는 질소 함유 포화 헤테로사이클릭 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 안전성이 우수하고, 투여와 관련된 이상반응이 관찰되지 않았다.
도 1은 본 발명의 실시예에서 사용된 식 I의 화합물의 말레이트의 XRPD패턴이다.
도 2는 실시예 3에서 정맥내(iv) 및 경구(po) 투여 후 원숭이 체내의 식 I의 화합물의 농도-시간 그래프이다. 여기서, 원숭이의 정맥내 투여량은 1 mg/kg이고, 경구 투여량은 1, 3 및 9 mg/kg이다.
이하 실시예를 통해 본 발명을 추가로 설명할 것이지만, 본 발명은 이로 인해 설명된 실시예 범위로 제한되지 않는다. 하기 실시예에서 특정 조건을 명시하지 않은 실험 방법은 일반적인 방법 및 조건에 따라, 또는 제품 설명서에 따라 선택한다.
하기 실시예에서 사용된 식 I의 화합물의 말레이트는 특허 공개 제CN106928218A호의 실시예 1에 따른 제조 방법으로 제조되고 확인된 구조이고, 발사르탄(Valsartan)은 상업 채널을 통해 구매하였고, 사용된 레서스 원숭이는 Sichuan PriMed Shines Bio-tech Co., Ltd.(Primate Primate Research Center)에서 구입하였다.
약어
Figure pct00008
실시예 1: 만성 신부전 합병 만성 심부전이 있는 레서스 원숭이(중년/고령)에게 8주 동안 연속으로 투여된 식 I의 화합물의 말레이트의 유효성 및 안전성 연구
1. 연구 목적
8주 동안 연속으로 투여된 식 I의 화합물의 말레이트의 신장 기능에 대한 개선 및 신장 기능을 지연시키거나 개선할 수 있는 유효 용량, 작용 강도 및 CVD 사건의 위험을 평가하여, 임상 시험 용량 설계, 환자 선택 기준 및 안전성에 근거를 제공한다. 주요 효능 엔드포인트(ENDPOINT): 1. 신장 기능 개선: 사구체 여과율eGFRcreat-cys, 시스타틴C(CysC), 크레아티닌 및 UACR; 2. 심장 기능 개선: 투여 전후의 심장 구조 및 수축, 이완기 기능의 변화를 분석하기 위한 심초음파 지표; 3. 안전성 지표: 혈압, 혈중 칼륨, 당지질 대사 관련 지표 등.
2. 시험 시스템
2.1 만성 자발성 신부전이 있는 레서스 원숭이
동물 종: Macaca mulatta (Rhesus Macaque)
등급: 보통 등급. 신체 검사, 2차 결핵균 시험, 기생충, 살모넬라, 시겔라, B형 바이러스 검사 등을 포함한 시험 전 검역 통과.
동물 식별: 목에는 아라비아 숫자가 새겨진 스테인리스 스틸 번호판을 착용하고 가슴에는 타투가 새겨져 있다.
공급자: 야안 프라임 바이오테크놀로지
생산 허가 번호: SCXK(chuan)2019-027.
동물 합격 번호: 0016710, 0016944, 0016966.
2.2 선택 기준
23마리의 수컷/암컷, 14-24세(40-70세 성인에 해당), 체중 수컷: 8.45-14.93kg, 암컷 1마리: 6.43kg;
3년 이상의 당지질 대사 장기적 이상; 당대사 이상은 공복혈당(FPG)＞4.8 mmol/l이고, vs 연령 일치 대조군 4.1±0.3 mmol/l;
CKD-EPI 평가 등급 G3a-G3b, 사구체 여과율eGFR: 30~59 ml/min/1.73m2; 또는 단백뇨 중등도, 중증 증가(A2-A3): 소변 알부민/크레아티닌 비율(UACR)≥15 mg/g -350 mg/g (4-6시간 소변 수집), vs 연령 일치 대조군3±2 mg/g.
정상 혈압, 1급 또는 2급 고혈압(임상 환자 기준과 일치);
HFrEF: LVEF 30% - 49%(정상 수치: 50% - 70% Simpson's biplane method) 또는 HFpEF(중등도 이상 손상): Ea<8 또는 E/Ea>10 (임상 진단 기준에 따름).
2.3 배제 기준
1) 만성 간 질환(기존 활동성 간염 포함) 및/또는 알라닌 아미노전이효소(ALT) 또는 아스파르테이트 아미노전이효소(AST) >3x정상 상한치(ULN).
2) 이상 지질혈증 관련 배제 기준: TC >7 mmol/l; TG >3.5 mmol/l.
3) 약효 평가에 영향을 줄 수 있는 모든 기타 병력.
하기 표 5는 베이스라인 기간 - 각 용량군의 만성 DKD 신부전을 가진 시험 대상 레서스 원숭이의 기본 병인 및 특징을 나타낸다.
표 5: 베이스라인 기간 - 각 용량군의 만성 DKD 신부전을 가진 시험 대상 레서스 원숭이의 기본 병인 및 특징
Figure pct00009
Figure pct00010
비고: #257 흉부 기형이 있는 동물은 심장 초음파 이미지를 수집할 수 없다.
표 5: 베이스라인 기간- 각 용량군의 만성 DKD 신부전을 가진 시험 대상 레서스 원숭이의 기본 병인 및 특징(계속)
Figure pct00011
Figure pct00012
3. 시험 설계
3.1 성분 및 용량 설계
동물은 세 단계로 나뉘어 본 시험에 포함되고, 제1 단계는 총 2개 그룹으로, 식 I의 화합물의 말레이트 5mg/kg군은 동물 3마리(#257, #4721, #287), 위약군은 동물 2마리(#1029, #4713)이고, 제2 단계에서 식 I의 화합물의 말레이트 5mg/kg군은 동물 3마리(#144, #5073, #6651), Valsartan군은 동물 3마리(#2091, #4861, #6645), 위약군은 동물 2마리(#6653, #231)이고, 제3 단계에서 식 I의 화합물의 말레이트 2mg/kg군은 동물 5마리(#4829, #6501, #287, #4721, #2091), 식 I의 화합물의 말레이트 1mg/kg군은 동물 5마리(#1567, #4861, #5453, #6653, #5073)이며,
여기서 제1 단계는 2예의 동물(#287 및 #4721)에 대해 약물을 중단하고 약 9개월 동안 용출시키며, 제2 단계는 4예의 동물(#5073, #2091, #4861 및 #6653)에 대해 약물을 중단하고 약 5개월 동안 용출시키며, 이후 제3 단계의 베이스라인 기간(베이스라인 기간은 1개월)으로 진입한다.
구체적으로 하기 표 6 참조.
표 6: 군별 설계 정보
Figure pct00013
3.2 투여 정보
투여 경로: 경구 투여.
투여 빈도: 식 I의 화합물의 말레이트 1일 1회, Valsartan군 투여 기간 1~2주차 1일 1회, 3~4주차 1일 2회.
투여량 계산: 매회 측정한 체중으로 다음 1주 동안의 투여량을 계산한다.
투여 시간: 08:00-09:00투여.
3.3 주요 약효 지표
사구체 여과율eGFRcreat-cys: 크레아티닌(Cr-P), 요소질소(BUN), 시스타틴(CysC)을 측정하고, eGFR값을 계산한다. 투여 전 1회, 투여 후 2주마다 1회 측정한다.
eGFRmale=135×min(Cr/0.9, 1)-0.207×max(Cr/0.9, 1)-0.601×min(CysC/0.8, 1)-0.375×max(CysC/0.8, 1)-0.711×0.995Age×3
eGFRfemale=135×min(Cr/0.7, 1)-0.284×max(Cr/0.7, 1)-0.601×min(CysC/0.8, 1)-0.375×max(CysC/0.8, 1)-0.711×0.995Age×3×0.969
UACR: 4h/6h 소변 수집, 소변의 마이크로알부민(malb) 및 소변 크레아티닌(Cr-U)을 측정하고, UACR값을 계산한다. 투여 전 1회, 투여 종료 후 1회. UACR=MALB / Cr-U.
혈압: 마취 후 혈압을 측정하고, 수축기 혈압(SBP), 이완기 혈압(DBP), 평균 혈압(MBP) 및 심박수(HR)를 포함한다. 투여 전 1회, 투여 후 4주 및 8주에 각각 1회.
심장 GE 도플러 초음파: 1년 이내 과거 초음파 1회(선택된 동물), 투여 전 1회(베이스라인 기간 D-30일 이내), 투여 후 8주에 1회.
3.4 부차적 약효 지표
혈중 칼륨, 투여 전 2회, 투여 기간 2주마다 1회;
당지질 대사 및 간 기능: FPG, FRA, LDL-c, HDL-c, TG, TC, NT-proBNP, ALT, AST, TBIL 등, 투여 전 2회, 투여 기간 4주 및 8주에 각각 1회;
기타 생화학적 지표 및 혈액학, 투여 전후 각각 1회;
체중: 투여 전 1회, 투여 기간 매주 1회;
투여 후 음식 섭취, 행동 등의 변화를 24시간 관찰.
3.5 측정 방법 및 장치
측정 방법: 하기 표 7 및 하기 표 8 참조.
혈액학 측정 기기: Siemens ADVIA 2120i Hematolagy Systems.
혈액 생화학 및 소변 지표 측정 기기: Roche cobas6000 analyzer series C501모듈로 측정, NT-proBNP는 ELISA키트를 이용하여 측정.
표 7: 생화학 측정 항목
Figure pct00014
표 8: 혈액학 측정 항목
Figure pct00015
3.6 심장 도플러 초음파
마취 방법: 15 mg/kg 케타민 하이드로클로라이드를 근육내 주사하여 마취하고, 동물의 마취 상태에 따라 수의사의 판단 후 추가 마취를 시행하였으며, 매번 추가 마취 용량은 초기 용량의 1/2이다.
측정 방법: 좌측 측와위 동물에게, 6S-RS프로브(주파수 2.7-8.0 MHz)를 사용하여 이미지를 수집하였다.
분석 방법: 이미지를 수집하고 저장한 후 지원 분석 워크스테이션 EchoPAC 소프트웨어를 사용하여 연속된 3개 심장 주기 내에서 심장 수축 및 이완 기능의 각 지표를 반복적으로 측정하였다.
측정 지표 및 초음파 기술: 하기 표 9 참조.
측정 기기: GE Vivid S5 컬러 도플러 초음파 진단기.
3.7 혈압 측정
측정 방법: 15 mg/kg 케타민 하이드로클로라이드를 근육 주사하여 동물을 마취시키고, 마취 후 앙와위로 눕혀 왼쪽 상완의 털을 깨끗이 깎고, 규격에 따라 적당한 크기의 커프를 묶은 후 혈중산소탐침을 동물의 손가락이나 발가락에 끼우고(왼손 제외), 빨간 감광면은 손가락이나 발가락의 안쪽에 위치하고 자동 모드에서 동물의 혈압을 1분 간격으로 연속 3회 측정한다. 3회 이상 혈압의 DBP, SBP 및 MBP의 차이가 크지 않으면(최고 값과 최저 값의 차이가 15mmHg 미만) 측정을 종료한다.
측정 지표: 측정 지표는 수축기 혈압(SBP), 이완기 혈압(DBP), 평균 혈압(MBP) 및 심박수(HR)를 포함한다.
측정 기기: GE B40i전기생리학적 모니터.
표 9: 심장 초음파 측정 지표
Figure pct00016
Figure pct00017
3.8 임상 관찰
관찰 횟수: 1일 1회 관찰.
관찰 방법: 케이지 관찰.
관찰 내용: 주사 부위, 피부, 털, 눈, 귀, 코, 입, 가슴, 복부, 비뇨생식기, 사지 등 부위 및 호흡, 움직임, 배뇨, 배변 및 행동 변화 등
3.9 섭취량 측정
급식 방법: 오전 8:00~9:00, 10:00, 오후 2:00 및 오후4:00 각각 한 번씩 주고, 자유롭게 먹도록 먹이통에 먹이가 있도록 보장하여, 다음날 오전 07:40-08:00에 남은 사료를 제거한다.
급식 양: 약 250-500 g/마리/일, 시험 동안 동물이 자유롭게 먹도록 24시간 동안 먹이통에 사료가 있도록 보장한다.
섭취량 측정 방법: 사료는 반 정량적 방법을 사용하여 추정하고, 매일 급식 양, 버린 양, 먹이동에 남은 양을 기록한다. 섭취량=급식 양-버린 양-먹이통에 남은 양.
3.10 체중 측정
계량 시간: 당일 급식 전.
측정 방법: 동물은 체중을 측정하기 전에 14-16시간 동안 금식시켰고, 동물이 깨어 있는 상태로 케이지에 옮긴 후, 큰 동물 저울로 체중을 측정한다.
측정 기기: METTLER TOLEDO전자 플랫폼.
4.0 시험 종료 기준
a. 심각한 부작용 발생.
b. 심각한 감염 발생.
5. 결과 및 분석
5.1 UACR에 미치는 영향
단백뇨(UACR)에 대한 각 군의 투여 영향은 하기 표 10을 참조하기 바란다. 각 군은 단백뇨 중등도, 중증이 증가하고, 베이스라인 소변 알부민/크레아티닌 비율 (UACR)≥15mg/g -350mg/g(4-6시간 소변 수집)을 나타내는 CKD 레서스 원숭이를 선택하여 베이스라인 및 8주(W8) 투여 후 알부민/크레아티닌 비율 변화를 분석하였다.
위약군(n=4): 베이스라인과 비교하면, W8의 시험 기간이 종료된 UACR은 평균 30.64±34.50% 증가하였고, 4예의 동물은 단백뇨(UACR)가 일정한 범위 내에서 안정적으로 변동하였고, 급격한 진행을 보이지 않았다.
Valsartan군(n=3, 중등도, 중증 단백뇨 증가는 통계에 포함됨): 베이스라인과 비교하면, W8 투여한 2예의 동물(#2091, #4861)은 UACR이 40%-70% 감소하였고, 모두 이점을 보였고, 1예의 동물은 베이스라인의 UACR이 15mg/g이고, W8 투여 후 UACR은 20.4%이고, 이점이 뚜렷하지 않다. 군에 들어간 동물의 수가 적기 때문에 위약군과 비교하면 통계적 차이가 없다.
식 I의 화합물의 말레이트(5 mg/kg 1일 1회(qd))군(n=6, 4/6마리 중등도, 중증 단백뇨 증가는 통계에 포함됨): 베이스라인과 비교하면, W8 투여 후 UACR은 평균 46.87±36.93% 감소하였고, 위약군과 비교하면 크게 감소하였다(p＜0.05). W8 투여한 3예의 동물은 베이스라인과 비교하면 UACR은 60%-70% 감소하였고, 모두 이점을 보였고, 1예의 동물은 이점을 보이지 않았다.
식 I의 화합물의 말레이트(2mg/kg qd)군(n=5, 3/5마리 중등도, 중증 단백뇨 증가는 통계에 포함됨): 베이스라인과 비교하면, W8 투여 후 UACR은 평균 66.00±17.42% 감소하였고, 위약군과 비교하면 크게 감소하였다(p＜0.01). W8 투여된 3예의 동물은 베이스라인과 비교하면 UACR은 약 50%-80% 감소하였고, 모두 이점을 보였다.
식 I의 화합물의 말레이트(1mg/kg qd)군(n=5, 2/5마리 중등도, 중증 단백뇨 증가는 통계에 포함됨): 베이스라인과 비교하면, W8 투여 후 1예의 동물은 UACR이 39% 감소하였고, 1예는 이점이 뚜렷하지 않다.
결론적으로, 식 I의 화합물의 말레이트의 2-5mg/kg qd는 8주 투여하면 단백뇨(UACR)를 현저히 개선할 수 있다.
표 10: 식 I의 화합물의 말레이트의 8주 투여가 만성 자발성 신장 질환(CKD) 레서스 원숭이의 UACR에 미치는 영향
Figure pct00018
Figure pct00019
Figure pct00020
비고: 1. UACR=MALB / Cr-U
2. 변화율=(투여 후 시점-베이스라인 값)/베이스라인 값*100%, 음수 값은 감소; “#” 위약군과 비교하여 p＜0.05.
3. NA, UACR 정상 동물은 통계에 포함되지 않음.
표 10: 식 I의 화합물의 말레이트의 8주 투여가 만성 자발성 신장 질환(CKD) 레서스 원숭이의 UACR에 미치는 영향(계속)
Figure pct00021
비고: 1. UACR=MALB / Cr-U
2. 변화율=(투여 후 시점-베이스라인 값)/베이스라인 값*100%, 음수 값은 감소; “#” 위약군과 비교하여 p＜0.05, “##” 위약군과 비교하여 p＜0.01.
3. NA, UACR 정상 동물은 통계에 포함되지 않음.
5.2 사구체 여과율eGFR creat-cys 에 미치는 영향
eGFR에 대한 각 군의 영향은 하기 표 11 및 하기 표 12를 참조하기 바란다. 각 군은 eGFRcreat-cys을 선택하였고, 30~59 ml/min/1.73m2, 베이스라인 및 W8 투여 후 사구체에 대한 여과율 변화를 분석한다.
위약군(n=4): 베이스라인과 비교하면, 4예의 동물의 사구체 여과율eGFRcreat-cys은 일정한 범위 내에서 안정적으로 변동하였고, 급격한 진행을 보이지 않았다.
Valsartan군(n=3): 베이스라인과 비교하면, W8 투여 후 Valsartan군의 사구체 여과율eGFRcreat-cys은 평균 6±2 ml/min/1.73m2 증가하였고, 위약군 변화값과 비교하면 크게 증가하였고(p＜0.01), 사구체 악화가 크게 개선되었으며 치료 효과는 시효성을 보여줬다.
식 I의 화합물의 말레이트(5 mg/kg qd)군(n=6): 베이스라인과 비교하면, W8 투여 후 사구체 여과율eGFRcreat-cys은 평균 6±6 ml/min/1.73m2 증가하였고, 위약군 변화값과 비교하면 크게 증가하였고(p＜0.05), 치료 효과는 시효성을 보여줬다.
식 I의 화합물의 말레이트(2mg/kg qd)군(n=5): 베이스라인과 비교하면, W8 투여 후 사구체 여과율eGFRcreat-cys은 평균 3±3 ml/min/1.73m2 증가하였고, 위약군 변화값과 비교하면 크게 증가하였다(p＜0.05).
식 I의 화합물의 말레이트(1mg/kg qd)군(n=5): 베이스라인과 비교하면, W8 투여 후 사구체 여과율eGFRcreat-cys은 평균 3±4 ml/min/1.73m2 증가하였고, 위약군 변화값과 비교하면 통계적으로 유의미한 변화가 없다.
결론적으로, 식 I의 화합물의 말레이트의 2-5mg/kg qd는, 8주 투여하면 사구체 여과율eGFR creat-cys 을 크게 개선할 수 있다.
표 11: 식 I의 화합물의 말레이트의 8주 투여가 만성 자발성 신장 질환이 있는 레서스 원숭이의 eGFRcreat-cys에 미치는 영향
Figure pct00022
Figure pct00023
비고: 변화값=8주-Baseline, 음수 값은 감소. “#”변화값은 위약군과 비교하여 p＜0.05, “##”변화값은 위약군과 비교하여 p＜0.01
표 12: 식 I의 화합물의 말레이트 8주 투여 후 만성 자발성 신장 질환이 있는 레서스 원숭이의 eGFRcreat-cys 변화값
Figure pct00024
Figure pct00025
비고: 변화값=현재값-Baseline, 음수 값은 감소.
5.3 CysC, Cr-P 및 BUN에 미치는 영향
각 군의 투여 후 CysC, Cr-P 및 BUN에 미치는 영향은 하기 표 13 내지 표 15를 참조하기 바란다.
표 13: 식 I의 화합물의 말레이트의 8주 투여가 만성 자발성 신장 질환이 있는 레서스 원숭이의 Cr-P에 미치는 영향
Figure pct00026
Figure pct00027
비고: “*”베이스라인(Baseline)값과 비교하여 p＜0.05, “**”베이스라인(Baseline)값과 비교하여 p＜0.01.
표 14: 식 I의 화합물의 말레이트의 8주 투여가 만성 자발성 신장 질환이 있는 레서스 원숭이의 CysC에 미치는 영향
Figure pct00028
Figure pct00029
비고: “**”Baseline과 비교하여 p＜0.01.
표 15: 식 I의 화합물의 말레이트의 8주 투여가 만성 자발성 신장 질환이 있는 레서스 원숭이의 BUN에 미치는 영향
Figure pct00030
Figure pct00031
5.4 혈압에 미치는 영향
각 투여 군의 투여가 혈압에 미치는 영향은 표 16을 참조하기 바란다. 영장류의 혈압 테스트는 마취가 필요하므로, 각 시점에서 심박수의 변이성을 제어해야 통계가 가능하다.
위약군(n=4, 2/4 고혈압): 베이스라인과 비교하면, 4예의 동물은 혈압이 일정한 범위 내에서 안정적으로 변동하였다.
Valsartan군(n=3, 1/3마리 고혈압): 베이스라인과 비교하면, W8 투여 후, SBP 및 DBP는 각각 평균 14±4 mmHg 및 7±0 mmHg 감소하였고, 위약군 변화값과 비교하면 크게 감소하였다(p＜0.01).
식 I의 화합물의 말레이트(5 mg/kg qd)군(n=6, 4/6예 고혈압): 베이스라인과 비교하면, W8 투여 후, SBP 및 DBP는 각각 평균 21±8 mmHg 및 10±7 mmHg 감소하였고, 위약군 변화값과 비교하면 크게 감소하였고(p＜0.01), 치료 효과는 시효성을 보여줬다.
식 I의 화합물의 말레이트(2 mg/kg qd)군(n=5, 2/5예 고혈압): 베이스라인과 비교하면, W8 투여 후, SBP 및 DBP는 각각 평균 19±9 mmHg 및 9±8 mmHg 감소하였고, 위약군 변화값과 비교하면 크게 감소하였고(p＜0.01), 치료 효과는 시효성을 보여줬다.
식 I의 화합물의 말레이트(1 mg/kg qd)군(n=5): 베이스라인과 비교하면, W8 투여 후, SBP 및 DBP는 각각 평균 11±4 mmHg 및 5±4 mmHg 감소하였고, 위약군 변화값과 비교하면 크게 감소하였다(p＜0.05).
결론적으로, 식 I의 화합물의 말레이트의 1-5mg/kg qd는, 8주 투여하면 모두 혈압의 활성을 감소시켰다.
표 16: 식 I의 화합물의 말레이트의 8주 투여가 만성 자발성 신장 질환이 있는 레서스 원숭이의 혈압에 미치는 영향
Figure pct00032
Figure pct00033
비고: “*”은 베이스라인 값과 비교하여 p＜0.05, “**”는 베이스라인(Baseline) 값과 비교하여 p＜0.01. “#”변화값은 위약군과 비교하여 p＜0.05, “##”변화값은 위약군과 비교하여 p＜0.01. NA, 심박수 불안정은 통계 분석에 포함되지 않는다.
5.5 심장 기능에 미치는 영향
각 군의 심초음파 지표에 미치는 영향은 표 17을 참조하기 바란다.
식 I의 화합물의 말레이트의 각 투여 용량군, Valsartan군 및 위약군은 투여 후 심장 수축 및 이완 기능에 명백한 부작용이 없었다.
또한, 식 I의 화합물의 말레이트 5mg/kg군의 2예는 박출률이 낮아 심부전(SD)이 있는 레서스 원숭이 동물(#5073 및 #287)은 베이스라인에 비해 8주 투여 후 LVEF%가 상승함을 보여주었다. 그러나 본 제품이 만성 심부전을 치료할 수 있는지 여부는 더 많은 후속 연구 코호트 데이터에 의해 뒷받침되어야 한다.
표 17: 식 I의 화합물의 말레이트의 8주 투여가 만성 자발성 신장 질환이 있는 레서스 원숭이의 심장 기능 주요 지표에 미치는 영향 및 치료 효과 평가
Figure pct00034
Figure pct00035
비고: 이완 기능 이상 등급은 Ea, E/Ea, Ea/Aa 및 기타 기능 지표를 종합적으로 고려하여 결정하며, 시험 대상 동물의 이완 기능 이상 등급이 베이스라인에 비해 개선되면 “이점 있음”으로 간주되고, 그렇지 않을 경우 “무효”이고, #257 흉부 기형이 있는동물은 심장 초음파 이미지를 수집할 수 없다.
5.6 심장 기능 손상 혈액Biomarker에 미치는 영향
5.6.1 NT-proBNP에 미치는 영향
식 I의 화합물의 말레이트의 NT-proBNP에 미치는 영향은 표 18을 참조하기 바란다.
베이스라인 기간과 비교하면, 8주 투여 후 각 투여 군 동물의 NT-proBNP 수준은 큰 변화가 없었다.
표 18: 식 I의 화합물의 말레이트의 8주 투여가 만성 자발성 신장 질환이 있는 레서스 원숭이의 NT-proBNP에 미치는 영향
Figure pct00036
Figure pct00037
5.6.2 K + 에 미치는 영향
식 I의 화합물의 말레이트의 K+에 미치는 영향은 표 19를 참조하기 바란다.
베이스라인 기간과 비교하면, 8주 투여 후 각 투여 군의 동물 혈청K+ 수준은 큰 변화가 없었다.
표 19: 식 I의 화합물의 말레이트의 8주 투여가 만성 자발성 신장 질환이 있는 레서스 원숭이의 K+에 미치는 영향
Figure pct00038
Figure pct00039
5.7 안전성 내성 연구
투여 기간 동안, 화학식 I의 화합물의 말레이트 그룹에서 투여 관련 부작용이 관찰되지 않았고, 간 기능, 신장 기능, 섭취량, 체중 및 혈액학적 지표에서 유의미한 변화가 관찰되지 않았다.
6. 결론
식 I의 화합물의 말레이트2-5mg/kg qd는 8주 투여하면 단백뇨(UACR)를 현저히 개선할 수 있고, 사구체 여과율eGFRcreat-cys을 크게 개선하고, 치료 효과는 Valsartan군과 대등하다.
식 I의 화합물의 말레이트 1-5mg/kg qd는, 8주 투여하면 모두 혈압의 활성을 감소시켰다. 동시에 본 시험 조건에서 고칼륨혈증 위험이 관찰되지 않았다.
실시예 2: 식 I의 화합물의 임상 전 안전성 평가
1. 재료 및 방법
1.1. 테스트 물질
식 I의 화합물은 CN103562191B의 방법에 따라 제조하였고 구조를 확인하였다. 용매는 0.5％의 CMC-Na(Sodium carboxymethyl cellulose)이다. 식 I의 화합물은 빛과 습기를 피해 실온에서 보관한다. 게잡이 원숭이의 안전성 연구에서, 시험 물질을 관련 농도로 0.5% CMC-Na에 현탁시켰다. 보고된 용량이 올바르게 투여되도록 보장하기 위해 제조된 현탁액의 균질성, 농도 및 1주 안정성을 분석했다. 활성 약물 성분(API)의 6개월 가속 안정성을 테스트하였다.
1.2. 동물 사육
3~4세의 건강한 수컷 및 암컷 게잡이 원숭이는 Hainan Xinyuan Biotechnology Co., Ltd.(중국 하이난)에 의해 제공되었다. 치료 시작 시, 체중은 수컷의 경우 3.2~5.8kg, 암컷의 경우 2.5~3.7kg이었다. 이들은 연구 전에 36일의 순응 기간 동안 보관되었다. 매일 아침 한 번 동물들은 자유롭게 음식과 물을 섭취할 수 있다.
해당 비임상 실험 연구는 중국 식품 약품 감독관리국(CFDA)의 지침에 따라 수행되었다. 상기 실험은 국제실험실동물 관리평가 및 감정 협회(AAA LAC)의 승인을 받은 시설에서 수행되었으며, 동물은 <실험동물 관리 및 사용 가이드>(Nussberger 등, 2008)에 따라 동물을 사육하였다.
1.3. 용량 및 치료 시간표
체중 기반 컴퓨터 무작위화 프로그램을 사용하여 게잡이 원숭이(5/성별/군)를 선택하고 비강 급식으로 식 I의 화합물(용량 수준은 0(대조군), 20, 100, 450 mg/kg/일, 부피는 5 ml/kg)을 공급하였다. 동물 체중에 따라 개별 용량을 매주 조정하였다. 모든 군에 대해 28일째 2/3 동물을 무작위로 선택하고 안락사시켰다. 약물 중단 28일 후에 나머지 동물은 안락사시켰다.
1.4. 임상 관찰
사망률 및 임상 징후는 격리 기간부터 시작하여 매일 평가되었다. 각 동물의 행동, 투여 후의 반응 또는 질병 발생에 대해 적어도 하루에 2회 검사한다.
관찰은 피부와 털의 변화; 눈과 점막; 호흡, 순환, 자율신경계, 중추신경계 및 행동 패턴이 포함되지만 이에 한정되지 않는다. 직장 온도는 투여 전(2회), 첫 투여 후 1시간 및 24시간, 26일째 투여 전 및 투여 후 1시간 및 24시간에 측정하였다. 체중은 매주 측정하였다. 매일 원숭이의 먹이 소모량을 추정한다. 휴대용 세극등(YZ2)과 직접 검안경(GFJY-01B)을 사용하여 원숭이에 대해 검안경 검사를 수행하였다.
1.5. 실험실 테스트
원숭이에 대한 연구는, 격리 기간(2회, 01일쩨 및 02일째), 14일째, 28일째 및 56일째 하기 표 20에 나타낸 바와 같이 파라미터를 측정하였다. (1)혈액 및 혈액응고지수 검사는 Bayer ADVIA2120(독일)과 Sysmex CA-1500(일본)을 사용하였다. (2)혈청 생화학 검사는 HITACHI 7080 자동 분석기(일본)와 Easylyte PLUS 전해질 분석기(미국 MEDICA)를 사용하여 평가하였다. (3)각 케이지 아래의 트레이를 통해 각 동물의 24시간 풀링된 소변을 수집한다. 소변 분석은 Uritest-300(중국)을 사용하여 수행하였다. (4)각 케이지 아래의 트레이를 통해 각 원숭이의 24시간 동안 배설물을 수집한다. 배설물 잠혈을 측정한다. (5)ACCESS 2 화학발광 면역분석법은 심장 트로포닌(TropI, non-GLP) 측정에 사용된다.
표 20: 혈액학, 혈청 화학 및 소변 분석에서 평가된 매개변수
Figure pct00040
1.6. 일반적인 심전도 분석
각 예정된 시간(투여 후 1일째, 투여 후 01일째, 02일째, 투여 후 1일째의 1시간 및 24시간, 투여 전, 및 투여 후 26일째, 56일째의 1시간, 제24시간)마다 일반적인 ECG 분석을 수행하였다. ECG 시스템은 Derived DII(ECG-6951E, Shanghai, China)를 사용하여 P파, R파, T파, PR 간격, Q-T 간격, QRS 지속 시간 및 심박수를 기록하였다.
1.7. 부검 및 조직병리학
노출 단계(28일째) 및 회복 단계(56일째)가 종료될 때, 육안 검사에 의해 모든 동물에 대해 완전한 부검을 수행하였다. 뇌, 심장, 신장, 신장, 간, 비장, 흉선, 고환, 부고환, 자궁, 난소, 부신 및 갑상선(부갑상선 포함)과 같은 선택된 기관을 손질하고 칭량하여 절대 중량 및 최종 체중 또는 뇌 중량의 백분율을 평가하였다. 뇌, 뇌하수체, 갑상선(부갑상선 포함), 기관, 심장, 췌장, 비장, 부신, 전립선, 난소, 자궁(자궁경부 및 나팔관 포함), 질, 고환, 부고환, 정액 소포, 식도, 십이지장, 공장, 회장, 맹장, 결장, 직장, 장간막 림프절, 파이어판, 상악하 림프절, 대동맥, 눈, 골격근, 좌골신경, 대퇴골(골간단 포함), 유방, 흉골, 침샘, 척수, 방광, 폐(기관지 포함), 간, 신장, 위, 골수(흉골), 흉선, 흉골, 담낭, 명백한 병변 또는 종괴 등 조직을 10% 중성 포르말린에 보관하였다. 부검 시 폐 조직은 정착액에 의해 감염되었다. 보관된 모든 조직을 포매하고 절개하고 헤마톡실린과 에오신(HE)으로 염색하고 현미경으로 검사하였다. 골수 세포의 형태학적 검사는 도말(원숭이 흉골) 및 쌍으로 포매된 흉골 절편 모두에서 수행되었다.
1.8. 독성 동역학
투여 후 1일째 및 26일째의 0시간, 0.5시간, 1.5시간, 3시간, 5시간, 7시간 및 24시간에 혈액 샘플을 수집하였다. 매번 정맥에서 약 1.0mL의 혈액을 채취하여 EDTA-K2 항응고 튜브에 수집한다. 혈액 샘플을 얼음 위에 놓고 4℃에서 원심분리(3500rpm, 5분)하여 혈장 샘플을 얻었고, 분석할 때까지 대략 -80℃에서 동결하였다. 식 1의 화합물의 독성 동역학 측정은 중국 과학 아카데미 상하이 물질 의학 연구소(Shanghai Institute of Materia Medica Chinese Academy of Sciences)에서 수행되었다.
1.9. 통계 분석
성별에 따라 체중, 직장 체온, ECG, 장기 중량, 혈액학 매개변수, 혈청 생화학적 데이터를 통계 소프트웨어 SAS 9.3로 분석하였다. 먼저, Levene's test를 이용하여 분산의 균질성을 분석하였다. P> 0.05이면 단방향 분산 분석이 사용되었다. P<0.05이면 Kruskal-Wallis 테스트가 사용되었다. 얻어진 ANOVA p값<0.05인 경우 각 군을 Dunnett의 T-테스트를 사용하여 비교하였다. 얻어진 Kruskal-Wallis 테스트 p값 <0.05인 경우 데이터 순위 변환 후 Dunnett's T-테스트를 수행했다.
2. 결과
2.1. 임상 관찰
대조군과 비교하면, 고용량군의 체중 증가량은 약간 감소(암컷 2.7±0.4 vs. 3.2±0.2, 수컷 4.1±0.5 vs. 4.6±0.5)하여 통계적으로 유의미하지 않았다.
23일째에 투여 관련 조기 사망이 발생했고, 활동 저하, 후만증, 저체온증, 설사, 경미한 장고막 위축 및 흉선 위축을 포함한 임상 징후가 고용량 암컷에서 발생했다. 치료 관련 임상 독성의 명백한 징후는 다른 동물에서 관찰되지 않았다.
2.2. 혈액학 및 응고
NEUT%의 증가와 LYMPH%의 감소는 치료받은 모든 암컷과 고용량 수컷에서 관찰되었다. 중간 및 고용량 동물에서 Fbg의 증가가 관찰되었고 고용량 암컷 동물에서 APTT의 증가가 관찰되었다(표 21).
표 21: 4주 동안 식 I의 화합물로 처리된 원숭이의 혈액학적 데이터.
Figure pct00041
Figure pct00042
*p <0.05, 대조군과 비교하여, ** p <0.01, 대조군과 비교하여, 값은 평균값±S.D.
2.3. 혈청 생화학
고용량 게잡이 원숭이 수컷과 암컷의 혈청 화학 매개변수 CPK, BUN 및 CREA는 모두 현저히 증가하였고, 특히 23일째 일찍 죽은 원숭이에서 현저히 증가하였다(14일째 데이터, BUN: 34.99; CREA: 526). 고용량 수컷의 CHOL은 현저히 감소되었다. 고용량 수컷의 혈청 Na 수준은 약간 감소했지만 26일째에 통계적으로 유의미했다. 다른 통계적으로 유의미한 발견은 개별적으로 발생된 사건이며, 독성학적으로 유의미하지 않은 것으로 간주되었다(표 22).
표 22: 4주 동안 식 I의 화합물로 처리된 원숭이의 혈청 화학성분
Figure pct00043
Figure pct00044
*p <0.05, 대조군과 비교하여, ** p <0.01, 대조군과 비교하여, 값은 평균값±S.D.
2.4. 소변 분석
수컷 또는 암컷 원숭이에서 검사한 모든 소변 분석 매개변수에서 유의미한 변화가 보고되지 않았다.
2.5. ECG매개변수
한 마리의 중간 용량 투여 암컷에서 투여 후 26일째 1시간에 QTc 간격의 연장(동물 #303의 경우 296ms)이 관찰되었다. 한 마리의 고용량 수컷에서 투여 후 26일째 1시간에 부비동 부정맥, QRS 간격의 연장(동물 #411은 60ms)이 관찰되었고, 고용량 수컷에서 투여 후 1일째 및 26일째 1시간에 마찬가지로 QRS 간격의 연장이 관찰되었다(표 23).
표 23: 4주 동안 식 I의 화합물로 처리된 원숭이의 심전도 데이터
Figure pct00045
Figure pct00046
*p <0.05, 대조군과 비교하여, ** p <0.01, 대조군과 비교하여, 값은 평균값±S.D. 2.6. 부검
2.6.1. 전체 병리 및 장기 중량
원숭이의 거시적 소견이 없으면 시험 물질의 복용과 관련이 있는 것으로 간주되지만, 상대적으로 일찍 죽은 원숭이의 경우 경미한 장고막 및 흉선의 위축은 제외된다. 고용량 원숭이는 간과 신장의 상대적 무게가 비교적 높고, 흉선의 상대적 무게가 비교적 낮으며, 자궁의 절대 또는 상대적 무게가 비교적 낮다(표 24).
표 24: 4주 동안 식 I의 화합물로 처리된 게잡이 원숭이의 장기 중량
Figure pct00047
Figure pct00048
*p <0.05, 대조군과 비교하여, ** p <0.01, 대조군과 비교하여, 값은 평균값±S.D.
2.7. 독성 동역학
20-450mg/kg 용량 범위에서 전신 노출량(화합물 자체 및 주요 대사물의 혈장 AUC0-24h 및 Cmax로 표시됨)의 증가 비율은 용량의 증가 비율보다 훨씬 더 크다. 28일 연속 투여 후 축적이 관찰되지 않았다.
실시예 3: 비임상 약동학
1. 재료 및 방법
1.1. 재료
CN103562191B의 방법에 따라 식 I의 화합물을 제조하였고 구조를 확인하였다.
1.2. 동물
게잡이 원숭이(3/성별/그룹: 체중 3-5kg, 나이 5-6세)는 Suzhou Xishan Zhongke Laboratory Animal Center(Shanghai, China)로부터 제공되었다. 연구 전에 7일 동안 동물을 적응시켰다. 원숭이를 우리에 혼자 가두고 온도(18-26℃) 및 습도(50±20%)가 조절되는 동물방에 넣되, 공기 흐름은 10이고 1시간마다 신선한 공기를 환기하였다. 조명 주기는 12시간 켜기 및 12시간 끄기이고, 매일 아침 원숭이에게 사료와 물을 주었다. 모든 동물 실험은 모두 AMMS 동물 관리 및 사용 위원회에서 제정한 <동물 관리 및 사용 지침>에 따라 수행되었다.
2. 식 I의 화합물의 정맥내 및 경구 투여
식 1의 화합물을 밤새 금식한 게잡이 원숭이에게 정맥내 또는 경구 투여하였다. 용량은 각각 1mg/kg(정맥), 1mg/kg, 3mg/kg 및 9mg/kg(경구)이다. 투여 후 0, 5, 15분에 각각 0.25, 0.5, 1, 2, 4, 6, 8, 12 및 24시간에 정맥에서 혈액 샘플(각 시점에서 0.2mL)을 수집하였다. 수집 후 모든 혈액 샘플을 바로 10,000 Ⅹg로 5분 동안 원심분리하고 혈장을 분석할 때까지 -75 ± 10℃에서 보관하였다. 단백질 침전에 의해 혈장 샘플을 제조하였다. 혈장 내에서 식 1의 화합물의 농도는 검증된 액체 크로마토그래피-탠덤 질량 분석법에 의해 측정되었다.
혈장 농도-시간 곡선하 면적(AUC), 최대 혈장 농도(Cmax), Cmax에 도달하는 시간(Tmax), 반감기(T1/2), 전신 혈장 제거율(CL), 평균 체류 시간(MRT) 및 안정 상태에서의 분포 부피(Vss)와 같은 약동학 매개면수는 WinNonlin v1.3(Pharsight, Mountain View, CA, USA)을 사용한 비구획 분석에 의해 계산하였다. 불균등 성장 모델의 경우, 동물의 약동학 데이터는 2구획 모델 및 Kinetica 5.1 소프트웨어 패키지(v.3.0; InnaPhase, Philadelphia, PA, USA)를 통해 시뮬레이션하였다.
3. 결과
혈장 약동학 및 생체 이용률
표 25 및 도 2는 게잡이 원숭이에게 정맥내 및 경구 투여한 후의 약동학 데이터를 보여준다. 정맥 주사 후, 약물 농도는 이중 지수 감소를 나타냈고, 제거율은 1.96 L/h/kg이고, 원숭이의 분포 부피는 1.86 L/kg이다. 경구 투여 후, 식 1의 화합물은 1.0-1.30시간 내에 Cmax에 도달하고, 혈장 내의 T1/2는 2.73-5.99h로 사라진다. 정맥내 및 경구 투여 후 AUC0-24h 계산을 통해, 원숭이에서 식 1의 화합물의 경구 생체 이용률은 3.3-11.3%였으며, 이는 유출 수송 단백질의 관여를 의미한다.
표 25:
Figure pct00049
iv 후의 CL 제거율, iv 후 안정 상태에서의 Vss 분포 부피, MRT의 평균 체류 시간, T1/2 반감기, Cmax 최대 혈장 농도, Cmax에 도달하는 Tmax 시간, AUC총 혈장 농도-시간 곡선하의 총 면적, CL/F 경구 투여 후 제거율, Vss/F 경구 투여 후 안정 상태에서의 분포 부피, F 경구 투여 절대적 생체 이용률, iv 정맥 주사, po 경구 투여.

Claims (10)

  1. 하기 식 I로 표시되는 질소 함유 포화 헤테로사이클릭 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 만성 신장 질환의 치료 및/예방을 위한 약물의 제조에 있어서의 응용:
    Figure pct00050
  2. 제1항에 있어서,
    상기 약학적으로 허용가능한 염은 하이드로클로라이드, 설페이트, 포스페이트, 하이드로브로마이드, 아세테이트, 푸마레이트, 옥살레이트, 시트레이트, 메탄설포네이트, 벤젠설포네이트, p-톨루엔설포네이트, 말레에이트, 말레이트, 타르트레이트, 에타노에이트 또는 나프탈렌 디설포네이트인, 질소 함유 포화 헤테로사이클릭 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 만성 신장 질환의 치료 및/예방을 위한 약물의 제조에 있어서의 응용.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    상기 약학적으로 허용가능한 염은 식 I의 화합물의 말레이트이고, 이는 식 I의 화합물 및 말산이 1:1 몰비로 형성되는 화합물이고, 구조식은 아래와 같은 질소 함유 포화 헤테로사이클릭 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 만성 신장 질환의 치료 및/예방을 위한 약물의 제조에 있어서의 응용.
    Figure pct00051
  4. 제3항에 있어서,
    상기 말레이트는 결정체이며, X선 분말 회절 패턴은 7.767°±0.2°, 13.897°±0.2°, 14.775°±0.2°, 17.098°±0.2°, 18.999°±0.2°, 20.153±0.2°, 20.960°±0.2°, 21.423°±0.2°, 26.348°±0.2°, 27.892°±0.2°의 2θ에서 특징 피크를 가지고,
    특히, 상기 말레이트 결정체의 X선 분말 회절 패턴은 또한 5.598°±0.2°, 7.357°±0.2°, 10.395°±0.2°, 11.108°±0.2°, 16.037°±0.2°, 16.523°±0.2°, 19.410°±0.2°, 22.645°±0.2°, 26.630°±0.2°, 26.891°±0.2°, 27.380°±0.2°, 31.056°±0.2°, 33.306°±0.2°, 33.775°±0.2°, 39.231°±0.2°의 2θ에서 특징 피크를 가지는, 질소 함유 포화 헤테로사이클릭 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 만성 신장 질환의 치료 및/예방을 위한 약물의 제조에 있어서의 응용.
  5. 제4항에 있어서,
    상기 식 I의 화합물의 말레이트 결정체는 도 1에 도시된 바와 같은 X선 분말 회절 패턴을 가지는, 질소 함유 포화 헤테로사이클릭 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 만성 신장 질환의 치료 및/예방을 위한 약물의 제조에 있어서의 응용.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 만성 신장 질환은 고혈압 합병 신장 질환, 당대사 이상을 동반한 고혈압 합병 신장 질환, 만성 신부전 합병 만성 심부전 또는 당대사 이상을 동반한 만성 신장 질환인, 질소 함유 포화 헤테로사이클릭 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 만성 신장 질환의 치료 및/예방을 위한 약물의 제조에 있어서의 응용.
  7. 제6항에 있어서,
    상기 고혈압 합병 신장 질환에서 고혈압은 1급 고혈압, 2급 고혈압 또는 3급 고혈압이고, 바람직하게는 1급 고혈압 또는 2급 고혈압인, 질소 함유 포화 헤테로사이클릭 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 만성 신장 질환의 치료 및/예방을 위한 약물의 제조에 있어서의 응용.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 만성 신장 질환은 만성 신장 질환의 G1, G2, G3a, G3b, G4기를 의미하고, 바람직하게는 G2, G3a 또는 G3b기인, 질소 함유 포화 헤테로사이클릭 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 만성 신장 질환의 치료 및/예방을 위한 약물의 제조에 있어서의 응용.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 약물의 제형은 정제, 캡슐, 정맥내 주사제, 흡입제, 연무제, 동결건조제, 패치, 겔, 분무제 또는 좌제이고, 바람직하게는 정제를 포함하는, 질소 함유 포화 헤테로사이클릭 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 만성 신장 질환의 치료 및/예방을 위한 약물의 제조에 있어서의 응용.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 약물은 단위 용량이고, 바람직하게는, 상기 단위 용량에는 25 mg-200 mg의 식 I로 표시되는 질소 함유 포화 헤테로사이클릭 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 예를 들면 25 mg, 50 mg, 100 mg, 150 mg, 200 mg의 식 I로 표시되는 질소 함유 포화 헤테로사이클릭 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이 포함되는, 질소 함유 포화 헤테로사이클릭 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 만성 신장 질환의 치료 및/예방을 위한 약물의 제조에 있어서의 응용.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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JP5764628B2 (ja) * 2012-09-14 2015-08-19 田辺三菱製薬株式会社 医薬組成物
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