TW202204309A - 脂質奈米粒子組成物 - Google Patents

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Abstract

本文提供脂質，其可與其他脂質組分，諸如中性脂質、膽固醇及聚合物結合之脂質組合使用以形成脂質奈米粒子用於遞送治療劑(例如核酸分子)以實現治療或預防目的，包括疫苗接種。

Description

脂質奈米粒子組成物
本揭示案大體上係關於脂質，其可與其他脂質組分，諸如中性脂質、膽固醇及聚合物結合之脂質組合使用以形成脂質奈米粒子用於在活體外及活體內遞送治療劑(例如核酸分子，包括核酸模擬物，諸如鎖核酸(LNA)、肽核酸(PNA)及𠰌啉核酸(morpholinos))以實現治療或預防目的，包括疫苗接種。
治療性核酸具有澈底改變疫苗接種、基因療法、蛋白質替代療法及其他遺傳性疾病治療方法的潛力。自2000年代開始對治療性核酸進行首次臨床研究以來，核酸分子及其遞送方法之設計已取得重大進展。然而，核酸治療劑仍面臨若干挑戰，包括低細胞滲透性及對包括RNA在內之某些核酸分子之降解的高敏感性。因此，仍需要開發新的核酸分子，以及促進該等核酸分子之活體外或活體內遞送以實現治療及/或預防目的之相關方法及組成物。
在一個實施例中，本文提供脂質化合物，包括其醫藥學上可接受之鹽、前藥或立體異構物，其可單獨使用或與其他脂質組分，諸如中性脂質、帶電脂質、類固醇(包括例如所有固醇)及/或其類似物及/或聚合物結合之脂質及/或聚合物組合使用以形成用於遞送治療劑(例如核酸分子，包括核酸模擬物，諸如鎖核酸(LNA)、肽核酸(PNA)及𠰌啉核酸)的脂質奈米粒子。在一些情況下，使用該等脂質奈米粒子遞送核酸，諸如反義及/或信使RNA。亦提供使用此類脂質奈米粒子治療各種疾病或疾患，諸如由感染物及/或蛋白質不足引起之疾病或疾患的方法。
在一個實施例中，本文提供一種式(I)之化合物：
Figure 02_image001
(I)， 或其醫藥學上可接受之鹽、前藥或立體異構物，其中G1 、G2 、G3 、L1 、L2 及R3 如本文或別處所定義。
在一個實施例中，本文提供一種式(II)之化合物：
Figure 02_image003
(II)， 或其醫藥學上可接受之鹽、前藥或立體異構物，其中G1 、G2 、G4 、L1 、L2 及R3 如本文或別處所定義。
在一個實施例中，本文提供一種奈米粒子組成物，其包含本文所提供之化合物及治療或預防劑。在一個實施例中，該治療或預防劑包含至少一個編碼抗原或其片段或抗原決定基的mRNA。
熟習此項技術者在考慮以下對特定實施例之詳細描述之後將對本揭示案之額外特徵顯而易知。
本申請案主張2020年4月9日申請之中國專利申請案第202010275664.4號、2020年4月16日申請之美國臨時申請案第63/011,140號及2021年3月19日申請之中國專利申請案第202110299761.1號之優先權，各案內容以引用之方式併入。5.1 一般 技術
本文所描述或引用的技術及程序包括熟習此項技術者一般使用習知方法很好地理解及/或通常採用的該等技術及程序，諸如Sambrook等人,Molecular Cloning: A Laboratory Manual (第3版, 2001)；Current Protocols in Molecular Biology (Ausubel等人編, 2003)中所描述之廣泛使用之方法。5.2 術語
除非另有描述，否則本文中使用的所有技術及科學術語具有與熟習此項技術者通常所理解相同的含義。出於解釋本說明書之目的，將應用以下術語描述，且在適當時，以單數形式使用之術語亦將包括複數形式，且反之亦然。所有專利、申請案、公開之申請案及其他出版物均以全文引用之方式併入。若所闡述的關於術語之任何描述與以引用之方式併入本文的任何文件相衝突，則以下文闡述的術語描述為準。
如本文所使用且除非另有說明，否則術語「脂質」係指一組有機化合物，其包括但不限於脂肪酸酯，且一般以難溶於水但可溶於許多非極性溶劑中為特徵。儘管脂質一般具有弱水溶性，但是某些類別之脂質(例如經極性基團改質之脂質，例如DMG-PEG2000)具有有限的水溶性且在某些條件下可溶於水。已知之脂質類型包括生物分子，諸如脂肪酸、蠟、固醇、脂溶性維生素、甘油單酸酯、甘油二酸酯、甘油三酸酯及磷脂。脂質可分為至少三類：(1)「簡單脂質」，包括脂肪及油，以及蠟；(2)「化合物脂質」，包括磷脂及醣脂(例如DMPE-PEG2000)；及(3)「衍生化脂質」，諸如類固醇。此外，如本文所使用，脂質亦包括類脂質化合物。術語「類脂質化合物」，又簡稱為「類脂質」，係指類脂質化合物(例如具有類脂質物理性質之兩親性化合物)。
術語「脂質奈米粒子」或「LNP」係指具有至少一個奈米(nm)級尺寸(例如1至1,000 nm)之粒子，其含有一或多種類型之脂質分子。本文所提供之LNP可進一步含有至少一個非脂質有效負載分子(例如一或多個核酸分子)。在一些實施例中，LNP包含部分或完全包封在脂質殼內的非脂質有效負載分子。具體言之，在一些實施例中，其中有效負載係帶負電分子(例如編碼病毒蛋白之mRNA)，且LNP之脂質組分包含至少一種陽離子脂質。不受理論束縛，經審慎考慮，陽離子脂質可與帶負電的有效負載分子相互作用，並在LNP形成期間促進有效負載併入及/或包封至LNP中。可形成如本文所提供之LNP之一部分的其他脂質包括但不限於中性脂質及帶電脂質，諸如類固醇、聚合物結合之脂質及各種兩性離子性脂質。在某些實施例中，根據本揭示案之LNP包含如本文所描述的一或多種式(I)至(IV) (及其子式)之脂質。
術語「陽離子脂質」係指在其環境之任何pH值或氫離子活性下帶正電，或能夠回應於其環境(例如其預定用途之環境)之pH值或氫離子活性而帶正電的脂質。因此，術語「陽離子」涵蓋「永久性陽離子」和「可陽離子化」。在某些實施例中，陽離子脂質中之正電荷源自四級氮原子之存在。在某些實施例中，陽離子脂質包含兩性離子性脂質，該兩性離子性脂質在其預定用途之環境中(例如在生理pH值下)帶正電荷。在某些實施例中，陽離子脂質係如本文所描述的一或多種式(I)至(IV) (及其子式)之脂質。
術語「聚合物結合之脂質」係指既包含脂質部分又包含聚合物部分的分子。聚合物結合之脂質的實例有聚乙二醇化脂質(PEG-脂質)，其中聚合物部分包含聚乙二醇。
術語「中性脂質」涵蓋在所選pH值下或在所選pH值範圍內以不帶電形式或以中性兩性離子形式存在的任何脂質分子。在一些實施例中，所選的有用pH值或範圍對應於預定脂質用途之環境中的pH條件，諸如生理pH值。作為非限制性實例，可結合本揭示案使用的中性脂質包括但不限於磷脂醯膽鹼，諸如1,2-二硬脂醯基-sn-甘油-3-磷酸膽鹼(DSPC)、1,2-二棕櫚醯基-sn-甘油-3-磷酸膽鹼(DPPC)、1,2-二肉荳蔻醯基-sn-甘油-3-磷酸膽鹼(DMPC)、1-棕櫚醯基-2-油醯基-sn-甘油-3-磷酸膽鹼(POPC)、1,2-二油醯基-sn-甘油-3-磷酸膽鹼(DOPC)；磷脂醯乙醇胺，諸如1,2-二油醯基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(DOPE)、磷酸氫2-((2,3-雙(油醯氧基)丙基))二甲基銨基)乙酯(DOCP)；鞘磷脂(SM)；神經醯胺；類固醇，諸如固醇及其衍生物。本文所提供之中性脂質可為合成的或衍生自天然來源或化合物(自其分離或改質)。
術語「帶電脂質」涵蓋在所選pH值下或所選pH值範圍內以帶正電或帶負電形式存在的任何脂質分子。在一些實施例中，所選pH值或範圍對應於預定脂質用途之環境中的pH條件，諸如生理pH值。作為非限制性實例，可與本揭示案結合使用之中性脂質包括但不限於磷脂醯絲胺酸、磷脂酸、磷脂醯甘油、磷脂醯肌醇、固醇半琥珀酸酯、二烷基三甲基銨-丙烷(例如DOTAP、DOTMA)、二烷基二甲基胺基丙烷、乙基磷酸膽鹼、二甲基胺基乙烷胺基甲醯基固醇(例如DC-Chol)、1,2-二油醯基-sn-甘油-3-磷酸-L-絲胺酸鈉鹽(DOPS-Na)、1,2-二油醯基-sn-甘油-3-磷酸-(1'-外消旋-甘油)鈉鹽(DOPG-Na)及1,2-二油醯基-sn-甘油-3-磷酸鈉鹽(DOPA-Na)。本文所提供之帶電脂質可為合成的或衍生自天然來源或化合物(自其分離或改質)。
如本文所使用且除非另有說明，否則術語「烷基」係指僅由碳及氫原子組成的飽和直鏈或支鏈烴鏈基團。在一個實施例中，烷基具有例如一至二十四個碳原子(C1 -C24 烷基)、四至二十個碳原子(C4 -C20 烷基)、六至十六個碳原子(C6 -C16 烷基)、六至九個碳原子(C6 -C9 烷基)、一至十五個碳原子(C1 -C15 烷基)、一至十二個碳原子(C1 -C12 烷基)、一至八個碳原子(C1 -C8 烷基)或一至六個碳原子(C1 -C6 烷基)且其藉由單鍵連接至分子其餘部分。烷基之實例包括但不限於甲基、乙基、正丙基、1-甲基乙基(異丙基)、正丁基、正戊基、1,1-二甲基乙基(三級丁基)、3-甲基己基、2-甲基己基及類似基團。除非另有說明，否則烷基視情況經取代。
如本文所使用且除非另有說明，否則術語「烯基」係指僅由碳及氫原子組成的直鏈或支鏈烴鏈基團，其含有一或多個碳-碳雙鍵。熟習此項技術者應瞭解，術語「烯基」亦包含具有「順式 」及「反式 」構形，或者具有「E」及「Z」構形的基團。在一個實施例中，烯基具有例如二至二十四個碳原子(C2 -C24 烯基)、四至二十個碳原子(C4 -C20 烯基)、六至十六個碳原子(C6 -C16 烯基)、六至九個碳原子(C6 -C9 烯基)、二至十五個碳原子(C2 -C15 烯基)、二至十二個碳原子(C2 -C12 烯基)、二至八個碳原子(C2 -C8 烯基)或二至六個碳原子(C2 -C6 烯基)且其藉由單鍵連接至分子其餘部分。烯基之實例包括但不限於乙烯基、丙-1-烯基、丁-1-烯基、戊-1-烯基、戊-1,4-二烯基及類似基團。除非另有說明，否則烯基視情況經取代。
如本文所使用且除非另有說明，否則術語「炔基」係指僅由碳及氫原子組成的直鏈或支鏈烴鏈基團，其含有一或多個碳-碳參鍵。在一個實施例中，炔基具有例如二至二十四個碳原子(C2 -C24 炔基)、四至二十個碳原子(C4 -C20 炔基)、六至十六個碳原子(C6 -C16 炔基)、六至九個碳原子(C6 -C9 炔基)、二至十五個碳原子(C2 -C15 炔基)、二至十二個碳原子(C2 -C12 炔基)、二至八個碳原子(C2 -C8 炔基)或二至六個碳原子(C2 -C6 炔基)且其藉由單鍵連接至分子其餘部分。炔基之實例包括但不限於乙炔基、丙炔基、丁炔基、戊炔基及類似基團。除非另有說明，否則炔基視情況經取代。
如本文所使用且除非另有說明，否則術語「伸烷基」或「伸烷基鏈」係指將分子其餘部分連接至基團之直鏈或支鏈二價烴鏈，其僅由碳及氫組成且為飽和的。在一個實施例中，伸烷基具有例如一至二十四個碳原子(C1 -C24 伸烷基)、一至十五個碳原子(C1 -C15 伸烷基)、一至十二個碳原子(C1 -C12 伸烷基)、一至八個碳原子(C1 -C8 伸烷基)、一至六個碳原子(C1 -C6 伸烷基)、二至四個碳原子(C2 -C4 伸烷基)、一至二個碳原子(C1 -C2 伸烷基)。伸烷基之實例包括但不限於亞甲基、伸乙基、伸丙基、伸正丁基及類似基團。伸烷基鏈經由單鍵連接至分子其餘部分，並經由單鍵連接至基團。伸烷基鏈與分子其餘部分及與基團之連接點可經由該鏈內的一個碳或任何兩個碳進行。除非另有說明，否則伸烷基鏈視情況經取代。
如本文所使用且除非另有說明，否則術語「伸烯基」係指將分子其餘部分連接至基團之直鏈或支鏈二價烴鏈，其僅由碳及氫組成且含有一或多個碳-碳雙鍵。在一個實施例中，伸烯基具有例如二至二十四個碳原子(C2 -C24 伸烯基)、二至十五個碳原子(C2 -C15 伸烯基)、二至十二個碳原子(C2 -C12 伸烯基)、二至八個碳原子(C2 -C8 伸烯基)、二至六個碳原子(C2 -C6 伸烯基)或二至四個碳原子(C2 -C4 伸烯基)。伸烯基之實例包括但不限於伸乙烯基、伸丙烯基、伸正丁烯基及類似基團。伸烯基經由單鍵或雙鍵連接至分子其餘部分，並經由單鍵或雙鍵連接至基團。伸烯基與分子其餘部分及與基團之連接點可經由該鏈內之一個碳或任何兩個碳進行。除非另有說明，否則伸烯基視情況經取代。
如本文所使用且除非另有說明，否則術語「環烷基」係指僅由碳及氫原子組成的非芳族飽和單環或多環烴基。環烷基可包括稠合或橋連環系統。在一個實施例中，環烷基具有例如3至15個環碳原子(C3 -C15 環烷基)、3至10個環碳原子(C3 -C10 環烷基)或3至8個環碳原子(C3 -C8 環烷基)。環烷基藉由單鍵連接至分子其餘部分。單環環烷基之實例包括但不限於環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基及環辛基。多環環烷基之實例包括但不限於金剛烷基、降莰基、十氫萘基、7,7-二甲基-雙環[2.2.1]庚基及類似基團。除非另有說明，否則環烷基視情況經取代。
如本文所使用且除非另有說明，否則術語「伸環烷基」係二價環烷基。除非另有說明，否則伸環烷基視情況經取代。
如本文所使用且除非另有說明，否則術語「環烯基」係指僅由碳及氫原子組成且包括一或多個碳-碳雙鍵之非芳族單環或多環烴基。環烯基可包括稠合或橋連環系統。在一個實施例中，環烯基具有例如3至15個環碳原子(C3 -C15 環烯基)、3至10個環碳原子(C3 -C10 環烯基)或3至8個環碳原子(C3 -C8 環烯基)。環烯基藉由單鍵連接至分子其餘部分。單環環烯基之實例包括但不限於環丙烯基、環丁烯基、環戊烯基、環己烯基、環庚烯基、環辛烯基及類似基團。除非另有說明，否則環烯基視情況經取代。
如本文所使用且除非另有說明，否則術語「伸環烯基」係二價環烯基。除非另有說明，否則伸環烯基視情況經取代。
如本文所使用且除非另有說明，否則術語「雜環基」係指含有一或多個(例如一個、一個或兩個、一個至三個、或一個至四個)獨立地選自氮、氧、磷及硫之雜原子的非芳族基團單環或多環部分。該雜環基可在任何雜原子或碳原子處連接至主結構。雜環基可為單環、雙環、三環、四環或其他多環系統，其中該等多環系統可為稠合、橋連或螺環系統。雜環基多環系統可在一或多個環中包括一或多個雜原子。雜環基可為飽和或部分不飽和的。飽和雜環烷基可稱為「雜環烷基」。部分不飽和之雜環烷基在雜環基含有至少一個雙鍵時可稱為「雜環烯基」，或在雜環基含有至少一個參鍵時稱為「雜環炔基」。在一個實施例中，雜環基具有例如3至18個環原子(3至18員雜環基)、4至18個環原子(4至18員雜環基)、5至18個環原子(3至18員雜環基)、4至8個環原子(4至8員雜環基)或5至8個環原子(5至8員雜環基)。當在本文中出現時，數字範圍，諸如「3至18」係指該給定範圍中之每個整數；例如「3至18個環原子」意思指雜環基可由3個環原子、4個環原子、5個環原子、6個環原子、7個環原子、8個環原子、9個環原子、10個環原子等，至多且包括18個環原子。雜環基之實例包括但不限於咪唑基、咪唑啶基、㗁唑基、㗁唑啶基、噻唑基、噻唑啶基、吡唑啶基、吡唑基、異㗁唑啶基、異㗁唑基、異噻唑啶基、異噻唑基、𠰌啉基、吡咯基、吡咯啶基、呋喃基、四氫呋喃基、噻吩基、吡啶基、哌啶基、喹啉基及異喹啉基。除非另有說明，否則雜環基視情況經取代。
如本文所使用且除非另有說明，否則術語「伸雜環基」係二價雜環基。除非另有說明，否則伸雜環基視情況經取代。
如本文所使用且除非另有說明，否則術語「芳基」係指含有至少一個芳族烴環的單環芳族基團及/或多環單價芳族基團。在某些實施例中，芳基具有6至18個環碳原子(C6 -C18 芳基)、6至14個環碳原子(C6 -C14 芳基)或6至10個環碳原子(C6 -C10 芳基)。芳基之實例包括但不限於苯基、萘基、茀基、薁基、蒽基、菲基、芘基、聯苯基及聯三苯基。術語「芳基」亦指雙環、三環或其他多環烴環，其中至少一個環係芳族環，且其他環可為飽和、部分不飽和或芳族環，例如二氫萘基、茚基、二氫茚基或四氫萘基(tetrahydronaphthyl/tetralinyl)。除非另有說明，否則芳基視情況經取代。
如本文所使用且除非另有說明，否則術語「伸芳基」係二價芳基。除非另有說明，否則伸芳基視情況經取代。
如本文所使用且除非另有說明，否則術語「雜芳基」係指含有至少一個芳族環之單環芳族基團及/或多環芳族基團，其中至少一個芳族環含有一或多個(例如一個、一個或兩個、一個或三個、或一個或四個)獨立地選自O，S及N之雜原子。雜芳基可在任何雜原子或碳原子處連接至主結構。在某些實施例中，雜芳基具有5至20個、5至15個或5至10個環原子。術語「雜芳基」亦指雙環、三環或其他多環，其中至少一個環係芳族環，且其他環可為飽和、部分不飽和或芳族環，其中至少一個芳族環含有一或多個獨立地選自O、S及N之雜原子。單環雜芳基之實例包括但不限於吡咯基、吡唑基、吡唑啉基、咪唑基、㗁唑基、異㗁唑基、噻唑基、噻二唑基、異噻唑基、呋喃基、噻吩基、㗁二唑基、吡啶基、吡𠯤基、嘧啶基、嗒𠯤基及三𠯤基。雙環雜芳基之實例包括但不限於吲哚基、苯并噻唑基、苯并㗁唑基、苯并噻吩基、喹啉基、四氫異喹啉基、異喹啉基、苯并咪唑基、苯并哌喃基、吲哚𠯤基、苯并呋喃基、異苯并呋喃基、色酮基、香豆素基、㖕啉基、喹㗁啉基、吲唑基、嘌呤基、吡咯并吡啶基、呋喃并吡啶基、噻吩并吡啶基、二氫異吲哚基及四氫喹啉基。三環雜芳基之實例包括但不限於咔唑基、苯并吲哚基、啡啉基、吖啶基、啡啶基及二苯并哌喃基。除非另有說明，否則雜芳基視情況經取代。
如本文所使用且除非另有說明，否則術語「伸雜芳基」係二價雜芳基。除非另有說明，否則伸雜芳基視情況經取代。
當本文所描述之基團被稱為「經取代」時，其可經一或多個任何適當之取代基取代。取代基之說明性實例包括但不限於在本文所提供之示例性化合物及實施例中發現的取代基，以及：鹵素原子，諸如F、Cl、Br或I；氰基；側氧基(=O)；羥基(-OH)；烷基；烯基；炔基；環烷基；芳基；-(C=O)OR’；-O(C=O)R’；-C(=O)R’；-OR’；-S(O)x R’；-S-SR’；-C(=O)SR’；-SC(=O)R’；-NR’R’；-NR’C(=O)R’；-C(=O)NR’R’；-NR’C(=O)NR’R’；-OC(=O)NR’R’；-NR’C(=O)OR’；-NR’S(O)x NR’R’；-NR’S(O)x R'；及-S(O)x NR’R’，其中：R’在每次出現時獨立地為H、C1 -C15 烷基或環烷基，且x係0、1或2。在一些實施例中，取代基係C1 -C12 烷基。在其他實施例中，取代基係環烷基。在其他實施例中，取代基係鹵基，諸如氟基。在其他實施例中，取代基係側氧基。在其他實施例中，取代基係羥基。在其他實施例中，取代基係烷氧基(-OR’)。在其他實施例中，取代基係羧基。在其他實施例中，取代基係胺基(-NR’R’)。
如本文所使用且除非另有說明，否則術語「視情況選用之」或「視情況」(例如視情況經取代)係指隨後描述之事件或情況可能會發生或可能不會發生，且該描述包括該事件或情況發生之情形及其不發生之情形。舉例而言，「視情況經取代之烷基」係指烷基可經取代或可不經取代，且該描述包括經取代之烷基及不具有取代之烷基。
如本文所使用且除非另有說明，否則術語生物活性化合物之「前藥」係指可在生理條件下或藉由溶劑分解而轉化為生物活性化合物的化合物。在一個實施例中，術語「前藥」係指醫藥學上可接受的生物活性化合物之代謝前驅物。當將前藥投與有需要之個體時，該前藥可能為無活性的，但在活體內轉化為生物活性化合物。前藥典型地在活體內迅速轉型以產生母體生物活性化合物，例如藉由在血液中水解而轉型。前藥化合物在哺乳動物生物體中通常提供溶解性、組織相容性或延遲釋放之優點(參見Bundgard, H., Design of Prodrugs (1985), 第7-9頁, 第21-24頁 (Elsevier, Amsterdam))。關於前藥之論述提供於Higuchi, T.等人, A.C.S. Symposium Series, 第14卷；及Bioreversible Carriers in Drug Design, Edward B. Roche編輯, American Pharmaceutical Association and Pergamon Press, 1987中。
在一個實施例中，術語「前藥」亦意圖包括任何共價鍵接之載劑，當將此類前藥投與哺乳動物個體時，其在活體內釋放活性化合物。化合物之前藥可藉由修飾化合物中存在之官能基來製備，其方式係使得該等修飾可在常規操作中或在活體內裂解而得到母體化合物。前藥包括羥基、胺基或巰基鍵接至任何基團之化合物，當將化合物之前藥投與哺乳動物個體時，該基團裂解而分別形成游離羥基、游離胺基或游離巰基。
前藥之實例包括但不限於本文所提供化合物中之醇的乙酸酯、甲酸酯及苯甲酸酯衍生物或胺官能基之醯胺衍生物。
如本文所使用且除非另有說明，否則術語「醫藥學上可接受之鹽」包括酸及鹼加成鹽。
醫藥學上可接受之酸加成鹽的實例包括但不限於鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸及類似酸；以及有機酸，諸如但不限於乙酸、2,2-二氯乙酸、己二酸、褐藻酸、抗壞血酸、天冬胺酸、苯磺酸、苯甲酸、4-乙醯胺基苯甲酸、樟腦酸、樟腦-10-磺酸、癸酸、己酸、辛酸、碳酸、肉桂酸、檸檬酸、環拉酸(cyclamic acid)、十二烷基磺酸、乙烷-1,2-二磺酸、乙烷磺酸、2-羥基乙烷磺酸、甲酸、富馬酸、半乳糖二酸、龍膽酸、葡庚糖酸、葡糖酸、葡醣醛酸，麩胺酸、戊二酸、2-側氧基戊二酸、甘油磷酸、乙醇酸、馬尿酸、異丁酸、乳酸、乳糖酸、月桂酸、馬來酸、蘋果酸、丙二酸、扁桃酸、甲烷磺酸、黏液酸、萘-1,5-二磺酸、萘-2-磺酸、1-羥基-2-萘甲酸、菸鹼酸、油酸、乳清酸、草酸、棕櫚酸、帕莫酸(pamoic acid)、丙酸、焦麩胺酸、丙酮酸、水楊酸、4-胺基水楊酸、癸二酸、硬脂酸、琥珀酸、酒石酸、硫氰酸、對甲苯磺酸、三氟乙酸、十一碳烯酸及類似酸。
醫藥學上可接受之鹼加成鹽的實例包括但不限於藉由將無機鹼或有機鹼添加至游離酸化合物而製備的鹽。衍生自無機鹼之鹽包括但不限於鈉、鉀、鋰、銨、鈣、鎂、鐵、鋅、銅、錳、鋁鹽及類似鹽。在一個實施例中，無機鹽係銨鹽、鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽及鎂鹽。衍生自有機鹼之鹽包括但不限於以下之鹽：一級胺、二級胺及三級胺；經取代胺，包括天然存在之經取代胺；環胺及鹼性離子交換樹脂，諸如氨、異丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、二乙醇胺、乙醇胺、丹醇(deanol)、2-二甲基胺基乙醇、2-二乙基胺基乙醇、二環己胺、離胺酸、精胺酸、組胺酸、咖啡因(caffeine)、普魯卡因(procaine)、哈胺(hydrabamine)、膽鹼、甜菜鹼、苯乙芐胺(benethamine)、芐星(benzathine)、乙二胺、葡糖胺、甲基葡糖胺、可可鹼(theobromine)、三乙醇胺、胺丁三醇(tromethamine)、嘌呤、哌𠯤、哌啶、N-乙基哌啶、聚胺樹脂及類似物。在一個實施例中，有機鹼係異丙胺、二乙胺、乙醇胺、三甲胺、二環己胺、膽鹼及咖啡因。
本文所提供之化合物可含有一或多個不對稱中心且因此可產生鏡像異構物、非鏡像異構物及其他立體異構形式，該等形式可根據絕對立體化學定義為(R)-或(S)-或對於胺基酸可定義為( D)-或(L)-。除非另有說明，否則本文所提供之化合物意圖包括所有此等可能之異構物，以及其外消旋及光學純形式。光學活性(+)與(-)、(R)-與(S)-或(D)-與(L)-異構物可使用對掌性合成子或對掌性試劑製備，或使用習知技術，例如層析法及分步結晶法解析。用於製備/分離個別鏡像異構物之習知技術包括自適合的光學純前驅物對掌性合成或使用例如對掌性高壓液相層析法(HPLC)解析外消旋體(或鹽或衍生物之外消旋體)。當本文所述中化合物含有烯屬雙鍵或其他幾何不對稱中心時，且除非另有說明，否則該等化合物意欲包括E及Z幾何異構物。同樣，亦意欲包括所有互變異構形式。
如本文所使用且除非另有說明，否則術語「異構物」係指具有相同分子式之不同化合物。「立體異構物」係僅原子在空間中之排列方式不同的異構物。「阻轉異構物」係由繞單鍵之受阻旋轉得到的立體異構物。「鏡像異構物」係一對互為不可重疊之鏡像的立體異構物。一對鏡像異構物的任何比例之混合物可稱為「外消旋」混合物。「非鏡像異構物」係具有至少兩個不對稱原子但不互為鏡像的立體異構物。
「立體異構物」亦可包括E及Z異構物或其混合物，以及順式及反式異構物或其混合物。在某些實施例中，本文所述之化合物係分離為E或Z異構物。在其他實施例中，本文所述之化合物係E及Z異構物之混合物。
「互變異構物」係指彼此平衡的化合物之異構形式。異構形式之濃度將取決於發現該化合物之環境，且可取決於例如該化合物係固體抑或在有機或水溶液中而不同。
亦應注意，本文所述之化合物可在一或多個原子處含有非天然比例之原子同位素。舉例而言，化合物可用放射性同位素進行放射性標記，諸如氚(3 H)、碘-125(125 I)、硫-35(35 S)或碳-14(14 C)，或者可為同位素富集的，諸如氘(2 H)、碳-13 (13 C)或氮-15 (15 N)。如本文所使用，「同位素」係同位素富集之化合物。術語「同位素富集」係指原子之同位素組成不為該原子之天然同位素組成。「同位素富集」亦可指化合物含有的至少一個原子之同位素組成不同於該原子之天然同位素組成。術語「同位素組成」係指給定原子存在之每種同位素的量。經放射性標記且同位素富集之化合物可用作治療劑，例如癌症治療劑；研究試劑，例如結合分析試劑；及診斷劑，例如活體內成像劑。本文所述化合物之所有同位素變異體，無論是否具有放射性，皆意欲涵蓋在本文所提供之實施例的範圍內。在一些實施例中，提供本文所述化合物之同位素，例如同位素係氘、碳-13及/或氮-15富集的。如本文所使用，「氘代」係指化合物中之至少一個氫(H)已經氘(以D或2 H表示)置換，亦即，該化合物在至少一個位置處富含氘。
應注意，若所描繪之結構與該結構之名稱之間存在差異，則應以所描繪之結構為準。
如本文所使用且除非另有說明，否則術語「醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑」包括但不限於被美國食品與藥品管理局批准可接受用於人類或家畜的任何佐劑、載劑、賦形劑、助流劑、甜味劑、稀釋劑、防腐劑、染料/著色劑、風味增強劑、表面活性劑、潤濕劑、分散劑、助懸劑、穩定劑、等滲劑、溶劑或乳化劑。
術語「組成物」意欲涵蓋含有視情況之指定量的指定成分(例如本文所提供之mRNA分子)的產品。
如本文可互換使用的，術語「聚核苷酸」或「核酸」係指任何長度的核苷酸聚合物，且包括例如DNA及RNA。核苷酸可為脫氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、經修飾之核苷酸或鹼基及/或其類似物，或可藉由DNA或RNA聚合酶或藉由合成反應併入聚合物中的任何受質。聚核苷酸可包含經修飾之核苷酸，諸如甲基化核苷酸及其類似物。核酸可為單股或雙股形式。如本文所使用且除非另有說明，否則「核酸」亦包括核酸模擬物，諸如鎖核酸(LNA)、肽核酸(PNA)及𠰌啉核酸(morpholinos)。如本文所使用，「寡核苷酸」係指短的合成聚核苷酸，其長度一般但未必少於約200個核苷酸。術語「寡核苷酸」與「聚核苷酸」並非互相排斥的。以上關於聚核苷酸之描述同樣且完全適用於寡核苷酸。除非另有說明，否則本文所揭示之任何單股聚核苷酸序列的左手端為5'端；雙股聚核苷酸序列之左手方向稱為5'方向。新生RNA轉錄物之5'至3'添加方向稱為轉錄方向；DNA股上具有與RNA轉錄物相同之序列且相對於RNA轉錄物之5'端而位於5'端的序列區域稱為「上游序列」；DNA股上具有與RNA轉錄物相同之序列且相對於RNA轉錄物3'端而位於3'端的序列區域稱為「下游序列」。
「分離之核酸」係指與天然地伴隨天然序列之其他基因體DNA序列以及蛋白質或複合物(諸如核糖體及聚合酶)實質上分離的核酸，例如RNA、DNA或混合核酸。「分離」之核酸分子係與存在於核酸分子之天然來源中的其他核酸分子分離的核酸分子。此外，當藉由重組技術製造時，「分離」之核酸分子，諸如mRNA分子，可實質上不含其他細胞材料或培養基，或者當化學合成時，其可實質上不含化學前驅物或其他化學品。在一個特定實施例中，編碼本文所述抗原之一或多個核酸分子係分離或純化的。該術語包括已自其天然存在之環境移除之核酸序列，且包括重組或選殖之DNA或RNA分離物以及化學合成之類似物或由異源系統生物合成之類似物。實質上純的分子可包括該分子之經分離形式。
術語「編碼核酸」或其語法等效物當用於核酸分子時包括(a)處於天然狀態或藉由熟習此項技術者熟知之方法操作時可轉錄產生mRNA且接著轉譯成肽及/或多肽的核酸分子；及(b) mRNA分子本身。反義股係此類核酸分子之補體，且可由其推斷出編碼序列。術語「編碼區」係指編碼核酸序列中轉譯成肽或多肽之部分。術語「非轉譯區」或「UTR」係指編碼核酸中不轉譯成肽或多肽之部分。取決於UTR相對於核酸分子之編碼區的取向，UTR若位於編碼區5'端，則稱為5'-UTR，且UTR若位於編碼區3'端，則稱為3'-UTR。
如本文所使用，術語「mRNA」係指包含一或多個開放閱讀框(ORF)之信使RNA分子，其可經細胞或生物體轉譯，只要該mRNA產生一或多種肽或蛋白質產物即可。含有一或多個ORF之區域稱為mRNA分子之編碼區。在某些實施例中，mRNA分子進一步包含一或多個非轉譯區(UTR)。
在某些實施例中，mRNA係僅包含一個ORF的單順反子mRNA。在某些實施例中，單順反子mRNA編碼包含選定抗原(例如致病性抗原或腫瘤相關抗原)之至少一個抗原決定基的肽或蛋白質。在其他實施例中，mRNA係包含兩個或更多個ORF之多順反子mRNA。在某些實施例中，多順反子mRNA編碼彼此相同或不同的兩種或更多種肽或蛋白質。在某些實施例中，由多順反子mRNA編碼之每種肽或蛋白質包含選定抗原之至少一個抗原決定基。在某些實施例中，由多順反子mRNA編碼的不同肽或蛋白質各自包含不同抗原之至少一個抗原決定基。在本文所述實施例中之任一個中，該至少一個抗原決定基可為抗原之至少2個、至少3個、至少4個、至少5個、至少6個、至少7個、至少8個、至少9個或至少10個抗原決定基。
術語「核鹼基」涵蓋嘌呤及嘧啶，包括天然化合物腺嘌呤、胸腺嘧啶、鳥嘌呤、胞嘧啶、尿嘧啶、肌苷及其天然或合成類似物或衍生物。
如本文所使用，術語「功能性核苷酸類似物」係指經典核苷酸A、G、C、U或T之經修飾型式，該型式(a)保留相應經典核苷酸之鹼基配對特性，且(b)含有至少一種對相應天然核苷酸之(i)核鹼基、(ii)糖基、(iii)磷酸酯基或(iv) (i)至(iii)之任何組合的化學修飾。如本文所使用，鹼基配對不僅涵蓋經典沃森-克里克(Watson-Crick)腺嘌呤-胸腺嘧啶、腺嘌呤-尿嘧啶或鳥嘌呤-胞嘧啶鹼基對，而且亦涵蓋在經典核苷酸與功能性核苷酸類似物之間或在一對功能性核苷酸類似物之間形成的鹼基對，其中氫鍵供體與氫鍵受體之佈置允許在經修飾之核鹼基與經典核鹼基之間或在兩個互補的經修飾核鹼基結構之間形成氫鍵。舉例而言，鳥苷(G)之功能性類似物保留與胞嘧啶(C)或胞嘧啶之功能性類似物鹼基配對的能力。此類非經典鹼基配對的一個實例係經修飾核苷酸肌苷與腺嘌呤、胞嘧啶或尿嘧啶之間的鹼基配對。如本文所述，功能性核苷酸類似物可為天然存在或非天然存在的。因此，含有功能性核苷酸類似物之核酸分子可具有至少一個經修飾之核鹼基、糖基及/或核苷間鍵聯。本文提供對核酸分子之核鹼基、糖基或核苷間鍵聯之示例性化學修飾。
如本文所使用，術語「轉譯強化子元件」、「TEE」及「轉譯強化子」係指核酸分子中用於促進核酸之編碼序列轉譯成蛋白質或肽產物，諸如經由戴帽依賴性或不依賴於戴帽之轉譯而轉譯成蛋白質或肽產物的區域。TEE典型地位於核酸分子(例如mRNA)之UTR區，並增強位於上游或下游之編碼序列的轉譯水準。舉例而言，核酸分子之5'-UTR中的TEE可位於核酸分子之啟動子與起始密碼子之間。各種TEE序列係此項技術中已知的(Wellensiek等人, Genome-wide profiling of human cap-independent translation-enhancing elements,Nature Methods , 2013年8月; 10(8): 747–750；Chappell等人, PNAS, 2004年6月29日, 101 (26) 9590-9594)。已知一些TEE在多個物種中係保守的(Páneket等人,Nucleic Acids Research , 第41卷, 第16期, 2013年9月1日, 第7625–7634頁)。
如本文所使用，術語「莖-環序列」係指具有至少兩個區域之單股聚核苷酸序列，當以相反方向閱讀時，該兩個區域彼此互補或實質上互補，且因此能夠彼此鹼基配對形成至少一個雙螺旋及一個未配對之環。由此得到的結構稱為莖-環結構、髮夾或髮夾環，此係在許多RNA分子中發現之二級結構。
如本文所使用，術語「肽」係指含有二至五十(2-50)個經一或多個共價肽鍵連接之胺基酸殘基的聚合物。該等術語適用於天然存在之胺基酸聚合物以及一或多個胺基酸殘基係非天然存在之胺基酸(例如胺基酸類似物或非天然胺基酸)之胺基酸聚合物。
術語「多肽」與「蛋白質」在本文中可互換使用，指具有超過五十(50)個由共價肽鍵連接之胺基酸殘基的聚合物。亦即，針對多肽之描述同樣適用於針對蛋白質之描述，且反之亦然。該等術語適用於天然存在之胺基酸聚合物以及一或多個胺基酸殘基係非天然存在之胺基酸(例如胺基酸類似物)之胺基酸聚合物。如本文所使用，該等術語涵蓋任何長度之胺基酸鏈，包括全長蛋白質(例如抗原)。
術語「抗原」係指能夠被個體之免疫系統(包括適應性免疫系統)識別的物質，且在個體與該抗原接觸之後能夠觸發免疫反應(包括抗原特異性免疫反應)。在某些實施例中，抗原係與患病細胞，諸如與感染病原體之細胞或贅生性細胞相關的蛋白質(例如腫瘤相關抗原(TAA))。
在肽或多肽之情形中，如本文所使用，術語「片段」係指包含少於全長之胺基酸序列的肽或多肽。此類片段可例如來自於胺基末端之截短、羧基末端之截短及/或胺基酸序列中殘基之內部缺失。片段可例如由替代性RNA剪接或由活體內蛋白酶活性產生。在某些實施例中，片段係指包括含多肽之胺基酸序列的至少5個連續胺基酸殘基、至少10個連續胺基酸殘基、至少15個連續胺基酸殘基、至少20個連續胺基酸殘基、至少25個連續胺基酸殘基、至少30個連續胺基酸殘基、至少40個連續胺基酸殘基、至少50個連續胺基酸殘基、至少60個連續胺基酸殘基、至少70個連續胺基酸殘基、至少80個連續胺基酸殘基、至少90個連續胺基酸殘基、至少連續100個胺基酸殘基、至少125個連續胺基酸殘基、至少150個連續胺基酸殘基、至少175個連續胺基酸殘基、至少200個連續胺基酸殘基、至少250個、至少300個、至少350個、至少400個、至少450個、至少500個、至少550個、至少600個、至少650個、至少700個、至少750個、至少800個、至少850個、至少900個或至少950個連續胺基酸殘基之胺基酸序列的多肽。在一個特定實施例中，多肽之片段保留該多肽之至少1種、至少2種、至少3種或更多種功能。
「抗原決定基」係抗原分子表面上與單個抗體分子結合之位點，諸如抗原表面上能夠結合至抗體之一或多個抗原結合區的局部區域，且其在動物體內，諸如在哺乳動物體內(例如人體內)具有抗原或免疫原性活性，能夠引起免疫反應。具有免疫原性活性之抗原決定基係在動物體內引起抗體反應的多肽之一部分。具有抗原活性之抗原決定基係藉由此項技術中熟知之任何方法，包括例如藉由免疫分析確定的抗體所結合之多肽之一部分。抗原性抗原決定基未必具有免疫原性。抗原決定基通常由分子之化學活性表面基團，諸如胺基酸或糖側鏈組成，並具有特定三維結構特徵以及特定的電荷特徵。抗體抗原決定基可為線性抗原決定基或構象抗原決定基。線性抗原決定基係由蛋白質中之連續胺基酸序列形成的。構象抗原決定基係由在蛋白質序列中不連續但在蛋白質摺疊成其三維結構時結合在一起之胺基酸形成。當蛋白質之三維結構呈改變之構象時，諸如在另一種蛋白質或配體活化或結合之後，形成誘導性抗原決定基。在某些實施例中，抗原決定基係多肽之三維表面特徵。在其他實施例中，抗原決定基係多肽之線性特徵。一般而言，抗原具有若干或許多不同的抗原決定基，且可與許多不同的抗體反應。
如本文所使用，術語「基因疫苗」係指包含至少一個核酸分子之治療性或預防性組成物，該至少一個核酸分子編碼與目標疾病(例如感染性疾病或贅生性疾病)相關之抗原。向個體投與疫苗(「疫苗接種」)允許產生編碼之肽或蛋白質，由此在個體體內引起針對目標疾病之免疫反應。在某些實施例中，免疫反應包含適應性免疫反應，諸如產生針對編碼之抗原的抗體，及/或能夠特異性消除表現該抗原之患病細胞之免疫細胞的活化及增殖。在某些實施例中，免疫反應進一步包含先天免疫反應。根據本揭示案，疫苗可在目標疾病之臨床症狀發作之前或之後投與個體。在一些實施例中，對健康或無症狀個體進行疫苗接種使經疫苗接種之個體對目標疾病之發展具有免疫性或不太敏感。在一些實施例中，對顯示疾病症狀之個體進行疫苗接種將改善經疫苗接種之個體的疾病狀況或治療該疾病。
術語「先天免疫反應」及「先天免疫」係此項技術中公認的，且係指身體之免疫系統在識別出病原體相關分子模式時啟動的非特異性防禦機制，其涉及不同形式之細胞活動，包括經由各種路徑的細胞介素產生及細胞死亡。如本文所使用，先天免疫反應包括但不限於炎症細胞介素之產生(例如I型干擾素或IL-10產生)增加；NFκB路徑之活化；免疫細胞之增殖、成熟、分化及/或存活增加，以及在某些情況下細胞凋亡之誘導。先天免疫之活化可使用此項技術中已知之方法偵測，諸如量測(NF)-κB活化情況。
術語「適應性免疫反應」及「適應性免疫」係此項技術中公認的，且係指身體之免疫系統在識別出特定抗原時啟動的抗原特異性防禦機制，包括體液反應及細胞介導之反應。如本文所使用，適應性免疫反應包括由疫苗組成物，諸如本文所述之遺傳組成物觸發及/或增強的細胞反應。在一些實施例中，疫苗組成物包含作為抗原特異性適應性免疫反應之目標的抗原。在其他實施例中，疫苗組成物在投與後允許在經免疫接種之個體中產生抗原，該抗原係抗原特異性適應性免疫反應之目標。適應性免疫反應之活化可使用此項技術中已知之方法偵測，諸如量測抗原特異性抗體之產生或抗原特異性細胞介導之細胞毒性水準。
術語「抗體」意欲包括在免疫球蛋白類多肽範圍內的B細胞之多肽產物，其能夠與特定分子抗原結合並由兩對相同的多肽鏈構成，其中每一對具有一條重鏈(約50-70 kDa)及一條輕鏈(約25 kDa)，每條鏈之每個胺基末端部分包括含約100至約130個或更多個胺基酸之可變區，且每條鏈之每個羧基末端部分包括一個恆定區。參見例如Antibody Engineering (Borrebaeck編, 第2版, 1995)；及Kuby,Immunology (第3版, 1997)。在特定實施例中，特定分子抗原可由本文所提供之抗體結合，包括多肽、其片段或抗原決定基。抗體亦包括但不限於合成抗體、重組產生之抗體、駱駝化抗體、內抗體、抗獨特型(抗Id)抗體及以上任一種之功能片段，功能片段係指抗體重鏈或輕鏈多肽的保留作為該片段來源之抗體之部分或全部結合活性的一部分。功能片段之非限制性實例包括單鏈Fv (scFv) (例如包括單特異性、雙特異性等)、Fab片段、F(ab')片段、F(ab)2 片段、F(ab')2 片段、二硫鍵連接之Fv (dsFv)、Fd片段、Fv片段、雙功能抗體、三功能抗體、四功能抗體及微型抗體。具體言之，本文所提供之抗體包括免疫球蛋白分子及免疫球蛋白分子之免疫活性部分，例如抗原結合結構域或含有抗原結合位點之分子(例如抗體之一或多個CDR)。此類抗體片段可見於例如Harlow及Lane,Antibodies: A Laboratory Manual (1989)；Mol. Biology and Biotechnology: A Comprehensive Desk Reference (Myers編, 1995)；Huston等人 , 1993, Cell Biophysics 22:189-224；Plückthun及Skerra, 1989, Meth. Enzymol. 178:497-515；及Day,Advanced Immunochemistry (第2版, 1990)。本文所提供之抗體可為免疫球蛋白分子之任何類別(例如IgG、IgE、IgM、IgD及IgA)或任何亞類(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2)。
術語「投與(administer/administration)」係指將存在於體外之物質(例如本文所述之脂質奈米粒子組成物)注射或另外以物理方式遞送至患者體內的操作，諸如經黏膜、真皮內、靜脈內、肌肉內遞送及/或本文所描述或此項技術中已知的任何其他物理遞送方法遞送。當治療疾病、病症、疾患或其症狀時，典型地在該疾病、病症、疾患或其症狀發作之後進行該物質之投與。當預防疾病、病症、疾患或其症狀時，典型地在該疾病、病症、疾患或其症狀發作之前進行該物質之投與。
「長期」投與係與急性模式相對，係指以連續模式投與一或多劑(例如持續一段時間，諸如數天、數週、數月或數年)，由此在一段較長時間內維持初始治療效果(活性)。「間歇性」投與係並非連續而無中斷地進行的治療，其本質上係週期性的。
如本文所使用，術語「靶向遞送」或動詞形式「靶向」係指相較於遞送至任何其他器官、組織、細胞或細胞內隔室(稱為非目標位置)，促進所遞送之劑(諸如本文所述之脂質奈米粒子組成物中的治療有效負載分子)到達特定器官、組織、細胞及/或細胞內隔室(稱為目標位置)的過程。靶向遞送可使用此項技術中已知之方法偵測，例如藉由將所遞送之劑在目標細胞群體中之濃度與在全身投與後該所遞送之劑在非目標細胞群體處之濃度相比較來偵測。在某些實施例中，靶向遞送使得在目標位置處之濃度比非目標位置之濃度高至少2倍。
「有效量」一般係足以降低症狀之嚴重程度及/或頻率；消除症狀及/或潛在原因；防止症狀及/或其潛在原因之發生；及/或改善或補救由疾病、病症或疾患，包括例如由感染及贅瘤形成引起或與之相關之損害的量。在一些實施例中，有效量係治療有效量或預防有效量。
如本文所使用，術語「治療有效量」係指足以減少及/或改善給定疾病、病症或疾患，及/或其相關症狀(例如感染性疾病，諸如由病毒感染引起之感染性疾病，或贅生性疾病，諸如癌症)之嚴重程度及/或持續時間的劑(例如疫苗組成物)的量。本揭示案之物質/分子/劑(例如本文所述之脂質奈米粒子組成物)的「治療有效量」可根據諸多因素而變化，諸如個體之疾病狀態、年齡、性別及體重，以及該物質/分子/劑在個體體內引起所希望反應的能力。治療有效量包含該物質/分子/劑之治療有益作用勝過其任何有毒或有害作用的量。在某些實施例中，術語「治療有效量」係指有效「治療」個體或哺乳動物之疾病、病症或疾患的如本文所述之脂質奈米粒子組成物或其中所含治療劑或預防劑(例如治療性mRNA)的量。
「預防有效量」係當投與個體時將具有預期預防作用，例如預防疾病、病症、疾患或相關症狀(例如感染性疾病，諸如由病毒感染引起之感染性疾病，或贅生性疾病，諸如癌症)、延遲其發作(或復發)或降低其發作(或復發)可能性的醫藥組成物之量。典型地但非必須的，由於預防劑量係在疾病、病症或疾患之前或其早期階段用於個體，故預防有效量可能小於治療有效量。完全的治療或預防作用未必藉由投與一次劑量而發生，而可能僅在投與一系列劑量後才發生。因此，治療或預防有效量可分一或多次投與來投與。
術語「預防(prevent/preventing/prevention)」係指降低疾病、病症、疾患或相關症狀(例如感染性疾病，諸如由病毒感染引起之感染性疾病，或贅生性疾病，諸如癌症)發作(或復發)的可能性。
術語「管理(manage/managing/management)」係指個體自療法(例如預防劑或治療劑)獲得的有益作用，其不會引起疾病之治癒。在某些實施例中，向個體投與一或多種療法(例如預防劑或治療劑，諸如本文所述之脂質奈米粒子組成物)以「管理」感染性或贅生性疾病、其一或多種症狀，由此預防疾病之進展或惡化。
術語「預防劑」係指可以完全或部分地抑制個體之疾病及/或其相關症狀之發展、復發、發作或擴散的任何劑。
術語「治療劑」係指可用於治療、預防或減輕疾病、病症或疾患，包括用於治療、預防或減輕疾病、病症或疾患及/或其相關症狀之一或多種症狀的任何劑。
術語「療法」係指可用於預防、管理、治療及/或改善疾病、病症或疾患的任何方案、方法及/或劑。在某些實施例中，術語「療法」係指熟習此項技術者，諸如醫務人員已知可用於預防、管理、治療及/或改善疾病、病症或疾患之生物療法、支持療法及/或其他療法。
如本文所使用，「預防有效血清力價」係個體(例如人類)體內完全或部分地抑制該個體之疾病、病症或疾患，及/或其相關症狀之發展、復發、發作或擴散的抗體之血清力價。
在某些實施例中，「治療有效血清力價」係個體(例如人類)體內降低該個體的疾病、病症或疾患的嚴重程度、持續時間及/或其相關症狀的抗體之血清力價。
術語「血清力價」係指一名個體中來自多個樣品(例如在多個時間點)或在至少10名、至少20名、至少40名至約100名、1000名或更多個體之群體中的平均血清力價。
術語「副作用」涵蓋療法(例如預防劑或治療劑)的不想要及/或不良作用。不想要之作用未必為不良的。療法(例如預防劑或治療劑)之不良作用可能為有害的、令人不適的或有風險的。副作用之實例包括腹瀉、咳嗽、腸胃炎、喘鳴、噁心、嘔吐、厭食、腹部絞痛、發燒、疼痛、體重減輕、脫水、脫髮、呼吸困難、失眠、頭暈、黏膜炎、神經及肌肉影響、疲勞、口乾、食慾不振、投與部位出現皮疹或腫脹、諸如發燒、發冷及疲勞之類的類似流感之症狀、消化道問題及過敏反應。患者經歷之其他不期望的作用眾多且為此項技術中所知的。有許多作用描述於Physician’s Desk Reference (第68版, 2014)中。
術語「個體」與「患者」可互換使用。如本文所使用，在某些實施例中，個體係哺乳動物，諸如非靈長類動物(例如牛、豬、馬、貓、狗、大鼠等)或靈長類動物(例如猴及人類)。在特定實施例中，個體係人類。在一個實施例中，個體係患有感染性疾病或贅生性疾病之哺乳動物(例如人類)。在另一個實施例中，個體係有發展感染性疾病或贅生性疾病之風險的哺乳動物(例如人類)。
術語「可偵測探針」係指提供可偵測信號之組成物。該術語包括但不限於經由活性提供可偵測信號的任何螢光團、發色團、放射性標記、酶、抗體或抗體片段及類似物。
術語「可偵測劑」係指可用於確定樣品或個體中所希望分子，諸如由本文所述之mRNA分子編碼之抗原之持續存在或存在的物質。可偵測劑可為能夠被目測之物質或者能夠以其他方式確定及/或量測(例如藉由定量)之物質。
「實質上全部」係指至少約60%、至少約65%、至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約98%、至少約99%或約100%。
如本文所使用且除非另有說明，否則術語「約」或「大約」意思指普通熟習此項技術者所測定之特定值的可接受之誤差，其部分取決於量測或測定該值之方式。在某些實施例中，術語「約」或「大約」意思指在1、2、3或4個標準差範圍內。在某些實施例中，術語「約」及「大約」意思指在給定值或範圍之20%之內、15%之內、10%之內、9%之內、8%之內、7%之內、6%之內、5%之內、4%之內、3%之內、2%之內、1%之內、0.5%之內、0.05%之內或更低。
除非上下文另外明確指出，否則本文所使用之單數形式術語「一個(種) (a/an)」及「該」包括複數個(種)參考物。
本說明書中引用之所有出版物、專利申請案、寄存編號及其他參考文獻皆以全文引用之方式併入本文，其引用程度就如同特定且單獨地指示每一個別出版物或專利申請案係以引用之方式併入一般。本文所論述之出版物僅僅提供在本申請案之申請日之前的揭示內容。本文中任何內容均不應解釋為承認本發明無權憑藉在先發明而早於此類出版物。此外，提供的公開日期可能與實際公開日期有所不同，實際公開日期可能需要獨立確認。
已經描述本發明之多個實施例。然而，應理解，在不脫離本發明之精神及範圍的情況下，可進行各種修改。因此，實驗部分及實例中的描述旨在說明而非限制申請專利範圍中所描述的發明範圍。5.3 脂質化合物
在一個實施例中，本文提供一種式(I)之化合物：
Figure 02_image001
(I), 或其醫藥學上可接受之鹽、前藥或立體異構物，其中： G1 及G2 各自獨立地為鍵、C2 -C12 伸烷基或C2 -C12 伸烯基，其中該伸烷基或伸烯基中之一或多個-CH2 -視情況經-O-置換； L1 係–OC(=O)R1 、-C(=O)OR1 、-OC(=O)OR1 、-C(=O)R1 、-OR1 、-S(O)x R1 、-S-SR1 、-C(=O)SR1 、-SC(=O)R1 、-NRa C(=O)R1 、-C(=O)NRb Rc 、-NRa C(=O)NRb Rc 、-OC(=O)NRb Rc 、-NRa C(=O)OR1 、-SC(=S)R1 、-C(=S)SR1 、-C(=S)R1 、-CH(OH)R1 、-P(=O)(ORb )(ORc )、-(C6 -C10 伸芳基)-R1 、-(6至10員伸雜芳基)-R1 或R1 ； L2 係–OC(=O)R2 、-C(=O)OR2 、-OC(=O)OR2 、-C(=O)R2 、-OR2 、-S(O)x R2 、-S-SR2 、-C(=O)SR2 、-SC(=O)R2 、-NRd C(=O)R2 、-C(=O)NRe Rf 、-NRd C(=O)NRe Rf 、-OC(=O)NRe Rf 、-NRd C(=O)OR2 、-SC(=S)R2 、-C(=S)SR2 、-C(=S)R2 、-CH(OH)R2 、-P(=O)(ORe )(ORf )、-(C6 -C10 伸芳基)-R2 、-(6至10員伸雜芳基)-R2 或R2 ； R1 及R2 各自獨立地為C6 -C32 烷基或C6 -C32 烯基； Ra 、Rb 、Rd 及Re 各自獨立地為H、C1 -C24 烷基或C2 -C24 烯基； Rc 及Rf 各自獨立地為C1 -C32 烷基或C2 -C32 烯基； G3 係C2 -C24 伸烷基、C2 -C24 伸烯基、C3 -C8 伸環烷基或C3 -C8 伸環烯基； R3 係-N(R4 )R5 ； R4 係C3 -C8 環烷基、C3 -C8 環烯基、4至8員雜環基或C6 -C10 芳基；或R4 、G3 或G3 之一部分連同其所連接之氮一起形成環狀部分； R5 係C1 -C12 烷基或C3 -C8 環烷基；或R4 、R5 連同其所連接之氮一起形成環狀部分； x係0、1或2；且 其中各烷基、烯基、環烷基、環烯基、雜環基、芳基、伸烷基、伸烯基、伸環烷基、伸環烯基、伸芳基、伸雜芳基及環狀部分獨立地視情況經取代。
在一個實施例中，本文提供一種式(I)之化合物：
Figure 02_image001
(I)， 或其醫藥學上可接受之鹽、前藥或立體異構物，其中： G1 及G2 各自獨立地為鍵、C2 -C12 伸烷基或C2 -C12 伸烯基； L1 係–OC(=O)R1 、-C(=O)OR1 、-OC(=O)OR1 、-C(=O)R1 、-OR1 、-S(O)x R1 、-S-SR1 、-C(=O)SR1 、-SC(=O)R1 、-NRa C(=O)R1 、-C(=O)NRb Rc 、-NRa C(=O)NRb Rc 、-OC(=O)NRb Rc 、-NRa C(=O)OR1 、-SC(=S)R1 、-C(=S)SR1 、-C(=S)R1 、-CH(OH)R1 、-P(=O)(ORb )(ORc )、-(C6 -C10 伸芳基)-R1 、-(6至10員伸雜芳基)-R1 或R1 ； L2 係–OC(=O)R2 、-C(=O)OR2 、-OC(=O)OR2 、-C(=O)R2 、-OR2 、-S(O)x R2 、-S-SR2 、-C(=O)SR2 、-SC(=O)R2 、-NRd C(=O)R2 、-C(=O)NRe Rf 、-NRd C(=O)NRe Rf 、-OC(=O)NRe Rf 、-NRd C(=O)OR2 、-SC(=S)R2 、-C(=S)SR2 、-C(=S)R2 、-CH(OH)R2 、-P(=O)(ORe )(ORf )、-(C6 -C10 伸芳基)-R2 、-(6至10員伸雜芳基)-R2 或R2 ； R1 及R2 各自獨立地為C6 -C24 烷基或C6 -C24 烯基； Ra 、Rb 、Rd 及Re 各自獨立地為H、C1 -C12 烷基或C2 -C12 烯基； Rc 及Rf 各自獨立地為C1 -C12 烷基或C2 -C12 烯基； G3 係C2 -C24 伸烷基、C2 -C24 伸烯基、C3 -C8 伸環烷基或C3 -C8 伸環烯基； R3 係-N(R4 )R5 ； R4 係C3 -C8 環烷基、C3 -C8 環烯基或C6 -C10 芳基； R5 係C1 -C12 烷基； x係0、1或2；且 其中各烷基、烯基、環烷基、環烯基、芳基、伸烷基、伸烯基、伸環烷基、伸環烯基、伸芳基及伸雜芳基獨立地視情況經取代。
在一個實施例中，本文提供一種式(II)之化合物：
Figure 02_image003
(II)， 或其醫藥學上可接受之鹽、前藥或立體異構物，其中：
Figure 02_image007
係單鍵或雙鍵； G1 及G2 各自獨立地為鍵、C2 -C12 伸烷基或C2 -C12 伸烯基，其中該伸烷基或伸烯基中之一或多個-CH2 -視情況經-O-置換； L1 係–OC(=O)R1 、-C(=O)OR1 、-OC(=O)OR1 、-C(=O)R1 、-OR1 、-S(O)x R1 、-S-SR1 、-C(=O)SR1 、-SC(=O)R1 、-NRa C(=O)R1 、-C(=O)NRb Rc 、-NRa C(=O)NRb Rc 、-OC(=O)NRb Rc 、-NRa C(=O)OR1 、-SC(=S)R1 、-C(=S)SR1 、-C(=S)R1 、-CH(OH)R1 、-P(=O)(ORb )(ORc )、-(C6 -C10 伸芳基)-R1 、-(6至10員伸雜芳基)-R1 或R1 ； L2 係–OC(=O)R2 、-C(=O)OR2 、-OC(=O)OR2 、-C(=O)R2 、-OR2 、-S(O)x R2 、-S-SR2 、-C(=O)SR2 、-SC(=O)R2 、-NRd C(=O)R2 、-C(=O)NRe Rf 、-NRd C(=O)NRe Rf 、-OC(=O)NRe Rf 、-NRd C(=O)OR2 、-SC(=S)R2 、-C(=S)SR2 、-C(=S)R2 、-CH(OH)R2 、-P(=O)(ORe )(ORf )、-(C6 -C10 伸芳基)-R2 、-(6至10員伸雜芳基)-R2 或R2 ； R1 及R2 各自獨立地為C6 -C32 烷基或C6 -C32 烯基； Ra 、Rb 、Rd 及Re 各自獨立地為H、C1 -C24 烷基或C2 -C24 烯基； Rc 及Rf 各自獨立地為C1 -C32 烷基或C2 -C32 烯基； G4 係鍵、C1 -C23 伸烷基、C2 -C23 伸烯基、C3 -C8 伸環烷基或C3 -C8 伸環烯基； R3 係-N(R4 )R5 ； R4 係C1 -C12 烷基、C3 -C8 環烷基、C3 -C8 環烯基、4至8員雜環基或C6 -C10 芳基；或R4 、G3 或G3 之一部分連同其所連接之氮一起形成環狀部分； R5 係C1 -C12 烷基或C3 -C8 環烷基；或R4 、R5 連同其所連接之氮一起形成環狀部分； x係0、1或2；且 其中各烷基、烯基、環烷基、環烯基、雜環基、芳基、伸烷基、伸烯基、伸環烷基、伸環烯基、伸芳基、伸雜芳基及環狀部分獨立地視情況經取代。
在一個實施例中，本文提供一種式(II)之化合物：
Figure 02_image003
(II)， 或其醫藥學上可接受之鹽、前藥或立體異構物，其中：
Figure 02_image007
係單鍵或雙鍵； G1 及G2 各自獨立地為鍵、C2 -C12 伸烷基或C2 -C12 伸烯基； L1 係–OC(=O)R1 、-C(=O)OR1 、-OC(=O)OR1 、-C(=O)R1 、-OR1 、-S(O)x R1 、-S-SR1 、-C(=O)SR1 、-SC(=O)R1 、-NRa C(=O)R1 、-C(=O)NRb Rc 、-NRa C(=O)NRb Rc 、-OC(=O)NRb Rc 、-NRa C(=O)OR1 、-SC(=S)R1 、-C(=S)SR1 、-C(=S)R1 、-CH(OH)R1 、-P(=O)(ORb )(ORc )、-(C6 -C10 伸芳基)-R1 、-(6至10員伸雜芳基)-R1 或R1 ； L2 係–OC(=O)R2 、-C(=O)OR2 、-OC(=O)OR2 、-C(=O)R2 、-OR2 、-S(O)x R2 、-S-SR2 、-C(=O)SR2 、-SC(=O)R2 、-NRd C(=O)R2 、-C(=O)NRe Rf 、-NRd C(=O)NRe Rf 、-OC(=O)NRe Rf 、-NRd C(=O)OR2 、-SC(=S)R2 、-C(=S)SR2 、-C(=S)R2 、-CH(OH)R2 、-P(=O)(ORe )(ORf )、-(C6 -C10 伸芳基)-R2 、-(6至10員伸雜芳基)-R2 或R2 ； R1 及R2 各自獨立地為C6 -C24 烷基或C6 -C24 烯基； Ra 、Rb 、Rd 及Re 各自獨立地為H、C1 -C12 烷基或C2 -C12 烯基； Rc 及Rf 各自獨立地為C1 -C12 烷基或C2 -C12 烯基； G4 係鍵、C1 -C23 伸烷基、C2 -C23 伸烯基、C3 -C8 伸環烷基或C3 -C8 伸環烯基； R3 係-N(R4 )R5 ； R4 係C1 -C12 烷基、C3 -C8 環烷基、C3 -C8 環烯基或C6 -C10 芳基； R5 係C1 -C12 烷基； x係0、1或2；且 其中各烷基、烯基、環烷基、環烯基、芳基、伸烷基、伸烯基、伸環烷基、伸環烯基、伸芳基及伸雜芳基獨立地視情況經取代。
在一個實施例中，
Figure 02_image007
係單鍵。在一個實施例中，
Figure 02_image007
係雙鍵。在一個實施例中，
Figure 02_image007
係雙鍵，且該化合物具有(Z)-構形。在一個實施例中，
Figure 02_image007
係雙鍵，且該化合物具有(E)-構形。
在一個實施例中，本文提供一種式(III)之化合物：
Figure 02_image010
(III)， 或其醫藥學上可接受之鹽、前藥或立體異構物。
在一個實施例中，本文提供一種式(IV)之化合物：
Figure 02_image012
(IV)， 或其醫藥學上可接受之鹽、前藥或立體異構物。
在一個實施例中，G1 係鍵。在一個實施例中，G2 係鍵。在一個實施例中，G1 及G2 均為鍵。
在一個實施例中，G1 及G2 各自獨立地為C2 -C12 伸烷基或C2 -C12 伸烯基。在一個實施例中，G1 及G2 各自獨立地為C2 -C12 伸烷基。在一個實施例中，G1 及G2 各自獨立地為C2 -C12 伸烯基。在一個實施例中，G1 及G2 各自獨立地為C3 -C7 伸烷基。在一個實施例中，G1 及G2 各自獨立地為C5 伸烷基。
在一個實施例中，G1 未經取代。在一個實施例中，G1 經取代。在一個實施例中，G1 經–OH取代。在一個實施例中，G1 經(另一個) L1 取代(亦即，G1 連接至兩個L1 )。在一個實施例中，G1 經-O-(C6 -C24 烷基)取代。在一個實施例中，G1 經-O-(C6 -C24 烯基)取代。在一個實施例中，G1 經–C(=O)-(C6 -C24 烷基)取代。在一個實施例中，G1 經–C(=O)-(C6 -C24 烯基)取代。
在一個實施例中，G2 未經取代。在一個實施例中，G2 經取代。在一個實施例中，G2 經–OH取代。在一個實施例中，G2 經(另一個) L2 取代(亦即，G2 連接至兩個L2 )。在一個實施例中，G2 經-O-(C6 -C24 烷基)取代。在一個實施例中，G2 經-O-(C6 -C24 烯基)取代。在一個實施例中，G2 經–C(=O)-(C6 -C24 烷基)取代。在一個實施例中，G2 經–C(=O)-(C6 -C24 烯基)取代。
在一個實施例中，G1 及/或G2 中該伸烷基或伸烯基中的一或多個-CH2 -視情況經-O-置換。在一個實施例中，G1 及G2 各自獨立地為C5 -C9 伸烷基，其中該伸烷基中之一或多個-CH2 -視情況經-O-置換。在一個實施例中，G1 及G2 各自獨立地為C5 -C7 伸烷基，其中該伸烷基中之一或多個-CH2 -視情況經-O-置換。在一個實施例中，G1 及G2 均為-CH2 -CH2 -O-CH2 -CH2 -。在一個實施例中，G1 及G2 均為-CH2 -CH2 -O-CH2 -CH2 -O-CH2 -。
在一個實施例中，該化合物係式(I-A)之化合物：
Figure 02_image014
(I-A)， 其中y及z各自獨立地為2至12之整數， 或其醫藥學上可接受之鹽、前藥或立體異構物。
在一個實施例中，該化合物係式(II-A)之化合物：
Figure 02_image016
(II-A)， 其中y及z各自獨立地為2至12之整數， 或其醫藥學上可接受之鹽、前藥或立體異構物。
在一個實施例中，該化合物係式(III-A)之化合物：
Figure 02_image018
(III-A)， 其中y及z各自獨立地為2至12之整數， 或其醫藥學上可接受之鹽、前藥或立體異構物。
在一個實施例中，該化合物係式(IV-A)之化合物：
Figure 02_image020
(IV-A)， 其中y及z各自獨立地為2至12之整數， 或其醫藥學上可接受之鹽、前藥或立體異構物。
在一個實施例中，y及z各自獨立地為2至10之整數。在一個實施例中，y及z各自獨立地為2至6之整數。在一個實施例中，y及z各自獨立地為4至10之整數。
在一個實施例中，y與z不同。在一個實施例中，y與z相同。在一個實施例中，y與z相同且選自4、5、6、7、8及9。在一個實施例中，y係5且z係5。
在一個實施例中，L1 係–OC(=O)R1 、-C(=O)OR1 、-OC(=O)OR1 、-C(=O)R1 、-OR1 、-S(O)x R1 、-S-SR1 、-C(=O)SR1 、-SC(=O)R1 、-NRa C(=O)R1 、-C(=O)NRb Rc 、-NRa C(=O)NRb Rc 、-OC(=O)NRb Rc 、-NRa C(=O)OR1 、-SC(=S)R1 、-C(=S)SR1 、-C(=S)R1 、-CH(OH)R1 或-P(=O)(ORb )(ORc )。在一個實施例中，L1 係-(C6 -C10 伸芳基)-R1 。在一個實施例中，L1 係-(6至10員伸雜芳基)-R1 。在一個實施例中，L1 係R1 。
在一個實施例中，L1 係–OC(=O)R1 、-C(=O)OR1 、-C(=O)SR1 、-SC(=O)R1 、-NRa C(=O)R1 或-C(=O)NRb Rc 。在一個實施例中，L1 係–OC(=O)R1 、-C(=O)OR1 、-NRa C(=O)R1 或-C(=O)NRb Rc 。在一個實施例中，L1 係–OC(=O)R1 。在一個實施例中，L1 係-C(=O)OR1 。在一個實施例中，L1 係-NRa C(=O)R1 。在一個實施例中，L1 係-C(=O)NRb Rc 。在一個實施例中，L1 係-NRa C(=O)NRb Rc 。在一個實施例中，L1 係-OC(=O)NRb Rc 。在一個實施例中，L1 係-NRa C(=O)OR1 。
在一個實施例中，L2 係–OC(=O)R2 、-C(=O)OR2 、-OC(=O)OR2 、-C(=O)R2 、-OR2 、-S(O)x R2 、-S-SR2 、-C(=O)SR2 、-SC(=O)R2 、-NRd C(=O)R2 、-C(=O)NRe Rf 、-NRd C(=O)NRe Rf 、-OC(=O)NRe Rf 、-NRd C(=O)OR2 、-SC(=S)R2 、-C(=S)SR2 、-C(=S)R2 、-CH(OH)R2 或-P(=O)(ORe )(ORf )。在一個實施例中，L2 係-(C6 -C10 伸芳基)-R2 。在一個實施例中，L2 係-(6至10員伸雜芳基)-R2 。在一個實施例中，L2 係R2 。
在一個實施例中，L2 係–OC(=O)R2 、-C(=O)OR2 、-C(=O)SR2 、-SC(=O)R2 、-NRd C(=O)R2 或-C(=O)NRe Rf 。在一個實施例中，L2 係–OC(=O)R2 、-C(=O)OR2 、-NRd C(=O)R2 或-C(=O)NRe Rf 。在一個實施例中，L2 係–OC(=O)R2 。在一個實施例中，L2 係-C(=O)OR2 。在一個實施例中，L2 係-NRd C(=O)R2 。在一個實施例中，L2 係-C(=O)NRe Rf 。在一個實施例中，L2 係-NRd C(=O)NRe Rf 。在一個實施例中，L2 係-OC(=O)NRe Rf 。在一個實施例中，L2 係-NRd C(=O)OR2 。
在一個實施例中，L1 係–OC(=O)R1 、-NRa C(=O)R1 、-C(=O)OR1 或-C(=O)NRb Rc 且L2 係–OC(=O)R2 、-NRd C(=O)R2 、-C(=O)OR2 或-C(=O)NRe Rf 。在一個實施例中，L1 係–OC(=O)R1 、-C(=O)OR1 或-C(=O)NRb Rc 且L2 係–OC(=O)R2 、-C(=O)OR2 或-C(=O)NRe Rf 。在一個實施例中，L1 係–OC(=O)R1 且L2 係–OC(=O)R2 。在一個實施例中，L1 係–OC(=O)R1 且L2 係-NRd C(=O)R2 。在一個實施例中，L1 係-NRa C(=O)R1 且L2 係-NRd C(=O)R2 。在一個實施例中，L1 係-C(=O)OR1 且L2 係-C(=O)OR2 。在一個實施例中，L1 係-C(=O)OR1 且L2 係-C(=O)NRe Rf 。在一個實施例中，L1 係-C(=O)NRb Rc 且L2 係-C(=O)NRe Rf 。
在一個實施例中，L1 係-NRa C(=O)NRb Rc 且L2 係-NRd C(=O)NRe Rf 。在一個實施例中，L1 係-OC(=O)NRb Rc 且L2 係-OC(=O)NRe Rf 。在一個實施例中，L1 係-NRa C(=O)OR1 且L2 係-NRd C(=O)OR2 。
在一個實施例中，該化合物係式(I-B)、(I-B’)、(I-B”)、(I-C)、(I-D)或(I-E)之化合物：
Figure 02_image022
(I-B)、
Figure 02_image024
(I-B’)、
Figure 02_image026
(I-B”)、
Figure 02_image028
(I-C)、
Figure 02_image030
(I-D)或
Figure 02_image032
(I-E)，
或其醫藥學上可接受之鹽、前藥或立體異構物。
在一個實施例中，該化合物係式(II-B)、(II-B’)、(II-B”)、(II-C)、(II-D)或(II-E)之化合物：
Figure 02_image034
(II-B)、
Figure 02_image036
(II-B’)、
Figure 02_image038
(II-B”)、
Figure 02_image040
(II-C)、
Figure 02_image042
(II-D)或
Figure 02_image044
(II-E)，
或其醫藥學上可接受之鹽、前藥或立體異構物。
在一個實施例中，該化合物係式(III-B)、(III-B’)、(III-B”)、(III-C)、(III-D)或(III-E)之化合物：
Figure 02_image046
(III-B)、
Figure 02_image048
(III-B’)、
Figure 02_image050
(III-B”)、
Figure 02_image052
(III-C)、
Figure 02_image054
(III-D)或
Figure 02_image056
(III-E)，
或其醫藥學上可接受之鹽、前藥或立體異構物。
在一個實施例中，該化合物係式(IV-B)、(IV-B’)、(IV-B”)、(IV-C)、(IV-D)或(IV-E)之化合物：
Figure 02_image058
(IV-B)、
Figure 02_image060
(IV-B’)、
Figure 02_image062
(IV-B”)、
Figure 02_image064
(IV-C)、
Figure 02_image066
(IV-D)或
Figure 02_image068
(IV-E)，
或其醫藥學上可接受之鹽、前藥或立體異構物。
在一個實施例中，該化合物係式(I-F)、(I-F’)、(I-F”)、(I-G)、(I-H)或(I-I)之化合物：
Figure 02_image070
(I-F)、
Figure 02_image072
(I-F’)、
Figure 02_image074
(I-F”)、
Figure 02_image076
(I-G)、
Figure 02_image078
(I-H)或
Figure 02_image080
(I-I)，
其中y及z各自獨立地為2至12之整數， 或其醫藥學上可接受之鹽、前藥或立體異構物。
在一個實施例中，該化合物係式(II-F)、(II-F’)、(II-F”)、(II-G)、(II-H)或(II-I)之化合物：
Figure 02_image082
(II-F)、
Figure 02_image084
(II-F’)、
Figure 02_image086
(II-F”)、
Figure 02_image088
(II-G)、
Figure 02_image090
(II-H)或
Figure 02_image092
(II-I)，
其中y及z各自獨立地為2至12之整數， 或其醫藥學上可接受之鹽、前藥或立體異構物。
在一個實施例中，該化合物係式(III-F)、(III-F’)、(III-F”)、(III-G)、(III-H)或(III-I)之化合物：
Figure 02_image094
(III-F)、
Figure 02_image096
(III-F’)、
Figure 02_image098
(III-F”)、
Figure 02_image100
(III-G)、
Figure 02_image102
(III-H)或
Figure 02_image104
(III-I)，
其中y及z各自獨立地為2至12之整數， 或其醫藥學上可接受之鹽、前藥或立體異構物。
在一個實施例中，該化合物係式(IV-F)、(IV-F’)、(IV-F”)、(IV-G)、(IV-H)或(IV-I)之化合物：
Figure 02_image106
(IV-F)、
Figure 02_image108
(IV-F’)、
Figure 02_image110
(IV-F”)、
Figure 02_image112
(IV-G)、
Figure 02_image114
(IV-H)或
Figure 02_image116
(IV-I)，
其中y及z各自獨立地為2至12之整數， 或其醫藥學上可接受之鹽、前藥或立體異構物。
在一個實施例中，y及z各自獨立地為2至10之整數。在一個實施例中，y及z各自獨立地為2至6之整數。在一個實施例中，y及z各自獨立地為4至10之整數。
在一個實施例中，y與z不同。在一個實施例中，y與z相同。在一個實施例中，y與z相同且選自4、5、6、7、8及9。在一個實施例中，y係5且z係5。
在一個實施例中，G3 係C2 -C24 伸烷基。在一個實施例中，G3 係C2 -C12 伸烷基。在一個實施例中，G3 係C2 -C8 伸烷基。在一個實施例中，G3 係C2 -C6 伸烷基。在一個實施例中，G3 係C2 -C4 伸烷基。在一個實施例中，G3 係C2 伸烷基。在一個實施例中，G3 係C4 伸烷基。
在一個實施例中，G3 經一或多個側氧基取代。在一個實施例中，G3 係-(C1 -C23 伸烷基)-C(=O)-。在一個實施例中，G3 係-(C1 -C11 伸烷基)-C(=O)-。在一個實施例中，G3 係-(C1 -C7 伸烷基)-C(=O)-。在一個實施例中，G3 係-(C1 -C5 伸烷基)-C(=O)-。在一個實施例中，G3 係-(C1 -C3 伸烷基)-C(=O)-。在一個實施例中，G3 係–CH2 -C(=O)-。在一個實施例中，G3 係–CH2 -CH2 -CH2 -C(=O)-。在一個實施例中，–C(=O)-連接至氮原子，且伸烷基連接至R3 。
在一個實施例中，該化合物係式(I-J)、(I-J’)、(I-J”)、(I-K)、(I-L)或(I-M)之化合物：
Figure 02_image118
(I-J)、
Figure 02_image120
(I-J’)、
Figure 02_image122
(I-J”)、
Figure 02_image124
(I-K)、
Figure 02_image126
(I-L)或
Figure 02_image128
(I-M)，
其中y及z各自獨立地為2至12之整數，且 s係2至24之整數， 或其醫藥學上可接受之鹽、前藥或立體異構物。
在一個實施例中，y及z各自獨立地為2至10之整數。在一個實施例中，y及z各自獨立地為2至6之整數。在一個實施例中，y及z各自獨立地為4至10之整數。
在一個實施例中，y與z不同。在一個實施例中，y與z相同。在一個實施例中，y與z相同且選自4、5、6、7、8及9。在一個實施例中，y係5且z係5。
在一個實施例中，s係2至12之整數。在一個實施例中，s係2至8之整數。在一個實施例中，s係2至6之整數。在一個實施例中，s係2至4之整數。在一個實施例中，s係2。在一個實施例中，s係4。
在一個實施例中，y係5，z係5，且s係2。
在一個實施例中，y係5，z係5，且s係4。
在一個實施例中，G3 係C2 -C24 伸烯基。在一個實施例中，G3 係C2 -C12 伸烯基。在一個實施例中，G3 係C2 -C8 伸烯基。在一個實施例中，G3 係C2 -C6 伸烯基。在一個實施例中，G3 係C2 -C4 伸烯基。
在一個實施例中，G3 係C3 -C8 伸環烷基。在一個實施例中，G3 係C5 -C6 伸環烷基。
在一個實施例中，G3 係C3 -C8 伸環烯基。在一個實施例中，G3 係C5 -C6 伸環烯基。
在一個實施例中，G4 係鍵。
在一個實施例中，G4 係C1 -C23 伸烷基。在一個實施例中，G4 係C1 -C11 伸烷基。在一個實施例中，G4 係C1 -C7 伸烷基。在一個實施例中，G4 係C1 -C5 伸烷基。在一個實施例中，G4 係C1 -C3 伸烷基。在一個實施例中，G4 係C1 伸烷基。在一個實施例中，G4 係C2 伸烷基。在一個實施例中，G4 係C3 伸烷基。在一個實施例中，G4 係C4 伸烷基。
在一個實施例中，該化合物係式(II-J)、(II-J’)、(II-J”)、(II-K)、(II-L)或(II-M)之化合物：
Figure 02_image130
(II-J)、
Figure 02_image132
(II-J’)、
Figure 02_image134
(II-J”)、
Figure 02_image136
(II-K)、
Figure 02_image138
(II-L)或
Figure 02_image140
(II-M)，
其中y及z各自獨立地為2至12之整數，且 u係0至23之整數， 或其醫藥學上可接受之鹽、前藥或立體異構物。
在一個實施例中，該化合物係式(III-J)、(III-J’)、(III-J”)、(III-K)、(III-L)或(III-M)之化合物：
Figure 02_image142
(III-J)、
Figure 02_image144
(III-J’)、
Figure 02_image146
(III-J”)、
Figure 02_image148
(III-K)、
Figure 02_image150
(III-L)或
Figure 02_image152
(III-M)，
其中y及z各自獨立地為2至12之整數，且 u係0至23之整數， 或其醫藥學上可接受之鹽、前藥或立體異構物。
在一個實施例中，該化合物係式(IV-J)、(IV-J’)、(IV-J”)、(IV-K)、(IV-L)或(IV-M)之化合物：
Figure 02_image154
(IV-J)、
Figure 02_image156
(IV-J’)、
Figure 02_image158
(IV-J”)、
Figure 02_image160
(IV-K)、
Figure 02_image162
(IV-L)或
Figure 02_image164
(IV-M)，
其中y及z各自獨立地為2至12之整數，且 u係0至23之整數， 或其醫藥學上可接受之鹽、前藥或立體異構物。
在一個實施例中，y及z各自獨立地為2至10之整數。在一個實施例中，y及z各自獨立地為2至6之整數。在一個實施例中，y及z各自獨立地為4至10之整數。
在一個實施例中，y與z不同。在一個實施例中，y與z相同。在一個實施例中，y與z相同且選自4、5、6、7、8及9。在一個實施例中，y係5且z係5。
在一個實施例中，u係0至12之整數。在一個實施例中，u係0至8之整數。在一個實施例中，u係0至6之整數。在一個實施例中，u係0至4之整數。在一個實施例中，u係0。在一個實施例中，u係1。在一個實施例中，u係2。在一個實施例中，u係3。在一個實施例中，u係4。
在一個實施例中，y係5，z係5，且u係0。
在一個實施例中，y係5，z係5，且u係2。
在一個實施例中，G4 係C2 -C23 伸烯基。在一個實施例中，G4 係C2 -C12 伸烯基。在一個實施例中，G4 係C2 -C8 伸烯基。在一個實施例中，G4 係C2 -C6 伸烯基。在一個實施例中，G4 係C2 -C4 伸烯基。
在一個實施例中，G4 係C3 -C8 伸環烷基。在一個實施例中，G4 係C5 -C6 伸環烷基。
在一個實施例中，G4 係C3 -C8 伸環烯基。在一個實施例中，G4 係C5 -C6 伸環烯基。
在一個實施例中，R5 係C1 -C12 烷基。在一個實施例中，R5 係C1 -C10 烷基。在一個實施例中，R5 係C1 -C8 烷基。在一個實施例中，R5 係C1 -C6 烷基。在一個實施例中，R5 係C1 -C4 烷基。在一個實施例中，R5 係C1 -C2 烷基。在一個實施例中，R5 係甲基。在一個實施例中，R5 係乙基。在一個實施例中，R5 係丙基。在一個實施例中，R5 係正丁基。在一個實施例中，R5 係正己基。在一個實施例中，R5 係正辛基。在一個實施例中，R5 係正壬基。
在一個實施例中，R5 係C3 -C8 環烷基。在一個實施例中，R5 係環丙基。在一個實施例中，R5 係環丁基。在一個實施例中，R5 係環戊基。在一個實施例中，R5 係環己基。在一個實施例中，R5 係環庚基。在一個實施例中，R5 係環辛基。
在一個實施例中，R4 、R5 連同其所連接之氮一起形成環狀部分。
在一個實施例中，該環狀部分(由R4 及R5 連同其所連接之氮一起形成)係雜環基。在一個實施例中，該環狀部分係雜環烷基。在一個實施例中，該環狀部分係4至8員雜環烷基。在一個實施例中，該環狀部分係4員雜環烷基。在一個實施例中，該環狀部分係5員雜環烷基。在一個實施例中，該環狀部分係6員雜環烷基。在一個實施例中，該環狀部分係7員雜環烷基。在一個實施例中，該環狀部分係8員雜環烷基。
在一個實施例中，該環狀部分(由R4 及R5 連同其所連接之氮一起形成)係氮雜環丁烷-1-基。在一個實施例中，該環狀部分係吡咯啶-1-基。在一個實施例中，該環狀部分係哌啶-1-基。在一個實施例中，該環狀部分係氮𠰢-1-基。在一個實施例中，該環狀部分係氮雜環辛烷-1-基。在一個實施例中，該環狀部分係𠰌啉基。在一個實施例中，該環狀部分係哌𠯤-1-基。此等基團中之連接點連至G3 。
如本文所述且除非另有說明，否則R5 之取代模式亦適用於由R4 及R5 連同其所連接之氮一起形成的環狀部分。
在一個實施例中，R5 未經取代。
在一個實施例中，R5 經一或多個選自由以下組成之群的取代基取代：側氧基、–ORg 、-NRg C(=O)Rh 、-C(=O)NRg Rh 、-C(=O)Rh 、- OC(=O)Rh 、-C(=O)ORh 及–O-Ri -OH，其中： Rg 在每次出現時獨立地為H或C1 -C6 烷基； Rh 在每次出現時獨立地為C1 -C6 烷基；且 Ri 在每次出現時獨立地為C1 -C6 伸烷基。
在一個實施例中，R5 經一或多個羥基取代。在一個實施例中，R5 經一個羥基取代。
在一個實施例中，R5 經一或多個羥基及一或多個側氧基取代。在一個實施例中，R5 經一個羥基及一個側氧基取代。在一個實施例中，R5 係–CH2 CH2 OH。
在一個實施例中，R5 係-(CH2 )p Q、-(CH2 )p CHQR、-CHQR或-CQ(R)2 ，其中Q係C3 -C8 環烷基、C3 -C8 環烯基、C3 -C8 環炔基、4至8員雜環基、C6 -C10 芳基、5至10員雜芳基、-OR、-O(CH2 )p N(R)2 、-C(O)OR、-OC(O)R、-CX3 、-CX2 H、-CXH2 、-CN、-N(R)2 、-C(O)N(R)2 、-N(R)C(O)R、-N(R)S(O)2 R、-N(R)C(O)N(R)2 、-N(R)C(S)N(R)2 、-N(R)R22 、-O(CH2 )p OR、-N(R)C(=NR23 )N(R)2 、-N(R)C(=CHR23 )N(R)2 、-OC(O)N(R)2 、-N(R)C(O)OR、-N(OR)C(O)R、-N(OR)S(O)2 R、-N(OR)C(O)OR、-N(OR)C(O)N(R)2 、-N(OR)C(S)N(R)2 、-N(OR)C(=NR23 )N(R)2 、-N(OR)C(=CHR23 )N(R)2 、-C(=NR23 )N(R)2 、-C(=NR23 )R、-C(O)N(R)OR或-C(R)N(R)2 C(O)OR、且各p獨立地為1、2、3、4或5； R22 係C3 -C8 環烷基、C3 -C8 環烯基、C3 -C8 環炔基、4至8員雜環基、C6 -C10 芳基或5至10員雜芳基； R23 係H、-CN、-NO2 、C1 -C6 烷基、-OR、-S(O)2 R、-S(O)2 N(R)2 、C2 -C6 烯基、C3 -C8 環烷基、C3 -C8 環烯基、C3 -C8 環炔基、4至8員雜環基、C6 -C10 芳基或5至10員雜芳基； 各R獨立地為H、C1 -C3 烷基或C2 -C3 烯基；或N(R)2 部分中之兩個R連同其所連接之氮一起形成環狀部分；且 各X獨立地為F、CI、Br或I。
在一個實施例中，該化合物係式(I-N)、(I-N’)、(I-N”)、(I-O)、(I-P)或(I-Q)之化合物：
Figure 02_image166
(I-N)、
Figure 02_image168
(I-N’)、
Figure 02_image170
(I-N”)、
Figure 02_image172
(I-O)、
Figure 02_image174
(I-P)或
Figure 02_image176
(I-Q)，
其中y及z各自獨立地為2至12之整數， s係2至24之整數， t係1至12之整數，且 R6 係氫或羥基， 或其醫藥學上可接受之鹽、前藥或立體異構物。
在一個實施例中，該化合物係式(II-N)、(II-N’)、(II-N”)、(II-O)、(II-P)或(II-Q)之化合物：
Figure 02_image178
(II-N)、
Figure 02_image180
(II-N’)、
Figure 02_image182
(II-N”)、
Figure 02_image184
(II-O)、
Figure 02_image186
(II-P)或
Figure 02_image188
(II-Q)，
其中y及z各自獨立地為2至12之整數， u係0至23之整數， t係1至12之整數，且 R6 係氫或羥基， 或其醫藥學上可接受之鹽、前藥或立體異構物。
在一個實施例中，該化合物係式(III-N)、(III-N’)、(III-N”)、(III-O)、(III-P)或(III-Q)之化合物：
Figure 02_image190
(III-N)、
Figure 02_image192
(III-N’)、
Figure 02_image194
(III-N”)、
Figure 02_image196
(III-O)、
Figure 02_image198
(III-P)或
Figure 02_image200
(III-Q)，
其中y及z各自獨立地為2至12之整數， u係0至23之整數， t係1至12之整數，且 R6 係氫或羥基， 或其醫藥學上可接受之鹽、前藥或立體異構物。
在一個實施例中，該化合物係式(IV-N)、(IV-N’)、(IV-N”)、(IV-O)、(IV-P)或(IV-Q)之化合物：
Figure 02_image202
(IV-N)、
Figure 02_image204
(IV-N’)、
Figure 02_image206
(IV-N”)、
Figure 02_image208
(IV-O)、
Figure 02_image210
(IV-P)或
Figure 02_image212
(IV-Q)，
其中y及z各自獨立地為2至12之整數， u係0至23之整數， t係1至12之整數，且 R6 係氫或羥基， 或其醫藥學上可接受之鹽、前藥或立體異構物。
在一個實施例中，該化合物係式(I-R)、(I-R’)、(I-R”)、(I-S)、(I-T)或(I-U)之化合物：
Figure 02_image214
(I-R)、
Figure 02_image216
(I-R’)、
Figure 02_image218
(I-R”)、
Figure 02_image220
(I-S)、
Figure 02_image222
(I-T)或
Figure 02_image224
(I-U)，
其中y及z各自獨立地為2至12之整數， s係2至24之整數， t係1至12之整數，且 R6 係氫或羥基， 或其醫藥學上可接受之鹽、前藥或立體異構物。
在一個實施例中，該化合物係式(II-R)、(II-R’)、(II-R”)、(II-S)、(II-T)或(II-U)之化合物：
Figure 02_image226
(II-R)、
Figure 02_image228
(II-R’)、
Figure 02_image230
(II-R”)、
Figure 02_image232
(II-S)、
Figure 02_image234
(II-T)或
Figure 02_image236
(II-U)，
其中y及z各自獨立地為2至12之整數， u係0至23之整數， t係1至12之整數，且 R6 係氫或羥基， 或其醫藥學上可接受之鹽、前藥或立體異構物。
在一個實施例中，該化合物係式(III-R)、(III-R’)、(III-R”)、(III-S)、(III-T)或(III-U)之化合物：
Figure 02_image238
(III-R)、
Figure 02_image240
(III-R’)、
Figure 02_image242
(III-R”)、
Figure 02_image244
(III-S)、
Figure 02_image246
(III-T)或
Figure 02_image248
(III-U)，
其中y及z各自獨立地為2至12之整數， u係0至23之整數， t係1至12之整數，且 R6 係氫或羥基， 或其醫藥學上可接受之鹽、前藥或立體異構物。
在一個實施例中，該化合物係式(IV-R)、(IV-R’)、(IV-R”)、(IV-S)、(IV-T)或(IV-U)之化合物：
Figure 02_image250
(IV-R)、
Figure 02_image252
(IV-R’)、
Figure 02_image254
(IV-R”)、
Figure 02_image256
(IV-S)、
Figure 02_image258
(IV-T)或
Figure 02_image260
(IV-U)，
其中y及z各自獨立地為2至12之整數， u係0至23之整數， t係1至12之整數，且 R6 係氫或羥基， 或其醫藥學上可接受之鹽、前藥或立體異構物。
在一個實施例中，y及z各自獨立地為2至10之整數。在一個實施例中，y及z各自獨立地為2至6之整數。在一個實施例中，y及z各自獨立地為4至10之整數。
在一個實施例中，y與z不同。在一個實施例中，y與z相同。在一個實施例中，y與z相同且選自4、5、6、7、8及9。在一個實施例中，y係5且z係5。
在一個實施例中，s係2至12之整數。在一個實施例中，s係2至8之整數。在一個實施例中，s係2至6之整數。在一個實施例中，s係2至4之整數。在一個實施例中，s係2。在一個實施例中，s係4。
在一個實施例中，y係5，z係5，且s係2。
在一個實施例中，y係5，z係5，且s係4。
在一個實施例中，u係0至12之整數。在一個實施例中，u係0至8之整數。在一個實施例中，u係0至6之整數。在一個實施例中，u係0至4之整數。在一個實施例中，u係0。在一個實施例中，u係1。在一個實施例中，u係2。在一個實施例中，u係3。在一個實施例中，u係4。
在一個實施例中，y係5，z係5，且u係0。
在一個實施例中，y係5，z係5，且u係2。
在一個實施例中，t係1至10之整數。在一個實施例中，t係1至8之整數。在一個實施例中，t係1至6之整數。在一個實施例中，t係1至4之整數。在一個實施例中，t係1至3之整數。在一個實施例中，t係1至2之整數。在一個實施例中，t係1。在一個實施例中，t係2。在一個實施例中，t係3。在一個實施例中，t係4。在一個實施例中，t係5。在一個實施例中，t係6。在一個實施例中，t係7。
在一個實施例中，R4 係C1 -C12 烷基。在一個實施例中，R4 係C1 -C8 烷基。在一個實施例中，R4 係C1 -C6 烷基。在一個實施例中，R4 係C1 -C4 烷基。在一個實施例中，R4 係甲基。在一個實施例中，R4 係乙基。在一個實施例中，R4 係正丙基。在一個實施例中，R4 係正丁基。在一個實施例中，R4 係正戊基。在一個實施例中，R4 係正己基。在一個實施例中，R4 係正辛基。在一個實施例中，R4 係正壬基。
在一個實施例中，R4 係C3 -C8 環烷基。在一個實施例中，R4 係環丙基。在一個實施例中，R4 係環丁基。在一個實施例中，R4 係環戊基。在一個實施例中，R4 係環己基。在一個實施例中，R4 係環庚基。在一個實施例中，R4 係環辛基。
在一個實施例中，R4 係C3 -C8 環烯基。在一個實施例中，R4 係環丙烯基。在一個實施例中，R4 係環丁烯基。在一個實施例中，R4 係環戊烯基。在一個實施例中，R4 係環己烯基。在一個實施例中，R4 係環庚烯基。在一個實施例中，R4 係環辛烯基。
在一個實施例中，R4 係C6 -C10 芳基。在一個實施例中，R4 係苯基。
在一個實施例中，R4 係4至8員雜環基。在一個實施例中，R4 係4至8員雜環烷基。在一個實施例中，R4 係氧雜環丁烷基。在一個實施例中，R4 係四氫呋喃基。在一個實施例中，R4 係四氫哌喃基。在一個實施例中，R4 係四氫硫代哌喃基。在一個實施例中，R4 係N-甲基哌啶基。
在一個實施例中，R4 、G3 或G3 之一部分連同其所連接之氮一起形成環狀部分。
在一個實施例中，該環狀部分(由R4 、G3 或G3 之一部分連同其所連接之氮一起形成)係雜環基。在一個實施例中，該環狀部分係雜環烷基。在一個實施例中，該環狀部分係4至8員雜環烷基。在一個實施例中，該環狀部分係4員雜環烷基。在一個實施例中，該環狀部分係5員雜環烷基。在一個實施例中，該環狀部分係6員雜環烷基。在一個實施例中，該環狀部分係7員雜環烷基。在一個實施例中，該環狀部分係8員雜環烷基。
在一個實施例中，該環狀部分(由R4 、G3 或G3 之一部分連同其所連接之氮一起形成)係氮雜環丁烷-3-基。在一個實施例中，該環狀部分係吡咯啶-3-基。在一個實施例中，該環狀部分係哌啶-4-基。在一個實施例中，該環狀部分係氮𠰢-4-基。在一個實施例中，該環狀部分係氮雜環辛烷-5-基。此等基團之連接點係連至與G1 及G2 連接之氮的方向。
如本文所述且除非另有說明，否則R4 之取代模式亦適用於由R4 、G3 或G3 之一部分連同其所連接之氮形成的環狀部分。
在一個實施例中，R4 未經取代。
在一個實施例中，R4 經一或多個選自由以下組成之群的取代基取代：側氧基、–ORg 、-NRg C(=O)Rh 、-C(=O)NRg Rh 、-C(=O)Rh 、- OC(=O)Rh 、-C(=O)ORh 及–O-Ri -OH，其中： Rg 在每次出現時獨立地為H或C1 -C6 烷基； Rh 在每次出現時獨立地為C1 -C6 烷基；且 Ri 在每次出現時獨立地為C1 -C6 伸烷基。
在一個實施例中，R4 經一或多個羥基取代。在一個實施例中，R4 經一個羥基取代。
在一個實施例中，R4 經一或多個羥基及一或多個側氧基取代。在一個實施例中，R4 經一個羥基及一個側氧基取代。
在一個實施例中，R3 具有以下結構之一：
Figure 02_image262
、
Figure 02_image264
、
Figure 02_image266
、
Figure 02_image268
、
Figure 02_image270
、
Figure 02_image272
、
Figure 02_image274
、
Figure 02_image276
、
Figure 02_image278
、
Figure 02_image280
、
Figure 02_image282
或
Figure 02_image284
。
在一個實施例中，R3 具有
Figure 02_image286
之結構。
在一個實施例中，R3 具有
Figure 02_image288
之結構。
在一個實施例中，R1 及R2 各自獨立地為支鏈C6 -C32 烷基或支鏈C6 -C32 烯基。在一個實施例中，R1 及R2 各自獨立地為支鏈C6 -C24 烷基或支鏈C6 -C24 烯基。
在一個實施例中，R1 及R2 各自獨立地為-R7 -CH(R8 )(R9 )，其中R7 係C1 -C5 伸烷基，且R8 及R9 獨立地為C2 -C10 烷基或C2 -C10 烯基。
在一個實施例中，R1 係直鏈C6 -C32 烷基。在一個實施例中，R1 係直鏈C6 -C24 烷基。在一個實施例中，R1 係直鏈C7 -C15 烷基。在一個實施例中，R1 係直鏈C7 烷基。在一個實施例中，R1 係直鏈C8 烷基。在一個實施例中，R1 係直鏈C9 烷基。在一個實施例中，R1 係直鏈C10 烷基。在一個實施例中，R1 係直鏈C11 烷基。在一個實施例中，R1 係直鏈C12 烷基。在一個實施例中，R1 係直鏈C13 烷基。在一個實施例中，R1 係直鏈C14 烷基。在一個實施例中，R1 係直鏈C15 烷基。
在一個實施例中，R1 係直鏈C6 -C32 烯基。在一個實施例中，R1 係直鏈C6 -C24 烯基。在一個實施例中，R1 係直鏈C7 -C17 烯基。在一個實施例中，R1 係直鏈C7 烯基。在一個實施例中，R1 係直鏈C8 烯基。在一個實施例中，R1 係直鏈C9 烯基。在一個實施例中，R1 係直鏈C10 烯基。在一個實施例中，R1 係直鏈C11 烯基。在一個實施例中，R1 係直鏈C12 烯基。在一個實施例中，R1 係直鏈C13 烯基。在一個實施例中，R1 係直鏈C14 烯基。在一個實施例中，R1 係直鏈C15 烯基。在一個實施例中，R1 係直鏈C16 烯基。在一個實施例中，R1 係直鏈C17 烯基。
在一個實施例中，R1 係支鏈C6 -C32 烷基。在一個實施例中，R1 係支鏈C6 -C24 烷基。在一個實施例中，R1 係-R7 -CH(R8 )(R9 )，其中R7 係C0 -C5 伸烷基，且R8 及R9 獨立地為C2 -C10 烷基。在一個實施例中，R1 係-R7 -CH(R8 )(R9 )，其中R7 係C0 -C1 伸烷基，且R8 及R9 獨立地為C4 -C8 烷基。
在一個實施例中，R1 係支鏈C6 -C32 烯基。在一個實施例中，R1 係支鏈C6 -C24 烯基。在一個實施例中，R1 係-R7 -CH(R8 )(R9 )，其中R7 係C0 -C5 伸烷基，且R8 及R9 獨立地為C2 -C10 烯基。在一個實施例中，R1 係-R7 -CH(R8 )(R9 )，其中R7 係C0 -C1 伸烷基，且R8 及R9 獨立地為C6 -C10 烯基。
在一個實施例中，R2 係直鏈C6 -C32 烷基。在一個實施例中，R2 係直鏈C6 -C24 烷基。在一個實施例中，R2 係直鏈C7 -C15 烷基。在一個實施例中，R2 係直鏈C7 烷基。在一個實施例中，R2 係直鏈C8 烷基。在一個實施例中，R2 係直鏈C9 烷基。在一個實施例中，R2 係直鏈C10 烷基。在一個實施例中，R2 係直鏈C11 烷基。在一個實施例中，R2 係直鏈C12 烷基。在一個實施例中，R2 係直鏈C13 烷基。在一個實施例中，R2 係直鏈C14 烷基。在一個實施例中，R2 係直鏈C15 烷基。
在一個實施例中，R2 係直鏈C6 -C32 烯基。在一個實施例中，R2 係直鏈C6 -C24 烯基。在一個實施例中，R2 係直鏈C7 -C17 烯基。在一個實施例中，R2 係直鏈C7 烯基。在一個實施例中，R2 係直鏈C8 烯基。在一個實施例中，R2 係直鏈C9 烯基。在一個實施例中，R2 係直鏈C10 烯基。在一個實施例中，R2 係直鏈C11 烯基。在一個實施例中，R2 係直鏈C12 烯基。在一個實施例中，R2 係直鏈C13 烯基。在一個實施例中，R2 係直鏈C14 烯基。在一個實施例中，R2 係直鏈C15 烯基。在一個實施例中，R2 係直鏈C16 烯基。在一個實施例中，R2 係直鏈C17 烯基。
在一個實施例中，R2 係支鏈C6 -C32 烷基。在一個實施例中，R2 係支鏈C6 -C24 烷基。在一個實施例中，R2 係-R7 -CH(R8 )(R9 )，其中R7 係C0 -C5 伸烷基，且R8 及R9 獨立地為C2 -C10 烷基。在一個實施例中，R2 係-R7 -CH(R8 )(R9 )，其中R7 係C0 -C1 伸烷基，且R8 及R9 獨立地為C4 -C8 烷基。
在一個實施例中，R2 係支鏈C6 -C32 烯基。在一個實施例中，R2 係支鏈C6 -C24 烯基。在一個實施例中，R2 係-R7 -CH(R8 )(R9 )，其中R7 係C0 -C5 伸烷基，且R8 及R9 獨立地為C2 -C10 烯基。在一個實施例中，R2 係-R7 -CH(R8 )(R9 )，其中R7 係C0 -C1 伸烷基，且R8 及R9 獨立地為C6 -C10 烯基。
在一個實施例中，Rc 係直鏈C6 -C32 烷基。在一個實施例中，Rc 係直鏈C6 -C24 烷基。在一個實施例中，Rc 係直鏈C7 -C15 烷基。在一個實施例中，Rc 係直鏈C7 烷基。在一個實施例中，Rc 係直鏈C8 烷基。在一個實施例中，Rc 係直鏈C9 烷基。在一個實施例中，Rc 係直鏈C10 烷基。在一個實施例中，Rc 係直鏈C11 烷基。在一個實施例中，Rc 係直鏈C12 烷基。在一個實施例中，Rc 係直鏈C13 烷基。在一個實施例中，Rc 係直鏈C14 烷基。在一個實施例中，Rc 係直鏈C15 烷基。
在一個實施例中，Rc 係直鏈C6 -C32 烯基。在一個實施例中，Rc 係直鏈C6 -C24 烯基。在一個實施例中，Rc 係直鏈C7 -C17 烯基。在一個實施例中，Rc 係直鏈C7 烯基。在一個實施例中，Rc 係直鏈C8 烯基。在一個實施例中，Rc 係直鏈C9 烯基。在一個實施例中，Rc 係直鏈C10 烯基。在一個實施例中，Rc 係直鏈C11 烯基。在一個實施例中，Rc 係直鏈C12 烯基。在一個實施例中，Rc 係直鏈C13 烯基。在一個實施例中，Rc 係直鏈C14 烯基。在一個實施例中，Rc 係直鏈C15 烯基。在一個實施例中，Rc 係直鏈C16 烯基。在一個實施例中，Rc 係直鏈C17 烯基。
在一個實施例中，Rc 係支鏈C6 -C32 烷基。在一個實施例中，Rc 係支鏈C6 -C24 烷基。在一個實施例中，Rc 係-R7 -CH(R8 )(R9 )，其中R7 係C0 -C5 伸烷基，且R8 及R9 獨立地為C2 -C10 烷基。在一個實施例中，Rc 係-R7 -CH(R8 )(R9 )，其中R7 係C0 -C1 伸烷基，且R8 及R9 獨立地為C4 -C8 烷基。
在一個實施例中，Rc 係支鏈C6 -C32 烯基。在一個實施例中，Rc 係支鏈C6 -C24 烯基。在一個實施例中，Rc 係-R7 -CH(R8 )(R9 )，其中R7 係C0 -C5 伸烷基，且R8 及R9 獨立地為C2 -C10 烯基。在一個實施例中，Rc 係-R7 -CH(R8 )(R9 )，其中R7 係C0 -C1 伸烷基，且R8 及R9 獨立地為C6 -C10 烯基。
在一個實施例中，Rf 係直鏈C6 -C32 烷基。在一個實施例中，Rf 係直鏈C6 -C24 烷基。在一個實施例中，Rf 係直鏈C7 -C15 烷基。在一個實施例中，Rf 係直鏈C7 烷基。在一個實施例中，Rf 係直鏈C8 烷基。在一個實施例中，Rf 係直鏈C9 烷基。在一個實施例中，Rf 係直鏈C10 烷基。在一個實施例中，Rf 係直鏈C11 烷基。在一個實施例中，Rf 係直鏈C12 烷基。在一個實施例中，Rf 係直鏈C13 烷基。在一個實施例中，Rf 係直鏈C14 烷基。在一個實施例中，Rf 係直鏈C15 烷基。
在一個實施例中，Rf 係直鏈C6 -C32 烯基。在一個實施例中，Rf 係直鏈C6 -C24 烯基。在一個實施例中，Rf 係直鏈C7 -C17 烯基。在一個實施例中，Rf 係直鏈C7 烯基。在一個實施例中，Rf 係直鏈C8 烯基。在一個實施例中，Rf 係直鏈C9 烯基。在一個實施例中，Rf 係直鏈C10 烯基。在一個實施例中，Rf 係直鏈C11 烯基。在一個實施例中，Rf 係直鏈C12 烯基。在一個實施例中，Rf 係直鏈C13 烯基。在一個實施例中，Rf 係直鏈C14 烯基。在一個實施例中，Rf 係直鏈C15 烯基。在一個實施例中，Rf 係直鏈C16 烯基。在一個實施例中，Rf 係直鏈C17 烯基。
在一個實施例中，Rf 係支鏈C6 -C32 烷基。在一個實施例中，Rf 係支鏈C6 -C24 烷基。在一個實施例中，Rf 係-R7 -CH(R8 )(R9 )，其中R7 係C0 -C5 伸烷基，且R8 及R9 獨立地為C2 -C10 烷基。在一個實施例中，Rf 係-R7 -CH(R8 )(R9 )，其中R7 係C0 -C1 伸烷基，且R8 及R9 獨立地為C4 -C8 烷基。
在一個實施例中，Rf 係支鏈C6 -C32 烯基。在一個實施例中，Rf 係支鏈C6 -C24 烯基。在一個實施例中，Rf 係-R7 -CH(R8 )(R9 )，其中R7 係C0 -C5 伸烷基，且R8 及R9 獨立地為C2 -C10 烯基。在一個實施例中，Rf 係-R7 -CH(R8 )(R9 )，其中R7 係C0 -C1 伸烷基，且R8 及R9 獨立地為C6 -C10 烯基。
在一個實施例中，R1 、R2 、Rc 及Rf 各自獨立地為直鏈C6 -C18 烷基、直鏈C6 -C18 烯基或-R7 -CH(R8 )(R9 )，其中R7 係C0 -C5 伸烷基，且R8 及R9 獨立地為C2 -C10 烷基或C2 -C10 烯基。
在一個實施例中，R1 、R2 、Rc 及Rf 各自獨立地為直鏈C7 -C15 烷基、直鏈C7 -C15 烯基或-R7 -CH(R8 )(R9 )，其中R7 係C0 -C1 伸烷基，且R8 及R9 獨立地為C4 -C8 烷基或C6 -C10 烯基。
在一個實施例中，R1 、R2 、Rc 及Rf 各自獨立地為以下結構之一：
Figure 02_image290
、
Figure 02_image292
、
Figure 02_image294
、
Figure 02_image296
、
Figure 02_image298
、
Figure 02_image300
、
Figure 02_image302
、
Figure 02_image304
、
Figure 02_image306
、
Figure 02_image308
、
Figure 02_image310
、
Figure 02_image312
、
Figure 02_image314
、
Figure 02_image316
、
Figure 02_image318
、
Figure 02_image320
、
Figure 02_image322
、
Figure 02_image324
、
Figure 02_image326
、
Figure 02_image328
或
Figure 02_image330
。
在一個實施例中，R1 、R2 、Rc 及Rf 各自獨立地視情況經取代。在一個實施例中，視情況選用之取代基係-O-(C6 -C24 烷基)。在一個實施例中，視情況選用之取代基係-O-(C6 -C24 烯基)。在一個實施例中，視情況選用之取代基係–C(=O)-(C6 -C24 烷基)。在一個實施例中，視情況存在之取代基係–C(=O)-(C6 -C24 烯基)。
在一個實施例中，Ra 及Rd 各自獨立地為H。在一個實施例中，Ra 、Rb 、Rd 及Re 各自獨立地為H。在一個實施例中，Ra 及Rd 各自獨立地為C1 -C24 烷基。在一個實施例中，Ra 及Rd 各自獨立地為C1 -C18 烷基。在一個實施例中，Ra 及Rd 各自獨立地為C1 -C12 烷基。在一個實施例中，Ra 及Rd 各自獨立地為C1 -C6 烷基。
在一個實施例中，Rb 、Rc 、Re 及Rf 各自獨立地為正己基或正辛基。
在一個實施例中，Rc 及Rf 各自獨立地為支鏈C6 -C24 烷基或支鏈C6 -C24 烯基。在一個實施例中，Rc 及Rf 各自獨立地為-R7 -CH(R8 )(R9 )，其中R7 係C1 -C5 伸烷基，且R8 及R9 獨立地為C2 -C10 烷基或C2 -C10 烯基。
在一個實施例中，化合物係表1中之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、前藥或立體異構物。表 1.
Figure 02_image332
化合物1
Figure 02_image334
化合物2
Figure 02_image336
化合物3
Figure 02_image338
化合物4
Figure 02_image340
化合物5
Figure 02_image342
化合物6
Figure 02_image344
化合物7
Figure 02_image346
化合物8
Figure 02_image348
化合物9
Figure 02_image350
化合物10
Figure 02_image352
化合物11
Figure 02_image354
化合物12
Figure 02_image356
化合物13
Figure 02_image358
化合物14
Figure 02_image360
化合物15
Figure 02_image362
化合物16
Figure 02_image364
化合物17
Figure 02_image366
化合物18
Figure 02_image368
化合物20
Figure 02_image370
化合物21
Figure 02_image372
化合物22
Figure 02_image374
化合物23
Figure 02_image376
化合物24
Figure 02_image378
化合物25
Figure 02_image380
化合物26
Figure 02_image382
化合物27
Figure 02_image384
化合物28
Figure 02_image386
化合物29
Figure 02_image388
化合物30
Figure 02_image390
化合物31
Figure 02_image392
化合物32
Figure 02_image394
化合物33
Figure 02_image396
化合物34
Figure 02_image398
化合物35
Figure 02_image400
化合物36
Figure 02_image402
化合物37
Figure 02_image404
化合物38
Figure 02_image406
化合物39
Figure 02_image408
化合物40
Figure 02_image410
化合物41
Figure 02_image412
化合物42
Figure 02_image414
化合物43
Figure 02_image416
化合物44
Figure 02_image418
化合物45
Figure 02_image420
化合物46
Figure 02_image422
化合物47
Figure 02_image424
化合物48
Figure 02_image426
化合物49
Figure 02_image428
化合物50
Figure 02_image430
化合物51
Figure 02_image432
化合物52
Figure 02_image434
化合物54
Figure 02_image436
化合物55
Figure 02_image438
化合物56
Figure 02_image440
化合物57
Figure 02_image442
化合物58
Figure 02_image444
化合物59
Figure 02_image446
化合物60
Figure 02_image448
化合物61
Figure 02_image450
化合物62
Figure 02_image452
化合物63
Figure 02_image454
化合物64
Figure 02_image456
化合物65
Figure 02_image458
化合物66
Figure 02_image460
化合物67
Figure 02_image462
化合物68
Figure 02_image464
化合物69
Figure 02_image466
化合物70
Figure 02_image468
化合物71
Figure 02_image470
化合物72
Figure 02_image472
化合物73
Figure 02_image474
化合物74
Figure 02_image476
化合物75
Figure 02_image478
化合物76
Figure 02_image480
化合物77
Figure 02_image482
化合物78
Figure 02_image484
化合物79
Figure 02_image486
化合物80
Figure 02_image488
化合物81
Figure 02_image490
化合物82
Figure 02_image492
化合物83
Figure 02_image494
化合物84
Figure 02_image496
化合物85
Figure 02_image498
化合物86
Figure 02_image500
化合物87
Figure 02_image502
化合物88
Figure 02_image504
化合物89
Figure 02_image506
化合物90
Figure 02_image508
化合物91
Figure 02_image510
化合物92
Figure 02_image512
化合物93
Figure 02_image514
化合物94
Figure 02_image516
化合物95
Figure 02_image518
化合物96
Figure 02_image520
化合物97
Figure 02_image522
化合物98
Figure 02_image524
化合物99
Figure 02_image526
化合物101
Figure 02_image528
化合物102
Figure 02_image530
化合物103
Figure 02_image532
化合物104
Figure 02_image534
化合物105
Figure 02_image536
化合物106
Figure 02_image538
化合物107
Figure 02_image540
化合物108
Figure 02_image542
化合物109
Figure 02_image544
化合物110
Figure 02_image546
化合物111
Figure 02_image548
化合物112
Figure 02_image550
化合物113
Figure 02_image552
化合物114
Figure 02_image554
化合物115
Figure 02_image556
化合物116
Figure 02_image558
化合物117
Figure 02_image560
化合物118
Figure 02_image562
化合物119
Figure 02_image564
化合物120
Figure 02_image566
化合物121
Figure 02_image568
化合物122
Figure 02_image570
化合物123
Figure 02_image572
化合物124
Figure 02_image574
化合物125
Figure 02_image576
化合物126
Figure 02_image578
化合物127
Figure 02_image580
化合物128
Figure 02_image582
化合物129
Figure 02_image584
化合物130
Figure 02_image586
化合物131
Figure 02_image588
化合物132
Figure 02_image590
化合物133
Figure 02_image592
化合物134
Figure 02_image594
化合物135
Figure 02_image596
化合物136
Figure 02_image598
化合物137
Figure 02_image600
化合物138
Figure 02_image602
化合物139
Figure 02_image604
化合物140
Figure 02_image606
化合物141
Figure 02_image608
化合物142
Figure 02_image610
化合物143
Figure 02_image612
化合物144
Figure 02_image614
化合物145
Figure 02_image616
化合物146
Figure 02_image618
化合物147
Figure 02_image620
化合物148
Figure 02_image622
化合物149
Figure 02_image624
化合物150
Figure 02_image626
化合物151
Figure 02_image628
化合物152
Figure 02_image630
化合物153
Figure 02_image632
化合物154
Figure 02_image634
化合物155
應理解，如上所示的本文所提供之化合物的任何實施例，以及如上所示的本文所提供之化合物的任何特定取代基及/或變量可獨立地與該等化合物之其他實施例及/或取代基及/或變量組合以形成以上未具體闡述之實施例。另外，在列出任何特定基團或變數之取代基及/或變量之清單的情況下，應理解，可自特定實施例及/或申請專利範圍中刪除每一個別取代基及/或變量，且其餘的取代基及/或變量清單將被認為在本文所提供之實施例的範圍內。
應理解，在本說明書中，所描繪各式之取代基及/或變量的組合只有在此類貢獻產生穩定化合物時才為容許的。5.4 奈米粒子組成物
在一個態樣中，本文描述包含本文所述之脂質化合物的奈米粒子組成物。在特定實施例中，該奈米粒子組成物包含如本文所描述的根據式(I)至(IV) (及其子式)之化合物。
在一些實施例中，當諸如藉由動態光散射(DLS)、透射電子顯微鏡檢查、掃描電子顯微鏡檢查或另一種方法量測時，本文提供之奈米粒子組成物的最大尺寸係1 μm或更短(例如≤1 μm、≤900 nm、≤800 nm、≤700 nm、≤600 nm、≤500 nm、≤400 nm、≤300 nm、≤200 nm、≤175 nm、≤150 nm、≤125 nm、≤100 nm、≤75 nm、≤50 nm或更短)。在一個實施例中，本文提供之脂質奈米粒子具有在約40至約200 nm範圍內的至少一個尺寸。在一個實施例中，該至少一個尺寸在約40至約100 nm範圍內。
可結合本揭示案使用之奈米粒子組成物包括例如脂質奈米粒子(LNP)、奈米脂蛋白粒子、脂質體、脂質囊泡及脂質複合物(lipoplex)。在一些實施例中，奈米粒子組成物係包括一或多個脂質雙層之囊泡。在一些實施例中，奈米粒子組成物包括經水性隔室隔開的兩個或更多個同心雙層。脂質雙層可經官能化及/或彼此交聯。脂質雙層可包括一或多種配體、蛋白質或通道。
奈米粒子組成物之特徵可取決於其組分。舉例而言，包括膽固醇作為結構脂質之奈米粒子組成物可具有與包括不同結構脂質之奈米粒子組成物不同的特徵。類似地，奈米粒子組成物之特徵可取決於其組分之絕對或相對量。舉例而言，包括較高莫耳分率之磷脂的奈米粒子組成物可具有與包括較低莫耳分率之磷脂的奈米粒子組成物不同的特徵。特徵亦可取決於該奈米粒子組成物之製備方法及條件而變化。
奈米粒子組成物可藉由多種方法表徵。舉例而言，可使用顯微鏡檢查(例如透射電子顯微鏡檢查或掃描電子顯微鏡檢查)來檢查奈米粒子組成物之形態及大小分佈。可使用動態光散射或電位測定法(例如電位滴定法)量測ζ電位。動態光散射亦可用於確定粒度。亦可使用儀器，諸如Zetasizer Nano ZS (Malvem Instruments Ltd, Malvem及Worcestershire, UK)量測奈米粒子組成物之多個特徵，諸如粒度、多分散指數及ζ電位。
Dh (大小)：奈米粒子組成物之平均大小可在數十奈米至數百奈米之間。舉例而言，平均大小可為約40 nm至約150 nm，諸如為約40 nm、45 nm、50 nm、55 nm、60 nm、65 nm、70 nm、75 nm、80 nm、85 nm、90 nm、95 nm、100 nm、105 nm、110 nm、115 nm、120 nm、125 nm、130 nm、135 nm、140 nm、145 nm或150 nm。在一些實施例中，奈米粒子組成物之平均大小可為約50 nm至約100 nm、約50 nm至約90 nm、約50 nm至約80 nm、約50 nm至約70 nm、約50 nm至約60 nm、約60 nm至約100 nm、約60 nm至約90 nm、約60 nm至約80 nm、約60 nm至約70 nm、約70 nm至約100 nm、約70 nm至約90 nm、約70 nm至約80 nm、約80 nm至約100 nm、約80 nm至約90 nm或約90 nm至約100 nm。在某些實施例中，奈米粒子組成物之平均大小可為約70 nm至約100 nm。在一些實施例中，平均大小可為約80 nm。在其他實施例中，平均大小可為約100 nm。
PDI：奈米粒子組成物可為相對均質的。可使用多分散指數指示奈米粒子組成物之均質性，例如奈米粒子組成物之粒度分佈。較小(例如小於0.3)的多分散指數一般指示較窄的粒度分佈。奈米粒子組成物之多分散指數可為約0至約0.25，諸如0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07、0.08、0.09、0.10、0.11、0.12、0.13、0.14、0.15、0.16、0.17、0.18、0.19、0.20、0.21、0.22、0.23、0.24或0.25。在一些實施例中，奈米粒子組成物之多分散指數可為約0.10至約0.20。
包封效率：治療劑及/或預防劑之包封效率描述相對於所提供之初始量，在製備後經奈米粒子組成物包封或以其他方式與奈米粒子組成物締合的治療劑及/或預防劑之量。包封效率合意地較高(例如接近100%)。包封效率可例如藉由比較在用一或多種有機溶劑或清潔劑破壞奈米粒子組成物之前與之後含有奈米粒子組成物之溶液中治療劑及/或預防劑之量來量測。螢光可用於量測溶液中游離治療劑及/或預防劑(例如RNA)之量。對於本文所述之奈米粒子組成物，治療劑及/或預防劑之包封效率可為至少50%，例如50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%。在一些實施例中，包封效率可為至少80%。在某些實施例中，包封效率可為至少90%。
表觀pKa：奈米粒子組成物之ζ電位可用於指示該組成物之動電位。舉例而言，ζ電位可描述奈米粒子組成物之表面電荷。具有相對較低正電荷或負電荷之奈米粒子組成物一般係合意的，因為帶較高電荷之物質可與體內之細胞、組織及其他成分發生不合意之相互作用。在一些實施例中，奈米粒子組成物之ζ電位可為約- 10 mV至約+ 20 mV、約- 10 mV至約+ 15mV、約- 10 mV至約+ 10 mV、約- 10 mV至約+ 5 mV、約- 10 mV至約0 mV、約- 10 mV至約- 5 mV、約- 5 mV至約+ 20 mV、約- 5 mV至約+ 15 mV、約- 5 mV至約+ 10 mV、約- 5 mV至約+ 5 mV、約- 5 mV至約0 mV、約0 mV至約+ 20 mV、約0 mV至約+ 15 mV、約0 mV至約+ 10 mV、約0 mV至約+ 5 mV、約+ 5 mV至約+ 20 mV、約+ 5 mV至約+ 15 mV或約+ 5 mV至約+ 10 mV。
在另一個實施例中，自複製型RNA可調配於脂質體中。作為非限制性實例，自複製型RNA可如以全文引用之方式併入本文中的國際公開案第WO20120067378號中所述而調配於脂質體中。在一個態樣中，脂質體可包含pKa值有利於遞送mRNA之脂質。在另一個態樣中，脂質體可在生理pH值下具有基本上呈中性之表面電荷且因此可有效用於免疫接種(參見例如以全文引用之方式併入本文中的國際公開案第WO20120067378號中所述之脂質體)。
在一些實施例中，所述奈米粒子組成物包含脂質組分，該脂質組分包括至少一種脂質，諸如本文所述的根據式(I)至(IV) (及其子式)之一的化合物。舉例而言，在一些實施例中，奈米粒子組成物可包括脂質組分，該脂質組分包括一種本文所提供之化合物。奈米粒子組成物亦可包括一或多種如下所述之其他脂質或非脂質組分。5.4.1 陽離子 / 可電離脂質
如本文所述，在一些實施例中，本文所提供之奈米粒子組成物除包含根據式(I)至(IV) (及其子式)之脂質以外，亦包含一或多種帶電或可電離之脂質。不受理論束縛，經審慎考慮，奈米粒子組成物之某些帶電或兩性離子脂質組分類似於細胞膜中之脂質組分，由此可改善奈米粒子之細胞攝取。可形成本發明奈米粒子組成物之一部分的示例性帶電或可電離之脂質包括但不限於3-(雙十二烷基胺基)-N1,N1,4-三(十二烷基)-1-哌𠯤乙胺(KL10)、N1-[2-(雙十二烷基胺基)乙基]-N1,N4,N4-三(十二烷基)-1,4-哌𠯤二乙胺(KL22)、14,25-雙十三烷基-15,18,21,24-四氮雜-八(三十烷)(KL25)、1,2-二亞油基氧基-N,N-二甲基胺基丙烷(DLinDMA)、2,2-二亞油基-4-二甲基胺基甲基-[1,3]-二氧雜環戊烷(DLin-K-DMA)、4-(二甲基胺基)丁酸七(三十碳)-6,9,28,31-四烯-19-基酯(DLin-MC3-DMA)、2,2-二亞油基-4-(2-二甲基胺基乙基)-[1,3]-二氧雜環戊烷(DLin-KC2-DMA)、1,2-二油基氧基-N,N-二甲基胺基丙烷(DODMA)、2-({8-[(3β)-膽固-5-烯-3-基氧基]辛基}氧基)-N,N-二甲基-3 [(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基氧基]丙-1-胺(Octyl-CLinDMA)、(2R)-2-({8-[(3β)-膽固-5-烯-3-基氧基]辛基}氧基)-N,N-二甲基-3-[(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基氧基]丙-1-胺(Octyl-CLinDMA (2R))、(2S)-2-({8-[(3β)-膽固-5-烯-3-基氧基]辛基}氧基)-N,N-二甲基-3-[(9Z-,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基氧基]丙-1-胺(Octyl-CLinDMA(2S))、(12Z,15Z)-N,N-二甲基-2-壬基二十一碳-12,15-二烯-1-胺、N,N-二甲基-1-{(1S,2R)-2-辛基環丙基}十七烷-8-胺。可形成本發明奈米粒子組成物之一部分的額外示例性帶電或可電離之脂質包括在Sabnis等人, 「A Novel Amino Lipid Series for mRNA Delivery: Improved Endosomal Escape and Sustained Pharmacology and Safety in Non-human Primates」,  Molecular Therapy第26卷, 第6期, 2018年中所述之脂質(例如脂質5)，該文獻全部以引用之方式併入本文。
在一些實施例中，適合陽離子脂質包括氯化N-[1-(2,3-二油基氧基)丙基]-N,N,N-三甲基銨(DOTMA)；氯化N-[1-(2,3-二油醯基氧基)丙基]-N,N,N-三甲基銨(DOTAP)；1,2-二油醯基-sn-甘油-3-乙基磷酸膽鹼(DOEPC)；1,2-二月桂醯基-sn-甘油-3-乙基磷酸膽鹼(DLEPC)；1,2-二肉荳蔻醯基-sn-甘油-3-乙基磷酸膽鹼(DMEPC)；1,2-二肉荳蔻油醯基-sn-甘油-3-乙基磷酸膽鹼(14:1)；N1-[2-((1S)-1-[(3-胺基丙基)胺基]-4-[二(3-胺基-丙基)胺基]丁基甲醯胺基)乙基]-3,4-二[油基氧基]-苯甲醯胺(MVL5)；雙十八烷基醯胺基-甘胺醯基精四胺(DOGS)；3b-[N-(N',N'-二甲基胺基乙基)胺甲醯基]膽固醇(DC-Chol)；溴化雙十八烷基二甲基銨(DDAB)；SAINT-2, N-甲基-4-(二油基)甲基吡錠；溴化1,2-二肉荳蔻基氧基丙基-3-二甲基羥乙基銨(DMRIE)；溴化1,2-二油醯基-3-二甲基-羥乙基銨(DORIE)；氯化1,2-二油醯基氧基丙基-3-二甲基羥乙基銨(DORI)；二烷基化胺基酸(DILA2 ) (例如C18:1-norArg-C16)；氯化二油基二甲基銨(DODAC)；1-棕櫚醯基-2-油醯基-sn-甘油-3-乙基磷酸膽鹼(POEPC)；1,2-二肉荳蔻油醯基-sn-甘油-3-乙基磷酸膽鹼(MOEPC)；二油酸(R)-5-(二甲基胺基)戊烷-1,2-二基酯鹽酸鹽(DODAPen-Cl)；二油酸(R)-5-胍基戊烷-1,2-二基酯鹽酸鹽(DOPen-G)；及氯化(R)-N,N,N-三甲基-4,5-雙(油醯基氧基)戊-1-胺鎓鹽(DOTAPen)。具有在生理pH值下帶電荷之頭基的陽離子脂質亦係適合的，諸如一級胺(例如DODAG N',N'-雙十八烷基-N-4,8-二氮雜-10-胺基胺基癸醯基甘胺酸醯胺)及胍鎓頭基(例如雙-胍鎓-精三胺-膽固醇(BGSC)、雙-胍鎓-膽固醇(BGTC)、PONA及二油酸(R)-5-胍基戊烷-1,2-二基酯鹽酸鹽(DOPen-G))。又另一適合的陽離子脂質係二油酸(R)-5-(二甲基胺基)戊烷-1,2-二基酯鹽酸鹽(DODAPen-Cl)。在某些實施例中，陽離子脂質係特定鏡像異構物或外消旋形式，且包括上述陽離子脂質之各種鹽形式(例如氯化物或硫酸鹽)。舉例而言，在一些實施例中，陽離子脂質係氯化N-[1-(2,3-二油醯基氧基)丙基]-N,N,N-三甲基銨(DOTAP-Cl)或硫酸N-[1-(2,3-二油醯基氧基)丙基]-N,N,N-三甲基銨(DOTAP-Sulfate)。在一些實施例中，陽離子脂質係可電離陽離子脂質，諸如溴化雙十八烷基二甲基銨(DDAB)；1,2-二亞油基氧基-3-二甲基胺基丙烷(DLinDMA)；2,2-二亞油基-4-(2二甲基胺基乙基)-[1,3]-二氧雜環戊烷(DLin-KC2-DMA)；4-(二甲基胺基)丁酸三十七碳-6,9,28,31-四烯-19-基酯(DLin-MC3-DMA)；1,2-二油醯基氧基-3-二甲基胺基丙烷(DODAP)；1,2-二油基氧基-3-二甲基胺基丙烷(DODMA)；及N-𠰌啉基膽固醇(Mo-CHOL)。在某些實施例中，脂質奈米粒子包括兩種或多於兩種陽離子脂質(例如兩種或多於兩種上述陽離子脂質)之組合。
另外，在一些實施例中，可形成本發明奈米粒子組成物之一部分的帶電或可電離之脂質係包括環胺基之脂質。適用於本文所揭示之調配物及方法的額外陽離子脂質包括WO2015199952、WO2016176330及WO2015011633中所描述者，各案全部內容以全文引用之方式併入本文中。5.4.2 聚合物結合之脂質
在一些實施例中，奈米粒子組成物中之脂質組分可包括一或多種聚合物結合之脂質，諸如聚乙二醇化脂質(PEG脂質)。不受理論束縛，經審慎考慮，奈米粒子組成物中之聚合物結合之脂質組分可改善膠體穩定性及/或減少奈米粒子之蛋白質吸收。可結合本揭示案使用之示例性陽離子脂質包括但不限於PEG改質之磷脂醯乙醇胺、PEG改質之磷脂酸、PEG改質之神經醯胺、PEG改質之二烷基胺、PEG改質之二醯基甘油、PEG改質之二烷基甘油及其混合物。舉例而言，PEG脂質可為PEG-c-DOMG、PEG-DMG、PEG-DLPE、PEG-DMPE、PEG-DPPC、PEG-DSPE、神經醯胺-PEG2000或Chol-PEG2000。
在一個實施例中，聚合物結合之脂質係聚乙二醇化脂質。舉例而言，一些實施例包括聚乙二醇化二醯基甘油(PEG-DAG)，諸如1-(單甲氧基-聚乙二醇)-2,3-二肉荳蔻基甘油(PEG-DMG)；聚乙二醇化磷脂醯乙醇胺(PEG-PE)；PEG琥珀酸酯二醯基甘油(PEG-S-DAG)，諸如4-O-(2’,3’-二(十四烷醯氧基)丙基-1-O-(ω-甲氧基(聚乙氧基)乙基)丁二酸酯(PEG-S-DMG)；聚乙二醇化神經醯胺(PEG-cer)；或PEG二烷氧基丙基胺基甲酸酯，諸如ω-甲氧基(聚乙氧基)乙基-N-(2,3-二(十四烷氧基)丙基)胺基甲酸酯或2,3-二(十四烷氧基)丙基-N-(ω-甲氧基)(聚乙氧基)乙基)胺基甲酸酯。
在一個實施例中，聚合物結合之脂質係以在1.0至2.5莫耳%範圍內之濃度存在。在一個實施例中，聚合物結合之脂質係以約1.7莫耳%之濃度存在。在一個實施例中，聚合物結合之脂質係以約1.5莫耳%之濃度存在。
在一個實施例中，陽離子脂質與聚合物結合之脂質的莫耳比在約35:1至約25:1範圍內。在一個實施例中，陽離子脂質與聚合物結合之脂質的莫耳比在約100:1至約20:1範圍內。
在一個實施例中，聚乙二醇化脂質具有下式：
Figure 02_image636
或其醫藥學上可接受之鹽、互變異構物或立體異構物，其中： R12 及R13 各自獨立地為含有10至30個碳原子之直鏈或支鏈飽和或不飽和烷基鏈，其中該烷基鏈視情況間雜有一或多個酯鍵；且 w具有在30至60範圍內之平均值。
在一個實施例中，R12 及R13 各自獨立地為含有12至16個碳原子之直鏈飽和烷基鏈。在其他實施例中，平均w在42至55範圍內，例如平均w係42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54或55。在一些特定實施例中，平均w係約49。
在一個實施例中，聚乙二醇化脂質具有下式：
Figure 02_image638
其中平均w係約49。5.4.3 結構脂質
在一些實施例中，奈米粒子組成物之脂質組分可包括一或多種結構脂質。不受理論束縛，經審慎考慮，結構脂質可使奈米粒子之兩親結構，諸如但不限於奈米粒子之脂質雙層結構穩定。可結合本揭示案使用之示例性結構脂質包括但不限於膽固醇、糞固醇、穀固醇、麥角固醇、菜油固醇、豆固醇、菜子固醇、番茄鹼、番茄苷、熊果酸、α-生育酚及其混合物。在某些實施例中，結構脂質係膽固醇。在一些實施例中，結構脂質包括膽固醇及皮質類固醇(諸如普賴蘇穠(prednisolone)、地塞米松(dexamethasone)、普賴松(prednisone)及氫化可體松(hydrocortisone))或其組合。
在一個實施例中，本文所提供之脂質奈米粒子包含類固醇或類固醇類似物。在一個實施例中，類固醇或類固醇類似物係膽固醇。在一個實施例中，類固醇係以在39至49莫耳%、40至46莫耳%、40至44莫耳%、40至42莫耳%、42至44莫耳%或44至46莫耳%範圍內之濃度存在。在一個實施例中，類固醇係以40、41、42、43、44、45或46莫耳%之濃度存在。
在一個實施例中，陽離子脂質與類固醇之莫耳比在1.0:0.9至1.0:1.2、或1.0:1.0至1.0:1.2範圍內。在一個實施例中，陽離子脂質與膽固醇之莫耳比在約5:1至1:1範圍內。在一個實施例中，類固醇以在32至40莫耳%類固醇範圍內之濃度存在。5.4.4 磷脂
在一些實施例中，奈米粒子組成物中之脂質組分可包括一或多種磷脂，諸如一或多種(多)不飽和脂質。不受理論束縛，經審慎考慮，磷脂可組裝成一或多個脂質雙層結構。可形成本發明奈米粒子組成物之一部分的示例性磷脂包括但不限於1,2-二硬脂醯基-sn-甘油-3-磷酸膽鹼(DSPC)、1,2-二油醯基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(DOPE)、1,2-二亞油醯基-sn-甘油-3-磷酸膽鹼(DLPC)、1,2-二肉荳蔻醯基-sn-甘油磷酸膽鹼(DMPC)、1,2-二油醯基-sn-甘油-3-磷酸膽鹼(DOPC)、1,2-二棕櫚醯基-sn-甘油-3-磷酸膽鹼(DPPC)、1,2-二(十一烷醯基)-sn-甘油磷酸膽鹼(DUPC)、1-棕櫚醯基-2-油醯基-sn-甘油-3-磷酸膽鹼(POPC)、1,2-二-O-十八碳烯基-sn-甘油-3-磷酸膽鹼(18:0 Diether PC)、1-油醯基-2-膽固醇基半琥珀醯基-sn-甘油-3-磷酸膽鹼(OChemsPC)、1-十六烷基-sn-甘油-3-磷酸膽鹼(C16 Lyso PC)、1,2-二亞油醯基-sn-甘油-3-磷酸膽鹼、1,2-二花生四烯醯基-sn-甘油-3-磷酸膽鹼、1,2-二十二碳六烯醯基-sn-甘油-3-磷酸膽鹼、1,2-二植烷醯基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(ME 16.0 PE)、1,2-二硬脂醯基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺、1,2-二亞油醯基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺、1,2-二亞油醯基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺、1,2-二花生四烯醯基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺、1,2-二十二碳六烯醯基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺、1,2-二油醯基-sn-甘油-3-磷酸-外消旋-(1-甘油)鈉鹽(DOPG)及鞘磷脂。在某些實施例中，奈米粒子組成物包括DSPC。在某些實施例中，奈米粒子組成物包括DOPE。在一些實施例中，奈米粒子組成物包括DSPC及DOPE兩者。
另外的示例性中性脂質包括例如二棕櫚醯基磷脂醯甘油(DPPG)、棕櫚醯基油醯基磷脂醯乙醇胺(POPE)及二油醯基磷脂醯乙醇胺4-(N-馬來醯亞胺基甲基)-環己烷-1甲酸酯(DOPE-mal)、二棕櫚醯基磷脂醯乙醇胺(DPPE)、二肉荳蔻醯基磷酸乙醇胺(DMPE)、二硬脂醯基-磷脂醯乙醇胺(DSPE)、16-O-單甲基PE、16-O-二甲基PE、18-1-反式PE、1-硬脂醯基-2-油醯基磷脂醯乙醇胺(SOPE)及1,2-二反油醯基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(transDOPE)。在一個實施例中，中性脂質係1,2-二硬脂醯基-sn-甘油-3磷酸膽鹼(DSPC)。在一個實施例中，中性脂質選自DSPC、DPPC、DMPC、DOPC、POPC、DOPE及SM。
在一個實施例中，中性脂質係磷脂醯膽鹼(PC)、磷脂醯乙醇胺(PE)、磷脂醯絲胺酸(PS)、磷脂酸(PA)或磷脂醯甘油(PG)。
可形成本發明奈米粒子組成物之一部分的額外磷脂亦包括WO2017/112865中所描述者，其全部內容以全文引用之方式併入本文中。5.4.5 治療性有效負載
根據本揭示案，本文所述之奈米粒子組成物可進一步包含一或多種治療劑及/或預防劑。此等治療劑及/或預防劑在本揭示案中有時稱為「治療性有效負載」或「有效負載」。在一些實施例中，該治療性有效負載可在活體內或活體外，使用奈米粒子作為遞送媒劑投與。
在一些實施例中，治療性組成物包含以下作為治療性有效負載：小分子化合物(例如小分子藥物)，諸如抗癌劑(例如長春新鹼(vincristine)、小紅莓(doxorubicin)、米托蒽醌(mitoxantrone)、喜樹鹼(camptothecin)、順鉑(cisplatin)、博萊黴素(bleomycin)、環磷醯胺(cyclophosphamide)、甲胺喋呤(methotrexate)及鏈脲佐菌素(streptozotocin))、抗腫瘤劑(例如放線菌素D (actinomycin D)、長春新鹼、長春花鹼(vinblastine)、胞嘧啶阿拉伯糖苷(cytosine arabinoside)、蒽環黴素(anthracyclines)、烷基化劑)、鉑類化合物、抗代謝物及核苷類似物，諸如甲胺喋呤以及嘌呤及嘧啶類似物)、抗感染劑、局麻藥(例如地布卡因(dibucaine)及氯丙嗪(chlorpromazine))、β-腎上腺素性阻斷劑(例如普萘洛爾(propranolol)、噻嗎洛爾(timolol)及拉貝洛爾(labetalol))、抗高血壓劑(例如可樂定(clonidine)及肼屈嗪(hydralazine))、抗抑鬱劑(例如丙咪嗪(imipramine)、阿米替林(amitriptyline)及多塞平(doxepin))、抗痙攣劑(例如苯妥英(phenytoin))、抗組胺劑(例如苯海拉明(diphenhydramine)、氯非安明(chlorpheniramine)及異丙嗪(promethazine))、抗生素/抗細菌劑(例如慶大黴素(gentamycin)、環丙沙星(ciprofloxacin)及頭孢西丁(cefoxitin))、抗真菌劑(例如咪康唑(miconazole)、特康唑(terconazole)、益康唑(econazole)、異康唑(isoconazole)、布康唑(butaconazole)、克黴唑(clotrimazole)、伊曲康唑(itraconazole)、制黴菌素(nystatin)、萘替芬(naftifine)及兩性黴素B (amphotericin B))、抗寄生蟲劑、激素、激素拮抗劑、免疫調節劑、神經傳遞質拮抗劑、抗青光眼劑、維生素、麻醉劑及成像劑。
在一些實施例中，該治療性有效負載包含細胞毒素、放射性離子、化學治療劑、疫苗、引起免疫反應之化合物及/或另一治療劑及/或預防劑。細胞毒素或細胞毒性劑包括可能對細胞有害之任何劑。實例包括但不限於紫杉醇(taxol)、細胞鬆弛素B (cytochalasin B)、短桿菌肽D (gramicidin D)、溴化乙錠(ethidium bromide)、依米丁(emetine)、絲裂黴素(mitomycin)、依託泊苷(etoposide)、替尼泊苷(teniposide)、長春新鹼、長春花鹼、秋水仙鹼(colchicine)、小紅莓、道諾黴素(daunorubicin)、二羥基蒽二酮(dihydroxyanthracinedione)、米托蒽醌、米拉黴素(mithramycin)、放線菌素D (actinomycin D)、1-脫氫睪酮、糖皮質激素、普魯卡因(procaine)、丁卡因(tetracaine)、利多卡因(lidocaine)、普萘洛爾、嘌呤黴素(puromycin)、美登素類化合物(maytansinoids)，例如美登醇(maytansinol)、拉奇黴素(rachelmycin) (CC-1065)及其類似物或同系物。放射性離子包括但不限於碘(例如碘125或碘131)、鍶89、磷、鈀、銫、銥、磷酸根、鈷、釔90、釤153及鐠。
在其他實施例中，本發明奈米粒子組成物之治療性有效負載可包括但不限於治療劑及/或預防劑，諸如抗代謝物(例如甲胺喋呤、6-巰基嘌呤、6-硫鳥嘌呤、阿糖胞苷(cytarabine)、5-氟尿嘧啶、達卡巴嗪(dacarbazine))、烷基化劑(例如氮芥(mechlorethamine)、噻替哌(thiotepa)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、拉奇黴素(CC-1065)、美法崙(melphalan)、卡莫司汀(carmustine) (BSNU)、洛莫司汀(lomustine) (CCNU)、環磷醯胺、白消安(busulfan)、二溴甘露醇(dibromomannitol)、鏈脲佐菌素、絲裂黴素C及順二氯二胺鉑(II) (DDP)順鉑)、蒽環黴素(例如道諾黴素(先前稱為柔紅黴素(daunomycin))及小紅莓)、抗生素(例如放線菌素D (dactinomycin) (先前稱為放線菌素))、博萊黴素、米拉黴素及安曲黴素(anthramycin) (AMC))及抗有絲分裂劑(例如長春新鹼、長春花鹼、紫杉醇及美登素類化合物)。
在一些實施例中，該奈米粒子組成物包含諸如肽及多肽之類生物分子作為治療性有效負載。形成本發明奈米粒子組成物之一部分的生物分子可為天然來源或合成的。舉例而言，在一些實施例中，本發明奈米粒子組成物之治療性有效負載可包括但不限於慶大黴素、阿米卡星(amikacin)、胰島素、紅血球生成素(EPO)、顆粒球集落刺激因子(G-CSF)、顆粒球-巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)、因子VIR、促黃體激素釋放激素(LHRH)類似物、干擾素、肝素、B型肝炎表面抗原、傷寒疫苗、霍亂疫苗以及肽及多肽。5.4.5.1 核酸
在一些實施例中，本發明奈米粒子組成物包含一或多個核酸分子(例如DNA或RNA分子)作為治療性有效負載。可包括在本發明奈米粒子組成物中作為治療性有效負載的核酸分子之例示性形式包括但不限於以下一或多種：脫氧核糖核酸(DNA)、核糖核酸(RNA)，包括信使mRNA (mRNA)、其雜交體、RNAi誘導劑、RNAi劑、siRNA、shRNA、miRNA、反義RNA、核糖酶、催化性DNA、誘導形成三螺旋之RNA、適體、載體等。在某些實施例中，該治療性有效負載包含RNA。可包括在本發明奈米粒子組成物中作為治療性有效負載的RNA分子包括但不限於短聚體(shortmer)、agomir、antagomir、反義體(antisense)、核糖酶、小干擾RNA (siRNA)、不對稱干擾RNA (aiRNA)、微小RNA (miRNA)、Dicer-受質RNA (dsRNA)、小髮夾RNA (shRNA)、轉移RNA (tRNA)、信使RNA (mRNA)及此項技術中已知之RNA分子的其他形式。在特定實施例中，該RNA係mRNA。
在其他實施例中，該奈米粒子組成物包含siRNA分子作為治療性有效負載。確切地說，在一些實施例中，siRNA分子能夠選擇性干擾並下調感興趣基因之表現。舉例而言，在一些實施例中，在向有需要之個體投與包括siRNA之奈米粒子組成物後，siRNA有效負載使特定疾病、病症或疾患選擇性沉默。在一些實施例中，siRNA分子包含與編碼感興趣蛋白質產物之mRNA序列互補的序列。在一些實施例中，siRNA分子係免疫調節性siRNA。
在一些實施例中，該奈米粒子組成物包含shRNA分子或編碼shRNA分子之載體作為治療性有效負載。確切地說，在一些實施例中，該治療性有效負載在投與目標細胞後，在目標細胞內產生shRNA。與shRNA相關之構築體及機制係相關技術中熟知的。
在一些實施例中，該奈米粒子組成物包含mRNA分子作為治療性有效負載。確切地說，在一些實施例中，該mRNA分子編碼感興趣多肽，包括任何天然或非天然存在或以其他方式修飾之多肽。由mRNA編碼之多肽可具有任何大小且可具有任何二級結構或活性。在一些實施例中，由mRNA有效負載編碼之多肽當在細胞中表現時可具有治療作用。
在某一實施例中，本揭示案之核酸分子包含mRNA分子。在特定實施例中，該核酸分子包含至少一個編碼感興趣肽或多肽之編碼區(例如開放閱讀框(ORF))。在一些實施例中，核酸分子還包含至少一個非轉譯區(UTR)。在特定實施例中，非轉譯區(UTR)位於編碼區之上游(5'端)，且在本文中稱為5'-UTR。在特定實施例中，非轉譯區(UTR)位於編碼區之下游(3'端)，且在本文中稱為3'-UTR。在特定實施例中，核酸分子同時包含5'-UTR及3'-UTR。在一些實施例中，5'-UTR包含5'-帽結構。在一些實施例中，核酸分子包含Kozak序列(例如在5'-UTR中)。在一些實施例中，核酸分子包含聚A區(例如在3'-UTR中)。在一些實施例中，核酸分子包含聚腺苷酸化信號(例如在3'-UTR中)。在一些實施例中，核酸分子包含穩定區(例如在3'-UTR中)。在一些實施例中，核酸分子包含二級結構。在一些實施例中，二級結構係莖-環。在一些實施例中，核酸分子包含莖-環序列(例如在5'-UTR及/或3'-UTR中)。在一些實施例中，核酸分子包含一或多個能夠在剪接過程中切除的內含子區。在一個特定實施例中，核酸分子包含一或多個選自5'-UTR及編碼區之區域。在一個特定實施例中，核酸分子包含一或多個選自編碼區及3'-UTR之區域。在一個特定實施例中，核酸分子包含一或多個選自5'-UTR、編碼區及3’-UTR之區域。編碼區
在一些實施例中，本揭示案之核酸分子包含至少一個編碼區。在一些實施例中，編碼區係編碼單個肽或蛋白質之開放閱讀框(ORF)。在一些實施例中，編碼區包含至少兩個ORF，每個ORF編碼一種肽或蛋白質。在編碼區包含多於一個ORF之實施例中，編碼之肽及/或蛋白質可彼此相同或不同。在一些實施例中，編碼區中之多個ORF經非編碼序列隔開。在特定實施例中，隔開兩個ORF之非編碼序列包含內部核糖體進入位點(IRES)。
不受理論束縛，經審慎考慮，內部核糖體進入位點(IRES)可用作唯一的核糖體結合位點，或充當mRNA之多個核糖體結合位點之一。包含多於一個功能性核糖體結合位點的mRNA分子可編碼若干肽或多肽，該等肽或多肽獨立地由核糖體轉譯(例如多順反子mRNA)。因此，在一些實施例中，本揭示案之核酸分子(例如mRNA)包含一或多個內部核糖體進入位點(IRES)。可以與本揭示案結合使用之IRES序列的實例包括但不限於來自小RNA病毒(例如FMDV)、害蟲病毒(CFFV)、脊髓灰質炎病毒(PV)、腦心肌炎病毒(ECMV)、口蹄疫病毒(FMDV)、C型肝炎病毒(HCV)、豬瘟病毒(CSFV)、鼠白血病病毒(MLV)、猴免疫缺陷病毒(SIV)或蟋蟀麻痺病毒(CrPV)。
在各個實施例中，本揭示案之核酸分子編碼至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10種或更多種肽或蛋白質。核酸分子編碼之肽及蛋白質可相同或不同。在一些實施例中，本揭示案之核酸分子編碼二肽(例如肌肽及鵝肌肽)。在一些實施例中，核酸分子編碼三肽。在一些實施例中，核酸分子編碼四肽。在一些實施例中，核酸分子編碼五肽。在一些實施例中，核酸分子編碼六肽。在一些實施例中，核酸分子編碼七肽。在一些實施例中，核酸分子編碼八肽。在一些實施例中，核酸分子編碼九肽。在一些實施例中，核酸分子編碼十肽。在一些實施例中，核酸分子編碼具有至少約15個胺基酸之肽或多肽。在一些實施例中，核酸分子編碼具有至少約50個胺基酸之肽或多肽。在一些實施例中，核酸分子編碼具有至少約100個胺基酸之肽或多肽。在一些實施例中，核酸分子編碼具有至少約150個胺基酸之肽或多肽。在一些實施例中，核酸分子編碼具有至少約300個胺基酸之肽或多肽。在一些實施例中，核酸分子編碼具有至少約500個胺基酸之肽或多肽。在一些實施例中，核酸分子編碼具有至少約1000個胺基酸之肽或多肽。
在一些實施例中，本揭示案之核酸分子的長度為至少約30個核苷酸(nt)。在一些實施例中，核酸分子之長度為至少約35 nt。在一些實施例中，核酸分子之長度為至少約40 nt。在一些實施例中，核酸分子之長度為至少約45 nt。在一些實施例中，核酸分子之長度為至少約50 nt。在一些實施例中，核酸分子之長度為至少約55 nt。在一些實施例中，核酸分子之長度為至少約60 nt。在一些實施例中，核酸分子之長度為至少約65 nt。在一些實施例中，核酸分子之長度為至少約70 nt。在一些實施例中，核酸分子之長度為至少約75 nt。在一些實施例中，核酸分子之長度為至少約80 nt。在一些實施例中，核酸分子之長度為至少約85 nt。在一些實施例中，核酸分子之長度為至少約90 nt。在一些實施例中，核酸分子之長度為至少約95 nt。在一些實施例中，核酸分子之長度為至少約100 nt。在一些實施例中，核酸分子之長度為至少約120 nt。在一些實施例中，核酸分子之長度為至少約140 nt。在一些實施例中，核酸分子之長度為至少約160 nt。在一些實施例中，核酸分子之長度為至少約180 nt。在一些實施例中，核酸分子之長度為至少約200 nt。在一些實施例中，核酸分子之長度為至少約250 nt。在一些實施例中，核酸分子之長度為至少約300 nt。在一些實施例中，核酸分子之長度為至少約400 nt。在一些實施例中，核酸分子之長度為至少約500 nt。在一些實施例中，核酸分子之長度為至少約600 nt。在一些實施例中，核酸分子之長度為至少約700 nt。在一些實施例中，核酸分子之長度為至少約800 nt。在一些實施例中，核酸分子之長度為至少約900 nt。在一些實施例中，核酸分子之長度為至少約1000 nt。在一些實施例中，核酸分子之長度為至少約1100 nt。在一些實施例中，核酸分子之長度為至少約1200 nt。在一些實施例中，核酸分子之長度為至少約1300 nt。在一些實施例中，核酸分子之長度為至少約1400 nt。在一些實施例中，核酸分子之長度為至少約1500 nt。在一些實施例中，核酸分子之長度為至少約1600 nt。在一些實施例中，核酸分子之長度為至少約1700 nt。在一些實施例中，核酸分子之長度為至少約1800 nt。在一些實施例中，核酸分子之長度為至少約1900 nt。在一些實施例中，核酸分子之長度為至少約2000 nt。在一些實施例中，核酸分子之長度為至少約2500 nt。在一些實施例中，核酸分子之長度為至少約3000 nt。在一些實施例中，核酸分子之長度為至少約3500 nt。在一些實施例中，核酸分子之長度為至少約4000 nt。在一些實施例中，核酸分子之長度為至少約4500 nt。在一些實施例中，核酸分子之長度為至少約5000 nt。
在特定實施例中，治療性有效負載包含如本文所述之疫苗組成物(例如基因疫苗)。在一些實施例中，治療性有效負載包含能夠引發針對一或多種目標疾患或疾病之免疫的化合物。在一些實施例中，目標疾患與病原體感染相關或由病原體感染引起，該病原體諸如為冠狀病毒(例如2019-nCoV)、流感病毒、麻疹病毒、人乳頭瘤病毒(HPV)、狂犬病病毒、腦膜炎病毒、百日咳病毒、破傷風病毒、鼠疫病毒、肝炎病毒及結核病病毒。在一些實施例中，治療性有效負載包含編碼病原體特有之致病性蛋白質或其抗原片段或抗原決定基的核酸序列(例如mRNA)。疫苗在投與經疫苗接種之個體後，允許表現編碼之致病性蛋白質(或其抗原片段或抗原決定基)，由此在該個體體內引發針對病原體之免疫。
在一些實施例中，目標疾患與細胞之贅生性生長(諸如癌症)相關或由細胞之贅生性生長引起。在一些實施例中，治療性有效負載包含編碼癌症特有之腫瘤相關抗原(TAA)或其抗原片段或抗原決定基的核酸序列(例如mRNA)。疫苗在投與經疫苗接種之個體後，允許表現所編碼之TAA (或其抗原片段或抗原決定基)，由此在該個體體內引發針對表現TAA之贅生性細胞之免疫。5’- 帽結構
不受理論束縛，經審慎考慮，聚核苷酸之5'-帽結構參與核輸出並增加聚核苷酸穩定性，且結合mRNA帽結合蛋白(CBP)，CBP負責細胞中之聚核苷酸穩定性，且經由CBP與聚A結合蛋白締合形成成熟環狀mRNA物種來引起轉譯能力。5'-帽結構進一步有助於mRNA剪接期間5'-近端內含子之移除。因此，在一些實施例中，本揭示案之核酸分子包含5'-帽結構。
核酸分子可在5'端經細胞內源性轉錄機構戴帽，由此在聚核苷酸的末端鳥苷帽殘基與5'末端轉錄之有義核苷酸之間產生5'-ppp-5'-三磷酸鍵聯。接著，此5'-鳥苷酸帽可經甲基化以產生N7-甲基-鳥苷酸殘基。聚核苷酸5'端之末端及/或末端前(anteterminal)轉錄之核苷酸的核糖亦可視情況經2'-O-甲基化。經由鳥苷酸帽結構水解及裂解進行的5'-脫帽可靶向降解的核酸分子，諸如mRNA分子。
在一些實施例中，本揭示案之核酸分子包含對由內源過程產生之天然5'-帽結構的一或多個改變。不受理論束縛，對5'-帽之修飾可增加聚核苷酸之穩定性，增加聚核苷酸之半衰期，且可增加聚核苷酸之轉譯效率。
對天然5'-帽結構之示例性改變包括產生不可水解之帽結構，以防止脫帽，並由此增加聚核苷酸之半衰期。在一些實施例中，因為帽結構水解需要裂解5'-ppp-5'磷酸二酯鍵，所以在一些實施例中，可在戴帽反應期間使用經修飾之核苷酸。舉例而言，在一些實施例中，可根據製造商之說明書，將來自New England Biolabs (Ipswich, Mass.)之牛痘病毒戴帽酶(Vaccinia Capping Enzyme)用於α-硫代鳥苷核苷酸以在5'-ppp-5'帽中產生硫代磷酸酯鍵聯。可使用額外經修飾之鳥苷核苷酸，諸如α-甲基膦酸及硒代磷酸核苷酸。
對於天然5'-帽結構之額外示例性改變亦包括在戴帽之鳥苷三磷酸(GTP)的2'位及/或3'位的修飾、糖環氧(產生碳環之氧)替代為亞甲基部分(CH2 )、在帽結構之三磷酸橋部分處的修飾或在核鹼基(G)部分處之修飾。
對於天然5'-帽結構之額外示例性改變包括但不限於聚核苷酸5'-末端及/或5'-末端前核苷酸之核糖在糖2'-羥基上的2'-O-甲基化(如上所述)。可使用多個不同的5'-帽結構產生聚核苷酸(諸如mRNA分子)之5'-帽。可與本揭示案結合使用的額外示例性5'-帽結構進一步包括國際專利公開案第WO2008127688號、第WO 2008016473號及第WO 2011015347號中描述者，各案之全部內容以引用之方式併入本文。
在各個實施例中，5'-末端帽可包括帽類似物。帽類似物，在本文中又稱為合成帽類似物、化學帽、化學帽類似物、或結構或功能性帽類似物，在其化學上不同於天然(亦即，內源性、野生型或生理性) 5'-帽結構，同時保留帽功能。帽類似物可按化學方式(亦即，非酶方式)或酶方式合成及/或連接至聚核苷酸。
舉例而言，抗反向帽類似物(ARCA)帽含有經5'-5'-三磷酸酯基團連接之兩個鳥苷，其中一個鳥苷含有N7-甲基以及3'-O-甲基(亦即，N7,3'-O-二甲基-鳥苷-5'-三磷酸-5'-鳥苷、m7 G-3'mppp-G，其可等效地稱為3'O-Me-m7G(5')ppp(5')G)。另一個未改變之鳥苷的3'-O原子與戴帽聚核苷酸(例如mRNA)之5'-末端核苷酸連接。N7-及3'-O-甲基化之鳥苷提供戴帽聚核苷酸(例如mRNA)之末端部分。另一個示例性的帽結構為mCAP，其類似於ARCA，但在鳥苷上具有2'-O-甲基(即 ，N7,2'-O-二甲基-鳥苷-5'-三磷酸-5'-鳥苷，m7 Gm-ppp-G)。
在一些實施例中，帽類似物可為二核苷酸帽類似物。作為非限制性實例，二核苷酸帽類似物可在不同磷酸酯位置處用硼烷磷酸酯基(boranophosphate)或硒代磷酸酯基(phophoroselenoate)進行修飾，諸如美國專利第8,519,110號中所描述之二核苷酸帽類似物，該案全部內容以全文引用的方式併入本文。
在一些實施例中，帽類似物可為此項技術中已知及/或本文所描述的N7-(4-氯苯氧基乙基)取代之二核苷酸帽類似物。N7-(4-氯苯氧基乙基)取代之二核苷酸帽類似物的非限制性實例包括N7-(4-氯苯氧基乙基)-G(5')ppp(5')G及N7-(4-氯苯氧基乙基)-m3'-OG(5')ppp(5')G帽類似物(參見例如Kore等人 , Bioorganic & Medicinal Chemistry 2013 21:4570-4574中所述之各種帽類似物及合成帽類似物之方法；該文獻之完整內容以引用之方式併入本文中)。在其他實施例中，可與本揭示案之核酸分子結合使用的帽類似物係4-氯/溴苯氧基乙基類似物。
在各個實施例中，帽類似物可包括鳥苷類似物。有用的鳥苷類似物包括但不限於肌苷、N1-甲基-鳥苷、2'-氟-鳥苷、7-脫氮-鳥苷、8-側氧基-鳥苷、2-胺基-鳥苷、LNA-鳥苷及2-疊氮基-鳥苷。
不受理論束縛，經審慎考慮，儘管帽類似物允許在活體外轉錄反應中同時進行聚核苷酸之戴帽，但高達20%之轉錄物仍未戴帽。此情形以及帽類似物與細胞內源轉錄機構產生之聚核苷酸之天然5'-帽結構的結構差異可能導致轉譯能力減弱及細胞穩定性降低。
因此，在一些實施例中，本揭示案之核酸分子亦可使用酶在轉錄後戴帽，以便產生更真實(authentic)之5'-帽結構。如本文所使用，短語「更真實」係指一種特徵在結構上或功能上密切反映或模仿內源或野生型特徵。亦即，與先前技術之合成特徵或類似物相比，「更真實」之特徵更好地代表內源性、野生型、天然或生理細胞功能及/或結構，或者其在一或多個方面勝過相應內源性、野生型、天然或生理特徵。可與本揭示案之核酸分子結合使用的更真實之5'-帽結構的非限制性實例為相較於此項技術中已知之合成5'-帽結構(或相較於野生型、天然或生理性5'-帽結構)，尤其具有增強的與帽結合蛋白之結合、增加之半衰期、降低的對5'-核酸內切酶之敏感性及/或減少之5'-脫帽的結構。舉例而言，在一些實施例中，重組牛痘病毒戴帽酶及重組2'-O-甲基轉移酶可在聚核苷酸之5'-末端核苷酸與鳥苷帽核苷酸之間產生經典的5'-5'-三磷酸酯鍵聯，其中帽鳥苷含有N7-甲基化，且聚核苷酸之5'-末端核苷酸含有2'-O-甲基。此類結構稱為帽1結構。與例如此項技術中已知之其他5'帽類似物結構相比，此帽引起更高之轉譯能力、細胞穩定性及減少的細胞促炎性細胞介素之活化。其他示例性帽結構包括7mG(5’)ppp(5’)N,pN2p (帽0)、7mG(5’)ppp(5’)NlmpNp (帽1)、7mG(5’)-ppp(5’)NlmpN2mp (帽2)及m(7)Gpppm(3)(6,6,2’)Apm(2’)Apm(2’)Cpm(2)(3,2’)Up (帽4)。
不受理論束縛，經審慎考慮，本揭示案之核酸分子可在轉錄後戴帽，且由於此方法較為高效，故幾乎100%之核酸分子可經戴帽。非轉譯區 (UTR)
在一些實施例中，本揭示案之核酸分子包含一或多個非轉譯區(UTR)。在一些實施例中，UTR位於核酸分子中編碼區之上游，並被稱為5'-UTR。在一些實施例中，UTR位於核酸分子中編碼區之下游，並被稱為3'-UTR。UTR之序列可與核酸分子中所發現之編碼區的序列同源或異源。多個UTR可包括在核酸分子中，且可具有相同或不同的序列及/或基因起源。根據本揭示案，核酸分子中UTR之任何部分(不包括任何部分)可經密碼子優化，且任何部分可在密碼子優化之前及之後獨立地含有一或多個不同的結構或化學修飾。
在一些實施例中，本揭示案之核酸分子(例如mRNA)包含相對於彼此同源的UTR及編碼區。在一些實施例中，本揭示案之核酸分子(例如mRNA)包含相對於彼此為異源的UTR及編碼區。在一些實施例中，為了監測UTR序列之活性，可在活體外(例如細胞或組織培養物)或在活體內(例如向個體)投與包含UTR及可偵測探針之編碼序列的核酸分子，且可使用此項技術中已知之方法量測UTR序列之作用(例如調節表現量、編碼產物之細胞定位或編碼產物之半衰期)。
在一些實施例中，本揭示案之核酸分子(例如mRNA)的UTR包含至少一個轉譯強化子元件(TEE)，該TEE起到增加由該核酸分子產生之多肽或蛋白質之量的作用。在一些實施例中，TEE位於核酸分子之5'-UTR中。在其他實施例中，TEE位於核酸分子之3'-UTR處。在又其他實施例中，至少兩個TEE分別位於核酸分子之5'-UTR及3'-UTR處。在一些實施例中，本揭示案之核酸分子(例如mRNA)可包含一或多個拷貝之TEE序列或包含多於一個不同的TEE序列。在一些實施例中，存在於本揭示案之核酸分子中的不同TEE序列可相對於彼此為同源的或異源的。
各種TEE序列係此項技術中已知的且可與本揭示案結合使用。舉例而言，在一些實施例中，TEE可為內部核糖體進入位點(IRES)、HCV-IRES或IRES元件。Chappell等人 , Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101:9590-9594, 2004；Zhou等人 ,Proc. Natl. Acad. Sci. 102:6273-6278, 2005。可與本揭示案結合使用的額外內部核糖體進入位點(IRES)包括但不限於美國專利第7,468,275號、美國專利公開案第2007/0048776號及美國專利公開案第2011/0124100號，以及國際專利公開案第 WO2007/025008號及國際專利公開案第WO2001/055369號中所述之IRES，各案之內容以全文引用之方式併入本文。在一些實施例中，TEE可為Wellensiek等人, Genome-wide profiling of human cap-independent translation-enhancing elements,Nature Methods , 2013年8月; 10(8): 747–750之補充表1及補充表2中所述之TEE；各文獻之內容以全文引用之方式併入本文中。
可與本揭示案結合使用的額外示例性TEE包括但不限於美國專利第6,310,197號、美國專利第6,849,405號、美國專利第7,456,273號、美國專利第7,183,395號、美國專利公開案第2009/0226470號、美國專利公開案第2013/0177581號、美國專利公開案第2007/0048776號、美國專利公開案第2011/0124100號、美國專利公開案第2009/0093049號、國際專利公開案第WO2009/075886號、國際專利公開案第WO2012/009644號及國際專利公開案第WO1999/024595號、國際專利公開案第WO2007/025008號、國際專利公開案第WO2001/055371號、歐洲專利第2610341號、歐洲專利第2610340號中所述之TEE序列，各案之內容以全文引用之方式併入本文中。
在各種實施例中，本揭示案之核酸分子(例如mRNA)包含至少一個UTR，其包含至少1個、至少2個、至少3個、至少4個、至少5個、至少6個、至少7個、至少8個、至少9個、至少10個、至少11個、至少12個、至少13個、至少14個、至少15個、至少16個、至少17個、至少18個、至少19個、至少20個、至少21個、至少22個、至少23個、至少24個、至少25個、至少30個、至少35個、至少40個、至少45個、至少50個、至少55個或超過60個TEE序列。在一些實施例中，核酸分子UTR中之TEE序列係該TEE序列之拷貝。在其他實施例中，核酸分子UTR中之至少兩個TEE序列具有不同的TEE序列。在一些實施例中，多個不同的TEE序列以一或多種重複模式佈置於核酸分子之UTR區中。僅出於說明之目的，重複模式可為例如ABABAB、AABBAABBAABB、ABCABCABC或類似物，其中在此等示例性模式中，每個大寫字母(A、B或C)代表不同的TEE序列。在一些實施例中，在核酸分子之UTR中，至少兩個TEE序列彼此為連續的(亦即，其間無間隔子序列)。在其他實施例中，至少兩個TEE序列藉由間隔子序列隔開。在一些實施例中，UTR可包含TEE序列-間隔子序列模組，該模組在UTR中重複至少一次、至少兩次、至少3次、至少4次、至少5次、至少6次、至少7次、至少8次、至少9次或更多次。在本段中描述之任何實施例中，UTR可為核酸分子之5'-UTR、3'-UTR或5'-UTR及3'-UTR兩者。
在一些實施例中，本揭示案之核酸分子(例如mRNA)的UTR包含至少一個轉譯抑制元件，該元件起到減少由該核酸分子產生之多肽或蛋白質之量的作用。在一些實施例中，核酸分子之UTR包含經一或多個小RNA識別的一或多個miR序列或其片段(例如miR種子序列)。在一些實施例中，核酸分子之UTR包含下調核酸分子之轉譯活性的一或多個莖-環結構。用於抑制與核酸分子相關之轉譯活性的其他機制係此項技術中已知的。在本段中描述之任何實施例中，UTR可為核酸分子之5'-UTR、3'-UTR或5'-UTR及3'-UTR兩者。聚腺苷酸化 ( 聚 A) 區
在天然RNA加工過程中，通常將長鏈腺苷核苷酸(聚A區)添加至信使RNA (mRNA)分子中以增加該分子之穩定性。轉錄後，立即將轉錄物之3'-端裂解以釋放3'-羥基。接著，聚A聚合酶將一連串腺苷核苷酸添加至RNA中。該過程稱為聚腺苷酸化，添加一個長度在100與250個殘基之間之的聚A區。不受理論束縛，經審慎考慮，聚A區可賦予本揭示案之核酸分子多個優點。
因此，在一些實施例中，本揭示案之核酸分子(例如mRNA)包含聚腺苷酸化信號。在一些實施例中，本揭示案之核酸分子(例如mRNA)包含一或多個聚腺苷酸化(聚A)區。在一些實施例中，聚A區完全由腺嘌呤核苷酸或其功能性類似物構成。在一些實施例中，核酸分子在其3'端包含至少一個聚A區。在一些實施例中，核酸分子在其5'端包含至少一個聚A區。在一些實施例中，核酸分子在其5'末端包含至少一個聚A區且在其3'端包含至少一個聚A區。
根據本揭示案，在不同實施例中，聚A區可具有不同長度。詳言之，在一些實施例中，本揭示案之核酸分子之聚A區的長度為至少30個核苷酸。在一些實施例中，本揭示案之核酸分子之聚A區的長度為至少35個核苷酸。在一些實施例中，本揭示案之核酸分子之聚A區的長度為至少40個核苷酸。在一些實施例中，本揭示案之核酸分子之聚A區的長度為至少45個核苷酸。在一些實施例中，本揭示案之核酸分子之聚A區的長度為至少50個核苷酸。在一些實施例中，本揭示案之核酸分子之聚A區的長度為至少55個核苷酸。在一些實施例中，本揭示案之核酸分子之聚A區的長度為至少60個核苷酸。在一些實施例中，本揭示案之核酸分子之聚A區的長度為至少65個核苷酸。在一些實施例中，本揭示案之核酸分子之聚A區的長度為至少70個核苷酸。在一些實施例中，本揭示案之核酸分子之聚A區的長度為至少75個核苷酸。在一些實施例中，本揭示案之核酸分子之聚A區的長度為至少80個核苷酸。在一些實施例中，本揭示案之核酸分子之聚A區的長度為至少85個核苷酸。在一些實施例中，本揭示案之核酸分子之聚A區的長度為至少90個核苷酸。在一些實施例中，本揭示案之核酸分子之聚A區的長度為至少95個核苷酸。在一些實施例中，本揭示案之核酸分子之聚A區的長度為至少100個核苷酸。在一些實施例中，本揭示案之核酸分子之聚A區的長度為至少110個核苷酸。在一些實施例中，本揭示案之核酸分子之聚A區的長度為至少120個核苷酸。在一些實施例中，本揭示案之核酸分子之聚A區的長度為至少130個核苷酸。在一些實施例中，本揭示案之核酸分子之聚A區的長度為至少140個核苷酸。在一些實施例中，本揭示案之核酸分子之聚A區的長度為至少150個核苷酸。在一些實施例中，本揭示案之核酸分子之聚A區的長度為至少160個核苷酸。在一些實施例中，本揭示案之核酸分子之聚A區的長度為至少170個核苷酸。在一些實施例中，本揭示案之核酸分子之聚A區的長度為至少180個核苷酸。在一些實施例中，本揭示案之核酸分子之聚A區的長度為至少190個核苷酸。在一些實施例中，本揭示案之核酸分子之聚A區的長度為至少200個核苷酸。在一些實施例中，本揭示案之核酸分子之聚A區的長度為至少225個核苷酸。在一些實施例中，本揭示案之核酸分子之聚A區的長度為至少250個核苷酸。在一些實施例中，本揭示案之核酸分子之聚A區的長度為至少275個核苷酸。在一些實施例中，本揭示案之核酸分子之聚A區的長度為至少300個核苷酸。在一些實施例中，本揭示案之核酸分子之聚A區的長度為至少350個核苷酸。在一些實施例中，本揭示案之核酸分子之聚A區的長度為至少400個核苷酸。在一些實施例中，本揭示案之核酸分子之聚A區的長度為至少450個核苷酸。在一些實施例中，本揭示案之核酸分子之聚A區的長度為至少500個核苷酸。在一些實施例中，本揭示案之核酸分子之聚A區的長度為至少600個核苷酸。在一些實施例中，本揭示案之核酸分子之聚A區的長度為至少700個核苷酸。在一些實施例中，本揭示案之核酸分子之聚A區的長度為至少800個核苷酸。在一些實施例中，本揭示案之核酸分子之聚A區的長度為至少900個核苷酸。在一些實施例中，本揭示案之核酸分子之聚A區的長度為至少1000個核苷酸。在一些實施例中，本揭示案之核酸分子之聚A區的長度為至少1100個核苷酸。在一些實施例中，本揭示案之核酸分子之聚A區的長度為至少1200個核苷酸。在一些實施例中，本揭示案之核酸分子之聚A區的長度為至少1300個核苷酸。在一些實施例中，本揭示案之核酸分子之聚A區的長度為至少1400個核苷酸。在一些實施例中，本揭示案之核酸分子之聚A區的長度為至少1500個核苷酸。在一些實施例中，本揭示案之核酸分子之聚A區的長度為至少1600個核苷酸。在一些實施例中，本揭示案之核酸分子之聚A區的長度為至少1700個核苷酸。在一些實施例中，本揭示案之核酸分子之聚A區的長度為至少1800個核苷酸。在一些實施例中，本揭示案之核酸分子之聚A區的長度為至少1900個核苷酸。在一些實施例中，本揭示案之核酸分子之聚A區的長度為至少2000個核苷酸。在一些實施例中，本揭示案之核酸分子之聚A區的長度為至少2250個核苷酸。在一些實施例中，本揭示案之核酸分子之聚A區的長度為至少2500個核苷酸。在一些實施例中，本揭示案之核酸分子之聚A區的長度為至少2750個核苷酸。在一些實施例中，本揭示案之核酸分子之聚A區的長度為至少3000個核苷酸。
在一些實施例中，核酸分子中聚A區之長度可基於核酸分子或其部分之總體長度(諸如核酸分子的編碼區之長度或開放閱讀框之長度等)選擇。舉例而言，在一些實施例中，聚A區佔含有聚A區之核酸分子之總長度的約5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或更高百分比。
不受理論束縛，經審慎考慮，某些RNA結合蛋白可結合至位於mRNA分子3'端之聚A區。此等聚A結合蛋白(PABP)可調節mRNA表現，諸如與細胞中之轉譯起始機構相互作用及/或保護3'-聚A尾免於降解。因此，在一些實施例中，本揭示案之核酸分子(例如mRNA)包含聚A結合蛋白(PABP)之至少一個結合位點。在其他實施例中，在將核酸分子裝載至遞送媒劑(例如脂質奈米粒子)中之前，使其與PABP形成結合物或複合物。
在一些實施例中，本揭示案之核酸分子(例如mRNA)包含聚A-G四聯體。G四聯體係DNA及RNA中可由富含G之序列形成的氫鍵接之四個鳥苷核苷酸之環狀陣列。在此實施例中，將G四聯體併入聚A區之一端。可分析所得聚核苷酸(例如mRNA)之穩定性、蛋白質產生及其他參數，包括在不同時間點之半衰期。已發現，聚A-G四聯體結構之蛋白質產量等於僅使用含120個核苷酸之聚A區所觀察到的蛋白質產量之至少75%。
在一些實施例中，本揭示案之核酸分子(例如mRNA)可包括聚A區且可藉由添加3'-穩定區來穩定。在一些實施例中，可用於使核酸分子(例如mRNA)穩定之3'-穩定區包括國際專利公開案第WO2013/103659號中所述之聚A或聚A-G四聯體結構，該公開案之內容以全文引用之方式併入本文中。
在其他實施例中，可與本揭示案之核酸分子結合使用的3'-穩定區包括鏈終止核苷，諸如但不限於3'-脫氧腺苷(蟲草素(cordycepin))；3'-脫氧尿苷；3'-脫氧胞嘧啶；3'-脫氧鳥苷；3'-脫氧胸腺嘧啶；2’,3’-雙脫氧核苷，諸如2’,3’-雙脫氧腺苷、2’,3’-雙脫氧尿苷、2’,3’-雙脫氧胞嘧啶、2’,3’-雙脫氧鳥苷、2’,3’-雙脫氧胸腺嘧啶；2'-脫氧核苷；或O-甲基核苷；3'-脫氧核苷；2’,3’-雙脫氧核苷；3'-O-甲基核苷；3'-O -乙基核苷；3'-阿拉伯糖苷，及此項技術中已知及/或本文所描述的其他替代性核苷。二級結構
不受理論束縛，經審慎考慮，莖-環結構可引導RNA摺疊，保護核酸分子(例如mRNA)之結構穩定性，提供RNA結合蛋白之識別位點，並用作酶反應之受質。舉例而言，miR序列及/或TEE序列之併入將改變莖-環區之形狀，由此可增加及/或減少轉譯(Kedde等人 , A Pumilio-induced RNA structure switch in p27-3’UTR controls miR-221 and miR-222 accessibility.Nat Cell Biol. , 2010年10月; 12(10):1014-20，該文獻之內容以全文引用之方式併入本文中)。
因此，在一些實施例中，本文所述之核酸分子(例如mRNA)或其一部分可呈莖-環結構，諸如但不限於組蛋白莖-環。在一些實施例中，莖-環結構由長度為約25個或約26個核苷酸之莖-環序列形成，諸如但不限於國際專利公開案第WO2013/103659號中所述之結構，該案內容以全文引用之方式併入本文中。莖-環序列之額外實例包括國際專利公開案第WO2012/019780號及國際專利公開案第WO201502667號中所述之序列，各案內容以引用之方式併入本文中。在一些實施例中，莖-環序列包含如本文所述之TEE。在一些實施例中，莖-環序列包含如本文所述之miR序列。在特定實施例中，莖環序列可包括miR-122種子序列(seed sequence)。在特定實施例中，核酸分子包含莖-環序列CAAAGGCTCTTTTCAGAGCCACCA (SEQ ID NO:1)。在其他實施例中，核酸分子包含莖-環序列CAAAGGCUCUUUUCAGAGCCACCA (SEQ ID NO:2)。
在一些實施例中，本揭示案之核酸分子(例如mRNA)包含位於核酸分子中編碼區上游(在5'端)之莖-環序列。在一些實施例中，莖-環序列位於核酸分子5'-UTR內。在一些實施例中，本揭示案之核酸分子(例如mRNA)包含位於核酸分子中編碼區下游(在3'端)之莖-環序列。在一些實施例中，莖-環序列位於核酸分子3'-UTR內。在一些情況下，核酸分子可含有多於一個莖-環序列。在一些實施例中，核酸分子在5'-UTR中包含至少一個莖-環序列且在3'-UTR中包含至少一個莖-環序列。
在一些實施例中，包含莖-環結構之核酸分子進一步包含穩定區。在一些實施例中，穩定區包含至少一個鏈終止核苷，其起到減慢降解並由此增加核酸分子之半衰期的作用。可與本揭示案之核酸分子結合使用的示例性鏈終止核苷包括但不限於3'-脫氧腺苷(蟲草素)；3'-脫氧尿苷；3'-脫氧胞嘧啶；3'-脫氧鳥苷；3'-脫氧胸腺嘧啶；2’,3’-雙脫氧核苷，諸如2’,3’-雙脫氧腺苷、2’,3’-雙脫氧尿苷、2’,3’-雙脫氧胞嘧啶、2’,3’-雙脫氧鳥苷、2’,3’-雙脫氧胸腺嘧啶；2'-脫氧核苷；或O-甲基核苷；3'-脫氧核苷；2’,3’-雙脫氧核苷；3'-O-甲基核苷；3'-O -乙基核苷；3'-阿拉伯糖苷，及此項技術中已知及/或本文所描述的其他替代性核苷。在其他實施例中，莖-環結構可藉由改變聚核苷酸之3'-區域來穩定，該改變可防止及/或抑制寡聚(U)之添加(國際專利公開案第WO2013/103659號，以全文引用之方式併入本文中)。
在一些實施例中，本揭示案之核酸分子包含至少一個莖-環序列及聚A區或聚腺苷酸化信號。包含至少一個莖-環序列及聚A區或聚腺苷酸化信號之聚核苷酸序列的非限制性實例包括國際專利公開案第WO2013/120497號、國際專利公開案第WO2013/120629號、國際專利公開案第WO2013/120500號、國際專利公開案第WO2013/120627號、國際專利公開案第WO2013/120498號、國際專利公開案第WO2013/120626號、國際專利公開案第WO2013/120499號及國際專利公開案第WO2013/120628號中所述之序列，各案內容以全文引用之方式併入本文中。
在一些實施例中，包含莖-環序列及聚A區或聚腺苷酸化信號之核酸分子可編碼病原體抗原或其片段，諸如國際專利公開案第WO2013/120499號及國際專利公開案第WO2013/120628號中所述之聚核苷酸序列，各案內容以全文引用之方式併入本文中。
在一些實施例中，包含莖-環序列及聚A區或聚腺苷酸化信號之核酸分子可編碼治療性蛋白質，諸如國際專利公開案第WO2013/120497號及國際專利公開案第WO2013/120629號中所述之聚核苷酸序列，各案內容以全文引用之方式併入本文中。
在一些實施例中，包含莖-環序列及聚A區或聚腺苷酸化信號之核酸分子可編碼腫瘤抗原或其片段，諸如國際專利公開案第WO2013/120500號及國際專利公開案第WO2013/120627號中所述之聚核苷酸序列，各案內容以全文引用之方式併入本文中。
在一些實施例中，包含莖-環序列及聚A區或聚腺苷酸化信號之核酸分子可編碼致敏性抗原或自體免疫性自體抗原，諸如國際專利公開案第WO2013/120498號及國際專利公開案第WO2013/120626號中所述之聚核苷酸序列，各案內容以全文引用之方式併入本文中。功能性核苷酸類似物
在一些實施例中，本文所述之有效負載核酸分子僅含有選自A (腺苷)、G (鳥苷)、C (胞嘧啶)、U (尿苷)及T (胸苷)之經典核苷酸。不受理論束縛，經審慎考慮，某些功能性核苷酸類似物可賦予核酸分子有用的特性。在本揭示案之上下文中，此類有用特性之實例包括但不限於核酸分子之穩定性增加、核酸分子在誘導先天免疫反應中之免疫原性降低、由核酸分子編碼之蛋白質的產量增加、核酸分子之細胞內遞送及/或保留增加，及/或核酸分子之細胞毒性降低等。
因此，在一些實施例中，有效負載核酸分子包含至少一種如本文所述之功能性核苷酸類似物。在一些實施例中，功能性核苷酸類似物含有至少一個針對核鹼基、糖基及/或磷酸酯基的化學修飾。因此，包含至少一種功能性核苷酸類似物的有效負載核酸分子含有至少一個針對核鹼基、糖基及/或核苷間鍵聯的化學修飾。本文提供對核酸分子之核鹼基、糖基或核苷間鍵聯之示例性化學修飾。
如本文所述，有效負載核酸分子中所有核苷酸的0%至100%範圍之核苷酸可以為如本文所述之功能性核苷酸類似物。舉例而言，在各個實施例中，核酸分子中之所有核苷酸中約1%至約20%、約1%至約25%、約1%至約50%、約1%至約60%、約1%至約70%、約1%至約80%、約1%至約90%、約1%至約95%、約 10%至約20%、約10%至約25%、約10%至約50%、約10%至約60%、約10%至約70%、約10%至約80%、約10%至約90%、約10%至約95%、約10%至約100%、約20%至約25%、約20%至約50%、約20%至約60%、約20%至約70%、約20%至約80%、約20%至約90%、約20%至約95%、約20%至約100%、約50%至約60%、約50%至約70%、約50%至約80%、約50%至約90%、約50%至約95%、約50%至約100%、約70%至約80%、約70%至約90%、約70%至約95%、約70%至約100%、約80%至約90%、約80%至約95%、約80%至約100%、約90%至約95%、約90%至約100%、或約95%至約100%的核苷酸係本文所述之功能性核苷酸類似物。在該等實施例中之任一個中，功能性核苷酸類似物可存在於核酸分子之任何位置處，包括5'-末端、3'-末端及/或一或多個內部位置。在一些實施例中，單個核酸分子可含有不同的糖修飾、不同的核鹼基修飾及/或不同類型的核苷間鍵聯(例如主鏈結構)。
如本文所述，有效負載核酸分子中一種類型之所有核苷酸(例如作為一種類型的所有含嘌呤核苷酸、或作為一種類型的所有含嘧啶核苷酸、或作為一種類型的所有A、G、C、T或U)中範圍自0%至100%之核苷酸可為本文所述之功能性核苷酸類似物。舉例而言，在各個實施例中，核酸分子中一種類型之所有核苷酸中約1%至約20%、約1%至約25%、約1%至約50%、約1%至約60%、約1%至約70%、約1%至約80%、約1%至約90%、約1%至約95%、約 10%至約20%、約10%至約25%、約10%至約50%、約10%至約60%、約10%至約70%、約10%至約80%、約10%至約90%、約10%至約95%、約10%至約100%、約20%至約25%、約20%至約50%、約20%至約60%、約20%至約70%、約20%至約80%、約20%至約90%、約20%至約95%、約20%至約100%、約50%至約60%、約50%至約70%、約50%至約80%、約50%至約90%、約50%至約95%、約50%至約100%、約70%至約80%、約70%至約90%、約70%至約95%、約70%至約100%、約80%至約90%、約80%至約95%、約80%至約100%、約90%至約95%、約90%至約100%、或約95%至約100%的核苷酸係本文所述之功能性核苷酸類似物。在該等實施例中之任一個中，功能性核苷酸類似物可存在於核酸分子之任何位置處，包括5'-末端、3'-末端及/或一或多個內部位置。在一些實施例中，單個核酸分子可含有不同的糖修飾、不同的核鹼基修飾及/或不同類型的核苷間鍵聯(例如主鏈結構)。核鹼基之修飾
在一些實施例中，功能性核苷酸類似物含有非經典核鹼基。在一些實施例中，核苷酸中之經典核鹼基(例如腺嘌呤、鳥嘌呤、尿嘧啶、胸腺嘧啶及胞嘧啶)可經修飾或置換以提供該核苷酸之一或多種功能性類似物。核鹼基之示例性修飾包括但不限於一或多個取代或修飾，包括但不限於烷基、芳基、鹵基、側氧基、羥基、烷氧基及/或硫代取代；一或多個稠環或開環、氧化及/或還原。
在一些實施例中，非經典核鹼基係經修飾之尿嘧啶。具有經修飾之尿嘧啶的示例性核鹼基及核苷包括假尿苷(ψ)、吡啶-4-酮核糖核苷、5-氮雜尿嘧啶、6-氮雜尿嘧啶、2-硫代-5-氮雜尿嘧啶、2-硫代尿嘧啶(s2 U)、4-硫代-尿嘧啶(s4 U)、4-硫代-假尿苷、2-硫代-假尿苷、5-羥基-尿嘧啶(ho5 U)、5-胺基烯丙基-尿嘧啶、5-鹵代尿嘧啶(例如5-碘尿嘧啶或5-溴尿嘧啶)、3-甲基尿嘧啶(m3 U)、5-甲氧基尿嘧啶(mo5 U)、尿嘧啶5-氧乙酸(cmo5 U)、尿嘧啶5-氧乙酸甲酯(mcmo5 U)、5-羧甲基-尿嘧啶(cm5 U)、1-羧甲基-假尿苷、5-羧基羥甲基-尿嘧啶(chm5 U)、5-羧基羥甲基-尿嘧啶甲酯(mchm5 U)、5-甲氧基羰基甲基-尿嘧啶(mcm5 U)、5-甲氧基羰基甲基-2-硫代尿嘧啶(mcm5 s2 U)、5-胺基甲基-2-硫代尿嘧啶(nm5 s2 U)、5-甲基胺基甲基尿嘧啶(mnm5 U)、5-甲基胺基甲基-2-硫代尿嘧啶(mnm5 s2 U)、5-甲基胺基甲基-2-硒代尿嘧啶(mnm5 se2 U)、5-胺甲醯基甲基尿嘧啶(ncm5 U)、5-羧甲基胺基甲基-尿嘧啶(cmnm5 U)、5-羧甲基胺基甲基-2-硫代尿嘧啶(cmnm5 s2 U)、5-丙炔基-尿嘧啶、1-丙炔基-假尿嘧啶、5-牛磺酸甲基-尿嘧啶(τm5 U)、1-牛磺酸甲基-假尿苷、5-牛磺酸甲基-2-硫代-尿嘧啶(τm5 5s2 U)、1-牛磺酸甲基-4-硫代-假尿苷、5-甲基-尿嘧啶(m5 U，亦即，具有核鹼基脫氧胸腺嘧啶)、1-甲基-假尿苷(m1 ψ)、1-乙基-假尿苷(Et1 ψ)、5-甲基-2-硫代-尿嘧啶(m5 s2 U)、1-甲基-4-硫代-假尿苷(m1 s4 ψ)、4-硫代-1-甲基-假尿苷、3-甲基-假尿苷(m3 ψ)、2-硫代-1-甲基-假尿苷、1-甲基-1-脫氮-假尿苷、2-硫代-1-甲基-1-脫氮-假尿苷、二氫尿嘧啶(D)、二氫假尿苷, 5,6-二氫尿嘧啶、5-甲基-二氫尿嘧啶(m5 D)、2-硫代-二氫尿嘧啶、2-硫代-二氫假尿苷、2-甲氧基-尿嘧啶、2-甲氧基-4-硫代-尿嘧啶、4-甲氧基-假尿苷、4-甲氧基-2-硫代-假尿苷、N1-甲基-假尿苷、3-(3-胺基-3-羧基丙基)尿嘧啶(acp3 U)、1-甲基-3-(3-胺基-3-羧基丙基)假尿苷(acp3 ψ)、5-(異戊烯基胺基甲基)尿嘧啶(m5 U)、5-(異戊烯基胺基甲基)-2-硫代-尿嘧啶(m5 s2 U)、5,2’-O-二甲基-尿嘧啶 (m5 Um)、2-硫代-2’-O-甲基-尿嘧啶(s2 Um)、5-甲氧基羰甲基-2’-O-甲基-尿嘧啶(mcm5 Um)、5-胺甲醯基甲基-2’-O-甲基-尿嘧啶(ncm5 Um)、5-羧甲基胺基甲基-2’-O-甲基-尿嘧啶(cmnm5 Um)、3,2’-O-二甲基-尿嘧啶(m3 Um)及5-(異戊烯基胺基甲基)-2’-O-甲基-尿嘧啶(inm5 Um)、1-硫代-尿嘧啶、脫氧胸苷、5-(2-甲氧羰基乙烯基)-尿嘧啶、5-(胺甲醯基羥甲基)-尿嘧啶、5-胺甲醯基甲基-2-硫代-尿嘧啶、5-羧甲基-2-硫代-尿嘧啶、5-氰基甲基-尿嘧啶、5-甲氧基-2-硫代-尿嘧啶及5-[3-(1-E-丙烯基胺基)]尿嘧啶。
在一些實施例中，非經典核鹼基係經修飾之胞嘧啶。具有經修飾之胞嘧啶的示例性核鹼基及核苷包括5-氮雜胞嘧啶、6-氮雜胞嘧啶、假異胞苷、3-甲基胞嘧啶(m3C)、N4-乙醯基胞嘧啶(ac4C)、5-甲醯基胞嘧啶(f5C)、N4-甲基-胞嘧啶(m4C)、5-甲基-胞嘧啶(m5C)、5-鹵代-胞嘧啶(例如 5-碘-胞嘧啶)、5-羥甲基-胞嘧啶(hm5C)、1-甲基-假異胞苷、吡咯并胞嘧啶、吡咯并假異胞苷、2-硫代胞嘧啶(s2C)、2-硫代-5-甲基胞嘧啶、4-硫代假異胞苷、4-硫代-1-甲基-假異胞苷、4-硫代-1-甲基-1-脫氮-假異胞苷、1-甲基-1-脫氮-假異胞苷、澤布他林(zebularine)、5-氮雜-澤布他林、5-甲基-澤布他林、5-氮雜-2-硫代-澤布他林、2-硫代-澤布他林、2-甲氧基-胞嘧啶、2-甲氧基-5-甲基-胞嘧啶、4-甲氧基-假異胞苷、4-甲氧基-1-甲基-假異胞苷、賴西丁(lysidine) (k2C)、5,2’-O-二甲基-胞苷(m5Cm)、N4-乙醯基-2’-O-甲基-胞苷(ac4Cm)、N4,2’-O-二甲基-胞苷(m4Cm)、5-甲醯基-2’-O-甲基-胞苷(fSCm)、N4,N4,2’-O-三甲基-胞苷(m42Cm)、1-硫代-胞嘧啶、5-羥基-胞嘧啶、5-(3-疊氮基丙基)-胞嘧啶及5-(2-疊氮基乙基)-胞嘧啶。
在一些實施例中，非經典核鹼基係經修飾之腺嘌呤。具有替代性腺嘌呤之示例性核鹼基及核苷包括2-胺基-嘌呤、2,6-二胺基嘌呤、2-胺基-6-鹵代-嘌呤(例如2-胺基-6-氯-嘌呤)、6-鹵代-嘌呤(例如6-氯-嘌呤)、2-胺基-6-甲基-嘌呤、8-疊氮基-腺嘌呤、7-脫氮-腺嘌呤、7-脫氮-8-氮雜-腺嘌呤、7-脫氮-2-胺基-嘌呤、7-脫氮-8-氮雜-2-胺基-嘌呤、7-脫氮-2,6-二胺基嘌呤、7-脫氮-8-氮雜-2,6-二胺基嘌呤、1-甲基-腺嘌呤(m1A)、2-甲基-腺嘌呤(m2A)、N6-甲基-腺嘌呤(m6A)、2-甲硫基-N6-甲基-腺嘌呤(ms2m6A)、N6-異戊烯基-腺嘌呤(i6A)、2-甲硫基-N6-異戊烯基-腺嘌呤(ms2i6A)、N6-(順-羥基異戊烯基)腺嘌呤(io6A)、2-甲硫基-N6-(順-羥基異戊烯基)腺嘌呤(ms2io6A)、N6-甘胺醯基胺甲醯基-腺嘌呤(g6A)、N6-蘇胺醯基胺甲醯基-腺嘌呤(t6A)、N6-甲基-N6-蘇胺醯基胺甲醯基-腺嘌呤(m6t6A)、2-甲硫基-N6-蘇胺醯基胺甲醯基-腺嘌呤(ms2g6A)、N6,N6-二甲基-腺嘌呤(m62A)、N6-羥基正纈胺醯基胺甲醯基-腺嘌呤(hn6A)、2-甲硫基-N6-羥基正纈胺醯基胺甲醯基-腺嘌呤(ms2hn6A)、N6-乙醯基-腺嘌呤(ac6A)、7-甲基-腺嘌呤、2-甲硫基-腺嘌呤、2-甲氧基-腺嘌呤、N6,2’-O-二甲基-腺苷(m6Am)、N6,N6,2’-O-三甲基-腺苷(m62Am)、1,2’-O-二甲基-腺苷(m1Am)、2-胺基-N6-甲基-嘌呤、1-硫代-腺嘌呤、8-疊氮基-腺嘌呤、N6-(19-胺基-五氧雜十九烷基)-腺嘌呤、2,8-二甲基-腺嘌呤、N6-甲醯基-腺嘌呤及N6-羥甲基-腺嘌呤。
在一些實施例中，非經典核鹼基係經修飾之鳥嘌呤。具有經修飾之鳥嘌呤的示例性核鹼基及核苷包括肌苷(I)、1-甲基-肌苷(m1I)、懷俄苷(wyosine) (imG)、甲基懷俄苷(mimG)、4-脫甲基-懷俄苷(imG-14)、異懷俄苷(imG2)、懷丁苷(wybutosine) (yW)、戊氧基懷丁苷(o2yW)、羥基懷丁苷(OHyW)、未修飾之羥基懷丁苷(OHyW*)、7-脫氮-鳥嘌呤、Q苷(queuosine) (Q)、環氧Q苷(oQ)、半乳糖基-Q苷(galQ)、甘露糖基-Q苷(manQ)、7-氰基-7-脫氮-鳥嘌呤(preQO)、7-胺基甲基-7-脫氮-鳥嘌呤(preQ1)、古嘌苷(archaeosine) (G+)、7-脫氮-8-氮雜-鳥嘌呤、6-硫代-鳥嘌呤、6-硫代-7-脫氮-鳥嘌呤、6-硫代-7-脫氮-8-氮雜-鳥嘌呤、7-甲基-鳥嘌呤 (m7G)、6-硫代-7-甲基-鳥嘌呤、7-甲基-肌苷、6-甲氧基-鳥嘌呤、1-甲基-鳥嘌呤(m1G)、N2-甲基-鳥嘌呤(m2G)、N2,N2-二甲基-鳥嘌呤(m22G)、N2,7-二甲基-鳥嘌呤(m2,7G)、N2, N2,7-二甲基-鳥嘌呤(m2,2,7G)、8-側氧基-鳥嘌呤、7-甲基-8-側氧基-鳥嘌呤、1-甲基-6-硫代-鳥嘌呤、N2-甲基-6-硫代-鳥嘌呤、N2,N2-二甲基-6-硫代-鳥嘌呤、N2-甲基-2’-O-甲基-鳥苷(m2Gm)、N2,N2-二甲基-2’-O-甲基-鳥苷(m22Gm)、1-甲基-2’-O-甲基-鳥苷(m1Gm)、N2,7-二甲基-2’-O-甲基-鳥苷(m2,7Gm)、2’-O-甲基-肌苷(Im)、1,2’-O-二甲基-肌苷(m1Im)、1-硫代-鳥嘌呤及O-6-甲基-鳥嘌呤。
在一些實施例中，功能性核苷酸類似物之非經典核鹼基可獨立地為嘌呤、嘧啶、嘌呤或嘧啶類似物。舉例而言，在一些實施例中，非經典核鹼基可為經修飾之腺嘌呤、胞嘧啶、鳥嘌呤、尿嘧啶或次黃嘌呤。在其他實施例中，非經典核鹼基亦可包括例如鹼基之天然存在的及合成的衍生物，包括吡唑并[3,4-d]嘧啶；5-甲基胞嘧啶(5-me-C)；5-羥甲基胞嘧啶；黃嘌呤；次黃嘌呤；2-胺基腺嘌呤；腺嘌呤及鳥嘌呤之6-甲基及其他烷基衍生物；腺嘌呤及鳥嘌呤之2-丙基及其他烷基衍生物；2-硫代尿嘧啶、2-硫代胸腺嘧啶及2-硫代胞嘧啶；5-丙炔基尿嘧啶及胞嘧啶；6-偶氮尿嘧啶、胞嘧啶及胸腺嘧啶；5-尿嘧啶(假尿嘧啶)；4-硫代尿嘧啶；8-鹵代(例如8-溴)、8-胺基、8-硫醇、8-硫代烷基、8-羥基及其他8-取代之腺嘌呤及鳥嘌呤；5-鹵代，尤其是5-溴、5-三氟甲基及其他5-取代之尿嘧啶及胞嘧啶；7-甲基鳥嘌呤及7-甲基腺嘌呤；8-氮雜鳥嘌呤及8-氮雜腺嘌呤；脫氮鳥嘌呤、7-脫氮鳥嘌呤、3-脫氮鳥嘌呤；脫氮腺嘌呤、7-脫氮腺嘌呤、3-脫氮腺嘌呤；吡唑并[3,4-d]嘧啶；咪唑并[1,5-a] 1,3,5三𠯤酮；9-脫氮雜嘌呤；咪唑并[4,5- d ]吡𠯤；噻唑并[4,5-d]嘧啶；吡𠯤-2-酮；1,2,4-三𠯤；嗒𠯤；或1,3,5三𠯤。糖之修飾
在一些實施例中，功能性核苷酸類似物含有非經典糖基。在各個實施例中，非經典糖基可為具有一或多個取代之5-碳或6-碳糖(諸如戊糖、核糖、阿拉伯糖、木糖、葡萄糖、半乳糖或其脫氧衍生物)，該一或多個取代諸如為鹵素、羥基、硫醇基、烷基、烷氧基、烯基氧基、炔基氧基、環烷基、胺基烷氧基、烷氧基烷氧基、羥基烷氧基、胺基、疊氮基、芳基、胺基烷基、胺基烯基、胺基炔基等。
一般而言，RNA分子含有核糖基，該核糖基係含氧5員環。示例性非限制性替代核苷酸包括核糖中之氧置換(例如用S、Se或伸烷基，諸如亞甲基或伸乙基置換)；雙鍵之添加(例如用環戊烯基或環己烯基置換核糖)；核糖之縮環(例如用於形成環丁烷或氧雜環丁烷之4員環)；核糖之擴環(例如用於形成具有額外碳或雜原子之6員或7員環，諸如對於失水己醣醇、阿卓糖醇(altritol)、甘露糖醇，環己烷基、環己烯基及N-𠰌啉基(其亦具有胺基磷酸酯主鏈))；多環形式(例如三環及「未鎖定」形式，諸如二醇核酸(GNA) (例如R-GNA或S-GNA，其中核糖經連接至磷酸二酯鍵之二醇單元置換)、蘇糖核酸(TNA，其中核糖經α-L-呋喃蘇糖基-(3’‎‎‎‎à2’)置換)及肽核酸(PNA，其中2-胺基-乙基-甘胺酸鍵聯置換核糖及磷酸二酯主鏈)。
在一些實施例中，糖基含有一或多個碳，該一或多個碳具有與核糖中相應碳相反之立體化學構形。因此，核酸分子可包括含例如阿拉伯糖或L-核糖作為糖之核苷酸。在一些實施例中，核酸分子包括至少一個核苷，其中糖係L-核糖、2'-O-甲基核糖、2'-氟核糖、阿拉伯糖、己糖醇、LNA或PNA。核苷間鍵聯之修飾
在一些實施例中，本揭示案之有效負載核酸分子可含有一或多個經修飾之核苷間鍵聯(例如磷酸酯主鏈)。主鏈磷酸酯基可藉由用不同取代基取代一或多個氧原子來改變。
在一些實施例中，功能性核苷酸類似物可包括用本文所述之另一個核苷間鍵聯置換未改變之磷酸酯部分。替代性磷酸酯基的實例包括但不限於硫代磷酸酯、硒代磷酸酯、硼烷磷酸鹽、硼烷磷酸酯、膦酸氫酯、胺基磷酸酯、二胺基磷酸酯、烷基或芳基膦酸酯及磷酸三酯。二硫代磷酸酯的兩個非連接氧均經硫置換。亦可藉由用氮(橋連之胺基磷酸酯)、硫(橋連之硫代磷酸酯)及碳(橋連之亞甲基膦酸酯)置換連接氧來改變磷酸酯連接基。
替代性核苷及核苷酸可包括一或多個非橋連氧被甲硼烷部分(BH3 )、硫(硫代)、甲基、乙基及/或甲氧基置換。作為非限制性實例，在同一位置(例如alpha (α)、beta (β)或gamma (γ)位置)處的兩個非橋連氧可經硫(硫代)及甲氧基置換。置換磷酸酯部分(例如α-硫代磷酸酯)位置處之一或多個氧原子可經由非天然硫代磷酸酯主鏈鍵聯賦予RNA及DNA穩定性(諸如針對核酸外切酶及核酸內切酶的穩定性)。硫代磷酸酯DNA及RNA具有增加之核酸酶抗性，並因此在細胞環境中具有較長的半衰期。
本文描述可根據本揭示案使用的其他核苷間鍵聯，包括不含磷原子之核苷間鍵聯。
可結合本揭示案使用的核酸分子(例如mRNA)、相關組成物、調配物及/或方法的額外實例進一步包括WO2002/098443、WO2003/051401、WO2008/052770、WO2009127230、WO2006122828、WO2008/083949、WO2010088927、WO2010/037539、WO2004/004743、WO2005/016376、WO2006/024518、WO2007/095976、WO2008/014979、WO2008/077592、WO2009/030481、WO2009/095226、WO2011069586、WO2011026641、WO2011/144358、WO2012019780、WO2012013326、WO2012089338、WO2012113513、WO2012116811、WO2012116810、WO2013113502、WO2013113501、WO2013113736、WO2013143698、WO2013143699、WO2013143700、WO2013/120626、WO2013120627、WO2013120628、WO2013120629、WO2013174409、WO2014127917、WO2015/024669、WO2015/024668、WO2015/024667、WO2015/024665、WO2015/024666、WO2015/024664、WO2015101415、WO2015101414、WO2015024667、WO2015062738、WO2015101416中所述者，各案之內容以全文併入本文中。5.5 調配物
根據本揭示案，本文所描述之奈米粒子組成物可包括至少一種脂質組分及一或多種額外組分，諸如治療劑及/或預防劑。奈米粒子組成物可設計成用於一或多種特定應用或目標。奈米粒子組成物之成分可基於特定應用或目標，及/或基於一或多種成分之功效、毒性、費用、易用性、可用性或其他特徵來選擇。類似地，奈米粒子組成物之特定配方可根據例如各成分之特定組合的功效及毒性，針對特定應用或目標來選擇。
奈米粒子組成物之脂質組分可包括例如本文所述的根據式(I)至(IV) (及其子式)之一的脂質、磷脂(諸如不飽和脂質，例如DOPE或DSPC)、PEG脂質及結構脂質。脂質組分各成分可以特定百分率提供。
在一個實施例中，本文提供一種奈米粒子組成物，其包含本文所提供的陽離子或可電離之脂質化合物、治療劑及一或多種賦形劑。在一個實施例中，陽離子或可電離之脂質化合物包含如本文所述的根據式(I)至(IV) (及其子式)之一的化合物，以及視情況選用的一或多種額外可電離之脂質化合物。在一個實施例中，該一或多種賦形劑選自中性脂質、類固醇及聚合物結合之脂質。在一個實施例中，治療劑係包封於脂質奈米粒子內或與脂質奈米粒子締合。
在一個實施例中，本文提供一種奈米粒子組成物(脂質奈米粒子)，其包含： i) 在40至50莫耳%的陽離子脂質； ii) 中性脂質； iii) 類固醇； iv) 聚合物結合之脂質；及 v) 治療劑。
如本文所使用，「莫耳百分比」係指一種組分相對於LNP中所有脂質組分之總莫耳數(亦即，陽離子脂質、中性脂質、類固醇及聚合物結合之脂質的總莫耳數)的莫耳百分比。
在一個實施例中，脂質奈米粒子包含41至49莫耳%、41至48莫耳%、42至48莫耳%、43至48莫耳%、44至48莫耳%、45至48莫耳%、46至48莫耳%或47.2至47.8莫耳%的陽離子脂質。在一個實施例中，脂質奈米粒子包含約47.0、47.1、47.2、47.3、47.4、47.5、47.6、47.7、47.8、47.9或48.0莫耳%的陽離子脂質。
在一個實施例中，中性脂質以在5至15莫耳%、7至13莫耳%或9至11莫耳%範圍內之濃度存在。在一個實施例中，中性脂質以約9.5、10或10.5莫耳%之濃度存在。在一個實施例中，陽離子脂質與中性脂質之莫耳比在約4.1:1.0至約4.9:1.0、約4.5:1.0至約4.8:1.0、或約4.7:1.0至4.8:1.0範圍內。
在一個實施例中，類固醇以在39至49莫耳%、40至46莫耳%、40至44莫耳%、40至42莫耳%、42至44莫耳%或44至46莫耳%範圍內之濃度存在。在一個實施例中，類固醇以40、41、42、43、44、45或46莫耳%之濃度存在。在一個實施例中，陽離子脂質與類固醇之莫耳比在1.0:0.9至1.0:1.2、或1.0:1.0至1.0:1.2範圍內。在一個實施例中，類固醇係膽固醇。
在一個實施例中，LNP中治療劑與脂質的比率(亦即，N/P，其中N表示陽離子脂質之莫耳數，P表示作為核酸主鏈之一部分存在的磷酸酯之莫耳數)在2:1至30:1範圍內，例如在3:1到22:1範圍內。在一個實施例中，N/P在6:1至20:1或2:1至12:1範圍內。示例性N/P範圍包括約3:1、約6:1、約12:1及約22:1。
在一個實施例中，本文提供一種脂質奈米粒子，其包含： i) 有效pKa大於6.0之陽離子脂質；ii) 5至15莫耳%之中性脂質； iii) 1至15莫耳%之陰離子脂質； iv) 30至45莫耳%之類固醇； iv) 聚合物結合之脂質；以及 vi) 治療劑，或其醫藥學上可接受之鹽或前藥， 其中莫耳百分比係基於脂質奈米粒子中存在之脂質的總莫耳數確定。
在一個實施例中，陽離子脂質可為在選定pH值，諸如生理pH值下帶有淨正電荷之多種脂質物種中之任一種。示例性陽離子脂質在下文描述。在一個實施例中，陽離子脂質之pKa大於6.25。在一個實施例中，陽離子脂質之pKa大於6.5。在一個實施例中，陽離子脂質之pKa大於6.1，大於6.2，大於6.3，大於6.35，大於6.4，大於6.45，大於6.55，大於6.6，大於6.65或大於6.7。
在一個實施例中，脂質奈米粒子包含40至45莫耳%之陽離子脂質。在一個實施例中，脂質奈米粒子包含45至50莫耳%之陽離子脂質。
在一個實施例中，陽離子脂質與中性脂質之莫耳比在約2:1至約8:1範圍內。在一個實施例中，脂質奈米粒子包含5至10莫耳%之中性脂質。
示例性陰離子脂質包括但不限於磷脂醯甘油、二油醯基磷脂醯甘油(DOPG)、二棕櫚醯基磷脂醯甘油(DPPG)或1,2-二硬脂醯基-sn-甘油-3-磷酸-(1'-外消旋-甘油) (DSPG)。
在一個實施例中，脂質奈米粒子包含1至10莫耳%之陰離子脂質。在一個實施例中，脂質奈米粒子包含1至5莫耳%之陰離子脂質。在一個實施例中，脂質奈米粒子包含1至9莫耳%、1至8莫耳%、1至7莫耳%或1至6莫耳%之陰離子脂質。在一個實施例中，陰離子脂質與中性脂質之莫耳比在1:1至1:10範圍內。
在一個實施例中，類固醇係膽固醇。在一個實施例中，陽離子脂質與膽固醇之莫耳比在約5:1至1:1範圍內。在一個實施例中，脂質奈米粒子包含32至40莫耳%之類固醇。
在一個實施例中，中性脂質之莫耳百分比與陰離子脂質之莫耳百分比的總和在5至15莫耳%範圍內。在一個實施例中，中性脂質之莫耳百分比及陰離子脂質之莫耳百分比的總和在7至12莫耳%範圍內。
在一個實施例中，陰離子脂質與中性脂質之莫耳比在1:1至1:10範圍內。在一個實施例中，中性脂質之莫耳百分比與類固醇之莫耳百分比的總和在35至45莫耳%範圍內。
在一個實施例中，脂質奈米粒子包含： i) 45至55莫耳%之陽離子脂質； ii) 5至10莫耳%之中性脂質； iii) 1至5莫耳%之陰離子脂質；以及 iv) 32至40莫耳%之類固醇。
在一個實施例中，脂質奈米粒子包含1.0至2.5莫耳%的經結合脂質。在一個實施例中，聚合物結合之脂質係以約1.5莫耳%之濃度存在。
在一個實施例中，中性脂質以在5至15莫耳%、7至13莫耳%或9至11莫耳%範圍內之濃度存在。在一個實施例中，中性脂質以約9.5、10或10.5莫耳%之濃度存在。在一個實施例中，陽離子脂質與中性脂質之莫耳比在約4.1:1.0至約4.9:1.0、約4.5:1.0至約4.8:1.0、或約4.7:1.0至4.8:1.0範圍內。
在一個實施例中，類固醇係膽固醇。在一個實施例中，類固醇以在39至49莫耳%、40至46莫耳%、40至44莫耳%、40至42莫耳%、42至44莫耳%或44至46莫耳%範圍內之濃度存在。在一個實施例中，類固醇以40、41、42、43、44、45或46莫耳%之濃度存在。在一個實施例中，陽離子脂質與類固醇之莫耳比在1.0:0.9至1.0:1.2、或1.0:1.0至1.0:1.2範圍內。
在一個實施例中，陽離子脂質與類固醇之莫耳比在5:1至1:1範圍內。
在一個實施例中，脂質奈米粒子包含1.0至2.5莫耳%的經結合脂質。在一個實施例中，聚合物結合之脂質係以約1.5莫耳%之濃度存在。
在一個實施例中，陽離子脂質與聚合物結合之脂質的莫耳比在約100:1至約20:1範圍內。在一個實施例中，陽離子脂質與聚合物結合之脂質的莫耳比在約35:1至約25:1範圍內。
在一個實施例中，脂質奈米粒子之平均直徑在50 nm至100 nm，或60 nm至85 nm範圍內。
在一個實施例中，該組成物包含本文所提供之陽離子脂質、DSPC、膽固醇及PEG-脂質，以及mRNA。在一個實施例中，本文所提供之陽離子脂質、DSPC、膽固醇及PEG-脂質的莫耳比為約50:10:38.5:1.5。
奈米粒子組成物可設計成用於一或多種特定應用或目標。舉例而言，奈米粒子組成物可設計成用於將治療劑及/或預防劑，諸如RNA遞送至哺乳動物體內之特定細胞、組織、器官或系統或其群組。奈米粒子組成物之物理化學特性可經改變以增加對特定身體目標之選擇性。舉例而言，可基於不同器官之開窗大小來調整粒度。奈米粒子組成物中所包括的治療劑及/或預防劑亦可基於一或多個所希望之遞送目標進行選擇。舉例而言，治療劑及/或預防劑可針對特定適應症、疾患、疾病或病症及/或針對遞送至特定細胞、組織、器官或系統或其群組(例如局部或特異性遞送)進行選擇。在某些實施例中，奈米粒子組成物可包括編碼能夠在細胞內轉譯產生感興趣多肽之感興趣多肽的mRNA。此類組成物可設計成特異性遞送至特定器官。在某些實施例中，組成物可設計成特異性遞送至哺乳動物肝臟。
奈米粒子組成物中治療劑及/或預防劑之量可取決於奈米粒子組成物之大小、組成、期望目標及/或應用，或其他特性，以及治療劑及/或預防劑之特性。舉例而言，可用於奈米粒子組成物中的RNA之量可取決於RNA之大小、序列及其他特徵。奈米粒子組成物中治療劑及/或預防劑及其他成分(例如脂質)之相對量亦可變化。在一些實施例中，奈米粒子組成物中脂質組分與治療劑及/或預防劑之wt/wt比率可為約5:1至約60:1，諸如為5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1、11:1、12:1、13:1、14:1、15:1、16:1、17:1、18:1、19:1、20:1、25:1、30:1、35:1、40:1、45:1、50:1及60:1。舉例而言，脂質組分與治療劑及/或預防劑之wt/wt比率可為約10:1至約40:1。在某些實施例中，wt/wt比率為約20:1。奈米粒子組成物中治療劑及/或預防劑之量可例如使用吸收光譜法(例如紫外-可見光譜法)量測。
在一些實施例中，奈米粒子組成物包括一或多種RNA，且可選擇一或多種RNA、脂質及其量來提供特定N:P比。組成物之N∶P比係指一或多種脂質中之氮原子與RNA中磷酸酯基之數量的莫耳比。在一些實施例中，選擇較低的N∶P比。可選擇一或多種RNA、脂質及其量以提供約2:1至約30:1，諸如2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1、12:1、14:1、16:1、18:1、20:1、22:1、24:1、26:1、28:1或30:1之N:P比。在某些實施例中，N∶P比可為約2:1至約8:1。在其他實施例中，N∶P比為約5:1至約8:1。舉例而言，N:P比可為約5.0:1、約5.5:1、約5.67:1、約6.0:1、約6.5:1或約7.0:1。舉例而言，N:P比可為約5.67:1。
奈米粒子組成物之物理特性可取決於其組分。舉例而言，包括膽固醇作為結構脂質之奈米粒子組成物可具有與包括不同結構脂質之奈米粒子組成物不同的特徵。類似地，奈米粒子組成物之特徵可取決於其組分之絕對或相對量。舉例而言，包括較高莫耳分率之磷脂的奈米粒子組成物可具有與包括較低莫耳分率之磷脂之奈米粒子組成物不同的特徵。特性亦可取決於奈米粒子組成物之製備方法及條件而變化。
奈米粒子組成物可藉由多種方法表徵。舉例而言，可使用顯微鏡檢查(例如透射電子顯微鏡檢查或掃描電子顯微鏡檢查)來檢查奈米粒子組成物之形態及大小分佈。可使用動態光散射或電位測定法(例如電位滴定法)量測ζ電位。動態光散射亦可用於確定粒度。亦可使用儀器，諸如Zetasizer Nano ZS (Malvem Instruments Ltd, Malvem, Worcestershire, UK)量測奈米粒子組成物之多個特徵，諸如粒度、多分散指數及ζ電位。
在各個實施例中，奈米粒子組成物之平均大小可在數十奈米至數百奈米之間。舉例而言，平均大小可為約40 nm至約150 nm，諸如約40 nm、45 nm、50 nm、55 nm、60 nm、65 nm、70 nm、75 nm、80 nm、85 nm、90 nm、95 nm、100 nm、105 nm、110 nm、115 nm、120 nm、125 nm、130 nm、135 nm、140 nm、145 nm或150 nm。在一些實施例中，奈米粒子組成物之平均大小可為約50 nm至約100 nm、約50 nm至約90 nm、約50 nm至約80 nm、約50 nm至約70 nm、約50 nm至約60 nm、約60 nm至約100 nm、約60 nm至約90 nm、約60 nm至約80 nm、約60 nm至約70 nm、約70 nm至約100 nm、約70 nm至約90 nm、約70 nm至約80 nm、約80 nm至約100 nm、約80 nm至約90 nm、或約90 nm至約100 nm。在某些實施例中，奈米粒子組成物之平均大小可為約70 nm至約100 nm。在一些實施例中，平均大小可為約80 nm。在其他實施例中，平均大小可為約100 nm。
奈米粒子組成物可為相對均質的。多分散指數可用於指示奈米粒子組成物之均勻性，例如奈米粒子組成物之粒度分佈。較小(例如小於0.3)的多分散指數一般指示較窄的粒度分佈。奈米粒子組成物之多分散指數可為約0至約0.25，例如0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07、0.08、0.09、0.10、0.11、0.12、0.13、0.14、0.15、0.16、0.17、0.18、0.19、0.20、0.21、0.22、0.23、0.24或0.25。在一些實施例中，奈米粒子組成物之多分散指數可為約0.10至約0.20。
奈米粒子組成物之ζ電位可用於指示該組成物之動電位。舉例而言，ζ電位可描述奈米粒子組成物之表面電荷。具有相對較低正或負電荷之奈米粒子組成物一般係合意的，因為帶較高電荷之物質可與體內之細胞、組織及其他成分發生不合意之相互作用。在一些實施例中，奈米粒子組成物之ζ電位可為約-10 mV至約+20 mV、約-10 mV至約+15 mV、約-10 mV至約+10 mV、約-10 mV至約+5 mV、約-10 mV至約 0 mV、約-10 mV 至約-5 mV、約-5 mV至約+20 mV、約-5 mV至約+15 mV、約-5 mV至約+10 mV、約-5 mV至約+5 mV、約-5 mV 至約 0 mV、約 0 mV至約+20 mV、約 0 mV至約+15 mV、約 0 mV至約+10 mV、約 0 mV至約+5 mV、約 +5 mV至約+20 mV、約 +5 mV至約+15 mV、或約+5 mV至約+10 mV。
治療劑及/或預防劑之包封效率描述相對於所提供之初始量，在製備後經奈米粒子組成物包封或以其他方式與奈米粒子組成物締合的治療劑及/或預防劑之量。包封效率合意地較高(例如接近100%)。包封效率可例如藉由比較在用一或多種有機溶劑或清潔劑破壞奈米粒子組成物之前與之後含有奈米粒子組成物之溶液中治療劑及/或預防劑之量來量測。螢光可用於量測溶液中游離治療劑及/或預防劑(例如RNA)之量。對於本文所述之奈米粒子組成物，治療劑及/或預防劑之包封效率可為至少50%，例如50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%。在一些實施例中，包封效率可為至少80%。在某些實施例中，包封效率可為至少90%。
奈米粒子組成物可視情況包含一或多種包覆劑。舉例而言，可將奈米粒子組成物調配成具有包覆劑之膠囊、膜片或錠劑。包括本文所述組成物之膠囊、膜片或錠劑可具有任何有用的大小、抗拉強度、硬度或密度。5.6 醫藥 組成物
根據本揭示案，奈米粒子組成物可整體或部分地調配成醫藥組成物。醫藥組成物可包括一或多種奈米粒子組成物。舉例而言，醫藥組成物可包括一或多種奈米粒子組成物，該一或多種奈米粒子組成物包括一或多種不同的治療劑及/或預防劑。醫藥組成物可進一步包括一或多種醫藥學上可接受之賦形劑或輔助成分，諸如本文所述者。關於醫藥組成物及各劑之調配及製造的一般準則可見於例如Remington’s The Science and Practice of Pharmacy, 第21版, A. R. Gennaro；Lippincott, Williams & Wilkins, Baltimore, Md., 2006。習知賦形劑及輔助成分可用於任何醫藥組成物中，除非任何習知賦形劑或輔助成分不可與奈米粒子組成物之一或多種組分相容。若賦形劑或輔助成分與奈米粒子組成物之組分不相容，則其與該組分之組合會導致任何不希望之生物作用或其他有害作用。
在一些實施例中，該一或多種賦形劑或輔助成分可構成包括奈米粒子組成物之醫藥組成物之總質量或體積的超過50%。舉例而言，該一或多種賦形劑或輔助成分可構成醫藥慣例(pharmaceutical convention)之50%、60%、70%、80%、90%或跟高百分比。在一些實施例中，醫藥學上可接受之賦形劑為至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%純。在一些實施例中，賦形劑經批准用於人類及獸醫用途。在一些實施例中，賦形劑得到美國食品與藥物管理局批准。在一些實施例中，賦形劑係醫藥級的。在一些實施例中，賦形劑符合美國藥典(USP)、歐洲藥典(EP)、英國藥典及/或國際藥典之標準。
根據本揭示案之醫藥組成物中的一或多種奈米粒子組成物、一或多種醫藥學上可接受之賦形劑及/或任何額外成分的相對量將取決於所治療個體之身分、體格及/或狀況且進一步取決於投與組成物之途徑而變化。舉例而言，醫藥組成物可包含在0.1%與100% (wt/wt)之間的一或多種奈米粒子組成物。
在某些實施例中，本揭示案之奈米粒子組成物及/或醫藥組成物經冷藏或冷凍儲存及/或運輸(例如在4℃或更低溫度下，諸如在約-150℃與約0℃之間或在約-80℃與約-20℃之間(例如約-5℃、-10℃、-15℃、-20℃、-25℃、-30℃、-40℃、-50℃、-60℃、-70℃、-80℃、-90℃、-130℃或-150℃溫度下儲存)。舉例而言，包含式(I)至(IV) (及其子式)中任一個之化合物的醫藥組成物係在例如約-20℃、30℃、-40℃、-50℃、-60℃、-70℃或-80℃下冷藏儲存及/或運輸之溶液。在某些實施例中，本揭示案亦關於一種藉由在4℃或更低溫度下，諸如在約-150℃與約0℃之間或在約-80℃與約-20℃之間之溫度下，例如在約-5℃、-10℃、-15℃、-20℃、-25℃、-30℃、-40℃、-50℃、-60℃、-70℃、-80℃、-90℃、-130℃或-150℃溫度下儲存包含式(I)至(IV) (及其子式)中任一個之化合物的奈米粒子組成物及/或醫藥組成物來增加該等奈米粒子組成物及/或醫藥組成物之穩定性的方法。舉例而言，本文所揭示之奈米粒子組成物及/或醫藥組成物在例如4℃或更低(例如約4℃與-20℃之間)之溫度下穩定保持約至少1週、至少2週、至少3週、至少4週、至少5週、至少6週、至少1個月、至少2個月、至少4個月、至少6個月、至少8個月、至少10個月、至少12個月、至少14個月、至少16個月、至少18個月、至少20個月、至少22個月或至少24個月。在一個實施例中，調配物在約4℃下穩定保持至少4週。在某些實施例中，本揭示案之醫藥組成物包含本文所揭示之奈米粒子組成物及醫藥學上可接受之載劑，該載劑選自以下中之一或多種：Tris、乙酸鹽(例如乙酸鈉)、檸檬酸鹽(例如檸檬酸鈉)、鹽水、PBS及蔗糖。在某些實施例中，本揭示案之醫藥組成物的pH值在約7與8之間(例如6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9或8.0，或在7.5與8之間或在7與7.8之間)。舉例而言，本揭示案之醫藥組成物包含本文所揭示之奈米粒子組成物、Tris、鹽水及蔗糖，且具有約7.5-8之pH值，其適於在例如約-20℃下儲存及/或運輸。舉例而言，本揭示案之醫藥組成物包含本文所揭示之奈米粒子組成物及PBS，且具有約7-7.8之pH值，適合於在例如約4℃或更低溫度下儲存及/或運輸。在本揭示案之上下文中，「穩定性」、「穩定化」及「穩定的」係指本文所揭示之奈米粒子組成物及/或醫藥組成物在給定製造、製備、轉運、儲存及/或使用條件下，例如當施加壓力，諸如剪切力、冷凍/解凍壓力等時，對化學或物理變化(例如降解、粒度變化、聚集、包封之變化等)具有抗性。
可將奈米粒子組成物及/或包括一或多種奈米粒子組成物之醫藥組成物投與任何患者或個體，包括可受益於藉由將治療劑及/或預防劑遞送至一或多個特定細胞、組織、器官或系統或其群組，諸如腎臟系統所提供之治療作用的患者或個體。儘管本文所提供的關於奈米粒子組成物及包括奈米粒子組成物之醫藥組成物的描述主要針對適合於投與人類之組成物，但熟習此項技術者應理解，此類組成物一般適合於投與任何其他哺乳動物。為了使該等組成物適合於投與各種動物而對適於投與人類之組成物的改進係眾所周知的，且有普通技術之獸醫藥理學家僅藉由普通實驗(若有的話)即可設計及/或進行此類改進。經考慮，投與該等組成物之個體包括但不限於人類、其他靈長類動物及其他哺乳動物，包括商業上相關之哺乳動物，諸如牛、豬、馬、綿羊、貓、犬、小鼠及/或大鼠。
包括一或多種奈米粒子組成物之醫藥組成物可藉由藥理學領域中已知或以後將開發之任何方法製備。一般而言，此類製備方法包括使活性成分與賦形劑及/或一或多種其他輔助成分結合，且接著，若需要或必要，則將產物分成、成型成及/或包裝成所希望之單劑量或多劑量單元形式。
根據本揭示案之醫藥組成物可作為單次單位劑量及/或作為多個單次單位劑量製備、包裝及/或出售。如本文所使用，「單位劑量」係包含預定量之活性成分(例如奈米粒子組成物)之醫藥組成物的離散量。活性成分之量一般等於將被投與個體之活性成分的劑量及/或此類劑量之便利部分，諸如此類劑量之一半或三分之一。
醫藥組成物可製備成適合多種投與途徑及方法之多種形式。舉例而言，醫藥組成物可製備成液體劑型(例如乳液、微乳液、奈米級乳液、溶液、懸浮液、糖漿及酏劑)、可注射形式、固體劑型(例如膠囊、錠劑、丸劑、粉劑及顆粒劑)、用於表面及/或經皮投與之劑型(例如軟膏劑、糊劑、乳膏劑、洗劑、凝膠劑、粉劑、溶液、噴霧劑、吸入劑及貼片)、懸浮液、粉劑及其他形式。
經口及不經腸投與之液體劑型包括但不限於醫藥學上可接受之乳液、微乳液、奈米級乳液、溶液、懸浮液、糖漿及/或酏劑。除活性成分外，液體劑型亦可包含此項技術中常用之惰性稀釋劑，諸如水或其他溶劑、增溶劑及乳化劑，諸如乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苯甲酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲醯胺、油類(尤其是棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄欖油、蓖麻油及芝麻油)、甘油、四氫糠醇、聚乙二醇及脫水山梨糖醇脂肪酸酯，以及其混合物。除惰性稀釋劑外，口服組成物亦可包括額外治療劑及/或預防劑、額外劑，諸如濕潤劑、乳化劑及懸浮劑、甜味劑、調味劑及/或加香劑。在供非經腸投與之某些實施例中，將組成物與增溶劑混合，該等增溶劑諸如為CremophorTM 、醇、油、改質油、二醇、聚山梨醇酯、環糊精、聚合物及/或其組合。
可注射製劑，例如無菌可注射水性或油性懸浮液，可根據已知技術，使用適合分散劑、濕潤劑及/或助懸劑來調配。無菌注射製劑可為在無毒非經腸可接受之稀釋劑及/或溶劑中之無菌注射溶液、懸浮液及/或乳液，例如在1,3-丁二醇中之溶液。可以使用的可接受之媒劑及溶劑為水、林格氏溶液(Ringer’s solution)、USP及等張氯化鈉溶液。無菌不揮發性油通常用作溶劑或懸浮介質。為此，可以使用任何溫和的不揮發性油，包括合成甘油單酯或甘油二酯。脂肪酸如油酸可用於製備註射劑。
可注射調配物可經滅菌，例如藉由濾過細菌截留過濾器過濾，及/或藉由併入呈無菌固體組成物形式之滅菌劑來滅菌，該滅菌劑可在使用前溶解或分散於無菌水或其他無菌可注射介質中。
本揭示案之特徵在於向哺乳動物細胞或器官遞送治療劑及/或預防劑，在哺乳動物細胞中產生感興趣多肽，以及治療有需要之哺乳動物之疾病或病症的方法，該等方法包括向哺乳動物投與包括治療劑及/或預防劑之奈米粒子組成物及/或使哺乳動物細胞與該奈米粒子組成物接觸。6. 實例
本節中之實例僅作為示例提供，而不是作為限制。 一般方法 .
一般製備型HPLC方法：HPLC純化係在配備有二極體陣列偵測器(DAD)之Waters 2767上，在Inertsil Pre-C8 OBD管柱上，一般利用含0.1% TFA之水作為溶劑A且利用乙腈作為溶劑B進行。
一般LCMS方法：LCMS分析係在Shimadzu (LC-MS2020)系統上進行。層析係在SunFire C18上，一般利用含0.1%甲酸之水作為溶劑A且利用含0.1%甲酸之乙腈作為溶劑B執行。6.1 實例 1 ：製備化合物 1.
Figure 02_image640
步驟 1 ：製備中間體 1-2
在室溫下，向1-1 (1.9 g，4.53 mmol，2.1 eq)及2-胺基乙醇(132.0 mg，2.16 mmol，1.0 eq)於ACN (15.0 mL)中之溶液中添加K2 CO3 (626 mg，4.53 mmol，2.1 eq)、Cs2 CO3 (210.0 mg，0.65 mmol，0.3 eq)及NaI (20.0 mg，0.11 mmol，0.05 eq)。在80℃下，將混合物攪拌144小時。LCMS顯示反應完成，減壓蒸發混合物並利用急驟管柱層析法(FCC) (石油醚/乙酸乙酯(PE/EA)=10/1-4/1)純化，得到呈無色油狀之1-2 (1.1 g，69%產率)。步驟 2 ：製備中間體 1-3
在室溫下，向1-2 (1.1 g，1.5 mmol，1.0 eq)於CHCl3 (15.0 mL)中之溶液中添加SOCl2 (535.0 mg，4.5 mmol，3.0 eq)。將混合物攪拌16小時。LCMS顯示反應完成，減壓蒸發混合物，得到呈褐色油狀之1-3 (1.0 g，粗品)。步驟 3 ：製備中間體 1-5
在氬氣下，在室溫下將酮1-4 (0.7 g，10.0 mmol，1.0 eq)、異丙醇鈦(IV)(3.69 g，13 mmol，1.3 eq)及2-胺基乙醇(1.83 g，30.0 mmol，3.0 eq)於甲醇(10.0 mL)中之混合物攪拌5小時。接著，在0℃下添加硼氫化鈉(380.0 mg，10.0 mmol，1.0 eq)並將所得混合物再攪拌2小時。接著，藉由添加水(10.0 mL)淬滅反應。在室溫下繼續攪拌20分鐘，接著用鹽酸(1 M，5 mL)酸化反應混合物。經矽藻土墊過濾後，用水及EA洗滌。分離有機層且經Na2 SO4 乾燥，減壓蒸發混合物並利用FCC (PE/EA=5/1-0/1)純化，得到呈無色油狀之1-5 (300.0 mg，26%產率)。步驟 4 ：製備化合物 1
在0℃下，向1-3 (300 mg，0.4 mmol，1.0 eq)及1-5 (136 mg，1.2 mmol，3.0 eq)於THF (5.0 mL)中之溶液中添加DIEA (258 mg，2.0 mmol，5.0 eq)。在70℃下，將混合物攪拌16小時。LCMS顯示反應完成，減壓蒸發混合物並利用製備型HPLC純化，得到呈無色油狀之化合物1 (100.0 mg，30%產率)。
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.86-0.90 (m, 12H), 1.27 (s, 52H), 1.46-1.67 (m, 12H), 1.95-2.10 (m, 5H), 2.29-2.34 (m, 5H), 2.44-2.77 (m, 9H), 3.30 (s, 1H), 3.66 (s, 2H), 3.96 (d,J=6.0 Hz , 4H)。LCMS: Rt: 1.285 min；MS m/z (ESI): 835.7[M+H]。6.2 實例 2 ：製備化合物 2.
Figure 02_image642
步驟 1 ：製備中間體 2-2
在氬氣下，在室溫下將酮2-1 (2.0 g，20.0 mmol，1.0 eq)、異丙醇鈦(IV)(7.4 g，26 mmol，1.3 eq)及2-胺基乙醇(3.66 g，60.0 mmol，3.0 eq)於甲醇(10.0 mL)中之混合物攪拌5小時。接著，在0℃下添加硼氫化鈉(760.0 mg，20.0 mmol，1.0 eq)並將所得混合物再攪拌2小時。接著，藉由添加水(10.0 mL)淬滅反應。在室溫下繼續攪拌20分鐘，接著用鹽酸(1 M，5 mL)酸化反應混合物。經矽藻土墊過濾後，用水及EA洗滌。分離有機層且經Na2 SO4 乾燥，減壓蒸發混合物並利用FCC(PE/EA=5/1-0/1)純化，得到呈黃色油狀之2-2 (1.5 g，52%產率)。步驟 2 ：製備化合物 2
在0℃下，向1-3 (378 mg，0.5 mmol，1.0 eq)及2-2 (214 mg，1.5 mmol，3.0 eq)於THF (5.0 mL)中之溶液中添加DIEA (322 mg，2.5 mmol，5.0 eq)。在70℃下將混合物攪拌16小時。LCMS顯示反應完成，減壓蒸發混合物並利用製備型HPLC純化，得到呈黃色油狀之化合物2 (35.0 mg，8%產率)。
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.80-0.83 (m, 12H), 0.91-1.20 (m, 4H),1.25 (s, 56H), 1.54-1.59 (m, 8H), 1.70 (s, 3H),1.79-1.86 (m, 6H), 2.22-2.34 (m, 4H), 2.74-3.06 (m, 6H), 3.06-3.20 (m, 2H), 3.69 (s, 1H), 3.88-4.05 (m, 4H)。LCMS: Rt: 1.989 min；MS m/z (ESI): 863.7[M+H]。6.3 實例 3 ：製備化合物 3.
Figure 02_image644
步驟 1 ：製備中間體 3-2
在氬氣下。在室溫下將酮3-1 (1.12 g，10.0 mmol，1.0 eq)、異丙醇鈦(IV)(3.69 g，13 mmol，1.3 eq)及2-胺基乙醇(1.83 g，30.0 mmol，3.0 eq)於甲醇(10.0 mL)中之混合物攪拌隔夜。接著，在0℃下添加硼氫化鈉(380.0 mg，10.0 mmol，1.0 eq)並將所得混合物再攪拌2小時。接著，藉由添加水(10.0 mL)淬滅反應。在室溫下繼續攪拌20分鐘，接著將反應混合物經矽藻土墊過濾，用水及EA洗滌。分離有機層且經Na2 SO4 乾燥，減壓蒸發混合物並利用FCC (PE/EA=5/1-0/1)純化，得到呈無色油狀之3-2 (550.0 mg，35%產率)。步驟 2 ：製備化合物 3
在0℃下，向1-3 (300 mg，0.4 mmol，1.0 eq)及3-2 (188 mg，1.2 mmol，3.0 eq)於THF (5.0 mL)中之溶液中添加DIEA (258 mg，2.0 mmol，5.0 eq)。在70℃下，將混合物攪拌16小時。LCMS顯示反應完成，減壓蒸發混合物並利用製備型HPLC純化，得到呈無色油狀之化合物3 (53.0 mg，15%產率)。
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.86-0.90 (m, 15H), 1.26 (s, 65H), 1.24-1.46 (m, 4H),1.6-1.67 (m, 7H), 2.29-2.47 (m, 8H), 2.73-2.77 (m, 2H), 3.46-3.50 (t,J=8.0 Hz , 1H), 3.96-3.98 (d,J=8.0 Hz , 4H)。LCMS: Rt: 1.834 min；MS m/z (ESI): 877.7[M+H]。6.4 實例 4 ：製備化合物 4.
Figure 02_image646
步驟 1 ：製備中間體 4-2
在室溫下，向4-1 (250 mg，2.0 mmol，1.0 eq)及環丙胺(125 mg，2.2 mmol，1.1 eq)於ACN (5.0 mL)中之溶液中添加K2 CO3 (552 mg，4.0 mmol，2.0 eq)。在80℃下，將混合物攪拌隔夜。LCMS顯示反應完成，用EA (40 ml×2)萃取混合物，藉由鹽水洗滌並減壓蒸發，得到4-2 (170 mg，粗品)。粗產物不經進一步純化即用於下一步驟中。步驟 2 ：製備化合物 4
在0℃下，向1-3 (300 mg，0.4 mmol，1.0 eq)及4-2 (160 mg，1.6 mmol，4.0 eq)於THF (5.0 mL)中之溶液中添加DIEA (205 mg，2.0 mmol，4.0 eq)。在70℃下，將混合物攪拌16小時。LCMS顯示反應完成，減壓蒸發混合物並利用製備型HPLC純化，得到呈無色油狀之化合物4 (58.0 mg，17.6%產率)。
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.86-0.90 (t,J=8.0 Hz 12H), 1.26-1.39 (m, 54H), 1.43-1.66 (m, 12H), 2.30-2.33 (m, 6H), 2.81-3.01(m, 8H), 3.49 (s, 4H), 3.96-3.98 (d,J=8.0 Hz , 4H)。LCMS: Rt: 1.39 min；MS m/z (ESI): 821.8[M+H]。6.5 實例 5 ：製備化合物 5.
Figure 02_image648
步驟 1 ：製備中間體 5-2
在氬氣下，在室溫下將環戊酮5-1 (840 mg，10.0 mmol，1.0 eq)、異丙醇鈦(IV)(3.69 g，13 mmol，1.3 eq)及2-胺基乙醇(1.83 g，30.0 mmol，3.0 eq)於甲醇(10.0 mL)中之混合物攪拌隔夜。接著，在0℃下添加硼氫化鈉(380.0 mg，10.0 mmol，1.0 eq)並將所得混合物再攪拌2小時。接著，藉由添加水(10.0 mL)淬滅反應。在室溫下繼續攪拌20分鐘，接著將反應混合物經矽藻土墊過濾，用水及EA洗滌。分離有機層且經Na2 SO4 乾燥，減壓蒸發混合物並利用FCC (PE/EA=2/1-0/1)純化，得到呈無色油狀之5-2 (410 mg，32%產率)。步驟 2 ：製備化合物 5
在0℃下，向1-3 (300 mg，0.4 mmol，1.0 eq)及5-2 (154 mg，1.2 mmol，3.0 eq)於THF (5.0 mL)中之溶液中添加DIEA (258 mg，2.0 mmol，5.0 eq)。在70℃下，將混合物攪拌16小時。LCMS顯示反應完成，減壓蒸發混合物並利用製備型HPLC純化，得到呈無色油狀之化合物5 (10.0 mg，3%產率)。
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.80-0.83 (m, 12H), 1.20 (m, 54H), 1.51-1.61 (m, 4H) 1.68-1.79 (m, 8H), 1.85-1.94(m, 2H), 2.02 (s, 1H), 2.29-2.50(m, 4H) 2.69-3.15(m, 10H),  3.27-3.59(m, 4H) 3.89-3.91 (d,J=8.0 Hz , 4H)。LCMS: Rt: 2.22 min；MS m/z (ESI): 849.8[M+H]。6.6 實例 6 ：製備化合物 6.
Figure 02_image650
步驟 1 ：製備中間體 6-2
在氬氣下，在室溫下將環辛酮6-1 (1.26 g，10.0 mmol，1.0 eq)、異丙醇鈦(IV)(3.69 g，13 mmol，1.3 eq)及2-胺基乙醇(1.83 g，30.0 mmol，3.0 eq)於甲醇(10.0 mL)攪中之混合物拌隔夜。接著，在0℃下添加硼氫化鈉(380.0 mg，10.0 mmol，1.0 eq)，並將所得混合物再攪拌2小時。接著，藉由添加水(10.0 mL)淬滅反應。在室溫下繼續攪拌20分鐘，接著反應混合物經矽藻土墊過濾，用水及EA洗滌。分離有機層且經Na2 SO4 乾燥，減壓蒸發混合物並利用FCC (PE/EA=5/1-0/1)純化，得到呈無色油狀之2 (900 mg，52%產率)。步驟 2 ：製備化合物 6
在0℃下，向1-3 (300 mg，0.4 mmol，1.0 eq)及6-2 (208 mg，1.2 mmol，3.0 eq)於THF (5.0 mL)中之溶液中添加DIEA (258 mg，2.0 mmol，5.0 eq)。在70℃下，將混合物攪拌16小時。LCMS顯示反應完成，減壓蒸發混合物並利用製備型HPLC純化，得到呈無色油狀之化合物6 (40.0 mg，11%產率)。
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.86-0.90 (m, 12H), 1.26 (m, 52H), 1.62-1.73 (m, 16H), 1.94-1.85(m, 2H) 2.12-2.3 (m, 11H), 2.32-2.34 (m, 4H), 2.75-3.30 (m, 8H) 3.96-3.98 (d,J=8.0 Hz , 4H)。LCMS: Rt: 1.81 min；MS m/z (ESI): 891.5[M+H]。6.7 實例 7 ：製備化合物 7.
Figure 02_image652
步驟 1 ：製備中間體 7-2
在氬氣下，在室溫下將碘苯7-1 (0.81 g，4.0 mmol，1.0 eq)、2-胺基乙醇(0.73 g，12.0 mmol，3.0 eq)及CuCl (39.6 mg，0.4 mmol，0.1 eq)、KOH (0.73 g，12.0 mmol，3.0 eq)中之混合物攪拌16小時。接著，藉由添加水(10.0 mL)淬滅反應，用EA萃取。分離有機層且經Na2 SO4 乾燥，減壓蒸發混合物並利用FCC (PE/EA=5/1-1/1)純化，得呈黃色油狀之到7-2 (0.5 g，90%產率)。步驟 2 ：製備化合物 7
在0℃下，向1-3 (300 mg，0.4 mmol，1.0 eq)及7-2 (163 mg，1.19 mmol，3.0 eq)於THF (10.0 mL)中之溶液中添加DIEA (256 mg，1.98 mmol，5.0 eq)。在70℃下，將混合物攪拌16小時。LCMS顯示反應完成，減壓蒸發混合物並利用製備型HPLC純化，得到呈無色油狀之化合物7 (60.0 mg，18%產率)。
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.86-0.90 (m, 12H), 1.27-1.37 (m, 55H), 1.69 (s, 12H), 2.31 (s, 4H), 2.43 (s, 2H), 2.70 (s, 1H), 3.61-3.71 (m, 5H), 3.88-3.96 (m, 4H), 6.55-6.83 (m, 3H), 7.14-7.26 (m, 2H)。LCMS:  Rt: 2.193 min；MS m/z (ESI): 858.2 [M+H]。6.8 實例 8 ：製備化合物 8.
Figure 02_image654
步驟 1 ：製備中間體 8-2
在氬氣下，在室溫下將8-1 (0.5 g，2.66 mmol，1.0 eq)及酮1-4 (0.37 g，5.32 mmol，2.0 eq)於甲醇(10.0 mL)中之混合物攪拌2小時。接著，添加NaCNBH3 (355.0 mg，5.32 mmol，2.0 eq)並將所得混合物再攪拌16小時。接著，藉由添加水(10.0 mL)淬滅反應。在室溫下繼續攪拌20分鐘，接著用EA萃取反應混合物，用鹽水洗滌。分離有機層且經Na2 SO4 乾燥，減壓蒸發混合物，得到呈黃色油狀之8-2 (0.35 g，54%產率)。步驟 2 ：製備中間體 8-3
向8-2 (0.35 g，1.45 mmol，1.0 eq)及3-羥基丙酸(1.2 mL, 4.35 mmol，3.0 eq)於DMF (10.0 mL)中之混合物中添加HATU (0.72 g，1.88 mmol，1.3 eq)及DIEA (0.56 g，4.35 mmol，3.0 eq)，並在氬氣下，在室溫下攪拌2小時。LCMS顯示反應完成，添加EA (100.0 mL)。用飽和鹽水洗滌混合物，經Na2 SO4 乾燥。 將混合物減壓蒸發，得到呈褐色油狀之8-3 (400 mg，粗品)。步驟 3 ：製備中間體 8-4
向8-3 (0.4 g，1.27 mmol，1.0 eq)於二㗁烷(5.0 mL)中之混合物中添加HCl/二㗁烷(5.0 mL)，並在室溫下攪拌2小時。LCMS顯示反應完成。將混合物減壓蒸發，得到呈白色固體狀之8-4 (170 mg，粗品)。步驟 4 ：製備化合物 8
在室溫下，向8-4 (120 mg，0.56 mmol，1.0 eq)及8-5 (1.17 g，2.8 mmol，5.0 eq)於ACN (15.0 mL)中之溶液中添加K2 CO3 (309 mg，2.24 mmol，4.0 eq)、Cs2 CO3 (55.0 mg，0.17 mmol，0.3 eq)及NaI (10.0 mg，0.06 mmol，0.1 eq)。在80℃下，將混合物攪拌72小時。LCMS顯示反應完成，減壓蒸發混合物並利用製備型HPLC純化，得到呈黃色油狀之化合物8 (40.0 mg，8%產率)。
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.80-0.90 (m, 14H), 0.91-0.98 (m, 2H),1.32 (s, 54H), 1.36-1.50 (m, 4H), 1.62-1.70 (m, 15H), 1.77-1.86 (m, 5H), 2.31-2.34 (m, 4H), 2.89-3.08 (m, 1H), 3.52-3.55 (m, 3H), 3.97 (d,J=6.0 Hz , 4H)。LCMS: Rt: 1.149 min；MS m/z (ESI): 891.6 [M+H]。6.9 實例 9 ：製備化合物 9.
Figure 02_image656
步驟 1 ：製備中間體 9-1
在氬氣下，在室溫下將8-1 (0.5 g，2.66 mmol，1.0 eq)及酮2-1 (0.5 g，5.32 mmol，2.0 eq)於甲醇(10.0 mL)中之混合物攪拌2小時。接著，添加NaCNBH3 (355.0 mg，5.32 mmol，2.0 eq)並將所得混合物再攪拌16小時。接著，藉由添加水(10.0 mL)淬滅反應。在室溫下繼續攪拌20分鐘，接著用EA萃取反應混合物，用鹽水洗滌。分離有機層且經Na2 SO4 乾燥，減壓蒸發混合物，得到呈黃色油狀之9-1 (0.35 g，48%產率)。步驟 2 ：製備中間體 9-2
將9-1 (0.35 g，1.31 mmol，1.0 eq)及3-羥基丙酸(1.0 mL, 3.93 mmol，3.0 eq)於DMF (10.0 mL)中之混合物添加HATU (0.72 g，1.88 mmol，1.3 eq)及DIEA (0.56 g，4.35 mmol，3.0 eq)，並在氬氣下，在室溫下攪拌2小時。LCMS顯示反應完成，添加EA (100.0 mL)。用飽和鹽水洗滌混合物，經Na2 SO4 乾燥。將混合物減壓蒸發，得到呈褐色油狀之9-2 (400 mg，粗品)。步驟 3 ：製備中間體 9-3
在室溫下，向9-2 (0.4 g，1.2 mmol，1.0 eq)於二㗁烷(5.0 mL)中之混合物中添加HCl/二㗁烷(5.0 mL)，攪拌2小時。LCMS顯示反應完成。將混合物減壓蒸發，得到呈白色固體狀之9-3 (170 mg，粗品)。步驟 4 ：製備化合物 9
在室溫下，向9-3 (120 mg，0.5 mmol，1.0 eq)及8-5 (0.84 g，2.0 mmol，4.0 eq)於ACN (15.0 mL)中之溶液中添加K2 CO3 (207 mg，1.5 mmol，3.0 eq)、Cs2 CO3 (50.0 mg，0.15 mmol，0.3 eq)及NaI (7.0 mg，0.05 mmol，0.1 eq)。在80℃下，將混合物攪拌72小時。LCMS顯示反應完成，減壓蒸發混合物並利用製備型HPLC純化，得到呈無色油狀之化合物9 (24.0 mg，5%產率)。
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.86-0.90 (m, 12H), 1.27-1.38 (m, 50H), 1.52-1.57 (m, 8H), 1.79-1.94 (m, 22H), 2.28-2.42 (m, 5H), 2.50-2.60 (m, 2H), 2.90 (s, 3H), 3.29 (s, 1H), 3.57 (s, 1H), 3.83-3.87 (m, 2H), 3.96-3.98 (m, 4H)。LCMS: Rt: 1.704 min；MS m/z (ESI): 919.7 [M+H]。6.10 實例 10 ：製備化合物 10.
Figure 02_image658
步驟 1 ：製備中間體 10-1
在氬氣下，在室溫下將8-1 (2.0 g，8.92 mmol，1.0 eq)及酮3-1 (2.0 g，17.85 mmol，2.0 eq)於甲醇(15.0 mL)中之混合物攪拌2小時。接著，添加NaCNBH3 (1.12 g，17.85 mmol，2.0 eq)並將所得混合物再攪拌16小時。接著，藉由添加水(20.0 mL)淬滅反應。在室溫下繼續攪拌20分鐘，接著用EA萃取反應混合物，用鹽水洗滌。分離有機層且經Na2 SO4 乾燥，減壓蒸發混合物，得到呈黃色油狀之10-1 (1.52 g，60%產率)。步驟 2 ：製備中間體 10-2
將10-1 (500 mg，1.76 mmol，1.0 eq)及3-羥基丙酸(676 mg，5.28 mmol，3.0 eq)於DMF (10.0 mL)中之混合物添加HATU (869 mg，2.29 mmol，1.3 eq)及DIEA (681 mg，5.28 mmol，3.0 eq)，並在氬氣下，在室溫下攪拌2小時。LCMS顯示反應完成，添加EA (100.0 mL)。用飽和鹽水洗滌混合物，經Na2 SO4 乾燥. 將混合物減壓蒸發，得到呈褐色油狀之10-2 (590 mg，粗品)。步驟 3 ：製備中間體 10-3
向10-2 (590 mg，1.65 mmol，1.0 eq)於二㗁烷(5.0 mL)中之混合物中添加HCl/二㗁烷(5.0 mL)，在室溫下攪拌2小時。LCMS顯示反應完成。將混合物減壓蒸發，得到呈白色固體狀之10-3 (400 mg，粗品)。步驟 4 ：製備化合物 10
在室溫下，向10-3 (150 mg，0.58 mmol，1.0 eq)及8-5 (1.22 g，2.92 mmol，5.0 eq)於ACN (15.0 mL)中之溶液中添加K2 CO3 (322 mg，2.32 mmol，4.0 eq)、Cs2 CO3 (57.0 mg，0.17 mmol，0.3 eq)及NaI (10.0 mg，0.06 mmol，0.1 eq)。在80℃下，將混合物攪拌72小時。LCMS顯示反應完成，減壓蒸發混合物並利用製備型HPLC純化，得到呈黃色油狀之化合物10 (92.0 mg，17%產率)。
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.87-0.90 (m, 14H), 1.27 (s, 62H), 1.44-1.50 (m, 6H), 1.62-1.72 (m, 12H), 1.85-1.92 (m, 2H), 2.29-2.35 (m, 5H), 3.13-3.68 (m, 5H), 3.85-3.87 (m, 2H), 3.96-3.98 (d,J=8.0 Hz , 4H)。LCMS: Rt: 1.520 min；MS m/z (ESI): 933.9 [M+H]。6.11 實例 11 ：製備化合物 11.
Figure 02_image660
步驟 1 ：製備中間體 11-1
向化合物1-1 (10 g，21.87 mmol，3.0 eq)於CH3 CN (50 mL)中之溶液中添加K2 CO3 (3.02 g，21.87 mmol，3.0 eq)、Cs2 CO3 (2.38 g，7.29 mmol，1.0 eq)、NaI(0.2 g，1.46 mmol，0.2 eq)及(4-甲氧基苯基)甲胺(1 g，7.29 mmol，1.0 eq)。在80℃下攪拌反應10小時。將反應混合物倒入水(100 ml)中並用CH2 Cl2 (3*100 mL)萃取。將合併之有機層用鹽水洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥並真空濃縮。將粗產物藉由急驟管柱層析法(EtOAc : PE =2 : 1)純化，得到呈黃色油狀之11-1 (5 g，產率：84%)。步驟 2 ：製備中間體 11-2
向11-1 (5 g，6.14 mmol，1.0 eq)於EtOAc (100 mL)中之溶液中添加Pd/C (1.0 g)。在H2 下，在室溫下攪拌反應10小時。將反應混合物過濾，真空濃縮，得到呈黃色油狀之11-2 (4.0 g，產率：94%)。步驟 3 ：製備中間體 11-3
向11-2 (200 mg，0.29 mmol，1.0 eq)於CH2 Cl2 (20 mL)中之溶液中添加DIPEA (120 mg，0.87 mmol，3.0 eq)及2-溴乙醯基溴(120 mg，0.58 mmol，2.0 eq)。在0℃下攪拌反應1小時。將反應混合物倒入水(50 ml)中並用CH2 Cl2 (3*50 mL)萃取。將合併之有機層用鹽水洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥並真空濃縮，得到呈黃色油狀之11-3 (200 mg，產率：85%)。步驟 4 ：製備化合物 11
向11-3 (200 mg，0.24 mmol，1.0 eq)於CH3 CN (10 mL)中之溶液中添加K2 CO3 (170 mg，1.23 mmol，3.0 eq)及化合物1-5 (85 mg，0.74 mmol，3.0 eq)。在80℃下攪拌反應10小時。將反應混合物過濾，真空濃縮。將粗產物藉由製備型HPLC純化，得到呈無色油狀之化合物11 (50 mg，產率：24%)。
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.87 (t,J = 8 Hz, 12H), 1.22-1.46 (m, 54H), 1.50-1.69 (m, 14H), 1.77-2.04 (m, 4H), 2.28-2.34 (m, 4H), 2.76-2.80 (m, 2H), 3.18-3.44 (m, 4H), 3.51-3.58 (m, 2H), 3.95-3.98(m, 4H)。LCMS:  Rt: 1.431 min；MS m/z (ESI): 849.7 [M+H]。6.12 實例 12 ：製備化合物 12.
Figure 02_image662
步驟 1 ：製備中間體 12-1
向11-2 (200 mg，0.29 mmol，1.0 eq)於CH2 Cl2 (20 mL)中之溶液中添加DIPEA (120 mg，0.87 mmol，3.0 eq)及3-溴丙醯氯(100 mg，0.58 mmol，2.0 eq)。在0℃下攪拌反應1小時。將反應混合物倒入水(50 ml)中並用CH2 Cl2 (3*50 mL)萃取。將合併之有機層用鹽水洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥並真空濃縮，得到呈黃色油狀之12-1 (185 mg，產率：77%)。步驟 2 ：製備化合物 12
向12-1 (180 mg，0.21 mmol，1.0 eq)於CH3 CN (10 mL)中之溶液中添加K2 CO3 (150 mg，1.09 mmol，5.0 eq)及1-5 (75 mg，0.65 mmol，3.0 eq)。在80℃下攪拌反應10小時。將反應混合物過濾，真空濃縮。將粗產物藉由製備型HPLC純化，得到呈無色油狀之化合物12 (10 mg，產率：5%)。
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.87 (t,J = 8 Hz, 12H), 1.02-1.45 (m, 56H), 1.50-1.67 (m, 13H), 1.99-2.08 (m, 2H), 2.23-2.34 (m, 4H), 2.51-3.03 (m, 4H), 3.14-3.31 (m, 5H), 3.51-3.88 (m, 2H), 3.95-3.98(m, 4H)。LCMS: Rt: 1.491 min；MS m/z (ESI): 863.7 [M+H]。6.13 實例 13 ：製備化合物 13.
Figure 02_image664
步驟 1 ：製備中間體 13-1
向11-2 (200 mg，0.29 mmol，1.0 eq)於CH2 Cl2 (20 mL)中之溶液中添加DIPEA (120 mg，0.87 mmol，3.0 eq)及4-溴丁醯氯(107 mg，0.58 mmol，2.0 eq)。在0℃下攪拌反應1小時。將反應混合物倒入水(50 ml)中並用CH2 Cl2 (3*50 mL)萃取。將合併之有機層用鹽水洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥並真空濃縮，得到呈黃色油狀之13-1 (191 mg，產率：78%)。步驟 2 ：製備化合物 13
向13-1 (190mg, 0.22 mmol，1.0 eq)於CH3 CN (10 mL)中之溶液中添加K2 CO3 (155 mg，1.13 mmol，5.0 eq)及1-5 (78 mg，0.67 mmol，3.0 eq)。在80℃下攪拌反應10小時。將反應混合物過濾，真空濃縮。將粗產物藉由製備型HPLC純化，得到呈無色油狀之化合物13 (21 mg，產率：10%)。
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.87 (t,J = 8 Hz, 12H), 1.39-1.48 (m, 54H), 1.50-1.83 (m, 15H), 2.02-2.04 (m, 2H), 2.24-2.34 (m, 6H), 2.46-2.50 (m, 2H), 2.55-2.57 (m, 2H), 3.18-3.30 (m, 5H), 3.52-3.54 (m, 2H), 3.95-3.98(m, 4H)。LCMS: Rt: 1.503 min；MS m/z (ESI): 877.7 [M+H]。6.14 實例 14 ：製備化合物 14.
Figure 02_image666
步驟 1 ：製備中間體 14-B
使14-A (20.0 g，103 mmol，1.0 eq)、苯甲醇(10.0 g，93 mmol，0.9 eq)及濃H2 SO4 (1 ml)於甲苯(200 ml)中之混合物回流6小時，且共沸移除水。TLC顯示反應完成。將混合物用乙酸乙酯(100 ml)稀釋並用飽和NaHCO3 水溶液及鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥並濃縮。將殘餘物藉由層析管柱純化，得到呈無色油狀之14-B (24.2 g，92%產率)。步驟 2 ：製備中間體 14-2
在惰性N2 氛圍下，在0℃下向14-1 (12.0 g，55.4 mmol，1.0 eq)於無水THF (100ml)中之溶液中添加NaH (2.22 g，55.4 mmol，1.0 eq)。將混合物攪拌30分鐘，並添加14-B (15.6g, 55.4mmol，1.0 eq)。在室溫下，將混合物攪拌隔夜。TLC顯示反應完成。將混合物濃縮並藉由層析管柱純化，得到呈無色油狀之14-2 (16.8 g，72%產率)。步驟 3 ：製備中間體 14-3
在惰性氛圍下，在室溫下向14-2 (16.8 g，40.0 mmol，1.0 eq)於無水THF (100ml)中之溶液中添加NaH (1.60 g，40.0 mmol，1.0 eq)。將混合物攪拌30分鐘，並添加14-B (7.3 g，35.6mmol，1.0 eq)。在回流下將混合物攪拌隔夜。TLC顯示反應完成。將混合物濃縮並藉由層析管柱純化，得到呈無色油狀之14-3 (15.0 g，60%產率)。步驟 4 ：製備中間體 14-4
在回流下，將14-3 (9.0 g，14.4 mmol，1.0 eq)及TFA (8.2 g，74.0 mmol，5.0 eq)於DCM (50 ml)中之混合物攪拌4小時。TLC顯示反應完成。將混合物濃縮且使殘餘物在二甲基苯(100 ml)中回流並濃縮。將殘餘物藉由層析管柱純化，得到呈無色油狀之14-4 (5.8 g，86%產率)。步驟 5 ：製備中間體 14-5
在惰性氛圍下，在-78℃下向14-4 (5.8 g，12.4 mmol，1.0 eq)於無水THF (30 ml)中之溶液中添加BH3 (於THF中，1M，20 ml)。在此溫度下將混合物攪拌4小時。TLC顯示反應完成。藉由Na2 CO3 水溶液淬滅混合物，用乙酸乙酯萃取，用水及鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥並濃縮。將殘餘物藉由層析管柱純化，得到呈無色油狀之14-5 (2.9 g，51.4%產率)。步驟 6 ：製備中間體 14-6
在0℃下，向14-5 (2.1 g，5.4 mmol，1.0 eq)及三乙胺(920 mg，10.8 mmol，2.0 eq)於DCM (30 ml)中之混合物中逐滴添加甲烷磺醯氯(880 mg，6.5 mmol，1.2 eq)。將混合物攪拌4小時。TLC顯示反應完成。將所得物用水及鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥並濃縮。將殘餘物藉由層析管柱純化，得到呈無色油狀之14-6 (2.2 g，89%產率)。步驟 7 ：製備中間體 14-7
在氫氣球下，在室溫下將14-6 (2.2 g，4.1 mmol，1.0 eq)及Pd/C (200 mg)於乙酸乙酯(30 ml)中之混合物攪拌隔夜。TLC顯示反應完成。將所得物過濾並濃縮濾液，得到14-7 (1.5 g，粗品)。殘餘物不經進一步純化即用於下一步驟。步驟 8 ：製備中間體 14-8
使14-7 (1.5 g，4.1 mmol，1.0 eq)、2-己基癸-1-醇(3.0 g，12.4 mmol，3.0 eq)及濃H2 SO4 (0.5 ml)於甲苯 (50 ml)中之混合物回流3小時，且共沸移除水。TLC顯示反應完成。將混合物用乙酸乙酯(100 ml)稀釋並用飽和NaHCO3 水溶液及鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥並濃縮。將殘餘物藉由層析管柱純化，得到呈無色油狀之14-8 (3.2 g，97%產率)。步驟 9 ：製備化合物 14
在70℃下，將14-8 (200 mg，0.25 mmol，1.0 eq)、2-(甲基胺基)乙醇(100 mg，1.3 mmol，5.3 eq)、K2 CO3 (70 mg，0.50 mmol，2.0 eq)於乙腈(10 ml)中之混合物攪拌隔夜。LCMS顯示反應完成。將混合物用乙酸乙酯(100 ml)稀釋並用水及鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥並濃縮。將殘餘物藉由製備型HPLC純化，得到呈無色油狀之化合物14 (69 mg)。
1 H NMR (400 MHz, CCl3 D) δ: 0.86-0.90 (m, 12H), 1.26-1.28 (m, 60H), 1.62(s, 8H), 2.20 (s, 5H), 2.28-2.31 (m, 4H), 2.49(s, 2H), 3.55-3.57 (m, 2H), 3.96-3.97 (d,J =5.6Hz, 4H)。LCMS: Rt: 1.830 min；MS m/z (ESI): 780.7 [M+H]。
以下化合物係以與化合物14類似之方式，使用相應起始物質製備。
化合物 表徵
Figure 02_image362
化合物16		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.87 (t,J = 8 Hz, 12H), 1.19-1.35 (m, 62H), 1.42-1.55 (m, 9H), 1.58-2.24 (m, 6H), 2.46-3.72 (m, 4H), 3.83-3.90(m, 6H)。LCMS: Rt: 2.040 min；MS m/z (ESI): 794.7 [M+H]。
Figure 02_image364
化合物17		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.87 (t,J = 8 Hz, 12H), 1.27-1.32 (m, 65H), 1.58-1.62 (m, 16H), 1.95-2.32 (m, 6H), 2.65-3.52 (m, 4H), 3.96-3.97(m, 4H), 4.11-4.12(m, 2H)。LCMS: Rt: 2.130 min；MS m/z (ESI): 876.8 [M+H]。
6.15 實例 15 ：製備化合物 15.
Figure 02_image670
向14-8 (200 mg，0.25 mmol，1.0 eq)於CH3 CN (10 mL)中之溶液中添加K2 CO3 (175 mg，1.25 mmol，5.0 eq)及1-5 (90 mg，0.75 mmol，3.0 eq)。在80℃下攪拌反應10小時。將反應混合物過濾，並真空濃縮。將粗產物藉由製備型HPLC純化，得到呈無色油狀之化合物15 (6 mg，產率：3%)。
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.87 (t,J = 8 Hz, 12H), 1.39-1.48 (m, 55H), 1.50-1.87 (m, 14H), 1.92-2.18 (m, 4H), 2.21-2.325 (m, 4H), 2.40-3.68 (m, 8H), 3.82-3.90 (m, 4H)。LCMS: Rt: 1.883 min；MS m/z (ESI): 820.7 [M+H]。6.16 實例 16 ：製備化合物 A.
Figure 02_image672
在0℃下，向1-3 (300 mg，0.4 mmol，1.0 eq)及2-胺基乙醇2 (74 mg，1.2 mmol，3.0 eq)於THF (5.0 mL)中之溶液中添加DIEA (209 mg，1.6 mmol，4.0 eq)。在70℃下將混合物攪拌16小時。LCMS顯示反應完成，減壓蒸發混合物並利用製備型HPLC純化，得到呈無色油狀之化合物A(20.0 mg，6.4%產率)。
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.86-0.90 (t,J=8.0 Hz , 12H), 1.27-1.35 (m, 54H), 1.5-1.53 (m, 4H), 1.6-1.65 (m, 4H), 2.31-2.35 (t,J=8.0 Hz , 4H), 2.51-2.54 (m, 4H), 2.82 (s, 2H), 2.98-3.06 (m, 4H), 3.89-3.91 (m, 2H), 3.95-3.97 (d,J=8.0 Hz , 4H)。LCMS: Rt: 2.43 min；MS m/z (ESI): 781.7[M+H]。6.17 實例 17 ：製備化合物 B.
Figure 02_image674
在0℃下，向1-3 (300 mg，0.4 mmol，1.0 eq)及2-(甲基胺基)乙醇(91 mg，1.2 mmol，3.0 eq)於THF (5.0 mL)中之溶液中添加DIEA (209 mg，1.6 mmol，4.0 eq)。在70℃下，將混合物攪拌16小時。LCMS顯示反應完成，減壓蒸發混合物並利用製備型HPLC純化，得到呈無色油狀之化合物B(104.0 mg，32.3%產率)。
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.86-0.90 (t, J=8.0 Hz, 12H),1.26-1.34 (m, 52H), 1.54-1.66 (m, 10H), 2.29-2.35 (m, 7H), 2.60-2.82 (m, 10H), 3.49-3.60 (m, 3H), 3.95-3.97 (d, J=8.0 Hz, 4H)。LCMS: Rt: 1.53 min；MS m/z (ESI): 796.6[M+H]。6.18 實例 18 ：製備化合物 C.
Figure 02_image676
向化合物1-3 (300 mg，0.40 mmol，1.0 eq)、DIEA (206 mg，1.60 mmol，4.0 eq)於THF (20 mL)中之混合物中添加2-(丁基胺基)乙醇(141 mg，1.20 mmol，3.0 eq)。在70℃下，將反應混合物攪拌16小時。LCMS顯示反應完成。在移除溶劑後，將殘餘物藉由製備型HPLC純化，得到呈無色油狀之化合物C (50 mg，15%產率)。
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.86-0.94 (m, 15H), 1.27-1.34 (m, 56H), 1.43-1.68 (m, 12H), 2.29-2.33 (m, 4H), 2.56-2.82 (m, 12H), 3.57-3.58 (m, 1H), 3.97 (d,J =5.6 Hz, 4H)。LCMS: Rt: 1.650 min；MS m/z (ESI): 837.8[M+H]。6.19 實例 19 ：製備化合物 D.
Figure 02_image678
在0℃下，向1-3 (300 mg，0.4 mmol，1.0 eq)及2-(己基胺基)乙醇(176 mg，1.2 mmol，3.0 eq)於THF (5.0 mL)中之溶液中添加DIEA (209 mg，1.6 mmol，4.0 eq)。在70℃下，將混合物攪拌16小時。LCMS顯示反應完成，減壓蒸發混合物並利用製備型HPLC純化，得到呈無色油狀之化合物D( 48 mg，14.3%產率)。
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.87-0.90 (t,J=6.6 Hz , 15H), 1.26-1.35 (m, 62H), 1.62-1.67 (m, 10H), 2.30-2.34 (m, 4H), 2.70-3.10 (m, 10H) 3.35-3.73 (m, 2H), 3.95-3.97 (d,J=8.0 Hz , 4H)。LCMS: Rt: 1.89 min；MS m/z (ESI): 865.8[M+H]。6.20 實例 20 ：製備化合物 18
Figure 02_image680
步驟 1 ：製備化合物 18-2
在惰性氛圍下，在-78℃下向化合物14-5 (800 mg，1.76 mmol，1.0 eq.)、DMSO (410 mg，5.28 mmol，3.0 eq.)於DCM (30 ml)中之混合物中添加醯基氯(450 mg，3.52 mmol，2.0 eq)於DCM(10 ml)中之溶液，在-78℃下攪拌2小時後，藉由Et3 N (900 mg，8.8 mmol，5.0 eq)淬滅反應。將反應混合物升溫至室溫且用DCM稀釋，並用水及鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥並濃縮。將殘餘物藉由管柱層析法純化，得到呈無色油狀之化合物18-2 (760 mg)。步驟 2 ：製備化合物 18-3
在惰性氛圍下，在0℃下向化合物18-2a (810 mg，3.23 mmol，2.0 eq)於無水THF (100 ml)中之溶液中添加NaH(130 mg，3.23 mmol，2.0 eq)。將混合物攪拌30分鐘，並添加化合物18-2 (730 mg，1.61 mmol，1.0 eq)。在室溫下，將混合物攪拌隔夜。TLC顯示反應完成。將混合物濃縮並藉由層析管柱純化，得到呈無色油狀之化合物18-3(690 mg)。步驟 3 ：製備化合物 18-4
在氫氣下，將化合物18-3 (690 mg，1.25 mmol，1.0 eq)及Pd/C (70 mg)於EA(20 ml)中之混合物攪拌隔夜。TLC顯示反應完成。將混合物過濾並濃縮濾液，且將殘餘物不經進一步純化即用於下一步驟。步驟 4 ：製備化合物 18-5
將化合物18-4 (470 mg，1.25 mmol，1.0 eq)及EDCI (720 mg，3.75 mmol，3.0 eq)、十八烷醇(910 mg，3.75 mmol，3.0 eq)、DMAP(50 mg)及DIEA (1300 mg，10.00 mmol，8.0 eq)於DCM(20 ml)中之混合物攪拌隔夜。將混合物用DCM稀釋並用鹽水洗滌，並濃縮。且將殘餘物藉由管柱層析法純化，得到化合物18-5 (630 mg)。步驟 5 ：製備化合物 18-6
向化合物18-5 (630 mg，0.77 mmol，1.0eq)於DCM (10 ml)中之溶液中添加TFA(1 ml)。在回流下將混合物攪拌4小時。TLC顯示反應完成。將所得物濃縮且殘餘物不經進一步純化即用於下一步驟。步驟 6 ：製備化合物 18-7
在-78℃下，向化合物18-6 (580 mg，0.77 mmol，1.0 eq)於無水THF (20 ml)中之混合物中添加BH3 (1.0 M於THF中，5.0 ml)。將混合物攪拌4小時並藉由飽和Na2 CO3 水溶液淬滅並用EA萃取，用鹽水洗滌並濃縮。將殘餘物藉由層析管柱純化，得到呈無色油狀之化合物18-7 (320 mg)。步驟 7 ：製備化合物 18-8
在0℃下，向化合物18-7 (320 mg，0.43mmol，1.0 q)及Et3 N (65 mg，0.65 mmol，1.5 eq)於DCM (10 ml)中之混合物中添加甲烷磺醯氯(60 mg，0.52 mmol，1.2 eq)。4小時後，TLC顯示反應完成。將混合物用DCM稀釋並用鹽水洗滌，並濃縮。將殘餘物藉由管柱層析法純化，得到化合物18-8 (280 mg)。步驟 8 ：製備化合物 18
在70℃下，將化合物18-8 (200 mg，0.25 mmol，1.0 eq)、2-(甲基胺基)乙醇(100 mg，1.3 mmol，5.3 eq)、K2 CO3 (70 mg，0.50 mmol，2.0 eq)於乙腈(10 ml)中之混合物攪拌隔夜。LCMS顯示反應完成。將混合物用EA (100 ml)稀釋並用水及鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥並濃縮。將殘餘物藉由製備型HPLC純化，得到呈無色油狀之化合物18 (24 mg)。
1 H NMR (400 MHz, CCl3 D) δ: 0.87-0.90 (m, 12H), 1.39 (s, 62H), 1.41-1.42(m, 4H), 1.60-1.62(m, 6H), 2.25 (s, 3H), 2.28-2.32(m, 4H), 2.35-2.39(m, 2H), 2.51-2.54(m, 2H),3.57-3.59 (m, 2H), 3.97(d,J =5.6Hz, 4H)。LCMS: Rt: 0.090 min；MS m/z (ESI): 808.7 [M+H]。6.21 實例 21 ：製備化合物 20
Figure 02_image682
步驟 1 ：製備化合物 20-2
向20-1(30.0 g，98.25 mmol)於DMF (800 mL)中之溶液中添加NaCN(9.63 g，196.5 mmol)。在60℃下攪拌反應10小時。將反應混合物倒入水(500 ml)中並用EtOAc (3*500 mL)萃取。將合併之有機層用鹽水洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥並真空濃縮。將粗產物藉由急驟管柱層析法(EtOAc : PE =1:20)純化，得到呈黃色油狀之目標產物(18.3 g，產率：74%)。步驟 2 ：製備化合物 20-3
向20-2(17.0 g，67.61 mmol)於EtOH (200 mL)中之溶液中添加H2 SO4 (40 mL)。在90℃下攪拌反應48小時。將反應混合物倒入水(500 ml)中並用EtOAc (3*500 mL)萃取。將合併之有機層用鹽水洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥並真空濃縮，得到呈黃色油狀之目標產物(15 g，產率：75%)。步驟 3 ：製備化合物 20-4
向20-3(14 g，46.90 mmol)於MeOH (240 mL)及H2 O (60 mL)中之溶液中添加LiOH. H2 O (9.84 g，234.5 mmol)。在50℃下攪拌反應10小時。真空濃縮反應混合物，得到目標產物。將粗產物溶解於水中。用6M HCl將殘餘物調至PH = 2並用EtOAc (3*500 mL)萃取。將合併之有機層用鹽水洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥並真空濃縮，得到呈黃色油狀之目標產物(15 g，產率：75%)。步驟 4 ：製備化合物 20-5
向20-4(4 g，14.79 mmol)於CH2 Cl2 (100 mL)中之溶液中添加DIEA (5.73 g，44.37 mmol)、5-溴戊-1-醇(2.96 g，17.75 mmol)、EDCI (4.25 g，22.18 mmol)及DMAP (550 mg，4.44 mmol)。在50℃下攪拌反應10小時。真空濃縮反應混合物並藉由急驟管柱層析法(EtOAc: PE =20:1)純化，得到呈黃色油狀之目標產物(4 g，產率：64%)。步驟 5 ：製備化合物 20-6
向20-5(2.0 g，4.91 mmol)於CH3 CN (50 mL)中之溶液中添加K2 CO3 (700 mg，4.91 mmol)、Cs2 CO3 (160 mg，0.49 mmol)、NaI(80 mg，0.49 mmol)及2-胺基乙-1-醇(100 mg，1.64 mmol)。在80℃下攪拌反應10小時。真空濃縮反應混合物。將粗產物藉由急驟管柱層析法(CH2 Cl2 : MeOH =10 : 1)純化，得到呈黃色油狀之目標產物(600 mg，產率：50%)。步驟 6 ：製備化合物 20-7
向20-6 (300 mg，0.54 mmol)於CH2 Cl2 (10 mL)中之溶液中添加SOCl2 (150 mg，1.22 mmol)。在30℃下攪拌反應10小時。真空濃縮反應混合物，得到呈黃色油狀之目標產物(308 mg，產率：100%)。步驟 7 ：製備化合物 20
向20-7(300 mg，0.4 mmol)於THF (10 mL)中之溶液中添加DIEA (160 mg，1.19 mmol)、NaI(60 mg，0.4 mmol)及1-5 (100 mg，0.8 mmol)。在70℃下攪拌反應10小時。將反應混合物過濾，真空濃縮。將粗產物藉由製備型HPLC純化，得到呈無色油狀之目標產物(40 mg，產率：12%)。
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ): δ0.87 (t,J = 8 Hz, 12H), 1.30-1.36 (m, 54H), 1.45-1.52 (m, 4H), 1.56-1.68 (m, 6H), 1.83-1.88 (m, 4H), 1.97-2.01 (m, 2H), 2.21-2.23 (m, 4H), 2.43-2.56 (m, 9H), 3.14-3.16 (m, 1H), 3.51-3.54 (m, 2H), 4.03-4.07(m, 4H)。LCMS: Rt: 1.930 min；MS m/z (ESI): 835.7 [M+H]。
以下化合物係以與化合物20類似之方式，使用相應起始物質製備。
化合物 表徵
Figure 02_image376
化合物24		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.41-0.48 (m, 4H),0.87 (t,J = 8 Hz, 12H), 1.46 (s, 53H), 1.52-1.66 (m, 8H), 1.83-1.93 (m, 4H), 2.21-2.23 (m, 4H), 2.36-2.56 (m, 5H), 2.74-2.79 (m, 4H), 3.58 (s, 2H), 4.03-4.07(m, 4H)。LCMS: Rt: 1.480 min；MS m/z (ESI): 821.6 [M+H]。
Figure 02_image378
化合物25		 1 H NMR (400 MHz, CCl3 D) δ: 4.06-4.03 (m, 4H), 3.54-3.52 (m, 2H), 3.10-3.06 (m, 1H), 2.63-2.58 (m, 4H), 2.50-2.41 (m, 6H), 2.22 (d, J=6.8 Hz, 4 H), 1.83-1.72 (m, 4 H), 1.67-1.60 (m, 6H), 1.55-1.30 (m, 6 H), 1.26 (s, 55 H), 0.89-0.86 (m, 12 H)。LCMS: Rt: 1.480 min；MS m/z (ESI): 849.7[M+H]。
Figure 02_image380
化合物26		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.87 (t,J = 8 Hz, 12H), 1.26 (s, 56H), 1.47-2.01 (m, 16H), 2.21-2.30 (m, 4H), 2.43-2.85 (m, 7H), 2.88-3.14 (m, 5H), 3.49 (s, 1H), 3.76 (s, 1H), 4.03-4.07 (m, 4H)。LCMS: Rt: 1.440 min；MS m/z (ESI): 864.6 [M+H]。
Figure 02_image382
化合物27		 1 H NMR (400 MHz, CCl3 D) δ: 4.06-4.03 (m, 4 H), 3.48 (s, 2 H), 2.55 (d, J=14.4 Hz, 5 H), 2.43 (s, 6 H), 2.22 (d, J=6.8 Hz, 4 H), 1.83 (d, J=0.8 Hz, 5 H), 1.69-1.60 (m, 7 H), 1.57-1.29 (m, 14 H), 1.26 (s, 49 H), 0.89-0.86 (m, 12 H)。LCMS: Rt: 1.685 min；MS m/z (ESI): 877.7[M+H]。
Figure 02_image416
化合物44		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.87 (t,J = 8 Hz, 12H), 1.25-1.48 (m, 68H), 1.54-1.65 (m, 10H), 1.83-2.00 (m, 5H), 2.27-2.33 (m, 2H), 2.42-2.55 (m, 10H), 3.13-3.17 (m, 1H), 3.52-3.54 (m, 2H), 4.04-4.08(m, 4H)。LCMS: Rt: 1.861 min；MS m/z (ESI): 919.8 [M+H]。
Figure 02_image418
化合物45		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.87 (t,J = 8 Hz, 12H), 1.11-1.26 (m, 56H), 1.56-1.66 (m, 10H), 1.80-2.02 (m, 5H), 2.27-2.34 (m, 2H), 2.41-2.55 (m, 10H), 3.14-3.18 (m, 1H), 3.51-3.54 (m, 2H), 4.04-4.08 (m, 4H)。LCMS: Rt: 1.184 min；MS m/z (ESI): 835.8 [M+H]。
6.22 實例 22 ：製備化合物 21
Figure 02_image690
步驟 1 ：製備化合物 21-1
在氬氣氛圍下，在室溫下將4-羥基環己-1-酮(2.28 g，20 mmol，1.0 eq)、2-胺基乙醇(1.2 g，20 mmol，1.0 eq)及四異丙醇鈦(7.4 g，26 mmol，1.3 eq)於甲醇(40 mL)中之混合物攪拌16小時。接著，在0℃下添加硼氫化鈉(757 mg，20 mmol，1.0 eq)並將所得混合物再攪拌2小時。用水(20 mL)淬滅反應並經由矽藻土墊過濾，用MeOH洗滌。減壓濃縮濾液並藉由管柱層析法(矽膠，DCM/MeOH=20/1-10/1)純化，得到呈黃色油狀之標題化合物(1.3 g，40%產率)。LCMS: Rt: 0.320 min；MS m/z (ESI): 160.3[M+H]。步驟 2 ：製備化合物 21
向1-3 (300 mg，0.40 mmol，1.0 eq)及21-1 (191 mg，1.2 mmol，3.0 eq)於THF (10 mL)中之溶液中添加DIEA (258 mg，2.0 mmol，5.0 eq)及NaI (12 mg，0.08 mmol，0.2 eq)。在70℃下攪拌混合物16小時。LCMS顯示反應完成。將混合物減壓蒸發並藉由製備型HPLC純化，得到呈無色油狀之標題化合物(60 mg，17%)。
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.88 (t,J =6.8 Hz, 12H), 1.26 (s, 56H), 1.32-1.53 (m, 4H), 1.60-1.68 (m, 7H), 1.72-1.89 (m, 3H), 1.99-2.04 (m, 1H), 2.31 (t,J =7.4 Hz, 4H), 2.43-2.49 (m, 6H), 2.50-2.65 (m, 4H), 3.49-3.56 (m, 3H), 3.97 (d,J =5.6 Hz, 4H)。LCMS: Rt: 1.02 min；MS m/z (ESI): 879.7[M+H]+ 。
以下化合物係以與化合物21類似之方式，使用相應起始物質製備。
化合物 表徵
Figure 02_image372
化合物22		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.86-0.90 (m, 12H), 1.17-1.41 (m, 53H), 1.62-1.72 (m, 9H), 2.10-2.13 (m, 2H), 2.32-2.36 (m, 4H), 2.60-2.83 (m, 9H), 2.94-3.10 (m, 5H), 3.69 (s, 2H), 3.96-3.99 (m, 4H)。LCMS: Rt: 1.002 min；MS m/z (ESI):851.7[M+H]。
Figure 02_image374
化合物23		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.88 (t,J =6.8 Hz, 12H), 1.26 (s, 56H), 1.57-1.62 (m, 4H), 1.64-1.67 (m, 8H), 1.77-1.80 (m, 4H), 2.15 (s, 2H), 2.28-2.32 (m, 4H), 2.44 (s, 4H), 2.60-2.61 (m, 4H), 3.49-3.50 (m, 2H), 3.96-3.97 (m, 4H)。LCMS: Rt: 1.190 min；MS m/z (ESI): 899.7[M+H]+ 。
Figure 02_image384
化合物28		 1 H NMR (400 MHz, CCl3 D) δ: 3.96 (d, J=5.6 Hz, 4 H), 3.79-3.77 (m, 2 H), 3.07-3.03 (m, 1 H), 2.60-2.51 (m, 6 H), 2.42-2.38 (m, 4 H), 2.32-2.28 (m, 4 H), 2.04-2.00 (m, 2 H), 1.92-1.85 (m, 2 H), 1.67-1.55 (m, 11 H), 1.46-1.38 (m, 5 H), 1.26 (s, 51 H), 0.90-0.86 (m, 12 H)。LCMS: Rt: 1.770 min；MS m/z (ESI): 849.7[M+H]。
Figure 02_image386
化合物29		 1 H NMR (400 MHz, CCl3 D) δ: 3.966 (d, J=6 Hz, 4 H), 3.599 (s, 2 H), 2.571-2.550 (m, 3 H), 2.324 (s, 5 H), 2.324-2.286 (m, 5 H), 2.034 (d, J=3.6 Hz, 3 H), 1.652-1.596 (m, 12 H), 1.460-4.380 (m, 5 H), 1.264 (s, 55 H), 0.899-0.836 (m, 12 H)。LCMS: Rt: 1.330 min；MS m/z (ESI): 863.6[M+H]。
Figure 02_image388
化合物30		 1 H NMR (400 MHz, CCl3 D) δ: 3.96 (d, J=6 Hz, 4 H), 3.65-3.62 (m, 2 H), 3.101 (s, 1 H), 2.46 (d, J=36.4 Hz, 9 H), 2.32-2.28 (m, 4 H), 2.02-1.89 (m, 6 H), 1.66-1.55 (m, 11 H), 1.53-1.36 (m, 9 H), 1.26 (s, 52 H), 0.90-0.86 (m, 12 H)。LCMS: Rt: 1.630 min；MS m/z (ESI): 891.7[M+H]。
Figure 02_image390
化合物31		 1 H NMR (400 MHz, CCl3 D) δ: 3.89 (d, J=4.8 Hz, 4 H), 3.58-3.55 (m, 2 H), 3.01 (d, J=18 Hz, 1 H), 2.37 (d, J=33.2 Hz, 10 H), 2.25-2.21 (m, 4 H), 1.93 (s, 3 H), 1.61-1.54 (m, 12 H), 1.49-1.46 (m, 7 H), 1.20 (s, 59 H), 0.83-0.76 (m, 12 H)。LCMS: Rt: 1.710 min；MS m/z (ESI):919.7[M+H]。
Figure 02_image392
化合物32		 1 H NMR (400 MHz, CCl3 D) δ: 3.96 (d, J=6 Hz, 4 H), 3.69 (d, J=4.8 Hz, 1 H), 3.16 (s, 1 H), 2.59-2.35 (m, 7 H), 2.32-2.19 (m, 6 H), 1.99-1.81 (m, 4 H), 1.81-1.38 (m, 13 H), 1.26 (s, 52 H), 1.09-1.03 (m, 4 H), 0.88-0.86 (m, 12 H)。LCMS: Rt: 1.660 min；MS m/z (ESI): 849.7[M+H]。
Figure 02_image398
化合物35		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.89 (t,J = 6.6 Hz, 12H), 1.13-1.26 (m, 48H), 1.59-1.62 (m, 5H), 1.75-1.81 (m, 4H), 1.99-2.01 (m, 2H), 2.02-2.05 (m, 2H), 2.3-2.34 (m, 4H), 2.47-2.49 (m, 4H), 2.51-2.59 (m, 6H), 3.17-3.21 (m, 1H), 3.54-3.55 (m, 2H), 3.96-3.97 (m, 4H)。LCMS: Rt: 2.210 min；MS m/z (ESI): 779.7 [M+H]。
Figure 02_image400
化合物36		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ:  0.87 (t,J = 8 Hz, 12H), 1.11-1.26 (m, 49H), 1.41-1.67 (m, 12H), 1.83-1.87 (m, 2H), 1.97-2.00 (m, 2H), 2.30-2.53 (m, 14H), 3.13-3.17 (m, 1H), 3.50-3.53 (m, 2H), 3.96-3.97 (m, 4H)。LCMS: Rt: 1.127 min；MS m/z (ESI): 807.7 [M+H]。
Figure 02_image402
化合物37		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ:  0.87 (t,J = 8 Hz, 12H), 1.26-1.48 (m, 61H), 1.56-1.66 (m, 8H), 1.82-1.88 (m, 2H), 1.96-2.02 (m, 2H), 2.28-2.31 (m, 4H), 2.40-2.55 (m, 10H), 3.13-3.17 (m, 1H), 3.51-3.53 (m, 2H), 3.96-3.97 (m, 4H)。LCMS: Rt: 1.459 min；MS m/z (ESI): 863.7 [M+H]。
Figure 02_image410
化合物41		 1 H NMR (400 MHz, CCl3 D) δ: 3.96 (d, J= 6 Hz, 4 H), 3.54-3.51 (m, 2 H), 3.16 (d, J= 7.6 Hz, 1 H), 2.56-2.45 (m, 10 H), 2.33-2.30 (m, 4H), 2.04-1.98 (m, 2 H), 1.88-1.73 (m, 6 H), 1.66-1.56 (m, 4 H), 1.26 (s, 57 H), 0.90-0.87 (m, 12 H)。LCMS: Rt: 1.720 min；MS m/z (ESI): 835.7[M+H]。
Figure 02_image412
化合物42		 1 H NMR (400 MHz, CCl3 D) δ: 3.90 (d, J= 6.0 Hz, 4 H), 3.47-3.44 (m, 2 H), 3.09 (s, 1 H), 2.49-2.36 (m, 10 H), 2.27-2.24 (m, 4 H), 1.94-1.90 (m, 3 H), 1.82-1.69 (m, 7 H), 1.64-1.57 (m, 6 H), 1.55-1.43 (m, 4 H), 1.19 (s, 53 H), 0.83-0.80 (m, 12 H)。LCMS: Rt: 1.880 min；MS m/z (ESI): 863.7[M+H]。
Figure 02_image414
化合物43		 1 H NMR (400 MHz, CCl3 D) δ: 3.96 (d, J= 6 Hz, 4 H), 3.53 (s, 2 H), 3.18-3.14 (m, 1 H), 2.54-2.42 (m, 10 H), 2.31-2.28 (m, 4 H), 1.99 (d, J= 7.2 Hz, 2 H), 1.66-1.56 (m, 20 H), 1.45-1.38 (m, 4 H), 1.26 (s, 55 H), 0.90-0.81 (m, 12 H)。LCMS: Rt: 2.034 min；MS m/z (ESI): 919.8[M+H]。
Figure 02_image422
化合物47		 1 H NMR (400 MHz, CCl3 D) δ: 3.96 (d, J= 4.8 Hz, 4 H), 3.53-3.51 (m, 2 H), 3.16 (s, 1 H), 2.54-2.45 (m, 11 H), 2.33-2.29 (m, 4H), 2.00 (d, J= 6.8 Hz, 3 H), 1.87-1.75 (m, 10 H), 1.68-1.56 (m, 6 H), 1.26 (s, 57 H), 0.89-0.86 (m, 12 H)。LCMS: Rt: 1.090 min；MS m/z (ESI): 891.8[M+H]。
Figure 02_image424
化合物48		 1 H NMR (400 MHz, CCl3 D) δ: 3.97 (d, J= 5.6 Hz, 4 H), 3.72 (s, 2 H), 3.33-2.87 (m, 11 H), 2.34-2.31 (m, 4 H), 2.07 (s, 3 H), 1.67-1.62 (m, 10 H), 1.27 (s, 48 H), 0.90-0.87 (m, 12 H)。LCMS: Rt: 1.590 min；MS m/z (ESI): 779.7[M+H]。
Figure 02_image426
化合物49		 1 H NMR (400 MHz, CCl3 D) δ: 3.96 (d, J= 5.6 Hz, 4 H), 3.54-3.51 (m, 2 H), 3.20-3.12 (m, 1 H), 2.54-2.41 (m, 10 H), 2.33-2.29 (m, 4 H), 2.00-1.83 (m, 4 H), 1.66-1.60 (m, 8 H), 1.47-1.43 (m, 4 H), 1.27 (s, 53 H), 0.90-0.87 (m, 12 H)。LCMS: Rt: 1.090 min；MS m/z (ESI): 835.8[M+H]。
Figure 02_image428
化合物50		 1 H NMR (400 MHz, CCl3 D) δ: 3.96 (d, J= 5.2 Hz, 4 H), 3.54 (s, 2 H), 3.18 (s, 1 H), 2.52 (d, J= 34.8, 9 H), 2.33-2.29 (m, 4 H), 2.01-1.89 (m, 4 H), 1.68-1.57 (m, 8 H), 1.48 (s, 4 H), 1.26 (s, 62 H), 0.90-0.86 (m, 12 H)。LCMS: Rt: 0.039 min；MS m/z (ESI): 891.8[M+H]。
Figure 02_image430
化合物51		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.82-0.94 (m, 12 H), 1.17-1.38 (m, 58 H), 1.39-1.51 (m, 5 H), 1.52-1.75 (m, 25 H), 1.78-1.90 (m, 2 H), 1.94-2.08 (m, 3 H), 2.18-2.36 (m,4 H), 2.38-2.60 (m, 5 H), 3.52 (s, 1 H), 3.96 (d, J=6.0Hz, 2H)。LCMS: Rt: 0.093 min；MS m/z (ESI): 947.7 [M+H]+ 。
Figure 02_image432
化合物52		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ:  0.87 (t,J = 8 Hz, 12H), 1.12-1.33 (m, 77H), 1.44-1.68 (m, 12H), 1.85-2.01 (m, 4H), 2.29-2.55 (m, 14H), 3.15-3.19 (m, 1H), 3.53-3.55 (m, 2H), 3.95-5.97 (m, 4H)。LCMS: Rt: 0.693 min；MS m/z (ESI):1003.7[M+H]。
Figure 02_image450
化合物62		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.86-0.89 (m, 6H), 1.31-1.50 (m, 21H), 1.62-1.71 (m, 10H), 1.91-2.13 (m, 12H), 2.28-2.46 (m, 4H), 2.53-2.56 (m, 10H), 3.12-3.21 (m, 1H), 3.53-3.55 (m, 2H), 4.05-4.08 (m, 4H), 5.32-5.43 (m, 4H)。LCMS: Rt: 0.909 min；MS m/z (ESI): 663.4[M+H]。
Figure 02_image456
化合物65		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.86-0.89 (m, 12H), 1.10-1.13 (m, 50H), 1.43-1.50 (m, 4H), 1.51-1.69 (m, 29H), 1.71-1.81 (m, 4H),2.31-2.37 (m, 3H),3.04-3.10 (m, 2H),3.40-3.45 (m, 2H),3.96-4.05 (m, 4H), 4.07-4.16 (m, 2H)。LCMS: Rt: 1.470min；MS m/z (ESI): 921.8 [M+H]。
Figure 02_image458
化合物66		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ:  0.87 (t,J = 8 Hz, 12H), 1.27-1.65(m, 57H), 1.80-2.01 (m, 20H), 2.27-2.55 (m, 14H), 3.13-3.16 (m, 1H), 3.21-3.53 (m, 2H), 3.95-3.97 (m, 4H), 5.30-5.40(m, 8H)。LCMS: Rt: 2.44 min；MS m/z (ESI):995.8[M+H]。
Figure 02_image478
化合物76		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.86-0.89 (m, 12H), 1.10-1.33 (m, 52H), 1.38-1.40 (m, 4H), 1.41-1.49 (m, 22H), 1.51-1.67 (m, 3H),1.83-1.90 (m, 2H),2.31-2.34 (m, 3H),2.80-2.81 (m, 2H),3.01-3.17 (m, 4H), 3.41 (s, 1H), 3.91-3.96 (m, 4H), 7.20-7.26 (m, 2H), 7.32-7.26 (m, 2H)。LCMS: Rt: 1.840min；MS m/z (ESI): 967.8 [M+H]。
Figure 02_image482
化合物78		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.83-0.89 (m, 12H), 0.99-1.47 (m, 64H), 1.49-1.71 (m, 10H), 1.72-1.91 (m, 3H), 2.15-2.24 (m, 2H),2.25-2.33 (m, 5H),2.35-2.58 (m, 4H),2.60-2.71 (m, 6H),3.47-3.59 (m, 2H), 3.91-3.99 (m, 4H)。LCMS: Rt: 1.800min；MS m/z (ESI): 955.8 [M+H]。
Figure 02_image484
化合物79		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.79-0.83 (m, 12H), 1.15-1.27 (m, 62H), 1.30-1.48 (m, 4H), 1.49-1.59 (m, 6H), 2.21-2.31 (m, 4H),2.33-2.48 (m, 5H),2.49-2.54 (m, 6H),2.56-2.61 (m, 2H),3.11-3.17 (m, 1H), 3.45-3.50 (m, 2H), 3.85-3.90(m, 4H)。LCMS: Rt: 1.620min；MS m/z (ESI): 927.7 [M+H]。
Figure 02_image500
化合物87		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.86-0.92 (m, 12H), 1.00-1.23 (m, 1H), 1.32-1.40 (m, 58H), 1.41-1.53 (m, 4H), 1.54-1.69 (m, 6H),1.70-1.98 (m, 3H),1.99-2.24 (m, 2H),2.25-2.28 (m, 1H),2.31-2.40 (m, 4H), 2.42-2.52 (m, 3H), 2.55-2.73 (m, 3H), 2.74-3.00 (m, 1H), 3.01-3.31 (m, 3H), 3.51-3.69 (m, 2H),3.70-3.88 (m, 3H),3.97-4.14 (m, 4H)。LCMS: Rt: 1.830min；MS m/z (ESI): 907.7 [M+H]。
Figure 02_image502
化合物88		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.86-0.89 (t,J =6.8 Hz, 12H), 1.26 (s, 52H), 1.42-1.44 (m, 4H), 1.62-1.77 (m, 6H), 2.02(m, 1H), 2.32-2.36(m, 4H), 2.504(m, 1H), 2.923(m, 1H), 3.08-3.16(m, 3H), 3.38-3.45(m, 4H),  3.62-3.95(m, 8H), 3.95-3.97 (m, 4H)。LCMS: Rt: 2.20 min；MS m/z (ESI): 837.7 [M+H]+ 。   
Figure 02_image504
化合物89		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.88 (t,J =6.8 Hz, 12H), 1.26 (s, 54H), 1.32-1.51 (m, 4H), 1.62-1.68 (m, 10H), 2.31 (t,J =7.4 Hz, 4H), 2.43-2.49 (m, 5H), 2.51-2.65 (m, 5H), 3.32-3.36 (m, 2H), 3.47-3.54 (m, 2H), 3.97 (d,J =6.0 Hz, 4H), 4.01-4.04 (m, 2H)。LCMS: Rt: 1.220 min；MS m/z (ESI): 865.7[M+H]+ 。
Figure 02_image506
化合物90		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.88 (t,J =6.8 Hz, 12H), 1.26 (s, 50H), 1.32-1.51 (m, 4H), 1.62-1.68 (m, 8H), 1.81-1.87 (m, 2H), 1.97-2.04 (m, 2H), 2.31 (t,J =7.6 Hz, 4H), 2.40-2.49 (m, 5H), 2.57-2.68 (m, 4H), 3.50-3.55 (m, 3H), 3.64-3.68 (m, 2H), 3.70-3.78 (m, 1H), 3.93-3.99 (m, 4H)。LCMS: Rt: 1.140 min；MS m/z (ESI): 851.7[M+H]+ 。
Figure 02_image508
化合物91		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.88 (t,J =6.8 Hz, 12H), 1.26 (s, 56H), 1.47 (s, 4H), 1.61-1.67 (m, 8H), 2.07-2.10 (m, 2H), 2.28-2.32 (m, 5H), 2.42 (s, 6H), 2.63-2.70 (m, 8H), 3.50 (s, 2H), 3.96-3.97 (m, 4H)。LCMS: Rt: 1.194 min；MS m/z (ESI): 881.6[M+H]+ 。
Figure 02_image510
化合物92		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.87-0.90 (m, 12H), 1.27-1.32 (m, 58H), 1.44-1.45 (m, 4H),  1.60-1.62 (m, 7H), 1.64-1.66 (m, 4H), 1.67-2.05 (m, 3H) 2.29-2.33 (m, 5H), 2.42-2.51 (m, 10H), 2.86-2.91 (m, 1H), 3.96-3.97 (m, 4H)。LCMS: Rt: 1.48min；MS m/z (ESI): 889.7[M+H]+ 。
Figure 02_image512
化合物93		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.88 (t,J =6.8 Hz, 12H), 1.26 (s, 58H), 1.32-1.51 (m, 4H), 1.59-1.63 (m, 8H), 1.63-1.65 (m, 2H), 1.81-2.04 (m, 6H), 2.28-2.32 (m, 4H), 2.37-2.41 (m, 8H), 3.25 (m, 1H), 3.54 (s, 1H), 3.96-3.97 (m, 4H)。LCMS: Rt: 1.230 min；MS m/z (ESI): 889.7[M+H]+ 。
Figure 02_image514
化合物94		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 3.89 (d, J=6 Hz, 4 H), 3.42 (d, J=4.4 Hz, 2 H), 2.90 (d, J=9.2 Hz, 2 H), 2.55 (d, J=4.4 Hz, 4 H), 2.396 (s, 6 H), 2.25-2.18 (m, 6 H), 1.97-1.82 (m, 2 H), 1.64-1.53 (m, 9 H), 1.42 (s, 4 H), 1.19 (s, 56 H), 0.83-0.76 (m, 12 H)。LCMS: Rt: 0.865 min；MS m/z (ESI): 878.8[M+H]。
Figure 02_image524
化合物99		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.87-0.90 (m, 12H), 0.94-0.98 (m, 6H), 1.27-1.30 (m, 48H), 1.41-1.47 (m, 6H), 1.65-1.74 (m, 10H), 1.75-1.80 (m, 6H), 1.92-2.08 (m, 5H), 2.30-2.32 (m, 5H), 2.71-3.05 (m, 8H), 3.59-3.69 (m, 2H), 3.96-3.97 (m, 4H)。LCMS: Rt: 1.36 min；MS m/z (ESI): 917.7[M+H]+ 。
6.23 實例 23 ：製備化合物 33
Figure 02_image726
步驟 1 ：製備化合物 33-2
向環丁胺(853 mg，12 mmol，1.2 eq)於EtOH (10 mL)中之溶液中添加33-1 (1 g，10 mmol)。在室溫下將反應混合物攪拌16小時。LCMS顯示反應完成。移除溶劑，執行FCC，得到呈無色油狀之化合物33-2 (450 mg，26.26%)。LCMS: Rt: 0.690 min；MS m/z (ESI): 172.2 [M+H]。步驟 2 ：製備化合物 33
向化合物33-2 (450 mg，2.626 mmol，8.0 eq)、DIEA (214 mg，1.652 mmol，5.0 eq)於THF (10 mL)中之混合物中添加1-3 (250 mg，0.3304 mmol，1 eq)。在70℃下將反應混合物攪拌16小時。LCMS顯示反應完成。在移除溶劑後，將殘餘物藉由製備型HPLC純化，得到呈無色油狀之標題化合物(90 mg，30.55%產率)。
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 3.96 (d, J=5.6 Hz, 4 H), 3.51-3.50 (m, 1 H), 3.19-3.11 (m, 1 H), 2.42-2.28 (m, 15 H), 2.02-1.76 (m, 6 H), 1.65-1.60 (m, 9 H), 1.45-1.30 (m, 7 H), 1.26 (s, 52 H), 0.92-0.87 (m, 15 H)。LCMS: Rt: 1.760 min；MS m/z (ESI): 891.8[M+H]。
以下化合物係以與化合物33類似之方式，使用相應起始物質製備。
化合物 表徵
Figure 02_image396
化合物34		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.86-0.89 (m, 15H), 1.27 (s, 66H), 1.38-1.49 (m, 6H), 1.52-1.64 (m, 9H), 1.93-2.02 (m, 2H), 2.14-2.56 (m, 14H), 3.08-3.22 (m, 1H), 3.51-3.56 (m, 1H), 3.97 (d,J =5.6 Hz, 1H)。LCMS: Rt: 2.100 min；MS m/z (ESI):947.8[M+H]+ 。
6.24 實例 24 ：製備化合物 39
Figure 02_image729
步驟 1 ：製備化合物 39-2
在-78℃下，向(COCl)2 (7.85 g，61.87 mmol)於CH2 Cl2 (120 mL)中之溶液中添加DMSO (4.83 g，61.87 mmol)。在-78℃下攪拌反應1小時。添加39-1(5 g，20.62 mmol)於CH2 Cl2 (30 mL)中之溶液。在-78℃下攪拌反應2小時。添加Et3 N (10.43 g，103.17 mmol)。在室溫下攪拌反應5小時。將反應混合物倒入水(100 ml)中並用CH2 Cl2 (3*100 mL)萃取。將合併之有機層用鹽水洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥並真空濃縮。將粗產物藉由急驟管柱層析法(PE: EtOAc = 20: 1)純化，得到呈黃色油狀之目標產物(4.2 g，產率：84%)。步驟 2 ：製備化合物 39-3
在-78℃下，向39-2(2.1 g，8.3 mmol)於THF (100 mL)中之溶液中添加乙基溴化鎂(9 mL, 18 mmol)。在-30℃下攪拌反應1小時。將反應混合物倒入冰-水(100 ml)中並用CH2 Cl2 (3*100 mL)萃取。將合併之有機層用鹽水洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥並真空濃縮。將粗產物藉由急驟管柱層析法(PE: EtOAc = 10: 1)純化，得到呈黃色油狀之目標產物(1.5 g，產率：63%)。步驟 3 ：製備化合物 39-4
向39-3(1.5 g，5.55 mmol)於CH2 Cl2 (50 mL)中之溶液中添加DIEA (3.58 g，27.73 mmol)、6-溴己酸(1.62 g，8.32 mmol)、EDCI (2.13 g，11.09 mmol)及DMAP (350 mg，2.77 mmol)。在40℃下攪拌反應10小時。真空濃縮反應混合物並藉由急驟管柱層析法(EtOAc: PE =20: 1)純化，得到呈黃色油狀之目標產物(1.3 g，產率：52%)。步驟 4 ：製備化合物 39-5
向39-4(1.13 g，2.46 mmol)於CH3 CN (50 mL)中之溶液中添加K2 CO3 (350 mg，2.46 mmol)、Cs2 CO3 (80 mg，0.25 mmol)、NaI(40 mg，0.25 mmol)及2-胺基乙-1-醇(50 mg，0.82 mmol)。在80℃下攪拌反應10小時。真空濃縮反應混合物。將粗產物藉由急驟管柱層析法(CH2 Cl2 : MeOH =10: 1)純化，得到呈黃色油狀之目標產物(300 mg，產率：46%)。LCMS: Rt: 1.870 min；MS m/z (ESI): 794.7 [M+H]。步驟 5 ：製備化合物 39-6
向39-5(300 mg，0.37 mmol)於CH2 Cl2 (10 mL)中之溶液中添加SOCl2 (135 mg，1.13 mmol)。在30℃下攪拌反應10小時。真空濃縮反應混合物，得到呈黃色油狀之目標產物(307mg, 產率：100%)。LCMS: Rt: 0.250 min；MS m/z (ESI): 812.7 [M+H]。步驟 6 ：製備化合物 39
向39-6(400 mg，0.51 mmol)於THF (5 mL)中之溶液中添加DIEA (150 mg，1.11 mmol)、NaI(60 mg，0.37 mmol)及1-5(85 mg，0.74 mmol)。在70℃下攪拌反應10小時。將反應混合物過濾，真空濃縮。將粗產物藉由製備型HPLC純化，得到呈黃色油狀之目標產物(45 mg，產率：13%)。
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ:  0.87 (t,J = 8 Hz, 18H), 1.11-1.26 (m, 52H), 1.43-1.68 (m, 17H), 1.83-2.02 (m, 4H), 2.28-2.55 (m, 14H), 3.14-3.18 (m, 1H), 3.51-3.53 (m, 2H), 4.83-4.88 (m, 2H)。LCMS: Rt: 1.726 min；MS m/z (ESI):891.8 [M+H]。
以下化合物係以與化合物39類似之方式，使用相應起始物質製備。
化合物 表徵
Figure 02_image404
化合物38		 1 H NMR (400 MHz, CCl3 D) δ: 4.96-4.92 (m, 2 H), 3.53-3.51 (m, 2 H), 3.18-3.14 (m, 1 H), 2.55-2.41 (m, 10 H), 2.29-2.51 (m, 4 H), 2.00-1.83 (m, 5 H), 1.67-1.50 (m, 7 H), 1.47-1.30 (m, 6 H), 1.26 (s, 50 H), 1.19-1.06 (m, 7 H), 0.90-0.83 (m, 12 H)。 LCMS: Rt: 1.915 min；MS m/z (ESI): 863.7[M+H]。
Figure 02_image408
化合物40		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ:  0.87 (t,J = 8 Hz, 18H), 1.11-1.26 (m, 54H), 1.41-1.67 (m, 19H), 1.80-2.02 (m, 4H), 2.26-2.30 (m, 4H), 2.40-2.54 (m, 10H), 3.13-3.17 (m, 1H), 3.50-3.53 (m, 2H), 4.92-4.97 (m, 2H)。LCMS: Rt: 2.101 min；MS m/z (ESI): 919.8 [M+H]。
6.25 實例 25 ：製備化合物 54
Figure 02_image733
步驟 1 ：製備化合物 54-2
向53-1 (575mg, 5.0 mmol，1.0 eq)於DCM (10 ml)中之溶液中添加Boc2 O (1145 mg，5.25 mmol，1.05 eq)。在室溫下攪拌混合物3小時。LCMS顯示反應完成。真空濃縮混合物，將粗產物不經進一步純化即用於下一步驟(1.1 g，粗品)，呈黃色油狀。步驟 2 ：製備化合物 54-3
向54-2 (1.1 g，5.11 mmol，1.0 eq)於無水THF (20 ml)中之溶液中添加LiAlH4 (970 mg，25.55 mmol，5.0eq)。在75℃下攪拌混合物隔夜。藉由15% NaOH溶液(5 ml)淬滅，過濾混合物。減壓蒸發有機相。將粗產物不經進一步純化即用於下一步驟(550 mg，粗品)，呈白色固體狀。LCMS: Rt: 0.380 min；MS m/z (ESI): 130.3[M+H]+ 。步驟 3 ：製備化合物 54
向1-3 (300 mg，0.397 mmol，1.0 eq)及54-3 (153 mg，1.19 mmol，3.0eq)於THF (10 mL)中之溶液中添加DIEA (205 mg，1.59mmol，4.0 eq)。在70℃下攪拌混合物16小時。LCMS顯示反應完成。將混合物減壓蒸發並藉由製備型HPLC純化，得到呈無色油狀之標題化合物(60 mg，17.9%)。
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.87-0.90 (m, 12H), 1.27-1.33 (m, 54H), 1.43-1.47 (m, 5H), 1.59-1.65 (m, 7H), 1.82-2.03 (m, 4H), 2.26-2.32 (m, 7H), 2.40-2.44 (m, 5H), 2.46-2.51 (m, 4H), 3.59-3.69 (m, 2H), 3.96-3.97 (m, 4H)。LCMS: Rt: 1.40 min；MS m/z (ESI): 849.7[M+H]+ 。
以下化合物係以與化合物54類似之方，使用相應起始物質式製備。
化合物 表徵
Figure 02_image444
化合物59		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.88-0.90 (m, 12H), 1.27-1.33 (m, 52H), 1.43-1.46 (m, 4H), 1.63-1.67 (m, 6H), 1.76-1.77 (m, 2H), 2.12-2.29 (m, 5H), 2.30-2.34 (m, 7H), 2.41-2.51 (m, 4H), 2.53-2.56 (m, 4H), 3.96-3.98 (m, 4H)。LCMS: Rt: 1.58 min；MS m/z (ESI): 821.6[M+H]+ 。
Figure 02_image472
化合物73		 1 H NMR (400 MHz, CCl3 D) δ: 0.86-0.90 (m, 12 H), 1.30-1.32 (m, 66H), 1.47-1.60 (m, 4H), 1.62-1.67 (m, 7 H), 1.86-2.05 (m, 4H), 2.28-2.32 (m, 6 H), 2.39-2.55(m,8 H), 3.57-3.58 (m, 1 H), 3.96-3.97 (d,J =6.0Hz 4 H)。LCMS: Rt: 2.34 min；MS m/z (ESI): 905.7[M+H]。
6.26 實例 26 ：製備化合物 55
Figure 02_image737
步驟 1 ：製備化合物 55-2
向53-1 (500 mg，4.34 mmol，1.0 eq)於MeOH (10 ml)中之溶液中添加乙醛(191 mg，4.34 mmol，1.0 eq)。在室溫下攪拌混合物隔夜。接著，添加NaBH4 (200 mg，5.21 mmol，1.2 eq)。在室溫下攪拌混合物2小時。LCMS顯示反應完成。真空濃縮混合物，將殘餘物經矽膠管柱層析法(DCM:MeOH=1:0至10:1)純化，得到呈黃色油狀之所需產物55-2 (200mg, 23.6%)。LCMS: Rt: 0.36 min；MS m/z (ESI): 144.2[M+H]+ 。步驟 2 ：製備化合物 55
向1-3 (300 mg，0.397 mmol，1.0 eq)及55-2 (172 mg，1.19 mmol，3.0eq)於THF (10 mL)中之溶液中添加DIEA (205 mg，1.59mmol，4.0 eq)。在70℃下攪拌混合物16小時。LCMS顯示反應完成。將混合物減壓蒸發並藉由製備型HPLC純化，得到呈無色油狀之標題化合物(82 mg，23.9%)。
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.92-0.93 (m, 12H), 0.95-0.97 (m, 3H), 1.25-1.34 (m, 54H), 1.38-1.42 (m, 5H), 1.53-1.60 (m, 7H), 1.72-1.74 (m, 3H), 1.94-1.95 (m, 2H),  2.21-2.25 (m, 4H), 2.32-2.49 (m, 11H), 3.49-3.51 (m, 1H), 3.89-3.90 (m, 4H)。LCMS: Rt: 1.63 min；MS m/z (ESI): 863.6[M+H]+ 。
以下化合物係以與化合物55類似之方式，使用相應起始物質製備。
化合物 表徵
Figure 02_image438
化合物56		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.86-0.90 (m, 15H), 1.26-1.29 (m, 52H), 1.38-1.48 (m, 6H), 1.62-1.65 (m, 12H), 1.7-1.80 (m, 2H), 1.98-2.02 (m, 2H), 2.41-2.48 (m, 14H), 3.52-3.60 (m, 1H), 3.96-3.97 (m, 4H)。LCMS: Rt: 1.68 min；MS m/z (ESI): 877.7[M+H]+ 。
Figure 02_image442
化合物58		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.88-0.92 (m, 15H), 1.26-1.36 (m, 56H), 1.43-1.48 (m, 6H), 1.59-1.74 (m, 11H), 2.01-2.03 (m, 2H), 2.29-2.34 (m, 4H), 2.42-2.48 (m, 11H), 3.54-3.56 (m, 1H), 3.96-3.98 (m, 4H)。LCMS: Rt: 1.56 min；MS m/z (ESI): 891.7[M+H]+ 。
Figure 02_image446
化合物60		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.88-0.90 (m, 15H), 1.21-1.26 (m, 51H), 1.40-1.46 (m, 6H), 1.56-1.79 (m, 10H), 1.99-2.22 (m, 2H), 2.29-2.37 (m, 10H), 2.39-2.68 (m, 6H), 3.96-3.98 (m, 4H)。LCMS: Rt: 1.68 min；MS m/z (ESI): 849.7[M+H]+ 。
Figure 02_image448
化合物61		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.86-0.91 (m, 15H), 1.26 (s, 61H), 1.44-1.50 (m, 6H), 1.60-1.66 (m, 8H), 1.72-1.81 (m, 1H), 1.97-2.02 (m, 2H), 2.29-2.33 (m, 4H), 2.40-2.50 (m, 7H), 2.66-2.72 (m, 2H), 2.92-3.04 (m, 1H), 3.52-3.61 (m, 1H), 3.96-3.97 (m, 4H)。LCMS: Rt: 1.620 min；MS m/z (ESI): 905.7[M+H]+ 。
Figure 02_image460
化合物67		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.86-0.93 (m, 15H), 1.30-1.36 (m, 62H), 1.39-1.49 (m, 6H), 1.59-1.77 (m, 12H), 2.02-2.03 (m, 2H), 2.29-2.33(m, 4H), 2.42-2.51 (m, 12H), 3.55-3.57 (m, 1H), 3.96-3.97 (m, 4H)。LCMS: Rt: 2.46 min；MS m/z (ESI): 947.8[M+H]+ 。
Figure 02_image462
化合物68		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.87 (t,J = 8 Hz, 15H), 1.15-1.38 (m, 60H), 1.42-1.92 (m, 19H), 2.28-2.83 (m, 15H), 3.85-3.97 (m, 5H)。LCMS: Rt: 0.588 min；MS m/z (ESI): 919.8 [M+H]。
Figure 02_image464
化合物69		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.87 (t,J = 8 Hz, 15H), 1.15-1.38 (m, 63H), 1.42-2.11 (m, 18H), 2.08-2.48 (m, 15H), 3.25-3.30 (m, 1H), 3.95-3.97 (m, 4H)。LCMS: Rt: 0.614 min；MS m/z (ESI): 933.7 [M+H]。
Figure 02_image466
化合物70		 1 H NMR (400 MHz, CCl3 D) δ: 0.84-0.93 (m, 15 H), 1.26 (s, 64H), 1.33-1.44 (m, 6H), 1.60-1.74 (m, 7 H), 1.77 (s, 2H), 2.01 (s, 2H), 2.28-2.32 (m, 4 H), 2.36-2.47 (m,11 H), 2.53-3.56 (m, 1 H), 3.96 (d,J =5.6Hz 4 H)。LCMS: Rt: 0.573 min；MS m/z (ESI): 933.8[M+H]。
Figure 02_image468
化合物71		 1 H NMR (400 MHz, CCl3 D) δ: 0.77-0.83 (m, 15 H), 1.20-1.27 (m, 58H), 1.32-1.38 (m, 6H), 1.53-1.60 (m, 6 H), 1.71-1.95 (m, 4H), 2.22-2.31 (m, 4 H), 2.33-2.41 (m,10 H), 3.48-3.49 (m, 1 H), 3.89-3.90 (m, 4 H)。LCMS: Rt: 1.55 min；MS m/z (ESI): 877.7[M+H]。
Figure 02_image470
化合物72		 1 H NMR (400 MHz, CCl3 D) δ: 0.86-0.90 (m, 15 H), 1.27-1.32 (m, 48H), 1.43-1.45 (m, 6H), 1.60-1.67 (m, 7 H), 1.78-2.02 (m, 4H), 2.29-2.38 (m, 4 H), 2.40-2.49 (m,11 H), 3.54-3.56 (m, 1 H), 3.96-3.97 (d,J =6.0Hz, 4 H)。LCMS: Rt: 2.01 min；MS m/z (ESI): 821.7[M+H]。
Figure 02_image474
化合物74		 1 H NMR (400 MHz, CCl3 D) δ: 0.86-0.91 (m, 15 H), 1.26 (s, 68H), 1.30-1.45 (m, 6H), 1.60-1.67 (m, 7 H), 1.77 (s, 2H), 2.02 (s, 2H), 2.28-2.32 (m, 4 H), 2.41-2.48 (m,11 H), 3.53 (s, 1 H), 3.96 (d,J =6.0Hz 4 H)。LCMS: Rt: 0.573 min；MS m/z (ESI): 961.8[M+H]。
Figure 02_image476
化合物75		 1 H NMR (400 MHz, CCl3 D) δ: 0.87-0.91 (m, 15 H), 1.26 (s, 69H), 1.38-1.44 (m, 6H), 1.60-1.67 (m, 8 H), 1.77 (s, 2H), 2.01 (s, 2H), 2.28-2.32 (m, 5 H), 2.40-2.46 (m,10 H), 3.52-3.57 (m, 1 H), 3.96 (d,J =5.6Hz, 4 H)。LCMS: Rt: 0.600 min；MS m/z (ESI): 975.8[M+H]。
6.27 實例 27 ：製備化合物 57
Figure 02_image751
步驟 1 ：製備化合物 57-2
向53-1 (300 mg，2.61 mmol，1.2 eq)於EtOH (10 ml)中之溶液中添加2-碘丙烷(369 mg，2.17 mmol，1.0 eq)、NaHCO3 (547 mg 6.52 mmol，3.0 eq)。在80℃下攪拌混合物隔夜。LCMS顯示反應完成。過濾混合物，真空濃縮有機層，將殘餘物經矽膠管柱層析法(DCM:MeOH=1:0至10:1)純化，得到呈白色固體狀之所需產物57-2 (300mg，88%)。步驟 2 ：製備化合物 57
向1-3 (300 mg，0.397 mmol，1.0 eq)及57-2 (187 mg，1.19 mmol，3.0eq)於THF (10 mL)中之溶液中添加DIEA (205 mg，1.59mmol，4.0 eq)。在70℃下攪拌混合物16小時。LCMS顯示反應完成。將混合物減壓蒸發並藉由製備型HPLC純化，得到呈黃色油狀之標題化合物(35mg，10.1%)。
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.80-0.83 (m, 12H), 0.93-0.94(m, 6H), 1.19-1.25 (m, 54H), 1.35-1.40 (m, 4H), 1.53-1.59 (m, 8H), 1.70-1.75 (m, 2H), 1.92-1.94 (m, 2H), 2.18-2.51(m, 14H), 2.89-2.91(m, 1H), 3.46-3.53 (m, 1H), 3.89-3.90 (m, 4H)。LCMS: Rt: 1.34 min；MS m/z (ESI): 877.7[M+H]+ 。6.28 實例 28 ：製備化合物 46
Figure 02_image753
步驟 1 ：製備化合物 46-3
向46-1 (2.0 g，10.25 mmol)於CH2 Cl2 (50 mL)中之溶液中添加DIEA (6.63 g，51.27 mmol)、46-2 (2.19 g，15.38 mmol)、EDCI (3.93 g，20.51 mmol)及DMAP (650 mg，5.13 mmol)。在室溫下攪拌反應10小時。真空濃縮反應混合物並藉由急驟管柱層析法(EtOAc: PE =20: 1)純化，得到呈黃色油狀之目標產物(2 g，產率：64%)。步驟 2 ：製備化合物 46-4
向46-3(1.6 g，4.91 mmol)於CH3 CN (50 mL)中之溶液中添加K2 CO3 (700 mg，4.91 mmol)、Cs2 CO3 (100 mg，0.49 mmol)、NaI(80 mg，0.49 mmol)及2-胺基乙-1-醇(100 mg，0.1.64 mmol)。在80℃下攪拌反應10小時。真空濃縮反應混合物。將粗產物藉由急驟管柱層析法(CH2 Cl2 : MeOH =10: 1)純化，得到呈黃色油狀之目標產物(300 mg，產率：61%)。LCMS: Rt: 0.746 min；MS m/z (ESI): 300.2 [M+H]。步驟 3 ：製備化合物 46-7
向46-5(1.0 g，16.65 mmol)於THF (20 mL)中之溶液中添加46-6 (100 mL, 100 mmol)。在室溫下攪拌反應1小時。將反應混合物倒入冰-水(100 ml)中並用CH2 Cl2 (3*100 mL)萃取。將合併之有機層用鹽水洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥並真空濃縮。將粗產物藉由急驟管柱層析法(PE: EtOAc = 10: 1)純化，得到呈黃色油狀之目標產物(1.0 g，產率：26%)。步驟 4 ：製備化合物 46-9
向46-7(0.5 g，2.19 mmol)於PhMe (30 mL)中之溶液中添加TsOH. H2 O (40 mg，0.22 mmol)及46-8(1.1 g，6.57 mmol)。在130℃下攪拌反應2小時。真空濃縮反應混合物並藉由急驟管柱層析法(EtOAc: PE =20: 1)純化，得到呈黃色油狀之目標產物(0.5 g，產率：63%)。步驟 5 ：製備化合物 46-10
向46-4(300 mg，1.0 mmol)於CH3 CN (20 mL)中之溶液中添加K2 CO3 (420 mg，3.01 mmol)、Cs2 CO3 (100 mg，0.3 mmol)、NaI(50 mg，0.3 mmol)及46-9 (500 mg，1.3 mmol)。在80℃下攪拌反應10小時。真空濃縮反應混合物。粗產物藉由急驟管柱層析法(PE: EtOAc = 2: 1)純化，得到呈黃色油狀之目標產物(200 mg，產率：33%)。LCMS: Rt: 0.915 min；MS m/z (ESI): 596.4 [M+H]。步驟 6 ：製備化合物 46-11
向46-10(200 mg，0.33 mmol)於CH2 Cl2 (10 mL)中之溶液中添加SOCl2 (120 mg，1.01 mmol)。在30℃下攪拌反應10小時。真空濃縮反應混合物，得到呈黃色油狀之目標產物(206 mg，產率：100%)。LCMS: Rt: 1.460 min；MS m/z (ESI): 614.4 [M+H]。步驟 7 ：製備化合物 46
向46-11(200 mg，0.32 mmol)於THF (10 mL)中之溶液中添加DIEA (130 mg，0.98 mmol)、NaI(50 mg，0.32 mmol)及1-3(75 mg，0.65 mmol)。在70℃下攪拌反應10小時。將反應混合物過濾，真空濃縮。粗產物藉由製備型HPLC純化，得到呈黃色油狀之目標產物(20 mg，產率：9%)。
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 )δ: 0.87 (t,J = 8 Hz, 9H), 1.35-1.68 (m, 22H), 1.72-2.33 (m, 24H), 2.41-2.55 (m, 17H), 3.14-3.18 (m, 1H), 3.50-3.53 (m, 2H), 4.61-4.63 (m, 2H), 4.85-4.89 (m, 1H), 5.50-5.65 (m, 2H)。LCMS: Rt: 0.940 min；MS m/z (ESI):693.5 [M+H]。
以下化合物係以與化合物46類似之方式，使用相應起始物質製備。
化合物 表徵
Figure 02_image452
化合物63		 1 H NMR (400 MHz, CCl3 D) δ: 0.86-0.89 (m, 9 H), 1.26-1.71 (m, 40 H), 1.80-1.90 (m, 2 H), 1.96-2.13 (m, 14 H), 2.27-2.55 (m, 14 H), 3.14-3.17 (m, 1 H), 3.51-3.53 (m, 2H), 4.05-4.08 (m, 2H), 4.87-4.90 (m, 1H), 5.28-5.44 (m, 6H)。LCMS: Rt: 1.150min；MS m/z (ESI): 815.5[M+H]。
Figure 02_image480
化合物77		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.87 (t,J = 8 Hz, 12H), 1.20-1.32 (m, 53H), 1.43-2.02 (m, 16H), 2.28-2.55 (m, 14H), 3.13-3.17 (m, 1H), 3.51-3.53 (m, 2H), 3.95-3.97 (m, 4H)。LCMS: Rt: 1.650 min；MS m/z (ESI): 835.7[M+H]。
Figure 02_image486
化合物80		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.45-0.49 (m, 4H),0.87 (t,J = 8 Hz, 9H), 1.15-1.67 (m, 60H), 1.89-1.93 (m, 1H), 2.28-2.79 (m, 14H), 3.55-3.58 (m, 2H), 3.95-4.07 (m, 4H)。LCMS: Rt: 1.160 min；MS m/z (ESI): 779.6[M+H]。
Figure 02_image488
化合物81		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.87 (t,J = 8 Hz, 9H), 1.15-2.02 (m, 66H), 2.28-2.55 (m, 14H), 3.14-3.18 (m, 1H), 3.51-3.53 (m, 2H), 3.95-4.07 (m, 4H)。LCMS: Rt: 1.330 min；MS m/z (ESI): 793.6[M+H]。
Figure 02_image490
化合物82		 1 H NMR (400 MHz, CCl3 D) δ: 0.86-0.89(m, 9H), 1.26-1.30 (m, 50H), 1.45-1.49 (m, 6H), 1.60-1.77 (m, 12H), 2.28-2.32(m, 4H), 2.40-2.44 (m, 6H), 2.61-2.62 (m, 4H), 3.04-3.11 (m, 1H), 3.53-3.54 (m, 2H), 3.96-4.07 (m, 4H)。LCMS: Rt: 1.33 min；MS m/z (ESI): 807.7[M+H]。
Figure 02_image492
化合物83		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.86-0.90 (m, 9H), 1.26-1.47 (m, 53H), 1.48-1.58 (m, 4H), 1.60-1.70 (m, 10H), 1.71-1.80 (m, 4H), 2.26-2.34 (m, 5H), 2.36-2.51 (m, 6H), 2.52-2.69 (m, 4H), 3.41-3.54 (m, 1H), 3.91-4.03 (m, 2H), 4.04-4.07 (m, 2H)。LCMS: Rt: 1.240min；MS m/z (ESI): 821.7 [M+H]。
Figure 02_image494
化合物84		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.86-0.90 (m, 9H), 1.26-1.47 (m, 54H), 1.48-1.58 (m, 9H), 1.60-1.62 (m, 2H), 1.63-1.75 (m, 10H), 1.76-1.90 (m, 1H), 2.26-2.34 (m, 4H), 2.36-2.49 (m, 5H), 2.50-2.69 (m, 5H), 3.41-3.54 (m, 1H), 3.91-4.01 (m, 2H), 4.03-4.07 (m, 2H)。LCMS: Rt: 1.230min；MS m/z (ESI): 835.7 [M+H]。
6.29 實例 29 ：製備化合物 85
Figure 02_image762
步驟 1 ：製備化合物 85-1
在回流下，將6-溴己酸(10.0 g，51.3 mmol，1.0 eq)及PPh3 (13.4 g，51.3 mmol，1.0 eq)於ACN (150 mL)中之混合物攪拌16小時。LCMS顯示反應完成。將反應混合物冷卻至室溫並過濾。真空乾燥濾餅，得到呈白色固體狀之標題化合物85-2 (19.3 g，82%)。LCMS: Rt: 0.720 min；MS m/z (ESI): 377.1 [M-Br]+ 。步驟 2 ：製備化合物 85-2
在N2 下，在室溫下向NaHMDS (10.0 mL, 20.0 mmol，2.0 eq)於THF (50.0 mL)中之混合物中添加85-1 (4.5 g，10.0 mmol，1.0 eq)。在45℃下將反應混合物攪拌1小時。添加5-壬酮(1.42 g，10.0 mmol，1.0 eq)。在80℃下將反應混合物攪拌16小時。TLC顯示反應完成。用1M HCl將混合物調至PH=2-3並用EA萃取。用飽和鹽水洗滌混合物，經Na2 SO4 乾燥。移除溶劑，執行FCC (PE/EA=100/1-10/1)，得到呈黃色油狀之化合物85-2 (2.3 g，粗品)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.86-0.89 (m, 6H), 1.25-1.34 (m, 12H), 1.34-1.42 (m, 2H), 1.93-2.05 (m, 4H), 2.35-2.42 (m, 2H), 5.05-5.09 (m, 1H)。步驟 3 ：製備化合物 85-3
向85-2 (0.7 g，3.0 mmol，1.0 eq)及5-溴戊-1-醇(0.5 g，3.0 mmol，1.0 eq)溶解於20 mL甲苯中之溶液中添加TsOH. H2O (60 mg，0.3 mmol，0.1 eq)。在140℃下將混合物攪拌2.0小時。蒸發溶劑，得到粗產物，將其藉由管柱(矽膠，0-2% EA於PE中)層析法純化並蒸發純產物部分，得到呈黃色油狀之產物85-3 (0.8 g，粗品)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.86-0.89 (m, 6H), 1.25-1.34 (m, 9H), 1.51-1.53 (m, 3H), 1.63-1.69 (m, 3H), 1.86-2.37 (m, 6H), 2.39-2.41 (m, 2H), 3.40-3.43 (m, 4H), 4.06-4.09 (m, 2H), 5.07-5.12 (m, 1H)。步驟 4 ：製備化合物 85-4
在室溫下，向85-3 (0.8 g，2.0 mmol，3.0 eq)及乙醇胺(42 mg，0.68 mmol，1.0 eq)於ACN (10.0 mL)中之溶液中添加Cs2 CO3 (61.0 mg，0.0.19 mmol，0.3 eq)、K2 CO3 (261.0 mg，1.89 mmol，3.0 eq)及NaI (9 mg，0.063 mmol，0.1 eq)。在85℃下將混合物攪拌16小時。LCMS顯示反應完成，減壓蒸發混合物並藉由FCC (DCM/MeOH=1/0-20/1)純化，得到呈黃色油狀之85-4 (0.2 g，42%產率)。LCMS: Rt: 0.945 min；MS m/z (ESI): 678.5 [M+H]。步驟 5 ：製備化合物 85-5
向85-4 (0.2 g，0.3 mmol，1.0 eq)於MeOH (10 mL)中之溶液中添加Pd/C (30 mg)。在H2 下，在室溫下將反應混合物攪拌16小時。LCMS顯示反應完成。將混合物經由矽藻土過濾。移除溶劑，得到呈褐色油狀之化合物85-5 (200 mg，粗品)。LCMS: Rt: 1.033 min；MS m/z (ESI): 662.6 [M+H]。步驟 6 ：製備化合物 85-6
在室溫下，向85-5 (200.0 mg，0.29 mmol，1.0 eq)於DCM (5.0 mL)中之溶液中添加SOCl2 (105 mg，0.88 mmol，3.0 eq)。將混合物攪拌16小時。LCMS顯示反應完成，減壓蒸發混合物，得到呈褐色油狀之85-6 (0.21 g，粗品)。LCMS: Rt: 0.585min；MS m/z (ESI): 700.4 [M+H]。步驟 7 ：製備化合物 85
在0℃下，向85-6 (200.0 mg，0.28 mmol，1.0 eq)及1-3 (98.0 mg，0.86 mmol，3.0 eq)於THF (5.0 mL)中之溶液中添加DIEA (180.0 mg，1.4 mmol，5.0 eq)。在70℃下將混合物攪拌16小時。LCMS顯示反應完成，減壓蒸發混合物並利用製備型HPLC純化，得到呈黃色油狀之85 (70.0 mg，32%產率)。
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.79-0.90 (m, 12H), 1.21-1.35 (m, 43H), 1.58-1.68 (m, 15H), 1.78-2.02 (m, 4H), 2.27-2.31 (m, 4H), 2.47-2.61 (m, 9H), 3.18 (s, 1H), 3.55 (s, 2H), 4.04-4.08 (m, 4H)。LCMS: Rt: 1.330 min；MS m/z (ESI): 779.6[M+H]。
以下化合物係以與化合物85類似之方式，使用相應起始物質製備。
化合物 表徵
Figure 02_image498
化合物86		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.79-0.90 (m, 12H), 1.21-1.35 (m, 62H), 1.52-1.68 (m, 14H), 1.84-2.02 (m, 3H), 2.27-2.47 (m, 4H), 2.48-2.56 (m, 8H), 3.18 (s, 1H), 3.52 (s, 2H), 4.04-4.07 (m, 4H)。LCMS: Rt: 0.593 min；MS m/z (ESI): 891.6[M+H]。
6.30 實例 30 ：製備化合物 64
Figure 02_image765
向化合物1 (300 mg，0.36 mmol，1.0 eq)及DIPEA (140 mg，1.08 mmol，3.0 eq)於DCM (10 mL)中之溶液中添加乙酸酐(74 mg，0.72 mmol，2.0 eq)。在室溫下攪拌混合物16小時。LCMS顯示反應完成。將反應混合物濃縮並藉由製備型HPLC純化，得到呈黃色油狀之標題化合物(40 mg，13%產率)。
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.86-0.90 (m, 12H), 1.26 (s, 52H), 1.43-1.48 (m, 4H), 1.58-1.67 (m, 8H), 1.89-1.89 (m, 2H), 1.97-2.06 (m, 6H), 2.30 (t,J =7.4 Hz, 4H), 2.35-2.56 (m, 6H), 2.68-2.73 (m, 2H), 2.94-3.07 (m, 1H), 3.12-3.20 (m, 1H), 3.96-3.97 (m, 4H), 4.09 (t,J =6.0 Hz, 2H)。LCMS: Rt: 1.630 min；MS m/z (ESI): 878.6[M+H]+ 。6.31 實例 31 ：製備化合物 95
Figure 02_image767
向吡咯啶-3-醇(104 mg，1.189 mmol，3.0 eq)、DIEA (256 mg，1.983 mmol，5.0 eq)於THF (10 mL)中之混合物中添加1-3 (300 mg，0.3965 mmol，1.0 eq)、NaI (10 mg)。在70℃下將反應混合物攪拌16小時。LCMS顯示反應完成。在移除溶劑後，將殘餘物藉由製備型HPLC純化，得到呈黃色油狀之標題化合物(120 mg，37.49%產率)。
1 H NMR (400 MHz, CCl3 D)δ: 4.33 (d, J= 1.6 Hz, 1 H), 3.97 (d, J= 5.6 Hz, 4 H), 2.82 (d, J= 4.8 Hz, 1 H), 2.73 (d, J= 9.6 Hz, 1 H), 2.56-2.50 (m, 5 H), 2.44-2.40 (m, 4 H), 2.32-2.25 (m, 5 H), 1.85-1.74 (m, 4 H), 1.67-1.60 (m, 6 H), 1.49-1.41 (m, 4 H), 1.26 (s, 51 H), 0.90-0.87 (m, 12H)。LCMS: Rt: 1.640 min；MS m/z (ESI): 806.7[M+H]。
以下化合物係以與化合物95類似之方式，使用相應起始物質製備。
化合物 表徵
Figure 02_image518
化合物96		 1 H NMR (400 MHz, CCl3 D) δ: 3.96 (d, J= 6 Hz, 4 H), 3.70-3.67 (m, 1 H), 2.80-2.77 (m, 2 H), 2.58-2.54 (m, 2 H), 2.43-2.40 (m, 6 H), 2.32-2.28 (m, 4 H), 2.18-2.13 (m, 2 H), 1.82-1.77 (m, 4 H), 1.67-1.57 (m, 8 H), 1.46-1.38 (m, 4 H), 1.26 (s, 51 H), 0.90-0.87 (m, 12 H)。LCMS: Rt: 1.500 min；MS m/z (ESI): 821.7[M+H]。
Figure 02_image520
化合物97		 1 H NMR (400 MHz, CCl3 D) δ: 4.42 (d, J= 5.6 Hz, 1 H), 3.97 (d, J= 6 Hz, 4 H), 3.69-3.65 (m, 2 H), 2.96-2.92 (m, 2 H), 2.57-2.53 (m, 2 H), 2.42-2.37 (m, 6 H), 2.32-2.28 (m, 4 H), 1.83 (s, 4 H), 1.67-1.59 (m, 6 H), 1.45-1.40 (m, 4 H), 1.27 (s, 49 H), 0.90-0.83 (m, 12 H)。LCMS: Rt: 1.310 min；MS m/z (ESI): 793.7[M+H]。
6.32 實例 32 ：製備化合物 100
Figure 02_image771
步驟 1 ：製備化合物 100-2
在100℃下，將化合物100-1 (3.0 g，13.0 mmol，1.0 eq)及NaCN (940 mg，19.2 mmol，1.5 eq)於DMF (30 mL)中之混合物攪拌隔夜。TLC顯示反應完成。將混合物用水及鹽水稀釋，濃縮，將殘餘物藉由管柱層析法純化，得到呈無色油狀之產物SM1(1.8g, 84%產率)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.85-0.91 (m, 3H), 1.24-1.39 (m, 6H), 1.69-1.76 (m, 2H), 2.01-2.06 (m, 2H), 2.18-2.23(m, 2H), 2.31-2.36 (m, 2H), 5.25-5.31 (m, 1H), 5.45-5.52 (m, 1H)。步驟 2 ：製備化合物 100-3
在惰性氛圍下，在-78℃下向100-2 (1.8 g，11.3 mmol，1.0 eq)於無水DCM (30 ml)中之溶液中添加DIBAL (1M於己烷中，13.5 ml，1.2 eq)。將混合物攪拌2小時。TLC顯示反應完成。將混合物用5M HCl (水溶液，100 ml)稀釋並用DCM萃取，乾燥，濃縮。將殘餘物藉由管柱層析法純化，得到呈無色油狀之產物100-3 (1.24 g，66%產率)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.86-0.90 (m, 3H), 1.22-1.38 (m, 6H), 1.66-1.74 (m, 2H), 1.98-2.11 (m, 4H), 2.43-2.46(m, 2H), 5.29-5.46 (m, 2H), 9.77 (s, 1H)。步驟 3 ：製備化合物 100-5
將化合物100-4 (2.8 g，9.1 mmol，1.0 eq)於DCM (30 ml)中之溶液用PCC於二氧化矽中之1:1分散液(5.9 g，27.2 mmol，因此為11.8 g於二氧化矽中之1:1混合物)處理。攪拌90分鐘後，TLC顯示反應完成。過濾混合物並濃縮，將殘餘物藉由管柱層析法純化，得到呈無色油狀之產物100-5 (2.2 g，78.6%產率)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.85-0.90 (m, 6H), 1.23-1.37 (m, 12H), 1.61-1.67 (m, 4H), 1.97-2.04(m, 8h), 2.38-2.41 (m, 4H), 5.27-5.43 (m, 4H)。步驟 4 ：製備化合物 100-6
在惰性氛圍下，在-78℃下向100-5 (2.2 g，7.2 mmol，1.0 eq)於無水THF (20 ml)中之溶液中添加LDA (2M in THF, 4.3 ml, 1.2 eq)。攪拌40分鐘後，在-78℃下逐滴添加於THF (10 ml)中之100-3 (1.3 g，7.9 mmol，1.1 eq)。攪拌1小時後，藉由添加NH4 Cl (飽和水溶液)淬滅反應，並用EA萃取，經Na2 SO4 乾燥並濃縮。將殘餘物藉由管柱層析法純化，得到呈無色油狀之產物100-6 (1.2 g，35%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.87-0.90 (m, 9H), 1.23-1.65 (m, 25H), 1.98-2.08 (m, 12H),2.38-2.62 (m, 4H), 3.74-3.76 (m, 1H), 5.28-5.42 (m, 6H)。步驟 5 ：製備化合物 100-7
在室溫下，將100-6 (1.2 g，2.5 mmol，1.0 eq)、6-溴己酸(650 mg，3.3 mmol，1.3 eq)、EDCI (650 mg，3.3 mmol，1.3 eq)、DMAP (60 mg，0.5 mmol，0.2 eq)、DIEA (980 mg，7.6 mmol，3.0 eq)於DCM (30 mL)中之混合物攪拌12小時。TLC顯示反應完成。將混合物倒入水中並用EA洗滌。分離有機層且經Na2 SO4 乾燥。移除溶劑並藉由FCC純化，得到呈無色油狀之化合物100-7 (1.3 g，86%產率)。步驟 6 ：製備化合物 100
在回流下，將100-7 (1.2 g，1.92 mmol，2.0 eq)、100-8 (300 mg，0.96 mmol，1.0 eq)、K2 CO3 (400 mg，2.88 mmol，3.0 eq)、Cs2 CO3 (95 mg，0.29 mmol，0.3 eq)、NaI (43 mg，0.29 mmol，0.3 eq)於ACN (10 mL)中之溶液中攪拌隔夜。TLC顯示反應完成。將混合物濃縮並將殘餘物藉由製備型HPLC純化，得到呈無色油狀之產物(400 mg，41%產率)。
1 H NMR (400 MHz, CCl3 D) δ: 0.87-0.90 (m, 12 H), 1.29-1.32 (m, 30 H), 1.42-1.47 (m, 7H), 1.51-1.58 (m, 9H), 1.62-1.71 (m, 1H), 1.90-1.98 (m, 14H), 2.00-2.06 (m, 2H), 2.11-2.58 (m, 12H), 2.70-2.77 (m, 1H), 3.49-3.54 (m, 2H), 4.02-4.10 (m, 2H), 5.04-5.13 (m, 1H), 5.30-5.43 (m, 8H)。LCMS: Rt: 1.390 min；MS m/z (ESI): 884.6[M+H]。6.33 實例 33 ：製備化合物 101
Figure 02_image773
步驟 1 ：製備化合物 101-2
在室溫下，將100 (200 mg，0.23 mmol，1.0 eq)及SOCl2 (80 mg，0.9 mmol，3.0 eq)於DCM (5 ml)中之混合物攪拌4小時。LCMS顯示反應完成。將混合物濃縮且殘餘物不經進一步純化即用於下一步驟。步驟 2 ：製備化合物 101
在回流下，將101-2 (210mg，0.23 mmol，1.0 eq)、1-5 (210mg，1.84 mmol，8.0 eq)、DIEA (120 mg，0.92 mmol，4.0 eq)於THF (10 ml)中之混合物攪拌12小時。LCMS顯示反應完成。將混合物濃縮並將殘餘物藉由製備型HPLC純化，得到呈無色油狀之產物101 (79 mg，36%產率)。
1 H NMR (400 MHz, CCl3 D)δ: 0.86-0.90 (m, 12 H), 1.28-1.36 (m, 31H), 1.43-1.57 (m, 7 H), 1.59-1.76 (m, 10 H), 1.83-2.09 (m, 2 H), 2.13-2.32 (m, 16 H), 2.73-2.80 (m, 1H), 3.05-3.10 (m, 1H),3.51-3.53 (m, 2H), 4.01-4.08 (m, 2H), 5.01-5.14 (m, 1H), 5.22-5.44 (m, 8H)。LCMS: Rt: 1.560min；MS m/z (ESI): 981.7[M+H]。6.34 實例 34 ：製備化合物 102
Figure 02_image775
步驟 1 ：製備化合物 102-2
在N2 下，在室溫下向NaH (600 mg，15.0 mmol，1.5 eq)於THF (20.0 mL)中之混合物中添加102-1 (1.5 g，10.0 mmol，1.0 eq)。在室溫下將反應混合物攪拌1小時。添加3-溴丙酸甲酯(2.5 g，15.0 mmol，1.5 eq)。在室溫下將反應混合物攪拌16小時。TLC顯示反應完成。將混合物倒入水中並用EA洗滌。分離有機層且經Na2 SO4 乾燥。移除溶劑，執行FCC (PE/EA=10/1-4/1)，得到呈黃色油狀之化合物102-2 (1.0 g，42%)。步驟 2 ：製備化合物 102-3
在室溫下，向102-2 (1.0 g，4.2 mmol，1.0 eq)於THF (6.0 mL)及H2 O (3.0 mL)中之溶液中添加LiOH. H2 O (0.9 g，21.0 mmol，5.0 eq)。將混合物攪拌16小時。LCMS顯示反應完成，用1M HCl將混合物調至PH=4-5並用EA萃取。用飽和鹽水洗滌混合物，經Na2 SO4 乾燥。將混合物減壓蒸發，得到呈白色固體狀之102-3 (0.8 g，85%)。LCMS: Rt: 0.934 min；MS m/z (ESI): 223.1 [M-H]。步驟 3 ：製備化合物 102-4
向102-3 (0.8 g，3.6 mmol，1.0 eq)及102-3A (1.2 g，4.6 mmol，1.3 eq)溶解於20 mL二氯甲烷中之溶液中添加二異丙基乙胺(1.4 g，10.7 mmol，3.0 eq)及DMAP (43.0 mg，0.36 mmol，0.1 eq)。在環境溫度下攪拌5分鐘後，添加EDCI (1.0 g，5.4 mmol，1.5 eq)並在室溫下將反應混合物攪拌隔夜，之後TLC顯示起始醇完全消失。將反應混合物用CH2 Cl2 (300 mL)稀釋並用飽和NaHCO3 (100 mL)、水(100 mL)及鹽水(100 mL)洗滌。將合併之有機層經Na2 SO4 乾燥並在真空中移除溶劑。蒸發溶劑，得到粗產物，將其藉由管柱(矽膠，0-5% EA於PE中)層析法純化並蒸發純產物部分，得到呈無色油狀之產物102-4 (1.2 g，71%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.86-0.89 (m, 6H), 1.26 (s, 28H), 2.60-2.63 (m, 2H), 3.52-3.66 (m, 5H), 3.75-3.78 (m, 2H), 3.98 (d, J=5.6 Hz, 2H), 4.56 (s, 2H), 7.27-7.34 (m, 5H)。步驟 4 ：製備化合物 102-5
向102-4 (1.2 g，2.67 mmol，1.0 eq)於MeOH (10 mL)中之溶液中添加Pd/C (300 mg)及HCl (5滴)。在H2 下，在室溫下將反應混合物攪拌16小時。LCMS顯示反應完成。將混合物經由矽藻土過濾。移除溶劑，得到呈褐色油狀之化合物102-5 (0.8 g，78%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.86-0.89 (m, 6H), 1.26 (s, 30H), 2.60 (t, J=6.0 Hz, 2H), 3.57-3.59 (m, 2H), 3.71-3.78 (m, 4H), 4.02 (d, J=6.0 Hz, 2H)。步驟 5 ：製備化合物 102-6
向102-5 (0.8 g，2.07 mmol，1.0 eq)於DCM (10.0 mL)中之溶液中並在0℃下添加DIEA (0.5 g，4.1 mmol，2.0 eq)及MsCl (0.28 g，2.5 mmol，1.2 eq)。將混合物攪拌1小時。TLC顯示反應完成，添加H2 O並用DCM萃取，經Na2 SO4 乾燥。將混合物減壓蒸發，得到呈黃色油狀之102-6 (0.88 g，88%)。步驟 6 ：製備化合物 102-7
在室溫下，向102-6 (0.88 g，1.9 mmol，3.0 eq)及乙醇胺(38 mg，0.63 mmol，1.0 eq)溶解於ACN (10.0 mL)中之溶液中添加Cs2 CO3 (61.0 mg，0.0.19 mmol，0.3 eq)、K2 CO3 (261.0 mg，1.89 mmol，3.0 eq)及NaI (9 mg，0.063 mmol，0.1 eq)。在85℃下，將混合物攪拌16小時。LCMS顯示反應完成，減壓蒸發混合物並藉由FCC (DCM/MeOH=1/0-20/1)純化，得到呈黃色油狀之102-7 (0.42 g，83%產率)。LCMS: Rt: 1.820 min；MS m/z (ESI): 798.7 [M+H]。步驟 7 ：製備化合物 102-8
在室溫下，向102-7 (120.0 mg，0.15 mmol，1.0 eq)於DCM (5.0 mL)中之溶液中添加SOCl2 (53.0 mg，0.45 mmol，3.0 eq)。將混合物攪拌16小時。LCMS顯示反應完成，減壓蒸發混合物，得到呈褐色油狀之102-8 (0.14 g，粗品)。LCMS: Rt: 0.696min；MS m/z (ESI): 816.6 [M+H]。步驟 8 ：製備化合物 102
在0℃下，向102-8 (140.0 mg，0.17 mmol，1.0 eq)及1-5 (58.0 mg，0.52mmol，3.0 eq)於THF (5.0 mL)中之溶液中添加DIEA (110.0 mg，0.85 mmol，5.0 eq)。在70℃下將混合物攪拌16小時。LCMS顯示反應完成，減壓蒸發混合物並利用製備型HPLC純化，得到呈黃色油狀之102 (70.0 mg，46%產率)。
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.79-0.83 (m, 12H), 1.25 (s, 58H), 1.47-1.60 (m, 4H), 1.88-1.95 (m, 4H), 2.49-2.52 (m, 9H), 2.64-2.67 (m, 4H), 3.01 (s, 1H), 3.46-3.49 (m, 6H), 3.61-3.64 (m, 4H), 3.91 (d, J=6.4 Hz, 4H)。LCMS: Rt: 1.510 min；MS m/z (ESI): 895.7[M+H]。
以下化合物係以與化合物102類似之方式，使用相應起始物製備質。
化合物 表徵
Figure 02_image530
化合物103		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.86-0.90 (m, 12H), 1.25 (s, 61H), 1.62 (s, 4H), 2.54-2.70 (m, 5H), 2.75-2.89 (m, 5H), 3.17 (s, 2H), 3.62-3.72 (m, 13H), 4.04 (d, J=6.0 Hz, 4H), 4.13 (s, 4H)。LCMS: Rt: 1.903 min；MS m/z (ESI): 955.7[M+H]。
Figure 02_image532
化合物104		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.86-0.90 (m, 12H), 1.25 (s, 62H), 1.54-1.87 (m, 7H), 2.39-2.59 (m, 10H), 2.72 (s, 5H), 3.43-3.56 (m, 6H), 3.67-3.71 (m, 4H), 3.98 (d, J=6.0 Hz, 4H)。LCMS: Rt: 2.050 min；MS m/z (ESI): 923.7[M+H]。
6.35 實例 35 ：製備化合物 105
Figure 02_image779
步驟 1 ：製備化合物 105-2
向20-4(5.0 g，18.49 mmol)於DMF (150 mL)中之溶液中添加DIEA (7.17 g，55.46 mmol)、105-1 (2.29 g，22.18 mmol)及HATU (10.54 g，27.73 mmol)。在室溫下攪拌反應10小時。將反應混合物倒入水(200 ml)中並用EtOAc (3*200 mL)萃取。合併之有機層用鹽水洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥並真空濃縮。將粗產物藉由急驟管柱層析法(EtOAc)純化，得到呈黃色油狀之目標產物(4 g，產率：61%)。步驟 2 ：製備化合物 105-3
向105-2(4.0 g，11.25 mmol)於CH2 Cl2 (100 mL)中之溶液中添加DIEA (4.36 g，33.75 mmol)及MsCl (1.93 g，16.87 mmol)。在室溫下攪拌反應1小時。將反應混合物倒入水(100 ml)中並用CH2 Cl2 (3*100 mL)萃取。將合併之有機層用鹽水洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥並真空濃縮，得到呈黃色油狀之目標產物(3.1 g，產率：63%)。步驟 3 ：製備化合物 105-4
向105-3 (2.1 g，4.91 mmol)於CH3 CN (50 mL)中之溶液中添加K2 CO3 (700 mg，4.91 mmol)、Cs2 CO3 (160 mg，0.49 mmol)、NaI(80 mg，0.49 mmol)及2-胺基乙-1-醇(100 mg，1.64 mmol)。在80℃下攪拌反應10小時。真空濃縮反應混合物。將粗產物藉由急驟管柱層析法(CH2 Cl2 : MeOH =10 : 1)純化，得到呈黃色油狀之目標產物(800 mg，產率：66%)。步驟 4 ：製備化合物 105-5
向105-4 (300 mg，0.4 mmol)於CH2 Cl2 (10 mL)中之溶液中添加SOCl2 (145 mg，1.22 mmol)。在30℃下攪拌反應10小時。真空濃縮反應混合物，得到呈黃色油狀之目標產物(300 mg，產率：100%)。LCMS: Rt: 1.022min；MS m/z (ESI): 754.6 [M+H]。步驟 5 ：製備化合物 105
向105-5(300 mg，0.4 mmol)於THF (10 mL)中之溶液中添加DIEA (155 mg，1.19 mmol)、NaI(60 mg，0.4 mmol)及1-5 (100 mg，0.8 mmol)。在70℃下攪拌反應10小時。將反應混合物過濾，真空濃縮。將粗產物藉由製備型HPLC純化，得到呈無色油狀之目標產物(30 mg，產率：9%)。
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 )δ: 0.87 (t,J = 8 Hz, 12H), 1.25-1.36 (m, 51H), 1.44-1.65 (m, 10H), 1.83-2.07 (m, 12H), 2.42-2.55 (m, 10H), 3.15-3.27 (m, 5H), 3.52-3.54 (m, 2H), 5.85-5.88 (m, 2H)。LCMS: Rt: 0.945 min；MS m/z (ESI): 833.7 [M+H]。
以下化合物係以與化合物105類似之方式，使用相應起始物質製備。
化合物 表徵
Figure 02_image550
化合物113		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 )δ: 0.42-0.47 (m, 4H), 0.87 (t,J = 8 Hz, 12H), 1.25-1.33 (m, 52H), 1.42-1.54 (m, 8H), 1.85-1.93 (m, 4H), 2.05-2.07 (m, 4H), 2.38-2.54 (m, 6H), 2.72-2.79 (m, 4H), 3.21-3.26 (m, 4H), 3.56-3.58 (m, 2H), 5.78-5.81(m, 2H)。LCMS: Rt: 0.930 min；MS m/z (ESI): 819.7 [M+H]。
Figure 02_image552
化合物114		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 )δ: 0.87 (t,J = 8 Hz, 12H), 1.18-1.35 (m, 52H), 1.40-1.55 (m, 10H), 1.59-1.85 (m, 9H), 2.05-2.07 (m, 4H), 2.41-2.49 (m, 6H), 2.58-2.63 (m,4H), 3.04-3.08 (m, 1H),3.22-3.27 (m, 4H), 3.52-3.54 (m, 2H), 5.82-5.85(m, 2H)。LCMS: Rt: 0.946 min；MS m/z (ESI): 847.7 [M+H]。
Figure 02_image783
化合物115		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 )δ: 0.87 (t,J = 8 Hz, 12H), 1.18-1.35 (m, 49H), 1.46-1.86 (m, 24H), 2.05-2.07 (m, 4H), 2.43-2.62 (m, 11H), 3.22-3.27 (m, 4H), 3.47-3.50 (m, 2H), 5.83-5.84(m, 2H)。LCMS: Rt: 0.952 min；MS m/z (ESI): 861.7 [M+H]。
Figure 02_image556
化合物116		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 )δ: 0.87 (t,J = 8 Hz, 12H), 1.29-1.38 (m, 42H), 1.42-1.85 (m, 32H), 2.05-2.07 (m, 5H), 2.42-2.59 (m, 11H), 3.22-3.27 (m, 4H), 3.48-3.50 (m, 2H), 5.83-5.84(m, 2H)。LCMS: Rt: 0.973 min；MS m/z (ESI): 875.8 [M+H]。
Figure 02_image612
化合物144		 1 H NMR (400 MHz, CCl3 D)δ: 5.83 (s, 2 H), 3.54 (s, 2 H), 3.50-3.48 (m, 2 H),3.27-3.22 (m, 4 H), 2.58-2.54 (m, 5 H), 2.42 (s, 6 H), 2.06 (d, J=6.8 Hz, 4 H), 1.86-1.68 (m, 8 H), 1.53-1.45 (m, 10 H), 1.25 (s, 65 H), 0.90-0.86 (m, 12 H)。LCMS: Rt: 1.384 min；MS m/z (ESI): 931.8[M+H]。
6.36 實例 36 ：製備化合物 106
Figure 02_image787
步驟 1 ：製備化合物 106-2
向化合物1-1 (10 g，23.9 mmol)於CH3 CN (150 mL)中之溶液中添加K2 CO3 (9.9 g，71.7 mmol)、Cs2 CO3 (2.3 g，7.17 mmol)、NaI(1.1 g，7.17 mmol)及2-胺基乙-1-醇(2.9 g，47.8 mmol)。在80℃下將反應混合物攪拌16小時。真空濃縮反應混合物。將粗產物藉由急驟管柱層析法(CH2 Cl2 : MeOH =20:1-10 : 1)純化，得到呈黃色油狀之目標產物(5.1 g，產率：53%)。LCMS: Rt: 0.880 min；MS m/z (ESI): 400.3 [M+H]。步驟 2 ：製備化合物 106-4
向化合物106-2 (5.1 g，12.8 mmol)於CH3 CN (100 mL)中之溶液中添加K2 CO3 (5.3 g，38.4 mmol)、Cs2 CO3 (1.25 g，3.84 mmol)、NaI(576 mg,3.84mmol)及化合物106-3 (5.4 g，12.8 mmol)。在80℃下攪拌反應16小時。TLS顯示反應完成。真空濃縮反應混合物。將粗產物藉由急驟管柱層析法(CH2 Cl2 : MeOH =20 : 1純化)，得到呈黃色油狀之目標產物(7.1 g，產率：75%)。LCMS: Rt: 1.060 min；MS m/z (ESI): 737.6 [M+H]。步驟 3 ：製備化合物 106-5
向化合物106-4 (7.1 g，9.6 mmol)於CH2 Cl2 (50 mL)中之溶液中添加SOCl2 (3.4g, 28.8 mmol)。在30℃下攪拌反應16小時。真空濃縮反應混合物。將殘餘物用EA (50 mL)稀釋並用飽和NaHCO3 溶液(水層之pH值在8與9之間)、水(50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌。合併之有機層經Na2 SO4 乾燥並在真空中移除溶劑。將粗產物藉由管柱層析法(矽膠，PE/EA=5/1-3/1)純化，得到呈黃色油狀之標題化合物106-5 (2.0 g，28%)。LCMS: Rt: 1.470 min；MS m/z (ESI): 755.6 [M+H]。步驟 4 ：製備化合物 106
向化合物106-5 (1.7 g，2.2 mmol)於THF (50 mL)中之溶液中添加DIEA (1.4 g，11.0 mmol)、NaI(66 mg，0.44mmol)及化合物1-5 (760 mg，0.79 mmol)。在70℃下攪拌反應16小時。將反應混合物過濾，真空濃縮。將粗產物藉由管柱層析法(矽膠，DCM/MeOH=100/1-40/1)純化，得到目標產物 (1.3 g)。
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 )δ: 0.87 (t,J = 8 Hz, 12H), 1.22-1.46 (m, 53H), 1.47-1.52 (m, 6H), 1.53-1.67 (m, 6H), 1.83-1.87 (m, 3H), 1.98-2.01 (m, 2H), 2.15-2.19 (m, 2H), 2.29-2.32 (m, 2H), 2.42-2.55 (m, 10H), 3.13-3.19 (m, 2H), 3.51-3.53 (m, 2H), 3.95-3.97(m, 2H), 5.56-5.57 (m, 1H)。LCMS: Rt: 0.999min；MS m/z (ESI): 834.8 [M+H]。
以下化合物係以與化合物106類似之方式，使用相應起始物質製備。
化合物 表徵
Figure 02_image542
化合物109		 1 H NMR (400 MHz, CCl3 D)δ: 5.47 (s, 1 H), 3.89 (d, J=5.6 Hz, 2 H), 3.51-3.48 (m, 2 H), 3.12-3.09 (m, 2 H), 2.72-2.64 (m, 4 H), 2.46 (s, 2 H), 2.33-2.21 (m, 6 H), 2.12-2.08 (m, 2 H), 1.85 (s, 1 H), 1.59-1.53 (m, 6 H), 1.37 (d, J=8.4 Hz, 5 H), 1.19 (s, 52 H), 0.83-0.79 (m, 12 H), 0.40-0.35 (m, 4 H)。LCMS: Rt: 1.040 min；MS m/z (ESI): 820.6[M+H]。
Figure 02_image576
化合物126		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.86-0.89 (m, 12H), 1.26 (s, 56H), 1.43-1.68 (m, 14H), 1.81-1.87 (m, 2H), 1.97-2.04 (m, 2H), 2.19-2.26 (m, 2H), 2.40-2.90 (m, 10H), 3.17 (t,J =6.0 Hz, 2H), 3.64-3.66 (m, 1H), 3.70-3.78 (m, 1H), 3.94-3.98 (m, 2H)。LCMS: Rt: 1.070 min；MS m/z (ESI): 848.6[M+H]+ 。
Figure 02_image578
化合物127		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.79-0.83 (m, 12H), 1.26-1.30 (m, 56H), 1.40-1.52(m, 6H), 1.54-1.62(m, 6H), 1.67-1.69(m, 4H), 2.08-2.21 (m,2H), 2.32-2.35 (m, 2H), 2.49-2.51 (m, 7H), 2.52-2.54 (m, 4H), 3.09-3.12 (m, 2H), 3.39-3.42 (m, 2H), 3.89-3.90 (m, 2H), 5.55 (s, 1H)。LCMS: Rt: 1.230 min；MS m/z (ESI): 862.7[M+H]。
Figure 02_image580
化合物128		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.86-0.90 (m, 12H), 1.26-1.30 (m, 54H), 1.38-1.51 (m, 10H), 1.65-1.69 (m, 8H), 1.73-1.81 (m,2H), 2.15-2.32 (m, 4H), 2.38-2.58 (m, 11H), 3.19-3.16 (m, 2H), 3.47-3.49 (m, 2H), 3.96-3.97 (m, 2H), 5.62 (s, 1H)。LCMS: Rt: 1.250 min；MS m/z (ESI): 876.7[M+H]。
Figure 02_image590
化合物133		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 )δ: 0.87 (t,J = 8 Hz, 15H), 1.27-1.79 (m, 70H), 1.99-2.01 (m, 2H), 2.14-2.24 (m, 2H), 2.35-2.47 (m, 14H), 3.16-3.19 (m, 2H), 3.54-3.55 (m, 1H), 3.96-3.97 (m, 2H), 5.45-5.47 (m, 1H)。LCMS: Rt: 1.45 min；MS m/z (ESI): 876.7 [M+H]。
Figure 02_image596
化合物136		 1 H NMR (400 MHz, CCl3 D)δ: 5.60 (s, 1 H), 3.96 (d, J= 5.6 Hz, 2 H), 3.53 (s, 2 H), 3.19-3.06 (m, 3 H), 2.62-2.43 (m, 10 H), 2.32-2.29 (m, 2 H), 2.19-2.15 (m, 2 H), 1.75-1.48 (m, 10 H), 1.40 (s, 7 H), 1.26 (s, 62 H), 0.90-0.86 (m, 12 H)。LCMS: Rt: 1.630 min；MS m/z (ESI): 904.8[M+H]。
Figure 02_image600
化合物138		 1 H NMR (400 MHz, CCl3 D)δ: 5.59 (s, 1 H), 3.96 (d, J= 5.6 Hz, 2 H), 3.49-3.46 (m, 2 H), 3.19-3.16 (m, 2 H), 2.62-2.56 (m, 4 H),2.32 (s, 7 H), 2.32-2.28 (m, 2 H), 2.19-2.15 (m, 2 H), 1.78-1.60 (m, 11 H), 1.48-1.46 (m, 6 H), 1.26 (s, 64 H), 0.90-0.86 (m, 12 H)。LCMS: Rt: 1.710 min；MS m/z (ESI): 918.8[M+H]。
Figure 02_image602
化合物139		 1 H NMR (400 MHz, CCl3 D)δ: 5.59 (s, 1 H), 3.96 (d, J= 5.6 Hz, 2 H), 3.50-3.47 (m, 2 H), 3.19-3.16 (m, 2 H), 2.58-2.52 (m, 5 H), 2.42 (s, 6 H), 2.32-2.28 (m, 2 H), 2.19-2.15 (m, 2 H), 1.82-1.78 (m, 3 H), 1.67-1.62 (m, 6 H), 1.47-1.45 (m, 8 H), 1.26 (s, 66 H), 0.90-0.86 (m, 12 H)。LCMS: Rt: 1.750 min；MS m/z (ESI): 932.8[M+H]。
Figure 02_image604
化合物140		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 )δ: 5.61 (s, 1 H), 3.96 (d, J= 6.0 Hz, 2 H), 3.54-3.51 (m, 2 H), 3.19-3.16 (m, 2 H), 3.09-3.06 (m, 1 H), 2.62-2.59 (m, 4 H), 2.49-2.41 (m, 6 H), 2.32-2.29 (m, 2 H), 2.19-2.15 (m, 2 H), 1.78-1.72 (m, 2 H), 1.67-1.60 (m, 7 H), 1.50-1.46 (m, 7 H), 1.26 (s, 47 H), 0.90-0.87 (m, 12 H)。LCMS: Rt: 1.030 min；MS m/z (ESI): 792.7[M+H]。
Figure 02_image606
化合物141		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 )δ: 5.58 (s, 1 H), 3.96-3.97 (d, J= 6.0 Hz, 2 H), 3.46-3.49 (m, 2 H), 3.19-3.16 (m, 2 H), 2.42-2.58 (m, 12 H), 2.29-2.34 (m, 2 H), 2.15-2.22 (m, 2 H), 1.76-1.81 (m, 3 H), 1.59-1.67 (m, 10 H), 1.52-1.58 (m, 12 H), 1.26-1.33(m. 40 H), 0.90-0.87 (m, 12 H)。LCMS: Rt: 1.09 min；MS m/z (ESI): 820.7[M+H]。
Figure 02_image616
化合物146		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 )δ: 0.86-0.90 (m, 9 H), 1.26 (s, 49 H), 1.47 (s, 5 H), 1.56-1.68 (m, 8 H), 1.83-2.00 (m, 4 H), 2.16-2.19 (m, 2 H), 2.28-2.32 (m, 2 H), 2.44-2.56 (m, 10 H), 3.16-3.19 (m, 3 H), 3.51-3.54 (m, 2 H), 4.03-4.07 (m, 2H), 5.60 (s, 2 H)。LCMS: Rt: 1.120 min；MS m/z (ESI): 792.6[M+H]。
Figure 02_image618
化合物147		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.78-0.93 (m, 9 H), 1.14-1.39 (m, 50 H), 1.40-1.55 (m, 8 H), 1.56-1.70 (m, 8 H), 1.71-1.82 (m, 4 H), 2.11-2.20 (m, 2 H), 2.25-2.34 (m, 2 H), 2.35-2.53 (m, 5 H), 2.54-2.68 (m, 4 H), 2.99-3.13 (m, 1 H), 3.14-3.22 (m, 2 H), 3.46-3.61 (m, 2 H), 3.96-4.12 (m, 2 H)。LCMS: Rt: 1.370 min；MS m/z (ESI): 806.7[M+H]。
Figure 02_image620
化合物148		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.86-0.89 (m, 9H), 1.16-1.21 (m, 55H), 1.48-1.57 (m, 5H), 1.59-1.68 (m, 7H), 1.78 (s, 4H), 2.16-2.20 (m, 2H), 2.28-2.32 (m, 2H), 2.44-2.62 (m, 10H), 3.15-3.18 (m, 2H), 3.49 (s, 2H), 4.05 (t, J=6.8 Hz, 2H), 5.62 (s, 1H)。LCMS: Rt: 1.201 min；MS m/z (ESI): 820.7[M+H]。
Figure 02_image622
化合物149		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.78-0.93 (m, 9 H), 1.14-1.39 (m, 48 H), 1.37-1.82 (m, 26 H), 2.11-2.20 (m, 2 H), 2.25-2.34 (m, 2 H), 2.36-2.63 (m, 10 H), 3.14-3.22 (m, 2 H), 3.49 (s, 2 H), 3.96-4.12 (m, 2 H)。LCMS: Rt: 1.300 min；MS m/z (ESI): 834.7 [M+H]。
Figure 02_image626
化合物151		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.80-0.92 (m, 9 H), 1.16-1.37 (m, 50 H), 1.38-1.51 (m, 5 H), 1.54-1.77 (m, 13 H), 1.87-1.96 (m, 1 H), 2.12-2.21 (m, 2 H), 2.25-2.34 (m, 2 H), 2.35-2.45 (m, 3 H), 2.48-2.57 (m, 1 H), 2.67-2.82 (m, 3 H), 3.11-3.24 (m, 2 H), 3.51-3.62 (m, 2 H), 4.01-4.11 (m, 2 H)。LCMS: Rt: 1.050 min；MS m/z (ESI): 778.6 [M+H]。
6.37 實例 37 ：製備化合物 107
Figure 02_image804
步驟 1 ：製備化合物 106-3
在室溫下，向107-1 (240.0 mg，1.0 mmol，1eq)及6-溴己酸(289.0 mg，1.5 mmol，1.5eq)於DMF (5.0 mL)中之溶液中添加HATU (494.0 mg，1.3 mmol，1.3eq)及DIEA (387.0 mg，3.0 mmol，3.0eq)。將混合物攪拌16小時。LCMS顯示反應完成，添加EA (100.0 mL)，用飽和鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥，減壓蒸發混合物。將殘餘物藉由急驟管柱層析法(PE/EA=10:1-4:1)純化，得到呈無色油狀之106-3 (300 mg，72%產率)。步驟 2 ：製備化合物 107-3
在室溫下，向107-2 (0.29 g，0.7 mmol，2.5 eq)及2-胺基乙-1-醇(17.0 mg，0.27 mmol，1.0 eq)於ACN (15.0 mL)中之溶液中添加K2 CO3 (115.0 mg，0.83 mmol，3 eq)、Cs2 CO3 (27.0 mg，0.08 mmol，0.3 eq)及NaI (3.0 mg，0.028 mmol，0.1 eq)。在80℃下將混合物攪拌24小時。LCMS顯示反應完成，減壓蒸發混合物並利用FCC (DCM/MeOH=1/0-10/1)純化，得到呈無色油狀之107-3 (0.2 g，90%產率)。步驟 3 ：製備化合物 107-4
在室溫下，向107-3 (0.2 g，0.27 mmol，1.0 eq)於CHCl3 (15.0 mL)中之溶液中添加SOCl2 (94.0 mg，0.81 mmol，3.0 eq)。將混合物攪拌16小時。LCMS顯示反應完成，減壓蒸發混合物，得到呈褐色油狀之107-4 (170.0 mg，粗品)。步驟 4 ：製備化合物 107
在0℃下，向107-4 (170 mg，0.225 mmol，1.0 eq)及1-5 (77 mg，0.675 mmol，3.0 eq)於THF (5.0 mL)中之溶液中添加DIEA (145 mg，1.125 mmol，5.0 eq)。在70℃下將混合物攪拌16小時。LCMS顯示反應完成，減壓蒸發混合物並利用製備型HPLC純化，得到呈褐色油狀之107 (90.0 mg，48%產率)。
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.86-0.90 (m, 12H), 1.30-1.34 (s, 52H), 1.46-1.58 (m, 6H), 1.62-1.69 (m, 6H), 1.83-1.88 (m, 2H), 1.98-2.00 (m, 2H), 2.16-2.20 (m, 4H), 2.42-2.56 (m, 10H), 3.14-3.18 (m, 4H), 3.52-3.54 (m, 2H), 5.71 (s, 2H)。LCMS: Rt: 1.018 min；MS m/z (ESI): 833.7[M+H]。
以下化合物係以與化合物107類似之方式，使用相應起始物質製備。
化合物 表徵
Figure 02_image544
化合物110		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.42-0.47 (m, 4H), 0.88-0.92 (m, 12H), 1.26 (m, 48H), 1.43-1.50 (m, 6H), 1.61-1.68 (m, 8H), 1.91-2.02 (m,2H), 2.15-2.19 (m, 4H), 2.37-2.41 (m, 4H),2.51-2.53 (m, 2H), 2.71-2.79 (m, 4H), 3.16-3.19 (m, 4H), 3.55-3.58 (m, 2H), 5.57-5.60 (m, 2H)。LCMS: Rt: 1.010 min；MS m/z (ESI): 819.7[M+H]。
Figure 02_image546
化合物111		 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.86-0.90 (m, 12H), 1.26 (m, 52H), 1.39-1.47 (m, 8H), 1.54-1.71 (m, 10H), 1.74-2.02 (m,1H), 2.15-2.19 (m, 4H), 2.41-2.44 (m, 6H), 2.58-2.61 (m, 4H), 3.13-3.12 (m, 1H), 3.16-3.19 (m, 4H), 3.51-3.53 (m, 2H), 5.58-5.60 (m, 2H)。LCMS: Rt: 0.980 min；MS m/z (ESI): 847.7[M+H]。
Figure 02_image548
化合物112		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.86-0.90 (m, 12H), 1.26 (m, 52H), 1.32-1.47 (m, 12H), 1.63-1.81 (m, 12H), 2.01 (m,1H), 2.15-2.22 (m, 4H), 2.38-2.42 (m, 5H), 2.51-2.58 (m, 4H), 3.16-3.19 (m, 4H), 3.47-3.49 (m, 2H), 5.61 (m, 2H)。LCMS: Rt: 1.000 min；MS m/z (ESI): 875.7[M+H]。
Figure 02_image570
化合物123		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.88-0.90 (m, 6H), 1.20-1.32 (m, 30H), 1.45-1.50 (m, 8H), 1.63-1.69 (m, 5H), 1.74-1.78 (m, 4H), 2.14-2.16 (m, 4H), 2.40-2.44 (m, 7H), 2.59-2.62 (m, 4H), 3.23-3.25 (m, 4H), 3.46-3.49 (m, 2H), 5.84-5.85 (m, 2H)。LCMS: Rt: 0.770 min；MS m/z (ESI): 637.6 [M+H]。
Figure 02_image582
化合物129		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.86-0.90 (m, 12H), 1.26 (m, 52H), 1.43-1.54 (m, 8H), 1.61-1.78 (m, 12H), 2.02 (m,1H), 2.15-2.19 (m, 4H), 2.41-2.42 (m, 7H), 2.57-2.60 (m, 4H), 3.16-3.19 (m, 4H), 3.46-3.48 (m, 2H), 5.61 (m, 2H)。LCMS: Rt: 0.980 min；MS m/z (ESI): 861.8[M+H]。
Figure 02_image592
化合物134		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.87 (t,J = 8 Hz, 15H), 1.27-1.82(m, 64H), 2.01-2.51 (m, 19H), 2.52-2.53 (m, 0.6H), 3.15-3.19 (m, 4H), 3.48-3.51 (m, 0.4H), 3.85-3.94 (m, 0.6H), 4.39-4.45 (m, 0.4H), 5.45-5.47 (m, 2H)。LCMS: Rt: 1.080 min；MS m/z (ESI): 847.7 [M+H]。
Figure 02_image594
化合物135		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.87 (t,J = 8 Hz, 15H), 1.27-1.76 (m, 72H), 1.99-2.01 (m, 2H), 2.14-2.24 (m, 4H), 2.35-2.47 (m, 10H), 3.16-3.19 (m, 4H), 3.54-3.55 (m, 1H), 5.45-5.47 (m, 2H)。LCMS: Rt: 1.033 min；MS m/z (ESI): 875.7 [M+H]。
Figure 02_image598
化合物137		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.88-0.90 (m, 12 H), 1.13-1.26 (m, 62H), 1.44-1.47 (m, 7H), 1.63-1.69 (m, 7 H), 1.76-1.78 (m, 5H), 2.02-2.15 (m, 4 H), 2.17-2.20 (m,7 H), 2.29-2.40 (m, 4H), 3.16-3.19 (m, 4H), 3.46-3.48 (m, 2 H), 5.60-5.61 (m, 2H)。LCMS: Rt: 1.39 min；MS m/z (ESI): 917.8 [M+H]。
6.38 實例 38 ：製備化合物 108
Figure 02_image814
步驟 1 ：製備化合物 108-2
向1-1(1.5 g，3.58 mmol)於CH3 CN (50 mL)中之溶液中添加K2 CO3 (1.48 g，10.73 mmol)、Cs2 CO3 (0.4 g，1.07 mmol)、NaI(0.16 g，1.07 mmol)及2-胺基乙-1-醇(0.45 g，7.15 mmol)。在80℃下攪拌反應10小時。真空濃縮反應混合物。將粗產物藉由急驟管柱層析法(CH2 Cl2 : MeOH =10 : 1)純化，得到呈黃色油狀之目標產物(800 mg，產率：56%)。LCMS: Rt: 0.898 min；MS m/z (ESI): 400.3 [M+H]。步驟 2 ：製備化合物 108-4
向108-2(800 mg，2.0 mmol)於CH3 CN (20 mL)中之溶液中添加K2 CO3 (830 mg，6.01 mmol)、Cs2 CO3 (200 mg，0.6 mmol)、NaI(90 mg，0.6 mmol)及108-3(1.0 g，2.4 mmol)。在80℃下攪拌反應10小時。真空濃縮反應混合物。將粗產物藉由急驟管柱層析法(CH2 Cl2 :MeOH =10 : 1)純化，得到呈黃色油狀之目標產物(1.1 g，產率：74%)。步驟 3 ：製備化合物 108-5
向108-4 (300 mg，0.4 mmol)於CH2 Cl2 (10 mL)中之溶液中添加SOCl2 (150 mg，1.22 mmol)。在30℃下攪拌反應10小時。真空濃縮反應混合物，得到呈黃色油狀之目標產物(300 mg，產率：100%)。LCMS: Rt: 1.022 min；MS m/z (ESI): 754.6 [M+H]。步驟 4 ：製備化合物 108
向108-5 (300 mg，0.4 mmol)於THF (10 mL)中之溶液中添加DIEA (160 mg，1.19 mmol)、NaI(60 mg，0.4 mmol)及1-5(100 mg，0.8 mmol)。在70℃下攪拌反應10小時。將反應混合物過濾，真空濃縮。將粗產物藉由製備型HPLC純化，得到呈無色油狀之目標產物(50 mg，產率：15%)。
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.87 (t,J = 8 Hz, 12H), 1.29-1.35 (m, 53H), 1.51-1.68 (m, 10H), 1.82-1.88 (m, 4H), 1.97-2.07 (m, 4H), 2.21-2.23 (m, 2H), 2.45-2.56 (m, 10H), 3.14-3.27 (m, 3H), 3.52-3.55 (m, 2H), 4.04-4.07 (m, 2H), 5.91-5.94(m, 1H)。LCMS: Rt: 1.009 min；MS m/z (ESI): 834.7 [M+H]。
以下化合物係以與化合物108類似之方式，使用相應起始物質製備。
化合物 表徵
Figure 02_image558
化合物117		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.88 (t,J =6.8 Hz, 12H), 1.26 (s, 50H), 1.32-1.51 (m, 4H), 1.62-1.68 (m, 8H), 1.81-1.87 (m, 2H), 1.97-2.04 (m, 2H), 2.31 (t,J =7.6 Hz, 4H), 2.40-2.49 (m, 5H), 2.57-2.68 (m, 4H), 3.50-3.55 (m, 3H), 3.64-3.68 (m, 2H), 3.70-3.78 (m, 1H), 3.93-3.99 (m, 4H)。LCMS: Rt: 1.140 min；MS m/z (ESI): 821.6[M+H]+ 。
Figure 02_image584
化合物130		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.88 (t,J =6.6 Hz, 12H), 1.26 (s, 55H), 1.41-1.51 (m, 8H), 1.52-1.68 (m, 4H), 1.71-1.90 (m, 4H), 2.06-2.08 (m, 2H), 2.21-2.23 (m, 2H), 2.36-2.75 (m, 10H), 3.04-3.10 (m, 1H), 3.16-3.26 (m, 2H), 3.53-3.64 (m, 2H), 4.06 (t,J =6.6 Hz, 2H), 5.91-6.00 (m, 1H)。LCMS: Rt: 1.090 min；MS m/z (ESI): 848.7[M+H]+ 。
Figure 02_image586
化合物131		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.86-0.90 (m, 12H), 1.30 (m, 56H), 1.48-1.52(m, 6H), 1.61-1.66 (m, 4H), 1.75-1.85 (m, 7H), 2.05-2.07 (d,J= 7.2Hz, 2H), 2.21-2.23 (d,J= 7.2Hz, 2H), 2.39-2.48 (m, 7H), 2.58-2.62 (m, 4H), 3.23-3.25 (m, 2H), 3.47-3.49 (m, 2H), 4.04-4.07 (m, 2H), 5.88 (m, 1H)。LCMS: Rt: 1.080 min；MS m/z (ESI): 862.7[M+H]。
Figure 02_image588
化合物132		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.86-0.90 (m, 12H), 1.30 (m, 56H), 1.51-1.62 (m, 12H), 1.73-1.74 (m, 4H), 1.78-1.87 (m, 4H), 2.05 (d,J= 7.2Hz, 2H), 2.21 (d,J= 7.2Hz, 2H), 2.44-2.48 (m, 5H), 2.52-2.58 (m, 5H), 3.22-3.27 (m, 2H), 3.48-3.50 (m, 2H), 4.05-4.07 (m, 2H), 5.83-5.86 (m, 1H)。LCMS: Rt: 1.164 min；MS m/z (ESI): 876.8[M+H]。
Figure 02_image608
化合物142		 1 H NMR (400 MHz, CCl3 D) δ: 0.86-0.89 (m, 12H), 1.26-1.35 (m, 48H), 1.40-1.52 (m, 12H), 1.64-1.89 (m, 8H), 2.05-2.07 (m, 2H), 2.21-2.23 (m, 2H), 2.41-2.45 (m, 5H), 2.54-2.59 (m, 5H), 3.24-3.25 (m, 2H), 3.49-3.52 (m, 2H), 4.04-4.07 (m, 2H), 5.84-5.87 (m, 1H)。LCMS: Rt: 1.10 min；MS m/z (ESI): 820.7[M+H]。
Figure 02_image610
化合物143		 1 H NMR (400 MHz, CCl3 D) δ: 5.93 (s, 1 H), 4.07-4.04 (m, 2 H), 3.54 (s, 2 H), 3.27-3.22 (m, 2 H), 3.10-3.05 (m, 1 H), 2.63-2.44 (m, 10 H), 2.22 (d, J= 6.8 Hz, 2 H), 2.06 (d, J=7.2 Hz, 2 H), 1.80 (d, J=39.2 Hz, 6 H), 1.66-1.61 (m, 5 H), 1.53-1.50 (m, 8 H), 1.25 (s, 60 H), 0.89-0.86 (m, 12 H)。LCMS: Rt: 1.690 min；MS m/z (ESI): 904.8[M+H]。
Figure 02_image614
化合物145		 1 H NMR (400 MHz, CCl3 D) δ: 5.81 (s, 1 H), 4.07-4.03 (m, 2 H), 3.50-3.48 (m, 2 H), 3.25-3.24 (m, 2 H), 2.59-2.39 (m, 10 H), 2.23-2.21 (m, 2 H), 2.07-2.05 (m, 2 H), 1.83-1.80 (m, 4 H), 1.68-1.62 (m, 4 H), 1.54-1.46 (m, 12 H), 1.35-1.30 (m. 64 H), 0.89-0.86 (m, 12 H)。LCMS: Rt: 1.56 min；MS m/z (ESI): 932.8[M+H]。
Figure 02_image628
化合物152		 1 H NMR (400 MHz, CCl3 D): 0.86-0.89(m, 12H), 1.26-1.38(m, 50H), 1.43-1.66(m, 9H), 1.75-1.84 (m, 6H), 2.05-2.07 (m, 2H), 2.21-2.23 (m, 2H), 2.42-2.44 (m, 7H), 2.57-2.62 (m, 4H), 3.22-3.27 (m, 2H), 3.56-3.58 (m, 2H), 4.04-4.07 (m, 2H), 5.86-5.89 (m, 1H)。LCMS: Rt: 1.118 min；MS m/z (ESI): 806.7[M+H]。
Figure 02_image630
化合物153		 1 H NMR (400 MHz, CCl3 D) δ: 0.44-0.47 (m, 4H), 0.86-0.89 (m, 12H), 1.26-1.38 (m, 44H), 1.43-1.66 (m, 9H), 1.85-1.94 (m, 3H), 2.05-2.07 (m, 2H), 2.21-2.23 (m, 2H), 2.40-2.42 (m, 4H), 2.54-2.55 (m, 2H), 2.72-2.80 (m, 4H), 3.22-3.27 (m, 2H), 3.56-3.58 (m, 2H), 4.04-4.07 (m, 2H), 5.83-5.85 (m, 1H)。LCMS: Rt: 0.99 min；MS m/z (ESI): 764.6[M+H]。
Figure 02_image632
化合物154		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 5.87-5.84 (m, 1 H), 4.00-3.97 (m, 2 H), 3.47-3.45 (m, 2 H), 3.20-3.15 (m, 2 H),3.02-2.98 (m, 1 H), 2.56-2.51 (m, 4 H), 2.42-2.33 (m, 6 H), 2.15 (d, J= 7.2 Hz, 2 H), 1.99 (d, J=7.2 Hz, 2 H), 1.78-1.64 (m, 4 H), 1.61-1.54 (m, 4 H), 1.48-1.38 (m, 8 H), 1.19 (s, 47 H), 0.82-0.79 (m, 12 H)。LCMS: Rt: 1.110 min；MS m/z (ESI): 792.6[M+H]。
6.39 實例 39 ：製備化合物 121
Figure 02_image826
步驟 1 ：製備化合物 121-3
在室溫下，向121-1 (1.0 g，6.6 mmol，1.0 eq)及121-2 (5.6 g，19.8 mmol，3.0 eq)於ACN (20.0 mL)中之溶液中添加K2 CO3 (2.7 g，19.8 mmol，3.0 eq)。在80℃下將混合物攪拌16小時。LCMS顯示反應完成，減壓蒸發混合物並利用FCC (PE/EA=10/0-0/1)純化，得到呈無色油狀之121-3 (2.0 g，55%產率)。LCMS: Rt: 0.944 min；MS m/z (ESI): 554.2 [M+H]。步驟 2 ：製備化合物 121-4
在室溫下，向121-3 (2.0 g，3.62 mmol，1.0 eq)於EtOH (20.0 mL)中之溶液中添加N2 H4 . H2 O (2.0 mL)。在80℃下將混合物攪拌3小時。LCMS顯示反應完成，將混合物過濾並減壓蒸發，得到呈無色油狀之121-4 (1.0 g，粗品)。LCMS: Rt: 0.307 min；MS m/z (ESI): 294.2 [M+H]。步驟 3 ：製備化合物 121-6
在0℃下，向121-5 (729.0 mg，3.0 mmol，1.0 eq)於DCM (10.0 mL)中之溶液中依序添加DIEA (1.9 g，15.0 mmol，5.0 eq)及三光氣(591.0 mg，1.5 mmol，0.5 eq)。在室溫下將混合物攪拌1小時，接著添加121-4 (288.0 mg，0.99 mmol，0.33 eq)。在室溫下將混合物攪拌16小時。TLC顯示反應完成，將混合物倒入H2 O中，用EA萃取。將混合物減壓蒸發並藉由FCC (DCM/MeOH=1/0-10/1)純化，得到呈褐色油狀之121-6 (0.6 g，粗品)。LCMS: Rt: 1.341 min；MS m/z (ESI): 828.5 [M+H]。步驟 4 ：製備化合物 121-7
向121-6 (600.0 mg，0.72 mmol，1.0 eq)於MeOH (10.0 mL)中之溶液中添加Pd/C (30.0 mg)及HCl (5滴)。在H2 下，在室溫下將混合物攪拌3小時。LCMS顯示反應完成，將混合物過濾並減壓蒸發，得到呈褐色油狀之121-7 (300 mg，粗品)。LCMS: Rt: 1.036 min；MS m/z (ESI): 738.6 [M+H]。步驟 5 ：製備化合物 121-8
在室溫下，向121-7 (300.0 mg，0.41 mmol，1.0 eq)於DCM (5.0 mL)中之溶液中添加SOCl2 (144.0 mg，1.23 mmol，3.0 eq)。將混合物攪拌16小時。LCMS顯示反應完成，減壓蒸發混合物，得到呈褐色油狀之121-8 (280 mg，粗品)。LCMS: Rt: 1.329 min；MS m/z (ESI): 756.6 [M+H]。步驟 6 ：製備化合物 121
在0℃下，向121-8 (110.0 mg，0.15 mmol，1.0 eq)及1-5 (52.0 mg，0.45 mmol，3.0 eq)於THF (5.0 mL)中之溶液中添加DIEA (97.0 mg，0.75 mmol，5.0 eq)及NaI (2.1 mg，0.015 mmol，0.1 eq)。在70℃下將混合物攪拌16小時。LCMS顯示反應完成，減壓蒸發混合物並利用製備型HPLC純化，得到呈黃色油狀之121 (50.0 mg，40%產率)。
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.79-0.98 (m, 12H), 1.62 (s, 47H), 1.65 -1.74 (m, 14H), 1.83-2.01 (m, 5H), 2.55-2.62 (m, 9H), 3.06-3.20(m, 9H), 3.55-3.57 (m, 2H), 4.29-4.32 (m, 1H), 5.01-5.28 (m, 3H)。LCMS: Rt: 1.030 min；MS m/z (ESI): 835.7[M+H]。
以下化合物係以與化合物121類似之方式，使用相應起始物質製備。
化合物 表徵
Figure 02_image568
化合物122		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.79-0.98 (m, 12H), 1.12-1.47 (m, 55H), 1.51-1.79 (m, 15H), 2.41-2.64 (m, 11H), 3.06-3.20 (m, 8H), 3.51-3.53 (m, 2H), 5.06-5.31 (m, 3H)。LCMS: Rt: 1.079 min；MS m/z (ESI): 863.7[M+H]。
6.40 實例 40 ：製備化合物 155
Figure 02_image829
步驟 1 ：製備化合物 155-2
在0℃下，將39-1 (484.0 mg，1.0 mmol，1.0 eq)溶解於DCM (10.0 mL)中，接著添加Py (1.1 g，16.0 mmol，8.0 eq)及三光氣(355.0 mg，1.2 mmol，0.6 eq)。在室溫下將混合物攪拌1小時，接著添加4-溴丁-1-胺(560.0 mg，2.4 mmol，1.2 eq)。在室溫下將混合物攪拌16小時。TLC顯示反應完成，將混合物倒入H2 O中，用EA萃取。將混合物減壓蒸發並藉由FCC (PE/EA=100/1-10/1)純化，得到呈黃色油狀之155-2 (0.27 g，32%產率)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.86-0.90 (m, 6H), 1.58 (s, 25H), 1.61-1.70 (m, 2H), 1.86-1.94 (m, 2H), 3.19-3.24 (m, 2H), 3.41-3.56 (m, 2H), 3.94-3.96 (m, 2H), 5.30 (s, 1H)。步驟 2 ：製備化合物 155-3
在室溫下，向155-2 (270.0 mg，0.64 mmol，3.0 eq)及乙醇胺(13.0 mg，0.213 mmol，1.0 eq)於ACN (15.0 mL)中之溶液中添加K2 CO3 (88.0 mg，0.64 mmol，3.0 eq)、Cs2 CO3 (21.0 mg，0.064 mmol，0.3 eq)及NaI (3.0 mg，0.023 mmol，0.1 eq)。在80℃下將混合物攪拌48小時。LCMS顯示反應完成，減壓蒸發混合物並利用FCC (DCM/MeOH=1/0-10/1)純化，得到呈無色油狀之155-3 (0.1 g，63%產率)。LCMS: Rt: 1.018 min；MS m/z (ESI): 740.6 [M+H]。步驟 3 ：製備化合物 155-4
在室溫下，向155-3 (100.0 mg，0.135 mmol，1.0 eq)於DCM (5.0 mL)中之溶液中添加SOCl2 (47.0 mg，0.405 mmol，3.0 eq)。將混合物攪拌16小時。LCMS顯示反應完成，減壓蒸發混合物，得到呈褐色油狀之155-4 (100 mg，粗品)。LCMS: Rt: 1.780 min；MS m/z (ESI): 758.6 [M+H]。步驟 4 ：製備化合物 155
在0℃下，向155-4 (100.0 mg，0.13 mmol，1.0 eq)及1-5 (45.0 mg，0.397 mmol，3.0 eq)於THF (5.0 mL)中之溶液中添加DIEA (85 mg，0.66 mmol，5.0 eq)。在70℃下將混合物攪拌16小時。LCMS顯示反應完成，減壓蒸發混合物並利用製備型HPLC純化，得到呈黃色油狀之155 (30.0 mg，27%產率)。
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.79-0.83 (m, 12H), 1.23 (s, 48H), 1.51-1.63 (m, 12H), 1.86-1.96 (m, 5H), 2.47-2.54 (m, 10H), 3.11-3.13 (m, 5H), 3.51 (s, 2H), 3.86-3.88 (m, 4H), 4.95 (s, 2H)。LCMS: Rt: 1.232 min；MS m/z (ESI): 837.7[M+H]。
以下化合物係以與化合物155類似之方式，使用相應起始物質製備。
化合物 表徵
Figure 02_image572
化合物124		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.86-0.90 (m, 12H), 1.26 (s, 53H), 1.51-1.80 (m, 16H), 2.44-2.64 (m, 11H), 3.18 (s, 4H), 3.50 (s, 2H), 3.93-3.95 (m, 4H), 4.99 (s, 2H)。LCMS: Rt: 1.240 min；MS m/z (ESI): 865.7[M+H]。
Figure 02_image574
化合物125		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.86-0.89 (m, 12H), 1.26-1.79 (m, 66H), 2.50-2.68 (m, 11H), 3.17 (s, 5H), 3.59 (s, 2H), 3.93-3.95 (m, 4H), 5.00 (s, 2H)。LCMS: Rt: 1.420 min；MS m/z (ESI): 851.7[M+H]。
6.41 實例 41 ：製備化合物 118
Figure 02_image833
步驟 1 ：製備化合物 118-3
在0℃下，向118-2a (4.4 g，10.9 mmol，1.2 eq)於無水THF(30 ml)中之溶液中添加KMHDS (1M於THF中，11 ml)，攪拌2小時，添加化合物18-2 (4.1 g，9.1 mmol，1.0 eq)。將混合物攪拌12小時，TLC顯示反應完成。將混合物用EA稀釋並用水及鹽水洗滌，濃縮。將殘餘物藉由管柱層析法(矽膠，2%-20% EA於PE中)純化，得到呈黃色油狀之118-3 (2.8 g，68.3%%產率)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 1.31-1.45 (m, 12H), 1.59-1.66 (m, 4H), 1.88 (s, 1H), 2.32-2.36 (m, 4H), 4.87-4.95 (m, 2H), 5.11 (s, 4H), 5.43-5.52 (m, 1H), 7.30-7.38 (m, 10H)。步驟 2 ：製備化合物 118-4
在室溫下，向118-3 (2.8 g，6.2 mmol，1.0 eq)於無水THF (20 mL)中之溶液中添加硼烷(1M於THF中，6.5 ml)。在室溫下攪拌混合物12小時。添加10% NaOH溶液(2 ml)及H2 O2 (30%，4 ml)。攪拌2小時後，TLC顯示反應完成。將混合物減壓蒸發。將殘餘物用EA (50 mL)稀釋並用飽和NaHCO3 溶液(水層之pH值係8)及鹽水洗滌。合併之有機層經Na2 SO4 乾燥並在真空中移除溶劑。將殘餘物溶解於DCM(20)中，在0℃下添加NEt3 (940 mg，9.3 mmol，1.5 eq)及甲烷磺醯氯(860 mg，7.5 mmol，1.2 eq)。攪拌2小時後，TLC顯示反應完成。將混合物用水及鹽水洗滌，濃縮。將殘餘物藉由管柱層析法(矽膠，10%-40% EA於PE中)純化，得到118-4 (1.2 g，36%產率)。步驟 3 ：製備化合物 118-5
在氫氣氛圍下，在室溫下將118-4 (1.2 g，2.2 mmol，1.0 eq)及Pd/C(100 mg)於EA (30 ml)中之混合物攪拌24小時。TLC顯示反應完成。將混合物過濾並濃縮濾液，得到118-5 (0.9 g，粗品)。步驟 4 ：製備化合物 118-6
在室溫下，向118-5 (0.9 g，2.45 mmol，1.0 eq)及118-5a (1.3 g，5.4 mmol，2.2 eq)於無水DCM (30 ml)中之溶液中添加HATU (2.8 g，7.35 mmol，3.0 eq)及DIEA (1.6 g，12.2 mmol，5.0 eq)，攪拌2小時。TLC顯示反應完成。將混合物用DCM稀釋並用水及鹽水洗滌，濃縮。將殘餘物藉由管柱層析法(矽膠，2%-100% EA於PE中)純化，得到呈黃色油狀之118-6 (1.4 g，70%產率)。步驟 5 ：製備化合物 118
在0℃下，向118-6 (150.0 mg，0.18 mmol，1.0 eq)及1-5 (64.0 mg，0.55 mmol，3.0 eq)於THF (5.0 mL)中之溶液中添加DIEA (116.0 mg，0.9 mmol，5.0 eq)。在70℃下將混合物攪拌16小時。LCMS顯示反應完成，減壓蒸發混合物並利用製備型HPLC純化，得到呈黃色油狀之118 (25.0 mg，17%產率)。
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.81-0.90 (m, 24H), 1.12-1.26 (m, 22H), 1.34-1.45(m, 42H), 1.91-1.98 (m, 4H), 2.10-2.57 (m, 5H), 3.09-3.12 (m, 4H), 3.48-3.49 (m, 2H),5.27-5.44 (m, 2H)。LCMS: Rt: 1.320 min；MS m/z (ESI): 832.7[M+H]。
以下化合物係以與化合物118類似之方式，使用相應起始物質製備。
化合物 表徵
Figure 02_image562
化合物119		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.42-0.43 (m, 4H), 0.81-0.90 (m, 12H), 1.19-1.24 (m, 52H), 1.36-1.40 (m, 5H), 1.61-1.75 (m, 14H), 2.08-2.11 (m, 4H), 2.51-2.55 (m, 2H), 2.67-2.70 (m, 2H),3.09-3.12 (m, 4H), 3.51-3.54 (m, 2H), 5.43 (m, 2H)。LCMS: Rt: 1.340 min；MS m/z (ESI): 818.7[M+H]。
Figure 02_image564
化合物120		 1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.81-0.90 (m, 24H), 1.12-1.26 (m, 23H), 1.34-1.45 (m, 48H), 2.01-2.17 (m, 4H), 2.45-2.62 (m, 5H), 3.16-3.17 (m, 4H), 3.18 (s, 2H), 5.54-5.55 (m, 2H)。LCMS: Rt: 1.480 min；MS m/z (ESI): 860.8[M+H]。
6.42 實例 42 ：製備化合物 150
Figure 02_image837
步驟 1 ：製備化合物 150-2
在-78℃下，向(COCl)2 (6.7 mL, 77.0 mmol，2.0 eq)於30 mL之DCM中之溶液中添加DMSO (10.9 mL，154 mmol，4.0 eq)。攪拌20分鐘後，添加6-溴己-1-醇(6.8 g，37.6 mmol，1.0 eq)。再在-78℃下攪拌1.5小時，添加Et3 N (10 mL)並在室溫下將反應混合物攪拌1.0小時。將反應混合物用CH2 Cl2 (100 mL)稀釋並用水(50 mL)及鹽水(500 mL)洗滌。將合併之有機層經Na2 SO4 乾燥並在真空中移除溶劑。蒸發溶劑，得到粗產物，將其藉由管柱(矽膠，0-5% EA於PE中)層析法純化並蒸發純產物部分，得到呈無色油狀之產物150-2 (7.0 g，粗品)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 1.45-1.51 (m, 2H), 1.53-1.70 (m, 2H), 1.85-1.91 (m, 2H), 2.44-2.50 (m, 2H), 3.40-3.43 (m, 2H), 9.78 (s, 1H)。步驟 2 ：製備化合物 150-3
在室溫下，向150-2 (7.0 g，39.0 mmol，1.0 eq)及辛-1-醇(15.0 g，117.0 mmol，3.0 eq)於DCM (100.0 mL)中之溶液中添加TsOH. H2 O (1.3 g，7.8 mmol，0.2 eq)、Na2 SO4 (16.0 g，117 mmol，3.0 eq)。在室溫下將混合物攪拌16小時。TLC顯示反應完成，減壓蒸發混合物並藉由FCC (PE)純化，得到呈黃色油狀之150-3 (10.0 g，粗品)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.86-0.90 (m, 6H), 1.27-1.48 (m, 24H), 1.52-1.64 (m, 6H), 1.85-1.88 (m, 2H), 3.37-3.53 (m, 4H), 3.54-3.59 (m, 2H), 4.44-4.47 (m, 1H)。步驟 3 ：製備化合物 150-5
在室溫下，向108-3 (0.2 g，0.54 mmol，1.0 eq)及150-3 (340 mg，0.81 mmol，1.5 eq)於ACN (10.0 mL)中之溶液中添加Cs2 CO3 (52.0 mg，0.16 mmol，0.3 eq)、K2 CO3 (223.0 mg，1.62 mmol，3.0 eq)及NaI (7.0 mg，0.05 mmol，0.1 eq)。在85℃下將混合物攪拌16小時。LCMS顯示反應完成，減壓蒸發混合物並藉由FCC (DCM/MeOH=1/0-20/1)純化，得到呈黃色油狀之150-4 (0.3 g，60%產率)。LCMS: Rt: 1.595min；MS m/z (ESI): 712.7 [M+H]。步驟 4 ：製備化合物 150-5
在0℃下，向150-4 (0.3 g，0.42 mmol，1.0 eq)於DCM (5.0 mL)中之溶液中添加DIEA (108.0 mg，0.84 mmol，2.0 eq)及MsCl (60.0 mg，0.51 mmol，1.2 eq)。將混合物攪拌1小時。TLC顯示反應完成。將反應混合物用CH2 Cl2 (50 mL)稀釋並用水(10 mL)及鹽水(10 mL)洗滌。將合併之有機層經Na2 SO4 乾燥並在真空中移除溶劑，得到呈褐色油狀之150-5 (0.35 g，粗品)。步驟 5 ：製備化合物 150
在0℃下，向150-5 (350 mg，0.44 mmol，1.0 eq)及1-5 (153.0 mg，1.32 mmol，3.0 eq)於THF (5.0 mL)中之溶液中添加DIEA (284.0 mg，2.2 mmol，5.0 eq)及NaI (6.0 mg，0.044 mmol，0.1 eq)。在70℃下將混合物攪拌16小時。LCMS顯示反應完成，減壓蒸發混合物並利用FCC (DCM/MeOH=1/0-20/1)純化，得到呈黃色油狀之150 (18.0 mg，5%產率)。
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.86-0.89 (m, 12H), 1.26-1.54 (m, 52H), 1.57-1.71 (m, 15H), 2.00-2.05 (m, 4H), 2.21-2.24 (m, 2H), 2.58-2.63 (m, 6H), 3.15-3.18 (m, 3H), 3.37-3.43 (m, 2H), 3.54-3.61 (m, 4H), 4.43-4.46 (m, 1H)。LCMS: Rt: 1.310 min；MS m/z (ESI): 808.7[M+H]。6.43 實例 43 ：製備化合物 98
Figure 02_image839
步驟 1 ：製備化合物 98-3
向11-1 (600 mg，0.86 mmol)於CH2 Cl2 (50 mL)中之溶液中添加98-2 (520 mg，2.59 mmol)及Ti(i-PrO)4 (1 mL)。在室溫下攪拌反應3小時。添加NaBH3 CN (280 mg，4.32 mmol)。在室溫下攪拌反應10小時。將反應混合物倒入水(50 ml)中並用CH2 Cl2 (3*50 mL)萃取。將合併之有機層用鹽水洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥並真空濃縮。將粗產物藉由急驟管柱層析法(PE: EtOAc = 1: 2)純化，得到呈黃色油狀之目標產物(400 mg，產率：59%)。LCMS: Rt: 1.531 min；MS m/z (ESI): 877.8 [M+H]。步驟 2 ：製備化合物 98-4
向98-3(450 mg，0.51 mmol)於CH2 Cl2 (10 mL)中之溶液中添加TFA (2 mL)。在室溫下攪拌反應1小時。真空濃縮反應混合物，得到呈黃色油狀之目標產物(400 mg，產率：100%)。LCMS: Rt: 0.965 min；MS m/z (ESI): 777.7 [M+H]。步驟 3 ：製備化合物 98
向98-4(400 mg，0.51 mmol)於CH3 CN (20 mL)中之溶液中添加K2 CO3 (220 mg，1.54 mmol)、NaI(80 mg，0.51 mmol)及2-溴乙醇(100 mg，0.77 mmol)。在80℃下攪拌反應12小時。將反應混合物過濾，真空濃縮。將粗產物藉由製備型HPLC純化，得到呈黃色油狀之目標產物(15 mg，產率：4%)。
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ: 0.87 (t,J = 8 Hz, 12H), 1.26-1.67 (m, 67H), 1.95-2.03 (m, 2H), 2.28-2.51 (m, 11H), 2.89-2.93 (m, 2H), 3.57-3.60 (m, 2H), 3.96-3. (m, 4H)。LCMS: Rt: 0.942 min；MS m/z (ESI):821.6 [M+H]。6.44 實例 44 ：脂質奈米粒子之製備及表徵
簡言之，將本文所提供之陽離子脂質、DSPC、膽固醇及PEG-脂質以50:10:38.5:1.5之莫耳比溶解於乙醇中，並在10至50 mM檸檬酸鹽緩衝液pH = 4中稀釋mRNA。藉由使用微流體設備，以在9-30 mL/min範圍內之總流速，以1:3之體積比混合脂質乙醇溶液與mRNA水溶液，以約10:1至30:1之總脂質與mRNA重量比製備出LNP。使用透析移除乙醇且以DPBS替代。最後，將脂質奈米粒子經0.2 μm無菌過濾器過濾。
藉由動態光散射，使用Malvern Zetasizer Nano ZS (Malvern UK)，使用173° 反向散射偵測模式測定脂質奈米粒子大小。使用Quant-it Ribogreen RNA定量分析套組(Thermo Fisher Scientific, UK)，根據製造商之說明書，測定脂質奈米粒子之包封效率。
如文獻中所報導，LNP調配物之表觀pKa與在活體內LNP對於核酸之遞送效率相關。表觀pKa之範圍在約5至約7之間。使用基於2-(對甲苯胺基)-6-萘磺酸(TNS)之螢光的分析來測定各調配物之表觀pKa。如上文所述，製備出在PBS中包含陽離子脂質/DSPC/膽固醇/DMG-PEG (50 /10 /38.5/1.5 mol%)之LNP調配物。製備TNS於蒸餾水中之300 uM儲備液。在3 mL含有50 mM檸檬酸鈉、50 mM磷酸鈉、50 mM硼酸鈉及30 mM氯化鈉之緩衝溶液(其中pH值在3至9範圍內)中將LNP調配物稀釋至0.1 mg/ml總脂質。添加TNS溶液之等分試樣以得到0.1 mg/ml之最終濃度且在渦旋混合後，在室溫下，在Molecular Devices Spectramax iD3光譜儀中，使用325 nm及435 nm之激發及發射波長量測螢光強度。將S形曲線最佳擬合分析應用於螢光資料且當pH產生半數最大螢光強度時，量測pKa值。6.45 實例 45 ：動物研究
藉由尾靜脈注射將0.5 mg/kg劑量的包封人紅血球生成素(hEPO) mRNA的包含化合物1 – 10之脂質奈米粒子經全身投與6-8週齡之雌性ICR小鼠(Xipuer-Bikai, Shanghai)並在投與後之特定時間點(例如6小時)時收集小鼠血液樣品。除前述測試組外，亦將相同劑量的包封hEPO mRNA的包含二亞油基甲基-4-二甲基胺基丁酸酯(DLin-MC3-DMA，通常縮寫為MC3)之脂質奈米粒子以類似方式投與年齡及性別相當組之小鼠作為陽性對照。
在最後一個取樣時間點後，藉由超劑量CO2 對小鼠實施安樂死。藉由在4℃下以5000 g離心10分鐘，自全血分離出血清，急速冷凍並在-80℃下儲存以進行分析。使用可商購套組(DEP00, R&D systems)，根據製造商之說明書，進行ELSA分析。
自測試組量測的測試脂質奈米粒子之特徵，包括hEPO表現量(μg/ml)列於下表中且繪製於圖 2 中。表 2.
脂質 大小(nm) 多分散性 包封效率 在6小時之表現量(μg/ml) 表觀Pka
1 76.5 0.168 95.7% 16.21 6.40
2 75.3 0.065 96.8% 6.16 6.27
3 58.7 0.060 96.3% 2.63 6.22
4 57.5 0.068 98.1% 0.48 5.87
5 54.0 0.029 96.2% 0.25 6.24
6 60.5 0.109 96.6% 0.00 5.88
7 149.1 0.110 47.0% 0.00 5.39
8 54.7 0.065 96.9% 0.00 5.84
9 77.6 0.106 93.3% 0.86 6.01
10 69.2 0.113 96.0% 0.79 5.83
A 58.5 0.108 100.0% 0.01 6.96
B 79.0 0.060 100.0% 0.44 7.33
C 65.0 0.061 96.9% 2.95 6.46
D 59.2 0.118 95.5% 1.02 6.28
MC3 79.8 0.042 98.5% 2.35 6.33
表 3.
脂質 大小(nm) 多分散性 包封效率 在6小時之表現量(μg/ml) 表觀Pka
11 67.23 0.109 90.9% D 5.662
12 75.86 0.015 99.80% D 5.801
13 89.96 0.095 96.8% C 7.206
14 60.13 0.172 94.9% C 9.356
15 51.17 0.313 89.8% D 9.21
16 54.69 0.225 98.87% D 4.403
17 57.6 0.209 18.18% D
18 71.85 0.15 100.16% C 6.327
20 76.79 0.103 98.1% A 6.252
21 75.26 0.077 100.6% D 7.652
22 71.2 0.081 98.3% D 6.884
23 60.64 0.14 93.9% B
24 64.96 0.077 95.4% C 6.087
25 74.3 0.032 96.7% A 6.334
26 55.51 0.125 96.7% C
27 58.44 0.133 96.7% C 6.153
28 79.82 0.002 96.5% A 6.529
29 85.17 0.078 97.2% A 6.477
30 80.46 0.071 95.9% B
31 71.64 0.076 92.4% C 5.822
32 77.76 0.039 94.3% C 5.941
33 62.2 0.091 94.5% D 5.315
34 63.32 0.095 96.1% D 5.29
35 60.58 0.086 94.8% C 5.945
36 70.36 0.065 98.3% A 5.907
37 84.26 0.034 97.0% A 6.205
38 65.94 0.167 98.7% C 6.172
39 64.4 0.043 98.8% C 6.061
40 66.39 0.081 99.2% C
41 64.04 0.054 97.5% C 5.93
42 65.63 0.065 96.4% C 6.196
43 74.8 0.068 97.3% B
44 83.85 0.063 97.5% B 6.049
45 71.47 0.032 96.6% A
46 110.4 0.073 93.8% C 6.307
47 62.38 0.103 95.3% C
48 72.52 0.065 91.80% A 6.347
49 65.13 0.075 94.1% A 6.249
50 67.68 0.085 94.90% A 6.143
51 59.73 0.073 94.10% A 6.093
52 69.18 0.054 95.70% A
54 102.7 0.051 97.2% D
55 95.51 0.109 96.7% C
56 85.46 0.07 96.4% A 6.466
57 93.52 0.063 96.1% A 6.645
58 74.68 0.067 90.7% A 6.364
59 93.24 0.008 97.7% B 6.682
60 68.6 0.086 92.1% B 6.329
61 65.04 0.087 83.4% A
62 244.8 0.156 36.2% D 6.438
63 94.11 0.088 85.9% B 6.406
64 84.93 0.181 84.1% D
65 63.83 0.066 93.0% A 6.544
66 63.86 0.064 80.0% B 6.036
67 64.75 0.05 79.3% B 6.341
68 56.96 0.052 80.1% C 6.279
69 58.74 0.06 78.3% D
70 77.54 0.034 84.3% A 6.381
71 91.13 0.038 93.0% A 6.613
72 113.9 0.109 93.5% A 6.712
73 78.99 0.027 93.1% C
74 54.58 0.076 93.2% B 6.2
75 62.36 0.032 94.1% A
76 54.94 0.096 91.71% C
77 69.81 0.038 90.06% A 6.352
78 44.47 0.091 92.4% C
79 52.19 0.154 89.2% C 5.735
80 76.71 0.06 85.2% B 6.201
81 75.89 0.028 94.6% A 6.476
82 87.68 0.025 94.7% A 6.406
83 67.62 0.087 93.5% B 6.328
84 65.55 0.083 93.2% B 6.064
85 82.91 0.065 93.7% B 6.46
86 76.56 93.8% C 6.32
87 65.71 0.037 91.2% A 6.515
88 66.89 0.21 97.2% D 7.41
89 84.53 0.028 94.6% A 6.7
90 72 0.067 97.3% B 6.6
91 62.06 0.106 92.1% B 6.257
92 66.94 0.04 95.2% B 6.331
93 93.74 0.041 98.3% A 6.491
94 67.01 0.298 100.3% D
95 82.43 0.285 97.2% D
96 85.98 0.101 96.9% D
97 66.69 0.204 96.8% D
98 86.23 0.105 97.6% D
99 66.06 0.1 100.2% C
100 58.6 0.208 87.7% C 6.187
101 72 0.067 85.5% B 6.071
102 70.49 0.004 94.10% B 6.406
103 67.57 0.054 94.41% C
104 70.93 0.022 89.96% A 6.184
105 92.4 0.042 93.3% A 6.698
106 76.97 0.174 95.14% A
107 106.9 0.11 95.64% A
108 80.78 0.064 95.6% A 6.711
109 73.52 0.06 97.6% A 6.633
110 91.1 0.063 90.0% C 6.696
111 92.3 0.049 89.0% B 6.668
112 49.51 0.111 95.9% C
113 90 0.04 91.2% A 6.728
114 87.92 0.025 89.3% A 6.695
115 65.12 0.117 98.2% A 6.732
116 79.28 0.201 94.5% A 6.795
117 76.79 0.157 95.2% A 6.72
118 62.72 0.057 98.9% A 6.523
119 67.17 0.06 93.2% D
120 59.78 0.1 97.1% B 6.264
121 71.02 0.134 94.5% B
122 57.81 0.044 89.4% A 7.048
123 264.9 0.285 30.1% A
124 64.66 0.061 96.9% A 6.984
125 72.36 0.116 95.6% A 6.833
126 78.17 0.101 100.10% A
127 77.12 0.111 98.70% A
128 79.73 0.107 86.10% A
129 63.13 0.131 91.20% A
130 79.92 0.097 92.50% A
131 79.11 0.064 80.00% A
132 70.33 0.129 88.00% A
133 109.90 0.083 90.6% A 6.668
134 105.50 0.033 87.9% A 6.442
135 104.1 0.035 85.6% C 6.652
136 61.17 0.063 94.29% A
137 60.84 0.029 95.29% A 6.751
138 63.52 0.013 94.50% A 6.688
139 67.31 0.052 92.64% A 6.518
140 138.7 0.075 83.4% A 6.981
141 71.93 0.036 89.1% A 6.766
142 81.13 0.027 85.3% A 6.678
143 58.61 0.032 93.2% A 6.836
144 64.08 0.035 95.0% A 6.794
145 61.5 0.04 93.1% A 6.634
146 66.27 0.052 94.6% B 7.496
147 69.58 0.082 91.4% A 7.304
148 83.84 0.046 85.6% A 7.146
149 72.85 0.07 86.3% B 6.810
150 66.33 0.06 93.5% A 6.918
151 73.86 0.061 94.0% C 6.948
152 92.17 0.026 88.2% A 6.686
153 107.4 0.059 85.5% A 6.621
154 104.8 0.068 88.4% A 6.836
155 64.39 0.035 98.4% B 6.797
A：≥ 2 B：≥ 1且＜ 2 C：≥ 0.1且＜ 1 D：＜ 0.1
圖 1 示出形成脂質奈米粒子之實例，其涉及使用陽離子脂質。圖 2 顯示在動物研究中不同脂質化合物對hEPO表現之影響。
Figure 12_A0101_SEQ_0001
Figure 110112766-A0101-11-0001-1

Claims (63)

  1. 一種式(I)之化合物，
    Figure 03_image001
    (I)， 或其醫藥學上可接受之鹽、前藥或立體異構物，其中： G1 及G2 各自獨立地為鍵、C2 -C12 伸烷基或C2 -C12 伸烯基，其中該伸烷基或伸烯基中之一或多個-CH2 -視情況經-O-置換； L1 係–OC(=O)R1 、-C(=O)OR1 、-OC(=O)OR1 、-C(=O)R1 、-OR1 、-S(O)x R1 、-S-SR1 、-C(=O)SR1 、-SC(=O)R1 、-NRa C(=O)R1 、-C(=O)NRb Rc 、-NRa C(=O)NRb Rc 、-OC(=O)NRb Rc 、-NRa C(=O)OR1 、-SC(=S)R1 、-C(=S)SR1 、-C(=S)R1 、-CH(OH)R1 、-P(=O)(ORb )(ORc )、-(C6 -C10 伸芳基)-R1 、-(6至10員伸雜芳基)-R1 或R1 ； L2 係–OC(=O)R2 、-C(=O)OR2 、-OC(=O)OR2 、-C(=O)R2 、-OR2 、-S(O)x R2 、-S-SR2 、-C(=O)SR2 、-SC(=O)R2 、-NRd C(=O)R2 、-C(=O)NRe Rf 、-NRd C(=O)NRe Rf 、-OC(=O)NRe Rf 、-NRd C(=O)OR2 、-SC(=S)R2 、-C(=S)SR2 、-C(=S)R2 、-CH(OH)R2 、-P(=O)(ORe )(ORf )、-(C6 -C10 伸芳基)-R2 、-(6至10員伸雜芳基)-R2 或R2 ； R1 及R2 各自獨立地為C6 -C32 烷基或C6 -C32 烯基； Ra 、Rb 、Rd 及Re 各自獨立地為H、C1 -C24 烷基或C2 -C24 烯基； Rc 及Rf 各自獨立地為C1 -C32 烷基或C2 -C32 烯基； G3 係C2 -C24 伸烷基、C2 -C24 伸烯基、C3 -C8 伸環烷基或C3 -C8 伸環烯基； R3 係-N(R4 )R5 ； R4 係C3 -C8 環烷基、C3 -C8 環烯基、4至8員雜環基或C6 -C10 芳基；或R4 、G3 或G3 之一部分連同其所連接之氮一起形成環狀部分； R5 係C1 -C12 烷基或C3 -C8 環烷基；或R4 、R5 連同其所連接之氮一起形成環狀部分； x係0、1或2；且 其中各烷基、烯基、環烷基、環烯基、雜環基、芳基、伸烷基、伸烯基、伸環烷基、伸環烯基、伸芳基、伸雜芳基及環狀部分獨立地視情況經取代。
  2. 一種式(II)之化合物，
    Figure 03_image003
    (II)， 或其醫藥學上可接受之鹽、前藥或立體異構物，其中：
    Figure 03_image007
    係單鍵或雙鍵； G1 及G2 各自獨立地為鍵、C2 -C12 伸烷基或C2 -C12 伸烯基，其中該伸烷基或伸烯基中之一或多個-CH2 -視情況經-O-置換； L1 係–OC(=O)R1 、-C(=O)OR1 、-OC(=O)OR1 、-C(=O)R1 、-OR1 、-S(O)x R1 、-S-SR1 、-C(=O)SR1 、-SC(=O)R1 、-NRa C(=O)R1 、-C(=O)NRb Rc 、-NRa C(=O)NRb Rc 、-OC(=O)NRb Rc 、-NRa C(=O)OR1 、-SC(=S)R1 、-C(=S)SR1 、-C(=S)R1 、-CH(OH)R1 、-P(=O)(ORb )(ORc )、-(C6 -C10 伸芳基)-R1 、-(6至10員伸雜芳基)-R1 或R1 ； L2 係–OC(=O)R2 、-C(=O)OR2 、-OC(=O)OR2 、-C(=O)R2 、-OR2 、-S(O)x R2 、-S-SR2 、-C(=O)SR2 、-SC(=O)R2 、-NRd C(=O)R2 、-C(=O)NRe Rf 、-NRd C(=O)NRe Rf 、-OC(=O)NRe Rf 、-NRd C(=O)OR2 、-SC(=S)R2 、-C(=S)SR2 、-C(=S)R2 、-CH(OH)R2 、-P(=O)(ORe )(ORf )、-(C6 -C10 伸芳基)-R2 、-(6至10員伸雜芳基)-R2 或R2 ； R1 及R2 各自獨立地為C6 -C32 烷基或C6 -C32 烯基； Ra 、Rb 、Rd 及Re 各自獨立地為H、C1 -C24 烷基或C2 -C24 烯基； Rc 及Rf 各自獨立地為C1 -C32 烷基或C2 -C32 烯基； G4 係鍵、C1 -C23 伸烷基、C2 -C23 伸烯基、C3 -C8 伸環烷基或C3 -C8 伸環烯基； R3 係-N(R4 )R5 ； R4 係C1 -C12 烷基、C3 -C8 環烷基、C3 -C8 環烯基、4至8員雜環基或C6 -C10 芳基；或R4 、G3 或G3 之一部分，連同其所連接之氮一起形成環狀部分； R5 係C1 -C12 烷基或C3 -C8 環烷基；或R4 、R5 連同其所連接之氮一起形成環狀部分； x係0、1或2；且 其中各烷基、烯基、環烷基、環烯基、雜環基、芳基、伸烷基、伸烯基、伸環烷基、伸環烯基、伸芳基、伸雜芳基及環狀部分獨立地視情況經取代。
  3. 如請求項2之化合物，其中
    Figure 03_image007
    係單鍵。
  4. 如請求項2之化合物，其中
    Figure 03_image007
    係雙鍵。
  5. 如請求項1至4中任一項之化合物，其中G1 及G2 各自獨立地為C2 -C12 伸烷基。
  6. 如請求項5之化合物，其中G1 及G2 各自獨立地為C5 伸烷基。
  7. 如請求項5之化合物，其係式(I-A)之化合物：
    Figure 03_image014
    (I-A)， 其中y及z各自獨立地為2至12之整數， 或其醫藥學上可接受之鹽、前藥或立體異構物。
  8. 如請求項5之化合物，其係式(II-A)之化合物：
    Figure 03_image016
    (II-A)， 其中y及z各自獨立地為2至12之整數， 或其醫藥學上可接受之鹽、前藥或立體異構物。
  9. 如請求項7或8之化合物，其中y係5且z係5。
  10. 如請求項1至9中任一項之化合物，其中L1 係–OC(=O)R1 、-C(=O)OR1 或-C(=O)NRb Rc ；且L2 係–OC(=O)R2 、-C(=O)OR2 或-C(=O)NRe Rf 。
  11. 如請求項1之化合物，其係式(I-B)、(I-B’)、(I-B”)、(I-C)、(I-D)或(I-E)之化合物：
    Figure 03_image022
    (I-B)、
    Figure 03_image024
    (I-B’)、
    Figure 03_image026
    (I-B”)、
    Figure 03_image028
    (I-C)、
    Figure 03_image030
    (I-D)或
    Figure 03_image032
    (I-E)，
    或其醫藥學上可接受之鹽、前藥或立體異構物。
  12. 如請求項2之化合物，其係式(II-B)、(II-B’)、(II-B”)、(II-C)、(II-D)或(II-E)之化合物：
    Figure 03_image034
    (II-B)、
    Figure 03_image036
    (II-B’)、
    Figure 03_image038
    (II-B”)、
    Figure 03_image040
    (II-C)、
    Figure 03_image042
    (II-D)或
    Figure 03_image044
    (II-E)，
    或其醫藥學上可接受之鹽、前藥或立體異構物。
  13. 如請求項11之化合物，其係式(I-F)、(I-F’)、(I-F”)、(I-G)、(I-H)或(I-I)之化合物：
    Figure 03_image070
    (I-F)、
    Figure 03_image072
    (I-F’)、
    Figure 03_image074
    (I-F”)、
    Figure 03_image076
    (I-G)、
    Figure 03_image078
    (I-H)或
    Figure 03_image080
    (I-I)，
    其中y及z各自獨立地為2至12之整數， 或其醫藥學上可接受之鹽、前藥或立體異構物。
  14. 如請求項12之化合物，其係式(II-F)、(II-F’)、(II-F”)、(II-G)、(II-H)或(II-I)之化合物：
    Figure 03_image082
    (II-F)、
    Figure 03_image084
    (II-F’)、
    Figure 03_image086
    (II-F”)、
    Figure 03_image088
    (II-G)、
    Figure 03_image090
    (II-H)或
    Figure 03_image092
    (II-I)，
    其中y及z各自獨立地為2至12之整數， 或其醫藥學上可接受之鹽、前藥或立體異構物。
  15. 如請求項13或14之化合物，其中y係5且z係5。
  16. 如請求項1至15中任一項之化合物，其中G3 係C2 -C24 伸烷基。
  17. 如請求項16之化合物，其中G3 係C2 -C4 伸烷基。
  18. 如請求項16或17之化合物，其中G3 經一或多個側氧基取代。
  19. 如請求項1之化合物，其係式(I-J)、(I-J’)、(I-J”)、(I-K)、(I-L)或(I-M)之化合物：
    Figure 03_image118
    (I-J)、
    Figure 03_image120
    (I-J’)、
    Figure 03_image122
    (I-J”)、
    Figure 03_image124
    (I-K)、
    Figure 03_image126
    (I-L)或
    Figure 03_image128
    (I-M)，
    其中y及z各自獨立地為2至12之整數，且 s係2至24之整數， 或其醫藥學上可接受之鹽、前藥或立體異構物。
  20. 如請求項19之化合物，其中y係5，z係5，且s係2。
  21. 如請求項19之化合物，其中y係5，z係5，且s係4。
  22. 如請求項1至15中任一項之化合物，其中G4 係鍵。
  23. 如請求項1至15中任一項之化合物，其中G4 係C1 -C23 伸烷基。
  24. 如請求項2之化合物，其係式(II-J)、(II-J’)、(II-J”)、(II-K)、(II-L)或(II-M)之化合物：
    Figure 03_image130
    (II-J)、
    Figure 03_image132
    (II-J’)、
    Figure 03_image134
    (II-J”)、
    Figure 03_image136
    (II-K)、
    Figure 03_image138
    (II-L)或
    Figure 03_image140
    (II-M)，
    其中y及z各自獨立地為2至12之整數，且 u係0至23之整數， 或其醫藥學上可接受之鹽、前藥或立體異構物。
  25. 如請求項24之化合物，其中y係5，z係5，且u係0。
  26. 如請求項1至25中任一項之化合物，其中R5 未經取代。
  27. 如請求項1至25中任一項之化合物，其中R5 經一或多個羥基取代。
  28. 如請求項1之化合物，其係式(I-N)、(I-N’)、(I-N”)、(I-O)、(I-P)或(I-Q)之化合物：
    Figure 03_image166
    (I-N)、
    Figure 03_image168
    (I-N’)、
    Figure 03_image170
    (I-N”)、
    Figure 03_image172
    (I-O)、
    Figure 03_image174
    (I-P)或
    Figure 03_image176
    (I-Q)，
    其中y及z各自獨立地為2至12之整數， s係2至24之整數， t係1至12之整數，且 R6 係氫或羥基， 或其醫藥學上可接受之鹽、前藥或立體異構物。
  29. 如請求項2之化合物，其係式(II-N)、(II-N’)、(II-N”)、(II-O)、(II-P)或(II-Q)之化合物：
    Figure 03_image178
    (II-N)、
    Figure 03_image180
    (II-N’)、
    Figure 03_image182
    (II-N”)、
    Figure 03_image184
    (II-O)、
    Figure 03_image186
    (II-P)或
    Figure 03_image188
    (II-Q)，
    其中y及z各自獨立地為2至12之整數， u係0至23之整數， t係1至12之整數，且 R6 係氫或羥基， 或其醫藥學上可接受之鹽、前藥或立體異構物。
  30. 如請求項1至25中任一項之化合物，其中R5 經一或多個羥基及一或多個側氧基取代。
  31. 如請求項30之化合物，其中R5 係–CH2 CH2 OH。
  32. 如請求項1至25中任一項之化合物，其中R5 係-(CH2 )p Q、-(CH2 )p CHQR、-CHQR或-CQ(R)2 ，其中Q係C3 -C8 環烷基、C3 -C8 環烯基、C3 -C8 環炔基、4至8員雜環基、C6 -C10 芳基、5至10員雜芳基、-OR、-O(CH2 )p N(R)2 、-C(O)OR、-OC(O)R、-CX3 、-CX2 H、-CXH2 、-CN、-N(R)2 、-C(O)N(R)2 、-N(R)C(O)R、-N(R)S(O)2 R、-N(R)C(O)N(R)2 、-N(R)C(S)N(R)2 、-N(R)R22 、-O(CH2 )p OR、-N(R)C(=NR23 )N(R)2 、-N(R)C(=CHR23 )N(R)2 、-OC(O)N(R)2 、-N(R)C(O)OR、-N(OR)C(O)R、-N(OR)S(O)2 R、-N(OR)C(O)OR、-N(OR)C(O)N(R)2 、-N(OR)C(S)N(R)2 、-N(OR)C(=NR23 )N(R)2 、-N(OR)C(=CHR23 )N(R)2 、-C(=NR23 )N(R)2 、-C(=NR23 )R、-C(O)N(R)OR或-C(R)N(R)2 C(O)OR，且各p獨立地為1、2、3、4或5；  R22 係C3 -C8 環烷基、C3 -C8 環烯基、C3 -C8 環炔基、4至8員雜環基、C6 -C10 芳基或5至10員雜芳基； R23 係H、-CN、-NO2 、C1 -C6 烷基、-OR、-S(O)2 R、-S(O)2 N(R)2 、C2 -C6 烯基、C3 -C8 環烷基、C3 -C8 環烯基、C3 -C8 環炔基、4至8員雜環基、C6 -C10 芳基或5至10員雜芳基； 各R獨立地為H、C1 -C3 烷基或C2 -C3 烯基；或N(R)2 部分中之兩個R連同其所連接之氮一起形成環狀部分；且 各X獨立地為F、CI、Br或I。
  33. 如請求項1之化合物，其係式(I-R)、(I-R’)、(I-R”)、(I-S)、(I-T)或(I-U)之化合物：
    Figure 03_image214
    (I-R)、
    Figure 03_image216
    (I-R’)、
    Figure 03_image218
    (I-R”)、
    Figure 03_image220
    (I-S)、
    Figure 03_image222
    (I-T)或
    Figure 03_image224
    (I-U)，
    其中y及z各自獨立地為2至12之整數， s係2至24之整數， t係1至12之整數，且 R6 係氫或羥基， 或其醫藥學上可接受之鹽、前藥或立體異構物。
  34. 如請求項2之化合物，其係式(II-R)、(II-R’)、(II-R”)、(II-S)、(II-T)或(II-U)之化合物：
    Figure 03_image226
    (II-R)、
    Figure 03_image228
    (II-R’)、
    Figure 03_image230
    (II-R”)、
    Figure 03_image232
    (II-S)、
    Figure 03_image234
    (II-T)或
    Figure 03_image236
    (II-U)，
    其中y及z各自獨立地為2至12之整數， u係0至23之整數， t係1至12之整數，且 R6 係氫或羥基， 或其醫藥學上可接受之鹽、前藥或立體異構物。
  35. 如請求項2至34中任一項之化合物，其中R4 係C1 -C12 烷基。
  36. 如請求項1至34中任一項之化合物，其中R4 係C3 -C8 環烷基。
  37. 如請求項1至36中任一項之化合物，其中R4 未經取代。
  38. 如請求項1至37中任一項之化合物，其中R1 及R2 各自獨立地為支鏈C6 -C24 烷基或支鏈C6 -C24 烯基。
  39. 如請求項38之化合物，其中R1 及R2 各自獨立地為-R7 -CH(R8 )(R9 )，其中R7 係C1 -C5 伸烷基，且R8 及R9 獨立地為C2 -C10 烷基或C2 -C10 烯基。
  40. 如請求項1至39中任一項之化合物，其中Ra 、Rb 、Rd 及Re 各自獨立地為H。
  41. 如請求項1至40中任一項之化合物，其中Rc 及Rf 各自獨立地為支鏈C6 -C24 烷基或支鏈C6 -C24 烯基。
  42. 如請求項41之化合物，其中Rc 及Rf 各自獨立地為-R7 -CH(R8 )(R9 )，其中R7 係C1 -C5 伸烷基，且R8 及R9 獨立地為C2 -C10 烷基或C2 -C10 烯基。
  43. 一種表1中之化合物，或其醫藥學上可接受之鹽、前藥或立體異構物。
  44. 一種組成物，其包含如請求項1至43中任一項之化合物，及治療劑或預防劑。
  45. 如請求項44之組成物，其進一步包含一或多種結構脂質。
  46. 如請求項45之組成物，其中該一或多種結構脂質係DSPC。
  47. 如請求項45或46之組成物，其中該化合物與該等結構脂質之莫耳比在約2:1至約8:1之範圍內。
  48. 如請求項44至47中任一項之組成物，其進一步包含類固醇。
  49. 如請求項48之組成物，其中該類固醇係膽固醇。
  50. 如請求項48或49之組成物，其中該化合物與該類固醇之莫耳比在約5:1至約1:1之範圍內。
  51. 如請求項44至50中任一項之組成物，其中該組成物進一步包含一或多種聚合物結合之脂質。
  52. 如請求項51之組成物，其中該聚合物結合之脂質係DMG-PEG2000或DMPE-PEG2000。
  53. 如請求項51或52之組成物，其中該化合物與該等聚合物結合之脂質的莫耳比在約100:1至約20:1之範圍內。
  54. 如請求項44至53中任一項之組成物，其中該治療劑或預防劑包含至少一個編碼抗原或其片段或抗原決定基之mRNA。
  55. 如請求項54之組成物，其中該mRNA係單順反子mRNA。
  56. 如請求項54之組成物，其中該mRNA係多順反子mRNA。
  57. 如請求項54至56中任一項之組成物，其中該抗原係致病性抗原。
  58. 如請求項54至56中任一項之組成物，其中該抗原係腫瘤相關抗原。
  59. 如請求項54至58中任一項之組成物，其中該mRNA包含一或多種功能性核苷酸類似物。
  60. 如請求項59之組成物，其中該功能性核苷酸類似物係選自以下之一或多種：假尿苷、1-甲基-假尿苷及5-甲基胞嘧啶。
  61. 如請求項44至60中任一項之組成物，其中該組成物係奈米粒子。
  62. 一種脂質奈米粒子，其包含如請求項1至43中任一項之化合物或如請求項44至60中任一項之組成物。
  63. 一種醫藥組成物，其包含如請求項1至43中任一項之化合物、如請求項44至60中任一項之組成物或如請求項62之脂質奈米粒子，及醫藥學上可接受之賦形劑或稀釋劑。
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