TW202200537A - 新穎之氫醌衍生物 - Google Patents

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奧利維爾 馬丁
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Abstract

本發明提供新穎氫醌衍生物及其前藥、新穎製備方法、新穎關鍵中間體、以及治療及/或預防包括自體免疫、免疫、風濕病學、血管病症、眼科病症、纖維變性病症、代謝及胃腸病症、神經發炎性及神經退化性疾病、贅生物及癌症相關病症、激素相關疾病及由病毒及細菌感染性疾病引起的免疫病症及其等之併發症的醫藥組成物及方法。

Description

新穎之氫醌衍生物
本發明大體上關於新穎氫醌衍生物、其製備及藉由將此種化合物投予需要的溫血動物來治療病症的方法。本發明也關於可用於預防及/或治療以下者的化合物：自體免疫、免疫、風濕病學、血管病症、眼科病症、纖維變性病症、代謝及胃腸病症、神經發炎性及神經退化性疾病、贅生物及癌症相關病症、激素相關疾病及由病毒及細菌感染性疾病引起的免疫病症及其等之併發症。
一些基於氫醌的衍生物(像是例如2,5-二羥基苯磺酸衍生物且特別為羥苯磺酸鈣(calcium dobesilate)、止血敏(ethamsylate)及過矽酸鈣(persilate))為本領域已知用於治療男性性功能障礙及其他內皮源性血管病症的活性劑，可單獨使用或與其他藥劑組合使用。例如，US專利第6,147,112號描述一種使用2,5-二羥基苯磺酸衍生物，較佳羥苯磺酸鈣、止血敏及過矽酸鈣的方法。羥苯磺酸鈣或氫醌磺酸鈣(化學名稱為2,5-二羥基苯磺酸鈣鹽)以Dexium (Delalande)及Doxium (Carrion)販售，且其等之製備方法描述於US專利第3,509,207號。
許多含有酚或兒茶酚基團的藥物在口服投予後的吸收期間會在羥基上過早代謝。由於使用的保護基太不穩定(O═COR或O═CR)或太穩定(CH3 )，先前對保護羥基的努力通常並不成功。因此，本發明的目的是提供新穎的氫醌衍生物、其藥學上可接受鹽及調配物。此等新穎氫醌衍生物具有特別有效的抗纖維變性、抗發炎及抗血管生成性質。
國際公開WO2018160618A1揭示某些經取代的氫醌、1,4-醌、兒茶酚、1,2-醌、蒽醌及蒽氫醌，作為新興技術例如介導的燃料電池或有機介體液流電池中的氧化還原介體。
Richter等人在Synthesis, 1976, 1976(3), 192-194揭示雙-N-芳基胺基甲酸酯及2,5-二羥基-3,6-雙[N-芳基甲醯胺基]-1,4-苯并醌以及其從2,5-二羥基-1,4-苯并醌及異氰酸芳基酯的製備。
日本公開JP 51026839A揭示苯甲醯苯胺I (R = H、OH)，其具有抗結核、止痛、抗發炎及尿酸排泄作用：
Figure 02_image005
苯甲醯苯胺I
US核准專利US 3,973,038也揭示具有以下通式的苯甲醯基苯胺化合物：
Figure 02_image007
其中(R1 = OH、醯氧基；R2 = H、OH、低碳數烷基、鹵素、醯氧基；R3 = Cl、Br、低碳數烷基；R4 = OH、NH2 、低碳數烷氧基、醯氧基；R5 = H、鹵素、CO2H、低碳數烷基、醯氧基)具有活體內 酶抑制性質、特別是組織胺去乙醯酶及黃嘌呤氧酶。
然而，先前技術文獻皆未揭示本發明新穎類型的氫醌衍生物化合物，其對於預防及/或治療各種疾病特別有用，所述疾病包括自體免疫、免疫、風濕病學、血管病症、眼科病症、纖維變性病症、代謝及胃腸病症、神經發炎性及神經退化性疾病、贅生物及癌症相關病症、激素相關疾病及由病毒及細菌感染性疾病引起的免疫病症及其等之併發症。
本發明也關於諸如糖尿病及肥胖症的代謝病症的治療、預防及減輕。隨著餐後血糖水平的上升，分泌胰島素並刺激周圍組織的細胞(骨骼肌及脂肪)主動吸收血液中的葡萄糖作為能量來源。由於胰島素分泌或作用不良所導致的血糖調控喪失通常導致諸如糖尿病的代謝紊亂，可能被肥胖共同觸發或進一步加劇。由於此等情況通常有致命性，因此需要採取恢復血流中足夠的葡萄糖清除的策略。隨著工業化國家人口的年齡增長及久坐不動的生活方式變得越來越普遍，代謝性病症，特別是葡萄糖及脂質調節性病症正變得越來越普遍。此類病症經常相互關聯，並且經常是彼此的預測因素或結果。
例如，糖尿病是由胰島素阻抗及胰臟β細胞分泌胰島素缺陷的組合引起的。具有胰島素阻抗的個體經常患有腹部肥胖、血脂異常、高血壓、葡萄糖不耐受性及凝血酶原病況(prothrombitic state)(代謝症候群)。相應地，肥胖個體整體而言獲得胰島素阻抗的風險更高。因此，代謝途徑的破壞會引發多種病症，諸如血內脂質過多、肥胖症、糖尿病、胰島素阻抗、葡萄糖不耐受性、高血糖症、代謝症候群及高血壓，進而可能引發進一步的代謝功能不良，導致全身性疾病，並使個體處於罹患其他併發症及過早發病的風險中。葡萄糖及脂質的水平部分受肝臟的調節，肝臟在葡萄糖、蛋白質及脂質的合成、儲存、分泌、轉化及分解發揮作用。疾病或外傷會大大降低肝臟進行此等正常活動的能力。因此，肝功能不良的大多數臨床表現源於細胞損傷及正常肝功能的損害。肝功能不良可能是遺傳病況、發炎疾病、毒素(諸如藥物及酒精)、免疫病症、血管病症或代謝病況所造成。無論原因為何，肝損傷皆可對代謝過程的功能以及血糖及血脂水平的調節產生全身性影響，使慢性疾病狀態加劇，並導致進一步疾病及發病的風險增加。血糖升高及降低都會觸發經設計用於恢復血糖調控葡萄糖清除。低血糖會觸發胰高血糖素從胰臟a細胞的釋放。高血糖會觸發胰島素從胰臟b細胞釋放。腦下垂體釋放的ACTH及生長激素藉由抑制肝外組織的攝取來增加血糖。葡萄糖皮質素也藉由抑制葡萄糖的攝取來增加血糖水平。皮質醇是從腎上腺皮質釋放的主要糖皮質素，其是根據循環ACTH的增加而分泌。腎上腺髓質激素、腎上腺素、藉由回應應力刺激而激活肝醣分解作用來刺激葡萄糖的產生。影響葡萄糖及脂質代謝的代謝紊亂，諸如血內脂質過多、肥胖症、糖尿病、胰島素阻抗、高血糖症、葡萄糖不耐受性、代謝症候群及高血壓對健康產生長期影響，導致包括心血管疾病及過早發病的慢性病況。這種代謝及心血管疾病可能相互關聯、加重或彼此觸發，並產生難以中斷的反饋機制。當前用於代謝及心血管疾病的藥物治療包括降脂藥、降糖藥、抗高血壓藥、飲食及運動的組合。然而，複雜的治療方案可能會導致多藥問題，如副作用增加、藥物相互作用、依從性下降以及用藥錯誤增加。因此，本領域迫切需要確認新穎化合物、調配物及方法，以安全有效地治療代謝及心血管性疾病以及與代謝病症有關的病況。
代謝病況的實例包括但不限於疼痛、傷口癒合、發燒、神經發炎性及神經退化性病況、發炎、產熱、熱療、三酸甘油酯分解、糖分解、克氏循環(Krebs cycle)、發酵、光合作用、代謝率、生物及非生物壓力，分泌、氧化應力、應力、贅生物生長、皮膚病況、心血管病況、神經發炎性及神經退化性病況、精神及行為病症。這樣的過程或病況可以發生在細胞、一組細胞或整個生物體。
分子醫學的最新進展已導致在贅生物疾病的診斷及治療取得一定的進展。儘管獲得部分成功，但此等病理仍然是一項巨大的挑戰。對於某些類型的癌症，當前的治療在某些情況下基於多種原因而失敗。一方面，其是腫瘤細胞的固有抗性，其具有不斷突變及逃避治療的能力。另一方面，其也是腫瘤環境的異質性。從基因組輪廓的觀點來看，對於個體受試者而言，相同類型的腫瘤存在很大差異，這指示所謂「個人」療法的必要性。更大的問題是相同腫瘤中突變的異質性，正如最近針對腎臟腫瘤所顯示者，這種情況也可能在其他類型的腫瘤中出現。基於這個原因，有必要尋找新的方案及腫瘤中所有或大多數惡性細胞共有的不變的干預點，並且較佳地影響癌細胞的基本功能。似乎這種干預點可能是在代謝水平上，例如線粒體，即細胞器，此等細胞器對於細胞中所有生理和病理生理過程必需能量的產生至關重要。儘管腫瘤細胞在很大程度上利用所謂的需氧糖解來產生能量，但線粒體呼吸(即與ATP形成有關的氧氣消耗)是大多數(如果不是全部)類型的腫瘤所固有的。因此，在本領域中存在未滿足且迫切的需要，以鑑定安全有效地治療此類贅生物疾病的新穎化合物、調配物和方法。
本發明提供新穎氫醌衍生物、新穎製備方法、及新穎關鍵中間體。本發明也關於醫藥組成物，其包含治療有效量的此種氫醌衍生物及藥學上可接受的賦型劑。
本發明進一步提供一種治療及/或預防血管生成(血管)、發炎及/或纖維變性病理生物學的方法，因為其等具有抗纖維變性、抗發炎及抗血管生成功效。因此，本發明最終提供一種治療及/或預防包括免疫/風濕病學/血管病症、眼科病症、纖維變性病症、代謝&胃腸病症、贅生物及癌症相關病症的疾病或病症的方法，所述方法包含投予需要的個體治療有效劑量的如上所述的本發明的化合物及/或醫藥組成物。特別的，本發明提供一種治療及/或預防自體免疫、免疫、風濕病學、血管病症、眼科病症、纖維變性病症、代謝及胃腸病症、神經發炎性及神經退化性疾病、贅生物及癌症相關病症、激素相關疾病及由病毒及細菌感染性疾病引起的免疫病症及其等之併發症的疾病或病症的方法。
本文揭示可用於治療罹患疾病、病症、或功能障礙的個體的新穎化合物。此種疾病、疾病、或功能障礙的實例包括但不限於自體免疫、代謝、發炎、退化性及贅生物病症，特別是發炎病理、血管生成疾病及/或纖維變性病症，諸如糖尿病性視網膜病變、糖尿病性腎病變、關節黏連性脊椎炎、慢性胰臟炎、肝纖維化、腎纖維化、以及胰功能障礙引起的代謝疾病。
在下文中，除非另有說明，否則可以利用本文揭示的新穎化合物治療的疾病、病症、或功能障礙的集合統稱為「醫學病況」。
如本文所用，用語「個體」包含任何及所有生物，並且包括用語「患者」。待根據本文描述的方法治療的個體可以是已經由執業醫師診斷為罹患醫學病況的個體。可以藉由任何合適的方式進行診斷。本領域技術人員將理解，待根據本文之揭示內容治療的個體可能已經接受標準測試以診斷醫學病況。如一般技藝人士已知的，本文揭示類型的醫學病況的臨床特徵根據致病機制而變化。
本文中的「治療」是指將揭示的化合物用於治療目的。可以例如對罹患醫學病況的個體投予治療性治療，以改善或穩定個體的病況。因此，在本文描述的申請專利範圍及具體實例中，治療是指出於治療目的而接受本文揭示的方法的個體。
如本文所用，前藥是指任何廣泛的前藥策略。例如，前藥策略在1958年被Adrian Albert正式識別出(Albert, A. Chemical aspects of selective toxicity. Nature, 1958, 182, 421–422)，但是在上世紀早期即已開始，例子為六亞甲四胺、非那西汀(phenacetin)及普隆托西(prontosil)。前藥通常為具有很少或沒有藥理活性但具有內在結構不穩定性的分子，無論是偶然還是設計之故，所述結構不穩定性允許活體內生物轉化為活性藥物。轉化可以藉由化學或酶促過程或兩者的組合進行。活性分子通常與不欲的理化性質有關，對其輸送至適當的生物目標帶來嚴重挑戰。前藥可以改善通常歸因於肝臟代謝的代謝不穩定性。類似地，不要的藥物腸道代謝可以藉由選擇性的前藥策略來克服。這種不穩定性會大大減少到達體循環及其目標的藥物總量。前藥可藉由掩蓋代謝不穩定但在藥理上必要的官能基(諸如酚)以避免快速代謝，從而保護活性藥物不受到這種首渡效應(first-pass effect)。
經過藥物結構修飾獲得的前藥被設計為影響分子的固有物化性質使其能夠輸送。此等開發並非總在發現階段就被整合到新分子的設計中。通常，模擬最適化是前進的較佳途徑。實施早期的前藥策略可能會導致更快的臨床開發，最終使藥物產品商業化。
可以應用許多前藥策略來影響母體藥物的親脂性。藥物的親脂性藉由短鏈烴前驅部分掩蓋其極性及離子化功能而得到改善。親水性羥基、羧基、磷酸根或胺以及其他帶負電荷或帶正電荷的基團已成功轉化成更具親脂性的烷基或芳基酯或N-醯基衍生物，其藉由普遍存在的酯酶或肽酶迅速水解回體內的母體藥物。
本發明因此提供式(I)化合物：
Figure 02_image003
式(I) 其中： Ra 、Rb = H、C1-4 醯基、芳基C1-4 烷基、C6 -C10 芳基CO、HOOC(CH2 )n CO、C1 -C7 烷基NHCO、膦醯基(phosphono)、膦醯氧基甲基、C1 -C6 醯氧基甲基、C1 -C6 醯氧基-1-乙基、C1 -C6 烷氧基羰氧基甲基、或C1 -C6 烷氧基羰氧基-1-乙基； R1 = COOR4 、(CH2 )n COOR4 、SO3 H、(CH2 )n SO3 H、或CONH-R10 ； R2 及R3 為H或R5 ，其限制條件為當R2 及R3 其中一者為R5 時，另一者為H，且當R2 及R3 其中一者為H時，另一者為R5 ； R4 = H、C1-4 烷基、芳基C1-4 烷基、官能化C1 -C6 烷基，其包括N-
Figure 110108763-A0304-12-01
啉基-C1 -C6 烷基、吡咯啶基-C1 -C6 烷基、N-甲基哌
Figure 110108763-A0304-12-02
基-C1-C6烷基、C6-C10芳基，其包括o -甲氧基苯基(癒創木酚酯)、C1 -C6 醯氧基甲基、C1 -C6 醯氧基-1-乙基、C1 -C6 烷氧基羰氧基甲基、C1 -C6 烷氧基羰氧基-1-乙基、或(氧代二氧呃基)甲基； R5 =R6 、R7 或R8 ； R6 =CONH-R9 、CONHCOR9 、CONH(CH2 )n -R9 、或CONHCH(COOR4 )(CH2 )k R9 、雜芳基-R9 ，其中k = 0-4； R7 =苯并雜芳基，其經至少一或多個選自以下者的基團取代：COOR4 、(CH2 )n COOR4 、SO3 H、(CH2 )n SO3 H、OR4 、唑[5-員含氮雜環]、或氟； R8 = (CH2 )m X(CH2 )p R9 ； X = O、S、SO2 、NH、NAc、或N(CH2 )q R9 ； R9 =芳基或雜芳基，其經至少一或多個選自以下者的基團取代：COOR4 、(CH2 )n COOR4 、(CH2 )n SO3 H、OR4 、SO3 H、唑[5-員含氮雜環]、氟、C=O、NHCO-R10 ； R10 =芳基、或雜芳基，其經至少一或多個選自以下者的基團取代：COOR4 、(CH2 )n COOR4 、(CH2 )n SO3 H、OR4 、SO3 H、唑[5-員含氮雜環]、氟； 其中R9 及R10 的芳基是選自苯基、萘基、聯苯基的含6至14個碳原子的芳香族基團；且R9 及R10 的雜芳基為含有1至14個碳原子及一或多個氮的芳香族基團；且n、m、p及q獨立地為1-4。
本發明進一步提供式(I)化合物：
Figure 02_image003
(I) 其中： Ra 、Rb =H、C1-4 醯基、芳基C1-4 烷基、C6 -C10 芳基CO、HOOC(CH2 )n CO、C1 -C7 烷基NHCO、膦醯基、膦醯氧基甲基、C1 -C6 醯氧基甲基、C1 -C6 醯氧基-1-乙基、C1 -C6 烷氧基羰氧基甲基、或C1 -C6 烷氧基羰氧基-1-乙基； R1 = COOR4 、(CH2 )n COOR4 、SO3 H、(CH2 )n SO3 H、或CONH-R10 ； R2 及R3 為H或R5 ，其限制條件為當R2 及R3 其中一者為R5 時，另一者為H，且當R2 及R3 其中一者為H時，另一者為R5 ； R4 = H、C1-4 烷基、芳基C1-4 烷基、官能化C1 -C6 烷基，其包括N-
Figure 110108763-A0304-12-01
啉基-C1 -C6 烷基、吡咯啶基-C1 -C6 烷基、N-甲基哌
Figure 110108763-A0304-12-02
基-C1-C6烷基、C6-C10芳基，其包括o -甲氧基苯基(癒創木酚酯)、C1 -C6 醯氧基甲基、C1 -C6 醯氧基-1-乙基、C1 -C6 烷氧基羰氧基甲基、C1 -C6 烷氧基羰氧基-1-乙基、或(氧代二氧呃基)甲基； R5 =R6 、或R7 、 R6 =CONH-R9 、CONHCOR9 、CONH(CH2 )n -R9 、或CONHCH(COOR4 )(CH2 )k R9 ；其中k = 0-4； R7 =苯并雜芳基，其經至少一或多個選自以下者的基團取代：COOR4 、(CH2 )n COOR4 、SO3 H、(CH2 )n SO3 H、OR4 、唑[5-員含氮雜環]、或氟； R9 =芳基、雜芳基，其經至少一或多個選自以下者的基團取代：COOR4 、(CH2 )n COOR4 、(CH2 )n SO3 H、OR4 、SO3 H、唑[5-員含氮雜環]、氟、C=O、或NHCO-R10 ； R10 =芳基、雜芳基，其經至少一或多個選自以下者的基團取代：COOR4 、(CH2 )n COOR4 、(CH2 )n SO3 H、OR4 、SO3 H、唑[5-員含氮雜環]、或氟；其中R9 及R10 的芳基是選自苯基、萘基、聯苯的含6至14個碳原子的芳香族基團；且R9 及R10 的雜芳基為含有1至14個碳原子及一或多個氮的芳香族基團；且n獨立地為1-4。
本發明也提供式(I)化合物：
Figure 02_image003
(I) 其中： Ra 、Rb = H、C1-4 醯基、芳基C1-4 烷基、C6 -C10 芳基CO、HOOC(CH2 )n CO、C1 -C7 烷基NHCO、膦醯基、膦醯氧基甲基、C1 -C6 醯氧基甲基、C1 -C6 醯氧基-1-乙基、C1 -C6 烷氧基羰氧基甲基、或C1 -C6 烷氧基羰氧基-1-乙基； R1 = COOR4 、(CH2 )n COOR4 、SO3 H、(CH2 )n SO3 H、或CONH-R10 ； R2 及R3 為H或R5 ，其限制條件為當R2 及R3 其中一者為R5 時，另一者為H，且當R2 及R3 其中一者為H時，另一者為R5 ； R4 = H、C1-4 烷基、芳基C1-4 烷基、官能化C1 -C6 烷基，其包括N-
Figure 110108763-A0304-12-01
啉基-C1 -C6 烷基、吡咯啶基-C1 -C6 烷基、N-甲基哌
Figure 110108763-A0304-12-02
基-C1-C6烷基、C6-C10芳基，其包括o -甲氧基苯基(癒創木酚酯)、C1 -C6 醯氧基甲基、C1 -C6 醯氧基-1-乙基、C1 -C6 烷氧基羰氧基甲基、C1 -C6 烷氧基羰氧基-1-乙基、或(氧代二氧呃基)甲基； R5 = R8 R8 = (CH2 )m X(CH2 )p R9 ； X = O、S、SO2 、NH、NAc、或N(CH2 )q R9 ； R9 =芳基、雜芳基，其經至少一或多個選自以下者的基團取代：COOR4 、(CH2 )n COOR4 、(CH2 )n SO3 H、OR4 、SO3 H、唑[5-員含氮雜環]、氟、C=O、或NHCO-R10 ； R10 =芳基、雜芳基，其經至少一或多個選自以下者的基團取代：COOR4 、(CH2 )n COOR4 、(CH2 )n SO3 H、OR4 、SO3 H、唑[5-員含氮雜環]、氟； 其中R9 及R10 的芳基是選自苯基、萘基、聯苯基的含6至14個碳原子的芳香族基團；其中R9 及R10 的雜芳基為含有1至14個碳原子及一或多個氮的芳香族基團；且n、m、p及q獨立地為1-4。
表達方式「烷基」指的是飽和、直鏈或分支烴基，其含有1至20個碳原子，較佳地1至12個碳原子，特別地1至6個(例如 1、2、3或4個)碳原子，例如甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、異丁基、第二丁基或第三丁基。此外，用語烷基指的是其中一或多個氫原子被鹵素原子(較佳地，F或Cl)取代的基團，諸如例如2,2,2-三氯乙基或三氟甲基。
表達方式「醯基」指的是基團(烷基)-C(O)-、(芳基)-C(O)-、(雜芳基)-C(O)-、(雜烷基)-C(O)-、及(雜環烷基)-C(O)-，其中所述基團經由羰基官能基連接至母體結構。一些具體實例中，其為C1 -C4 醯基，指的是醯氧基的烷基、芳基、雜芳基或雜環烷基部分的鏈或環原子總數加上醯基的羰基碳，亦即另外三個環或鏈原子加上羰基。
表達方式「芳基」指的是含有一或多個環的芳香族基團，所述環含有6至14個環碳原子，較佳地6至10個(特別為6個)環碳原子。
表達方式「芳烷基」或「芳基C1-4 烷基」指的是同時含有根據上述定義的芳基及烷基、烯基、炔基及/或環烷基的基團，但不限於芐基、2-苯基乙基、3-苯基丙基、及2-萘-2-基乙基。芳烷基較佳地含有1或2個含有6至10個碳原子的芳香族環系統(1或2環)及1或2個含有1或2至6個碳原子的烷基、烯基及/或炔基及/或含有5或6個環碳原子的環烷基。
表達方式「雜芳基」指的是芳香族基團，其含有一或多個含有5至14個環原子，較佳地5至10個(特別為5或6或9或10個)環原子的環以及含有一或多個(較佳地，1、2、3或4個)氧、氮、磷或硫環原子(較佳地為O、S或N)。實例為吡啶基(例如 4-吡啶基)、咪唑基(例如 2-咪唑基)、苯基吡咯基(例如 3-苯基吡咯基)、噻唑基、異噻唑基、1,2,3-三唑基、1,2,4-三唑基、㗁二唑基、噻二唑基、吲哚基、吲唑基、四唑基、吡
Figure 110108763-A0304-12-02
基、嘧啶基、嗒
Figure 110108763-A0304-12-02
基、㗁唑基、異㗁唑基、三唑基、四唑基、異㗁唑基、吲唑基、吲哚基、苯并咪唑基、苯并㗁唑基、苯并異㗁唑基、苯并噻唑基、嗒
Figure 110108763-A0304-12-02
基、喹啉基、異喹啉基、吡咯基、嘌呤基、咔唑基、吖啶基、嘧啶基、2,3-二呋喃基、吡唑基(例如3-吡唑基)及異喹啉基。
表達方式「苯并雜芳基」或「苯并雜芳香族」指的是二環狀環，其包含稠合至單環雜芳香族環的苯基環。苯并雜芳基的實例包括苯并異㗁唑基、苯并㗁唑基、苯并異噻唑基、苯并噻唑基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并噻嗯基(包括S-氧化物及二氧化物)、喹啉基、異喹啉基、吲唑基、吲哚基及類似者。
用語「唑」指的是5員雜芳基，其具有氮環原子及0與3個之間的額外的選自N、O或S的環雜原子。咪唑、㗁唑、噻唑及四唑為代表性的唑基。
表達方式「環烷基」指的是飽和或部分飽和(例如環烯基)環狀基，其含有一或多個環(較佳地，1或2個)，以及含有3至14個環碳原子，較佳地3至10個(特別地3、4、5、6或7個)環碳原子。環烷基的特定實例為環丙基、環丁基、環戊基。
表達方式「視需要經取代」指的是其中至少一個、或視需要二個、三個或更多個氫原子可能已被氟、氯、溴、碘原子、或被OH、═O、SH、═S、NH2 、═NOH、N3 或NO2 基團取代的基團。此種表達方式進一步指的是可被至少一個、二個、三個或更多個未經取代的C1 -C10 烷基、C2 -C10 烯基、C2 -C10 炔基、雜烷基、C3 -C18 環烷基、C2 -C17 雜環烷基、C4 -C20 烷基環烷基、C2 -C19 雜烷基環烷基、C6 -C18 芳基、C1 -C17 雜芳基、C7 -C20 芳烷基或C2 -C19 雜芳烷基取代的基團。此種表達方式進一步特別地指的是可被至少一個、二個、三個或更多個未經取代的C1 -C6 烷基、C2 -C6 烯基、C2 -C6 炔基、C1 -C6 雜烷基、C3 -C10 環烷基、C2 -C9 雜環烷基、C7 -C12 烷基環烷基、C2 -C11 雜烷基環烷基、C6 -C10 芳基、C1 -C9 雜芳基、C7 -C12 芳烷基、或C2 -C11 雜芳烷基取代的基團。
根據較佳的具體實例，本文所述所有的烷基、烯基、炔基、雜烷基、芳基、雜芳基、環烷基、雜環烷基、烷基環烷基、雜烷基環烷基、芳烷基及雜芳烷基可視需要經取代。
較佳地，本發明提供式(I)氫醌衍生物化合物，其中： (A) Ra 、Rb = H、C1-4 醯基、芳基C1-4 烷基、C6 -C10 芳基CO、HOOC(CH2 )n CO、C1 -C7 烷基NHCO、膦醯基、膦醯氧基甲基、C1 -C6 醯氧基甲基、C1 -C6 醯氧基-1-乙基、C1 -C6 烷氧基羰氧基甲基、或C1 -C6 烷氧基羰氧基-1-乙基； R1 = COOR4 ；R4 = H、C1-4 烷基、芳基C1-4 烷基、官能化C1 -C6 烷基，其包括N-
Figure 110108763-A0304-12-01
啉基-C1 -C6 烷基、吡咯啶基-C1 -C6 烷基、N-甲基哌
Figure 110108763-A0304-12-02
基-C1-C6烷基、C6-C10芳基，其包括o -甲氧基苯基(癒創木酚酯)、C1 -C6 醯氧基甲基、C1 -C6 醯氧基-1-乙基、C1 -C6 烷氧基羰氧基甲基、C1 -C6 烷氧基羰氧基-1-乙基、或(氧代二氧呃基)甲基； R2 = H；R3 = R5 ；且 R5 = R6 = CONH-R9 ； 或 (B) Ra 、Rb = H、C1-4 醯基、芳基C1-4 烷基、C6 -C10 芳基CO、HOOC(CH2 )n CO、C1 -C7 烷基NHCO、膦醯基、膦醯氧基甲基、C1 -C6 醯氧基甲基、C1 -C6 醯氧基-1-乙基、C1 -C6 烷氧基羰氧基甲基、或C1 -C6 烷氧基羰氧基-1-乙基； R1 = COOR4 ；R4 = H、C1-4 烷基、芳基C1-4 烷基、官能化C1 -C6 烷基，其包括N-
Figure 110108763-A0304-12-01
啉基-C1 -C6 烷基、吡咯啶基-C1 -C6 烷基、N-甲基哌
Figure 110108763-A0304-12-02
基-C1-C6烷基、C6-C10芳基，其包括o -甲氧基苯基(癒創木酚酯)、C1 -C6 醯氧基甲基、C1 -C6 醯氧基-1-乙基、C1 -C6 烷氧基羰氧基甲基、C1 -C6 烷氧基羰氧基-1-乙基、或(氧代二氧呃基)甲基； R3 = H；R2 = R5 ；且 R5 = R6 = CONH-R9 。
第一具體實例中，本發明因此包括根據表1的化合物： 表1
A.
Figure 02_image009
R3 = R5 = CONHR9
化合物編號 化合物化學名稱 Ra Rb R4 R9
Ia-001a 4-(2-羧基苯基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸 H H H 2-羧基苯基
Ia-001a-Tz 4-(2-(1H-四唑-5-基)苯基-胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸 H H H 2-(1H-四唑-5-基)苯基
Ia-001c 2,5-二羥基-4-(2-磺酸基苯基胺基羰基)苯甲酸 H H H 2-磺酸基苯基
Ia-002a 4-(3-羧基苯基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸 H H H 3-羧基苯基
Ia-002a-Tz 4-(3-(1H-四唑-5-基)苯基-胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸 H H H 3-(1H-四唑-5-基)苯基
Ia-002c 2,5-二羥基-4-(3-磺酸基苯基胺基羰基)苯甲酸 H H H 3-磺酸基苯基
Ia-003a 4-(4-羧基苯基-胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸 H H H 4-羧基苯基
Ia-003a-Tz 4-(4-(1H-四唑-5-基)苯基-胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸 H H H 4-(1H-四唑-5-基)苯基
Ia-003c 2,5-二羥基-4-(4-磺酸基苯基胺基羰基)苯甲酸 H H H 4-磺酸基苯基
Ia-004a 4-(3-羧基-4-羥基苯基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸 H H H 3-羧基-4-羥基苯基
Ia-005a 4-(4-羧基-3-羥基苯基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸 H H H 4-羧基-3-羥基苯基
Ia-056a    4-(4-羧基-2,5-二羥基苯基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸 H H H 4-羧基-2,5-二羥基苯基
Ia-006a 4-(2-羧基-4-羥基苯基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸 H H H 2-羧基-4-羥基苯基
Ib-010a 3,5-雙(2,5-二羥基-4-羧基苯甲醯基胺基)苯甲酸 H H H
Figure 02_image011
Ia-011a 3-(4-羧基-2,5-二羥基苄醯胺基)鄰苯二甲酸； H H H 2,3-二羧基苯基
Ia-012a 2-(4-羧基-2,5-二羥基苄醯胺基)對苯二甲酸 H H H 2,5-二羧基苯基
Ia-013a 化合物36：2-(4-羧基-2,5-二羥基苄醯胺基)間苯二甲酸 H H H 2,6-二羧基苯基
Ia-014a 化合物38：4-(4-羧基-2,5-二羥基苄醯胺基)鄰苯二甲酸 H H H 3,4-二羧基苯基
Ia-015a 5-(4-羧基-2,5-二羥基苄醯胺基)間苯二甲酸 H H H 3,5-二羧基苯基
Ia-016a 2-(4-羧基-2,5-二羥基苄醯胺基)菸鹼酸 H H H 3-羧基吡啶-2-基
Ia-017a 2-(4-羧基-2,5-二羥基苄醯胺基)異菸鹼酸 H H H 4-羧基吡啶-2-基
Ia-018a 6-(4-羧基-2,5-二羥基苄醯胺基)菸鹼酸 H H H 5-羧基吡啶-2-基
Ia-019a 6-(4-羧基-2,5-二羥基苄醯胺基)吡啶-2-羧酸 H H H 6-羧基吡啶-2-基
Ia-020a 2-(4-羧基-2,5-二羥基苄醯胺基)-5-氟菸鹼酸 H H H 3-羧基-5-氟吡啶-2-基
Ia-021a 6-(4-羧基-2,5-二羥基苄醯胺基)吡啶-2,5-二羧酸 H H H 3,6-二羧基吡啶-2-基
Ia-022a 2-(4-羧基-2,5-二羥基苄醯胺基)吡啶-3,5-二羧酸 H H H 3,5-二羧基吡啶-2-基
Ia-023a 3-(4-羧基-2,5-二羥基苄醯胺基)異菸鹼酸 H H H 4-羧基吡啶-3-基
Ia-024a 5-(4-羧基-2,5-二羥基苄醯胺基)菸鹼酸 H H H 5-羧基吡啶-3-基
Ia-025a 5-(4-羧基-2,5-二羥基苄醯胺基)吡啶-2-羧酸 H H H 6-羧基吡啶-3-基
Ia-026a 3-(4-羧基-2,5-二羥基苄醯胺基)吡啶-2-羧酸 H H H 2-羧基吡啶-3-基
Ia-027a 5-(4-羧基-2,5-二羥基苄醯胺基)-2-氟異菸鹼酸 H H H 4-羧基-6-氟吡啶-3-基
Ia-028a 4-(4-羧基-2,5-二羥基苄醯胺基)菸鹼酸 H H H 3-羧基吡啶-4-基
Ia-029a 4-(4-羧基-2,5-二羥基苄醯胺基)吡啶-2-羧酸 H H H 2-羧基吡啶-3-基
Ia-032a 4-(4-(羧基甲基)苯基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸 H H H 4-(羧基甲基)苯基
Ia-033a 4-(3-(羧基甲基)苯基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸 H H H 3-(羧基甲基)苯基
Ia-033a-HyP 2,5-二羥基-4-(3-(1-羥基-1H-吡唑-4-基)苯基胺基羰基)苯甲酸 H H H 3-(1-羥基-1H-吡唑-4-基) 苯基
Ia-034a 4-(2-(羧基甲基)苯基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸 H H H 2-(羧基甲基)苯基
Ia-001a-E2-A2 4-(2-(乙氧基羰基)苯基胺基羰基)-2,5-二乙醯氧基苯甲酸乙酯 Ac Ac Et 2-(乙氧基羰基)苯基
Ia-001a-E2 4-(2-(乙氧基羰基)苯基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸乙酯 H H Et 2-(乙氧基羰基)苯基
Ia-001a-Tz-E1-A2 4-(2-(1H-四唑-5-基)苯基胺基羰基)-2,5-二乙醯氧基苯甲酸乙酯 Ac Ac Et 2-(1H-四唑-5-基)苯基
Ia-001a-Tz-E1 4-(2-(1H-四唑-5-基)苯基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸乙酯 H H Et 2-(1H-四唑-5-基)苯基
Ia-004a-E2 2,5-二羥基-4-(4-羥基-3-(甲氧基羰基)苯基胺基羰基)苯甲酸乙酯 H H Et 4-羥基-3-(甲氧基羰基)苯基
Ib-010a-E3-A4 3,5-雙(2,5-二乙醯氧基-4-乙氧基羰基苯甲醯基胺基)苯甲酸乙酯 Ac Ac Et
Figure 02_image013
Ib-010a- E3 3,5-雙(2,5-二羥基-4-乙氧基羰基苯甲醯基胺基)苯甲酸乙酯 H H Et
Figure 02_image015
Ia-023a-E2 3-(4-(乙氧基羰基)-2,5-二羥基苄醯胺基)異菸酸乙酯 H H Et 4-乙氧基羰基吡啶-3-基
Ia-056a-E2 化合物390：4-(4-乙氧基羰基-2,5-二羥基苯基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸乙酯 H H Et 4-乙氧基羰基-2,5-二羥基苯基
B 。
Figure 02_image017
R2 = R5 = CONHR9
IIa-001a 3-(2-羧基苯基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸 H H H 2-羧基苯基
IIa-001a-Tz 3-(2-(1H-四唑-5-基)苯基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸 H H H 2-(1H-四唑-5-基)苯基
IIa-001c 2,5-二羥基-3-(2-磺酸基苯基胺基羰基)苯甲酸 H H H 2-磺酸基苯基
IIa-002a 3-(3-羧基苯基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸 H H H 3-羧基苯基
IIa-002a-Tz 3-(3-(1H-四唑-5-基)苯基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸 H H H 3-(1H-四唑-5-基)苯基
IIa-002c 2,5-二羥基-3-(3-磺酸基苯基胺基羰基)苯甲酸 H H H 3-磺酸基苯基
IIa-003a 3-(4-羧基苯基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸 H H H 4-羧基苯基
IIa-003a-Tz 3-(4-(1H-四唑-5-基)苯基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸 H H H 4-(1H-四唑-5-基)苯基
IIa-003c 2,5-二羥基-3-(4-磺酸基苯基胺基羰基)苯甲酸 H H H 4-磺酸基苯基
IIa-004a 3-(3-羧基-4-羥基苯基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸 H H H 3-羧基-4-羥基苯基
IIa-005a 3-(4-羧基-3-羥基苯基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸 H H H 4-羧基-3-羥基苯基
IIa-006a 3-(2-羧基-4-羥基苯基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸 H H H 2-羧基-4-羥基苯基
IIb-010a 3,5-雙(2,5-二羥基-3-羧基苯甲醯基胺基)苯甲酸 H H H
Figure 02_image019
IIa-011a 3-(3-羧基-2,5-二羥基苄醯胺基)鄰苯二甲酸 H H H 2,3-二羧基苯基
IIa-012a 2-(3-羧基-2,5-二羥基苄醯胺基)對苯二甲酸 H H H 2,5-二羧基苯基
IIa-013a 2-(3-羧基-2,5-二羥基苄醯胺基)間苯二甲酸 H H H 2。6-二羧基苯基
IIa-014a 4-(3-羧基-2,5-二羥基苄醯胺基)鄰苯二甲酸 H H H 3。4-二羧基苯基
IIa-015a 5-(3-羧基-2,5-二羥基苄醯胺基)間苯二甲酸 H H H 3,5-二羧酸
IIa-016a 2-(3-羧基-2,5-二羥基苄醯胺基)菸鹼酸 H H H 3-羧基吡啶-2-基
IIa-017a 2-(3-羧基-2,5-二羥基苄醯胺基)異菸鹼酸 H H H 4-羧基吡啶-2-基
IIa-018a 6-(3-羧基-2,5-二羥基苄醯胺基)菸鹼酸 H H H 5-羧基吡啶-2-基
IIa-019a 6-(3-羧基-2,5-二羥基苄醯胺基)吡啶-2-羧酸 H H H 6-羧基吡啶-2-基
IIa-020a 2-(3-羧基-2,5-二羥基苄醯胺基)-5-氟菸鹼酸 H H H 3-羧基-5-氟吡啶-2-基
IIa-021a 6-(3-羧基-2,5-二羥基苄醯胺基)吡啶-2,5-二羧酸 H H H 3,6-二羧基吡啶-2-基
IIa-022a 2-(3-羧基-2,5-二羥基苄醯胺基)吡啶-3,5-二羧酸 H H H 3,5-二羧基吡啶-2-基
IIa-023a 3-(3-羧基-2,5-二羥基苄醯胺基)異菸鹼酸 H H H 4-羧基吡啶-3-基
IIa-024a 5-(3-羧基-2,5-二羥基苄醯胺基)菸鹼酸 H H H 5-羧基吡啶-3-基
IIa-025a 5-(3-羧基-2,5-二羥基苄醯胺基)吡啶-2-羧酸 H H H 6-羧基吡啶-3-基
IIa-026a 3-(3-羧基-2,5-二羥基苄醯胺基)吡啶-2-羧酸 H H H 2-羧基吡啶-3-基
IIa-027a 5-(3-羧基-2,5-二羥基苄醯胺基)-2-氟異菸鹼酸 H H H 4-羧基-6-氟吡啶-3-基
IIa-028a 4-(3-羧基-2,5-二羥基苄醯胺基)菸鹼酸 H H H 3-羧基吡啶-4-基
IIa-029a 化合物172：4-(3-羧基-2,5-二羥基苄醯胺基)吡啶-2-羧酸； H H H 2-羧基吡啶-3-基
IIa-032a 3-(4-(羧基甲基)苯基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸 H H H 4-(羧基甲基)苯基
IIa-033a 3-(3-(羧基甲基)苯基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸 H H H 3-(羧基甲基)苯基
IIa-033a-Hyp 2,5-二羥基-3-(3-(1-羥基-1H-吡唑-4-基)苯基胺基羰基)苯甲酸 H H H 3-(1-羥基-1H-吡唑-4-基)苯基
IIa-034a 3-(2-(羧基甲基)苯基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸 H H H 2-(羧基甲基)苯基
IIa-001aTz-E1 3-(2-(1H-四唑-5-基)苯基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸乙酯 H H Et 2-(1H-四唑-5-基)苯基
IIa-034a-E2 3-(2-(乙氧基羰基甲基)苯基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸乙酯 H H Et 2-(2-乙氧基羰基甲基)苯基
較佳地，本發明提供式(I)化合物，其中： (A) Ra 、Rb = H； R1 = SO3 H； R2 = H；R3 = R5 ；且 R5 = R6 = CONH-R9 ； 或 (B) Ra 、Rb = H； R1 = SO3 H； R3 = H；R2 = R5 ；且 R5 = R6 = CONH-R9 。
第二具體實例中，本發明包括根據表2的化合物： 表2
A.       
Figure 02_image021
R3 = R5 = CONHR9
化合物編號 化合物化學名稱 Ra Rb R9
Ia-001b 2-(2,5-二羥基-4-磺酸基苄醯胺基)苯甲酸 H H 2-羧基苯基
Ia-001d 2,5-二羥基-4-(2-磺酸基苯基胺基羰基)苯磺酸 H H 2-磺酸基苯基
Ia-002b 3-(2,5-二羥基-4-磺酸基苄醯胺基)苯甲酸 H H 3-羧基苯基
Ia-002d 2,5-二羥基-4-(3-磺酸基苯基胺基羰基)苯磺酸 H H 3-磺酸基苯基
Ia-003b 4-(2,5-二羥基-4-磺酸基苄醯胺基)苯甲酸 H H 4-羧基苯基
Ia-003d 2,5-二羥基-4-(4-磺酸基苯基胺基羰基)苯磺酸 H H 4-磺酸基苯基
Ia-004b 5-(2,5-二羥基-4-磺酸基苄醯胺基)-2-羥基苯甲酸 H H 3-羧基-4-羥基苯基
Ia-005b 4-(2,5-二羥基-4-磺酸基苄醯胺基)-2-羥基苯甲酸 H H 4-羧基-3-羥基苯基
Ia-006b 2-(2,5-二羥基-4-磺酸基苄醯胺基)-5-羥基苯甲酸 H H 2-羧基-4-羥基苯基
Ib-010b 3,5-雙(2,5-二羥基-4-磺酸基苄醯胺基)苯甲酸 H H
Figure 02_image023
Ia-011b 3-(2,5-二羥基-4-磺酸基苄醯胺基)鄰苯二甲酸 H H 2,3-二羧基苯基
Ia-012b 2-(2,5-二羥基-4-磺酸基苄醯胺基)對苯二甲酸 H H 2,5-二羧基苯基
Ia-013b 2-(2,5-二羥基-4-磺酸基苄醯胺基)間苯二甲酸 H H 2,6-二羧基苯基
Ia-014b 4-(2,5-二羥基-4-磺酸基苄醯胺基)鄰苯二甲酸 H H 3,4-二羧基苯基
Ia-015b 5-(2,5-二羥基-4-磺酸基苄醯胺基)間苯二甲酸 H H 3,5-二羧基苯基
Ia-016b 2-(2,5-二羥基-4-磺酸基苄醯胺基)菸鹼酸 H H 3-羧基吡啶-2-基
Ia-017b 2-(2,5-二羥基-4-磺酸基苄醯胺基)異菸鹼酸 H H 4-羧基吡啶-2-基
Ia-018b 6-(2,5-二羥基-4-磺酸基苄醯胺基)菸鹼酸 H H 5-羧基吡啶-2-基
Ia-019b 6-(2,5-二羥基-4-磺酸基苄醯胺基)吡啶-2-羧酸 H H 6-羧基吡啶-2-基
Ia-020b 2-(2,5-二羥基-4-磺酸基苄醯胺基)-5-氟菸鹼酸 H H 3-羧基-5-氟吡啶-2-基
Ia-021b 6-(2,5-二羥基-4-磺酸基苄醯胺基)吡啶-2,5-二羧酸 H H 3,6-二羧基吡啶-2-基
Ia-022b 2-(2,5-二羥基-4-磺酸基苄醯胺基)吡啶-3,5-二羧酸 H H 3,5-二羧基吡啶-2-基
Ia-023b 3-(2,5-二羥基-4-磺酸基苄醯胺基)異菸鹼酸 H H 4-羧基吡啶-3-基
Ia-024b 5-(2,5-二羥基-4-磺酸基苄醯胺基)菸鹼酸 H H 5-羧基吡啶-3-基
Ia-025b 5-(2,5-二羥基-4-磺酸基苄醯胺基)吡啶-2-羧酸 H H 6-羧基吡啶-3-基
Ia-026a 3-(2,5-二羥基-4-磺酸基苄醯胺基)吡啶-2-羧酸 H H 2-羧基吡啶-3-基
Ia-027b 5-(2,5-二羥基-4-磺酸基苄醯胺基)-2-氟異菸鹼酸 H H 4-羧基-6-氟吡啶-3-基
Ia-028b 4-(2,5-二羥基-4-磺酸基苄醯胺基)菸鹼酸 H H 3-羧基吡啶-4-基
Ia-029b 4-(2,5-二羥基-4-磺酸基苄醯胺基)吡啶-2-羧酸 H H 2-羧基吡啶-3-基
Ia-032b (4-(2,5-二羥基-4-磺酸基苄醯胺基)苯基)乙酸 H H 4-(羧基甲基)苯基
Ia-033b (3-(2,5-二羥基-4-磺酸基苄醯胺基)苯基)乙酸 H H 3-(羧基甲基)苯基
Ia-034b (2-(2,5-二羥基-4-磺酸基苄醯胺基)苯基)乙酸 H H 2-(羧基甲基)苯基
B。
Figure 02_image025
R2 = R5 = CONHR9
IIa-001b 2-(2,5-二羥基-3-磺酸基苄醯胺基)苯甲酸 H H 2-羧基苯基
IIa-001d 2,5-二羥基-3-(2-磺酸基苯基胺基羰基)苯磺酸 H H 2-磺酸基苯基
IIa-002b 3-(2,5-二羥基-3-磺酸基苄醯胺基)苯甲酸 H H 3-羧基苯基
IIa-002d 2,5-二羥基-3-(3-磺酸基苯基胺基羰基)苯磺酸 H H 3-磺酸基苯基
IIa-003b 4-(2,5-二羥基-3-磺酸基苄醯胺基)苯甲酸 H H 4-羧基苯基
IIa-003d 2,5-二羥基-3-(4-磺酸基苯基胺基羰基)苯磺酸 H H 4-磺酸基苯基
IIa-004b 5-(2,5-二羥基-3-磺酸基苄醯胺基)-2-羥基苯甲酸 H H 3-羧基-4-羥基苯基
IIa-005b 4-(2,5-二羥基-3-磺酸基苄醯胺基)-2-羥基苯甲酸 H H 4-羧基-3-羥基苯基
IIa-006b 2-(2,5-二羥基-3-磺酸基苄醯胺基)-5-羥基苯甲酸 H H 2-羧基-4-羥基苯基
IIb-010b 3-(2,5-二羥基-3-磺酸基苄醯胺基)-5-(2,5-二羥基-4-磺酸基苄醯胺基)苯甲酸 H H
Figure 02_image027
IIa-011b 3-(2,5-二羥基-3-磺酸基苄醯胺基)鄰苯二甲酸 H H 2,3-二羧基苯基
IIa-012b 2-(2,5-二羥基-3-磺酸基苄醯胺基)對苯二甲酸 H H 2,5-二羧基苯基
IIa-013b 2-(2,5-二羥基-3-磺酸基苄醯胺基)間苯二甲酸 H H 2,6-二羧基苯基
IIa-014b 4-(2,5-二羥基-3-磺酸基苄醯胺基)鄰苯二甲酸 H H 3,4-二羧基苯基
IIa-015b 5-(2,5-二羥基-3-磺酸基苄醯胺基)間苯二甲酸 H H 3,5-二羧基苯基
IIa-016b 2-(2,5-二羥基-3-磺酸基苄醯胺基)菸鹼酸 H H 3-羧基吡啶-2-基
IIa-017b 2-(2,5-二羥基-3-磺酸基苄醯胺基)異菸鹼酸 H H 4-羧基吡啶-2-基
IIa-018b 6-(2,5-二羥基-3-磺酸基苄醯胺基)菸鹼酸 H H 5-羧基吡啶-2-基
IIa-019b 6-(2,5-二羥基-3-磺酸基苄醯胺基)吡啶-2-羧酸 H H 6-羧基吡啶-2-基
IIa-020b 2-(2,5-二羥基-3-磺酸基苄醯胺基)-5-氟菸鹼酸 H H 3-羧基-5-氟吡啶-2-基
IIa-021b 6-(2,5-二羥基-3-磺酸基苄醯胺基)吡啶-2,5-二羧酸 H H 3,6-二羧基吡啶-2-基
IIa-022b 2-(2,5-二羥基-3-磺酸基苄醯胺基)吡啶-3,5-二羧酸 H H 3,5-二羧基吡啶-2-基
IIa-023b 3-(2,5-二羥基-3-磺酸基苄醯胺基)異菸鹼酸 H H 4-羧基吡啶-3-基
IIa-024b 5-(2,5-二羥基-3-磺酸基苄醯胺基)菸鹼酸 H H 5-羧基吡啶-3-基
IIa-025b 5-(2,5-二羥基-3-磺酸基苄醯胺基)吡啶-2-羧酸 H H 6-羧基吡啶-3-基
IIa-026b 3-(2,5-二羥基-3-磺酸基苄醯胺基)吡啶-2-羧酸 H H 2-羧基吡啶-3-基
IIa-027b 5-(2,5-二羥基-3-磺酸基苄醯胺基)-2-氟異菸鹼酸 H H 4-羧基-6-氟吡啶-3-基
IIa-028b 4-(2,5-二羥基-3-磺酸基苄醯胺基)菸鹼酸 H H 3-羧基吡啶-4-基
IIa-029b 化合物173：4-(2,5-二羥基-3-磺酸基苄醯胺基)吡啶-2-羧酸 H H 2-羧基吡啶-3-基
IIa-032b (4-(2,5-二羥基-3-磺酸基苄醯胺基)苯基)乙酸 H H 4-(羧基甲基)苯基
IIa-033b (3-(2,5-二羥基-3-磺酸基苄醯胺基)苯基)乙酸 H H 3-(羧基甲基)苯基
IIa-034b (2-(2,5-二羥基-3-磺酸基苄醯胺基)苯基)乙酸 H H 2-(羧基甲基)苯基
較佳地，本發明提供式(I)氫醌衍生物化合物，其中： (A) Ra 、Rb = H； R1 = (CH2 )n COOR4 ；R4 = H、C1-4 烷基、芳基C1-4 烷基、官能化C1 -C6 烷基，其包括N-
Figure 110108763-A0304-12-01
啉基-C1 -C6 烷基、吡咯啶基-C1 -C6 烷基、N-甲基哌
Figure 110108763-A0304-12-02
基-C1-C6烷基、C6-C10芳基，其包括o -甲氧基苯基(癒創木酚酯)、C1 -C6 醯氧基甲基、C1 -C6 醯氧基-1-乙基、C1 -C6 烷氧基羰氧基甲基、C1 -C6 烷氧基羰氧基-1-乙基、或(氧代二氧呃基)甲基； R2 = H；R3 = R5 ；且 R5 = R6 = CONH-R9 ； 或 (B) Ra 、Rb = H； R1 = (CH2 )n COOR4 ；R4 = H、C1-4 烷基、芳基C1-4 烷基、官能化C1 -C6 烷基，其包括N-
Figure 110108763-A0304-12-01
啉基-C1 -C6 烷基、吡咯啶基-C1 -C6 烷基、N-甲基哌
Figure 110108763-A0304-12-02
基-C1-C6烷基、C6-C10芳基，其包括o -甲氧基苯基(癒創木酚酯)、C1 -C6 醯氧基甲基、C1 -C6 醯氧基-1-乙基、C1 -C6 烷氧基羰氧基甲基、C1 -C6 烷氧基羰氧基-1-乙基、或(氧代二氧呃基)甲基； R3 = H；R2 = R5 ；且 R5 = R6 = CONH-R9 。
第三具體實例中，本發明包括根據表3的化合物： 表3
A。
Figure 02_image029
R3 = R5 = R6 = CONH-R9
化合物編號 化合物化學名稱 R1 Ra Rb R9
IIIa-001a 2-(4-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)苯甲酸 CH2COOH H H 2-羧基苯基
IIIa-001a-Tz (2-(1H-四唑-5-基)苯基胺基羰基)-2,5-二羥基苯基)乙酸 CH2COOH H H 2-(1H-四唑-5-基)苯基
IIIa-001c (2,5-二羥基-4-(2-磺酸基苯基胺基羰基)苯基)乙酸 CH2COOH H H 2-磺酸基苯基
IIIa-002a 3-(4-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)苯甲酸； CH2COOH H H 3-羧基苯基
IIIa-002c (2,5-二羥基-4-(3-磺酸基苯基胺基羰基)苯基)乙酸； CH2COOH H H 3-磺酸基苯基
IIIa-003a 4-(4-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)苯甲酸； CH2COOH H H 4-羧基苯基
IIIa-003c 2-(2,5-二羥基-4-(4-磺酸基苯基胺基羰基)苯基)乙酸； CH2COOH H H 4-磺酸基苯基
IIIa-004a 化合物216：5-(4-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)-2-羥基苯甲酸 CH2COOH H H 3-羧基-4-羥基苯基
IIIa-005a 4-(4-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)-2-羥基苯甲酸 CH2COOH H H 4-羧基-3-羥基苯基
IIIa-006a 2-(4-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)-5-羥基苯甲酸 CH2COOH H H 2-羧基-4-羥基苯基
IIIb-010a 3,5-雙(2,5-二羥基-4-羧基甲基苯甲醯基胺基)苯甲酸 CH2COOH H H
Figure 02_image031
IIIa-011a 3-(4-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)鄰苯二甲酸 CH2COOH H H 2,3-二羧基苯基
IIIa-012a 2-(4-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)對苯二甲酸 CH2COOH H H 2,5-二羧基苯基
IIIa-013a 2-(4-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)間苯二甲酸 CH2COOH H H 2,6-二羧基苯基
IIIa-014a 4-(4-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)鄰苯二甲酸 CH2COOH H H 3,4-二羧基苯基
IIIa-015a 5-(4-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)間苯二甲酸 CH2COOH H H 3,5-二羧基苯基
IIIa-016a 2-(4-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)菸鹼酸 CH2COOH H H 3-羧基吡啶-2-基
IIIa-017a 2-(4-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)異菸鹼酸 CH2COOH H H 4-羧基吡啶-2-基
IIIa-018a 6-(4-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)菸鹼酸 CH2COOH H H 5-羧基吡啶-2-基
IIIa-019a 6-(4-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)吡啶-2-羧酸 CH2COOH H H 6-羧基吡啶-2-基
IIIa-020a 2-(4-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)-5-氟菸鹼酸 CH2COOH H H 3-羧基-5-氟吡啶-2-基
IIIa-021a 6-(4-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)吡啶-2,5-二羧酸 CH2COOH H H 3,6-二羧基吡啶-2-基
IIIa-022a 2-(4-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)吡啶-3,5-二羧酸 CH2COOH H H 3,5-二羧基吡啶-2-基
IIIa-023a 3-(4-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)異菸鹼酸； CH2COOH H H 4-羧基吡啶-3-基
IIIa-024a 5-(4-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)菸鹼酸 CH2COOH H H 5-羧基吡啶-3-基
IIIa-025a 5-(4-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)吡啶-2-羧酸 CH2COOH H H 6-羧基吡啶-3-基
IIIa-026a 3-(4-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)吡啶-2-羧酸 CH2COOH H H 2-羧基吡啶-3-基
IIIa-027a 5-(4-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)-2-氟異菸鹼酸 CH2COOH H H 4-羧基-6-氟吡啶-3-基
IIIa-028a 4-(4-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)菸鹼酸； CH2COOH H H 3-羧基吡啶-4-基
IIIa-029a 4-(4-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)吡啶-2-羧酸； CH2COOH H H 2-羧基吡啶-3-基
IIIa-032a (4-(4-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)苯基)乙酸 CH2COOH H H 4-(羧基甲基)苯基
IIIa-033a (3-(4-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)苯基)乙酸 CH2COOH H H 3-(羧基甲基)苯基
IIIa-034a (2-(4-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)苯基)乙酸 CH2COOH H H 2-(羧基甲基)苯基
IIIa-001a-E2 2-(4-(乙氧基羰基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)苯甲酸甲酯 CH2COOEt H H 2-(甲氧基羰基)苯基
IIIa-001aTz-E1 化合物383：(4-(2-(1H-四唑-5-基)苯基胺基羰基)-2,5-二羥基苯基)乙酸乙酯； CH2COOEt H H 2-(1H-四唑-5-基)苯基
IIIa-015a-E3 5-(4-(乙氧基羰基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)間苯二甲酸二乙酯 CH2COOEt H H 3,5-二乙氧基羰基苯基
IIIb-010a-E3 3,5-雙(4-(乙氧基羰基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)苯甲酸甲酯 CH2COOEt H H
Figure 02_image033
B.
Figure 02_image035
R2 = R5 = R6 = CONHR9
IVa-001a 2-(3-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)苯甲酸 CH2COOH H H 2-羧基苯基
IVa-001c (2,5-二羥基-3-(2-磺酸基苯基胺基羰基)苯基)乙酸 CH2COOH H H 2-磺酸基苯基
IVa-002a 3-(3-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)苯甲酸 CH2COOH H H 3-羧基苯基
IVa-002c (2,5-二羥基-3-(3-磺酸基苯基胺基羰基)苯基)乙酸 CH2COOH H H 3-磺酸基苯基
IVa-003a 4-(3-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)苯甲酸 CH2COOH H H 4-羧基苯基
IVa-003c (2,5-二羥基-3-(4-磺酸基苯基胺基羰基)苯基)乙酸 CH2COOH H H 4-磺酸基苯基
IVa-004a 5-(3-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)-2-羥基苯甲酸 CH2COOH H H 3-羧基-4-羥基苯基
IVa-005a 4-(3-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)-2-羥基苯甲酸 CH2COOH H H 4-羧基-3-羥基苯基
IVa-006a 化合物295：2-(3-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)-5-羥基苯甲酸； CH2COOH H H 2-羧基-4-羥基苯基
IVb-010a 3,5-雙(2,5-二羥基-3-羧基甲基苯甲醯基胺基)苯甲酸 CH2COOH H H
Figure 02_image031
IVa-011a 3-(3-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)鄰苯二甲酸 CH2COOH H H 2,3-二羧基苯基
IVa-012a 2-(3-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)對苯二甲酸 CH2COOH H H 2,5-二羧基苯基
IVa-013a 2-(3-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)間苯二甲酸 CH2COOH H H 2,6-二羧基苯基
IVa-014a 4-(3-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)鄰苯二甲酸 CH2COOH H H 3,4-二羧基苯基
IVa-015a 5-(3-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)間苯二甲酸 CH2COOH H H 3,5-二羧基苯基
IVa-016a 2-(3-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)菸鹼酸 CH2COOH H H 3-羧基吡啶-2-基
IVa-017a 2-(3-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)異菸鹼酸 CH2COOH H H 4-羧基吡啶-2-基
IVa-018a 6-(3-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)菸鹼酸 CH2COOH H H 5-羧基吡啶-2-基
IVa-019a 6-(3-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)吡啶-2-羧酸 CH2COOH H H 6-羧基吡啶-2-基
IVa-020a 2-(3-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)-5-氟菸鹼酸 CH2COOH H H 3-羧基-5-氟吡啶-2-基
IVa-021a 6-(3-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)吡啶-2,5-二羧酸 CH2COOH H H 3,6-二羧基吡啶-2-基
IVa-022a 2-(3-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)吡啶-3,5-二羧酸 CH2COOH H H 3,5-二羧基吡啶-2-基
IVa-023a 3-(3-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)異菸鹼酸 CH2COOH H H 4-羧基吡啶-3-基
IVa-024a 5-(3-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)菸鹼酸 CH2COOH H H 5-羧基吡啶-3-基
IVa-025a 5-(3-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)吡啶-2-羧酸 CH2COOH H H 6-羧基吡啶-3-基
IVa-026a 3-(3-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)吡啶-2-羧酸 CH2COOH H H 2-羧基吡啶-3-基
IVa-027a 5-(3-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)-2-氟異菸鹼酸 CH2COOH H H 4-羧基-6-氟吡啶-3-基
IVa-028a 4-(3-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)菸鹼酸 CH2COOH H H 3-羧基吡啶-4-基
IVa-029a 4-(3-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)吡啶-2-羧酸 CH2COOH H H 2-羧基吡啶-3-基
IVa-032a (4-(3-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)苯基)乙酸 CH2COOH H H 4-(羧基甲基)苯基
IVa-033a (3-(3-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)苯基)乙酸 CH2COOH H H 3-(羧基甲基)苯基
IVa-034a (2 -(3-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)苯基)乙酸 CH2COOH H H 2-(羧基甲基)苯基
較佳地，本發明提供式(I)氫醌衍生物化合物，其中： (A) Ra 、Rb = H、C1-4 醯基、芳基C1-4 烷基、C6 -C10 芳基CO、HOOC(CH2 )n CO、C1 -C7 烷基NHCO、膦醯基、膦醯氧基甲基、C1 -C6 醯氧基甲基、C1 -C6 醯氧基-1-乙基、C1 -C6 烷氧基羰氧基甲基、或C1 -C6 烷氧基羰氧基-1-乙基； R1 = CONH-R10 ；R4 = H、C1-4 烷基、芳基C1-4 烷基、官能化C1 -C6 烷基，其包括N-
Figure 110108763-A0304-12-01
啉基-C1 -C6 烷基、吡咯啶基-C1 -C6 烷基、N-甲基哌
Figure 110108763-A0304-12-02
基-C1-C6烷基、C6-C10芳基，其包括o -甲氧基苯基(癒創木酚酯)、C1 -C6 醯氧基甲基、C1 -C6 醯氧基-1-乙基、C1 -C6 烷氧基羰氧基甲基、C1 -C6 烷氧基羰氧基-1-乙基、或(氧代二氧呃基)甲基； R2 = H；R3 = R5 ；且 R5 = R6 = CONH-R9 ； 或 (B) Ra 、Rb = H、C1-4 醯基、芳基C1-4 烷基、C6 -C10 芳基CO、HOOC(CH2 )n CO、C1 -C7 烷基NHCO、膦醯基、膦醯氧基甲基、C1 -C6 醯氧基甲基、C1 -C6 醯氧基-1-乙基、C1 -C6 烷氧基羰氧基甲基、或C1 -C6 烷氧基羰氧基-1-乙基； R1 = CONH-R10 ；R4 = H、C1-4 烷基、芳基C1-4 烷基、官能化C1 -C6 烷基，其包括N-
Figure 110108763-A0304-12-01
啉基-C1 -C6 烷基、吡咯啶基-C1 -C6 烷基、N-甲基哌
Figure 110108763-A0304-12-02
基-C1-C6烷基、C6-C10芳基，其包括o -甲氧基苯基(癒創木酚酯)、C1 -C6 醯氧基甲基、C1 -C6 醯氧基-1-乙基、C1 -C6 烷氧基羰氧基甲基、C1 -C6 烷氧基羰氧基-1-乙基、或(氧代二氧呃基)甲基； R3 = H；R2 = R5 ；且 R5 = R6 = CONH-R9 。
第四具體實例中，本發明包括根據表4的化合物： 表4
A.       
Figure 02_image037
R3 = R5 = R6 = CONH-R9
化合物編號 化合物化學名稱 Ra Rb R10 R9
Ic-001a-Tz/1-004a 5-(4-(2-(1H-四唑-5-基)苯基胺基羰基)-2,5-二羥基苄醯胺基)-2-羥基 苯甲酸 H H 3-羧基-4-羥基苯基 2-(1H-四唑-5-基)苯基
Ic-001a-Tz(2) N1 ,N4 -雙(2-(1H-四唑-5-基)苯基)-2,5-二羥基對苯二甲醯胺 H H 2-(1H-四唑-5-基)苯基 2-(1H-四唑-5-基)苯基
Ic-007a 5-(4-(3-羧基-4-羥基苯基胺基羰基)-2,5-二羥基苄醯胺基)-2-羥基 苯甲酸； H H 3-羧基-4-羥基苯基 3-羧基-4-羥基苯基
Ic-007b 5-(2,5-二羥基-4-(4-羥基-3-磺酸基苯基胺基羰基)苄醯胺基)-2-羥基苯磺酸 H H 4-羥基-3-磺醯基苯基 4-羥基-3-磺醯基苯基
Ic-008a 4-(4-(4-羧基-3-羥基苯基胺基羰基)-2,5-二羥基苄醯胺基)-2-羥基苯甲酸 H H 4-羧基-3-羥基苯基 4-羧基-3-羥基苯基
Ic-008b 4-(2,5-二羥基-4-(3-羥基-4-磺酸基苯基胺基羰基)苄醯胺基)-2-羥基苯磺酸 H H 3-羥基-4-磺醯基苯基 3-羥基-4-磺醯基苯基
Ic-009a 2-(2,5-二羥基-4-(4-羥基-2-羧基苯基胺基羰基)苄醯胺基)-5-羥基苯甲酸 H H 2-羧基-4-羥基苯基 2-羧基-4-羥基苯基
Ic-009b 2-(2,5-二羥基-4-(4-羥基-2-磺酸基苯基胺基羰基)苄醯胺基)-5-羥基苯磺酸 H H 4-羥基-2-磺酸基苯基 4-羥基-2-磺酸基苯基
Ib-001a-Tz/1-004a-E1 5-(4-(2-(1H-四唑-5-基)苯基胺基羰基)-2,5-二羥基苄醯胺基)-2-羥基苯甲酸甲酯； H H 4-羥基-3-(甲氧基羰基)苯基- 2-(1H-四唑-5-基)苯基
Ic-007a-E2-A4 5-(2,5-二乙醯氧基-4-(4-乙醯氧基-3-(甲氧基羰基)苯基胺基羰基) 苄醯胺基)-2-乙醯氧基苯甲酸甲酯； Ac Ac 4-乙醯氧基-3-(甲氧基羰基)苯基 4-乙醯氧基-3-(甲氧基羰基)苯基
Ic-007a-E2 5-(2,5-二羥基-4-(4-羥基-3-(甲氧基羰基)苯基胺基羰基)苄醯胺基)-2-羥基苯甲酸甲酯； H H 4-羥基-3-(甲氧基羰基)苯基 4-羥基-3-(甲氧基羰基)苯基
Ic-007a-pive2 5-[[4-[[3-[1-(2,2-二甲基丙醯氧基)乙氧基羰基]-4-羥基-苯基]胺甲醯基]-2,5-二羥基-苯甲醯基]胺基]-2-羥基苯甲酸1-(2,2-二甲基丙醯氧基)乙酯 H H 3-[1-(2,2-二甲基丙醯氧基)乙氧基羰基]-4-羥基苯基 3-[1-(2,2-二甲基丙醯氧基)乙氧基羰基]-4-羥基-苯基
Ic-009a-E2 2-(2,5-二羥基-4-(4-羥基-2-(甲氧基羰基)苯基胺基羰基)苄醯胺基)-5-羥基苯甲酸甲酯 H H 4-羥基-2-(甲氧基羰基)苯基 4-羥基-2-(甲氧基羰基)苯基
B。
Figure 02_image039
R2 = R5 = R6 = CONH-R9
IIc-007a 5-(3-(3-羧基-4-羥基苯基胺基羰基)-2,5-二羥基苄醯胺基)-2-羥基苯甲酸 H H 3-羧基-4-羥基苯基 3-羧基-4-羥基苯基
IIc-007b 5-(2,5-二羥基-3-(4-羥基-3-磺酸基苯基胺基羰基)苄醯胺基)-2-羥基苯磺酸 H H 4-羥基-3-磺酸基苯基 4-羥基-3-磺酸基苯基
IIc-008a 4-(3-(3-羥基-4-羧基苯基胺基羰基)-2,5-二羥基苄醯胺基)-2-羥基 苯甲酸 H H 3-羥基-4-羧基苯基 3-羥基-4-羧基苯基
IIc-008b 4-(2,5-二羥基-3-(3-羥基-4-磺酸基苯基胺基羰基)苄醯胺基)-2-羥基苯磺酸 H H 3-羥基-4-磺酸基苯基 3-羥基-4-磺酸基苯基
IIc-009a 2-(3-(2-羧基-4-羥基苯基胺基羰基)-2,5-二羥基苄醯胺基)-5-羥基苯甲酸 H H 2-羧基-4-羥基苯基 2-羧基-4-羥基苯基
IIc-009b 2-(2,5-二羥基-3-(4-羥基-2-磺酸基苯基胺基羰基)苄醯胺基)-5-羥基苯磺酸 H H 4-羥基-2-磺酸基苯基 4-羥基-2-磺酸基苯基
較佳地，本發明提供式(I)氫醌衍生物化合物，其中： (A) Ra 、Rb = H； R1 = COOR4 ；(CH2 )n COOR4 ；R4 = H、C1-4 烷基、芳基C1-4 烷基、官能化C1 -C6 烷基，其包括N-
Figure 110108763-A0304-12-01
啉基-C1 -C6 烷基、吡咯啶基-C1 -C6 烷基、N-甲基哌
Figure 110108763-A0304-12-02
基-C1-C6烷基、C6-C10芳基，其包括o -甲氧基苯基(癒創木酚酯)、C1 -C6 醯氧基甲基、C1 -C6 醯氧基-1-乙基、C1 -C6 烷氧基羰氧基甲基、C1 -C6 烷氧基羰氧基-1-乙基、或(氧代二氧呃基)甲基； R2 = H；R3 = R5 ；且 R5 = R6 = CONHCOR9 ； 或 (B) Ra 、Rb = H； R1 = COOR4 ；(CH2 )n COOR4 ；R4 = H、C1-4 烷基、芳基C1-4 烷基、官能化C1 -C6 烷基，其包括N-
Figure 110108763-A0304-12-01
啉基-C1 -C6 烷基、吡咯啶基-C1 -C6 烷基、N-甲基哌
Figure 110108763-A0304-12-02
基-C1-C6烷基、C6-C10芳基，其包括o -甲氧基苯基(癒創木酚酯)、C1 -C6 醯氧基甲基、C1 -C6 醯氧基-1-乙基、C1 -C6 烷氧基羰氧基甲基、C1 -C6 烷氧基羰氧基-1-乙基、或(氧代二氧呃基)甲基； R3 = H；R2 = R5 ；且 R5 = R6 = CONHCOR9 。
第五具體實例中，本發明包括根據表5的化合物： 表5
A.       
Figure 02_image041
R3 = R5 = R6 = CONHCOR9
化合物編號 化合物化學名稱 R1 R9
Ia-040a N-(1,3,4,5-四羥基環己基羰基) 4-羧基-2,5-二羥基苯甲醯胺 COOH
Figure 02_image043
Ia-041a N-(4-羧基-2,5-二羥基苯甲醯基) 4-羧基-2,5-二羥基-苯甲醯胺 COOH 2,5-二羥基-4-羧基苯基
Ia-042a N-(3-羧基-2,5-二羥基苯甲醯基) 4-羧基-2,5-二羥基-苯甲醯胺 COOH 2,5-二羥基-3-羧基苯基
Ia-043a N-(3,4-二羥基苯甲醯基) 4-羧基-2,5-二羥基苯甲醯胺 COOH 3,4-二羥基苯基
Ia-044a N-(3,5-二羥基苯甲醯基) 4-羧基-2,5-二羥基苯甲醯胺 COOH 3,5-二羥基苯基
IIIa-040a N-(1,3,4,5-四羥基環己基羰基) 3-羧基-2,5-二羥基苯甲醯胺 CH2COOH
Figure 02_image045
IIIa-041a N-(4-羧基-2,5-二羥基苯甲醯基) 3-羧基-2,5-二羥基-苯甲醯胺 CH2COOH 2,5-二羥基-4-羧基苯基
IIIa-042a N-(3-羧基-2,5-二羥基苯甲醯基) 3-羧基-2,5-二羥基-苯甲醯胺 CH2COOH 2,5-二羥基-3-羧基苯基
IIIa-043a N-(3,4-二羥基苯甲醯基) 3-羧基-2,5-二羥基苯甲醯胺 CH2COOH 3,4-二羥基苯基
IIIa-044a N-(3,5-二羥基苯甲醯基) 3-羧基-2,5-二羥基苯甲醯胺 CH2COOH 3,5-二羥基苯基
B.        
Figure 02_image047
R2 = R5 = R6 = CONHCOR9
IIa-040a N-(1,3,4,5-四羥基環己基羰基) 4-羧基甲基-2,5-二羥基苯甲醯胺 COOH
Figure 02_image049
IIa-041a N-(4-羧基-2,5-二羥基苯甲醯基) 4-羧基甲基-2,5-二羥基-苯甲醯胺 COOH 2,5-二羥基-4-羧基苯基
IIa-042a N-(3-羧基-2,5-二羥基苯甲醯基) 4-羧基甲基-2,5-二羥基-苯甲醯胺 COOH 2,5-二羥基-3-羧基苯基
IIa-043a N-(3,4-二羥基苯甲醯基) 4-羧基甲基-2,5-二羥基苯甲醯胺 COOH 3,4-二羥基苯基
IIa-044a N-(3,5-二羥基苯甲醯基) 4-羧基甲基-2,5-二羥基苯甲醯胺 COOH 3,5-二羥基苯基
IVa-040a N-(1,3,4,5-四羥基環己基羰基) 3-羧基甲基-2,5-二羥基苯甲醯胺 CH2COOH
Figure 02_image051
IVa-041a N-(4-羧基-2,5-二羥基苯甲醯基) 3-羧基甲基-2,5-二羥基-苯甲醯胺 CH2COOH 2,5-二羥基-4-羧基苯基
IVa-042a N-(3-羧基-2,5-二羥基苯甲醯基) 3-羧基甲基-2,5-二羥基-苯甲醯胺 CH2COOH 2,5-二羥基-3-羧基苯基
IVa-043a N-(3,4-二羥基苯甲醯基) 3-羧基甲基-2,5-二羥基苯甲醯胺 CH2COOH 3,4-二羥基苯基
IVa-044a N-(3,5-二羥基苯甲醯基) 3-羧基甲基-2,5-二羥基苯甲醯胺 CH2COOH 3,5-二羥基苯基
較佳地，本發明提供式(I)氫醌衍生物化合物，其中： (A) Ra 、Rb = H； R1 = COOR4 ；(CH2 )n COOR4 ；R4 = H、C1-4 烷基、芳基C1-4 烷基、官能化C1 -C6 烷基，其包括N-
Figure 110108763-A0304-12-01
啉基-C1 -C6 烷基、吡咯啶基-C1 -C6 烷基、N-甲基哌
Figure 110108763-A0304-12-02
基-C1-C6烷基、C6-C10芳基，其包括o -甲氧基苯基(癒創木酚酯)、C1 -C6 醯氧基甲基、C1 -C6 醯氧基-1-乙基、C1 -C6 烷氧基羰氧基甲基、C1 -C6 烷氧基羰氧基-1-乙基、或(氧代二氧呃基)甲基； R2 = H；R3 = R5 ；且 R5 = R6 = CONH(CH2 )n -R9 ； 或 (B) Ra 、Rb = H； R1 = COOR4 ；(CH2 )n COOR4 ；R4 = H、C1-4 烷基、芳基C1-4 烷基、官能化C1 -C6 烷基，其包括N-
Figure 110108763-A0304-12-01
啉基-C1 -C6 烷基、吡咯啶基-C1 -C6 烷基、N-甲基哌
Figure 110108763-A0304-12-02
基-C1-C6烷基、C6-C10芳基，其包括o -甲氧基苯基(癒創木酚酯)、C1 -C6 醯氧基甲基、C1 -C6 醯氧基-1-乙基、C1 -C6 烷氧基羰氧基甲基、C1 -C6 烷氧基羰氧基-1-乙基、或(氧代二氧呃基)甲基； R3 = H；R2 = R5 ；且 R5 = R6 = CONH(CH2 )n -R9 。
第六具體實例中，本發明包括根據表6的化合物： 表6
A
Figure 02_image041
R3 = R5 = R6 = CONH(CH2 )n -R9
化合物編號 化合物化學名稱 R1 n R9
Ia-035a 4-(3,4-二羥基苯基甲基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸； COOH 1 3,4-二羥基苯基
Ia-035a-2 4-(2-(3,4-二羥基苯基)乙基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸； COOH 2 3,4-二羥基苯基
Ia-037a 4-(3,5-二羥基苯基甲基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸； COOH 1 3,5-二羥基苯基
Ia-038a 4-((4,5-二羥基-3-側氧環己-1-烯基)甲基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸； COOH 1 4,5-二羥基-3-側氧環己-1-烯基)
Ia-039a 2,5-二羥基-4-((3,4,5-三羥基環己基)甲基胺基羰基)苯甲酸 COOH 1 3,4,5-三羥基環己基)
Ia-053a 4-(2-羧基苯基甲基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸 COOH 1 2-羧基苯基
Ia-054a 4-(3-羧基苯基甲基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸 COOH 1 3-羧基苯基
Ia-055a 4-(4-羧基苯基甲基胺基羰基) 2,5-二羥基苯甲酸 COOH 1 4-羧基苯基
IIIa-035a 3-(3,4-二羥基苯基甲基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸 CH2COOH 1 3,4-二羥基苯基
IIIa-037a 3-(2-(3,4-二羥基苯基)乙基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸 CH2COOH 1 3,5-二羥基苯基
IIIa-038a 3-(3,5-二羥基苯基甲基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸 CH2COOH 1 4-((4,5-二羥基-3-側氧環己-1-烯基)
IIIa-039a 3-((4,5-二羥基-3-側氧環己-1-烯基)甲基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸 CH2COOH 1 3,4,5-三羥基環己基)
IIIa-053a 2,5-二羥基-3-((3,4,5-三羥基環己基)甲基胺基羰基)苯甲酸 CH2COOH 1 2-羧基苯基
IIIa-054a 3-(2-羧基苯基甲基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸 CH2COOH 1 3-羧基苯基
IIIa-055a 3-(3-羧基苯基甲基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸 CH2COOH 1 4-羧基苯基
B。
Figure 02_image053
R2 = R5 = R6 = CONH(CH2)n-R9
IIa-035a 3-(4-羧基苯基甲基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸 COOH 1 3,4-二羥基苯基
IIa-035a-2 (4-(3,4-二羥基苯基甲基胺基羰基)-2,5-二羥基苯基)乙酸 COOH 2 3,4-二羥基苯基
IIa-037a (4-(3,5-二羥基苯基甲基胺基羰基)-2,5-二羥基苯基)乙酸 COOH 1 3,5-二羥基苯基
IIa-038a (4-((4,5-二羥基-3-側氧環己-1-烯基)甲基胺基羰基)-2,5-二羥基苯基)乙酸 COOH 1 4,5-二羥基-3-側氧環己-1-烯基)
IIa-039a 化合物191：(2,5-二羥基-4-((3,4,5-三羥基環己基)甲基胺基羰基)苯基)乙酸 COOH 1 3,4,5-三羥基環己基
IIa-053a (4-(2-羧基苯基甲基胺基羰基)-2,5-二羥基苯基)乙酸 COOH 1 2-羧基苯基
IIa-054a (4-(3-羧基苯基甲基胺基羰基)-2,5-二羥基苯基)乙酸 COOH 1 3-羧基苯基
IIa-055a (4-(4-羧基苯基甲基胺基羰基)-2,5-二羥基苯基)乙酸 COOH 1 4-羧基苯基
IVa-035a (3-(3,4-二羥基苯基甲基胺基羰基)-2,5-二羥基苯基)乙酸 CH2COOH 1 3,4-二羥基苯基
IVa-037a (3-(3,5-二羥基苯基甲基胺基羰基)-2,5-二羥基苯基)乙酸 CH2COOH 1 3,5-二羥基苯基
IVa-038a (3-((4,5-二羥基-3-側氧環己-1-烯基)甲基胺基羰基)-2,5-二羥基苯基) 乙酸 CH2COOH 1 4,5-二羥基-3-側氧環己-1-烯基)
IVa-039a (2,5-二羥基-3-((3,4,5-三羥基環己基)甲基羰基胺基)苯基)乙酸 CH2COOH 1 3,4,5-三羥基環己基
IVa-053a (3-(2-羧基苯基甲基胺基羰基)-2,5-二羥基苯基)乙酸 CH2COOH 1 2-羧基苯基
IVa-054a (3-(3-羧基苯基甲基胺基羰基)-2,5-二羥基苯基)乙酸 CH2COOH 1 3-羧基苯基
IVa-055a (3-(4-羧基苯基甲基胺基羰基)-2,5-二羥基苯基)乙酸 CH2COOH 1 4-羧基苯基
較佳地，本發明提供式(I)氫醌衍生物化合物，其中： Ra 、Rb = H； R1 = SO3 H； R2 = H；R3 = R5 ；且 R5 = R6 = CONH(CH2 )n -R9 。
根據第七具體實例，本發明包括根據以下表7的化合物： 表7
Figure 02_image055
R3 = R5 = CONH(CH2 )n -R9
化合物編號 化合物化學名稱 n R9
Ia-053b 2-((2,5-二羥基-4-磺酸基苄醯胺基)甲基)苯甲酸 1 2-羧基苯基
Ia-054b 3-((2,5-二羥基-4-磺酸基苄醯胺基)甲基)苯甲酸 1 3-羧基苯基
Ia-055b 4-((2,5-二羥基-4-磺酸基苄醯胺基)甲基)苯甲酸 1 4-羧基苯基
較佳地，本發明關於式(I)氫醌衍生物化合物，其中： (A) Ra 、Rb = H； R1 = COOR4 ；(CH2 )n COOR4 ；R4 = H、C1-4 烷基、芳基C1-4 烷基、官能化C1 -C6 烷基，其包括N-
Figure 110108763-A0304-12-01
啉基-C1 -C6 烷基、吡咯啶基-C1 -C6 烷基、N-甲基哌
Figure 110108763-A0304-12-02
基-C1-C6烷基、C6-C10芳基，其包括o -甲氧基苯基(癒創木酚酯)、C1 -C6 醯氧基甲基、C1 -C6 醯氧基-1-乙基、C1 -C6 烷氧基羰氧基甲基、C1 -C6 烷氧基羰氧基-1-乙基、或(氧代二氧呃基)甲基； R2 = H；R3 = R5 ；且 R5 = R6 = CONHCH(COOR4 )(CH2 )k -R9 ； 或 (B) Ra 、Rb = H； R1 = COOR4 ；(CH2 )n COOR4 ；R4 = H、C1-4 烷基、芳基C1-4 烷基、官能化C1 -C6 烷基，其包括N-
Figure 110108763-A0304-12-01
啉基-C1 -C6 烷基、吡咯啶基-C1 -C6 烷基、N-甲基哌
Figure 110108763-A0304-12-02
基-C1-C6烷基、C6-C10芳基，其包括o -甲氧基苯基(癒創木酚酯)、C1 -C6 醯氧基甲基、C1 -C6 醯氧基-1-乙基、C1 -C6 烷氧基羰氧基甲基、C1 -C6 烷氧基羰氧基-1-乙基、或(氧代二氧呃基)甲基； R3 = H；R2 = R5 ；且 R5 = R6 = CONHCH(COOR4 )(CH2 )k -R9 。
根據第八具體實例。本發明包括根據以下表8的化合物： 表8
A.       
Figure 02_image057
R3 = R5 = R6 = CONHCH(COOR4 )(CH2 )k R9
化合物編號 化合物化學名稱 R1 R4 k R9
Ia-035a-3 4-(1-羧基-2-(3,4-二羥基苯基)乙基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸 COOH H 1 3,4-二羥基苯基
Ia-036a 4-(羧基(3,4-二羥基苯基)甲基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸 COOH H 0 3,4-二羥基苯基
IIIa-036a 3-(1-羧基-2-(3,4-二羥基苯基)乙基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸 CH2 COOH H 0 3,4-二羥基苯基
B.        
Figure 02_image059
R2 = R5 = R6 = CONHCH(COOR4 )(CH2 )k R9
IIa-035a-3 3-(羧基(3,4-二羥基苯基)甲基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸 COOH H 1 3,4-二羥基苯基
IIa-036a (4-(羧基(3,4-二羥基苯基)甲基胺基羰基)-2,5-二羥基苯基)乙酸 COOH H 0 3,4-二羥基苯基
IVa-036a (3-(羧基(3,4-二羥基苯基)甲基胺基羰基)-2,5-二羥基苯基)乙酸 CH2 COOH H 0 3,4-二羥基苯基
特定具體實例中，本發明提供式(I)氫醌衍生物化合物，其中 (A) Ra 、Rb = H； R1 = COOR4 ；(CH2 )n COOR4 ；SO3 H、(CH2 )n SO3 H、或CONH-R10 ； R4 = H、C1-4 烷基、芳基C1-4 烷基、官能化C1 -C6 烷基，其包括N-
Figure 110108763-A0304-12-01
啉基-C1 -C6 烷基、吡咯啶基-C1 -C6 烷基、N-甲基哌
Figure 110108763-A0304-12-02
基-C1-C6烷基、C6-C10芳基，其包括o -甲氧基苯基(癒創木酚酯)、C1 -C6 醯氧基甲基、C1 -C6 醯氧基-1-乙基、C1 -C6 烷氧基羰氧基甲基、C1 -C6 烷氧基羰氧基-1-乙基、或(氧代二氧呃基)甲基； R2 = H；R3 = R5 ；且 R5 = R6 =雜芳基-R9 ； 或 (B) Ra 、Rb = H； R1 = COOR4 ；(CH2 )n COOR4 ；SO3 H、(CH2 )n SO3 H、或CONH-R10 ； R4 = H、C1-4 烷基、芳基C1-4 烷基、官能化C1 -C6 烷基，其包括N-
Figure 110108763-A0304-12-01
啉基-C1 -C6 烷基、吡咯啶基-C1 -C6 烷基、N-甲基哌
Figure 110108763-A0304-12-02
基-C1-C6烷基、C6-C10芳基，其包括o -甲氧基苯基(癒創木酚酯)、C1 -C6 醯氧基甲基、C1 -C6 醯氧基-1-乙基、C1 -C6 烷氧基羰氧基甲基、C1 -C6 烷氧基羰氧基-1-乙基、或(氧代二氧呃基)甲基； R3 = H；R2 = R5 ；且 R5 = R6 =雜芳基-R9 。
根據第九具體實例，本發明包括根據表9的化合物： 表9
A.       
Figure 02_image061
R3 = R5 = R6 = 雜芳基 -R9
化合物編號 化合物化學名稱 R1 雜芳基 -R9
Ia-045a 4,6-雙(4-羧基-2,5-二羥基苯基)-1,3,5-三
Figure 110108763-A0304-12-02
-2-酮		 COOH
Figure 02_image063
Ia-046a 4-(4-羧基-2,5-二羥基苯基)-6-(3-羧基-2,5-二羥基苯基)-1,3,5-三
Figure 110108763-A0304-12-02
-2-酮		 COOH
Figure 02_image065
Ia-047a 4-(4-羧基-2,5-二羥基苯基)-6-(3,4-二羥基苯基)-1,3,5-三
Figure 110108763-A0304-12-02
-2-酮		 COOH
Figure 02_image067
Ia-048a 4-(4-羧基-2,5-二羥基苯基)-6-(3,5-二羥基苯基)-1,3,5-三
Figure 110108763-A0304-12-02
-2-酮		 COOH
Figure 02_image069
Ia-049a 4,6-雙(4-羧基-2,5-二羥基苯基)-1,3,5-三
Figure 110108763-A0304-12-02
 COOH
Figure 02_image071
Ia-050a 2-(4-羧基-2,5-二羥基苯基)-4-(3-羧基-2,5-二羥基苯基)-1,3,5-三
Figure 110108763-A0304-12-02
 COOH
Figure 02_image073
Ia-051a 2-(4-羧基-2,5-二羥基苯基)-4-(3,4-二羥基苯基)-1,3,5-三
Figure 110108763-A0304-12-02
 COOH
Figure 02_image075
Ia-052a 2-(4-羧基-2,5-二羥基苯基)-4-(3,5-二羥基苯基)-1,3,5-三
Figure 110108763-A0304-12-02
 COOH
Figure 02_image077
IIa-046a 4,6-雙(3-羧基-2,5-二羥基苯基)-1,3,5-三
Figure 110108763-A0304-12-02
-2-酮		 COOH
Figure 02_image079
IIa-050a 4-(3-羧基-2,5-二羥基苯基)-6-(4-羧基-2,5-二羥基苯基)-1,3,5-三
Figure 110108763-A0304-12-02
-2-酮		 COOH
Figure 02_image081
IIIa-045a 4-(3-羧基-2,5-二羥基苯基)-6-(3,4-二羥基苯基)-1,3,5-三
Figure 110108763-A0304-12-02
-2-酮		 CH2COOH
Figure 02_image083
IIIa-046a 4-(3-羧基-2,5-二羥基苯基)-6-(3,5-二羥基苯基)-1,3,5-三
Figure 110108763-A0304-12-02
-2-酮		 CH2COOH
Figure 02_image085
IIIa-047a 4,6-雙(3-羧基-2,5-二羥基苯基)-1,3,5-三
Figure 110108763-A0304-12-02
 CH2COOH
Figure 02_image087
IIIa-048a 2-(3-羧基-2,5-二羥基苯基)-4-(4-羧基-2,5-二羥基苯基)-1,3,5-三
Figure 110108763-A0304-12-02
 CH2COOH
Figure 02_image089
IIIa-049a 2-(3-羧基-2,5-二羥基苯基)-4-(3,4-二羥基苯基)-1,3,5-三
Figure 110108763-A0304-12-02
 CH2COOH
Figure 02_image091
IIIa-050a 2-(3-羧基-2,5-二羥基苯基)-4-(3,5-二羥基苯基)-1,3,5-三
Figure 110108763-A0304-12-02
 CH2COOH
Figure 02_image093
IIIa-051a 2-(3-羧基甲基-2,5-二羥基苯基)-4-(3,4-二羥基苯基)-1,3,5-三
Figure 110108763-A0304-12-02
 CH2COOH
Figure 02_image095
IIIa-052a 2-(3-羧基甲基-2,5-二羥基苯基)-4-(3,5-二羥基苯基)-1,3,5-三
Figure 110108763-A0304-12-02
 CH2COOH
Figure 02_image097
B。
Figure 02_image099
R2 = R5 = R6 = 雜芳基 -R9
IIa-045a 4-(4-羧基甲基-2,5-二羥基苯基)-6-(3,4-二羥基苯基)-1,3,5-三
Figure 110108763-A0304-12-02
-2-酮		 COOH
Figure 02_image101
IIa-047a 4-(4-羧基甲基-2,5-二羥基苯基)-6-(3,5-二羥基苯基)-1,3,5-三
Figure 110108763-A0304-12-02
-2-酮		 COOH
Figure 02_image103
IIa-048a 2-(4-羧基-2,5-二羥基苯基)-4-(4-羧基甲基-2,5-二羥基苯基)-1,3,5-三
Figure 110108763-A0304-12-02
 COOH
Figure 02_image105
IIa-049a 2-(3-羧基-2,5-二羥基苯基)-4-(4-羧基甲基-2,5-二羥基苯基)-1,3,5-三
Figure 110108763-A0304-12-02
 COOH
Figure 02_image107
IIa-051a 2-(4-羧基甲基-2,5-二羥基苯基)-4-(3,4-二羥基苯基)-1,3,5-三
Figure 110108763-A0304-12-02
 COOH
Figure 02_image109
IIa-052a 2-(4-羧基甲基-2,5-二羥基苯基)-4-(3,5-二羥基苯基)-1,3,5-三
Figure 110108763-A0304-12-02
 COOH
Figure 02_image111
IVa-045a 4-(4-羧基-2,5-二羥基苯基)-6-(3-羧基甲基-2,5-二羥基苯基)-1,3,5-三
Figure 110108763-A0304-12-02
-2-酮		 CH2COOH
Figure 02_image113
IVa-046a 4-(3-羧基-2,5-二羥基苯基)-6-(3-羧基甲基-2,5-二羥基苯基)-1,3,5-三
Figure 110108763-A0304-12-02
-2-酮		 CH2COOH
Figure 02_image115
IVa-047a 4-(3-羧基甲基-2,5-二羥基苯基)-6-(3,4-二羥基苯基)-1,3,5-三
Figure 110108763-A0304-12-02
-2-酮		 CH2COOH
Figure 02_image117
IVa-048a 4-(3-羧基甲基-2,5-二羥基苯基)-6-(3,5-二羥基苯基)-1,3,5-三
Figure 110108763-A0304-12-02
-2-酮		 CH2COOH
Figure 02_image119
IVa-049a 2-(4-羧基-2,5-二羥基苯基)-4-(3-羧基甲基-2,5-二羥基苯基)-1,3,5-三
Figure 110108763-A0304-12-02
 CH2COOH
Figure 02_image121
IVa-050a 2-(3-羧基-2,5-二羥基苯基)-4-(3-羧基甲基-2,5-二羥基苯基)-1,3,5-三
Figure 110108763-A0304-12-02
 CH2COOH
Figure 02_image123
IVa-051a 2-(3-羧基甲基-2,5-二羥基苯基)-4-(3,4-二羥基苯基)-1,3,5-三
Figure 110108763-A0304-12-02
 CH2COOH
Figure 02_image125
IVa-052a 2-(3-羧基甲基-2,5-二羥基苯基)-4-(3,5-二羥基苯基)-1,3,5-三
Figure 110108763-A0304-12-02
 CH2COOH
Figure 02_image127
較佳地，本發明提供式(I)氫醌衍生物化合物，其中： (A) Ra 、Rb = H； R1 = COOR4 ；(CH2 )n COOR4 ；SO3 H、(CH2 )n SO3 H、CONH-R10 ； R4 = H、C1-4 烷基、芳基C1-4 烷基、官能化C1 -C6 烷基，其包括N-
Figure 110108763-A0304-12-01
啉基-C1 -C6 烷基、吡咯啶基-C1 -C6 烷基、N-甲基哌
Figure 110108763-A0304-12-02
基-C1-C6烷基、C6-C10芳基，其包括o -甲氧基苯基(癒創木酚酯)、C1 -C6 醯氧基甲基、C1 -C6 醯氧基-1-乙基、C1 -C6 烷氧基羰氧基甲基、C1 -C6 烷氧基羰氧基-1-乙基、或(氧代二氧呃基)甲基；； R2 = H；R3 = R5 ；且 R5 = R7 =苯并雜芳基，其經至少一或多個選自以下者的基團取代：COOR4 、(CH2 )n COOR4 、SO3 H、(CH2 )n SO3 H、OR4 、唑[5-員含氮雜環]、或氟； 或 (B) Ra 、Rb = H； R1 = COOR4 ；(CH2 )n COOR4 ；SO3 H、 (CH2 )n SO3 H、或CONH-R10 ； R4 = H、C1-4 烷基、芳基C1-4 烷基、官能化C1 -C6 烷基，其包括N-
Figure 110108763-A0304-12-01
啉基-C1 -C6 烷基、吡咯啶基-C1 -C6 烷基、N-甲基哌
Figure 110108763-A0304-12-02
基-C1-C6烷基、C6-C10芳基，其包括o -甲氧基苯基(癒創木酚酯)、C1 -C6 醯氧基甲基、C1 -C6 醯氧基-1-乙基、C1 -C6 烷氧基羰氧基甲基、C1 -C6 烷氧基羰氧基-1-乙基、或(氧代二氧呃基)甲基； R3 = H；R2 = R5 ；且 R5 = R7 =苯并雜芳基，其經至少一或多個選自以下者的基團取代：COOR4 、(CH2 )n COOR4 、SO3 H、(CH2 )n SO3 H、OR4 、唑[5-員含氮雜環]、或氟。
根據第10個具體實例，本發明包括根據表10的化合物： 表10
A.       
Figure 02_image129
R3 = R5 = R7
化合物編號 化合物化學名稱 R1 R3
Id-030a 2-(4-羧基-2,5-二羥基苯基)-1H-苯并[d]咪唑-4-羧酸 COOH
Figure 02_image131
Id-030a-E2 2-(4-乙氧基羰基-2,5-二羥基苯基)-1H-苯并[d]咪唑-4-羧酸甲酯 COOEt
Figure 02_image133
Id-030b 2-(2,5-二羥基-4-磺酸基苯基)-1H-苯并[d]咪唑-4-羧酸 SO3H
Figure 02_image131
Id-031a 2-(4-羧基-2,5-二羥基苯基)-1H-苯并[d]咪唑-5-羧酸 COOH
Figure 02_image135
Id-031b 2-(2,5-二羥基-4-磺酸基苯基)-1H-苯并[d]咪唑-5-羧酸 SO3H
Figure 02_image137
IIId-030a 2-(3-羧基-2,5-二羥基苯基)-1H-苯并[d]咪唑-4-羧酸 CH2COOH
Figure 02_image131
IIId-031a 2-(2,5-二羥基-3-磺酸基苯基)-1H-苯并[d]咪唑-4-羧酸 CH2COOH
Figure 02_image137
B.        
Figure 02_image139
R2 = R5 = R7
IId-030a 2-(3-羧基-2,5-二羥基苯基)-1H-苯并[d]咪唑-5-羧酸 COOH
Figure 02_image131
IId-030b 2-(2,5-二羥基-3-磺酸基苯基)-1H-苯并[d]咪唑-5-羧酸 SO3H
Figure 02_image131
IId-031a 2-(4-(羧基甲基)-2,5-二羥基苯基)-1H-苯并[d]咪唑-4-羧酸 COOH
Figure 02_image135
IId-030a 2-(4-(羧基甲基)-2,5-二羥基苯基)-1H-苯并[d]咪唑-5-羧酸 SO3H
Figure 02_image137
IVd-030a 2-(3-(羧基甲基)-2,5-二羥基苯基)-1H-苯并[d]咪唑-4-羧酸 CH2COOH
Figure 02_image131
IVd-031a 2-(3-(羧基甲基)-2,5-二羥基苯基)-1H-苯并[d]咪唑-5-羧酸 CH2COOH
Figure 02_image137
較佳地，本發明提供式(I)氫醌衍生物化合物，其中： (A) Ra 、Rb = H、C1-4 醯基、芳基C1-4 烷基、C6 -C10 芳基CO、HOOC(CH2 )n CO、C1 -C7 烷基NHCO、膦醯基、膦醯氧基甲基、C1 -C6 醯氧基甲基、C1 -C6 醯氧基-1-乙基、C1 -C6 烷氧基羰氧基甲基、或C1 -C6 烷氧基羰氧基-1-乙基； R1 = COOR4 ；(CH2 )n COOR4 ；SO3 H、(CH2 )n SO3 H、或CONH-R10 ； R4 = H、C1-4 烷基、芳基C1-4 烷基、官能化C1 -C6 烷基，其包括N-
Figure 110108763-A0304-12-01
啉基-C1 -C6 烷基、吡咯啶基-C1 -C6 烷基、N-甲基哌
Figure 110108763-A0304-12-02
基-C1-C6烷基、C6-C10芳基，其包括o -甲氧基苯基(癒創木酚酯)、C1 -C6 醯氧基甲基、C1 -C6 醯氧基-1-乙基、C1 -C6 烷氧基羰氧基甲基、C1 -C6 烷氧基羰氧基-1-乙基、或(氧代二氧呃基)甲基； R2 = H；R3 = R5 ；且 R5 = R8 = (CH2 )m X(CH2 )p R9 ； 其中 X = O、S、SO2 、NH、NAc、或N(CH2 )q R9 ； 或 (B) Ra 、Rb = H、C1-4 醯基、芳基C1-4 烷基、C6 -C10 芳基CO、HOOC(CH2 )n CO、C1 -C7 烷基NHCO、膦醯基、膦醯氧基甲基、C1 -C6 醯氧基甲基、C1 -C6 醯氧基-1-乙基、C1 -C6 烷氧基羰氧基甲基、或C1 -C6 烷氧基羰氧基-1-乙基； R1 = COOR4 ；(CH2 )n COOR4 ；SO3 H、(CH2 )n SO3 H、或CONH-R10 ； R4 = H、C1-4 烷基、芳基C1-4 烷基、官能化C1 -C6 烷基，其包括N-
Figure 110108763-A0304-12-01
啉基-C1 -C6 烷基、吡咯啶基-C1 -C6 烷基、N-甲基哌
Figure 110108763-A0304-12-02
基-C1-C6烷基、C6-C10芳基，其包括o -甲氧基苯基(癒創木酚酯)、C1 -C6 醯氧基甲基、C1 -C6 醯氧基-1-乙基、C1 -C6 烷氧基羰氧基甲基、C1 -C6 烷氧基羰氧基-1-乙基、或(氧代二氧呃基)甲基； R3 = H；R2 = R5 ；且 R5 = R8 = (CH2 )m X(CH2 )p R9 ； 其中X = O、S、SO2 、NH、NAc、或N(CH2 )q R9 。
根據第11個具體實例，本發明包括根據表11的化合物： 表11
A.       
Figure 02_image140
R3 = (CH2 )m X(CH2 )p R9
編號 化合物化學名稱 R1 Ra Rb m X p R9
   IIIc-056a    雙(4-羧基-2,5-二羥基苯基甲基)胺 COOH H H 1 NH 1 4-羧基-2,5-二羥基苯基
   IIIc-056b    4-((2,5-二羥基-4-磺酸基苯基甲基胺基)甲基)-2,5-二羥基苯甲酸 SO3H H H 1 NH 1 4-羧基-2,5-二羥基苯基
   IIIc-056c    化合物267：4-((2,5-二羥基-3-磺酸基苯基甲基胺基)甲基)-2,5-二羥基苯甲酸 COOH H H 1 NH 1 2,5-二羥基-3-磺酸基苯基
   IIIc-056d    雙(2,5-二羥基-4-磺酸基苯基甲基)胺 SO3H H H 1 NH 1 2,5-二羥基-4-磺酸基苯基
IIIc-057a N,N-雙(4-羧基-2,5-二羥基苯基甲基)乙醯胺 COOH H H 1 NH(COCH3) 1 4-羧基-2,5-二羥基苯基
IIIc-057b    N-(2,5-二羥基-4-磺酸基苯基甲基) N-(4-羧基-2,5-二羥基苯基甲基)乙醯胺 SO3H H H 1 NH(COCH3) 1 4-羧基-2,5-二羥基苯基
IIIc-057c    N-(2,5-二羥基-3-磺酸基苯基甲基) N-(4-羧基-2,5-二羥基苯基甲基)乙醯胺 COOH H H 1 NH(COCH3) 1 2,5-二羥基-3-磺酸基苯基
IIIc-057d    N,N-雙(2,5-二羥基-4-磺酸基苯基甲基)乙醯胺 SO3H H H 1 NH(COCH3) 1 2,5-二羥基-4-磺酸基苯基
IIIc-058a 4-((2,5-二羥基-4-羧基苯基)甲硫基甲基)-2,5-二羥基苯甲酸 COOH H H 1 S 1 4-羧基-2,5-二羥基苯基
IIIc-058b    4-((2,5-二羥基-4-磺酸基苯基)甲硫基甲基)-2,5-二羥基苯甲酸 SO3H H H 1 S 1 4-羧基-2,5-二羥基苯基
IIIc-058c    4-((2,5-二羥基-3-磺酸基苯基)甲硫基甲基)-2,5-二羥基苯甲酸 COOH H H 1 S 1 2,5-二羥基-3-磺酸基苯基
   IIIc-058d    4-((2,5-二羥基-4-磺酸基苯基)甲硫基甲基)-2,5-二羥基苯磺酸； SO3H H H 1 S 1 2,5-二羥基-4-磺酸基苯基
IIIc-059a 4-((2,5-二羥基-4-羧基苯基)甲基磺醯基甲基)-2,5-二羥基苯甲酸； COOH H H 1 SO2 1 4-羧基-2,5-二羥基苯基
   IIIc-059b    4-((2,5-二羥基-4-磺酸基苯基)甲基磺醯基甲基)-2,5-二羥基苯甲酸； SO3H H H 1 SO2 1 4-羧基-2,5-二羥基苯基
IIIc-059c    4-((2,5-二羥基-3-磺酸基苯基)甲基磺醯基甲基)-2,5-二羥基苯甲酸 COOH H H 1 SO2 1 2,5-二羥基-3-磺酸基苯基
IIIc-059d    4-((2,5-二羥基-4-磺酸基苯基)甲基磺醯基甲基)-2,5-二羥基苯磺酸 SO3H H H 1 SO2 1 2,5-二羥基-4-磺酸基苯基
IIIc-060a 4-((2,5-二羥基-4-羧基苯基)甲氧基甲基)-2,5-二羥基苯甲酸 COOH H H 1 O 1 4-羧基-2,5-二羥基苯基
IIIc-060b    4-((2,5-二羥基-4-磺酸基苯基)甲氧基甲基)-2,5-二羥基苯甲酸； SO3H H H 1 O 1 4-羧基-2,5-二羥基苯基
IIIc-060c    4-((2,5-二羥基-3-磺酸基苯基)甲氧基甲基)-2,5-二羥基苯甲酸 COOH H H 1 O 1 2,5-二羥基-3-磺酸基苯基
   IIIc-060d    4-((2,5-二羥基-4-磺酸基苯基)甲氧基甲基)-2,5-二羥基苯磺酸 SO3H H H 1 O 1 2,5-二羥基-4-磺酸基苯基
IIIc-061a    參(4-羧基-2,5-二羥基苯基甲基)胺 COOH H H 1 N(CH2)qR9 q = 1： R9 = 4-羧基-2,5-二羥基苯基 1 4-羧基-2,5-二羥基苯基
IIIc-061a-E3 參(4-乙氧基羰基-2,5-二羥基苯基甲基)胺 COOEt H H    (CH2)qR9 q = 1： R9 = 4-乙氧基羧基-2,5-二羥基苯基 1 4-乙氧基羰基-2,5-二羥基苯基
B.        
Figure 02_image142
R2 = (CH2 )m X(CH2 )p R9
   IVc-056a    雙(3-羧基-2,5-二羥基苯基甲基)胺 COOH H H 1 NH 1 3-羧基-2,5-二羥基苯基
   IVc-056b    3-((2,5-二羥基-3-磺酸基苯基甲基胺基)甲基)-2,5-二羥基苯甲酸 SO3H H H 1 NH 1 3-羧基-2,5-二羥基苯基
   IVc-056c    3-((2,5-二羥基-4-磺酸基苯基甲基胺基)甲基)-2,5-二羥基苯甲酸 COOH H H 1 NH 1 2,5-二羥基-3-磺酸基苯基
IVc-056d    雙(2,5-二羥基-3-磺酸基苯基甲基)胺 SO3H H H 1 NH 1 2,5-二羥基-4-磺酸基苯基
IVc-057a    N,N-雙(3-羧基-2,5-二羥基苯基甲基)乙醯胺 COOH H H 1 NH(COCH3) 1 3-羧基-2,5-二羥基苯基
IVc-057b    N-(2,5-二羥基-3-磺酸基苯基甲基) N-(3-羧基-2,5-二羥基苯基甲基)乙醯胺 SO3H H H 1 NH(COCH3) 1 3-羧基-2,5-二羥基苯基
IVc-057c     N-(2,5-二羥基-4-磺酸基苯基甲基) N-(3-羧基-2,5-二羥基苯基甲基)乙醯胺 COOH H H 1 NH(COCH3) 1 2,5-二羥基-3-磺酸基苯基
IVc-057d    N,N-雙(2,5-二羥基-3-磺酸基苯基甲基)乙醯胺 SO3H H H 1 NH(COCH3) 1 2,5-二羥基-4-磺酸基苯基
IVc-058a 3-((2,5-二羥基-3-羧基苯基)甲硫基甲基)-2,5-二羥基苯甲酸 COOH H H 1 S 1 3-羧基-2,5-二羥基苯基
IVc-058b    3-((2,5-二羥基-3-磺酸基苯基)甲硫基甲基)-2,5-二羥基苯甲酸 SO3H H H 1 S 1 3-羧基-2,5-二羥基苯基
IVc-058c 3-((2,5-二羥基-4-磺酸基苯基)甲硫基甲基)-2,5-二羥基苯甲酸 COOH H H 1 S 1 2,5-二羥基-3-磺酸基苯基
IVc-058d    3-((2,5-二羥基-3-磺酸基苯基)甲硫基甲基)-2,5-二羥基苯磺酸 SO3H H H 1 S 1 2,5-二羥基-4-磺酸基苯基
IVc-059a 3-((2,5-二羥基-3-羧基苯基)甲基磺醯基甲基)-2,5-二羥基苯甲酸 COOH H H 1 SO2 1 3-羧基-2,5-二羥基苯基
IVc-059b    3-((2,5-二羥基-3-磺酸基苯基)甲基磺醯基甲基)-2,5-二羥基苯甲酸 SO3H H H 1 SO2 1 3-羧基-2,5-二羥基苯基
IVc-059c 3-((2,5-二羥基-4-磺酸基苯基)甲基磺醯基甲基)-2,5-二羥基苯甲酸 COOH H H 1 SO2 1 2,5-二羥基-3-磺酸基苯基
IVc-059d    3-((2,5-二羥基-3-磺酸基苯基)甲基磺醯基甲基)-2,5-二羥基苯磺酸 SO3H H H 1 SO2 1 2,5-二羥基-4-磺酸基苯基
IVc-060a    3-((2,5-二羥基-3-羧基苯基)甲氧基甲基)-2,5-二羥基苯甲酸 COOH H H 1 O 1 3-羧基-2,5-二羥基苯基
IVc-060b    3-((2,5-二羥基-3-磺酸基苯基)甲氧基甲基)-2,5-二羥基苯甲酸 SO3H H H 1 O 1 3-羧基-2,5-二羥基苯基
IVc-060c 3-((2,5-二羥基-4-磺酸基苯基)甲氧基甲基)-2,5-二羥基苯甲酸 COOH H H 1 O 1 2,5-二羥基-3-磺酸基苯基
   IVc-060d    3-((2,5-二羥基-3-磺酸基苯基)甲氧基甲基)-2,5-二羥基苯磺酸 SO3H H H 1 O 1 2,5-二羥基-4-磺酸基苯基
IVc-061a 參(3-羧基-2,5-二羥基苯基甲基)胺 COOH H H 1 N(CH2 )qR9 q = 1： R9 = 3-羧基-2,5-二羥基苯基 1 3-羧基-2,5-二羥基苯基
IVc-059a-E2-A4 3-((2,5-二乙醯氧基-3-甲氧基羰基苯基)甲基磺醯基甲基)-2,5-二乙醯氧基苯甲酸甲酯 COOMe Ac Ac 1 SO2 1 2,5-二乙醯氧基-3-(甲氧基羰基)苯基
IVc-059a-E2 3-((2,5-二羥基-3-甲氧基羰基苯基)甲基磺醯基甲基)-2,5-羥基苯甲酸甲酯 COOMe H H 1 SO2 1 2,5-二羥基-3-(甲氧基羰基)苯基
IVc-059a-mpe2 3-((2,5-二羥基-3-(2-N-
Figure 110108763-A0304-12-01
啉基乙氧基羰基)苯基)甲基磺醯基甲基)-2,5-羥基苯甲酸2-N-
Figure 110108763-A0304-12-01
啉基乙酯		 COOR R=2-N-
Figure 110108763-A0304-12-01
啉基乙基		 H H 1 SO2 1 2,5-二羥基-3-(2-N-
Figure 110108763-A0304-12-01
啉基乙氧基羰基)苯基
IVc-061a-E3 參(3-羧基-2,5-二羥基苯基甲基)胺 COOEt H H 1 N(CH2 )qR9 q = 1： R9 = 3-乙氧基羰基-2,5-二羥基-苯基 1 3-乙氧基羰基-2,5-二羥基苯基
根據又另外的具體實例，本發明包括根據表12的化合物： 表12
化合物編號 化合物化學名稱 結構
V-001a 4-(3-(2,5-二羥基-4-羧基苯基胺甲醯基)-5-羥基苄醯胺基)-2,5-二羥基 苯甲酸
Figure 02_image144
V-001a 二乙酯 4-(3-(4-(乙氧基羰基)-2,5-二羥基苯基胺甲醯基)-5-羥基苄醯胺基)-2,5-二羥基苯甲酸 乙酯
Figure 02_image146
V-002a 2-羥基-5-(3-羥基-5-(4-羥基-3-羧基苯基胺甲醯基)苄醯胺基)苯甲酸
Figure 02_image148
V-002a 二乙酯 5-(3-(3-(乙氧基羰基)-4-羥基苯基胺甲醯基)-5-羥基苄醯胺基)-2-羥基苯甲酸乙酯
Figure 02_image150
V-003a 4,4'-羰基雙(氮烷二基(azanediyl))雙(2,5-二羥基苯甲酸)
Figure 02_image152
V-003a 二乙酯 4,4'-羰基雙(氮烷二基)雙(2,5-二羥基苯甲酸二乙酯)
Figure 02_image154
本發明也關於一種製備式(I)氫醌衍生物化合物的方法，其包含： 步驟(a)：在NMI存在下，經由相應的醯氯或使用醯胺偶合劑諸如TCFH，將帶有酚官能基經保護的氫醌衍生的羧酸與帶有各種官能基的苯胺偶合。 步驟(b)：酯官能基的脫保護通常藉由皂化反應進行；及 步驟(c)：酚官能基的脫保護通常藉由催化氫化進行。 或者，可替代地， 步驟(d)：還原酚官能基經保護的氫醌衍生羧酸而生成苄醇 步驟(e)：活化芐醇官能基並被帶有各種官能基的芐基親核試劑(醇、硫醇，一級胺或三級胺)取代； 步驟(f)：酯官能基的脫保護通常藉由皂化反應進行；及 步驟(g)：酚官能基的脫保護通常藉由催化氫化進行。
所述方法如下圖所示：
Figure 02_image156
本發明的氫醌衍生物化合物可以光學活性形式(立體異構物)、E/Z異構物、對映異構物、外消旋物、非對映異構物以及其水合物及溶劑化物存在。化合物的溶劑化物是化合物分子與所用惰性溶劑之間互相吸引所致。溶劑化物例如為單水合物、二水合物或醇化物。
本發明的氫醌衍生物也可以藥學上可接受的鹽(其中母體氫醌衍生物藉由製備其酸性或鹼性鹽而改質)存在。
藥學上可接受鹽的實例尤其包括鹼性殘基(諸如胺)的無機或有機酸鹽；以及酸性殘基(諸如羧酸及類似者)的鹼性或有機鹽。藥學上可接受鹽可包括習用無毒的鹽或季銨鹽，其適合化合物的所有投予途徑，例如從無毒的有機或無機酸得到。例如，該習用無毒的鹽包括衍生自無機酸(諸如鹽酸、氫溴酸、硫酸、胺基苯磺酸、磷酸、硝酸及類似者)者；以及由有機酸(諸如乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、抗壞血酸、撲酸、馬來酸、羥基酸(hydroxyleleic)、苯乙酸、谷胺酸、苯甲酸、水楊酸、氫硫基、2-乙醯氧基-苯甲酸、富馬酸、甲苯磺酸、甲磺酸、乙烷二磺酸、草酸、2-羥乙磺酸、三氟乙酸及類似者)製成的鹽。
陽離子及陰離子的藥學上可接受鹽描述於「Pharmaceutical salts: A summary on doses of salt formers from the Orange Book. Saal C, European Journal of Pharmaceutical Sciences, 2013, 49, 614–623」。作為陽離子之例子，吾人可以列舉鋁、精胺酸、苄星(benzathine)、鈣、氯普羅卡因、膽鹼、二乙醇胺、二乙基胺、乙醇胺、乙二胺、賴胺酸、鎂、組胺酸、鋰、葡甲胺、鉀、普羅卡因、鈉、三乙基胺、鋅。作為陰離子之例子，吾人可以列舉乙酸鹽、天冬胺酸鹽、苯磺酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽(besylate)、碳酸氫鹽、酒石酸氫鹽、溴化物、迷迭香酸鹽、碳酸鹽、氯化物、檸檬酸鹽、癸酸鹽、依地酸鹽(edetate)、乙磺酸鹽(esylate)、富馬酸鹽、葡庚糖酸鹽、葡萄糖酸鹽、谷胺酸鹽、乙醇酸鹽、己酸鹽、羥基萘甲酸鹽、碘化物、2-羥乙磺酸鹽(isethionate)、乳酸鹽、乳酸脂酸鹽(lactobionate)、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、扁桃酸鹽、甲磺酸鹽、甲基硫酸鹽、黏酸鹽(mucate)、萘磺酸鹽(napsylate)、硝酸鹽、辛酸鹽、油酸鹽、巴摩酸鹽(pamoate)、泛酸鹽、磷酸鹽、聚半乳醣醛酸鹽、丙酸鹽、水楊酸鹽、硬脂酸鹽、乙酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、茶氯酸鹽(teoclate)、甲苯磺酸鹽(tosylate)。或者，兩性離子可作為鹽使用，諸如作為陽離子相對離子的游離胺基酸或賴胺酸以及作為陰離子相對離子的谷胺酸或天冬胺酸。作為精胺酸或賴胺酸的重複單元的短肽(2至20個胺基酸)及其與其他中性胺基酸的組合。此等陽離子細胞穿透肽(CPP)可用作藥物滲透到細胞的增強劑。
可用於本發明化合物的藥學上可接受鹽可以例如藉由習用化學方法由含有鹼性或酸性部分的母體化合物合成。通常，該鹽可以藉由使此等化合物的游離酸或鹼性形式與化學計量的合適鹼或酸在水中或在有機溶劑中或在兩者混合物中反應加以製備。通常，較佳為非水介質，諸如例如醚、乙酸乙酯、乙醇、異丙醇或乙腈。Remington的Pharmaceutical Sciences, 17th ed., Mack Publishing Company, Easton, PA, 1985, p. 1418列出合適的鹽，其揭示內容以引用方式併入本文。
根據本發明以及如本文在各種具體實例中所述的合適劑量可以根據個體的狀況、年齡及種類而變化，並且可以由本領域技術人員容易地決定。獸醫學及人類用藥所用的總日劑量適宜在0.01-2000 mg/kg體重的範圍，較佳在0.1-1000 mg/kg體重的範圍，較佳在1-100 mg/kg的體重範圍，並且可以單劑或分開數劑投予，此外，發現有指示時，也可以超過上限。在每種情況下，可以將此種劑量調整至個體需求，包括投予的特定化合物、投予途徑、所治療的病況以及所治療的患者。然而，化合物也可以每週、每月或甚至更長的間隔作為長效製劑(depot preparation)(植入物、緩釋調配物等)投予。在這種情況下，劑量可能比每日劑量高得多，並且可以適應投予形式、體重及具體適應症。適當的劑量可以經由進行習用的模型測定，較佳動物模型來測定。通常，對於重約70 kg的成年人口服或腸胃外投予，每日劑量應為約10 mg至約10.000 mg，較佳約200 mg至約1000 mg，儘管有指示時可能超過上限。應當理解，上述治療有效劑量不必是單次投予的結果，而通常是多次單位劑量投予的結果。此等單位劑量又可以包括每日或每週劑量的一部分，因此，在治療(接觸)期間測定治療有效劑量。例如，對於口服投予而言，日劑量可以為約0.04至約1.0 mg/kg體重，更佳為約0.04至約0.20 mg/kg/天，更佳為約0.05至約0.15 mg/kg/天，最佳約0.1 mg/kg體重。通常，活性物質的投予量可以在相對寬的範圍內變化，以達到且較佳維持所需的血漿濃度。活性成分的單位劑型可包含約0.1毫克至約15毫克。較佳單位劑型含有約0.1至約1毫克的藥劑，並且每天可以投予2至5次。然而，應注意還涵蓋其他替代途徑，例如以設計為維持上述血漿濃度的速率連續注入。視疾病的嚴重性、治療是用於急性表現還是用於預防目的、以及類似的考慮而定，特殊治療的時間也可以隨之改變。典型的投予持續約5至約14天的時間，通常為7天。
投予過程(週期)也可以每月間隔重複，或者腸胃外單位劑量可以每週一次間隔。口服單位劑量可以間隔一到數天投予，以提供決定的治療有效劑量。本發明化合物的合適劑量將視待治療的疾病類型、疾病的嚴重程度及病程、投予藥物是為預防或治療目的、患者的病史以及對化合物的反應以及負責醫師的標準而定。決定合適的劑量或投予途徑顯然在當前醫師的能力範圍內。動物實驗為決定人類治療的有效劑量提供可靠的指南。可以按照Mordenti, J.及Chappell, W.在所著毒動學及藥物開發一書中的「在毒動學中進行種間測量的使用」(「The use of interspecies scaling in toxicokinetics」, in Toxicokinetics and New Drug Development, editors Yacobi et al., Pergamon Press, New York, 1989, pp. 42-96)中建立的原則進行有效劑量的種間測量(inter-species scaling)。
本發明進一步提供醫藥組成物，其包含(i)治療有效量的式(I)氫醌衍生物化合物或藥學上可接受的鹽、或前藥、或其立體異構物、以及(ii)藥學上可接受的一或多種賦型劑。
根據本發明的醫藥賦型劑可選自由習用賦型劑組成之群，諸如但不限於增溶劑、黏合劑、填料、崩解劑、潤滑劑、pH調節劑、滲透促進劑、釋放調節劑、防腐劑、包衣劑、載體、掩味劑及其等之組合。
具有一或多種醫藥組分的本發明化合物的醫藥組成物可以與該賦型劑一起調配為液體藥物、固體或半固體藥物及/或氣體藥物。
當醫藥組成物以固體調配物形式存在時，可以包括但不限於顆粒劑、丸劑、片劑、膠囊劑、散劑、薄膜、錠劑、可壓碎片劑、可溶片劑、崩解片、可分散片劑、薄膜包衣片劑、以及任何上述固體形式的受控、持續、擴展或改質形式。此種調配物也可以是直接釋放、延遲釋放或改變釋放的形式。此外，直接釋放組成物可以是習用、可分散的、可咀嚼的、口溶的或快速融化的製劑，而可包含親水性或疏水性、或親水性及疏水性的組合、釋放速率控制物質的改變釋放組成物以形成基質或儲庫或基質及儲庫系統的組合。
可以使用任何一或多種技術來製備組成物，諸如直接摻混、乾式造粒、濕式造粒、均質化、研磨、微粉化、擠製及球形化。組合物可以未包衣、薄膜包衣、糖包衣、粉末包衣、腸溶衣和調釋包衣的形式存在。當組成物存在於液體調配物中時，可以包括但不限於任何液體形式，諸如溶液、懸浮液、奈米懸浮液、分散液、膠體、乳劑、洗劑、霜劑、軟膏劑、酊劑及凍乾組成物。當組成物以氣態調配物存在時，可以包括但不限於研磨粉或摻混物、微粉化粉末或摻混物、奈米懸浮液、氣霧劑、噴霧劑、小滴、薄霧、霧化溶液或懸浮液及/或霧化蒸氣。
如果需要、根據本發明的醫藥組成物可以進一步包含任何添加劑，諸如載體、黏合劑、香料、調味劑、甜味劑、著色劑、防腐劑、抗氧化劑、穩定劑及界面活性劑。
可將本發明的醫藥組成物及化合物調配成藉由以下者投予：腸內途徑諸如口服途徑；藉由注射，諸如靜脈內、皮下、眼內、肌肉內或腹膜內注射的腸胃外途徑；局部途徑諸如眼部途徑、黏膜及穿黏膜途徑，包括舌下/頰部途徑；以及肺、鼻、鼻內、支氣管內、肺內途徑。眼部投予途徑包括局部眼部投予、眼內、玻璃體內或眼球後投予。
根據本發明化合物的較佳調配物包括液體口服調配物、眼用調配物以及靜脈內和腹膜內調配物。
液體口服調配物為用於口服藥物投予的溶液及懸劑液形式，是常見、方便且被認為安全。液體口服調配物可用於輸送相對大量的藥物，並經常用於兒童族群以及吞嚥片劑或膠囊劑有困難的人。藉由胃腸道引入快速溶解及吸收藥物，但是必須考慮耐受性以及與胃腸中其他物質的相互作用。活性醫藥成分(API)的性質可以使其自身在簡單的水基口服溶液中調配，但是當API溶解性較差時，調配物需要圍繞分子設計以提高溶解度及生物利用度。引入界面活性劑、溶劑、緩衝劑及油增加溶解度並減少與胃液相互作用時的沉澱及/或降解。在需要懸浮液之處，通常會減小及和控制粒徑，以增強藥物的溶解度、滲透性並最終藥物吸收。隨著調配物開發的進展，引入防腐劑及調味劑以使患者順應及貯藏期限適當。
眼用調配物是直接遞送至眼睛的眼用調配物，並且通常為溶液或懸浮液形式的液體。眼睛投予避免胃腸道的新陳代謝，可用於口服吸收不良的藥物。眼藥水是無菌且等滲透壓，標稱pH為4-8，以避免刺激眼睛。將包括增溶劑、螯合劑、聚合物、界面活性劑、滲透促進劑及環糊精的賦型劑加入調配物以改善難溶性藥物的穩定性、改變黏度或增加溶解性、滲透性及生物利用度。
腸胃外給藥後，靜脈內調配物可將全部劑量快速吸收，並到達患者系統，以立即產生回應。這種引入模式避免胃腸道的新陳代謝，可用於口服時吸收不良的藥物。注射劑通常是無菌、等滲透壓的水性溶液，設計用於投予時不引起疼痛。對於難溶性藥物，可以用有機助溶劑、界面活性劑及緩衝劑對調配物進行改質以增加溶解度，奈米懸浮物調配物也可以接受。對於在溶液中不穩定的那些分子，可以將調配物凍乾供使用時稀釋。
本發明也提供套組，其包含含有治療有效劑量的一或多種本發明化合物或其調配物的組成物、以及用於投予該組成物或調配物的輸送裝置、以及包含使用手冊說明的仿單。
為了製備本發明的醫藥組成物，根據習用醫藥混合技術，可以將根據本發明的活性成分與醫藥上可接受的載體、佐劑及/或賦型劑混合。可用於本發明組成物中的藥學上可接受的載體包括任何標準醫藥載體，諸如磷酸鹽緩衝鹽溶液、水及乳劑，諸如油/水或水/油乳劑、以及各種類型的潤濕劑。組成物可另外包含固體醫藥賦型劑諸如澱粉、纖維素、滑石粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明膠、麥芽、稻米、麵粉、白堊、矽膠、硬脂酸鎂、硬脂酸鈉、單硬脂酸甘油酯、氯化鈉、脫脂奶粉及類似者。液體及半固體賦型劑可以選自甘油、丙二醇、聚乙二醇、水、乙醇及各種油，包括石油、動物、植物或合成來源的油，例如花生油、大豆油、礦物油、芝麻油等。液體載體(特別是用於注射溶液的液體載體)包括水、鹽水、葡萄糖水溶液及乙二醇。有關載體、穩定劑及佐劑的實例請參見Remington's Pharmaceutical Sciences, edited by E. W. Martin (Mack Publishing Company, 18th ed., 1990)。
組成物也可以包括穩定劑水及防腐劑。可以在本發明組成物中使用的藥學上可接受的溶劑的實例可以在諸如以下參考書中找到：Handbook of Pharmaceutical Excipients (Ninth Edition, Pharmaceutical Press, London and American Pharmacists Association, Washington, 2020)、Aulton's Pharmaceutics, The Design and Manufacture of Medicines. (Fifth edition, Editors： Kevin Taylor and Michael Aulton, Elsevier, 2017)," Ullmann's Encyclopedia of Industrial Chemistry, 6th Ed." (various editors, 1989-1998, Marcel Dekker) and in" Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems" (ANSEL et al., 1994 et 2011, WILLIAMS & WILKINS)。可以在本發明組成物中使用的藥學上可接受的溶劑的非限制實例包括但不限於丙二醇(也稱為1,2-二羥基丙烷、2-羥基丙醇、甲基乙二醇、甲基乙二醇或丙烷-1,2-二醇)、乙醇、甲醇、丙醇、異丙醇、丁醇、甘油、聚乙二醇(PEG)、乙二醇、Cremophor EL或任何形式的聚乙氧基化蓖麻油、二丙二醇、二甲基異山梨醇酯、碳酸亞丙酯、N-甲基吡咯烷酮、四氫呋喃聚乙二醇醚(glycofurol)、四乙二醇、丙二醇脂肪酸酯及其等之混合物。
根據本發明的化合物已顯示出抗纖維變性、抗發炎及抗血管生成功效。之後本文列出的數種疾病不僅涉及一個目標，而且涉及兩個甚至三個目標。疾病類別顯示主要的血管生成(血管)、發炎及/或纖維變性病理生物學。
一些具體實例中，本發明關於根據本發明化合物的前藥。此前藥的益處藉由本領域技術人員已知的方法獲得，例如藉由添加適當的可裂解的官能基，其將產生例如對於腸胃外輸送或口服輸送的更佳的水溶性。
具有很強的極性及帶電荷性質的用於本發明分子的前藥為特佳，因為此等官能基可能積極影響跨生物膜的被動滲透性。極性及帶電荷藥物的主要障礙是其膜通透性差，往往導致低量且多變的口服吸收，以及低口服生物利用度。此外，極性及帶電荷藥物的口服吸收通常與實質物種間變異性有關聯。滲透性差的藥物即使在局部投予後，在特定目標器官中的暴露水平也很低。截至目前，改善膜的滲透性一直是前藥研究中最富有成果的領域之一。
對本發明的藥物已開發不同的前藥策略，以克服眼上的局部途徑障礙、或口腔黏膜障礙、轉運子效應或其他局部使用。
前藥策略在1958年被Adrian Albert正式識別出(Albert, A. Chemical aspects of selective toxicity. Nature, 1958, 182, 421–422)，但是在上世紀早期即已開始，例子為六亞甲四胺、非那西汀(phenacetin)及普隆托西(prontosil)。前藥為具有很少或沒有藥理活性但具有內在的結構不穩定性的分子，無論是偶然還是設計之故，所述結構不穩定性允許活體內生物轉化為活性藥物。轉化可以藉由化學或酶促過程或兩者的組合進行。活性分子通常與不欲的理化性質有關，對其輸送至適當的生物目標帶來嚴重挑戰。
經過藥物結構修飾獲得的前藥被設計為影響分子的固有物化性質使其能夠輸送。此等開發並非總在發現階段就被整合到新分子的設計中。通常，類似物最適化是前進的較佳途徑。實施早期的前藥策略可能會導致更快的臨床開發，最終使藥物產品商業化。
對母體藥物最常見官能基的前藥策略描述於Rautio J, 2018 (Jarkko Rautio et al, Nature Reviews Drug Discovery, 2018, 17, 559-587)。這篇回顧描述前藥在當代藥物設計及開發中日益重要的角色以及對母體藥物最常見的官能基的前藥策略。
藉由添加適當的可裂解的官能基來獲得前藥的益處，所述可裂解的官能基將產生例如對於腸胃外輸送或口服輸送更好的水溶性。另一方面，對於極性很強且帶電荷的分子，此等官能基可能積極影響跨生物膜的被動滲透性。極性及帶電荷藥物的主要障礙是其膜通透性差，往往導致低量且多變的口服吸收，以及低口服生物利用度。
此外，極性及帶電荷藥物的口服吸收通常與實質物種間變異性有關聯。滲透性差的藥物即使在局部投予後，在特定目標器官中的暴露水平也很低。截至目前，改善膜的滲透性一直是前藥研究中最富有成果的領域之一。可以應用許多前藥策略來影響母體藥物的親脂性。藥物的親脂性藉由短鏈烴前驅部分掩蓋其極性及離子化功能而得到改善。親水性羥基、羧基、磷酸根或胺以及其他帶負電荷或帶正電荷的基團已成功轉化成更具親脂性的烷基或芳基酯或N-醯基衍生物，其藉由普遍存在的酯酶或肽酶迅速水解回體內的母體藥物。
已經開發大部分親脂性前藥以改善膜的滲透性及口服吸收。可以應用相同的前藥策略來改善經由皮膚或眼睛吸收的母體藥物的局部投予。對眼睛局部投予期間，前藥在滴注後很容易穿透角膜，前藥在此主要被羧基酯酶水解。
前藥也可以利用載體介導轉運。此等轉運子為膜蛋白，在控制關鍵極性內源營養素的攝取及排出扮演重要角色。其等的特異性不僅限於內源性受質，而且與內源性受質結構相似的藥物也可以藉由轉運子跨過細胞膜攜帶。載體介導轉運對極性及帶電荷藥物特別重要，因為藥物在跨生物膜的被動擴散可以忽略不計。可以利用載體介導轉運機制的前藥在藥物設計提供令人感興趣的目標。同樣的，前藥可以帶來改善的代謝穩定性。
前藥可以改善通常歸因於肝臟代謝的代謝不穩定性。類似地，不要的藥物腸道代謝可以藉由選擇性的前藥策略來克服。這種不穩定性會大大減少到達體循環及其目標的藥物總量。前藥可藉由掩蓋代謝不穩定但在藥理上必要的官能基(諸如酚)以避免快速代謝，從而保護活性藥物不受到這種首渡效應(first-pass effect)。
為了解決血漿水平不足及延長作用持續時間的問題，通常藉由諸如懸浮劑及聚合基質的調配物來控製藥物，所述調配物控製藥物釋放並避免峰頂效應並延長其作用。藉由影響活性藥物的釋放速率、吸收速率或其組織分佈的方式來改質其水溶性及溶解性，前藥可用於實現活性藥物的受控釋放。
前藥在數種皮下或肌內持續釋放貯庫注射劑的開發特別有用，此等注射劑可使母體藥物的治療血漿水平維持數周至數月。此等前藥通常是脂肪酸酯，諸如癸酸酯、棕櫚酸酯、庚酸酯、環戊丙酸酯或戊酸酯，其被調配在油基載體中，導致前藥的緩釋並因此調節母體藥物的布置。此等前藥的高親脂性也導致與血液及組織蛋白的結合，其減緩酶轉化，因此導致活性藥物緩慢地出現於體循環。
較佳靶向及較低的副作用經常可以藉由用具有酸不穩定性前藥在腫瘤組織的酸性環境中、在胞內體或溶酶體中裂解的前藥靶向來實現。使用位置特異性酶也可以實現類似的方案，並且前藥主要在酶濃度最高的所需器官或組織中裂解。對於帶電荷荷的藥物，細胞內裂解導致負電荷或正電荷藥物的高細胞濃度，其留在目標細胞內。
對本發明的藥物已開發不同的前藥策略，以克服眼上的局部途徑障礙、或口腔黏膜障礙、轉運子效應或其他局部使用。
根據本發明的藥物正帶有帶電荷的極性基團。要解決的問題視投予途徑以及長期或短期藥物作用而定。已經成功合成被小鼠以及人類組織及血液酯酶裂解的前藥實例。
本發明的化合物帶有羧基官能團和酚基。可以考慮從此等功能基衍生的各式各樣前藥：例如，羧酸最常被轉化為酯：簡單的烷酯(甲基、乙基、異丙基及較長鏈)、官能化的烷酯，諸如N-
Figure 110108763-A0304-12-01
啉基烷酯、吡咯啶基烷酯、N-甲基哌
Figure 110108763-A0304-12-02
基-烷酯、還有芳基酯，諸如癒創木酚衍生酯；混合的縮醛酯，諸如醯氧基甲基(或1-乙基)或烷氧基羰氧基甲基(或1-乙基)酯及(氧代二氧呃基)甲酯也是羧酸的有效前藥官能團。多種酯及官能化醚已被用作基於酚的前藥：簡單的脂族酯、芳香族酯、二羧酸的半酯、胺基酸酯、胺基甲酸酯、磷酸單酯、膦醯氧基甲基醚、醯氧基甲基(或1-乙基)醚、烷氧基羰氧基甲基(或1-乙基)醚、胺基醯氧基甲基醚及類似者。
因此，本發明提供一種治療及/或預防自體免疫、免疫、風濕病學、血管病症、眼科病症、纖維變性病症、代謝及胃腸病症、神經發炎性及神經退化性疾病、贅生物及癌症相關病症、激素相關疾病及由病毒及細菌感染性疾病引起的免疫病症及其等之併發症的疾病或病症的方法，所述方法包含投予需要的個體治療有效劑量的本發明如上所述的化合物及/或醫藥組成物。
根據本發明的醫藥組成物及方法特別適用的個體為人類或非人類動物個體。
根據本發明的化合物可以基於其等各自的細胞介素輪廓來靶向疾病，如對於數種化合物提供在BIODATA所述(參見圖3A-D)。以下網站Open Targets Platform (URL： https：//www.targetvalidation.org/, Denise Carvalho et al, Nucleic Acids Research, Volume 47, Issue D1, 08 January 2019, D1056–D1065, https：//doi.org/10.1093/nar/gky1133)會根據當前書目信息提供完整的圖片，並且可以按疾病或細胞介素進行檢索。
兩個典型的實例：(a)對糖尿病視網膜病變的疾病特異性檢索得到以下描述的與所述疾病高度相關的細胞介素(圖3C)。最上面三個細胞介素是作為糖尿病視網膜病變檢索的實例，顯示VEGFA評分= 1(血管內皮生長因子A)、HFE評分= 1(體內恆定鐵調節子)及TNF評分= 0.86(腫瘤壞死因子)，(b)檢索VEGFA：得到神經系統疾病、血管疾病、眼睛疾病、視網膜病變及其他數種疾病，如圖3D所示。
為了說明化合物對少數群組發炎細胞介素的效力，評估化合物對人類全血的影響(實施例3.6)及其IC50值對LPS誘導的發炎的抑制(表13，µM)。 表13：
化合物 GM-CSF IFNγ IL-1b IL-2 IL-4 IL-5 IL-6 IL-9 IL-10 IL-12p70 IL-13 IL-17A IL-17F IL-18 IL-21 IL-33 TGFβ TNFα TNFβ
Ia-001a 100 30.5 34.4 94.3 100 100 1.24 5.63 100 1.5 26.4 0.1 14.7 100 100 19.3 100 0.02 13.20
Ia-001a-Tz 100 100 100 7.99 100 100 0.75 8.63 26.1 32.4 32.1 0.11 46.5 100 100 23.6 100 0.63 53.00
Ia-001a-Tz/004a 3.4 0.61 100 4.91 100 100 3.04 8.48 19.5 12.2 1.5 0.02 2.4 46.6 0.3 1.67 100 0.002 3.02
Ic-001a-Tz2 100 1.38 100 9.45 100 100 0.52 9.13 100 29.1 0.12 0.31 0.15 33.9 32 0.23 100 0.1 0.41
Ia-001c 100 0.44 100 12.8 100 100 0.95 46.9 1.9 0.44 86.1 0.09 89.7 100 100 100 100 0.05 29.70
Ia-003a-Tz 100 2.95 100 43 100 100 1.41 3.62 6.94 1.26 89.6 0.07 83.9 100 1.49 72.2 100 0.18 55.00
Ic-007a 100 1.44 100 100 100 100 0.09 27.1 12.5 0.49 30.1 0.04 22.9 100 1.9 18.4 100 0.27 6.52
Ib-010a 100 2.22 33.3 2.74 100 100 1.02 11.58 100 0.27 100 0.42 100 100 67.8 31.3 100 0.31 49.30
Ib-010a-E3 100 2.79 100 36.2 100 100 0.24 26.8 100 0.84 33 0.52 34.2 100 100 20 100 0.98 38.20
Ia-015a 2.76 100 100 7.08 100 100 0.77 1.47 5.27 0.12 0.15 0.05 0.15 100 57.2 0.24 100 0.17 0.30
IIc-007a 26 0.11 100 12.8 100 100 0.05 2.14 17.9 3.37 0.25 0.01 0.26 100 9.41 0.18 100 0.03 0.29
IIc-009a 100 0.54 100 19.6 100 100 0.27 18.9 11.31 100 0.13 0.001 0.13 2.95 8.01 0.29 100 0.11 6.94
IIa-053a 100 1.04 100 1.67 100 100 2.2 1.41 100 0.27 29.9 100 28.8 100 100 12.1 100 0.02 91.50
IIIa-001aTz 100 18.9 100 100 100 100 1.98 3.01 7.78 0.48 0.15 0.17 0.16 27.7 3 0.14 100 0.31 0.23
IIIa-013a 27.8 0.15 100 57.1 100 100 3.55 11.9 37.3 0.5 0.37 0.15 0.41 100 1.63 1.11 100 0.51 0.89
IIIc-057a 100 0.9 16.2 24.2 100 100 0.19 11.1 100 0.73 4.73 1.32 5.06 100 1.56 2.93 100 0.15 1.58
IIIc-061a 31.2 2.48 100 100 100 100 0.18 8.85 17.9 37.2 0.31 0.04 0.32 32.4 6.38 0.31 100 0.03 0.81
IVc-058a 100 10.6 27.5 3.82 100 100 0.21 31.1 16.4 4.23 55.9 0.1 86.8 100 3.2 33.9 100 0.18 59.30
IVc-059a 100 4.34 38.6 21.2 100 100 0.11 0.4 1.31 42 100 0.16 100 100 1.87 27.5 100 0.16 0.33
IVc-059a-E2-A4 1.83 3.5 14.1 10.4 100 100 0.99 2.9 16.8 51.4 18.7 0.02 25.8 100 100 23.2 100 0.3 19.40
免疫/風濕病學/血管疾病可包括例如腹膜炎、川崎病(KD)、高津動脈炎(TA)、顯微多血管炎(MP)、巨大細胞動脈炎(GCA)、抗磷脂抗體症候群(APS)、貝西氏病(Behcet’s disease，BD)、伴隨多血管炎之肉芽腫病(GPA)或韋格納肉芽腫病(WG)、伴隨多血管炎之嗜酸性肉肉芽腫病、Churg-Strauss二氏症候群(Churg-Strauss syndrome)(EGPA)及酒渣鼻(RO)。
風濕病學病症特別會影響關節肌腱、疼痛的韌帶及骨骼、無法行動及發炎。此等疾病包括許多類型的關節炎諸如骨關節炎(OA)、類風濕性關節炎(RA)、狼瘡、脊椎關節炎：關節黏連性脊椎炎(AS)及乾癬性關節炎(PsA)、修格蘭氏症候群(Sjogren’s syndrome)、痛風、硬皮病、感染性關節炎、幼年特發性關節炎、風濕性多發性肌痛症。
腹膜炎為通常由於細菌或真菌感染引起的腹膜發炎。腹膜炎有兩種類型。第一類型是自發性腹膜炎，可發展成肝病(諸如肝硬化)或腎臟疾病的併發症。第二類型腹膜炎可能是由於腹部穿孔或其他醫學病況引起的併發症。若不接受治療，腹膜炎可導致嚴重、可能威脅生命的感染。
川崎病會造成全身中型動脈壁發炎，主要影響兒童。發炎傾向於影響冠狀動脈，而冠狀動脈提供血液給心肌。川崎病有時也稱為黏膜皮膚淋巴結症候群，因為其也會影響在感染時會腫脹的淋巴結、皮膚以及口腔、鼻子及喉嚨內的黏膜。
高津動脈炎是一種罕見的血管炎，是引起血管發炎的疾病群組。高津動脈炎中，發炎損害主動脈及其主要分支。所述疾病可導致動脈狹窄或阻塞，或導致動脈瘤。高津動脈炎也會導致手臂或胸部疼痛、高血壓，最終導致心臟衰竭或中風。需要藥物來控制動脈中的發炎並預防併發症。
伴隨多血管炎之肉芽腫病是一種罕見的病症，會引起鼻子、鼻竇、喉嚨、肺部及腎臟內血管發炎。這種病症以前稱為韋格納肉芽腫病，是稱為血管炎的血管疾病群組之一。其減慢血液流向某些器官的速度。受影響的組織會發展成稱為肉芽腫的發炎區域，會影響此等器官的運作方式。未經治療，所述病況可能會致命。
巨大細胞動脈炎是動脈壁的發炎。最常見，其會影響頭部的動脈，特別是太陽穴。因此，巨大細胞動脈炎有時被稱為顳動脈炎。巨大細胞動脈炎經常引起頭痛、頭皮壓痛、下顎疼痛及視力問題。未經治療會導致失明。
當免疫系統錯誤地產生使血液更容易形成血栓的抗體時，就會發生抗磷脂抗體症候群。這會在腿部、腎臟、肺部及大腦中引起危險的血栓。抗磷脂抗體症候群也會導致孕婦流產及死產。抗磷脂抗體症候群無法治癒。只有可用的藥物才能減少血栓的風險。
貝西氏病也稱為貝西氏症候群，是一種引起血管發炎罕見疾病。這種疾病可能導致許多徵象及症狀，乍看之下似乎並不相關。其等可能包括口腔疱疹、眼睛發炎、皮疹及病變以及生殖器疱疹。當前的治療可能有助於減輕貝西氏病的病況並預防嚴重的併發症，諸如失明。
Churg-Strauss二氏症候群是一種以血管發炎為特徵的疾病。這種發炎會限制血液流向器官及組織，有時會造成永久損壞。這種病況也被稱為伴隨多血管炎之嗜酸性肉芽腫病(EGPA)。哮喘是Churg-Strauss二氏症候群最常見的徵象。此病症也可能引起其他問題，諸如花粉症、皮疹、胃腸道出血以及手腳疼痛及麻木。Churg-Strauss二氏症候群無法治癒。當前的藥物包括類固醇及其他有效的免疫抑制劑藥物，以幫助控制病況。
酒渣鼻是一種常見的皮膚病況，會導致臉部發紅及可見血管。其也可能產生小、紅色的充滿膿液的腫塊。此等徵象及症狀可能會發作數周至數月，然後消失一段時間。酒渣鼻可能被誤認為痤瘡、其他皮膚問題或自然紅潤。酒渣鼻無法治癒，但治療可以控制及減輕徵象及症狀。骨關節炎是關節炎的最常見形式，影響全球數百萬人。當保護性軟骨隨著時間的演進而磨損時就會發生。儘管骨關節炎會損害任何關節，但所述病症最常見的是影響手、膝蓋、臀部及脊椎的關節。骨關節發炎狀通常可以獲得控制，儘管關節的損害無法逆轉。
狼瘡是一種自體免疫疾病。其會導致免疫系統產生稱為自體抗體的蛋白質，此等蛋白質會攻擊包括腎臟的自身組織及器官。狼瘡腎炎是患有全身性紅斑狼瘡(通常稱為狼瘡)的人的常見併發症。當狼瘡自體抗體影響腎臟結構時，就會發生狼瘡腎炎。這會導致腎臟發炎，並可能導致尿液中的血液、尿液中的蛋白質、高血壓、腎功能受損或甚至腎衰竭。
硬皮病是一組罕見疾病，涉及皮膚及結締組織的硬化及繃緊。硬皮病有許多不同的類型。硬皮病僅影響某些人的皮膚。但是硬皮病也會損害許多人皮膚以外的結構，諸如血管、內部器官及消化道(全身性硬皮病)。硬皮病無法治愈。
修格蘭氏症候群為一種免疫系統病症，其最常見的兩種症狀是：眼乾及口乾。所述病況經常伴有其他免疫系統病症，諸如類風濕性關節炎及狼瘡。修格蘭氏症候群通常首先影響眼睛及嘴巴的黏膜及分泌水分的腺體-導致流淚及唾液減少。
感染性或敗血性關節炎是關節的痛苦感染，可能是細菌從身體的另一部分經由血液傳送造成。當諸如動物咬傷或外傷的穿透性損傷將細菌直接傳送到關節時，也會發生敗血性關節炎。有人工關節的人也有感染性關節炎的風險。膝蓋最常受感染，但敗血性關節炎也會影響臀部，肩膀及其他關節。感染會迅速嚴重破壞關節內的軟骨及骨骼，因此及時治療至關重要。
幼年特發性關節炎以前稱為幼年類風濕性關節炎，是16歲以下兒童最常見的關節炎類型。幼年特發性關節炎會引起持續的關節疼痛、腫脹及僵硬。有些孩子可能僅幾個月就出現症狀，而另一些孩子則多年才出現症狀。某些類型的青少年特發性關節炎會引起嚴重的併發症，諸如生長問題、關節損傷及眼睛發炎。
風濕性多發性肌痛症是一種發炎病症，會引起肌肉疼痛及僵硬，特別是肩膀及臀部。風濕性多發性肌痛症的徵象及症狀通常很快開始，早晨更嚴重。患有風濕性多發性肌痛症的大多數人超過65歲。此種病況與另一種稱為巨大細胞動脈炎的病況有關。
眼科疾病可包括例如且不限於老年黃斑部退化(AMD或ARMD、乾濕形式)、翼狀胬肉(PTE)、糖尿病性視網膜病變(DR)、糖尿病性黃斑部水腫(DME)、Stargardt氏病(SD)、增生性玻璃體視網膜病變(PVR)、乾眼症候群(DYS)、眼內炎、中心性漿液性脈絡視網膜病變(CSC)、色素沉著性視網膜炎(RP)、青光眼及青光眼相關併發症、及葡萄膜炎(UVE)。
濕式黃斑部退化是一種慢性眼病，會導致視力模糊或視野中的盲點。其通常是由異常血管引起，此等血管將液體或血液洩漏到黃斑部。黃斑部在視網膜中負責中央視力的部分。濕性黃斑部退化是與年齡有關的黃斑部退化的兩種類型之一。濕式類型往往從乾式類型開始。乾式黃斑部退化更常見且不那麼嚴重。其由於黃斑部變薄，也會導致中央視力模糊或減弱。乾式黃斑部退化可能先在一隻或兩隻眼睛中發展，然後影響到兩隻眼睛。通常喪失中心視力，但仍保留周圍的視力。
糖尿病性視網膜病變一種影響眼睛的糖尿病的併發症。其係由於視網膜血管受損所致。首先，糖尿病性視網膜病變可能不會引起任何病況或僅引起輕度視力問題。其最終會導致失明。任何患有1型或2型糖尿病的人皆會演變成此病況。DME是一種嚴重的眼部併發症，其發生在微動脈瘤從血管壁突出、滲漏或將液體及血液滲入視網膜從而引起黃斑部水腫時。
Stargadt疾病是一種眼睛疾病，會導致兒童和年輕人的視力下降。其是一種遺傳性疾病，因此會從其父母傳給孩子。Stargardt疾病是一種黃斑部退化，通常被稱為青少年黃斑部退化。
PVR是一種以裂孔性視網膜剝離的併發症之形式發展的疾病。在進行初次視網膜剝離手術的患者中，約有8–10%的患者發生PVR，阻礙裂孔性視網膜剝離的成功手術修復。PVR可以藉由手術治療以重新附著剝離的視網膜，但手術的視覺效果非常差。
乾眼疾病是一種在眼淚不能為眼睛提供足夠潤滑時發生的常見病況。基於多種原因，眼淚可能不足且不穩定。例如，如果您沒有產生足夠的眼淚或產生品質不良的眼淚，可能會導致眼睛乾澀。這種淚液的不穩定性導致發炎及眼睛表面的損傷。
眼內炎是眼睛內部的發炎，可能在眼睛注射或手術後發生。徵象通常是：視力模糊或其他視力變化、眼睛疼痛、眼睛紅、眼睛畏光或流淚。
色素沉著性視網膜炎(RP)是一組罕見的遺傳性疾病，其涉及視網膜(其為沿眼睛後部排列的光敏組織)細胞的破裂及損失。常見症狀包括夜間看不清及側(周圍)視力喪失。
青光眼是一組損害視神經(其健康對於良好視力至關重要)的眼睛病況。此損壞通常是由異常高的眼壓引起的。青光眼是60歲以上的人失明主要原因之一。其可以在任何年齡發生，但更常見於老年人。許多形式的青光眼沒有警告徵象。效應極為漸進，直到病況發展到晚期視力才有改變。
葡萄膜炎是眼睛發炎的一種形式。其影響眼壁或葡萄膜組織的中間層。葡萄膜炎警告徵象經常突然出現並迅速惡化。其等包括眼睛發紅、疼痛及視力模糊。葡萄膜炎的可能原因是感染、受傷或自體免疫或發炎疾病。葡萄膜炎可能很嚴重而導致永久性視力喪失。
根據本發明的化合物及醫藥組成物也可用於治療及/或預防選自糖尿病性視網膜病變、與年齡有關的黃斑部退化、青光眼、及色素沉著性視網膜炎組成之群組的視網膜神經退化性疾病的方法。
視網膜神經退化性疾病是指以進行性神經元喪失為特徵的視網膜病況。糖尿病性視網膜病變、與年齡有關黃斑部退化、青光眼及色素沉著性視網膜炎被視為其中神經退化扮演重要作用的視網膜疾病。
根據此較佳具體實例，根據本發明的化合物可以與其他活性劑組合以增強待治療病況的治療功效，特別是與二肽基肽酶-4抑制劑(DPPIV)或其藥學上可接受的鹽組合使用，用於局部眼睛治療及/或預防視網膜神經退化性疾病。DPPIV抑制劑可以選自由西他列汀(sitagliptin)、沙格列汀(saxagliptin)、維達列汀(vildagliptin)、利那列汀(linagliptin)、阿那列汀(anagliptin)、替格列汀(teneligliptin)、阿格列汀(alogliptin)、翠拉列汀(trelagliptin)、吉密列汀(gemigliptin)、歐馬列汀(omarigliptin)、其等之藥學上可接受的鹽及其等之混合物組成之群組。
為了減少患者所需的眼內抗-VEGF抗體注射的次數，根據本發明的化合物與抗-VEGF治療的組合也是有利的。對具有視網膜神經退化性疾病(諸如例如糖尿病性視網膜病變、年齡相關性黃斑部退化)的患者投予減緩此等疾病的進展並減少患者所需的抗-VEGF藥物療法。
纖維變性疾病可包括例如但不限於囊腫纖維化、腹膜後纖維變性、特發性肺纖維化、合併肺纖維化及肺氣腫(CPFE)、嗜酸性紅球性血管中心性纖維化、腸纖維化、卵巢纖維化、腎性系統性纖維化、口腔黏膜下纖維化(OSMF)及肝纖維化。
囊腫纖維化(CF)是一種遺傳性病症，會對肺、消化系統及體內其他器官造成嚴重損害。其會影響產生黏液、汗液及消化液的細胞。分泌物不起潤滑劑的作用，而是堵塞管子、導管及通道，特別是在肺及胰臟中。
肺纖維化是一種在肺組織受損及疤痕形成時發生的肺部疾病。此增厚、僵硬的組織使肺部更難以正常運作。與肺纖維化相關的結疤可能是由多種因素引起。由肺纖維化引起的肺損傷無法修復，但是藥物及療法有時可以幫助緩解病況並改善生活質量。
肺氣腫是導致呼吸急促的肺部病況。肺泡受損，隨著時間的流逝，肺泡的內壁會減弱並破裂，從而形成較大的空氣空間，而不是許多較小的空氣空間。此減少肺的表面積，進而減少到達血液的氧氣量。受損的肺泡無法正常運作，導致舊空氣滯留，並且沒有空間讓新鮮的富氧空氣進入。
代謝及胃腸疾病可包括但不限於糖尿病誘導併發症：糖尿病性腎病變(DN)、糖尿病性視網膜病變(DR)、糖尿病心肌病(DCDM)、或糖尿病足潰瘍(DFU)。肝病可能包括非酒精性脂肪肝(NAFLD)、非酒精性脂性肝炎(NASH)、原發性膽汁性膽管炎(PBC)、肝纖維化或肝硬化(HF)、發炎腸病(IBD)：潰瘍性結腸炎、克羅恩氏病、腸道纖維化。除糖尿病性腎病變以外，其他腎臟疾病可包括多囊性腎臟疾病(PKD)、多囊性腎病變(CKD)、腎性全身性纖維化(NSF)、及胰臟炎(急性及慢性)。
糖尿病性腎病變是1型糖尿病及2型糖尿病的嚴重腎臟相關併發症。其也稱為糖尿病腎病。大約25%的糖尿病患者最終會演變成腎臟疾病。糖尿病性腎病變會影響腎臟進行從體內清除廢物及多餘液體的日常工作的能力。隨著多年過去，此病況慢慢損害腎臟精細的過濾系統，並可能演變成腎功能衰竭，也稱為末期腎臟疾病。腎衰竭是危及生命的病況。
非酒精性脂肪肝(NAFLD)是一系列會影響喝少量酒或不喝酒的人的肝臟病況的總稱。顧名思義，NAFLD的主要特徵是肝細胞儲存的過多脂肪。最常見的慢性肝病形式。一些患有NAFLD的個體會演變成非酒精性脂性肝炎(NASH)，其為一種侵襲性形式的脂肪肝疾病，特徵是肝臟發炎，並可能演變為晚期結疤(肝硬化)及肝衰竭。此損害類似於大量飲酒所造成的損害。
原發性膽汁性膽管炎是一種慢性自體免疫，其中肝臟中的膽管被緩慢破壞。當膽管受損時，膽汁會在肝臟中倒退，有時會導致不可逆的肝硬化。遺傳因素及環境因素的組合引發這種疾病。
IBD描述涉及消化道慢性發炎的疾病。IBD的類型包括潰瘍性結腸炎，其涉及沿結腸及直腸的淺層內壁的潰瘍、以及克羅恩氏病，其特徵在於消化道內壁的發炎，其往往可涉及消化道的更深層。潰瘍性結腸炎及克羅恩氏病通常都以腹瀉、直腸出血、腹痛、疲勞、體重減輕為特徵，有時會導致危及生命的併發症。
與贅生物和癌症相關的病症可能包括胰臟癌：最多為纖維化、腎細胞癌、輻射誘導性纖維化、原發性骨髓纖維化、纖維增生、纖維肉瘤、肝細胞癌、視網膜母細胞瘤、眼內淋巴瘤及黑色素瘤(增生、結膜、葡萄膜)。
本發明也關於經由結合病毒蛋白硫酸乙醯肝素(heparan sulfate)結合位置來治療、預防及減少病毒感染。根據本發明的化合物與生長因子(FGF、VEGF及其他生長因子)及生長因子受體(FGFR、VEGFR及其他)的硫酸乙醯肝素結合區相互作用。已知許多病毒利用其等對結合到細胞膜的硫酸乙醯肝素部分的親和力與哺乳動物細胞相互作用。在其表面蛋白上帶有硫酸乙醯肝素(HS)結合域的病毒將這種HS親和力用作進入及感染細胞並與附著在細胞上的硫酸乙醯肝素結合的主要入口之一。附著於HS時，病毒便可以使用每種病毒特有的各種入侵機制來感染細胞。根據本發明的化合物與蛋白質(特別是病毒蛋白質)的乙醯肝素結合域的強相互作用，可預防血液細胞、位於血管及器官的內皮細胞以及口腔、鼻黏膜及肺部以及胃腸道存在的表面上皮細胞病毒感染。已知數種與硫酸乙醯肝素具有高親和力的病毒種類，諸如但不限於呼吸道融合細胞病毒、人類間質肺炎病毒、流感(H1N1及類似者)、人類鼻病毒(HRV)、鼻合病毒(rhinosyncitial virus)(RV)、屈公熱病毒(chikungunya virus)、冠狀病毒諸如CoV、SARS-CoV、MERS-Cov、COVID-19(SARS-CoV-2及其變體)。HS是SARS-CoV-2感染的必要輔助因子。HS與鄰近ACE2的SARSCoV-2棘蛋白的受體結合域相互作用，使棘結構轉變為開放構型，從而促進ACE2結合。病毒及細菌感染性疾病也可包括敗血性休克、由於手術或感染引起的眼內發炎(諸如眼內炎)。實施例 實施例 1 ：化合物及中間體的合成 實施例 1.1 ：類型 Ia 的分子 ：單醯胺， 25個實例
Figure 02_image158
前驅物的合成 流程 1. 合成中間體KI-1 及 KI-6
Figure 02_image160
程序 ： KI-1 及 KI-6 的 合成(步驟[1]，[2])
2,5- 雙 ( 芐氧基 ) 對苯二甲酸二乙酯 (KI-0)( 步驟 [1]) 。 在15分鐘內，於環境溫度下將碳酸鉀-325目(326.1 g，2.4 mol)分批加入2,5-二羥基對苯二甲酸二乙酯(200.0 g，0.79 mol)在DMF(800.0 mL)中的攪拌溶液。然後在30分鐘內將溴化芐基(280.0 mL，2.4 mol)滴加到反應燒瓶中，並將得到的混合物在100°C加熱2小時，從而形成濃稠的奶油色沉澱物。將反應混合物冷卻至環境溫度，並用飽和氯化銨水溶液(2L)處理。將得到的懸浮液攪拌30分鐘，然後過濾。固體材料用飽和氯化銨水溶液(2×200 mL)洗滌。然後將固體懸浮在乙醇(400 mL)中，過濾並在真空烘箱中乾燥，得到所欲產物，為白色固體(341.0 g，0.785 mol，99.8%)。
UPLC-MS (酸性方法, 2分鐘)：rt = 1.36分鐘，未觀察到電離，峰面積＞95%
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.51–7.44 (m, 6H),7.44–7.36 (m, 4H),7.36–7.28 (m, 2H),5.17 (s, 4H),4.29 (q,J = 7.1 Hz, 4H),1.26 (t,J = 7.1 Hz, 6H)。2,5- 雙 ( 芐氧基 )-4-( 乙氧基羰基 ) 苯甲酸 (KI-1) 及 2,5- 雙 ( 芐氧基 ) 對苯二甲酸 (KI-6)( 步驟 [2])
將氫氧化鉀(14.2 g，0.25 mol)在水(200.0 mL)中的溶液快速加入2,5-雙(芐氧基)對苯二甲酸二乙酯(100 g，0.23 mol)於1,4-二㗁口山(1 L)溶液中，並將所得混合物在環境溫度下攪拌過夜。真空除去溶劑，導致形成白色漿料。將粗產物懸浮於EtOH(500 mL)中、過濾，並將收集的固體在真空烘箱中乾燥，得到純的2,5-雙(芐氧基)對苯二甲酸二乙酯(23.0 g，0.053 mol，23%)。
UPLC-MS (酸性方法, 2分鐘)：rt = 1.36分鐘，未觀察到電離，峰面積98%，
濃縮乙醇濾液，得到油。加入乙酸乙酯(500 mL)而形成沉澱，將其過濾並用乙酸乙酯(200 mL)洗滌，得到2,5-雙(芐氧基)對苯二甲酸(KI-6) ，為白色固體(18.9 g，0.042 mol，18%)。
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：rt = 1.22分鐘，m/z 377.1 [M–H]– ，峰面積95%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.52–7.45(m, 4H),7.41–7.33(m, 4H),7.33–7.26(m, 4H),5.13(s, 4H)。
濾液用碳酸鈉水溶液(200 mL)、1M鹽酸水溶液(500 mL)及鹽水(500 mL)的飽和溶液洗滌，然後乾燥(Na2 SO4 )，過濾並濃縮至乾，得到2,5-雙(芐氧基)-4-(乙氧基羰基)苯甲酸(KI-1) ，為白色固體(53 g，0.130 mol，57.0%)。
UPLC-MS (酸性方法, 2分鐘)：rt = 1.22分鐘，m/z 405.3 [M-H]- 、峰面積96%。
1 H NMR(400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.52–7.27(m,13H),5.17(s, 4H),4.28(q,J = 7.1 Hz, 2H),1.26 (t,J = 7.1 Hz, 3H)。合成 KI-1 的大規模方案
在10 L夾套式反應器中裝入2,5-雙(芐氧基)對苯二甲酸二乙酯(500.00 g，1.15 mol)、1,4-二㗁口山(2.5 L)、氫氧化鉀(71.00 g，1.26 mol)及水(500 mL )。將反應混合物在室溫下攪拌過夜。LCMS分析顯示反應已經完成一半，也顯示副產物(二酸)與起始原料(二酯)的比例為(二酯：單酸：二酸= 28：58：14 )。(二酸：4.44 rt、單酸：5.08 rt、二酯：5.68 rt)。在此階段，真空除去溶劑。在10 L夾套式容器中，將粗產物放入2：1的乙醇：水(3 L)混合物中，攪拌過夜並過濾以得到： 固體：(二酯：單酸：二酸 = 86：12：2，110.00 g，無色固體) 濾液：(二酯：單酸：二酸 = 3：63：34)
將濾液真空濃縮，得到油。將此油溶於乙酸乙酯(2.5 L)，在10 L夾套式容器中攪拌過夜，並過濾，得到白色固體(150.00 g)。
固體：(二酯：單酸：二酸=微量：40：60)。
收集濾液，用碳酸氫鈉(100 mL)，1N鹽酸溶液(200 mL)及鹽水(200 mL)的飽和水溶液洗滌，用無水硫酸鈉乾燥並過濾。減壓除去溶劑，得到所欲產物，為白色固體的2,5-雙(芐氧基)-4-(乙氧基羰基)苯甲酸(KI-1)，將其在真空烘箱中於50°C乾燥48小時(225.00 g，產率49%)(產率在49-65%之間變化)。流程 2 ：合成中間體KI-1Bn
Figure 02_image162
程序： KI-1Bn的合成：
2,5- 雙 ( 芐氧基 )-4-( 芐氧基羰基 ) 苯甲酸 (KI-1Bn)。在0°C下，在攪拌下對2,5-二羥基對苯二甲酸(1.97 g，10 mmol)在DMF(20 mL)中的溶液加入氫化鈉(2.0 g，50 mmol)，然後在5分鐘內滴加芐基溴(5.95 mL，50 mmol，5eq)，所得混合物保持在室溫2小時。然後將混合物在60°C加熱18小時。將反應混合物冷卻至環境溫度，並小心地用MeOH(5 mL)處理。在減壓下濃縮混合物，並將殘餘材料與庚烷(3x)共蒸發。將殘餘物溶於DCM(30 mL)，將有機相用1M HCl(25 mL)洗滌，將分離的水層用DCM(3×30 mL)萃取，並將合併的有機相乾燥(MgSO4)並濃縮。將粗固體從EtOH(〜30mL)再結晶，得到純的KI-0Bn(2.286 g，41%)。將KI-0Bn樣本(282 mg，0.5 mmol)加入1,4-二㗁口山(10 mL)及氫氧化鋰水合物(22 mg，0.52 mmol)的混合物，並將混合物加熱至80°C 持續3天。將混合物冷卻至室溫，加入AcOEt(30 mL)中，並將溶液用1M HCl(2 mL)洗滌。將有機相乾燥並濃縮，並將殘餘物進行管柱層析法，得到被約16%的二酯KI-0Bn污染的單酯KI-1Bn。
KI-0Bn ：1 H NMR (400 MHz, CDCl3 )：δ 7.51 (s, 2H),7.36–7.30 (m, 20H), 5.34 (s, 4H),5.11 (s, 4H)。
KI-1Bn ：1 H NMR (250 MHz, CDCl3 )：δ 7.86 (s, 1H),7.61 (s, 1H),7.41–7.30 (m, 20H),5.36 (s, 2H),5.26 (s, 2H),5.16 (s, 2H)。單醯胺的合成 流程 3. 單醯胺Ia 的 合成
Figure 02_image164
醯胺偶合 [3A] 的 通用程序 A
Figure 02_image166
從KI-1 或 KI-6 經由 醯氯的偶合模型反應 (Ia-013a)
2-(2,5- 雙 ( 芐氧基 )-4-( 乙氧基羰基 ) 苯甲醯基胺基 ) 間苯二甲酸二甲酯 。將2,5-雙(芐氧基)-4-(乙氧基羰基)苯甲酸(KI-1，1.1 g，2.8 mmol)溶解在亞硫醯氯(6 mL)，並將得到的混合物攪拌5分鐘。加入幾滴DMF，並將所得混合物在環境溫度下攪拌18小時。真空除去過量的亞硫醯氯，並將殘餘物與甲苯(3×20 mL)共蒸餾，得到醯氯。在環境溫度下，將醯氯在DCM(10 mL)中的溶液快速加入胺(2-胺基間苯二甲酸二甲酯二甲基，210 mg，3.1 mmol)及N,N-二異丙基乙胺(0.53 mL，3.045 mmol)在DCM(10 mL中)的溶液，攪拌反應18小時。用DCM(70 mL)稀釋反應，並用1M鹽酸水溶液(100 mL)、水(100 mL)洗滌，乾燥(Na2 SO4 )，過濾並濃縮，得到粗產物，將其藉由矽膠層析法，用乙酸乙酯(0至25%)於異己烷中的梯度洗滌，得到所欲產物，為白色固體(1.24 g，2.075 mmol，75%)。
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：rt = 1.37分鐘；m/z = 598.2 [M+H]+ ，峰面積＞95%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 11.60 (s, 1H),8.02 (d,J = 7.8 Hz, 2H),7.69 (s, 1H),7.59 – 7.23 (m, 12H),5.49 (s, 2H),5.19 (s, 2H),4.28 (q,J = 7.1 Hz, 2H),3.71 (s, 6H),1.26 (t,J = 7.1 Hz, 3H)。醯胺偶合 [3B] 的通用程序 B
Figure 02_image166
從KI-1 或 KI-6 使用縮合劑進行偶合 模型反應 (Ia-001a)
2-(2,5- 雙 ( 芐氧基 )-4-( 乙氧基羰基 ) 苯甲醯基氨基 ) 苯甲酸甲酯 。在環境溫度下，將1-甲基咪唑(13.0 mL，163 mmol)加入2,5-雙(芐氧基)-4-(乙氧基羰基)苯甲酸(KI-1 ，12.95 g，32 mmol)及鄰胺苯甲酸甲酯(5.729 g，38 mmol，1.190 eq)於MeCN(150 mL)中的混合物。在30分鐘內分批加入六氟磷酸N ,N,N′,N ′-四甲基氯甲脒(TCFH)(10.728 g，0.038 mol)，並將得到的混合物在環境溫度攪拌過夜。反應混合物用1M鹽酸水溶液(700 mL)處理。將得到的懸浮液攪拌10分鐘，然後過濾。用水(2×200 mL)洗滌固體材料。然後將固體懸浮在乙醇(200 mL)中，過濾，用乙醚(100 mL)洗滌，並在真空烘箱中乾燥，得到所欲產物，為白色固體(14.7 g，27 mmol，86%)。
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)： rt = 1.43分鐘；m/z = 540.2 [M+H]+ ，峰面積＞99%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 11.87 (s, 1H),8.65 (d,J = 8.4 Hz, 1H),7.98 (dd,J = 8.0,1.7 Hz, 1H),7.81 – 7.61 (m, 2H),7.59 – 7.12 (m, 12H),5.41 (s, 2H),5.20 (s, 2H),4.28 (q,J = 7.1 Hz, 2H),3.74 (s, 3H),1.27 (t,J = 7.1 Hz, 3H)。通用去 保護 流程 [4] 、 [5] 皂化 模型反應 ( Ia-013a)
2-(2,5- 雙 ( 芐氧基 )-4- 羧基苯甲醯基胺基 ) 間苯二甲酸 。將氫氧化鋰(42 mg，1 mmol)在水(4 mL)中的溶液添加至2-(2,5-雙(芐氧基)-4-(乙氧基羰基)苯甲醯基胺基)間苯二甲酸二甲酯(100 mg，0.167 mmol ) 在THF(6 mL)中的溶液，並將所得混合物在環境溫度下攪拌18小時。將另外的LiOH(6 eq)在水(4 mL)中的溶液加入反應混合物，再攪拌23小時。完成後，將水(50 mL)加入到反應中，並將混合物用乙酸乙酯(50 mL)洗滌。水層用1M鹽酸水溶液酸化至pH＝2，並用乙酸乙酯(2×50 mL)萃取。收集有機層，乾燥(Na2 SO4 )，過濾並濃縮，得到標題化合物，為白色固體(82 mg，0.151 mmol，91%)。
UPLC-MS(酸性方法，2分鐘)：rt = 1.02分鐘；m/z = 542.1 [M+H]+ ，峰面積＞95%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 13.18 (s, 2H),11.74 (s, 1H),8.00 (d,J = 7.8 Hz, 2H),7.71 (s, 1H),7.58 – 7.43 (m, 5H),7.40 – 7.24 (m, 7H),5.47 (s, 2H), 5.14 (s, 2H)。脫芐基 模型反應 (Ia-013a)
2-(2,5- 二羥基 -4- 羧基苯甲醯基胺基 ) 間苯二甲酸 (Ia-013a) 。將Pd/C(94 mg，10%)加入2-(2,5-雙(芐氧基)-4-羧基苯甲醯胺基)間苯二甲酸(0.94 g，1.74 mmol)在EtOH及DCM為10：30的混合物中的溶液。將混合物在大氣壓下於環境溫度下置於氫氣下並攪拌18小時。完成後，將混合物通過矽藻土(Celite)過濾，用DCM及MeOH洗滌。合併濾液及洗滌液，並在減壓下濃縮，得到所欲產物Ia-013a ，為黃色固體(644 mg，1.69 mmol，98%)。
UPLC-MS (酸性方法，4分鐘)： rt = 0.91分鐘；m/z =362.0 [M+H]+ ，峰面積＞98%
1 H NMR (DMSO-d6 ) δ：13.11 (s, 2H),11.70 (s, 1H),11.13 (s, 1H),7.97 (d,J = 7.8 Hz, 2H), 7.47 (s, 1H),7.41 (s, 1H),7.38 (t,J = 7.7 Hz, 1H)流程 4a. 從 KI-1Bn 合成單醯胺Ia
Figure 02_image168
來自 KI-1Bn 的通用程序
Figure 02_image166
經由醯氯的偶合模型反應： Ia-032a 的合成
4-(2,5- 雙 ( 芐氧基 )-4-( 芐氧基羰基 ) 苯甲醯基胺基 ) 苯乙酸芐酯 。向KI-1Bn (233 mg，純度84%)在DCM(10 mL)中的溶液添加SOCl2 (1.8 mL，60eq)，並將混合物在50o C加熱3小時。蒸發溶劑，將殘餘物與甲苯(3×10 mL)共蒸發，得到粗製的醯氯(237 mg，99%)。將該材料溶解在DCM(3 mL)中，加入二異丙基乙胺(0.08 mL，1.15 eq)，然後加入4-胺基苯基乙酸芐酯(92 mg，0.95 eq)在DCM(3 mL)中的溶液。最終反應體積為10 mL。反應混合物在室溫下攪拌18小時。混合物用DCM(15 mL)稀釋，用飽和氯化銨水溶液(12 mL)洗滌。分離的水相用DCM(2×2 mL)萃取，合併有機相，乾燥(MgSO4 )並濃縮。將該粗產物進行管柱層析法(Pet. Et./DCM 1：1，然後梯度至100%DCM)，得到第一部分純KI-0Bn，第二部分包含純的所欲產物(237 mg，86%)，校正KI-1Bn的純度)。
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 )：δ 10.10 (s, 1H),8.08 (s, 1H),7.65 (s, 1H),7.53-7.30 (m, 20H),7.22–7.13 (br AB, 4H),5.39,5.22,5.21,5.12 (4s, 4x 2H),3.61 (s, 2H)。
4-(4-( 羧甲基 ) 苯基胺基羰基 )-2,5- 二羥基苯甲酸 (Ia-032a) 。向上述製備的前驅物(225 mg，0.33 mmol)在DCM(20 mL)中的溶液添加5%炭上Pd (72 mg)，然後加入EtOH(20 mL)。將燒瓶用Ar(3x)沖洗，然後填充氫氣(大氣壓)，將混合物在室溫下攪拌2小時。通過在微孔過濾器上過濾以移除催化劑，蒸發濾液，將殘餘物乾燥，得到產物Ia-032a ，為淺黃色固體(107 mg，99%)。
1 H NMR (250 MHz, DMSO-d6 )：δ 12.28 (br, 1H),10.92 (s, 1H),10.44 (s, 1H),7.65 (br d, 2H),7.41 (s, 1H),7.38 (s, 1H),7.25 (br d, 2H),3.55 (s, 2H)。
例如 ：
Figure 02_image158
Figure 02_image171
條件及產率：參考圖4A-D1) 4-(2- 羧基苯基胺基羰基 )-2,5- 二羥基苯甲酸， 化合物Ia-001a
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：r.t = 0.95分鐘，m/z = 316 [M-H]- ，峰面積＞ 97%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 12.22 (s, 1H),10.85 (s, 1H),8.65 (d,J = 8.4 Hz, 1H),8.01 (dd,J = 8.0, 1.7 Hz, 1H),7.71 – 7.56 (m, 1H),7.41 (d,J = 6.9 Hz, 2H),7.22 (t,J = 7.6 Hz, 1H)。
HRMS：[M+H]+ ，C15 H12 NO7 計算值：318.06083，實際值：318.06080。
Biodata：Ia-001a ：FGF-1 IC50 [µM] = 41；FGF-2 IC50 [µM] = 39；VEGF-A1 IC50 [µM] = 7.3；VEGFR-磷酸化抑制 IC50 [µM] =2.25；PMN ROS [在0.3 µM的抑制[%] = 48；PMN ROS抑制IC50 [µM] = 0.355；嗜中性白血球黏著抑制 [%] = 44.3；全血：GM-CSF IC50 [µM] = ＞100；IFNγ IC50 [µM] = 30.5；IL-1β IC50 [µM] = 34.4；IL-2 IC50 [µM] = 94.3；IL-4 IC50 [µM] = ＞100；IL-5 IC50 [µM] = ＞100；IL-6 IC50 [µM] = 1.24；IL-9 IC50 [µM] = 5.63；IL-10 IC50 [µM] = ＞100；IL-12p70 IC50 [µM] = 1.5；IL-13 IC50 [µM] = 26.4；IL-17A IC50 [µM] = 0.1；IL-17F IC50 [µM] = 14.7；IL-18 IC50 [µM] = ＞100；IL-21 IC50 [µM] = ＞100；IL-33 IC50 [µM] = 19.3；TGFβ IC50 [µM] = ＞100；TNFα IC50 [µM] = 0.02；TNFβ IC50 [µM] = 13.2。二乙酯 ：
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：r.t = 1.39分鐘，m/z = 372.2 [M-H]- ，峰面積＞ 98%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 11.96 (s, 1H),11.05 (s, 1H),9.87 (s, 1H), 8.57 (dd,J = 8.5, 1.2 Hz, 1H),7.99 (dd,J = 7.9, 1.7 Hz, 1H),7.65 (ddd,J = 8.7, 7.3, 1.7 Hz, 1H),7.49 (s, 1H),7.40 (s, 1H),7.25 (td,J = 7.6, 1.2 Hz, 1H),4.35 (m, 4H),1.33 (m, 6H)。
HRMS：[M+H]+ ，C19 H20 NO7 計算值：374.12342，實際值：374.12354。
Biodata：Ia-001a-E2 ： FGF-1 IC50 [µM] = 9.2；FGF-2 IC50 [µM] = 200；VEGF-A1 IC50 [µM] = 123；VEGFR-磷酸化抑制IC50 [µM] =1.25；PMN ROS [在0.3 µM的抑制[%]= 51.47]；PMN ROS抑制IC50 [µM] = 2.58；嗜中性白血球黏著抑制[%] = 50.5。2) 4-(2-(1H- 四唑 -5- 基 ) 苯基胺基羰基 )-2,5- 二羥基苯甲酸， 化合物Ia-001aTz ：
UPLC-MS (酸性方法，4分鐘)：rt = 1.17分鐘；m/z =342.0 [M+H]+ ，峰面積＞96%。
1 H NMR (400 MHz，DMSO-d6 ) δ 11.60 (s, 1H),10.90 (s, 2H),8.47 (d,J = 8.4 Hz, 1H),7.93 (d,J = 7.9 Hz, 1H),7.61 (t,J = 7.9 Hz, 1H),7.50 – 7.32 (m, 3H)。
HRMS：[M+H]+ ，C15 H12 N5 O5 計算值：342.08329，實際值342.08318。
Biodata：Ia-001a-Tz ：FGF-1 IC50 [µM] = 6.2；FGF-2 IC50 [µM] = 20；VEGF-A1 IC50 [µM] = 17；VEGFR-磷酸化抑制IC50 [µM] =0.23；PMN ROS [在0.3 µM 的抑制[%]= 54.33]；PMN ROS抑制 IC50 [µM] = 1.54；嗜中性白血球黏著抑制 [%] = 69.75；全血：GM-CSF IC50 [µM] = ＞100；IFNγ IC50 [µM] = ＞100；IL-1β IC50 [µM] = ＞100；IL-2 IC50 [µM] = 7.99；IL-4 IC50 [µM] = ＞100；IL-5 IC50 [µM] = ＞100；IL-6 IC50 [µM] = 0.75；IL-9 IC50 [µM] = 8.63；IL-10 IC50 [µM] = 26.1；IL-12p70 IC50 [µM] = 32.4；IL-13 IC50 [µM] = 32.1；IL-17A IC50 [µM] = 0.11；IL-17F IC50 [µM] = 46.5；IL-18 IC50 [µM] = ＞100；IL-21 IC50 [µM] = ＞100；IL-33 IC50 [µM] = 23.6；TGFβ IC50 [µM] = ＞100；TNFα IC50 [µM] = 0.63；TNFβ IC50 [µM] = 53。乙酯：
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：r.t = 1.08分鐘，m/z = 370.1 [M+H]+ ，峰面積＞ 97%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 11.48 (s, 1H),9.88 (s, 1H),8.46 (d,J = 8.4 Hz, 1H),7.89 (dd,J = 7.8,1.6 Hz, 1H),7.62 (ddd,J = 8.6, 7.4, 1.6 Hz, 1H),7.47 (s, 1H),7.42 – 7.34 (m, 2H),4.37 (q,J = 7.1 Hz, 2H),1.34 (t,J = 7.1 Hz, 3H)。
HRMS：[M+H]+ ，C17 H16 N5 O5 計算值：370.11460，實際值：370.11458。
Biodata：Ia-001a-Tz-E1 ：FGF-1 IC50 [µM] = 200；FGF-2 IC50 [µM] = 200；VEGF-A1 IC50 [µM] = 200；VEGFR-磷酸化抑制 IC50 [µM] =3.8； PMN ROS [在0.3 µM的抑制[%]] = 75.97；PMN ROS抑制IC50 [µM] = N.D.；嗜中性白血球黏著抑制[%] = 98.88，二 乙酸 乙 酯 ：
UPLC-MS (酸性方法，4分鐘)：r.t = 1.57分鐘，m/z = 454.1 [M+H]+ ，峰面積＞ 97%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 11.23 (s, 1H),8.23 (d,J = 8.6 Hz, 1H),7.96 (dd,J = 7.9, 1.7 Hz, 1H),7.84 (s, 1H),7.73 (s, 1H),7.64 (t,J = 7.5 Hz, 1H),7.43 (td,J = 7.6, 1.2 Hz, 1H),4.32 (q,J = 7.1 Hz, 2H),2.34 (s, 3H),2.18 (s, 3H),1.32 (t,J = 7.1 Hz, 3H)。
HRMS：[M+H]+ ，C21 H20 N5 O7 計算值：454.13572，實際值：454.13542。
Biodata：Ia-001a-Tz-E1-A2 ：FGF-1 IC50 [µM] = 60；FGF-2 IC50 [µM] = 200；VEGF-A1 IC50 [µM] = 200；VEGFR-磷酸化抑制 IC50 [µM] =ND；PMN ROS [在0.3 µM的抑制[%]= 49.85；PMN ROS抑制 IC50 [µM] = N.D.；嗜中性白血球黏著抑制[%] = 98.2。3) 2,5- 二羥基 -4-(2- 磺酸基苯基胺基羰基 ) 苯甲酸， 化合物Ia-001c ：
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：rt = 0.73分鐘；m/z =352.0 [M-H]- ，峰面積＞99%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 11.54 (s, 1H),10.99 (s, 1H),8.34 (d, J = 8.2 Hz, 1H),7.74 (dd, J = 7.7, 1.7 Hz, 1H),7.42 – 7.28 (m, 3H),7.12 (td, J = 7.5, 1.2 Hz, 1H)。
HRMS：[M+H]+ ，C14 H12 NO8 S計算值：354.02781，實際值：354.02754。
Biodata：Ia-001c ：FGF-1 IC50 [µM] = 21；FGF-2 IC50 [µM] = 13；VEGF-A1 IC50 [µM] = 100；VEGFR-磷酸化抑制IC50 [µM] =3.31；PMN ROS [在0.3 µM的抑制 [%] = 40.36；PMN ROS抑制 IC50 [µM] = 2.4；嗜中性白血球黏著抑制 [%] = 31.33；全血：GM-CSF IC50 [µM] = ＞100；IFNγ IC50 [µM] = 0.44；IL-1β IC50 [µM] = ＞100；IL-2 IC50 [µM] = 12.8；IL-4 IC50 [µM] = ＞100；IL-5 IC50 [µM] = ＞100；IL-6 IC50 [µM] = 0.95；IL-9 IC50 [µM] = 46.9；IL-10 IC50 [µM] = 1.9；IL-12p70 IC50 [µM] = 0.44；IL-13 IC50 [µM] = 86.1；IL-17A IC50 [µM] = 0.09；IL-17F IC50 [µM] = 89.7；IL-18 IC50 [µM] = ＞100；IL-21 IC50 [µM] = ＞100；IL-33 IC50 [µM] = ＞100；TGFβ IC50 [µM] = ＞100；TNFα IC50 [µM] = 0.05；TNFβ IC50 [µM] = 29.7。4) 4-(3- 羧基苯基胺基羰基 )-2,5- 二羥基苯甲酸， 化合物Ia-002a ：
1 H-NMR (250 MHZ, DMSO-d6 ) δ ~13 (v br, 1H),10.82 (br s, 1H),10.60 (br s, 1H),8.38 (s, 1H),7.92 (d, 1H),,7.71 (d, 1H),7.49 (t, 1H),7.39 (s, 2H)。
Biodata：1a-002a ： FGF-1 IC50 [µM] = 20；FGF-2 IC50 [µM] = 59；VEGF-A1 IC50 [µM] = 71；VEGFR-磷酸化抑制 IC50 [µM] =5.7；PMN ROS [在0.3 µM的抑制 [%] = 42.1；PMN ROS抑制IC50 [µM] = 0.312；嗜中性白血球黏著抑制 [%] = 27.925) 4-(3-(1H- 四唑 -5- 基 ) 苯基胺基羰基 )-2,5- 二羥基苯甲酸， 化合物Ia-002aTz ：
UPLC-MS (酸性方法，4分鐘)：rt = 1.13分鐘；m/z =342.0 [M+H]+ ，峰面積＞99%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 10.81 (s, 1H),10.67 (s, 1H),8.54 (s, 1H),7.91 – 7.84 (m, 1H),7.79 (dt, J = 7.8, 1.4 Hz, 1H),7.60 (t, J = 7.9 Hz, 1H),7.41 (d, J = 2.2 Hz, 2H)。
HRMS：[M+H]+ ，C15 H12 N5 O5 計算值：342.08329，實際值：342.08317。
Biodata：Ia-002a-Tz ：FGF-1 IC50 [µM] = 10；FGF-2 IC50 [µM] = 53；VEGF-A1 IC50 [µM] = 57；VEGFR-磷酸化抑制IC50 [µM] =100；PMN ROS [在0.3 µM的抑制[%] = 66.61；PMN ROS抑制 IC50 [µM] = 1.86；嗜中性白血球黏著抑制[%] = 38.56) 2,5- 二羥基 -4-(3- 磺酸基苯基胺基羰基 ) 苯甲酸， 化合物Ia-002c ：
1 H-NMR (250 MHZ, DMSO-d6 ) δ 11.04 (s, 1H),10.53 (s, 1H),7.96 (s, 1H),7.69 (d, 1H),7.43 (s, 2H)及7.40-7.28 (m, 2H)。
Biodata：Ia-002c ：FGF-1 IC50 [µM] = 14；FGF-2 IC50 [µM] = 150； VEGF-A1 IC50 [µM] = 150；VEGFR-磷酸化抑制IC50 [µM] =100；PMN ROS [在0.3 µM的抑制[%] = 38.9；PMN ROS抑制IC50 [µM] = 0.405；嗜中性白血球黏著抑制[%] = 1.87。7) 4-(4- 羧苯基胺基羰基 )-2,5- 二羥基苯甲酸， 化合物Ia-003a ：
1 H-NMR (250 MHz, DMSO-d6 ) δ 12.8 (br, 1H),10.73 (s, 1H),10.68 (s, 1H),7.94 (AB的d, 2H),7.84 (AB的d, 2H),7.39 (s, 1H),7.34 (s, 1H)。
HRMS (AX033)
Biodata：Ia-003a ：FGF-1 IC50 [µM] = 12；FGF-2 IC50 [µM] = 34；VEGF-A1 IC50 [µM] = 150；VEGFR-磷酸化抑制IC50 [µM] =ND；PMN ROS [在0.3 µM的抑制[%] = 44.4；PMN ROS抑制IC50 [µM] = 0.414；嗜中性白血球黏著抑制[%] = 39.1。8) 4-(4-(1H- 四唑 -5- 基 ) 苯基胺基羰基 )-2,5- 二羥基苯甲酸， 化合物Ia-003aTz ：
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：rt = 0.79分鐘；m/z =342.0 [M+H]+ ，峰面積＞97%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 10.77 (s, 1H),10.70 (s, 1H),8.04 (d, J = 8.7 Hz, 2H),7.96 (d, J = 8.5 Hz, 2H),7.41 (s, 1H),7.37 (s, 1H)。
HRMS：[M+H]+ ，C15 H12 N5 O5 計算值：342.08329，實際值：342.08326。
Biodata：Ia-003a-Tz ：FGF-1 IC50 [µM] = 6.7；FGF-2 IC50 [µM] = 45；VEGF-A1 IC50 [µM] = 13；VEGFR-磷酸化抑制 IC50 [µM] =6.4；PMN ROS [在0.3 µM的抑制 [%] = 62.21；PMN ROS抑制 IC50 [µM] = 2.49；嗜中性白血球黏著抑制[%] = 30.33；全血：GM-CSF IC50 [µM] = ＞100；IFNγ IC50 [µM] = 2.95；IL-1β IC50 [µM] = ＞100；IL-2 IC50 [µM] = 43；IL-4 IC50 [µM] = ＞100；IL-5 IC50 [µM] = ＞100；IL-6 IC50 [µM] = 1.41；IL-9 IC50 [µM] = 3.62；IL-10 IC50 [µM] = 6.94；IL-12p70 IC50 [µM] = 1.26；IL-13 IC50 [µM] = 89.6；IL-17A IC50 [µM] = 0.07；IL-17F IC50 [µM] = 83.9；IL-18 IC50 [µM] = ＞100；IL-21 IC50 [µM] = 1.49；IL-33 IC50 [µM] = 72.2；TGFβ IC50 [µM] = ＞100；TNFα IC50 [µM] = 0.18； TNFβ IC50 [µM] = 55。9) 2,5- 二羥基 -4-(4- 磺酸基苯基胺基羰基 ) 苯甲酸， 化合物Ia-003c ：
1 H-NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 10.90 (s, 1H),10.51 (s, 1H),7.66 (AB的d, 2H),7.58 (AB的d, 2H),7.40 (s, 1H),7.39 (S, 1H)。
Biodata：Ia-003c ： FGF-1 IC50 [µM] = 35；FGF-2 IC50 [µM] = 150；VEGF-A1 IC50 [µM] = 150；VEGFR-磷酸化抑制IC50 [µM] =0.4；PMN ROS [在0.3 µM的抑制[%] = N.D.；PMN ROS抑制 IC50 [µM]-；嗜中性白血球黏著抑制[%] = N.D。10) 4-(3- 羧基 -4- 羥苯基胺基羰基 )-2,5- 二羥基苯甲酸， 化合物Ia-004a ：
UPLC-MS (酸性方法，6.5分鐘)：rt = 1.40分鐘；m/z =332.0 [M-H]- ，峰面積＞96%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 10.94 (s, 1H),10.37 (s, 1H),8.20 (d, J = 2.7 Hz, 1H),7.74 (dd, J = 8.9, 2.8 Hz, 1H),7.39 (s, 1H),7.34 (s, 1H),6.93 (d, J = 8.9 Hz, 1H)。
HRMS：[M+H]+ ，C15 H12 NO8 計算值：334.05574，實際值：334.05572。
Biodata：Ia-004a ：FGF-1 IC50 [µM] = 32；FGF-2 IC50 [µM] = 15； VEGF-A1 IC50 [µM] = 28；VEGFR-磷酸化抑制IC50 [µM] =7.7；PMN ROS [在0.3 µM的抑制[%] = 64.61；PMN ROS抑制IC50 [µM] = 0；嗜中性白血球黏著抑制[%] = 28.38。乙甲酯 ：
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：r.t = 1.16分鐘，m/z = 376.1 [M+H]+ ，峰面積＞ 95%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.90 (s, 1H),10.50 (s, 1H),10.36 (s, 1H),9.91 (s, 1H),8.26 (d,J = 2.7 Hz, 1H),7.76 (dd,J = 8.9, 2.8 Hz, 1H),7.43 (s, 1H),7.36 (s, 1H),7.01 (d,J = 8.9 Hz, 1H),4.37 (q,J = 7.1 Hz, 2H),3.91 (s, 3H),1.34 (t,J = 7.1 Hz, 3H)。
HRMS：[M+H]+ ，C18 H18 NO8 計算值：376.10269，實際值：376.10259。
Biodata：Ia-004a-E2 ：FGF-1 IC50 [µM] = 35；FGF-2 IC50 [µM] = 36；VEGF-A1 IC50 [µM] = 200；VEGFR-磷酸化抑制IC50 [µM] =6.1；PMN ROS [在0.3 µM的抑制[%] = 85.34；PMN ROS抑制 IC50 [µM] = N.D.；嗜中性白血球黏著抑制[%] = 97.65。11) 4-(2- 羧基 -4- 羥苯基胺基羰基 )-2,5- 二羥基苯甲酸， 化合物Ia-006a ：
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：rt = 0.81分鐘；m/z =334.0 [M+H]+ ，峰面積＞96%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 13.33 (s, 1H),11.86 (s, 1H),10.90 (s, 1H),9.66 (s, 1H),8.39 (d,J = 9.0 Hz, 1H),7.40 (d,J = 6.8 Hz, 2H),7.03 (dd,J = 9.0, 3.0 Hz, 1H)。
HRMS：[M+H]+ ，C15 H12 NO8 計算值：334.05574，實際值：334.05562。
Biodata：Ia-006a ：FGF-1 IC50 [µM] = 89；FGF-2 IC50 [µM] = 224；VEGF-A1 IC50 [µM] = 100；VEGFR-磷酸化抑制IC50 [µM] =11.8；PMN ROS [在0.3 µM的抑制[%] = 60.56；PMN ROS抑制 IC50 [µM] = 1.2；嗜中性白血球黏著抑制[%] = 25.33。12) 3-(4- 羧基 -2,5- 二羥基苄醯胺基 ) 鄰苯二甲酸， 化合物Ia-011a ：
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：rt = 0.69分鐘；m/z = 360.1 [M-H]- ，峰面積＞89%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 13.46 (s, 2H),11.37 (s, 1H),10.97 (s, 1H),8.33 (dd,J = 8.2, 1.3 Hz, 1H),7.63 (dd,J = 7.7, 1.3 Hz, 1H),7.57 (t,J = 7.9 Hz, 1H),7.52 (s, 1H),7.44 (s, 1H)。
HRMS：[M+H]+ ，C16 H12 NO9 計算值：362.05065，實際值：362.05036。
Biodata：Ia-011a ：FGF-1 IC50 [µM] = 35；FGF-2 IC50 [µM] = 110； VEGF-A1 IC50 [µM] = 200；VEGFR-磷酸化抑制IC50 [µM] =100；PMN ROS [在0.3 µM的抑制[%] = 57.71；PMN ROS抑制 IC50 [µM] = N.D.；嗜中性白血球黏著抑制[%] = 42.32。13) 2-(4- 羧基 -2,5- 二羥基苄醯胺基 ) 對苯二甲酸， 化合物Ia-012a ：
UPLC-MS (酸性方法，4分鐘)：rt = 1.12分鐘；m/z = 362.1 [M+H]+ ，峰面積＞96%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 13.41 (brs, 2H),12.29 (s, 1H),10.94 (s, 1H),9.26 (d,J = 1.7 Hz, 1H),8.09 (d,J = 8.2 Hz, 1H),7.73 (dd,J = 8.2, 1.7 Hz, 1H),7.42 (s, 2H)。
HRMS：[M+H]+ ，C16 H12 NO9 計算值：362.05065，實際值：362.05046。
Biodata：Ia-012a ：FGF-1 IC50 [µM] = 38；FGF-2 IC50 [µM] = 36；VEGF-A1 IC50 [µM] = 30；VEGFR-磷酸化抑制IC50 [µM] =100；PMN ROS [在0.3 µM的抑制[%] = 59.52；PMN ROS抑制IC50 [µM] = 1.85；嗜中性白血球黏著抑制[%] = 28.5。14) 2-(4- 羧基 -2,5- 二羥基苄醯胺基 ) 間苯二甲酸， 化合物Ia-013a ：
UPLC-MS (酸性方法，4分鐘)：rt = 0.91分鐘；m/z = 362.0 [M+H]+ ，峰面積＞98%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 13.11 (s, 2H),11.70 (s, 1H),11.13 (s, 1H),7.97 (d, J = 7.8 Hz, 2H),7.47 (s, 1H),7.41 (s, 1H),7.38 (t, J = 7.7 Hz, 1H)。
HRMS：[M+H]+ ，C16 H12 NO9 計算值：362.05065，實際值：362.05041。
Biodata：Ia-013a ：FGF-1 IC50 [µM] = 29；FGF-2 IC50 [µM] = 18；VEGF-A1 IC50 [µM] =17；VEGFR-磷酸化抑制 IC50 [µM] =100；PMN ROS [在 0.3 µM的抑制[%] = 38.52；PMN ROS抑制 IC50 [µM] = 2.38；嗜中性白血球黏著抑制[%] = 27.67。15) 4-(4- 羧基 -2,5- 二羥基苄醯胺基 ) 鄰苯二甲酸， 化合物Ia-014a ：
UPLC-MS (酸性方法，4分鐘)：rt = 0.98分鐘；m/z = 362.1 [M+H]+ ，峰面積＞94%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 10.76 (s, 1H),10.70 (s, 1H),8.14 (s, 1H), 7.94 – 7.84 (m, 2H),7.38 (s, 1H),7.30 (s, 1H)。
HRMS：[M+H]+ ，C16 H12 NO9 計算值：362.05065，實際值：362.05047。
Biodata：Ia-014a ：FGF-1 IC50 [µM] = 20；FGF-2 IC50 [µM] = 20；VEGF-A1 IC50 [µM] = 88；VEGFR-磷酸化抑制IC50 [µM] =100；PMN ROS [在0.3 µM的抑制[%] = 61.3；PMN ROS抑制IC50 [µM] = 1；嗜中性白血球黏著抑制[%] = 9.667。16) 5-(4- 羧基 -2,5- 二羥基苄醯胺基 ) 間苯二甲酸， 化合物Ia-015a ：
1 H NMR (250 MHz, DMSO-d6 ) δ 10.74 (s, 1H)、8.56 (窄d, 2H)、8.22 (窄t, 1H)、7.41 (s, 1H)及7.37 (s, 1H)。
Biodata：Ia-015a ：FGF-1 IC50 [µM] = 20；FGF-2 IC50 [µM] = 9.3；VEGF-A1 IC50 [µM] = 19；VEGFR-磷酸化抑制IC50 [µM] =0.15；PMN ROS [在0.3 µM的抑制 [%] = 43.8；PMN ROS抑制IC50 [µM] = 0.387；嗜中性白血球黏著抑制[%] = 17.38；全血：GM-CSF IC50 [µM] = 2.76；IFNγ IC50 [µM] = ＞100；IL-1β IC50 [µM] = ＞100；IL-2 IC50 [µM] = 7.08；IL-4 IC50 [µM] = ＞100；IL-5 IC50 [µM] = ＞100；IL-6 IC50 [µM] = 0.77；IL-9 IC50 [µM] = 1.47；IL-10 IC50 [µM] = 5.27；IL-12p70 IC50 [µM] = 0.12；IL-13 IC50 [µM] = 0.15；IL-17A IC50 [µM] = 0.05；IL-17F IC50 [µM] = 0.15；IL-18 IC50 [µM] = ＞100；IL-21 IC50 [µM] = 57.2；IL-33 IC50 [µM] = 0.24；TGFβ IC50 [µM] = ＞100；TNFα IC50 [µM] = 0.17；TNFβ IC50 [µM] = 0.3。17) 3-(4- 羧基 -2,5- 二羥基苄醯胺基 ) 異菸鹼酸， 化合物Ia-023a ：
UPLC-MS (酸性方法，4分鐘)：rt = 0.63分鐘；m/z = 319.1 [M+H]+ ，峰面積＞93%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 12.17 (s, 1H),11.03 (s, 1H),9.78 (s, 1H),8.46 (d, J = 5.0 Hz, 1H),7.82 (d,J = 5.0 Hz, 1H),7.45 (s, 1H),7.43 (s, 1H)。
HRMS：[M+H]+ ，C14 H11 N2 O7 計算值：319.05608，實際值：319.05610。
Biodata：Ia-023a ：FGF-1 IC50 [µM] = N.D.；FGF-2 IC50 [µM] = 63；VEGF-A1 IC50 [µM] = 143；VEGFR-磷酸化抑制 IC50 [µM] =100；PMN ROS [在0.3 µM的抑制[%] = 61.95；PMN ROS抑制 IC50 [µM] = 0；嗜中性白血球黏著抑制[%] = 13.37。二 乙酯：
UPLC-MS (酸性方法，4分鐘)：r.t = 1.87分鐘，m/z = 375.1 [M+H]+ ，峰面積＞ 98%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.79 (s, 1H),11.23 (s, 1H),9.87 (s, 1H),9.68 (s, 1H),8.50 (d, J = 5.0 Hz, 1H),7.81 (dd, J = 5.1, 0.7 Hz, 1H),7.53 (s, 1H),7.41 (s, 1H),4.46 – 4.27 (m, 4H),1.41 – 1.25 (m, 6H)。
HRMS：[M+H]+ ，C18 H19 N2 O7 計算值：375.11867，實際值：375.11867。
Biodata：Ia-023a-E2 ：FGF-1 IC50 [µM] = N.D.；FGF-2 IC50 [µM] = 76；VEGF-A1 IC50 [µM] = 141；VEGFR-磷酸化抑制 IC50 [µM] =6.6；PMN ROS [在0.3 µM的抑制[%] = 69.47；PMN ROS抑制IC50 [µM] = 0；嗜中性白血球黏著抑制[%] = 34。18) 4-(4-( 羧基甲基 ) 苯基胺基羰基 )-2,5- 二羥基苯甲酸， 化合物Ia-032a ：
1 H NMR(250 MHz, DMSO-d6)：δ 12.28 (br, 1H),10.92(s, 1H),10.44 (s, 1H),7.65 (br d, 2H),7.41 (s, 1H),7.38 (s, 1H),7.25 (br d, 2H),3.55 (s, 2H)。
Biodata：Ia-032a ：FGF-1 IC50 [µM] = N.D.；FGF-2 IC50 [µM] = 91；VEGF-A1 IC50 [µM] = N.D.；VEGFR-磷酸化抑制 IC50 [µM] =100；PMN ROS [在0.3 µM的抑制[%] = N.D.；PMN ROS抑制 IC50 [µM]-；嗜中性白血球黏著抑制[%] = N.D。19) 4-(3-( 羧基甲基 ) 苯基胺基羰基 )-2,5- 二羥基苯甲酸， 化合物Ia-033a ：
UPLC-MS (酸性方法，6.5分鐘)：rt = 1.71分鐘；m/z = 332.1 [M+H]+ ，峰面積＞99%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 10.89 (s, 1H),10.46 (s, 1H),7.65 (s, 1H),7.59 (d,J = 8.1 Hz, 1H),7.40 (s, 1H),7.38 (s, 1H),7.03 (d,J = 7.6 Hz, 1H),3.57 (s, 2H)。
HRMS：[M+H]+ ，C16 H14 NO7 計算值：332.07647，實際值：332.07644。
Biodata：Ia-033a ：FGF-1 IC50 [µM] = 60；FGF-2 IC50 [µM] = 165；VEGF-A1 IC50 [µM] = 281；VEGFR-磷酸化抑制IC50 [µM] =100；PMN ROS [在0.3 µM的抑制[%] = 57.73；PMN ROS抑制 IC50 [µM] = 1.32；嗜中性白血球黏著抑制[%] = 38。20) 4-(2-( 羧基甲基 ) 苯基胺基羰基 )-2,5- 二羥基苯甲酸， 化合物Ia-034a ：
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：rt = 0.82分鐘；m/z = 332.1 [M+H]+ ，峰面積＞98%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.78 (d,J = 8.1 Hz, 1H),7.31 (d,J = 3.0 Hz, 2H),7.28 (d,J = 7.6 Hz, 2H),7.15 (t,J = 7.4 Hz, 1H),3.63 (s, 2H)。
HRMS：[M+H]+ ，C16 H14 NO7 計算值：332.07648，實際值：332.07641。
Biodata：Ia-034a ：FGF-1 IC50 [µM] = 79；FGF-2 IC50 [µM] = 14；VEGF-A1 IC50 [µM] = 102；VEGFR-磷酸化抑制 IC50 [µM] =100；PMN ROS [在0.3 µM的抑制[%] = 49.07；PMN ROS抑制 IC50 [µM] = 2.28；嗜中性白血球黏著抑制[%] = 15。21) 4-(3,4- 二羥基苯基甲基胺基羰基 )-2,5- 二羥基苯甲酸， 化合物Ia-035a ：
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：rt = 1.02分鐘；m/z = 320.1 [M+H]+ ，峰面積＞91%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 11.56 (s, 1H),9.21 (t,J = 5.9 Hz, 1H),8.91 (s, 1H),8.79 (s, 1H),7.46 (s, 1H),7.28 (s, 1H),6.72 (d,J = 2.1 Hz, 1H),6.67 (d,J = 8.0 Hz, 1H),6.57 (dd,J = 8.0,2.1 Hz, 1H),4.32 (d,J = 5.8 Hz, 2H)。
HRMS：[M+H]+ ，C15 H14 NO7 計算值：320.07648，實際值：320.07650。
Biodata：Ia-035a ：FGF-1 IC50 [µM] = 20；FGF-2 IC50 [µM] = 71；VEGF-A1 IC50 [µM] = 200；VEGFR-磷酸化抑制 IC50 [µM] =36；PMN ROS [在 0.3 µM的抑制[%] = 75.13；PMN ROS抑制 IC50 [µM] = 0.41；嗜中性白血球黏著抑制[%] = 27。22) 4-(2-(3,4- 二羥基苯基 ) 乙基胺基羰基 )-2,5- 二羥基苯甲酸， 化合物Ia-035a-2 ：
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：rt = 0.77分鐘；m/z = 332.0 [M-H]- ，峰面積＞99%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 11.50 (s, 1H),8.85 (t, J = 5.6 Hz, 1H),8.76 (s, 1H),8.66 (s, 1H),7.41 (s, 1H),7.28 (s, 1H),6.67 – 6.60 (m, 2H),6.48 (dd, J = 8.0, 2.1 Hz, 1H),3.44 (q, J = 6.8 Hz, 2H),2.67 (dd, J = 8.6, 6.0 Hz, 2H)。δ 11.56 (s, 1H),9.21 (t, J = 5.9 Hz, 1H),8.91 (s, 1H),8.79 (s, 1H),7.46 (s, 1H),7.28 (s, 1H),6.72 (d, J = 2.1 Hz, 1H),6.67 (d, J = 8.0 Hz, 1H),6.57 (dd, J = 8.0, 2.1 Hz, 1H),4.32 (d, J = 5.8 Hz, 2H)。
HRMS：[M+H]+ ，C16 H16 NO7 計算值：334.09213，實際值：334.09242。
Biodata：Ia-035a-2 ：FGF-1 IC50 [µM] = 10；FGF-2 IC50 [µM] = 65；VEGF-A1 IC50 [µM] = 109；VEGFR-磷酸化抑制 IC50 [µM] =10；PMN ROS [在0.3 µM的抑制[%] = 58.81；PMN ROS抑制 IC50 [µM] = 1.1；嗜中性白血球黏著抑制[%] = 21.5。23) 4-(1- 羧基 -2-(3,4- 二羥基苯基 ) 乙基胺基羰基 )-2,5- 二羥基苯甲酸， 化合物Ia-035a-3 ：
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：rt = 0.70分鐘；m/z = 376.0 [M-H]- ，峰面積＞99%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 12.90 (s, 1H),11.11 (s, 1H),8.98 (d, J = 7.4 Hz, 1H),8.73 (d, J = 13.1 Hz, 2H),7.45 (s, 1H),7.31 (s, 1H),6.61 (dd, J = 5.1, 2.9 Hz, 2H),6.47 (dd, J = 8.1, 2.1 Hz, 1H),3.01 (dd, J = 13.9, 4.9 Hz, 1H),2.96 – 2.84 (m, 1H)。
HRMS：[M+H]+ ，C17 H16 NO9 計算值：378.08196，實際值：378.08195。
Biodata：Ia-035a-3 ：FGF-1 IC50 [µM] = 34；FGF-2 IC50 [µM] = 207；VEGF-A1 IC50 [µM] = 198；VEGFR-磷酸化抑制 IC50 [µM] =10；PMN ROS [在0.3 µM的抑制[%] = 79.62；PMN ROS抑制IC50 [µM] = 0.66；嗜中性白血球黏著抑制[%] = 22。24) 4-( 羧基 (3,4- 二羥基苯基 ) 甲基胺基羰基 )-2,5- 二羥基苯甲酸， 化合物Ia-036a ：
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：rt = 0.62分鐘；m/z = 362.1 [M-H]- ，峰面積＞92%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 11.00 (s, 1H),9.32 (d,J = 6.7 Hz, 1H),9.05 (s, 1H),8.97 (s, 1H),7.40 (s, 1H),7.34 (s, 1H),6.81 (d,J = 2.1 Hz, 1H),6.75 – 6.64 (m, 2H),5.29 (d,J = 6.6 Hz, 1H)。
HRMS：[M+H]+ ，C16 H14 NO9 計算值：364.06630，實際值：364.06615。
Biodata：Ia-036a ：FGF-1 IC50 [µM] = N.D.；FGF-2 IC50 [µM] = 37；VEGF-A1 IC50 [µM] = 123；VEGFR-磷酸化抑制 IC50 [µM] =1.6；PMN ROS [在0.3 µM的抑制[%] = 87.17；PMN ROS抑制 IC50 [µM] = N.D.；嗜中性白血球黏著抑制[%] = 30.77。25) 4-(2- 羧基苯基甲基胺基羰基 )-2,5- 二羥基苯甲酸， 化合物Ia-053a ：
UPLC-MS (酸性方法，4分鐘)：rt = 1.08分鐘；m/z = 332.0 [M+H]+ ，峰面積＞97%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 13.09 (s, 1H),11.19 (s, 1H),9.34 – 9.27 (m, 1H),7.91 (dd, J = 7.8, 1.4 Hz, 1H),7.55 (dd, J = 7.5, 1.5 Hz, 1H),7.46 (d, J = 7.9 Hz, 2H),7.39 (td, J = 7.5, 1.4 Hz, 1H),7.32 (s, 1H),4.82 (d, J = 5.9 Hz, 2H)。
HRMS：[M+H]+ ，C16 H14 NO7 計算值：332.07648，實際值：332.07622。
Biodata：Ia-053a ：FGF-1 IC50 [µM] = 150；FGF-2 IC50 [µM] = 124；VEGF-A1 IC50 [µM] = 210；VEGFR-磷酸化抑制 IC50 [µM] =100；PMN ROS [在0.3 µM的抑制[%] = 52.92；PMN ROS抑制 IC50 [µM] = 2.5；嗜中性白血球黏著抑制[%] = 18.67。流程 4b. 4-胺基-2,5-二芐氧基苯甲酸乙酯(苯胺A )的合成
Figure 02_image173
方案：苯胺A 的 合成
4- 胺基 -2,5- 二芐氧基苯甲酸乙酯 ( 苯胺 A) 。 2,5- 雙 ( 芐氧基 )-4-( 乙氧基羰基 ) 苯甲酸 (KI-1) (2.0 g，4.9 mmol)及Et3N(1.6 mL，11.3 mmol)於THF(25)中的溶液經冷卻(冰浴)後在惰性氣氛(N2 )下緩慢加入DPPA(1.1 mL，5.2 mmol)。將混合物緩慢回溫至室溫，並在此溫度下攪拌3小時。然後加入水(8 mL)，並將反應混合物加熱至70°C2小時。將反應混合物倒入碳酸氫鈉飽和溶液(250 mL)中並攪拌5分鐘，然後用EtOAc(3×100 mL)萃取。合併的有機層經硫酸鈉乾燥，過濾，並在減壓下濃縮，得到無色油。殘餘物通過快速柱色譜法純化(異己烷/EtOAc為1：0，然後梯度至30%EtOAc)，得到標題化合物苯胺 A (1.0 g，53%)，為灰白色固體。
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：rt = 1.26分鐘；m/z = 378.2 [M+H]+ ，峰面積94%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.54 – 7.46 (m, 4H),7.44 – 7.36 (m, 4H),7.35 – 7.25 (m, 3H),6.46 (s, 1H),5.65 (s, NH2 ),5.06 (s, 2H),5.02 (s, 2H),4.16 (q, J = 7.1 Hz, 2H),1.22 (t, J = 7.1 Hz, 3H)。26) 4-(4- 羧基 -2,5- 二羥基苯基胺基羰基 )-2,5- 二羥基苯甲酸， 化合物Ia-056a ：
UPLC-MS (酸性方法，4分鐘)：rt = 0.90分鐘；m/z = 348.0 [M-H]-，峰面積97%。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.28 (brs, 1H),11.26 (s, 1H),9.97 (s, 1H),8.09 (s, 1H),7.48 (s, 1H),7.42 (s, 1H),7.26 (s, 1H)。二 乙酯 ：
UPLC-MS (酸性方法，4分鐘)：rt = 1.86分鐘；m/z = 404.2 [M-H]- ，峰面積92%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 11.48 (brs, 1H),11.32 (brs, 1H),10.28 (s, 1H),10.07 (brs, 1H),9.88 (s, 1H),8.12 (s, 1H),7.58 (s, 1H),7.39 (s, 1H),7.28 (s, 1H),4.46 – 4.27 (m, 4H),1.46 – 1.12 (m, 6H)。實施例 1.2 - 類型 Ib 的分子 ：來自二胺的二醯胺，1個實例
Figure 02_image175
流程 5. 類型Ib 二醯胺的合成
Figure 02_image177
合成程序 ：參見通用程序，步驟[3]、[4]、[5]
實例：
Figure 02_image179
條件及產率：參見圖4A-D27) 3,5- 雙 (2,5- 二羥基 -4- 羧基苯甲醯基胺基 ) 苯甲酸， 化合物Ib-010a ：
UPLC-MS (酸性方法，4分鐘)：rt = 0.98分鐘；m/z = 511.0 [M-H]‑ ，峰面積＞93%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 10.81 (s, 2H),10.65 (s, 2H),8.38 (d,J = 2.0 Hz, 1H),8.12 (d,J = 2.0 Hz, 2H),7.39 (d,J = 2.3 Hz, 4H)。
HRMS：[M+H]+ ，C23 H17 N2 O12 計算值：513.07760，實際值：513.07736。
Biodata：Ib-010a ：FGF-1 IC50 [µM] = 14；FGF-2 IC50 [µM] = 3.8；VEGF-A1 IC50 [µM] = 15；VEGFR-磷酸化抑制IC50 [µM] =1.6；PMN ROS [在0.3 µM的抑制 [%] = 71.84；PMN ROS抑制 IC50 [µM] = 1.06；嗜中性白血球黏著抑制[%] = 1.5；全血：GM-CSF IC50 [µM] = ＞100；IFNγ IC50 [µM] = 2.22；IL-1β IC50 [µM] = 33.3；IL-2 IC50 [µM] = 2.74； IL-4 IC50 [µM] = ＞100；IL-5 IC50 [µM] = ＞100；IL-6 IC50 [µM] = 1.02；IL-9 IC50 [µM] = 11.58；IL-10 IC50 [µM] = ＞100；IL-12p70 IC50 [µM] = 0.27；IL-13 IC50 [µM] = ＞100；IL-17A IC50 [µM] = 0.42；IL-17F IC50 [µM] = ＞100；IL-18 IC50 [µM] = ＞100；IL-21 IC50 [µM] = 67.8；IL-33 IC50 [µM] = 31.3；TGFβ IC50 [µM] = ＞100；TNFα IC50 [µM] = 0.31；TNFβ IC50 [µM] = 49.3。三 乙酯 ：
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：r.t = 1.29分鐘，m/z = 597.1 [M+H]+ ，峰面積＞ 96%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 10.80 (s, 2H),10.68 (s, 2H),9.95 (s, 2H),8.40 (t,J = 2.0 Hz, 1H),8.15 (d,J = 2.0 Hz, 2H),7.42 (s, 2H),7.39 (s, 2H),4.42 – 4.33 (m, 6H),1.38 – 1.33 (m, 9H)。
HRMS：[M+H]+ ，C29 H29 N2 O12 計算值：597.17150，實際值：597.17131。
Biodata：Ib-010a-E3 ：FGF-1 IC50 [µM] = 26；FGF-2 IC50 [µM] = 226；VEGF-A1 IC50 [µM] = 200；VEGFR-磷酸化抑制IC50 [µM] =0.09； PMN ROS [在0.3 µM的抑制 [%] = 36.41；PMN ROS抑制 IC50 [µM] = 6.52；嗜中性白血球黏著抑制[%] = 79.5；全血：GM-CSF IC50[µM] = ＞100； IFNγ IC50 [µM] = 2.79；IL-1β IC50 [µM] = ＞100；IL-2 IC50 [µM] = 36.2；IL-4 IC50 [µM] = ＞100；IL-5 IC50 [µM] = ＞100；IL-6 IC50 [µM] = 0.24；IL-9 IC50 [µM] = 26.8；IL-10 IC50 [µM] = ＞100；IL-12p70 IC50 [µM] = 0.84；IL-13 IC50 [µM] = 33；IL-17A IC50 [µM] = 0.52；IL-17F IC50 [µM] = 34.2；IL-18 IC50 [µM] = ＞100；IL-21 IC50 [µM] = ＞100；IL-33 IC50 [µM] = 20；TGFβ IC50 [µM] = ＞100；TNFα IC50 [µM] = 0.98；TNFβ IC50 [µM] = 38.2。四 乙酸三乙酯 ：
UPLC-MS(酸性方法，2分鐘)：r.t = 1.19分鐘，m/z = 782.1 [M+NH4 ]+ ，峰面積91%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 10.84 (s, 2H),8.40 (m, 1H),8.08 (d, J = 2.0 Hz, 2H),7.80 (s, 2H),7.63 (s, 2H),4.45 – 4.22 (m, 6H),2.32 (s, 6H),2.23 (s, 6H),1.38 – 1.27 (m, 9H)。
Biodata：Ib-010a-E3-A4 ：FGF-1 IC50 [µM] = 200；FGF-2 IC50 [µM] = 200；VEGF-A1 IC50 [µM] = 200；VEGFR-磷酸化抑制IC50 [µM] =0.54； PMN ROS [在0.3 µM的抑制[%] = 54.86；PMN ROS抑制IC50 [µM] = 1.49；嗜中性白血球黏著抑制[%] = 96。實施例 1.3. 類型 Ic 的分子 ：來自二酸的二醯胺，4個實例
Figure 02_image181
流程 6. 類型Ic 醯胺(其中R = R’)的合成
Figure 02_image183
流程：參見來自KI-6 [3]、[4]、[5]的通用程序
實例：
Figure 02_image181
Figure 02_image186
條件及產率：參見圖4A-D28) N1 ,N4 - 雙 (2-(1H- 四唑 -5- 基 ) 苯基 )-2,5- 二羥基對苯二甲醯胺， 化合物Ic-001aTz2 ：
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：rt = 0.97分鐘；m/z = 485.1 [M+H]+ ，峰面積＞97%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 11.53 (s, 1H),10.98 (s, 1H),8.49 (dd, J = 8.4, 1.2 Hz, 1H),7.90 (dd, J = 7.8, 1.6 Hz, 1H),7.62 (ddd, J = 8.7, 7.4, 1.6 Hz, 1H),7.58 (s, 1H),7.37 (td, J = 7.6, 1.2 Hz, 1H)。
HRMS：[M+H]+ ，C22 H17 N10 O4 計算值：485.14287，實際值：485.17274。
Biodata：Ic-001aTz2 ：FGF-1 IC50 [µM] = 200；FGF-2 IC50 [µM] = 70；VEGF-A1 IC50 [µM] = 45；VEGFR-磷酸化抑制 IC50 [µM] =2.2；PMN ROS [在0.3 µM的抑制[%] = 60.64；PMN ROS抑制 IC50 [µM] = N.D.；嗜中性白血球黏著抑制[%] = 97.15；全血：GM-CSF IC50 [µM] = ＞100；IFNγ IC50 [µM] = 1.38；IL-1β IC50 [µM] = ＞100；IL-2 IC50 [µM] = 9.45；IL-4 IC50 [µM] = ＞100；IL-5 IC50 [µM] = ＞100；IL-6 IC50 [µM] = 0.52；IL-9 IC50 [µM] = 9.13；IL-10 IC50 [µM] = ＞100；IL-12p70 IC50 [µM] = 29.1；IL-13 IC50 [µM] = 0.12；IL-17A IC50 [µM] = 0.31；IL-17F IC50 [µM] = 0.15；IL-18 IC50 [µM] = 33.9；IL-21 IC50 [µM] = 32；IL-33 IC50 [µM] = 0.23；TGFβ IC50 [µM] = ＞100；TNFα IC50 [µM] = 0.1；TNFβ IC50 [µM] = 0.41。29) 5-(4-(3- 羧基 -4- 羥基苯基胺基羰基 )-2,5- 二羥基苄醯胺基 )-2- 羥基苯甲酸 ， 化合物Ic-007a ：
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：rt = 0.80分鐘；m/z = 469.1 [M+H]+ ，峰面積＞91%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 8.08 (s, 2H),7.65 (s, 2H),7.59 (s, 2H),7.30 – 6.89 (m, 5H),6.79 (d,J = 8.8 Hz, 2H)。
13 C NMR (100 MHz, DMSO-d6 ) δ 172.1、165.2、158.3、150.1、130.2、129.2 (CH)、122.8、122.6 (CH)、117.7 (CH)、117.3 (CH)、113.3。
HRMS：[M+H]+ ，C22 H17 N2 O10 計算值：469.08777，實際值：469.08739。
Biodata：Ic-007a ：FGF-1 IC50 [µM] = 13；FGF-2 IC50 [µM] = 5.4；VEGF-A1 IC50 [µM] = 3.2；VEGFR-磷酸化抑制IC50 [µM] =0.09；PMN ROS [在0.3 µM的抑制 [%] = 57.99；PMN ROS抑制 IC50 [µM] = 2.7；嗜中性白血球黏著抑制 [%] = 57.5；全血：GM-CSF IC50 [µM] = ＞100；IFNγ IC50 [µM] = 1.44；IL-1β IC50 [µM] = ＞100；IL-2 IC50 [µM] = ＞100；IL-4 IC50 [µM] = ＞100；IL-5 IC50 [µM] = ＞100；IL-6 IC50 [µM] = 0.09；IL-9 IC50 [µM] = 27.1；IL-10 IC50 [µM] = 12.5；IL-12p70 IC50 [µM] = 0.49；IL-13 IC50 [µM] = 30.1；IL-17A IC50 [µM] = 0.04；IL-17F IC50 [µM] = 22.9；IL-18 IC50 [µM] = ＞100；IL-21 IC50 [µM] = 1.9；IL-33 IC50 [µM] = 18.4；TGFβ IC50 [µM] = ＞100；TNFα IC50 [µM] = 0.27；TNFβ IC50 [µM] = 6.52。二 甲酯 ：
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：r.t = 1.13分鐘，m/z = 497.0 [M+H]+ ，峰面積＞ 95%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.08 (s, 2H),10.48 (s, 2H),10.38 (s, 2H),8.27 (d,J = 2.8 Hz, 2H),7.89 – 7.74 (m, 2H),7.56 (s, 2H),7.03 (d,J = 8.9 Hz, 2H),3.93 (s, 6H)。
HRMS：[M+H]+ ，C24 H21 N2 O10 計算值：497.11907，實際值：497.11874。
Biodata：Ic-007a-E2 ：FGF-1 IC50 [µM] = 23；FGF-2 IC50 [µM] = 49；VEGF-A1 IC50 [µM] = 200；VEGFR-磷酸化抑制IC50 [µM] =0.25；PMN ROS [在0.3 µM的抑制[%] = 21.33；PMN ROS抑制 IC50 [µM] = 7.9；嗜中性白血球黏著抑制[%] = 2。可替代的大規模 合成 Ic-007a a) 5-(4-(3- 甲氧基羰基 -4- 羥基苯基胺基羰基 )-2,5- 二芐氧基苄醯胺基 )-2- 羥基苯甲酸甲酯
在5L的凸緣燒瓶中裝入2,5-雙(芐氧基)對苯二甲酸(KI-6，141.00 g，0.373 mol)、芐基三乙基氯化銨(850 mg，3.73 mmol，0.01 eq)及氯仿(2.5 L)。然後，裝設氮氣入口、溫度計、均壓滴液漏斗，通向空白Dreschel瓶的出口及氫氧化鈉起泡器。將攪拌的溶液溫熱至55°C，在40分鐘內滴加亞硫醯氯(59 mL，0.802 mol，2.15 eq)。將該溶液在55°C下保持6小時，然後冷卻至室溫過夜。將等分試樣在乙醇中進行超音波處理5分鐘，然後藉由LCMS分析進行分析，僅顯示出二乙酯。將混合物轉移到兩個圓底燒瓶，在真空中除去揮發物；用乙酸乙酯萃取。酸氯化物與甲苯(每個燒瓶800 mL)共沸。在10L夾套式容器中裝入5-胺基-2-羥基苯甲酸甲酯(137.00 g，0.819 mol，2.2 eq)及二氯甲烷(2.5 L，18 vol)。將溶液冷卻至15°C。將酸氯化物吸收在二氯甲烷(2.5 L，18 vol)中，並加入到攪拌的反應中。反應立即形成大量固體，攪拌變得困難。反應放熱到30°C。但是，長時間攪拌後，混合物變成粉紅色/紫色細懸浮液。將混合物在25°C下攪拌72小時。將懸浮液過濾，用二氯甲烷(2 L，14 vol)洗滌，並將所得固體在真空烘箱中乾燥，得到240.00 g產物(94%產率)。b) 5-(4-(3- 羧基 -4- 羥基苯基胺基羰基 )-2,5- 二羥基苄醯胺基 )-2- 羥基苯甲酸 ， Ic-007a
皂化：向5升3頸圓底燒瓶加入剛研磨的5-(4-(3- 甲氧基羰基 -4- 羥基苯基胺基羰基 )-2,5- 二芐氧基苯甲醯胺基 )-2- 羥基苯甲酸甲酯 (150.00 g，0.22 mol)及異丙醇(1.5 L，10 vol)。將混合物溫熱至50°C，並加入氫氧化四丁銨(444 mL，0.67 mol，3 eq)及水(1.1 L，7 vol)。1小時後，殘留一些固體，因此再添加60 mL氫氧化四丁銨溶液及水(120 mL)，將混合物在50°C攪拌6小時，然後冷卻至室溫過夜。加入另外的氫氧化四丁基銨(80 mL)，並將混合物在60℃下進一步攪拌1小時，直到沒有固體殘留。
氫解：將反應脫氣(用N2 循環3次)，然後加入在水(100 mL)中呈漿料的催化劑(30.00 g，10%C上Pd)。將反應物進一步脫氣(用N2 循環3次，用H2 循環2次)，並在50℃的H2 (氣球壓力)下放置過夜。向反應物注入氫氣，並在50°C下再保持4小時，此後LCMS分析顯示反應完全。將反應混合物脫氣(用N2 循環3次)，通過矽藻土墊過濾，並用溫水/異丙醇(1 L，1：1，60℃)洗滌。在真空中將體積減少至〜1.2 L。將混合物用水(〜3 L)轉移至5L凸緣燒瓶中。燒瓶裝有頂置式攪拌器(大錨型)，並用鹽酸(35%)酸化。在添加過程中形成大量沉澱。將混合物在55℃加熱6小時，然後歷經72小時冷卻至室溫。過濾混合物，將固體在1M HCl水溶液(3 L)中製成漿料，並加熱至50℃達3小時，然後冷卻至室溫過夜。過濾混合物，用1M HCl水溶液(2 L)、水(1.5 L)及丙酮(1 L)洗滌。將固體在真空烘箱中乾燥，得到100.00 g產物，產物仍被〜5 mol%的四丁基銨鹽(NMR)污染。將固體在70℃的1M鹽酸水溶液(3 L)中攪拌8小時，然後冷卻至室溫過夜。過濾固體，用水洗滌並在真空烘箱中乾燥。四丁基銨的量減少至〜0.62 mol% (85.90 g，產率82%)(棕色粉末)。30) 2-(2,5- 二羥基 -4-(4- 羥基 -2- 羧基苯基胺基羰基 ) 苄醯胺基 )-5- 羥基苯甲酸， 化合物Ic-009a ：
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：rt = 0.85分鐘；m/z = 469.0 [M+H]+ ，峰面積＞98%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 13.31 (s, 2H),11.93 (s, 2H),10.85 (s, 2H),9.64 (s, 2H),8.41 (d,J = 9.0 Hz, 2H),7.55 (s, 2H),7.39 (d,J = 3.0 Hz, 2H),7.03 (dd,J = 9.0, 3.0 Hz, 2H)。
HRMS：C22 H17 N2 O10 計算值：469.08777，實際值：469.08755
Biodata：Ic-009a ：FGF-1 IC50 [µM] = 32；FGF-2 IC50 [µM] = 202；VEGF-A1 IC50 [µM] = 208；VEGFR-磷酸化抑制 IC50 [µM] =ND；PMN ROS [在0.3 µM的抑制[%] = 72.85；PMN ROS抑制 IC50 [µM] = N.D.；嗜中性白血球黏著抑制[%] = 72.21。二 甲酯：
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：r.t = 1.03分鐘，m/z = 497.1 [M+H]+ ，峰面積＞ 92%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.69 (s, 2H),11.01 (s, 2H),9.75 (s, 2H),8.36 (d,J = 9.0 Hz, 2H),7.62 (s, 2H),7.37 (d,J = 3.0 Hz, 2H),7.07 (dd,J = 9.0, 3.0 Hz, 2H),3.87 (s, 6H)。
HRMS：C24 H21 N2 O10 計算值：497.11907，實際值：497.11913。
Biodata：Ic-009a-E2 ：FGF-1 IC50 [µM] = 23；FGF-2 IC50 [µM] = 30；VEGF-A1 IC50 [µM] = 200；VEGFR-磷酸化抑制IC50 [µM] =0.02；PMN ROS [在0.3 µM的抑制[%] = 24.12；PMN ROS抑制IC50 [µM] = N.D.；嗜中性白血球黏著抑制[%] = 41.05。流程 7. 類型Ic 醯胺(R ≠ R’)的合成
Figure 02_image188
合成程序：參見來自KI-1 的 通用程序。
實例：
Figure 02_image190
Figure 02_image192
條件及產率：參見圖4A-D31) 5-(4-(2-(1H- 四唑 -5- 基 ) 苯基胺基羰基 )-2,5- 二羥基苄醯胺基 )-2- 羥基苯甲酸， 化合物Ic-001aTz/004a ：
UPLC-MS (酸性方法，4分鐘)：rt = 1.40分鐘；m/z = 477.2 [M-H]- ，峰面積＞99%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 10.92 (s, 1H),10.42 (s, 1H),8.47 (dd, J = 8.4, 1.2 Hz, 1H),8.25 (d, J = 2.7 Hz, 1H),7.98 – 7.88 (m, 1H),7.76 (dd, J = 8.9, 2.8 Hz, 1H),7.63 – 7.56 (m, 2H),7.51 (s, 1H),7.37 (td, J = 7.6, 1.2 Hz, 1H),6.97 (d, J = 8.9 Hz, 1H)。
HRMS：[M+H]+ ，C22 H17 N6 O7 計算值：477.11532，實際值：477.11475。
Biodata：Ic-001a-Tz/004a ：FGF-1 IC50 [µM] = 19；FGF-2 IC50 [µM] = 87；VEGF-A1 IC50 [µM] = 25；VEGFR-磷酸化抑制IC50 [µM] =2.6； PMN ROS [在0.3 µM的抑制 [%] = 82.83；PMN ROS抑制 IC50 [µM] = N.D.；嗜中性白血球黏著抑制[%] = 96.99；全血：GM-CSF IC50 [µM] = 3.4；IFNγ IC50 [µM] = 0.61；IL-1β IC50 [µM] = ＞100；IL-2 IC50 [µM] = 4.91；IL-4 IC50 [µM] = ＞100；IL-5 IC50 [µM] = ＞100；IL-6 IC50 [µM] = 3.04；IL-9 IC50 [µM] = 8.48；IL-10 IC50 [µM] = 19.5；IL-12p70 IC50 [µM] = 12.2；IL-13 IC50 [µM] = 1.5；IL-17A IC50 [µM] = 0.02；IL-17F IC50 [µM] = 2.4；IL-18 IC50 [µM] = 46.6；IL-21 IC50 [µM] = 0.3；IL-33 IC50 [µM] = 1.67；TGFβ IC50 [µM] = ＞100；TNFα IC50 [µM] = 0.002；TNFβ IC50 [µM] = 3.02。甲 酯 ：
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：r.t = 1.06分鐘，m/z = 491.1 [M+H]+ ，峰面積＞ 89%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.55 (s, 1H),10.90 (s, 1H),10.45 (s, 1H),10.37 (s, 1H),8.47 (dd, J = 8.4, 1.2 Hz, 1H),8.30 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 7.91 (dd, J = 7.8, 1.6 Hz, 1H),7.76 (dd, J = 8.9, 2.7 Hz, 1H),7.63 (ddd, J = 8.7, 7.4, 1.6 Hz, 1H),7.58 (s, 1H),7.51 (s, 1H),7.38 (td, J = 7.6, 1.2 Hz, 1H),7.02 (d, J = 8.8 Hz, 1H),3.93 (s, 4H)。
HRMS：[M+H]+ ，C23 H19 N6 O7 計算值：491.13097，實際值：491.13071。
Biodata：Ic-001a-Tz/004a-E1 ：FGF-1 IC50 [µM] =104；FGF-2 IC50 [µM] = 200；VEGF-A1 IC50 [µM] = 35；VEGFR-磷酸化抑制IC50 [µM] =0.1；PMN ROS [在0.3 µM的抑制[%] = 73.97；PMN ROS抑制IC50 [µM] = N.D.；嗜中性白血球黏著抑制[%] = 97.56。實施例 1.4. 類型 Id 分子 ：苯并咪唑連結，1個實例
Figure 02_image194
流程 8. 類型Id 化合物的合成
Figure 02_image196
合成程序：參見來自KI-1 [3]、[4]、[5]的通用程序
環化步驟：參見圖4A-D
實例：
Figure 02_image198
32) 2-(4- 羧基 -2,5- 二羥基苯基 )-1H- 苯并 [d] 咪唑 -4- 羧酸， 化合物Id-030a ：
UPLC-MS (酸性方法，4分鐘)：rt = 0.99分鐘；m/z = 313.1 [M-H]- ，峰面積＞97%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 8.10 (d, J = 8.2 Hz, 1H),8.05 (d, J = 7.7 Hz, 1H),7.80 (s, 1H),7.68 (t, J = 8.0 Hz, 1H),7.62 (s, 1H)。
Biodata –在DMSO中不穩定乙甲 酯 ：
UPLC-MS (酸性方法，4分鐘)：r.t = 2.09分鐘，m/z = 357.1 [M+H]+ ，峰面積＞ 89%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 +D2 O 10%) δ 7.97 (d,J = 8.0 Hz, 1H),7.90 – 7.83 (m, 2H),7.44 – 7.36 (m, 2H),4.35 (q,J = 7.1 Hz, 2H),3.94 (s, 3H),1.33 (t,J = 7.1 Hz, 3H)。
HRMS：[M+H]+ ，C18 H17 N2 O6 計算值：357.10811，實際值：357.10827。
Biodata：Id-030a-E2 ：FGF-1 IC50 [µM] = 115；FGF-2 IC50 [µM] = 200；VEGF-A1 IC50 [µM] = 200；VEGFR-磷酸化抑制IC50 [µM] =0.33；PMN ROS [在0.3 µM的抑制[%] = 0；PMN ROS抑制IC50 [µM] = 0；嗜中性白血球黏著抑制[%] = 43。實施例 1.5 ： 類型 IIa 的分子：單醯胺， 16個實例
Figure 02_image200
前驅物的合成 流程 9a. 中間體KI-2 及 KI-7 的 合成
Figure 02_image202
程序 ：KI-2 及 KI-7 的 合成
2,6- 二 ( 乙氧基羰基 ) 環己烷 -1,4- 二酮 [步驟1] [參考：Rodriguez et al.Synth. Comm . 28 (1998) 2259-69]：在30分鐘內，在回流溫度下，將在THF(500 mL)中的1,3-二氯丙酮(12.5 g，0.1 mol)滴加到1,3-丙酮二羧酸二乙酯(18 mL，0.1 mol) 及碳酸鉀-325目(21.5 g，0.15 mol)在THF(1 L)中的懸浮液。2小時後，反應完成，將混合物冷卻至室溫，然後經Celite©過濾。固體殘餘物用THF(200 mL)洗滌，然後減壓除去溶劑。粗產物藉由快速管柱層析法純化(己烷/EtOAc，0至20%)，得到標題化合物(9.3 g，37%產率)。
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：rt = 1.01分鐘；m/z = 257.1 [M+H]- ，峰面積＞74%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) 烯醇及順式/反式異構體的複雜混合物δ 12.10 (s),4.23 (q,J = 7.1 Hz),4.11 (m),3.85 – 3.77 (m),3.70 (s),3.10 – 2.89 (m),2.89 – 2.80 (m),2.62 – 2.58 (m),1.25 (t,J = 7.1 Hz),1.22–1.15 (m, 9H)。
2,5- 二羥基間苯二甲酸二乙酯 [步驟2]：[從Zhong等人Chem Eur. J. 25 (2019) 8177-8169獲得的方案：室溫下在30分鐘內，將NBS(3.5 g，20 mmol)分批加入2,6-二(乙氧基羰基)-環己烷-1,4-二酮(5.0 g，20 mmol)在AcOH(17 mL)中的攪拌溶液。再過20分鐘後，藉由加入水(100 ml)將反應淬滅。分離為固體的所欲產物。過濾並乾燥後，分離標題化合物，為白色固體(4.6 g，93%產率)。
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：rt = 1.00分鐘；m/z = 253.1 [M-H]- ，峰面積＞90%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 10.85 (s, 1H),9.57 (s, 1H),7.39 (s, 2H),4.32 (q,J = 7.1 Hz, 4H),1.31 (t,J = 7.1 Hz, 6H)。
2,5- 雙 ( 芐氧基 ) 間苯二甲酸二乙酯 [步驟3]：在10分鐘內，對2,5-二羥基間苯二甲酸二乙酯(19.0 g，75 mmol)及碳酸鉀-325目(82.6 g，598 mmol)在DMF(83 mL)中的懸浮液滴加芐基溴(43.0mL，362mmol)。將反應混合物在100°C下加熱2小時。冷卻至室溫後，減壓除去溶劑。然後將水(500 mL)加入殘餘物。將混合物用EtOAc(3×250 mL)萃取，將收集的有機層用鹽水(300 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾，然後在減壓下濃縮。粗材料藉由快速管柱層析法純化(己烷/ EtOAc， 0至15%)，得到標題化合物(29.4g，90%產率)。
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：rt = 1.38分鐘；m/z = 435.2 [M+H]+ ，峰面積＞90%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.50 (s, 2H),7.49 – 7.45 (m, 2H),7.44 – 7.37 (m, 5H),7.37 – 7.29 (m, 3H),5.17 (s, 2H),4.95 (s, 2H),4.26 (q,J = 7.1 Hz, 4H),1.22 (t, J = 7.1 Hz, 6H)。
2,5- 雙 ( 芐氧基 )-3-( 乙氧基羰基 ) 苯甲酸 (KI-2) [步驟4]：將氫氧化鉀(4.4 g，79 mmol)在水(66 mL)中的溶液快速加入2,5-雙(芐氧基)間苯二甲酸二乙酯(31.3 g，72 mmol)在1,4-二㗁口山(430 mL)溶液。將反應混合物在室溫下攪拌1.5時。減壓除去1,4-二㗁口山，然後加入Na2 CO3 飽和水溶液(1L)，水層用EtOAc(3×500 mL)萃取，經Na2 SO4 乾燥，過濾並真空除去溶劑。使用己烷/EtOAc(1/1)、然後用EtOAc(1% v/v AcOH)作為洗提劑，殘留物藉由矽膠墊過濾純化，得到兩種不同的餾分：
起始原料：2,5-雙(芐氧基)間苯二甲酸二乙酯(20.4 g，65%產率)。
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：rt = 1.38分鐘；m/z = 435.2 [M+H]+ ，峰面積＞78%。
1 H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ 7.50 (s, 2H),7.49 – 7.45 (m, 2H),7.44 – 7.37 (m, 5H),7.37 – 7.29 (m, 3H),5.17 (s, 2H),4.95 (s, 2H),4.26 (q,J = 7.1 Hz, 4H),1.22 (t,J = 7.1 Hz, 6H)。
所欲產物2,5-雙(芐氧基)-3-(乙氧基羰基)苯甲酸為白色蓬鬆固體，(KI-2 ) (3.5 g，12%產率)。
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：rt = 1.22分鐘；m/z = 405.1 [M-H]- ，峰面積＞90%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 13.30 (s, 1H),7.48 (t,J = 3.0 Hz, 2H),7.46 – 7.42 (m, 5H),7.39 (m, 3H),7.37 – 7.31 (m, 2H),5.17 (s, 2H),4.96 (s, 2H),4.25 (q,J = 7.1 Hz, 2H),1.22 (t,J = 7.1 Hz, 3H)。
然後使用濃鹽酸將原始的Na2 CO3 飽和水溶液酸化至pH〜7。然後用EtOAc(2×500 mL)萃取，經硫酸鈉乾燥，過濾並在減壓下濃縮，得到KI-2 及KI-7 的混合物(3.0g，11%產率)。
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：rt = 1.00分鐘；m/z = 377.1 [M-H]- ，峰面積25%，rt = 1.22分鐘；m/z = 405.1 [M-H]- ，峰面積56%。
1 H NMR(400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 13.23(s, 2H),7.52 – 7.29 (m, 12H),5.17 (s, 2H),4.97 (s, 2H)。流程 9b ： KI-7 的 替代合成
Figure 02_image204
2,6- 二甲基 -1,4- 亞苯基二乙酸酯 [步驟1]：對2,6-二甲基氫醌(5.0 g，36 mmol)在吡啶(10 mL)中的攪拌溶液快速加入乙酸酐(10 mL)。將該溶液在室溫下攪拌18小時。然後減壓除去溶劑，用EtOAc(250 mL)溶解殘餘物，然後用鹽酸水溶液(1 M，250 mL)、飽和NaHCO3 水溶液(250 mL)及水( 250mL)洗滌，用Na2 SO4 乾燥，過濾，以真空除去溶劑，得到標題化合物(7.4 g，92%)，為白色固體。
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：rt = 1.07分鐘；m/z = 240.2 [M+NH4 ]+ ，峰面積＞90%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 6.88 (HAr , 2H),2.37 – 2.30 (m, 3H),2.27 – 2.21 (m, 3H),2.12 – 2.02 (m, 6H)。
2,6- 雙 ( 二溴甲基 )-1,4- 亞苯基二乙酸酯 [步驟2]：對2,6- 二甲基 -1,4- 亞苯基二乙酸酯 (6.34 g，29 mmol)在1,2-二氯乙烷(130 mL)中的攪拌溶液依次添加2,2'-偶氮雙(2-甲基丙腈)(AIBN)(0.93 g，6 mmol)及N-溴代琥珀醯亞胺(NBS)(25.39 g，143 mmol)。在回流下攪拌溶液24小時。加入另外的2,2'-偶氮雙(2-甲基丙腈)(AIBN)(0.93 g，6 mmol)及N-溴代琥珀醯亞胺(NBS)(5.08g，28.6 mmol)，反應混合物在回流下攪拌另外24小時。將反應冷卻至室溫，藉由過濾除去殘留的固體，用DCM(250 mL)洗滌。濾液用碳酸氫鈉飽和水溶液(250 mL)、鹽酸水溶液(1M，250 mL)及鹽水(250 mL)洗滌。然後用硫酸鈉乾燥有機層，過濾，在減壓下濃縮，得到為橙色油的標題化合物(9.38 g，61%)，。
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：rt = 1.23分鐘；m/z = 553.1 [M+NH4 ]+ ，峰面積＞88%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.69 (s, 2H),7.31 (s, 2H),2.49 (s, 3H),2.32 (s, 3H)。
2,5- 二羥基間苯二甲醛 [ 步驟 3] ：對2,6- 雙 ( 二溴甲基 )-1,4- 亞苯基二乙酸酯 (3.89 g，7.23 mmol)在甲酸(50 mL)中的攪拌懸浮液加入水(5 mL )。在回流下攪拌混合物18小時。然後將反應混合物緩慢倒入飽和碳酸氫鈉水溶液(300 mL)。然後藉由過濾分離形成的沉澱，得到為棕色固體的標題化合物(0.94g，78%)。
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：rt = 0.74分鐘；m/z = 165.0 [M-H]- ，峰面積＞98%。
2,5- 雙 ( 芐氧基 ) 間苯二甲醛 [ 步驟 4] ：在環境溫度下，將碳酸鉀-325目(2.34 g，17.0 mmol)加入2,5- 二羥基間苯二甲醛 (0.94 g，5.7 mmol)在DMF(6 mL)中的攪拌溶液。然後將芐基溴(2.0 mL，17.0 mmol)加入反應燒瓶，將得到的混合物在100 °C下加熱18小時。將反應混合物冷卻至環境溫度，用飽和氯化銨水溶液(100 mL)處理。將得到的懸浮液攪拌30分鐘，然後過濾。用飽和氯化銨水溶液(2×50 mL)洗滌固體材料。然後用乙醇(5 mL)研磨固體，藉由抽吸乾燥，得到為棕色固體的所欲產物(1.58 g，68%)。
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：rt = 1.28分鐘，未觀察到電離，峰面積78%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 10.14 (s, 2H),7.63 (s, 2H),7.53 – 7.28 (m, 10H),5.23 (s, 2H),5.21 (s, 2H)。
2,5- 雙 ( 芐氧基 ) 間苯二甲酸 (KI-7)[ 步驟 5] ：將2,5- 雙 ( 芐氧基 ) 間苯二甲醛 (1.58 g，4.5 mmol)溶解在於THF (2.0 M，25 mL)的2-甲基-2-丁烯溶液。然後加入亞氯酸鈉(5.1 g，45.0 mmol)及磷酸二氫鉀(4.6 g，33.8 mmol)在水(25 mL)中的溶液，在室溫下攪拌反應混合物18小時。然後將反應混合物倒入NaHCO3 飽和水溶液(400 mL)。用EtOAc(3×100 mL)洗滌水層，然後用濃鹽酸(pH〜1) 酸化。然後用DCM(2×150 mL)及Et 2 O(2×200 mL)萃取水層，用硫酸鈉乾燥收集的有機層，過濾，在減壓下濃縮。然後用正戊烷(3×50 mL)研磨殘餘物，得到為白色固體的標題化合物KI-7(0.98 g，58%)。
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：rt = 1.03分鐘，m/z = 379.1 [M+H]+ ，峰面積＞96%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 13.23 (s, 2H),7.57 – 7.28 (m, 12H),5.17 (s, 2H),4.97 (s, 2H)。流程 9c ： KI-2Ac2 的合成
Figure 02_image206
2,5- 二乙醯氧基 -3- 甲基苯甲酸甲酯 。如Nudenberg等人於J. Org. Chem. 1943 ,8 , 500-508所報導，用過硫酸鹽氧化3-甲基水楊酸。將3-甲基水楊酸(15.0 g，98.6 mmol)溶於氫氧化鈉(15.0 g，375 mmol，3.8 eq)在水(37.5 mL)中的溶液。將淺棕色溶液冷卻至20°C，並在攪拌的同時，從氫氧化物開始，用7.75 mL的40%氫氧化鈉溶液及33.8 mL的10%的過硫酸鉀溶液進行處理，其速度應使溫度維持在30-35o C，直至各加入十份為止。加完後，繼續攪拌1小時，使混合物在室溫下靜置16-20小時，然後加入濃HCl直至藍色變成剛果紅(Congo)。此時未反應的3-甲基水楊酸分離為固體，藉由過濾除去。將濾液用乙醚萃取幾次(5×50 mL)，以回收剩餘的3-甲基水楊酸。然後用濃HCl(100 mL)處理水溶液，回流2小時以分解單硫酸鹽中間體。使溫熱的溶液冷卻至室溫。將沉澱的幾乎呈黑色的結晶固體過濾，用水洗滌並乾燥。用乙醚萃取水性濾液，得到另一批為棕色固體的2,5-二羥基-3-甲基苯甲酸(總計：7.71 g，47%)。熔點212-214°C；1 H NMR(250 MHz,DMSO)：δ10.94(br.s. ,1H),7.00(dd, J = 3.0及0.75,1Har),6.86(dd,J = 3.0和0.75,1 Har ),2.12(s, 3H)。
酯化。在0°C及氮氣下，將濃硫酸(0.7 mL)小心地加入2,5-二羥基-3-甲基苯甲酸(2.05 g，12.2 mmol)於MeOH(7 mL)的溶液中。然後在100o C下攪拌反應混合物6小時。冷卻至室溫後，減壓除去溶劑。將獲得的粗產物溶解在乙酸乙酯(50 mL)，溶液用水(20 mL)、10%NaHCO3 水溶液(20 mL)、5% HCl水溶液(20 mL)及鹽水(20 mL) 洗滌，然後乾燥(MgSO4 )。過濾後，將有機層真空濃縮，得到殘餘物，藉由矽膠快速層析法純化(石油醚/乙酸乙酯＝9/1)，得到為白色固體的2,5- 二羥基 -3- 甲基苯甲酸甲酯 (370 mg，75%)。熔點：101-103o C。
1 H NMR (250 MHz, CDCl3 )： δ10.56 (d,J = 0.50 Hz, 1H),7.12 (dd,J = 3.25及0.50 Hz, 1Har ),6.90 (dt,J = 3.00及0.50 Hz, 1Har ),4.45 (s, 3H),2.24 (s 3H)； HRMS (ESI+ )：m/z，C9 H11 O4 [M+H]+ 計算值：183.0652；實際值：183.0651。
乙醯化。在氬氣下，將過量的乙酸酐(10 mL)添加至2,5-二羥基-3-甲基-苯甲酸甲酯(4.43 g，24.3 mmol)在吡啶(10 mL)中的溶液。在室溫下攪拌12小時後，藉由與甲苯(25 mL)在減壓下共蒸發除去吡啶及乙酸酐。然後將粗產物溶解於乙酸乙酯(15 mL)，依次用2%HCl水溶液(5 mL)、飽和NaHCO3 水溶液(5 mL)及鹽水(5 mL)洗滌溶液。乾燥有機相(MgSO 4)，減壓蒸發溶劑。將獲得的無色油狀物藉由矽膠快速層析法純化(石油醚/乙酸乙酯= 8/2)，得到白色固體的乙醯化標題產物(2,5-乙醯氧基-3-甲基-苯甲酸酯)(6.25 g，97%)。Mp 69-71o C；1 H NMR (250 MHz, CDCl3 )：δ7.58 (dd,J = 3.00及0.50 Hz, 1Har ),7.18 (dd,J = 3.00及0.75 Hz, 1Har ),3.85 (s, 3H),2.37 (s, 3H),2.30 (s, 3H),2.22 (s, 3H)；HRMS (ESI+ )：m/z，C13 H18 NO6 [M+NH4 ]+ 計算值： 284.1129；實際值：284.1128。
2,5- 二乙醯氧基 -3- 二溴甲基苯甲酸甲酯 。將2,5-乙醯氧基-3-甲基苯甲酸甲酯(2.15 g，8.08 mmol)、N-溴代琥珀醯亞胺(2.87 mg，16.2 mmol，2.0 eq)及偶氮雙異丁腈(AIBN，27.0 mg，0.162 mmol，0.02 eq)在四氯化碳(45 mL)中的溶液回流約12小時，直到白色固體漂浮在表面上。冷卻後，過濾混合物，然後在減壓下濃縮濾液。將獲得的無色油狀物藉由矽膠快速層析法純化(石油醚/乙酸乙酯＝9/1)，得到為白色固體的二溴化產物(3.29 g，84%)。Mp 117-119o C；1 H NMR (250 MHz, CDCl3 )： δ7.86 (d,J = 2.75 Hz, 1Har ),7.78 (d,J = 2.75 Hz, 1Har ),6.81 (s, 1H),3.86 (s, 3H),2.42 (s, 3H),2.33 (s, 3H)； HRMS (ESI+ )：m/z，C13 H12 Br2 NaO6 [M+Na]+ 計算值：444.8893；實際值：444.8896。
2,5- 二乙醯氧基 -3- 甲醯基苯甲酸甲酯 。2,5-二乙醯氧基-3-二溴甲基苯甲酸甲酯(2.30 g，5.42 mmol)及硝酸銀(2.29 g，13.5 mmol，2.5 eq)在丙酮-H2 O混合物(4.7：1，40 mL)中的溶液在室溫下、黑暗中攪拌12小時，然後過混合物濾，用乙酸乙酯(2×20 mL)萃取濾液。用鹽水(5mL)洗滌合併的有機相，乾燥(MgSO4 )，在減壓下濃縮。如此獲得的無色油狀物藉由矽膠快速層析法純化(石油醚/乙酸乙酯＝ 9/1)，得到為黃色固體的醛(1.14 g，75%)。Mp 102-104o C；1 H NMR (250 MHz, CDCl3)：δ10.17 (s, 1H),8.00 (d, J = 3.00 Hz, 1Har),7.82 (d, J = 3.00 Hz, 1Har),3.90 (s, 3H),2.44 (s, 3H),2.34 (s, 3H)。
2,5- 二乙醯氧基間苯二甲酸單甲酯 (KI-2Ac2) 。將磷酸氫鈉(1.35 g，9.81 mmol，2.5 eq)在水(3.5 mL)中的溶液滴加到2,5-二乙醯氧基-3-甲醯基苯甲酸甲酯(1.10 g，3.93 mmol)在DMSO( 14 mL)中的溶液。然後將混合物冷卻至0o C，並緩慢加入亞氯酸鈉(1.06 g，9.34 mmol，2.4 eq)在水(3.5 mL)中的溶液。在室溫下攪拌72小時後，用飽和NaHCO3 水溶液(10 mL)淬滅混合物，用乙酸乙酯(2×30 mL)萃取。然後用1M HCl酸化水相至pH＝1，以乙酸乙酯(2×30 mL) 萃取。用鹽水(5 mL)洗滌合併的有機相，乾燥(MgSO4 )，在減壓下濃縮。所獲得的橙色油不經任何純化而用於下一步驟。單醯胺的合成 流程 10. 單醯胺IIa 的合成
Figure 02_image208
方案：單醯胺的合成
醯胺偶合及去保護程序 參見來自 KI-1 及 KI-6 步驟[3]、[4]、[5]的通用流程， 來自KI-2 、 KI-2Ac2 及KI-7 的相同程序
實例
Figure 02_image200
Figure 02_image210
條件及產率：參見表2(圖5A-C)33) 3-(2- 羧基苯基胺基羰基 )-2,5- 二羥基苯甲酸， 化合物IIa-001a ：
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：rt = 0.86分鐘；m/z = 318.0 [M+H]+ ，峰面積＞92%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.49 (s, 1H),12.16 (s, 1H),9.54 (s, 1H),8.70 (dd,J = 8.5, 1.2 Hz, 1H),7.99 (dd,J = 7.9, 1.7 Hz, 1H),7.70 – 7.51 (m, 2H),7.42 (d,J = 3.3 Hz, 1H),7.20 (td,J = 7.6, 1.2 Hz, 1H)。
HRMS：[M+H]+ ，C15 H12 NO7 計算值：318.06083，實際值：318.06082。
Biodata：IIa-001a ：FGF-1 IC50 [µM] = 8.6；FGF-2 IC50 [µM] = 11；VEGF-A1 IC50 [µM] =150；VEGFR-磷酸化抑制IC50 [µM] =100；PMN ROS [在0.3 µM的抑制[%] = 30.5；PMN ROS抑制IC50 [µM] = 0.408；嗜中性白血球黏著抑制[%] = 36.24。34) 3-(2-(1H- 四唑 -5- 基 ) 苯基胺基羰基 )-2,5- 二羥基苯甲酸， 化合物IIa-001aTz ：
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：rt = 0.71分鐘；m/z = 342.1 [M+H]+ ，峰面積＞99%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 11.40 (s, 1H),9.49 (s, 1H),8.51 (d, J = 8.3 Hz, 1H),7.87 (d, J = 7.7 Hz, 1H),7.72 – 7.51 (m, 2H),7.51 – 7.26 (m, 2H)。
HRMS：[M+H]+ ，C15 H12 N5 O5 計算值：342.08329，實際值：342.08317。
Biodata：IIa-001a-Tz ：FGF-1 IC50 [µM] = N.D.；FGF-2 IC50 [µM] = 9.8；VEGF-A1 IC50 [µM] = 187；VEGFR-磷酸化抑制 IC50 [µM] =ND；PMN ROS [在0.3 µM的抑制[%] = 74.15；PMN ROS抑制 IC50 [µM] = N.D.； 嗜中性白血球黏著抑制[%] = 24.18。乙酯
UPLC-MS (酸性方法，4分鐘)：rt = 1.46分鐘；m/z = 370.1 [M+H]+ ，峰面積＞92%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 11.51 (s, 1H),11.37 (s, 1H),9.63 (s, 1H), 8.47 (d,J = 8.3 Hz, 1H),7.92 (dd,J = 7.8, 1.6 Hz, 1H),7.66 – 7.57 (m, 2H), 7.43 (d,J = 3.2 Hz, 1H),7.38 (td,J = 7.6, 1.2 Hz, 1H),4.40 (q,J = 7.1 Hz, 2H),1.36 (t,J = 7.1 Hz, 3H)。
HRMS：[M+H]+ ，C17 H16 N5 O5 計算值：370.11460，實際值：370.11444。
Biodata：IIa-001aTz-E1 ：FGF-1 IC50 [µM] = 200；FGF-2 IC50 [µM] = 42；VEGF-A1 IC50 [µM] = 200；VEGFR-磷酸化抑制 IC50 [µM] =100； PMN ROS [在0.3 µM的抑制[%] = 68.86；PMN ROS抑制IC50 [µM] = N.D.；嗜中性白血球黏著抑制[%] = 81.94。35) 2,5- 二羥基 -3-(2- 磺酸基苯基胺基羰基 ) 苯甲酸， 化合物IIa-001c ：
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：rt = 0.63分鐘；m/z = 354.0 [M+H]+ ，峰面積＞80%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 11.18 (s, 1H),9.48 (s, 1H),8.34 – 8.27 (m, 1H),7.72 (dd, J = 7.7, 1.7 Hz, 1H),7.52 (d, J = 3.2 Hz, 1H),7.41 – 7.31 (m, 2H),7.08 (td, J = 7.5, 1.2 Hz, 1H)。
HRMS：[M+H]+ ，C14 H12 NO8 S計算值：354.02781，實際值：354.02781。
Biodata：IIa-001c ：FGF-1 IC50 [µM] = N.D.；FGF-2 IC50 [µM] = 71；VEGF-A1 IC50 [µM] = 283；VEGFR-磷酸化抑制 IC50 [µM] =ND；PMN ROS [在0.3 µM的抑制[%] = 72.62；PMN ROS抑制 IC50 [µM] = N.D.；嗜中性白血球黏著抑制[%] = 43.53。36) 3-(3- 羧基苯基胺基羰基 )-2,5- 二羥基苯甲酸， 化合物IIa-002a ：
1 H NMR (250 MHz, CD3 OD)：δ 8.37 (t, 1H),7.93 (br d, 1H),7.81 (br d, 1),7.76 (d, 1H),7.52 (d, 1H),7.48 (t, 1H)。
HRMS (ESI-)： [M-H]- ，C15 H10 NO7 計算值：316.0461，實際值：318.0463。
Biodata：IIa-002a ：FGF-1 IC50 [µM] =19；FGF-2 IC50 [µM] = 131； VEGF-A1 IC50 [µM] = 150；VEGFR-磷酸化抑制IC50 [µM] =ND；PMN ROS [在0.3 µM的抑制[%] = 43.3；PMN ROS抑制IC50 [µM] = 0.299；嗜中性白血球黏著抑制[%] = 17.39。37) 3-(4- 羧基苯基胺基羰基 )-2,5- 二羥基苯甲酸 ) 醯胺， 化合物IIa-003a ：
1 H NMR (250 MHz, CD3 OD)：δ 8.06 (AA’BB’的BB’, 2H),7.85 (AA’BB’的AA’, 2H),7.75 (d, 1H),7.58 (d, 1H)。
HRMS (ESI-)：C15 H10 NO7 [M-H]- 計算值：316.0461；實際值： 316.0462。
Biodata：IIa-003a ：FGF-1 IC50 [µM] =22；FGF-2 IC50 [µM]=13； VEGF-A1 IC50 [µM] = 150；VEGFR-磷酸化抑制 IC50 [µM] =2.5；PMN ROS [在0.3 µM的抑制[%] = 59.3；PMN ROS抑制 IC50 [µM] = N.D.；嗜中性白血球黏著抑制[%] = 35.27。38) 3-(3- 羧基 -4- 羥基苯基胺基羰基 )-2,5- 二羥基苯甲酸， 化合物IIa-004a ：
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：rt = 0.76分鐘；m/z = 334.0 [M+H]+ ，峰面積＞99%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 14.02 (brs, 1H),11.07 (brs, 1H),10.32 (s, 1H),9.47 (brs, 1H),8.27 (d,J = 2.7 Hz, 1H),7.76 (dd,J = 8.9, 2.7 Hz, 1H),7.42 (d,J = 3.2 Hz, 1H),7.36 (d,J = 3.2 Hz, 1H),6.96 (d,J = 8.9 Hz, 1H)。
HRMS：[M+H]+ ，C15 H12 NO8 計算值：334.05574，實際值：334.05571。
Biodata： IIa-004a ：FGF-1 IC50 [µM] = 47；FGF-2 IC50 [µM] = 33；VEGF-A1 IC50 [µM] = 200；VEGFR-磷酸化抑制IC50[µM] =100；PMN ROS [在0.3 µM的抑制[%] = 63.5；PMN ROS抑制IC50[µM] = 1.002；嗜中性白血球黏著抑制[%] = 36。39) 3-(2- 羧基 -4- 羥基苯基胺基羰基 )-2,5- 二羥基苯甲酸， 化合物IIa-006a ：
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：rt = 0.65分鐘；m/z = 334.0 [M+H]+ ，峰面積＞99%
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 13.36 (s, 1H),11.83 (s, 1H),9.62 (s, 1H),9.47 (s, 1H),8.47 (d,J = 9.1 Hz, 1H),7.64 (d,J = 3.3 Hz, 1H),7.41 (d,J = 3.2 Hz, 1H),7.37 (d,J = 3.0 Hz, 1H),7.03 (dd,J = 9.1, 3.0 Hz, 1H)。
HRMS：[M+H]+ ，C15 H12 NO8 計算值：334.05574，實際值：334.05548。
Biodata：IIa-006a ：FGF-1 IC50 [µM] = N.D.；FGF-2 IC50 [µM] = 43；VEGF-A1 IC50 [µM] = 121；VEGFR-磷酸化抑制IC50 [µM] =2.9；PMN ROS [在0.3 µM的抑制[%] = 84.29；PMN ROS抑制IC50 [µM] = N.D.；嗜中性白血球黏著抑制[%] = 20.29。40) 3-(3- 羧基 -2,5- 二羥基苄醯胺基 ) 鄰苯二甲酸， 化合物IIa-011a ：
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：rt = 0.72分鐘；m/z = 360.1 [M-H]- ，峰面積＞77%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 10.83 (s, 1H),9.55 (s, 1H),8.43 (dd,J = 7.9, 1.5 Hz, 1H),7.73 (d,J = 3.3 Hz, 1H),7.63 – 7.53 (m, 2H),7.46 (d,J = 3.3 Hz, 1H)。
HRMS：[M+H]+ ，C16 H12 NO9 計算值：362.05066，實際值：362.05045。
Biodata：IIa-011a ：FGF-1 IC50 [µM] = 141；FGF-2 IC50 [µM] = 123；VEGF-A1 IC50 [µM] = 200；VEGFR-磷酸化抑制IC50[µM] =100；PMN ROS [在0.3 µM的抑制[%] = 58.1；PMN ROS抑制IC50 [µM] = 1.18；嗜中性白血球黏著抑制[%] = 26。41) 2-(3- 羧基 -2,5- 二羥基苄醯胺基 ) 對苯二甲酸， 化合物IIa-012a ：
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：rt = 0.73分鐘；m/z = 362.0 [M+H]，峰面積＞97%。
1 H NMR(DMSO-d6 ) δ：13.81 (s, 1H),13.34 (s, 1H),12.23 (s, 1H),9.50 (s, 1H),9.30 (d,J = 1.6 Hz, 1H),8.06 (d,J = 8.2 Hz, 1H),7.71 (dd,J = 8.2, 1.7 Hz, 1H),7.64 (d,J = 3.3 Hz, 1H),7.43 (d,J = 3.3 Hz, 1H)。
HRMS：[M+H]+ ，C16 H12 NO9 計算值：362.05066，實際值：362.05046。
Biodata：IIa-012a ：FGF-1 IC50 [µM] = 150；FGF-2 IC50 [µM] = 150；VEGF-A1 IC50 [µM] = 32；VEGFR-磷酸化抑制 IC50 [µM] =3.31；PMN ROS [在0.3 µM的抑制[%] = 44.8；PMN ROS抑制 IC50 [µM] = 0.313；嗜中性白血球黏著抑制[%] = 7.5。42) 2-(3- 羧基 -2,5- 二羥基苄醯胺基 ) 間苯二甲酸， 化合物IIa-013a ：
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：rt = 1.68分鐘；m/z = 362.0 [M+H]+ ，峰面積＞96%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 13.12 (brs, 3H),11.71 (s, 1H),9.47 (s, 1H),7.96 (s, 1H),7.94 (s, 1H),7.66 (d,J = 3.3 Hz, 1H),7.44 (d,J = 3.3 Hz, 1H),7.35 (t,J = 7.8 Hz, 1H)。
HRMS：[M+H]+ ，C16 H12 NO9 計算值：362.05066，實際值：362.05047。
Biodata：IIa-013a ：FGF-1 IC50 [µM] = 137；FGF-2 IC50 [µM] = 12；VEGF-A1 IC50 [µM] = 34；VEGFR-磷酸化抑制IC50 [µM] =100；PMN ROS [在0.3 µM的抑制[%] = 57.68；PMN ROS抑制IC50 [µM] = 2.54；嗜中性白血球黏著抑制[%] = 15.75。43) 4-(3- 羧基 -2,5- 二羥基苄醯胺基 ) 鄰苯二甲酸， 化合物IIa-014a ：
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：rt = 0.63分鐘；m/z = 362.1 [M+H]+ ，峰面積＞88%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.80 (s, 1H),9.45 (s, 1H),8.01 (d,J = 2.2 Hz, 1H),7.86 (dd,J = 8.5, 2.2 Hz 1H),7.74 (d,J = 8.5 Hz, 1H),7.45 – 7.33 (m, 2H)。
HRMS：[M+H]+ ，C16 H12 NO9 計算值：362.05066，實際值：362.05048。
Biodata：IIa-014a ： FGF-1 IC50 [µM] = 40；FGF-2 IC50 [µM] = 61；VEGF-A1 IC50 [µM] = 91；VEGFR-磷酸化抑制IC50[µM] =17.6；PMN ROS [在0.3 µM的抑制[%] = 73.94；PMN ROS抑制IC50[µM] = N.D.；嗜中性白血球黏著抑制[%] = 21.5。44) 5-(3- 羧基 -2,5- 二羥基苄醯胺基 ) 間苯二甲酸， 化合物IIa-015a ：
1 H NMR (250 MHz, CD3 OD)：δ 8.60 (d,J = 1.5 Hz, 2H),8.44 (t,J = 1.5 Hz, 1H),7.75 (d,J = 3.2 Hz, 1H),7.56 (d,J = 3.2 Hz, 1)。
HRMS (ESI+)：m/z ，C16H12NO9 [M+H]+ 計算值：362.0507；實際值 362.0505 [LM-163]。
Biodata：IIa-015a ：FGF-1 IC50 [µM] = N.D.；FGF-2 IC50 [µM] = 125；VEGF-A1 IC50 [µM] = N.D.；VEGFR-磷酸化抑制IC50 [µM] =ND；PMN ROS [在0.3 µM的抑制[%] = N.D.；PMN ROS抑制IC50 [µM] = N.D.；嗜中性白血球黏著抑制[%] = N.D.。45) (3-(3-( 羧基甲基 ) 苯基胺基羰基 )-2,5- 二羥基苯甲酸， 化合物IIa-033a ：
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：rt = 0.78分鐘；m/z = 330.1 [M-H]- ，峰面積＞98%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 10.40 (s, 1H),9.45 (s, 1H),7.66 (t, J = 1.9 Hz, 1H),7.63 – 7.57 (m, 1H),7.45 (d, J = 3.3 Hz, 1H),7.38 (d, J = 3.2 Hz, 1H),7.29 (t, J = 7.8 Hz, 1H),7.05 – 6.95 (m, 1H),3.56 (s, 2H)。
HRMS：[M+H]+ ，C16 H14 NO7 計算值：332.07648，實際值：332.07644。
Biodata：IIa-033a ：FGF-1 IC50 [µM] = 35；FGF-2 IC50 [µM] = 32；VEGF-A1 IC50 [µM] = 200；VEGFR-磷酸化抑制IC50 [µM] =4.9；PMN ROS [在0.3 µM的抑制[%] = 50.64；PMN ROS抑制IC50 [µM] = 0.914；嗜中性白血球黏著抑制[%] = 11.75。46) 3-(2-( 羧基甲基 ) 苯基胺基羰基 )-2,5- 二羥基苯甲酸， 化合物IIa-034a ：
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：rt = 0.74分鐘；m/z = 332.0 [M+H]+ ，峰面積＞95%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 12.48 (s, 1H),10.65 (s, 1H),9.30 (s, 1H), 7.97 (d,J = 8.3 Hz, 1H),7.64 (d,J = 3.2 Hz, 1H),7.40 (d,J = 3.3 Hz, 1H),7.33 – 7.26 (m, 2H),7.13 (td,J = 7.5, 1.3 Hz, 1H),3.70 (s, 2H)。
HRMS：[M+H]+ ，C16 H14 NO7 計算值：332.07648，實際值：332.07653。
Biodata：IIa-034a ：FGF-1 IC50 [µM] = 22；FGF-2 IC50 [µM] = 5.7；VEGF-A1 IC50 [µM] = 86；VEGFR-磷酸化抑制IC50 [µM] =100；PMN ROS [在0.3 µM的抑制[%] = 69.2；PMN ROS抑制IC50 [µM] = N.D.；嗜中性白血球黏著抑制[%] = 26.58。二 乙酯
UPLC-MS(酸性方法，2分鐘)：rt = 1.12分鐘；m/z = 388.1 [M+H]+ ，峰面積＞99%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 11.81 (s, 1H),9.58 (s, 1H),7.77 (t,J = 8.5 Hz, 1H),7.65 (d,J = 3.4 Hz, 1H),7.42 (d,J = 3.4 Hz, 1H),7.36 – 7.31 (m, 2H),7.20 (t,J = 7.4 Hz, 1H),4.39 (q,J = 7.1 Hz, 2H),4.05 (q,J = 7.1 Hz, 2H),3.77 (s, 2H),1.36 (t,J = 7.1 Hz, 3H),1.13 (t,J = 7.1 Hz, 3H)。
HRMS：[M+H]+ ，C20 H22 NO7 計算值：388.13907，實際值：388.13887。
Biodata：IIa -034a-E2 ：FGF-1 IC50 [µM] = N.D.；FGF-2 IC50 [µM] = 164；VEGF-A1 IC50 [µM] = 200；VEGFR-磷酸化抑制IC50 [µM] =ND；PMN ROS [在0.3 µM的抑制[%] = 68.73；PMN ROS抑制IC50 [µM] = N.D.；嗜中性白血球黏著抑制[%] = 11.86。47) 3-(3,4- 二羥基苯基甲基胺基羰基 )-2,5- 二羥基苯甲酸， 化合物IIa-035a ：
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：rt = 0.69分鐘；m/z = 318.0 [M-H]- 、峰面積＞99%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 9.38 (s, 1H), 8.84 (s, 1H), 8.75 (s, 1H), 7.55 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 7.34 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 6.74 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 6.67 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.58 (dd, J = 8.1, 2.1 Hz, 1H), 4.34 (d, J = 5.7 Hz, 2H)。
HRMS：[M+H]+ ，C15 H14 NO7 計算值：320.07647，實際值：320.07625。
Biodata：IIa-035a ：FGF-1 IC50 [µM] = 16；FGF-2 IC50 [µM] = 61；VEGF-A1 IC50 [µM] = 45；VEGFR-磷酸化抑制IC50 [µM] =0.52；PMN ROS [在0.3 µM的抑制[%] = 76.99；PMN ROS抑制IC50 [µM] = 1；嗜中性白血球黏著抑制[%] = 36.67。48) 3-(2- 羧基苯基甲基胺基羰基 )-2,5- 二羥基苯甲酸， 化合物IIa-053a ：
UPLC-MS(酸性方法，4分鐘)：rt = 1.08分鐘；m/z = 332.0 [M+H]+ ，峰面積＞97%。
1 H NMR (DMSO-d6 ) δ：13.13 (brs, 1H), 12.73 (brs, 1H), 9.40 (s, 1H), 9.05 (s, 1H), 7.91 (dd, J = 7.8, 1.4 Hz, 1H), 7.65 – 7.29 (m, 5H), 4.80 (d, J = 6.1 Hz, 2H)。
HRMS：[M+H]+ ，C16 H14 NO7 計算值：332.07648，實際值：332.07626。
Biodata：IIa-053a ：FGF-1 IC50 [µM] = 84；FGF-2 IC50 [µM] = 18；VEGF-A1 IC50 [µM] = 37；VEGFR-磷酸化抑制 IC50 [µM] =0.27；PMN ROS [在0.3 µM的抑制[%] = 63.13；PMN ROS抑制 IC50 [µM] = 0.62；嗜中性白血球黏著抑制[%] = 20；全血：GM-CSF IC50 [µM] = ＞100；IFNγ IC50 [µM] = 1.04；IL-1β IC50 [µM] = ＞100；IL-2 IC50 [µM] = 1.67；IL-4 IC50 [µM] = ＞100；IL-5 IC50 [µM] = ＞100；IL-6 IC50 [µM] = 2.2；IL-9 IC50 [µM] = 1.41；IL-10 IC50 [µM] = ＞100；IL-12p70 IC50 [µM] = 0.27；IL-13 IC50 [µM] = 29.9；IL-17A IC50 [µM] = ＞100；IL-17F IC50 [µM] = 28.8；IL-18 IC50 [µM] = ＞100；IL-21 IC50 [µM] = ＞100；IL-33 IC50 [µM] = 12.1；TGFβ IC50 [µM] = ＞100；TNFα IC50 [µM] = 0.02；TNFβ IC50 [µM] = 91.5。實施例 1.6. 類型 IIb 的分子 ：來自二胺的二醯胺，1個實例
Figure 02_image212
流程 11. 類型IIb 的 二醯胺的合成
Figure 02_image214
程序：參見來自KI-1 [3]、[4]、[5]的通用程序
例如：
Figure 02_image216
條件及產率：參見表2(圖5A-C)49) 3,5- 雙 (2,5- 二羥基 -3- 羧基苯甲醯基胺基 ) 苯甲酸， 化合物IIb-010a ：
UPLC-MS (酸性方法，4分鐘)：rt = 0.98分鐘；m/z = 511.1 [M-H]- ，峰面積＞93%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 10.81 (s, 2H), 10.65 (s, 2H), 8.38 (m, 1H), 8.12 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 7.39 (d, J = 2.3 Hz, 4H)。
HRMS：[M+H]+ ，C23 H17 N2 O12 計算值：513.07760，實際值：513.07774。
Biodata：IIb-010a ：FGF-1 IC50 [µM] = 200；FGF-2 IC50 [µM] = 102；VEGF-A1 IC50 [µM] = 28；VEGFR-磷酸化抑制IC50 [µM] =ND；PMN ROS [在0.3 µM的抑制[%] = 81.87；PMN ROS抑制 IC50 [µM] = N.D.；嗜中性白血球黏著抑制[%] = 59.84。實施例 1.7. 類型 I Ic 的分子 ：來自二酸的二醯胺，2個實例
Figure 02_image218
流程 12. 類型IIc 的 醯胺( R = R’)的合成
Figure 02_image220
程序：參見來自KI-6 [3]、[4]、[5]的通用程序
例如
Figure 02_image222
Figure 02_image224
條件及產率：參見表2(圖5A-C)50) 5-(3-(3- 羧基 -4- 羥基苯基胺基羰基 )-2,5- 二羥基苄醯胺基 )-2- 羥基苯甲酸， 化合物IIc-007a ：
UPLC-MS (酸性方法，4分鐘)：rt = 1.20分鐘；m/z = 469.1 [M+H]+ ，峰面積＞91%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.41 (s, 2H), 9.51 (s, 1H), 8.22 (d, J = 2.7 Hz, 2H), 7.79 (dd, J = 9.0, 2.7 Hz, 2H), 7.58 (s, 2H), 6.98 (d, J = 8.9 Hz, 2H)。
13 C NMR (100 MHz, DMSO-d6 ) δ 172.1, 166.1, 158.3, 152.0, 149.4, 130.2, 129.5 (CH), 122.8 (CH), 120.3, 119.8 (CH), 117.7 (CH). 113.0。
HRMS：[M+H]+ ，C22 H17 N2 O10 計算值：469.08777，實際值：469.08803。
Biodata：IIc-007a ：FGF-1 IC50 [µM] = 11；FGF-2 IC50 [µM] = 91；VEGF-A1 IC50 [µM] = 8.2；VEGFR-磷酸化抑制IC50 [µM] =0.44；PMN ROS [在0.3 µM的抑制[%] = 93.04；PMN ROS抑制IC50 [µM] = N.D.；嗜中性白血球黏著抑制[%] = 64.61；全血：GM-CSF IC50 [µM] = 26；IFNγ IC50 [µM] = 0.11；IL-1β IC50 [µM] = ＞100；IL-2 IC50 [µM] = 12.8；IL-4 IC50 [µM] = ＞100；IL-5 IC50 [µM] = ＞100；IL-6 IC50 [µM] = 0.05；IL-9 IC50 [µM] = 2.14；IL-10 IC50 [µM] = 17.9；IL-12p70 IC50 [µM] = 3.37；IL-13 IC50 [µM] = 0.25；IL-17A IC50 [µM] = 0.01；IL-17F IC50 [µM] = 0.26；IL-18 IC50 [µM] = ＞100；IL-21 IC50 [µM] = 9.41；IL-33 IC50 [µM] = 0.18；TGFβ IC50 [µM] = ＞100；TNFα IC50 [µM] = 0.03；TNFβ IC50 [µM] = 0.29。IIc-007a 的替代大規模合成 2,5- 二芐氧基間苯二甲酸 (KI-7)
向5 L夾套式容器中加入2,5-二芐氧基間苯二甲醛(流程9b)(300 g，866 mmol)、間苯二酚(286 g，2.60 mol)、KH2 PO4 (354 g，2.60 mol)、丙酮(1.5 L)及水(516 ml)。在15-25o C下攪拌漿料。15-30o C 的溫度下，在90分鐘內加入80% NaClO2 (294 g，2.60 mol)在水(1 L)中的溶液(放熱)。加完後，將反應在15-25o C下攪拌1小時。10分鐘內於T ＜30o C下加入85% H3 PO4 (85 ml，1.24 mol)在水(1175 ml)中的溶液[〜1 M](放熱)，得到沉澱。將批料冷卻至0-5o C並過濾。用水(3×1.2 L)洗滌固體，在烘箱中乾燥(50o C)，得到325.6 g二酸KI-7 。HPLC：98.9%；m / z(MH +)。NMR＞ 95%。校正後的產率(90.6%)。
5-(3-(3- 甲氧基羰基 -4- 羥基苯基胺基羰基 )-2,5- 二芐氧基苯甲醯胺基 )-2- 羥基苯甲酸甲酯 。對2升的夾套式容器加入二酸KI-7 (80 g，211 mmol)、HBTU(2-(1H-苯並三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基鈾六氟磷酸鹽)(176.8 g，466 mmol)及THF(560 ml)。在15-25o C下攪拌批料，加入N-甲基咪唑(50.6 ml，635 mmol)。30分鐘後，加入5-胺基-2-羥基苯甲酸甲酯(77.8 g，466 mmol)，在25o C下攪拌反應過夜。加入水(1.2 L)，在20o C下攪拌批料30分鐘。過濾批料，先後用水(2×480 ml)及MeCN(320 ml)洗滌批料。將所得的固體(236 g)與MeCN(800 ml)一起加裝回到容器。將漿料加熱至50°C 40分鐘，然後冷卻至20°C。將批料過濾，用MeCN(320l)洗滌。固體(156 g)的NMR分析顯示沒有TMU、HOBt、NMI或HBTU。將該材料在50o C下乾燥過夜，得到125 g二醯胺。HPLC：98.2%。NMR：＞ 97%。產率：88%。
5-(3-(3- 羧基 -4- 羥基苯基胺胺基羰基 )-2,5- 二芐氧基苯甲醯胺基 )-2- 羥基苯甲酸 。將先前的二醯胺(110 g，163 mmol)、THF(550 ml)及水(1100 ml)裝入2 L夾套式容器中。在15-25o C下攪拌批料，加入85%的KOH(32.2 g，488 mmol)(少量放熱)。將溶液加熱至50o C 4小時，然後冷卻至20o C，攪拌過夜。在15-25o C 下、在30分鐘在內加入6 M AcOH(550 ml，3.3 mol)水溶液。添加完成後，攪拌批料30分鐘，然後過濾。用水(3×550 ml)洗滌固體，然後在50o C烘箱乾燥。得到102 g游離二酸。HPLC：98.9%(0.3%的單醯胺，0.19%的單酸)。NMR：＞97%。產率：97%。
5-(3-(3- 羧基 -4- 羥基苯基胺基羰基 )-2,5- 二羥基苯甲醯胺基 )-2- 羥基苯甲酸 IIc-007a 。在N2 下對2 L夾套式容器加入10%Pd/C(10g，50%濕式類型87L)，然後加入先前的二酸(100 g，154 mmol)、AcOH(5 ml，88 mmol)及THF(1200 ml)。攪拌批料，然後用H2 鼓泡，並加熱至40o C2小時。對批料通入氮氣，然後過濾(GF/F)。用THF(300 ml)及用於在過濾器上洗滌催化劑的沖洗液沖洗容器。將濾液裝入容器中，並用THF(400 ml)將體積調節至2L。將溶液溫熱至30o C，加入SPM32(10 g)，在30o C下攪拌批料過夜。濾出SPM32，用THF(200 ml)洗滌。真空除去溶劑，得到淺黃色固體(110 g)。NMR分析顯示28%的THF。20°C將物質在EtOH(1L)中製漿料2小時，然後濾出。用EtOH(400 ml)洗滌固體，在60o C下烘箱乾燥過夜。NMR顯示表明8.7%EtOH，無THF。將材料在80o C下進一步乾燥4晚，得到66.5 g呈灰白色固體的IIc-007a，產率為92%。HPLC：99.5%(0.31%單醯胺)。NMR：4.6%EtOH，無THF。Pd (ICP-OES)：＜2 ppm。
IIc-007a-THF 溶劑化物 ：濃縮THF濾液，得到黃色固體，藉由NMR通常含有25-30%THF，該黃色固體法藉由乾燥除去，顯示非化學計量的溶劑化物。
將在THF(10 ml)中少量THF溶劑化物(1.45 g)加熱至50o C達1小時，冷卻至室溫，分離，用3 ml THF洗滌。得到1.13 gIIc-007a-THF 。NMR：27%THF。HPLC：99.6%(0.1%單醯胺)。藉由過濾分離THF溶劑化物提高純度，並將主要雜質(單醯胺，IIa-004a )的有效清除率從0.7%降至0.1%。回收產率：78%。THF溶劑化物在THF中的溶解度經計算在20o C為〜25 mg/ml。
在丙酮、EtOH及EtOAc中對材料進行去溶劑化測試。每批在20體積溶劑中於50°C加熱1小時，然後在室溫下分離並在烘箱中乾燥(60°C)。選擇乙醇作為脫溶劑化溶劑是因為乾燥後產物中摻入的EtOH含量低，並且從系統優異地清除THF。對12.1 g產物(25%THF)進行去溶劑化步驟。對材料加入EtOH(20體積)，將批料在室溫下攪拌過夜。濾出樣本，這顯示在室溫下成功去溶劑化。總產量：8.67 g。HPLC：99.4%。NMR：＞ 97%(0.8%EtOH)。XRPD顯示分離產物的高度結晶性。
產物IIc-007a 也形成DMSO溶劑化物(DMSO：產物為3：2的比例)。51) 2-(3-(2- 羧基 -4- 羥基苯基胺基羰基 )-2,5- 二羥基苄醯胺基 )-5- 羥基苯甲酸， 化合物IIc-009a ：
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：rt = 0.79分鐘；m/z = 469.1 [M+H]+ ，峰面積＞95%。
1 H NMR (400 MHz, DMF-d7) δ 10.11 (s,1H), 10.01 (s,2H), 8.71 (d,J = 9.0 Hz, 2H), 8.01 (s, 2H), 7.82 (d,J = 3.0 Hz, 2H), 7.46 (d, J = 8.9 Hz, 2H)。
HRMS：[M+H]+ ，C22 H17 N2 O10 計算值：469.08777，實際值：469.08714。
Biodata：IIc-009a ：FGF-1 IC50 [µM] = 30；FGF-2 IC50 [µM] = N.D.；VEGF-A1 IC50 [µM] = 182；VEGFR-磷酸化抑制 IC50 [µM] =1.7；PMN ROS [在0.3 µM的抑制[%] = 75.31；PMN ROS抑制 IC50 [µM] = N.D.；嗜中性白血球黏著抑制[%] = 53.15；全血：GM-CSF IC50 [µM] = ＞100；IFNγ IC50 [µM] = 0.54；IL-1β IC50 [µM] = ＞100；IL-2 IC50 [µM] = 19.6；IL-4 IC50 [µM] = ＞100；IL-5 IC50 [µM] = ＞100；IL-6 IC50 [µM] = 0.27；IL-9 IC50 [µM] = 18.9；IL-10 IC50 [µM] = 11.31；IL-12p70 IC50 [µM] = ＞100；IL-13 IC50 [µM] = 0.13；IL-17A IC50 [µM] = 0.001；IL-17F IC50 [µM] = 0.13；IL-18 IC50 [µM] = 2.95；IL-21 IC50 [µM] = 8.01；IL-33 IC50 [µM] = 0.29；TGFβ IC50 [µM] = ＞100；TNFα IC50 [µM] = 0.11；TNFβ IC50 [µM] = 6.94。實施例 1.8 ： 類型 IIIa 的分子：單醯胺， 4 個實例
Figure 02_image226
前驅物的合成 流程 13. 合成的中間體：來自 KI-1 的 KI-8 及 KI-9
Figure 02_image228
合成方案 中間體KI-8 及KI-9 ( 藉由 KI-10 及 KI-11)
2,5- 雙 ( 芐氧基 )-4-( 羥甲基 ) 苯甲酸乙酯 (KI-10) [步驟1]：在惰性氣體(N2 )的正流下，對-20o C的KI-1(62.3 g，153 mmol)在THF(700 mL)中的冷卻溶液緩慢加入BH3 .THF(615.0 mL，615 mmol)(-10°C)的預冷溶液。添加的方式應使反應的內部溫度不超過-15o C。將反應物略微溫熱，內部溫度不允許超過-7o C。將混合物在該溫度下保持2.5小時。然後將反應混合物倒入冰/水(8L)中。將獲得的模糊的白色混合物在室溫下攪拌2小時，並將殘留的白色懸浮液經由燒結漏斗過濾(孔隙率3)。將由此獲得的白色固體進一步在40o C真空烘箱中乾燥過夜，得到白色固體的2,5-雙(芐氧基)-4-(羥甲基)苯甲酸乙酯(KI-10) (60.5 g，97%產率)。
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：rt = 1.25分鐘；m/z = 391.2 [M-H]- ，峰面積＞68%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.54 – 7.48 (m, 2H), 7.48 – 7.43 (m, 2H), 7.43 – 7.35 (m, 4H), 7.35 – 7.27 (m, 4H), 5.28 (t,J = 5.4 Hz, 1H), 5.13 (s, 2H), 5.11 (s, 2H), 4.58 (d,J = 5.4 Hz, 2H), 4.25 (q,J = 7.1 Hz, 2H), 1.26 (t , J = 7.1 Hz, 3H)。
可替代的，中間體KI-10 可以從KI-1 藉由混合酸酐(在三乙胺存在下，用在THF中的氯甲酸異丁酯處理KI-1) ，然後在THF中的硼氫化鈉還原混合酸酐而獲得(產率為85- 90%，規模為150 g)。
2,5- 雙 ( 芐氧基 )-4-( 氯甲基 ) 苯甲酸乙酯 (KI-11) [步驟2]：將甲苯磺醯氯(17.0 g，70 mmol)緩慢加入KI-10 (25.0 g，64 mmol)、DIPEA(12.2 mL，70 mmol)及DMAP(0.778 g，6 mmol)在DCM(260 mL)中的冷卻溶液(冰浴)。反應混合物在60o C下攪拌30小時，據此判斷反應已完成。加入DCM(100 mL)，分離有機層，用飽和碳酸氫鈉水溶液(4×50 mL)、水(2×50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥並濃縮。將粗產物進行管柱層析法(己烷/EtOAc為0-20%)，得到2,5-雙(芐氧基)-4-(氯甲基)苯甲酸乙酯(KI-11) (23.5g，75%)。
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：rt = 1.39分鐘；m/z = 無離子，峰面積＞84%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.54 – 7.44 (m, 4H), 7.43 – 7.36 (m, 6H), 7.36 – 7.28 (m, 2H), 5.18 (s, 2H), 5.13 (s, 2H), 4.76 (s, 2H), 4.26 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 1.25 (t, J = 7.1 Hz, 3H)。
可替代的，中間體KI-11 可以藉由在-10°C下用在二氯甲烷中的亞硫醯氯(1.14當量)處理KI-10 ，然後蒸發溶劑並從庚烷中沉澱來獲得(產率90%，規模為300g)。
2,5- 雙 ( 芐氧基 )-4-( 氰甲基 ) 苯甲酸乙酯 [步驟3]：KI-11 (7.5 g，18.2 mmol)在EtOH(90 mL)及H2 O(45 mL)的混合物中的懸浮液 用氰化鉀(1.8 g，27.4 mmol)處理。將反應混合物加熱至75°C，並在此溫度下攪拌16小時。用水(500 mL)稀釋反應混合物，用EtOAc(2×200 mL)萃取，然後用鹽水(200 mL)洗滌合併的有機相，經硫酸鈉乾燥，過濾並真空濃縮。分離出為2,5-雙(芐氧基)-4-(氰甲基)苯甲酸乙酯及2,5-雙(芐氧基)-4-(氰甲基)苯甲酸的混合物(7.1 g)的粗產物， 無需進一步純化即可用於下一步驟。
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：rt = 1.30分鐘；m/z = 402.2 [M+H]+ ，峰面積＞65% 及rt = 1.15分鐘；m/z = 374.1 [M+H]+ ，峰面積＞8%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.56 – 7.27 (m, 12H), 5.19 (s, 2H), 5.14 (s, 2H), 4.26 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.95 (s, 2H), 1.25 (t, J = 7.1 Hz, 3H)。
2,5- 雙 ( 芐氧基 )-4-( 羧甲基 ) 苯甲酸 (KI-9) [步驟4]：對2,5-雙(芐氧基)-4-(氰甲基)苯甲酸乙酯 (7.1 g，13.2 mmol) 在EtOH(20 mL)中的懸浮液加入氫氧化鈉(8.5g，212.5 mmol)在水(50 mL)中的溶液，並將反應混合物在回流下攪拌18小時。將反應混合物用水(100 mL)稀釋，並將所得溶液用EtOAc(2×100 mL)洗滌，將如此獲得的有機層用水(100 mL)萃取，並收集所有水層。然後用檸檬酸飽和水溶液將水層酸化至pH〜3，過濾形成的沉澱並減壓乾燥。將固體在40°C真空烘箱中進一步乾燥過夜，得到淡黃色固體的2,5-雙(芐氧基)-4-(羧甲基)苯甲酸(KI-9) (6.4 g，92%產率)。
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：rt = 1.07分鐘；m/z = 393.2 [M+H]+ ，峰面積＞74%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.46 (s, 2H), 7.55 – 7.27 (m, 11H), 7.19 (s, 1H), 5.11 (s, 2H), 5.09 (s, 2H), 3.61 (s, 2H)。
2,5- 雙 ( 芐氧基 )-4-(2- 乙氧基羰甲基 ) 苯甲酸 (KI-8) [步驟5]：將KI-9(5.5 g，14.0 mmol)懸浮在EtOH(30 mL)中，用亞硫醯氯(0.52 mL，7.1 mmol)處理懸浮液，將反應混合物在室溫下攪拌24小時。然後，將反應混合物倒入碳酸氫鈉飽和溶液(1L)中，得到白色懸浮液。經由過濾分離固體，並進一步用Et2 O(2×20 mL)研磨。將固體在真空烘箱中進一步乾燥過夜，得到白色固體的2,5-雙(芐氧基)-4-(2-乙氧基羰基甲基)苯甲酸(KI-8) (4.2g，64%)。
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：rt = 1.23分鐘；m/z = 419.3 [M-H]- ，峰面積＞79%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 12.68 (brs, 1H), 7.58 – 7.27 (m, 11H), 7.19 (s, 1H), 5.11 (s, 2H), 5.08 (s, 2H), 4.01 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.66 (s, 2H), 1.11 (t, J = 7.1 Hz, 3H)。單醯胺的合成 流程 14. 單醯胺IIIa 的 合成
Figure 02_image230
合成方案
醯胺偶合及去保護程序： 參見從KI-1 及 KI-6 步驟[3]、[4]、[5]的通用流程
實例
Figure 02_image226
Figure 02_image232
條件及產率：參見表3(圖6)52) 2-(4-( 羧基甲基 )-2,5- 二羥基苄醯胺基 ) 苯甲酸， 化合物IIIa-001a ：
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：rt = 0.89分鐘；m/z = 332.1 [M+H]+ ，峰面積＞98%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.38 (s, 1H), 12.17 (s, 1H), 10.67 (s, 1H), 9.23 (s, 1H), 8.64 (dd,J = 8.5, 1.2 Hz, 1H), 8.00 (dd,J = 7.9, 1.7 Hz, 1H), 7.62 (ddd,J = 8.7, 7.3, 1.7 Hz, 1H), 7.33 (s, 1H), 7.19 (td,J = 7.6, 1.2 Hz, 1H), 6.80 (s, 1H), 3.49 (s, 2H)。
HRMS：[M+H]+ ，C16 H14 NO7 計算值：332.07648，實際值：332.07666。
Biodata：IIIa-001a ：FGF-1 IC50 [µM] = 62；FGF-2 IC50 [µM] = 10； VEGF-A1 IC50 [µM] = 32；VEGFR-磷酸化抑制 IC50 [µM] =ND；PMN ROS在 0.3 µM的[抑制[%] = 74.79；PMN ROS抑制 IC50 [µM] = N.D.；嗜中性白血球黏著抑制[%] = 30.4。乙甲酯
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：rt = 1.14分鐘；m/z = 374.2 [M+H]+ ，峰面積＞96%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.91 (s, 1H), 10.78 (s, 1H), 9.25 (s, 1H), 8.60 (dd, J = 8.5, 1.2 Hz, 1H), 7.97 (dd, J = 8.0, 1.7 Hz, 1H), 7.64 (ddd, J = 8.7, 7.3, 1.7 Hz, 1H), 7.38 (s, 1H), 7.26 – 7.18 (m, 1H), 6.81 (s, 1H), 4.08 (q,J = 7.1 Hz, 2H), 3.88 (s, 3H), 3.56 (s, 2H), 1.19 (t,J = 7.1 Hz, 3H)。
HRMS：[M+H]+ ，C19 H20 NO7 計算值：374.12342，實際值：374.12333。
Biodata：IIIa-001a-E2 ：FGF-1 IC50 [µM] = 200；FGF-2 IC50 [µM] = 33；VEGF-A1 IC50 [µM] = 43；VEGFR-磷酸化抑制IC50[µM] =ND；PMN ROS [在0.3 µM的抑制[%] = 69.66；PMN ROS抑制IC50 [µM] = N.D.； 嗜中性白血球黏著抑制[%] = 44.46。53) (2-(1H- 四唑 -5- 基 ) 苯基胺基羰基 )-2,5- 二羥基苯基 ) 乙酸， 化合物IIIa- 001aTz ：
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：rt = 0.87分鐘；m/z = 356.1 [M+H]，峰面積＞95%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 12.22 (s, 1H), 11.43 (s, 1H), 10.74 (s, 1H), 9.21 (s, 1H), 8.46 (dd,J = 8.5, 1.2 Hz, 1H), 7.87 (d,J = 8.1 Hz, 1H), 7.60 (td,J = 8.6, 7.9, 1.6 Hz, 1H), 7.39 – 7.30 (m, 2H), 6.80 (s, 1H), 3.48 (s, 2H)。
HRMS：[M+H]+ ，C16 H14 N5 O5 計算值：356.09894，實際值：356.09889。
Biodata：IIIa-001aTz ：FGF-1 IC50 [µM] = 51；FGF-2 IC50 [µM] = 14；VEGF-A1 IC50 [µM] = 12；VEGFR-磷酸化抑制 IC50 [µM] =0.71；PMN ROS [在 0.3 µM的抑制 [%] = 69.35；PMN ROS抑制 IC50 [µM] = N.D.；嗜中性白血球黏著抑制 [%] = 39.74；全血：GM-CSF IC50 [µM] = ＞100；IFNγ IC50 [µM] = 18.9；IL-1β IC50 [µM] = ＞100；IL-2 IC50 [µM] = ＞100；IL-4 IC50 [µM] = ＞100；IL-5 IC50 [µM] = ＞100；IL-6 IC50 [µM] = 1.98； IL-9 IC50 [µM] = 3.01；IL-10 IC50 [µM] = 7.78；IL-12p70 IC50 [µM] = 0.48；IL-13 IC50 [µM] = 0.15；IL-17A IC50 [µM] = 0.17；IL-17F IC50 [µM] = 0.16；IL-18 IC50 [µM] = 27.7；IL-21 IC50 [µM] = 3；IL-33 IC50 [µM] = 0.14；TGFβ IC50 [µM] = ＞100；TNFα IC50 [µM] = 0.31；TNFβ IC50 [µM] = 0.23。乙酯 ：
UPLC-MS (酸性方法，4分鐘)：rt = 1.56分鐘；m/z = 384.2 [M+H]+ ，峰面積＞95%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 11.34 (s, 1H), 10.73 (s, 1H), 9.25 (s, 1H), 8.45 (dd,J = 8.5, 1.2 Hz, 1H), 7.85 (dd,J = 7.8, 1.6 Hz, 1H), 7.61 (ddd,J = 8.7, 7.4, 1.6 Hz, 1H), 7.39 – 7.30 (m, 2H), 6.80 (s, 1H), 4.08 (q,J = 7.1 Hz, 2H), 3.56 (s, 2H), 1.19 (t,J = 7.1 Hz, 3H)。
HRMS：[M+H]+ ，C18 H18 N5 O5 計算值：384.13024，實際值：384.12999。
Biodata：IIIa-001aTz-E1 ：FGF-1 IC50 [µM] = 200；FGF-2 IC50 [µM] = 200；VEGF-A1 IC50 [µM] = 200；VEGFR-磷酸化抑制IC50 [µM] =0.32； PMN ROS [在0.3 µM的抑制[%] = 70.03；PMN ROS抑制 IC50 [µM] = N.D.；嗜中性白血球黏著抑制[%] = 91.76。54) 2-(4-( 羧基甲基 )-2,5- 二羥基苄醯胺基 ) 間苯二甲酸， 化合物IIIa-013a ：
UPLC-MS (酸性方法，4分鐘)：rt = 0.82分鐘；m/z = 376.0 [M+H]+ ，峰面積＞89%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.67 – 11.48 (m, 3H), 10.82 (s, 1H), 9.19 (s, 1H), 7.95 (d,J = 7.8 Hz, 2H), 7.36 (s, 1H), 7.33 (t,J = 7.8 Hz, 1H), 6.79 (s, 1H), 3.48 (s, 2H)。
HRMS：[M+H]+ ，C17 H14 NO9 計算值：376.06630，實際值：376.06638。
Biodata：IIIa-013a ：FGF-1 IC50 [µM] = 17；FGF-2 IC50 [µM] = 31；VEGF-A1 IC50 [µM] = 43；VEGFR-磷酸化抑制IC50 [µM] =1.3；PMN ROS [在0.3 µM的抑制[%] = 76.55；PMN ROS抑制IC50 [µM] = N.D.；嗜中性白血球黏著抑制[%] = 30.667；全血：GM-CSF IC50 [µM] = 27.8；IFNγ IC50 [µM] = 0.15；IL-1β IC50 [µM] = ＞100；IL-2 IC50 [µM] = 57.1；IL-4 IC50 [µM] = ＞100；IL-5 IC50 [µM] = ＞100；IL-6 IC50 [µM] = 3.55；IL-9 IC50 [µM] = 11.9；IL-10 IC50 [µM] = 37.3；IL-12p70 IC50 [µM] = 0.5；IL-13 IC50 [µM] = 0.37；IL-17A IC50 [µM] = 0.15；IL-17F IC50 [µM] = 0.41；IL-18 IC50 [µM] = ＞100；IL-21 IC50 [µM] = 1.63；IL-33 IC50 [µM] = 1.11；TGFβ IC50 [µM] = ＞100；TNFα IC50 [µM] = 0.51；TNFβ IC50 [µM] = 0.89。55) 5-(4-( 羧基甲基 )-2,5- 二羥基苄醯胺基 ) 間苯二甲酸， 化合物I IIa-015a ：
UPLC-MS (酸性方法，4分鐘)：rt = 0.93分鐘；m/z = 376.0 [M+H]+ ，峰面積＞96%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6+10% D2 O) δ 8.34 (s, 2H), 8.18 (s, 1H), 7.38 (s, 1H), 6.71 (s, 1H), 3.39 (s, 2H)。
HRMS：[M+H]+ ，C17 H14 NO9 計算值：376.06630，實際值：376.06665。
Biodata：IIIa-015a ：FGF-1 IC50 [µM] = 16；FGF-2 IC50 [µM] = 114；VEGF-A1 IC50 [µM] = 202；VEGFR-磷酸化抑制IC50 [µM] =0.89；PMN ROS [在0.3 µM的抑制[%] = 78.76；PMN ROS抑制 IC50 [µM] = N.D.；嗜中性白血球黏著抑制[%] = 12.13乙 二 甲 酯
UPLC-MS (酸性方法，4分鐘)：rt = 1.69分鐘；m/z = 432.1 [M+H]+ ，峰面積＞97%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.23 (s, 1H), 8.58 (s, 1H), 8.58 (s, 1H), 8.23 – 8.21 (m, 1H), 7.31 (s, 1H), 6.81 (s, 1H), 4.08 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 3.91 (s, 6H), 3.58 (s, 2H), 1.19 (t, J = 7.1 Hz, 3H)。
HRMS：[M+H]+ ，C21 H22 NO9 計算值：432.12891，實際值：432.02903。
Biodata：IIIa-015a-E3 ：FGF-1 IC50 [µM] = N.D.；FGF-2 IC50 [µM] = 191；VEGF-A1 IC50 [µM] = 87；VEGFR-磷酸化抑制 IC50 [µM] =7.2； PMN ROS [在0.3 µM的抑制[%] = 91.37；PMN ROS抑制 IC50 [µM] = N.D.；嗜中性白血球黏著抑制[%] = 61.22。實施例 1.9. 類型 IIIb 的分子 ：來自二胺的二醯胺，1個實例
Figure 02_image234
流程 15. 類型IIIb 的分子， 二醯胺的合成
Figure 02_image236
程序：參見來自KI-1 步驟[3]、[4]、[5]的通用程序
例如：
Figure 02_image238
IIIb-010a
條件及產率：參見表3(圖6)56) 3,5- 雙 (2,5- 二羥基 -4- 羧基甲基苯甲醯基胺基 ) 苯甲酸， 化合物IIIb-010a ：
UPLC-MS (酸性方法，4分鐘)：rt = 1.08分鐘；m/z = 539.2.1 [M-H]- ，峰面積80%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 10.85 (brs, 2H), 10.57 (brs, 2H), 9.20 (s, 2H), 8.26 (m, 1H), 8.09 (d,J = 2.0 Hz, 2H), 7.36 (s, 2H), 6.82 (s, 2H), 3.50 (s, 4H)。
HRMS：[M+H]+，C23H17N2O12計算值：513.07760，實際值：513.07774。三 乙酯
UPLC-MS (酸性方法，4分鐘)：rt = 1.81分鐘；m/z = 623.3 [M-H]- ，峰面積94%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 10.87 (s, 2H), 10.65 (s, 2H), 9.23 (s, 2H), 8.31 – 8.28 (m, 1H), 8.10 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 7.35 (s, 2H), 6.81 (s, 2H), 4.35 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 4.08 (q, J = 7.1 Hz, 4H), 3.58 (s, 4H), 1.35 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 1.19 (t, J = 7.1 Hz, 6H)。
Biodata：IIIb-010a-E3 ：FGF-1 IC50 [µM] = 200；FGF-2 IC50 [µM] = 200；VEGF-A1 IC50 [µM] = 200；VEGFR-磷酸化抑制IC50 [µM] =0.65；PMN ROS [在0.3 µM的抑制[%] = N.D.；PMN ROS抑制 IC50 [µM] = N.D.；嗜中性白血球黏著抑制[%] = 0。實施例 1.10 ：類型 IIIc. 二聚體的分子， 6 個實例
Figure 02_image240
合成流程及程序流程 16 ： X=O
Figure 02_image242
合成程序由 KI-10 及 KI-11 形成醚鍵
2,5- 二芐氧基 -4-[(2,5- 二芐氧基 -4- 乙氧基羰基苯基 ) 甲氧基甲基 ] 苯甲酸乙酯 [步驟1]：KI-11 (340 mg，0.83 mmol)及KI-10 (250 mg，0.64 mmol)在DMF(6 mL)中的溶液在冰浴中冷卻後分批加入氫化鈉(76 mg，1.9 mmol)。1小時後，將反應混合物倒入飽和氯化銨水溶液(50 mL)中，並將材料用EtOAc(3 x 30 mL)萃取，有機相進一步用水(2 x 50 mL)、然後用鹽水(50 mL) 洗滌，用硫酸鈉乾燥並在減壓下濃縮。粗產物通過快速管柱層析法純化(己烷/EtOAc為0至20%)，得到為棕色固體的標題化合物(161 mg，33%產率)。
去保護程序： 參見通用流程[4]、[5]
例如
Figure 02_image244
條件及產率：參見表4 (去保護)(圖7)57) 4-((2,5- 二羥基 -4- 羧基苯基 ) 甲氧基甲基 )-2,5- 二羥基苯甲酸， 化合物IIIc-060a ：
UPLC-MS (酸性方法，4分鐘)：rt = 0.94分鐘；m/z = 349.1 [M-H]- ，峰面積＞90%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.20 (s, 2H), 6.92 (s, 2H), 4.56 (s, 4H)。
Biodata：IIIc-060a ：FGF-1 IC50 [µM] = 200；FGF-2 IC50 [µM] = 51；VEGF-A1 IC50 [µM] = 114；VEGFR-磷酸化抑制 IC50 [µM] =1.3；PMN ROS [在0.3 µM的抑制[%] = 86.84；PMN ROS抑制IC50 [µM] = N.D.；嗜中性白血球黏著抑制[%] = 41.38。流程 17 ： X = NH
Figure 02_image246
合成流程從 KI-12 及 KI-13 經由 KI-10 及 KI-11 形成 胺鍵
2,5- 雙 ( 芐氧基 )-4- 甲醯苯甲酸乙酯 (KI-12) ：對KI-10 (3.4 g，8.6 mmol)在二氯甲烷(50 mL)中的溶液加入二氧化錳(4.5 g，51.9 mmol)。將得到的懸浮液在回流下攪拌4小時。反應物藉由Celite®墊過濾，固體用二氯甲烷(300 mL)洗滌，然後在減壓下除去溶劑，得到為淡黃色固體的標題化合物(3.2g，94%產率)。
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：rt = 1.33分鐘；m/z =無離子，峰面積＞93%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 10.39 (s, 1H), 7.56 (s, 1H), 7.54 – 7.26 (m, 11H), 5.28 (s, 2H), 5.20 (s, 2H), 4.30 (q,J = 7.1 Hz, 2H), 1.27 (t,J = 7.1 Hz, 3H)。
4-( 疊氮甲基 )-2,5- 雙 ( 芐氧基 ) 苯甲酸乙酯 ：對KI-10 (3.0 g，7.6 mmol)及1,8-二氮雜雙環[5.4.0]十一碳-7-烯(DBU)(1.5 mL，9.9 mmol)在甲苯(30 mL)中的懸浮液加入二苯磷醯疊氮化物(DPPA)(2 mL，9.1 mmol)。將所得混合物在室溫下攪拌18小時。加入1M氯化氫水溶液(200 mL)，產物用EtOAc(3×100 mL)萃取，合併的有機層用水(2×50 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥並在減壓下濃縮。殘餘物藉由快速管柱層析法純化(己烷/EtOAc為0至20%)，得到為無色油狀物的標題化合物(3.1g，98%)，隨著時間的流逝變成白色固體。
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：rt = 1.37分鐘；m/z = 390.2，[M+H-N2 ]+ ，峰面積＞93%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.53 – 7.46 (m, 4H), 7.44 – 7.26 (m, 8H), 5.16 (s, 2H), 5.14 (s, 2H), 4.48 (s, 2H), 4.26 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 1.25 (t, J = 7.1 Hz, 3H)。
4-( 胺基甲基 )-2,5- 雙 ( 芐氧基 ) 苯甲酸乙酯 (KI-13) ：對4-(疊氮甲基)-2,5-雙(芐氧基)苯甲酸乙酯(2.8 g，6.7 mmol)在THF(60 mL)及水(6 mL)中的溶液加入聚合物結合的三苯膦(4.7g，〜3 mmol/g負載)，並將所得混合物在室溫下攪拌18小時。藉由過濾除去樹脂，用水(100 mL)及EtOAc(2×100 mL)洗滌。分離各相，進一步用EtOAc(100 mL)萃取水層，用鹽水(200mL)洗滌收集的有機層，經硫酸鈉乾燥並濃縮，得到為白色固體的標題化合物(KI-13) (1.8 g，產率70%)。
UPLC-MS (鹼性方法，2分鐘)：rt = 1.20分鐘；m/z = 392.2，[M+H]+ ，峰面積＞93%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.60 – 7.22 (m, 12H), 5.14 (s, 2H), 5.10 (s, 2H), 4.24 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.75 (s, 2H), 1.25 (t,J = 7.1 Hz, 3H)。
2,5- 二芐氧基 -4-[[(2,5- 二芐氧基 -4- 乙氧基羰基苯基 ) 甲基氨基甲基 ] 苯甲酸乙酯 ：將KI-12 (500 mg，1.3 mmol)及KI-13 (641 mg，1.6 mmol)溶解在DCM(35mL)中，然後加入活化的分子篩(10個珠子)。將所得混合物在室溫下攪拌5小時。然後加入三乙醯氧基硼氫化鈉(654 mg，3.1 mmol)，將所得混合物在室溫下攪拌18小時。加入DCM(25 mL)，將反應混合物傾入分液漏斗，用水(50mL)洗滌，用硫酸鈉乾燥並在減壓下濃縮。殘餘物藉由快速管柱層析法純化(己烷/ EtOAc為 0至50%)，得到為無色油狀物的標題化合物(631mg，64%產率)，其隨著時間的流逝而變為固體。
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：rt = 1.37分鐘；m/z = 766.3，[M+H]+ ，峰面積＞92%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.47 – 7.42 (m, 4H), 7.38 – 7.25 (m, 20H), 5.08 (s, 4H), 5.04 (s, 4H), 4.25 (q,J = 7.1 Hz, 4H), 3.76 (s, 4H), 1.25 (t,J = 7.1 Hz, 6H)。
去保護程序：參見通用流程[4]、[5]
條件及產率：參見圖7。
例如
Figure 02_image248
。58) 雙 (4- 羧基 -2,5- 二羥基苯基甲基 ) 胺， 化合物IIIc-056a ：
UPLC-MS (酸性方法，4分鐘)：rt = 0.57分鐘；m/z = 350.0 [M+H]+ ，峰面積＞96%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.97 (s, 2H), 9.08 (s, 2H), 7.31 (s, 2H), 7.02 (s, 2H), 4.11 (s, 4H)。
HRMS：[M+H]+ ，C16 H16 NO8 計算值：350.08704，實際值：350.08706。
Biodata：IIIc-056a ：FGF-1 IC50 [µM] = 200；FGF-2 IC50 [µM] = 35；VEGF-A1 IC50 [µM] = 200；VEGFR-磷酸化抑制 IC50 [µM] =ND；PMN ROS [在0.3 µM的抑制[%] = 90.07；PMN ROS抑制IC50 [µM] = N.D.；嗜中性白血球黏著抑制[%] = 35。流程 18 ： X = NAc
Figure 02_image250
合成流程
N,N- 雙 -[[2,5- 二芐氧基 -4- 乙氧基羰基苯基甲基 ] 乙醯胺： 在氮氣氛下，對N,N-雙-[2,5-二芐氧基-4-乙氧基羰基苯基甲基]胺(300 mg，0.39 mmol)及吡啶在二氯甲烷(6 mL)中的溶液加入乙酸酐(0.2 mL，2.1 mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌1小時，並在減壓下濃縮。殘餘物藉由快速管柱層析法純化(己烷/EtOAc為0至50%)，得到為無色油狀物的標題化合物(316 mg，92%產率)。
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：rt = 1.44分鐘；m/z = 808.2 [M+H]+ ，峰面積＞95%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.49 – 7.17 (m, 22H), 6.92 (s, 1H), 6.72 (s, 1H), 5.03 (s, 2H), 5.00 (s, 2H), 4.96 (s, 2H), 4.94 (s, 2H), 4.46 (s, 4H), 4.31 – 4.16 (m, 4H), 1.96 (s, 3H), 1.28 – 1.20 (m, 6H)。
去保護程序： 參見通用流程[4]、[5]
例如
Figure 02_image252
條件及產率：參見圖7(去保護)。59) N,N- 雙 (4- 羧基 -2,5- 二羥基苯基甲基 ) 乙醯胺， 化合物IIIc-057a ：
UPLC-MS (酸性方法，4分鐘)：rt = 0.84分鐘；m/z = 392.1 [M+H]+ ，峰面積＞99%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.50 (s, 1H), 9.34 (s, 1H), 7.22 (s, 1H), 7.17 (s, 1H), 6.63 (s, 1H), 6.53 (s, 1H), 4.48 (s, 2H), 4.39 (s, 2H), 2.11 (s, 3H)。
HRMS：[M+H]+ ，C18 H18 NO9 計算值：392.09761，實際值：392.09766。
Biodata：IIIc-057a ：FGF-1 IC50 [µM] = 87；FGF-2 IC50 [µM] = 77；VEGF-A1 IC50 [µM] = 38；VEGFR-磷酸化抑制IC50 [µM] =0.2；PMN ROS [在0.3 µM的抑制[%] = 90.34；PMN ROS抑制IC50 [µM] = N.D.；嗜中性白血球黏著抑制[%] = 40.04；全血：GM-CSF IC50 [µM] = ＞100；IFNγ IC50 [µM] = 0.9；IL-1β IC50 [µM] = 16.2；IL-2 IC50 [µM] = 24.2；IL-4 IC50 [µM] = ＞100；IL-5 IC50 [µM] = ＞100；IL-6 IC50 [µM] = 0.19；IL-9 IC50 [µM] = 11.1；IL-10 IC50 [µM] = ＞100；IL-12p70 IC50 [µM] = 0.73；IL-13 IC50 [µM] = 4.73；IL-17A IC50 [µM] = 1.32；IL-17F IC50 [µM] = 5.06；IL-18 IC50 [µM] = ＞100；IL-21 IC50 [µM] = 1.56；IL-33 IC50 [µM] = 2.93；TGFβ IC50 [µM] = ＞100；TNFα IC50 [µM] = 0.15；TNFβ IC50 [µM] = 1.58。流程 19 ： X = NCH2 C6 H3 (OH)2 COOH
Figure 02_image254
合成程序由 KI-11 及 NH3 形成第三胺
參 (4- 乙氧基羰基 -2,5- 二芐氧基苯基甲基 ) 胺 ：在密封管中裝入KI-11(32.5 g，79 mmol)、碘化鈉(0.79 g，5 mmol)、氨在MeOH中的溶液(7 N )(38 mL，264 mmol)及EtOAc(80 mL)。然後將管密封，將反應混合物在60℃下加熱24小時。24小時後，原料(KI-11) 被消耗，反應混合物中含有所欲產物，也含有單體及二聚體結構。加入水(100 mL)，將所得混合物用EtOAc(3×100 mL)萃取，將收集的有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。將獲得的殘餘物溶於EtOAc(165 mL)，加入KI-11 (2.5g，6mmol)、碘化鈉(0.79g，5 mmol)、DIPEA(10 mL，58 mmol)，將得到的溶液在60°C加熱。18小時後，加入水(100 mL)，用EtOAc(3×100 mL)萃取所得混合物，收集的有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。藉由使用EtOH/EtOAc 95/5(20 mL)作為溶劑經由再結晶以純化殘餘物，得到為白色結晶的標題化合物(15.0g，50%)。
UPLC-MS (鹼性方法，2分鐘)：rt = 1.71分鐘；m/z = 1140.3 [M+H]+ ，峰面積＞99%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 6.56 – 6.49 (m, 12H), 6.48 – 6.38 (m, 24H), 4.22 (s, 6H), 4.04 (s, 6H), 3.42 (q, J = 7.1 Hz, 6H), 3.00 (s, 6H), 0.42 (t, J = 7.1 Hz, 9H)。
可替代地，可以經由矽膠快速管柱層析法純化產物：規模最大至270 g；儀器：Combiflash Torrent；卡匣：RediSep 管柱，Silica 3kg；負載類型： 將粗製物溶於1L的庚烷：甲苯(1：1)。用乙酸乙酯/庚烷洗提。檢測：UV– 240 nm。
去保護程序：參見通用程序[4]、[5]
條件及產率：參見圖7(去保護)。替代的，大規模去保護程序 ：
皂化。將參(4-乙氧基羰基-2,5-二芐氧基苯基甲基)胺(95.00 g，0.083 mol)、氫氧化鈉(40.00 g，0.99 mol)、水(570 mL)及四氫呋喃(1.9 L)加入5 L圓底燒瓶。使用溫度模塊，在80℃(回流溫度為65℃)下加熱反應混合物48小時，然後在室溫下攪拌24小時。然後真空除去溶劑。收集粗製材料，進一步用水(2.85 L)稀釋。在室溫下，在另一個10 L燒瓶中攪拌乙酸(180 mL)及水(950 mL)的混合物。在30分鐘內將粗產物在水中的混合物加入乙酸混合物中，同時用頂置式攪拌器攪拌，沉澱出乳狀固體。再攪拌反應混合物1小時，在過濾時分離出固體；將其分離。母液的pH為4.2。分離出的固體與水(1425 mL)一起攪拌1小時，然後過濾。母液的pH為4.5。將回收的固體與更多的水(1425 mL)一起攪拌1小時，然後過濾；母液的pH為4.5。將上述固體與丙酮(950 mL)一起攪拌1小時並過濾。在分析之前，將乳白色固體在50°C真空烘箱中乾燥48小時(82.00 g，93%的產率)(產率在90-95%之間變化)。
註記：在洗滌過程中，pH是使產物保持游離酸形式並從產物去除過量的乙酸的關鍵參數。
理想的pH：4.2至4.5(最終鈉含量在2 ppm-20 ppm之間變化)。
氫解及分離 。將參(4-羧基-2,5-二芐氧基苯基甲基)胺(58.00 g，54.00 mmol，1 eq)及四氫呋喃(1160 mL)裝入2 L圓底燒瓶中。用氮氣使混合物脫氣，然後用氫氣/真空循環沖洗4-5次。將碳上載鈀(JM 10% 424 Pd/C，70 g，15%負載)加入反應混合物，在25°C下攪拌5-6小時。然後使反應物脫氣，經由矽藻土墊過濾除去催化劑，用四氫呋喃(3×1160 mL)洗滌。最後，將濾液在減壓下濃縮。收集粗固體，與庚烷(1160 mL)一起攪拌並過濾以得到灰色固體，在50°C真空烘箱中乾燥過夜(32.50 g，以粗產物計＞100%的產率)。將收集的粗物質溶解在乙醇(325 mL)中，加熱至60°C(澄清溶液)。然後，在15-20分鐘內在60°C下緩慢加入水(325 mL)(在添加過程至少保持溫度在50°C)。在此階段，觀察到渾濁液體。在回流溫度下攪拌渾濁的反應混合物30分鐘。
此時間之後，使反應混合物再冷卻至室溫30分鐘。過濾分離沉澱的固體，用乙醇：水的1：1混合物(66 mL)洗滌。在分析之前，將固體在50°C的真空烘箱中乾燥至少72小時，然後進行分析，以提供所欲產物IIIc-061a (22.00 g，76%產率)(產率在65-75%之間變化)。LCMS：＞95%，NMR：＞95%純度。
Figure 02_image256
參 (4- 羧基 -2,5- 二羥基苯基甲基 ) 胺， 化合物IIIc-061a ：
UPLC-MS (酸性方法，4分鐘)：rt = 0.74分鐘；m/z = 516.0 [M+H]+ ，峰面積＞86%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.27 (s, 3H), 6.83 (s, 3H), 4.33 (s, 6H)。
13 C NMR (100 MHz, DMSO-d6 ) δ 172.0, 154.3, 148.3, 134, 117.8 (CH), 114.9 (CH), 112.4, 53.6 (CH2 )。
HRMS：[M+H]+ ，C24 H22 NO12 計算值：516.11365，實際值：516.11389。
Biodata： IIIc-061a ：FGF-1 IC50 [µM] = 9；FGF-2 IC50 [µM] = 7.6；VEGF-A1 IC50 [µM] = 21；VEGFR-磷酸化抑制IC50 [µM] =4.3；PMN ROS[在0.3 µM的抑制[%] = 92.5；PMN ROS抑制IC50 [µM] = N.D.；嗜中性白血球黏著抑制 [%] = 58.69；全血：GM-CSF IC50 [µM] = 31.2；IFNγ IC50 [µM] = 2.48；IL-1β IC50 [µM] = ＞100；IL-2 IC50 [µM] = ＞100；IL-4 IC50 [µM] = ＞100；IL-5 IC50 [µM] = ＞100；IL-6 IC50 [µM] = 0.18；IL-9 IC50 [µM] = 8.85；IL-10 IC50 [µM] = 17.9；IL-12p70 IC50 [µM] = 37.2；IL-13 IC50 [µM] = 0.31；IL-17A IC50 [µM] = 0.04；IL-17F IC50 [µM] = 0.32；IL-18 IC50 [µM] = 32.4；IL-21 IC50 [µM] = 6.38；IL-33 IC50 [µM] = 0.31；TGFβ IC50 [µM] = ＞100；TNFα IC50 [µM] = 0.03；TNFβ IC50 [µM] = 0.81三 乙酯
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：rt = 1.05分鐘；m/z = 600.2 [M+H]+ ，峰面積＞82%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.02 (s, 3H), 9.54 (s, 3H), 7.17 (s, 3H), 7.00 (s, 3H), 4.33 (q, J = 7.1 Hz, 6H), 3.59 (s, 6H), 1.31 (t, J = 7.1 Hz, 9H)。
HRMS： [M+H]+ ，C30 H34 NO12 計算值：600.20755，實際值：600.20790。
Biodata： IIIc-061a-E3 ：FGF-1 IC50 [µM] = 200；FGF-2 IC50 [µM] = 200；VEGF-A1 IC50 [µM] = 200；VEGFR-磷酸化抑制IC50 [µM] =0.34；PMN ROS [在0.3 µM的抑制[%] = N.D.；PMN ROS抑制IC50 [µM] = N.D.；嗜中性白血球黏著抑制[%] =10.4。流程 20 ： X = S
Figure 02_image258
合成流程
由 KI-11 形成 硫醚鍵 參見流程 21 。形成硫醚鍵的相同條件。
去保護流程：參見通用流程[4]、[5]
例如
Figure 02_image260
條件及產率：參見圖7(去保護)。60) 4-((2,5- 二羥基 -4- 羧基苯基 ) 甲硫基甲基 )-2,5- 二羥基苯甲酸， 化合物IIIc-058a ：
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：rt = 0.84分鐘；m/z = 365.1 [M-H]- ，峰面積＞79%。
1 H NMR (400 MHz, Methanol-d4 ) δ 7.25 (s, 2H), 6.83 (s, 2H), 3.69 (s, 4H)。
HRMS：[M+H]+ ，C16 H15 O8 S計算值：367.04822，實際值：367.04768。
Biodata：IIIc-058a ：FGF-1 IC50 [µM] = 12；FGF-2 IC50 [µM] = 12；VEGF-A1 IC50 [µM] = 124；VEGFR-磷酸化抑制IC50 [µM] =0.29；PMN ROS [在0.3 µM的抑制[%] = 61.22；PMN ROS抑制 IC50 [µM] = 1.17；嗜中性白血球黏著抑制[%] = 23。流程 21 ： X = SO2
Figure 02_image262
合成流程
硫醚鍵 的氧化 參見IVc-059a 的製備：相同氧化條件。
去保護流程：參見通用流程[4]、[5]
例如
Figure 02_image264
條件及產率：參見圖7(去保護)。61) 4-((2,5- 二羥基 -4- 羧基苯基 ) 甲基磺醯基甲基 )-2,5- 二羥基苯甲酸， 化合物IIIc-059a ：
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：rt = 0.72分鐘；m/z = 397.1 [M-H]- ，峰面積＞97%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 13.94 (brs, 2H), 10.63 (brs, 2H), 9.71 (s, 2H), 7.27 (s, 2H), 6.91 (s, 2H), 4.44 (s, 4H)。
HRMS：[M+H]+ ，C16 H15 O10 S計算值：399.03804，實際值：399.03768。
Biodata：IIIc-059a ：FGF-1 IC50 [µM] = 47；FGF-2 IC50 [µM] = 50；VEGF-A1 IC50 [µM] = 200；VEGFR-磷酸化抑制IC50 [µM] =3.61；PMN ROS [在0.3 µM的抑制[%] = 66.39；PMN ROS抑制IC50 [µM] = 1；嗜中性白血球黏著抑制[%] = 14.67。實施例 1.11 ：類型 IVc 化合物
Figure 02_image266
流程 22 ： X=S 經由二甲醚的合成
Figure 02_image268
合成流程 由 5-O- 甲基龍膽酸合成
3- 甲醯基 -2- 羥基 -5- 甲氧基苯甲酸 。將六亞甲基四胺(40.019 g，0.285 mol)添加至2-羥基-5-甲氧基苯甲酸(24.0 g，0.143 mol)在三氟乙酸(190.0 mL)中的混合物。將反應物回流18小時。完成後，將反應冷卻至環境溫度，將2M鹽酸(700 mL)的溶液加入混合物，在環境溫度下攪拌混合物24小時。過濾沉澱，用水(500 mL)洗滌，並在真空烘箱中乾燥，得到淺黃色固體的3-甲醯基-2-羥基-5-甲氧基苯甲酸(21.30 g，0.11 mol，77.0%)。
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：rt = 0.69分鐘；m/z = 195.1 [M-H]- ，峰面積＞98%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 10.36 (s, 1H), 7.62 (d,J = 3.4 Hz, 1H), 7.44 (d,J = 3.4 Hz, 1H), 3.78 (s, 3H)。
3- 甲醯基 -2,5- 二甲氧基苯甲酸甲酯 。將碘甲烷(6.7 mL，0.107 mol)加入3-甲醯基-2-羥基-5-甲氧基苯甲酸(10.0 g，0.05 mol)及在DMF(100.0 mL)中的碳酸鉀-325目(28.18 g，0.20 mol)。在環境溫度攪拌所得混合物18小時。將反應冷卻至環境溫度，用冷水(400 mL)處理，導致形成沉澱。攪拌所得懸浮液10分鐘，然後過濾並在真空烘箱中乾燥，得到為黃色固體的3-甲醯基-2,5-二甲氧基苯甲酸甲酯(8.90 g，0.04 mol，78.0%)。
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：rt = 0.95分鐘；m/z = 225.1 [M+H]+ ，峰面積＞98%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 10.27 (s, 1H), 7.55 (d,J = 3.4 Hz, 1H), 7.41 (d,J = 3.4 Hz, 1H), 3.88 (s, 3H), 3.87 (s, 3H), 3.83 (s, 3H)。
3-( 羥甲基 )-2,5- 二甲氧基苯甲酸甲酯 。在0°C下，緩慢將硼氫化鈉(16.198 g，0.428 mol)加入3-甲醯基-2,5-二甲氧基苯甲酸甲酯(48.0 g，0.214 mol)在MeOH(900 mL)中的溶液，在環境溫度攪拌得到的混合物15分鐘。真空除去溶劑，將殘留物溶於DCM(200 mL)，然後用水(200 mL)洗滌。有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾，並濃縮至乾，得到為白色固體的3-(羥甲基)-2,5-二甲氧基苯甲酸甲酯(45.6 g，0.20 mol，95.0%)。
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：rt = 0.84分鐘；無離子化，峰面積＞98%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.20 (d,J = 3.2 Hz, 1H), 7.08 (d,J = 3.3 Hz, 1H), 5.24 (t,J = 5.7 Hz, 1H), 4.54 (d,J = 5.6 Hz, 2H), 3.83 (s, 3H), 3.76 (s, 3H), 3.68 (s, 3H)。
3-( 氯甲基 )-2,5- 二甲氧基苯甲酸甲酯 。在環境溫度下於30分鐘內將亞硫醯氯(17.2 mL，0.235 mol)滴加到3-(羥甲基)-2,5-二甲氧基苯甲酸甲酯(45.60 g，0.20 mol)的溶液。在環境溫度下攪拌所得混合物18小時。完成後，用碳酸鈉水溶液(3×500 mL)及鹽水(500 mL)的飽和溶液洗滌反應混合物。有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾並濃縮至乾，得到為棕色固體的3-(氯甲基)-2,5-二甲氧基苯甲酸甲酯(49.1g，0.18mol，90%)。
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：rt = 1.10分鐘；無離子化，峰面積＞92%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.29 (d,J = 3.2 Hz, 1H), 7.22 (d,J = 3.3 Hz, 1H), 4.74 (s, 2H), 3.85 (s, 3H), 3.77 (s, 3H), 3.76 (s, 3H)。
3-( 乙醯硫基甲基 )-2,5- 二甲氧基苯甲酸甲酯 。在環境溫度下，將硫代乙酸鉀(15.54 g，0.136 mol)加入3-(氯甲基)-2,5-二甲氧基苯甲酸甲酯(22.20 g，0.091 mol)在THF(500.0 mL)中的溶液。在75℃下攪拌反應混合物18小時。完成後，減壓除去溶劑，得到紅色油狀殘留物，用飽和鹽水溶液(500 mL)處理，然後用乙醚(2×250 mL)萃取。合併有機相，用Na2 SO4 乾燥，過濾並濃縮至乾，得到為棕色固體的3-(乙醯硫基甲基)-2,5-二甲氧基苯甲酸甲酯(25.50g，0.09mol，99%)。
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：rt = 1.10分鐘；無離子化，峰面積＞92%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.12 (d,J = 3.3 Hz, 1H), 7.10 (d,J = 3.2 Hz, 1H), 4.10 (s, 2H), 3.84 (s, 3H), 3.74 (s, 3H), 3.70 (s, 3H), 2.35 (s, 3H)。
3-( 巰甲基 )-2,5- 二甲氧基苯甲酸甲酯 。在0°C、氮氣氣氛下，對3-(乙醯硫甲基)-2,5-二甲氧基苯甲酸甲酯(25.5 g，89.68 mmol)在無水甲醇(800 mL)中的溶液滴加甲醇鈉溶液(5.81 g，107.62 mmol)。在室溫下攪拌混合物45分鐘，然後用Dowex X8(H+ )離子交換樹脂淬滅，並攪拌15分鐘。過濾後，減壓蒸發溶劑，得到，為棕色油狀物的粗產物(其以2：1的比例含有所欲產物及相應的二硫化物)。將殘留物溶解在DMF(400.0mL)，並在氮氣氛下用二硫蘇糖醇(DTT)(33.95 g，0.26 mol)處理。在75°C下攪拌反應混合物18小時。二硫化物完全轉化成硫醇後，蒸發溶劑。將所得殘留物溶於DCM(1 L)中，用鹽水(7×500 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾並濃縮至乾，得到呈棕色油狀的均質3-(巰甲基)-2,5-二甲氧基苯甲酸甲酯(21.40 g，88.32 mmol，99%)。
UPLC-MS (酸性方法, 2 min): rt = 1.05 min; m/z = 243.1 [M+H]+ , 峰面積＞95%
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.19 (d,J = 3.2 Hz, 1H), 7.09 (d,J = 3.3 Hz, 1H), 3.83 (s, 3H), 3.76 (s, 3H), 3.73 (s, 3H), 3.71 (d,J = 8.0 Hz, 2H), 2.93 (t,J = 8.0 Hz, 1H)。
3,3’-( 硫代雙 ( 亞甲基 )) 雙 (2,5- 二甲氧基苯甲酸二甲酯 ) 。在氮氣氣氛下，將三乙胺(19.0 mL，136.61 mmol)加入3-(巰甲基)-2,5-二甲氧基苯甲酸甲酯(21.40 g，88.32 mmol)及3-(氯甲基)-2,5-二甲氧基苯甲酸甲酯(22.69 g，92.74 mmol)的溶液。在環境溫度下攪拌反應18小時。完成後，真空除去溶劑，得到褐色油殘留物，用水(1 L)處理，然後用二乙醚(3×500 mL)萃取。合併有機相，用鹽水(5×250 mL)洗滌，經Na2 SO乾燥，過濾並濃縮至乾，得到棕色油狀的粗產物，經矽膠層析法純化：用在異己烷中的乙酸乙酯(0至20%)梯度洗提，得到呈棕色固體的3,3'-(硫代雙(亞甲基))雙(2,5-二甲氧基苯甲酸酯)二甲基(29.9 g，66.37 mmol，76%)。
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：rt = 1.22分鐘；m/z = 451.2 [M+H]+ ，峰面積＞92%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.12 – 7.08 (m, 4H), 3.83 (s, 6H), 3.76 (s, 4H), 3.73 (s, 6H), 3.67 (s, 6H)。
3,3’-( 硫代雙 ( 亞甲基 )) 雙 (2,5- 二甲氧基苯甲酸 ) 。將氫氧化鋰單水合物(1.0 g，23.83 mmol)在水(30.0 mL)中的溶液加入3,3'-(硫代雙(亞甲基))雙(2,5-二甲氧基苯甲酸二甲酯)(2.0 g，4.44 mmol)在THF(100.0 mL)中的溶液。在環境溫度下攪拌反應48小時。完成後，將水(100 mL)加入反應，並用乙酸乙酯(100 mL)洗滌混合物。用1M鹽酸水溶液將水層酸化至pH＝2，並用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。收集有機層，乾燥(Na2 SO4 )，過濾並濃縮，得到呈棕色固體的3,3'-(硫代雙(亞甲基))雙(2,5-二甲氧基苯甲酸)(1.91 g，4.11 mmol，93%)。
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：rt = 0.93分鐘；m/z = 421.1 [M-H]- ，峰面積＞95%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 12.96 (s, 2H), 7.10 (d,J = 3.3 Hz, 2H), 7.08 (d,J = 3.2 Hz, 2H), 3.76 (s, 4H), 3.73 (s, 6H), 3.69 (s, 6H)。
3-[(2,5- 二羥基 -3- 羧苯基 ) 甲基硫代甲基 ]-2,5- 二羥基苯甲酸 。在0°C下，對前述硫醚(5.0 g，0.01 mol)在DCM(200.0 mL)中的溶液緩慢加入三溴硼烷在DCM(100.7 mL，0.101 mol)中的1M溶液，並將反應混合物回流48小時。此時間之後，過濾固體，用DCM(500 mL)洗滌，然後懸浮在1M鹽酸(50 mL)的溶液。將所得混合物回流2小時。過濾得到的棕色懸浮液並乾燥，得到粗產物，經反相管柱層析法純化(25 g，MeCN：H2 O在12CV下為5%至95%)，得到白色固體的2,5-二羥基-3-[(2,5-二羥基-3-羧苯基)甲基硫甲基]苯甲酸(1.1 g，0.003 mol，26%)。
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：rt = 0.70分鐘；m/z = 365.1 [M-H]- ，峰面積＞95%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 13.86 (s, 2H), 11.09 (s, 2H), 9.14 (s, 2H), 7.08 (d,J = 3.1 Hz, 2H), 7.02 (d,J = 3.1 Hz, 2H), 3.65 (s, 4H)。
實例：62) 3-((2,5- 二羥基 -3- 羧基苯基 ) 甲硫基甲基 )-2,5- 二羥基苯甲酸， 化合物IVc-058a ：
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：rt = 0.70分鐘；m/z = 365.1 [M-H]- ，峰面積＞95%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 13.86 (s, 2H), 11.09 (s, 2H), 9.14 (s, 2H), 7.08 (d,J = 3.1 Hz, 2H), 7.02 (d,J = 3.1 Hz, 2H), 3.65 (s, 4H)。
HRMS：[M+H]+ ，C16 H15 O8 S計算值：367.04822，實際值：367.04734。
Biodata：IVc-058a ：FGF-1 IC50 [µM] = 36；FGF-2 IC50 [µM] = 4.9；VEGF-A1 IC50 [µM] = 83；VEGFR-磷酸化抑制 IC50 [µM] =0.53；PMN ROS [在0.3 µM的抑制[%] = 77.04；PMN ROS抑制IC50 [µM] = 0.29；嗜中性白血球黏著抑制 [%] = 43.5；全血：GM-CSF IC50 [µM] = ＞100；IFNγ IC50 [µM] = 10.6；IL-1β IC50 [µM] = 27.5；IL-2 IC50 [µM] = 3.82；IL-4 IC50 [µM] = ＞100；IL-5 IC50 [µM] = ＞100；IL-6 IC50 [µM] = 0.21；IL-9 IC50 [µM] = 31.1；IL-10 IC50 [µM] = 16.4；IL-12p70 IC50 [µM] = 4.23；IL-13 IC50 [µM] = 55.9；IL-17A IC50 [µM] = 0.1；IL-17F IC50 [µM] = 86.8；IL-18 IC50 [µM] = ＞100；IL-21 IC50 [µM] = 3.2；IL-33 IC50 [µM] = 33.9；TGFβ IC50 [µM] = ＞100；TNFα IC50 [µM] = 0.18；TNFβ IC50 [µM] = 59.3。流程 23 ： X = SO2
Figure 02_image270
由 化合物 IVc-058a 的 合成
3-((2,5- 二羥基 -3- 羧苯基 ) 甲基磺 醯 基甲基 )-2,5- 二羥基苯甲酸 。對硫代醚IVc-058a (4.25 g，9.28 mmol)在DMF(20.0 mL)中的溶液緩慢加入3-氯苯-1-甲過氧酸(3-chlorobenzene-1-carboperoxy acid)(mCPBA純度≤77%，5.80 g，25.88 mmol)在DMF(20.0 mL)中的溶液。在環境溫度下攪拌反應混合物18小時。將粗產物進行HPLC純化(參見通用條件)，得到白色固體(3.20g)，將其與1M HCl(50mL)一起研磨，得到為白色固體的所欲產物(2.55 g，6.40 mmol，56%)。
UPLC-MS (酸性方法，4分鐘)：rt = 0.68分鐘；m/z = 397.1 [M-H]- ，峰面積＞95%。63) 3-((2,5- 二羥基 -3- 羧基苯基 ) 甲基磺醯基甲基 )-2,5- 二羥基苯甲酸， 化合物IVc-059a ：
UPLC-MS (酸性方法，4分鐘)：rt = 0.68分鐘；m/z = 397.1 [M-H]- ，峰面積＞95%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 11.24 (s, 1H), 9.32 (s, 1H), 7.21 (d,J = 3.1 Hz, 1H), 7.09 (d,J = 3.1 Hz, 1H), 4.44 (s, 2H)。
13 C NMR (100 MHz, DMSO-d6 ) δ 172.4, 153.4, 149.2, 117.4, 116.1 (CH), 113.3 (CH), 53.6 (CH2 )。
HRMS：[M+H]+ ，C16 H15 O10 S計算值：399.03804，實際值：399.03775。
Biodata：IVc-059a ：FGF-1 IC50 [µM] = 6.7；FGF-2 IC50 [µM] = 2.7；VEGF-A1 IC50 [µM] = 12；VEGFR-磷酸化抑制IC50 [µM] =4.8；PMN ROS [在0.3 µM的抑制[%] = 74；PMN ROS抑制IC50 [µM] = 0.147；嗜中性白血球黏著抑制 [%] = 10；全血：GM-CSF IC50 [µM] = ＞100；IFNγ IC50 [µM] = 4.34；IL-1β IC50 [µM] = 38.6；IL-2 IC50 [µM] = 21.2；IL-4 IC50 [µM] = ＞100；IL-5 IC50 [µM] = ＞100；IL-6 IC50 [µM] = 0.11；IL-9 IC50 [µM] = 0.4；IL-10 IC50 [µM] = 1.31；IL-12p70 IC50 [µM] = 42；IL-13 IC50 [µM] = ＞100；IL-17A IC50 [µM] = 0.16；IL-17F IC50 [µM] = ＞100；IL-18 IC50 [µM] = ＞100；IL-21 IC50 [µM] = 1.87；IL-33 IC50 [µM] = 27.5；TGFβ IC50 [µM] = ＞100；TNFα IC50 [µM] = 0.16；TNFβ IC50 [µM] = 0.33。二 甲酯
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：rt = 0.94分鐘；m/z = 427.1 [M+H]+ ，峰面積＞95%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 10.28 (s, 2H), 9.43 (s, 2H), 7.21 (d,J = 3.1 Hz, 2H), 7.13 (d,J = 3.1 Hz, 2H), 4.47 (s, 4H), 3.91 (s, 6H)。
HRMS：[M+H]+ ，C18 H19 O10 S計算值：427.06934，實際值：427.06942。
Biodata：IVc-059a-E2 ：FGF-1 IC50 [µM] = 78；FGF-2 IC50 [µM] = 94；VEGF-A1 IC50 [µM] = 200；VEGFR-磷酸化抑制IC50 [µM] =2.7；PMN ROS [在0.3 µM的抑制[%] = 45.67；PMN ROS抑制IC50 [µM] = 2.64；嗜中性白血球黏著抑制[%] = 50.5。二 甲酯 四 乙酸酯
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：rt = 1.05分鐘；m/z = 593.1 [M-H]- ，峰面積＞95%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.75 (d,J = 2.8 Hz, 2H), 7.53 (d,J = 2.9 Hz, 2H), 4.65 (s, 4H), 3.81 (s, 6H), 2.31 (s, 6H), 2.23 (s, 6H)。
HRMS：[M+H]+ ，C26 H27 O14 S計算值：595.11160，實際值：595.11149。
Biodata：IVc-059a-E2-A4 ：FGF-1 IC50 [µM] = 54；FGF-2 IC50 [µM] = 200；VEGF-A1 IC50 [µM] = 25；VEGFR-磷酸化抑制IC50 [µM] =ND；PMN ROS [在0.3 µM的抑制[%] = 29.17；PMN ROS抑制 IC50 [µM] = 4.13；嗜中性白血球黏著抑制 [%] = 87.5；全血：GM-CSF IC50 [µM] = 1.83；IFNγ IC50 [µM] = 3.5；IL-1β IC50 [µM] = 14.1；IL-2 IC50 [µM] = 10.4；IL-4 IC50 [µM] = ＞100；IL-5 IC50 [µM] = ＞100；IL-6 IC50 [µM] = 0.99；IL-9 IC50 [µM] = 2.9；IL-10 IC50 [µM] = 16.8；IL-12p70 IC50 [µM] = 51.4；IL-13 IC50 [µM] = 18.7；IL-17A IC50 [µM] = 0.02；IL-17F IC50 [µM] = 25.8；IL-18 IC50 [µM] = ＞100；IL-21 IC50 [µM] = ＞100；IL-33 IC50 [µM] = 23.2；TGFβ IC50 [µM] = ＞100；TNFα IC50 [µM] = 0.3；TNFβ IC50 [µM] = 19.4。IVc-059a 可 替代 、 可規模化的 合成 流程 24 ： 由2,5-二芐氧基苯二甲醛合成IVc-059a
Figure 02_image272
2,5- 雙 ( 芐氧基 )-3-( 羥甲基 ) 苯甲醛 [步驟1]：將2,5-雙(芐氧基)-間苯二甲醛(25.0 g，72.1 mmol)(參見流程9b)溶於THF(150 mL)，並加入EtOH(15 mL)。將該棕色溶液保持在正氮氣流下，並在室溫下攪拌10分鐘，然後在20分鐘內分批添加固體NaBH4 (695 mg，18.37 mmol)，不讓反應的內部溫度超過25°C(使用水浴)。在室溫下攪拌反應混合物30分鐘，然後每15分鐘添加另外的NaBH4 ，直到原料完全轉化(總共：107 mg，分兩部分)。然後將反應混合物倒入水(1.2 L)中並攪拌20分鐘。經由過濾分離由此形成的棕色沉澱，並將獲得的固體在40°C真空烘箱中進一步乾燥直至恆質量，得到為棕色油的標題化合物(22.9 g，校正產率76%)。NMR譜顯示83%的所欲產物、15%的過度還原的二醇、2%原料，此材料不進行進一步純化即用於下一步驟。
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：r.t = 1.19分鐘, 86%, m/z = 347.2 [M-H]-。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.11 (s, 1H), 7.52 – 7.28 (m, 11H), 7.19 (d, J = 3.3 Hz, 1H), 5.34 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 5.15 (s, 2H), 4.99 (s, 2H), 4.60 (d, J = 5.6 Hz, 2H)。
2,5- 雙 ( 芐氧基 )-3-( 羥甲基 ) 苯甲酸 [步驟2]：將2,5-雙(芐氧基)-3-(羥甲基)苯甲醛(44.3 g，103 mmol，81%純度)及KH2 PO4 (25.9 g，190 mmol)溶解在丙酮(440 mL)及水(130 mL)中。加入間苯二酚(21.0 g，191 mmol)，在室溫下攪拌反應混合物10分鐘。在30分鐘內緩慢加入亞氯酸鈉(21.5 g，191 mmol)在水(60 mL)中的溶液，不讓內部溫度超過25°C。在室溫下攪拌反應混合物3小時，加入2M H3 PO4 水溶液(95 mL)。攪拌混合物20分鐘，在過濾之前用冰浴冷卻至6°C。用水進一步洗滌固體，直到濾液的pH為〜6。將獲得的固體懸浮在水(約300 mL)中，加入NaOH(17 g，412 mmol)在水(200 mL)中的預冷(5–10°C)溶液。在室溫下攪拌懸浮液30分鐘，然後在燒結漏斗上過濾。分離的固體進一步用1M NaOH水溶液(2×50 mL)及水(50 mL)洗滌。然後使用預冷的6N HCl水溶液(5–10°C)將鹼性溶液酸化至pH〜1。用磁力攪拌得到的懸浮液20分鐘，然後過濾，將得到的固體在40°C真空烘箱中進一步乾燥直至恆質量，得到為淺米色固體的標題化合物(34.8 g，88%)。
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：rt = 1.06分鐘，99%，m/z = 363.2 [M-H]- 。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.02 (s, 1H), 7.51 – 7.31 (m, 10H), 7.28 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 7.22 (d, J = 3.3 Hz, 1H), 5.21 (s, 1H), 5.12 (s, 2H), 4.88 (s, 2H), 4.53 (s, 2H)。
2,5- 雙 ( 芐氧基 )-3-( 羥甲基 ) 苯甲酸乙酯 [步驟3]：將2,5-雙(芐氧基)-3-(羥甲基)苯甲酸(32.5 g，89.3 mmol)及Cs2 CO3 (32.3 g，99.2 mmol)懸浮於DMF(200 mL)中，並將碘乙烷(9.0 mL，112 mmol)加入反應混合物。在室溫下攪拌3小時後，將反應混合物倒入飽和NH4 Cl水溶液(1 L)中，並加入固體NaCl(〜30 g)。攪拌10分鐘後，用EtOAc(2×500 mL)萃取此材料。用鹽水(2×500 mL)洗滌收集的有機層，用硫酸鈉乾燥，過濾並在減壓下濃縮，得到褐色油殘留物(42.0 g，粗製，89.3 mmol)。粗製材料無需進一步純化即可用於下一步。
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：rt = 1.24分鐘，93%，m/z = 弱離子化。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.51 – 7.32 (m, 10H), 7.31 (d, J = 3.3 Hz, 1H), 7.22 (d, J = 3.3 Hz, 1H), 5.24 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 5.13 (s, 2H), 4.87 (s, 2H), 4.54 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 4.26 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 1.24 (t, J = 7.1 Hz, 3H)。
2,5- 雙 ( 芐氧基 )-3-( 氯甲基 ) 苯甲酸乙酯 (KI-14) [步驟4]：在惰性氣氛(N2 )下將2,5-雙(芐氧基)-3-(羥甲基)苯甲酸乙酯(42 g來自上一步的粗製材料，89.3 mmol)溶於DCM(200 mL)中，然後在0°C(冰浴)中加入SOCl2 (9.8 mL，133.9 mmol)，並使反應混合物升溫至室溫。2小時後，減壓除去揮發物，然後使用甲苯(3×100 mL)共沸蒸餾，得到半固體棕色油(38.0 g，粗製，89.3 mmol)。
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：rt = 1.40分鐘，91%，m/z = 弱離子化。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.54 – 7.26 (m, 12H), 5.14 (s, 2H), 4.95 (s, 2H), 4.71 (s, 2H), 4.28 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 1.28 – 1.22 (t, J = 7.1 Hz, 3H)。
雙 (2,5- 二芐氧基 -3- 乙氧基羰基苯基甲基 ) 硫化物 [步驟5]：對KI-14(38.0 g，原料，89.3 mmol)在DMF(420 mL)中的溶液加入硫代乙醯胺(8.4 g，111.8 mmol))，然後加入K2 CO3 -325目(16.7 g，120.8 mmol)。在45 °C下加熱反應48小時。將反應冷卻至室溫，然後加入硫代乙醯胺(2.5 g，33.3 mmol)及K2 CO3 -325目(5.0 g，36.1 mmol)，並在45 °C下進一步攪拌18小時以完成反應。將反應混合物倒入水(4L)。將反應混合物攪拌20分鐘，然後添加EtOAc(2L)，接著添加固體NaCl(〜60 g)。分離各相，然後用EtOAc(1.5L)另外萃取。用鹽水(1.5L)洗滌收集的有機層，以Na2 SO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮，得到為棕色油的粗製標題化合物(39.8 g，44.6 mmol)，其無需純化即可用於下一步驟。
UPLCMS (酸性方法，2min)：rt = 1.57分鐘，m/z = 800.5 [M+NH4]+ ，峰面積77%。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.46 – 7.17 (m, 24H), 5.05 (s, 4H), 4.83 (s, 4H), 4.23 (q, J = 7.1 Hz, 4H), 3.73 (s, 4H), 1.20 (t, J = 7.1 Hz, 6H)。
雙 (2,5- 二芐氧基 -3- 乙氧基羰基苯基甲基 ) 碸 [步驟6]：對雙(2,5-二芐氧基-3-乙氧基羰基苯基甲基)硫化物(39.8 g粗製，44.6 mmol)在乙酸(850 mL)中的溶液緩慢加入30%重量過氧化氫溶液(50 mL，490 mmol)。在室溫攪拌反應18小時。將反應混合物倒入冰/水(5L)中，在室溫下攪拌30分鐘，然後加入EtOAc(2L)及固體NaCl(〜40 g)。分離各相後，用EtOAc(1L)再萃取水層一次。用鹽水(1.5L)洗滌收集的有機層，以Na2 SO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮，得到褐色固體。將固體懸浮在MTBE(250 mL)中，以磁力攪拌30分鐘，然後過濾，再用MTBE(150 mL)溶提(titruration)，得到標題化合物(23.56 g，28.9 mmol，經過4步驟的產率64%)。
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：rt = 1.48分鐘；m/z = 832.5 [M+NH4]+ ，峰面積96%。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.50 – 7.24 (m, 24H), 5.08 (s, 4H), 4.85 (s, 4H), 4.50 (s, 4H), 4.26 (q, J = 7.1 Hz, 4H), 1.25 – 1.17 (m, 6H)。
雙 (2,5- 二芐氧基 -3- 羧苯基甲基 ) 碸 [步驟7]：將氫氧化鋰(9.7 g，233 mmol)在水(100 mL)中的溶液加入雙(2,5-二芐氧基-3-乙氧基羰基苯基甲基)碸(33.3 g，38.8 mmol)在THF(350 mL)中的溶液，在回流下攪拌得到的混合物18小時。此時間之後，在減壓下除去大部分THF，得到白色懸浮液。加入水(3 L)及氫氧化鈉水溶液(1 M，1 L)後，混合物保持懸浮液。在室溫攪拌懸浮液18小時，經由添加6M鹽酸水溶液將水層酸化至pH〜1，藉由過過濾收集所得固體，並用水洗滌，直至液體呈中性為止，由此在40°C真空烘箱中進一步使獲得的白色固體乾燥直至質量恆定，得到為白色固體的標題化合物(29.4 g，38.7 mmol，99%)。
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：rt = 1.39分鐘；m/z = 757.1 [M-H]- ，峰面積100%。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.23 (s, 2H), 7.47 – 7.25 (m, 24H), 5.08 (s, 4H), 4.88 (s, 4H), 4.48 (s, 4H)。
雙 (2,5- 二羥基 -3- 羧苯基甲基 ) 碸 [步驟8]，IVc-059a ：對雙(2,5-二芐氧基-3-羧苯基甲基)碸(10.08 g，13.28 mmol)在EtOH(140)及四氫呋喃(140 mL)中的懸浮液加入中加入呈在水(20 mL)中懸浮液的碳上鈀(20%重量，2 g)。經過數次真空/氫氣循環後，使混合物保持在25°C的H2 氣氛下，攪拌20小時。完成後，使用THF經由Celite®過濾混合物。在減壓下濃縮濾液，得到灰白色固體。然後將殘留物懸浮在乙腈(100 mL)中，在磁力攪拌下加熱至回流，然後將混合物冷卻至-5°C，接著過濾並進一步以冷乙腈洗滌。在40°C真空烘箱中進一步乾燥產物直至質量恆定，得到為白色固體的所欲產物(5.35 g，12.78 mmol，96%)。
UPLC-MS (酸性方法，4分鐘)：rt = 0.67分鐘；m/z = 397.1 [M-H]- ，峰面積100%。
NMR數據：參見上文。實施例 1.12 - 類型 V 的分子 ：參考化合物 衍生自5-羥基間苯二甲酸的二醯胺 2個實例
Figure 02_image274
合成流程及程序流程 25 ： V-001a 的合成
Figure 02_image276
醯胺鍵的形成 參見使用苯胺A (2個分子)或5-胺基水楊酸甲酯進行醯胺偶合 [3B] 的通用程序 B
去保護流程：參見通用流程[4]、[5]
詳細內容參見圖8
例如
Figure 02_image278
64) 5- 羥基間苯二甲酸雙 -N-(4- 羧基 -2,5- 二羥基苯基 ) 醯胺 (V-001a)
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：rt = 0.72分鐘；m/z = 483.0 [M+H]+ ，峰面積＞95%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.28 (s, 1H), 9.83 (s, 2H), 9.48 (s, 2H), 7.92 (s, 1H), 7.68 (s, 2H), 7.52 (d, J = 1.5 Hz, 2H), 7.30 (s, 2H)。二 乙酯
UPLC-MS (酸性方法，2分鐘)：rt = 1.09分鐘；m/z = 539.2 [M-H]- ，峰面積94%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.23 (s, 2H), 9.92 (s, 2H), 9.49 (s, 2H), 7.91 (s, 1H), 7.73 (s, 2H), 7.51 (d, J = 1.5 Hz, 2H), 7.32 (s, 2H), 4.35 (q, J = 7.1 Hz, 4H), 1.34 (t, J = 7.1 Hz, 6H)。
Figure 02_image280
65) 5- 羥基間苯二甲酸 雙 -N-(3- 羧基 -4- 羥基苯基 ) 醯胺 (V-002a)
UPLC-MS (酸性方法，4分鐘)：rt = 1.00分鐘；m/z = 451.1 [M-H]- ，峰面積97%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.31 (s, 2H), 10.11 (s, 1H), 8.28 (d, J = 2.7 Hz, 2H), 7.98 (m, 1H), 7.89 (dd, J = 9.0, 2.7 Hz, 2H), 7.50 (d, J = 1.5 Hz, 2H), 6.97 (d, J = 9.0 Hz, 2H)。 連結脲的龍膽酸單元，1個實例
Figure 02_image282
合成流程及流序流程 26 ： V-003a 的 合成
Figure 02_image284
脲鍵的形成
來自KI-1 的 程序：
N,N’- 雙 (2,5- 二芐氧基 -4- 乙氧基羰基苯基 ) 脲 。在惰性氣氛(N2 )下，緩慢將DPPA(1.1 mL，5.2 mmol)加入2,5-雙(芐氧基)-4-(乙氧基羰基)苯甲酸(KI-1) (2.0 g，4.9 mmol)及Et3N(1.6 mL，11.3 mmol)在THF(25 mL)中的冷卻溶液(冰浴)。將混合物緩慢升溫至室溫，並在該溫度下攪拌3小時。然後加入tBuOH(8 mL)，並將反應混合物在室溫攪拌18小時。反應曲線顯示大部分為脲鍵產物而不是所欲Boc-苯胺。將混合物倒入碳酸氫鈉飽和溶液(250 mL)並攪拌5分鐘，然後用EtOAc(3×50 mL)萃取。合併的有機層經硫酸鈉乾燥，過濾，並在減壓下濃縮，得到無色油。殘留物藉由快速管柱層析法純化(異己烷/EtOAc為1∶0，然後梯度至30%EtOAc)，得到為灰白色固體的標題化合物(1.1 g，56%)。
UPLC-MS (鹼性方法，2分鐘)：rt = 1.50分鐘；m/z = 781.2 [M+H]+ ，峰面積85%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 9.49 (s, 2H), 8.18 (s, 2H), 7.58 – 7.45 (m, 8H), 7.43 – 7.35 (m, 8H), 7.35 – 7.28 (m, 6H), 5.27 (s, 4H), 5.11 (s, 4H), 4.22 (q, J = 7.1 Hz, 4H), 1.24 (t, J = 7.1 Hz, 6H)。
去保護程序：參見通用程序[4]、[5]
詳細內容參圖8
例如 66) N,N’- 雙 (2,5- 二羥基 -4- 羧基苯基 ) 脲 (V-003a)
Figure 02_image286
V-003a
UPLC-MS (酸性方法，4分鐘)：rt = 0.90分鐘；m/z = 363.1 [M-H]- ，峰面積93%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.36 (s, 2H), 10.86 (s, 2H), 9.64 (s, 2H), 9.48 (s, 2H), 7.77 (s, 2H), 7.17 (s, 2H)。二 乙 酯
UPLC-MS (酸性方法，4分鐘)：rt = 1.79分鐘；m/z = 419.2 [M-H]- ，峰面積97%。
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.26 (s, 2H), 9.74 (s, 2H), 9.53 (s, 2H), 7.81 (s, 2H), 7.20 (s, 2H), 4.32 (q, J = 7.1 Hz, 4H), 1.33 (t, J = 7.1 Hz, 6H)。實施例 1.13 ： 鹽的形成 a) 固體 。
通用方案：將適量的當量數的鹼加至所欲化合物在水中的溶液或懸浮液，以超音波處理直至完全溶解，然後根據需要藉由添加HCl水溶液或過量鹼將pH值調整為7.0至7.4，然後凍乾溶液，從而獲得固體鹽。或者，藉由溶解在DMSO中，然後用EtOH(IIc-007a) 沉澱，可以獲得某些鹽。從以下鹼產生固體：氫氧化鈉、二乙胺(DEA)、賴胺酸(Lys)、葡甲胺(Meg)、三乙醇胺(TEA)。
例如： 根據通用方案，在不調節pH的情況下獲得固體形式的Ic-007a 、 IIc-007a 、 IIIc-061a 的鈉及二乙銨(DEA)鹽。 - 在水中的大約總溶解度：Ic-007a -DEA2： ＜ 10 mg/mLIc-007a -DEA3： ＞ 20 mg/mLIIc-007a- DEA1： ＞ 10 mg/mLIIc-007a -DEA2： ＞ 20 mg/mLIIIc-061a -DEA3： ＞ 25 mg/mL -游離酸及為固體的鹽的穩定性： 游離酸Ic-007a 、IIc-007a 、 IIIc-061a 及以下Ic-007a- DEA2、IIc-007a -DEA2、IIIc-061a -DEA3的鹽在4°C、20°C及40°C溫度下達到56d的固體穩定性；鹽Ic-007a -DEA3在相同溫度下達到36d穩定度。 b)溶液
通用方案：將適量的當量數的鹼加至所欲化合物在水中的溶液或懸浮液，以超音波處理直至完全溶解，然後根據需要藉由添加HCl水溶液或過量鹼將pH值調整為7.0至7.4，從而獲得溶液鹽。研究以下鹼：乙胺、三乙胺、乙二胺、二乙醇胺、三乙醇胺、膽鹼、葡甲胺、賴胺酸及精胺酸。
例如 ： Ic-007a 的鹽：
在40°C下攪拌混合物2天後，用葡甲胺、賴胺酸及二乙醇胺獲得可溶性鹽。藉由以乙醇沉澱從DMSO獲得固體形式的Ic-007a-Lys2鹽。在室溫下，鹽以水溶液形式穩定至少7天。IIc-007a 的鹽 ：
DEA1- 鹽 ：在不調整pH的情況下，經通用程序在小規模下獲得單二乙基銨鹽。溶解度：17.4 mg/mL，而母體二酸為1.8 mg/mL 大規模方法及特徵：
將EtOH(200 ml)加入IIc-007a (20 g，42.7 mmol)。在室溫攪拌反應物，得到漿料。加入DEA(4.4 ml，42.7 mmol)，將在50°C加熱反應2小時。將批料冷卻至室溫，並過過濾固體。用EtOH(50 mL)洗滌濾餅，在40°C的烘箱乾燥，得到呈黃色固體的21.5g單DEA鹽，產率98%。NMR：1.6% EtOH，1.04 eq DEA。HPLC：99.6%。
XRPD分析中，IIc-007a 的單DEA鹽的固態數據顯示清晰的晶體圖案。微量TGA顯示在＜120°C有少量EtOH損失，表明EtOH可以在60-80°C下乾除。然後，吾人觀察到與DSC熔融吸熱(峰值在273.8°C)有關的DEA損失(1：1的鹽，理論為13.5%重量)，隨後為游離酸形式的熔融。
經調整 pH 的 DEA2- 鹽 ：藉由通用程序進行pH調整獲得(達到pH = 7.25需要額外添加0.51當量的Et2 NH)。溶液中的鹽在40°C下經過21天後表現明顯的降解，在80°C下經過24小時後表現廣泛的降解。
未經 調整 pH 的 DEA2- 鹽： 藉由通用程序未進行pH調整而獲得。溶液的pH＝5.87。溶液中的鹽在4°C、20°C及40°C下經過21天後沒有降解。
未經 調整 pH 的 Lys2- 鹽： 藉由通用程序使用2當量L-賴胺酸而獲得。溶液pH = 5.74。
註記：類似2-羥基間苯二甲酸的雙(N-甲基)醯胺(酚的pKa = 6.81)，IIc-007a 的間苯二甲酸雙醯胺核的2-OH基團顯著為酸性，其離子化導致分子降解。未觀察到Ic-007a (酚官能基的預期pKa在9.8-10.0範圍)有此效果。因此，重要的是不要調整IIc-007a 的二陽離子鹽溶液的pH值。IIIc-061a 的鹽：
經調整 pH 的 DEA3- 鹽： 藉由通用程序使用3當量Et2 NH及pH調整(達到最終pH = 7.22需要再添加0.8當量的HCl(0.5 M))。溶液中的鹽在4°C、20°C下經過21天後沒有降解，在40°C下經過33天後有些微降解。
經調整 pH 的 Meg3- 鹽 ：藉由通用程序使用3當量葡甲胺並進行pH調整以達到最終pH=7.22 (HCl 0.5M)。溶液中的鹽在4°C、20°C及40°C下經過14天後沒有降解。IVc-059a 的鹽：
經調整 pH 的 DEA2- 鹽： 藉由通用程序使用pH調整(達到pH=7.3需要額外的0.32當量Et2 NH)。溶液中的鹽在4°C、20°C 及40°C下經過26天後顯示穩定性。實施例 1.14 ：前藥 Ic-007a 的前藥 1) 2-N-
Figure 110108763-A0304-12-01
 啉基乙基 5-[[2,5- 二羥基 -4-[[4- 羥基 -3-(2-N-
Figure 110108763-A0304-12-01
 啉基乙氧基羰基 ) 苯基 ] 胺甲醯基 ] 苯甲醯基 ] 胺基 ]-2- 羥基 - 苯甲酸酯 (Ic-007a-mpe2)
Figure 02_image288
酯化 。5-[[2,5-二芐氧基-4-[(3-羧基-4-羥基苯基)胺基甲醯基]-苯甲醯基]胺基] -2-羥基-苯甲酸(130 mg，0.2 mmol)在N,N-二甲基甲醯胺(4 ml)中的懸浮液在室溫下攪拌。加入N,N-二甲基吡啶-4-胺(49 mg，0.4 mmol)及2-N-
Figure 110108763-A0304-12-01
啉基乙醇(53 mg，0.4 mmol)在N,N-二甲基甲醯胺(0.5 ml)中的溶液。加入1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(115 mg，0.6 mmol)，反應混合物在60°C微波反應器中加熱1.5小時。過濾反應混合物，用四氫呋喃稀釋濾液，蒸發溶劑。殘留物藉由過矽膠層析法純化，用0-40%二氯甲烷中的甲醇溶液洗滌，得到為白色固體的標題產物(80 mg，45%)。LCMS(m/z)[M+H] 875.1。
氫解：製備以上獲得的二酯(80 mg，0.092 mmol)在四氫呋喃(12 ml)及水(4 ml)中的溶液，加入10%碳上鈀(50 mg，105糊劑)。在氫氣氛下攪拌反應混合物17小時。藉由過濾除去催化劑，蒸發溶劑。將殘留物經由反相製備HPLC在C18管柱上使用10-97%(乙腈+ 0.1%甲酸)：(水+ 0.1%甲酸)的梯度純化。用乙醚溶提殘留物，以在真空下乾燥，得到為黃色固體的標題產物Ic-007a-mpe2 (22 mg，35%)。
1 H NMR (d6-DMSO ppm) δ 11.16-11.00 (br s, 1H), 10.46 (s, 1H), 10.45-10.15 (br s, 1H), 8.25 (d, J=2.7 Hz, 1H), 7.77 (dd, J=9.0, 2.7Hz, 1H), 7.53 (s, 1H), 7.01 (d, J=9.0 Hz, 1H), 4.46 (t, J=5.4 Hz, 2H), 3.62-3.56 (m, 4H), 2.77-2.69 (m, 2H), 2.56-2.50 (m, 4H, 被DMSO峰部分遮蓋)。LCMS (m/z) [M+H] 695.0。2) 5-[[2,5- 二羥基 -4-[[4- 羥基 -3-(2- N-
Figure 110108763-A0304-12-01
 啉基 乙氧基羰基 ) 苯基 ] 胺甲醯基 ] 苯甲醯基 ] 胺基 ]-2- 羥基 - 苯甲酸 (Ic-007a-mpe1)
Figure 02_image290
酯化。5-[[2,5-二芐氧基-4-[(3-羧基-4-羥基-苯基)-胺基甲醯基]苯甲醯基]胺基]-2-羥基-苯甲酸(324 mg，0.5 mmol)及三乙胺(101 mg，0.15 ml，1 mmol)在N,N-二甲基甲醯胺(7 ml)中的溶液在室溫下攪拌。加入2-N-
Figure 110108763-A0304-12-01
啉基乙醇(66 mg，0.5 mmol)在N,N-二甲基甲醯胺(1 ml)及N,N-二甲基吡啶-4-胺(122 mg，1 mmol)中的溶液。加入1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(115 mg，0.6 mmol)，在室溫攪拌反應混合物2小時，然後在60°C的微波中加熱4小時。以相似的規模重複反應，合併反應混合物。蒸發溶劑，用乙醚溶提殘留物，得到單酯及二酯的混合物(230 mg)。LCMS(m/z)[M+H] 762.0(單酯)。
氫解。將以上獲得的單酯及二酯的混合物(230 mg)溶於乙酸(10 ml)、四氫呋喃(15 ml)及水(5 ml)中，並加入10%碳上鈀(150 mg，10%糊劑)。在氫氣氛下攪拌反應混合物16小時。過濾除去催化劑，蒸發溶劑，得到黃色膠狀物(140 mg)。將殘留物經由反相製備HPLC在C18管柱上，使用10-70%(乙腈+ 0.1%甲酸)：(水+ 0.1%甲酸)的梯度純化。將殘餘物用乙醚溶提，並在真空下乾燥，得到為黃色固體的標題單酯Ic-007a-mpe1 (11 mg)。
1 H NMR (d6-DMSO ppm) δ 11.33-11.29 (br s, 1H), 11.13-10.08 (br s, 1H), 10.50-10.44 (br s, 2H), 10.36-10.30 (br s, 1H), 8.25 (d, J=2.4 Hz, 1H), 8.06-8.02 (m, 1H), 7.78 (dd, J=9.0, 2.4Hz, 1H), 7.69-7.60 (m, 2H), 7.52 (s, 1H), 7.01 (d, J=9.0 Hz, 1H), 6.75 (d, J=8.7 Hz, 1H), 4.50-4.45 (m, 2H), 3.65-3.55 (m, 4H), 2.81-2.71 (m, 2H), 2.60-2.50 (m, 4H,被DMSO峰部分遮蓋)。LCMS (m/z) [M+H] 582.0。3) 5-[[4-[[3-[1-(2,2- 二甲基丙醯氧基 ) 乙氧基羰基 ]-4- 羥基 - 苯基 ] 胺甲醯基 ]-2,5- 二羥基 - 苯甲醯基 ] 胺基 ]-2- 羥基 - 苯甲酸 1-(2,2- 二甲基丙醯氧基 ) 乙酯 (Ic-007a-pive2) 及 4) 5-[[4-[[3-[1-(2,2- 二甲基丙醯氧基 ) 乙氧基羰基 ]-4- 羥基 - 苯基 ] 胺甲醯基 ]-2,5- 二羥基 - 苯甲醯基 ] 胺基 ]-2- 羥基 - 苯甲酸 (Ic-007a-pive1)
Figure 02_image292
酯化。在0°C下，攪拌5-[[2,5-二芐氧基-4-[(3-羧基-4-羥基-苯基)胺基甲醯基]苯甲醯基]胺基] -2-羥基-苯甲酸(324 mg，0.5 mmol)及三乙胺(152 mg，0.21 mmol)在N,N-二甲基甲醯胺(10 mL)中的溶液，加入2,2-二甲基丙酸1-碘乙酯(572 mg，2 mmol)。使反應混合物溫熱至室溫，並在室溫攪拌24小時。蒸發二甲基甲醯胺，並將殘留物在二氯甲烷及偏亞硫酸氫鈉水溶液之間分配。用無水硫酸鎂使有機相乾燥、蒸發，得到單酯及二酯的1∶1混合物(187 mg)。重複反應，並合併1∶1的酯混合物。LCMS(m/z)[M+H] 777.0(單酯)及905.1(二酯)。
Figure 02_image294
氫解
將以上獲得的單酯及二酯的混合物(320 mg)溶於四氫呋喃(50 ml)及水(5 ml)中，並加入10%碳上鈀 (300 mg，10%糊劑)。在氫氣氛下攪拌反應混合物20小時。藉由過濾除去催化劑，並蒸發溶劑。LCMS顯示僅達成部分脫保護。將殘留物溶於四氫呋喃(36 ml)及水(6 ml)，加入10%碳上鈀(600 mg，10%糊劑)。在氫氣氛下攪拌反應混合物22小時。藉由過濾除去催化劑，蒸發溶劑。將殘留物經由反相製備HPLC在C18管柱上，使用40-97%(乙腈+ 0.1%甲酸)：(水+0.1%甲酸)的梯度純化。用乙醚溶提殘留物，在真空下乾燥，得到標題產物：
二酯(Ic-007a-pive2 )：黃色固體(60 mg)。1 H NMR (d6-DMSO ppm) δ 11.05 (s, 1H), 10.46 (s, 1H), 10.18 (s, 1H), 8.18 (br s, 1H), 7.83-7.77 (m, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.05-6.96 (m, 2H), 1.58 (d, J=5.5 Hz, 3H), 1.17 (s, 9H). LCMS (m/z) [M+H] 724.9。
Biodata：T1/2 (小鼠血漿：62.2分鐘 (酯裂解；1小時後殘留65%)；T1/2 (人類血漿)：＞ 180分鐘。
單酯(Ic-007a-pive1 )：黃色固體(35 mg)。1 H NMR (d6-DMSO ppm) δ 11.13 (s, 1H), 11.06 (s, 1H), 10.46 (s, 1H), 10.42 (s, 1H), 10.18 (s, 1H), 8.21-8.18 (m, 2H), 8.78-8.72 (m, 2H), 7.55 (s, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.03-6.92 (m, 3H), 1.58 (d, J=5.5 Hz, 3H), 1.17 (s, 9H)。LCMS (m/z) [M+H] 596.9。
Biodata：T1/2 (小鼠血漿：44.6分鐘 (酯裂解 ；1小時後殘留49%)； T1/2 (人類血漿)：＞ 180分鐘。IIc-007a 的前藥 1) 5-[[3-[[3-(2,2- 二 甲基 丙醯氧基 甲氧基羰基 )-4- 羥基 - 苯基 ] 胺甲醯基 ]-2,5- 二羥基 - 苯甲醯基 ] 胺基 ]-2- 羥基 - 苯甲酸 2,2- 二 甲基 丙醯氧基 甲酯 (IIc-007a-pivm2)
Figure 02_image296
酯化。製備5-[[2,5-二芐氧基-3-[(3-羧基-4-羥基-苯基)胺基甲醯基]苯甲醯基]胺基]-2-羥基-苯甲酸(280 mg，0.432 mmol)在N,N-二甲基甲醯胺中的溶液，並添加了2,2-二甲基丙酸氯甲基酯(137 µL，0.95 mmol)，然後添加三乙胺(167 µL，1.2 mmol)及碘化鈉(143 mg，0.95 mmol)。在50℃加熱攪拌的溶液18小時。然後將溶液冷卻，並在飽和氯化銨溶液及乙酸乙酯之間分配。有機層經硫酸鈉乾燥，過濾並蒸發。將殘留物藉由矽膠管柱層析法純化，使用100%異己烷至50%乙酸乙酯、50%異己烷的梯度，得到無色膠狀的二酯(192 mg，51%)。LCMS(m/z)[M+H] 876.9。
氫解：製備以上獲得的二酯(192 mg，0.219 mmol)在四氫呋喃(4.5 mL)中的溶液，並將其加入10%碳上鈀 (40 mg，0.04 mmol)在水(1.5 mL)中的攪拌懸浮液。將攪拌的反應混合物在氫氣氛下放置18小時。過濾反應物以除去催化劑，並將溶液蒸發，得到乳白色固體(142 mg)。固體藉由HPLC在C18管柱上純化，使用60%乙腈、40%水至100%乙腈(0.1%甲酸)的梯度，得到為白色固體的標題二酯IIc-007a-pivm2 (75mg，49%)。1 H NMR (DMSO-D6 ppm) δ 13.03 (br s, 1H), 10.43 (br s, 2H), 10.16 (s, 2H), 9.52 (br s, 1H), 8.17 (d,J= 2.7Hz, 2H), 7.82 (dd,J =8.9Hz, 2.7Hz, 2H), 7.55 (s, 2H), 7.02 (d,J =8.9Hz, 2H), 5.98 (s, 4H), 1.17 (s, 18H)。LCMS (m/z) [M-H] 694.9。 2)5-[[3-[[3-[1-(2,2- 二甲基丙醯氧基 ) 乙氧基羰基 ]-4- 羥基 - 苯基 ] 胺甲醯基 ]-2,5- 二羥基 - 苯甲醯基 ] 胺基 ]-2- 羥基 - 苯甲酸 (IIc-007a-pive1)
Figure 02_image298
酯化。5-[[2,5-二芐氧基-3-[(3-羧基-4-羥基-苯基)胺基甲醯基]苯甲醯基]胺基]-2-羥基-苯甲酸(324 mg，0.5 mmol)及三乙胺(101 mg，0.14 ml，1.0 mmol)在N,N-二甲基甲醯胺(10 ml)中的溶液在0°C下攪拌。加入2,2-二甲基丙酸1-碘乙酯(154 mg，0.6 mmol)。在室溫攪拌反應混合物21小時。加入另外的三乙胺(0.14 ml，1.0 mmol)及2,2-二甲基丙酸1-碘乙酯(154 mg，0.6 mmol)，在室溫攪拌反應混合物1小時。蒸發溶劑。將殘留物在二氯甲烷及焦亞硫酸鈉溶液之間分配。合併有機萃取物，用鹽水洗滌，使溶液通過疏水性玻璃料乾燥。蒸發濾液，得到單酯及二酯的混合物。殘留物藉由矽膠層析法純化，用5-100%乙酸乙酯的異己烷溶液洗滌，然後用10%甲醇的二氯甲烷溶液洗滌，得到黃色固體的單酯(121 mg)。LCMS(m/z)[M+H] 777。
氫解。將上述獲得的單酯(121 mg，0.15 mmol)在四氫呋喃(16 ml)及含有10%碳上鈀(250 mg，10%糊劑)的水(4 ml)中的溶液在氫氣氛下攪拌18小時。藉由過濾除去催化劑，並蒸發溶劑。將殘留物經由反相製備HPLC純化，使用40-97%(乙腈+ 0.1%甲酸)：(水+0.1%甲酸)的梯度，得到黃色固體的單酯IIc-007a-pive1 (34 mg)。1 H NMR (DMSO-D6” ppm) δ 13.15 (br s, 1H), 10.47 (br s, 2H), 10.18 (s, 1H), 9.47 (br s, 1H), 8.21 (d, J=3 Hz 1H), 8.17 (d, J=3 Hz 1H), 7.82 (dd, J=9, 3 Hz 1H), 7.78 (dd, J=9, 3 Hz 1H), 7.59-7.55 (m, 2H), 7.03 (d, J=9 Hz 1H), 6.99 (q, J=5.4 Hz 1H), 7.96 (d, J=9 Hz 1H), 1.58 (d, J=5.4 Hz, 3H), 1.17 (s, 9H)。LCMS (m/z) [M-H] 595.1。IVc-059a 的 前藥 1) 2,5- 二羥基 -3-[[2,5- 羥基 -3-(2- N-
Figure 110108763-A0304-12-01
 啉基 乙氧基羰基 ) 苯基 ] 甲基磺醯基 甲基 ] 苯甲酸 (IVc-059a-mpe1)
Figure 02_image300
酯化。製備2,5-二芐氧基-3-[(2,5-二芐氧基-3-羧苯基)甲基磺醯基-甲基]苯甲酸(300 mg，0.40 mmol)及2-N-
Figure 110108763-A0304-12-01
啉基乙醇(53 mg，0.40 mmol)在N,N-二甲基甲醯胺(93 mL)中的溶液，添加1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳二亞胺(EDC，93 mg，0.48 mmol)及N,N-二甲基吡啶-4-胺(10 mg，0.08 mmol)。在室溫攪拌反應混合物18小時。將所得溶液蒸發至乾，殘留物藉由HPLC在C18管柱上純化，使用30%乙腈、70%水至100%乙腈(0.1%甲酸)的梯度，得到無色膠狀的N-
Figure 110108763-A0304-12-01
啉基乙酯(111 mg，32%)。LCMS (m/z) [M+H] 872.1。
氫解。 將上述單酯(111 mg，0.127mmol)在四氫呋喃(3 mL)中的溶液加到10%碳上鈀(20 mg，0.019mmol)在水(1 mL)中的攪拌懸浮物中。攪拌的反應混合物在氫氣氛下放置18小時。
將反應過濾以除去催化劑，將溶液蒸發，得到褐色固體。固體藉由HPLC在C18管柱上純化，使用10%乙腈、90%水至60%乙腈、40%水(0.1%甲酸)的梯度，得到白色固體(20.5mg)。用二乙醚溶提磨固體，在真空下乾燥，得到為白色固體的標題產物IVc-059a-mpe1 (5mg，8%)。
1 H NMR (DMSO-d6 ppm) δ 10.33 (br s, 1H), 9.30 (s, 1H) 8.92 (s, 1H), 7.08-7.15 (m, 3H), 6.91 (d, J=3.1Hz, 1H), 4.40 (t, J=5.0Hz, 2H), 4.36 (s, 2H), 3.65-3.72 (m, 4H), 3.05 (t, J=5.0Hz, 2H), 2.78-2.87 (m, 4H)。LCMS (m/z) [M+H] 511.9。
Biodata：在小鼠血漿穩定長達60分鐘。2) 2,5- 二羥基 -3-[[2,5- 羥基 -3-(2- N-
Figure 110108763-A0304-12-01
 啉基 乙氧基羰基 ) 苯基 ] 甲基磺醯基 甲基 ] 苯甲酸 2- N-
Figure 110108763-A0304-12-01
 啉基 乙酯 (IVc-059a-mpe2)
Figure 02_image302
製備2,5-二芐氧基-3-[(2,5-二芐氧基-3-羧苯基)甲基磺醯基甲基]苯甲酸(69 mg，0.091 mmol)及2-N-
Figure 110108763-A0304-12-01
啉基乙醇(25 mg，0.19 mmol)在N,N-二甲基甲醯胺(1 mL)中的溶液，並加入1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳二亞胺(42 mg，0.48 mmol)及N,N-二甲基吡啶-4-胺(5 mg，0.04 mmol)。在室溫攪拌反應混合物18小時。將所得溶液蒸發至乾，殘留物藉由矽膠管柱色層析法純化，使用10%甲醇、90%二氯甲烷，得到為無色膠狀物的標題產物(58mg，65%)。LCMS(m/z)[M+H] 985.0。
製備以上獲得的二酯(58 mg，0.059 mmol)在四氫呋喃(1.5 mL)中的溶液，並將其加入10%碳上鈀(5 mg，0.005 mmol)在水(0.5 mL)中的攪拌懸浮液。將攪拌的反應混合物在氫氣氛下放置18小時。將反應過濾以除去催化劑，將溶液蒸發，得到褐色固體。固體藉由HPLC在C18管柱上純化，使用10%乙腈、90%水至60%乙腈、40%水(0.1%甲酸)的梯度，得到白色固體(13.7 mg)。
用二乙醚溶提固體，並真空乾燥，得到為白色固體的標題產物IVc-059a-mpe2 (9.1mg，25%)。
1 H NMR (CD3 OD ppm) δ 8.34 (br s,  2H), 7.32 (d, J=3.1Hz, 2H), 7.16 (d, J=3.1Hz, 2H), 4.52 (t, J=5.5Hz, 4H), 4.45 (s, 4H), 3.68-3.73 (m, 8H), 2.83 (t, J=5.5Hz, 4H), 2.58-2.65 (m, 8H). LCMS (m/z) [M+H] 625.0。
Biodata：在小鼠血漿穩定長達60分鐘；T1/2 (人類血漿)：＞ 180分鐘。3) 3-[[3-[1-(2,2- 二甲基丙醯氧基 ) 乙氧基羰基 ]-2,5- 二羥基 - 苯基 ] 甲基 - 磺醯基 - 甲基 ]-2,5- 二羥基 - 苯甲酸 1-(2,2- 二甲基丙醯氧基 ) 乙酯 (IVc-059a-pive2)
Figure 02_image304
酯化。製備2,5-二芐氧基-3-[(2,5-二芐氧基-3-羧基-苯基)甲基-磺醯基甲基]苯甲酸(200 mg，0.263 mmol)在無水N,N-二甲基甲醯胺(5 mL)中的溶液，加入三乙胺(88 μL，0.63 mmol)、碘化鈉(8 mg，0.053 mmol)及粗製的2-碘二丙酸1-碘乙酯(約4.2 mmol)。在室溫攪拌反應混合物18小時。將所得溶液蒸發至小體積，並將殘留物在二氯甲烷及硫代硫酸鈉溶液之間分配。經由疏水玻璃料過濾有機層並蒸發。殘留物藉由矽膠層析法純化，用100%異己烷至50∶50乙酸乙酯/異己烷的梯度洗滌，得到為無色膠狀物的二酯(110 mg，41%)。LCMS(m/z)[M+Na] 1037.0。
還從與無色膠狀物相同的管柱中分離單酯(90 mg，40%)。LCMS (m/z) [M+Na] 909.6。
氫解：
Figure 02_image306
將以上分離的二酯(110 mg，0.108 mmol)在四氫呋喃(3 mL)中的溶液加入10%碳上鈀(20 mg，0.02 mmol)在水(1 mL)中的攪拌懸浮液中。將攪拌的反應混合物在氫氣氛下放置48小時。過濾反應混合物以除去催化劑，蒸發溶液，殘留物藉由矽膠層析法純化，用100%二氯甲烷至10%甲醇、90%二氯甲烷的梯度洗滌，得到為乳白色固體的標題產物IVc-059a- pive2 (55 mg，78%)。
1 H NMR (CDCl3 ppm) δ 10.55 (s, 2H), 7.24-7.28 (m, 2H), 7.14-7.18 (m, 2H), 7.05 (q, J=5.4Hz, 2H), 6.18 (br s, 2H), 4.30-4.50 (m, 4H), 1.60 (d, J=5.4Hz, 6H), 1.21 (s, 18H). LCMS (m/z) [M-H] 653.9。
Biodata：在小鼠血漿及人類血漿中迅速水解。4) 3-[[3-[1-(2,2- 二甲基丙醯氧基 ) 乙氧基羰基 ]-2,5- 二羥基 - 苯基 ] 甲基磺醯基 - 甲基 ]-2,5- 二羥基 - 苯甲酸 (IVc-059a-pive1)
氫解：
Figure 02_image308
將以上分離的單酯(90 mg，0.104 mmol)在四氫呋喃(3 mL)中的溶液加入10%碳上鈀(20 mg，0.02 mmol)在水(1 mL)中的攪拌懸浮液。將攪拌的反應混合物在氫氣氛下放置48小時。過濾反應物以除去催化劑，蒸發溶液，殘留物藉由矽膠層析法純化，用100%二氯甲烷至20%甲醇、80%二氯甲烷的梯度洗滌，得到為乳白色固體的標題產物IVc-059a-pive1 (22.5 mg，43%)。
1H NMR (CD3 OD ppm) δ 7.39 (d, , J=3.1Hz, 1H), 7.25 (d, J=3.1Hz, 1H), 7.18 (d, J=3.1Hz, 1H), 7.05 (q, J=5.4Hz, 1H), 6.96 (d, J=3.1Hz, 1H), 4.40-4.45 (m, 4H), 1.61 (d, J=5.4Hz, 3H), 1.21 (s, 9H). LCMS (m/z) [M-H] 524.9。
Biodata：在小鼠血漿中迅速水解。5) 2,5- 二羥基 -3-[[2,5- 二羥基 -3-(2,2- 二甲基 - 丙醯氧基甲氧基羰基 ) 苯基 ] 甲基磺醯基甲基 ] 苯甲酸 2,2- 二甲基丙醯氧基甲酯 (IVc-059a-pivm2)
Figure 02_image310
酯化。製備2,5-二芐氧基-3-[(2,5-二芐氧基-3-羧基-苯基)甲基磺醯基-甲基]苯甲酸(100 mg，0.131 mmol)在無水N,N-二甲基甲醯胺(1 mL)中的溶液，先後加入2,2-二甲基丙酸氯甲酯(91 μL，0.631 mmol)、三乙胺(110 μL，0.789 mmol)及碘化鈉(87 mg，0.579 mmol)。在50°C加熱反應混合物6.5小時。蒸發所得溶液，將殘留物在乙酸乙酯及水之間分配。有機層經硫酸鈉乾燥，過濾並蒸發。殘留物藉由矽膠層析法純化，用100%異己烷至50%乙酸乙酯、50%異己烷的梯度洗滌，得到無色膠狀的二酯產物(85 mg，66%)。LCMS(m/z)[M+Na] 1010.0。
氫解：將以上獲得的二酯(85 mg，0.086 mmol)在四氫呋喃(3 mL)中的溶液加入10%碳上鈀(20 mg，0.02 mmol)在水(1 mL)中的攪拌懸浮液。將攪拌的反應混合物在氫氣氛下放置18小時。過濾反應物以除去催化劑，蒸發溶液，殘留物藉由矽膠層析法純化，用100%異己烷至60%乙酸乙酯、40%異己烷的梯度洗滌，得到為白色固體的二酯IVc-059a-pivm2 (31 mg，57%)。
1 H NMR (CDCl3 ppm) δ 7.29 (d, J=2.9Hz, 2H), 7.19 (d, J=2.9Hz, 2H), 5.97 (s, 4H), 4.42 (s, 4H), 1.22 (s, 18H)。LCMS (m/z) [M-H] 624.8。
Biodata：迅速水解小鼠血漿，T1/2 = 14.1分鐘；T1/2 (人類血漿)： ＞ 180分鐘。6) 2,5- 二羥基 -3-[[2,5- 二羥基 -3-(2,2- 二甲基丙醯氧基甲氧基羰基 ) 苯基 ] 甲基 - 磺醯基甲基 ] 苯甲酸 (IVc-059a-pivm1)
Figure 02_image312
酯化：製備2,5-二芐氧基-3-[((2,5-二芐氧基-3-羧苯基)甲基磺醯基甲基]苯甲酸(300 mg，0.395mmol)在無水N，N-二甲基甲醯胺(3 mL)中的溶液，先後加入2,2-二甲基丙酸氯甲酯(57 μL，0.395 mmol)，以及三乙胺(68 μL，0.489 mmol)及碘化鈉(129 mg，0.870 mmol)。在50°C加熱反應混合物4小時。冷卻所得溶液，然後蒸發。殘留物藉由矽膠層析法純化，用20%乙酸乙酯、80%異己烷至80%乙酸乙酯、20%異己烷的梯度洗滌，得到白色固體狀的單酯產物(121mg，35%)。LCMS(m/z)[M-H] 871.0。
氫解：將以上獲得的單酯(121 mg，0.138 mmol)在四氫呋喃(3 mL)中的溶液添加至10%碳上鈀(20 mg，0.02 mmol)在水(1 mL)中的攪拌懸浮液中。將攪拌的反應混合物在氫氣氛下放置48小時。過濾反應物以除去催化劑，將溶液蒸發，殘留物藉由HPLC在C18管柱上純化，用30%乙腈、70%水至100%乙腈(0.1%甲酸)的梯度洗滌，得到為白色固體的單酯IVc-059a-pivm1 (30 mg，42%)。
1 H NMR (CD3 OD ppm) δ 7.34 (d, J=3.0Hz, 1H), 7.27 (d, J=3.1Hz, 1H), 7.20 (d, J=3.1Hz, 1H), 7.08 (d, J=3.0Hz, 1H) , 6.01 (s, 2H), 4.45 (s, 4H), 1.22 (s, 9H)。LCMS (m/z) [M-H] 510.9。
Biodata： 迅速水解小鼠血漿，T1/2 = 6.7分鐘； T1/2 (人類血漿)： ＞ 180分鐘。實施例 2 ：通用實驗方法 NMR光譜
在Bruker Advance III NMR光譜儀上於400 MHz記錄1 H NMR光譜。在氘代氯仿(CDCl3 )或二甲基亞碸(DMSO-d6 )中製備樣本，並使用Mnova NMR軟體處理原始數據。使用MaXis ESI qTOF超高解析度質譜儀記錄高解析度質譜圖。 UPLC-MS分析
由Acquity I-Class Sample Manager-FL、Acquity I-Class Binary Solvent Manager 及Acquity I-Class UPLC 管柱 Manager組成的Waters Acquity UPLC系統進行UPLC-MS分析。使用Acquity I-Class UPLC PDA檢測器(210–400 nm掃描)完成UV檢測，而使用Acquity QDa檢測器(100–1250 Da的質量掃描；同時以正模式及負模式)完成質量檢測。使用Waters Acquity UPLC BEH C18管柱(2.1×50 mm，1.7 mm) 完成分析物的分離。
藉由在有或無音波處理下溶於1 mL的MeCN在H2 O中的1：1(v/v)的混合物中以製備樣本。經由0.45 μm注射器過濾器過濾所得溶液，然後進行分析。所用所有溶劑(包括甲酸及36%的氨溶液)皆為HPLC級。
這項工作使用四種不同分析方法，其詳細內容如下所述。
酸性操作 (2 分鐘 ) ： 水中含0.1% v/v甲酸[沖提液A]；MeCN中含0.1% v/v甲酸[沖提液B]；流速0.8 mL/min；注射量2 μL；樣本之間的平衡時間為1.5分鐘。 表14：
時間 ( 分鐘 ) 沖提 液 A(%) 沖提 液 B(%)
0.00 95 5
0.25 95 5
1.25 5 95
1.55 5 95
1.65 95 5
2.00 95 5
酸性操作 (4 分鐘 ) ： 水中含0.1% v/v甲酸[沖提液A]；MeCN中含0.1% v/v 甲酸[沖提液B]；流速0.8 mL/min；注射量2 μL；樣本之間的平衡時間為1.5分鐘。 表15：
時間 ( 分鐘 ) 沖提 液 A (%) 沖提 液 B (%)
0.00 95 5
0.25 95 5
2.75 5 95
3.25 5 95
3.35 95 5
4.00 95 5
酸性操作 (6.5 分鐘 ) ： 10 mM甲酸銨+0.1% v/v甲酸[沖提液A]；MeCN中含0.1% v/v甲酸[沖提液B]；流速0.6 mL/min；注射量2 μL。 表16：
時間 ( 分鐘 ) 沖提 液 A(%) 沖提 液 B(%)
0.00 95 5
0.50 95 5
4.00 5 95
4.50 5 95
4.52 95 5
6.50 95 5
鹼性 操作 (2 分鐘 ) ： 水中含0.1%氨[沖提液A]；MeCN中含0.1%氨[沖提液B]；流速0.8 mL/min；注射量2 μL；樣本之間的平衡時間為1.5分鐘。 表17：
時間 ( 分鐘 ) 沖提液 A (%) 沖提液 B (%)
0.00 95 5
0.25 95 5
1.25 5 95
1.55 5 95
1.65 95 5
2.00 95 5
鹼性 操作 (4 分鐘 ) ： 水中含0.1%氨[沖提液A]；MeCN中含0.1%氨[沖提液B]；流速0.8 mL/min；注射量2 μL；樣本之間的平衡時間為1.5分鐘。 表18：
時間 ( 分鐘 )) 沖提液 A (%) 沖提液 B (%)
0.00 95 5
0.25 95 5
2.75 5 95
3.25 5 95
3.35 95 5
4.00 95 5
鹼性 操作 (6.5 分鐘 ) ： 10 mM碳酸氫銨+0.1 % v/v 35%氨溶液[沖提液A]；MeCN中含0.1% v/v甲酸[沖提液B]；流速0.6 mL/min；注射量2 μL。 表19：
時間 ( 分鐘 )) 沖提液 A (%) 沖提液 B (%)
0.00 95 5
0.50 95 5
4.00 5 95
4.50 5 95
4.52 95 5
6.50 95 5
製備性HPLC純化
使用具有XBridge Prep C18管柱(19 x 150 mm)的Waters自動純化系統進行製備性HPLC。Waters系統由Waters 2545 Binary Prep Pump、Waters 2767 Sample Manager、Waters SFO Column Organiser、Waters 2998 DAD、Waters 515 Make up Pump及Acquity QDa質譜儀組成。
純化系統由具有Open Access Login模組的MassLynx 軟體(版本4.2)控制。
流動相由(A) 10mM甲酸銨(+0.1% v/v 甲酸)及(B) 乙腈(+0.1% v/v甲酸)組成。
藉由溶於10% v/v的含水DMSO得到〜150 mg/mL的濃度以製備樣本。將體積為320 mL的製備樣本載入管柱，並在室溫下以25 mL/min的流速以梯度洗提進行純化。每次注射之間有1.5分鐘的平衡。 表20：梯度：
時間(分鐘 ) ) %(A)
0.0 95
0.5 95
14.5 0
17.4 0
17.5 95
18.0 95
實施例 3 ：試管內篩選方法 實施例 3.1 ：試管內 HUVEC 細胞 FGF1 、 FGF2 及 VEGF-A 抑制方法
此試管內方法的目的是在基於球體的細胞血管生成鑑定中評估化合物對FGF-2、FGF-1或VEGF-A誘導人類臍靜脈內皮細胞(HUVEC)芽生的功效。在將生長因子添加到細胞之前，將其與化合物預培育。測試舒尼替尼作為對照(未預培育)。
舒尼替尼對照如預期抑制FGF-2、FGF-1及VEGF-A誘導HUVEC芽生。經測試化合物的IC50值以microM [µM]表示，在化學表徵後的實施例中，每種化合物之後皆列出抑制FGF-1、FGF2及VEGF-A誘導生長(芽生)的值。
對溶解在DMSO中的化合物進行芽生測試，使其達到100倍濃縮原料溶液，並溶解在培養基中。由ProQinase GmbH提供的舒尼替尼作為參考化合物。生長因子購自rhFGF-basic (FGF-2), Peprotech, New Jersey, USA, #100-18C, Lot# 0415571；rhFGF-acidic (FGF-1)，Peprotech, New Jersey, USA, #100-17A, Lot# 031207；hVEGF-A165(ProQinase GmbH, Freiburg, Germany；05.02.2010)用於刺激HUVEC細胞生長。
測試系統：將來自合併供體的人類臍靜脈內皮細胞(HUVEC)與70%培養基、20%FCS、10%DMSO冷凍保存，每次約1 x 106 個細胞/安瓿。HUVEC細胞，初代人類臍靜脈內皮細胞(PromoCell, Heidelberg, Germany)經過第3繼代至第4繼代後使用。細胞的形態為以黏附、呈鵝卵石狀單層生長，並在內皮細胞生長及基礎培養基(ECGM/ECBM, PromoCell)中培養。每3-5天將繼代培養分割為1：3；以約1 x 104 個細胞/cm2 播種，並在37°C下與5%CO2 以加倍時間24-48小時培育。
測試化合物的稀釋：用適當的溶劑(在DMSO或水中)製備每種測試化合物的100倍濃縮溶液(相對於最終鑑定濃度)。將此等100倍化合物溶液在內皮細胞生長及基礎培養基(ECBM)(1：7.5)中進一步稀釋，獲得13.33倍濃縮溶液。隨後將75 μl的13.33倍溶液與25 μl的40倍濃縮刺激物(溶於ECBM)混合，得到10倍濃縮刺激物/化合物混合物。在37°C下培育此混合物(100 μl)30分鐘，然後添加到900 μl含有HUVEC球體的凝膠中(得到最終鑑定濃度)。
測試方法：以原始發表方案的修改版進行實驗(Korff and Augustin: J Cell Sci 112: 3249-58, 1999)。簡言之，如(Korff and Augustin: J Cell Biol 143: 1341-52, 1998)所描述製備球體，藉由以懸滴吸取400HUVEC在塑料皿上使球體聚隔夜集。然後將50個HUVEC球體接種在0.9 ml的膠原蛋白凝膠中，並吸移到24孔板的各個孔中以進行聚合。將測試化合物與生長因子(FGF-1、FGF-2或VEGF-A的最終濃度25 ng/mL)在10倍濃縮溶液中進行預培育，然後將100 μl的此溶液添加到已聚合凝膠上。首先將所有化合物在溶劑(DMSO或水)中稀釋為100x原料液(意味著在溶劑中製備每種最終鑑定濃度的100x原料液)。隨後，將此等原料液進一步在培養基中稀釋(得到每種最終鑑定濃度的13.33x原料液)成測試最終濃度：100、50、25、12.5、6.25、3.13及1.56 x 10-6 M。將板在37℃培育24小時，並藉由添加4% PFA(Roth, Karlsruhe, Germany)固定。
生長因子抑制的定量：用生長因子及抑制劑處理過的HUVEC球體的芽生強度藉由影像分析系統定量，以測定每個球體的累積芽生(CSL)。使用倒置顯微鏡及數字成像軟體NIS-Elements BR 3.0(Nikon)拍攝單一球體的圖像。隨後，將球體圖像上傳到Wimasis公司的主頁進行影像分析。使用成像分析工具WimSprout測定每個球體的累積芽生。將10個隨機選擇球體的累積芽生長度的平均值作為單獨數據點進行分析。對於IC50的測定，將原始數據轉換為相對於溶劑對照(包含刺激物)的HUVEC芽生百分比，經設定為100%)及基礎對照(沒有刺激)，經設定為0%。IC50值是使用GraphPad Prism 5軟體測定，其下限為0、上限為100，使用具有可變坡度的非線性回歸曲線。
結果：評估所有化合物對生長因子誘導內皮細胞芽生的劑量反應關係。使用標準參數測定IC50值，其基於溶劑對照的信號作為最上限(100% HUVEC芽生)，基礎對照的信號作為下限(0%)。每種化合物對FGF1、FGF2及VEGFA的各自IC50值皆在BIODATA段落中每種化合物下方以其化學特徵進行彙整。實施例 3.2 ：靜態條件、方法下的試管內 嗜中性白血球黏著
從健康供體的血沉棕黃層(buffy coats)獲得的人類嗜中性白血球以3 x 106 /ml懸浮在黏附緩衝液(含有1 mM CaCl2/MgCl2及10%FCS的PBS，pH 7.2)。將嗜中性白血球與40 µM及80 µM的化合物在37°C下預培育30分鐘。
在18孔載玻片上於4°C用人類血纖維蛋白原包覆18小時進行黏著鑑定(在無內毒素的PBS中20 μg/孔)；將20 μl細胞懸浮液加入每個孔，在37°C下以5 μl的1 nM 最終濃度的fMLP刺激1分鐘。洗滌後，將黏附細胞固定在PBS中1.5%的戊二醛中，藉由電腦輔助計算進行計數。藉由計算均值及標準差(SD)進行統計分析；藉由不成對的t-測試計算顯著性。所有統計分析皆使用GraphPad Prism 6(GraphPad軟體)進行。
在每種化合物下在其等之化學特徵下總結了每種化合物對中性白血球黏附的抑制作用，以[%]表示(在[BIODATA]段中)。實施例 3.3 ：抑制人類嗜中性白血球產生活性氧化物 (ROS) 的試管內測試
位於質膜及特定顆粒膜中的NADPH氧化酶產生超氧陰離子，其他ROS諸如過氧化氫、單態氧、次氯酸鹽及活性羥基會從中產生超氧陰離子。ROS被釋放到周圍的介質或膜封閉的亞細胞器。一種用於量測此等代謝物生成的快速且靈敏的方法是化學發光(CL)。異發光胺(Isoluminol)放大CL技術非常靈敏，被廣泛用於研究嗜中性白血球誘導的呼吸爆發(主要是ROS的細胞外產生)。
從得自健康供體的血沉棕黃層中分離出人類嗜中性白血球。將分離的嗜中性白血球(3 x 106 /ml)懸浮在含鈣及鎂的Hanks' Balanced Salt 溶液 (HBSS)中。在37°C下，將嗜中性白血球與不同濃度(0.1、0.3、1、3及10 µM)的化合物預培育30分鐘。黑色的96孔細胞培養板用人類血纖維蛋白原包覆(在PBS中0.25 mg/ml)，在4℃下培育過夜或在37℃下培育2小時。然後用無內毒素的PBS洗滌板。將嗜中性白血球與TNF-α(20 ng/ml)在37°C培育(促發)10分鐘。然後，將75 μl的細胞懸浮液及75 μl(異發光胺 + HRP溶液)加入到每個孔中。使用Multilabel Reader victor3(Perkin Elmer, USA)激活fMLP(1 µM)後記錄化學發光(每25秒記錄一次，進行250秒)。從所有讀數(CPS，每秒計數)減去背景值，背景值定義為在HBSS中稀釋的異發光胺的平均化學發光值。進行鑑定二次或三次。
從異發光胺放大的CL鑑定獲得的結果顯示，在fMLP +TNF-α刺激的PMN中，化合物以濃度依賴的方式強烈降低ROS含量。
在BIODATA段落中每種化合物下方以其化學特徵彙整以[%]及IC50 [µM]表示在0.3 µM 對PMN ROS抑制。實施例 3.4 ： 試管內人類嗜中性白血球及人類單核細胞發炎細胞介素的產生、方法
在無內毒素的條件下，從健康供體的血沉棕黃層中分離嗜中性白血球及單核細胞。簡言之，將血沉棕黃層在Ficoll-Paque PLUS梯度上分層，然後在室溫下以400 x g離心30分鐘。然後收集嗜中性白血球，進行葡聚醣沉澱，然後進行低張溶解以除去紅血球。在Percoll梯度離心後，從PBMC中分離單核細胞。將人類嗜中性白血球及單核細胞分別以5x106 /ml及2.5x106 /ml懸浮在補充10%低內毒素FBS(＜0.5 EU/ml；來自BioWhittaker-Lonza, Basel, Switzerland)的RPMI 1640培養基中，然後在37°C，5%CO2 氣氛、有或無不同濃度(20-40 µM)的化合物存在下接種於24孔組織培養板。藥物治療1小時後，單核細胞用0.1 μg/ml刺激，而嗜中性白血球用1 μg/ ml大腸桿菌0111：B4菌株(InvivoGen)的超純LPS刺激。經LPS刺激6小時後，收集嗜中性白血球及單核細胞，並以300 x g的轉速離心5分鐘。立即在-80°C冷凍無細胞的上清液。
藉由對人類特異性的市售ELISA套組：CXCL8、IL-6、TNF-α (Mabtech，Sweden)量測無細胞上清液的細胞介素濃度。此等ELISA的檢測限制為：CXCL8為4 pg/ml、IL-6為10 pg/ml、TNF-α為4 pg/ml。
藉由計算均值及標準差(SD)進行統計分析；藉由不成對的t-測試計算顯著性。所有統計分析皆使用GraphPad Prism 6(GraphPad軟體)進行。
每種化合物的細胞介素值以ng/ml表示，並在BIODATA段落中彙整每種化合物的化學特徵。實施例 3.5 ：用 VEGF-165 化合物誘導 VEGF- 受體磷酸化 對 初代人類臍靜脈內皮細胞 (HUVEC) 試管內抑制 的 方法
細胞培養：例行將初代人類臍靜脈內皮細胞(HUVECs)培養在0.1%明膠預包覆的燒瓶或培養皿中，直至第6繼代。使用Tecan 微盤分析儀(Genios)藉由CCK-8套組評估不同濃度(0、1.25、2.5、5、10及20 μM)的單獨化合物對細胞活力的作用。為了量測化合物對VEGF-誘導的細胞活力的功效，在沒有血清及生長因子的培養基(飢餓培養基)中用預混各種濃度化合物(0、1.25、2.5、5、10及20 μM)的VEGF(25 ng/ml)處理HUVEC(1×104 個細胞/孔)24小時48小時。在此濃度範圍內的化合物不會影響細胞活力。
用於VEGFR-2, p-Tyr1175的兔子一級抗體購自Cell Signaling Technology (Leiden, The Netherlands)。Phospho-VEGFR-2 (Tyr1175) Sandwich ELISA Kit 來自Cell Signaling Technology。
與用濃度分別為0、0.16、0.31、0.63、1.25、2.5、5、10及20 μM的化合物預培育HUVEC60分鐘，隨後為三個溫熱培養基洗滌步驟，然後用(25 ng/mL)刺激2分鐘。使用抗磷酸-VEGFR-2抗體進行西方墨點法分析(Western blot analysis)，並在膜剝離後將總VEGFR-2用作上樣對照(loading control)。
抑制VEGFR-2-磷酸化的結果以IC50(單位為microM [µM])表示，對上未使用抑制性化合物的經VEGF處理的HUVEC對照。
每種化合物的IC50值以[µM]表示，並在BIODATA段落中以其化學特徵以下的形式彙整在每種化合物下。實施例 3.6 ： LPS 誘導人類全血後化合物對試管內細胞介素釋放的抑制作用
此試管內方法的目的是評估脂多醣(LPS)誘導的發炎反應後，化合物對全血中一系列細胞介素釋放的功效。在LPS誘導之前，與用化合物培育全血1小時。使用基於多重FACS系列量測血液中的細胞介素水平。
對於每種化合物，列出以microM [µM]表示的測試化合物的IC50值及抑制細胞介素的值。
LPS誘導後，對溶解在DMSO或H2 O中的化合物進行LPS誘導對細胞介素釋放的影響，以使濃縮的原液達到10倍並溶解在培養基中。
測試系統：從單個供體抽取全血(放入包覆肝素鋰的試管中；BD Vacutainer；367886)，並用RPMI 1640(Thermo Fisher，61870036)以1：5稀釋。採樣30分鐘內，在LPS刺激之前(O111：B4 – Sigma L4391；10ng/ml最終濃度)，用化合物培育血液1小時。在標準細胞培養條件下(37°C，含5%CO2 )繼續刺激過夜(18小時)，然後對板離心，移出上清液並在-80°C冷凍，直至分析為止。
測試化合物的稀釋：用適當的溶劑(在DMSO或水中)製備每種測試化合物的10x濃縮溶液(相對於最終鑑定濃度)。然後將此等10x化合物溶液(10 μl)添加到90 μl預稀釋的全血(全血：RPMI1640，1：5)中，得到最終的鑑定濃度。
測試方法：用化合物(10 μl)預培育經稀釋的全血(80 μl)與，以得到100、30、10、3、1、0.3及0.1 x 10-6 M的最終鑑定濃度。在37°C及5%CO2 中培育血液1小時。將LPS在細胞培養基中稀釋至110 ng/ml的濃度；將10 μl加至全血中，使最終濃度為10 ng/ml。在37℃下培育板18小時。將板在4℃下以3,000 RPM離心5分鐘，除去上清液，並在-80℃下冷凍，直到進行FACS分析為止。
根據製造商的說明，使用定制的多重系統(ELISA Genie)量測細胞介素的釋放。製備的樣本在Attune NxT流式細胞儀(Thermo Fisher)上操作。
細胞介素釋放抑制的定量：將已知濃度標準作為細胞介素系列的一部分操作，為每個樣本中每種細胞介素的濃度定量。這是使用FCAP Array v3.0軟體進行。對於IC50的測定，將原始數據轉換為相對於溶劑對照的濃度百分比(設定為100%)。使用GraphPad Prism 8軟體測定IC50值，使用具有可變坡度的非線性回歸曲線以下限為0，以上限為100。
結果：對於所有化合物，評估LPS誘導全血中發炎反應後細胞介素釋放的劑量反應關係。測定每種化合物對一系列細胞介素GM-CSF，IFN-γ，IL-1β，IL-2，IL-4，IL-5，IL-6，IL-8，IL-9，IL-10，IL-12p40，IL-13，IL-17A，IL-17F，IL-18，IL-21，IL-22，IL-33，TGF-β，TNF-α，TNF-β)的IC50值。
在BIODATA段落以及表13，在每種化合物下以其化學特徵彙整每種化合物的以[µM]值表示的細胞介素IC50。實施例 4 ：化合物調配物 實施例 4.1 ：化合物 Ic-007a 的 口服調配物
開發5種調配物並進行適用性審視。調配物都是懸浮物及溶液，其詳細內容列於下表中。 表21：化合物Ic-007a的懸浮物及溶液之調配物詳細內容。
懸浮物 A 溶液 D 溶液 A 溶液 B 溶液 C
組分 量(%) 
API 1% w/v (10 mg/mL) 0.1% w/v (1 mg/mL) 1% w/v (10 mg/mL) 1% w/v (10 mg/mL) 1% w/v (10 mg/mL)
DMSO 5% v/v 5% v/v 5% v/v 5% v/v 5% v/v
PEG 400 10% v/v 10% v/v 10% v/v 10% v/v 10% v/v
Solutol HS15 10% w/v 10% w/v 10% w/v 10% w/v 10% w/v
氫氧化鈉 1M n/a n/a 至pH 6 至pH 8 至pH 9
水 至100% 至100% 至100% 至100% 至100%
製造：懸浮液A及溶液D：
100 mL的方法實例(適當縮放規模以適合最終體積)。藉由量測5 mL DMSO裝入乾淨的容器中來製備溶劑原液。稱出正確量的化合物Ic-007a，在搖動器、渦旋儀或超音波振盪器上混合下逐漸加入DMSO溶液中，在乾淨的乾燥容器中將Solutol於60°C的水浴中融化。當sollutol在室溫下固化時，在配製調配物期間，將熔融的Solutol置於60°C的水浴中。將10 g(10%w/v)的熔融Solutol加入溫熱的合適標記(最終體積為100 mL)容器中。在溫熱的100 mL容器中，將10 mL PEG 400加到Solutol中。將DMSO藥物原料溶液添加到Solutol及PEG400混合物中，立即混合內容物，然後添加35 mL去離子水，並在40°C的浴中進行間歇性渦旋混合以溶解大顆粒。將調配物冷卻至室溫，用去離子水補足至最終的100 mL體積。 溶液A、B & C的製造：
100 mL的方法實例(適當縮放規模以適合最終體積)。藉由量測5 mL DMSO裝入乾淨的容器中來製備溶劑原液。稱出1 g化合物Ic-007a，在搖動器、渦旋儀或超音波振盪器上混合下逐漸加入DMSO溶液中，在乾淨的乾燥容器中將Solutol於60°C的水浴中融化。當sollutol在室溫下固化時，在配製調配物期間，將熔融的Solutol置於60°C的水浴中。將10 g(10%w/v)的熔融Solutol加入溫熱的合適標記(最終體積為100 mL)容器中。在溫熱的100 mL容器中，將10 mL PEG 400加到Solutol中。將DMSO藥物原料溶液添加到Solutol及PEG400混合物的標記容器中，立即混合內容物，然後添加35 mL去離子水加入內容物並混合，並在40°C的浴中進行間歇性渦旋混合以溶解大顆粒。將調配物冷卻至室溫，並使用1M氫氧化鈉(NaOH)溶液將其pH值進一步調節至pH 6、7、8及9。以1 mL規模製備初始調配物，起始pH為4.3。加入3 µL的 1M NaOH，達到pH 6(溶液A)、加入22 µL達到pH 8 (溶液B)以及加入43 µL達到pH 9(溶液C)。此等調配物在製造後立即給藥。
發現10 mg/mL懸浮物調配物及1 mg/mL溶液調配物在環境條件下在兩週內是物理穩定的。實施例 4.2 ：化合物 Ia-001a-Tz 的口服調配物
將化合物Ia-001a-Tz製備成呈調配物的10 mg/mL口服溶液，其具有如下表所示載體組成。
載體作為溶劑(或稀釋劑)的載體或惰性介質，其中調配及/或投予藥物活性劑。 表22：化合物Ia-001aTz的口服調配物的調配物詳細內容
載體 組成
A 40% PEG400、10% Transcutol、10% Solutol HS15、40%類型1水
B 40% PEG400、10% Transcutol、10% Solutol HS15、40%水溶液(包含0.5% HPMC 606)
C 40% PEG400、10% Transcutol、0% Solutol HS15、40%水溶液(包含0.5% Kollidon VA 64)
D 40% PEG400、10% Transcutol、10% Cremophor RH40、40%類型1水
E 40% PEG400、10% Transcutol、10% Vitamin E TPGS、40%類型1水
F 40% PEG400、10% Transcutol、5% Solutol HS15、45%類型1水
G 40% PEG400、10% Transcutol、5% Solutol HS15、45%水溶液(包含1% Kollidon VA 64)
製造方法
為了製備10 mg/g的溶液，將10 mg化合物準確稱量到小瓶中，直接將1 ml的載體添加到API上並施予渦旋而得到溶液。製備載體
調配物A：藉由將4 g PEG400稱量到乾淨的20 mL玻璃容器來製備10 g載體。加入1 g Transcutol，藉由攪拌混合組分。加入1 g Solutol HS15，然後加入4 g類型1水。在室溫下混合物攪拌1小時，使所有組分溶解。
調配物B：藉由將4 g PEG400稱量到乾淨的20 mL玻璃容器來製備10 g載體。加入1 g Transcutol，藉由攪拌混合組分。加入1 g Solutol HS15。藉由將50 mg HPMC 606稱量到乾淨的玻璃小瓶中來製備0.5%HPMC 606水溶液。添加9.95 g類型1水。在室溫攪拌各組分1小時以確保充分混合。然後將4 g包含0.5%HPMC 606的水溶液添加到PEG400，Transcutol及Solutol HS15的溶液。在室溫下攪拌混合物1小時，使所有組分溶解。
調配物C：藉由將4 g PEG400稱量到乾淨的20 mL玻璃容器來製備10 g載體。加入1 g Transcutol，藉由攪拌混合組分。添加1 g Solutol HS15。將50 mg Kollidon VA64稱重入乾淨的玻璃小瓶來製備0.5%Kollidon VA64水溶液。添加9.95 g的類型1水。在室溫攪拌各組分1小時以確保充分混合。然後將4 g包含Kollidon VA64的水溶液添加到PEG400、Transcutol及Solutol HS15的溶液。在室溫下混合物攪拌1小時，使所有組分溶解。
調配物D：藉由將4 g PEG400稱量到乾淨的20 mL玻璃容器來製備10 g載體物。加入1 g Transcutol，藉由攪拌混合組分。添加1 g Cremophor RH40，然後添加4 g的類型1水。在室溫下攪拌混合物1小時，使所有組分溶解。
調配物E：藉由將4 g PEG400稱量到乾淨的20 mL玻璃容器來製備1 0g載體。加入1 g Transcutol，藉由攪拌混合組分。添加1 g維生素E TPGS，然後添加4 g類型1水。在室溫下攪拌混合物1小時，使所有組分溶解。
調配物F：藉由將4 g PEG400稱量到乾淨的20 mL玻璃容器來製備10 g載體。加入1 g Transcutol，藉由攪拌混合組分。加入0.5 g Solutol HS15，然後加入4.5 g類型1水。在室溫下混合物攪拌1小時，使所有組分溶解。
調配物G：藉由將4 g PEG400稱量到乾淨的20 mL玻璃容器來製備10 g載體。加入1 g Transcutol，藉由攪拌混合組分。加入0.5 g Solutol HS15。藉由將100 mg Kollidon VA64稱重到乾淨的玻璃小瓶，製備1% Kollidon VA64水溶液。添加9.9 g的類型1水。在室溫攪拌各組分1小時以確保充分混合。然後將4.5 g包含Kollidon VA64的水溶液添加到PEG400、Transcutol及Solutol HS15的溶液。在室溫下混合物攪拌1小時，使所有組分溶解。實施例 4.3 化合物 IIc-007a 、 IVc-059a 、 IIIc-061a 的口服調配物
使用詳列於下表的組分將化合物IIc-007a、IVc-059a、IIIc-061a製備為口服調配物。 表23：化合物IIc-007a、IVc-059a、IIIc-061a的口服調配物的口服調配物詳細內容
組分 量 (%w/w)
調配物 1 調配物 2
PEG 400 40.0 31.0
Transcutol HP 3.5 10.0
Meglumine 4.0 4.0
Cremophor RH 40 12.5 15.0
DMSO 5.0 5.0
15% SLS水溶液 35.0 35.0
以 50 mL 規模製備 15% 的 SLS 水溶液：
在50 mL容量瓶中準確稱量7.5 g SLS。將水加到50 mL體積，攪拌直至完全溶解為止。調配物載體的製備： `
調配物1：藉由將40 g PEG 400(40.0%)稱重到塑膠燒杯來製備100 g載體。3.5 g Transcutol(3.5%)、12.5 g Cremophor RH40(12.5%)、4.0 g葡甲胺(4.0%)、5 g DMSO(5.0%)及35 g 15%SLS水溶液(35.0%，最終SLS 5.25%)。在室溫下攪拌混合物1小時，使所有組分溶解。
調配物2：藉由將40 g PEG 400(40.0%)稱重入塑膠燒杯，製備100 g載體。10.0 g Transcutol(10.0%)、15.0 g Cremophor RH40(15.0%)、4.0 g葡甲胺(4.0%)、5 g DMSO(5.0%)及35 g 15%SLS水溶液(35.0%，最終SLS 5.25%)。在室溫下攪拌混合物1小時，使所有組分溶解。
在用渦旋及超音波處理10分鐘之前，直接將載體添加到每種化合物。如果需要，用1M氫氧化鈉或1M鹽酸調整調配物的pH以達到適合口服給藥的pH範圍。IIc-007a溶液的濃度最高為70 mg/mL，包括70 mg/mL。IIIc-061a溶液的濃度最高為40 mg/mL，包括40 mg/mL。IVc-059a溶液的濃度最高為150 mg/mL，包括150 mg/mL。實施例 4.4 ：靜脈內 (IV) 調配物
將化合物Ia-001a、Ia-001a-Tz、Ia-001a-Tz/004a、Ic-007a、Ib-010a、IVc-059a、IIIc-061a製備為靜脈內調配物。
下表24提供的調配物詳細內容用於不同臨床前活 體內模型中的IV投予。藉由用氫氧化鈉溶液調整pH直至獲得溶液來製造每種化合物的溶液。 表24：IV調配物組成物
組分 量 (%)
API 藥物 1 % w/v
DMSO 5 % v/v
PEG 400 10 % v/v
Solutol HS15 10 % w/v
氫氧化鈉 1M q.s.
鹽水 溶液 0.9% 至100 %
製造方法 ：
10 mL的方法實例(適當縮放規模以適合最終體積)。藉由量測0.5 mL DMSO裝入乾淨的容器中來製備溶劑原液。稱重100 mg每種化合物，在搖動器、渦旋儀或超音波振盪器上混合下逐漸加入DMSO溶液中，在乾淨的乾燥容器中將Solutol於60°C的水浴中融化。當sollutol在室溫下固化時，在配製調配物期間，將熔融的Solutol置於60°C的水浴中。將1 g(10%w/v)的熔融Solutol加入溫熱的合適標記(最終體積為10 mL)容器中。在溫熱的10 mL容器中，將1 mL PEG 400加到Solutol中。將DMSO藥物原料溶液添加到Solutol及PEG 400混合物的標記容器，立即混合到內容物中。加入0.9%的鹽水溶液*以達到目標體積的85%，然後在40°C的浴中混合內容物，並進行間歇渦流以溶解大顆粒。將調配物冷卻至室溫，用0.9%的鹽水溶液*補足至最終目標體積(10 mL)，並使用1M氫氧化鈉(NaOH)溶液將調配物製pH調整至pH 7.4。使用0.2 µm過濾器將調配物過濾到II類生物通風櫥內的無菌小瓶中。調配物製於動物給藥。
*對於某些化合物，用0.9%的鹽水溶液代替pH 7.4的PBS溶液。實施例 4.5 ：靜脈內 (IV) 腹膜內 (IP) 調配物
製備化合物Ic-007a、IIc-007a、IVc-059a、IIIc-061a作為用於靜脈內及腹膜內投予的調配物。調配物包含水及二乙胺，每種相應化合物的莫耳當量詳述於表25。此等調配物用於不同臨床前活體內模型的IV及IP投予。 製造方法：
1 mL的方法實例(適當縮放規模以適合最終體積)。準確稱取10 mg每種化合物放入乾淨的小瓶中。將相應量的二乙胺添加到小瓶中。然後加入水以補足至1 mL體積。以渦旋或超音波處理內容物以形成溶液。如果需要，可使用1M鹽酸改變溶液的pH值，使其達到適用於IV或IP劑量的範圍。 表 25：IV及IP調配物中化合物所需的二乙胺莫耳當量。
化合物 Ic-007a IIc-007a IIIc-061a IVc-059a
所需 二 乙胺莫耳當量 2.0 2.0 3.1 2.0
製造 1 mL IV 調配物 所需 二乙胺 44 µL 44 µL 62 µL 51.9 µL
實施例 4.6 ：眼用製劑
提供根據本發明的數種化合物以用於調配物發展成眼用形式。化合物、其最終濃度及形式列於下表26中。 表26：眼用調配物
化合物 濃度 (% w/v) 懸浮物 / 溶液
IVc-059a 5 mg/mL (0.5) 溶液
Ia-001a-Tz/004a 5 mg/mL (0.5) 溶液
Ia-001a-Tz 10 mg/mL (1.0) 溶液
IIIc-061a 10 mg/mL (1.0) 溶液
Ia-001a 10 mg/mL (1.0) 溶液
Ic-007a 5 mg/mL (0.5) 懸浮物
Ib-010a 10 mg/mL (1.0) 懸浮物
組成：調配物的組成詳見下表27。API的濃度及其所得形式各不相同。 表27：眼用調配物組成物。
組分 量 (%)
API 藥物 參見上表
Kolliphor EL 5 % w/v
聚乙烯吡咯烷酮 0.5 % w/v
HPMC 0.5 % w/v
Polysorbate 80 0.1 % v/v
pH 7.4 PBS 緩衝液 ( 用 NaOH 1M 調整 pH) 加至總體積
製造方法：
對於產生溶液的該等化合物，遵循以下製造方法：
將總計50 mg的Kolliphor EL稱重到乾淨的乾燥容器。稱出正確量的化合物，在磁力攪拌器上混合的同時逐漸添加到Kolliphor EL中。加熱到30°C有助於將藥物混合到Kolliphor調配物中。在單獨的容器中，製備0.5%w/v的HPMC、0.5%w/v的聚乙烯吡咯烷酮及0.1%的polysorbate 80於pH 7.4磷酸鹽緩衝(PBS)緩衝液中的水溶液。在混合的同時將600 µL的水溶液加入Kolliphor EL及藥物，並立即以渦旋處理。在混合的同時，使用1 M NaOH將調配物的pH調整至7.4。使用水溶液將體積調整至目標體積。使用0.2 µm過濾器將調配物過濾到II類生物通風櫥內的無菌小瓶中。調配物可用於計量。
對於產生溶液的該等化合物，遵循以下製造方法：將量為50 mg的Kolliphor EL稱重到乾淨的乾燥容器。稱出正確量的不同化合物，在磁力攪拌器上混合的同時逐漸添加到Kolliphor EL中。加熱到30°C有助於將藥物混合到Kolliphor調配物中。在單獨的容器中，製備0.5%w/v的HPMC、0.5%w/v的聚乙烯吡咯烷酮及0.1%的polysorbate 80於pH 7.4磷酸鹽緩衝(PBS)緩衝液中的水溶液。使用0.22 μm的過濾器過濾水溶液。在混合的同時將600 µL的水溶液加入Kolliphor 及藥物，並立即以渦旋處理。在連續混合調配物的情況下，使用過濾的1 M NaOH將調配物的pH調整至7.4。使用水溶液將體積調整至目標體積。在給藥前對調配物進行超音波處理，以使絮凝物破裂並分散。 化合物Ic-007a、IIc-007a的眼用調配物 表28：具有Ic-007a及IIc-007a的眼用調配物組成
1 2
組分 量(%)
Ic-007a 0.5 %w/v (5 mg/mL) -
IIc-007a - 0.5 %w/v (5 mg/mL)
Kolliphor EL 5 % w/v 5 % w/v
Povidone 0.5 % w/v 0.5 % w/v
HPMC 0.5 % w/v 0.5 % w/v
Polysorbate 80 0.1 % v/v 0.1 % v/v
pH 7.4 PBS 緩衝液 ( 用 NaOH 0.5M 調整 pH) 加至總體積 加至總體積
製造方法：
將總計50 mg的Kolliphor EL稱重到乾淨的乾燥容器。稱出正確量的化合物，在磁力攪拌器上混合的同時逐漸添加到Kolliphor EL中。加熱到30°C有助於將藥物混合到Kolliphor調配物中。在單獨的容器中，製備0.5%w/v的HPMC、0.5%w/v的聚乙烯吡咯烷酮及0.1%的polysorbate 80於pH 7.4磷酸鹽緩衝(PBS)緩衝液中的水溶液。在混合的同時將600 µL的水溶液加入Kolliphor EL及藥物，並立即以渦旋處理。在混合的同時，使用1 M NaOH將調配物的pH調整至7.4。使用水溶液將體積調整至目標體積。使用0.2 µm過濾器將調配物過濾到II類生物通風櫥內的無菌小瓶中。
化合物IIc-007a的溶液：將總計50 mg的Kolliphor EL稱重到乾淨的乾燥容器。稱出正確量的化合物(標的濃度5 mg/mL)，在磁力攪拌器上混合的同時逐漸添加到Kolliphor EL中。加熱到30°C有助於將藥物混合到Kolliphor調配物中。在單獨的容器中，製備0.5%w/v的HPMC、0.5%w/v的聚乙烯吡咯烷酮及0.1%的polysorbate 80於pH 7.4磷酸鹽緩衝(PBS)緩衝液中的水溶液。在混合的同時將600 µL的水溶液加入Kolliphor EL及藥物，並立即以渦旋處理。在混合的同時，使用0.5 M NaOH將調配物的pH調整至7.4。使用水溶液將體積調整至目標體積。使用0.2 µm過濾器將調配物過濾到II類生物通風櫥內的無菌小瓶中。調配物可用於計量。使用前，將化合物IIc-007a溶液以渦旋處理2分鐘，在10分鐘內使用。
*可以觀察出現凝膠/膠體結構，但在渦旋後會重新分散
化合物Ic-007a的懸浮物：將總計50 mg的Kolliphor EL稱重到乾淨的乾燥容器。稱出正確量的化合物(標的濃度 5 mg/mL)，在磁力攪拌器上混合的同時逐漸添加到Kolliphor EL中。加熱到30°C有助於將藥物混合到Kolliphor調配物中。在單獨的容器中，製備0.5%w/v的HPMC、0.5%w/v的聚乙烯吡咯烷酮及0.1%的polysorbate 80於pH 7.4磷酸鹽緩衝(PBS)緩衝液中的水溶液。
使用0.22 µm過濾器過濾水溶液。在混合的同時將600 µL的水溶液加入Kolliphor EL及藥物，並立即以渦旋處理。在混合的同時，使用0.5 M NaOH將調配物的pH調整至7.4。使用水溶液將體積調整至目標體積。
在使用前，使用以下方案對化合物Ic-007a的懸浮液進行超音波處理，以破碎絮凝物/聚集體：在超音波儀內部的小培養皿/燒杯中加水。將小瓶放入燒杯/培養皿中，在40°C下以超音波處理10分鐘。10分鐘後，將小瓶移出並以渦旋處理2分鐘，然後再次以超音波處理10分鐘。重複方法總計50分鐘。 IIc-007a的眼用調配物
載體組成及化合物濃度顯示於表29。 表29：調配物A、B及C的組成
調配物 組成 IIc-007a濃度
A 0.4%w/w TRIS 0.5%w/w HPMC 0.5%w/w PVP K30 0.1%w/w tween 80 於H2 O中 5 mg/g
B 0.4%w/w TRIS 5%w/w cremophor EL於H2 O中 5 mg/g
C 5%w/w cremophor EL1.2%w/w PVP K90 0.9%w/w TRIS 於H2 O中中 10 mg/g
D 二乙胺0.3% w/v： 於H2 O中 10 mg/g
為了製備10 mg/g溶液，將10 mg化合物準確稱重到小瓶中，直接將1 ml載體添加到API上並以渦旋處理以形成溶液
為了製備5 mg/g溶液，將5 mg化合物準確稱重到小瓶中，直接將1 ml載體添加到API上並以渦旋處理以形成溶液 載體製備
調配物A：藉由稱重0.25 g的HPMC(0.5% w/w)至100 mL的杜蘭玻璃瓶，來製備50 g的載體。然後將49.25 g的類型1水添加到瓶中，然後添加0.200 g TRIS(0.4% w/w)、50 mg Tween 80(0.1%w/w)及0.25 g PVP K30 (0.5% w/w)。在室溫下攪拌混合物1小時，使所有組分溶解。
調配物B：藉由稱重2.5 g cremophor EL(5% w/w)至100 mL的杜蘭玻璃瓶，來製備50 g的載體。然後將47.3 g 的類型1水添加到瓶中，然後添加200 mg TRIS(0.4% w/w)。
調配物C：藉由稱重2.5 g cremophor EL(5% w/w)至100 mL的杜蘭玻璃瓶，來製備50 g的載體。然後將46.45 g 的類型1水添加到瓶中，然後添加450 mg TRIS(0.9% w/w)及600 mg PVP K90(1.2% w/w)。在室溫下攪拌混合物1小時，使所有組分溶解。
調配物D：0.3% w/v的二乙胺：藉由在14 mL玻璃小瓶中添加9869 µL的類型1水來製備9.9 g的二乙胺載體。然後使用移液管對小瓶加入44.2 µL(31.3 mg)二乙胺。將溶液攪拌5分鐘以確保均勻性。 IVc-059a的眼用調配物
載體組成及化合物濃度顯示於表30。 表30：調配物A、B及C的組成
調配物 組成物 IVc-059a濃度
A 5%w/w cremophor EL 1.2%w/w PVP K90 0.9%w/w TRIS 於H2 O中    10 mg/g
B 二乙胺0.3% w/v：  於H2 O中 用二乙胺調整pH 10 mg/g
C 0.5% w/w HPMC、 0.5% w/w PVP K30、 0.1% w/w tween 80 於PBS中 用NaOH調整pH 10 mg/g
為了製備10 mg/g溶液，將10 mg化合物準確稱重到小瓶中，然後直接將1 ml的溶媒添加到API上並以渦旋處理以形成溶液。 載體製備
調配物A：藉由稱重2.5 g的cremophor EL(5% w/w)到100 mL的杜蘭玻璃瓶，來製備50 g的載體。然後將46.45 g的類型1水添加到瓶中，添加450 mg TRIS(0.9% w/w)及600 mg PVP K90(1.2% w/w)。在室溫下攪拌混合物1小時，使所有組分溶解。
調配物B：0.3% v/v的二乙胺：藉由在14 mL玻璃小瓶中添加9869 µL的類型1水來製備9.9 g的二乙胺載體。然後使用移液管對小瓶加入44.2 µL(31.3 mg)二乙胺。將溶液攪拌5分鐘以確保均勻性。
調配物C：藉由稱重49.45 g PBS(以下的製備方法)到50 mL 杜蘭玻璃瓶中來製備50 g載體。依次對玻璃瓶加入250 mg HPMC(0.5% w/w)、250 mg PVP K30(0.5% w/w)及50 µL(液體置換移液管)tween 80 (0.1% w/w)。在室溫下攪拌混合物1小時，使所有組分溶解。
PBS製備：精確稱重799.1 mg NaCl、21.6 mg KCl、24.9 mg KH2 PO4 、180.4 mg Na2 HPO4 ·2H2 O並溶於100 mL類型1水中。溶液的pH為7.6。 Ic-007a及IIc-007a的眼用調配物
將化合物調配為表31所示載體中的溶液。 表31：調配物A、B、C及D的組成
組分 量(% w/w)
   載體 A 載體 B 載體 C 載體 D
Cremophor EL 5.0 5.0 5.0 5.0
PEG 400 0 0 0.4 0
TRIS 0.9 0.9 0.9 0.9
Meglumine 0 0 0 1.0
Kollophor RH40 0 0.2 0.2 0.2
水 94.1 93.9 93.5 92.9
以50g規模製備載體
載體A：藉由將0.45 g的TRIS(0.9%w/w)及2.5 g的Cremphor EL(5.0%w/w)加入47.05 g的水(94.1%w/w)來製備50 g的載體。在室溫下攪拌混合物1小時，使所有組分溶解。
載體B：將0.45 g TRIS (0.9%w/w)、2.5 g Cremphor EL(5.0%w/w)及0.1 g Kolliphor RH40(0.2%w/w)加到46.95 g水(93.9%w/w)來製備50 g載體。在室溫下攪拌混合物1小時，使所有組分溶解。
載體C：將0.45 g TRIS (0.9%w/w)、2.5 g Cremphor EL(5.0%w/w)及0.1 g Kolliphor RH40(0.2%w/w)及0.2 g PEG400加到46.95 g水(93.5%w/w)來製備50 g載體。在室溫下攪拌混合物1小時，使所有組分溶解。
載體D：將0.45 g TRIS (0.9%w/w)、0.5 g meglume(1.0%w/w)、2.5克Cremphor EL (5.0%w/w)及0.1 g Kolliphor RH40(0.2%w/w)加入46.45 g水 (92.9%w/w)以製備50 g載體。在室溫下攪拌混合物1小時，使所有組分溶解。
直接將載體加入API以產生表32中所列濃度。以渦旋及超音波處理樣本，直到獲得溶液為止。 表32：使用載體A、B、C及D的調配物中化合物濃度
   API濃度 (mg/mL)
   載體 A 載體 B 載體 C 載體 D
Ic-007a 10 10 10 20
IIc-007a 10 10 10 20
為了製備10 mg/g的溶液，準確稱重10 mg化合物到小瓶中，然後直接將1 ml的載體加入API並以渦旋處理以形成溶液。
為了製備20 mg/g的溶液，準確稱重20 mg化合物到小瓶中，然後直接將1 ml的載體加入API並以渦旋處理以形成溶液。實施例 5 ：化合物的治療活性 實施例 5.1 ：急性胰臟炎的治療及 / 或預防
以急性胰臟炎小鼠模型評估根據本發明的化合物的治療功效。獲得組織樣本以進行胰臟炎參數的生命後分析(post in-life analysis)。在化合物投予後，也獲得血漿樣本以評估動物暴露水平。
動物：總計70隻8-10週大、體重約20-25 g的Balb/c小鼠用於研究(Charles River)。適應7天後，將其等分配到不同的組別。將小鼠飼養在IVC籠中(每籠最多5隻小鼠)，每隻小鼠以尾巴標記識別。使用前對籠子、被褥及水進行消毒。為動物提供玉米-玉米棒子濃縮墊料(Corn-o-cobs enrichment bedding)以提供環境濃縮和築巢材料。所有動物均可免費獲得標準認證的商業飲食及水。將動物飼養室保持如下：室溫在20-24o C、濕度在30-70%，並使用12小時的光照/黑暗的周期。儘管本研究中使用的動物具有免疫能力，但在無菌生物安全櫃中進行投藥溶液的製備及投藥/稱重。
測試物質及調配物：第一個實驗中，為化合物Ia-001a、Ia-001aTz、Ic-001aTz/004a、Ic-007a、Ib-010a、IIIc-061a、IVc-059a稱重並溶解在DMSO中。最終調配物在5% DMSO、10% Solutol、10% PEG400、75% 0.9%鹽水中，並用0.5M NaOH溶液將pH調整至7。
第一個實驗中，為化合物Ic-001aTz2、IIc-007a、IIIa-001aTz、IIIc-061a、IIIc-061a-E3、IVc-059a稱重並溶解在DMSO中。最終調配物在5% DMSO、10% Solutol、10% PEG400、75% 0.9%鹽水中，並用0.5M NaOH溶液將pH調整至7。對於口服(PO)投藥，IVc-059a是在水中調配。在給藥當天調配藥物溶液。
此研究的目的是以急性胰臟炎模型(14天)評估化合物功效，產生組織樣本以對胰臟炎參數進行生命後分析，並產生四個血漿樣本以評估從第一次及最後一次注射後1小時及24小時採集血液樣本所獲得的第一次及最後一次注射後的動物暴露水平。
研究設計：第一個研究日，將動物隨機分為治療組，以確保體重均等分佈。在進行藍皮素(caerulein)給藥之前5分鐘，用測試化合物對小鼠(陰性對照組除外)進行治療，然後在研究期間每天經由腹膜內途徑(IP)以2 μg/kg的劑量注射藍皮素。 表33：第一個實驗
組別 動物數目 製劑 劑量含量；途徑
1 3 陰性對照(非誘導) 載體(tbc)；IV
2 3 陰性對照(誘導) 載體(tbc)；IV
3 8 吡非尼酮 40 mg/kg；IV
4 8 Ia-001a 15 mg/kg；IV
5 8 Ia-001aTz 15 mg/kg；IV
6 8 Ic-001aTz/004a 15 mg/kg；IV
7 8 Ic-007a 15 mg/kg；IV
8 8 Ib-010a 150 mg/kg；PO
9 8 IIIc-061a 15 mg/kg；IV
10 8 IVc-059a 150 mg/kg； PO
表34：第二個實驗
組別 動物數目 化合物 劑量含量；途徑
1 3 陰性對照(非誘導) 載體(tbc)；IV
2 3 陰性對照(誘導) 載體(tbc)；IV
3 8 吡非尼酮 40 mg/kg；IV
4 8 Ic-001aTz2 15 mg/kg；IV
5 8 IIc-007a 15 mg/kg；IV
6 8 IIIa-001aTz 15 mg/kg；IV
7 8 IIIc-061a 15 mg/kg；IV
8 8 IIIc-061a-E3 150 mg/kg；PO
9 8 IVc-059a 15 mg/kg；IV
10 8 IVc-059a 150 mg/kg；PO
在進行藍皮素給藥之前5分鐘，用測試化合物進行治療。 表35：研究時程
時間(天) T0 T1 T2 T3 T4 T5 T6 T7 T8 T9 T10 T11 T12 T13 T14
化合物I.V. Dose Dose Dose Dose Dose Dose Dose Dose Dose Dose Dose Dose Dose Dose 犧牲
藍皮素I.P. 1st 2nd 3rd 4th 5th 6th 7th 8th 9th 10th 11th 12th 13th 14th   
PK採血 T0+1h T0+24h                                     T12+24h T13+1h   
器官分析                                           胰臟
連續觀察
體重：每天量測並記錄研究的所有小鼠的體重；該訊息用於計算每隻動物的精確劑量。
一般體徵和病況：每天觀察小鼠，註記任何不適或變化徵象至例如星毛皮(starred fur)、缺乏運動、呼吸困難的一般病況。
採樣及生命後分析：在以上所述時間將全血樣本(60 μl)從側尾靜脈採集到塗有K2-EDTA的試管中。製備血漿樣本並在-20°C冷凍保存。將血漿樣本發送至客戶生物分析提供者Eurofins (FR)，以對化合物進行定量。
最終採樣：終止前為動物稱重。最終研究動物經由吸入二氧化碳被撲殺。經由心臟穿刺獲取最終血樣並製備血漿。使用可商購的ELISA套組經由ELISA量測脂肪酶及澱粉酶的活性。儲存剩餘的血漿供將來的細胞介素分析使用。切除胰臟組織並稱重，將切片(50 μg)快速冷凍並為胰臟樣本中的化合物分析定量。處理切片(50 μg)而經由ELISA量測MPO活性、IL-33及TGF-B水平。其餘的用福馬林固定並包埋在石蠟中。進行H&E染色並使用許密特標準評分系統評估切片，檢查水腫、發炎浸潤、實質壞死、出血。進行馬森三色染色(Massons’ Trichrome staining)，並使用QuPath軟體對纖維化組織覆蓋的區域進行數字方式定量。使用IdeXX CHEM15及LYTE4片段將最終血清樣本用於評估血液化學(每個治療組4隻動物)。 IV治療後15日的急性胰臟炎結果
胰臟受損的組織病理學評估基於以下四個標準：水腫、發炎浸潤、實質壞死、出血並按以下所述評分。 表36：基於四個標準的分數等級
項目 分數等級
0 1 2 3
間質性水腫 無 小葉間的 涉及小葉 如腺泡細胞的隔離島
白血球浸潤 無 ＜ 20% 20% - 50% ＞ 50%
腺泡細胞壞死 無 ＜ 5% 5% - 20% ＞ 20%
出血 無 1-2點 3-5點 ＞ 5點
表37：動物組分數等級結果
計分摘要
間質性水腫 白血球浸潤 腺泡細胞壞死 出血
分數 1 2 3 4
陰性對照(非誘導) 0-0-0 0-0-0 0-0-0 0-0-0
陰性對照 (藍皮素誘導) 2-3-3 3-3-3 2-2-3 2-2-2
Ia-001a (藍皮素誘導) 1-1-1-1-1-2-2 3-3-3-3-3-3-3 0-1-1-1-1-1-1 1-1-1-1-1-1-2
Ia-001aTz (藍皮素誘導) 1-1-1-1-2-2-2-2 2-3-3-3-3-3-3-3 0-0-0-0-1-1-1-1 0-1-1-1-1-1-1-1
Ic-001aTz/004a (藍皮素誘導) 1-1-1-1-2-2-2-3 1-3-3-3-3-3-3-3 1-1-1-1-2-2-2-2 1-1-1-1-1-1-1-1
Ic-007a (藍皮素誘導) 1-1-1-1-1-1-1-1 3-3-3-3-3-3-3-3 1-1-1-1-1-1-1-1 1-1-1-1-1-1-1-1
Ib-010a (藍皮素誘導) 1-1-1-1-2-2-2-2 3-3-3-3-3-3-3-3 1-1-1-1-1-1-1-1 0-0-1-1-1-1-1-1
IIIc-061a (藍皮素誘導) 1-1-1-1-1-1-1-1 1-1-1-1-1-1-1-1 0-0-0-0-1-1-1-1 1-1-1-1-1-1-1-1
IVc-059a (藍皮素誘導) 1-1-1-1-1-1-1-1 1-1-1-1-1-1-1-1 0-0-1-1-1-1-2-2 1-1-1-1-1-1-1-1
吡非尼酮 (藍皮素誘導) 1-1-1-1-1-1-1-1 2-2-2-2-2-2-2-2-2 0-0-1-1-1-1-1-1 0-0-0-0-1-1-1-1
許密特分數
許密特(Schmidt)分數是根據下表所述四種組織病理學標準對化合物的功效進行評估。許密特分數增加的化合物順序(最高分數 = 10為藍皮素誘導+載體治療且最低分數 = 0為非誘導動物)。圖2中化合物的許密特分數圖為所有產物均顯示出比藍皮素對照動物更高的許密特分數。 表38：許密特分數及4種參數表
測試化合物 間質性水腫 白血球浸潤 腺泡細胞壞死 出血 許密特分數(H&E)   
非誘導 + 載體 0 0 0 0 0 完整的頂端邊界 具有豐富分泌顆粒的健康腺泡 沒有壞死徵象 沒有水腫徵象 沒有出血徵象
誘導 + IIIc-061a 1.0 1.0 0.5 1.0 3.5 觀察到輕度水腫 觀察到輕度出血 觀察到輕度腺泡細胞壞死 觀察到輕度白血球浸潤 觀察到正常胰島形態 與其他治療組不同，區域的整體病理相對正常，但觀察到輕度水腫
誘導 + IVc-059a 1.0 1.0 1.0 1.0 4.0 較少觀察到輕度水腫 較少觀察到輕度出血 觀察到輕度腺泡細胞壞死 觀察到輕度白血球浸潤 觀察到一些胰島增生 破壞嗜鹼性區域
誘導 + 吡非尼酮 1.0 2.0 0.8 0.4 4.1 觀察到輕度水腫 觀察到輕度出血 觀察到輕度腺泡細胞壞死 觀察到白血球浸潤 在區域內觀察到正常胰島形態
誘導 + Ib-001aTz 1.5 2.9 0.6 0.9 5.9 觀察到整個胰臟水腫 觀察到輕度出血 觀察到輕度腺泡細胞壞死 白血球浸潤 整個 觀察到(微量)異常胰島形態 破壞嗜鹼性區域
誘導 + Ic-007a 1.0 3.0 1.0 1.0 6.0 觀察到輕度水腫 觀察到輕度出血 觀察到輕度腺泡細胞壞死 觀察到白血球浸潤 破壞嗜鹼性區域
誘導 + Ib-010a 1.5 3.0 1.0 0.8 6.3 整個胰臟及腺泡細胞內觀察到水腫 輕度出血 觀察到 觀察到輕度腺泡細胞壞死 觀察到白血球浸潤 破壞嗜鹼性區域
誘導 + Ia-001a 1.3 3.0 0.9 1.1 6.3 觀察到整個胰臟水腫 觀察到出血 觀察到輕度腺泡細胞較少壞死 整個白血球浸潤 觀察到異常胰島形態 破壞嗜鹼性區域
誘導 + Ic-001aTz/004a 1.6 2.8 1.5 1.0 6.9 觀察到整個胰臟水腫 觀察到輕度出血 觀察到腺泡細胞壞死 整個白血球浸潤 破壞嗜鹼性區域
誘導 + 載體 2.7 3.0 2.3 2.0 10.0 觀察到整個胰臟水腫 觀察到出血,特別是在胰頭內 觀察到腺泡細胞壞死 整個白血球浸潤 破壞嗜鹼性區域
如下表所示，所有化合物Ia-001a、Ia-001aTz、Ic-001aTz/004a、Ic-007a、Ib-010a、IIIc-061a、IVc-059a相較於「誘導」組顯示顯著降低的胰臟組織水平IL33。Ic-007a、Ib-010a、IIIc-061a、IVc-059a的TGF-B水平顯著降低。對於所有化合物，特別對於化合物IIIc-061a、IVc-059a，Global許密特分數皆有所提高。
下表39及40顯示胰臟組織樣本中MPO的最終胰臟濃度、IL33組織濃度及TGF-B濃度。 表39：
測試化合物 平均最終BW (最初的%) 平均最終胰臟 重量(g) 胰臟MPO活性 胰臟IL33 水平 對誘導的p值 胰臟TGF-B 水平 對誘導的p值
載體 93.8 0.148 2.81 76 ± 19 --- 184 ± 107 ---
Ia-001a 90.3 0.083 3.76 330 ± 162 0.017 592 ± 358 0.984
Ia-001aTz 89.1 0.084 2.68 154 ± 49 0.000 507 ± 289 0.663
Ic-001aTz/004a 93.5 0.104 2.15 180 ± 54 0.000 369 ± 195 0.113
Ic-007a 91.2 0.109 1.65 147 ± 47 0.000 188 ± 77 0.000
Ib-010a 91 0.091 1.83 157 ± 70 0.000 219 ± 140 0.00035
IIIc-061a 91.4 0.086 2.13 177 ± 80 0.000 295 ± 146 0.015
IVc-059a 93.3 0.09 2.88 86 ± 23 0.000 231 ± 199 0.020
吡非尼酮 97.6 0.136 1.26 78 ± 23 0.000 289 ± 170 0.024
誘導 93.8 0.148 2.81 628 ± 57 0.000 592 ± 358 0.015
表40：
測試化合物 血清澱粉水解酶水平 血清脂酶水平 血清IL33水平 血清TGF-B level 調配物的鹽水/PBS 許密特分數(H&E)
載體 43.69 11.66 37.22 10.88 - 1.0
Ia-001a 34.07 6.72 39.52 8.69 鹽水 6.3
Ia-001aTz 35.35 8.57 37.02 8.69 鹽水 5.9
Ic-001aTz/004a 36.51 8.21 35.43 8.99 PBS 6.9
Ic-007a 34.86 9.28 34.93 6.17 PBS 6.0
Ib-010a 37.46 9.06 35.36 6.87 PBS 6.3
IIIc-061a 38.38 9.79 33.72 4.65 鹽水 3.5
IVc-059a 38.56 10.21 46.54 5.69 鹽水 4.0
吡非尼酮 37.71 7.65 39.16 5.5 - 4.1
誘導 43.69 11.66 37.22 10.88    10.0
第二實驗中，以相同模型使用吡非尼酮100 mg/kg作為陽性對照，以15 mg/k的化合物Ic-001a-TZ(2)、IIc-007a、Ia-015a、IIIc-061a、IVc-059a進行評估。 表41：結果
組(途徑及劑量mg/kg) 澱粉酶 mU/mL 脂酶 mU/mL MPO U/mg IL-33 ng/mL TGF-B ng/mL 許密特分數 三色染色 (纖維化%區域)
非誘導 25.887 ± 0.63 3.216 ± 0.212 1.37 ± 0.39 88 ± 37 355 ± 67 11.3 ± 0.6 0.33 ± 0.168
誘導 60.858 ± 7.088 9.027 ± 1.33 2.66 ± 0.28 719 ± 97 1292 ± 263 5.9 ± 1.3 5.313 ± 2.089
吡非尼酮 (100 mg/kg) 45.171 ± 6.008 4.541 ± 1.457 1.68 ± 0.44 226 ± 151 578 ± 230 8 ± 1 1.277 ± 0.888
Ic-001a-Tz(2) (IV, 15 mg/kg) 50.912 ± 5.074 8.305 ± 3.036 2.63 ± 0.63 493 ± 126 696 ± 448 3.9 ± 0.8 1.366 ± 0.562
IIc-007a (IV, 15 mg/kg) 45.325 ± 6.579 6.481 ± 2.908 2.74 ± 0.76 340 ± 211 500 ± 195 8.3 ± 1.6 1.821 ± 1.12
Ia-015a (IV, 15 mg/kg) 51.669 ± 12.029 5.31 ± 2.219 2.68 ± 0.6 398 ± 148 547 ± 373 4.6 ± 0.8 1.704 ± 1.621
IIc-061a (IV, 15 mg/kg) 40.889 ± 6.556 5.038 ± 0.874 1.72 ± 0.21 240 ± 119 514 ± 227 10.9 ± 1.6 0.714 ± 0.452
IVc-059a (IV, 15 mg/kg) 41.149 ± 5.42 4.324 ± 1.121 1.813 ± 0.405 215 ± 84 403 ± 84 10.63 ± 2.33 1.048 ± 0.449
澱粉酶：除Ia-015a外，所有測試化合物的澱粉酶活性水平顯著低於經誘導載體處理的對照組，但未達到未誘導動物的水平。
脂酶：用載體誘導及治療的動物血清中的脂酶活性高於未誘導的動物。用陽性對照吡非尼酮、Ia-015a、IIIc-061a及IVc 059a進行處理，其脂酶活性明顯低於載體處理的動物。
骨髓過氧化 酶(MPO) ：用載體誘導及處理的動物的胰臟組織中的MPO 活性顯著高於非誘導動物，表明為胰臟炎。用陽性對照吡非尼酮、 IIIc-061a及IVc-059a治療導致MPO 活性水平顯著低於誘導載體處理的對照。
IL-33及TGF-B：除IIIc-061a及IVc-059a劑量的PO以外，所有治療導致胰臟 IL-33水平低於誘導載體治療的對照。與血清TGF-B水平一樣， 導致TGF-B水平顯著低於誘導載體治療的對照。
基於間質性水腫、白血球浸潤、 腺泡細胞壞死及出血的臨床使用的許密特評分標準用於評估H&E染色的胰臟組織切片。所有測試化合物導致許密特分數顯著低於誘導載體治療的對照，其中IIIc-061a (IV)及IVc-059a (IV)的分數低於陽性對照吡非尼酮。
纖維化染色 ：使用市售染色套組 (Abcam；ab150686, Trichrome染色)為胰臟組織切片進行膠原蛋白染色。使用QuPath數位成像軟體為膠原蛋白(藍色)染色所覆蓋的面積百分比定量。所有測試的化合物導致三色染色面積顯著低於誘導載體處理的對照。實施例 5.2 ：胰臟癌 及 腎癌 的 治療及 / 或預防：
這項研究的目的是臨床前評估根據本發明的化合物在雌性C57BL/6小鼠中治療皮下鼠胰臟癌同基因模型(Pan02)及雌性BALB/c小鼠中腎癌同基因模型(Renca)的活體內治療功效研究。。
動物：C57BL/6小鼠雌性(用於Pan02模型)；BALB/c小鼠雌性(用於Renca模型)，6-8週，＞ 17 g，每籠最多5隻小鼠。
Pan02模型治療及組：化合物Ia-001a-Tz、Ic-007a、Ib-010a、IVc-059a、IIc-007a以每天15 mg/kg的劑量經由IV推注注射，5天/週，連續2週。
Renca模型治療及組：化合物Ia-001a-Tz、Ic-007a、Ib-010a、IVc-059a、IIc-007a以每天15 mg/kg的劑量經由IV推注注射，7天/週，連續3週。
細胞培養：將Renca腫瘤細胞在補充10%胎牛血清的DMEM培養基中，在空氣中5%CO2的氣氛下，於37ºC試管內保存。在接種腫瘤之前，收集處於指數生長階段的細胞並藉由細胞計數器進行定量。
細胞培養：將Pan02腫瘤細胞在補充10%胎牛血清的RPMI 1640 培養基中，在空氣中5%CO2的氣氛下，於37ºC試管內保存。在接種腫瘤之前，收集處於指數生長階段的細胞並藉由細胞計數器進行定量。
Renca模型的腫瘤接種：每隻小鼠在右後脅皮下皮下接種0.1 mL PBS中的Renca腫瘤細胞(1 x 106 )，用於腫瘤發育。
Pan02模型的腫瘤接種：每隻小鼠在右前脅皮下皮下接種0.1 mL PBS中的Pan02腫瘤細胞(3 x 106 )，用於腫瘤發育。
隨機化：當平均腫瘤大小達到約100(80-110)mm3 時開始隨機分組。對於這兩種模型，都將48隻小鼠納入研究。將所有動物隨機分配至6個研究組。使用多任務方法(StudyDirectorTM軟體，3.1.399.19版本)，基於「匹配分配」方法進行隨機化。隨機化日期表示為第0天。
觀察及數據收集：接種腫瘤細胞後，每天檢查動物的發病率及死亡率。在例行監測過程中，檢查動物的腫瘤生長和治療對行為的影響，例如活動性、食物及水的消耗、體重增減(隨機化後每週量測兩次體重)、眼/毛髮暗淡以及任何其他行為。其他異常。詳細記錄每隻動物的死亡率和觀察到的臨床徵象。
在使用卡尺以二維隨機化後，每週量測腫瘤體積兩次，並使用以下公式以mm3 表示體積：「 V = (L x W x W)/2」，其中V是腫瘤體積，L是腫瘤長度(最長的腫瘤尺寸)，W是腫瘤寬度(垂直於L的最長腫瘤尺寸)。研究結束時量測腫瘤重量。在層流櫃中進行劑量以及腫瘤和體重的量測。
研究終點：腫瘤生長抑制(TGI)：TGI%作為抗腫瘤活性的指標，表示為：TGI(%)= 100 *(1-T/C)T及C分別為指定一天的平均腫瘤體積(或重量)。
使用以下方法中之一對各組之間的平均腫瘤體積差異進行統計分析：
儘管各個終止日期不同，使用每組最後一次給藥/觀察日收集的數據。
使用當載體組的平均腫瘤體積達到人道終點時收集的數據，以便可以為參與研究的所有/大多數小鼠導出TGI。
使用任何治療組或對照組終止之日收集的數據，即使其餘組按計劃進行治療也是如此。
AUC的差異(ΔAUC)=使用線性混合功效回歸模型進行的統計分析。
研究終止：進行3週功效研究。
統計分析：為了在預定的一天比較不同組的腫瘤體積，首先使用Bartlett測試檢驗所有組方差同質性的假設。當Bartlett測試的p值≥0.05時，使用單因子方差分析(One-way ANOVA)檢驗所有組的均值總體均等性(overall equality of means)。如果單因子方差分析的p值＜0.05，則藉由運作Tukey的HSD(誠實顯著差異)測試進行所有成對比較的事後測試，並進行Dunnett測試以比較每個治療組及載體組。當Bartlett測試的p值＜0.05時，使用Kruskal-Wallis測試來檢驗所有組中位數的總體均等性(overall equality of medians)。如果Kruskal-Wallis檢驗的p值＜0.05，則藉由運作Conover非參數測試對所有成對比較或將每個治療組與載體組進行比較以進行事後檢驗，皆採用單步p值調整。所有統計分析皆在R-a語言及環境進行，用於統計計算及圖形(3.3.1版本)。除非另有說明，否則所有測試皆為雙面測試，p值＜0.05被認為具有統計學意義顯著性。 結果 表42：第13天收集到數據可得出測試物件的抗腫瘤活性
組 治療 腫瘤體積 ± SEM (mm3 ) TGI (%)
對照組 載體, 5 µL/g, I.V., QD*5 (2週)     187.91 ± 11.19(8) -
化合物 IVc-059a IVc-059a, 15 mg/kg, 5 µL/g, I.V., QD*5(2週) 148.49 ± 7.05(8) 20.98%
表43：使用第13天收集的數據對腫瘤體積進行統計分析
測試 p值 顯著性水平
方差及正態性同質性測試
Bartlett測試 2.76E-05 ***
各組間總體均等性測試
Kruskal-Wallis測試 0.00965 **
個別組均等性測試(Conover非參數多對一比較測試)
對組對化合物IVc-059a 0.0226 *
結果摘要
在這項研究中，評估測試化合物IVc-059a在治療雌性C57BL/6小鼠皮下鼠胰臟癌同基因模型(Pan02)的活體內治療效果。化合物IVc-059a以15mg/kg I.V.給藥顯著抑制腫瘤生長，TGI值為20.98%(P ＜0.05)。 表44：Pan02模型對腫瘤體積的平均抑制%
天 0  3  6  9  13 
IVc-059a -0.11% 19.86% 18.64% 18.49% 20.98%
平均抑制% =(平均(對照NaCl)-平均(經Cpd處理))/平均(對照NaCl)* 100% 表45：Renca模型對腫瘤體積的平均抑制%
天 0  3  6  9  13  16
IVc-059a 0.05% -0.90% 5.02% 14.83% 23.07% 19.42%
實施例 5.3 ：糖尿病性視網膜病變 (DR) 的治療及 / 或預防
動物模型：使用db/db小鼠模型，並與作為非糖尿病對照的db/+小鼠進行比較。db/db小鼠的瘦素受體基因帶有突變，是肥胖引起的2型糖尿病的模型。Bogdanov等人在PLoS One, 2014, 9, e97302報告db/db小鼠複製人類糖尿病眼睛發生的神經退化過程的特徵。此外，此模型發展成由糖尿病誘導的早期微血管異常(血管滲漏) (Hernández等人 Diabetes 2016, 65, 172-187；Hernandez等人Diabetologia 2017, 60, 2285-2298)。因此，此模型被認為是測試本發明化合物治療糖尿病性視網膜病變(DR)早期療效的合適模型。
以db/db小鼠模型測試含有Ia-007a的眼藥水對糖尿病誘導的血管滲漏的影響。8週齡的db/db(BKS.Cg-Dock7m +/+ Leprdb/J)小鼠及非糖尿病(db/+)小鼠購自Charles River Labo大鼠ories (Calco, Italy)。
動物可以自由獲取自由食物(ENVIGO Global Diet Complete Feed for Rodents, Mucedola, Milan, Italy)及過濾水。將小鼠保持在溫度(20℃)及濕度(60%)的嚴格環境條件下。而且，其等具有12小時/12小時光照/黑暗的周期。
干擾研究：當db/db小鼠10週齡時，使用注射器將Ia-007a眼藥水或載體眼藥水直接隨機投予到每隻眼睛的上角膜表面。每天兩次對每隻眼睛投予一滴(5 µL)Ia-007a(5 mg/mL)或對每隻眼睛給藥載體(5µL的0.9%氯化鈉)，持續14天。第15天，屍體剖檢前約一小時，對動物眼睛滴入Ia-007a或載體。所有實驗皆按照歐洲共同體的宗旨(86/609/CEE)進行。
藉由使用伊文思藍白蛋白方法(Evans Blue白蛋白 method)評估白蛋白從血管外滲至視網膜，離體檢視視網膜血管分布的滲透性。為此目的，為每組四隻動物腹膜內注射伊文思藍溶液(E2129 SIGMA, Sant Louis, Missouri, USA) (5 mg/mL溶於PBS，pH 7.4)。注射後，動物變成藍色，證實染料的吸收及分佈。2小時後，藉由頸椎脫位術使小鼠安樂死，並摘除眼睛。隔離每隻動物的視網膜，稱重並迅速避光。獲得平裝的載玻片，並用一滴封固劑rolong Gold防褪色試劑(Invitrogen, Thermo Fisher Scientific, Oregon, USA)蓋上蓋片。使用共聚焦雷射掃描顯微鏡(FV1000； Olympus, Hamburg, Germany)，使用561 nm雷射線以60倍的分辨率從所有視網膜的不同隨機場獲取數位影像，並在相同的光束強度以大小為1024像素×1024像素記錄每個影像。為了定量分析結合白蛋白的伊文思藍，計算每個視野0.44 mm2 的外滲次數。此項研究是由不知道小鼠接受治療的研究者進行的。 結果
用Ia-007a眼藥水治療的db/db小鼠在治療結束時的血糖濃度及體重與用載體治療的db/db小鼠相似。在糖尿病小鼠視網膜發現伊文思藍的血管外位置(圖1，白色箭頭)。用Ia-007a進行局部治療能夠顯著減少每個視野的外滲次數，從而預防由於血視網膜屏障的破壞而引起的血管滲漏。實施例 5.4 ：腹膜炎 的 治療及 / 或預防
如Cook AD等人(J Immunol. 2003；171(9):4816-4823)及Tsai JM等人(血液 Adv. 2019；3(18):2713–2721. doi:10.1182/血液advances.2018024026) 所述，使用巰基乙酸鹽誘導腹膜炎小鼠模型評估本發明化合物的治療功效。
在誘導腹膜炎之前1小時，用50 mg/kg的劑量以腹膜內(i.p.)對C57BL/6J小鼠注射1 mL化合物。然後用1 ml 4%(重量/體積)無菌巰基乙酸鹽肉湯或PBS誘導腹膜炎作為對照。3小時後，藉由腹膜內注射含有5 mg/ml氯胺酮及1 mg/ml甲苯噻
Figure 110108763-A0304-12-02
的PBS溶液將小鼠麻醉，並用5 ml含EDTA 2 mM的無Ca2+ /Mg2+ 的冰冷無菌HBSS 1X洗滌腹膜腔。在4°C下以1200 rpm將腹腔內浸潤細胞(PEC)離心5分鐘，然後裂解紅血球。洗滌PEC，再懸浮於PBS 10%FBS中，與抗-CD16/CD32及mIgG FcR阻斷劑一起培育，然後用螢光共軛抗體染色以表徵遷移的白血球(抗-CD45、抗-CD11b、抗-Ly6G、抗-CD8a、抗-CD4、抗-CD3)。藉由7-AAD排除法量測細胞活力。使用MACSQuant Analyzer(Miltenyi Biotec)藉由流動式細胞測量術採集標本，並使用FlowJo軟體進行分析。
動物：每種化合物用於每組四隻C57BL/6J小鼠，對四隻經載體治療的小鼠。
用cpds治療：腹膜內注射50 mg/kg的化合物： -     Ic-007a：注射量： DMSO中的68,5 µl化合物Ic-007a (1,375 mg)+ 431,5 µl PBS(500 µl總體積，5,87 mM)，小鼠約28克。 -     IIc-007a：注射量：DMSO中的67,25 µl化合物(1,345 mg) + 431,5 µl PBS (500 µl總體積，5,74 mM)，小鼠約27 g。 -     IIIc-061a：注射量：DMSO中58,75 µl 化合物(1,175 mg) + 441,25 µl PBS (500 µl 總體積，4,56 mM)，小鼠約23.5 g。 -     IVc-059a： 注射量：DMSO中52,25 µl化合物(1,045 mg) + 447,75µl PBS (500 µl總體積，5,25 mM)，小鼠約20.9 g。
在巰基乙酸鹽誘導腹膜炎前60分鐘，用產物Ic-007a、IIc-007a、IIIc-061a、IVc-059a進行治療。注射巰基乙酸鹽後1小時進行讀出。
讀出方法：使用抗i-CD45、抗i-CD11b、抗i-Ly6G、抗i-CD8a、抗i-CD4、抗i-CD3表徵遷移的白血球的流動式細胞測量術。
結果及統計分析：使用FlowJo軟體分析結果。數據以平均值±SEM顯示。統計分析使用顯著性水平為0.05的雙尾史都登氏t測試(Two-tailed Student’s t test)。 結果 表46：化合物Ic-007a數據的實例
細胞計數 經載體治療的小鼠 經C76/24治療的小鼠 減少%
白血球 (CD45+ 細胞) 60.8 x 104 (± 10.8 x 104 ) 31.3 x 104 (± 6.66 x 104 ) 48 %
PMNs (CD11b-Ly6G 雙重 + 細胞) 10.4 x 104 (± 7.75 x 104 ) 2.03 x 104 (± 0.36 x 104 ) 80 %
CD4+淋巴細胞 1.58 x 104 (± 0.54 x 104 ) 1.03 x 104 (± 0.15 x 104 ) 35 %
CD8+淋巴細胞 1.86 x 104 (± 0.59 x 104 ) 0.54 x 104 (± 0.15 x 104 ) 71 %
表 47：4種化合物結果的摘要
讀出 C20治療的小鼠比載體治療的小鼠減少%
細胞計數 Ic-007a IIc-007a IIIc-061a IVc-059a
白血球(CD45+ 細胞) 48.0% 11.8% -2.4% 4.0%
PMNs(CD11b-Ly6G 雙重+細胞) 80.0% 27.3% -8.3% -13.0%
CD4+淋巴細胞 35.0% 40.0% 42.9% 6.0%
CD8+淋巴細胞 71.0% 20.0% 33.3% 23.0%
化合物Ic-007a具有最強的抗發炎作用，並減少白血球的募集(48%)，對PMN(80%)、CD8 +淋巴細胞(71%)及CD4 +淋巴細胞(35%)的作用非常強。實施例 5.5 ：糖尿病心肌病的治療及 / 或預防
使用由Li C等人描述的糖尿病心肌病小鼠模型來測試本發明化合物的治療功效(Cardiovasc Diabetol. 2019；18(1):15. Published 2019 Feb 2. doi:10.1186/s12933-019-0816-2)。
動物程序及藥物治療：將30隻8周大的KK-Ay小鼠(遺傳2型糖尿病模型)及C57BL/6J小鼠飼養在籠子(每籠4–6隻)，可自由使用飲料/飼料盒。將小鼠飼養在保持24°C的房間中，以12小時/12小時光照/黑暗為周期。
給2型糖尿病模型小鼠餵食高脂飲食。每天量測血糖。連續2週血糖濃度大於15 mM(200 mg/dL)的小鼠用於以下實驗。隨後，將動物隨機分組(每組15隻)並飼養8週。此等組包括對照組：(1)未經治療的健康C57BL/6J小鼠；(2)未經治療的2型糖尿病KK-Ay小鼠；及(3)用本發明化合物治療的2型糖尿病KK-Ay小鼠。
心臟超音波之影像評估：心臟超音波之影像測量是在實驗干擾之前及研究期末進行。使用配備17.5 MHz線性陣列換能器系統(Vevo 2100™ High Resolution Imaging System； Visual Sonics)的M型心臟超音波之影像圖。評估心率(HR)以及以下結構變量：舒張期的左心室內部尺寸(LVIDD)、收縮期的左心室內部尺寸(LVIDS)、收縮期的心室間隔厚度(IVSs)及舒張期的心室間隔厚度(IVSd)以及LV 收縮期(LVPWs)及舒張期(LVPWd)的後壁厚度。使用公式[(LVIDd+LVPWd+IVSd)3 - (LVIDd)3 ×1.04×0.8+0.6]計算LV質量。LV功能由以下參數評估，包括縮短分率(FS)、射出分率(EF)和E/A比。所有測量心皆由對實驗組不知情的一名研究人員進行。
心肌羥脯胺酸濃度：量測左心室的心肌羥脯胺酸濃度，以估計心肌膠原蛋白含量。根據製造商的規程，藉由分光光度計使用商業套組(BioVision, Mountain View, CA, USA)進行量測。
血清脂質、葡萄糖、胰島素及HbA1c水平的檢測：在研究結束時，藉由吸入空氣中3%異戊烷來麻醉小鼠。將空腹血液標本藉由每隻動物的舌下靜脈收集到含有肝素鋰作為抗凝劑的商試品管中，並以3000 rpm/min的速度離心6分鐘。將血漿保存在一個採血管(plain tube)，並保存在-20°C的溫度下直至進行分析。總膽固醇(TC)、三酸甘油酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)及高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)血漿濃度藉由分光光度法測定。使用血糖儀(ACCU-CHEK, Roche, USA)量測血糖水平。過夜禁食後，分別使用小鼠胰島素及胰島素原酶聯免疫吸附測定(ELISA)套組(Nanjing Jiancheng Biotech, China)測定空腹胰島素及胰島素原水平。還藉由色譜-分光光度離子交換套組(Biosystems, Spain)保留用於測量HbA1c的血液。
評估心臟組織的氧化應力：使動物安樂死，取出心臟，在研究結束時用克雷布斯-林格溶液(Krebs–Ringer solution) (115 mM NaCl, 5 mM KCl, 1.2 mM KH2 PO4 , 25 mM NaHCO3 , 1.2 mM MgSO4 , 1.25 mM CaCl2 and 11 mM葡萄糖)逆行沖洗。保持灌注溶液的溫度在37°C。然後為心臟稱重，將心臟組織在冰上於pH 7.4的含有1 mM EDTA的冷磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)中均質化。將均質物在冷鹽水中以7000 rpm/min的速度離心10分鐘。以牛血清白蛋白套組為標準測定上清液的蛋白質濃度。上清液用於分析脂質氫過氧化物水平及麩胱甘肽過氧化物酶酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)水平。根據製造商的規程，使用分光光度計以商業套件(Solarbio, China)進行量測。脂質氫過氧化物水平以nmol/mg蛋白質表示。GSH-Px、SOD及MDA水平分別以μmol/mg蛋白質、nmol/mg蛋白質及mmol/mg蛋白質表示。藉由西方墨點法(Western blotting)測定NOX4的表達水平。使用小鼠單株抗Nox4(1：1000，Abcam)及辣根過氧化物酶偶聯的第二抗體(CWBIO)。β-肌動蛋白(1：1000，Abcam)用作參考。
組織學及免疫組織化學分析：將心臟組織在0.1M磷酸鹽緩衝液中的4%多聚甲醛中固定48小時，脫水並包埋在石蠟中，切成4 μm的厚度，並安置在載玻片上。馬森三色染色用於評估心肌纖維化的程度。
為了回收抗原，在100°C下將脫石蠟的玻片在10 mM檸檬酸鈉(pH 6.0)溶液中置放10分鐘。然後將切片在3%過氧化氫中培育以阻斷內源性過氧化物酶活性，並與一級抗體(針對TGF-β1、膠原蛋白I及膠原蛋白III的小鼠單株抗體；Abcam)培育1.5小時，然後在室溫下與相應的二級抗體培育2.5小時。隨後，將切片在PBS中洗滌3次，並在0.02%二胺基聯苯胺溶液中培育2-8分鐘。用蘇木精對比染色後，短暫洗滌載玻片，用樹脂烯(resinene)固定，在光學顯微鏡下觀察。
藉由西方墨點法分析Nrf2/ARE及TGF-β/SMAD途徑：吾人先前研究已描述西方墨點法方案。簡言之，將心肌組織在冰冷的RIPA緩衝液(150 mM氯化鈉、0.1%十二烷基硫酸鈉(SDS)、0.5%脫氧膽酸鈉、1.0%NP-40、PMSF 1 mM及50 mM Tris，pH8.0)中裂解，用於萃取總蛋白。藉由BCA蛋白質鑑定套組(Medchem Express, USA)為總蛋白質濃度定量。藉由12% SDS-聚丙烯醯胺凝膠電泳(PAGE)分離等量的蛋白質。然後，將蛋白質從凝膠轉移到聚偏二氟乙烯膜上。用5%脫脂奶封閉後，將膜在一級抗體(Nrf2、HO-1、TGF-β1、p-Smad2、Smad2、p-Smad3、Smad3、Smad7、α-SMA 1：1000, Abcam)中培育過夜。用特異性辣根過氧化物酶偶聯的二級抗體(CWBIO)檢測條帶帶。β-肌動蛋白(1：1000，Abcam)用作總細胞蛋白質的參考。實施例 5.6 ： 糖尿病 及 糖尿病傷口癒合 的 治療及 / 或預防
使用鏈脲佐菌素(streptozotocin)(STZ-誘導的糖尿病)的糖尿病小鼠模型用於評估本發明化合物對糖尿病傷口癒合的功效，並產生組織樣本以進行皮膚組織的生命後分析。
動物：共植入104隻5-7週大、重約25-30 g的雌性CD-1小鼠用於研究。此等小鼠是從Charles River購買，送達後馴化7天。
動物飼養：將小鼠飼養在IVC籠中(每籠最多5隻小鼠)，每隻小鼠以尾巴標記識別。使用前對籠子、被褥及水進行消毒。為動物提供玉米-玉米棒子濃縮墊料，以提供環境濃縮及築巢材料。每個籠子都清楚地標記一張卡片，標明動物的數量、性別、品系、DOB、研究編號以及開始日期及治療。每週更換一次籠子，必要時更換食物及水。
將動物飼養室保持如下：室溫在20-24o C、濕度在30-70%，並使用12小時的光照/黑暗的周期。
無菌技術及投藥：儘管本研究中使用的動物具有免疫能力，但在無菌生物安全櫃中進行投藥溶液的製備及動物的投藥/稱重。靜脈內IV給藥：將化合物在5% DMSO：10% Solutol：10% PEG400：75% PBS 中調配，用0.5M NaOH溶液將pH調節至7。PO投藥：調配物在水中。
在投藥當天調配藥物溶液，投藥結束時剩餘的任何藥物均儲存在-20°C下。
研究設計：連續5天每天為小鼠(陰性對照組除外)注射STZ(55 mg/kg；IP)。注射前讓小鼠餓6小時。誘導完成後一週，監測葡萄糖水平，並將低於15 mml/L(280 mg/gL)水平的小鼠從研究中刪除，因為其等並未發展成理想糖尿病嚴重的程度。麻醉動物，並使用無菌活檢打孔器打出6 mm厚的傷口。傷口成像(第0天)。每2天對動物進行治療並成像直到第14天(治癒對照的非糖尿病小鼠傷口)。以數字方式評估傷口影像的傷口面積，並以閉合百分比與時間繪圖。 表48：
組 動物數目 測試化合物 劑量含量；途徑
1 3 (3) 陰性對照(非誘導) 載體；IV
2 3 (3) 陰性對照(誘導) 載體；IV
3 8 (3) 吡非尼酮 250mg/kg；PO
4 8 (3) Ia-001a 15mg/kg；IV
5 8 (3) Ia-001aTZ 15mg/kg；IV
7 8 (3) Ib-010a 15mg/kg；IV
8 8 (3) IIIc-061a 15mg/kg；IV
9 8 (3) IVc-059a 15mg/kg；IV
10 8 (3) IVc-059a 150mg/kg；PO
治療將持續2週(14天)。對括號內的動物數目投藥7天，然後取樣進行中期研究PD分析。 表49：研究時程：
時間 ( 週 ) W1 W2 W3 W4 W5
STZ 投藥 (5天) --- ---- --- ---
測試    血糖 血糖 血糖 每2天影像後立即提供傷口影像 血糖 每2天傷口影像
化合物 --- --- --- 每天IV投藥 每天PO投藥 每天IV投藥 每天PO投藥
器官          投藥7天後每組採樣3隻動物。皮膚組織採樣   
連續觀察
體重：每天量測並記錄研究所有小鼠的體重；該訊息用於計算每隻動物的精確劑量。
一般徵象及病況：每天觀察小鼠，註記任何不適或變化徵象至例如星毛皮、缺乏運動、呼吸困難的一般病況。
研究中期採樣：投藥7天後，每組殺死3隻動物，並去除傷口組織，並分為切片(A)及(B)： (A)第一切片是FFPE，並用以下物質染色：H＆E，馬森三色、CD31、TGF-β。 (B)第二切片均質，供以下ELISA使用：SOD、GTPx、過氧化氫酶(Catalase)、TNFα、IL-6、TGF-β水平。
終止：最終研究動物經由吸入二氧化碳被撲殺。終止前為動物稱重。提前終止： 如果量測體重減輕≥20%，並且對表現嚴重徵象及病況或無法進食/飲水的任何受傷動物，則提前終止。 結果：
血糖：與非誘導載體對照相比，STZ誘導導致血糖顯著增加。與誘導載體對照相比，用Ia-001a、IIIc-061a及IVc-059a IV治療導致血糖水平顯著降低。7天後，所有化合物均已在STZ誘導的糖尿病模型顯示一定程度的加速傷口癒合(圖10，投藥7天後，每組採樣3隻動物)。採樣皮膚組織。實施例 5.7 ：糖尿病足 的 治療及 / 或預防
使用Zhang Y等人所述糖尿病潰瘍的大鼠模型(J Diabetes Res. 2016, 2016, 5782904. doi:10.1155/2016/5782904)對本發明的化合物進行測試。
皮膚及其他黏膜組織的傷口癒合涉及一系列複雜的事件，包括凝血病例、急性及慢性發炎、上皮再形成(reepithelialisation)、肉芽化組織形成、傷口收縮及結締組織重塑。然而，一些遺傳及後天性病況，諸如衰老、營養不良(例如，維生素C及蛋白質缺乏症)、感染、缺氧及遺傳疾病例如Ehlers-Danlos症候群，可能會損害此修復過程。在此等病況中，糖尿病是傷口受損或不癒合最常見原因。例如，令人震驚的數據突顯長期高血糖症的臨床意義，該數據顯示85%未治癒的糖尿病足潰瘍最終需要截肢。最近一項研究的作者概述“慢性傷口的途徑”，重點在於長期或慢性發炎，其特徵在於巨噬細胞的活化(以及嗜中性白血球的積累)，從而導致促發炎細胞介素、活性氧、基質金屬蛋白酶(MMP)及其他中性蛋白酶(例如，彈性蛋白酶)水平升高。這再加上缺乏內源性蛋白酶抑制劑，都會導致「過度基質降解、生長因子降解及上皮形成受損」。
第一個實驗中，經由尾靜脈給15隻成年雄性Sprague-Dawley大鼠(體重300-325 g，Charles River Laborayories International，Inc.，Wilmington、 MA)注射10 μmM檸檬酸鹽水緩衝液(pH 4.5)(非糖尿病對照組，NDC)或含有鏈脲佐菌素的相同溶液(STZ；ENZO Life Sciences, Inc., Plymouth Meeting, PA；70mg/kg體重)以誘導I型糖尿病。然後將大鼠分為以下五個實驗組(n = 3隻大鼠/組)。所有大鼠都可以無限制地獲取食物及水。48小時內，注射STZ的大鼠尿液中葡萄糖水平顯著升高。誘導糖尿病三週後，將所有大鼠的背部皮膚剃毛，每隻大鼠使用一系列外科手術的環鋸(trephine)製成六個標準傷口，每個直徑為6 mm。建立以下五個實驗組(在此初始實驗中，所有組的治療時間為7天；以下實驗3描述更長期的研究)：藉由每天局部施用白凡士林果凍(“載體”)治療的非糖尿病對照(NDC)大鼠；每天單獨用載體局部治療的糖尿病大鼠(D組)；用測試化合物治療的糖尿病大鼠。
在這段時間結束時，每隻大鼠的六個圓形傷口藉由卡尺量測傷口直徑(以毫米為單位)進行臨床評估，收集血液樣本，殺死大鼠，並如下所述解剖皮膚樣本以進行組織學/組織化學及生化評估。
在建立標準化傷口後的第七天，麻醉所有動物，採集血樣進行血糖量測(One Touch Ultra Glucometer； Johnson & Johnson, New Brunswick, NJ)及HbA1c (Bayer A1CNow Selfcheck, Sunnyvale, CA)量測，在完成以下步驟後，藉由吸入二氧化碳殺死大鼠。
拍攝照片供臨床量測以評估傷口閉合(每個實驗組18個傷口)。藉由量測治療方案前後每個傷口的直徑(毫米)，計算傷口表面的減少百分比。
從每隻大鼠的兩個部位切下第7天的傷口組織，並合併用於生化分析。將每個組織池均質化，在4°C下用在含有0.2M NaCl及5mM CaCl2的50 Mm Tris-HCl緩衝液(pH 7.8)中的5 M脲萃取過夜，然後在11,000 g下離心1小時，如本文以上所述。將上清液在Tris-HCl、NaCl及CaCl2緩衝液中透析，並藉由硫酸銨添加至60%飽和度部分純化蛋白酶。藉由ELISA分析沉澱的蛋白酶的膠原酶MMP-8(Sigma-Aldrich Life Sciences Inc., St. Louis, MO)及MMP-13 (TSZ Scientific LLC, Framingham, MA)。
取兩個傷口部位(包括周圍未受傷組織)的活檢，在10%中性福馬林緩衝液中固定24小時，然後轉移到50%乙醇中，然後粗略處理、酒精脫水、二甲苯清除、石蠟包埋及切片。用H&E及馬森三色染色對五微米的切片進行染色，並使用校準的目鏡測微器經由組織形態計量術量測傷口邊緣之間的距離，並確認影像分析。如下所述，解剖每隻大鼠的最後兩個傷口，水解並分析羥脯胺酸。
在14天及30天治療方案結束時，物理量測以及組織學和組織化學評估與上述7天實驗的描述相同。此外，在所有三個時間段內，將6 mm打孔活檢的組織樣本在120°C下的2 N NaOH中水解兩次，每次1小時。然後對皮膚組織水解產物的50 µL等分試樣中的羥脯胺酸進行分析，羥脯胺酸是一種基本上只存在於膠原蛋白中的胺基酸。實施例 5.8 ：糖尿病性視網膜病變 及 糖尿病性腎病變 的 治療及 / 或預防
使用利用具有STZ誘導糖尿病的DBA/2小鼠品系的糖尿病小鼠模型，評估本發明化合物的治療功效，並追踪包括腎臟損害的糖尿病性視網膜病變。經由連續5天低劑量STZ注射誘導糖尿病後五週，其尿白蛋白：Cr的比率是424倍，而年齡匹配的對照為36.9倍。
為了治療糖尿病性腎病變，用STZ(連續5天低劑量)誘導DBA/2小鼠。誘導完成一週後，監測葡萄糖水平，並將水平低於15 mml/L(280 mg/0.1L)的小鼠從研究中剔除，因為其等的糖尿病沒有嚴重到會導致腎損傷。在STZ誘導後每周和5週監測葡萄糖水平，藉由量測尿白蛋白和肌酸酐水平並確認其等在所需範圍內，進行腎受損的生化評估。在成功完成此階段後，將動物分配至治療組。
進行四個週治療(靜脈給藥)，每週評估血糖和尿白蛋白/肌酸酐水平。在治療期結束時，採集以下樣本： -     用於量測葡萄糖及血尿素氮(BUN)的血液 -     用於量測血清肌酸酐的血液 -     用於最終白蛋白/肌酸酐比的尿液 -     切除腎臟並進行FFPE：進行天狼星紅(Picro-Sirius Red)、馬森三色染色及H&E染色以辨別纖維化區域，以及腎小球環間膜硬化、小動脈玻璃樣變性、腎小球基底膜(GBM)增厚的證據。
為了評估化合物對糖尿病性視網膜病變的作用，經由眼底照相機每週為動物拍攝一次影像。殺死前，立即經由尾靜脈給動物注射FITC-葡聚醣。採樣期間，對眼睛進行採樣並用福馬林固定。製備視網膜舖片(Retinal Flatmounts)並以螢光檢查化合物對血管的血管質化(vascularity)及滲漏的影響(由高背景染色指示)。動物組(每組n = 8隻小鼠)： 表50：
組 動物數目 化合物
1 3 陰性對照(非誘導)
2 3 陽性對照(誘導)
3 8 Captopril 50mg/kg
4 8 Ia-001a 15 mg/kg I.V.
5 8 Ia-001aTZ 15 mg/kg I.V.
6 8 Ic-007a 15 mg/kg I.V.
7 8 Ib-010a 15 mg/kg I.V.
8 8 IIIc-061a 15 mg/kg I.V.
9 8 IVc-059a 15 mg/kg I.V.
10 8 IVc-059a 150 mg/kg P.O.
每週量測血糖及尿白蛋白/肌酸酐，治療持續4週(28天)。
在最後一次化合物(製劑)給藥後，器官及血液採樣後殺死。 表51：研究時程
時間 ( 週 ) W1 W2 W3 W4 W5 W6 W7 W8 W9 End W9 犧牲
STZ Dose (5日) --- ---- --- --- --- --- --- --- ---
測試    血糖 血糖    血糖尿 ALB/CREA 血糖尿 ALB/CREA 血糖尿ALB/CREA 血糖尿 ALB/CREA 血糖尿 ALB/CREA 血糖尿 ALB/CREA
化合物 --- --- --- --- --- 每天IV投藥 每天IV投藥 每天IV投藥 每天IV投藥 ---
器官                            血(血漿) 腎 眼睛
連續觀察
體重：每天量測並記錄研究所有小鼠的體重；該訊息用於計算每隻動物的精確劑量。
一般徵象及病況：每天觀察小鼠，註記任何不適或變化徵象至例如星毛皮、缺乏運動、呼吸困難的一般病況 。 採樣及生命後分析
析在最終採樣前，立即對每組4隻動物注射FITC-葡聚醣以進行視網膜膜舖片評估。
最終採樣： ○  經由心臟穿刺及從每隻動物製備的血漿/血清採集最終血樣。 ■        血糖量測 ■        血清肌酸酐量測 ■        BUN量測 ■        尿ALB/肌酸酐 ■        用於CRP、TNF-α、IL-6及TGF-β的ELISAs ■        保留剩餘血漿用於細胞介素分析 ○  切除腎臟組織並稱重 ■        將一個腎臟迅速冷凍以進行可能的生物分析或其他分析 ■        將一個腎臟固定在福馬林並包埋在石蠟中 ˙   用於以下述的H&E及馬森三色染色 ○     腎小球環間膜硬化及腎小球硬化、 ○     小動脈玻璃樣變性 ○     GBM增厚 ○  待進行FFPE的眼睛組織 ■        另一隻眼(每個治療組4隻)用於視網膜舖片分析以量測血管形成(vascular patterning) ■        被血管覆蓋的面積 ■        評估血管滲漏
終止：最終研究動物經由吸入二氧化碳被撲殺。終止前為動物稱重。
結果：化合物Ia-001a、IIIc-061及IVc-059a顯著降低具有STZ誘導糖尿病的DBA/2小鼠品系的血糖水平，如圖9所示(顯示一週及二週)。實施例 5.9 ： 貝西氏病(Behçet’s disease，BD)的治療及 / 或預防
使用如ZHENG等人所述的貝西氏病小鼠模型(Acta Derm Venereol 2015；95: 952–958)來測試根據本發明的化合物的治療功效。
貝西氏病是一種慢性、復發性、多系統性、發炎疾病，主要影響口腔及泌尿生殖道的黏膜及葡萄膜。雖然貝西氏病的病因及發病機制尚不清楚，但已提出多種病因，包括環境、感染及免疫學因子；以循環免疫複合體及補體活活為特徵的自體免疫基礎獲得越來越多的認同。為了測試及理解貝西氏病的免疫發病機制，基於環境污染物、細菌及人類熱休克蛋白衍生肽以及病毒注射劑而開發動物模型。分別及/或同時使用此等動物模型可以更有效地調查貝西氏病。
最近開發找到有效及安全的治療選項的動物模型。嗜中性白血球的活化是BD的免疫發病機制之一。嗜中性白血球在先天免疫反應發揮關鍵作用。由於典型的BD病變(例如膿皰性毛囊炎)、病理反應及眼前房積膿具有顯著的嗜中性白血球浸潤，因此已調查嗜中性白血球功能及活化狀態。對BD的基礎及fMLP刺激的超氧化物生成、吞噬作用、趨化性及嗜中性白血球與內皮的黏附增加、正常或降低的報導有相互矛盾。在BD的HLA轉基因小鼠推測模型中，唯一看到的異常是對fMLP的回應是超氧化物釋放增加。在同一研究中，HLA-B51 +患者及健康對照也存在高超氧化物回應。
藉由接種4-5週大的癌症研究所(ICR)雄性小鼠的Vero細胞中生長的HSV 1型，開發類似貝西氏病的小鼠模型。簡言之，用針劃傷實驗小鼠的耳垂，並以10天的間隔用病毒接種兩次。在最終接種後觀察受感染的小鼠16週。出現至少2種類似貝西氏病況的HSV接種小鼠被用作類似貝西氏病的小鼠模型(n = 5)。未受感染的ICR小鼠(n = 2)及HSV接種但無病況的小鼠。實施例 5.10 ：葡萄膜炎 (UVE) 的 治療及 / 或預防
使用自體免疫葡萄膜炎的動物模型，其包括大鼠中內毒素誘導的葡萄膜炎(EIU)，以測試本發明化合物的治療功效，如Fruchon S等人所述(Molecules. 2013；18(8):9305–9316. 2013年8月5日刊登. doi:10.3390/molecules18089305)。此模型被認為是人類前葡萄膜炎的臨床相關模型。其包括脂多醣(LPS)的全身投予，會導致眼睛的前部及後部發生急性發炎反應，並破壞血-眼屏障及發炎細胞浸潤。EIU的臨床徵象反映在人類疾病中觀察到的變化。因此，與「黃金標準」地塞松(地塞松)相比，在大鼠的EIU模型中測試本發明化合物的治療功效。
動物：只收取沒有可見的眼睛缺陷徵象的動物。在預測試期間檢查動物，特別注意眼睛。實驗前觀察其等一週。將動物單獨飼養在標準籠子，可以自由獲取食物及自來水。
眼睛耐受性研究：所述研究由三組的三隻Sprague-Dawley雄性大鼠組成。在第0天，為動物稱重、麻醉及藉由單一5 μL玻璃體內注射兩隻眼睛投予。第一組接受鹽水載體(NaCl 0.9%)，而其他組接受不同劑量的本發明化合物。然後藉由臨床觀察及眼睛檢查以評估每隻動物。眼睛檢查包括眼底鏡檢查，使用螢光素染料對角膜進行裂隙燈檢查(SLE)，從而進行McDonald-Shadduck評分。McDonald-Shadduck評分系統解決：結膜參數(充血、腫脹及排出)、水性潮紅(aqueous flare)(丁道爾現象的強度)作為血水屏障破裂的推定證據；注入虹膜中的二級和三級血管；角膜混濁、其相對面積，新血管形成及上皮完整性(螢光素標記)；鏡頭完整性。在最終眼睛檢查後，將所有動物殺死。驗屍時收集眼睛，在改善的戴維森(Davidson)溶液中固定12小時，然後用10%中性福馬林緩衝液處理並進行組織學處理。由委員會認證(board-certified)的獸醫病理學家經由光學顯微鏡對蘇木精-伊紅染色的組織切片進行評估。
內毒素-誘導葡萄膜炎(EIU)大鼠模型：將36隻雌性白化病Lewis大鼠隨機分為六組，每組六隻。EIU由100 µL足背注射的無菌無熱原鹽水溶液所誘導，該溶液中含200 µg LPS(來自沙門氏鼠傷寒桿菌的脂多醣，Sigma-Aldrich, Saint-Quentin, France)。在EIU誘導之前，立即藉由用5 µL玻璃體內注射在動物的兩隻眼睛注射不含活性成分或測試化合物或20 µg地塞松的鹽水溶液(NaCl 0.9%)以治療動物。藉由裂隙燈檢查(SLE)在24小時(即此模型中疾病的臨床高峰)檢查動物。每隻眼睛的臨床眼睛發炎強度評分為0到5。0級表示無發炎。1級表示存在最小虹膜及結膜血管舒張，但未觀察到前房(AC)的潮紅或細胞。2級表明存在中等程度的虹膜及結膜血管擴張，但AC中沒有明顯的潮紅或細胞。3級表示AC中存在強烈的虹膜血管擴張，潮紅及每個裂隙燈視野少於十個細胞。等級4表示比等級3更嚴重的臨床徵象，在有或沒有形成眼前房積膿之下，AC中每個裂隙燈視野有十個以上的細胞。5級表示存在強烈的發炎反應，AC中形成纖維蛋白且瞳孔完全閉塞。在實驗結束時，即LPS攻擊後24小時，藉由腹膜內注射戊巴比妥(30 mg/kg)麻醉大鼠，然後用致死劑量的戊巴比妥殺死。
眼液中細胞介素濃度的量測：殺死後從每隻動物的兩眼獲取房水及玻璃體。藉由多重分析確定促發炎T輔助細胞介素 TNFα、IL-1β、IL-2、IL-6、IL-17及IFNγ以及抗發炎細胞介素 IL-4及IL-10的量。
血清中細胞介素濃度的測量：在實驗結束時收集三組大鼠的血清(鹽水載體，10 µg化合物及地塞松)，並保存在-80°C下。根據製造商的說明，其等用於經由Cytometric Bead Array (rat CBA Flex set, BD Biosciences, San Jose, CA, USA)在FACS Calibur流式細胞儀(BD Biosciences)上同時測定五種細胞介素(IFNγ、TNFα、 IL-2、IL-4及IL-10)的水平。使用FCAP Array軟體(BD Biosciences)，將每種細胞介素的量相對於標準曲線進行分析。實施例 5.11 ：糖尿病感覺運動性多發性神經病變及糖尿病神經病變的治療及 / 或預防
使用糖尿病周圍神經病變的大鼠模型測試本發明化合物的治療功效(Kambiz S.等人(PLoS One. 2015；10(6):e0131144；PLoS One. 2015；10(5):e0126892. 2015 May 18發表. doi:10.1371/journal.pone.0126892)。
動物：WAG/RijHsd雌性大鼠(n = 27，10週大，體重130–150克)購自Charles River (l'Arbresle, France)。將此等動物在室溫下按12小時光照/黑暗時間表配對飼養在有蓋子的籠子中，並隨意給水及食物。
糖尿病的誘導：如上所述，以65 mg/kg體重的劑量單次腹膜內注射在65 mol/L檸檬酸鈉緩衝液(pH 4.5)中的STZ(Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA)，在21隻大鼠誘導糖尿病。將大鼠隨機分為3組：A、B及C(每組n = 7)。誘導糖尿病後，4週後將A組殺死，6週後將B組殺死，8週後將C組殺死。對照組由6隻大鼠組成，其接受具有等體積不含STZ的載體的單次腹膜內注射。追踪對照大鼠8週。藉由血糖儀(OneTouch, LifeScan, Milpitas, California, USA)從尾靜脈血液量測血糖。在糖尿病誘導後的整個4週內，當血糖水平高於20 mmol/L時，診斷出大鼠的糖尿病。
足底後爪皮膚的血流及加氧作用：雷射多普勒血流儀及分光光度法組合系統(O2C, LEA Medizintechnik, Giessen, Germany)用於非侵入式量測平滑足底後爪的血流及氧飽和度。在糖尿病及對照大鼠中，在第4、6及8週時評估氧飽和度百分比及皮膚血流量。
冷暴露後的變暖率：使用內建紅外數位相機(320×240像素)藉由1 Hz數據採集系統(ThermaCAM Researcher 2001 HS； FLIR Systems, Berchem, Belgium)對皮膚的溫度進行評估，數據由膝上型電腦連續收集。相機與後爪之間的距離為13 cm ± 2 cm。溫度記錄的像素大小為0.8×0.8 mm。將動物放置在14°C的平板上5秒鐘後，在固定動物的同時記錄整個足底後爪的皮膚溫度。使用ThermaCAM Researcher Pro (2001-HS版本；FLIR Systems, Wilsonville, Oregon, USA)將足底後爪的最低溫度導出到文本檔案。藉由圍繞整個足底後爪畫一條帶線來選擇感興趣的區域。平均變暖率顯示為每120秒的皮膚溫度升高。
熱敏性：為了確定是否發生熱超敏性，如以上所述進行冷板及熱板測試。簡言之，將大鼠置於表面透明的開放式腔室中，其表面溫度為5°C(冷板)或50°C(熱板)。此等實驗在不同的日期進行，以防止干擾。觀察到後爪退縮或舔拭的時間。
馮佛雷氏(Von Frey)測試：在用於確定痛覺的機械敏性閾值馮佛雷氏測試中，將每隻大鼠放在帶有網眼金屬地板的腔室中。然後，如前所述，使用2至300克的馮佛雷氏毛髮5次，並在觀察到至少3次甩動爪(動物的反射性撤退反應)時評分為陽性。對照組為參考組。
肌電圖(EMG)：藉由記錄糖尿病組及對照動物中腓肚肌的誘導CMAP峰-峰幅度及潛伏期來評估肌肉中運動軸突的神經支配。記錄CMAP峰-峰值幅度及潛伏期，並對一批20個回應進行平均。將每個糖尿病組中的平均幅度與對照組比較。MNCV計算為刺激電極到記錄電極的距離(mm)/潛伏期等待時間(ms)。
組織準備：在第4、6或8週後，用過量的戊巴比妥(100 mg/kg ip)殺死動物。對於每隻大鼠，解剖後爪的足底皮膚，並在4°C下直接浸泡固定在2%的多聚甲醛-溶素過碘酸鹽(PLP)中24小時。如前所述，將皮膚進一步處理並包埋在明膠中。最後，用冷凍切片機將包埋的皮膚切成40 μm的切片，並收集在甘油中在-20°C下長期保存。
收集大鼠的胰臟組織，將其固定在10%中性福馬林緩衝溶液中，並包埋在石蠟中。隨後，此等樣本用蘇木精及伊紅(H&E)染色。每個樣本用明場顯微鏡評估並掃描成數位幻燈片(Nanozoomer 2.0 series, Hamamatzu, Japan)。
免疫組織化學：如前所述進行皮膚切片的免疫組織化學，以半定量支配皮膚的感覺神經纖維的密度，並評估CD-31陽性內皮細胞的存在。在4°C下，將皮膚切片在含有稀釋的一級抗體Protein Gene Product 9.5 (PGP9.5, 1/10.000, anti-rabbit, Enzo Life Sciences, New York, USA)或CD31+(1/5000, anti-rabbit, Spring Bioscience, California, USA)的2%BSA混合物中培育48小時。隨後，將皮膚切片與標記有辣根過氧化物酶(HRP)的適當的生物素化二級抗體(1/200, Biotine, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA)一起在至溫培育90分鐘。然後，使用3,-3'二胺基聯苯胺(DAB)反應揭示一級抗體的抗原結合位置。此後，將切片置於載玻片上，將CD31+染色切片用0.05%的硫堇染色4分鐘，從而使角質細胞染成藍色。最後，使用無水乙醇(＜0.01%甲醇)將所有皮膚切片脫水、轉移至二甲苯中，並用片膠(Permount)(Fisher Scientific, Hampton, NH)封片。
用Nanozoomer 2.0系列(Nanozoomer 2.0 series, Hamamatzu, Japan)將每個皮膚切片掃描成3層，每層8 μm。使用ImageScope軟體(Aperio ImageScope v11.1.2.760)的40倍物鏡，對足底後爪的4個近端皮膚切片及4個遠端遠端皮膚切片定量足底後爪中央部分的表皮神經纖維(80.000 μm2)。計算每隻大鼠每mm2 的平均標記神經纖維及平均表皮厚度。CD31陽性細胞百分比是藉由Leica Cell-D(Olympus, Imaging software for life science microscopy, USA)在足底後爪整個上皮的4個近端皮膚切片及4個遠端遠端皮膚切片計算。實施例 5.12 ：腸道纖維化 的治療及 / 或預防
如Pham BT等人所述，使用大鼠或小鼠模型來測試本發明化合物的治療功效(Physiol Rep. 2015；3(4):e12323. doi:10.14814/phy2.12323)。
大鼠及小鼠腸核心的製備：使用成年非禁食雄性Wistar大鼠及C57BL/6小鼠(Harlan PBC, Zeist, The Netherlands)。將大鼠及小鼠在溫度及濕度受控的房間中以12小時的光照/黑暗的周期飼養，並隨意餵食食物(Harlan chow no 2018, Horst, The Netherlands)及水。在實驗開始之前，使動物適應至少七天。
用異氟烷/O2(Nicholas Piramal, London, UK)麻醉大鼠及鼠。切除大鼠空腸(距離胃約25 cm，長度15 cm)及小鼠空腸(距離胃約15 cm，長度10 cm)並保存在冰冷的Krebs-Henseleit緩衝液(KHB)中，並補充25 mm D-葡萄糖(Merck, Darmstadt, Germany)、25 mm NaHCO3(Merck)、10 mm HEPES(MP Biomedicals, Aurora, OH)，用碳合氣(carbogen)(95%O2/5%CO2)飽和，並調節至pH 7.4。用KHB沖洗內腔清潔空腸，然後分成2 cm的片段。在37°C下將此等片段充滿在0.9%NaCl中的3%(w/v)瓊脂糖溶液，並埋入瓊脂糖核心包埋的單元中。
人腸核心的製備：從動過胰十二指腸切除術的患者切除的腸獲取健康的人空腸組織用於研究。
將健康的空腸保存在冰冷的KHB中，直到包埋程序為止。收集組織後一小時內，小心地從黏膜除去黏膜下層、肌層及漿膜。將黏膜分為0.4 cm ×1 cm的薄片。在37°C下將此等薄片包埋在0.9%NaCl中的3%(w/v)瓊脂糖溶液的溶液中，然後插入包埋單元中。
PCIS的製備：PCIS藉由Krumdieck組織切片機(Alabama Research and Development)在冰冷的KHB中製備。估計濕重為3-4 mg的切片的厚度為300-400 μm。將切片保存在冰冷的KHB中，直到實驗開始。
腸切片的培育：將切片在人類PCIS(hPCIS)及大鼠PCIS(rPCIS)的12孔中培育，或在小鼠PCIS(mPCIS)的24孔中培育。將hPCIS及rPCIS分別在1.3 mL中且mPCIS在補充25 mg葡萄糖、50 μg/mL僅大黴素(Invitrogen)及2.5 μg/mL兩性黴素-B(Invitrogen)的0.5 mL含有L-谷胺醯胺的Williams Medium E (Invitrogen, Paisly, UK)中培育。在培育箱(MCO-18M, Sanyo)中培育(在37°C及80%O2/5%CO2下)的過程中，以90 rpm(振幅2 cm)讓盤水平震盪。在有或沒有濃度範圍為1至10 ng/mL的人類TGF-β1(Roche Diagnostics, Mannheim, Germany)下，培育rPCIS達24小時，培育mPCIS及hPCIS達72小時。所有培育均進行多次(使用在單獨盤中分別培育的3–6切片)，並用3至16個不同人、大鼠或小鼠的腸重複進行。
生存力及形態：藉由量測PCIS的腺苷三磷酸(ATP)含量來評估生存力。簡言之，培育後，將切片轉移至1 mL超音波處理溶液(包含70%乙醇及2 mm EDTA)中，在液態氮中急速冷凍並保存在-80°C下。為了測定生存力，使用ATP生物發光試劑盒(Roche Diagnostics, Mannheim, Germany)在超音波處理45秒並在4°C下以16.000×g離心2分鐘的樣本上清液中測量ATP含量。將ATP值(pmol)標準化為藉由Lowry方法(BIO-rad RC DC Protein Assay, Bio Rad, Veenendaal, The Netherlands)估算的PCIS的總蛋白質含量(μg)。
為了評估形態，將培育的切片固定在4%福馬林中並包埋在石蠟中。切下4 μm的切片，用蘇木精及伊紅(HE)染色。根據改善的Park score對HE切片評分，其描述局部缺血及再灌注後的腸道組織損傷的發展順序。對PCIS的7個片段的完整性評分為0到3。如果沒有壞死，則將上皮、基質(stroma)、隱窩及肌肉層的生存力分別評分為0，如果存在大量壞死，則評分為3。腸片的其他部分的評分如下：上皮的形狀：0 =立方上皮，3 =超過2/3的細胞是扁平的，絨毛變扁平：0 =正常，3 =超過2/3個絨毛變扁平，水腫的量：0 =無水腫，3 =嚴重水腫。最高分數21表示嚴重受損。在人類樣本中，黏膜肌層的形態學評分是在「肌肉層」部分確定的。B.T.P.、W.T.v.H.及J.N.進行盲目評分；計算三個總分的平均值。
基因表現：藉由Taqman或SYBRgreen方法確定纖維化基因即COL1A1、αSMA、HSP47、CTGF、FN2、TGF-β1、PAI-1、及SYN的表達。在hPCIS中，也藉由SYBRgreen方法量測ELA基因表達。
腸道纖維化是發發炎腸病(IBD)患者的嚴重但普遍的結局。雖然在開發新穎治療方法以控制IBD的慢性腸道發炎方面取得進展，但迄今為止尚無有效的抗纖維變性療法。因此，對腸道纖維化分子機制的更深入了解及相關動物模型的可用性對於推動此研究領域至關重要。
IL-17和相關介體(mediators)：Th17細胞定義T輔助細胞(T helper cells)的子集，其主要產生IL-17A，但也產生IL-17F、IL-21及IL-22，並且在幾種包括IBD (7)的慢性發炎疾病中越來越被認為至關重要。IL-17A與多種器官的纖維化有關，包括肺(8)、肝(9)及心臟(10)；最近的研究也支持其在腸道中的作用，將IL-17/Th17免疫回應及其他相關基質在腸道纖維化的發病機制聯繫起來。
腸道纖維化的其他動物模型敘述如下： 表52：
類別 模型 投予 模式 / 結果
化學 誘導 DSS 在飲用水中投予，引起上皮受損傷及結腸黏膜通透性，繼而引發急性發炎；DSS的循環導致慢性發炎並隨後發生纖維化
TNBS 結腸灌腸投予TNBS/乙醇會破壞上皮屏障並引起T細胞依賴性透壁發炎；長期投予會導致結腸纖維化
微生物 PG-PS 直接注射到盲腸或小腸壁引起肉芽腫小腸結腸炎，並伴隨顯著纖維化
糞便注射 直接將糞便懸浮液注射至結腸腸壁引起侵襲性結腸炎及透壁纖維化
慢性沙門氏菌感染 鏈黴素預治療後的口服投予引起結腸黏膜及透壁發炎，並伴隨顯著纖維化
AIEC感染 用鏈黴素預治療後，對AIEC的人類CD分離物NRG857進行胃管灌食法導致迴腸結腸發炎以及Th1及Th17介導的纖維化
基因操縱的小鼠 TGFβ1-Tg TβRIIΔk-fib-Tg 將此等過度表現TGFβ的腺病毒載體灌腸投予結腸導致急性及慢性發炎、ECM沉積及肌層增厚
MCP-1-Tg 直腸腔內注射帶有MCP-1的腺病毒載體導致透壁發炎、膠原蛋白沉積及纖維化
缺乏IL-10 IL-10的基因缺失導致結腸透壁發炎病變、隱窩膿腫及腸壁增厚；盲腸切除術後小腸發展為術後纖維化敏感性增加的證據
免疫介導 T細胞轉移 將供體CD4+ /CD45RBhigh T細胞轉移至免疫缺陷受體小鼠體內導致消瘦症、結腸炎及輕度纖維化
自發性 SAMP1/YitFc小鼠小鼠品系 發展成自發性末端迴腸炎及隨後的纖維化
     
實施例 5.13 ：卵巢纖維化 的 治療及 / 或預防
本發明化合物的治療功效是使用Pala Ş等人描述的卵巢過度刺激症候群(OHSS)小鼠模型(Drug Des Devel Ther. 2015；9:1761–1766. 2015 Mar 24發表. doi:10.2147/DDDT.S75266)測試，以檢查測試化合物對在實驗環境過度刺激症候群(OHSS)中卵巢組織病理學、血清VEGF及內皮素1水平的影響。
動物：使用22天大的雌性Wistar白化病大鼠，隨機分組。連續4天對15隻大鼠皮下投予促卵泡激素10 IU，第5天藉由30 IU人類絨毛膜促性腺素誘導OHSS。第1組包含35天大的對照大鼠，第2組包含35天大的OHSS大鼠，第3組包含接受7天試驗化合物的27天大的OHSS大鼠。然後在第35天將所有大鼠斷頭。評估所有大鼠的血清VEGF、內皮素1及卵巢濾泡儲備。
在全身麻醉下，藉由氯胺酮(75 mg/kg)及甲苯噻
Figure 110108763-A0304-12-02
(10 mg/kg)腹膜內投予，在第13天進行血容比(Hematocrit)及體重量測，在第35天進行斷頭術。
酶聯免疫吸附鑑定：從每隻殺死大鼠獲得約3 mL血液樣本。藉由以2,500 rpm離心血液樣本4分鐘來分離血清，並保持在-20°C直到進行VEGF及內皮素1鑑定。使用小鼠VEGF酶聯免疫吸附鑑定套組(ELM-VEGF-001；RayBio, USA)鑑定VEGF，並使用內皮素1 E/Kit(EK-023-01；Phoenix Pharmaceuticals, USA)量測內皮素。
卵巢形態：剖腹手術後，取出卵巢並清除培養基中的黏附組織，然後稱重。卵巢組織用10%甲醛固定，然後將石蠟包埋的組織樣本切成4 μm的橫截面，以預估平均卵巢濾泡計數。用馬森三色染料為切片染色，在光學顯微鏡(Olympus BX-50)下確定OFR。根據先前描述的方法，將4 μm厚的橫截面以50 μm的間隔置於顯微鏡載玻片上，以防止對相同結構計數兩次。將12濾泡分類為原始、初代、次代及三代。萎縮濾泡(atretic follicle)(AF)定義為存在十個以上固縮細胞核；對於最小濾泡而言，萎縮的標準是退化卵母細胞、形成早熟胃竇，或兩者。
主要成效評估：主要成效評估是年齡(天)、體重(g)、血容比(%)、卵巢重量(mg)、VEGF血清水平(pg/mL)及內皮素1(ng/mL)，以及確定原始濾泡、初代濾泡、次代濾泡及三代濾泡的總數。實施例 5.14 ：多囊胞性卵巢症候群 (PCOS) 的 治療及 / 或預防
如Wang D等人所述(J Ovarian Res. 2018；11(1):6. 2018年1月10日發表. doi:10.1186/s13048-017-0375-7)，使用DHEA誘導的卵巢過度纖維化動物模型來測試本發明化合物的治療功效。
多囊胞性卵巢症候群(PCOS)為一種常見的代謝和內分泌疾病，其病理機制尚不清楚。以下研究調查在脫氫表雄固酮(DHEA)誘導的多囊胞性卵巢症候群(PCOS)大鼠模型中，經由轉化生長因子-β(TGF-β)信號傳導途徑形成的卵巢過度纖維化。
動物：30隻21天大、體重約50 g的雌性Sprague-Dawley(SD)大鼠用於此鑑定。將動物飼養在溫度為22±1℃、相對濕度為50±1%、12小時/12小時光照/黑暗周期的無特定病原體(SPF)的環境中。自由獲取自由食物及水。
方法：將30隻雌性Sprague-Dawley大鼠隨機分為空白組(n = 6)、油組(n = 6)以及油+ DHEA誘導的模型組(n= 6 + 12)。以連續35天皮下注射DHEA建立模型組。將大鼠另外分為載體物組(n＝6)及治療組(n＝6)。每天治療一次，持續治療35天。治療後18天，每天透過判斷14天的細胞類型從所有大鼠收集陰道抹片，以確定每天的發情週期。第36天，對空白組及油治療組中的所有大鼠以及DHEA誘導的模型組中的6隻大鼠實施安樂死(使用腹膜內注射過量的5%水合氯醛)，收集血液(從上腔靜脈)，雙側卵巢並解剖子宮。
在4°C下將卵巢固定於4%多聚甲醛中24小時，然後包埋在石蠟中。將其餘組織冷凍在-80°C中，以進行進一步西方墨點法及即時聚合酶鏈反應(RT -PCR)分析。
來自DHEA誘導模型組的其餘12隻大鼠隨機分為另外兩組：治療組及載體治療組(對照組)，每組6隻。在此治療過程中，不再給予大鼠DHEA。治療持續2週，之後將所有動物安樂死，並收集血液，並按照上述說明解剖雙側卵巢及子宮。
使用H&E染色、免疫組織化學及天狼星紅染色檢測卵巢形態、纖維蛋白及膠原蛋白定位及在卵巢中的表現。使用西方墨點法及檢查卵巢蛋白質及RNA。
發情週期：DHEA治療後第18天，收集所有大鼠的陰道抹片。然後用甲苯胺藍處理樣本30分鐘，然後在光學顯微鏡(Leica Microsystems, Germany)下檢查細胞的形態及發情週期。
血清激素水平：從上腔靜脈收集血液樣本。立即分離血清並儲存在-20°C下，藉由酶聯免疫吸附鑑定(ELISA)(睾丸激素(T)、雌二醇(E2)、黃體激素(LH)、濾泡刺激素(FSH))進一步測定激素(rat T, E2, LH and FSH ELISA Kits, USCN, Wuhan, China)。實施例 5.15 ：原發性膽汁性膽管炎 (PBC) 的 治療及 / 或預防
如Hohenester S等人所述，使用PBC小鼠模型評估本發明化合物的治療功效(Cells. 2020, 9(2), 281. doi: 10.3390/cells9020281)。
膽汁淤積性肝病，諸如原發性膽汁性膽管炎(PBC)或原發性硬化性膽管炎(PSC)是慢性進行性疾病，經常導致肝硬化，並伴隨併發症。疏水性膽鹽被認為可促進膽汁淤積的肝纖維化。但是，仍然缺乏這種被廣泛接受假設的證據。
在已建立的膽汁淤積動物模型中，例如藉由Mdr2敲除(knockout)、膽汁淤積及纖維化都是繼發於(secondary to)膽道損害。
因此，為了測試膽汁淤積性疾病中膽鹽累積對肝纖維化的特定貢獻，使用由膽酸鹽餵養的Atp8b1G308V/G308V小鼠中可誘導的肝細胞膽汁淤積的獨特模型。如HPLC所證實，補充甘鵝去氧膽酸鹽(GCDCA)以使小鼠膽鹽池人源化。對膽汁淤積及肝纖維化的生物標誌物進行定量。用膽鹽刺激從野生型小鼠分離的肝星狀細胞(HSC)。確定HSC的增生、細胞積累及膠原蛋白沉積。在膽汁淤積的Atp8b1G308V/G308V小鼠中，αSMA及膠原蛋白1a mRNA的肝表現增加以及肝膠原蛋白沉積過多，顯示只有在補充GCDCA後發展火肝纖維化。在試管內，用疏水性而非親水性膽鹽培育後，肌纖維母細胞及膠原蛋白沉積的數量增加，並與EGFR及MEK1/2活化相關。膽鹽可能對HSC有直接的促纖維化作用，可能涉及EGFR及MEK1/2信號傳導。
動物實驗：雄性動物在8週大時用於活體內研究。將動物關在12小時的光照/黑暗周期，並在可以隨意獲取飲食及水的豐富環境飼養。
血清生化及血清膽鹽量測：在respons® 910全自動分析儀(DiaSys, Holzheim, Germany)中，從新鮮血清定量血清鹼性磷酸酶、膽紅素及丙胺酸胺基轉移酶的含量。根據製造商的說明，使用Diazyme總膽鹽套組(Diazyme Laboratories, Poway, CA, USA)以酶方式定量血清總膽鹽含量。
肝組織學、免疫組織化學及羥脯胺酸定量：將石蠟塊切成4 μm厚的切片，並置放在顯微鏡載玻片上(Superfrost plus, Thermo Scientific/Menzel, Braunschweig, Germany)。逐步脫蠟及再水合後，按照標準流程用蘇木精及伊紅對載玻片染色。使用單株兔子抗α平滑肌肌動蛋白抗體(Abcam, Cambridge, UK)對α-SMA進行免疫組織化學。為了膠原蛋白定量，用Direct Red 80(Sirius Red, Sigma-Aldrich, Darmstadt, Germany)為載玻片染色1小時，然後在乙醇中脫色兩次，在二甲苯中脫色一次。為了定量總DNA作為細胞數目的替代物，用PicoGreen® (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA)培育HSC，並用CytoFluor 4000系統(PerSeptive Biosystems, Framingham, MA, USA)檢測螢光訊號。根據製造商的說明，使用BrdU-鑑定套組(Roche, Penzberg, Germany)為HSC的增生定量。為了定量總細胞數，將接種在Lab-Tek II Chamber Slides (Nunc, Rochester, NY, USA USA)的HSCs用包括DAPI(Vector, Burlingame, CA, USA)的Vectashield封固劑置於蓋玻片上。用全景Midi Slide Scanner (3DHistech, Budapest, Hungary)掃描玻片，用ImageJ2軟體在完整的玻片(0.7 cm2 )上進行核計數。
試管內膠原蛋白定量：用PBS洗滌細胞，並用在飽和苦味酸中的0.1%天狼星紅染色1小時。然後用100%乙醇洗滌細胞3次，將結合的染料溶解在50%甲醇/氫氧化鈉(50 mmol/L)中，在540 nm下量測吸收。實施例 5.16 ：肝纖維化或肝硬化 (HF) 的治療及 / 或預防
如FransénPettersson等人所述，使用已建立的NOD-發炎纖維化(N-IF)小鼠模型來評估根據本發明化合物用於抑制自發性、慢性肝發炎及纖維化的治療功效(PLoS One. 2018； 13(9): e0203228. doi: 10.1371/journal.pone.0203228)。
動物：在免疫缺陷NOD.Rag2-/-小鼠產生的T細胞受體(TCR)轉基因自然殺手T(NKT)-II細胞驅動，N-IF小鼠自發發展為慢性發炎及肝纖維化。N-IF小鼠的肝臟病理學的數個部分與人類病況重疊，在這種病況下，漸進式慢性炎症之後發展為纖維化。此外，已證實在N-IF小鼠肝臟發展的纖維化與表現α-SMA的肝星狀細胞的積累有關。與其他可用的囓齒動物肝纖維化模型相比，此等表型相似性使N-IF小鼠模型具有獨特性，並提供測試抗纖維變性候選藥物功效的新穎工具。
每天觀察動物不健康徵象，收集尿液並量測尿液的蛋白質。解剖時記錄肝臟及腎臟的重量。從經固定的每隻動物解剖肝臟及腎臟、切片，並用天狼星紅及H&E染色。從每個肝臟取一塊用於羥脯胺酸的量測。
羥脯胺酸量測： 使用羥脯胺酸比色鑑定套組(BioVision, Milpitas, CA, USA)測定肝臟及脾臟的羥脯胺酸含量。
組織學：治療後，麻醉小鼠並經由心臟內穿刺用PBS灌注。為肝臟及脾臟稱重，將器官活檢固定在4%中性緩衝的福馬林中，包埋在石蠟中並切片。實施例 5.17 ：非酒精性脂性肝炎 (NASH) 的治療及 / 或預防
如Barbara Ulmasov B.等人所述，使用NASH小鼠模型來評估根據本發明的化合物的治療功效(Hepatology Communications, 2018, 3(2) - https://doi.org/10.1002/hep4.1298 ) 。
小鼠：將C57BL/6J 5週大的雄性小鼠置於在受控的溫度、濕度及12小時/12小時的光照/黑暗周期條件下能自由飲水的標準設施中。
膽鹼缺乏、L-胺基酸定義的NASH的高脂小鼠模型：膽鹼缺乏、胺基酸定義的高脂飲食(CDAHFD)22從Research Diets(A06071309；New Brunswick, NJ)獲得。此種飲食被調配為高脂肪、膽鹼缺乏的飲食，其中包括0.1%的甲硫胺酸(methionine)及45%的大卡脂肪(20%的豬油、25%的豆油)。對照飲食是標準的囓齒動物食物，其含有13.6%來自脂肪的卡路里。從6週大開始，將30隻小鼠置於CDAHFD上，將30隻小鼠安排為標準飲食。6週結束時，將來自每個飲食組的10隻小鼠禁食5小時並殺死。收集血液及肝臟樣本。將肝臟分為切片，切片被固定在10%磷酸鹽緩衝的福馬林中、在液態氮中冷凍或置於RNA穩定溶液中，以備將來評估。再維持剩餘小鼠4週的飲食，共10週，然後禁食，殺死並收集樣本。
生化分析：根據製造商的說明，使用三酸甘油酯比色鑑定套組(Cayman Chemicals, Ann Arbor, MI)量測肝的三酸甘油酯含量。丙胺酸胺基轉移酶(ALT)、天冬胺酸胺基轉移酶(AST)、葡萄糖、胰島素、三酸甘油酯及膽固醇的血漿水平由Advanced Veterinary Laboratory (Saint Louis, MO)進行商業量測。
RT-PCR：進行即時定量逆轉錄聚合酶鏈反應，以計算mRNA豐度(mRNA abundance)的變化。
組織病理學：將福馬林固定的肝切片包埋在石蠟中，切成5 μm的切片，藉由蘇木精及伊紅(H&E)進行染色，並使用標準方案進行顯微鏡評估。為了評估肝臟膠原蛋白的含量，石蠟包埋的肝臟切片用天狼星紅/堅牢綠染料染色。天狼星紅可與所有類型的膠原蛋白結合，而堅牢綠可為非膠原蛋白質染色。
對肝切片進行預處理以去除石蠟，並使用Weigert的蘇木精鐵溶液對細胞核染色。洗滌後，將組織用飽和苦味酸中的0.1%天狼星紅(Direct Red 80； Sigma, Saint Louis, MO)、0.1%經認證的堅牢綠FCF(Sigma)染色2小時。然後將玻片在水中洗滌，用乙醇及二甲苯脫水，最後置於Permaslip(Alban Scientific, Inc., Saint Louis, MO)。藉由形態分析對膠原蛋白積累程度進行評估。
肝羥脯胺酸含量的測定：羥脯胺酸含量是肝臟中總膠原蛋白含量的量度。將肝組織在蒸餾水中均質化，用三氯乙酸沉澱，在105°C的12 N HCl中水解48小時。蒸發樣本，將乾燥的丸劑(pellets)在蒸餾水中重組。將重組後的樣本以13,000g離心10分鐘，然後用12 N HCl稀釋上清液，以使最終樣本中的濃度達到4 N HCl。使用敏感組織羥脯胺酸鑑定法測定肝羥脯胺酸含量。
免疫組織化學：用標準方法預處理福馬林固定的肝組織以去除石蠟。藉由在室溫下於甲醇中的3.3%過氧化氫培育1小時來封閉內源性過氧化物酶的活性。
肝組織中的凋亡細胞檢測：藉由末端脫氧核苷酸轉移酶介導的脫氧尿苷三磷酸缺口末端標記法(TUNEL)，使用ApopTag過氧化物酶檢測套組(Millipore, Temecula, CA)，經由標記及檢測DNA鏈斷裂來辨認肝組織的凋亡細胞。計數具有肝細胞形態的染色凋亡細胞。為了檢測具有HSC形態的凋亡細胞，隨後用肌間線蛋白(desmin)抗體(HSC的標記物)對TUNEL染色的肝組織進行染色，除了使用ImmPACT VIP Peroxidase Substrate kit (Vector Laboratories)檢測二級抗體過氧化物酶活性外。
西方墨點法：按照以下一級抗體的說明進行西方墨點法：抗磷酸化母體抗生物皮膚生長因子同源子3(anti‐phosphorylated mothers against decapentaplegic homolog 3)(p-SMAD3)，ab52903，1：1,000(Abcam)；抗甘油醛3-磷酸脫氫酶(anti-GAPDH)，sc-25778 (Santa Cruz Biotechnology, Inc., Dallas, TX)。實施例 5.18 ：糖尿病腎病變或 糖尿病腎 疾病 (DN 或 DKD) 的治療及 / 或預防
使用I型糖尿病小鼠模型(STZ誘導的糖尿病)在活體內研究根據本發明的化合物的治療功效。
動物模型：將10週大的129/SV雄性小鼠(Charles River, Germany)關在單獨通風的籠子裡，接受標準飲食，可自由飲用自來水。體重匹配的129/SV小鼠在第1天及第4天以腹膜內接受125 mg/kg體重的STZ(Sigma-Aldrich)在50 mM檸檬酸鈉(pH 4.5)或檸檬酸鈉緩衝液(非糖尿病對照組)，用於誘導高血糖(葡萄糖＞ 15 mmol/l)。小鼠在研究期間不接受胰島素。
對糖尿病小鼠投予安慰劑(鹽水)12週或接受測試的化合物。每週量測體重及葡萄糖水平。在第6周及第12週量測HbA1c(Olympus AU400)及腎臟功能(血清肌酸酐)。使用小鼠白蛋白ELISA套組評估蛋白尿。
感覺神經傳導速度(NCV)研究是在第6週及第12週用2%異氟烷(isoflurane)麻醉小鼠進行。藉由沿尾巴向近端以3 cm的記錄距離進行刺激來測定尾巴感覺NCV。為了進行量測，使用來自Toennies Inc.的神經屏幕。12週後，對小鼠實施安樂死，並進行雙側開胸及剖腹手術，並經由左心室將冰冷的鹽水溶液灌注腎臟。
免疫組織化學：為進行免疫螢光術，處理多聚甲醛固定及石蠟包埋的組織切片(2 μm)。用10%兔血清封閉後，用對抗pP38及F4/80的抗體以及與Cy3共軛的二級抗體對石蠟切片進行染色。實施例 5.19 ： STZ- 誘導糖尿病模型中糖尿病腎病變、 糖尿病腎 疾病及糖尿病 視網膜病變 的治療及 / 或預防。
共使用70隻5-7週大、重約25-30 g的雌性CD-1小鼠進行研究。此等是從Charles River, UK購買，適應期為7天。將動物圈養在IVC籠子(每籠最多5隻)，通過尾標識別單個小鼠。在研究期間，允許所有動物自由獲得標準認證的商業飲食及消毒水。圈養室保持在標準條件下：18-24°C，55-70%的濕度及12小時的光照/黑暗周期。
本研究使用的所有方案皆已得到動物福利和道德審查委員會(Animal Welfare and Ethical Review Committee)的批准，所有程序皆在1986年動物(科學程序)法案的指導下進行。
連續5天每天對小鼠(陰性對照組除外)注射STZ(55mg/kg；IP)。注射前讓小鼠飢餓6小時。誘導完成一週後，監控葡萄糖水平，從研究中移除水平低於15 mml/L(280 mg/Gl)的小鼠，因為其等沒有發展成理想的糖尿病嚴重程度。每週及STZ誘導5週後監控葡萄糖水平，藉由量測尿白蛋白及肌酸酐水平並確認其等在所需範圍內，進行腎臟受損的生化評估。成功地完成此階段後，將動物分為治療組。 表53
組 動物數目 製劑 劑量含量；途徑
1 3 陰性對照(非誘導) 載體；IV
2 3 陰性對照(誘導) 載體；IV
33 8 Ia-001a 15 mg/kg；IV
4 8 Ia-001a-TZ 15 mg/kg；IV
5 8 Ic-001a-Tz/1-004a 15 mg/kg；IV
6 8 Ic-007a 15 mg/kg；IV
7 8 Ib-010a 15 mg/kg；IV
8 8 IIIc-061a 15 mg/kg；IV
9 8 IVc-059a 15 mg/kg；IV
10 8 Captopril 50 mg/kg；PO
治療持續4週(28天)，每週量測血糖及尿白蛋白/肌酸酐。以下詳細介紹研究時程，每週(第5至9週)血糖水平、尿白蛋白/肌酸酐比率以及終末(第9週)血液化學及細胞介素、腎臟組織學及眼視網膜滲漏。 表54
時間(週) 1週 2週 3週 4週 5週 6週 7週 8週 9週 終末9週 犧牲
STZ 5天，每天 --- ---- --- --- --- --- --- --- ---
測試    血糖 血糖    血糖 尿 ALB/CREA 血糖 尿 ALB/CREA 血糖 尿 ALB/CREA 血糖 尿 ALB/CREA 血糖 尿 ALB/CREA 血糖 尿 ALB/CREA
化合物 --- --- --- --- --- 每天IV投藥 每天IV投藥 每天IV投藥 每天IV投藥 ---
器官                            血液 (血漿) 腎臟 眼
結果
臨床徵象 ：觀察到許多治療組都有體重最初下降，這是可以預期的，並且在大多數情況下，體重在給藥期結束時逐漸恢復。一些動物體重下降到初始體重90%以下，但是沒有動物必須免於給藥。
血糖：與未誘導的載體對照相比，以STZ誘導導致血糖顯著增加(表55)。與第28天誘導的載體對照相比，以IVc-059a IV治療導致血糖水平顯著降低**。以IIIc-061a IV治療也導致血糖水平降低，但是未達到統計學顯著性。 表55：STZ誘導的糖尿病模型中，雌性ICR-CD1小鼠在第0天及第28天的平均血糖濃度。顯示值為平均值±SD；非誘導及誘導載體組，n = 3；所有其他治療組，n = 8。
治療 組 治療 n 第0天平均濃度 (mmol/L) (SD) 第28天平均濃度 (mmol/L) (SD) 相較於載體組的p值
1 陰性對照(非誘導) 3 6.7 (0.2) 8.9 (1.8) n/a
2 陰性對照(誘導) 3 24.9 (1.8) 33.0 (-) n/a
3 Ia-001a 8 25.7 (6.3) 31.6 (3.8) 0.7082
4 Ia-001a-TZ 8 24.9 (7.4) 30.8 (6.2) 0.5618
5 Ic-001a-Tz/1-004a 8 25.8 (5.7) 29.6 (7.8) 0.3745
6 Ic-007a 8 25.5 (5.7) 31.1 (4.6) 0.6241
7 Ib-010a 8 25.1 (6.1) 31.1 (3.4) 0.6110
8 IIIc-061a 8 24.8 (6.2) 26.3 (7.8) 0.0775
9 IVc-059a 8 24.3 (6.4) 23.7 (6.6) 0.0159
10 Captopril 8 23.7 (6.9) 32.2 (2.3) 0.8256
腎臟重量：以動物體重百分比表示的濕腎臟重量或腎臟重量皆無統計學差異。
尿白蛋白：肌酸酐 ( ALB：CRE) ：每週收集尿液，並匯總於每個治療組。用Ib-010a、IIIc-061a及IVc-059a進行後，在殺死前第28天的最後治療(治療時程的第9週)的ALB：CREA減少(表56)。
血脲氮 (BUN) ：用Ic-007、Ib-010a、IIIc-061a及IVc-059a治療導致血脲氮水平顯著低於誘導載體對照。
ELISA：在治療期結束時，收集血液並將其處理為血清。使用市售ELISA套組定量CRP、TGF-β、IL-6及TNF-α的血清水平，結果列於表56。
血清CRP：治療28天後，STZ誘導的糖尿病模型中，雌性ICR-CD1小鼠的血清CRP水平。STZ誘導的動物中，血清CRP水平顯著增加。與載體誘導的對照相比(分別為** p = 0.0074，* p = 0.0304和** p = 0.0026，單因子方差分析，表56)，用Ia-001a、Ia-001aTz及對照卡托普利(Captopril)治療導致顯著降低血清CRP水平。
血清TGF-β：STZ誘導的對照組中，血清TGF-β水平顯著升高。用Ic-007a及IIIc-061a以外的所有化合物進行治療，導致TGF-β水平顯著低於載體誘導的對照(p≤0.05；單因子方差分析，表56)。
在STZ誘導的對照中，血清IL-6水平顯著升高。用IVc-059a及對照化合物卡托普利之外的所有化合物進行治療，導致IL-6水平顯著低於載體誘導的對照(p≤0.05；單因子方差分析，表56)。
在STZ誘導的對照中，血清TNF-α水平顯著升高。用Ia-001a、Ia-001aTz、Ic-001aTz/1-004a及IIIc-061a治療，導致TNF-α水平顯著低於載體誘導的對照(p≤0.05；單因子方差分析，表56)。
腎臟組織學：在給藥期結束時進行膠原蛋白定量，將動物殺死並切除腎臟。將組織用福馬林固定並以石蠟包埋，然後根據製造商的說明用馬森三色染色。使用Chen等人於2017年發表的方法對膠原蛋白進行定量。與非誘導 載體對照相比，STZ誘導載體對照中膠原蛋白的覆蓋率顯著增加。與誘導載體對照相比，用IIIc-061a及IVc-059a治療，導致膠原蛋白水平顯著降低(分別為p = 0.0210及p = 0.0134；單因子方差分析，表56)。
疾病評分：使用H&E染色和評估腎小球膜和腎小球硬化症、小動脈玻璃樣變性和GBM增厚來為腎臟疾病評分定量。顯然，與非誘導載體對照相比，STZ誘導載體對照的疾病評分顯著增加。與誘導載體對照相比，用Ic-001aTz/1-004a以外的所有化合物進行治療，導致疾病評分顯著降低(p≤0.005；單因子方差分析，表56)。
眼視網膜組織學：在給藥期結束時，在最終採樣之前立即對每組4隻動物注射FITC-葡聚醣以進行視網膜舖片評估，殺死動物並切除眼睛。製備視網膜舖片，使用螢光顯微鏡(EVOS，Thermo Fisher)成像。與非誘導載體對照相比，STZ誘導載體對照中血管分布覆蓋面積顯著增加。與誘導載體對照相比，用Ic-007a、IIIc-061a和IVc-059a治療，導致血管分布覆蓋率顯著降低(分別為p = 0.0432，p = 0.0337和p = 0.0131；單因子方差分析，表56)。 表56：治療第28天(時程的第9週)的尿白蛋白肌酸酐比率(ALB：CRE)、BUN、血液-CRP、血液-TGF-β、血液-IL-6、血液-TNF-α、三色染色(腎臟纖維化)、疾病評分和眼睛面積。
組 治療 第28天 n ALB： CRE BUN CRP TGF-β IL-6 TNF-α 三色染色 疾病評分 眼睛面積
1 陰性對照 (非誘導) 3 1.45 15.8 ± 0.4 3558 ± 106 11.64 ± 0.81 70.56 ± 1.25 261.7 ± 21 0.48 ± 0.4 1 ± 0 6.7 ± 1.2
2 陰性對照 (誘導) 3 37.04 28.6 ± 0.9 6759 ± 993 19.64 ± 1.97 151.4 ± 15.59 389 ± 24 2.63 ± 0.5 11 ± 2 11.2 ± 1
3 Ia-001a 8 35.68 25.1 ± 3.1 4759 ± 1181 15.54 ± 2.8 114.16 ± 29.96 342.3 ± 15.6 1.87 ± 0.65 7 ± 1 9.9 ± 1.9
4 Ia-001a-TZ 8 29.86 25.3 ± 3.1 5191 ± 993 14.76 ± 2.95 112.35 ± 20.01 327 ± 40.7 2.6 ± 0.98 8 ± 3 11.8 ± 1
5 Ic-001a-Tz/1-004a 8 35.10 24.1 ± 4.1 6077 ± 863 15.48 ± 1.73 104.66 ± 22.89 322.8 ± 40.1 2.48 ± 0.46 9 ± 1 10.7 ± 2.1
6 Ic-007a 8 38.10 21.7 ± 3.0 5707 ± 892 16.66 ± 2.11 109.27 ± 19.03 326.8 ± 63 2.23 ± 0.61 7 ± 1 9.1 ± 1.1
7 Ib-010a 8 24.28 20.5 ± 3.4 5915 ± 1352 13.17 ± 3.11 102.72 ± 25.4 395.6 ± 46.7 1.97 ± 0.8 6 ± 1 11.8 ± 1
8 IIIc-061a 8 24.12 22.5 ± 4.1 5963 ± 849 17.35 ± 2.09 117.59 ± 29.21 324.6 ± 43.6 1.54 ± 0.55 8 ± 1 9.1 ± 1.1
9 IVc-059a 8 18.85 22.5 ± 2.8 5691 ± 1395 13.47 ± 3.33 120.88 ± 23.05 350.2 ± 41.4 1.48 ± 0.73 7 ± 1 8.7 ± 1.2
10 Captopril 8 24.40 28.5 ± 7.6 4534 ± 821 14.55 ± 2.86 125.56 ± 15.75 415 ± 51.7 1.98 ± 0.47 6 ± 1 11.8 ± 1.4
實施例 5.20 ：多囊性腎臟疾病 (PKD 或 PCKD) 的治療及 / 或預防
如Lee EC等人所述(Nat Commun 10, 4148 (2019)，使用Pcy小鼠模型在活體內研究根據本發明化合物的治療功效。
臨床前模型：pcy小鼠，一種與遺傳相關的囓齒動物PKD模型與人類疾病密切相關，可用於新穎製劑功效評估。此模型演變為與導致人類疾病的基因相關的PKD，從而提供可轉譯的囓齒動物模型，該模型與人類PKD的演變密切相關。其已針對疾病的進展和對治療的反應進行全面表徵，為藥物發現研究提供高度信心。
動物模型：pcy小鼠，帶有與導致3型人類腎消耗病(nephronophthisis)相同基因相關的基因突變的CD-1-pcyIusm 小鼠品系(CrownBio)。疾病病況和進展是緩慢進行性的腎囊性疾病，其囊腫在收集小管中發展，隨著疾病的進展，腎單位的其他部分變得呈囊狀。雄性和雌性小鼠同樣受到疾病的影響。小鼠5週大，接受正常飲食、具有載體的正常飲食(陰性對照)，分別為陽性對照和皆與正常飲食混合的測試化合物。
對照：用於化合物的載體在一個動物組用作陰性對照，托伐普坦血管加壓素受體2(V2)拮抗劑在一個動物組中用作陽性對照。
讀出及終點：每週記錄腎臟的囊腫體積和纖維化，包括組織學檢查、腎臟重量、血清BUN、血液中測試物件濃度、體重和食物攝入量。實施例 5.21 ：輻射誘導纖維化 (RIF) 的治療及 / 或預防
如Ryu SH等人所述(Oncotarget. 2016, 7(13), 15554–15565, doi:10.18632/oncotarget.6952)，使用RIF小鼠模型在活體內研究根據本發明化合物的治療功效。
輻射誘導纖維化(RIF)是輻射療法最常見的晚期併發症之一。在RIF小鼠模型中，腿部攣縮鑑定用於測試化合物的活體內功效。
輻射誘導纖維化(RIF)的特徵是皮膚和軟組織中細胞外基質過度積聚，纖維母細胞的增生是輻射療法最常見的晚期併發症之一。同樣，RIF是死纖維組織的不可逆過程，並且是與藉由再活化肌纖維母細胞重塑疤組織有關的動態過程。
RIF小鼠模型：將雄性BALB/c小鼠用於RIF小鼠模型。在麻醉下，使用線性加速器讓每隻小鼠的右後肢接受44 Gy的輻射劑量(22 Gy×2倍，持續2週)。使用特殊設計的屏蔽保護身體的其餘部分，並在皮膚上施加1 cm厚的推注，以確保後腿表面有足夠的輻射劑量。照射後，將小鼠隨機分為兩組。每組每天用鹽水(對照組)或化合物(治療組)治療一次。未接受照射或藥物的小鼠作為陰性對照組。
為了證明化合物對受照射腿的皮膚和軟組織的抗纖維變性作用，使用H & E染色量測從表皮表面到真皮底部的上皮厚度。實施例 5.22 ： Stargardt 氏 病 (SD) 的治療及 / 或預防
如Fang Y.等人所述(Faseb Journal, 2020, DOI: 10.1096/fj.201901784RR)，使用SD小鼠模型在活體內研究根據本發明化合物的治療功效。
動物：著色小鼠Abca4-/-小鼠(129S4/SvJae-Abca4tm1Ght)將從The Jackson Laboratory (Bar Harbor, Maine, USA)購買。著色的野生型(WT)小鼠(129S2/SvPas)從Janvier Labs(Le Genest-Saint-Isle, France)獲得。每組中，雄性雌性比例為1：1。在12小時：12小時的光照(籠中約50勒克司)-黑暗周期飼養小鼠，隨意給食物和水。
藍光照明(BLI)：使用包括0.05 mg/kg芬太尼、5 mg/kg咪達唑侖和0.5 mg/kg千克美托咪定三組分麻醉對年齡相匹配的著色Abca4-/-和WT小鼠(9個月大)進行腹腔內麻醉。用0.5%托品醯胺和2.5% 4-去羥腎上腺素鹽酸鹽的混合物使瞳孔擴張。METHOCEL(Omni Vision, Puchheim, Germany)用於潤濕角膜。在光照期間，將玻璃片放在裸露眼睛的角膜上。將每隻小鼠經照射的眼睛暴露於50 mW/cm2 強度的藍光(波長：430 nm)15分鐘。仔細遮住未經照射的眼睛作為對照，以防止漫射光。
進行一系列測試，包括在BLI之前和BLI之後7天的光同調斷層掃描(OCT)、光學顯微鏡和透射電子顯微鏡(TEM)、藉由HPLC對雙維生素A(bisretinoids)定量，以及全場視網膜電圖ERG。實施例 5.23 ：增生性玻璃體視網膜病變 (PVR) 的治療及 / 或預防
如Hou H等人所述(Ophthalmic Res 2018；60:195-204. doi: 10.1159/000488492) 或Márkus B等人所述(FEBS Open Bio. 2017；7(8):1166–1177. Published 2017 年6月29日發表. doi:10.1002/2211-5463.12252)，使用PVR小鼠模型在活體內研究根據本發明的化合物的治療功效。
動物樣本：藉由玻璃體腔注射蛋白水解酶Dispase使用PVR小鼠模型。已知此模型可誘導神經膠質活化以及上視網膜膜和下視網膜膜的形成。
雌性4至6個月大的野生型經戊巴比妥(90 mg·kg-1，ip)麻醉，並接受一滴1%的普羅卡因鹽酸鹽(Novocaine, EGIS, Budapest, Hungary)進行局部麻醉和一滴托品醯胺(Mydrum, Chauvin Aubeans, Montpellier, France)用於虹膜擴張。使用自動移液器在立體顯微鏡控制下(Ctrl)將4微升Dispase (Sigma-Aldrich； 0.4 U·μL-1，溶解在無菌生理鹽水溶液中)玻璃體內注入右眼。Ctrl動物接受4μL無菌生理鹽水溶液。注射後拍攝Stratus光同調斷層掃描影像(OCT；Carl Zeiss Meditec, Dublin, CA, USA)，以確認PVR的誘導並監控疾病的進展。注射後第14天，當明顯出現PVR的徵象時，將Ctrl和經Dispase治療的小鼠殺死：OCT檢查中存在視網膜前膜(epiretinal membrane)及/或視網膜脫離。
樣本製備和純化：使用解剖刀片將角膜切開的角膜連同鞏膜蓋勒分離，分離小鼠的玻璃體，然後移開水晶體。用含7 m尿素、30 mm Tris、2 m硫脲和4%CHAPS的溶解緩衝液(pH 8.5)溶解玻璃體後，將溶解物在冰冷的水浴中以超音波處理5分鐘，然後在4°C下以16 900 g離心10分鐘。將上清液轉移至LoBind Eppendorf管中，並根據製造商的規程藉由Ready-Prep 2-D CleanUp Kit (Bio‐Rad Laboratories, Hercules, CA, USA)進行純化。簡言之，經過沉澱和離心後，將沉澱乾燥並再懸浮於240 μL再水合緩衝液中，該緩衝液包含7 m尿素、2 m硫脲、4% w/v CHAPS、1%二硫蘇糖醇(DTT)、2% v/v Bio-Lyte (Bio-Rad)和0.001%溴酚藍，並立即用於等電聚焦(isoelectric focusing)。
2D凝膠電泳：將來自每組的三個玻璃體樣本進行2-DE。首先，在20°C下使用被動再水合以與萃取的玻璃體蛋白質將IPG (24 cm，pH 4–7； Bio‐Rad)的固定pH梯度(IPG)條帶再水合過夜。隨後藉由施加300 V 3小時進行等電聚焦，然後在5小時內逐漸增加到3500 V，然後在3500 V下保持18小時。等電聚焦後，將IPG條帶立即置於-70°C直至平衡。將IPG條帶在含有0.6%DTT的平衡緩衝液(500 mm Tris/HCl，pH 8.5，6 m尿素，2%SDS，20%甘油)中平衡15分鐘，在含有1.2%碘乙醯胺的平衡緩衝液中平衡15分鐘。在第二維中，將條帶置於12%聚丙烯醯胺凝膠的頂部，並用瓊脂糖覆蓋。使用Protean Plus Dodeca Cell (Bio‐Rad)，以100 mA/凝膠進行電泳24小時，直到溴酚藍染料到達凝膠底部為止。所有12種凝膠在相同條件下操作。使用內建製備的參(深啡碄雙磺酸酯)釕II (ruthenium II tris(bathophenanthroline disulfonate))螢光染料25對蛋白質染色，使用Pharos FX Plus Molecular Imager (Bio‐Rad)記錄凝膠影像。在所有情況下皆分析三個生物學複製(biological replicates)，來自Ctrl和經Dispase治療的組的樣本在同一天一起處理。實施例 5.24 ：濕性及乾性的與年齡有關黃斑部退化 (ARMD 或 AMD) 的治療及 / 或預防
如Matsuda Y等人所述(Mol Ther Nucleic Acids. 2019；17:819–828. doi:10.1016/j.omtn.2019.07.018)，使用AMD鼠模型在活體內研究根據本發明化合物的治療功效。
動物：雌性C57BL/6J小鼠自日本Charles River Laboratories獲得。獲得雄性BN大鼠。雄性New Zealand White (NZW)兔子自Kitayama Labes, Japan獲得。將小鼠、大鼠和兔子置於無病原體的特殊條件下。
RPE細胞的EMT鑑定：將在37°C培養的RPE細胞以1×105 細胞/孔的密度接種到96孔微量滴定培養盤。培育24小時後，用含或不含本發明化合物的FGF2 (2 ng/mL)和TGF-β2 (3 ng/mL)處理細胞3天。用定量即時PCR評估EMT生物標誌物α-SMA和I型膠原蛋白的mRNA表現水平。
基質膠栓鑑定：將0.5 mL Matrigel Matrix GFR(生長因子降低)-PRF(不含酚紅)(BD Biosciences)溶液與1 μg FGF2混合，皮下植入雌性C57BL/6J小鼠的右脅(8週，n = 3)。腹膜內投予根據本發明的化合物，並在植入後第7天取出基質膠栓並照相。根據製造商的說明，使用氰變性血紅素方法，藉由基質膠栓中的血紅素濃度確定血管生成的等級。在微盤分析儀中量測樣本在540 nm處的光密度(OD540)值，並根據血紅素標準(Sigma-Aldrich)計算血紅素濃度。
小鼠雷射誘導的CNV模型：將Mydrin-P眼藥水注入到雄性C57BL/6J小鼠的眼睛中，使瞳孔擴大。然後使用狹縫燈 (SL-130)和多色雷射光凝聚器(波長532 nm；光斑大小50 μm；照射時間0.1秒；雷射輸出120 mW)在眼睛的6個部位進行雷射照射(MC-300)，避免大的視網膜毛細血管。藉由雷射照射誘導CNV後，立即經由玻璃體內注射投予根據本發明的測試化合物和對照。雷射照射7天後，將4%FITC-葡聚醣溶液以0.5 ml/動物的體積投予尾靜脈。投予FITC-葡聚醣1至5分鐘後，藉由頸椎脫位術使動物安樂死。移走眼球，在4%的多聚甲醛磷酸酯緩衝液中固定12–24小時。脈絡膜舖片是在立體顯微鏡下製備。使用共聚焦顯微鏡拍攝CNV部位的照片。在整個雷射誘導的CNV動物實驗中，當動物模型眼中形成氣泡才確認每次照射成功。
大鼠雷射誘導的CNV和下視網膜纖維化模型：使用雄性BN大鼠的大鼠模型將採用相同的技術。對CNV模型，雷射設定為光斑大小80μm，在視網膜脈絡膜的8個部位的120 mW處的照射時間為0.05秒。對於下視網膜纖維化CNV模型，使用的雷射功率為240毫瓦。雷射照射後，立即用對照和本發明測試化合物進行玻璃體內注射。對於下視網膜纖維化CNV研究，使用(1)鹽水載體和(2)本發明化合物(單次注射為15 μg/眼，或每隔兩週注射兩次或3次)。雷射照照後，對於CNV研究，在雷射照射後14天使用上述FITC-葡聚醣方案，並準備舖片脈絡膜的共聚焦顯微鏡用去核眼。對於下視網膜纖維化研究，在6週後殺死動物，準備去核的眼睛用於組織病理學研究，使用光學顯微鏡對下視網膜纖維化進行定量。將眼睛包埋在石蠟塊中，根據例行方法切片並用馬森三色染色。纖維化是由兩位或三位獨立的研究員根據以下標準以盲法進行分級：等級0，無；等級1，最小；等級2，輕度；等級3，中度；等級4，嚴重。實施例 5.25 ：翼狀胬肉 (PTE) 的 治療及 / 或預防
藉由使用脈絡膜血管新生病變小鼠模型(CNV)、直接活體內 血管生成鑑定(DIVAA)及翼狀胬肉小鼠模型，評估根據本發明化合物對脈絡膜血管生成及翼狀胬肉生長的治療功效。
翼狀胬肉為眼表面良性纖維小管生長，通常與不適和紅眼有關，隨著疾病進展，通常與視力下降(地形散光)和在嚴重情況下眼球運動受限有關。藉由纖維化生長因子、氧化應力和DNA甲基化誘導的多種促發炎細胞介素與翼狀胬肉發病有關。由於一些因素受紫外線(UV)照射的影響，來自多個來源的最新證據顯示，高度暴露於陽光下的人罹患翼狀胬肉的風險增加。儘管進行廣泛研究，對翼狀胬肉的發病機制尚無明確了解，但促成發病機制的最重要因素之一是與紫外線照射相關的輪部幹細胞的贅生物改變以及致癌病毒(人類乳宊病毒)的可能作用。
截至目前為止，已經描述三種翼狀胬肉的動物模型，其在兔子和小鼠使用人類上皮翼狀胬肉細胞、外源性細胞外基質或紫外線散射輻射進行注射。使用紫外線散射光的兔子模型的結果集中在組織生長的大小和形狀的計算預測上，沒有組織學分析。小鼠模型顯示人類翼狀胬肉的組織學特徵，然而，由於眼睛結構和大小與人類眼睛相似，因此對兔子進行眼科手術更為容易。
方法：小鼠接受水，有或沒有測試的化合物。對於CNV，在雷射誘導7天後，使用共聚焦顯微鏡在脈絡膜視網膜色素上皮(RPE)舖片中確定新生血管病變體積。對DIVAA，將含有10,000個人類翼狀胬肉上皮細胞的聚矽氧膠囊皮下植入小鼠脅部面。11天後，在小鼠尾靜脈注射螢光異硫氰酸鹽(FITC)標記的葡聚醣後，使用分光螢光法對新血管形成(NV)進行定量。藉由在無胸腺裸鼠的鼻結膜下腔內注入10,000個人翼狀胬肉上皮細胞，建立翼狀胬肉上皮細胞模型。
主要結果量測：學生t-測試用於評估CNV和DIVAA模型的數據，組織學製劑用於評估翼狀胬肉病變。實施例 5.26 ：中心性漿液性脈絡視網膜病變 (CSC) 的治療及 / 或預防
如Wei-Da Chio等人所述(Life Sci J 2019；16(12):115-126]. ISSN: 1097-8135)，使用CSC動物模型在活體內研究根據本發明的化合物的治療功效。
中心性漿液性脈絡視網膜病變(CSC)的發病機制仍不完全清楚。與皮質類固醇有關是無可爭議的，儘管尚不清楚其確切作用。CSC潛在機制的其他部分主要是藉由成像技術(如螢光素和循血綠眼底攝影(indocyanine green angiography))闡明。即使大多數CSC病例都是自限性的，但也存在嚴重和反復發作的過程，並且對於此等患者僅提供有限的治療選擇：雷射光凝術(具有盲點和脈絡膜新生血管形成的風險)和光動力療法。
方法：治療有CSCR的雄性SD大鼠。將病例的右眼隨機分為兩組(對照和測試化合物)，進行包括間接眼底鏡檢查和每週OCT掃描的系列檢查。首先將所有SD大鼠引入CSCR模型。如果在OCT成像下CSCR消失，則認為化合物有效。實施例 5.27 ：影響肺以及胰、肝、腎和腸的囊腫纖維化 (CF) 的治療及 / 或預防
如McCarron A等人所述(Respir Res. 2018；19(1):54. 2018年4月2日發表 Apr 2. doi:10.1186/s12931-018-0750-y)，使用CF小鼠模型在活體內研究根據本發明化合物的治療功效。
在人類中，肺囊腫纖維化(CF)的特徵是慢性感染、發炎、氣道重塑和黏液阻塞。CF小鼠模型缺乏肺部表徵妨礙對氣道疾病發病機制理的研究，以及潛在療法的開發和測試。然而，最近產生的CF動物模型(包括大鼠、雪貂和豬模型)證實一系列特徵明確、嚴重程度不同的肺部疾病表現型。當前可獲得的CF動物模型具有不同的氣道表現型，其展示每種模型在氣道相關CF研究的潛在應用。特別地，已經開發具有常見的引起人類CF突變(例如，Phe508del或Gly551Asp)的突變等位基因(mutant alleles)，其被引入小鼠CFTR序列中。實施例 5.28 ：特發性肺纖維化 (IPF) 的治療及 / 或預防
如Chen SS等人所述(J Thorac Dis. 2017；9(1):96–105. doi:10.21037/jtd.2017.01.22)，使用IPF動物模型在活體內研究根據本發明化合物的治療功效。
PF是一種慢性進行性間質性肺疾病，具有嚴重的肺纖維化。IPF的病因尚不清楚。患者通常在被診斷為IPF後僅存活2-3年。IPF的發生和發展與上皮細胞受損、纖維細胞增生、發炎反應和細胞外基質沉積有關。IPF的病理表現為通常的間質性肺炎(UIP)。目前，IPF患者的死亡率很高。然而，缺乏針對IPF的有效治療。IPF相關死亡的主因是IPF急性惡化(AE-IPF)，佔IPF相關死亡的50%以上。AE-IPF的大多數患者由於病情嚴重而無法耐受支氣管鏡檢查或肺活檢。缺乏對AE-IPF的活檢實質上限制對AE-IPF的深入研究。可以模擬AE-IPF的實驗動物模型將是研究AE-IPF的有利工具。
使用博來黴素(BLM)-誘導的IPF的動物模型。IPF的大鼠模型是藉由氣管內灌注BLM建立的。理論上，第二次氣管內BLM灌注應該會使在第一次灌注時已發展為肺纖維化的大鼠誘導更多的肺受損。額外的肺受損可能類似AE-IPF的病理特徵。
將Sprague Dawley(SD)大鼠隨機分為不同的組：只用化合物治療的對照組，具有化合物+ BLM + BLM組的AE-IPF模型組，AE-IPF模型組(cpd + BLM + BLM組)，用化合物治療的IPF模型組(Cpd + BLM組)，IPF模型組(BLM組)和無BLM的正常對照組。
BLM + BLM組的大鼠在第一次BLM灌注後的第28天進行BLM的第二次灌注。其他兩組的大鼠皆接受鹽水作為第二次灌注。分別在第一次灌注後第31天、第35天和第42天殺死每組六隻大鼠。
BLM + BLM組大鼠的病理生理特徵與AE-IPF患者相似，如 (Chen SS, J Thorac Dis 2017；9(1):96-105)所述，第二次BLM灌注似乎可誘導急性加劇肺纖維化，可用於在大鼠中建立AE-IPF模型。
使用單獨和分別兩種氣管內博來黴素灌注誘導的AE-IPF在此大鼠模型中化合物調配物的作用應改善組織病理學發現(對H & E和馬森染色的切片進行急性肺受損的分析和評分)以及存活率。實施例 5.29 ：博來黴素誘導的 C57BL/6 小鼠肺纖維化持續 21 天
總共使用40隻8-10週大的雄性Balb/c小鼠進行研究。此等小鼠是從Charles River, UK購買，適應期為7天。將動物圈養在IVC籠子中(每籠最多5隻)，藉由尾標識別個別小鼠。在研究期間，允許所有動物自由獲得標準認證的商業飲食和消毒水。圈養室保持在標準條件下：18-24°C、55-70%濕度和12小時的光照/黑暗周期。
本研究使用的所有方案皆已得到動物福利和道德審查委員會(Animal Welfare and Ethical Review Committee)的批准，所有程序皆在1986年動物(科學程序)法案的指導下進行。
使用IP注射甲苯噻
Figure 110108763-A0304-12-02
和氯胺酮來麻醉小鼠。一旦達到適當的麻醉水平(plane of anaesthesia)，就經由氣管內途徑將1.0 U/kg博來黴素硫酸鹽灌輸入動物體內。液體的總體積為50 µL。如下表57所示，將小鼠隨機分配至治療組： 表57：
組數 IT 誘導 治療 動物 數目 終止 劑量方案
1 鹽水 來自第1天的載體    6 第21天 QD (IV)
2 博來黴素 – 1U/kg第0天 來自第1天的載體    12 第21天 QD (IV)
3 博來黴素 – 1U/kg 第0天 來自第1天100 mg/kg的吡非尼酮 12 第21天 QD (PO)
4 博來黴素 – 1U/kg第0天 來自第1天的mg/kg的IVc-059a 15 12 第21天 QD (IV)
博來黴素滴注後24小時，開始IV注射和陽性對照(吡非尼酮)。
在給藥前立即調配藥物溶液。對於15 mg/kg的劑量(足以供應12隻，30 g的小鼠)，稱重4.5 mg化合物。加入75 μl(5%)DMSO，混合直至藥物溶解。添加150 μl(10%)的solutol並輕輕渦旋，添加150 μl(10%)PEG400並輕輕渦旋。加入1000 μl PBS(pH7))，量測基質以確保維持pH 7.0。加入剩餘的PBS(總計1500 μl)。化合物保留在溶液中。
終止後採樣(最終給藥日)：採樣日，最終劑量後2小時，經由過量麻醉殺死小鼠。對動物進行以下採樣：
血清：殺死後，立即經由心臟穿刺取血，並放入微量離心管(Eppendorf tubes)。將微量離心管在室溫下儲存至少20分鐘，然後以6,000 rpm離心5分鐘。將樣本儲存在-80°C。
肉眼屍檢(Gross Necropsy)：終止後，暴露內臟並予以觀察。注意任何異常。
肺：切除前先用福馬林給肺充氣。簡言之，將小鼠的氣管暴露出來，用刀片做一個小切口。將縫線材料輕輕地放在切口下方的氣管後部周圍，並鬆散地綁起來。將福馬林輕輕插入肺，並緊密縫合縫線以確保充氣。將肺放入福馬林中，並用三色染色和H&E染色劑進行染色，以分析膠原蛋白沉積和疾病進展(Ashcroft評分)。將一部分肺組織急速冷凍。
Ashcroft評分： 0     正常肺 1     肺泡或細支氣管(bronchiolar)血管的的最小纖維化增厚 2     在最小和中等之間 3     中度的壁增厚，對肺結構沒有明顯損害 4     中度和加劇纖維化之間，對肺結構造成損害 5     加劇纖維化，對肺結構有一定的損害以及形成纖維帶或小纖維團 6     加劇纖維化和肺結構嚴重變形之間 7     結構嚴重變形及大纖維面積；蜂巢狀肺」 8     視野的總纖維阻塞 結果
臨床徵象 ：研究過程未發現體重變化，且沒有動物必須免於給藥。
Ashcroft 評分 ：每隻動物的肺皆用FFPE切片，並根據內部規程用H&E染色。將玻片在Glissando玻片掃描儀上成像，以得到完整的玻片影圖像。根據Hübneret等人2008，使用Ashcroft評分系統對每個肺進行評分，以量測發炎/纖維化程度。評分以盲法進行。100 mg/kg的吡非尼酮和15 mg/kg的IVc-059a皆可降低小鼠肺纖維化的發病(使用ANOVA，分別為p = 0.0018和0.0130)。用吡非尼酮治療對纖維化的發病與用IVc-059a治療具有相同的效果(p = 0.4441，2尾，T-測試)。代表性影像顯示於圖11A。
圖11A顯示在治療第21天的肺纖維化的代表性影像：結締組織三色染色(x20)的實施例影像；(A1)非誘導(健康)；A2，用載體治療博來黴素誘導；A3，100 mg/kg吡非尼酮治療博來黴素誘導；A4，用IVc-059a治療博來黴素誘導。圖11B顯示健康、未治療的博來黴素誘導、與吡非尼酮、IVc-059a的Ashcroft評分。
將每隻動物的整個肺固定在福馬林中，並儲存在70%的乙醇中。在包埋在石蠟中之前，將此等切片在乙醇濃度增加的條件下進行脫水。將切片切成5 µM，然後在Superfrost載玻片上烘烤2小時。使用可商購的用於結締組織的套組(Abcam ab150686)對切片進行染色。使用Qupath和ImageJ軟體為三色染色覆蓋的面積百分比定量。實施例 5.30 ：試管內結果和 ADME 毒理學
對化合物Ic-007a、IIc-007a、IIIc-061a和IVc-059a進行ADME毒理學的綜合評估。
對Ic-007a、IIc-007a、IIIc-061a和IVc-059a評估心臟離子通道鑑定(CiPA) Core QPatch Panel：以下三種鑑定用於CiPA：Nav1.5基於人鈉離子通道細胞的QPatch CiPA鑑定、hERG基於人鉀離子通道細胞的QPatch CiPA鑑定、Cav1.2(L型)基於人鈣離子通道細胞的QPatch CiPA鑑定。
評估肝細胞微粒體和人肝細胞的代謝。評估一組全面的結合鑑定、酶和吸收鑑定以及溶液性質、試管內吸收、代謝和毒性。使用AMES *和微核鑑定評估基因毒性。
* Ames是用於鑑識可產生基因突變的化合物的細菌鑑定，通過囓齒類動物致癌性測試顯示很高的預測價值。試管內
**試管內微核鑑定，用於鑑識誘導染色體損傷的化合物(破骨細胞和無細胞細胞(clastogens and aneugens))。 結果
高極性化合物在肝微粒體顯示低代謝，半衰期大於60分鐘。從生存力看，沒有觀察到肝細胞有顯著的毒性作用。大多數帶負電荷的化合物與血漿蛋白質高度結合。沒有觀察到遺傳毒性作用。化合物對濃度為5 µM至0.1 mM的Ames波動測試* TA100 -S9、TA100 + S9、TA1535-S9、TA1535 + S9、TA1537 – S9、TA1537 + S9、TA98 – S9、TA98 + S9的沒有顯著影響。在TA100 -S9、TA1535-S9、TA1537 – S9、TA98 – S9未觀察到細菌毒性。
對於濃度範圍為8 µM至1 mM的濃度，在微核鑑定中未觀察到任何影響。
在CiPA監督盤中，使用三種基於細胞的鑑定：Cav1.2(L型)基於人鈣離子通道細胞的自動膜片鉗CiPA鑑定、基於hERG人鉀離子通道細胞的自動膜片鉗CiPA鑑定和Nav1.5 基於人鈉離子通道細胞的自動膜片鉗CiPA鑑定：所有皆以3個濃度水平評估，在0.1 µM至10 µM之間未觀察到顯著的抑制作用。
在安全監督盤中，化合物對以下酶系統無抑制作用或抑制作用極低，對5-HT轉運蛋白人類(h)(拮抗劑放射性配體)顯示良好的安全性輪廓；5-HT1A(h)(促效劑放射性配體)；5-HT1B(h)(拮抗劑放射性配體)；5-HT2A(h)(促效劑放射性配體)；5-HT2B(h)(促效劑放射性配體)；5-HT3(h)(拮抗劑放射性配體)；A2A(h)(促效劑放射性配體)；乙醯膽鹼酯酶(h)；α 1A(h)(拮抗劑放射性配體)；α 2A(h)(拮抗劑放射性配體)；AR(h)(促效劑放射性配體)；β 1(h)(促效劑放射性配體)；β 2(h)(拮抗劑放射性配體)；BZD(中央)(促效劑放射性配體)；Ca2+ 通道(L，二氫吡啶位置)(拮抗劑放射性配體)；CB1(h)(促效劑放射性配體)；CB2(h)(促效劑放射性配體)；CCK1(CCKA)(h)(促效劑放射性配體)；D1(h)(拮抗劑放射性配體)；D2S(h)(促效劑放射性配體)；δ(DOP)(h)(促效劑放射性配體)；多巴胺轉運蛋白(h)(拮抗劑放射性配體)；ETA(h)(促效劑放射性配體)；GR(h)(促效劑放射性配體)；H1(h)(拮抗劑放射性配體)；H2(h)(拮抗劑放射性配體)；κ(KOP)(促效劑放射性配體)；KV通道(拮抗劑放射性配體)；Lck激酶(h)；M1(h)(拮抗劑放射性配體)；M2(h)(拮抗劑放射性配體)；M3(h)(拮抗劑放射性配體)；MAO-A(拮抗劑放射性配體)；mu(MOP)(h)(促效劑放射性配體)；N神經元α 4β 2(h)(促效劑放射性配體)；Na+ 通道(位置2)(拮抗劑放射性配體)；NMDA(拮抗劑放射性配體)；正腎上腺素轉運蛋白(h)(拮抗劑放射性配體)；PDE3A(h)；PDE4D2(h)；鉀通道hERG(人類)-[3H]多芬利特；V1a(h)(促效劑放射性配體)。
化合物的抗發炎作用與部分環氧合酶酵素的抑制作用一致，例如Ic-007a、IIc-007a、IIIc-061a 及IVc-059a表現對COX2(環氧合酶-2)的部分抑制作用。實施例 5.31 ：使用 BioMap Plus 進行試管內分析
使用基於人類初代細胞的測定法進行了一系列試管內 鑑定，此等鑑定模擬器官的複雜組織和疾病生物學(血管分布、免疫系統、皮膚、肺)和一般組織生物學，用於在保留串擾和反饋機制的條件下對化合物進行表型分析與活體內結果有關。
使用BioMaps Plus表型細胞鑑定(Eurofins-DiscoverX, San Francisco, CA, USA)，以下述細胞系統評估濃度為30 μM、10 μM、3.3 μM、1.1 μM的化合物Ic-007a、IIc-007a、IIIc-061a、IVc-059a的效力、選擇性、安全性、作用機制和疾病徵象： - 靜脈內皮細胞，以評估心血管疾病、慢性發炎、哮喘、過敏、自體免疫疾病、異位性疾病； -具有靜脈內皮細胞的PBMC，以評估心血管疾病、慢性發炎、自體免疫疾病、慢性發炎； -具有PBMC的B細胞，以評估自身免疫性疾病、發炎； -支氣管上皮細胞，以評估肺炎、COPD； -冠狀動脈平滑肌細胞，以評估心血管發炎、再狹窄； -皮膚纖維母細胞，以評估纖維化、慢性發炎、傷口癒合、組織重塑、基質調節； -角質細胞/皮膚纖維母細胞，以評估牛皮癬、皮炎、皮膚生物學； -肺纖維母細胞，以評估纖維化、慢性發炎、基質重塑； -帶有巨噬細胞的小靜脈內皮細胞，以評估心血管發炎、再狹窄、慢性發炎。
BioMpas Plus參考文獻：書籍：Phenotypic Drug Discovery, Chapter 2 - Development and Validation of Disease Assays for Phenotypic Screening. Ellen L. Berg, Sheryl P. Denker and Alison O'Mahony. https://doi.org/10.1039/9781839160721-00020 ISBN 978-1-83916-072-1。
在BioMAP分析系統評估水果和蔬菜萃取物的生物活性暴露輪廓。Wetmore BA, Clewell RA, Cholewa B, Parks B, Pendse SN, Black MB, Mansouri K, Haider S, Berg EL, Judson RS, Houck KA, Martin M, Clewell HJ 3rd, Andersen ME, Thomas RS, McMullen PD. Toxicology in Vitro. 2019,54,41–57。 結果
在這項研究測試的濃度下，IC-007a沒有細胞毒性。Ic-007a對人類初代T細胞(30 μM)和纖維母細胞(30 Μm、10 μM、3.3 μM、1.1 μM)具有抗增生作用。Ic-007a具有20種帶註解的讀數，並且在生物學和疾病分類中列出關鍵生物標誌物活性的介導變化。Ic-007a主要影響發炎相關活性(VCAM-1、sTNFα、MIP-1α、I-TAC、MIG降低；IL-8升高；IP-10調變)、免疫調變活性(CD40，M-CSF降低)和組織重塑活性(膠原蛋白I、膠原蛋白IV、TIMP-1、tPA、膠原蛋白III、PAI-1、uPAR、bFGF降低)。
在這項研究測試的濃度下，IIc-007a沒有細胞毒性。在測試的濃度下，IIc-007a對此等人類初代細胞沒有任何抗增生作用。
IIc-007a具有12種帶註解的讀數，並且在生物學和疾病分類中列出關鍵生物標誌物活性的介導變化。IIc-007a主要影響發炎相關活性(sTNFα、MIP-1α降低；IL-8升高；MCP-1調變)、免疫調變活性(sIL-10、sIL-2降低)和組織重塑活性(膠原蛋白I、膠原蛋白IV、膠原蛋白III、PAI-1降低)。
在這項研究測試的濃度下，IIIc-061a沒有細胞毒性。在測試的濃度下，IIIc-061a對此等人類初代細胞沒有任何抗增生作用。IIIc-061a具有6種帶註解的讀數，並且在生物學和疾病分類中列出關鍵生物標誌物活性的介導變化。IIIc-061a影響發炎相關活性(I-TAC、MIG降低)、免疫調變活性(sIL-17A降低)和組織重塑活性(膠原蛋白I、膠原蛋白III、PAI-1降低)。
在這項研究測試的濃度下，IVc-059a沒有細胞毒性。IVc-059a對人類初代內皮細胞(1.1 μM)具有抗增生作用。IVc-059a具有3種帶註解的讀數，並且在生物學和疾病分類中列出關鍵生物標誌物活性的介導變化。IVc-059a影響發炎相關活性(sTNFα降低)和組織重塑活性(sIL-10、sIL-2降低)。實施例 5.32 ：人類視網膜色素上皮細胞 (RPE)ARPE-19 和人類視網膜內皮細胞 (HREC) 的試管內結果
評估化合物Ic-007a、IIc-007a、IVc-059a和貝伐單抗(BEVA)對糖尿病誘導的內、外血液視網膜屏障破壞的作用。評估兩種不同濃度(25 µM和50 µM)的化合物Ic-007a、IIc-007a、IVc-059a。藉由RT-PCR利用其mRNA表達水平評估螢光葡聚醣的滲透性和促炎細胞介素的產生，以探索受試治療抗滲透作用的作用機制。
外血液視網膜屏障病況：人視網膜色素上皮細胞(RPE)培養基ARPE-19，一種自發永生的人類RPE細胞族系，自美國菌種保存中心(American Type Culture Collection (Manassas, VA, USA))獲得。在正常血糖條件下(D-葡萄糖(D-Glc)，5.5 mmol/L)和高血糖條件下(D-葡萄糖，25 mmol/L)，於37°C及5%(vol./vol.)CO2下將ARPE-19細胞在培養基(DMEM/F12)中培養18天，培養基經補充10%(vol./vol.)FBS(Hyclone; Thermo Fisher Scientific，UT，USA)和1%(vol./vol.)青黴素/鏈黴素(Hyclone; Thermo Fisher Scientific)。使用第20繼代的ARPE-19細胞，每3-4天更換一次培養基。為了進行滲透性研究，將ARPE-19細胞以400,000個細胞/ml(80,000 RPE細胞/孔)的密度接種在0.33 cm2 HTS-Transwells(Costar; Corning，NY，USA)。對於即時PCR，使用西方墨點法分析，以20,000個細胞/ml接種免疫螢光細胞。
實驗條件和處理：除了在正常血糖條件之外，在25 mmol/L D-葡萄糖培養的細胞中測試18種不同條件：
條件1)對照細胞未接受5 mM D-葡萄糖的任何處理。
條件2)將細胞用糖尿病環境(diabetic milieu)25mM D-葡萄糖+載體處理(第15、16和17天，一天施用一次)，以評估其在預防糖尿病環境引起細胞損傷的作用。
條件3、4、5、6、7、8)用25 mM D-葡萄糖和兩種不同濃度的每種產物處理細胞：Ic-007a(3，4) 25 µg/mL(= 53 µM)和50 µg/mL(= 107 µM)；IIc-007a(5，6) 25 µg/mL(= 53 µM)和50 µg/mL(= 107 µM)；IVc-059a(7，8) 20 µg/mL(= 50 µM)和40 µg/mL(= 100 µM)，持續72小時(第15、16和17天，一天施用一次)，以評估其潛在的細胞毒性作用。
條件9)用25mM D-葡萄糖和貝伐單抗(0.2mg/ml)處理細胞72小時(第15、16和17天，一天施用一次)，以評估其潛在的細胞毒性作用。
條件10)=糖尿病環境；用25 mM D-葡萄糖+IL-1β(10 ng/ml) +TNF-α(25 ng/ml) + VEGF(25 ng/ml)處理細胞48小時(第16和第17天，一天施用一次)，以激發單層細胞的破壞。
條件11、12、13、14、15、16)用糖尿病環境(25 mM D-葡萄糖+IL-1β (10 ng/ml)+TNF-α(25 ng/ml) + VEGF(25 ng/ml)) +兩種濃度的新化合物(Ic-007a、IIc-007a和IVc-059a(第15、16和17天，一天施用一次)處理細胞，以評估其等在預防由糖尿病環境激發細胞受損的作用。。
條件17)用糖尿病環境(25 mM D-葡萄糖+IL-1β(10 ng/ml) + TNF-α (25 ng/ml) +VEGF(25 ng/ml)) +貝伐單抗(0.2 mg/ml)處理細胞(第15、16和第17天，一天施用一次)，以評估其等在預防由糖尿病環境激發細胞受損的作用。
ARPE-19滲透性的量測：按照Villarroel等人先前報導的程序(Villarroel et al. Exp Eye Res, 2009, 89, 913–920)，藉由量測FITC-葡聚醣(40 kDa)(Sigma, St Louis, MI, USA)的頂端至底側運動(apical to basolateral movements)，在18天時測定RPE細胞的滲透性。
內血液視網膜屏障條件：從一瓶由Innoprot (Vizcay、Spain)購得的冷凍保存細胞獲得初代人類視網膜內皮細胞(HRECs)。此等細胞是從屍體眼睛的人視網膜組織分離出來，在37°C下用0.1 mg/mL I型膠原蛋白酶消化1小時。然後，最後用塗有CD31抗體的磁珠(DynaBeads; Dynal, Oslo, Norway)選擇內皮細胞。HRECs在實驗室中解凍，並在含有5.5 mM D-葡萄糖、5% FBS(胎牛血清)、100 U/mL青黴素、100 μg/mL鏈黴素和ECG(內皮細胞生長補充物)補充物(Innoprot, Vizcay, Spain)的內皮基礎培養基(EBM)中培養。以5 µg/mL的人類纖維接合素(MerckMillipore, Madrid, Spain)進行細胞附著。第2-3繼代的細胞將用於實驗。為了進行實驗，將HRECs生長至匯合，然後將細胞培養基更換為補充1%FBS的培養基24小時，然後進行不同的處理。
條件/處理：使用在ARPE-19細胞實驗中指定的相同條件。
HREC滲透性的量測：HREC單層的滲透性是在滲透性支持物上以12 x 105 個細胞/孔(24孔，PCF過濾器，Merck Millipore)獲得的。將插入物在37°C在5%CO2 -空氣中培育48小時，以形成單層。最後，在進行治療前24小時將培養基中的血清消耗掉。下部腔室充滿600 μL完全EBM培養基，上部腔室充滿100 μL血清消耗掉的細胞懸浮液(1%)。
為了檢測滲透率的變化，將100 μg/ml的螢光FITC-DEXTRAN (Sigma, Madrid, Spain)添加到插入物的上側。每30分鐘在485/528 nm的激發/放射波長SpectraMax Gemini (Molecular Devices, Sunnyvale, CA)讀取來自基底隔室的200 μL等分試樣。最後，藉由在標準曲線外插螢光讀數來確定葡聚醣的濃度。每個條件測試三次。
細胞生存力和增生 ：在HREC進行細胞計數和MTT鑑定，以評估在測試條件下細胞的生存力。量測HREC的生存力和增生。簡言之，用DAPI為細胞染色，並以螢光倒置顯微鏡(具有V-RFL-T Olympus的Olympus iX71)拍照(20x)。借助Image J軟體在每種情況的三個不同像場(fields)對細胞核計數。重複實驗三次。另外，MTT鑑定(Sigma, Madrid, Spain)用於評估細胞的生存力。簡言之，在處理後將10 μl的5 mg/ml MTT(PBS中)添加至每個孔，並在37°C 下再培育1小時。移除培養基，將獲得的甲臢(formazan)顆粒溶解在100%二甲基亞碸(DMSO)中，並用ELISA plate reader (ELx800. Bio-Tek Instruments, VT, USA)在562 nm處檢測吸光度。此鑑定排除由於不同條件下細胞增生變化而導致結果的潛在偏差。
作用機制： -藉由RT-PCR在ARPE-19細胞中評估促炎細胞介素，並使用雙三角CT方法2 ΔΔCT量測IL-6、TNF-α、IL-1β、IL-18、VEGF、IL-10、FGF的mRNA， 用感興趣的基因和內源性人類B-肌動蛋白的Cts值獲得ΔCT；mRNA值表示為相對於條件25mM D-Gluc的相對變化。(參考：Livak KJ, Analysis of Relative Gene Expression Data Using Real-Time Quantitative PCR and the 2-ΔΔCT Method, Methods, 2001, 25(4), 402-408, doi 10.1006/meth.2001.1262)。 -使用Cell Biolabs’ OxiSelect™ Intracellular ROS Assay (綠色螢光)(Bionova, Madrid, Spain)評估ROS的產生。鑑定採用可滲透細胞的螢光探針2',7'-二氯二氫螢光素二乙酸酯(DCFH-DA)，被細胞ROS氧化為高螢光2',7'-二氯二氫螢光素(DCF)。 -藉由免疫組織化學分析和RT-PCR分析HREC單層中的內皮素-1、PDGF和VCAM-1的表現。 -藉由免疫組織化學分析在ARPE-19和HREC單層中的TJ表現(ZO)。結果：
表58顯示外血液視網膜屏障(ARPE19單層)和內血液視網膜屏障(HREC)的滲透性結果。化合物Ic-007a、IIc-007a、IVc-059a降低內外層的滲透性。
化合物Ic-007a、IIc-007a、IVc-059a對暴露於非糖尿病和糖尿病環境的ARPE19單層細胞中ROS和TNF-α，IL-1β，IL-6，IL-18和VEGF-mRNA生產的影響顯示於表59。 表58：使用FITC-葡聚醣螢光(ng/mL/cm2 )的滲漏，外血液視網膜屏障及內血液視網膜屏障的滲透性。
      ARPE19 HREC
編號 條件 % 滲透性 p＜0.05 % 滲透性 p＜0.05
1 DMEN HAM'S F-12 1% 5.5 mM D-Gluc 105.1 ± 34.1    88.3 ± 26.2   
2 DMEN HAM'S F-12 1% 25 mM D-Gluc (#) 94.9 ± 10.3    100.0 ± 15.6   
3  (#) + Ic-007a 25 µg/mL 75.2 ± 11.1    126.3 ± 8.3   
4  (#) + IIc-007a 25 µg/mL 66.1 ± 4.9    136.3 ± 16.7   
5  (#) + IVc-059a 25 µg/mL 70.2 ± 8.8    109.9 ± 24.7   
6  (#) + Ic-007a 50 µg/mL + VEGF, TNF-α, IL-1β 107.3 ± 43.9    127.4 ± 2.1   
7  (#) + IIc-007a 50 µg/mL + VEGF, TNF-α, IL-1β 113.1 ± 11.4    147.7 ± 17.6   
8  (#) + IVc-059a 50 µg/mL + VEGF, TNF-α, IL-1β 112.6 ± 19.8    135.4 ± 6.7   
9  (#) + BEVA 0.2 mg/mL 109.5 ± 22.9    127.1 ± 26.2   
10 (#)  + VEGF, TNF-α, IL-1β         = DIABETIC MILIEU 159.9 ± 5.0 170.0 ± 12.0
11  (#) + Ic-007a 25 µg/mL + VEGF, TNF-α, IL-1β 103.7 ± 15.7 * 111.6 ± 24.2 *
12  (#) + IIc-007a  25 µg/mL + VEGF, TNF-α, IL-1β 114.7 ± 19.0 * 135.8 ± 16.6 *
13  (#) + IVc-059a  25 µg/mL + VEGF, TNF-α, IL-1β 98.5 ± 36.5 * 124.0 ± 6.3 *
14  (#) + Ic-007a 50 µg/mL + VEGF, TNF-α, IL-1β 127.1 ± 13.5 * 159.0 ± 23.9   
15  (#) + IIc-007a  50 µg/mL + VEGF, TNF-α, IL-1β 136.8 ± 13.0 * 145.2 ± 8.8   
16  (#) + IVc-059a  50 µg/mL + VEGF, TNF-α, IL-1β 130.4 ± 24.8    115.3 ± 14.7 *
17  (#) + BEVA 0.2mg/mL + VEGF, TNF-α, IL-1β 120.7 ± 30.1    129.0 ± 35.3   
*相較於糖尿病環境(25 mM D-Gluose + VEGF、TNF-α、IL-1β)， 90分鐘後以[ng/mL/cm2 ]為單位量測FITC 葡聚醣滲漏的p＜0.05 表 59：非糖尿病和糖尿病環境中藉由ARPE19單層細胞產生ROS和TNF-a，IL-1b，IL-6，IL-18和VEGF mRNA
      ROS    IL-1β IL-6 TNFα IL-18 VEGF  
編號 條件 %    R.Q. mRNA R.Q. mRNA R.Q. mRNA R.Q. mRNA R.Q. mRNA  
1 DMEN HAM'S F-12 1% 5.5 mM D-Gluc 86 ± 12 0.11  ± 0.02 0.93 ± 0.01 0.18 ± 0.16 1.08  ± 0.44  1.60  ± 0.05  
2 DMEN HAM'S F-12 1% 25 mM D-Gluc (#) 100 ± 9 1.02  ± 0.20 1.00 ± 0.03 1.36 ± 0.86 1.04  ± 0.35  1.54  ± 0.32  
3  (#) + Ic-007a 25 µg/mL 32 ± 15 0.12  ± 0.01 0.52 ± 0.49 0.27 ± 0.07 0.45  ± 0.18  0.09  ± 0.02  
4  (#) + IIc-007a 25 µg/mL 55 ± 6.4 0.74  ± 0.26 0.73 ± 0.00 0.57 ± 0.18 0.75  ± 0.09  0.06  ± 0.01  
5  (#) + IVc-059a 25 µg/mL 62 ± 9 0.20  ± 0.05 0.28 ± 0.11 0.27 ± 0.08 0.07  ± 0.01  0.11  ± 0.01  
6  (#) + Ic-007a 50 µg/mL 26 ± 4.6 0.15  ± 0.03 0.20 ± 0.07 0.59 ± 0.33 0.07  ± 0.01  0.12  ± 0.03  
7  (#) + IIc-007a 50 µg/mL 72 ± 11 0.24  ± 0.11 0.34 ± 0.08 0.45 ± 0.30 0.04  ± 0.00  0.12  ± 0.03  
8  (#) + IVc-059a 50 µg/mL 116 ± 12 0.21  ± 0.13 0.28 ± 0.11 0.27 ± 0.10 0.04  ± 0.01 0.06  ± 0.03  
9  (#) + BEVA 0.2 mg/mL 110 ± 54 1.46  ± 0.72 0.64 ± 0.34 0.46 ± 0.63 0.09  ± 0.01 1.68  ± 0.83  
10 (#)  + VEGF 、 TNF-α 、 IL-1β = DIABETIC MILIEU 145 ± 9.3 96.07 ± 48.11 65.49 ± 21.16 9.13 ± 1.84 2.22 ± 0.19 2.01 ± 0.69  
11  (#) + Ic-007a 25 µg/mL + VEGF、TNF-a、IL-1b 33 ± 4.8 * 12.21  ± 1.46 * 0.52 ± 0.49 * 11.26 ± 0.96 0.02  ± 0.00 * 0.06  ± 0.02 *  
12  (#) + IIc-007a  25 µg/mL + VEGF、TNF-a、IL-1β 47 ± 7.6 * 41.03  ± 17.57 * 10.83 ± 6.90 * 6.31 ± 0.06 * 0.07  ± 0.01 * 0.11  ± 0.01 *  
13  (#) + IVc-059a  25 µg/mL + VEGF、TNF-a、IL-1β 61 ± 40 * 20.81  ± 5.11 * 5.84 ± 1.13 * 5.39 ± 1.01 * 0.03  ± 0.01 * 0.04  ± 0.00 *  
14  (#) + Ic-007a 50 µg/mL + VEGF、TNF-a、IL-1b 27 ± 13 * 10.66  ± 3.01 * 3.28 ± 1.46 * 5.22 ± 3.96 0.02  ± 0.00 * 0.17  ± 0.05 *  
15  (#) + IIc-007a  50 µg/mL + VEGF、TNF-a、IL-1β 74 ± 38 * 11.39  ± 6.52 * 1.50 ± 1.19 * 4.24 ± 0.77 * 0.03  ± 0.00 * 0.13  ± 0.02 *  
16  (#) + IVc-059a  50 µg/mL + VEGF、TNF-a、IL-1β 159 ± 32 27.76  ± 5.18 * 9.78 ± 2.30 * 3.61 ± 1.82 * 0.01  ± 0.00 * 0.20  ± 0.03 *  
17  (#) + BEVA 0.2mg/mL + VEGF、TNF-α、IL-1β 111 ± 50 31.22  ± 12.65 * 32.35 ± 13.48 * 1.37 ± 0.27 * 0.53  ± 0.04 * 3.88  ± 0.68
ROS%至25 mM D-葡萄糖; R.Q.＝相對於條件25mM D-Gluc的相對變化表示的細胞介素和生長因子值的相對定量mRNA。 * p ＜0.05，介於25 mM D-Glc + VEGF +TNF-α+IL-1β(糖尿病環境)與化合物Ic-007a、IIc-007a、IVc-059之間
無
[ 圖 1] ： (A)藉由每個實驗組的代表性小鼠的視網膜整裝(whole mount)中的埃文斯藍色染料(Evans blue dye)滲漏來評估的血管滲透性的共焦免疫螢光影像。箭頭指示外滲位置。比例尺為30 µm。(B)藉由評估每個視野(0.44 mm2)的滲漏數量來進行的血管滲漏定量。Ic-007a眼藥水的作用因為將血管滲漏減少到與非糖尿病對照組中發生者相同的水平所以是顯著的。與其他組相比，* p ＜0.01。[ 圖 2] ： (A)許密特(Schmidt)分數是基於四種組織病理學評估標準的化合物的療效之評估，該等標準基於四個參數的以下分數(括號中的數字)描述胰臟損傷。(a)間質性水腫，分數(0)：無，分數(1)：小葉間，分數(2)與小葉有關，分數(3)分離的島，如腺泡細胞。(b)發炎浸潤=白血球浸潤，分數(0)：無，分數(1)：＜20%，分數(2)：20%-50%，分數(3)：＞ 50%。(c)實質性壞死=腺泡細胞壞死，分數(0)：無，分數(1)：＜5%，分數(2)：5%-20%，分數(3)：＞ 20%。(d)出血，分數(0)：無，分數(1)：1-2點，分數(2)：3-5點，分數(3)：＞ 5點。許密特最高分= 10，是藍皮素誘導 + 載體治療，最低分= 0，是非誘導動物。許密特分數是a + b + c + d分數的總和，****表示與藍皮素誘導組在統計學上的顯著差異，如圖2所示。與藍皮素對照動物相比，所有產品皆顯示改善的許密特分數。 [圖3A-D]：圖3A-B顯示一疾病列表及與所選疾病有關的主要細胞介素(Akdis M. et al, J Allergy Clin Immunol 2016;138:984-1010)，且圖3C顯示部分檢索結果，其中在https://www.targetvalidation.org/檢索後細胞介素與基因按分數排序且可能與所選疾病有關，以「糖尿病性視網膜病變」作為一個例子給出。在圖3D中，使用VEGFA作為細胞介素進行檢索以找到提及VEGFA的疾病列表。圖3D僅顯示部分與VEGFA有關的疾病。參考：Open Targets Platform：兩年以來的新發展和更新。Denise Carvalho等人(Nucleic Acids Research, Volume 47, Issue D1, 08 January 2019, D1056–D1065, https://doi.org/10.1093/nar/gky1133)。[ 圖 4(A-D)] ： 顯示列出實施例1.1至1.4所述的Ia-Id類型化合物的條件和產率的表。由原料2,5-二羥基對苯二甲酸計算總產率。[ 圖 5(A-C)] ： 顯示列出實施例1.5至1.7所述的IIa-IIc類型化合物的條件和產率的表。[ 圖 6] ： 顯示列出實施例1.8及1.9所述的IIIa及IIIb類型化合物的條件和產率的表。[ 圖 7] ： 顯示列出實施例1.10所述的IIIc類型化合物的條件和產率的表。[ 圖 8] ： 為列出實施例1.12相對於V類型化合物所述去保護流程的表。[ 圖 9] ： 顯示在給藥前第0天以及每天藉由靜脈內或口服途徑給藥後7天及14天採樣的每組所有動物在STZ誘導的糖尿病模型的非空腹血糖水平(所有動物的平均值±標準差)。[ 圖 10] ： 顯示在藉由靜脈內或口服途徑每天給藥7天後採樣的每組3隻動物在STZ誘導的糖尿病模型中加速傷口癒合。[ 圖 11] ：圖11A顯示在治療21天的肺纖維化的代表性影像：(A1)非誘導(健康)；A2，用載體治療博來黴素(Bleomycine)誘導；A3，用100 mg/kg吡非尼酮(pirfenidone)治療博來黴素誘導；A4，用IVc-059a治療博來黴素誘導。圖11B顯示健康、博來黴素誘導未治療對比吡非尼酮對比IVc-059a的Ashcroft評分。
Figure 110108763-A0101-11-0002-1

Claims (15)

  1. 一種式(I)之經取代的氫醌，
    Figure 03_image003
    (I) 其中： Ra 、Rb = H、C1-4 醯基、芳基C1-4 烷基、C6 -C10 芳基CO、HOOC(CH2 )n CO、C1 -C7 烷基NHCO、膦醯基(phosphono)、膦醯氧基甲基、C1 -C6 醯氧基甲基、C1 -C6 醯氧基-1-乙基、C1 -C6 烷氧基羰氧基甲基、或C1 -C6 烷氧基羰氧基-1-乙基； R1 = COOR4 、(CH2 )n COOR4 、SO3 H、(CH2 )n SO3 H、或CONH-R10 ； R2 及R3 為H或R5 ，其限制條件為當R2 及R3 其中一者為R5 時，另一者為H，且當R2 及R3 其中一者為H時，另一者為R5 ； R4 = H、C1-4 烷基、芳基C1-4 烷基、官能化C1 -C6 烷基，其包括N-
    Figure 110108763-A0304-12-01
    啉基-C1 -C6 烷基、吡咯啶基-C1 -C6 烷基、N-甲基哌
    Figure 110108763-A0304-12-02
    基-C1-C6烷基、C6-C10芳基，其包括o -甲氧基苯基(癒創木酚酯)、C1 -C6 醯氧基甲基、C1 -C6 醯氧基-1-乙基、C1 -C6 烷氧基羰氧基甲基、C1 -C6 烷氧基羰氧基-1-乙基、或(氧代二氧呃基)甲基((oxodioxolyl)methyl)； R5 =R6 、R7 或R8 ； R6 =CONH-R9 、CONHCOR9 、CONH(CH2 )n -R9 、CONHCH(COOR4 )(CH2 )k R9 ，其中k = 0-4； R7 =苯并雜芳基，其經至少一或多個選自以下者的基團取代：COOR4 、(CH2 )n COOR4 、SO3 H、(CH2 )n SO3 H、OR4 、唑[5-員含氮雜環]、或氟； R8 = (CH2 )m X(CH2 )p R9 ； X = O、S、SO2 、NH、NAc、或N(CH2 )q R9 ； R9 =芳基、雜芳基，其經至少一或多個選自以下者的基團取代：COOR4 、(CH2 )n COOR4 、(CH2 )n SO3 H、OR4 、SO3 H、唑[5-員含氮雜環]、氟、C=O、或NHCO-R10 ； R10 =芳基、雜芳基，其經至少一或多個選自以下者的基團取代：COOR4 、(CH2 )n COOR4 、(CH2 )n SO3 H、OR4 、SO3 H、唑[5-員含氮雜環]或氟； 其中R9 及R10 的芳基是選自苯基、萘基、聯苯基的含6至14個碳原子的芳香族基團；且R9 及R10 的雜芳基為含有1至14個碳原子及一或多個氮的芳香族基團；且n、m、p及q獨立地為1-4。
  2. 一種式(I)化合物，
    Figure 03_image003
    (I) 其中： Ra 、Rb =H、C1-4 醯基、芳基C1-4 烷基、C6 -C10 芳基CO、HOOC(CH2 )n CO、C1 -C7 烷基NHCO、膦醯基、膦醯氧基甲基、C1 -C6 醯氧基甲基、C1 -C6 醯氧基-1-乙基、C1 -C6 烷氧基羰氧基甲基、或C1 -C6 烷氧基羰氧基-1-乙基； R1 = COOR4 、(CH2 )n COOR4 、SO3 H、(CH2 )n SO3 H、或CONH-R10 ； R2 及R3 為H或R5 ，其限制條件為當R2 及R3 其中一者為R5 時，另一者為H，且當R2 及R3 其中一者為H時，另一者為R5 ； R4 = H、C1-4 烷基、芳基C1-4 烷基、官能化C1 -C6 烷基，其包括N-
    Figure 110108763-A0304-12-01
    啉基-C1 -C6 烷基、吡咯啶基-C1 -C6 烷基、N-甲基哌
    Figure 110108763-A0304-12-02
    基-C1-C6烷基、C6-C10芳基，其包括o -甲氧基苯基(癒創木酚酯)、C1 -C6 醯氧基甲基、C1 -C6 醯氧基-1-乙基、C1 -C6 烷氧基羰氧基甲基、C1 -C6 烷氧基羰氧基-1-乙基、或(氧代二氧呃基)甲基； R5 = R6 、或R7 ， R6 =CONH-R9 、CONHCOR9 、CONH(CH2 )n -R9 、或CONHCH(COOR4 )(CH2 )k R9 ；其中k = 0-4； R7 =苯并雜芳基，其經至少一或多個選自以下者的基團取代：COOR4 、(CH2 )n COOR4 、SO3 H、(CH2 )n SO3 H、OR4 、唑[5-員含氮雜環]、或氟； R9 =芳基、雜芳基，其經至少一或多個選自以下者的基團取代：COOR4 、(CH2 )n COOR4 、(CH2 )n SO3 H、OR4 、SO3 H、唑[5-員含氮雜環]、氟、C=O、或NHCO-R10 ； R10 =芳基、雜芳基，其經至少一或多個選自以下者的基團取代：COOR4 、(CH2 )n COOR4 、(CH2 )n SO3 H、OR4 、SO3 H、唑[5-員含氮雜環]、或氟；其中R9 及R10 的芳基是選自苯基、萘基、聯苯基的含6至14個碳原子的芳香族基團；且R9 及R10 的雜芳基為含有1至14個碳原子及一或多個氮的芳香族基團；且n獨立地為1-4。
  3. 如請求項2之化合物，其中： (A) Ra 、Rb = H、C1-4 醯基、芳基C1-4 烷基、C6 -C10 芳基CO、HOOC(CH2 )n CO、C1 -C7 烷基NHCO、膦醯基、膦醯氧基甲基、C1 -C6 醯氧基甲基、C1 -C6 醯氧基-1-乙基、C1 -C6 烷氧基羰氧基甲基、或C1 -C6 烷氧基羰氧基-1-乙基； R1 = COOR4 ；R4 = H、C1-4 烷基、芳基C1-4 烷基、官能化C1 -C6 烷基，其包括N-
    Figure 110108763-A0304-12-01
    啉基-C1 -C6 烷基、吡咯啶基-C1 -C6 烷基、N-甲基哌
    Figure 110108763-A0304-12-02
    基-C1-C6烷基、C6-C10芳基，其包括o -甲氧基苯基(癒創木酚酯)、C1 -C6 醯氧基甲基、C1 -C6 醯氧基-1-乙基、C1 -C6 烷氧基羰氧基甲基、C1 -C6 烷氧基羰氧基-1-乙基、或(氧代二氧呃基)甲基； R2 = H；R3 = R5 ；且 R5 = R6 = CONH-R9 ； 或 (B) Ra 、Rb = H、C1-4 醯基、芳基C1-4 烷基、C6 -C10 芳基CO、HOOC(CH2 )n CO、C1 -C7 烷基NHCO、膦醯基、膦醯氧基甲基、C1 -C6 醯氧基甲基、C1 -C6 醯氧基-1-乙基、C1 -C6 烷氧基羰氧基甲基、或C1 -C6 烷氧基羰氧基-1-乙基； R1 = COOR4 ；R4 = H、C1-4 烷基、芳基C1-4 烷基、官能化C1 -C6 烷基，其包括N-
    Figure 110108763-A0304-12-01
    啉基-C1 -C6 烷基、吡咯啶基-C1 -C6 烷基、N-甲基哌
    Figure 110108763-A0304-12-02
    基-C1-C6烷基、C6-C10芳基，其包括o -甲氧基苯基(癒創木酚酯)、C1 -C6 醯氧基甲基、C1 -C6 醯氧基-1-乙基、C1 -C6 烷氧基羰氧基甲基、C1 -C6 烷氧基羰氧基-1-乙基、或(氧代二氧呃基)甲基； R3 = H；R2 = R5 ；且 R5 = R6 = CONH-R9 ； 或 其中該化合物選自由以下者組成之群組： 4-(2-羧基苯基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸； 4-(2-(1H-四唑-5-基)苯基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸； 2,5-二羥基-4-(2-磺酸基苯基胺基羰基)苯甲酸； 4-(3-羧基苯基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸； 4-(3-(1H-四唑-5-基)苯基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸； 2,5-二羥基-4-(3-磺酸基苯基胺基羰基)苯甲酸； 4-(4-羧基苯基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸； 4-(4-(1H-四唑-5-基)苯基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸； 2,5-二羥基-4-(4-磺酸基苯基胺基羰基)苯甲酸； 4-(3-羧基-4-羥基苯基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸； 4-(4-羧基-3-羥基苯基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸； 4-(4-羧基-2,5-二羥基苯基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸； 4-(2-羧基-4-羥基苯基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸； 3,5-雙(2,5-二羥基-4-羧基苯甲醯基胺基)苯甲酸； 3-(4-羧基-2,5-二羥基苄醯胺基)鄰苯二甲酸； 2-(4-羧基-2,5-二羥基苄醯胺基)對苯二甲酸； 2-(4-羧基-2,5-二羥基苄醯胺基)間苯二甲酸； 4-(4-羧基-2,5-二羥基苄醯胺基)鄰苯二甲酸； 5-(4-羧基-2,5-二羥基苄醯胺基)間苯二甲酸； 2-(4-羧基-2,5-二羥基苄醯胺基)菸鹼酸； 2-(4-羧基-2,5-二羥基苄醯胺基)異菸鹼酸； 6-(4-羧基-2,5-二羥基苄醯胺基)菸鹼酸； 6-(4-羧基-2,5-二羥基苄醯胺基)吡啶-2-羧酸； 2-(4-羧基-2,5-二羥基苄醯胺基)-5-氟菸鹼酸； 6-(4-羧基-2,5-二羥基苄醯胺基)吡啶-2,5-二羧酸； 2-(4-羧基-2,5-二羥基苄醯胺基)吡啶-3,5-二羧酸； 3-(4-羧基-2,5-二羥基苄醯胺基)異菸鹼酸； 5-(4-羧基-2,5-二羥基苄醯胺基)菸鹼酸； 5-(4-羧基-2,5-二羥基苄醯胺基)吡啶-2-羧酸； 3-(4-羧基-2,5-二羥基苄醯胺基)吡啶-2-羧酸； 5-(4-羧基-2,5-二羥基苄醯胺基)-2-氟異菸鹼酸； 4-(4-羧基-2,5-二羥基苄醯胺基)菸鹼酸； 4-(4-羧基-2,5-二羥基苄醯胺基)吡啶-2-羧酸； 4-(4-(羧基甲基)苯基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸； 4-(3-(羧基甲基)苯基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸； 2,5-二羥基-4-(3-(1-羥基-1H-吡唑-4-基)苯基胺基羰基)苯甲酸； 4-(2-(羧基甲基)苯基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸； 4-(2-(乙氧基羰基)苯基胺基羰基)-2,5-二乙醯氧基苯甲酸乙酯； 4-(2-(乙氧基羰基)苯基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸乙酯； 4-(2-(1H-四唑-5-基)苯基胺基羰基)-2,5-二乙醯氧基苯甲酸乙酯； 4-(2-(1H-四唑-5-基)苯基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸乙酯； 2,5-二羥基-4-(4-羥基-3-(甲氧基羰基)苯基胺基羰基)苯甲酸乙酯； 3,5-雙(2,5-二乙醯氧基-4-乙氧基羰基苯甲醯基胺基)苯甲酸乙酯； 3,5-雙(2,5-二羥基-4-乙氧基羰基苯甲醯基胺基)苯甲酸乙酯； 3-(4-(乙氧基羰基)-2,5-二羥基苄醯胺基)異菸酸乙酯； 4-(4-乙氧基羰基-2,5-二羥基苯基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸乙酯； 3-(2-羧基苯基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸； 3-(2-(1H-四唑-5-基)苯基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸； 2,5-二羥基-3-(2-磺酸基苯基胺基羰基)苯甲酸； 3-(3-羧基苯基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸； 3-(3-(1H-四唑-5-基)苯基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸； 2,5-二羥基-3-(3-磺酸基苯基胺基羰基)苯甲酸； 3-(4-羧基苯基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸； 3-(4-(1H-四唑-5-基)苯基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸； 2,5-二羥基-3-(4-磺酸基苯基胺基羰基)苯甲酸； 3-(3-羧基-4-羥基苯基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸； 3-(4-羧基-3-羥基苯基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸； 3-(2-羧基-4-羥基苯基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸； 3,5-雙(2,5-二羥基-3-羧基苯甲醯基胺基)苯甲酸； 3-(3-羧基-2,5-二羥基苄醯胺基)鄰苯二甲酸； 2-(3-羧基-2,5-二羥基苄醯胺基)對苯二甲酸； 2-(3-羧基-2,5-二羥基苄醯胺基)間苯二甲酸； 4-(3-羧基-2,5-二羥基苄醯胺基)鄰苯二甲酸； 5-(3-羧基-2,5-二羥基苄醯胺基)間苯二甲酸； 2-(3-羧基-2,5-二羥基苄醯胺基)菸鹼酸； 2-(3-羧基-2,5-二羥基苄醯胺基)異菸鹼酸； 6-(3-羧基-2,5-二羥基苄醯胺基)菸鹼酸； 6-(3-羧基-2,5-二羥基苄醯胺基)吡啶-2-羧酸； 2-(3-羧基-2,5-二羥基苄醯胺基)-5-氟菸鹼酸； 6-(3-羧基-2,5-二羥基苄醯胺基)吡啶-2,5-二羧酸； 2-(3-羧基-2,5-二羥基苄醯胺基)吡啶-3,5-二羧酸； 3-(3-羧基-2,5-二羥基苄醯胺基)異菸鹼酸； 5-(3-羧基-2,5-二羥基苄醯胺基)菸鹼酸； 5-(3-羧基-2,5-二羥基苄醯胺基)吡啶-2-羧酸； 3-(3-羧基-2,5-二羥基苄醯胺基)吡啶-2-羧酸 5-(3-羧基-2,5-二羥基苄醯胺基)-2-氟異菸鹼酸； 4-(3-羧基-2,5-二羥基苄醯胺基)菸鹼酸； 4-(3-羧基-2,5-二羥基苄醯胺基)吡啶-2-羧酸； 3-(4-(羧基甲基)苯基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸； 3-(3-(羧基甲基)苯基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸； 2,5-二羥基-3-(3-(1-羥基-1H-吡唑-4-基)苯基胺基羰基)苯甲酸； 3-(2-(羧基甲基)苯基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸； 3-(2-(1H-四唑-5-基)苯基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸乙酯；及 3-(2-(乙氧基羰基甲基)苯基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸乙酯。
  4. 如請求項2之化合物，其中： (A) Ra 、Rb = H； R1 = SO3 H； R2 = H；R3 = R5 ；且 R5 = R6 = CONH-R9 ； 或 (B) Ra 、Rb = H； R1 = SO3 H； R3 = H；R2 = R5 ；且 R5 = R6 = CONH-R9 ； 或 其中該化合物選自由以下者組成之群組： 2-(2,5-二羥基-4-磺酸基苄醯胺基)苯甲酸； 2,5-二羥基-4-(2-磺酸基苯基胺基羰基)苯磺酸； 3-(2,5-二羥基-4-磺酸基苄醯胺基)苯甲酸； 2,5-二羥基-4-(3-磺酸基苯基胺基羰基)苯磺酸； 4-(2,5-二羥基-4-磺酸基苄醯胺基)苯甲酸； 2,5-二羥基-4-(4-磺酸基苯基胺基羰基)苯磺酸； 5-(2,5-二羥基-4-磺酸基苄醯胺基)-2-羥基苯甲酸； 4-(2,5-二羥基-4-磺酸基苄醯胺基)-2-羥基苯甲酸； 2-(2,5-二羥基-4-磺酸基苄醯胺基)-5-羥基苯甲酸； 3,5-雙(2,5-二羥基-4-磺酸基苄醯胺基)苯甲酸； 3-(2,5-二羥基-4-磺酸基苄醯胺基)鄰苯二甲酸； 2-(2,5-二羥基-4-磺酸基苄醯胺基)對苯二甲酸； 2-(2,5-二羥基-4-磺酸基苄醯胺基)間苯二甲酸； 4-(2,5-二羥基-4-磺酸基苄醯胺基)鄰苯二甲酸； 5-(2,5-二羥基-4-磺酸基苄醯胺基)間苯二甲酸； 2-(2,5-二羥基-4-磺酸基苄醯胺基)菸鹼酸； 2-(2,5-二羥基-4-磺酸基苄醯胺基)異菸鹼酸； 6-(2,5-二羥基-4-磺酸基苄醯胺基)菸鹼酸； 6-(2,5-二羥基-4-磺酸基苄醯胺基)吡啶-2-羧酸； 2-(2,5-二羥基-4-磺酸基苄醯胺基)-5-氟菸鹼酸； 6-(2,5-二羥基-4-磺酸基苄醯胺基)吡啶-2,5-二羧酸； 2-(2,5-二羥基-4-磺酸基苄醯胺基)吡啶-3,5-二羧酸； 3-(2,5-二羥基-4-磺酸基苄醯胺基)異菸鹼酸； 5-(2,5-二羥基-4-磺酸基苄醯胺基)菸鹼酸； 5-(2,5-二羥基-4-磺酸基苄醯胺基)吡啶-2-羧酸； 3-(2,5-二羥基-4-磺酸基苄醯胺基)吡啶-2-羧酸； 5-(2,5-二羥基-4-磺酸基苄醯胺基)-2-氟異菸鹼酸； 4-(2,5-二羥基-4-磺酸基苄醯胺基)菸鹼酸； 4-(2,5-二羥基-4-磺酸基苄醯胺基)吡啶-2-羧酸； (4-(2,5-二羥基-4-磺酸基苄醯胺基)苯基)乙酸； (3-(2,5-二羥基-4-磺酸基苄醯胺基)苯基)乙酸； (2-(2,5-二羥基-4-磺酸基苄醯胺基)苯基)乙酸； 2-(2,5-二羥基-3-磺酸基苄醯胺基)苯甲酸； 2,5-二羥基-3-(2-磺酸基苯基胺基羰基)苯磺酸； 3-(2,5-二羥基-3-磺酸基苄醯胺基)苯甲酸； 2,5-二羥基-3-(3-磺酸基苯基胺基羰基)苯磺酸； 4-(2,5-二羥基-3-磺酸基苄醯胺基)苯甲酸； 2,5-二羥基-3-(4-磺酸基苯基胺基羰基)苯磺酸； 5-(2,5-二羥基-3-磺酸基苄醯胺基)-2-羥基苯甲酸； 4-(2,5-二羥基-3-磺酸基苄醯胺基)-2-羥基苯甲酸； 2-(2,5-二羥基-3-磺酸基苄醯胺基)-5-羥基苯甲酸； 3-(2,5-二羥基-3-磺酸基苄醯胺基)-5-(2,5-二羥基-4-磺酸基苄醯胺基)苯甲酸 3-(2,5-二羥基-3-磺酸基苄醯胺基)鄰苯二甲酸； 2-(2,5-二羥基-3-磺酸基苄醯胺基)對苯二甲酸； 2-(2,5-二羥基-3-磺酸基苄醯胺基)間苯二甲酸； 4-(2,5-二羥基-3-磺酸基苄醯胺基)鄰苯二甲酸； 5-(2,5-二羥基-3-磺酸基苄醯胺基)間苯二甲酸； 2-(2,5-二羥基-3-磺酸基苄醯胺基)菸鹼酸； 2-(2,5-二羥基-3-磺酸基苄醯胺基)異菸鹼酸； 6-(2,5-二羥基-3-磺酸基苄醯胺基)菸鹼酸； 6-(2,5-二羥基-3-磺酸基苄醯胺基)吡啶-2-羧酸； 2-(2,5-二羥基-3-磺酸基苄醯胺基)-5-氟菸鹼酸； 6-(2,5-二羥基-3-磺酸基苄醯胺基)吡啶-2,5-二羧酸； 2-(2,5-二羥基-3-磺酸基苄醯胺基)吡啶-3,5-二羧酸； 3-(2,5-二羥基-3-磺酸基苄醯胺基)異菸鹼酸； 5-(2,5-二羥基-3-磺酸基苄醯胺基)菸鹼酸； 5-(2,5-二羥基-3-磺酸基苄醯胺基)吡啶-2-羧酸； 3-(2,5-二羥基-3-磺酸基苄醯胺基)吡啶-2-羧酸； 5-(2,5-二羥基-3-磺酸基苄醯胺基)-2-氟異菸鹼酸； 4-(2,5-二羥基-3-磺酸基苄醯胺基)菸鹼酸； 4-(2,5-二羥基-3-磺酸基苄醯胺基)吡啶-2-羧酸； (4-(2,5-二羥基-3-磺酸基苄醯胺基)苯基)乙酸； (3-(2,5-二羥基-3-磺酸基苄醯胺基)苯基)乙酸；及 (2-(2,5-二羥基-3-磺酸基苄醯胺基)苯基)乙酸。
  5. 如請求項2之化合物，其中： (A) Ra 、Rb = H； R1 = (CH2 )n COOR4 ；R4 = H、C1-4 烷基、芳基C1-4 烷基、官能化C1 -C6 烷基，其包括N-
    Figure 110108763-A0304-12-01
    啉基-C1 -C6 烷基、吡咯啶基-C1 -C6 烷基、N-甲基哌
    Figure 110108763-A0304-12-02
    基-C1-C6烷基、C6-C10芳基，其包括o -甲氧基苯基(癒創木酚酯)、C1 -C6 醯氧基甲基、C1 -C6 醯氧基-1-乙基、C1 -C6 烷氧基羰氧基甲基、C1 -C6 烷氧基羰氧基-1-乙基、或(氧代二氧呃基)甲基； R2 = H或R5 ，R3 = R5 ；且 R5 = R6 = CONH-R9 ； 或 (B) Ra 、Rb = H； R1 = (CH2 )n COOR4 ；R4 = H、C1-4 烷基、芳基C1-4 烷基、官能化C1 -C6 烷基，其包括N-
    Figure 110108763-A0304-12-01
    啉基-C1 -C6 烷基、吡咯啶基-C1 -C6 烷基、N-甲基哌
    Figure 110108763-A0304-12-02
    基-C1-C6烷基、C6-C10芳基，其包括o -甲氧基苯基(癒創木酚酯)、C1 -C6 醯氧基甲基、C1 -C6 醯氧基-1-乙基、C1 -C6 烷氧基羰氧基甲基、C1 -C6 烷氧基羰氧基-1-乙基、或(氧代二氧呃基)甲基； R3 = H；R2 = R5 ；且 R5 = R6 = CONH-R9 ； 或其中該化合物選自由以下者組成之群組： 2-(4-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)苯甲酸； (2-(1H-四唑-5-基)苯基胺基羰基)-2,5-二羥基苯基)乙酸； (2,5-二羥基-4-(2-磺酸基苯基胺基羰基)苯基)乙酸； 3-(4-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)苯甲酸； (2,5-二羥基-4-(3-磺酸基苯基胺基羰基)苯基)乙酸； 4-(4-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)苯甲酸； 2-(2,5-二羥基-4-(4-磺酸基苯基胺基羰基)苯基)乙酸； 5-(4-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)-2-羥基苯甲酸； 4-(4-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)-2-羥基苯甲酸； 2-(4-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)-5-羥基苯甲酸； 3,5-雙(2,5-二羥基-4-羧基甲基苯甲醯基胺基)苯甲酸 3-(4-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)鄰苯二甲酸； 2-(4-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)對苯二甲酸； 2-(4-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)間苯二甲酸； 4-(4-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)鄰苯二甲酸； 5-(4-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)間苯二甲酸； 2-(4-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)菸鹼酸； 2-(4-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)異菸鹼酸； 6-(4-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)菸鹼酸； 6-(4-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)吡啶-2-羧酸； 2-(4-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)-5-氟菸鹼酸； 6-(4-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)吡啶-2,5-二羧酸； 2-(4-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)吡啶-3,5-二羧酸； 3-(4-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)異菸鹼酸； 5-(4-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)菸鹼酸； 5-(4-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)吡啶-2-羧酸； 3-(4-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)吡啶-2-羧酸； 5-(4-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)-2-氟異菸鹼酸； 4-(4-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)菸鹼酸； 4-(4-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)吡啶-2-羧酸； (4-(4-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)苯基)乙酸； (3-(4-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)苯基)乙酸； (2-(4-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)苯基)乙酸； 2-(4-(乙氧基羰基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)苯甲酸甲酯； (4-(2-(1H-四唑-5-基)苯基胺基羰基)-2,5-二羥基苯基)乙酸乙酯； 5-(4-(乙氧基羰基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)間苯二甲酸二乙酯； 3,5-雙(4-(乙氧基羰基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)苯甲酸甲酯； 2-(3-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)苯甲酸； (2,5-二羥基-3-(2-磺酸基苯基胺基羰基)苯基)乙酸； 3-(3-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)苯甲酸； (2,5-二羥基-3-(3-磺酸基苯基胺基羰基)苯基)乙酸； 4-(3-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)苯甲酸； (2,5-二羥基-3-(4-磺酸基苯基胺基羰基)苯基)乙酸； 5-(3-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)-2-羥基苯甲酸； 4-(3-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)-2-羥基苯甲酸； 2-(3-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)-5-羥基苯甲酸； 3,5-雙(2,5-二羥基-3-羧基甲基苯甲醯基胺基)苯甲酸 3-(3-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)鄰苯二甲酸； 2-(3-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)對苯二甲酸； 2-(3-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)間苯二甲酸； 4-(3-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)鄰苯二甲酸； 5-(3-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)間苯二甲酸； 2-(3-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)菸鹼酸； 2-(3-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)異菸鹼酸； 6-(3-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)菸鹼酸； 6-(3-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)吡啶-2-羧酸； 2-(3-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)-5-氟菸鹼酸； 6-(3-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)吡啶-2,5-二羧酸； 2-(3-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)吡啶-3,5-二羧酸； 3-(3-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)異菸鹼酸； 5-(3-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)菸鹼酸； 5-(3-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)吡啶-2-羧酸； 3-(3-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)吡啶-2-羧酸； 5-(3-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)-2-氟異菸鹼酸； 4-(3-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)菸鹼酸； 4-(3-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)吡啶-2-羧酸； (4-(3-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)苯基)乙酸； (3-(3-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)苯基)乙酸；及 (2 -(3-(羧基甲基)-2,5-二羥基苄醯胺基)苯基)乙酸。
  6. 如請求項2之化合物，其中： (A) Ra 、Rb = H、C1-4 醯基、芳基C1-4 烷基、C6 -C10 芳基CO、HOOC(CH2 )n CO、C1 -C7 烷基NHCO、膦醯基、膦醯氧基甲基、C1 -C6 醯氧基甲基、C1 -C6 醯氧基-1-乙基、C1 -C6 烷氧基羰氧基甲基、或C1 -C6 烷氧基羰氧基-1-乙基； R1 = CONH-R10 ；R4 = H、C1-4 烷基、芳基C1-4 烷基、官能化C1 -C6 烷基，其包括N-
    Figure 110108763-A0304-12-01
    啉基-C1 -C6 烷基、吡咯啶基-C1 -C6 烷基、N-甲基哌
    Figure 110108763-A0304-12-02
    基-C1-C6烷基、C6-C10芳基，其包括o -甲氧基苯基(癒創木酚酯)、C1 -C6 醯氧基甲基、C1 -C6 醯氧基-1-乙基、C1 -C6 烷氧基羰氧基甲基、C1 -C6 烷氧基羰氧基-1-乙基、或(氧代二氧呃基)甲基； R2 = H；R3 = R5 ；且 R5 = R6 = CONH-R9 ； 或 (B) Ra 、Rb = H、C1-4 醯基、芳基C1-4 烷基、C6 -C10 芳基CO、HOOC(CH2 )n CO、C1 -C7 烷基NHCO、膦醯基、膦醯氧基甲基、C1 -C6 醯氧基甲基、C1 -C6 醯氧基-1-乙基、C1 -C6 烷氧基羰氧基甲基、或C1 -C6 烷氧基羰氧基-1-乙基； R1 = CONH-R10 ；R4 = H、C1-4 烷基、芳基C1-4 烷基、官能化C1 -C6 烷基，其包括 N-
    Figure 110108763-A0304-12-01
    啉基-C1 -C6 烷基、吡咯啶基-C1 -C6 烷基、N-甲基哌
    Figure 110108763-A0304-12-02
    基-C1-C6烷基、C6-C10芳基，其包括o -甲氧基苯基(癒創木酚酯)、C1 -C6 醯氧基甲基、C1 -C6 醯氧基-1-乙基、C1 -C6 烷氧基羰氧基甲基、C1 -C6 烷氧基羰氧基-1-乙基、或(氧代二氧呃基)甲基； R3 = H；R2 = R5 ；且 R5 = R6 = CONH-R9 ； 或 其中該化合物選自由以下者組成之群組： 5-(4-(2-(1H-四唑-5-基)苯基胺基羰基)-2,5-二羥基苄醯胺基)-2-羥基苯甲酸； N1 ,N4 -雙(2-(1H-四唑-5-基)苯基)-2,5-二羥基對苯二甲醯胺； 5-(4-(3-羧基-4-羥基苯基胺基羰基)-2,5-二羥基苄醯胺基)-2-羥基苯甲酸； 5-(2,5-二羥基-4-(4-羥基-3-磺酸基苯基胺基羰基)苄醯胺基)-2-羥基苯磺酸； 4-(4-(4-羧基-3-羥基苯基胺基羰基)-2,5-二羥基苄醯胺基)-2-羥基苯甲酸； 4-(2,5-二羥基-4-(3-羥基-4-磺酸基苯基胺基羰基)苄醯胺基)-2-羥基苯磺酸； 2-(2,5-二羥基-4-(4-羥基-2-羧基苯基胺基羰基)苄醯胺基)-5-羥基苯甲酸； 2-(2,5-二羥基-4-(4-羥基-2-磺酸基苯基胺基羰基)苄醯胺基)-5-羥基苯磺酸； 5-(4-(2-(1H-四唑-5-基)苯基胺基羰基)-2,5-二羥基苄醯胺基)-2-羥基苯甲酸甲酯； 5-(2,5-二乙醯氧基-4-(4-乙醯氧基-3-(甲氧基羰基)苯基胺基羰基)苄醯胺基)-2-乙醯氧基苯甲酸甲酯； 5-(2,5-二羥基-4-(4-羥基-3-(甲氧基羰基)苯基胺基羰基)苄醯胺基)-2-羥基苯甲酸甲酯； 2-(2,5-二羥基-4-(4-羥基-2-(甲氧基羰基)苯基胺基羰基)苄醯胺基)-5-羥基苯甲酸甲酯； 5-[[4-[[3-[1-(2,2-二甲基丙醯氧基)乙氧基羰基]-4-羥基-苯基]胺基羰基]-2,5-二羥基-苯甲醯基]胺基]-2-羥基苯甲酸1-(2,2-二甲基丙醯氧基)乙酯； 5-(3-(3-羧基-4-羥基苯基胺基羰基)-2,5-二羥基苄醯胺基)-2-羥基苯甲酸； 5-(2,5-二羥基-3-(4-羥基-3-磺酸基苯基胺基羰基)苄醯胺基)-2-羥基苯磺酸； 4-(3-(3-羥基-4-羧基苯基胺基羰基)-2,5-二羥基苄醯胺基)-2-羥基苯甲酸； 4-(2,5-二羥基-3-(3-羥基-4-磺酸基苯基胺基羰基)苄醯胺基)-2-羥基苯磺酸； 2-(3-(2-羧基-4-羥基苯基胺基羰基)-2,5-二羥基苄醯胺基)-5-羥基苯甲酸；及 2-(2,5-二羥基-3-(4-羥基-2-磺酸基苯基胺基羰基)苄醯胺基)-5-羥基苯磺酸。
  7. 如請求項2之化合物，其中： (A) Ra 、Rb = H； R1 = COOR4 ；(CH2 )n COOR4 ；R4 = H、C1-4 烷基、芳基C1-4 烷基、官能化C1 -C6 烷基，其包括N-
    Figure 110108763-A0304-12-01
    啉基-C1 -C6 烷基、吡咯啶基-C1 -C6 烷基、N-甲基哌
    Figure 110108763-A0304-12-02
    基-C1-C6烷基、C6-C10芳基，其包括o -甲氧基苯基(癒創木酚酯)、C1 -C6 醯氧基甲基、C1 -C6 醯氧基-1-乙基、C1 -C6 烷氧基羰氧基甲基、C1 -C6 烷氧基羰氧基-1-乙基、或(氧代二氧呃基)甲基； R2 = H；R3 = R5 ；且 R5 = R6 = CONHCOR9 ； 或 (B) Ra 、Rb = H； R1 = COOR4 ；(CH2 )n COOR4 ；R4 = H、C1-4 烷基、芳基C1-4 烷基、官能化C1 -C6 烷基，其包括N-
    Figure 110108763-A0304-12-01
    啉基-C1 -C6 烷基、吡咯啶基-C1 -C6 烷基、N-甲基哌
    Figure 110108763-A0304-12-02
    基-C1-C6烷基、C6-C10芳基，其包括o -甲氧基苯基(癒創木酚酯)、C1 -C6 醯氧基甲基、C1 -C6 醯氧基-1-乙基、C1 -C6 烷氧基羰氧基甲基、C1 -C6 烷氧基羰氧基-1-乙基、或(氧代二氧呃基)甲基； R3 = H；R2 = R5 ；且 R5 = R6 = CONHCOR9 ； 或其中該化合物選自由以下者組成之群組： N-(1,3,4,5-四羥基環己基羰基) 4-羧基-2,5-二羥基苯甲醯胺； N-(4-羧基-2,5-二羥基苯甲醯基) 4-羧基-2,5-二羥基-苯甲醯胺； N-(3-羧基-2,5-二羥基苯甲醯基) 4-羧基-2,5-二羥基-苯甲醯胺； N-(3,4-二羥基苯甲醯基) 4-羧基-2,5-二羥基苯甲醯胺； N-(3,5-二羥基苯甲醯基) 4-羧基-2,5-二羥基苯甲醯胺； N-(1,3,4,5-四羥基環己基羰基) 3-羧基-2,5-二羥基苯甲醯胺； N-(4-羧基-2,5-二羥基苯甲醯基) 3-羧基-2,5-二羥基-苯甲醯胺； N-(3-羧基-2,5-二羥基苯甲醯基) 3-羧基-2,5-二羥基-苯甲醯胺； N-(3,4-二羥基苯甲醯基) 3-羧基-2,5-二羥基苯甲醯胺； N-(3,5-二羥基苯甲醯基) 3-羧基-2,5-二羥基苯甲醯胺； N-(1,3,4,5-四羥基環己基羰基) 4-羧基甲基-2,5-二羥基苯甲醯胺； N-(4-羧基-2,5-二羥基苯甲醯基) 4-羧基甲基-2,5-二羥基-苯甲醯胺； N-(3-羧基-2,5-二羥基苯甲醯基) 4-羧基甲基-2,5-二羥基-苯甲醯胺； N-(3,4-二羥基苯甲醯基) 4-羧基甲基-2,5-二羥基苯甲醯胺； N-(3,5-二羥基苯甲醯基) 4-羧基甲基-2,5-二羥基苯甲醯胺； N-(1,3,4,5-四羥基環己基羰基) 3-羧基甲基-2,5-二羥基苯甲醯胺； N-(4-羧基-2,5-二羥基苯甲醯基) 3-羧基甲基-2,5-二羥基-苯甲醯胺； N-(3-羧基-2,5-二羥基苯甲醯基) 3-羧基甲基-2,5-二羥基-苯甲醯胺； N-(3,4-二羥基苯甲醯基) 3-羧基甲基-2,5-二羥基苯甲醯胺；及 N-(3,5-二羥基苯甲醯基) 3-羧基甲基-2,5-二羥基苯甲醯胺。
  8. 如請求項2之化合物，其中 (A) Ra 、Rb = H； R1 = COOR4 ；(CH2 )n COOR4 ；R4 = H、C1-4 烷基、芳基C1-4 烷基、官能化C1 -C6 烷基，其包括N-
    Figure 110108763-A0304-12-01
    啉基-C1 -C6 烷基、吡咯啶基-C1 -C6 烷基、N-甲基哌
    Figure 110108763-A0304-12-02
    基-C1-C6烷基、C6-C10芳基，其包括o -甲氧基苯基(癒創木酚酯)、C1 -C6 醯氧基甲基、C1 -C6 醯氧基-1-乙基、C1 -C6 烷氧基羰氧基甲基、C1 -C6 烷氧基羰氧基-1-乙基、或(氧代二氧呃基)甲基； R2 = H；R3 = R5 ；且 R5 = R6 = CONH(CH2 )n -R9 ； 或 (B) Ra 、Rb = H； R1 = COOR4 ；(CH2 )n COOR4 ；R4 = H、C1-4 烷基、芳基C1-4 烷基、官能化C1 -C6 烷基，其包括N-
    Figure 110108763-A0304-12-01
    啉基-C1 -C6 烷基、吡咯啶基-C1 -C6 烷基、N-甲基哌
    Figure 110108763-A0304-12-02
    基-C1-C6烷基、C6-C10芳基，其包括o -甲氧基苯基(癒創木酚酯)、C1 -C6 醯氧基甲基、C1 -C6 醯氧基-1-乙基、C1 -C6 烷氧基羰氧基甲基、C1 -C6 烷氧基羰氧基-1-乙基、或(氧代二氧呃基)甲基； R3 = H；R2 = R5 ；且 R5 = R6 = CONH(CH2 )n -R9 ； 或其中該化合物選自由以下者組成之群組： 4-(3,4-二羥基苯基甲基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸； 4-(2-(3,4-二羥基苯基)乙基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸； 4-(3,5-二羥基苯基甲基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸； 4-((4,5-二羥基-3-側氧環己-1-烯基)甲基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸； 2,5-二羥基-4-((3,4,5-三羥基環己基)甲基胺基羰基)苯甲酸； 4-(2-羧基苯基甲基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸； 4-(3-羧基苯基甲基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸； 4-(4-羧基苯基甲基胺基羰基) 2,5-二羥基苯甲酸； 3-(3,4-二羥基苯基甲基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸； 3-(2-(3,4-二羥基苯基)乙基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸； 3-(3,5-二羥基苯基甲基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸； 3-((4,5-二羥基-3-側氧環己-1-烯基)甲基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸； 2,5-二羥基-3-((3,4,5-三羥基環己基)甲基胺基羰基)苯甲酸； 3-(2-羧基苯基甲基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸； 3-(3-羧基苯基甲基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸； 3-(4-羧基苯基甲基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸； (4-(3,4-二羥基苯基甲基胺基羰基)-2,5-二羥基苯基)乙酸； (4-(3,5-二羥基苯基甲基胺基羰基)-2,5-二羥基苯基)乙酸； (4-((4,5-二羥基-3-側氧環己-1-烯基)甲基胺基羰基)-2,5-二羥基苯基)乙酸； (2,5-二羥基-4-((3,4,5-三羥基環己基)甲基胺基羰基)苯基)乙酸； (4-(2-羧基苯基甲基胺基羰基)-2,5-二羥基苯基)乙酸； (4-(3-羧基苯基甲基胺基羰基)-2,5-二羥基苯基)乙酸； (4-(4-羧基苯基甲基胺基羰基)-2,5-二羥基苯基)乙酸； (3-(3,4-二羥基苯基甲基胺基羰基)-2,5-二羥基苯基)乙酸； (3-(3,5-二羥基苯基甲基胺基羰基)-2,5-二羥基苯基)乙酸； (3-((4,5-二羥基-3-側氧環己-1-烯基)甲基胺基羰基)-2,5-二羥基苯基)乙酸； (2,5-二羥基-3-((3,4,5-三羥基環己基)甲基羰基胺基)苯基)乙酸； (3-(2-羧基苯基甲基胺基羰基)-2,5-二羥基苯基)乙酸； (3-(3-羧基苯基甲基胺基羰基)-2,5-二羥基苯基)乙酸；及 (3-(4-羧基苯基甲基胺基羰基)-2,5-二羥基苯基)乙酸。
  9. 如請求項2之化合物，其中： Ra 、Rb = H； R1 = SO3 H； R2 = H；R3 = R5 ；及 R5 = R6 = CONH(CH2 )n -R9 ； 或其中該化合物選自由以下者組成之群組： 2-((2,5-二羥基-4-磺酸基苄醯胺基)甲基)苯甲酸； 3-((2,5-二羥基-4-磺酸基苄醯胺基)甲基)苯甲酸；及 4-((2,5-二羥基-4-磺酸基苄醯胺基)甲基)苯甲酸。
  10. 如請求項2之化合物，其中： (A) Ra 、Rb = H； R1 = COOR4 ；(CH2 )n COOR4 ；R4 = H、C1-4 烷基、芳基C1-4 烷基、官能化C1 -C6 烷基，其包括N-
    Figure 110108763-A0304-12-01
    啉基-C1 -C6 烷基、吡咯啶基-C1 -C6 烷基、N-甲基哌
    Figure 110108763-A0304-12-02
    基-C1-C6烷基、C6-C10芳基，其包括o -甲氧基苯基(癒創木酚酯)、C1 -C6 醯氧基甲基、C1 -C6 醯氧基-1-乙基、C1 -C6 烷氧基羰氧基甲基、C1 -C6 烷氧基羰氧基-1-乙基、或(氧代二氧呃基)甲基； R2 = H；R3 = R5 ；且 R5 = R6 = CONHCH(COOR4 )(CH2 )k R9 ； 或 (B) Ra 、Rb = H； R1 = COOR4 ；(CH2 )n COOR4 ；R4 = H、C1-4 烷基、芳基C1-4 烷基、官能化C1 -C6 烷基，其包括N-
    Figure 110108763-A0304-12-01
    啉基-C1 -C6 烷基、吡咯啶基-C1 -C6 烷基、N-甲基哌
    Figure 110108763-A0304-12-02
    基-C1-C6烷基、C6-C10芳基，其包括o -甲氧基苯基(癒創木酚酯)、C1 -C6 醯氧基甲基、C1 -C6 醯氧基-1-乙基、C1 -C6 烷氧基羰氧基甲基、C1 -C6 烷氧基羰氧基-1-乙基、或(氧代二氧呃基)甲基； R3 = H；R2 = R5 ；且 R5 = R6 = CONHCH(COOR4 )(CH2 )k R9 ； 或其中該化合物選自由以下者組成之群組： 4-(1-羧基-2-(3,4-二羥基苯基)乙基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸； 4-(羧基(3,4-二羥基苯基)甲基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸； 3-(1-羧基-2-(3,4-二羥基苯基)乙基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸 3-(羧基(3,4-二羥基苯基)甲基胺基羰基)-2,5-二羥基苯甲酸； (4-(羧基(3,4-二羥基苯基)甲基胺基羰基)-2,5-二羥基苯基)乙酸；及 (3-(羧基(3,4-二羥基苯基)甲基胺基羰基)-2,5-二羥基苯基)乙酸。
  11. 如請求項2之化合物，其中： (A) Ra 、Rb = H； R1 = COOR4 、(CH2 )n COOR4 、SO3 H、(CH2 )n SO3 H、CONH-R10 ； R4 = H、C1-4 烷基、芳基C1-4 烷基、官能化C1 -C6 烷基，其包括N-
    Figure 110108763-A0304-12-01
    啉基-C1 -C6 烷基、吡咯啶基-C1 -C6 烷基、N-甲基哌
    Figure 110108763-A0304-12-02
    基-C1-C6烷基、C6-C10芳基，其包括o -甲氧基苯基(癒創木酚酯)、C1 -C6 醯氧基甲基、C1 -C6 醯氧基-1-乙基、C1 -C6 烷氧基羰氧基甲基、C1 -C6 烷氧基羰氧基-1-乙基、或(氧代二氧呃基)甲基； R2 = H；R3 = R5 ；且 R5 = R7 =苯并雜芳基，其經至少一或多個選自以下者的基團取代：COOR4 、(CH2 )n COOR4 、SO3 H、(CH2 )n SO3 H、OR4 、唑[5-員含氮雜環]、或氟； 或 (B) Ra 、Rb = H； R1 = COOR4 、(CH2 )n COOR4 、SO3 H、(CH2 )n SO3 H、CONH-R10 ； R4 = H、C1-4 烷基、芳基C1-4 烷基、官能化C1 -C6 烷基，其包括N-
    Figure 110108763-A0304-12-01
    啉基-C1 -C6 烷基、吡咯啶基-C1 -C6 烷基、N-甲基哌
    Figure 110108763-A0304-12-02
    基-C1-C6烷基、C6-C10芳基，其包括o -甲氧基苯基(癒創木酚酯)、C1 -C6 醯氧基甲基、C1 -C6 醯氧基-1-乙基、C1 -C6 烷氧基羰氧基甲基、C1 -C6 烷氧基羰氧基-1-乙基、或(氧代二氧呃基)甲基； R3 = H；R2 = R5 ；且 R5 = R7 =苯并雜芳基，其經至少一或多個選自以下者的基團取代：COOR4 、(CH2 )n COOR4 、SO3 H、(CH2 )n SO3 H、OR4 、唑[5-員含氮雜環]、或氟； 或其中該化合物選自由以下者組成之群組： 2-(4-羧基-2,5-二羥基苯基)-1H-苯并[d]咪唑-4-羧酸； 2-(4-乙氧基羰基-2,5-二羥基苯基)-1H-苯并[d]咪唑-4-羧酸甲酯； 2-(2,5-二羥基-4-磺酸基苯基)-1H-苯并[d]咪唑-4-羧酸； 2-(4-羧基-2,5-二羥基苯基)-1H-苯并[d]咪唑-5-羧酸； 2-(2,5-二羥基-4-磺酸基苯基)-1H-苯并[d]咪唑-5-羧酸； 2-(3-羧基-2,5-二羥基苯基)-1H-苯并[d]咪唑-4-羧酸； 2-(2,5-二羥基-3-磺酸基苯基)-1H-苯并[d]咪唑-4-羧酸； 2-(3-羧基-2,5-二羥基苯基)-1H-苯并[d]咪唑-5-羧酸； 2-(2,5-二羥基-3-磺酸基苯基)-1H-苯并[d]咪唑-5-羧酸； 2-(4-(羧基甲基)-2,5-二羥基苯基)-1H-苯并[d]咪唑-4-羧酸； 2-(4-(羧基甲基)-2,5-二羥基苯基)-1H-苯并[d]咪唑-5-羧酸； 2-(3-(羧基甲基)-2,5-二羥基苯基)-1H-苯并[d]咪唑-4-羧酸；及 2-(3-(羧基甲基)-2,5-二羥基苯基)-1H-苯并[d]咪唑-5-羧酸。
  12. 一種式(I)化合物，
    Figure 03_image003
    (I) 其中： Ra 、Rb = H、C1-4 醯基、芳基C1-4 烷基、C6 -C10 芳基CO、HOOC(CH2 )n CO、C1 -C7 烷基NHCO、膦醯基、膦醯氧基甲基、C1 -C6 醯氧基甲基、C1 -C6 醯氧基-1-乙基、C1 -C6 烷氧基羰氧基甲基、或C1 -C6 烷氧基羰氧基-1-乙基； R1 = COOR4 、(CH2 )n COOR4 、SO3 H、(CH2 )n SO3 H、或CONH-R10 ； R2 及R3 為H或R5 ，其限制條件為當R2 及R3 其中一者為R5 時，另一者為H，且當R2 及R3 其中一者為H時，另一者為R5 ； R4 = H、C1-4 烷基、芳基C1-4 烷基、官能化C1 -C6 烷基，其包括N-
    Figure 110108763-A0304-12-01
    啉基-C1 -C6 烷基、吡咯啶基-C1 -C6 烷基、N-甲基哌
    Figure 110108763-A0304-12-02
    基-C1-C6烷基、C6-C10芳基，其包括o -甲氧基苯基(癒創木酚酯)、C1 -C6 醯氧基甲基、C1 -C6 醯氧基-1-乙基、C1 -C6 烷氧基羰氧基甲基、C1 -C6 烷氧基羰氧基-1-乙基、或(氧代二氧呃基)甲基； R5 =R8 ； R8 = (CH2 )m X(CH2 )p R9 ； X = O、S、SO2 、NH、NAc、或N(CH2 )q R9 ； R9 =芳基、雜芳基，其經至少一或多個選自以下者的基團取代：COOR4 、(CH2 )n COOR4 、(CH2 )n SO3 H、OR4 、SO3 H、唑[5-員含氮雜環]、氟、C=O、或NHCO-R10 ； R10 =芳基、雜芳基，其經至少一或多個選自以下者的基團取代：COOR4 、(CH2 )n COOR4 、(CH2 )n SO3 H、OR4 、SO3 H、唑[5-員含氮雜環]或氟； 其中R9 及R10 的芳基是選自苯基、萘基、聯苯基的含6至14個碳原子的芳香族基團；且R9 及R10 的雜芳基為含有1至14個碳原子及一或多個氮的芳香族基團；且n、m、p及q獨立地為1-4。
  13. 如請求項12之化合物，其中： (A) Ra 、Rb = H、C1-4 醯基、芳基C1-4 烷基、C6 -C10 芳基CO、HOOC(CH2 )n CO、C1 -C7 烷基NHCO、膦醯基、膦醯氧基甲基、C1 -C6 醯氧基甲基、C1 -C6 醯氧基-1-乙基、C1 -C6 烷氧基羰氧基甲基、或C1 -C6 烷氧基羰氧基-1-乙基； R1 = COOR4 、(CH2 )n COOR4 、SO3 H、(CH2 )n SO3 H、CONH-R10 ； R4 = H、C1-4 烷基、芳基C1-4 烷基、官能化C1 -C6 烷基，其包括N-
    Figure 110108763-A0304-12-01
    啉基-C1 -C6 烷基、吡咯啶基-C1 -C6 烷基、N-甲基哌
    Figure 110108763-A0304-12-02
    基-C1-C6烷基、C6-C10芳基，其包括o -甲氧基苯基(癒創木酚酯)、C1 -C6 醯氧基甲基、C1 -C6 醯氧基-1-乙基、C1 -C6 烷氧基羰氧基甲基、C1 -C6 烷氧基羰氧基-1-乙基、或(氧代二氧呃基)甲基； R2 = H；R3 = R5 ；且 R5 = R8 = (CH2 )m X(CH2 )p R9 ； 其中X = O、S、SO2 、NH、NAc、或N(CH2 )q R9 ； 或 (B) Ra 、Rb = H、C1-4 醯基、芳基C1-4 烷基、C6 -C10 芳基CO、HOOC(CH2 )n CO、C1 -C7 烷基NHCO、膦醯基、膦醯氧基甲基、C1 -C6 醯氧基甲基、C1 -C6 醯氧基-1-乙基、C1 -C6 烷氧基羰氧基甲基、或C1 -C6 烷氧基羰氧基-1-乙基； R1 = COOR4 、(CH2 )n COOR4 、SO3 H、(CH2 )n SO3 H、CONH-R10 ； R4 = H、C1-4 烷基、芳基C1-4 烷基、官能化C1 -C6 烷基，其包括N-
    Figure 110108763-A0304-12-01
    啉基-C1 -C6 烷基、吡咯啶基-C1 -C6 烷基、N-甲基哌
    Figure 110108763-A0304-12-02
    基-C1-C6烷基、C6-C10芳基，其包括o -甲氧基苯基(癒創木酚酯)、C1 -C6 醯氧基甲基、C1 -C6 醯氧基-1-乙基、C1 -C6 烷氧基羰氧基甲基、C1 -C6 烷氧基羰氧基-1-乙基、或(氧代二氧呃基)甲基； R3 = H；R2 = R5 ；且 R5 = R8 = (CH2 )m X(CH2 )p R9 ； 其中X = O、S、SO2 、NH、NAc、或N(CH2 )q R9 ； 或其中該化合物選自由以下者組成之群組： 雙(4-羧基-2,5-二羥基苯基甲基)胺； 4-((2,5-二羥基-4-磺酸基苯基甲基胺基)甲基)-2,5-二羥基苯甲酸； 4-((2,5-二羥基-3-磺酸基苯基甲基胺基)甲基)-2,5-二羥基苯甲酸； 雙(2,5-二羥基-4-磺酸基苯基甲基)胺； N,N-雙(4-羧基-2,5-二羥基苯基甲基)乙醯胺； N-(2,5-二羥基-4-磺酸基苯基甲基) N-(4-羧基-2,5-二羥基苯基甲基)乙醯胺； N-(2,5-二羥基-3-磺酸基苯基甲基) N-(4-羧基-2,5-二羥基苯基甲基)乙醯胺； N,N-雙(2,5-二羥基-4-磺酸基苯基甲基)乙醯胺； 4-((2,5-二羥基-4-羧基苯基)甲硫基甲基)-2,5-二羥基苯甲酸； 4-((2,5-二羥基-4-磺酸基苯基)甲硫基甲基)-2,5-二羥基苯甲酸； 4-((2,5-二羥基-3-磺酸基苯基)甲硫基甲基)-2,5-二羥基苯甲酸； 4-((2,5-二羥基-4-磺酸基苯基)甲硫基甲基)-2,5-二羥基苯磺酸； 4-((2,5-二羥基-4-羧基苯基)甲基磺醯基甲基)-2,5-二羥基苯甲酸； 4-((2,5-二羥基-4-磺酸基苯基)甲基磺醯基甲基)-2,5-二羥基苯甲酸； 4-((2,5-二羥基-3-磺酸基苯基)甲基磺醯基甲基)-2,5-二羥基苯甲酸； 4-((2,5-二羥基-4-磺酸基苯基)甲基磺醯基甲基)-2,5-二羥基苯磺酸； 4-((2,5-二羥基-4-羧基苯基)甲氧基甲基)-2,5-二羥基苯甲酸； 4-((2,5-二羥基-4-磺酸基苯基)甲氧基甲基)-2,5-二羥基苯甲酸； 4-((2,5-二羥基-3-磺酸基苯基)甲氧基甲基)-2,5-二羥基苯甲酸； 4-((2,5-二羥基-4-磺酸基苯基)甲氧基甲基)-2,5-二羥基苯磺酸； 參(4-羧基-2,5-二羥基苯基甲基)胺； 參(4-乙氧基羰基-2,5-二羥基苯基甲基)胺； 雙(3-羧基-2,5-二羥基苯基甲基)胺； 3-((2,5-二羥基-3-磺酸基苯基甲基胺基)甲基)-2,5-二羥基苯甲酸； 3-((2,5-二羥基-4-磺酸基苯基甲基胺基)甲基)-2,5-二羥基苯甲酸； 雙(2,5-二羥基-3-磺酸基苯基甲基)胺； N,N-雙(3-羧基-2,5-二羥基苯基甲基)乙醯胺； N-(2,5-二羥基-3-磺酸基苯基甲基) N-(3-羧基-2,5-二羥基苯基甲基)乙醯胺； N-(2,5-二羥基-4-磺酸基苯基甲基) N-(3-羧基-2,5-二羥基苯基甲基)乙醯胺； N,N-雙(2,5-二羥基-3-磺酸基苯基甲基)乙醯胺； 3-((2,5-二羥基-3-羧基苯基)甲硫基甲基)-2,5-二羥基苯甲酸； 3-((2,5-二羥基-3-磺酸基苯基)甲硫基甲基)-2,5-二羥基苯甲酸； 3-((2,5-二羥基-4-磺酸基苯基)甲硫基甲基)-2,5-二羥基苯甲酸； 3-((2,5-二羥基-3-磺酸基苯基)甲硫基甲基)-2,5-二羥基苯磺酸； 3-((2,5-二羥基-3-羧基苯基)甲基磺醯基甲基)-2,5-二羥基苯甲酸； 3-((2,5-二羥基-3-磺酸基苯基)甲基磺醯基甲基)-2,5-二羥基苯甲酸； 3-((2,5-二羥基-4-磺酸基苯基)甲基磺醯基甲基)-2,5-二羥基苯甲酸； 3-((2,5-二羥基-3-磺酸基苯基)甲基磺醯基甲基)-2,5-二羥基苯磺酸； 3-((2,5-二羥基-3-羧基苯基)甲氧基甲基)-2,5-二羥基苯甲酸； 3-((2,5-二羥基-3-磺酸基苯基)甲氧基甲基)-2,5-二羥基苯甲酸； 3-((2,5-二羥基-4-磺酸基苯基)甲氧基甲基)-2,5-二羥基苯甲酸； 3-((2,5-二羥基-3-磺酸基苯基)甲氧基甲基)-2,5-二羥基苯磺酸； 3-((2,5-二乙醯氧基-3-甲氧基羰基苯基)甲基磺醯基甲基)-2,5-二乙醯氧基苯甲酸甲酯； 3-((2,5-二羥基-3-甲氧基羰基苯基)甲基磺醯基甲基)-2,5-羥基苯甲酸甲酯； 2-N-
    Figure 110108763-A0304-12-01
    啉基乙基 3-((2,5-二羥基-3-(2-N-
    Figure 110108763-A0304-12-01
    啉基乙氧基羰基)苯基)甲基磺醯基甲基)-2,5-羥基苯甲酸酯； 參(3-羧基-2,5-二羥基苯基甲基)胺；及 參(3-乙氧基羰基-2,5-二羥基苯基甲基)胺。
  14. 一種醫藥組成物，其包含治療有效量的如請求項1-13中任一項之化合物或其藥學上可接受的鹽、立體異構物、及藥學上可接受的賦型劑。
  15. 一種如請求項1-13中任一項之化合物，其用於治療及/或預防自體免疫、免疫、風濕病學、血管病症、眼科病症、纖維變性病症、代謝及胃腸病症、神經發炎性及神經退化性疾病、贅生物及癌症相關病症、激素相關疾病及由病毒及細菌感染性疾病引起的免疫病症及其等之併發症的方法中。
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